特表 2024-530774 環状グアノシン一リン酸アナログの改善された生成方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-23

(54)【発明の名称】環状グアノシン一リン酸アナログの改善された生成方法

(51)【国際特許分類】

   C07H 19/04 20060101AFI20240816BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALN20240816BHJP

   A61P 27/02 20060101ALN20240816BHJP

【ＦＩ】

C07H19/04 CSP

A61K31/7068

A61P27/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024513779

(86)(22)【出願日】2022-09-06

(85)【翻訳文提出日】2024-02-29

(86)【国際出願番号】 EP2022074740

(87)【国際公開番号】W WO2023031481

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】21195043.1

(32)【優先日】2021-09-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517325560

【氏名又は名称】ミレカ メディシンズ ゲーエムベーハー

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】ボルマーク， マーティン

(72)【発明者】

【氏名】シュヴェーデ， フランク ディーター

【テーマコード（参考）】

4C057

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C057AA18

4C057BB02

4C057DD03

4C057LL03

4C086AA03

4C086AA04

4C086EA17

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA20

4C086ZA33

(57)【要約】

本発明は、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸アナログを調製するための方法に関する。本発明はまた、本方法により得られる新しい環状グアノシン一リン酸アナログ及び中間体に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

環状グアノシン－３’，５’－一リン酸（ｃＧＭＰ）アナログ又はその合成中間体を生成するための方法であって、
ｉ）一般式（Ｉ）のグアノシンアナログ又はその塩：

【化1】

（式中、
ｈは、Ｈ、ハロゲン、又はＱであり、
Ｘ^１及びＸ^２は、各々独立して、Ｈ又はｐ’から選ばれ、
ｐ’は、各場合とも独立して、ヒドロキシル保護基から選ばれ、
Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立して、Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ_３～９ヘテロシクリル、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、及びａｒから選ばれ、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、若しくは４から選ばれ、又はＲ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－若しくは－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成し、
ａｒは、各場合とも独立して、５若しくは６員芳香環又はヘテロ芳香環、好ましくはフェニル又は２－フラニルであり、ａｒの各場合とも個別に、ハロゲン、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＯＣＨ_３、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、又は－ＣＦ_３で任意に置換されていてもよく、且つａｒの第２の場合に任意に縮合されて、好ましくはナフチル部分を形成してもよく、
Ｑは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－Ｏ－Ｃ（ＣＨ_３）_３、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］_ｎＨ）_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎｃ^１ｃ^２であり、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成し、又はｃ^１はＨであり、且つｃ^２は、３～８員ヘテロ環、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、若しくはリンカー部分であり、いずれの－Ｈも、ハロゲンにより任意に置き換えられていてもよく、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、若しくは８から選ばれる）
を提供するステップと、
ｉｉ）前記提供されたグアノシンアナログとリンオキソ酸誘導体とを接触させてグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを得るステップと、
ｉｉｉ）前記得られたグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを結晶化により単離するステップと、
を含む、方法。

【請求項2】

ステップｉ）で使用される一般式（Ｉ）の前記グアノシンアナログ又はその塩に対して、
ｈは、Ｈ若しくはハロゲン若しくはＱ、好ましくはＨ若しくはＢｒ若しくはＱ、より好ましくはＢｒであり、
Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、
ｐ’は、メトキシメチル（ＭＯＭ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、ｔ－ブチル（ｔＢｕ）、アリル（ａｌｌ）、ベンジル（Ｂｎ）、（トリ）アルキルシリル（たとえば、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、若しくはｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ））、アシル（たとえば、アセチル（Ａｃ）、ピバロイル（Ｐｖ）、若しくはベンゾイル（Ｂｚ））から、好ましくはＴＨＰ、（トリ）アルキルシリル、及びアシルからなる群から選択され、
Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、
ａｒは、フェニル、４－メチルフェニル、３－チオフェニル、若しくは２－フラニル、好ましくはフェニルであり、且つ／又は
Ｑは、フラニル、－ＣＦ_３、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（イソプロピルフェニル）、－Ｓ（フェニルアミドメチル）、－Ｓ（ハロフェニル）、－Ｓ（ヒドロキシフェニル）、－Ｓ（アミノフェニル）、－Ｓ（ニトロフェニル）、－Ｓ（メトキシフェニル）、－Ｓ（トルイル）、－Ｓ（トリフルオロメチルフェニル）、－Ｎｃ^１ｃ^２（ここで、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成する）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、若しくは－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、好ましくはフラニル、－ＣＦ_３、－Ｓ（４－ヒドロキシフェニル）、若しくは－Ｓ（４－クロロフェニル）である、
請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ステップｉ）で使用される一般式（Ｉ）の前記グアノシンアナログ又はその塩に対して、
ｈは、Ｂｒであり、
Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、
ｐ’は、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、
Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、且つ
ａｒは、フェニルである、
請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

ステップｉｉ）の前記リンオキソ酸誘導体がリン酸化剤又はホスホニル化剤である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

ステップｉｉ）の前記リンオキソ酸誘導体が、一般式（Ｐ）：

【化2】

（式中、
Ｍは、Ｓ若しくはＯであり、又は不在であり、
ｏ^１及びｏ^２は、各々独立して、ハロゲン、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、及び－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２から選択され、且つ
ｏ^３は、Ｈ若しくはｏ^１に対して定義される通りであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成する）
のものである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

ステップｉｉ）で得られた前記グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログが、一般式（ＩＩ）のもの又はその塩：

【化3】

（式中、
ｈ、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義される通りであり、
ｏ^１及びｏ^３は、それぞれ独立して、－ＯＨであり、又は請求項５に定義される通りであり、且つ
Ｍは、Ｓ又はＯである）
である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

Ｘ^１がＨであり且つＸ^２がｐ’であり、一般式（Ｉ）の前記グアノシンアナログ又はその塩が、
Ｉａ）一般式（ｐＩ）の非保護グアノシンアナログ又はその塩：

【化4】

（式中、ｈ、Ｒ^１、及びＲ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義される通りである）
を提供するステップと、
Ｉｂ）前記非保護グアノシンアナログと（トリ）アルキルシリルハリドとを接触させて多重保護グアノシンアナログを得るとともに、任意に結晶化により前記多重保護グアノシンアナログを単離するステップと、
Ｉｃ）前記多重保護グアノシンアナログを選択的に脱保護して一般式（Ｉ）（式中、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’である）の前記グアノシンアナログを得るステップと、
Ｉｄ）前記得られた一般式（Ｉ）（式中、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’である）のグアノシンアナログを結晶化により任意に単離するステップと、
により提供される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

ｉｖ）ステップｉｉ）で得られた前記グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを環化して環状グアノシン－３’，５’－一リン酸（ｃＧＭＰ）アナログを得るステップであって、前記環化は、立体障害塩基の存在下で好ましくは実施される、ステップ、
をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ｃＧＭＰアナログが、一般式（ＩＩＩ）のもの又はその塩：

【化5】

（式中、
ｈ、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義される通りであり、好ましくはＸ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義されるｐ’であり、
ｏ^３は、請求項６に定義される通りであり、好ましくはｏ^３は、Ｈである）
であり、
前記方法が、
ｖ）前記ｃＧＭＰアナログと硫化剤とを接触させて一般式（ＩＩＩ）（式中、ｏ^３は、－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ_１～１２炭化水素、好ましくは－ＳＨである）のチオール化ｃＧＭＰアナログを得るステップ
を任意にさらに含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

一般式（ＩＩＩ）の前記ｃＧＭＰアナログが、一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）：

【化6】

（式中、
ｈ、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義される通りであり、好ましくはＸ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義されるｐ’であり、
ｏ^３は、請求項６に定義される通りであり、好ましくはｏ^３は、Ｈである）
のものであり、
任意に、前記チオール化ｃＧＭＰアナログが、一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）
（式中、
ｈ、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義される通りであり、好ましくはＸ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義されるｐ’であり、
ｏ^３は、－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ_１～１２炭化水素であり、好ましくは－ＳＨである）
のものである、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

Ｘ^２がｐ’であり、
ｖｉ）Ｘ^２により保護された前記ヒドロキシル部分を脱保護して脱保護ｃＧＭＰアナログを得るステップと、
ｖｉｉ）前記脱保護ｃＧＭＰアナログを任意にトリチュレートするステップと、
ｖｉｉｉ）前記脱保護ｃＧＭＰアナログを薬学的に許容可能な塩、好ましくはナトリウム塩に任意に変換するステップと、
をさらに含む、請求項９又は１０に記載の方法。

【請求項12】

一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩：

【化7】

（式中、
ｈ、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、請求項１～３のいずれか一項に定義される通りであり、
ｏ^１及びｏ^３は、それぞれ独立して、－ＯＨであり、又は請求項５に定義される通りであり、好ましくはｏ^３はＨであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成し、
Ｍは、Ｓ又はＯであり、
好ましくは、前記化合物は塩である）。

【請求項13】

ｏ^３がＨである、請求項１２に記載の化合物。

【請求項14】

ｈは、Ｂｒであり、
Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、
ｐ’は、好ましくはトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、
Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、
ａｒはフェニルであり、
ｏ^１はＯＨであり、
ｏ^３はＨであり、且つ
ＭはＳ又はＯ、好ましくはＯである、
請求項１２又は１３に記載の化合物。

【請求項15】

ｈは、Ｂｒであり、
Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、
ｐ’は、好ましくはトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、
Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、
ａｒは、４－メチルフェニルであり、
ｏ^１はＯＨであり、
ｏ^３はＨであり、且つ
ＭはＳ又はＯ、好ましくはＯである、
請求項１２又は１３に記載の化合物。

【請求項16】

前記化合物が結晶性である、請求項１２に記載の化合物。

【請求項17】

前記化合物が結晶性である、請求項１３に記載の化合物。

【請求項18】

前記化合物が結晶性である、請求項１４に記載の化合物。

【請求項19】

前記化合物が結晶性である、請求項１５に記載の化合物。

【請求項20】

前記化合物が一般式（ＩＩ）
（式中、
ｈは、Ｈであり、
Ｘ^１及びＸ^２は、一緒になって、アセトニド保護基を形成し、
Ｒ^１はＨであり、且つＲ^２はＨ又は－ＣＨ_３であり、
ｏ^１はＯＨであり、
ｏ^３はＨであり、且つ
ＭはＯである）
のものでない、請求項１３に記載の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸アナログを調製するための方法に関する。発明はまた、本方法により得られる新しい環状グアノシン一リン酸アナログ及び中間体に関する。

【背景技術】

【0002】

色素性網膜炎（ＲＰ）は、一群の重度障害性遺伝神経変性疾患である。典型的には、桿体フォトレセプター細胞（薄暗い光条件下での視覚を可能にする）が、疾患期間中、最初に変性する。続いて、桿体の損失が、昼光の高解像度色覚源の錐体フォトレセプター細胞の二次変性をトリガーし、最終的に全盲をもたらす。

【0003】

色素性網膜炎で変異した遺伝子は、通常、フォトレセプター機能に関連するが、一般的細胞機能に関係するものも存在する（Ｋｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．２００５，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．２１，１０３－１１０）。分子ｃＧＭＰ（環状グアノシン一リン酸）は、光が当たったときにフォトレセプター細胞内に起こる光伝達カスケードで直接的役割を果たす。多くの場合、色素性網膜炎変異は、フォトレセプターにｃＧＭＰの過剰蓄積をもたらし（Ａｒａｎｇｏ－Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．２０１４ ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．９，ｅ１１２１４２）、フォトレセプターｃＧＭＰ代謝に関与する酵素の遺伝子が影響を受ける状況がその例である。このことは、ｃＧＭＰをＧＭＰに加水分解するフォトレセプター酵素のホスホジエステラーゼ６（そのサブユニットは、遺伝子ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｇ、及び錐体フォトレセプターに対するＰＤＥ６Ｃ、ＰＤＥ６Ｈによりコードされる）の変異の場合にあてはまる。Ｐｄｅ６ｂ遺伝子は、色素性網膜炎のｒｄ１マウスモデルで変異し、多くの実験室で十分に研究されてきた。推測されたイベントチェーンでは、ＰＤＥ６Ｂ変異体網膜へのｃＧＭＰの蓄積は、実際の遺伝子欠損の直接的帰趨として発生し、そのため、これは早期及び機序的に基本変性成分と見なされうる。その次のステップでは、ｃＧＭＰの増加は、４つの標的：１）ｃＧＭＰにより活性化されたときに特異的タンパク質をリン酸化するｃＧＭＰ依存プロテインキナーゼ（プロテインキナーゼＧ、ＰＫＧ）、２）ｃＧＭＰにより活性化されたときにＮａ^＋及びＣａ^２＋のｃＧＭＰ制御流入を可能にする環状ヌクレオチドゲートイオンチャネル（ＣＮＧＣ）、３）ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）、及び４）過分極活性化環状ヌクレオチドゲート（ＨＣＮ）チャネルの少なくとも１つを有すると想定可能である。最初の２つのｃＧＭＰ標的は、フォトレセプター変性に直接関連するが（Ｐａｑｕｅｔ－Ｄｕｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．２００９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１０８，７９６－８１０、Ｐａｑｕｅｔ－Ｄｕｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．２０１１，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０，９４１－９４７）、他のものは、既知のｃＧＭＰ標的であることから、変性プロセスに潜在的に関与する。初期イベントとの直接的関連に起因して、ＰＫＧ及びＣＮＧＣは、疾患ドライバーとみなしうるが、とはいえ、下流機序は、依然としてそれほど詳細には理解されていない（Ｔｒｉｆｕｎｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．２０１２，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１２，５９８－６１２）。

【0004】

ｃＧＭＰアナログ（たとえば、Ｒｐ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰＳなど）としても知られるｃＧＭＰ由来ＰＫＧインヒビターは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏマウス色素性網膜炎モデルの両方でｒｄ１及びｒｄ２フォトレセプターの保護を提供することが知られている（Ｐａｑｕｅｔ－Ｄｕｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，２００９）。

【0005】

ｃＧＭＰアナログは、当技術分野で公知である。国際公開第２０１２１３０８２９号パンフレットには、環状ヌクレオチドのボラノホスフェートアナログが記載されている。国際公開第２０１８／０１０９６５号パンフレットには、ｃＧＭＰアナログのマルチメリック複合体が記載されている。Ｂｕｔｔ ｅｔ ａｌ．（ＦＥＢＳ ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９０，２６３（１）：４８，ＤＯＩ：１０．１０１６／００１４－５７９３（９０）８０７０２－Ｋ）には、（Ｒｐ）－グアノシン３’，５’－一チオリン酸によるｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼの阻害が記載されている。その中で、グアノシン３’，５’－一チオリン酸（Ｓｐ）－ｃＧＭＰＳ及び（Ｒｐ）－ｃＧＭＰＳ並びに８－クロログアノシン３’，５’一チオリン酸（Ｓｐ）－８－Ｃｌ－ｃＧＭＰＳ及び（Ｒｐ）－８－Ｃｌ－ｃＧＭＰＳ）のジアステレオマーによるｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼ及びｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼの活性化が調べられた。（Ｓｐ）－ジアステレオマーは、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼに結合してそのホスホトランスフェラーゼ活性を刺激した。これとは対照的に、（Ｒｐ）－異性体は、その活性の刺激を伴うことなく酵素に結合した。（Ｒｐ）－ｃＧＭＰＳ及び（Ｒｐ）－８－Ｃｌｃ－ＧＭＰＳは、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼの活性化をアンタゴナイズした。（Ｒｐ）－ｃＧＭＰＳはまた、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼの活性化もアンタゴナイズした。これとは対照的に、（Ｒｐ）－８－Ｃｌ－ｃＧＭＰＳは、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼの弱いインヒビターであった。（Ｒｐ）－８－Ｃｌ－ｃＧＭＰＳは、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼのやや選択的インヒビターであると見られている。

【0006】

ｃＧＭＰアナログの合成は、当技術分野で公知であるが、Ｓｅｋｈａｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４２：１０３－１０８）やＭｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １２：５３１０－５３１９）に記載のものなど、既知のプロトコルは、実験室スケールでのみ実行可能であるにすぎない。この理由は、多くの場合、クロマトグラフィーを含む労力のかかる精製ステップが合成に関与していることにある。Ｓｐ又はＲｐ立体異性体のどちらかでありうるｃＧＭＰアナログの異なる立体異性体を分離するには、大掛かりなクロマトグラフィーが必要とされうる。この場合、Ｒｐ配置がより効力のある物質である。

【0007】

ｃＧＭＰアナログの合成は、たとえば、国際公開第２００５／１２３７５５号パンフレットの１８頁のスキーム４でｃＡＭＰアナログに対して記載されるように、リンの導入に続いて環化が関与している。その中で記載されるように、初期リン酸化は、糖の５’－ＯＨ基で起こると考えられるが、２’－ＯＨ基も３’－ＯＨ基も保護されなかった。この中間体は決して単離されない。その代わりに、次いで、生成物を水性アセトニトリル中で水酸化アルカリにより高希釈で直接環化しておおよそ１：１の比でジアステレオ異性ヌクレオシド－３’，５’－環状チオリン酸ｃＡＭＰを与え、これをクロマトグラフィー技術により分離しなければならない。国際公開第２００５／１２３７５５号パンフレットの２３頁のスキーム９には、代わりにホスフィットを用いてどのようにジアステレオ異性比を２：３（Ｓｐ／Ｒｐ）に有利にシフト可能であるかが記載されている。この混合物は、その際も再び分離しなければならなかったか、又は単に混合物として使用しなければならなかった。いずれの場合も、既知の反応は実験室スケールである。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

