特表 2024-529078 抗新型コロナウイルスのポリペプチド及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-01

(54)【発明の名称】抗新型コロナウイルスのポリペプチド及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/165 20060101AFI20240725BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240725BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20240725BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240725BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240725BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240725BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240725BHJP

   A61K 39/215 20060101ALI20240725BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20240725BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20240725BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20240725BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20240725BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240725BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240725BHJP

【ＦＩ】

C07K14/165 ZNA

C12N15/63 Z

C12N15/50

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/215

A61K9/12

A61K9/20

A61K9/48

A61K9/16

A61K9/10

A61P31/14

A61P37/04

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024507927

(86)(22)【出願日】2022-08-05

(85)【翻訳文提出日】2024-02-07

(86)【国際出願番号】 CN2022110464

(87)【国際公開番号】W WO2023020298

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】202110939740.1

(32)【優先日】2021-08-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517121939

【氏名又は名称】中国科学院微生物研究所

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ， ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥＳ

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】高福

(72)【発明者】

【氏名】王奇慧

(72)【発明者】

【氏名】▲う▼麗麗

(72)【発明者】

【氏名】鄭安▲ち▼

(72)【発明者】

【氏名】孫歓

(72)【発明者】

【氏名】柴彦

(72)【発明者】

【氏名】韓鵬程

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA88X

4B065AA90X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA45

4C076AA22

4C076AA24

4C076AA31

4C076AA36

4C076AA53

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB25

4C076CC06

4C076CC35

4C076EE30

4C076EE41

4C076EE56

4C085AA03

4C085BA71

4C085CC08

4C085EE01

4C085GG01

4C085GG08

4C085GG10

4H045BA18

4H045BA19

4H045CA01

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

【課題】 本願は、新型コロナウイルスを予防又は治療するポリペプチド及びその使用に関する。
【解決手段】 前記ポリペプチドは、Ｐ３ポリペプチド並びにＰ３ポリペプチドによって誘導されたＰ３－１ポリペプチド、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド、Ｐ３－４ポリペプチド及びＰ３－５ポリペプチドのうちの少なくとも１種であり、それらのアミノ酸配列はそれぞれ配列番号１～６で示される。本願のポリペプチドは、新型コロナウイルス親株及び複数種の変異株に対していずれも強い阻害効果があるため、新型コロナウイルスによって引き起こされる疾患を予防及び／又は治療する薬物又はワクチンを製造するために利用することができ、当該ポリペプチドには将来に出現する新しい変異株及びサルベコウイルスに対しても予防及び／又は治療する潜在能力があることが見込まれる。
【選択図】 図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗新型コロナウイルスのポリペプチドであって、
Ｐ３ポリペプチド並びにそれによって誘導されたＰ３－１ポリペプチド、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド、Ｐ３－４ポリペプチド及びＰ３－５ポリペプチドのうちの少なくとも１種であり、ただし、
Ｐ３ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１で示され、
Ｐ３－１ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２で示され、
Ｐ３－２ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号３で示され、
Ｐ３－３ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号４で示され、
Ｐ３－４ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号５で示され、
Ｐ３－５ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号６で示される、
ポリペプチド。

【請求項2】

前記ポリペプチドが、Ｐ３－１ポリペプチド、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド及びＰ３－４ポリペプチドから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項3】

前記ポリペプチドにはキャリアタンパク質が連結されており、好ましくは、前記キャリアタンパク質は、ヒト血清アルブミンであることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗新型コロナウイルスのポリペプチド。

【請求項4】

請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。

【請求項5】

前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ又はｍＲＮＡであり、
好ましくは、前記ポリヌクレオチドが、配列番号７～１２で示されるヌクレオチド配列から選ばれるものを含む請求項４に記載のポリヌクレオチド。

【請求項6】

請求項４又は５に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物。

【請求項7】

前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結された少なくとも１つの発現制御エレメントをさらに含むことを特徴とする請求項６に記載の核酸構築物。

【請求項8】

請求項６又は７に記載の核酸構築物を含む発現ベクター。

【請求項9】

請求項４若しくは５に記載のポリヌクレオチド、請求項６若しくは７に記載の核酸構築物又は請求項８に記載の発現ベクターを含む形質転換された細胞。

【請求項10】

請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４又は５に記載のポリヌクレオチド、請求項６又は７に記載の核酸構築物、請求項８に記載の発現ベクター又は請求項９に記載の形質転換された細胞と、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項11】

前記医薬組成物が、点鼻スプレー製剤又は経口製剤又は非経口製剤の形態であり、
好ましくは、前記経口製剤が、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤及び丸剤から選ばれ、好ましくは、前記非経口製剤が、注射可能な又はボーラス投与可能な製剤であり、
好ましくは、前記医薬組成物が、ワクチン組成物であることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

