特表 2024-529484 キメラタンパク質および免疫治療の方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-06

(54)【発明の名称】キメラタンパク質および免疫治療の方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240730BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240730BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240730BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240730BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20240730BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 15/869 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 15/861 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20240730BHJP

   C12N 15/863 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 27/16 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 31/06 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240730BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/13

C12N15/12

C07K19/00

C07K16/28

C07K14/47

C07K14/705

C12N15/867 Z

C12N15/869 Z

C12N15/861 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/864 Z

C12N15/863 Z

A61P35/00

A61P29/00

A61P29/00 101

A61P17/10

A61P11/02

A61P37/08

A61P11/06

A61P9/10

A61P17/00

A61P37/02

A61P11/00

A61P1/00

A61P1/16

A61P13/08

A61P13/12

A61P1/04

A61P13/10

A61P27/02

A61P27/16

A61P25/04

A61P19/02

A61P31/04

A61P37/06

A61P31/06

A61P9/14

A61P25/00

A61P3/10

A61P25/08

A61P21/00

A61P7/06

A61P21/04

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K38/16

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024505279

(86)(22)【出願日】2022-07-29

(85)【翻訳文提出日】2024-03-28

(86)【国際出願番号】 EP2022071407

(87)【国際公開番号】W WO2023006975

(87)【国際公開日】2023-02-02

(31)【優先権主張番号】21306069.2

(32)【優先日】2021-07-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．Ｓｐａｎ

(71)【出願人】

【識別番号】513246469

【氏名又は名称】インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル）

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＥＲＭ（ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥＬＡ ＳＡＮＴＥ ＥＴ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＭＥＤＩＣＡＬＥ）

(71)【出願人】

【識別番号】507421289

【氏名又は名称】ナント・ユニヴェルシテ

【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＴＥＳ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100121728

【弁理士】

【氏名又は名称】井関 勝守

(74)【代理人】

【識別番号】100165803

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 修平

(74)【代理人】

【識別番号】100179648

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 咲江

(74)【代理人】

【識別番号】100222885

【弁理士】

【氏名又は名称】早川 康

(74)【代理人】

【識別番号】100140338

【弁理士】

【氏名又は名称】竹内 直樹

(74)【代理人】

【識別番号】100227695

【弁理士】

【氏名又は名称】有川 智章

(74)【代理人】

【識別番号】100170896

【弁理士】

【氏名又は名称】寺薗 健一

(74)【代理人】

【識別番号】100219313

【弁理士】

【氏名又は名称】米口 麻子

(74)【代理人】

【識別番号】100161610

【弁理士】

【氏名又は名称】藤野 香子

(72)【発明者】

【氏名】ボワスジェロール，ニコラス

(72)【発明者】

【氏名】ペティトーム，タシアン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA44

4C084CA53

4C084NA14

4C084ZA01

4C084ZA06

4C084ZA08

4C084ZA33

4C084ZA34

4C084ZA36

4C084ZA44

4C084ZA45

4C084ZA55

4C084ZA59

4C084ZA66

4C084ZA68

4C084ZA75

4C084ZA81

4C084ZA89

4C084ZA94

4C084ZA96

4C084ZB07

4C084ZB08

4C084ZB11

4C084ZB13

4C084ZB15

4C084ZB26

4C084ZB35

4C084ZC35

4C085AA13

4C085AA14

4C085CC01

4C085CC08

4C085DD42

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA41

4H045CA42

4H045DA50

4H045DA76

4H045DA86

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）はリンカーであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）はリンカーであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸またはキメラタンパク質に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

－ Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、
－ Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸。

【請求項2】

－ Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、
－ Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、キメラタンパク質。

【請求項3】

前記シグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメイン（ａ）は、単量体、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ三量体、またはヘテロ三量体である、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項4】

前記シグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメイン（ｃ）は、単量体、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ三量体、またはヘテロ三量体である、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項5】

前記シグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメイン（ａ）は、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＴＩＭ－３、抗ＶＩＳＴＡ、抗ＢＴＬＡ、抗ＬＡＧ３、抗ＣＤ２８、抗メソテリン（抗ＭＳＬＮ）、抗ＣＤ１９、抗ＨＥＲ２から選択される、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項6】

前記機能的リンカー（ｂ）は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または寛容抗原から選択される、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項7】

前記腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、またはＭＵＣ－１である、請求項６に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項６に記載のキメラタンパク質。

【請求項8】

前記シグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメイン（ｃ）は、４－１ＢＢＬ、ＯＸ－４０リガンド（ＯＸ－４０Ｌ）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＴＲＡＩＬ、およびＴＬ１Ａから選択されるシグナリングドメインである、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項9】

前記キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項10】

前記キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ＯＸ－４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項11】

前記キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［二量体４－１ＢＢＬおよび単量体ＯＸ－４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい、請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項12】

処置を必要とする対象におけるがんまたは炎症性疾患を処置する方法であって、
－ Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、
－ Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、キメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む方法。

【請求項13】

前記炎症性疾患は、尋常性ざ瘡、急性炎症、アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、アトピー性皮膚炎、自己免疫性疾患、自己炎症性疾患、常染色体劣性痙性失調症、気管支拡張症、セリアック病、慢性胆嚢炎、慢性炎症、慢性前立腺炎、大腸炎、憩室炎、家族性好酸球増加症（ｆｅ）、糸球体腎炎、グリセロールキナーゼ欠乏症、化膿性汗腺炎、過敏症、炎症、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、間質性膀胱炎、喉頭炎症性疾患、リー症候群、扁平苔癬、マスト細胞賦活化症候群、マスト細胞症、眼炎症性疾患、耳炎、疼痛、骨盤炎症性疾患、再灌流傷害、呼吸器疾患、再狭窄、リウマチ熱、関節リウマチ、鼻炎、サルコイドーシス、敗血症性ショック、珪肺症または他の塵肺症、移植片拒絶、結核、および血管炎を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記自己免疫性疾患または状態は、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギランバレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群、移植拒絶（例えば、同種移植片拒絶の予防）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、または他の自己免疫性疾患である、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

請求項１に記載のキメラタンパク質をコードする核酸を含む発現ベクター。

【請求項16】

前記ベクターは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、レンチウイルス（ＬＶ）、レトロウイルス（ＲＶ）、アデノウイルス（ＡＶ）、麻疹ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、粘液腫ウイルス、レオウイルス、パルボウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＶＶ）、または同じファミリーのウイルスである、請求項１５に記載の発現ベクター。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は免疫治療の分野のものである。より具体的には、本発明は、がんに罹患する対象におけるがん処置を選択するための方法および組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

融合タンパク質は、異なるタンパク質またはタンパク質の一部を組み合わせて得られる人工タンパク質である。これは、所望のタンパク質またはタンパク質の一部に対応するオープンリーディングフレームを含む遺伝子のＤＮＡを組み換えることによって作製した後に得られる。融合タンパク質はまた、キメラタンパク質とも呼ばれ得る。

【0003】

がん免疫治療のための従来の治療用タンパク質（例えば、抗体、リガンド）は、アゴニスト性またはアンタゴニスト性の活性のために、腫瘍細胞と免疫細胞との両方の表面に存在する免疫調節タンパク質を標的とする。がん免疫治療のためのキメラタンパク質は、１つの分子においてアゴニスト特性とアンタゴニスト特性との両方を示すことによって、これらの活性を組み合わせることができる。しかしながら、それらは通常、がん処置に関連する組織だけでなく、生物体全体に及ぶその効力に関連した毒性を示す。これは、免疫細胞が免疫調節分子を発現する腫瘍細胞と相互作用する腫瘍微小環境に対してキメラタンパク質を適切にベクター化することで解決され得る。このベクター化は、腫瘍において特異的に複製する腫瘍溶解性ウイルスなどのウイルスベクターを含む遺伝子治療ベクターに、キメラタンパク質をコードする遺伝子を挿入することによって達成できる。この腫瘍への特異的なベクター化により、強力なキメラタンパク質が対象の場所で発現されることが保証され、これにより毒性を抑えながら抗腫瘍効果を向上させることが期待される。この安全性の向上は、他の免疫機構を活性化して、ゆえに免疫賦活特性を強化し得る、さらなる機能的ドメインを追加できる、キメラタンパク質のさらなる改変の機会を提供するものである。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、がんに罹患する対象におけるがん処置を選択するための方法および組成物に関する。特に、本発明は特許請求の範囲によって規定される。

【図面の簡単な説明】

【0005】

【図1】図１は、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子の一般的な図を示す。ＴＡＭＥ－ＩＴ分子は、別個の免疫刺激活性を有する３つの異なるドメインから構成されるキメラタンパク質である。「ターゲティングドメイン」は、腫瘍細胞または免疫細胞のいずれかの表面におけるマーカーを認識し、これが、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子を細胞表面に固定して示し、ターゲット細胞内にシグナルを送るまたはシグナリングを遮断することができる。「機能的リンカー」は、ＴＡＭＥ－ＩＴターゲット細胞の貪食の際に抗原提示細胞を含む、様々な細胞型によって、プロセシングされて主要組織適合遺伝子複合体分子上において提示される腫瘍抗原またはウイルス抗原のペプチド配列を含む。「シグナリングドメイン」は、ＴＮＦファミリーの単量体、二量体、または三量体のタンパク質から構成され、様々な免疫細胞型の活性化を刺激するアゴニスト特性を持つ。

【図2】図２は、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質がターゲット細胞の表面上にアゴニストリガンドを提示することを示す。ＰＤ－Ｌ１^＋細胞をＫＮ０３５－ＴＡＡ－ｔｈ４－１ＢＢＬ分子（ＫＮ０３５は抗ＰＤ－Ｌ１ｎａｏｎｂｏｄｙであり、ｔｈ４－１ＢＢＬは三量体ヒト４－１ＢＢＬドメインである）とインキュベートし、洗浄してから、蛍光色素コンジュゲート抗４－１ＢＢＬ抗体で染色した。ＴＡＭＥ－ＩＴ分子のＫＮ０３５－ｔｈ４－１ＢＢＬは表面のＰＤ－Ｌ１を認識することができ、ＰＤ－Ｌ１^＋細胞を４－１ＢＢＬ陽性にする（Ａ）。このプロセスは、単量体ヒト４－１ＢＢＬ（ｍｈ４－１ＢＢＬ）に連結したヒトＰＤ－１部分から構成された従来の分子よりも効率的である（Ｄ）。メソテリン^＋細胞をＡ１－ｔｈＣＤ４０Ｌ分子（Ａ１は抗メソテリンｎａｏｎｂｏｄｙであり、ｔｈＣＤ４０Ｌは三量体ヒトＣＤ４０Ｌドメインである）とインキュベートし、洗浄してから、蛍光色素コンジュゲート抗ＣＤ４０Ｌ抗体で染色した（Ｂ）。ＴＡＭＥ－ＩＴ分子のＡ１－ｔｈＣＤ４０Ｌは表面のメソテリンを認識することができ、メソテリン^＋細胞をＣＤ４０Ｌ陽性にしながら（濃灰色）、メソテリン^－細胞をＣＤ４０Ｌ^－に留めた（薄灰色）。可溶性三量体ＣＤ４０Ｌ（ｓｔｈＣＤ４０Ｌ）のみから構成された分子を用いたとき、メソセリン^＋細胞はＣＤ４０Ｌ^－に留まり、これは抗メソセリンＡ１ｎａｏｎｂｏｄｙが表面固定に必要であることを示している（Ｃ）。ＣＴＬＡ－４^＋／ＣＤ４０Ｌ^－細胞を、［抗ＣＴＬＡ－４］－［ｔｈＣＤ４０Ｌ］ＴＡＭＥ－ＩＴ分子とインキュベートし（濃灰色）、またはインキュベートせず（薄灰色）、洗浄してから、蛍光色素コンジュゲート抗ＣＤ４０Ｌ抗体で染色した。（Ｅ）ＴＡＭＥ－ＩＴ分子は、表面に固定されたことから、ＣＴＬＡ－４^＋／ＣＤ４０Ｌ^－細胞をＣＤ４０Ｌ陽性にする。

【図3】図３は、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子がヒト樹状細胞を活性化することを示す。（Ａ～Ｃ）ヒト単球由来樹状細胞を、ＫＮ０３５－ｔｈ４－１ＢＢＬ作製細胞（濃灰色）またはコントロール細胞（薄灰色）のいずれかの上清と４８時間インキュベートした。その後、樹状細胞を、フローサイトメトリーによってＣＤ８０、ＣＤ８３、およびＣＤ８６成熟マーカーの発現について分析した。これは、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質が抗原提示細胞の成熟を誘導することを示す。ヒト単球由来樹状細胞（ＤＣ）を、ＬＰＳ（陽性コントロール）、および／または、これまでにＴＡＭＥ－ＩＴ分子Ａ１－ｔｈＣＤ４０Ｌ（Ａ１は抗メソテリンｎａｏｎｂｏｄｙである）とインキュベートした、もしくはインキュベートしなかった、メソテリン＋腫瘍細胞（Ｍｅｓｏ１３）と、２０時間インキュベートした後、ＣＤ８３成熟マーカーの発現について分析した。ＴＡＭＥ－ＩＴ分子を腫瘍細胞に固定すると、後者によって誘導されたＤＣ成熟の阻害が回復した。抗メソテリンｎａｏｎｂｏｄｙを欠いたＴＡＭＥ－ＩＴ分子の切断型（ｓｔｈＣＤ４０Ｌ）を使用するか、または、ＤＣと腫瘍細胞とを物理的に分離（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）すると、この免疫活性化特性は失われた。

【図4】図４は、改変した腫瘍溶解性ウイルスに感染した細胞がＴＡＭＥ－ＩＴ分子を作製することを示す。ＨＥＫ細胞にＡ１－ｔｈＣＤ４０Ｌ分子をコードするＶＳＶを感染させた。培養上清（ＳＮ）を回収し、遠心分離によって濃縮した（ＣＳＮ）。その後、Ａ１－ｔｈＣＤ４０Ｌをウエスタンブロットによって検出した。陰性コントロールとして、関連性のないタンパク質（ｍＲｕｂｙ２）をコードするＶＳＶを用いた。

【図5】図５は、「機能的リンカー」にコードされた抗原がＣＤ４Ｔ細胞に効率的に提示されることを示す。ヒト腫瘍細胞を、抗原ペプチドを含む「機能的リンカー」を含むかまたは含まない様々なＴＡＭＥ－ＩＴ分子をコードするＶＳＶに感染させた。その後、これらの感染細胞を、ヒト単球由来樹状細胞と共培養した後、または共培養しなかった後、「機能的リンカー」にペプチド配列が見受けられる腫瘍抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的なヒトのＨＬＡ－ＤＰ４制限ＣＤ４Ｔ細胞クローンと６時間共培養した。Ｔ細胞の活性化は、ガンマインターフェロンの細胞内染色によって評価され、「機能的リンカー」を含むＴＡＭＥ－ＩＴ分子をコードするＶＳＶに感染した腫瘍細胞をそれまでに取り込んだＨＬＡ－ＤＰ４^＋樹状細胞（ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現）に対してのみ観察された。これは、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子の抗原ペプチドがヒト抗原提示細胞によって効率的にプロセシングされ、腫瘍関連抗原特異的ヒトＣＤ４Ｔ細胞に提示されることを示す。

【図6】図６は、「機能的リンカー」にコードされた抗原がＣＤ８Ｔ細胞に効率的に提示されることを示す。ヒト腫瘍細胞を、抗原ペプチドを含む「機能的リンカー」を含むかまたは含まない様々なＴＡＭＥ－ＩＴ分子をコードするＶＳＶに感染させた。その後、これらの感染細胞を、ヒト単球由来樹状細胞と共培養した後、または共培養しなかった後、「機能的リンカー」にペプチド配列が見受けられる腫瘍抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的なヒトのＨＬＡ－Ａ２制限ＣＤ８Ｔ細胞クローンと６時間共培養した。Ｔ細胞の活性化は、ガンマインターフェロンの細胞内染色によって評価され、「機能的リンカー」を含むＴＡＭＥ－ＩＴ分子をコードするＶＳＶを用いた条件におけるＨＬＡ－Ａ２^＋腫瘍細胞および樹状細胞に対してのみ観察された。これは、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子の抗原ペプチドが感染細胞または免疫細胞によって効率的にプロセシングされ、腫瘍関連抗原特異的ヒトＣＤ８Ｔ細胞に提示されることを示す。

【図7】図７は、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質が様々な種類のヒトリンパ球を活性化することを示す。（Ａ）ＰＤ－Ｌ１^＋ヒトメラノーマ細胞を、抗ＰＤ－１抗体ニボルマブまたはＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質ＫＮ０３５－ＴＡＡ－ｔｈ４－１ＢＢＬの存在下または非存在下で、１：２、１：１、または２：１のターゲット：エフェクター比にて、活性化または非活性化ヒトポリクローナルＣＤ８Ｔ細胞と５日間共培養した。ＣＤ８Ｔ細胞による殺傷を評価するため、実験時に、ターゲットのメラノーマ細胞のコンフルエンスを顕微鏡によって分析した。ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質は、ＣＤ８Ｔ細胞の活性化およびメラノーマ細胞の殺傷を増強する。（Ｂ）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳腺腫瘍細胞を、ＫＮ０３５－ＴＡＡ－ｔｈ４－１ＢＢＬのＴＡＭＥ－ＩＴ分子をコードするＶＳＶまたはコードしないＶＳＶに１８時間感染させた。その後、これらの感染細胞をヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と６時間共培養した。ＮＫ細胞の活性化は、ＣＤ１０７ａの表面染色によって評価され、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子をコードするＶＳＶを使用する条件において増加した。

【図8】図８は、ＫＮ４１は、リンパ球Ｔを大きく活性化させることを示す。（Ａ）全ＰＢＭＣを、抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体と結合させたビーズの存在下または非存在下で、２０個のＰＢＭＣに対して１個のボールの割合において、Ｍ１１３またはＭ１１３－ＰＤ－Ｌ１細胞（１ウェルあたり１０，０００個の腫瘍細胞）と、図示したターゲット：エフェクター比にて、共培養した。細胞を、ＫＮ４１で同時に処理するか、またはＫＮ４１とプレインキュベートした（ＫＮ４１ ＰＩ）。２４時間後、上清を採取し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮｇを測定した。（Ｂ）腫瘍細胞１個あたり５個のＰＢＭＣおよび抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いた条件下で、上清中のＩＦＮｇを、図示した時間に測定した。（Ｃ）選別され、フィーダー細胞においてそれまでに増幅された全ＣＤ８ＬＴを、抗ＣＤ３．ＣＤ２８ビーズの存在下（１：２０）において、Ｍ１１３またはＭ１１３－ＰＤ－Ｌ１細胞と、腫瘍細胞１個に対してエフェクター細胞２個で、共培養した。培養物を、ＫＮ４１または抗ＰＤ－１抗体（ニボルマブ）で処理した、または処理しなかった。上清中のＩＦＮｇを、図示した時間に測定した。

【発明を実施するための形態】

【0006】

本発明者らは、様々な病理学的状況（例えば、がん、移植、アレルギー、自己免疫疾患）において、細胞を標的とした免疫応答を特異的かつ正確に逆転させる新しい免疫治療分子を構築した。

