特表 2024-529254 がん誘導性又は抗生物質誘導性のディスバイオシスを診断するための方法及び免疫療法によるがん治療を改善するためのそれらの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-06

(54)【発明の名称】がん誘導性又は抗生物質誘導性のディスバイオシスを診断するための方法及び免疫療法によるがん治療を改善するためのそれらの使用

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/53 20060101AFI20240730BHJP

   C12Q 1/686 20180101ALI20240730BHJP

   C12N 7/00 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 1/20 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 9/16 20060101ALI20240730BHJP

   C12Q 1/6897 20180101ALI20240730BHJP

   C12M 1/34 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240730BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 33/243 20190101ALI20240730BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 38/14 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240730BHJP

   A61K 38/46 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/203 20060101ALI20240730BHJP

   G01N 33/15 20060101ALI20240730BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20240730BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20240730BHJP

   C12Q 1/66 20060101ALN20240730BHJP

【ＦＩ】

G01N33/53 D

C12Q1/686 Z

C12N7/00

C12N1/20 E

C12N9/16 Z

C12Q1/6897 Z

C12M1/34 A

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K35/17

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K33/243

A61K31/282

A61K38/14

A61K35/76

A61K38/46

A61K31/203

G01N33/15 Z

G01N33/50 Z

C07K14/705

C12Q1/66

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023578925

(86)(22)【出願日】2022-06-21

(85)【翻訳文提出日】2024-02-20

(86)【国際出願番号】 EP2022066929

(87)【国際公開番号】W WO2022268841

(87)【国際公開日】2022-12-29

(31)【優先権主張番号】21305846.4

(32)【優先日】2021-06-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】21306817.4

(32)【優先日】2021-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】508061930

【氏名又は名称】アンスティテュ ギュスタブ ルシ

(71)【出願人】

【識別番号】523269258

【氏名又は名称】エブリミューヌ

(71)【出願人】

【識別番号】520018392

【氏名又は名称】ユニベルシテ パリ－サクレー

(71)【出願人】

【識別番号】500248467

【氏名又は名称】アンスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サントゥ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル（イーエヌエスエーエールエム）

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100170852

【弁理士】

【氏名又は名称】白樫 依子

(72)【発明者】

【氏名】マリーヌ フィデル

(72)【発明者】

【氏名】ローランス ジトボジェル

(72)【発明者】

【氏名】ロマン ダイレール

(72)【発明者】

【氏名】コンラート ラウバー

【テーマコード（参考）】

2G045

4B029

4B063

4B065

4C084

4C085

4C086

4C087

4C206

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA24

2G045AA40

2G045CA26

2G045DA36

2G045FB02

2G045FB03

4B029AA07

4B029BB15

4B029FA12

4B063QA01

4B063QA18

4B063QA19

4B063QQ02

4B063QQ03

4B063QQ08

4B063QQ13

4B063QQ22

4B063QQ49

4B063QQ53

4B063QQ79

4B063QR02

4B063QR33

4B063QR36

4B063QR48

4B063QR56

4B063QR60

4B063QR62

4B063QR72

4B063QR77

4B063QR80

4B063QS25

4B063QS33

4B063QS34

4B063QS36

4B063QS38

4B063QS39

4B063QX02

4B065AA01X

4B065AA98X

4B065CA44

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA44

4C084DA44

4C084DC22

4C084NA05

4C084ZB26

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE03

4C085GG01

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA23

4C086HA12

4C086HA24

4C086HA26

4C086HA28

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA05

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB65

4C087BC83

4C087MA02

4C087NA05

4C087ZB26

4C087ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206DA12

4C206JB16

4C206MA02

4C206MA03

4C206MA04

4C206NA05

4C206ZB26

4C206ZC75

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045CA42

4H045DA50

4H045EA50

4H045EA54

4H045FA71

(57)【要約】

本発明は、抗がん免疫療法の分野に関する。特に、本発明は、がん治療の有効性におけるＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸腸内細菌叢の役割に関し、かつ患者が、がん治療、より正確には、免疫チェックポイント遮断剤ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、又はＰＤ－Ｌ２に対する抗体を、単独で若しくはＣＴＬＡ４及び／又は化学療法と一緒に投与することを含む治療などの、イムノオンコロジー（imuno-oncology）（Ｉ－Ｏ）療法から利益を得る可能性が高いかどうかを決定するための方法を提供する。本発明はまた、それを必要とする患者におけるそのような治療の有効性を改善する方法を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

イムノオンコロジー（Ｉ－Ｏ）療法に対する抵抗性又は感受性のマーカとしての血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルの使用であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減が、前記Ｉ－Ｏ療法に対する抵抗性のマーカである、使用。

【請求項2】

がん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスのマーカとしての血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルの使用であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減が、がん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスのマーカである、使用。

【請求項3】

血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１を測定することを含む、がんを有する個体においてがん関連又は抗生物質関連腸管ディスバイオシスをインビトロで診断するための方法であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減が、前記個体ががん関連又は抗生物質関連腸管ディスバイオシスを有することを指し示す、方法。

【請求項4】

前記血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルが、代表的なコホートにおける前記可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの中央値よりも低い場合、低減しているものとみなされる、請求項１若しくは請求項２に記載の使用、又は請求項３に記載の方法。

【請求項5】

がんを有する個体が、がん免疫（Ｉ－Ｏ）療法の投与前に代償性微生物叢中心介入（ＭＣＩ）を必要とするかどうかを決定するためのセラノスティック方法であって、請求項３及び請求項４のいずれか一項に記載の方法を用いて、前記個体ががん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスを有するか否かを評価することを含み、前記個体ががん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスを有する場合、前記個体がＩ－Ｏ療法による治療の投与前にＭＣＩを必要とする、セラノスティック方法。

【請求項6】

Ｉ－Ｏ療法による前記治療が、抗ＰＤ１抗体（Ａｂ）、抗ＰＤＬ－１ Ａｂ、抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ、抗Ｌａｇ３ Ａｂ、抗Ｔｉｍ３ Ａｂ、抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ、抗ＯＸ４０ Ａｂ、抗４１ ＢＢ Ａｂ、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂ、ＰＤ１及びＬａｇ３を標的とする二重特異性抗体、ＣＡＲ－Ｔ細胞、養子ＴＩＬ移入、並びにそれらの任意の組合せからなる群から選択され、単独で又は別の抗悪性腫瘍剤と組合され、特に免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣｌ）と、タキサン、シスプラチン、及び／又はオキサリプラチンとの任意の組合せである、請求項５に記載のセラノスティック方法。

【請求項7】

前記ＭＣＩが、以下：
－経口バンコマイシン抗生物質、
－エンテロクロスター（Enterocloster）新属分岐群の細菌を死滅させるファージ、
－エンテロクロスター新属分岐群の細菌を死滅させるように操作されたＣｒｉｓｐｒ Ｃａｓ９などのレアカットエンドヌクレアーゼ、
－アッカーマンシア（Akkermansia）菌種及び／又はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）（他の有益な細菌と混合されている可能性がある）、
－レチノイン酸、
－糞便微生物移植、並びに
－それらの混合物、
からなる群から選択される、請求項５又は６に記載のセラノスティック方法。

【請求項8】

がん誘導性ディスバイオシスを有する個体においてＩ－Ｏ療法と組み合わせてがんを治療するための、ＭＣＩのための薬剤であって、前記薬剤が、以下：
－経口バンコマイシン抗生物質、
－エンテロクロスター（Enterocloster）新属分岐群の細菌を死滅させるファージ、
－エンテロクロスター新属分岐群の細菌を死滅させるように操作されたＣｒｉｓｐｒ Ｃａｓ９などのレアカットエンドヌクレアーゼ、
－アッカーマンシア（Akkermansia）菌種及び／又はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）（他の有益な細菌と混合されている可能性がある）、
－糞便微生物組成物、及び
－それらの混合物、
からなる群から選択される、ＭＣＩのための薬剤。

【請求項9】

血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１を測定することを含む、ＭＣＩの成功をフォローアップするための方法であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１の正常化されたレベルが、前記ＭＣＩが腸のユーバイオーシスを成功裏に回復させたことを指し示す、方法。

【請求項10】

心血管イベントを経験している高リスクのヘビースモーカ（ＨＲＨＳＣＶ）における初期ＮＳＣＬＣ発生率を予測するバイオマーカとしての、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルの使用であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減が、ＮＳＣＬＣの発症を予測するマーカである、使用。

【請求項11】

可溶性ＭＡｄＣＡＭの低い血清レベルを有する患者におけるがんの治療における使用のための、（ｉ）抗ＰＤ１抗体又は抗ＰＤＬ１抗体と、（ｉｉ）抗ＩＬ１７Ａ抗体若しくは抗ＩＬ１７Ｒ抗体及び／又は組換えＩＬ－７と、を含む、併用療法。

【請求項12】

粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルを正常化することができる薬剤を同定するためのスクリーニング方法であって、（ｉ）ＭＡｄＣＡＭ－１を発現するか、又は前記ＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下においてレポータ遺伝子を発現するように操作された培養細胞を、試験化合物とインビトロで接触させることと、及び（ｉｉ）前記化合物のいずれが、ＭＡｄＣＡＭ－１の発現、又は前記ＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下において発現されるレポータ遺伝子の発現を誘導したかを評価することと、を含む、スクリーニング方法。

【請求項13】

腸ヒト化アバターマウスに試験化合物を投与することを含む、前記粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルを正常化することができる薬剤を同定するための、スクリーニング方法。

【請求項14】

アバターマウスにおける培養細胞又は他の実験で得られた結果を検証する工程を含み、アバターマウスが、８～１０日間の広域スペクトルＡＴＢで前処置され、次いで経口胃管栄養法によってヒトＦＭＴ生成物によって再コロニー形成された腸ヒト化マウスであり、
（ｉ）前記ＦＭＴ生成物が、前記培養細胞において前記ＭＡｄＣＡＭ－１の発現を誘導するものと同定されている化合物であるか、又は
（ｉｉ）前記ＦＭＴ生成物が、前記培養細胞において前記ＭＡｄＣＡＭ－１の発現を誘導しないものと同定されており、かつＨＵＶＥＣ細胞において前記ＭＡｄＣＡＭ－１の発現を誘導するものと同定されている別の化合物で富化されているか；又は
（ｉｉｉ）前記ＦＭＴが、ユーバイオーシス又は高可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１と関連した分類学的組成を有する、
請求項１２又は１３に記載の方法。

【請求項15】

以下：
（ｉ）胃管栄養法から８日後までに、前記腸ヒト化アバターマウスの一部を屠殺して、ＦＭＴレシピエントにおいてＭＡｄＣＡＭ－１及びＦｏｘｐ３ベースの回腸ＰＣＲを行い、それらを対照と比較すること；
（ｉｉ）前記腸ヒト化アバターマウスにおけるＭＡｄＣＡＭ－１の有意な上方制御の場合、各群の少なくとも３匹のマウスに皮下肉腫を接種し、それらを抗ＰＤ１ Ａｂで処置して、このＦＭＴがＡＴＢ処置マウスと比較して治療有効性を媒介し得ることを確実にすること；
（ｉｉｉ）腸ヒト化アバターマウスが抗ＰＤ１ Ａｂでの前記処置に応答する場合、それを富化するために使用された前記ＦＭＴ生成物又は前記非ＦＭＴ化合物は、前記粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルを正常化することができるものと推定すること、
を含む、請求項１３又は１４に記載の方法。

【請求項16】

前記ＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下においてレポータ遺伝子を発現する細胞と、生成物バンク中の薬剤をピッキングし、これらを培養細胞株に送達し、かつ前記レポータ遺伝子の発現を評価するように構成されたロボットと、を含む、請求項１２～請求項１５のいずれか一項に記載の方法を実施するためのスクリーニングプラットフォーム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗がん免疫療法の分野に関する。特に、本発明は、がん治療の有効性におけるＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸腸内細菌叢の役割に関し、かつ患者が、がん治療、より正確には、免疫チェックポイント遮断剤ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、又はＰＤ－Ｌ２に対する抗体を、単独で若しくはＣＴＬＡ４と一緒に投与することを含む治療などの、イムノオンコロジー（imuno-oncology）（Ｉ－Ｏ）療法から利益を得る可能性が高いかどうかを決定するための方法を提供する。本発明はまた、それを必要とする患者におけるそのような治療の有効性を改善する方法を提供する。

【背景技術】

【0002】

過去１０年間に、腸内マイクロバイオームは、広範囲の進行性悪性腫瘍にわたる免疫チェックポイント遮断に対する一次抵抗性における腸管内ディスバイオシスの役割の説得力のあるエビデンスと共に、進化するイムノオンコロジーの文脈において大きな注目を集めてきた。この主張は、ステージＩＩＩ及びステージＩＶの肺がん、腎臓がん、膀胱がん、及びメラノーマにおける抗ＰＤ－１／抗ＰＤＬ－１抗体（Ａｂ）の臨床アウトカムにおける広域スペクトル抗生物質の有害な影響を指摘する、多数の疫学的研究によって支持された。注目すべきことに、腸管内生態系の豊富さの減少は、Ｔ細胞浸潤物が乏しい腫瘍微小環境に関連していた。

【0003】

治療失敗における腸内ディスバイオシスの潜在的寄与の認識の高まりにより、多くの研究者は、免疫療法に対する抵抗性に関連したメタゲノミックベースの腸管の青写真について記載するようになった。しかしながら、どの程度まで、がん関連ディスバイオシスが腫瘍化プロセスに先行し、したがって、新生物発生と因果関係があるか、又は単にその直接的な結果であるのかについて、不明のままである。

【0004】

β７インテグリン含有ヘテロ二量体は、腸への白血球ホーミング、及び上皮表面での保持において中心的な役割を果たす。β７インテグリンサブユニットは、α４（ＣＤ４９ｄ）インテグリンサブユニットとヘテロ二量体を形成することで、α４β７インテグリンを得ることができる（また、「リンパ球パイエル板接着分子－１」（Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule-1：ＬＰＡＭ－１）と称される）。α４β７インテグリンは、その対抗受容体である粘膜アドレシン細胞接着分子－１（Mucosal Addressin Cellular Adhesion Molecule-1：ＭＡｄＣＡＭ－１）との相互作用を介して、リンパ球の接着、及び血管内皮バリアを越えた循環から腸関連二次リンパ組織（gut-associated secondary lymphoid tissue：ＧＡＬＴ）又は腸管粘膜固有層（lamina propria：ＬＰ）への血管外漏出を媒介する。膜貫通接着分子ＭＡｄＣＡＭ－１は、ＬＰ細静脈及びＧＡＬＴ高内皮細静脈（high endothelial venule：ＨＥＶ）上に構成的に発現され、かつ炎症促進性サイトカインによって誘導可能である（Ｂｒｉｓｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ｇｏｒｆｕ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００５）。レチノイン酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ：ＲＡ）発現ＣＤ１０３＋樹状細胞は、ＧＡＬＴにおけるα４β７インテグリン及びＣＣＲ９受容体の発現を支配して、ＭＡｄＣＡＭ－１への結合、及び腸管ＣＣＲ９リガンド、ＣＣＬ２５を介した腸粘膜へのリンパ球のホーミングを可能にする。循環からの炎症性β７＋Ｔ細胞の腸への流入及び血管外遊出を防止することによって、α４β７又はＭＡｄＣＡＭ－１を標的とする抗体は、動物モデルにおいて及び炎症性腸疾患に罹患している患者において、大腸炎の重症度を有意に低減させた（Ｈａｓｓａｎ－Ｚａｈｒａｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｒｅｉｎｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。腸上皮バリアの完全性を確実にするために腸管内Ｔｒｅｇ及びＴＨ１７細胞の調節機能を維持する際の、腸管内微生物叢が果たす役割への認識が高まっている（Ｌｉｔｔｍａｎ ａｎｄ Ｒｕｄｅｎｓｋｙ，２０１０；Ｐａｎｄｉｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。

【0005】

腸管におけるそれらの精液の恒常性の役割を超えて、ＴＨ１７はまた、腸外炎症性病変も制御する（Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１ａ；Ｍａｇｎｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１０）．。重要なことに、ＴＨ１７及びそれらの系譜関連ＦｏｘＰ３^＋調節性細胞は、慢性的な発がんの過程において誘導される炎症の期間中の耐性を回復させることによって抗腫瘍免疫監視を鈍らせる（Ｃｏｃｈａｕｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｆｒｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｇｕｅｒｙ ａｎｄ Ｈｕｇｕｅｓ，２０１５；Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｙｏｕｎｇ，２０１６）。ＲＯＲγｔ発現は、腸内共生生物によって誘導されるヒト及びマウスにおける、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの表現型的に安定な集団を同定した（Ｓｅｆｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。条件付きＲＯＲ_γｔノックアウトマウスは、樹状細胞が関与する間接的な機構を介して、腫瘍発生率又はポリープ形成の低減を示した（Ｂｌａｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｒｉｚｚｏ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。

【0006】

免疫チェックポイント阻害剤（Immune checkpoint inhibitor：ＩＣＩ）は、腫瘍免疫監視を元通りにし、かついくつかの組織学的型のがんの臨床管理のための標準的なケアになっている（Ｂｒａｈｍｅｒら、２０１５年；Ｒｏｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。ＩＣＩに対する一次抵抗性は、主に、腫瘍細胞の低い腫瘍突然変異負荷及び乏しい内因性抗原性（Ｒｉａｚ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｒｉｚｖｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５）、欠損抗原提示（Ｓｐｒａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５）、腫瘍内Ｔ細胞疲弊（Ｓｍｙｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１６）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）シグナル伝達経路におけるゲノム欠損（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）、ＣＳＦ１依存性腫瘍関連マクロファージ（Ｎｅｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１８）、及び免疫抑制性代謝キュー（Ｓｍｙｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１６）に起因するとされてきた。加えて、いくつかの研究は、逸脱した腸内マイクロバイオームレパートリがＩＣＩ有効性に悪影響を及ぼすことを指し示し、がん免疫設定点に影響を及ぼすことにおける共生生物の決定的な重要性を示唆している（Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｍｅｌｌｍａｎ，２０１７）。患者生存に対する抗生物質（ＡＴＢ）の影響を分析する後向き及び前向き研究は、免疫チェックポイント遮断中の臨床アウトカムに対するそれらの負の予測的影響を明らかにした（Ｅｌｋｒｉｅｆ ｅｔ ａｌ．，２０１９ｂ；Ｍｏｈｉｕｄｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｒｏｕｔｙ ｅｔ ａｌ．，２０１７；Ｔｉｎｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）。メタ分析により、ＡＴＢ取込みは、抗ＰＤ１／ＰＤＬ－１ Ａｂの最初の全身投与前（全身投与の間ではなく）に投与された場合、臨床アウトカムに対してより有害であることが明らかになり、直接的な医原性効果ではなくＡＴＢ過程後の再コロニー形成が有害であり得ることが示唆された（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。実際に、ＡＴＢ治療患者は、別々の種（フンガテラ・ハセワイ（Hungatella hathewayi）など（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）によってコロニー形成される傾向にあった。これらの疫学的知見から、ＡＴＢが、腸管生態系の組成に影響を及ぼすことによって、腸管恒常性制御性Ｔ細胞サブセットの腸／腫瘍輸送に影響を及ぼすことによって腫瘍内エフェクターと調節性Ｔ細胞との間の平衡を傾斜させ（３８）、それによって、がん免疫抑制を悪化させ得るという仮説が導かれた。

【発明の概要】

【0007】

最近、本発明者らが行ったメタ分析により、ＡＴＢ取込みが、抗ＰＤ１／ＰＤＬ－１ Ａｂの最初の全身投与前（全身投与の間ではなく）に投与された場合、臨床アウトカムに対してより有害であることが明らかになり、直接的な医原性効果ではなくＡＴＢ過程後の再コロニー形成が有害であり得ることが示唆された（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２０２１）。

【0008】

以下の実験部分では、本発明者らはこの仮説を確認し、かつ腸内細菌叢がいくつかの種類のがんの発生及び免疫療法に対する患者の応答に遠隔的に影響を及ぼす経路を示す。

【0009】

実際に、本発明者らは、ＡＴＢ誘導性ディスバイオシス（Ｒｏｕｔｙ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｖｅｔｉｚｏｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５）が、腸作用性Ｔ細胞によって発現される粘膜アドレシン細胞接着分子－１（ＭＡｄＣＡＭ－１）とその受容体α４β７との相互作用の破壊をもたらすことを示した。

【0010】

ＡＴＢの過程が停止する場合、細菌のエンテロクロスター（Enterocloster）新属から選択された種（以前に細菌のクロストリジウム（Clostridia）クラスに分類された、エンテロクロスター・クロストリジオホルミス（Enterocloster clostridioformis）新組合せなど（Ｈａａｓ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，２０２０））は、回腸粘膜固有層及び高内皮細静脈上における、回腸粘膜アドレシン細胞接着分子－１（ｍａｄｃａｍ１）遺伝子及び細胞表面タンパク質発現を引き継ぎ、かつ下方制御する。ＭＡｄＣＡＭ－１の喪失は、腸ホーミングα４β７^＋ ＴＨ１７及びＲＯＲ_γｔ^＋Ｔｒｅｇ ＣＤ４^＋Ｔ細胞の腫瘍床へのエクソダスを誘起し、これは、がん微小環境を許容し、ＰＤ－１遮断に対する抵抗性という結果となる。

【0011】

本発明はこれらの結果に基づいており、最初に、がんをまた有する個体ががん関連ディスバイオシス又は抗生物質関連ディスバイオシスも有するか否かを、血清若しくは回腸におけるＭＡｄＣＡＭの下方制御及び／又は腸オンコマイクロビオームシグネチャ（Gut OncoMicrobiome Signature：ＧＯＭＳ）に基づいて、インビトロで評価するための方法に関係する。この方法はまた、患者における微生物叢中心介入（microbiota-centered intervention：ＭＣＩ）の効果をフォローアップするために使用され得る。

【0012】

そのようながん関連及び／又はＡＴＢ関連ディスバイオシスを診断することは、特に免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）又は別のイムノオンコロジー（Ｉ－Ｏ）療法による治療を受ける前に、対象が代償性微生物叢中心介入（ＭＣＩ）を必要とすることを指し示す。

【0013】

Ｉ－Ｏ療法に対する感受性を回復させるための、経口バンコマイシン抗生物質、エンテロクロスター新属分岐群の細菌を死滅させることができるファージ、及びレアカット（rare-cutting）エンドヌクレアーゼ、アッカーマンシア（Akkermansia）菌種、及び／又はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）（他の有益な細菌と混合されている可能性がある）、レチノイン酸、糞便微生物移植、並びにそれらの混合物を含むそのようなＭＣＩの使用もまた、本発明の一部である。

【0014】

本発明はまた、低レベルの血清可溶性ＭＡｄＣＡＭを有するがん患者のための、（ｉ）抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１抗体と、（ｉｉ）抗ＩＬ－１７Ａ若しくは抗ＩＬ－１７Ｒ抗体、及び／又は組換えＩＬ－７とによる併用療法に関係する。

【0015】

本発明はまた、粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルを正常化することができる薬剤を同定するための、スクリーニング方法に関する。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1-1】広域スペクトル抗生物質（ＡＴＢ）は、回腸脈管構造におけるＭＡＤＣＡＭ－１発現を下方制御する。

【0017】

Ａ～Ｄ．連続広域スペクトル抗生物質（ＡＴＢ：アンピシリン、コリスチン、ストレプトマイシン）後、又はＡＴＢ停止から４～７日後の自発的再コロニー形成（ＡＴＢ_ＲＥＣＯ）後の、ＲＴ－ＰＣＲ（Ａ）、ＬＰ細静脈（上の顕微鏡写真）及び高内皮細静脈（ＨＥＶ、下側の顕微鏡写真）におけるＭＡｄＣＡＭ－１の免疫組織化学染色（Ｂ）、ＬＰのＣＤ４５^－細胞に対するフローサイトメトリーゲーティング（Ｃ）、又はＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける回腸（Ａ～Ｄ）若しくは結腸（Ａ）組織のＥＬＩＳＡ（Ｄ）で得られた、Ｍａｄｃａｍ１遺伝子生成物の相対的転写レベル（Ａ）及びタンパク質レベル（Ｂ～Ｄ）。各ドットは、１つの回腸又は結腸を表す。Ｅ～Ｆ．８日間の経口バンコマイシン（Ｅ）又は広域スペクトルＡＴＢで処置し、それに続く４～７日間の再コロニー形成（ＡＴＢ_ＲＥＣＯ）（Ｆ）、次いで、７日後の屠殺前に胃管栄養法でエンテロクロスター・クロストリジオホルミスを一度補充したマウスの回腸粘膜における、相対的なｍａｄｃａｍ１遺伝子発現の定量的ＲＴ－ＰＣＲ。各グラフは、同様の結果をもたらす２～３のうちの代表的な実験（５～６匹のマウス／群を含む）を図示する。パネルＡ又はＥ左パネルは２つの実験のデータをプールした。Ｇ．Ｅと同様であるが、ｘ軸に整列した細菌種を用いてＳＰＦ条件（ＡＴＢ前処置なし）において飼育したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスで、経口胃管栄養法を実施した。

【図1-2】広域スペクトル抗生物質（ＡＴＢ）は、回腸脈管構造におけるＭＡＤＣＡＭ－１発現を下方制御する。 Ｈ．左パネル：診断時（ＰＤ－１遮断前）にＮＳＣＬＣ患者由来の糞便を用いた３日間のＡＴＢ処置レシピエントマウスにおける糞便微生物移植（fecal microbiota transplantation：ＦＭＴ）が、ナイーブ特定病原体除去（specific-pathogen free：ＳＰＦ）マウス群で正規化された回腸Ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現に及ぼす影響（ｌｏｇ１０軸）。各実験は、異なるＦＭＴドナーを使用し、５～６匹の動物／群を含んでいた。各ドットは回腸を表す。右パネル：ドナー糞便の分類学的組成（taxonomic composition）の教師なし階層的クラスタリング（non supervised hierarchical clustering）（ショットガンＭＧシーケンシングを用いて定義）、２５％超の高い広がり及び臨床的に関連する細菌を選択。Ｉ．連続ＡＴＢ中又はＡＴＢ_ＲＥＣＯ期に、回腸粘膜固有層ＣＤ４^＋Ｔ細胞サブセット（α４β７^＋対ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔｒｅｇ対ＲＯＲγｔ^＋ＣＤ４＋（Ｔ_Ｈ１７）細胞）のフローサイトメトリー分析を実施するＡ～Ｄと同じ実験であり、各ドットは１つの回腸を表す。同様の結果が得られている２つのうちの代表的なＦａｃｓ分析が図示される。同様の回腸粘膜組織に関するｑＰＣＲ関連データについては図５Ｈ～図５Ｉもまた参照されたい。Ｊ．Ａと同様であるが、ＡＴＢ前処置なしのＭａｄｃａｍ－１遺伝子欠損マウス（回腸ＭＡＤＣＡＭ－１発現レベルに影響を及ぼさなかった抗ＰＤ１ Ａｂで処置又は非処置、図には示さず）。各ドットは１つの回腸のｑＰＣＲデータを表す。

