特表 2024-529197 ヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物、その調製方法及び使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-05

(54)【発明の名称】ヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物、その調製方法及び使用

(51)【国際特許分類】

   C07C 69/76 20060101AFI20240723BHJP

   C07C 67/08 20060101ALI20240723BHJP

   C07C 201/12 20060101ALI20240723BHJP

   C07C 205/59 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 31/235 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240723BHJP

   C07B 61/00 20060101ALN20240723BHJP

【ＦＩ】

C07C69/76 Z CSP

C07C67/08

C07C201/12

C07C205/59

A61K31/235

A61P9/00

A61P9/10

A61P25/28

A61P27/02

A61P25/00

A61P13/12

C07B61/00 300

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024502699

(86)(22)【出願日】2022-08-15

(85)【翻訳文提出日】2024-01-17

(86)【国際出願番号】 CN2022112512

(87)【国際公開番号】W WO2023165094

(87)【国際公開日】2023-09-07

(31)【優先権主張番号】202210205661.2

(32)【優先日】2022-03-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520101410

【氏名又は名称】中国医学科学院薬用植物研究所

(74)【代理人】

【識別番号】110001896

【氏名又は名称】弁理士法人朝日奈特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】▲孫▼ ▲暁▼波

(72)【発明者】

【氏名】田 ▲瑜▼

(72)【発明者】

【氏名】▲孫▼ ▲瀟▼

【テーマコード（参考）】

4C206

4H006

4H039

【Ｆターム（参考）】

4C206AA01

4C206AA02

4C206AA03

4C206AA04

4C206DB29

4C206DB57

4C206EA02

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA72

4C206MA83

4C206MA86

4C206NA14

4C206ZA02

4C206ZA16

4C206ZA33

4C206ZA36

4C206ZA81

4H006AA01

4H006AA02

4H006AA03

4H006AB20

4H006AB23

4H006AC48

4H006BA51

4H006BD10

4H006BJ50

4H006BM72

4H006BM73

4H006BM74

4H006KA06

4H006KC30

4H039CA66

(57)【要約】

本願は、ヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物、その調製方法及び使用を開示する。本願は、組み合わせ原理を利用して、ｄ－ボルネオールによる薬物血液脳関門通過促進機能によって、脳血管におけるブチルフタリドの薬物濃度を上昇させ、薬物の多標的・多通路による相乗的な脳保護機能を発揮する一方、ｄ－ボルネオールによる脳虚血治療作用を発揮する。合成された化合物について生体内での脳虚血に対する薬力学的活性の評価を行うことで、高活性候補薬物が得られ、しかも、合成方法は工業的生産が可能である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式の化合物。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【請求項2】

下記式のものである請求項１に記載の化合物。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【請求項3】

下記化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体と、を含有することを特徴とする医薬組成物。

【請求項5】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を唯一の活性成分とすることを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又は請求項４又は５に記載の医薬組成物を含有することを特徴とする医薬製剤。

【請求項7】

その剤形は、経口投与剤形、注射剤形、又は経皮剤形である、ことを特徴とする請求項６に記載の医薬製剤。

【請求項8】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する他の活性成分をさらに含有することを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物又は請求項６に記載の医薬製剤。

【請求項9】

下記ステップを含む請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の調製方法。

（ここで、Ｒ'は、

であり、
Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩであり、
スキーム１は、
ｎ－ブチリデンフタリド又は置換のｎ－ブチリデンフタリド類物質（Ｒ－１）を接触水素化して二重結合を還元し、ブチルフタリド又は置換のブチルフタリドラセミ体（Ｒ－２）を得るステップａと、
１）又は２）：１）加熱反応、温度２０℃～１２０℃、１ｈ～５ｈ、２）マイクロ波反応、温度２０℃～６０℃、３０ｍｉｎ～１ｈから選択される反応条件で、Ｒ－２を強塩基で加水分解し、反応終了後、希酸でｐＨを２～４に調整し、酢酸エチル又はエチルエーテルで抽出して濃縮し、中間体Ｒ－３を得、Ｒ－３を順次無水コハク酸、ＤＭＡＰ及びＥｔ₃Ｎと混合して反応させ、Ｒ－４を得るステップｂと、
Ｒ－４をＤＣＣで触媒して、ｄ－ボルネオールと縮合反応させ、目的生成物Ｒ－５を得るステップｃと、を含み、
スキーム２
化合物Ｒ－２を化学的にキラル分割し、キラル化合物Ｌ－１を得た後、上記のステップｂ～ｃによって、目的生成物Ｌ－４を得る。）

【請求項10】

ステップａにおける水素化反応の触媒は、パラジウム炭素又はラネーニッケルから選択されることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項11】

ステップｂにおける強塩基は水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムから選択され、強塩基とＲ－２とのモル比が５：１～１：１であることを特徴とする請求項９又は１０に記載の調製方法。

【請求項12】

ステップｂにおける無水コハク酸とＲ－２とのモル比が５：１～１：１であり、Ｅｔ₃ＮとＲ－２とのモル比が５：１～１：１であり、ステップｃにおけるｄ－ボルネオールとＲ－４とのモル比が１０：１～２：１であることを特徴とする請求項９又は１０に記載の調製方法。

【請求項13】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する薬物の調製における、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又は請求項４～５のいずれか１項に記載の組成物又は請求項６～７のいずれか１項に記載の製剤の使用。

【請求項14】

前記心脳血管疾患は虚血性心脳血管疾患であり、前記糖尿病誘発性血管障害は糖尿病性脳症、糖尿病性心疾患、糖尿病性網膜症、又は糖尿病性腎症である請求項１３に記載の使用。

【請求項15】

前記虚血性心脳血管疾患は脳梗塞又は心筋梗塞である請求項１４に記載の使用。

【請求項16】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する方法であって、
請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又は請求項４～５のいずれか１項に記載の組成物又は請求項６～７のいずれか１項に記載の製剤の治療有効量を、これを必要とする被験者に投与することを含む、方法。

【請求項17】

前記心脳血管疾患は虚血性心脳血管疾患であり、前記糖尿病誘発性血管障害は糖尿病性脳症、糖尿病性心疾患、糖尿病性網膜症、又は糖尿病性腎症である請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記虚血性心脳血管疾患は脳梗塞又は心筋梗塞である請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記治療有効量は７．５ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇである請求項１６～１８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願の相互参照］
本願は、２０２２年３月４日に中国特許庁に提出された、出願番号が２０２２１０２０５６６１．２、発明の名称が「ヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物、その調製方法及び医薬的な使用」である中国特許出願の優先権を主張しており、そのすべての内容は引用により本明細書に組み込まれている。

