特表 2024-528875 処理のための装置、システム及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-01

(54)【発明の名称】処理のための装置、システム及び方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/10 20060101AFI20240725BHJP

   B01D 29/11 20060101ALI20240725BHJP

   C07H 21/02 20060101ALI20240725BHJP

   C12M 1/00 20060101ALI20240725BHJP

【ＦＩ】

C12N15/10 100Z

B01D29/10 510A

C07H21/02

C12M1/00 A

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024504768

(86)(22)【出願日】2022-07-27

(85)【翻訳文提出日】2024-01-25

(86)【国際出願番号】 US2022038427

(87)【国際公開番号】W WO2023009568

(87)【国際公開日】2023-02-02

(31)【優先権主張番号】63/203,638

(32)【優先日】2021-07-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520445473

【氏名又は名称】フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ シックス，エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ミスラ，トゥーシャー・カンティ

(72)【発明者】

【氏名】セルツァー，オルガ

(72)【発明者】

【氏名】シニコラ，ダニエル・ピー

【テーマコード（参考）】

4B029

4C057

4D116

【Ｆターム（参考）】

4B029AA23

4B029BB20

4C057AA04

4C057CC03

4C057DD01

4C057MM02

4D116BB01

4D116BC29

4D116BC45

4D116BC74

4D116DD01

4D116DD06

4D116GG12

4D116GG21

4D116KK04

4D116QC32A

4D116QC34A

4D116VV30

(57)【要約】

本発明は、概して、（ａ）ろ液チャンバと（ｂ）廃棄物回収チャンバと、これらを隔てる（ｃ）フィルタとを備えるリザーバを備える加圧装置であって；リザーバが（ｄ）圧力入口ポートに接触している取り外し可能なキャップを更に備える；正圧源と流体連通している装置の使用を含む、環状ポリリボヌクレオチドの調製及び処理のための装置、システム、及び方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ろ液チャンバと廃棄物回収チャンバとの間に配設されたフィルタを備えるリザーバを備える装置を提供するステップであって；前記リザーバが、圧力入口ポートを有する取り外し可能なキャップを更に備え；前記装置が前記圧力入口ポートを通じて正圧源と流体連通している、ステップ；
（ｂ）第１の流体中の環状ポリリボヌクレオチドを前記ろ液チャンバに提供するステップ；
（ｃ）前記リザーバを前記正圧源で加圧するステップであって、前記第１の流体が前記フィルタを通過し、且つ前記環状ポリリボヌクレオチドが前記フィルタを通過しないステップ；
（ｄ）前記リザーバに第２の流体を適用するステップ；及び
（ｅ）前記リザーバを前記正圧源で加圧するステップであって、前記第２の緩衝液が前記フィルタを通過し、且つ前記環状ポリリボヌクレオチドが前記フィルタを通過しないステップ
を含む、環状ポリリボヌクレオチドを処理する方法。

【請求項2】

ステップ（ｄ）及び（ｅ）を１～５回繰り返すステップを更に含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

（ｆ）ステップ（ｅ）の後に前記フィルタから前記環状ポリヌクレオチドを吸引するステップを更に含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

５０ｍｇ～１５０ｍｇの環状ポリリボヌクレオチドが前記フィルタから吸引される、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記第２の流体が、前記キャップにある流体入口ポートを通じて適用される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記流体入口ポートが流体源と流体連通している、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

加圧するステップ（ｃ）及び（ｄ）が、前記リザーバを１０～１００ＰＳＩで加圧することを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

適用するステップ（ｄ）が、前記リザーバに５ｍＬ～１５ｍＬの流体を適用することを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記第１及び／又は第２の流体が液体である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記液体が溶液である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記溶液が緩衝液である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記緩衝液が、製剤化緩衝液、貯蔵緩衝液、又は精製緩衝液である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

フィルタによって隔てられたろ液チャンバと廃棄物回収チャンバとを備えるリザーバを備える装置であって；前記リザーバが、圧力入口ポートに接触している取り外し可能なキャップを更に備え；正圧源と流体連通している装置。

【請求項14】

前記リザーバが管である、請求項１３に記載の装置。

【請求項15】

前記管が遠心管である、請求項１４に記載の装置。

【請求項16】

前記ろ液チャンバが漏斗状である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の装置。

【請求項17】

センサーを更に含む、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の装置。

【請求項18】

前記センサーが液体検出センサーである、請求項１７に記載の装置。

【請求項19】

前記キャップが流体入口ポートを更に備える、請求項１３～１８のいずれか一項に記載の装置。

【請求項20】

前記リザーバの容積が５～１００ｍＬである、請求項１３～１９のいずれか一項に記載の装置。

【請求項21】

前記ろ液チャンバの容積が５～１５ｍＬである、請求項１３～２０のいずれか一項に記載の装置。

【請求項22】

前記フィルタが２～２００ｋＤａである、請求項１３～２１のいずれか一項に記載の装置。

【請求項23】

前記ろ液チャンバ及びフィルタが、前記リザーバの上に積み重ねられるか、その中にねじ込まれるか、又はそれに入れ子にされる、請求項１３～２２のいずれか一項に記載の装置。

【請求項24】

前記圧力入口ポートが密閉されている、請求項１３～２３のいずれか一項に記載の装置。

【請求項25】

フィルタを有するろ液チャンバを備える試料リザーバを有するフィルタトレーと、前記フィルタトレーを間に配設する、圧力入口ポートを有する蓋と、廃棄物リザーバとを備えるシステムであって；前記圧力入口ポートが正圧源と流体連通している、システム。

