特表 2024-528885 がんの治療における使用のための、ミトコンドリアのピルビン酸輸送体阻害剤としての［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-01

(54)【発明の名称】がんの治療における使用のための、ミトコンドリアのピルビン酸輸送体阻害剤としての［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20240725BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240725BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20240725BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 146

C07D487/04 CSP

A61K31/519

A61P1/16

A61P3/00

A61P3/10

A61P9/10

A61P9/14

A61P11/00

A61P17/02

A61P17/14

A61P25/00

A61P25/16

A61P25/28

A61P35/00

A61P37/02

A61P37/04

A61P43/00 121

C12Q1/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024504980

(86)(22)【出願日】2022-08-12

(85)【翻訳文提出日】2024-03-21

(86)【国際出願番号】 EP2022072681

(87)【国際公開番号】W WO2023017154

(87)【国際公開日】2023-02-16

(31)【優先権主張番号】21191387.6

(32)【優先日】2021-08-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524033618

【氏名又は名称】エムペセ テラピューティクス エスアー

【氏名又は名称原語表記】ＭＰＣ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＳＡ

(71)【出願人】

【識別番号】503083421

【氏名又は名称】ユニベルシテ ドゥ ジュネーブ

(74)【代理人】

【識別番号】100094640

【弁理士】

【氏名又は名称】紺野 昭男

(74)【代理人】

【識別番号】100103447

【弁理士】

【氏名又は名称】井波 実

(74)【代理人】

【識別番号】100111730

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 武泰

(74)【代理人】

【識別番号】100180873

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 慶政

(72)【発明者】

【氏名】ペリー、バンジャマン

(72)【発明者】

【氏名】マルティヌ、ジャン－クロード

【テーマコード（参考）】

4B063

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B063QA20

4B063QQ02

4B063QQ08

4B063QR90

4B063QS40

4B063QX10

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB08

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA16

4C086ZA36

4C086ZA59

4C086ZA75

4C086ZA89

4C086ZA92

4C086ZB07

4C086ZB09

4C086ZB26

4C086ZC21

4C086ZC35

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、ミトコンドリアのピルビン酸輸送体（ＭＰＣ）活性を阻害することができ、免疫療法、特に、Ｔ細胞療法、免疫チェックポイント阻害剤または抗がんワクチンに有用である、化合物、方法、組成物、および使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

がん；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症；代謝性疾患、例えば、２型糖尿病；脱毛障害、例えば、脱毛症；神経変性障害、例えば、パーキンソン病もしくはアルツハイマー病；線維症、例えば、肺線維症もしくは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；皮膚もしくは組織の傷害、例えば、皮膚創傷もしくは熱傷；および脳の急性病態、例えば、脳卒中もしくは脳外傷から選択される疾患または障害の予防および／または治療における使用のための、または皮膚もしくは組織の再生における使用のための、下記式（Ｉ）の化合物：

【化1】

［式中、Ｒ１は、Ｒ５－Ｒ６部分であり；Ｒ２は、Ｈ、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、場合により置換されていてもよいアリールＣ_１－Ｃ_６アルキル、場合により置換されていてもよいヘテロアリールＣ_１－Ｃ_６アルキル、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシ、例えば、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシ置換Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、場合により置換されていてもよいＣ_３－Ｃ_８ヘテロシクロアルキル、および場合により置換されていてもよいＣ_３－Ｃ_８シクロアルキル、例えば、場合により置換されていてもよいシクロプロピルから選択され；Ｒ３は、Ｈおよび場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは、Ｈではなく；Ｒ４は、Ｈであり；Ｒ５は、結合、Ｓ、ＳＯ_２、ＮＲ９およびＯから選択され；Ｒ６は、－（ＣＲ１０Ｒ１１）_ｎ－Ｒ７基（ここで、ｎは、０～２の整数である）であり；Ｒ７は、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル、場合により置換されていてもよいＣ_２－Ｃ_６アルケニル、場合により置換されていてもよいヘテロ環、場合により置換されていてもよいアリール、例えば、場合により置換されていてもよいフェニル、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、シアノ、および－Ｃ（Ｏ）－Ｒ８から選択され；Ｒ８は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいアルコキシ、および場合により置換されていてもよいアリールから選択され；Ｒ９は、Ｈまたは場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６であり；Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、Ｈおよび場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルから選択される］、ならびにその互変異性体、幾何異性体、光学活性形態、薬学的に許容される塩および薬学的に活性な誘導体。

【請求項2】

Ｒ１が、Ｓ－Ｒ６部分である、請求項１に記載の使用のための化合物。

【請求項3】

Ｒ１が、ＮＲ９－Ｒ６部分である、請求項１に記載の使用のための化合物。

【請求項4】

Ｒ１が、Ｒ６部分である、請求項１に記載の使用のための化合物。

【請求項5】

Ｒ２が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項6】

Ｒ３が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項7】

Ｒ３が、Ｈである、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項8】

Ｒ４が、Ｈである、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項9】

Ｒ７が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項10】

Ｒ７が、場合により置換されていてもよいＣ_２－Ｃ_６アルケニルである、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項11】

Ｒ７が、場合により置換されていてもよいアリールである、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項12】

ｎが、０および１から選択される整数であり、Ｒ５が、Ｓであり、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいアリールである、請求項１～８、１１のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項13】

Ｒ７が、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項14】

以下の群：
３－［（３，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［３－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［２－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［４－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
４－フルオロ－２－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
３－［（５－フルオロ－２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－クロロ－３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（５－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン）；
３－［（４－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－フェニルエチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（フラン－３－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
４－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
３－［（１－ベンゾフラン－５－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，６－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－プロピル－３－［（１Ｈ－ピラゾール－４－イルメチル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，６－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［２－（２，４－ジフルオロフェニル）エチル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－｛２－［（４－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－｛２－［（２－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－｛２－［（３－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メトキシエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－エチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－ブチル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－シクロプロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メチルプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（シクロプロピルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（１Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（３，３，３－トリフルオロプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－ベンジル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
４－｛［（５－ベンジル－７－オキソ－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
３－（フェニルスルファニル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－６－メチル－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）アミノ］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルホニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－（２－フェニルエチル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－メチル－３－（メチルスルファニル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－メチル－３－［（４－ニトロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［（２Ｅ）－３－フェニルプロパ－２－エン－１－イル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
Ｎ－（４－エトキシフェニル）－２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセトアミド；
メチル５－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝フラン－２－カルボキシレート；
エチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］プロパノエート；
エチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］ブタノエート；
メチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］ブタノエート；
メチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］プロパノエート；
ベンジル［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセテート；
［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセトニトリル；
３－［（２－オキソ－２－フェニルエチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［２－（４－メトキシフェニル）－２－オキソエチル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
Ｎ－（５－クロロ－２－メトキシフェニル）－２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセトアミド；
５，６－ジメチル－３－（プロピルスルファニル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－［（３－メチルブチル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－［（４－ニトロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－［（３－メチルベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－［（４－メチルベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－［（３－ニトロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－クロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－｛［３－（トリフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５，６－ジメチル－３－｛［４－（トリフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－フルオロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－クロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，４－ジクロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－クロロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－フルオロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－ブロモベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－クロロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－（ベンジルスルファニル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（ナフタレン－１－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３，４－ジクロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，４－ジクロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；および
３－［（３－クロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン
から選択される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項15】

医薬としての使用のための、請求項１４に記載の化合物。

【請求項16】

以下の群：
３－［（３，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［３－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［２－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［４－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
４－フルオロ－２－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
３－［（５－フルオロ－２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－クロロ－３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（５－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－フェニルエチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（フラン－３－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（３－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
４－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
３－［（１－ベンゾフラン－５－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（４－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，６－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－プロピル－３－［（１Ｈ－ピラゾール－４－イルメチル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，６－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－｛［２－（２，４－ジフルオロフェニル）エチル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－｛２－［（４－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－｛２－［（２－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－｛２－［（３－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メトキシエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－エチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－ブチル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－シクロプロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メチルプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（シクロプロピルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（１Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（３，３，３－トリフルオロプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
５－ベンジル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
４－｛［（５－ベンジル－７－オキソ－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル；
３－（フェニルスルファニル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－６－メチル－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）アミノ］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルホニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン；および
３－（２－フェニルエチル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン
から選択される化合物。

【請求項17】

少なくとも１つの抗がん免疫療法剤、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞または免疫チェックポイント阻害剤、および少なくとも１つのその薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わされた、請求項１～１３のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物、ならびにその互変異性体、幾何異性体、光学活性形態および薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。

【請求項18】

疾患または障害を患っている対象を治療するための方法であって、前記疾患または障害が、がん；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症；代謝性疾患、例えば、２型糖尿病；脱毛障害、例えば、脱毛症；神経変性障害、例えば、パーキンソン病もしくはアルツハイマー病；線維症、例えば、肺線維症もしくは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；皮膚もしくは組織の傷害、例えば、皮膚創傷もしくは熱傷；および脳の急性病態、例えば、脳卒中もしくは脳外傷から選択され、前記方法が、有効量の１つ以上の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項19】

メモリー表現型を有するＴ細胞を得るおよび／または維持するためのインビトロ方法であって、当該方法が、以下の工程：
－ メモリー表現型に分化する能力を有する少なくとも１つのＴ細胞、例えば、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞を用意する工程；
－ 前記少なくとも１つのＴ細胞を、少なくとも１つの請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物またはそれらの混合物と接触させる工程；
－ Ｔ細胞培養培地中で前記細胞を培養する工程；
－ 得られたＴ細胞を単離する工程
を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、免疫療法、特に、養子細胞移入免疫療法およびワクチン療法の分野に関する。特に、本発明は、ミトコンドリアピルビン酸輸送体（ＭＰＣ）阻害剤およびその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

養子細胞移入（ＡＣＴ）免疫療法は、がんまたはウイルス感染症などの疾患を治療するための患者へのＴ細胞の移入である。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、特異的腫瘍抗原を標的にするキメラ抗原受容体を発現するようにエクスビボで遺伝子操作された移入Ｔ細胞（患者自身またはドナーのいずれかのもの）を含む１種のＡＣＴである。ＣＡＲ Ｔ療法は、再発性および難治性血液悪性腫瘍のための最も有望なアプローチの１つとして登場している。実際に、これは、病状が極めて重い患者が、化学療法などの従来の治療が失敗したびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を打ち負かすのを既に助けている（Ｗａｎｇら，２０１７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１０（１）：５３）。しかしながら、ＣＡＲ Ｔ療法は、がんの症例の大部分を占める（米国においてがんの症例のおよそ９０％）固形腫瘍に対して限定的な効果しか示していない。特に、患者への注入後のＴ細胞の増殖および持続の欠如が、固形腫瘍におけるＣＡＲ－Ｔ療法の不十分な効果に対する大部分の原因であることが示されている。また、９０％程度の高い完全寛解率を有する血液悪性腫瘍であっても、患者は、インビボでのＣＡＲ－Ｔ細胞の不十分な持続を理由として、再発のリスクが残っている（Ｇａｕｔｈｉｅｒら，２０１７，Ｃｕｒｒ Ｒｅｓ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ，６５（３）：９３－１０２）。したがって、インビボで生存し、拡大増殖し、持続するＣＡＲ Ｔ細胞を開発するための満たされていない必要性が存在する。

【0003】

１つの戦略は、初期メモリー表現型を有するＴ細胞を注入することである。それらの分化段階に従って、Ｔ細胞は、関連する機能性および性質を有する固有の表現型を提示する。最近、臨床応答が、Ｔ細胞分化の状態に関連することが明らかになっている（Ｌｅｃｕｒｏｕｘら，２００９，Ｂｌｏｏｄ，１１３（１４）：３２０９－３２１７）。歴史的に見て、ＡＣＴは、それらの強力な死滅能力に起因して、最終分化Ｔ「エフェクター」細胞を使用していた。しかしながら、Ｔ「エフェクター」細胞は、インビボで拡大増殖および持続する能力が乏しい。マウス腫瘍モデルにおいて、自己複製する、初期メモリー表現型を有するＴ細胞の注入が、より強く、より持続する抗腫瘍応答を付与することが示されている（Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら，２０１１，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１７，５３４３－５３５２）。さらにまた、ある特定の代謝プロセス単独の阻害または刺激が、細胞が感染マウスまたは腫瘍保持マウスに再注入されると、対応するインビボ効果を伴って、メモリー分化に対してエフェクターを誘導するのに十分であることが示されている（Ｂａｌｍｅｒら，２０１６，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４４，１３１２－１３２４；Ｐｈａｎら，２０１６，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４５，１０２４－１０３７）。しかしながら、現在の戦略は、Ｔ細胞増殖を著しく阻害し、したがって、ＡＣＴ免疫療法のためのＴ細胞のエクスビボ製造プロセスの間の補充としての使用に好適ではない。そのため、メモリー表現型を有するＴ細胞を得るための改善された方法に対する必要性が存在する。

【0004】

さらに、ワクチンのためのアジュバントを改善する必要性が存在する。実際に、病原体感染およびがんの文脈において予防的および治療的ワクチン接種の主な目標の１つは、強力なメモリーＴ細胞プールの確立である。ワクチン接種のための現在のアジュバントは、アルミニウム塩およびエマルジョン、またはすべてが抗原提示細胞（ＡＰＣ）を標的にし、活性化するように設計された、より具体的なパターン認識受容体アゴニストのいずれかである。これは、ウイルス中和および／または排除（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２など）の成功のための必要要件である液性免疫および細胞免疫の両方の高効率の活性化を常にもたらすわけではない（Ｐｕｌｅｎｄｒａｎら，２０２１，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２０，４５４－４７５）。

【0005】

最近、Ｔ細胞メモリー形成およびメタボリックフィットネスをブーストする標的化ミトコンドリア代謝が、ＣＡＲ－Ｔ療法を含むがん免疫療法を改善するための魅力的な戦略となる可能性があることが示された（Ｌｉら ２０２０，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１：１８３４）。

【0006】

ピルビン酸は、いくつかの生物学的プロセスに関与する代謝産物であり、細胞呼吸において特に重要である。サイトゾルにおける解糖の最終産物であるピルビン酸は、クレブス回路をあおり、酸化的リン酸化およびＡＴＰ産生をブーストするためにミトコンドリアに入る必要がある。ミトコンドリアに入るために、ピルビン酸は、ミトコンドリア外膜を横断して、大きく、比較的非特異的な、電位依存性アニオンチャネルをおそらく通って、膜間部分に達し、これは、次いで、ミトコンドリアピルビン酸輸送体（ＭＰＣ）によって、ミトコンドリア内膜を横断して、プロトンと一緒に輸送される（Ｐａｐａら，１９７１，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１２，２８５－２８８）。ＭＰＣの存在は、数十年前に理論的基礎として提案されたが、ＭＰＣ複合体の分子的同定は、２０１２年に初めて達成された（Ｈｅｒｚｉｇら，２０１２、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３７、９３－９６）。ピルビン酸のミトコンドリアマトリックスへの移行の唯一のポイントとして、ＭＰＣは、解糖およびミトコンドリア活動の調整において重要な役割を果たし、これは、細胞エネルギー産生および代謝をモジュレートするための重要な決定ポイントを提供する。

【0007】

ＭＰＣが、胚発生から加齢関連神経変性まで、人間の生存期間にわたって多くの生理学的および病理学的プロセスにおいて極めて重要な役割を果たすことが最近報告された（Ｂｕｃｈａｎａｎら，２０２０，Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１０（８）：１１６２；Ｚａｎｇａｒｉら，２０２０，Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１０（７）：１０６８）。特に、ＭＰＣは、がん細胞代謝および腫瘍形成において重要なものである（Ｒｕｉｚ Ｉｇｌｅｓｉａｓら，２０２１，Ｃａｎｃｅｒｓ ２０２１，１３，１４８）。

【0008】

特に、ＭＰＣの遺伝的阻害が、腸および皮膚を含むさまざまな組織において幹細胞の増殖を刺激することが示されている（Ｆｌｏｒｅｓら，２０２１，Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，３０（４）：４４８－４５６；Ｓｃｈｅｌｌら，２０１７，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９（９）：１０２７－１０３６）。

【0009】

さらに、ＭＰＣの遺伝的阻害が、２型糖尿病を含む代謝性疾患（Ｈｏｊｌｕｎｄら，２００８，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．，３７（３）：７１３－３）、およびがんにおいて、益々一般的な肝臓疾患である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（Ｈａｒｉｓｓｏｎら，２０２０，Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，７２，６１３－６２６）を治療するための興味深い治療戦略であり、放射線療法を含む既存のがん治療を強化すること（Ｃｏｒｂｅｔら，２０１８，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，９，１２０８）が示されている。

【0010】

したがって、がんワクチン、養子細胞免疫療法、免疫チェックポイント遮断および腫瘍溶解性ウイルスなどのがん免疫療法におけるさまざまな戦略の最近の開発を考慮して、それらの有効性に対して遭遇する限界もあるが、固形腫瘍がんのための、特に、がんワクチン治療を強化するであろう免疫療法に対する抵抗性を発達させやすいがんのための効率的な抗がん療法を開発する必要性が増加している。さらに、さまざまな障害におけるＭＰＣ活性の役割をさらに理解するために、効率的なＭＰＣ阻害剤の開発に対する必要性が存在する。

【発明の概要】

【0011】

本発明は、ＡＣＴ製品の調製のためのＴ細胞培養の間の本発明の化合物による薬理学的ＭＰＣ阻害が、メモリー表現型および改善された抗腫瘍活性を獲得するのに深く関与する活性化Ｔ細胞の割合の増加を誘導することができるという予想外の知見に向けられている。したがって、本発明によるＭＰＣ阻害剤は、特に、ＣＡＲ Ｔ療法のために、ならびに／またはがんワクチンおよび／もしくは感染性疾患に対するワクチンのために、がんの特異的免疫療法、特に、養子Ｔ細胞移入アプローチ（ＡＣＴ）において、高い興味が持たれるものであると考えられる。

【0012】

本発明は、ＭＰＣの活性を阻害するため、したがって、特に、ＡＣＴを含むがん治療の有効性および耐久性を増強するため、腸、皮膚および脳を含むさまざまな組織における幹細胞の増殖を刺激するため、肝臓、肺、膵臓、筋肉を含むいくつかの器官の炎症および線維症を減少させるため、腫瘍の発生を減少させ、ならびに／または免疫チェックポイント阻害剤および放射線療法を含む既存のがん治療を強化するための、有用な組成物および方法を対象とする。

【0013】

本発明の第１の態様は、疾患または障害の予防および／または治療のための本発明の化合物であって、前記疾患または障害が、がん；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症；代謝性疾患、例えば、２型糖尿病；脱毛障害、例えば、脱毛症；神経変性障害、例えば、パーキンソン病またはアルツハイマー病；線維症、例えば、肺線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；皮膚または組織の傷害、例えば、皮膚創傷または熱傷；および脳の急性病態、例えば、脳卒中または脳外傷から選択される、化合物を提供する。

【0014】

本発明の別の態様は、皮膚または組織の再生における使用のための本発明の化合物を提供する。

【0015】

本発明の別の態様は、疾患または障害の予防および／または治療のための医薬組成物の調製のための１つ以上の本発明の化合物の使用であって、前記疾患または障害が、がん；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症；代謝性疾患、例えば、２型糖尿病；脱毛障害、例えば、脱毛症；神経変性障害、例えば、パーキンソン病またはアルツハイマー病；線維症、例えば、肺線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；皮膚または組織の傷害、例えば、皮膚創傷または熱傷；および脳の急性病態、例えば、脳卒中または脳外傷から選択される、使用を提供する。

