(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-16
(54)【発明の名称】ポストバイオティクス
(51)【国際特許分類】
C12N 1/20 20060101AFI20240808BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20240808BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20240808BHJP
A61K 35/745 20150101ALI20240808BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240808BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240808BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240808BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20240808BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240808BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20240808BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240808BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240808BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20240808BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240808BHJP
A23L 33/135 20160101ALI20240808BHJP
【ＦＩ】
C12N1/20 A
A61K9/20
A61K9/48
A61K35/745
A61P1/04
A61P37/08
A61P17/00
A61P31/00
A61P35/00
A61P19/00
A61P9/10 101
A61P43/00 111
A61K9/14
A61P37/02
A23L33/135
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024508414
(86)(22)【出願日】2022-08-18
(85)【翻訳文提出日】2024-02-09
(86)【国際出願番号】 EP2022073082
(87)【国際公開番号】W WO2023021140
(87)【国際公開日】2023-02-23
(31)【優先権主張番号】21192228.1
(32)【優先日】2021-08-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】590002013
【氏名又は名称】ソシエテ・デ・プロデュイ・ネスレ・エス・アー
(74)【代理人】
【識別番号】100088155
【弁理士】
【氏名又は名称】長谷川 芳樹
(74)【代理人】
【識別番号】100140453
【弁理士】
【氏名又は名称】戸津 洋介
(74)【代理人】
【識別番号】100200540
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 祐子
(72)【発明者】
【氏名】ジョンソン， カーチャ
【テーマコード（参考）】
4B018
4B065
4C076
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B018LB10
4B018LE02
4B018MD86
4B018ME05
4B018ME07
4B018ME08
4B018ME14
4B018MF06
4B065AA21X
4B065AB10
4B065AC20
4B065BA30
4B065BB20
4B065BB40
4B065BC01
4B065BD10
4B065CA41
4B065CA44
4C076AA30
4C076AA36
4C076AA53
4C076BB01
4C076CC07
4C076CC16
4C076CC18
4C076CC27
4C076CC31
4C076FF01
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC59
4C087CA10
4C087MA35
4C087MA37
4C087MA43
4C087MA52
4C087NA14
4C087ZA66
4C087ZA68
4C087ZA96
4C087ZB07
4C087ZB13
4C087ZB32
4C087ZC41
(57)【要約】
本発明は、過剰活性免疫系障害を有する又は過剰活性免疫系障害のリスクがある対象の胃腸管における、抗炎症性サイトカインの発現の増強、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現の減少に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。本発明はまた、ＩＬ－１０介在性疾患を有する又はＩＬ－１０介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－１０の発現の増強に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。本発明はまた、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強することによる、ＩＬ－１０介在性疾患の治療又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供すする。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
過剰活性免疫系障害を有する又は過剰活性免疫系障害のリスクがある対象の胃腸管における、抗炎症性サイトカインの発現の増強、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現の減少に使用するのための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項2】
ＩＬ－１０介在性疾患を有する又はＩＬ－１０介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－１０の発現の増強に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項3】
対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強することによる、ＩＬ－１０介在性疾患の治療又は予防に使用するのための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項4】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０から選択され、好ましくは、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６である、請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項5】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、糖及び酵母エキス、並びに任意選択的にアスコルビン酸ナトリウム及び／又はポリソルベートを含む培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって得られる又は得ることができ、好ましくは、（ｉ）前記培養培地が、約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の糖を含み、
（ｉｉ）前記培養培地が、約１重量％～約１０重量％、又は約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の酵母エキスを含み、
（ｉｉｉ）前記培養培地が、約０重量％～約０．５重量％、又は約０．１重量％～約０．２重量％のアスコルビン酸ナトリウムを含み、かつ、
（ｉｖ）前記培養培地が、約０重量％～約１重量％、又は約０重量％～約０．３重量％のポリソルベートを含む、
請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項6】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスを、定常期に達するまで培養すること及び／又は嫌気性条件下で培養することによって得られる又は得ることができる、請求項１～請求項５のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項7】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、パスチャライズ及び／又は乾燥され、好ましくは前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥によって乾燥される、請求項１～請求項６のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項8】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、経口投与される、請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項9】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、サプリメント又は栄養組成物の形態であり、好ましくは前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、カプセル又はタブレットの形態である、請求項１～請求項８のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項10】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、（ｉ）全糖濃度の減少を有し、好ましくは、全糖濃度が少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％減少している、
（ｉｉ）全酸濃度の増加を有し、好ましくは、全酸濃度が、全糖の濃度減少の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％増加している、及び／又は、
（ｉｉｉ）全アミノ酸濃度の減少を有し、好ましくは、全アミノ酸濃度が少なくとも約０．１重量％、少なくとも約０．２重量％、又は少なくとも約０．３重量％減少している、
請求項１～請求項９のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項11】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、（ｉ）約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、若しくは約０．５重量％以下の全糖、（ｉｉ）約０．５重量％以上、約１重量％以上、約１．５重量％以上、若しくは約２重量％以上の全酸、及び／又は、（ｉｉｉ）約３．５重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．８重量％以下、若しくは約０．６重量％以下の全アミノ酸、を含む、請求項１～請求項１０のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項12】
前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと組み合わせて使用され、好ましくは前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、１つ以上のプロバイオティクスと組み合わせて使用され、より好ましくは前記ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスと組み合わせて使用される、請求項１～請求項１１のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項13】
前記対象が、ＩＬ－１０欠乏症を有する、又はＩＬ－１０欠乏症のリスクがある、請求項１～請求項１２のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項14】
前記ＩＬ－１０介在性疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アレルギー性疾患、皮膚炎、自己免疫疾患、感染に関連する免疫病理、結腸直腸がん、骨治癒不良、及びアテローム性動脈硬化症から選択される、請求項３～請求項１３のいずれか一項に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項15】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清であって、噴霧乾燥されている、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
【請求項16】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントであって、好ましくは、前記サプリメントがカプセル又はタブレットの形態である、サプリメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ポストバイオティクス、並びに抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ－１０）の発現の増強及び／又は炎症促進性ケモカインの発現の低減におけるそれらの使用に関する。本発明はまた、過剰活性免疫系障害（例えば、ＩＬ－１０介在性疾患）の治療におけるポストバイオティクスの使用に関する。
【0002】
［背景技術］
抗炎症性サイトカインは、特異的サイトカイン抑制因子及び可溶性サイトカイン受容体と共に作用して、ヒト免疫応答を調節する。主な抗炎症性サイトカインには、インターロイキン（ＩＬ）－１受容体アンタゴニスト、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、及びＩＬ－１３が含まれる（Ｏｐａｌ，Ｓ．Ｍ．ａｎｄ ＤｅＰａｌｏ，Ｖ．Ａ．，２０００．Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｃｈｅｓｔ，１１７（４），ｐｐ．１１６２－１１７２）。
抗炎症性サイトカインは、特異的サイトカイン抑制因子及び可溶性サイトカイン受容体と共に作用して、ヒト免疫応答を調節する。主な抗炎症性サイトカインには、インターロイキン（ＩＬ）－１受容体アンタゴニスト、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、及びＩＬ－１３が含まれる（Ｏｐａｌ，Ｓ．Ｍ．ａｎｄ ＤｅＰａｌｏ，Ｖ．Ａ．，２０００．Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｃｈｅｓｔ，１１７（４），ｐｐ．１１６２－１１７２）。
【0003】
インターロイキン（ＩＬ）－１０は、多くの細胞集団によって産生される重要な抗炎症性サイトカインである。ＩＬ－１０の主な生物学的機能は、炎症反応の制限及び終結、並びにＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、抗原提示細胞、肥満細胞、及び顆粒球などのいくつかの免疫細胞の分化及び増殖の調節である（Ａｓａｄｕｌｌａｈ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，２００３．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ，５５（２），ｐｐ．２４１－２６９）。
【0004】
ＩＬ－１０などの抗炎症性サイトカインの調節不全は、慢性全身性炎症及び過剰活性免疫系をもたらし得る。例えば、ＩＬ－１０欠乏症は、免疫系の重度の調節不全をもたらす場合があり、微生物への暴露に対する炎症反応を増強する場合があり、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）及びいくつかの自己免疫疾患の発症をもたらし得る（Ｉｙｅｒ，Ｓ．Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｅｎｇ，Ｇ．，２０１２．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３２（１））。
【0005】
しかしながら、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０）の発現を増強する既存の解決策には、いくつかの欠点がある。ＩＬ－１０による全身性治療は、典型的には、臨床的寛解を誘導するのにあまり有効ではなく、かなりの副作用を伴う。いくつかのプロバイオティクス株はＩＬ－１０発現を増強することが示されているが、プロバイオティクスは生菌のままである必要があり、その適用が制限される（ｄｅ Ｍｏｒｅｎｏ ｄｅ ＬｅＢｌａｎｃ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２０１１．ＩＳＲＮ ２０１１，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ８９２９７１）。
【0006】
したがって、対象の胃腸管における抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０）の発現を増強することができる代替の試薬及び組成物が求められている。
【0007】
［発明の概要］
ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）亜種ラクティス（ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）又はＢ．ラクティス（Ｂ．ｌａｃｔｉｓ）としても知られる）培養上清は、驚くべきことに、様々な臨床試験における免疫調節効果が文献に十分に報告されているＢ．ラクティスプロバイオティクスの培養上清よりも、いくつかの特徴において優れた免疫調節効果を呈することが見出された。
ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）亜種ラクティス（ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）又はＢ．ラクティス（Ｂ．ｌａｃｔｉｓ）としても知られる）培養上清は、驚くべきことに、様々な臨床試験における免疫調節効果が文献に十分に報告されているＢ．ラクティスプロバイオティクスの培養上清よりも、いくつかの特徴において優れた免疫調節効果を呈することが見出された。
【0008】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、Ｂ．ラクティスと比較して、抗炎症性サイトカインのＩＬ－６及びＩＬ－１０の分泌を強く増加させた。更に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、炎症促進性ケモカインＩＬ－８の分泌を減少させた。特に注目すべきことに、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－１０の分泌を２倍超に増加させた。
【0009】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
【0010】
別の態様では、本発明は、免疫調節物質としてのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。
【0011】
別の態様では、本発明は、免疫抑制剤としてのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。
【0012】
別の態様では、本発明は、過剰活性免疫系障害を有する又は過剰活性免疫系障害のリスクがある対象の胃腸管における、抗炎症性サイトカインの発現を増強する、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現を減少させる使用のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強し、及び／又は過剰活性免疫系障害は、ＩＬ－１０介在性疾患である。
【0013】
別の態様では、本発明は、ＩＬ－１０介在性疾患を有する又はＩＬ－１０介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－１０の発現を増強する使用のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
【0014】
別の態様では、本発明は、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強することによるＩＬ－１０介在性疾患の治療又は予防における使用のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
【0015】
任意の好適なビフィドバクテリウム・ラクティス株を本発明で使用してもよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０から選択される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６に対して、少なくとも９９．０％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスである。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６である。
【0016】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティスを好適な培養培地で培養することによって、得てもよい又は得られ得る。いくつかの実施形態では、培養培地は、糖及び酵母エキス、並びに任意選択的にアスコルビン酸ナトリウム及び／又はポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、培養培地は、（ｉ）約１重量％～約６重量％、若しくは約２重量％～約４重量％の糖、（ｉｉ）約１重量％～約１０重量％、若しくは約１重量％～約６重量％、若しくは約２重量％～約４重量％の酵母エキス、（ｉｉｉ）約０重量％～約０．５重量％、若しくは約０．１重量％～約０．２重量％のアスコルビン酸ナトリウム、及び／又は、（ｉｖ）約０重量％～約１重量％、若しくは約０重量％～約０．３重量％のポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、ｐＨは、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨに制御される。ビフィドバクテリウム・ラクティスは、任意の好適な条件下で培養してもよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、定常期に達するまで培養される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、嫌気性条件下で培養される。
【0017】
任意の好適な処理工程を使用して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得てもよい。ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物からビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の全て又は実質的に全てを除去することによって得てもよい又は得られ得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離によって除去される。
【0018】
いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、パスチャライズされる。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、乾燥される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、噴霧乾燥によって乾燥される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、オートムギ繊維、マルトデキストリン、アカシアゴム、デンプン、及びイヌリンのうち１つ以上から選択される担体材料と共に噴霧乾燥される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、アカシアゴムと共に噴霧乾燥される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清及び担体材料は、総固形分比約１：３～約２：１（担体：培養上清乾燥固形分）で混合され、好ましくは総固形分比は、約１：１（担体：培養上清乾燥固形分）である。
【0019】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の好適な形態で提供され得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、経口投与に好適な形態である。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、サプリメント又は栄養組成物の形態である。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、カプセル又はタブレットの形態である。