【0007】

ターゲット腫瘍細胞に対する免疫反応を増強することが目的である、がん免疫治療の場合において、これらの分子は、ターゲット細胞の免疫認識と、特異的、局所的、および長期的な抗腫瘍免疫反応を誘発するための付近の免疫細胞の活性化とを向上させ得る。

【0008】

標的となった自己または移植細胞に対する免疫反応を最小にすることが目的である、自己免疫性疾患、アレルギー、および移植の場合において、これらの分子は、ターゲット細胞の免疫認識を阻害し、患者を経時で細胞および組織破壊から防護するように付近の免疫細胞を寛容化し得る。

【0009】

キメラタンパク質
第１の目的において、本発明は、
－ Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、
－ Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0010】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0011】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0012】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0013】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0014】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体（例えば、ホモ三量体またはヘテロ三量体）ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0015】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体（例えば、ホモ三量体またはヘテロ三量体）ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0016】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0017】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸に関する。

【0018】

第２の目的において、本発明は、
－ Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、
－ Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0019】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0020】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0021】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0022】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0023】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はターゲティング単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体（例えば、ホモ三量体またはヘテロ三量体）ドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0024】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体（例えば、ホモ三量体またはヘテロ三量体）ドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0025】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）ドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0026】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）ドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0027】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ターゲティングドメイン（ａ）および／またはターゲティングドメイン（ｃ）から構成される。

【0028】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｃ）－（ｂ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）ドメインまたは三量体（例えば、ホモ三量体またはヘテロ三量体）ドメインである、キメラタンパク質に関する。

【0029】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、免疫破壊もしくは防護、または免疫リプログラミングの標的となる細胞表面の分子に特異的に結合するターゲティングドメイン（ａ）を有する。一部の実施形態において、キメラタンパク質は、免疫破壊もしくは防護、または免疫リプログラミングの標的となる細胞表面の分子に特異的に結合するターゲティングドメイン（ｃ）を有する。

【0030】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、シグナリングドメイン（ａ）および／またはシグナリングドメイン（ｃ）から構成される。

【0031】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、シグナル伝達カスケードを開始するシグナリングドメイン（ａ）を有する。一部の実施形態において、キメラタンパク質は、シグナル伝達カスケードを開始するシグナリングドメイン（ｃ）を有する。

【0032】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ターゲティングドメインおよび／またはシグナリングドメインであるドメイン（ａ）を有する。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ターゲティングドメインおよび／またはシグナリングドメインであるドメイン（ｃ）を有する。

【0033】

本明細書において使用するように、「キメラタンパク質」という用語は、当初は別個のタンパク質をコードしていた２つ以上の遺伝子を連結することによって作製されたタンパク質を指す。この融合遺伝子を翻訳すると、当初の各タンパク質由来の機能特性を有する単一または複数のポリペプチドが得られる。キメラタンパク質は、第一のアミノ酸配列と、自然界には存在しない第二のアミノ酸配列が連結したものである。アミノ酸配列は、通常は別個のタンパク質に存在し、融合タンパク質において一緒になり得、または、通常は同じタンパク質に存在するが、融合タンパク質において新しい配置になり得る。キメラタンパク質は、例えば、化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされたポリヌクレオチドを作製して翻訳することによって、作製することができる。

【0034】

本明細書において使用するように、「ＴＡＭＥ－ＩＴ」という用語は、本発明のキメラタンパク質を指す。

【0035】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、マウスのリガンド／レセプターに結合することができる。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ヒトのリガンド／レセプターに結合することができる。

【0036】

一部の実施形態において、キメラタンパク質はアクチベータータンパク質である。

【0037】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、免疫刺激シグナルの伝達を増強、増加、および／または刺激するように改変されている。

【0038】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は阻害タンパク質である。

【0039】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、免疫刺激シグナルの伝達を阻害、低下、および／または遮断するように改変されている。

【0040】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１を含み、以下のように、単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＨＶＥＭ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲ、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ２７、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ２８、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７、および／または、抗ＰＤ－Ｌ１／単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａである。一部の実施形態において、キメラタンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、または、抗ＰＤ－Ｌ１－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）であり、Ｆｃは、抗体のＦｃドメインの少なくとも一部を含むとともに、ジスルフィド結合を形成することができる少なくとも１つのシステイン残基を含むリンカーを表す。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１はｎａｎｏｂｏｄｙまたはｓｃＦｖである。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１のｎａｎｏｂｏｄｙは、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１７；３：１７００４参照）または５ＤＸＷ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／５ＤＸＷ参照）である。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１のｓｃＦｖはａＰＤ－Ｌ１である。

【0041】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ２を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激レセプターとペアになり、以下とは、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＨＶＥＭ、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲ、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ２７、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ２８、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０、および、抗ＰＤ－Ｌ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７である。

【0042】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＴＩＭ－３を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＴＩＭ－３／ＴＬ１ Ａ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、および、抗ＴＩＭ－３／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。実施形態において、キメラタンパク質は、抗ＴＩＭ３－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）であり、Ｆｃは、抗体のＦｃドメインの少なくとも一部を含むとともに、ジスルフィド結合を形成することができる少なくとも１つのシステイン残基を含むリンカーを表す。

【0043】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＣＴＬＡ－４を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＬＩＧＨＴ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＧＩＴＲＬ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＣＤ７０、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＣＤ３０Ｌ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＣＤ１３７Ｌ、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）三量体ＴＬ１Ａ、および、抗ＣＴＬＡ－４／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。一部の実施形態において、抗ＣＴＬＡ－４はｓｃＦｖである。特定の実施形態において、抗ＣＴＬＡ－４のｓｃＦｖはａＣＴＬＡ－４である（Ｇｒｉｆｆｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００ Ｍａｙ １；１６４（９）：４４３３－４２参照）。

【0044】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＴＩＧＩＴを含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＴＩＧＩＴ／単量体または二量体または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。

【0045】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＶＩＳＴＡを含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＶＩＳＴＡ／４－１ＢＢＬ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＯＸ－４０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＬＩＧＨＴ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＧＩＴＲＬ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＣＤ７０単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＣＤ３０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＣＤ４０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＣＤ１３７Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＶＩＳＴＡ／ＴＬ１Ａ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、および、抗ＶＩＳＴＡ／ＯＸ４０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）である。

【0046】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＢＴＬＡを含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＢＴＬＡ／４－１ＢＢＬ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＯＸ－４０Ｌ単量体または二量体または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＬＩＧＨＴ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＧＩＴＲＬ三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＣＤ７０単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＣＤ３０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＣＤ４０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＣＤ１３７Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＢＴＬＡ／ＴＬ１Ａ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、および、抗ＢＴＬＡ／ＯＸ４０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）である。

【0047】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。実施形態において、キメラタンパク質は、抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）－Ｆｃ－ＣＤ４０Ｌ三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）または抗ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ単量体もしくは二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）もしくは三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）であり、Ｆｃは、抗体のＦｃドメインの少なくとも一部を含むとともに、ジスルフィド結合を形成することができる少なくとも１つのシステイン残基を含むリンカーを表す。

【0048】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＣＤ１１５を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＣＤ１１５／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。

【0049】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＴＭＩＧＤ２を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＴＭＩＧＤ２／ＣＤ３０Ｌ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体ＣＤ４０Ｌ、抗ＴＭＩＧＤ２／ＣＤ１３７Ｌ単量体または二量体または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＴＭＩＧＤ２／単量体または二量体または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。

【0050】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＣＤ２００を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＣＤ２００／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。

【0051】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＣＤ１９を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＣＤ１９ 単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＣＤ１９ 単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＣＤ１９／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。一部の実施形態において、抗ＣＤ１９はｎａｎｏｂｏｄｙまたはｓｃＦｖである。特定の実施形態において、抗ＣＤ１９のｓｃＦｖはａＣＤ１９である（Ｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２ Ｓｅｐ ４；１０９（３６）：１４５２６－３１参照）。

【0052】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗ＭＳＬＮ（すなわち抗メソテリン）を含み、以下のように、単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）免疫刺激剤とペアになり、以下とは、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）４－１ＢＢＬ、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ－４０Ｌ、抗ＭＳＬＮ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＬＩＧＨＴ、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＧＩＴＲＬ、抗ＭＳＬＮ単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ７０、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ３０Ｌ、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ４０Ｌ、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＣＤ１３７Ｌ、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＴＬ１Ａ、および、抗ＭＳＬＮ／単量体または二量体（例えば、ホモ二量体、ヘテロ二量体）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ＯＸ４０Ｌである。一部の実施形態において、抗ＭＳＬＮはｎａｎｏｂｏｄｙである。特定の実施形態において、抗ＭＳＬＮのｎａｎｏｂｏｄｙはＡ１である（Ｐｒａｎｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１５ Ｊｕｌ；１１（７）：１２０１－１２）。

【0053】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ヒトキメラタンパク質である。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、マウスキメラタンパク質である。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、げっ歯動物キメラタンパク質である。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、哺乳動物のネコキメラタンパク質である。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、イヌキメラタンパク質である。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、霊長類キメラタンパク質である。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、非ヒト（すなわち、ヒト以外の他の種）キメラタンパク質である。

【0054】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［二量体４－１ＢＢＬおよび単量体ＯＸ－４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0055】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［二量体ＯＸ－４０Ｌおよび単量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0056】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0057】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ＯＸ－４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0058】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＭＳＬＮ］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ＯＸ－４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0059】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ｈＣＤ４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0060】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＭＳＬＮ］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ｈＣＤ４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0061】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＭＳＬＮ］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0062】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＣＴＬＡ－４］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0063】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＣＴＬＡ－４］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ＣＤ４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0064】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ＣＤ１９］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体ＣＤ４０Ｌ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0065】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ｍＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0066】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ｍＰＤ－Ｌ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［二量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0067】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［抗ｍＰＤ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0068】

特定の実施形態において、キメラタンパク質は、［二量体抗ｍＰＤ１］－［ＴＡＡ］_ｎ－［三量体４－１ＢＢＬ］であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に等しい。

【0069】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、約１ｎＭ～約５ｎＭ、例えば、約１ｎＭ、約１．５ｎＭ、約２ｎＭ、約２．５ｎＭ、約３ｎＭ、約３．５ｎＭ、約４ｎＭ、約４．５ｎＭ、または約５ｎＭのＫＤで、ヒトＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に結合する。実施形態において、キメラタンパク質は、約５ｎＭ～約１５ｎＭ、例えば、約５ｎＭ、約５．５ｎＭ、約６ｎＭ、約６．５ｎＭ、約７ｎＭ、約７．５ｎＭ、約８ｎＭ、約８．５ｎＭ、約９ｎＭ、約９．５ｎＭ、約１０ｎＭ、約１０．５ｎＭ、約１１ｎＭ、約１１．５ｎＭ、約１２ｎＭ、約１２．５ｎＭ、約１３ｎＭ、約１３．５ｎＭ、約１４ｎＭ、約１４．５ｎＭ、または約１５ｎＭのＫＤで、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、約１ｎＭ～約３０ｎＭ、例えば、約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、９ｎＭ、１０ｎＭ、１１ｎＭ、１２ｎＭ、１３ｎＭ、１４ｎＭ、１５ｎＭ、１６ｎＭ、１７ｎＭ、１８ｎＭ、１９ｎＭ、２０ｎＭ、２１ｎＭ、２２ｎＭ、２３ｎＭ、２４ｎＭ、２５ｎＭ、２６ｎＭ、２７ｎＭ、２８ｎＭ、２９ｎＭ、３０ｎＭのＫＤで、ヒトＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に結合する。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、約１ｎＭ～約１０００ｎＭ、例えば、約１ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、４００ｎＭ、５００ｎＭ、６００ｎＭ、７００ｎＭ、８０ｎＭ、９００ｎＭ、１０００ｎＭのＫＤで、ヒトＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に結合する。

【0070】

一部の実施形態において、本発明の本キメラタンパク質は、（例えば、腫瘍に対して）免疫活性化を促進することが可能であり、免疫活性化を促進することを含む方法に使用され得る。

【0071】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、（例えば、腫瘍を生存させる）免疫阻害を抑制することが可能であり、免疫阻害を抑制することを含む方法に使用され得る。

【0072】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、コンストラクトのキメラ特性によって得られるシグナリングの近接性により、免疫活性化を改善し、および／または免疫阻害の抑制を改善する。

【0073】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、例えば、エフェクターアプトプットのレベルの調節などの、免疫応答の振幅を調節することが可能であり、免疫応答の振幅を調節することを含む方法に使用され得る。

【0074】

一部の実施形態において、例えば、本キメラタンパク質は、がんの処置に使用されるとき、限定されないが、サイトカイン産生、増殖のレベル増加、またはターゲット殺傷能を刺激することを含む、Ｔ細胞応答の振幅を増加させるように、免疫阻害と比較して、免疫刺激の程度を変化させる。

【0075】

一部の実施形態において、三量体シグナリング分子を用いることで、単量体と比較して治療効果が向上する。

【0076】

ターゲティングドメイン（ａ）または（ｃ）
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ターゲティングドメイン（ａ）および／またはターゲティングドメイン（ｃ）から構成される。

【0077】

本明細書において使用するように、「ターゲティングドメイン」という用語は、目的の組織または器官における特定の細胞の表面を認識し、そこに固定する機能を有するドメインを指す。本発明のターゲティングドメインは、特定の細胞、例えば腫瘍細胞または免疫細胞の表面におけるマーカーを認識し、これが、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子を細胞表面に固定して示し、ターゲット細胞内にシグナルを送ることができる。また、本発明のターゲティングドメインは、競合することによってシグナルを遮断することもできる。

【0078】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、単量体ターゲティングドメイン（ａ）または二量体（例えば、ホモ二量体もしくはヘテロ二量体）ターゲティングドメイン（ａ）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ターゲティングドメイン（ａ）から構成される。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、単量体ターゲティングドメイン（ｃ）または二量体（例えば、ホモ二量体もしくはヘテロ二量体）ターゲティングドメイン（ｃ）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）ターゲティングドメイン（ｃ）から構成される。

【0079】

一部の実施形態において、ターゲティングドメイン（ａ）またはターゲティングドメイン（ｃ）は、免疫破壊（例えば、腫瘍細胞）もしくは防護（例えば、移植細胞）、または免疫リプログラミング（例えば、樹状細胞）の標的となる細胞表面の分子に特異的に結合する。ターゲティングドメインは、免疫モジュレーター（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ３、ＣＤ２８）および系列特異的抗原（例えば、メソテリン、ＣＤ１９、ＨＥＲ２）を含むがこれらに限定されない１つ以上の分子を標的とするように改変されることができる。ターゲティングドメインは、完全もしくは短尺形態のいずれかの抗体、誘導体、もしくは任意の他のターゲティング部分（例えば、ｓｃＦｖ、ｎａｎｏｂｏｄｙ、単一ドメイン抗体、アフィチン、アフィボディ、アプタマー）、またはターゲット分子と相互作用することが知られている天然の細胞レセプターの細胞外ドメイン（例えば、ＰＤ－１、ＣＤ８０／ＣＤ８６、ＥＧＦ）から作製することができる。

【0080】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、免疫阻害に関与する１つ以上の分子を標的とするように改変され得、これには、例えば、ＣＳＦ１ Ｒ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、および／またはＣＥＡＣＡＭ－５）、ならびに各種Ｂ－７ファミリーリガンド（Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６、およびＢ７－Ｈ７を含むがこれらに限定されない）を含む。

【0081】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＳＦ１ Ｒ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１７２ａ（ＳＩＲＰ１ａ）、２Ｂ４、ＶＩＳＴＡ、ＶＳＩＧ８、ＣＤ２００、およびＴＭＩＧＤ２の１つ以上を限定することなく含む、１つ以上の分子を標的とするように改変され得る。

【0082】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ヒト白血球、骨髄細胞、内皮細胞に存在する１つ以上の分子を標的とするように改変され得、これには、ＯＸ４０、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－２Ｒａ、４－１ ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ－２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、ＢＴＬＡ、Ｂ７－１、ＩＬ－４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－７Ｒａ、ＩＬ－１０Ｒａ、ＩＬ－１０Ｒβ、ＩＬ－１２Ｒβ１、ＩＬ－１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ－１３Ｒａ１、ＩＬ－１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ルテグリン（ｌｕｔｅｇｒｉｎ）ａ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンａＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンａＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンａＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤＩＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｃｏｍｍｏｎ γ鎖／ＩＬ－２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＳＩＲＰβ１、ＳＬＡＭ、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｅｙＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュリシン、ＴＮＦ ＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬ ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦＩＯＡ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬ Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－ｙＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１ Ｒ１、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ（ＴＮＦＲＳＦ３）、およびＴＳＬＰ Ｒの細胞外ドメインを限定することなく含む。

【0083】

本明細書において使用するように、「白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）」という用語は、白血球細胞（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ、ＷＢＣ）または白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）としても知られており、感染疾患および異物の両方から身体を防護することに関与する免疫系の細胞である。すべての白血球は、造血幹細胞として知られる骨髄の多能性細胞から産生され、それに由来する。白血球は、血液およびリンパ系を含む身体にわたって見受けられる。

【0084】

本明細書において使用するように、「骨髄細胞」という用語は、多様な機能を有する様々な細胞型からなる、身体の有核造血細胞を指す。これらは、単球、マクロファージ、樹状細胞、および顆粒球を含み、免疫システムの重要な一翼を担っている。

【0085】

本明細書において使用するように、「リンパ球細胞」という用語は、免疫系において役割を担う細胞を指す。サイズが小さいＢリンパ球およびＴリンパ球、ならびに大きく顆粒状であるＮＫリンパ球の異なる３つのリンパ球系列が存在する。リンパ球は、主にリンパ節および脾臓に見受けられる小さい白血球細胞（白血球）である。

【0086】

本明細書において使用するように、「線維芽細胞」という用語は、細胞外マトリックスおよびコラーゲンを合成し［１］、動物組織の構造的基質（ストローマ）を産生し、創傷治癒に重要な役割を果たす［２］生物学的細胞の種類を指す。線維芽細胞は動物における結合組織の最も一般的な細胞である。

【0087】

本明細書において使用するように、「内皮細胞」という用語は、血管の透過性バリアを指し、血流の調節に関与する。内皮細胞は、創傷治癒、血管形成、炎症プロセス、血液脳関門、糖尿病、および他の心血管疾患に関する応用において重要である。

【0088】

本明細書において使用するように、「プログラム細胞死リガンド１」（ＰＤ－Ｌ１）という用語は、表面抗原分類２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）としても知られており、ヒトにおいてＣＤ２７４遺伝子（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ９ＮＺＱ７）によってコードされるタンパク質を指す。ＰＤ－Ｌ１は、免疫系の適応性部分の抑制に主要な役割を果たすと推測されている４０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質である。