【0016】

本発明の別の態様は、少なくとも１つの抗がん免疫療法剤、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞または免疫チェックポイント阻害剤、および少なくとも１つのその薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わされた、少なくとも１つの本発明による化合物、ならびにその互変異性体、幾何異性体、光学活性形態および薬学的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。

【0017】

本発明の別の態様は、疾患または障害を患っている対象を治療するための方法であって、前記疾患または障害が、がん；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症；代謝性疾患、例えば、２型糖尿病；脱毛障害、例えば、脱毛症；神経変性障害、例えば、パーキンソン病またはアルツハイマー病；線維症、例えば、肺線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；皮膚または組織の傷害、例えば、皮膚創傷または熱傷；および脳の急性病態、例えば、脳卒中または脳外傷から選択され、前記方法が、有効量の１つ以上の本発明の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法に関する。

【0018】

本発明の別の態様は、記載されるＭＰＣ阻害剤、それらの医薬製剤、および医薬としてのそれらの使用に関する。

【0019】

本発明の別の態様は、メモリー表現型を有するＴ細胞を生成するおよび／または維持するためのインビトロ方法に関する。

【0020】

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】図１は、実施例３に記載される、治療プロトコール（Ａ）、およびメモリー特性に対するミトコンドリアピルビン酸輸送体を阻害する化合物（ＭＰＣｉ）によるマウスＣＤ８ Ｔ細胞のインビトロ治療の効果（Ｂ～Ｃ）を表す。（Ａ）インビトロマウスＣＤ８ Ｔ細胞の活性化および治療の略図。（Ｂ～Ｃ）メモリーマーカーＣＤ６２Ｌ（Ｂ）およびＣＤ１２７（Ｃ）に陽性の細胞のパーセンテージを示す７日目のＦＡＣＳ分析。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＞０．０１、^＊＊＊ｐ＞０．０１。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。

【図2】図２は、実施例４に記載される、治療プロトコール（Ａ）、およびマウス黒色腫モデルにおける本発明の化合物（Ｃ４５）の抗腫瘍活性（Ｂ～Ｓ）を表す。（Ｂ～Ｃ）化合物４５もしくはＤＭＳＯ処理細胞の移入の際のマウス、または未治療マウスにおける、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍の成長（Ｂ）および体重（Ｃ）。（Ｄ～Ｇ）移入細胞（Ｄ）、短命エフェクター細胞（Ｅ）、メモリー前駆細胞（Ｆ）およびセントラルメモリー細胞（Ｇ）のパーセンテージを示すＡＣＴ後９日目の血液分析；（Ｈ～Ｋ）移入細胞（Ｈ）、消耗細胞（Ｉ）、最終消耗細胞（Ｊ）および前駆消耗細胞（Ｋ）のパーセンテージを示す腫瘍浸潤性Ｔ細胞の分析。（Ｌ～Ｎ）移入細胞（Ｌ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｍ）およびＴＣＦ１を発現するＴ細胞（Ｎ）のパーセンテージを示す脾臓の分析。（Ｏ～Ｓ）オボアルブミン（Ｏｖａｌｂｕｂｉｎ）Ｎ４ペプチドで４時間再刺激された腫瘍の単一細胞懸濁液。ＩＦＮγ（Ｏ）、ＴＮＦα（Ｐ）、ＩＬ２（Ｑ）、グランザイムＢ（Ｒ）およびＣＤ１０７ａ（Ｓ）発現を、フローサイトメトリーによって測定した。ｎｓ：有意でない、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＞０．０１、^＊＊＊ｐ＞０．００１。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。

【図3】図３は、実施例４に記載される、治療プロトコール（Ａ）、およびマウス黒色腫モデルにおける本発明の化合物（Ｃ４５）の抗腫瘍活性（Ｂ～０）を表す（１０^５個のみの代わりに、２×１０^６個のＤＭＳＯまたは化合物４５処理ＯＴ１Ｔ細胞を移入する）。（Ｂ～Ｃ）化合物４５もしくはＤＭＳＯ処理細胞の移入の際のマウス、または未治療マウスにおける、Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍の成長（Ｂ）および体重（Ｃ）。（Ｄ～Ｇ）移入細胞（Ｄ）、消耗細胞（Ｅ）、最終消耗細胞（Ｆ）および前駆消耗細胞（Ｇ）の数を示す腫瘍浸潤性Ｔ細胞の分析。（Ｈ～Ｊ）移入細胞（Ｈ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｉ）およびＴＣＦ１を発現するＴ細胞（Ｊ）の数を示す脾臓の分析。（Ｋ～Ｏ）Ｎ４ペプチドで４時間再刺激された腫瘍の単一細胞懸濁液。ＩＦＮγ（Ｋ）、ＴＮＦα（Ｌ）、ＩＬ２（Ｍ）、グランザイムＢ（Ｎ）およびＣＤ１０７ａ（Ｏ）発現を、フローサイトメトリーによって測定した。ｎｓ：有意でない、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＞０．０１、^＊＊＊ｐ＞０．００１。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。

【図4】図４および５は、実施例５に記載される、実験設計（４Ａ）、ならびにマウスＣＡＲ Ｔ細胞の産生の間の本発明の化合物の、養子細胞移入療法の際のそれらのメモリー表現型および抗腫瘍機能を改善する効果（４Ｂ～Ｆおよび５Ａ～Ｋ）を表す。（４Ｂ）腫瘍成長曲線；（４Ｃ）解剖時の腫瘍重量Ｔ；（４Ｄ）血液１μｌあたりのＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞の数；（４ＥおよびＦ）Ｈｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちの短命エフェクター細胞（４Ｅ）およびメモリー前駆細胞（４Ｆ）のパーセンテージ。ｎｓ：有意でない、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＞０．０１。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。（５Ａ）腫瘍流入領域リンパ節あたりのＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞の数；（５Ｂ）リンパ節におけるＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちのセントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージ；（５Ｃ）リンパ節におけるＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちのＴＣＦ１陽性細胞のパーセンテージ；（５Ｄ）脾臓あたりのＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞の数；（５Ｅ）脾臓におけるＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちのセントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージ；（５Ｆ）脾臓におけるＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちのＴＣＦ１陽性細胞のパーセンテージ；（５Ｇ）腫瘍１ｍｇあたりのＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞の数。（５Ｈ）腫瘍におけるＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちのＴＣＦ１陽性細胞のパーセンテージ；（５ＩおよびＪ）腫瘍におけるＨｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のうちの前駆消耗Ｔ細胞（Ｉ）および最終消耗Ｔ細胞（５Ｊ）のパーセンテージ；（５Ｋ）腫瘍における消耗マーカー（ＰＤ１およびＴＩＭ３）発現Ｈｅｒ２－ＣＡＲ Ｔ細胞のパーセンテージ。ｎｓ：有意でない、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＞０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。

【図5】上記に同じ。

【発明を実施するための形態】

【0022】

「固形腫瘍がん」という表現は、神経膠芽腫、肺がん（小細胞および非小細胞）、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、頭頸部がん、黒色腫、肝細胞癌、結腸がん、直腸がん、結腸直腸癌、腎臓がん、前立腺がん、胃がん、気管支がん、膵臓がん、膀胱がん、肝がんおよび脳がん、特に、神経膠芽腫を含む。

【0023】

「液体腫瘍がん」という表現は、リンパ腫および白血病を含む。

【0024】

「免疫療法剤」という表現は、がんなどの疾患と戦う免疫系をサポートする薬剤を指す。現在、４つの主なカテゴリー：Ｔ細胞療法、免疫チェックポイント阻害剤、モノクローナル抗体およびがんワクチンがある。

【0025】

本明細書において使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」および「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などは、一般に、所望の薬理学的および生理学的効果を得ることを意味する。「治療」という用語は、本明細書において使用される場合、哺乳動物、特に、ヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、疾患を阻害すること、すなわち、その発生を停止させること；あるいは疾患を緩和すること、すなわち、疾患および／またはその症状もしくは状態の縮小、例えば、腫瘍成長の停止または腫瘍縮小を引き起こすことを含む。

【0026】

「対象」という用語は、本明細書において使用される場合、哺乳動物を指す。例えば、本発明によって企図される哺乳動物としては、ヒト、霊長類、飼育動物、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、実験用げっ歯動物、イヌなどが挙げられる。

【0027】

「有効量」という用語は、本明細書において使用される場合、求められる組織、系、動物、またはヒトにおける生物学的または医薬的応答を誘発する本発明による少なくとも１つの粒子またはその医薬製剤の量を指す。一実施形態において、有効量は、治療される疾患または状態の症状の軽減のための「治療有効量」である。典型的には、有効量は、がん細胞の成長を阻害する、すなわち、がん細胞の増殖および／もしくは移動の速度を任意に遅延させること、がん細胞の増殖および／もしくは移動の停止、またはがん細胞の死滅のために使用することができ、その結果、がん細胞の成長の速度は、未治療対照がん細胞の成長の観察速度または予測速度と比較して、低減される。「成長を阻害する」という用語は、がん細胞または腫瘍のサイズの低減または消失、およびその転移可能性の低減も指し得る。好ましくは、細胞レベルでのそのような阻害は、患者におけるがんのサイズを低減し、成長を延期させ、攻撃性を低減し、または転移を予防もしくは阻害し得る。当業者は、がん細胞の成長が阻害されるかどうかを、各種の好適な兆候のいずれかによって容易に決定することができる。

【0028】

本発明による治療の「有効性」という用語は、本発明による使用または方法に応答した疾患の過程における変化に基づいて測定することができる。本発明によるがんの治療の有効性は、腫瘍体積の低減、ならびに／または対象の無増悪生存期間の増加および／もしくは健康と福祉の増加（例えば、がんを抑制すること）によって測定することができる。がん細胞の成長の阻害は、例えば、細胞周期の特定の段階におけるがん細胞の停止、例えば、細胞周期のＧ２／Ｍ期での停止によって証明されてもよい。がん細胞の成長の阻害は、周知のイメージング法、例えば、磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、光音響イメージング、Ｘ線および蛍光イメージング／検出を使用して証明することもできる。がん細胞の成長は、例えば、循環癌胎児抗原、前立腺特異抗原、またはがん細胞の成長と相関する他のがん特異抗原のレベルを決定することによって、間接的に決定することもできる。

【0029】

特に、本発明による併用治療の有効性は、腫瘍サイズの低減、または腫瘍、もしくはがん型に関連する任意のバイオマーカーの消失によって評価することができる。養子細胞移入（ＡＣＴ）の文脈において、有効性は、腫瘍への移入Ｔ細胞浸潤、リンパ節への移入Ｔ細胞の移動、またはＴ細胞「プロファイル」もしくは「分化状態」の任意の変化を評価することによって測定することもできる。

【0030】

本発明による細胞、特に、Ｔ細胞または任意の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の「プロファイル」という用語は、本発明による使用または方法に対する、応答における遺伝子発現もしくは細胞表面マーカーの変化、ならびに／または対照と比較した基礎酸素消費量、最大呼吸容量および／もしくは予備呼吸能力の増加に基づいて測定することができる。

【0031】

より具体的には、「メモリー表現型」という用語は、本明細書において使用される場合、一部の態様において少なくともメモリーＴ細胞と似ている細胞状態として定義される。「メモリー様Ｔ細胞」という用語は、本明細書において、「メモリー表現型」という用語と互換的に使用される。メモリー表現型に関連する重要な特徴は、細胞の長寿命である。長寿命は、細胞または前駆体が、例えば、治療効果を誘発することが可能な対象において、分裂なしまたはゆっくりとした分裂で、十分に長く生存することを意味する。特に、メモリー表現型を有する細胞は、幹細胞様の性質を有する。長寿命は、好ましくは、増殖を含む自己再生に起因する。自己再生は、本明細書において使用される場合、厳密な意味を意味しないが、必ずしも同一ではないが、治療上関連する期間、ほぼ類似の表現型を維持する能力も含む。自己再生は、寿命全体、またはそれを超えて維持することができるが、本明細書において使用される場合、治療目的のために十分長く維持されれば十分である。治療上関連する期間は、対象において、治療効果を有するのに十分長く移入細胞またはそれらの子孫が持続することを意味する。メモリー表現型を有するＴ細胞が生きている、好ましくは、増殖している間、それは、典型的には、エフェクター細胞に分化する能力を維持する。そのため、エフェクターＴ細胞を生成する能力は、メモリー表現型に関連する別の重要な特徴である。そのため、メモリー表現型を有するＴ細胞は、むしろ早期に老化して死滅する傾向があるエフェクター細胞それ自身よりも多数の治療的に活性なエフェクター細胞を産生することができる。メモリー表現型に関連する重要な機能的特徴は、他の細胞集団と比べて測定することもできる。例えば、長寿命、自己再生および／またはエフェクター細胞に分化する能力は、エフェクター細胞、最終分化細胞および／または老化細胞と比較されてもよい。

【0032】

メモリー表現型のための好適な陽性発現マーカー（メモリーマーカー）、特に、ＣＤ８＋ Ｔ細胞のもの、しかしまた少なくとも部分的に、ＣＤ４＋ Ｔ細胞および／またはＢ細胞のものは、例えば、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７および／またはＴＣＦ１である。

【0033】

メモリー表現型に関連する別の重要な特徴は、例えば、メモリーＴ細胞で観察されるような、抗原の再遭遇に対する（再）活性化の増加した振幅で細胞が反応する能力である。

【0034】

個々の置換基の定義によって他に拘束されないかぎり、「置換され」（「置換される」、または「置換された」）という用語は、「Ｃ_１－Ｃ_６アルキル」、「Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル」、「Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル」、「Ｃ_３－Ｃ_８－シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール」、「Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリール」、「Ｃ_１－Ｃ_６アルキルシクロアルキル」、「Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロシクロアルキル」、「アミノ」、「アルキルアミノ」、「アリールアミノ」、「ヘテロアリールアミノ」および「アリールオキシ」、「ヘテロアリールオキシ」、「ウレア」、「アミノスルホニル」、「アンモニウム」、「アルコキシ」、「アシル」、「アシルアミノ」、「アミノカルボニル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「スルフィニル」、「スルホニル」、「スルホンアミド」、「アルコキシ」、「アルコキシカルボニル」、「カルバメート」、「スルファニル」、「ハロゲン」、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロなどからなる群から選択される１～５個の置換基で置換されるまたは置換された基を指す。

【0035】

「薬学的に許容される塩または錯体」という用語は、下記に規定される本発明の化合物の塩または錯体を指す。そのような塩の例としては、制限されるものではないが、本発明の化合物と、有機もしくは無機塩基、例えば、アルカリ金属（ナトリウム、カリウムまたはリチウム）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）からなる群において選択されるものなどの金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などとの、または有機第一級、第二級もしくは第三級アルキルアミンとの反応によって形成される塩基付加塩が挙げられる。そのような塩の他の例としては、制限されるものではないが、本発明の化合物と、有機または無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、パラ－トルエンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、カンファースルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸などとの反応によって形成される酸付加塩が挙げられる。

【0036】

本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物の同位体異性体、例えば、重水素化およびＣ１３アナログも含む。

【0037】

「薬学的に活性な誘導体」は、投与の際に、レシピエントが、本明細書に開示される活性を直接的にまたは間接的に提供することができる任意の化合物を指す。

【0038】

本発明による化合物
一実施形態において、本発明は、がん；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症；代謝性疾患、例えば、２型糖尿病；脱毛障害、例えば、脱毛症；神経変性障害、例えば、パーキンソン病またはアルツハイマー病；線維症、例えば、肺線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；皮膚または組織の傷害、例えば、皮膚創傷または熱傷；および脳の急性病態、例えば、脳卒中または脳外傷から選択される疾患もしくは障害の予防および／または治療における使用のための、または皮膚もしくは組織の再生における使用のための、式（Ｉ）の化合物：

【化1】

［式中、Ｒ１は、Ｒ５－Ｒ６部分であり；Ｒ２は、Ｈ、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル（場合により置換されていてもよいメチル、場合により置換されていてもよいエチル、場合により置換されていてもよいプロピル、例えば、トリフルオロプロピル、場合により置換されていてもよいブチル、場合により置換されていてもよいｔ－ブチルなど）、場合により置換されていてもよいアリール、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、場合により置換されていてもよいアリールＣ_１－Ｃ_６アルキル（場合により置換されていてもよいアリールメチル、例えば、場合により置換されていてもよいフェニルメチル）、場合により置換されていてもよいヘテロアリールＣ_１－Ｃ_６アルキル、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシ、例えば、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシ置換Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、例えば、場合により置換されていてもよいエトキシ（例えば、場合により置換されていてもよいエトキシベンジル、例えば、場合により置換されていてもよいエトキシハロゲノベンジル、すなわち、２－クロロベンジルオキシエチルまたは３－クロロベンジルオキシエチル、４－クロロベンジルオキシエチル、または場合により置換されていてもよいエトキシメチル）など、場合により置換されていてもよいメトキシ（例えば、場合により置換されていてもよいメトキシメチル）、場合により置換されていてもよいＣ_３－Ｃ_８ヘテロシクロアルキル、および場合により置換されていてもよいＣ_３－Ｃ_８シクロアルキル、例えば、場合により置換されていてもよいシクロプロピルから選択され；Ｒ３は、Ｈおよび場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、場合により置換されていてもよいメチル）から選択され、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは、Ｈではなく；Ｒ４は、Ｈであり；Ｒ５は、結合、Ｓ、ＳＯ_２、ＮＲ９およびＯから選択され；Ｒ６は、－（ＣＲ１０Ｒ１１）_ｎ－Ｒ７基（ここで、ｎは、０～２の整数である）であり；Ｒ７は、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、場合により置換されていてもよいメチル、場合により置換されていてもよいプロピル、場合により置換されていてもよいｔ－ブチル）、場合により置換されていてもよいＣ_２－Ｃ_６アルケニル（例えば、３－フェニルプロピレニル）、場合により置換されていてもよいヘテロ環、場合により置換されていてもよいアリール、例えば、場合により置換されていてもよいフェニル（例えば、４－ニトロフェニル、２－ニトロフェニル、３－ニトロフェニル、４－ニトロフェニル、２－フルオロフェニル、３－フルオロフェニル、２，５－ジフルオロフェニル、２，４－ジフルオロフェニル、３，５－ジフルオロフェニル、２，４－ジフルオロフェニル、２，６－ジフルオロフェニル、３－（ジフルオロメチル）フェニル、２－（ジフルオロメチル）フェニル、４－（ジフルオロメチル）フェニル、３，４－ジフルオロフェニル、２－クロロ－６－フルオロフェニル、２－クロロフェニル、２－クロロ－５－フルオロフェニル、３－クロロ－５－フルオロフェニル、４－クロロ－３－フルオロフェニル、３－クロロフェニル、２，４－ジクロロフェニル、３，４－ジクロロフェニル、４－クロロフェニル、５－フルオロ－２－メチルフェニル、４－フルオロ－２－ベンゾニトリル、２，５－ジメチルフェニル、３－メチルフェニル、４－メチルフェニル、３－（トリフルオロメチル）フェニル、４－（トリフルオロメチル）フェニル、５－フルオロ－２－メトキシフェニル、２－メトキシフェニル、３－メトキシフェニル、４－メトキシフェニル、４－ブロモフェニル）、場合により置換されていてもよいナフタレニル（例えば、場合により置換されていてもよいナフタレン－１－イル）、場合により置換されていてもよいヘテロアリール、例えば、場合により置換されていてもよいフラニル（例えば、場合により置換されていてもよいフラン－３－イル、例えば、フラニル、メトキシカルボニルフラニル）、場合により置換されていてもよいピラゾリル、場合により置換されていてもよいピリジニル（例えば、場合により置換されていてもよいピリジン－４－イル）、場合により置換されていてもよいベンゾフラニル（例えば、１－ベンゾフラニル）、シアノおよびＣ（Ｏ）－Ｒ８から選択され；Ｒ８は、場合により置換されていてもよいアミノ（例えば、場合により置換されていてもよい４－エトキシフェニルアミノ）、場合により置換されていてもよいアルコキシ（例えば、場合により置換されていてもよいメトキシ、場合により置換されていてもよいエトキシ）、および場合により置換されていてもよいアリール（例えば、場合により置換されていてもよいフェニル、例えば、フェニル、２－メトキシフェニル、２－クロロ－６－フルオロフェニル）から選択され；Ｒ９は、Ｈまたは場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、場合により置換されていてもよいメチル、場合により置換されていてもよいエチル）であり；Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、Ｈおよび場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、場合により置換されていてもよいメチル、場合により置換されていてもよいエチル）から選択される］；ならびにその互変異性体、幾何異性体、光学活性形態、薬学的に許容される塩および薬学的に活性な誘導体を提供する。