【0020】
培養の間、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、培養培地中の栄養素（例えば、糖及びアミノ酸）を消費し、様々な可溶性因子（例えば、有機酸及び他の代謝産物）で培養培地を富化する。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ｉ）全糖濃度の減少、（ｉｉ）全酸濃度の増加、及び／又は、（ｉｉｉ）全アミノ酸濃度の減少を有する。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、（ｉ）全糖濃度は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％減少しており、（ｉｉ）全酸濃度は、全糖の濃度減少の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％増加しており、及び／又は、（ｉｉｉ）培地中の全アミノ酸濃度は、少なくとも約０．１重量％、少なくとも約０．２重量％、若しくは少なくとも約０．３重量％減少している。
【0021】
いくつかの実施形態では、パスチャライズの前に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約１×１０７～約１×１０９ｃｆｕ／ｍＬの生細胞数を有する。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ｉ）約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、若しくは約０．５重量％以下の全糖、（ｉｉ）約０．５重量％以上、約１重量％以上、約１．５重量％以上、若しくは約２重量％以上の全酸、及び／又は、（ｉｉｉ）約３．５重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．８重量％以下、若しくは約０．６重量％以下の全アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨを有し、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約６．２のｐＨを有する。
【0022】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の他の好適な試薬又は組成物と組み合わせて使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと組み合わせて使用され、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、１つ以上のプロバイオティクスと組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスと組み合わせて使用され、好ましくはプロバイオティクスビフィドバクテリウム・ラクティスは、培養上清が由来するビフィドバクテリウム・ラクティスと同じである。
【0023】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、対象の胃腸管における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現を増強し得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－６及び／又はＩＬ－１０の発現を増強させる。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－１０の発現を増強させる。
【0024】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、対象の胃腸管における１つ以上の炎症促進性ケモカインの発現を低減し得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＣＸＣＬ１０及び／又はＩＬ－８の発現を低減させる。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－８の発現を減少させる。
【0025】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、かかる培養上清を必要とする任意の対象へ投与されてもよい。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、過剰活性免疫系障害を有する、又は過剰活性免疫系障害のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＬ－１０欠乏症を有する、又はＩＬ－１０欠乏症のリスクがある。
【0026】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を使用して、任意の好適な過剰活性免疫系障害又はＩＬ－１０介在性疾患を治療又は予防してもよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０介在性疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アレルギー性疾患、皮膚炎、自己免疫疾患、感染に関連する免疫病理、結腸直腸がん、骨治癒不良（ｉｍｐａｉｒｅｄ ｂｏｎｅ ｈｅａｌｉｎｇ）、及びアテローム性動脈硬化症から選択される。いくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＢＤは、クローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ：ＵＣ）であり、（ｉｉ）アレルギー性疾患は、アレルギー性喘息又は食物アレルギーであり、（ｉｉｉ）皮膚炎は、アトピー性皮膚炎又は接触性皮膚炎であり、（ｉｖ）自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、強直性脊椎炎、及びギラン・バレー症候群から選択され、並びに／又は、（ｖ）感染症は、原虫感染症、細菌感染症、線虫感染症、ウイルス感染症、及び真菌感染症から選択される。
【0027】
別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを提供する。サプリメントは、カプセル又はタブレットの形態であってもよい。
【0028】
別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む栄養組成物を提供する。
【0029】
サプリメント又は栄養組成物中に存在するビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、本発明にかかる任意のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清であってもよい。
【0030】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の他の好適な試薬又は組成物と組み合わせて存在させてもよい。いくつかの実施形態では、サプリメント又は栄養組成物は、１種以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスを含み、好ましくはサプリメント又は栄養組成物は、１種以上のプロバイオティクスを含む。いくつかの実施形態では、サプリメント又は栄養組成物は、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスを含み、好ましくはプロバイオティクスビフィドバクテリウム・ラクティスは、培養上清が由来するビフィドバクテリウム・ラクティスと同じである。
【0031】
別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を製造する方法を提供し、本方法は、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
を含む。
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
を含む。
【0032】
本方法は、好ましくは、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させる工程（ｄ）を更に含み、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、噴霧乾燥によって乾燥される。
【0033】
本発明の方法によって製造されるビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、本発明にかかる任意のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清であり得る。
【0034】
別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを製造する方法を提供し、本方法は、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
（ｄ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させて、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を得る工程と、
（ｅ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包、圧縮成形、及び／又は包装して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを得る工程と、
を含む。
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
（ｄ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させて、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を得る工程と、
（ｅ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包、圧縮成形、及び／又は包装して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを得る工程と、
を含む。
【0035】
工程は任意の好適な手段によって実行されてよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、噴霧乾燥によって乾燥される。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末をカプセル内包して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むカプセルを得る。
【0036】
本発明の方法によって製造されるサプリメントは、本発明にかかる任意のサプリメントであり得る。
【図面の簡単な説明】
【0037】
【図1】ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）細胞のＮＦ－κＢ活性に対する結腸のバッチ懸濁液の効果 結腸のバッチ懸濁液によりアピカル側を２４時間前処理した後、Ｃａｃｏ－２／ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）共培養の基底膜側に対してＬＰＳ処理を行い、６時間後にＮＦ－κＢ活性レベルを測定した。点線は対照実験のＬＰＳ＋に対応する。データを、平均±ＳＥＭとして表した。（＊）は、対照試料と処置試料との間の統計的有意差を表す。（＊）＝ｐ＜０．０５、（＊＊）＝ｐ＜０．０１、（＊＊＊）＝ｐ＜０．００１。ＢＬ＝ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ＳＵＰ＝ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６由来の培養上清、ｌｏｗ＝低用量での試行、Ｄ１＝ドナー１、Ｄ２＝ドナー２、Ｄ３＝ドナー３、Ｄ１～Ｄ３＝全３名のドナーの平均。
【図2】ＩＬ－６及びＩＬ－１０の分泌に対する結腸のバッチ懸濁液の効果 （Ａ）ＩＬ－６及び（Ｂ）ＩＬ－１０。結腸のバッチ懸濁液によりアピカル側を２４時間前処理した後、Ｃａｃｏ－２／ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）共培養の基底膜側に対してＬＰＳ処理を行い、６時間後にサイトカインレベルを測定した。点線は対照実験のＬＰＳ＋に対応する。データを、平均±ＳＥＭとして表した。（＊）は、処置と対照との間の統計的有意差を表す。（＊）＝ｐ＜０．０５（＊＊）＝ｐ＜０．０１、（＊＊＊）＝ｐ＜０．００１、（＊＊＊）＝ｐ＜０．０００１。ＢＬ＝ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６；ＳＵＰ＝ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６由来の培養上清、ｌｏｗ＝低用量での試行、Ｄ１＝ドナー１、Ｄ２＝ドナー２、Ｄ３＝ドナー３、Ｄ１～Ｄ３＝全３名のドナーの平均。
【図3】ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－８の分泌に対する結腸のバッチ懸濁液の効果 （Ａ）ＣＸＣＬ１０及び（Ｂ）ＩＬ－８。結腸バッチ懸濁液によりアピカル側を２４時間前処理した後、Ｃａｃｏ－２／ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）共培養の基底膜側に対してＬＰＳ処理を行い、６時間後にサイトカインレベルを測定した。点線は対照実験のＬＰＳ＋に対応する。データを、平均±ＳＥＭとして表した。（＊）は、処置と対照との間の統計的有意差を表す。（＊）＝ｐ＜０．０５（＊＊）＝ｐ＜０．０１、（＊＊＊）＝ｐ＜０．００１、（＊＊＊）＝ｐ＜０．０００１。ＢＬ＝ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ＳＵＰ＝ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６由来の培養上清、ｌｏｗ＝低用量での試行、Ｄ１＝ドナー１、Ｄ２＝ドナー２、Ｄ３＝ドナー３、Ｄ１～Ｄ３＝全３名のドナーの平均。
【図4】結腸のバッチ懸濁液処理群をブランク対照の結腸のバッチ懸濁液に対して正規化した細胞実験結果。 灰色の陰影の濃さは、対照と比較して正の変化の程度に比例する。値＝１（対照からの変化なし）、値＞１（処置群では対象よりも高い）、値＜１（処置群では対照よりも低い）。
【0038】
［発明を実施するための形態］
次に、本発明の様々な好ましい特徴及び実施形態を、非限定的な実施例により記載する。
次に、本発明の様々な好ましい特徴及び実施形態を、非限定的な実施例により記載する。
【0039】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別段の指示がない限り、複数の指示対象を含むことについて留意する必要がある。
【0040】
本明細書で使用するとき、用語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」は、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含有している（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であり、他を包含し得る、すなわちオープンエンドなものであり、かつ追加の、列挙されていない構成、要素、又は工程を除外しない。用語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」はまた、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」を含む。
【0041】
数値範囲は、その範囲を画定する数を含む。本明細書で使用するとき、用語「約」は、およそ、ほぼ、概ね、又はその付近、を意味する。用語「約」が数値又は範囲と共に使用される場合、その値又は範囲は、記載された数値（複数可）の上方及び下方の境界を拡大することによって、その値又は範囲を修正する。一般に、用語「約」及び「ほぼ」は、本明細書では、規定された値（複数可）を１０％超える及び下回る数値（複数可）を調整するために使用される。
【0042】
本明細書で論じられる刊行物は、単に本出願の出願日より前にそれらが開示されていたがために提供されている。本明細書において引用されるいかなる文献も、これらの刊行物が本明細書に添付の特許請求の範囲に対する先行技術を構成するものであると認めるものとして解釈されるべきではない。
【0043】
本開示は、本明細書に開示される例示的な方法及び材料によって限定されず、本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、本開示の実施形態の実施又は試験に使用することができる。当業者は、開示される本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明の全ての特徴を組み合わせることができることを理解されたい。
【0044】
本明細書で言及される全ての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0045】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
【0046】
本明細書で使用するとき、「培養上清（ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ）」は、細胞が培養されていた馴化（ｓｐｅｎｔ）培養培地又は部分的に馴化された培養培地を指し得る。典型的には、全ての細胞又は実質的に全ての細胞は、培養終了時に培養培地から除去される。例えば、培養上清は、（ａ）培養培地で細胞を培養して、発酵物を得る工程と、（ｂ）発酵物から全ての細胞又は実質的に全ての細胞を除去して、培養上清を得る工程と、を含む方法によって得てもよい又は得られ得る。
【0047】
本明細書で使用するとき、「ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清」は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養物に由来する培養上清を指し得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から全て又は実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、を含む方法によって得てもよい又は得られ得る。
【0048】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ポストバイオティクス（ｐｏｓｔｂｉｏｔｉｃ）と称され得る。本明細書で使用するとき、「ポストバイオティクス」は、酵素、ペプチド、テイコ酸、ペプチドグリカン由来のムロペプチド、多糖類、細胞表面タンパク質、及び有機酸などの、生菌によって分泌される、又は細菌溶解後に放出される可溶性因子（生成物又は代謝副産物）を指し得る（例えば、Ａｇｕｉｌａｒ－ＴｏａｌａＪ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７５，ｐｐ．１０５－１１４を参照されたい）。
【0049】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、又はそれからなるポストバイオティクスを提供する。
【0050】
ビフィドバクテリウム・ラクティス株
ビフィドバクテリウム・ラクティス（ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスとしてもまた知られる、ＮＣＢＩ：ｔｘｉｄ３０２９１１）は、ヒトの大腸内に見られるビフィドバクテリウム属の、グラム陽性、嫌気性、棒状細菌である。ビフィドバクテリウム・アニマリス及びビフィドバクテリウム・ラクティスは、２つの異なる種として以前は記載されていた。現在は、両方とも、亜種であるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスを含む、Ｂ．アニマリスと見なされている（Ｍａｓｃｏ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ，２００４．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５４（４），ｐｐ．１１３７－１１４３）。
ビフィドバクテリウム・ラクティス（ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスとしてもまた知られる、ＮＣＢＩ：ｔｘｉｄ３０２９１１）は、ヒトの大腸内に見られるビフィドバクテリウム属の、グラム陽性、嫌気性、棒状細菌である。ビフィドバクテリウム・アニマリス及びビフィドバクテリウム・ラクティスは、２つの異なる種として以前は記載されていた。現在は、両方とも、亜種であるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスを含む、Ｂ．アニマリスと見なされている（Ｍａｓｃｏ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ，２００４．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５４（４），ｐｐ．１１３７－１１４３）。
【0051】
任意の好適なビフィドバクテリウム・ラクティス株を本発明で使用してもよい。例えば、プロバイオティクス効果を有すると知られている任意のビフィドバクテリウム・ラクティス株を本発明で使用してもよい。そのようなビフィドバクテリウム・ラクティス株は当業者に周知である。
【0052】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０から選択され得る。
【0053】
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、当業者に知られている任意のＢ．アニマリス亜種ラクティスに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスであり得る。ビフィドバクテリウム・ラクティスは、当業者に知られている任意のＢ．アニマリス亜種ラクティスに対して、少なくとも９９．０％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスであり得る。公的に利用可能な少なくとも１０３のゲノムアセンブリがある。
【0054】
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２（受託番号ＣＰ００４０５３）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１（受託番号ＣＰ００３０３９）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０（受託番号ＣＰ００１６０６）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９（受託番号ＣＰ００１８９２）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４（受託番号ＣＰ００１５１５）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７（受託番号ＮＣ＿０１７８６７）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０（受託番号ＮＣ＿０１７８６６）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２（受託番号ＣＰ００１８５３）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１（受託番号ＣＰ００１２１３）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９（受託番号ＣＰ０３１１５４）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、又はビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０に対して、少なくとも９９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスであり得る。
【0055】
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２（受託番号ＣＰ００４０５３）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１（受託番号ＣＰ００３０３９）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０（受託番号ＣＰ００１６０６）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９（受託番号ＣＰ００１８９２）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４（受託番号ＣＰ００１５１５）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７（受託番号ＮＣ＿０１７８６７）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０（受託番号ＮＣ＿０１７８６６）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２（受託番号ＣＰ００１８５３）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１（受託番号ＣＰ００１２１３）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９（受託番号ＣＰ０３１１５４）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、又はビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０に対して、少なくとも９９．０％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスであり得る。
