特表 2024-530742 ステロイド系化合物、その調製方法及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-23

(54)【発明の名称】ステロイド系化合物、その調製方法及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07J 9/00 20060101AFI20240816BHJP

   C07F 7/18 20060101ALI20240816BHJP

【ＦＩ】

C07J9/00 CSP

C07F7/18 A

C07F7/18 D

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024513259

(86)(22)【出願日】2022-08-30

(85)【翻訳文提出日】2024-04-03

(86)【国際出願番号】 CN2022115896

(87)【国際公開番号】W WO2023030332

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】202111013742.4

(32)【優先日】2021-08-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521556440

【氏名又は名称】コアンチョウ オキュサン オフサルミック バイオテクノロジー カンパニー リミテッド

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ ４０２， Ｎｏ． ２２３ Ｗｅｓｔ Ｈｕａｎｓｈｉ Ｒｏａｄ， Ｎａｎｓｈａ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４００ Ｃｈｉｎａ

(71)【出願人】

【識別番号】523236744

【氏名又は名称】オキュサン・オフサルミック・ファーマスーティカル（コアンチョウ）・カンパニー・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＯＣＵＳＵＮ ＯＰＨＴＨＡＬＭＩＣ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ（ＧＵＡＮＧＺＨＯＵ）ＣＯ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｆｌｏｏｒ １－３，Ｂｌｏｃｋ Ａ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ２０３，Ｔｏｎｇｆａ Ｒｏａｄ ２，Ｗａｎｑｉｎｇｓｈａ Ｔｏｗｎ，Ｎａｎｓｈａ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４００ Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002262

【氏名又は名称】ＴＲＹ国際弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】于 垂亮

(72)【発明者】

【氏名】李 小林

(72)【発明者】

【氏名】王 延東

(72)【発明者】

【氏名】蘭 小兵

(72)【発明者】

【氏名】▲はお▼ 飛

(72)【発明者】

【氏名】蘇 映雪

(72)【発明者】

【氏名】賀 海鷹

(72)【発明者】

【氏名】呉 美容

【テーマコード（参考）】

4C091

4H049

【Ｆターム（参考）】

4C091AA01

4C091BB02

4C091CC03

4C091DD01

4C091EE03

4C091FF01

4C091GG01

4C091HH01

4C091JJ03

4C091KK01

4C091LL01

4C091MM03

4C091NN01

4C091PA05

4C091PB05

4C091QQ01

4C091RR08

4H049VN01

4H049VP01

4H049VQ06

4H049VR23

4H049VR41

4H049VT42

4H049VT48

4H049VV05

4H049VV09

4H049VW06

4H049VW08

(57)【要約】

ステロイド系化合物、その調製方法及びその使用である。一方では、式Ｉで表される化合物、その調製方法、及びラノステロールの分離・精製方法におけるその使用を提供し、他方では、ラノステロールの分離・精製方法を提供し、当該方法は、操作が簡単で、工程が安定で、生産能力が高く、コストが低く、得られるラノステロールの純度が高く、その医薬用途に応じることができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉで表される構造を有する化合物。

【請求項2】

Ｘは、ＴＭＳ、ＴＥＳ、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ、ＴＩＰＳ、ＤＭＩＰＳ、ＴＢＤＭＳ又はＭＤＩＰＳである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて式Ｉの化合物を得ることを含むことを特徴とする、請求項１に記載の式Ｉの化合物の調製方法。

【請求項4】

前記ヒドロキシ保護剤はシリルエーテル保護剤であることを特徴とする、請求項３に記載の調製方法。

【請求項5】

前記ヒドロキシ保護剤は、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択されることを特徴とする、請求項３に記載の調製方法。

【請求項6】

カラムクロマトグラフィーにより式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを分離・精製して、式Ｉの化合物を得る工程を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物の分離・精製方法。

【請求項7】

粗ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて前記原料Ａを得る工程をさらに含む、請求項６に記載の式Ｉの化合物の分離・精製方法。

【請求項8】

前記ヒドロキシ保護剤はシリルエーテル保護剤であり；例えば、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択されることを特徴とする、請求項７に記載の分離・精製方法。

【請求項9】

ラノステロールの分離・精製における、請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物の使用。

【請求項10】

式Ｉの化合物をヒドロキシ脱保護してラノステロールを得る工程を含む、請求項９に記載の使用。

【請求項11】

カラムクロマトグラフィーにより式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを分離・精製して、前記式Ｉの化合物を得る工程をさらに含む、請求項１０に記載の使用。

【請求項12】

粗ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて前記原料Ａを得る工程をさらに含む、請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを再結晶化させることにより前記式Ｉの化合物を得る工程を含む式Ｉの化合物の精製方法。

