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特表2024-528877キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＧメンバー１（ＫＬＲＧ１）枯渇性抗体
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-01
(54)【発明の名称】キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＧメンバー１（ＫＬＲＧ１）枯渇性抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240725BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240725BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240725BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240725BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240725BHJP
A61P 21/02 20060101ALI20240725BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240725BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240725BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240725BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
A61K39/395 N
A61P43/00 105
A61P37/06
A61P37/02
A61P21/02
A61P35/00
C12N15/13
C12N15/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024504840
(86)(22)【出願日】2022-07-26
(85)【翻訳文提出日】2024-02-20
(86)【国際出願番号】 US2022038310
(87)【国際公開番号】W WO2023009498
(87)【国際公開日】2023-02-02
(31)【優先権主張番号】63/225,828
(32)【優先日】2021-07-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/308,222
(32)【優先日】2022-02-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521111504
【氏名又は名称】アブクロ，インク．
【氏名又は名称原語表記】Ａｂｃｕｒｏ， Ｉｎｃ．
【住所又は居所原語表記】９０ Ｂｒｉｄｇｅ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｎｅｗｔｏｎ， ＭＡ ０２４５８， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
(74)【代理人】
【識別番号】100114890
【弁理士】
【氏名又は名称】アインゼル・フェリックス＝ラインハルト
(74)【代理人】
【識別番号】100098501
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 拓
(74)【代理人】
【識別番号】100116403
【弁理士】
【氏名又は名称】前川 純一
(74)【代理人】
【識別番号】100134315
【弁理士】
【氏名又は名称】永島 秀郎
(74)【代理人】
【識別番号】100162880
【弁理士】
【氏名又は名称】上島 類
(72)【発明者】
【氏名】ステファノ ヴィセンゾ ガラ
(72)【発明者】
【氏名】ケネス エヴァン トンプソン
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA22
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ＫＬＲＧ１へ特異的に結合する抗体またはその断片、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）を発現するＴ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを必要とする対象において、当該Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる方法、過剰のＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞と関係する障害を処置することを必要とする対象において当該障害を処置する方法、対象においてがんを処置する方法、対象におけるがんの処置のための補助療法、細胞の混合集団においてＫＬＲＧ１発現細胞を枯渇させる方法、ＫＬＲＧ１発現ＣＤＳエフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させる方法、抗ＫＬＲＧ１抗体の医薬組成物、ならびに抗ＫＬＲＧ１抗体のためのキットに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号１３（ＣＤＲ－Ｌ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域とを含む、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する、抗体またはその断片。
【請求項2】
前記軽鎖可変領域が配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはその断片。
【請求項3】
前記抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその断片。
【請求項4】
前記抗体またはその断片が、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項5】
前記抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１に記載の抗体またはその断片。
【請求項6】
前記抗体またはその断片が、エピトープＰＬＮＦＳＲＩ（配列番号１４）、または少なくとも５個の連続するアミノ酸を含むその断片を特異的に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項7】
前記抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片もしくは派生体を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項8】
前記抗体またはその断片が、ヒト化抗体またはその断片を含む、請求項１または２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項9】
前記ＫＬＲＧ１が、ヒトＫＬＲＧ１またはカニクイザルＫＬＲＧ１を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項10】
ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを必要とする対象において前記細胞を枯渇させる方法であって、前記対象へ、治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を送達し、それによって、前記対象においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを含む、前記方法。
【請求項11】
過剰のＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞と関係する障害を処置することを必要とする対象において前記障害を処置する方法であって、前記対象へ、治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を送達し、それによって、前記対象における前記過剰のＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞を低減させることを含む、前記方法。
【請求項12】
前記障害が、移植性障害である、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記障害が、自己免疫疾患である、請求項１１に記載の方法。
【請求項14】
前記障害が、封入体筋炎（ＩＢＭ）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項15】
がんが、ＫＬＲＧ１を発現するがん細胞を含む、対象における前記がんを処置する方法であって、前記対象へ、治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を送達することを含み、前記対象への前記送達が、前記ＫＬＲＧ１を発現するがん細胞を枯渇させる、前記方法。
【請求項16】
対象におけるがんの処置のための補助療法であって、前記がんがＫＬＲＧ１を発現するか否かに関わらず、前記対象がチェックポイント療法を受けている、前記補助療法であって、前記対象へ、治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を送達することを含み、送達が、前記対象において自己組織を攻撃するＫＬＲＧ１発現病原性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる、前記補助療法。
【請求項17】
細胞の混合集団においてＫＬＲＧ１発現細胞を枯渇させる方法であって、前記ＫＬＲＧ１発現細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、がん細胞、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞を含む、前記方法であって、前記細胞の混合集団へ、治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を送達することを含み、前記送達が、前記細胞の混合集団においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞、ＮＫ細胞、がん細胞、及びこれらの組み合わせを枯渇させる、前記方法。
【請求項18】
ＫＬＲＧ１発現ＣＤ８エフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させるが、ナイーブＴ細胞及び／または調節性Ｔ細胞を相対的に温存する方法であって、対象へ、治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を送達し、それによってＫＬＲＧ１発現ＣＤ８エフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させることを含む、前記方法。
【請求項19】
請求項１～９のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体またはその断片と、医薬として許容され得る担体とを含む、医薬組成物。
【請求項20】
請求項１～９のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体またはその断片と、使用説明書とを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年７月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／２２５，８２８号、及び２０２２年２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／３０８，２２２号の利益を主張し、その内容全体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年７月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／２２５，８２８号、及び２０２２年２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／３０８，２２２号の利益を主張し、その内容全体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
細胞傷害性Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、不適切な細胞損傷を通じて（例えば、自己免疫）、または制御されていない増殖を通じて（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞またはＮＫ細胞を包含する特定の白血病及びリンパ腫）、疾患をもたらし得る。細胞傷害性Ｔ細胞による組織への損傷は、自己免疫疾患、１型糖尿病、実質臓器移植片拒絶反応、及び移植片対宿主病に関与する。細胞傷害性Ｔ細胞またはＮＫ細胞の制御されていない増殖はまた、肝脾Ｔ細胞リンパ腫及びＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫など、特定のＴ細胞白血病及びリンパ腫にも関与する。成熟細胞傷害性Ｔ細胞上に存在することが公知の細胞表面マーカーであるキラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）は、高い殺傷能を有する細胞傷害性Ｔ細胞上に存在することが実証されている（ＷＯ２０１８０５３２６４）。したがって、ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを必要とする対象において、当該細胞を枯渇させるための組成物及び方法に対する必要性が存在する。
【0003】
発明の概要
多くの異なる実施形態のうち、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する抗体及びその断片、ならびに枯渇処置を必要とする対象においてかかる抗体及び断片を使用してＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる方法が、本明細書に開示される。
多くの異なる実施形態のうち、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する抗体及びその断片、ならびに枯渇処置を必要とする対象においてかかる抗体及び断片を使用してＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる方法が、本明細書に開示される。
【0004】
一態様において、本開示は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号１３（ＣＤＲ－Ｌ３）のアミノ酸配列を含む３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域を含む、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する抗体またはその断片に関する。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号５を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号６を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号７を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号６を含む重鎖、及び配列番号７を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、エピトープＰＬＮＦＳＲＩ（配列番号１４）または少なくとも５個の連続するアミノ酸を含むその断片を特異的に結合する。抗体またはその断片は、モノクローナル抗体、またはその断片もしくは派生体であり得る。抗体またはその断片は、ヒト化抗体、またはその断片であり得る。ＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１またはカニクイザルＫＬＲＧ１であり得る。
【0005】
いくつかの態様において、本開示は、ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを必要とする対象において当該細胞を枯渇させる方法に関するものであり、対象へ治療有効量の本明細書に開示される抗体またはその断片を送達し、それによって対象においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを含む。
【0006】
本開示の他の態様は、過剰のＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞と関係する障害を処置することを必要とする対象において、当該障害を処置する方法に関するものであり、対象へ治療有効量の本明細書に開示される抗体またはその断片を送達し、それによってＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞を枯渇させることを含む。障害は、移植障害であり得る。障害は、自己免疫疾患であり得る。障害は、封入体筋炎であり得る。
【0007】
一態様において、本開示は、対象におけるがんを処置する方法であって、当該がんが、ＫＬＲＧ１を発現するがん細胞を含む方法であって、対象へ治療有効量の本明細書に開示される抗体またはその断片を送達することを含む方法であって、対象への当該送達が、ＫＬＲＧ１を発現するがん細胞を枯渇させる方法に関する。
【0008】
別の態様において、本開示は、対象における補助療法を用いたがんの処置であって、（当該がんがＫＬＲＧ１を発現するかどうかに関係なく）、当該対象が、チェックポイント療法を受けている処置であって、当該補助療法が、対象へ治療有効量の本明細書に開示される抗体またはその断片を送達することを含む処置であって、送達が、対象における自己組織を攻撃するＫＬＲＧ１発現病原性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる処置に関する。
【0009】
一態様では、本開示は、細胞の混合集団においてＫＬＲＧ１発現細胞を枯渇させる方法に関し、ＫＬＲＧ１発現細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、がん細胞、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞を含み、細胞の混合集団に、細胞の混合集団においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞、ＮＫ細胞、がん細胞、またはそれらの組み合わせを枯渇させるのに有効な量で、本明細書に開示される抗体またはその断片の治療有効量を送達することを含む。
【0010】
本開示の別の態様は、ＫＬＲＧ１発現ＣＤ８エフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させるが、ナイーブＴ細胞及び／または調節性Ｔ細胞を相対的に温存する方法であって、対象へ、治療有効量の本明細書に開示される抗体またはその断片を送達し、それによってＫＬＲＧ１発現ＣＤ８エフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させることを含む方法に関する。
【0011】
本開示の他の態様は、本明細書に開示される少なくとも１つの抗体またはその断片と、医薬として許容され得る担体とを含む医薬組成物に関する。
【0012】
本開示はまた、本明細書に開示される少なくとも１つの抗体またはその断片及び使用説明書を備えるキットに関する。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】正常脾臓での発現と比較した、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）新生物によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図2】ＮＫ細胞株及びＧ－Ｄ Ｔ細胞株と比較した、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）新生物によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図3】末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）と比較した、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）新生物によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図4】ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）新生物によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図5】菌状息肉症によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図6】健常細胞と比較した、菌状息肉症によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図7】ＫＡＲＰＡＳ－３８４（γ－δＴ細胞株）、ＫＨＹＧ－１（進行性ＮＫ細胞白血病）、及びＭＴＡ（進行性ＮＫ細胞白血病）を含む、Ｔ細胞及びＮＫ細胞リンパ腫細胞株及び白血病細胞株によるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図8】Ｔ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）新生物にわたるヒトＫＬＲＧ１の遺伝子発現を示す。