新型コロナウイルスを予防及び／又は治療する薬物又はワクチンの製造における請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４若しくは５に記載のヌクレオチド配列、請求項６若しくは７に記載の核酸構築物、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９に記載の形質転換された細胞又は請求項１０若しくは１１に記載の医薬組成物の使用。

【請求項13】

前記新型コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株及び／又はサルベコウイルスであり、
好ましくは、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、Ｄ６１４Ｇ株、アルファ（Ｂ．１．１．７）株、ベータ（Ｂ．１．３５１）株、ガンマ（Ｐ．１）株、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）株及び／又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）株であり、前記サルベコウイルスは、ベータコロナウイルス属サルベコウイルス亜属ウイルスであることを特徴とする請求項１２に記載の使用。

【請求項14】

必要とする被験者に予防又は治療有効量の請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４若しくは５に記載のヌクレオチド配列、請求項６若しくは７に記載の核酸構築物、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９に記載の形質転換された細胞又は請求項１０若しくは１１に記載の医薬組成物を投与することを含む、新型コロナウイルスを予防又は治療する方法。

【請求項15】

前記新型コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株及び／又はサルベコウイルスであり、
好ましくは、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、Ｄ６１４Ｇ株、アルファ（Ｂ．１．１．７）株、ベータ（Ｂ．１．３５１）株、ガンマ（Ｐ．１）株、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）株及び／又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）株であり、前記サルベコウイルスは、ベータコロナウイルス属サルベコウイルス亜属ウイルスである請求項１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【関連出願の相互参照】

【0001】

本願は、２０２１年８月１６日に提出された、出願番号が２０２１１０９３９７４０．１で、発明の名称が「抗新型コロナウイルスのポリペプチド及びその使用」である中国特許出願の優先権を主張し、それが全体として参照により本明細書に組み込まれる。

【技術分野】

【0002】

本願は、バイオ医薬品の分野に関し、具体的には、新型コロナウイルスを予防又は治療するためのポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、当該ポリヌクレオチドを含む核酸構築物、当該核酸構築物を含む発現ベクター、形質転換された細胞及び前記のものを含む医薬組成物、並びに、新型コロナウイルスを予防及び／又は治療する薬物又はワクチンの製造におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0003】

新型コロナウイルス肺炎（ＣＯＶＩＤ－１９）によるパンデミックが、世界の公衆衛生及び人類の健康に重大な脅威をもたらしている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、新型コロナウイルス肺炎によるパンデミックの病原体であり、２１世紀に入ってから人類にパンデミックを引き起こす３種目のコロナウイルスでもある。現在、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する複数種のワクチン及びモノクローナル抗体薬は緊急使用許可を得ているが、当面幅広く伝播している新型コロナウイルス変異株、例えば、アルファ（Ｂ．１．１．７）、ベータ（Ｂ．１．３５１）、ガンマ（Ｐ．１）などに対してそれらの防御効果が低下していることが多くの研究で明らかになったため、現在流行中の及び将来に出現する新しい変異株に対する広域スペクトルの薬物又はワクチンを開発することが急務となっている。

【0004】

現在、新型コロナウイルスに関連するコロナウイルス（サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）に属する）として、例えば、コウモリ由来のＲａＴＧ１３、ＲｍＹＮ０２、ＺＣ４５、ＺＸＣ２１など、センザンコウ由来のＧＸ／Ｐ２Ｖ／２０１７及びＧＤ／１／２０１９が複数報告されており、ＲａＴＧ１３、ＧＸ／Ｐ２Ｖ／２０１７、ＧＤ／１／２０１９などもヒトに感染する潜在能力があることが研究で明らかになったため、将来に新たに出現するパンデミックに対処するために、それらの関連コロナウイルスに対する薬物又はワクチンを早急に開発する必要がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本願の目的は、新型コロナウイルスを予防又は治療するためのポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、当該ポリヌクレオチドを含む核酸構築物、当該核酸構築物を含む発現ベクター、形質転換された細胞及び前記のものを含む医薬組成物、並びに、新型コロナウイルスを予防又は治療する薬物又はワクチンの製造におけるそれらの使用を提供することである。

