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特表2024-529128ｓＢＣＭＡバリアント及びそのＦＣ融合タンパク質を使用するＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-01
(54)【発明の名称】ｓＢＣＭＡバリアント及びそのＦＣ融合タンパク質を使用するＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/00 20060101AFI20240725BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240725BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240725BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20240725BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20240725BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240725BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240725BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240725BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240725BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240725BHJP
【ＦＩ】
A61K39/00 H
A61P37/02
A61P43/00 105
A61P13/12
A61P21/04
A61P25/00
A61P19/02
A61P11/00
A61P1/16
A61P17/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024508471
(86)(22)【出願日】2022-08-11
(85)【翻訳文提出日】2024-04-08
(86)【国際出願番号】 US2022074868
(87)【国際公開番号】W WO2023019223
(87)【国際公開日】2023-02-16
(31)【優先権主張番号】63/232,124
(32)【優先日】2021-08-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523449768
【氏名又は名称】アクソ バイオファーマシューティカル， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100079382
【弁理士】
【氏名又は名称】西藤 征彦
(74)【代理人】
【識別番号】100123928
【弁理士】
【氏名又は名称】井▲崎▼ 愛佳
(74)【代理人】
【識別番号】100136308
【弁理士】
【氏名又は名称】西藤 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100207295
【弁理士】
【氏名又は名称】寺尾 茂泰
(72)【発明者】
【氏名】ジアッシア アマト ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】ミャオ ユー
(72)【発明者】
【氏名】チャン シン エリック
【テーマコード（参考）】
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C085AA06
4C085BB11
4C085EE01
(57)【要約】
本発明は、自己免疫疾患及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧなど）を低減する方法であって、対象に、ｓＢＣＭＡバリアント及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を投与することを含む、方法を対象とする。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
自己免疫疾患又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効用量の可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含み、前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、前記アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む、方法。
【請求項2】
正常なＢ細胞の生存率が変化しない、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記方法が、ＩｇＡの産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記方法が、ＩｇＭの産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項5】
前記方法が、ＩｇＧの産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項6】
前記方法が、ＩｇＡ及びＩｇＭの両方の産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項7】
前記方法が、ＩｇＡ及びＩｇＧの両方の産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項8】
前記方法が、ＩｇＭ及びＩｇＧの両方の産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項9】
前記方法が、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項10】
前記対象が、前記自己免疫疾患と診断されている、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記自己免疫疾患が、ＩｇＡ腎症、全身性エリテマトーデス、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、重症筋無力症、多発性硬化症、及び関節リウマチからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記対象が、前記線維症と診断されている、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記線維症が、特発性肺線維症、非アルコール性脂肪性肝炎、強皮症、及び腎線維症からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ、ａ）前記バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）前記任意選択的なリンカーと、
ｃ）前記Ｆｃドメインと、を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ、ａ）前記Ｆｃドメインと、
ｂ）前記任意選択的なリンカーと、
ｃ）前記バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記アミノ酸置換（複数可）が、前記位置のうちの１つ、前記位置のうちの２つ、前記位置のうちの３つ、前記位置のうちの４つ、前記位置のうちの５つ、前記位置のうちの６つ、前記位置のうちの７つ、前記位置のうちの８つ、又は前記位置のうちの９つで生じる、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記アミノ酸置換（複数可）が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記アミノ酸置換（複数可）が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、及びＮ５３Ｅからなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記アミノ酸置換（複数可）が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、及びＴ３６Ａからなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、及びＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６８のアミノ酸配列を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６９のアミノ酸配列を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号７４のアミノ酸配列を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン又はバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記Ｆｃドメインが、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、請求項３７に記載の方法。
【請求項40】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、請求項３７に記載の方法。
【請求項41】
前記リンカーが、配列番号８７である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
前記リンカーが、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎからなる群から選択され、式中、ｎが、１、２、３、４、及び５からなる群から選択される、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
前記リンカーが、配列番号８８である、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項45】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項46】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項47】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項48】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
Ｉ．技術分野
本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧなど）を低減する方法であって、対象に、可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアント及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を投与することを含む、方法に関する。
本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧなど）を低減する方法であって、対象に、可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアント及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を投与することを含む、方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ＩＩ．背景技術
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーのメンバーである。ＢＣＭＡの細胞外ドメインのアミノ酸配列を、図３０に示す。例えば、ＢＣＭＡは、ＴＮＦファミリーのβ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）の受容体である。抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む抗ＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡ二重特異性Ｔ細胞エンゲージング抗体及びＢＣＭＡを使用するＣＡＲ－Ｔ構築物と同様に、初期の試験におけるがんの治療で初期成功を示した。
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーのメンバーである。ＢＣＭＡの細胞外ドメインのアミノ酸配列を、図３０に示す。例えば、ＢＣＭＡは、ＴＮＦファミリーのβ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）の受容体である。抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む抗ＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡ二重特異性Ｔ細胞エンゲージング抗体及びＢＣＭＡを使用するＣＡＲ－Ｔ構築物と同様に、初期の試験におけるがんの治療で初期成功を示した。
【0003】
ＢＡＦＦは、以前に、ＷＯ／００１２９６４及びＵＳ９，６５０，４３０Ｂ２（これらは、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＢＡＦＦの細胞外ドメインのアミノ酸配列を、図７に示す。ＢＡＦＦは、Ｂ細胞の細胞生存及び成熟因子であり、ＢＡＦＦの過剰産生は、全身性自己免疫疾患と関連している。ヒトでは、自己免疫性リウマチ性疾患、特に、全身性エリテマトーデス及びシェーグレン症候群を有する一定の割合の患者の血中に、高レベルのＢＡＦＦが検出可能である（Ｇｒｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２００２，１０９：５９、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００１，１６６：６、Ｃｈｅｅｍａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．２００１，４４：１３１３（これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる））。ＢＡＦＦはまた、Ｔ細胞の有効な共刺激因子であり、この共刺激は、もっぱらＢＡＦＦ－Ｒを介して生じる（Ｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００４，１７３：８０７、参照により本明細書に組み込まれる）。
【0004】
ＡＰＲＩＬは、以前に、ＷＯ９９／１２９６５及びＵＳ７，２７６，２４１Ｂ２（これらは、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＡＰＲＩＬの細胞外ドメインのアミノ酸配列を、図３０に示す。ＡＰＲＩＬの発現及び機能の研究では、腫瘍細胞がこのタンパク質を利用して、急速な増殖を誘導することが示唆されている。加えて、ＡＰＲＩＬは、他の疾患環境、例えば、一部の自己免疫疾患（例えば、ループス）に関連して生じる疾患などの細胞増殖性疾患、又は細胞集団が急速に増殖する炎症性疾患（例えば、細菌性敗血症）（ＵＳ７，２７６，２４１Ｂ２（これは、参照により本明細書に組み込まれる））においても作用する可能性がある。
【0005】
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）としても知られている、膜貫通活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）は、ＩＩＩ型膜貫通タンパク質である。いくつかのタンパク質（ＢＡＦＦ／ＢＬｙｓ、ＡＰＲＩＬ、Ｓｙｎｄｅｃａｎ－２）が、ＴＡＣＩリガンドとして特定されている。ＴＡＣＩとそのリガンドとの相互作用は、転写因子ＮＦＡＴ、ＡＰ１、及びＮＦ－κＢの活性化を誘導し、Ｂ細胞の増殖及び生存を調節することによって体液性免疫において決定的な役割を果たす。Ｂ細胞のＴＡＣＩ活性化は、抗体アイソタイプスイッチ及びＴ細胞非依存性抗体産生を含む、それらの分化及び成熟をもたらす（Ｃｈｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１，１２７（６）：１５７９、参照により本明細書に組み込まれる）。
【0006】
ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦは、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ受容体（ＢＡＦＦＲ）及びＴＡＣＩなどの受容体に結合することができ、したがって、中和ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦを、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及び／又はＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患（例えば、がん、自己免疫疾患、及び線維症）の治療に使用することができる。
【0007】
患者（特に、免疫グロブリンのレベルが高い患者）における自己免疫疾患及び／又は線維性障害に対する現在の治療は、有効性が低いこと、生存率への影響が低いこと、重篤な副作用を引き起こす毒性、又はそれらの組み合わせにより不十分である。したがって、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧのレベルが高い患者において自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症を治療するための更なる方法を開発する必要がある。本発明は、少なくともこの必要性を満たす。
【0008】
本発明の目的は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維性障害（複数可）と診断された対象における免疫グロブリンの産生（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧなど）を低減する方法であって、対象に、可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアント及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を投与することを含む、方法を提供することである。
【発明の概要】
【0009】
ＩＩＩ．発明の概要
本発明は、とりわけ、自己免疫疾患及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量の可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアントタンパク質及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。
本発明は、とりわけ、自己免疫疾患及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量の可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアントタンパク質及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。
【0010】
本発明は、とりわけ、自己免疫疾患及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量の可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアントタンパク質及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＡの産生を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＭの産生を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＧの産生を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＡ及びＩｇＭの両方の産生を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＡ及びＩｇＧの両方の産生を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＭ及びＩｇＧの両方の産生を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する。
【0011】
一態様では、本発明は、自己免疫疾患又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量の可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含み、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、
ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む。
ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む。
【0012】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、正常なＢ細胞の生存率が変化しない、方法を提供する。
【0013】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡの産生を低減する、方法を提供する。
【0014】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＭの産生を低減する、方法を提供する。
【0015】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＧの産生を低減する、方法を提供する。
【0016】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡ及びＩｇＭの両方の産生を低減する、方法を提供する。
【0017】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡ及びＩｇＧの両方の産生を低減する、方法を提供する。
【0018】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＭ及びＩｇＧの両方の産生を低減する、方法を提供する。