【0089】

本明細書において使用するように、「細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４」（ＣＴＬＡ－４）という用語は、ＣＤ１５２（表面抗原分類１５２）としても知られており、免疫チェックポイントとして機能するとともに免疫応答をダウンレギュレートするタンパク質レセプターを指す。ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞において恒常的に発現されるが、活性化後の通常型Ｔ細胞においてのみアップレギュレートされる（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ１６４１０）。ＣＴＬＡ－４タンパク質は、ヒトにおいてＣＴＬＡ４遺伝子によってコードされている。

【0090】

本明細書において使用するように、「ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫レセプター」（ＴＩＧＩＴ）という用語は、一部のＴ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ）に存在する免疫レセプターを指す（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ４９５Ａ１）。

【0091】

本明細書において使用するように、「Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－３」（ＴＩＭ－３）という用語は、ヒトにおいてＨＡＶＣＲ２遺伝子（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ８ＴＤＱ０）によってコードされるタンパク質を指す。

【0092】

本明細書において使用するように、「Ｖドメイン免疫グロブリン［Ｉｇ］含有Ｔ細胞活性化サプレッサー」（ＶＩＳＴＡ）という用語は、免疫チェックポイントとして機能し、Ｃ１０ｏｒｆ５４遺伝子（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ９Ｈ７Ｍ９）によってコードされるＩ型膜貫通タンパク質を指す。

【0093】

本明細書において使用するように、「ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター」（ＢＴＬＡ）という用語は、ヒトにおいてＢＴＬＡ遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。ＢＴＬＡはまた、ＣＤ２７２（表面抗原分類２７２）としても指定されている（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ７Ｚ６Ａ９）。

【0094】

本明細書において使用するように、「リンパ球活性化遺伝子３」（ＬＡＧ３）という用語は、ヒトにおいてＬＡＧ３遺伝子によってコードされ、ＣＤ２２３（表面抗原分類２２３）としても指定されるタンパク質を指す（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ１８６２７）。

【0095】

本明細書において使用するように、「表面抗原分類２８」（ＣＤ２８）という用語は、Ｔ細胞の活性化および生存に必要な共刺激シグナルを提供する、Ｔ細胞に発現されるタンパク質を指す（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ１０７４７）。

【0096】

本明細書において使用するように、「メソテリン」という用語は、ＭＳＬＮとしても知られており、ヒトにおいてＭＳＬＮ遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。メソテリンは、中皮細胞に発現される４０ｋＤａのタンパク質である（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ１３４２１）。

【0097】

本明細書において使用するように、「Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９」（ＣＤ１９）という用語は、ＣＤ１９分子（表面抗原分類１９）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２、およびＣＶＩＤ３１としても知られており、ヒトにおいてＣＤ１９遺伝子によってコードされる膜貫通タンパク質を指す。ヒトにおいて、ＣＤ１９はすべてのＢ系列細胞に発現される。ＣＤ１９（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ１５３９１）。

【0098】

本明細書において使用するように、「レセプター型チロシンプロテインキナーゼｅｒｂＢ－２」という用語は、ＣＤ３４０（表面抗原分類３４０）、癌原遺伝子Ｎｅｕ、Ｅｒｂｂ２（げっ歯動物）、またはＥＲＢＢ２（ヒト）としても知られており、ヒトにおいてＥＲＢＢ２遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＥＲＢＢは、トリゲノムから単離された遺伝子である赤芽球癌遺伝子Ｂの略称である。これはまた、ＨＥＲ２（ヒト上皮増殖因子レセプター２から）またはＨＥＲ２／ｎｅｕ．ＨＥＲ２」と呼ばれることも多い。ＨＥＲ２は、ヒト上皮増殖因子レセプター（ＨＥＲ／ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ）ファミリーのメンバーを指す。この癌遺伝子の増幅または過剰発現は、重要な役割を果たすことが示されている（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ０４６２６）。

【0099】

一部の実施形態において、ターゲティングドメインは抗体である。

【0100】

本明細書において使用するように、「抗体」という用語は、最も広範な意味で使用され、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および、所望の生物学的活性を示す限りにおいて抗体フラグメントを網羅する。該用語は、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、ＴａｎｄＡｂ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ｄｓＦｖ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体フラグメント、バイボディ、トリボディ（それぞれ二重特異性または三重特異性のｓｃＦｖ－Ｆａｂフュージョン）、ｓｃ－ダイアボディ、κ（λ）ボディ（ｓｃＦｖ－ＣＬフュージョン）、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、Ｔ細胞を誘引するｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ直列型）、ＤＶＤ－Ｉｇ（二重可変ドメイン抗体、二重特異性フォーマット）、ＳＩＰ（小分子免疫タンパク質、ミニボディの一種）、ＳＭＩＰ（「小分子モジュラー免疫医薬」ｓｃＦｖ－Ｆｃ二量体）、ＤＡＲＴ（ｄｓ安定化ダイアボディ「二重親和性再ターゲティング」）、サメのＩｇＮＡＲ（新しい免疫グロブリン抗原レセプター）、１つ以上のＣＤＲを含む小分子抗体擬態分子などの、抗原結合ドメインを含む抗体フラグメントを含む。種々の抗体に基づくコンストラクトおよびフラグメントを調製および使用する技術は当該技術において周知である（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１を参照。これは特に言及することによって本明細書に援用される）。ダイアボディは特に、欧州特許第４０４，０９７号および国際公開第９３／１１１６１号にさらに記載されており、直鎖状抗体はＺａｐａｔａ等（１９９５）によってさらに記載されている。抗体は、従来技術を使用してフラグメント化することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは抗体をペプシンで処理することによって作製することができる。得られたＦ（ａｂ’）２フラグメントはジスルフィド架橋を還元するように処理して、Ｆａｂ’フラグメントを作製することができる。パパイン消化により、Ｆａｂフラグメントを形成することができる。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ＴａｎｄＡｂ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、二量体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体フラグメント、ならびに他のフラグメントも、組換え技術によって合成可能である、または化学的に合成可能である。抗体フラグメントを作製する技術は周知であり、当該技術において記載されている。例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ等、２００６、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５、Ｌｅ Ｇａｌｌ等、２００４、ＲｅｆｆおよびＨｅａｒｄ、２００１、Ｒｅｉｔｅｒ等、１９９６、ならびにＹｏｕｎｇ等、１９９５のそれぞれが、有効な抗体フラグメントの作製をさらに記載し、それを可能にしている。一部の実施形態において、抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載されているような「キメラ」抗体である。一部の実施形態において、抗体は、米国特許第６，９８２，３２１号明細書および第７，０８７，４０９号明細書に記載されているようなヒト化抗体である。一部の実施形態において、抗体はヒト抗体である。「ヒト抗体」は、米国特許第６，０７５，１８１号明細書および第６，１５０，５８４号明細書に記載されている。一部の実施形態において、抗体は、欧州特許第０３６８６８４号、国際公開第０６／０３０２２０号、および国際公開第０６／００３３８８号に記載されているような単一ドメイン抗体である。

【0101】

特定の実施形態において、ターゲティングドメインはモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、培養における連続細胞株によって抗体分子の作製を提供する任意の技術を使用して調製および単離することができる。作製および単離のための技術は、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、およびＥＢＶハイブリドーマ技術を含むが、これらに限定されない。

【0102】

本明細書において使用するように、「イントラボディ」という用語は、一般に細胞内抗体または抗体フラグメントを指す。抗体、特に単鎖可変抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）は、細胞内局在化のために修飾することができる。このような修飾は、例として、例えばマルトース結合タンパク質などの安定な細胞内タンパク質への融合、または例えば小胞体保留などの細胞内輸送／局在化ペプチド配列の付加を伴い得る。一部の実施形態において、イントラボディは単一ドメイン抗体である。一部の実施形態において、本発明における抗体は単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」（ｓｄＡｂ）または「ＶＨＨ」という用語は、ラクダ科の哺乳動物において見受けられ得る種類である、自然に軽鎖を欠いている抗体における単一重鎖可変ドメインを指す。このようなＶＨＨは、「ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）」とも呼ばれる。本発明において、ｓｄＡｂは、特にラマｓｄＡｂであり得る。一部の実施形態において、抗体は任意の遮断抗体であり得る。

【0103】

一部の実施形態において、ターゲティングドメインは単一ドメイン抗体である。本明細書において使用するように、「単一ドメイン抗体」という用語は当該技術におけるその一般的な意味を有し、ラクダ科の哺乳動物において見受けられ得る種類である、自然に軽鎖を欠いている抗体の単一重鎖可変ドメインを指す。そのような単一ドメイン抗体はまた、ＶＨＨまたは「ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）」とも呼ばれる。（単一）ドメイン抗体の一般的な記載について、上述の先行技術、ならびに、欧州特許第０３６８６８４号、Ｗａｒｄ等（Ｎａｔｕｒｅ １９８９ Ｏｃｔ １２；３４１（６２４２）：５４４－６）、Ｈｏｌｔ等、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２００３，２１（１１）：４８４－４９０、および国際公開第０６／０３０２２０号、国際公開第０６／００３３８８号も参照される。ｎａｎｏｂｏｄｙは、ヒトＩｇＧ分子の約１０分の１である分子量を有し、該タンパク質は、たった数ナノメートルの物理的直径を有する。この小さいサイズの１つの結果としては、大きな抗体タンパク質には機能的に認識されない抗原部位にラクダｎａｎｏｂｏｄｙが結合できることであり、すなわち、ラクダｎａｎｏｂｏｄｙは、従来の免疫学的技術を使用するとさもないと隠れてしまう抗原を検出する試薬として、および可能性のある治療剤として有用である。したがって、小さいサイズのさらなる他の結果としては、ｎａｎｏｂｏｄｙが、ターゲットタンパク質の溝または狭い間隙の特定の部位に結合する結果として阻害することができ、それにより、従来の抗体の機能よりも従来の低分子量薬剤の機能により近似した能力をもって機能することができることである。さらに、低分子量および小型サイズにより、さらに、ｎａｎｏｂｏｄｙが極めて熱安定性となり、極端なｐＨおよびタンパク質分解消化に対して安定となり、あまり抗原性でなくなる。他の結果としては、ｎａｎｏｂｏｄｙが、循環器系から組織へ、さらに血液脳関門を越えて、容易に移動し、神経組織に影響を与える障害を処置し得ることである。ｎａｎｏｂｏｄｙは、さらに、血液脳関門を越える薬剤輸送を容易にすることができる。２００４年８月１９日に公開された米国特許出願第２００４０１６１７３８号明細書が参照される。ヒトへの低い抗原性と合わせたこれらの特徴は、大きな治療的可能性を示すものである。単一ドメイン抗体のアミノ酸配列および構造は、４つのフレームワーク領域または「ＦＲ」から構成されると考えられ得、これらはそれぞれ、「フレームワーク領域１」または「ＦＲ１」、「フレームワーク領域２」または「ＦＲ２」、「フレームワーク領域３」または「ＦＲ３」、および「フレームワーク領域４」または「ＦＲ４」と当該技術および本明細書において呼ばれ、該フレームワーク領域は、３つの相補性決定領域または「ＣＤＲ」により中断され、これらはそれぞれ、「ＣＤＲ１」の「相補性決定領域」、「相補性決定領域２」または「ＣＤＲ２」、および「相補性決定領域３」または「ＣＤＲ３」と当該技術において呼ばれる。したがって、単一ドメイン抗体は、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の一般構造を有し、式中、ＦＲ１～ＦＲ４がそれぞれフレームワーク領域１～４を指し、ＣＤＲ１～ＣＤＲ３が相補性決定領域１～３を指す、アミノ酸配列として規定することができる。本発明の文脈において、単一ドメイン抗体のアミノ酸残基は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システムアミノ酸番号付け（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／）によって与えられるＶＨドメインについての一般的な番号付けに従って番号付けされる。

【0104】

一部の実施形態において、本発明の抗原結合フラグメントは、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、およびバーサボディからなる群より選択される抗体模倣物とも呼ばれる非免疫グロブリンに基づく抗体にグラフティングされる。

【0105】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、免疫阻害特性を有するＩ型膜タンパク質の細胞外ドメインを含む。

【0106】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、免疫阻害シグナルの伝達を妨害、遮断、低下、および／または阻害するように改変されている。

【0107】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、腫瘍細胞表面の阻害性リガンドをマスキングすること、および、その免疫阻害性リガンドを免疫刺激性リガンドに置き換えることが可能であるか、またはそれらに関与する方法において使用される。したがって、本キメラタンパク質は、実施形態において、阻害性免疫シグナルを低下もしくは排除すること、および／または免疫刺激性シグナルを増加もしくは活性化することが可能であるか、またはそれらに関与する方法において使用される。例えば、阻害性シグナルを保持する（したがって免疫応答を回避する）腫瘍細胞を、腫瘍細胞を攻撃できるＴ細胞に結合する陽性シグナルに置き換えることができる。したがって、一部の実施形態において、阻害性免疫シグナルが本発明のコンストラクトによってマスキングされ、刺激性免疫シグナルが活性化される。このような有利な特性は、本キメラタンパク質の単一コンストラクトの手法によって強化される。

【0108】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２、ならびに／またはＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２との結合を遮断、低下、および／または阻害する。一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、ＣＴＬＡ－４の活性、ならびに／またはＣＴＬＡ－４とＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１つ以上との結合を遮断、低下、および／または阻害する。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＧＩＴＲ、および／またはＧＩＴＲとＧＩＴＲリガンドの１つ以上との結合を増加および／または刺激する。

【0109】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＯＸ４０、および／またはＯＸ４０とＯＸ４０リガンドの１つ以上との結合を増加および／または刺激する。

【0110】

一部の実施形態において、本発明の本キメラタンパク質は、免疫調節を増強、回復、促進、および／または刺激することが可能であるか、またはそれらに関与する方法において使用される。

【0111】

一部の実施形態において、本明細書に記載する本発明のキメラタンパク質は、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、および樹状細胞を含むが、これらに限定されない１つ以上の免疫細胞の腫瘍細胞に対する活性または活性化を回復、促進、および／または刺激する。

【0112】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、Ｔ細胞の活性および／または活性化を増強、回復、促進、および／または刺激し、これには、生存促進シグナル、オートクリンもしくはパラクリン増殖シグナル、ｐ３８ ＭＡＰＫ－、ＥＲＫ－、ＳＴＡＴ－、ＪＡＫ－、ＡＫＴ－、もしくはＰＩ３Ｋ－媒介シグナル、抗アポトーシスシグナル、ならびに／または、炎症促進サイトカイン産生、もしくはＴ細胞遊走、もしくはＴ細胞腫瘍浸潤の１つ以上を促進する、および／もしくはそれに必要なシグナルを含む、１つ以上のＴ細胞内在性シグナルを活性化および／または刺激することを、非限定的な例として含む。

【0113】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、腫瘍または腫瘍微小環境において、Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を限定することなく含む）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、単球、ならびにマクロファージ（例えば、Ｍ１およびＭ２の１つ以上）の１つ以上の増加をもたらすことが可能であるか、またはそれらに関与する方法において使用される。

【0114】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、腫瘍および／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）への、免疫抑制細胞（例えば、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ））の動員の低下を阻害する、および／または、該低下をもたらすことが可能であるか、またはそれらに関与する方法において使用される。

【0115】

一部の実施形態において、本治療は、腫瘍部位および／またはＴＭＥにおけるＭ１マクロファージとＭ２マクロファージとの比率を変化させ、Ｍ１マクロファージを有利にすることができる。

【0116】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、Ｔ細胞不活性化、および／または腫瘍に対する免疫寛容を阻害および／または低下し、本明細書に記載するキメラタンパク質を有効量で対象に投与することを含むことが可能であり、それらを含む方法において使用され得る。

【0117】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＩＦＮｙ、ＴＮＦａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、およびＩＬ－２２の１つ以上を含むがこれらに限定されない様々なサイトカインの血清レベルを増加させることができる。一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、処置された対象の血清中のＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＴＮＦａ、またはＩＦＮｙを増強することが可能である。一部の実施形態において、本キメラタンパク質の投与により、ＴＮＦａ分泌を増強することが可能である。

【0118】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質の投与により、白血球によるスーパー抗原媒介ＴＮＦａ分泌を増強することが可能である。このようなサイトカイン応答の検出により、上述のキメラタンパク質の最適な投与レジメンを決定する方法が得られ得る。

【0119】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、抗腫瘍ＣＤ８＋および／もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞死を阻害、遮断、および／もしくは低下させる、または、腫瘍促進Ｔ細胞の細胞死を刺激、誘導、および／もしくは増加させる。Ｔ細胞の疲弊は、増殖機能およびエフェクター機能の漸進的な喪失を特徴とするＴ細胞機能不全の状態であり、結果としてクローン除去に至る。したがって、腫瘍促進Ｔ細胞は、多くの慢性感染症およびがんの際に生じるＴ細胞機能不全の状態を指す。この機能不全は、増殖機能および／またはエフェクター機能の不良、阻害性レセプターの持続的発現、ならびに機能的エフェクターまたはメモリーＴ細胞のものとは異なる転写状態によって規定される。疲弊によって、感染および腫瘍の最適な調節が妨げられる。さらに、抗腫瘍ＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍に対して免疫応答をもたらすことができるＴ細胞を指す。例示的な腫瘍促進Ｔ細胞は、Ｔｒｅｇ、１つ以上のチェックポイント阻害性レセプターを発現するＴｒｅｇ、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｈ２細胞、ならびにＴｈ１７細胞を含むが、これらに限定されない。チェックポイント阻害性レセプターは、免疫細胞に発現され、調節されない免疫応答を抑止または阻害するレセプター（例えば、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ－３）を指す。

【0120】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、エフェクターＴ細胞と制御性Ｔ細胞との比率を増加することが可能であり、それを含む方法に使用され得る。例示的なエフェクターＴ細胞は、ＩＣＯＳ^＋エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞｛例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＯ^＋｝、ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞｛例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋｝、ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞｛例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）、エフェクターメモリーＴ細胞｛例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４^＋、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ｝、セントラルメモリーＴ細胞｛例えば、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋）、ＣＤ６２Ｌ^＋エフェクターＴ細胞、初期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^＋ＣＤ６２Ｌ^－）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^－ＣＤ６２Ｌ^－）（それぞれＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８^＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、ＣＤ１２７（^－）ＣＤ２５（ｌｏｗ／－）エフェクターＴ細胞、ＣＤ１２７（）ＣＤ２５（）エフェクターＴ細胞、ＣＤ８^＋幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）｛例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（^＋）｝、ＴＨ１エフェクターＴ細胞｛例えば、ＣＸＣＲ３^＋、ＣＸＣＲ６^＋、およびＣＣＲ５^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－１２Ｒ^＋、ＩＦＮｙＲ^＋、ＣＸＣＲ３^＋｝、ＴＨ２エフェクターＴ細胞｛例えば、ＣＣＲ３^＋、ＣＣＲ４^＋、およびＣＣＲ８^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－４Ｒ^＋、ＩＬ－３３Ｒ^＋、ＣＣＲ４^＋、ＩＬ－１７ＲＢ^＋、ＣＲＴＨ２^＋｝、ＴＨ９エフェクターＴ細胞｛例えばαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋）、ＴＨ１７エフェクターＴ細胞｛例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－２３Ｒ^＋、ＣＣＲ６^＋、ＩＬ－１Ｒ^＋）、ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７（）エフェクターＴ細胞、ならびにＩＬ－２、ＩＬ－４および／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞を含む。例示的な制御性Ｔ細胞は、ＩＣＯ^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５－制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ制御性Ｔ細胞、ＴＩＭ－３^＋ＰＤ－１^＋制御性Ｔ細胞、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ１５２^＋制御性Ｔ細胞、ニューロピリン－１（Ｎｒｐ－１）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＣＲ４^＋ＣＣＲ^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ－セレクチン）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＢＩｏｗ制御性Ｔ細胞、ＣＤ１２７ＩＯＷ制御性Ｔ細胞、ＬＲＲＣ３２／ＧＡＲＰ^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ３９^＋制御性Ｔ細胞、ＧＩＴＲ^＋制御性Ｔ細胞、ＬＡＰ^＋制御性Ｔ細胞、１ Ｂ１ １^＋制御性Ｔ細胞、ＢＴＬＡ^＋制御性Ｔ細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、Ｔヘルパー３型（Ｔｈ３）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞表現型の制御性細胞（ＮＫＴｒｅｇ）、ＣＤ８^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ２８－制御性Ｔ細胞、ならびに／または、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－ａ、ガレクチン－１、ＩＦＮ－Ｙ、および／もしくはＭＣＰ１を分泌する制御性Ｔ細胞を含む。