【0006】

コロナウイルスのスパイク（Ｓ）タンパク質は、ウイルス侵入のプロセスを媒介する上で重要な役割を発揮し、Ｓ１及びＳ２の２つのサブユニットに分けられ、ただし、Ｓ１サブユニットは受容体を認識し、Ｓ２サブユニットはウイルスのエンベロープと宿主細胞膜の膜融合を媒介する。Ｓ２中のヘプタペプチドの繰り返し配列ＨＲ１及びＨＲ２は６ヘリックスバンドル構造を形成することで膜融合機能を発揮し、外因性のＨＲ１又はＨＲ２ポリペプチドを加えることで、ウイルス自体のＨＲ１及びＨＲ２による６ヘリックスバンドル構造の形成を阻害し、さらに膜融合プロセスを阻害することができるということが研究で明らかになった。本願のポリペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質のＨＲ２領域に基づいて設計されており、それはＳタンパク質の媒介する膜融合プロセスを効果的に阻害し、さらに新型コロナウイルスの感染を阻害することができる。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本願は、上記の目的を達成するために、次の技術的解決手段を提供する。
第１態様で、本願は、抗新型コロナウイルスのためのポリペプチドを提供し、前記ポリペプチドは、Ｐ３ポリペプチド並びにそれによって誘導されたＰ３－１ポリペプチド、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド、Ｐ３－４ポリペプチド及びＰ３－５ポリペプチドのうちの少なくとも１種であり、ただし、
Ｐ３ポリペプチドのアミノ酸配列は、ＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬであり（配列番号１で示される）、
Ｐ３－１ポリペプチドのアミノ酸配列は、ＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＫＥＬであり（配列番号２で示される）、
Ｐ３－２ポリペプチドのアミノ酸配列は、ＶＤＬＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬであり（配列番号３で示される）、
Ｐ３－３ポリペプチドのアミノ酸配列は、ＶＫＦＧＤＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＫＥＥＩＤＲＬＹＥＶＶＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬであり（配列番号４で示される）、
Ｐ３－４ポリペプチドのアミノ酸配列は、ＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＫＥＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＮＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬであり（配列番号５で示される）、
Ｐ３－５ポリペプチドのアミノ酸配列は、ＩＳＧＩＮＡＳＶＶＮＩＱＫＥＩＤＲＬＮＥＶＡＫＥＬＮＥＳＬＩＤＬＱＥＬである（配列番号６で示される）。

【0008】

好ましい具体的な実施形態で、前記ポリペプチドが、Ｐ３－１ポリペプチド、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド及びＰ３－４ポリペプチドから選ばれる少なくとも１種であり、
好ましくは、前記ポリペプチドが、Ｐ３－３ポリペプチドである。

【0009】

別の好ましい具体的な実施形態で、前記ポリペプチドには、キャリアタンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンが連結されており、前記キャリアタンパク質を加える目的は、ポリペプチドの体内での半減期を延長させることなどを含む。

【0010】

第２態様で、本願は、第１態様に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0011】

好ましくは、前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ又はｍＲＮＡであり、
具体的な実施形態で、前記ポリヌクレオチドが、配列番号７～１２で示されるヌクレオチド配列から選ばれるものを含み、
具体的には、Ｐ３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号７で示され、Ｐ３－１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号８で示され、Ｐ３－２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号９で示され、Ｐ３－３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号１０で示され、Ｐ３－４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号１１で示され、Ｐ３－５ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号１２で示される。
配列番号７：
ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＡＴＴＡＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＣＴＣＡＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧ；
配列番号８：
ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＡＴＴＡＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＣＴＣＡＴＴＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＧ；
配列番号９：
ＧＴＧＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＴＴＡＧＣＧＧＣＡＴＴＡＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＣＴＣＡＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧ；
配列番号１０：
ＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＧＣＧＡＣＡＴＴＡＧＣＧＧＣＡＴＴＡＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＡＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＧＴＡＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＡＣＣＴＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＣＴＣＡＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧ；
配列番号１１：
ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＡＴＴＡＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＡＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＣＴＣＡＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧ；
配列番号１２：
ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＡＴＴＡＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＣＴＣＡＴＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧ。

【0012】

第３態様で、本願は、上記の第２態様に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物を提供する。

【0013】

好ましくは、前記核酸構築物が、前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結された少なくとも１つの発現制御エレメントをさらに含む。

【0014】

第４態様で、本願は、上記の第３態様に記載の核酸構築物を含む発現ベクターを提供する。

【0015】

第５態様で、本願は、上記の第２態様に記載のポリヌクレオチド、上記の第３態様に記載の核酸構築物又は上記の第４態様に記載の発現ベクターを含む形質転換された細胞を提供する。

【0016】

第６態様で、本願は、上記の第１態様に記載のポリペプチド、上記の第２態様に記載のポリヌクレオチド、上記の第３態様に記載の核酸構築物、上記の第４態様に記載の発現ベクター又は上記の第５態様に記載の形質転換された細胞と、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。