【0019】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する、方法を提供する。
【0020】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、対象が、自己免疫疾患と診断されている、方法を提供する。
【0021】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、自己免疫疾患が、ＩｇＡ腎症、全身性エリテマトーデス、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、重症筋無力症、多発性硬化症、及び関節リウマチからなる群から選択される、方法を提供する。追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、自己免疫疾患が、ループスである、方法を提供する。
【0022】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、対象が、線維症と診断されている、方法を提供する。
【0023】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、線維症が、特発性肺線維症、非アルコール性脂肪性肝炎、強皮症、及び腎線維症からなる群から選択される、方法を提供する。
【0024】
更なる態様では、本開示は、本明細書に開示される方法であって、当該融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ：
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む、方法を提供する。
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む、方法を提供する。
【0025】
更なる態様では、本開示は、本明細書に開示される方法であって、当該融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ：
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、方法を提供する。
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、方法を提供する。
【0026】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0027】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、当該位置のうちの１つ、当該位置のうちの２つ、当該位置のうちの３つ、当該位置のうちの４つ、当該位置のうちの５つ、当該位置のうちの６つ、当該位置のうちの７つ、当該位置のうちの８つ、又は当該位置のうちの９つで生じる、方法を提供する。
【0028】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される、方法を提供する。
【0029】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、及びＮ５３Ｅからなる群から選択される、方法を提供する。
【0030】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、及びＴ３６Ａからなる群から選択される、方法を提供する。
【0031】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、及びＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択される、方法を提供する。
【0032】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0033】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0034】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0035】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0036】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0037】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0038】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0039】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0040】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0041】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0042】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0043】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６８のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0044】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６９のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0045】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0046】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号７４のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0047】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン又はバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、方法を提供する。
【0048】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、方法を提供する。
【0049】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該Ｆｃドメインが、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、方法を提供する。
【0050】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、方法を提供する。
【0051】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該リンカーが、配列番号８７である、方法を提供する。
【0052】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該リンカーが、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎからなる群から選択され、式中、ｎが、１、２、３、４、及び５からなる群から選択される、方法を提供する。
【0053】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該リンカーが、配列番号８８である、方法を提供する。
【0054】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0055】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0056】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0057】
更なる態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0058】
追加の態様では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0059】
ＩＶ．図面の簡単な説明
【図1】非ヒト単回用量毒性研究の設計を示す。
【図2】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルの免疫細胞数を示す。図２Ａ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔリンパ球。図２Ｂ、ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞。図２Ｃ、ＣＤ３－ＣＤ１６＋ＮＫ細胞。図２Ｄ、ＣＤ３－ＣＤ１９＋ＰａｎＢ細胞。図２Ｅ、ＣＤ３－ＣＤ２０＋成熟Ｂ細胞。
【図3】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルの免疫細胞数を示す。図３Ａ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔリンパ球。図３Ｂ、ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞。図３Ｃ、ＣＤ３－ＣＤ１６＋ＮＫ細胞。図３Ｄ、ＣＤ３－ＣＤ１９＋ＰａｎＢ細胞。図３Ｅ、ＣＤ３－ＣＤ２０＋成熟Ｂ細胞。
【図4】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄（図４Ａ）及び雌（図４Ｂ）カニクイザルの経時的な体重を示す。
【図5】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄（図５Ａ）及び雌（図５Ｂ）カニクイザルの経時的な総リンパ球数を示す。
【図6】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける免疫グロブリンレベルの経時的な変化を示す。
【図7】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける免疫グロブリンの経時的な変化を示す。
【図8】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける血液学パネルＩを示す。略語：ＲＢＣ（赤血球）、ＨＧＢ（ヘモグロビン）、ＨＣＴ（ヘマトクリット）、ＭＣＶ（平均赤血球体積）、ＭＣＨ（平均赤血球ヘモグロビン）、ＭＣＨＣ（平均赤血球ヘモグロビン濃度）、ＲＤＷ（赤血球分布幅）、ＲＥＴ（網状赤血球（絶対値））。
【図9】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける血液学パネルＩＩを示す。略語：ＰＬＴ（血小板）、ＷＢＣ（白血球）、ＮＥＵＴ（好中球（絶対値））、ＬＹＭＰ（リンパ球（絶対値））、ＭＯＮＯ（単球（絶対値））、ＥＯＳ（好酸球（絶対値））、ＢＡＳＯ（好塩基球（絶対値））。
【図10】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける血液学パネルＩを示す。略語：ＲＢＣ（赤血球）、ＨＧＢ（ヘモグロビン）、ＨＣＴ（ヘマトクリット）、ＭＣＶ（平均赤血球体積）、ＭＣＨ（平均赤血球ヘモグロビン）、ＭＣＨＣ（平均赤血球ヘモグロビン濃度）、ＲＤＷ（赤血球分布幅）、ＲＥＴ（網状赤血球（絶対値））。
【図11】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける血液学パネルＩＩを示す。略語：ＰＬＴ（血小板）、ＷＢＣ（白血球）、ＮＥＵＴ（好中球（絶対値））、ＬＹＭＰ（リンパ球（絶対値））、ＭＯＮＯ（単球（絶対値））、ＥＯＳ（好酸球（絶対値））、ＢＡＳＯ（好塩基球（絶対値））。
【図12】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける凝固パネルを示す。略語：ＰＴ（プロトロンビン時間）、ＡＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、ＦＩＢ（フィブリノーゲン）。
【図13】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける凝固パネルを示す。略語：ＰＴ（プロトロンビン時間）、ＡＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、ＦＩＢ（フィブリノーゲン）。
【図14】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける化学パネルＩを示す。略語：ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）、ＧＧＴ（ガンマグルタミルトランスフェラーゼ）、ＣＫ（クレアチンキナーゼ）、ＴＢＩＬ（総ビリルビン）、ＧＬＵ（グルコース）。
【図15】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける化学パネルＩＩを示す。略語：ＵＲＥＡ（尿素）、ＣＲＥＡ（クレアチニン）、ＴＧ（トリグリセリド）、ＣＨＯＬ（総コレステロール）、ＴＰ（総タンパク質）、ＡＬＢ（アルブミン）、ＧＬＯＢ（グロブリン）。
【図16】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおける化学パネルＩＩＩを示す。略語：Ａ／Ｇ（アルブミン／グロブリン比）、Ｎａ（ナトリウム）、Ｋ（塩化カリウム）、Ｃｌ（塩化物）、ＩｇＡ（免疫グロブリンＡ）、ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）、ＩｇＭ（免疫グロブリンＭ）。
【図17】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける化学パネルＩを示す。略語：ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）、ＧＧＴ（ガンマグルタミルトランスフェラーゼ）、ＣＫ（クレアチンキナーゼ）、ＴＢＩＬ（総ビリルビン）、ＧＬＵ（グルコース）。
【図18】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける化学パネルＩＩを示す。略語：ＵＲＥＡ（尿素）、ＣＲＥＡ（クレアチニン）、ＴＧ（トリグリセリド）、ＣＨＯＬ（総コレステロール）、ＴＰ（総タンパク質）、ＡＬＢ（アルブミン）、ＧＬＯＢ（グロブリン）。
【図19】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおける化学パネルＩＩＩを示す。略語：Ａ／Ｇ（アルブミン／グロブリン比）、Ｎａ（ナトリウム）、Ｋ（塩化カリウム）、Ｃｌ（塩化物）、ＩｇＡ（免疫グロブリンＡ）、ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）、ＩｇＭ（免疫グロブリンＭ）。
【図20】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおけるサイトカインパネルＩを示す。略語：ＰｒＤ０Ｍ（投与前０分）、１ＨＰＤ（投与後１時間）、３ＨＰＤ（投与後３時間）、８ＨＰＤ（投与後８時間）。
【図21】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雄カニクイザルにおけるサイトカインパネルＩＩを示す。略語：ＰｒＤ０Ｍ（投与前０分）、１ＨＰＤ（投与後１時間）、３ＨＰＤ（投与後３時間）、８ＨＰＤ（投与後８時間）。
【図22】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおけるサイトカインパネルＩを示す。略語：ＰｒＤ０Ｍ（投与前０分）、１ＨＰＤ（投与後１時間）、３ＨＰＤ（投与後３時間）、８ＨＰＤ（投与後８時間）。
【図23】単回用量毒性研究における、ビヒクル対照、並びに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１００ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ Ｆｃで処置された雌カニクイザルにおけるサイトカインパネルＩＩを示す。略語：ＰｒＤ０Ｍ（投与前０分）、１ＨＰＤ（投与後１時間）、３ＨＰＤ（投与後３時間）、８ＨＰＤ（投与後８時間）。
【図24A】Ｆｅｂバッチ培養中１１日目のｓＢＣＭＡバリアントクローンプールの生細胞密度を示す。各行は、ＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ又はＢａｌａｎＣＤ ＣＨＯで増殖したプールされたクローンの細胞増殖を表す。
【図24B】Ｆｅｂバッチ培養中１１日目のｓＢＣＭＡバリアントクローンプールの生存率を示す。各行は、ＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ又はＢａｌａｎＣＤ ＣＨＯで増殖したプールされたクローンの細胞増殖を表す。
【図25】非還元（上）又は還元（下）形態のＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用する、ＰＮＧａｓｅＦの存在下及び不在下でのＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ又はＢａｌａｎＣＤ ＣＨＯにおけるｓＢＣＭＡバリアントクローンのＰｒｏＡ精製材料及びグリコシル化研究を示す。
【図26】フェッドバッチ実験１２日目のｓＢＣＭＡバリアント単一細胞クローンの力価、ＩＶＣＤ、及び生存率を示す。ＩＶＣＤ（生細胞密度の積分）。
【図27】フェッドバッチ実験１２日目のｓＢＣＭＡバリアントの上位１０クローンのＮ－グリカンプロファイルを示す。
【図28A】配列番号１に示される野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインの配列と比較した、ｓＢＣＭＡバリアントクローンの配列を示す。Ｓ３クローン＃１～１２の配列を示す。
【図28B】配列番号１に示される野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインの配列と比較した、ｓＢＣＭＡバリアントクローンの配列を示す。Ｓ４クローン＃１３～４１の配列を示す。
【図28C】配列番号１に示される野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインの配列と比較した、ｓＢＣＭＡバリアントクローンの配列を示す。Ｓ５クローン＃４２～７４の配列を示す。
【図28D】配列番号１に示される野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインの配列と比較した、ｓＢＣＭＡバリアントクローンの配列を示す。Ｓ６クローン＃７５～１１８の配列を示す。
【図29】配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８４に示されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。バリアントｓＢＣＭＡドメインは下線で示され、リンカードメインは太字で示され、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは斜体で示されている。
【図30】野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメイン（配列番号１）、ＡＰＲＩＬの細胞外ドメイン（配列番号８５）、ＢＡＦＦの細胞外ドメイン（配列番号８６）、リンカードメイン（配列番号８７）、及び別のリンカードメイン（配列番号８８）のアミノ酸配列を示す。
【図31】ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウス＋ＰｒｉｓｔａｎｅにおけるループスモデルでのｓＢＣＭＡバリアントの評価からの結果を示す。
【図32】ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウス＋ＰｒｉｓｔａｎｅにおけるループスモデルでのｓＢＣＭＡバリアントの評価からの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0060】
Ｖ．発明を実施するための形態
特許請求される本発明の主題をより明確かつ簡潔に指摘するために、以下の書面による説明及び添付の特許請求の範囲で使用される特定の用語について、以下の定義が提供される。
特許請求される本発明の主題をより明確かつ簡潔に指摘するために、以下の書面による説明及び添付の特許請求の範囲で使用される特定の用語について、以下の定義が提供される。
【0061】
Ａ．序論
本発明は、アミノ酸修飾を含むヒトＢＣＭＡの可溶性形態、例えば、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質の使用を対象とする。これらのバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡリガンドであるヒトＢＡＦＦ及び／又はヒトＡＰＲＩＬの一方又は両方に、野生型ヒトＢＣＭＡより強い親和性で結合する。ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦは、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及びＴＡＣＩなどの受容体に結合することができ、したがって、中和ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦを、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及び／又はＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患の治療に使用することができる。これらの疾患には、自己免疫疾患及び線維症が含まれる。中和ＡＰＲＩＬ単独が、ＡＰＲＩＬへの結合によって活性化されるＢＣＭＡ及びＴＡＣＩ又は他の受容体を高レベルで発現する自己免疫疾患及び線維症の治療に有効であり得る。中和ＢＡＦＦ単独が、ＢＡＦＦへの結合によって活性化されるＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及びＴＡＣＩ、又は他の受容体を発現する線維症及び自己免疫疾患の治療に有効であり得る。したがって、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、より強固に結合することによって、したがって、優先的にリガンド（複数可）（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦ）に結合することによって、したがって、そうでなければ細胞の表面上のＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及び／又はＴＡＣＩとＡＰＲＩＬ又はＢＡＦＦとの間で生じるであろう正常な受容体シグナル伝達を変化させることによって、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦとの結合を介して活性化されるＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、及び／又は任意の他の受容体を発現する免疫調節障害及び／又は線維性疾患を治療するために使用することができる。