【0039】

特定の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物の同位体異性体、例えば、重水素化およびＣ１３アナログが提供される。

【0040】

特定の態様によれば、Ｒ１が、Ｓ－Ｒ６部分である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0041】

特定の態様によれば、Ｒ１が、ＮＲ９－Ｒ６部分である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0042】

特定の態様によれば、Ｒ１が、ＮＨ－Ｒ６部分である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0043】

特定の態様によれば、Ｒ１が、Ｒ６部分である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0044】

特定の態様によれば、Ｒ２が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0045】

特定の態様によれば、Ｒ２が、場合により置換されていてもよいプロピルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0046】

特定の態様によれば、Ｒ３が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0047】

特定の態様によれば、Ｒ３が、場合により置換されていてもよいメチルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0048】

特定の態様によれば、Ｒ３が、Ｈである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0049】

特定の態様によれば、ｎが、０である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0050】

特定の態様によれば、ｎが、１である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0051】

特定の態様によれば、ｎが、２である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0052】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0053】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいＣ_２－Ｃ_６アルケニルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0054】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいアリールである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0055】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいフェニルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0056】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいヘテロアリールである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0057】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいフラニルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0058】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいピラゾリルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0059】

特定の態様によれば、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいピリジニルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0060】

特定の態様によれば、Ｒ７が、シアノである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0061】

特定の態様によれば、Ｒ９が、Ｈである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0062】

特定の態様によれば、Ｒ１０が、Ｈである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0063】

特定の態様によれば、Ｒ１０が、場合により置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルキルである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0064】

特定の態様によれば、Ｒ１１が、Ｈである、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0065】

特定の態様によれば、ｎが、０～１から選択される整数であり、Ｒ５が、Ｓであり、Ｒ７が、場合により置換されていてもよいアリール（例えば、場合により置換されていてもよいフェニル）である、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0066】

特定の態様によれば、前記化合物がＭＰＣに対する阻害活性を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0067】

さらなる特定の実施形態において、本発明の化合物は、特に、以下の群：
３－［（３，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１）；
３－［（２－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２）；
３－［（３，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３）；
３－｛［３－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４）；
３－｛［２－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５）；
３－｛［４－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６）；
３－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（７）；
４－フルオロ－２－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（８）；
３－［（５－フルオロ－２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９）；
３－［（３－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１０）；
３－［（４－クロロ－３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１１）；
３－［（５－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１２）；
３－［（４－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１３）；
３－［（２－フェニルエチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１４）；
３－［（フラン－３－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１５）；
３－［（２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１６）；
３－［（３－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１７）；
４－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（１８）；
３－［（１－ベンゾフラン－５－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１９）；
３－［（４－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２０）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２１）；
３－［（２，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２２）；
３－［（２，６－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２３）；
５－プロピル－３－［（１Ｈ－ピラゾール－４－イルメチル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２４）；
３－［（２，６－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２５）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２６）；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２７）；
３－｛［２－（２，４－ジフルオロフェニル）エチル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２８）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２９）；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３０）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３１）；
５－｛２－［（４－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３２）；
５－｛２－［（２－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３３）；
５－｛２－［（３－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３４）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メトキシエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３５）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３６）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－エチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３７）；
５－ブチル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３８）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－シクロプロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３９）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メチルプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４０）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（シクロプロピルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４１）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４２）；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（１Ｈ）－オン（４３）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（３，３，３－トリフルオロプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４４）；
５－ベンジル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４５）；
４－｛［（５－ベンジル－７－オキソ－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（４６）；
３－（フェニルスルファニル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４７）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－６－メチル－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４８）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）アミノ］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４９）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルホニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５０）；
３－（２－フェニルエチル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５１）；
３－［（２－クロロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５２）；
５－メチル－３－（メチルスルファニル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５３）；
５－メチル－３－［（４－ニトロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５４）；
３－｛［（２Ｅ）－３－フェニルプロパ－２－エン－１－イル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５５）；
Ｎ－（４－エトキシフェニル）－２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセトアミド（５６）；
メチル５－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝フラン－２－カルボキシレート（５７）；
エチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］プロパノエート（５８）；
エチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］ブタノエート（５９）；
メチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］ブタノエート（６０）；
メチル２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］プロパノエート（６１）；
ベンジル［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセテート（６２）；
［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセトニトリル（６３）；
３－［（２－オキソ－２－フェニルエチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６４）；
３－｛［２－（４－メトキシフェニル）－２－オキソエチル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６５）；
Ｎ－（５－クロロ－２－メトキシフェニル）－２－［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］アセトアミド（６６）；
５，６－ジメチル－３－（プロピルスルファニル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６７）；
５，６－ジメチル－３－［（３－メチルブチル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６８）；
５，６－ジメチル－３－［（４－ニトロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６９）；
５，６－ジメチル－３－［（３－メチルベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７０）；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７１）；
５，６－ジメチル－３－［（４－メチルベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７２）；
５，６－ジメチル－３－［（３－ニトロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７３）；
３－［（４－クロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７４）；
３－［（２－クロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７５）；
５，６－ジメチル－３－｛［３－（トリフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７６）；
５，６－ジメチル－３－｛［４－（トリフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７７）；
３－［（２－フルオロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７８）；
３－［（３－クロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（７９）；
３－［（２，４－ジクロロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８０）；
３－［（３－クロロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８１）；
３－［（３－フルオロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８２）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８３）；
３－［（４－ブロモベンジル）スルファニル］－５，６－ジメチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８４）；
３－［（４－クロロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８５）；
３－（ベンジルスルファニル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８６）；
３－［（２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８７）；
３－［（３－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８８）；
３－［（４－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（８９）；
３－［（ナフタレン－１－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９０）；
３－［（３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９１）；
３－［（４－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９２）；
３－［（２－クロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９３）；
３－［（３，４－ジクロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９４）；
３－［（２－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９５）；
３－［（２，４－ジクロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９６）；
３－［（３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９７）；
３－［（２－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９８）；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９９）；および
３－［（３－クロロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１００）
から選択される化合物を含む。

【0068】

別のさらなる特定の実施形態において、医薬としての使用のための化合物であって、本明細書に定義される化合物（１）～（１００）から選択される化合物が提供される。

【0069】

別のさらなる特定の実施形態において、以下の群：
３－［（３，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１）；
３－［（２－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２）；
３－［（３，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３）；
３－｛［３－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４）；
３－｛［２－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５）；
３－｛［４－（ジフルオロメチル）ベンジル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（６）；
３－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（７）；
４－フルオロ－２－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（８）；
３－［（５－フルオロ－２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（９）；
３－［（３－クロロ－５－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１０）；
３－［（４－クロロ－３－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１１）；
３－［（５－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１２）；
３－［（４－フルオロ－２－メチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１３）；
３－［（２－フェニルエチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１４）；
３－［（フラン－３－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１５）；
３－［（２－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１６）；
３－［（３－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１７）；
４－｛［（７－オキソ－５－プロピル－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（１８）；
３－［（１－ベンゾフラン－５－イルメチル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（１９）；
３－［（４－メトキシベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２０）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２１）；
３－［（２，４－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２２）；
３－［（２，６－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２３）；
５－プロピル－３－［（１Ｈ－ピラゾール－４－イルメチル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２４）；
３－［（２，６－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２５）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２６）；
３－［（２，５－ジメチルベンジル）スルファニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２７）；
３－｛［２－（２，４－ジフルオロフェニル）エチル］スルファニル｝－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２８）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（２９）；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３０）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３１）；
５－｛２－［（４－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３２）；
５－｛２－［（２－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３３）；
５－｛２－［（３－クロロベンジル）オキシ］エチル｝－３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３４）；
３－［（２，５－ジフルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メトキシエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３５）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３６）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－エチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３７）；
５－ブチル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３８）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－シクロプロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（３９）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（２－メチルプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４０）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（シクロプロピルメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４１）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（メトキシメチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４２）；
５－［２－（ベンジルオキシ）エチル］－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（１Ｈ）－オン（４３）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－５－（３，３，３－トリフルオロプロピル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４４）；
５－ベンジル－３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４５）；
４－｛［（５－ベンジル－７－オキソ－７，８－ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－イル）スルファニル］メチル｝ベンゾニトリル（４６）；
３－（フェニルスルファニル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４７）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルファニル］－６－メチル－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４８）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）アミノ］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（４９）；
３－［（２－クロロ－６－フルオロベンジル）スルホニル］－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５０）；および
３－（２－フェニルエチル）－５－プロピル［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（５１）
から選択される本発明の化合物が提供される。

【0070】

特定の態様によれば、免疫療法との併用のための本発明の化合物が提供される。

【0071】

特定の態様によれば、Ｔ細胞移入療法、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）療法との併用のための本発明の化合物が提供される。

【0072】

さらなる特定の態様によれば、がんワクチンまたは少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤との併用のための本発明の化合物が提供される。

【0073】

特定の態様によれば、免疫チェックポイント阻害剤との併用のための本発明の化合物が提供される。

【0074】

特定の態様によれば、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤から選択される。

【0075】

特定の態様によれば、本発明による免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤である。

【0076】

特定の態様によれば、免疫療法剤との併用のための本発明の化合物が提供されるが、前記免疫療法剤は、少なくとも１つのモノクローナル抗体、例えば、リツキシマブおよびブリナツモマブである。

【0077】

特定の態様によれば、免疫療法剤との併用のための本発明の化合物が提供され、ここで、前記免疫療法剤は、少なくとも１つのサイトカイン、例えば、インターフェロンおよびアルデスロイキンである。

【0078】

別のさらなる特定の態様によれば、抗がんワクチンとの併用のための本発明の化合物が提供される。

【0079】

特定の態様によれば、抗がんワクチンは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチドおよび腫瘍溶解性ウイルスワクチンから選択される。

【0080】

特定の態様によれば、がんワクチン、例えば、腫瘍溶解性または抗単純ヘルペスワクチンとの併用のための本発明の化合物が提供される。

【0081】

別のさらなる特定の態様によれば、ウイルス中和および／または排除（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２など）の成功のための必要要件である液性免疫および細胞免疫の両方の活性化のための使用のための本発明の化合物が提供される。

【0082】

さらなる態様によれば、ワクチン接種の際の細胞免疫応答および液性免疫応答の両方の寿命を改善するための、古典的アジュバントを補完するワクチンアジュバント構成要素としての使用のための本発明の化合物が提供される。

【0083】

別のさらなる特定の態様によれば、がん型に応じて、化学療法薬、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗剤、植物アルカロイドおよび天然産物、抗腫瘍抗生物質、ホルモン剤、生体応答修飾物質との併用のための本発明の化合物が提供される。

【0084】

別のさらなる特定の態様によれば、強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）、回転型強度放射線療法（ＶＭＡＴ）および画像誘導放射線療法（ＩＧＲＴ）を含む放射線療法との併用のための本発明の化合物が提供される。

【0085】

本発明による化合物の合成
本発明の化合物は、以下の一般的な方法および手順を使用して、容易に入手可能な出発材料から調製することができる。典型的なまたは好ましい実験条件（すなわち、反応温度、時間、試薬のモル、溶媒など）が与えられる場合に、別段の記載がない限り、他の実験条件を使用することもできることが認識されるであろう。最適な反応条件は、使用される特定の反応物または溶媒により変わり得るが、そのような条件は、日常的な最適化手順を使用して、当業者によって決定することができる。

【0086】

式（Ｉ）の化合物を得るための一般的な合成アプローチを、下記のスキーム１および２に表す。

【化2】

【0087】

Ｒ２およびＲ３官能化β－ケトアセテート（ｉｖ）は、容易に入手可能な出発材料から、限定されるものではないが、単純なアセチルアセテート（ｉ）、もしくはアルファ位が無置換のβ－ケトアセテート（ｉｉ）の塩基触媒アルキル化もしくは求電子置換、またはアセテート（ｉｉｉ）のアセチル化を介してを含む、広範囲の変換を介して入手できる。Ｓ－メチルイソチオウレアとの塩基触媒縮合は、中間体２－メチルスルファニル－１Ｈ－ピリミジン－４－オン（ｖ）をもたらし、これは、ヒドラジンによる求核芳香族置換を受けて、２－ヒドラジノ－１Ｈ－ピリミジン－４－オン（ｖｉ）を与える。中間体（ｖｉ）は、３－チオキソ－２，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７－オン（ｖｉｉ）への二硫化炭素による環化を受けることができ、これは、次いで、限定されるものではないが、塩基媒介Ｓアルキル化または金属媒介（例えば、銅－ヨウ素を介した）Ｓアリール化を含む、各種の変換を受けて、式（Ｉ）、特に、式（Ｉａ）の最終化合物を与えることができる。同位体異性体の調製の場合において、同位体標識されたビルディングブロック、例えば、Ｃ１３またはＣ１４二硫化炭素、Ｎ１５ヒドラジンなどをスキーム１において使用することができる。

【0088】

中間体（ｖｉ）は、イソチオシアネートとの反応を受けて、アミノチオウレア（ｖｉｉｉ）を与えることができ、これは、次に、ＤＣＣまたは類似のペプチドカップリング剤の存在下で環化されて、式（Ｉ）、特に、式（Ｉｂ）の最終化合物が得られる。

【化3】

【0089】

２，４－ジクロロ－６－メトキシピリミジン（ｉｘ）は、金属アルキル、例えば、グリニャール試薬による位置選択的アルキル化を受けて、官能化２－クロロ－６－メトキシピリミジン（ｍｅｔｈｏｘｙｐａｒｉｍｉｄｉｎｅｓ）（ｘ）が得られ、これは、次に、ヒドラジンによる求核芳香族置換を受けて、２－ヒドラジノ－６－メトキシ－ピリミジン中間体（ｘｉ）を与えることができる。（ｘｉ）の二硫化炭素との環化は、７－メトキシ－２Ｈ－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－３－チオン（ｘｉｉ）を与え、これは、アルキル化または金属媒介アリール化を介してチオ基上でさらなる官能化を受けて、３位で置換された７－メトキシ－３－スルファニル－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン（ｘｉｉｉ）を与えることができる。中間体（ｘｉｉｉ）は、例えば、臭化水素酸を介して、７位で酸媒介脱メチル化を受けて、式（Ｉ）、特に、式（Ｉａ）の最終化合物を与えることができ、あるいは、化合物（ｘｉｉｉ）は、さらなる官能化、例えば、７－メトキシ－３－スルホニル－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン（ｘｉｖ）へのメタ－クロロ過安息香酸（ｍ－ＣＰＢＡ）媒介酸化を受けることができ、これは、次いで、７位で酸媒介脱メチル化を受けて、式（Ｉ）、特に、式（Ｉｃ）の最終化合物を与えることができる。

【0090】

中間体（ｘｉ）は、アミドカップリング条件（例えば、ＥＤＣ／ＨＯＢｔ）下でのカルボン酸との反応を介してアセトヒドリド中間体（ｘｖ）を形成することができ、これは、次いで、例えば、バージェス試薬を介して媒介される脱水により７－メトキシ－３－アルキル－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジンまたは７－メトキシ－３－アリール－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン中間体（ｘｖｉ）に環化することができ、これは、次いで、７位で酸媒介脱メチル化を受けて、式（Ｉ）、特に、式（Ｉｄ）の最終化合物を与えることができる。

【0091】

最終化合物または中間体における側鎖のさらなる官能化または官能基操作は、当業者によって実現され、スキーム１およびスキーム２を介して得られ得る式（Ｉ）の最終化合物の範囲を広げることができる。

【0092】

組成物
本発明は、免疫療法に対する抵抗性を示している、または抵抗性を示しやすい固形腫瘍がんを患っている、患者、好ましくは、哺乳動物患者、最も好ましくは、ヒト患者を治療するための組成物および方法としての医薬品または治療剤を提供する。

【0093】

本発明の医薬組成物は、本明細書に記載される任意の形態の１つ以上の化合物を含有することができる。本発明の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される追加の成分、例えば、ミョウバン、可溶化剤、安定剤、抗菌剤、緩衝剤、着色剤、香味剤、アジュバントなどをさらに含んでいてもよい。

【0094】

本発明の化合物は、従来用いられているアジュバント、担体、希釈剤または賦形剤と一緒に、医薬組成物の形態およびその単位投薬量に入れられてもよく、そのような形態において、すべて経口使用のための、固体、例えば、サシェ中の粉末、錠剤もしくは充填カプセル剤、または液体、例えば、液剤、懸濁剤、エマルジョン、エリキシル剤、経鼻スプレー剤、もしくはそれで充填されたカプセル剤として、あるいは非経口（皮下を含む）使用のための無菌注射液の形態で用いられてもよい。そのような医薬組成物およびその単位剤形は、追加の活性化合物または物質の有無にかかわらず、従来の割合で成分を含んでいてもよく、そのような単位剤形は、用いられる意図される１日投薬量範囲と等しい活性成分の任意の好適な有効量を含有していてもよい。本発明による組成物は、好ましくは、経口、舌下、経鼻および皮下である。

【0095】

本発明の組成物はまた、限定されるものではないが、水性または油性懸濁剤、液剤、エマルジョン、シロップ剤、スプレー剤およびエリキシル剤を含む液体製剤であってもよい。経口投与に好適な液体形態は、緩衝剤、懸濁化剤および分散剤、着色剤、香味剤などとともに、好適な水性または非水性媒体を含んでいてもよい。組成物はまた、使用前に水または他の好適な媒体による再構成のための乾燥製品として製剤化されてもよい。そのような液体調製物は、限定されるものではないが、懸濁化剤、乳化剤、非水性媒体および保存剤を含む補助剤を含有していてもよい。懸濁化剤としては、限定されるものではないが、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、および水素化食用脂が挙げられる。乳化剤としては、限定されるものではないが、レシチン、ソルビタンモノオレエート、およびアカシアが挙げられる。非水性媒体としては、限定されるものではないが、食用油、アーモンド油、分画ココナツ油、油状エステル、プロピレングリコール、およびエチルアルコールが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、メチルまたはプロピルｐ－ヒドロキシベンゾエート、およびソルビン酸が挙げられる。さらなる材料および処理技法などは、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２３版，２０２０，Ａｄｅｂｏｙｅ Ａｄｅｊａｒｅ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓに示されている。