【0017】

好ましくは、前記医薬組成物が、点鼻スプレー製剤又は経口製剤又は非経口製剤の形態であり、
より好ましくは、前記経口製剤が、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤及び丸剤から選ばれ、
より好ましくは、前記非経口製剤が、注射可能な又はボーラス投与可能な製剤であり、
好ましくは、前記医薬組成物が、ワクチン組成物である。

【0018】

第７態様で、本願は、新型コロナウイルス感染を予防及び／又は治療する薬物又はワクチンの製造における上記の第１態様に記載のポリペプチド、上記の第２態様に記載のポリヌクレオチド、上記の第３態様に記載の核酸構築物、上記の第４態様に記載の発現ベクター若しくは上記の第５態様に記載の形質転換された細胞又は上記の第６態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。

【0019】

好ましくは、前記新型コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株及び／又はサルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）であり、
より好ましくは、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、Ｄ６１４Ｇ株、アルファ（Ｂ．１．１．７）株、ベータ（Ｂ．１．３５１）株、ガンマ（Ｐ．１）株、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）株及び／又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）株であり、前記サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）は、ベータコロナウイルス属サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）亜属ウイルスである。

【0020】

第８態様で、本願は、必要とする被験者に予防又は治療有効量の上記の第１態様に記載のポリペプチド、上記の第２態様に記載のポリヌクレオチド、上記の第３態様に記載の核酸構築物、上記の第４態様に記載の発現ベクター若しくは上記の第５態様に記載の形質転換された細胞又は上記の第６態様に記載の医薬組成物を投与することを含む、新型コロナウイルスを予防又は治療する方法を提供する。

【0021】

好ましくは、前記新型コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株及び／又はサルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）であり、
より好ましくは、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、Ｄ６１４Ｇ株、アルファ（Ｂ．１．１．７）株、ベータ（Ｂ．１．３５１）株、ガンマ（Ｐ．１）株、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）株及び／又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）株であり、前記サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）は、ベータコロナウイルス属サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）亜属ウイルスである。

【発明の効果】

【0022】

本願の発明者は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのＳタンパク質のＨＲ２領域に基づいて、ポリペプチドＰ３を設計し、それに対して一連の改変を行って（１つ又は複数のアミノ酸の付加又は置換を含む）誘導ペプチドＰ３－１、Ｐ３－２、Ｐ３－３、Ｐ３－４及びＰ３－５を形成させており、ポリペプチドＰ３及び各誘導ペプチドはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び複数種の変異株に対して強い阻害効果があるため、新型コロナウイルスを予防又は治療する薬物又はワクチンを製造するために利用することができ、当該ポリペプチドには将来に出現する新しい変異株及びサルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）に対しても予防又は治療する潜在能力があることが見込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0023】

１つ又は複数の実施例をそれに対応する図面における画像で例示的に説明し、それらの例示的な説明は、実施例に対する限定を構成しない。ここで使用される言葉「例示的な」は「例、実施例又は説明として用いる」ことを意味する。ここで「例示的に」説明される実施例のいずれも、必ずしも他の実施例より優れている又はより良いと解釈する必要がない。

【図1】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びその関連コロナウイルスのＳタンパク質のＨＲ１及びＨＲ２領域の配列比較図である。

【図2】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及びその変異株のシュードウイルスに対する本願の異なるポリペプチドの阻害効果である。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本願の実施例の目的、技術的解決手段及び利点が一層明瞭になるよう、以下に本願の実施例に係る技術的解決手段を明瞭かつ完全に記述し、言うまでもないことであるが、記述される実施例は全ての実施例ではなく、本願の一部の実施例である。当業者が本願における実施例に基づいて、進歩性のある作業をすることなく得ているその他の実施例の全てが、本願が保護する範囲に属する。他に明確な断りがない限り、明細書及び特許請求の範囲の全体において、用語「含む」又はその変形、例えば、「含んでいる」又は「含有する」などは、記述されるエレメント又は構成部分を含むが、他のエレメント又は他の構成部分は除外されないように理解される。

【0025】

また、本願の一層の説明のために、後述の具体的な実施形態で具体的な細部の説明を多く提供している。特定の具体的な細部がなくても、本願は実施できるということが当業者は理解しているだろう。いくつかの実施例では、本願の要旨を引き立てるために、当業者の熟知している原料、エレメント、方法、手段などについて詳細に記述していない。

