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特表2024-529377抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の医薬組成物及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-06
(54)【発明の名称】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の医薬組成物及びその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240730BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240730BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240730BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240730BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240730BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240730BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20240730BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240730BHJP
A61P 9/04 20060101ALI20240730BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20240730BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240730BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240730BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240730BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240730BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240730BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240730BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240730BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240730BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20240730BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240730BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N ZNA
A61P3/06
A61P9/00
A61P35/00
A61P29/00
A61P9/10 101
A61P9/12
A61P9/10
A61P25/00
A61P9/04
A61P1/18
A61P1/16
A61P27/02
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P3/10
A61K9/08
A61K47/12
A61K47/22
A61K47/26
A61K9/19
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024503454
(86)(22)【出願日】2022-07-21
(85)【翻訳文提出日】2024-03-18
(86)【国際出願番号】 CN2022106993
(87)【国際公開番号】W WO2023001228
(87)【国際公開日】2023-01-26
(31)【優先権主張番号】202110822526.8
(32)【優先日】2021-07-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】519352757
【氏名又は名称】江▲蘇▼恒瑞医▲薬▼股▲フン▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＪＩＡＮＧＳＵ ＨＥＮＧＲＵＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】ＮＯ．７ ＫＵＮＬＵＮＳＨＡＮ ＲＯＡＤ， ＥＣＯＮＯＭＩＣ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＺＯＮＥ， ＬＩＡＮＹＵＮＧＡＮＧ， ＪＩＡＮＧＳＵ ２２２０４７， ＣＨＩＮＡ
(71)【出願人】
【識別番号】516174208
【氏名又は名称】上海恒瑞医薬有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＥＮＧＲＵＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ
【住所又は居所原語表記】ＮＯ． ２７９ ＷＥＮＪＩＮＧ ＲＯＡＤ， ＭＩＮＨＡＮＧ ＤＩＳＴＲＩＣＴ， ＳＨＡＮＧＨＡＩ ２００２４５， ＣＨＩＮＡ
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】▲楊▼ 喜琴
(72)【発明者】
【氏名】葛 凌霄
(72)【発明者】
【氏名】王 宏▲偉▼
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA29
4C076CC01
4C076CC04
4C076CC10
4C076CC11
4C076CC16
4C076CC21
4C076CC27
4C076DD09E
4C076DD38Q
4C076DD41Z
4C076DD42Z
4C076DD43Z
4C076DD60Z
4C076DD67Q
4C076EE23E
4C076FF15
4C076FF61
4C076GG06
4C085AA14
4C085AA16
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE05
(57)【要約】
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の医薬組成物及びその使用である。具体的に、上記医薬組成物は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片及び酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、上記医薬組成物は、糖及び界面活性剤をさらに含んでもよい。良好な抗体安定性がある。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、緩衝剤とを含む医薬組成物であって、前記緩衝剤は酢酸－酢酸ナトリウム、コハク酸－コハク酸ナトリウム、ヒスチジン－塩酸塩及びクエン酸－クエン酸ナトリウム緩衝剤から選ばれるいずれか１つであり、酢酸－酢酸ナトリウム又はコハク酸－コハク酸ナトリウム緩衝剤が好ましく、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１４、配列番号１５と配列番号１６で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、且つ前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、医薬組成物。
【請求項2】
前記緩衝剤のｐＨは４．０～７．０、好ましくは５．０～５．４、最も好ましくは約５．２である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記緩衝剤の濃度は５～４０ｍＭ、好ましくは５～２０ｍＭ、最も好ましくは約１０ｍＭである、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の濃度は１０～２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは８０～１２０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは約１００ｍｇ／ｍＬである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
界面活性剤をさらに含み、前記界面活性剤は、好ましくはポリソルベート８０又はポリソルベート２０、より好ましくはポリソルベート８０である、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記界面活性剤の濃度は０．０５～０．６ｍｇ／ｍＬ、好ましくは０．１～０．４ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約０．２ｍｇ／ｍＬである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項7】
糖である安定剤をさらに含み、好ましくは、前記糖はスクロース、トレハロース、マンニトール及びソルビトールから選ばれ、より好ましくは、前記糖はスクロースである、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記糖の濃度は６０～９０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは７０～８０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは約７５ｍｇ／ｍＬである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項9】
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸塩緩衝液と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．０５～０．６ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
前記医薬組成物のｐＨは、好ましくは４．５～６．５、より好ましくは５．０～５．４である、
請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
（ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
前記医薬組成物のｐＨは、好ましくは５．０～５．４、より好ましくは約５．２である、
請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、マウス抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体であり、好ましくは、前記ヒト化抗体の軽鎖と重鎖ＦＲ配列は、それぞれヒト生殖細胞系の軽鎖と重鎖のＦＲに由来する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１７で示されるか又はそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、且つ前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１８で示されるか又はそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖と軽鎖を含み、そのうち、前記重鎖のアミノ酸配列は、配列番号２１で示されるか又はそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、且つ前記軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号２２で示されるか又はそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製する方法であって、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の原液を緩衝剤で置換するステップを含み、そのうち、前記緩衝剤は、好ましくは酢酸－酢酸ナトリウム緩衝剤である、方法。
【請求項15】
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む凍結乾燥製剤であって、前記凍結乾燥製剤は、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を凍結乾燥することにより得られ、好ましくは、前記凍結乾燥は、予備凍結、一次乾燥及び二次乾燥のステップを順に含む、凍結乾燥製剤。
【請求項16】
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む再溶解溶液であって、請求項１５に記載の凍結乾燥製剤を再溶解することにより得られる、再溶解溶液。
【請求項17】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物、又は請求項１５に記載の凍結乾燥製剤、又は請求項１６に記載の再溶解溶液が収容された容器を含む、製品。
【請求項18】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物、又は請求項１５に記載の凍結乾燥製剤、又は請求項１６に記載の再溶解溶液の、疾患又は病状を治療及び／又は予防するための薬剤の調製における使用であって、好ましくは、前記疾患又は病状は、高脂血症、高リポタンパク血症、脂質異常症、心臓血管疾患又は病状、がん又は腫瘍、非腫瘍性血管新生関連疾患又は病状、及び炎症性疾患又は病状から選ばれる１つ又は複数であり、
より好ましくは、前記疾患又は病状は、アテローム硬化性脂質異常症、糖尿病性脂質異常症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、カイロミクロン血症、混合型脂質異常症、脂肪異栄養症、脂肪萎縮症、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、高血圧、狭心症、脳卒中、脳血管疾患、うっ血性心不全、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、急性膵臓炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、血糖異常症、加齢黄斑変性症、網膜中心静脈閉塞症又は網膜分枝静脈閉塞症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、関節炎、関節リウマチ（ＲＡ）及び乾癬から選ばれる１つ又は複数である、
使用。
【請求項19】
疾患又は病状を治療及び／又は予防する方法であって、必要とする対象に請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物、又は請求項１６に記載の再溶解溶液を投与することを含み、好ましくは、前記疾患又は病状は、高脂血症、高リポタンパク血症、脂質異常症、心臓血管疾患又は病状、がん又は腫瘍、非腫瘍性血管新生関連疾患又は病状、及び炎症性疾患又は病状から選ばれる１つ又は複数であり、
より好ましくは、前記疾患又は病状は、アテローム硬化性脂質異常症、糖尿病性脂質異常症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、カイロミクロン血症、混合型脂質異常症、脂肪異栄養症、脂肪萎縮症、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、高血圧、狭心症、脳卒中、脳血管疾患、うっ血性心不全、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、急性膵臓炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、血糖異常症、加齢黄斑変性症、網膜中心静脈閉塞症又は網膜分枝静脈閉塞症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、関節炎、関節リウマチ（ＲＡ）及び乾癬から選ばれる１つ又は複数である、
使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０２１年７月２１日に提出された出願番号が２０２１１０８２２５２６．８である中国特許出願の優先権を主張する。
【0002】
本開示は、医薬製剤分野に関し、具体的に、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物及びその医薬使用に関する。
【背景技術】
【0003】
アンジオポエチン様タンパク質３（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ３、ＡＮＧＰＴＬ３）は、アンジオポエチン様タンパク質ファミリーのメンバーとして、主に肝臓で発現される分泌タンパク質の１種である。ＡＮＧＰＴＬ３のアミノ末端がカールした領域は、リポプロテインリパーゼ（Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ、ＬＰＬ）活性の阻害に関連し、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、ＴＧ）を調節するカルボキシ末端フィブリノゲン様領域は、主に血管新生の調節に関連しているので、当該タンパク質は、脂質代謝の調節及び血管新生の促進という機能を有する。
【0004】
ＡＮＧＰＴＬ３の主な役割は、リポタンパク質代謝の調節であり、ＬＰＬ及び内皮リパーゼ（ＥＬ）を阻害することにより、脂質代謝の調節に役割を果たす。現在、ＡＮＧＰＴＬ３阻害物は、ＡＮＧＰＴＬ３－ＡＳＯと、ＥｖｉｎａｃｕｍａｂなどのＡＮＧＰＴＬ３モノクローナル抗体という２つに分けられ、両者のメカニズム及び作用部位は異なっており、ＡＮＧＰＴＬ３－ＡＳＯは主に肝細胞に作用し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂは血液循環において効果を奏する。しかしながら、表現型でも、遺伝子レベルでも、ＡＮＧＰＴＬ３を阻害すると、顕著で安定的な脂質低下効果が認められる。ＡＮＧＰＴＬ３を標的とするＩｇＧ４サブタイプのモノクローナル抗体は、ＡＮＧＰＴＬ３に結合可能であり、ＡＮＧＰＴＬ３とＬＰＬの結合を遮断することにより、ＡＮＧＰＴＬ３によるＬＰＬ酵素活性の阻害を解除し、血漿におけるトリグリセリドの分解を促進し、高脂血症を治療する目的を達成させる。
【0005】
ＷＯ２０２１１４７９８４Ａには、血中脂質低下効果がより良くかつより持続的な抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及びその抗原結合断片が提供されている。抗体薬物は、分子量が大きく、構造が複雑で、分解や重合したり、望ましくない化学修飾などが生じたりして不安定になることが容易である。抗体が投与に適し、保存中及びその後の使用中に安定性を維持し、より良い治療効果を果たすことを可能にするために、抗体薬物の安定化製剤の研究が特に重要である。従って、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及びその抗原結合断片については、比較的安定した製剤を開発しなければならない。本開示は、十分に安定で、凍結乾燥形態が良く、投与により適する、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。
【発明の概要】
【0006】
本開示は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、緩衝剤とを含む医薬組成物を提供する。また、本開示は、上記医薬組成物を疾患の治療・予防に用いる方法、及びその医薬使用を提供する。
【0007】
幾つかの実施形態において、上記緩衝剤は、酢酸塩緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤及びクエン酸緩衝剤から選ばれるいずれか１つであり、例えば、酢酸塩緩衝剤である。
【0008】
幾つかの実施形態において、上記緩衝剤は、酢酸－酢酸ナトリウム、ヒスチジン－塩酸塩、リン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、コハク酸－コハク酸ナトリウムとクエン酸－クエン酸ナトリウム緩衝剤から選ばれるいずれか１つであり、例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝剤である。
【0009】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域は、配列番号９で示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、及び／又は上記軽鎖可変領域は、配列番号１０で示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。ここで、上記ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ又はＣｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従って定義され、幾つかの具体的な実施形態では、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って定義される。
【0010】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が配列番号１４で示されるＨＣＤＲ１、ＬＩＮＰＲＤＤＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２３）で示されるＨＣＤＲ２と、配列番号１６で示されるＨＣＤＲ３を含み、及び／又は上記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＴＹＬＤ（配列番号２４）で示されるＬＣＤＲ１、配列番号１２で示されるＬＣＤＲ２と、配列番号１３で示されるＨＣＤＲ３を含む。
【0011】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域は、配列番号１７で示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、及び／又は上記軽鎖可変領域は、配列番号１８で示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。ここで、上記ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ又はＣｏｎｔａｃｔ番号付けシステムに従って定義され、幾つかの具体的な実施形態では、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って定義される。