本発明は、アミノ酸修飾を含むヒトＢＣＭＡの可溶性形態、例えば、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質の使用を対象とする。これらのバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡリガンドであるヒトＢＡＦＦ及び／又はヒトＡＰＲＩＬの一方又は両方に、野生型ヒトＢＣＭＡより強い親和性で結合する。ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦは、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及びＴＡＣＩなどの受容体に結合することができ、したがって、中和ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦを、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及び／又はＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患の治療に使用することができる。これらの疾患には、自己免疫疾患及び線維症が含まれる。中和ＡＰＲＩＬ単独が、ＡＰＲＩＬへの結合によって活性化されるＢＣＭＡ及びＴＡＣＩ又は他の受容体を高レベルで発現する自己免疫疾患及び線維症の治療に有効であり得る。中和ＢＡＦＦ単独が、ＢＡＦＦへの結合によって活性化されるＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及びＴＡＣＩ、又は他の受容体を発現する線維症及び自己免疫疾患の治療に有効であり得る。したがって、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、より強固に結合することによって、したがって、優先的にリガンド（複数可）（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦ）に結合することによって、したがって、そうでなければ細胞の表面上のＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及び／又はＴＡＣＩとＡＰＲＩＬ又はＢＡＦＦとの間で生じるであろう正常な受容体シグナル伝達を変化させることによって、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦとの結合を介して活性化されるＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、及び／又は任意の他の受容体を発現する免疫調節障害及び／又は線維性疾患を治療するために使用することができる。
【0062】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0063】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＧ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0064】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0065】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0066】
追加的に、いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアントは、概して、血流から迅速に除去される小さなタンパク質であるため、本発明は、本明細書で考察されるヒト又はバリアントＦｃドメインにｓＢＣＭＡバリアントを連結する融合タンパク質を提供する。Ｆｃドメインは、ＦｃＲｎ受容体への結合によって血清中での半減期を延長するため、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃドメイン融合タンパク質の生成は、改善された療法をもたらす。したがって、本発明は、本明細書で「融合タンパク質」とも称されるｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメイン融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質のｓＢＣＭＡバリアント又はバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、ＡＰＲＩＬに対して増強された結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質のｓＢＣＭＡバリアント又はバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、ＢＡＦＦに対して増強された結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質のｓＢＣＭＡバリアント又はバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに対して増強された結合親和性を示す。
【0067】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0068】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＧ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0069】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0070】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0071】
Ｂ．定義
本明細書で使用される場合、以下の用語は、別段の指定がない限り、それらに帰する意味を有する。
本明細書で使用される場合、以下の用語は、別段の指定がない限り、それらに帰する意味を有する。
【0072】
本明細書で使用される「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」という用語は、１つのメンバーを有する態様を含むだけでなく、２つ以上のメンバーを有する態様も含む。例えば、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈による別途明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの細胞」への言及は、複数のそのような細胞を含み、「薬剤」への言及は、当業者に既知の１つ以上の薬剤への言及を含むなどである。
【0073】
本明細書で使用される場合、本明細書における「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、及びペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。
【0074】
「単離された」という用語は、その自然環境を実質的に含まず、他のタンパク質を含まない分子を指す。例えば、単離されたタンパク質は、それが由来する細胞又は組織源からの細胞性材料又は他のタンパク質を実質的に含まない。「単離された」という用語はまた、単離されたタンパク質が、薬学的組成物として投与されるのに十分に純粋であるか、又は少なくとも約７０％～８０％、８０％～９０％、若しくは９０％～９５％（ｗ／ｗ）純粋であるか、又は少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％（ｗ／ｗ）純粋である、調製物を指す。具体的には、ポリペプチドは、「本質的に純粋な形態」であること、すなわち、ポリペプチド調製物が、天然に会合している他のポリペプチド材料を本質的に含まないことが好ましい。これは、例えば、周知の組換え方法によって、又は古典的な精製方法によって、ポリペプチドを調製することによって達成され得る。
【0075】
Ｂ細胞成熟抗原「ＢＣＭＡ」という用語は、Ｇｒａｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９５，７：１０９３、Ｙ．Ｌａａｂｉ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９２，１１：３８９７に記載されているＢ細胞の成熟のためのタンパク質を指す。ＢＣＭＡは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。例えば、ＢＣＭＡは、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦの受容体である。野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインのアミノ酸配列（配列番号１）を、表３及び図３０に示す。
【0076】
「リガンド」という用語は、生物学的目的を果たすために標的細胞の表面上に存在する受容体などの第２の生体分子に結合し、複合体を形成することが可能である、生体分子を指す。リガンドは、概して、例えば、イオン結合、水素結合、疎水性相互作用、双極子－双極子結合、又はファンデルワールス力などの分子間力によって、標的タンパク質上の部位に結合する、エフェクター分子である。本発明において、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦは、リガンドタンパク質である。
【0077】
「受容体」という用語は、リガンドなどの第２の生体分子に結合し、複合体を形成することが可能である、標的細胞の表面上に存在する、生体分子を指す。受容体は、概して、特定のシグナル伝達経路を活性化する。例えば、ＢＣＭＡは、ＴＮＦファミリーのメンバーであるＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦの受容体である。
【0078】
本明細書で使用される「位置」とは、タンパク質の配列中の場所を意味する。本発明のいくつかの実施形態では、位置は、成熟タンパク質（例えば、図２８に示されているヒトＢＣＭＡタンパク質）の最初のアミノ酸から開始して連続的に番号付けされる。いくつかの場合では、例えば、本明細書に記載の融合タンパク質のＦｃドメイン部分の場合、Ｆｃドメインの位置は、連続的に、又は確立された形式（例えば、ＥＵインデックス）に従って番号付けされ得る。ＥＵインデックス、又はＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックス、又はＥＵ番号付けスキームは、ＥＵ番号付けを指す（ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１－３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（参照により全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたく、また、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ６３：７８－８５（参照により全体が本明細書に組み込まれる）も参照されたい）。
【0079】
本明細書における「アミノ酸修飾」又は「アミノ酸配列修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失を意味する。
【0080】
本明細書で使用される「親タンパク質」とは、バリアントを生成するように後に修飾される出発タンパク質を意味する。親タンパク質は、天然に存在するタンパク質、又は天然に存在するタンパク質のバリアント若しくは操作されたバージョンであってもよい。親タンパク質は、タンパク質自体、親タンパク質を含む組成物、又はそれをコードするアミノ酸配列を指し得る。この文脈では、「親Ｆｃドメイン」は、列挙されたバリアントに関連するものであり、したがって、「バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン」はヒトＩｇＧの親Ｆｃドメインと比較され、例えば、「バリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン」はヒトＩｇＧ１の親Ｆｃドメインと比較されるなどである。
【0081】
本明細書における「野生型」又は「ＷＴ」とは、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、天然には存在しない配列に意図的に修飾されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。
【0082】
本明細書で使用される「バリアントタンパク質」又は「タンパク質バリアント」又は「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。例えば、本明細書で使用される「バリアントｓＢＣＭＡ」又は「ｓＢＣＭＡバリアント」とは、以下に概説されるように、少なくとも１つのアミノ酸配列の修飾に基づいて親ｓＢＣＭＡタンパク質のそれとは異なるが、依然として同族リガンドに結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。いくつかの実施形態では、親タンパク質は、ヒト野生型配列である。いくつかの実施形態では、親タンパク質は、バリアントを含むヒト配列である。タンパク質バリアントは、タンパク質自体、タンパク質を含む組成物、又はそれをコードするアミノ配列を指し得る。いくつかの実施形態では、タンパク質バリアントは、１つの位置、２つの位置、３つの位置、４つの位置、５つの位置、６つの位置、７つの位置、８つの位置、９つの位置、又は１０の位置にアミノ酸置換（複数可）を有する。本明細書におけるタンパク質バリアント配列は、親タンパク質配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９８％の配列同一性を有し、好ましくは、少なくとも約８５％、８６％、８８％、９０％、９３％、又は９５％の配列同一性を有する。２つのアミノ酸配列間、又は２つのヌクレオチド配列間の関連性は、パラメータ「配列同一性」又は「同一性」によって説明される。本発明のアミノ酸配列（「本発明の配列」）と、特許請求の範囲で言及される親アミノ酸配列（例えば、配列番号１）との間の同一性の程度は、「本発明の配列」の長さ又は親アミノ酸配列の長さのうちの短い方で割った、２つの配列のアライメントにおける正確な一致の数として計算される。その結果は、以下で計算されるパーセント同一性で表される。
【0083】
本発明の目的のために、配列番号１に示されるｓＢＣＭＡの細胞外ドメインを親タンパク質として使用して、ｓＢＣＭＡバリアントにおける対応するアミノ酸配列修飾を決定する。ｓＢＣＭＡバリアントタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸配列とアライメントされ、そのアライメントに基づいて、配列番号１に開示される任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号は、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラムで実装されるＮｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３）（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６－２７７）（好ましくはバージョン５．０．０以降）を使用して決定される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティが１０、ギャップエクステンションペナルティが０．５、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長の同一性」とラベル付けされたＮｅｅｄｌｅの出力（－ノーブリーフ（ｎｏｂｒｉｅｆ）オプションを使用して取得された）は、パーセント同一性として使用され、以下のように計算される：
【0084】
（同一の残基×１００）／（アライメントの長さ－アライメントのギャップの総数）。
【0085】
別のｓＢＣＭＡバリアントにおける対応するアミノ酸残基の特定は、限定されないが、ＭＵＳＣＬＥ（対数期待値による多重配列比較；バージョン３．５以降；Ｅｄｇａｒ，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２：１７９２－１７９７）、ＭＡＦＦＴ（バージョン６．８５７以降；Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｋｕｍａ，２００２，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３０：３０５９－３０６６；Ｋａｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３：５１ １－５１８；Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｔｏｈ，２００７，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３：３７２－３７４；Ｋａｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５３７：３９－６４；Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｔｏｈ，２０１０，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２６：１８９９－１９００）、ＣｌｕｓｔａｌＷを用いるＥＭＢＯＳＳ ＥＭＭＡ（１．８３以降；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２：４６７３－４６８０）、及びＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａを用いるＥＭＢＬ－ＥＢＩ（Ｓｉｅｖｅｒｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，２０１４，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１４；１０７９：１０５－１６）を含むいくつかのコンピュータプログラムを使用して、それぞれのデフォルトパラメータを使用して、複数のポリペプチド配列をアライメントすることによって決定することができる。
【0086】
他のバリアントポリペプチドが野生型ｓＢＣＭＡから分岐しており、それらの関係が従来の配列ベースの比較では検出できない場合（Ｌｉｎｄａｈｌ ａｎｄ Ｅｌｏｆｓｓｏｎ，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９５：６１３－６１５）、他のペアワイズ配列比較アルゴリズムを使用することができる。ポリペプチドファミリー（プロファイル）の確率的表現を利用してデータベースを検索する検索プログラムを使用して、配列ベースの検索の感度を更に高めることができる。例えば、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴプログラムは、反復データベース検索プロセスによってプロファイルを生成し、遠隔のホモログを検出することができる（Ａｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２）。ポリペプチドのファミリー又はスーパーファミリーが、タンパク質構造データベースに１つ以上の代表例を有する場合、更に高い感度を達成することができる。ＧｅｎＴＨＲＥＡＤＥＲ（Ｊｏｎｅｓ，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：７９７－８１５； ＭｃＧｕｆｆｉｎ ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ，２００３，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １９：８７４－８８１）などのプログラムは、様々なソース（ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ、二次構造予測、構造アライメントプロファイル、及び溶媒和電位）からの情報を、クエリ配列の構造的折り畳みを予測するニューラルネットワークへの入力として利用する。同様に、Ｇｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１３：９０３－９１９の方法を使用して、未知の構造の配列を、ＳＣＯＰデータベースに存在するスーパーファミリーモデルとアライメントさせることができる。これらのアライメントは、次に、ポリペプチドの相同性モデルを生成するために使用することができ、そのようなモデルは、その目的のために開発された様々なツールを使用して、精度について評価することができる。
【0087】
タンパク質の構造が既知である場合、構造アライメントを取得及び生成するためのいくつかのツール及びリソースが利用可能である。例えば、タンパク質のＳＣＯＰスーパーファミリーは構造的にアライメントされており、それらのアライメントは、アクセス可能かつダウンロード可能である。２つ以上のタンパク質構造を、距離アライメントマトリックス（Ｈｏｌｍ ａｎｄ Ｓａｎｄｅｒ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ３３：８８－９６）又はコンビナトリアルエクステンション（Ｓｈｉｎｄｙａｌｏｖ ａｎｄ Ｂｏｕｒｎｅ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １１：７３９－７４７）などの様々なアルゴリズムを使用してアライメントさせることができ、これらのアルゴリズムの実装を更に利用して、可能な構造ホモログを発見するために、目的の構造で構造データベースを照会することができる（例えば、Ｈｏｌｍ ａｎｄ Ｐａｒｋ，２０００，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：５６６－５６７）。
