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▶ ヘーフェイ ティージー イミュノファーマ カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-06
(54)【発明の名称】抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/30 20060101AFI20240730BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240730BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240730BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240730BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240730BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240730BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240730BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240730BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240730BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20240730BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240730BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20240730BHJP
【ＦＩ】
C07K16/30 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61P35/00
G01N33/53 D
G01N33/531 A
C12N15/13
C12P21/08
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024505497
(86)(22)【出願日】2022-12-07
(85)【翻訳文提出日】2024-01-29
(86)【国際出願番号】 CN2022137233
(87)【国際公開番号】W WO2023124857
(87)【国際公開日】2023-07-06
(31)【優先権主張番号】202111629693.7
(32)【優先日】2021-12-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523346629
【氏名又は名称】ヘーフェイ ティージー イミュノファーマ カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100120891
【弁理士】
【氏名又は名称】林 一好
(74)【代理人】
【識別番号】100165157
【弁理士】
【氏名又は名称】芝 哲央
(74)【代理人】
【識別番号】100205659
【弁理士】
【氏名又は名称】齋藤 拓也
(74)【代理人】
【識別番号】100126000
【弁理士】
【氏名又は名称】岩池 満
(74)【代理人】
【識別番号】100185269
【弁理士】
【氏名又は名称】小菅 一弘
(72)【発明者】
【氏名】ティエン ジーガン
(72)【発明者】
【氏名】カオ グオシュアイ
(72)【発明者】
【氏名】シャオ ウェイファ
(72)【発明者】
【氏名】スン ルイ
(72)【発明者】
【氏名】スン ハオユー
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064CA10
4B064CA20
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA91X
4B065AB02
4B065AC14
4B065BA08
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB01
4C085BB11
4C085CC02
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4H045AA11
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は抗体及びその使用を提供し、該抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３、及び軽鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～６の中から選ばれた少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。本発明によって製造される抗体はＭＩＣＡまたはＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した関連疾患を効果的に治療または予防することができ、例えばＮＫ細胞による腫瘍の殺傷を促進する。
【選択図】図なし
【選択図】図なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体または抗原結合断片であって、重鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３、
軽鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～６のうちから選ばれた少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む、ことを特徴とする抗体または抗原結合断片。
【請求項2】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項3】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、（ｉ）前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列及びその保存的修飾形態のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％相同性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、（ｉｉ）前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列及びその保存的修飾形態のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％相同性を有するアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１または２に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項4】
前記重鎖可変領域は、（ｉ）から選ばれる重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相同性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、（ｉｉ）から選ばれる軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項5】
前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項３または４に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項6】
重鎖と軽鎖を含み、前記重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項7】
前記抗体はモノクローナル抗体、マウス由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト由来抗体、Ｆｖ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨまたはＦ（ａｂ’）２である、ことを特徴とする請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
前記抗体またはその抗原結合断片はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列の中の少なくとも一部と結合できる、ことを特徴とする請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
免疫複合体であって、治療薬及び請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を含み、前記抗体または抗原結合断片は治療薬にカップリングされる、ことを特徴とする免疫複合体。
【請求項10】
請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は請求項９に記載の免疫複合体を含む、ことを特徴とする組成物。
【請求項11】
請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を含む、ことを特徴とするＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキット。
【請求項12】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキットの製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項13】
請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は請求項９に記載の免疫複合体及び／又は請求項１０に記載の組成物を含む、ことを特徴とする薬物。
【請求項14】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療するための薬物の製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は請求項９に記載の免疫複合体及び／又は請求項１０に記載の組成物の使用であって、任意選択に、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、
任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、使用。
【請求項15】
請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片をコードする配列を含む核酸であって、任意選択に、前記核酸はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３で示されるヌクレオチド配列を有する、ことを特徴とする核酸。
【請求項16】
請求項１５に記載の核酸を含む、ことを特徴とする組換えベクターまたは形質転換体。
【請求項17】
請求項１５に記載の核酸、請求項１６に記載の発現ベクターまたは形質転換体を担持するか、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を発現する、ことを特徴とする組換え細胞。
【請求項18】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の治療及び／又は予防における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項９に記載の免疫複合体、請求項１０に記載の組成物、請求項１３に記載の薬物、請求項１５に記載の核酸、請求項１６に記載の組換えベクターまたは形質転換体または請求項１７に記載の組換え細胞の使用。
【請求項19】
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、ことを特徴とする請求項１８に記載の使用。
【請求項20】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を治療及び／又は予防する方法であって、１）請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、
２）請求項９に記載の免疫複合体、
３）請求項１０に記載の組成物、
４）請求項１３に記載の薬物、
５）請求項１５に記載の核酸、
６）請求項１６に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び
７）請求項１７に記載の組換え細胞のうちの少なくとも１つを被験者に投与するステップを含む、ことを特徴とするＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を治療及び／又は予防する方法。
【請求項21】
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、ことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを診断する方法であって、１）請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、
２）請求項１５に記載の核酸、
３）請求項１６に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び
４）請求項１７に記載の組換え細胞のうちの少なくとも１つを使用して測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出し、
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの検出結果に基づいて、前記測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量を判定するステップを含む、ことを特徴とする方法。
【請求項23】
前記測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量は疾患の最低基準以上であることは、測定対象であるサンプルがＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っている患者に由来する指示である、ことを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、ことを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項25】
１）請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）請求項１５に記載の核酸、
３）請求項１６に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び
４）請求項１７に記載の組換え細胞のうちの少なくとも１つの、被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかの診断における使用。
【請求項26】
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、ことを特徴とする請求項２５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明はバイオ医薬分野に属し、具体的に、抗体及びその使用に関し、より具体的に、抗体または抗原結合断片、免疫複合体、組成物、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキット、キットの製造における前記抗体または抗原結合断片の使用、薬物、薬物の製造における前記抗体または抗原結合断片及び／又は免疫複合体及び／又は組成物の使用、核酸、組換えベクターまたは形質転換体に関する。
【背景技術】
【0002】
ＮＫＧ２ＤはＮＫ細胞でホモ二量体を形成し、４つのＤＡＰ１０分子と六量体を形成する。ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢなどのリガンドと結合した後、ＮＫＧ２Ｄ六量体はＮＫ細胞内に活性化シグナルを伝達し、ＮＫ細胞からＩＦＮ－γなどの細胞因子の分泌を促進し、リガンドを発現する標的細胞を殺傷する。ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢは自己遺伝子によってコードされるタンパク質であり、正常な組織、細胞では発現しなく、細胞が悪性転移して腫瘍細胞になると、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢは腫瘍細胞の表面を発現する。ＮＫ細胞はＮＫＧ２Ｄ－ＭＩＣＡ／Ｂ相互作用によって腫瘍を識別して殺傷する。
【0003】
腫瘍は、マトリックスメタロプロテアーゼを媒介したＭＩＣＡ／Ｂの剥離など、様々なメカニズムを介して細胞表面のＭＩＣＡ／Ｂ発現を下方制御する。ＭＩＣＡ／ＢはＩ型膜貫通タンパク質であり、その細胞外セグメントにはα１、α２、α３の３つの構造ドメインが含まれ、α１、α２構造ドメインを介してＮＫＧ２Ｄと結合する。マトリックスメタロプロテアーゼの作用下で、ＭＩＣＡ／Ｂの細胞外セグメントのアミノ酸の大部分（α１、α２構造ドメイン及びα３構造ドメインの一部を含む）が腫瘍細胞の表面から脱落する。ＮＫＧ２Ｄは細胞表面に残っているα３構造ドメインの一部と結合できないため、腫瘍はＮＫ細胞の免疫監視を逃れることができる。
【0004】
研究によると、α３構造ドメインに結合したＭＩＣＡ抗体は、腫瘍表面からのＭＩＣＡの脱落を抑制し、さらにＮＫＧ２Ｄ－ＭＩＣＡ／Ｂを媒介したＮＫ細胞の識別を促進し、腫瘍の免疫逃逸を抑制するため、α３構造ドメインと結合できるＭＩＣＡ抗体の開発は腫瘍の治療に重要な価値がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本願は、発明者が以下の事実と問題に対する発見と認識に基づいて作成されたものであり、
ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢは腫瘍細胞にしか発現しないため、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢを標的とする特異的抗体を製造することは潜在的な腫瘍の治療手段である。発明者らは、ＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡ－Ｆｃ）を抗原として、マウスを免疫した後、複数回のスクリーニングにより、抗ヒトＭＩＣＡとＭＩＣＢ免疫グロブリンを含むマウスを得て、引き続きサブクローンのスクリーニングを行い、目的の抗体を取得し、検出により、前記抗体はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと結合でき、さらに、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとＮＫ細胞活化性受容体ＮＫＧ２Ｄとの結合を促進し、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷を促進する。
ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢは腫瘍細胞にしか発現しないため、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢを標的とする特異的抗体を製造することは潜在的な腫瘍の治療手段である。発明者らは、ＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡ－Ｆｃ）を抗原として、マウスを免疫した後、複数回のスクリーニングにより、抗ヒトＭＩＣＡとＭＩＣＢ免疫グロブリンを含むマウスを得て、引き続きサブクローンのスクリーニングを行い、目的の抗体を取得し、検出により、前記抗体はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと結合でき、さらに、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとＮＫ細胞活化性受容体ＮＫＧ２Ｄとの結合を促進し、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷を促進する。
【課題を解決するための手段】
【0006】
このため、本発明の第１の態様では、本発明は抗体または抗原結合断片を提供する。本発明の実施例によれば、重鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３、軽鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～６の中から選ばれた少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。本発明の実施例による抗体または抗原結合断片は、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
ＧＦＳＬＴＴＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。
ＩＷＴＤＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＳＳＶＳＳＳＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＳＴＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＨＱＹＨＲＳＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
ＧＦＳＬＴＴＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。
ＩＷＴＤＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＳＳＶＳＳＳＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＳＴＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＨＱＹＨＲＳＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
【0007】