（ここで、Ｘの定義は請求項１又は２に記載の通りであり、前記再結晶化の溶媒は、
１）酢酸エチルとイソプロピルアルコールの混合物、又は２）酢酸イソプロピルから選択され；
好ましくは、前記酢酸エチルとイソプロピルアルコールの混合物において、酢酸エチルとイソプロピルアルコールの体積比は、１：（０．５～１０）であり；好ましくは、１：（１～１０）、例えば１：（０．５～２）である。）

【請求項14】

前記原料Ａにおいて、前記式Ｉの化合物の質量百分率は７５％以上であり；好ましくは８５％以上であり；より好ましくは９０％以上である、請求項１３に記載の精製方法。

【請求項15】

式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む組成物Ｙ。

【請求項16】

Ｘは、ＴＭＳ、ＴＥＳ、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ、ＴＩＰＳ、ＤＭＩＰＳ、ＴＢＤＭＳ又はＭＤＩＰＳであることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物Ｙ。

【請求項17】

前記式Ｉの化合物の質量百分率は５５％～９５％であり、例えば、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％又は９４％であることを特徴とする、請求項１５又は１６に記載の組成物Ｙ。

【請求項18】

１）粗ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて、請求項６又は１４に記載の式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを得る工程；
２）前記原料Ａをカラムクロマトグラフィーにより分離して、式Ｉの化合物を得る工程；及び
３）前記式Ｉの化合物をヒドロキシ脱保護して、精製されたラノステロールを得る工程；を含み；
ここで、前記粗ラノステロールは、ラノステロールとジヒドロラノステロールを含み；
前記ヒドロキシ保護剤は、シリルエーテル保護剤である、
ことを特徴とするラノステロールを精製する方法。

【請求項19】

前記シリルエーテル保護剤は、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択されることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は有機溶媒の存在下で行われ；
好ましくは、前記有機溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンである、請求項３～５のいずれか一項に記載の調製方法、請求項７～８のいずれか一項に記載の分離・精製方法、又は請求項１８～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は酸結合剤の存在下で行われ；
好ましくは、前記酸結合剤は有機塩基又は無機塩基であり；
より好ましくは、前記酸結合剤は、ピリジン、イミダゾール、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、炭酸カリウム、又は炭酸ナトリウムである、請求項３～５のいずれか一項に記載の調製方法、請求項７～８のいずれか一項に記載の分離・精製方法、又は請求項１８～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は２５～１２０℃の温度で行われ；
好ましくは、前記ラノステロールと前記シリルエーテル保護剤との反応は、６０～８５℃の温度で行われる、請求項３～５のいずれか一項に記載の調製方法、請求項７～８のいずれか一項に記載の分離・精製方法、又は請求項１８～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記カラムクロマトグラフィーはシリカゲルカラムクロマトグラフィーであり；
好ましくは、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで選択されるシリカゲルの仕様は、１００～２００メッシュ、２００～３００メッシュ、又は３００～４００メッシュであり；
好ましくは、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、石油エーテル、ｎ－ヘプタン、ｎ－ヘキサン、ジクロロメタン、及び酢酸エチルのうちの一つ又は複数であり；
より好ましくは、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤にアンモニア水が添加される、請求項１１～１２のいずれか一項に記載の使用又は請求項１８～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ヒドロキシ脱保護は、酢酸、フッ化テトラアルキルアンモニウム、トリフルオロ酢酸、又は塩酸のうちの一つ又は複数の存在下で行われ；
好ましくは、前記ヒドロキシ脱保護は、フッ化テトラブチルアンモニウムの存在下で行われる、請求項１０に記載の使用又は請求項１８～１９のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、出願日が２０２１年８月３１日である中国特許出願２０２１１１０１３７４２４の優先権を主張する。本出願は上記の中国特許出願の全文を引用する。

【0002】

本発明は、有機化合物の分離・精製の分野に関し、具体的にはステロイド系化合物、その調製方法及びその使用に関する。

【背景技術】

【0003】

ラノステロールは四環式トリテルペノイドに属し、コレステロールの生合成の中間体である。現在、ラノステロールは主に粗ラノステロールからの分離・抽出によって得られている。しかし、粗ラノステロールは、ラノリンから結晶化によって分離された四環式トリテルペノイドの混合物であり、一般的に約６０％のラノステロール（ＣＡＳ番号：７９－６３－０）と約３０％のジヒドロマノステロール（ＣＡＳ番号：７９－６２－９）、及びコレステロール（ＣＡＳ番号：５７－８８－５）などのその他の不純物を含んでいる。このうち、ラノステロールとジヒドロラノステロールは極性が非常に似ているため、分離することが非常に困難である。

【0004】

ＣＮ１０１６９１３９１には、高速液体クロマトグラフィー分離による分離純度９７％のラノステロールの調製が報告されているが、調製量はわずか２５０ｍｇであり、コストが高く、商業的に大規模に生産することは困難である。現在、９０％を超える純度のラノステロールを大規模に生産及び調製するための精製工程は存在せず、医療用途のニーズを満たすことは困難である。

