特表 2024-530050 中枢神経系に影響を及ぼす障害の改善された治療のための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-14

(54)【発明の名称】中枢神経系に影響を及ぼす障害の改善された治療のための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/76 20150101AFI20240806BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20240806BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240806BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240806BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240806BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240806BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240806BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240806BHJP

【ＦＩ】

A61K35/76

C12N15/864 100Z

A61P25/00

A61K48/00

A61P25/28

A61P25/16

A61K31/7088

C12N15/12 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024508455

(86)(22)【出願日】2022-08-10

(85)【翻訳文提出日】2024-04-05

(86)【国際出願番号】 EP2022072487

(87)【国際公開番号】W WO2023017098

(87)【国際公開日】2023-02-16

(31)【優先権主張番号】63/232,053

(32)【優先日】2021-08-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/331,614

(32)【優先日】2022-04-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513200313

【氏名又は名称】キングス・カレッジ・ロンドン

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】クリストファー ショー

(72)【発明者】

【氏名】ヨウン ボク リー

(72)【発明者】

【氏名】ド ヨン リー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084MA65

4C084NA14

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA151

4C084ZA152

4C084ZA161

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4C084ZA222

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

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4C086MA04

4C086MA65

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA15

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4C086ZA22

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB28

4C087CA44

4C087MA65

4C087NA14

4C087ZA02

4C087ZA15

4C087ZA16

4C087ZA22

(57)【要約】

中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有するか、または発症するリスクがある対象を治療するための方法が、本明細書に記載される。本開示の方法は、治療用タンパク質（例えば、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）を発現するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを投与することを含み得る。本開示のＡＡＶベクターは、例えば、末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）における形質導入を回避しながら、ＣＮＳにおける遺伝子発現を達成する特定の量で、かつ特定の投与経路によって、投与され得る。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者の中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす障害を治療する方法であって、前記方法が、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に視床内（ｉｎｔｒａｔｈａｌａｍｉｃａｌｌｙ）投与される、前記方法。

【請求項2】

患者のＣＮＳに影響を及ぼす障害を有すると診断された前記患者における認知機能を改善する方法であって、前記方法が、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に視床内投与される、前記方法。

【請求項3】

ＣＮＳに影響を及ぼす障害を有すると診断された患者の脳（例えば、前頭皮質）において、治療用タンパク質を発現させる方法であって、前記方法が、前記治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に視床内投与される、前記方法。

【請求項4】

前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に投与され、任意選択で、前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１０ｖｇ／半球、２×１０^１０ｖｇ／半球、３×１０^１０ｖｇ／半球、４×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、６×１０^１０ｖｇ／半球、７×１０^１０ｖｇ／半球、８×１０^１０ｖｇ／半球、９×１０^１０ｖｇ／半球、１×１０^１１ｖｇ／半球、２×１０^１１ｖｇ／半球、３×１０^１１ｖｇ／半球、４×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１１ｖｇ／半球、６×１０^１１ｖｇ／半球、７×１０^１１ｖｇ／半球、８×１０^１１ｖｇ／半球、９×１０^１１ｖｇ／半球、１×１０^１２ｖｇ／半球、２×１０^１２ｖｇ／半球、３×１０^１２ｖｇ／半球、４×１０^１２ｖｇ／半球、または５×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記ＡＡＶベクターが、約５×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１０ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記ＡＡＶベクターが、約５×１０^１０ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項５に記載の方法。

【請求項8】

前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項５に記載の方法。

【請求項9】

前記ＡＡＶベクターが、前記量を含む、半球当たり単回用量で前記患者に投与される、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記ＡＡＶベクターが、ともに前記量を含む、半球当たり複数回の用量で前記患者に投与される、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記治療用タンパク質が、その欠損または活性の欠如が前記障害に関連するタンパク質である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記治療用タンパク質が、分泌タンパク質または本明細書の表５に列挙されるタンパク質である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記障害が、神経認知障害、神経筋障害、神経変性障害、またはリソソーム蓄積障害である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記障害が、リソソーム蓄積障害である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記障害が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記導入遺伝子が、神経細胞及び／またはグリア細胞において活性であるプロモーターに動作可能に連結され、任意選択で、前記導入遺伝子が、ＰＧＲＮをコードする、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記プロモーターが、シナプシンプロモーター、テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｔＴＡ）プロモーター、逆テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｒＴＡ）プロモーター、Ｕ１プロモーター、Ｕ６プロモーター、Ｕ７プロモーター、プリオンプロモーター、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＣＢ７プロモーター、Ｈ１プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＣＭＶ－ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩＩプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、マイクロチューブリン関連タンパク質ＩＢ（ＭＡＰ ＩＢ）プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来成長因子ベータ鎖プロモーター、ニューロフィラメント軽鎖プロモーター、ニューロン特異的ＶＧＦ遺伝子プロモーター、ニューロン核（ＮｅｕＮ）プロモーター、大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ）プロモーター、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ－１）プロモーター、またはホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーターである、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記プロモーターが、シナプシンプロモーターである、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記シナプシンプロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記シナプシンプロモーターが、前記配列番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、前記シナプシンプロモーターが、前記配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記シナプシンプロモーターが、前記配列番号１の核酸配列を有する、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮであり、前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＰＧＲＮが、前記配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、前記配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記ＰＧＲＮが、前記配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記導入遺伝子が、ＰＧＲＮをコードし、ＰＧＲＮをコードする前記導入遺伝子が、コドン最適化されている、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

ＰＧＲＮをコードする前記導入遺伝子が、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

ＰＧＲＮをコードする前記導入遺伝子が、前記配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、ＰＧＲＮをコードする前記導入遺伝子が、前記配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

ＰＧＲＮをコードする前記導入遺伝子が、前記配列番号３の核酸配列を有する、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記導入遺伝子が、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）イントロンに動作可能に連結され、任意選択で、（ｉ）前記ｈＧＨイントロンが、ｈＧＨイントロン３であり、及び／または（ｉｉ）前記導入遺伝子が、ＰＧＲＮをコードする、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記ｈＧＨイントロンが、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記ｈＧＨイントロンが、前記配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、前記ｈＧＨイントロンが、前記配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ｈＧＨイントロンが、前記配列番号４の核酸配列を有する、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記導入遺伝子が、３’エンハンサーエレメントに動作可能に連結され、任意選択で、前記導入遺伝子が、ＰＧＲＮをコードする、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記３’エンハンサーエレメントが、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記３’エンハンサーエレメントが、前記配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、前記３’エンハンサーエレメントが、前記配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記３’エンハンサーエレメントが、前記配列番号５の核酸配列を有する、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、及びＡＡＶｒｈ．１０からなる群から選択されるＡＡＶ血清型に由来するカプシドタンパク質を含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記ＡＡＶが、順行性輸送ＡＡＶまたは逆行性輸送ＡＡＶである、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、またはＡＡＶｒｈ．１０由来の５’逆位末端反復（ＩＴＲ）及び／または３’ＩＴＲを含み、任意選択で、前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ２由来の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲを含む、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記ＡＡＶベクターが、１つのＡＡＶ血清型由来の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲ、ならびに異なるＡＡＶ血清型由来のカプシドタンパク質を含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ２／９ベクターである、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記ＡＡＶが、前記配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記ＡＡＶが、前記配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意選択で、前記ＡＡＶが、前記配列番号６の核酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記ＡＡＶが、配列番号６の核酸を有する、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮであり、前記ＡＡＶベクターの投与前、前記患者が、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベルを示す、請求項１～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮであり、前記ＡＡＶベクターの投与後、前記患者が、前記ＡＡＶベクターの投与前に得られた前記患者のＰＧＲＮ発現レベルの測定値に対して、ＰＧＲＮ発現の増加を示す、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＰＧＲＮ発現の増加が、前記患者の視床、前頭皮質、大脳基底核、頭頂皮質、側頭皮質、頭頂及び側頭皮質、及び／または脳脊髄液（ＣＳＦ）において観察される、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮであり、前記ＡＡＶベクターの投与後、前記患者が、前記前頭皮質において、約２ｎｇ／ｍｇ～約１００ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す、請求項１～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記ＡＡＶベクターが、対流補助方式で前記患者に投与される、請求項１～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

患者のＣＮＳに影響を及ぼす障害を治療する方法であって、前記方法が、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、前記患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質発現のレベルを達成するのに十分な量で前記患者に投与され、前記レベルが、前記治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に前記障害を有するヒト対象において観察された治療用タンパク質発現のレベルと同等である、前記方法。

【請求項53】

患者のＣＮＳに影響を及ぼす障害を有すると診断されたヒト患者における認知機能を改善する方法であって、前記方法が、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、前記患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質発現のレベルを達成するのに十分な量で前記患者に投与され、前記レベルが、前記治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に前記障害を有するヒト対象において観察された治療用タンパク質発現のレベルと同等である、前記方法。

【請求項54】

患者のＣＮＳに影響を及ぼす障害を有すると診断されたヒト患者の脳（例えば、前頭皮質）において、治療用タンパク質を発現させる方法であって、前記方法が、前記治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、前記患者の前記脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質発現のレベルを達成するのに十分な量で前記患者に投与され、前記レベルが、前記治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に前記障害を有するヒト対象において観察された治療用タンパク質発現のレベルと同等である、前記方法。

【請求項55】

ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害の治療を必要とするヒト患者において、それを行う方法であって、前記方法が、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇまたはそれを超える前記患者の脳（例えば、前頭皮質）におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で、前記患者に投与される、前記方法。

【請求項56】

ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害を有すると診断されたヒト患者における認知機能を改善する方法であって、前記方法が、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇまたはそれを超える前記患者の脳（例えば、前頭皮質）におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で、前記患者に投与される、前記方法。

【請求項57】

ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害を有すると診断されたヒト患者の脳（例えば、前頭皮質）において、ＰＧＲＮを発現させる方法であって、前記方法が、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを前記患者に投与することを含み、前記ＡＡＶベクターが、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇまたはそれを超える前記患者の前記脳（例えば、前頭皮質）におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で、前記患者に投与される、前記方法。

【請求項58】

前記治療用タンパク質が、その欠損または活性の欠如が前記障害に関連するタンパク質である、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記治療用タンパク質が、分泌タンパク質または本明細書の表５に列挙されるタンパク質である、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮである、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記障害が、神経認知障害、神経筋障害、神経変性障害、またはリソソーム蓄積障害である、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記障害が、リソソーム蓄積障害である、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記障害が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害である、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含む前記ＡＡＶ２／９ベクターが、配列番号６の核酸配列を有する、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記患者に投与された前記ＡＡＶベクターが、順行性輸送ＡＡＶまたは逆行性輸送ＡＡＶである、請求項５２～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記患者に投与された前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、及びＡＡＶｒｈ．１０からなる群から選択されるＡＡＶ血清型に由来するカプシドタンパク質を含む、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記患者に投与された前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、またはＡＡＶｒｈ．１０由来の５’ＩＴＲ及び／または３’ＩＴＲを含み、任意選択で、前記患者に投与された前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ２由来の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲを含む、請求項５２～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記患者に投与された前記ＡＡＶベクターが、１つのＡＡＶ血清型由来の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲ、ならびに異なるＡＡＶ血清型由来のカプシドタンパク質を含む、請求項５２～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記患者に投与された前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ２／９ベクターである、請求項５２～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記ヒト患者が、ＧＲＮ遺伝子における変異によるＦＴＤを有すると診断される、請求項１～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記ＡＡＶベクターの投与時に、１０％未満の末梢組織における導入遺伝子発現の増加が観測される、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記末梢組織が、肝臓、肺、及び／または脾臓を含む、請求項７１に記載の方法。

【請求項73】

前記導入遺伝子発現が、ＧＡＰＤＨ発現に対して計算される、請求項７１または７２に記載の方法。

【請求項74】

前記患者が、哺乳動物である、請求項１～７３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

前記患者が、ヒトである、請求項１～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

患者の中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす障害の治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ＡＡＶベクターが、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含み、前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に視床内投与される、前記アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項77】

前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に投与され、任意選択で、前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１０ｖｇ／半球、２×１０^１０ｖｇ／半球、３×１０^１０ｖｇ／半球、４×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、６×１０^１０ｖｇ／半球、７×１０^１０ｖｇ／半球、８×１０^１０ｖｇ／半球、９×１０^１０ｖｇ／半球、１×１０^１１ｖｇ／半球、２×１０^１１ｖｇ／半球、３×１０^１１ｖｇ／半球、４×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１１ｖｇ／半球、６×１０^１１ｖｇ／半球、７×１０^１１ｖｇ／半球、８×１０^１１ｖｇ／半球、９×１０^１１ｖｇ／半球、１×１０^１２ｖｇ／半球、２×１０^１２ｖｇ／半球、３×１０^１２ｖｇ／半球、４×１０^１２ｖｇ／半球、または５×１０^１２ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項78】

前記ＡＡＶベクターが、約５×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項79】

前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１０ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項80】

前記ＡＡＶベクターが、約５×１０^１０ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項81】

前記ＡＡＶベクターが、約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項82】

前記ＡＡＶベクターが、前記量を含む、半球当たり単回用量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項83】

前記ＡＡＶベクターが、ともに前記量を含む、半球当たり複数回の用量で前記患者に投与される、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項84】

前記治療用タンパク質が、その欠損または活性の欠如が前記障害に関連するタンパク質である、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項85】

前記治療用タンパク質が、分泌タンパク質または本明細書の表５に列挙されるタンパク質である、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項86】

前記治療用タンパク質が、ＰＧＲＮである、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項87】

前記障害が、神経認知障害、神経筋障害、神経変性障害、またはリソソーム蓄積障害である、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項88】

前記障害が、リソソーム蓄積障害である、請求項７６に記載の使用のためのＡＡＶ。

【請求項89】

ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを含むキットであって、前記キットが、請求項１～７５のいずれか１項に記載の方法に従って、前記ＡＡＶベクターを前記患者に投与するように前記キットの使用者に指示する添付文書を更に含む、前記キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、対象（例えば、ヒト対象）の中枢神経系に影響を及ぼす疾患を治療するための組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0002】

プログラニュリン（ＰＧＲＮ）は、成長因子シグナル伝達経路を含む、腫瘍形成、炎症、及び修復に長い間関与してきた６８．５ｋＤの糖タンパク質である。ＰＧＲＮは、主に、成長因子様機能を果たし得る脳組織のミクログリア及びニューロンにおいて発現される。最近の発見は、ＰＧＲＮが神経変性障害、特に、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）に関与していることを示唆しており、ＧＲＮ遺伝子の常染色体優性変異が、根本的なＦＴＤ表現型として記載されている。ＰＧＲＮはまた、アルツハイマー病及び他のアミロイド関連疾患（例えば、レビー小体型認知症）におけるβアミロイドプラークと関連して、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を有する患者における主な疾患関連タンパク質であるトランス活性化応答エレメントＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）と関連して見出されている。ＦＴＤなどのそのような神経変性疾患に対する既存の治療は、疾患の症状を改善するよう努めている。しかしながら、根本的な神経変性を標的とする療法は欠如しており、したがって、新しい治療手段の必要性が強調される。

【発明の概要】

【0003】

本開示は、中枢神経系の障害、例えば、中枢神経系に悪影響を及ぼす他の障害の中でもとりわけ、神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、神経変性疾患）またはリソソーム蓄積障害を治療するために使用され得る組成物及び方法を提供する。本開示の組成物及び方法を使用して治療され得る例示的な障害には、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ならびに関連する神経認知障害及び運動ニューロン障害が挙げられる。本開示の組成物及び方法を使用して、本明細書に記載の他の病態の中でとりわけ、神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害などの神経変性障害）またはリソソーム蓄積障害を有する患者（例えば、ヒト患者などの哺乳動物患者）は、治療用タンパク質（例えば、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を投与され得る。本開示の組成物及び方法と組み合わせて有用な例示的な導入遺伝子としては、本明細書に記載の他の治療用タンパク質の中でもとりわけ、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）が挙げられ、いくつかの実施形態では、タンパク質発現を更に増加するために、コドン最適化された導入遺伝子の形態で送達され得る。本明細書に記載の使用方法は、特に、肝臓、肺、及び脾臓を含むがこれらに限定されない末梢組織における顕著な導入遺伝子発現を回避するため、有益である。

【0004】

第１の態様では、本開示は、患者の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び／または脾臓）における導入遺伝子の発現を最小限に抑え、または完全に回避しながら、患者の中枢神経系（ＣＮＳ）における治療用導入遺伝子（例えば、本明細書に記載の様々な他の治療用導入遺伝子の中でとりわけ、ＰＧＲＮ）の発現を達成する方法を提供する。患者は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有する患者であり得、方法は、治療用導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。

【0005】

別の態様では、本開示は、治療用導入遺伝子（例えば、本明細書に記載の他の治療用導入遺伝子の中でもとりわけ、ＰＧＲＮ）を患者のＣＮＳに導入することによって、認知の改善、神経変性の低減、及び／または神経筋機能の改善を必要とする患者において、それを行う方法を提供する。方法は、患者の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び／または脾臓）において、導入遺伝子の発現を最小限に抑えるか、または完全に回避し得る。患者は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有する患者であり得、方法は、治療用導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。

【0006】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）の治療を必要とするヒト患者において、それを行う方法であって、方法が、本明細書に記載の様々な他の治療用タンパク質の中でとりわけ、ＰＧＲＮなどの治療用タンパク質（例えば、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。

【0007】

更なる態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有すると診断されたヒト患者における認知機能を改善する方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、本明細書に記載の様々な他の治療用タンパク質の中でとりわけ、ＰＧＲＮなど、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。

【0008】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有すると診断されたヒト患者の脳（例えば、前頭皮質）において、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ、または本明細書に記載の別の治療用タンパク質）を発現するか、またはその発現を回復させる方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、本明細書に記載の様々な他の治療用タンパク質の中でとりわけ、ＰＧＲＮなど、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。

【0009】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球、２×１０^１０ｖｇ／半球、３×１０^１０ｖｇ／半球、４×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、６×１０^１０ｖｇ／半球、７×１０^１０ｖｇ／半球、８×１０^１０ｖｇ／半球、９×１０^１０ｖｇ／半球、１×１０^１１ｖｇ／半球、２×１０^１１ｖｇ／半球、３×１０^１１ｖｇ／半球、４×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１１ｖｇ／半球、６×１０^１１ｖｇ／半球、７×１０^１１ｖｇ／半球、８×１０^１１ｖｇ／半球、９×１０^１１ｖｇ／半球、１×１０^１２ｖｇ／半球、２×１０^１２ｖｇ／半球、３×１０^１２ｖｇ／半球、４×１０^１２ｖｇ／半球、５×１０^１２ｖｇ／半球、６×１０^１２ｖｇ／半球、７×１０^１２ｖｇ／半球、８×１０^１２ｖｇ／半球、または９×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に投与される。

【0010】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、治療用タンパク質は、分泌タンパク質である。いくつかの実施形態では、治療用タンパク質は、本明細書の表５に列挙されるタンパク質である。いくつかの実施形態では、治療用タンパク質は、ＰＧＲＮである。

【0011】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、障害は、神経認知障害、神経筋障害、神経変性障害、またはリソソーム蓄積障害である。いくつかの実施形態では、障害は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害である。

【0012】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、その量を含む、半球当たり単回用量で患者に投与される。

【0013】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ともにその量を含む、半球当たり複数回の用量（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回）で患者に投与される。

【0014】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、導入遺伝子（例えば、本明細書に記載の他の治療用タンパク質の中でもとりわけ、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子）は、神経細胞及び／またはグリア細胞において活性なプロモーターに動作可能に連結される。例えば、いくつかの実施形態では、プロモーターは、シナプシンプロモーター、テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｔＴＡ）プロモーター、逆テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｒＴＡ）プロモーター、Ｕ１プロモーター、Ｕ６プロモーター、Ｕ７プロモーター、プリオンプロモーター、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＣＢ７プロモーター、Ｈ１プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＣＭＶ－ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩＩプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、マイクロチューブリン関連タンパク質ＩＢ（ＭＡＰ ＩＢ）プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来成長因子ベータ鎖プロモーター、ニューロフィラメント軽鎖プロモーター、ニューロン特異的ＶＧＦ遺伝子プロモーター、ニューロン核（ＮｅｕＮ）プロモーター、大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ）プロモーター、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ－１）プロモーター、またはホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、シナプシンプロモーターである。

【0015】

いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列を有する。

【0016】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ＰＧＲＮをコードする。ＰＧＲＮは、例えば、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、任意選択で、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列を有する。

【0017】

いくつかの実施形態では、導入遺伝子（例えば、ＰＧＲＮをコードする）は、コドン最適化される。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、配列番号３の核酸配列を有する。

【0018】

いくつかの実施形態では、導入遺伝子（例えば、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子）は、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）イントロンに動作可能に連結される。例えば、いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、ｈＧＨイントロン３である。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列を有する。

【0019】

いくつかの実施形態では、導入遺伝子（例えば、ＰＧＲＮをコードする）は、３’エンハンサーエレメントに動作可能に連結される。いくつかの実施形態では、３’エンハンサーエレメントは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、３’エンハンサーエレメントは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有し、任意選択で、３’エンハンサーエレメントは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、３’エンハンサーエレメントは、配列番号５の核酸配列を有する。

【0020】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意選択で、ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸を有する。