【0121】

機能的リンカー
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、リンカーから構成される。

【0122】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）は、ドメイン（ａ）をドメイン（ｃ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0123】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）は、ターゲティングドメイン（ａ）をシグナリングドメイン（ｃ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0124】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）は、シグナリングドメイン（ａ）をターゲティングドメイン（ｃ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0125】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）は、ドメイン（ｃ）をドメイン（ａ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0126】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）は、ターゲティングドメイン（ｃ）をシグナリングドメイン（ａ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0127】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）は、シグナリングドメイン（ｃ）をターゲティングドメイン（ａ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0128】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）はターゲティング／シグナリングドメイン（ａ）をシグナリングドメイン／ターゲティングドメイン（ｃ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0129】

一部の実施形態において、機能的リンカー（ｂ）はターゲティング／シグナリングドメイン（ｃ）をシグナリングドメイン／ターゲティングドメイン（ａ）に、特に長さの制限なく、接続する。

【0130】

一部の実施形態において、キメラタンパク質はリンカーを含む。一部の実施形態において、リンカーは、高度な可動性を限定することなく含む、可動性であり得る。一部の実施形態において、リンカーは、剛性αヘリックスを限定することなく含む、剛性であり得る。

【0131】

本明細書において使用するように、「リンカー」という用語は、単一タンパク質における複数のドメインを分離するように自然界で作られた、短いアミノ酸配列を指す。

【0132】

一部の実施形態において、リンカーは、機能的であり得る。例えば、限定しないが、リンカーは、本キメラタンパク質のフォールディングおよび／もしくは安定性の改善、発現の改善、薬物動態の改善、ならびに／または生物活性の改善のために機能し得る。他の例において、リンカーは、キメラタンパク質を特定の細胞型または位置に標的化するように機能することができる。

【0133】

本明細書において使用するように、「機能的リンカー」という用語は、それ自体が免疫機構を活性化する能力を有するリンカーを指す。本発明の機能的リンカーは、様々な細胞型によって、例えばＴＡＭＥ－ＩＴターゲット細胞の貪食の際に抗原提示細胞によって、または直接的にターゲット細胞によって、プロセシングされて主要組織適合遺伝子複合体分子上において提示される腫瘍抗原のペプチド配列を含む。本発明の機能的リンカーは、特定の抗原（例えば腫瘍関連抗原、新生抗原、ウイルス抗原）に対する免疫応答を誘導する。

【0134】

本明細書において使用するように、「腫瘍関連抗原」（ＴＡＡ）という用語は、胚性タンパク質、糖タンパク質抗原、扁平上皮細胞抗原などを含む、腫瘍細胞または正常細胞上に存在する抗原分子を指し、数多くの腫瘍の処置に広く使用されている。

【0135】

本明細書において使用するように、「抗原」という用語は、病原体の外側に存在し得、抗原特異的抗体、Ｂ細胞抗原レセプターまたはＴ細胞抗原レセプターによって結合され得る、分子または分子構造を指す。通常、身体内に抗原が存在すると免疫応答を誘発する。抗原は、抗体およびＴ細胞抗原レセプターによって「標的」とされる。それぞれの抗体またはＴ細胞抗原レセプターは、免疫系の細胞が抗原に接触した後に、抗原に適合するように免疫系によって特異的に作製される。これにより、抗原の正確な同定または合致、および適応応答の開始が可能になる。

【0136】

本明細書において使用するように、「マウス抗原」という用語は、抗原特異的抗体、Ｂ細胞抗原レセプターまたはＴ細胞抗原レセプターによって結合され得る、マウス分子またはマウス分子構造を指す。

【0137】

本明細書において使用するように、「ウイルス抗原」という用語は、宿主において免疫応答を引き起こす、ウイルスが放出する毒素または他の物質を指す。ウイルスタンパク質は、ウイルスゲノムによって特定され、特異的な免疫学的応答によって検出され得る抗原である。

【0138】

本明細書において使用するように、「新生抗原」という用語は、腫瘍細胞における突然変異によって生じた、腫瘍細胞でのみ発現される腫瘍特異的抗原を主に指す（１１）。また、新生抗原は、ウイルス感染、選択的スプライシング、および遺伝子再編成によっても作製され得る（１２－１４）。これは、Ｔ細胞ががん細胞を認識するための理想的なターゲットであり、強力な抗腫瘍免疫応答を誘導することができる。

【0139】

一部の実施形態において、本発明の機能的リンカーはＴＡＡペプチドの組合せを有する。一部の実施形態において、本発明の機能的リンカーは、１つまたは複数のＴＡＡペプチドを含む。例えば、機能的リンカーは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のＴＡＡペプチドを含む。

【0140】

一部の実施形態において、機能的リンカーは、同じＴＡＡペプチドを含む。

【0141】

一部の実施形態において、機能的リンカーは、少なくとも１、２、３、４、５コピーの同じＴＡＡペプチド、および少なくとも１、２、３、４、５コピーの他のＴＡＡペプチドを含む。

【0142】

一部の実施形態において、腫瘍、または細菌やウイルスのような病原性微生物によって発現される抗原を、本発明のキメラタンパク質のリンカー（ｂ）に抗原ペプチドとして挿入することができる。したがって、これらのキメラタンパク質は、患者の特異的抗原からの配列を使用して、リンカー（ｂ）の抗原ペプチドを変更することによって、各患者に対して「個別化」することができる。

【0143】

一部の実施形態において、リンカーは、４つのグリシンおよび１つのセリン（Ｇ４Ｓ配列、ＧＧＧＧＳとしても知られる）のリピート、一般的な実験技術によって特異的抗体でタンパク質を検出するためのペプチドタグ、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩ分子に提示され得、特異的免疫応答が誘導される、例えば腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、ＭＵＣ－１）または寛容抗原（例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ、ＭＯＧ）などの、１つまたは複数の同定された、治療に関連する抗原ペプチド配列から選択される。特定の実施形態において、リンカーはＴＡＡである。

【0144】

一部の実施形態において、リンカーは、ジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも１つのシステイン残基を含む。本明細書の他の箇所に記載されているように、ジスルフィド結合を形成することが可能な、このような少なくとも１つのシステイン残基は、理論に縛られることを望むものではないが、キメラタンパク質の適切な多量体状態を維持し、効率的な作製を可能にする役割を担っている。

【0145】

一部の実施形態において、安定なキメラタンパク質を作製する方法が提供され、該方法は、得られるキメラタンパク質が適切にフォールディングされ、および／または、安定な多量体状態に形成されるように、ジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも１つのシステイン残基を含むリンカーに、Ｉ型およびＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを隣接させることを含む。一部の実施形態において、リンカーは、自然起源のマルチドメインタンパク質に由来し得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ等、（２０１３）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７、Ｃｈｅｎ等、（２０１３）、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されているような実証的リンカーであり、これらの内容全体が言及することによって本明細書に援用される。一部の実施形態において、リンカーは、Ｃｈｅｎ等、（２０１３）、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９およびＣｒａｓｔｏ等、（２０００）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載されているようなものなどのリンカー設計データベースおよびコンピュータープログラムを使用して設計され得、これらの内容全体が言及することによって本明細書に援用される。

【0146】

一部の実施形態において、リンカーは、（ポリエチレングリコール）ＰＥＧなどの合成リンカーである。本明細書において使用するように、「ＰＥＧ」という用語は、石油由来のポリエーテル化合物を指す。ＰＥＧの構造は一般にＨ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－ＯＨとして表される。ＰＥＧは、例えばモノ（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ－もしくはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール－マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するために使用されるＰＥＧの形態のいずれも包含することを意図する。

【0147】

一部の実施形態において、リンカーはポリペプチドである。「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する自然起源のアミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに自然起源のアミノ酸ポリマーおよび自然起源でないアミノ酸ポリマーに適用する。他に示さない限り、特定のポリペプチド配列はまた、その保存的に修飾した変異体も暗黙的に包含する。

【0148】

一部の実施形態において、リンカーは、連続する少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、ＭＵＣ－１）から構成される。

【0149】

一部の実施形態において、リンカーは、連続する少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個の寛容抗原（例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ、ＭＯＧ）から構成される。

【0150】

一部の実施形態において、リンカーは、約５００アミノ酸長、約４５０アミノ酸長、約４００アミノ酸長、約３５０アミノ酸長、約３００アミノ酸長、約２５０アミノ酸長、約２００アミノ酸長、約１５０アミノ酸長、または約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。一部の実施形態において、リンカーは可動性である。他の実施形態において、リンカーは剛性である。

【0151】

一部の実施形態において、リンカーは、実質的にグリシン残基およびセリン残基（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％、または約９８％、または約９９％、または約１００％のグリシンおよびセリン）から構成される。

【0152】

一部の実施形態において、リンカーは、抗体（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）のヒンジ領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラスの抗体に見受けられるヒンジ領域は、可動性スペーサーとして機能し、Ｆａｂ部分が空間内で自由に動くことを可能にする。定常領域とは対照的に、ヒンジドメインは構造的に多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラスの間で配列と長さとの両方が変化する。例えば、ヒンジ領域の長さおよび可動性は、ＩｇＧサブクラス間で変化する。ＩｇＧ１のヒンジ領域はアミノ酸２１６～２３１を包含し、それが自由に可動性であるため、Ｆａｂフラグメントは、その対称軸を中心に回転し、重鎖間の２つのジスルフィド架橋の第１を中心とする球内を移動することができる。ＩｇＧ２は、１２個のアミノ酸残基および４つのジスルフィド架橋を有する、ＩｇＧ１よりも短いヒンジを有する。ＩｇＧ２のヒンジ領域はグリシン残基を欠き、比較的短く、追加の重鎖間ジスルフィド架橋によって安定化された硬いポリプロリン二重らせんを含有する。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可動性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸（２１個のプロリンおよび１１個のシステインを含む）を含有し、可動性でないポリプロリン二重らせんを形成する、その特有の拡張ヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍ほどの長さ）によって他のサブクラスと異なる。ＩｇＧ３において、ＦａｂフラグメントはＦｃフラグメントから比較的離れており、より高い柔軟性を分子に与えている。また、ＩｇＧ３の伸長ヒンジは、他のサブクラスと比較してその分子量がより高いことの要因となっている。ＩｇＧ４のヒンジ領域はＩｇＧ１のものよりも短く、その可動性はＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ領域の可動性は、ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２の順序で低下すると報告されている。一部の実施形態において、リンカーは、ヒトＩｇＧ４に由来し、二量体化（Ｓ２２８Ｐを含む）またはＦｃＲｎ結合を増強するために１つ以上の突然変異を含有し得る。

【0153】

結晶学的研究によると、免疫グロブリンのヒンジ領域は、さらに、上部ヒンジ領域、コア領域、および下部ヒンジ領域という３つの領域に機能的に細分化できる。Ｓｈｉｎ等、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ領域は、Ｃｍのカルボキシル末端から、動きを制限するヒンジの第１の残基、一般に２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合を形成する第１のシステイン残基までのアミノ酸を含む。上部ヒンジ領域の長さは、抗体のセグメントの可動性と相関する。コアヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド架橋を含有し、下部ヒンジ領域は、ＣＨ２ドメインのアミノ末端に連結し、ＣＨ２の残基を含む。Ｉｄ。野生型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域は、Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓの配列を含有し、これは、ジスルフィド結合形成によって二量体化したとき、回転軸として機能すると考えられる環状オクタペプチドを生じ、そのため可動性を与える。一部の実施形態において、本リンカーは、任意の抗体（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）の上部ヒンジ領域、コア領域、および下部ヒンジ領域の１つ、または２つ、または３つを含む。また、ヒンジ領域は、炭水化物結合のための、いくつかの構造的に別個の種類の部位を含む、１つ以上のグリコシル化部位を含有し得る。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７個のアミノ酸のセグメント内に５つのグリコシル化部位を含有し、分泌型免疫グロブリンに有利な特性と考えられる、腸プロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの耐性を付与する。実施形態において、本発明のリンカーは、１つ以上のグリコシル化部位を含む。

【0154】

一部の実施形態において、リンカーは、抗体（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）のＦｃドメインを含む。一部の実施形態において、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３のＦｃドメインを含む。一部の実施形態において、リンカーは、ヒトＩｇＧ１抗体に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３のＦｃドメインを含む。一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、新生児型Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）に対する親和性の増加および結合の増強を示す。一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦｃＲｎへの親和性を増加させて結合を増強する１つ以上の突然変異を含む。理論に縛られることを望むものではないが、ＦｃＲｎに対する親和性の増加および結合の増強は、本キメラタンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させると考えられる。

【0155】

一部の実施形態において、リンカーは、抗体のＦｃドメインを含まない。

【0156】

本明細書において使用するように、「個別化治療」という用語は、疾患の予防、診断、または処置のための、その人自身の遺伝子またはタンパク質についての情報に関する。がんにおいては、個別化医療は、診断、治療計画、処置がうまくいっているかの判定、または予後の判定を支援するために、その人の腫瘍についての特定の情報を使用する。

【0157】

一部の実施形態において、リンカー（ｂ）は、個別化治療の観点から患者に適応させるように交換することができる。腫瘍、または細菌やウイルスのような病原性微生物によって発現される抗原を、本発明のキメラタンパク質のリンカー（ｂ）に抗原ペプチドとして挿入することができる。したがって、これらのキメラタンパク質は、患者の特異的抗原からの配列を使用して、リンカー（ｂ）の抗原ペプチドを変更することによって、各患者に対して「個別化」することができる。

【0158】

シグナリングドメイン（ａ）または（ｃ）
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、シグナリングドメイン（ａ）および／またはシグナリングドメイン（ｃ）から構成される。

【0159】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、単量体シグナリングドメイン（ａ）または二量体（例えば、ホモ二量体もしくはヘテロ二量体）シグナリングドメイン（ａ）または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）シグナリングドメイン（ａ）から構成される。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、単量体シグナリングドメイン（ｃ）または二量体シグナリングドメイン（ｃ）または三量体シグナリングドメイン（ｃ）から構成される。

【0160】

本明細書において使用するように、「シグナリングドメイン」という用語は、表面分子に結合して、細胞内シグナル伝達カスケードを開始するドメインを指す。「シグナリングドメイン」は、ＴＮＦファミリーの単量体、二量体（例えば、ホモ二量体もしくはヘテロ二量体）、または三量体（例えば、ホモ三量体もしくはヘテロ三量体）のタンパク質から構成され、様々な免疫細胞型の活性化を刺激するアゴニスト特性を持つ。

【0161】

一部の実施形態において、シグナリングドメイン（ｃ）またはシグナリングドメイン（ａ）は、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）の分子の場合、例えば、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）およびＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）を含むが、これらに限定されず、活性形態はリガンドの細胞外ドメインのホモ三量体である。ＴＮＦＳＦは２７個のメンバーから構成されている。

【0162】

本明細書において使用するように、「腫瘍壊死因子スーパーファミリー」（ＴＮＦＳＦ）という用語は、細胞外システイン高含有ドメインを介して腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）と結合する能力を特徴とするサイトカインレセプターのタンパク質スーパーファミリーを指す。ＴＮＦＳＦは、２７個のメンバーから構成され、なかでもＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）およびＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）があり、活性形態はリガンドの細胞外ドメインのホモ三量体である。

【0163】

本明細書において使用するように、「表面抗原分類４０」（ＣＤ４０）という用語は、抗原提示細胞に見受けられる共刺激タンパク質を指し、その活性化に必要とされる。ＴＨ細胞上のＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）とＣＤ４０との結合により、抗原提示細胞を活性化し、様々な下流作用を誘導する（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ２５９４２）。

【0164】

本明細書において使用するように、「表面抗原分類１３７Ｌ」（ＣＤ１３７Ｌ）という用語は、４－１ＢＢＬ、壊死因子レセプタースーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）としても知られており、リンパ球活性化（ＩＬＡ）によって誘導される。４－１ＢＢＬは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターファミリーのメンバーであり、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋の両方の系列の活性化Ｔ細胞によって発現される。また、４－１ＢＢＬは、樹状細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージにも発現される（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ０７０１１）。ＣＤ１３７リガンドは、主に、専門的抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば樹状細胞、単球／マクロファージ、およびＢ細胞などに発現され、これらの細胞の活性化時にその発現がアップレギュレートされる。しかしながら、その発現は様々な造血細胞および非造血細胞において確認されている。一般に、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌは、多くの細胞型において恒常的に発現されているが、少数の細胞型を除いて発現レベルは低い。興味深い点として、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌは、様々な細胞型においてＣＤ１３７（４－１ＢＢおよびＴＮＦＲＳＦ９としても知られている）と共発現されるが、ＣＤ１３７／４－１ＢＢの発現は、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌのエンドサイトーシスをもたらす２つの分子間のシス相互作用によって、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌの発現を強力にダウンレギュレートする（Ｂｙｕｎｇｓｕｋ Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｓ ＣＤ１３７ Ｌｉｇａｎｄ （ＣＤ１３７Ｌ）“Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａ Ｆｉｎｅ Ｔｕｎｅｒ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ？” Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２０１５ Ｊｕｎ；１５（３）：１２１－１２４を参照）。

【0165】

本明細書において使用するように、「腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー、メンバー４」（ＴＮＦＲＳＦ４）という用語は、ＣＤ１３４およびＯＸ４０レセプターとしても知られており、ＣＤ２８とは異なり、休止ナイーブＴ細胞上に恒常的に発現されないレセプターのＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーである（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ４３４８９）。

【0166】

一部の実施形態において、シグナリングドメイン（ｃ）またはシグナリングドメイン（ａ）は、病理学的状況に応じて、目的の免疫細胞（例えば、樹状細胞、Ｔｒｅｇを含むＴ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、骨髄系由来サプレッサー細胞）上に発現されるレセプターの特異的アゴニストとして機能する。シグナリングドメイン（ｃ）またはシグナリングドメイン（ａ）は、免疫リガンド（例えば、ＴＮＦＳＦファミリー、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４）の細胞外ドメインの活性形態（単量体または多量体）に基づく。