【0088】
本発明のバリアントを説明する際、以下に記載される命名法は、参照しやすいように適合されている。標準的に受け入れられているＩＵＰＡＣの１文字又は３文字のアミノ酸の略語が用いられている。
【0089】
アミノ酸置換に関して、以下の命名法が本明細書で使用される：元のアミノ酸、位置、置換されたアミノ酸。したがって、４３位のアラニンのバリンへの置換は、「Ａｌａ４３Ｖａｌ」又は「Ａ４３Ｖ」として示される。複数の変異は、スラッシュマーク（「／」）で区切られる。例えば、「Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ」は、それぞれ、１１位、１６位、及び３１位での置換を表す。表１に、２０種類のアミノ酸の各々の名前、３文字の略語、及び１文字の略語を示す。
【表1】
【0090】
「核酸構築物」という用語は、一本鎖又は二本鎖のいずれかであり、天然に存在する遺伝子から単離されるか、又はそうでなければ天然に存在しない若しくは合成である様式で核酸のセグメントを含むように修飾され、１つ以上の対照配列を含む核酸分子を指す。
【0091】
「作動可能に連結された」という用語は、制御配列がコード配列の発現を指示するように、制御配列がポリヌクレオチドのコード配列に対して適切な位置に配置されている構成を指す。
【0092】
本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」又は「バリアントＦｃ」は、親Ｆｃドメインと比較して少なくとも１つのアミノ酸配列修飾を含む、タンパク質を意味する。いくつかの実施形態では、親Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３からのＦｃ領域などの、ヒト野生型Ｆｃ配列である。いくつかの実施形態では、親Ｆｃドメインは、バリアントを含むヒトＦｃ配列である。ヒトＩｇＧのＦｃドメインに関する本発明で考察される全ての位置については、別途記載がない限り、アミノ酸位置の番号付けは、ＥＵインデックスに従う。修飾は、本明細書に概説される付加、欠失、置換、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。代替的には、バリアントＦｃドメインは、親Ｆｃドメインに対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のアミノ酸修飾を有し得る。追加的に、本明細書で考察されるように、本明細書におけるバリアントＦｃドメインは、非変性ゲル電気泳動などの本明細書に記載の既知の技術を使用して測定して、別のＦｃドメインとともに二量体を形成する能力、並びにＦｃＲｎ受容体に結合する能力を依然として保持する。
【0093】
本明細書における「可溶性ＢＣＭＡ」又は「ｓＢＣＭＡ」という用語は、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はその断片若しくは切断されたバージョンを含むが、ＢＣＭＡの膜貫通ドメイン又は細胞質（細胞内）ドメイン全体を含むわけではない、ＢＣＭＡの可溶性部分を意味する。ヒト野生型ｓＢＣＭＡのＥＣＤを、配列番号１として示す。いくつかの実施形態では、親野生型ｓＢＣＭＡドメインは、後述するように、切断された野生型ｓＢＣＭＡが生物学的活性（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに結合する生物学的活性）を保持している限り、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断を有し得る。
【0094】
「ｓＢＣＭＡバリアント」又は「バリアントｓＢＣＭＡ」という用語は、少なくとも１つのアミノ酸配列修飾に基づいて、親ｓＢＣＭＡタンパク質のバリアントを指す。いくつかの実施形態では、親タンパク質は、ヒト野生型ｓＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアントは、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦなどのＴＧＦファミリーメンバー（複数可）への特異的結合を保持するが、アミノ酸配列修飾（例えば、アミノ酸置換）を有し、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、Ｎ末端又はＣ末端切断を有し得る。この場合の特異的結合は、ＥＬＩＳＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｓａｐｉｄｙｎｅ ＫｉｎＥｘＡ、又はフローサイトメトリー結合分析などの任意の適切な結合アッセイによって判定されるものであり、これらのアッセイはまた、以下に概説されるように、結合親和性を判定するために使用することができる。本明細書で考察されるように、ｓＢＣＭＡバリアントは、場合によっては、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦ）に対する増加した結合親和性を有し得る。
【0095】
「結合親和性」という用語は、タンパク質、例えば、受容体又はそのバリアントと配位結合を形成する、リガンド又はそのバリアントの能力を指す。リガンドとタンパク質との間の結合親和性は、平衡解離定数（ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔ、Ｋｄ）、リガンドとタンパク質（例えば、受容体又はそのバリアント）との間のｋｏｆｆ／ｋｏｎ比によって表すことができる。Ｋｄ及び結合親和性は、反比例する。例えば、Ｋｄ値は、ＴＧＦファミリーメンバーに結合するのに必要なｓＢＣＭＡバリアントの濃度に関連し、より低いＫｄ値（より低いｓＢＣＭＡバリアント濃度）は、ＴＧＦファミリーメンバーに対するより高い結合親和性に対応する。高い結合親和性は、リガンドとタンパク質との間のより高い分子間力に対応する。低い結合親和性は、リガンドとタンパク質との間のより低い分子間力に対応する。いくつかの場合では、リガンドの結合親和性の増加は、例えば、少なくとも１．４倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．８倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、又はそれ以上のオフ速度の減少として表すことができる。
【0096】
特定のリガンド又はそのバリアントへの「特異的結合」、又は「～に特異的に結合する」、又は「～に特異的である」とは、測定可能なほどに非特異的相互作用とは異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、概して、結合活性を持たない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を判定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子との競合によって判定することができる。いくつかの実施形態では、結合親和性は、標準的なＢｉａｃｏｒｅアッセイなどの、上で考察したような当業者によって理解される任意の適切なアッセイを使用して測定される。
【0097】
特定のリガンド又はそのバリアントに対する特異的結合は、例えば、別のリガンドタンパク質に対して、少なくとも約１０-4Ｍ、少なくとも約１０-5Ｍ、少なくとも約１０-6Ｍ、少なくとも約１０-7Ｍ、少なくとも約１０-8Ｍ、少なくとも約１０-9Ｍ、あるいは少なくとも約１０-10Ｍ、少なくとも約１０-11Ｍ、少なくとも約１０-12Ｍ、少なくとも約１０-15Ｍ、又はそれ以上のＫｄを有するタンパク質によって示され得、Ｋｄは、特定のタンパク質－リガンド相互作用の解離速度を指す。いくつかの実施形態では、本発明のバリアントｓＢＣＭＡ（複数可）は、対照分子と比較して、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、又はそれ以上大きい結合親和性でリガンドに結合する。
【0098】
本明細書で使用される「残基」とは、タンパク質における位置及びその関連するアミノ酸同一性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７又はＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。
【0099】
本明細書において「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」又は「ヒンジドメイン」とは、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインと間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧ ＣＨ１ドメインはＥＵの２１５位で終わり、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインは残基ＥＵの２３１位で始まる。したがって、ＩｇＧの場合、抗体のヒンジは、２１６位（ＩｇＧ１ではＥ２１６）から２３０位（ＩｇＧ１ではＰ２３０）を含むように本明細書で定義され、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従う。いくつかの場合では、「ヒンジ断片」が使用され、これは、ヒンジドメインのＮ末端又はＣ末端のいずれか又は両方により少ないアミノ酸を含む。本明細書に概説されるように、いくつかの場合では、ヒンジを含むＦｃドメインが使用され、ヒンジは、概して可動性リンカーとして使用される。（追加的に、本明細書で更に記載されるように、ヒンジを有するか又は有さないかのいずれかの追加の可動性リンカー成分が使用され得る）。
【0100】
本明細書で使用される「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」若しくは「Ｆｃドメイン」とは、ＩｇＧ分子のＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含むポリペプチドを意味し、いくつかの場合では、ヒンジを含む。ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けでは、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、アミノ酸２３１～４４７を含み、ヒンジは、２１６～２３０である。したがって、「Ｆｃドメイン」の定義には、アミノ酸２３１～４４７（ＣＨ２－ＣＨ３）若しくは２１６～４４７（ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）の両方、又はそれらの断片が含まれる。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、いくつかの場合では、これらのドメインに対する可動性ヒンジＮ末端を含む。ＩｇＡ及びＩｇＭでは、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧでは、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３を含み、いくつかの場合では、Ｃγ１とＣγ２との間に下部ヒンジ領域を含む。この文脈における「Ｆｃフラグメント」は、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方のより少ないアミノ酸を含んでもよいが、概して、サイズに基づく標準的な方法（例えば、非変性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど）を使用して検出できるように、別のＦｃドメイン又はＦｃフラグメントとダイマーを形成する能力を依然として保持する。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、本発明において特に有用であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３からのＦｃドメインであり得る。一般に、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。いくつかの実施形態では、例えば、１つ以上のＦｃγＲ受容体若しくはＦｃＲｎ受容体への結合を変化させるために、及び／又はインビボでの半減期を増加させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸配列修飾が行われる。
【0101】
本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」又は「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１個のアミノ酸を、異なる、アライメントしたＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に交換するアミノ酸配列修飾を意味する。例えば、ＥＵの２９６位においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であるとみなされる。同様に、２４１位に、ＩｇＧ１はプロリンを有し、ＩｇＧ４はセリンを有するため、Ｓ２４１Ｐを有するＩｇＧ４分子は、ＩｇＧサブクラス修飾であるとみなされる。本明細書では、サブクラス修飾はアミノ酸置換とみなされることに留意されたい。
【0102】
本明細書で使用される「アミノ酸」及び「アミノ酸同一性」とは、ＤＮＡ及びＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。
【0103】
本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能としては、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が挙げられる。多くの場合において、異なるＩｇＧアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ４）又はＦｃドメインにおけるアミノ酸置換のいずれかを使用して、ほとんど又は全てのエフェクター機能を除去することが望ましく、しかしながら、ＦｃＲｎ受容体への結合を保持することが望ましいのは、これがヒト血清中の融合タンパク質の半減期に寄与するためである。
【0104】
本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」又は「新生児Ｆｃ受容体」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。
【0105】
本明細書で使用される「標的細胞」とは、標的ポリペプチド又はタンパク質を発現する細胞を意味する。
【0106】
本明細書の本発明によるバリアントｓＢＣＭＡ又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を産生する文脈における「宿主細胞」とは、バリアントｓＢＣＭＡ又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の成分をコードする外因性核酸を含み、好適な条件下でそのようなバリアントｓＢＣＭＡ又はＦｃ融合タンパク質を発現できる細胞を意味する。好適な宿主細胞については、以下に記載する。
【0107】
本明細書において「改善された活性」又は「改善された機能」とは、少なくとも１つの生化学的特性の望ましい変化を意味する。この文脈における改善された機能は、所望の特性の増加（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する結合親和性及び／又は特異性の増加、タンパク質の安定性の増加、インビボでの半減期の増加など）を伴う、特定の活性のパーセンテージの増加又は減少として、又は「倍率」の変化として測定することができる。一般に、パーセンテージ変化は、１００％未満の生化学的活性の変化について記載するために使用され、倍率変化は、（親タンパク質と比較して）１００％超の生化学的活性の変化について記載するために使用される。本発明では、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、及び９９％の生化学的活性のパーセンテージ変化（通常は増加）を達成することができる。本発明では、「増加倍数」（又は減少倍数）は、親タンパク質と比較して測定される。多くの実施形態では、改善は、少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、又はそれ以上である。
【0108】
Ｃ．ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質
本発明のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメイン、Ｆｃドメイン、及び任意選択的に、バリアントｓＢＣＭＡドメインをＦｃドメインと連結するリンカーを含む組成物を含む。
本発明のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメイン、Ｆｃドメイン、及び任意選択的に、バリアントｓＢＣＭＡドメインをＦｃドメインと連結するリンカーを含む組成物を含む。
【0109】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される組成物であって、当該融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ、
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む、組成物を提供する。
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む、組成物を提供する。
【0110】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される組成物であって、当該融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ、
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、組成物を提供する。
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、組成物を提供する。
【0111】
Ｄ．バリアントｓＢＣＭＡタンパク質及びドメイン
本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を、独立して、及びＦｃドメインと融合されたｓＢＣＭＡドメインとしての融合タンパク質構築物として提供する。本発明のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ヒトＢＣＭＡの可溶性ＥＣＤの少なくとも一部分、概して、アミノ酸バリアントを有する、図３０に示されるＥＣＤドメイン全体（配列番号１）を含む。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質又はｓＢＣＭＡバリアントは、Ｂｉａｃｏｒｅ又はＯｃｔｅｔアッセイなどの、当該技術分野における結合親和性アッセイによって判定され、以下に考察される野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する増加した結合親和性及び／又は特異性を示す。
本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を、独立して、及びＦｃドメインと融合されたｓＢＣＭＡドメインとしての融合タンパク質構築物として提供する。本発明のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ヒトＢＣＭＡの可溶性ＥＣＤの少なくとも一部分、概して、アミノ酸バリアントを有する、図３０に示されるＥＣＤドメイン全体（配列番号１）を含む。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質又はｓＢＣＭＡバリアントは、Ｂｉａｃｏｒｅ又はＯｃｔｅｔアッセイなどの、当該技術分野における結合親和性アッセイによって判定され、以下に考察される野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する増加した結合親和性及び／又は特異性を示す。
【0112】
いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに結合して、内因性ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及びＴＡＣＩ受容体とのそれらの相互作用を緩和又は遮断するアンタゴニストである。バリアントｓＢＣＭＡタンパク質をアンタゴニストとして使用して、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、並びに／又はＡＰＲＩＬ及び／若しくはＢＡＦＦへの結合によって活性化される他の受容体、具体的には、腫瘍療法／化学療法、免疫調節及び／若しくは線維性疾患を介して変化したシグナル伝達経路に関連する状態を治療することができる。
【0113】
追加の実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、ＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を有する対象におけるＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0114】
追加の実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩ、及び／又はＡＰＲＩＬへの結合によって活性化される他の受容体を発現する自己免疫疾患を有する対象におけるＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0115】
更なる実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、ＡＰＲＩＬを発現する線維症を有する対象におけるＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0116】
更なる実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩ、及び／又はＡＰＲＩＬへの結合によって活性化される他の受容体を発現する線維症を有する対象におけるＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0117】
追加の実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質がＢＡＦＦに結合する、対象におけるＢ細胞増殖、免疫グロブリン産生、又はその両方を阻害する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0118】