【0021】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与前、患者は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）またはリソソーム蓄積障害）を有しない、同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性治療用タンパク質発現レベル（例えば、内因性ＰＧＲＮ発現レベル）のレベルの約１％～約４０％である内因性治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）の発現のレベルを示す。

【0022】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、ＡＡＶベクターの投与前に得られた患者の治療用タンパク質発現レベルの測定に対して、治療用タンパク質（例えば、本明細書に記載の他の治療用タンパク質の中でもとりわけ、ＰＧＲＮ）の発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現の増加は、患者の視床、前頭皮質、大脳基底核、頭頂皮質、側頭皮質、頭頂及び側頭皮質、及び／または脳脊髄液（ＣＳＦ）において観察される。

【0023】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２ｎｇ／ｍｇ～約１００ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約９９ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約９８ｎｇ／ｍｇ、５ｎｇ／ｍｇ～約９７ｎｇ／ｍｇ、１０ｎｇ／ｍｇ～約９０ｎｇ／ｍｇ、２０ｎｇ／ｍｇ～約８０ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ～約７０ｎｇ／ｍｇ、４０ｎｇ／ｍｇ～約６０ｎｇ／ｍｇ、または約５０ｎｇ／ｍｇ）の治療用タンパク質発現（例えば、ＰＧＲＮ発現）のレベルを示す。

【0024】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、対流補助方式で患者に投与される。

【0025】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）の治療を必要とするヒト患者において、それを行う方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含み、ＡＡＶベクターが患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルが、本明細書に記載のＡＡＶベクター（例えば、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクター）の約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量での視床内投与後に、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有するヒト対象において観測された治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）の発現のレベルと同等である、方法を提供する。

【0026】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有すると診断されたヒト患者における認知機能を改善する方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含み、ＡＡＶベクターが患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）の発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルが、本明細書に記載のＡＡＶベクター（例えば、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクター）の約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量での視床内投与後に、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有するヒト対象において観測された治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現のレベルと同等である、方法を提供する。

【0027】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有すると診断されたヒト患者の脳（例えば、前頭皮質）において、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）を発現させるか、またはその発現を回復させる方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含み、ＡＡＶベクターが患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質発現（例えば、ＰＧＲＮ発現）のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルが、本明細書に記載のＡＡＶベクター（例えば、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクター）の約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量での視床内投与後に、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有するヒト対象において観測された治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現のレベルと同等である、方法を提供する。

【0028】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）の治療を必要とするヒト患者において、それを行う方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、本明細書に記載の他の治療用タンパク質の中でとりわけ、ＰＧＲＮなど、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約７ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約６ｎｇ／ｍｇ、または約５ｎｇ／ｍｇ）、またはそれを超える（例えば、約９ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約６０ｎｇ／ｍｇ、約７０ｎｇ／ｍｇ、約８０ｎｇ／ｍｇ、約９０ｎｇ／ｍｇ、または約１００ｎｇ／ｍｇ）の患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。

【0029】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）を有すると診断されたヒト患者における認知機能を改善する方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮなど、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含み、ＡＡＶベクターが、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約７ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約６ｎｇ／ｍｇ、または約５ｎｇ／ｍｇ）、またはそれを超える（例えば、約９ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約６０ｎｇ／ｍｇ、約７０ｎｇ／ｍｇ、約８０ｎｇ／ｍｇ、約９０ｎｇ／ｍｇ、または約１００ｎｇ／ｍｇ）の患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される、方法を提供する。

【0030】

別の態様では、本開示は、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積症）を有すると診断されたヒト患者の脳（例えば、前頭皮質）において、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）を発現させるか、またはその発現のレベルを回復させる方法であって、方法が、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮなど、その欠損もしくは活性の欠如が障害に関連しているか、またはその補充が患者に利益をもたらす可能性が高い）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与することを含み、ＡＡＶベクターが、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約７ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約６ｎｇ／ｍｇ、または約５ｎｇ／ｍｇ）、またはそれを超える（例えば、約９ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約６０ｎｇ／ｍｇ、約７０ｎｇ／ｍｇ、約８０ｎｇ／ｍｇ、約９０ｎｇ／ｍｇ、または約１００ｎｇ／ｍｇ）の患者の脳（例えば、前頭皮質）における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される、方法を提供する。

【0031】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、及びＡＡＶｒｈ．１０からなる群から選択されるＡＡＶ血清型に由来するカプシドタンパク質を含む。

【0032】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、順行性輸送ＡＡＶまたは逆行性輸送ＡＡＶである。

【0033】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、またはＡＡＶｒｈ．１０由来の５’逆位末端反復（ＩＴＲ）及び／または３’ＩＴＲを含み、任意選択で、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２由来の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、１つのＡＡＶ血清型由来の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲ、ならびに異なるＡＡＶ血清型由来のカプシドタンパク質を含む。

【0034】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／９ベクターである。

【0035】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ヒト患者は、ＧＲＮ遺伝子における変異によるＦＴＤを有すると診断される。

【0036】

前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与時、末梢組織における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現の顕著な増加がないか、または治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）発現の任意のそのような増加が１０％以下（例えば、９％未満、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、または０％）である。いくつかの実施形態では、末梢組織は、肝臓、肺、及び／または脾臓を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮ導入遺伝子発現は、ＧＡＰＤＨ発現に対して計算される。

【0037】

別の態様では、本開示は、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮなどの本明細書に記載の治療用タンパク質）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを含むキットであって、キットが、前述の態様のうちのいずれかの方法に従って、ＡＡＶベクターを患者に投与するようにキットの使用者に指示する添付文書を更に含む、キットを提供する。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】コドン最適化されたヒトプログラニュリン（ｈＰＧＲＮ）遺伝子をコードするアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）（本明細書では「ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ」と略される）のマップである。陰影付きの矢印及び長方形は、５’から３’への第１のＡＡＶ２逆位末端反復（ＩＴＲ）、ヒトシナプシン（ｈＳｙｎ）プロモーター、ヒト成長ホルモンイントロン（ｈＧＨｉ３）、コドン最適化されたｈＧＲＮ遺伝子（ＰＧＲＮ－ＧＳ）、ｈＰＧＲＮ ３’非翻訳領域（ｈＰＧＲＮ－３’ＵＴＲ）、ウシ成長ホルモンポリアデニル化（ポリ（Ａ））シグナル、ファージ由来の複製起点（ｆ１ ｏｒｉ）、ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ａｍｐＣ β－ラクタマーゼ（ＡｍｐＲ）プロモーター、カナマイシン選択遺伝子（ＫａｎＲ）、及び第２の複製起点（ｏｒｉ）を含む核酸分子を表す。

【図2】１×１０^１０ｖｇ／半球の低用量の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮを視床内（ＩＴＭ）注入されたヒツジの皮質の６つの層にわたるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）発現の顕微鏡写真である。略語：ＮｅｕＮ、ニューロン核；ＤＡＰＩ、４’、６－ジアミジノ－２－フェニルインドール。

【図3】低用量（１×１０^１０ｖｇ／半球）、中用量（５×１０^１０ｖｇ／半球）、または高用量（１×１０^１１ｖｇ／半球）の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたヒツジの生検組織の脳領域にわたるμｇ当たりのベクターゲノム（ｖｇ）を示すグラフのセットである。略語：ＣＤ／ＰＴ、尾状核被殻／頭頂側頭部。

【図4】低用量（１×１０^１０ｖｇ／半球）、中用量（５×１０^１０ｖｇ／半球）、または高用量（１×１０^１１ｖｇ／半球）の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたヒツジ（例えば、ＫＣＬ９～ＫＣＬ１３）の前頭前（ＰＦ）皮質におけるｈＰＧＲＮ、ＮｅｕＮ、及びＩＢＡ１（例えば、ミクログリア活性化のマーカー）発現の顕微鏡写真のセットである。

【図5】低用量（１×１０^１０ｖｇ／半球）、中用量（５×１０^１０ｖｇ／半球）、または高用量（１×１０^１１ｖｇ／半球）の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたヒツジの脳領域にわたるｈＰＧＲＮタンパク質レベルを示すグラフのセットである。略語：ＣＤ／ＰＴ、尾状核被殻／頭頂側頭部。

【図6】１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、１×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１１ｖｇ／半球、または５×１０^１２ｖｇ／半球の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたヒツジにおける、それぞれ、前頭Ａ皮質、前頭Ｂ皮質、及び視床にわたるｈＰＧＲＮタンパク質レベルを示すグラフのセットである。

【図7】視床におけるｈＰＧＲＮタンパク質レベル発現のパーセント（％）に対して正規化された、低用量（１×１０^１０ｖｇ／半球）、中用量（５×１０^１０ｖｇ／半球）、または高用量（１×１０^１１ｖｇ／半球）の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたヒツジの脳領域にわたるｈＰＧＲＮタンパク質レベルを示すグラフのセットである。略語：ＣＤ／ＰＴ、尾状核被殻／頭頂側頭部。

【図8】Ａ及びＢは、脳脊髄液（ＣＳＦ）中のｈＰＧＲＮタンパク質レベルを示すグラフのセットである。Ａは、健常な対照対象と比較した、症状の発病の前後（それぞれ、症状が出る前及び症状が出た後）の前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有すると診断された患者のＣＳＦ中のｈＰＧＲＮレベルを示すグラフである。Ｂは、ＩＴＭ投与された低用量（１×１０^１０ｖｇ／半球）、中用量（５×１０^１０ｖｇ／半球）、または高用量（１×１０^１１ｖｇ／半球）の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの形質導入の４週間後のヒツジのＣＳＦ中のｈＰＧＲＮレベルを示すグラフである。

【図9】Ａ及びＢは、血清中のｈＰＧＲＮタンパク質レベルを示すグラフのセットである。Ａは、健常な対照対象と比較した、症状の発病の前後（それぞれ、症状が出る前及び症状が出た後）のＦＴＤを有すると診断された患者の血清中のｈＰＧＲＮレベルを示すグラフである。Ｂは、ＩＴＭ投与された低（１×１０^１０ｖｇ／半球）、中（５×１０^１０ｖｇ／半球）、または高用量（１×１０^１１ｖｇ／半球）の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの形質導入の１週間前または４週間後のヒツジの血清中のｈＰＧＲＮレベルを示すグラフである。

【図10】１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、または１×１０^１１ｖｇ／半球の用量の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮを注入されたヒツジ（例えば、ＫＣＬ９～ＫＣＬ１３）のヘマトキシリン染色された切片のＰＦ皮質及び視床の顕微鏡写真のセットである。

【図11】１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、または１×１０^１１ｖｇ／半球の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ形質導入されたヒツジの脳領域にわたるｖｇ／μｇに正規化されたｈＰＧＲＮタンパク質レベルを示すグラフのセットである。

【図12】それぞれ、１×１０^１３の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、またはＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するＡＡＶ９もしくはＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮ及びＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ）を大槽内（ＩＣＭ）形質導入されたヒツジの小脳におけるｈＰＧＲＮ発現の顕微鏡写真のセットである。パネルＡ～Ｃは、ＰＧＲＮ、ＮｅｕＮ、及びＤＡＰＩのマージされた画像である。パネルＤ～Ｆは、抗ｈＰＧＲＮ抗体単独で染色された組織を示す。パネルＧ～Ｉは、抗ＮｅｕＮ抗体単独で染色された組織を示す。略語：ＳＹＮ：シナプシン；ＣＢ７、サイトメガロウイルスエンハンサーを有するニワトリβ－アクチンプロモーター。

【図13】１×１０^１０ｖｇ／半球または１×１０^１３の図１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、またはそれぞれｈＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するＡＡＶ９もしくはＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮ及びＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ）をＩＴＭ注入またはＩＣＭ注入されたヒツジのそれぞれＰＦ皮質及び視床におけるＰＧＲＮ発現の顕微鏡写真のセットである。略語：ＣＢ７、サイトメガロウイルスエンハンサーを有するニワトリβ－アクチンプロモーター。

【図14】１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、もしくは１×１０^１１ｖｇ／半球の図１２に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮをＩＴＭ形質導入された、または１×１０^１３ｖｇ／動物のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮをＩＣＭ形質導入されたヒツジ（例えば、ＫＣＬ－９～ＫＣＬ－１３）にわたる生検脳組織の領域にわたるｖｇ／μｇを示すグラフのセットである。陰影の強度は、ｖｇ発現レベルを示す。

【図15】それぞれ、１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、１×１０^１１の図１２に記載のＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ形質導入された、または１×１０^１３のＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＣＭ形質導入されたヒツジ（例えば、ＫＣＬ－９～ＫＣＬ－１３）にわたる脳領域にわたるｈＰＧＲＮ発現を示すグラフのセットである。陰影の強度は、ｈＰＧＲＮ発現レベルを示す。

【図16】５×１０^１０ｖｇ／半球のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ形質導入された、または１×１０^１３ｖｇ／動物の図１２に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮをＩＣＭ形質導入されたヒツジにおける皮質脳領域にわたるｈＰＧＲＮ発現を示すグラフである。

【図17】１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、もしくは１×１０^１１ｖｇ／半球のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ形質導入された、または１×１０^１３ｖｇ／動物の図１２に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮをＩＣＭ形質導入されたヒツジの前頭Ａ皮質におけるｈＰＧＲＮ発現を示すグラフのセットである。

【図18】１×１０^１０ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球、もしくは１×１０^１１ｖｇ／半球のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭもしくはＩＣＭ形質導入された、または１×１０^１３ｖｇ／動物の図１２に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、ＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ、もしくはＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮをＩＣＭ形質導入されたヒツジの前頭Ｂ皮質におけるｈＰＧＲＮ発現を示すグラフのセットである。

【図19】非常に低用量（２．３×１０^７ｖｇ／半球、例えば、１×１０^１０ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）、低用量（１．１×１０^８ｖｇ／半球、例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）、中用量（２．３×１０^８ｖｇ／半球、例えば、１×１０^１１ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）、または高用量（２．３×１０^９ｖｇ／半球、例えば、１×１０^１２ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたＧＲＮ^－／－マウスの視床における、リポフスチン症マーカーのサブユニットＣミトコンドリアルＡＴＰ合成酵素（ＳＣＭＡＳ）によって測定される、ＰＧＲＮ及びリポフスチン症レベルの顕微鏡写真のセットである。ＰＢＳ注射をＳＣＭＡＳの対照として使用した。パネルＡ～Ｅは、ＰＧＲＮ及びＳＣＭＡＳがマージされた画像である。パネルＦ～Ｊは、抗ｈＰＧＲＮ抗体単独で染色された組織を示す。パネルＫ～Ｏは、抗ＳＣＭＡＳ抗体単独で染色された組織を示す。

【図20】ＧＲＮ^－／－マウスの脳において、ＡＡＶ－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ投与によってリポフスチン症が有意に低減したことを示すグラフである。リポフスチン症は、野生型（ＷＴ）対照またはＧＲＮ^－／－ホームケージ対照（「２０ｗ Ｈｏｍ」、例えば、ホームケージで２０週間過ごした未処置マウス）と比較して、非常に低用量（２．３×１０^７ｖｇ／半球、例えば、１×１０^１０ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）、低用量（１．１×１０^８ｖｇ／半球、例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）、中用量（２．３×１０^８ｖｇ／半球、例えば、１×１０^１１ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）、または高用量（２．３×１０^９ｖｇ／半球、例えば、１×１０^１２ｖｇ／半球のヒツジの用量と同等）でＡＡＶ－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたＧＲＮ^－／－マウスにおけるＳＣＭＡＳ陽性顆粒によって定量された。略語：ｎｓ、有意でない。

【図21】ヒツジの脳におけるＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮベクターのＩＴＭ投与の４週間後のヒツジの肝臓におけるベクターの生体内分布を示すグラフである。ヒツジの肝臓当たり６部位を生検し、ベクター用量当たり２匹のヒツジにベクターを投与した。

【図22】ＡＡＶ９－ＰＧＲＮベクターのＩＴＭ投与後に、血流において、ＰＧＲＮ発現レベルの有意な増加が最小限～観察されないことを実証するグラフである。データは、対流増強送達を使用したカニクイザルにおけるＡＡＶ９．ＰＧＲＮの単回両側ＩＴＭ注射から得られた（低用量：２．５×１０^１０ｖｇ／半球、高用量：２．５×１０^１１ｖｇ／半球）。血液試料を、０日目、２、４、８、及び１２週目に採取し、ＥＬＩＳＡによってＰＧＲＮタンパク質について分析した。（注：非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）における２．５×１０^１１ｖｇ／半球は、ヒトにおける４×１０^１２ｖｇ／半球と同等である。）

【図23】ＡＡＶ９－ＰＧＲＮベクターのＩＴＭ投与後に、非神経組織において、ＰＧＲＮの有意な発現が観察されないことを実証する表である。データは、対流増強送達を使用したカニクイザルにおけるＡＡＶ９．ＰＧＲＮの単回両側ＩＴＭ注射から得られた（低用量：２．５×１０^１０ｖｇ／半球、高用量：２．５×１０^１１ｖｇ／半球）。１２週目での末端生検を主要な非神経系器官から採取し、ｑＰＣＲによってｈＰＧＲＮ ＲＮＡのレベルについてアッセイした。（注：非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）における２．５×１０^１１ｖｇ／半球は、ヒトにおける４×１０^１２ｖｇ／半球と同等である。）

【0039】

定義
本明細書中で使用される場合、「約」という用語は、記載されている値から１０％以内で上回るかまたは下回る値を指す。

【0040】

本明細書で使用される場合、「アデノ随伴ウイルス」（ＡＡＶ）という用語には、ＡＡＶ１型、ＡＡＶ２型、ＡＡＶ３型（３Ａ型及び３Ｂ型を含む）、ＡＡＶ４型、ＡＡＶ５型、ＡＡＶ６型、ＡＡＶ７型、ＡＡＶ８型、ＡＡＶ９型、ＡＡＶ１０型、ＡＡＶ１１型、ＡＡＶ１２型、ＡＡＶ１３型、ヘビＡＡＶ、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、エビＡＡＶ、及び現在知られているか、または後で発見される任意の他のＡＡＶが含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，４^ｔｈ ｅｄ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６を参照されたい。追加のＡＡＶ血清型及びクレードが最近特定されている。（例えば、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６３８１（２００４）、Ｍｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒｏｌ．３３：３７５（２００４）を参照されたい。様々な血清型のＡＡＶのゲノム配列、ならびに天然のＩＴＲ、Ｒｅｐタンパク質、及びカプシドサブユニットの配列は、当該技術分野で既知である。そのような配列は、文献またはＧｅｎＢａｎｋなどの公的データベースにおいて見出され得る。例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ－００２０７７、ＮＣ－００１４０１、ＮＣ－００１７２９、ＮＣ－００１８６３、ＮＣ－００１８２９、ＮＣ－００１８６２、ＮＣ－０００８８３、ＮＣ－００１７０１、ＮＣ－００１５１０、ＮＣ－００６１５２、ＮＣ－００６２６１、ＡＦ０６３４９７、Ｕ８９７９０、ＡＦ０４３３０３、ＡＦ０２８７０５、ＡＦ０２８７０４、Ｊ０２２７５、Ｊ０１９０１、Ｊ０２２７５、Ｘ０１４５７、ＡＦ２８８０６１、ＡＨ００９９６２、ＡＹ０２８２２６、ＡＹ０２８２２３、ＡＹ６３１９６６、ＡＸ７５３２５０、ＥＵ２８５５６２、ＮＣ－００１３５８、ＮＣ－００１５４０、ＡＦ５１３８５１、ＡＦ５１３８５２、及びＡＹ５３０５７９を参照されたく、これらの開示は、ＡＡＶの核酸及びアミノ酸配列を教示するために参照により本明細書に組み込まれる。また、例えば、Ｂａｎｔｅｌ－Ｓｃｈａａｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：９３９（１９９９）、Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：６８２３（１９９７）、Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：１３０９（１９９９）、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１１８５４（２００２）、Ｍｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒｏｌ．３３：３７５（２００４）、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒｏｌ．２２１：２０８（１９９６）、Ｒｕｆｆｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７５：３３８５（１９９４）、Ｒｕｔｌｅｄｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：３０９（１９９８）、Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８２：８９１１（２００８）、Ｓｈａｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５８：９２１（１９８６）、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：５５５（１９８３）、Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：３９９４（１９９９）、ＷＯ００／２８０６１、ＷＯ９９／６１６０１、ＷＯ９８／１１２４４、及びＵＳ６，１５６，３０３を参照されたく、これらの開示は、ＡＡＶの核酸及びアミノ酸配列を教示するために参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、「ＡＡＶ」という用語は、順行性輸送ＡＡＶ及び／または逆行性輸送ＡＡＶを包含する。

【0041】

本明細書で使用される場合、「筋萎縮性側索硬化症」及び「ＡＬＳ」という用語は、ルーゲーリッグ病とも呼ばれ、皮質、脳幹、及び脊髄の運動ニューロンに影響を及ぼす致命的な疾患を指す。本発明の文脈では、「ＡＬＳ」という用語には、古典的（シャルコー）ＡＬＳ、ルーゲーリッグ病、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、進行性延髄性麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、延髄発病ＡＬＳ、脊髄発病ＡＬＳ、及び多系統関与を有するＡＬＳの名前で知られる神経変性障害の範囲が含まれる（Ｗｉｊｅｓｅｋｅｒａ Ｌ Ｃ ａｎｄ Ｌｅｉｇｈ Ｐ Ｎ．Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊ．Ｒａｒｅ Ｄｉｓ．２００９，４：３）。