【請求項26】

前記ろ液チャンバが漏斗状である、請求項２５に記載のシステム。

【請求項27】

前記ろ液チャンバの容積が５ｍＬ～１５ｍＬである、請求項２５又は２６に記載のシステム。

【請求項28】

前記廃棄物リザーバが重力又は真空ドレンを備える、請求項２５～２７のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項29】

液体検出センサーを更に備える、請求項２５～２８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項30】

ベントを更に備える、請求項２５～２９のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項31】

前記フィルタトレー、蓋、及び廃棄物リザーバが一体に密閉可能に接続されている、請求項２５～３０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項32】

前記ろ液チャンバが、前記試料リザーバの上に積み重ねられるか、その中にねじ込まれるか、又はそれに入れ子にされる、請求項２５～３１のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項33】

前記蓋が流体入口ポートを更に備える、請求項２５～３２のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項34】

前記フィルタトレーが複数の試料リザーバを備える、請求項２５～３３のいずれか一項に記載のシステム。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

環状ポリリボヌクレオチドの作製及び処理のための方法が必要とされている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0002】

本発明は、概して、環状ポリリボヌクレオチドの調製及び処理のための装置、システム、及び方法に関する。

【課題を解決するための手段】

【0003】

一態様において、本発明は、環状ポリリボヌクレオチドを処理する方法を特徴とする。この方法は、（ａ）装置を提供するステップであって、装置が（ｉ）フィルタと、それを間に配設する（ｉｉ）ろ液チャンバと（ｉｉｉ）廃棄物回収チャンバとを有するリザーバを備え、リザーバが、圧力入口ポートを有する取り外し可能なキャップを更に備え；装置が圧力入口ポートを通じて正圧源と流体連通している、ステップ；（ｂ）第１の流体中の環状ポリリボヌクレオチドをろ液チャンバに提供するステップ；（ｃ）リザーバを正圧源で加圧するステップであって、ひいては第１の流体がフィルタを通過し、且つ環状ポリリボヌクレオチドがフィルタを通過しないステップ；（ｄ）リザーバに第２の流体を適用するステップ；及び（ｅ）リザーバを正圧源で加圧するステップであって、ひいては第２の緩衝液がフィルタを通過し、且つ環状ポリリボヌクレオチドがフィルタを通過しないステップを含む。

【0004】

一部の実施形態において、本方法は、ステップ（ｄ）及び（ｅ）を１～５回繰り返すステップを更に含む。一部の実施形態において、本方法は、（ｆ）ステップ（ｅ）の後にフィルタから環状ポリヌクレオチドを吸引するステップを更に含む。一部の実施形態において、１ｍｇ～１０００ｍｇの環状ポリリボヌクレオチドがフィルタから吸引される。一部の実施形態において、５０ｍｇ～１５０ｍｇの環状ポリリボヌクレオチドがフィルタから吸引される。一部の実施形態において、約１００ｍｇの環状ポリリボヌクレオチドがフィルタから吸引される。

【0005】

一部の実施形態において、第２の流体は、キャップにある流体入口ポートを通じて適用される。一部の実施形態において、流体入口ポートは流体源と流体連通している。一部の実施形態において、第１及び／又は第２の流体は液体である。一部の実施形態において、液体は溶液である。一部の実施形態において、溶液は緩衝液である。一部の実施形態において、緩衝液は、製剤化緩衝液、貯蔵緩衝液、又は精製緩衝液である。

【0006】

一部の実施形態において、加圧するステップ（ｃ）及びステップ（ｄ）は、リザーバを１０ＰＳＩ～１００ＰＳＩで加圧することを含む。一部の実施形態において、適用するステップ（ｄ）は、リザーバに５ｍＬ～１５ｍＬの流体を適用することを含む。

【0007】

別の態様において、本発明は、フィルタによって隔てられたろ液チャンバ及び廃棄物回収チャンバと、圧力入口ポートに接触している取り外し可能なキャップとを有するリザーバを備える装置であって；正圧源と流体連通している装置を特徴とする。

【0008】

一部の実施形態において、リザーバは管である。一部の実施形態において、管は遠心管である。一部の実施形態において、ろ液チャンバは漏斗状である。一部の実施形態において、キャップは流体入口ポートを更に備える。一部の実施形態において、リザーバの容積は５ｍＬ～１００ｍＬである。一部の実施形態において、ろ液チャンバの容積は５ｍＬ～１５ｍＬである。一部の実施形態において、フィルタは２ｋＤａ～２００ｋＤａである。一部の実施形態において、ろ液チャンバ及びフィルタは、リザーバの上に積み重ねられるか、その中にねじ込まれるか、又はそれに入れ子にされる。一部の実施形態において、圧力入口ポートは密閉されている。

【0009】

一部の実施形態において、本装置はセンサー（例えば、液体検出センサー）を更に備える。一部の実施形態において、液体検出センサーは、光センサー、振動センサー、超音波センサー、浮力センサー、静電容量センサー、レーダーセンサー、伝導度センサー、又は抵抗センサーからなるリストから選択される。一部の実施形態において、センサーは光センサーである。

【0010】

別の態様において、本発明は、（ｉ）フィルタを有するろ液チャンバを備える試料リザーバを有するフィルタトレーと、フィルタトレーを間に配設する（ｉｉ）圧力入口ポートを有する蓋と、（ｉｉｉ）廃棄物リザーバとを備えるシステムであって；圧力入口ポートが、（ｉｖ）正圧源と流体連通しているシステムを特徴とする。