【0026】

以下、本願を詳しく記述する。

【0027】

本願では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質のＨＲ２領域に基づいて、ポリペプチドＰ３を設計し、Ｐ３ポリペプチドに対して一連の改変を行っており（１つ又は複数のアミノ酸の付加又は置換を含む）、改変後のポリペプチドを、それぞれ、Ｐ３－１、Ｐ３－２、Ｐ３－３、Ｐ３－４及びＰ３－５と命名した。当分野で一般的に利用する方法で直接的に合成した。

【0028】

実験の装置及び材料：
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ細胞バンクより購入）、
シュードウイルスによってパッケージングされたスケルトンウイルスＧ＊ＶＳＶ－ｄｅｌＧ（武漢枢密脳科学技術有限公司より購入）、
真核系タンパク質ｐＣＡＧＧＳ発現ベクター（蘇州金唯智公司から提供）、
Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞（出願人によって構築されたｈＡＣＥ２安定トランスフェクション細胞株、実施例１参照）、
深セン翰宇薬業有限公司によって合成された、コード配列が配列番号１であるポリペプチドＰ３、
深セン翰宇薬業有限公司によって合成された、コード配列が配列番号２であるポリペプチドＰ３－１、
深セン翰宇薬業有限公司によって合成された、コード配列が配列番号３であるポリペプチドＰ３－２、
深セン翰宇薬業有限公司によって合成された、コード配列が配列番号４であるポリペプチドＰ３－３、
深セン翰宇薬業有限公司によって合成された、コード配列が配列番号５であるポリペプチドＰ３－４、
深セン翰宇薬業有限公司によって合成された、コード配列が配列番号６であるポリペプチドＰ３－５。
上記の６種のポリペプチドの配列は表１で示され、そのうち太字部分は、ポリペプチドＰ３に対して付加又は置換されたアミノ酸である。

【表1】

【0029】

本願のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及びその変異株のシュードウイルスは、発明者の実験室によってパッケージングされたものである（実施例２参照）。

【0030】

実施例１
Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞株の構築
まず、ｈＡＣＥ２遺伝子とｆｌａｇタグを融合して発現させ、配列を人工合成した後（蘇州金唯智により合成サービスを提供した）、ｐＬＶＸレンチウイルス発現ベクターに連結して、ｈＡＣＥ２発現ベクターｐＬＶＸ－ｈＡＣＥ２を得た。

【0031】

細胞株の構築は、次のとおりであった。
ａ．細胞の用意である。翌日に８０～９０％のコンフルエントに達するよう、１日前に６ウェル細胞培養プレートにＨＥＫ２９３Ｔ細胞をプレーティングした。

【0032】

ｂ．トランスフェクションである。各目的プラスミド（ｐＬＶＸ－ｈＡＣＥ２及びレンチウイルスによってパッケージングされたプラスミドｐｓＰＡＸ２及びｐＭＤ２．Ｇ）を２：２：１の比率で混合し、プラスミドとＰＥＩの比率が１：３で均一に混合した後にトランスフェクションし、４～６時間後に、細胞培養液を２％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地と交換して、引き続き４８時間培養した。

【0033】

ｃ．ウイルス収集及び感染である。細胞培養上清にはパッケージング済みのレンチウイルスが含有されており、それを０．４５μｍ滅菌フィルターで濾過して、細胞破片を除去し、１日前に用意したＨｅｌａ細胞に加えた。

【0034】

ｄ．クローンのスクリーニングである。２μｇ／ｍＬのピューロマイシンを含有する培地を使用してＨｅｌａ細胞を培養して、陽性クローンをスクリーニングした。

【0035】

ｅ．モノクローナル細胞株の確立である。フローサイトメトリー法によりモノクローナル細胞を選別して９６ウェル細胞培養プレートに入れ、顕微鏡下で単一の細胞塊が見られるまで引き続き培養し、拡大培養した後、目的遺伝子の配列決定などの方法で確認した。

【0036】

実施例２
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び変異株のシュードウイルスのパッケージング
短縮Ｓタンパク質の発現プラスミドの作製
１）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株（ＷＴ）及び変異株（Ｄ６１４Ｇ、アルファ（Ｂ．１．１．７）、ベータ（Ｂ．１．３５１）、ガンマ（Ｐ．１）、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）及びデルタ（Ｂ．１．６１７．２））のＳタンパク質の最後から数えた１８位置のアミノ酸をコードするヌクレオチドを除去して、それぞれ、ヌクレオチド配列のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＷＴ－Ｓ－ｄｅｌ１８、Ｄ６１４Ｇ－Ｓ－ｄｅｌ１８、Ｂ．１．１．７－Ｓ－ｄｅｌ１８、Ｂ．１．３５１－Ｓ－ｄｅｌ１８、Ｐ．１－Ｓ－ｄｅｌ１８、Ｂ．１．６１７．１－Ｓ－ｄｅｌ１８、Ｂ．１．６１７．２－Ｓ－ｄｅｌ１８を得て（それらの配列はそれぞれ配列番号１３～１９で示される）、蘇州金唯智公司により合成した。