【0042】

本明細書で使用される場合、「アルツハイマー病」及び「ＡＤ」とは、認知機能低下、短期及び長期記憶喪失、注意欠陥、言語特異的な問題、見当識障害、衝動制御、社会的離脱、無快感症、及び他の症状として提示される遅発性神経変性障害を指す。ＡＤ患者の脳組織は、アミロイドβタンパク質の細胞外凝集体及び高リン酸化微小管関連タウタンパク質の神経原線維のもつれなどの神経病理学的特徴を示す。これらの凝集体の蓄積は、大脳皮質の前頭葉、側頭葉、及び頭頂葉、ならびに基底前脳コリン作動系及び脳幹内の青斑核のような皮質下構造を含む多くの脳領域におけるニューロン損失及び萎縮と関連している。ＡＤはまた、反応性グリオーシス及び炎症促進性サイトカインレベルの上昇によって特徴付けられる神経炎症の増加と関連している。

【0043】

本明細書で使用される「カプシドタンパク質」は、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９を含む、ＡＡＶウイルス粒子の構成要素であるＡＡＶカプシドタンパク質のうちのいずれかを指す。

【0044】

本明細書で使用される「コドン」という用語は、特定のアミノ酸または翻訳のための開始もしくは停止シグナルを指定する、所与のメッセンジャーＲＮＡ分子、またはＤＮＡのコード鎖における３つの連続したヌクレオチド塩基の任意の群を指す。コドンという用語はまた、ＤＮＡ鎖における塩基トリプレットを指す。

【0045】

本明細書で使用される場合、「コドン最適化」は、コードＤＮＡにおける同義コドン（例えば、同じアミノ酸をコードするコドン）の出現の頻度が異なる種において偏るという原則に従って、核酸配列を修飾するプロセスを指す。そのようなコドン縮重は、同一のポリペプチドが様々なヌクレオチド配列によってコードされることを可能にする。このように修飾された配列は、本明細書において「コドン最適化」と称される。このプロセスは、発現または安定性を増強させるために、本明細書に記載の配列のうちのいずれでも実施され得る。コドン最適化は、例えば、米国特許第７，５６１，９７２号、同第７，５６１，９７３号、及び同第７，８８８，１１２号に記載されているような、当該技術分野で公知の任意の方法によって実施され得、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。翻訳開始部位の周囲の配列は、既知の方法に従ってコンセンサスＫｏｚａｋ配列に変換され得る。例えば、Ｋｏｚａｋ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５（２０）： ８１２５－８１４８を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。複数の停止コドンが組み込まれ得る。

【0046】

本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語句、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、記載されている整数または整数の群の包含を意味するが、任意の他の整数または整数の群の除外を意味するものではないことが理解されるであろう。

【0047】

本明細書で使用される場合、「保存的変異」、「保存的置換」、及び「保存的アミノ酸置換」という用語は、極性、静電荷、及び立体体積などの同様の物理化学的特性を示す１つ以上の異なるアミノ酸での１つ以上のアミノ酸の置換を指す。これらの特性は、以下の表１に２０個の天然に存在するアミノ酸の各々について要約されている。

【表1】

【0048】

この表から、保存的アミノ酸ファミリーには、例えば、（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、及びＭ、（ｉｉ）Ｄ及びＥ、（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ、及びＴ、（ｉｖ）Ｈ、Ｋ、及びＲ、（ｖ）Ｎ及びＱ、ならびに（ｖｉ）Ｆ、Ｙ、及びＷが含まれ、したがって、保存的変異または置換は、１つのアミノ酸を同じアミノ酸ファミリーのメンバーに置換することである（例えば、ＳｅｒのＴｈｒとの置換またはＬｙｓのＡｒｇとの置換）ことが理解される。

【0049】

「ＣｐＧ部位」とは、その長さに沿ってヌクレオチドの線状核酸配列においてグアニンヌクレオチドの隣にシトシンヌクレオチドが存在する、例えば、－Ｃ－ホスフェート－Ｇ－、シトシン及びグアニンは、１つのホスフェートのみによって分離されるか、またはグアニンヌクレオチドに対してシトシン５’のＤＮＡの領域を意味する。

【0050】

本明細書で使用される場合、「レビー小体型認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｗｉｔｈ Ｌｅｗｙ ｂｏｄｉｅｓ）」及び「レビー小体型認知症（Ｌｅｗｙ ｂｏｄｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）」という用語は、変動する認知障害、特定の詳細な事象が繰り返し現れる幻覚、及び／またはパーキンソニズムの認知症症状を含む障害を指すために交換的に使用される。

【0051】

本明細書で使用される場合、本明細書に記載のＡＡＶベクターの「有効量」、「治療有効量」、及び「十分な量」という用語は、哺乳動物、例えばヒトを含む対象に投与される場合、臨床結果を含む、有益または所望の結果を達成するのに十分な量を指す。したがって、「有効量」、またはその類義語は、適用される状況に依存する。例えば、神経認知障害または神経筋障害を治療するという文脈において、それは、ＡＡＶベクターを投与せずに得られた応答と比較して、治療応答を達成するのに十分なＡＡＶベクターの量である。そのような量に対応する本明細書に記載の所与のＡＡＶベクターの量は、例えば、薬学的製剤、対象の属性（例えば、年齢、性別、体重）などの様々な因子に応じて変化するであろうが、それにもかかわらず、当業者によって日常的に決定され得る。また、本明細書で使用される場合、本開示のＡＡＶベクターの「治療有効量」は、対照と比較して、対象における有益または所望の結果をもたらす量である。本明細書で定義される場合、本開示のＡＡＶベクターの治療有効量は、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量を含み得る。

【0052】

本明細書中で使用する場合、「内因性」という用語は、特定の生体（例えば、ヒト）または生体内の特定の場所（例えば、器官、組織または細胞、例えば、ヒト細胞）に自然に見出される分子（例えば、ポリペプチド、核酸または補因子）を表す。

【0053】

本明細書で使用される場合、「前頭側頭型認知症」及び「ＦＴＤ」という用語は、脳の前頭葉の変性及び側頭葉に延在し得る変性によって引き起こされる障害を指す。ＦＴＤは前頭側頭葉変性によって引き起こされる３つの症候群のうちの１つであり、ＡＤに次いで早期認知症の２番目に多い一般的な原因である。ルンド・マンチェスター基準による診断基準には、発病及び漸進的な進行、早期の社会的対人行動の低下、早期の個人行動の制御の障害、早期の感情的鈍化、及び早期の洞察の喪失が含まれる。ＦＴＤの症状は、約４５～約６５歳（例えば、５０～約６０歳）の年齢の間に出現する可能性がある。本明細書で使用される場合、「ＦＴＤ」は、疾患の全ての病期（前臨床段階など）及びサブタイプを含むことが意図される。

【0054】

本明細書で使用される場合、「ＧＣ含有量」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチドなどの特定の核酸分子中のヌクレオシドの量を指し、それは、核酸分子中に存在するヌクレオシドの総量に対するグアノシン（Ｇ）またはシチジン（Ｃ）のいずれかである。ＧＣ含有量は、例えば、以下の式に従って、割合として表され得る：
ＧＣ含有量＝（（グアノシンヌクレオシドの総量）＋（シチジンヌクレオシドの総量）／（ヌクレオシドの総量））×１００

【0055】

本明細書で使用される場合、「ＧＲＮ変異」または「ＧＲＮ関連ＦＴＤ」に罹患している患者は、ＦＴＤを有すると診断されており、またＧＲＮ遺伝子において有害な変異を含有する患者である。ＧＲＮ遺伝子において、７０個超の病原性変異が報告されており、その大部分は、早期終止コドン及び切断ＧＲＮ ｍＲＮＡの無意味な介在の崩壊をもたらす。ＧＲＮ変異は、Ｇｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．２９（１２），１３７３－１３８６，（２０１２）及びＰｏｔｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１３８（Ｓｕｐｐｌ．１），３２：５３，（２０１６）に記載されており、これらの開示は、ヒトＧＲＮ変異に関連する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0056】

本明細書で使用される場合、「イントロン」という用語は、そのヌクレオチド配列が、対応するタンパク質のアミノ酸配列に翻訳されない遺伝子のコード領域内の領域を指す。イントロンという用語はまた、遺伝子から転写されたＲＮＡの対応する領域も指す。いくつかの実施形態では、遺伝子は、例えば、少なくとも２つのイントロンを含み得、その各々が２つのエクソン間の介在配列を形成する。イントロンは、ｍＲＮＡ前駆体に転写されるが、プロセシング中に除去され、成熟ｍＲＮＡには含まれない。

【0057】

「ＩＴＲ」は、回文核酸、例えば、逆位末端反復であり、約１２０ヌクレオチド～約２５０ヌクレオチド長であり、ヘアピンを形成することができる。「ＩＴＲ」という用語には、パルボウイルスタンパク質（例えば、Ｒｅｐ７８／６８）によって認識及び結合され得るウイルスゲノム複製の部位が含まれる。ＩＴＲは、任意のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来し得、血清型２が好ましい。ＩＴＲは、複製タンパク質結合エレメント（ＲＢＥ）及び末端分解配列（ＴＲＳ）を含む。「ＩＴＲ」という用語は、ＩＴＲがウイルスパッケージング、複製、統合、及び／またはプロウイルスレスキューなどを媒介するように機能する限り、野生型パルボウイルスＩＴＲを必要としない（例えば、野生型核酸配列は、挿入、欠失、切断、またはミスセンス変異によって変更されてもよい）。「５’ＩＴＲ」は、核酸分子の５’境界に位置するパルボウイルスＩＴＲを意味することが意図され、「３’ＩＴＲ」という用語は、核酸分子の３’境界に位置するパルボウイルスＩＴＲを意味することが意図される。

【0058】

本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオチド」という用語は、１つ以上の酵素または合成化学変換によって変化させられたヌクレオチドまたはその部分（例えば、アデノシン、グアノシン、チミジン、シチジン、またはウリジン）を指す。本明細書に記載または当該技術分野で既知の修飾されたヌクレオチドにおいて観察される例示的な変化には、２－デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドの１つ以上の位置（例えば、２’、３’、及び／または５’位）に、ハロ、チオ、アミノ、アジド、アルキル、アシル、または他の官能基などの化学置換基の導入が含まれる。

【0059】

本明細書で使用される場合、「運動ニューロン障害」及び「運動ニューロン疾患」という用語は、互換的に、歩行、呼吸、発話、及び嚥下などの骨格筋活動を制御する細胞である、運動ニューロンを破壊する進行性神経学的障害の群を指す。例示的な非限定的な運動ニューロン障害としては、ＡＬＳ、進行性延髄性麻痺、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、及びポリオ後症候群が挙げられる。上記のリストが、全てを網羅するものではないことを理解されたい。

【0060】

本明細書で使用する場合、「変異」という用語は、遺伝子（例えば、ＧＲＮ）のヌクレオチド配列における変化、またはタンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）のポリペプチド配列における変化を指す。遺伝子またはタンパク質における変異は、例えば、ＤＮＡ複製、ＤＮＡ修復、照射、及び発がん物質への曝露における誤りの結果として自然に生じ得、または変異は、変異体遺伝子を発現する導入遺伝子の投与の結果として誘導され得る。変異は、単一または複数のヌクレオチドの挿入、欠失、または置換から生じ得る。

【0061】

本明細書で使用される場合、「神経認知障害」（ＮＣＤ）という用語は、一次臨床欠陥が、例えば、複雑な注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知の欠陥などの認知機能である、一連の臨床障害または症候群を指す。ＮＣＤは、発達性の病態ではなく、後天性の病態として特徴付けられる。例えば、ＮＣＤは、認知障害が出生時または非常に早い時期から明らかではなかった病態であり、したがって、ＮＣＤにおける認知機能が以前に取得されたレベルから低下したことが必要である。ＮＣＤは、ＮＣＤが中核の欠陥が認知機能である障害のみを含むという点で、患者が認知障害を呈する他の障害と区別される。ＮＣＤは、「重大なＮＣＤ」または「軽度のＮＣＤ」であり得る。重大なＮＣＤは、個人の独立性及び正常な日常機能を妨げる著しい認知機能低下によって特徴付けられ、せん妄または他の精神障害によるものではない。軽度のＮＣＤは、個人の独立性及び正常な日常機能を妨げない中等度の認知機能低下によって特徴付けられ、せん妄または他の精神障害によるものではない。また、重大及び軽度のＮＣＤは、上記の特定の認知機能のうちのいずれか１つにわたる定量的認知試験に基づいて区別され得る。例えば、重大なＮＣＤは、参照集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から２超の標準偏差離れているＮＣＤを有するか、またはそれを発症するリスクがあると特定された対象による認知試験で得られるスコア、または参照集団のスコアの分布の３パーセンタイルにあるスコアによって特徴付けられ得る。軽度のＮＣＤは、参照集団の平均スコアから１～２標準偏差離れているＮＣＤを有するか、またはそれを発症するリスクがあると特定された対象による認知試験で得られたスコア、または参照集団のスコアの分布の３～１６パーセンタイルの間にあるスコアによって特徴付けられ得る。重大または軽度のＮＣＤのいずれかを有するとしてＮＣＤ患者を分類するために使用され得る認知試験の非限定的な例には、ＡＤ８、ＡＷＶ、ＧＰＣＯＧ、ＨＲＡ、ＭＩＳ、ＭＭＳＥ、ＭｏＣＡ、ＳＬＵＭＳ、及び短いＩＱＣＯＤＥが挙げられる。更に、ＮＣＤは、例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、またはレビー小体型認知症などのＮＣＤの特定の病因学的起源を示す症候群サブタイプを含む。

【0062】

本明細書で使用される場合、「神経変性障害」及び「神経変性疾患」という用語は、互換的に、ニューロンの数（例えば、細胞死による）、構造、及び／または機能の進行性の喪失によって特徴付けられる障害を指す。いくつかの事例では、神経認知障害または神経筋障害（例えば、神経変性疾患）は、遺伝子欠陥（例えば、ＧＲＮ遺伝子における変異）タンパク質の誤った折り畳み、タンパク質分解における欠陥、プログラムされた細胞死、膜損傷、または他のプロセスに関連付けられ得る。例示的な非限定的な神経変性障害としては、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、ルーゲーリッグ病、ＭＮＤ、ＰＢＰ、ＰＭＡ、ＰＬＳ、延髄発病ＡＬＳ、脊髄発病ＡＬＳ、及び多系統関与を有するＡＬＳ、ならびに関連する運動ニューロン障害が挙げられる。

【0063】

本明細書で使用される場合、「神経筋障害」という用語は、関連する筋肉の活動を制御する１つ以上のニューロンの能力を損なう疾患を指す。神経筋障害の例としては、とりわけ、パーキンソン病（ＰＤ）、ＡＬＳ、先天性筋無力症候群、先天性ミオパチー、けいれん線維束性攣縮（ｃｒａｍｐ ｆａｓｃｉｃｕｌａｔｉｏｎ）症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、糖原病ＩＩ型、遺伝性痙性対麻痺、封入体筋炎、アイザック症候群、カーンズ・セイヤー（Ｋｅａｒｎｓ－Ｓａｙｒｅ）症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、ミトコンドリアミオパチー、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋強直性ジストロフィー、末梢神経障害、球脊髄性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症、スティッフパーソン症候群、トロイヤー症候群、及びギラン・バレー症候群が挙げられる。

【0064】

上記のリストは、全てを網羅しているわけではなく、障害または疾患は様々な分類に収まり得ることを理解されたい。例えば、ＡＤは、神経認知障害、及び神経変性疾患とみなされ得る。同様に、ＰＤは、神経筋障害及び神経変性疾患とみなされ得る。

【0065】

「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、本明細書で交換可能に使用される場合、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。

【0066】

本明細書で使用される場合、「動作可能に連結された」という用語は、第１の分子が第２の分子に結合されることを指し、ここで、分子は、第１の分子が第２の分子の機能に影響を与えるように配置される。２つの分子は、単一の連続する分子の一部である場合もあればそうでない場合もあり、隣接している場合もあればそうでない場合もある。例えば、プロモーターが細胞内の目的の転写可能なポリヌクレオチド分子の転写を調節する場合、プロモーターは転写可能なポリヌクレオチド分子に動作可能に連結される。更に、転写調節エレメントの２つの部分は、一方の部分の転写活性化機能が他方の部分の存在によって悪影響を受けないように結合されている場合、互いに動作可能に連結される。２つの転写調節エレメントは、リンカー核酸（例えば、介在する非コード核酸）を介して互いに動作可能に連結されてもよく、または介在するヌクレオチドが存在せずに互いに動作可能に連結されてもよい。

【0067】

参照ポリヌクレオチド配列または参照ポリペプチド配列に対する「配列同一性の割合（％）」とは、配列を並べ、必要に応じてギャップを導入して、最大の配列同一性の割合を達成した後、参照ポリヌクレオチド配列または参照ポリペプチド配列における核酸またはアミノ酸と同一である候補配列における核酸またはアミノ酸の割合として定義される。核酸またはアミノ酸配列同一性の割合を決定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの、公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の能力の範囲内の様々な方法で達成され得る。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列を並べるのに適切なパラメータを決定し得る。例えば、配列同一性の割合の値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用して生成されてもよい。一例として、所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、それとの（ｗｉｔｈ）、それに対する（ａｇａｉｎｓｔ）所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ａの配列同一性の割合（これは代替的に、所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、それとの（ｗｉｔｈ）、それに対する（ａｇａｉｎｓｔ）ある特定の割合の配列同一性を有する所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下のように計算される：
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
［式中、Ｘは、ＡとＢとのプログラムのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）によって同一の一致としてスコアリングされたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂの核酸の総数である］。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性割合は、Ａに対するＢの配列同一性割合と等しくないことが理解されるであろう。

【0068】

「ポリアデニル化シグナル」、「ポリアデニル化部位」、及び「ｐＡ」という用語は、本明細書では互換的に、細胞内で発現されるＲＮＡ分子へのポリアデノシンリボ核酸の付加を指向するのに十分な核酸配列を意味するために使用される。

【0069】

本明細書で使用される場合、「プラスミド」という用語は、追加のＤＮＡセグメントが連結され得る染色体外環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す。プラスミドは、ベクターの一種であり、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ある特定のプラスミドは、それらが導入された宿主細胞において自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌プラスミド及びエピソーム哺乳動物プラスミド）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに統合されることができ、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。特定のプラスミドは、それらが動作可能に連結された遺伝子の発現を指向することができる。

【0070】

本明細書で使用される場合、「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、分泌された栄養因子及びグラニュリンの前駆体ペプチドを指す。この遺伝子は染色体１７ｑ２１．３１上に位置し、ＧＲＮとして知られている。「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語はまた、野生型ＰＧＲＮペプチドのアミノ酸配列（例えば、配列番号２）と少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９．９％の同一性、またはそれを超える）を有するバリアントタンパク質、または野生型ＧＲＮ遺伝子の核酸配列（例えば、配列番号７）と少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９．９％の同一性、またはそれを超える）を有するポリヌクレオチドなど、野生型プログラニュリンペプチドのバリアント及びそれをコードする核酸を指し、ただし、コードされたＰＧＲＮ類似体が、野生型ＰＧＲＮの治療機能を保持していることを条件とする。「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語はまた、天然の分泌シグナルペプチドが存在するＰＧＲＮタンパク質を指し得る。本明細書で使用される場合、当業者によって理解されるように、「ＰＧＲＮ」は、ペプチドを指すが、「ＧＲＮ」は、このタンパク質をコードする遺伝子を指す。

【0071】

本明細書で使用される場合、「パーキンソン病」及び「ＰＤ」という用語は、運動及び非運動症状によって特徴付けられる神経変性疾患を指す。運動症状には、主にジスキネジア、筋緊張低下、硬直、及び進行が含まれ、運動ジスキネジアには、運動誘導性弛緩、及び更には貧血が含まれる。非運動症状には、疼痛、便秘、胃排出遅延、うつ病、及び睡眠障害が含まれる。

【0072】

本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するＤＮＡ上の認識部位を指す。ポリメラーゼは、導入遺伝子の転写を駆動する。本明細書に記載の組成物及び方法との使用に好適な例示的なプロモーターは、例えば、Ｓａｎｄｅｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．８：４２４（２００７）に記載されており、この開示は、核酸調節エレメントに関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0073】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性、刺激、アレルギー応答及び他の問題となる合併症を生じることなく、合理的な利益／リスク比に見合った、哺乳動物（例えば、ヒト）などの対象の組織との接触に好適な化合物、材料、組成物及び／または剤形を指す。

【0074】

本明細書で使用される場合、「分泌シグナルペプチド」という用語は、前駆体タンパク質内の短い（通常は１６～６０アミノ酸）ペプチド領域を指し、前駆体タンパク質の分泌を宿主の細胞質から細胞膜周辺腔または細胞外空間に指向する。そのような分泌シグナルペプチドは、概して、前駆体タンパク質のアミノ末端に位置する。いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドは、アミノ末端に連結される。典型的には、分泌シグナルペプチドは、細胞分泌経路を介して輸送中に切断される。分泌タンパク質が所望の活性を保持する限り、切断は必須ではない。例示的な分泌シグナルペプチドとしては、ＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドが挙げられる。

【0075】

本明細書で使用される場合、「治療用タンパク質」という用語は、（ｉ）その欠損または活性の欠如が障害（例えば、本明細書に記載の神経障害）に関連するタンパク質、ならびに（ｉｉ）患者において必ずしも欠損していないが、それにもかかわらず、その補充が患者に対して有益な効果を有するであろうタンパク質を指す。本開示の組成物及び方法と組み合わせて有用な例示的な治療用タンパク質を、本明細書の表５に記載する。