【図1-3】広域スペクトル抗生物質（ＡＴＢ）は、回腸脈管構造におけるＭＡＤＣＡＭ－１発現を下方制御する。 Ｋ．９人の対照（ＡＴＢ非治療）患者及び７人のＡＴＢ治療患者における内視鏡介入中に収集された、腸管生検におけるヒトＭＡＤＣＡＭ－１、ＦＯＸＰ３、ＲＯＲＣ遺伝子のＲＴ－ＰＣＲベースの転写レベル（表１）。各ドットは、回腸、結腸、及び盲腸のいずれかからの１つの生検を表し、単一の患者は１～３回表される。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。

【表1】

【0018】

【図2-1】腸作用性ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２２分泌α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ及びＴｒｅｇ細胞のＡＴＢ後の細菌再コロニー形成によって誘導される腫瘍床への遊出

【0019】

Ａ～Ｂ．概要図に従って照明した後（Ａ、左パネル）、又は野生型マウスのｍＬＮへとＣＦＳＥを注射することによって（Ｂ、左パネル）、Ｋａｅｄｅマウスで評価した、二次リンパ器官（腸間膜ＬＮ、脾臓、ｔｄＬＮ：腫瘍排出ＬＮ）における光変換（Ａ）又はＣＦＳＥ標識（Ｂ）腸起源細胞のフローサイトメトリー決定。左パネルは実験設定の概要図を示し、右パネルは、様々な二次リンパ器官におけるｍＬＮ中の組織ＵＶ－Ａ照射又はＣＦＳＥ注射の２４時間後の、色勾配を用いた系統において詳述された各サブセットにおける光変換（photoconverted：ＰＣ）細胞対常在（非光変換（non photoconverted：ＮＰＣ））細胞の（Ａ）又はＣＦＳＥ標識細胞対常在（非標識）細胞の（Ｂ）、相対蓄積（ｌｏｇ２倍率変化（Fold Change：ＦＣ））を示す。統計：Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法によってｐ値を調整したマン・ホイットニーの検定、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。

【図2-2】腸作用性ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２２分泌α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ及びＴｒｅｇ細胞のＡＴＢ後の細菌再コロニー形成によって誘導される腫瘍床への遊出 Ｃ．Ｋａｅｄｅ（左）、又はｍＬＮ－ＣＦＳＥ注射ＷＴマウス（中央パネル）におけるｔｄＬＮへの、又は反対側（controlatreal）ＬＮへの（右パネル）、腸由来細胞の再循環に対する、αＭＡｄＣＡＭ－１ ｍＡｂを用いたＭＡｄＣＡＭ－１の中和の効果。各ドットは１匹のマウスを表す。２つのうち代表的な実験が図示されており、同様の結論に達している。Ｄ．５匹のＭＣＡ２０５担がん動物においてｍＬＮから細胞選別された、α４β７^ｈｉｇｈ対α４β７^ｎｅｇＣＤ４^＋リンパ球のＲＮＡシーケンシングにおける差次的遺伝子転写物を図示するボルケーノプロット。５匹のマウスについて各細胞型で発現された各遺伝子生成物について、（ｉ）α４β７^ｈｉｇｈ対α４β７^ｎｅｇＣＤ４^＋リンパ球における正規化後の、転写物の平均相対存在量の間の倍数比（ｆｏｌｄ ｒａｔｉｏ：ＦＲ）のｌｏｇ２（ｘ軸）；（ｉｉ）絶対値の相対存在量に基づいて計算された、マン・ホイットニーのＵ検定から導出されたｐ値のｃｏ－ｌｏｇ１０（ｙ軸）をコンピュータ処理して、ボルケーノプロットを作成した。黒色及び灰色のドットは有意である（ｐ＜０．０５）とみなされるが、一方でバックドット（back dots）は有意ではない（ｐ＞０．０５）。Ｅ．ＡＴＢ前処置（アンピシリン、コリスチン、ストレプトマイシン）後のＡＴＢ_ＲＥＣＯ期中にｔｄＬＮに達するＣＦＳＥ^＋（ｍＬＮに由来する、灰色のドット）又はＣＦＳＥ細胞（ｔｄＬＮ常在細胞、黒色のドット）内のＩＬ－１７Ａ^＋分泌α４β７^＋Ｔｒｅｇ（中央パネル）又はα４β７^＋Ｔ変換（右パネル）ＣＤ４^＋Ｔ細胞の実験設定（左パネル）及びフローサイトメトリー評価。各グラフは、２つの独立したプールした実験（５～６匹のマウス／群を含む）を図示する。Ｆ．ｍＬＮ中のＣＦＳＥ注射後のＭａｄｃａｍｔ１^－／－マウス（ＡＴＢで処置されていない）に対する野生型を担持するＭＣＡ２０５中における、ｔｄＬＮ又は反対側ＬＮに到達するＣＦＳＥ^＋Ｔｒｅｇ細胞のフローサイトメトリー決定。各ドットは１匹のマウスを表し、同様の結果をもたらした２つのうち代表的な実験が図示されている。

【図2-3】腸作用性ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２２分泌α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ及びＴｒｅｇ細胞のＡＴＢ後の細菌再コロニー形成によって誘導される腫瘍床への遊出 Ｇ．同上。Ｅ．と同様であるが、抗ＭＡＤＣＡＭ－１ Ａｂで処置した又は処置しなかったＫａｅｄｅマウスでは、フローサイトメトリーはＣＤ２５及びＣＤ１２７の膜染色を用いてＴｒｅｇを同定することができた。Ｈ．エンテロクロスター菌種による強制経口胃管栄養法の有無にかかわらず、腸作用性ＣＤ４＋Ｔ細胞の再循環に対するＡＴＢ過程を停止した後の細菌再コロニー形成の短期（４～７日）効果を評価するための実験設定（左パネル）。ＡＴＢ_ＲＥＣＯ期の間にｔｄＬＮに達するＰＣ（ｍＬＮに由来）又はＮＰＣ細胞（ｔｄＬＮ常在細胞）内のＫａｅｄｅマウスにおいて、高レベルのＣＤ２５（Ｔｒ１７様、中央パネル）又はＴＨ１７変換（右パネル）を発現する、ＴＨ１７細胞のフローサイトメトリー表現型決定（Ｇ）。各ドットは１匹のマウスを表し、グラフは２つのプールした実験を図示する。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）又はウィルコクソンの対応した符号付き順位検定：生のｐ値を指し示す。

【図2-4】腸作用性ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２２分泌α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ及びＴｒｅｇ細胞のＡＴＢ後の細菌再コロニー形成によって誘導される腫瘍床への遊出 Ｉ．水で処理（群１）、７日間のＡＴＢ処理で、ＡＴＢ継続中（群２）、又はＡＴＢを４日間（ＡＴＢ_ＲＥＣＯ）から停止（群３）、又はＥ．クロストリジオホルミス（E.clostridioformis）による経口胃管栄養法に４日間置き換え（群４）を行ったＭＣＡ２０５担腫瘍体において、ｔｄＬＮへと遊出するＣＦＳＥ＋ｍＬＮ由来ＣＤ４＋Ｔ細胞の単一細胞トランスクリプトミクス分析であり、この実験は、５匹の動物／群を含有する。教師なしクラスタリングによるプレートベースの全長単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑデータにおけるＣＦＳＥ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の遊出の４つのサブセットにおけるＵＭＡＰ遺伝子パターンであり、マウスの４つの群を重ねて示す（Ｉ、左パネル）。Ｌｏｇ２ ｐ値による各特定の細胞型と関連した差次的遺伝子発現パターンのボルケーノプロット、及び他の３つと比較した各サブタイプの割合（Ｔｒｅｇ（Ｉ、中央パネル）と増殖細胞（Ｉ、右パネル）との倍数比。４つの実験群の各々による細胞型遺伝子パターンについては図７を参照されたい。

【図2-5】腸作用性ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２２分泌α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ及びＴｒｅｇ細胞のＡＴＢ後の細菌再コロニー形成によって誘導される腫瘍床への遊出 教師なしクラスタリングによるプレートベースの全長単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑデータにおけるＣＦＳＥ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の遊出の４つのサブセットにおけるＵＭＡＰ遺伝子パターンであり、マウスの４つの群を重ねて示す（Ｉ、左パネル）。Ｌｏｇ２ ｐ値による各特定の細胞型と関連した差次的遺伝子発現パターンのボルケーノプロット、及び他の３つと比較した各サブタイプの割合（Ｔｒｅｇ（Ｉ、中央パネル）と増殖細胞（Ｉ、右パネル）との倍数比。４つの実験群の各々による細胞型遺伝子パターンについては図７を参照されたい。

【0020】

【図3-1】ＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸の破壊は、マウスにおいてαＰＤ－１ベースの免疫療法に対する不適応応答を誘導した。

【0021】

Ａ．Ｉｔｇｂ７又はＭａｄｃａｍ１遺伝子欠損マウスに対する、野生型（ｗｔ）に移植された皮下ＭＣＡ２０５（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊの同系）の腫瘍成長動態。２つの処置群（抗ＰＤ１対アイソタイプ対照Ａｂ）における経時的な５～６匹のマウス／群間の腫瘍サイズの平均＋ＳＥＭ。Ｂ～Ｄ．抗ＰＤ１療法抗体（又はアイソタイプ対照Ａｂ）を受けながら、アイソタイプ対照、抗α４β７ ｍＡｂ、又は－αＭＡｄＣＡＭ－１ｍＡｂで処置した動物における、皮下ＭＣＡ２０５（Ｂ）、乳腺４Ｔ１（ＢＡＬＢ／ｃの同系、Ｃ）、及び肺同所性ＴＣ１－ｌｕｃ（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊの同系、Ｄ）腫瘍の移植後の腫瘍成長動態又は腫瘍発光。肺同所性ＴＣ１腫瘍の場合、ＩＶＩＳのイメージングシステムを用いる全身発光を使用して、肺におけるルシフェラーゼ発現ＴＣ１速度論を定量化した。アイソタイプ対照ｍＡｂ、αα４β７ ｍＡｂ、又はαＭＡｄＣＡＭ－１ ｍＡｂによるＰＤ－１遮断前後の比率を計算した。Ｅ．Ｍａｄｃａｍ１遺伝子欠損マウスに対する野生型（ｗｔ）における、ＣＤ４＋Ｔ細胞脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（tumor infiltrating lymphocyte：ＴＩＬ）上のα４β７発現のフローサイトメトリー分析。各ドットは１匹のマウスを表す。グラフは、５匹のマウス／群の２回の独立した実験をプールした。スチューデントのｔ検定。

【図3-2】ＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸の破壊は、マウスにおいてαＰＤ－１ベースの免疫療法に対する不適応応答を誘導した。 Ｆ．中和αＭＡｄＣＡＭ－１ ｍＡｂ又はアイソタイプ対照ｍＡｂで処置したマウスにおける、様々な免疫α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞サブセットの相対的割合（確立された皮下ＭＣＡ２０５から解離した、ＴＩＬのフローサイトメトリー分析によって決定）を示す、ヒートマップで表される教師なし階層的クラスタリング。

【図3-3】ＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸の破壊は、マウスにおいてαＰＤ－１ベースの免疫療法に対する不適応応答を誘導した。 Ｇ～Ｉ．野生型（ｗｔ）対Ｍａｄｃａｍ１遺伝子欠損マウス（Ｇ）における、又は抗ＰＤ１ Ａｂで処置された若しくは処置されていない、ＡＴＢ前処置レジメン（（ＡＴＢ停止後４日（ＡＴＢ_{ＲＥＣＯ－Ｓ}）若しくはＡＴＢ停止後１２日（ＡＴＢ_{ＲＥＣＯ－Ｌ}））を受けている野生型ＭＣＡ２０５担腫瘍マウスにおける、α４β７^＋Ｔｒｅｇ ＴＩＬでのＲｏｒγｔ発現の細胞内フローサイトメトリー分析（Ｈ、Ｉ）。各ドットは１匹のマウスを表す。同様の結果をもたらし、５匹のマウス／群を含む、２つの独立した実験のうちの代表的な実験を図示する（Ｇ、Ｉ）。スチューデントのｔ検定（Ｇ）。

【図3-4】ＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸の破壊は、マウスにおいてαＰＤ－１ベースの免疫療法に対する不適応応答を誘導した。 Ｊ．ＰＤ－１遮断の設定で、アイソタイプ対照ｍＡｂ、αα４β７ ｍＡｂ、又はαＭＡｄＣＡＭ－１ ｍＡｂで処置した皮下ＭＣＡ２０５担腫瘍マウスにおける、ＣＣＲ５^＋ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞についての腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）のフローサイトメトリー分析。Ｋ．ＡＴＢ_ＲＥＣＯ期の最中のαＰＤ－１ ｍＡｂによる治療法後、及び免疫療法と並行してαＩＬ－１７Ａ ｍＡｂ（ｉｐ）を用いたＩＬ－１７Ａの全身中和後の屠殺時における、皮下４Ｔ１野生型（左）又は４Ｔ１ ＩＬ－２２Ｒα１ノックアウト（右）腫瘍細胞株の実験設定の概要図（左パネル）及び腫瘍サイズの断面研究（平均±ＳＥＭ）。各実験において、４つのαＰＤ－１腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を、ＡＴＢ_ＲＥＣＯ期の最中、３日ごとに投与した。各実験は６匹のマウス／群を含んでいた。２～３のうち代表的な実験を図示する。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊生のｐ値を指し示す。

【0022】

【図4-1】血清可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１は、ＮＳＣＬＣ患者におけるＰＤ１遮断に対する臨床的利益の予測因子であり、かつ腸内ディスバイオシスの尺度である。

【0023】

Ａ．６５匹のＭＣＡ２０５担腫瘍マウスにおけるＲＴ－ＰＣＲ決定回腸Ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現レベルと血清可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１（ＥＬＩＳＡによって決定）との間のスピアマン相関（各ドットは１匹の動物を表す）。Ｂ．健常ボランティアにおける血清レベル（ＨＶ、ｎ＝７０）と比較した、最近のＡＴＢ取込みの履歴による（右パネル）、２つの独立したコホート（Ｃ０１、Ｃ０２、左パネル）に属する３０１人のＮＳＣＬＣ患者における可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１の血清レベルのＥＬＩＳＡモニタリング。各ドットは１人の患者の血清を表す。Ｃ～Ｄ．ＮＳＣＬＣ患者における血清ｓＭＡＤＣＡＭ－１レベルによる腸管内微生物叢の分類学的内容のα多様性及びβ多様性。９５人のＮＳＣＬＣ患者で構成される集団全体におけるｓＭＡＤＣＡＭ－１の中央値（Ｃ）、及び両群における組成物の個体間可変性（Ｄ）による、ショットガンＭＧシーケンシングにおけるＭＧＳ多様性ベースの豊富さ評価。Ｅ．ＰＦＳ（Ｅ）及びＯＳ（Ｆ）についてαＰＤ－１ ｍＡｂ免疫療法で治療したステージＩＶ ＮＳＣＬＣの２つの独立した（左側カラム及び右側カラム）コホートにおける、各コホートの中央値に従って分割したｓＭＡＤＣＡＭ－１の血清レベルの予測値のカプラン・マイヤー生存曲線及びコックス回帰線形分析（患者の説明及び多変量分析については、表５～表６を参照のこと）。

【図4-2】血清可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１は、ＮＳＣＬＣ患者におけるＰＤ１遮断に対する臨床的利益の予測因子であり、かつ腸内ディスバイオシスの尺度である。 Ｇ．ｓＭＡＤＣＡＭ－１血清レベル（＜（低）又は＞（高）中央値）によるＭＧＳの教師あり階層的クラスタリング（広がり＞１０％）、カラーコードは、様々なパイプライン及びアルゴリズムを用いて左側カラムの棒グラフに整列した、各有意種の相対的存在量を特徴付ける。Ｈ．ｓＭＡＤＣＡＭ－１血清レベル（＜（低）又は＞（高）中央値）に従って２つの群に分けた９５人の患者の糞便材料中の全ＭＧＳ種間の割合でのＥ．クロストリジオホルミスの相対存在量。各ドットは、１つの糞便／血清／患者を表す。スチューデントｔ’検定。

【0024】

【図5-1】ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスは、腸管粘膜固有層における免疫遺伝子生成物の転写プログラムに影響を及ぼす。

【0025】

Ａ．組織溶解物のＥＬＩＳＡ（左パネル）及びＲＴ－ＰＣＲ（右パネル）における、ケモカイン（左パネル）及びサイトカイン／転写因子（右パネル）発現プロファイルについての、ＡＴＢ処理及び非処理（水）回腸、結腸、並びに腫瘍床の間のｌｏｇ２倍率変化比率のヒートマップ。統計：Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法によってｐ値を調整したマン・ホイットニーの検定、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。

【図5-2】ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスは、腸管粘膜固有層における免疫遺伝子生成物の転写プログラムに影響を及ぼす。 Ｂ．ＡＴＢ処置マウスにおけるＩＨＣによる回腸ＨＥＶ上のＣＤ３１発現の評価。Ｃ．回腸組織（左）における又は腸間膜リンパ節（右）におけるＭａｄｃａｍ１遺伝子の相対転写レベルに対する、様々な抗生物質レジメンによる７日間の前処置又はＡＴＢ_ＲＥＣＯ後の影響のＲＴ－ＰＣＲ評価。連続（ｃ．）、Ａｍｐｉ_ｃ：ｃ．アンピシリン、Ｃｏｌｉｓｔ_ｃ：ｃ．コリスチン、Ｓｔｒｅｐｔｏ_ｃ：ｃ．ストレプトマイシン、Ｖａｎｃｏ_ｃ：ｃ．バンコマイシン、Ｅｒｙｔｈｒ_ｃ：ｃ．バンコマイシン。各ドットは１つの回腸を表す。グラフは、５匹のマウス／群を含む２～３回の実験を集めた。Ｄ．パイエル板（ＰＰ）（Ｄ）における、Ｍａｄｃａｍ１（Ｄ、Ｅ）、及びＶＣＡＭ１（Ｅ）遺伝子の相対的発現のＲＴ－ＰＣＲ評価。各ドットは１つの回腸を表す。グラフは、５匹のマウス／群を含む２つの実験を集めた。

【図5-3】ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスは、腸管粘膜固有層における免疫遺伝子生成物の転写プログラムに影響を及ぼす。 Ｅ．様々なリンパ節（ＬＮ）（ｍＬＮ：腸間膜ＬＮ、ｓｋ：皮膚ＬＮ、ｔｄ：腫瘍排出ＬＮ）（Ｅ）における、Ｍａｄｃａｍ１（Ｄ、Ｅ）、及びＶＣＡＭ１（Ｅ）遺伝子の相対的発現のＲＴ－ＰＣＲ評価。各ドットは１つの回腸を表す。グラフは、５匹のマウス／群を含む２つの実験を集めた。Ｆ．様々なＡＴＢレジメン（Ｃ参照）で処置し、かつ処置停止から４日後に屠殺したマウスから採取した、回腸材料の好気性条件及び嫌気性条件下におけるカルチャロミクス（culturomics）。

【図5-4】ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスは、腸管粘膜固有層における免疫遺伝子生成物の転写プログラムに影響を及ぼす。 Ｇ．各条件における培養種の質量分析法による定性的な同定。Ｈ～Ｉ．ＡＴＢで処置したマウス又は処置しなかったマウスの回腸組織におけるマウスＦｏｘｐ３、ＲＯＲｃ、及びＩＬ１７ａ遺伝子のＲＴ－ＰＣＲ評価（Ｈ）、並びにマウスにおける回腸Ｍａｄｃａｍ１とＲｏｒｃ又はＦｏｘｐ３との発現レベルのスピアマン相関（Ｉ）。各ドットは１匹の動物を表す。３つの独立した実験からの連結データ。Ｊ．９人の対照（ＡＴＢなし）患者及び７人のＡＴＢ治療患者における内視鏡介入中に収集した、腸管生検におけるヒトＦＯＸＰ３（左）及びＩＬ－１７Ａ（右）とＭａｄｃａｍ－１との遺伝子のＲＴ－ＰＣＲベース転写レベル間のスピアマン相関（表１）。各ドットは、回腸、結腸、及び盲腸のいずれかからの１つの生検を表し、単一の患者は１～３回表される。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。

【0026】

【図6-1】様々な区画における腸起源細胞のプロファイリング。

【0027】

Ａ．担腫瘍Ｋａｅｄｅマウスにおける腸管（回腸、盲腸、ｍＬＮ）のＵＶ－Ａ照射の実験設定、並びにｔｄＬＮ（上部パネル）及びｍＬＮ（下部パネル）における光変換細胞（ＰＣ）のフローサイトメトリーゲーティング戦略の概略図。開腹及び腸管区画のＵＶ－Ａ照射の前、５分後、及び２４時間後の標的器官におけるＰＣ頻度を指し示す。Ｂ．同上。Ａと同様に、２４時間でのｍＬＮ、脾臓、ｔｄＬＮ、及び腫瘍床におけるＰＣ細胞の詳細な割合を有し、各ドットは１匹のマウスを表す。同様の結果をもたらす３つのうちの典型的な実験を図示する。Ｃ．異なる組織（ｘ軸）におけるｍＬＮでのＣＦＳＥ注射の２４時間後の、ＣＦＳＥ＋細胞の実験設定（左パネル）及びフローサイトメトリー決定であり、各ドットはマウス１匹を表す。３つの独立した実験からのデータをプールしている。Ｄ．同上。Ｂ．と同様に、「腸管」（回腸＋盲腸＋ｍＬＮ）対回腸のみのＵＶ－Ａ照射後の腸作用性細胞のｔｄＬＮ又は腫瘍床に向かっての動員をモニタリングし、各ドットは１匹のマウスを表す。同様の結果をもたらす２つのうちの典型的な実験を図示する。

【図6-2】様々な区画における腸起源細胞のプロファイリング。 Ｅ～Ｆ．ＵＶ－Ａ照射領域（回腸対「腸管」（回腸＋盲腸＋ｍＬＮ）に応じた、Ｋａｅｄｅマウス又はｍＬＮ（Ｆ）中にＣＦＳＥ注射した野生型マウスにおける、脾臓、ｔｄＬＮ、又は腫瘍床における常在（ＮＰＣ）又は再循環（ＰＣ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞による腸インテグリンα４β７発現のフローサイトメトリー評価。Ｇ．ＡＴＢで処置した又は処置していない、及び皮下ＭＣＡ２０５を担持し、２４時間前にｍＬＮ中でＣＦＳＥ注射に供された動物におけるＣＦＳＥ標識によって追跡した、ｔｄＬＮ中の異なるＣＤ４＋ Ｔｒｅｇ細胞型（α４β７、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２の発現が変動）のフローサイトメトリー評価。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊生ｐ値を注記。

【図6-3】Ｈ．ＡＴＢで処置した又は処置していない、及び皮下ＭＣＡ２０５を担持し、２４時間前にｍＬＮ中でＣＦＳＥ注射に供された動物におけるＣＦＳＥ標識によって追跡した、ｔｄＬＮ中の異なるＣＤ４＋ Ｔｒｅｇ細胞型（α４β７、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２の発現が変動）のフローサイトメトリー評価。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊生ｐ値を注記。

【0028】

【図7-1】再コロニー形成によって誘導される遺伝子発現プロファイリング。

【0029】

Ａ．ｓｃＲＮＡ配列データ収集のための実験設計。５匹のＭＣＡ２０５担腫瘍動物を含有するマウスの４つの実験群（水、連続ＡＴＢ、ＡＴＢ_ＲＥＣＯ、Ｅ．クロストリジオホルミス）において、ｍＬＮでのＣＦＳＥ接種の２４時間後にｔｄＬＮから採取したＣＦＳＥ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞に対して単一細胞トランスクリプトミクスを実施した。Ｂ．品質管理及びシーケンシング後の各条件についてｔｄＬＮで回収されたＣＦＳＥ＋細胞の絶対数。

【図7-2】再コロニー形成によって誘導される遺伝子発現プロファイリング。 Ｃ．水群（対照）に対するＡＴＢ_ＲＥＣＯ群のＴｒｅｇサブセット細胞に属する、ＣＦＳＥ^＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のＲＮＡシーケンシングにおける差次的遺伝子転写を図示するボルケーノプロット。５匹のマウスについて各細胞型で発現された各遺伝子生成物について、（ｉ）群３対群１における正規化後の、転写物の平均相対存在量の間の倍数比（ＦＲ）のｌｏｇ２（ｘ軸）；（ｉｉ）絶対値の相対存在量に基づいて計算された、マン・ホイットニーのＵ検定から導出されたｐ値のｃｏ－ｌｏｇ１０（ｙ軸）をコンピュータ処理して、ボルケーノプロットを作成した。青色（下方制御された遺伝子生成物）及び赤色（上方制御された遺伝子生成物）のドットは有意であるとみなされるが（ｐ＜０．０５）、一方でバックドットは有意ではない（ｐ＞０．０５）。

【図7-3】再コロニー形成によって誘導される遺伝子発現プロファイリング。 Ｄ．Ｃと同様であるが、Ｔｒｅｇにおける遺伝子転写物を、ＡＴＢ_ＲＥＣＯ（群３、左パネル）又はＡＴＢ Ｅ．クロストリジオホルミス（群４）内の他のＴ細胞サブセットと比較する。

【図7-4】再コロニー形成によって誘導される遺伝子発現プロファイリング。 Ｅ．Ｄと同様であるが、増殖性Ｔ細胞サブセットの遺伝子転写物を、陰性対照群（水、群１、左パネル）及びＡＴＢ_ＲＥＣＯ（群３、右パネル）内の他のＴ細胞サブセットと比較する。

【図7-5】再コロニー形成によって誘導される遺伝子発現プロファイリング。 Ｆ．Ｅと同様であるが、２つのマウス群（水、群１対ＡＴＢ_ＲＥＣＯ（群３）のクラスタ１に属する細胞（ＵＭＡＰ、図２Ｉ）の遺伝子転写物を左パネルで比較し、次いで、これらのクラスタ１細胞サブセットの転写プロファイルをＡＴＢ_ＲＥＣＯ（群３）の他のクラスタと比較する（右パネル）。