改善された収率を有するよりロバストな合成経路及び生成方法が必要とされる。労力のかかる分離技術を回避する生成方法のニーズが存在する。改善された立体選択性を有する生成方法のニーズが存在する。高純度を有する中間体のニーズが存在する。異なる立体異性体の改善された分離のニーズが存在する。より大きなスケールでの反応を可能にする合成プロトコルのニーズが存在する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明は、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸（ｃＧＭＰ）アナログ又はその合成中間体を生成するための方法であって、
ｉ）一般式（Ｉ）のグアノシンアナログ又はその塩：

【化1】

（式中、ｈは、Ｈ、ハロゲン、又はＱであり、Ｘ^１及びＸ^２は、各々独立して、Ｈ又はｐ’から選ばれ、ｐ’は、各場合とも独立して、ヒドロキシル保護基から選ばれ、Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立して、Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ_３～９ヘテロシクリル、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、及びａｒから選ばれ、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、若しくは４から選ばれ、又はＲ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－若しくは－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成し、ａｒは、各場合とも独立して、５若しくは６員芳香環又はヘテロ芳香環、好ましくはフェニル又は２－フラニルであり、ａｒの各場合とも個別に、ハロゲン、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＯＣＨ_３、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、又は－ＣＦ_３で任意に置換されていてもよく、且つａｒの第２の場合に任意に縮合されて、好ましくはナフチル部分を形成してもよく、Ｑは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－Ｏ－Ｃ（ＣＨ_３）_３、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］_ｎＨ）_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎｃ^１ｃ^２であり、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成し、又はｃ^１はＨであり、且つｃ^２は、３～８員ヘテロ環、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、若しくはリンカー部分であり、いずれの－Ｈも、ハロゲンにより任意に置き換えられていてもよく、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、若しくは８から選ばれる）
を提供するステップと、
ｉｉ）提供されたグアノシンアナログとリンオキソ酸誘導体とを接触させてグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを得るステップと、
ｉｉｉ）得られたグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを結晶化により単離するステップと、
を含む、方法を提供する。好ましい実施形態では、ｈは、Ｈ若しくはハロゲン若しくはＱ、好ましくはＨ若しくはＢｒ若しくはＱ、より好ましくはＢｒであり、Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、ｐ’は、メトキシメチル（ＭＯＭ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、ｔ－ブチル（ｔＢｕ）、アリル（ａｌｌ）、ベンジル（Ｂｎ）、（トリ）アルキルシリル（たとえば、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、若しくはｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ））、アシル（たとえば、アセチル（Ａｃ）、ピバロイル（Ｐｖ）、若しくはベンゾイル（Ｂｚ））から、好ましくはＴＨＰ、（トリ）アルキルシリル、及びアシルからなる群から選択され、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、ａｒは、フェニル、４－メチルフェニル、３－チオフェニル、若しくは２－フラニル、好ましくはフェニルであり、且つ／又はＱは、フラニル、－ＣＦ_３、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（イソプロピルフェニル）、－Ｓ（フェニルアミドメチル）、－Ｓ（ハロフェニル）、－Ｓ（ヒドロキシフェニル）、－Ｓ（アミノフェニル）、－Ｓ（ニトロフェニル）、－Ｓ（メトキシフェニル）、－Ｓ（トルイル）、－Ｓ（トリフルオロメチルフェニル）、－Ｎｃ^１ｃ^２（ここで、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成する）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＮＨ_２、若しくは－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＯＨ、好ましくはフラニル、－ＣＦ_３、－Ｓ（４－ヒドロキシフェニル）、若しくは－Ｓ（４－クロロフェニル）である。

【0010】

好ましい実施形態では、ステップｉ）で使用される一般式（Ｉ）のグアノシンアナログ又はその塩は、ｈがＢｒであり、Ｘ^１がＨであり且つＸ^２がｐ’であり、ｐ’がトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、Ｒ^１及びＲ^２が、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、且つａｒがフェニルである。好ましい実施形態では、ステップｉｉ）のリンオキソ酸誘導体は、リン酸化剤又はホスホニル化剤であり、好ましくは、ステップｉｉ）のリンオキソ酸誘導体は、一般式（Ｐ）：

【化2】

（式中、Ｍは、Ｓ若しくはＯであり、又は不在であり、ｏ^１及びｏ^２は、各々独立して、ハロゲン、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、及び－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２から選択され、且つｏ^３は、Ｈ若しくはｏ^１に対して定義される通りであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成する）
のものである。

【0011】

好ましい実施形態では、ステップｉｉ）で得られるグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログは、一般式（ＩＩ）のもの又はその塩：

【化3】

（式中、ｏ^１及びｏ^３は、それぞれ独立して、－ＯＨ又は以上に定義される通りであり、且つＭは、Ｓ又はＯである）
である。好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）のグアノシンアナログ又はその塩は：Ｉａ）一般式（ｐＩ）の非保護グアノシンアナログ又はその塩：

【化4】

を提供するステップと、
Ｉｂ）非保護グアノシンアナログと（トリ）アルキルシリルハリドとを接触させて多重保護グアノシンアナログを得るとともに、任意に結晶化により多重保護グアノシンアナログを単離するステップと、
Ｉｃ）多重保護グアノシンアナログを選択的に脱保護して一般式（Ｉ）（式中、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’である）のグアノシンアナログを得るステップと、
Ｉｄ）得られた一般式（Ｉ）（式中、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’である）のグアノシンアナログを結晶化により任意に単離するステップと、
により提供される。

【0012】

好ましい実施形態では、本方法は、
ｉｖ）ステップｉｉ）で得られたグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを環化して環状グアノシン－３’，５’－一リン酸（ｃＧＭＰ）アナログを得るステップであって、前記環化は、立体障害塩基の存在下で好ましくは実施される、ステップと、
をさらに含む。

【0013】

好ましくは、ｃＧＭＰアナログは、一般式（ＩＩＩ）のもの又はその塩：

【化5】

（式中、好ましくはＸ^２は以上に定義されたｐ’であり、且つ好ましくはｏ^３はＨである）
であり、且つ本方法は、ｖ）ｃＧＭＰアナログと硫化剤とを接触させて一般式（ＩＩＩ）（式中、ｏ^３は、－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ_１～１２炭化水素、好ましくは－ＳＨである）のチオール化ｃＧＭＰアナログを得るステップを任意にさらに含む。好ましくは、一般式（ＩＩＩ）のｃＧＭＰアナログは、一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）：

【化6】

（式中、好ましくはＸ^２はｐ’であり、且つ好ましくはｏ^３はＨであり、任意に、チオール化ｃＧＭＰアナログは一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）のものであり、好ましくはＸ^２はｐ’であり、ｏ^３は－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ_１～１２炭化水素、好ましくは－ＳＨである）
である。任意にＸ^２はｐ’であり、且つ本方法は、
ｖｉ）Ｘ２により保護されたヒドロキシル部分を脱保護して脱保護ｃＧＭＰアナログを得るステップと、
ｖｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログを任意にトリチュレートするステップと、
ｖｉｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログを薬学的に許容可能な塩、好ましくはナトリウム塩に任意に変換するステップと、
をさらに含む。

【0014】

他の一態様では、一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩：

【化7】

（式中、ｈ、Ｘ１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、以上に定義される通りであり、ｏ^１及びｏ^３は、各々独立して、－ＯＨ又は以上に定義される通りであり、好ましくはｏ^３はＨであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成し、Ｍは、Ｓ又はＯであり、好ましくは、化合物は塩である）が提供される。好ましい実施形態では、化合物は結晶性である。好ましくはｏ^３はＨである。好ましくはｈはＢｒであり、Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、ｐ’は、好ましくはトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、ａｒはフェニルであり、ｏ^１はＯＨであり、ｏ^３はＨであり、且つＭはＳ又はＯ、好ましくはＯである。

【0015】

実施形態の説明
本発明は、ｃＧＭＰアナログの改善された合成方法を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、リンが最初に導入された後に形成される鍵を握る中間体グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログ（Ｈ－ホスホン酸モノエステルともいわれうる）が結晶化可能であることを見いだした。重要なこととして、この中間体の単離により、本発明の方法を用いたｃＧＭＰ合成にクロマトグラフィー分離が必要とされない程度の純度を有する生成物を後続ステップで生成可能になった。そのほか、グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログ中間体の使用により、後続環化の反応条件全体にわたりより精密な制御が可能になったたため、Ｒｐアナログの改善された収率が可能になるとともに、さらにはいずれの時点でもクロマトグラフィーを必要とすることなくＲｐアナログの生成に至るまで可能になった。本方法は、５０ｍｇ程度の少量から１００グラムを超えるスケールまでの合成を可能にした。本方法は、その均一反応ステップ、室温での反応性、及び発熱の欠如のおかげで、容易にスケーリング可能である。

【0016】

合成方法
本発明は、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸（ｃＧＭＰ）アナログ又はその合成中間体を生成するための方法であって、
ｉ）一般式（Ｉ）のグアノシンアナログ又はその塩：

【化8】

（式中、
ｈは、Ｈ、ハロゲン、又はＱであり、
Ｘ^１及びＸ^２は、各々独立して、Ｈ又はｐ’から選ばれ、
ｐ’は、各場合とも独立して、ヒドロキシル保護基から選ばれ、
Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立して、Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ_３～９ヘテロシクリル、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、及びａｒから選ばれ、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、若しくは４から選ばれ、又はＲ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－若しくは－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成し、
ａｒは、各場合とも独立して、５若しくは６員芳香環又はヘテロ芳香環、好ましくはフェニル又は２－フラニルであり、ａｒの各場合とも個別に、ハロゲン、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＯＣＨ_３、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、又は－ＣＦ_３で任意に置換されていてもよく、且つａｒの第２の場合に任意に縮合されていてもよく、
Ｑは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－Ｏ－Ｃ（ＣＨ_３）_３、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］_ｎＨ）_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎｃ^１ｃ^２であり、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成し、又はｃ^１はＨであり、且つｃ^２は、３～８員ヘテロ環、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、若しくはリンカー部分であり、いずれの－Ｈも、ハロゲンにより任意に置き換えられていてもよく、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、若しくは８から選ばれる）
を提供するステップと、
ｉｉ）提供されたグアノシンアナログとリンオキソ酸誘導体とを接触させてグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを得るステップと、
ｉｉｉ）得られたグアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを結晶化により単離するステップと、
を含む、方法を提供する。

【0017】

かかる方法は、これ以降では、本発明に係る方法といわれる。本方法は、ｃＧＭＰアナログを生成するためのものであるが、ｃＧＭＰアナログのさらなる生成に有用な中間体を生成するためにもかなり好適である。好ましい実施形態では、本方法は、ｃＧＭＰアナログを生成するためのものである。好ましい実施形態では、本方法は、ｃＧＭＰアナログへのさらなる変換に好適な中間体を生成するためのものである。本発明に係る方法により生成される好ましい合成中間体は、一般式ＩＩの化合物、一般式ＩＩＩの化合物、一般式ＩＩＩ－Ｒｐの化合物、又はそれらの塩である。塩及びこれらの化合物に対する定義は、より後の段階で本明細書に提供される。好ましい実施形態では、中間体は、一般式ＩＩ又はＩＩＩ－Ｒｐのものである。好ましい実施形態では、中間体は、一般式ＩＩＩのものである。好ましい実施形態では、中間体は、一般式ＩＩＩ－Ｒｐのものである。一般式ＩＩの化合物は、最も好ましい中間体である。

【0018】

本方法により生成される好ましいｃＧＭＰアナログは、以下に記載される。一般的には、それらは、ｃＧＭＰアナログの適用によりモジュレートされるべき標的結合性タンパク質により支配される。好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸依存性プロテインキナーゼの活性化に対するものであり、好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ（式中、ｏ^３はＯＨである）のもの又は一般式ＩＩＩ－Ｓｐ（式中、ｏ^３は、ＳＨ、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、又はシアノボラノである）のものである。カーン・インゴルド・プレローグ命名法規則内で酸素と比較してホウ素の優先度が低いため、前記ホウ素アナログはＲｐアナログといわれることに留意されたい。

【0019】

好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸依存性プロテインキナーゼの阻害のためのものであり、且つ好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ－Ｒｐ（式中、ｏ^３は、ＳＨ、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノである）のものである。しかしながら、カーン・インゴルド・プレローグ命名法規則内で酸素と比較してホウ素の優先度が低いため、前記ホウ素アナログはＳｐアナログといわれる。

【0020】

好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸ゲートイオンチャネルの活性化のためのものであり、且つ好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ（式中、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成しない）のものである。

【0021】

好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸依存性プロテインキナーゼ及び環状グアノシン－３’，５’－一リン酸ゲートイオンチャネルの同時活性化のためのものであり、且つ好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ－Ｓｐ（式中、ｏ^３は、ＳＨ、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、若しくはシアノボラノ、又は任意にＯＨであり、且つ式中、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成しない）のものである。

【0022】

好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは、環状グアノシン－３’，５’－一リン酸依存性プロテインキナーゼ及び環状グアノシン－３’，５’－一リン酸ゲートイオンチャネルの同時阻害のためのものであり、且つ好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ－Ｒｐ（式中、ｏ^３は、Ｓ、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、若しくはシアノボラノである）のものであり、又はより好ましくは、好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ－Ｒｐ（式中、ｏ^３はＳであり、且つ式中、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－若しくは－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－、好ましくは－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成する）のものであり、又はより好ましくは、好ましいｃＧＭＰアナログは、一般式ＩＩＩ－Ｒｐ（式中、ｏ^３は、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、若しくはシアノボラノであり、且つ式中、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－も－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－も形成しない）のものである。

【0023】

環状グアノシン－３’，５’－一リン酸アナログのさらなる好ましい例は、以下のものである。
１．８－ブロモグアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸（８－Ｂｒ－ｃＧＭＰＳ）、
２．８－（２，４－ジヒドロキシフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｏ，ｐＤＨＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｏ，ｐＤＨＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
３．８－（２－アミノフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ＡＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ＡＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
４．８－（４－ヒドロキシフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｐＨＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＨＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
５．８－（４－アミノフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｐＡＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＡＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
６．８－（４－クロロフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環式一リン酸（８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
７．８－（４－クロロフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｐＣＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＣＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
８．８－（２，４－ジクロロフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｏ，ｐＤＣｌＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｏ，ｐＤＣｌＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
９．８－（４－メトキシフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｐＭｅＯＰＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＭｅＯＰＴ－ｃＧＭＰＳ、
１０．８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１１．８－ブロモ－（２－ナフチル－１，Ｎ^２－エテノ）グアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－Ｂｒ－（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－Ｂｒ－（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１２．８－（４－ヒドロキシフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｐＨＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＨＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１３．８－（４－クロロフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一リン酸（８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１４．２－ナフチル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一リン酸（（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１５．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一リン酸（ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１６．４－メトキシβ－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－一リン酸（ｐＭｅＯ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）又はそのチオリン酸ｐＭｅＯ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ、
１７．β－１，Ｎ^２－アセチル－８－ブロモグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（β－１，Ｎ^２－Ａｃ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（β－１，Ｎ^２－Ａｃ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ）、
１８． ８－ブロモ－δ－１，Ｎ^２－ブチリルグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－Ｂｒ－δ－１，Ｎ^２－Ｂｕｔ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－Ｂｒ－δ－１，Ｎ^２－Ｂｕｔ－ｃＧＭＰ）、
１９．８－ブロモ－（４－メチル－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノ）グアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－Ｂｒ－ｐＭｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－Ｂｒ－ｐＭｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）、
２０．－ブロモ－（３－チオフェン－イル－１，Ｎ^２－エテノ）グアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－Ｂｒ－（３－Ｔｐ）ＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－Ｂｒ－（３－Ｔｐ）ＥＴ－ｃＧＭＰ）、
２１．１－ベンジル－８－ブロモグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（１－Ｂｎ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰＳ）及びのそのリン酸（１－Ｂｎ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ）、
２２．８－チオグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－Ｔ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－Ｔ－ｃＧＭＰ）、
２３．８－（４－イソプロピルフェニルチオ）グアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ｐＩＰｒＰＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－ｐＩＰｒＰＴ－ｃＧＭＰ）、
２４．８－フェニルアミドメチルチオグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰ）、
２５．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノ－８－フェニルアミドメチルチオグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（ＰＥＴ－８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰＳ）及びリン酸（ＰＥＴ－８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰ）
２６．８－（４－イソプロピルフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ｐＩＰｒＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－ｐＩＰｒＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）、
２７．８－（２－アミノフェニルチオ）－β－フェニル－１、Ｎ^２エテノグアノシン３’、５’環状一チオリン酸（８－ｏＡＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びのそのホスフェート（８－ｏＡＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）
２８．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノ－８－チオグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（ＰＥＴ－８－Ｔ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（ＰＥＴ－８－Ｔ－ｃＧＭＰ）、
２９．８－メチルチオ－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ＭｅＳ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－ＭｅＳ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）、
３０．８－メチルチオ－グアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ＭｅＳ－ｃＧＭＰＳ）、好ましくはナトリウム塩、及びそのリン酸（８－ＭｅＳ－ｃＧＭＰ）、
３１．８－フェニルグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－Ｐｈｅ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－Ｐｈｅ－ｃＧＭＰ）、
３２．８－（２－フリル）グアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－（２－Ｆｕｒ）－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－（２－Ｆｕｒ）－ｃＧＭＰ）、
３３．８－（４－クロロフェニル）グアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ｐＣＰ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－ｐＣＰ－ｃＧＭＰ）、
３４．８－フェニル－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－Ｐｈｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－Ｐｈｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）、並びに
３５．８－（４－クロロフェニル）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－３’，５’－環状一チオリン酸（８－ｐＣＰ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳ）及びそのリン酸（８－ｐＣＰ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ）、
並びにそれらの薬学的に許容可能な塩。より好ましいｃＧＭＰアナログは、８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、及び８－Ｂｒ－（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－δ－１，Ｎ２－Ｂｕｔ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－δ－１，Ｎ２－Ｂｕｔ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－（３－Ｔｐ）ＥＴ－ｃＧＭＰ、１－Ｂｎ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ、並びにそれらのチオリン酸、好ましくはそれらのチオリン酸である。他のより好ましいｃＧＭＰアナログは、８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＨＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰ、（２－Ｎ）ＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－ｐＭｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－（３－Ｔｐ）ＥＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＩＰｒＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｏＡＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－８－Ｔ－ｃＧＭＰ、８－ＭｅＳ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｐｈｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＣＰ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、及びｐＭｅＯ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、並びにそれらのチオリン酸、好ましくはそれらのチオリン酸、より好ましくは８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＨＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＣＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－ｐＭｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＩＰｒＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｏＡＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－８－Ｔ－ｃＧＭＰ、８－ＭｅＳ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｐｈｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＣＰ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、及びｐＭｅＯ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、並びにそれらのチオリン酸、好ましくはそれらのチオリン酸である。他の好ましいｃＧＭＰアナログは、β－１，Ｎ２－Ａｃ－８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ及び８－Ｂｒ－δ－１，Ｎ２－Ｂｕｔ－ｃＧＭＰ並びにそれらのチオリン酸、好ましくはそれらのチオリン酸である。最も好ましいｃＧＭＰアナログは、８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ又はそのチオリン酸、好ましくはそのチオリン酸である。他の一群のきわめて好ましいｃＧＭＰアナログは、８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－ｐＭｅ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、８－Ｂｒ－（３－Ｔｐ）ＥＴ－ｃＧＭＰ、８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰ、ＰＥＴ－８－ＰＡｍｄＭＴ－ｃＧＭＰ、８－ｐＩＰｒＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰを、及び８－ｏＡＰＴ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ、並びにそれらのチオリン酸、好ましくはそれらのＲｐ異性体、好ましくはそれらのチオリン酸、最も好ましくはそれらのチオリン酸のＲｐ異性体からなる。