【0167】

本明細書において使用するように、「樹状細胞（ＤＣ）」は、哺乳動物の免疫系の抗原提示細胞（アクセサリー細胞としても知られる）を指す。その主な機能は、抗原物質を処理し、それを細胞表面において免疫系のＴ細胞に提示することである。これは、自然免疫系と適応免疫系との間のメッセンジャーとして機能する。

【0168】

本明細書において使用するように、「Ｔ細胞」という用語はリンパ球の種類を指す。Ｔ細胞は免疫系の重要な白血球細胞の１つであり、適応免疫応答において中心的な役割を果たしている。Ｔ細胞は、その細胞表面にＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）が存在することによって、他のリンパ球と容易に区別することができる。Ｔ細胞は骨髄に見受けられる造血幹細胞から発生する。その後、発生中のＴ細胞は、成熟するために胸腺に移動する。Ｔ細胞の名前は、それが発達（または成熟）するこの器官に由来する。胸腺に移動した後、前駆細胞はいくつかの別個の種類のＴ細胞に成熟する。Ｔ細胞の分化はまた、胸腺を出た後も続く。特異的な分化Ｔ細胞サブタイプのグループは、免疫応答の調節および形成において様々な重要な機能を有する。それらの機能の１つが免疫媒介細胞死であり、これは、ＣＤ８＋「キラー」Ｔ細胞およびＣＤ４＋「ヘルパー」Ｔ細胞である２つの主要なサブタイプによって行われる。（これらは、細胞表面タンパク質ＣＤ８またはＣＤ４が存在することから名付けられた。）ＣＤ８＋Ｔ細胞は「キラーＴ細胞」としても知られており、細胞傷害性であり、これはウイルス感染細胞やがん細胞を直接的に殺傷することができることを意味する。また、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、免疫応答をもたらす際に、サイトカインとして知られている小さなシグナリングタンパク質を用いて、他の種類の細胞を動員することができる。Ｔ細胞の別の集団であるＣＤ４＋Ｔ細胞は、「ヘルパー細胞」として機能する。これらのＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、ＣＤ８＋キラーＴ細胞とは異なり、異物として特定された細胞を間接的に殺傷することによって機能する。これらは、免疫系の他の部分が認知した特定の脅威に応答するかどうか、またどのように応答するかを決定する。また、ヘルパーＴ細胞は、サイトカインシグナリングを用いて制御性Ｂ細胞に直接的に影響を与え、他の細胞集団に間接的に影響を与える。

【0169】

本明細書において使用するように、以前はサプレッサーＴ細胞として知られていた「制御性Ｔ細胞」（Ｔｒｅｇ）という用語は、免疫系を調節し、自己抗原への寛容性を維持し、自己免疫性疾患を防ぐ、Ｔ細胞の分集団を指す。Ｔｒｅｇは免疫抑制性であり、一般にエフェクターＴ細胞の誘導および増殖を抑制またはダウンレギュレートする。Ｔｒｅｇは、ＣＤ４、ＦＯＸＰ３、およびＣＤ２５というバイオマーカーを発現し、ナイーブＣＤ４細胞と同じ系列に由来すると考えられている。

【0170】

本明細書において使用するように、「ナチュラルキラー細胞」（ＮＫ細胞）という用語は、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）としても知られており、急速に拡大している自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）ファミリーに属するとともに、ヒトの全循環リンパ球の５～２０％に相当する、自然免疫系に重要である細胞傷害性リンパ球の種類を指す。ＮＫ細胞の役割は、脊椎動物の適応免疫応答における細胞傷害性Ｔ細胞の役割と類似する。ＮＫ細胞は、感染後約３日目に作用して、ウイルス感染細胞に対して迅速な応答を行い、腫瘍形成に対して応答する。典型的に、免疫細胞は感染細胞表面に提示された主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）を検出し、サイトカイン放出を誘発し、溶解またはアポトーシスによって感染細胞の死をもたらす。しかしながら、ＮＫ細胞は、抗体やＭＨＣが存在しない場合にもストレスを受けた細胞を認識して殺傷する能力を有し、はるかに迅速な免疫応答を可能にするため、特有である。これは、ＭＨＣクラス１の「自己」マーカーを失った細胞を殺傷するために活性化を必要としないという考え方から、「ナチュラルキラー」と名付けられた。ＭＨＣＩマーカーを失った有害な細胞は、Ｔリンパ球細胞などの他の免疫細胞によって検出および破壊されないので、この役割は特に重要である。ＮＫ細胞は、ＣＤ５６の存在およびＣＤ３の欠如（ＣＤ５６＋、ＣＤ３－）によって同定することができる。ＮＫ細胞（自然リンパ球細胞のグループに属する）は、共通のリンパ球前駆体から分化した３種類の細胞の１つであり、他の２つはＢリンパ球とＴリンパ球である。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃腺、および胸腺において分化および成熟し、その後循環に入ることが知られている。

【0171】

本明細書において使用するように、「骨髄系由来サプレッサー細胞」（ＭＤＳＣ）という用語は、骨髄系列（骨髄幹細胞に由来する細胞ファミリー）からの異種グループの免疫細胞である。ＭＤＳＣは、慢性感染症およびがんなどの病的状況において、造血が変化した結果、大きく増殖する。ＭＤＳＣは、免疫賦活特性ではなく強い免疫抑制活性を持つことから、他の骨髄細胞型から区別される。他の骨髄細胞と同様に、ＭＤＳＣも、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、およびナチュラルキラー細胞を含む他の免疫細胞型と相互作用して、それらの機能を調節している。

【0172】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、４－１ＢＢＬ、ＯＸ－４０リガンド（ＯＸ－４０Ｌ）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１３７リガンド、ＴＲＡＩＬ、およびＴＬ１Ａのうちの１つ以上である、免疫刺激シグナルの細胞外ドメインの三量体を含む。

【0173】

特定の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、３つの同一の免疫刺激シグナルの組合せを含み、該免疫刺激シグナルは、４－１ＢＢＬ、ＯＸ－４０リガンド（ＯＸ－４０Ｌ）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１３７リガンド、ＴＲＡＩＬ、およびＴＬ１Ａから選択されるが、これらに限定されない。

【0174】

特定の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、３つの異なる免疫刺激シグナルの組合せを含み、該免疫刺激シグナルは、４－１ＢＢＬ、ＯＸ－４０リガンド（ＯＸ－４０Ｌ）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１３７リガンド、ＴＲＡＩＬ、およびＴＬ１Ａから選択されるが、これらに限定されない。

【0175】

特定の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、２つの同一の免疫刺激シグナルと１つの異なる免疫刺激シグナルとの組合せを含み、該免疫刺激シグナルは、４－１ＢＢＬ、ＯＸ－４０リガンド（ＯＸ－４０Ｌ）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１３７リガンド、ＴＲＡＩＬ、およびＴＬ１Ａから選択されるが、これらに限定されない。

【0176】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、そのフォールディングまたはリガンド／レセプター相互作用を高めるように改変された、免疫刺激シグナルの細胞外ドメインの三量体を含む。

【0177】

本明細書において使用するように、「ＬＩＧＨＴ」という用語は、腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）としても知られており、ＴＮＦスーパーファミリーの分泌タンパク質である。これは、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）およびデコイレセプター３によって認識される（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｏ４３５５７）。

【0178】

本明細書において使用するように、「腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１８」（ＴＮＦＳＦ１８）という用語は、ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）としても知られており、ヒトにおいてＴＮＦＳＦ１８遺伝子（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｑ９ＵＮＧ２）によってコードされるタンパク質を指す。

【0179】

本明細書において使用するように、「表面抗原分類７０」（ＣＤ７０）という用語は、ヒトにおいてＣＤ７０遺伝子によってコードされるタンパク質を指し［１］、ＣＤ７０はＣＤ２７のリガンドである。ＣＤ７０タンパク質は（Ｔ細胞リンパ腫およびＢ細胞リンパ腫のように）高度に活性化されたリンパ球に発現する。（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ３２９７０）。

【0180】

本明細書において使用するように、「ＣＤ３０リガンド」という用語は、ＴＮＦＲＳＦ８としても知られており、腫瘍壊死因子レセプターファミリーの細胞膜タンパク質であり、腫瘍マーカーである。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属するサイトカインである。このサイトカインは、ＴＮＦＲＳＦ１８／ＡＩＴＲ／ＧＩＴＲレセプターのリガンドである。これは、末梢組織におけるＴリンパ球の生存を調節することが示されている。また、このサイトカインは内皮細胞に発現されることが分かっており、Ｔリンパ球と内皮細胞との相互作用に重要であると考えられている。（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ２８９０８）。

【0181】

本明細書において使用するように、「ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）」という用語は、ＣＤ２５３（表面抗原分類２５３）およびＴＮＦＳＦ１０（腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーメンバー１０）とも呼ばれており、アポトーシスと呼ばれる細胞死のプロセスを誘導するリガンドとして機能するタンパク質を指す。ＴＲＡＩＬは、ほとんどの正常組織細胞によって産生および分泌されるサイトカインである。これは、特定のデスレセプターと結合することによって、主に腫瘍細胞にアポトーシスを引き起こす。（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｐ５０５９１）。

【0182】

本明細書において使用するように、「腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１５」（ＴＮＦＳＦ１５）という用語は、ＴＬ１Ａとしても知られており、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属するサイトカインを指す。これは、内皮細胞に特異的に発現される（ＵｎｉＰｒｏｔ番号：Ｏ９５１５０）。

【0183】

本明細書において使用するように、「三量体タンパク質」という用語は、タンパク質または核酸のような、通常は非共有結合で結合した３つの高分子によって形成される高分子複合体を指す。ホモ三量体は３つの同一分子によって形成される。ヘテロ三量体は３つの異なる高分子によって形成される。特に、「三量体」という用語は、それらの分子のそれぞれにおける細胞外ドメインの配列の反復（×３）を指し、その三量体化同族レセプターへの効率的な結合によって、目的の細胞の最適な活性化を可能にする。

【0184】

一部の実施形態において、シグナリングドメイン（ｃ）またはシグナリングドメイン（ａ）は、三量体タンパク質である。一部の実施形態において、本発明のシグナリングドメイン（ａ）または（ｃ）は、三量体４－１ＢＢＬ、三量体ＯＸ－４０Ｌ、三量体ＬＩＧＨＴ、三量体ＧＩＴＲＬ、三量体ＣＤ７０、三量体ＣＤ３０Ｌ、三量体ＣＤ４０Ｌ、三量体ＨＶＥＭ、三量体ＧＩＴＲ、三量体ＣＤ２７、三量体ＣＤ２８、三量体ＣＤ１３７、および三量体ＴＬ１Ａのような三量体免疫刺激剤を含む。

【0185】

特定の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、三量体４－１ＢＢＬを含む。

【0186】

特定の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、リンカーによって共に連結された、３つの単量体４－１ＢＢＬを含み、該リンカーは、４つのグリシンおよび１つのセリン（Ｇ４Ｓ配列）のリピート、一般的な実験技術によって特異的抗体でタンパク質を検出するためのペプチドタグ、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩ分子に提示され得、特異的免疫応答が誘導される、例えば腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、ＭＵＣ－１）または寛容抗原（例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ、ＭＯＧ）などの、１つまたは複数の同定された、治療に関連する抗原ペプチド配列から選択される。特定の実施形態において、４－１ＢＢＬの単量体の間のリンカーはＴＡＡである。

【0187】

一部の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、４－１ＢＢＬの２つの単量体と１つの単量体ＯＸ－４０Ｌとを有する三量体免疫刺激剤を含み、４－１ＢＢＬの各単量体は、リンカーによって共に連結されており、該リンカーは、４つのグリシンおよび１つのセリン（Ｇ４Ｓ配列）のリピート、一般的な実験技術によって特異的抗体でタンパク質を検出するためのペプチドタグ、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩ分子に提示され得、特異的免疫応答が誘導される、例えば腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、ＭＵＣ－１）または寛容抗原（例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ、ＭＯＧ）などの、１つまたは複数の同定された、治療に関連する抗原ペプチド配列から選択される。特定の実施形態において、４－１Ｌの単量体の間のリンカーはＴＡＡである。

【0188】

特定の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、三量体ＯＸ－４０Ｌを含む。特定の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、リンカーによって共に連結された、３つの単量体ＯＸ－４０Ｌを含み、該リンカーは、４つのグリシンおよび１つのセリン（Ｇ４Ｓ配列）のリピート、一般的な実験技術によって特異的抗体でタンパク質を検出するためのペプチドタグ、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩ分子に提示され得、特異的免疫応答が誘導される、例えば腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、ＭＵＣ－１）または寛容抗原（例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ、ＭＯＧ）などの、１つまたは複数の同定された、治療に関連する抗原ペプチド配列から選択される。特定の実施形態において、ＯＸ－４０Ｌの単量体の間のリンカーはＴＡＡである。

【0189】

特定の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、三量体ＣＤ４０Ｌを含む。特定の実施形態において、本発明のシグナリングドメインは、リンカーによって共に連結された、３つの単量体ＣＤ４０Ｌを含み、該リンカーは、４つのグリシンおよび１つのセリン（Ｇ４Ｓ配列）のリピート、一般的な実験技術によって特異的抗体でタンパク質を検出するためのペプチドタグ、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩ分子に提示され得、特異的免疫応答が誘導される、例えば腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メランＡ抗原、ＭＵＣ－１）または寛容抗原（例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ、ＭＯＧ）などの、１つまたは複数の同定された、治療に関連する抗原ペプチド配列から選択される。特定の実施形態において、ＣＤ４０Ｌの単量体の間のリンカーはＴＡＡである。

【0190】

本明細書において使用するように、「三量体」という用語は、３つの同一の単純な分子、または３つの異なる単純な分子、または２つの同一の単純な分子および１つの異なる単純な分子からなる化学物質または分子に関する。一部の実施形態において、「三量体」という用語は、ホモ三量体またはヘテロ三量体を含む。

【0191】

一部の実施形態において、シグナリングドメイン（ｃ）またはシグナリングドメイン（ａ）は、単量体である。

【0192】

本明細書において使用するように、「単量体」という用語は、１つの単純な分子からなる化学物質または分子に関する。

【0193】

一部の実施形態において、シグナリングドメイン（ｃ）またはシグナリングドメイン（ａ）は、二量体である。

【0194】

本明細書において使用するように、「二量体」という用語は、２つの同一の単純な分子、または２つの異なる単純な分子からなる化学物質または分子に関する。一部の実施形態において、「二量体」という用語は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を含む。

【0195】

タンパク質のベクター化
一部の実施形態において、本発明は、異種核酸の送達のためのベクターに関し、該核酸は本発明のキメラタンパク質をコードする。

【0196】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質をコードする核酸または本発明のキメラタンパク質のベクター化は、任意の発現系を使用し、複製および非複製ウイルス（例えば、腫瘍溶解性ウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス）、ｍＲＮＡ、プラスミド、ならびに他の遺伝子治療ベクターに限定されない。

【0197】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0198】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0199】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0200】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0201】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0202】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0203】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0204】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0205】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0206】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0207】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0208】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質を含む水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に関する。

【0209】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0210】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0211】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0212】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0213】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0214】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0215】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0216】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0217】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0218】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0219】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0220】

一部の実施形態において、本発明は、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体ドメインである、キメラタンパク質をコードする核酸を含むワクシニアウイルス（ＶＶ）に関する。

【0221】

一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載するキメラタンパク質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。一部の実施形態において、発現ベクターはＤＮＡまたはＲＮＡを含む。一部の実施形態において、発現ベクターは哺乳動物の発現ベクターである。

【0222】

キメラタンパク質の発現には、原核生物ベクターおよび真核生物ベクターの両方が使用できる。原核生物ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ配列に基づくコンストラクトを含む（例えば、Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １９９６，６０：５１２－５３８を参照）。Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現に使用できる調節領域の非限定的な例は、ｌａｃ、ｔｒｐ、ｌｐｐ、ｐｈｏＡ、ｒｅｃＡ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７、およびＡＰＬを含む。原核生物発現ベクターの非限定的な例は、Ａｇｔ１１などのＡｇｔベクターシリーズ（Ｈｕｙｎｈ ｅｔ ａｌ．，“ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｖｏｌ．Ｉ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”，１９８４，（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．），ｐｐ．４９－７８，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）、およびｐＥＴベクターシリーズ（Ｓｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９９０，１８５：６０－８９）を含み得る。しかしながら、原核生物宿主ベクター系は、哺乳動物細胞の翻訳後プロセスの多くを行うことができない。そのため、真核生物宿主ベクター系が、特に有用であり得る。哺乳動物宿主細胞におけるキメラタンパク質の発現には、様々な調節領域が使用できる。例えば、ＳＶ４０初期および後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、およびラウス肉腫ウイルスの長末端リピート（ＲＳＶ－ＬＴＲ）プロモーターを使用することができる。哺乳動物細胞に有用であり得る誘導性プロモーターは、メタロチオネインＩＩ遺伝子に関連するプロモーター、マウス乳癌ウイルスグルココルチコイド応答性長末端リピート（ＭＭＴＶ－ＬＴＲ）、β－インターフェロン遺伝子、およびｈｓｐ７０遺伝子を限定することなく含む（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９８９，４９：２７３５－４２；およびＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９０，１０：１６５－７５を参照）。ヒートショックプロモーターまたはストレスプロモーターもまた、組換え宿主細胞におけるキメラタンパク質の発現を促進するために有利であり得る。

【0223】

一部の実施形態において、本発明の発現ベクターは、哺乳動物細胞において機能的である、発現制御領域、またはその相補配列に作動可能に連結された、キメラタンパク質（および／もしくはさらなる薬剤）またはその相補配列をコードする核酸を含む。発現制御領域は、発現ベクターで形質転換されたヒト細胞において遮断剤および／または刺激剤が生成されるように、作動可能に連結された遮断剤および／または刺激剤をコードする核酸の発現を促進できる。発現制御領域は、作動可能に連結された核酸の発現に影響を与える、プロモーターおよびエンハンサーなどの調節ポリヌクレオチド（本明細書においてエレメントと呼ぶこともある）である。本発明の発現ベクターの発現制御領域は、ヒト細胞において作動可能に連結されたコード核酸を発現することができる。一部の実施形態において、細胞は腫瘍細胞である。他の実施形態において、細胞は非腫瘍細胞である。一部の実施形態において、発現制御領域は、調節可能な発現を、作動可能に連結された核酸に付与する。シグナル（刺激と呼ばれることもある）は、そのような発現制御領域に作動可能に連結された核酸の発現を増加または低下させることができる。シグナルに応答して発現を増加させるそのような発現制御領域は、多くの場合、誘導性と呼ばれる。シグナルに応答して発現を低下させるそのような発現制御領域は、多くの場合、抑制性と呼ばれる。典型的に、そのようなエレメントによって付与される増加または低下の量は、存在するシグナルの量に比例し、シグナルの量が多いほど、発現の増加または低下が大きくなる。一部の実施形態において、本発明は、合図に応答して一時的に高レベルの発現をもたらすことができる誘導性プロモーターの使用を企図する。例えば、腫瘍細胞の近くにある場合、そのような発現制御配列を含むキメラタンパク質（および／またはさらなる薬剤）のための発現ベクターで形質転換された細胞は、該形質転換された細胞を適切な合図に暴露することによって高レベルの薬剤を一時的に生成するように誘導される。例示的な誘導性発現制御領域は、低分子化学物質などの合図で刺激される誘導性プロモーターを含むものを含む。特定の例は、例えば、米国特許第５，９８９，９１０号明細書、米国特許第５，９３５，９３４号明細書、米国特許第６，０１５，７０９号明細書、および米国特許第６，００４，９４１号明細書において見受けられ得、これらのそれぞれの全体が、言及することによって本明細書に援用される。発現制御領域および遺伝子座制御領域は、天然のプロモーターおよびエンハンサーエレメントなどの全長プロモーター配列、ならびに全長または非変異体機能のすべてまたは一部を保持する部分配列またはポリヌクレオチド変異体を含む。本明細書において使用するように、「機能的」という用語およびその文法的変異形は、核酸配列、部分配列、またはフラグメントを参照して使用されるとき、配列が天然の核酸配列（例えば、非変異体または非改変配列）の１つ以上の機能を有することを意味する。