【0002】

［技術分野］
本発明は、新規なヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル系化合物に関し、具体的には、２分子ｄ－ボルネオールと２－（α－ヒドロキシ－ｎ－ペンチル）安息香酸（すなわち、開環ブチルフタリド）との組み合わせ化合物、その調製方法及び使用に関する。

【背景技術】

【0003】

脳卒中は、脳虚血と低酸素によって引き起こされる急性の脳血管疾患であり、虚血性脳卒中と出血性脳卒中の２つのカテゴリーに分けられ、そのうち虚血性脳卒中は７０％以上を占め、罹患率、死亡率、障害率が高く、人間の健康と生命を危険にさらしてしまう。現在、虚血性脳卒中に対する薬物治療手段は主に２種類あり、１つは、血栓溶解薬、抗血小板凝集薬、抗凝固薬、及び繊維減少薬を利用することであり、もう１つは神経保護薬物を利用して虚血による神経細胞の損傷やアポトーシスを軽減することである。近年、血管内血栓除去術は急性虚血性脳卒中の治療に大きな価値を示しているが、この治療を受けられる脳卒中患者はほとんどおらず、永続的に恩恵を受けられる患者は半数未満である。組織プラスミノーゲン活性化因子であるアルテプラーゼ（alteplase）は、急性虚血性脳卒中治療薬として米国ＦＤＡによって承認された唯一の薬剤であるが、治療範囲が狭い、出血性副作用が起こりやすい、神経保護作用がないなどの問題があり、適用が限定されている。したがって、脳部の血液供給機能を改善し、一定の神経保護を有する薬物の研究開発は虚血性脳卒中の治療に重要な意義がある。

【0004】

ブチルフタリド（3-n-nutylphthalide、ＮＢＰ、下記式Ａ）は、セロリ種子から抽出されたベンゾフラノン系化合物であり、その化学名が、（Ｒ／Ｓ）－３－ｎ－ブチル－１（３Ｈ）－イソベンゾフラノンである。ＮＢＰは、中国が独自に開発し、２００２年に発売された虚血性脳卒中治療薬であり、「中国急性虚血性脳卒中治療ガイドライン２０１８」では、ＮＢＰは「脳血液循環改善薬」と定義されている。ＮＢＰは、抗血小板凝集、抗血栓、脳梗塞領域の減少、脳微小循環の改善など、多種の生物活性を有する。ＮＢＰは、脳虚血の多くの病理的なプロセスに対して治療作用があるが、水溶性が極めて悪く、その水溶性と活性を改善するために、現在、キラル分割、ベンゼン環への置換基の導入、ラクトン開環後の誘導化などの方法によってＮＢＰの構造修飾と改造を行っている。２－（α－ヒドロキシ－ｎ－ペンチル）安息香酸はＮＢＰのラクトン開環生成物であり、ＮＢＰと類似した生物活性と薬物動態学的特徴を有するが、生体内でも生体外でも不安定であり、臨床応用に適した薬物を調製することが困難である。ＮＢＰは、それ自身の治療効果が限られているため、臨床ではその治療効果を増強するために他の薬物と併用するのが一般的であり、例えば中国特許出願公開第１０７５９５８７４号明細書では、ブチルフタリドとメコバラミンを併用することによって、ブチルフタリドの治療効果を高め、それによってブチルフタリドの最低有効量を減少させ、投与量を減少させ、長期使用による不良反応の発生を減少させる。

【0005】

ｄ－ボルネオール、すなわち、デキストロボルネオール（上記式Ｂ）は、クスノキ科植物の新鮮な枝や葉から抽出及び加工されることが多く、（＋）－ボルネオールとしても知られる二環式モノテルペン系化合物である。脳をリフレッシュし、心を浄化し、薬物血液脳関門通過を促進し、心血管及び脳血管を保護すること、血栓予防、鎮痛、抗炎症、抗菌などの作用がある。現代の薬理学的研究により、ボルネオールは、トランスポーターの排出を阻害し、生化学物質のレベルを調節し、皮膚角質層の構造を変化させ、内皮細胞の連結構造を調整することなどによって心脳血管系の薬物濃度を高め、血液脳関門の開放を促進することができ、そのため、他の薬物と併用して有効薬物の保留時間を明らかに延長し、薬効を高めることが多く、例えば中国特許出願公開第１０５２６７２１２号明細書では、エダラボンとデキストロボルネオールとの組成物を心脳血管疾患の治療に用いる。中国特許出願公開第１１３４０２５４３号明細書では、ブチルフタリドを改変しようとしたが、その改変後の新規化合物は、ブチルフタリドに対して有効性が明らかに向上しておらず、両者の効果の間に統計学的差異がなく、臨床応用に適した薬物を調製することが困難である。本発明者のチームは、心脳血管疾患の治療薬をより多く開発するために鋭意研究を進めてきた。

【発明の概要】

【0006】

ブチルフタリド及びｄ－ボルネオールの両方には、脳循環を改善し、心脳血管を保護する作用があることから、本チームは、進歩的な事前実験を利用して、最初に、ブチルフタリドとｄ－ボルネオールとを１：１（モル比）で簡単に組み合わせて組成物を形成し、その結果、この組成物を生体内注射又は経口投与する場合、ブチルフタリド又はｄ－ボルネオール単独投与よりも、中大脳動脈血栓症（ＭＣＡＯ）モデルラットの脳梗塞領域を減少させる効果が明らかではない。これに基づいて、ブチルフタリド開環生成物とｄ－ボルネオールとを１：１（モル比）で組み合わせて、新規化合物（下記式Ｂ）を形成することを検討した結果、この化合物は、活性が僅かに向上しており、さらに、ブチルフタリド開環生成物とｄ－ボルネオールとを１：２（モル比）で組み合わせた結果、２分子ｄ－ボルネオールで置換された２－（α－ヒドロキシ－ｎ－ペンチル）安息香酸誘導体（下記式Ｃ）は、活性が、１分子ｄ－ボルネオールで置換された２－（α－ヒドロキシ－ｎ－ペンチル）安息香酸誘導体（下記式Ｂ）よりもはるかに優れた。また、本願では、活性に対するキラル配置の影響を詳細に調査した結果、２分子ｄ－ボルネオールで置換された２－（α－ヒドロキシ－ｎ－ペンチル）安息香酸誘導体の中で、左旋性化合物（下記式Ｄ）の方は活性がより優れていることを見出した。