【図9】カニクイザルにおけるＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図10】封入体筋炎（ＩＢＭ）に罹患している３人の対象におけるＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図11】封入体筋炎（ＩＢＭ）に罹患している３人の対象におけるＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図12】カニクイザルにおけるＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の種々の用量及び投与計画の影響を示す。
【図13】ＩＢＭに罹患している９人の対象（３人の対象からなるコホート３つ）におけるベースラインＣＤ８ ＫＬＲＧ１陽性／ＫＬＲＧ１陰性Ｔ細胞の比率を示す。
【図15】ＩＢＭに罹患している３人の対象における調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図16】ＩＢＭに罹患している９人の対象（３人の対象からなるコホート３つ）におけるＴｒｅｇに対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。アレムツズマブについての比較データも示す。
【図17】ＩＢＭに罹患している９人の対象（各々３人の対象からなるコホート３つ）におけるセントラルメモリーＴ細胞に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。アレムツズマブについての比較データも示す。
【図18】ＡＢＣ００８についての薬物動態データを示す。
【図19】０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０ｍｇ／ｋｇのＡＢＣ００８を受けた９人の対象（各々３人の対象からなるコホート３つ）におけるＡＢＣ００８についての薬物動態データを示す。
【図20A】ＡＢＣ００８を受けたＩＢＭに罹患している３人の対象象についての、経時的な散発性封入体筋炎の身体機能評価（ｓＩＦＡ）スコアを示す。
【図20B】ＡＢＣ００８を受けたＩＢＭに罹患している３人の対象についての経時的な修正されたタイムアップアンドゴー（ｍＴＵＧ）スコアを示す。
【図20C】ＡＢＣ００８を受けたＩＢＭに罹患している３人の対象について、５６日後のｓＩＦＡ、封入体筋炎機能評価尺度（ＩＢＭＦＲＳ）、ｍＴＵＧ、及び徒手筋力テスト（ＭＭＴ１２）スコアの変化を要約する。
【図21】ＣＤ８陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬに対するＡＢＣ００８、フコシル化ＡＢＣ００８（ＡＢＣ１０８）、及びアイソタイプ対照についてのインビトロ力価データを示す。
【図22】ＩＢＭに罹患している１１人の対象におけるベースラインＣＤ８ ＫＬＲＧ１陽性／ＫＬＲＧ１陰性Ｔ細胞比率を示す。
【図24】封入体筋炎（ＩＢＭ）に罹患している３人の対象からなる第１のコホートにおけるＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図25】封入体筋炎（ＩＢＭ）に罹患している３人の対象からなる第２のコホートにおけるＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図26】封入体筋炎（ＩＢＭ）に罹患している５人の対象からなる第３のコホートにおけるＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）Ｔ細胞集団に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。
【図27】ＩＢＭに罹患している３つの対象コホートにおけるＣＤ８ナイーブＴ細胞に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。アレムツズマブについての比較データも示す。
【図28】ＩＢＭに罹患している３つの対象コホートにおけるＣＤ８セントラルメモリーＴ細胞に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。アレムツズマブについての比較データも示す。凡例：円形、コホート１；菱形、コホート２；逆三角形、コホート３；正方形、アレムツズマブ。
【図29】ＩＢＭに罹患している３つの対象コホートにおけるＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。アレムツズマブについての比較データも示す。凡例：円形、コホート１；菱形、コホート２；逆三角形、コホート３；正方形、アレムツズマブ。
【図30】ＩＢＭに罹患している３つの対象コホートにおけるＣＤ８終末分化エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ）に対する抗体ＡＢＣ００８の影響を示す。アレムツズマブについての比較データも示す。
【図31A】ＡＢＣ００８を受けたＩＢＭに罹患している複数の対象についての経時的な封入体筋炎機能評価尺度（ＩＢＭＦＲＳ）スコアを示す。
【図31B】ＡＢＣ００８を受けたＩＢＭに罹患している複数の対象についての経時的な徒手筋力テスト（ＭＭＴ）スコアを示す。
【図31C】ＡＢＣ００８を受けたＩＢＭに罹患している複数の対象についての経時的な修正されたタイムアップアンドゴー（ｍＴＵＧ）スコアを示す。
【発明を実施するための形態】
【0014】
キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ１）は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性を調節することによって共抑制性受容体として機能することができるＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＫＬＲＧ１の細胞内部分は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）介在性シグナル伝達の共抑制に関与する免疫受容体チロシン系抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含有する。ＫＬＲＧ１の細胞外部分は、既知のリガンドがカドヘリンであるＣ型レクチンドメインを含有する。ＫＬＲＧ１リガンドには、Ｅ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、Ｒ－カドヘリン、及びこれらの組み合わせがある。
【0015】
受容体ＫＬＲＧ１は、上皮細胞及び間葉系細胞上のリガンドへ結合するＴ細胞及びＮＫ細胞の細胞表面上に発現する。ヒトにおいて、ＫＬＲＧ１発現は、一般に、免疫系の細胞に限定され、具体的にはＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＮＫ細胞に限定され、これらまでではないにせよ、ＣＤ４陽性Ｔ細胞に限定される。ＫＬＲＧ１発現は、後期分化表現型と関係している。抗原特異的Ｔ細胞が分化するにつれて、細胞傷害性分子の高い発現を獲得することができるため、高い細胞傷害性能力を有することができる。
【0016】
したがって、ＫＬＲＧ１発現（またはＫＬＲＧ１陽性）Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は病原性であり得、それゆえ、細胞枯渇療法のための有利な標的である。例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を有する有効量のＫＬＲＧ１枯渇薬（例えば、ＫＬＲＧ１発現細胞枯渇薬）を必要とする対象へ投与することにより、例えば、自己免疫疾患及び移植障害の場合、健常細胞を損傷する細胞傷害性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を排除することができる、または当該細胞傷害性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の数を低減させることができる。本明細書に開示される抗体及びその断片などのＫＬＲＧ１発現細胞枯渇薬を投与することを含む方法はまた、ＫＬＲＧ１を発現するがん細胞を有する患者を処置する上で有利である。
【0017】
ＫＬＲＧ１陽性細胞の枯渇は、組織試料におけるＫＬＲＧ１細胞またはＫＬＲＧ１陽性細胞の異常な蓄積を有する疾患において望ましいであろう。当該疾患には、成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞の特定のリンパ腫及び白血病、特に、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）、進行性ＮＫ細胞白血病（ＡＮＫＬ）、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）、γ－δＴ細胞リンパ腫（ＧＤＴＣＬ）、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）、進行性ＮＫ細胞白血病（ＡＮＫＬ）、Ｔ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、成熟Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、亜急性脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫（ＳＰＴＣＬ）、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（ＣＴＣＬ）、他に特定されない末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、分類不能Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ－ＵＮ）、及びＴ細胞大顆粒リンパ球性白血病（Ｔ－ＬＧＬＬ）がある。加えて、特定の自己免疫疾患、特に封入体筋炎（ＩＢＭ）、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、多発性硬化症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、口腔扁平苔癬、白斑、シェーグレン症候群、赤芽球癆、再生不良性貧血、１型糖尿病、狼瘡、ループス腎炎、円形脱毛症、及びアジソンについては、ＫＬＲＧ１陽性細胞を枯渇させることも望ましくあり得る。
【0018】
特定の例示的な実施形態は今から、本明細書に開示される抗体、その断片、物質の組成物、キット、ならびに関連する方法及び療法の構造、機能、製造、ならびに使用の原理の全体的な理解を提供するために説明される。当業者は、本明細書に説明される開示が例示的な実施形態であること、及び本開示の範囲が特許請求の範囲によってのみ定義されていることを理解するであろう。１つの例示的な実施形態と関連して示されるまたは説明される特徴は、他の実施形態の特徴と組み合わせられ得る。かかる変更及び変化は、本開示の範囲内に包含されることが企図される。
【0019】
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書における本開示の説明で使用される用語は、具体的な実施形態を説明する目的のためにのみあるのであって、本開示、及び本明細書で説明されるまたは他の方法で提供されるいかなる発明（複数可）の制限となるよう企図するものではない。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書における本開示の説明で使用される用語は、具体的な実施形態を説明する目的のためにのみあるのであって、本開示、及び本明細書で説明されるまたは他の方法で提供されるいかなる発明（複数可）の制限となるよう企図するものではない。
【0020】
アミノ酸は、本明細書において、確立された用法に従って、一文字表記または三文字表記のいずれかによって表される。
【0021】
本明細書で引用される全ての公表物、特許出願、特許、特許公開、及び他の参考文献は、参照が提示される文及び／または段落に関連する教示について、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
【0022】
文脈が別段明らかに示さない限り、本開示及び添付の特許請求の範囲の説明で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数形も同様に含むことが意図される。
【0023】
本明細書で使用されるとき、「及び／または」は、関連する列挙された項目のうちの１つ以上のいかなる及び全ての可能な組み合わせ、ならびに選択肢（「または」）で解釈されるときの組み合わせの欠如を指し、これらを包含する。
【0024】
本明細書で使用される「約」及び「おおよそ」という用語は、ポリペプチドの量、用量、時間、温度、酵素活性、または他の生物学的活性などの測定可能な値を指す場合、指定された量の±２０％、±１０％、±５％、±１％、＋０．５％、またはさらには±０．１％の変化を包含することを意味する。
【0025】
「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という移行句は、請求項の範囲が、当該請求項において列挙された指定の材料またはステップ、及び特許請求された本発明の「基本的なかつ新規の特性（複数可）に実質的に影響を及ぼさないもの」を包含すると解釈されることを意味する。
【0026】
本開示のポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列に適用される場合、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語（及び文法上の異形体）は、列挙される配列（例えば、配列番号）と、ポリペプチドの機能が実質的に変化しないように、列挙される配列のＮ末端及び／またはＣ末端上への合計１０個以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加のアミノ酸との両方からなるポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。合計１０個以下の追加のアミノ酸は、両端の追加のアミノ酸を一緒に加算した総数を含むことができる。
【0027】
本明細書で使用される「有効量」は、所望の効果を提供する量である。「有効量」という用語は、ＫＬＲＧ１の活性を低下させて、患者の症状の改善をもたらすか、または所望の生物学的転帰、例えば、ＫＬＲＧ１の活性の低下、リンパ球共抑制応答の調節、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化の上昇もしくは低下、または細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞によるＩＦＮγの放出の増大もしくは減少を達成するのに十分な、抗体または抗原結合断片の投与量または量を指す。
【0028】
本明細書で使用される「治療有効量」は、何らかの臨床上の改善または利益を対象へ提供する量である。言い換えれば、「治療有効」量は、対象における少なくとも１つの臨床症状において何らかの緩和、軽減、または減少をもたらす量である。当業者であれば、何らかの利益が対象に提供される限り、治療効果が完全または治癒的である必要はないことを理解するであろう。
【0029】
「処置する」、「処置すること」、または「の処置」という用語は、対象の容態の重症度が低減されるか、または少なくとも部分的に改善もしくは修正されること、及び少なくとも１つの臨床症状の何らかの緩和、軽減、または低減が達成されることを意図する。
【0030】
Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞ならびに／またはＫＬＲＧ１発現がん細胞に関して本明細書で使用される「枯渇させる」という用語は、対象におけるまたは試料中の当該細胞の数の測定可能な減少を指す。低減は、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれより大であり得る。特定の実施形態において、当該用語は、対象におけるまたは試料中のＴ細胞及び／またはＮＫ細胞ならびに／またはＫＬＲＧ１発現がん細胞の数が検出可能な限界を下回る量まで減少することを指す。
【0031】
「自己免疫障害」という用語は、自己免疫反応と関係するいかなる障害も指す。例としては、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、狼瘡、及び炎症性腸疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【0032】
本明細書で使用される「がん」という用語は、細胞のいかなる悪性異常成長も指す。例としては、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、膵癌、結腸癌、黒色腫、悪性黒色腫、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、神経膠腫、神経膠芽腫、肝癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌腫、乳癌腫、卵巣癌腫、肺癌、小細胞肺癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣癌、膀胱癌腫、膵癌腫、胃癌、結腸癌腫、前立腺癌腫、腎尿路生殖器癌、甲状腺癌、食道癌、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、悪性膵インスリノーマ、悪性カルチノイド癌、絨毛癌、菌状息肉症、悪性高カルシウム血症、子宮頚部過形成、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、神経芽腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性多血症、本態性血小板増加症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨肉腫、原発性マクログロブリン血症、及び網膜芽細胞腫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、がんは、腫瘍形成がんの群から選択される。当業者は、どのがんがその群の範囲内にあるかを認識するであろう。
【0033】
がんの別の例は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。
【0034】
本明細書で使用される場合、「移植」という用語は、その元の天然の部位または宿主から取り出され、同じ人間または別個の個体における新たな位置へ移される、組織の切片または完全な器官を指す。移植のレシピエントを処置するための方法は、特に哺乳動物において、器官または組織の移植片拒絶反応を阻害する方法に関する。より具体的には、本開示は、移植片拒絶反応を阻害することを必要とする哺乳動物における移植拒絶反応を阻害する方法に関し、この方法は、かかる哺乳動物へ、ＫＬＲＧ１を特異的に結合する抗体及びその断片を含む、移植拒絶反応阻害量の抗ＫＬＲＧ１結合薬を投与することを含むことができる。
【0035】
本明細書で使用する場合の「単離された」という用語は、細胞材料、ウイルス材料、及び／または培養培地（組換えＤＮＡ技法によって産生される場合）、または化学物質前駆体もしくは他の化学物質（化学的に合成される場合）を実質的に含まないポリペプチドを指す。さらに、「単離された断片」は、断片として天然に存在せず、天然状態では認められないポリペプチドの断片である。「単離された」とは、調製物が技術的に純粋（均一）であることを意味するのではなく、ポリペプチドまたは核酸を、意図した目的のために使用することができる形態で提供するのに十分に純粋であることを意味する。したがって、「単離された」という用語は、その天然環境を実質的に含まない分子を指す。例えば、単離されたタンパク質は、細胞材料またはそれが由来する細胞源もしくは組織源からの他のタンパク質を実質的に含まない。「単離された」という用語はまた、単離されたタンパク質が、医薬組成物として投与されるのに十分に純粋であるか、またはおおよそ少なくとも７０～８０％（ｗ／ｗ）純粋である、より好ましくはおおよそ少なくとも８０～９０％（ｗ／ｗ）純粋である、さらにより好ましくはおおよそ９０～９５％純粋である、及び最も好ましくはおおよそ少なくとも９５％、おおよそ少なくとも９６％、おおよそ少なくとも９７％、おおよそ少なくとも９８％、おおよそ少なくとも９９％、もしくはおおよそ少なくとも１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物も指す。
【0036】
ポリペプチドに適用される場合、本明細書で使用される「断片」という用語は、参照のポリペプチドまたはアミノ酸配列と比較して長さが短く、かつ参照のポリペプチドまたはアミノ酸配列と同一またはほぼ同一（例えば、おおよそ９０％、おおよそ９２％、おおよそ９５％、おおよそ９８％、おおよそ９９％同一）の連続したアミノ酸からなるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、及び／またはそれからなる、アミノ酸配列を指す。本開示によるかかるポリペプチド断片は、適宜、その構成要素である大きめのポリペプチドに含まれ得る。いくつかの実施形態において、かかる断片は、本開示によるポリペプチドまたはアミノ酸配列の少なくとも約４、約５、約６、約８、約１０、約１２、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約１００、約１５０、約２００、またはそれより多数の連続したアミノ酸の長さを有するペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、及び／またはそれからなることができる。