【図7-6】再コロニー形成によって誘導される遺伝子発現プロファイリング。 Ｇ．Ｅと同様であるが、２つのマウス群（水、群１対ＡＴＢ_ＲＥＣＯ（群３））におけるクラスタ０に属する細胞（ＵＭＡＰ、図２Ｉ）における遺伝子転写物を比較する。

【0030】

【図8-1】αＰＤ－１ ｍＡｂは、ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスによって引き起こされる腫瘍病変への、腸作用性α４β７^＋ＲＯＲ_γｔ^＋Ｔ_ｒｅｇ又はＩＬ－１７Ａ^＋ＩＬ－２２^＋Ｔ_ｒｅｇの蓄積を悪化させる。

【0031】

Ａ．ＭＣＡ２０５担腫瘍（抗ＰＤ１又はアイソタイプ対照Ａｂ処置）マウスにおける、回腸Ｍａｄｃａｍ１と腫瘍サイズとのスピアマン相関。各ドットは１匹のマウスを表す。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊生ｐ値を注記。Ｂ．皮下ＭＣＡ２０５腫瘍におけるα４β７^＋又はα４β７^－ＣＤ４^＋ ＴＩＬ画分の中のＲＯＲ_γｔ＋ Ｔｒｅｇ（Ｔ_ｒ１７）のフローサイトメトリー評価。各ドットは、１つの腫瘍及びマウスを表す。Ｃ．担腫瘍者における様々な期間のＡＴＢ間隔中のＰＤ１遮断の実験設定。Ｄ～Ｅ．ｍＬＮ腫瘍（Ｄ）における又は皮下ＭＣＡ２０５腫瘍（^Ｅ）におけるＴｒｅｇ内の、ＲＯＲγｔ^＋細胞又はＩＬ－１７Ａ＋ＩＬ－２２＋細胞のフローサイトメトリー評価。

【図8-2】αＰＤ－１ ｍＡｂは、ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスによって引き起こされる腫瘍病変への、腸作用性α４β７^＋ＲＯＲ_γｔ^＋Ｔ_ｒｅｇ又はＩＬ－１７Ａ^＋ＩＬ－２２^＋Ｔ_ｒｅｇの蓄積を悪化させる。 Ｆ．４Ｔ１腫瘍（^Ｆ）におけるＴｒｅｇ内の、ＲＯＲγｔ^＋細胞又はＩＬ－１７Ａ＋ＩＬ－２２＋細胞のフローサイトメトリー評価。Ｇ．皮下（ｓ．ｃ．）におけるＩＬ－１７Ａ^＋ＩＬ－２２^＋分泌Ｔｒｅｇ細胞（左）及びα４β７^＋Ｔｒｅｇ細胞（右）のフローサイトメトリー決定ＡＴＢ停止後のＰＤ１遮断によって、及びαＰＤ－１ベース療法中のＥ．クロストリジオホルミス細菌又はＬ．ロイテリ（L．reuteri）細菌による自発的ＡＴＢ_{ＲＥＣＯＬ}＋／－強制腸内コロニー形成によって治療された、ＭＣＡ２０５腫瘍。各ドットは、同様の結果得る２つのうち６匹のマウス／群を含有する典型的な実験において、屠殺時の各動物の腫瘍サイズを表す。詳細な表現型については表４を参照されたい。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）：^＊生ｐ値を注記。

【0032】

【図9-1】アッカーマンシア・ムシニフィラは、回腸Ｍａｄｃａｍ－１遺伝子発現を上方制御し、かつＭＡＤＣＡＭ－１依存的様式で腸作用性Ｔ細胞の腫瘍床への再循環を防止した。

【0033】

Ａ．生きている又は低温殺菌されたＡ．ムシニフィラ（A．muciniphila）ＳＧＢ９２２８（Ａ．ｍｕｃ、左パネル）の経口胃管栄養法での補充あり又は補充なしで、３日間ＡＴＢで処置し、ＰＤ１難治性ＮＳＣＬＣ患者由来のＦＭＴを用いて腸ヒト化したＭＣＡ２０５担腫瘍マウス（ＦＭＴＮＲ）における屠殺時の腫瘍サイズ。ｔｄＬＮ排出皮下ＭＣＡ２０５肉腫における、ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるα４β７及び／又はＣＣＲ９発現のフローサイトメトリー評価（中央及び右パネル）。Ｂ．細菌＋／－抗ＭＡＤＣＡＭ－１ Ａｂで補償した抗ＰＤ１処置ＦＭＴ ＮＲアバターマウスの腫瘍サイズ間の比率として図示される、ＰＤ１遮断に対する応答に対する低温殺菌Ａ．ムシニフィラＳＧＢ９２２８の代償性効果に対する抗ＭＡＤＣＡＭ－１中和抗体の効果。Ｃ～Ｄ．ＦＭＴ ＮＲをコロニー形成し、かつ経口胃管栄養法によってアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａ．ｍｕｃ）を補充し、αＭＡｄＣＡＭ－１ ｍＡｂ処置を受けた又は受けなかったマウス、及びαＰＤ－１ ｍＡｂでの処置を受けたマウスのｔｄＬＮにおける、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞によるＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２２サイトカイン分泌のフローサイトメトリー評価（Ｃ）。細菌＋／－抗ＭＡＤＣＡＭ－１ Ａｂで補償された抗ＰＤ１処置ＦＭＴ ＮＲアバターマウスにおいてｔｄＬＮに達する、ＩＬ－１７＋ＩＬ－２２＋Ｔｒｅｇ又は総ＣＤ４^＋Ｔ細胞の間の比率として図示された、Ｔｒ１７の腸外エクソダスを防止するための低温殺菌Ａ．ムシニフィラＳＧＢ９２２８の予防効果に対する抗ＭＡＤＣＡＭ－１中和抗体の効果（Ｄ）。ＡＮＯＶＡ統計分析（クラスカル・ワリス検定）又はウィルコクソンの対応した符号付き順位検定：^＊生のｐ値が注記されている。

【図9-2】アッカーマンシア・ムシニフィラは、回腸Ｍａｄｃａｍ－１遺伝子発現を上方制御し、かつＭＡＤＣＡＭ－１依存的様式で腸作用性Ｔ細胞の腫瘍床への再循環を防止した。 Ｅ．ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスの状況で回腸ＨＥＶにおいてＭＡＤＣＡＭ－１発現の破壊がある場合に生じる、腸で初回刺激されたＩＬ－１７Ａ^＋ＩＬ－２２^＋ＲＯＲγｔ^＋α４β７^＋Ｔｒｅｇ（Ｔ_ｒ１７）細胞の腫瘍微小環境への再循環を説明する図による概要。

【0034】

【図10-1】可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１血清レベルは、ＰＤ－１遮断に対する臨床的利益の堅固な予測因子である。

【0035】

Ａ．４ノットの制限三次スプライン（restricted cubic spline：ＲＣＳ）を用いて、表５に記載の各コホートＣ０１及びＣ０２におけるＰＤ１遮断及び血清ｓＭＡＤＣＡＭ－１（ＥＬＩＳＡでモニタリングした）中における、進行又は死亡のリスクについてのハザード比（Hazard Ratio：ＨＲ）を評価するコックス線形回帰分析。ノット数は、赤池の情報量基準に従って選択された。左パネル（Ｃ０１）：Ｎ＝１１５人のＮＳＣＬＣ患者、６２人の死亡、ＯＳ中央値＝１５ヶ月（９５％Ｃ．Ｉ：１１．２～２５ヶ月）、ＨＲ＝０．９２（９５％Ｃ．Ｉ：０．８８～０．９７、ｐ＝０．００１）右パネル（Ｃ０２）：Ｎ＝１８６人のＮＳＣＬＣ患者、８３人の死亡、ＯＳ中央値＝１２ヶ月（９５％Ｃ．Ｉ：９～１７ヶ月）、ＨＲ＝０．９７（９５％Ｃ．Ｉ：０．９４～０．９９、ｐ＝０．０２）。Ｂ．Ｐｒｅｖａｌｕｎｇ研究：フォローアップの２年以内に肺がんと診断される患者（Ｎ＝９）対肺がんと診断されない患者（Ｎ＝５６対照）の肺がん発生より前の、ＣＶＤ喫煙者の血清ｓＭＡＤＣＡＭ－１レベル。Ｃ．ｓｅｒｍ ｓＭＡＤＣＡＭ－１と循環α４β７＋Ｒｏｒγｔ Ｔｒｅｇとのスピアマン相関。Ｅ．分類学的ＭＧＳベースのクラスタリングとｓＭＡＤＣＡＭ－１の中央値との分離のＡＮＯＶＡ統計分析。

【図10-2】可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１血清レベルは、ＰＤ－１遮断に対する臨床的利益の堅固な予測因子である。 Ｄ．ｓＭＡＤＣＡＭ－１ペア血清レベルによるＮＳＣＬＣ患者の糞便のショットガンＭＧシーケンシングに基づく分類学的組成の教師なし階層的クラスタリング。

【0036】

【図11】血清中のｓＭＡｄＣＡＭ－１の中央値に従って２１２人のＲＣＣ患者のログランク統計学的検定を用いた、カプラン・マイヤー全生存曲線及びコックス回帰単変量分析。チロシンキナーゼ阻害剤の失敗後の抗ＰＤ１ Ａｂに基づくセカンドライン免疫療法におけるＲＣＣ。

【0037】

【図12】血清中のｓＭＡｄＣＡＭ－１の中央値に従って２１２人のＲＣＣ患者のログランク統計学的検定を用いた、カプラン・メヤー（Kaplan Meir）無増悪生存曲線及びコックス回帰単変量分析。チロシンキナーゼ阻害剤の失敗後の抗ＰＤ１ Ａｂに基づくセカンドライン免疫療法におけるＲＣＣ。

【0038】

【図13】前治療されたセカンドライン転移性膀胱がん患者における、抗ＰＤＬ－１ Ａｂデュルバルマブに対する臨床的利益を予測するためのバイオマーカｓＭＡｄＣＡＭ－１の有効性。

【0039】

Ａ．各ドットは１つの時点及び患者を表し、各患者は３回表される、デュルバルマブ前のベースライン時、並びに応答者（エリート患者、ＰＦＳ＞５ヶ月）及び非応答者（発症者、ＯＳ＞６ヶ月）における１ヶ月及び４ヶ月の治療法中の、患者の血清中のｓＭＡｄＣＡＭ＿１の濃度。Ｂ～Ｃ．全コホート内のＭＡｄＣＡＭ＿１の中央値に従って分離した患者における、ｓＭＡｄＣＡＭ＿１の予測値、並びに生存（ＯＤ、Ｂ）及びＰＦＳ（Ｃ）のカプラン・マイヤー曲線のログランク単変量分析。

【発明を実施するための形態】

【0040】

第１の態様によれば、本発明は、当該個体からの血清試料中の可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１を測定すること（例えば、ＥＬＩＳＡによる）を含む、がんを有する個体においてがん関連又は抗生物質関連腸管ディスバイオシスをインビトロで診断するための方法であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減が、個体ががん関連又は抗生物質関連腸ディスバイオシスを有することを指し示す、方法に関する。

【0041】

あるいは、上記の方法は、患者の回腸生検における回腸粘膜固有層（lamina propria：ＬＰ）細静脈における又は高内皮細静脈（ＨＥＶ）における、ＭＡｄＣＡＭ－１の発現を評価することによって実施され得、ここで、ＬＰ又はＨＥＶにおけるＭＡｄＣＡＭ－１発現の低減は、個体ががん関連回腸障害（ileopathy）／ディスバイオシスを有することを指し示す。そのような場合、ＭＡｄＣＡＭ－１の発現は、ＲＴ－ＰＣＲによって、又は生検に対して実施されるＥＬＩＳＡ若しくはフローサイトメトリー若しくは免疫組織化学によって測定され得る。

【0042】

したがって、本発明は、がん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスのマーカとしての血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルの使用であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減が、がん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスのマーカである、使用に関する。

【0043】

以下の実験部分に示されるように、本発明者らは、個体の血清中の可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルがまた、イムノオンコロジー（Ｉ－Ｏ）療法に対する抵抗性又は感受性のマーカであり、ここで、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１の低減したレベルが、Ｉ－Ｏ療法に対する抵抗性のマーカであることを実証した。

【0044】

したがって、本発明によれば、個体の血清中の可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルを使用して、個体がイムノオンコロジー（Ｉ－Ｏ）療法（低レベル）に抵抗する可能性が高いか否かを評価することができる。血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１の正常な（又は上昇した）レベルは、臨床的利益のマーカである。

【0045】

本文において、「Ｉ－Ｏ療法」という語句は、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）、並びにＣＡＲ－Ｔ細胞、養子ＴＩＬ移入、及びそれらの組合せを含む。本発明の文脈において、「Ｉ－Ｏ療法」とはまた、上記のＩ－Ｏ剤のうち１つ、並びに化学療法、特に免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）と、タキサン、ペルメトレキセド（permetrexed）、シスプラチン、及び／若しくはオキサリプラチン（oxaliplatinum）、又はＥＧＦＲ阻害剤との任意の組合せなどの他の抗悪性腫瘍治療を含む、併用療法も含む。

【0046】

本発明の文脈において、「ＩＣＩ」としては、抗ＰＤ１抗体（Ａｂ）、抗ＰＤＬ－１ Ａｂ、抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ、抗Ｌａｇ３ Ａｂ、抗Ｔｉｍ３ Ａｂ、抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ、抗ＯＸ４０ Ａｂ、抗４１ ＢＢ Ａｂ、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂ、ＰＤ１及びＬａｇ３を標的とする二重特異性抗体、並びに上記の免疫チェックポイントのいずれかを遮断する非Ａｂ分子などの同じ機能（複数可）を発揮する他の分子が挙げられる。特定の実施形態によれば、Ｉ－Ｏ療法は、抗ＰＤ１／ＰＤＬ－１ Ａｂ、例えばＰＤ１又はＰＤＬ－１を遮断するモノクローナルＡｂを含む。

【0047】

治療抵抗性のある特定の場合において、ＩＣＩ薬物は、役に立たないだけでなく、有害な影響さえも有し得、急速な腫瘍進行をもたらし得ることが示されている（すなわち、過進行性疾患又はＨＰＤ）。したがって、Ｉ－Ｏ治療に抵抗する可能性が高い患者を同定することは、この患者にＩ－Ｏ治療を投与しないことを判定するために、少なくともＨＰＤ発症を回避するための代償性治療又は併用療法なしでは投与しないことを判定するために非常に重要である。

【0048】

本発明は、Ｉ－Ｏ療法／ＩＣＩの最初の投与の６０日前から４２日後の範囲にわたる期間中に、広域スペクトル抗生物質を摂取した個体の抵抗性状態を評価するのに特に有用である。実際に、以下の実験部分に示すように、広域スペクトル抗生物質は、Ｉ－Ｏ抵抗性に関連したディスバイオシスのリスクを増加させる。

【0049】

上記の方法を実施する場合、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルは、それが所定の閾値よりも低い場合に低減したものとみなされる。この閾値は、例えば、代表的なコホート、例えばがんに罹患している個体のコホート、好ましくは試験された個体と同じがんに罹患している個体のコホートなどにおける、可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの中央値であり得る。更により好ましくは、代表的なコホートは、試験された個体と同じがんに罹患しており、かつ同じ治療スキームでＩ－Ｏ療法／ＩＣＩを受けている（特に、同じ治療ラインとして、少なくとも１Ｌ対２Ｌ以上の治療法を区別する）、個体のコホートである。当業者は、同じ治療歴を共有し、かつ同じＩ－Ｏ療法を受けた患者のコホートにおける可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの中央値を測定することによって、閾値を精緻化することができる。以下に開示される実験結果では、この中央値の値は、化学療法の有無にかかわらず抗ＰＤ１／Ｌ－１抗体で治療された進行した非小細胞肺がん（non small cell lung cancer：ＮＳＣＬＣ）患者の発見及び検証コホートでは、それぞれ、１７７．１ｎｇ／ｍＬ及び２３３．３ｎｇ／ｍＬであったが（実施例１）、一方で、セカンドライン治療法でニボルマブで治療された腎臓がん患者のコホートでは８８．８ｎｇ／ｍＬであり（実施例２．１）、かつデュルバルマブで治療された前治療された転移性膀胱を有するがん患者のコホートでは１５８．８ｎｇ／ｍＬであった（実施例２．２）。

【0050】

あるいは、所定の閾値は、がんに罹患していない個体のコホートから計算され得る。例えば、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルは、それががんに罹患していない個体のコホートの下位３分位にある場合、低減しているものとみなし得る。

【0051】

上記の方法は、免疫療法単独で、又は化学療法若しくはチロシンキナーゼ阻害剤若しくはホルモン療法（アンドロゲン欠乏若しくはエストロゲン欠乏、又はＬＨＲＨアンタゴニスト）と組み合わせて適用可能であるがんに罹患している患者にとって、特に興味深い。

【0052】

そのようながんの例としては、乳がん、慢性骨髄単球性白血病（Chronic Myelomonocytic Leukemia：ＣＭＭＬ）、結腸直腸がん、腎臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、尿路上皮がん、メラノーマ、卵巣がん、胃及び食道がん、中皮腫、肝細胞がん、前立腺がん、並びに抗ＰＤ１ ＡｂについてＦＤＡ承認されている不可視性組織学が存在する任意のミスマッチ修復不全（mismatch repair insufficiency：ＭＳＩ）高腫瘍が挙げられる。特定の実施形態によれば、個体は、ＮＳＣＬＣ、メラノーマ、乳がん、腎臓がん、膀胱がん、及び結腸直腸がんからなる群から選択されるがんに罹患している。

【0053】

本発明はまた、がんを有する個体が、がん免疫（Ｉ－Ｏ）療法の投与前に代償性微生物叢中心介入（ＭＣＩ）を必要とするかどうかを決定するためのセラノスティック方法であって、上記方法による、個体ががん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスを有するか否かを評価することを含み、個体ががん関連又は抗生物質関連ディスバイオシスを有する場合、個体がＩ－Ｏ療法による治療の投与前にＭＣＩを必要とする、セラノスティック方法に関する。

【0054】

肺がんなどのある特定の場合には、ＭＣＩを、別の治療、例えばＨＰＤを回避するための化学療法と組み合わせることができる。

【0055】

本文において、「微生物叢中心介入（ＭＣＩ）」という語句は、腸管内微生物叢組成物に対して直接的又は間接的な効果を有する任意の治療を指す。

【0056】

本発明によるＭＣＩの例としては、以下：
－経口バンコマイシン抗生物質（例えば、クロストリジウム・ディフィシル（C．difficile）感染の治療と同じプロトコル）、
－エンテロクロスター新属分岐群の細菌を死滅させるファージ、
－エンテロクロスター新属分岐群の細菌を死滅させるように操作されたＣｒｉｓｐｒ Ｃａｓ９などのレアカットエンドヌクレアーゼ、
－アッカーマンシア菌種及び／又はアッカーマンシア・ムシニフィラ（他の有益な細菌と混合されている可能性がある）、
－レチノイン酸、
－特に生成物を用いて、例えば下記に記載されるような方法によって、粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルが増加することが証明された、糞便微生物移植（ＦＭＴ）、並びに
－上記治療剤の混合物、
が含まれる。

【0057】

上記では、ファージ及びエンドヌクレアーゼは、Ｈａａｓ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２０２０；７０：２３－３４．に報告されているクレーディング（clading）分類学に対応するエンテロクロスターリストの種の少なくとも１つの細菌を死滅させることができる場合、「エンテロクロスター新属分岐群の細菌を死滅させること」とみなされる。

【0058】

このリストは、以下を含む：
クロストリジウム（Clostridium）／エンテロクロスター・アスパラギフォルミス（Enterocloster asparagiformis）
クロストリジウム／エンテロクロスター・ラバレンス（Enterocloster lavalense）
クロストリジウム／エンテロクロスター・ボルテアエ（Enterocloster boltae）
クロストリジウム／エンテロクロスター・クロストリジオフォルメ（Enterocloster clostridioforme）
クロストリジウム／エンテロクロスター・シトロニアエ（Enterocloster citroniae）
クロストリジウム／エンテロクロスター・アルデネンゼ（Enterocloster aldenense）
クロストリジウム／エンテロクロスター・シンボジウム（Enterocloster symbosium）
フンガテラ・ハセワイ（Hungatella hathewayi）
フンガテラ・エフルビア（Hungatella effluvia）

【0059】

本発明はまた、がん誘導性ディスバイオシスを有する個体において、Ｉ－Ｏ療法と組み合わせてがんを治療するための、上に列挙したＭＣＩのための薬剤の使用に関係する。

【0060】

本発明の別の目的は、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルを測定することを含む、ＭＣＩの成功をフォローアップするための方法であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１の正常化されたレベルが、ＭＣＩが腸のユーバイオーシスを成功裏に回復させたこと、又はディスバイオシスを少なくとも部分的に修正したことを指し示す、方法である。

【0061】

この方法を実施する場合、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルは、それが（上記のように）所定の閾値よりも高い場合、「正常化された」とみなすことができる。あるいは、ＭＣＩの前よりも高い場合、「正常化された」又は少なくとも「部分的に正常化された」ものとみなすことができる。

【0062】

本発明はまた、心血管イベントを経験している高リスクのヘビースモーカ（ＨＲＨＳＣＶ）における初期ＮＳＣＬＣ発生率を予測するバイオマーカとしての、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルの使用であって、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１の低減が、ＮＳＣＬＣの発症を予測するマーカである、使用に関する。

【0063】

以下の実験部分において、本発明者らは、腸管内ディスバイオシスの設定において、ＰＤ１遮断がＧＡＬＴにおけるＴＨ１７／Ｔｒ１７の腫瘍の増幅及びホーミングを促進することを実証した。本発明者らはまた、そのような状況において、ＩＬ－１７Ａ生物活性を遮断することにより、ディスバイオシスの有害な影響を回避することができることを示した。

【0064】

それ故に、ＩＬ－１７Ａ及びＰＤ１遮断を組み合わせることは、上記の方法のうち１つによって抗ＰＤ１ Ａｂによる治療に抵抗する可能性があると同定された患者にとって、臨床的に非常に興味深い。

【0065】

その上、ＩＬ－７は、α４β７インテグリン発現を制御し、Ｔ細胞に腸ホーミング特異性をインプリントし、炎症性腸疾患における遊出Ｔｒ１７上に高発現するＣＤ１２７に作用する（Ｂｅｌａｒｉｆ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｍａｙ ２０１９，ｖｏｌ １２９，ｎｕｍｅｒｏ ５）。

【0066】

結果として、組換えＩＬ－７をＰＤ１遮断と組み合わせることは、上記の方法のうち１つによって抗ＰＤ１ Ａｂによる治療に抵抗する可能性があると同定された患者にとって、臨床的に非常に興味深い別の選択肢である。

【0067】

したがって、本発明の別の態様は、可溶性ＭＡｄＣＡＭの低い血清レベルを有する患者におけるがんの治療のための、（ｉ）抗ＰＤ１抗体又は抗ＰＤＬ１抗体と、（ｉｉ）抗ＩＬ－１７Ａ抗体若しくは抗ＩＬ－１７Ｒ抗体及び／又は組換えＩＬ－７と、を含む、併用療法である。

【0068】

上記の併用療法では、ＩＬ－１７Ｒ又はＩＬ－１７を遮断し、次いでＰＤ１又はＰＤＬ－１／ＰＤＬ－２を阻害することによって開始して、２つ以上の薬剤を一緒に又は別々に投与することができる。

【0069】

本発明の他の態様は、粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルを正常化することができる薬剤を同定するための、方法及びツールに関する。

【0070】

そのような方法は、（ｉ）ＭＡｄＣＡＭ－１を発現するか、又はＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下においてレポータ遺伝子を発現するように操作された細胞を、試験される化合物とインビトロで接触させることと、及び（ｉｉ）当該化合物のいずれが、ＭＡｄＣＡＭ－１の発現、又はＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下において発現されるレポータ遺伝子の発現を誘導したかを評価することと、を含む。

【0071】

この方法を実施するために使用され得る細胞の例としては、ヒト臍帯静脈内皮細胞（Human umbilical vein endothelial cell：ＨＵＶＥＣ）、形質転換類洞内皮細胞（transformed sinusoidal endothelial cell：ＴＳＥＣ）、ｂＥｎｄ．３細胞、及びそれらの誘導体（特に、ＭＡｄＣＡＭ－１調節エレメントの制御下においてレポータ遺伝子を安定に組み込むことによって、これらの細胞株に由来する操作された細胞）が挙げられる。

【0072】

別の方法に従って、試験される化合物を腸ヒト化アバターマウスへと投与し、当該マウスの内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１の発現を測定する。

【0073】

２つの方法はまた組み合わせることもできる。

【0074】

そのような合わせたスクリーニング方法では、インビトロ結果は、アバターマウスにおける検証の工程によって完了され、ここで、アバターマウスは、８～１０日間の広域スペクトルＡＴＢで前処置され、次いで経口胃管栄養法によってヒトＦＭＴ生成物によって再コロニー形成された腸ヒト化マウスであり、ここで、
（ｉ）ＦＭＴ生成物は、ＭＡｄＣＡＭ－１を発現する細胞においてＭＡｄＣＡＭ－１の発現を誘導するものとして同定されているか、若しくはＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下においてレポータ遺伝子を発現するように操作されているか、又は
（ｉｉ）ＦＭＴ生成物は、そのような細胞においてＭＡｄＣＡＭ－１の発現を誘導しないものと同定されており、かつこれらの細胞においてＭＡｄＣＡＭ－１の発現を誘導するものと同定されている別の薬剤で富化されているか、又は
（ｉｉｉ）ＦＭＴは、（本発明者らのデータベースにおいて、又は任意の以前の実験の結果として）ユーバイオーシス又は高可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１と関連した分類学的組成を有する。