【0012】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、及び／又は上記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
【0013】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、全ヒト抗体から選ばれ、幾つかの具体的な実施形態では、ヒト化抗体である。
【0014】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載されるヒト化ＡＮＧＰＴＬ３抗体の軽鎖と重鎖可変領域における軽鎖と重鎖ＦＲ配列は、それぞれヒト生殖細胞系の軽鎖と重鎖のＦＲ又はその変異配列に由来する。
【0015】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号９で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有し、及び／又は上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有する。
【0016】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１７で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有し、及び／又は上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１８で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有する。
【0017】
本開示において、「少なくとも９０％以上の配列同一性」は、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％以上の配列同一性を包含する。
【0018】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号９で示され、上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０で示される。
【0019】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、そのうち、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７で示され、上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１８で示される。
【0020】
幾つかの実施形態において、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖定常領域と軽鎖定常領域をさらに含む。選択的な実施形態において、上記重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４定常領域に由来し、上記軽鎖定常領域はヒトκとλ鎖定常領域に由来する。
【0021】
幾つかの実施形態において、上記重鎖定常領域のアミノ酸配列は、配列番号１９で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有し、及び／又は上記軽鎖定常領域のアミノ酸配列は、配列番号２０で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有する。
【0022】
幾つかの実施形態において、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖と軽鎖を含み、そのうち、上記重鎖のアミノ酸配列は、配列番号２１で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有し、及び／又は上記軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号２２で示されるか又はそれに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上の配列同一性を有する。
【0023】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体重鎖と軽鎖を含み、そのうち、上記重鎖のアミノ酸配列は配列番号２１で示され、且つ上記軽鎖のアミノ酸配列は配列番号２２で示される。
【0024】
幾つかの実施形態において、本開示に記載される抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及び二重特異性抗体から選ばれる。
【0025】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される緩衝剤のｐＨ値は、４．０～７．０、例えば、４．０～６．９、４．０～６．８、４．０～６．７、４．０～６．６、４．０～６．５、４．０～６．４、４．０～６．３、４．０～６．２、４．０～６．１、４．０～６．０、４．０～５．９、４．０～５．８、４．０～５．７、４．０～５．６、４．０～５．５、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、５．０～７．０、５．０～６．５、５．０～６．０、５．０～５．５、４．６～６．６、４．６～６．５、４．６～６．４、４．６～６．３、４．６～６．２、４．６～６．１、４．６～６．０、４．６～５．９、４．６～５．８、４．６～５．７、４．６～５．６、４．６～５．５、４．６～５．４、４．８～６．６、４．８～６．５、４．８～６．４、４．８～６．３、４．８～６．２、４．８～６．１、４．８～６．０、４．８～５．９、４．８～５．８、４．８～５．７、４．８～５．６、４．８～５．５、４．８～５．４、４．９～５．４、５．０～５．４であり、幾つかの具体的な実施形態において、上記緩衝剤のｐＨ値は、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９又は約７．０、例えば、約５．２である。
【0026】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される緩衝剤濃度は５～４０ｍＭ、例えば、５～３０ｍＭ、５～２０ｍＭ、５～１５ｍＭ、５～１０ｍＭ、１０～１５ｍＭ、８～１２ｍＭであり、幾つかの具体的な実施形態において、上記緩衝剤の濃度は約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１８ｍＭ、約２０ｍＭ、例えば、約１０ｍＭである。
【0027】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に記載される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の濃度は１０～２００ｍｇ／ｍＬ、例えば、５０～２００ｍｇ／ｍＬ、５０～１５０ｍｇ／ｍＬ、６０～１５０ｍｇ／ｍＬ、６０～１２０ｍｇ／ｍＬ、８０～１５０ｍｇ／ｍＬ、８０～１２０ｍｇ／ｍＬ、９０～１２０ｍｇ／ｍＬ、９０～１１０ｍｇ／ｍＬであり、幾つかの具体的な実施形態において、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０５ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１１５ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、又はいずれか２つの値の間の任意の値、例えば、約１００ｍｇ／ｍＬである。
【0028】
幾つかの実施形態において、医薬組成物に含まれる界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサルコール、Ｔｒｉｔｏｎ、ドデシルスルホン酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、オクチルグルコシドナトリウム、ラウリル－スルホベタイン、ミリスチル－スルホベタイン、リノール－スルホベタイン、ステアリン－スルホベタイン、ラウリル－サルコシン、ミリスチル－サルコシン、リノール－サルコシン、ステアリン－サルコシン、リノール－ベタイン、ミリスチル－ベタイン、セチル－ベタイン、ラウラミドプロピル－ベタイン、コカミドプロピル－ベタイン、リノールアミドプロピル－ベタイン、ミリスタミドプロピル－ベタイン、パルミタミドプロピル－ベタイン、イソステアラミドプロピル－ベタイン、ミリスタミドプロピル－ジメチルアミン、パルミタミドプロピル－ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル－ジメチルアミン、メチルココイルナトリウム、メチルオレイルタウリンナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレン及びプロピレングリコールの共重合体などから選ばれてもよい。幾つかの具体的な実施形態において、上記界面活性剤は、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０、例えば、ポリソルベート８０である。
【0029】
幾つかの実施形態において、医薬組成物における界面活性剤の濃度は０．０５～０．６ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．１～０．６ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．４ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．１～０．３ｍｇ／ｍＬであり、幾つかの具体的な実施形態において、上記医薬組成物における界面活性剤の濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１５ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．２ｍｇ／ｍＬである。
【0030】
幾つかの実施形態において、医薬組成物は安定剤をさらに含む。選択的な実施形態において、上記安定剤は、糖又はアミノ酸から選ばれる。選択的な実施形態において、糖は、通常の組成物（ＣＨ２Ｏ）ｎ及びその誘導体を含み、単糖、二糖、三糖、多糖、糖アルコール、還元糖、非還元糖などを含む。選択的な実施形態において、糖は、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、キシロース、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンニノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、ソルビトール、マルトースアルコール、ラクトースアルコール、イソ－マルツロースなどから選ばれてもよい。幾つかの具体的な実施形態において、上記糖は、非還元二糖、例えば、スクロースである。幾つかの具体的な実施形態において、上記アミノ酸は、グリシン、メチオニン及びプロリンから選ばれる。
【0031】
幾つかの実施形態において、医薬組成物における糖の濃度は４０～１１０ｍｇ／ｍＬ、例えば、４０～９５ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、６０～８０ｍｇ／ｍＬ、７０～９０ｍｇ／ｍＬ、７０～８０ｍｇ／ｍＬであり、幾つかの具体的な実施形態において、上記糖の濃度は約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ又はいずれか２つの値の間の任意の値、例えば、約７５ｍｇ／ｍＬである。
【0032】
本開示は、
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ）の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）約１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジン緩衝液と、
を含む医薬組成物を提供し、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは６．０～６．６（例えば、約６．０、約６．６）である。
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ）の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）約１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジン緩衝液と、
を含む医薬組成物を提供し、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは６．０～６．６（例えば、約６．０、約６．６）である。
【0033】
本開示は、
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ）の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液と、
を含む医薬組成物を提供し、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは４．６～５．０（例えば、約４．６、約５．０）である。
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ）の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液と、
を含む医薬組成物を提供し、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは４．６～５．０（例えば、約４．６、約５．０）である。
【0034】
本開示は、
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
を含む医薬組成物を提供する。
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
を含む医薬組成物を提供する。
【0035】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）４０～９０ｍｇ／ｍＬの糖（例えば、スクロース）と、
（ｄ）０．０５～０．６ｍｇ／ｍＬの界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０）と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは４．５～６．５、例えば、５．０～５．４、例えば、約５．２である。
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）４０～９０ｍｇ／ｍＬの糖（例えば、スクロース）と、
（ｄ）０．０５～０．６ｍｇ／ｍＬの界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０）と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは４．５～６．５、例えば、５．０～５．４、例えば、約５．２である。
【0036】
本開示は、
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～２０ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
を含む医薬組成物を提供する。
（ａ）１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～２０ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
を含む医薬組成物を提供する。
【0037】
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．５である。
【0038】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）５０～１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．０５～０．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～６．０である。
（ａ）５０～１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．０５～０．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～６．０である。
【0039】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）４０～１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．８である。
（ａ）４０～１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．８である。
【0040】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）８０～１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）７０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．５である。
（ａ）８０～１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）７０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．５である。
【0041】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）８０～１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）７０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．５である。
（ａ）８０～１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）７０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．５である。
【0042】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）９０～１１０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）８～１２ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）７５～８５ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１５～０．２５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．１～５．３である。
（ａ）９０～１１０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）８～１２ｍＭの酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液）と、
（ｃ）７５～８５ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１５～０．２５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．１～５．３である。
【0043】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、
（ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．４である。
（ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と、
（ｂ）５～１５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースと、
（ｄ）０．１～０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と、を含み、
選択的に、上記医薬組成物のｐＨは５．０～５．４である。
【0044】
幾つかの具体的な実施形態において、上記医薬組成物は、
（１）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（２）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（３）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（４）約８０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（５）約１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（６）約１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（７）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約６０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（８）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約６５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（９）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１０）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１１）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１２）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１３）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）である。