【0007】

本願は、ブチルフタリド又はＬ－ブチルフタリドの開環生成物とｄ－ボルネオールとを特定の比率で組み合わせ反応させることにより、２分子ｄ－ボルネオールで置換された一連の２－（α－ヒドロキシ－ｎ－ペンチル）安息香酸誘導体を得た。前記誘導体は、ｄ－ボルネオールによる薬物血液脳関門通過促進機能によって、脳血管におけるブチルフタリド開環生成物の薬物濃度を上昇させ、組み合わせ薬物の多標的・多通路による相乗的な脳保護効果を発揮することができる。本願は、生体内の脳虚血に対する薬力学ＭＣＡＯ／Ｒモデルラットの脳梗塞領域の活性評価により、高活性な臨床候補薬を得ることができ、合成方法は、工業的生産が可能である。本願は、ブチルフタリドのラクトン環開環生成物と２分子ｄ－ボルネオールとの組み合わせ反応により一連のヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物を得ることで、ブチルフタリドの構造最適化を実現し、ブチルフタリドの抗脳虚血効果を顕著に高めることができる。

【0008】

本願のヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物は、臨床上に積極的な治療価値があり、しかも、創薬性が明らかであり、深く開発する価値がある。

【0009】

本願のヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物の構造一般式を以下に示す。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【0010】

本願はまた、上記化合物の合成方法を提供する。

（ここで、Ｒ'は、

であり、
Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。
スキーム１は、
ｎ－ブチリデンフタリド又は置換のｎ－ブチリデンフタリド類物質（Ｒ－１）を（パラジウム炭素、ラネーニッケル等）接触水素化して二重結合を還元し、ブチルフタリド又は置換のブチルフタリドラセミ体（Ｒ－２）を得るステップａと、
１）又は２）：１）加熱反応、温度２０℃～１２０℃、１ｈ～５ｈ、２）マイクロ波反応、温度２０℃～６０℃、３０ｍｉｎ～１ｈから選択される反応条件で、Ｒ－２を強塩基（水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどとＲ－２とのモル比は５：１～１：１）で加水分解し、反応終了後、希酸でｐＨを調整し、酢酸エチル又はエチルエーテルで抽出して濃縮し、中間体Ｒ－３を得、Ｒ－３を順次無水コハク酸（Ｒ－２に対するモル比は５：１～１：１）、ＤＭＡＰ及びＥｔ₃Ｎ（Ｒ－２に対するモル比は５：１～１：１）と混合して反応させ、Ｒ－４を得るステップｂと、
Ｒ－４をＤＣＣ（Ｒ－４に対するモル比は１０：１～２：１）で触媒して、ｄ－ボルネオールと縮合反応させ（ｄ－ボルネオールとＲ－４とのモル比は１０：１～２：１）、目的生成物Ｒ－５を得るステップｃと、を含む。
スキーム２
化合物Ｒ－２を化学的にキラル分離し、キラル化合物Ｌ－１を得た後、上記のステップｂ～ｃによって、目的生成物Ｌ－４を得る。）

【0011】

本願の任意の化合物の構造は以下の通りである。

【0012】

本発明の一態様によれば、心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する方法であって、上記の化合物、その組成物又はその製剤の治療有効量を、これを必要とする被験者に投与することを含む、方法を提供する。

【0013】

任意選択に、前記心脳血管疾患は虚血性心脳血管疾患であり、前記糖尿病誘発性血管障害は糖尿病性脳症、糖尿病性心疾患、糖尿病性網膜症、又は糖尿病性腎症である。

【0014】

任意選択に、前記虚血性心脳血管疾患は脳梗塞又は心筋梗塞である。

【0015】

任意選択に、前記治療有効量は７．５ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇである。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】中間体Ｒ－２の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図2】中間体Ｒ－２の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図3】中間体Ｒ－４の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図4】中間体Ｒ－４の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図5】実施例１の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図6】実施例１の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図7】実施例２の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図8】実施例２の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図9】実施例３の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図10】実施例３の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図11】実施例４の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図12】実施例４の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図13】実施例５の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図14】実施例５の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図15】実施例６の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図16】実施例６の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図17】実施例７の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図18】実施例７の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図19】実施例８の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図20】実施例８の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図21】実施例９の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図22】実施例９の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図23】実施例１０の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図24】実施例１０の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図25】実施例１１の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図26】実施例１１の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図27】実施例１２の¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。

【図28】実施例１２の¹³Ｃ－ＡＰＴスペクトルである。

【図29】ラットの神経機能スコアに対するＮＢＰ誘導体の影響である（＃＃，ｐ＜０．０１ ｖｓ ｓｈａｍ群；＊＊，ｐ＜０．０１ ｖｓ ＭＣＡＯ／Ｒ群；＄，ｐ＜０．０５ ｖｓ ＮＢＰ群；＄＄，ｐ＜０．０１ ｖｓ ＮＢＰ群）。

【図30】ラットの脳梗塞領域に対するＮＢＰ誘導体の影響である（＃＃，ｐ＜０．０１ ｖｓ ｓｈａｍ群；＊＊，ｐ＜０．０１ ｖｓ ＭＣＡＯ／Ｒ群；＄，ｐ＜０．０５ ｖｓ ＮＢＰ群；＄＄，ｐ＜０．０１ ｖｓ ＮＢＰ群）。

【図31】全脳スライス写真である。

【発明を実施するための形態】

【0017】

中間体Ｒ－２の調製
ｎ－ブチリデンフタリド（５．０ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）を無水エタノール５０ｍＬに溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ ２５０ｍｇを加えて、常圧で水素ガスを導入し、室温で２～３ｈ反応させた。薄層クロマトグラフィーＴＬＣによって反応を監視し、石油エーテル：酢酸エチル（８：１）を展開剤条件とした。反応終了後、濾過し、濾液を収集して、溶媒を回転乾燥させ、黄色油状液体Ｒ－２を５．０ｇ得た。収率は９８．９％であった。化合物Ｒ－２の¹Ｈ－ＮＭＲ及び¹³Ｃ－ＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.88 (d, J= 7.6 Hz, 1H, H-6), 7.55 (td, J= 7.6, 7.2, 1.0 Hz , 1H, H-4), 7.51 (t, J= 7.6, 7.2 Hz, 1H, H-5), 7.43 (dd, J= 7.6, 0.6 Hz, 1H, H-3), 5.47 (m, 1H, -C(CH)O-), 2.06-2.01 (m, 1H, -CHCH ₂ -), 1.78-1.72 (m, 1H, -CHCH ₂ -), 1.49-1.33 (m, 4H, -CH ₂ CH ₂ CH₃), 0.90 (t, J= 7.5 Hz, 3H, -CH₃); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 170.8, 150.1, 134.0, 129.0, 126.1, 125.6, 121.8, 81.5, 34.4, 26.9, 22.4, 13.9.