【0224】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、分泌されるまたは分泌され得る。

【0225】

本明細書において使用するように、「作動可能な連結」は、構成成分が意図される様式で機能できるように記載されているように構成成分の物理的な並置を指す。核酸と作動可能に連結した発現制御エレメントの例において、制御エレメントが核酸の発現を調節するような関係になっている。典型的には、転写を調節する発現制御領域は、転写された核酸の５’末端（すなわち「上流」）付近に並置される。発現制御領域はまた、転写された配列の３’末端（すなわち、「下流」）または転写物内（例えば、イントロン）に配置することができる。発現制御エレメントは、転写された配列から離れた距離（例えば、核酸から１００～５００、５００～１０００、２０００～５０００、またはそれより多くのヌクレオチド）に配置することができる。発現制御エレメントの特定の例はプロモーターであり、これは転写された配列の５’側に通常は位置する。発現制御エレメントの他の例はエンハンサーであり、これは転写された配列の５’側もしくは３’側または転写された配列内に配置することができる。

【0226】

ヒト細胞において機能する発現系は、当該技術において周知であり、かつウイルス系を含む。一般に、ヒト細胞において機能するプロモーターは、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼに結合してｍＲＮＡへのコード配列の下流（３’）転写を開始できる任意のＤＮＡ配列である。プロモーターは、コード配列の５’末端近くに通常位置する転写開始領域、および典型的には、転写開始部位の２５～３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスを有する。ＴＡＴＡボックスは、正しい部位でＲＮＡ合成を開始するようにＲＮＡポリメラーゼＩＩを誘導すると考えられている。プロモーターはまた、ＴＡＴＡボックスの１００～２００塩基対上流内に典型的に位置する、上流プロモーターエレメント（エンハンサーエレメント）を含有する。上流プロモーターエレメントは、転写が開始される速度を決定し、いずれかの方向にも作用できる。哺乳動物ウイルス遺伝子は、多くの場合、高度に発現され、広い宿主範囲を有するので、哺乳動物ウイルス遺伝子のプロモーターはプロモーターとして特に有用である。例には、ＳＶ４０初期プロモーター、マウス乳癌ウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、およびＣＭＶプロモーターを含む。典型的に、哺乳動物細胞によって認識される転写終結配列およびポリアデニル化配列は、翻訳終止コドンの３’側に位置する調節領域であり、そのため、プロモーターエレメントと共に、コード配列に隣接する。成熟ｍＲＮＡの３’末端は、部位特異的な翻訳後切断およびポリアデニル化によって形成される。転写ターミネーターおよびポリアデニル化シグナルの例は、ＳＶ４０由来のものを含む。また、イントロンも発現コンストラクトに含まれ得る。核酸を生存細胞に核酸を導入するために利用可能な様々な技術がある。核酸を哺乳動物細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏで導入することに適する技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、微量注入法、細胞融合、ポリマーベースのシステム、ＤＥＡＥ－デキストラン、ウイルス形質導入、リン酸カルシウム沈殿法などの使用を含む。ｉｎ ｖｉｖｏの遺伝子導入では、リポソーム、キトサンおよびゼラチンなどの天然ポリマー系送達ビヒクルを含む多くの技術および試薬もまた、使用することができる。ウイルスベクターも、ｉｎ ｖｉｖｏの形質導入に適する。一部の状況において、腫瘍細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体またはリガンドなどの、ターゲティング物質を提供することが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質は、例えば、特定の細胞型を指向するカプシドタンパク質またはそのフラグメント、循環中に内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在を標的とし細胞内半減期を増強するタンパク質を標的化し、および／またはその取り込みを促進するために使用され得る。レセプター媒介エンドサイトーシスの技術は、例えば、Ｗｕ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２，４４２９－４４３２（１９８７）、およびＷａｇｎｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７、３４１０－３４１４（１９９０）によって記載されている。該当する場合、例えば、組み込み配列などの遺伝子送達因子を用いることもできる。多数の組み込み配列が当該技術において知られている（例えば、Ｎｕｎｅｓ－Ｄｕｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２６：３９１－４０６，１９９８；Ｓａｄｗｏｓｋｉ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｄ．，１６５：３４１－３５７，１９８６；Ｂｅｓｔｏｒ，Ｃｅｌｌ，１２２（３）：３２２－３２５，２００５；Ｐｌａｓｔｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＧ １５：３２６－３３２，１９９９；Ｋｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３－４３９，２００３を参照）。これらは、リコンビナーゼおよびトランスポサーゼを含む。例には、Ｃｒｅ（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：４６７－４８６，１９８１）、ｌａｍｂｄａ（Ｎａｓｈ，Ｎａｔｕｒｅ，２４７，５４３－５４５，１９７４），Ｆｌｐ（Ｂｒｏａｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２９：２２７－２３４，１９８２）、Ｒ（Ｍａｔｓｕｚａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１７２：６１０－６１８，１９９０）、ｃｐＣ３１（例えば、Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３５：６６７－６７８，２００４を参照）、スリーピングビューティー（ｓｌｅｅｐｉｎｇ ｂｅａｕｔｙ）、マリナーファミリーのトランスポサーゼ（Ｐｌａｓｔｅｒｋ ｅｔ ａｌ．、上述参照）、ならびに、レトロウイルスまたはレンチウイルスのＬＴＲ配列およびＡＡＶのＩＴＲ配列などのウイルス組み込みを提供する構成成分を有するＡＡＶ、レトロウイルス、レンチウイルスなどのウイルスを組み込むための構成成分（Ｋｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３－４３９，２００３）を含む。さらに、直接的かつ標的化した遺伝子組み込みの方策が、キメラ融合タンパク質をコードする核酸配列を挿入するために使用され得、これには、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９、亜鉛フィンガー、ＴＡＬＥＮ、およびメガヌクレアーゼ遺伝子編集技術を含む。

【0227】

一態様において、本発明は、ウイルスベクターである、キメラタンパク質（および／またはさらなる薬剤）の発現のための発現ベクターを提供する。遺伝子治療に有用な多くのウイルスベクターが知られている（例えば、Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１：１ １７，１２２，２００３を参照）。例示的なウイルスベクターは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、レンチウイルス（ＬＶ）、レトロウイルス（ＲＶ）、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）または同じファミリーのウイルス、麻疹ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス（ＶＶ）、粘液腫ウイルス、レオウイルス、パルボウイルス、流行性耳下腺炎ウイルスから選択されるものを含むが、他のウイルスベクターも使用され得る。ｉｎ ｖｉｖｏの使用では、αウイルスおよびアデノウイルスなど、宿主ゲノムに組み込まれないウイルスベクターが使用に適する。例示的なαウイルスの種類は、シンドビスウイルス、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）ウイルス、およびセムリキフォレストウイルス（ＳＦＶ）、ＨＳＶ、エンテロウイルス、パラミクソウイルス、ポックスウイルス、ラブドウイルスを含む。ｉｎ ｖｉｔｒｏの使用では、レトロウイルス、ＡＡＶ、およびレンチウイルスなど、宿主ゲノムに組み込まれるウイルスベクターが適する。一部の実施形態において、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてヒト細胞に形質導入する方法であって、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて固形腫瘍を本発明のウイルスベクターと接触させることを含む、方法を提供する。

【0228】

特定の実施形態において、本発明のウイルスベクターは水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。

【0229】

特定の実施形態において、本発明のウイルスベクターは組換えワクシニアウイルス（ＶＶ）である。

【0230】

一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載するキメラタンパク質を含む発現ベクター含む宿主細胞を提供する。

【0231】

発現ベクターは、本発明のキメラタンパク質を作製するために宿主細胞に導入することができる。細胞は、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて培養されるか、または遺伝子学的に改変され得る。有用な哺乳動物宿主細胞は、ヒト、サル、およびげっ歯動物に由来する細胞を限定することなく含む（例えば、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、“Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ” １９９０，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．を参照）。これらには、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓細胞株（例えば、ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎臓株（例えば、２９３、２９３－ＥＢＮＡ、または懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ １９７７，３６：５９）；ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞ＤＨＦＲ（例えば、ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ、およびＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０，７７：４２１６）；ＤＧ４４ ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、マウスセルトリ細胞（Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ １９８０，２３：２４３－２５１）；マウス線維芽細胞（例えば、ＮＩＨ－３Ｔ３）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸部癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；およびマウス乳癌細胞（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）を含む。本明細書に記載するキメラタンパク質を発現させるための例示的ながん細胞型は、マウス線維芽細胞株、ＮＩＨ３Ｔ３、マウスルイス肺癌細胞株、ＬＬＣ、マウスマスト細胞腫細胞株、Ｐ８１５、マウスリンパ腫細胞株、ＥＬ４およびそのオボアルブミン遺伝子導入体、Ｅ．Ｇ７、マウス黒色腫細胞株、Ｂ１６Ｆ１０、マウス線維肉腫細胞株、ＭＣ５７、ならびにヒト小細胞肺癌細胞株のＳＣＬＣ＃２およびＳＣＬＣ＃７を含む。

【0232】

本発明の実施において有用な遺伝子送達ウイルスベクターは、分子生物学の技術分野で周知の方法論を利用して構築することができる。典型的には、導入遺伝子を有するウイルスベクターは、導入遺伝子をコードするポリヌクレオチド、適切な調節エレメント、および細胞形質導入を媒介するウイルスタンパク質の作製に必要なエレメントから構成される。

【0233】

宿主細胞は、健康なヒト、がん患者、および感染疾患を有する患者を含む健常もしくは罹患している患者、民間研究室寄託、アメリカンタイプカルチャーコレクションなどの公共のカルチャーコレクション、または商業サプライヤーから入手できる。

【0234】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ ｖｉｖｏにおける本キメラタンパク質の作製に使用できる細胞は、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球などの血液細胞；様々な幹細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、骨髄から得られるもの）、臍帯血、末梢血、胎児肝臓などを限定することなく含む。細胞型の選択は、処置または予防される腫瘍または感染症の種類によって決まり、当業者によって決定することができる。

【0235】

処置
一部の実施形態において、本発明は、がんおよび／または腫瘍を処置または予防する方法に関する。がんの処置は、免疫阻害よりも免疫刺激を促進するように本キメラタンパク質によって免疫系を調節することに関与し得る。

【0236】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する患者において処置または予防する方法における使用のためのキメラタンパク質に関する。

【0237】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0238】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ａ）はドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0239】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0240】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／またはターゲティングドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0241】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は三量体ドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0242】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は三量体ドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0243】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ａ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体ドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0244】

一部の実施形態において、本発明は、がんに罹患する対象を処置する方法であって、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の構造を含み、式中、（ｃ）は単量体ドメインであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体ドメインであるキメラタンパク質を治療有効量で投与することを含む、方法に関する。

【0245】

本明細書において使用するように、「対象」という用語は、哺乳動物、例えばげっ歯動物、ネコ、イヌ、および霊長動物などを指す。特に、本発明における対象はヒトである。より具体的には、本発明における対象は、がんを有する、またはがんにかかりやすい。

【0246】

本明細書において使用するように、「対象」という用語は「患者」を包含する。

【0247】

本明細書において使用するように、「生物学的サンプル」という用語は、対象から得られた任意のサンプル、例えば、血清サンプル、血漿サンプル、尿サンプル、血液サンプル、リンパ液サンプル、または組織生検などを指す。特定の実施形態において、生物学的サンプルは組織生検である。

【0248】

本明細書において使用するように、「組織」という用語は、身体または器官の一部を参照して使用されるとき、一般に、身体において特定の機能を行うために共に機能する、形態学的に類似した細胞、ならびに関連するアクセサリー細胞およびサポート細胞、ならびに細胞外マトリックス物質、脈管供給部、および体液を含む、細胞間物質の凝集体または集合体を指す。動物および人間には、一般に、筋肉組織、神経組織、上皮組織、および結合組織を含む４つの基本的種類の組織がある。

【0249】

一部の実施形態において、対象ががんに罹患するとき、組織サンプルは腫瘍組織サンプルである。本明細書において使用するように、「腫瘍組織サンプル」という用語は、対象に由来する任意の組織の腫瘍サンプルを意味する。上述の組織サンプルは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ評価の目的で取得される。一部の実施形態において、腫瘍サンプルは対象から切除した腫瘍に由来することができる。一部の実施形態において、腫瘍サンプルは、対象の原発腫瘍に行った、または対象の原発腫瘍から離れた転移サンプルに行った生検に由来することができる。一部の実施形態において、腫瘍組織サンプルは、全体的な原発腫瘍（全体として）、腫瘍中心からの組織サンプル、手術前に採取した腫瘍組織サンプル（例えば、処置後の患者の経過観察のため）、および遠隔転移を含む。腫瘍組織サンプルには、当然ながら、多様な周知の採取後調製手法および保存手法を施すことができる（例えば、固定、保存、凍結など）。サンプルは、未処理、凍結、固定（例えば、ホルマリン固定）、または包埋（例えば、パラフィン包埋）することができる。

【0250】

本明細書において使用するように、「がん」という用語は当該技術におけるその一般的な意味を有し、身体の他の部分に浸潤するまたは広がる可能性を有する異常な細胞増殖に関与する疾患グループを指す。「がん」という用語は、原発性がんおよび転移性がんの両方をさらに含む。本発明の方法および組成物によって処置され得るがんの例は、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸管、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、または子宮からのがん細胞を含むが、これらに限定されない。加えて、がんは、具体的には以下の組織型であってもよいが、これらに限定されない：悪性新生物；がん腫；未分化がん；巨細胞および紡錘細胞がん；小細胞がん；乳頭がん；扁平上皮がん；リンパ上皮がん；基底細胞がん；石灰化上皮がん；移行上皮がん；乳頭状移行上皮がん；腺がん；悪性ガストリノーマ；胆管がん；肝細胞がん；肝細胞がんと胆管がんの混合型；索状腺がん；腺様嚢胞がん；腺腫性ポリープ中の腺がん；家族性大腸ポリポーシス腺がん；固形がん；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支肺胞腺がん（ｂｒａｎｃｈｉｏｌｏ－ａｌｖｅｏｌａｒ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）；乳頭腺がん；色素嫌性がん；好酸球がん；好酸性腺がん；好塩基球がん；明細胞腺がん；顆粒細胞がん；濾胞腺がん；乳頭および濾胞腺がん；非被包性硬化性がん；副腎皮質がん；類内膜がん（ｅｎｄｏｍｅｔｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）；皮膚付属器がん；アポクリン腺がん；皮脂腺がん；耳垢腺がん；粘液性類表皮がん；嚢胞腺がん；乳頭状嚢胞腺がん；乳頭状漿液性嚢胞腺がん；粘液性嚢胞腺がん；粘液腺がん；印環細胞がん；浸潤性導管がん；髄様がん；小葉がん；炎症性がん；乳房パジェット病；腺房細胞がん；腺扁平上皮がん；扁平上皮化生を伴う腺がん；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性莢膜腫瘍；悪性顆粒膜細胞腫；悪性神経芽細胞腫（ｒｏｂｌａｓｔｏｍａ）；セルトリ細胞がん；悪性ライディッヒ細胞腫；悪性脂質細胞腫；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性メラノーマ；無色素性メラノーマ；表在拡大型メラノーマ；巨大色素性母斑中の悪性メラノーマ；類上皮細胞メラノーマ；悪性青色母斑；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；悪性混合腫瘍；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；がん肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレンナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；未分化胚細胞腫；胚性がん；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺種；絨毛がん；悪性中腎腫；血管肉腫；悪性血管内皮腫；カポジ肉腫；悪性血管外皮腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽細胞腫；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル上皮肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル上皮線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫；上衣腫；上衣腫；原形質性星状細胞腫；線維性星状細胞腫；星状芽細胞腫；髄芽腫、膠芽腫；乏突起膠腫；乏突起膠芽腫；原始神経外胚葉腫瘍（ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ）；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原性腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキンリンパ腫；側肉芽腫；悪性小リンパ球性リンパ腫；悪性びまん性大細胞型リンパ腫；悪性濾胞性リンパ腫；菌状息肉腫；その他の特定されている非ホジキンリンパ腫；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞性白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞性白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；ならびに有毛細胞白血病。

【0251】

本明細書において使用するように、「処置する」または「処置」という用語は、疾患にかかるリスクを有するまたは疾患にかかったと疑われる対象、および病気であるまたは疾患もしくは医学的状態に罹患していると診断された対象の処置を含む、予防または防止処置、および根治または疾患修飾処置の両方を指し、臨床における再発の抑制を含む。処置は、障害もしくは再発の障害を予防する、治癒する、その発症を遅延する、その重篤度を軽くする、もしくはその１つ以上の症状を改善するため、または、そうした処置が存在しない場合に予想される生存期間を超えて対象の生存期間を延長するため、医学的障害を有するまたは最終的にそうした障害に罹患し得る対象に行うことができる。「治療レジメン」は、病気の処置のパターン、例えば治療時に使用する投薬のパターンを意味する。治療レジメンは、誘導レジメンおよび維持レジメンを含むことができる。「誘導レジメン」または「誘導期間」という表現は、疾患の初期の処置に使用する治療レジメン（または治療レジメンの一部）を指す。誘導レジメンの全体的な目的は、初期の処置レジメンの期間に高レベルの薬剤を対象に提供することである。誘導レジメンは、「負荷レジメン」を（部分的または全体的に）使用することができ、これは、医師が維持レジメン時に使用し得るものより多い用量の薬剤を投与すること、医師が維持レジメン時に薬剤を投与し得るより頻回で薬剤を投与すること、またはその両方を含むことができる。「維持レジメン」または「維持期間」という表現は、例えば対象を長期間（数か月または数年）寛解の状態に維持するために、病気の処置時に対象のメンテナンスに使用される治療レジメン（または治療レジメンの一部）を指す。維持レジメンは、持続的治療（例えば、薬剤を一定の間隔で、例えば毎週、毎月、毎年等投与すること）、または断続的治療（例えば、中断を含む処置、断続的処置、再発における処置、もしくは所定の特定の条件［例えば痛み、疾患の徴候等］を満たした上での処置）を用いることができる。