【0011】

一部の実施形態において、ろ液チャンバは漏斗状である。一部の実施形態において、ろ液チャンバの容積は５ｍＬ～１５ｍＬである。一部の実施形態において、廃棄物リザーバは重力又は真空ドレンを備える。一部の実施形態において、本システムは液体検出センサーを更に備える。一部の実施形態において、本システムはベントを更に備える。一部の実施形態において、フィルタトレー、蓋、及び廃棄物リザーバは、一体に密閉可能に接続されている。一部の実施形態において、ろ液チャンバは、試料リザーバの上に積み重ねられるか、その中にねじ込まれるか、又はそれに入れ子にされる。一部の実施形態において、蓋は流体入口ポートを更に備える。一部の実施形態において、フィルタトレーは複数の試料リザーバを備える。

【0012】

定義
本発明は、詳細な実施形態に関して、及び特定の図を参照して記載されることになるが、本発明がそれらに限定されることはなく、本発明は特許請求の範囲によってのみ限定される。以下に示すとおりの用語は、特に指示がない限り、概してその一般的な意味で理解されるものとする。

【0013】

本明細書で使用されるとき、用語「環状ポリリボヌクレオチド」又は「ｃｉｒｃＲＮＡ」又は「環状ＲＮＡ」は同義的に使用され、遊離末端を有しない（即ち、遊離３’及び／又は５’末端を有しない）構造を有するポリリボヌクレオチド分子、例えば、共有結合性又は非共有結合性の結合を通じて環状又はエンドレス構造を形成するポリリボヌクレオチド分子を意味する。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、共有結合性の結合を通じて環状又はエンドレス構造を形成した「共有結合的に閉じたポリリボヌクレオチド」である。

【0014】

本明細書で使用されるとき、用語「環状ポリリボヌクレオチド試料」、「ｃｉｒｃＲＮＡ試料」、及び「環状ＲＮＡ試料」は同義的に使用され、ｃｉｒｃＲＮＡ分子と溶液とを含む組成物を意味する。

【0015】

本明細書で使用されるとき、用語「発現配列」は、産物、例えば、ペプチド又はポリペプチドをコードする核酸配列、又は調節性の核酸を指す。

【0016】

「ポリペプチド」及び「タンパク質」は同義的に使用され、２つ以上のアミノ酸が共有結合性の結合（例えば、アミド結合）によってつなぎ合わされたポリマーを指す。本明細書に記載されるとおりのポリペプチドには、完全長タンパク質（例えば、完全にプロセシングされたタンパク質）並びにより短いアミノ酸配列（例えば、天然に存在するタンパク質の断片又は合成ポリペプチド断片）が含まれ得る。ポリペプチドには、天然に存在するアミノ酸（例えば、自然界で合成されるペプチドに一般に見出される、一文字略記Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ及びＶによって公知の２０個のアミノ酸のうちの１つ）及び天然に存在しないアミノ酸（例えば、合成アミノ酸、アミノ酸類似体、及びアミノ酸模倣体を含めた、自然界で合成されるペプチドに一般に見出される２０個のアミノ酸のうちの１つでないアミノ酸）が含まれ得る。

【0017】

本明細書で使用されるとき、用語「アプタマー配列」又は「アプタマー」は、標的分子に特異的に結合する天然に存在しない又は合成のオリゴヌクレオチドを指す。典型的には、アプタマーは２０～２５０ヌクレオチドである。典型的には、アプタマーはその標的に対し、配列相同性よりむしろ、二次構造を通じて結合する。

【0018】

本明細書で使用されるとき、用語「結合部位」は、別の実体、例えば、化学的化合物、タンパク質、核酸等と相互作用する環状ポリリボヌクレオチド中の領域を指す。結合部位には、アプタマー配列が含まれ得る。

【0019】

本明細書で使用されるとき、「緩衝液」は、酸性又は塩基性成分を加えたときのｐＨの変化に耐えることのできる溶液である。「緩衝液」の例としては、組成物の製剤化に使用するための「製剤化緩衝液」、組成物の貯蔵に使用するための「貯蔵緩衝液」、精製に使用するための「精製緩衝液」などが挙げられる。

【0020】

用語「緩衝液交換」は、本明細書で使用されるとき、ポリリボヌクレオチドなど、分子又は粒子を第１の緩衝液から取り出して、第２の緩衝液に取り込むための過程を指す。

【0021】

用語「流体連通」は、本明細書で使用されるとき、少なくとも２つの装置要素、例えば、リザーバ、圧力源等の間にある接続であって、流体がかかる装置要素間を１つ以上の介在する装置要素を通過して又は通過せずに移動することを可能にするような接続を指す。

【0022】

本明細書で使用されるとき、「溶液」は、溶媒及び溶質を含めた２つ以上の物質の均一な混合物である。

【0023】

参照による援用
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個別の刊行物、特許、又は特許出願が参照により援用されることが具体的且つ個別に示されたものとするのと同程度に本明細書において参照により援用される。

【0024】

環状ポリリボヌクレオチドについては、例えば、米国特許出願公開第２０２０／０３０６２８６号明細書、及び国際公開第２０２０／１８１０１３号パンフレット及び同第２０２０／０２３６５５号パンフレット（これらは参照により本明細書に援用される）に記載されている。

【0025】

本発明の実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むと一層良く理解されるであろう。本発明を例示することを目的に、図面には実施形態が示され、それらの実施形態は本明細書で例として挙げられているものである。しかしながら、本発明は、図面に示される実施形態の正確な構成及び手段に限定されないことが理解されなければならない。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】ろ液チャンバと廃棄物回収チャンバとの間に配設されたフィルタ、並びに圧力入口ポートを有するキャップを有するリザーバを備える加圧装置を示し、ここで加圧装置は正圧下にあり、及び圧力は正圧ポートを通じて及ぼされる。