【0056】
ＮＣＣ ２８１８ともまた呼称されるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６を、２００５年６月７日にＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ），Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ，２５ ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ Ｒｏｕｘ，Ｆ－７５７２４ ＰＡＲＩＳ Ｃｅｄｅｘ １５，Ｆｒａｎｃｅに寄託し、寄託番号１－３４４６を得た。
【0057】
いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６に対して、少なくとも９９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスである。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６に対して、少なくとも９９．０％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスである。
【0058】
いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６である。
【0059】
培養上清調製
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の好適な方法によって調製され得る。例えば、細菌上清の調製は、Ｍｏｒａｄｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０２１．Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４３，ｐ．１０９７２２に記載されている。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の好適な方法によって調製され得る。例えば、細菌上清の調製は、Ｍｏｒａｄｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０２１．Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４３，ｐ．１０９７２２に記載されている。
【0060】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去する工程と、を含む方法によって得てもよい又は得られ得る。。
【0061】
好適な培養条件及び処理工程は当業者に周知である。例示的な培養条件及び処理工程を本明細書に記載する。
【0062】
培養培地
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティスを培養培地で培養することによって、得てもよい又は得られ得る。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティスを培養培地で培養することによって、得てもよい又は得られ得る。
【0063】
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、任意の好適な培養培地で培養され得る。好適な培養培地は当業者によく知られている。例えば、Ｍａｒｓａｕｘ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，１２（８），ｐ．２２６８には、デキストロース２．８％、酵母由来アミノ酸３％、及びビタミンＣからなるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６の好適な培養培地が記載されている。
【0064】
好適には、培養培地は、ＭＲＳブロスなどの市販の培地であり得る。ＭＲＳブロスは、乳酸菌の大量増殖のための非選択的培地であり、約２％のグルコース、約０．４％の酵母エキス、及び約０．１％のポリソルベートを含んでもよく、かつ約６．２のｐＨを有してもよい。
【0065】
培養培地は、糖、酵母エキス、ビタミンＣ、及び／又はポリソルベートを含んでよい。好適には、培養培地は、糖及び酵母エキスを含んでよい。好適には、培養培地は、糖、酵母エキス、及びビタミンＣを含んでよい。好適には、培養培地は、糖、酵母エキス、ビタミンＣ、及びポリソルベートを含んでよい。
【0066】
好適な糖は当業者に知られており、グルコース、デキストロース、及び／又はグルコースシロップが挙げられる。好適には、培養培地は、約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の糖を含んでよい。
【0067】
酵母エキスは、自己消化酵母の水溶性部分である。好適には、培養培地は、約１重量％～約１０重量％、約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の酵母エキスを含んでよい。
【0068】
ビタミンＣ（アスコルビン酸塩又はアスコルビン酸としてもまた知られる）の好適な供給源は当業者に周知である。例えば、アスコルビン酸ナトリウムは、アスコルビン酸の数多くのミネラル塩のうちの１つである。好適には、培養培地は、約０重量％～約０．５重量％、又は約０．１重量％～約０．２重量％のアスコルビン酸ナトリウムを含んでよい。
【0069】
好適なポリソルベートは当業者に周知であり、例えば、ポリソルベート８０が挙げられる。好適には、培養培地は、約０重量％～約１重量％、又は約０重量％～約０．３重量％のポリソルベートを含んでよい。
【0070】
好適には、培養物は、ミネラル（例えば、硫酸マンガン）及び／又はペプトン（例えば、酵母ペプトン）などの任意の他の好適な構成成分を含んでよい。
【0071】
いくつかの実施形態では、培養培地は、約１重量％～約６重量％の糖、約１重量％～約６重量％の酵母エキス、約０重量％～約０．５重量％のアスコルビン酸ナトリウム、及び約０重量％～約１重量％のポリソルベートを含む。
【0072】
いくつかの実施形態では、培養培地は、約２重量％～約４重量％の糖、約２重量％～約４重量％の酵母エキス、約０．１重量％～約０．２重量％のアスコルビン酸ナトリウム、及び約０重量％～約０．３重量％のポリソルベートを含む。
【0073】
好適なｐＨは当業者に周知であり、任意の好適な手段によって調整され得る。好適には、培養培地は、約７未満のｐＨ、例えば、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨなどを有し得る。
【0074】
培養条件
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、任意の好適な条件下で培養してもよい。好適な培養条件は当業者に周知である。例えば、Ｍａｒｓａｕｘ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，１２（８），ｐ．２２６８には、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６を３７℃でインキュベートしたことが記載されている。
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、任意の好適な条件下で培養してもよい。好適な培養条件は当業者に周知である。例えば、Ｍａｒｓａｕｘ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，１２（８），ｐ．２２６８には、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６を３７℃でインキュベートしたことが記載されている。
【0075】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティスを嫌気性条件下で培養することによって、得てもよい又は得られ得る。。
【0076】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、対数増殖期後期又は定常期に達するまでビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって、得てもよい又は得られ得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、定常期に達するまでビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって、得られてもよい又は得られ得る。
【0077】
細菌の培養において認識される段階は当業者に公知であり、「誘導期」、「対数増殖期」、「定常期」、及び「死滅」期が挙げられる。「誘導期」は、生細菌細胞の数の増加がない時期である。「対数増殖期」は、生細菌細胞の数が指数関数的に増加する時期である。「対数増殖期後期」は、対数増殖期の後半、例えば、対数増殖期全体の少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％を指し得る。「定常期」は、生細菌細胞の数が一定のままである時期である。「死滅期」は、生細菌細胞の数が減少する時期である。
【0078】
培養フェーズは、当業者に公知の任意の好適な方法により決定され得る。例えば、定常期の開始は、追加の酸が生成されず、かつ所望のｐＨを維持するための塩基の添加がもはや必要とされない時点として決定され得る。あるいは、培養フェーズは、培養培地中の細菌濃度と相関する６００ｎｍでの光学密度に基づいて決定され得る。
【0079】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約３５℃～約４０℃、又は約３７℃で培養することによって、得てもよい又は得られ得る。温度は当業者に公知の任意の好適な方法によって制御されてもよい。
【0080】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ｐＨ制御しながら培養することによって、得てもよい又は得られ得る。ｐＨは、当業者に公知の任意の好適な方法によって、例えば塩基添加を用いることによって制御され得る。好適には、ｐＨは、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨに制御され得る。好適には、ｐＨは６．０のｐＨに制御され得る。
【0081】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、撹拌しながら及び／又はヘッド・スペース・ガス法（ｈｅａｄ ｓｐａｃｅ ｇａｓｓｉｎｇ）で培養することによって、得てもよい又は得られ得る。撹拌及び／又はヘッド・スペース・ガス法は、当業者に公知の任意の好適な方法によって、例えば、二酸化炭素によるヘッド・スペース・ガス法によって実施され得る。
【0082】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約３７℃にて、約ｐＨ６でｐＨ制御し、撹拌しながら、及び／又は二酸化炭素でヘッド・スペース・ガス法により培養することによって、得てもよい又は得られ得る。
【0083】
発酵物の処理
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物からビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の全て又は実質的に全てを除去することによって得てもよい又は得られ得る。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物からビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の全て又は実質的に全てを除去することによって得てもよい又は得られ得る。
【0084】
ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、当業者に公知の任意の好適な方法によって除去され得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離又は濾過によって除去され得る。
【0085】
ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離によって除去され得る。好適な遠心分離条件は当業者によく知られており、例えば、約４０００～約１２０００ｇで約１０分間にわたる遠心分離である。
【0086】
ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、濾過によって除去され得る。好適な濾過条件は当業者に周知であり、例えば、約０．２μｍの孔径を用いて全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去する、若しくは約０．３μｍ～約０．５μｍの孔径を実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去する膜濾過、又は約０．５μｍ～約２．０μｍの孔径フィルタを使用して、実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去してもよい。
【0087】
本明細書で使用するとき、「実質的に全て」は、大部分のビフィドバクテリウム・ラクティス細胞、例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％を意味し得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の「実質的に全て」を除去することは、ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％が除去されることを意味し得る。
【0088】
いくつかの実施形態では、一部のビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、培養上清中に留まる（例えば、除去後に）。例えば、不活性化の前に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約１×１０６～約１×１０１０ｃｆｕ／ｍＬの生細胞数、又は約１×１０７～約１×１０９ｃｆｕ／ｍＬの生細胞数を有し得る。
【0089】
いくつかの実施形態では、残存しているビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、熱不活性化される。ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を熱不活性化する好適な方法は当業者によく知られている。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清はパスチャライズされてもよい。好適なパスチャライズ条件は当業者によく知られている。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約７０℃～約１００℃の温度で約１０～約３０秒間、約７０℃～約１００℃で約１０～約１５秒間、又は約８０℃～約１００℃で約１０秒間パスチャライズされ得る。
【0090】
いくつかのその他の実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、無細胞培養上清であり得る（すなわち、ビフィドバクテリウム・ラクティス細胞の１００％が除去される）。無細胞培養上清は、培養上清を１つ以上のフィルタに通して、全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去することによって得てもよい。好適な濾過条件は当業者によく知られている。例えば、０．２２μｍ又は０．４μｍ孔径のフィルタを使用して、全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去してもよい。
【0091】
上清の乾燥
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、乾燥させてもよい。乾燥形態のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得ることは、長期貯蔵にとってより好適であり得る。ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、当業者に公知の任意の好適な方法によって乾燥させてもよい。例えば、培養上清は、噴霧乾燥又は凍結乾燥によって乾燥させてもよい。誤解を避けるために、用語「培養上清」は、乾燥した培養上清、例えば固体（例えば、粉末）形態）の培養上清を含む。
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、乾燥させてもよい。乾燥形態のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得ることは、長期貯蔵にとってより好適であり得る。ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、当業者に公知の任意の好適な方法によって乾燥させてもよい。例えば、培養上清は、噴霧乾燥又は凍結乾燥によって乾燥させてもよい。誤解を避けるために、用語「培養上清」は、乾燥した培養上清、例えば固体（例えば、粉末）形態）の培養上清を含む。
【0092】
いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、噴霧乾燥される。ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を噴霧乾燥するための好適な方法は当業者によく知られていることであろう（例えば、Ｓａｎｔｏｓ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｐｈｙｓｉｃｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ－Ｎｅｗ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＩｎＴｅｃｈ Ｏｐｅｎ、Ｓｐｒａｙ Ｄｒｙｉｎｇ：Ａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗを参照されたい）。誤解を避けるために、用語「培養上清」は、噴霧乾燥した培養上清を含む。
【0093】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、担体材料と共に噴霧乾燥され得る。好適な担体材料は当業者によく知られている。例えば、担体材料は、オートムギ繊維、マルトデキストリン、アカシアゴム、デンプン、及びイヌリンのうち１つ以上から選択され得る。いくつかの実施形態では、担体材料は、アカシアゴムである。
【0094】
任意の好適な量の担体材料が使用され得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清及び担体材料は、総固体比約１：５～約５：１（担体：培養上清乾燥固形分）、又は総固形分比約１：３～約３：１（担体：培養上清乾燥固形分）、又は総固形分比約１：２～約２：１（担体：培養上清乾燥固形分）、又は総固形分比約１：１．５～約１．５：１（担体：培養上清乾燥固形分）、又は総固形分比約１：１（担体：培養上清乾燥固形分）で混合され得る。
【0095】
培養上清の形態
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の好適な形態で提供され得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、固体（例えば、粉末）、液体、又はゼラチン状の形態であり得る。ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、経口投与又は経腸投与に好適な形態で提供され得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、経口投与に好適な形態で提供される。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、任意の好適な形態で提供され得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、固体（例えば、粉末）、液体、又はゼラチン状の形態であり得る。ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、経口投与又は経腸投与に好適な形態で提供され得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、経口投与に好適な形態で提供される。
【0096】
いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、固体（例えば、粉末）形態で提供される。固体（例えば、粉末）の形態であるビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供することは、サプリメント（例えば、タブレットの形態又はカプセルの形態）としての摂取により好適であり得る。
【0097】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、サプリメント又は栄養組成物の形態で提供され得る。
【0098】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを提供する。
【0099】
「サプリメント」又は「ダイエタリーサプリメント」とは、個体の栄養を補完するために使用されてもよい（典型的にはそのように使用されるものの、ダイエタリーサプリメントはまた、摂取を意図している任意の種類の組成物に添加されてもよい）。サプリメントは任意の好適な様式で調製してもよい。
【0100】
サプリメントは、例えば、タブレット、カプセル、トローチ、又は液体の形態であり得る。いくつかの実施形態では、サプリメントは、カプセル又はタブレットの形態である。
【0101】
サプリメントは、保護親水コロイド（ガム、タンパク質、加工デンプンなど）、結合剤、皮膜形成剤、カプセル内包剤／材料、壁／シェル材料、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、表面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチンなど）、吸着剤、担体、充填剤、共化合物、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動剤、味覚マスキング剤、増量剤、ゼリー化剤、及びゲル形成剤を更に含有してもよい。かかるサプリメントはまた、従来の医薬品添加物及び補助剤、賦形剤、及び希釈剤を含有してもよく、これには、水、任意の由来のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホネート、タルク、糖、デンプン、アラビアガム、植物油、ポリアルキレングリコール、風味剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、緩衝液、潤滑剤、着色剤、湿潤剤、充填剤などが挙げられるが、これらに限定されない。更に、サプリメントには、経口又は非経口投与に好適な有機又は無機担体材料に加え、ＵＳＲＤＡなどの政府機関の推奨に従い、ビタミン類、ミネラル類、微量元素及びその他の微量栄養素を含有させることもできる。サプリメントは単位用量の形態で提供され得る。
【0102】
いくつかの実施形態では、サプリメントは、ペットのサプリメントである。「ペットのサプリメント」は、ペットを意図したサプリメントを指し得る。ペットは、イヌ、ネコ、鳥、魚、げっ歯類、例えばマウス、ラット、及びモルモットなど、ウサギから選択される動物であり得る。
【0103】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む栄養組成物を提供する。
【0104】
本発明によれば、「栄養組成物」は、対象に栄養を与える組成物を意味する。栄養組成物は任意の好適な様式で調製してもよい。
【0105】
栄養組成物は、投与（例えば、経口投与又は静脈内投与）に好適であるものであれば特に限定されない。好適な栄養組成物の例としては、食料品、飲料、薬用基剤（ｄｒｕｇ ｂａｓｅｓ）、及び動物飼料が挙げられる。
【0106】
本発明による栄養組成物は、経腸栄養組成物であってもよい。「経腸栄養組成物」は、投与に胃腸管が関与する食料品である。
【0107】
栄養組成物は乳児に好適であり得る。例えば、栄養組成物は、乳児用フォーミュラ、ベビーフード、乳児用シリアル組成物、又は強化剤であってもよい。好適には、栄養組成物は、乳児用フォーミュラ又は強化剤であってもよい。
【0108】
好適には、栄養組成物は、医薬組成物であってもよい。医薬製剤の形態は特に限定されず、例えば、タブレット剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などが挙げられる。経口投与用の医薬担体として広く用いられている賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味剤、希釈剤、界面活性剤などの添加剤が使用されてもよい。好適な結合剤の例としては、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えばグルコース、無水ラクトース、流動性ラクトース、β－ラクトースなど、コーン甘味料、天然ガム及びガム、例えばアカシア、トラガカント、又はアルギン酸ナトリウムなど、カルボキシメチルセルロース、及びポリエチレングリコールが挙げられる。好適な潤滑剤の例としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び塩化ナトリウムなどが挙げられる。