【0096】

本発明の固体組成物は、従来の方法で製剤化された、サシェ中の粉末、錠剤、またはロゼンジ剤の形態であってもよい。例えば、経口または舌下投与のためのサシェ、錠剤およびカプセル剤は、限定されるものではないが、結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤および湿潤剤を含む従来の賦形剤を含有していてもよい。結合剤としては、限定されるものではないが、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプンの粘液、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。増量剤としては、限定されるものではないが、ラクトース、糖、微結晶性セルロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、およびソルビトールが挙げられる。滑沢剤としては、限定されるものではないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、およびシリカが挙げられる。崩壊剤としては、限定されるものではないが、ジャガイモデンプン、およびデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられる。湿潤剤としては、限定されるものではないが、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。錠剤は、当技術分野において周知の方法に従ってコーティングされていてもよい。

【0097】

注射用組成物は、典型的には、注射用無菌生理食塩水もしくはリン酸緩衝生理食塩水、または当技術分野において公知の他の注射用担体がベースである。

【0098】

本発明の組成物はまた、限定されるものではないが、注射または持続注入によってを含む、非経口投与のために製剤化されていてもよい。注射のための製剤は、油性または水性媒体中の懸濁剤、液剤、またはエマルジョンの形態であってもよく、限定されるものではないが、懸濁化剤、安定剤、および分散剤を含む製剤化剤を含有していてもよい。組成物はまた、限定されるものではないが、無菌のパイロジェンフリーの水を含む好適な媒体による再構成のための粉末形態で提供されてもよい。

【0099】

本発明の組成物はまた、デポー調製物として製剤化されてもよく、これは、インプラントによって、または筋肉内注射によって投与されてもよい。組成物は、好適なポリマー材料または疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）、イオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）、製剤化されていてもよい。

【0100】

本発明の化合物は、持続放出形態で、または持続放出薬物送達システムから投与することもできる。代表的な持続放出材料の説明は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおけるｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌｓに見出すこともできる。

【0101】

投与のモード
本発明の組成物は、限定されるものではないが、局所、経口、非経口、舌下、頬側投与を介して、経鼻、病巣内、脳室内、その組み合わせを含む、任意の方法で投与されてもよい。非経口投与としては、限定されるものではないが、皮下および筋肉内が挙げられる。本発明の組成物はまた、インプラントの形態で投与されてもよく、これは、組成物の遅延放出、ならびにゆっくりと制御されたｉ．ｖ．注入を可能にする。特定の実施形態において、１つ以上の本発明の化合物が、経口投与される。

【0102】

個体に、単回または複数回用量として、投与される投薬量は、薬物動態学的性質、患者の状態および特性（年齢、体重、健康状態、身体サイズ）、症状の程度、治療の頻度および所望される効果を含む各種の要因に応じて変わる。

【0103】

組み合わせ
本発明の一実施形態によれば、本発明による化合物およびその医薬製剤は、抗がん免疫療法剤、特に、抗がんワクチン、または少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、例えば、少なくとも１つのＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１またはＣＴＬＡ４阻害剤と組み合わせて、投与または使用される。

【0104】

本発明は、本発明の化合物またはその医薬製剤の投与を包含し、ここで、前記本発明の化合物またはその医薬製剤は、抗がん免疫療法剤の前に、またはそれと同時に、例えば、同じ製剤により同時的に、または異なる製剤により別々に、特に、異なる製剤経路を通って、個体に投与される。

【0105】

本発明の特定の態様によれば、本発明による化合物およびその医薬製剤は、治療の期間の間、慢性的に（例えば、毎日または毎週）、抗がん免疫療法剤または抗血管新生治療の投与の前に投与される。

【0106】

本発明の別の特定の態様によれば、本発明による化合物およびその医薬製剤は、抗がん免疫療法剤と同時的に投与される。

【0107】

本発明の別の特定の態様によれば、抗がん免疫療法剤は、治療有効量のがんの治療に有用な他の治療レジメンまたは同時薬剤（例えば、複数薬物レジメン）と組み合わせて、例えば、がんを治療する、安定化する、予防する、および／または遅延させるのに有用な物質、例えば、固形腫瘍に対する従来の化学療法において使用される、転移の確立の制御のための物質、またはプログラム細胞死を引き起こすことによって作用する任意の他の分子と組み合わせて投与することができる。特に、本発明の別の特定の態様によれば、抗がん免疫療法剤は、治療有効量のがんの治療に有用な他の治療レジメンまたは同時薬剤（例えば、複数薬物レジメン）と組み合わせて投与することができる。

【0108】

前記抗がん免疫療法剤と同時に投与される本発明の化合物またはその医薬製剤は、同じまたは異なる組成物中またはその内で、同じまたは異なる投与経路によって投与することができる。

【0109】

患者
一実施形態において、本発明による対象は、固形腫瘍がん、特に、免疫療法に対する抵抗性を示しているか、または抵抗性を示しやすい、応答性が低い固形腫瘍がんを患っている対象である。

【0110】

特定の実施形態において、本発明による対象は、肺がん（小細胞および非小細胞）、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、頭頸部がん、黒色腫、肝細胞癌、結腸がん、直腸がん、結腸直腸癌、腎臓がん、前立腺がん、胃がん、気管支がん、膵臓がん、膀胱がん、肝がんおよび脳がんから選択される固形腫瘍がん、特に、神経膠芽腫を患っている対象である。

【0111】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、頭頸部腫瘍を患っている対象である。

【0112】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、黒色腫を患っている対象である。

【0113】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、結腸がんを患っている対象である。

【0114】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、肺癌を患っている対象である。

【0115】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、乳がんを患っている対象である。

【0116】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、肝細胞癌または肝がんを患っている対象である。

【0117】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、直腸がんまたは結腸直腸癌を患っている対象である。

【0118】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、腎臓がんを患っている対象である。

【0119】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、膵臓がんを患っている対象である。

【0120】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、脳がん、特に、神経膠芽腫を患っている対象である。

【0121】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、別の併用治療または遺伝的素因に起因して抗がん免疫療法に抵抗性または部分的に抵抗性を発生するリスクがある固形腫瘍がんを有する対象である。

【0122】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、代謝性疾患、例えば、２型糖尿病を患っている対象である。

【0123】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、線維症、例えば、肺線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を患っている対象である。

【0124】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症を患っている対象である。

【0125】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、脱毛障害、例えば、脱毛症を患っている対象である。

【0126】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、神経変性障害、例えば、パーキンソン病またはアルツハイマー病を患っている対象である。

【0127】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、皮膚または組織傷害、例えば、皮膚創傷または熱傷を患っている対象である。

【0128】

別の特定の実施形態において、本発明による対象は、脳の急性病態、例えば、脳卒中または脳外傷を患っている対象である。

【0129】

本発明による使用
特定の実施形態において、本発明は、脱毛障害の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。

【0130】

別の特定の実施形態において、本発明は、皮膚または組織傷害、例えば、皮膚創傷または熱傷の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。典型的には、本発明の化合物は、皮膚または組織に局所的に適用される。

【0131】

典型的には、特定の実施形態によれば、本発明の化合物は、皮膚に局所的に適用される。

【0132】

別の特定の実施形態において、本発明は、自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。

【0133】

別の特定の実施形態において、本発明は、神経変性障害、例えば、パーキンソン病またはアルツハイマー病の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。

【0134】

別の特定の実施形態において、本発明は、線維症、例えば、肺線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。

【0135】

別の特定の実施形態において、本発明は、脳の急性病態、例えば、脳卒中または脳外傷の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。

【0136】

別の特定の実施形態において、本発明は、代謝性疾患、例えば、２型糖尿病の予防および／または治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供する。

【0137】

典型的には、特定の実施形態によれば、本発明の化合物は、経口投与される。

【0138】

特定の態様によれば、免疫療法、特に、抗がん免疫療法、またはワクチン療法に対する免疫応答を誘発または増加させるための方法であって、前記方法が、有効量の１つ以上の本発明の化合物またはその医薬製剤を、免疫療法剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法が提供される。

【0139】

特定の実施形態において、本発明は、組み合わせの形態の固形腫瘍がんの治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供し、ここで、少なくとも１つの本発明の化合物は、ワクチン、特に、抗がんワクチン、例えば、腫瘍溶解性ワクチンまたは抗単純ヘルペスウイルスワクチンと組み合わせて投与される。

【0140】

特定の態様によれば、がんを患っている対象を治療するための方法であって、前記方法が、有効量の１つ以上の本発明の化合物を、抗がん免疫療法剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法が提供される。

【0141】

特定の実施形態において、本発明は、組み合わせの形態の固形腫瘍がんの治療に有用な化合物、方法、使用および組成物を提供し、ここで、少なくとも１つの本発明の化合物は、少なくとも１つの抗がん免疫療法剤と組み合わせて投与される。

【0142】

特定の態様によれば、がんを患っている対象を治療するための方法であって、前記方法が、有効量の１つ以上の本発明の化合物を、抗がん免疫療法剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法が提供される。

【0143】

特定の態様によれば、メモリー表現型を有するＴ細胞を得るおよび／または維持するためのインビトロ方法であって、前記方法が、以下の工程：
－ メモリー表現型に分化する能力を有する少なくとも１つのＴ細胞、例えば、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞を準備する工程；
－ 前記少なくとも１つのＴ細胞を、少なくとも１つの本発明による化合物またはその混合物と接触させる工程；
－ Ｔ細胞培養培地中で細胞を培養する工程；
－ 得られたＴ細胞を単離する工程
を含む、方法が提供される。

【0144】

特定の実施形態によれば、前記少なくとも１つの本発明からの化合物は、Ｔ細胞を培養するために使用される培地に含まれ、次いで、Ｔ細胞は、前記少なくとも１つの本発明の化合物の存在下で培養される。

【0145】

別の実施形態において、前記少なくとも１つの本発明の化合物は、Ｔ細胞培養が開始された後、例えば、細胞が播種またはインキュベートされた後またはその間に、しかし理想的には培養開始後すぐに、培地に添加される。

【0146】

特定の態様によれば、Ｔ細胞は、少なくとも活性化の間、好ましくは、培養および／または活性化の開始から、例えば、最初の３または４日間、本発明の化合物と接触させる。

【0147】

別の特定の態様によれば、Ｔ細胞は、培養期間中ずっと、本発明の化合物と接触させてもよい。

【0148】

別の特定の態様によれば、本発明の化合物は、最初の活性化段階（プライミング段階）後に洗い流され、培養は、本発明の化合物の非存在下、例えば、ＩＬ－２およびＩＬ－７を含む培地を用いて継続される。

【0149】

本発明の化合物は、培養の開始から培養培地中に存在することが好ましい。また、好ましくは、Ｔ細胞は、本発明の化合物と少なくとも接触するが、本発明の化合物が、活性化段階全体の間に存在することは厳密には必要ではない。それ故に、本発明の化合物は、本明細書に記載されるように、Ｔ細胞を培養するために、特に、メモリー表現型を有するＴ細胞を生成および／または維持するために使用される。

【0150】

本発明による活性化Ｔ細胞は、次いで、一般に実行される抗がんＴ細胞免疫療法を改善するために使用されてもよい。

【0151】

本明細書に引用された参考文献は、それらの全体が、参照により本明細書に組み込まれる。本発明を説明してきたが、以下の実施例は、実例によって示され、限定するものではない。

【実施例】

【0152】

本発明の化合物を調製するためのいくつかの方法を、以下の実施例において説明する。別段の記載がない限り、すべての出発材料は、商業的供給業者から得られ、さらなる精製なく使用した。具体的には、以下の略語が、実施例および明細書全体にわたって使用され得る。

【0153】

以下の略語は、それぞれ、下記の定義を指す：
ＡＭＵ（原子質量単位）；ＣＤＩ（カルボニルジイミダゾール）；ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）；ＤＣＭ（ジクロロメタン）；ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；ＥＤＣ（１－［３－（ジメチルアミノ）プロピル］－３－エチルカルボジイミドメチオジド）；ＨＯＢｔ（１－ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ＩＰＡ（イソプロピルアルコール）；ＨＭＢＣ（異種核多結合相関）；ｍ－ＣＰＢＡ（メタ－クロロ過安息香酸）；ＴＥＡ（トリエチルアミン）。

【0154】

実施例１：本発明の化合物の合成
本発明の化合物を、本明細書に記載されるようにして合成した。

【0155】

ａ）Ｒ７が、場合により置換されていてもよいフェニルである、式（Ｉ）の化合物
化合物１～２８を、本明細書からのスキーム１に従って合成した。

【化4】

【0156】

特に、下記のスキーム３に従い、ここで、Ｒは、１つ以上のハロゲン（フルオロ、クロロ）、シアノ、ハロゲノＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルで置換されたフェニルもしくはベンジル基から、またはヘテロ芳香族基、例えば、ベンゾフラン、フラン、ピラゾールから選択される。

【化5】

【0157】

スキーム３、工程１：中間体（１ｃ）（２－（メチルチオ）－６－プロピルピリミジン－４（１Ｈ）－オン）の調製
水（２０ｍＬ）中のエチルブチリルアセテート（１ａ）（２．５ｇ、１５．８０３ｍｍｏｌ）および２－メチル－２－チオプソイドウレアヘミ硫酸塩（１ｂ）（２．４２ｇ、１７．３８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎａ_２ＣＯ_３（２．６８ｇ、２５．２８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で４８時間撹拌した。白色沈殿が形成され、これを、濾過し、エーテルを用いて粉砕して、所望の中間体（１ｃ）を、収率４８．０８％、１．４ｇで、白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８８（ｔ、３Ｈ）、１．５２－１．６５（ｍ、２Ｈ）、２．３７（ｔ、２Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、５．９１（ｓ、１Ｈ）、１２．４７（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．４７分；［Ｍ＋Ｈ］＝１８５（５分の実行時間）。

【0158】

スキーム３、工程２：中間体（１ｄ）の調製
エタノール（１０ｍｌ）中の（１ｃ）（１．４ｇ、７．５９ｍｍｏｌｅ）およびヒドラジン水和物（３．７９ｇ、７５．９８ｍｍｏｌｅ）の撹拌溶液に添加し、６時間還流した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、ＥｔＯＨを用いて粉砕して、中間体（１ｄ）を、収率６２．６％、８００ｍｇで、白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８６（ｔ、３Ｈ）、１．５０－１．５９（ｍ、２Ｈ）、２．２２（ｔ、２Ｈ）、４．４８（ｂｒｓ、２Ｈ）、５．３５（ｓ、１Ｈ）、８．４５（ｂｒｓ、１Ｈ）、９．９１（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．２４分；［Ｍ＋Ｈ］＝１６９（５分の実行時間）。

【0159】

スキーム３、工程３：中間体（１ｅ）の調製
ピリジン（５５ｍＬ）中の（１ｄ）（２ｇ、１１．９０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＳ_２（１１ｍＬ）を添加し、６時間還流した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、トルエンと共沸させ、最後に、ＥｔＯＨを用いて粉砕して、中間体（１ｅ）を、収率３１．９６％、８００ｍｇで、オフホワイト固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９５（ｔ、３Ｈ）、１．５６－１．７３（ｍ、２Ｈ）、３．３６（ｔ、２Ｈ）、５．８２（ｓ、１Ｈ）、１２．５４（ｂｒｓ、１Ｈ）、１３．７４（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．７７分；［Ｍ＋Ｈ］＝２１１（５分の実行時間）。

【0160】

スキーム３、工程４による本発明の化合物（１）～（２８）の調製：
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の中間体（１ｅ）（１当量）およびＴＥＡ（２．５当量）の撹拌溶液に、置換ベンジルブロミド（１当量）を添加し、室温で１８時間撹拌した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、１０％のＭｅＯＨ－ＤＣＭおよび水の間で分配した。有機相を乾燥し、濃縮し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（０．１～０．２％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）および最後に分取ＴＬＣで精製して、対応する本発明の化合物を得た。

【0161】

化合物を、下記に詳述する方法を用いて特性評価した：

【0162】

化合物（１）：４２ｍｇ、白色固体（収率２６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９４（ｔ、３Ｈ）、１．５６（ｍ、２Ｈ）、２．８５（ｔ、２Ｈ）、４．４５（ｓ、２Ｈ）、５．８８（ｓ、１Ｈ）、７．２１（ｍ、１Ｈ）、７．３８（ｍ、１Ｈ）、７．４５（ｍ、１Ｈ）；１２．６８（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝２．４８分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５３（３分の実行時間）ＨＰＬＣ＝９９．６０％。

【0163】

化合物（２）：８０ｍｇ、白色固体（収率３２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ）、１．５２－１．５７（ｔ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、２Ｈ）、４．４５（ｓ、２Ｈ）、５．８８（ｓ、１Ｈ）、７．１８－７．２２（ｔ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、１Ｈ）、７．５０－７．５３（ｍ、１Ｈ）；１２．７３（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．８６分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３７（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．６４％。

【0164】

化合物（３）：７０ｍｇ、白色固体（収率２９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９５（ｔ、３Ｈ）、１．５４－１．６０（ｔ、２Ｈ）、２．８６（ｔ、２Ｈ）、４．４５（ｓ、２Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、７．０９－７．１６（ｔ、３Ｈ）、７．２７（ｄ、１Ｈ）、１２．６９（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．３７分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３７。ＨＰＬＣ＝９８．９７％。

【0165】

化合物（４）：１０５ｍｇ、白色固体（収率４２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９４（ｔ、３Ｈ）、１．５０－１．５５（ｔ、２Ｈ）、２．８０（ｔ、２Ｈ）、４．５０（ｓ、２Ｈ）、５．８３（ｓ、１Ｈ）、６．８４（ｓ、１Ｈ）、６．９８（ｓ、１Ｈ）、７．１２（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｂｒｓ、２Ｈ）、７．５０（ｂｒｓ、２Ｈ）、１２．６８（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５４分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５１。ＨＰＬＣ＝９８．１８％。

【0166】

化合物（５）：１０５ｍｇ、白色固体（収率４２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９０（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５４（ｔ、２Ｈ）、２．７７（ｔ、２Ｈ）、４．５８（ｓ、２Ｈ）、５．８５（ｓ、１Ｈ）、７．１７－７．３９（ｍ、２Ｈ）、７．４５（ｂｒｓ、２Ｈ）、７．６０（ｄ、１Ｈ）、７．４５（ｂｒｓ、２Ｈ）、１２．６９（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５６分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５１。ＨＰＬＣ＝９７．９６％。

【0167】

化合物（６）：１０５ｍｇ、白色固体（収率４２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５７（ｔ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、２Ｈ）、４．５０（ｓ、２Ｈ）、５．８５（ｓ、１Ｈ）、６．９９（ｍ、２Ｈ）、７．４９（ｂｒｓ、４Ｈ）、１２．６７（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５５分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５１。ＨＰＬＣ＝９９．６５％。