【0005】

さらに、ラノステロールとその他の不純物化合物の分離も非常に難しく、カラムクロマトグラフィーや再結晶化によってラノステロールを完全に分離することはほとんど不可能である。例えば、他の不純物を混合したラノステロールを再結晶化させた後、析出したラノステロール結晶中の不純物の割合が結晶化前と大きく変わらないことが判明した研究もある。

【0006】

従って、ラノステロールをよりよく研究し、医療分野に使用するためには、ラノステロールを分離・精製する方法が市場で緊急に必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、従来技術に存在する上記の技術的課題の一つを解決するために、ステロイド系化合物、その調製方法及びその使用を提供し、さらに本発明は、粗ラノステロールからラノステロールを分離・精製することができるラノステロールの精製方法を提供する。当該方法は、操作が簡単で、工程が安定で、生産能力が高く、コストが低く、得られるラノステロールの純度が高く、その医薬用途に応じることができる。

【0008】

本発明の一態様は、式Ｉで表される構造を有する化合物を提供する。

【0009】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｘは、ＴＭＳ、ＴＥＳ、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ、ＴＩＰＳ、ＤＭＩＰＳ、ＴＢＤＭＳ又はＭＤＩＰＳである。

【0010】

本発明の別の態様は、ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて式Ｉの化合物を得る工程を含む、前記式Ｉの化合物の調製方法を提供する。

【0011】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ヒドロキシ保護剤は、シリルエーテル保護剤である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ヒドロキシ保護剤は、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択される。

【0012】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、有機溶媒の存在下で行うことができる。本発明の他のいくつかの実施形態によれば、前記有機溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンである。

【0013】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、酸結合剤の存在下で行われる。本発明の他のいくつかの実施形態によれば、前記酸結合剤は、有機塩基又は無機塩基である。本発明のさらにいくつかの実施形態によれば、前記酸結合剤は、ピリジン、イミダゾール、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、炭酸カリウム、又は炭酸ナトリウムである。

【0014】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、２５～１２０℃の温度で行うことができる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、６０～８５℃の温度で行うことができる。

【0015】

本発明の別の態様は、カラムクロマトグラフィーにより式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを分離・精製して、式Ｉの化合物を得る工程を含む、前記式Ｉの化合物の分離・精製方法を提供する。

【0016】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記化合物Ｉの質量百分率は４５％～８５％である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記化合物Ｉの質量百分率は５５％～７０％である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記化合物Ｉの質量百分率は６０％～７０％である。

【0017】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記カラムクロマトグラフィーは、シリカゲルカラムクロマトグラフィーである。

【0018】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで選択されるシリカゲルの仕様は、１００～２００メッシュ、２００～３００メッシュ、又は３００～４００メッシュである。

【0019】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、石油エーテル、ｎ－ヘプタン、ｎ－ヘキサン、ジクロロメタン、及び酢酸エチルのうちの一つ又は複数である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤にアンモニア水が添加される。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、ｎ－ヘプタンと酢酸エチルの混合物、ｎ－ヘキサンと酢酸エチルの混合物、又はｎ－ヘプタン、酢酸エチル及びアンモニア水の混合物であってもよい。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、ｎ－ヘプタンと酢酸エチルの混合物であってもよく、ここで、ｎ－ヘプタンと酢酸エチルの体積比は、（９０～１００）：（１０～０）、例えば１００：１である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、ｎ－ヘキサンと酢酸エチルの混合物であってもよく、ここで、ｎ－ヘキサンと酢酸エチルの体積比は、（９０～１００）：（１０～０）、例えば１００：１である。

【0020】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａは、１００～２００メッシュのシリカゲルと混合された後、上記のシリカゲルカラムクロマトグラフィーが行われる。

【0021】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、１回又は複数回、例えば、１、２、３、４又は５回行うことができる。

【0022】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記式Ｉの化合物の分離・精製方法は、粗ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて前記原料Ａを得る工程をさらに含む。

【0023】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ヒドロキシ保護剤は、シリルエーテル保護剤である；例えば、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択される。

【0024】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、有機溶媒の存在下で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記有機溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンである。

【0025】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、酸結合剤の存在下で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記酸結合剤は、有機塩基又は無機塩基である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記酸結合剤は、ピリジン、イミダゾール、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、炭酸カリウム、又は炭酸ナトリウムである。

【0026】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、２５～１２０℃の温度で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、６０～８５℃の温度で行われる。

【0027】

本発明の別の態様は、ラノステロールの分離・精製における前記式Ｉの化合物の使用を提供する。
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記使用は、式Ｉの化合物をヒドロキシ脱保護してラノステロールを得る工程を含む。