【0076】

本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」という用語は、原核宿主細胞または真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的に使用される多種多様な技術のうちのいずれか、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、カルシウム－リン酸沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクション、ヌクレオフェクション、スクイーズ－ポレーション、ソノポレーション、光トランスフェクション、マグネトフェクション、インパレフェクションなどを指す。

【0077】

本明細書で使用される場合、「導入遺伝子」という用語は、遺伝子産物（例えば、ＰＧＲＮ）をコードする組換え核酸（例えば、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ）を指す。遺伝子産物は、ＲＮＡ、ペプチド、またはタンパク質であり得る。遺伝子産物のコード領域に加えて、導入遺伝子は、プロモーター、エンハンサー（複数可）、不安定化ドメイン（複数可）、応答エレメント（複数可）、レポーターエレメント（複数可）、インスレーターエレメント（複数可）、ポリアデニル化シグナル（複数可）、及び／または他の機能エレメントなどの、発現を促進または強化するための１つ以上のエレメントを含むか、またはそれらに動作可能に連結され得る。本開示の実施形態は、任意の既知の好適なプロモーター、エンハンサー（複数可）、不安定化ドメイン（複数可）、応答エレメント（複数可）、レポーターエレメント（複数可）、インスレーターエレメント（複数可）、ポリアデニル化シグナル（複数可）、及び／または他の機能エレメントを利用し得る。

【0078】

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は動物（例えば、ヒトなどの哺乳動物）を指す。本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、ＦＴＤまたはＧＲＮ関連の神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有すると診断された対象、またはこれらの病態のうちの１つ以上を発症するリスクのある対象であり得る。診断は、当該技術分野で既知の任意の方法または技術によって実施され得る。当業者は、本開示に従って治療される対象が、標準的な検査に供されている場合があるか、または検査なしで、疾患もしくは病態に関連する１つ以上のリスク因子の存在によりリスクにさらされている対象として特定されている場合があることを理解するであろう。

【0079】

本明細書で使用される場合、「形質導入」及び「形質導入する」という用語は、細胞内にウイルスベクター構築物またはその一部を導入し、細胞内でベクター構築物またはその一部によるコードされた導入遺伝子のその後の発現の方法を指す。

【0080】

本明細書で使用される場合、「治療」及び「治療すること」は、有益な、または所望の結果、例えば、臨床結果を得るためのアプローチを指す。有益な、または所望の結果としては、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、１つ以上の症状または病態の緩和または改善；疾患または病態の程度の軽減；疾患、障害、または病態の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）；疾患または病態の蔓延の予防；疾患または病態の進行の遅延または減速；疾患または病態の改善または緩和；及び、（部分的または完全）寛解が挙げられ得るが、これらに限定されない。疾患または病態を「改善すること」または「緩和すること」とは、治療の非存在下の程度または時間経過と比較して、疾患、障害、または病態の程度及び／または望ましくない臨床症状が減少し、及び／または進行の時間経過が減速もしくは延長されることを意味する。「治療」はまた、治療を受けない場合に予想される生存と比較して、生存を延長することも意味し得る。治療を必要とする者には、すでに病態もしくは障害を有している者、ならびに病態もしくは障害を有する傾向がある者、または病態もしくは障害を予防する必要がある者が含まれる。

【0081】

本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語は、核酸ベクター、例えば、プラスミドなどのＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、ウイルス、または他の好適なレプリコン（例えば、ウイルスベクター）を含む。外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを原核細胞または真核細胞に送達するために、様々なベクターが開発されている。そのような発現ベクターの例は、例えば、ＷＯ１９９４／０１１０２６に開示されており、目的の遺伝子の発現に好適なベクターに関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法との使用に好適な発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、ならびに、例えば、タンパク質の発現及び／または哺乳動物細胞のゲノムへのこれらのポリヌクレオチド配列の統合に使用される追加の配列エレメントを含有する。本明細書に記載のＰＧＲＮの発現に使用され得るある特定のベクターとしては、遺伝子転写を指向する、プロモーター及びエンハンサー領域などの調節配列を含有するプラスミドが挙げあれる。ＰＧＲＮの発現のための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を増強するか、または遺伝子転写から得られるｍＲＮＡの安定性または核外排出を改善するポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列エレメントとしては、例えば、発現ベクター上に担持される遺伝子の効率的な転写を指向するための、５’及び３’非翻訳領域、ＩＲＥＳ、及びポリアデニル化シグナル部位が挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法との使用に好適な発現ベクターはまた、そのようなベクターを含有する細胞の選択のためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含み得る。好適なマーカーの例は、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ノーセオスリシン、またはゼオシンなどの抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子である。

【発明を実施するための形態】

【0082】

詳細な説明
対象（例えば、哺乳動物対象、例えば、ヒト）における中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害）、またはリソソーム蓄積障害）の治療のための組成物及び方法が本明細書に記載される。本明細書に記載の組成物及び方法は、その欠損または活性の欠如が対象の障害に関連するタンパク質、または患者において必ずしも欠損していないが、その補充が患者に有益な効果を有する可能性が高いタンパク質などの治療用タンパク質の発現を刺激するのに有用である。本開示の例示的な治療用タンパク質は、ヒトプログラニュリン（ＰＧＲＮ）タンパク質であり、これは、ＦＴＤなどのプログラニュリン遺伝子（ＧＲＮ）における変異に関連する障害を治療するのに特に有用である。本明細書に記載の組成物及び方法は、神経認知障害及び／または神経筋障害、ならびにリソソーム蓄積障害に罹患している患者を改善し得るか、またはそうでなければ利益をもたらし得る様々な他の治療用タンパク質の発現を刺激するのにも有用である。本開示の組成物及び方法と組み合わせて有用な例示的な治療用タンパク質を、以下の表５に記載する。

【0083】

本明細書に記載の組成物は、治療用タンパク質をコードするアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含む。そのようなタンパク質をコードするために使用され得る治療用導入遺伝子には、例えば、細胞におけるＰＧＲＮタンパク質の発現に有用である、ヒトＧＲＮまたはそのコドン最適化されたヒトＧＲＮが含まれる。本明細書に記載のＡＡＶは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与され得る。機序に限定されるものではないが、本明細書に記載の組成物は、治療用タンパク質（例えば、本明細書に記載の中でとりわけ、ＰＧＲＮ）の発現を効果的に刺激することによって、中枢神経系に影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知障害もしくは運動ニューロン障害など）、またはリソソーム蓄積障害）に関連する病理を改善し得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、本明細書に記載のＡＡＶを投与することによって、上記の障害のうちの１つ以上を治療し得る。

【0084】

本発明は、少なくとも部分的に、治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含むＡＡＶの視床内送達が、（例えば、ＡＡＶの順行性及び／または逆行性輸送によって）皮質を形質導入する、及び皮質において治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）の発現を誘導する驚くほど優れた能力をもたらすという発見に基づいている。ＰＧＲＮ遺伝子療法の文脈では、この特性は、大脳皮質の前頭葉及び側頭葉における神経変性によって特徴付けられる障害である、ＦＴＤを有するヒト患者のゲノムなどの哺乳動物ゲノムにおけるＧＲＮ遺伝子の変異の有病率を考慮すると、特に有益である。本発明はまた、少なくとも部分的に、視床内送達後の皮質における治療用タンパク質（例えば、ＰＧＲＮ）の当該発現を達成するための最適な投与範囲の特定に基づいている。送達方法と組み合わせた最適な投与範囲は、末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）に対して、ＣＮＳにおける非常に特異的な形質導入及びその後の形質導入遺伝子発現をもたらす。末梢組織におけるＰＧＲＮ発現の上昇は、限定されないが、がん増殖及び炎症関連有害反応を含むがこれらに限定されないある特定の有害作用と関連付けられているため、この特異性は、非常に望ましい。したがって、末梢組織における導入遺伝子発現がほとんどないか、または全くないことを保証する送達方法は、非常に有利である。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、例えば、重要で健常なＧＲＮ、またはそのコドン最適化されたバリアントの発現、及びそれらのコードされたＰＧＲＮタンパク質産物は、皮質において有効に増強され得る。

【0085】

以下のセクションでは、ＣＮＳに影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害、神経筋障害、もしくは神経変性障害（ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、ＡＬＳ、または関連する神経認知もしくは運動ニューロン障害）またはリソソーム蓄積障害）を治療するために使用され得る方法を提供するために、投与レジメン及びそのような構築物をコードするＡＡＶベクターと組み合わせて使用され得る、コドン最適化された治療用導入遺伝子（例えば、ヒトＧＲＮ）を産生するための例示的なコドン最適化及びその産生方法の説明を提供する。

【0086】

神経認知障害及び神経筋障害
神経認知障害は、コア症状として認知障害を特徴とし、かつ発達障害ではなく、以前のより高いレベルの認知に対して認知低下（例えば、後天性障害）を示す障害の集合として定義され、一方、神経筋障害は、進行性の筋力低下によって特徴付けられる。神経認知障害は、その病因学的起源に基づいて分類され得る。例えば、神経認知障害の非限定的な例としては、ＡＤによる神経認知障害、レビー小体を伴う神経認知障害（例えば、レビー小体型認知症）、ＰＤによる神経認知障害、前頭側頭神経認知障害（例えば、ＦＴＤ）、白質ジストロフィーによる神経認知障害（例えば、ＰＬＯＳＬ）、血管神経認知障害、外傷性脳損傷による神経認知障害、ＨＩＶ感染による神経認知障害、物質／薬物誘導性神経認知障害、ハンチントン病による神経認知障害、プリオン病による神経認知障害、別の医学的病態による神経認知障害、複数の病因による神経認知障害、及び不特定の神経認知障害が挙げられ得る。神経筋障害の非限定的な例としては、ＰＤ、ＡＬＳ、先天性筋無力症候群、先天性ミオパチー、けいれん線維束性攣縮症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、糖原病ＩＩ型、遺伝性痙性対麻痺、封入体筋炎、アイザック症候群、カーンズ・セイヤー（Ｋｅａｒｎｓ－Ｓａｙｒｅ）症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、ミトコンドリアミオパチー、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋強直性ジストロフィー、末梢神経障害、球脊髄性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症、スティッフパーソン症候群、トロイヤー症候群、及びギラン・バレー症候群、ならびに関連する運動ニューロン障害が挙げられる。本明細書に開示される組成物及び方法は、神経認知障害及び／または神経筋障害の治療に有用である。

【0087】

ＧＲＮ変異に関連する神経認知障害及び神経筋障害
ＦＴＤは、大脳皮質の前頭葉及び側頭葉における進行性神経変性によって特徴付けられる臨床症候群である。ＦＴＤの臨床症状は、複雑かつ不均一であるが、進行性失語症、認知の低下（例えば、作業記憶及び実行機能の低減）、衝動制御の減少、永続的行動の出現、失行症、無関心、及び／または社会的離脱として現れる場合がある。ＦＴＤ患者の脳におけるニューロンの喪失は、ＧＲＮ遺伝子における変異、タウ陽性ニューロン及びグリア封入体の存在、またはユビキチン（ｕｂ）陽性及びＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ４３）陽性であるが、タウ陰性の封入物を含む、異なる神経病理に関連する。これらの神経病理は、ＦＴＤの病因において重要であり、また、ＡＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、及び関連する運動ニューロン障害などの他の神経変性疾患においても役割を果たすために、ＰＧＲＮが相互作用すると考えられる他のタンパク質のいくつかを強調すると考えられる。例えば、ＰＧＲＮの低減とＴＤＰ－４３の蓄積との間には既知の関係があり、ＴＤＰ－４３は、ＡＬＳを有する患者の死後組織の細胞質凝集体における一次構成要素であることが示されているタンパク質である。更に、ＦＴＤ患者のほぼ半数は、認知症、ＡＬＳ、またはＰＤを有する一親等家族を有し、疾患の原因への強い遺伝的関連を示唆し、染色体１７ｑ２１におけるいくつかの変異は、ＦＴＤの提示に関連している。

【0088】

染色体１７ｑ２１とＦＴＤとの間の関連を調査する研究は、ＰＧＲＮ遺伝子、ＧＲＮにおいて、多くのＦＴＤ関連の変異を見出した。これらの変異は、多くの場合、ＦＴＤ患者の脳におけるｕｂ陽性、ＴＤＰ４３陽性、タウ陰性の神経病理学的封入物の凝集及び蓄積をもたらす。ＰＧＲＮは、いくつかの成熟グラニュリンタンパク質への分泌前駆体ペプチドであり、主に神経栄養成長因子として機能し、神経細胞の分化及び生存を促進すると考えられている。ＰＧＲＮはまた、抗炎症及び神経保護機能を果たすことが実証されている。ＰＧＲＮは、遍在して発現するが、ＦＴＤとの関連の結果として、多くの注目が中枢神経系（ＣＮＳ）に向けられ、ＰＧＲＮは、神経細胞、グリア細胞、及び内皮細胞を含む複数の細胞型において発現される。ＧＲＮ遺伝子における７０個超の機能喪失変異がＦＴＤにおいて特定されており、その大部分は、ハプロ不全及び血清ＰＧＲＮレベルの５０％超の低減をもたらす。ＧＲＮ変異は、Ｇｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．２９（１２），１３７３－８６（２００８）に記載されており、この開示は、ヒトＧＲＮ変異に関連する場合、参照により本明細書に組み込まれる。機能的なＰＧＲＮタンパク質を完全に欠くホモ接合患者は、ＣＬＮ１１ニューロンセロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）として知られるリソソーム蓄積疾患を発症するため、ＧＲＮ変異の影響は、用量依存的であり、正常なリソソーム機能におけるこのタンパク質の更なる役割を示唆する。神経変性、認知症、及び早期認知機能低下も、ＮＣＬ症状の特徴である。

【0089】

神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の臨床管理は、疾患症状を改善するために主に用いられている。例えば、ＦＴＤでは、臨床管理への現在のアプローチは、多くの場合、ＦＴＤに伴う感情及び行動の変化を管理するために、選択的セロトニン再取り込み阻害剤及び抗精神病薬を用いる。しかしながら、この戦略は、その発達及び進行に対処することなく、疾患の症状を改善することを目的とする。これらの治療とは異なり、本明細書に記載の組成物及び方法は、ＰＧＲＮ関連病理の発症の根底にある可能性のある異なる生化学的現象を治療するという利益を提供する。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法は、その疾患の生理学的原因を標的とし、潜在的な根治療法を表す。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを視床内投与することによって、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を治療し得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、任意の病因、例えば、遺伝子変異、環境毒素、または散発性を有する、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を治療し得る。これらの組成物及び方法もまた、ＧＲＮ関連ＦＴＤを有する患者を治療するために使用され得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、低減したＰＧＲＮ活性及び／または発現（例えば、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ活性及び／または発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベル）を有する患者、またはＧＲＮ変異状態及び／またはＰＧＲＮ活性レベルが未知である患者を治療し得る。神経認知障害または神経筋障害を有しないヒト対象のＣＮＳにおいて、２～１０ｎｇ／ｍＬのＰＧＲＮの健常な生理学的レベルが観察される。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、神経認知障害もしくは神経筋障害を発症するリスクがある患者、低減したＰＧＲＮ活性及び／または発現（例えば、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ活性及び／または発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベル）を有する患者、またはＧＲＮ遺伝子に変異を有する患者に予防的治療として投与され得る。

【0090】

本明細書に記載の方法によれば、患者は、以下の配列番号２のアミノ酸配列をコードする導入遺伝子、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える配列同一性）を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または配列番号２に対して１つ以上の保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上の保存的アミノ酸置換）を含有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば、以下の配列番号３を発現するＡＡＶベクターを投与され得、ただし、コードされたＰＧＲＮ類似体が、野生型ＰＧＲＮの治療機能を保持していることを条件とする。いくつかの実施形態では、野生型ＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチドは、以下に詳細に記載されるように、コドン最適化ポリヌクレオチドであり得る。

【0091】

野生型ヒトＰＧＲＮ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００２０７８．１）は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＭＷＴＬＶＳＷＶＡＬＴＡＧＬＶＡＧＴＲＣＰＤＧＱＦＣＰＶＡＣＣＬＤＰＧＧＡＳＹＳＣＣＲＰＬＬＤＫＷＰＴＴＬＳＲＨＬＧＧＰＣＱＶＤＡＨＣＳＡＧＨＳＣＩＦＴＶＳＧＴＳＳＣＣＰＦＰＥＡＶＡＣＧＤＧＨＨＣＣＰＲＧＦＨＣＳＡＤＧＲＳＣＦＱＲＳＧＮＮＳＶＧＡＩＱＣＰＤＳＱＦＥＣＰＤＦＳＴＣＣＶＭＶＤＧＳＷＧＣＣＰＭＰＱＡＳＣＣＥＤＲＶＨＣＣＰＨＧＡＦＣＤＬＶＨＴＲＣＩＴＰＴＧＴＨＰＬＡＫＫＬＰＡＱＲＴＮＲＡＶＡＬＳＳＳＶＭＣＰＤＡＲＳＲＣＰＤＧＳＴＣＣＥＬＰＳＧＫＹＧＣＣＰＭＰＮＡＴＣＣＳＤＨＬＨＣＣＰＱＤＴＶＣＤＬＩＱＳＫＣＬＳＫＥＮＡＴＴＤＬＬＴＫＬＰＡＨＴＶＧＤＶＫＣＤＭＥＶＳＣＰＤＧＹＴＣＣＲＬＱＳＧＡＷＧＣＣＰＦＴＱＡＶＣＣＥＤＨＩＨＣＣＰＡＧＦＴＣＤＴＱＫＧＴＣＥＱＧＰＨＱＶＰＷＭＥＫＡＰＡＨＬＳＬＰＤＰＱＡＬＫＲＤＶＰＣＤＮＶＳＳＣＰＳＳＤＴＣＣＱＬＴＳＧＥＷＧＣＣＰＩＰＥＡＶＣＣＳＤＨＱＨＣＣＰＱＧＹＴＣＶＡＥＧＱＣＱＲＧＳＥＩＶＡＧＬＥＫＭＰＡＲＲＡＳＬＳＨＰＲＤＩＧＣＤＱＨＴＳＣＰＶＧＱＴＣＣＰＳＬＧＧＳＷＡＣＣＱＬＰＨＡＶＣＣＥＤＲＱＨＣＣＰＡＧＹＴＣＮＶＫＡＲＳＣＥＫＥＶＶＳＡＱＰＡＴＦＬＡＲＳＰＨＶＧＶＫＤＶＥＣＧＥＧＨＦＣＨＤＮＱＴＣＣＲＤＮＲＱＧＷＡＣＣＰＹＲＱＧＶＣＣＡＤＲＲＨＣＣＰＡＧＦＲＣＡＡＲＧＴＫＣＬＲＲＥＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ
（配列番号２）

【0092】

野生型ヒトＧＲＮ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００２０８７．３）は、以下の核酸配列を有する：
ＡＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＴＣＣＣＴＡＧＡＡＡＴＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＧＴＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＣＡＴＴＣＣＡＧＧＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＣＴＣＴＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＧＴＡＧＣＣＡＡＴＧＧＧＡＧＣＧＧＧＴＡＧＣＣＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＡＡＣＴＧＡＧＧＴＡＧＧＣＧＧＧＴＣＡＴＣＧＣＧＣＴＧＧＧＧＴＣＴＧＴＡＧＴＣＴＧＡＧＣＧＣＴＡＣＣＣＧＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡＧＴＣＧＧＡＣＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＣＡＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＴＣＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＡＡＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＧＧＣＣＡＣＴＣＣＴＧＣＡＴＣＴＴＴＡＣＣＧＴＣＴＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＧＧＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＣＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＧＣＧＡＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＧＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＴＣＡＧＴＴＣＧＡＡＴＧＣＣＣＧＧＡＣＴＴＣＴＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＴＧＴＴＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＧＣＡＣＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＡＣＣＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＧＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＧＧＴＣＡＴＧＴＧＴＣＣＧＧＡＣＧＣＡＣＧＧＴＣＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＧＴＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＴＧＣＣＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＧＴＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＡＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＣＴＡＣＣＡＣＧＧＡＣＣＴＣＣＴＣＡＣＴＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＡＡＡＴＧＴＧＡＣＡＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＧＣＧＧＧＧＴＴＴＡＣＧＴＧＴＧＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＧＧＧＧＣＣＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＴＧＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＣＴＣＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＧＴＧＴＡＧＣＴＧＡＧＧＧＧＣＡＧＴＧＴＣＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＧＧＧＣＴＴＣＣＴＴＡＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＧＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＧＡＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＣＣＧＴＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＧＡＣＡＡＣＣＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＧＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＣＣＧＣＴＧＣＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＧＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＴＴＴＧＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＡＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＣＣＣＡＣＴＣＧＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＧＧＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＡＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＡＴＴＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＡＴＣＴＡＡＧＧＣＣＴＴＣＣＣＴＧＴＣＡＧＡＡＧＧＧＧＧＴＴＧＴＧＧＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＧＧＴＧＣＴＴＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＡＣＡＧＧＧＧＴＧＴＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＴＴＴＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＴＧＴＡＣＡＣＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
（配列番号１０）

