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特表2024-529511糖尿病関連腎臓病および糸球体疾患を処置するための方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-06
(54)【発明の名称】糖尿病関連腎臓病および糸球体疾患を処置するための方法
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20240730BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240730BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20240730BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240730BHJP
A61K 47/60 20170101ALI20240730BHJP
C07K 14/51 20060101ALN20240730BHJP
C07K 19/00 20060101ALN20240730BHJP
C07K 16/22 20060101ALN20240730BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240730BHJP
C12N 15/19 20060101ALN20240730BHJP
C12N 15/62 20060101ALN20240730BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00 ZNA
A61P3/10
A61P13/12
A61K39/395 N
A61K47/60
A61K39/395 M
C07K14/51
C07K19/00
C07K16/22
C12N15/13
C12N15/19
C12N15/62 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024505519
(86)(22)【出願日】2022-07-27
(85)【翻訳文提出日】2024-03-28
(86)【国際出願番号】 EP2022071139
(87)【国際公開番号】W WO2023006850
(87)【国際公開日】2023-02-02
(31)【優先権主張番号】63/226,125
(32)【優先日】2021-07-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/302,460
(32)【優先日】2022-01-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524037960
【氏名又は名称】ネフリス エッセエッレエッレ
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】フィオリーナ， パオロ
(72)【発明者】
【氏名】ダッディオ， フランチェスカ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA94
4C076BB13
4C076BB16
4C076CC17
4C076CC21
4C076CC41
4C076EE23
4C076EE59
4C076FF31
4C076FF68
4C084AA17
4C084DA39
4C084MA55
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA12
4C084NA14
4C084ZA811
4C084ZA812
4C084ZC351
4C084ZC352
4C085AA14
4C085BB36
4C085BB41
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE05
4C085GG02
4C085GG04
4C085GG10
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA41
4H045BA57
4H045CA40
4H045DA01
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における、腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法、あるいは腎臓病を処置するための方法が、提供される。これらの方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量、詳細には、ヒトポドサイトのＮＢＬ１媒介性毒性を阻害可能な薬剤の有効量を、１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象に投与することを含む。一部の実施形態において、その薬剤はヒトＮＢＬ１に結合可能な抗体である．
【特許請求の範囲】
【請求項1】
１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法であって、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量を該対象に投与すること
を含む、方法。
【請求項2】
前記薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記薬剤がヒトＮＢＬ１に結合可能である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記薬剤が、ヒトＮＢＬ１に結合可能な、抗体または抗体の抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記抗体または抗原結合フラグメントが３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、該３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
該選択されたＣＤＲ配列（ａ）～（ｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する、
請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記抗体または抗原結合フラグメントが、前記選択されたＣＤＲと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲが、ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
該選択されたＣＤＲ配列ｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する、
請求項５または請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記抗体または抗原結合フラグメントが、前記選択されたＣＤＲと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記抗体フレームワーク領域がヒト抗体フレームワーク領域である、請求項４～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記抗体が全長二価単一特異性モノクローナル抗体である、請求項４～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域、またはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記抗体がヒトＩｇＧ１定常領域を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記抗体Ｆｃ領域が、少なくとも１つの型のＦｃレセプターへの抗体結合を減少させ、かつ／または補体結合を減少させる、操作された変異を有する、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法
【請求項14】
前記抗体がＦａｂであり、必要に応じて該Ｆａｂはペグ化されている、請求項４～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記抗体または抗原結合フラグメントがさらにカニクイザルＮＢＬ１に結合可能である、請求項４～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記抗体または抗原結合フラグメントがさらにマウスＮＢＬ１に結合可能である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記抗体または抗原結合フラグメントが１００ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項４～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記抗体または抗原結合フラグメントが１０ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記抗体または抗原結合フラグメントが５ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
前記薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、請求項２２に記載の方法。
【請求項25】
前記薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、請求項１に記載の方法。
【請求項27】
前記薬剤が非経口投与される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記薬剤が静脈内投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記薬剤が皮下投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項30】
前記薬剤が少なくとも３か月間投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記薬剤が少なくとも６か月間投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記薬剤が少なくとも１２か月間投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記対象が上昇した処置前血漿ＮＢＬ１レベルを有する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記対象が１型糖尿病を有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記対象が２型糖尿病を有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記対象が糸球体疾患を有する、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記糸球体疾患を有する前記対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
前記糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される、請求項３６または請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
腎機能低下の発症を予防するかまたは腎機能低下を遅くする、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）または糸球体疾患を処置する方法であって、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量を該対象に投与すること
を含む、方法。
【請求項41】
前記薬剤が、ヒトＮＢＬ１に結合可能な、抗体または抗体の抗原結合フラグメントである、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
抗体または抗原結合フラグメントであって、該抗体は、ＮＢＬ１に結合可能であり、ヒトポドサイトのＮＢＬ１誘発毒性を阻害可能である、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項43】
前記抗体または抗原結合フラグメントが３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、該３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、ｕ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｖ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｗ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｘ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｙ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｚ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ａａ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｂｂ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｃｃ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｄｄ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｅｅ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｆｆ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｇｇ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｈｈ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｉｉ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｊｊ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｋｋ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｌｌ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｍｍ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｎｎ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
該選択されたＣＤＲ配列（ａ）～（ｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する、
請求項４２に記載の抗体。
【請求項44】
前記選択されたＣＤＲと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む、請求項４３に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項45】
前記３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲが、ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
該選択されたＣＤＲ配列ｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する、