【0018】

中間体Ｒ－３の調製
化合物Ｒ－２（５．０ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）をエタノール－水混合溶液（体積比２：１）３０ｍＬに加え、水酸化カリウム（２．０ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）を加えて、７０℃、マイクロ波で３０ｍｉｎ反応させ（又は２ｈ加熱還流反応）、反応終了後、溶媒を回転乾燥させ、濃縮液に水を加えて希釈し、希塩酸でｐＨを３～４に調整し、白色固体を析出させて、酢酸エチルで３回抽出し、有機層を併せて、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、次の反応にそのまま用いた。

【0019】

中間体Ｒ－４の調製
無水コハク酸（３．４ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）を化合物Ｒ－３の酢酸エチル溶液に加え、ＤＭＡＰ（２４０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた後、トリエチルアミン（４ｍＬ、２８．８ｍｍｏｌ）を滴下し、撹拌して反応させた。反応終了後、水を加えて抽出し、有機層を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過し、溶媒を蒸発乾燥させ、次の反応にそのまま用いた。化合物Ｒ－４の¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 8.10 (dd, J= 8.2, 1.0 Hz, 1H, H-3), 7.55 (td, J= 7.9, 6.9, 1.0 Hz , 1H, H-5), 7.52 (dd, J= 7.8, 1.4 Hz, 1H, H-6), 7.34 (td, J= 8.1, 6.6, 1.6 Hz, 1H, H-4), 6.62 (m, 1H, -C(CH)O-), 2.74-2.64 (m, 4H, -COCH ₂ CH ₂ COOH), 1.86-1.80 (m, 2H, -OCHCH ₂ -), 1.44-1.29 (m, 4H, -CH ₂ CH ₂ CH₃), 0.88 (t, J= 7.5 Hz, 3H, -CH₃); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 178.6, 172.4, 171.6, 144.3, 133.3, 131.3, 127.3, 127.0, 126.1, 73.6, 36.5, 29.7, 29.0, 27.9.

【0020】

実施例１：化合物１（すなわち、合成スキーム１のＲ－５）の調製

化合物Ｒ－４（２．５７ｇ、８．３ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン３０ｍＬに溶解し、ＤＣＣ（４．３ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．６４ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で３０ｍｉｎ撹拌した後、ｄ－ボルネオール（３．２ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）を加えて室温に移し、一晩撹拌した。反応終了後、吸引濾過し、濾液を収集して濃縮させ、濃縮液を４℃で２時間静置し、吸引濾過し、濾液を石油エーテル：酢酸エチル（６：１）でカラムクロマトグラフィーにかけて、淡黄色粘稠状液体を３．５９ｇ得た。収率は８２．３％であった。化合物Ｒ－５の¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.89 (d, J= 7.2 Hz, 1H, H-3), 7.52-7.49 (m, 2H, H-5, 6), 7.34 (m, 1H, H-4), 6.62 (m, 1H, C(CH)O), 5.12 (m, 1H, COOCH), 4.86(m, 1H, COOCH), 2.75-2.60 (m, 4H, -COCH ₂ CH ₂ COOH), 0.97-0.85 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 172.4, 171.43, 171.38, 167.24, 167.21, 143.40, 143.38, 132.1, 130.14, 130.12, 129.14, 129.10, 127.1, 126.2, 80.96, 80.88, 80.26, 80.25, 73.25, 73.20, 49.0, 48.76, 48.73, 47.95, 47.92, 47.91, 47.80, 44.95, 44.93, 44.8, 37.0, 36.8, 36.67, 36.62, 34.9, 29.50, 29.48, 28.1, 28.0, 27.6, 27.50, 27.48, 27.0, 25.5, 22.65, 22.63, 19.77, 19.71, 18.99, 18.95, 14.0, 13.8, 13.6, 13.50, 13.48.

【0021】

中間体Ｌ－１の調製
化合物Ｒ－２（３２．８ｇ、１７２．５ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、水酸化カリウム水溶液を加えて、６０℃で１ｈマイクロ波反応させた。反応終了後、メタノールを蒸発除去し、濃縮液を希釈し、－１０℃で希塩酸を用いてＰＨを３～４に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機層に（－）－α－フェニルエチルアミン（２０．７ｇ、１７１．２ｍｍｏｌ）を加えて、－１０℃で５～１０ｍｉｎ静置した後、さらに室温で５～１０ｈ静置し、白色の光学活性アミン塩結晶を収集した。白色結晶をメタノール／酢酸エチル混合溶媒で２～３回再結晶した後、得た針状結晶を水に溶解し、２Ｎ水酸化カリウムを加えて解離し、酢酸エチルで抽出した後、水層を収集して、希塩酸でＰＨを１～２に調整し、酢酸エチルで抽出し、乾燥して濾過し、濃縮すると、化合物Ｌ－１を１２．２ｇ得た。収率は３７．２％であった。

【0022】

実施例２：化合物２（すなわち、合成スキーム２のＬ－４）の調製

化合物Ｌ－２、Ｌ－３、Ｌ－４（実施例２）の合成は、実施例１のＲ－３、Ｒ－４、Ｒ－５の合成を参照した。本実施例の生成物Ｌ－４は淡黄色油状液体であった、¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.89 (d, J= 7.2 Hz, 1H, H-3), 7.53-7.48 (m, 2H, H-5, 6), 7.32 (m, 1H, H-4), 6.63 (m, 1H, C(CH)O), 5.13 (m, 1H, COOCH), 4.85(m, 1H, COOCH), 2.74-2.61 (m, 4H, -COCH ₂ CH ₂ COOH), 0.96-0.85 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 172.5, 171.4, 167.2, 143.3, 132.1, 129.1, 127.1, 126.2, 80.9, 80.3, 73.2, 49.0, 48.7, 47.9, 47.8, 44.9, 44.8, 37.0, 36.8, 36.7, 29.5, 29.4, 28.1, 28.0, 27.9, 27.4, 27.1, 22.6, 19.8, 19.7, 18.9, 18.8, 14.0, 13.6, 13.5.

【0023】

実施例３：化合物３の調製

化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水マレイン酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は８０．３％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.92 (m, 1H, H-3), 7.54-7.50 (m, 2H, H-5, 6), 7.34 (m, 1H, H-4), 6.89 (m, 2H, CH=CH), 6.74 (m, 1H, C(CH)O), 5.52-5.13, 5.01-4.99 (m, 2H, COOCH×2), 0.98-0.85 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 166.13, 166.11, 164.3, 163.31, 163.28, 141.78, 141.73, 133.1, 132.4, 131.1, 129.17, 129.15, 128.15, 128.12, 126.3, 125.11, 125.10, 80.1, 79.98, 79.92, 72.98, 72.95, 48.00, 47.92, 46.90, 46.88, 43.90, 43.87, 43.8, 35.9, 35.8, 35.7, 35.67, 35.60, 33.9, 27.1, 26.98, 26.96, 26.9, 26.44, 26.38, 26.1, 24.4, 21.56, 21.53, 18.72, 18.65, 17.89, 17.80, 13.0, 12.7, 12.6, 12.49, 12.48.