【0028】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ヒドロキシ脱保護は、酢酸、フッ化テトラアルキルアンモニウム、トリフルオロ酢酸、又は塩酸のうちの一つ又は複数の存在下で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ヒドロキシ脱保護は、フッ化テトラブチルアンモニウムの存在下で行われる。

【0029】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記使用は、カラムクロマトグラフィーにより式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを分離・精製して、式Ｉの化合物を得る工程をさらに含む。

【0030】

【0031】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記Ｘは、ＴＭＳ、ＴＥＳ、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ、ＴＩＰＳ、ＤＭＩＰＳ、ＴＢＤＭＳ又はＭＤＩＰＳである。

【0032】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記化合物Ｉの質量百分率は４５％～８５％である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記化合物Ｉの質量百分率は５５％～７０％である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記化合物Ｉの質量百分率は６０％～７０％である。

【0033】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記カラムクロマトグラフィーは、シリカゲルカラムクロマトグラフィーである。

【0034】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで選択されるシリカゲルの仕様は、１００～２００メッシュ、２００～３００メッシュ、又は３００～４００メッシュである。

【0035】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、石油エーテル、ｎ－ヘプタン、ｎ－ヘキサン、ジクロロメタン、及び酢酸エチルのうちの一つ又は複数である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤にアンモニア水が添加される。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、ｎ－ヘプタンと酢酸エチルの混合物、ｎ－ヘキサンと酢酸エチルの混合物、又はｎ－ヘプタン、酢酸エチル及びアンモニア水の混合物であってもよい。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、ｎ－ヘプタンと酢酸エチルの混合物であってもよく、ここで、ｎ－ヘプタンと酢酸エチルの体積比は、（９０～１００）：（１０～０）、例えば１００：１である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶離剤は、ｎ－ヘキサンと酢酸エチルの混合物であってもよく、ここで、ｎ－ヘキサンと酢酸エチルの体積比は、（９０～１００）：（１０～０）、例えば１００：１である。

【0036】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａは、１００～２００メッシュのシリカゲルと混合された後、上記のシリカゲルカラムクロマトグラフィーが行われる。

【0037】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、１回又は複数回、例えば、１、２、３、４又は５回行うことができる。

【0038】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記式Ｉの化合物の分離・精製方法は、粗ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて前記原料Ａを得る工程をさらに含む。

【0039】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ヒドロキシ保護剤は、シリルエーテル保護剤である；例えば、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択される。

【0040】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、有機溶媒の存在下で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記有機溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンである。

【0041】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、酸結合剤の存在下で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記酸結合剤は、有機塩基又は無機塩基である。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記酸結合剤は、ピリジン、イミダゾール、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、炭酸カリウム、又は炭酸ナトリウムである。

【0042】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、２５～１２０℃の温度で行われる。本発明のいくつかの実施形態によれば、前記粗ラノステロールと前記ヒドロキシ保護剤との反応は、６０～８５℃の温度で行われる。

【0043】

本発明の別の態様は、式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを再結晶化させることにより前記式Ｉの化合物を得る工程を含む式Ｉの化合物の精製方法を提供する。

【0044】

ここで、Ｘの定義は上記の通りであり、前記再結晶化の溶媒は、
１）酢酸エチルとイソプロピルアルコールの混合物、又は２）酢酸イソプロピルから選択される。

【0045】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記酢酸エチルとイソプロピルアルコールの混合物において、酢酸エチルとイソプロピルアルコールの体積比は、１：（０．５～１０）であり、好ましくは、１：（１～１０）、例えば１：（０．５～２）である。

【0046】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記原料Ａにおいて、前記式Ｉの化合物の質量百分率は７５％以上であり、好ましくは８５％以上であり、より好ましくは９０％以上である。

【0047】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記再結晶化は、まず前記原料Ａを前記溶媒に溶解し、溶解するまで温度を上昇させ、次に室温まで冷却することを含む。

【0048】

本発明の別の態様は、式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む組成物Ｙを提供する。

【0049】

【0050】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｘは、ＴＭＳ、ＴＥＳ、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ、ＴＩＰＳ、ＤＭＩＰＳ、ＴＢＤＭＳ又はＭＤＩＰＳである。

【0051】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記組成物Ｙにおいて、前記式Ｉの化合物の質量百分率は５５％～９５％であり、例えば、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％又は９４％である。

【0052】

本発明の別の態様は、
１）粗ラノステロールをヒドロキシ保護剤と反応させて、式Ｉの化合物及び式Ｉ’の化合物を含む原料Ａを得る工程；
２）前記原料Ａをカラムクロマトグラフィーにより分離して、式Ｉの化合物を得る工程；及び
３）前記式Ｉの化合物をヒドロキシ脱保護して、精製されたラノステロールを得る工程；
を含むラノステロールを精製する方法を提供する。
ここで、前記粗ラノステロールは、ラノステロールとジヒドロラノステロールを含む。
前記ヒドロキシ保護剤は、シリルエーテル保護剤である。