本発明の第２の態様では、本発明は免疫複合体を提供する。本発明の実施例によれば、第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片を含む。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質のα３構造ドメインと結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0008】
本発明の第３の態様では、本発明は組成物を提供する。本発明の実施例によれば、第１の態様に記載の抗体及び／又は第２の態様に記載の免疫複合体を含む。以上のように、本発明の実施例の前記抗体または抗原結合断片、免疫複合体はいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、上記物質を含む組成物は同様な効果を有し、よりさらに、前記組成物は、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を効果的に促進でき、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0009】
本発明の第４の態様では、本発明は、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキットを提供する。本発明の実施例によれば、前記キットは、第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片を含む。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、さらに、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するキットを製造するために使用でき、前記キットはＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを効果的に検出することができ、前記キットは、生物学的サンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質分子の定性的または定量的検出などの科学研究に使用でき、要件を満たす生物学的サンプルを得て、さらなる研究を行うようにし、前記生物学的サンプルは動物組織、血液、血清、細胞などを含む。
【0010】
本発明の第５の態様では、本発明はキットの製造における第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片の使用を提供する。本発明の実施例によれば、前記キットはＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用される。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、さらに、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するキットを製造するために使用できる。
【0011】
本発明の第６の態様では、本発明は薬物を提供する。本発明の実施例によれば、第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は第２の態様に記載の免疫複合体及び／又は第３の態様に記載の組成物を含む。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片、免疫複合体、組成物にいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できる物質が存在するため、上記物質を含む薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、さらにＮＫ細胞が腫瘍細胞を殺傷するなどの作用を促進し、前記薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が顕著である。
【0012】
本発明の第７の態様では、本発明は薬物の製造における第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は第２の態様に記載の免疫複合体及び／又は第３の態様に記載の組成物の使用を提供する。本発明の実施例によれば、前記薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療するために使用される。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片、免疫複合体、組成物にいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できる物質が存在するため、上記物質を含む薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、さらにＮＫ細胞が腫瘍細胞を殺傷するなどの作用を促進し、前記薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が顕著である。
【0013】
本発明の第８の態様では、本発明は核酸を提供する。本発明の実施例によれば、前記核酸は第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片をコードする。本発明の実施例による核酸でコードされる抗体または抗原結合断片ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、前記核酸でコードされたタンパク質はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0014】
本発明の第９の態様では、本発明は、組換えベクターまたは形質転換体を提供する。本発明の実施例によれば、第８の態様に記載の核酸を含む。前記発現ベクターは、前記核酸分子に操作可能に接続される選択可能な制御配列を含む。前記制御配列は宿主中での前記核酸分子の発現を指導できる１つまたは複数の制御配列である。本発明実施例による組換えベクターは適切な宿主細胞に前記抗体または抗原結合断片を効率よく発現することができ、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0015】
本発明の第１０の態様では、本発明は組換え細胞を提供する。本発明の実施例によれば、前記組換え細胞は第８の態様に記載の核酸、第９の態様に記載の組換えベクターまたは形質転換体を担持し、または第１の態様に記載の抗体または抗原結合断片を発現する。前記組換え細胞は前記発現ベクターをトランスフェクションまたは形質転換することによって得られる。本発明の実施例によれば、前記組換え細胞は適切な条件で上記抗体を効果的に発見でき、前記抗体ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0016】
本発明の第１１の態様では、本発明は、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の治療及び／又は予防における以上のような抗体またはその抗原結合断片、免疫複合体、組成物、薬物、核酸、組換えベクターまたは形質転換体または組換え細胞の使用を提供する。以上のように、前記抗体またはその抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、さらにＮＫ細胞が腫瘍細胞を殺傷するなどの作用を促進するため、前記抗体またはその抗原結合断片、及び適切な条件で得られた前記抗体またはその抗原結合断片を発現できる物質はいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を効果的に予防及び／又は治療することができる。
【0017】
本発明の第１２の態様では、本発明は、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。本発明の実施例によれば、前記方法は、１）上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）上記に記載の免疫複合体、３）上記に記載の組成物、４）上記に記載の薬物、５）上記に記載の核酸、６）上記に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び７）上記に記載の組換え細胞の中の少なくとも１つを被験者に投与するステップを含む。以上のように、前記抗体またはその抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、さらにＮＫ細胞が腫瘍細胞を殺傷するなどの作用を促進し、このため、前記抗体またはその抗原結合断片、及び適切な条件で得られた前記抗体またはその抗原結合断片を発現できる物質、または前記抗体またはその抗原結合断片を含む物質はいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療することができ、本発明の実施例による方法はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を効果的に予防及び／又は治療することができる。
【0018】
本発明の第１３の態様では、本発明は、被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを診断する方法を提供する。本発明の実施例によれば、前記方法は、１）上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）上記に記載の核酸、３）上記に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び４）上記に記載の組換え細胞中の少なくとも１つを使用して測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出し、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの検出結果に基づいて、前記測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量を判定するステップを含む。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢが複数種の疾患を媒介するため、被験者由来の生物学的サンプルに含まれる前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのレベルに基づいて前記被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを判断することができる。なお、上記物質を利用して被験者の測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量を監視してもよく、即ち上記物質はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っている被験者の疾患の病期分類に使用してもよく、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の予後評価に使用してもよい。
【0019】
本発明の第１４の態様では、本発明は、被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかの診断における、１）上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）上記に記載の核酸、３）上記に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び４）上記に記載の組換え細胞の中の少なくとも１つの使用を提供する。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢが複数種の疾患を媒介するため、被験者由来の生物学的サンプルに含まれる前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのレベルに基づいて前記被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを判断することができる。
【0020】
本発明の付加的な態様と利点は以下の説明から部分的に示され、部分的に以下の説明から明らかになるか、本発明の実践を通じて了解することができる。
【図面の簡単な説明】
【0021】
本発明の上記及び／又は付加的な態様と利点は、以下の図面と組み合わせた実施例の説明から明らかになり、理解しやすく、その中で、
【図1】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するＥＬＩＳＡ結果図である。
【図2】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡα３構造ドメインに結合するＥＬＩＳＡ結果図である。
【図3】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡに結合する結果図である。
【図4】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢに結合する結果図である。
【図5】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１に結合する結果図である。
【図6】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢに結合する結果図である。
【図7】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がメラノーマＡ３７５細胞に結合する結果図である。
【図8】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体が肺癌ＮＣＩ－Ｈ１２９９細胞に結合する結果図である。
【図9】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＫ５６２細胞に結合する結果図である。
【図10】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体のＷｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ検出に用いる結果図である。
【図11】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＮＫＧ２Ｄ－ＦｃのＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ細胞への結合を促進する結果図である。
【図12】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＮＫ９２細胞のＡ３７５細胞への殺傷を促進する結果図である。
【図13】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡα３＊００２変異体に結合する結果図である。
【図14】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡα３＊００４変異体に結合する結果図である。
【図15】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡα３＊００５変異体に結合する結果図である。
【図16】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡα３＊００８変異体に結合する結果図である。
【図17】本発明の具体的な実施形態によるＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＢα３＊００５変異体に結合する結果図である。
【発明を実施するための形態】
【0022】
以下、本発明の実施例を詳細に説明し、前記実施例の例は図面に示される。以下、図面を参照して説明する実施例は例示であり、本発明を解釈するために使用され、本発明を制限するためのものとして理解することができない。
【0023】
なお、「第１の」、「第２の」といった用語は目的を説明するためのものにすぎず、相対的に重要性を示す若しくは暗に示す、または技術的特徴を明示する数を暗に示すとみなすことはできない。したがって、「第１の」、「第２の」と限定している特徴は１つまたは複数の該特徴を含むことを明示するまたは暗に示すことができ、本発明の説明において、特に明確かつ具体的に限定している場合を除き、「複数」の概念は少なくとも２つ、例えば２つまたは３つである。
【0024】
本明細書で開示された範囲の終点と任意の値は該正確な範囲または値に限定されず、これらの範囲または値は、これらの範囲または値に近い値を含むと理解されるべきである。数値範囲について、各範囲の終点値間、各範囲の終点値と個々の点値間、及び個々の点値間は互いに組み合わせて１つまたは複数の新しい数値範囲が得られ、これらの数値範囲は本明細書で具体的に開示されると見なされるべきである。
【0025】
本発明の理解を容易にするために、以下にいくつかの技術用語と科学用語を具体的に定義する。本明細書において明示的に定義されている場合を除き、本明細書で使用される他のすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般的に理解する意味を有する。アミノ酸残基の略語は、当分野で使用されている２０個の一般的なＬ－アミノ酸の１つを指す標準的な３文字及び／又は１文字コードである。
【0026】
本明細書では、可変領域の一部の領域のアミノ酸組成と配列順序がより高い変化の程度を持っており、高変領域（Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ、ＨＶＲ）と呼ばれ、高変領域は抗原と抗体が結合する位置であるため、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ、ＣＤＲ）とも呼ばれる。重鎖可変領域と軽鎖可変領域にいずれも３つのＣＤＲ領域がある。
【0027】
本明細書では、「抗体」は、以上のように、本発明の抗体は全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）であるか、抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）のみを含むか、機能に影響を与えるように修飾されてもよい。本発明は修飾されたグリコシル化モードを有する抗ＭＩＣＡ抗体を含む。一部の使用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するように修飾することは有用であるか、またはオリゴ糖鎖にフコシャリド部分が存在しなく、例えば抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）機能を高める抗体である。他の一部の使用では、ガラクトシダーゼ修飾を行い、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を変化することができる。
【0028】
本明細書に使用される「抗原結合断片」という用語は、特にＦｖ、ｓｃＦｖ（ｓｃは一本鎖を指す）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’の抗体の一部の断片、ｓｃＦｖ－Ｆｃ断片または二重抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、または化学修飾により、またはリポソームに組み込むことにより半減期を増加させることができる任意の断片を指し、前記化学修飾は、例えばポリエチレングリコール（「ポリエチレングリコール化、ＰＥＧ化」）（Ｆｖ－ＰＥＧ、ｓｃＦｖ－ＰＥＧ、Ｆａｂ－ＰＥＧ、Ｆ（ａｂ’）２－ＰＥＧまたはＦａｂ’－ＰＥＧのポリエチレングリコール化断片と呼ばれる）（「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールである）などのポリ（アルキレン）グリコールを添加することを指し、前記断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ結合活性を有する。好ましくは、前記抗原結合断片は、由来抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域の部分配列により軽、重鎖可変領域の部分配列を構成するかまたは含有し、前記部分配列は由来抗体と同じ結合特異性と十分な親和力を保持するのに十分であり、及び／又はＭＩＣＢに対して、好ましくは、少なくともその由来抗体の親和力の１／１００であり、より好ましい形態では、少なくとも１／１０である。このような抗原結合断片は少なくとも５個のアミノ酸を含み、好ましくその由来する抗体配列の１０、１５、２５、５０及び１００個の連続的なアミノ酸を含む。
【0029】
本明細書では、抗体の生体受容性をさらに高めるために、抗体をヒト化することもでき、即ち、前記抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体である。「キメラ抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技術を利用し、ある種（例えばマウス）からのモノクローナル抗体の定常領域アミノ酸配列を他の種（例えば人）からの抗体の定常領域に置き換えた組換え抗体を指す。「ヒト化抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技術を利用し、ある種（例えばマウス）からのモノクローナル抗体の定常領域と可変領域の非ＣＤＲ（Ｆｖ骨格領域（ＦＲ））アミノ酸配列をすべて他の種（例えば人）からの抗体の定常領域と可変領域の非ＣＤＲアミノ酸配列に置き換えた組換え抗体を指す。即ち、１つの抗体の定常領域がヒト化されたときキメラ抗体と呼ばれ、定常領域と可変領域の非ＣＤＲアミノ酸配列がすべてヒト化されたときヒト化抗体と呼ばれる。ヒト化の方法は通常の抗体工学技術を参照して行うことができるが、ここで説明を省略する。
【0030】
相同性は、本発明において、２つ以上のヌクレオチド配列を比較するために、［第１の配列中の対応する位置のヌクレオチドと同じヌクレオチドの数を除算］することにより第１の配列と第２の配列との間の「配列相同性」の割合を算出することができる。第２の配列中のヌクレオチドから［１番目の配列中のヌクレオチドの総数］を引いて、次に［１００％］をかけ、２番目のヌクレオチド配列中の各ヌクレオチドの欠損、挿入、置換または添加は第１のヌクレオチド配列に対して単一のヌクレオチド（位置）上の違いであると考える。
【0031】
または、標準的な設定を使用し、配列比較に使用される既知のコンピュータアルゴリズム、例えばＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔ ｖ２．０を使用し、２つまたは複数のヌクレオチド配列間の配列の同一性程度を計算する。