【0075】

本発明による方法はまた、以下：
（ｉ）胃管栄養法から８日後までに、腸ヒト化アバターマウスの一部を屠殺にして、ＦＭＴレシピエントにおいてＭＡｄＣＡＭ－１及びＦｏｘｐ３ベースの回腸ＰＣＲ（及び所望により、ＩＨＣ染色）を行い、それらを対照（連続ＡＴＢ）と比較すること；
（ｉｉ）腸ヒト化アバターマウスにおけるＭＡｄＣＡＭ－１の有意な上方制御の場合、各群の少なくとも３匹のマウスに皮下肉腫を接種し、それらを抗ＰＤ１ Ａｂで処置して、このＦＭＴがＡＴＢ処置マウスと比較して治療法有効性を媒介し得ることを確実にすること；
（ｉｉｉ）腸ヒト化アバターマウスが抗ＰＤ１ Ａｂでの処置に応答する場合、それを富化するために使用されたＦＭＴ生成物又は非ＦＭＴ剤は、粘膜固有層の内皮細胞におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現レベルを正常化することができるものと推定すること、
を含み得る。

【0076】

上記の方法を実施するためのスクリーニングプラットフォームもまた本発明の一部である。そのようなプラットフォームは、ＭＡｄＣＡＭ－１プロモータの制御下においてレポータ遺伝子を発現する細胞（例えば、ＨＵＶＥＣ、ＴＳＥＣ、若しくはｂＥｎｄ．３細胞、又はこれらに由来する細胞）と、生成物バンクにおいて薬剤をピッキングし、これらを培養細胞株に送達し、かつレポータ遺伝子の発現を（例えば、レポータ遺伝子が蛍光タンパク質を発現する場合、蛍光を測定することによって）評価するように構成されたロボットと、を含む。

【0077】

上述したように、がん患者の血清中の低レベルの可溶性ＭＡｄＣＡＭは、この患者における腸内ディスバイオシスのマーカであり、Ｉ－Ｏ療法に対する抵抗性を誘導する可能性が高いため、この患者は、Ｉ－Ｏ療法の前に代償性調製物を必要とし、かつ有利には、以下の工程：
（ｉ）上記のものから選択されるＭＣＩを投与する工程と、
（ｉｉ）上記のものから選択されるＩ－Ｏ療法を投与する工程と、
を含む治療から有利に利益を得ることができる。

【0078】

Ｉ－Ｏ療法（例えば、上述の方法による）を開始又は継続する前にがん患者の血清中の可溶性ＭＡｄＣＡＭのレベルを測定することは、患者が併用治療（ＭＣＩ＋Ｉ－Ｏ）を必要としているかどうかを決定するのに役立つ。

【0079】

この測定が特に有用である患者は、重度の腸内ディスバイオシスを有する可能性がより高いので、ＩＣＩ、特に抗ＰＤ１／ＰＤＬ－１ Ａｂの最初の投与の６０日前から４２日後の範囲にわたる期間中に広域スペクトル抗生物質を摂取した患者である。

【0080】

有利には、可溶性ＭＡｄＣＡＭの血清レベルの新規測定が、上記の工程（ｉｉ）の前に行われて、ＭＣＩががん関連ディバイオシス（dybiosis）を低減したか否かがチェックされる。

【0081】

上記の併用治療（ＭＣＩ＋Ｉ－Ｏ）を実施する場合、６０日未満前に広域スペクトル抗生物質を受けた個体は、低温殺菌されたアッカーマンシア菌種及び／又はアッカーマンシア・ムシニフィラが富化された場合もある糞便微生物移植を有利に受けることができ、６０日未満前に広域スペクトル抗生物質を受けていない個体は、生きているアッカーマンシア菌種、及び／又はアッカーマンシア・ムシニフィラを有利に受けることができる。

【0082】

本発明の他の特徴もまた、本発明の枠組みで実施され、かつその範囲を限定することなく、必要な実験的支持を提供する、生物学的アッセイの以下の記述の過程で明らかになるであろう。

【実施例】

【0083】

実施例１：抗生物質は回腸ＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸を破壊し、ＰＤ－１遮断中の腫瘍免疫監視を損なう

【0084】

材料及び方法
橋渡し研究のための医療センター及び規制承認。

【0085】

糞便材料。糞便収集のために、倫理ガイドライン及び現地のＣＣＰＰＲＢの承認に従って、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｇｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ／Ｆｒａｎｃｅで補助研究を行った。研究名は、「Ｏｎｃｏｂｉｏｔｉｃｓ」、Ｂ２Ｍ倫理プロトコル番号ＰＰ：１５－０１３であった。ヘルシンキ宣言に従って書面によるインフォームドコンセントを全ての患者から得た。内視鏡及び血液試料の収集のために、倫理ガイドライン及びＲｅｇｉｅｒｕｎｇｓｐｒａｓｉｓｉｕｍ Ｋａｒｌｓｒｕｈｅの承認に従って、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｌｉｎｉｃｓ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ／ドイツにて、臨床研究「Ｅｉｎｆｌｕｓｓ ｖｏｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｋａ ａｕｆ ｄａｓ Ｄａｒｍ－Ｃｈｅｍｏｋｉｎｎｅｔｚｗｅｒｋ ｂｅｉ Ｐａｔｉｅｎｔｅｎ ｍｉｔ ｓｏｌｉｄｅｎ Ｔｕｍｏｒｅｎ」を行った。適格患者は、扁平上皮又は非扁平上皮の組織学を有するステージＩＩＩＡ～ステージＩＶ非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を有し、かつ少なくとも１つの以前の治療ライン後に再発又は進行が実証された。参加地域はＧｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｍｐｕｓ（Ｖｉｌｌｅｊｕｉｆ、フランス）であった。ＮＳＣＬＣ患者は、欧州医薬品庁（European Medical Agency：ＥＭＡ）によって承認された治療様式の一部として、抗ＰＤ－１ ｍＡｂ、ニボルマブを受けた。腫瘍応答は、ＲＥＣＩＳＴ基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ１．１）を用いて評価した。コンピュータトモグラフィ（Computer tomography：ＣＴ）スキャンを、ベースライン、及び最初の１年間は８～１２週間ごと、次いで疾患進行までは１２～１５週間ごとに実施した。初回注射（Ｔ０）の前に、国際ヒト微生物叢標準（International Human Microbiome Standards：ＩＨＭＳ）ガイドライン（ＳＯＰ ０３ Ｖ１）に従って糞便を収集した。簡単に記載すると、嫌気性発生剤（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ）を含む収集キットを患者に与えた。試料を在宅患者によって収集し、４～２４時間後に－８０℃で、Ｇｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｍｐｕｓにおいて、ＢＨＩ＋２％グリセロールを含む又は含まないプラスチックチューブ（１０００－Ｓａｒｓｔｅｄｔによるプラスチック容器）中で凍結させた。

【0086】

内視鏡試料及び血液試料の収集。適格患者は、２０１８年７月～２０１９年１１月の間に、試験に関連しない適応症についての臨床標準プロトコルに従って回腸－結腸内視鏡検査を受けた（表１）。実行可能である場合、末端回腸、盲腸、及び左右の結腸の粘膜の内視鏡生検を各患者に実施した。組織試料を、液体窒素中で急速凍結し、－８０℃で貯蔵するか、又は組織学のために２％ＰＦＡへと浸漬するかのいずれかを行った。加えて、回腸－結腸内視鏡検査（ile-colonoscopy）の前に、２つの血液試料（１０ｍＬ ＥＤＴＡチューブ）を収集した。含まれる全ての患者は、食事歴を評価するためのアンケートに応答し、臨床ベースラインデータを局所臨床情報システムから検索した。

【0087】

細胞培養物、試薬、及び腫瘍細胞株。ＭＣＡ－２０５線維肉腫細胞、ＭＣ３８、及びＲＥＴメラノーマ細胞（すなわち、Ｖｉｋｔｏｒ Ｕｍａｎｓｋｙ教授の厚意により提供された、自発的メラノーマ形成を駆動するメタロチオネイン－１プロモータの制御下におけるＲｅｔがん原遺伝子の導入遺伝子強化発現によって産生された、メラノーマ）（Ｃ５７ＢＬ／６マウスについて全て同系）を、１０％ＦＣＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１００Ｕｌ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、及びＭＥＭ非必須アミノ酸を含有するＲＰＭＩ １６４０（以下、完全ＲＰＭＩ１６４０と称する）中、５％ＣＯ２の存在下にて、３７℃で培養した。ルシフェラーゼをトランスフェクトしたＴＣ－１細胞株（Ｅｒｉｃ Ｄｅｕｔｓｃｈ教授（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｇｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ、フランス）の厚意により提供された、Ｃ５７ｂｌ６マウスの同系）を、完全ＲＰＭＩ１６４０及び１ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液中５％ＣＯ２の存在下において、３７℃で培養した。細胞株を、マイコプラズマ汚染について定期的に試験し、かつ１０継代を超えた後は使用しなかった。

【0088】

マウス。全ての動物実験は、フランス及び欧州の法律及び規制に従って実施した。現地の施設内動物倫理委員会（institutional animal ethics board）及びフランス国リセルシェ省（French Ministere de la Recherche）は、全てのマウス実験を承認した（許可番号：２０１６－０４９－４６４６、２０１７＿０４９＿９９７４１、２０１９＿０３６＿２１１２４）。実験は、政府及び機関のガイドライン及び規制に従って実施した。雌Ｃ５７ＢＬ／６はＨａｒｌａｎ（フランス）から購入した。マウスは７～１２週齢の間で使用した。ＭＡｄＣＡＭ－１－ＫＯマウス及びＩＴＧＢ ７－ＫＯマウスは、Ａｎｇｅｌａ Ｓｃｈｉｐｐｅｒｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａａｃｈｅｎ、Ａａｃｈｅｎ、ドイツから厚意により提供された。ＭＡｄＣＡＭ－１－ＫＯマウス及びＩＴＧＢ７－ＫＯマウス、並びに対照同腹仔を、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドで戻し交配し、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａａｃｈｅｎの地域動物ケア施設の施設内飼育から得た。ＣＣＲ５－ＫＯマウスは、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅ Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ、Ｈｏｐｉｔａｌ Ｓａｌｐｅｔｒｉｅｒｅ、Ｐａｒｉｓ、フランスから厚意により提供された。ＣＣＲ９－ＫＯマウスは、Ｆｏｒｓｔｅｒ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｈａｎｎｏｖｅｒ、ドイツから厚意により提供された。ＣＣＲ５－ＫＯマウス及びＣＣＲ９－ＫＯマウスの両方を、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドで維持した。全てのマウス実験は、動物が特定の病原体を含まない条件で収容されたＧｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｍｐｕｓの動物施設で実施した。

【0089】

抗生物質処置。別途示されない場合、マウスを、アンピシリン（１ｍｇ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（５ｍｇ／ｍＬ）、及びコリスチン（１ｍｇ／ｍＬ）を含有する広域スペクトル抗生物質溶液（ＡＴＢ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）をマウスの滅菌飲料水に添加して処置した。単一の抗生物質を使用した実験では、濃度は、それぞれ、アンピシリン（１ｍｇ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（５ｍｇ／ｍＬ）、コリスチン（１ｍｇ／ｍＬ）、エリスロマイシン（１ｍｇ／ｍＬ）、又はシプロフロキサシン（０．１ｍｇ／ｍＬ）であった。溶液及びボトルを週に２回交換した。抗生物質混合物を使用した実験では、ＣＯＳ（ヒツジ血液５％を有するコロンビア寒天培地）プレート上の０．１ｇ／ｍＬのＢＨＩ＋１５％グリセロール中に再懸濁した糞便ペレットを、３７℃で４８時間にわたり、好気性条件及び嫌気性条件において毎週培養することによって、抗生物質活性を確認した。ＡＴＢ処置の期間は、実験設定に基づいてわずかに異なり（αＰＤ－１処置の７～１４日前）、かつ各実験の結果に指し示されている。手短に言えば、抗ＰＤ－１ ｍＡｂの有効性を損なうために、マウスを腫瘍移植の１～２週間前にＡＴＢで処置し、かつ実験全体を通してＡＴＢを継続するか、又は個々の実験で指し示されるように抗ＰＤ－１処置開始日に中断した。糞便微生物移植実験との関連において、マウスは、動物飼料針を用いる経口胃管栄養法によって翌日に糞便微生物移植を受ける前に、３日間のＡＴＢを受けた。ＴＣ－１モデルでは、ＡＴＢ処置を、腫瘍注射の３日前に開始し、最初の細菌胃管栄養法の１日前に中断した。

【0090】

ＭＣＡ－２０５肉腫、ＭＣ３８、及びＲＥＴメラノーマの皮下モデル。同系Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、それぞれ、０．８×１０^６個のＭＣＡ－２０５肉腫、１．０×１０^６個のＭＣ３８、又は０．５×１０６個のＲＥＴメラノーマ細胞を皮下移植し、腫瘍が２０～４０ｍｍ^２のサイズに達した時点で、抗ＰＤ－１ ｍＡｂ（２５０μｇ／マウス；クローンＲＭＰ１－１４）、又はアイソタイプ対照（クローン２Ａ３）により腹腔内（ｉ．ｐ．）で処置した。マウスに抗ＰＤ－１ ｍＡｂを３日間隔で４回注射した。腫瘍の長さ及び幅を、キャリパーによって１週間に３回で日常的にモニタリングした。抗ａ４ｂ７ ｍＡｂ（ＤＡＴＫ３２、マウス当たり２００μｇ）又は抗ＭａｄＣＡＭ ｍＡｂ（ＭＥＣＡ－３６７、マウス当たり２００μｇ）を用いる実験では、ｍＡｂ（又はそれらのアイソタイプ対照、いずれの場合もクローン２Ａ３）を、０日目から開始して最終抗ＰＤ－１注射まで、３日ごとに腹腔内注射した。全ての抗体は、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、ＮＨ、米国から購入した。

【0091】

同所性ルシフェラーゼ操作ＴＣ－１。Ｃ５７ＢＬ／６マウスをイソフルランで麻酔した。滅菌条件下において、各マウスの胸壁に側方切開を行い、１０μＬのＭａｔｒｉｇｅｌ（Corning）中の６×１０^５個のＴＣ－１－Ｌｕｃ細胞を、肺へと注射した。皮膚切開部を外科用皮膚クリップで閉じた。腫瘍成長を、Ｉ ＶＩＳ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ ５０シリーズ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｘｅｎｏｇｅｎ）で週に２回モニタリングした。３日目から開始して、上記と同じ用量及びスケジュールに従って、マウスに抗ＰＤ－１ ｍＡｂ又は推奨アイソタイプを注射した。

【0092】

ＦＭＴ実験。糞便微生物叢移植（ＦＭＴ）を、糞便材料を解凍することによって実施した。マウスを新しいケージに入れた。次いで、２００μＬの懸濁液を、経口胃管栄養法によって各無菌レシピエント又はＡＴＢ前処置（３日間）レシピエントへと移植した。加えて、各動物の毛皮へと更に１００μＬを適用した。ＦＭＴの２週間後、腫瘍細胞を皮下又は同所に注射し、マウスを上述のように抗ＰＤ－１又はアイソタイプ対照で処置した。経口細菌胃管栄養法を、以下に記載されるようにαＰＤ－１処理と同じ日に実施した。

【0093】

共生生物種による経口細菌胃管栄養法。アッカーマンシア・ムシニフィラＣＳＵＲ Ｐ２２６１及びＡ．インディスティンクタス（A．indistictus）ＣＳＵＲ Ｐ７２３は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｈｏｓｐｉｔａｌｏ－ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｉｒｅ Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、フランスによって提供された。エンテロコッカス・ヒラエ（Enterococcus hirae）１３１４４単離物は、Ｇｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ Ｃａｎｃｅｒ ＣａｍｐｕｓにおいてＣＴＸで処置されたＳＰＦマウスの脾臓又は腸間膜リンパ節から最初に単離された。Ａ．ムシニフィラを、３つの嫌気性発生剤（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ）を用いて作製された嫌気性雰囲気中のＣＯＳプレート上において、３７℃で少なくとも７２時間にわたり成長させた。Ｅ．ヒラエ（E．hirae）１３１４４を、５％ヒツジ血液富化コロンビア寒天上において、３７℃で好気性条件にて２４時間成長させた。ＡＴＢ前処置マウス又はＧＦ Ｃ５７ＢＬ／６マウスのコロニー形成を、１×１０^８個の細菌を含有する１００μＬの懸濁液を用いて経口胃管栄養法によって実施した。細菌胃管栄養法の場合：蛍光分光光度計（Eppendorf）を用いて、ＰＢＳ中６００ｎｍの光学密度で、１０^９ＣＦＵ／ｍＬの懸濁液を得た。各マウスについて、抗ＰＤ－１ ｍＡｂの初回注射の最初の２４時間前、続いて抗ＰＤ－１ ｍＡｂ注射と同日に４回の細菌胃管栄養法を実施した。Ｅ．ヒラエ（E．hirae）１３１４４によるコロニー形成の有効性は、胃管栄養法後の４８時間後に糞便を培養することによって確認された。糞便ペレットを採取し、０．１ｇ／ｍＬのＢＨＩ＋１５％グリセロール中に再懸濁した。糞便の連続希釈液を、５％ヒツジ血液富化コロンビア寒天上にプレーティングし、好気性条件及び嫌気性条件において３７℃で４８時間にわたりインキュベートした。４８時間後、単一コロニーを単離し、グラム染色を実施した。特定の細菌の同定は、マトリックス支援レーザ脱離イオン化飛行時間型（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionisation Time of Flight：ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析計（Ａｎｄｒｏｍａｓ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、フランス）を用いて達成した。

【0094】

フローサイトメトリー分析。腫瘍、腸間膜リンパ節（mesenteric lymph node：ｍＬＮ）、排出リンパ節（draining lymph node：ｔｄＬＮ）、及び脾臓を、個々の実験で指し示さされるように異なる時点で採取した。切除した腫瘍を小片に切断し、２５μｇ／ｍＬのＬｉｂｅｒａｓｅ（商標）（Ｒｏｃｈｅ）及び１５０ＵＩ／ｍＬのＤＮａｓｅ１（Ｒｏｃｈｅ）を含有するＲＰＭＩ培地中において、３７℃で３０分間消化し、次いで破砕し、１００μｍ及び７０μｍセルストレーナ（Ｂｅｃｔｏｎ＆Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて２回濾過した。リンパ節及び脾臓をＲＰＭＩ培地で破砕し、続いて１００μｍセルストレーナで２回濾過した。４００万個の腫瘍細胞、リンパ節細胞、又は脾細胞を、精製抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（クローン９３；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と共に、４℃で３０分間プレインキュベートし、その後膜染色を行った。細胞内染色には、Ｆｏｘｐ３染色キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用した。死細胞を、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｙｅｌｌｏｗ ｄｅａｄ ｃｅｌｌ ｓｔａｉｎ ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）又はＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔを用いて除外した。ＣＤ３（１４５－２Ｃ１１）、ＣＤ４（ＧＫ１．５又はＲＭ４－５）、ＣＤ８（５３－６．７）、ＣＤ２５（３Ｃ７）、ＣＤ４４（ＩＭ７）、ＣＤ４５（３０－Ｆ１１）、ＣＤ６２Ｌ（ＭＥＬ－１４）、ＣＤ１２７（Ａ７Ｒ３４）、Ｆｏｘｐ３（１５０Ｄ）、ＲＯＲ_γｔ（Ｂ２Ｄ）、ＣＸＣＲ３（ＦＡＢ１６８５Ｐ）、ＣＸＣＲ５（Ｊ２５２Ｄ４）、ＣＣＲ２（ＳＡ２０３Ｇ１１）、ＣＣＲ４（２Ｇ１２）、ＣＣＲ５（ＨＭ－ＣＣＲ５）、ＣＣＲ６（２９－２Ｌ１７）、ＣＣＲ７（４Ｂ１２）、ＣＣＲ９（ＣＷ－１．２）、ベータ７（ＦＩＢ５０４）、ａ４ｂ７／ＬＰＡＭ－１（ＤＡＴＫ３２及びＲＥＡ４５７）、ＭａｄＣＡＭ－１（ＭＥＣＡ３６７）に対する抗マウス抗体（全てＭｉｌｔｅｎｙｉ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、及びｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入）を使用して、細胞を染色した。染色した試料を、ＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓ １３色（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）又はＢＤ Ｆａｃｓ ＣＡＮＴＯ ＩＩ（ＢＤ）で取得し、分析をＫａｌｕｚａ ｓｏｆｔｗａｒｅ １．５（Ｂｅｃｋｍａｎｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実施した。Ｔセントラルメモリー（ＴＣＭ）ゲーティング：生存ＣＤ３＋でのゲーティング後、ＣＤ４＋を選択し、次いでＴＣＭをいずれかのＣＤ６２Ｌ＋であるものと同定した。エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）細胞を、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ４４＋として選択した。Ｔｈ１７ゲーティングは、使用したマウスモデルに依存した。Ｋａｅｄｅ蛍光色素は、ＰＦＡによる固定の際にその光変換状態を保持しない。Ｔｈ１７ゲーティング：生存ＣＤ３＋でゲーティングした後、ＣＤ４＋を選択し、次いでＴｈ１７をＲＯＲ_γｔ＋として同定した。非固定細胞の場合、Ｔｈ１７はＣＸＣＲ３－及びＣＣＲ６＋として同定された。Ｔｒｅｇゲーティング：生存ＣＤ３＋でゲーティングした後、ＣＤ４＋を選択し、固定細胞についてはＴｒｅｇをＦｏｘＰ３＋ ＣＤ２５＋として同定した。非固定細胞については、ＴｒｅｇをＣＤ１２７－ＣＤ２５＋として同定した。カットオフ値の定義のために、蛍光マイナスワン（Fluorescence minus one：ＦＭＯ）対照を適切に使用した。

【0095】

免疫組織化学。ホルマリン固定され、パラフィン包埋されたマウス回腸、及び結腸の３μｍ厚の切片を、「スイスロール（swiss roll）」として調製し、かつポリ－Ｌ－リジンでコーティングされたスライドにマウントし、脱パラフィンし、段階的にアルコールから水によって水和させた。抗原賦活化は、緩衝液中で、９８℃にて３０分間にわたり切片を加熱することによって行った（それぞれ、ＣＤ３の染色の場合は０．０１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）による、及びＦｏｘＰ３の染色の場合は１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）による）。内因性ペルオキシダーゼ活性を、３％水素ペルオキシダーゼ（ＤＡＫＯ）で１０分間にわたり阻害し、次いでＰｏｗｅｒＶｉｓｉｏｎ ＩＨＣ／ＩＳＨ Ｓｕｐｅｒ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＰＶ６１２２）で２０分間にわたり飽和させた。洗浄せずに、ウサギ抗ヒトＣＤ３ポリクローナル抗体Ａｂ（既製品、ＤＡＫＯ、＃ＩＳ５０３）及びウサギ抗マウスＦｏｘｐ３ポリクローナル抗体Ａｂ（２μｇ／ｍＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＡ１－４６１２６）一次抗体を適用し、１時間インキュベートした後、二次ＡｂであるＰｏｗｅｒＶｉｓｉｏｎポリホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ・コンジュゲート抗ウサギ抗体（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＃ ＰＶ６１１９）を適用した。ペルオキシダーゼを、ジアミノベンジジン（Di Amino Benzidine：ＤＡＢ）－ペルオキシダーゼ基質キット（ＤＡＫＯ）によって検出し、切片を、マイヤーヘマトキシリンで対比染色した。ＣＤ４の免疫組織化学染色を自動免疫染色装置（ＢｅｎｃｈＭａｒｋ ＵＬＴＲＡ、Ｖｅｎｔａｎａ、ＩＧＲ）で実施した。９５℃で３２分間にわたりＥＤＴＡ緩衝液（ｐＨ８．０）中において熱誘導抗原賦活化を実施した。一次モノクローナル抗マウスＣＤ４抗体（１，２４６μｇ／ｍＬ、＃ａｂ１８３６８５、Ａｂｃａｍ）を、抗体希釈液（Ｚｙｔｏｍｅｄ）で１：５００に希釈し、スライドを３７℃で１時間にわたりインキュベートした。ＤＡＢを色素原として用いる検出技術のビオチン不含有ペルオキシダーゼシステムを適用した（キットｕｌｔｒａＶｉｅｗ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＡＢ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ、Ｖｅｎｔａｎａ）。スライドはまた、ヘマトキシリンキット（Ｖｅｎｔａｎａ）によって対比染色した。

【0096】

Ｋａｅｄｅ実験。Ｋａｅｄｅマウスは、トムラ・ミチオ、京都大学、京都、日本から厚意により提供され、戻し交配され、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドで維持された。Ｋａｅｄｅトランスジェニックマウスを、２～２．５％イソフルランで麻酔し、鎮痛のためにブプレノルフィン（０．０１ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。回腸の光変換のため、腹腔内末端回腸にアクセスするために腹部皮膚及び腹膜を正中線で切断した。結腸、回腸、又は腸間膜リンパ節を含む回腸の光変換のために、盲腸極（cecal pole）を識別し、末端回腸、腸間膜リンパ節、及び近位結腸を含む盲腸極を、滅菌プラスチックコーティング外科用ドレープ上への中腹部切開を通して穏やかに動員した。非標的構造体をアルミニウム箔で覆った。標的構造体の腹側及び背側部分を、各３０秒間、３９５ｎｍ波長発光ダイオード（Ｗｉｎｚｗｏｎ）光から放射される紫色光に曝露した。照射後、組織を滅菌等張塩化ナトリウムで湿らせ、腹膜腔に穏やかに再配置した。腹膜を、５－０モノフィルックナイロン縫合糸（Ｅｔｈｉｃｏｎ）による連続ステッチによって閉じた。皮膚は２つの９ｍｍ創傷クリップ（ＥＺ Ｃｌｉｐ Ｋｉｔ）で閉じた。

【0097】

ＣＦＳＥを用いた腸間膜及び腫瘍排出リンパ節からの白血球の遊走の追跡。Ｃ５７Ｂｌ６マウスを、２～２．５％イソフルランで麻酔し、鎮痛のためにブプレノルフィン（０．０１ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。腹部皮膚及び腹膜を正中線で切断して、腸間膜リンパ節にアクセスした。腸間膜リンパ節を、中腹部切開を通して滅菌プラスチックコーティング外科用ドレープ上に穏やかに動員した。回腸排出腸間膜リンパ節を、それらの脈管構造に従って視覚的に識別した。２つの最も顕著な腸間膜リンパ節に、３０Ｇインスリンシリンジを用いて５μＬのＰＢＳに希釈した１００μＭ ＣＦＳＥを注射した。腸間膜リンパ節の再配置後、腹膜を、５－０モノフィルックナイロン縫合糸（Ｅｔｈｉｃｏｎ）による連続ステッチによって閉じた。腫瘍排出リンパ節の場合、腹部皮膚を正中線で切開し、腹膜を残した。ハサミを用いて腹部皮膚と腹膜とを穏やかに分離することによって、腫瘍排出リンパ節を可視化した。腫瘍排出リンパ節に、３０Ｇインスリンシリンジを用いて５μＬのＰＢＳで希釈した１００μＭ ＣＦＳＥを注射した。皮膚は２つの９ｍｍ創傷クリップ（ＥＺ Ｃｌｉｐ Ｋｉｔ）で閉じた。