【0024】

以上のｃＧＭＰアナログは、好ましくはＲｐ異性体である（参照を容易にするために、たとえば、ＰＥＴ－ｃＧＭＰのＲｐ異性体は、Ｒｐ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰで表され、且つ対応するチオリン酸は、ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳで表される）。

【0025】

ステップｉ）グアノシンアナログの提供
本方法の第１のステップは、グアノシンアナログの提供である。本明細書で用いられる場合、グアノシン自体も、グアノシンアナログとみなすことが可能であり、読みやすくするために別々に挙げられていない。グアノシンを用いて本発明を実践しｃＧＭＰを得ることも可能であることは、当業者であれば理解される。グアノシンアナログは、本方法の一部として合成的に調製可能であり、又は商業的に取得可能であり、さもなければ他のどこかから調達可能である。本方法の一部として、リンは、このグアノシンアナログの５’位に導入され、その後、環化されてｃＧＭＰアナログを形成する。後で本明細書に定義されるｈ、Ｒ１、Ｒ２などの可変部分は、ステップｉ）の終了から開始して一定を維持することが好ましい。

【0026】

グアノシンアナログ（又は以上に説明したようにグアノシン）はまた、塩でありうる。本発明との関連では、塩は、好ましくは薬学的に許容可能な塩である。薬学的に許容可能な塩は、当技術分野で公知である。好ましい塩は、酸付加塩である。他の好ましい塩は、塩基付加塩である。本発明との関連では、薬学的に許容可能な塩は、好ましくは、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｍｎなどの無機塩基に由来する塩、Ｎ，Ｎ’－ジアセチルエチレンジアミン、グルカミン、トリエチルアミン、コリン、ジシクロヘキシルアミン、ベンジルアミン、（トリ）アルキルアミン、チアミン、グアニジン、ジエタノールアミン、アルファフェニルエチルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピリジン、ヒドロキシエチルピロリジン、ヒドロキシエチルピペリジンなどの有機塩基の塩を含む。かかる塩はまた、グリシン、アラニン、シスチン、システイン、リシン、アルギニン、フェニルアラニン、グアニジンなどのアミノ酸の塩を含む。かかる塩は、たとえば、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩、ホウ酸塩、ＨＣｌ塩やＨＢｒ塩などのハロゲン化水素酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、パルモ酸塩、メタンスルホン酸塩、トシル酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、アスコルビン酸塩、グリセロリン酸塩、ケトグルタル酸塩など、適宜、酸付加塩を含みうる。好ましい塩は、ＨＣｌ塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＨ＋）塩、ナトリウム塩、及びトリフルオロ酢酸塩である。より好ましい塩は、ＴＥＡＨ＋塩及びナトリウム塩である。本発明に係る方法により生成されるｃＧＭＰアナログに対しては、好ましい塩はナトリウム塩である。本発明に係る方法により生成される又は本発明に係る方法の一部として生成される中間体に対しては、好ましい塩はＴＥＡＨ＋塩である。

【0027】

「薬学的に許容可能」という語句は、生理学的に耐容性のある、且つ典型的には哺乳動物に投与したときに限定されるものではないが胃の不調又は眩暈をはじめとするアレルギー性又は類似の有害反応を引き起こさない、化合物又は組成物を意味する。何が薬学的に許容可能であるかないかは、当業者であれば見分けることが可能である。

【0028】

グアノシンアナログはまた、水和物又は溶媒和物でもありうる。本発明との関連では、水和物は、溶媒が水であるときの溶媒和物を意味する。溶媒和物という用語は、本明細書で用いられる場合、溶媒を含有する物質の結晶形を意味する。溶媒和物は、好ましくは薬学的に許容可能な溶媒和物であり、水和物でありうるか又はアルコール、エーテルなどの他の結晶化溶媒を含みうる。それゆえ、結晶は、水和物又は溶媒和物でありうるとともに、結晶化は、水和物又は溶媒和物を生成可能である。

【0029】

グアノシンアナログは、好ましくは、一般式（Ｉ）のもの又はその塩：

【化9】

（式中、
ｈは、Ｈ、ハロゲン、又はＱであり、好ましくは、ｈは、Ｈ、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ、又はＱであり、より好ましくは、Ｈ、Ｂｒ、又はＱであり、きわめて好ましい実施形態では、ｈはＨであり、きわめて好ましい実施形態では、ｈはＢｒであり、きわめて好ましい実施形態では、ｈはＨ又はＢｒであり、きわめて好ましい実施形態では、ｈはＱであり、最も好ましい実施形態では、ｈはＨ又はＢｒ又はＱであり、
Ｘ^１及びＸ^２は、各々独立して、Ｈ又はｐ’から選ばれ、好ましくは、Ｘ^１はＨであり、より好ましくは、後で本明細書に記載されるように環状リンオキソ酸ジエステルが形成されるステップの前はＨであり、好ましくは、５’－リンオキソ酸エステルの形成前で、且つＸ^２はｐ’であり、最も好ましくは、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’であり、
ｐ’は、各場合とも独立して、ヒドロキシル保護基から選ばれ、ヒドロキシル保護基は、当技術分野で公知であり、ヒドロキシル部分の酸素原子を保護することが可能である）である。好適なヒドロキシル保護基の例は、たとえば、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ｉｎ Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００６（ＩＳＢＮ：９７８－０－４７１－６９７５４－１）により、当技術分野で広範囲に記載されている。当業者であれば、本発明に従って使用される好適な保護基を選択可能であろう。好適なヒドロキシル保護基の例は、メトキシメチル（ＭＯＭ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、ｔ－ブチル（ｔＢｕ）、アリル（ａｌｌ）、ベンジル（Ｂｎ）、（トリ）アルキルシリル（たとえば、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、又はｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、好ましい（トリ）アルキルシリルはトリアルキルシリルである）、及びアシル（たとえば、アセチル（Ａｃ）、ピバリル（Ｐｖ）、又はベンゾイル（Ｂｚ））であり、より好ましくはトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）である。ｐ’の好ましい基は、ＴＨＰ、（トリ）アルキルシリル、及びアシルである。ｐ’のより好ましい基は、ＴＨＰ及び（トリ）アルキルシリル（好ましくはＴＩＰＳ）であり、最も好ましくはｐ’は、（トリ）アルキルシリル（好ましくはＴＩＰＳ）である。当技術分野で公知のように、ｐ’は、常に酸素に結合され、複数の場合のｐ’は、一緒になって２つ以上のヒドロキシル基を保護する単一保護基を形成可能である。かかる多価保護基の例は、アセトニド及びベンジリデンアセタールである。好ましい実施形態では、ｐ’により保護された２つの部分が同一炭素原子又は隣接炭素原子に結合されているとき、２つの場合のｐ’は、一緒になって単一多価保護基を形成する。

【0030】

Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立して、Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ_３～９ヘテロシクリル、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、及びａｒから選ばれ、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、若しくは４から選ばれ、又はＲ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－若しくは－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成し、ｎが０であるとき、ＣＨ_２単位はまったく存在せず、それゆえ、好ましい実施形態では、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ３～９ヘテロシクリルはＣ３～９ヘテロシクリルである。ヘテロシクリルは、本発明との関連では、３、４、５、６、７、８、又は９個の炭素原子を有する任意に不飽和であってもよいヘテロ環である。ヘテロ環は、ａｒに対して記載されるように任意に置換されていてもよく、任意の置換中の炭素原子は、Ｃ３～９にカウントされない。ヘテロ原子は、好ましくは、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される。好ましくは、ヘテロシクリルは、多くとも３、より好ましくは多くとも２、最も好ましくは多くとも１個のヘテロ原子を有する。ヘテロシクリルは、好ましくは少なくとも１、より好ましくは少なくとも２個のヘテロ原子を有する。ヘテロシクリルの好ましい例は、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、ピラゾリル、及びピロリジニルである。Ｒ^１及びＲ^２が、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－又は－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成するとき、好ましい実施形態では、ａｒ又はＣ（＝Ｏ）は、Ｒ１が描かれた箇所の最も近くにある。他の好ましい実施形態では、ａｒ又は（Ｃ＝Ｏ）は、Ｒ２が描かれた箇所の最も近くにある。好ましくは、Ｒ^１及びＲ^２が、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－又は－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成するとき、スチリレン部分が形成され、それゆえ、ａｒはフェニルである。最も好ましくは、Ｒ^１及びＲ^２が、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成するとき、フェニルがＲ２の最も近くにある－ＣＨ＝Ｃ（フェニル）－が形成される。好ましくは、Ｒ^１及びＲ^２が、一緒になって、－（ＣＨ_２）_１～４Ｃ（＝Ｏ）－を形成するとき、－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－又は－（ＣＨ_２）３－Ｃ（＝Ｏ）－が形成される。

【0031】

ａｒは、各場合とも独立して、５若しくは６員芳香環又はヘテロ芳香環、好ましくはフェニル又は２－フラニルであり、ａｒの各場合とも個別に、ハロゲン、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＯＣＨ_３、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、又は－ＣＦ_３で任意に置換されていてもよく、且つａｒの第２の場合に任意に縮合されて、好ましくはナフチル部分を形成してもよく、好ましくは、ａｒの２つ以下の場合がかかる縮合部分に含まれる。好ましい実施形態では、ａｒはａｒのさらなる場合に縮合される。好ましい実施形態では、ａｒは６員である。好ましい実施形態では、ａｒは未置換である。ａｒの好ましい例は、フェニル、フラニル、ピリジニル、イミダゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル、チオフェニル、ベンゾチアゾリル、インドリル、４－メチルフェニル、３－チオフェニル、及びナフチルである。ａｒのきわめて好ましい実施形態は、４－メチルフェニルである。

【0032】

Ｑは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－Ｏ－Ｃ（ＣＨ_３）_３、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］_ｎＨ）_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎｃ^１ｃ^２であり、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成し、又はｃ^１はＨであり、且つｃ^２は、３～８員ヘテロ環、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－アミド－（ａｒ）、若しくはリンカー部分であり、いずれの－Ｈも、ハロゲンにより任意に置き換えられていてもよく、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、若しくは８から選ばれ、ヘテロ環は、以上に定義されている。リンカーは、以下に定義される。好ましい実施形態では、Ｑは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－Ｏ－Ｃ（ＣＨ_３）_３、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］_ｎＨ）_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎｃ^１ｃ^２であり、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成し、又はｃ^１はＨであり、且つｃ^２は、３～８員ヘテロ環、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）、若しくは－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）であり、いずれの－Ｈも、ハロゲンにより任意に置き換えられていてもよく、ｎの各場合とも独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、若しくは８から選ばれる。－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈは、好ましくは－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈ又は－（ＣＨ_２）_ｎ－ＳＨである。－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨでは、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２では、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈは、好ましくは－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ又は－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈである。－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨでは、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２では、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］ｎＨ）２は、好ましくは、ｎが少なくとも２である－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、又はｎの各場合とも少なくとも２である－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎ（－［ＣＨ_２］ｎＨ）２である。ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＮＨ_２では、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＯＨでは、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｎｃ^１ｃ^２では、ｎは、好ましくは２、３、４、５、又は６である。好ましい実施形態では、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環、より好ましくは４～６員ヘテロ環、最も好ましくは５又は６員ヘテロ環を形成する。他の好ましい実施形態では、ｃ^１はＨであり、且つｃ^２は、３～８員ヘテロ環、より好ましくは４、５、又は６員ヘテロ環、最も好ましくは５又は６員ヘテロ環である。－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｈでは、ｎは、好ましくは０、１、２、３、４、５、又は６、より好ましくは１、２、３、又は４、さらにより好ましくは１又は２、最も好ましくは１である。－（ＣＨ_２）_ｎ－ａｒでは、ｎは、好ましくは０、１、２、３、４、５、又は６、より好ましくは０、１、２、又は３、さらにより好ましくは０、１、又は２、最も好ましくは０又は２である。－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）では、ｎは、好ましくは少なくとも２である。－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）では、ｎは、好ましくは少なくとも２である。－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ａｒ）では、ｎは、好ましくは少なくとも２である。好ましくは、少なくとも１つの－Ｈは、ハロゲン、より好ましくはフッ素により置き換えられていてもよく、好ましくは、－Ｈの多くとも３つの場合がハロゲンにより置き換えられる。任意に、Ｈのすべての場合がＦにより置き換えられる。好ましくは、直接連結ヘテロ原子を生じるおそれのあるときは、ｎは０ではなく、より好ましくは０でも１でもない。好ましくは、ｎは多くとも６である。

【0033】

リンカーは、当技術分野で公知である。リンカーの構造は、リンカーが本発明に使用される化合物に容易に化学結合してリンカー化合物を形成可能になるようにするとともに、得られるリンカー化合物がポリペプチドや表面などのさらなる物質に容易にコンジュゲート可能になるようにするものである。リンカーの選択は、循環系中又は表面上にあるときのかかる最終的コンジュゲートの安定性に影響を及ぼす可能性がある。リンカーは、切断性又は非切断性でありうる。切断性リンカーは、たとえば、リソソームプロテアーゼ又は酸性ｐＨを有する環境に晒されたときに切断可能な部分を含む。好適な切断性リンカーは、当技術分野で公知であり、たとえば、ジ、トリ、又はテトラペプチド、すなわち、２、３、又は４つのアミノ酸残基で構成されたペプチドを含む。そのほか、切断性リンカーは、自己犠牲部分、たとえば、ω－アミノアミノカルボニル環化スペーサー（Ｓａａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，３３（１），９７－１０１を参照されたい）、又は－ＮＨ－ＣＨ_２－Ｏ－部分を含みうる。リンカーの切断は、周囲媒体による化合物の利用可能性を向上させることが可能である。非切断性リンカーは、たとえば、コンジュゲートポリペプチドがリソソーム中で分解された後、本発明に係る化合物を依然として効果的に放出可能である。非切断性リンカーとしては、たとえば、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル（シクロヘキサン）－１－カルボキシレート及びマレイミドカプロン酸並びにそれらのアナログが挙げられる。

【0034】

好ましい実施形態では、ｈは、Ｈ若しくはハロゲン若しくはＱ、好ましくはＨ若しくはＢｒ若しくはＱ、より好ましくはＢｒ若しくはＱ、最も好ましくはＢｒであり、
Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、
ｐ’は、メトキシメチル（ＭＯＭ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、ｔ－ブチル（ｔＢｕ）、アリル（ａｌｌ）、ベンジル（Ｂｎ）、（トリ）アルキルシリル（たとえば、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、若しくはｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ））、アシル（たとえば、アセチル（Ａｃ）、ピバロイル（Ｐｖ）、若しくはベンゾイル（Ｂｚ））から、好ましくはＴＨＰ、（トリ）アルキルシリル、及びアシルからなる群から選択され、
Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、
ａｒは、フェニル、４－メチルフェニル、３－チオフェニル、若しくは２－フラニル、好ましくはフェニル若しくは２－フラニル、より好ましくはフェニルであり、且つ／又は
Ｑは、フラニル、－ＣＦ_３、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（イソプロピルフェニル）、－Ｓ（フェニルアミドメチル）、－Ｓ（ハロフェニル）、－Ｓ（ヒドロキシフェニル）、－Ｓ（アミノフェニル）、－Ｓ（ニトロフェニル）、－Ｓ（メトキシフェニル）、－Ｓ（トルイル）、－Ｓ（トリフルオロメチルフェニル）、－Ｎｃ^１ｃ^２（ここで、ｃ^１及びｃ^２は、それらが結合されているＮと一緒になって、３～８員ヘテロ環を形成する）、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ、－Ｓ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＮＨ_２、若しくは－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｎＯＨ、好ましくはフラニル、－ＣＦ_３、－Ｓ（４－ヒドロキシフェニル）、若しくは－Ｓ（４－クロロフェニル）である。