【図2】ろ液チャンバと廃棄物回収チャンバとの間に配設されたフィルタ、並びに圧力入口ポートと流体入口ポートとの両方を有するキャップを有するリザーバを備える加圧装置を示し、ここで加圧装置は正圧下にあり、及び圧力は圧力入口ポートを通じて及ぼされ；及びここで新鮮な流体が流体入口ポートを通じてろ液チャンバに適用されてもよい。

【図3A】少なくとも１つのポートを有する蓋と、フィルタを有する試料リザーバを複数有するフィルタトレーと、廃棄物リザーバとを備える加圧システム又は加圧ロボットアセンブリを示す。

【図3B】少なくとも１つのポートを有する蓋と、フィルタを有する試料リザーバを複数有するフィルタトレーと、廃棄物リザーバとを備える加圧システム又は加圧ロボットアセンブリを示す。

【図3C】少なくとも１つのポートを有する蓋と、フィルタを有する試料リザーバを複数有するフィルタトレーと、廃棄物リザーバとを備える加圧システム又は加圧ロボットアセンブリを示す。

【発明を実施するための形態】

【0027】

本発明は、概して、環状ポリリボヌクレオチド試料の処理のための、例えば、かかる試料の緩衝液交換のための装置、システム、及び方法に関する。本発明者らは、環状ポリヌクレオチドを含む溶液（例えば、緩衝液）などの流体を加圧すると、簡単且つ迅速な液体交換につながることを見出した。本発明の一実施形態は、加圧、例えば、加圧とろ過との組み合わせを用いて環状ポリリボヌクレオチドを第１の流体から第２の流体へと移し替えるように構成された装置である。

【0028】

一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、環状であるポリリボヌクレオチド、即ち、遊離末端を有しないポリリボヌクレオチドである。環状ポリリボヌクレオチドについては、例えば、米国特許出願公開第２０２０／０３０６２８６号明細書、及び国際公開第２０２０／１８１０１３号パンフレット及び同第２０２０／０２３６５５号パンフレット（これらは参照により本明細書に援用される）に記載されている。環状ポリリボヌクレオチドについてはまた、例えば、国際公開第２０１５／０３４９２５号パンフレット、国際公開第２０１６／０１１２２２号パンフレット、米国特許第１０４０７６８３号明細書、国際公開第２０１７／２２２９１１号パンフレット、国際公開第２０２１／０４１５４１号パンフレット、国際公開第２０１９／２３６６７３号パンフレット、国際公開第２０２０／２３７２２７号パンフレット、国際公開第２０１６／１９７１２１号パンフレット、国際公開第２０１８／１９１７２２号パンフレット、及び国際公開第２０２０／０２３５９５号パンフレット（これらは参照により本明細書に援用される）にも記載されている。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、対応する線状ポリリボヌクレオチドと比較して、安定性の向上、半減期の増加、免疫原性の低下、及び／又は機能性（例えば、本明細書に記載される機能についての機能性）の向上を呈する。

【0029】

一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、少なくとも約２０塩基対、少なくとも約３０塩基対、少なくとも約４０塩基対、少なくとも約５０塩基対、少なくとも約７５塩基対、少なくとも約１００塩基対、少なくとも約２００塩基対、少なくとも約３００塩基対、少なくとも約４００塩基対、少なくとも約５００塩基対、又は少なくとも約１，０００塩基対である。

【0030】

一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、長さが少なくとも１００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも３００ヌクレオチド、少なくとも４００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも１，０００ヌクレオチド、少なくとも２，０００ヌクレオチド、少なくとも３，０００ヌクレオチド、少なくとも４，０００ヌクレオチド、少なくとも５，０００ヌクレオチド、少なくとも７，５００ヌクレオチド、少なくとも１０，０００ヌクレオチド、少なくとも１５，０００ヌクレオチド、少なくとも２０，０００ヌクレオチドであり、有用であり得る。

【0031】

一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、発現配列、例えば、ポリペプチドをコードする発現配列を少なくとも１つ含む。一部の実施形態において、発現配列は、ペプチド又はポリヌクレオチドをコードする。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、同じであっても異なってもよい複数の発現配列を含む。一部の実施形態において、発現配列は、長さが５０００ｂｐ未満（例えば、約５０００ｂｐ未満、４０００ｂｐ、３０００ｂｐ、２０００ｂｐ、１０００ｂｐ、９００ｂｐ、８００ｂｐ、７００ｂｐ、６００ｂｐ、５００ｂｐ、４００ｂｐ、３００ｂｐ、２００ｂｐ、１００ｂｐ、５０ｂｐ、４０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、又はそれ以下）である。一部の実施形態において、発現配列は、独立に、又はそれに加えて、長さが１０ｂｐ超（例えば、少なくとも約１０ｂｐ、２０ｂｐ、３０ｂｐ、４０ｂｐ、５０ｂｐ、６０ｂｐ、７０ｂｐ、８０ｂｐ、９０ｂｐ、１００ｂｐ、２００ｂｐ、３００ｂｐ、４００ｂｐ、５００ｂｐ、６００ｂｐ、７００ｂｐ、８００ｂｐ、９００ｂｐ、１０００ｋｂ、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂ、１．６ｋｂ、１．７ｋｂ、１．８ｋｂ、１．９ｋｂ、２ｋｂ、２．１ｋｂ、２．２ｋｂ、２．３ｋｂ、２．４ｋｂ、２．５ｋｂ、２．６ｋｂ、２．７ｋｂ、２．８ｋｂ、２．９ｋｂ、３ｋｂ、３．１ｋｂ、３．２ｋｂ、３．３ｋｂ、３．４ｋｂ、３．５ｋｂ、３．６ｋｂ、３．７ｋｂ、３．８ｋｂ、３．９ｋｂ、４ｋｂ、４．１ｋｂ、４．２ｋｂ、４．３ｋｂ、４．４ｋｂ、４．５ｋｂ、４．６ｋｂ、４．７ｋｂ、４．８ｋｂ、４．９ｋｂ、５ｋｂ又はそれ以上）である。