【0037】

２）それぞれ、１）で得た各ヌクレオチド配列をｐＣＡＧＧＳ発現ベクターにクローニングして、発現プラスミドのｐＣＡＧＧＳ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＷＴ－Ｓ－ｄｅｌ１８、ｐＣＡＧＧＳ－Ｄ６１４Ｇ－Ｓ－ｄｅｌ１８、ｐＣＡＧＧＳ－Ｂ．１．１．７－Ｓ－ｄｅｌ１８、ｐＣＡＧＧＳ－Ｂ．１．３５１－Ｓ－ｄｅｌ１８、ｐＣＡＧＧＳ－Ｐ．１－Ｓ－ｄｅｌ１８、ｐＣＡＧＧＳ－Ｂ．１．６１７．１－Ｓ－ｄｅｌ１８、ｐＣＡＧＧＳ－Ｂ．１．６１７．２－Ｓ－ｄｅｌ１８を得た。

【0038】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び変異株のシュードウイルスのパッケージング
ａ．細胞の用意である。翌日に８０％程度のコンフルエントになるよう、１０ｃｍの細胞培養用ディッシュにＨＥＫ２９３Ｔ細胞をプレーティングした。

【0039】

ｂ．トランスフェクションである。上記のステップ２）で得た各Ｓタンパク質の発現プラスミドに対して、ＰＥＩを用いて３０μｇのプラスミド／１０ｃｍの細胞培養用ディッシュでトランスフェクションし、目的プラスミドとＰＥＩを１：３の比率で均一に混合した後にトランスフェクションし、４～６時間で培養液を交換し（１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地）、３７℃で２４時間培養した。

【0040】

ｃ．ウイルス添加である。シュードウイルスによってパッケージングされたスケルトンウイルスＧ＊ＶＳＶ－ｄｅｌＧ（武漢枢密脳科学技術有限公司より購入）を上記のトランスフェクションした後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞に加えて、３７℃で２時間インキュベートし、培養液を交換して（１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地）、ＶＳＶ－Ｇ抗体を加え（当該抗体を発現するハイブリドーマ細胞はＡＴＣＣ細胞バンクより購入した）、インキュベータで引き続き３０時間培養した。

【0041】

ｄ．ウイルス収集である。上清を収集して３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、クリーンベンチにおいて０．４５μｍ滅菌フィルターで濾過して、細胞破片を除去し、分注して、－８０℃の冷蔵庫で冷凍保存した。

【0042】

上記のステップで、それぞれ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＴ）及び変異株（Ｄ６１４Ｇ、アルファ（Ｂ．１．１．７）、ベータ（Ｂ．１．３５１）、ガンマ（Ｐ．１）、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）及びデルタ（Ｂ．１．６１７．２））のシュードウイルスを得た。

【0043】

実施例３
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及びその変異株のシュードウイルスに対するポリペプチドの阻害効果の評価
当実施例の目的は、親株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＴ）及び変異株（Ｄ６１４Ｇ、アルファ（Ｂ．１．１．７）、ベータ（Ｂ．１．３５１）、ガンマ（Ｐ．１）、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）及びデルタ（Ｂ．１．６１７．２））のシュードウイルスに対するポリペプチドＰ３及びその５つの誘導ポリペプチド（Ｐ３－１、Ｐ３－２、Ｐ３－３、Ｐ３－４及びＰ３－５）の阻害効果を測定することであった。

【0044】

実験の群分けは、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞（ブランクコントロール群、ウイルスに感染していない細胞）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋ＤＭＥＭ培地（陰性コントロール群、ウイルスに感染しているがポリペプチドで処理していない細胞）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋ポリペプチドＰ３（Ｐ３処理群）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋Ｐ３－１（Ｐ３－１処理群）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋Ｐ３－２（Ｐ３－２処理群）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋Ｐ３－３（Ｐ３－３処理群）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋Ｐ３－４（Ｐ３－４処理群）、Ｈｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞＋親株又は変異株のシュードウイルス＋Ｐ３－５（Ｐ３－５処理群）であった。

【0045】

ポリペプチド原液の調製である。それぞれ、ポリペプチドのＰ３、Ｐ３－１、Ｐ３－２、Ｐ３－３、Ｐ３－４及びＰ３－５をＤＭＳＯで１０ｍＭの母液として調製し、さらに１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地で母液を２０μＭに希釈し、これをさらに勾配希釈する原液とした。