（１）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（２）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（３）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（４）約８０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（５）約１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（６）約１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（７）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約６０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（８）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約６５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（９）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１０）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１１）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１２）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）であり、
（１３）約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、約７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び約１５ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが５．０～５．４（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４）である。
【0045】
上述した実施形態において、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、以下から選ばれる：
１）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、且つ上記重鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
２）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７で示され、上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１８で示され、
３）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖及び軽鎖を含み、上記重鎖のアミノ酸配列は配列番号２１で示され、且つ上記軽鎖のアミノ酸配列は配列番号２２で示され、
４）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号２４、配列番号１２及び配列番号１３で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、且つ上記重鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１４、配列番号２３及び配列番号１６で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
５）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号９で示され、上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０で示される。
１）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、且つ上記重鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
２）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７で示され、上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１８で示され、
３）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖及び軽鎖を含み、上記重鎖のアミノ酸配列は配列番号２１で示され、且つ上記軽鎖のアミノ酸配列は配列番号２２で示され、
４）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号２４、配列番号１２及び配列番号１３で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、且つ上記重鎖可変領域は、アミノ酸配列がそれぞれ配列番号１４、配列番号２３及び配列番号１６で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
５）上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号９で示され、上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０で示される。
【0046】
本開示に係る医薬組成物は、十分な創薬安定性を持っており、長期間安定に放置することができる。本開示に係る医薬組成物は、少なくとも、安定性が良く、凍結乾燥形態が良いなどのメリットを有する。
【0047】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、２～８℃で少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月又は少なくとも２４ヶ月間安定している。幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、２５℃で少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月又は少なくとも２４ヶ月間安定している。幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、４０℃で少なくとも７日、少なくとも１４日又は少なくとも２８日間安定している。
【0048】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、２００ｒｐｍ、室温で少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、少なくとも４８時間、又は少なくとも６０時間振とうされた後も安定したままである。
【0049】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、－３５℃／室温で少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回凍結融解した後も安定したままである。
【0050】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、５０００Ｌｘ、２５℃で少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日間光照射された後も安定したままである。
【0051】
本開示は、上記医薬組成物を調製する方法であって、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の原液を緩衝剤で置換するステップを含む方法をさらに提供し、そのうち、上記緩衝剤は酢酸－酢酸ナトリウム緩衝剤であってもよい。
【0052】
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は液体製剤である。別の幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は凍結乾燥製剤である。
【0053】
本開示は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む凍結乾燥製剤を調製する方法であって、上記医薬組成物を凍結乾燥するステップを含む方法をさらに提供する。選択的な実施形態において、上記凍結乾燥は、予備凍結、一次乾燥及び二次乾燥のステップを順に含む。
【0054】
本開示は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む凍結乾燥製剤であって、上記の凍結乾燥製剤を調製する方法により調製された凍結乾燥製剤をさらに提供する。
【0055】
本開示は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む凍結乾燥製剤の再溶解溶液を調製する方法であって、上記凍結乾燥製剤を再溶解するステップを含む方法をさらに提供し、その再溶解に用いられる溶液は、注射用水、生理食塩水又はグルコース溶液から選ばれるが、これらに限定されない。
【0056】
本開示は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む再溶解溶液であって、上記の再溶解溶液を調製する方法により調製された再溶解溶液をさらに提供する。
【0057】
本開示は、製品、生産品又は試薬キットを提供し、それは、上記本開示に係る抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物、液体製剤、凍結乾燥製剤、再溶解溶液のいずれかを含む。選択的に、上記本開示に係る医薬組成物、液体製剤、凍結乾燥製剤、再溶解溶液のいずれかが収容された１つ又は複数の容器をさらに含む。幾つかの実施形態において、上記容器はガラスバイアルであり、例えば、中性ホウケイ酸ガラス管製の注射剤バイアルである。
【0058】
本開示は、上記医薬組成物又は凍結乾燥製剤又は凍結乾燥製剤の再溶解溶液が収容された容器を含む製品をさらに提供する。
【0059】
本開示は、疾患又は病状を治療・予防する方法に使用される医薬組成物又は凍結乾燥製剤又は凍結乾燥製剤の再溶解溶液をさらに提供する。
【0060】
本開示は、上記医薬組成物又は凍結乾燥製剤又は凍結乾燥製剤の再溶解溶液の、疾患又は病状を治療及び／又は予防するための薬剤の調製における使用をさらに提供する。
【0061】
本開示は、疾患又は病状を治療及び／又は予防する方法であって、必要とする対象に治療及び／又は予防有効量の上記の医薬組成物又は凍結乾燥製剤又は凍結乾燥製剤の再溶解溶液を投与することを含む、方法をさらに提供する。幾つかの実施形態において、上記対象はヒト対象である。
【0062】
幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状は、ＡＮＧＰＴＬ３の活性に関連する任意の疾患又は病状であり、ＡＮＧＰＴＬ３により媒介される疾患又は病状を含む。
【0063】
幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状の実例は、高脂血症、高リポタンパク血症及び脂質異常症などの脂質代謝に関わる疾患又は病状を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状の実例は、アテローム硬化性脂質異常症、糖尿病性脂質異常症、高トリグリセリド血症（重篤なトリグリセリド血症を含み、ＴＧ＞１０００ｍｇ／ｄＬ）、高コレステロール血症、カイロミクロン血症、混合型脂質異常症（例えば、肥満、メタボリック症候群、糖尿病など）、脂肪異栄養症、脂肪萎縮症などを含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状の実例は、ＬＰＬ活性の低下、ＬＰＬ欠損、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）活性の低下、ＬＤＬ受容体欠損症（例えば、ＬＤＬＲ－／－ホモ接合体家族性高コレステロール血症）、変化したＡｐｏＣ２／ＡｐｏＥ欠損、ＡｐｏＢの増加、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の産生及び／又は除去の低下、ある薬物療法（例えば、グルココルチコイド療法による脂質異常症）、いずれかの遺伝的素因、食事、生活様式などに起因する脂質異常症であってもよい。
【0064】
幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状は、高脂血症、高リポタンパク血症及び／又は脂質異常症に関連するか、或いはそれによる疾患又は病状であってもよく、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、高血圧、狭心症、脳卒中、脳血管疾患、うっ血性心不全、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患などの心臓血管疾患又は病状、急性膵臓炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、糖尿病、肥満などの血糖異常症を含むが、これらに限定されない。
【0065】
幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状の他の実例は、がん／腫瘍及び非腫瘍性血管新生に関連する疾患又は病状を含む。選択的な実施形態において、上記疾患又は病状は、加齢黄斑変性症、網膜中心静脈閉塞症又は網膜分枝静脈閉塞症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症などの眼内血管新生関連疾患又は病状であってもよい。選択的な実施形態において、上記疾患又は病状は、関節炎、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬などの炎症性疾患又は病状であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【0066】
【図1】Ｐ８ＢＧ抗体によるＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、スプラーグドーリー）ラットの血清トリグリセリドへの影響である。
【図2】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体によるＨＦＤ（Ｈｉｇｈ－ｆａｔ－ｄｉｅｔ、高脂肪食）マウスの血漿トリグリセリドへの影響である。
【図3】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体によるＨＦＤマウスの血漿低密度リポタンパク質コレステロール（Ｌｏｗ－Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、ＬＤＬ－Ｃ）への影響である。
【図4】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体によるＨＦＤマウスの血漿総コレステロールへの影響である。
【図5】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体によるＡＰＯＥマウス（アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ、ＡｐｏＥ）遺伝子ノックアウトマウス）の血漿トリグリセリドへの影響である。
【図6】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体によるＡＰＯＥマウスの血漿高密度リポタンパク質コレステロール（Ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｔｅｉｎ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、ＨＤＬ－Ｃ）への影響である。
【図7】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のマウス体内における薬物動態実験の結果である。
【図8】抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のカニクイザル体内における薬物動態実験の結果である。
【発明を実施するための形態】
【0067】
一、用語
本開示がさらに容易に理解されるように、以下、幾つかの技術・科学用語を具体的に定義する。本願で別途明確に定義しない限り、本願に使用される他の技術・科学用語の全ては、当業者に通常理解されている意味を持っている。
本開示がさらに容易に理解されるように、以下、幾つかの技術・科学用語を具体的に定義する。本願で別途明確に定義しない限り、本願に使用される他の技術・科学用語の全ては、当業者に通常理解されている意味を持っている。
【0068】
「緩衝剤」は、その酸－塩基共役成分の作用によりｐＨの変化に耐える緩衝剤を指す。ｐＨを適当な範囲に制御する緩衝剤の例は、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、グルコン酸塩、ヒスチジン塩、シュウ酸塩、乳酸塩、リン酸塩、枸櫞酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グリシルグリシン及び他の有機酸緩衝剤を含む。
【0069】
「ヒスチジン塩緩衝剤」は、ヒスチジンイオンを含む緩衝剤である。ヒスチジン塩緩衝剤の実例は、ヒスチジン－塩酸塩、ヒスチジン－酢酸塩、ヒスチジン－リン酸塩、ヒスチジン－硫酸塩などの緩衝剤、例えば、ヒスチジン－酢酸塩緩衝剤又はヒスチジン－塩酸塩緩衝剤を含み、ヒスチジン－酢酸塩緩衝剤は、ヒスチジンと酢酸により調製されたもので、ヒスチジン塩緩衝剤はヒスチジンと塩酸により調製されたものである。
【0070】
「枸櫞酸塩緩衝剤」は、枸櫞酸イオンを含む緩衝剤である。枸櫞酸塩緩衝剤の実例は、枸櫞酸－枸櫞酸ナトリウム、枸櫞酸－枸櫞酸カリウム、枸櫞酸－枸櫞酸カルシウム、枸櫞酸－枸櫞酸マグネシウムなどを含む。枸櫞酸塩緩衝剤は、枸櫞酸－枸櫞酸ナトリウムであってもよい。
【0071】
「コハク酸塩緩衝剤」は、コハク酸イオンを含む緩衝剤である。コハク酸塩緩衝剤の実例は、コハク酸－コハク酸ナトリウム、コハク酸－コハク酸カリウム、コハク酸－コハク酸カルシウム塩などを含む。コハク酸塩緩衝剤は、コハク酸－コハク酸ナトリウムであってもよい。
【0072】
「リン酸塩緩衝剤」は、リン酸イオンを含む緩衝剤である。リン酸塩緩衝剤の実例は、リン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナトリウム－枸櫞酸などを含む。リン酸塩緩衝剤は、リン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素ナトリウムであってもよい。
【0073】
「酢酸塩緩衝剤」は、酢酸イオンを含む緩衝剤である。酢酸塩緩衝剤の実例は、酢酸－酢酸ナトリウム、酢酸ヒスチジン塩、酢酸－酢酸カリウム、酢酸－酢酸カルシウム、酢酸－酢酸マグネシウムなどを含む。酢酸緩衝剤は、酢酸－酢酸ナトリウムであってもよい。
【0074】
「医薬組成物」は、１種又は複数種の本願に記載される化合物又はその生理学的／薬学的に許容される塩又はプロドラッグと、生理学的／薬学的に許容されるベクター及び賦形剤などの他の化学成分とを含む混合物を示す。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収に寄与してさらに生物活性を発揮するためのものである。本願において、「医薬組成物」及び「製剤」は、入れ替えて使用されてもよい。
【0075】
本開示に記載される医薬組成物の溶液形態は、特に説明のない限り、その中の溶媒はいずれも水である。
【0076】
「凍結乾燥製剤」は、液体若しくは溶液形態の医薬組成物又は溶液製剤を真空下で凍結乾燥するステップの後に得られた製剤又は医薬組成物を示す。
【0077】
本願に使用される「約」又は「ほぼ」という用語は、数値が当業者により測定される具体値の許容可能な誤差範囲にあることを意味し、上記数値部分は、如何に計測又は測定するか（即ち、計測システムの限度）によって決められる。例えば、この分野での各回の実行において「約」は、１以内又は１を超えた標準差を意味してもよい。或いは、「約」又は「基本的に含む」は、多くとも±２０％の範囲を意味してもよく、例えば、約５．５のｐＨは、ｐＨ５．５±１．１を意味する。さらに、特に生物学的システム又は過程について、当該用語は、多くとも１桁又は数値の多くとも５倍を意味してもよい。特に説明のない限り、具体値が本願及び特許請求の範囲に現れる場合、「約」又は「基本的に含む」の意味は、当該具体値の許容可能な誤差範囲内にあると仮定すべきである。
【0078】
本開示に記載される医薬組成物は、安定的な効果を達成することができ、即ち、その中の抗体が貯蔵後に基本的にその物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物学的活性を保持しており、好ましくは、医薬組成物は貯蔵後に、基本的にその物理的・化学的安定性及びその生物学的活性を保持している。貯蔵期間は、一般的に医薬組成物の所定の保存期間によって選択される。現在、タンパク質の安定性を測定する分析技術は複数種あり、所定温度で、所定期間貯蔵した後の安定性を測定することができる。
【0079】
安定した薬物抗体製剤は、冷蔵温度（２～８℃）で少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年間、最大２年間も保存した場合に、顕著な変化が認められない製剤である。また、安定した液体製剤は、２５℃を含む温度で１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は４０℃で１ヶ月を含む期間保存した後、所望の特徴を示している液体製剤を含む。安定性の典型的な許容可能な基準は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定され、通常、約１０％を超えず、例えば、約５％を超えない抗体モノマーが分解されることである。視覚的分析により、薬物抗体製剤は無色であるか、又は透明からやや乳白色である。上記製剤の濃度、ｐＨ及び重量モル浸透圧濃度は、変化が±１０％を超えない。通常、約１０％を超えず、例えば、約５％を超えない切断が見られ、通常、約１０％を超えず、例えば、約５％を超えない凝集が形成される。
【0080】
色及び／又は透明度を目視で検査したところ、又はＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及び動的光散乱（ＤＬＳ）により測定したところ、抗体が顕著な凝集の増加、沈殿及び／又は変性を示さない場合、上記抗体は、薬物製剤において「その物理的安定性を保持している」とする。タンパク質の配座の変化は、蛍光分光法（タンパク質の三次構造を確定するもの）により、及びＦＴＩＲ分光法（タンパク質の二次構造を確定するもの）により評価されてもよい。
【0081】
抗体が顕著な化学的変化を示さない場合、上記抗体は、薬物製剤において「その化学的安定性を保持している」とする。化学的に形態が変化されたタンパク質を検出・定量することにより、化学的安定性を評価することができる。タンパク質の化学構造を常に変化させる分解プロセスは、加水分解又は切断（サイズ排除クロマトグラフィー及びＳＤＳ－ＰＡＧＥなどの方法により評価される）、酸化（質量分析法又はＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組み合わせるペプチドマッピングなどの方法により評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸の測定などの方法により評価される）及び異性化（イソアスパラギン酸の含有量の測定、ペプチドマッピングなどにより評価される）を含む。
