特表 2024-529510 新規ベンゼン誘導体およびその免疫抑制関連用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-06

(54)【発明の名称】新規ベンゼン誘導体およびその免疫抑制関連用途

(51)【国際特許分類】

   C07C 233/65 20060101AFI20240730BHJP

   C07D 213/81 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 213/82 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 217/26 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 215/48 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 237/24 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 233/64 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 213/71 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 241/24 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/44 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/455 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/472 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/47 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/50 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/4965 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/4164 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/40 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240730BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/167 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/166 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 231/56 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/416 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 303/36 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/336 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/165 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/18 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/137 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 239/28 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/505 20060101ALI20240730BHJP

   A61K 31/27 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 233/66 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 235/84 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 237/48 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 233/11 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 235/60 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 237/30 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 311/16 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 311/39 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 233/78 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 233/83 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 233/27 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 271/44 20060101ALI20240730BHJP

   C07D 207/325 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 211/29 20060101ALI20240730BHJP

   C07C 233/69 20060101ALI20240730BHJP

【ＦＩ】

C07C233/65

C07D213/81 CSP

C07D213/82

C07D217/26

C07D215/48

C07D237/24

C07D233/64

C07D213/71

C07D241/24

A61K31/44

A61K31/455

A61K31/472

A61K31/47

A61K31/50

A61K31/4965

A61K31/4164

A61K31/40

A61P37/06

A61P37/08

A61P29/00

A61K31/167

A61K31/166

C07D231/56 Z

A61K31/416

C07D303/36

A61K31/336

A61K31/165

A61K31/18

A61K31/137

C07D239/28

A61K31/505

A61K31/27

C07C233/66

C07C235/84

C07C237/48

C07C233/11

C07C235/60

C07C237/30

C07C311/16

C07C311/39

C07C233/78

C07C233/83

C07C233/27

C07C271/44

C07D207/325

C07C211/29

C07C233/69

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024505518

(86)(22)【出願日】2022-07-29

(85)【翻訳文提出日】2024-03-28

(86)【国際出願番号】 KR2022011254

(87)【国際公開番号】W WO2023008973

(87)【国際公開日】2023-02-02

(31)【優先権主張番号】10-2021-0100261

(32)【優先日】2021-07-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524037915

【氏名又は名称】プロヴィバイオ・カンパニー・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＶＩＢＩＯ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】４１７‐７ＨＯ， ＣＨＡＮＧＪＯＧＷＡＮ， １９７ ＩＮＪＥ‐ＲＯ， ＧＩＭＨＡＥ‐ＳＩ， ＧＹＥＯＮＧＳＡＮＧＮＡＭ‐ＤＯ ５０８３４， ＲＥＰＵＢＬＩＣ ＯＦ ＫＯＲＥＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110001818

【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ

(72)【発明者】

【氏名】パク，ソク・ジュ

【テーマコード（参考）】

4C086

4C206

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BA01

4C086BC05

4C086BC17

4C086BC19

4C086BC28

4C086BC30

4C086BC37

4C086BC38

4C086BC41

4C086BC42

4C086BC48

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB08

4C086ZB11

4C086ZB13

4C206AA01

4C206AA02

4C206AA03

4C206FA08

4C206GA07

4C206GA08

4C206GA09

4C206GA22

4C206GA28

4C206GA30

4C206GA31

4C206HA24

4C206JA13

4C206KA01

4C206KA04

4C206MA01

4C206MA04

4C206NA14

4C206ZB08

4C206ZB11

4C206ZB13

4H006AA01

4H006AA03

4H006AB20

4H006BJ50

4H006BM10

4H006BM30

4H006BM71

4H006BM73

4H006BM74

4H006BV22

4H006BV25

4H006BV72

4H006BV74

4H006RA22

4H006RA28

(57)【要約】

本発明は、新規ベンゼン誘導体およびその免疫抑制関連用途に関する。具体的に、本発明は、化学式１の化合物、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩を含む組成物に関する。組成物は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患のような免疫疾患の予防または治療用途を持つ。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記化学式１の化合物、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩：