【0032】

一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、発現配列など、１つ以上のエレメントを含み、それらの１つ以上のエレメントは、スペーサー配列又はリンカーによって互いに隔てられていてもよい。一部の実施形態において、エレメントは、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約１５ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約１５０ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約２５０ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド、約９００ヌクレオチド、又は約１０００ヌクレオチドだけ互いに隔てられていてもよい。一部の実施形態において、１つ以上のエレメントは互いに隣接しており、例えば、スペーサーエレメントを欠いている。一実施形態において、約０．０５：１、約０．０６：１、約０．０７：１、約０．０８：１、約０．０９：１、約０．１：１、約０．１２：１、約０．１２５：１、約０．１５：１、約０．１７５：１、約０．２：１、約０．２２５：１、約０．２５：１、約０．３：１、約０．３５：１、約０．４：１、約０．４５：１、約０．５：１、約０．５５：１、約０．６：１、約０．６５：１、約０．７：１、約０．７５：１、約０．８：１、約０．８５：１、約０．９：１、約０．９５：１、約０．９８：１、約１：１、約１．０２：１、約１．０５：１、約１．１：１、約１．１５：１、約１．２：１、約１．２５：１、約１．３：１、約１．３５：１、約１．４：１、約１．４５：１、約１．５：１、約１．５５：１、約１．６：１、約１．６５：１、約１．７：１、約１．７５：１、約１．８：１、約１．８５：１、約１．９：１、約１．９５：１、約１．９７５：１、約１．９８：１、又は約２：１のスペーサー配列と環状ポリリボヌクレオチドの非スペーサー配列、例えば、発現配列との比。一実施形態において、スペーサー配列は、スペーサー配列の両側にある環状ポリリボヌクレオチドのエレメント間にコンホメーション上の柔軟性を付与するように構成されている。

【0033】

一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、１つ以上の繰り返しのエレメントを含み得る。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、１つ以上の修飾を含む。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、又は８０％の修飾ヌクレオチドを含む。

【0034】

環状ポリリボヌクレオチドは、標的に対する、例えば、標的の結合部分に対する少なくとも１つの結合部位を含み得る。環状ポリリボヌクレオチドは、標的に結合する少なくとも１つのアプタマー配列を含み得る。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、１つ以上の標的に対して１つ以上の結合部位を含む。標的としては、限定はされないが、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ－ＤＮＡハイブリッド）、小分子（例えば、薬物、フルオロフォア、代謝産物）、アプタマー、ポリペプチド、タンパク質、脂質、炭水化物、抗体、ウイルス、ウイルス粒子、膜、多成分複合体、細胞小器官、細胞、他の細胞構成部分、これらの任意の断片、及びこれらの任意の組み合わせが挙げられる。一部の実施形態において、環状ポリリボヌクレオチドは、単一の標的又は複数の（例えば、２つ以上の）標的との結合部位を含む。一実施形態において、単一の環状ポリリボヌクレオチドが、単一の標的に対して２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上の異なる結合部位を含む。一実施形態において、単一の環状ポリリボヌクレオチドが、単一の標的に対して同じ結合部位の２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上を含む。一実施形態において、単一の環状ポリリボヌクレオチドが、１つ以上の異なる標的に対して２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上の異なる結合部位を含む。一実施形態において、標的の混合物又はライブラリなど、２つ以上の標的が試料中にあり、試料は、その２つ以上の標的に結合する２つ以上の結合部位を含む環状ポリリボヌクレオチドを含む。

【0035】

環状リボヌクレオチド試料の処理においては、環状リボヌクレオチドを第１の流体から第２の流体へと移し替える必要があることもあり、ここで第２の流体は、更なる処理、製剤化、貯蔵、精製等に一層適している。本発明の流体交換は、環状ポリリボヌクレオチドを有するフィルタを含め、リザーバを空にすることなく行われてもよく、一層手のかからない、ロバストな方法論が提供されることになる。一実施形態において、このプロセスを流体検出センサーで更に強化してもよく、フィルタそれ自体が過度に乾燥するのを防ぐ制御されたプロセスを提供し得る。環状ポリリボヌクレオチド試料は、流体で分配されてもよい。一実施形態において、流体は液体又は気体である。一実施形態において、流体は溶液である。一実施形態において、溶液は緩衝液である。本発明で使用されることになる緩衝液としては、環状ポリリボヌクレオチドを安定したｐＨ及び／又は安定した構造に維持する任意の水溶液が挙げられる。緩衝液には、組成物の製剤化に使用するための製剤化緩衝液、組成物の貯蔵に使用するための貯蔵緩衝液、及び精製の使用のための精製緩衝液などが含まれ得る。緩衝液としては、クエン酸ナトリウム緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリスベースの緩衝液、リン酸ナトリウム、水などを挙げることができる。本発明は、複数の流体で連続して使用されてもよく（例えば、一つずつ使用されてもよく）、又は並行して使用されてもよい（例えば、一緒に使用されてもよい）。

【0036】

一部の実施形態において、本装置及びシステムでは、市販品のフィルタが使用されてもよい。フィルタとしては、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）ウルトラフィルタ、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）タンパク質コンセントレータＰＥＳフィルタ等が挙げられる。種々のフィルタ細孔径が考えられ、限定はされないが、２ｋＤａ未満、３ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａなどが挙げられる。種々の分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するフィルタが考えられ、限定はされないが、１０ＭＷＣＯ、３０ＭＷＣＯ、及び１００ＭＷＣＯが挙げられる。