【0046】

ポリペプチド勾配希釈液の調製である。１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地で上記の２０μＭの各ポリペプチド原液を２倍で倍加希釈し、合計で９つの勾配に希釈し（それぞれが１０μＭ、５μＭ、２．５μＭ、１．２５μＭ、０．６２５μＭ、０．３１２５μＭ、０．１５６μＭ、０．０７８μＭ、０．０３９μＭであった）、各勾配は３ウェル並行であり、各ウェルは５０μＬであった。

【0047】

シュードウイルスの使用量の決定である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株又は変異株のシュードウイルス原液及び一連の希釈液をＨｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞において定量し、１０００個のＦＦＵが出現したときの希釈度をポリペプチドの阻害効果を評価するときのウイルスの使用量とした（希釈倍数は６～２０倍であった）。

【0048】

ウイルス阻害効果の測定方法は次のとおりであった。
ａ．９６ウェル細胞培養プレートにＨｅｌａ ｈＡＣＥ２細胞をプレーティングし、翌日に８０～９０％のコンフルエントに達するよう培養した。

【0049】

ｂ．上記の実験の群分けに基づいて、上記の各ポリペプチド勾配希釈液に、等体積（５０μＬ）の定量されたシュードウイルス希釈液を加え、均一に混合した後、３７℃で１時間インキュベートした。

【0050】

ｃ．ステップａにおける９６ウェル細胞培養プレートから注意深く上清を捨て、ステップｂにおけるポリペプチド－シュードウイルス液体混合物を加え（１００μＬ／ウェル）、インキュベータで引き続き１５～２４時間培養した。

【0051】

ｄ．ハイコンテント顕微鏡を利用して感染された細胞の数を統計し、各ポリペプチドの異なる濃度における阻害率を計算し、また、ＧｒａｐｈＰａｄを利用して各ポリペプチドのＩＣ_５０を算出し（図２参照）、結果は表２で示された。また、ポリペプチドＰ３に対する誘導ポリペプチドＰ３－１～５のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株のシュードウイルス阻害効果の向上倍数を算出し、結果は表３で示された。

【表2】

【表3】

【0052】

表２、表３から分かるように、Ｐ３ポリペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び複数種の変異株に対していずれも非常に良い阻害効果があり（０．４５μＭ≦ＩＣ_５０≦１．３９μＭ）、Ｐ３ポリペプチドと比べて、誘導ポリペプチドのＰ３－１、Ｐ３－２、Ｐ３－３及びＰ３－４のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び複数種の変異株に対する阻害効果はいずれも異なる程度の向上を持っているが、特にポリペプチドＰ３－３は向上が最も明らかであった。Ｐ３－５の阻害効果はやや低下しているが、カッパ変異株に対するその阻害効果はＰ３をやや上回っていた。

【0053】

表２、表３から、本願のポリペプチドは、新型コロナウイルスによって引き起こされる疾患を予防又は治療するために利用することができることが分かったため、サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）によって引き起こされる疾患にも幅広く利用できると推定している。

【0054】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が宿主細胞に侵入するプロセスで、本願のポリペプチドはＳタンパク質の媒介する膜融合プロセスを阻害することによりウイルスの侵入を阻害し、新型コロナウイルス親株及び変異株、例えば、Ｄ６１４Ｇ、Ｂ．１．１．７（アルファ）、Ｂ．１．３５１（ベータ）、Ｐ．１（ガンマ）、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）に対する治療又は予防に適し、サルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）及び将来に出現する新しい新型コロナウイルス変異株にも阻害効果があり、潜在的な幅広い使用価値があると推定している。

【0055】

最後には、上記の実施例は、本願の技術的解決手段を制限するためではなく、それを説明するものに過ぎないということを明言すべきである。前記実施例で本願を詳細に説明しているが、それでも前記各実施例に記載の技術的解決手段に変更をしたり、又はその一部の技術的特徴に対して同等の置換を行ったりしてもよいということが当業者は理解しているだろう。それらの変更又は置換で、対応する技術的解決手段の主旨が本願の各実施例の技術的解決手段の趣旨及び範囲から逸脱することはない。