【0032】
配列の同一性程度を決定するためのいくつかの他の技術、コンピュータアルゴリズム及び設定は、例えばＷＯ０４／０３７９９９、ＥＰ０９６７２８４、ＥＰ１０８５０８９、ＷＯ００／５５３１８、ＷＯ００／７８９７２、ＷＯ９８／４９１８５及びＧＢ２３５７７６８－Ａに記載される。
【0033】
ポリペプチドについて、「（実質）相同性」という用語は、２つのポリペプチドまたはその指定配列が最適な照合及び比較（ここで、ヌクレオチドの適切な挿入または欠損）の時点で少なくとも約８０％のアミノ酸、通常、少なくとも約９０％～９５％、且つより好ましく少なくとも約９８％～９９．５％のアミノ酸は同様である。
【0034】
２つの配列間の相同性％は最適な照合配列の場合、これらの配列が共有する同じ位置の数によって変化（即ち相同性％＝同じ位置数／合計位置数×１００）し、最適な照合系は、２つの配列の最適な照合を達成するために導入する必要がある空の桁数及び各空の桁の長さを考慮して決定される。２つの配列の間の配列比較及び同一性の百分率の測定は、以下の非制限的な実施例で説明するように、数学アルゴリズムを使用して完成することができる。
【0035】
抗体活性（少なくとも９５％の活性を保つ）に実質的に影響を及ぼすことなく、当業者は、本発明の配列を１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上）のアミノ酸に置き換え、添加及び／又は欠損させ、前記抗体またはその機能性断片の配列の変異体を取得することができる。それらは本発明が保護する範囲内に含まれると考えられる。可変領域で同様の性質を持つアミノ酸を置き換える。本発明に記載の変異体の配列は参照配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の一致性（または相同性）を有することができる。本発明に記載の配列の一致性は配列解析ソフトウェアを使用して測定することができる。例えばデフォルトのパラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。本発明で言及されたアミノ酸配列はいずれもＮ端からＣ端まで示される。
【0036】
本明細書では、「保存的修飾形態のアミノ酸配列」は、該アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に著しく影響を与えたり、変化したりしないアミノ酸修飾を指し、該修飾はアミノ酸の置き換え、増加及び欠損を含む。修飾は、例えば定点変異誘導やＰＣＲを媒介した変異誘導などの標準技術によって本発明の抗体に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、その中のアミノ酸残基が類似の側鎖を持つアミノ酸残基で切り替えられる置き換えである。本分野では、類似の側鎖を持つアミノ酸残基ファミリーを決定した。これらのファミリーは塩基性側鎖を持つアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を持つアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、帯電していない極性側鎖を持つアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を持つアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β－分岐側鎖を持つアミノ酸（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香側鎖を持つアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。このため、本発明の抗体のＣＤＲ領域における１つまたは複数のアミノ酸残基は同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で代替されることができ、且つ、ここで説明する機能測定方法を用いて変化された抗体の保持機能をテストする。保存的修飾は、数の上で１つまたは２つ以下であることが好ましい。
【0037】
本明細書では、「操作可能に接続」とは、外来遺伝子をベクターに接続することで、ベクター内の制御素子、例えば転写制御配列や翻訳制御配列などは、その期待される外来遺伝子の転写と翻訳を調節する機能を発揮することができることを意味する。
【0038】
本発明の一態様では、本発明は抗体または抗原結合断片を提供し、重鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列、軽鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～６またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列の中から選ばれた少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６で示されるいずれかのアミノ酸配列に保存的修飾された後に、該アミノ酸配列を含む抗体または抗原結合断片の結合特性に大きく影響を与え、変化しないため、本発明の実施例によるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６の中の少なくとも１つ及び／又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６で示されるアミノ酸配列に保存的修飾された後に得られたアミノ酸配列を含む少なくとも１つの抗体または抗原結合断片は、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した関連疾患を効果的に治療または予防することができ、例えばＮＫ細胞による腫瘍の殺傷を促進する。
ＧＦＳＬＴＴＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。
ＩＷＴＤＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＳＳＶＳＳＳＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＳＴＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＨＱＹＨＲＳＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
ＧＦＳＬＴＴＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。
ＩＷＴＤＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＳＳＶＳＳＳＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＳＴＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＨＱＹＨＲＳＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
【0039】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、上記抗体または抗原結合断片は以下のような付加的な技術的特徴の少なくとも１つを含むことができる。
【0040】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【0041】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記重鎖可変領域ＣＤＲをコードする遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５～１７で示されるヌクレオチド配列の中の少なくとも１つを有する。
ＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）。
ＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）。
ＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）。
ＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）。
ＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）。
ＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）。
【0042】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記軽鎖可変領域ＣＤＲをコードする遺伝子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８～２０で示されるヌクレオチド配列の中の少なくとも１つを有する。
ＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）。
ＴＣＣＡＣＣＴＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）。
ＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）。
ＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）。
ＴＣＣＡＣＣＴＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）。
ＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）。
【0043】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、ここで、（ｉ）前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列及びその保存的修飾形態のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％相同性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、（ｉｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列及びその保存的修飾形態のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％相同性を有するアミノ酸配列を含む。
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＩＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＭＩＷＴＤＧＴＴＤＹＮＡＡＦＩＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＡＤＤＴＧＩＹＹＣＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＱＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＧＧＳＧＴＳＹＳＬＴＶＳＮＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＩＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＭＩＷＴＤＧＴＴＤＹＮＡＡＦＩＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＡＤＤＴＧＩＹＹＣＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＱＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＧＧＳＧＴＳＹＳＬＴＶＳＮＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
【0044】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記重鎖可変領域をコードする遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されるヌクレオチド配列を有する。
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＴＡＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＡＧＴＡＴＣＣＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）。
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＴＡＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＡＧＴＡＴＣＣＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）。
【0045】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記軽鎖可変領域をコードする遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されるヌクレオチド配列を有する。
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）。
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）。
【0046】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記重鎖可変領域は（ｉ）から選ばれる重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は（ｉｉ）から選ばれる軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【0047】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、Ｆｃ領域をさらに含み、前記Ｆｃ領域の少なくとも一部はマウス由来抗体、ヒト由来抗体、霊長目由来抗体またはその突然変異体の少なくとも１つに由来する。
【0048】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｆｃ領域の少なくとも一部はマウス由来、ヒト由来、霊長目由来ＩｇＧ抗体またはその突然変異体に由来する。
【0049】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｆｃ領域の少なくとも一部はマウス由来ＩｇＧ２ａ抗体、ヒト由来、霊長目由来ＩｇＧ１抗体またはその突然変異体に由来する。
【0050】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｆｃ領域の少なくとも一部はマウス由来ＩｇＧ２ａ抗体またはその突然変異体に由来する。
【0051】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｆｃ領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されるアミノ酸配列を有する。
ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）。
ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）。
【0052】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記抗体または抗原結合断片は重鎖と軽鎖を含み、前記重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列を含む。
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＩＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＭＩＷＴＤＧＴＴＤＹＮＡＡＦＩＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＡＤＤＴＧＩＹＹＣＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）。
ＱＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＧＧＳＧＴＳＹＳＬＴＶＳＮＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＩＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＭＩＷＴＤＧＴＴＤＹＮＡＡＦＩＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＡＤＤＴＧＩＹＹＣＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）。
ＱＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＧＧＳＧＴＳＹＳＬＴＶＳＮＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。
【0053】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記抗体または抗原結合断片はＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。
【0054】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記抗体はモノクローナル抗体、マウス由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、人抗体、Ｆｖ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨまたはＦ（ａｂ’）２である。
【0055】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記抗体またはその抗原結合断片はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に結合できる。
ＭＧＬＧＰＶＦＬＬＬＡＧＩＦＰＦＡＰＰＧＡＡＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＱＴＦＨＶＳＡＶＡＡＡＡＩＦＶＩＩＩＦＹＶＲＣＣＫＫＫＴＳＡＡＥＧＰＥＬＶＳＬＱＶＬＤＱＨＰＶＧＴＳＤＨＲＤＡＴＱＬＧＦＱＰＬＭＳＤＬＧＳＴＧＳＴＥＧＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
ＭＧＬＧＰＶＦＬＬＬＡＧＩＦＰＦＡＰＰＧＡＡＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＱＴＦＨＶＳＡＶＡＡＡＡＩＦＶＩＩＩＦＹＶＲＣＣＫＫＫＴＳＡＡＥＧＰＥＬＶＳＬＱＶＬＤＱＨＰＶＧＴＳＤＨＲＤＡＴＱＬＧＦＱＰＬＭＳＤＬＧＳＴＧＳＴＥＧＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
【0056】
本発明の他の態様では、本発明は、治療薬及び上記抗体または抗原結合断片を含む免疫複合体を提供し、前記抗体または抗原結合断片は前記治療薬にカップリングされる。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質のα３構造ドメインと結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好であり、前記抗体または抗原結合断片が治療薬にカップリングした後に得られた免疫複合体は同様に上記機能を有する。
【0057】
本発明の更なる態様では、本発明は、上記に記載の抗体またはその抗原結合断片及び／又は上記に記載の免疫複合体を含む組成物を提供する。以上のように、本発明の実施例の前記抗体または抗原結合断片、免疫複合体はいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、食品組成物または薬物組成物などの上記物質を含む組成物は同様な効果を有し、よりさらに、前記組成物は、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を効果的に促進でき、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0058】
本発明の具体的な実施例によれば、前記組成物は薬学的に許容できるベクターをさらに含む。
【0059】
注意すべき点として、前記組成物は、本発明の目的を達成するために共同で機能する限り、時間及び／又は空間的に分離された組み合わせを含む。例えば、前記組成物に含まれる成分は、全体として被験者に投与してもよいし、別々に被験者に投与してもよい。前記組成物に含まれる成分は別々に被験者に投与される場合、各成分は同時にまたは順次被験者に投与されてもよい。
【0060】
本発明の一態様では、本発明はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキットを提供し、前記キットは上記に記載の抗体または抗原結合断片を含む。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、さらに、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するキットを製造するために使用でき、前記キットはＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを効果的に検出することができ、前記キットは、生物学的サンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質分子の定性的または定量的検出などの科学研究に使用でき、より具体的に、ウェスタンブロッティング、免疫沈降などのＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質とその抗体特異的結合性能を利用して検出するキットなどに使用できる。これらのキットは、拮抗薬、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ抗体または薬物参照材料、タンパク質精製カラム、免疫グロブリン親和精製緩衝剤、細胞の測定希釈剤の中のいずれか１種または複数種を含むことができる。ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ抗体は異なるタイプの診断テストに使用でき、例えば体外または体内で様々な疾患または薬物、毒素またはその他のタンパク質などの存在を検出することができる。例えば被験者の血清または血液を検出することによって、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ関連疾患をテストすることができる。