【0024】

実施例４：化合物４の調製

化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水グルタル酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は６９．５％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.90 (m, 1H, H-3), 7.51-7.50 (m, 2H, H-5, 6), 7.32 (m, 1H, H-4), 6.60 (m, 1H, C(CH)O), 5.13, 4.89 (m, 2H, COOCH×2), 0.98-0.82 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 173.3, 172.18, 172.13, 167.2, 143.64, 143.54, 132.0, 130.2, 131.1, 129.1, 127.1, 126.1, 80.94, 80.90, 79.9, 72.94, 72.87, 49.0, 48.7, 47.9, 47.8, 44.9 (d, J= 4.4 Hz), 44.8, 37.0, 36.9, 36.8, 36.85, 36.80, 33.8, 33.6, 28.05, 28.02, 27.1, 22.63, 22.60, 20.4, 20.3, 19.8, 18.95, 18.86, 14.0, 13.8, 13.6, 13.5.

【0025】

実施例５：化合物５の調製

ブチルフタリドを３－ニトロ－ブチルフタリドに変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は７４．５％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 8.71 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-6), 8.33 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H, H-5), 7.72 (d, J= 8.6 Hz, 1H, H-3), 6.59 (m, 1H, C(CH)O), 5.17, 4.86 (m, 2H, COOCH×2), 0.96-0.80 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 172.3, 171.56, 171.50, 165.25, 165.21, 150.51, 150.49, 146.6, 130.30, 130.28, 127.7, 126.5, 125.32, 125.31, 82.2, 82.1, 80.4, 72.83, 72.79, 48.76, 48.74, 48.06, 48.04, 47.8, 44.89, 44.87, 44.8, 36.9, 36.7, 36.67, 36.63, 36.40, 36.38, 33.9, 29.30, 29.27, 28.1, 28.00, 27.9, 27.47, 27.41, 27.1, 22.52, 22.50, 19.76, 19.69, 18.92, 18.83, 14.0, 13.8, 13.6, 13.51, 13.46.

【0026】

実施例６：化合物６の調製

ブチルフタリドを３－ニトロ－ブチルフタリドに変更し、化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水マレイン酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は８０．２％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 8.71 (m, 1H, H-6), 8.33 (dd, J= 2.40, 8.62 Hz, 1H, H-5), 7.74 (m, 1H, H-3), 6.89 (m, 2H, CH=CH), 6.65 (m, 1H, C(CH)O), 6.32, 6.23 (m, 2H, CH=CH), 5.17, 4.89 (m, 2H, COOCH×2), 0.98-0.74 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 172.3, 173.06, 172.88, 153.4, 136.9, 133.2, 130.9, 128.86, 128.72, 127.6, 121.3, 80.14, 80.12, 79.9, 65.6, 60.4, 50.0, 48.7, 47.8, 44.86, 44.84, 36.90, 36.85, 36.4, 33.77, 33.71, 33.62, 33.53, 33.4, 32.4, 30.6, 29.27, 28.10, 28.09, 28.04, 27.1, 26.07, 25.98, 25.42, 25.38, 25.0, 24.8, 22.5, 20.34, 20.30, 19.7, 18.8, 14.2, 14.0, 13.57, 13.54.

【0027】

実施例７：化合物７の調製

ブチルフタリドを３－クロロ－ブチルフタリドに変更し、化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水マレイン酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は７２．１％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.85 (m, 1H, H-6), 7.47 (m, 2H, H-3, 5), 6.87 (m, 2H, CH=CH), 6.67 (m, 1H, C(CH)O), 5.15, 4.99 (m, 2H, COOCH×2), 0.94-0.85 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 166.0, 165.0, 165.3, 164.30, 164.29, 141.31, 141.28, 134.4, 133.7, 133.2, 133.1, 132.23, 132.14, 130.82, 130.80, 129.9, 127.83, 137.82, 81.6, 81.5, 81.26, 81.17, 73.8, 73.4, 49.06, 48.99, 48.01, 47.95, 44.90, 44.89, 36.9, 36.7, 36.7, 36.4, 28.1, 28.0, 28.0, 27.2, 27.49, 27.43, 27.15, 27.14, 22.57, 22.54, 19.77, 19.71, 18.9, 18.8, 14.0, 13.8, 13.6, 13.5.

【0028】

実施例８：化合物８の調製

ブチルフタリドを３－クロロ－ブチルフタリドに変更し、化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水グルタル酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は５５．４％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.83 (m, 1H, H-6), 7.45 (m, 2H, H-3, 5), 6.53 (m, 1H, C(CH)O), 5.15, 4.88 (m, 2H, COOCH×2), 0.96-0.82 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 173.3, 172.14, 172.10, 166.03 166.01, 142.12, 142.05, 135.0, 133.0, 132.1, 130.7, 129.9, 127.78, 127.77, 81.57, 51.49, 80.0, 72.42, 72.27, 49.1, 48.6, 48.0, 47.8, 44.91, 44.89, 44.8, 36.9, 36.8, 36.7, 36.56, 36.54, 33.7, 33.5, 28.1, 28.15, 28.06, 27.9, 27.48, 27.42, 22.57, 22.55, 20.3, 19.76, 19.73, 18.93, 19.86, 14.0, 13.8, 13.6, 13.5.

【0029】

実施例９：化合物９の調製

ブチルフタリドを３－ブロモ－ブチルフタリドに変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は８６．２％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.96 (d, J= 2.0 Hz, 1H, H-6), 7.61 (dd, J= 8.3, 2.0 Hz, 1H, H-5), 7.39 (d, J= 8.4 Hz, 1H, H-3), 6.51 (m, 1H, C(CH)O), 5.12, 4.86 (m, 2H, COOCH×2), 0.96-0.76 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 172.4, 171.43, 171.38, 165.97, 165.93, 142.35, 142.31, 135.0, 132.75, 132.71, 131.03, 130.98, 128.17, 128.16, 120.9, 81.6, 81.5, 80.32, 80.29, 72.78, 72.74, 49.07, 49.23, 48.76, 48.73, 48.00, 47.99, 47.81, 47.80, 44.90, 44.81, 44.8, 36.9, 36.7, 36.66, 36.63, 36.5, 29.43, 29.39, 28.1, 28.03, 28.00, 27.9, 27.8, 27.5, 27.4, 27.09, 27.08, 22.59, 22.58, 19.76, 19.70, 18.93, 18.84, 14.0, 13.8, 13.6, 13.49. 13.47.