【0035】

さらにより好ましくは、ｈはＢｒであり、Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、ｐ’は、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、好ましくはａｒがＲ２の最も近くにある－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、且つａｒは、フェニルであり又は４－メチルフェニルである。

【0036】

提供されるＧＭＰアナログでは、Ｘ^２がｐ’であり且つＸ^１がＨであることが大いに好ましい。というのは、これにより５’－一リンオキソ酸エステルアナログの化学選択的導入が促進されるからである。本発明者らは、驚くべきことに、Ｘ１の保護がＸ２の保護よりも影響が少ないことを見いだした。それゆえ、好ましい実施形態では、Ｘ^１がＨであり且つＸ^２がｐ’である本発明に係る方法が提供され、一般式（Ｉ）のグアノシンアナログ又はその塩は、以下のステップにより提供される：
Ｉａ）一般式（ｐＩ）の非保護グアノシンアナログ又はその塩：

【化10】

（式中、ｈ、Ｒ^１、及びＲ^２は、一般式Ｉに対して定義される通りである）
を提供するステップ。このステップでは、ステップｉｉ）で変換されるグアノシンアナログの前駆体が提供される。この前駆体は、Ｘ^１及びＸ^２の両方にＨを有することを特徴とし、したがって、非保護グアノシンアナログといわれる。
Ｉｂ）非保護グアノシンアナログと（トリ）アルキルシリルハリドとを接触させて多重保護グアノシンアナログを得るとともに、任意に結晶化により多重保護グアノシンアナログを単離するステップ。このステップでは、非保護グアノシンアナログは、（トリ）アルキルシリルハリドを用いて保護され、ｐ’の好ましい保護基である（トリ）アルキルシリル保護基になったＸ２をもたらす。そのほか、５’－ＯＨ基は、この反応ステップで保護状態になることが可能である。驚くべきことに、Ｘ^１は、Ｈを維持することが見いだされた。５’－及び２’－保護グアノシンアナログは、結晶化により便利に単離可能であり、これは好ましい実施形態では行われる。反応は、好ましくは、ＤＭＦ、ピリジン、テトラメチルウレア、ジメチルアセトアミド、ＮＭＰなどの非プロトン性極性溶媒中、より好ましくはＤＭＦ又はＮＭＰ中で実施される。反応は、好ましくはマイルドな塩基、より好ましくはマイルドな有機塩基、たとえば、イミダゾール、ピリジン、トリメチルアミンなどのトリアルキルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、又はＮ－メチルイミダゾール、より好ましくはイミダゾールの存在下で実施される。反応の進行は、好ましくは、クロマトグラフィー技術などの分析技術、ＴＬＣ又はＨＰＬＣを用いてモニターされる。実質的にすべてのＸ^２が保護された後、反応は、好ましくは、たとえば、１０当量（ｅｑｕｉｖ．）などの過剰の水の添加によりクエンチされる。クエンチされた反応は、好ましくは、水性相で洗浄した後、非プロトン性有機溶媒、好ましくはトルエンなどの低極性のもの、イソプロピルアセテートやブチルアセテートなどのエステル、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルなどのエーテル、又はベンゼン、より好ましくはトルエン中に抽出される。反応生成物は、好ましくは結晶化により、好ましくはメタノールでない有機溶媒から、より好ましくは非プロトン性有機溶媒から、さらにより好ましくはエチルアセテートやプロピルアセテートなどの極性のものから、最も好ましくはイソプロピルアセテートから単離される。結晶化は、好ましくは種晶を加えて、より好ましくは結晶化される所望の生成物を用いて行われる。好ましくは少なくとも４、より好ましくは少なくとも８、さらにより好ましくは少なくとも１２時間放置される結晶化の後、結晶は、好ましくは洗浄及び／又は乾燥される。洗浄は、好ましくは、結晶化に使用されたものと同一の溶媒を用いて実施される。乾燥は、好ましくは真空中で、より好ましくは昇温で、たとえば約４０～８０℃で、好ましくは約５０～７０℃で実施される。
Ｉｃ）多重保護グアノシンアナログを選択的に脱保護して一般式（Ｉ）（式中、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’である）のグアノシンアナログを得るステップ。このステップでは、２’－及び５’－保護位の反応性の差が使用され、水性ＴＦＡなどのマイルドな反応条件を用いて保護５’－ＯＨが選択的に脱保護される。このステップは、ＴＨＦ及び／又は水と酸とのいずれかの組合せ、好ましくはＴＦＡを用いて実施可能であるが、好ましくは、非プロトン性有機溶媒、好ましくは極性のもの、たとえば、ＴＨＦ又は１，４－ジオキサン中で実施される。脱保護は、好ましくは、強酸、好ましくはＴＦＡを用いて、好ましくは約７～１３、たとえば１０体積の溶媒、約１～３、たとえば２体積の水、及び約０．２～１、たとえば０．４５体積のＴＦＡを用いて行われる。反応の進行は、好ましくは、クロマトグラフィーなどの好適な分析技術、たとえばＨＰＬＣを用いてモニターされる。モニタリングは、２’位もまた脱保護されるおそれのある過剰脱保護を検出可能であるので有益である。実質的にすべての５’－保護基が除去されたとき、反応は、好ましくは、塩基、好ましくはアンモニアなどのマイルドな窒素ベース塩基、若しくはトリアルキルアミンなどの好適なアミン塩基、又はカーボネートやビカーボネートなどの無機塩基、より好ましくはアンモニア又はアミン塩基（これはガスの発生を回避する）、最も好ましくは体積効率の良いアンモニアの添加によりクエンチされる。好ましくは、クエンチされた粗反応混合物は、蒸発され、完全脱保護された副生成物が可溶でない混合物中に、たとえば、ジクロロメタン又はクロロホルムと少量の水との混合物（約１０～２０、たとえば１５体積のたとえばジクロロメタン対約１～３、たとえば２体積の水）中に、又はアセトンなどの混合物中に再懸濁される。得られた希釈スラリーは、可能性のある不溶性汚染物を除去するために選択的に濾過される。濾液の有機相は、好ましくは分離され、その後、蒸発させて残渣を得ることが可能である。残渣は、好ましくは、極性有機溶媒、好ましくは非プロトン性のもの、たとえば、アセトニトリル又はエチルアセテート、より好ましくはアセトニトリルを用いてトリチュレートされる。残留固形分は、好ましくは、トリチュレーションに使用したものと同一の溶媒を用いて洗浄され、その後、生成物は、好ましくは真空乾燥などで乾燥される。
Ｉｄ）得られた一般式（Ｉ）（式中、Ｘ^１はＨであり、且つＸ^２はｐ’である）のグアノシンアナログを結晶化又は好ましくはトリチュレーションにより任意に単離するステップ。ここで、ｐ’は、（トリ）アルキルシリルであるとともに、２’－保護グアノシンアナログは、結晶化により便利に単離される。単離は、好ましくは、ステップＩｃで以上に記載したように実施される。

【0037】

ステップｉ）のグアノシンアナログがＲ^１及びＲ^２の両方にＨを有するとき、アナログは、Ｒ^１及びＲ^２が一緒になって－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成するアナログに有利に変換可能である。この目的では、Ｒ^１及びＲ^２の両方がＨであるアナログは、好ましくは、高極性非プロトン性溶媒、好ましくはＤＭＳＯ中に溶解され、その後、約１～３、たとえば１．５ｅｑｕｉｖ．の（ａｒ）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２Ｂｒが添加される。本明細書では、ａｒは、以上に定義される通りであり、たとえばフェニル又はフラニル、好ましくはフェニルである。（ａｒ）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２Ｂｒ中のａｒがフェニルであるとき、反応剤はフェナンシルブロミドである。（ａｒ）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２Ｂｒの添加後、強塩基、好ましくは強有機塩基、たとえばＤＢＵ又はテトラメチルグアニジン、より好ましくはＤＢＵ、好ましくは約１～５、たとえば約２．５ｅｑｕｉｖ、好ましくはある時間にわたり、たとえば約１０～６０分間、たとえば約３０分間にわたり添加される。反応完了後、たとえば約１ｈ後、反応は、好ましくは、中和され、より好ましくは、酸、好ましくは弱酸、より好ましくは有機酸、たとえば酢酸の添加により行われる。生成物は、好ましくは、たとえば水、たとえば約１０体積の添加により粗反応混合物から沈殿される。沈殿生成物は、好ましくは、濾過により単離され、好ましくは、たとえば水性ＤＭＳＯ又は水で洗浄され、その後、固形分は、好ましくは、真空乾燥などで乾燥される。次いで、好ましくは、固形分は、好適な非プロトン性極性有機溶媒、たとえばアセトニトリル又はＴＨＦ、より好ましくはアセトニトリルを用いてトリチュレートされ、その後、生成物は、好ましくは、真空乾燥などで乾燥される。真空乾燥は、好ましくは、昇温で、たとえば約７０℃で実施される。

【0038】

ステップｉｉ）グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログの形成
第２のステップでは、ステップｉ）で提供されたグアノシンアナログは、グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを得るためにリンオキソ酸誘導体に接触される。リンオキソ酸誘導体は、好ましくは、リン酸化剤又はホスホニル化剤であり、リンオキソ酸誘導体という用語は、実際のオキソ酸のみを包含するように狭義に解釈されるべきでなく、チオ－アナログ及び誘導体、たとえばＰＣｌ３もまた包含されることが想定される。かかる作用剤は、当技術分野で公知である。本発明との関連では、作用剤は、グアノシンアナログの５’位にリンオキソ酸エステルを導入してＧＭＰアナログを形成するためのものである。リン酸化剤は、リンが形式酸化状態Ｐ（Ｖ）であるエステル、たとえば（ＨＯ）_２Ｐ（＝Ｏ）－グアノシンを形成する。ホスホニル化剤は、リンが形式酸化状態Ｐ（ＩＩＩ）であるエステル、たとえば（ＨＯ）ＨＰ（＝Ｏ）－グアノシンを形成する。好ましい実施形態では、リンオキソ酸誘導体はリン酸化剤である。さらにより好ましい実施形態では、リンオキソ酸誘導体はホスホニル化剤である。

【0039】

好ましい実施形態では、ステップｉｉ）のリンオキソ酸誘導体は、一般式（Ｐ）：

【化11】

（式中、
Ｍは、Ｓ若しくはＯであり、又は不在であり、好ましい実施形態では、Ｍは、Ｓ又はＯであり、より好ましくはＯであり、他の好ましい実施形態では、Ｍは、不在であり、
ｏ^１及びｏ^２は、各々独立して、ハロゲン、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、及び－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２から選択され、且つ
ｏ^３は、Ｈ若しくはｏ^１に対して定義される通りであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成する）
のものである。一般式（Ｐ）の化合物がリン酸化剤であるとき、ｏ^３はＨでなく、且つＭは不在でない。一般式（Ｐ）で示される化合物がホスホニル化剤であるとき、ｏ^３はＨであり、又はＭは不在であるとともｏ^１及びｏ^３は一緒になってキラル補助剤を形成する。

【0040】

Ｃ_１～８炭化水素は、これとの関連では、好ましくは、好適な脱離基を形成する。炭化水素は、ヘテロ原子を含むことが可能であり、ハロゲンで、好ましくはフッ素で任意に置換可能である。好ましい実施形態では、ｏ^１は、好適な脱離基、たとえば、ハロゲン、－ＯＣ_６Ｆ_５などの－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＳＣ_６Ｆ_５などの－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、及び－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２を表す。好ましい実施形態では、ｏ^２は、好適な脱離基、たとえば、ハロゲン、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、及び－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２を表す。より好ましい実施形態では、ｏ^１及びｏ^２は、両方とも好適な脱離基を表す。好ましくは、ｏ^１及びｏ^２は、同一部分を表す。好適な脱離基の例は、フェノール、ペンタフルオロフェノール、イミダゾール、トリアゾール、ジイソプロピルアミン、及びハロゲン、たとえば塩素又は臭素、より好ましくは塩素である。Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２では、２つの炭化水素は、一緒になって、たとえば、イミダゾールが形成されるときなど、それらが結合されている窒素を含む環式構造を形成可能であるものと理解される。

【0041】

キラル補助剤は、当技術分野で公知のように（たとえば、Ｋｎｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｕ３３６９を参照されたい）、キラル補助剤が一般式（Ｐ）の中心リン原子の周りにキラル環式構造を形成することから、所与の立体化学配置で最終的環化を促進する部分である。キラル中心を強調するために使用される下線付きで、ｏ^１及びｏ^３が結合された位置間をブリッジする２価基としてここに描かれたキラル補助剤の例は、

【化12】

（式中、Ｃ^＊及びＣ^＊＊は、それらが結合されている炭素原子と一緒になって、

【化13】

を表すことにより環式構造を形成する）である。キラル補助剤が存在する一般式（Ｐ）の化合物では、Ｍは、好ましくはＳ又はＯ、より好ましくはＳである。

【0042】

一般式（Ｐ）の好ましい化合物は、ジフェニルホスフィット、ジメチルホスフィット、ジエチルホスフィット、ジイソプロピルホスフィット、ジクロロホスフィットなどのジハロホスフィット、ジ（ペンタフルオロフェニル）ホスフィット、ジフェニルチオホスフィット、ジメチルチオホスフィット、ジエチルチオホスフィット、ジイソプロピルチオホスフィット、ジクロロチオホスフィットなどのジハロチオホスフィット、ジ（ペンタフルオロフェニル）チオホスフィット、ジ（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィット（［（ｉＰｒ）２Ｎ］２Ｐ［ＯＭｅ］）、［（ｉＰｒ）２Ｎ］２Ｐ［ＯＥｔ］、Ｃｌ２Ｐ（Ｓ）（ＯＭｅ）、Ｃｌ２Ｐ（Ｓ）（ＯＥｔ）、Ｃｌ２Ｐ（Ｏ）（ＳＭｅ）、Ｃｌ２Ｐ（Ｏ）（ＳＥｔ）、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（キラル補助剤）、Ｐ（Ｓ）Ｃｌ３、Ｐ（Ｏ）Ｃｌ３、ＣｌＰ（Ｓ）（ＯＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＯＥｔ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＯＭｅ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＯＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＯＭｅ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＯＥｔ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＳＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＳＥｔ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＳＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＳＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＳＭｅ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＳＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＳＭｅ）２、及び（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＳＥｔ）２であり、より好ましいのは、以下により好ましいホスホニル化剤又はリン酸化剤として表されるものである。

【0043】

好ましいホスホニル化剤は、ジフェニルホスフィット、ジメチルホスフィット、ジエチルホスフィット、ジイソプロピルホスフィット、ジハロホスフィット、たとえば、ジクロロホスフィット、ジ（ペンタフルオロフェニル）ホスフィット、ジフェニルチオホスフィット、ジメチルチオホスフィット、ジエチルチオホスフィット、ジイソプロピルチオホスフィット、ジハロチオホスフィット、たとえば、ジクロロチオホスフィット、ジ（ペンタフルオロフェニル）チオホスフィット、［（ｉＰｒ）_２Ｎ］_２Ｐ［ＯＭｅ］、及び［（ｉＰｒ）_２Ｎ］_２Ｐ［ＯＥｔ］であり、より好ましいのは、ジフェニルホスフィット、ジフェニルチオホスフィット、及び［（ｉＰｒ）_２Ｎ］_２Ｐ［ＯＭｅ］であり、最も好ましいのは、ジフェニルホスフィットである。

【0044】

好ましいリン酸化剤は、Ｃｌ２Ｐ（ｓ）（ＯＭｅ）、Ｃｌ２Ｐ（ｓ）（ＯＥｔ）、Ｃｌ２Ｐ（Ｏ）（ＳＭｅ）、Ｃｌ２Ｐ（Ｏ）（ＳＥｔ）、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（キラル補助剤）、Ｐ（Ｓ）Ｃｌ３、Ｐ（Ｏ）Ｃｌ３、ＣｌＰ（Ｓ）（ＯＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＯＥｔ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＯＭｅ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＯＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＯＭｅ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＯＥｔ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＳＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＳＥｔ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＳＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＳＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＳＭｅ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（ＳＥｔ）２、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＳＭｅ）２、及び（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｏ）＝（ＳＥｔ）２であり、より好ましいのは、Ｃｌ２Ｐ（Ｓ）（ＯＭｅ）、Ｃｌ２Ｐ（Ｏ）（ＳＭｅ）、（ペンタフルオロフェニル）ＯＰ（Ｓ）＝（キラル補助剤）、Ｐ（Ｓ）Ｃｌ３、Ｐ（Ｏ）Ｃｌ３、ＣｌＰ（Ｓ）（ＯＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）２、ＣｌＰ（Ｓ）（ＳＭｅ）２、及びＣｌＰ（Ｏ）（ＳＭｅ）２である。

【0045】

リンオキソ酸誘導体とグアノシンアナログとを接触させることは、好ましくは、グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログの形成に資する条件下で実施される。接触させることは、好ましくは非プロトン性溶媒中で、より好ましくは相対的に低極性の非プロトン性溶媒、たとえばジクロロメタン又はクロロホルム中で実施される。接触させることは、好ましくは、マイルドな塩基、好ましくは非求核性のもの、たとえば、ピリジン、ルチジン、イミダゾール、又は約４～７、より好ましくは約５～７のｐＫａを有する他の含窒素塩基の存在下で実施される。接触させることは、好ましくは、過剰のリンオキソ酸誘導体を用いて、好ましくは、約２～約５ｅｑｕｉｖ．、たとえば、約３ｅｑｕｉｖ．の反応剤を用いて実施される。反応が進行した後、反応は、好ましくは、たとえば、塩基性水性溶液、たとえば、水性（トリ）アルキルアミン溶液、たとえば、１体積の水及び１体積のトリメチルアミンを用いてクエンチされ、次いで、好ましくは、約１０～６０分間、たとえば、約３０分間放置される。有機相は、好ましくは、その後、水などで洗浄される。次いで、有機相は、好ましくは、たとえば、溶媒の蒸発、好ましくは、続いて共蒸発、たとえば、トルエン、エチルアセテート、又はイソプロパノールを用いて、好ましくはエチルアセテート及び／又はイソプロパノールを用いて共蒸発により乾燥させる。