【0037】

種々の環状ポリリボヌクレオチド濃度が考えられ、限定はされないが、０．５～２．０ｍｇ／ｍＬが挙げられる。

【0038】

緩衝液など、第２の流体への取り込みのための、結果として得られる種々の環状ポリリボヌクレオチド重量が考えられ、１～２００ｍｇ、例えば、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、又は２００ｍｇが挙げられる。

【0039】

図１は、ろ液チャンバ（１０４）と廃棄物回収チャンバ（１０５）との間に配設されたフィルタ（１０２）、並びに圧力入口ポート（１０８）を有するキャップ（１０６）を有するリザーバ（１０３）を備える加圧装置（１０１）を示し、ここで加圧装置は正圧下にあり、及び圧力は圧力入口ポート（１０８）を通じて及ぼされる。加圧装置（１０１）は、流体接続構成要素（１０７）を更に備えてもよく、これによってリザーバが圧力源と流体連通した状態に置かれ得る。

【0040】

図２は、ろ液チャンバ（２０４）と廃棄物回収チャンバ（２０５）との間に配設されたフィルタ（２０２）、並びに圧力入口ポート（２０８）と流体入口ポート（２０９）とを有するキャップ（２０６）を有するリザーバ（２０３）を備える加圧装置（２０１）の代替的実施形態を示し、ここで加圧装置（２０１）は正圧下にあり、及び圧力は圧力入口ポート（２０８）を通じて及ぼされ；及びここで新鮮な流体が、流体入口ポート（２０９）を通じてろ液チャンバ（２０４）に適用されてもよい。加圧装置（２０１）は流体接続構成要素（２０７）を更に備えてもよく、これによってリザーバが圧力源と流体連通した状態に置かれ得る。一部の実施形態において、キャップは圧力入口ポートを備える。圧力入口ポートは流体接続構成要素によって圧力源に接続されてもよい。本明細書に記載される特定の装置、方法、及びシステムでは、流体をフィルタに押し通すため、正圧源によって圧力入口ポートから正圧が及ぼされ得る。環状ポリリボヌクレオチドの流体交換には、ある範囲の圧力が想定され、１０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、例えば、１０ＰＳＩ～２０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～２５ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～３０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～５０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～６０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～７０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～２５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～３０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～５０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～６０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～７０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～５０ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～６０ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～７０ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、３０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～５０ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～６０ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～７０ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、４０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、５０ＰＳＩ～６０ＰＳＩ、５０ＰＳＩ～７０ＰＳＩ、５０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、５０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、５０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、６０ＰＳＩ～７０ＰＳＩ、６０～７５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、６０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、６０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、７０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ～８０ＰＳＩ、７０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、７０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、８０ＰＳＩ～９０ＰＳＩ、８０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、９０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、又は約１０、２０、３０、４０、５０、６０、６５、７０、８０、９０、又は１００ＰＳＩが挙げられる。一実施形態において、１つ又は複数の圧力入口ポート及び／又は１つ又は複数の流体入口ポートを有するキャップは、加圧に耐えるように密閉されていてもよい。一実施形態において、本リザーバ、フィルタ、キャップ、及び関係する流体接続は、加圧に耐えるように一体に接続され、例えば、留め金で固定される。一実施形態において、金属留め金を使用して本装置及びシステムを一体に固定してもよい。

【0041】

正圧は、ある期間にわたってリザーバ全体に維持されてもよい。リザーバは１分間～数時間まで加圧されてもよい。一実施形態において、リザーバは３時間未満、より好ましくは１時間未満加圧される。一実施形態において、リザーバは初期流体洗浄について１０分未満加圧され、続く流体洗浄について１０分～５５分間加圧される。ある範囲の加圧ろ過時間が考えられ、５分未満、１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、４５分、１時間、９０分、２時間、３時間、１０分～４０分、２０分～４０分、３０分～６０分等が挙げられる。

【0042】

一部の実施形態において、キャップは、圧力入口ポートに加えて流体入口ポートを備える。一部の実施形態において、キャップは、複数の流体入口ポート、例えば、１～３個のポート、１～５個のポート、２～５個のポート、又は１、２、３、４、５個等のポートを備える。一部の実施形態において、流体入口ポートは流体源と流体的に連通していてもよい。一部の実施形態において、複数の流体が同じ流体入口ポート又は異なる流体入口ポートを通じてリザーバに加えられてもよい。一部の実施形態において、流体入口ポートの前に流体接合部があってもよく、ここでは流体接合部の各分岐が別個の流体源と流体的に接続している。一部の実施形態において、流体入口ポート及び緩衝液入口ポートは同じポートである。流体入口ポートは接続構成要素を介して流体源に接続し得る。一部の実施形態において、接続構成要素は管であってもよい。一部の実施形態において、管材は使い捨てであり、各リザーバへの流体の送達及び溶出を無菌的に行うことが可能になる。