請求項４３もしくは請求項４４に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項46】
前記選択されたＣＤＲと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む、請求項４５に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項47】
前記抗体フレームワーク領域がヒト抗体フレームワーク領域である、請求項４３～４６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項48】
前記抗体が全長二価単一特異性モノクローナル抗体である、請求項４３～４７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項49】
前記抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域、またはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。請求項４８に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項50】
前記抗体がヒトＩｇＧ１定常領域を含む、請求項４９に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項51】
前記抗体Ｆｃ領域が、ＦｃＲγへの抗体結合を減少させ、かつ／または補体結合を減少させる、操作された変異を有する、請求項４８～５０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項52】
前記抗体がＦａｂであり、必要に応じて該Ｆａｂはペグ化されている、請求項４３～４７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項53】
さらにカニクイザルＮＢＬ１に結合可能である、請求項４２～５２のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項54】
さらにマウスＮＢＬ１に結合可能である、請求項５３に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項55】
１００ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項４２～５４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項56】
１０ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項５５に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項57】
５ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項５５に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項58】
請求項４２～５７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメント、および薬学的に受容可能なキャリア
を含む、医薬組成物。
【請求項59】
非経口投与のために製剤化される、請求項５８に記載の医薬組成物。
【請求項60】
静脈内投与のために製剤化される、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項61】
皮下投与のために製剤化される、請求項５９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（１．関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年７月２７日に出願された米国特許仮出願第６３／２２６，１２５号および２０２２年１月２４日に出願された米国特許仮出願第６３／３０２，４６０号の利益および優先権を主張し、これらの米国特許仮出願は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書中に援用される。
本出願は、２０２１年７月２７日に出願された米国特許仮出願第６３／２２６，１２５号および２０２２年１月２４日に出願された米国特許仮出願第６３／３０２，４６０号の利益および優先権を主張し、これらの米国特許仮出願は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書中に援用される。
【背景技術】
【0002】
（２．発明の背景）
１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）および２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）には、合わせると世界中で少なくとも３億４千７百万人が罹患しており、有病率は増加中である。糖尿病は、高血糖症と、患者の生活の質および寿命に大きく影響を与える合併症とによって特徴付けられ、社会に対して大きな経済的な負担を課す。米国糖尿病学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）によって行われた研究は、２０１７年の米国における糖尿病の米国内の経済的負担を３，２７０億ドルと評価した。これは、この費用が最後に調べられた２０１２年における２，４５０億ドルから２６％の増加を示す。
１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）および２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）には、合わせると世界中で少なくとも３億４千７百万人が罹患しており、有病率は増加中である。糖尿病は、高血糖症と、患者の生活の質および寿命に大きく影響を与える合併症とによって特徴付けられ、社会に対して大きな経済的な負担を課す。米国糖尿病学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）によって行われた研究は、２０１７年の米国における糖尿病の米国内の経済的負担を３，２７０億ドルと評価した。これは、この費用が最後に調べられた２０１２年における２，４５０億ドルから２６％の増加を示す。
【0003】
Ｔ１ＤについてもＴ２Ｄについても、現在は治癒が存在しない。ほどんとの治療は、患者がその症状をある特定の程度に管理することを助けるが、糖尿病患者は依然として、複数の長期間にわたる健康上の合併症に直面する。これらの合併症のうちには腎損傷（ｋｉｄｎｅｙ ｄａｍａｇｅ）があり、これは末期腎不全（ＥＳＲＤ）へと進行し得る。糖尿病は、２０１１年にすべての新規症例のうちの４４％において腎不全の主要原因であった。糖尿病に関連する合併症（詳細には、腎臓病およびその進行）の有病率および重症度を考慮すると、糖尿病における腎臓病の発症および進行を遅延させる治療剤の必要性が、存在する。
【0004】
腎損傷はまた、他の病因も有する。糖尿病以外の障害によって引き起こされる腎臓病の発症および進行を遅延させる治療剤の必要性が、存在する。糸球体障害を処置する治療剤の必要性が、特に存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
（３．発明の概要）
本開示の実験的実施例において詳述されるとおり、本発明者らは、神経芽細胞腫腫瘍形成抑制因子１（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｔｕｍｏｒｇｅｎｉｃｉｔｙ １）（ＮＢＬ１）というタンパク質が、腎細胞（ポドサイトおよび尿細管細胞を含む）に対して直接的に毒性であることを発見した。その毒性作用は、腎ＢＭＰタンパク質の阻害を通じては媒介されない。本発明者らは、ＢＭＰが、腎細胞中では発現されず腎細胞によって分泌されないことを示す。さらに、本発明者らは、ＮＢＬ１もまた腎細胞中で発現されないが、循環免疫細胞中で発現されることを発見した。ＮＢＬ１をアンタゴニスト（ｓＢＭＰ２または抗ＮＢＬ１モノクローナル抗体のいずれか）で中和すると、毒性をインビトロで防止する。最後に、本発明者らは、ＮＢＬ１が１型糖尿病および２型糖尿病において上昇することを示す。したがって、ＮＢＬ１の阻害は、特に１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する患者において、循環ＮＢＬ１によって引き起こされる腎損傷の発症および進行を予防するための新規な治療アプローチである。ＮＢＬ１の阻害はまた、ＮＢＬ１によって損傷が媒介される非糖尿病性糸球体疾患を処置することにおいて有効である。
本開示の実験的実施例において詳述されるとおり、本発明者らは、神経芽細胞腫腫瘍形成抑制因子１（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｔｕｍｏｒｇｅｎｉｃｉｔｙ １）（ＮＢＬ１）というタンパク質が、腎細胞（ポドサイトおよび尿細管細胞を含む）に対して直接的に毒性であることを発見した。その毒性作用は、腎ＢＭＰタンパク質の阻害を通じては媒介されない。本発明者らは、ＢＭＰが、腎細胞中では発現されず腎細胞によって分泌されないことを示す。さらに、本発明者らは、ＮＢＬ１もまた腎細胞中で発現されないが、循環免疫細胞中で発現されることを発見した。ＮＢＬ１をアンタゴニスト（ｓＢＭＰ２または抗ＮＢＬ１モノクローナル抗体のいずれか）で中和すると、毒性をインビトロで防止する。最後に、本発明者らは、ＮＢＬ１が１型糖尿病および２型糖尿病において上昇することを示す。したがって、ＮＢＬ１の阻害は、特に１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する患者において、循環ＮＢＬ１によって引き起こされる腎損傷の発症および進行を予防するための新規な治療アプローチである。ＮＢＬ１の阻害はまた、ＮＢＬ１によって損傷が媒介される非糖尿病性糸球体疾患を処置することにおいて有効である。
【0006】
したがって、第一の局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法が、提供される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な（詳細には、ヒトポドサイトに対するＮＢＬ１毒性を阻害可能な）薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。一部の実施形態において、この方法は、腎機能低下の発症を予防するかまたは腎機能低下を遅くする．
【0007】
さらなる局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎機能低下を遅くするための方法が、提供される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な（詳細には、ヒトポドサイトに対するＮＢＬ１毒性を阻害可能な）薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。
【0008】
なおさらなる局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）を処置するための方法が、提供される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な（詳細には、ヒトポドサイトに対するＮＢＬ１毒性を阻害可能な）薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。
【0009】
これらの方法の一部の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１に結合可能である。一部の実施形態において、その薬剤はヒトＮＢＬ１に結合可能である。
【0010】
一部の実施形態において、その薬剤は、ヒトＮＢＬ１に結合可能な、抗体または抗体の抗原結合フラグメントである。
【0011】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、これらの３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、
ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列セット（ａ）～（ｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸変化により異なる配列を有する。
ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列セット（ａ）～（ｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸変化により異なる配列を有する。
【0012】
これらの方法の一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、その選択されたＣＤＲと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列セットｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸変化により異なる配列を有する。
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列セットｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸変化により異なる配列を有する。
【0013】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、その選択されたＣＤＲと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。
【0014】
一部の実施形態において、その抗体フレームワーク領域はヒト抗体フレームワーク領域である。
【0015】
一部の実施形態において、その抗体は全長二価単一特異性モノクローナル抗体である。一部の実施形態において、その抗体はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域、またはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、その抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態において、その抗体Ｆｃ領域は、少なくとも１つの型のＦｃレセプターへの抗体結合を減少させ、かつ／または補体結合を減少させる、操作された変異を有する。一部の実施形態において、その抗体はＦａｂであり、必要に応じてそのＦａｂはペグ化されている。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントはさらにカニクイザルＮＢＬ１に結合可能である。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントはさらにマウスＮＢＬ１に結合可能である。
【0016】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは１００ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは１０ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは５ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは１ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。
【0017】
一部の実施形態において、その薬剤は骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む。一部の実施形態において、その薬剤はヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む。一部の特定の実施形態において、その薬剤は、血清半減期を延長させる部分をさらに含む。一部の実施形態において、その半減期延長部分は抗体Ｆｃドメインである。一部の実施形態において、その半減期延長部分は、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である。