【0168】

化合物（７）：４８ｍｇ、オフホワイト固体（収率３１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９４（ｔ、３Ｈ）、１．５６（ｍ、２Ｈ）、２．８４（ｔ、２Ｈ）、４．４８（ｓ、２Ｈ）、５．８５（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｔ、１Ｈ）、７．７１（ｍ、２Ｈ）、７．８２（ｓ、１Ｈ）、１２．６１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：Ｒ_ｔ＝２．２１分；［Ｍ＋Ｈ］＝３２６．２（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．２６％。

【0169】

化合物（８）：３０ｍｇ、白色固体（収率１８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９６（ｔ、３Ｈ）、１．５６－１．６２（ｔ、２Ｈ）、２．９０（ｔ、２Ｈ）、４．５１（ｓ、２Ｈ）、５．９０（ｓ、１Ｈ）、７．３４－７．４７（ｍ、２Ｈ）、７．９３（ｍ、１Ｈ）、１２．７４（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５０分；［Ｍ＋Ｈ］＝３４４。ＨＰＬＣ＝９９．３６％。

【0170】

化合物（９）：６０ｍｇ、白色固体（収率２４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９０（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５６（ｔ、２Ｈ）、２．８０（ｔ、２Ｈ）、３．７１（ｓ、３Ｈ）４．２９（ｓ、２Ｈ）、５．８６（ｓ、１Ｈ）、６．９６－７．１１（ｍ、３Ｈ）、１２．７４（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５５分；［Ｍ＋Ｈ］＝３４９。ＨＰＬＣ＝９９．６４％。

【0171】

化合物（１０）：５０ｍｇ、白色固体（収率２０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ）、１．５４－１．５９（ｔ、２Ｈ）、２．８５（ｔ、２Ｈ）、４．４４（ｓ、２Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、７．２１－７．３４（ｍ、３Ｈ）、１２．６９（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．４８分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５３。ＨＰＬＣ＝９９．１０％。

【0172】

化合物（１１）：５０ｍｇ、白色固体（収率２０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．５３－１．５９（ｔ、２Ｈ）、２．８５（ｔ、２Ｈ）、４．４５（ｓ、２Ｈ）、５．８６（ｓ、１Ｈ）、７．２１－７．５４（ｍ、３Ｈ）、１２．６８（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ＝２．４７分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５３。ＨＰＬＣ＝９９．１７％。

【0173】

化合物（１２）：３６ｍｇ、白色固体（収率１５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．５１－１．５６（ｔ、２Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）２．８０（ｔ、２Ｈ）、４．４２（ｓ、２Ｈ）、５．８５（ｓ、１Ｈ）、７．００－７．２４（ｍ、３Ｈ）、１２．７１（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５８分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３３。ＨＰＬＣ＝９９．２４％。

【0174】

化合物（１３）：６０ｍｇ、白色固体（収率２５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９１（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５５（ｔ、２Ｈ）、２．３５（ｓ、３Ｈ）２．７９（ｔ、２Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、５．７９（ｓ、１Ｈ）、６．８９－７．１９（ｍ、３Ｈ）、１２．６９（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．６０分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３３。ＨＰＬＣ＝９７．６４％。

【0175】

化合物（１４）：８０ｍｇ、白色固体（収率２７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ）、１．５６－１．６１（ｍ、２Ｈ）、２．８６（ｔ、２Ｈ）、３．０１（ｔ、２Ｈ）、３．４８（ｔ、２Ｈ）、５．８６（ｓ、１Ｈ）、７．１８－７．３０（ｍ、５Ｈ）、１２．６５（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５６分；［Ｍ＋Ｈ］＝３１５（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．５１％。

【0176】

化合物（１５）：２７ｍｇ、白色固体（収率２０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９５（ｔ、３Ｈ）、１．５６－１．６２（ｍ、２Ｈ）、２．８８（ｔ、２Ｈ）、４．３０（ｓ、２Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、６．４４（ｓ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、２Ｈ）、１２．６６（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．４８分；［Ｍ＋Ｈ］＝２９１（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９７．０１％。

【0177】

化合物（１６）：４０ｍｇ、白色固体（収率２５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８８（ｔ、３Ｈ）、１．４７ １．５２（ｍ、２Ｈ）、２．７６（ｔ、２Ｈ）、３．７３（ｓ、３Ｈ）、４．３１（ｓ、２Ｈ）、５．８２（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｄ、１Ｈ）、６．９７（ｔ、１Ｈ）、７．１４（ｄ、１Ｈ）、７．２７（ｔ、１Ｈ）、１２．６９（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．６０分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３１（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９６．６１％。

【0178】

化合物（１７）：８０ｍｇ、白色固体（収率２５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８５（ｔ、３Ｈ）、１．４８－１．５６（ｍ、２Ｈ）、２．８０（ｔ、２Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、５．８３（ｓ、１Ｈ）、６．８２－６．８８（ｍ、３Ｈ）、７．２１（ｔ、１Ｈ）、１２．６８（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３１（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．３８％。

【0179】

化合物（１８）：３６ｍｇ、白色固体（収率２３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９４（ｔ、３Ｈ）、１．５１－１．５８（ｍ、２Ｈ）、２．８４（ｔ、２Ｈ）、４．５３（ｓ、２Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、１２．６７（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．５３分；［Ｍ＋Ｈ］＝３２６（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．５６％。

【0180】

化合物（１９）：６０ｍｇ、白色固体（収率２５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９０（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５５（ｍ、２Ｈ）、２．８１（ｔ、２Ｈ）、４．５５（ｓ、２Ｈ）、５．８２（ｓ、１Ｈ）、６．９２（ｓ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、１Ｈ）、７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、１Ｈ）、１２．６５（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－３）：Ｒ_ｔ＝２．８７分；［Ｍ＋Ｈ］＝３４１（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９７．６５％。

【0181】

化合物（２０）：４０ｍｇ、白色固体（収率２５％）^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．５０－１．５９（ｍ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、２Ｈ）、３．７１（ｓ、３Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、５．８４（ｓ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、２Ｈ）、７．２４（ｄ、２Ｈ）、１２．６６（ｂｒｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－３）：Ｒ_ｔ＝２．８１分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３１（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９８．８５％。

【0182】

化合物（２１）：３０ｍｇ、白色固体（収率１９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９４（ｔ、３Ｈ）、１．５３－１．５９（ｍ、２Ｈ）、２．８６（ｔ、２Ｈ）、４．４２（ｓ、２Ｈ）、５．８９（ｓ、１Ｈ）、７．１６－７．２８（ｍ、３Ｈ）、１２．７３（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３７（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．７５％。

【0183】

化合物（２２）：３０ｍｇ、白色固体（収率１９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．５１－１．５７（ｍ、２Ｈ）、２．８３（ｔ、２Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、５．８３（ｓ、１Ｈ）、７．００－７．０４（ｍ、１Ｈ）、７．２１－７．２７（ｍ、１Ｈ）、７．３７－７．４３（ｍ、１Ｈ）、１２．７３（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．３７分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３７（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．３１％。

【0184】

化合物（２３）：３５ｍｇ、白色固体（収率２２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．５０－１．５７（ｍ、２Ｈ）、２．８６（ｔ、２Ｈ）、４．３６（ｓ、２Ｈ）、５．８９（ｓ、１Ｈ）、７．０９（ｔ、２Ｈ）７．３７－７．４３（ｍ、１Ｈ）、１２．７２（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．３２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３７（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９８．７４％。

【0185】

化合物（２４）：７０ｍｇ、白色固体（収率１７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９４（ｔ、３Ｈ）、１．５４－１．６０（ｍ、２Ｈ）、２．８５（ｔ、２Ｈ）、４．３５（ｓ、２Ｈ）、５．８５（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｓ、２Ｈ）、１２．７１（ｂｒｓ、１Ｈ）ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．８２９分；［Ｍ＋Ｈ］＝２９１（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９８．４５％。

【0186】

化合物（２５）：３０ｍｇ、白色固体（収率１９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９１（ｔ、３Ｈ）、１．５２－１．６２（ｍ、２Ｈ）、２．３３（ｓ、６Ｈ）、２．８２（ｔ、２Ｈ）、４．４９（ｓ、２Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、７．０４－７．１３（ｍ、３Ｈ）、１２．６９（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．６９分；［Ｍ＋Ｈ］＝３２９（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．６％。

【0187】

化合物（２６） ２３０ｍｇ、白色固体（収率２７．３８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９１（ｔ、３Ｈ）、１．５０－１．５５（ｍ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、２Ｈ）、４．４１（ｓ、２Ｈ）、５．８８（ｓ、１Ｈ）、７．２０－７．２４（ｍ、１Ｈ）、７．３３－７．４０（ｍ、２Ｈ）、１２．７７（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５８分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５３（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．８２％。

【0188】

化合物（２７） ２３４ｍｇ、白色固体（収率２９．９％）^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８８（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５４（ｍ、２Ｈ）、２．１５（ｓ、３Ｈ）、２．２９（ｓ、３Ｈ）、２．７４（ｔ、２Ｈ）、４．３６（ｓ、２Ｈ）、５．８１（ｓ、１Ｈ）、６．８６（ｓ、１Ｈ）、６．９８ ６．９９（ｍ、１Ｈ）、７．０６－７．０８（ｍ、２Ｈ）、１２．７７（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．６３分；［Ｍ＋Ｈ］＝３２９（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．７９％。

【0189】

化合物（２８） ４０ｍｇ、白色固体（収率１２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ）、１．５５－１．６１（ｔ、２Ｈ）、２．８３（ｔ、２Ｈ）３．０３（ｔ、２Ｈ）、３．４７（ｔ、２Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、７．００－７．４２（ｍ、３Ｈ）、１２．６９（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．６７分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５１。ＨＰＬＣ＝９８．３４％。

【0190】

ｂ）Ｒ２が、場合により置換されていてもよいアルキルである、式（Ｉ）の化合物
化合物２９～４６を、本明細書からのスキーム１に従って合成した。

【化6】

【0191】

特に、下記のスキーム４に従い、ここで、Ｒ２は、シクロアルキル、ベンジル、場合により置換されていてもよいアルキル、例えば、３，３，３－トリフルオロプロピル、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ａ（式中、Ａは、メチル、または場合により置換されていてもよいＣＨ_２Ｐｈから選択される）から選択される。

【化7】

【0192】

化合物（２９）の調製
スキーム４、工程１：Ｒ２＝Ｍｅを有する中間体（２ｃ）の代表的な調製
水［２４ｍＬ、８体積］中のエチルアセトアセテート（２ａ、Ｒ２＝Ｍｅ）［３ｇ、１．０当量］の撹拌溶液に、２－メチル－２－チオウレア（２ｂ）［７．０ｇ、１．１当量］、続いて炭酸ナトリウム［３．９ｇ、１．６当量］を添加した。反応を、室温で４８時間撹拌した。白色固体が沈殿し、濾過し、ジエチルエーテル（２体積）で洗浄し、減圧下で乾燥して、中間体（２ｃ Ｒ２＝Ｍｅ）を、白色固体（１．８ ｇｍ、収率５０％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ２．１１（ｓ、３Ｈ）、２．４１（ｓ、３Ｈ）、５．８４（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－２）：生成物：ＲＴ＝１．５７分、ｍ／ｚ＝１５７（Ｍ＋Ｈ）。

【0193】

スキーム４、工程２：Ｒ２＝Ｍｅを有する中間体（２ｄ）の代表的な調製
エタノール［８ｍＬ、１０体積］中の中間体（２ｃ、Ｒ２＝Ｍｅ）［８００ｍｇ、１．０当量］の撹拌溶液に、１００％のヒドラジン水和物［４．９ｍＬ、３０当量］を室温で添加した。反応集団を、８０℃で２４時間加熱した。反応集団を、ＴＬＣ／ＬＣＭＳによってモニタリングした。出発材料の完全な消費後、反応混合物を、減圧下で蒸留し、トルエンと共蒸留した。固体を、エタノールを用いて再結晶し、白色固体が沈殿した。固体を濾過し、固体をエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥して、中間体（２ｄ、Ｒ２＝Ｍｅ）を、白色固体（４２０ｍｇ、収率５８％）として得た。ＬＣＭＳ（方法－２）：生成物：ＲＴ＝０．８分、ｍ／ｚ＝１４１（Ｍ＋Ｈ）。

【0194】

スキーム４、工程３：Ｒ２＝Ｍｅを有する中間体（２ｅ）の代表的な調製
ピリジン［１１ｍＬ、２７体積］中の中間体（２ｄ、Ｒ２＝Ｍｅ）［４００ｍｇ、１．０当量］の撹拌溶液に、二硫化炭素［２．２ｍＬ、５．５体積］を室温で添加した。反応集団を、１００℃で２４時間加熱した。反応集団を、ＴＬＣ／ＬＣＭＳによってモニタリングした。出発材料の完了後、反応混合物を、減圧下で蒸留し、トルエンと共蒸留した。固体を、エタノールを用いて再結晶し、白色固体が沈殿した。固体を濾過し、固体をエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥して、中間体（２ｅ、Ｒ２＝Ｍｅ）を白色固体（１５０ｍｇ、収率２９％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ２．１１（ｓ、３Ｈ）、５．２８（ｓ、１Ｈ）、５．８３（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－２）：生成物：ＲＴ＝０．５２分、ｍ／＝１８３．２（Ｍ＋Ｈ）。

【0195】

スキーム４、工程４による化合物（２９）の調製：
エタノール［１５ｍＬ、５０体積］中の中間体（２ｅ、Ｒ２＝Ｍｅ）［３５０ｍｇ、１．０当量］の撹拌溶液に、トリエチルアミン［０．３ｍＬ、１．１当量］、続いて２，５－ジフルオロベンジルブロミド［３９７ｍｇ、１．０当量］を室温で添加した。反応集団を、ＲＴで２４時間撹拌した。反応集団を、ＴＬＣ／ＬＣＭＳによってモニタリングした。出発材料の完了後、反応混合物を、減圧下で蒸留した。次いで、水を添加し、３×１０体積の２０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭで抽出した。有機層を、ブライン溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗製物を、酢酸エチル／ヘキサンで溶出させる１００～２００メッシュのシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製した。化合物を、再び、分取ＴＬＣによって精製し、化合物（２９）を固体（３５ｍｇ、収率６％）（Ｒ＝ＣＨ_３）で得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ２．６６（ｓ、３Ｈ）、４．３６（ｓ、２Ｈ）、５．９４（ｓ、１Ｈ）、７．１８－７．２５（ｍ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－２）：生成物：ＲＴ＝１．４４分、ｍ／ｚ＝３０９．３（Ｍ＋Ｈ）

【0196】

化合物３０～３５を、さまざまな置換中間体２ａから出発して、スキーム４、工程１～４を介して、化合物２９と同様に調製した。

【0197】

化合物（３０）、中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｐｈ）から出発：収率１３％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ３．２４－３．２７（ｔ、２Ｈ）、３．７１－３．７３（ｔ、２Ｈ）、４．３７（ｓ、２Ｈ）、４．４８（ｓ、２Ｈ）、５．９６（ｓ、１Ｈ）、７．１７－７．３１（ｍ、８Ｈ）、１２．７５（ｂｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：生成物：ＲＴ＝２．５３分、ｍ／ｚ＝４２９．１（Ｍ＋Ｈ）。ＨＰＬＣ：９９．１８％。

【0198】

化合物（３１） 中間体（２ａ、Ｒ２＝ＣＨ_２ＯＣＨ_３）から出発：収率１２％。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ３．３１（ｓ、３Ｈ）、４．２７（ｓ、２Ｈ）、４．６２（ｓ、２Ｈ）、６．０６（ｓ、１Ｈ）、７．１２－７．１９（ｍ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：生成物：ＲＴ＝２．１４分、ｍ／ｚ＝３３９．１（Ｍ＋Ｈ）。

【0199】

化合物（３２） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２（４－Ｃｌ－Ｐｈ））から出発：収率５％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ３．２４－３．２７（ｔ、２Ｈ）、３．７０－３．７３（ｔ、２Ｈ）、４．３７（ｓ、２Ｈ）、４．４７（ｄ、２Ｈ）、５．９４（ｓ、１Ｈ）、７．１７－７．２４（ｍ、３Ｈ）、７．２８－７．３０（ｄ、２Ｈ）、７．３６－７．３８（ｄ、２Ｈ）、１２．７５（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：生成物：ＲＴ＝２．６６分、ｍ／ｚ＝４６３．１（Ｍ＋Ｈ）。ＨＰＬＣ：９６．４７％。

【0200】

化合物（３３）、中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２（２－Ｃｌ－Ｐｈ））から出発：収率２５％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ３．２７－３．３１（ｔ、２Ｈ）、３．７８－３．８１（ｔ、２Ｈ）、４．３８（ｓ、２Ｈ）、４．５５（ｓ、２Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、７．１４－７．２３（ｍ、３Ｈ）、７．２４－７．３１（ｄ、２Ｈ）、７．４０－７．４２（ｔ、２Ｈ）、１２．７５（ｂｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：生成物：ＲＴ＝２．６３分、ｍ／ｚ＝４６３．１（Ｍ＋Ｈ）。ＨＰＬＣ：９９．６４％。

【0201】

化合物（３４）、中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２（３－Ｃｌ－Ｐｈ））から出発：収率１５％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ３．２６－３．２９（ｔ、２Ｈ）、３．７２－３．７５（ｔ、２Ｈ）、４．３８（ｓ、２Ｈ）、４．４９（ｓ、２Ｈ）、５．９７（ｓ、１Ｈ）、７．１５－７．３７（ｍ、７Ｈ）、１２．７６（ｂｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：生成物：ＲＴ＝２．６５分、ｍ／ｚ＝４６３（Ｍ＋Ｈ）。ＨＰＬＣ：９９．１１％。

【0202】

化合物（３５）、中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３）から出発：収率１３％。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ３．２４－３．２７（ｔ、２Ｈ）、３．７１－３．７３（ｔ、２Ｈ）、４．３７（ｓ、２Ｈ）、４．４８（ｓ、２Ｈ）、５．９６（ｓ、１Ｈ）、７．１７－７．３１（ｍ、８Ｈ）、１２．７５（ｂｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：生成物：ＲＴ＝２．５３分、ｍ／ｚ＝４２９．１（Ｍ＋Ｈ）。ＨＰＬＣ：９９．１８％。

【0203】

化合物（３６）の調製
スキーム４、工程１：Ｒ２＝Ｍｅを有する中間体（２ｃ）の代表的な調製
水（１０ｍＬ）中のエチルアセトアセテート（２ａ、Ｒ２＝Ｍｅ）（５ｇ、３８．４６２ｍｍｏｌ）および２－メチル－２－チオプソイドウレア硫酸塩（１２．８３ｇ、４６．１５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎａ_２ＣＯ_３（１０．１９ｇ、９６．１５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で４８時間撹拌した。白色沈殿が形成され、これを、濾過し、ジエチルエーテルを用いて粉砕して、所望の中間体（２ｃ、Ｒ２＝Ｍｅ）を、収率８６％、５．２ｇで、白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．５０（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、５．９５（ｓ、１Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）

【0204】

スキーム４、工程２：Ｒ２＝Ｍｅを有する中間体（２ｃ）の代表的な調製
中間体（２ｃ、Ｒ２＝Ｍｅ）（１．３ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）を、密閉管に取り、それに、１（Ｍ）のＴＨＦ中のヒドラジン（１８ｍｌ、１６．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、１００℃で１６時間加熱した。ＴＬＣは、極性スポットの生成を示した。粗ＬＣＭＳデータは、生成物の形成を確認した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、ジエチルエーテルを用いて粉砕して、中間体（２ｄ、Ｒ＝Ｍｅ）を、収率５６％、６５０ｍｇで、ピンク色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．３２（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、５．３６（ｓ、１Ｈ）、４．５４（ｂｒ、２Ｈ）、１．９９（ｓ、３Ｈ）