【0043】

ポリリボヌクレオチドは、加圧後にフィルタから取り除かれてもよい。ポリリボヌクレオチドは吸引によって取り除かれてもよく、例えば、フィルタ表面から吸引されてもよい。一部の実施形態において、１ｍｇ～１０００ｍｇの環状ポリリボヌクレオチド、例えば、１ｍｇ～５ｍｇ、１ｍｇ～１０ｍｇ、１ｍｇ～２５ｍｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、１ｍｇ～７５ｍｇ、１ｍｇ～１００ｍｇ、１ｍｇ～１２５ｍｇ、１ｍｇ～１５０ｍｇ、１ｍｇ～２００ｍｇ、５ｍｇ～２５ｍｇ、５ｍｇ～５０ｍｇ、１０ｍｇ～５０ｍｇ、２５ｍｇ～５０ｍｇ、２５ｍｇ～５０ｍｇ、２５ｍｇ～７５ｍｇ、２５ｍｇ～１００ｍｇ、２５ｍｇ～１２５ｍｇ、２５ｍｇ～１５０ｍｇ、５０ｍｇ～７５ｍｇ、５０ｍｇ～１００ｍｇ、５０ｍｇ～１５０ｍｇ、５０ｍｇ～２００ｍｇ、５０ｍｇ～２５０ｍｇ、７５ｍｇ～１２５ｍｇ、７５ｍｇ～１５０ｍｇ、７５ｍｇ～２００ｍｇ、８０ｍｇ～１２０ｍｇ、９０ｍｇ～１１０ｍｇ、１００ｍｇ～１５０ｍｇ、１００ｍｇ～２００ｍｇ、１００ｍｇ～２５０ｍｇ、１２５ｍｇ～１７５ｍｇ、１５０ｍｇ～２５０ｍｇ、２５０ｍｇ～５００ｍｇ、２５０ｍｇ～７５０ｍｇ、又は５００ｍｇ～１０００ｍｇがフィルタから吸引される。

【0044】

本発明の一実施形態は、図３Ａ～図３Ｃに見られるとおりの、少なくとも１つのポート（３０３）を有する蓋（３０２）と、フィルタを有する複数の試料リザーバ（３０５）を有するフィルタトレー（３０４）と、廃棄物リザーバ（３０６）とを備える加圧システム（３０１）又は加圧ロボットアセンブリである。一部の実施形態において、本加圧システムは、２個のリザーバ～２４個のリザーバ、好ましくは８個のリザーバ～１２個のリザーバ、例えば、８個のリザーバ～１０個のリザーバ、１０個のリザーバ～１２個のリザーバ、又は２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個等のリザーバなど、複数のリザーバを並行して処理することができる。本加圧システムは、種々のリザーバ容積、例えば、５０ｍＬ及び１５ｍＬの両方のリザーバ向けに構成される。一部の実施形態において、本加圧システムはロボットアームを更に備える。

【0045】

一部の実施形態において、本装置、システム、及び方法を使用すると、１０個以上、２０個以上、３０個以上、４０個以上、５０個以上、６０個以上、７０個以上、８０個以上、９０個以上、又は１００個以上など、複数の環状ポリリボヌクレオチド試料を処理し得る。一部の実施形態において、複数の加圧システム、例えば１０～１２個の加圧システムが併せて使用される。

【0046】

一部の実施形態において、本装置及びシステムはセンサーを備える。センサーを使用すると、リザーバの液体レベルが一定のレベルにまで下がったときに加圧を停止させることができる。一部の実施形態において、液体検出センサーは、光センサー、振動センサー、超音波センサー、浮力センサー、静電容量センサー、レーダーセンサー、伝導度センサー、及び抵抗センサーからなる群から選択される。一部の実施形態において、センサーは光センサーである。

【0047】

一部の実施形態において、本装置及びシステムは、加圧に起因したリザーバの破砕など、操作者の負傷を防ぐため、少なくとも１つの安全構成要素又は少なくとも１つの安全機能を備えている。例えば、リザーバ及び接続部などの、高圧に耐えることができる高圧用構成要素、又は留め金などの固定構成要素が含まれてもよい。

【実施例】

【0048】

以下の例は、本発明の一部の実施形態を例示するために提供されるが、本発明の範囲を限定することを意図するものではない；その例示的性質により、当業者に公知の他の手順、方法論、又は技法が代わりに用いられてもよいことは理解されるであろう。

【0049】

実施例１
本例は、加圧装置の使用を実証する。

【0050】

図２に示されるとおりの、１０ｋＤａのフィルタ多孔度を有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタを、正圧を使用した緩衝液交換用に適合させた。図１に示されるとおり、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタと共に使用するための圧力入口ポートを有するキャップを作製した。このキャップは、システムがより高い圧力、例えば１５ＰＳＩ超に耐えるのを助けるための密閉構成要素を備えた。正圧源に接続するための構成要素のシステムは、後から取り付けられるキャップを有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタを備えた緩衝液交換装置を加圧する使用向けに設計した。

【0051】

環状ポリリボヌクレオチドの緩衝液交換のため、初めに圧力入口ポートを有するキャップを取り外し、初期緩衝液１００ｍＭ ＴＥＡＡ中５～１０％アセトニトリルの溶液中の５ｍＬの環状ポリリボヌクレオチドを装置のリザーバ内のフィルタ上方に分注し、次に再びキャップを被せた。圧縮空気を使用して１５ＰＳＩの圧力を圧力入口ポートからリザーバに適用すると、第１の緩衝液がフィルタに押し通されて廃棄物回収域に至り、環状ポリリボヌクレオチドはフィルタに残ったままであった。第１の加圧は約４分かかった。次に圧縮空気を止めて、キャップをゆっくりと開いた。次に、５ｍＬの水をリザーバへとフィルタ上方に分注し、再びキャップを被せ、圧力を回復させた。圧力を一時的に停止させて、キャップを取り外し、第２の緩衝液を加え、再びキャップを被せて圧力を戻すプロセスを５回繰り返し、第２の緩衝液による緩衝液洗浄を合計６回行った。続く加圧ろ過は５～４０分かかった。次にキャップを開け、下流処理に組み込むための２００μＬの環状ポリリボヌクレオチドをフィルタから吸引した。