更なる実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、及び／又はＢＡＦＦへの結合によって活性化される他の受容体を発現するＢ細胞過形成又は自己免疫疾患を有する対象におけるＢＡＦＦの活性を阻害する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0119】
追加の実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、対象においてＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、及びＢＡＦＦに結合することによって活性化される他の受容体（複数可）からなる群から選択される少なくとも１つの受容体を発現する自己免疫疾患を治療する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0120】
更なる実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、対象においてＢＡＦＦ及び／又はＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を治療する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0121】
追加の実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、対象におけるＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、及び／又はＴＡＣＩを発現する線維症を治療する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0122】
追加の実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質（単離されたタンパク質として、又は本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインとしてのいずれか）は、対象におけるＢＡＦＦ及び／又はＡＰＲＩＬを発現する線維症を治療する方法で使用することができ、当該方法は、対象に、治療有効用量の本明細書に開示される１つ以上の当該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む。
【0123】
いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、アミノ酸の置換、欠失、若しくは挿入、又はそれらの任意の組み合わせを含み、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦのいずれか又は両方へのそれらの結合活性を増加させる。
【0124】
本開示は、親ｓＢＣＭＡと比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡタンパク質（複数可）を提供する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡは、親ｓＢＣＭＡと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、しかし１００％未満の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、親ｓＢＣＭＡドメインは、ヒト野生型ｓＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、親ｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、しかし１００％未満の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、バリアントｓＢＣＭＡは、切断されたバリアントｓＢＣＭＡが本明細書に概説される結合アッセイのうちの１つによって測定される生物学的活性（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦへの結合活性）を保持する限り、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、Ｎ末端及び／又はＣ末端切断を有し得る。明確にするために、本発明のバリアントＢＣＭＡは、配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、したがって、配列番号１ではない。
【0125】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のバリアントｓＢＣＭＡは、野生型ｓＢＣＭＡポリペプチド／ドメインよりも強い、ＴＧＦファミリーメンバー（すなわち、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡは、野生型ｓＢＣＭＡのものよりも少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、又はそれ以上である、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。
【0126】
特定の実施形態では、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対するバリアントｓＢＣＭＡの結合親和性は、野生型ｓＢＣＭＡのものと比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、又はそれ以上増加する。他の実施形態では、本発明のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦとの結合に対して約１×１０-8Ｍ、１×１０-9Ｍ、１×１０-10Ｍ、１×１０-12Ｍ、又は１×１０-15Ｍ未満のＫｄ値を有する。更に他の実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアントは、インビボ、インビトロのいずれか又は両方でのＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦへの野生型ｓＢＣＭＡの結合を阻害するか又はそれらに競合する。
【0127】
１．特定のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質
本発明は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡを含む組成物であって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、組成物を提供する。
本発明は、配列番号１と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡを含む組成物であって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、組成物を提供する。
【0128】
好ましい実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0129】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１位のメチオニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、プロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、及びＭ１Ｖから選択される。
【0130】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２位のロイシンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、プロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ２Ｃ又はＬ２Ｓである。
【0131】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３位のグルタミンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ３Ｐ又はＱ３Ｒである。
【0132】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４位のメチオニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、及びＭ４Ｖから選択される。
【0133】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで５位のアラニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ａ５Ｔである。
【0134】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで６位のグリシンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｇ６Ｅである。
【0135】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで７位のグルタミンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ７Ｒである。
【0136】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで９位のセリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、及びＳ９Ｐから選択される。
【0137】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１０位のグルタミンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、及びＱ１０Ｒから選択される。
【0138】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１１位のアスパラギンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｎ１１Ｄ又はＮ１１Ｓである。
【0139】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１２位のグルタミン酸のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｅ１２Ｋである。
【0140】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１４位のフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｆ１４Ｌである。
【0141】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１６位のセリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、及びＳ１６Ｒから選択される。
【0142】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで１９位のヒスチジンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｈ１９Ｌ又はＨ１９Ｙである。
【0143】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２０位のアラニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ａ２０Ｖ又はＡ２０Ｔである。
【0144】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２２位のイソロイシンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｉ２２Ｍ又はＩ２２Ｖである。
【0145】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２３位のプロリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｐ２３Ｓである。
【0146】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２５位のグルタミンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ２５Ｒである。
【0147】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２６位のロイシンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ２６Ｆである。
【0148】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで２９位のセリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ２９Ａである。
【0149】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３１位のアスパラギンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｎ３１Ｄ又はＮ３１Ｓである。
【0150】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３２位のスレオニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、及びＴ３２Ｐから選択される。
【0151】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３５位のロイシンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ３５Ｓ又はＬ３５Ｐである。
【0152】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３６位のスレオニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、及びＴ３６Ｐから選択される。
【0153】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３８位のグルタミンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ３８Ｒである。
【0154】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで３９位のアルギニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ３９Ｈである。
【0155】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４２位のアスパラギンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、及びＮ４２Ｓから選択される。
【0156】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４３位のアラニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ａ４３Ｔ又はＡ４３Ｖである。
【0157】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４４位のセリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、及びＳ４４Ｒから選択される。
【0158】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４５位のバリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｖ４５Ａ又はＶ４５Ｍである。
【0159】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４６位のスレオニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｔ４６Ａ又はＴ４６Ｉである。
【0160】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４７位のアスパラギンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、及びＮ４７Ｓから選択される。
【0161】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４８位のセリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、及びＳ４８Ｔから選択される。
【0162】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで４９位のバリンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｖ４９Ａ又はＶ４９Ｍである。
【0163】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで５０位のリジンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、及びＫ５０Ｔから選択される。
【0164】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで５１位のグリシンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｇ５１Ｅである。
【0165】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで５２位のスレオニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９種類の天然に存在するアミノ酸、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｔ５２Ａ又はＴ５２Ｍである。
【0166】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで５３位のアスパラギンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、及びＮ５３Ｓから選択される。
【0167】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、成熟領域から始まる位置番号付けで５４位のアラニンのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、及びチロシンのうちの任意の他のものによるものであり、いくつかの実施形態では、システイン（ジスルフィド形成の可能性に起因する）又はプロリン（立体効果に起因する）を利用しない。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ａ５４Ｖ又はＡ５４Ｔである。
【0168】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0169】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、及びＮ５３Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0170】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、及びＴ３６Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0171】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、及びＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0172】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0173】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0174】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0175】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0176】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0177】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0178】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0179】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0180】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0181】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0182】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６７のアミノ酸配列を有する。
【0183】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６８のアミノ酸配列を有する。
【0184】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６９のアミノ酸配列を有する。
【0185】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号４９のアミノ酸配列を有する。
【0186】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号７４のアミノ酸配列を有する。
【0187】
表２に、クローン番号、配列番号１のアミノ酸配列と比較したアミノ酸置換、及び例示的なバリアントｓＢＣＭＡタンパク質の割り当てられた配列番号を示す。