【0093】

治療方法
本開示は、少なくとも部分的に、本明細書に記載の投与経路（例えば、視床内投与）及び本明細書に記載の投与量によって、患者に送達されるＰＧＲＮをコードするＡＡＶベクターが、２桁のｎｇ／ｍＬのオーダーで患者のＣＮＳにおけるＰＧＲＮ発現レベルを達成することができるという発見に基づいている（例えば、以下に記載の実施例を参照されたい）。健常なヒト対象のＣＮＳにおけるＰＧＲＮタンパク質の生理学的レベルが（患者の脳脊髄液中で測定される）２～６ｎｇ／ｍＬのオーダーにあるため、この発見は、重要である。したがって、本明細書に記載のＰＧＲＮコード組成物は、ヒト対象のＣＮＳにおいて生理学的ＰＧＲＮ発現レベルを生じさせることができる。この発見に導かれて、本発明者らは、多種多様な他の治療用タンパク質も、ＣＮＳにおいて最大２桁のｎｇ／ｍＬのオーダーの健常な濃度レベルを有するため、本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、他の治療用タンパク質を生理学的に関連する量で送達し得ることを見出した。以下の表は、本開示の例示的な治療用タンパク質及びＣＮＳにおけるそれらの対応する生理学的発現レベルのリストを提供する。

【表2】

【0094】

本明細書に記載の治療され得る例示的な対象は、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、もしくは関連する運動ニューロン障害などの神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、神経変性障害）を有するか、またはそれを発症するリスクがある対象である。ＦＴＤのタイプは、ＧＲＮ関連ＦＴＤ、散発性ＦＴＤ、環境毒素、例えば、除草剤または農薬によって引き起こされるＦＴＤ、または非ＧＲＮ変異、例えば、ＦＴＤに関連する遺伝子のうちの１つ以上における変異に関連するＦＴＤであり得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、低減したＰＧＲＮ活性及び／または発現（例えば、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベル）を有する患者、またはＧＲＮ変異状態及び／またはＰＧＲＮ活性レベルが未知である患者を治療し得る。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を発症するリスクがある患者、例えば、ＧＲＮ変異を有する患者、低減したＰＧＲＮ活性及び／または発現（例えば、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベル）を有する患者、神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）に関連する遺伝子のうちの１つ以上において変異を有する患者、または神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）に関連する環境毒素に曝露された患者に予防的治療として投与され得る。神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）のリスクがある患者は、治療が施される場合に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の初期症状を示していてもよく、またはまだ症候性でなくてもよい。

【0095】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、例えば、フレームシフト変異（例えば、ｐ．Ｃ３１ＬｆｓＸ３５、ｐ．Ｃ３１ＬｆｓＸ３５、ｐ．Ｓ８２ＶｆｓＸ１７４、ｐ．Ｌ２７１ＬｆｓＸ１７４、及び／またはｐ．Ｔ３８２ＮｆｓＸ３２変異）、ミスセンス変異（ｐ．Ｃ５２１Ｙ、ｐ．Ａ９Ｄ、ｐ．Ｐ２４８Ｌ、ｐ．Ｒ４３２Ｃ、ｐ．Ｃ１３９Ｒ、ｐ．Ｃ５２１Ｙ、及び／またはｐ．Ｃ１３９Ｒ変異）、ナンセンス変異（例えば、ｐ．Ｑ１２５Ｘ変異）、挿入変異（例えば、ｃ．１１４５ｉｎｓＡ変異）、及び／またはトランスバージョン変異（例えば、ｐ．０（ＩＶＳ１＋５Ｇ＞Ｃ変異）を含むＧＲＮ変異を有する患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、ＧＲＮ遺伝子において任意の他の病原性変異を担持する患者に投与され得る。例えば、ＧＲＮ遺伝子における病原性変異は、Ｇｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ２９（１２），１３７３－１３８６，（２０１２）において論述された変異のうちのいずれかであり得、この開示は、ヒトＧＲＮ変異に関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0096】

いくつかの実施形態では、本開示は、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の治療を必要とするヒト患者において、それを行う方法を提供する。

【0097】

いくつかの実施形態では、本開示は、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有すると診断されたヒト患者における認知機能を改善する方法を提供する。

【0098】

いくつかの実施形態では、本開示は、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有すると診断されたヒト患者の脳（例えば、前頭皮質）において、ＰＧＲＮを発現させるか、またはその発現を回復させる方法を提供する。

【0099】

ＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチド
ＰＧＲＮ活性は、ＦＴＤを有する患者において低減している。本明細書に記載の組成物及び方法は、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するＡＡＶベクターを投与することによって、この機能障害を標的とする。そのような構築物は、当業者に周知の方法を使用して産生され得る。

【0100】

哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼによるＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチドの認識及び結合は、遺伝子発現にとって重要である。したがって、ＲＮＡポリメラーゼを動員し、転写開始部位での転写複合体の集合を促進する転写因子に対して高い親和性を示す配列エレメントをポリヌクレオチド内に含め得る。そのような配列エレメントには、例えば、哺乳動物プロモーターが含まれ、その配列は、特定の転写開始因子、及び最終的にＲＮＡポリメラーゼによって認識され、結合され得る。哺乳動物プロモーターの例は、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｓｙｓ．Ｂｉｏｌ．，３：７３，ｏｎｌｉｎｅ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎに記載されており、この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0101】

本明細書に記載の組成物及び方法との使用に好適なポリヌクレオチドはまた、哺乳動物プロモーターの下流にＰＧＲＮをコードするものも含む。哺乳動物細胞におけるＧＲＮの発現に有用なプロモーターとしては、例えば、シナプシンプロモーター、テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｔＴＡ）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、逆テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｒＴＡ）プロモーター、Ｕ１プロモーター、Ｕ６プロモーター、Ｕ７プロモーター、プリオンプロモーター、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＣＢ７プロモーター、Ｈ１プロモーター、ＣＭＶ－ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩＩプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、マイクロチューブリン関連タンパク質ＩＢ（ＭＡＰ ＩＢ）プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来成長因子ベータ鎖プロモーター、ニューロフィラメント軽鎖プロモーター、ニューロン特異的ＶＧＦ遺伝子プロモーター、ニューロン核（ＮｅｕＮ）プロモーター、大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ）プロモーター、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ－１）プロモーター、またはホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーター、伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーター、ＣＤ６８分子（ＣＤ６８）プロモーター（Ｄａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２３：８３５（２０１５）、ＧＲＮを発現するためのＰＧＫ及びＣＤ６８プロモーターの使用に関する場合、本明細書に組み込まれる）、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１）プロモーター、インテグリンサブユニットアルファＭ（ＩＴＧＡＭ）プロモーター、同種移植炎症因子１（ＡＩＦ１）プロモーター、プリン作動性受容体Ｐ２Ｙ１２（Ｐ２Ｙ１２）プロモーター、膜貫通タンパク質１１９（ＴＭＥＭ１１９）プロモーター、及びコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）プロモーターが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、シナプシンプロモーターである。

【0102】

いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、神経細胞（例えば、シナプシン）及び／またはグリア細胞において活性であるプロモーターに動作可能に連結される。

【0103】

本明細書に記載の組成物及び方法における使用のためのポリヌクレオチドに含まれ得る他のＤＮＡ配列エレメントは、エンハンサー配列である。エンハンサーは、ＤＮＡが転写開始部位での転写因子及びＲＮＡポリメラーゼの結合に有利な三次元配向を選ぶような、目的の遺伝子を含有するポリヌクレオチドの立体構造変化を誘導する別のクラスの調節エレメントを表す。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法における使用のためのポリヌクレオチドは、ＰＧＲＮをコードするものを含み、加えて、哺乳動物エンハンサー配列を含む。現在、多くのエンハンサー配列が、哺乳動物遺伝子から知られており、例としては、哺乳動物グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリンをコードする遺伝子由来のエンハンサーである。本明細書に記載の組成物及び方法における使用のためのエンハンサーにはまた、真核細胞に感染することができるウイルスの遺伝物質に由来するエンハンサーも含まれる。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（１００～２７０ｂｐ）、ＣＭＶ初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーである。真核生物遺伝子の転写の活性化を誘導する追加のエンハンサー配列は、Ｙａｎｉｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：１７（１９８２）に開示されている。

【0104】

例示的ＰＧＲＮ
一アプローチでは、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＰＧＲＮを提供する。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８６％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８７％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８８％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８９％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９１％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９２％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９３％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９４％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と同一であるタンパク質をコードする。

【0105】

分泌シグナルペプチド
ＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチドは、分泌シグナルペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み得る。分泌シグナルペプチドは、５～３０残基長のアミノ酸配列を有し得、ＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチドの上流（すなわち、５’から）に位置し得る。これらの分泌シグナルペプチドは、ＥＲへの転座、輸送小胞へのパッケージング、及び最終的な分泌をもたらすシグナル認識粒子による合成中の新生ポリペプチドの認識を可能にする。タンパク質分泌のための例示的な分泌シグナルペプチドは、ＰＧＲＮ、ＩＧＦ－ＩＩ、アルファ１抗トリプシン、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＣＤ５、免疫グロブリン、トリプシノーゲン、血清アルブミン、プロラクチン、エラスチン、組織プラスミノーゲン活性化因子シグナルペプチド（ｔＰＡ－ＳＰ）、及びインスリンからのものである。いくつかの実施形態では、分泌型のＰＧＲＮを発現する多能性細胞（例えば、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、またはＣＤ３４＋細胞）は、欠落タンパク質を血流に注入することによってタンパク質欠損（例えば、ＰＧＲＮ）を矯正するための治療戦略として利用され得る。血液が患者の組織を灌流するため、ＰＧＲＮは細胞に取り込まれ、その作用部位に輸送される。

【0106】

コドン最適化
本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、例えば、特定の細胞型におけるＰＧＲＮの発現の増強を達成するように、ＧＲＮの核酸配列またはＰＧＲＮをコードするそのＲＮＡ等価物を最適化し得る。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、遺伝子及びそのＲＮＡ等価物は、ＰＧＲＮなどのコードされたタンパク質の組織特異的発現のために最適化され得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して最適化された遺伝子及びそのＲＮＡ等価物は、化学合成技術によって合成され得、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づく増幅方法を使用するか、または外因性核酸を複製することができる細菌細胞もしくは哺乳動物細胞などの細胞への遺伝子のトランスフェクションによって増幅され得る。

【0107】

本明細書に記載の遺伝子及びＲＮＡ等価物は、重要な臨床有用性を有し得る。例えば、ＦＴＤは、天然ＰＧＲＮタンパク質の欠損の現れである。遺伝子療法の出現により、標的細胞（例えば、ヒト細胞）への外因性タンパク質コード核酸の導入のための、広範なベクター及び遺伝子送達技術が開発されている。しかしながら、目的の細胞におけるタンパク質の堅牢かつ安定した発現を達成するために、ＰＧＲＮをコードする外因性導入遺伝子の配列を最適化するために、従うことができる統一された一連のガイドラインの必要性が残っている。

【0108】

コードされたタンパク質のアミノ酸配列を保存する単一ヌクレオチド変異は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡによってまとめられた、以下の表３に表される標準的な遺伝コードによって知らせることができる。

【表3】

【0109】

コドン最適化プロセスは、反復して実施され得る。例えば、当業者は、野生型遺伝子配列（例えば、イントロンＤＮＡを除く）から開始し、かつ標的細胞内で発現される遺伝子（例えば、発現レベルが、意図される標的細胞における遺伝子発現レベルの上位１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれを超える中にある遺伝子）に対して、遺伝子の配列同一性を低減する置換をこの配列に導入し得る。このプロセスは、目的の遺伝子内の全てのコドンが、標的細胞内で高レベルで発現される遺伝子に対して、配列同一性を低減させ得る単一ヌクレオチド置換を導入する機会について評価されるまで繰り返され得る。代替的には、例えば、野生型配列に対して遺伝子のＧＣ含有量を増加させる、及び／または遺伝子のＣｐＧ含有量を低減させるコドン置換を組み込むことによって、遺伝子の野生型配列に対して先に修飾された遺伝子配列から開始することができる。結果として得られた遺伝子の配列は、その後、所望の標的細胞において発現される遺伝子（例えば、発現レベルが、意図される標的細胞における遺伝子発現レベルの上位１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれを超える中にある遺伝子）のコード鎖に並べられ、標的細胞内で高レベルで発現される遺伝子に関して、先に修飾された遺伝子の配列同一性を最小限に抑えるために、遺伝子全体を通して反復コドン置換が導入され得る。

【0110】

コドン最適化された遺伝子の調製
設計されると、最終的なコドン最適化された遺伝子は、例えば、当該技術分野で既知の固相核酸手順によって調製され得る。例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの核酸分子の化学合成を実施するために、ホスホラミダイト法を使用した固相合成プロセスが用いられ得る。この手順によれば、核酸は、概して、以下のステップによって合成される。

【0111】

まず、合成される核酸の３’末端に生じる５－ＯＨ保護ヌクレオシドは、ヌクレオシドを切断可能なリンカーに付加することによって、３’－ＯＨ機能を介して固体支持体にエステル化される。次いで、ヌクレオシドが固定されている固相合成用の支持体を、反応カラムに配置することができ、それは、次いで、自動核酸合成機にセットされる。

【0112】

その後、以下のステップを含む反復合成プロセスが、自動核酸合成機の合成プログラムに従って反応カラム内で実施され得る：
・（１）保護された固定化ヌクレオシドの５’－ＯＨ部分の脱保護のステップ（例えば、ジクロロメタン溶液中のトリクロロ酢酸などの酸を用いて、酸不安定性ヒドロキシル保護基を除去する）、
・（２）活性化剤（例えば、テトラゾールなど）の存在下で、５－ＯＨ保護されたヌクレオシドホスホラミダイトを、固定化されたヌクレオシドの脱保護された５’－ＯＨ基とカップリングさせるステップ、
・（３）３’末端ヌクレオシドの未反応の５’－ＯＨ基を（例えば、無水酢酸などで）キャッピングするステップ、及び
・（４）固定化されたホスファイト置換基を（例えば、ヨウ素水溶液などで）酸化するステップ。

【0113】

上記のプロセスを繰り返して、必要に応じて３’から５’方向に核酸を伸長させ得る。５’末端方向が促進され、所望の配列を有する核酸が合成される。

【0114】

最後に、切断可能なリンカーを（例えば、アンモニア水溶液、メチルアミン溶液などで）加水分解して、合成された核酸を固相支持体から切断する。核酸の化学合成のための前述などの手順は、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許第８，８３５，６５６号に記載されており、その開示は、核酸分子の合成のためのプロトコルに関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0115】

更に、調製された遺伝子は、例えば、本明細書に記載、または当該技術分野で既知のＰＣＲに基づく技術を使用して、及び／または設計された遺伝子を含有するプラスミドを用いたＤＨ５α Ｅ．ｃｏｌｉの形質転換によって増幅され得る。細菌は、その後、その中のＤＮＡを増幅するために培養され得、遺伝子は、当該技術分野で既知のプラスミド精製技術によって単離され得、任意選択で、続いて、同一性コドン最適化遺伝子を検証するために、プラスミドの制限消化及び／または配列決定が行われ得る。

【0116】

例示的なコドン最適化されたＰＧＲＮ
一アプローチでは、本発明は、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有するコドン最適化されたＰＧＲＮを提供する。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と同一であるタンパク質をコードする。

【0117】

ＰＧＲＮを標的細胞に送達するためのＡＡＶ
ウイルスゲノムは、目的の遺伝子を標的細胞（例えば、ヒト細胞などの哺乳動物細胞）のゲノムに効率的に送達するために使用することができるベクターの豊富な供給源を提供する。ウイルスゲノムは、そのようなゲノム内に含有されるポリヌクレオチドが、典型的に、一般化された形質導入または特殊化された形質導入によって標的細胞のゲノムに組み込まれるため、特に有用な遺伝子送達用ベクターである。これらのプロセスは、天然のウイルス複製サイクルの一部分として生じ、遺伝子統合を誘導するために追加のタンパク質または試薬を必要としない。ウイルスベクターの例としては、ＡＡＶが挙げられる。

【0118】

本明細書に記載の組成物及び方法の核酸は、細胞へのそれらの導入を容易にするために、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター及び／またはビリオンに組み込まれ得る。ＡＡＶベクターは、中枢神経系において使用され得、適切なプロモーター及び血清型は、Ｐｉｇｎａｔａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ （２０１７），ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔに論述され、その開示は、ＣＮＳ遺伝子療法において有用なプロモーター及びＡＡＶ血清型に関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法において有用なｒＡＡＶベクターは、（１）発現される異種配列（例えば、ＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチド）及び（２）異種遺伝子の統合及び発現を容易にするウイルス配列を含む組換え核酸構築物である。ウイルス配列は、ＤＮＡの複製及びビリオンへのパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶの配列を含み得る。そのようなｒＡＡＶベクターはまた、マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子を含有し得る。有用なｒＡＡＶベクターは、全体的または部分的に欠失しているが、機能的な隣接ＩＴＲ配列を保持しているＡＡＶ ＷＴ遺伝子のうちの１つ以上を有する。ＡＡＶ ＩＴＲは、特定の用途に好適な任意の血清型のものであり得る。ｒＡＡＶベクターを使用するための方法は、例えば、Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．７：２７９（２０００）、及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４（２０００）に記載されており、これらの各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0119】

本明細書に記載の核酸及びベクターは、細胞内への核酸またはベクターの導入を容易にするために、ｒＡＡＶウイルス粒子内に組み込むことができる。ＡＡＶのカプシドタンパク質は、ビリオンの外側の非核酸部分を構成し、ＡＡＶ ｃａｐ遺伝子によってコードされる。ｃａｐ遺伝子は、ビリオン集合に必要とされる３つのウイルスコートタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３をコードする。ｒＡＡＶビリオンの構築は、例えば、ＵＳ５，１７３，４１４、ＵＳ５，１３９，９４１、ＵＳ５，８６３，５４１、ＵＳ５，８６９，３０５、ＵＳ６，０５７，１５２、及びＵＳ６，３７６，２３７、ならびにＲａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：７９１（２００２）及びＢｏｗｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：４２３（２００３）に記載されており、その各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0120】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて有用なｒＡＡＶビリオンとしては、ＡＡＶ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０及びｒｈ７４を含む様々なＡＡＶ血清型に由来するものが挙げられる。中枢神経系に位置するか、または中枢神経系に送達される細胞を標的とするために、ＡＡＶ２、ＡＡＶ９、及びＡＡＶ１０は、特に有用であり得る。異なる血清型のＡＡＶベクター及びＡＡＶタンパク質の構築及び使用は、例えば、Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：６１９（２０００）、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：３４２８（２０００）、Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：２２２４（１９９８）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：６６１５（２００１）、及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に記載されており、その各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0121】

また、本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて有用なものは、偽型ｒＡＡＶベクターである。偽型ベクターには、所与の血清型以外の血清型（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８など）に由来するカプシド遺伝子で偽型化された所与の血清型（例えば、ＡＡＶ９）のＡＡＶベクターが含まれる。例えば、代表的な偽型ベクターは、ＡＡＶ血清型２に由来するカプシド遺伝子で偽型化された治療用タンパク質（例えば、フラタキシン）をコードするＡＡＶ８またはＡＡＶ９ベクターである。偽型ｒＡＡＶビリオンの構築及び使用を伴う技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：７６６２（２００１）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）、Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８：１５８（２００２）、及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に記載されている。

【0122】

ビリオンカプシド内に変異を有するＡＡＶビリオンは、変異していないカプシドビリオンよりも効果的に特定の細胞型に感染するために使用することができる。例えば、好適なＡＡＶ変異体は、ＡＡＶを特定の細胞型に標的化することを容易にするためにリガンド挿入変異を有し得る。挿入変異体、アラニンスクリーニング変異体、及びエピトープタグ変異体を含むＡＡＶカプシド変異体の構築及び特徴は、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：８６３５（２０００）に記載されている。本明細書に記載の方法において使用され得る他のｒＡＡＶビリオンとしては、ウイルスの分子育種によって、及びエクソンシャッフリングによって生成されるカプシドハイブリッドが挙げられる。例えば、Ｓｏｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，２５：４３６（２０００）及びＫｏｌｍａｎ ａｎｄ Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４２３（２００１）を参照されたい。

【0123】

例示的なＡＡＶベクター
本明細書に記載のように、例示的なＡＡＶベクター構成要素は、プロモーター、イントロン、ＰＧＲＮもしくはそのコドン最適化されたＰＧＲＮをコードするポリヌクレオチド、３’エンハンサーエレメント、及び／またはウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化部位（ｐＡ）を含み得る。

【0124】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、シナプシンプロモーター、テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｔＴＡ）プロモーター、逆テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質（ｒＴＡ）プロモーター、Ｕ１プロモーター、Ｕ６プロモーター、Ｕ７プロモーター、プリオンプロモーター、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＣＢ７プロモーター、Ｈ１プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＣＭＶ－ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩＩプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、マイクロチューブリン関連タンパク質ＩＢ（ＭＡＰ ＩＢ）プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来成長因子ベータ鎖プロモーター、ニューロフィラメント軽鎖プロモーター、ニューロン特異的ＶＧＦ遺伝子プロモーター、ニューロン核（ＮｅｕＮ）プロモーター、大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ）プロモーター、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ－１）プロモーター、またはホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーターを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、プロモーターは、シナプシンプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、神経細胞及び／またはグリア細胞において活性なプロモーターに動作可能に連結される。