【0082】
所定の期間における抗体の生物活性が薬物製剤の調製時に示された生物活性の所定範囲にあると、上記抗体は、薬物製剤において「その生物活性を保持している」とする。抗体の生物活性は、例えば、抗原結合測定によって決定することができる。
【0083】
本開示に使用されるアミノ酸の３文字コードと１文字コードは、Ｊ．ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ、２４３、ｐ３５５８（１９６８）に記載された通りである。
【0084】
本開示に係る「抗体」とは、免疫グロブリンであり、天然完全抗体は２本の同じ重鎖と２本の同じ軽鎖が鎖間ジスルフィド結合により連結されてなるテトラペプチド鎖構造である。免疫グロブリンは、重鎖定常領域のアミノ酸組成と配列順序が異なるので、その抗原性も異なる。これにより、免疫グロブリンは、５種類、又は、免疫グロブリンのアイソタイプと呼ばれるＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥに分けることができ、その対応する重鎖は、それぞれμ鎖、δ鎖、γ鎖、α鎖及びε鎖である。同一種類のＩｇは、そのヒンジ領域のアミノ酸組成及び重鎖ジスルフィド結合の数と位置の違いによって、さらに異なるサブクラスに分けることができ、例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４に分けることができる。軽鎖は、定常領域によって、κ鎖又はλ鎖に分けられる。５種類のＩｇのそれぞれは、κ鎖又はλ鎖を有してもよい。
【0085】
抗体重鎖及び軽鎖は、Ｎ末端に近い約１１０個のアミノ酸の配列の変化が大きくて、可変領域（Ｆｖ領域）となり、Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列が比較的に安定的で、定常領域となる。可変領域は、３つの超可変領域（ＨＶＲ）と、配列が比較的に保存的である４つの骨格領域（ＦＲ）とを含む。３つの超可変領域は、抗体の特異性を決定し、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される。それぞれの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲ領域と、４つのＦＲ領域とからなり、アミノ末端からカルボキシ末端へ、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配列される。軽鎖の３つのＣＤＲ領域は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を指す。本開示に記載される抗体又は抗原結合断片のＬＣＶＲ領域及びＨＣＶＲ領域のＣＤＲアミノ基酸残基は、数量と位置において既知のＫａｂａｔ番号付け規則（ＬＣＤＲ１－３、ＨＣＤＲ２－３）に適合し、又はｋａｂａｔとｃｈｏｔｈｉａ番号付け規則（ＨＣＤＲ１）に適合する。
【0086】
本開示の抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、例えばヒト化抗体を含む。
【0087】
「マウス抗体」という用語は、本開示において、この分野での知識と技術により調製されたヒトＡＮＧＰＴＬ３に対するモノクローナル抗体である。調製時に、ＡＮＧＰＴＬ３抗原を試験対象に注射した後、所望の配列又は機能特性を有する抗体を発現したハイブリドーマを分離する。本開示の一選択的な実施形態において、上記マウス抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、マウスκ、λ鎖又はその変異体の軽鎖定常領域をさらに含み、或いは、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又はその変異体の重鎖定常領域をさらに含んでもよい。
【0088】
「キメラ抗体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、異種（例えば、マウス）抗体の可変領域を抗体（例えば、ヒト抗体）の定常領域と融合してなる抗体であり、異種抗体により誘発される免疫応答反応を低減することができる。キメラ抗体、例えば、ヒトマウスキメラ抗体を作成するには、まず、マウス特異的モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作成し、そしてマウスハイブリドーマ細胞から可変領域遺伝子をクローンニングし、さらに、必要に応じてヒト抗体の定常領域遺伝子をクローンニングし、マウス可変領域遺伝子とヒト定常領域遺伝子とをキメラ遺伝子になるように連結した後、発現ベクターに挿入し、最後に真核細胞系又は原核細胞系においてキメラ抗体分子を発現する。本開示の一選択的な実施形態において、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３キメラ抗体の抗体軽鎖は、ヒトκ、λ鎖又はその変異体の軽鎖定常領域をさらに含む。上記ＡＮＧＰＴＬ３キメラ抗体の抗体重鎖は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又はその変異体の重鎖定常領域をさらに含み、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖定常領域を含み、或いはアミノ酸変異（例えば、Ｌ２３４Ａ及び／又はＬ２３５Ａ変異、及び／又はＳ２２８Ｐ変異）のＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４変異体を使用する。
【0089】
「ヒト化抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、ＣＤＲ移植抗体（ＣＤＲ－ｇｒａｆｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）とも呼ばれ、異種（例えば、マウス）のＣＤＲ配列をヒトの抗体可変領域フレームワーク、即ち、異なる種類のヒト生殖細胞系の抗体フレームワーク配列に移植して発生された抗体を指す。キメラ抗体が大量のマウスタンパク質成分を持つことにより誘導された異種反応性を克服することができる。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む共通ＤＮＡデータベース又は開示された参考文献から取得することができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネットｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃｏｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで取得可能）、及びＫａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．、１９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版で見出すことができる。免疫原性の低下に伴う活性の低下を回避するために、上記ヒト抗体可変領域フレームワーク配列に対して最も少ない逆変異又は復帰変異を行うことにより、活性を保つことができる。本開示のヒト化抗体は、さらに酵母菌で提示される、ＣＤＲに対して親和性成熟変異を行ったヒト化抗体も含む。
【0090】
「ヒト抗体」及び「ヒト化抗体」という用語は、入れ替えて使用されてもよく、１つ又は複数の可変領域及び定常領域がヒト免疫グロブリン配列に由来することを指す。その一選択的な形態では、いずれの可変領域及び定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来するものであり、即ち、「完全ヒト化抗体」又は「全ヒト抗体」である。これらの抗体は様々な方法により調製して得られるが、ファージディスプレイ法により、ヒトＰＢＭＣ、脾臓、リンパ節組織からＢ細胞を分離して、天然単鎖ファージヒト抗体ライブラリーを構築して、或いはヒト抗体軽重鎖を発現できる組換えマウスを免疫することでスクリーニングして得られた抗体を含む。本開示のヒト抗体は、ヒト抗体を基に１つ又は複数のアミノ酸変異により得られた、依然として目標抗原に結合する抗体をさらに含む。
【0091】
本開示の「抗体」は、全長抗体の他に、抗原に結合可能な抗原結合断片を含む。
【0092】
「抗原結合断片」又は「機能断片」という用語は、抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）に特異的に結合する能力が保たれた抗体の１つ又は複数の断片である。全長抗体の断片により抗体の抗原結合機能を果たすことができることが示されている。「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の実例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片と、（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片と、（ｉｉｉ）ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片と、（ｉｖ）抗体の単アームのＶＨとＶＬドメインからなるＦｖ断片と、（ｖ）ＶＨとＶＬにより鎖間ジスルフィド結合で形成された安定的な抗原結合断片であるｄｓＦｖと、（ｖｉ）ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂなどの断片を含む二重抗体、二重特異性抗体及び多重特異性抗体と、を含む。なお、Ｆｖ断片は、２つのドメインＶＬ及びＶＨが分離した遺伝子でコードされるが、組換え法により、合成されたリンカーでそれらを連結することで、その中のＶＬ及びＶＨ領域がペアになって１価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれ、例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３～４２６、及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ８５：５８７９～５８８３を参照）として産生することができる。このような単鎖抗体も、抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる。このような抗体断片は、当業者に知られている通常の技術により得られ、且つ、完全抗体と同じように、断片が機能性によってスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術により、又は、完全な免疫グロブリンを酵素的若しくは化学的に切断することにより産生することができる。抗体は、異なるアイソタイプの抗体であってもよく、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソフォーム）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭ抗体である。
【0093】
本開示に記載される変異配列における「変異」は、「復帰変異」、「保存的修飾」又は「保存的置き換え又は置換」を含むが、これらに限定されない。本開示に記載される「保存的修飾」又は「保存的置き換え又は置換」は、類似の特徴（例えば、電荷、側鎖の大きさ、疎水性／親水性、主鎖の立体配座や剛性など）を有する他のアミノ酸でタンパク質中のアミノ酸を置換することで、タンパク質の生物学的活性を変えずに頻繁に変化可能にすることを意味する。当業者に知られているように、一般的に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換によって、基本的に生物学的活性を変えることはない（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．、第２２４ページ、（第４版）を参照）。また、構造又は機能が類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。
【0094】
本開示に記載される「変異配列」は、本開示のヌクレオチド配列及び／又はアミノ酸配列に対して適当な置換、挿入や欠失などの変異修飾を行った場合に、得られた本開示のヌクレオチド配列及び／又はアミノ酸配列と異なる百分率の配列同一性程度を有するヌクレオチド配列及び／又はアミノ酸配列を指す。本開示に記載される配列同一性は、少なくとも８５％、９０％又は９５％、例えば、少なくとも９５％であってもよい。非限定的な実施例は、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％を含む。２つの配列同士の配列比較及び同一性の百分率測定は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのホームページから取得可能なＢＬＡＳＴＮ／ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定により行うことができる。
【0095】
「配列同一性」又は「配列相同性」はアミノ酸配列に使用される場合、２つのタンパク質又はポリペプチド間の配列類似性を指す。２つの比較される配列における位置がいずれも同じアミノ酸残基に占められる場合、例えば、２つのポリペプチドの１つの位置が同一のアミノ酸残基に占められる場合、上記分子は当該位置で相同である。配列同一性百分率及び配列類似性百分率を決定するのに適したアルゴリズムの実例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、それらは、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウエアは、米国国立生物工学情報センターから公的に入手可能である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）。
【0096】
従来技術においてよく知られている抗体及び抗原結合断片の産生・精製方法は、例えば、コールド・スプリング・ハーバーの抗体実験技術マニュアルの５章～８章及び１５章の通りである。本開示に記載される抗体又は抗原結合断片は、遺伝子工学的方法により、非ヒト由来のＣＤＲ領域に１つ又は複数のヒト由来のＦＲ領域が加えられる。ヒトＦＲ生殖細胞系配列は、ＩＭＧＴヒト抗体可変領域生殖細胞系遺伝子データベースとＭＯＥソフトウエアをアラインメントすることにより、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）のホームページであるｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒから得るか、又は免疫グロブリン雑誌である２００１ＩＳＢＮ０１２４４１３５１から得ることができる。
【0097】
本開示に係る工学的な抗体又は抗原結合断片は、通常の方法により調製・精製することができる。例えば、重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、クローンニングしてＧＳ発現ベクターに組換えることができる。組換えた免疫グロブリン発現ベクターは、ＣＨＯ細胞を安定的にトランスフェクションすることができる。さらに好ましい従来技術の一つとして、哺乳類発現系は、特にＦｃ領域の高度に保存的なＮ末端部位において、抗体のグリコシル化を引き起こすことになる。ヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体を発現することにより、安定的なクローンが得られる。陽性のクローンは、バイオリアクターの無血清培地において培養を拡大することで、抗体を産生する。抗体が分泌された培養液は、通常の技術により精製することができる。例えば、調整された緩衝液を含むＡ又はＧ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラムで精製が行われる。非特異的に結合した成分を洗い流す。さらに、ｐＨ勾配法により、結合した抗体を溶離し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで抗体断片を検出し、収集する。抗体は、通常の方法によりろ過濃縮することができる。可溶性の混合物及びポリマーは、分子ふるい、イオン交換などの通常の方法により除去されてもよい。得られた生成物は、直ちに－７０℃などで冷凍し、又は凍結乾燥しなければならない。
【0098】
「投与」及び「処理」は、動物、ヒト、実験の対象、細胞、組織、器官や生物流体に適用される場合に、外因性薬剤、治療剤、診断薬又は組成物と、動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官や生物流体との接触を意味する。「投与」及び「処理」は例えば、治療、薬物動態、診断、研究及び実験方法を意味してもよい。細胞の処理は、試薬の細胞との接触、及び試薬の流体との接触を含み、ここで、上記流体は細胞と接触する。「投与」及び「処理」は、また、試薬、診断、結合組成物により、又は別種の細胞を通じて、体外及びインビトロで例えば細胞を処理することを意味する。「処理」はヒト、獣医学又は研究対象に適用される場合に、治療的処理、予防又は予防的措置、研究と診断的応用を意味する。
【0099】
「治療」は、例えば、本開示のいずれか１つの結合化合物の組成物を含む経口又は外用治療剤を対象に与えることを意味し、上記対象は１種又は複数種の疾患症状を有するが、既知の上記治療剤は、これらの症状に対して治療作用を有する。通常、治療を受ける対象又はグループには、１種又は複数種の疾患症状を効果的に緩和する量で治療剤を与えることにより、これらの症状の解消を誘導し、又は臨床的に測定可能な任意の程度まで進行しないようにこれらの症状を抑制する。いずれかの具体的な疾患症状を効果的に緩和する治療剤の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、対象の疾患状態、年齢と体重、及び薬剤の対象に必要な治療効果を発生させる能力などの複数の要因によって、変化することができる。当該症状の重症度や進行状況の評価に医者や他のプロのヘルスケアプロバイダによく用いられる任意の臨床的検出方法により、疾患症状が低減されたか否かを評価することができる。本開示の実施形態（例えば、治療方法又は製品）は、それぞれの目標疾患症状の緩和において無効な可能性があるが、この分野で知られている任意の統計学的検定方法、例えばＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定、カイ二乗検定、Ｍａｎｎ及びＷｈｉｔｎｅｙによるＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定）、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ－Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定とＷｉｌｃｏｘｏｎ検定により、統計学的に有意な数の対象において目標疾患症状を低減可能なことが確認される。
【0100】
「有効量」は、医学的疾患の症状又は病状の改善又は予防に十分な量を含む。有効量は、さらに、診断の許容又は促進に十分な量を指す。特定の対象又は獣医学的対象に使用される有効量は、例えば、治療すべき病状、対象の全体的健康状態、投与の方法や経路と用量、及び副作用の重症度といった要因によって変化することができる。有効量は、顕著な副作用又は毒性作用を回避する最大用量又は投与計画であってもよい。
【0101】
「Ｔｍ値」とは、タンパク質の熱変性温度、即ち、タンパク質の半分がアンフォールディングした場合の温度であり、この場合、タンパク質の空間構造が破壊されたので、Ｔｍ値が高いほど、タンパク質の熱安定性が高くなる。
【0102】
実施例
以下、実施例と合わせて本開示をさらに説明するが、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものではない。本開示の実施例において具体的な条件が明記されていない実験方法は、一般的に、例えばコールド・スプリング・ハーバーの抗体技術実験マニュアル、分子クローニングマニュアルなどの通常の条件、或いは原料又は商品メーカーにより提案された条件に従う。具体的な供給源が明示されていない試薬は、市販される通常の試薬である。
以下、実施例と合わせて本開示をさらに説明するが、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものではない。本開示の実施例において具体的な条件が明記されていない実験方法は、一般的に、例えばコールド・スプリング・ハーバーの抗体技術実験マニュアル、分子クローニングマニュアルなどの通常の条件、或いは原料又は商品メーカーにより提案された条件に従う。具体的な供給源が明示されていない試薬は、市販される通常の試薬である。
【0103】
実施例１、ＡＮＧＰＴＬ３抗原の設計及び発現
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ９Ｙ５Ｃ１）、マウスＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ９Ｒ１８２）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＤＣ５）、ラットＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｆ７ＦＨＰ０）を本開示ＡＮＧＰＴＬ３のテンプレートとして、本開示に係る抗原及び検出用タンパク質を設計し、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質を基に異なるタグを融合し、それぞれｐＴＴ５ベクター（Ｂｉｏｖｅｃｔｏｒ、Ｃａｔ＃：１０２７６２）にクローニングし、２９３細胞で一過性トランスフェクションして発現してから、精製し、本開示に係る抗原及び検出用タンパク質を得た。
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ９Ｙ５Ｃ１）、マウスＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ９Ｒ１８２）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＤＣ５）、ラットＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｆ７ＦＨＰ０）を本開示ＡＮＧＰＴＬ３のテンプレートとして、本開示に係る抗原及び検出用タンパク質を設計し、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質を基に異なるタグを融合し、それぞれｐＴＴ５ベクター（Ｂｉｏｖｅｃｔｏｒ、Ｃａｔ＃：１０２７６２）にクローニングし、２９３細胞で一過性トランスフェクションして発現してから、精製し、本開示に係る抗原及び検出用タンパク質を得た。
【0104】
１、ヒト全長ＡＮＧＰＴＬ３：ヒト－ＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓであり、免疫及び検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：一重下線部分はシグナルペプチド配列であり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４６０番目のアミノ酸である。