【0037】
本明細書で使用されるとき、「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、別途示されない限り、互換的に使用され、ペプチド及びタンパク質の両方を包含する。
【0038】
本明細書で使用される融合タンパク質は、天然では一緒に融合しているのが見つかっていない２つ（またはそれより多数）の異なるポリペプチドをコードする２つの異種ヌクレオチド配列またはその断片が、正しい翻訳リーディングフレームで一緒に融合する場合に生成されるポリペプチドを指す。例示的な融合ポリペプチドとしては、グルタチオン－トランスフェラーゼ、マルトース結合タンパク質、またはレポータータンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質、β－グルクロニダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼなど）、赤血球凝集素、ｃーＭｙｃ、ＦＬＡＧエピトープなどの全部または一部に対する本開示のポリペプチド（またはその断片）の融合体が挙げられる。
【0039】
本明細書で使用される「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを含む、全てのタイプの免疫グロブリンを指す。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、ヒト、ヒト化を含むいかなる起源種でもあり得るか、あるいはキメラ抗体であり得る。抗体は、例えば、米国特許第４，４７４，８９３号または米国特許第４，８１６，５６７号に開示される方法によって生成される組換えモノクローナル抗体であり得る。抗体はまた、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示される方法によって、化学的に構築することもできる。
【0040】
本明細書で使用する「抗原結合ドメイン」、「抗原結合断片」、及び「結合断片」という用語は、抗体と抗原との間の特異的結合を担うアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。抗原が大きい事例では、抗原結合ドメインは、抗原の一部へのみ結合し得る。抗原結合ドメインとの特異的相互作用を担う抗原分子の一部は、「エピトープ」または「抗原決定基」と称される。
【0041】
「ＫＬＲＧ１と関係する障害」という句は、本明細書で使用される場合、ＫＬＲＧ１タンパク質及び／またはＫＬＲＧ１の発現が、疾患、障害、または容態における原因、病理的性質、副作用、症状、または他の態様において役割を担っているいかなる疾患、障害、または容態も指す。かかる障害の例としては、自己免疫障害（例えば、封入体筋炎（ＩＢＭ）、多発性硬化症、及び関節リウマチ）、移植障害、１型糖尿病、及びがん（例えば、黒色腫、前立腺癌、ならびに特定の白血病およびリンパ腫、例えば、成熟Ｔ及びＮＫ細胞リンパ腫ならびにＴ細胞大顆粒リンパ球性白血（ＴーＬＧＬＬ））が挙げられるが、これらに限定されない。ＫＬＲＧ１と関係する障害の他の例としては、微生物（例えば、細菌）、ウイルス（例えば、インフルエンザなどの全身性ウイルス感染症、ヘルペスまたは帯状疱疹などのウイルス性皮膚疾患）、または寄生虫による感染が挙げられるが、これらに限定されない。
【0042】
ＫＬＲＧ１と関係する障害の別の例は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。
【0043】
本明細書で使用する「ＫＬＲＧ１活性」という用語は、ＫＬＲＧ１と関係する１つ以上のリンパ球共抑制性活性を指す。例えば、ＫＬＲＧ１活性は、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化の調節を意味し得る。
【0044】
「調節する」という用語及びその同系語は、抗ＫＬＲＧ１抗体との相互作用に起因する、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化と関係するＫＬＲＧ１の活性の低下または上昇を指すのであって、その低下または上昇は、同じ抗体の不在下でのＫＬＲＧ１の活性と比較される。活性の低下または上昇は、好ましくは、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれより大である。ＫＬＲＧ１活性が低下する場合、「調節性の」及び「調節する」という用語は、「抑制性の」及び「抑制する」という用語と互換性がある。ＫＬＲＧ１活性が上昇する場合、「調節性の」及び「調節する」という用語は、「活性化している」及び「活性化する」という用語と互換性がある。
【0045】
抗体及び組成物
本明細書に説明する抗体などの抗体は、免疫系において少なくとも２つの機能を呈する。抗体は、抗原、例えばＫＬＲＧ１を結合し、補体系の活性化、またはマクロファージなどの食細胞にある細胞受容体（Ｆｃ受容体）、及び／またはＮＫ細胞、白血球、血小板、及び胎盤栄養芽細胞などの他の免疫細胞にある細胞受容体（Ｆｃ受容体）との相互作用、を含むがこれらに限定されない免疫グロブリンエフェクター機能を介して、抗原を発現する細胞を含むこれらの抗原を排除する。ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合するが、ＫＬＲＧ１へのＥ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、またはＲーカドヘリンの結合と競合せず、かつ対象へ投与されるとＫＬＲＧ１を発現する細胞を枯渇させる、抗体またはその断片が本明細書に開示される。
本明細書に説明する抗体などの抗体は、免疫系において少なくとも２つの機能を呈する。抗体は、抗原、例えばＫＬＲＧ１を結合し、補体系の活性化、またはマクロファージなどの食細胞にある細胞受容体（Ｆｃ受容体）、及び／またはＮＫ細胞、白血球、血小板、及び胎盤栄養芽細胞などの他の免疫細胞にある細胞受容体（Ｆｃ受容体）との相互作用、を含むがこれらに限定されない免疫グロブリンエフェクター機能を介して、抗原を発現する細胞を含むこれらの抗原を排除する。ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合するが、ＫＬＲＧ１へのＥ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、またはＲーカドヘリンの結合と競合せず、かつ対象へ投与されるとＫＬＲＧ１を発現する細胞を枯渇させる、抗体またはその断片が本明細書に開示される。
【0046】
抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）は、標的細胞を殺滅する、従って枯渇させるための３つの周知の抗体介在性機序である。
【0047】
機序または理論に拘束されることを望むものではないが、抗体の抗原結合領域（可変ドメイン）を経た標的細胞への抗体の結合は、抗体の定常領域のＦｃ領域（複数可）を経た免疫エフェクターへの標的細胞の結合を提供することができる。ＡＤＣＣにおいて、典型的には、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ＮＫ細胞上のＦｃγＲＩＩＩａ受容体へ結合し、次いで、標的細胞を殺滅することができる。ＡＤＣＰにおいて、典型的には、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、マクロファージ細胞上のＦｃγＲＩＩａ受容体へ結合し、次いで、標的細胞を貪食及び殺滅することができる。免疫複合体Ｃ１ｑが標的細胞へ結合した抗体のＦｃ領域へ結合すると、ＣＤＣが誘導され、標的細胞の表面内へと孔を開ける膜攻撃複合体の形成の引き金となる。
【0048】
したがって、抗体の定常領域は、補体の活性化及びＦｃ受容体との相互作用を含むエフェクター機能に介在し、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、またはＣＤＣなどの効果を可能にする。ＣＨ１ドメインもＣκドメインまたはＣλドメインもエフェクター機能に介在せず、このことは、ＦａｂがＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、またはＣＤＣを示さない理由である。
【0049】
Ｆｃγ受容体には、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の３つのクラスがある。ＦｃγＲＩのみが単量体形態でＩｇＧを結合することができ、免疫グロブリン受容体ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩと比較してＦｃγＲＩ受容体の親和性は高い。高親和性受容体ＦｃγＲｌは、単球、マクロファージ、及び樹状細胞上で構成性発現しており、発現は、好中球及び好酸球上で誘導されることができる。したがって、これらの細胞は、標的細胞へ結合した、Ｆｃ領域を含む抗体またはその抗体断片を通じて、標的細胞へ動員されることができる。
【0050】
ＦｃγＲＩＩａ受容体は、マクロファージ、単球、及び好中球上に認められ、ＦｃγＲＩＩｂ受容体は、Ｂ細胞、マクロファージ、マスト細胞、及び好酸球上に認められる。ＦｃγＲＩＩＩａ受容体は、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球、単球、及びＴ細胞上に認められ、ＦｃγＲＩＩＩｂ受容体は、好中球上で高水準で発現する。ここでもまた、これらの種々の細胞型は、標的細胞へ結合したｆｃ領域を含む抗体またはその抗体断片を通じて標的細胞へ結合した抗体によって、標的細胞へ動員されることができる。
【0051】
したがって、いくつかの態様において、本明細書に開示される抗体およびその抗原結合断片を含む、ＫＬＲＧ１結合分子は、抗体定常ドメインまたはその断片と一緒にＫＬＲＧ１抗原結合部位を含む。このことは、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、またはＣＤＣを含むがこれらに限定されないエフェクター機能に介在するように機能することができる。いくつかの態様において、ＫＬＲＧ１結合分子は、国際特許出願公開第ＷＯ０２／４４２１５号に説明されているように、抗体の抗原結合部位及びペプチド結合Ｆｃ－エフェクター分子からなるか、またはこれらを含む。
【0052】
免疫グロブリンとしても公知のインタクトな抗体は、典型的には、各々おおよそ２５キロダルトン（ｋＤａ）の２つの軽（Ｌ）鎖と、各々おおよそ５０ｋＤａの２つの重（Ｈ）鎖とから構成される四量体グリコシル化タンパク質である。抗体がグリコシル化され得る例示的な炭水化物部分は、フコース部分である。λ鎖及びκ鎖として示される２つのタイプの軽鎖が、抗体において認められる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、５つの主要なクラス、すなわち、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、及びＭに割り当てられることができ、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２へとさらに分けられ得る。
【0053】
異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び３次元配置は、当該技術分野で周知である。簡潔に述べると、各軽鎖は、Ｎ末端可変ドメイン（ＶＬ）及び定常ドメイン（ＣＬ）から構成されることができる。各重鎖は、Ｎ末端可変ドメイン（ＶＨ）、３つまたは４つの定常ドメイン（ＣＨ）、及びヒンジ領域から構成することができる。ＶＨに最も近位のＣＨドメインは、ＣＨ１と呼ばれる。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）と呼ばれる比較的保存された配列の４つの領域からなるか、またはそれらで構成され、ＣＤＲと呼ばれる高度可変配列の３つの領域のための足場を形成する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を担う残基のほとんどを含有することができる。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と称される。重鎖のＣＤＲ成分は、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３と称されるのに対し、軽鎖のＣＤＲ成分は適宜、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３と呼ばれる。ＣＤＲ３、及び特Ｈ３は、抗原結合ドメイン内の分子多様性の最大の源である。Ｈ３は、例えば、２６を超える２つのアミノ酸残基のように短くあることができる。
【0054】
本開示の範囲内に含まれる抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、及びＦｖ断片；ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体；ヴァクシボディ（ｖａｃｃｉｂｏｄｙ）、直鎖状抗体；一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多特異的抗体が挙げられる。かかる断片は、既知の技法によって製造することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体分子のペプシン消化によって製造することができ、Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成することができる。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーは、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ容易な特定を可能にするように構築することができる（Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８９ Ｄｅｃ ８；２４６（４９３５）：１２７５－１２８１を参照されたい）。
【0055】
Ｆａｂ断片（抗原結合断片）、またはＦａｂは、定常領域間のジスルフィド結合によって共有結合したＶＨ－ＣＨ１及びＶＬ－ＣＬのドメインからなるか、またはそれらを含む。当業者に既知であるが、Ｆａｂ（大きさ約５０ｋＤａ）は、分子内ジスルフィド結合によって結合したＶＨ，ＣＨ１及びＶＬ，ＣＬ領域からなるか、またはそれらで構成される、ＩｇＧ及びＩｇＭから製造される一価の断片である。宿主細胞において共発現させたときにＦｖ中の非共有結合したＶＨ及びＶＬのドメインが解離する傾向を克服するために、一本鎖（ｓｃ）Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を構築することができる。ｓｃＦｖにおいて、可撓性のかつ十分に長いポリペプチド、ＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端へ、またはＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端へ、のいずれかで連結する。最も一般的には、１５残基（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチド（配列番号１５）は、リンカーとして使用することができるが、他のリンカーも当該技術分野で公知である。
【0056】
抗体多様性は、可変領域をコードする複数の生殖系列細胞遺伝子と種々の体細胞事象との組合せ集合の結果である。体細胞事象には、完全なＶＨ領域を作製するための多様部（Ｄ）及び結合部（Ｊ）の遺伝子セグメントとの可変部遺伝子セグメントの組換え、ならびに完全なＶＬ領域を作製するための可変部及び結合部の遺伝子セグメントの組換えが含まれ得る。組換えプロセス自体は不正確であり、Ｖ（Ｄ）Ｊ接合部でアミノ酸の喪失または付加をもたらす。これらの多様性の機序は、抗原曝露に先立って発生中のＢ細胞において生じる。抗原刺激後、Ｂ細胞内で発現した抗体遺伝子は体細胞突然変異を起こし得る。
【0057】
Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．，１９９３によると、生殖系列細胞遺伝子セグメントの推定数、これらのセグメントのランダムな組換え、及びランダムＶＨ－ＶＬ対合に基づいて、最大おおよそ１．６×１０７個の異なる抗体を製造することができる。Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ，２ｎｄ ｅｄ．，ｅｄｓ．Ｊｏｎｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９５によって裏付けられるように、抗体多様性に寄与する他のプロセス（体細胞変異など）を考慮に入れると、おおよそ１×１０１０個以上の異なる抗体が潜在的に生成され得ると考えられる。抗体の多様性に多くのプロセスが関与するために、独立して生成された抗体がＣＤＲならびに重鎖及び軽鎖可変領域において同一のアミノ酸配列を有する可能性はほとんどない。
【0058】
本開示は、細胞表面ＫＬＲＧ１を発現する細胞を枯渇させる上で有効である、新規の可変重鎖及び完全重鎖配列を提供する。ＣＤＲを担持するための足場構造は、一般に、抗体の重鎖もしくは軽鎖またはその一部分であり得るが、それに限定されず、ＣＤＲは、天然に存在するＶＨ及びＶＬのＣＤＲに対応する位置に位置する。免疫グロブリン可変ドメインの構造及び位置は、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎｏ．９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載されているように決定することができる。
【0059】
特定の実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号１３（ＣＤＲ－Ｌ３）の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。これらの態様のいくつかの態様において、抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、及び配列番号５を含む軽鎖可変領域を含む。これらの実施形態のいくつかの態様において、抗体またはその断片は、配列番号６を含む重鎖を含む。あるいは、または加えて、抗体またはその断片は、配列番号７を含む軽鎖を含む。これらの実施形態のより具体的な態様において、抗体またはその断片は、配列番号６を含む重鎖、及び配列番号７を含む軽鎖を含む。
【表1】
【表2】
【0060】
いくつかの実施形態において、開示される抗体またはその断片が結合するＫＬＲＧ１は、ヒトＫＬＲＧ１またはカニクイザルＫＬＲＧ１であり得る。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、少なくとも５個の連続するアミノ酸を含むエピトープＰＬＮＦＳＲＩ（配列番号１４）またはその断片を特異的に結合することができる。
【0061】
いくつかの実施形態において、抗体は、抗体アミノ酸配列が、配列番号４、５、６、または７と少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれを超えて同一である配列を含む限り、結合の特異性及び／またはＫＬＲＧ１発現細胞枯渇薬である能力を保有すると予想することができる。これらの実施形態のいくつかの態様において、抗体またはその断片は、配列番号８～１３の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを保有する。これらの態様の各々において、重鎖可変領域は、配列番号４、及び配列番号１１～１３の軽鎖ＣＤＲを含む。同一性の百分率は、例えば、Ａｌｔｓｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０に記載されるＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）などの標準的な整列アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４－４５３のアルゴリズム、またはＭｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１－１７のアルゴリズムによって決定することができる。Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１－１７。
【0062】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、モノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体またはその断片は、キメラ抗体またはその断片を含む。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体またはその断片は、ヒト化抗体、またはその断片を含む。
【0063】
いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号１３（ＣＤＲ－Ｌ３）の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。これらの実施形態のいくつかの態様において、モノクローナル抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、及び配列番号５を含む軽鎖可変領域を含む。これらの実施形態のいくつかの態様において、モノクローナル抗体またはその断片は、配列番号６を含む重鎖を含む。これらの実施形態のいくつかの態様において、モノクローナル抗体またはその断片は、配列番号７を含む軽鎖を含む。これらの実施形態のいくつかのより具体的な態様において、モノクローナル抗体またはその断片は、配列番号６を含む重鎖、及び配列番号７を含む軽鎖を含む。