【0046】

こうした接触の生成物は、グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログである。この化合物は、好ましくは、一般式（ＩＩ）のもの又はその塩：

【化14】

（式中、ｈ、Ｘ１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、以上に定義される通りであり、ｈは、好ましくはＢｒであり、Ｘ^１は、好ましくはＨであり、Ｘ^２は、好ましくはｐ’、より好ましくは（トリ）アルキルシリル、たとえばＴＩＰＳであり、Ｒ^１は、好ましくはＨであり又はＲ２と一緒になって－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、Ｒ^２は、好ましくはＲ２と一緒になって－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し又はＨであり、最も好ましくはＲ^１及びＲ^２は、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、
ｏ^１及びｏ^３は、各々独立して、－ＯＨ又は以上に定義される通りであり、且つ
Ｍは、Ｓ又はＯ、好ましくはＯである）
である。一般式（ＩＩ）の化合物では、ｈの定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（Ｉ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩ）の化合物では、Ｒ１の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（Ｉ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩ）の化合物では、Ｒ２の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（Ｉ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩ）の化合物では、Ｘ１の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（Ｉ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩ）の化合物では、Ｘ２の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（Ｉ）の化合物に対して定義される通りである。

【0047】

好ましい実施形態では、ｏ^３はＨであり、且つｏ^１は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２、より好ましくは－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２である。他の好ましい実施形態では、ｏ^１及びｏ^３は両方とも、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２、より好ましくは－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２である。好ましい実施形態では、ｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、以上に定義されるキラル補助剤を形成する。最も好ましくは、ｏ^１は－ＯＨであり、且つＯ^３はＨである。

【0048】

下記は、一般式（ＩＩ）の好ましい化合物である。
１．８－ブロモグアノシン５’－一リン酸、
２．８－（２，４－ジヒドロキシフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
３．８－（２－アミノフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
４．８－（４－ヒドロキシフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
５．８－（４－アミノフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
６．８－（４－クロロフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノグアノシン－５’－一リン酸
７．８－（４－クロロフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
８．８－（２，４－ジクロロフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
９．８－（４－メトキシフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸、
１０．８－ブロモβ－フェニル－１、Ｎ^２エテノグアノシン－５’－一リン酸
１１．８－ブロモ－（２－ナフチル－１、Ｎ^２エテノ）グアノシン－５’－一リン酸
１２．８－（４－ヒドロキシフェニルチオ）－β－フェニル－１、Ｎ^２エテノグアノシン－５’－一リン酸
１３．８－（４－クロロフェニルチオ）－β－フェニル－１、Ｎ^２エテノグアノシン－５’－一リン酸
１４．２－ナフチル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－一リン酸
１５．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－一リン酸、
１６．４－メトキシ－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン５’－一リン酸
１７．８－ブロモグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
１８．８－（２，４－ジヒドロキシフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
１９．８－（２－アミノフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２０．８－（４－ヒドロキシフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２１．８－（４－アミノフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２２．８－（４－クロロフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホネート、
２３．８－（４－クロロフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２４．８－（２，４－ジクロロフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２５．８－（４－メトキシフェニルチオ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２６．８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２７．８－ブロモ－（２－ナフチル－１，Ｎ^２－エテノ）グアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２８．８－（４－ヒドロキシフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
２９．８－（４－クロロフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
３０．２－ナフチル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
３１．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
３２．４－メトキシ－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－モノ－Ｈ－ホスホン酸、
３３．β－１，Ｎ^２－アセチル－８－ブロモグアノシン５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
３４．８－ブロモ－δ－１，Ｎ^２－ブチリルグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
３５．８－ブロモ－（４－メチル－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノ）グアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
３６．８－ブロモ－（３－チオフェン－イル－１，Ｎ^２－エテノ）グアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
３７．１－ベンジル－８－ブロモグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
３８．８－チオグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
３９．８－（４－イソプロピルフェニルチオ）グアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４０．８－フェニルアミドメチルチオグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４１．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノ－８－フェニルアミドメチルチオグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４２．８－（４－イソプロピルフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４３．８－（２－アミノフェニルチオ）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４４．β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノ－８－チオグアノシン－５’一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４５．８－メチルチオ－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４６．８－メチルチオ－グアノシン－５’－ホスホン酸、好ましくはナトリウム塩及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４７．８－フェニルグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４８．８－（２－フリル）グアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
４９．８－（４－クロロフェニル）グアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
５０．８－フェニル－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸、
５１．８－（４－クロロフェニル）－β－フェニル－１，Ｎ^２－エテノグアノシン－５’－一リン酸及びそのモノ－Ｈ－ホスホン酸又はその塩。

【0049】

以上のリストの化合物への参照は、かかる化合物の塩も参照することが意図され、この場合、塩は、本明細書の他の箇所に定義される通りである。好ましい実施形態では、遊離塩基化合物が参照される。好ましい実施形態では、塩が参照される。より好ましい実施形態では、化合物は、化合物１～１６から選択される。他のより好ましい実施形態では、化合物は、化合物１７～３２から選択される。他の好ましい実施形態では、化合物は、１、１０、１１、１７、２６、及び２７から、より好ましくは１、１０、及び１１から、代替的により好ましくは１７、２６、及び２７から選択される。他の好ましい実施形態では、化合物は、６、１０～１６、２２、及び２６～３２から、より好ましくは６及び１０～１６から、代替的により好ましくは２２及び２６～３２から選択される。他の好ましい実施形態では、化合物は、６、１０～１３、１５、１６、２２、２６～２９、３１、及び３２から、より好ましくは６、１０～１３、１５、及び１６から、代替的により好ましくは２２及び２６～２９、３１、及び３２から選択される。他の好ましい実施形態では、化合物は、１～５、７～９、１７～２１、及び２３～２５から、より好ましくは１～５及び７～９から、代替的により好ましくは１７～２１及び２３～２５から選択される。非常にきわめて好ましい化合物は、化合物１０及び２６、最も好ましくは化合物２６である。他の非常にきわめて好ましい化合物は、化合物１０、３５、３６、及び４０～４３、並びにそれらのモノ－Ｈ－ホスホン酸、より好ましくはそれらのモノ－Ｈ－ホスホン酸である。

【0050】

ステップｉｉｉ）グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログの結晶化
本発明者らは、驚くべきことに、ステップｉｉ）で生成された５’－一リンオキソ酸エステルアナログを結晶化可能であることを見いだした。この中間体は、当技術分野で公知のｃＧＭＰ生成方法では決して単離されないが、この中間体の精製は、環化収率の増加、環化生成物のキラリティーに対する制御の改善など、有利な効果を有することが見いだされた。好ましくは、グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログは、結晶化されるときは塩であり、より好ましくは、カウンターイオンが水素化有機塩基である塩、最も好ましくはカウンターイオンがＴＥＡＨ＋などの水素化（トリ）アルキルアミンであるものである。

【0051】

グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログは、好ましくは非プロトン性有機溶媒から、より好ましくは極性のもの、たとえば、エチルアセテート又はプロピルアセテート又はＴＨＦ又はｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルから、最も好ましくはエチルアセテートから、結晶化により単離される。結晶化は、好ましくは種晶を加えて、より好ましくは結晶化される所望の生成物を用いて行われる。好ましくは少なくとも４、より好ましくは少なくとも８、さらにより好ましくは少なくとも１２時間放置される結晶化の後、結晶は、好ましくは洗浄及び／又は乾燥される。結晶化は、好ましくは室温でのものである。洗浄は、好ましくは、結晶化に使用されたものと同一の溶媒を用いて実施される。乾燥は、好ましくは真空中で、より好ましくは昇温で、たとえば約４０～８０℃で、好ましくは約５０～７０℃で実施される。好ましい実施形態では、得られる結晶は溶媒和物である。好ましい結晶は、実質的に純粋な生成物を含み、より好ましくは少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％、さらにより好ましくは少なくとも９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％、最も好ましくは少なくとも９７％、任意にそれ以上の純度を有する。

【0052】

ステップｉｖ）環状ジエステルの形成
ステップｉｉｉ）で単離された５’－リン酸モノエステルは、ｃＧＭＰアナログの合成を継続するために有利に使用可能である。それゆえ、好ましい本発明に係る方法は、以下のステップをさらに含む。
ｉｖ）ステップｉｉ）で得られた（及びステップｉｉｉで結晶化された）グアノシン５’－一リンオキソ酸エステルアナログを環化して環状グアノシン－３’，５’－一リン酸（ｃＧＭＰ）アナログを得るステップであって、前記環化は、好ましくは、立体障害塩基の存在下で実施される、ステップ。Ｘ^１がＨでない場合、好ましくは、このステップに先行して、対応する保護ヒドロキシル部分を脱保護することによりＸ１からＨへの変換を行うことは、理にかなっている。

【0053】

ｃＧＭＰアナログは、好ましくは、一般式（ＩＩＩ）のもの又はその塩：

【化15】

（式中、ｈ、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、以上に定義される通りであり、好ましくは一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りである）
である。好ましくはＸ^２はｐ’であり、より好ましくはＴＩＰＳなどの（トリ）アルキルシリルである。ｏ^３は、一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りであり、好ましくはｏ^３はＨである。他の好ましい実施形態では、ｏ^３は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２、最も好ましくは－ＯＨである。

【0054】

一般式（ＩＩＩ）の化合物では、ｈの定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩＩ）の化合物では、Ｒ１の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩＩ）の化合物では、Ｒ２の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りである。一般式（ＩＩＩ）の化合物では、Ｘ２の定義及び好ましい実施形態は、好ましくは一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りである。

【0055】

環化は、当技術分野で公知の方法を用いて実施可能である。好ましくは、環化は、カップリング試薬の存在下で実施される。好ましくは、環化は、立体障害塩基又はピリジン、より好ましくはマイルドな立体障害塩基又はピリジン、さらにより好ましくはマイルドな立体障害塩基の存在下で実施される。最も好ましくは、カップリング試薬及び立体障害塩基の両方が使用される。環化は、好ましくは、希釈条件下で、たとえば、溶媒１リットル当たりの５’－一リンオキソ酸エステルアナログの重量として表したとき、多くとも約２００ｇ／Ｌ、好ましくは多くとも約１００ｇ／Ｌ、より好ましくは多くとも約８０ｇ／Ｌ、さらにより好ましくは多くとも約６０ｇ／Ｌ、たとえば、約５０ｇ／Ｌで実施される。溶媒は、好ましくは非プロトン性溶媒、より好ましくはわずかに極性のもの、たとえばジクロロメタン又はクロロホルム又はアセトニトリル、さらにより好ましくはクロロホルム又はジクロロメタンである。当業者であれば気付くであろうが、希釈条件下では、塩基は、好ましくは過剰に、たとえば約２～９ｅｑｕｉｖ．、より好ましくは約４～６ｅｑｕｉｖ．、たとえば約５ｅｑｕｉｖ．で存在する。同様に、カップリング試薬は、好ましくは過剰に、たとえば約１．１～５ｅｑｕｉｖ．、より好ましくは約１．２～３ｅｑｕｉｖ．、たとえば約１．５ｅｑｕｉｖ．で存在する。好ましくは、最初に塩基が希釈５’－一リンオキソ酸エステルアナログ溶液に添加され、その後、カップリング試薬が添加される。反応は、好ましくは少なくとも３０分間、より好ましくは少なくとも１時間、最も好ましくは約２時間以上進行させる。

【0056】

好適な立体障害塩基の好ましい例は、ルチジン、ピコリン、コリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン、Ｎ－メチルモルホリン、及びキノロン、より好ましくはルチジンである。さらに好ましい立体障害塩基は、約４～７、より好ましくは約５～７のｐＫａを有する。

【0057】

好適なカップリング試薬は、当技術分野で周知である。好適なカップリング試薬の好ましい例は、アリールスルホン酸誘導体、ジエステルクロロホスフェート、カルボジイミド、及びアシルハリド、たとえば、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、ビス（２－オキソ－３－オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢＯＰ－Ｃｌ）、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（ＣＤＭＴ）、（クロロメチレン）ジメチルイミニウムクロリド（フィルスマイヤー試薬）、Ｎ－（ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチル－カルボジイミド（ＥＤＣ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）、ジエチルクロロホスフェート、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、イソブチルクロロホルメート、及びピバロイルクロリドである。より好ましくはアシルハリドが使用され、そのうちアシルクロリド、たとえば、プロピルクロリド、ベンゾイルクロリド、エチルクロロホルメート、イソブチルクロロホルメート、及びピバロイルクロリドが最も好ましい。ピバロイルクロリドは、最もきわめて有利である。

【0058】

好ましくは、ｃＧＭＰアナログは、好ましくは水で、有機相を洗浄することにより単離可能であり、その後、好ましくは、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒で希釈される。好ましくは、有機相は蒸発される。得られた粗生成物は、好ましくは、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒中に粗固形分を再懸濁させることによりさらに精製され、その後、固形分は濾別される。次いで、濾液は、好ましくは真空濃縮され、その後、好ましくは、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒中に再溶解される。次いで、粗溶液は、好ましくは、過剰のエーテル溶媒、好ましくはｔｅｒｔ－ブチルエーテル溶媒、たとえばｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）の添加により処理される。過剰は、好ましくは少なくとも５体積、より好ましくは少なくとも１０体積、たとえば約１２体積である。得られた組成物は、好ましくは少なくとも約４時間、より好ましくは少なくとも約８時間放置し、その後、溶媒は、好ましくはデカンテーション及び／又は蒸発により除去される。得られた残渣は油でありうる。得られた残渣は、好ましくは真空乾燥され、その後、好ましくはエーテル溶媒、好ましくはＴＢＭＥなどのｔｅｒｔ－ブチルエーテル溶媒を用いてトリチュレートされる。他のきわめて好ましい実施形態では、好ましくは、環化に続いてホスホロチオエート形成を行うべきであり、ｃＧＭＰアナログは、いずれのさらなる反応ステップの前でも単離されない。

【0059】

本発明者らは、驚くべきことに、立体障害塩基の使用が反応の非常に望ましい立体化学的結果をもたらすこと、すなわち、好ましい立体異性体であるＲｐ立体異性体の大きなジアステレオマー過剰率をもたらすことを見いだした。一般式（ＩＩＩ）のＲｐ及びＳｐ立体異性体は、以下に示されており、それぞれ、一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）及び（ＩＩＩ－Ｓｐ）のものである。理論に拘束されることを望むものではないが、立体障害塩基の使用は、全体的に緩徐な反応又は速度論的制御下の反応をもたらすことが可能であり、その結果、Ｒｐ生成物である速度論的生成物の好ましい形成が得られる。

【化16】

【0060】

好ましい実施形態では、一般式（ＩＩＩ）の化合物は、一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）のものである。異なる用途では異なるジアステレオマーが妥当でありうるので、他の好ましい実施形態では、一般式（ＩＩＩ）の化合物は、一般式（ＩＩＩ－Ｓｐ）のものである。一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）又は（ＩＩＩ－Ｓｐ）の化合物では、ｈ、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、好ましくは以上に定義される通りであり、より好ましくは一般式（ＩＩＩ）の化合物に対して定義される通りである。好ましくはＸ^２は、ｐ’、より好ましくは（トリ）アルキルシリル、最も好ましくはＴＩＰＳである。ｏ^３は、好ましくは、一般式（ＩＩ）の化合物に対して定義される通りであり、より好ましくは、そこに定義される通りであるが、ただし、－ＯＨではなく、さらにより好ましくはｏ^３は、Ｈ又はＳＨである。ステップｉｖで生成される中間生成物として、最も好ましくはｏ^３はＨである。

【0061】

好ましくは、化合物が一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）又は一般式（ＩＩＩ－Ｓｐ）のものであるとき、対応するジアステレオマーは、少なくとも２：１、より好ましくは少なくとも３：１、さらにより好ましくは少なくとも４：１、そのほかより好ましくは少なくとも５：１、そのほかさらにより好ましくは少なくとも６：１、そのほかより好ましくは少なくとも７：１、最も好ましくは少なくとも約８：１のジアステレオマー過剰率で存在する。好ましくは、一般式（ＩＩＩ）及び／又は一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）若しくは（ＩＩＩ－Ｓｐ）の化合物がステップｉｖ）の後に得られるとき、化合物は、少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又はそれ以上のパーセントの純度を有する。より好ましくは純度は、少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも７５％、そのほかより好ましくは少なくとも８０％、そのほかさらにより好ましくは少なくとも８５％、そのほかより好ましくは少なくとも９０％である。純度は、公知の技術を用いてアッセイ可能であり、好ましくはＨＰＬＣを用いてアッセイされる。

【0062】

一般式（ＩＩＩ）の好ましい化合物は、その塩、より好ましくはカウンターイオンが水素化有機塩基である塩、最も好ましくはカウンターイオンがＴＥＡＨ＋などの水素化（トリ）アルキルアミンであるものである。一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）の好ましい化合物は、その塩、より好ましくはカウンターイオンが水素化有機塩基である塩、最も好ましくはカウンターイオンがＴＥＡＨ＋などの水素化（トリ）アルキルアミンであるものである。一般式（ＩＩＩ－Ｓｐ）の好ましい化合物は、その塩、より好ましくはカウンターイオンが水素化有機塩基である塩、最も好ましくはカウンターイオンがＴＥＡＨ＋などの水素化（トリ）アルキルアミであるものである。