【0053】

本発明のいくつかの実施形態によれば、前記シリルエーテル保護剤は、トリメチルクロロシラン、トリエチルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、ジメチルイソプロピルクロロシラン、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン、メチルジイソプロピルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルから選択される。

【0054】

ここで、前記ラノステロールの精製方法において、原料Ａ、式Ｉの化合物、並びに各工程の反応条件及び操作は、上記のいずれかのスキームに記載された通りである。

【0055】

本発明は、粗ラノステロール（原料）の精製を実現するために、まず粗ラノステロールをヒドロキシシリルエーテルで保護し、ヒドロキシシリルエーテルにより保護されたラノステロールとヒドロキシシリルエーテルにより保護されたジヒドロラノステロールとの間に存在する極性の差を利用し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより両者を分離して、純粋なヒドロキシシリルエーテルにより保護されたラノステロールを得ることができ、次にシリルエーテル保護基を除去した後、純粋なラノステロールを得る。さらに、本発明は、ヒドロキシシリルエーテルにより保護されたラノステロールが良好な結晶化特性を有し、保護基を除去する前に再結晶化させることで一部の不純物を母液中に保持し、その後ヒドロキシ保護基を除去することにより、精製されたラノステロールが得られることを見出した。得られたラノステロールは、大規模調製という商業的ニーズを満たすだけでなく、医薬使用のニーズも満たすことができる。多くの実験により、アルキルエーテル、カルボン酸エステル、アミノ酸エステルなどの他の非シリルエーテル基のヒドロキシ保護基ではラノステロールとジヒドロラノステロールを分離できないことが証明されている。

【0056】

以下、本発明の理解を助けるために実施例を提供する。しかしながら、これらの実施例は本発明を説明するためにのみ使用され、いかなる制限も構成しないことを理解されたい。本発明の実際の保護範囲は特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神から逸脱することなく、いかなる修正及び変更も可能であることを理解されたい。

【発明を実施するための形態】

【0057】

本発明の目的、技術的解決策及び利点をより明確かつ理解しやすくするために、以下、実施例に関連して本発明をさらに詳細に説明する。ここで説明する具体的な実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明を限定するものではない。さらに、以下の説明では、本発明の概念を不必要に混乱させることを避けるために、周知の構造及び技術の説明を省略する。このような構造及び技術は多くの出版物にも記載されている。

【0058】

別段の定義がない限り、本発明で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野で一般的に使用されるものと同じ意味を有する。本明細書を解釈する目的で、下記の定義が適用され、必要に応じて、単数形で使用される用語には複数形も含まれ、またその逆も同様である。

【0059】

本明細書で使用される場合、「一つ」及び「一個」という表現は、文脈上明らかに別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「一つの細胞」への言及には、複数のそのような細胞及び当業者に知られている等価物などが含まれる。

【0060】

本明細書で使用される「約」という用語は、その後の数値の±２０％の範囲を意味する。いくつかの実施形態において、「約」という用語は、その後の数値の±１０％の範囲を意味する。いくつかの実施形態において、「約」という用語は、その後の数値の±５％の範囲を意味する。

【0061】

本明細書で使用される溶媒は市販品として入手可能である。本明細書では下記の略語が使用される：
ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシラン
ＴＩＰＳＣｌ：トリイソプロピルクロロシラン
ＤＭＩＰＳ：ジメチルイソプロピルシラン
ＤＭＩＰＳＣｌ：ジメチルイソプロピルクロロシラン
ＴＥＳ：トリエチルシラン
ＴＥＳＣｌ：トリエチルクロロシラン
ＴＭＳ：トリメチルシラン
ＴＢＤＰＳ：ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシラン
ＴＢＤＰＳＣｌ：ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン
ＴＢＳ：ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシラン
ＴＢＳＣｌ：ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン
ＴＭＳＣｌ：トリメチルクロロシラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＢＡＦ：フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ｅｑ：当量
化合物は手作業で又はソフトウェアＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）を使用して命名し、市販の化合物はサプライヤーのカタログ名を使用して命名した。

【0062】

ラノステロール原料（粗生成物）（サプライヤーはＳｈａｎｄｏｎｇ Ｊｕｎｒｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．又はＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｃｈｉｎａ Ｌｔｄ．である）

【0063】

＜実施例＞
カラムクロマトグラフィーでは、溶離液中の標的中間体の溶出を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で追跡し、その条件は石油エーテル：酢酸エチル＝５：１であり、発色にはリンモリブデン酸を使用した。