【0018】
一部の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である。
【0019】
一部の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１発現を阻害可能である。
【0020】
一部の実施形態において、その薬剤は非経口投与される。一部の実施形態において、その薬剤は静脈内投与される。一部の実施形態において、その薬剤は皮下投与される。一部の実施形態において、その薬剤は少なくとも３か月間投与される。一部の実施形態において、その薬剤は少なくとも６か月間投与される。一部の実施形態において、その薬剤は少なくとも１２か月間投与される。
【0021】
一部の実施形態において、その対象は、上昇した処置前血漿ＮＢＬ１レベルを有する。一部の実施形態において、その対象は１型糖尿病を有する。一部の実施形態において、その対象は２型糖尿病を有する。一部の実施形態において、その対象は糸球体疾患を有する。一部の実施形態において、糸球体疾患を有するその対象は１型糖尿病も２型糖尿病も有しない。一部の実施形態において、その糸球体疾患は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される。
【0022】
別の局面において、ＮＢＬ１に結合可能であり、ヒトポドサイトのＮＢＬ１誘発毒性を阻害可能である、抗体または抗原結合フラグメントが提供される。
【0023】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、これらの３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、
ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
（ａ）～（ｔ）から選択されるＣＤＲ配列とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、これらの選択されたＣＤＲセット（ａ）～（ｔ）のうちの１つと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。
ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
（ａ）～（ｔ）から選択されるＣＤＲ配列とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、これらの選択されたＣＤＲセット（ａ）～（ｔ）のうちの１つと同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。
【0024】
一部の実施形態において、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列ｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、その選択されたＣＤＲｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、またはｔ）と同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列ｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、その選択されたＣＤＲｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、またはｔ）と同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。
【0025】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントのフレームワーク領域はヒト抗体フレームワーク領域である。
【0026】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは全長二価単一特異性モノクローナル抗体である。一部の実施形態において、その抗体はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域、またはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、その抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態において、その抗体Ｆｃ領域は、ＦｃＲγへの抗体結合を減少させ、かつ／または補体結合を減少させる、操作された変異を有する。
【0027】
一部の実施形態において、その抗原結合フラグメントはＦａｂであり、必要に応じてそのＦａｂはペグ化されている。
【0028】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントはさらにカニクイザルＮＢＬ１に結合可能である。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントはさらにマウスＮＢＬ１に結合可能である。
【0029】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満または１ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。
【0030】
別の局面において、医薬組成物が提供される。その組成物は、上記の抗ＮＢＬ１抗体または抗原結合フラグメント、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。一部の実施形態において、その組成物は非経口投与のために製剤化されている。一部の実施形態において、その組成物は静脈内投与のために製剤化されている。一部の実施形態において、その組成物は皮下投与のために製剤化されている。
【0031】
（４．図面のいくつかの図の簡単な説明）
本発明のこれらの特色（feature）、局面、および利点ならびに他の特色、局面、および利点は、以下の説明および添付の図面に関して、より良く理解されるようになる。
本発明のこれらの特色（feature）、局面、および利点ならびに他の特色、局面、および利点は、以下の説明および添付の図面に関して、より良く理解されるようになる。
【図面の簡単な説明】
【0032】
【0033】
【図2A-B】図２Ａ～図２Ｂは、２μｇ／ｍｌのＮＢＬ１とともに培養したヒトポドサイト（図２Ａ）または未処理のままにしたヒトポドサイト（図２Ｂ）に対して実施した、共焦点分析の代表的画像を示す。これらのポドサイトは、Ａｐｏｐｔａｇ（アポトーシスについてのマーカー）およびＳｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ（ポドサイトについてのマーカー）で染色した。図２Ｃは、ＡｐｏｐｔａｇとＳｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎとについて二重陽性であるヒトポドサイト（Ｓｙｎ＋Ａｐｏ＋）のパーセンテージを定量化する棒グラフである。この実験は、分化したヒトポドサイトのＮＢＬ１誘導性アポトーシスを示す（図２Ｂにおける矢印、図２Ｃにおいて定量化した）。
【図2C】同上。
【0034】
【0035】
【0036】
【図5A】図５Ａ～図５Ｂは、フローサイトメトリー分析を使用して、Ｔ細胞および種々のＴ細胞セブセット（ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞）ならびに骨髄系細胞（ＣＤ１４＋）におけるＮＢＬ１タンパク質の高発現を示す。図５Ａの左上のパネルは、単球（上のゲート）およびリンパ球（下のゲート）に対する物理的ゲーティングを示す。すべての分析は、健常なボランティアの血液サンプルから単離した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に対して実施した。図５Ｃ～図５Ｄは、免疫組織化学によって種々のヒト組織におけるＮＢＬ１発現を調査するＮＢＬ１ Ａｔｌａｓ研究の結果を示す。図５Ｃは、免疫組織化学技術によってＮＢＬ１の存在を示す種々の組織サンプルの画像を示す。図５Ｄは、腸組織および筋組織におけるＮＢＬ１タンパク質の高発現を示す棒グラフである。
【図5B】同上。
【図5C】同上。
【図5D】同上。
【0037】
【0038】
【0039】
【発明を実施するための形態】
【0040】
（５．発明の詳細な説明）
（５．１．定義）
別途に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。
（５．１．定義）
別途に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。
【0041】
用語「個体」と「対象」とは交換可能に使用され、用語「個体」および「対象」は、処置されるべき動物を指し、その動物としては、ヒト；非ヒト霊長類；齧歯類（ラットおよびマウスが挙げられる）；ウシ；ウマ；ヒツジ；ネコ；ならびにイヌが挙げられるが、それらに限定はされない。
【0042】
用語「患者」とはヒト対象を指す。
【0043】
用語「処置すること」、「処置」、およびそれらの文法上の変化形は、臨床分野において理解される最も広い意味で使用される。したがって、この用語は、疾患の治癒も完全寛解も必要とせず、なんらかの臨床的に望ましい薬理学的および／または生理学的効果を得ることを含む。本明細書において使用される場合、「糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）を処置すること」は、１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体障害を有する患者において腎損傷の発症を遅延させること、腎損傷に進行を遅延させること、および腎機能低下を遅くすることを明示的に含む。
【0044】
句「治療有効量」とは、疾患、状態、または障害を処置することのために哺乳動物対象もしくは他の対象に投与された場合に、処置が本明細書において定義されるように、その疾患、状態、または障害の処置をもたらすために十分な化合物の量を指す。その「治療有効量」を決定することは、当業者の範囲内にある。
【0045】
神経芽細胞腫腫瘍形成抑制因子１（ＮＢＬ１）は、ＤＡＮ（ディファレンシャルスクリーニングにより選択された、神経芽細胞腫において異常な遺伝子）遺伝子ファミリーの初期メンバーである。このＤＡＮ遺伝子ファミリーのメンバーは、発生中に発現され、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）アンタゴニストとして機能する。ＤＡＮタンパク質は、ＢＭＰに結合し、そのＢＭＰがＢＭＰレセプターと相互作用することを防止する。神経芽細胞腫腫瘍形成抑制因子１（ＮＢＬ１）（Ｄ１Ｓ１７３３Ｅ、ＤＡＮ、ＤＡＮＤ１、ＮＢ、およびＮＯ３としても知られている）は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：４６８１によって特定される。ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：４６８１のタンパク質配列は、参照によって本明細書中に援用される。
【0046】
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）は、それが骨および軟骨の形成を誘導する能力によって元々は同定された一群の成長因子であり、現在は、身体全体にわたる組織構造を調整する、一群の中心的な形態形成シグナルを構成すると考えられている。ヒトＢＭＰ－２（ＢＤＡ２、ＢＭＰ２Ａ、ＳＳＦＳＣ、およびＳＳＦＳＣ１としても知られている）は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：６５０によって特定される。ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：６５０のタンパク質配列は、参照によって本明細書中に援用される。ヒトＢＭＰ－４（ＢＭＰ２Ｂ、ＢＭＰ２Ｂ１、ＭＣＯＰＳ６、ＯＦＣ１１、およびＺＹＭＥとしても知られている）は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：６５２によって特定される。ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：６５２のタンパク質配列は、参照によって本明細書中に援用される。ヒトＢＭＰ－７（ＯＰ－１としても知られている）は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：６５５によって特定される。ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ：６５５のタンパク質配列は、参照によって本明細書中に援用される。
【0047】
本明細書において使用される場合、用語「抗体」は、当該分野によって認識されるその最も広い意味を有し、したがって、すべての既知フォーマットを含む。この用語は、詳細には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体が挙げられる）、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体を含むが、それらに限定はされない。重鎖定常領域ドメインを含む抗体は、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡが挙げられる）ならびに任意のサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２が挙げられる）の抗体であり得る。抗体の「抗原結合フラグメント」は、由来する抗体の結合特徴（例えば、特異性、一価親和性または二価アビディティー）を保持する抗体フラグメント（および／または抗体フラグメントを含むポリペプチド）であり、当該分野によって認識されるその最も広い意味を有する。この用語は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、シングルドメイン抗体（ラクダＶＨＨ形態およびサメＶＮＡＲ形態が挙げられる）、ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体（Ｆ（ａｂ）２、およびダイアボディが挙げられるが、それらに限定はされない）を含むが、それらに限定はされない。
【0048】
本明細書において使用される場合、「慢性腎臓病」（ＣＫＤ）は、米国腎臓財団（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）ＫＤＯＱＩガイドラインにおいて帰せられている意味を有し、ＣＫＤのステージは、このＮＫＦ ＫＤＯＱＩガイドラインにおいて提示されているとおりに定義される。「末期腎不全（ｅｎｄ ｓｔａｇｅ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ）」（ＥＳＫＤ）と「末期腎不全（ｅｎｄ ｓｔａｇｅ ｒｅｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）」（ＥＳＲＤ）とは、本明細書において交換可能に使用され、米国腎臓財団ＫＤＯＱＩガイドラインにおいて帰せられている意味を有する。
【0049】
本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（挙げられる）（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含むこと（挙げられること）（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、およびそれらの言語の変化形は、米国特許法においてそれらに帰せられている意味を有し、明示的に記載されている成分の他に追加的成分の存在を許容する。