【0064】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖、またはそれとおおよそ９０％の配列同一性、例えば、それと少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％同一の配列同一性を有する配列、ならびに軽鎖ＣＤＲ配列番号１１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号１３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列の少なくとも５０個の連続するアミノ酸を含む重鎖、または当該連続するアミノ酸と、例えば、少なくとも約１００個もしくは約１５０個もしくは約２００個もしくはそれより多数の連続するアミノ酸とおおよそ少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖を含む。
【0065】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、配列番号７のアミノ酸配列またはそれとを含むおおよそ９０％の配列同一性、例えば、それと少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％同一の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号７のアミノ酸配列の少なくとも５０個の連続するアミノ酸を含む軽鎖、または当該連続するアミノ酸と、例えば、少なくとも約１００個もしくは約１５０個もしくは約２００個もしくはそれより多数の連続するアミノ酸とおおよそ少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖を含む。
【0066】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号４を含む重鎖可変領域、配列番号６のアミノ酸配列またはそれとおおよそ少なくとも９０％の配列同一性を有する、例えば、少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％同一の配列を含む重鎖を含み、及び配列番号７のアミノ酸配列、またはそれとおおよそ少なくとも９０％の配列同一性を有する、例えば、少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％同一の配列を含む軽鎖を含む。
【0067】
ＫＬＲＧ１発現細胞の枯渇
処置を必要とする対象においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる方法が本明細書に開示される。本明細書に提供される方法は、処置を必要とする対象へ、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する、有効量の本明細書に開示されているものなどの抗体またはその断片などのＫＬＲＧ１枯渇薬を送達し、それにより対象においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞を枯渇させることを含む。
処置を必要とする対象においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる方法が本明細書に開示される。本明細書に提供される方法は、処置を必要とする対象へ、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する、有効量の本明細書に開示されているものなどの抗体またはその断片などのＫＬＲＧ１枯渇薬を送達し、それにより対象においてＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞を枯渇させることを含む。
【0068】
処置を必要とする対象における過剰の及び／または望ましくないＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞と関係する障害を処置する方法であって、対象へ、治療有効量のＫＬＲＧ１枯渇薬（例えば、上述に開示される抗ＫＬＲＧ１抗体）を送達することを含む方法もまた本明細書に開示される。ＫＬＲＧ１枯渇薬は、ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞を枯渇させることができ、対象への送達は、過剰のまたは望ましくないＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞を枯渇させる。
【0069】
本方法のいくつかの実施形態において、障害は、移植関連障害であり得、対象への送達は、対象における移植された組織を攻撃するＫＬＲＧ１発現病原性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる。本方法のいくつかの実施形態において、障害は、対象への送達が対象における自己組織を攻撃するＫＬＲＧ１発現病原性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させる、自己免疫疾患（例えば、封入体筋炎）であり得る。
【0070】
対象におけるがんを処置する方法であって、がんがＫＬＲＧ１を発現するがん細胞を含む方法もまた本明細書に開示される。この方法は、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する、治療有効量の本明細書に開示される抗体またはその断片などのＫＬＲＧ１枯渇薬を対象へ送達することを含むことができる。
【0071】
成熟細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞上に存在することが公知の細胞表面マーカーであるＫＬＲＧ１は、特定の成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞リンパ腫及び白血病にもまた存在する（実施例１～８を参照されたい）。本明細書に記載の処置方法は、他の特定の成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞リンパ腫／白血病の中でも、ＫＬＲＧ１枯渇薬が進行性ＮＫ細胞白血病（ＡＮＫＬ）、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＫ）、γ－δＴ細胞リンパ腫の処置において有用であり得るという発見に関する。例えば、処置方法は、本明細書に記載の抗体またはその断片を含む，有効量のＫＬＲＧ１枯渇薬（例えば、ＫＬＲＧ１発現細胞枯渇薬）を投与することを必要とする対象へ、それを投与することを含むことができる。加えて、本明細書に記載の抗体またはその断片の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、新生物のＴ細胞またはＮＫ細胞の数を排除するまたは低減させることができる。本明細書に開示されるＡＤＣは、以下に記載されるように、毒性薬または別の治療薬を含み得る。
【0072】
いくつかの実施形態において、ＫＬＲＧ１を発現する細胞の増殖を包含する特定の白血病及びリンパ腫が処置される。ＫＬＲＧ１は、通常、Ｔ細胞及びＮＫ細胞、特に成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞の亜集団において発現する。いくつかの血液学的新生物は、成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖を包含しているので、これらの腫瘍細胞は、ＫＬＲＧ１をしばしば発現する。処置され得る例示的な白血病及びリンパ腫としては、Ｔ細胞性前リンパ性白血病、Ｔ細胞性大顆粒リンパ球性白血病、ＮＫ細胞の慢性リンパ増殖異常症、進行性ＮＫ細胞白血病、小児期の全身性ＥＢＶ陽性Ｔ細胞リンパ腫、種痘様水疱症様リンパ増殖異常症、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、単一型上皮向性腸管Ｔ細胞リンパ腫、くすぶり型と予後不良因子とがない慢性型の消化管Ｔ細胞リンパ増殖異常症、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉症、セザリー症候群、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖異常症、リンパ腫様丘疹症、原発性皮膚未分化大細胞型リンパ腫、原発性皮膚γ－δＴ細胞リンパ腫、原発性皮膚ＣＤ８陽性進行性表皮向性細胞傷害性Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚末端型ＣＤ８陽性Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚ＣＤ４陽性小型／中型Ｔ細胞リンパ増殖異常症、末梢Ｔ細胞リンパ腫の非特定型、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ＴＦＨ表現型を有する結節性末梢Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ１陽性未分化大細胞型リンパ腫、ＡＬＫ１陰性未分化大細胞型リンパ腫、及び乳房インプラント関連未分化大細胞型リンパ腫が挙げられる。
【0073】
特に、進行性ＮＫ細胞白血病（ＡＮＫＬ）及びＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）は、ある範囲の疾患を構成し得かつ本明細書に開示される抗体の投与によって処置され得る関連障害である。いくつかの肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）がγ／δＴ細胞受容体を発現する場合、ＨＳＴＣＬ及びＨＳＴＣＬと重積するγ－δＴ細胞リンパ腫（ＧＤＴＣＬ）もまた、本明細書に開示される抗体及び方法を使用して処置され得る。
【0074】
チェックポイント療法を受けている対象など、対象におけるがんの処置のための補助療法が本明細書に開示される。補助療法は、がんがＫＬＲＧ１を発現するか否かに関わらず行うことができる。補助療法は、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する、抗体またはその断片など、治療有効量のＫＬＲＧ１枯渇薬を対象へ送達することを含むことができる。対象への送達は、対象における自己組織を攻撃するＫＬＲＧ１発現病原性Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることによって、ＫＬＲＧ１活性を変調することができる。
【0075】
細胞の混合集団においてＫＬＲＧ１発現細胞を枯渇させる方法が本明細書に開示される。ＫＬＲＧ１発現細胞は、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞及び／またはがん細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞を含むことができる。この方法は、ＫＬＲＧ１へ特異的に結合しかつＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞及び／またはがん細胞を枯渇させる、抗体またはその断片など、有効量のＫＬＲＧ１枯渇薬を細胞の混合集団へ送達し、それによって細胞の混合集団におけるＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞及び／またはがん細胞を枯渇させることを含むことができる。
【0076】
ナイーブＴ細胞及び／または調節性Ｔ細胞を相対的に温存しながらＫＬＲＧ１発現ＣＤ８エフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させる方法が、本明細書に開示される。この方法は、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する治療有効量の抗体またはその断片を対象へ送達し、それによってＫＬＲＧ１発現ＣＤ８エフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させることを含むことができる。
【0077】
ＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を選択的に枯渇させることを必要とする対象において、当該細胞を選択的に枯渇させる方法が、本明細書に開示される。この方法は、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインへ特異的に結合する、治療有効量の抗体またはその断片を対象へ送達し、それによって対象におけるＫＬＲＧ１発現Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を枯渇させることを含むことができる。
【0078】
ＫＬＲＧ１発現細胞の枯渇のための手段としての免疫毒素
いくつかの態様において、本開示によって提供される抗体及び／またはその抗原結合断片は、毒性薬へ結合しており、したがって、標的細胞、例えば、細胞表面ＫＬＲＧ１を発現する病原性細胞及び／またはがん細胞を枯渇させるために、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、またはＣＤＣにおける内在性エフェクター細胞に必ずしも依存しない。
いくつかの態様において、本開示によって提供される抗体及び／またはその抗原結合断片は、毒性薬へ結合しており、したがって、標的細胞、例えば、細胞表面ＫＬＲＧ１を発現する病原性細胞及び／またはがん細胞を枯渇させるために、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、またはＣＤＣにおける内在性エフェクター細胞に必ずしも依存しない。
【0079】
１つ以上の細胞毒素を含む免疫複合体は、「免疫毒素」と称される。細胞毒性のある作用薬、薬物、またはこれらに類するものへ結合した抗体はまた、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）としても公知である。免疫複合体は、抗体薬物複合体が内在化し分解されかつ、放出された毒素による細胞殺滅を誘導するのに十分な期間の半減期を有し得る。細胞毒素または細胞毒性薬には、細胞に対して有害である（例えば、細胞を殺滅する）いずれかの作用薬を含むことができる。本開示の免疫複合体を形成するための適切な細胞毒性作用薬としては、タキソール、ツブリシン、デュオスタチン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、メイタンシンまたはその類似体もしくは誘導体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン；カリケアマイシンまたはその類似体もしくは誘導体、代謝拮抗薬（メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５－フルオロウラシル、デカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、クラドリビンなど）、アルキル化薬（メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、及びカルボプラチンなどの他の白金誘導体；ならびにデュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ＣＣ－１０６５（別名、ラケルマイシン）、またはＣＣ－１０６５の類似体もしくは誘導体）、ドラスタチン、アウリスタチン、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、インドリノベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）、またはその類似体、抗生物質（ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、ミトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）など）、ジフテリア毒素及び関連分子（ジフテリアＡ鎖及びその活性断片ならびに複合分子など）などの抗有糸分裂薬（例えば、チューブリンターゲティング薬）；リシン毒素（リシンＡまたは脱グリコシル化リシンＡ鎖毒素など）、コレラ毒素、志賀様毒素（ＳＬＴ－Ｉ、ＳＬＴ－ＩＩ、ＳＬＴ－ＩＩＶ）、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ダイズＢｏｗｍａｎ－Ｂｉｒｋプロテアーゼ阻害薬、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、アロリン、サポリン、モデシン、ゲラニン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害薬、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、及びエノマイシン毒素が挙げられる。他の適切な結合分子としては、ＣＬＩＰ、マガイニン２、メリチン、セクロピン、及びＰ１８などの抗菌性／溶解性ペプチド、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、ＤＮアーゼＩ、ぶどう球菌エンテロトキシンＡ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリア毒素、ならびにシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素が挙げられる。
【0080】
補足的治療薬
本開示の抗体であって、その断片及びその複合体を含む抗体は、任意選択的に、他の治療薬と併せて患者へ送達することができる。追加の治療薬は、本開示の抗体と併行して送達することができる。本明細書で使用されるとき、「併行して」という語は、併用効果を生み出すのに十分に近い時間を意味する（すなわち、併行してというのは、同時であり得るか、または、併行してというのは、互いの前または後の短い期間内に発生する２つ以上の事象であり得る）。特定の実施形態において、他の治療薬は、ＡＤＣを形成するために、本明細書に開示される抗体または断片へ結合させることができる。
本開示の抗体であって、その断片及びその複合体を含む抗体は、任意選択的に、他の治療薬と併せて患者へ送達することができる。追加の治療薬は、本開示の抗体と併行して送達することができる。本明細書で使用されるとき、「併行して」という語は、併用効果を生み出すのに十分に近い時間を意味する（すなわち、併行してというのは、同時であり得るか、または、併行してというのは、互いの前または後の短い期間内に発生する２つ以上の事象であり得る）。特定の実施形態において、他の治療薬は、ＡＤＣを形成するために、本明細書に開示される抗体または断片へ結合させることができる。
【0081】
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド及びテニポシド）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＣ））、酵素（例えば、Ｌ－アスパラギナーゼ）、生物学的応答修飾因子（例えば、インターフェロン－α）、白金配位錯体（例えば、シスプラチン及びカルボプラチン）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、置換尿素（例えば、ヒドロキシ尿素）、メチルヒドラジン誘導体（例えば、プロカルバジン（Ｎ－メチルヒドラジン，ＭＨ））、副腎皮質抑制薬（例えば、ミトタン（ｏ，Ｐ’－ＤＤＤ）及びアミノグルテチミド）、副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）、プロゲスチン（例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、及び酢酸メゲストロール）、エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオール）、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）、アンドロゲン（例えば、テストステロンプロピオナート及びフルオキシメステロン）、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド）、及び 生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン類似体（例えば、ロイプロリド）などの抗がん薬と併せて投与することができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＶＥＧＦに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（アバスチン）、ラニビズマブ（ルセンティス））、及び血管新生の他のプロモーター（例えば、ｂＦＧＦ、アンギオポイエチン１）、α－ｖ／β－３血管インテグリンに対する抗体（例えば、ビタキシン）、アンギオスタチン、エンドスタチン、ダルテパリン、ＡＢＴ－５１０、ＣＮＧＲＣペプチドＴＮＦアルファ複合体（配列番号１６として開示される「ＣＮＧＲＣ」）、シクロホスファミド、コンブレタスタチンＡ４ホスファート、ジメチルキサンテノン酢酸、ドセタキセル、レナリドミド、エンザスタウリン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤（アブラキサン）、ダイズイソフラボン（ゲニステイン）、クエン酸タモキシフェン、サリドマイド、ＡＤＨ－１（エクスヘリン）、ＡＧ－０１３７３６、ＡＭＧ－７０６、ＡＺＤ２１７１、ソラフェニブトシラート（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｔｏｓｙｌａｔｅ）、ＢＭＳ－５８２６６４、ＣＨＩＲ－２６５、パゾパニブ、ＰＩ－８８、バタラニブ、エベロリムス、スラミン、スニチニブリンゴ酸塩、ＸＬ１８４、ＺＤ６４７４、ＡＴＮ－１６１、シレンギチド、及びセレコキシブなどの抗血管新生薬と併せて投与することができる。