【0064】

経験に基づいて、核磁気分析と組み合わせて、標的中間体を含む収集された溶出液のＴＬＣ結果を３つのカテゴリに分類した。不純物スポットが基本的にないもの（高純度生成物と定義され、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分割合又はＨＰＬＣ純度は約８５～９０％の間である）、不純物スポットがあるが純度に大幅な改善があるもの（純度の比較的高い生成物と定義され、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分割合又はＨＰＬＣ純度は約７０～８５％の間である）、不純物スポットがあるが純度に大幅な改善が見られず、溶離液中の標的中間体の濃度は比較的高いもの（低純度生成物と定義され、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分割合又はＨＰＬＣ純度は一般的に＜７０％である）、ここで、純度の改善は、その時点でカラムクロマトグラフィーによる試料の純度に対するものである。

【0065】

＜実施例１＞
１．１ ヒドロキシ保護
市販のラノステロール原料（ラノステロールの純度は約６０％である）５００ｇを２５０ｇずつ２等分し、それぞれ下記の処理を行った。

【0066】

１５℃で２５０ｇのラノステロール原料のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（２５００ｍＬ）にイミダゾール（８７．８ｇ、１．２９ｍｏｌ）及びＴＢＳＣｌ（１３２．５ｇ、８７９ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で６時間撹拌した。次に、１５℃まで冷却し、石油エーテル（２５００×２ｍＬ）を加えて抽出し、石油エーテル相を飽和ＮａＣｌ溶液（２０００ｍＬ）及び水（２０００ｍＬ）で順次洗浄した。

【0067】

３４８ｇの中間生成物１ａ及び３５０ｇの中間生成物１ｂをそれぞれ得た。

【0068】

当分野の常識によれば、ヒドロキシ保護反応前後の中間生成物１ａ、１ｂとラノステロール原料との純度の差は無視できるほどである。

【0069】

１．２ カラムクロマトグラフィー
３４８ｇの中間生成物１ａを１０００ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、１０ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行った。ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、純度の比較的高い生成物の溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、１２５ｇの中間生成物１ｃを得、収率は約６６％であった。

【0070】

３５０ｇの中間生成物１ｂを１０００ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、１０ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲル（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でカラムクロマトグラフィーを行った。ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、高純度生成物の溶出液を収集し、乾燥し、１２１ｇの中間生成物１ｄを得、収率は約６４％であった。

【0071】

中間生成物１ｃと１ｄを合わせ、７４０ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、７．４ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行い、ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、高純度生成物の溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、１７９ｇの中間生成物１ｅを得、収率は約４７％であった。

【0072】

１７９ｇの中間生成物１ｅを５４０ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、５．４ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行った。ｎ－ヘキサンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、高純度生成物の溶出液を収集し、乾燥し、１６１ｇの中間生成物１ｆを得、収率は約４２％であった。中間生成物１ｆをＴＬＣでモニタリングしたところ、薄い不純物スポットの存在が依然として観察され、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分により、ＴＢＳ－ラノステロールは全ステロールの約８３％を占めることが示された。

【0073】

１６１ｇの中間生成物１ｆを４８０ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、５．０ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行った。ｎ－ヘキサンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、高純度生成物の溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、１４７ｇの中間生成物１ｈを得た。４回の精製の合計収率は約３９％であった。中間生成物１ｈをＴＬＣでモニタリングしたところ、不純物スポットが明らかではないことが示され、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分により、ＴＢＳ－ラノステロールは全ステロール含有量の約９１％を占めることが示された。

【0074】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝５．０７（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１７（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），２．０５‐１．３５（ｍ，２４Ｈ），１．２９（ｂｒ ｓ，５Ｈ），１．１８‐０．９７（ｍ，５Ｈ），０．９５（ｓ，３Ｈ），０．９０‐０．８８（ｍ，４Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ），０．７４（ｓ，３Ｈ），０．６６（ｓ，３Ｈ），０．００（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，７Ｈ）ｐｐｍ．

【0075】

１．３ ヒドロキシ脱保護
４９．２ｇの中間生成物１ｈを取り、２５０ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解した。１５℃で１１０ｍＬのＴＢＡＦ溶液（１．０Ｍ）を加え、１６時間加熱還流させた。反応をＴＬＣでモニタリングした。反応が終了した後、反応溶液を直接減圧スピン乾燥して残渣を得た。残渣に６００ｍＬのメタノールを加え、４時間還流させて、白色懸濁液を得た。６０℃で２４時間撹拌し、次に１５℃まで冷却し、ろ過し、ケーキを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、吸引乾燥して、３８．３ｇの最終生成物を得、収率は約９８．４％であり、ＨＰＬＣで測定したラノステロールの純度は約９１％であった。

【0076】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝５．１２（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ），３．２６（ｄｄ，Ｊ＝４．６４，１１．４２Ｈｚ，１Ｈ），１．７３‐２．１３（ｍ，１０Ｈ），１．７１（ｓ，３Ｈ），１．６４‐１．６８（ｍ，１Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．０５‐１．５９（ｍ，１２Ｈ），１．０２（ｓ，３Ｈ），１．００（ｓ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．２７Ｈｚ，３Ｈ），０．９０（ｓ，３Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ），０．７１（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．