【0050】
具体的に記載されておらず文脈から明らかでもない限りは、本明細書において使用される場合、用語「または（もしくは、あるいは）（ｏｒ）」は包括的であると理解される。
【0051】
具体的に記載されておらず文脈から明らかでもない限りは、本明細書において使用される場合、用語「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は単数または複数であると理解される。
【0052】
本明細書において使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、元のかつ置換されたアミノ酸が類似の生化学的性質を有するか、または表４５に示される置換の間でそれらの生化学的影響が同様に維持される、置換である。
【0053】
（５．２．実験結果の概要）
本開示における実験的実施例において詳述されるとおおり、本発明者らは、ＮＢＬ１が腎細胞（ポドサイトおよび尿細管細胞を含む）に対して直接的に毒性であることを発見した。その毒性作用は、腎ＢＭＰタンパク質の阻害を通じては媒介されない。本発明者らは、ＢＭＰが、腎細胞中では発現されず腎細胞によって分泌されないことを示す。さらに、本発明者らは、ＮＢＬ１もまた腎細胞中で発現されないが、循環免疫細胞中で発現されることを発見した。ＮＢＬ１をアンタゴニストで中和すると、毒性を防止する。最後に、本発明者らは、ＮＢＬ１が１型糖尿病および２型糖尿病において上昇することを示す。
本開示における実験的実施例において詳述されるとおおり、本発明者らは、ＮＢＬ１が腎細胞（ポドサイトおよび尿細管細胞を含む）に対して直接的に毒性であることを発見した。その毒性作用は、腎ＢＭＰタンパク質の阻害を通じては媒介されない。本発明者らは、ＢＭＰが、腎細胞中では発現されず腎細胞によって分泌されないことを示す。さらに、本発明者らは、ＮＢＬ１もまた腎細胞中で発現されないが、循環免疫細胞中で発現されることを発見した。ＮＢＬ１をアンタゴニストで中和すると、毒性を防止する。最後に、本発明者らは、ＮＢＬ１が１型糖尿病および２型糖尿病において上昇することを示す。
【0054】
（５．３．腎損傷の発症または進行を遅延させる方法）
したがって、第一の局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象または１型糖尿病もしくは２型糖尿病のリスクがある対象あるいは糸球体疾患を有する対象または糸球体疾患を発症するリスクがある対象における、腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法が、提示される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な（詳細には、ヒトポドサイトのＮＢＬ１媒介性毒性を阻害可能な）薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。
したがって、第一の局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象または１型糖尿病もしくは２型糖尿病のリスクがある対象あるいは糸球体疾患を有する対象または糸球体疾患を発症するリスクがある対象における、腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法が、提示される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な（詳細には、ヒトポドサイトのＮＢＬ１媒介性毒性を阻害可能な）薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。
【0055】
種々の実施形態において、その方法は、腎血管、ポドサイト、腎尿細管細胞、または糸球体基底膜もしくは尿細管基底膜のうちの１つもしくは複数に対する損傷の発症または進行を遅延させる。一部の実施形態において、その方法は、糸球体基底膜および尿細管基底膜の肥厚、メサンギウム基質の増加、キンメルスティール・ウィルソン結節、微小動脈瘤、滲出性病変もしくは硝子変性病変、カプスラードロップまたは輸入細動脈硝子変性および輸出細動脈硝子変性の、発症または進行を遅延させる。
【0056】
一部の実施形態において、その対象は１型糖尿病を有する。一部の実施形態において、その対象は２型糖尿病を有する。一部の実施形態において、その対象は前糖尿病である。一部の実施形態において、その対象は、ヘモグロビンＡ１ｃレベルまたは血中ブドウ糖レベルによって測定された場合に前糖尿病ではないが、１型糖尿病または２型糖尿病のリスクがあり、上昇した血漿ＮＢＬ１レベルを有する。
【0057】
一部の実施形態において、その対象は糸球体疾患を有する。特定の実施形態において、糸球体疾患を有するその対象は１型糖尿病も２型糖尿病も有しない。特定の実施形態において、その糸球体疾患は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される。
【0058】
一部の実施形態において、その対象は、１型糖尿病も２型糖尿病も前糖尿病も有しない正常対象よりも少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％高い処置前血漿ＮＢＬ１レベルを有する。一部の実施形態において、その処置されるべき対象は、１型糖尿病も２型糖尿病も前糖尿病も有しない正常対象の少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍の高さの血漿ＮＢＬ１レベルを有する。
【0059】
一部の実施形態において、その方法は、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象におけるか、または前糖尿病である対象におけるか、あるいは１型糖尿病も２型糖尿病も前糖尿病も有しない正常対象と比較して上昇した血漿ＮＢＬ１レベルを有する、１型糖尿病もしくは２型糖尿病のリスクがある対象における、循環遊離ＮＢＬ１の利用可能性を効果的に減少させる。一部の実施形態において、その方法は、糸球体疾患を有する対象における、循環遊離ＮＢＬ１の利用可能性を効果的に減少させる。特定の実施形態において、その方法は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される糸球体疾患を有する対象における、循環遊離ＮＢＬ１の利用可能性を効果的に減少させる。
【0060】
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤はＮＢＬ１に結合可能である。一部の実施形態において、その結合はＮＢＬ１のＮ末端において生じる。一部の実施形態において、その結合はＮＢＬ１の機能的ＤＡＮドメインにおいて生じる。一部の実施形態において、その結合はＮＢＬ１のＣ末端において生じる。一部の実施形態において、その結合は非共有である。一部の実施形態において、その結合は共有結合である。ある特定の共有結合の実施形態において、その阻害剤は、そのＤＡＮドメイン内のジスルフィド結合によってＮＢＬ１に結合する。
【0061】
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、ＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である。
【0062】
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、２つのＮＢＬ１モノマー間における安定化水素結合の形成を防止する二量体形成阻害剤である。一部の実施形態において、その二量体形成阻害剤は、各モノマー内に環様構造（システインノットチーフとしても知られている）を形成する３つのジスルフィド結合のうちの少なくとも１つを破壊するか、またはＦ１とＦ２とを連結するジスルフィド結合（Ｆ１およびＦ２は、それぞれ、Ｎ末端から１番目のループであるフィンガー１、およびＮ末端から３番目のループであるフィンガー２である）を破壊する。
【0063】
（５．３．１．可溶性ＢＭＰ阻害剤）
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、そのＢＭＰはＢＭＰ－２またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。一部の実施形態において、そのＢＭＰはＢＭＰ－４またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。一部の実施形態において、そのＢＭＰはＢＭＰ－７またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。現在の好ましい実施形態において、そのＢＭＰはヒトＢＭＰまたはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、そのＢＭＰはＢＭＰ－２またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。一部の実施形態において、そのＢＭＰはＢＭＰ－４またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。一部の実施形態において、そのＢＭＰはＢＭＰ－７またはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。現在の好ましい実施形態において、そのＢＭＰはヒトＢＭＰまたはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントである。
【0064】
一部の実施形態において、ＮＢＬ１を阻害可能な薬剤は、血清半減期を延長させる部分をさらに含む。
【0065】
一部の実施形態において、血清半減期を延長させる部分は、共有結合性化学的改変を通じて提供される。一部の実施形態において、血清半減期を延長させる部分は、少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である。一部の実施形態において、そのＰＥＧ部分は、その薬剤に永続的に結合されている。一部の実施形態において、そのＰＥＧ部分は、共有結合性化学的改変を通じて提供された遊離可能なキャリアである。特定の実施形態において、その薬剤は、ペグ化されたＢＭＰまたはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントを含む。
【0066】
一部の実施形態において、血清半減期を延長させる部分は、抗体Ｆｃドメインである。一部の実施形態において、そのＦｃドメインは、ｐＨ依存性ＩｇＧ Ｆｃ－ＦｃＲｎ相互作用を最適化するように操作されている。特定の実施形態において、そのＦｃドメインは、ＹＴＥ三重変異（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を有するように操作されている。特定の実施形態において、そのＦｃドメインは、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異を有するように操作されている。特定の実施形態において、そのＦｃドメインは、ＢＭＰまたはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントにインフレームで融合されている。
【0067】
一部の実施形態において、血清半減期を延長させる部分は、血清アルブミン分子である。特定の実施形態において、血清半減期を延長させる部分は、ＢＭＰまたはその可溶性ＮＢＬ１結合フラグメントにインフレームで融合された、ヒト血清アルブミン分子である。
【0068】
一部の実施形態において、血清半減期を延長させる部分は、Ｐｏｄｕｓｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６（１１）：７４３～５３（２０１３）（その開示は、その全体が参照により本明細書中に援用される）において記載されるとおり、薬剤に共有結合されたＸＴＥＮタンパク質ポリマーである。
【0069】
（５．３．２．抗体およびその抗原結合フラグメント）
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、ＮＢＬ１に結合可能で、ＮＢＬ１活性を阻害可能で、詳細には、ヒトポドサイトのＮＢＬ１媒介性毒性を阻害可能な、抗体またはそのＮＢＬ１結合フラグメントである。好ましい実施形態において、その抗体または抗原結合抗体フラグメントは、ヒトＮＢＬ１に結合可能である。
一部の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、ＮＢＬ１に結合可能で、ＮＢＬ１活性を阻害可能で、詳細には、ヒトポドサイトのＮＢＬ１媒介性毒性を阻害可能な、抗体またはそのＮＢＬ１結合フラグメントである。好ましい実施形態において、その抗体または抗原結合抗体フラグメントは、ヒトＮＢＬ１に結合可能である。
【0070】
一部の実施形態において、その抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＮＢＬ１のＮ末端ドメイン内のエピトープに結合する。一部の実施形態において、その抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＮＢＬ１のＤＡＮドメイン内のエピトープに結合する。一部の実施形態において、その抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＮＢＬ１のＣ末端ドメイン内のエピトープに結合する。
【0071】
一部の実施形態において、その抗体またはその抗原結合フラグメントは、下記の表２３～表４４から選択される重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲ、または、それと比較して、１０アミノ酸以下の欠失、挿入もしくは（表４５において定義される）保存的アミノ酸置換を伴う、下記の表２３～表４４から選択される重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。
【表45】
【0072】
一部の実施形態において、そのアミノ酸の欠失、挿入、または保存的置換は８個以下である。一部の実施形態において、そのアミノ酸の欠失、挿入、または保存的置換は６個以下である。一部の実施形態において、そのアミノ酸の欠失、挿入、または保存的置換は４個以下である。
【0073】
一部の実施形態において、その抗体またはその抗原結合フラグメントは、下記の表１～表２２から選択される重鎖Ｖ領域および軽鎖Ｖ領域を含む。
【0074】
一部の実施形態において、その抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２３～表４４から選択され、それと比較して、１０アミノ酸以下の欠失、挿入、または（表４５において定義される）保存的アミノ酸置換を伴う、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、そのアミノ酸の欠失、挿入、または保存的置換は８個以下である。一部の実施形態において、そのアミノ酸の欠失、挿入、または保存的置換は６個以下である。一部の実施形態において、そのアミノ酸の欠失、挿入、または保存的置換は４個以下である。
【表A】
【表B】
【表C】
【表D】
【表E】
【表F】
【表G】
【表H】
【表I】
【表J】
【表K】
【表L】
【表M】
【表N】
【表O】
【表P】
【表Q】
【表R】
【表S】
【表T】
【表U】
【表V】
【0075】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、この３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、
ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列（ａ）～（ｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。
ａ）配列番号３、８、および１３ならびに配列番号１８、２３、および２８（抗体Ｅ０５）；