【0098】

ＲＮＡ抽出及びｒｔＰＣＲ。溶解及び抽出プロトコルは、ヒト試料及びマウス試料について同一であった。腫瘍又は腸管試料を、０．１％ベータメルカプトエタノールを含有するＲＬＴ Ｐｌｕｓ緩衝液中の液体窒素中で急速凍結した。抽出当日、試料を４℃で解凍し、マイクロチューブホモジナイザ（Benchmark Scientific）で、ＲＮＡ不含有ガラスビーズチューブ（Dutscher）中でホモジナイズした。全ＲＮＡ抽出及びゲノムＤＮＡ除去は、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、製造業者の推奨に従って実施した。ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて測定した最大１μｇのＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＲＮａｓｅＯＵＴ（商標）組換えリボヌクレアーゼ阻害剤（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、Ｒａｎｄｏｍ ｐｒｉｍｅｒｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、及びＤｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｓｅｔ、ＰＣＲグレード（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）から構成される混合物を用いてｃＤＮＡへと逆転写した。

【0099】

Ｒｈａｐｓｏｄｙによる単一細胞ＲＮＡシーケンシング。フローサイトメトリーによってＣＦＳＥ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した後、細胞を、冷たいＰＢＳ中１０．０００細胞で洗浄し、ＢＤ Ｒｈａｐｓｏｄｙ（商標）カートリッジ上にロードし、予め設計された免疫応答パネル（マウス）を用いて、標的化された単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑについての製造者の指示に従って処理した。ライブラリを、ＮｅｘｔＳｅｑ５００システム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）上にて１．７５ｐＭでクラスタ化して、Ｈｉｇｈ Ｏｕｔｐｕｔ ｖ２化学を用いて細胞当たり約４０．０００のペアエンド（２×７５ｂｐ）リードを生成した。シーケンシングした単一細胞データを、ｂｃｌ２ｆａｓｔｑ２ ｖ２．２０を用いて逆多重化した。

【0100】

定量的遺伝子発現アッセイ。Ｂ２Ｍ、ＦｏｘＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１７、ＭａｄＣＡＭ、Ｐｐｉａ、ＲＯＲｃ、ＴＮＦα（全てＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）の発現を、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ＩＩを用いてＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙにより分析した。以下のランピングプロファイルを用いて増幅を行った：９５℃で１０分間の１サイクル、続いて９５℃で３０秒間、６０℃で１分間の４５サイクル。定量的ＲＴ－ＰＣＲデータを、２－ΔＣｔ法に１０^６を掛けることにより、各図に指し示すように、ハウスキーピング遺伝子β２Ｍ又はＰｐｉａの発現レベルに対して正規化した。

【0101】

組織溶解及びケモカイン分析。腸管試料及び腫瘍試料を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣＬ、３００ｍＭスクロース、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ １００Ｘを含有する非変性細胞溶解緩衝液中、液体窒素で急速凍結した。その後の溶解のために、試料を４℃で解凍し、セラミックビーズ溶解チューブ（Precellys）中のチューブホモジナイザー（Precellys）上で溶解した。組織ホモジネートを４０００ｇで５分間遠心分離した。上清をその後の分析に使用した。組織溶解物中のケモカイン濃度を、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２５、及びＭａｄＣＡＭ Ｄｕｏｓｅｔ ＥＬＩＳＡキット（ＲｎＤ）を用いて、又はＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓ（Ｂｅｃｋｍａｎｎ ｃｏｕｌｔｅｒ）で実施されるサイトメトリー分析と共にＬｅｇｅｎｄｐｌｅｘマウス炎症促進性ケモカインパネル（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて、製造業者の推奨に従って決定した。

【0102】

統計。マウス。データ分析は、統計環境Ｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．Ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）又はＰｒｉｓｍ ６（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国）のいずれかで実施した。腫瘍サイズの差は、ノンパラメトリックｔ検定を用いて計算した。全ての報告された試験は両側であり、ｐ＜０．０５で有意とみなした。患者。ＮＳＣＬＣ患者におけるＰＤ１遮断に対する応答の予測因子としてのＭＡＤＣＡＭ－１。４ノットの制限三次スプライン（ＲＣＳ）を用いて、ｓＭａｄＣＡＭ１レベルの予後の役割を研究した。ノット数は、赤池の情報量基準に従って選択した。本発明者らは、バイオマーカ効果の非線形性について試験した。直線性仮説が拒絶されなかった場合、線形コーディングを使用してバイオマーカの効果を推定した。
結果
１．１．ＡＴＢはマウス及び患者におけるＭＡｄＣＡＭ－１の回腸発現を下方制御する

【0103】

本発明者らは、広域スペクトルＡＴＢカクテル（アンピシリン、コリスチン、及びストレプトマイシン）によるマウスの腸内滅菌が、ＰＤ－１遮断の抗がん有効性を鈍らせたことを報告した（Ｒｏｕｔｙ ｅｔ ａｌ．，２０１８ａ）。本発明者らは、最初に、抗ＰＤ－１ ｍＡｂで処置したＭＣＡ２０５担腫瘍マウスの腸管におけるケモカイン及びインテグリンリガンドの発現のＡＴＢ誘導性変動を分析した。ＡＴＢは、ほとんどの回腸ケモカイン及びＭａｄｃａｍ１遺伝子生成物の発現の有意な喪失を誘導したが（図５Ａ、左パネル及び右パネル、図１Ａ左パネル）、一方で、結腸及び腫瘍ケモカイン並びにＭａｄｃａｍ１遺伝子パターンに影響を及ぼすことはできなかった（図１Ａ右パネル、図５Ａ右パネル）。回腸Ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現の減少は、転写だけでなく、回腸組織の免疫組織化学（図１Ｂ）、回腸ＣＤ４５’ＬＰ細胞のフローサイトメトリー（図１Ｃ）、及び回腸溶解物の免疫酵素アッセイ（図１Ｄ）で測定される、タンパク質レベルでも見られた。注目すべきことに、ＣＤ３１^＋血管数の安定化によって示されるように、腸管構築物及び脈管構造の完全性がＡＴＢの投与下において保存された（図５Ｂ）。Ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現の減少は、ＡＴＢ投与の３日目までに始まり、ＡＴＢを７～１４日間摂取した場合、自発再コロニー形成（ＲＥＣＯ）中のＡＴＢ停止後１２日目までに回復しなかった（図１Ｄ）。広域スペクトルＡＴＢとは別に、他のＡＴＢレジメンは、回腸ＬＰだけでなく腸間膜リンパ節（ｍＬＮ）でもまた、ストレプトマイシンなどのＭａｄｃａｍ１遺伝子発現を下方制御し、ここで、Ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現は、ＬＰ（図５Ｃ、左パネル及び右パネル）並びにパイエル板（ＰＰ）（図５Ｄ）よりも高かった。アンピシリン又はエリスロマイシンとは対照的に、バンコマイシンは、ｍＬＮ Ｍａｄｃａｍ１発現を下方制御することができず、回腸ＬＰにおけるＭａｄｃａｍ１転写を増加させさえした（図５Ｃ、それぞれ、右パネル及び左パネル）。注目すべきことに、Ｍａｄｃａｍ１（Ｖｃａｍ１ではない）遺伝子発現レベルは、腫瘍排出ＬＮにおいてｍＬＮよりも１０倍低かった（図５Ｅ）。ＧＡＬＴ Ｍａｄｃａｍ１に対するＡＴＢの強力な阻害効果に興味を持って、本発明者らは、様々なＡＴＢレジメンで処置した動物の回腸内容物の好気性条件及び嫌気性条件下における培養を行った。回腸細菌コロニーの質量分析による同定では、ＡＴＢ中止４日後に優勢になるが他の実験条件では優勢にならない、細菌（エンテロクロスター・クロストリジオホルミス新規組合せ、エンテロクロスター・ボルテアエ新規組合せ（Ｈａａｓ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，２０２０）など）のエンテロクロスター新属分岐群に属する数種（菌種）が明らかになった（図５Ｆ）。これらのエンテロクロスター菌種は、ＰＤ１遮断に抵抗性の腎臓及び肺がん患者の便中で以前に同定された（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）。バンコマイシン（エンテロクロスター菌種を死滅させる）は、回腸Ｍａｄｃａｍ１遺伝子転写物を上方制御した（図５Ｃ、左パネル）が、一方で、エンテロクロスター・クロストリジオホルミスによる経口補充は、この効果を消滅させ、かつ更にアドレシン発現に影響を及ぼした（図１Ｅ）。同様に、自発的再コロニー形成期中のＡＴＢ停止後のエンテロクロスター・クロストリジオホルミスによる経口胃管栄養法は、Ｍａｄｃａｍ１発現の喪失を悪化させた（図１Ｆ）。対照的に、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ｒｏｕｔｙ ｅｔ ａｌ．，２０１８ａ）、（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）又はエンテロコッカス・ヒラエ（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｉｒａｅ）（Ｄａｉｌｌｅｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｇｏｕｂｅｔ ｅｔ ａｌ．，２０２１）などの免疫原性共生生物による経口胃管栄養法は、特定病原体除去（ＳＰＦ）条件で飼育されたユーバイオティクスマウスの回腸組織における基礎Ｍａｄｃａｍ１発現を更に増加させることができた（図１Ｇ）。

【0104】

ＰＤ１遮断から利益を得たメラノーマ患者からの便の糞便微生物移植（ＦＭＴ）は、転移性メラノーマレシピエントの１／３においてＩＣＩに対する一次抵抗性を回避することができた（Ｂａｒｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｄａｖａｒ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。実際に、異なるドナーＦＭＴは、臨床的利益をレシピエントに移植することができなかった（表１）。それ故に、本発明者らは、肺又は腎臓がん患者からＡＴＢによって処置されたアバターマウスへのランダムＦＭＴ（Ｒｏｕｔｙ ｅｔ ａｌ．，２０１８ａ，２０１８ｂ）（上記で報告したとおり）が、ＳＰＦ条件で飼育されたレシピエントマウスにおける回腸Ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現を下方制御できるか否かを試験した。６つのＦＭＴのうち３つがそうであり（図１Ｈ、左パネル）、独特の分類学的組成に対応し、Ｅ．クロストリジオホルミスを含むエンテロクロスター菌種（又は、ＡＴＢ関連フンガテラ・ハセワイ（Ｈｕｎｇａｔｅｌｌａ ｈａｔｈｅｗａｙｉ）（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２０２０）の過剰提示により定義され、ショットガンメタゲノミクスに基づく分析でエンテロクロスター菌種（Ｈａａｓ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，２０２０）と同じ分岐群を共有する（図１Ｈ、右パネル）。

【0105】

炎症促進性アトポビウム・パルブルム（Atopobium parvulum）、Ｌ．ロイテリ（L．reuteri）を含むがフンガテラ・ハセワイ（H．hathewayi）を含まない、様々な共生生物によるＦＭＴレシピエントの経口補充は、Ｍａｄｃａｍ１回腸遺伝子発現に更に影響を及ぼし得る（図５Ｇ）。

【0106】

回腸におけるＡＴＢ誘導性Ｍａｄｃａｍ１遺伝子下方制御は、制御性サイトカイン及び転写因子（Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ２２、Ｆｏｘｐ３、ＲＯＲｃなど）の下方制御と並行し、かつ相関していた（図５Ａ左パネル、図５Ｈ～図５Ｉ）。これらのＰＣＲ結果は、ＡＴＢが、回腸ＬＰにおいて粘膜ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及びＲＯＲγｔ^＋ＣＤ４^＋（ＴＨ１７）Ｔ細胞集団の有意な喪失を誘導したことを示すフローサイトメトリー分析によって支持された（図１Ｉ）。事実、ＡＴＢは、回腸ＬＰにおけるＭａｄｃａｍ１遺伝子欠損の回腸免疫調節効果又はＭＡＤＣＡＭ１の抗体中和を表現型模写した（図１Ｊ）。

【0107】

マウスにおいて示されるように、本発明者らは、ＡＴＢを摂取し、かつ様々な適応症について腸内視鏡検査及び生検を受けた１６人の患者において、Ｍａｄｃａｍ１、Ｆｏｘｐ３、及びＲｏｒｃの腸管発現に対するＡＴＢの協調阻害効果を確認した（図１Ｋ、図５Ｊ、表２）。

【表2】

【0108】

まとめると、広域スペクトルＡＴＢレジメンは、マウス及びヒトにおいて回腸粘膜アドレシンＭＡＤＣＡＭ１の持続的下方制御を誘導し、これは、回腸Ｆｏｘｐ３、Ｉｌ１７ａ、及びＲＯＲｃ発現の低減と顕著に相関していた。

【0109】

１．２．腸から腫瘍排出リンパ節への腸作用性α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞のＡＴＢ誘導性エクソダス
本発明者らは、ＭＡＤＣＡＭ－１分子の喪失が、ＧＡＬＴにおけるそのα４β７受容体を発現する腸作用性Ｔ細胞のホーミング又は保持に影響を及ぼし得るものと仮定した。担腫瘍宿主における回腸Ｔ細胞の遊走を追跡するために、本発明者らは、２つの相補的な実験戦略を利用した。最初に、本発明者らは、細胞の完全性を破壊することなく細胞を不可逆的に標識することを可能にする、トランスジェニックＫａｅｄｅマウスモデルを使用した。このモデルは、３５０～４００ｎｍの波長の紫外線への曝露後に緑色から赤色へと光変換され得る、サンゴ由来の光変換可能な蛍光タンパク質Ｋａｅｄｅ（Ｔｏｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２００８）を遍在的に発現するレポータマウスを利用する。Ｋａｅｄｅマウスは、炎症を起こした末梢器官への遊走性腸管Ｔ_Ｈ１７細胞を追跡するための強力なツールである（Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｍａｇｎｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ＭＣＡ２０５担腫瘍体におけるＧＡＬＴ細胞の運命を追跡するために、回腸、盲腸、及び腸間膜ＬＮを、皮下腫瘍移植後１０日目（Ｄ１０）に光変換し、マウスを、フローサイトメトリーによる様々な器官における光変換細胞の検出のために２４時間後に屠殺した（図２Ａ、図６Ａ）。本発明者らは、照射の５分後に、腸間膜ＬＮにおいておよそ６０％の光変換率を達成した（図６Ａ）。２４時間で、腸管で光変換された（ＰＣ）白血球の２２．８±２．６％のみがｍＬＮに残ったが、かなりの割合のＧＡＬＴ放出光変換（ＰＣ）細胞を、脾臓（５．１±０．５％）及び腫瘍排出リンパ節（ｔｄＬＮ）（４．０±０．３％）の遠隔部位で検出することができた（図２Ａ、図６Ａ～図６Ｂ）。第２のアプローチを用いて、本発明者らは、外科手技によるｍＬＮの直接ＣＦＳＥ標識後にカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（carboxyfluorescein succinimidyl ester：ＣＦＳＥ）標識細胞を直接追跡した（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２０１６）（図２Ｂ、図６Ｃ、左パネル）。ＣＦＳＥ注射後２４時間以内に、最大１．０±０．２％の脾細胞、０．８±０．１％のｔｄＬＮ細胞、及び０．２±０．０２％の腫瘍滞留白血球が、ｍＬＮ由来白血球で置き換えられた（図６Ｃ、右パネル）。回腸照射は、腸白血球のエクソダスをｔｄＬＮ又はｓｃ腫瘍へと動員する際に、ＧＡＬＴを標的としたものよりも不充分であった（図６Ｄ）。しかしながら、局所照射及びＧＡＬＴ照射の両方が、２４時間での脾臓、ｔｄＬＮ、及びｓｃ ＭＣＡ２０５への光変換（ＰＣ）（腸由来）－ＣＤ４^＋Ｔ細胞のα４β７^＋画分の選択的動員を誘導したが、一方で他のＰＣ細胞サブセットは、組織常在（非ＰＣ）細胞と比較して富化されなかった（図２Ａ～図２Ｂ及び図６Ｅ）。再び、腫瘍微小環境（tumor microenvironment：ＴＭＥ）内のα４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の大部分は、ＣＦＳＥ ｍＬＮ標識後にＣＦＳＥ^＋であった（図２Ｂ、図６Ｆ）。ＣＤ４^＋Ｔ細胞の腸外エクソダスにおけるα４β７インテグリンの分子的関与を確認して、本発明者らは、ｔｄＬＮ中の細胞の光変換又はＣＦＳＥ標識（反対側ＬＮではなく）が、中和抗ＭＡｄＣＡＭ－１ Ａｂで処置した担腫瘍マウスにおいて有意に増加することを示した（図２Ｃ、左パネル、中央パネル、及び右パネル）。

【0110】

腸間膜ＬＮから遊出するα４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の表現型を解読するために、本発明者らは、担腫瘍体のｍＬＮから精製されたα４β７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞と比較して、α４β７^ｈｉｇｈＣＤ４^＋Ｔ細胞のバルクＲＮＡシーケンシングを実施した。α４β７^ｈｉｇｈＣＤ４^＋Ｔの転写プロファイルは、それらのＩｔｇａ４（α４β７インテグリンをコードする）腸の特徴だけでなく、また、Ｔｒｅｇ機能と関連した遺伝子生成物（Ｉｃｏｓ、Ｃｔｌａ４、Ｃｄ７４、Ｍｋｉ６７、Ｐ２ｒｘ７（Ｄａｎｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、及びＴ_Ｈ１７（Ｉｌ１７ｒｅ、Ｔｎｆｓｆ１１、Ｉｌ２２）極性化など、の顕著な増加を明らかにしたが、一方でＴｎｆｒｓｆ９Ｔ細胞共刺激遺伝子生成物（４－１ＢＢ）は、このサブセットにおいて有意に下方制御された（図２Ｄ）。

【0111】

次に、本発明者らは、ＡＴＢ誘導性ディスバイオシスが、細胞内フローサイトメトリーと組み合わせた両方のイメージングアプローチを用いて、どのようにして腸作用性α４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の腫瘍排出ＬＮへのエクソダスに影響するかを検討した（図２Ｅ～図２Ｆ）。再コロニー形成は、α４β７^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞（腸由来Ｔｒ１７）を分泌するＩＬ－１７Ａのホーミングを促進したが、α４β７^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞（ｔｄＬＮ常在－Ｔｒ１７）のホーミングも、ＩＬ－１７Ａ^＋α４β７^＋Ｆｏｘｐ３ＣＤ４^＋Ｔ細胞のｔｄＬＮへのホーミングも促進しなかった（図２Ｅ、図６Ｇ）。ＡＴＢは、ｍａｄｃａｍ１遺伝子欠損を表現型模写した（図２Ｆ）。実際には、ＡＴＢは、局所的に拡大した（腸外、ＣＦＳＥ陰性）細胞によって大きく構成されるｔｄＬＮの真の（bona fide）Ｔｒｅｇプールをほとんど増加させなかった（bearly increased）（図６Ｈ、左パネル）。Ｔｒ１７のα４β７^＋ＣＦＳＥ^＋腸遊出画分は、ＡＴＢ後の再コロニー形成中の２４時間当たりの到達ｔｄＬＮにおいて総ＣＤ４＋の０．２±０．１％を表した（図６Ｈ、中央パネル）。注目すべきことに、再コロニー形成中に遊出した腸作用性Ｔｒ１７は、ＩＬ－１７だけでなくＩＬ－２２もまた産生した（図６Ｈ、右パネル）。

【0112】

中和抗ＭＡＤＣＡＭ－１抗体はまた、ＣＤ２５^ｈｉｇｈα４β７^＋ＣＤ４^＋Ｔの遊出を促進した（図２Ｇ）。ＡＴＢ過程後の再コロニー形成は、本発明者らがＥ．クロストリジオホルミスによる強制経口胃管栄養法によって模倣しようとしたエンテロクロスター菌種（図５Ｆ）の出現を伴った。実際に、この細菌は、ｔｄＬＮへの、ＰＣ（非ＰＣではない）ＴＨ １７ ＣＤ２５^ｈｉｇｈ（ＣＤ２５^－ではない）α４β７^＋Ｔｒ１７様ＣＤ４^＋Ｔ細胞の腸からの排出を促進した（図２Ｈ）。

【0113】

光変換は正確な細胞内染色及び高次元表現型決定を可能にしないので、本発明者らは、Ｅ．クロストリジオホルミスが補充された又は補充されなかった１４日間のＡＴＢ過程（又はＡＴＢなし）から４日後に、ｍＬＮのＣＦＳＥ注射の２４時間後にｔｄＬＮに到達するＣＦＳＥ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞のＲｈａｐｓｏｄｙベースの単一細胞ＲＮＡシーケンシングを実施する腸遊出細胞のより深い特徴付けについて詳しく検討した（図７Ａ～図７Ｂ）。本発明者らは、それぞれ４つの群の各々において分配された、採取された合計４５１，２４６個の個々のＣＦＳＥ^＋ＣＤ４^＋ｔｄＬＮ Ｔ細胞をプロファイリングし（図７Ａ～図７Ｂ）、かつＡＴＢ誘導性ディスバイオシスと関連した遺伝子シグネチャを特徴付けた。ＣＦＳＥ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の教師なしクラスタリングは、データを４つの細胞クラスタ（図２Ｈ、左パネル）に分割し、本発明者らは、ｔ確率的近傍埋め込み及び報告されたマーカ遺伝子の発現による事後標識を用いて可視化した（Ｃａｎｏ－Ｇａｍｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。各クラスタは、異なる表現型と関連していた。小さなクラスタは、Ｆｏｘｐ３、Ｎｒｐ１、Ｉｌ２ｒａ、Ｔｎｆｓｆ４、Ｃｔｌα４、及び腸管特異的遺伝子発現インプリンティング（Ｔｎｆｓｆ１８、Ｒｇｓ１）によって定義されるプロトタイプの全組織エフェクターＴｒｅｇ発現パターンを特色とし、Ｔｃｆ７及びＣｄ５２（Ｓｅｆｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０１５）の下方制御を伴っていた（図２Ｈ、中央パネル）。このＴｒｅｇサブセットは、腫瘍免疫抑制に関与する負の免疫調節因子Ｐｉｋ３ｉｐ１を過剰発現し（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１９）、定常状態と比較して再コロニー形成期にＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｂａｕｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２００３）のＣＤ９５Ｌ媒介性アポトーシスに関与する転写因子ＡＰ１のメンバーであるＦｏｓｂを下方制御し（図７Ｃ）、また、再コロニー形成期又はＥ．クロストリジオホルミスによる経口胃管栄養法にＴｒ１７青写真に関連する遺伝子（Ｓｅｆｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０１５）（Ｉｋｓｆ２（また、ヘリオスとも称される）及びＬｒｒｃ３２（また、ＴＧＦβ活性化因子ＧＡＲＰとも称される）の過剰発現によって他の全ての遊出細胞と対照的であった（図７Ｄ、左パネル及び右パネル）。対照的に、増殖の特徴（Ｐｃｎａ、Ｍｙｃ、Ｍａｐｋ１、Ｆｙｎ、Ｈｉｆ１ａ）を有する別のクラスタは、Ｉｒｆ８、並びにＰｏｕ２ａｆ１（また、転写因子ＯＣＴ１又はＯＣＴ２の転写コアクチベータとして作用する、ＯＢＦ１とも称される）及びＦａｓによって支配され、その両方が、ＩＬ－２又はＩＦＮγの発現をそれぞれ抑制することによって、ＴＨ１７プログラムを促進した（Ｙｏｓｅｆ ｅｔ ａｌ．，２０１３）（図２Ｈ、右パネル）。この増殖性ＴＨ１７サブセットはまた、原型マーカを全組織Ｔｒｅｇ（ＩＩ２ｒｂ、Ｃｔｌａ４、Ｉｃｏｓ）、腸管Ｔｒｅｇ（Ｂｃｌ２ａ１ａ、Ｂｃｌ６など）、及び皮膚Ｔｒｅｇ（Ｌｇａｌｓ３）と共有した。ＡＴＢ停止誘導再コロニー形成、及びＥ．クロストリジオホルミスによる補充の最中に、病原体特異的Ｔｈ１７応答の最適なプライミングに不可欠な、インフラマソームとは無関係のＴ細胞内因性遺伝子として記載されたカスパーゼ１遺伝子（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，２０２０）が、ＴＮＦＲＳＦ並びにサイトカイン／ケモカイン形質導入及びＮＦｋｂ活性化経路（Ｎｆｋｂ１、Ｃｘｃｒ３、Ｃｘｃｒ５、Ｅｏｍｅｓ、Ｔｎｆｒｓｆ８、Ｔｎｆｒｓｆ９、Ｔｎｆ、Ｆａｓｌ、Ｆａｓ、Ｔｉｇｉｔ、Ｉｃａｍ１、Ｒｕｎｘ３、Ｊａｋ２）と併せて上方制御された（図７Ｅ、表３）。残りの２つの優性細胞クラスタは、腸炎症性活性化及び／又は抑制の原型ＩＩ７ｒ及びＰｉｋ３ｉｐ１遺伝子の特徴の発現を共有していた（Ｂｅｌａｒｉｆ ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。それらは、再コロニー形成中のＥｇｒ１、Ｆｏｘｏ１、Ｓｔａｔ６、Ｉｋｂｋｂ転写因子対Ｂｔｌａ、Ｃｎｏｔ２及びＤｕｓｐ２などの他のフィンガープリントについてわずかに異なるが（図７Ｆ～図７Ｇ）、それでも全てが腫瘍免疫抑制特性に収束する（Ｄａｎ Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２０２０；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。

【0114】

それ故に、本発明者らは、抗ＭＡｄＣＡＭ－１ ｍＡｂ又はＡＴＢ誘導再コロニー形成のいずれかによってＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸が損なわれた条件下で、２つの独立した追跡方法によってＧＡＬＴから腫瘍排出リンパ節への、腫瘍免疫監視に潜在的に有害な免疫抑制フィンガープリントを示す腸作用性α４β７^＋ＣＤ４^＋、最も具体的にはＴ_ｒ１７細胞の退出を実証した。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0115】