【表2-1】
【表2-2】
【0188】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１と比較して、ＡＰＲＩＬ又はＢＡＦＦに対する増強された結合親和性を示す。
【0189】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１と比較して、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに対する増強された結合親和性を示す。
【0190】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０のアミノ酸配列を有する。
【0191】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８１のアミノ酸配列を有する。
【0192】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８２のアミノ酸配列を有する。
【0193】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。
【0194】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。
【0195】
２．結合親和性を測定するためのアッセイ
本明細書に概説されるように、本発明は、ヒトＡＰＲＩＬ及び／又はヒトＢＡＦＦのいずれか又は両方に対して増加した結合親和性を示すこれらのバリアントを含むｓＢＣＭＡバリアント及び融合タンパク質を提供する。この文脈において、増加した結合親和性は、以下に概説されるように、インビトロ又はエクスビボ研究で、ヒト野生型ＢＣＭＡ又は配列番号１と比較される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡポリペプチド／ドメイン及び／又は配列番号１よりも強いＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡ及び／又は配列番号１よりも少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、又はそれ以上であるＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。
本明細書に概説されるように、本発明は、ヒトＡＰＲＩＬ及び／又はヒトＢＡＦＦのいずれか又は両方に対して増加した結合親和性を示すこれらのバリアントを含むｓＢＣＭＡバリアント及び融合タンパク質を提供する。この文脈において、増加した結合親和性は、以下に概説されるように、インビトロ又はエクスビボ研究で、ヒト野生型ＢＣＭＡ又は配列番号１と比較される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡポリペプチド／ドメイン及び／又は配列番号１よりも強いＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡ及び／又は配列番号１よりも少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、又はそれ以上であるＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。
【0196】
ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに結合するｓＢＣＭＡバリアントの能力は、例えば、アッセイプレート上にコーティングされたＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに結合する推定リガンドの能力によって判定することができる。代替的には、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対するｓＢＣＭＡ（バリアント）の結合親和性は、微生物細胞表面、例えば、酵母細胞表面上にｓＢＣＭＡ（バリアント）を提示し、結合した複合体を、例えば、フローサイトメトリーによって検出することによって判定することができる（実施例３を参照されたい）。ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対するｓＢＣＭＡ（バリアント）の結合親和性は、限定されないが、放射性リガンド結合アッセイ、非放射性（蛍光）リガンド結合アッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、Ｏｃｔｅｔ（商標）などの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、プラズモン－導波路型共鳴（ＰＷＲ）、熱力学的結合アッセイ、全細胞リガンド結合アッセイ、及び構造に基づくリガンド結合アッセイを含む、当業者によって理解されるであろう任意の適切な方法を使用して測定することができる。
【0197】
３．融合タンパク質の形式
本明細書に記載されるように、融合タンパク質の形式は、いくつかの構成をとる場合があり、成分ドメインが、タンパク質中で順序が切り替わる（Ｎ末端からＣ末端へ）。一実施形態では、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは使用されず、その場合、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメイン又はＦｃドメイン－バリアントｓＢＣＭＡドメインのいずれかを含む。いくつかの場合では、同じ融合タンパク質が、いくらか異なってラベル付けされ得ることに留意されたい。例えば、Ｆｃドメインがヒンジドメインを含む場合、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ヒンジドメインの形態のリンカーを依然として含む。代替的には、この同じタンパク質は、Ｆｃドメインに含まれるヒンジドメインを有さない場合があり、その場合、融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
本明細書に記載されるように、融合タンパク質の形式は、いくつかの構成をとる場合があり、成分ドメインが、タンパク質中で順序が切り替わる（Ｎ末端からＣ末端へ）。一実施形態では、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは使用されず、その場合、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメイン又はＦｃドメイン－バリアントｓＢＣＭＡドメインのいずれかを含む。いくつかの場合では、同じ融合タンパク質が、いくらか異なってラベル付けされ得ることに留意されたい。例えば、Ｆｃドメインがヒンジドメインを含む場合、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ヒンジドメインの形態のリンカーを依然として含む。代替的には、この同じタンパク質は、Ｆｃドメインに含まれるヒンジドメインを有さない場合があり、その場合、融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0198】
したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質を提供し、Ｆｃドメインが、ヒンジドメインを含み、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、ヒンジドメイン：バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ヒンジドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３によってＦｃドメインと連結される。
【0199】
いくつかの実施形態では、本開示は、上記のバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質を提供し、Ｆｃドメインが、ヒンジドメインを含み、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、本明細書に記載される追加のリンカーによってＦｃドメインと連結される。すなわち、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－ヒンジドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３、ヒンジドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメイン、又はＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメインであり得る。
【0200】
いくつかの実施形態では、本開示は、上記のバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質を提供し、Ｆｃドメインが、ヒンジドメインを含まず、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、本明細書に記載されるドメインリンカー（例えば、非ヒンジ）によってＦｃドメインと連結される。
【0201】
いくつかの実施形態では、本開示は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、
ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む、組成物を提供する。
ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む、組成物を提供する。
【0202】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む。
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む。
【0203】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む。
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む。
【0204】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のバリアントｓＢＣＭＡドメインは、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する結合親和性を増加させるのに役立つ。様々な実施形態では、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の（バリアント）Ｆｃドメインは、融合タンパク質の半減期を増加させる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、線維症及び／又は免疫調節性疾患を治療するために使用される。
【0205】
表３に、指定されたタンパク質／タンパク質ドメイン及び対応するアミノ酸配列の名前をそれぞれ列挙する。
【表3】
【0206】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦのいずれか又はその両方への結合活性を増加させる、配列番号１のアミノ酸配列へのアミノ酸置換（複数可）、欠失（複数可）、若しくは挿入（複数可）、又はそれらの任意の組み合わせを含む。
【0207】
本開示は、配列番号１のアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインを提供する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、親ｓＢＣＭＡドメインと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、しかし１００％未満の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、親ｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、しかし１００％未満の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、切断されたバリアントｓＢＣＭＡが本明細書に概説される結合アッセイのうちの１つによって測定される生物学的活性（例えば、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦへの結合）を保持する限り、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、Ｎ末端及び／又はＣ末端切断を有し得る。明確にするために、本発明のバリアントＢＣＭＡドメインは、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、したがって、配列番号１のアミノ酸配列ではない。
【0208】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、１つの位置、２つの位置、３つの位置、４つの位置、５つの位置、６つの位置、７つの位置、８つの位置、９つの位置、又は１０の位置にアミノ酸置換（複数可）を有する。
【0209】
特定の実施形態では、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対する本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインの結合親和性は、野生型ｓＢＣＭＡのものと比較して、少なくとも約０．４％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、又はそれ以上増加する。他の実施形態では、本発明のバリアントＢＣＭＡドメインは、ＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦに対して約１×１０-8Ｍ、１×１０-9Ｍ、１×１０-10Ｍ、１×１０-12Ｍ、又は１×１０-15Ｍ未満の結合親和性を有する。更に他の実施形態では、本明細書に記載されるバリアントＢＣＭＡドメインは、インビボ、インビトロのいずれか又は両方でのＡＰＲＩＬ及び／又はＢＡＦＦへの野生型ｓＢＣＭＡの結合を阻害するか又はそれに競合する。
【0210】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである。
【0211】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0212】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0213】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、及びＮ５３Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0214】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、及びＴ３６Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。
【0215】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、及びＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0216】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0217】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0218】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0219】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0220】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む。
【0221】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0222】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0223】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0224】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0225】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0226】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６７を有する。
【0227】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６８を有する。
【0228】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６９を有する。
【0229】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号４９を有する。
【0230】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号７４を有する。
【0231】
表２に、クローン番号、配列番号１のアミノ酸配列と比較したアミノ酸置換、及び例示的なバリアントｓＢＣＭＡドメインの割り当てられた配列番号を示す。
【0232】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、ＡＰＲＩＬに対する増強された結合親和性を示す。
【0233】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、ＢＡＦＦに対する増強された結合親和性を示す。
【0234】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに対する増強された結合親和性を示す。
【0235】
４．Ｆｃドメイン
本明細書で考察されるように、上記のｓＢＣＭＡバリアントドメインに加えて、本発明の融合タンパク質はまた、限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３を含むいくつかのサブクラスを有するＩｇＧクラスに概して、基づく抗体のＦｃドメインを含む。本明細書に記載されるように、Ｆｃドメインは、任意選択的に、ＩｇＧ抗体のヒンジドメインを含む。
本明細書で考察されるように、上記のｓＢＣＭＡバリアントドメインに加えて、本発明の融合タンパク質はまた、限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３を含むいくつかのサブクラスを有するＩｇＧクラスに概して、基づく抗体のＦｃドメインを含む。本明細書に記載されるように、Ｆｃドメインは、任意選択的に、ＩｇＧ抗体のヒンジドメインを含む。
【0236】
ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、本発明において特に有用なものであり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３からのＦｃドメインに由来し得る。一般に、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。
【0237】
本発明の融合タンパク質に含まれるヒトＩｇＧタンパク質のＦｃドメインは、融合タンパク質の半減期の有意な増加を付与することができ、Ｉｇ分子との追加の結合又は相互作用を提供することができる。いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、単量体バリアントｓＢＣＭＡポリペプチドと比較して、他の分子の精製、多量体化、結合、及び中和を容易にすることができる。
【0238】
Ｆｃドメインはまた、必要に応じて機能を変化させるＦｃバリアントを含み得る。しかしながら、多くの実施形態によれば、Ｆｃバリアントは、概して、二量体を形成する能力、並びにＦｃＲｎに結合する能力の両方を保持する必要がある。したがって、本明細書における実施形態のうちの多くは、ヒトＩｇＧ１ドメインの使用に依存するが、他のＩｇＧドメインにおける機能を増強又は無効にするＦｃバリアントが作製され得る。したがって、例えば、当業者によって理解されるであろうように、ＩｇＧ１又はＩｇＧ２におけるエフェクター機能を低減若しくは排除する除去バリアントが使用され得、かつ／又はＦｃＲｎ受容体へのより強固な結合を付与するＦｃＲｎバリアントが使用され得る。
【0239】
一実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン又はバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。
【0240】
別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0241】
更なる実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0242】
別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0243】
いくつかの実施形態では、本開示のＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ３などの、ＩｇＧ１以外の他のＩｇＧからのＦｃドメインであり得る。一般に、ＩｇＧ２が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。
【0244】
追加の実施形態では、Ｆｃドメインは、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。しかしながら、本明細書のバリアントＦｃドメインは、既知のものを使用して測定して、別のＦｃドメインと二量体を形成する能力、並びにＦｃＲｎに結合する能力を依然として保持しているため、これは、本明細書の融合タンパク質の血清半減期の増加に有意に寄与する。
【0245】
バリアントＩｇＧ Ｆｃドメインは、親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して、付加、欠失、置換、又はそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【0246】