【0125】

いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、シナプシンＩＤ番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、シナプシンプロモーターは、配列番号１の核酸配列と同一である核酸配列を有する。

【0126】

いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）イントロンに動作可能に連結される。例えば、いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、ｈＧＨイントロン３である。

【0127】

いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、ＩＤ番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｈＧＨイントロンは、配列番号４の核酸配列と同一である核酸配列を有する。

【0128】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＰＧＲＮを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８６％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８７％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８８％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８９％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９１％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９２％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９３％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９４％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と同一であるタンパク質をコードする。

【0129】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有するコドン最適化されたＰＧＲＮを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３の核酸配列と同一であるタンパク質をコードする。

【0130】

いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、３’エンハンサーエレメントに動作可能に連結される。いくつかの実施形態では、３’エンハンサーエレメントは、ヒトＰＧＲＮ ３’非翻訳領域（ＵＴＲ）である。

【0131】

いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＰＧＲＮ ３’ＵＴＲは、配列番号５の核酸配列と同一である核酸配列を有する。

【0132】

いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮは、ｂＧＨ ｐＡに動作可能に連結される。

【0133】

いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｂＧＨ ｐＡは、配列番号８の核酸配列と同一である核酸配列を有する。

【0134】

ＡＡＶに組み込まれ得る例示的な核酸を、以下の表４に記載する。

【表4】

【0135】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である核酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９１％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９２％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９３％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９４％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９６％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９７％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９９％同一である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、配列番号６の核酸配列と同一である核酸配列を有する。

【0136】

本明細書に記載のように、配列番号６の核酸配列を有する例示的なＡＡＶを以下に示す：
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＴＧＣＡＡＡＧＡＴＧＧＡＴＡＡＡＧＴＴＴＴＡＡＡＣＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＣＴＴＴＧＣＡＧＣＴＡＡＴＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＣＴＴＧＡＡＡＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＧＴＣＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＧＣＡＡＡＴＧＧＴＴＡＡＴＴＡＡＴＣＴＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＴＧＣＧＴＡＴＧＡＧＴＧＣＡＡＧＴＧＧＧＴＴＴＴＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＧＧＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＴＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＣＧＡＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＡＣＣＣＣＣＡＴＴＣＣＣＣＡＡＡＴＴＧＣＧＣＡＴＣＣＣＣＴＡＴＣＡＧＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＡＡＣＡＧＧＡＴＧＣＧＧＣＧＡＧＧＣＧＣＧＴＧＣＧＣＡＣＴＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＴＣＡＧＣＡＣＴＧＡＡＧＧＣＧＣＧＣＴＧＡＣＧＴＣＡＣＴＣＧＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＧＣＡＡＡＣＴＣＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＣＡＣＣＴＴＧＧＴＣＧＣＧＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＣＣＣＡＧＣＣＧＧＡＣＣＧＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＧＧＣＧＣＧＡＧＡＴＡＧＧＧＧＧＧＣＡＣＧＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＴＧＣＧＣＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＧＡＣＴＣＡＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＴＣＧＴＧＴＣＧＴＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＡＧＴＣＧＡＧＡＧＧＡＴＣＣＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＣＣＴＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＡＴＧＧＧＧＧＡＧＡＣＣＴＧＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＧＧＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＡＡＴＧＣＣＣＧＴＣＣＴＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴＣＧＣＴＣＴＧＡＣＣＧＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＣＧＣＴＧＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＣＣＣＣＧＡＴＧＧＡＣＡＧＴＴＴＴＧＣＣＣＣＧＴＣＧＣＴＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＣＧＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＣＣＧＣＣＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＴＧＣＣＡＧＧＴＧＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＧＴＴＣＣＧＣＣＧＧＡＣＡＣＴＣＴＴＧＣＡＴＣＴＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＣＧＡＣＧＧＡＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＧＣＡＧＧＴＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＧＣＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＣＣＡＧＴＴＣＧＡＡＴＧＣＣＣＡＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＧＡＣＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＧＣＣＡＣＡＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＧＧＡＧＣＣＴＴＣＴＧＴＧＡＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＣＣＣＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＧＧＡＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＣＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＧＴＣＴＡＧＡＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＡＴＧＣＣＡＡＡＣＧＣＣＡＣＡＴＧＣＴＧＴＴＣＣＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＡＴＣＴＧＡＴＣＣＡＧＴＣＴＡＡＧＴＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＡＧＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＴＡＴＧＧＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＧＣＴＧＴＡＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＡＴＧＧＧＧＡＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＴＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＧＴＧＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＣＡＣＡＴＧＣＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣＣＴＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＧＡＴＡＡＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＧＡＴＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＣＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＡＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＣＡＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＴＧＧＧＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＡＣＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＴＡＧＧＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＴＡＧＧＧＡＴＡＡＴＡＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＡＴＡＧＧＣＡＧＧＧＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＣＡＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＧＧＣＴＴＴＣＧＧＴＧＣＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＧＣＣＴＧＣＧＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＣＣＧＧＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＣＧＡＧＡＣＣＣＣＧＣＣＣＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡＣＧＧＧＡＣＡＧＴＡＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＣＣＣＡＣＴＣＧＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＧＧＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＡＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＡＴＴＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＡＴＣＴＡＡＧＧＣＣＴＴＣＣＣＴＧＴＣＡＧＡＡＧＧＧＧＧＴＴＧＴＧＧＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＧＧＴＧＣＴＴＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＡＣＡＧＧＧＧＴＧＴＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＴＴＴＣＧＣＴＡＧＣＣＴＣＧＡＧＡＧＡＴＣＧＡＴＣＴＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＧＴＧＣＧＧＡＣＣＧＡＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＡＣＴＡＧＴＴＧＡＴＧＣＧＧＴＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＴＡＣＧＣＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＴＡＴＴＴＣＡＣＡＣＣＧＣＡＴＡＣＧＴＣＡＡＡＧＣＡＡＣＣＡＴＡＧＴＡＣＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＧＣＧＧＣＧＣＡＴＴＡＡＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＡＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＡＧＣＧＣＣＣＧＣＴＣＣＴＴＴＣＧＣＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＴＴＴＣＴＣＧＣＣＡＣＧＴＴＣＧＣＣＧＧＣＴＴＴＣＣＣＣＧＴＣＡＡＧＣＴＣＴＡＡＡＴＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＴＴＴＡＧＧＧＴＴＣＣＧＡＴＴＴＡＧＴＧＣＴＴＴＡＣＧＧＣＡＣＣＴＣＧＡＣＣＣＣＡＡＡＡＡＡＣＴＴＧＡＴＴＴＧＧＧＴＧＡＴＧＧＴＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＡＣＧＧＴＴＴＴＴＣＧＣＣＣＴＴＴＧＡＣＧＴＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＧＴＴＣＴＴＴＡＡＴＡＧＴＧＧＡＣＴＣＴＴＧＴＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＴＣＡＡＣＣＣＴＡＴＣＴＣＧＧＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＡＴＡＡＧＧＧＡＴＴＴＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＧＧＣＣＴＡＴＴＧＧＴＴＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＣＴＧＡＴＴＴＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＧＣＧＡＡＴＴＴＴＡＡＣＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＣＧＴＴＴＡＣＡＡＴＴＴＴＡＴＧＧＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＡＴＣＴＧＣＴＣＴＧＡＴＧＣＣＧＣＡＴＡＧＴＴＡＡＧＣＣＡＧＣＣＣＣＧＡＣＡＣＣＣＧＣＣＡＡＣＡＣＣＣＧＣＴＧＡＣＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＧＧＧＣＴＴＧＴＣＴＧＣＴＣＣＣＧＧＣＡＴＣＣＧＣＴＴＡＣＡＧＡＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＧＧＧＡＧＣＴＧＣＡＴＧＴＧＴＣＡＧＡＧＧＴＴＴＴＣＡＣＣＧＴＣＡＴＣＡＣＣＧＡＡＡＣＧＣＧＣＧＡＧＡＣＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴＣＧＴＧＡＴＡＣＧＣＣＴＡＴＴＴＴＴＡＴＡＧＧＴＴＡＡＴＧＴＣＡＴＧＡＴＡＡＴＡＡＴＧＧＴＴＴＣＴＴＡＧＡＣＧＴＣＡＧＧＴＧＧＣＡＣＴＴＴＴＣＧＧＧＧＡＡＡＴＧＴＧＣＧＣＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＴＴＴＧＴＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＡＡＡＴＡＣＡＴＴＣＡＡＡＴＡＴＧＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＴＧＡＧＡＣＡＡＴＡＡＣＣＣＴＧＡＴＡＡＡＴＧＣＴＴＣＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＡＧＴＡＴＧＡＧＣＣＡＴＡＴＴＣＡＡＣＧＧＧＡＡＡＣＧＴＣＧＡＧＧＣＣＧＣＧＡＴＴＡＡＡＴＴＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＴＡＴＧＧＧＴＡＴＡＡＡＴＧＧＧＣＴＣＧＣＧＡＴＡＡＴＧＴＣＧＧＧＣＡＡＴＣＡＧＧＴＧＣＧＡＣＡＡＴＣＴＡＴＣＧＣＴＴＧＴＡＴＧＧＧＡＡＧＣＣＣＧＡＴＧＣＧＣＣＡＧＡＧＴＴＧＴＴＴＣＴＧＡＡＡＣＡＴＧＧＣＡＡＡＧＧＴＡＧＣＧＴＴＧＣＣＡＡＴＧＡＴＧＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＧＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＣＴＧＡＣＧＧＡＡＴＴＴＡＴＧＣＣＴＣＴＴＣＣＧＡＣＣＡＴＣＡＡＧＣＡＴＴＴＴＡＴＣＣＧＴＡＣＴＣＣＴＧＡＴＧＡＴＧＣＡＴＧＧＴＴＡＣＴＣＡＣＣＡＣＴＧＣＧＡＴＣＣＣＣＧＧＡＡＡＡＡＣＡＧＣＡＴＴＣＣＡＧＧＴＡＴＴＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＣＣＴＧＡＴＴＣＡＧＧＴＧＡＡＡＡＴＡＴＴＧＴＴＧＡＴＧＣＧＣＴＧＧＣＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＧＴＴＧＣＡＴＴＣＧＡＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＴＡＡＴＴＧＴＣＣＴＴＴＴＡＡＣＡＧＣＧＡＴＣＧＣＧＴＡＴＴＴＣＧＴＣＴＣＧＣＴＣＡＧＧＣＧＣＡＡＴＣＡＣＧＡＡＴＧＡＡＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＧＴＴＧＡＴＧＣＧＡＧＴＧＡＴＴＴＴＧＡＴＧＡＣＧＡＧＣＧＴＡＡＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＧＡＡＣＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＧＣＡＴＡＡＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＴＣＴＣＡＣＣＧＧＡＴＴＣＡＧＴＣＧＴＣＡＣＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＴＴＣＴＣＡＣＴＴＧＡＴＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＴＴＧＡＣＧＡＧＧＧＧＡＡＡＴＴＡＡＴＡＧＧＴＴＧＴＡＴＴＧＡＴＧＴＴＧＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＡＴＣＧＣＡＧＡＣＣＧＡＴＡＣＣＡＧＧＡＴＣＴＴＧＣＣＡＴＣＣＴＡＴＧＧ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ＴＧＴＣＡＧＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＴＣＡＴＡＴＡＴＡＣＴＴＴＡＧＡＴＴＧＡＴＴＴＡＡＡＡＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴＴＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＡＧＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴＣＴＣＡＴＧＡＣＣＡＡＡＡＴＣＣＣＴＴＡＡＣＧＴＧＡＧＴＴＴＴＣＧＴＴＣＣＡＣＴＧＡＧＣＧＴＣＡＧＡＣＣＣＣＧＴＡＧＡＡＡＡＧＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＴＣＴＴＧＡＧＡＴＣＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣＧＣＧＴＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＴＧＣＡＡＡＣＡＡＡＡＡＡＡＣＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＴＧＧＴＴＴＧＴＴＴＧＣＣＧＧＡＴＣＡＡＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＧＡＡＧＧＴＡＡＣＴＧＧＣＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＧＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＴＧＴＴＣＴＴＣＴＡＧＴＧＴＡＧＣＣＧＴＡＧＴＴＡＧＧＣＣＡＣＣＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＣＴＣＴＧＴＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＡＣＣＴＣＧＣＴＣＴＧＣＴＡＡＴＣＣＴＧＴＴＡＣＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＧＧＣＧＡＴＡＡＧＴＣＧＴＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＧＴＴＧＧＡＣＴＣＡＡＧＡＣＧＡＴＡＧＴＴＡＣＣＧＧＡＴＡＡＧＧＣＧＣＡＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＧＧＧＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＣＡＧＣＴＴＧＧＡＧＣＧＡＡＣＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＡＡＣＴＧＡＧＡＴＡＣＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＧＡＧＡＡＡＧＣＧＣＣＡＣＧＣＴＴＣＣＣＧＡＡＧＧＧＡＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＧＴＡＡＧＣＧＧＣＡＧＧＧＴＣＧＧＡＡＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＣＡＣＧＡＧＧＧＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＣＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＴＴＴＡＴＡＧＴＣＣＴＧＴＣＧＧＧＴＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧＡＧＣＧＴＣＧＡＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＧＴＣＡＧＧＧＧＧＧＣＧＧＡＧＣＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＡＣＧＣＣＡＧＣＡＡＣＧＣＧＧＣＣＴＴＴＴＴＡＣＧＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＴＴＴＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＴＧＣＴＣＡＧＧＣＣＴＡＣＡＴＧＴ

【0137】

追加の治療用導入遺伝子及びタンパク質
本明細書に記載のＡＡＶは、ＣＮＳに悪影響を及ぼす他の障害の中でもとりわけ、ＣＮＳに影響を及ぼす障害（例えば、神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、神経変性疾患）またはリソソーム蓄積障害の治療に有用な治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み得る。本開示の組成物及び方法と組み合わせて有用な例示的な治療用タンパク質を、以下の表５に示す。

【表5】

【0138】

表５に記載のタンパク質をコードする導入遺伝子をコードする例示的なＡＡＶは、神経認知障害または神経筋障害を有しない健常なヒト対象のＣＮＳにおける当該タンパク質の健常な生理学的濃度を発現または回復させるのに有用である。例えば、ＧＤＮＦの健常な生理学的濃度は、ＣＮＳにおいて１０ｎｇ／ｍＬ未満である。ＢＤＮＦの健常な生理学的濃度は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中で５０ｐｇ／ｍＬ以下であり、前頭前皮質において最大約２５ｐｇ／ｍＬである。ＡｐｏＥの健常な生理学的濃度は、ＣＳＦ中で４．５ｎｇ／ｍＬである。ＧＣａｓｅの健常な生理学的濃度は、ＣＳＦ中で０．０２～０．１４ｎｇ／ｍＬである。

【0139】

本明細書に記載のＡＡＶは、リソソーム蓄積障害に関連するＣＮＳタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み得る。例示的なタンパク質としては、α－ガラクトシダーゼａ、α－１－イズロニダーゼ、イズロ酸スルファターゼ、リソソーム酸α－グルコシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ（ＨｅｘＡ）、ヘキソサミニダーゼＢ（ＨｅｘＢ）、アリールスルファターゼＡ（ＡＲＳＡ）、リソソーム酸リパーゼ、酸セラミダーゼ、ガラクトシルセラミダーゼ、α－フコシダーゼ、α－、β－マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミニダーゼ、ノイラミダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｄａｓｅ）、ヘパラン－Ｎ－スルファターゼ、Ｎ－アセチル－α－グルコサミニダーゼ、アセチル－ＣｏＡ：α－グルコサミドＮ－アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミン－６－硫酸スルファターゼ、アリールスルファターゼＢ（ＡＲＳＢ）、及びβ－グルクロニダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。リソソーム蓄積障害に関連するタンパク質をコードする導入遺伝子をコードする例示的なＡＡＶは、神経認知障害または神経筋障害を有しない健常なヒト対象のＣＮＳにおける当該タンパク質の健常な生理学的濃度を発現または回復させるのに有用である。例えば、ＡＲＳＡの健常な生理学的濃度は、ＣＮＳにおいて１００ｎｇ／ｍｇである。ＨｅｘＡの健常な生理学的濃度は、血漿中で２０ｎｇ／ｍＬであり、ＨｅｘＢの健常な生理学的濃度は、血漿中で４０ｎｇ／ｍＬである。

【0140】

投与の経路
本明細書に記載のＡＡＶは、ＦＴＤを有する対象に視床内投与され得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、対流補助方式で患者に投与される。

【0141】

いくつかの実施形態では、投与は、例えば、Ｂｏｂｏ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ．９１：６（１９９４）： ２０７６－２０８０に記載されるものなどの対流補助投与を含み得、この開示は、対流補助投与に関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。

【0142】

投与レジメン
本開示の組成物及び方法を使用して、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有する患者は、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球の量で、ＰＧＲＮ（例えば、コドン最適化されたＰＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含有するＡＡＶベクターを視床内投与され得る。

【0143】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、１×１０^９ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球、２×１０^９ｖｇ／半球～約４×１０^１２ｖｇ／半球、３×１０^９ｖｇ／半球～約３×１０^１２ｖｇ／半球、４×１０^９ｖｇ／半球～約２×１０^１２ｖｇ／半球、５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、１×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球、２×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１１ｖｇ／半球、３×１０^１０ｖｇ／半球～約７×１０^１１ｖｇ／半球、４×１０^１０ｖｇ／半球～約６×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^９ｖｇ／半球～約４×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^９ｖｇ／半球～約３×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^９ｖｇ／半球～約２×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^１０ｖｇ／半球～約７×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^１０ｖｇ／半球～約６×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。

【0144】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、１×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、２×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球、３×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１１ｖｇ／半球、４×１０^１０ｖｇ／半球～約７×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球～約６×１０^１１ｖｇ／半球、６×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、７×１０^１０ｖｇ／半球～約４×１０^１１ｖｇ／半球、８×１０^１０ｖｇ／半球～約３×１０^１１ｖｇ／半球、９×１０^１０ｖｇ／半球～約２×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^１０ｖｇ／半球～約７×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１０ｖｇ／半球～約６×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約６×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約７×１０^１０ｖｇ／半球～約４×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約８×１０^１０ｖｇ／半球～約３×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約９×１０^１０ｖｇ／半球～約２×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。

【0145】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球（例えば、５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球、６×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１０ｖｇ／半球、または７×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１０ｖｇ／半球）の量で患者に視床内投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約６×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約７×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。

【0146】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約６×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約７×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約８×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約９×１０^９ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約６×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約７×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約８×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約９×１０^１０ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約６×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約７×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約８×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約９×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約２×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約３×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約４×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０^１２ｖｇ／半球の量で患者に視床内投与される。

【0147】

例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、１×１０^９ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球、２×１０^９ｖｇ／半球～約４×１０^１２ｖｇ／半球、３×１０^９ｖｇ／半球～約３×１０^１２ｖｇ／半球、４×１０^９ｖｇ／半球～約２×１０^１２ｖｇ／半球、５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、１×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球、２×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１１ｖｇ／半球、３×１０^１０ｖｇ／半球～約７×１０^１１ｖｇ／半球、４×１０^１０ｖｇ／半球～約６×１０^１１ｖｇ／半球、５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約２×１０^９ｖｇ／半球～約４×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約３×１０^９ｖｇ／半球～約３×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約４×１０^９ｖｇ／半球～約２×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^１０ｖｇ／半球～約９×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約２×１０^１０ｖｇ／半球～約８×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約３×１０^１０ｖｇ／半球～約７×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約４×１０^１０ｖｇ／半球～約６×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約５×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与され、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。

【0148】

いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約７ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約６ｎｇ／ｍｇ、または約５ｎｇ／ｍｇ）、またはそれを超える（例えば、約９ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約６０ｎｇ／ｍｇ、約７０ｎｇ／ｍｇ、約８０ｎｇ／ｍｇ、約９０ｎｇ／ｍｇ、または約１００ｎｇ／ｍｇ）の患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約２９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約３９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約４９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５１ｎｇ／
ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約５９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約６９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約７９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約８９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９０ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９１ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９２ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９３ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９４ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９５ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９６ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９７ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９９ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約９８ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、前頭皮質における約１００ｎｇ／ｍｇの患者の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを達成するのに十分な量で患者に投与される。

【0149】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、その量を含む、半球当たり単回用量で患者に投与される。

【0150】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ともにその量を含む、半球当たり複数回（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回）の用量で患者に投与される。