【0063】

ステップｖ）ホスホロチオエート形成
ホスホロチオエートは、有用なｃＧＭＰアナログである。それゆえ、好ましい実施形態では、本発明に係る方法は以下のステップｖ）を含む：
ｖ）ｃＧＭＰアナログと硫化剤とを接触させて、一般式（ＩＩＩ）（式中、ｏ^３は－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ_１～１２炭化水素、好ましくは－ＳＨである）のチオール化ｃＧＭＰアナログを得るステップ。好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）のものである。他の好ましい実施形態では、ｃＧＭＰアナログは一般式（ＩＩＩ－Ｓｐ）のものである。ステップｖ）は、Ｍが一般式（ＩＩ）のグアノシン５’－一リンオキソ酸アナログでＯであるとき、有利である。一般式（ＩＩ）のかかる前駆体でＭがＳであるとき、好ましくはステップｖ）は本方法に含まれない。

【0064】

硫化剤は、当技術分野で公知である。硫化剤の好ましい例は、硫黄、フェニルアセチルジスルフィド、及びＮ－（アルキル－チオ）－スクシンイミド、たとえば、Ｎ－メチルチオ－スクシンイミド、Ｎ－エチルチオ－スクシンイミド、及びＮ－プロピルチオ－スクシンイミドである。硫黄は最も好ましい。好ましいＣ_１～１２炭化水素は、Ｃ_１～８炭化水素、より好ましくはＣ_１～４炭化水素である。好ましい－Ｓ－Ｃ_１～１２炭化水素の例は、－ＳＣＨ_３、－Ｓ－ＣＨ_２ＣＨ_３、－Ｓ－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣ（ＣＨ_３）_３、及び－Ｓ－フェニルであり、－Ｓ－ＣＨ_３は最も好ましい。好適な硫黄導入は、求電子性硫黄を使用すること、好ましくは以上に記載の硫化剤の使用、それに続く酸化（すなわち、酸化状態の増加）、好ましくは以下に記載の酸化剤を使用すること、を含む。求核性硫黄の使用は有利でない。

【0065】

好ましくは、接触させることは、塩基、より好ましくは（トリ）アルキルアミン、たとえばトリエチルアミンの存在下で実施される。反応は、好ましくは、少なくとも３０分間、より好ましくは少なくとも６０分間、最も好ましくは少なくとも９０分間進行させる。反応の進行は、好ましくはＨＰＬＣなどの公知の技術を用いてアセスされる。

【0066】

代替的に、ｏ３がＨであるｃＧＭＰアナログから開始してこのステップが実施されるとき、Ｐ（ＩＩＩ）をＰ（Ｖ）に変換することが有用でありうる。それゆえ、好ましい実施形態では、本発明に係る方法は以下のステップｖ－Ｏ）を含む。
ｖ－Ｏ）ｃＧＭＰアナログと酸化剤とを接触させてｏ３が－ＯＨである一般式（ＩＩＩ）のｃＧＭＰアナログを得るステップ。かかるオキソ誘導体は、ＰＫＧのアクチベーターであり、ｏ３がＳを含むチオホスフェートなどのそのインヒビターではない。特徴及び条件は、好ましくは、ステップｖ）に対して記載される通りである。酸化剤は、当技術分野で公知である。ステップｖ－Ｏ）は、好ましくは、無水条件下で実施される。ステップｖ－Ｏ）に好適な酸化剤の例は、ペルオキシド、たとえば、過酸化水素、ビス（トリメチルシリル）ペルオキシド、ｔ－ブチルヒドロペルオキシド、クメンヒドロペルオキシド、ヨウ素、及びアルキルアミノ－オキシド、たとえばＮ－メチルモルホリンＮ－オキシドである。代替的に、作用剤は、Ｐｄ／Ｃ粉末などの触媒でありうる。ホスフェートへのホスフィット酸化の例は、たとえば、ペルオキシドを用いたＨａｙａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．（Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．１９８６，ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ００４０－４０３９（００）８４９４６－１）から、及びＰｄ／Ｃを用いたＮａｇａｏｓａ ａｎｄ Ａｏｙａｍａ（Ｃａｒｂｏｎ，２００１，ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ０００８－６２２３（０１）００２０６－８）から、公知である。

【0067】

好ましくは、一般式（ＩＩＩ）及び／又は一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）若しくは（ＩＩＩ－Ｓｐ）の化合物がステップｖ）又はｖ－Ｏ）の後に得られるとき、化合物は、少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又はそれ以上のパーセントの純度を有する。より好ましくは純度は、少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも７５％、そのほかより好ましくは少なくとも８０％、そのほかさらにより好ましくは少なくとも８５％、そのほかより好ましくは少なくとも９０％である。純度は、公知の技術を用いてアッセイ可能であり、好ましくはＨＰＬＣを用いてアッセイされる。

【0068】

ステップｖｉ）ｃＧＭＰアナログの脱保護
興味深い薬理学的性質を有する生成物を得るために、本発明の方法により生成されたｃＧＭＰアナログは、好ましくは脱保護される。このことは、本発明との関連では、生成された一般式（ＩＩＩ）のｃＧＭＰアナログが、好ましくは、ＨであるＸ２を有することを意味する。したがって、好ましい実施形態では、Ｘ^２がｐ’である本発明に係る方法が提供され、本方法は、以下のステップをさらに含む。
ｖｉ）Ｘ２により保護されたヒドロキシル部分を脱保護して脱保護ｃＧＭＰアナログを得るステップ。脱保護ｃＧＭＰアナログは、一般式（ＩＩＩ）（式中、Ｘ^２はＨである）のｃＧＭＰアナログである。脱保護の手段は、当技術分野で周知であり、ｐ’の性質に依存する。一般に、脱保護は、酸性条件で、たとえばｐＨ＜１で、任意に昇温で実施可能である。脱保護はまた、好ましくはフルオリドの存在下で、たとえば、ＨＦ、（トリ）アルキルアミン・ＨＦ、又はＴＢＡＦを用いて、実施される。（トリ）アルキルシリル保護基の脱保護では、フルオリドの存在下での脱保護、より好ましくは（トリ）アルキルアミン・ＨＦ、たとえばトリエチルアミンＨＦを用いた、好ましくは１０～５０ｖｏｌ．－％、より好ましくは２０～４０ｖｏｌ．－％、たとえば約３３ｖｏｌ．－％の溶液でのものが好ましい。脱保護は、好ましくは非プロトン性溶媒、より好ましくは環状エーテルである極性非プロトン性溶媒、たとえばテトラヒドロフラン又は１，４－ジオキサン中で実施される。反応は、好ましくは約１日間、より好ましくは約２日間、さらにより好ましくは約３日間進行させる。反応進行をモニターするために、ＨＰＬＣなどの標準的分析技術を使用可能である。沈殿した脱保護生成物は、好ましくは、濾過により単離され、その後、好ましくは洗浄され、より好ましくは脱保護に使用された溶媒が使用される。その後、生成物は、好ましくは、真空下などで乾燥される。この方法で得られた生成物は、脱保護ｃＧＭＰアナログのフルオリド複合体である。好ましい実施形態では、生成されたｃＧＭＰアナログは、フルオリドとの複合体の状態である。このｃＧＭＰアナログフルオリド複合体は、好ましくは、ｃＧＭＰアナログのアッセイで、少なくとも６０、６５、７０、７５、又は８０パーセントの純度を有する。より好ましくは純度は、少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも７５％、そのほかより好ましくは少なくとも８０％である。純度は、公知の技術を用いてアッセイ可能であり、好ましくはＨＰＬＣを用いてアッセイされる。この化合物は、好ましくは塩、より好ましくは（トリ）アルキルアミン塩、最も好ましくはＴＥＡＨ＋塩である。

【0069】

ステップｖｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログのトリチュレーション
好ましい実施形態では、本発明に係る方法は以下のステップｖｉｉｉ）を含む。
ｖｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログをトリチュレートするステップ。

【0070】

脱保護ｃＧＭＰアナログは、以上に記載される通りである。このトリチュレーションは、好ましくは、ｃＧＭＰアナログフルオリド複合体からフルオリドを除去する。しかしながら、本発明者らはまた、驚くべきことに、トリチュレーションが、単離された一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）の化合物の改善されたジアステレオマー過剰率をもたらすことを見いだした。それゆえ、本発明は、ステップｖｉ）を含む、より好ましくはステップｖｉ）及びｖｉｉを含む、ｃＧＭＰアナログの生成方法を提供する。ここで、特徴及び定義は、本明細書の他の箇所に定義される通りであり、好ましくは本方法はまた、以下に記載のステップｖｉｉｉ）も含む。

【0071】

好ましくは、トリチュレーションでは、脱保護ｃＧＭＰアナログは、極性溶媒、好ましくはアセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒に再懸濁させることが可能である。次いで、好ましくは、濾過及び洗浄し、より好ましくは、再懸濁させた溶媒を用いて洗浄する。得られるｃＧＭＰアナログは、好ましくは少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又はそれ以上のパーセントの純度を有する。より好ましくは純度は、少なくとも７５％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、そのほかより好ましくは少なくとも８５％、そのほかさらにより好ましくは少なくとも９０％、そのほかより好ましくは少なくとも約９５％である。この脱保護ｃＧＭＰアナログは、好ましくは実質的にフルオリドフリー、より好ましくは完全にフルオリドフリーである。フルオリドの不在は、１９Ｆ ＮＭＲを用いて確認可能である。純度は、公知の技術を用いてアッセイ可能であり、好ましくはＨＰＬＣを用いてアッセイされる。この化合物は、好ましくは塩、より好ましくは（トリ）アルキルアミン塩、最も好ましくはＴＥＡＨ＋塩である。

【0072】

ステップｖｉｉｉ）薬学的に許容可能な塩の形成
医薬用途では、ｃＧＭＰアナログは、遊離塩基又は薬学的に許容可能な塩のどちらか、より好ましくは薬学的に許容可能な塩であることが好ましい。それゆえ、好ましい本発明に係る方法は以下のステップｖｉｉｉ）を含む。
ｖｉｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログを薬学的に許容可能な塩、好ましくはナトリウム塩に任意に変換するステップ。特徴及び定義は、以上に提供される通りである。ステップｖｉｉｉ）で変換されるｃＧＭＰアナログは、好ましくはステップｖｉ）又はステップｖｉｉ）の、最も好ましくはステップｖｉ）それに続くのステップｖｉｉ）の生成物である。この化合物は、最も好ましくは塩、より好ましくは（トリ）アルキルアミン塩、最も好ましくはＴＥＡＨ＋塩である。

【0073】

好ましくは、ｃＧＭＰアナログは、プロトン性溶媒、より好ましくはメタノールなどの低級アルコールと混合される。この結果として、好ましくはサスペンジョンが得られる。これに続いて、好ましくは、カウンターイオンが薬学的に許容可能なｃＧＭＰ塩に対する意図されたカウンターイオンであるアルコキシド塩、好ましくは、溶媒と、アルカリ金属、たとえばカリウム又はナトリウム、より好ましくはナトリウムと、のアルコキシド塩の添加が行われる。好ましいアルコキシド塩は、ナトリウムメトキシドである。得られた溶液は、ｃＧＭＰアナログの薬学的に許容可能な塩、好ましくはナトリウム塩を得るために、好ましくは真空濃縮される。

【0074】

この濃縮の後、得られた固形分は、好ましくは低級アルコールと共に、より好ましくはエタノールと共に撹拌され、その後、固形分は濾過により分離される。本発明者らは、驚くべきことに、濾過後、母液が濾別された固形分よりも低い分率のＳｐジアステレオマーを含有することを見いだした。それゆえ、本発明は、ステップｖｉｉｉ）を含む、ｃＧＭＰアナログの生成方法を提供する。ここで、特徴及び定義は、本明細書の他の箇所に定義される通りであり、好ましくは本方法はまた、以上に記載のステップｖｉｉ）も含む。

【0075】

好ましい実施形態では、固形分は、少なくとも１、より好ましくは少なくとも２時間にわたり、わずかに湿潤した低級アルコールと共に、より好ましくはわずかに湿潤したエタノールと共に、最も好ましくは９６％エタノール（残りの４％は、好ましくは実質的に水であり、両方ともｖｏｌ．－％である）と共に撹拌される。この後、濾液は、好ましくは真空濃縮される。得られた固形分の純度は、好ましくは、無水低級アルコール中、好ましくは無水エタノール中へのさらなる懸濁によりさらに増加され、その後、サスペンジョンは濾過され、固形分は、好ましくは追加の無水アルコール、好ましくは再懸濁に使用したものと同一のアルコールで洗浄される。その後、得られた固形分は、好ましくは、真空乾燥などで乾燥される。

【0076】

好ましくは、ｃＧＭＰアナログの薬学的に許容可能な塩は、多くとも１０％、より好ましくは多くとも５％、さらにより好ましくは多くとも４、３、又は２％、さらにより好ましくは多くとも１％、たとえば多くとも０．５％の望まれないジアステレオマーを含む。好ましくは、ｃＧＭＰアナログの薬学的に許容可能な塩は、少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又はそれ以上のパーセントの純度を有する。より好ましくは純度は、少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、そのほかより好ましくは少なくとも９５％、そのほかさらにより好ましくは少なくとも９６％、そのほかより好ましくは少なくとも約９７％である。純度は、公知の技術を用いて、好ましくはＮＭＲを用いてアッセイ可能である。

【0077】

きわめて好ましい実施形態では、Ｘ^２がｐ’である本発明に係る方法が提供され、本方法は、
ｖｉ）Ｘ２により保護されたヒドロキシル部分を脱保護して脱保護ｃＧＭＰアナログを得るステップと、
ｖｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログを任意にトリチュレートするステップと、
ｖｉｉｉ）脱保護ｃＧＭＰアナログを薬学的に許容可能な塩、好ましくはナトリウム塩に任意に変換するステップと、
をさらに含む。

【0078】

本方法により生成される生成物及び中間体
本発明に係る方法はまた、ｃＧＭＰアナログに至る有利な経路を提供する以外に、いくつかの鍵を握る中間体の効率的形成を可能にする。他の一態様では、本発明は、こうした化合物のいくつか、好ましくは一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩を提供する。式中、ｈ、Ｘ１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、以上に定義される通りであり、ｏ^１及びｏ^３は、各々独立して、－ＯＨ又は一般式（Ｐ）の化合物に対して定義される通りであり、好ましくはｏ^３はＨであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成し、Ｍは、Ｓ又はＯであり、好ましくは、化合物は塩である。生成物は、医薬剤、好ましくは色素性網膜炎の処置のための医薬剤の製造に使用可能である。

【0079】

さらなる特徴及び定義は、一般式（ＩＩ）の化合物に対する以上の第１の態様に記載される通りである。それゆえ、この態様内の好ましい実施形態では、ｏ^３はＨであり、且つｏ^１は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２、より好ましくは－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２である。他の好ましい実施形態では、ｏ^１及びｏ^３は両方とも、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、ボラノ、メチルボラノ、ジメチルボラノ、シアノボラノ、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２、より好ましくは－Ｏ－Ｃ_１～８炭化水素、－Ｓ－Ｃ_１～８炭化水素、－ＮＨ－Ｃ_１～８炭化水素、又は－Ｎ（Ｃ_１～８炭化水素）_２である。好ましい実施形態では、ｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、以上に定義されるキラル補助剤を形成する。最も好ましくは、ｏ^１は－ＯＨであり、且つｏ^３はＨである。

【0080】

好ましくは、この態様内の化合物は結晶性である。中間体はまた、水和物又は溶媒和物でもありうる。好ましい実施形態では、結晶は、溶媒和物、より好ましくはイソプロピルアセテート溶媒和物である。他の実施形態では、結晶は水和物である。きわめて好ましい実施形態では、結晶は、溶媒和物でも水和物でもない。好ましい実施形態では、結晶はフルオリドを含む。好ましい実施形態では、結晶は、実質的に純粋な中間体を含み、より好ましくは少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％、さらにより好ましくは少なくとも９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％、最も好ましくは少なくとも９７％、又は任意にそれ以上の純度を有する。

【0081】

好ましい実施形態では、本発明は、一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩（式中、ｈ、Ｘ１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、以上に定義された通りであり、ｏ^１は、－ＯＨ又は一般式（Ｐ）の化合物に対して定義される通りであり、ｏ^３は、Ｈであり、Ｍは、Ｓ又はＯであり、好ましくは化合物は、塩、より好ましくはＴＥＡＨ＋塩である）を提供する。さらなる特徴及び定義は、一般式（ＩＩ）の化合物に対する以上の第１の態様に記載される通りである。

【0082】

好ましい実施形態では、本発明は、一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩（式中、ｈ、Ｘ１、Ｘ^２、Ｒ^１、及びＲ^２は、以上に定義された通りであり、又はｏ^１及びｏ^３は、一緒になって、好ましくはＣ_２～１２炭化水素であるキラル補助剤を形成し、Ｍは、Ｓ又はＯであり、好ましくは、化合物は塩である）を提供する。さらなる特徴及び定義は、一般式（ＩＩ）の化合物に対する以上の第１の態様に記載される通りである。

【0083】

好ましい実施形態では、本発明は、一般式（ＩＩ）の化合物又はその塩（式中、ｈはＢｒであり、Ｘ^１はＨであり且つＸ^２はｐ’であり、ｐ’は、好ましくは（トリ）アルキルシリル、より好ましくはトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）であり、Ｒ^１及びＲ^２は、一緒になって、好ましくはａｒがＲ２に最も近接する－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成し、ａｒは、フェニル又はナフチル、好ましくはフェニルであり、ｏ^１はＯＨであり、ｏ^３はＨであり、且つＭはＳ又はＯ、好ましくはＯである）を提供する。