【化1】

前記化学式１において、
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ_５のうちから１個または２個原子は窒素であり、残りの原子は炭素であり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、互いに独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ１４アルキル基、Ｃ２－Ｃ１４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ１４アルキニル基、Ｃ５－Ｃ１４アリール基、Ｃ５－Ｃ１４アリールアルキル基、Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキルアルキル基、Ｃ３－１４ヘテロアリール基、Ｃ３－１４ヘテロアリールアルキル基、Ｃ３－１４ヘテロシクロアルキル基、Ｃ３－１４ヘテロシクロアルキルアルキル基、Ｃ１－Ｃ１４アルコキシ基、Ｃ５－Ｃ１４アリールオキシ基、Ｃ５－Ｃ１４ヘテロアリールオキシ基、－ＮＯ_２、－ＮＲ_６、－ＳＯ_２Ｒ_６、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ_６）_２、－ＣＦ_３、－ＯＨ、シアン基、チオール基、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、ジアゾール、イミダゾール、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、ヘテロシクロアミンおよびビオチンのうちから選択され、
Ｙは、－ＯＨ、チオール基、フェノキシ、シアン基、チアゾール、ジアゾール、イミダゾール、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、－ＣＯＮ（Ｒ_６）_２、－ＮＲ_６ＣＯＲ_６、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ_６）_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＣＯＯＲ_６、－Ｒ_７ＣＯＯＲ_６、－Ｒ_７ＣＯＮ（Ｒ_６）_２、－ＣＯＮＨＳＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＳＲ_６、－ＣＯＮＨＳＳＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＳＳＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＳＯ_２Ｒ_６、－ＣＯＮＨＯＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＯＲ_６、－ＣＯＮ（Ｒ_７）_２ＣＯＮ（Ｒ_６）_２および－ＣＯＮ（Ｒ_７）_２ＮＲ_７ＣＯＲ_６のうちから選択され、
ここで、Ｒ_６およびＲ_７は、互いに独立して、水素、ハロゲン、チオール基、フェノキシ、シアン基、チアゾール、ジアゾール、イミダゾール、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ６アルケニル基、Ｃ２－Ｃ６アルキニル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ６－Ｃ１２アリールアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキルアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロアリール基、Ｃ３－１０ヘテロアリールアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキルアルキル基、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ基、－ＣＦ_３、アミン、Ｃ１－６アルキルアミンおよび－ＣＮのうち一つ以上によって置換されているかまたは置換されていない、水素、Ｃ１－Ｃ１４アルキル基、Ｃ２－Ｃ１４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ１４アルキニル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ６－Ｃ１２アリールアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキルアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロアリール基、Ｃ３－１０ヘテロアリールアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキルアルキル基、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、ヘテロシクロアミンおよびビオチンのうちから選択される。

【請求項2】

請求項１に記載の化学式１の化合物、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩を含む、組成物。

【請求項3】

前記組成物は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患から選択される免疫疾患の予防または治療用薬学組成物である、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記組成物は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患から選択される免疫疾患の予防または改善用食品組成物である、請求項２に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患から選択される免疫疾患の予防または改善用化粧料組成物である、請求項２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規ベンゼン誘導体およびその免疫抑制関連用途に関する。具体的に、本発明は、化学式１の化合物、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩を含む組成物に関する。前記組成物は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患のような免疫疾患の予防または治療用途を持つ。

【背景技術】

【0002】

自己免疫とは、体液性免疫、細胞性免疫または両方ともによって細胞や組織に損傷をもたらすものであって、免疫係の自己抗原（ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ）に対する不適切な反応を指す。自己免疫疾患は、自己免疫反応が標的とする分子、細胞および組織と関連があり、標的抗原の分布によって全身性で現れるか、または特定の臓器に特異的に現れることがある。例えば、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ；ＳＬＥ）、リューマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ＲＡ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）などは全身性自己免疫疾患に属し、自己免疫性貧血、インスリン依存性糖尿病（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ；ＩＤＤＭ）、グレーブス病（ｇｒａｖｅ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）などは臓器特異的自己免疫疾患に属する。

【0003】

移植拒絶反応とは、移植される組織が移植受取人の免疫係によって拒否されるときに発生し、移植される組織を破壊する。これは、超急性拒絶反応、急性拒絶反応、慢性拒絶反応などに分類されることができる。

【0004】

アレルギー性疾患は、特定対象体に対してアレルギー抗原として特定物質に露出したり、接触したりすると、抗体係が過敏に反応することがあり、この場合、該当部位に炎症が生じてアレルギー症状が発生することを言う。ここには、気管支喘息、アレルギー鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹（血管性浮腫、発疹など）、アナフィラキシー反応、アレルギー性結膜炎、季節性アレルギー、薬物アレルギー、食物アレルギーなどが含まれる。

【0005】

炎症疾患は、非正常的な炎症が発生して、火傷、外傷などの物理的原因、病原体、過敏症、ストレスなどの生物学的原因、毒素、粒子状物質など多様な化学的原因によって発生する。

【0006】

上記のような自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患は、過度な免疫反応によって引き起こされることを共通した特徴として持っている。このような免疫疾患は、患者数が多く、これを治療または予防するために古くから研究および開発されている。例えば、抗ヒスタミン剤、ステロイド剤などが開発され、現在までも一般的に使用されている。しかし、毒性および耐性のような問題点が引き起こされるにつれ、依然として免疫疾患に対しては副作用および逆効果なしに所望の治療または予防効果を示すことができる物質に対する必要性が該当技術分野に大きく存在する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明者らは、前記従来技術の問題点を認知し、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患から選択される免疫疾患に対して優れた治療、予防または改善効果を有する化合物を見出すために、数多くの試行錯誤を経て研究を繰り返した。その結果、化学式１の化合物を開発して本発明を完成するに至った。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の目的を達成するための本発明に係る化合物は、下記化学式１で示される。