【0151】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、各々個別にその量を含む、半球当たり２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回）の用量で患者に投与される。

【0152】

いくつかの実施形態では、半球当たりの２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回）の用量は、互いに１年以上（例えば、１年、１年及び１日、１年及び１か月、１年及び６か月、２年、３年、４年、または５年）離される。

【0153】

いくつかの実施形態では、半球当たりの２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回）の用量は、互いの約１２か月（例えば、約１２か月、約１１か月、約１０か月、約９か月、約８か月、約７か月、約６か月、約５か月、約４か月、約３か月、約２か月、または約１か月）以内に患者に投与される。

【0154】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、表５に記載のタンパク質などの、神経認知障害、神経筋障害、またはリソソーム蓄積障害に関連するタンパク質をコードする導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、α－ガラクトシダーゼａ、α－１－イズロニダーゼ、イズロ酸スルファターゼ、リソソーム酸α－グルコシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、アリールスルファターゼＡ、リソソーム酸リパーゼ、酸セラミダーゼ、ガラクトシルセラミダーゼ、α－フコシダーゼ、α－、β－マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミニダーゼ、ノイラミダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｄａｓｅ）、ヘパラン－Ｎ－スルファターゼ、Ｎ－アセチル－α－グルコサミニダーゼ、アセチル－ＣｏＡ：α－グルコサミドＮ－アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミン－６－硫酸スルファターゼ、アリールスルファターゼＡ、アリールスルファターゼＢ、及びβ－グルクロニダーゼなどのリソソーム蓄積障害に関連するタンパク質をコードする導入遺伝子を含む。

【0155】

本明細書に記載のＡＡＶは、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）における１つ以上の病理学的特徴を改善するのに十分な量で投与され得る。本明細書に記載のＡＡＶの投与は、対象の認知能力を改善し、前頭皮質における導入遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を回復させ（例えば、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約７ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約６ｎｇ／ｍｇ、または約５ｎｇ／ｍｇ）、またはそれを超える（例えば、約９ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約６０ｎｇ／ｍｇ、約７０ｎｇ／ｍｇ、約８０ｎｇ／ｍｇ、約９０ｎｇ／ｍｇ、または約１００ｎｇ／ｍｇ））、対象の運動機能を改善し、α－シヌクレインタンパク質レベル、タウ陽性神経細胞封入物レベル、及び／または対象の脳組織におけるＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）陽性封入物レベルを低減させ得る。認知及び運動機能は、治療前及び治療後の標準的な神経学的試験を使用して評価され得、タンパク質レベル（例えば、ＰＧＲＮ）は、ＥＬＩＳＡを使用して、血漿及び脳脊髄液（ＣＳＦ）中で検出され得る。神経変性は、Ｆ１８－フルオロデオキシグルコースＰＥＴスキャンまたはＭＲＩスキャンを使用して評価され得る。患者は、ＡＡＶの投与の１か月後、２か月後、３か月後、４か月後、５か月後、６か月後以上に評価され得る。評価の結果に応じて、患者は追加の治療を受けてもよい。

【0156】

医薬組成物
本明細書に記載のＡＡＶは、インビボでの投与に好適な生物学的に適合する形態で、神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を呈するか、またはそのリスクがあるヒト患者などの患者に投与するための医薬組成物に製剤化され得る。例えば、本明細書に記載のＰＧＲＮをコードする１つ以上の導入遺伝子を含むＡＡＶを含有する医薬組成物は、典型的には、薬学的に許容される希釈剤または担体を含む。医薬組成物は、例えば、滅菌生理食塩水溶液及び核酸を含み得る（例えば、それらからなる）。滅菌生理食塩水は、典型的には、医薬品グレードの生理食塩水である。医薬組成物は、例えば、滅菌水及び核酸を含み得る（例えば、それらからなる）。滅菌水は、典型的には、医薬品グレードの水である。医薬組成物は、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）及び核酸を含み得る（例えば、それらからなる）。滅菌ＰＢＳは、典型的には、医薬品グレードのＰＢＳである。

【0157】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の組成物または核酸分子と、１つ以上の賦形剤と、を含む。ある特定の実施形態では、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンから選択される。

【0158】

ある特定の実施形態では、核酸分子は、医薬組成物または製剤の調製のために、薬学的に許容される活性物質及び／または不活性物質と混合され得る。組成物及び医薬組成物を製剤化するための方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される用量を含むがこれらに限定されない、いくつかの基準に依存する。

【0159】

ある特定の実施形態では、核酸分子を含む医薬組成物は、阻害剤の任意の薬学的に許容される塩、阻害剤のエステル、またはそのようなエステルの塩を包含する。ある特定の実施形態では、核酸分子を含む医薬組成物は、対象（例えば、ヒト）に投与されると、生物学的に活性な代謝産物またはその残渣を（直接的にまたは間接的に）もたらすことが可能である。したがって、例えば、本開示はまた、阻害剤の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、及び他の生物学的等価物にも引き出される。好適な薬学的に許容される塩には、ナトリウム及びカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、プロドラッグは、核酸分子に結合した１つ以上のコンジュゲート基を含み、コンジュゲート基は、体内の内因性ヌクレアーゼによって切断される。

【0160】

脂質部分は、核酸療法に様々な方法で使用されてきた。ある特定のそのような方法では、核酸は、カチオン性脂質及び中性脂質の混合物で作られた予め形成されたリポソームまたはリポプレックスに導入される。ある特定の方法では、モノまたはポリカチオン性脂質とのＤＮＡ複合体は、中性脂質の存在なしで形成される。ある特定の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞または組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態では、脂質部分は、脂肪組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態では、脂質部分は、筋肉組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。

【0161】

特定の実施形態では、医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例としては、リポソーム及びエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の送達系は、疎水性化合物を含むものを含む特定の医薬組成物を調製するのに有用である。ある特定の実施形態では、ジメチルスルホキシドなどのある特定の有機溶媒が使用される。

【0162】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、本発明の１つ以上の医薬品を特定の組織または細胞型に送達するように設計された１つ以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある特定の実施形態では、医薬組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。

【0163】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、共溶媒系を含む。そのような共溶媒系の確信には、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、及び水相が含まれる。ある特定の実施形態では、そのような共溶媒系は、疎水性化合物に使用される。そのような共溶媒系の非限定的な例は、ＶＰＤ共溶媒系であり、これは、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤ポリソルベート８０（商標）、及び６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００を含む無水エタノールの溶液である。そのような共溶媒系の割合は、それらの溶解性及び毒性特性を著しく変えることなく大幅に変化され得る。更に、共溶媒構成要素の同一性は、変化する場合もあり、例えば、ポリソルベート８０（商標）の代わりに他の界面活性剤が使用されてもよく、ポリエチレングリコールの分割量が変化されてもよく、他の生体適合性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンが、ポリエチレングリコールに置き換わってもよく、他の糖またはポリサッカライドがデキストロースと置換されてよい。

【0164】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、視床内投与のために調製される。そのような実施形態では、医薬組成物は、担体を含み得、水またはハンクス溶液、リンガー溶液、または生理学的生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液などの水溶液中で製剤化される。いくつかの実施形態では、他の成分（例えば、溶解性を助けるか、または防腐剤として機能する成分）が含まれる。いくつかの実施形態では、注射可能な懸濁液は、適切な液体担体、懸濁化剤などを使用して調製される。ある特定の注射用医薬組成物は、単位剤形として、例えば、アンプル中または複数用量容器中で提供される。ある特定の注射用医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンであり、懸濁化剤、安定化剤、及び／または分散剤などの製剤化剤を含有し得る。注射用医薬組成物における使用に好適なある特定の溶媒には、ゴマ油などの親油性溶媒及び脂肪油、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、ならびにリポソームが含まれるが、これらに限定されない。

【0165】

有効性の監視
臨床有効性は、他の方法の中でとりわけ、バイオマーカーを使用して監視され得る。有効性を監視するための測定可能なバイオマーカーとしては、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の身体症状のうちの１つ以上を監視することを含むが、これらに限定されない。これらには、振戦、筋肉の痙攣または筋力低下（例えば、腕、脚、首または横隔膜に影響を与える）、こわばり（例えば、こわばった筋肉）、調整及び／またはバランスの不良、咀嚼または嚥下の困難、劇的な過食による体重増加、こわばった筋肉、歩行時にすり足及び引きずる足、椅子から立つまたは椅子に座るのに問題がある、疲労、膀胱を制御するのに問題がある、発作、制御不能な収縮（例えば、腕、脚、肩、または舌の線維束性攣縮）、動作緩慢、姿勢の低下、自動運動の喪失、発話の変化、書き方の変化、身体機能の調節不良（例えば、自律神経系）、睡眠障害、不器用、つまずき、不明瞭な発話、または筋肉の消耗が含まれ得る。１つ以上の症状の安定化、改善、及び／または逆転の観察は、治療または予防レジームが有効であることを示す。１つ以上の症状の進行、増加、または増悪の観察は、治療または予防レジームが有効でないことを示す。神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の治療を評価するための好ましいバイオマーカーは、ＰＧＲＮのレベルである。このマーカーは、好ましくはタンパク質レベルで評価されるが、ＰＧＲＮをコードするｍＲＮＡの測定をまた、ＰＧＲＮ発現のサロゲート測定として使用することもできる。そのようなレベルは、血液試料中で測定され得る。そのようなレベルは、疾患のない個体の対照集団に対して、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有する対象において低減する（例えば、患者は、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベルを示す）。したがって、レベルの増加は、好ましい治療応答の指示を提供し、一方、変化していないか、または減少しているレベルは、好ましくないか、または少なくとも最適でない治療応答の指示を提供する。

【0166】

ある特定の実施形態では、監視方法は、本明細書に記載のＡＡＶの投薬量を投与する前に、対象における測定可能なバイオマーカーまたは疾患パラメータのベースライン値を決定すること、及び治療経過後の同じ測定可能なバイオマーカーまたはパラメータの値と比較することを必然的に伴い得る。

【0167】

他の方法では、測定可能なバイオマーカーまたはパラメータの対照値（すなわち、平均値及び標準偏差）は、対照集団に対して決定される。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与前に、患者は、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しない同じ年齢、性別、及び／または体格指数のヒト対象において観察された内因性ＰＧＲＮ発現のレベルの約１％～約４０％である内因性ＰＧＲＮの発現のレベルを示す。ある特定の実施形態では、対照集団の個体は、事前の治療を受けておらず、かつ神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有しておらず、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を発症するリスクがない。そのような場合、測定可能なバイオマーカーまたは臨床パラメータの値が対照値に近づく場合、したがって、治療は有効であるとみなされる。他の実施形態では、対照集団の個体は、事前の治療を受けておらず、かつ神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）と診断されている。このような場合、測定可能なバイオマーカーまたは臨床パラメータの値が対照値に近づく場合、したがって、治療は効果がないとみなされる。

【0168】

他の方法では、現在治療を受けていないが、以前の治療過程を受けたことがある対象は、治療の再開が必要かどうかを決定するために、バイオマーカーまたは臨床パラメータのうちの１つ以上について監視される。対象におけるバイオマーカーまたは臨床パラメータのうちの１つ以上の測定値は、以前の治療経過後に対象において以前に達成された値と比較され得る。代替的には、対象における測定値は、治療の経過を受けた後の対象の集団において決定された対照値（平均プラス標準偏差）と比較され得る。代替的には、対象における測定値は、疾患の症状がないままである予防的に処置された対象の集団、または疾患特性の改善を示す治療的に処置された対象の集団における対照値と比較され得る。そのような場合、測定可能なバイオマーカーまたは臨床パラメータの値が対照値に近づく場合、したがって、治療は有効であるとみなされ、再開する必要はない。これらの場合の全てにおいて、対照レベルに対して有意な差（すなわち、標準偏差を超える）は、対象において治療が再開される必要があることの指標である。

【0169】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、ＡＡＶベクターの投与前に得られた患者のＰＧＲＮ発現レベルの測定に対して、ＰＧＲＮ発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮ発現の増加は、患者の視床、前頭皮質、大脳基底核、頭頂皮質、側頭皮質、頭頂及び側頭皮質、及び／またはＣＳＦにおいて観察される。

【0170】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２ｎｇ／ｍｇ～約１００ ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約９９ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約９８ｎｇ／ｍｇ、５ｎｇ／ｍｇ～約９７ｎｇ／ｍｇ、１０ｎｇ／ｍｇ～約９０ｎｇ／ｍｇ、２０ｎｇ／ｍｇ～約８０ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ～約７０ｎｇ／ｍｇ、４０ｎｇ／ｍｇ～約６０ｎｇ／ｍｇ、または約５０ｎｇ／ｍｇ）のＰＧＲＮ発現のレベルを示す。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３ｎｇ／ｍｇ～約９９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４ｎｇ／ｍｇ～約９８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５ｎｇ／ｍｇ～約９７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１０ｎｇ／ｍｇ～約９０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２０ｎｇ／ｍｇ～約８０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３０ｎｇ／ｍｇ～約７０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４０ｎｇ／ｍｇ～約６０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。

【0171】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約２９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約３９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約４９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約５９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約６９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約７９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、
前頭皮質において、約８７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約８９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９０ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９１ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９２ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９３ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９４ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９５ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９６ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９７ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９９ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約９８ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質において、約１００ｎｇ／ｍｇのＰＧＲＮ発現のレベルを示す。

【0172】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質においてＰＧＲＮ発現レベルを示し、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球、約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球、または約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球）の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質においてＰＧＲＮ発現レベルを示し、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約５×１０^９ｖｇ／半球～約１×１０^１２ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質においてＰＧＲＮ発現レベルを示し、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、前頭皮質においてＰＧＲＮ発現レベルを示し、そのレベルは、配列番号６の核酸配列を有するＡＡＶ２／９ベクターの約５×１０^１０ｖｇ／半球～約１×１０^１１ｖｇ／半球の量での視床内投与後に、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有するヒト対象において観察されたＰＧＲＮ発現のレベルと同等である。

【0173】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターのＩＴＭ投与後、患者は、１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）において、約１０％未満（例えば、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満、０％など）の増加など、ＰＧＲＮの発現の顕著な増加を示さない。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約９％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約８％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約７％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約６％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約５％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約４％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約３％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約２％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、約１％未満の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの投与後、患者は、０％の１つ以上（例えば、２、３、４個、またはそれを超える）の末梢組織（例えば、肝臓、肺、及び脾臓）におけるＰＧＲＮの発現の増加を示す

【0174】

いくつかの実施形態では、末梢組織は、肝臓、肺、及び脾臓を含むが、これらに限定されない。

【0175】

いくつかの実施形態では、ＰＧＲＮの発現は、ＧＡＰＤＨの発現に対して測定される。

【0176】

キット
本明細書に記載の組成物は、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の治療における使用のためのキットにおいて提供され得る。いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の本明細書に記載のＡＡＶを含み得る。キットは、本明細書に記載の方法のうちのいずれか１つを実施するために当該技術分野の医師などのキットの使用者に指示する添付文書を含み得る。キットは、任意選択で、組成物を投与するための注射器または他のデバイスを含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の追加の治療剤を含み得る。

【実施例】

【0177】

以下の実施例は、本明細書に記載される組成物及び方法をどのように使用し、評価し得るかについての説明を当業者に提供するために提示され、本発明の純粋な例示であることが意図されるものであり、本発明者らが発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。

【0178】

実施例１．プログラニュリンの有効な皮質発現のためのコドン最適化されたヒトプログラニュリン構築物の開発
ヒトプログラニュリン（ｈＰＧＲＮ）の有効なタンパク質発現のためのＧＲＮ遺伝子のコドン最適化
イントロンＤＮＡを除くヒトＧＲＮ遺伝子配列は、以下のとおりである：
ＡＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＴＣＣＣＴＡＧＡＡＡＴＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＧＴＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＣＡＴＴＣＣＡＧＧＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＣＴＣＴＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＧＴＡＧＣＣＡＡＴＧＧＧＡＧＣＧＧＧＴＡＧＣＣＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＡＡＣＴＧＡＧＧＴＡＧＧＣＧＧＧＴＣＡＴＣＧＣＧＣＴＧＧＧＧＴＣＴＧＴＡＧＴＣＴＧＡＧＣＧＣＴＡＣＣＣＧＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡＧＴＣＧＧＡＣＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＣＡＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＴＣＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＡＡＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＧＧＣＣＡＣＴＣＣＴＧＣＡＴＣＴＴＴＡＣＣＧＴＣＴＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＧＧＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＣＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＧＣＧＡＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＧＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＴＣＡＧＴＴＣＧＡＡＴＧＣＣＣＧＧＡＣＴＴＣＴＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＴＧＴＴＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＧＣＡＣＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＡＣＣＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＧＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＧＧＴＣＡＴＧＴＧＴＣＣＧＧＡＣＧＣＡＣＧＧＴＣＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＧＴＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＴＧＣＣＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＧＴＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＡＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＣＴＡＣＣＡＣＧＧＡＣＣＴＣＣＴＣＡＣＴＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＡＡＡＴＧＴＧＡＣＡＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＧＣＧＧＧＧＴＴＴＡＣＧＴＧＴＧＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＧＧＧＧＣＣＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＴＧＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＣＴＣＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＧＴＧＴＡＧＣＴＧＡＧＧＧＧＣＡＧＴＧＴＣＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＧＧＧＣＴＴＣＣＴＴＡＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＧＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＧＡＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＣＣＧＴＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＧＡＣＡＡＣＣＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＧＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＣＣＧＣＴＧＣＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＧＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＴＴＴＧＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＡＣＴＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＣＣＣＡＣＴＣＧＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＧＧＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＡＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＡＴＴＣＴＧＡＧＣＴＣＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＡＴＣＴＡＡＧＧＣＣＴＴＣＣＣＴＧＴＣＡＧＡＡＧＧＧＧＧＴＴＧＴＧＧＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＡＴＴＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＧＧＴＧＣＴＴＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＡＣＡＧＧＧＧＴＧＴＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＴＴＴＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＴＧＴＡＣＡＣＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ （配列番号１０）。

【0179】

ヒトＰＧＲＮアミノ酸配列は、以下のとおりである：
ＭＷＴＬＶＳＷＶＡＬＴＡＧＬＶＡＧＴＲＣＰＤＧＱＦＣＰＶＡＣＣＬＤＰＧＧＡＳＹＳＣＣＲＰＬＬＤＫＷＰＴＴＬＳＲＨＬＧＧＰＣＱＶＤＡＨＣＳＡＧＨＳＣＩＦＴＶＳＧＴＳＳＣＣＰＦＰＥＡＶＡＣＧＤＧＨＨＣＣＰＲＧＦＨＣＳＡＤＧＲＳＣＦＱＲＳＧＮＮＳＶＧＡＩＱＣＰＤＳＱＦＥＣＰＤＦＳＴＣＣＶＭＶＤＧＳＷＧＣＣＰＭＰＱＡＳＣＣＥＤＲＶＨＣＣＰＨＧＡＦＣＤＬＶＨＴＲＣＩＴＰＴＧＴＨＰＬＡＫＫＬＰＡＱＲＴＮＲＡＶＡＬＳＳＳＶＭＣＰＤＡＲＳＲＣＰＤＧＳＴＣＣＥＬＰＳＧＫＹＧＣＣＰＭＰＮＡＴＣＣＳＤＨＬＨＣＣＰＱＤＴＶＣＤＬＩＱＳＫＣＬＳＫＥＮＡＴＴＤＬＬＴＫＬＰＡＨＴＶＧＤＶＫＣＤＭＥＶＳＣＰＤＧＹＴＣＣＲＬＱＳＧＡＷＧＣＣＰＦＴＱＡＶＣＣＥＤＨＩＨＣＣＰＡＧＦＴＣＤＴＱＫＧＴＣＥＱＧＰＨＱＶＰＷＭＥＫＡＰＡＨＬＳＬＰＤＰＱＡＬＫＲＤＶＰＣＤＮＶＳＳＣＰＳＳＤＴＣＣＱＬＴＳＧＥＷＧＣＣＰＩＰＥＡＶＣＣＳＤＨＱＨＣＣＰＱＧＹＴＣＶＡＥＧＱＣＱＲＧＳＥＩＶＡＧＬＥＫＭＰＡＲＲＡＳＬＳＨＰＲＤＩＧＣＤＱＨＴＳＣＰＶＧＱＴＣＣＰＳＬＧＧＳＷＡＣＣＱＬＰＨＡＶＣＣＥＤＲＱＨＣＣＰＡＧＹＴＣＮＶＫＡＲＳＣＥＫＥＶＶＳＡＱＰＡＴＦＬＡＲＳＰＨＶＧＶＫＤＶＥＣＧＥＧＨＦＣＨＤＮＱＴＣＣＲＤＮＲＱＧＷＡＣＣＰＹＲＱＧＶＣＣＡＤＲＲＨＣＣＰＡＧＦＲＣＡＡＲＧＴＫＣＬＲＲＥＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ （配列番号２）。