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｃ）配列番号６３、６８、および７３ならびに配列番号７８、８３、および８８（抗体Ｆ０６）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｅ）配列番号１２３、１２８、および１３３ならびに配列番号１３８、１４３、および１４８（抗体Ｇ０１）；
ｆ）配列番号１５３、１５８、および１６３ならびに配列番号１６８、１７３、および１７８（抗体Ｅ１１）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｈ）配列番号２１３、２１８、および２２３ならびに配列番号２２８、２３３、および２３８（抗体Ｄ１２）；
ｉ）配列番号２４３、２４８、および２５３ならびに配列番号２５８、２６３、および２６８（抗体Ｈ０１）；
ｊ）配列番号２７３、２７８、および２８３ならびに配列番号２８８、２９３、および２９８（抗体Ｃ１１）；
ｋ）配列番号３０３、３０８、および３１３ならびに配列番号３１８、３２３、および３２８（抗体Ｅ０５）；
ｌ）配列番号３３３、３３８、および３４３ならびに配列番号３４８、３５３、および３５８（抗体Ｆ１０）；
ｍ）配列番号３６３、３６８、および３７３ならびに配列番号３７８、３８３、および３８８（抗体Ｇ１０）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｏ）配列番号４２３、４２８、および４３３ならびに配列番号４３８、４４３、および４４８（抗体Ｅ０７）；
ｐ）配列番号４５３、４５８、および４６３ならびに配列番号４６８、４７３、および４７８（抗体Ｅ１２）；
ｑ）配列番号４８３、４８８、および４９３ならびに配列番号４９８、５０３、および５０８（抗体Ｄ０８）；
ｒ）配列番号５１３、５１８、および５２３ならびに配列番号５２８、５３３、および５３８（抗体Ｅ１０）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列（ａ）～（ｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。
【0076】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、その選択されたＣＤＲ（ａ）～（ｔ）と同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換によってかまたは各ＣＤＲにおける多くて１個の保存的アミノ酸置換によって、その選択されたＣＤＲ配列（ａ）～（ｔ）とは異なる配列を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、６個すべてのＣＤＲにわたって合計６個の保存的アミノ酸変化、６個すべてのＣＤＲにわたって合計５個の保存的アミノ酸置換、６個すべてのＣＤＲにわたって合計４個の保存的アミノ酸置換、６個すべてのＣＤＲにわたって合計３個の保存的アミノ酸置換、６個すべてのＣＤＲにわたって合計２個の保存的アミノ酸置換、または６個すべてのＣＤＲにわたって合計１個の保存的アミノ酸置換によって、その選択されたＣＤＲ配列（ａ）～（ｔ）とは異なる配列を有する。
【0077】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列ｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。
ｂ）配列番号３３、３８、および４３ならびに配列番号４８、５３、および５８（抗体Ｈ０８）；
ｄ）配列番号９３、９８、および１０３ならびに配列番号１０８、１１３、および１１８（抗体Ａ１２）；
ｇ）配列番号１８３、１８８、および１９３ならびに配列番号１９８、２０３、および２０８（抗体Ｂ０６）；
ｎ）配列番号３９３、３９８、および４０３ならびに配列番号４０８、４１３、および４１８（抗体Ｅ０４）；
ｓ）配列番号５４３、５４８、および５５３ならびに配列番号５５８、５６３、および５６８（抗体Ｄ０６）；ならびに
ｔ）配列番号５７３、５７８、および５８３ならびに配列番号５８８、５９３、および５９８（抗体Ｅ０１）
から選択される配列を有するか、または
これらの選択されたＣＤＲ配列ｂ）、ｄ）、ｇ）、ｎ）、ｓ）、およびｔ）とは各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換により異なる配列を有する。
【0078】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、その選択されたＣＤＲ（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｎ）、（ｓ）または（ｔ）と同一の配列を有する、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、各ＣＤＲにおける多くて２個の保存的アミノ酸置換によってかまたは各ＣＤＲにおける多くて１個の保存的アミノ酸置換によって、その選択されたＣＤＲ配列（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｎ）、（ｓ）もしくは（ｔ）とは異なる配列を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、その３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、６個すべてのＣＤＲにわたって合計６個の保存的アミノ酸変化、６個すべてのＣＤＲにわたって合計５個の保存的アミノ酸置換、６個すべてのＣＤＲにわたって合計４個の保存的アミノ酸置換、６個すべてのＣＤＲにわたって合計３個の保存的アミノ酸置換、６個すべてのＣＤＲにわたって合計２個の保存的アミノ酸置換、または６個すべてのＣＤＲにわたって合計１個の保存的アミノ酸置換によって、その選択されたＣＤＲ配列（ｂ）、（ｄ）、（ｇ）、（ｎ）、（ｓ）もしくは（ｔ）とは異なる配列を有する。
【0079】
一部の実施形態において、その抗体フレームワーク領域はヒト抗体フレームワーク領域である。一部の実施形態において、その抗体は全長二価単一特異性モノクローナル抗体である。一部の実施形態において、その抗体はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域、またはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、その抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態において、その抗体Ｆｃ領域は、少なくともＦｃγレセプターへの抗体結合を減少させる、少なくとも１つの操作された変異を有する。一部の実施形態において、その変異はＮ２９７Ａである。一部の実施形態において、その抗体Ｆｃ領域は、補体結合を減少させる、少なくとも１つの操作された変異を有する。一部の実施形態において、その変異はＫ３２２Ａである。
【0080】
一部の実施形態において、その抗体はＦａｂであり、必要に応じてそのＦａｂはペグ化されている。
【0081】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントはさらにカニクイザルＮＢＬ１に結合可能である。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントはさらにマウスＮＢＬ１に結合可能である。
【0082】
一部の実施形態において、その抗体はＩｇＧモノクローナル抗体である。特定の実施形態において、その抗体はＩｇＧ１モノクローナル抗体またはＩｇＧ４モノクローナル抗体である。
【0083】
一部の実施形態において、その抗体はヒトモノクローナル抗体である。一部の実施形態において、その抗体はヒト化抗体である。一部の実施形態において、その抗体はキメラマウス－ヒト抗体である。一部の実施形態において、その薬剤は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、またはダイアボディから選択される、ＮＢＬ１結合抗原結合フラグメントを含む。
【0084】
一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは１００ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは１０ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは５ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、その抗体または抗原結合フラグメントは１ｎＭ未満のヒトＮＢＬ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。
特定の実施形態において、ＮＢＬ１二量体形成阻害剤は抗体である。これらの実施形態の一部において、その抗体はモノクローナル抗体である。これらの実施形態の一部において、その抗体はポリクローナル抗体である。一部の実施形態において、その二量体形成阻害剤は、各ＮＢＬ１モノマー由来の同義の（ｓｙｎｏｎｙｍｏｕｓ）β鎖のうちの少なくとも１本に結合する。
特定の実施形態において、ＮＢＬ１二量体形成阻害剤は抗体である。これらの実施形態の一部において、その抗体はモノクローナル抗体である。これらの実施形態の一部において、その抗体はポリクローナル抗体である。一部の実施形態において、その二量体形成阻害剤は、各ＮＢＬ１モノマー由来の同義の（ｓｙｎｏｎｙｍｏｕｓ）β鎖のうちの少なくとも１本に結合する。
【0085】
（５．３．３．ＮＢＬ１発現阻害剤）
一部の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１発現を阻害可能である。
一部の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１発現を阻害可能である。
【0086】
特定の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１遺伝子の転写を阻害する。特定の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１ ｍＲＮＡの分解を引き起こす。特定の実施形態において、その薬剤はＮＢＬ１ ｍＲＮＡの翻訳を阻害する。特定の実施形態において、その薬剤は、ＮＢＬ１タンパク質を分解のための標的とする。
【0087】
特定の実施形態において、その薬剤はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、その薬剤はＲＮＡ干渉を媒介する。特定のＲＮＡ干渉の実施形態において、その薬剤は、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）または低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。特定の実施形態において、その薬剤はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。特定の実施形態において、その薬剤は配列特異的ｍＲＮＡインターフェラーゼである。
【0088】
（５．４．腎機能低下を遅くする方法）
さらなる局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象または１型糖尿病もしくは２型糖尿病のリスクがある対象あるいは糸球体疾患を有する対象または糸球体疾患を発症するリスクがある対象における、腎機能低下を遅くするための方法が、提供される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。種々の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、上記の節５．３．１、５．３．２、または５．３．３に記載されている阻害剤である。
さらなる局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象または１型糖尿病もしくは２型糖尿病のリスクがある対象あるいは糸球体疾患を有する対象または糸球体疾患を発症するリスクがある対象における、腎機能低下を遅くするための方法が、提供される。この方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。種々の実施形態において、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤は、上記の節５．３．１、５．３．２、または５．３．３に記載されている阻害剤である。
【0089】
一部の実施形態において、その方法は、微量アルブミン尿の進行を遅くするか、顕性アルブミン尿の進行を遅くするか、タンパク尿の進行を遅くするか、または糸球体濾過率（ＧＦＲ）の減少を遅くする。
【0090】
一部の実施形態において、その方法は、進行性腎機能低下（ＰＫＦＤ）の発症を予防するか、または進行性腎機能低下（ＰＫＦＤ）を遅くする。一部の実施形態において、その薬剤は、ＰＫＦＤに関連する少なくとも１つまたは複数の症状の進行を阻害する。一部の実施形態において、未処置コントロール群と比較したその対象の腎機能低下速度は、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％減少される。
【0091】
一部の実施形態において、その方法は、末期腎不全（ＥＳＫＤ）の発症を予防するか、または末期腎不全（ＥＳＫＤ）への進行を遅くする。一部の実施形態において、その方法は、ＥＳＫＤに関連する少なくとも１つまたは複数の症状の進行を阻害する。一部の実施形態において、その方法は、必要とされる透析への進行を阻害する。
【0092】
一部の実施形態において、その方法は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のステージ１からステージ２へ、ステージ２からステージ３へ、ステージ３Ａからステージ３Ｂへ、ステージ３Ｂからステージ４へ、ステージ４からステージ５への進行、または透析を伴わないステージ５から透析を伴うステージ５への進行を遅くする。
【0093】
一部の実施形態において、その対象は１型糖尿病を有する。一部の実施形態において、その対象は２型糖尿病を有する。一部の実施形態において、その対象は前糖尿病である。一部の実施形態において、その対象は、ヘモグロビンＡ１ｃレベルまたは血中ブドウ糖レベルによって測定された場合に前糖尿病ではないが、１型糖尿病または２型糖尿病のリスクがあり、上昇した血漿ＮＢＬ１レベルを有する。一部の実施形態において、その対象は糸球体障害を有する。特定の実施形態において、その対象は糸球体障害を有し、１型糖尿病も２型糖尿病も有しない。特定の実施形態において、その糸球体障害は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される。
【0094】
一部の実施形態において、その方法は、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象におけるか、または前糖尿病である対象におけるか、あるいは１型糖尿病も２型糖尿病も前糖尿病も有しない正常対象と比較して上昇した血漿ＮＢＬ１レベルを有する、１型糖尿病もしくは２型糖尿病のリスクがある対象における、循環遊離ＮＢＬ１の利用可能性を効果的に減少させる。一部の実施形態において、その方法は、糸球体疾患を有する対象における、循環遊離ＮＢＬ１の利用可能性を効果的に減少させる。特定の実施形態において、その方法は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される糸球体疾患を有する対象における、循環遊離ＮＢＬ１の利用可能性を効果的に減少させる。
【0095】
種々の実施形態において、その薬剤は、参照により本明細書中に援用される、上記の節５．３．１、５．３．２、または５．３．３に記載されている薬剤である。
【0096】
（５．５．糖尿病関連腎臓病または糸球体疾患を処置する方法）
さらなる局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象または糸球体疾患を有する対象における糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）を処置するための方法が、提示される。その方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。