【産業上の利用可能性】

【0056】

本願は、新型コロナウイルスを予防又は治療するポリペプチド及びその使用を提供し、前記ポリペプチドは、Ｐ３ポリペプチド並びにＰ３ポリペプチドによって誘導されたＰ３－１ポリペプチド、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド、Ｐ３－４ポリペプチド及びＰ３－５ポリペプチドのうちの少なくとも１種である。本願によって提供されるポリペプチドは、新型コロナウイルス親株及び複数種の変異株に対していずれも強い阻害効果があるため、新型コロナウイルスによって引き起こされる疾患を予防及び／又は治療する薬物又はワクチンを製造するために利用することができ、それは将来に出現する新しい変異株及びサルベコウイルス（ｓａｒｂｅｃｏｖｉｒｕｓ）に対しても予防及び／又は治療する潜在能力があることが見込まれ、これにより臨床で使用する将来性と価値が非常に大きい。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【配列表】

2024529078000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-03-18

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗新型コロナウイルスのポリペプチドであって、
Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－１ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド、Ｐ３－４ポリペプチド、Ｐ３－５ポリペプチド及びＰ３ポリペプチドのうちの少なくとも１種であり、前記Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－１ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド、Ｐ３－４ポリペプチド、Ｐ３－５ポリペプチドは、いずれも、Ｐ３ポリペプチドによって誘導されたものであり、ただし、
Ｐ３－２ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号３で示され、
Ｐ３－１ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２で示され、
Ｐ３－３ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号４で示され、
Ｐ３－４ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号５で示され、
Ｐ３－５ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号６で示され、
Ｐ３ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１で示される、
ポリペプチド。

【請求項2】

前記ポリペプチドが、Ｐ３－２ポリペプチド、Ｐ３－１ポリペプチド、Ｐ３－３ポリペプチド及びＰ３－４ポリペプチドから選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項3】

前記ポリペプチドにはキャリアタンパク質が連結されており、好ましくは、前記キャリアタンパク質は、ヒト血清アルブミンであることを特徴とする請求項１又は２に記載のポリペプチド。

【請求項4】

請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。

【請求項5】

前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ又はｍＲＮＡであり、
好ましくは、前記ポリヌクレオチドが、配列番号７～１２で示されるヌクレオチド配列から選ばれるものを含む請求項４に記載のポリヌクレオチド。

【請求項6】

請求項４又は５に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物。

【請求項7】

前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結された少なくとも１つの発現制御エレメントをさらに含むことを特徴とする請求項６に記載の核酸構築物。

【請求項8】

請求項６又は７に記載の核酸構築物を含む発現ベクター。

【請求項9】

請求項４若しくは５に記載のポリヌクレオチド、請求項６若しくは７に記載の核酸構築物又は請求項８に記載の発現ベクターを含む形質転換された細胞。

【請求項10】

請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４又は５に記載のポリヌクレオチド、請求項６又は７に記載の核酸構築物、請求項８に記載の発現ベクター又は請求項９に記載の形質転換された細胞と、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項11】

前記医薬組成物が、点鼻スプレー製剤又は経口製剤又は非経口製剤の形態であり、
好ましくは、前記経口製剤が、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤及び丸剤から選ばれ、好ましくは、前記非経口製剤が、注射可能な又はボーラス投与可能な製剤であり、
好ましくは、前記医薬組成物が、ワクチン組成物であることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

新型コロナウイルスを予防及び／又は治療する薬物又はワクチンの製造における請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４若しくは５に記載のポリヌクレオチド、請求項６若しくは７に記載の核酸構築物、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９に記載の形質転換された細胞又は請求項１０若しくは１１に記載の医薬組成物の使用。

【請求項13】

前記新型コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株及び／又はサルベコウイルスであり、
好ましくは、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、Ｄ６１４Ｇ株、アルファ（Ｂ．１．１．７）株、ベータ（Ｂ．１．３５１）株、ガンマ（Ｐ．１）株、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）株及び／又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）株であり、前記サルベコウイルスは、ベータコロナウイルス属サルベコウイルス亜属ウイルスであることを特徴とする請求項１２に記載の使用。

【請求項14】

必要とする被験者に予防又は治療有効量の請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４若しくは５に記載のポリヌクレオチド、請求項６若しくは７に記載の核酸構築物、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９に記載の形質転換された細胞又は請求項１０若しくは１１に記載の医薬組成物を投与することを含む、新型コロナウイルスを予防又は治療する方法。

【請求項15】

前記新型コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２親株及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株及び／又はサルベコウイルスであり、
好ましくは、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異株が、Ｄ６１４Ｇ株、アルファ（Ｂ．１．１．７）株、ベータ（Ｂ．１．３５１）株、ガンマ（Ｐ．１）株、カッパ（Ｂ．１．６１７．１）株及び／又はデルタ（Ｂ．１．６１７．２）株であり、前記サルベコウイルスは、ベータコロナウイルス属サルベコウイルス亜属ウイルスである請求項１４に記載の方法。

【国際調査報告】