【化1】

前記化学式１において、
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ_５のうちから１個または２個原子は窒素であり、残りの原子は炭素であり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、互いに独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ１４アルキル基、Ｃ２－Ｃ１４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ１４アルキニル基、Ｃ５－Ｃ１４アリール基、Ｃ５－Ｃ１４アリールアルキル基、Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキルアルキル基、Ｃ３－１４ヘテロアリール基、Ｃ３－１４ヘテロアリールアルキル基、Ｃ３－１４ヘテロシクロアルキル基、Ｃ３－１４ヘテロシクロアルキルアルキル基、Ｃ１－Ｃ１４アルコキシ基、Ｃ５－Ｃ１４アリールオキシ基、Ｃ５－Ｃ１４ヘテロアリールオキシ基、－ＮＯ_２、－ＮＲ_６、－ＳＯ_２Ｒ_６、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ_６）_２、－ＣＦ_３、－ＯＨ、シアン基、チオール基、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、ジアゾール、イミダゾール、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、ヘテロシクロアミンおよびビオチンのうちから選択され、
Ｙは、－ＯＨ、チオール基、フェノキシ、シアン基、チアゾール、ジアゾール、イミダゾール、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、－ＣＯＮ（Ｒ_６）_２、－ＮＲ_６ＣＯＲ_６、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ_６）_２、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＣＯＯＲ_６、－Ｒ_７ＣＯＯＲ_６、－Ｒ_７ＣＯＮ（Ｒ_６）_２、－ＣＯＮＨＳＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＳＲ_６、－ＣＯＮＨＳＳＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＳＳＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＳＯ_２Ｒ_６、－ＣＯＮＨＯＲ_６、－ＣＯＮＨＲ_７ＯＲ_６、－ＣＯＮ（Ｒ_７）_２ＣＯＮ（Ｒ_６）_２および－ＣＯＮ（Ｒ_７）_２ＮＲ_７ＣＯＲ_６のうちから選択され、
ここで、Ｒ_６およびＲ_７は、互いに独立して、水素、ハロゲン、チオール基、フェノキシ、シアン基、チアゾール、ジアゾール、イミダゾール、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ６アルケニル基、Ｃ２－Ｃ６アルキニル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ６－Ｃ１２アリールアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキルアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロアリール基、Ｃ３－１０ヘテロアリールアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキルアルキル基、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ基、－ＣＦ_３、アミン、Ｃ１－６アルキルアミンおよび－ＣＮのうち一つ以上によって置換されているかまたは置換されていない、水素、Ｃ１－Ｃ１４アルキル基、Ｃ２－Ｃ１４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ１４アルキニル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、Ｃ６－Ｃ１２アリールアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキルアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロアリール基、Ｃ３－１０ヘテロアリールアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキル基、Ｃ３－１０ヘテロシクロアルキルアルキル基、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、ヘテロシクロアミンおよびビオチンのうちから選択される。

【0009】

前記化学式１は、下記の化学式と相互交換的に使用されることができ、同一の意味を持つ。

【0010】

本発明において使用される用語「互いに独立して」は、２個以上の置換基が個別的に定義されて、互いに異なってもよく、同一であってもよいということを意味する。例えば、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５およびＸ_６は、炭素または窒素であり、互いに同一または異なってよい。

【0011】

本発明において、アルキル、アルケニル、アルキニルのような用語は、直鎖（または線状とも指称する）または側鎖（または分岐状とも指称する）をすべて含むと意図される。

【0012】

本発明において使用される用語「ハロゲン」は、フルオロ、塩素、臭素またはヨードを意味する。

【0013】

本発明において使用される用語「アルコキシ」は、Ｏ－アルキルを意味する。

【0014】

本発明において使用される用語「ヘテロ」は、酸素、窒素および硫黄のうちから選択されたヘテロ原子を意味する。

【0015】

本発明において使用される用語「ヘテロシクロアルキル」は、ヘテロ原子が環内に含まれたシクロアルキルを意味する。

【0016】

本発明は、化学式１で示される化合物、その異性体、溶媒化物、または薬学的に許容可能な塩を含む、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患から選択される免疫疾患の治療または予防用組成物を提供する。

【0017】

本発明において使用される用語「治療」は、本発明に係る組成物の投与によって免疫疾患の症状が好転または完治されるすべての行為を意味する。

【0018】

本発明において使用される用語「予防」は、本発明に係る組成物の投与によって免疫疾患が抑制または遅延するすべての行為を意味する。

【0019】

前記免疫疾患は、免疫疾患が進行されて追加で発生するか、または免疫疾患の重症度が高まった症状、疾患、状態などをすべて含むと理解されるべきである。

【0020】

例えば、自己免疫疾患には、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ；ＳＬＥ）、リューマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ＲＡ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、自己免疫性貧血、インスリン依存性糖尿病（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ；ＩＤＤＭ）、1型糖尿病、グレーブス病（ｇｒａｖｅ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、グレーブス甲状腺亢進症（Ｇｒａｖｅｓ ｈｙｐｅｒｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ）、菊池（Ｋｉｋｕｃｈｉ）病、血球貪食性リンパ組織球症（Ｈｅｍｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、成人スチル病（Ａｄｕｌｔ ｏｎｓｅｔ Ｓｔｉｌｌ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、ＩｇＧ４－関連性疾患、乾癬などが含まれ得るが、これに制限されるものではない。