【0082】
自己免疫疾患の処置または移植処置における処置を含むがこれらに限定されないいくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、シクロスポリンＡ、ラパマイシン、グルココルチコイド、アザチオプリン、ミゾリビン、アスピリン誘導体、ヒドロキシクロロキン、メトトレキサート、シクロホスファミド、及びＦＫ５０６（タクロリムス）を含む免疫抑制薬と併せて投与することができる。特定の実施形態において、免疫抑制薬は、ＡＤＣを形成するために、本明細書に開示される抗体または断片へ結合させることができる。
【0083】
抗ＫＬＲＧ１抗体は、任意選択的に、抗体定常領域またはその部分を含み得る。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端に、ヒトＣκ鎖またはＣλ鎖を含む抗体軽鎖定常ドメインを結合させていてもよい。同様に、ＶＨドメインに基づく特異的抗原結合ドメインは、任意の抗体同位体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ、ならびにＩｇＧ１及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、同位体サブクラスのいずれかに由来する免疫グロブリン重鎖の全部または一部を結合させていてもよい。のＣ末端断片についてのＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は当該技術分野において周知である。
【0084】
「レパートリー」という用語は、発現した免疫グロブリンをコードする配列から全部または部分的に誘導されるヌクレオチドの遺伝的に多様な集合を指す。配列は、例えば、Ｈ鎖に対するＶ、Ｄ、及びＪセグメント、ならびに例えば、Ｌ鎖に対するＶ及びＪセグメントのインビボでの再配列によって生成することができる。あるいは、配列は、インビトロでの刺激に応答して再配列が生じる当該刺激によって細胞株から生成され得る。あるいは、配列の部分または全部は、ヌクレオチド合成、ランダム突然変異誘発、及び、例えば、米国特許第５，５６５，３３２号に開示されるような他の方法によって、例えば、再配列されていないＶセグメントをＤ及びＪセグメントと組み合わせることによって得られ得る。
【0085】
「特異的相互作用」及び「特異的結合」という用語は、生理学的条件下で比較的安定である複合体を形成する２つの分子を指す。特異的結合は、通常、中程度～高容量で低親和性を有する非特異的結合と区別されるように、高親和性及び低～中程度の容量を特徴とし得る。典型的には、結合は、親和性定数ＫＡがおおよそ１０６Ｍ－１よりも高いとき、またはより好ましくはおおよそ１０８Ｍ－１よりも高いとき、特異的とみなされる。必要に応じて、非特異的結合は、例えば、結合条件を変化させることによって、特異的結合に実質的に影響を与えることなく、低減することができる。抗体の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合に許容される時間、ブロッキング剤（例えば、血清アルブミン、乳カゼイン）の濃度などの適切な結合条件は、日常的な技法を使用して当業者によって最適化され得る。
【0086】
ある特定の実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウスまたはサルＫＬＲＧ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）内のエピトープを、少なくとも約２ｎＭ、約１ｎｍ、約１００ｐＭ、約１０ｐＭ、または約５ｐＭのＫＤで表される親和性で特異的に結合することができる。ヒト及びカニクイザルＫＬＲＧ１のＥＣＤのアミノ酸配列を、表１に列挙するように、配列番号１及び配列番号２に示す。
【0087】
抗体及びその断片を生成するための方法
本開示はまた、ＫＬＲＧ１に特異的な抗体を得るための方法も提供する。かかる抗体におけるＣＤＲは、本明細書に開示されるＶＨ及びＶＬの具体的な配列に限定されず、これらの配列の変異体を含み得る。かかる変異体は、当該技術分野で周知の技術を用いて当業者によって、本明細書に提供される配列から得られ得る。例えば、アミノ酸の置換、欠失、または付加は、フレームワーク領域（ＦＲ）において及び／またはＣＤＲにおいて行うことができる。ＦＲの変更は通常、抗体の安定性及び免疫原性を改善するように設計され得るが、ＣＤＲの変更は、典型的には、抗体の標的に対する抗体の親和性を高めるように設計され得る。
本開示はまた、ＫＬＲＧ１に特異的な抗体を得るための方法も提供する。かかる抗体におけるＣＤＲは、本明細書に開示されるＶＨ及びＶＬの具体的な配列に限定されず、これらの配列の変異体を含み得る。かかる変異体は、当該技術分野で周知の技術を用いて当業者によって、本明細書に提供される配列から得られ得る。例えば、アミノ酸の置換、欠失、または付加は、フレームワーク領域（ＦＲ）において及び／またはＣＤＲにおいて行うことができる。ＦＲの変更は通常、抗体の安定性及び免疫原性を改善するように設計され得るが、ＣＤＲの変更は、典型的には、抗体の標的に対する抗体の親和性を高めるように設計され得る。
【0088】
ＦＲへの変更には、非ヒト由来をヒト化すること、または抗原接触のためにもしくは結合部位を安定化するために重要である特定のフレームワーク残基を操作すること、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号及び同５，６４８，２６０号、ならびにＬｕｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ． Ｉｍｍｕｎ．１４７：２６５７－２６６２及びＭｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８６：３１９－３２４に記載の通り、Ｆｃ受容体絵都合などのエフェクター機能を変化させ得る具体的なアミノ酸残基を変化させることが挙げられるが、これらに限定されない。
【0089】
ＦＲの変異体には、天然に存在する免疫グロブリンアロタイプも含まれる。かかる親和性の高まる変化は、ＣＤＲを改変すること、及び親和性抗体の標的に対する親和性抗体を試験することを包含する日常的な技法によって経験的に決定され得る。例えば、保存的アミノ酸置換は、開示されるＣＤＲのうちのいずれか１つ内で行われ得る。種々の改変は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，１９９５に記載される方法に従って行うことができる。これらには、限定されないが、配列内の機能的に等価なアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換によって改変され、したがって「サイレント」変化を生じるヌクレオチド配列が含まれる。例えば、非極性アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びメチオニンが挙げられる。極性中性アミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンが挙げられる。正に帯電した（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、リジン、及びヒスチジンが挙げられる。負に帯電した（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が挙げられる。配列内のアミノ酸の置換基は、そのアミノ酸が属するクラスの他のメンバー（すなわち、非極性、極性中性、塩基性、または酸性）から選択され得る。
【0090】
一実施形態において、置換は、表３に列挙される例示的な保存的置換から選択され得る。
【表3】
【0091】
さらに、ポリペプチド中の任意の天然残基もまた、アラニンで置換され得る（例えば、ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５－６７、Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１－２４を参照されたい）。
【0092】
本開示の抗体は、抗体が産生された種以外の種との適合性に関して改変され得または突然変異し得る。例えば、抗体は、ヒト化またはラクダ化され得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ１、Ｆ（ａｂ′）２、または抗体の他の抗原結合部分配列）である。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含み、レシピエントのＣＤＲからの残基は、所望の特異性、親和性、及び容量を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基により置き換えられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基で置き換えることができる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでもよい。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことができ、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域（すなわち、ＣＤＲ領域間の配列）の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最適に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分を含むことができる。
【0093】
ある特定の実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬドメインは、生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）されていてもよく、すなわち、これらのドメインのフレームワーク領域（ＦＲ）は、生殖系列細胞によって産生されるものと一致するように従来の分子生物学技法を使用して突然変異させられる。他の実施形態では、フレームワーク配列は、コンセンサス生殖系列配列から乖離したままである。
【0094】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野で周知である。本開示、及び本明細書に提供される任意の発明（複数可）は、任意の特定の供給源、起源の種、または製造の方法に限定されない。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである起源からヒト化抗体へと導入される１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的に「移入」可変ドメインから取られるため、「移入」残基と称されることが多い。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４（１９８８））に従って、齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって行うことができる。したがって、このようなヒト化抗体は、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）であり、実質的に決して未処置ではない非ヒト可変ドメインが、非ヒト種からの対応する配列により置換されている。実際に、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、ＣＤＲ全部またはその一部）及びおそらくいくつかのＦＲ残基は、齧歯類抗体における類似部位からの残基により置換されたヒト抗体である。
【0095】
ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野において公知の様々な技法を使用して産生されることもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２２：５８１（１９９１））。ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に使用可能である（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を遺伝子導入動物、例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスへと導入することによって作製されることができる。負荷時に、遺伝子再配列、集合、及び抗体レパートリーを含む全ての点でヒトにおいて見られるものと非常に類似するヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第９，４３４，７８２号、第９，２５３，９６５号、第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、及び第５，６６１，０１６号において、ならびに以下の科学的な公表物において記載されている。Ｌｅｅ，Ｅ－Ｃｈｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｌｏｃｉ ｅｎａｂｌｅｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ”Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｖｏｌｕｍｅ ３２，ｐａｇｅｓ ３５６－３６３（２０１４）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｈ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６ （１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２ （１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｈ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：Ｍ５（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １４：８２６（１ ９６）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ，Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５（１９９５）。
【0096】
本開示を実施するために使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２６５：４９５（１９７５）の技法により、ハイブリドーマ細胞株で産生されることができる。例えば、適切な抗原を含有する溶液をマウスに注射し、十分な時間の後、マウスを屠殺し、脾細胞を得ることができる。次いで、脾細胞を、例えば、典型的にはポリエチレングリコールの存在下で、骨髄腫細胞またはリンパ腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を産生することによって不死化させることができる。次いで、ハイブリドーマ細胞は、適切な培地で成長させることができ、上清は、所望の特異性を有するモノクローナル抗体についてスクリーニングされることができる。モノクローナルＦａｂ断片は、当業者に公知の組換え技術によってＥ．ｃｏｌｉにおいて産生されることができる。標的ポリペプチドに特異的な抗体はまた、当技術分野で周知のようにファージディスプレイ技術により得ることができる。
【0097】
様々なイムノアッセイをスクリーニングに使用して、ＫＬＲＧ１の細胞外ドメインに対して所望の特異性を有する抗体を特定することができる。確立された特異性を有するモノクローナル抗体を用いた競合的結合分析または免疫放射定量分析のための多くのプロトコルが当該技術分野で周知である。かかるイムノアッセイは典型的には、抗原とその特異的抗体との間の複合体形成（例えば、抗原／抗体複合体形成）の測定を包含する。本開示のポリペプチドまたはペプチド上の２つの非干渉エピトープに反応するモノクローナル抗体を利用する２部位のモノクローナルベースのイムノアッセイを、競合結合アッセイと同様に使用することができる。
【0098】
本明細書に記載される抗ＫＬＲＧ１抗体は、公知の技術に従って、固体支持体（例えば、ラテックスまたはポリスチレンなどの材料から形成されるビーズ、プレート、スライド、またはウェル）に結合することができる。本明細書に記載される抗ＫＬＲＧ１抗体は、同様に、公知の技術に従って、放射性標識（例えば、従来の化学的特性を使用して抗体へ結合し得る３５Ｓ、１２５Ｉ、１３１Ｉまたは９９ｍＴｃ）、酵素標識（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ）、及び蛍光標識（例えば、フルオレセイン）などの検出可能な基へ結合させることができる。検出可能な標識は、特定の同族検出可能な部分、例えば、標識アビジンへの結合を介して検出され得る、ビオチンなどの化学部分をさらに含む。本開示の方法における抗体／抗原複合体の形成の決定は、例えば、沈降、凝集、フロキュレーション、放射能、発色または変色、蛍光、発光などの検出によるものであり得、当該技術分野で周知である。
【0099】
上述のように、本明細書に記載される抗ＫＬＲＧ１抗体は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（アルブミン、別の抗体など）、毒素、放射性同位体、細胞傷害性作用薬、または細胞分裂抑制薬へ連結することができる。例えば、抗体は、化学架橋によってまたは組換え法によって、かかる他の機能分子へ連結することができる。抗体はまた、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、及び同第４，１７９，３３７号に記載される様式で、様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンのうちの１つへも連結することができる。抗体は、例えば、それらの循環半減期を延長させるために、ポリマーへの共有結合によって化学修飾され得る。例示的なポリマー及び当該ポリマーを結合させる方法はまた、米国特許第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号、及び同第４，６０９，５４６号において示されている。
【0100】
本明細書に記載の抗ＫＬＲＧ１抗体はまた、天然パターンとは異なるグリコシル化パターンを有するように改変され得る。例えば、１つ以上の炭水化物部分を欠失させ、及び／または１つ以上のグリコシル化部位を元の抗体へ付加することができる。本開示の抗体へのグリコシル化部位の付加は、当該技術分野で公知のグリコシル化部位コンセンサス配列を含有するようにアミノ酸配列を変更することによって達成することができる。かかる方法は、国際特許出願公開第ＷＯ８７／０５３３０号、及びＡｐｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８１）ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９－３０６に記載されている。グリコシル化の低減は、かかる部位を構成する１つまたは２つのアミノ酸を変更することによってグリコシル化部位を除去することによって達成することができる。抗体からのいかなる炭水化物部分の除去もまた、化学的または酵素で、例えば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｈｙｓ．，２５９：５２、及びＥｄｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９８１）．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１１８：１３１によって、ならびにＴｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．によって記載されるとおり、達成され得る。
【0101】
一実施形態において、抗体またはその断片は、１つ以上のフコシル化アミノ酸残基を含有し得る。別の実施形態において、抗体またはその断片は、いかなるフコシル化アミノ酸残基も欠失させ得、及び／またはいかなる他のグリコシル化アミノ酸残基も欠失させ得る。フコシル化の欠失は、抗体またはその断片の製造条件から生じ得るか、または当業者に公知の技術によって影響され得る。
【0102】
特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその断片は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。さらなる実施形態において、キメラ抗体またはヒト化抗体は、モノクローナル抗体のＣＤＲの少なくとも一部を含む。本明細書で使用される場合、ＣＤＲの「部分」は、ＣＤＲを構成する軽鎖および重鎖の各々からの（例えば、ＣＤＲの１～６からの）３つのループのうちの１つ以上、または少なくとも３つの連続するアミノ酸を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるループのうちの１つ以上の部分として定義される。例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体は、１、２、３、４、５、もしくは６個のＣＤＲループ、１、２、３、４、５、もしくは６個のＣＤＲループの部分、またはそれらの混合物を、いずれかの組み合わせで含み得る。
【0103】
核酸、クローン化、及び発現系
本開示は、開示された抗体をコードする単離された核酸をさらに提供する。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよく、全体的または部分的に合成または組換えであってもよい。本明細書に示されるヌクレオチド配列への言及は、文脈上別段の必要がない限り、特定の配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＴがＵで置換される特定の配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