【0061】
本発明の他の態様では、本発明はキットの製造における上記に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用を提供し、前記キットはＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用される。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できるため、前記抗体はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、さらに、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するキットを製造するために使用でき、前記キットはＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを効果的に検出することができ、前記キットは、生物学的サンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質分子の定性的または定量的検出などの科学研究に使用でき、より具体的には、ウェスタンブロッティング、免疫沈降などのＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢタンパク質とその抗体特異的結合性能を利用して検出するキットなどに使用できる。これらのキットは、拮抗薬、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ抗体または薬物参照材料、タンパク質精製カラム、免疫グロブリン親和精製緩衝剤、細胞の測定希釈剤の中のいずれか１種または複数種を含むことができる。ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ抗体又は抗原断片は異なるタイプの診断テストに使用でき、例えば体外または体内で様々な疾患または薬物、毒素またはその他のタンパク質などの存在を検出することができる。例えば被験者の血清または血液を検出することによって、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢ関連疾患をテストすることができる。
【0062】
本発明の更なる態様では、本発明は上記に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は上記に記載の複合体及び／又は上記に記載の組成物を含む薬物を提供し、前記薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療するために使用される。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片、免疫複合体、組成物にいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合できる物質が存在するため、上記物質を含む薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、前記薬物はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が顕著である。
【0063】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、上記薬物は以下の付加的な技術的特徴の少なくとも１つを含んでもよい。
【0064】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患である。
【0065】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌の中の少なくとも１つである。
【0066】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、薬学的に許容できるベクターと有効量の前記抗体活性成分を含む。
【0067】
本明細書に使用されるように、用語「有効量」または「有効投与量」とは、人及び／又は動物に機能または活性をもたらすことができ、且つ人及び／又は動物に許容される量を指す。
【0068】
本明細書に使用されるように、「薬学的に許容できる」成分は、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激およびアレルギー）がなく、人及び／又は哺乳動物に適した物質、即ち合理的な利益／リスク比を有する物質である。「薬学的に許容できるベクター」という用語は、各種の賦形剤と希釈剤を含む治療薬の投与に用いられるベクターを指す。
【0069】
本発明の薬物は安全で有効な量の本発明の活性成分及び薬学的に許容できるベクターを含む。このようなベクターは、食塩水、緩衝液、グルコース、水、グリセリン、エタノール、及びその組み合わせを含む（これらに制限されない）。通常、薬物製剤は投与方式に合わせるべきであり、本発明の薬物の剤形は注射剤、経口製剤（錠剤、カプセル、経口液）、経皮剤、徐放剤である。例えば生理食塩水またはグルコースや他の補助剤を含む水溶液は通常の方法によって製造することができる。前記薬物は無菌条件下で製造することができることが望ましい。
【0070】
本発明に記載の活性成分の有効量は投与のパターンや治療対象である疾患の重症度などによって変化する。好ましい有効量の選択は、当業者が様々な要因に基づいて決定することができる（例えば臨床試験に合格する）。前記要因は、例えば、バイオアベイラビリティ、代謝、半減期などの前記の活性成分の薬物動態パラメータ、患者が治療する疾患の重症度、患者の体重、患者の免疫状况、投与経路などを含むが、これらに限定されない。例えば、治療状況の切実な要求により、１日に何回も別々の投与量を与えたり、それに比例して投与量を減らしたりすることができる。
【0071】
本発明に記載の薬学的に許容できるベクターは、水、食塩水、リポソーム、脂質、タンパク質、タンパク質－抗体複合体、ペプチド類物質、セルロース、ナノゲル、またはその組み合わせを含むが（これらに限定されない）。ベクターの選択は投与方式に合わせるべきであり、これらは当業者が既知のものである。
【0072】
本発明の一態様では、本発明は、上記に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする配列を含む核酸を提供する。本発明の実施例による核酸でコードされる抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、前記核酸でコードされるタンパク質はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0073】
本発明の具体的な実施例によれば、前記核酸はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３で示されるヌクレオチド配列を有する。
【0074】
前記抗体または抗原結合断片をコードする重鎖の遺伝子は以下で示されるヌクレオチド配列を有する。
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＴＡＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＡＧＴＡＴＣＣＴＣＴＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＴＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＧＴＴＴＧＣＧＧＧＧＡＴＡＣＣＡＣＴＧＧＴＡＧＣＴＣＴＧＴＣＡＣＣＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＡＴＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＧＣＡＧＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＴＡＣＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＡＴＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＴＣＡＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＴＣＡＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣＣＡＧＡＧＴＡＴＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＡＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＴＴＧＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＴＧＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＣＣＣＴＡＣＴＡＴＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＣＣＴＧＴＡＡＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＣＣＣＡＴＣＴＧＴＧＴＴＴＡＴＴＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＡＴＴＡＡＧＧＡＣＧＴＣＣＴＣＡＴＧＡＴＴＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＡＴＣＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＣＣＣＡＧＡＣＧＴＡＣＡＧＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＡＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＣＡＧＣＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＡＴＣＧＧＧＡＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＴＴＧＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＣＴＴＴＧＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＡＡＡＴＧＴＡＡＧＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＣＣＧＣＴＣＣＡＡＴＡＧＡＧＡＧＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＧＴＡＧＴＧＴＴＣＧＡＧＣＣＣＣＣＣＡＧＧＴＡＴＡＣＧＴＡＣＴＧＣＣＡＣＣＣＣＣＴＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＡＧＧＴＧＡＣＡＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＧＴＣＧＡＡＴＧＧＡＣＴＡＡＴＡＡＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＧＡＡＣＴＧＡＡＴＴＡＴＡＡＡＡＡＴＡＣＣＧＡＡＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＧＴＣＣＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＣＧＡＡＡＣＴＣＴＴＡＣＴＣＣＴＧＣＡＧＴＧＴＴＧＴＧＣＡＣＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＡＣＡＡＣＣＡＴＣＡＴＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＴＡＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＡＧＴＡＴＣＣＴＣＴＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＴＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＧＴＴＴＧＣＧＧＧＧＡＴＡＣＣＡＣＴＧＧＴＡＧＣＴＣＴＧＴＣＡＣＣＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＡＴＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＧＣＡＧＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＴＡＣＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＡＴＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＴＣＡＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＴＣＡＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＣＣＡＧＡＧＴＡＴＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＡＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＴＴＧＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＴＧＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＣＣＣＴＡＣＴＡＴＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＣＣＴＧＴＡＡＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＣＡＡＴＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＣＣＣＡＴＣＴＧＴＧＴＴＴＡＴＴＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＡＴＴＡＡＧＧＡＣＧＴＣＣＴＣＡＴＧＡＴＴＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＡＴＣＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＣＣＣＡＧＡＣＧＴＡＣＡＧＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＴＣＧＴＧＡＡＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＣＡＧＣＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＡＴＣＧＧＧＡＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＴＴＧＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＣＴＴＴＧＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＡＡＡＴＧＴＡＡＧＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＣＣＧＣＴＣＣＡＡＴＡＧＡＧＡＧＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＡＧＧＴＡＧＴＧＴＴＣＧＡＧＣＣＣＣＣＣＡＧＧＴＡＴＡＣＧＴＡＣＴＧＣＣＡＣＣＣＣＣＴＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＡＧＧＴＧＡＣＡＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＧＴＣＧＡＡＴＧＧＡＣＴＡＡＴＡＡＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＧＡＡＣＴＧＡＡＴＴＡＴＡＡＡＡＡＴＡＣＣＧＡＡＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＧＴＣＣＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＣＧＡＡＡＣＴＣＴＴＡＣＴＣＣＴＧＣＡＧＴＧＴＴＧＴＧＣＡＣＧＡＧＧＧＧＣＴＴＣＡＣＡＡＣＣＡＴＣＡＴＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。
【0075】
前記抗体または抗原結合断片をコードする軽鎖の遺伝子は以下で示されるヌクレオチド配列を有する。
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＡＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＴＡＧＴＡＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＴＴＣＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＴＴＡＣＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＣＧＡＣＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＴＧＧＣＧＴＡＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＡＡＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＴＡＣＧＡＡＣＧＧＣＡＴＡＡＣＴＣＣＴＡＴＡＣＡＴＧＴＧＡＧＧＣＴＡＣＣＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＣＡＣＣＴＣＡＣＣＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）。
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＡＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＴＡＧＴＡＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＴＴＣＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＴＴＡＣＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＣＧＡＣＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＴＧＧＣＧＴＡＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＡＡＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＡＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＴＡＣＧＡＡＣＧＧＣＡＴＡＡＣＴＣＣＴＡＴＡＣＡＴＧＴＧＡＧＧＣＴＡＣＣＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＣＡＣＣＴＣＡＣＣＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）。
【0076】
説明する必要がある点として、本発明の明細書と請求の範囲で言及された核酸に対して、当業者が、実際には相補二本鎖のいずれか一方、または両方を含むことを理解すべきである。便宜上で、本明細書と請求の範囲では、多くの場合、１本の鎖しか示されていないが、実際にはそれと相補的なもう１本の鎖も公開されている。また、本願における核酸配列はＤＮＡ形式またはＲＮＡ形式を含み、一方が公開されているということは、他方も公開されていることを意味する。
【0077】
本発明の他の態様では、本発明は上記に記載の核酸を含む組換えベクターまたは形質転換体を提供する。前記組換えベクターは選択可能な制御配列を含んでもよく、前記制御配列は前記核酸分子に操作可能に接続される。前記制御配列は宿主中での前記核酸分子の発現を指導できる１つまたは複数の制御配列である。本発明の実施例で言及される組換えベクターは適切な宿主細胞に前記抗体または抗原結合断片を効率よく発現することができ、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0078】
組換えベクターはクローンベクターでも、発現ベクターでもよく、前記核酸と市販のベクター（例えばプラスミドまたはウイルスベクター）に操作可能に接続されることによって得られ、本発明における組換えベクターは特に制限されず、よく使用されているプラスミド、例えばｐＳｅＴａｇ２、ＰＥＥ１４、ｐＭＨ３を使用することができる。
【0079】
本発明の更なる態様では、本発明は組換え細胞を提供し、前記組換え細胞に上記に記載の核酸、組換えベクターまたは形質転換体を担持するか、上記に記載の抗体または抗原結合断片を発現する。前記組換え細胞は前記発現ベクターをトランスフェクションまたは形質転換することによって得られる。本発明の実施例によれば、前記組換え細胞は適切な条件で上記抗体を効果的に発見でき、前記抗体ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、前記抗体または抗原結合断片は、ＮＫ細胞による腫瘍の殺傷促進など、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療する効果が良好である。
【0080】