【0021】

アレルギー性疾患には、気管支喘息、アレルギー鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹（血管性浮腫、発疹など）、アナフィラキシー反応、アレルギー性結膜炎、季節性アレルギー、薬物アレルギー、食物アレルギーなどが含まれ得るが、これに制限されるものではない。

【0022】

炎症疾患には、火傷、外傷などの物理的原因、病原体、過敏症、ストレスなどの生物学的原因、毒素、粒子状物質など、多様な化学的原因によって発生する炎症疾患が含まれ得るが、これに制限されるものではない。

【0023】

前記化合物には、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩が含まれる。

【0024】

本発明において使用される用語「薬学的に許容可能な塩」は、当該技術分野における通常の方法によって製造されることができるものであって、例えば、塩酸、臭素化水素、硫酸、硫酸水素ナトリウム、リン酸、炭酸などの無機酸との塩またはギ酸、酢酸、シュウ酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、ゲンチジン酸、フマル酸、ラクトビオン酸、サリチル酸、またはアセチルサリチル酸（アスピリン）のような有機酸とともに薬学的に許容可能なこれらの酸の塩を形成したり、またはナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属イオンと反応して、これらの金属塩を形成したり、またはアンモニウムイオンと反応して、さらに他の形態の薬学的に許容可能な塩を形成することもでき、これに限定されるものではない。

【0025】

本発明に係る薬学組成物は、前記化学式１で示される化合物、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩を単独で含有するか、または一つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤をさらに含有することができる。

【0026】

前記薬学的に許容される担体としては、例えば、経口投与用担体または非経口投与用担体をさらに含むことができる。経口投与用担体は、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸などを含むことができる。また、非経口投与用担体は、水、適したオイル、食塩水、水性グルコースおよびグリコールなどを含むことができ、安定化剤および保存剤をさらに含むことができる。適した安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適した保存剤としては、ベンザルコニウムクロリド、メチル－またはプロピル－パラベンおよびクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体としては、次の文献に記載されているものを参考にすることができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９ｔｈ ｅｄ．、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９５）。

【0027】

本発明の薬学組成物は、ヒトを始めとした哺乳動物に如何なる方法でも投与することができる。例えば、経口または非経口的に投与することができる。非経口的な投与方法としてはこれに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下または直腸内投与であってよい。例えば、本発明の薬学組成物を注射型剤形で製造して、これを３０ゲージの細い注射針で皮膚を軽く単刺（ｐｒｉｃｋ）する方法、または皮膚に直接的に塗布する方法で投与されることができる。

【0028】

本発明の薬学組成物は、上述のような投与経路によって経口投与用または非経口投与用製剤に剤形化することができる。

【0029】

経口投与用製剤の場合に、本発明の組成物は、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液などで、当業界に公知になっている方法を利用して剤形化されることができる。例えば、経口用製剤は、活性成分を固体賦形剤と配合した後、これを粉砕して適した補助剤を添加した後、顆粒混合物で加工することで錠剤または糖衣錠剤を収得することができる。適した賦形剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトールおよびマルチトールなどを含む糖類とトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプンおよびジャガイモデンプンなどを含むデンプン類、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチル－セルロースなどを含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなどのような充填剤が含まれることができる。また、場合によって、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどを崩壊剤として添加することができる。さらに、本発明の組成物は、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤および防腐剤などをさらに含むことができる。

【0030】

非経口投与用製剤の場合には、注射剤、クリーム剤、ローション剤、外用軟膏剤、オイル剤、保湿剤、ゲル剤、エアロゾルおよび鼻腔吸入剤の形態で当業界に公知になっている方法で剤形化することができる。これらの剤形は、すべての製薬化学に一般的に公知になっている処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９７５．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １８０４２，Ｃｈａｐｔｅｒ ８７：Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒ）に記載されている。

【0031】

本発明の薬学組成物の総有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）で患者に投与されることができ、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によって投与されることができる。本発明の薬学組成物は、疾患の症状によって有効性分の含量を異にすることができる。好ましくは、本発明の組成物の好ましい全用量は、１日当たり患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１μｇ～１，０００ｍｇ、最も好ましくは、０．１μｇ～１００ｍｇであってよい。しかし、前記本発明の薬学組成物の用量は、投与経路および治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌および排泄率など多様な要因を考慮して患者に対する有効投与量を考慮して、当分野における通常の知識を有する者が適切な有効投与量を決めることができるはずである。本発明に係る薬学組成物は、本発明の効果を見せる限り、その剤形、投与経路および投与方法に特に制限されてない。

【0032】

また、本発明の薬学組成物は、個別治療剤で投与されるか、他の治療剤と併用して投与されることができる。他の治療剤と併用して投与される場合、本発明の組成物と他の治療剤は、同時に、個別的にまたは順次に投与されることができる。前記他の治療剤は、免疫疾患の治療または改善効果を有するものと既に知られている物質であってよい。前記他の治療剤は、薬物療法以外の外科的処置、手術などをすべて含む。