本開示は、開示された抗体をコードする単離された核酸をさらに提供する。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよく、全体的または部分的に合成または組換えであってもよい。本明細書に示されるヌクレオチド配列への言及は、文脈上別段の必要がない限り、特定の配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＴがＵで置換される特定の配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
【0104】
本明細書に提供される核酸は、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨドメイン、及び／またはＶＬドメイン、完全長重鎖、ならびに／または完全長軽鎖についてのコード配列を含むことができる。本開示はまた、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨドメイン、及び／またはＶＬドメイン、完全長重鎖、ならびに／または完全長軽鎖をコードする少なくとも１つの核酸を含むことができる、プラスミド、ベクター、ファージミド、転写または発現カセットの形態の構築物を提供する。本開示は、上述のような１つ以上の構築物を含み得る宿主細胞をさらに提供する。
【0105】
いずれかのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、またはＣＤＲ－Ｌ３）、ＶＨドメイン及び／またはＶＬドメイン、重鎖及び／または軽鎖をコードする核酸、ならびにコードされた産物を作製する方法も提供される。この方法は、コード核酸からコードされた産物を発現することを含み得る。発現は、例えば、核酸を含有する組換え宿主細胞を適切な条件下で培養することによって達成され得る。ＶＨドメインまたはＶＬドメインの発現による産生に続いて、特異的結合メンバーは、任意の適切な技術を使用して単離及び／または精製され得、次いで、適切に、かつ当業者によって理解されるように使用され得る。
【0106】
種々の異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローン化及び発現のためのシステムは、当該技術分野で周知である。抗体を産生するのに適した細胞については、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｅｄｓ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，１９９９を参照されたい。簡潔には、好適な宿主細胞としては、細菌、植物細胞、哺乳動物細胞、ならびに酵母系及びバキュロウイルス系が挙げられる。異種ポリペプチドの発現のために当該技術分野で利用可能な哺乳動物細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳＯマウス骨髄腫細胞、及び多くの他の細胞が挙げられる。一般的な細菌宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉである。本発明と適合性のある任意のタンパク質発現系を使用して、開示される抗体を産生し得る。好適な発現系としては、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ｅｄｓ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，１９９９に記載されるトランスジェニック動物が挙げられる。
【0107】
好適なベクターは、プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、及び必要に応じて他の配列を含む、適切な調節配列を含有するように選択または構築することができる。ベクターは、必要に応じて、プラスミドまたはウイルス、例えば、ファージもしくはファージミドであってもよい。さらなる詳細については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい。例えば、核酸構築物の調製、突然変異誘発、配列決定、細胞へのＤＮＡの導入及び遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析における核酸の操作のための多くの公知の技法ならびにプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄｓ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２において詳細に記載されている。
【0108】
本開示のさらなる態様は、本明細書に開示される核酸を含むかさもなくば本開示から誘導可能な核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示のなおもさらなる態様は、かかる核酸を宿主細胞へと導入することを含む方法を提供する。導入は、任意の利用可能な技法を用いることができる。真核細胞の場合、好適な技法としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム介在性トランスフェクション、ならびにレトロウイルスもしくは他のウイルス、例えば、ワクシニア、または昆虫細胞についてはバキュロウイルスを使用した形質導入が挙げられ得る。細菌細胞の場合、好適な技法としては、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、及びバクテリオファージを使用したトランスフェクションが挙げられ得る。細胞内への核酸の導入に続いて、例えば、遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸からの発現を引き起こすか、またはそれを可能にすることができる。
【0109】
医薬組成物及び投与方法
本開示は、本明細書に記載の少なくとも１つのＫＬＲＧ１枯渇薬、抗ＫＬＲＧ１抗体、及び／またはその断片、及び／またはその結合体及び／または融合タンパク質を含む、本明細書に記載の組成物を提供する。本開示の組成物は、任意選択的に、薬用品、医薬品、担体、薬学的に許容され得る担体、アジュバント、分散剤、希釈剤などを含み得る。かかる組成物、薬学的使用及び患者への投与に好適であり得る。「薬学的に許容され得る」とは、生物学的または他の様式では望ましくないことのない材料を意味し、すなわち、毒性などのいかなる望ましくない生物学的効果も引き起こすことなく、当該材料を対象へ投与することができる。組成物は典型的には、本開示の１つ以上の抗体と、薬学的に許容され得る賦形剤と、を含む。「薬学的に許容され得る賦形剤」という句は、薬学的投与と適合するあらゆる全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌薬及び抗真菌薬、等張化剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。薬学的活性のある物質のためのかかる媒体及び作用薬の使用は、当該技術分野で周知である。組成物はまた、補足的、追加の、または増強された治療機能を提供する他の活性化合物も含有し得る。薬学的組成物は、投与のための指示書とともに、容器、パック、またはディスペンサーに含まれていてもよい。
本開示は、本明細書に記載の少なくとも１つのＫＬＲＧ１枯渇薬、抗ＫＬＲＧ１抗体、及び／またはその断片、及び／またはその結合体及び／または融合タンパク質を含む、本明細書に記載の組成物を提供する。本開示の組成物は、任意選択的に、薬用品、医薬品、担体、薬学的に許容され得る担体、アジュバント、分散剤、希釈剤などを含み得る。かかる組成物、薬学的使用及び患者への投与に好適であり得る。「薬学的に許容され得る」とは、生物学的または他の様式では望ましくないことのない材料を意味し、すなわち、毒性などのいかなる望ましくない生物学的効果も引き起こすことなく、当該材料を対象へ投与することができる。組成物は典型的には、本開示の１つ以上の抗体と、薬学的に許容され得る賦形剤と、を含む。「薬学的に許容され得る賦形剤」という句は、薬学的投与と適合するあらゆる全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌薬及び抗真菌薬、等張化剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。薬学的活性のある物質のためのかかる媒体及び作用薬の使用は、当該技術分野で周知である。組成物はまた、補足的、追加の、または増強された治療機能を提供する他の活性化合物も含有し得る。薬学的組成物は、投与のための指示書とともに、容器、パック、またはディスペンサーに含まれていてもよい。
【0110】
当業者は、全体として本開示の利益とともに、ラクトース、グルコース、ならびにスクロース等の糖類；トウモロコシデンプンならびにジャガイモデンプン等のデンプン；セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース等のその誘導体；粉状トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターならびに坐剤ワックス等の賦形剤；落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、ならびにダイズ油等の油；プロピレングリコール等のグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ならびにポリエチレングリコール等のポリオール；オレイン酸エチルならびにラウリン酸エチル等のエステル；寒天；水酸化マグネシウムならびに水酸化アルミニウム等の緩衝剤；界面活性剤；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張性塩類溶液；リンガー液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；ヒスチジン緩衝液；薬学的製剤において採用される他の非毒性の適合性材料が挙げられるがこれらに限定されない様々な薬学的に許容される担体を使用することができることを理解するであろう。薬学的に許容される担体は、例えば、ＦＤＡによって指定される「安全であると一般にみなされる」（ＧＲＡＳ）物質を含むことができる。
【0111】
本開示の組成物は、公知の技術に従って、薬学的担体中での投与のために製剤することができる。本開示による薬学的製剤の製造において、化合物（生理学的に許容され得るその塩を含む）は、典型的には、とりわけ、許容され得る担体と混合することができる。担体は、固体もしくは液体、またはその両方であることができ、化合物を単位用量製剤、例えば錠剤として化合物と共に製剤することができ、これはおおよそ０．１重量％またはおおよそ０．５重量％からおおよそ９５重量％またはおよそ９９重量％または９９体積％の化合物を含有することができる。１つ以上の化合物は、本開示の製剤中に組み込むことができ、これは、当業者に公知の薬剤学の技術のいずれかによって調製することができる。
【0112】
本開示の薬学的組成物は、その意図した投与経路と適合しているように製剤することができる。投与を達成する方法は、当業者に公知である。投与は、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、皮下、及び／または経皮であり得る。局所もしくは経口を含む他の方法で投与され得る、または経粘膜送達をすることができ得る組成物を得ることも可能であり得る。
【0113】
皮内または皮下適用に使用される液剤または懸濁剤としては、典型的には、以下の成分のうちの１つ以上が挙げられる：注射用水、生理塩類溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝剤；及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性の調整のための作用薬。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調整することができる。かかる製剤は、アンプル、使い捨て注射器、または例えばガラス製もしくはプラスチック製の複数回用量バイアルに封入してもよい。
【0114】
注射に好適な薬学的組成物は、滅菌注射液もしくは分散液を即時調製するための滅菌水溶液もしくは分散液及び滅菌粉末を含む。静脈内投与では、好適な担体として、生理塩類溶液、静菌水、クレモフォールＥＬ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）が挙げられる。典型的には、組成物は無菌であるものとし、容易な注射可能条件が存在する程度まで流体であるものとする。組成物は、製造及び保管の条件下で安定であるものとし、細菌及び真菌等の微生物の混入作用から保護されるものとする。微生物作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどを含む種々の抗菌薬及び抗真菌薬によって達成することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖ならびに／または、マンニトール、ソルビトール、及び塩化ナトリウムなどの多価アルコールを組成物中に含むことが好ましい。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用して、分散液の場合における必要な粒径の維持によって、及び／または界面活性剤を使用して維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に吸収を延長させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム、及びゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【0115】
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または可食性担体を含む。経口組成物は、ゼラチンカプセル内に封入され得るか、または場合によっては錠剤へと圧縮され得る。経口投与のために、抗体を賦形剤と組み合わせ、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用することができる。薬学的に適合性のある結合剤及び／またはアジュバント材料は、組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれか、または同様の性質の化合物を含有することができる：微結晶性セルロース、トラガカントガム、またはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはトウモロコシでんぷんなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；あるいはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料などの香料。
【0116】
全身投与は、経粘膜的または経皮的手段によって行うこともできる。経粘膜投与または経皮投与のために、浸透するバリアに適切な浸透剤を製剤に使用することができる。かかる浸透剤は一般に当該技術分野で公知であり、例えば、界面活性剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、例えば、ロゼンジ剤、点鼻用スプレー剤、吸入剤、または坐剤を使用して達成され得る。例えば、Ｆｃ部分を含む抗体の場合、組成物は、腸、口腔、または肺の粘膜を横断して（例えば、米国特許第６，０３０，６１３号に記載されるＦｃＲｎ受容体介在経路を介して）送達することが可能であり得る。経皮投与の場合、活性化合物は、例えば、当該技術分野で一般的に公知の軟膏、ジェル剤、またはクリーム剤へと製剤され得る。吸入による投与の場合、抗体は、好適な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有することができる加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからのエアゾールスプレーの形態で送達され得る。
【0117】
ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤など、体からの急速な排出から化合物を保護するよう構成された担体を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及び／またはポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製のための方法は、当業者に明らかである。本明細書に開示される抗体を含有するリポソーム懸濁剤もまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。当該リポソーム懸濁剤は、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるように、当業者に公知の方法により調製することができる。
【0118】
経口または非経口組成物を、投与の容易さ及び投与量の均一性のために単位剤形に製剤することが有利であり得る。本明細書で使用される「単位剤形」という用語は、処置される対象のために単位薬用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と関連して所望の治療効果がもたらされるように計算された所定の量の活性化合物を含有する。
【0119】
本開示の組成物の毒性及び治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団のおおよそ５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団のおおよそ５０％における治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、それは、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表すことができる。大きな治療指数を呈する組成物が典型的には好ましい。
【0120】
本開示で使用される、または本開示から得られ得る任意の組成物について、治療有効量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。好適なバイオアッセイの例としては、ＤＮＡ複製アッセイ、サイトカイン放出アッセイ、転写ベースのアッセイ、ＫＬＲＧ１／カドヘリン結合アッセイ、免疫学的アッセイ、他のアッセイ、例えば、下記の実施例に記載されるようなものが挙げられるが、これらに限定されない。細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータを、ヒトで使用するための投与量範囲の策定に使用することができる。用量は、ＩＣ５０を含む循環血漿濃度範囲（すなわち、症状の最大半量阻害を達成する抗体の濃度）を達成するために動物モデルで策定できる。血漿における循環レベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定され得る。任意の特定の投与量の効果を、好適なバイオアッセイによって監視することができる。投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くない循環濃度の範囲内にある。投与量は、採用される剤形及び利用される投与経路に少なくとも一部応じて変化し得る。あるいは、本開示の抗体または本開示から得られ得る抗体を、全身様式よりもむしろ局所様式で、例えばデポー製剤または徐放性製剤で投与することができる。
【0121】
本明細書に記載の任意の抗体の医薬組成物は、静脈内投与に適したいずれかの形態であり得る。
【0122】
本開示のさらなる態様は、本明細書に提供される方法に使用するための、または本開示を考慮して他の方法で得られ得るキットに関する。キットは、対象への投与に適した形態で、及び／または製剤への配合に適した形態で、本開示の少なくとも１つ以上の抗体もしくはその断片、及び／または本開示から得られ得る１つ以上の抗体を含むことができる。キットは、治療薬、担体、緩衝剤、容器、投与用のデバイスなどの他の構成要素をさらに備えることができる。キットは、治療用途、診断用途、及び／または研究用途のために設計することができ、追加の構成要素は、意図した用途に適したものとすることができる。当業者は、この性質のキットに含めるのに適した様々なかかる構成要素を認識するであろう。キットは、例えば、障害の処置のためのラベル及び／または説明書をさらに備えることができる。かかるラベル表示及び／または説明書は、例えば、抗体の投与の量、頻度、及び方法に関する情報を含むことができる。本開示を考慮して、当業者は、キットの一部として組み合わせて含まれ得る説明書のタイプを理解するであろう。説明書は、本明細書に提供されるか、または本開示を考慮して当業者によって得られ得る。
【実施例】
【0123】
実施例１：肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）
肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）に罹患している４人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ５７５２０）の遺伝子発現解析を行い、３人の患者からの正常脾と比較した発現は、ＫＬＲＧ１の発現上昇を示した（１３．０倍比）（図１）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）に罹患している４人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ５７５２０）の遺伝子発現解析を行い、３人の患者からの正常脾と比較した発現は、ＫＬＲＧ１の発現上昇を示した（１３．０倍比）（図１）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0124】