いくつかの実施形態では、本発明のバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、（上で考察された同一性アルゴリズムを使用し、一実施形態では、デフォルトパラメータを使用して、当該技術分野で既知のＢＬＡＳＴアルゴリズムを利用して）対応する親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有し得る。
【0247】
いくつかの実施形態では、本発明のバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のアミノ酸配列修飾を有し得る。
【0248】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン又はバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。
【0249】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0250】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃドメインは、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。
【0251】
５．リンカー
本発明の融合タンパク質は、ｓＢＣＭＡドメインをＦｃドメインに接続するための任意選択的なリンカーを含むことができる。
本発明の融合タンパク質は、ｓＢＣＭＡドメインをＦｃドメインに接続するための任意選択的なリンカーを含むことができる。
【0252】
本明細書で使用される「リンカー」又は「リンカーペプチド」とは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座であると仮定するような方式で、２つの分子を連結するのに十分な長さを有する。一実施形態では、リンカーは、約１～２０アミノ酸長、好ましくは約１～１０アミノ酸長である。一実施形態では、４～１０アミノ酸長のリンカーが使用されてもよい。有用なリンカーとしては、例えば、ＩＥＧＲＭＤ、又は（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、少なくとも１つの整数（概して、３～４）である）を含むグリシン－セリンポリマー、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、並びに他の可動性リンカーが挙げられる。代替的に、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして使用され得る。
【0253】
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインを一緒に連結するために（例えば、バリアントｓＢＣＭＡドメインとＦｃドメインを連結するために）使用される「ドメインリンカー」である。上で考察したように、多くの好適なリンカーを使用して、各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さ及び柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にすることができる。本明細書で考察されるように、特に有用なドメインリンカーは、ＩｇＧ１のヒンジドメインに結合されたＩＥＧＲＭＤリンカーである。
【0254】
様々な実施形態では、２つのドメイン（例えば、ｓＢＣＭＡバリアントドメイン及びＦｃドメイン）は、概して、本明細書に記載されるドメインリンカーを使用して連結される。多くの実施形態では、２つのドメインは、２つのドメインが独立して作用することができるような方法で、可動性リンカーを使用して結合される。可動性の結合は、従来のリンカー及び／又はヒンジリンカーを使用して、様々な方法で達成することができる。
【0255】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるリンカーは、ＩＥＧＲＭＤ（配列番号８７）である。
【0256】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号８８）である。
【0257】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ抗体のヒンジドメインが使用される。いくつかの場合では、ヒンジドメインは、アミノ酸置換も含み得る。
【0258】
いくつかの実施形態では、ドメインリンカーは、ＩｇＧ１ヒンジとＩＥＧＲＭＤリンカーとの組み合わせなどの、ヒンジドメインと可動性リンカーとの組み合わせである。
【0259】
一実施形態では、リンカーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長、より好ましくは約４～１０アミノ酸である。
【0260】
６．本発明の特定の実施形態
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を示す。
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を示す。
【0261】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を示す。
【0262】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を示す。
【0263】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を示す。
【0264】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を示す。
【0265】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を有する。
【0266】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を有する。
【0267】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を有する。
【0268】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８３に示されるアミノ酸配列を有する。
【0269】
いくつかの実施形態では、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８４に示されるアミノ酸配列を有する。
【0270】
Ｅ．治療方法
１．治療に適合する対象
様々な実施形態は、治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載される１つ以上のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む方法を対象とする。
１．治療に適合する対象
様々な実施形態は、治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載される１つ以上のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与することを含む方法を対象とする。
【0271】
様々な実施形態は、治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載される１つ以上のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む方法を対象とする。
【0272】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0273】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0274】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＧ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0275】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0276】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0277】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0278】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、正常なＢ細胞の生存率には影響しない。いくつかの実施形態では、対象は、自己免疫疾患と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、線維症と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【0279】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象における免疫グロブリンの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0280】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0281】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＧ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ、ＩｇＭ、又はその両方の産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0282】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0283】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＧ及びＩｇＭの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0284】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患（複数可）及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの産生を低減する方法であって、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（複数可）を投与することを含む、方法を提供する。
【0285】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、正常なＢ細胞の生存率には影響しない。いくつかの実施形態では、対象は、自己免疫疾患と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、線維症と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【0286】
本発明は、とりわけ、自己免疫疾患及び／又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質及び／又はｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、自己免疫疾患と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアントタンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、とりわけ、線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。
【0287】
いくつかの実施形態では、本発明は、自己免疫疾患又は線維症と診断された対象におけるＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの産生を低減する方法を提供し、当該方法は、対象に、治療有効用量のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含み、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、
ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む。
ａ）配列番号１と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、当該アミノ酸置換が、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、及び５４からなる群から選択される位置番号にあり、番号付けが、ＥＵインデックスによるものである、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）任意選択的なリンカーと、
ｃ）Ｆｃドメインと、を含む。
【0288】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、正常なＢ細胞の生存率が変化しない、方法を提供する。
【0289】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、対象が、自己免疫疾患と診断されている、方法を提供する。
【0290】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡの産生を低減する、方法を提供する。
【0291】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＧの産生を低減する、方法を提供する。
【0292】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＭの産生を低減する、方法を提供する。
【0293】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡ及びＩｇＭの両方の産生を低減する、方法を提供する。
【0294】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡ及びＩｇＧの両方の産生を低減する、方法を提供する。
【0295】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＭ及びＩｇＧの産生を低減する、方法を提供する。
【0296】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、本方法が、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＧの両方の産生を低減する、方法を提供する。
【0297】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、自己免疫疾患が、ＩｇＡ腎症、全身性エリテマトーデス、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、重症筋無力症、多発性硬化症、及び関節リウマチからなる群から選択される、方法を提供する。
【0298】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、対象が、線維症と診断されている、方法を提供する。
【0299】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、線維症が、特発性肺線維症、非アルコール性脂肪性肝炎、強皮症、及び腎線維症からなる群から選択される、方法を提供する。
【0300】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される方法であって、当該融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ：
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む、方法を提供する。
ａ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該Ｆｃドメインと、を含む、方法を提供する。
【0301】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該融合タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端へ、
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、方法を提供する。
ａ）当該Ｆｃドメインと、
ｂ）当該任意選択的なリンカーと、
ｃ）当該バリアントｓＢＣＭＡドメインと、を含む、方法を提供する。
【0302】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0303】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、当該位置のうちの１つ、当該位置のうちの２つ、当該位置のうちの３つ、当該位置のうちの４つ、当該位置のうちの５つ、当該位置のうちの６つ、当該位置のうちの７つ、当該位置のうちの８つ、又は当該位置のうちの９つで生じる、方法を提供する。
【0304】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される、方法を提供する。
【0305】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、及びＮ５３Ｅからなる群から選択される、方法を提供する。
【0306】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換（複数可）が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、及びＴ３６Ａからなる群から選択される、方法を提供する。
【0307】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、及びＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択される、方法を提供する。
【0308】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0309】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0310】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0311】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0312】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａを含み、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、及びＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含む、方法を提供する。
【0313】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0314】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0315】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0316】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0317】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する、方法を提供する。
【0318】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0319】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６８のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0320】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号６９のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0321】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0322】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号７４のアミノ酸配列を有する、方法を提供する。
【0323】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン又はバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、方法を提供する。
【0324】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、方法を提供する。
【0325】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該Ｆｃドメインが、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、方法を提供する。
【0326】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、方法を提供する。
【0327】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該リンカーが、配列番号８７である、方法を提供する。
【0328】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該リンカーが、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎからなる群から選択され、式中、ｎが、１、２、３、４、及び５からなる群から選択される、方法を提供する。
【0329】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、当該リンカーが、配列番号８８である、方法を提供する。