【0033】

本発明の薬学組成物が他の治療剤と併用して投与される場合、本発明の組成物と他の治療剤は、それぞれ別途の容器に分離させて剤形化されるか、同じ容器で一緒に剤形化されることができる。

【0034】

本発明のまた一つの側面において、本発明の組成物を個体に投与するステップを含む免疫疾患の治療または予防方法を提供する。

【0035】

本発明に係る免疫疾患の治療または予防方法で各用語は特に言及しない限り、前記免疫疾患の治療または予防用組成物で前述のところと同一の意味を持つ。

【0036】

用語「個体」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、羊、犬、およびげっ歯類、例えば、マウス、ラットおよびモルモットであってよい。前記個体は、好ましくはヒトであってよい。用語「個体」は、本明細書において「対象体」および「患者」と相互交換的に使用可能である。

【0037】

本発明に係る免疫疾患の治療または予防方法において、本発明の組成物は、他の治療剤と同時に、順次に、または個別的に個体に投与されてよい。前記「同時」投与は、本発明の組成物と他の治療剤を同じ注入方法を通じて一度に投与されることを意味する。前記「順次」投与は、別個の注入方法を利用して本発明の組成物と他の治療剤を投与するが、比較的連続的に投与することを意味するものであって、投与間隔に消耗する時間として可能な最小限の時間を承諾する。前記「個別的」投与は、一定時間間隔を置いて本発明の組成物と他の治療剤を投与することを意味する。前記本発明の組成物および他の治療剤の投与方法は、患者の治療効能および副作用を考慮して、当分野における通常の知識を有する者が適切に選択することができる。

【発明の効果】

【0038】

本発明に係る化学式１の化合物、その立体異性体、溶媒化物、水和物、結晶形または薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、アレルギー性疾患および炎症疾患から選択される免疫疾患を効果的に予防または治療することができる。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1】ＣＦＳＥの蛍光染色と細胞増殖の関係を説明するためのＦＡＣＳグラフである。

【図2】本発明の化合物をそれぞれ投与して、細胞の増殖をＦＡＣＳで読み取るグラフである。

【図3】それぞれ薬物処理して２４時間経過後、ＩＬ－２、７２時間経過後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ分泌量を測定したグラフである。

【図4】それぞれ薬物処理して２４時間経過後、ＩＬ－２、７２時間経過後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ分泌量を測定したグラフである。

【図5】それぞれ薬物処理して２４時間経過後、ＩＬ－２、７２時間経過後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ分泌量を測定したグラフである。

【図6】それぞれ薬物処理して２４時間経過後、ＩＬ－２、７２時間経過後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ分泌量を測定したグラフである。

【図7】乾癬マウス動物モデルから本発明の化合物の効能を見るための方法および結果を示したものである。

【図8】乾癬マウス動物モデルから本発明の化合物の効能を見るための方法および結果を示したものである。

【図9】乾癬マウス動物モデルから本発明の化合物の効能を見るための方法および結果を示したものである。

【図10a】乾癬マウス動物モデルから本発明の化合物の効能を評価した結果であって、ＣＤ１１ｂ 顆粒球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）、Ｂ細胞およびＴ細胞の構成割合に関する。

【図10b】乾癬マウス動物モデルから本発明の化合物の効能を評価した結果であって、ＣＤ１１ｂ 顆粒球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）、Ｂ細胞およびＴ細胞の構成割合に関する。

【図10c】乾癬マウス動物モデルから本発明の化合物の効能を評価した結果であって、ＣＤ１１ｂ 顆粒球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）、Ｂ細胞およびＴ細胞の構成割合に関する。

【発明を実施するための形態】

【0040】

以下、本発明を実施例によってより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されるものではない。また、当該技術分野における通常の知識を有する者であれば、本発明の趣旨を害しない範囲内で本発明に対して多様な変形および修正を加えることができるはずである。本明細書において特に定義されていない用語に対しては、本発明の属する技術分野において通常的に使用される意味を有するものと理解されなければならないだろう。

【0041】

製造例
化学式１に属する化合物が代表的に下記反応式１または２によって製造された。置換基が異なる化合物の場合にも、類似したステップを通じて実際製造したが、本明細書にすべて明示してはいない。当該技術分野における通常の知識を有する者であれば、下記の代表的な例を参照して、化学式１に属する化合物を容易に製造することができる。

【0042】

【化2】

【0043】

前記反応式１において、化合物Ａと化合物Ｂのカップリング反応を通じて１－エチル－３－（３´－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸（ＥＤＣ・ＨＣｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を利用したカップリング反応で化合物Ｃが収得される。

【0044】

【化3】

【0045】

前記反応式２において、化合物Ａと化合物Ｂを反応させて化合物Ｃが収得される。

【0046】

このように製造された化合物の代表的な例を下記に具体的な化学構造式とともに示した。ただし、下記表に見られるすべての化合物が本願発明に係る化学式１に含まれるものではない。