注意すべき点として、本発明に記載の組換え細胞は特に限定されず、原核細胞、真核細胞またはバクテリオファージであってもよい。前記原核細胞は大腸菌、枯草菌、ストレプトコッカスまたはグロテスク変形菌などであってもよい。前記真核細胞はパスツールピキア酵母、醸造酵母、分裂酵母、木カビなどの真菌、草原軍虫などの昆虫細胞、タバコなどの植物細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、骨髄腫細胞などの哺乳動物細胞を含むことができる。幾つかの実施例において、本発明に記載の組換え細胞は、哺乳動物細胞であることが好ましく、ＢＨＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＣＯＳ細胞を含み、且つ動物生殖細胞、受精卵または胚性幹細胞を含まない。
【0081】
説明する必要がある点として、本願の明細書に記載の「適切な条件」とは、本願に記載の組換え抗体の発現に適する条件を指す。当業者が理解しやすくなるように、組換え抗体の発現に適する条件は、適切な形質転換またはトランスフェクション方式、適切な形質転換またはトランスフェクション条件、健康的な宿主細胞状態、適切な宿主細胞密度、適切な細胞培養環境、適切な細胞培養時間を含む。「適切な条件」は特に限定されず、当業者は実験室の具体的な環境に応じて、最適な前記組換え抗体発現の条件を最適化することができる。
【0082】
本発明の一態様では、本発明はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の治療及び／又は予防における、上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、免疫複合体、組成物、薬物、核酸、組換えベクターまたは形質転換体または組換え細胞の使用を提供する。以上のように、前記抗体またはその抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、さらにＮＫ細胞が腫瘍細胞を殺傷するなどの作用を促進し、このため、前記抗体またはその抗原結合断片、及び適切な条件で得られた前記抗体またはその抗原結合断片を発現できる物質はいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を効果的に予防及び／又は治療することができる。
【0083】
本発明の具体的な実施例によれば、上記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の治療及び／又は予防における使用は、以下の付加的な技術的特徴の中の少なくとも１つを含んでよい。
【0084】
本発明の具体的な実施例によれば、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患である。
【0085】
本発明の具体的な実施例によれば、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌の中の少なくとも１種である。
【0086】
本発明の他の態様では、本発明はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。本発明の具体的な実施例によれば、前記方法は、１）上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）上記に記載の免疫複合体、３）上記に記載の組成物、４）上記に記載の薬物、５）上記に記載の核酸、６）上記に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び７）上記に記載の組換え細胞の中の少なくとも１つを被験者に投与するステップを含む。以上のように、前記抗体またはその抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、さらに、ＮＫＧ２ＤとＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢとの結合を促進し、さらにＮＫ細胞が腫瘍細胞を殺傷するなどの作用を促進し、このため、前記抗体またはその抗原結合断片、及び適切な条件で得られた前記抗体またはその抗原結合断片を発現できる物質、または前記抗体またはその抗原結合断片を含む物質はいずれもＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を効果的に予防及び／又は治療することができる。本発明の実施例による方法はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を効果的に予防及び／又は治療することができる。
【0087】
本発明の具体的な実施例によれば、上記方法以下の付加的な技術的特徴の中の少なくとも１つをさらに含んでよい。
【0088】
本発明の具体的な実施例によれば、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患である。
【0089】
本発明の具体的な実施例によれば、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌の中の少なくとも１種である。
【0090】
本発明の更なる態様では、本発明は被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを診断する方法を提供する。本発明の具体的な実施例によれば、前記方法は、１）上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）上記に記載の核酸、３）上記に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び４）上記に記載の組換え細胞中の少なくとも１つを使用して測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出し、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの検出結果に基づいて、前記測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量を判定する。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、このため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢが複数種の疾患を媒介するため、被験者由来の生物学的サンプルに含まれる前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのレベルに基づいて前記被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを判断することができる。なお、上記物質を利用して被験者の測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量を監視してもよく、即ち上記物質はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っている被験者の疾患の病期分類に使用してもよく、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の予後評価にも使用されてもよい。
【0091】
本発明の具体的な実施例によれば、上記方法は以下の付加的な技術的特徴の中の少なくとも１つをさらに含んでよい。
【0092】
本発明の具体的な実施例によれば、前記測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢの含有量は疾患の最低基準以上であることは、測定対象であるサンプルがＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っている患者に由来する指示である。前記最低基準の値は、多数の前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っている個体と多種の健康な個体の測定対象であるサンプル中のＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣの含有量に対する差の比較分析、及び検証によって決められる。
【0093】
本発明の具体的な実施例によれば、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患である。
【0094】
本発明の具体的な実施例によれば、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌の中の少なくとも１種である。
【0095】
本発明の具体的な実施例によれば、前記測定対象であるサンプルは組織、細胞、血液、血清、汗、糞便及び尿の少なくとも１つを含む。
【0096】
本発明の他の態様では、本発明は、被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかの診断における、１）上記に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）上記に記載の核酸、３）上記に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び４）上記に記載の組換え細胞の中の少なくとも１つの使用を提供する。以上のように、本発明の実施例の抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのα３構造ドメインと効果的に結合でき、このため、前記抗体または抗原結合断片はＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するために使用でき、ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢが複数種の疾患を媒介するため、被験者由来の生物学的サンプルに含まれる前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢのレベルに基づいて前記被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかを判断することができる。
【0097】
本発明の具体的な実施例によれば、上記使用は以下の付加的な技術的特徴の中の少なくとも１つをさらに含んでよい
【0098】
本発明の具体的な実施例によれば、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患である。
【0099】
本発明の具体的な実施例によれば、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌の中の少なくとも１種である。
【0100】
以下、実施例を具体的に説明する。実施例に具体的な技術または条件が示されない場合、当該分野の文献に記載されている技術または条件に従って、または製品の明細書に従って実行する必要がある。用いられる試薬または機器にメーカーが示されない場合、市販によって購入できる従来の製品である。
【0101】
実施例１ 抗体の製造
本実施例は主に以下の内容を含む。
ヒトＭＩＣＡに対するマウス由来モノクローナル抗体を生成し、次に、精製した組換えＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡ－Ｆｃ）（組換えＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質、アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示す）を抗原とし、Ｂａｌｂ／ｃマウス（９週齢、上海ＳＬＡＣから購入、体重２０ｇ程度）を免疫する。マウスの免疫には、精製抗原と完全フロイントアジュバントを使用して３回免疫し、免疫後のマウスを尾静脈から瀉血した後、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーで検出することにより、抗ヒトＭＩＣＡ免疫グロブリンを有するマウスを得る。
ＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）。
本実施例は主に以下の内容を含む。
ヒトＭＩＣＡに対するマウス由来モノクローナル抗体を生成し、次に、精製した組換えＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡ－Ｆｃ）（組換えＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質、アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示す）を抗原とし、Ｂａｌｂ／ｃマウス（９週齢、上海ＳＬＡＣから購入、体重２０ｇ程度）を免疫する。マウスの免疫には、精製抗原と完全フロイントアジュバントを使用して３回免疫し、免疫後のマウスを尾静脈から瀉血した後、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーで検出することにより、抗ヒトＭＩＣＡ免疫グロブリンを有するマウスを得る。
ＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）。
【0102】
得られた抗ヒトＭＩＣＡ免疫グロブリンを含むマウスから抗ＭＩＣＡ免疫グロブリンの含有量が最も高いマウスを選択し、その脾細胞とマウス骨髄腫細胞ＳＰ２／０細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１５８１）を融合させ、ハイブリドーマを製造する具体的な実験操は本分野の通常の操作である。融合後のハイブリドーマ細胞を利用して抗体をスクリーニングすることによって、マウスモノクローナル抗体を得る。
【0103】
候補ハイブリドーマ細胞の総数を１０６個に培養し、８００ｒｐｍ条件下で１０分間遠心分離して細胞を収集し、Ｔｒｉｚｏｌキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でハイブリドーマ細胞の総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを鋳型として、ｃＤＮＡライブラリー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を逆転写合成し、また、ｃＤＮＡを鋳型としてハイブリドーマ細胞に含まれる抗体に対応する可変領域核酸配列をＰＣＲ増幅する。ＰＣＲ増幅反応に使用されるプライマー配列は抗体可変領域の第１のフレーム領域またはシグナルペプチド領域と定常領域に相補的である（Ｌａｒｒｉｃｋ、Ｊ．Ｗ．、ｅｔ ａｌ．、（１９９０）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２、１２１－１２８和Ｃｏｌｏｍａ、Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．、（１９９１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１１、１５２－１５６）。５０μＬの反応系に、それぞれｃＤＮＡ２μＬ、１０×ＰＣＲ緩衝液５μＬ、上流及び下流プライマー２μＬ（５μｍｏｌ）、ｄＮＴＰ２μＬ、Ｔａｑ酵素１μＬ（Ｔａｋａｒａ、Ｅｘ Ｔａｑ）、Ｈ２Ｏ ３８μＬ；９５℃で５ｍｉｎ前変性し、温度サイクルに入り、ＰＣＲ増幅を行う。反応条件は、９４℃で３０Ｓ変性し、５８℃で４５Ｓアニールし、７２℃で５０Ｓ延長し、合計３２サイクルであり、次に７２℃で７ｍｉｎ延長する。増幅産物をシークエンシングした後、マウスモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）と軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）ヌクレオチド配列を得る。マウスモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）と軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）アミノ酸配列は以下のとおりである。
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＴＡＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＡＧＴＡＴＣＣＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）。
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）。
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＩＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＭＩＷＴＤＧＴＴＤＹＮＡＡＦＩＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＡＤＤＴＧＩＹＹＣＶＲＫＧＨＧＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＱＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＧＧＳＧＴＳＹＳＬＴＶＳＮＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＴＡＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＡＧＴＡＴＣＣＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）。
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）。
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【0104】
実施例２ ＭＩＣＡ抗体のＥＬＩＳＡ結合実験
ＥＬＩＳＡ実験は実施例１で得られたＭＩＣＡ抗体の結合特性を検出するために使用される。上記ＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡ－Ｆｃ）を９６ウェルプレートにコーティングし、抗体添加後のシグナルの強さは抗体とＭＩＣＡの結合特性を判断するために使用される。
ＥＬＩＳＡ実験は実施例１で得られたＭＩＣＡ抗体の結合特性を検出するために使用される。上記ＭＩＣＡ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡ－Ｆｃ）を９６ウェルプレートにコーティングし、抗体添加後のシグナルの強さは抗体とＭＩＣＡの結合特性を判断するために使用される。
【0105】
ＰＢＳ緩衝液でＭＩＣＡ－Ｆｃ融合タンパク質（アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示す）を１μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルの体積で９６ウェルプレートに添加し、４℃で一晩放置する。９６ウェルプレート中のＰＢＳ緩衝液を吸引除去し、ＰＢＳＴ（ｐＨ７．２ ＰＢＳ含有量０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０）緩衝液でプレートを６回洗浄した後、２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／１０％ＢＳＡを加え、３７℃で２ｈインキュベートして閉鎖する。閉鎖液を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄した後、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡで測定対象であるＭＩＣＡ抗体を適切な濃度に希釈し、次に、３７℃で１ｈインキュベートする。反応系を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄した後、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡでＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）標識抗マウス抗体二次抗体（Ｄｒ．Ｄｅｒ、ＢＡ１０５０）を希釈し、３７℃条件下で１ｈインキュベートする。インキュベートが終了した後ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄した後、８０μＬ／ウェルのＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）を添加し、室温で３ｍｉｎインキュベートし、８０μＬ／ウェルの４Ｍ硫酸を添加して反応を終止する。マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｍｍで吸光度値を読み取る。具体的な実験結果を図１に示し、本発明の抗体がＭＩＣＡに結合できることを示す。
ＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）。
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【0106】
実施例３ ＭＩＣＡ抗体のＥＬＩＳＡ結合実験
ＥＬＩＳＡ実験はＭＩＣＡ抗体の結合特性を検出するために使用される。ＭＩＣＡ細胞外領域α３構造ドメインＦｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡα３－Ｆｃ）を９６ウェルプレートにコーティングし、抗体添加後のシグナルの強さは抗体とＭＩＣＡの結合特性を判断するために使用される。
ＰＢＳ緩衝液でＭＩＣＡα３－Ｆｃ融合タンパク質（アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に示す）を１μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルの体積で９６ウェルプレートに添加し、４℃で一晩放置する。９６ウェルプレート中のＰＢＳ緩衝液を吸引除去し、ＰＢＳＴで（ｐＨ７．２ ＰＢＳが０．１％のＴｗｅｅｎ ２０を含有する）緩衝液でプレートを６回洗浄し、２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／１０％ ＢＳＡを添加し、３７℃で２ｈインキュベートして閉鎖する。閉鎖液を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡで適切な濃度に希釈した測定対象であるＭＩＣＡ抗体を添加し、３７℃で１ｈインキュベートする。反応系を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡでＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）標識抗マウス抗体二次抗体（Ｄｒ．Ｄｅｒ、ＢＡ１０５０）を希釈し、３７℃で１ｈインキュベートする。ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄し、８０μＬ／ウェルのＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）を添加し、室温で３ｍｉｎインキュベートし、８０μＬ／ウェルの４Ｍ硫酸を添加して反応を終止する。マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｍｍで吸光度値を読み取る。結果（図２）は本発明の抗体がＭＩＣＡα３構造ドメインに結合できることを示す。
ＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）。
ＥＬＩＳＡ実験はＭＩＣＡ抗体の結合特性を検出するために使用される。ＭＩＣＡ細胞外領域α３構造ドメインＦｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡα３－Ｆｃ）を９６ウェルプレートにコーティングし、抗体添加後のシグナルの強さは抗体とＭＩＣＡの結合特性を判断するために使用される。
ＰＢＳ緩衝液でＭＩＣＡα３－Ｆｃ融合タンパク質（アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に示す）を１μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルの体積で９６ウェルプレートに添加し、４℃で一晩放置する。９６ウェルプレート中のＰＢＳ緩衝液を吸引除去し、ＰＢＳＴで（ｐＨ７．２ ＰＢＳが０．１％のＴｗｅｅｎ ２０を含有する）緩衝液でプレートを６回洗浄し、２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／１０％ ＢＳＡを添加し、３７℃で２ｈインキュベートして閉鎖する。閉鎖液を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡで適切な濃度に希釈した測定対象であるＭＩＣＡ抗体を添加し、３７℃で１ｈインキュベートする。反応系を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡでＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）標識抗マウス抗体二次抗体（Ｄｒ．Ｄｅｒ、ＢＡ１０５０）を希釈し、３７℃で１ｈインキュベートする。ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄し、８０μＬ／ウェルのＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）を添加し、室温で３ｍｉｎインキュベートし、８０μＬ／ウェルの４Ｍ硫酸を添加して反応を終止する。マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｍｍで吸光度値を読み取る。結果（図２）は本発明の抗体がＭＩＣＡα３構造ドメインに結合できることを示す。
ＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）。
【0107】
実施例４ ＣＨＯ－Ｋ１過発現細胞構築
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を５×１０５細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種し、二重抗体を含まないＤＭＥＭ培地で一夜培養する。トランスフェクションの前に培地を捨て、１ｍＬの新鮮な二重抗体を含まないＤＭＥＭ培地を加える。目的遺伝子を含むｐＬＶＸ－ＥＦ１ａ－ＩＲＥＳ－ｐｕｒｏベクター（ｐＬＶＸ－ＥＦ１ａ－ＩＲＥＳ－ｐｒｕｏベクターの酵素切断部位ＥｃｏＲＩとＢａｍＨＩとの間にそれぞれＭＩＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）をコードするヌクレオチド配列（蘇州金唯智合成）が挿し込まれ、ｐＭＤ２Ｇ、ｐｓＰＡＸ２ベクター（合計３μｇ）を２：１：１の割合で２００μＬの血清のないＤＭＥＭ培地に添加し、１２μｇのポリエーテルイミド（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ株式会社）を添加する。均一に混合した後に１６ｍｉｎ静置し、次に全部の液体をＨＥＫ２９３Ｔ細胞を播種した６ウェルプレートに添加する。６ｈ培養した後、培地を捨て、新鮮な完全ＤＭＥＭ培地に加えて培養する。４８ｈトランスフェクションした後、細胞培養上清を収集し、０．４５μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を通過した後、ウイルス上清となる。ウイルス上清をすべて１×１０４のＣＨＯ－Ｋ１細胞を含む６ウェルプレートに添加し、終濃度が４μｇ／ｍＬのポリアミン（Ｓｉｇｍａ）を添加し、１２ｈ培養する。その後、上清を捨て、新鮮な完全ＤＭＥＭ培地を添加する。得られた細胞はＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢ、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ細胞であり、それぞれＭＩＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）タンパク質を発現できる。
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ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を５×１０５細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種し、二重抗体を含まないＤＭＥＭ培地で一夜培養する。トランスフェクションの前に培地を捨て、１ｍＬの新鮮な二重抗体を含まないＤＭＥＭ培地を加える。目的遺伝子を含むｐＬＶＸ－ＥＦ１ａ－ＩＲＥＳ－ｐｕｒｏベクター（ｐＬＶＸ－ＥＦ１ａ－ＩＲＥＳ－ｐｒｕｏベクターの酵素切断部位ＥｃｏＲＩとＢａｍＨＩとの間にそれぞれＭＩＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）をコードするヌクレオチド配列（蘇州金唯智合成）が挿し込まれ、ｐＭＤ２Ｇ、ｐｓＰＡＸ２ベクター（合計３μｇ）を２：１：１の割合で２００μＬの血清のないＤＭＥＭ培地に添加し、１２μｇのポリエーテルイミド（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ株式会社）を添加する。均一に混合した後に１６ｍｉｎ静置し、次に全部の液体をＨＥＫ２９３Ｔ細胞を播種した６ウェルプレートに添加する。６ｈ培養した後、培地を捨て、新鮮な完全ＤＭＥＭ培地に加えて培養する。４８ｈトランスフェクションした後、細胞培養上清を収集し、０．４５μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を通過した後、ウイルス上清となる。ウイルス上清をすべて１×１０４のＣＨＯ－Ｋ１細胞を含む６ウェルプレートに添加し、終濃度が４μｇ／ｍＬのポリアミン（Ｓｉｇｍａ）を添加し、１２ｈ培養する。その後、上清を捨て、新鮮な完全ＤＭＥＭ培地を添加する。得られた細胞はＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢ、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ細胞であり、それぞれＭＩＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）タンパク質を発現できる。
ＡＴＧＧＧＣＣＴＴＧＧＣＣＣＴＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＴＧＣＴＴＧＣＴＧＧＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＣＧＣＡＣＣＴＣＣＣＧＧＴＧＣＣＧＣＣＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＣＡＧＣＴＴＧＣＧＧＴＡＣＡＡＴＴＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＧＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＴＡＣＡＡＡＧＣＧＧＣＴＴＴＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＴＴＣＡＴＣＴＧＧＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＣＧＡＣＡＧＡＣＡＧＡＡＧＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＣＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＴＧＴＡＣＴＣＧＧＣＡＡＴＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＴＣＧＡＧＡＡＡＣＡＡＧＡＧＡＣＣＴＣＡＣＡＧＧＡＡＡＴＧＧＴＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＧＣＡＴＧＡＣＣＣＴＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＡＡＧＧＡＴＣＡＧＡＡＡＧＡＡＧＧＡＣＴＧＣＡＣＴＣＣＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＴＣＧＡＧＴＧＴＧＴＧＡＧＡＴＴＣＡＣＧＡＧＧＡＴＡＡＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＣＡＣＡＧＣＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＣＧＡＴＧＧＡＧＡＡＣＴＧＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＡＴＧＣＣＡＣＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＣＴＡＴＧＡＡＴＧＴＣＣＧＴＡＡＴＴＴＴＴＴＧＡＡＡＧＡＧＧＡＣＧＣＡＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣＴＡＣＣＡＴＧＣＣＡＴＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＴＧＡＧＡＣＧＡＴＡＣＣＴＣＡＡＡＴＣＣＧＧＧＧＴＴＧＴＧＣＴＣＡＧＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＣＣＡＡＴＧＧＴＡＡＡＣＧＴＧＡＣＴＣＧＧＴＣＴＧＡＡＧＣＴＴＣＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＴＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＧＣＧＧＴＴＴＴＴＡＣＣＣＣＴＧＧＡＡＣＡＴＣＡＣＴＣＴＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＡＧＧＡＣＧＧＴＧＴＧＴＣＣＣＴＣＡＧＣＣＡＴＧＡＴＡＣＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧＡＧＡＣＧＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＴＧＧＣＡＡＣＧＧＣＡＣＴＴＡＴＣＡＧＡＣＴＴＧＧＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＡＡＴＴＴＧＴＣＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＣＧＡＴＴＣＡＣＡＴＧＴＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＧＧＧＡＡＴＣＡＴＴＣＡＡＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＡＣＣＣＡＧＣＧＧＡＡＡＧＧＴＣＣＴＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＴＣＡＴＴＧＧＣＡＧＡＣＡＴＴＴＣＡＣＧＴＡＴＣＣＧＣＴＧＴＧＧＣＡＧＣＣＧＣＣＧＣＡＡＴＴＴＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＴＴＴＣＴＡＴＧＴＴＣＧＣＴＧＴＴＧＴＡＡＡＡＡＡＡＡＧＡＣＡＡＧＣＧＣＴＧＣＣＧＡＧＧＧＧＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＡＡＣＡＴＣＣＣＧＴＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＧＡＣＣＡＴＣＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＴＴＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＡＴＴＧＡＴＧＴＣＡＧＡＣＣＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＧＧＣＡＧＣＡＣＴＧＡＧＧＧＣＧＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）。
ＡＴＧＧＧＡＴＴＧＧＧＴＡＧＧＧＴＴＴＴＧＣＴＴＴＴＴＣＴＣＧＣＴＧＴＧＧＣＴＴＴＣＣＣＣＴＴＴＧＣＡＣＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＣＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＡＴＡＧＣＣＴＴＡＧＧＴＡＴＡＡＣＣＴＧＡＴＧＧＴＧＣＴＣＡＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＡＴＣＣＧＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＴＴＴＣＴＴＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＡＴＣＴＧＧＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＡＣＧＡＴＡＧＧＣＡＧＡＡＡＣＧＡＣＧＡＧＣＴＡＡＡＣＣＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＧＡＧＣＴＡＡＧＡＣＴＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＴＣＴＧＡＣＴＧＡＧＡＡＣＧＧＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＡＧＡＡＧＧＡＣＴＣＴＧＡＣＡＣＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧＧＧＡＧＧＧＴＴＧＣＡＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＡＡＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＴＧＡＧＡＴＴＣＡＣＧＡＧＧＡＣＴＣＡＴＣＡＡＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＴＡＧＧＣＡＣＴＴＴＴＡＣＴＡＣＧＡＴＧＧＡＧＡＧＣＴＧＴＴＴＣＴＧＡＧＴＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡＡＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＧＴＣＡＴＣＴＣＧＧＧＣＴＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＣＴＡＴＧＡＡＣＧＴＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＴＡＴＧＡＡＡＡＣＡＡＡＧＡＣＣＣＡＴＴＡＴＡＧＡＧＣＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＴＴＧＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＴＴＧＣＡＧＣＧＴＴＡＴＴＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＴＧＴＴＧＣＴＡＴＣＡＧＧＣＧＧＡＣＣＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＴＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＴＴＧＣＴＣＣＧＡＧＧＴＴＴＣＣＧＡＡＧＧＴＡＡＣＡＴＴＡＣＴＧＴＴＡＣＣＴＧＴＣＧＡＧＣＴＡＧＣＴＣＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＣＧＧＡＡＣＡＴＴＡＣＡＴＴＧＡＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＧＡＴＧＧＣＧＴＴＡＧＴＣＴＧＡＧＣＣＡＴＡＡＴＡＣＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧＡＧＡＣＧＴＴＣＴＧＣＣＴＧＡＣＧＧＡＡＡＴＧＧＣＡＣＡＴＡＣＣＡＧＡＣＣＴＧＧＧＴＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡＧＣＡＧＡＧＧＴＴＴＡＣＣＴＧＴＴＡＴＡＴＧＧＡＧＣＡＣＡＧＣＧＧＡＡＡＴＣＡＴＧＧＧＡＣＴＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧＣＴＣＧＴＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＣＴＴＴＣＣＴＴＡＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＧＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＣＴＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＴＡＴＣＡＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＴＣＴＧＣＡＧＣＣＧＡＧＧＧＧＣＣＴＧＡＡＣＴＴＧＴＧＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＧＣＡＣＣＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＡＧＡＣＧＣＡＧＣＣＣＡＡＣＴＧＧＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＧＣＣＡＣＴＧＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＴＴＣＴＡＣＣＧＡＧＧＧＡＧＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）。
ＡＴＧＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＴＴＴＴＧＣＴＣＴＴＴＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＴＴＴＴＴＣＣＣＴＴＣＧＣＴＡＧＡＣＣＡＧＧＣＧＣＴＣＣＡＡＣＡＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＴＧＣＧＣＴＡＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＣＴＣＡＧＣＡＧＧＧＡＴＧＧＧＴＣＣＧＴＧＣＡＧＴＣＣＧＡＴＴＴＣＣＴＣＧＣＴＧＡＧＧＧＣＣＡＴＣＴＴＧＡＴＡＧＣＣＡＡＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＧＣＴＡＣＧＡＣＣＧＣＧＡＧＡＣＡＣＧＧＣＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＴＧＧＧＣＣＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＧＣＧＣＡＡＡＡＡＣＡＴＧＧＧＡＣＡＣＴＧＡＡＡＣＴＧＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＡＧＡＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＧＧＣＧＴＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＣＡＴＴＧＡＧＧＧＡＣＡＡＡＡＧＧＧＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＧＧＡＴＡＴＡＣＡＧＡＡＴＴＧＴＧＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＣＴＡＣＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＣＡＴＴＴＴＴＡＣＴＡＴＧＡＴＧＧＧＧＡＧＡＧＡＴＴＴＣＴＧＴＣＣＣＴＴＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＣＴＣＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＡＧＴＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＧＣＣＧＡＧＣＡＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＧＡＡＧＧＡＡＧＡＴＡＣＴＡＴＧＡＡＡＡＣＡＡＡＴＡＣＡＣＡＣＴＡＣＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＡＡＧＣＴＧＡＧＡＣＧＣＴＡＣＣＡＡＡＡＧＴＣＣＡＧＡＧＴＧＧＣＴＧＴＡＣＧＡＣＧＣＡＣＣＧＣＣＣＣＴＣＣＴＡＴＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＣＡＴＴＣＣＧＡＧＧＣＴＡＧＴＧＡＧＧＧＴＡＡＴＡＴＴＡＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＡＡＴＡＴＡＧＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＣＧＡＣＡＧＧＡＣＧＧＴＧＴＴＴＣＡＴＴＧＡＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＧＧＣＡＴＡＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣＡＧＡＡＴＧＧＣＡＣＴＴＡＣＣＡＧＡＣＴＴＧＧＧＴＧＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＧＴＴＴＣＧＣＣＴＧＣＴＡＴＡＴＧＧＡＧＣＡＴＡＧＣＧＧＴＡＡＴＣＡＣＴＣＴＡＣＣＣＡＴＣＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＧＧＡＡＡＧＧＴＣＣＴＧＧＴＣＴＴＴＣＡＡＴＣＴＣＡＧＴＧＧＣＴＧＧＡＴＡＴＴＣＣＡＴＡＣＧＴＧＣＴＧＧＧＴＧＴＡＧＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＡＡＴＴＴＴＣＧＴＴＡＴＴＡＴＣＣＴＧＴＡＣＧＴＴＣＴＧＴＧＴＴＧＣＡＡＧＡＡＡＡＡＧＡＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＣＧＡＡＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＧＴＧＡＧＴＣＴＧＣＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＣＣＧＴＴＧＧＴＡＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＧＣＡＡＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）。
ＡＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＡＧＡＧＴＡＴＴＧＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＧＴＣＧＡＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＴＴＣＴＣＧＣＣＴＣＣＡＴＴＴＴＣＴＣＴＴＴＴＡＣＴＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＣＣＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＣＡＣＴＣＡＣＴＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＴＧＴＣＴＡＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＧＴＴＴＴＴＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＴＴＴＧＧＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＧＴＧＡＧＧＴＡＣＧＡＴＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＡＧＡＣＣＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＴＧＴＴＧＧＧＧＧＡＣＣＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＧＡＣＣＧＡＧＡＡＣＧＣＡＣＡＧＧＡＣＣＴＧＣＧＣＡＧＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＡＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＡＡＧＧＧＣＧＧＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＡＴＡＡＡＡＡＴＣＴＧＣＧＡＡＡＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＴＧＧＣＴＣＴＡＣＴＧＧＣＧＧＡＴＴＴＴＧＧＣＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＧＧＧＡＧＣＴＧＴＴＴＣＴＧＴＣＣＣＴＴＡＡＴＣＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＧＧＡＣＡＧＴＡＧＣＴＣＡＧＴＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＴＣＡＡＡＣＣＣＴＧＧＣＡＡＴＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＧＧＡＧＧＡＣＡＣＴＡＴＧＡＡＡＡＣＴＡＡＴＡＣＡＣＡＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＴＧＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＧＣＴＴＧＡＡＡＡＡＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＧＧＧＴＴＧＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＧＴＴＣＣＣＣＣＴＡＴＧＧＴＧＡＡＴＧＴＣＡＣＴＣＡＴＧＧＧＧＡＧＧＣＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＡＡＣＡＴＡＡＣＡＧＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＧＣＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＡＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧＧＡＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＴＣＡＣＧＡＣＧＣＡＣＡＡＣＡＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＣＣＴＧＡＴＴＧＧＡＡＴＧＧＣＡＣＣＴＡＴＣＡＧＡＣＡＴＧＧＧＴＣＧＣＣＡＣＡＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＧＴＴＴＴＧＣＣＴＧＴＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＡＴＡＧＣＧＧＣＡＡＴＣＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＡＣＣＡＧＴＧＣＴＣＣＡＧＴＣＣＧＡＡＣＧＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＣＴＧＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＴＡＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＧＴＣＡＣＴＧＣＣＴＴＴＡＴＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＧＴＴＣＡＣＣＧＡＴＧＴＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＡＣＴＣＴＴＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＣＧＧＡＡＣＴＧＧＧＧＡＴＣＡＴＡＧＡＧＡＴＧＣＴＡＣＣＣＡＧＣＴＧＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＧＧＧＴＣＣＡＣＣＧＧＡＴＣＡＡＣＴＧＡＡＧＧＧＧＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）。
ＭＧＬＧＰＶＦＬＬＬＡＧＩＦＰＦＡＰＰＧＡＡＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＱＴＦＨＶＳＡＶＡＡＡＡＩＦＶＩＩＩＦＹＶＲＣＣＫＫＫＴＳＡＡＥＧＰＥＬＶＳＬＱＶＬＤＱＨＰＶＧＴＳＤＨＲＤＡＴＱＬＧＦＱＰＬＭＳＤＬＧＳＴＧＳＴＥＧＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
ＭＧＬＧＲＶＬＬＦＬＡＶＡＦＰＦＡＰＰＡＡＡＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＭＶＬＳＱＤＥＳＶＱＳＧＦＬＡＥＧＨＬＤＧＱＰＦＬＲＹＤＲＱＫＲＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＡＫＴＷＤＴＥＴＥＤＬＴＥＮＧＱＤＬＲＲＴＬＴＨＩＫＤＱＫＧＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＳＳＴＲＧＳＲＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＱＥＳＴＶＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＴＮＦＷＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＲＡＭＱＡＤＣＬＱＫＬＱＲＹＬＫＳＧＶＡＩＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＣＳＥＶＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＳＦＹＰＲＮＩＴＬＴＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＮＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＲＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＧＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＱＲＴＤＦＰＹＶＳＡＡＭＰＣＦＶＩＩＩＩＬＣＶＰＣＣＫＫＫＴＳＡＡＥＧＰＥＬＶＳＬＱＶＬＤＱＨＰＶＧＴＧＤＨＲＤＡＡＱＬＧＦＱＰＬＭＳＡＴＧＳＴＧＳＴＥＧＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）。
ＭＧＰＧＲＶＬＬＦＬＴＳＩＦＰＦＡＲＰＧＡＰＴＥＬＨＳＬＲＹＮＶＴＶＬＳＲＤＧＳＶＱＳＤＦＬＡＥＧＨＬＤＳＱＬＦＶＲＹＤＲＥＴＲＲＡＲＰＱＧＱＷＡＥＡＶＬＧＡＫＴＷＤＴＥＴＧＤＬＴＥＮＧＫＤＬＲＲＴＬＴＨＩＥＧＱＫＧＧＬＨＳＬＱＤＩＱＮＣＥＩＹＥＤＧＳＴＧＧＳＲＨＦＹＹＤＧＥＲＦＬＳＬＮＬＡＴＱＥＷＴＶＡＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＦＷＫＥＤＴＭＫＴＮＴＨＹＨＡＭＱＡＤＣＬＫＫＬＲＲＹＱＫＳＲＶＡＶＲＲＴＡＰＰＭＶＮＶＴＨＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＲＮＩＡＬＴＷＲＱＤＧＶＳＬＮＨＤＡＱＱＷＧＧＩＬＰＤＱＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＲＱＧＥＥＱＲＦＡＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＦＱＳＱＷＬＤＩＰＹＶＬＧＶＡＡＡＡＶＡＡＡＡＡＩＦＶＩＩＬＹＶＬＣＣＫＫＫＴＳＡＡＥＧＰＥＬＶＳＬＲＴＬＤＱＨＰＶＧＴＧＤＨＲＤＡＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）。
ＭＧＬＧＲＶＬＬＦＬＧＲＶＬＬＦＬＡＳＩＦＳＦＴＲＰＲＡＡＡＥＬＨＳＬＲＹＮＶＴＶＬＳＲＤＧＳＶＱＳＥＦＬＡＥＧＨＬＤＧＱＬＦＶＲＹＤＲＥＴＲＲＡＲＰＱＧＱＷＡＥＡＶＬＧＤＱＥＴＥＤＬＴＥＮＡＱＤＬＲＲＴＬＴＨＩＥＧＱＫＧＧＬＨＳＬＱＫＩＫＩＣＥＩＹＥＤＧＳＴＧＧＦＷＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＬＮＬＥＴＱＫＷＴＶＡＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＦＷＫＥＤＴＭＫＴＮＴＨＹＲＡＭＲＡＤＣＬＫＫＬＷＲＹＱＫＳＲＶＡＶＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＨＧＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＧＮＩＴＬＴＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＡＱＱＷＧＤＶＬＰＤＷＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＲＱＧＥＥＱＲＦＡＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＰＰＶＬＱＳＥＲＬＮＬＬＹＶＰＶＡＶＡＶＡＶＶＴＡＦＩＩＩＣＶＨＲＣＫＫＫＫＴＳＡＡＥＧＰＥＬＶＳＬＲＴＬＤＱＨＰＶＧＴＧＤＨＲＤＡＴＱＬＧＦＱＰＬＭＳＡＰＧＳＴＧＳＴＥＧＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）。
【0108】
実施例５ ＭＩＣＡ抗体のフローサイトメトリー結合実験
フローサイトメトリー実験はＭＩＣＡ抗体の結合特性を検出するために使用され、実施例４で得られたＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢ、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ細胞にそれぞれ実施例１で製造されたＭＩＣＡ抗体（番号が５Ａ１）及び対照組抗体マウスＩｇＧ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＭＧ１－４５）を添加し、抗体添加後のシグナルの強さは抗体とＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢタンパク質との結合特性を判断するために使用される。
ＰＢＳでＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢ、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ細胞を２×１０６／ｍＬに希釈し、１００μＬ／チューブの体積で１．５ｍＬ ＥＰチューブに添加し、その中に１０μＬ／チューブのヤギ血清を添加し、４℃で３０ｍｉｎ閉鎖する。異なる濃度（１０－４、１０－３、１０－２、１０－１、１００、１０１μｇ／ｍＬ）のＭＩＣＡ抗体を添加し、４℃条件下で３０ｍｉｎインキュベートする。ＥＰチューブに１ｍＬのＰＢＳを添加し、４℃で、３５００ｒｐｍ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、沈殿をもう一度ＰＢＳで洗う。遠心分離した後、上清を捨て、１００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を含む沈殿を重懸濁し、その中に０．１μＬ／チューブＡｌｅｘａ－６４７標識ヤギ抗マウス抗体二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、４０５３２２）を添加し、４℃、遮光条件で３０ｍｉｎインキュベートする。ＰＢＳで２回洗い、遠心分離した後、上清を捨てる。２００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を含む沈殿を重懸濁し、フローサイトメーターで検出し、結果は図３、４、５、６に示され、さらに本発明の該抗体がＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１及びＲｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢタンパク質と結合できることを示す。
フローサイトメトリー実験はＭＩＣＡ抗体の結合特性を検出するために使用され、実施例４で得られたＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢ、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ細胞にそれぞれ実施例１で製造されたＭＩＣＡ抗体（番号が５Ａ１）及び対照組抗体マウスＩｇＧ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＭＧ１－４５）を添加し、抗体添加後のシグナルの強さは抗体とＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢタンパク質との結合特性を判断するために使用される。
ＰＢＳでＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＢ、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１、ＣＨＯ－Ｋ１－Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢ細胞を２×１０６／ｍＬに希釈し、１００μＬ／チューブの体積で１．５ｍＬ ＥＰチューブに添加し、その中に１０μＬ／チューブのヤギ血清を添加し、４℃で３０ｍｉｎ閉鎖する。異なる濃度（１０－４、１０－３、１０－２、１０－１、１００、１０１μｇ／ｍＬ）のＭＩＣＡ抗体を添加し、４℃条件下で３０ｍｉｎインキュベートする。ＥＰチューブに１ｍＬのＰＢＳを添加し、４℃で、３５００ｒｐｍ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、沈殿をもう一度ＰＢＳで洗う。遠心分離した後、上清を捨て、１００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を含む沈殿を重懸濁し、その中に０．１μＬ／チューブＡｌｅｘａ－６４７標識ヤギ抗マウス抗体二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、４０５３２２）を添加し、４℃、遮光条件で３０ｍｉｎインキュベートする。ＰＢＳで２回洗い、遠心分離した後、上清を捨てる。２００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を含む沈殿を重懸濁し、フローサイトメーターで検出し、結果は図３、４、５、６に示され、さらに本発明の該抗体がＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒｈｅｓｕｓ ＭＩＣ１及びＲｈｅｓｕｓ ＭＩＣＢタンパク質と結合できることを示す。
【0109】
実施例６ ＭＩＣＡ抗体のフローサイトメトリー結合腫瘍細胞実験
フローサイトメトリー実験はＭＩＣＡ抗体結合腫瘍細胞の特性を検出するために使用され、肺癌ＮＣＩ－Ｈ１２９９細胞にそれぞれＭＩＣＡ抗体（番号が５Ａ１）及び対照組マウス抗体ＩｇＧ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＭＧ１－４５）を添加し、抗体添加後のシグナルの強さは抗体と腫瘍細胞の結合特性を判断するために使用される。
フローサイトメトリー実験はＭＩＣＡ抗体結合腫瘍細胞の特性を検出するために使用され、肺癌ＮＣＩ－Ｈ１２９９細胞にそれぞれＭＩＣＡ抗体（番号が５Ａ１）及び対照組マウス抗体ＩｇＧ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＭＧ１－４５）を添加し、抗体添加後のシグナルの強さは抗体と腫瘍細胞の結合特性を判断するために使用される。
【0110】
ＰＢＳでＮＣＩ－Ｈ１２９９細胞を２×１０６／ｍＬに希釈し、１００μＬ／チューブの体積で１．５ｍＬのＥＰチューブに添加し、その中に１０μＬ／チューブのヤギ血清を添加し、４℃で３０ｍｉｎ閉鎖する。異なる濃度（１０－７、１０－６、１０－５、１０－４、１０－３、１０－２、１０－１、１００、１０１、１０２μｇ／ｍＬ）のＭＩＣＡ抗体、対照組抗体ＩｇＧ１を添加し、４℃で３０ｍｉｎインキュベートする。ＥＰチューブに１ｍＬのＰＢＳを加え、４℃、３５００ｒｐｍ条件で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、得られた沈殿を再度ＰＢＳで洗う。再度遠心分離した後、上清を捨て、１００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を含む沈殿を重懸濁し、その中に０．１μＬ／チューブのＡｌｅｘａ－６４７標識ヤギ抗マウス抗体二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、４０５３２２）を添加し、４℃、遮光条件で３０ｍｉｎインキュベートする。ＰＢＳで２回洗い、遠心分離した後、上清を捨てる。２００μＬ／チューブのＰＢＳで沈殿を重懸濁し、フローサイトメーターで検出し、結果は図７、８、９に示され、さらに本発明の該抗体がメラノーマＡ３７５細胞、肺癌ＮＣＩ－Ｈ１２９９細胞、ヒト赤白血病Ｋ５６２細胞と結合できることを示す。
【0111】
実施例７ ＭＩＣＡ抗体の抗原エピトープ特性判断
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験はＭＩＣＡ抗体の抗原エピトープ特性を判断するために使用される。
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験はＭＩＣＡ抗体の抗原エピトープ特性を判断するために使用される。
【0112】
実施例４で構築したＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ、ＣＨＯ－Ｋ１細胞を、ＰＢＳで２回洗う。次にＲＩＰＡ溶解液を添加し、氷上で１５ｍｉｎ溶解し、４℃、１５０００ｇ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を収集する。ＢＣＡキットで溶解上清をタンパク質定量する。次にＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒでサンプルを調製し、サンプル添加量が５０ｕｇ／ウェルである。電気泳動後にニトロセルロース膜に移り、５％脱脂粉乳で室温で１ｈ閉鎖する。次に１：２０００（ｗ／ｖ）で希釈したＭＩＣＡ抗体を添加し、４℃で一晩インキュベートする。１‰のＰＢＳＴで５ｍｉｎ×６回膜洗浄し、次に１：５０００（ｖ／ｖ）で希釈したＨＲＰ－ヒツジ抗マウスＩｇＧを添加し、室温で１ｈインキュベートする。１‰のＰＢＳＴで５ｍｉｎ×６回膜洗浄する。ＥＣＬ基質現像により、化学発光を検出する。結果は図８に示され、さらに本発明の該抗体がＭＩＣＡタンパク質の線形エピトープと結合できることを示す。