【0030】

実施例１０：化合物１０の調製

ブチルフタリドを３－ブロモ－ブチルフタリドに変更し、化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水グルタル酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は５０．１％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.97 (m, 1H, H-6), 7.61 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H, H-5), 7.34 (d, J= 8.4 Hz, 1H, H-3), 6.51 (m, 1H, C(CH)O), 5.13, 4.89 (m, 2H, COOCH×2), 0.96-0.82 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 173.2, 172.14, 172.10, 165.94, 165.93, 142.58, 142.51, 135.0, 132.8, 130.9, 128.03, 128.02, 120.9, 81.6, 81.5, 79.9, 72.46, 72.41, 49.06, 49.05, 48.8, 48.0, 47.8, 44.90, 44.84, 36.92, 32.86, 36.7, 36.51, 36.48, 33.7, 33.5, 28.1, 28.06, 28.02, 27.9, 27.5, 27.48, 27.42, 27.1, 22.57, 22.55, 20.3, 19.77, 19.73, 18.93, 18.86, 14.0, 13.8, 13.6, 13.5.

【0031】

実施例１１：化合物１１の調製

ブチルフタリドを３－ヨード－ブチルフタリドに変更し、化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水マレイン酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は６１．３％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 8.45 (m, 1H, H-6), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.8 Hz, 1H, H-5), 7.26 (d, J= 8.3 Hz, 1H, H-3), 6.54 (m, 1H, C(CH)O), 6.28, 6.19 (m, 2H, CH=CH), 5.12, 4.96 (m, 2H, COOCH×2), 0.96-0.84 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 165.81, 165.75, 165.6, 164.0, 142.66, 142.62, 140.9, 138.6, 131.9, 131.6, 131.19, 131.13, 128.39, 128.35, 128.2, 127.8, 92.4, 81.6, 81.5, 81.4, 81.3, 73.65, 73.58, 49.1, 48.8, 48.0, 47.8, 44.90, 44.78, 36.86, 36.78, 36.5, 36.1, 35.8, 33.7, 33.5, 28.1, 28.0, 27.9, 27.5, 27.46, 27.38, 27.0, 22.59, 22.58, 19.78, 19.69, 18.93, 18.85, 14.0, 13.8, 13.6, 13.4.

【0032】

実施例１２：化合物１２の調製

ブチルフタリドを３－ヨード－ブチルフタリドに変更し、化合物Ｒ－４の合成時の無水コハク酸を無水グルタル酸に変更した以外、実施例１を参照した。生成物は、淡黄色油状液体で、収率は５１．１％であった。生成物¹ＨＮＭＲ及び¹³ＣＮＭＲのデータを以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 8.16 (m, 1H, H-6), 7.80 (dd, J= 8.2, 1.8 Hz, 1H, H-5), 7.23 (d, J= 8.2 Hz, 1H, H-3), 6.49 (m, 1H, C(CH)O), 5.13, 4.89 (m, 2H, COOCH×2), 0.96-0.82 (m, 21H, CH₃×7); ¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 173.2, 172.13, 172.09, 165.85, 165.83, 143.15, 148.08, 140.9, 138.7, 131.1, 130.9, 128.12, 128.10, 92.4, 81.6, 81.5, 79.9, 72.54, 72.49, 49.06, 49.05, 48.8, 48.0, 47.8, 44.90, 44.86, 36.91, 36.86, 36.7, 36.48, 36.45, 33.7, 33.5, 28.1, 28.06, 28.02, 27.90, 27.89, 27.5, 27.47, 27.40, 27.1, 22.58, 22.56, 20.3, 19.77, 19.73, 18.93, 18.86, 14.0, 13.8, 13.6, 13.5.

【0033】

薬力学的実験：ＮＢＰ誘導体（実施例１の化合物１及び実施例２の化合物２）による脳虚血再灌流障害の予防・治療作用に関する研究
一、実験方法
１．実験群分け
ＳＨＡＭ群：偽手術群
中大脳動脈血栓症（ＭＣＡＯ）モデル群
ブチルフタリド（ＮＢＰ）：５ｍｇ／ｋｇ
Ｌ－ブチルフタリド（Ｌ－ＮＢＰ）：２．５ｍｇ／ｋｇ
ＮＲＢ（化合物１）：１５ｍｇ／ｋｇ（換算により、ＮＢＰ ４．９ｍｇ／ｋｇの用量に相当）
Ｌ－ＮＲＢ（化合物２）低用量：７．５ｍｇ／ｋｇ（換算により、Ｌ－ＮＢＰ ２．４５ｍｇ／ｋｇの用量に相当）
Ｌ－ＮＲＢ（化合物２）高用量：１５ｍｇ／ｋｇ（換算により、Ｌ－ＮＢＰ ４．９ｍｇ／ｋｇの用量に相当）
アスピリン群（ＡＳＰ）：１０ｍｇ／ｋｇ

【0034】

２．投与方法
モデリング前に、５日間連続して腹腔内投与し、偽手術群とＭＣＡＯモデル群のラットに等量の生理食塩水を与え、その後ＭＣＡＯ手術を行った。

【0035】

３．中大脳動脈血栓症（ＭＣＡＯ）モデル作製
糸栓法を用いて中大脳動脈塞栓症（ＭＣＡＯ）モデルを作製した。手術は厳格な無菌条件で行われ、主要な手術過程は以下の通りである。抱水クロラールを腹腔内注射することでラットを麻酔し、総頸動脈（ＣＣＡ）、外頸動脈（ＥＣＡ）、及び内頸動脈（ＩＣＡ）を分離し、微小動脈クランプで総頸動脈を閉じて、双極性電気凝固ペンで外頸動脈の分岐を電気凝固した。外頸動脈幹を遊離し、総頸動脈分岐から３～４ｍｍで結紮した。微小動脈クランプで内頸動脈を一時的に閉じて、眼科用はさみを使用して外頸動脈に小さな開口部を切り、メチルポリシロキサンでコーティングされた４－０モノフィラメントナイロン糸を挿入し、外頸動脈の切り口にゆるい結び目を作り、内頸動脈の血液逆流をブロックした。内頚動脈の微小動脈クランプを外し、ナイロン糸を内頚動脈にゆっくりと押し込み、頭蓋内前大脳動脈に到達し、中大脳動脈(ＭＣＡ)の開口部をブロックし、挿入深さを約１８～２２ｍｍにした。総頚動脈の微小動脈クランプを外し、消毒後、皮下組織と皮膚を１層ずつ縫合し、手術２ｈ後に、ナイロン糸をゆっくり抜去して再灌流した。偽手術群では、ナイロン糸を挿入しなかったことを除いて、他のすべての操作は同様であった。実験中、すべてのラットの直腸温を３７℃に維持した。