【0205】

スキーム４、工程３：Ｒ２＝Ｍｅを有する中間体（２ｃ）の代表的な調製
ピリジン（１１ｍＬ）中の中間体（２ｄ、Ｒ＝Ｍｅ）（６５０ｍｇ、４．６４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＳ_２（７ｍＬ、１ｍｌ／ｍｍｏｌ）を添加し、１６時間還流した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、トルエンと共沸させ、最後に、エタノールを用いて粉砕し、濾過して、中間体（２ｅ、Ｒ＝Ｍｅ）を、収率５３％、４５０ｍｇで、黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．６９（ｓ、１Ｈ）、１２．４９（ｓ、１Ｈ）、５．８３（ｓ、１Ｈ）、２．８５（ｓ、３Ｈ）

【0206】

スキーム４、工程４による化合物（３６）の調製：
ＥｔＯＨ（１２ｍＬ）中の中間体（２ｅ、Ｒ＝Ｍｅ）（２３０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．４６ｍＬ、３．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２－クロロ－６－フルオロベンジルブロミド（２２５ｍｇ、１．０１１ｍｍｏｌ）を、０℃で添加し、室温で１時間撹拌した。ＴＬＣは、非極性スポット（所望の二置換化合物）の生成を示した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、次いで、ジクロロメタンで希釈し、水で２回抽出し、次いで、有機層を、無水硫酸ナトリウムを通過させた。有機層を乾燥し、濃縮し、Ｃｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈクロマトグラフィー（４％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）で精製して、化合物３６を、収率２２％、９１ｍｇで、白色固体として得た。Ｎ．Ｂ．ＨＭＢＣは、右領域の異性体形成を確認した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．７５（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３３－７．４０（ｍ、２Ｈ）、７．２０－７．２９（ｔ、１Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、４．４（ｓ、２Ｈ）、２．５４（Ｓ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－４）：Ｒ_ｔ＝２．１６分；［Ｍ＋Ｈ］＝３２５（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．８２％。

【0207】

化合物３７～４６を、さまざまな置換中間体２ａから出発して、スキーム４、工程１～４を介して、化合物３６と同様に調製した。

【0208】

化合物（３７） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_３）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．６（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３４－７．４１（ｍ、２Ｈ）、７．２１ －７．２５（ｔ、１Ｈ）、５．８８（ｓ、１Ｈ）、４．４３（ｓ、２Ｈ）、２．９３－２．９８（ｑ、２Ｈ）、１．１２－１．１６（ｔ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．６４分；［Ｍ＋Ｈ］＝３３９（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９５．１８％。

【0209】

化合物（３８） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．７６（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３７（ｍ、２Ｈ）、７．２２（ｔ、１Ｈ）、５．９１（ｓ、１Ｈ）、４．４２（ｓ、２Ｈ）、２．８４（ｔ、２Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．３２（ｍ、２Ｈ）、０．８７（３、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．６０分；［Ｍ＋Ｈ］＝３６７．３（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９５．６８％。

【0210】

化合物（３９） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝シクロプロピル）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．６（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３５－７．４２（ｍ、２Ｈ）、７．２３ －７．２７（ｔ、１Ｈ）、５．８１（ｓ、１Ｈ）、４．５１（ｓ、２Ｈ）、２．５０（ｓ、１Ｈ）、１．０２－１．０４（ｄ、２Ｈ）、０．９６（ｂｒｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－４）：Ｒ_ｔ＝２．３２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５１（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９５．７６％。

【0211】

化合物（４０） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．８１（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３４－７．４１（ｍ、２Ｈ）、７．２０ －７．２５（ｔ、１Ｈ）、４．４３（ｓ、２Ｈ）、２．６６－２．６８（ｄ、２Ｈ）、１．７９－１．８４（ｍ、１Ｈ）、０．８６－０．８８（ｄ、６Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：Ｒ_ｔ＝１．６２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３６７（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９７．６６％。

【0212】

化合物（４１） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２－シクロプロピル）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．８２（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３４－７．４１（ｍ、２Ｈ）、７．２１ －７．２５（ｔ、１Ｈ）、６．０８（ｓ、１Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、２．８０－２．８２（ｄ、２Ｈ）、０．９５（ｂｒｓ、１Ｈ）、０．５５－０．５７（ｄ、２Ｈ）、０．１３－０．１４（ｄ、２Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－４）：Ｒ_ｔ＝２．４２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３６５（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９７．４６％。

【0213】

化合物（４２） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＯＣＨ_３）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３４－７．４２（ｍ、２Ｈ）、７．２０－７．２４（ｔ、１Ｈ）、６．１（ｓ、１Ｈ）、４．６７（ｓ、２Ｈ）、４．３７（ｓ、２Ｈ）、３．３２（ｓ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－４）：Ｒ_ｔ＝２．１９分；［Ｍ＋Ｈ］＝３５５（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９６．０３％。

【0214】

化合物（４３） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｐｈ）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．８２（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３４（ｍ、８Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、４．４７（ｓ、２Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、３．７１（ｔ、２Ｈ）、３．２９（ｔ、２Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－６）：Ｒ_ｔ＝１．８２分；［Ｍ＋Ｈ］＝４４５．３（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９８．２３％。

【0215】

化合物（４４） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＦ_３）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ７．３３－７．４０（ｍ、２Ｈ）、７．２０－７．２４（ｔ、１Ｈ）、６．０４（ｓ、１Ｈ）、４．３９（ｓ、２Ｈ）、３．１６－３．１９（ｔ、２Ｈ）、２．６－２．６７（ｍ、２Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－４）：Ｒ_ｔ＝２．４３分；［Ｍ＋Ｈ］＝４０７（５分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．０６％。

【0216】

化合物（４５） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２Ｐｈ）から出発 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９０（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．３４－７．４３（ｍ、５Ｈ）、７．１９－７．３１（ｍ、３Ｈ）、５．４４（ｓ、１Ｈ）、４．３４（ｓ、２Ｈ）、４．２６（ｓ、２Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－５）：Ｒ_ｔ＝１．６０分；［Ｍ＋Ｈ］＝４０１（３分の実行時間）。ＨＰＬＣ＝９９．４６％。

【0217】

化合物（４６） 中間体（２ａ、（Ｒ２＝ＣＨ_２Ｐｈ）から出発し、工程４において２－クロロ－６－フルオロベンジルブロミドを４－シアノベンジルブロミドで置き換える：６０ｍｇ、白色固体（収率２５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：４．３４（ｓ、２Ｈ）、４．４１（ｓ、１Ｈ）、５．３９（ｓ、１Ｈ）、７．２２－７．３７（ｍ、５Ｈ）、７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．７５（ｄ、２Ｈ）、１２．６９（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５６分；［Ｍ＋Ｈ］＝３７４。ＨＰＬＣ＝９８．９３％。

【0218】

市販されていない場合、化合物３０～４６のための個々の中間体２ａは、次のようにして供給した。

【0219】

化合物３０、３２～３４および４３のための中間体２ａを、スキーム５に従って合成した。

【化8】

【0220】

スキーム５、工程１ 中間体（３ｂ）の調製
乾燥ヘキサン［１００ｍｌ、１０体積］中の４－クロロベンジルアルコール中間体（３ａ、Ｒ＝４－Ｃｌ）［１０ｇ、１．０当量］を、室温で１０分間撹拌し、次いで、パラホルムアルデヒド［２．７ｇ、１．０当量］を添加し、ＲＴで１０分間撹拌した。反応集団を、０℃に冷却し、乾燥ＨＣｌガスを１間、パージした。次いで、反応混合物を、５℃で２４時間継続した。反応集団を、１Ｈ ＮＮＭＲによってモニタリングした。反応混合物を、焼結漏斗を通して濾過し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮して、中間体（３ｂ、Ｒ＝４－Ｃｌ）を、液体（１０．９ｇ、収率８１％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ４．６９（ｓ、２Ｈ）、５．５０（ｓ、２Ｈ）、７．２７－７．３４（ｍ、４Ｈ）。

【0221】

ＲがＨである３ｂ：商業的供給業者から購入した。

【0222】

Ｒが、２－クロロである３ｂについて、２－クロロベンジルアルコール中間体（３ａ、Ｒ＝２－Ｃｌ）を使用し、対応する中間体（３ｂ Ｒ＝２－Ｃｌ）：収率８２％に至った。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ４．８４（ｓ、２Ｈ）、５．５７（ｓ、２Ｈ）、７．２４－７．２８（ｍ、２Ｈ）、７．３６－７．３９（ｔ、１Ｈ）、７．４３－７．４５（ｔ、１Ｈ）。

【0223】

Ｒが３－クロロである３ｂについて、３－クロロベンジルアルコール中間体（３ａ、Ｒ＝３－Ｃｌ）を使用し、対応する中間体化合物（３ｂ Ｒ＝３－Ｃｌ）：収率８５％に至った。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ４．７０（ｓ、２Ｈ）、５．５１（ｓ、２Ｈ）、７．２１－７．２９（ｍ、１Ｈ）、７．２９－７．３０（ｄ、２Ｈ）、７．３５（ｓ、１Ｈ）。

【0224】

スキーム５、工程１ 中間体（２ａ、Ｒ２＝ＣＨ _２ ＣＨ _２ ＯＣＨ _２ Ａｒ）の調製
ＮａＨ［１．６ｇ、１．０５当量］を、窒素雰囲気下で取り、乾燥ＴＨＦ［５０ｍＬ、１０体積］をゆっくりと添加した。反応混合物を、０℃に冷却し、次いで、乾燥ＴＨＦ中のエチルアセトアセテート［５ｇ、１．０当量］を滴下添加した。１０分間撹拌した後、２．５ＭのｎＢｕＬｉ［１７ｍｌ、１．１当量］を、０℃で滴下添加した。反応混合物を、１５分間撹拌し、次いで、３ａ（Ｒ＝４－Ｃｌ）［６．５ｇ、０．９当量］を滴下添加した。反応混合物を、室温にし、１～１．５時間撹拌し、次いで、０℃で氷冷水、続いて６ＮのＨＣｌ、ｐＨ＝２～３を用いてクエンチした。反応混合物を、酢酸エチル（３×１０体積）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗材料を、ヘキサンで溶出させる１００～２００メッシュのシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製した。２０％のＥＡ／Ｈｅｘで、純粋な画分を収集し、減圧下で蒸留して、純粋な中間体２ａ（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２－（４－Ｃｌ－Ｐｈ））を、液体（３．５ｇ、収率３２％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １．２１－１．２７（ｔ、３Ｈ）、１．７１－１．７４（ｔ、１Ｈ）、２．８０－２．８３（ｔ、２Ｈ）、３．４６（ｓ、１Ｈ）、３．７１－３．７４（ｔ、２Ｈ）、４．１４－４．２０（ｑ、２Ｈ）、４．４５（ｓ、２Ｈ）、４．６５－４．６６（ｄ、２Ｈ）、７．２２－７．３３（ｍ、４Ｈ）。

【0225】

以下の中間体２ａを、上記に記載されるようにして、３ｂから同じアプローチを使用して合成した。

【0226】

中間体２ａ（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２－（２－Ｃｌ－Ｐｈ））について、収率３９％。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １．２１－１．２９（ｔ、３Ｈ）、１．９０－９３－１．７４（ｔ、１Ｈ）、２．２６（ｓ、１Ｈ）、３．４３（ｓ、１Ｈ）、３．７１－３．７４（ｔ、２Ｈ）、４．１５－４．２２（ｑ、１Ｈ）、４．７７－４．７９（ｄ、２Ｈ）、７．２３－７．２９（ｍ、２Ｈ）、７．３４－７．３６（ｄ、１Ｈ）、７．４６－７．４８（ｄ、１Ｈ）。

【0227】

中間体２ａ（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｐｈ）について、収率３０％。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １．２１－１．２４（ｔ、３Ｈ）、２．０２（ｓ、２Ｈ）、４．１１－４．２０（ｍ、２Ｈ）、４．６８－４．６９（ｄ、１Ｈ）、４．７３（ｓ、１Ｈ）、５．２１（ｓ、２Ｈ）、７．２４－７．３６（ｍ、５Ｈ）。

【0228】

中間体２ａ（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２－（３－Ｃｌ－Ｐｈ））について、収率２１％。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １．２１－１．２７（ｔ、３Ｈ）、２．２４（ｓ、２Ｈ）、３．４９－３．５４（ｔ、２Ｈ）、４．１１－４．２０（ｑ、２Ｈ）、４．５８（ｓ、１Ｈ）、４．７７（ｓ、１Ｈ）、５．２８（ｓ、２Ｈ）、７．１９－７．２２（ｍ、１Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、７．３２－７．３６（ｔ、１Ｈ）、７．４１－７．４８ｄｄ、１Ｈ）。

【0229】

化合物３５を生成するための中間体２ａ（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＭｅ）を、以下の通り調製した：ＤＣＭ［１０体積］中のマロン酸エチルカリウム［１２．５ｇ、１．０当量］の撹拌溶液に、ＴＥＡ［１２．０ｍｌ、１．１当量］を添加した。反応混合物を、Ｎ２雰囲気下、１０℃に冷却し、３０分間撹拌した。塩化マグネシウム［１．２当量］を添加し、ＲＴで２．５時間撹拌した。反応混合物を、０℃に冷却し、３－メトキシプロピルクロリド（０．５当量）をゆっくりと添加し、ＲＴで１８時間撹拌した。反応混合物を、減圧下で蒸留し、次いで、１５％のＨＣｌを添加し、ＤＣＭ（３×１０体積）で抽出した。有機層を、ブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、ＥＡ／Ｈｅｘで溶出させる１００～２００メッシュのシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製した。１０～２０％のＥＡ／ヘキサンで、純粋な画分を収集し、減圧下で蒸留して、中間体２ａ（Ｒ＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＭｅ）（２．９ｇ、収率２３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １．１６－１．２０（ｔ、３Ｈ）、２．７２－２．７５（ｔ、２Ｈ）、３．２２（ｓ、３Ｈ）、３．５１－３．５４（ｔ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、２Ｈ）、４．０６－４．１１（ｑ、２Ｈ）。

【0230】

化合物４４を生成するための中間体２ａ（Ｒ２＝ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＦ_３）を、以下の通り調製した：１５ｍｌのＤＣＭ中の４，４，４－トリフルオロ酪酸（１．０ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、メルドラム酸（０．９８６ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１０分間撹拌した。それに、ＤＣＣおよびＤＭＡＰを添加し、反応混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物を、セライトベッドを通して濾過し、１（Ｎ）のＨＣｌで抽出した。合わせた有機部を、無水硫酸ナトリウムを通過させ、真空下で蒸発させ、粗製物を、さらなる精製なしで、次の工程に送った。次いで、粗製物をメタノールに溶解し、触媒のｐ－ＴＳＡを添加し、それを、１．５時間還流した。反応混合物を蒸発させて、乾固し、粗材料を、さらなる精製なしで、直接使用した。

【0231】

ｃ）Ｒ５がＳであり、ｎ＝０であり；Ｒ２およびＲ３が、両方ともアルキルであり；Ｒ５が、ＮＨである、式（Ｉ）の化合物
化合物４７～４９を、本明細書からのスキーム１に従って合成した。

【化9】

【0232】

化合物４７を、以下のスキーム６に従って調製した：

【化10】

【0233】

化合物（４７）を調製するためのスキーム６
ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の５－プロピル－３－チオキソ－２，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７（３Ｈ）－オン（スキーム３からの中間体１ｅ、５００ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）およびヨードベンゼン（７２８ｍｇ、３．５７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｋ_３ＰＯ_４（１．５１ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、密閉管中、反応混合物を、アルゴン雰囲気下で１０分間脱気した。次いで、ＣｕＩ（４５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）および１，１０－フェナントロリン（４１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、１２０℃で７２時間加熱した。反応混合物を、ｇｅｎｅ－ｖａｃｕｏ中で蒸発させ、Ｃｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（０．５％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって精製して、化合物４７を白色固体（２００ｍｇ、収率２９％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ）、１．５４－１．６１（ｔ、２Ｈ）、２．９６（ｔ、２Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、７．２３－７．３８（ｍ、５Ｈ）、１２．９０（ｓ、１Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．１６分；［Ｍ＋Ｈ］＝２８７。ＨＰＬＣ＝９９．７５％。

【0234】

化合物４８を、以下のスキーム７に従って調製した：

【化11】

【0235】

スキーム７、工程１：中間体（４ａ）
０℃のＤＭＦ（１００ｍＬ）中の酪酸エチル（５ｇ、３１．６２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（１０．９１ｇ、７９．０６ｍｍｏｌ）およびＭｅＩ（１．９７ｍＬ、３１．６２ｍｍｏｌ）を添加し、ｒｔで４８時間撹拌した。反応混合物を、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ水溶液の間で分配した。有機部を、乾燥し、濃縮し、Ｃｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（２％のＥＡ－Ｈｅｘで溶出）によって精製して、所望の中間体４ａを、収率２２．０３％、１．２ｇで、無色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８２（ｔ、３Ｈ）、１．１７（ｄ、３Ｈ）、１．４３－１．５２（ｍ、２Ｈ）、２．４５（ｓ、３Ｈ）、３．６６－３．７１（ｍ、１Ｈ）、４．０７－４．１２（ｍ、２Ｈ）；

【0236】

スキーム７、工程２：中間体（４ｂ）
水（２０ｍＬ）中の中間体４ａ（１．２ｇ、６．９６ｍｍｏｌ）および２－メチル－２－チオプソイドウレアヘミ硫酸塩（１．０６ｇ、７．６６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎａ_２ＣＯ_３（１．１８ｇ、１１．１５ｍｍｏｌ）を添加し、ｒｔで４８時間撹拌した。白色沈殿を、徐々に取り除き、試みた濾過は、焼結漏斗の壁に白色物質が付着したので、成功しなかった。そのため、反応混合物を、１０％のＩＰＡ－ＭｅＯＨおよび水の間で分配した。有機部を、乾燥し、濃縮し、エーテルを用いて粉砕して、所望の中間体４ｂを、収率５７．９％、８００ｍｇで、白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９０（ｔ、３Ｈ）、１．５４－１．６３（ｍ、２Ｈ）、１．８７（ｓ、３Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、２．４２（ｔ、２Ｈ）、８．７１（ｂｒｓ、１Ｈ）；

【0237】

スキーム７、工程３：中間体（４ｃ）
エタノール（１０ｍＬ）中の中間体４ｂ（８００ｍｇ、４．０３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＨ_２ＮＨ_２．Ｈ_２Ｏ（２．０１ｍＬ、４０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、２４時間還流した。反応混合物を、蒸発させて、乾固した。ニートＮＨ_２ＮＨ_２．Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ）を添加し、１６時間還流した。ＬＣＭＳは、主生成物の形成を示した。反応混合物を、蒸発させて、完全に乾固し、ＥｔＯＨおよびエーテルを用いて粉砕して、所望の中間体４ｃを、オフホワイト固体（粗製物）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８５（ｔ、３Ｈ）、１．４９－１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．７９（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｔ、２Ｈ）、３．９１（ｂｒｓ、２Ｈ）、７．０９（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．３２分；［Ｍ＋Ｈ］＝１８３（３分の実行時間、ＮＨ_４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。