【0113】
実施例８ 抗体がＭＩＣＡとＮＫＧ２Ｄとの結合を促進する能力のスクリーニング
ＭＩＣＡ抗体はＭＩＣＡ細胞外領域との結合により、ＭＩＣＡとその受容体ＮＫＧ２Ｄのシグナル経路を促進し、本実施例はフローサイトメトリー実験によりＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡとその受容体ＮＫＧ２Ｄとの結合に対する影響を検出する。
ＭＩＣＡ抗体はＭＩＣＡ細胞外領域との結合により、ＭＩＣＡとその受容体ＮＫＧ２Ｄのシグナル経路を促進し、本実施例はフローサイトメトリー実験によりＭＩＣＡ抗体がＭＩＣＡとその受容体ＮＫＧ２Ｄとの結合に対する影響を検出する。
【0114】
ＰＢＳを用いて実施例４で得られたＣＨＯ－Ｋ１－ＭＩＣＡ細胞を２×１０６個／ｍＬに希釈し、１００μＬ／チューブの体積で１．５ｍＬのＥＰチューブに添加し、その中に１０μＬ／チューブのマウス血清を添加し、４℃で３０ｍｉｎ閉鎖する。一連の希釈勾配（１０－４、１０－３、１０－２、１０－１、１００、１０１μｇ／ｍＬ）のＭＩＣＡ抗体（番号が５Ａ１）及び対照組抗体ＩｇＧ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＭＧ１－４５）を添加し、４℃で３０ｍｉｎインキュベートする。２μｇ／チューブのＮＫＧ２Ｄ細胞外領域Ｆｃ融合タンパク質（ＮＫＧ２Ｄ－Ｆｃ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、本実験室の発現による取得）、４℃で３０ｍｉｎインキュベートする。ＥＰチューブに１ｍＬのＰＢＳを添加し、４℃、３５００ｒｐｍ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、ＰＢＳをもう一度洗う。遠心分離後に、上清を捨て、１００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を重懸濁し、その中に１μＬ／チューブの６４７標識マウス抗ヒト抗体二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＨＰ６０１７）を添加し、４℃、遮光条件下で３０ｍｉｎインキュベートする。ＰＢＳで２回洗い、遠心分離後に上清を捨てる。２００μＬ／チューブのＰＢＳで細胞を重懸濁し、フローサイトメーターで検出し、結果は１１に示され、本発明の抗体はＭＩＣＡと受容体ＮＫＧ２Ｄとの結合を促進することができる。
ＩＷＳＡＶＦＬＮＳＬＦＮＱＥＶＱＩＰＬＴＥＳＹＣＧＰＣＰＫＮＷＩＣＹＫＮＮＣＹＱＦＦＤＥＳＫＮＷＹＥＳＱＡＳＣＭＳＱＮＡＳＬＬＫＶＹＳＫＥＤＱＤＬＬＫＬＶＫＳＹＨＷＭＧＬＶＨＩＰＴＮＧＳＷＱＷＥＤＧＳＩＬＳＰＮＬＬＴＩＩＥＭＱＫＧＤＣＡＬＹＡＳＳＦＫＧＹＩＥＮＣＳＴＰＮＴＹＩＣＭＱＲＴＶＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）。
ＩＷＳＡＶＦＬＮＳＬＦＮＱＥＶＱＩＰＬＴＥＳＹＣＧＰＣＰＫＮＷＩＣＹＫＮＮＣＹＱＦＦＤＥＳＫＮＷＹＥＳＱＡＳＣＭＳＱＮＡＳＬＬＫＶＹＳＫＥＤＱＤＬＬＫＬＶＫＳＹＨＷＭＧＬＶＨＩＰＴＮＧＳＷＱＷＥＤＧＳＩＬＳＰＮＬＬＴＩＩＥＭＱＫＧＤＣＡＬＹＡＳＳＦＫＧＹＩＥＮＣＳＴＰＮＴＹＩＣＭＱＲＴＶＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）。
【0115】
実施例９ ＭＩＣＡ抗体によるＮＫ９２細胞の抗腫瘍の促進
本実施例は体外殺傷実験であり、ＮＫ９２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－２４０７）の腫瘍細胞の殺傷に対するＭＩＣＡ抗体の影響を検出するために使用される。合計２組設定され、使用された腫瘍細胞はメラノーマＡ３７５細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６１９）であり、具体的な実験操作は以下の通りであり、
（１）Ａ３７５腫瘍細胞を無血清ＤＭＥＭ培地で２回洗い、４℃、２００ｇ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、１ｍＬの無血清ＤＭＥＭ培地で得られた沈殿を重懸濁し、終濃度５μＭのＣＴＶ、３７℃で３０ｍｉｎインキュベートする。
（２）インキュベートが終了した後、培養系に２００μＬの予め冷却されたウシ血清を加えて標識を終了し、４℃、２００ｇ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、１０％ウシ血清を含む完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で細胞沈殿を２回洗い、上清を捨て、完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で沈殿を重懸濁し、細胞計数を行い、完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で１．２５×１０５個／ｍＬに希釈する。
（３）１０％ウシ血清を含む完全ＲＰＭＩ－１６４０培地でＮＫ９２細胞を一連の濃度（２×１０５個／ｍＬ、４×１０５個／ｍＬ、８×１０５個／ｍＬ、１．６×１０６個／ｍＬ）に希釈する。
（４）希釈後のＰＢＭＣ（ＮＫ９２）は１００μＬ／ウェルの体積で９６ウェルの丸底板に添加する。
（５）完全ＲＰＭＩ－１６４０培地でＭＩＣＡ抗体（５Ａ１）または対照マウスＩｇＧを５０μｇ／ｍＬに希釈し、２０μＬ／ウェルの体積で希釈後のＭＩＣＡ抗体またはマウスＩｇＧを９６ウェルの丸底板に添加する。
（６）希釈後の腫瘍細胞を８０μＬ／ウェルの体積で９６ウェルの丸底板に添加する。
（７）ステップ（６）で得られた９６ウェルの丸底板を４℃で、１５００ｒｐｍ条件下で１ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離後の９６ウェルプレートを３７℃で４ｈインキュベートする。
（８）１μＬ／ウェルの体積で９６ウェルの丸底板に７－ＡＡＤ（ＢＤ、５５９９２５）を加え、均一に混合する。ウェル内のすべての液体をフローチューブに移り、フローサイトメーターで検出し、具体的な実験結果は図１２に示され、本発明の抗体はＮＫ９２細胞の腫瘍殺傷を促進することができることが分かる。
本実施例は体外殺傷実験であり、ＮＫ９２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－２４０７）の腫瘍細胞の殺傷に対するＭＩＣＡ抗体の影響を検出するために使用される。合計２組設定され、使用された腫瘍細胞はメラノーマＡ３７５細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６１９）であり、具体的な実験操作は以下の通りであり、
（１）Ａ３７５腫瘍細胞を無血清ＤＭＥＭ培地で２回洗い、４℃、２００ｇ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、１ｍＬの無血清ＤＭＥＭ培地で得られた沈殿を重懸濁し、終濃度５μＭのＣＴＶ、３７℃で３０ｍｉｎインキュベートする。
（２）インキュベートが終了した後、培養系に２００μＬの予め冷却されたウシ血清を加えて標識を終了し、４℃、２００ｇ条件下で５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、１０％ウシ血清を含む完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で細胞沈殿を２回洗い、上清を捨て、完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で沈殿を重懸濁し、細胞計数を行い、完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で１．２５×１０５個／ｍＬに希釈する。
（３）１０％ウシ血清を含む完全ＲＰＭＩ－１６４０培地でＮＫ９２細胞を一連の濃度（２×１０５個／ｍＬ、４×１０５個／ｍＬ、８×１０５個／ｍＬ、１．６×１０６個／ｍＬ）に希釈する。
（４）希釈後のＰＢＭＣ（ＮＫ９２）は１００μＬ／ウェルの体積で９６ウェルの丸底板に添加する。
（５）完全ＲＰＭＩ－１６４０培地でＭＩＣＡ抗体（５Ａ１）または対照マウスＩｇＧを５０μｇ／ｍＬに希釈し、２０μＬ／ウェルの体積で希釈後のＭＩＣＡ抗体またはマウスＩｇＧを９６ウェルの丸底板に添加する。
（６）希釈後の腫瘍細胞を８０μＬ／ウェルの体積で９６ウェルの丸底板に添加する。
（７）ステップ（６）で得られた９６ウェルの丸底板を４℃で、１５００ｒｐｍ条件下で１ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離後の９６ウェルプレートを３７℃で４ｈインキュベートする。
（８）１μＬ／ウェルの体積で９６ウェルの丸底板に７－ＡＡＤ（ＢＤ、５５９９２５）を加え、均一に混合する。ウェル内のすべての液体をフローチューブに移り、フローサイトメーターで検出し、具体的な実験結果は図１２に示され、本発明の抗体はＮＫ９２細胞の腫瘍殺傷を促進することができることが分かる。
【0116】
実施例１０：ＭＩＣＡ抗体のＥＬＩＳＡ結合実験
本実施例はＥＬＩＳＡによってＭＩＣＡ抗体とＭＩＣＡ、ＭＩＣＢのα３構造ドメインの結合特性を検出する。発明者は得られた多種のＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ変異体細胞外領域α３構造ドメイン（ＭＩＣＡα３＊－００２、００４、００５、００８、ＭＩＣＢα３＊－００５）Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡα３－Ｆｃ、ＭＩＣＢα３－Ｆｃ）、及び対照組抗体ＩｇＧを９６ウェルプレートにコーティングし、抗体添加後のシグナルの強さは、抗体とＭＩＣＡ、ＭＩＣＢとの結合特性を判断するために使用される。
本実施例はＥＬＩＳＡによってＭＩＣＡ抗体とＭＩＣＡ、ＭＩＣＢのα３構造ドメインの結合特性を検出する。発明者は得られた多種のＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ変異体細胞外領域α３構造ドメイン（ＭＩＣＡα３＊－００２、００４、００５、００８、ＭＩＣＢα３＊－００５）Ｆｃ融合タンパク質（ＭＩＣＡα３－Ｆｃ、ＭＩＣＢα３－Ｆｃ）、及び対照組抗体ＩｇＧを９６ウェルプレートにコーティングし、抗体添加後のシグナルの強さは、抗体とＭＩＣＡ、ＭＩＣＢとの結合特性を判断するために使用される。
【0117】
ＰＢＳ緩衝液で融合タンパク質（ＭＩＣＡ＊００２α３－Ｆｃアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に示し、ＭＩＣＡ＊００４α３－Ｆｃアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４に示し、ＭＩＣＡ＊００５α３－Ｆｃアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５に示し、ＭＩＣＡ＊００８α３－Ｆｃアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６に示し、ＭＩＣＢ＊００５α３－Ｆｃアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示す）を１μｇ／ｍｌに希釈し、１００μＬ／ウェルの体積で９６ウェルプレートに添加し、４℃で一晩放置する。９６ウェルプレート中のＰＢＳ緩衝液を吸引除去し、ＰＢＳＴ（ｐＨ７．２ ＰＢＳが０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含有する）緩衝液でプレートを６回洗浄した後、２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／１０％ＢＳＡを添加し、３７℃で２ｈインキュベートして閉鎖する。閉鎖液を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄した後、ＰＢＳＴ／０．０５％ＢＳＡで適切な濃度（１０－７、１０－６、１０－５、１０－４、１０－３、１０－２、１０－１、１００、１０１、１０２μｇ／ｍＬ）に希釈する１００μＬ／ウェルの測定対象であるＭＩＣＡ抗体を添加し、３７℃で１ｈインキュベートする。反応系を取り除き、ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄した後、１００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ／０．０５％ ＢＳＡでＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）標識の抗マウス抗体二次抗体を希釈し、３７℃で１ｈインキュベートする。ＰＢＳＴでプレートを６回洗浄した後、８０μＬ／ウェルのＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）を添加し、室温で３ｍｉｎインキュベートし、８０μＬ／ウェルの４Ｍ硫酸を添加して反応を終止する。マイクロプレートリーダーで４５０ｍｍで吸光度値を読み取る。結果は図１３、１４、１５、１６、１７に示され、本発明の抗体がＭＩＣＡ＊００２、ＭＩＣＡ＊００４、ＭＩＣＡ＊００５、ＭＩＣＡ＊００８、ＭＩＣＢ＊００５に結合できることを示す。
ＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）。
ＲＲＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＳＦＹＰＲＮＩＴＬＴＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）。
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【0118】
本明細書の説明では、「一実施例」、「いくつかの実施例」、「例」、「具体例」、または「いくつかの例」という参考用語などの説明は、該実施例または例を組み合わせて説明する具体的な特徴、構造、材料または特点は本発明の少なくとも１つの実施例または例に含まれる。本明細書では、上記用語の例示的な叙述は必ずしも同じ実施例または例を対象とする必要がない。また、説明する具体的な特徴、構造、材料または特点はいずれかまたは複数の実施例または例では適切な方式で結合することができる。なお、互いに衝突しない場合、当業者は本明細書に説明される異なる実施例または例示及び異なる実施例または例の特徴を結合と組み合わせることができる。
【0119】
本発明の実施例を提示し記述したが、上記実施例は例示的なものであり、本発明を制限するためのものとして理解することができなく、当業者であれば、本発明の範囲で上記実施例について様々な変化、修正、置換および変形が可能であることが理解できる。
【0120】
関連出願の相互参照
本願は２０２１年１２月２８日に中国国家知識産権局に提出した、特許出願番号が２０２１１１６２９６９３．７の特許出願の優先権と権益を主張し、且つ参照により全部が本明細書に組み込まれる。
本願は２０２１年１２月２８日に中国国家知識産権局に提出した、特許出願番号が２０２１１１６２９６９３．７の特許出願の優先権と権益を主張し、且つ参照により全部が本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-01-29
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体または抗原結合断片であって、重鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３、
軽鎖可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～６のうちから選ばれた少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む、ことを特徴とする抗体または抗原結合断片。
【請求項2】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列またはその保存的修飾形態のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項3】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、（ｉ）前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列及びその保存的修飾形態のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％相同性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は、（ｉｉ）前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列及びその保存的修飾形態のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％相同性を有するアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項4】
前記重鎖可変領域は、（ｉ）から選ばれる重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相同性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、（ｉｉ）から選ばれる軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項5】
前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項6】
重鎖と軽鎖を含み、前記重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項7】
前記抗体はモノクローナル抗体、マウス由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト由来抗体、Ｆｖ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨまたはＦ（ａｂ’）２である、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
前記抗体またはその抗原結合断片はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列の中の少なくとも一部と結合できる、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
免疫複合体であって、治療薬及び請求項１に記載の抗体または抗原結合断片を含み、前記抗体または抗原結合断片は治療薬にカップリングされる、ことを特徴とする免疫複合体。
【請求項10】
請求項１に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は請求項９に記載の免疫複合体を含む、ことを特徴とする組成物。
【請求項11】
請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を含む、ことを特徴とするＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキット。
【請求項12】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを検出するためのキットの製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項13】
請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を含む、ことを特徴とする薬物。
【請求項14】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患を予防及び／又は治療するための薬物の製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片及び／又は請求項９に記載の免疫複合体の使用であって、任意選択に、前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、
任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、使用。
【請求項15】
請求項１に記載の抗体または抗原結合断片をコードする配列を含む核酸であって、任意選択に、前記核酸はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３で示されるヌクレオチド配列を有する、ことを特徴とする核酸。
【請求項16】
請求項１５に記載の核酸を含む、ことを特徴とする組換えベクターまたは形質転換体。
【請求項17】
請求項１に記載の抗体または抗原結合断片を発現する、ことを特徴とする組換え細胞。
【請求項18】
ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患の治療及び／又は予防における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項９に記載の免疫複合体、請求項１５に記載の核酸、請求項１６に記載の組換えベクターまたは形質転換体または請求項１７に記載の組換え細胞の使用。
【請求項19】
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、ことを特徴とする請求項１８に記載の使用。
【請求項20】
１）請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、２）請求項１５に記載の核酸、
３）請求項１６に記載の組換えベクターまたは形質転換体、及び
４）請求項１７に記載の組換え細胞のうちの少なくとも１つの、被験者がＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患に罹っているかどうかの診断における使用。
【請求項21】
前記ＭＩＣＡ及び／又はＭＩＣＢを媒介した疾患は癌または移植拒絶、自己免疫疾患、感染性疾患であり、任意選択に、前記癌は肺癌、肝癌、卵単癌、子宮頸癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、乳腺癌、神経膠腫、腎癌、胃癌、食道癌、口腔扁平上皮癌及び頭頚癌のうちの少なくとも１種である、ことを特徴とする請求項２０に記載の使用。
【国際調査報告】