【0109】
いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物用飼料、例えばペットフード製品（特に、ドライペットフード製品）である。用語「ペットフード製品」は、ペットによる摂取を意図した栄養製剤を指し得る。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、イヌ用食品製品又はネコ用食品製品である。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、獣医学用組成物である。
【0110】
培養上清組成物
上記のように、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ａ）ビフィドバクテリウム・ラクティスを培養培地で培養する工程を含む方法により得てもよい又は得られ得る。培養の間、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、培地中の栄養素（例えば、糖及びアミノ酸）を消費し、様々な可溶性因子（例えば、有機酸及び他の代謝産物）で培地を富化する。
上記のように、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ａ）ビフィドバクテリウム・ラクティスを培養培地で培養する工程を含む方法により得てもよい又は得られ得る。培養の間、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、培地中の栄養素（例えば、糖及びアミノ酸）を消費し、様々な可溶性因子（例えば、有機酸及び他の代謝産物）で培地を富化する。
【0111】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清中のビフィドバクテリウム・ラクティス由来代謝産物は、多様な物理化学的特性及び機能的特性を有し得るものであり、当業者に公知の任意の好適な方法によって分析することができる。例えば、好適な方法には、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、分光光度法、ＮＭＲ分光法、及びＦＴＩＲ分光法が含まれる（例えば、Ｍｏｒａｄｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０２１．Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４３，ｐ．１０９７２２に記載されている）。
【0112】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、（ｉ）全糖濃度の減少、（ｉｉ）全酸濃度の増加、及び／又は、（ｉｉｉ）全アミノ酸濃度の減少を有し得る。
【0113】
本明細書で使用するとき、用語「全糖」は、例えばグルコース及びフルクトースを含む、任意の糖を指し得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）中の全糖濃度は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％減少し得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）中の全糖濃度は、約５０％～約１００％、又は約８０％～約１００％減少し得る。
【0114】
本明細書で使用するとき、用語「全酸」は、例えば、酢酸、乳酸、及びギ酸を含む、任意の有機酸（すなわち、アミノ酸を除外）を指し得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）中の全酸濃度は、全糖の濃度減少の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％増加し得る。例えば、全糖の濃度が１重量％減少した場合、全酸の濃度は、少なくとも約０．７重量％、少なくとも約０．８重量％、又は少なくとも約０．９重量％増加し得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）中の全酸濃度は、全糖の濃度減少の約７０％～約９０％増加し得る。
【0115】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）中の全アミノ酸濃度は、少なくとも約０．１重量％、少なくとも約０．２重量％、少なくとも約０．３重量％、少なくとも０．４重量％、又は少なくとも０．５重量％減少し得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）中の全アミノ酸濃度は、約０．１重量％～約０．５重量％減少し得る。
【0116】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約２重量％～約１８重量％、約２重量％～約１０重量％、約３重量％～約９重量％、約４重量％～約８重量％、約５重量％～約７重量％、又は約６重量％の総固形分含有量を有し得る。
【0117】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約５重量％以下、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．５重量％以下、約０．４重量％以下、約０．３重量％以下、約０．２重量％以下、又は約０．１重量％以下の全糖を含み得る。いくつかの実施形態では、上清は、０．３重量％未満、０．２重量％未満、又は０．１重量％未満の全糖を含み得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０重量％～約５重量％、約０重量％～約２重量％、約０重量％～約１重量％、約０重量％～約０．５重量％、又は約０重量％～約０．３重量％の全糖を含み得る。
【0118】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０．５重量％以上、約１重量％以上、約１．５重量％以上、約２重量％以上、約３重量％以上、約４重量％以上、又は約５重量％以上の全酸を含み得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０．５重量％～約５重量％、約１重量％～約３重量％、約１．５重量％～約２．５重量％、約２重量％～約２．５重量％、又は約２重量％の全酸を含み得る。
【0119】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０．５重量％～約６重量％、約１重量％～約３重量％、又は約１．５重量％～約２．５重量％の灰分を含み得る。
【0120】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約３．５重量％以下、約３重量％以下、約２．５重量％以下、約２重量％以下、約１．５重量％以下、約１重量％以下、約０．８重量％以下、約０．６重量％以下、約０．４重量％以下、又は約０．２重量％以下の全アミノ酸を含み得る。好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０．２重量％～約３．５重量％、約０．４重量％～約２重量％、約０．６重量％～約１重量％、約０．７重量％～約０．９重量％、又は約０．８重量％の全アミノ酸を含み得る。
【0121】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約５重量％以下の全糖と、約０．５重量％以上の全酸と、約３．５重量％以下の全アミノ酸と、を含み得る。
【0122】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約２重量％以下の全糖と、約１重量％以上の全酸と、約２重量％以下の全アミノ酸と、を含み得る。
【0123】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約１重量％以下の全糖と、約１．５重量％以上の全酸と、約１重量％以下の全アミノ酸と、を含み得る。
【0124】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０．５重量％以下の全糖と、約２重量％以上の全酸と、約０．８重量％以下の全アミノ酸と、を含み得る。
【0125】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０重量％～約５重量％の全糖と、約０．５重量％～約５重量％の全酸と、約０．２重量％～約３．５重量％以下の全アミノ酸と、を含み得る。
【0126】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０重量％～約２重量％の全糖と、約１重量％～約３重量％の全酸と、約０．４重量％～約２重量％の全アミノ酸と、を含み得る。
【0127】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０重量％～約１重量％の全糖と、約１．５重量％～約２．５重量％の全酸と、約０．６重量％～約１重量％の全アミノ酸と、を含み得る。
【0128】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０重量％～約０．３重量％の全糖と、約２重量％の全酸と、約０．８重量％の全アミノ酸と、を含み得る。
【0129】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、
（ｉ）約０．３重量％未満のグルコース、
（ｉｉ）約０．３重量％未満のフルクトース、
（ｉｉｉ）約０重量％～約０．５重量％のクエン酸、
（ｉｖ）約０．６重量％～約０．９重量％の乳酸、
（ｖ）約０．１重量％～約０．３重量％のギ酸、
（ｖｉ）約１．２重量％～約１．４重量％の酢酸、及び／又は
（ｖｉｉ）約０．２重量％の全窒素、
を含み得る。
（ｉ）約０．３重量％未満のグルコース、
（ｉｉ）約０．３重量％未満のフルクトース、
（ｉｉｉ）約０重量％～約０．５重量％のクエン酸、
（ｉｖ）約０．６重量％～約０．９重量％の乳酸、
（ｖ）約０．１重量％～約０．３重量％のギ酸、
（ｖｉ）約１．２重量％～約１．４重量％の酢酸、及び／又は
（ｖｉｉ）約０．２重量％の全窒素、
を含み得る。
【0130】
好適には、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物又はビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清（例えば、乾燥前）は、約０．３重量％未満のグルコース及び約０．３重量％未満のフルクトースを含む、約０重量％～約２重量％の全糖と、約０重量％～約０．５重量％のクエン酸、約０．６重量％～約０．９重量％の乳酸、約０．１重量％～約０．３重量％のギ酸、及び約１．２重量％～約１．４重量％の酢酸を含む、約１．５重量％～約２．５重量％の全酸と、約０．２重量％の全窒素を含む、約０．６重量％～約１重量％の全アミノ酸と、を含み得る。
【0131】
プロバイオティクス、プレバイオティクス、及びシンバイオティクスの組合せ
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと組み合わせて使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、１つ以上のプロバイオティクスと組み合わせて使用される。プロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清とを、任意の好適な用量で組み合わせてもよい。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと組み合わせて使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、１つ以上のプロバイオティクスと組み合わせて使用される。プロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清とを、任意の好適な用量で組み合わせてもよい。
【0132】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清と、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスとの組合せを含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。
【0133】
いくつかの実施形態では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清と、１つ以上のプロバイオティクスとの組合せを含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。
【0134】
用語「プロバイオティクス」は、適切な量で投与された場合に対象へ健康上の利益を与える、生きた微生物を含有する構成成分を指し得る（例えば、Ｈｉｌｌ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，２０１４．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ＆ ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１１（８），ｐ．５０６を参照されたい）。
【0135】
好適には、プロバイオティクスは、市販のプロバイオティクス株及び／又は健康上の利益を有することが示されている株を含み得る（例えば、Ｆｉｊａｎ，Ｓ．，２０１４．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ，１１（５），ｐｐ．４７４５－４７６７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、プロバイオティクスは、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（２０２０年３月までに定義）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、及び／又はエンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）を含む。
【0136】
いくつかの実施形態では、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスである。任意の好適なビフィドバクテリウム・ラクティス株としては、例えば、プロバイオティクス効果を有することが知られている任意のビフィドバクテリウム・ラクティス株が使用され得る。かかるビフィドバクテリウム・ラクティス株は当業者に周知であり、上記「ビフィドバクテリウム・ラクティス株」と題したセクションで説明した。ビフィドバクテリウム・ラクティスは、培養上清が由来するのと同じビフィドバクテリウム・ラクティスであってもよく、又は異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティスは、培養上清が由来するのと同じビフィドバクテリウム・ラクティスである。
【0137】
用語「プレバイオティクス」は、１つ以上の微生物分類群の好ましい増殖及び／又は活性を選択的に刺激することによって対象に利益をもたらす、難消化性の構成成分を指し得る。例示的なプレバイオティクスとしては、ヒトミルクオリゴ糖が挙げられる。例示的なプレバイオティックスオリゴ糖としては、ガラクトオリゴ糖（ｇａｌａｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＧＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ｆｒｕｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＦＯＳ）、２’－フコシルラクトース、ラクト－Ｎ－ネオ－テトラオース、及びイヌリンが挙げられる。
【0138】
用語「シンバイオティクス」は、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの両方を含有する構成成分を指し得る（例えば、Ｓｗａｎｓｏｎ，Ｋ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ＆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１７（１１），ｐｐ．６８７－７０１を参照されたい）。
【0139】
免疫調節物質としての使用
上記のとおり、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、驚くべきことに、様々な臨床試験におけるその免疫調節効果について文献により十分に説明されているＢ．ラクティスプロバイオティクスの培養上清よりも、いくつかの特徴において優れた免疫調節効果を呈することが見出された。
上記のとおり、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、驚くべきことに、様々な臨床試験におけるその免疫調節効果について文献により十分に説明されているＢ．ラクティスプロバイオティクスの培養上清よりも、いくつかの特徴において優れた免疫調節効果を呈することが見出された。
【0140】
一態様では、本発明は、免疫調節物質としてのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。本明細書で使用するとき、「免疫調節物質」は、免疫系の機能に影響を及ぼす物質である。いくつかの実施形態では、免疫調節物質としてのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用は、対象の胃腸管における抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０）の発現を増強し、かつ／又は炎症促進性ケモカインの発現を低減する。
【0141】
別の態様では、本発明は、免疫抑制剤としてのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。本明細書で使用するとき、「免疫抑制剤」は、免疫系の活性を阻害又は予防する物質である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤としてのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用は、対象の胃腸管における抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０）の発現を増強し、かつ／又は炎症促進性ケモカインの発現を低減する。
【0142】
別の態様では、本発明は、対象の胃腸管における、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０）の発現の増強、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現の低減に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
【0143】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、対象の胃腸管における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現を増強し得る。抗炎症性サイトカインは、炎症促進性サイトカインの応答を制御する一連の免疫調節性分子である（例えば、Ｏｐａｌ，Ｓ．Ｍ．ａｎｄ ＤｅＰａｌｏ，Ｖ．Ａ．，２０００．Ｃｈｅｓｔ，１１７（４），ｐｐ．１１６２－１１７２を参照されたい）。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－１受容体アンタゴニスト、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、及びＩＬ－１３から選択される１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現を増強し得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－６及び／又はＩＬ－１０の発現を増強させる。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－１０の発現を増強させる。
【0144】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、対象の胃腸管における１つ以上の炎症促進性ケモカインの発現を低減し得る。炎症促進性ケモカインは、炎症条件下において上方制御されるケモカインであり、主に炎症組織への白血球の動員に関与する（例えば、Ｚｌｏｔｎｉｋ，Ａ．ａｎｄ Ｙｏｓｈｉｅ，Ｏ．，２０１２．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３６（５），ｐｐ．７０５－７１６を参照されたい）。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＣＸＣＬ－８（ＩＬ－８）、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＸＣＬ１０から選択される１つ以上の炎症促進性ケモカインの発現を低減させ得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＣＸＣＬ１０及び／又はＩＬ－８の発現を低減させる。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、ＩＬ－８の発現を低減させる。
【0145】
インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）
一態様では、本発明は、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現の増強における使用のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
一態様では、本発明は、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現の増強における使用のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。
【0146】
インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）は、アレルギー、感染に関連する免疫病理、及び自己免疫から宿主を保護するのに重要な多面的な免疫調節性サイトカインである。ＩＬ－１０は、当初、２型ヘルパーＴ細胞（Ｔ ｈｅｌｐｅｒ：ＴＨ）特異的サイトカインであるとして評価されたが、しかしながら、さらなる調査により、ＩＬ－１０産生はＴ調節性（Ｔｒｅｇ）細胞応答にも関連することが明らかになった。ＩＬ－１０欠乏マウスは、抗原に対して長期の過度の免疫応答を呈し、その多くの場合に過剰な炎症及び組織損傷を伴い、またしばしば慢性腸炎を発症する（Ｋｕｈｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７５，２６３－２７４；Ｌｅｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５６，６９－７５）。ＩＬ－１０ｍＲＮＡの低発現に関連する一塩基多型（Ｓｉｎｇｌｅ－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：ＳＮＰ）もまた、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ＲＡ）（Ｈａｊｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２７，１４２－１４５）、重症喘息（Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｌａｎｃｅｔ ３５２，１１３、及び全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ＳＬＥ）（Ｇｉｂｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，３９１５－３９２２）を有する患者において過剰発現される。胸腺及び末梢で産生されたＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞は、ＩＬ－１０を分泌する（Ｓｋｙ Ｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３１ Ｍａｙ ２０１３）。
【0147】
ＴＨ２細胞によって分泌されるサイトカインＩＬ－４、サイトカインＩＬ－５、及びサイトカインＩＬ－１３は、寄生虫感染症に関連して防御免疫を提供するが、ＩｇＥの産生を増強することによってアレルギー反応を開始、増幅、及び延長し、好酸球及び肥満細胞の動員、増殖、及び分化に関与する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２６，２９８－３０４；Ｒｏｍａｇｎａｎｉ，１９９４，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２，２２７－２５７；Ｎｏｒｔｈｒｏｐ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７，１０６２－１０６９）。ネズミ鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｍｕｒｉｓ）及びＴ．クルーズ（Ｔ． ｃｒｕｚｉｉ）などのＴＨ２誘導性寄生生物感染実験の初期の研究は、致死的なＴ細胞応答の防止におけるＩＬ－１０の重要な役割を実証している（Ｓｃｈｏｐｆ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８，２３８３－２３９２）。