【0036】

二、検出指標
１．神経機能の評価
再灌流２４時間後、神経行動スコアは、Ｌｏｎｇａ ５レベルスコア法に従ってすべてのラットに対して実行された。Ｌｏｎｇａスコア基準:０、正常、神経障害なし。１、左前肢伸展障害、機能低下。２、左前肢の円運動、左前肢麻痺、機能の重度の低下、ラットの尾を持ち上げた後、ラットは損傷部位へねじり続けたこと。３、歩行時に左側に転倒。４、手足麻痺、意識不明。

【0037】

２．脳梗塞領域の測定
再灌流２４時間後、テトラゾリウムレッド(ＴＴＣ)染色を使用して脳梗塞領域を測定した。ラットを頸部解剖により屠殺し、すぐに脳全体を摘出し、－２０℃の冷蔵庫で一時冷凍し、製氷皿に置き、嗅球を除去し、冠状面に沿って前脳を厚さ２ｍｍの６枚に切った。脳スライスを１．５ ｍＬの２％ＴＴＣ溶液に入れて、暗所で３０ｍｉｎインキュベートし、脳スライスを１０％パラホルムアルデヒドに入れて一晩固定してから、写真を撮って分析した。Ｉｍａｇｅ－Ｊソフトウェアを使用して脳梗塞領域を計量して計算した。

【0038】

三、実験結果
１．神経機能スコア
モデル群の神経機能スコアは、偽手術群より明らかに高かった。各投与群の神経学的スコアはモデル群より明らかに低かった（ｐ＜０．０５）。ＮＢＰ群と比較して、ＮＲＢ群（ｐ＜０．０５）、Ｌ－ＮＲＢ低用量群（ｐ＜０．０５）、及びＬ－ＮＲＢ高用量群（ｐ＜０．０１）は有意に低下した（図２９、表１）。

【0039】

【表1】

【0040】

２．脳梗塞領域
モデル群の脳梗塞領域は偽手術群より明らかに高かった。各投与群の脳梗塞領域はモデル群より明らかに低かった（ｐ＜０．０５）。ＮＢＰ群と比較して、ＮＲＢ群（ｐ＜０．０５）、Ｌ－ＮＲＢ低用量群（ｐ＜０．０５）、及びＬ－ＮＲＢ高用量群（ｐ＜０．０１）は有意に低下した（図３０、図３１、表２）。評価対象の誘導体の脳梗塞領域減少結果は、神経機能改善スコアの結果と一致していた。

【0041】

【表2】

【0042】

四、実験の結論
脳梗塞領域の改善についての評価結果を例に挙げると、
１．モデル群と比較して、ＮＢＰ群（５ｍｇ／ｋｇ、すなわち０．０２６ｍｍｏｌ／ｋｇ）、Ｌ－ＮＢＰ群（２．５ｍｇ／ｋｇ、すなわち０．０１３ｍｍｏｌ／ｋｇ）、ＮＲＢ群（１５ｍｇ／ｋｇ、すなわち０．０２６ｍｍｏｌ／ｋｇ）、Ｌ－ＮＲＢ低用量群（７．５ｍｇ／ｋｇ、すなわち０．０１３ｍｍｏｌ／ｋｇ）、Ｌ－ＮＲＢ高用量群（１５ｍｇ／ｋｇ、すなわち０．０２６１ｍｍｏｌ／ｋｇ）は、いずれも、脳梗塞領域改善活性を示し、梗塞阻害率（モデル群に対する）は、それぞれ、３４．２％、４６．４％、６３．７％、６２．０％、７７．６％であり、有意差が認められた。この結果により、本願で合成したヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物は、すべて、良好な脳虚血治療活性を有し、しかも、その効果はブチルフタリドやＬ－ブチルフタリドよりも大幅に優れていた。
２．ＮＢＰ群と比較して、Ｌ－ＮＢＰ群、ＮＲＢ群、Ｌ－ＮＲＢ低用量群、Ｌ－ＮＲＢ高用量群は、いずれも、脳梗塞領域改善活性を示し、阻害有効率（ＮＢＰ群に対する）は、それぞれ、１８．６％、４４．８％、４２．３％、６６．０％であり、しかも、ＮＲＢ群、Ｌ－ＮＲＢ低用量群、Ｌ－ＮＲＢ高用量群は、いずれも、ＮＢＰ群と有意差が認められた。この結果により、１）左旋性配置のブチルフタリド又は誘導体は、いずれの活性も、対応するラセミ体より優れている。２）２つのｄ－ボルネオールを連結したブチルフタリド誘導体は、活性が元のブチルフタリド化合物より優れている。
３．Ｌ－ＮＢＰ群と比較して、Ｌ－ＮＲＢ低用量群、Ｌ－ＮＲＢ高用量群は、いずれも、明らかな脳梗塞領域改善活性を示し、阻害有効率（Ｌ－ＮＢＰ群に対する）は、それぞれ、２９．１％、５８．２％であり、しかも、Ｌ－ＮＲＢ低用量群、Ｌ－ＮＲＢ高用量群は、いずれも、Ｌ－ＮＢＰ群と有意差が認められた。この結果により、２つのｄ－ボルネオールを連結したＬ－ブチルフタリドは、活性が元のＬ－ブチルフタリド化合物より優れている。
４．モデル群と比較して、ＡＳＰ群は、脳梗塞領域改善活性を示し、同様にモデル群の作製に成功したことが明らかになった。ＡＳＰ群（１０ｍｇ／ｋｇ、すなわち０．５６ｍｍｏｌ／ｋｇ）と比較して、Ｌ－ＮＲＢ高用量群は、顕著な脳梗塞領域改善活性を示し、阻害有効率は５６．６％である。このことから、本願に係るヒドロキシペンチル安息香酸ジエステル化合物は、脳梗塞領域と神経機能の改善作用が良好で、臨床でよく使用されている薬物であるアスピリンの活性より明らかに優れ、臨床では積極的な治療作用があり、しかも、創薬性が明らかであり、深く開発する価値がある。

【0043】

上記の実施例は、本願の技術的構想及び特徴を説明するために過ぎず、当業者が本願の内容を理解し実施することを可能にすることを目的とし、これによって本願の保護範囲を制限するものではない。本願の精神的本質に基づいてなされた同等の変更又は修飾であれば、本願の保護範囲内に含まれるものとする。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【手続補正書】