【化1】
【0105】
２、ヒトＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域：ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－Ｆｌａｇ－Ｈｉｓであり、免疫及び検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：一重下線部分はシグナルペプチドであり、二重下線部分はリンカーであり、イタリック体部分はＦｌａｇ及びＨｉｓであり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～１７０番目のアミノ酸である。
【化2】
【0106】
３、ヒトＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０））とマウスＩｇＧ２ａＦｃ部分（略語：ｍＦｃ）との融合タンパク質：ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃであり、検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はマウスＩｇＧ２ａＦｃであり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～１７０番目のアミノ酸である。
【化3】
【0107】
４、ヒトＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０））とマウスＩｇＧ２ａＦｃ部分との融合タンパク質：ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０）－ｍＦｃであり、免疫及び検出に利用され、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はマウスＩｇＧ２ａＦｃであり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～２２０番目のアミノ酸である。
【化4】
【0108】
５、マウス全長ＡＮＧＰＴＬ３：マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓであり、免疫及び検出に利用され、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はマウスＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４５５番目のアミノ酸である。
【化5】
【0109】
６、マウスＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域（ｍｏｕｓｅ－ＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０））とマウスＩｇＧ２ａＦｃ部分との融合タンパク質：マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０）－ｍＦｃであり、免疫に利用され、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はマウスＩｇＧ２ａＦｃであり、ボールド体部分はマウスＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～２２０番目のアミノ酸である。
【化6】
【0110】
７、カニクイザル全長ＡＮＧＰＴＬ３：カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓであり、検出に利用され、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はカニクイザルＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４６０番目のアミノ酸である。
【化7】
【0111】
８、ラット全長ＡＮＧＰＴＬ３：ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓであり、検出に利用され、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はラットＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４５５番目のアミノ酸である。
【化8】
【0112】
実施例２、ＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質、ハイブリドーマ抗体、組換え抗体の精製
２．１ Ｈｉｓタグ付きの組換えタンパク質又はＦｌａｇ－ｈｉｓタグ付きの組換えタンパク質の精製
細胞発現試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上清を収集して、最終濃度が５ｍＭとなるようにイミダゾールを加えた。５ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液によりニッケルカラムを平衡し、２～５倍のカラム体積で洗浄した。細胞上清をカラムにかけた。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、５ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液によりカラムを洗浄した。次に、ＰＢＳ＋１０ｍＭのイミダゾールでクロマトグラフィーカラムを洗浄し、非特異的結合したヘテロタンパク質を除去し、流出液を収集した。さらに、３００ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液により標的タンパク質を溶離し、溶離ピークを収集した。
２．１ Ｈｉｓタグ付きの組換えタンパク質又はＦｌａｇ－ｈｉｓタグ付きの組換えタンパク質の精製
細胞発現試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上清を収集して、最終濃度が５ｍＭとなるようにイミダゾールを加えた。５ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液によりニッケルカラムを平衡し、２～５倍のカラム体積で洗浄した。細胞上清をカラムにかけた。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、５ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液によりカラムを洗浄した。次に、ＰＢＳ＋１０ｍＭのイミダゾールでクロマトグラフィーカラムを洗浄し、非特異的結合したヘテロタンパク質を除去し、流出液を収集した。さらに、３００ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液により標的タンパク質を溶離し、溶離ピークを収集した。
【0113】
収集された溶離液をＳｕｐｅｒｄｅｘゲル濾過カラムによりさらに精製し、別々のチューブに収集した。得られた試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定した後、分注して使用に備えた。Ｈｉｓタグ付きの組換えタンパク質又はＦｌａｇ－ｈｉｓタグ付きの組換えタンパク質を得た。
【0114】
２．２ ハイブリドーマ抗体又はｍＦｃタグ付きの組換えタンパク質の精製
試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上清を残した。１×ＰＢＳによりＰｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティーカラムを平衡し、２～５倍のカラム体積で洗浄した。遠心分離された細胞発現上清試料をカラムにかけた。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。０．１Ｍの酢酸（ｐＨ３．５～４．０）で標的タンパク質を溶離し、収集してから、直ちに１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０）でタンパク質をｐＨ値が中性になるように調整して溶離し、最後に透析又は濃縮して１×ＰＢＳ緩衝液中に換液した。試料を収集し、電気泳動、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定してから、分注して使用に備えた。ｍＦｃタグ付きの組換えタンパク質又はハイブリドーマ抗体を得た。
試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上清を残した。１×ＰＢＳによりＰｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティーカラムを平衡し、２～５倍のカラム体積で洗浄した。遠心分離された細胞発現上清試料をカラムにかけた。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。０．１Ｍの酢酸（ｐＨ３．５～４．０）で標的タンパク質を溶離し、収集してから、直ちに１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０）でタンパク質をｐＨ値が中性になるように調整して溶離し、最後に透析又は濃縮して１×ＰＢＳ緩衝液中に換液した。試料を収集し、電気泳動、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定してから、分注して使用に備えた。ｍＦｃタグ付きの組換えタンパク質又はハイブリドーマ抗体を得た。
【0115】
２．３ 抗体、Ｆｃタグ付きの組換えタンパク質の精製
試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上清を残した。１×ＰＢＳによりＰｒｏｔｅｉｎ Ｇアフィニティーカラムを平衡し、２～５倍カラム体積で洗浄した。遠心分離された細胞発現上清試料をカラムにかけた。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。酢酸（ｐＨ３．０）で標的タンパク質を溶離し、収集してから、すぐに１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０）でタンパク質をｐＨ値が中性となるように調整して溶離し、最後に透析又は濃縮して１×ＰＢＳ緩衝液中に交換した。試料を収集し、電気泳動、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定した後、分注して使用に備えた。抗体又はｈＦｃタグ付きの組換えタンパク質を得た。
試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上清を残した。１×ＰＢＳによりＰｒｏｔｅｉｎ Ｇアフィニティーカラムを平衡し、２～５倍カラム体積で洗浄した。遠心分離された細胞発現上清試料をカラムにかけた。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。酢酸（ｐＨ３．０）で標的タンパク質を溶離し、収集してから、すぐに１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０）でタンパク質をｐＨ値が中性となるように調整して溶離し、最後に透析又は濃縮して１×ＰＢＳ緩衝液中に交換した。試料を収集し、電気泳動、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定した後、分注して使用に備えた。抗体又はｈＦｃタグ付きの組換えタンパク質を得た。
【0116】
実施例３、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の調製
３．１ ファージライブラリーによる抗ＡＮＧＰＴＬ３ヒト抗体のスクリーニング
ヒト化ファージ単鎖抗体ライブラリーを包装・濃縮し、ファージライブラリー（１０１２～１０１３／ｐｆｕ）を２％のＭＰＢＳ（２％脱脂粉乳を含むＰＢＳ）１ｍＬに懸濁させ、１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｍ－２８０ストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｔ Ｎｏ．１１２０６Ｄ）を加え、ターンテーブルに置いて繰り返して反転し、室温で１時間ブロッキングした。チューブを磁気ラックに２ｍｉｎ置き、Ｄｙｎａｂｅａｄｓを除去し、ファージライブラリーを新しいチューブに移した。ブロッキングされたファージライブラリーにビオチンで標識したヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ ２μｇ／ｍＬを加え、ターンテーブルに置いて１時間繰り返して反転した。同時に１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓを取って２％のＭＰＢＳ １ｍＬに懸濁させ、ターンテーブルに置いて繰り返して反転し、室温で１ｈブロッキングした。チューブを磁気ラックに２ｍｉｎ置き、ブロッキング液を吸い取った。ブロッキングされたＤｙｎａｂｅａｄｓをファージライブラリーとヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓとの混合液に加え、ターンテーブルに置いて１５分間繰り返して反転した。チューブを磁気ラックに２ｍｉｎ置き、混合液を吸い取った。１ｍＬのＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）でＤｙｎａｂｅａｄｓを１０回洗浄し、さらに１ｍｇ／ｍＬのトリプシン（Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｔ１４２６－２５０ＭＧ）０．５ｍＬを加え、ターンテーブルに置いて１５分間繰り返して反転しながらインキュベートし、溶離し、溶離されてきたファージを大腸菌ＴＧ１コーティングプレートに感染させ、ランダムで単クローンを選択してファージＥＬＩＳＡに利用した。
３．１ ファージライブラリーによる抗ＡＮＧＰＴＬ３ヒト抗体のスクリーニング
ヒト化ファージ単鎖抗体ライブラリーを包装・濃縮し、ファージライブラリー（１０１２～１０１３／ｐｆｕ）を２％のＭＰＢＳ（２％脱脂粉乳を含むＰＢＳ）１ｍＬに懸濁させ、１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｍ－２８０ストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｔ Ｎｏ．１１２０６Ｄ）を加え、ターンテーブルに置いて繰り返して反転し、室温で１時間ブロッキングした。チューブを磁気ラックに２ｍｉｎ置き、Ｄｙｎａｂｅａｄｓを除去し、ファージライブラリーを新しいチューブに移した。ブロッキングされたファージライブラリーにビオチンで標識したヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ ２μｇ／ｍＬを加え、ターンテーブルに置いて１時間繰り返して反転した。同時に１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓを取って２％のＭＰＢＳ １ｍＬに懸濁させ、ターンテーブルに置いて繰り返して反転し、室温で１ｈブロッキングした。チューブを磁気ラックに２ｍｉｎ置き、ブロッキング液を吸い取った。ブロッキングされたＤｙｎａｂｅａｄｓをファージライブラリーとヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓとの混合液に加え、ターンテーブルに置いて１５分間繰り返して反転した。チューブを磁気ラックに２ｍｉｎ置き、混合液を吸い取った。１ｍＬのＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）でＤｙｎａｂｅａｄｓを１０回洗浄し、さらに１ｍｇ／ｍＬのトリプシン（Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｔ１４２６－２５０ＭＧ）０．５ｍＬを加え、ターンテーブルに置いて１５分間繰り返して反転しながらインキュベートし、溶離し、溶離されてきたファージを大腸菌ＴＧ１コーティングプレートに感染させ、ランダムで単クローンを選択してファージＥＬＩＳＡに利用した。
【0117】
クローンを９６ウェルのディープウェルプレート（Ｎｕｎｃ Ｃａｔ Ｎｏ．２６０２５１）に接種し、３７℃で１６～１８ｈ培養した。少量取り、ＯＤ６００が約０．５に達するまで、別の９６ウェルのディープウェルプレートに接種し、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（ＮＥＢ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｎ０３１５Ｓ）を加えて包装した。４０００ｇで１０分間遠心分離して菌細胞を除去し、培養液を吸い取ってＡＮＧＰＴＬ３結合のＥＬＩＳＡ検出を行った。陽性クローン菌種を種として凍結保存し、シークエンシング社に送ってシークエンシングした。ここで、測定された陽性クローンＰ８の対応するアミノ酸配列は下記の通りである。
【0118】
＞Ｐ８重鎖可変領域配列：
＞Ｐ８軽鎖可変領域配列：
備考：配列における下線部分はＫａｂａｔ番号付けシステムによって決定されたＣＤＲ配列であり、イタリック体はＦＲ配列である。
【化9】
【化10】
【0119】
３．２ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の変異
Ｐ８抗体の３次元構造を基に、Ｐ８重鎖可変領域の５５番目のアミノ酸残基（自然順番号）をＤからＥに変異させ、Ｐ８軽鎖可変領域の３４番目のアミノ酸残基（自然順番号）をＧからＶに変異させ、新しい抗体分子Ｐ８Ｂを得て、Ｐ８Ｂのアミノ酸配列は下記の通りである。
Ｐ８抗体の３次元構造を基に、Ｐ８重鎖可変領域の５５番目のアミノ酸残基（自然順番号）をＤからＥに変異させ、Ｐ８軽鎖可変領域の３４番目のアミノ酸残基（自然順番号）をＧからＶに変異させ、新しい抗体分子Ｐ８Ｂを得て、Ｐ８Ｂのアミノ酸配列は下記の通りである。
【0120】
＞Ｐ８Ｂ重鎖可変領域配列：
＞Ｐ８Ｂ軽鎖可変領域配列：
備考：配列における下線部分はＫａｂａｔ番号付けシステムによって決定されたＣＤＲ配列であり、イタリック体はＦＲ配列である。
【化11】
【化12】
【0121】
【表1】
【0122】
３．３ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の構築及び発現
プライマーＰＣＲを設計して抗体ＶＨ／ＶＫ遺伝子断片を組立て、さらに発現ベクターｐＨｒ（シグナルペプチド及び定常領域付きの遺伝子（ＣＨ１－ＦＣ／ＣＬ）断片）と相同組換えを行い、抗体全長発現ベクターＶＨ－ＣＨ１－ＦＣ－ｐＨｒ／ＶＫ－ＣＬ－ｐＨｒを構築した。抗体の重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４及びその変異体の定常領域から選ばれてもよく、軽鎖定常領域はヒトκ、λ鎖又はその変異体の軽鎖定常領域から選ばれてもよい。例示的に、抗体の重鎖定常領域は配列が配列番号１９で示されるヒトＩｇＧ４－ＹＴＥ変異体から選ばれ、軽鎖定常領域は配列が配列番号２０で示されるヒトκ鎖の定常領域から選ばれる。
プライマーＰＣＲを設計して抗体ＶＨ／ＶＫ遺伝子断片を組立て、さらに発現ベクターｐＨｒ（シグナルペプチド及び定常領域付きの遺伝子（ＣＨ１－ＦＣ／ＣＬ）断片）と相同組換えを行い、抗体全長発現ベクターＶＨ－ＣＨ１－ＦＣ－ｐＨｒ／ＶＫ－ＣＬ－ｐＨｒを構築した。抗体の重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４及びその変異体の定常領域から選ばれてもよく、軽鎖定常領域はヒトκ、λ鎖又はその変異体の軽鎖定常領域から選ばれてもよい。例示的に、抗体の重鎖定常領域は配列が配列番号１９で示されるヒトＩｇＧ４－ＹＴＥ変異体から選ばれ、軽鎖定常領域は配列が配列番号２０で示されるヒトκ鎖の定常領域から選ばれる。
【0123】
＞ヒトＩｇＧ４－ＹＴＥ変異体重鎖定常領域配列：
＞ヒトκ鎖軽鎖定常領域配列：
例示的に、上記軽鎖／重鎖定常領域は上記Ｐ８Ｂの可変領域と組合せて完全な抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体であるＰ８ＢＧを形成し、抗体の軽鎖／重鎖配列は下記の通りである。
【化13】
【化14】
【0124】
＞Ｐ８ＢＧ重鎖配列：
＞Ｐ８ＢＧ軽鎖配列：
【化15】
【化16】
【0125】
実施例４、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のインビトロ評価
４．１ ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合する抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＥＬＩＳＡ実験
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合することで、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の少なくとも１つの活性を抑制又は阻害した。ＥＬＩＳＡ実験により、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原への結合活性を検出した。ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃ）は、マイクロプレートで被覆されたヒツジ抗マウスＩｇＧに結合することで、９６ウェルマイクロプレートに固定され、抗体を加えた後のシグナルの強さによって抗体のＡＮＧＰＴＬ３への結合活性を判断した。同時にビオチン標識試薬キット（東仁化学、ＬＫ０３）により標識されたＨＩＳタグ付きのＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ）は、マイクロプレートで被覆されたストレプトアビジンに結合することで、９６ウェルマイクロプレートに固定され、抗体を加えた後のシグナルの強さによって抗体のＡＮＧＰＴＬ３への結合活性を判断した。
４．１ ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合する抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＥＬＩＳＡ実験
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合することで、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の少なくとも１つの活性を抑制又は阻害した。ＥＬＩＳＡ実験により、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原への結合活性を検出した。ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃ）は、マイクロプレートで被覆されたヒツジ抗マウスＩｇＧに結合することで、９６ウェルマイクロプレートに固定され、抗体を加えた後のシグナルの強さによって抗体のＡＮＧＰＴＬ３への結合活性を判断した。同時にビオチン標識試薬キット（東仁化学、ＬＫ０３）により標識されたＨＩＳタグ付きのＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ）は、マイクロプレートで被覆されたストレプトアビジンに結合することで、９６ウェルマイクロプレートに固定され、抗体を加えた後のシグナルの強さによって抗体のＡＮＧＰＴＬ３への結合活性を判断した。