【0084】

本方法の望ましい生成物は、一般式（ＩＩＩ）のもの、より好ましくは一般式（ＩＩＩ－Ｒｐ）のもの（式中、ｏ^３は－ＳＨであり（又は任意に化合物がナトリウム塩であるときは－Ｓであり）、Ｘ^２はＨであり、ｈは－Ｂｒであり、且つＲ^１及びＲ^２は、一緒になって、好ましくはａｒがＲ２に最も近接する、且つａｒが４－メチルフェニルである、－ＣＨ＝Ｃ（ａｒ）－を形成する）である。

【0085】

一般的定義
本文書及び特許請求の範囲では、「ｔｏ ｃｏｍｐｒｉｓｅ（～を含む）」は、その非限定的な意味で用いられ、その単語に続くアイテムを含むが具体的に挙げられていないアイテムを除外するものではないことを意味する。そのほか、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ（要素）」への参照は、ただ１つの要素のみが存在することが文脈上明らかに必要とされない限り、２つ以上の要素が存在する可能性を排除しない。そのため、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は、通常、「ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ（少なくとも１つ）」を意味する。

【0086】

数値との関連で用いられるときの「ａｂｏｕｔ（約）」又は「ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ（おおよそ）」という語（たとえば、ａｂｏｕｔ １０（約１０））は、好ましくは、所与の値がそれよりも１％大きい又は小さい値でありうることを意味する。

【0087】

オキソ酸はまた、オキシ酸としても知られ、水素と酸素と少なくとも１原子のさらなる元素とを含有するとともに、酸素に結合された少なくとも１個の水素原子が、Ｈ＋カチオンと酸のアニオンとを生成するように解離可能である、化合物である。リンオキソ酸は、さらなる元素がリンであるオキソ酸である。

【0088】

本発明で提供される分子は、任意に置換可能である。好適な任意の置換は、ハロゲンによる－Ｈの置換えである。好ましいハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩである。さらなる好適な任意の置換は、－ＮＨ_２、－ＯＨ、＝Ｏ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アルケン、ハロアルケン、アルキン、ハロアルキン、及びシクロアルキルによる１つ以上の－Ｈの置換である。アルキル基は、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１を有し、代替的に線状又は分岐状でありうる。非置換アルキル基はまた、環状部分も含有しうるので、付随的一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ－１を有する。任意に、アルキル基は、本文書にさらに具体的に示された１つ以上の置換基により置換される。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、２－プロピル、ｔ－ブチル、１－ヘキシル、１－ドデシルなどが挙げられる。

【0089】

とくに明記されていない限り、－Ｈは、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニル基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニル基、Ｃ_３～Ｃ_１２シクロアルキル基、Ｃ_５～Ｃ_１２シクロアルケニル基、Ｃ_８～Ｃ_１２シクロアルキニル基、Ｃ_１～Ｃ_１２アルコキシ基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニルオキシ基、Ｃ_２～Ｃ_１２－アルキニルオキシ基、Ｃ_３～Ｃ_１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ、及びシリル基からなる群から独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換されていてもよく、この場合、シリル基は、式（Ｒ^ｓ）_３Ｓｉ－により表すことが可能であり、Ｒｓは、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニル基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニル基、Ｃ_３～Ｃ_１２シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_１２アルコキシ基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニルオキシ基、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニルオキシ基、及びＣ_３～Ｃ_１２シクロアルキルオキシ基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、及びシクロアルキルオキシ基は、任意に置換されていてもよく、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、及びシクロアルコキシ基は、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１個以上のヘテロ原子が任意に介在していてもよい。

【0090】

構造式又は化学名はキラル中心を有すると当業者により理解されるが、とはいえキラリティーがまったく指示されていないとき、各キラル中心に対して、ラセミック混合物、純Ｒエナンチオマー、及び純Ｓエナンチオマーの３つのどれに対してもすべて、個別の参照が行われる。２つの部分が一緒になって結合を形成すると言われるとき、このことは、これらの部分の原子として不在を示唆し、原子価の遵守は置換え電子結合により満たされる。部分の表現中のダッシュは、主に読者に手引きを与える働きをし、非限定的例として、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＨ及び－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎＯＨは、同一部分を意味する。こうしたことはすべて、当技術分野で公知である。

【0091】

物質のパラメーターが本発明との関連で考察されるときは常に、とくに明記されていない限り、パラメーターは、生理学的条件下で決定、測定、又は発現されると仮定される。生理学的条件は、当業者に公知であり、一般に、水性溶媒系、大気圧、６～８のｐＨ値、室温～約３７℃の範囲内の温度（約２０℃～約４０℃）、及び緩衝塩又は他の成分の好適な濃度を含む。電荷は、多くの場合、平衡に関連付けられるものと理解される。電荷を運搬又は担持すると言われる部分は、かかる電荷を担持も運搬もしないものよりも頻繁にかかる電荷を担持又は運搬する状態で見いだされるであろう部分である。このため、当業者であれば理解されるであろうが、荷電されることが本開示で示唆される原子は、具体的条件下で非荷電でありうるとともに、中性部分は、具体的条件下で荷電されうる。

【0092】

本発明との関連では、アセスされるパラメーターの減少又は増加は、そのパラメーターに対応する値の少なくとも５％の変化を意味する。より好ましくは、値の減少又は増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、又は１００％の変化を意味する。この後者の場合、そのパラメーターに関連する検出可能値がもはや存在しない場合でありうる。

【0093】

本文書に記載の医薬剤としての物質の使用はまた、医薬剤の製造における前記物質の使用としても解釈可能である。同様に、物質が処置のために又は医薬剤として使用されるときは常に、それはまた、処置のための医薬剤の製造にも使用可能である。使用のための生成物は、処置方法での使用に好適である。

【0094】

濾過は、当技術分野で公知のいずれかの方法を用いて、たとえば、好ましくはブフナー漏斗又はアジテートヌッチェフィルターを用いて、実施可能である。

【0095】

本発明は、いくつかの模範的実施形態を参照して以上に記載されている。いくつかの部分又は要素の修正及び代替実現形態が可能であり、添付の特許請求の範囲に定義される保護範囲に含まれる。文献及び特許文書のすべての引用は、本願をもって参照により組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0096】

【図1】Ｒｐ－８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳに至る合成経路。

【発明を実施するための形態】

【0097】

実施例
実施例１－Ｒｐ－８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰＳの合成
１．１ ＰＥＴ形成
１５２ｇ ８－ブロモグアノシン（９０％アッセイ、残部水）を５ｖｏｌ ＤＭＳＯ（７６０ｍｌ）中で撹拌し、１．５ｅｑｕｉｖ．フェナシルブロミドをサスペンジョンに添加した。その次に、２．５ｅｑｕｉｖ．のＤＢＵを３０ｍｉｎ添加した。１時間後、３ｅｑｕｉｖ（６５ｍｌ）の酢酸を添加した。１０ｖｏｌ水（１５２０ｍｌ）を徐々に添加することにより生成物を沈殿させた。スラリーを濾過し、２０００ｍｌ ＤＭＳＯ：水１：２続いて２００ｍｌ水で洗浄した。ケークを真空乾燥し、２５００ｍｌ ＭｅＣＮ中に再懸濁し、一晩撹拌した。濾過及びＭｅＣＮ洗浄後、７０℃で真空乾燥し、１３０ｇ（７４％）の中間体１を与えた。

【0098】

１．２ グアノシンアナログの保護
１３０ｇ Ｂｒ－ＰＥＴ－グアノシン（中間体１）を５ｖｏｌ ＤＭＦ（６５０ｍｌ）中に懸濁させた。５ｅｑｕｉｖ．イミダゾール（９６ｇ）及び２．５ｅｑｕｉｖ．ＴＩＰＳ－Ｃｌ（１５１ｍｌ）を添加した。４８ｈ後、反応を分析した（ＨＰＬＣは、１．０８％ ５’－モノＴＩＰＳ、６７．７６％ ５’２’－ジＴＩＰＳ、２９．５２％ ５’３’－ジＴＩＰＳ、及び１．６４％ ５’２’３’－トリＴＩＰＳを示した）。反応を５０ｍｌ水（１０ｅｑｕｉｖ．）でクエンチし、１ｈ撹拌した。１５ｖｏｌトルエン（１９００ｍｌ）で希釈した後、反応物を３×５ｖｏｌ水（各６５０ｍｌ）で洗浄した。有機相を蒸発させ、スティッキー残渣を２０体積ｉ－プロピルアセテート（２３００ｍｌ）中に溶解させ、シードし一晩放置して結晶化させた。濾過及びｉ－プロピルアセテートによる洗浄は、真空乾燥後、８１ｇ（３７％）の中間体２（ＨＰＬＣにより９８．５％純度）を与えた。

【0099】

１．３ 選択的脱保護
１５０ｇ ５’－，２’－ジＴＩＰＳ－Ｂｒ－ＰＥＴ－グアノシン（中間体２）を１０ｖｏｌ ＴＨＦ（１５００ｍｌ）中に溶解させた。次いで、２ｖｏｌ水（３００ｍｌ）及び０．４５ｖｏｌ ＴＦＡ（６７．５ｍｌ）を添加した。一晩撹拌後（反応をチェックし、ＨＰＬＣは、３．８８％ダブル脱保護、９４．７５％の所望の２’－ＴＩＰＳ生成物、及び１．３７％未変換生成物を示した）、０．４ｖｏｌ ２８％アンモニア（ａｑ．）（６０ｍｌ）を添加し（ｐＨは５になった）、混合物を濃縮した。１５ｖｏｌ ＣＨ_２Ｃｌ２（２２５０ｍｌ）及び２ｖｏｌ水（３００ｍｌ）を添加し、得られた希釈スラリーを濾過した（これにより過加水分解材料、すなわちＢｒ－ＰＥＴ－グアノシンが除去される）。有機相を分離し、蒸発させた。残渣に３ｖｏｌアセトニトリル（４５０ｍｌ）を添加し、スラリーを１時間撹拌し、その後、濾過及び２ｖｏｌアセトニトリル（３００ｍｌ）による洗浄を行った。真空乾燥により９６ｇ（７８％）の中間体３を与えた。これはＨＰＬＣにより純度１００％であるとアッセイされた。

【0100】

１．４ ５’－モノエステルの形成
１１１ｇの２’－ＴＩＰＳ－Ｂｒ－ＰＥＴ－グアノシン（中間体３）を混合物の１９ｖｏｌ ＣＨ_２Ｃｌ２（１９４５ｍｌ）及び１ｖｏｌピリジン（１１０ｍｌ）中に溶解させた。その次に、撹拌しながら３ｅｑｕｉｖ．（１０２ｍｌ）のジフェニルホスフィットを添加した。２時間後、１ｖｏｌの水（１１０ｍｌ）及び１ｖｏｌのトリエチルアミン（１１０ｍｌ）を添加し、反応を３０ｍｉｎ放置し、次いで、２×１０体積（２×１１００ｍｌ）の水で洗浄した。有機相を蒸発させ、残渣を５００ｍｌ ｉ－プロパノール続いて５００ｍｌエチルアセテートで共蒸発させた。次いで、残油を１５００ｍｌエチルアセテート中に溶解させ、シードし一晩放置して結晶化させた。濾過及びエチルアセテートによる洗浄は、真空乾燥後、１０６ｇ（７６％）の中間体４を与えた。生成物は、逆相液体クロマトグラフィーシステムで良好な挙動を示さず、広幅の遅いピークを与えるが（Ｈ２Ｏ：ＭｅＣＮ、０．１％ギ酸）、９７．５６％でアッセイされる。

【0101】

１．５ 環化によるｃＧＭＰアナログの形成
５０．５ｇの５’－ホスホネート－２’－ＴＩＰＳ－ＢｒＰＥＴグアノシンを１０００ｍｌ ＣＨ_２Ｃｌ２（２０ｖｏｌ．）中に溶解させ、続いて３７ｍｌ ２，６－ルチジン（５ｅｑｕｉｖ．）を添加した。その次に、１１．８ｍｌピバロイルクロリドを添加した。反応を放置し、２時間進行させた。

【0102】

１．６ ホスホロチオエートの形成
実施例１．５の粗反応溶液に、５．９ｇの硫黄（３ｅｑｕｉｖ．）続いて２６ｍｌのトリエチルアミンを添加した。１．５ｈ後（ＨＰＬＣは、７４．０５％ Ｒｐジアステレオマー及び９．７２％ Ｓｐジアステレオマーを示し、残部は不純物であった）、溶液を２×２００ｍｌ水で洗浄し、有機相を２００ｍｌ ＭｅＣＮで希釈し、蒸発させた。残渣（１００ｇ）を４００ｍｌ ＭｅＣＮ中に１０ｍｉｎスラリー化し、濾過した。濾液を蒸発させ、１００ｍｌ ＭｅＣＮ中に再溶解させた。１２００ｍｌ ＴＢＭＥを徐々に添加し、一晩撹拌し、いくらかの油状スティッキー沈殿を与えた。デカンテーション及び蒸発及び溶解の後、残留油を高真空により徹底的に乾燥させ、スティッキーフォームを形成した。フォームを撹拌し、７００ｍｌ ＴＢＭＥでトリチュレートし、濾過及び乾燥後、３８ｇ黄色粉末を生成した。アッセイは、所望のジアステレオマーのＴＥＡＨ塩として計算して６８％であり、５０％の補正収率を与えた。ＨＰＬＣ純度は８０％（２６０ｎｍ）であり、ジアステレオマー比は８：１であった。

【0103】

１．７ ｃＧＭＰアナログの脱保護
３５ｇの中間体５（６８％アッセイのＲｐジアステレオマー）を４ｖｏｌ ＴＨＦ（１４０ｍｌ）に溶解させ、２ｖｏｌ ＴＥＡ・３ＨＦ（７０ｍｌ）を添加した。反応物を３日間撹拌し（ＨＰＬＣは７０．６８％脱保護を示した）、濾過し、３ｖｏｌ ＴＨＦ（１０５ｍｌ）で洗浄し、そして真空乾燥させた。８３％アッセイ（収率７６％）を有する１７．５ｇの生成物が得られた。材料は、ある種のフルオリド含有複合体である（１９Ｆ ＮＭＲに見られるように及び低いアッセイから明らかなように）。材料を３００ｍｌ ＭｅＣＮ中にスラリー化し、濾過し、１５０ｍｌ ＭｅＣＮで洗浄した（このＭｅＣＮ再スラリーは、ＮＭＲに見られるフルオリドを除去し、全体の純度を改善し、ＨＰＬＣは、９７．１３％の所望のＲｐ生成物及びわずか０．７８％の望まれないＳｐ生成物を示したが、一方、母液は、７６．８３％のＲｐ生成物及び１４．５３％の望まれないＳｐ生成物を含んでいた）。これは、９５％アッセイ、収率６７％を有する１３．５ｇの材料を与えた。材料は、１９Ｆ ＮＭＲに基づいてフルオリドを含有していなかった。

【0104】

１．８ ナトリウム塩の形成
１３ｇ中間体６（８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰ ＴＥＡＨ塩、９５％ＮＭＲアッセイ）を５００ｍｌ ＭｅＯＨ中に懸濁させた。１ｅｑｕｉｖ（１．０９５ｇ）ナトリウムメトキシドを添加してサスペンジョンを溶液とし、これをロータリーエバポレーターで濃縮した。溶液は、約１５０ｍＬが残留したとき、ゲルに変換された。蒸発を継続したところ、ゲルは、粉末に変換された。固形分を９５０ｍｌ ９６％ＥｔＯＨと共に１時間撹拌し、そして濾過した。これは、乾燥後、９ｇの材料を与えた。濾液は、蒸発及び乾燥後、２．９ｇの材料を与えた。ＨＰＬＣは、母液からの材料が９ｇ部分よりも少ない望まれないジアステレオマーを含有することを示したので（０．２５％対０．８５）、材料をプールし、９５０ｍｌ ９６％エタノール中に２時間再スラリー化し、その後、濾過した。母液（生成物のほとんどを含有する）を蒸発させ、１７０ｍｌ無水エタノール中に再スラリー化した。濾過及び１００ｍｌ無水エタノールによる洗浄は、ゲル様ケークを与え、これを真空乾燥させ、０．５％望まれないジアステレオマー（９７％ＮＭＲアッセイ、収率７２％）を有する８．１ｇの８－Ｂｒ－ＰＥＴ－ｃＧＭＰナトリウム塩を与えた。

【0105】

実施例２－ジアステレオマー的純粋Ｒ_Ｐ－グアノシン－３’，５’－環状チオリン酸アナログのクロマトグラフィーフリー合成、
２．１ 概要
環状グアノシン一チオリン酸アナログ１ａは、現在、遺伝性網膜神経変性の処置のための薬剤として潜在能力を示している。その進行中の前臨床開発を支援するために、我々は、その調製のためのジアステレオ選択的クロマトグラフィーフリー合成を開発した。合成シーケンスの注目すべき特徴は、３’，５’－ヒドロキシルに優先して２’，５’－の８０％選択率を有するシリル化ステップ及びＳ_Ｐジアステレオマーに対して９０％選択率を有する５’－Ｈ－ホスホン酸モノエステルの閉環を含む。化合物は、１２５ｇ収量及び＞９９．９％ＨＰＬＣ純度でＥｔ３ＮＨ＋塩として得られた最終生成物１ａを含めて、結晶化を介して単離された。