実施例２：肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）
肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）に罹患している４人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１９０６７）の遺伝子発現解析を行い、発現を１１人の患者からのＮＫ細胞株及び３人の患者からのγ－δＴ細胞株と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（ＮＫ細胞株と比較して１０．０倍の比率）（図２）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）に罹患している４人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１９０６７）の遺伝子発現解析を行い、発現を１１人の患者からのＮＫ細胞株及び３人の患者からのγ－δＴ細胞株と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（ＮＫ細胞株と比較して１０．０倍の比率）（図２）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0125】
実施例３：肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）
肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）に罹患している５人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１１９４６）の遺伝子発現解析を行い、発現を、他のタイプの末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）に罹患している１１人の患者からの腫瘍生検と比較し、ＫＬＲＧ１の発現上昇を示した（２．１倍比）（図３）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）に罹患している５人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１１９４６）の遺伝子発現解析を行い、発現を、他のタイプの末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）に罹患している１１人の患者からの腫瘍生検と比較し、ＫＬＲＧ１の発現上昇を示した（２．１倍比）（図３）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、肝脾Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0126】
実施例４：ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）。
ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）に罹患している１９人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１９０６７）の遺伝子発現解析を行い、発現を１１人の患者からのＮＫ細胞株及び３人の患者からのγ－δＴ細胞株と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（ＮＫ細胞株と比較して２．２倍の比率）（図４）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）に罹患している１９人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１９０６７）の遺伝子発現解析を行い、発現を１１人の患者からのＮＫ細胞株及び３人の患者からのγ－δＴ細胞株と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（ＮＫ細胞株と比較して２．２倍の比率）（図４）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（ＮＫＴＣＬ）は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0127】
実施例５：菌状息肉症
菌状息肉症に罹患している２人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１９０６７）の遺伝子発現解析を行い、発現を１１人の患者からのＮＫ細胞株及び３人の患者からのγ－δＴ細胞株と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（ＮＫ細胞株と比較して９．１倍の比率）（図５）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、菌状息肉症は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
菌状息肉症に罹患している２人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ１９０６７）の遺伝子発現解析を行い、発現を１１人の患者からのＮＫ細胞株及び３人の患者からのγ－δＴ細胞株と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（ＮＫ細胞株と比較して９．１倍の比率）（図５）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、菌状息肉症は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0128】
実施例６：菌状息肉症
菌状息肉症に罹患している６人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ３９０４１）の遺伝子発現解析を行い、発現を３人の患者からの健常皮膚ＣＤ４陽性Ｔ細胞と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（３．１倍の比率）（図６）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、菌状息肉症は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
菌状息肉症に罹患している６人の患者からの腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ３９０４１）の遺伝子発現解析を行い、発現を３人の患者からの健常皮膚ＣＤ４陽性Ｔ細胞と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（３．１倍の比率）（図６）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、菌状息肉症は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0129】
実施例７：Ｔ細胞及びＮＫ細胞リンパ腫細胞株
Ｔ細胞及びＮＫ細胞リンパ腫細胞株及び白血病細胞株からの発現データ（ＧＳＥ１１４０８５）の遺伝子発現解析を行い、ＫＡＲＰＡＳ－３８４（γ－δＴ細胞株）、ＫＨＹＧ－１（進行性ＮＫ細胞白血病）、及びＭＴＡ（進行性ＮＫ細胞白血病）を含む特定の細胞株におけるＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（図７）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、γ－δＴ細胞リンパ腫及び進行性ＮＫ細胞白血病は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
Ｔ細胞及びＮＫ細胞リンパ腫細胞株及び白血病細胞株からの発現データ（ＧＳＥ１１４０８５）の遺伝子発現解析を行い、ＫＡＲＰＡＳ－３８４（γ－δＴ細胞株）、ＫＨＹＧ－１（進行性ＮＫ細胞白血病）、及びＭＴＡ（進行性ＮＫ細胞白血病）を含む特定の細胞株におけるＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（図７）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、γ－δＴ細胞リンパ腫及び進行性ＮＫ細胞白血病は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0130】
実施例８：Ｔ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）
Ｔ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）に罹患している６人の患者由来の腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ５７８８）の遺伝子発現解析を行い、発現を８人の患者からの健常ドナーＴ細胞と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（１．４倍の比率）（図８）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、Ｔ細胞性前リンパ性白血病は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
Ｔ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）に罹患している６人の患者由来の腫瘍生検からの発現データ（ＧＳＥ５７８８）の遺伝子発現解析を行い、発現を８人の患者からの健常ドナーＴ細胞と比較し、ＫＬＲＧ１の発現の上昇を示した（１．４倍の比率）（図８）。データセットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎオムニバスデータベースから得、ＫＬＲＧ１発現について解析した。そのため、Ｔ細胞性前リンパ性白血病は、本発明による療法のための特に魅力的な標的である。
【0131】
実施例９：ＨＧ１Ｄ０３と比較したフコシル化ＡＢＣ００８の優れた純度
実施例９～１２は、ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３と命名された抗体を指す。ＡＢＣ００８は、表２の配列番号４～配列番号１３に示されるアミノ酸配列を特徴とする抗体であり、抗体はさらに脱フコシル化されている。ＡＢＣ１０８は、ＡＢＣ００８と同一のアミノ酸配列を有し、野生型フコシル化を保持する。ＨＧ１Ｄ０３は、ＫＬＲＧ１陽性Ｔ細胞において枯渇効果を及ぼすヒト化抗体である。ＨＧ１Ｄ０３は、米国特許第１１，１８０，５６１号において、重鎖及びκ鎖可変領域配列を含めて、より詳細に記載されている。
実施例９～１２は、ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３と命名された抗体を指す。ＡＢＣ００８は、表２の配列番号４～配列番号１３に示されるアミノ酸配列を特徴とする抗体であり、抗体はさらに脱フコシル化されている。ＡＢＣ１０８は、ＡＢＣ００８と同一のアミノ酸配列を有し、野生型フコシル化を保持する。ＨＧ１Ｄ０３は、ＫＬＲＧ１陽性Ｔ細胞において枯渇効果を及ぼすヒト化抗体である。ＨＧ１Ｄ０３は、米国特許第１１，１８０，５６１号において、重鎖及びκ鎖可変領域配列を含めて、より詳細に記載されている。
【0132】
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３は、１ＬスケールでＥｘｐｉＣｈｏ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて産生された。還元キャピラリー電気泳動（ｒＣＥ）、非還元キャピラリー電気泳動（ｎｒＣＥ）、及びキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を行い、３つの独立した実験において、４時間、７日、及び２８日のストレス実験（実施例１１～１２に記載のストレス実験）において、主ピークの割合を測定した。結果は、ＨＧ１Ｄ０３と比較して、ＡＢＣ１０８の、ＣＨＯ細胞産生中の優れた純度を示す（表４）。
【表4】
【0133】
実施例１０．ＨＧ１Ｄ０３と比較したＡＢＣ１０８の優れた熱特性（融点及び凝集温度）
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３は、１ＬスケールでＥｘｐｉＣｈｏ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて産生された。融点（Ｔｍ）を全スペクトル蛍光によって測定し、小分子凝集塊形成（Ｔａｇｇ ２６６）及び大分子凝集塊形成（Ｔａｇｇ ４７３）を、ＵＮＣＬＥ（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、静的光散乱（ＳＬＳ）によって測定した。データを、３つの独立した実験において、４時間、７日間、及び２８日間のストレス実験（実施例１１～１２に記載されているストレス実験）において収集した。結果は、ＨＧ１Ｄ０３と比較して、ＡＢＣ１０８について優れた熱特性（より高い融点及び凝集温度）を示す（表５）。
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３は、１ＬスケールでＥｘｐｉＣｈｏ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて産生された。融点（Ｔｍ）を全スペクトル蛍光によって測定し、小分子凝集塊形成（Ｔａｇｇ ２６６）及び大分子凝集塊形成（Ｔａｇｇ ４７３）を、ＵＮＣＬＥ（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、静的光散乱（ＳＬＳ）によって測定した。データを、３つの独立した実験において、４時間、７日間、及び２８日間のストレス実験（実施例１１～１２に記載されているストレス実験）において収集した。結果は、ＨＧ１Ｄ０３と比較して、ＡＢＣ１０８について優れた熱特性（より高い融点及び凝集温度）を示す（表５）。
【表5】
【0134】
実施例１１：ＨＧ１Ｄ０３と比較したＡＢＣ１０８の４０℃ストレス試験後の優れた安定性
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３をＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬで、４時間、７日間、及び２８日間４０℃への曝露によって熱安定性ストレス試験に供した。非還元キャピラリー電気泳動（ｎｒＣＥ）及びキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を行い、主ピークの割合を測定した。Ｔｍ１、Ｔａｇｇ ２６６、及びＴａｇｇ ４７３パラメータを、ＵＮＣＬＥプラットフォームを使用して測定した。温度走査を、毎分０．３℃の走査速度で２５℃から９５℃まで行った。Ｔｍ値は、重心平均法（ＢＣＭ）の解析によって計算した。純度の結果（表６）は、同様のｒＣＥ測定純度を示し、ｎｒＣＥ測定純度（例えば、２８日間で８５．５％対７９．３％）及びｃＩＥＦ測定純度（例えば、７日間で７８．０％対４１．６％）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について改善されている。熱特性についての結果（表７）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について類似の、またはわずかに優れた熱特性を示す。
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３をＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬで、４時間、７日間、及び２８日間４０℃への曝露によって熱安定性ストレス試験に供した。非還元キャピラリー電気泳動（ｎｒＣＥ）及びキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を行い、主ピークの割合を測定した。Ｔｍ１、Ｔａｇｇ ２６６、及びＴａｇｇ ４７３パラメータを、ＵＮＣＬＥプラットフォームを使用して測定した。温度走査を、毎分０．３℃の走査速度で２５℃から９５℃まで行った。Ｔｍ値は、重心平均法（ＢＣＭ）の解析によって計算した。純度の結果（表６）は、同様のｒＣＥ測定純度を示し、ｎｒＣＥ測定純度（例えば、２８日間で８５．５％対７９．３％）及びｃＩＥＦ測定純度（例えば、７日間で７８．０％対４１．６％）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について改善されている。熱特性についての結果（表７）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について類似の、またはわずかに優れた熱特性を示す。
【表6】
【表7】
【0135】
実施例１２：ＨＧ１Ｄ０３と比較した、ＡＢＣ１０８の低ｐＨ及び高ｐＨストレス試験後の優れた安定性
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３をＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬで４時間、７日間、及び２８日間、低ｐＨ（３．５）、及び高ｐＨ（８．５）ストレス試験に供した。純度についての結果（表８）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について測定された純度を高感度のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によって測定された改善された純度を示す。熱特性についての結果（表９～１０）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について類似の、またはわずかに優れた熱特性を示す。
ＡＢＣ１０８及びＨＧ１Ｄ０３をＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬで４時間、７日間、及び２８日間、低ｐＨ（３．５）、及び高ｐＨ（８．５）ストレス試験に供した。純度についての結果（表８）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について測定された純度を高感度のキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によって測定された改善された純度を示す。熱特性についての結果（表９～１０）は、ＡＢＣ１０８対ＨＧ１Ｄ０３について類似の、またはわずかに優れた熱特性を示す。
【表8】
【表9】
【表10】
【0136】
実施例１３：カニクイザルにおけるＡＢＣ００８によるＫＬＲＧ１陽性血球の枯渇
カニクイザルに、ビヒクル対照またはＡＢＣ００８を５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ＡＢＣ００８は、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団のほぼ完全な枯渇をもたらした（図９）。
カニクイザルに、ビヒクル対照またはＡＢＣ００８を５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ＡＢＣ００８は、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団のほぼ完全な枯渇をもたらした（図９）。
【0137】
別の実験において、カニクイザルに、ビヒクル対照またはＡＢＣ００８を０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇで、図１２に示す投与計画により複数回投与で皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。０．１ｍｇ／ｋｇのＡＢＣ００８は、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団において、おおよそ５０％を超える低減をもたらした。０．３ｍｇ／ｋｇ以上のＡＢＣ００８を投与した場合、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団の枯渇はほぼ完全だった（図１２）。
【0138】
実施例１４：ＩＢＭに罹患している患者におけるＡＢＣ００８によるＫＬＲＧ１陽性血球の枯渇
ＩＢＭに罹患している３人の患者に、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ皮下）の単回用量を投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ベースラインにおいて、ＣＤ８ Ｔ細胞のＫＬＲＧ１陽性％は５０～８８％であった。ＡＢＣ００８は、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団の４６～９６％のピーク枯渇をもたらした（図１０）。
ＩＢＭに罹患している３人の患者に、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ皮下）の単回用量を投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ベースラインにおいて、ＣＤ８ Ｔ細胞のＫＬＲＧ１陽性％は５０～８８％であった。ＡＢＣ００８は、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団の４６～９６％のピーク枯渇をもたらした（図１０）。
【0139】