【0126】
ｐＨ７．４のＰＢＳ（上海源培、Ｂ３２０）緩衝液でヒツジ抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ、Ｍ３５３４－１ＭＬ）を２μｇ／ｍＬの濃度まで希釈し、５０μＬ／ウェルの体積で９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＣＬＳ３５９０－１００ＥＡ）に加え、３７℃のインキュベータに３時間置き、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いた。液体を捨てた後、ＰＢＳで希釈された５％脱脂乳（ＢＤ、２３２１００）ブロッキング液を２５０μＬ／ウェルで加え、３７℃のインキュベータで３時間インキュベートし、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いてブロッキングした。ブロッキング完了後に、ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴ緩衝液（０．０５％ツィーン－２０を含むｐＨ７．４のＰＢＳ）でプレートを３回洗浄した後、試料希釈液（１％ＢＳＡを含むｐＨ７．４のＰＢＳ）で０．５μｇ／ｍＬに希釈されたヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃ（配列が配列番号３で示される）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃のインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後に、マイクロプレートにおける反応液を捨て、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈された様々な濃度の測定待ちの抗体を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃のインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後に、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、試料希釈液で希釈されたヒツジ抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００３）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、ＴＭＢ発色基質（ＫＰＬ、５２－００－０３）を５０μＬ／ウェルで加え、室温で２～５分間（ｍｉｎ）インキュベートし、ＭＨ２ＳＯ４を５０μＬ／ウェルで加えて反応を停止させ、ＶｅｒｓａＭａｘプレートリーダーにより４５０ｎｍで吸収値を読み取り、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質に対する結合のＥＣ５０値を算出した。実験の結果は表３に示されている。
【0127】
ｐＨ７．４のＰＢＳ（上海源培、Ｂ３２０）緩衝液でストレプトアビジン（Ｓｉｇｍａ、Ｓ４７６２－５ＭＧ）を３μｇ／ｍＬの濃度に希釈し、５０μＬ／ウェルの体積で９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＣＬＳ３５９０－１００ＥＡ）に加え、３７℃のインキュベータに３時間置き、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いた。液体を捨てた後、ＰＢＳで希釈された５％脱脂乳（ＢＤ、２３２１００）ブロッキング液を２５０μＬ／ウェルで加え、３７℃のインキュベータで３時間インキュベートし、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いてブロッキングした。ブロッキング完了後に、ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴ緩衝液（０．０５％ツィーン－２０を含むｐＨ７．４のＰＢＳ）でプレートを３回洗浄した後、試料希釈液（１％ＢＳＡを含むｐＨ７．４のＰＢＳ）で０．５μｇ／ｍＬに希釈されてビオチンで標識されたマウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号５で示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列が配列番号７で示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号８で示される）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃のインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後に、マイクロプレートにおける反応液を捨て、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈された様々な濃度の測定待ちの抗体を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃のインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後に、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈されてＨＲＰで標識されたヒツジ抗マウス二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５－０３５－００３）又はヒツジ抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００３）又はマウスＨＲＰ／抗Ｍ１３から複合された二次抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｃａｔ Ｎｏ．１１９７３－ＭＭ０５－１００、ファージスクリーニングに利用される）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、ＴＭＢ発色基質（ＫＰＬ、５２－００－０３）を５０μＬ／ウェルで加え、室温で２～５分間（ｍｉｎ）インキュベートし、ＭＨ２ＳＯ４を５０μＬ／ウェルで加えて反応を停止させ、ＶｅｒｓａＭａｘプレートリーダーにより４５０ｎｍで吸収値を読み取り、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質に対する結合のＥＣ５０値を算出した。実験の結果は表２に示されており、実験の結果によると、本開示の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、様々な種のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合することができる。
【0128】
【表2】
【0129】
４．２ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質へのＨＴＲＦ結合実験
ＨＴＲＦ実験は同様に、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の抗原への結合活性を検出するために利用される。ビオチン標識試薬キット（東仁化学、ＬＫ０３）により標識されたＨＩＳタグ付きのＡＮＧＰＴＬ３（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ）がＨＴＲＦ試薬Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－Ｔｂ ｃｒｙｐｔａｔａ（Ｃｉｓｂｉｏ、６１０ＳＡＴＬＡ）に結合し、抗体が加えられた後、抗体は、それぞれＨＴＲＦ試薬Ｐａｂ抗マウスＩｇＧ－ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、６１ＰＡＭＸＬＡ）及びアンジオポエチン様タンパク質３に結合することになり、シグナルの強さは、抗体のアンジオポエチン様タンパク質３への結合活性の判断に利用される。
ＨＴＲＦ実験は同様に、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の抗原への結合活性を検出するために利用される。ビオチン標識試薬キット（東仁化学、ＬＫ０３）により標識されたＨＩＳタグ付きのＡＮＧＰＴＬ３（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ）がＨＴＲＦ試薬Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－Ｔｂ ｃｒｙｐｔａｔａ（Ｃｉｓｂｉｏ、６１０ＳＡＴＬＡ）に結合し、抗体が加えられた後、抗体は、それぞれＨＴＲＦ試薬Ｐａｂ抗マウスＩｇＧ－ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、６１ＰＡＭＸＬＡ）及びアンジオポエチン様タンパク質３に結合することになり、シグナルの強さは、抗体のアンジオポエチン様タンパク質３への結合活性の判断に利用される。
【0130】
希釈液（１％ＢＳＡを含むｐＨ７．４のＰＢＳ）により、ビオチンで標識したヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列が配列番号１で示される）、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号５で示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列が配列番号７で示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号８で示される）４μｇ／ｍＬを調製し、５μＬ／ウェルで３８４ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ｏｐｔｉｐｌａｔｅ－３８４）に加えた後、ＨＴＲＦ試薬Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－Ｔｂ ｃｒｙｐｔａｔａとＰａｂ抗マウスＩｇＧ－ＸＬ６６５との混合液を５μＬ／ウェルで加え、最後に試料希釈液で希釈された様々な濃度の測定待ちの抗体を１０μＬ／ウェルで加え、２５℃で１時間インキュベートした。ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳ（ＢＭＧ ＬａｂＴＥＣＨ）によりＨＴＲＦモジュールにおいて数値を読み取り、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のアンジオポエチン様タンパク質３に対する結合のＥＣ５０値を算出した。実験の結果は表３に示されており、実施結果によると、本開示の抗体は、ヒト、マウス、カニクイザル、ラットなどの種のＡＮＧＰＴＬ３抗原に対していずれも良好な結合活性を有する。
【0131】
【表3】
【0132】
４．３ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体によるＬＰＬ酵素活性阻害実験
ＬＰＬの酵素活性検出実験は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質のＬＰＬ酵素への阻害作用を遮断する抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の活性を検出するために利用される。
ＬＰＬの酵素活性検出実験は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質のＬＰＬ酵素への阻害作用を遮断する抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の活性を検出するために利用される。
【0133】
希釈緩衝液（ｐＨ７．４のＰＢＳ＋２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）でウシＬＰＬ（Ｓｉｇｍａ、Ｌ２２５４－５ＫＵ）を１２．５単位となるように希釈し、２５μＬ／ウェルで９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３６０３）に加えてから、試料希釈液で希釈された様々な濃度の測定待ちの抗体を２５μＬ／ウェルで加え、さらに濃度が２７．６μｇ／ｍＬであるＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－Ｆｌａｇ－Ｈｉｓ（配列が配列番号２で示される）、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号５で示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列が配列番号７で示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号８で示される）を２５μＬ／ウェルで加え、振とう機にて９６ウェルプレートを均一に振とうし、３７℃のインキュベータにおいて３０ｍｉｎインキュベートした。最後に希釈緩衝液で希釈された２０μＭの基質（Ｓｉｇｍａ、３００５８－１０ＭＧ－Ｆ）を２５μＬ／ウェルで加え、振とう機にて９６ウェルプレートを均一に振とうし、３７℃のインキュベータにおいて３０ｍｉｎインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ３プレートリーダーによりＥｘ５３５／Ｅｍ６１２で数値を読取った。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウエアにより濃度及び対応する蛍光値データを処理して、ＩＣ５０を算出した。実験の結果は表４に示されており、実施結果によると、本開示の抗体は良好なＬＰＬ酵素阻害作用を有する。
【0134】
【表4】
【0135】
４．４ ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に対する抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＢｉａｃｏｒｅ検出実験
Ｂｉａｃｏｒｅにより、測定待ちの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のヒト、サル、ラット及びマウスＡＮＧＰＴＬ３への親和性を測定した。方法は下記の通りである。
Ｂｉａｃｏｒｅにより、測定待ちの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のヒト、サル、ラット及びマウスＡＮＧＰＴＬ３への親和性を測定した。方法は下記の通りである。
【0136】
それぞれＰｒｏｔｅｉｎ Ａバイオセンサチップ（Ｃａｔ．＃ ２９１２７５５６、ＧＥ）により所定量の測定待ちの抗体を親和的に捕捉した後、チップの表面で一定濃度のヒト、サル、ラット及びマウスのＡＮＧＰＴＬ３抗原（ヒト－ＡＮＧＰＴＬ３（Ｒ＆Ｄ、３８２９－ＡＮ）、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号５で示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列が配列番号７で示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列が配列番号８で示される））を流した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器により反応シグナルをリアルタイムで検出して、結合・解離曲線を得た。各サイクル解離が完了した後、ｐＨ１．５のグリシン－塩酸再生溶液（Ｃａｔ．＃ ＢＲ－１００３－５４、ＧＥ）でバイオチップを洗浄して再生した。試験作動緩衝液は、１×ＨＢＳ－ＥＰ緩衝溶液（Ｃａｔ．＃ ＢＲ－１００１－８８、ＧＥ）である。試験で得られたデータをＧＥ Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウエア３．０バージョンにより（１：１）Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルでフィッティングし、親和性の値を得た。実験の結果は表５に示されており、実験の結果によると、本開示の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ヒト、カニクイザル、ラット及びマウスのＡＮＧＰＴＬ３抗原に高親和性で結合することができる。
【0137】
【表5】
【0138】
実施例５、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のラット体内における薬効評価
５．１ Ｐ８ＢＧ抗体のラット体内における脂質低下実験
実験用ＳＤラットをラボ環境において１週間適応飼育し（４週齢のＳＤラット、ＳＰＦ、約１００ｇ、雄、上海ＳＬＡＣ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１７０００５０１３０１７、ＳＣＸＫ（滬）２０１７－０００５）、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で、動物にいずれも標準的な滅菌マウス用飼料を投与し、水や餌を自由に摂取させた。実験開始の７日前に、動物を４ｈ断食させた後、眼窩から採血し、３５００ＲＰＭで１５ｍｉｎ遠心分離し、血清を取った。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。ラットをトリグリセリドレベルによって６群（非相関ホモヒトＩｇＧタンパク質（ｈＩｇＧ、以下同様）を陰性対照群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（配列構造がＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．２９、Ｎｏ．３、２０１５中のＥｖｉｎａｃｕｍａｂ配列を参照）３．５ｍｐｋ群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ７ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ３．５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ１．７５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ７ｍｐｋ群とした）に分け、１群ラット６匹とし、皮下注射で１回投与し、注射後の１日目、５日目、９日目、１３日目及び１６日目に各群のラットを４時間断食させた後、採血して血清を分離し、ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
５．１ Ｐ８ＢＧ抗体のラット体内における脂質低下実験
実験用ＳＤラットをラボ環境において１週間適応飼育し（４週齢のＳＤラット、ＳＰＦ、約１００ｇ、雄、上海ＳＬＡＣ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１７０００５０１３０１７、ＳＣＸＫ（滬）２０１７－０００５）、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で、動物にいずれも標準的な滅菌マウス用飼料を投与し、水や餌を自由に摂取させた。実験開始の７日前に、動物を４ｈ断食させた後、眼窩から採血し、３５００ＲＰＭで１５ｍｉｎ遠心分離し、血清を取った。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。ラットをトリグリセリドレベルによって６群（非相関ホモヒトＩｇＧタンパク質（ｈＩｇＧ、以下同様）を陰性対照群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（配列構造がＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．２９、Ｎｏ．３、２０１５中のＥｖｉｎａｃｕｍａｂ配列を参照）３．５ｍｐｋ群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ７ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ３．５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ１．７５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ７ｍｐｋ群とした）に分け、１群ラット６匹とし、皮下注射で１回投与し、注射後の１日目、５日目、９日目、１３日目及び１６日目に各群のラットを４時間断食させた後、採血して血清を分離し、ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
【0139】
実験の結果は図１及表６に示す通りであり、陰性対照群と比べて、１日投与後に、各治療群はトリグリセリドが全て低下し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ３．５ｍｐｋ群を除き、他の各群はいずれも統計的に差があり、実験中において、Ｐ８ＢＧ７ｍｐｋ群はトリグリセリドが最大８３．７％低下し、Ｐ８ＢＧ３．５ｍｐｋ群はトリグリセリドが最大８１．８％低下し、Ｐ８ＢＧ１．７５ｍｐｋ群はトリグリセリドが最大６８．７％低下し、５日投与後に、Ｐ８ＢＧ３．５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ１．７５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ７ｍｐｋ群は依然としてトリグリセリドの低下において統計的に有意差があるが、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ３．５ｍｐｋ群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ７ｍｐｋ群は統計的に差がなく、９日投与後に、Ｐ８ＢＧ７ｍｐｋ群とＰ８ＢＧ３．５ｍｐｋ群は依然として統計的に有意差がある。これにより、同じ用量で、Ｐ８ＢＧはＥｖｉｎａｃｕｍａｂと比べてトリグリセリド低下效果がより良くて持続的であることが示されている。また、実験中に、各群の動物は体重が正常である。
【0140】
【表6】
【0141】
（備考：Ｍａｘ Ｉｎｈ％は陰性対照群ＴＧに対する最大脂質低下百分率を示し、ｍｐｋはｍｇ／ｋｇを示す。）
【0142】
５．２ 高脂肪高コレステロールで飼育されたｃ５７ｂｌ／６マウスにおける抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の血漿脂質濃度に対する体内効果の測定