【0047】

【0048】

前記化合物を製造したところ、確認された分子量、性状および１Ｈ ＮＭＲ値は、次の表１のとおりである。

【表1】

【0049】

実験例１：Ｔ細胞増殖抑制効果検証
前記製造例で収得された化合物がＴ細胞の増殖を抑制する効果があるか否かを調べるために、細胞内分子と共有結合で結合する蛍光染料カルボキシフルオセイン二酢酸サクシニミジルエステル（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ｅｓｔｅｒ）（ＣＦＳＥ）を利用してＴ細胞の増殖をｅｘ ｖｉｖｏで測定した。７週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスから脾臓を摘出して潰した後、ｓｔｒａｉｎｅｒ（４０μＭ 細孔サイズ（ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ）、ＳＰＬ）で単細胞だけ分離した後、ＡＣＫ（Ａｍｍｏｎｉｕｍ－Ｃｈｌｏｒｉｄｅ－Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）ｌｙｓｉｓ緩衝溶液で赤血球を除去して白血球だけ分離した。ここに、ＣＤ９０．２ マイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ）（１３０－１２１－２７８、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ．）を添加して４℃で２０分間反応させた後、ＭＡＣＳ Ｍａｇｎｅｔｉｃ ＳｔａｎｄとＬＳ ｃｏｌｕｍｎを利用して最終的に脾臓のＴ細胞（Ｔ ｃｅｌｌ）だけ分離した。脾臓細胞から分離したＴ ｃｅｌｌは、Ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ（ＲＰＭＩ－１６４０＋２００ Ｕ／ｍＬ ペニシリン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）＋２００μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ））１ｍＬで再懸濁した後、ＣＦＳＥ（１０ｍＭ）０．３μＬを添加して３７℃で５分間反応させた。続いて、Ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ １０ｍＬを添加して反応を停止し、遠心分離して細胞沈殿物を収得した。ここに、１０％ ＦＢＳおよび１００Ｕ／ｍＬ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、１００μｇ／ｍＬ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎが含有されているＲＰＭＩ １６４０培地を添加して細胞を浮遊させ、９６－ウェルプレート（ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）にｗｅｌｌ当たり２×１０^５ ｃｅｌｌの細胞を分注してＣＤ３、ＣＤ２８抗体を（それぞれ０．５μｇ／ｍＬ）で処理してＴ ｃｅｌｌを活性化させた。
ＤＭＳＯに希釈させた化合物を１０μＭ、３０μＭ、５０μＭの濃度でそれぞれ３個のｗｅｌｌずつ処理した。３７℃、５％ ＣＯ_２恒温培養器で３日間培養した後、ＦＡＣＳ ｃａｎｔｏ機器で細胞増殖程度をリーディング（Ｒｅａｄｉｎｇ）した。

【0050】

図１のＦＡＣＳグラフで縦軸は細胞の量（個数）を示し、横軸は細胞の蛍光水準を示す。ＣＦＳＥで染色された細胞は、細胞分裂を繰り返すことによりＣＦＳＥの量が減少し、これは、ＣＦＳＥの蛍光減少でグラフで横軸の左側に移動して表示されるが、これは細胞が増殖されることを意味する。

【0051】

図２は、化合物９、化合物６９および化合物８４をそれぞれ投与して細胞の増殖をＦＡＣＳで読み取ったグラフである。各グラフは、下から上に薬物の濃度を増加させながら投与したものであって、順に薬物濃度１０μＭ、３０μＭ、５０μＭに該当する。化合物６９と化合物８４は、１０～３０μＭ濃度で細胞増殖が抑制されることを見せるが、化合物９は、５０μＭ濃度で投与しても細胞増殖が抑制されないことを見せた。

【0052】

前記実験結果に対して、一括的に増殖抑制率を表示するために、増殖抑制率はＣＤ３／ＣＤ２８＋ＤＭＳＯを投与した後、測定した増殖量を基準に化合物投与後に増殖された量に対する相対的な増殖量を求め、これを抑制量に換算して百分率で表記した。具体的に、次のように増殖抑制率を算出した。

【0053】

増殖抑制率（％）＝｛１－薬物投与細胞における増殖量÷ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＤＭＳＯ投与後の増殖量｝×１００

【0054】

【表2】

【0055】

一方、下記表３から見られるように、本発明に係る化学式１に属さない化合物は、増殖抑制率が非常に低い水準と確認された。

【0056】

【表3】

【0057】

実験例２：細胞毒性実験
本発明に係る化合物の細胞毒性を評価するために、下記の実験を遂行した。

【0058】

韓国細胞株銀行から購入したＴリンパ球（Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）細胞株Ｊｕｒｋａｔ Ｅ６－１を１０％ ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、１００μｇ／ｍＬ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎが含まれたＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した後、これを回収して１，３００ｒｐｍの速度で５分間遠心分離した。以後、上澄み液を除去した細胞を同じ条件の培地に約２．２×１０^５ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度で再懸濁して、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（Ｃｏｓｔａｒ ９６ ｗｅｌｌ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｌａｔｅ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）にｗｅｌｌ当たり９０μＬずつ分注した。該当ｐｌａｔｅに各化合物を濃度別に１０μＬずつ処理した後、５％ ＣＯ_２恒温培養器で３７℃で２４時間培養した。以後、各ｗｅｌｌに１０μＬのＣＣＫ－８を加えて、さらに５％ ＣＯ_２恒温培養器で３７℃で２時間培養した後、４５０ｎｍで吸光度を測定して薬物を処理していない細胞に対する相対的な細胞生存率を表４に示した。