【0330】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0331】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0332】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0333】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８３のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0334】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される方法であって、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
【0335】
２．治療的投与
特定の実施形態では、１つ以上のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を有する治療的に有効な組成物又は製剤は、個体に全身的に投与され得るか、又は当該技術分野で既知の他の投与経路を介して投与され得る。
特定の実施形態では、１つ以上のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を有する治療的に有効な組成物又は製剤は、個体に全身的に投与され得るか、又は当該技術分野で既知の他の投与経路を介して投与され得る。
【0336】
特定の実施形態では、１つ以上のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を有する治療的に有効な組成物又は製剤は、個体に全身的に投与され得るか、又は当該技術分野で既知の他の投与経路を介して投与され得る。
【0337】
３．投薬
いくつかの実施形態では、例えば、線維性障害又は免疫調節障害の治療のための有効用量の本開示の治療実体は、投与手段、標的部位、患者（患者がヒト又は動物である）の生理学的状態、投与される他の医薬品、及び治療が予防的又は治療的であるかを含む、多くの異なる要因に応じて変動する。治療投薬量は、安全性及び効力を最適化するために滴定され得る。
いくつかの実施形態では、例えば、線維性障害又は免疫調節障害の治療のための有効用量の本開示の治療実体は、投与手段、標的部位、患者（患者がヒト又は動物である）の生理学的状態、投与される他の医薬品、及び治療が予防的又は治療的であるかを含む、多くの異なる要因に応じて変動する。治療投薬量は、安全性及び効力を最適化するために滴定され得る。
【実施例】
【0338】
ＶＩ．実施例
Ａ．実施例１：カニクイザル単回用量毒性研究
本研究の目的は、カニクイザルへの静脈内注入によるＡＢ００１（ｓＢＣＭＡクローン＃７１－Ｆｃ融合タンパク質）の単回投与後の急性毒性を評価し、その後の毒性研究及び臨床試験の設計のための参照として最大耐容用量（ＭＴＤ）を提供し、毒物動態及び免疫原性を特徴付けることであった。合計１０匹のカニクイザル（１匹の動物／性別／群）を５つの群に割り当て、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（０．１、１、１０、及び１００ｍｇ／ｋｇ）又はビヒクルの単回静脈内注入を与え、６週間観察した。用量体積は、動物の最新の体重に応じて調整した。実際の注入時間は、名目注入時間の５％を超えなかった（図１）。
Ａ．実施例１：カニクイザル単回用量毒性研究
本研究の目的は、カニクイザルへの静脈内注入によるＡＢ００１（ｓＢＣＭＡクローン＃７１－Ｆｃ融合タンパク質）の単回投与後の急性毒性を評価し、その後の毒性研究及び臨床試験の設計のための参照として最大耐容用量（ＭＴＤ）を提供し、毒物動態及び免疫原性を特徴付けることであった。合計１０匹のカニクイザル（１匹の動物／性別／群）を５つの群に割り当て、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（０．１、１、１０、及び１００ｍｇ／ｋｇ）又はビヒクルの単回静脈内注入を与え、６週間観察した。用量体積は、動物の最新の体重に応じて調整した。実際の注入時間は、名目注入時間の５％を超えなかった（図１）。
【0339】
評価されたパラメータには、臨床観察、体重、摂食量、血液学、凝固、血漿化学、リンパ球の免疫表現型、免疫グロブリン、サイトカイン、及び肉眼的病理が含まれた。臨床観察は、列挙された頻度に従って、無作為化の翌日から実験の完了まで、毎日行った。非投薬日：午前中に１回、午後に１回。投薬日：投与前に１回、投与後１時間以内及び３時間～６時間以内に１回。投薬前段階中に体重を監視した：それぞれ－１３日目と－６日目に１回、投与後１日目、２日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、及び４２日目に１回。投薬前段階中に血液採取を行った：－１３日目、－６日目、－３日目（Ｍ１３０５、Ｍ１４０７）、１日目（投薬前）、及び投薬段階：４回、２日目、７日目、１４日目、及び４２日目（このうち、７日目及び１４日目には凝固は含まれなかった）。観察期間の終了時（４３日目）に動物を剖検した。剖検前、動物を一晩（２４時間以内）絶食させた（図１）。結論として、観察期間中、各群の動物において、薬物関連の体重の異常は観察されなかった（図４）。血液学的所見には以下が含まれる：１００ｍｇ／ｋｇ：２日目の雄動物（図５Ａ）及び７日目の雌動物（５７％）（図５Ｂ）では、１日目の投薬前の値と比較して、ＬＹＭＰの減少（５６％）が認められた。１０ｍｇ／ｋｇ：７日目の雌動物では、１日目の投薬前の値と比較して、ＬＹＭＰの減少（３１％）が認められた（図５Ｂ）。雄動物では、有意な異常は認められなかった（図５Ａ）。１ｍｇ／ｋｇ：７日目の雌動物では、１日目の投薬前の値と比較して、ＬＹＭＰの減少（２６％）が認められた（図５Ｂ）。雄動物では、有意な異常は認められなかった。０．１ｍｇ／ｋｇ：雌動物又は雄動物では、有意な異常は認められなかった（図５）。２日目、７日目、及び／又は１４日目に、各群の雌動物及び雄動物で、ＲＢＣ、ＨＧＢ、及びＨＣＴの減少が観察された。実験中に多くの血液が採取されたことを考慮すると、ＲＢＣ、ＨＧＢ、及びＨＣＴの減少は、血液採取に関連している可能性があると考えられた（図８～１１）。各群の雌動物又は雄動物において、凝固パラメータの異常は認められなかった（図１２～１３）。各群の雌動物又は雄動物において、血漿化学パラメータの異常は認められなかった（図１４～１９）。各群の雌動物又は雄動物において、免疫表現型の異常は認められなかった。いずれの動物においても、病理学的な肉眼的異常は存在しなかった（図２及び３）。サイトカイン分析により、１００ｍｇ／ｋｇで、投薬前の値又はビヒクルと比較して、１日目、２日目又は３日目に、雄動物においてＩＬ－１０、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７Ａの増加が認められたことを示した（図２０及び２１）。雌動物では、サイトカインの異常は認められなかった（図２２及び２３）。他の群の雌動物又は雄動物では、サイトカインの異常は認められなかった。重要なことに、雌及び雄の両方の処置群において、免疫グロブリンレベルの差異が認められた。特に、１００ｍｇ／ｋｇ：投薬前の値と比較して、２日目～４２日目の間、雌動物及び／又は雄動物において、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの減少が観察された。１０ｍｇ／ｋｇ：投薬前の値と比較して、７日目～４２日目の間、雌動物及び／又は雄動物において、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＧの減少が観察された。１ｍｇ／ｋｇ：投与前値と比較して、７日目及び１４日目に、雌動物及び／又は雄動物において、ＩｇＡ及びＩｇＭの減少が観察された。０．１ｍｇ／ｋｇ：雌動物又は雄動物において、免疫グロブリンの異常は認められなかった（図６及び７、図１６及び１９）。
【0340】
Ｂ．実施例２：細胞発生及びクローン選択
ＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ６－４Ｇ５ ＳＣＢ細胞バンクから解凍したＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ６－４Ｇ５宿主細胞は、数回の継代において、ＨｙＣｅｌｌ ＴｒａｎＦｘ－Ｃ培地で対数期に維持されている。トランスフェクション当日に、細胞を、２７ｍＬの細胞培養物（１２５ｍＬの振盪フラスコ）中で生細胞密度１Ｅ＋０６細胞／ｍＬに調整した。５０μｇの線状化した発現プラスミドを２．５ｍＬのＯｐｔｉＰＲＯ ＳＦＭに希釈することによって、トランスフェクション混合物を調製した。次いで、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ＭＡＸ溶液を、ＤＮＡ溶液と混合し、室温で１０～２０分間放置した。インキュベーション後、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ６培養物（１２５ｍＬの振盪フラスコ内で２５ｍＬ）に、溶液を添加した。トランスフェクトした細胞を、１３０ｒｐｍ、３７℃、５％のＣＯ2のインキュベーターでインキュベートした。トランスフェクションの４８時間後、トランスフェクトした細胞の一部分を、安定なプールを生成するために使用した。
ＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ６－４Ｇ５ ＳＣＢ細胞バンクから解凍したＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ６－４Ｇ５宿主細胞は、数回の継代において、ＨｙＣｅｌｌ ＴｒａｎＦｘ－Ｃ培地で対数期に維持されている。トランスフェクション当日に、細胞を、２７ｍＬの細胞培養物（１２５ｍＬの振盪フラスコ）中で生細胞密度１Ｅ＋０６細胞／ｍＬに調整した。５０μｇの線状化した発現プラスミドを２．５ｍＬのＯｐｔｉＰＲＯ ＳＦＭに希釈することによって、トランスフェクション混合物を調製した。次いで、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ＭＡＸ溶液を、ＤＮＡ溶液と混合し、室温で１０～２０分間放置した。インキュベーション後、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ６培養物（１２５ｍＬの振盪フラスコ内で２５ｍＬ）に、溶液を添加した。トランスフェクトした細胞を、１３０ｒｐｍ、３７℃、５％のＣＯ2のインキュベーターでインキュベートした。トランスフェクションの４８時間後、トランスフェクトした細胞の一部分を、安定なプールを生成するために使用した。
【0341】
トランスフェクションの４８時間後に、トランスフェクトした細胞に薬物選択を施した。細胞を、選択薬物（１５μｇ／ｍＬのピューロマイシン＋８００ｎＭのＭＴＸ）を含む１５０Ｔフラスコ中の３０ｍＬの培地（４ｍＭのＬ－グルタミン及び０．１％のＦ－６８を含有するＨｙＣｅｌｌ ＴｒａｎｓＦｘ－Ｃ）中で５Ｅ＋０５細胞／ｍＬの密度で播種した。０日目に、細胞を、３７℃、８％のＣＯ2の静的インキュベーターでインキュベートした。
【0342】
５～７日後、細胞生存率は、１５～２５％に低下するであろう。細胞培養物を、２００ｇ、５分、２２℃で遠心分離した。細胞培養培地を除去し、細胞ペレットを、７５Ｔフラスコ中の１０ｍＬの新鮮な選択培地に再懸濁し、３７℃、８％のＣＯ2の静的インキュベーターでインキュベートした。更に１０～１５日で、細胞を、生存率が４０～６０％まで徐々に回復させ、７５Ｔフラスコで１０ｍＬの培養物中で維持する。細胞生存率が５０～６０％以上に達したら、細胞を、１２５ｍＬ振盪フラスコで２０～２５ｍＬ培養物に増殖させ、１３０ｒｐｍ、３７℃、５％のＣＯ2のインキュベーターでインキュベートする。更に８～１０日で、各プールは、約９０％の生存率まで回復するであろう。各プールがその後の培養によって９０％の生存率に達したら、１プール当たり少なくとも２つのバイアルで凍結保存を行った。
【0343】
全てのプールが９０％の生存率に回復し、凍結保存が行われると、各プールを解凍し、１１日間のフェッドバッチ培養実験によって評価する。０日目として、５０ｍＬスピンチューブ中の２つの異なる１０ｍＬの培地ＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ又はＢａｌａｎＣＤ ＣＨＯに、約５．５Ｅ＋０５細胞／ｍＬの生細胞密度で細胞の各プールを接種し、１８０ｒｐｍ、３７℃、５％のＣＯ2のインキュベーターでインキュベートした。生細胞密度及び生存率を、ＢＩＯＲＡＤ ＴＣ２０細胞カウンターによって記録した（図２４Ａ及びＢ）。
【0344】
１１日目に細胞培養液を採取し、続いて、２０００ｇ、２０分、２２℃で遠心分離した。培養上清を０．２２μｍフィルターに通し、力価測定の準備をした。濾過した上清の一部分は、ＧＥプロテインＡ ＨＰ ＳｐｉｎＴｒａｐカラムを使用したｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のクローンの精製のための原料であった。ＰｒｏＡ精製材料を、非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥに供した（図２５Ａ及びＢ）。
【0345】
ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の２つのプールを、その力価及び性能に基づいて選択し、解凍し、約１週間、１５μｇ／ｍＬのピューロマイシン及び８００ｎＭのＭＴＸ、又は６０μｇ／ｍＬのピューロマイシン及び３０００ｎＭのＭＴＸを含む４ｍＭのＬ－グルタミンを含有するＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ培地に適合させた。プールを対数期で維持し、１３０ｒｐｍ、３７℃、及び５％のＣＯ2のインキュベーターでインキュベートした。ＳＣＣ実験の１日前、選択薬物を用いて、細胞を、生細胞密度５～７Ｅ＋０５細胞／ｍＬで播種した。ＳＣＣ実験当日、細胞の条件は、約１．４Ｅ＋０６細胞／ｍＬの生細胞密度、≧９０％の生存率を達成する必要がある。２００μＬのクローニング培地を、９６ウェルプレートの各ウェルに分注した。各プールについて４つのプレートが存在した。各プレートを、バーコードでラベル付けした。セルストレーナー（例えば、４０μｍナイロンメッシュセルストレーナー）を使用して、少なくとも３ｍＬの均一な単一細胞懸濁液を得る。次いで、細胞を、４ｍＭのＬ－グルタミンを含むＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ培地で生細胞密度約７Ｅ＋０５細胞／ｍＬに調整した。７０μＬの細胞を、ＳＣＰ（商標）のカートリッジにロードする。単一細胞プリンタのパラメータを設定して、９６ウェルプレートの各ウェルに単一の細胞を分注した。次いで、プレートを２００ｇ、２２℃で５分間遠心分離した。画像は、ＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（ＣＳＩ）によって、０日目、１日目、及び２日目の高解像度モードで撮影した。次いで、プレートを、３７℃、８％のＣＯ2の静的インキュベーターでインキュベートした。１４日目又は１８日目に、ＣＳＩによって再び画像を撮影した。
【0346】
２つのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のプールの９６ウェルプレートから、それぞれ３５個及び２２個のクローンを採取した。スケールアッププロセス中に選択薬剤の濃度を徐々に増加させて１００％の選択圧に戻すと、一部のクローンは増殖することができなかった。最終的に、５０ｍＬスピンチューブで増殖することができ、最終的に≧９５％以上の生存率及び≧１Ｅ＋０６細胞／ｍＬの生細胞密度を達成したクローンを凍結保存した。４０個のクローンが凍結保存された。
【0347】
２つのプールからの４０個のクローンを、１２日間のフェッドバッチ培養の実験によってスクリーニングした。各クローンからの細胞を、合計１０ｍＬの生細胞密度５．５Ｅ＋０５細胞／ｍＬで培養した。５０ｍＬスピンチューブ中の選択薬物を含まない培地（６ｍＭのＬ－ｇｌｎを含有するＨｙＣｅｌｌ ＣＨＯ）を、１８０ｒｐｍ、３７℃、５％のＣＯ2のインキュベーターでインキュベートした。１２日目に細胞培養液を採取し、続いて、２０００ｇ、２０分、２２℃で遠心分離した。培養上清を０．２２μｍフィルターに通し、ＰｒｏＡ－ＨＰＬＣを使用して力価決定の準備をした。濾過した上清の一部分は、ＧＥプロテインＡ ＨＰ ＳｐｉｎＴｒａｐカラムを使用したＪＨＬ９９３１抗体の精製のための原料であった。上位のクローンは、ＰｒｏＡ－ＨＰＬＣ力価及び１２日目の細胞生存率に基づいて選択した（図２６）。加えて、上位クローンからの精製されたＰｒｏＡ材料を、Ｎ－グリカンプロファイルについてＵＰＬＣ－ＦＬＲ分析に供した（図２７）。
【0348】
上記の実施例は、当業者に本発明の組成物、システム、及び方法の実施形態を作製及び使用する方法の完全な開示及び説明を与えるために提供されるものであり、本発明者らが発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。当業者に明らかである、本発明を実施するための上述の形態の修正は、以下の特許請求の範囲内であることが意図される。本明細書で言及される全ての特許及び刊行物は、本発明が関連する当業者の技術レベルを示す。本開示で引用される全ての参考文献は、あたかも各参考文献が参照によりその全体が個別に組み込まれるのと同じ程度に、参照により組み込まれる。
【0349】
全ての見出し及びセクションの指定は、明確化及び参照の目的でのみ使用され、いかなる様式でも限定的であるとみなされるべきではない。例えば、当業者であれば、本明細書に記載の本発明の趣旨及び範囲に従って、異なる見出し及びセクションからの様々な態様を適切に組み合わせることの有用性を理解するであろう。
【0350】
本明細書で引用される全ての参考文献は、刊行物又は特許又は特許出願の各々が、全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれることが具体的かつ個別に示されたのと同じ程度に、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0351】
当業者には明らかなように、本出願の多くの修正及び変形を、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に記載の特定の実施形態及び実施例は、例としてのみ提供される。
【0352】
Ｃ．実施例３：ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウス＋プリスタンにおけるループスモデルに対するｓＢＣＭＡバリアントの評価
プリスタンを腹腔内注射したＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスにおけるループスモデルに対する被験物質の効果を評価した。１１～１２週のＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスを４つの群に無作為に割り当て、モデル群の動物にプリスタンを投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、正常対照として使用した。
プリスタンを腹腔内注射したＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスにおけるループスモデルに対する被験物質の効果を評価した。１１～１２週のＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスを４つの群に無作為に割り当て、モデル群の動物にプリスタンを投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、正常対照として使用した。
【0353】
ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスは、ＮＺＢとＮＺＷ株の間のＦ１ハイブリッドによって生成された古典的なループスモデルである。これらのハイブリッドマウスは、ループス患者と同様の重篤なループス様表現型を発症する。これらのループス様表現型には、リンパ節腫脹、脾腫大、抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧを含む血清抗核自己抗体（ＡＮＡ）の上昇、及び免疫複合体媒介性糸球体腎炎（ＧＮ）が含まれる。ＳＬＥ患者の場合、ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１株の疾患は、部分的にはエストロゲンレベルに起因して、雌に強く偏っている。
【0354】
プリスタンの腹腔内注射は、複数の核抗原に対するループス関連自己抗体の形成を刺激する。これは、ループス様自己免疫の発症を伴う慢性炎症をもたらし、これは特に、ＳＬＥに特徴的な抗体の形成、並びにヒトＳＬＥとの高度の類似性を有する免疫複合体腎炎を含む。
【0355】
４８匹のＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスを、実験前の体重及び尿タンパク質レベルに基づいて、各群１２匹ずつ、４つの群に無作為化した。全てのＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスに、腹腔内注射によって、０．５ｍＬの体積のプリスタンを投与した。群１には、プリスタンとともに生理食塩水ビヒクル対照を投与した。群２には、プリスタンとともに、週２回、１０ｍｇ／ｋｇのテリタシセプトを投与した。群３には、プリスタンとともに、週に２回、１ｍｇ／ｋｇのｓＢＣＭＡバリアントを投与した。群４には、プリスタンとともに、週に２回、１０ｍｇ／ｋｇのｓＢＣＭＡバリアントを投与した。
【0356】
処置後１４日目に蛋白尿レベル（ｍｇ／ｍｌ）を測定し、処置群２、３及び４で蛋白尿レベルの低減が観察された（図３１）。リンパ節腫脹スコアを記録した（図３２）。ビヒクル処置群は、他の処置群と比較して、リンパ節腫脹の最高スコアを示し、１０ｍｇ／ｋｇのｓＢＣＭＡバリアントで処置された動物は、リンパ節腫脹が観察されなかった。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【図8-3】
【図9-1】
【図9-2】
【図9-3】
【図10-1】
【図10-2】
【図10-3】
【図11-1】
【図11-2】
【図11-3】
【図12-1】
【図12-2】
【図13-1】
【図13-2】
【図14-1】
【図14-2】
【図15-1】
【図15-2】
【図16-1】
【図16-2】
【図17-1】
【図17-2】
【図18-1】
【図18-2】
【図19-1】
【図19-2】
【図20-1】
【図20-2】
【図21-1】
【図21-2】
【図22-1】
【図22-2】
【図23-1】
【図23-2】
【図24-1】
【図24-2】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28A】
【図28B】
【図28C】
【図28D】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【国際調査報告】