【0148】
ＴＨ２が産生したＩＬ－１０は、アレルギー反応の期間中のＩＬ－４及びＩＬ－１３の下方制御に関連する（Ｇｒｕｎｉｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｅｘｐ.Ｍｅｄ．１８５，１０８９－１１００；Ｊｕｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３，１２０５－１２１４；Ａｋｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９，１５６７－１５７５）。アレルギー性気道炎症のマウスモデルにおいて、ＩＬ－１０は、ＴＨ２応答を抑制するのに重要である（Ｇｒｕｎｉｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７）。アスペルギルス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）のアレルゲンの繰り返し吸入後のＩＬ－１０ノックアウトマウス由来の肺細胞及び気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液では、高レベルのＩＬ－４、ＩＬ－５、及びＩＦＮ－γが産生されており、気道炎症の悪化をもたらしていた（Ｇｒｕｎｉｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７）。さらに、喘息患者から単離された肺胞マクロファージは、非喘息患者からの肺胞マクロファージと比較して低いレベルのＩＬ－１０を分泌する（Ｂｏｒｉｓｈ，１９９８；Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５７，２５６－２６２）。
【0149】
ＩＬ－１０は、抗原特異的治療の寛容性を首尾よく調整するという重要な役割を果たす。例えば、卵白アルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ：ＯＶＡ）に由来するペプチドの経鼻投与は、ＴＨ２により促進されるＯＶＡ／ミョウバン誘導性の気道過敏症（ＡＨＲ）の症状を低減することができる（Ａｋｂａｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００１）。ＡＨＲからの保護は、インビトロにおいてＩＬ－４及びＩＬ－１０を分泌するＯＶＡ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導する能力を有し、ＩＬ－１０を分泌する肺ＤＣの誘導と関連する（Ａｋｂａｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００１）。寛容性誘導中のＩＬ－１０の中和は、ＯＶＡ特異的ＩｇＥの産生の増加をもたらし、ＯＶＡ投与の防御効果を打ち消す（Ｖｉｓｓｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３，１２０４－１２１０）。ヒトにおいて成功したアレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）、例えば、イネ科植物花粉又はチリダニアレルギーの治療におけるその療法は、ＩＬ－１０分泌ＣＤ４＋Ｔ細胞の産生と相関がある（Ｊｕｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３，１２０５－１２１４）。ＩＬ－１０は、ＩＬ－４の下方制御、ＤＣ上のＭＨＣクラスＩＩによる抗原提示の阻害、並びにＣＤ２８、ＩＣＯＳ、及びＣＤ２を含む共刺激分子の発現の抑制によって、ＴＨ２応答を制限する（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２０，７６－８３）。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてｓｒｃ相同性ホスファターゼ（ＳＨＰ）－１に介在されるこの制限は、ＩＬ－１０がエフェクター応答を調節することができ、またナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞からのＴＨ２細胞の分化を防止できることを示唆している（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）。
【0150】
免疫調節におけるＩＬ－１０の重要な役割は、アレルギー性疾患の予防にとどまらず、炎症性腸疾患及び自己免疫疾患を含む他の疾患にまで及ぶ。ＩＢＤに関しては、ＩＬ－１０欠乏マウスが大腸炎を自然発症することが示されている（Ｋｕｈｎ ｅｔ ａｌ；１９９３，Ｃｅｌｌ．７５，２６３－２７４）。このプロセスは、ＩＬ－１０の投与又はＩＬ－１０の過剰発現によって防止することができる（Ｓｔｅｉｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ；２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２８９，１３５２－１３５５ ａｎｄ Ｈａｇｅｎｂａｕｇｈ ｅｔ ａｌ；１９９７，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８５，２１０１－２１１０）。同様に、ヒトにおけるＩＢＤの素因は、ＩＬ－１０応答の異常と強く関連している（Ｇｌｏｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ；２００９，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３６１，２０３３－２０４５）。前臨床モデルでは、ＩＬ－１０の欠乏が関節リウマチ（Ｈａｔａ ｅｔ ａｌ；２００４，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１１４，５８２－５８８）、狼瘡（Ｉｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ；１９９４，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１７９，３０５－３１０）、及び脳脊髄炎（Ｂｅｔｔｅｌｉ ｅｔ ａｌ；１９９８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，３２９９－３３０６）の発症を悪化させたことから、免疫調節におけるＩＬ－１０の重要性は、さまざまな自己免疫の病状において更に実証されている。
【0151】
投与経路
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、当業者に公知の任意の好適な方法によって投与され得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、経口投与及び／又は経腸投与によって投与され得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、経口投与される。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、当業者に公知の任意の好適な方法によって投与され得る。例えば、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、経口投与及び／又は経腸投与によって投与され得る。いくつかの実施形態では、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、経口投与される。
【0152】
対象
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は対象へ投与してもよく、ここで、対象は哺乳動物である。好適には、対象は、ヒト又はペット、例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、若しくはモルモット）、又はウサギなどである。好ましくは、対象は、ヒト対象である。
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は対象へ投与してもよく、ここで、対象は哺乳動物である。好適には、対象は、ヒト又はペット、例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、若しくはモルモット）、又はウサギなどである。好ましくは、対象は、ヒト対象である。
【0153】
対象は任意の年齢であってもよい。例えば、対象は児童又は成人であり得る。用語「児童」は、１８歳未満の対象を指し得る。用語「成人」は、１８歳以上の対象を指し得る。いくつかの実施形態では、対象は、児童である。いくつかの実施形態では、対象は、成人である。
【0154】
いくつかの実施形態では、対象は、乳児、幼児、又は小児である。用語「乳児」は、約０歳～約１歳の対象を指し得る。用語「幼児」は、約１歳～約３歳の対象を指し得る。用語「小児」は、約３歳～約５歳の対象を指し得る。いくつかの実施形態では、乳児、幼児、又は小児は、早産児、幼児、又は小児である。「早産児」又は「低出生体重児（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ）」、幼児、又は小児は、満期で生まれなかった乳児、幼児、又は小児を意味する（例えば、在胎３６週までに出生）。いくつかの実施形態では、乳児、幼児、又は小児は、帝王切開によって誕生した、又は経膣分娩された。
【0155】
対象は、ＩＬ－１０欠乏症を有し得る、又はＩＬ－１０欠乏症のリスクがあり得る。対象がＩＬ－１０欠乏症であるかどうかは、当業者に知られている任意の方法によって評価され得る。罹患患者は、主に、人生の早い時期において炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を発症する。ＩＬ－１０変異は、遺伝子シーケンシングによってスクリーニングすることができる（例えば、Ｇｌｏｃｋｅｒ，Ｅ．Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，２０１１．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１２４６（１），ｐｐ．１０２－１０７）を参照されたい）。
【0156】
対象は、過剰活性免疫系障害を有し得る、又は過剰活性免疫系障害のリスクがあり得る。かかる過剰活性免疫系障害は、「過剰活性免疫系障害を治療及び／又は予防する方法」と題するセクションでより詳細に説明している。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＬ－１０介在性疾患を有する、又はＩＬ－１０介在性疾患のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、炎症性腸疾患を有する、又は炎症性腸疾患のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、アレルギー性疾患を有する、又はアレルギー性疾患のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、皮膚炎を有する、又は皮膚炎のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、自己免疫疾患を有する、又は自己免疫疾患のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、感染に関連する免疫病理を有する、又は感染に関連する免疫病理のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化症を有するか、又は結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化症のリスクがある。
【0157】
対象は、ＩＬ－６欠乏症を有し得る、又はＩＬ－６欠乏症のリスクがあり得る。対象がＩＬ－６欠乏症であるかどうかは、当業者に公知の任意の方法によって決定され得る。
【0158】
疾患を治療又は予防する方法
一態様では、本発明は、医薬品として使用するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を投与することを含む治療の方法を提供する。
一態様では、本発明は、医薬品として使用するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を投与することを含む治療の方法を提供する。
【0159】
一態様では、本発明は、医薬品として使用するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、医薬品製造のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を投与することを含む、治療方法を提供する。
【0160】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清、サプリメント、又は栄養組成物は、対象の胃腸管において、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０）の発現を増強すること、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現を低減することによって、疾患を予防又は治療し得る。
【0161】
過剰活性免疫系障害を治療又は予防する方法
抗炎症性サイトカイン及び／又は炎症促進性ケモカインの調節不全は、慢性全身性炎症及び過剰活性免疫系をもたらし得る。
抗炎症性サイトカイン及び／又は炎症促進性ケモカインの調節不全は、慢性全身性炎症及び過剰活性免疫系をもたらし得る。
【0162】
一態様では、本発明は、過剰活性免疫系障害の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、過剰活性免疫系障害を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象の過剰活性免疫系障害を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0163】
一態様では、本発明は、過剰活性免疫系障害の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、過剰活性免疫系障害を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象における過剰活性免疫系障害を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0164】
本明細書で使用するとき、「過剰活性免疫系障害」（また、「機能亢進性免疫系障害（ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」としても知られる）は、慢性全身性炎症及び／又は過剰活性免疫系によって引き起こされる疾患を指し得る。過剰活性免疫系障害には、例えば、アレルギー性疾患及び自己免疫疾患が含まれ得る。
【0165】
いくつかの実施形態では、過剰活性免疫系障害は、ＩＬ－１０欠乏症に関連する。いくつかの実施形態では、過剰活性免疫系障害は、ＩＬ－６欠乏症に関連する。いくつかの実施形態では、過剰活性免疫系障害は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アレルギー性疾患、皮膚炎、自己免疫疾患、感染に関連する免疫病理、結腸直腸がん、骨治癒不良、及びアテローム性動脈硬化症から選択される。
【0166】
ＩＬ－１０介在性疾患
ＩＬ－１０欠乏症（ＩＬ－１０ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）は、免疫系の重度の調節不全をもたらす場合があり、微生物への暴露に対する炎症反応を増強する場合があり、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）及びいくつかの自己免疫疾患の発症をもたらし得る（Ｉｙｅｒ，Ｓ．Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｅｎｇ，Ｇ．，２０１２．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３２（１））。
ＩＬ－１０欠乏症（ＩＬ－１０ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）は、免疫系の重度の調節不全をもたらす場合があり、微生物への暴露に対する炎症反応を増強する場合があり、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）及びいくつかの自己免疫疾患の発症をもたらし得る（Ｉｙｅｒ，Ｓ．Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｅｎｇ，Ｇ．，２０１２．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３２（１））。
【0167】
一態様では、本発明は、ＩＬ－１０介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、ＩＬ－１０介在性疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象のＩＬ－１０介在性疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0168】
一態様では、本発明は、ＩＬ－１０介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ＩＬ－１０介在性疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象におけるＩＬ－１０介在性疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0169】
炎症性腸疾患
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、結腸及び小腸の一群の炎症状態である。例示的なＩＢＤとしては、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、及び回腸嚢炎が挙げられる。血清ＩＬ－１０は、炎症性腸疾患を有する患者において疾患回復中に増加することが示されている（Ｍｉｔｓｕｙａｍａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，２００６．Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２００６（６），ｐｐ．２６８７５－２６８７５）。
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、結腸及び小腸の一群の炎症状態である。例示的なＩＢＤとしては、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、及び回腸嚢炎が挙げられる。血清ＩＬ－１０は、炎症性腸疾患を有する患者において疾患回復中に増加することが示されている（Ｍｉｔｓｕｙａｍａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，２００６．Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２００６（６），ｐｐ．２６８７５－２６８７５）。
【0170】
ＩＬ－１０組換え療法は、ＩＢＤのいくつかの前臨床モデルにおいて有効性が実証されている（Ｉｙｅｒ，Ｓ．Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｅｎｇ，Ｇ．，２０１２．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３２（１），ｐｐ．２３－６３；ａｎｄ Ｌｉ，Ｍ．Ｃ．ａｎｄ Ｈｅ，Ｓ．Ｈ．，２００４．Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０（５），ｐ．６２０）。
【0171】
一態様では、本発明は、ＩＢＤの治療及び／又は予防に使用するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、ＩＢＤを治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象におけるＩＢＤを治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0172】
一態様では、本発明は、ＩＢＤの治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ＩＢＤを治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象におけるＩＢＤを治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0173】
いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。
【0174】
アレルギー性疾患
アレルギー性疾患は、典型的には環境中の無害な物質に対する免疫系の過敏反応によって引き起こされるいくつかの状態である。アレルギー性疾患としては、花粉症、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、及びアナフィラキシーが挙げられる。
アレルギー性疾患は、典型的には環境中の無害な物質に対する免疫系の過敏反応によって引き起こされるいくつかの状態である。アレルギー性疾患としては、花粉症、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、及びアナフィラキシーが挙げられる。
【0175】
アレルゲン反応性の２型ヘルパーＴ（Ｔｈ２）細胞及び炎症促進性サイトカインは、アレルギー性喘息における炎症カスケードの誘導及び維持において重要な役割を果たすことが示唆されている。血漿中のＩＬ－１０及びＩＬ－１３濃度は、正常な対照対象よりもアレルギー性喘息患者において有意に高かった（Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ＆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２５（２），ｐｐ．１７７－１８３）。更に、喘息の動物モデルにおいて、ＩＬ－１０は、アレルゲン誘導性気道炎症及び非特異的応答を阻害することができると示された（Ｉｙｅｒ，Ｓ．Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｅｎｇ，Ｇ．，２０１２．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３２（１），ｐｐ．２３－６３）。
【0176】
ＩＬ－１０遺伝子の特定の一塩基多型は、食物アレルギーを発症するリスクを高めるようである。アレルギー性疾患の免疫療法におけるＩＬ－１０を分泌するアレルゲン特異的調節性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の発達に特に関心が寄せられている（Ｎｅｄｅｌｋｏｐｏｕｌｏｕ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ａｌｌｅｒｇｏｌｏｇｉａ ｅｔ ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｉａ，４８（４），ｐｐ．４０１－４０８）。
【0177】
一態様では、本発明は、アレルギー性疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、アレルギー性疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象のアレルギー性疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0178】
一態様では、本発明は、アレルギー性疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、アレルギー性疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象におけるアレルギー性疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0179】
いくつかの実施形態では、アレルギー性疾患は、アレルギー性喘息又は食物アレルギーである。
【0180】
皮膚炎
皮膚炎（湿疹としてもまた知られる）は、皮膚の炎症であり、典型的にはかゆみ、発赤、及び発疹を特徴とする。皮膚炎としては、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、及び鬱血性皮膚炎が挙げられる。
皮膚炎（湿疹としてもまた知られる）は、皮膚の炎症であり、典型的にはかゆみ、発赤、及び発疹を特徴とする。皮膚炎としては、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、及び鬱血性皮膚炎が挙げられる。
【0181】