【0238】

スキーム７、工程４：中間体（４ｄ）
ピリジン（１０ｍＬ）中の粗２－ヒドラジニル－５－メチル－６－プロピルピリミジン－４（１Ｈ）－オン（４００ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＳ２（２．２ｍＬ）を添加し、６時間還流した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、トルエンと共沸させ、最後に、ＥｔＯＨを用いて粉砕して、粗標的化合物をオフホワイト固体として得た。この粗物質（中間体４ｄ、１８０ｍｇ）を、さらなる精製なしで、次の工程のために使用した。

【0239】

化合物（４８）を調製するためのスキーム７、工程５
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の粗中間体４ｄ（１８０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１６７μＬ、１．２０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２－クロロ，６－フルオロベンジルブロミド（９９μＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を添加し、ｒｔで１８時間撹拌した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、１０％のＩＰＡ－ＤＣＭおよび水の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（１％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって、最後に分取ＴＬＣ（移動相 ５％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって精製して、所望の化合物（４８）を、収率６．７９％で、オフホワイト固体（２０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８５（ｔ、３Ｈ）、１．４６－１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．９３（ｓ、３Ｈ）、２．９４（ｔ、２Ｈ）、４．３８（ｓ、２Ｈ）、７．２２－７．３８（ｍ、３Ｈ）、１２．８７（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．５８分；［Ｍ＋Ｈ］＝３６７（３分の実行時間、ＨＣＯＯＨ＋ＭｅＣＮ）。ＨＰＬＣ＝９８．６０％。

【0240】

化合物４９を、以下のスキーム８に従って調製した：

【化12】

【0241】

スキーム８、工程１：中間体（５ｂ）
ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）中の中間体１ｄ（スキーム３、７００ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１－クロロ－３－フルオロ－２－（イソチオシアナトメチル）ベンゼン（５ａ、１．２５ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間還流した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、ＥｔＯＨで洗浄した。白色固体材料を、濾過し、濃縮して、粗中間体５ｂを、オフホワイト固体（６００ｍｇ）として得た。ＬＣＭＳ（方法－３）：Ｒ_ｔ＝２．８２分［Ｍ＋Ｈ］＝３７０（５分の実行時間、ＮＨ_４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。

【0242】

化合物（４９）を調製するためのスキーム８、工程２
ジオキサン（２５ｍＬ）中の中間体５ｂ（６００ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＣＣ（４０２ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間還流した。ＴＬＣは、出発材料の完全な消費、および２つの極性スポットの生成を示した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、１０％のＩＰＡ－ＤＣＭおよび飽和ＮａＨＣＯ_３溶液の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（１％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって精製して、（４９）を、収率１１％で、オフホワイト固体（６０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．７９（ｔ、３Ｈ）、１．５３－１．５８（ｍ、２Ｈ）、２．７９（ｔ、２Ｈ）、４．４９（ｓ、２Ｈ）、５．７０（ｓ、１Ｈ）、６．１２（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．２３－７．４０（ｍ、３Ｈ）、１２．２２（ｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝１．４６分［Ｍ＋Ｈ］＝３３６（３分の実行時間、ＨＣＯＯＨ＋ＭｅＣＮ）。ＨＰＬＣ＝９９．１８％。

【0243】

ｄ）Ｒ５がＳＯ _２ または結合である、式（Ｉ）の化合物
化合物５０～５１を、本明細書からのスキーム２に従って合成した。

【化13】

【0244】

化合物５０を、以下のスキーム９に従って調製した。

【化14】

【0245】

スキーム９、工程１：中間体（６ｂ）
０℃のＴＨＦ（２５ｍＬ）中の２，４－ジクロロ－６－メトキシピリミジン（６ａ、５００ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）およびＦｅ（ａｃａｃ）３（９９．２２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＰｒＭｇＢｒ（０．４１ｍｌ、２．８１ｍｍｏｌ）を添加し、ｒｔで４８時間撹拌した。反応混合物を、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ水溶液の間で分配した。有機部を、乾燥し、濃縮し、Ｃｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（２％のＥＡ－Ｈｅｘで溶出）によって精製して、所望の中間体６ｂを、収率５５％、３００ｍｇで、無色粘性液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８８（ｔ、３Ｈ）、１．６１－１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．６０（ｔ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、６．８４（ｓ、１Ｈ）；ポジティブｎＯｅが、芳香族プロトン（６．８４ｐｐｍ）と隣接ＣＨ２（２．６０ｐｐｍ）プロトンとの間で観察された。ＬＣＭＳ（方法－３）：Ｒ_ｔ＝３．４１分［Ｍ＋Ｈ］＝１８７（５分の実行時間、ＮＨ４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。

【0246】

スキーム９、工程２：中間体（６ｃ）
ジオキサン（２０ｍＬ）中の中間体６ｂ（３００ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＨ２ＮＨ２（４．０３ｍＬ、４０．３０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ）を添加し、２４時間還流した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、エーテルを用いて粉砕して、所望の中間体６ｃを、白色固体（１５０ｍｇ、粗製物）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．８８（ｔ、３Ｈ）、１．５７－１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．４０（ｔ、２Ｈ）、３．８１（ｓ、３Ｈ）、４．１０（ｂｒｓ、２Ｈ）、５．９０（ｓ、１Ｈ）、７．９２（ｓ、１Ｈ）。

【0247】

スキーム９、工程３：中間体（６ｄ）
ピリジン（２５ｍＬ）中の粗中間体６ｃ（１ｇ、５．４９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＳ２（５．５ｍＬ）を添加し、６時間還流した。反応混合物を、真空中で蒸発させ、トルエンと共沸させ、最後に、ＥｔＯＨを用いて粉砕して、粗標的中間体６ｄを、薄黄色固体（６００ｍｇ）として得た。この粗材料（６００ｍｇ）を、さらなる精製なしで、次の工程のために使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９５（ｔ、３Ｈ）、１．７０－１．７６（ｍ、２Ｈ）、３．５５（ｔ、２Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、６．３５（ｓ、１Ｈ）、１４．０９（ｓ、１Ｈ）。

【0248】

スキーム９、工程４：中間体（６ｅ）
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の粗中間体６ｄ（１００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（９３μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２－クロロ，６－フルオロベンジルブロミド（７１μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、ｒｔで１８時間撹拌した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、１０％のＩＰＡ－ＤＣＭおよび水の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（１％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって、最後に分取ＴＬＣ（移動相 ５％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって精製して、中間体６ｅを、収率４２．７６％で、オフホワイト固体（８０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９１（ｔ、３Ｈ）、１．５６－１．５８（ｍ、２Ｈ）、３．０２（ｔ、３Ｈ）、３．９７（ｓ、３Ｈ）、４．４１（ｓ、２Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、７．１５－７．３８（ｍ、３Ｈ）；ＨＭＢＣは、所望の異性体の形成を確認した。ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．７６分［Ｍ＋Ｈ］＝３６７（３分の実行時間、ＮＨ_４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。ＨＰＬＣ＝９９．８３％

【0249】

スキーム９、工程５：中間体（６ｆ）
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の３－（（２－クロロ－６－フルオロベンジル）チオ）－７－メトキシ－５－プロピル－［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン中間体６ｅ（２００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｍ－ＣＰＢＡ（３１２ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ、６０％）を添加し、ｒｔで１８時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液およびＤＣＭの間で分配した。有機層を、乾燥し、濃縮して、８０ｍｇの粗中間体６ｆを得た。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝２．１８分；［Ｍ＋Ｈ］＝３９９。

【0250】

化合物（５０）を調製するためのスキーム９、工程６
ＨＢｒ－ＡｃＯＨ（１０ｍＬ）を、中間体６ｆ（８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）に添加し、８０℃で１８時間加熱した。ＴＬＣは、出発材料の完全な消費、および極性スポットの生成を示した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、１０％のＩＰＡ－ＤＣＭおよび飽和ＮａＨＣＯ_３溶液の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（１％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって精製して、化合物（５０）を、収率１３％で、白色固体（１０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ）、１．６２－１．６６（ｍ、２Ｈ）、２．９０（ｔ、２Ｈ）、５．４１（ｓ、２Ｈ）、６．０６（ｓ、１Ｈ）、７．３７－７．５７（ｍ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ（方法－１）：Ｒ_ｔ＝３．７２分；［Ｍ＋Ｈ］＝３８５。ＨＰＬＣ＝９４．７８％。

【0251】

化合物５１を、以下のスキーム１０に従って調製した。

【化15】

【0252】

スキーム１０、工程１：中間体（７ａ）
ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の中間体６ｃ（スキーム９から、７００ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）および３－フェニルプロパン酸（５７７ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＥＤＣ．ＨＣｌ（１．１ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７９６ｍｇ、５．７６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．４８ｇ、１１．５３ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間撹拌した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、ＤＣＭおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（７０％のＥＡ－Ｈｅｘ）によって精製して、所望の中間体７ａを、収率４２％で、オフホワイト固体（５００ｍｇ）として得た。ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．７７分［Ｍ＋Ｈ］＝３１５（３分の実行時間、ＮＨ４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。

【0253】

スキーム１０、工程１：中間体（７ｂ）
ＴＨＦ（２５ｍｌ）中の中間体７ａ（５００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、バージェス試薬（７５８ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ）を添加し、４８時間撹拌した。ＬＣＭＳは、所望の生成物の形成およびいくつかの未反応ＳＭを示した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、ＤＣＭおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（６０％のＥＡ－Ｈｅｘ）によって精製して、所望の中間体７ｂを、収率４２％で、オフホワイト固体（２００ｍｇ）として得た。ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．７５分［Ｍ＋Ｈ］＝２９７（３分の実行時間、ＮＨ_４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。

【0254】

化合物（５１）を調製するためのスキーム１０、工程３
ＨＢｒ－ＡｃＯＨ（１０ｍＬ）を、中間体７ｂ（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）に添加し、８０℃で１８時間加熱した。ＴＬＣは、出発材料の完全な消費、および極性スポットの生成を示した。反応混合物を、蒸発させて、乾固し、１０％のＩＰＡ－ＤＣＭおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液の間で分配した。有機部を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、最初にＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（１％のＭｅＯＨ－ＤＣＭ）によって精製して、所望の化合物（５１）を、収率２６％で、オフホワイト固体（５０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ）、１．５８－１．６４（ｍ、２Ｈ）、２．８６（ｔ、２Ｈ）、３．１２（ｔ、２Ｈ）、５．８３（ｓ、１Ｈ）、７．２０－７．３１（ｍ、５Ｈ）、１２．６４（ｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ（方法－２）：Ｒ_ｔ＝１．５８分［Ｍ＋Ｈ］＝２８３（３分の実行時間、ＮＨ４ＯＡｃ＋ＭｅＣＮ）。ＨＰＬＣ＝９４．２２％。

【0255】

化合物５２～１００（表１）は、スキーム３の工程４のように、特に、適切な求電子試薬、例えば、臭化ベンジルによる中間体１ｅのアルキル化を介して、スキーム１および２から、当業者によって容易に得ることができる。化合物を、市販供給源を介して、試験のために取得した。

【0256】

【表1-1】

【0257】

【表1-2】

【0258】

【表1-3】

【0259】

【表1-4】

【0260】

【表1-5】

【0261】

【表1-6】

【0262】

【表1-7】

【0263】

【表1-8】

【0264】

【表1-9】

【0265】

【表1-10】

【0266】

ＬＣＭＳ方法
ＬＣ－ＭＳ方法１：
カラム－ＹＭＣ－Ｔｒｉａｔ Ｃ１８（３３×２．１ｍｍ、３ｍｍ）、（移動相：９８％［０．０５％の水中のＨＣＯＯＨ］および２％［ＣＨ３ＣＮ］を０．７５分、次いで、９０％［０．０５％の水中のＨＣＯＯＨ］および１０％［ＣＨ_３ＣＮ］を１．０分、さらに２％［０．０５％の水中のＨＣＯＯＨ］および９８％［ＣＨ_３ＣＮ］を２．０分保持し、この移動相組成を最大で２．５分保持し、最後に３．０分で初期状態に戻した）。流れ＝１．０ｍｌ／分。

【0267】

ＬＣ－ＭＳ方法２：
ＬＣＭＳ／ＭＳ－ＡＰＩ ２０００／Ｑ ｔｒａｐ

【0268】

モニタリング方法
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のＡＰＩ ２０００質量分析計（シングル四重極質量分析計）
イオン化方法：エレクトロスプレー；極性：ポジティブイオン。
キャピラリー（ｋＶ）５．５、ＤＰ（Ｖ）５０．００、入口電圧（Ｖ）１０、集束電圧（Ｖ）４００、供給源温度２００℃、イオン源ガス１（Ｐｓｉ）４０、イオン源ガス２（Ｐｓｉ）５０、カーテンガス（Ｐｓｉ）４０
質量範囲：１００～８００ＡＭＵ；ＵＶ波長範囲：２２０～２６０ｎｍ；以下のＨＰＬＣグラジエント条件（溶媒Ａ：１０Ｍｍの水中のＮＨ_４ＯＡｃおよび溶媒Ｂ：アセトニトリル）を用いる方法（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎａｎｃｅシステム）。流速：１．２ｍｌ／分。

【0269】

【表2】

【0270】

カラムの種類：Ｚｏｒｂａｘ Ｅｘｔｅｎｄ Ｃ１８；カラム長さ：５０ｍｍ；カラムの内径：４．６ｍｍ；粒子径：５ｍｍ

【0271】

質量条件：イオン化技法：ＡＰＩ（大気圧イオン化）源を使用するＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）；クラスター分離電位：化合物のイオン化に応じて１０～７０Ｖ。質量範囲：１００～８００ａｍｕ；スキャンの種類：Ｑ１；極性：＋ｖｅ；イオン源：ターボスプレー；イオンスプレー電圧：＋５５００；質量源温度：２００℃。

【0272】

ＬＣ－ＭＳ方法３：
ＬＣＭＳ／ＭＳ－ＡＰＩ ２０００／Ｑ ｔｒａｐ－モニタリング方法
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のＡＰＩ ２０００質量分析計（シングル四重極質量分析計）
イオン化方法：エレクトロスプレー；極性：ポジティブイオン。キャピラリー（ｋＶ）５．５、ＤＰ（Ｖ）５０．００、入口電圧（Ｖ）１０、集束電圧（Ｖ）４００、供給源温度２００℃、イオン源ガス１（Ｐｓｉ）４０、イオン源ガス（Ｐｓｉ）５０、カーテンガス（Ｐｓｉ）４０；質量範囲：１００～８００ａｍｕ；ＵＶ波長範囲：２２０～２６０ｎｍ；方法 以下のＨＰＬＣグラジエント条件（溶媒Ａ：１０Ｍｍの水中のＮＨ４ＯＡｃおよび溶媒Ｂ：アセトニトリル）を用いるＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ。流速：１．２ｍｌ／分。

【0273】

【表3】

【0274】

カラムの種類：Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８；カラム長さ：５０ｍｍ；カラムの内径：４．６ｍｍ；粒子径：５ミクロン。

【0275】

質量条件：イオン化技法：ＡＰＩ（大気圧イオン化）源を使用するＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）；クラスター分離電位：化合物のイオン化に応じて１０～７０Ｖ。質量範囲：１００～８００ａｍｕ；スキャンの種類：Ｑ１；極性：＋ｖｅ；イオン源：ターボスプレー；イオンスプレー電圧：＋５５００；質量源温度：２００℃。

【0276】

ＬＣ－ＭＳ方法４：ＵＰＬＣ－ＭＳ方法：
カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８；カラム長さ：５０ｍｍ；カラムの内径：４．６ｍｍ；粒子径：５ｍｍ。

【0277】

グラジエント条件：流速：１．５ｍｌ／分；カラム温度：５０℃；注入体積：０．５μＬ；以下のＨＰＬＣグラジエント条件（溶媒Ａ：５ｍＭの水中のＮＨ_４ＯＡｃおよび溶媒Ｂ：５ｍＭのアセトニトリル中のＮＨ_４ＯＡｃ：水－９０：１０）を用いるＷａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ。

【0278】

【表4】

【0279】

質量条件：
Ｗａｔｅｒｓ製のＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ質量分析計（シングル四重極質量分析計、Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ２）；イオン化方法：エレクトロスプレー；極性：ポジティブイオン；キャピラリー（ｋＶ）３．５０、コーン（Ｖ）４０．００、供給源温度１５０℃、脱溶媒和温度４５０℃、コーンガス流（Ｌ／時間）５０、脱溶媒和ガス流（Ｌ／時間）７５０；質量範囲：１００～８００Ｄａ；ＤＡＤ（ダイオードアレイ検出）；波長範囲（ｎｍ）：２１０～４００ｎｍ；ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ。

【0280】

ＬＣ－ＭＳ法５：Ａｇｉｌｅｎｔ ＵＰＬＣ－ＭＳ：
カラム－ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８（２．１×３３ｍｍ、３ｍｍ）

【0281】

グラジエント条件：流速：１．２ｍｌ／分；カラム温度：５０℃；注入体積：０．４μＬ 溶媒Ａ：０．０１％の水中のＨＣＯＯＨおよび溶媒Ｂ：０．０１％のＣＨ_３ＣＮ中のＨＣＯＯＨ、（移動相：９５％［０．０１％の水中のＨＣＯＯＨ］および５％［０．０１％のＣＨ_３ＣＮ中のＨＣＯＯＨ］を０．５０分、次いで、１％［０．０１％の水中のＨＣＯＯＨ］および９９％［０．０１％のＣＨ_３ＣＮ中のＨＣＯＯＨ］を３．０分保持し、この組成を最大で４．００分保持し、最後に４．１０分で初期状態に戻し、４．５０分保持した）。

【0282】

【表5】

【0283】

質量条件：Ａｇｉｌｅｎｔ製のＳＱＤ質量分析計（シングル四重極質量分析計）；イオン化方法：エレクトロスプレー；極性：ネガティブイオン キャピラリー（ｋＶ）４．００、フラグメンター（Ｖ）１５０．００、閾値－２００、乾燥ガス温度３５０℃、乾燥ガス流（Ｌ／分）１２、ネブライザー圧力（Ｐｓｉ）５０。

【0284】

実施例２：ＭＰＣに対する阻害活性
本発明の化合物によるミトコンドリアピルビン酸輸送体（ＭＰＣ）の阻害を以下の通り試験し、それらの阻害活性をＩＣ_５０値として表した。

【0285】

試薬
Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｘｆｅ２４ Ｆｌｕｘ Ａｎａｌｙｓｅｒ［Ａｇｉｌｅｎｔ］
アッセイ培地：１ｍＭのピルビン酸を含有するＰＢＳ／ＣａＣｌ_２／ＭｇＣｌ_２（Ｅｕｒｏｂｉｏ ＣＳ１ＰＢＳ００－０１）。

【0286】

以下の作業試薬を、１０×最終濃度で、アッセイ培地において作製した：
－オリゴマイシンＡ ストック：ＤＭＳＯ中１０ｍＭ。
作業溶液：２０μＭ（４μｌ／２ｍｌ）
－ｆＣＣＰ（カルボニルシアニド－（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン
ストック：ＤＭＳＯ中１０ｍＭ
作業溶液：１０μＭ（２μｌ／２ｍｌ）
－ロテノン ＤＭＳＯ中１０ｍＭ
作業溶液：１０μＭ
－アンチマイシン ストック：ＥｔＯＨ中１０ｍＭ
作業溶液：１０ｕＭ
（ロテノン＋アンチマイシン試薬をプールする：
２ｍｌのアッセイ培地中２μｌのロテノン＋２μｌのアンチマイシン）