１．３．ＰＤ１遮断の抗がん有効性はＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸に依存する
がん免疫監視の間のＴｒ１７細胞の報告された免疫抑制的役割（Ｂｌａｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｒｉｚｚｏ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｖｏｉｇｔ ｅｔ ａｌ．，２０１７）及びこれらのＴ細胞サブセットを保持する健康な腸の能力を考えると、本発明者らは、ＭＡＤＣＡＭ－１アドレシン若しくはβ７インテグリンの遺伝的欠陥、又は特異的抗体によるＭＡＤＣＡＭ－１若しくはα４β７ヘテロ二量体の宿主中和が、治療用抗ＰＤ－１ ｍＡｂの免疫刺激能力に干渉し得ることを予想した。

【0116】

第１に、回腸Ｍａｄｃａｍ１発現の喪失は、ＰＤ１遮断にかかわらず、ＭＣＡ２０５担腫瘍動物における腫瘍サイズの増加と相関した（図８Ａ）。次に、本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから同系の移植可能なＭＣＡ２０５線維肉腫を担持する野生型動物と比較して、Ｉｔｇｂ７^－／－マウス又はＭａｄｃａｍ１^－／－マウスにおいて、ＰＤ－１阻害の抗がん有効性の顕著な低減を観察した（図３Ａ）。同様に、ＢＡＬＢ／ｃマウスからのＭＣＡ２０５線維肉腫、同所性ＴＣ１肺がん、及び同系の４Ｔ１乳がんは、中和抗ＭＡｄＣＡＭ－１又は抗α４β７ヘテロ二量体抗体の存在下におけるＰＤ１遮断にもかかわらずインビボで増殖したが、一方でＭＡＤＣＡＭ１／α４β７軸が影響を受けなかった場合、ＩＣＩに応答した（図３Ｂ～図３Ｄ）。Ｍａｄｃａｍ１^－／－マウスでは、脾臓（図３Ｅ、左パネル）及び腫瘍におけるα４β７^＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の再循環の構成的増加があり、ここでは、既に記載されているように、これらはＴＩＬの最大３％（図３Ｅ、右パネル）を表した（Ｄｅｎｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００５））。フローサイトメトリー分析により、自発腫瘍進行中の中和抗ＭＡＤＣＡＭ－１Ａｂを用いたＭＡｄＣＡＭ－１アドレシン／α４β７インテグリン軸の遮断が、ＴＭＥを再形成し、かつＲＯＲ_γｔ^＋Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋）Ｔ_ｒ１７細胞の腫瘍内蓄積の約３倍の増加をもたらしたことが明らかになった（図３Ｆ～図３Ｇ）。一切の操作なしのＭＣＡ２０５ ＴＭＥにおいて、α４β７^＋ＣＤ４^＋ＴＩＬのうち最大７６±１．５％が、ＲＯＲ_γｔ^＋Ｔｒｅｇであり、α４β７’ ＣＤ４^＋ＴＩＬ内に含有されていたものは２～３倍少なかった（１７±０．９％）（図８Ｂ）。皮下腫瘍では、Ｔｒｅｇはα４β７^＋ＣＤ４^＋ＴＩＬの１２．１±１．０％を表し、これらのＴｒｅｇのうち、３０．４＋４．５％はＲＯＲ_γｔ^＋であった。（表４）

【表4】

【0117】

ＡＴＢ停止４日後の再コロニー形成は、ｍａｄｃａｍ－１遺伝子欠損を表現型模写し、腫瘍床におけるＲＯＲ_γｔ^＋Ｔｒｅｇ（Ｔｒ１７）の割合の３～５倍の増加を誘導する（図３Ｈ）。注目すべきことに、このＴｒ１７腫瘍内ホーミングは一過性であり、抗ＰＤ１ Ａｂを投与した場合を除いて、ＡＴＢ停止後１２日までにもはや観察されなかった（図３Ｈ～図３Ｉ、図８Ｃ）。実際に、抗ＰＤ１ Ａｂは、ＭＣＡ２０５担腫瘍マウスの腸間膜ＬＮにおける、Ｔｒ１７のプライミング及び／又は拡大を促進した（図８Ｄ）。抗ＰＤ１ Ａｂは、ＭＣＡ２０５中のＲｏｒγｔ^＋Ｔｒｅｇ又はＩＬ－１７^＋ＩＬ－２２^＋Ｔｒｅｇとして定義されるＴｒ１７（図３Ｉ、図８Ｅ）、並びに４Ｔ１担腫瘍体（図８Ｆ、左パネル及び右パネル）の腫瘍内蓄積の維持及び／又は増幅に寄与した。これに関連して、腫瘍内Ｔｒｅｇは、１８．７±３．４％のα４β７^＋ＣＤ４^＋ＴＩＬを表し、これらのＴｒｅｇの中で、５６．７±８．３％はＲＯＲ_γｔ^＋であった。（表４）

【0118】

ＰＤ１阻害によって促進されたＴｒ１７動員は、ＡＴＢ停止後に経口胃管栄養法によってＥ．クロストリジオホルミスを補充した場合に更に増加したが、一方で同様の条件では、経口ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）はそうすることができなかった（図８Ｇ、右パネル及び左パネル）。驚くべきことではないが、抗ＰＤ－１ ｍＡｂ治療法中のＭＡｄＣＡＭ－１／α４β７軸の遮断は、エフェクターＣＣＲ５^＋ＣＤ８^＋ＴＩＬの浸潤を劇的に障害した（図３Ｊ）。

【0119】

ＩＬ－１７及びＩＬ－２２が直接的及び間接的な血管新生促進効果及び腫瘍形成促進効果を有すると仮定すると（Ｌｉｍ ａｎｄ Ｓａｖａｎ，２０１４；Ｖｏｉｇｔ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、サイトカインの一方又は両方のいずれかを中和することにより、ＰＤ１阻害中のＡＴＢ後の再コロニー形成の有害な影響を回避し得る。本発明者らは、腫瘍形成性用量の野生型又はＩＬ－２２Ｒα１^－／－欠損乳腺４Ｔ１腫瘍細胞を播種したマウスを、抗ＩＬ－１７Ａ中和抗体と組み合わせた抗ＰＤ１ Ａｂのｉｐ注射によって処置した（図３Ｋ、左パネル）。予想通り、ＩＬ－２２Ｒα１^－／－欠損乳腺４Ｔ１は、それらの野生型対応物よりもゆっくりと成長した。興味深いことに、抗ＩＬ－１７Ａ抗体は、野生型又はＩＬ－２２Ｒα１^－／－欠損４Ｔ１の両方について同程度までＡＴＢの有害作用を回避することができ（図３Ｋ）、ＩＬ－２２に対する腫瘍細胞反応性がＡＴＢの免疫抑制作用の根底にある本質的な機構ではないことを示唆している。

【0120】

したがって、本発明者らは、ＰＤ１遮断が、腸管内ディスバイオシスの設定においてＧＡＬＴにおけるＴＨ１７／Ｔｒ１７の増幅及び腫瘍へのホーミングを促進すると結論する。

【0121】

外部操作によるα４β７／ＭＡｄＣＡＭ－１軸の適合性の再確立は、ＡＴＢで治療された腫瘍担持者又は明白な腸内ディスバイオシスに罹患している腫瘍担持者におけるＰＤ－１遮断に対する抵抗性を回復させ得る。ＰＤ１遮断を開始する前に腸内ユーバイオーシスを回復させることは、合理的な選択肢となり得る。宿主が経口アッカーマンシア・ムシニフィラ（（Ｒｏｕｔｙ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、図１Ｆ、図９Ａ）で補償されない限り、短期ＡＴＢ、及びそれに続くαＰＤ－１Ａｂにもかかわらず再発した患者からの糞便微生物移植は、回腸Ｍａｄｃａｍ１下方制御（図１Ｇ）及びＰＤ－１遮断の非効率性を引き起こした。中和抗体がこの片利共生生物薬の有益な効果を防止したので、外因性Ａ．ムシニフィラの代償性作用はＭＡｄＣＡＭ－１機能に依存した（図９Ｂ）。Ａ．ムシニフィラは、ＭＡＤＣＡＭ－１に依存する様式で、α４β７^＋及びＣＣＲ９^＋の単一又は二重陽性ＣＤ４^＋Ｔ細胞の腸外エクソダス、及びそれらのｔｄＬＮ（図９Ａ、右パネル）へのＴＭＥ再循環への再循環、並びにα４β７＋ＣＤ４＋ＩＬ－１７＋ＩＬ－２２＋及びＴｒ１７（図９Ｃ～図９Ｄ）を防止することができた（図９Ｄ）。

【0122】

それ故に、腸管内ユーバイオーシスの回復又はＩＬ－１７Ａの中和は、ＰＤ１遮断に対するＡＴＢ誘導性抵抗性を打ち消すための潜在的な選択肢である。
１．４．可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１は、進行したＮＳＣＬＣ患者におけるＰＤ１遮断に対する抵抗性の予測バイオマーカである

【0123】

腸管組織生検を得ることは困難であるので、ＩＢＤに罹患し、かつ抗ヘテロ二量体α４β７抗体（ベドリズマブなど）で治療された患者のフォローアップを研究するための、ｓＭＡｄＣＡＭ－１ ＥＬＩＳＡなどの有用な血液アッセイが開発されている（Ｈｏｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。しかしながら、可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルもまたマウスにおいてモニタリングされたことがない。本発明者らは、回腸ｍａｄｃａｍ１遺伝子発現と血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１との間に強い相関を見出した（図４Ａ）。次に、本発明者らは、フランス（Ｎ＝１８６）並びにフランス及びカナダ（Ｎ＝１１５）において、化学療法の有無にかかわらず抗ＰＤ１／Ｌ－１抗体で治療された進行非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）患者の２つの独立したコホートにおいて、診断時の血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１の臨床的有意性を分析した（表５）。第１に、ＮＳＣＬＣ患者は、健常ボランティアと比較して、両方のコホートにおいて低減した循環血清ｓＭＡｄＣＡＭ－１濃度を有しており、ＡＴＢを摂取した人においては更にそうであった（図４Ｂ、左パネル及び右パネル）。実際に、ＡＴＢを服用した患者は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１発現の下位３分位に属するＡＴＢ非含有個体と同じ範囲のｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルを示した（図４Ｂ）。全コホートの中央値を超える高いｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルを呈する患者は、両コホートにおいて、他の半分と比較して長期の無増悪生存期間及び全生存期間を有していた（図４Ｇ）。各コホートについてバイオマーカの＋１０Ｕ／ｍＬの増加ごとに８～１０％のリスク低減を伴う、ｓＭＡｄＣＡＭ－１絶対血清濃度の増加と、死亡リスクの低減との間に線形関係があった（図１０Ａ、左パネル及び右パネル）。ＡＴＢ治療患者は、ＭＡｄＣＡＭ－１^ｌｏｗサブグループにおいて最悪のＰＦＳを呈した（図４Ｆ）。更に、モデルにおけるＥＣＯＧ－ＰＳ、年齢、性別、ＰＤ－Ｌ１発現、治療法選択肢を考慮した多変量コックス回帰分析は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１がＮＳＣＬＣ患者におけるＰＤ１遮断に対する臨床的利益の独立した予測因子であると結論付けた（表６）。本発明者らは、心血管イベントを経験している高リスクのヘビースモーカ（ＨＲＨＳＣＶ）における早期ＮＳＣＬＣ発生率を予測するバイオマーカとして、このバイオマーカの臨床的関連性をＰＤ１阻害を超えて拡大した（ＰＲＥＶＡＬＵＮＧ研究、表７）。実際に、ｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルは、ＮＳＣＬＣの診断の６～１２ヶ月前に肺がん小結節を発症したと認められる１３人のＨＲＨＳＣＶ個体において、発症しなかった９９人の対になる対照と比較して有意に低かった（図１０Ｂ）。可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルは、全コホートにおいて循環α４β７^＋Ｒｏｒγｔ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞と相関していた（図１０Ｃ）。

【0124】

最後に、進行したＮＳＣＬＣ患者における可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルと腸内ディスバイオシスとの間の関係を直接示すために、本発明者らは、要求される全てのＭＧ及び血清情報を提供するｎ＝９５の患者におけるショットガンメタゲノミクス（ＭＧ）分析を用いて、ｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルの中央値に従って腸管内微生物叢の分類学的組成を定義するメタゲノミクス種（ＭＧＳ）の教師なし及び教師あり階層的クラスタリングを実施した。第１に、ＭＡｄＣＡＭ－１^ｌｏｗ患者（１１２人全てのＮＳＣＬＣ患者の中央値に基づいて分離された）においてＭＧＳ豊富性の低減があった（図４Ｃ）。更に、この異なるアルファ多様性は、有意に異なるベータ多様性を伴い、これは、分類学的腸組成が両方のサブセットにおいて類似していなかったことを意味する（図５Ｆ）。教師なしＭＧ分析は、実際にＭＡｄＣＡＭ－１中央値に基づいて患者をまた分離した２つのクラスタを明らかにした（フィッシャーの正確確率検定、ｐ＜０．０５、図１０Ｄ～図１０Ｅ）。

【0125】

最後に、マウスに見られ（図１Ｇ、右パネル）、大規模な一連のＮＳＣＬＣ患者において臨床的に予後不良に関連するＭＧＳのリストのみを選択すると（Ｔｓａｙ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｚｉｔｖｏｇｅｌ ａｎｄ Ｋｒｏｅｍｅｒ，２０２１）、（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）、本発明者らは、腸管Ｅ．クロストリジオホルミス及びＶ．パルブラ（Ｖ．ｐａｒｖｕｌａ）の広がりが高い患者が低レベルのｓＭＡｄＣＡＭ－１を提示する患者であると結論付け、確認する。

【0126】

まとめると、これらの知見は、可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１が、がん患者におけるＰＤ１遮断に対する抵抗性を予測する腸管内ディスバイオシスの代用マーカであることを指し示している。

【0127】

【表5】

【表6】

【表7】

【0128】

考察
本発明者らの知見は、ＧＡＬＴが腸指向性免疫抑制性Ｔ_Ｈ２２／Ｔ_Ｈ１７（そのうち、２０％までがＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ_ｒｅｇ細胞である）の遊出をチェックし続ける腫瘍形成プロセスによって攻撃される宿主における回腸の極めて重要な役割を明らかにする。腸及びＴＭＥの両方は、それらの受容体又はリガンド対を発現する循環リンパ球に対して競合する細胞誘引及びホーミング分子に富む。ＧＡＬＴから腫瘍床へのフェイトマッピングを可能にするツールを用いて、本発明者らは、腸滞留と腫瘍沈着物への化学誘引との間の腸作用性Ｔ細胞の運命決定が、ＭＡｄＣＡＭ－１アドレシン／α４β７インテグリン分子相互作用によって少なくとも部分的に制御されることを明らかにする。

【0129】

第１に、ＡＴＢは、ＬＰ回腸細静脈におけるＭＡｄＣＡＭ－１発現、並びに粘膜及びｍＬＮのＨＥＶを下方制御し、腸外病変に対するα４β７＋Ｔｈ１７／Ｔｒ１７細胞の回腸エクソダスを好む。第２に、ＭＡｄＣＡＭの欠損又は中和は、ＡＴＢの効果を表現型模写した。Ｍａｄｃａｍ－１若しくはβ７インテグリン遺伝子欠損マウス、又はこれらの分子を標的化する、中和Ａｂを受けた動物は、腸由来のα４β７＋Ｔｒ１７／ＴＨ１７細胞をＴＭＥに蓄積することによって、ＩＣＩに応答することができなかった。第３に、回腸ＨＥＶ上のＭＡｄＣＡＭ－１発現を回復させること（Ａ．ムシニフィラなど）又はＩＬ－１７Ａ生物活性を遮断することを目的とした操作は、腫瘍免疫監視におけるＡＴＢの阻害効果を補償した。第４に、エンテロクロスター菌種（Ｅ．クロストリジオホルミスなど）を用いた強制経口胃管栄養法は、ｔｄＬＮに対する腸作用性Ｔｒ１７のエクソダスを悪化させた。最後に、ＰＤ１遮断は、ｍＬＮにおけるα４β７＋Ｔｒ１７細胞の拡大及び／又はプライミングを悪化させ、腫瘍にホーミングして戻し、がん免疫監視を損なう傾向があった。これらの一連のエビデンスは全て、ＩＣＩ開始中又はＩＣＩ開始後とは対照的に、ＩＣＩ投与前のＡＴＢの有害作用を指摘する疫学的研究を支持している（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）。その結果、本発明者らは、血清可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１が回腸のｍａｄｃａｍ１遺伝子発現の生物学的代用物であり、少なくともＮＳＣＬＣ患者においてＰＤ１遮断に対する応答の信頼できる予測因子であることを示す。低いｓＭＡＤＣＡＭ－１血清レベルは、プロＴＨ１７細菌（例えば、ベイロネラ・パルブーラ（Veilonella parvula）など）又は生理病理学的障害に関連するエンテロクロスター属由来の種によって支配される腸管内ディスバイオシスを反映した（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，２０２０；Ｔｓａｙ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｚｉｔｖｏｇｅｌ ａｎｄ Ｋｒｏｅｍｅｒ，２０２１）（Ｄｅｒｏｓａ ｅｔ ａｌ．２０２２）。

【0130】

この実証は、腸由来Ｔ_Ｈ１７がまた、腸外自己免疫（Ｍａｇｎｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１０）（Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１ｂ）、又は炎症性／虚血性病変（Ｂｅｎａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｌｉｅｓｚ ｅｔ ａｌ．，２００９）も制御することを示すこれまでのエビデンスに沿うものである。ＲＯＲ_γｔ^＋Ｔｒｅｇは、本発明者らもＡＴＢ誘導性腸内ディスバイオシス設定において上方制御されることを見出した遺伝子生成物（Ｃｔｌα４、Ｉｃｏｓ、Ｈａｖｃｒ２（Ｓｅｆｉｋ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１５）など）の過剰発現を伴う、それらの系統関連Ｔｒｅｇと比較して悪化した免疫抑制表現型を有する。更に、本発明者らは、以前にランドマークとなる論文（Ｍｉｒａｇａｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ｍｕｎｏｚ－Ｒｏｊａｓ ａｎｄ Ｍａｔｈｉｓ，２０２１）に記載された本発明者らのＴｒ１７フィンガープリント、ＴＨ１７関連青写真（Ｙｏｓｅｆ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、並びに腫瘍免疫監視に機能的に関連する免疫抑制形質（Ｄｕｓｐ２／ＰＣＡ１（Ｄａｎ Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、ＰＩＫ３ｉｐ１（Ｕｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８）など）において、腸特異的Ｔｒｅｇ特徴を同定した。

【0131】

がん担持者におけるこの例は、抗α４β７抗体ベドリズマブによる治療中に、腸外α４β７^＋Ｔ_ｒｅｇ及びセントラルメモリーＴ細胞又はＣＣＲ６^＋ＣＤ４^＋Ｔリンパ球の再循環が増加することが報告されており、炎症性腸疾患に罹患している患者又はマカクで実施された過去の研究と一致している（Ｃａｌｅｎｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｄ’Ｈａｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。本発明者らの知見は、重要な臨床的意義を有する。これまでのところ、ベドリズマブは、その腸に制限された作用様式のために、ＩＣＩ誘導自己免疫性大腸炎に罹患しているがん患者におけるＴＮＦα阻害のより安全な代替物であると考えられていた（Ｓａｎｄｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。しかしながら、前向き研究は、ＩＣＩで治療された患者における臨床アウトカム及び毒性プロファイルとこれらの新規パラメータを相関させるために、マイクロバイオーム組成、腸、又は可溶性血清ＭＡｄＣＡＭ－１発現、並びにＣＣＲ９ α４β７^＋Ｔ_ｒｅｇ、Ｔｒ１７、及びＴ_ｈ２２細胞サブセットの再循環をモニタリングすべきである。最後に、糞便微生物移植の分野は、がん担持レシピエントにおけるＭＡＤＣＡＭ－１レベルを正規化する能力に基づいて、ドナー糞便の選択を誘導する方向に進化し得る。

【0132】

これらの知見は、がん担持患者が、最も強力な腸免疫チェックポイントＭＡＤＣＡＭ－１のうち１つを変化させる抗生物質を服用することによって、そのがん関連回腸障害を悪化させ得るという概念を裏付けている（Ｙｏｎｅｋｕｒａ ｅｔ ａｌ ２０２２）。本発明者らは、ＡＴＢ誘導性ディスバイオシス、最も具体的にはＡＴＢ過程後の再コロニー形成過程が、腸免疫チェックポイントＭＡＤＣＡＭ－１の主要調節因子であるものと推測する。いくつかの分子的手がかりは、腸内ディスバイオシスとＧＡＬＴ ＭＡＤＣＡＭ－１の変化とを結びつける可能性があり、例えば、胆汁酸塩の細菌誘導代謝の撹乱（Ｃａｍｐｂｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０２０；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、及び交感神経系の活性化（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０２１）などがあり、これは更なる研究に値する。

【0133】

実施例２：可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１は、いくつかの固形がんにおけるＰＤ１遮断に対する抵抗性の予測バイオマーカである
２．１．可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１は、腎臓がん患者におけるＰＤ１遮断に対する抵抗性の予測バイオマーカである
実施例１では、本発明者らは、進行した非小細胞肺がん患者（ＮＳＣＬＣ）の２つの独立したコホートにおいて、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１レベルが、イムノオンコロジー（Ｉ－Ｏ）療法に対する抵抗性又は感受性のマーカであることを示した。ここで、血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のレベルの低減は、Ｉ－Ｏ療法に対する抵抗性のマーカである。

【0134】

ここで、本発明者らは、この知見を別のがん型：セカンドライン治療（チロシンキナーゼ阻害剤の失敗後）において、ニボルマブで治療された腎臓がんへと拡張する（表８）。

【表8】

【0135】

全体として、ＮＩＶＯＲＥＩＮコホートからの２１２人の患者を抗ＰＤ１ｍＡｂ（ニボルマブ、ＢＭＳ）を受けるために登録した。３１人は抗生物質使用者であり（治療開始後－６０日目～＋４２日目）、１７６人は抗生物質を摂取しなかった。ベースラインでの血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１のＥＬＩＳＡによりモニタリングを実施したところ、これらの２１２人の転移性淡明細胞型腎細胞がん（ＲＣＣ）患者について８８．８ｎｇ／ｍＬ（１９．１，１７４．７）の中央値（最小、最大）（及び８８．４±２７．７ｎｇ／ｍＬの平均±ＳＤ）が明らかになった。ＮＳＣＬＣ患者について示されるように、抗生物質取込み（ＡＴＢ）は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１の濃度を減少させる傾向があった（ＡＴＢの服用を控えた患者における中央値８８．７ｎｇ／ｍＬから、ＡＴＢを服用した患者における７６．３ｎｇ／ｍＬまで）。注目すべきことに、これらのＡＴＢ＋患者の大部分（２３／３１）が抗ＰＤ１ Ａｂの開始後にＡＴＢを服用したので（臨床的にあまり有意ではない）、これは過小評価されている。

【0136】

全生存期間（ＯＳ）を、２１２人の患者のコホート全体について、抗ＰＤ１ Ａｂ開始直前のｓＭＡｄＣＡＭ－１ベースラインレベルの中央値に従って分析した。ＲＣＣ患者のカプラン・マイヤーＯＳ曲線は、８８．８ｎｇ／ｍＬ未満のｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルを示す者が７２／１０６例で死亡したが、一方で８８．８ｎｇ／ｍＬ以上のｓＭＡｄＣＡＭ－１血清濃度を有する者では死亡率が３６／１０６であったことを示す（ｐ＜１０ｅ－４）（図１１）。この予後パラメータを、ステージＩＶ ＲＣＣの生存に影響を及ぼす全ての臨床因子、例えば、年齢、ＩＭ ＤＣスコア、治療ライン、及び転移位置、並びに低アルブミン血症などを包含する多変量分析で分析した。多変量分析は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１＜８８．８ｎｇ／ｍＬが、ＩＭＤＣ重症について、ＨＲ＝２．２９（１．１１－４．７６，ｐ＝０．０８）に対してｓＭＡｄＣＡＭ－１についてハザード比：２．４０（１．５２－３．８０，ｐ＝０．０００２）でＩＭＤＣスコアを上回ることを明らかにした（表９）。

【表9】

【0137】

無増悪生存期間（ＰＦＳ）を、２１２人の患者のコホート全体について、抗ＰＤ１ Ａｂ開始直前のｓＭＡｄＣＡＭ－１ベースラインレベルの中央値に従って分析した。ＲＣＣのカプラン・マイヤーＰＦＳ曲線は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベル＜８８．８ｎｇ／ｍＬを呈する患者では、９９／１０６のケースで進行したが、一方でｓＭＡｄＣＡＭ－１血清濃度≧８８．８ｎｇ／ｍＬを有する患者では、進行率は８６／１０６であったことを示す（ｐ＜１０ｅ－４）（図１２）。この予後パラメータを、ステージＩＶ ＲＣＣの生存に影響を及ぼす全ての臨床因子、例えば、年齢、ＩＭ ＤＣスコア、治療法のライン、及び転移位置、並びに低アルブミン血症などを包含する多変量分析で分析した。多変量分析により、ｓＭＡｄＣＡＭ－１＜８８．８ｎｇ／ｍＬがＩＭＤＣスコアと同程度に良好であることが明らかになった（表１０、ＨＲ＝１．５５、ｐ＝０．００７１）。

【表10】

【0138】

客観的応答率（ＯＲＲ）に関して、ＮＩＶＯＲＥＮ試験（Ｎ＝７２９のＲＣＣ患者）は、２０．８％の客観的奏効率を記録した（１．完全応答の２％、及び部分応答の１９．６％、進行性疾患（ＰＤ）の７９．２％）。興味深いことに、ｓＭＡｄＣＡＭ－１血清レベルが利用可能であった２１２人のＲＣＣ患者のサブグループを、ＡＴＢ取込みあり／なし、及びｓＭＡｄＣＡＭ－１（≧８８．８対＜８８．８ｎｇ／ｍＬ）に従って細分した。最初に、ｓＭＡｄＣＡＭ－１による最良客観的応答のサブグループ分析により、ＰＤの割合は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１≧８８．８対＜８８．８ｎｇ／ｍＬの患者でそれぞれ３６．７％対６２．６％であることが明らかになった（ｐ＝０．０００３）（表１０）。次に、本発明者らがＡＴＢを服用しなかった患者のみを検討した場合、ｓＭＡｄＣＡＭ－１による最良応答の同じサブグループ分析は、ＰＤの割合がｓＭＡｄＣＡＭ－１≧８８．８対＜８８．８ｎｇ／ｍＬの患者において、それぞれ３８．６％対６０．５％であったことを明らかにした（ｐ＝０．００４４）。第３に、本発明者らがＡＴＢを服用したＲＣＣ患者を検討した場合、ｓＭＡｄＣＡＭ－１による最良応答率のこのサブグループ分析は、ＰＤの割合がｓＭＡｄＣＡＭ－１≧８８．８対＜８８．８ｎｇ／ｍＬの患者において、それぞれ３６．４％対７６．９％であったことを明らかにした（ｐ＝０．０４４６）。ＡＴＢ治療サブグループでは、完全応答者の割合は、ｓＭＡｄＣＡＭ－１≧８８．８対＜８８．８ｎｇ／ｍＬの患者でそれぞれ１８．２％対７．７％であった（以下の表１１）。