さらなる局面において、１型糖尿病もしくは２型糖尿病を有する対象または糸球体疾患を有する対象における糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）を処置するための方法が、提示される。その方法は、ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与することを含む。
【0097】
一部の実施形態において、その対象は、１型糖尿病または２型糖尿病を有し、糸球体肥大、糸球体硬化症、尿細管間質炎症（ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、線維症、糸球体過剰濾過、進行性アルブミン尿、ＧＦＲ低下、およびＥＳＫＤのうちの１つまたは複数を有する。
【0098】
一部の実施形態において、その対象は糸球体疾患を有する。特定の実施形態において、その対象は、糸球体疾患を有し、１型糖尿病も２型糖尿病も有しない。特定の実施形態において、その糸球体障害は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される。
【0099】
種々の実施形態において、その薬剤は、参照により本明細書中に援用される、上記の節５．３．１、５．３．２、または５．３．３に記載されている薬剤である。
【0100】
（５．６．投与レジメン）
本明細書において記載される方法の一部の実施形態において、その薬剤は非経口投与される。特定の実施形態において、その薬剤は静脈内投与される。特定の実施形態において、その対象は透析中であり、その薬剤は静脈内投与される。特定の実施形態において、その薬剤は皮下投与される。
本明細書において記載される方法の一部の実施形態において、その薬剤は非経口投与される。特定の実施形態において、その薬剤は静脈内投与される。特定の実施形態において、その対象は透析中であり、その薬剤は静脈内投与される。特定の実施形態において、その薬剤は皮下投与される。
【0101】
一部の実施形態において、その薬剤は１回投与される。一部の実施形態において、その薬剤は１回よりも多く投与される。特定の実施形態において、その薬剤は少なくとも３か月間投与される。特定の実施形態において、その薬剤は少なくとも６か月間投与される。特定の実施形態において、その薬剤は少なくとも１２か月間投与される。
【0102】
（５．７．抗体およびその医薬製剤）
別の局面において、ＮＢＬ１に結合可能であり、ヒトポドサイトのＮＢＬ１誘発毒性を阻害可能である、抗体または抗原結合フラグメントが提供される。実施形態は、参照により本明細書中に援用される、上記の節５．３．２に記載されているすべての抗体および抗原結合フラグメントの実施形態を含む。
別の局面において、ＮＢＬ１に結合可能であり、ヒトポドサイトのＮＢＬ１誘発毒性を阻害可能である、抗体または抗原結合フラグメントが提供される。実施形態は、参照により本明細書中に援用される、上記の節５．３．２に記載されているすべての抗体および抗原結合フラグメントの実施形態を含む。
【0103】
さらなる局面において、医薬組成物が提供される。その医薬組成物は、本明細書において記載されている抗体または抗原結合フラグメント、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。一部の実施形態において、その組成物は非経口投与のために製剤化されている。一部の実施形態において、その組成物は静脈内投与のために製剤化されている。一部の実施形態において、その組成物は皮下投与のために製剤化されている。
【0104】
（５．８．さらなる実施形態）
さらなる実施形態が、以下の番号の条項において示される。
１．１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法であって、
ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与すること
を含む、方法。
２．その薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、条項１に記載の方法。
３．その薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、条項２に記載の方法。
４．その薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、条項３に記載の方法。
５．その薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、条項３または条項４に記載の方法。
６．その半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、条項５に記載の方法。
７．その半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、条項５に記載の方法。
８．その薬剤が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、条項２に記載の方法。
９．その薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、条項２に記載の方法。
１０．その薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、条項１に記載の方法。
１１．その対象が１型糖尿病を有する、条項１～１０のいずれか一条項に記載の方法。
１２．その対象が２型糖尿病を有する、条項１～１０のいずれか一条項に記載の方法。
１３．その対象が糸球体疾患を有する、条項１～１０のいずれか一条項に記載の方法。
１４．糸球体疾患を有するその対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、条項１３に記載の方法。
１５．その糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される、条項１３または条項１４に記載の方法。
１６．その糸球体疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、条項１５に記載の方法。
１７．その糸球体疾患が慢性糸球体症である、条項１５に記載の方法。
１８．その糸球体疾患が遺伝性腎炎である、条項１５に記載の方法。
１９．その糸球体疾患が微小変化群である、条項１５に記載の方法。
２０．腎機能低下の発症を予防するかまたは腎機能低下を遅くする、条項１～１９のいずれか一条項に記載の方法。
２１．１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎機能低下を遅くする方法であって、
ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与すること
を含む、方法。
２２．進行性腎機能低下（ＰＫＦＤ）の発症を予防するかまたは進行性腎機能低下（ＰＫＦＤ）を遅くする、条項２１に記載の方法。
２３．末期腎不全（ＥＳＫＤ）の発症を予防するかまたは末期腎不全（ＥＳＫＤ）への進行を遅くする、条項２１に記載の方法。
２４．その薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、条項２１～２３のいずれか一条項に記載の方法。
２５．その薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、条項２４に記載の方法。
２６．その薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、条項２５に記載の方法。
２７．その薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、条項２５または条項２６に記載の方法。
２８．その半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、条項２７に記載の方法。
２９．その半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、条項２７に記載の方法。
３０．その薬剤が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、条項２４に記載の方法。
３１．その薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、条項２４に記載の方法。
３２．その薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、条項２１～２３のいずれか一条項に記載の方法。
３３．その対象が１型糖尿病を有する、条項２１～３２のいずれか一条項に記載の方法。
３４．その対象が２型糖尿病を有する、条項２１～３２のいずれか一条項に記載の方法。
３５．その対象が糸球体疾患を有する、条項２１～３２のいずれか一条項に記載の方法。
３６．糸球体疾患を有するその対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、条項３５に記載の方法。
３７．その糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ），慢性糸球体症，遺伝性腎炎，微小変化群からなる群より選択される、条項３５または条項３６に記載の方法。
３８．その糸球体疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、条項３７に記載の方法。
３９．その糸球体疾患が慢性糸球体症である、条項３７に記載の方法。
４０．その糸球体疾患が遺伝性腎炎である、条項３７に記載の方法。
４１．その糸球体疾患が微小変化群である、条項３７に記載の方法。
４２．１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）または糸球体疾患を処置する方法であって、
ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与すること
を含む、方法。
４３．その薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、条項４２に記載の方法。
４４．その薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、条項４３に記載の方法。
４５．その薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、条項４４に記載の方法。
４６．その薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、条項４４または条項４５に記載の方法。
４７．その半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、条項４６に記載の方法。
４８．その半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、条項４６に記載の方法。
４９．その薬剤が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、条項４３に記載の方法。
５０．その薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、条項４３に記載の方法。
５１．その薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、条項４２に記載の方法。
５２．その対象が１型糖尿病を有する、条項４２～５１のいずれか一条項に記載の方法。
５３．その対象が２型糖尿病を有する、条項４２～５１のいずれか一条項に記載の方法。
５４．その対象が糸球体疾患を有する、条項４２～５１のいずれか一条項に記載の方法。
５５．糸球体疾患を有するその対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、条項５４に記載の方法。
５６．その糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症，慢性糸球体症，遺伝性腎炎，微小変化群からなる群より選択される、条項５４または条項５５に記載の方法。
５７．その糸球体疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、条項５６に記載の方法。
５８．その糸球体疾患が慢性糸球体症である、条項５６に記載の方法。
５９．その糸球体疾患が遺伝性腎炎である、条項５６に記載の方法。
６０．その糸球体疾患が微小変化群である、条項５６に記載の方法。
６１．その薬剤が非経口投与される、条項１～６０のいずれか一条項に記載の方法。
６２．その薬剤が少なくとも３か月間投与される、条項１～６１のいずれか一条項に記載の方法。
６３．その薬剤が少なくとも６か月間投与される、条項６２に記載の方法。
６４．その薬剤が少なくとも１２か月間投与される、条項６３に記載の方法。
さらなる実施形態が、以下の番号の条項において示される。
１．１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎損傷の発症または進行を遅延させるための方法であって、
ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与すること
を含む、方法。
２．その薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、条項１に記載の方法。
３．その薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、条項２に記載の方法。
４．その薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、条項３に記載の方法。
５．その薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、条項３または条項４に記載の方法。
６．その半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、条項５に記載の方法。
７．その半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、条項５に記載の方法。
８．その薬剤が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、条項２に記載の方法。
９．その薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、条項２に記載の方法。
１０．その薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、条項１に記載の方法。
１１．その対象が１型糖尿病を有する、条項１～１０のいずれか一条項に記載の方法。
１２．その対象が２型糖尿病を有する、条項１～１０のいずれか一条項に記載の方法。
１３．その対象が糸球体疾患を有する、条項１～１０のいずれか一条項に記載の方法。
１４．糸球体疾患を有するその対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、条項１３に記載の方法。
１５．その糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性糸球体症、遺伝性腎炎、および微小変化群からなる群より選択される、条項１３または条項１４に記載の方法。
１６．その糸球体疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、条項１５に記載の方法。
１７．その糸球体疾患が慢性糸球体症である、条項１５に記載の方法。
１８．その糸球体疾患が遺伝性腎炎である、条項１５に記載の方法。
１９．その糸球体疾患が微小変化群である、条項１５に記載の方法。
２０．腎機能低下の発症を予防するかまたは腎機能低下を遅くする、条項１～１９のいずれか一条項に記載の方法。