【0077】

＜実施例２＞
２．１ ヒドロキシ保護
１５℃で、市販のラノステロール原料（２５０ｇ、ラノステロールの純度は約６０％である）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（２５００ｍＬ）にイミダゾール（８７．８ｇ、１．２９ｍｏｌ）及びＴＥＳＣｌ（１３２．５ｇ、８７９ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間撹拌した。反応をＴＬＣでモニタリングした。反応が終了した後、２５℃まで冷却し、６００ｍＬのメタノール及び３００ｍＬの水を加え、撹拌し、ろ過した。ケーキを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、ケーキを吸引乾燥して、３４１ｇの中間生成物２ａを得た。

【0078】

２．２ カラムクロマトグラフィー
３４１ｇの中間生成物２ａを１０００ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、１０ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行い、ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、高純度生成物の溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、１６８ｇの中間生成物２ｂを得（ＴＬＣでは薄い不純物スポットの存在が依然として観察された）、収率は約８８％であった。

【0079】

１６８ｇの中間生成物２ｂを５４０ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、５．４ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×１８０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行った。ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、不純物スポットが基本的にない溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、１１７ｇの中間生成物２ｃを得、収率は約６２％であり、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分により、ＴＥＳ－ラノステロールは全ステロール含有量の約８６％を占めることが示された。

【0080】

２．３ ヒドロキシ脱保護
２５℃で、２７ｇの中間生成物２ｃを秤量し、乾燥ＴＨＦ（１５０ｍＬ）及びＴＢＡＦ（５５ｍＬ、０．０５５ｍｏｌ）に溶解し、３０分間反応させた。次に、温度を６０℃まで上昇させ、還流させ、４時間撹拌した。反応が完了するまでＴＬＣでモニタリングした。８０ｍＬの水及び１６０ｍＬのメタノールを加え、１時間撹拌すると、固体が析出した。ろ過し、ケーキを少量の水及びメタノールで洗浄し、吸引乾燥して、１８．５ｇの白色固体の最終生成物を得、収率は８７％であり、ＨＰＬＣで測定したラノステロールの純度は約８９％であった。

【0081】

＜実施例３＞
３．１ ヒドロキシ保護
１５℃で、市販のラノステロール原料（２５０ｇ、ラノステロールの純度は約６０％である）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（２５００ｍＬ）にイミダゾール（８７．８ｇ、１．２９ｍｏｌ）及びＴＥＳＣｌ（１３２．５ｇ、８７９ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間撹拌した。反応をＴＬＣでモニタリングした。反応が終了した後、２５℃まで冷却し、６００ｍＬのメタノール及び３００ｍＬの水を加え、撹拌し、ろ過し、ケーキを吸引乾燥して、３５５ｇの中間生成物３ａを得た。

【0082】

３．２ カラムクロマトグラフィー
３５５ｇの中間生成物３ａを１０００ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、１０ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行った。ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、それぞれ高純度生成物及び純度の比較的高い生成物の溶出物を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、純度約８７～８９％の７１ｇの中間生成物３ｂ、及び純度約７０～８０％の９６ｇの中間生成物３ｃをそれぞれ得た。

【0083】

９６ｇの中間生成物３ｃを再び３００ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、３ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×１８０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行い、ｎ－ヘプタンと酢酸エチル（１００：１）の混合物で溶出を行った。溶出過程をＴＬＣで追跡し、純度の比較的高い溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、４４ｇの中間生成物３ｄを得た。

【0084】

中間生成物３ｂ及び３ｄを合わせ（中間生成物３ｅと命名する）、合計１１５ｇであり、収率は６１％であり、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分により、ＴＥＳ－ラノステロールは全ステロール含有量の約９０％を占めることが示された。

【0085】

３．３ ヒドロキシ脱保護
２５℃で、中間生成物３ｅ（２２ｇ、０．０４ｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１２０ｍＬ）に溶解し、ＴＢＡＦ（４５ｍＬ、０．０４５ｍｏｌ）を反応溶液に加え、３０分間保持した。次に、温度を６０℃まで上昇させ、還流させ、４時間撹拌した。反応をＴＬＣでモニタリングした。反応が終了した後、６０ｍＬの水及び１２０ｍＬのメタノールを加え、１時間撹拌すると、固体が析出した。ろ過し、ケーキを６０ｍＬの水で洗浄し、次に１００ｍＬのメタノールで洗浄し、ろ過してケーキを得、２００ｍＬのメタノールで３時間還流させ、冷却して析出させ、再びろ過して、１５．２ｇの白色固体を得、収率は約８８％であり、ＨＰＬＣで測定したラノステロールの純度は約９２％であった。