【表11】

【0139】

まとめると、これらの知見は、高レベルの血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１が、ＲＣＣのセカンドライン免疫療法におけるＰＤ１遮断に対する応答の増加に関連し、抗生物質を摂取した患者ではよりそうであることを実証している。８８ｎｇ／ｍＬの閾値は、セカンドラインに対して有効であるが、ファーストラインの患者を表すものではない。日常的な使用のために、１Ｌ又は２Ｌの治療法のコホートの中央値を考慮しなければならない。

【0140】

２．２．可溶性ＭＡＤＣＡＭ－１は、膀胱がん患者におけるＰＤ１遮断に対する抵抗性の予測バイオマーカである
最後に、本発明者らは、１５００ｍｇのデュルバルマブｉｖ（抗ＰＤ－Ｌ１Ａｂｓ）／４週間の固定用量を受けるために前治療した転移性膀胱がん患者を登録する、第３相試験のサブコホートにおいて、ｓＭＡｄＣＡＭ－１の予測値を三倍にすることを試みた。この強力な研究では、７９人の患者のみが分析され、全ＯＳ中央値は５．７９ヶ月、ＰＦＳ中央値は２．７９ヶ月であった。本発明者らは、極端な強コホート、３０人のエリート患者（ＯＳ＞６ヶ月、ＰＦＳ＞５ヶ月、ＰＲ＋ＣＲのみ）、及び急速発症者（ｎ＝４９、初回ＣＴスキャンで、ＯＳ＜６ヶ月及びＰＦＳ＜５ヶ月、並びにＰＤ）を選択した。このコホートでは、ＭＡｄＣＡＭ－１中央値（最小、最大）は１５８．８ｎｇ／ｍＬ（５３．４１、２４４．３６）であった。図１３Ａにおいて、本発明者らは、ｓＭＡｄＣＡＭ－１の中央値±ＳＥＭが進行者において劇的に減少し、ＯＳが、他の半分と比較して１５８．８ｎｇ／ｍＬ超のｓＭＡｄＣＡＭ－１のベースラインレベルを示す患者の前半において有意に良好であったことを示す（図１３Ｂ、ｐ＝０．０３）。ＰＦＳは、高いＭＡｄＣＡＭ－１レベルを有する患者において優れている傾向があった（図１３Ｃ、ｎｓ）。

【0141】

２．３．結論
まとめると、これらの知見は、高レベルの血清可溶性ＭＡｄＣＡＭ－１が、ＡＴＢ取込みに関係なく、ＲＣＣのセカンドライン免疫療法、セカンドライン転移性膀胱腫瘍、及びペンブロリズマブで治療した１Ｌ及び２Ｌ ＮＳＣＬＣにおいて、ＰＤ１／ＰＤＬ－１遮断に対する応答の増加に関連することを実証している。