ＩＬ－１０は、接触性皮膚炎及びアトピー性皮膚炎において抑制的役割を有し得ることが示されている（Ｂｏｙｍａｎ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２９（１），ｐｐ．１６０－１６１）。例えば、重度のアトピー性皮膚炎は、ＩＬ－１０生成アレルゲン特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の発現頻度の低下に関連することが示されている（Ｓｅｎｅｖｉｒａｔｎｅ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，２００６．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ：Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，３１（５），ｐｐ．６８９－６９４）。更に、肥満細胞由来のＩＬ－１０は、接触性皮膚炎における皮膚病変を制限する（Ｇｒｉｍｂａｌｄｅｓｔｏｎ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００７．Ｎａｔｕｒｅ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８（１０），ｐｐ．１０９５－１１０４）。
【0182】
一態様では、本発明は、皮膚炎の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、皮膚炎を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象における皮膚炎を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0183】
一態様では、本発明は、皮膚炎の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、皮膚炎を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象における皮膚炎を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0184】
いくつかの実施形態では、皮膚炎は、アトピー性皮膚炎又は接触性皮膚炎（例えば、アレルギー性接触性皮膚炎）である。
【0185】
自己免疫疾患
自己免疫疾患は、機能的な身体部分に対する異常な免疫応答から生じる状態である。自己免疫疾患は、自己反応性リンパ球の維持に機能する、調節不全のサイトカインの発現が存在することを特徴とする。
自己免疫疾患は、機能的な身体部分に対する異常な免疫応答から生じる状態である。自己免疫疾患は、自己反応性リンパ球の維持に機能する、調節不全のサイトカインの発現が存在することを特徴とする。
【0186】
自己免疫疾患のマウスモデル及びヒトモデルの両方に関するいくつかの研究では、ＩＬ－１０レベルと疾患との間の直接的な関連を示唆する、ＩＬ－１０血清レベルの変化が実証されている。ＩＬ－１０多型は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、及びギラン・バレー症候群を含む、自己免疫疾患に関連している（Ｇｉｂｓｏｎ ＡＷ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ＩＬ－１０ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｉｎ：Ｍａｄａｍｅ Ｃｕｒｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｄａｔａｂａｓｅ）。
【0187】
一態様では、本発明は、自己免疫疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、自己免疫疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象の自己免疫疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0188】
一態様では、本発明は、自己免疫疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、自己免疫疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象における自己免疫疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0189】
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、及びギラン・バレー症候群から選択される。
【0190】
感染に関連する免疫病理
いくつかの感染症では、免疫応答は疾患の主な原因であり得る。免疫系によって引き起こされる損傷は免疫病理として知られており、抗体、過剰な生得的応答、又はリンパ球によって引き起こされ得る。
いくつかの感染症では、免疫応答は疾患の主な原因であり得る。免疫系によって引き起こされる損傷は免疫病理として知られており、抗体、過剰な生得的応答、又はリンパ球によって引き起こされ得る。
【0191】
ＩＬ－１０は、病原体のクリアランスを妨げること、及び免疫病理学を改善することの両方ができ、ウイルス、細菌、真菌、原虫、及び蠕虫による感染症の間の重要な免疫調節因子であることが明らかとなってきている。複数の研究が、感染症の解消には、初期の炎症促進性の機構が病原体を除去した後、病態が生じる前にかかる機構がＩＬ-１0によって制限される、協調的応答が必要であることを示している。例えば、ＩＬ－１０シグナル伝達の消失は、Ｔ．ゴンディ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）、マラリア、及びクルーズ・トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）を含む多くの感染症において、重度で、しばしば致命的な免疫病理の発症を引き起こす（Ｃｏｕｐｅｒ，Ｋ．Ｎ，ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８０（９），ｐｐ．５７７１－５７７７）。
【0192】
一態様では、本発明は、感染に関連する免疫病理の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、感染に関連する免疫病理を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象における感染に関連する免疫病理を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0193】
一態様では、本発明は、感染に関連する免疫病理の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、感染に関連する免疫病理を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象における感染に関連する免疫病理を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0194】
いくつかの実施形態では、感染症は、原虫（例えば、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種、プラスモディウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種、クルーズ・トリパノソーマ）、細菌（例えば、マイコバクテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）種、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）種、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、蠕虫（例えば、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）、ヘリグモソモイデス・ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ））、ウイルス（例えば、ＨＩＶ、肝炎、ＨＳＶ－１、ＬＣＭＶ、ＭＣＭＶ）、又は真菌（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ））によるものである。
【0195】
その他の疾患
ＩＬ－１０の多型は、結腸直腸がんに関連し得る（Ｔｓｉｌｉｄｉｓ，Ｋ．Ｋ，ｅｔ ａｌ．，２００９．Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｕｓｅｓ ＆ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２０（９），ｐｐ．１７３９－１７５１））。更に、結腸直腸がんは、高レベルの循環ＩＬ－１０を伴わない、広範囲の単球／マクロファージ炎症促進性サイトカインの産生の強化に関連することが示されている（Ｓｚｋａｒａｄｋｉｅｗｉｃｚ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００９．Ａｒｃｈｉｖｕｍ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａｅ ｅｔ ｔｈｅｒａｐｉａｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ，５７（４），ｐｐ．２９１－２９４）。
ＩＬ－１０の多型は、結腸直腸がんに関連し得る（Ｔｓｉｌｉｄｉｓ，Ｋ．Ｋ，ｅｔ ａｌ．，２００９．Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｕｓｅｓ ＆ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２０（９），ｐｐ．１７３９－１７５１））。更に、結腸直腸がんは、高レベルの循環ＩＬ－１０を伴わない、広範囲の単球／マクロファージ炎症促進性サイトカインの産生の強化に関連することが示されている（Ｓｚｋａｒａｄｋｉｅｗｉｃｚ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００９．Ａｒｃｈｉｖｕｍ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａｅ ｅｔ ｔｈｅｒａｐｉａｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ，５７（４），ｐｐ．２９１－２９４）。
【0196】
破壊された骨が治癒しない場合、これは「偽関節」と呼ばれ、「遷延治癒」は、骨折が治癒するのに通常よりも長い時間がかかる場合である。ＩＬ１０は、骨形成タンパク質（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ：ＢＭＰ）経路を介して軟骨細胞の増殖及び分化を促進することによって骨形成に影響を及ぼすことができ、したがって、内軟骨性骨形成に影響を及ぼす。ＩＬ－１０欠乏症マウスは、骨形成及び骨芽細胞形成の抑制を示し、骨減少症及び骨の脆弱性の増加をもたらした（Ｍａｒｕｙａｍａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１１，ｐ．３８６）。
【0197】
動脈壁において線維脂肪病変が形成されるアテローム性動脈硬化症は、世界中の多くの罹患率及び死亡率に寄与し、ほぼ心筋梗塞及び多くの脳卒中を伴い、また末梢動脈疾患を重症にする。ＩＬ－１０欠乏症はアテローム性動脈硬化症において有害な役割を果たし得ること、並びにＩＬ－１０はアテローム形成を低減させ、プラークの安定性を改善し得ることが示されている（Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，２００３．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，９（１），ｐｐ．１０－１７；ａｎｄ Ｍａｌｌａｔ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ，８５（８），ｐｐ．ｅ１７－ｅ２４）。
【0198】
一態様では、本発明は、結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防用の医薬品を製造するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象における結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0199】
一態様では、本発明は、結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防用の医薬品を製造するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、サプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象における結腸直腸がん、骨治癒不良、又はアテローム性動脈硬化を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0200】
ＩＬ－６介在性疾患
ＩＬ－６欠乏症は、例えば、炎症性骨破壊（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｎｅ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）を増加させ得る（Ｂａｌｔｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，６９（２），ｐｐ．７４４－７５０）、及び／又はハンチントン病を悪化させ得る（Ｗｅｒｔｚ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１５，ｐｐ．１－８）。ＩＬ－６欠乏症に関連する例示的な疾患は、Ｍｕｒａｋａｍｉ，ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，５０（４），ｐｐ．８１２－８３１に記載されている。
ＩＬ－６欠乏症は、例えば、炎症性骨破壊（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｎｅ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）を増加させ得る（Ｂａｌｔｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，６９（２），ｐｐ．７４４－７５０）、及び／又はハンチントン病を悪化させ得る（Ｗｅｒｔｚ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，２０２０．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１５，ｐｐ．１－８）。ＩＬ－６欠乏症に関連する例示的な疾患は、Ｍｕｒａｋａｍｉ，ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，５０（４），ｐｐ．８１２－８３１に記載されている。
【0201】
一態様では、本発明は、ＩＬ－６介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を提供する。別の態様では、本発明は、ＩＬ－６介在性疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清の使用を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を対象へ投与することを含む、対象のＩＬ－６介在性疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0202】
一態様では、本発明は、ＩＬ－６介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ＩＬ－６介在性疾患を治療及び／又は予防するための医薬品の製造のための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメント又は栄養組成物を対象へ投与することを含む、対象におけるＩＬ－６介在性疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。
【0203】
製造方法
本発明のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、当技術分野で公知の任意の好適な方法によって調製してもよい。例えば、細菌上清の調製は、Ｍｏｒａｄｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０２１．Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４３，ｐ．１０９７２２に記載されている。
本発明のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、当技術分野で公知の任意の好適な方法によって調製してもよい。例えば、細菌上清の調製は、Ｍｏｒａｄｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０２１．Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４３，ｐ．１０９７２２に記載されている。
【0204】
例示的な培養条件及び処理工程は、上記「培養上清の調製」と題したセクションで説明しており、本発明にかかる製造方法は、該セクションに記載されている工程のいずれかを含み得る。
【0205】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を製造する方法を提供し、本方法は、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程であって、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離によって除去される、工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
を含む。
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程であって、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離によって除去される、工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
を含む。
【0206】
本方法は任意の他の好適な処理工程を含んでもよい。好ましい実施形態では、本方法は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させる工程（ｄ）を更に含む。
【0207】
ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、本明細書に記載の任意のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清であり得る。
【0208】
一態様では、本発明は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを得る方法を提供し、本方法は、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程であって、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離によって除去される、工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
（ｄ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させて、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を得る工程と、
（ｅ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を処理して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を含むサプリメントを得る工程と、
を含む。
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程であって、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス細胞は、遠心分離によって除去される、工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
（ｄ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させて、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を得る工程と、
（ｅ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を処理して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を含むサプリメントを得る工程と、
を含む。
【0209】
本方法は任意の他の好適な処理工程を含んでもよい。例えば、いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包、圧縮成形、及び／又は包装して、サプリメントを得る工程を含む。例えば、いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末をカプセル内包して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むカプセルを得る工程を含む。
【0210】
サプリメンは、本明細書に記載の任意のサプリメントであり得る。
【0211】
例示的な培養条件及び処理工程は、上記「培養上清の調製」と題したセクションで説明しており、本発明にかかる製造方法は、該セクションに記載されている工程のいずれかを含み得る。
【0212】
［実施例］
次に、実施例により本発明を更に説明するが、これらの実施例は、当業者が本発明を実施するのに役立てるために提供することを意味するものであり、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。
次に、実施例により本発明を更に説明するが、これらの実施例は、当業者が本発明を実施するのに役立てるために提供することを意味するものであり、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。
【0213】
実施例１ Ｂ．ラクティス培養上清、Ｂ．ラクティスプロバイオティクス、及びこれらの両方の組み合わせの免疫効果の比較
培養上清粉末の生成
Ｂ．ラクティス（ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６）の培養上清を、パイロットプラント規模で生成した（８０００Ｌの主発酵）。主発酵のための接種材料は、１２００Ｌスタータ発酵にてパイロットプラント規模で生成された。主発酵工程は、ｐＨ制御（ｐＨ６．０）、撹拌、及び定常期に達するまでのヘッド・スペース・ガス法（二酸化炭素）を用いて、３７℃で実施した。培地は、酵母エキス、アスコルビン酸ナトリウム、及びデキストロースを含有していた。定常期に達した後、発酵物を連続遠心分離機で遠心分離して、細菌細胞の大部分を除去した。続いて、培養上清を、プレート熱交換器で９９℃にて１０秒間パスチャライズして、残存している生細胞を不活性化させた後、キャニスタへ充填して凍結させた。
培養上清粉末の生成
Ｂ．ラクティス（ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６）の培養上清を、パイロットプラント規模で生成した（８０００Ｌの主発酵）。主発酵のための接種材料は、１２００Ｌスタータ発酵にてパイロットプラント規模で生成された。主発酵工程は、ｐＨ制御（ｐＨ６．０）、撹拌、及び定常期に達するまでのヘッド・スペース・ガス法（二酸化炭素）を用いて、３７℃で実施した。培地は、酵母エキス、アスコルビン酸ナトリウム、及びデキストロースを含有していた。定常期に達した後、発酵物を連続遠心分離機で遠心分離して、細菌細胞の大部分を除去した。続いて、培養上清を、プレート熱交換器で９９℃にて１０秒間パスチャライズして、残存している生細胞を不活性化させた後、キャニスタへ充填して凍結させた。
【0214】
液体の培養上清を、例えばサプリメントに使用することができる粉末へと変換するために、乾燥方法を開発した。噴霧乾燥は、この技術が大容量に好適であり、エネルギー効率がよく、容易に利用可能であるため、好ましい技術として選択した。噴霧乾燥実験のために、卓上型ビュッヒ噴霧乾燥機を使用した。粘着性を低下させ、物理的安定性を改善する担体材料を試験した。これらの試験では、オートムギ繊維、マルトデキストリン、アカシアゴム（アラビアガム）、デンプン、及びイヌリンが好適な食品用担体材料として特定された。担体を、総固形分比１：３及び総固形分比１：１（担体：培養上清乾燥固形分）で培養上清溶液へ添加した。全体として、１：１の比は、１：３の比と比較して粘着性の挙動がより少なかった。
【0215】
生成された全ての粉末のうち、１：１の比のアカシアゴムを含む培養上清粉末を、インビトロでの結腸シミュレーション研究のために選択し、続いてインビトロ免疫アッセイを行った。
【0216】
短期の結腸インキュベーション
成人腸内微生物叢における、プロバイオティクスＢ．ラクティス（ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６）を含む又は含まない培養上清粉末の腸内変換を模倣するために、結腸のインビトロモデルを採用した。短期のバッチでの実験は、ヒト微生物生態系の連続シミュレータ（ＳＨＩＭＥ（登録商標））の単純化されたシミュレーションを表す。このモデルは20年以上使用されており、これまでにインビボパラメータで検証されている。短期の結腸インキュベーションアッセイは、典型的には、選択されたドナーから得られた細菌接種材料を用いた健康な成人の近位大腸を表す模擬条件下において、選択された用量の試験化合物（複数可）を結腸発酵させることから構成される。