【0059】

表４に記入された数値は、薬物を処理していない細胞の生存率を１００％としたとき、各薬物を濃度別に処理したグループで、これによる相対的な細胞の生存率を意味する。

【0060】

【表4】

【0061】

実験例３：サイトカイン発現減少効果検証
本発明の化合物がＴ細胞が分泌するサイトカイン量変化に及ぼす影響を確認するために、下記実験を遂行した。

【0062】

７週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスから脾臓を摘出して潰した後、濾過器（ｓｔｒａｉｎｅｒ）（４０ｕＭ ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ、ＳＰＬ）で単細胞だけ分離した後、ＡＣＫ（Ａｍｍｏｎｉｕｍ－Ｃｈｌｏｒｉｄｅ－Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）ｌｙｓｉｓ緩衝溶液で赤血球を除去して白血球だけ分離した。これを１０ｖ／ｖ％ ＣＤ９０．２ ｍｉｃｒｏｂｅａｄ（１３０－１２１－２７８、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ．）と４℃で２０分反応させて、磁性を基盤とした錠剤に基づいて最終的に脾臓のＴ ｃｅｌｌだけ分離した。前記実験方法を通じて分離したＴ細胞を２×１０^５ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの量で９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに培養後、Ｔ細胞の活性化のために各ｗｅｌｌに１μｇ／ｍＬ濃度でａｎｔｉ－ＣＤ３／ＣＤ２８抗体を処理した。以後、ビヒクル（Ｖｅｈｉｃｌｅ）（ＤＭＳＯ）および３０μＭの化合物（化合物１４、化合物１９、化合物２６、化合物３１、化合物３５、化合物４０、化合物４１、化合物５６、化合物６９、化合物７５）を各ｗｅｌｌに処理して、５％ ＣＯ_２恒温培養器で３７℃培養した。２４時間および７２時間が経過した後、Ｔ細胞培養液を取って１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上澄み液を収得した。

【0063】

Ｔ細胞培養液に存在するサイトカインの濃度を測定するために、Ｍｏｕｓｅ Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ＣＢＡ Ｋｉｔ（Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ ｋｉｔ）５６０４８５、ＢＤ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を利用して、フローサイトメトリーを通じて各薬物処理後に２４時間経過後、ＩＬ－２、７２時間経過後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ分泌量を測定した。

【0064】

前記実験結果を示した図３～６から見られるように、本発明の化合物を処理せずにａｎｔｉ－ＣＤ３／ＣＤ２８抗体で刺激したＴ細胞ではＩＬ－２およびＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａを多量分泌する一方、化合物（化合物１４、化合物１９、化合物２６、化合物３１、化合物３５、化合物４０、化合物４１、化合物５６、化合物６９、化合物７５）を処理した場合、これらのサイトカイン分泌が顕著に減少することを確認した。これに基づいて、本発明に係る化合物は、Ｔ細胞の増殖を抑制する過程でサイトカイン分泌を減少させる効果があるということが立証された。

【0065】

実験例４：乾癬モデル治療効果検証
本発明に係る化合物の乾癬に対する治療効果を検証するために、下記のように乾癬動物モデルを構築し、化合物６９と化合物８３に該当する化合物を注射して皮膚病変の緩和と免疫細胞変化の様相を評価しようとした。

【0066】

乾癬マウス動物モデル構築のために、ＢＡＬＢ／ｃ（７週齢、２０ｇ、Ｆｅｍａｌｅ）を（株）ハナバイオテックから購入した後、一週間飼育環境に適応するようにした。以後、マウスの背中部位の毛を除毛器で１次除毛した後、除毛クリーム（ニクリンクリーム（チオグライコラックエシド８０％、ＩＬＤＯＮＧ製薬））を利用して２次で完全に除毛し、背中の傷を確認するために２４時間飼育した。

【0067】

以後、本発明に係る化合物の乾癬発生予防および治療効果を検証するために、図７および表５のように５つのグループの実験群を設定し、第２番目から第５番目のグループのマウスには乾癬を誘発するためにＡｌｄａｒａ（登録商標）ｃｒｅａｍを毎日８０ｍｇ（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ、４ ｍｇ）ずつ１日１回２週間（１４日、計１４回）間塗布した。これと同時に、本発明に係る化合物（化合物６９および化合物８３）の乾癬発生予防および治療効果を比較するために、薬物を処理するグループの場合、マウス１匹当たり４０ｍｇ／ｋｇの化合物を投与用量の１０％に該当するＤＭＳＯに完全に溶かした後、最終的にＤＭＳＯ：クレモフォール ＥＬ：ＰＥＧ ４００：蒸留水の割合が１：１：４：４（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）になるようにクレモフォール ＥＬ－ＰＥＧ ４００－蒸留水混合物にこれを希釈した。以後、該当注射液をマウス１匹当たり１００μＬずつ１日２回、１２時間間隔で腹腔注射した。Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群の場合、薬物を除いた注射液（ＤＭＳＯ：クレモフォールＥＬ：ＰＥＧ ４００：蒸留水＝１：１：４：４（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ））を１００μＬずつ１日２回、１２時間間隔で腹腔注射した。