【提出日】2024-01-17

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式の化合物。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【請求項2】

下記式のものである請求項１に記載の化合物。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【請求項3】

下記化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体と、を含有することを特徴とする医薬組成物。

【請求項5】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を唯一の活性成分とすることを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を含有することを特徴とする医薬製剤。

【請求項7】

その剤形は、経口投与剤形、注射剤形、又は経皮剤形である、ことを特徴とする請求項６に記載の医薬製剤。

【請求項8】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する他の活性成分をさらに含有することを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項9】

下記ステップを含む請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の調製方法。

（ここで、Ｒ'は、

であり、
Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩであり、
スキーム１は、
ｎ－ブチリデンフタリド又は置換のｎ－ブチリデンフタリド類物質（Ｒ－１）を接触水素化して二重結合を還元し、ブチルフタリド又は置換のブチルフタリドラセミ体（Ｒ－２）を得るステップａと、
１）又は２）：１）加熱反応、温度２０℃～１２０℃、１ｈ～５ｈ、２）マイクロ波反応、温度２０℃～６０℃、３０ｍｉｎ～１ｈから選択される反応条件で、Ｒ－２を強塩基で加水分解し、反応終了後、希酸でｐＨを２～４に調整し、酢酸エチル又はエチルエーテルで抽出して濃縮し、中間体Ｒ－３を得、Ｒ－３を順次無水コハク酸、ＤＭＡＰ及びＥｔ₃Ｎと混合して反応させ、Ｒ－４を得るステップｂと、
Ｒ－４をＤＣＣで触媒して、ｄ－ボルネオールと縮合反応させ、目的生成物Ｒ－５を得るステップｃと、を含み、
スキーム２
化合物Ｒ－２を化学的にキラル分割し、キラル化合物Ｌ－１を得た後、上記のステップｂ～ｃによって、目的生成物Ｌ－４を得る。）

【請求項10】

ステップａにおける水素化反応の触媒は、パラジウム炭素又はラネーニッケルから選択されることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項11】

ステップｂにおける強塩基は水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムから選択され、強塩基とＲ－２とのモル比が５：１～１：１であることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項12】

ステップｂにおける無水コハク酸とＲ－２とのモル比が５：１～１：１であり、Ｅｔ₃ＮとＲ－２とのモル比が５：１～１：１であり、ステップｃにおけるｄ－ボルネオールとＲ－４とのモル比が１０：１～２：１であることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項13】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する薬物の調製における、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の使用。

【請求項14】

前記心脳血管疾患は虚血性心脳血管疾患であり、前記糖尿病誘発性血管障害は糖尿病性脳症、糖尿病性心疾患、糖尿病性網膜症、又は糖尿病性腎症である請求項１３に記載の使用。

【請求項15】

前記虚血性心脳血管疾患は脳梗塞又は心筋梗塞である請求項１４に記載の使用。

【請求項16】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する方法であって、
請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の治療有効量を、これを必要とする被験者に投与することを含む、方法。

【請求項17】

前記心脳血管疾患は虚血性心脳血管疾患であり、前記糖尿病誘発性血管障害は糖尿病性脳症、糖尿病性心疾患、糖尿病性網膜症、又は糖尿病性腎症である請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記虚血性心脳血管疾患は脳梗塞又は心筋梗塞である請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記治療有効量は７．５ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇである請求項１６に記載の方法。

【手続補正書】

【提出日】2024-02-06

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式の化合物。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【請求項2】

下記式のものである請求項１に記載の化合物。

（ここで、Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。）

【請求項3】

下記化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体と、を含有することを特徴とする医薬組成物。

【請求項5】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を唯一の活性成分とすることを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を含有することを特徴とする医薬製剤。

【請求項7】

その剤形は、経口投与剤形、注射剤形、又は経皮剤形である、ことを特徴とする請求項６に記載の医薬製剤。

【請求項8】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する他の活性成分をさらに含有することを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項9】

下記ステップを含む請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の調製方法。

（ここで、Ｒ'は、

であり、
Ｒは、

であり、
Ｘは、Ｈ、ニトロ基、アミノ基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩであり、
スキーム１は、
ｎ－ブチリデンフタリド又は置換のｎ－ブチリデンフタリド類物質（Ｒ－１）を接触水素化して二重結合を還元し、ブチルフタリド又は置換のブチルフタリドラセミ体（Ｒ－２）を得るステップａと、
１）又は２）：１）加熱反応、温度２０℃～１２０℃、１ｈ～５ｈ、２）マイクロ波反応、温度２０℃～６０℃、３０ｍｉｎ～１ｈから選択される反応条件で、Ｒ－２を強塩基で加水分解し、反応終了後、希酸でｐＨを２～４に調整し、酢酸エチル又はエチルエーテルで抽出して濃縮し、中間体Ｒ－３を得、Ｒ－３を順次無水コハク酸、ＤＭＡＰ及びＥｔ₃Ｎと混合して反応させ、Ｒ－４を得るステップｂと、
Ｒ－４をＤＣＣで触媒して、ｄ－ボルネオールと縮合反応させ、目的生成物Ｒ－５を得るステップｃと、を含み、
スキーム２
化合物Ｒ－２を化学的にキラル分割し、キラル化合物Ｌ－１を得た後、上記のステップｂ～ｃによって、目的生成物Ｌ－４を得る。）

【請求項10】

ステップａにおける水素化反応の触媒は、パラジウム炭素又はラネーニッケルから選択されることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項11】

ステップｂにおける強塩基は水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムから選択され、強塩基とＲ－２とのモル比が５：１～１：１であることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項12】

ステップｂにおける無水コハク酸とＲ－２とのモル比が５：１～１：１であり、Ｅｔ₃ＮとＲ－２とのモル比が５：１～１：１であり、ステップｃにおけるｄ－ボルネオールとＲ－４とのモル比が１０：１～２：１であることを特徴とする請求項９に記載の調製方法。

【請求項13】

心脳血管疾患、アルツハイマー病、又は糖尿病誘発性血管障害を治療する薬物の調製における、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の使用。

【請求項14】

前記心脳血管疾患は虚血性心脳血管疾患であり、前記糖尿病誘発性血管障害は糖尿病性脳症、糖尿病性心疾患、糖尿病性網膜症、又は糖尿病性腎症である請求項１３に記載の使用。

【請求項15】

前記虚血性心脳血管疾患は脳梗塞又は心筋梗塞である請求項１４に記載の使用。

【国際調査報告】