成人腸内微生物叢における、プロバイオティクスＢ．ラクティス（ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６）を含む又は含まない培養上清粉末の腸内変換を模倣するために、結腸のインビトロモデルを採用した。短期のバッチでの実験は、ヒト微生物生態系の連続シミュレータ（ＳＨＩＭＥ（登録商標））の単純化されたシミュレーションを表す。このモデルは20年以上使用されており、これまでにインビボパラメータで検証されている。短期の結腸インキュベーションアッセイは、典型的には、選択されたドナーから得られた細菌接種材料を用いた健康な成人の近位大腸を表す模擬条件下において、選択された用量の試験化合物（複数可）を結腸発酵させることから構成される。
【0217】
新たに調製したヒト糞便試料を、結腸モデルの接種のための接種材料用の微生物群の供給源として使用した。異なる３名の健常ドナー（ドナーＤ１、ドナーＤ２、ドナーＤ３）から糞便接種材料を得た。短期の結腸インキュベーションの開始時に、試験製品を、結腸内に存在する基本栄養（例えば、ムチンなどの宿主由来グリカン）を含有する糖枯渇栄養培地へ添加した。Ｂ．ラクティス培養上清粉末の用量は３．６ｇ／Ｌとし、Ｂ．ラクティスプロバイオティクス培養粉末の用量は１．４Ｅ＋０８ｃｆｕ／ｍＬ（通常用量）とした。２つの原材料を個別に組み合わせて使用した。更に、２．６ｇ／Ｌの培養上清粉末及び１．４Ｅ＋０７ｃｆｕ／ｍＬのＢ．ラクティスとの低用量の組合せを試験した。細菌群のバックグラウンド活性を模倣するために、糖を枯渇させた栄養培地のみを含有するブランクもまた含めた。インキュベーションは、３７℃で、振盪（９０ｒｐｍ）及び嫌気性条件下で４８時間行われた。生物学的なばらつきを考慮して、全ての試験を３回行った。糖を枯渇させた栄養培地に被検原材料を添加して、３名のドナーの糞便接種材料を４８時間結腸インキュベーションした後、試料を採取し、濾過滅菌（０．２２μｍ）によって細胞を取り除いた。次いで、これらの濾過滅菌後の試料を免疫アッセイに使用した。
【0218】
免疫アッセイ
宿主と腸内微生物叢との間の界面を模倣するために、ヒト由来の腸上皮様細胞及び免疫細胞に基づくインビトロモデルが開発されている。この研究では、Ｓａｔｓｕ氏らの研究（Ｓａｔｓｕ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，３１２：３９０９－９３９）に基づいて、腸上皮様細胞（Ｃａｃｏ－２細胞）及びヒト単球／マクロファージ（ＴＨＰ１細胞）の共培養モデル（Ｐｏｓｓｅｍｉｅｒｓ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，６１：９３８０－９３９）を使用した。このモデルでは、抗炎症能は、サイトカインプロファイルの分析（抗炎症性サイトカインの増加及び炎症促進性サイトカインの低減）によって決定される。結腸インキュベーションから収集したフィルタ滅菌結腸懸濁液を、共培養物のアピカル側（Ｃａｃｏ－２細胞）と接触させる。次いで、基底膜側チャンバー（ＴＨＰ１細胞が存在する場所）で観察される効果は、Ｃａｃｏ－２細胞によって生成されるシグナルによって、並びに／又は微小分子及び巨大分子の輸送によって、間接的に調節される。これにより、消化工程中に腸内微生物叢によって生成される、生成物及び発酵由来代謝産物によって誘導される（したがって、純粋な生成物によってではない）効果を評価することができる。
宿主と腸内微生物叢との間の界面を模倣するために、ヒト由来の腸上皮様細胞及び免疫細胞に基づくインビトロモデルが開発されている。この研究では、Ｓａｔｓｕ氏らの研究（Ｓａｔｓｕ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，３１２：３９０９－９３９）に基づいて、腸上皮様細胞（Ｃａｃｏ－２細胞）及びヒト単球／マクロファージ（ＴＨＰ１細胞）の共培養モデル（Ｐｏｓｓｅｍｉｅｒｓ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，６１：９３８０－９３９）を使用した。このモデルでは、抗炎症能は、サイトカインプロファイルの分析（抗炎症性サイトカインの増加及び炎症促進性サイトカインの低減）によって決定される。結腸インキュベーションから収集したフィルタ滅菌結腸懸濁液を、共培養物のアピカル側（Ｃａｃｏ－２細胞）と接触させる。次いで、基底膜側チャンバー（ＴＨＰ１細胞が存在する場所）で観察される効果は、Ｃａｃｏ－２細胞によって生成されるシグナルによって、並びに／又は微小分子及び巨大分子の輸送によって、間接的に調節される。これにより、消化工程中に腸内微生物叢によって生成される、生成物及び発酵由来代謝産物によって誘導される（したがって、純粋な生成物によってではない）効果を評価することができる。
【0219】
共培養実験は、既報のように行った（Ｄａｇｕｅｔ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄｓ，２０：３６９－３７９）。手短に言えば、Ｃａｃｏ－２細胞（ＨＴＢ－３７；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を、２４ウェルの半透性インサートに播種した。機能性細胞の単層が得られるまで、３回の培地交換／週で１４日間にわたりＣａｃｏ－２単層を培養した。ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）細胞を２４ウェルプレートに播種し、マクロファージ様細胞（接着することができ、かつトール様受容体（ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＬＲ）シグナル伝達のためにプライミングされる）への細胞分化を誘導するホルボール１２ミリステート１３アセテート（ＰＭＡ）で処理した。既報のように、更なる実験のために、Ｃａｃｏ－２担持インサートをＰＭＡ分化ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）細胞の上に置いた（Ｐｏｓｓｅｍｉｅｒｓ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，６１：９３８０－９３９；Ｄａｇｕｅｔ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄｓ，２０：３６９－３７９）。簡潔には、アピカルコンパートメント（Ｃａｃｏ－２細胞を含有）を、濾過滅菌した（０．２２μｍ）結腸バッチ懸濁液で満たした。細胞はまた、陽性対照として酪酸ナトリウム（ＮａＢ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いアピカル側を処理した。基底膜側コンパートメント（ＴＨＰ１－Ｂｌｕｅ（商標）細胞を含有）をＣａｃｏ－２完全培地で満たした。細胞はまた、対照として両方のチャンバーにおいてＣａｃｏ－２完全培地に曝露させた。
【0220】
細胞を２４時間にわたり処理し、次いで、側底の培養上清を捨て、超純粋（ｕｌｔｒａｐｕｒｅ）リポ多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）を含有するＣａｃｏ－２完全培地により細胞の基底膜側を刺激した。細胞はまた、ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ：ＨＣ）と組み合わせたＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び対照としてＬＰＳを含まない培地（ＬＰＳ－）で、６時間にわたり、基底膜側を刺激した。ＬＰＳ刺激後、製造者による指示に従い、サイトカイン測定（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）マルチプレックス（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ－ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によるヒトＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＴＮＦ－α、ＣＸＣＬ１０、及びＭＣＰ－１）及びＮＦ－κＢ活性のために、基底膜側の培養上清を収集した。ＭＣＰ－１は規格の上限値を超えており、結果が信頼できないため除外した。
【0221】
全ての処理を３連で行った。細胞を、空気／ＣＯ２（９５：５、ｖ／ｖ）の加湿雰囲気中で、３７℃でインキュベートした。全ての結腸バッチ試料を、細胞アッセイにおいて生物学的複製物（ｎ＝３）として採取した。免疫マーカーの差を評価するために、ダネットの多重比較検定を用いた２元配置分散分析を用いて処置試料をそれぞれの対照試料と比較し、（＊）で表した。（＊）、（＊＊）、（＊＊＊）、及び（＊＊＊＊）は、それぞれ、ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、ｐ＜０．００１、及びｐ＜０．０００１を表す。全ての統計は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ８．３．０ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて行った。
【0222】
全ての結腸バッチ懸濁液は、ＬＰＳ＋対照と比較して、ＮＦ－κＢ活性を増加させた（図１）。更に、ドナー１において、Ｂ．ラクティスとのインキュベーションは、その対照と比較してＮＦ－κＢ活性を有意に増加させた。更に、ドナー１及びドナー３において、Ｂ．ラクティス由来培養上清、並びにＢ．ラクティスとその上清との組合せは、ＮＦ－κＢ活性を有意に増加させた。これらの効果は、全てのドナーの平均を観察したときに反映されていた。結論として、Ｂ．ラクティス由来培養上清及びＢ．ラクティスとその培養上清との組合せは、３名のドナーのうち２名においてＬＰＳ誘導性ＮＦ－κＢ活性を有意に増加させた。
【0223】
全ての結腸バッチ懸濁液（ドナー１におけるブランク試料並びにＢ．ラクティスと培養上清との試料を除く）は、ＬＰＳ＋対照と比較して、抗炎症性サイトカインＩＬ－６の分泌を増加させた（図２Ａ）。更に、Ｂ．ラクティスは、全てのドナーにおいてＬＰＳ誘導性ＩＬ－６分泌を増加させる傾向があったが、一方で培養上清は、ドナー１及びドナー３においてＩＬ－６分泌を有意に増加させた。ドナー２において、培養上清はＩＬ－６分泌を増加させる傾向があった。両方の濃度で、Ｂ．ラクティスと培養上清との組合せは、ドナー３におけるＩＬ－６分泌を有意に増加させた。ドナー２では、通常用量のＢ．ラクティスと培養上清とのみがＩＬ－６分泌を有意に増加させたが、一方でドナー１では効果は見られなかった。全ドナーの平均を観察したところ、Ｂ．ラクティス、その培養上清、及びＢ．ラクティスと培養上清との組合せ（通常用量）は、ＬＰＳ誘導性ＩＬ－６分泌を有意に増加させた。概して、ＩＬ－６分泌に対する効果は上清で最も顕著であった。
【0224】
全ての結腸バッチ懸濁液は、ＬＰＳ＋対照と比較して、抗炎症性サイトカインＩＬ－１０の分泌を増加させた（図２Ｂ）。ドナー２及びドナー３では、Ｂ．ラクティスとのインキュベーションはＩＬ－１０の分泌を増加させ、ドナー２においては有意に増加した。更に、全てのドナーにおいて培養上清はＩＬ－１０分泌を有意に増加させた。Ｂ．ラクティスと培養上清との組合せは、ドナー３においていずれの濃度でもＩＬ－１０の分泌を有意に増加させたが、一方で、ドナー２においては、この効果は、通常用量レベルでのみ観察された。全ドナーの平均を観察したところ、Ｂ．ラクティス、その培養上清、及びＢ．ラクティスと培養上清との組合せ（通常用量）は、ＬＰＳ誘導性ＩＬ－１０分泌を有意に増加させた。概して、ＩＬ－１０分泌に対する効果は上清で最も顕著であった。
【0225】
結論として、Ｂ．ラクティスは、抗炎症性サイトカインのＩＬ－６及びＩＬ－１０の分泌をわずかに増加させた。対照的に、Ｂ．ラクティス由来培養上清は、これらのサイトカインの分泌を強く増加させた。最後に、通常用量では、Ｂ．ラクティスと培養上清ともまた、ＩＬ－６及びＩＬ－１０の分泌を有意に増加させたが、ただし、その程度は培養上清単独よりも少ない。
【0226】
Ｂ．ラクティスと培養上清（通常用量）との組合せは、ドナー１及びドナー３において、対照と比較してケモカインＣＸＣＬ１０のＬＰＳ誘導性分泌を有意に減少させた（図３Ａ）。更に、Ｂ．ラクティス由来培養上清は、ドナー３におけるＣＸＣＬ１０分泌を有意に低減させた。Ｂ．ラクティスで処理した結腸懸濁液は、ドナー３においてＣＸＣＬ１０の分泌をわずかに減少させたが、一方で、ドナー２においてはその分泌を増加させた。全ドナーの平均を観察したところ、Ｂ.ラクティスと培養上清（通常用量）との組合せは、対照と比較して、ＣＸＣＬ１０の発現を有意に減少させた。Ｂ．ラクティスで処理したドナー２の試料及びドナー３のブランク試料のＣＸＣＬ１０レベルは、レプリケートの値のいくつかが標準の線形範囲から外れたため、正確に決定することができなかった。したがって、これらの試料では濃度が過大評価される可能性がある。
【0227】
Ｂ．ラクティスで処理した結腸懸濁液は、ドナー２及びドナー３において、対照と比較してケモカインＩＬ－８の分泌を有意に減少させた（図３Ｂ）。さらに、Ｂ．ラクティス由来培養上清及びＢ．ラクティスと培養上清との組合せ（通常用量）は、ドナー１及びドナー２においてＩＬ－８分泌を有意に減少させた。全ドナーの平均を観察したところ、Ｂ．ラクティス、その培養上清、及びＢ．ラクティスと培養上清との組合せ（通常用量）は、ＩＬ－８分泌を有意に減少させた。
【0228】
結論として、Ｂ．ラクティス、その培養上清、及びＢ．ラクティスと培養上清との組合せ（通常用量）は、ケモカインＩＬ－８の分泌を有意に減少させた。さらに、Ｂ．ラクティスと培養上清との通常用量は、ケモカインＣＸＣＬ１０の分泌を有意に減少させた。
【0229】
複数の異なる処理によって誘導される、ブランク対照と比較した変化の概要を提供するために、処理結腸バッチ懸濁液を対照結腸バッチ懸濁液に対して正規化した。図４に概説する。全ての処置は、抗炎症性サイトカインのＩＬ－６及びＩＬ－１０の分泌をわずかに増加させた。Ｂ.ラクティス由来培養上清では最も強い効果が認められ、次いで、Ｂ.ラクティスプロバイオティクスとその培養上清との組合せの通常用量で認められた。更に、全ての処理はケモカインＩＬ－８の分泌を減少させ、最も強い効果は上清で観察された。対照的に、Ｂ．ラクティスとその培養上清（通常用量）との組合せは、ケモカインＣＸＣＬ１０の分泌に対して最も強い阻害効果を示した。
【0230】
結論として、Ｂ．ラクティス由来培養上清並びにＢ．ラクティスとその培養上清との組合せ（通常用量）は、使用したインビトロＣａｃｏ－２／ＴＨＰ１共培養モデルにおいて有意な抗炎症特性を実証した。様々な臨床試験において、培養上清のいくつかの特徴が、その免疫調節効果についてプロバイオティクスが十分に実証されているプロバイオティクスビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６よりも優れていたことは、驚くべきことであった。
【0231】
実施形態
本発明の様々な好ましい特徴及び実施形態を、以下の付番したパラグラフ（段落）を参照して説明する。
１．過剰活性免疫系障害を有する又は過剰活性免疫系障害のリスクがある対象の胃腸管における、抗炎症性サイトカインの発現の増強、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現の低減に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強する、段落１に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３．過剰活性免疫系障害が、ＩＬ－１０介在性疾患である、段落１又は段落２に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４．ＩＬ－１０介在性疾患を有する又はＩＬ－１０介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－１０の発現の増強に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
５．対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強することによる、ＩＬ－１０介在性疾患の治療又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
６．ＩＬ－６介在性疾患を有する又はＩＬ－６介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－６の発現の増強に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
７．対象の胃腸管におけるＩＬ－６の発現を増強することによる、ＩＬ－６介在性疾患の治療又は予防に使用するのための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
８．ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０から選択される、段落１～段落７のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
９．ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６に対して、少なくとも９９．０％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスである、段落１～段落８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１０．ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６である、段落１～段落９のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、糖及び酵母エキス、並びに任意選択的にアスコルビン酸ナトリウム及び／又はポリソルベートを含む培養培地中においてビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって得られる、又は得ることがでる、段落１～段落１０のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１２．
（ｉ）培養培地が、約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の糖を含み、
（ｉｉ）培養培地が、約１重量％～約１０重量％、又は約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の酵母エキスを含み、
（ｉｉｉ）培養培地が、約０重量％～約０．５重量％、又は約０．１重量％～約０．２重量％のアスコルビン酸ナトリウムを含み、かつ、
（ｉｖ）培養培地が、約０重量％～約１重量％、又は約０重量％～約０．３重量％のポリソルベートを含む、
段落７に記載の使用、又は段落７に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１３．糖が、グルコース、デキストロース、及び／又はグルコースシロップである、段落１１若しくは段落１２に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨで培養することによって、得られる又は得ることができる、段落１１～段落１３のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティスを、定常期に達するまで培養することによって、得られる又は得ることができる、段落１～段落１４のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、嫌気性条件下においてビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって、得られる又は得ることができる、段落１～段落１５のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１７．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去することによって、得られる又は得ることができる、段落１～段落１６のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１８．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、パスチャライズされている、段落１～段落１７のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１９．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、乾燥されている、段落１～段落１８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２０．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥により乾燥されている、段落１９に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、オートムギ繊維、マルトデキストリン、アカシアゴム、デンプン、及びイヌリンのうち１つ以上から選択される担体材料と共に噴霧乾燥され、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、アカシアゴムと共に噴霧乾燥される、段落２０に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清及び担体材料が、総固形分比約１：３～約２：１（担体：培養上清乾燥固形分）で混合され、好ましくは総固形分比が、約１：１（担体：培養上清乾燥固形分）である、段落１７に記載の使用、又は段落１７に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、経口投与される、段落１～段落２２のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、サプリメント又は栄養組成物の形態である、段落１～段落２３のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、カプセル又はタブレットの形態である、段落１～段落２４のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が
（ｉ）全糖濃度の減少、
（ｉｉ）全酸濃度の増加、及び／又は、
（ｉｉｉ）全アミノ酸濃度の減少、
を有する、段落１若しくは段落４～段落２１のいずれか一段落に記載の使用、又は段落２～段落２１のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２７．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、全糖濃度が、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％減少している、段落２６に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２８．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、全酸濃度が、全糖濃度の減少の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％増加している、段落２６又は段落２７に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２９．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、全アミノ酸濃度が、少なくとも約０．１重量％、少なくとも約０．２重量％、又は少なくとも約０．３重量％減少している、段落２６～段落２８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３０．パスチャライズの前に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約１×１０７～約１×１０９ｃｆｕ／ｍＬの生細胞数を有する、段落１～段落２９のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、又は約０．５重量％以下の全糖を含む、段落１～段落３０のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約０．５重量％以上、約１重量％以上、約１．５重量％以上、又は約２重量％以上の全酸を含む、段落１～段落３１のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約３．５重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．８重量％以下、又は約０．６重量％以下の全アミノ酸を含む、段落１～段落３２のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨを有し、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約６．２のｐＨを有する、段落１～段落３３のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと組み合わせて使用され、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、１つ以上のプロバイオティクスと組み合わせて使用される、段落１～段落３４のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスと組み合わせて使用される、段落１～段落３５のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３７．プロバイオティクスビフィドバクテリウム・ラクティスが、培養上清が由来するビフィドバクテリウム・ラクティスと同じである、段落３６に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３８．対象が、ＩＬ－１０欠乏症を有する、又はＩＬ－１０欠乏症のリスクがある、段落１～段落３７のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３９．対象が、哺乳動物であり、好ましくは対象が、ヒト、イヌ、ネコ、げっ歯類、又はウサギであり、より好ましくは対象が、ヒトである、段落１～段落３８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４０．ＩＬ－１０介在性疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アレルギー性疾患、皮膚炎、自己免疫疾患、感染に関連する免疫病理、結腸直腸がん、骨治癒不良、及びアテローム性動脈硬化症から選択される、段落３～段落５又は段落８～段落３９のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４１．