【0180】

配列番号１０の分析により、遺伝子全体を通して様々なアミノ酸についての特定のコドンの優先傾向が明らかになる。コドン頻度の調査により、ある特定のアミノ酸については、特定のコドンが主であり、一方、他のコドンはそれほど頻繁に使用されないか、または全く使用されないことが明らかになる。当業者は、例えば、米国特許第７，５６１，９７２号、同第７，５６１，９７３号、及び同第７，８８８，１１２号などに記載されているものなどの方法など、当該技術分野で既知の任意の方法でコドン最適化を実施することができ、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0181】

最終的なコドン最適化された遺伝子は、配列番号３の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を示し得る。例えば、最終的なコドン最適化された遺伝子は、配列番号３の核酸配列に対して少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示し得る。別の例では、最終的なコドン最適化された遺伝子は、配列番号３の核酸配列と同一である核酸配列を有し得る。

【0182】

設計されると、最終的なコドン最適化された遺伝子は、例えば、当該技術分野で既知の固相核酸手順によって調製され得る。ポリヌクレオチドの固相合成技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許第５，５４１，３０７号に記載されており、その開示は、固相ポリヌクレオチドの合成及び精製に関する場合、参照により本明細書に組み込まれる。更に、調製された遺伝子は、例えば、当該技術分野で既知のＰＣＲに基づく技術を使用して、及び／または設計された遺伝子を含有するプラスミドを用いたＤＨ５α Ｅ．ｃｏｌｉの形質転換によって増幅され得る。細菌は、その後、その中のＤＮＡを増幅するために培養され得、遺伝子は、当該技術分野で既知のプラスミド精製技術によって単離され得、任意選択で、続いて、同一性コドン最適化遺伝子を検証するために、プラスミドの制限消化及び／または配列決定が行われ得る。

【0183】

コドン最適化されたヒトＰＧＲＮ構築物
ＰＣＲプライマーは、培養細胞から単離されたゲノムＤＮＡからのＧＲＮ核酸配列に結合し、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅するように設計された。上記のコドン最適化方法を使用して、単離されたＧＲＮを部位指向変異誘発によって修飾した。得られた修飾された増幅産物をゲル精製し、当該技術分野で既知の方法によって配列決定した。

【0184】

偽型アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）２／９（ＡＡＶ２／９）親ベクターを、コドン最適化されたヒトＰＧＲＮ（ｈＰＧＲＮ）の目的ベクターとして使用した。親ベクターは、以下の構成要素を有する核酸分子を含有する：第１のＡＡＶ２逆位末端反復、ヒトシナプシン（ｈＳｙｎ）プロモーター、ヒト成長ホルモンイントロン（ｈＧＨｉ３）、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化部位（ｐＡ）、第２のＡＡＶ２ ＩＴＲ（ＩＴＲ２）、ファージ由来の複製起点（ｆ１ ｏｒｉ）、ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ａｍｐＣ β－ラクタマーゼ（ＡｍｐＲ）プロモーター、カナマイシン選択遺伝子（ＫａｎＲ）、及び第２の複製起点（ｏｒｉ）。コドン最適化されたｈＰＧＲＮを親ベクターにクローニングした（図１、本明細書では「ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ」と称される）。

【0185】

実施例２．毒性副作用を回避しながら、皮質におけるｈＰＧＲＮの治療的発現を確立すること
目的
この研究の目的は、皮質におけるＰＧＲＮの救出された発現について、成体ヒツジにおける実施例１に記載のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの全身毒性及び／または発現とともに、順行性及び／または逆行性の輸送を評価することであった。更に、この研究は、皮質脳組織におけるＰＧＲＮの超生理学的レベルによって特定されるＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの有効な投与範囲を洗練するように設計された。

【0186】

材料及び方法
成体（約２歳）の野生型ヒツジ（ｎ＝２／用量）に、１×１０^１０ｖｇ／半球（本明細書では「低用量」と称される）、５×１０^１０ｖｇ／半球（本明細書では「中用量」と称される）、または１×１０^１１ｖｇ／半球（本明細書では「高用量」と称される）のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ（２５０μＬ／視床）を、それぞれ約９０分にわたって視床内（ＩＴＭ）注入（例えば、対流補助投与）した。ＩＴＭ投与の２８日後、動物を屠殺し、脳生検を収集した。脳、脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び血清を、ｈＰＧＲＮタンパク質発現及びｖｇレベルについて分析し、一方、脳の免疫蛍光画像化を実施して、ウイルスベクターに対するｈＰＧＲＮ発現及び潜在的な炎症応答（例えば、炎症マーカーの発現）を評価した。

【0187】

結果
結果として、視床に注入された本明細書に記載のベクター調製物は、低用量でさえも皮質において正常から超生理学的レベルのｈＰＧＲＮで、効果的に皮質を形質導入したことが観察された（図２）。更に、全ての脳領域においてｈＰＧＲＮレベルの用量依存的増加及び高い動物対動物の一貫性が観察された（図３）。この効果は、全てのヒツジの前頭前（ＰＦ）皮質全体にわたって観察され、ＩＢＡ１の発現レベルによって測定される、反応性ミクログリアの証拠は観察されなかった（図４）。皮質領域（例えば、前頭Ａ皮質（皮質の前部から採取された冠状スライス）、前頭Ｂ皮質（皮質の後部から採取された冠状スライス）、尾状核被殻／頭頂側頭部（ＣＤ／ＰＴ）皮質）、大脳基底核（例えば、尾状核及び被殻）、視床、及び海馬にわたる用量発現応答の評価において、試験された最も低い用量でさえ、基底レベルを上回るｈＰＧＲＮタンパク質発現を上昇させたことが観察された（図５及び６）。更に、このデータを視床におけるｈＰＧＲＮ発現の割合に対して正規化すると、低用量は、皮質への相対的なｈＰＧＲＮ送達がより大きくなる傾向があることが観察された（図７）。ＣＳＦでは、中用量及び高用量は、ｈＰＧＲＮレベルを上昇させ、１０～３０ｎｇ／ｍｌの範囲で超生理学的ヒトＣＳＦ ＰＧＲＮレベルを達成し、修復効果を示した（図８）。当該それぞれのヒツジの血清中に、ｈＰＧＲＮの検出可能な発現は観察されなかった（図９）。組織病理学に対処する研究では、ヘマトキシリン及びエオシン染色により、全ての動物が、用量投与中に引き起こされた損傷と一致して、脳白質及び／または視床に片側または両側の局所炎症性病変を示したことが明らかとなった。ｈＰＧＲＮ発現の部位に特異的な組織病理学的変化の証拠はなかった（図１０）。グリオーシスは、いくつかの動物において観察されたが、その最小限の局所的性質、及び異なる領域における白質及び灰白質の両方における散発的な発生を考慮して、ｈＰＧＲＮの発現とは無関係であると考えられた。これは、投与及び／または自発的なバックグラウンド変化にも関連していた可能性が高い。まとめると、これらのデータは、全ての用量レベルで、ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮが効果的に皮質を形質導入し、ＡＡＶベクターに対する免疫学的応答を誘発することなく、皮質ｈＰＧＲＮ発現レベルの上昇を媒介したことを実証した。

【0188】

実施例３．皮質におけるｈＰＧＲＮの投与効率の確立
目的
この研究の目的は、成体ヒツジにおけるＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮのＩＴＭ投与による皮質形質導入の効率を調査することであった。

【0189】

材料及び方法
材料及び方法は、実施例１及び２に記載される。

【0190】

結果
図１１は、それぞれ、低用量、中用量、または高用量でＩＴＭ投与された野生型ヒツジにおける脳領域にわたる、ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの定量されたｖｇ／μｇによって正規化されたｈＰＧＲＮの発現レベル（図３）を示す。低用量が、概して、ｈＰＧＲＮを皮質に送達することにおいてより効率的であることが観察された。

【0191】

実施例４．中央投与経路にわたる皮質におけるｈＰＧＲＮ形質導入の効率の比較
目的
この研究の目的は、成体ヒツジにおけるｈＰＧＲＮ導入遺伝子をコードするウイルスベクターのＩＴＭまたは大槽内（ＩＣＭ）投与による皮質形質導入の効率を比較することであった。

【0192】

材料及び方法
成体（約２歳）の野生型ヒツジ（それぞれ、ｎ＝２／用量または２／ベクター）に、それぞれ、１×１０^１０（約９０分にわたって２５０μＬ／視床）ｖｇ／半球のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮまたはサイトメガロウイルスエンハンサーを有するニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢ７、それぞれＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ及びＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮ）に動作可能に連結されたｈＰＧＲＮ導入遺伝子をコードするＡＡＶ１もしくはＡＡＶ９または対照オムニパークをＩＴＭ注入（例えば、対流補助投与）するか、あるいは１×１０^１３ｖｇ（ＣＳＦ交換で約１分にわたって２ｍＬ）の上記ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮまたはＡＡＶ１もしくはＡＡＶ９または対照オムニパークをＩＣＭ注入した。脳由来の領域を生検し、ｈＰＧＲＮタンパク質発現及びｖｇレベルについて分析し、一方、脳の免疫蛍光画像化を実施して、ｈＰＧＲＮ発現を評価した。

【0193】

結果
ｈＰＧＲＮについての小脳切片の初期評価は、ＩＣＭ投与が成功したことを裏付ける（図１２）。全ての動物は、小脳においてｈＰＧＲＮを示したが、差異が観察された。ＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮは、強力で表面的でほぼ排他的にグリア染色を示した。ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ及びＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮの両方は、ｈＰＧＲＮの小脳組織へのより良い浸透を示し、ＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮは、グリア細胞においてより広まっており、ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮは、ニューロンにおいてより広まっていた。ＰＦ皮質及び視床において、ＩＣＭ投与は、どのＡＡＶベクターを使用したかにかかわらず、ほとんど発現を媒介しなかった（図１３）。対照的に、この比較研究は、ＩＴＭ投与がＰＦ皮質におけるｈＰＧＲＮの強力な発現を媒介することを強調した。ＩＣＭ投与と比較して、ＩＴＭ投与が増強された形質導入をもたらしたという点で、脳領域にわたって同様の結果を得た（図１４）。

【0194】

ｈＰＧＲＮタンパク質発現のレベルの評価において、同様のパターンの結果が観察された。具体的には、ＩＣＭ処置されたヒツジの皮質及び皮質下において検出されたレベルは、対照（未処置ヒツジ）において検出されたバックグラウンドレベル内であったが、５×１０^１０ｖｇ／半球のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮをＩＴＭ注入されたヒツジは、ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮまたはＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮまたはＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮベクターをＩＣＭ投与されたヒツジと比較して、ｈＰＧＲＮのよりも高い皮質レベルを示した（図１５～１８）。ＩＣＭ注入された動物の皮質では、ＩＣＭ処置されたヒツジの視床及び頭頂／側頭皮質において検出されたｈＰＧＲＮの小さいポケットに範囲が及ぶ、無視できるｈＰＧＲＮレベルを観察した。

【0195】

まとめると、これらの結果は、ＩＣＭ投与は、皮質の不良な形質導入をもたらすが、一方で、ＩＴＭ投与は、優れた皮質形質導入を達成することを示す。

【0196】

実施例５．成体ヒツジにおけるｈＰＧＲＮ導入遺伝子をコードするウイルスベクターのＩＴＭ投与を介したＡＡＶ送達後の末梢組織と比較した皮質組織におけるｈＰＧＲＮの組織発現の評価
目的
この研究の目的は、成体ヒツジにおけるｈＰＧＲＮ導入遺伝子をコードするウイルスベクターのＩＴＭ投与後、末梢組織（例えば、肝臓、脾臓、及び肺）と比較して、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるｈＰＧＲＮ発現を評価することであった。

【0197】

材料及び方法
成体（約２歳）の野生型ヒツジ（それぞれｎ＝２／用量または２／ベクター、及び１匹の対照ヒツジ）に、それぞれ、１×１０^１０、５×１０^１０、または１×１０^１１（約９０分にわたって２５０μＬ／視床）ｖｇ／半球のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮ、またはサイトメガロウイルスエンハンサーを有するニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢ７、それぞれＡＡＶ１－ＣＢ７－ＰＧＲＮ及びＡＡＶ９－ＣＢ７－ＰＧＲＮ）に動作可能に連結されたｈＰＧＲＮ導入遺伝子をコードするＡＡＶ１もしくはＡＡＶ９、または対照オムニパークをＩＴＭ注入（例えば、対流補助投与）した。脳、肝臓、脾臓、及び肺由来の領域を生検し、ｈＰＧＲＮタンパク質発現及びｖｇレベルについて分析し、一方、脳、肝臓、脾臓、及び肺の免疫蛍光画像化を実施して、ｈＰＧＲＮ発現を評価した。

【0198】

結果
実施例４で論述されるように、ｈＰＧＲＮ導入遺伝子をコードするＡＡＶ９ベクターのＩＴＭ投与は、視床、前頭皮質、頭頂／側頭皮質、後頭皮質、被殻、尾状核、海馬、及び左右の半球からの血清を含む、脳におけるｈＰＧＲＮの強力な発現を媒介した。ｈＰＧＲＮタンパク質発現のレベルの評価において、（ウイルスＤＮＡによって評価される）ｈＰＧＲＮの有意な発現は、肝臓（図２１）、肺、及び脾臓を含む末梢組織において観察されなかった。

【0199】

特に、同様の結果がカニクイザルにおいて得られている（例えば、図２２及び２３を参照されたい）。

【0200】

まとめると、これらの結果は、このベクターのＩＴＭ投与がｈＰＧＲＮのＣＮＳ特異的発現を達成することを示す。

【0201】

実施例６．前頭側頭型認知症モデルにおけるリポフスチン症に対するコドン最適化されたヒトＰＧＲＮの有効性
目的
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、大脳皮質の前頭葉及び側頭葉における進行性神経変性によって特徴付けられる臨床症候群である。ＧＲＮ遺伝子における７０個超の機能喪失変異がＦＴＤにおいて特定されており、その大部分は、ハプロ不全及び血清ＰＧＲＮレベルの低減をもたらす。

【0202】

この研究の目的は、早期疾患（例えば、ＦＴＤ）のマウスモデルにおけるＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの有効性を実証することであった。

【0203】

材料及び方法
前頭側頭型認知症マウスモデル
ＧＲＮの欠失についてのホモ接合マウス（例えば、ＧＲＮ^－／－マウス）を、ＦＴＤのモデルとして使用した。６～８週齢で、実施例１に記載のように、マウスにＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮを注入し、ウイルス発現のために１２週を許容した。

【0204】

免疫蛍光
生検された脳組織を１０％ホルマリンで一晩固定し、次いで、７０％エタノールで保存した。組織をパラフィンに包埋し、５μｍの切片に切断した。

【0205】

免疫蛍光分析のために、組織を透過化し、スライドを洗浄し、５％ウサギ血清で３０分間ブロッキングした。切片を、それぞれ、抗ｈＰＧＲＮ、抗Ｉｂａ１、抗ＣＤ６８、及び抗サブユニットＣミトコンドリアＡＴＰ合成酵素（ＳＣＭＡＳ）の一次抗体とともに、室温で１時間インキュベーションした。スライドを二次抗体とともに３０分間インキュベーションした。評価には、ＳＣＭＡＳ免疫反応性の詳細な定量が含まれる。

【0206】

結果
結果として、反応性ミクログリア（例えば、ＣＤ６８及びＩＢＡ１陽性、アメーバ型細胞）標識がｈＰＧＲＮレベルと相関していることが観察された。図１９は、リポフスチンのＳＣＭＡＳ標識が、低レベルのｈＰＧＲＮ発現の領域でさえも低減することを示す。この傾向は、ＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮの全ての用量にわたって明らかであり、局所発現（例えば、視床におけるｈＰＧＲＮ陽性発現）と相関した。定量すると、低用量のＡＡＶ９－ＳＹＮ－ＰＧＲＮが、ＳＣＭＡＳ免疫反応性によって検出される、リポフスチン症を有意に改善することが明らかとなった（図２０）。まとめると、これらの結果は、コドン最適化されたｈＰＧＲＮをコードする例示的なＡＡＶ２／９プラスミドの有効性がＦＴＤのマウスモデルのＰＦ皮質、海馬、及び視床におけるリポフスチン症を改善したことを実証している。

【0207】

実施例７．神経認知障害または神経筋障害の治療のためのコドン最適化されたＧＲＮ遺伝子の使用
ＰＧＲＮをコードする遺伝子は、本明細書に記載の手順を使用して（例えば、上記の実施例１に記載されるように）コドン最適化され得る。例えば、最終的なコドン最適化されたＧＲＮ遺伝子は、配列番号３の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を示し得る。例えば、最終的なコドン最適化されたＧＲＮ遺伝子は、配列番号３の核酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示し得る。別の例では、最終的なコドン最適化された遺伝子は、配列番号３の核酸配列と同一である核酸配列を有し得る。

【0208】

遺伝子は、その後、ＡＡＶ２／９ベクターなどのプラスミドに組み込まれ得、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性疾患）に罹患する患者に投与され得る。例えば、ＦＴＤ、ＧＲＮ遺伝子における変異に関連する障害、またはＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害に罹患している患者は、ニューロンなどのヒト細胞における発現のための好適なプロモーターの制御下で、コドン最適化されたＧＲＮ遺伝子を含有するＡＡＶ２／９ベクターを投与され得る。例えば、ベクターの５’及び３’逆位末端反復の間にコドン最適化されたＧＲＮ遺伝子を組み込むＡＡＶ２／９ベクターなどのＡＡＶベクターが生成され得、遺伝子は、シナプシン（Ｓｙｎ）プロモーターなどのニューロン特異的プロモーターの制御下に置かれ得る。ＡＡＶベクターは、対象にＩＴＭ投与され得る。

【0209】

当業者は、様々な方法によって、コドン最適化されたＧＲＮ遺伝子の発現を監視し得る。例えば、当業者は、患者のニューロンにおけるコドン最適化された遺伝子の発現をモデル化するために、培養ニューロンをコドン最適化された遺伝子でトランスフェクションし得る。コードタンパク質の発現は、その後、例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡ－Ｓｅｑ、ＥＬＩＳＡ、または免疫ブロット手順などの本明細書に記載の発現アッセイを使用して監視され得る。遺伝子発現アッセイから得られるデータに基づいて、例えば、ｍＲＮＡ転写産物中のＣｐＧ含有量及びホモポリマー含有量を更に減少させるために、コドン最適化手順の更なる反復が実施され得る。インビトロで最適な発現パターンを有する候補遺伝子配列は、その後、好適なＡＡＶベクターへの組み込み、及び神経認知障害もしくは神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、もしくは関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）の動物モデルなどの哺乳動物対象、またはヒト患者への投与のために調製され得る。

【0210】

実施例８．ヒトＰＧＲＮの視床内投与によるヒト患者における神経認知障害または神経筋障害の治療
本開示の組成物及び方法を使用して、神経認知障害または神経筋障害（例えば、ＦＴＤ、ＡＤ、ＰＤ、レビー小体型認知症、関連する神経認知障害、ＡＬＳ、または関連する運動ニューロン障害などの神経変性障害）を有する患者は、ヒトＰＧＲＮをコードする核酸配列を含むＡＡＶ（例えば、偽型ＡＡＶ２／９）ベクターをＩＴＭ投与（例えば、対流補助投与）され得る。ヒトＰＧＲＮ配列は、コドン最適化され得、及び／またはＳｙｎプロモーター、例えば、配列番号６の核酸を有するＡＡＶベクターに動作可能に連結され得る。ＡＡＶは、例えば、約１×１０^９ｖｇ／半球～約９×１０^１２ｖｇ／半球（例えば、５×１０^９ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球、１×１０^１０ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球、１×１０^１１ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球、１×１０^１２ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球、または１×１０^１３ｖｇ／半球～約５×１０^１２ｖｇ／半球）の量で投与され得る。例えば、ＡＡＶベクターは、約１×１０^１０ｖｇ／半球、約５×１０^１０ｖｇ／半球、または約１×１０^１１ｖｇ／半球の量で患者に投与される。

【0211】

ｈＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与すると、患者はＰＧＲＮレベルの変化を示す。例えば、患者は、ｈＰＧＲＮをコードする核酸配列を含むＡＡＶベクターの患者への投与後、前頭皮質においてＰＧＲＮ発現の回復を示す。例えば、患者は、約２ｎｇ／ｍｇ～約８ｎｇ／ｍｇ（例えば、３ｎｇ／ｍｇ～約７ｎｇ／ｍｇ、４ｎｇ／ｍｇ～約６ｎｇ／ｍｇ、または約５ｎｇ／ｍｇ）、またはそれを超える（例えば、約９ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約６０ｎｇ／ｍｇ、約７０ｎｇ／ｍｇ、約８０ｎｇ／ｍｇ、約９０ｎｇ／ｍｇ、または約１００ｎｇ／ｍｇ）の前頭皮質におけるＰＧＲＮ発現のレベルを示す。加えて、または代替的に、例えば、ｈＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを患者に投与すると、患者は認知機能の改善を示す。

【0212】

他の実施形態
本明細書において言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が参照により本明細書に援用されることが具体的かつ個別に示される場合と同様に、参照により本明細書に援用される。

【0213】

特定の実施形態に関連して本発明を説明してきたが、本発明は、更なる変更が可能であり、本出願は、一般に、本発明の原理に従った本発明のあらゆる変形、使用、または適合を含むことが意図され、本発明が属する技術分野における既知のまたは慣習的な実施の範囲内であり、かつ本明細書に前述される本質的な特徴に適用され得る本発明からの逸脱を含み、特許請求の範囲の範囲に従うものであることが理解される。

【0214】

他の実施形態は、特許請求の範囲内である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【配列表】

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【国際調査報告】