【0252】

本明細書において使用するように、「投与する」または「投与」という用語は、例えば、静脈内、筋肉内、経腸、皮下、非経口、全身、局所、脊髄、鼻腔、外用、または上皮投与（例えば、注射もしくは注入によって）などによって、身体の外側に存在する物質（例えば、カスパーゼ８の阻害剤を単独で、または従来の処置と組み合わせて）を、対象に注射する、あるいは物理的に送達する行為を指す。疾患またはその症状を処置するとき、物質の投与は、典型的に、該疾患またはその症状の発症後に行われる。疾患またはその症状を予防するとき、物質の投与は、典型的に、該疾患またはその症状の発症前に行われる。

【0253】

「治療有効量」とは、所望の治療結果を得るために、必要な投与量および期間において有効な量を指す。薬剤の治療有効量は、個人の病状、年齢、性別、および体重、薬剤が個人において所望の応答を誘発できることのなどの要因に応じて変わり得る。また、治療有効量は、キメラタンパク質またはキメラタンパク質の部分の任意の毒性または有害な作用を、治療的に有益な作用が上回るものである。薬剤の効果的な投与量および投与レジメンは、処置する疾患または状態によって決まり、当業者が決定することができる。当業者である医師は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定して処方することができる。例えば、医師は、医薬組成物中に使用する薬剤の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるものよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を次第に増加させることができる。一般に、本発明の組成物の適切な用量は、特定の投与レジメンにより治療効果を生じるのに有効な最も低い用量である化合物の量であり得る。そうした有効用量は一般に、上述の要因によって決まり得る。例えば、治療用途のための治療有効量は、疾患の進行を安定化できるというによって判定することができる。当業者は、そうした量を、対象のサイズ、対象の症状の重篤度、および選択した特定の組成物または投与経路などの要因に基づいて決定することができ得る。薬剤の治療有効量の例示的で非限定的な範囲は、約０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．５、例えば約０．３、約１、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、または約８ｍｇ／ｋｇである。本発明のキメラタンパク質の治療有効量の例示的で非限定的な範囲は、０．０２～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２～３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０５～１０ｍｇ／ｋｇ、または０．１～３ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．５～２ｍｇ／ｋｇである。投与は、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下でとすることができ、例えばターゲット部位の近位に投与することができる。上述の処置方法および用途における投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば治療応答）をもたらすように調整される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、数回の分割用量を経時で投与してもよく、または、治療状況の緊急事態が示されれば、用量を比例して低下もしくは増加させてもよい。一部の実施形態において、処置効果は、治療時に、例えば所定の時点において、モニタリングされる。非限定的な例として、本発明における処置は、処置開始後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０日目の少なくとも１日に、またはあるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０週目の少なくとも１週に、またはそれらを任意に組み合わせて、１日あたり約０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．２、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇの量の、本発明の薬剤の１日用量として、単回用量または２４、１２、８、６、４、もしくは２時間毎に分割用量を使用して、またはそれらを任意に組み合わせて使用して、提供することができる。

【0254】

典型的に、上述のような本発明のキメラタンパク質をコードするタンパク質または遺伝子は、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の形態で対象に投与される。この組成物に使用することができる薬学的に許容される担体は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分的なグリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂を含むが、これらに限定されない。対象への投与における使用では、組成物は、対象への投与のために製剤化され得る。本発明の組成物は、経口、非経口、吸入スプレー、経局所、経直腸、経鼻、経口腔、経膣、胸膜内、腹腔内で、または留置リザーバーを介して投与することができる。本明細書で使用されるものは、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病変内、および頭蓋内の注射または注入技術を含む。本発明の組成物の滅菌注射剤形は、水性または油性懸濁液とすることができる。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、当該技術において知られている技術に従って製剤化することができる。また、滅菌注射調製物は、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液として、非毒性で非経口に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌の注射可能な溶液または懸濁液とすることができる。使用できる許容可能なビヒクルおよび溶媒のなかには、水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌の固定油は、従来より、溶媒または懸濁媒体として使用されている。この目的のため、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の刺激の少ない固定油を使用することができる。脂肪酸、例えばオレイン酸およびそのグリセリド誘導体は、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油、特にそれらのポリオキシエチル化タイプと同様に、注射剤の調製に有用である。また、これらの油性溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例えばエマルションおよび懸濁液を含む薬学的に許容される投与剤形の製剤に一般的に使用される、カルボキシメチルセルロースまたは同様の分散剤を含有することができる。また、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎなどの他の一般的に使用される界面活性剤、および薬学的に許容される固体、液体、または他の投与剤形の製造に一般的に使用される他の乳化剤または生物学的利用能増強剤も、製剤の目的で使用することができる。本発明の組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液または溶液を含むが、これらに限定されない、任意の経口に許容される投与剤形で経口投与することができる。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトースおよびコーンスターチを含む。また、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムが、典型的に添加される。カプセル剤形での経口投与では、有用な希釈剤としては、例えばラクトースを含む。経口使用に水性懸濁液を必要とするとき、活性成分は乳化剤および懸濁剤と組み合わせられる。望ましい場合、特定の甘味料、香味料、または着色剤を添加することもできる。あるいは、本発明の組成物は、直腸投与のための坐剤の剤形で投与することができる。これらは、薬剤を、室温では固体であるが直腸温では液体であり、したがって直腸で融解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって、調製することができる。そうした物質は、カカオバター、ミツロウ、およびポリエチレングリコールを含む。また、本発明の組成物は、特に、眼、皮膚、または下部腸管の疾患を含む、局所の適用によって容易に到達可能である領域または器官を処置のターゲットに含むとき、経局所で投与することができる。適切な局所用製剤は、これらの領域または器官のそれぞれに対して容易に調製される。局所の適用では、組成物は、１つ以上の担体に懸濁または溶解した活性成分を含有する適切な軟膏剤に製剤化することができる。本発明の化合物の局所投与のための担体は、鉱物油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、および水を含むが、これらに限定されない。あるいは、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解した活性成分を含有する適切なローション剤またはクリーム剤に製剤化することができる。適切な担体は、鉱物油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルズワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水を含むが、これらに限定されない。下部腸管のための局所の適用は、直腸坐剤（上述を参照）または適切な浣腸剤で行うことができる。また、貼付剤も使用することができる。また、本発明の組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与することができる。そうした組成物は、医薬製剤の分野において周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、生物学的利用能を増強させるための吸収促進剤、フルオロカーボンおよび／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製することができる。例えば、この発明の医薬組成物に存在するキメラタンパク質は、１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）の単回使用バイアルのいずれかにおいて１０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供することができる。製品は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムニ水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および滅菌注射用水中において静脈内投与用に製剤化される。ｐＨは６．５に調整される。この発明の医薬組成物におけるキメラタンパク質の例の適切な投与量範囲は、約１ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２とすることができる。しかしながら、これらの計画は例であり、臨床試験において決定する必要のある医薬組成物における特定の抗体の親和性および許容性を考慮して、最適な計画およびレジメンを適応させることができるということが理解される。注射（例えば筋肉内、静脈内）のための本発明の医薬組成物は、滅菌バッファー水（例えば筋肉内では１ｍｌ）、および約１ｎｇ～約１００ｍｇ、例えば約５０ｎｇ～約３０ｍｇ以上、好ましくは約５ｍｇ～約２５ｍｇの本発明の阻害剤を含有するように調製することができる。

【0255】

本明細書において使用するように、「組合せ」という用語は、第１の薬剤を、さらなる（第２、第３などの）薬剤と共に提供するすべての投与形態を指すことが意図される。薬剤は、共に、別個に、または連続して、および任意の順で、投与することができる。本発明において、薬剤は、該薬剤が肺に到達することを可能にする任意の適切な方法を使用して対象に投与される。一部の実施形態において、薬剤は、対象に全身性投与される（すなわち、全身投与を介して）。したがって、一部の実施形態において、薬剤は、循環系に入って身体にわたって分布するように、対象に投与される。一部の実施形態において、薬剤は、局所投与によって、例えば肺への局所投与によって、対象に投与される。

【0256】

本明細書において使用するように、「組合せ」という用語は、第１の薬剤を、さらなる（第２、第３などの）薬剤と共に提供するすべての投与形態を指すことが意図される。本キメラタンパク質は、共に、別個に、または連続して、および任意の順で、投与することができる。本発明において、本キメラタンパク質は、薬剤が腎臓に到達することを可能にする任意の適切な方法を使用して対象に投与される。一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、対象に全身性投与される（すなわち、全身投与を介して）。したがって、一部の実施形態において、薬剤は、循環系に入って身体にわたって分布するように、対象に投与される。

【0257】

本明細書において使用するように、「組み合わせの処置」、「組み合わせの治療」、または「治療の組合せ」という用語は、１つを超える薬剤を使用する処置を指す。組み合わせの治療は二剤併用療法（ｄｕａｌ ｔｈｅｒａｐｙ）または二重療法（ｂｉ－ｔｈｅｒａｐｙ）とすることができる。

【0258】

一部の実施形態において、本発明は、腫瘍増殖の阻害に有効な化学物質である。化学治療剤の例は、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドパ、カルボクオン、メツレドパ、およびウレドパ；エチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｒｎｉｄｅ）、およびトリメチロールオメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（ｃａｒｎｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（その合成類似体アドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシンを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ－２１８９およびＣＢＩ－ＴＭＩを含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラヌスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、特にカリケアマイシン１１およびカリケアマイシン２１１、例えば、Ａｇｎｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：１８３－１８６（１９９４）を参照）；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；エスペラミシン；およびネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カニノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン（ｉｄａｎｒｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｒｎｙｃｉｎ）、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、キラマイシン、ロドルビシン、ストレプトムグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎物質、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｒｎｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デホファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エフロルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲナニウム；テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン（２，２’，２’’－ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉｅｔｈｙｌａｒｎｉｎｅ）；トリコテセン（特にＴ－２トキシン、ベルカリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロジリンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｍｔｏｌ）；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ類似体、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；カペシタビン；ならびに、上記いずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体を含む。また、この定義には、腫瘍におけるホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む）、ならびに、抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン、ならびに、上記いずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体も含まれる。

【0259】

本明細書において使用するように、「免疫治療剤」という用語は、本明細書において使用するように、免疫治療において使用することができる任意の種類の化合物を指す。免疫治療は、本明細書において使用するように、免疫応答を誘導、増強、または抑制することによって疾患を処置することである。「抗がん免疫治療」は、本明細書において使用するように、腫瘍を排除して破壊するように免疫系を刺激するものである。したがって、本明細書において使用するように、「抗がん免疫治療剤」という用語は、本明細書において使用するように、例えば、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、免疫アジュバント、免疫モジュレーター、抗体、改変免疫細胞、サイトカイン、免疫チェックポイント阻害分子、ウイルスなどの化合物を含む。

【0260】

本明細書において使用するように、「免疫モジュレーター」という用語は、本明細書において使用するように、抗原に対する免疫応答を所望の免疫応答に向けて調節する成分である。

【0261】

一部の実施形態において、本発明は、１つ以上の免疫調節剤であり得るさらなる薬剤を含む。本明細書において使用するように、「免疫治療剤」という用語は、がん細胞に対する身体の免疫応答を間接的もしくは直接的に増強、刺激、もしくは増加する、および／または他の抗がん治療の副作用を低下させる、化合物、組成物、または処置を指す。免疫治療は、このように、がん細胞への免疫系の応答を直接的もしくは間接的に刺激もしくは増強する、および／または他の抗がん剤に起因したものであり得る副作用を軽減する治療である。また、免疫治療は、当該技術において、免疫学的治療、生物学的治療、生物学的応答調節治療、および生物療法とも呼ばれる。当該技術において知られている一般的な免疫治療剤の例は、免疫チェックポイント阻害剤、サイトカイン、がんワクチン、モノクローナル抗体、および非サイトカインアジュバントを含むが、これらに限定されない。あるいは、免疫治療の処置は、所定量の免疫細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、Ｂ細胞など）を対象に投与することからなり得る。免疫治療剤は、非特異的であり得る、すなわち、免疫系を全体的にブーストして、人体ががん細胞の増殖および／もしくは拡散と戦う際により有効になることができるか、または、それらは特異的である、すなわち、がん細胞自体を標的とすることができ、免疫治療レジメンは非特異的および特異的免疫治療剤の使用を組み合わせてもよい。非特異的免疫治療剤は、免疫系を刺激するまたは間接的に向上させる物質である。非特異的免疫治療剤は、がんの処置のための主な治療として単独で、および主な治療に加えて、使用されており、その場合において、非特異的免疫治療剤は、他の治療（例えば、がんワクチン）の有効性を増強するためにアジュバントとして機能する。また、非特異的免疫治療剤は、この後者の場合において、他の治療の副作用、例えば、特定の化学治療剤によって誘導される骨髄抑制を低下させるように、機能することができる。非特異的免疫治療剤は、主要な免疫系細胞に作用し、二次応答、例えばサイトカインおよび免疫グロブリンの産生増加などを生じさせることができる。あるいは、薬剤はそれ自体がサイトカインを含むことができる。非特異的免疫治療剤は一般的に、サイトカインまたは非サイトカインアジュバントとして分類される。多くのサイトカインには、免疫系をブーストするように設計された全面的な非特異的免疫治療剤として、または他の治療に提供されるアジュバントとしてのいずれかにおいて、がんの処置における利用が見出されている。適切なサイトカインは、インターフェロン、インターロイキン、およびコロニー刺激因子を含むが、これらに限定されない。本発明に考慮されるインターフェロン（ＩＦＮ）は、一般的な型のＩＦＮ、ＩＦＮ－アルファ（ＩＦＮ－α）、およびＩＦＮ－ベータ（ＩＦＮ－β）を含む。ＩＦＮは、例えば、がん細胞の増殖を遅らせること、より正常な挙動の細胞へと発生を促すこと、および／または、抗原の産生を増加させて、免疫系ががん細胞を認識して破壊しやすくすることによって、がん細胞に直接的に作用することができる。また、ＩＦＮは、例えば、血管新生を遅らせること、免疫系をブーストすること、ならびに／または、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、およびマクロファージを刺激することによって、がん細胞に間接的に作用することができる。組換えＩＦＮ－アルファは、ロフェロン（Ｒｏｃｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびイントロンＡ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）として市販で入手可能である。本発明に考慮されるインターロイキンは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１１、およびＩＬ－１２を含む。市販で入手可能な組換えインターロイキンの例は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（ＩＬ－２；Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびＮｅｕｍｅｇａ（ＩＬ－１２；Ｗｙｅｔｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含む。Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ社（Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ）は現在、組換え型のＩＬ－２１を試験しており、これも本発明の組合せにおける使用について考慮される。本発明に考慮されるコロニー刺激因子（ＣＳＦ）は、サルグラモスチムを含む。１つ以上の増殖因子を用いた処置は、従来の化学治療を受けている対象において新たな血液細胞の生成を刺激するために有用になり得る。したがって、ＣＳＦを用いた処置は、化学治療に関連する副作用の低下に有用であり得、より高い用量の化学治療剤の使用を可能にし得る。免疫治療剤は、特異的または非特異的なターゲットを有することに加え、能動的となり得る、すなわち、身体自身の免疫応答を刺激することができ、または、受動的となり得る、すなわち、身体の外部で作製された免疫系成分を含むことができる。受動的な特異的免疫治療は、典型的に、がん細胞の表面上に見受けられる特定の抗原に特異的である、または、特定の細胞増殖因子に特異的である、１つ以上のモノクローナル抗体の使用に関与する。モノクローナル抗体は、多くの方法でがんの処置に使用することができ、例えば、特定の種類のがんに対する対象の免疫応答を増強し、血管新生に関与する増殖因子などの、特定の細胞増殖因子を標的とすることによってがん細胞の増殖を妨害し、または、化学治療剤、放射性粒子、もしくは毒素などの薬剤に連結もしくは結合した場合、がん細胞への他の抗がん剤の送達を増強することによって使用してもよい。本発明の組合せに含めるのに適している、がん免疫治療剤として現在使用されているモノクローナル抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、トシツモマブ（ベキサール）、セツキシマブ（Ｃ－２２５、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガミシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、およびＢＬ２２を含むが、これらに限定されない。他の例は、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えばイピリムマブ）、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤＬ２抗体（非限定的な例として、ニボルマブ（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１ １０６、ＯＰＤＩＶＯ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、Ｍｅｒｃｋ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ、ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＯＣＨＥ）の１つ以上から選択される）、抗ＴＩＭＰ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、または抗Ｂ７Ｈ６抗体を含む。一部の実施形態において、抗体は、Ｂ細胞枯渇抗体を含む。典型的なＢ細胞枯渇抗体は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体［例えばリツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ）、イブリツモマブチウキセタン（Ｂａｙｅｒ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、トシツモマブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、オクレリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）、オファツムマブ（ＨｕＭａｘ－ＣＤ２０、Ｇｅｍｎａｂ）、ＴＲＵ－０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ）、およびＩＭＭＵ－１０６（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）］、抗ＣＤ２２抗体［例えばエプラツズマブ、Ｌｅｏｎａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｚ００４）１０：５３Ｚ７－５３３４］、抗ＣＤ７９ａ抗体、抗ＣＤ２７抗体、または抗ＣＤ１９抗体（例えば、米国特許第７，１０９，３０４号明細書）、抗ＢＡＦＦ－Ｒ抗体（例えばベリムマブ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、抗ＡＰＲＩＬ抗体（例えば、抗ヒトＡＰＲＩＬ抗体、ＰｒｏＳｃｉ ｉｎｃ．）、および抗ＩＬ－６抗体［例えば、Ｄｅ Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ等、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００１）１６６：４３３４－４３４０、およびＳｕｚｕｋｉ等、Ｅｕｒｏｐ Ｊ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）２２（８）１９８９－１９９３に、以前に記載されているもの。これらは、参照することによって本明細書に全面的に援用される。］、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）および／またはＣＤ１３７（４－１ＢＢ）と４－１ＢＢリガンドの１つ以上との結合を増加および／または刺激する薬剤（非限定的な例として、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体））、ならびに、ＣＴＬＡ－４の活性、および／またはＣＴＬＡ－４とＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１つ以上との結合、および／またはＯＸ４０とＯＸ４０Ｌとの結合（非限定的な例として、ＧＢＲ ８３０（ＧＬＥＮＭＡＲＫ）、ＭＥＤＩ６４６９（ＭＥＤＩＭＭＵＮＥ））を遮断、低下、および／または阻害する薬剤を含むが、これらに限定されない。

【0262】

免疫治療の処置は、同種移植、特に造血幹細胞ＨＳＣを用いた同種移植からなり得る。また、免疫治療の処置はまた、Ｎｉｃｈｏｌａｓ Ｐ．Ｒｅｓｔｉｆｏ、Ｍａｒｋ Ｅ． Ｄｕｄｌｅｙ、およびＳｔｅｖｅｎ Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、「Ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ：ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ」、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ １２、Ａｐｒｉｌ ２０１２に記載されているように、養子免疫治療に基づくものであってもよい。養子免疫治療において、対象の循環リンパ球、ＮＫ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで単離、増幅され、対象に再投与される。活性化リンパ球またはＮＫ細胞は、特に、以前に血液または腫瘍サンプルから単離され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化（または「増殖」）された対象自身の細胞である。