【0086】

＜実施例４＞
４．１再結晶化
実施例３で得られた中間生成物３ｅを５０ｇ取り、７５０ｍｌの酢酸エチルとイソプロピルアルコール（体積比１：１）の混合物に加え、９０℃まで加熱し、２時間還流させ、溶解・清澄化させ、撹拌を停止し、次にゆっくりと冷却すると、固体が析出した。固体をろ過してケーキを得、ケーキを洗浄し、乾燥し、４０ｇの中間生成物４ａを得、収率は８０％であり、^１Ｈ ＮＭＲ特性ピークの積分により、ＴＥＳ－ラノステロールは全ステロール含有量の約９３％を占めることが示された。

【0087】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝０．５６‐０．６６（ｍ，６Ｈ），０．７０‐０．９１（ｍ，９Ｈ），０．９２‐１．０７（ｍ，１９Ｈ），１．１２‐１．７７（ｍ，２１Ｈ），１．８２‐２．１２（ｍ，７Ｈ），３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１１．２９，４．５２Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，１Ｈ）。

【0088】

４．２ 脱保護
２５℃で、中間生成物４ａ（２０ｇ、０．０３７ｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１２０ｍＬ）に溶解した。ＴＢＡＦ（１Ｍ、１．５ｅｑ）を反応溶液に加え、３０分間保持した。温度を６０℃まで上昇させ、還流させ、４時間撹拌した。反応が完了するまでＴＬＣでモニタリングした。６０ｍＬの水及び１２０ｍＬのメタノールを加え、１時間撹拌すると、固体が析出した。ろ過し、ケーキを少量の水及びメタノールで順次洗浄し、ろ過して、ケーキを得た。ケーキに２００ｍｌのメタノールを加えて３時間還流させ、冷却析出させ、ろ過して、１３ｇの白色固体を得た。収率は約８５％であり、ＨＰＬＣで測定したラノステロールの純度は＞９９％であった。

【0089】

＜実施例５＞
５．１：ヒドロキシ保護
１５℃で、市販のラノステロール原料（２５０ｇ、ラノステロールの純度は約６０％である）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（２５００ｍＬ）にイミダゾール（８７．７５ｇ、１．２９ｍｏｌ）及びＴＭＳＣｌ（９５．４７ｇ、８７９ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で５時間撹拌した。反応が終了した後、反応溶液を１５℃まで冷却し、石油エーテル（２５００×２ｍＬ）を加えて抽出し、石油エーテル相を飽和ＮａＣｌ溶液（２０００ｍＬ）、水（２０００ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、２８７ｇの中間生成物５ａを得た。

【0090】

５．２：カラムクロマトグラフィー
２８７ｇの中間生成物５ａを８５０ｇの１００～２００メッシュのシリカゲルと混合し、８．５ｋｇの２００～３００メッシュのシリカゲルカラム（１０００ｍｍ×２３０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行い、ｎ－ヘプタン、酢酸エチル及びアンモニア水（１００：１：０．０５）の混合物で溶出を行った。ＴＬＣで追跡・観察し、溶出液を収集し、減圧蒸留して乾燥した後、５３ｇの生成物５ｂを得、ＴＭＳ－ラノステロール中間体の収率は約３０％であり、^１Ｈ ＮＭＲで測定した純度は約８０％であり、ＴＬＣでは薄い不純物スポットがあることが示された。

【0091】

＜実施例６＞
保護剤と実験条件の考察実験
１５℃で、市販のラノステロール原料（１０ｇ、０．０２３ｍｏｌ、純度約６０％）のＤＭＦ溶液１００ｍＬにイミダゾール（３．９ｇ）及びトリエチルクロロシラン（１～２ｅｑ）を加えた。ＴＬＣで反応が終了したことをモニタリングし、比較的きれいに変換された反応の場合は、下記の後処理操作を行った。室温まで冷却し、石油エーテル（７５×２ｍＬ）を加えて抽出し、石油エーテル相を飽和ＮａＣｌ溶液（７５ｍＬ）、水（７５０ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、乾燥して対応する粗生成物を得、カラムクロマトグラフィーにより精製した。

【0092】

上記の反応において、溶媒、保護試薬、温度、反応時間を変化させて考察した条件と結果を下表に示す。

【0093】

注：ａ 後処理操作は下記の通りである：室温まで冷却し、メタノール（２５ｍＬ）、水（１２．５ｍＬ）を加え、撹拌し、ろ過し、ケーキを少量のメタノールで洗浄し、ケーキを吸引乾燥して、対応する粗生成物を得、カラムにより精製する。ここで、この後処理操作を採用すると、生成物を直接析出させ、ろ過することができる。

【0094】

＜実施例７＞
実施例２でカラムにより精製された中間生成物２ｃを５．４１ｇ取り、溶質と溶媒の質量体積比が１ｇ：１０ｍＬである下表に示す再結晶化の条件を考察した。

【0095】

本発明の技術的解決策は、上記の具体的な実施例の制限に限定されるものではなく、本発明の技術的解決策に基づいて行われるすべての技術的変形は、本発明の保護範囲に含まれる。

【国際調査報告】