【0052】

実施例２
本例は、加圧装置の使用を実証する。

【0053】

１０ｋＤａのフィルタ多孔度を有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－３０フィルタユニットを、遠心に対立するものとしての加圧を使用した緩衝液交換用に適合させた。Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－３０フィルタユニットと共に使用するための圧力入口ポートを有するキャップを作製した。このキャップは、システムがより高い圧力、例えば６５ＰＳＩ超に耐えるのを助けるための密閉構成要素を備えた。正圧源と接続するための構成要素のシステムは、後から取り付けられるキャップを有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－３０フィルタユニットを備えた装置を加圧する使用向けに設計した。

【0054】

環状ポリリボヌクレオチドの緩衝液交換のため、初めに圧力入口ポートを有するキャップを取り外し、１００ｍＭ ＴＥＡＡ中５～１０％アセトニトリルの溶液中の３．１ｍｇの環状ポリリボヌクレオチドを有する４５ｍＬを装置のリザーバ内のフィルタ上方に分注し、次に再びキャップを被せた。６５ＰＳＩの圧力を圧力入口ポートからリザーバに適用すると、第１の緩衝液がフィルタに押し通されて廃棄物回収域に至り、環状ポリリボヌクレオチドはフィルタに残ったままであった。第１の加圧ろ過は約４分かかった。次に圧力を止め、キャップを開けた。次に、１０ｍＬのクエン酸ナトリウムをリザーバへとフィルタ上方に加え、再びキャップを被せ、圧力を回復させた。圧力を一時的に停止させて、キャップを取り外し、第２の緩衝液を加え、再びキャップを被せて圧力を戻すプロセスを５回繰り返し、第２の緩衝液による緩衝液洗浄を合計６回行った。続く加圧ろ過は３５～５０分かかった。次にキャップを開け、下流処理に組み込むための２ｍｇ（１３３５ｎｇ／μＬ）の環状ポリリボヌクレオチドをフィルタから吸引した。

【0055】

実施例３
本例は、加圧装置の使用を実証する。

【0056】

１０ｋＤａのフィルタ多孔度を有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタを、遠心に対立するものとしての加圧を使用した緩衝液交換用に適合させた。図１に示されるとおり、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタと共に使用するための圧力入口ポート及び緩衝液入口ポートを有するキャップを作製した。このキャップは、システムがより高い圧力、例えば６５ＰＳＩ超に耐えるのを助けるための密閉構成要素を備えた。正圧源及び緩衝液供給源に接続するための構成要素のシステムは、緩衝液交換装置を加圧し及び緩衝液交換に新鮮な緩衝液を供給する使用向けに設計した。

【0057】

環状ポリリボヌクレオチドの緩衝液交換のため、初めに装置のキャップを取り外し、１００ｍＭ ＴＥＡＡ中５～１０％アセトニトリル中の４ｍｇの環状ポリリボヌクレオチドを装置のリザーバ内のフィルタ上方に分注し、次に再びキャップを被せた。６５ＰＳＩの圧力を圧力入口ポートからリザーバに適用すると、第１の緩衝液がフィルタに押し通されて廃棄物回収域に至り、環状ポリリボヌクレオチドはフィルタに残ったままであった。第１の加圧ろ過は約１２分かかった。次に圧力を一時的に停止させた後、緩衝液入口ポートを介してリザーバへとフィルタ上方に１５ｍＬのクエン酸ナトリウムを加え、圧力を回復させた。圧力を一時的に停止させて、緩衝液入口ポートを通じて第２の緩衝液を加えて圧力を戻すプロセスを５回繰り返し、第２の緩衝液による緩衝液洗浄を合計６回行った。続く加圧は１８～５０分かかった。次にキャップを開け、下流処理に組み込むための３．４２ｍｇ（１８９８．１ｎｇ／μＬ）の環状ポリリボヌクレオチドをフィルタから吸引した。

【0058】

実施例４
本例は、自動加圧装置の使用を実証する。

【0059】

１０ｋＤａのフィルタ多孔度を有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタを、遠心に対立するものとしての加圧を使用した自動緩衝液交換用に適合させ得る。図１に示されるとおり、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５フィルタと共に使用するための圧力入口ポート及び緩衝液入口ポートを有するキャップを作製した。このキャップは、システムがより高い圧力、例えば６０ＰＳＩ超に耐えるのを助けるための密閉構成要素を備えた。正圧源及び緩衝液供給源に接続するための構成要素のシステムは、緩衝液交換装置を加圧し及び緩衝液交換に新鮮な緩衝液を供給する使用向けに設計した。装置は更に、流体検出センサーを備えるように適合させてもよい。

【0060】

緩衝液交換は、液体検出センサーを用いてプロセスを自動化することを除いては、実施例１又は実施例２のプロセスに従い得る。液体検出センサーは、決まった容積の第１若しくは第２の緩衝液又は任意の後続の緩衝液がフィルタに押し通されて廃棄物回収域に至ると検知する。フィルタ域より上方にあるリザーバの液体レベルが目標レベルに達すると、圧力が一時的に停止されることになり、所定の容積の第２の緩衝液がリザーバへとフィルタ上方に加えられてもよい。次には圧力が回復し得る。目標液体レベルが検知されたことによる圧力の一時的停止、第２の緩衝液の追加、及び圧力の回復は５回繰り返されて、第２の緩衝液による緩衝液洗浄が合計６回行われてもよく、その後キャップが取り外され、フィルタ上の環状ポリリボヌクレオチドが吸い出されて、第２の緩衝液の溶液中、又は第３の緩衝液の溶液中のいずれかに取り込まれる。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【国際調査報告】