【0142】

略語：
α４β７：アルファ４ベータ７、Ａｂ：抗体、ＡＣＳ：アンピシリン、コリスチン、ストレプトマイシン、ＡＴＢ：抗生物質、ＡＴＲＡ：全トランス型レチノイン酸、ＣＣＬ：ケモカインリガンド、ＣＣＲ：ケモカイン受容体、ＣＤ：分化クラスタ、ｃＤＣ１：古典的樹状細胞１型、ＣＦＳＥ：カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル、ｃＬＮ：反対側リンパ節、ＣＳＦ－１：コロニー刺激因子１、ＣＴＬ：細胞傷害性Ｔリンパ球、ＦＭＴ：糞便粘膜移行、ＦｏｘＰ３：有孔ボックスＰ３、ＧＡＬＴ：Ｇｕｔ関連リンパ組織、ＨＥＶ：高内皮細静脈、ＩＢＤ：炎症性腸疾患、ＩＣＩ：免疫チェックポイント阻害剤、ＩＦＮγ：インターフェロンγ、ＬＰ：粘膜固有層、ｍＡＢ：モノクローナル抗体、ＭＡｄＣＡＭ－１：粘膜アドレシン細胞接着分子－１、ｍＬＮ：腸間膜リンパ節、ＰＰ：パイエル板、ＲＡ：レチノイン酸、ＲＯＲＣ：ＲＡＲ関連オーファン受容体Ｃ、ＳＬＯ：二次リンパ器官、ｔｄＬＮ：腫瘍排出リンパ節、Ｔ_Ｈ１７：Ｔ－ヘルパー１７－ＣＤ４－Ｔ細胞、ＴＭＥ：腫瘍微小環境、ＴＮＦα：腫瘍壊死因子アルファ、Ｔ_ｒｅｇ：調節性Ｔ細胞、Ｔｒ１７：ＲＯＲ_γｔ＋Ｔ_ｒｅｇ－ＣＤ４－Ｔ細胞。
参考文献
Ｂａｒｕｃｈ，Ｅ．Ｎ．，Ｙｏｕｎｇｓｔｅｒ，Ｉ．，Ｂｅｎ－Ｂｅｔｚａｌｅｌ，Ｇ．，Ｏｒｔｅｎｂｅｒｇ，Ｒ．，Ｌａｈａｔ，Ａ．，Ｋａｔｚ，Ｌ．，Ａｄｌｅｒ，Ｋ．，Ｄｉｃｋ－Ｎｅｃｕｌａ，Ｄ．，Ｒａｓｋｉｎ，Ｓ．，Ｂｌｏｃｈ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ｆｅｃａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ－ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７１，６０２－６０９．
Ｂａｕｍａｎｎ，Ｓ．，Ｈｅｓｓ，Ｊ．，Ｅｉｃｈｈｏｒｓｔ，Ｓ．Ｔ．，Ｋｒｕｅｇｅｒ，Ａ．，Ａｎｇｅｌ，Ｐ．，Ｋｒａｍｍｅｒ，Ｐ．Ｈ．，ａｎｄ Ｋｉｒｃｈｈｏｆｆ，Ｓ．（２００３）．「Ａｎ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ＦｏｓＢ ｉｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ．」 Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２，１３３３－１３３９．
Ｂｅｌａｒｉｆ，Ｌ．，Ｄａｎｇｅｒ，Ｒ．，Ｋｅｒｍａｒｒｅｃ，Ｌ．，Ｎｅｒｒｉｅｒｅ－Ｄａｇｕｉｎ，Ｖ．，Ｐｅｎｇａｍ，Ｓ．，Ｄｕｒａｎｄ，Ｔ．，Ｍａｒｙ，Ｃ．，Ｋｅｒｄｒｅｕｘ，Ｅ．，Ｇａｕｔｔｉｅｒ，Ｖ．，Ｋｕｃｉｋ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．（２０１９）．「ＩＬ－７ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ａｎｔｉ－ＴＮＦ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｇｕｔ ｈｏｍｉｎｇ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ．」 Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２９，１９１０－１９２５．
Ｂｅｎａｋｉｓ，Ｃ．，Ｂｒｅａ，Ｄ．，Ｃａｂａｌｌｅｒｏ，Ｓ．，Ｆａｒａｃｏ，Ｇ．，Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．，Ｓｉｔａ，Ｇ．，Ｒａｃｃｈｕｍｉ，Ｇ．，Ｌｉｎｇ，Ｌ．，Ｐａｍｅｒ，Ｅ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．「Ｃｏｍｍｅｎｓａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ａｆｆｅｃｔｓ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ ｏｕｔｃｏｍｅ ｂｙ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ γδ Ｔ ｃｅｌｌｓ．」Ｎａｔ．Ｍｅｄ．．２２，５１６－５２３．
Ｂｌａｔｎｅｒ，Ｎ．Ｒ．，Ｍｕｌｃａｈｙ，Ｍ．Ｆ．，Ｄｅｎｎｉｓ，Ｋ．Ｌ．，Ｓｃｈｏｌｔｅｎｓ，Ｄ．，Ｂｅｎｔｒｅｍ，Ｄ．Ｊ．，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｊ．Ｄ．，Ｈａｍ，Ｓ．，Ｓａｎｄａｌｌ，Ｂ．Ｐ．，Ｋｈａｎ，Ｍ．Ｗ．，Ｍａｈｖｉ，Ｄ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２０１２）．「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＯＲ_γｔ Ｍａｒｋｓ ａ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｕｂｓｅｔ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４，１６４ｒａ１５９－１６４ｒａ１５９．
Ｂｒａｈｍｅｒ，Ｊ．，Ｒｅｃｋａｍｐ，Ｋ．Ｌ．，Ｂａａｓ，Ｐ．，Ｇｒｉｎｄ，Ｌ．，Ｅｂｅｒｈａｒｄｔ，Ｗ．Ｅ．Ｅ．，Ｐｏｄｄｕｂｓｋａｙａ，Ｅ．，Ａｎｔｏｎｉａ，Ｓ．，Ｐｌｕｚａｎｓｋｉ，Ａ．，Ｖｏｋｅｓ，Ｅ．Ｅ．，Ｈｏｌｇａｄｏ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．「Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ ｖｅｒｓｕｓ Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｓｑｕａｍｏｕｓ－Ｃｅｌｌ Ｎｏｎ－Ｓｍａｌｌ－Ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ．」Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７３，１２３－１３５．
Ｂｒｉｓｋｉｎ，Ｍ．，Ｗｉｎｓｏｒ－Ｈｉｎｅｓ，Ｄ．，Ｓｈｙｊａｎ，Ａ．，Ｃｏｃｈｒａｎ，Ｎ．，Ｂｌｏｏｍ，Ｓ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．，ＭｃＥｖｏｙ，Ｌ．Ｍ．，Ｂｕｔｃｈｅｒ，Ｅ．Ｃ．，Ｋａｓｓａｍ，Ｎ．，Ｍａｃｋａｙ，Ｃ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（１９９７）．「Ｈｕｍａｎ ｍｕｃｏｓａｌ ａｄｄｒｅｓｓｉｎ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１ ｉｓ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅ．」 Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５１，９７－１１０．
Ｃａｌｅｎｄａ，Ｇ．，Ｋｅａｗｖｉｃｈｉｔ，Ｒ．，Ａｒｒｏｄｅ－Ｂｒｕｓｅｓ，Ｇ．，Ｐａｔｔａｎａｐａｎｙａｓａｔ，Ｋ．，Ｆｒａｎｋ，Ｉ．，Ｂｙｒａｒｅｄｄｙ，Ｓ．Ｎ．，Ａｒｔｈｏｓ，Ｊ．，Ｃｉｃａｌａ，Ｃ．，Ｇｒａｓｐｅｒｇｅ，Ｂ．，Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．「Ｉｎｔｅｇｒｉｎ α４β７ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｉｍｐａｃｔｓ ＣＣＲ６＋ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍｕｃｏｓａｌ Ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｎａｉｖｅ Ｒｈｅｓｕｓ Ｍａｃａｑｕｅｓ．」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００，８１０－８２０．
Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｃ．，ＭｃＫｅｎｎｅｙ，Ｐ．Ｔ．，Ｋｏｎｓｔａｎｔｉｎｏｖｓｋｙ，Ｄ．，Ｉｓａｅｖａ，Ｏ．Ｉ．，Ｓｃｈｉｚａｓ，Ｍ．，Ｖｅｒｔｅｒ，Ｊ．，Ｍａｉ，Ｃ．，Ｊｉｎ，Ｗ．－Ｂ．，Ｇｕｏ，Ｃ．－Ｊ．，Ｖｉｏｌａｎｔｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．」 Ｎａｔｕｒｅ ５８１，４７５－４７９．
Ｃａｎｏ－Ｇａｍｅｚ，Ｅ．，Ｓｏｓｋｉｃ，Ｂ．，Ｒｏｕｍｅｌｉｏｔｉｓ，Ｔ．Ｉ．，Ｓｏ，Ｅ．，Ｓｍｙｔｈ，Ｄ．Ｊ．，Ｂａｌｄｒｉｇｈｉ，Ｍ．，Ｗｉｌｌｅ，Ｄ．，Ｎａｋｉｃ，Ｎ．，Ｅｓｐａｒｚａ－Ｇｏｒｄｉｌｌｏ，Ｊ．，Ｌａｒｍｉｎｉｅ，Ｃ．Ｇ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｏｒｎｅｓｓ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｓｈａｐｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．」 Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ １１，１８０１．
Ｃｈｅｎ，Ｄ．Ｓ．，ａｎｄ Ｍｅｌｌｍａｎ，Ｉ．（２０１７）．「Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ－ｉｍｍｕｎｅ ｓｅｔ ｐｏｉｎｔ．」 Ｎａｔｕｒｅ ５４１，３２１－３３０．
Ｃｈｅｎ，Ｙ．，Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｌｉ，Ｘ．，Ｓｏｎｇ，Ｊ．，Ｆａｎｇ，Ｊ．，Ｌｉｕ，Ｘ．，Ｌｉｕ，Ｔ．，Ｗａｎｇ，Ｄ．，Ｌｉ，Ｑ．，ｅｔ ａｌ．（２０１９）．「Ｐｉｋ３ｉｐ１ Ｉｓ ａ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｔｈａｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」 Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２５，６１８０－６１９４．
Ｃｏｃｈａｕｄ，Ｓ．，Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ，Ｊ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｃ．，Ｌａｐｒｅｖｏｔｔｅ，Ｅ．，Ｇａｒｂａｒ，Ｃ．，Ｓａｖｏｙｅ，Ａ．－Ｍ．，Ｃｕｒｅ，Ｈ．，Ｍａｓｃａｕｘ，Ｃ．，Ａｌｂｅｒｉｃｉ，Ｇ．，Ｂｏｎｎｅｆｏｙ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）．「ＩＬ－１７Ａ ｉｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ＴＩＬｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ＥＲＫ１／２．」 Ｓｃｉ Ｒｅｐ ３，３４５６．
Ｄａｉｌｌｅｒｅ，Ｒ．，Ｖｅｔｉｚｏｕ，Ｍ．，Ｗａｌｄｓｃｈｍｉｔｔ，Ｎ．，Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｔ．，Ｉｓｎａｒｄ，Ｃ．，Ｐｏｉｒｉｅｒ－Ｃｏｌａｍｅ，Ｖ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｃ．Ｐ．Ｍ．，Ｆｌａｍｅｎｔ，Ｃ．，Ｌｅｐａｇｅ，Ｐ．，Ｒｏｂｅｒｔｉ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．「Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｉｒａｅ ａｎｄ Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉｈｏｍｉｎｉｓ Ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ．」 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４５，９３１－９４３．
Ｄａｎ Ｌｕ，Ｌｉｕ，Ｌ．，Ｓｕｎ，Ｙ．，Ｓｏｎｇ，Ｊ．，Ｙｉｎ，Ｑ．，Ｚｈａｎｇ，Ｇ．，Ｑｉ，Ｆ．，Ｈｕ，Ｚ．，Ｙａｎｇ，Ｚ．，Ｚｈｏｕ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ＰＡＣ１ ａｃｔｓ ａｓ ａ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ａｎｄ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｈｏｓｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」 Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１，２８７－２９７．
Ｄａｎｉｅｌ，Ｃ．，Ｗｅｎｎｈｏｌｄ，Ｋ．，Ｋｉｍ，Ｈ．－Ｊ．，ａｎｄ ｖｏｎ Ｂｏｅｈｍｅｒ，Ｈ．（２０１０）．「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｒｅｇ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ．」 Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０７，１６２４６－１６２５１．
Ｄａｖａｒ，Ｄ．，Ｄｚｕｔｓｅｖ，Ａ．Ｋ．，ＭｃＣｕｌｌｏｃｈ，Ｊ．Ａ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ，Ｒ．Ｒ．，Ｃｈａｕｖｉｎ，Ｊ．－Ｍ．，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．，Ｄｅｂｌａｓｉｏ，Ｒ．Ｎ．，Ｍｅｎｎａ，Ｃ．，Ｄｉｎｇ，Ｑ．，Ｐａｇｌｉａｎｏ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ｆｅｃａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｎｔｉ－ＰＤ－１ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７１，５９５－６０２．
Ｄｅｎｎｉｎｇ，Ｔ．Ｌ．，Ｋｉｍ，Ｇ．，ａｎｄ Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．（２００５）．「Ｃｕｔｔｉｎｇ ｅｄｇｅ：ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｉｎｇ ｃａｎ ｐｒｅｖｅｎｔ ｃｏｌｉｔｉｓ．」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４，７４８７－７４９１．
Ｄｅｒｏｓａ，Ｌ．，Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．，Ｆｉｄｅｌｌｅ，Ｍ．，ｌｅｂｂａ，Ｖ．，Ａｌｌａ，Ｌ．，Ｐａｓｏｌｌｉ，Ｅ．，Ｓｅｇａｔａ，Ｎ．，Ｄｅｓｎｏｙｅｒ，Ａ．，Ｐｉｅｔｒａｎｔｏｎｉｏ，Ｆ．，Ｆｅｒｒｅｒｅ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｇｕｔ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｄｒｉｖｅｓ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｒｅｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．」 Ｅｕｒ Ｕｒｏｌ ７８，１９５－２０６．
Ｄｅｒｏｓａ，Ｌ．，Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．，Ｄｅｓｉｌｅｔｓ，Ａ．，Ｄａｉｌｌｅｒｅ，Ｒ．，Ｔｅｒｒｉｓｓｅ，Ｓ．，Ｋｒｏｅｍｅｒ，Ｇ．，ａｎｄ Ｚｉｔｖｏｇｅｌ，Ｌ．（２０２１）．「Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ－Ｃｅｎｔｅｒｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ：Ｔｈｅ Ｎｅｘｔ Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ？」 Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ １１，２３９６－２４１２．
Ｄｅｒｏｓａ Ｌ，Ｒｏｕｔｙ Ｂ，Ｔｈｏｍａｓ ＡＭ，ｌｅｂｂａ Ｖ，Ｚａｌｃｍａｎ Ｇ，Ｆｒｉａｒｄ Ｓ，Ｍａｚｉｅｒｅｓ Ｊ，Ａｕｄｉｇｉｅｒ－Ｖａｌｅｔｔｅ Ｃ，Ｍｏｒｏ－Ｓｉｂｉｌｏｔ Ｄ，Ｇｏｌｄｗａｓｓｅｒ Ｆ ｅｔ ａｌ．（２０２２）．「Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＰＤ－１ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．」 Ｎａｔ Ｍｅｄ ２８（２），３１５－３２４．
Ｄ’Ｈａｅｎｓ，Ｇ．，Ｖｅｒｍｅｉｒｅ，Ｓ．，Ｖｏｇｅｌｓａｎｇ，Ｈ．，Ａｌｌｅｚ，Ｍ．，Ｄｅｓｒｅｕｍａｕｘ，Ｐ．，Ｖａｎ Ｇｏｓｓｕｍ，Ａ．，Ｓａｎｄｂｏｒｎ，Ｗ．Ｊ．，Ｂａｕｍｇａｒｔ，Ｄ．Ｃ．，Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，Ｒ．Ｍ．，Ｃｏｍｅｒ，Ｇ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＰＦ－００５４７６５９ ｏｎ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ β７＋ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｃｒｏｈｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ＴＯＳＣＡ Ｓｔｕｄｙ．」 Ｊ Ｃｒｏｈｎｓ Ｃｏｌｉｔｉｓ １２，１８８－１９６．
Ｅｌｋｒｉｅｆ，Ａ．，Ｄｅｒｏｓａ，Ｌ．，Ｋｒｏｅｍｅｒ，Ｇ．，Ｚｉｔｖｏｇｅｌ，Ｌ．，ａｎｄ Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．（２０１９ａ）．「Ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｏｎ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：ａ ｎｅｗ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ？」Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．
Ｅｌｋｒｉｅｆ，Ａ．，Ｅｌ Ｒａｉｃｈａｎｉ，Ｌ．，Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｃ．，Ｍｅｓｓａｏｕｄｅｎｅ，Ｍ．，Ｂｅｌｋａｉｄ，Ｗ．，Ｍａｌｏ，Ｊ．，Ｂｅｌａｎｇｅｒ，Ｋ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｗ．，Ｊａｍａｌ，Ｒ．，Ｌｅｔａｒｔｅ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．（２０１９ｂ）．「Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ－ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．」 Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８，ｅ１５６８８１２．
Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ａ．，Ｚｕｎｄｌｅｒ，Ｓ．，Ａｔｒｅｙａ，Ｒ．，Ｒａｔｈ，Ｔ．，Ｖｏｓｋｅｎｓ，Ｃ．，Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎ，Ｓ．，Ｌｏｐｅｚ－Ｐｏｓａｄａｓ，Ｒ．，Ｗａｔｓｏｎ，Ａ．，Ｂｅｃｋｅｒ，Ｃ．，Ｓｃｈｕｌｅｒ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ α４β７ ａｎｄ ＧＰＲ１５ ｏｎ ｈｏｍｉｎｇ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＵＣ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｅｄ ｇｕｔ ｉｎ ｖｉｖｏ．」 Ｇｕｔ ６５，１６４２－１６６４．
Ｆｒｉｄｍａｎ，Ｗ．Ｈ．，Ｐａｇｅｓ，Ｆ．，Ｓａｕｔｅｓ－Ｆｒｉｄｍａｎ，Ｃ．，ａｎｄ Ｇａｌｏｎ，Ｊ．（２０１２）．「Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｎｔｅｘｔｕｒｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｕｒｓ：ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ．」 Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ １２，２９８－３０６．
Ｇａｏ，Ｊ．，Ｓｈｉ，Ｌ．Ｚ．，Ｚｈａｏ，Ｈ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｘｉｏｎｇ，Ｌ．，Ｈｅ，Ｑ．，Ｃｈｅｎ，Ｔ．，Ｒｏｓｚｉｋ，Ｊ．，Ｂｅｒｎａｔｃｈｅｚ，Ｃ．，Ｗｏｏｄｍａｎ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．「Ｌｏｓｓ ｏｆ ＩＦＮ－γ Ｐａｔｈｗａｙ Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ ａｓ ａ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ－４ Ｔｈｅｒａｐｙ．」 Ｃｅｌｌ １６７，３９７－４０４．ｅ９．
Ｇａｏ，Ｙ．，Ｄｅａｓｏｎ，Ｋ．，Ｊａｉｎ，Ａ．，Ｉｒｉｚａｒｒｙ－Ｃａｒｏ，Ｒ．Ａ．，Ｄｏｚｍｏｒｏｖ，Ｉ．，Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｌ．Ａ．，Ｒａｕｃｈ，Ｉ．，Ｅｖｅｒｓ，Ｂ．Ｍ．，Ｋｏｈ，Ａ．Ｙ．，Ｗａｋｅｌａｎｄ，Ｅ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃａｓｐａｓｅ－１ ａｓ ａ Ｔ ｃｅｌｌ－ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｔｈ １７ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．」 Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１７，ｅ２０１９０４７６．
Ｇｈｏｓｈ，Ｔ．Ｓ．，Ｄａｓ，Ｍ．，Ｊｅｆｆｅｒｙ，Ｉ．Ｂ．，ａｎｄ Ｏ’Ｔｏｏｌｅ，Ｐ．Ｗ．（２０２０）．「Ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ａｇｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ．」 Ｅｌｉｆｅ ９，ｅ５０２４０．
Ｇｏｒｆｕ，Ｇ．，Ｒｉｖｅｒａ－Ｎｉｅｖｅｓ，Ｊ．，ａｎｄ Ｌｅｙ，Ｋ．（２００９）．「Ｒｏｌｅ ｏｆ ｂｅｔａ７ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｏｍｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ．」Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．９，８３６－８５０．
Ｇｏｕｂｅｔ，Ａ．－Ｇ．，Ｗｈｅｅｌｅｒ，Ｒ．，Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ，Ａ．，Ｑｕ，Ｂ．，Ｌｅｍａｉｔｒｅ，Ｆ．，Ｉｒｉｂａｒｒｅｎ，Ｋ．，Ｍｏｎｄｒａｇｏｎ，Ｌ．，Ｔｉｄｊａｎｉ Ａｌｏｕ，Ｍ．，Ｐｉｚｚａｔｏ，Ｅ．，Ｄｕｒａｎｄ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄ ｍｏｄｅｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｉｒａｅ．」 Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ ２８，２２７６－２２９５．
Ｇｕｅｒｙ，Ｌ．，ａｎｄ Ｈｕｇｕｅｓ，Ｓ．（２０１５）．「Ｔｈ１７ Ｃｅｌｌ Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」 Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ ２０１５，３１４６２０．
Ｈａａｓ，Ｋ．Ｎ．，ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，Ｊ．Ｌ．（２０２０）．「Ｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｏｆｏｒｍｅ ａｎｄ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｈｅｎｏｉｄｅｓ ｃｌａｄｅｓ ａｓ Ｅｎｔｅｒｏｃｌｏｓｔｅｒ ｇｅｎ．ｎｏｖ．ａｎｄ Ｌａｃｒｉｍｉｓｐｏｒａ ｇｅｎ．ｎｏｖ．，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ １５ ｔａｘａ．」 Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ７０，２３－３４．
Ｈａｓｓａｎ－Ｚａｈｒａｅｅ，Ｍ．，Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ａ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｂ．，Ｚｈａｎｇ，Ｗ．，Ａｈｍａｄ，Ａ．，Ｐａｇｅ，Ｋ．，ｖｏｎ Ｓｃｈａｃｋ，Ｄ．，Ｚｈａｎｇ，Ｂ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ｓ．Ｗ．，Ｎａｙａｋ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．「Ａｎｔｉ－ＭＡｄＣＡＭ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ β７＋ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ＣＣＲ９ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ．」 Ｊ Ｃｒｏｈｎｓ Ｃｏｌｉｔｉｓ １２，７７－８６．
Ｈｏｌｍｅｒ，Ａ．Ｋ．，Ｂａｔｔａｔ，Ｒ．，Ｄｕｌａｉ，Ｐ．Ｓ．，Ｖａｎｄｅ Ｃａｓｔｅｅｌｅ，Ｎ．，Ｎｇｕｙｅｎ，Ｎ．，Ｊａｉｎ，Ａ．，Ｍｉｒａｌｌｅｓ，Ａ．，Ｎｅｉｌｌ，Ｊ．，Ｌｅ，Ｈ．，Ｓｉｎｇｈ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｗｉｔｈ ｖｅｄｏｌｉｚｕｍａｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．」 Ｔｈｅｒａｐ Ａｄｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ １３，１７５６２８４８２０９７１２１４．
Ｋｉｍ，Ｊ．－Ｈ．，Ｈｗａｎｇ，Ｊ．，Ｊｕｎｇ，Ｊ．Ｈ．，Ｌｅｅ，Ｈ．－Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｄ．Ｙ．，ａｎｄ Ｋｉｍ，Ｓ．－Ｈ．（２０１９）．「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｎｅｔｗｏｒｋｓ ｏｆ ＦＯＸＰ ｆａｍｉｌｙ：ｄｕａｌ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｉｎｔｅｒｐｌａｙ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．」 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ １８，１８０．
Ｋｒｅｂｓ，Ｃ．Ｆ．，Ｐａｕｓｔ，Ｈ．－Ｊ．，Ｋｒｏｈｎ，Ｓ．，Ｋｏｙｒｏ，Ｔ．，Ｂｒｉｘ，Ｓ．Ｒ．，Ｒｉｅｄｅｌ，Ｊ．－Ｈ．，Ｂａｒｔｓｃｈ，Ｐ．，Ｗｉｅｃｈ，Ｔ．，Ｍｅｙｅｒ－Ｓｃｈｗｅｓｉｎｇｅｒ，Ｃ．，Ｈｕａｎｇ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．「Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｉｓ Ｅｘａｃｅｒｂａｔｅｄ ｂｙ Ｓ１Ｐ－Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－１－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔｈ１７ Ｃｅｌｌ Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ Ｋｉｄｎｅｙ．」 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４５，１０７８－１０９２．
Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｘ．，Ｗｕ，Ｌ．，Ｍａｔｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｃｈｅｎ，Ｔ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｋ．，Ｂａｓｈａｍ，Ｂ．，ＭｃＣｌａｎａｈａｎ，Ｔ．，Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ，Ｒ．Ａ．，ａｎｄ Ｏｆｔ，Ｍ．（２００６）．「ＩＬ－２３ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｕｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ．」 Ｎａｔｕｒｅ ４４２，４６１－４６５．
Ｌｅｅ，Ｙ．Ｋ．，Ｍｅｎｅｚｅｓ，Ｊ．Ｓ．，Ｕｍｅｓａｋｉ，Ｙ．，ａｎｄ Ｍａｚｍａｎｉａｎ，Ｓ．Ｋ．（２０１１ａ）．「Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｐｒｏｍｏｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．」 Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０８ Ｓｕｐｐｌ １，４６１５－４６２２．
Ｌｅｅ，Ｙ．Ｋ．，Ｍｅｎｅｚｅｓ，Ｊ．Ｓ．，Ｕｍｅｓａｋｉ，Ｙ．，ａｎｄ Ｍａｚｍａｎｉａｎ，Ｓ．Ｋ．（２０１１ｂ）．「Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｐｒｏｍｏｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０８ Ｓｕｐｐｌ １，４６１５－４６２２．
Ｌｉ，Ｌ．，Ｐａｔｓｏｕｋｉｓ，Ｎ．，Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｖ．，ａｎｄ Ｂｏｕｓｓｉｏｔｉｓ，Ｖ．Ａ．（２０１２）．「Ｒｕｎｘ１ ａｎｄ Ｒｕｎｘ３ ａｒｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ＩＬ－１７－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ．」 ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ７，ｅ４５１１５．
Ｌｉｅｓｚ，Ａ．，Ｓｕｒｉ－Ｐａｙｅｒ，Ｅ．，Ｖｅｌｔｋａｍｐ，Ｃ．，Ｄｏｅｒｒ，Ｈ．，Ｓｏｍｍｅｒ，Ｃ．，Ｒｉｖｅｓｔ，Ｓ．，Ｇｉｅｓｅ，Ｔ．，ａｎｄ Ｖｅｌｔｋａｍｐ，Ｒ．（２００９）．「Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｋｅｙ ｃｅｒｅｂｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｏｋｅ．」Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１５，１９２－１９９．
Ｌｉｍ，Ｃ．，ａｎｄ Ｓａｖａｎ，Ｒ．（２０１４）．「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＩＬ－２２／ＩＬ－２２Ｒ１ ａｘｉｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．」 Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ ２５，２５７－２７１．
Ｌｉｔｔｍａｎ，Ｄ．Ｒ．，ａｎｄ Ｒｕｄｅｎｓｋｙ，Ａ．Ｙ．（２０１０）．「Ｔｈ１７ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｓｔｒａｉｎｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．」 Ｃｅｌｌ １４０，８４５－８５８．
Ｍａｇｎｕｓｏｎ，Ａ．Ｍ．，Ｔｈｕｒｂｅｒ，Ｇ．Ｍ．，Ｋｏｈｌｅｒ，Ｒ．Ｈ．，Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒ．，Ｍａｔｈｉｓ，Ｄ．，ａｎｄ Ｂｅｎｏｉｓｔ，Ｃ．（２０１５）．「Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｉｓｌｅｔ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉａｂｅｔｅｓ．」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１２，１５１１－１５１６．
Ｍｉｒａｇａｉａ，Ｒ．Ｊ．，Ｇｏｍｅｓ，Ｔ．，Ｃｈｏｍｋａ，Ａ．，Ｊａｒｄｉｎｅ，Ｌ．，Ｒｉｅｄｅｌ，Ａ．，Ｈｅｇａｚｙ，Ａ．Ｎ．，Ｗｈｉｂｌｅｙ，Ｎ．，Ｔｕｃｃｉ，Ａ．，Ｃｈｅｎ，Ｘ．，Ｌｉｎｄｅｍａｎ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．（２０１９）．「Ｓｉｎｇｌｅ－Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓ ｏｆ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｒｅｖｅａｌｓ Ｔｒａｊｅｃｔｏｒｉｅｓ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ．」 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５０，４９３－５０４．ｅ７．
Ｍｏｈｉｕｄｄｉｎ，Ｊ．Ｊ．，Ｃｈｕ，Ｂ．，Ｆａｃｃｉａｂｅｎｅ，Ａ．，Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｋ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｄｏｕｃｅｔｔｅ，Ａ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｃ．，Ｘｕ，Ｗ．，Ａｎｓｔａｄｔ，Ｅ．Ｊ．，Ａｍａｒａｖａｄｉ，Ｒ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｅｘｐｏｓｕｒｅ Ｗｉｔｈ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．」 Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ １１３，１６２－１７０．
Ｍｏｒｔｏｎ，Ａ．Ｍ．，Ｓｅｆｉｋ，Ｅ．，Ｕｐａｄｈｙａｙ，Ｒ．，Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒ．，Ｂｅｎｏｉｓｔ，Ｃ．，ａｎｄ Ｍａｔｈｉｓ，Ｄ．（２０１４）．「Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ ｐｈｏｔｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｓ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄｌｙ ｂｒｏａｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｔｏ ａｎｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｇｕｔ．」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１，６６９６－６７０１．
Ｍｕｎｏｚ－Ｒｏｊａｓ，Ａ．Ｒ．，ａｎｄ Ｍａｔｈｉｓ，Ｄ．（２０２１）．「Ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ：ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｈａｍｅｌｅｏｎｓ．」 Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１，５９７－６１１．
Ｎｅｕｂｅｒｔ，Ｎ．Ｊ．，Ｓｃｈｍｉｔｔｎａｅｇｅｌ，Ｍ．，Ｂｏｒｄｒｙ，Ｎ．，Ｎａｓｓｉｒｉ，Ｓ．，Ｗａｌｄ，Ｎ．，Ｍａｒｔｉｇｎｉｅｒ，Ｃ．，Ｔｉｌｌｅ，Ｌ．，Ｈｏｍｉｃｓｋｏ，Ｋ．，Ｄａｍｓｋｙ，Ｗ．，Ｍａｂｙ－ＥＩ Ｈａｊｊａｍｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．「Ｔ ｃｅｌｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＣＳＦ１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｍｅｌａｎｏｍａ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＰＤ１ ｂｌｏｃｋａｄｅ．」 Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ １０．
Ｏｇａｗａ，Ｈ．，Ｂｉｎｉｏｎ，Ｄ．Ｇ．，Ｈｅｉｄｅｍａｎｎ，Ｊ．，Ｔｈｅｒｉｏｔ，Ｍ．，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐ．Ｊ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｎ．Ａ．，Ｏｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｆ．，ａｎｄ Ｒａｆｉｅｅ，Ｐ．（２００５）．「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ＭＡｄＣＡＭ－１ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．」 Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８８，Ｃ２７２－２８１．
Ｐａｎｄｉｙａｎ，Ｐ．，Ｂｈａｓｋａｒａｎ，Ｎ．，Ｚｏｕ，Ｍ．，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｅ．，Ｊａｙａｒａｍａｎ，Ｓ．，ａｎｄ Ｈｕｅｈｎ，Ｊ．（２０１９）．「Ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｅｇｓ ａｎｄ Ｔｈ１７ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｍｕｃｏｓａ．」 Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０，４２６．
Ｒｅｉｎｉｓｃｈ，Ｗ．，Ｓａｎｄｂｏｒｎ，Ｗ．Ｊ．，Ｄａｎｅｓｅ，Ｓ．，Ｈｅｂｕｔｅｒｎｅ，Ｘ．，Ｋｌｏｐｏｃｋａ，Ｍ．，Ｔａｒａｂａｒ，Ｄ．，Ｖａｎａｓｅｋ，Ｔ．，Ｇｒｅｇｕｓ，Ｍ．，Ｈｅｌｌｓｔｅｒｎ，Ｐ．Ａ．，Ｋｉｍ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉ－ＭＡｄＣＡＭ－１ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｏｎｔａｍａｌｉｍａｂ［ＳＨＰ６４７］ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ：Ｔｈｅ Ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ Ｓｔｕｄｙ ＴＵＲＡＮＤＯＴ ＩＩ．」 Ｊ Ｃｒｏｈｎｓ Ｃｏｌｉｔｉｓ １５，９３８－９４９．
Ｒｉａｚ，Ｎ．，Ｈａｖｅｌ，Ｊ．Ｊ．，Ｋｅｎｄａｌｌ，Ｓ．Ｍ．，Ｍａｋａｒｏｖ，Ｖ．，Ｗａｌｓｈ，Ｌ．Ａ．，Ｄｅｓｒｉｃｈａｒｄ，Ａ．，Ｗｅｉｎｈｏｌｄ，Ｎ．，ａｎｄ Ｃｈａｎ，Ｔ．Ａ．（２０１６）．「Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ＳＥＲＰＩＮＢ３ ａｎｄ ＳＥＲＰＩＮＢ４ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｒｅｓｐｏｎｄ ｔｏ ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ４ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．」 Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４８，１３２７－１３２９．
Ｒｉｚｖｉ，Ｎ．Ａ．，Ｈｅｌｌｍａｎｎ，Ｍ．Ｄ．，Ｓｎｙｄｅｒ，Ａ．，Ｋｖｉｓｔｂｏｒｇ，Ｐ．，Ｍａｋａｒｏｖ，Ｖ．，Ｈａｖｅｌ，Ｊ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｗ．，Ｙｕａｎ，Ｊ．，Ｗｏｎｇ，Ｐ．，Ｈｏ，Ｔ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．「Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ＰＤ－１ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８，１２４－１２８．
Ｒｉｚｚｏ，Ａ．，Ｄｉ Ｇｉｏｖａｎｇｉｕｌｉｏ，Ｍ．，Ｓｔｏｌｆｉ，Ｃ．，Ｆｒａｎｚｅ，Ｅ．，Ｆｅｈｌｉｎｇ，Ｈ．－Ｊ．，Ｃａｒｓｅｔｔｉ，Ｒ．，Ｇｉｏｒｄａ，Ｅ．，Ｃｏｌａｎｔｏｎｉ，Ａ．，Ｏｒｔｅｎｚｉ，Ａ．，Ｒｕｇｇｅ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．「ＲＯＲ_γｔ－Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｔｒｅｇｓ Ｄｒｉｖｅ ｔｈｅ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｃｏｌｉｔｉｓ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ ｂｙ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ＩＬ６ ｉｎ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ．」 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ ６，１０８２－１０９２．
Ｒｏｂｅｒｔ，Ｃ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｌ．，Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ，Ｉ．，Ｏ’Ｄａｙ，Ｓ．，Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．，Ｇａｒｂｅ，Ｃ．，Ｌｅｂｂｅ，Ｃ．，Ｂａｕｒａｉｎ，Ｊ．－Ｆ．，Ｔｅｓｔｏｒｉ，Ａ．，Ｇｒｏｂ，Ｊ．－Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１１）．「Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ ｐｌｕｓ ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ ｆｏｒ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ．」 Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６４，２５１７－２５２６．
Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．，Ｌｅ Ｃｈａｔｅｌｉｅｒ，Ｅ．，Ｄｅｒｏｓａ，Ｌ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｃ．Ｐ．Ｍ．，Ａｌｏｕ，Ｍ．Ｔ．，Ｄａｉｌｌｅｒｅ，Ｒ．，Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ，Ａ．，Ｍｅｓｓａｏｕｄｅｎｅ，Ｍ．，Ｒａｕｂｅｒ，Ｃ．，Ｒｏｂｅｒｔｉ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．「Ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＰＤ－１－ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｇａｉｎｓｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｕｍｏｒｓ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ．
Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．，Ｌｅ Ｃｈａｔｅｌｉｅｒ，Ｅ．，Ｄｅｒｏｓａ，Ｌ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｃ．Ｐ．Ｍ．，Ａｌｏｕ，Ｍ．Ｔ．，Ｄａｉｌｌｅｒｅ，Ｒ．，Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ，Ａ．，Ｍｅｓｓａｏｕｄｅｎｅ，Ｍ．，Ｒａｕｂｅｒ，Ｃ．，Ｒｏｂｅｒｔｉ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８ａ）．「Ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＰＤ－１－ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｇａｉｎｓｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｕｍｏｒｓ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５９，９１－９７．
Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．，Ｇｏｐａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｖ．，Ｄａｉｌｌｅｒｅ，Ｒ．，Ｚｉｔｖｏｇｅｌ，Ｌ．，Ｗａｒｇｏ，Ｊ．Ａ．，ａｎｄ Ｋｒｏｅｍｅｒ，Ｇ．（２０１８ｂ）．「Ｔｈｅ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ａｎｄ ｇｅｎｅｒａｌ ｈｅａｌｔｈ．」 Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １５，３８２－３９６．
Ｓａｎｄｂｏｒｎ，Ｗ．Ｊ．，Ｐａｎｅｓ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｈ．，Ｙｕ，Ｄ．，Ｎｉｅｚｙｃｈｏｗｓｋｉ，Ｗ．，ａｎｄ Ｓｕ，Ｃ．（２０１６）．「Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｆｅｃａｌ Ｃａｌｐｒｏｔｅｃｔｉｎ ａｎｄ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ａ Ｐｈａｓｅ ２ Ｔｒｉａｌ．」 Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １５０，９６－１０２．
Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｍ．，Ａｚｕｌａｙ－Ｄｅｂｂｙ，Ｈ．，Ｂｏｓｈｎａｋ，Ｎ．，Ｅｌｙａｈｕ，Ｙ．，Ｋｏｒｉｎ，Ｂ．，Ｂｅｎ－Ｓｈａａｎａｎ，Ｔ．Ｌ．，Ｋｏｒｅｎ，Ｔ．，Ｋｒｏｔ，Ｍ．，Ｈａｋｉｍ，Ｆ．，ａｎｄ Ｒｏｌｌｓ，Ａ．（２０２１）．「Ｏｐｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｃａｌ ｃｏｌｏｎｉｃ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｉｎｎｅｒｖａｔｉｏｎｓ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｃｏｌｉｔｉｓ ｂｙ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ．」 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５４，１０２２－１０３６．ｅ８．
Ｓｅｆｉｋ，Ｅ．，Ｇｅｖａ－Ｚａｔｏｒｓｋｙ，Ｎ．，Ｏｈ，Ｓ．，Ｋｏｎｎｉｋｏｖａ，Ｌ．，Ｚｅｍｍｏｕｒ，Ｄ．，ＭｃＧｕｉｒｅ，Ａ．Ｍ．，Ｂｕｒｚｙｎ，Ｄ．，Ｏｒｔｉｚ－Ｌｏｐｅｚ，Ａ．，Ｌｏｂｅｒａ，Ｍ．，Ｙａｎｇ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．「Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｙｍｂｉｏｎｔｓ ｉｎｄｕｃｅ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＯＲγ＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４９，９９３－９９７．
Ｓｉｎｇｈ，Ｖ．，Ｒｏｔｈ，Ｓ．，Ｌｌｏｖｅｒａ，Ｇ．，Ｓａｄｌｅｒ，Ｒ．，Ｇａｒｚｅｔｔｉ，Ｄ．，Ｓｔｅｃｈｅｒ，Ｂ．，Ｄｉｃｈｇａｎｓ，Ｍ．，ａｎｄ Ｌｉｅｓｚ，Ａ．（２０１６）．「Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｆｔｅｒ Ｓｔｒｏｋｅ．」 Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３６，７４２８－７４４０．
Ｓｍｙｔｈ，Ｍ．Ｊ．，Ｎｇｉｏｗ，Ｓ．Ｆ．，Ｒｉｂａｓ，Ａ．，ａｎｄ Ｔｅｎｇ，Ｍ．Ｗ．Ｌ．（２０１６）．「Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｔａｉｌｏｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｔｕｍｏｕｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．」 Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １３，１４３－１５８．
Ｓｏｎｇ，Ｘ．，Ｓｕｎ，Ｘ．，Ｏｈ，Ｓ．Ｆ．，Ｗｕ，Ｍ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｗ．，Ｇｅｖａ－Ｚａｔｏｒｓｋｙ，Ｎ．，Ｊｕｐｐ，Ｒ．，Ｍａｔｈｉｓ，Ｄ．，Ｂｅｎｏｉｓｔ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．（２０２０）．「Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｂｉｌｅ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｇｕｔ ＲＯＲγ＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．」 Ｎａｔｕｒｅ ５７７，４１０－４１５．
Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｂａｏ，Ｒ．，ａｎｄ Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．（２０１５）．「Ｍｅｌａｎｏｍａ－ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ β－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｕｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」 Ｎａｔｕｒｅ ５２３，２３１－２３５．
Ｔｉｎｓｌｅｙ，Ｎ．，Ｚｈｏｕ，Ｃ．，Ｔａｎ，Ｇ．，Ｒａｃｋ，Ｓ．，Ｌｏｒｉｇａｎ，Ｐ．，Ｂｌａｃｋｈａｌｌ，Ｆ．，Ｋｒｅｂｓ，Ｍ．，Ｃａｒｔｅｒ，Ｌ．，Ｔｈｉｓｔｌｅｔｈｗａｉｔｅ，Ｆ．，Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．（２０１９）．「Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｕｓｅ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ Ｄｅｃｒｅａｓｅｓ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃａｎｃｅｒ．」 Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．
Ｔｏｍｕｒａ，Ｍ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．，Ｔａｎａｋａ，Ｊ．，Ｋａｒａｓａｗａ，Ｓ．，Ｍｉｗａ，Ｙ．，Ｍｉｙａｗａｋｉ，Ａ．，ａｎｄ Ｋａｎａｇａｗａ，Ｏ．（２００８）．「Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ｗｉｔｈ ｐｈｏｔｏｃｏｎｖｅｒｔｉｂｌｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ 「Ｋａｅｄｅ」ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ．」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０５，１０８７１－１０８７６．
Ｔｓａｙ，Ｊ．－Ｃ．Ｊ．，Ｗｕ，Ｂ．Ｇ．，Ｓｕｌａｉｍａｎ，Ｉ．，Ｇｅｒｓｈｎｅｒ，Ｋ．，Ｓｃｈｌｕｇｅｒ，Ｒ．，Ｌｉ，Ｙ．，Ｙｉｅ，Ｔ．－Ａ．，Ｍｅｙｎ，Ｐ．，Ｏｌｓｅｎ，Ｅ．，Ｐｅｒｅｚ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ｌｏｗｅｒ Ａｉｒｗａｙ Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ Ａｆｆｅｃｔｓ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．」 Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ １１，２９３－３０７．
Ｕｃｈｅ，Ｕ．Ｕ．，Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｏ，Ａ．Ｒ．，Ｋａｔａｏｋａ，Ｓ．，Ｇｒｅｂｉｎｏｓｋｉ，Ｓ．Ｊ．，Ｄ’Ｃｒｕｚ，Ｌ．Ｍ．，ａｎｄ Ｋａｎｅ，Ｌ．Ｐ．（２０１８）．「ＰＩＫ３ＩＰ１／ＴｒＩＰ ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ．」 Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１５，３１６５－３１７９．
Ｖｅｔｉｚｏｕ，Ｍ．，Ｐｉｔｔ，Ｊ．Ｍ．，Ｄａｉｌｌｅｒｅ，Ｒ．，Ｌｅｐａｇｅ，Ｐ．，Ｗａｌｄｓｃｈｍｉｔｔ，Ｎ．，Ｆｌａｍｅｎｔ，Ｃ．，Ｒｕｓａｋｉｅｗｉｃｚ，Ｓ．，Ｒｏｕｔｙ，Ｂ．，Ｒｏｂｅｒｔｉ，Ｍ．Ｐ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｃ．Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．「Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ ＣＴＬＡ－４ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｒｅｌｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ．」 Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５０，１０７９－１０８４．
Ｖｏｉｇｔ，Ｃ．，Ｍａｙ，Ｐ．，Ｇｏｔｔｓｃｈｌｉｃｈ，Ａ．，Ｍａｒｋｏｔａ，Ａ．，Ｗｅｎｋ，Ｄ．，Ｇｅｒｌａｃｈ，Ｉ．，Ｖｏｉｇｔ，Ｓ．，Ｓｔａｔｈｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．Ｔ．，Ａｒｅｎｄｔ，Ｋ．Ａ．Ｍ．，Ｈｅｉｓｅ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．「Ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍｅｍｏｒｙ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．」 ＰＮＡＳ １１４，１２９９４－１２９９９．
Ｗｕ，Ｈ．－Ｊ．，Ｉｖａｎｏｖ，Ｉ．Ｉ．，Ｄａｒｃｅ，Ｊ．，Ｈａｔｔｏｒｉ，Ｋ．，Ｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｕｍｅｓａｋｉ，Ｙ．，Ｌｉｔｔｍａｎ，Ｄ．Ｒ．，Ｂｅｎｏｉｓｔ，Ｃ．，ａｎｄ Ｍａｔｈｉｓ，Ｄ．（２０１０）．「Ｇｕｔ－ｒｅｓｉｄｉｎｇ ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｂａｃｔｅｒｉａ ｄｒｉｖｅ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｖｉａ Ｔ ｈｅｌｐｅｒ １７ ｃｅｌｌｓ．」 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３２，８１５－８２７．
Ｙａｎ，Ｙ．，Ｒａｍａｎａｎ，Ｄ．，Ｒｏｚｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．，ＭｃＧｏｖｅｒｎ，Ｋ．，Ｒａｓｔｅｌｌｉ，Ｄ．，Ｖｉｊａｙｋｕｍａｒ，Ｂ．，Ｙａｇｈｉ，Ｏ．，Ｖｏｉｓｉｎ，Ｔ．，Ｍｏｓａｈｅｂ，Ｍ．，Ｃｈｉｕ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．（２０２１）．「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｕｔ．」 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５４，４９９－５１３．ｅ５．
Ｙｏｎｅｋｕｒａ Ｓ，Ｔｅｒｒｉｓｓｅ Ｓ，Ａｌｖｅｓ Ｃｏｓｔａ Ｓｉｌｖａ Ｃ，Ｌａｆａｒｇｅ Ａ，ｌｅｂｂａ Ｖ，Ｆｅｒｒｅｒｅ Ｇ，Ｇｏｕｂｅｔ ＡＧ，Ｆａｈｒｎｅｒ ＪＥ，Ｌａｈｍａｒ Ｉ，Ｕｅｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．（２０２２）．「Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｄｕｃｅｓ ａ Ｓｔｒｅｓｓ Ｉｌｅｏｐａｔｈｙ Ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ ｏｎ β－Ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ ｔｈａｔ Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．」 Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ １２（４）：１１２８－１１５１．
Ｙｏｓｅｆ，Ｎ．，Ｓｈａｌｅｋ，Ａ．Ｋ．，Ｇａｕｂｌｏｍｍｅ，Ｊ．Ｔ．，Ｊｉｎ，Ｈ．，Ｌｅｅ，Ｙ．，Ａｗａｓｔｈｉ，Ａ．，Ｗｕ，Ｃ．，Ｋａｒｗａｃｚ，Ｋ．，Ｘｉａｏ，Ｓ．，Ｊｏｒｇｏｌｌｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）．「Ｄｙｎａｍｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｎｅｔｗｏｒｋ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ＴＨ１７ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．」 Ｎａｔｕｒｅ ４９６，４６１－４６８．
Ｙｏｕｎｇ，Ｍ．Ｒ．Ｉ．（２０１６）．「Ｔｈ１７ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｔｕｍｏｒ ｏｒ Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．」 Ｊ Ｃｌｉｎ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７，４３１．
Ｚｉｔｖｏｇｅｌ，Ｌ．，ａｎｄ Ｋｒｏｅｍｅｒ，Ｇ．（２０２１）．Ｌｏｗｅｒ Ａｉｒｗａｙ Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ Ｅｘａｃｅｒｂａｔｅｓ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ １１，２２４－２２６．

【図1-01】

【図1-02】

【図1-03】

【図2-01】

【図2-02】

【図2-03】

【図2-04】

【図2-05】

【図3-01】

【図3-02】

【図3-03】

【図3-04】

【図4-01】

【図】

【図4-02】

【図5-01】

【図5-02】

【図5-03】

【図5-04】

【図6-01】

【図6-02】

【図6-03】

【図7-01】

【図7-02】

【図7-03】

【図7-04】

【図7-05】

【図7-06】

【図8-01】

【図8-02】

【図9-01】

【図9-02】

【図10-01】

【図10-02】

【図11】

【図12】

【図13】

【国際調査報告】