２１．１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における腎機能低下を遅くする方法であって、
ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与すること
を含む、方法。
２２．進行性腎機能低下（ＰＫＦＤ）の発症を予防するかまたは進行性腎機能低下（ＰＫＦＤ）を遅くする、条項２１に記載の方法。
２３．末期腎不全（ＥＳＫＤ）の発症を予防するかまたは末期腎不全（ＥＳＫＤ）への進行を遅くする、条項２１に記載の方法。
２４．その薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、条項２１～２３のいずれか一条項に記載の方法。
２５．その薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、条項２４に記載の方法。
２６．その薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、条項２５に記載の方法。
２７．その薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、条項２５または条項２６に記載の方法。
２８．その半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、条項２７に記載の方法。
２９．その半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、条項２７に記載の方法。
３０．その薬剤が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、条項２４に記載の方法。
３１．その薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、条項２４に記載の方法。
３２．その薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、条項２１～２３のいずれか一条項に記載の方法。
３３．その対象が１型糖尿病を有する、条項２１～３２のいずれか一条項に記載の方法。
３４．その対象が２型糖尿病を有する、条項２１～３２のいずれか一条項に記載の方法。
３５．その対象が糸球体疾患を有する、条項２１～３２のいずれか一条項に記載の方法。
３６．糸球体疾患を有するその対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、条項３５に記載の方法。
３７．その糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ），慢性糸球体症，遺伝性腎炎，微小変化群からなる群より選択される、条項３５または条項３６に記載の方法。
３８．その糸球体疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、条項３７に記載の方法。
３９．その糸球体疾患が慢性糸球体症である、条項３７に記載の方法。
４０．その糸球体疾患が遺伝性腎炎である、条項３７に記載の方法。
４１．その糸球体疾患が微小変化群である、条項３７に記載の方法。
４２．１型糖尿病もしくは２型糖尿病または糸球体疾患を有する対象における糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）または糸球体疾患を処置する方法であって、
ＮＢＬ１活性を阻害可能な薬剤の有効量をその対象に投与すること
を含む、方法。
４３．その薬剤がＮＢＬ１に結合可能である、条項４２に記載の方法。
４４．その薬剤が骨形成タンパク質（ＢＭＰ）またはその可溶性フラグメントを含む、条項４３に記載の方法。
４５．その薬剤がヒトＢＭＰ－２の可溶性フラグメントを含む、条項４４に記載の方法。
４６．その薬剤が、血清半減期を延長させる部分をさらに含む、条項４４または条項４５に記載の方法。
４７．その半減期延長部分が抗体Ｆｃドメインである、条項４６に記載の方法。
４８．その半減期延長部分が、少なくとも１つの共有結合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分である、条項４６に記載の方法。
４９．その薬剤が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、条項４３に記載の方法。
５０．その薬剤がＮＢＬ１の二量体形成を阻害可能である、条項４３に記載の方法。
５１．その薬剤がＮＢＬ１発現を阻害可能である、条項４２に記載の方法。
５２．その対象が１型糖尿病を有する、条項４２～５１のいずれか一条項に記載の方法。
５３．その対象が２型糖尿病を有する、条項４２～５１のいずれか一条項に記載の方法。
５４．その対象が糸球体疾患を有する、条項４２～５１のいずれか一条項に記載の方法。
５５．糸球体疾患を有するその対象が１型糖尿病も２型糖尿病も有しない、条項５４に記載の方法。
５６．その糸球体疾患が、巣状分節性糸球体硬化症，慢性糸球体症，遺伝性腎炎，微小変化群からなる群より選択される、条項５４または条項５５に記載の方法。
５７．その糸球体疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、条項５６に記載の方法。
５８．その糸球体疾患が慢性糸球体症である、条項５６に記載の方法。
５９．その糸球体疾患が遺伝性腎炎である、条項５６に記載の方法。
６０．その糸球体疾患が微小変化群である、条項５６に記載の方法。
６１．その薬剤が非経口投与される、条項１～６０のいずれか一条項に記載の方法。
６２．その薬剤が少なくとも３か月間投与される、条項１～６１のいずれか一条項に記載の方法。
６３．その薬剤が少なくとも６か月間投与される、条項６２に記載の方法。
６４．その薬剤が少なくとも１２か月間投与される、条項６３に記載の方法。
【実施例】
【0105】
（６．実施例）
本開示を実行するための具体的な実施形態の例が、以下にある。これらの実施例は、例示目的のためだけに提供され、本開示の範囲をいかなる様式でも限定することは意図されない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して精度を保証するための努力を行ったが、当然、いくらかの実験誤差および偏差が許容されるべきである。
本開示を実行するための具体的な実施形態の例が、以下にある。これらの実施例は、例示目的のためだけに提供され、本開示の範囲をいかなる様式でも限定することは意図されない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して精度を保証するための努力を行ったが、当然、いくらかの実験誤差および偏差が許容されるべきである。
【0106】
本開示の実施は、別途示されない限りは、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、および薬理学の従来の方法を使用する。そのような技術は、本明細書において十分に説明されている。
【0107】
（６．１．実施例１．ＮＢＬ１はポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して直接的に毒性である）
上昇したＤＡＮタンパク質（Ｇｒｅｍ１、Ｇｒｅｍ２、Ｇｒｅｍ３、Ｃｅｒｂｅｒｕｓ，ＮＢＬ１、ＳＯＳＴ、およびＵＳＧ１）レベルは、成体腎臓における重篤な疾患状態と関連付けられている。Ｗｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１６０：１１３～１２１（２０１９）。
上昇したＤＡＮタンパク質（Ｇｒｅｍ１、Ｇｒｅｍ２、Ｇｒｅｍ３、Ｃｅｒｂｅｒｕｓ，ＮＢＬ１、ＳＯＳＴ、およびＵＳＧ１）レベルは、成体腎臓における重篤な疾患状態と関連付けられている。Ｗｅｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１６０：１１３～１２１（２０１９）。
【0108】
ＤＡＮタンパク質の存在の増加が腎損傷に対して因果効果を有するかどうかを評価するために、本発明者らは、ヒトポドサイト（ＨｕＰｏｄｏ）、ヒトメサンギウム細胞（ＨｕＨＭＲＣ）、およびヒト腎尿細管細胞（ＨｕＫ２）を、ヒトＮＢＬ１の存在下または非存在下で、インビトロで４８時間培養した。ヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｈｕｖｅｃ）をコントロールとして使用した。ポドサイトを、ＮＢＬ１（０．２μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ、および２．０μｇ／ｍｌ）の濃度を増加させながら培養した。メサンギウム細胞および尿細管細胞を２μｇ／ｍｌのＮＢＬ１中で培養した。ヒト臍帯静脈内皮細胞を０．２μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌというＮＢＬ１の濃度を増加させながら培養した。
【0109】
図１Ａ～図１Ｄは、簡便性のために任意単位（ＡＵ）を使用して定量化した、細胞死分析データを要約する棒グラフである。それらの結果は、ヒトポドサイトのアポトーシス／死の増加を示し、メサンギウム細胞および尿細管細胞のアポトーシス／死の増加をより少ない程度に示し、これらのアポトーシス／死の増加は、培養培地に添加したＮＢＬ１の存在に直接的に相関した。細胞死は、ＮＢＬ１で培養したヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｈｕｖｅｃ）においては、より高濃度であってさえも検出不能であった。
【0110】
図２Ａ～図２Ｂは、未処理のままにしたヒトポドサイト（図２Ａ）または２μｇ／ｍｌのＮＢＬ１とともに培養したヒトポドサイト（図２Ｂ）に対して実施した、共焦点分析の代表的画像を示し、これらは、ＳｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎおよびＡｐｏｐｔａｇで染色した。統合した画像を提示する。これらの顕微鏡写真は、ヒトポドサイトのＮＢＬ１誘導性アポトーシスの証拠を示す。矢印は、ＡｐｏｐｔａｇおよびＳｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎの共局在を強調し、これらのＡｐｏｐｔａｇおよびＳｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎはそれぞれアポトーシスについてのマーカーおよびポドサイトについてのマーカーである。この画像は、大部分のポドサイトがアポトーシスを起こしていることを強調する。図２Ｃは、ＮＢＬ１の存在下／非存在下でのＡｐｏｐｔａｇ＋Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｙｎ＋二重陽性ヒトポドサイトのパーセンテージを定量化する棒グラフ（ｎ＝３）である。この結果は、ＮＢＬ１の存在下でのアポトーシス性分化したヒトポドサイトのレベル上昇を示す。
【0111】
図３は、２μｇ／ｍｌのＮＢＬ１とともに培養したヒトポドサイトまたは未処理のままにしたヒトポドサイトのアポトーシス関連遺伝子のトランスクリプトーム解析を示す。このデータは、インビトロでＮＢＬ－１に曝露した際のアポトーシス関連遺伝子発現の有意な増加を示す。
【0112】
まとめると、これらの実験は、ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して直接的に毒性であり、ＮＢＬ１への曝露はヒトポドサイトおよびヒト腎尿細管細胞のアポトーシスを引き起こすことを、示す。
【0113】
（６．２．実施例２．ＢＭＰタンパク質はインビトロで腎細胞中で発現されず腎細胞により分泌されない）
他のＤＡＮタンパク質と同様に、ＮＢＬ１は骨形成タンパク質と相互作用することが知られている。Ｈｕｎｇら、Ｂｉｏｌ．ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄ．（２０１２）８６（５）：１５８、１～９。
他のＤＡＮタンパク質と同様に、ＮＢＬ１は骨形成タンパク質と相互作用することが知られている。Ｈｕｎｇら、Ｂｉｏｌ．ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄ．（２０１２）８６（５）：１５８、１～９。
【0114】
ＮＢＬ１が腎臓内のＢＭＰの阻害を通じてその毒性を発揮するかどうかを決定するために、本発明者らは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４およびＢＭＰ７がヒトポドサイト中でｍＲＮＡとして発現されたかどうかを分析した。本発明者らは、それらのＢＭＰのうちのいずれかのいかなるｍＲＮＡ発現も検出しなかった。次に、本発明者らは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４またはＢＭＰ７がポドサイトから上清中に分泌され、それにより自己分泌／傍分泌生存促進効果を可能にするかどうかを、評価した。本発明者らは、ヒトポドサイトの上清中のそれらのＢＭＰのうちのいずれも検出せず、これにより、ポドサイトがインビトロでＢＭＰを合成および分泌することが可能ではないことを確認した（データは示さない）。
【0115】
したがって、ポドサイトに対するＮＢＬ１の毒性はＢＭＰの存在とは無関係である。ＮＢＬ１のアポトーシス促進効果は、ＢＭＰの阻害によって媒介されない。
【0116】
（６．３．実施例３．ＮＢＬ１は腎細胞中で発現されないが、循環免疫細胞、腸組織および筋組織中で発現される）
ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して直接的に毒性であることを決定したので、本発明者らは、ＲＴ－ＰＣＲを使用して発現をβアクチン発現に対して正規化して、多くのヒト細胞株（腎細胞株が挙げられる）中でのＮＢＬ１のｍＲＮＡ発現を測定することによって、ＮＢＬ１の生理学的起源を探索した。図４は、ＮＢＬ１が腎臓由来細胞中で検出不能であったことを示す。ＮＢＬ１は他の種々の細胞株においても検出不能であった。しかし、ＮＢＬ１は、免疫細胞、例えば、ＣＤ１４＋単球ならびにＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞中で高度に発現された（図４を参照のこと）。
ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して直接的に毒性であることを決定したので、本発明者らは、ＲＴ－ＰＣＲを使用して発現をβアクチン発現に対して正規化して、多くのヒト細胞株（腎細胞株が挙げられる）中でのＮＢＬ１のｍＲＮＡ発現を測定することによって、ＮＢＬ１の生理学的起源を探索した。図４は、ＮＢＬ１が腎臓由来細胞中で検出不能であったことを示す。ＮＢＬ１は他の種々の細胞株においても検出不能であった。しかし、ＮＢＬ１は、免疫細胞、例えば、ＣＤ１４＋単球ならびにＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞中で高度に発現された（図４を参照のこと）。
【0117】
健常なボランティアの血液サンプルから単離した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）のフローサイトメトリーを使用するさらなる分析は、骨髄系（ＣＤ１４＋）細胞ならびに種々のＴ細胞セブセット（ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞）におけるＮＢＬ１タンパク質の高発現を確認した（図５Ａ～５Ｂを参照のこと）。ヒトＰＢＭＣを、ミラノ（イタリア）のＡＳＳＴ Ｓａｃｃｏ－ＦＢＦにて非糖尿病対象（ｎ＝５）から収集した８ｍｌ血液サンプルから、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（０７８０１、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）を使用することにより精製し、その後、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）およびＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）から入手した抗ヒトＣＤ３（３００３３０）、抗ＣＤ４５（５６０１７８）、抗ＣＤ４（５６１０３０）、抗ＣＤ８（５６０７７４）、抗ＣＤ１４（５６１７０７）を用いてフローサイトメトリー分析のために細胞を染色して、表面発現を定量化した。ウサギポリクローナル抗ＮＢＬ１（Ｓｉｇｍａ、ＨＰＡ００７３９４）を使用し、その後にロバ抗ウサギＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＮＢＬ１について染色した。ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、細胞を分析した。