（ｉ）ＩＢＤが、クローン病（ＣＤ）若しくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり；
（ｉｉ）アレルギー性疾患が、アレルギー性喘息若しくは食物アレルギーであり；
（ｉｉｉ）皮膚炎が、アトピー性皮膚炎若しくは接触性皮膚炎であり；
（ｉｖ）自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、強直性脊椎炎、及びギラン・バレー症候群から選択され；並びに／又は、
（ｖ）感染は、原虫感染症、細菌感染症、線虫感染症、ウイルス感染症、及び真菌感染症から選択される、
段落４０に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥されている、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、段落８項～段落１９項又は段落２１～段落３４のいずれか一段落に従って定義されるとおりである、段落４２に記載のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントであって、好ましくはサプリメントが、カプセル又はタブレットの形態である、サプリメント。
４５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、栄養組成物。
４６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、段落８～段落２３又は段落２５～段落３４のいずれか一段落に記載のとおりである、段落４４に記載のサプリメント、又は段落４５に記載の栄養組成物。
４７．サプリメント又は栄養組成物が、１種以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスを含み、好ましくはサプリメント又は栄養組成物が、１種以上のプロバイオティクスを含む、段落４４若しくは段落４６に記載のサプリメント、又は段落４５若しくは段落４６に記載の栄養組成物。
４８．サプリメント又は栄養組成物が、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスを含み、好ましくはプロバイオティクスビフィドバクテリウム・ラクティスが、培養上清が由来するビフィドバクテリウム・ラクティスと同じである、段落４４、段落４６、若しくは段落４７のいずれか一段落に記載のサプリメント、又は段落４５～段落４７のいずれか一段落に記載の栄養組成物。
４９．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を製造する方法であって、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
を含む、方法。
５０．方法が、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させる工程（ｄ）を更に含み、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥によって乾燥される、段落４９に記載の方法。
５１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、段落４２又は段落４３に記載のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清である、段落４９又は段落５０に記載の方法。
５２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを製造する方法であって、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程、
（ｄ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させて、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を得る工程と、
（ｅ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包、圧縮成形、及び／又は包装して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを得る工程、
を含む、方法。
５３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥によって乾燥される、段落５２に記載の方法。
５４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むカプセルを得る、段落５２又は段落５３に記載の方法。
５５．サプリメントが、段落４４、段落４６、段落４７、又は段落４８のいずれか一段落に記載のサプリメントである、段落５２～段落５４のいずれか一段落に記載の方法。
本発明の様々な好ましい特徴及び実施形態を、以下の付番したパラグラフ（段落）を参照して説明する。
１．過剰活性免疫系障害を有する又は過剰活性免疫系障害のリスクがある対象の胃腸管における、抗炎症性サイトカインの発現の増強、及び／又は炎症促進性ケモカインの発現の低減に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強する、段落１に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３．過剰活性免疫系障害が、ＩＬ－１０介在性疾患である、段落１又は段落２に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４．ＩＬ－１０介在性疾患を有する又はＩＬ－１０介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－１０の発現の増強に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
５．対象の胃腸管におけるＩＬ－１０の発現を増強することによる、ＩＬ－１０介在性疾患の治療又は予防に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
６．ＩＬ－６介在性疾患を有する又はＩＬ－６介在性疾患のリスクがある対象の胃腸管における、ＩＬ－６の発現の増強に使用するための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
７．対象の胃腸管におけるＩＬ－６の発現を増強することによる、ＩＬ－６介在性疾患の治療又は予防に使用するのための、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
８．ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＬＣ１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＳＭ１０１４０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶ９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌ－０４、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｉ－０７、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢ４２０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢＢ－１２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＤ０１１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＨＮ０１９、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＤＮ－１７３ ０１０、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＡＴＣＣ ２７５３６、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＶＴＴ Ｅ－０１２０１０から選択される、段落１～段落７のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
９．ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６に対して、少なくとも９９．０％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％の配列同一性を有する、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスである、段落１～段落８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１０．ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＣＮＣＭ Ｉ－３４４６である、段落１～段落９のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、糖及び酵母エキス、並びに任意選択的にアスコルビン酸ナトリウム及び／又はポリソルベートを含む培養培地中においてビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって得られる、又は得ることがでる、段落１～段落１０のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１２．
（ｉ）培養培地が、約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の糖を含み、
（ｉｉ）培養培地が、約１重量％～約１０重量％、又は約１重量％～約６重量％、又は約２重量％～約４重量％の酵母エキスを含み、
（ｉｉｉ）培養培地が、約０重量％～約０．５重量％、又は約０．１重量％～約０．２重量％のアスコルビン酸ナトリウムを含み、かつ、
（ｉｖ）培養培地が、約０重量％～約１重量％、又は約０重量％～約０．３重量％のポリソルベートを含む、
段落７に記載の使用、又は段落７に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１３．糖が、グルコース、デキストロース、及び／又はグルコースシロップである、段落１１若しくは段落１２に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清は、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨで培養することによって、得られる又は得ることができる、段落１１～段落１３のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティスを、定常期に達するまで培養することによって、得られる又は得ることができる、段落１～段落１４のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、嫌気性条件下においてビフィドバクテリウム・ラクティスを培養することによって、得られる又は得ることができる、段落１～段落１５のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１７．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去することによって、得られる又は得ることができる、段落１～段落１６のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１８．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、パスチャライズされている、段落１～段落１７のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
１９．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、乾燥されている、段落１～段落１８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２０．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥により乾燥されている、段落１９に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、オートムギ繊維、マルトデキストリン、アカシアゴム、デンプン、及びイヌリンのうち１つ以上から選択される担体材料と共に噴霧乾燥され、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、アカシアゴムと共に噴霧乾燥される、段落２０に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清及び担体材料が、総固形分比約１：３～約２：１（担体：培養上清乾燥固形分）で混合され、好ましくは総固形分比が、約１：１（担体：培養上清乾燥固形分）である、段落１７に記載の使用、又は段落１７に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、経口投与される、段落１～段落２２のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、サプリメント又は栄養組成物の形態である、段落１～段落２３のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、カプセル又はタブレットの形態である、段落１～段落２４のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が
（ｉ）全糖濃度の減少、
（ｉｉ）全酸濃度の増加、及び／又は、
（ｉｉｉ）全アミノ酸濃度の減少、
を有する、段落１若しくは段落４～段落２１のいずれか一段落に記載の使用、又は段落２～段落２１のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２７．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、全糖濃度が、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％減少している、段落２６に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２８．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、全酸濃度が、全糖濃度の減少の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％増加している、段落２６又は段落２７に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
２９．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養培地と比較して、全アミノ酸濃度が、少なくとも約０．１重量％、少なくとも約０．２重量％、又は少なくとも約０．３重量％減少している、段落２６～段落２８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３０．パスチャライズの前に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約１×１０７～約１×１０９ｃｆｕ／ｍＬの生細胞数を有する、段落１～段落２９のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、又は約０．５重量％以下の全糖を含む、段落１～段落３０のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約０．５重量％以上、約１重量％以上、約１．５重量％以上、又は約２重量％以上の全酸を含む、段落１～段落３１のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約３．５重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．８重量％以下、又は約０．６重量％以下の全アミノ酸を含む、段落１～段落３２のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約５～約７のｐＨ、約５．５～約６．５のｐＨ、又は約６のｐＨを有し、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、約６．２のｐＨを有する、段落１～段落３３のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、１つ以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスと組み合わせて使用され、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、１つ以上のプロバイオティクスと組み合わせて使用される、段落１～段落３４のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスと組み合わせて使用される、段落１～段落３５のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３７．プロバイオティクスビフィドバクテリウム・ラクティスが、培養上清が由来するビフィドバクテリウム・ラクティスと同じである、段落３６に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３８．対象が、ＩＬ－１０欠乏症を有する、又はＩＬ－１０欠乏症のリスクがある、段落１～段落３７のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
３９．対象が、哺乳動物であり、好ましくは対象が、ヒト、イヌ、ネコ、げっ歯類、又はウサギであり、より好ましくは対象が、ヒトである、段落１～段落３８のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４０．ＩＬ－１０介在性疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アレルギー性疾患、皮膚炎、自己免疫疾患、感染に関連する免疫病理、結腸直腸がん、骨治癒不良、及びアテローム性動脈硬化症から選択される、段落３～段落５又は段落８～段落３９のいずれか一段落に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４１．
（ｉ）ＩＢＤが、クローン病（ＣＤ）若しくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり；
（ｉｉ）アレルギー性疾患が、アレルギー性喘息若しくは食物アレルギーであり；
（ｉｉｉ）皮膚炎が、アトピー性皮膚炎若しくは接触性皮膚炎であり；
（ｉｖ）自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、強直性脊椎炎、及びギラン・バレー症候群から選択され；並びに／又は、
（ｖ）感染は、原虫感染症、細菌感染症、線虫感染症、ウイルス感染症、及び真菌感染症から選択される、
段落４０に記載の使用のためのビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥されている、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、段落８項～段落１９項又は段落２１～段落３４のいずれか一段落に従って定義されるとおりである、段落４２に記載のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清。
４４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントであって、好ましくはサプリメントが、カプセル又はタブレットの形態である、サプリメント。
４５．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含む、栄養組成物。
４６．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、段落８～段落２３又は段落２５～段落３４のいずれか一段落に記載のとおりである、段落４４に記載のサプリメント、又は段落４５に記載の栄養組成物。
４７．サプリメント又は栄養組成物が、１種以上のプロバイオティクス、プレバイオティクス、又はシンバイオティクスを含み、好ましくはサプリメント又は栄養組成物が、１種以上のプロバイオティクスを含む、段落４４若しくは段落４６に記載のサプリメント、又は段落４５若しくは段落４６に記載の栄養組成物。
４８．サプリメント又は栄養組成物が、ビフィドバクテリウム・ラクティスプロバイオティクスを含み、好ましくはプロバイオティクスビフィドバクテリウム・ラクティスが、培養上清が由来するビフィドバクテリウム・ラクティスと同じである、段落４４、段落４６、若しくは段落４７のいずれか一段落に記載のサプリメント、又は段落４５～段落４７のいずれか一段落に記載の栄養組成物。
４９．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を製造する方法であって、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程と、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程と、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程と、
を含む、方法。
５０．方法が、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させる工程（ｄ）を更に含み、好ましくはビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥によって乾燥される、段落４９に記載の方法。
５１．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、段落４２又は段落４３に記載のビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清である、段落４９又は段落５０に記載の方法。
５２．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを製造する方法であって、
（ａ）培養培地でビフィドバクテリウム・ラクティスを培養して、ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物を得る工程、
（ｂ）ビフィドバクテリウム・ラクティス発酵物から実質的に全てのビフィドバクテリウム・ラクティス細胞を除去して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を得る工程、
（ｃ）任意選択的に、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清をパスチャライズする工程、
（ｄ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を乾燥させて、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を得る工程と、
（ｅ）ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包、圧縮成形、及び／又は包装して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むサプリメントを得る工程、
を含む、方法。
５３．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清が、噴霧乾燥によって乾燥される、段落５２に記載の方法。
５４．ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清粉末を、カプセル内包して、ビフィドバクテリウム・ラクティス培養上清を含むカプセルを得る、段落５２又は段落５３に記載の方法。
５５．サプリメントが、段落４４、段落４６、段落４７、又は段落４８のいずれか一段落に記載のサプリメントである、段落５２～段落５４のいずれか一段落に記載の方法。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【国際調査報告】