【0263】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、１つ以上の炎症性疾患または状態を処置、調節、または予防するために使用される。炎症性疾患の非限定的な例は、尋常性ざ瘡、急性炎症、アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、アトピー性皮膚炎、自己免疫性疾患、自己炎症性疾患、常染色体劣性痙性失調症、気管支拡張症、セリアック病、慢性胆嚢炎、慢性炎症、慢性前立腺炎、大腸炎、憩室炎、家族性好酸球増加症（ｆｅ）、糸球体腎炎、グリセロールキナーゼ欠乏症、化膿性汗腺炎、過敏症、炎症、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、間質性膀胱炎、喉頭炎症性疾患、リー症候群、扁平苔癬、マスト細胞賦活化症候群、マスト細胞症、眼炎症性疾患、耳炎、疼痛、骨盤炎症性疾患、再灌流傷害、呼吸器疾患、再狭窄、リウマチ熱、関節リウマチ、鼻炎、サルコイドーシス、敗血症性ショック、珪肺症または他の塵肺症、移植片拒絶、結核、および血管炎を含む。

【0264】

一部の実施形態において、炎症性疾患は、自己免疫性の疾患または状態、例えば、多発性硬化症（例えば、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ））、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギランバレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群、移植拒絶（例えば、同種移植片拒絶の予防）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、または他の自己免疫性疾患などである。

【0265】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質が、移植片拒絶を処置、調節、または予防するために使用されるとき、キメラタンパク質は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）はリンカーであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は単量体シグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）はリンカーであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は単量体シグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである。

【0266】

一部の実施形態において、本キメラ薬剤は細胞内病原体を排除するために使用される。一部の態様において、本キメラ薬剤は１つ以上の感染症を処置するために使用される。

【0267】

一部の実施形態において、本キメラタンパク質は、ウイルス感染症（例えば、ＨＩＶおよびＨＣＶを含む）、寄生虫感染症（例えば、マラリアを含む）、および細菌感染症を処置する方法に使用される。一部の実施形態において、感染症は免疫抑制を誘導する。例えば、ＨＩＶ感染症は、多くの場合、感染した対象において免疫抑制をもたらす。したがって、本明細書の他の箇所に記載されているように、そのような感染症の処置は、一部の実施形態において、免疫阻害よりも免疫刺激を促進するように本キメラタンパク質によって免疫系を調節することに関与し得る。あるいは、本発明は免疫活性化を誘導する感染症を処置するための方法を提供する。例えば、腸蠕虫感染症は慢性的な免疫活性化と関連している。これらの実施形態において、そのような感染症の処置は、免疫刺激よりも免疫阻害を促進するように本キメラタンパク質によって免疫系を調節することに関与し得る。

【0268】

本明細書において使用するように、「共に投与」という用語は、同じ経路で、かつ同時にまたは実質的に同時に２つの活性成分を投与することを指す。「別個に投与」という用語は、異なる経路で、同時にまたは実質的に同時に２つの活性成分を投与することを指す。「連続して投与」という用語は、同一または異なる投与経路で、別の時点において２つの活性成分を投与することを指す。

【0269】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。例の実施形態において、キメラタンパク質は、ＯＸ－４０を発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。

【0270】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ＧＩＴＲを発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。例の実施形態において、キメラタンパク質は、４－１ＢＢを発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ＣＤ４０を発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。例の実施形態において、キメラタンパク質は、ＶＩＳＴＡを発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。例の実施形態において、キメラタンパク質は、ＣＳＦ１を発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ＩＬ－３４を発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。

【0271】

一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ＣＤ４７を発現する細胞（例えば、がん細胞または免疫細胞）を標的とし得る。一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ガレクチン－０９および／またはホスファチジルセリンを発現する細胞（例えば、がん細胞、ストローマ細胞、または免疫細胞）を標的とし得る。一部の実施形態において、本方法は、追加の薬剤に抵抗性である患者におけるキメラタンパク質による処置を提供し、このような「追加の薬剤」は、本明細書の他の箇所に記載されており、本明細書に記載する様々な化学治療剤を限定することなく含む。

【0272】

一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質が、がんを処置、調節、もしくは予防するために使用される、または免疫治療に使用されるとき、キメラタンパク質は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ａ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）はリンカーであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ｃ）は二量体もしくは三量体シグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである、または、Ｎ末端－（ｃ）－（ｂ）－（ａ）－Ｃ末端の一般構造を有し、式中、（ｃ）はシグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインであり、（ｂ）はリンカーであり、（ｂ）は機能的リンカーであり、（ａ）は二量体もしくは三量体シグナリングドメインおよび／もしくはターゲティングドメインである。

【0273】

本発明を以下の図面および実施例によってさらに例示する。しかしながら、これらの実施例および図面は、本発明の範囲を限定するようにいかようにも解釈されるべきでない。

【実施例】

【0274】

実施例１
目的
ＴＡＭＥ－ＩＴキメラタンパク質（図１）は、その「ターゲティングドメイン」がターゲットレセプターに結合することによって、目的の細胞を特異的に認識できるということを示す。

【0275】

材料および方法
タンパク質作製
ＬｅｎｔｉＸ細胞（ＨＥＫ－２９３Ｔ）を、０日目に、６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり７．１０^５細胞でプレーティングした。１日目に、１０％ＦＣＳを補った新しい２ｍＬのＤＭＥＭに培地を交換した。リポフェクタミン３０００を用いてＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードするｐｃＤＮＡ３．１プラスミド２μｇを細胞に遺伝子導入した。遺伝子導入後の４８時間において、上清を回収し、１０，０００ｇにおいて１０分間の遠心分離によって清澄化した。

【0276】

細胞染色
２．１０^５のＭｅｓｏ１３ヒト中皮腫細胞またはＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を、コントロール（ＥＦＧＰ）またはＴＡＭＥ－ＩＴ遺伝子導入ＨＥＫ細胞の上清と３０分間インキュベートした。２回のＰＢＳ洗浄後、細胞を抗ｈ４－１ＢＢＬ抗体または抗ｈＣＤ４０Ｌ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、それぞれカタログ番号３１１５０４および３１０８０６）で１５分間染色した。２回のＰＢＳ洗浄後、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ１フローサイトメーターを用いて細胞を分析した。

【0277】

結果
この実験は、ＰＤ－Ｌ１（図２Ａ）またはメソテリン（図２Ｂ）のいずれかを対象とするｎａｎｏｂｏｄｙを含むＴＡＭＥ－ＩＴ分子が、それぞれＰＤ－Ｌ１^＋細胞およびメソテリン^＋細胞を認識できることを示す。その結果、ターゲット細胞は、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子に含まれる、ここでは三量化４－１ＢＢＬまたはＣＤ４０Ｌである「シグナリングドメイン」で新たにコーティングされる。さらなる実験において、この「ターゲティングドメイン」の固定が、同じ表面タンパク質を認識する他の抗体と競合することを示し、したがって、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子がそのターゲットに特異的であることを示した（データは示さず）。図２Ｃに示すように、ターゲティングドメインを欠く分子はターゲット細胞を認識しないので、この新たなコーティングにはターゲティングドメインの存在が絶対的に必要である。図２Ｄにおいて、ＴＡＭＥ－ＩＴ構造が、抗ＰＤ－Ｌ１ｎａｎｏｂｏｄｙの代わりにヒトＰＤ－１細胞外ドメインを用いた競合分子よりも優れていることを示している。また、この特異的ターゲティングが、ＣＴＬＡ－４に対するｓｃＦｖを「ターゲティングドメイン」として用いることによって達成でき（図２Ｅ）、したがって、このドメインが様々な種類のターゲティング分子（例えば、ｎａｎｏｂｏｄｙ、ｓｃＦＶ）から作製できることを裏付けるということを示した。

【0278】

実施例２
目的
膜結合性ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質が、その「シグナリングドメイン」によって、対向する免疫細胞にシグナルを送る能力を保持していることを示す。

【0279】

材料および方法
タンパク質作製
ＬｅｎｔｉＸ細胞（ＨＥＫ－２９３Ｔ）を、０日目に、６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり７．１０^５細胞でプレーティングした。１日目に、１０％ＦＣＳを補った新しい２ｍＬのＤＭＥＭに培地を交換した。リポフェクタミン３０００を用いて当該コンストラクトをコードするｐｃＤＮＡ３．１プラスミド２μｇを細胞に遺伝子導入した。遺伝子導入後の４８時間において、上清を回収し、１０，０００ｇにおいて１０分間の遠心分離によって清澄化した。

【0280】

樹状細胞（ＤＣ）の分化
健康なドナーのヒト単球を、２％ヒトアルブミン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ、５００ＩＵ／ｍＬ）、およびインターロイキン－４（ＩＬ－４、５０ｎｇ／ｍＬ）を添加したＲＰＭＩ－１６４０培地中にて６ウェルプレートにおいて１ｍＬあたり２．１０^６細胞および１ｃｍ^２あたり１．１０^６細胞でプレーティングした。５日間の培養（３７℃、５％ＣＯ２）後、分化したＤＣを採取し、カウントした。

【0281】

ＤＣ成熟アッセイ
１００，０００個の分化したＤＣを、当該分子を含むＨＥＫ細胞の上清と直接的に、または、これらの上清でこれまでに染色し、共培養の前に洗浄した腫瘍細胞とのいずれかで、９６ウェルプレートにおいて４８時間インキュベートした。

【0282】

細胞染色
インキュベート時間終了時に、単球由来ＤＣをフラッシングによって回収した。２回のＰＢＳ洗浄後、これらを、抗ｈＣＤ８０、抗ｈＣＤ８３、抗ｈＣＤ８６、および抗ｈＨＬＡ－ＤＲ抗体で３０分間染色した。２回のＰＢＳ洗浄後、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターを用いて細胞を分析した。ＣＤ８０、ＣＤ８３、およびＣＤ８６の発現を、ＤＣに相当するＨＬＡ－ＤＲ＋細胞画分において判定した。

【0283】

結果
この実験は、ＴＡＭＥ－ＩＴ分子が、可溶形態（図３Ａ）または細胞結合形態（図３Ｂ）のいずれかにおいて、また、三量体ｈ４－１ＢＢＬ（図３Ａ）または三量体ｈＣＤ４０Ｌ（図３Ｂ～図３Ｃ）ドメインのいずれかを含むとき、ヒトＤＣの成熟を活性化できることを示す。ＴＡＭＥ－ＩＴ誘導によるＤＣ成熟は、腫瘍細胞（Ｍｅｓｏ１３）が極めて免疫抑制的であるにもかかわらず生じる（図３Ｃ）。病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）との相乗作用は、ＴＡＭＥ－ＩＴとＬＰＳとの両方でＤＣを共処理したときに観察されたように、示されている（図３Ｃ）。全体として、シグナリングドメインが十分に機能し、ヒト骨髄細胞を容易に活性化できることを示す。

【0284】

実施例３
目的
ＴＡＭＥ－ＩＴ分子が、腫瘍溶解性ウイルス（ＯＶ）にコードされることによってベクター化され、ＯＶ感染細胞によって効率的に作製されることができることを示す。

【0285】

材料および方法
ウイルス作製
ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードする遺伝子を、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）インディアナ株ゲノムに、ＶＳＶ－ＧリーディングフレームとＶＳＶ－Ｌリーディングフレームの間の逆遺伝学法によって挿入した。ＭＶＡ－Ｔ７に１時間感染させて、ＶＳＶ－Ｎ、ＶＳＶ－Ｐ、ＶＳＶ－Ｌコードベクター、およびＴＡＭＥ－ＩＴ配列を含む抗ゲノムＶＳＶベクターを遺伝子導入したＢＨＫ－２１細胞において、ウイルスを回復させた。組換えＶＳＶを、０．２２μｍのろ過とＢＨＫ－２１細胞でのさらなる数回の継代とによって、上清から回収した。同様に、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードする遺伝子を、相同組換えによってワクシニアウイルスの腫瘍溶解性株のゲノムに挿入した。

【0286】

細胞感染
ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を、６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり７．１０^５細胞でプレーティングし、２ｍＬ中ＭＯＩ＝０．１において一晩の感染で翌日に感染させた。

【0287】

その後、上清を回収し、１０，０００ｇにおいて３０分間の遠心分離を行った。１．５ｍＬの上清をＶｉｖａｓｐｉｎ、５，０００Ｄａにおいてさらに１０倍に濃縮した。その後、２０μＬを５Ｘレムリ／β－メルカプトエタノールと混合し、９５℃において５分間加熱した。サンプルをポリアクリルアミドゲルに添加し、２００Ｖにおいて４０分間泳動させた。その後、タンパク質をＰＶＤＦ膜に１００Ｖで１時間転写した。膜をＴＢＳ／ＢＳＡ中において１時間ブロッキングし、その後、ＴＢＳ／ＢＳＡ中においてＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ ＸＴ－ＨＲＰでタンパク質を検出した。最後に、ＣｌａｒｉｔｙウエスタンＥＣＬ基質およびＢｉｏＲａｄ Ｃｈｅｍｉｄｏｃイメージャーを用いて、化学発光によって、膜を画像化した。

【0288】

結果
この実験は、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質の配列が腫瘍溶解性ＶＳＶのゲノムに挿入され、ＶＳＶ感染腫瘍細胞によって効率的に作製されることできるということを示す（図４）。並行した実験において、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードする腫瘍溶解性ＶＶを用いたときに、同様の結果を得た。

【0289】

実施例４
目的
機能的リンカーがコードする抗原がＣＤ４細胞およびＣＤ８Ｔ細胞にプロセシングされて提示され得るかどうかを判定することによって、「機能的リンカー」の役割を示す。

【0290】

材料および方法
細胞感染
Ｍｅｓｏ３４およびＭｅｓｏ１３ヒト中皮腫細胞を、０日目に、９６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり１０^４細胞でプレーティングし、１日目に、異なるＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードするＶＳＶにＭＯＩ＝０．１で感染させた。２日目に、試験した条件に応じて、２．１０^５個のＤＣを共培養に加えた。３日目に、ＤＣをフラッシングし、Ｖ底９６ウェルプレートにおいて８．１０^５個のＴ細胞クローン（ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原に特異的なＣＤ４またはＣＤ８）と共にブレフェルジンＡの存在下で６時間プレーティングした。

【0291】

細胞染色
インキュベート時間終了時に、細胞をフラッシングによって回収した。２回のＰＢＳ洗浄後、これらを抗ｈＣＤ３抗体で３０分間染色した。２回のＰＢＳ洗浄後、細胞を４％パラホルムアルデヒドにおいて固定し、ＰＢＳ＋０．１％サポニンで透過処理し、抗ｈＩＦＮγ抗体で３０分間染色した。２回のＰＢＳ＋０．１％サポニンでの洗浄後、ＢＤ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターを用いて細胞を分析した。Ｔ細胞をＣＤ３＋細胞としてゲーティングし、細胞内ＩＦＮγ産生について分析した。

【0292】

結果
ＣＤ４Ｔ細胞クローンを用いた第１の実験は、「機能的リンカー」を含むＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質が、それをコードするＶＳＶに感染した腫瘍細胞によって効率的に作製されることを示す（図５）。これらの分子は、ＶＳＶ－ＴＡＭＥ－ＩＴに感染した腫瘍細胞をこれまでに貪食したＤＣによって、さらにプロセシングされ、ＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示される。その後、これらのＤＣはＴＡＡ特異的ＣＤ４Ｔ細胞を活性化する。これは、「機能的リンカー」がこのリンカーにコードされた抗原ペプチドを認識するＣＤ４Ｔ細胞の特異的活性化を可能にすることを示す。これらの結果は、異なるドナーのＤＣを用いたさらなる２つの実験において裏付けられた（データは示さず）。

【0293】

第２の実験は、「機能的リンカー」のＴＡＡペプチドも、（ｉ）ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードするＶＳＶに感染した腫瘍細胞、および（ｉｉ）これまでにＶＳＶ－ＴＡＭＥ－ＩＴに感染した腫瘍細胞を貪食したＤＣによって、効率的にプロセシングされ、ＭＨＣクラスＩ分子上でＴＡＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞に提示されることを示す（図６）。これらの結果は、異なるドナーのＤＣを用いたさらなる２つの実験において裏付けられた（データは示さず）。

【0294】

実施例５
目的
ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質による様々な種類のヒトリンパ球の活性化を示す。

【0295】

材料および方法
ＣＤ８Ｔ細胞活性化
０日目に、ＰＤ－Ｌ１^＋ヒトメラノーマ細胞を９６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり１０，０００細胞の濃度で播種した。１日目に、ヒトポリクローナルＣＤ８Ｔ細胞を、これまでに抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８でコーティングした活性化ビーズありまたはなしで、腫瘍細胞に、２：１、１：１、１：２の割合で添加した。一部の条件において、抗ＰＤ１抗体ニボルマブまたは精製ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質ＫＮ０３５－ＴＡＡ－ｔｈ４－１ＢＢＬを混合物に添加した。腫瘍細胞のコンフルエンスを、タイムラプス顕微鏡によって５日間分析した。

【0296】

ＮＫ細胞活性化
ＮＫ活性化分析では、１０^４個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を０日目に９６ウェルプレートにプレーティングした。１日目に、細胞をＶＳＶ－ＫＮ０３５－ＴＡＡ－ｔｈ４－１ＢＢＬにＭＯＩ＝０．１で１８時間感染させた後、ブレフェルジンＡの存在下で１０^５個の拡大ヒトＮＫ細胞と６時間インキュベートした。インキュベート時間終了時に、ＮＫ細胞をフラッシングによって回収した。２回のＰＢＳ洗浄後、これらを抗ｈＣＤ１０７ａ抗体で３０分間染色した。２回のＰＢＳ洗浄後、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ１フローサイトメーターを用いて細胞を分析した。

【0297】

結果
ＰＤ－Ｌ１^＋ヒトメラノーマ細胞を、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質ＫＮ０３５－ＴＡＡ－ｔｈ４－１ＢＢＬの存在下または非存在下で、活性化ポリクローナルＣＤ８Ｔ細胞と共培養した（図７Ａ）。この実験は、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質の存在がＣＤ８Ｔ細胞によるメラノーマ細胞の殺傷を増加させたことを示し、これは、Ｔリンパ球に対するその免疫活性化特性を示している。同様に、このＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質をコードする腫瘍溶解性ＶＳＶを用いてヒト乳がん細胞を感染させたとき、共培養したナチュラルキラー細胞はコントロール条件と比較して活性化が増強された（図７Ｂ）。

【0298】

さらに、ＫＮ４１はリンパ球Ｔを大きく活性化させる（図８Ａ～図８Ｃ）。これらの異なる結果は、ＴＡＭＥ－ＩＴタンパク質が抗腫瘍免疫の場面で異なる種類のヒトＴリンパ球を活性化する特性を有することを示す。

【0299】

参考文献
本願において、様々な参考文献によって、本発明が属する技術の現状が記載されている。これらの参考文献の開示は、本明細書において言及することによって本開示に援用される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【国際調査報告】