【0118】
ＮＢＬ１の発現をさらに探求するために、ＮＢＬ１ヒト組織発現の網羅的免疫染色研究を実施した。この研究において、ＮＢＬ１発現を、ヒト組織検体に対する免疫組織化学およびフローサイトメトリーによって検出した。ＮＢＬ１免疫反応性を、目的の領域１つ当たりの総細胞中のＮＢＬ１陽性細胞のパーセンテージに基づいて半定量的にスコア付けした。そのスコア付けは以下のとおりであった：＜１０％、１＋；１０％～３０％、２＋；３０％～５０％、３＋；５０％～８０％、４＋、および＞８０％、５＋。Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｔ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐａｒｍａ）から入手した非糖尿病対象のホルマリン固定パラフィン包埋組織サンプルアーカイブを、ＮＢＬ１免疫染色（抗ＮＢＬ１一次抗体＃ＨＰＡ００７３９４、Ｍｅｒｃｋ）のために使用した。各パネルのさらなる拡大図を右上の黒い四角の挿入図中に示しており、黒い矢印は陽性染色を強調している。元の倍率は２０倍であり、スケールバーは１００μｍである（図５Ｃを参照のこと）。
【0119】
半定量的スコアを、以下のとおりの二重陽性細胞のパーセンテージの定量化に基づいて、Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＮＢＬ１＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋ＮＢＬ１＋）および単球（ＣＤ１４＋ＮＢＬ１＋）において検出されたＮＢＬ１発現にも適用した：＜１５％、１＋；１５％～４５％、２＋；４５％～７５％、３＋；７５％～９０％、４＋、および＞９０％、５＋（図５Ａを参照のこと）。
【0120】
ヒト細胞におけるＮＢＬ１タンパク質発現を示す半定量的スコアを、図５Ｄに提示する棒グラフにおいて示す。細胞組織化学について、ｎ＝３の別々のスライドにおいて算出したスコアの平均値を示す。フローサイトメトリーに関し、Ｔ細胞、Ｂ細胞および単球を示すスコアは、分析したｎ＝５のサンプルにおいて得られた平均値を示す。（図５Ｄを参照のこと）。
【0121】
この研究の結果は、ＮＢＬ１（これは腎臓中で発現されない）が、循環免疫細胞（特に、Ｔ細胞および単球）中、種々の腸組織および筋肉中で発現され、生殖組織、骨および骨髄中でより少なく発現されることを、示す。
【0122】
（６．４．実施例４．ＮＢＬ１をアンタゴニストで中和すると、毒性を防止する）
ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して毒性であること、この毒性が直接媒介されること、ならびにＮＢＬ１が腎細胞中で局所的には産生されないが、その代わりに循環免疫細胞および他の非腎組織中で発現されることが示されたので、本発明者らは、ＮＢＬ１が、腎細胞を損傷から保護するための直接的治療介入のために適切な標的であり得るかどうかを試験した。
ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して毒性であること、この毒性が直接媒介されること、ならびにＮＢＬ１が腎細胞中で局所的には産生されないが、その代わりに循環免疫細胞および他の非腎組織中で発現されることが示されたので、本発明者らは、ＮＢＬ１が、腎細胞を損傷から保護するための直接的治療介入のために適切な標的であり得るかどうかを試験した。
【0123】
ヒトポドサイトを、ＮＢＬ１（２μｇ／ｍｌ）の存在下で、１：１の比の可溶性ＢＭＰ２の存在下または非存在下（ＮＢＬ１：ｓＢＭＰ２＝１：１）で、４８時間培養した。細胞死をＥＬＩＳＡによって検出した。可溶性ＢＭＰ２とのインキュベーションは、ＮＢＬ１の存在下で培養したヒトポドサイトが経験する細胞死効果を有意に減少させた。このことは、可溶性ＢＭＰ２が、インビトロでヒトポドサイトに対するＮＢＬ１のアポトーシス促進効果を部分的に中和可能であることを示す。上記の実験についての結果を図６に示す。３つの独立した実験を二連で行った。データは平均±ＳＥＭとして示す。市販の抗ＮＢＬ１ツール（ｔｏｏｌ）抗体（Ｓｉｇｍａ）は、より小さい効果を示した（データは示さない）。
【0124】
（６．５．実施例５．ヒト抗ＮＢＬ１抗体発見作戦）
ナイーブヒトファージディスプレイライブラリーをパニングして、ヒトＮＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ４１２７１）に結合可能なＦａｂを発見し、マウスＮＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ６１４７７）および／またはカニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＮＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ａ０Ａ２Ｋ５ＷＩＹ３）に対して潜在的種間交差反応性についてさらにスクリーニングした。上位２５種のＦａｂを発現ベクター中にクローニングし、全長ヒトＩｇＧ１抗体として発現させた。それらのＩｇＧ１フォーマット抗体の抗原結合をＥＬＩＳＡによって試験し、ＥＣ５０値を評価した。二十（２０）種のＩｇＧ１抗体が、ＥＬＩＳＡにおいてヒトＮＢＬ１、マウスＮＢＬ１、およびカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＮＢＬ１に１０ｎｇ／ｍＬと１００ｎｇ／ｍＬとの間（約０ｐＭ～約６００ｐＭ）のＥＣ５０で結合することが示された。
ナイーブヒトファージディスプレイライブラリーをパニングして、ヒトＮＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ４１２７１）に結合可能なＦａｂを発見し、マウスＮＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ６１４７７）および／またはカニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＮＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ａ０Ａ２Ｋ５ＷＩＹ３）に対して潜在的種間交差反応性についてさらにスクリーニングした。上位２５種のＦａｂを発現ベクター中にクローニングし、全長ヒトＩｇＧ１抗体として発現させた。それらのＩｇＧ１フォーマット抗体の抗原結合をＥＬＩＳＡによって試験し、ＥＣ５０値を評価した。二十（２０）種のＩｇＧ１抗体が、ＥＬＩＳＡにおいてヒトＮＢＬ１、マウスＮＢＬ１、およびカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＮＢＬ１に１０ｎｇ／ｍＬと１００ｎｇ／ｍＬとの間（約０ｐＭ～約６００ｐＭ）のＥＣ５０で結合することが示された。
【0125】
上記の節５．３．２に示されている表は、これらの２０種のＩｇＧ１抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を提示し、ＣＤＲ配列を別に提示する。
【0126】
（６．６．実施例６．モノクローナル抗ＮＢＬ１抗体はインビトロでヒトポドサイトのＮＢＬ１媒介性アポトーシスをレスキューする）
ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して直接的に毒性であること、ならびにその毒性がｓＢＭＰ２（これはＮＢＬ１に特異的に結合可能である）を使用して防止され得ることが示されたので、本発明者らは、ＮＢＬ１の存在下で培養したヒトポドサイトが経験する細胞死効果に対するモノクローナル抗ＮＢＬ１抗体の効果を評価することを決めた。実施例６において作製したモノクローナル抗体のうち、本発明者らは、１６種の抗体を試験し、インビボで培養したヒトポドサイトにおいてそれらが細胞死およびアポトーシスを防止する能力を評価した。
ＮＢＬ１がポドサイトおよび腎尿細管細胞に対して直接的に毒性であること、ならびにその毒性がｓＢＭＰ２（これはＮＢＬ１に特異的に結合可能である）を使用して防止され得ることが示されたので、本発明者らは、ＮＢＬ１の存在下で培養したヒトポドサイトが経験する細胞死効果に対するモノクローナル抗ＮＢＬ１抗体の効果を評価することを決めた。実施例６において作製したモノクローナル抗体のうち、本発明者らは、１６種の抗体を試験し、インビボで培養したヒトポドサイトにおいてそれらが細胞死およびアポトーシスを防止する能力を評価した。
【0127】
ヒトポドサイトを、１０％のＦＢＳを補充しＩＴＳ（１倍）を補充したＲＰＭＩ中で培養した。ヒトＮＢＬ１組換えタンパク質をＧｅｎｓｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）から入手した。ファージディスプレイされたＮＢＬ１結合ＦａｂをヒトＩｇＧ１フォーマットにクローニングすることによって得たヒトモノクローナルＮＢＬ１抗体（上記実施例６）を、濃度２０μｇ／ｍｌにて試験した。
【0128】
それらのヒトポドサイトを、１：１の比（モノクローナル抗体（ｍＡｂ）：ＮＢＬ１）のヒトＮＢＬ１（２μｇ／ｍｌ）の存在下／非存在下および本発明者らが作製した抗ＮＢＬ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（２０μｇ／ｍｌ）の存在下／非存在下で、４８時間培養した。細胞溶解物を培養４８時間で収集し、細胞死／アポトーシスを、ＥＬＩＳＡ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、１１５４４６７５００１、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用することにより評価した。細胞死の定量化を、未処理細胞に対して正規化した。
【0129】
本発明者らは、これらの新規に作製したモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の存在下でのインキュベーション後に、それらのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のうちの多くがＮＢＬ１誘導性細胞死を種々の程度に防止／低減可能である（ｐ＜０．０００１）ことを観察した。最も重要なことに、それらの１６種のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のうちの６種（ＹＵ１０１８－Ｈ０８、ＹＵ１０１９－Ｂ０６、ＹＵ１０１８－Ｅ０１、ＹＵ１０１８－Ｅ０４、ＹＵ１０１９－Ａ１２、ＹＵ１０１８－Ｄ０６）は、ＮＢＬ１で培養したヒトポドサイトが経験する細胞死効果を、ネガティブコントロール（最も左の棒、「培地」）のレベルまたはそれよりも低いレベルにまで低減可能であった。このことは、これらのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）がヒトポドサイトに対するＮＢＬ１のアポトーシス促進効果をインビトロで完全に中和可能であることを示し、これは、試験した抗体において、これらの抗体が、上昇した循環ＮＢＬ１レベルを有する対象（Ｔ１Ｄを有するヒト対象およびＴ２Ｄを有するヒト対象が挙げられる）における糸球体疾患／腎臓病の進行を最も強力に低減可能であることをさらに示す。結果を図８に示す。
【0130】
同じ実験において、本発明者らは、可溶性ＢＭＰ２（１μｇ／ｍｌ、１：１のＢＭＰ２：ＮＢＬ１比）がＮＢＬ１の効果を中和する能力を試験した。図８に示すとおり、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｈ０８、Ｂ０６、およびＥ０１は、ヒトポドサイトに対するＮＢＬ１媒介性アポトーシス効果の減少がｓＢＭＰ２よりも有意に強かった。このことは、ポドサイトをＮＢＬ１媒介性の毒性および損傷から保護することにおける抗ＮＢＬ１抗体の有益な有効性を強調する。
【0131】
（６．７．実施例７．ＮＢＬ１は１型糖尿病および２型糖尿病において上昇する）
ＮＢＬ１が糖尿病における腎損傷に関与するかどうかを決定するために、ＮＢＬ１血清レベルを、免疫標的化（ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｅｄ）アッセイを使用して評価した。ＮＢＬ１血清レベルを、長期にわたる１型糖尿病を有する患者（Ｔ１Ｄ、ｎ＝１５０）において測定し、非糖尿病対象（ｎ＝１５）の血清において観察されたＮＢＬ１血清レベルと比較した。長期にわたる１型糖尿病を有する患者のＮＢＬ１血清レベルは、ＮＢＬ１の有意な上昇を示した。非糖尿病対象におけるレベルに対する２型糖尿病を有する患者（Ｔ２Ｄ、ｎ＝７０）におけるＮＢＬ１血清レベルの並行比較もまた、ＮＢＬ１の有意な上昇を示した。結果を図７Ａに示す。
ＮＢＬ１が糖尿病における腎損傷に関与するかどうかを決定するために、ＮＢＬ１血清レベルを、免疫標的化（ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｅｄ）アッセイを使用して評価した。ＮＢＬ１血清レベルを、長期にわたる１型糖尿病を有する患者（Ｔ１Ｄ、ｎ＝１５０）において測定し、非糖尿病対象（ｎ＝１５）の血清において観察されたＮＢＬ１血清レベルと比較した。長期にわたる１型糖尿病を有する患者のＮＢＬ１血清レベルは、ＮＢＬ１の有意な上昇を示した。非糖尿病対象におけるレベルに対する２型糖尿病を有する患者（Ｔ２Ｄ、ｎ＝７０）におけるＮＢＬ１血清レベルの並行比較もまた、ＮＢＬ１の有意な上昇を示した。結果を図７Ａに示す。
【0132】
その後、Ｔ１ＤまたはＴ２Ｄを有し、糖尿病関連腎臓病（ＤＫＤ）の診断も受けた患者を選択し、本発明者らは彼らのＮＢＬ１血清レベルを分析した。その分析は、ステージ２～３の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する患者（ｅＧＦＲ＜６０ｍｌ／ｍｉｎ／ｍ２、ｎ＝６０）が、非糖尿病対象と比較して３倍に上昇したＮＢＬ１血清レベルを有し、ＣＫＤなしの糖尿病患者と比較して２倍に上昇したＮＢＬ１血清レベルを有することを実証した（図７Ｂを参照のこと）。
【0133】
したがって、ＮＢＬ１の阻害は、１型糖尿病または２型糖尿病を有する患者における腎損傷の発症および進行を予防するための新規な治療アプローチである。ＮＢＬ１の阻害はまた、ＮＢＬ１によって損傷が媒介される非糖尿病性糸球体疾患を処置することにおいて有効である。
【0134】
（７．等価物、および参照による援用）
本発明は好ましい実施形態および種々の選択的実施形態に関して特に示され記載されてきたが、形式および詳細の種々の変更が、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくそれらの実施形態において行われ得ることが、当業者によって理解される。
本発明は好ましい実施形態および種々の選択的実施形態に関して特に示され記載されてきたが、形式および詳細の種々の変更が、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくそれらの実施形態において行われ得ることが、当業者によって理解される。
【0135】
本明細書内で引用されたすべての参考文献、発行された特許、および特許出願は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書により援用される。
【図1】
【図2A-B】
【図2C】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6】
【図7】
【図8】
【国際調査報告】