ｃ５７ｂｌ／６マウスを５匹／ケージで飼育し（４週齢のｃ５７ｂｌ／６マウス、ＳＰＦ、約１６～１８ｇ、雄、上海Ｃａｖｅｎｓ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１９１３８１２、ＳＣＸＫ（蘇）２０１６－００１０）、ラボ環境で適応性飼育を４週間行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で、動物にいずれも一般的な飼料を与えて飼育し、水や餌を自由に摂取させた。事前採血の５日後に、一般的な飼料を高脂肪高コレステロール飼料（Ｄ１２０７９Ｂ、江蘇省協同医薬生物工程有限責任公司より購入）に交換して、実験が終了するまでマウスを飼育した。実験開始の８日前に動物を断食させ、４時間断食後に眼窩から採血し、８０００ＲＰＭで２ｍｉｎ遠心分離し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度を測定した。マウスをトリグリセリドレベルによって４群（ｈＩｇＧ陰性対照群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ２５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ５ｍｐｋ群）に分け、１群１１匹とし、皮下投与し、週１回注射し、合計８回投与した。実験開始後の２週目、３週目、５週目、７週目、９週目、１０週目と１１週目に、各群のマウスを４時間断食させた後、眼窩から採血して血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度（トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）及びＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ－Ｃ））を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
ｃ５７ｂｌ／６マウスを５匹／ケージで飼育し（４週齢のｃ５７ｂｌ／６マウス、ＳＰＦ、約１６～１８ｇ、雄、上海Ｃａｖｅｎｓ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１９１３８１２、ＳＣＸＫ（蘇）２０１６－００１０）、ラボ環境で適応性飼育を４週間行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で、動物にいずれも一般的な飼料を与えて飼育し、水や餌を自由に摂取させた。事前採血の５日後に、一般的な飼料を高脂肪高コレステロール飼料（Ｄ１２０７９Ｂ、江蘇省協同医薬生物工程有限責任公司より購入）に交換して、実験が終了するまでマウスを飼育した。実験開始の８日前に動物を断食させ、４時間断食後に眼窩から採血し、８０００ＲＰＭで２ｍｉｎ遠心分離し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度を測定した。マウスをトリグリセリドレベルによって４群（ｈＩｇＧ陰性対照群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ２５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ５ｍｐｋ群）に分け、１群１１匹とし、皮下投与し、週１回注射し、合計８回投与した。実験開始後の２週目、３週目、５週目、７週目、９週目、１０週目と１１週目に、各群のマウスを４時間断食させた後、眼窩から採血して血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度（トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）及びＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ－Ｃ））を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
【0143】
実験の結果は表７～表９及び図２～４に示す通りであり、ｈＩｇＧ陰性対照群と比べて、実験の２週間、３週間、５週間と７週間後に、Ｐ８ＢＧ２５ｍｐｋ群はＴＧ、ＴＣ及びＬＤＬ－Ｃが全て顕著に低下し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ｍｐｋ及びＰ８ＢＧ５ｍｐｋ群は実験の３週間、５週間と７週間後に、ＴＧ、ＴＣ及びＬＤＬ－Ｃが低下した。実験の９週間後に、ｈＩｇＧ陰性対照群と比べて、トリグリセリドが顕著に低下したものはＰ８ＢＧ２５ｍｐｋ群及びＰ８ＢＧ５ｍｐｋ群の２群だけである。Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ｍｐｋ群と比べて、実験の２週目、３週目、９週目に、Ｐ８ＢＧ２５ｍｐｋ群はトリグリセリド及び総コレステロールが全て顕著に低下し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ｍｐｋ群と比べて、実験の２週目、９週目に、Ｐ８ＢＧ２５ｍｐｋ群はＬＤＬ－Ｃが顕著に低下した。１～１１週目の全実験周期に、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ｍｐｋ群はＴＧが最低４０．５±２．３まで低下し、開始ＴＧよりも３２．６０％低下したが、Ｐ８ＢＧ２５ｍｐｋ群はＴＧが最低２１．１±１．３まで低下し、開始ＴＧよりも６４．９０％低下した。これにより、Ｐ８ＢＧはＥｖｉｎａｃｕｍａｂと比べて脂質低下效果がより良くて持続的であることが示されている。
【0144】
【表7】
【0145】
【表8】
【0146】
【表9】
【0147】
５．３ ＡＰＯＥマウスにおける抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の血漿脂質濃度に対する体内効果の測定
ＡＰＯＥマウスを２匹／ケージで飼育し（８週齢のＡＰＯＥマウス、ＳＰＦ、約２２ｇ、雄、上海Ｃａｖｅｎｓ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１９１７２６０、ＳＣＸＫ（蘇）２０１６－００１０）、ラボ環境で適応性飼育を４週間行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で、動物にいずれも高脂肪飼料（Ｄ１２１０８Ｃ）を与えて飼育し、水や餌を自由に摂取させた。実験開始の７日前に動物を断食させ、４時間（ｈ）断食後に眼窩から採血し、８０００ＲＰＭで２分間（ｍｉｎ）遠心分離し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度を測定した。マウスをトリグリセリドレベルによって５群（ｈＩｇＧ陰性対照群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ１０ｍｐｋ群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ１０ ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ５ｍｐｋ群）に分け、１群８匹であり、それぞれ皮下注射で１回投与し（各群の投与量は表６を参照）、投与後の１日目（ｄ）、７日目及び１１日目にそれぞれ、各群のマウスを４時間絶食させた後に眼窩から採血し、血漿を収集し、ＡＤＶＩＡ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度（トリグリセリド、ＨＤＬコレステロール）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
ＡＰＯＥマウスを２匹／ケージで飼育し（８週齢のＡＰＯＥマウス、ＳＰＦ、約２２ｇ、雄、上海Ｃａｖｅｎｓ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１９１７２６０、ＳＣＸＫ（蘇）２０１６－００１０）、ラボ環境で適応性飼育を４週間行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で、動物にいずれも高脂肪飼料（Ｄ１２１０８Ｃ）を与えて飼育し、水や餌を自由に摂取させた。実験開始の７日前に動物を断食させ、４時間（ｈ）断食後に眼窩から採血し、８０００ＲＰＭで２分間（ｍｉｎ）遠心分離し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度を測定した。マウスをトリグリセリドレベルによって５群（ｈＩｇＧ陰性対照群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ１０ｍｐｋ群、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ５ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ１０ ｍｐｋ群、Ｐ８ＢＧ５ｍｐｋ群）に分け、１群８匹であり、それぞれ皮下注射で１回投与し（各群の投与量は表６を参照）、投与後の１日目（ｄ）、７日目及び１１日目にそれぞれ、各群のマウスを４時間絶食させた後に眼窩から採血し、血漿を収集し、ＡＤＶＩＡ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度（トリグリセリド、ＨＤＬコレステロール）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
【0148】
この実験の結果は図５、６及び表１０に示す通りであり、ｈＩｇＧ陰性対照群と比べて、１ｄ投与後に、各治療群はトリグリセリドが全て低下し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（１０ｍｐｋ）群はトリグリセリドが最低６５．６±５．４ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも４６．２％低下し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（５ｍｐｋ）群はトリグリセリドが最低７１．８±３．３ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも４２．１％低下し、Ｐ８ＢＧ（１０ｍｐｋ）群はトリグリセリドが最低３３．３±２．２ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも７２．９％低下し、Ｐ８ＢＧ（５ｍｐｋ）群はトリグリセリドが最低３７．０±１．７ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも７０．２％低下した。また、実験の結果によると、１日投与後に、Ｐ８ＢＧ１０ｍｐｋ群は血漿ＨＤＬ－Ｃが向上し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ１０ｍｐｋ群は血漿ＨＤＬ－Ｃが低下したが、脂質低下実験において、通常、脂質低下と同時にＨＤＬ－Ｃを低下させることは望ましくない。
【0149】
【表10】
【0150】
実施例６、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の薬物動態評価
６．１ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のマウス体内における薬物動態実験
体重１８～２４ｇのＣ５７ＢＬ／６マウス（浙江維通利華実験動物技術有限公司より購入）である。ラボ環境で適応性飼育を３日間以上行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度１６～２６℃、相対湿度４０～７０％で、飼育期間に飼料や水を自由に摂取させた。実験開始の１日前に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに番号を付け、ランダムで群分けし、１群３匹である。実験当日に、各群のマウスにそれぞれ静脈注射により被験薬Ｐ８ＢＧ及びＥｖｉｎａｃｕｍａｂを投与し、投与量は１０ｍｇ／ｋｇで、注射体積はいずれも５ｍＬ／ｋｇである。
６．１ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のマウス体内における薬物動態実験
体重１８～２４ｇのＣ５７ＢＬ／６マウス（浙江維通利華実験動物技術有限公司より購入）である。ラボ環境で適応性飼育を３日間以上行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度１６～２６℃、相対湿度４０～７０％で、飼育期間に飼料や水を自由に摂取させた。実験開始の１日前に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに番号を付け、ランダムで群分けし、１群３匹である。実験当日に、各群のマウスにそれぞれ静脈注射により被験薬Ｐ８ＢＧ及びＥｖｉｎａｃｕｍａｂを投与し、投与量は１０ｍｇ／ｋｇで、注射体積はいずれも５ｍＬ／ｋｇである。
【0151】
投与群は、投与前及び投与後の５ｍｉｎ、８ｈ、１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄに全血０．１ｍＬを採取し、抗凝固薬を加えず、採血後に４℃で３０ｍｉｎ静置し、１０００ｇで１５ｍｉｎ遠心分離し、上清（血清）を取ってＥＰチューブに入れ、－８０℃で保存した。
【0152】
ＥＬＩＳＡ方法により血清中の抗体濃度を検出し、Ｗｉｎｎｏｌｉｎソフトウエアにより被験薬の薬物動態パラメータを算出した。得られた主な薬物動態結果は、表１１及び図７に示されている。実験の結果によると、本開示のＰ８ＢＧ抗体は、マウス体内における半減期が陽性対照Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂよりも高い。
【0153】
【表11】
【0154】
６．２ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のカニクイザル体内における薬物動態評価
体重３～４ｋｇのカニクイザル（広東前沿生物科技有限公司より購入）が使用された。動物を実験に移す前に、少なくとも１４日間検疫及び飼養を行った。動物をステンレスケージで飼育し、各群は２匹以下／ケージである。動物飼育室の室温を１８～２６℃、相対湿度を４０％～７０％に制御し、明暗交互に１２時間光照射した。実験過程において、動物に水を自由に摂取させた。生化学指標によってカニクイザル６匹をランダムで２群に分け、１群動物３匹である。各群にそれぞれ皮下注射により被験薬Ｐ８ＢＧ及びＥｖｉｎａｃｕｍａｂを投与し、投与量は１０ｍｇ／ｋｇで、注射体積は２ｍＬ／ｋｇである。
体重３～４ｋｇのカニクイザル（広東前沿生物科技有限公司より購入）が使用された。動物を実験に移す前に、少なくとも１４日間検疫及び飼養を行った。動物をステンレスケージで飼育し、各群は２匹以下／ケージである。動物飼育室の室温を１８～２６℃、相対湿度を４０％～７０％に制御し、明暗交互に１２時間光照射した。実験過程において、動物に水を自由に摂取させた。生化学指標によってカニクイザル６匹をランダムで２群に分け、１群動物３匹である。各群にそれぞれ皮下注射により被験薬Ｐ８ＢＧ及びＥｖｉｎａｃｕｍａｂを投与し、投与量は１０ｍｇ／ｋｇで、注射体積は２ｍＬ／ｋｇである。
【0155】
群分け後に動物を一晩断食させ、それぞれ投与前、投与開始後の１時間（ｈ）、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１日（ｄ）、３ｄ、５ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄ、３５ｄ、４２ｄ、４９ｄ及び５６ｄに下肢静脈から約２ｍＬ採血し、分離ゲルを含む採血管に入れ、採血後に室温で３０分間（ｍｉｎ）静置し、１０００ｇで１５ｍｉｎ遠心分離し、上清を取って２つの清潔なＥＰ管に分注し、－７０℃以下で一時的に保存した（採血後の２ｈ以内に完了させた）。ＥＬＩＳＡ方法により血清中の抗体濃度を検出し、Ｗｉｎｎｏｌｉｎソフトウエアにより被験薬の薬物動態パラメータを算出した。得られた主な薬物動態結果は、表１２及び図８に示されている。実験の結果によると、本開示のＰ８ＢＧ抗体は、カニクイザル体内における半減期が陽性対照Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂよりも高い。
【0156】
【表12】
【0157】
実施例７、例示的な抗体医薬組成物（製剤）の調製プロセス
ステップ１：抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及び安定剤で抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤原液を調製し、ろ過した後にセンターコンソールによりサンプリングして無菌性を検出した。原液を０．２２μｍのＰＶＤＦろ材でろ過し、ろ液を収集した。
ステップ１：抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及び安定剤で抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤原液を調製し、ろ過した後にセンターコンソールによりサンプリングして無菌性を検出した。原液を０．２２μｍのＰＶＤＦろ材でろ過し、ろ液を収集した。
【0158】
ステップ２：充填量を調整して充填し（充填量と包装材は未定）、栓をして、それぞれ充填開始、充填中、充填終了時にサンプリングしてターコンソールにより充填量の差を検出した。
【0159】
ステップ３：蓋付け機のスイッチを入れ、アルミニウム蓋を施し、蓋を圧着した。
【0160】
ステップ４：目視により、製品に充填量が正確でないといった欠陥がないかを確認した。バイアル瓶のラベルを印刷し、貼り付け、カートンのラベルを印刷し、カートンを折り畳み、カートンに入れ、カートンのラベルを貼り付けた。
【0161】
実施例７～１３に使用された抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体はＰ８ＢＧ抗体であり、その重鎖配列が配列番号２１で示され、軽鎖配列が配列番号２２で示される。
【0162】
実施例８、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤のｐＨ値のスクリーニング
以下の緩衝液を調製し、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度が１．０ｍｇ／ｍＬである抗体製剤を製造し、試料の融解温度（Ｔｍ）、熱分解開始温度（Ｔｏｎｓｅｔ）を測定することにより、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の様々なｐＨ条件での熱安定性を考察し、試料の凝集温度（Ｔａｇｇ）及び粒子径（Ｒａｄｉｕｓ）を測定することにより、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の様々なｐＨ条件でのコロイド安定性を考察した。
以下の緩衝液を調製し、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度が１．０ｍｇ／ｍＬである抗体製剤を製造し、試料の融解温度（Ｔｍ）、熱分解開始温度（Ｔｏｎｓｅｔ）を測定することにより、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の様々なｐＨ条件での熱安定性を考察し、試料の凝集温度（Ｔａｇｇ）及び粒子径（Ｒａｄｉｕｓ）を測定することにより、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の様々なｐＨ条件でのコロイド安定性を考察した。
【0163】
１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ４．２
２）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ４．６
３）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ５．０
４）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ５．４
５）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ５．８
６）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ６．２
７）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ６．６
８）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．０
９）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．４
１０）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．８
１１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ８．２
１２）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ８．６
２）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ４．６
３）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ５．０
４）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ５．４
５）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ５．８
６）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ６．２
７）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ６．６
８）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．０
９）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．４
１０）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．８
１１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ８．２
１２）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウム、ｐＨ８．６
【0164】
【表13-1】
【表13-2】
【0165】
（備考：％ＰＤは分散係数を示し、値が小さいほど、粒子径の分布が均一になることが示され、Ｎ／Ａは該当しないことを示す）