最初の３人の患者を第１のコホートとした。２つの追加のコホートで、ＩＢＭに罹患している各々３人の患者に、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８の単回用量を皮下投与した。用量は、コホート１：０．１ｍｇ／ｋｇ、コホート２：０．５ｍｇ／ｋｇ、コホート３：２．０ｍｇ／ｋｇとした。
【0140】
血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。図１３に示すように、ベースラインにおいて、ＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８ Ｔ細胞の割合は４６～８８％の範囲であった。図１４に示すように、ＡＢＣ００８の投与は、コホート１においてＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団の約７０％、ならびにコホート２及びコホート３の両方において約９５％のピーク枯渇をもたらした。
【0141】
２人の追加の患者は、コホート３に含める要件を満たしており、Ｃ３Ｐ４及びＣ３Ｐ５として匿名にした。図２２に示すように、ベースラインでは、これら２人の患者におけるＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８ Ｔ細胞の割合は５４～６０％の範囲であった。
【0142】
図２３は、コホート３を１１２日間追跡することによって図１４を補足する。図２３に示すように、３つのコホート全てにわたって、コホート１及びコホート２についてのＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団は、投与後８４日目から１６８日目までベースラインを約５０～７０％下回ったままであった。コホート３についてのＫＬＲＧ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞集団は、投与１１２日後に約４０％枯渇した。
【0143】
実施例１５．ＩＢＭに罹患している患者におけるＡＢＣ００８による大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）の枯渇
ＩＢＭに罹患している３人の患者に、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８の単回用量０．１ｍｇ／ｋｇを皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ベースラインにおいて、大顆粒リンパ球（ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ）Ｔ細胞のＫＬＲＧ１陽性％は、６４～９８％であった。ＡＢＣ００８の投与は、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ Ｔ細胞集団の４０～１００％のピーク枯渇をもたらした（図１１）。
ＩＢＭに罹患している３人の患者に、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８の単回用量０．１ｍｇ／ｋｇを皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ベースラインにおいて、大顆粒リンパ球（ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ）Ｔ細胞のＫＬＲＧ１陽性％は、６４～９８％であった。ＡＢＣ００８の投与は、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ Ｔ細胞集団の４０～１００％のピーク枯渇をもたらした（図１１）。
【0144】
患者を１６８日間追跡した。２人は、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ Ｔ細胞集団の持続的枯渇を示した（図２４）。
【0145】
２つの追加のコホートで、３人の患者のうちの１人及び５人の患者のうちの１人に、実施例１４のコホート２及びコホート３について記載のように、ＡＢＣ００８の単回用量を投与し、血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによって１６８日間（コホート２）または２８～１１２日間（コホート３）モニターした。
【0146】
コホート２については、大顆粒リンパ球（ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ）Ｔ細胞のベースラインＫＬＲＧ１陽性％は、６９～９７％であった。ＡＢＣ００８の投与は、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ Ｔ細胞集団の約９０～１００％のピーク枯渇、及びモニタリング期間の約４０～８０％の持続的枯渇をもたらした（図２５）。
【0147】
コホート３については、大顆粒リンパ球（ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ）Ｔ細胞のベースラインＫＬＲＧ１陽性％は、４７～８５％であった。ＡＢＣ００８の投与は、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬ Ｔ細胞集団の約５０～１００％のピーク枯渇を、患者１（１１２日間モニター）については約２５～５５％の、及び患者３（８４日間モニター）については９０％超の持続的枯渇をもたらした（図２６）。
【0148】
実施例１６．Ｔ細胞性大顆粒リンパ球性白血病（Ｔ－ＬＧＬＬ）に罹患している患者におけるＡＢＣ００８による大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）の枯渇。
Ｔ細胞性大顆粒リンパ球性白血病（Ｔ－ＬＧＬＬ）に罹患している３人の患者に、臨床試験において、１日目ならびに１、１２、２４、及び３６週目にＡＢＣ００８を０．２５ｍｇ／ｋｇ皮下投与する。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターする。ＡＢＣ００８を受ける群は、ＬＧＬ細胞の枯渇を示す。
Ｔ細胞性大顆粒リンパ球性白血病（Ｔ－ＬＧＬＬ）に罹患している３人の患者に、臨床試験において、１日目ならびに１、１２、２４、及び３６週目にＡＢＣ００８を０．２５ｍｇ／ｋｇ皮下投与する。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターする。ＡＢＣ００８を受ける群は、ＬＧＬ細胞の枯渇を示す。
【0149】
実施例１７：調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、ＩＢＭに罹患している患者においてＡＢＣ００８によって温存される。
３人のＩＢＭに罹患している患者へ、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ）の単回用量を皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ＡＢＣ００８は、Ｔｒｅｇ細胞集団の無視できる枯渇をもたらした（投与後２１～８４日目で約２０％未満）（図１５）。
３人のＩＢＭに罹患している患者へ、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ）の単回用量を皮下投与した。血液免疫細胞集団をＦＡＣＳによってモニターした。ＡＢＣ００８は、Ｔｒｅｇ細胞集団の無視できる枯渇をもたらした（投与後２１～８４日目で約２０％未満）（図１５）。
【0150】
３人のＩＢＭに罹患している患者を各々含む３つのコホートに、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってＴｒｅｇ細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、１８０日間にわたってＴｒｅｇの無視できる枯渇（ピーク枯渇約１０％未満）をもたらした（図１６）。対照的に、アレムツズマブは、同じ期間にわたってＴｒｅｇの約７５％を枯渇させた（図１６）。
【0151】
実施例１８：セントラルメモリーＴ細胞は、ＩＢＭに罹患している患者においてＡＢＣ００８によって温存される。
各々が３人のＩＢＭに罹患している患者を含む３つのコホートに、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってセントラルメモリーＴ細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、１８０日間にわたってセントラルメモリーＴ細胞の無視できる枯渇（ピーク枯渇約２５％未満）をもたらした（図１７）。対照的に、アレムツズマブは、同じ期間にわたってセントラルメモリーＴ細胞の約８０％超を枯渇させた（図１７）。
各々が３人のＩＢＭに罹患している患者を含む３つのコホートに、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってセントラルメモリーＴ細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、１８０日間にわたってセントラルメモリーＴ細胞の無視できる枯渇（ピーク枯渇約２５％未満）をもたらした（図１７）。対照的に、アレムツズマブは、同じ期間にわたってセントラルメモリーＴ細胞の約８０％超を枯渇させた（図１７）。
【0152】
３人のＩＢＭに罹患している患者を２つが含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってセントラルメモリーＴ細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、１８０日間にわたってセントラルメモリーＴ細胞の約６０％未満のピーク枯渇をもたらした（図２８）。対照的に、アレムツズマブは、同じ期間にわたってセントラルメモリーＴ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２８）。
【0153】
実施例１９：ＩＢＭに罹患している患者におけるＡＢＣ００８の薬物動態。
ＩＢＭに罹患している患者へ、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ）の単回用量を皮下投与した。図１８に示すように、ＡＢＣ００８は、モノクローナル抗体療法に典型的な長い吸収及び遅いクリアランスを示した。
ＩＢＭに罹患している患者へ、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１においてＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ）の単回用量を皮下投与した。図１８に示すように、ＡＢＣ００８は、モノクローナル抗体療法に典型的な長い吸収及び遅いクリアランスを示した。
【0154】
３人のＩＢＭに罹患している患者を各々含む３つのコホートに、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。図１９に示すように、ＡＢＣ００８は、モノクローナル抗体療法に典型的な長い吸収及び遅いクリアランスを示した。
【0155】
実施例２０：ＩＢＭに罹患している患者における疾患重症度に対するＡＢＣ００８の影響。
３人のＩＢＭに罹患している患者における疾患の重症度は、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１において、散発性封入体筋炎身体機能評価（ｓＩＦＡ）、封入体筋炎機能評価尺度（ＩＢＭＦＲＳ）、修正されたタイムアップアンドゴー（ｍＴＵＧ）、及び徒手筋力テスト（ＭＭＴ１２）の後に単回用量のＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与し、それに続いて同じ評価を５６日間にわたって用いる評価によって評価された。図２０Ａは、ＡＢＣ００８投与後の様々な時点での絶対的なｓＩＦＡスコアを示す。図２０Ｂは、様々な時点におけるｍＴＵＧの改善の割合を示す。図２０Ｃは、５６日後の４つの評価全部における変化をまとめたものである。最も顕著な改善は、ベースラインで最も高いＩＢＭ疾患重症度を有していた患者第２番でみられた。
３人のＩＢＭに罹患している患者における疾患の重症度は、臨床試験ＮＣＴ０４６５９０３１において、散発性封入体筋炎身体機能評価（ｓＩＦＡ）、封入体筋炎機能評価尺度（ＩＢＭＦＲＳ）、修正されたタイムアップアンドゴー（ｍＴＵＧ）、及び徒手筋力テスト（ＭＭＴ１２）の後に単回用量のＡＢＣ００８（０．１ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与し、それに続いて同じ評価を５６日間にわたって用いる評価によって評価された。図２０Ａは、ＡＢＣ００８投与後の様々な時点での絶対的なｓＩＦＡスコアを示す。図２０Ｂは、様々な時点におけるｍＴＵＧの改善の割合を示す。図２０Ｃは、５６日後の４つの評価全部における変化をまとめたものである。最も顕著な改善は、ベースラインで最も高いＩＢＭ疾患重症度を有していた患者第２番でみられた。
【0156】
図３１Ａ～図３１Ｃは、同じ臨床試験においてＡＢＣ００８の単回漸増皮下用量（０．１、０．５及び２．０ｍｇ／ｋｇ）を受けるＩＢＭ患者の３つのコホートにわたる組み合わせた機能的読出しについて、少なくとも５６日目までのＩＢＭＦＲＳ、ＭＭＴ、及びｍＴＵＧの機能的安定性または改善に向かう傾向を示す。
【0157】
実施例２１：ＡＢＣ００８またはＡＢＣ１０８によるヒトＣＤ８陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬのインビトロ枯渇。
精製ヒトＣＤ８陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬを、ＡＢＣ００８、ＡＢＣ１０８（ＡＢＣ００８のフコシル化形態）、またはアイソタイプ対照とともに、約０．１ｎＭ～約１ｍＭの濃度でインキュベートした。ＡＢＣ００８は、ＣＤ８陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬに対してＡＢＣ１０８よりも高い効力を示した（図２１）。
精製ヒトＣＤ８陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬを、ＡＢＣ００８、ＡＢＣ１０８（ＡＢＣ００８のフコシル化形態）、またはアイソタイプ対照とともに、約０．１ｎＭ～約１ｍＭの濃度でインキュベートした。ＡＢＣ００８は、ＣＤ８陽性ＣＤ５７陽性ＬＧＬに対してＡＢＣ１０８よりも高い効力を示した（図２１）。
【0158】
実施例２２：ナイーブＴ細胞は、ＩＢＭに罹患している患者においてＡＢＣ００８によって温存される。
２つが３人のＩＢＭに罹患している患者を含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってナイーブＴ細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、１８０日間にわたってナイーブＴ細胞の約４０％未満のピーク枯渇をもたらした（図２７）。対照的に、アレムツズマブは、同じ期間にわたってナイーブＴ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２７）。
２つが３人のＩＢＭに罹患している患者を含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってナイーブＴ細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、１８０日間にわたってナイーブＴ細胞の約４０％未満のピーク枯渇をもたらした（図２７）。対照的に、アレムツズマブは、同じ期間にわたってナイーブＴ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２７）。
【0159】
実施例２３：ＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、ＩＢＭに罹患している患者においてＡＢＣ００８によって枯渇される。
２つが３人のＩＢＭに罹患している患者を含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってＣＤ８エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、ＴＥＭ細胞の約５０～７５％のピーク枯渇をもたらし、１１２～１８０日間にわたって約３０～５０％の持続的枯渇をもたらした（図２９）。比較すると、アレムツズマブは、同じ期間にわたってＴＥＭ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２９）。
２つが３人のＩＢＭに罹患している患者を含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってＣＤ８エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、ＴＥＭ細胞の約５０～７５％のピーク枯渇をもたらし、１１２～１８０日間にわたって約３０～５０％の持続的枯渇をもたらした（図２９）。比較すると、アレムツズマブは、同じ期間にわたってＴＥＭ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２９）。
【0160】
実施例２４：ＣＤ８末端分化型エフェクターメモリーＴ細胞は、ＩＢＭに罹患している患者においてＡＢＣ００８によって枯渇される。
２つが３人のＩＢＭに罹患している患者を含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってＣＤ８末端分化型エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭＲＡ）細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、ＴＥＭＲＡ細胞の約５５～９５％のピーク枯渇をもたらし、１１２～１８０日間にわたって約２０～７０％の持続的枯渇をもたらした（図３０）。比較すると、アレムツズマブは、同じ期間にわたってＴＥＭＲＡ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２９）。
２つが３人のＩＢＭに罹患している患者を含みかつ３つ目が５人の患者を含む３つのコホートへ、実施例１４に示したＡＢＣ００８を皮下投与した。ＦＡＣＳによってＣＤ８末端分化型エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭＲＡ）細胞集団をモニターし、多発性硬化症に対するアレムツズマブの試験からの履歴データと比較した。ＡＢＣ００８の投与は、ＴＥＭＲＡ細胞の約５５～９５％のピーク枯渇をもたらし、１１２～１８０日間にわたって約２０～７０％の持続的枯渇をもたらした（図３０）。比較すると、アレムツズマブは、同じ期間にわたってＴＥＭＲＡ細胞の約８０％超を枯渇させた（図２９）。
【0161】
当業者であれば、本開示の趣旨または範囲を変更することなく実施され得る多数の変更及び変形を認識するであろう。かかる変更及び変形は、本開示の範囲内に包含される。本出願を通じて引用される全ての参考文献、特許、及び公開特許出願の全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0162】
参考文献
Ｓｗｅｒｄｌｏｗ ＳＨ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ２０１６ ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｂｌｏｏｄ ２０１６；１２７（２０）：２３７５－９０。
Ｓｗｅｒｄｌｏｗ ＳＨ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ２０１６ ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｂｌｏｏｄ ２０１６；１２７（２０）：２３７５－９０。
【0163】
Ｔａｋａｔａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ＮＫ／Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ，ｎａｓａｌ ｔｙｐｅ ａｎｄ ＣＤ５６－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ａ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｉｎｅａｇｅ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ６０ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ａｓｉａ．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０１５；３９（１）：１－１２。
【0164】
Ｚｉｎｇ ＮＰＣ，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ Ｎｅｗ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｉｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ－ＰＡＲＴ ２：ＥＮＫＴＬ，ＥＡＴＬ，Ｉｎｄｏｌｅｎｔ Ｔ－Ｃｅｌｌ ＬＤＰ ｏｆ ｔｈｅ ＧＩ Ｔｒａｃｔ，ＡＴＬＬ，ａｎｄ Ｈｅｐａｔｏｓｐｌｅｎｉｃ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｌｉｓｔｏｎ Ｐａｒｋ）２０１８；３２（８）：ｅ８３－ｅ９。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20A】
【図20B】
【図20C】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31A】
【図31B】
【図31C】
【国際調査報告】