【0068】

【表5】

【0069】

実験１４日後、各グループに該当するマウスの背中部位の皮膚の紅斑、厚さおよび鱗屑の程度を観察し、Ｈ＆Ｅ染色を通じて該当部位の病理組織の分析を施した。図８から見られるように、乾癬だけ誘発したグループ（乾癬、注射なし：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｎｏｎ－ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）および乾癬を誘発すると同時に注射液溶媒を腹腔に注射したグループ（乾癬、ビヒクル：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、背中部位皮膚の紅斑、厚さおよび鱗屑の程度が酷かったが、化合物６９または化合物８３を投与したグループでは、皮膚病変が軽微に現れるか、ほとんど確認されなかった。

【0070】

図９から見られるように、乾癬だけ誘発したグループ（乾癬、注射なし：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｎｏｎ－ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）および乾癬を誘発すると同時に注射液溶媒を腹腔に注射したグループ（乾癬、ビヒクル：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、過角化症（ｈｙｐｅｒｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、錯角化症（ｐａｒａｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、不規則な棘細胞症（ａｃａｎｔｈｏｓｉｓ）が酷く現れただけでなく、炎症細胞の浸潤が酷く現れたのに対し、化合物６９または化合物８３を投与したグループでは、このような現象が軽微に現れるか、ほとんど確認されなかった。

【0071】

各化合物が生体内で免疫細胞に及ぼす影響を確認するために、各化合物を投与したマウスの脾臓を摘出して細胞を抽出した後、ＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒ（２ ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％ ＦＢＳ、ＮａＣｌ １３７ｍＭ、ＫＣｌ ２．７ｍＭ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４ １０ｍＭ、ＫＨ_２ＰＯ_４ １．８ｍＭ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ．）に懸濁する。フローサイトメトリーのためにＦＡＣＳチューブ（５ｍＬ ｒｏｕｎｄ ｔｕｂｅ、Ｆａｌｃｏｎ）に各マウスの脾臓細胞を５×１０^５個ずつ分注した後、抗体が非特異的に結合することを防ぐために、各チューブに１μｇ／ｍＬのａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ１６／ＣＤ３２（ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ）を３０分間処理した後、１３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離してＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒ １００μＬに再懸濁した。以後、確認しようとする免疫細胞の種類によって、次のように実験を進行した。

【0072】

Ｂ細胞の場合、各ＦＡＣＳチューブを１μｇ／ｍＬのＦＩＴＣが結合されたａｎｔｉ－Ｂ２２０抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標））で４℃で３０分間染色した後、２ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。以後、各チューブを１５，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄み液を捨てて沈んだ細胞は２００μＬの４％パラホルムアルデヒド水溶液を利用して固定した。

【0073】

Ｔ細胞の場合、各ＦＡＣＳチューブを１μｇ／ｍＬのＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５が結合されたａｎｔｉ－ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＦＩＴＣが結合されたａｎｔｉ－ＣＤ８（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標））、Ｃｙ７が結合されたａｎｔｉ－ＣＤ４抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標））で４℃で３０分間染色した。以後、各チューブを２ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで洗浄して１５，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄み液を捨てて沈んだ細胞は２００μＬの４％パラホルムアルデヒド水溶液を利用して固定した。

【0074】

マクロファージの場合、各ＦＡＣＳチューブを１μｇ／ｍＬのＦＩＴＣが結合されたａｎｔｉ－ＣＤ１１ｂ抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標））で４℃で３０分間染色した後、２ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。以後、各チューブを１５，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄み液を捨てて沈んだ細胞は２００μＬの４％パラホルムアルデヒド水溶液を利用して固定した。

【0075】

上記の過程を通じて、免疫細胞を染色してフローサイトメトリーを実施したところ、図１０ａ～図１０ｃから見られるように、イミキモドを塗布して乾癬だけ誘発したグループ（乾癬、注射なし：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｎｏｎ－ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、そして、イミキモドを塗布するとともにＶｅｈｉｃｌｅを腹腔内投与したグループ（乾癬、ビヒクル：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ、Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、ＣＤ１１ｂ陽性顆粒球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）が脾臓で急激に増加し、相対的にＢ細胞とＴ細胞の構成割合が減少する様相を見せた。しかし、化合物６９または化合物８３を腹腔内投与したグループにおいては、ＣＤ１１ｂ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅの割合が減少し、これとともにＢ細胞とＴ細胞の割合が増加した。最終的に、有効化合物を投与したとき脾臓のＣＤ１１ｂ陽性ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅとＢ細胞およびＴ細胞の構成割合が正常マウスから見られるものと類似になることを確認して、薬物が治療効果を見せることを確認した。

【0076】

上記の結果を通じて、本発明の化合物である化合物６９または化合物８３は、自己免疫疾患の一種である乾癬動物モデルに対する治療効能を示すことを検証し、その過程において、免疫細胞の作用に影響を及ぼすことを検証した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10a】

【図10b】

【図10c】

【国際調査報告】