その結果、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ｐＨ値が５．０±０．４である条件でＴａｇｇ及びＴｏｎｓｅｔ値が比較的高く、ｐＨ値が６．２±０．４である条件で粒子径が比較的小さく、分布がより均一であり、且つＴｍ１値が比較的高いことで、当該抗体は、ｐＨ値が５．０±０．４及び６．２±０．４である条件で熱安定性とコロイド安定性が比較的良いことが示されている。
その結果、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ｐＨ値が５．０±０．４である条件でＴａｇｇ及びＴｏｎｓｅｔ値が比較的高く、ｐＨ値が６．２±０．４である条件で粒子径が比較的小さく、分布がより均一であり、且つＴｍ１値が比較的高いことで、当該抗体は、ｐＨ値が５．０±０．４及び６．２±０．４である条件で熱安定性とコロイド安定性が比較的良いことが示されている。
【0166】
実施例９、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤の緩衝系のスクリーニング及び確認
９．１ ｐＨ６．０緩衝系スクリーニング
１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．０、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．０
２）１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０
９．１ ｐＨ６．０緩衝系スクリーニング
１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．０、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．０
２）１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０
【0167】
【表14】
【0168】
【表15-1】
【表15-2】
【0169】
【表16】
その結果、同じ考察条件で、１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．０緩衝系と比べて、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０緩衝系においてＴａｇｇ値がより高く、粒子径がより小さく、ポリマーの含有量がより低いことで、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０緩衝系において安定性がより良いことが示されている。
【0170】
９．２ ｐＨ６．６緩衝系のスクリーニング
１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．６、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．６の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．６
２）１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．６
１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．６、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．６の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．６
２）１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．６
【0171】
【表17】
【0172】
【表18】
【0173】
【表19】
その結果、同じ考察条件で、１０ｍＭのリン酸二水素ナトリウム－リン酸水素二ナトリウムｐＨ６．６緩衝系と比べて、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．６緩衝系においてＴｏｎｓｅｔ値がより低く、Ｔａｇｇ値がより高く、粒子径が比較的より大きいが、ポリマーの含有量が比較的より低く、モノマーとメインピークの含有量が比較的より高いことで、総じて考えると、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．６緩衝系において安定性がより良いことが示されている。
【0174】
９．３ ｐＨ４．６緩衝系のスクリーニング
１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含む抗体製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６
１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含む抗体製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６
【0175】
【表20】
【0176】
【表21】
【0177】
【表22】
その結果、同じ考察条件で、１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６緩衝系と比べて、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６緩衝系においてＴｍ１値がより低いが、Ｔｏｎｓｅｔ値がより高く、粒子径がより小さく、且つポリマーの含有量がより低いことで、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６緩衝系において安定性がより良いことが示されている。
【0178】
９．４ ｐＨ５．０緩衝系のスクリーニング
１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ５．０、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ５．０
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０
１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ５．０、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温（４０℃）と室温（２５℃）での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ５．０
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０
【0179】
【表23】
【0180】
【表24】
【0181】
【表25】
その結果、同じ考察条件で、１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ５．０緩衝系と比べて、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０緩衝系においてＴｍ１値、Ｔｏｎｓｅｔ値、Ｔａｇｇ値がより高く、且つ粒子径がより小さく、ポリマーの含有量がより低く、モノマーとメインピークの含有量が高いことで、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０緩衝系において安定性がより良いことが示されている。
【0182】
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の緩衝系スクリーニングの結果によると、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０緩衝系において外観が比較的良く、且つＴｍ１、Ｔａｇｇ及びＴｏｎｓｅｔ値が比較的高いが、高温４０℃の条件では、ポリマーが明らかに増加され、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０緩衝系において外観が比較的悪く、Ｔｍ１、Ｔａｇｇ及びＴｏｎｓｅｔ値が比較的高く、高温条件では、ポリマーの有意な増加がない。緩衝系スクリーニングに使用された試料が混合試料であることを考慮したら、最終的なｐＨと緩衝系をさらに確認するために、モノクローナル抗体試料を使用して緩衝系の確認を行った。
【0183】
９．５ 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤の緩衝系の確認
１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０、１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温６０℃と４０℃での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジン、ｐＨ６．０、
２）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウム、ｐＨ４．６、
３）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ４．６、
４）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０、１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０の緩衝系を選択して、５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む製剤を調製し、サンプリングして高温６０℃と４０℃での安定性の研究を行った：
１）１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジン、ｐＨ６．０、
２）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウム、ｐＨ４．６、
３）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ４．６、
４）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
【0184】
【表26】
【0185】
【表27】
その結果、１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウムｐＨ４．６及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ４．６緩衝系と比べて、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０緩衝系において安定性がより良いが、１０ｍＭのヒスチジン－塩酸ヒスチジンｐＨ６．０緩衝系では、顕著な乳白光を示し、且つポリソルベート８０を加えた後、外観が改善されなかった。
【0186】
実施例１０、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤における糖濃度のスクリーニング
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０の緩衝系を選択して、様々な糖濃度を有する緩衝系又は抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤を調製した：
１）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、６０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
３）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
４）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
５）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
６）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
７）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
以上の１）～７）のいずれにおいても、１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体が含まれた。
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムｐＨ５．０の緩衝系を選択して、様々な糖濃度を有する緩衝系又は抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤を調製した：
１）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、６０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
３）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
４）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
５）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
６）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
７）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ５．０、
以上の１）～７）のいずれにおいても、１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体が含まれた。
【0187】
各試料の浸透圧結果は、下記の表に示されている。
【0188】
【表28】
【0189】
実施例１１、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤における界面活性剤濃度のスクリーニング
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムを選択して、１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、様々な濃度のポリソルベート８０を含む製剤を調製し、且つ振とう・凍結融解・光照射・高温条件での抗体安定性を考察した。
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムを選択して、１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、様々な濃度のポリソルベート８０を含む製剤を調製し、且つ振とう・凍結融解・光照射・高温条件での抗体安定性を考察した。
【0190】
１）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．０
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．０
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．０
【0191】
【表29-1】
【表29-2】
【0192】
【表30-1】
【表30-2】
その結果、０．１ｍｇ／ｍＬ又は０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含む抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤は、振とう・凍結融解・光照射・高温条件で、安定性に有意差がないので、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤は、ポリソルベート８０の利用可能な濃度範囲が０．１～０．４ｍｇ／ｍＬである。
【0193】
実施例１２、製剤ｐＨの安定性への影響
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムを選択して、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度が１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨがそれぞれ５．０と５．４である製剤を調製し、振とう・凍結融解・光照射・高温条件で抗体製剤の安定性を考察した。
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウムを選択して、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含み、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度が１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨがそれぞれ５．０と５．４である製剤を調製し、振とう・凍結融解・光照射・高温条件で抗体製剤の安定性を考察した。
【0194】
１）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．０
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．４
２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度１００ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．４
【0195】
【表31-1】
【表31-2】
【0196】
【表32-1】
【表32-2】
その結果、０時と比べて、振とう・凍結融解・光照射・高温条件で、ｐＨ５．０と５．４の製剤におけるタンパク質の変化傾向が近いので、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤のｐＨの範囲は５．０～５．４と決定された。
【0197】
０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０と０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０は、抗体安定性への影響があまり大きくないので、製剤に利用可能なポリソルベート８０の濃度範囲は０．１～０．４ｍｇ／ｍＬであり、ｐＨ値５．０と５．４は抗体安定性への影響があまり大きくないので、製剤に利用可能なｐＨ範囲は５．０～５．４であり、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の濃度は１００ｍｇ／ｍＬと決定された。
【0198】
実施例１３、選択可能な製剤配合法
また、本開示は、他の製剤配合法による抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体医薬製剤をさらに提供し、当該製剤配合法は以下を含むが、これらに限定されない：
（１）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．０、
（２）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．０、
（３）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．０、
（４）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．２、
（５）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．２、
（６）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．２、
（７）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．４、
（８）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．４、
（９）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．４、
（１０）８０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ又は１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０～５．４、
（１１）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ又は９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０～５．４。
また、本開示は、他の製剤配合法による抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体医薬製剤をさらに提供し、当該製剤配合法は以下を含むが、これらに限定されない：
（１）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．０、
（２）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．０、
（３）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．０、
（４）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．２、
（５）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．２、
（６）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．２、
（７）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．４、
（８）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．４、
（９）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ５．４、
（１０）８０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ又は１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、７５ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０～５．４、
（１１）１００ｍｇ／ｍＬの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ又は９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０～５．４。
【0199】
実験の結果によると、上記製剤配合法による抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体製剤は、いずれも良好な安定性を有し、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体医薬の調製に適用可能である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】
【国際調査報告】