【0287】

前日
細胞を、専用のＳｅａｈｏｒｓｅプレートに蒔いた。ＨｅＬａ細胞について、播種は、５００ｍｌのＤＭＥＭ、１０％のＦＢＳ、１％のｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ／グルタミン中、４×１０^４個細胞／ウェルである。３ウェルは、内部較正のために、ブランク（培地単独）のままである。アッセイカートリッジを、１ｍｌ／ウェルのＸＦ Ｃａｌｉｂｒａｎｔ溶液中、３７℃で終夜水和した。

【0288】

アッセイ日
試薬プレート
アッセイ培地中で調製される試薬／希釈物。
５０μｌの本発明の化合物が、４５０μｌの洗浄された細胞に注入されるので、化合物は、１０×最終所望濃度で、アッセイ培地において作製される。
用量応答分析のために、化合物を、最終濃度３０、５、０．８３、０．１４、０．０２３μＭ（３０ｍＭから１：６連続希釈）で試験する。
陽性対照：３０ｍＭ（実際の系列を生じさせる親ヒット化合物）
陰性対照：アッセイ培地単独。

【0289】

ｓｅａｈｏｒｓｅ試薬プレートを、以下の通り調製し、較正工程のために、Ｘｆｅ２４ ａｎａｌｙｓｅｒに移す。
ポートＡ 化合物（５０μｌ）
ポートＢ オリゴマイシンＡ（５５μｌ）
ポートＣ ｆＣＣＰ［（カルボニルシアニド４－（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン］（６２μｌ）
ポートＤ ロテノン＋アンチマイシン（６８μｌ）。

【0290】

細胞プレート
培地を、細胞を乾燥させずに、ウェルからほぼ完全に除去する。

【0291】

細胞を、３００μｌのアッセイ培地で２回洗浄する。４５０μｌの新鮮なアッセイ培地を、それぞれのウェルに添加する。プレートを、ピルビン酸依存性ＯＣＲの測定のために、Ｘｆｅ２４ ａｎａｌｙｓｅｒに移す。化合物の添加前に測定され、１００％と指定される、それぞれのウェルにおける初期基礎呼吸速度に対して、すべての値を正規化する。ＩＣ_５０決定は、ｆＣＣＰの存在下で行われた３回の測定の平均に基づいており、３０μＭの親ヒット化合物を最大阻害、およびＰＢＳ／Ｃａ／Ｍｇをゼロ阻害とする。

【0292】

下記の表２は、本発明の化合物のＩＣ_５０を表す。

【0293】

【表6】

【0294】

実施例３：メモリーマーカー発現に対するＣＤ８ Ｔ細胞のインビトロプライミングの間のＭＰＣ阻害の効果
ＯＴ１脾細胞を、１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ １０２７０－１０６）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ １５０７０－０６３）、５０μＭのβ－メルカプトエタノール、１％のＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０－０８０）、１×非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ １１１４０－０３５）、１％のＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ ２５０３０－０８１）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ １１３６０－０３９）を補充したＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ ６１８７０－０１）中、１ｍＬあたり１０６個細胞の濃度で、３日間培養した。細胞に、追加的に、１００Ｕ／ｍｌのｈＩＬ－２（Ｇｌａｘｏ－ＩＭＢ）、１μｇ／ｍｌのオボアルブミンＮ４ペプチド（２５７－２６４）（オボアルブミン由来のモデルペプチド抗原）、および異なる濃度の化合物４５もしくは４７のいずれか、または対照としてそれらの溶媒ＤＭＳＯを補充した。３日目に、脾細胞を収集し、洗浄し、分け、細胞を、化合物４５もしくは４７、またはＤＭＳＯのいずれかを補充した１００Ｕ／ｍｌのｈＩＬ－２およびｈＩＬ－７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ ２００－０７）とともに、さらに４日間培養した。７日目に、フローサイトメトリー分析を、表面マーカー発現について行った。

【0295】

Ｔ細胞分化に対するＭＰＣ阻害の効果を評価するために、ＯＴ１脾細胞を、１μｇ／ｍｌのオボアルブミン由来Ｎ４ペプチド、１００ＩＵ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）およびＭＰＣ阻害剤の化合物４５もしくは４７、または対照ＤＭＳＯの存在下で、３日間培養した。細胞を、１００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２および１０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ－７（図１Ａ）、ならびに阻害剤またはＤＭＳＯの存在下で、さらに４日間培養した。７日目にフローサイトメトリーによってセントラルメモリーマーカーＣＤ６２Ｌ（図１Ｂ）および生存促進性受容体ＣＤ１２７（図１Ｃ）の表面発現を分析すると、ＤＭＳＯと比較して、最高用量の本発明の化合物で処理された細胞の増加が観察された。

【0296】

したがって、これらのデータは、本発明の化合物によるＣＤ８ Ｔ細胞の処理が、増強されたメモリー特生をもたらすことを裏付ける。

【0297】

実施例４：本発明の化合物で処理されたＣＤ８ Ｔ細胞の養子細胞移入療法
本発明の化合物の効果を、以下の通り処理されたＣＤ８ Ｔ細胞を用いる養子細胞移入療法モデルにおいて、および黒色腫腫瘍モデルにおいて試験する。

【0298】

養子細胞移入
活性化ＣＤ４５．１＋ ＯＴ－１脾細胞を、上記に記載されるようにして、インビトロで７日間培養し、収集し、Ｆｉｃｏｌｌ勾配において精製し、死および生脾細胞を分離させた。生脾細胞を、０．４％のトリパンブルー染色を用いてカウントした。１００，０００または２，０００，０００個の生脾細胞を、尾静脈注射によって、ＣＤ４５．２＋宿主マウスに移入した。

【0299】

生成したメモリーＴ細胞の機能的能力を評価するために、化合物４５処理細胞を、黒色腫のマウスモデルにおいてさらに試験した。

【0300】

黒色腫腫瘍モデル
Ｂ１６－ＯＶＡ細胞を、マウス脇腹へのそれらの皮下注射の前に、１０％のＦＢＳおよび１％のＰ／Ｓを有するＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）中で培養した。それぞれのマウスは、２００μｌのＰＢＳの体積中の１００，０００個細胞を受けた。Ｂ１６－ＯＶＡ細胞注射の６日後、腫瘍を測定し、マウスを無作為化し、照射（５Ｇｒａｙ）によってリンパ枯渇させた。Ｂ１６－Ｏｖａ注射の７日後、マウスに、前に記載したＡＣＴプロトコールを用いて、養子移入した。ＡＣＴ後、マウスは、尾部に皮下注射される１００μｌ／マウスの総体積を得るためにＰＢＳに希釈されたＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびＮ４ Ｏｖａペプチド（１０μｇ／マウス）のワクチン接種を受けた。腫瘍を２日ごとに測定し、腫瘍体積を、式：Ｖ＝π×［ｄ２×Ｄ］／６（式中、ｄは、腫瘍短軸であり、Ｄは腫瘍主軸である）に従って算出した。腫瘍生着後２６日目に、腫瘍および脾臓を解剖し、次いで、フローサイトメトリー分析のために染色した。

【0301】

簡潔には、１０５個のオボアルブミン発現Ｂ１６黒色腫細胞を、６週齢のマウスに、皮下注射した。生着後６日目に、触知できる腫瘍が存在したら、マウスを、５Ｇｙで照射した。翌日、１０５個の化合物４５またはＤＭＳＯ処理ＯＴ１細胞を、静脈内注射し、それに続いて、５０μｇのＣｐＧおよび１０μｇのＮ４ Ｏｖａペプチドの皮下ワクチン接種を行った（図２Ａ）。メモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞が、腫瘍成長の制御においてより強力であることが前に示されており、実際に、Ｂ１６腫瘍成長は、ＤＭＳＯと比較して、化合物４５で事前処理されたＯＴ１ ＣＤ８＋ Ｔ細胞を受けたマウスにおいて低減された（図２Ｂ）。しかしながら、腫瘍重量は、高い変動に起因して、有意に低減されなかった（図２Ｃ）。養子細胞移入９日後に血液を分析すると、ＤＭＳＯと比較して、インビトロで化合物４５で処理された場合に、移入細胞の数の増加が観察できた（図２Ｄ）。短命エフェクターＴ細胞のパーセンテージの低減（図２Ｅ）、ならびにメモリー前駆エフェクターＴ細胞およびセントラルメモリー表現型を有する細胞の増加（図２Ｆおよび２Ｇ）があったので、化合物４５処理細胞の表現型は、メモリーの方に偏った。解剖の際に腫瘍を分析すると、より多くの化合物４５処理Ｔ細胞が、腫瘍に浸潤していた（図２Ｈ）。しかしながら、腫瘍浸潤性化合物４５処理Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ処理Ｔ細胞と比較して、多かれ少なかれ有意に消耗していなかった（図２Ｉ）。最終消耗Ｔ細胞または前駆消耗Ｔ細胞の相違はなかった（図２Ｊおよび２Ｋ）。脾臓において、化合物４５処理Ｔ細胞の数も増加し（図２Ｌ）、それらは、セントラルメモリー表現型の増加を示したが（図２Ｍ）、ＴＣＦ１発現は、有意に変更されなかった（図２Ｎ）。腫瘍の単一細胞集団をインビトロでＯＶＡペプチドで再刺激すると、化合物４５で処理されたＯＴ１ Ｔ細胞は、ＩＦＮｙ、ＴＮＦ、ＩＬ２またはグランザイムＢ発現の有意な増加を示さなかったが（図２Ｏ－Ｒ）、細胞表面膜上でＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ１）の発現が増加し、増加した脱顆粒を示し、これは、改善された細胞傷害能と相関した（図２Ｓ）。

【0302】

これらのデータは、本発明の化合物で処理されたＣＤ８ Ｔ細胞が増強された抗腫瘍活性を示すことを裏付ける。

【0303】

移入ＯＴ１ Ｔ細胞のより強い抗腫瘍応答を観察するために、以前の実験を、１０^５個のみ（図３Ａ）の代わりに、２×１０^６個のＤＭＳＯまたは化合物４５処理ＯＴ１ Ｔ細胞を移入することによって繰り返した。これらの状況で、Ｂ１６の腫瘍成長および重量は、ＤＭＳＯと比較して、化合物４５で事前処理されたＯＴ１ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞を受けたマウスにおいて、強く低減された（図３Ｂおよび３Ｃ）。解剖の際に腫瘍を分析すると、Ｔ細胞浸潤の相違は観察されなかった（図３Ｄ）。驚くべきことに、腫瘍浸潤性化合物４５処理Ｔ細胞は、ＤＭＳＯ処理Ｔ細胞と比較して、より消耗していた（図３Ｅ）。しかしながら、最終消耗Ｔ細胞または前駆消耗Ｔ細胞の相違はなかった（図３Ｆおよび３Ｇ）。脾臓において、化合物４５処理Ｔ細胞の数は減少したが（図３Ｈ）、それらは、セントラルメモリー表現型の増加（図３Ｉ）、およびＴＣＦ１発現の増加の傾向（図３Ｊ）を示した。腫瘍の単一細胞集団をインビトロでＯＶＡペプチドで再刺激すると、化合物４５で処理されたＯＴ１ Ｔ細胞は、ＩＦＮｙ、ＴＮＦまたはＩＬ２発現の相違を示さなかったが（図３Ｋ～３Ｍ）、グランザイムＢ発現の増加を示した（図３Ｎ）。ＣＤ１０７ａ発現の相違はなかった（図３Ｏ）。

【0304】

これらのデータは、本発明の化合物で処理されたＣＤ８ Ｔ細胞の養子細胞移入療法が、腫瘍成長をより良好に制御することが可能であることを裏付ける。

【0305】

実施例５：養子細胞移入療法の際のマウスＣＡＲ Ｔ細胞の産生の間のＭＰＣ阻害の効果
上記のデータは、ＭＨＣクラスＩ分子において提示された場合にニワトリオボアルブミンタンパク質（Ｎ４ペプチド）のペプチド配列を認識する１つの固有のＴ細胞受容体を発現するように設計されているトランスジェニックＯＴ１マウスから単離されたＣＤ８ Ｔ細胞を使用して、マウスにおいて得られた。

【0306】

４－１ＢＢ共刺激ドメインを含有する、ヒト乳がんに高頻度で関与する癌遺伝子である、ヒトＨＥＲ２を認識するＣＡＲ構築物を使用することによって、マウスＣＡＲ Ｔ細胞の産生の間に適用される場合に、本発明の化合物が有用であるかをさらに検討した。

【0307】

レトロウイルス調製物（Ｔｓｃｈｕｍｉら，２０１８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ．；６（１）：７１から改変されたプロトコール）
それぞれのレトロウイルス調製物について、８×１０^６個のＰｈｏｅｎｉｘ ＥＣＯ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－３２１４）を、Ｔ１５０組織培養フラスコにおいて、１０％のＦＣＳ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび５０Ｕ／ｍｌのペニシリン－ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地に蒔いた。翌日、細胞を、製造業者のプロトコールに従って、Ｔｕｒｂｏｆｅｃｔトランスフェクション試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、２１μｇのレトロウイルス構築物でトランスフェクトした。培地を、毎日変更し、トランスフェクション４８時間および７２時間後に収集した。４８時間および７２時間のウイルス上清を、プールし、２２，０００ｒｃｆで、４℃で２時間、沈降させた。最後に、レトロウイルスペレットを、２ｍｌの全ＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、それぞれ２５０μｌの８つのアリコートに分け、これを、ドライアイス上で瞬間凍結し、－８０℃で貯蔵した。

【0308】

Ｔ細胞形質導入（Ｔｓｃｈｕｍｉら，２０１８、上記から改変されたプロトコール）
野生型ＣＤ４５．１．２マウスからの脾臓を、７０μｍの細胞ストレーナー上で破壊した。ＣＤ８ Ｔ細胞を、製造業者のプロトコールに従って、ＥａｓｙＳｅｐＴＭマウスＣＤ８＋ Ｔ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して精製した。０．５×１０６個のＣＤ８ Ｔ細胞を、４８ウェルプレートにおいて、１０％のＦＣＳ、抗生物質および５０ＩＵ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２を補充した０．５ｍｌの完全ＲＰＭＩ １６４０培地に蒔き、ＤＭＳＯまたは２０μＭの化合物４５のいずれかに曝露した。マウスＴ細胞を、細胞１個あたり２個のビーズの比で、活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて活性化した。レトロウイルス感染を、３７℃で２４時間実施した。未処理の４８ウェルプレートを、２０μｇ／ｍｌの組換えヒトフィブロネクチン（Ｔａｋａｒａ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）で、４℃で２４時間コーティングし、続いてＰＢＳ ２％のＢＳＡでＲＴで３０分間、最後にＰＢＳで洗浄した。濃縮されたレトロウイルスの１アリコートを、それぞれのフィブロネクチンコーティング４８ウェルプレートに蒔き、２，０００ｒｃｆで、３２℃で９０分間遠心分離した。次いで、０．５×１０^６個の２４時間活性化ＣＤ８ Ｔ細胞を、ウイルスの上に添加し、４００ｒｃｆで、３２℃で１０分間スピンした。３日目に、培地を、ＤＭＳＯまたは２０Ｍの化合物４５のいずれかを含有する、１０ＩＵ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－７および１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－１５で置き換えた。次いで、細胞を、２日ごとに分けた。

【0309】

養子細胞移入（Ｔｓｃｈｕｍｉら，２０１８、上記から改変されたプロトコール）
ＣＤ４５．２ Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＨＥＲ２を発現するように改変された４×１０^５個のＢ１６Ｆ１０腫瘍を皮下移植した。６日後、マウスを、１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃ７３９７）ｉ．ｐ．注射によりリンパ枯渇させ、均一な群を、腫瘍体積に関して構築した。Ｔ細胞（５×１０^６個）を、翌日、ｉ．ｖ．で養子移入した。腫瘍体積を、キャリパーを用いて週に３回測定し、式：Ｖ＝π×［ｄ２×Ｄ］／６（式中、ｄは、腫瘍短軸であり、Ｄは腫瘍主軸である）を使用して算出した。腫瘍を収集し、皮膚から分離した。単一細胞懸濁液を、製造業者のプロトコールに従って、マウス腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、１３０－０９６－７３０）を用いて得た。脾臓および流入領域リンパ節を、７０μｍの細胞ストレーナー上で破壊した。単一細胞懸濁液を、フローサイトメトリー分析前に、抗体を用いて染色した。

【0310】

野生型マウスからのポリクローナルＣＤ８ Ｔ細胞を、ＤＭＳＯまたは２０μＭの化合物４５の存在下で活性化し、次いで、ＨＥＲ２－ＣＡＲ構築物を用いて、レトロウイルスで形質導入した（図４Ａ）。ＨＥＲ２を発現するＢ１６黒色腫腫瘍を保持するマウスにおいてＴ細胞を養子移入（ＡＣＴ）すると、化合物４５処理ＨＥＲ２ＣＡＲ Ｔ細胞のＡＣＴのみが、腫瘍成長を有意に抑制することが可能であった（図４Ｂおよび４Ｃ）。ＡＣＴの１２日後に血液を分析すると、ＣＡＲ Ｔ細胞の数の相違は観察されなかったが（図４Ｄ）、しかしながら、短命エフェクターＴ細胞を形成する化合物４５－ＨＥＲ２ＣＡＲ Ｔ細胞のパーセンテージは、有意に低減された（図４Ｅ）。メモリー前駆エフェクターＴ細胞（図４Ｆ）、ＴＣＦ１発現Ｔ細胞（図４Ｇ）のパーセンテージの相違は、検出できなかった。化合物４５－ＨＥＲ２ＣＡＲ Ｔ細胞の生着の増加の傾向が、腫瘍－流入領域リンパ節において観察されたが、この増加は、脾臓において有意であった（図５Ａおよび５Ｄ）。流入領域リンパ節においても、脾臓においても、セントラルメモリーＴ細胞分化（図５Ｂおよび５Ｅ）またはメモリー特異的転写因子ＴＣＦ１を発現するＨＥＲ２ＣＡＲ Ｔ細胞（図５Ｃおよび５Ｆ）の相違は観察できなかった。化合物４５－ＨＥＲ２ＣＡＲで治療されたマウスの腫瘍は、有意により多くのＣＡＲ Ｔ細胞を含有していた（図５Ｇ）。より多くの腫瘍浸潤性化合物４５処理ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＴＣＦ１を発現した（図５Ｈ）。興味深いことに、ＴＣＦ１とＰＤ１の共発現に目を向けると、化合物４５処理ＣＡＲ Ｔ細胞は、より多くの前駆消耗Ｔ細胞（ＴＣＦ１陽性）およびより少ない最終分化消耗Ｔ細胞（ＴＣＦ１陰性）を形成し（図５Ｉおよび５Ｊ）、チェックポイント遮断免疫療法との併用療法から利益を受ける可能性がある幹細胞様表現型の増加を示した。最後に、いくつかの化合物４５処理ＣＡＲ Ｔ細胞は、より少ない消耗表現型を示す阻害分子ＰＤ１およびＴＩＭ３を発現していた（図５Ｋ）。

【0311】

まとめると、これらのデータは、本発明の化合物が、養子細胞移入療法の際にそれらのメモリー表現型および抗腫瘍機能を改善することによって、ＣＡＲ Ｔ細胞の産生の間に有用であることを裏付ける。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4】

【図5】

【国際調査報告】