【0106】

２．２ 緒言
遺伝性網膜神経変性（ＩＲＤ）のいくつかの動物モデルでのフォトレセプター死は、グアノシン依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＧ）の過剰活性化により部分的に媒介される代替的非アポトティック経路により主に支配されることが、最近の研究により示唆されている。この過剰活性化は、光伝達カスケードの破壊が原因であるフォトレセプター中への環状グアノシン－一リン酸（ｃＧＭＰ）の非天然蓄積から生じる。これは、このＰＫＧ媒介経路をブロックすることによりＩＲＤの治療剤として潜在的に作用可能なｃＧＭＰアナログの探究への関心を引き起こした。その結果は、ｉｎ ｖｉｖｏで効力のあるニューロン保護作用を有する有望な環状グアノシン一チオリン酸（ｃＧＭＰＳ）アナログ１ａの発見であった。化合物は、ヌクレオ塩基上にフェニルエテニル（ＰＥＴ）基及びチオリン酸上にＲ_Ｐ配置を有する８－ブロモ－ｃＧＭＰＳ誘導体である。環状ヌクレオチド一チオリン酸（ｃＮＭＰＳ）は、ホスホジエステラーゼによる切断に耐えることが知られており、したがって、細胞中でそのリン酸カウンターパートよりも長く生存し、このことが治療剤としての１ａの潜在能力に加わる。ＰＫＧに対するそのアンタゴニスティック活性とは対照的に、そのＳ_Ｐ－ジアステレオマー１ｂ及びそのリン酸等価物１ｃは両方との、天然ｃＧＭＰと同様にＰＫＧアゴニストであることが見いだされた（スキーム１）。

【化17】

【0107】

前臨床開発をさらに可能にするために、この活性医薬成分（ＡＰＩ）のより大量供給が望まれ、高純度１ａの調製のためのスケーラブルロバスト合成プロセスを目指す我々の研究がここに提示される。公開された環状チオリン酸合成は、スホリルクロリドとアニリンとの反応でホスホロアニリデートジアステレオマーの混合物を得て、次いで、これを分離することが関与するＳｔｅｃらによるものを含む（Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ３’，５’－（Ｓｐ）－ａｎｄ－（Ｒｐ）－Ｃｙｃｌｉｃ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｓ（ｃＡＭＰＳ）．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １９７９，９４０－９４１）。完全立体配置保持を有する環状チオリン酸を生成するために、所望の異性体は、強塩基及び二硫化炭素で処理される（ステック反応）。Ｅｃｋｓｔｅｉｎらは、５’－ビスニトロフェニルホスホロチオエートを調製するために、非保護ヌクレオシド上でビスニトロフェニルホスホロクロリドチオエートを使用した。これらは、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドによる処理により直接環化された。Ｇｅｎｉｅｓｅｒのグループは、米国特許第５６２５０５６号明細書に記載のように、環化ステップ用の前駆体として５’－チオホスホロジクロリデートを得るためにチオホスホリルクロリドを利用することにより類似のアプローチを使用し、事実上１ａを合成する第１のグループであった。以上のすべての事例では、ｃＮＭＰＳｓ（又はその前駆体）は、後でクロマトグラフィーにより分離されるジアステレオマー混合物として得られた。より最近の合成では、Ａｎｄｒｅｉ ｅｔ ａｌ．（Ｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００７，５，２０７０－２０８０）は、これらの方法から着想を得て、立体選択的塩素化－アミド化－ステックシーケンスを開発し、今度は出発材料として環状アデノシン一リン酸を用いた。しかしながら、この戦術では、Ｒ_Ｐジアステレオマーのみが利用可能であり、さらなるクロマトグラフィー精製が依然として必要とされた。ｃＧＭＰＳに至るまったく異なるアプローチは、Ｓｔａｗｉｎｓｋｉのグループ（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１３，１５，４０８２－４０８５）により開発されたＨ－ホスホン酸経路である。それは、対応する３’，５’－環状Ｈ－ホスホン酸ジエステルを形成するためにヌクレオシド－３’－Ｈ－ホスホン酸モノエステルの内部環化を必要とし、続いて、硫化により環状チオリン酸を与える。そうしたレポートでは、３’，５’－環状ヌクレオシド－Ｈ－ホスホン酸は、ジアステレオ選択的に形成され、且つこの選択率は、優先性のあるジアステレオマーに向けることが可能であることが示された。

【0108】

２．３ 結果及び考察
経路の開発。我々は、後者のアプローチが最も有望であり、そのため、我々の開発の焦点になることを見いだした。我々は、先行技術分野で１，Ｎ２－フェニルエテニル（ＰＥＴ）基が環状チオリン酸の形成後に導入されることに注目した。また、それは２’－ヒドロキシル上でなんら保護を用いることなく実施された。対応するＨ－ホスホネートアプローチは、ヌクレオ塩基及びリボース上の副反応に対してより感受性があろう。したがって、我々の合成設計は、最初に、保護基に類似して機能するはずであることからＰＥＴ基を導入することを目指し、次いで、２’，３’－環状副生成物の形成を打ち消すために２’に保護基を導入する。また、我々は、結晶化を優先させてクロマトグラフィー精製を回避すること、さらには望まれないＰＫＧアゴニスト１ｂや１ｃなどの鍵を握る不純物を制御するプロセスの能力、に重要を置いた。

【化18】

【0109】

フェニルエテニル化。１，Ｎ２－フェニルエテニル（ＰＥＴ）修飾を有する８－ブロモグアノシンの報告された合成は、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク－７－エン（ＤＢＵ）－ＤＭＳＯ組合せを使用し、これは、我々の開発の出発点の働きをした。１０体積（ｍｌ／ｇ）のＤＭＳＯ中に８－ブロモグアノシンを溶解し、５ｅｑｕｉｖ．の２－ブロモアセトフェノン続いて７ｅｑｕｉｖ．のＤＢＵを添加し、メジャー生成物（約７０％ ＬＣ面積）として８－ブロモＰＥＴグアノシン２の形成を伴って、３０分以内に出発材料の消費を引き起こした。酢酸を用いた中和に続いて、水（１５体積）の添加により生成物を沈殿させたが、わずかに着色した固形分であった。２－ブロモアセトフェノン及びＤＢＵの量は両方とも、変換を損なうことなく２．５ｅｑｕｉｖ．まで低減可能であることも判明した。全体として、反応は、化学量論量を変化させたとき、生成物形成の変動がほとんどなくロバストであるように思われた。その次に、体積効率及び仕込み順序を検討した。ブロモケトンの前にＤＢＵを添加することにより、８－ブロモグアノシンは、わずか４体積のＤＭＳＯに溶解した。１体積のＤＭＳＯ中の溶液としてブロモアセトフェノンをこの混合物に添加することにより、ほぼ５０％の収率で生成物を与えた。そのほか、２－ブロモアセトフェノン／ＤＭＳＯ溶液は、透明溶液の定常的黄変さらにはＨＰＬＣで副生成物の蓄積により示されるように、安定ではなかった。この分解は、収率の低減に関連するとは思われない。というのは、５体積のＤＭＳＯ中のブロモグアノシン及びＤＢＵの溶液に固形分としてブロモアセトフェノンを添加しても、まったく改善が見られ与えなかったからである。最終的には、８－ブロモグアノシンを真空乾燥させることによりＤＭＳＯ中へのその溶解性が増加することを見いだした。市販の８－ブロモグアノシンは、約８％水（カールフィッシャー）を含有し、これは、８０℃までの温度で純度に影響を及ぼすことなく真空乾燥により＞０．５％に低減可能であることが分かった。乾燥させた材料は、１５分以内に５体積のＤＭＳＯ中で透明溶液を与えた。生成物の沈殿に関して、４体積を超える水（５体積のＤＭＳＯを使用したとき）でも、純度又は収率の改善はまったく見られなかった。迅速な水添加は、スティッキー塊形成の原因になるので回避されるべきである。興味深いことに、反応混合物が前もって酢酸で中和されなかったとき、たとえ水を徐々に添加したとしても、同じ影響が得られた。また、ＭｅＣＮを用いた最終ケーク洗浄は、色及びいくらかのマイナー不純物を除去することも判明した。そのため、５体積のＤＭＳＯ中で反応を実施し、４体積の水を用いて生成物を沈殿させ、続いて、ＭｅＣＮで洗浄したところ、収率７１％で白色固体として中間体２が得られた。生成物は、結晶性及び＞９８％純物質（ＨＰＬＣ）であることが分かった。

【0110】

保護ストラテジー。
２’位に保護基を導入することは、５’位に導入することなしには達成できず、次いで、後者を除去する必要がある。そのほか、３’－ヒドロキシルに優先して２’－ヒドロキシルの選択率を達成することは、依然として２つの類似反応性に起因して難題である。通常、これは、我々が回避を目指すクロマトグラフィーを介する異性体の分離により対処される。２’位のさらなる保護の後に除去可能である５’及び３’位を同時にブロックするシリル化剤、たとえば、１，３－ジハロ－１，１，３，３－テトラアルキルジシロキサンの助けを借りてこの競合をバイパスすることが可能である。これは広く普及しているアプローチであるが、それは、一般に、２’－保護のための余計なテップが関与し、我々は、２’に対する選択率に関して伝統的シリル化を最適化するとともに、以下に記載のように選択的結晶化を開発することにより、より良好な成功を収めた。

【0111】

選択的保護。
我々は、１：２シリル化剤：塩基混合物、最も一般的な２．５ｅｑｕｉｖ．のｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳ）及び５ｅｑｕｉｖ．イミダゾールである、最も一般的なシリル化方法の探究から始めた。この方法では、ジシリル化は１．５時間以内に達成されたが、ジシリル化異性体のいずれに対する選択性も実質的に存在しなかった。さらに、２’，３’，５’－トリシリル化副生成物は、生成物組成の４４％を構成した。ＴＢＤＭＳ－ＣｌをＴＩＰＳ－Ｃｌで置き換えたとき、第２のヒドロキシルでの置換は、２’優位に８０：２０の比をもたらし、３日後、１％未満の三置換が見られた。しかしながら、２’→３’シリル移動が経時的に発生し、初期の８０：２０異性体比は、数日にわたり６０：４０で平衡に達した。残念ながら、第２のヒドロキシル位置の保護は、完全変換前に混合物がいくらかの異性化を受けるのに十分な程度に遅かった。１３０ｇの出発材料を用いた１つのトライアルでは、わずか１．５％の５’－Ｏ－ＴＩＰＳ－８－ブロモグアノシンが２日後に残留し、ジシリル化生成物は、７０：３０異性体比を有していた。抽出による後処理及び蒸発に続いて、得られた油は、結晶化試験に付された。結晶化は、いくつかの溶媒から誘発可能であり、完全脱飽和には数日が必要とされることが見いだされた。ＭｅＯＨは、３’，５’異性体を選択的に結晶化し、一方、他の溶媒は、２’，５’異性体に対して選択的であることが見いだされた。２’，５’－異性体の結晶化では、異性体のみが過剰結晶化し、母液中には１：１に近い異性体混合物が残った。結果として、収率３３％で＞９８％純結晶性材料が得られた。このことに勇気づけられて、我々は、濾液への生成物損失に関して改善を試みた。溶媒体積の変化及び貧溶媒の添加による結晶化収率の増加の試みはすべて、無益であった。というのは、収率の増加は、常に純度の犠牲を伴うからであった。その次に、２ステップ結晶化を試みて、ＭｅＯＨからの結晶化により望まれない異性体を最初に除去し、蒸発後、イソプロピルアセテートから母液残渣を再結晶化した。これは、４０％のいくらか改善された収率で所望の異性体を与えた。依然として、この２ステップ結晶化は、時間がかかるので、スケール上採用しなかった。３’，５’－異性体が結晶化時に所望の２’，５’－異性体に異性化する動的条件を見いだす少数の試みは（ＤＢＵ及びＴＥＡの添加が試みられた）、失敗であった。異性化も結晶化もどちらも起こらなかった。結晶化試験からの結論は、３の単離収率を増加させるために、シリル化の位置選択性を改善しなければならないことであった。同様に２’→３’シリル移動速度を増加されることなく、シリル化速度を増加させることが難題であることが証明された。試みは、他の溶媒（ピリジン、ＮＭＰが試みられた）、各種塩基の使用、及び反応温度の増加を含んでいた。後者で広範な副生成物形成が観測され、完全変換で異性体比を改善したいくつかの条件が見いだされたが（表１のエントリー３を参照されたい）、最も印象的な結果は、ＴＩＰＳ－Ｃｌ量を２倍にすることに由来した（表１のエントリー４）。このことから、有意な異性化を伴うことなく第２のシリル化ステップを一晩後に完了することが奨励された。最後に、この異性体混合物の結晶化は、収率５８％で３を生成した。

【0112】

【表1】

【0113】

また、このステップを合成の最初として探究した。というのは最低収率を与えたからである。しかしながら、得られた粗製物の結晶化は不成功であり、単離にクロマトグラフィーが必要とされた。そのうえ、後続ＰＥＴステップの強塩基性条件もまた、いくらかのシリル移動の原因になり、我々はこのシーケンスをさらに探究しなかった。

【0114】

選択的脱保護。我々は、最初にＨ２Ｏ中のＡｃＯＨ及びＴＨＦ中のＴＦＡ／Ｈ２Ｏを調べた。出発材料は、最初の混合物に不溶であり、後者は、マイルドな条件で一晩で完全変換を伴って好結果を与えることが見いだされた。依然として、我々は、過加水分解生成物２に対する生成物４の比に及ぼす溶媒、酸強度及び濃度、並びに含水率の影響を探究した（表２参照）。加水分解の代わりにＭｅＯＨによるアルコリシスを実施すると、変換が有意に緩徐化されたが、この混合物に水を添加すると、反応速度はいくらかを回復された。トルエン及びＤＣＭ（ＣＨ_２Ｃｌ２）は、ＴＨＦと比較したとき、わずかに高い反応速度及び低い副生成物形成を与えたが、二相系が形成され、トルエンは、ＴＨＦやＤＣＭのように良好に出発材料を溶解できなかった。ＤＣＭは、２を継続して沈殿させ、その除去を促進するので、有利である。最後に、ほとんどの溶媒中への生成物の溶解性が低いにもかかわらず、ＭｅＣＮのみは、粗混合物からそれを結晶化させて、三晩後、収率８０％及び純度＞９８％で２’－モノシリルオキシヌクレオシド４を与えることが可能であった。

【0115】

【表2】

【0116】

Ｈ－ホスホネートモノエステルの形成。ジフェニルホスフィット（ＤＰＰ、ジフェニルＨ－ホスホネート）は、ヌクレオシドＨ－ホスホン酸モノエステルの形成用の通常の試薬である。それは、簡単にピリジン中でアルコール及びヌクレオシドによるエステル交換を受けて、混合フェニルＨ－ホスホネートジエステル（たとえば、ジエステル７、スキーム３）を形成する。フェニル部分の加水分解後、ヌクレオシドモノエステルは良好な収率で得られる。ＤＰＰ（４が２つの遊離ヒドロキシルを有するので、ビスエステル形成のリスクを低減するために１ｅｑｕｉｖ．）をピリジン中の４の溶液に添加したとき、所望の中間体７に加えて、３’，５’－環状Ｈ－ホスホネート、３’－混合エステル、又はジヌクレオシドエステルの形成に対応する０～１５ｐｐｍのいくつかピークが、３１Ｐ－ＮＭＲ共鳴に現れる。系があまりにも反応性であったので、ＤＣＭ中に５％ピリジンを含有するより低塩基性溶媒混合物を評価した。この系を用いて、混合エステル７のクリーン形成が３１Ｐ－ＮＭＲに見られた。緩徐な変換速度に起因して、我々は、ＤＰＰの量を３ｅｑｕｉｖ．に増させ、副生成物の形成を伴うことなく１時間以内で完全変換を与えた。１時間後、水及びＥｔ３Ｎの添加により、混合エステル７を加水分解し、トリエチルアンモニウム５’Ｈ－ホスホネートモノエステル５を与えた。抽出による後処理により、過剰のＤＰＰからの残渣のほとんどを除去し、得られた粗製物を結晶化溶媒に関してスクリーニングした。ＥｔＯＡｃへの溶媒交換によりモノエステル５を収率７５％及び純度＞９５％で結晶化させた。

【化19】

【0117】

代替シーケンスもまた簡潔に探究した（スキーム４）。ジシリル中間体３はまた、３’－ＯＨでホスホニル化してモノエステル８を生成することも可能であった。５’－シリル基の酸性脱保護は、２’－保護－３’－Ｈ－ホスホネート９を与えた。中間体８の初期結晶化の試みが望み通りにはうまくいかなかったので、我々は、このシーケンスをさらに探究しなかった。

【化20】

【0118】

Ｈ－ホスホネート環化。我々は、初期に、カップリング剤としてピバロイルクロリド（Ｐｖ－Ｃｌ）を用いて、ＤＣＭ／ピリジン１９：１混合物の既知の条件を追跡した。（約１０ｍｉｎ後に）記録された最初のＮＭＲスペクトル内に、Ｓ_Ｐ：Ｒ_Ｐ－環状Ｈ－ホスホネートの形成に合致する０．１ｐｐｍ（１ＪＰＨ＝７３４Ｈｚ）及び５．８ｐｐｍ（１ＪＰＨ＝７０４Ｈｚ）の２つのピーク間の７：３の比が観測された。２０ｍｉｎ後にこの混合物を元素硫黄で処理することにより、対応する７：３Ｒ_Ｐ：Ｓ_Ｐ環状ホスホロチオエート混合物を生成した（立体配置保持、それぞれ、５６．４及び５５．１ｐｐｍ、３ＪＰＨ＝１８及び２４Ｈｚ）。

【化21】

【0119】

また、Ｓｔａｗｉｎｓｋｉのグループにより記載された環状Ｈ－ホスホネートジアステレオマー間の異性化挙動も観測された。すなわち、閉環を一晩放置したところ、１：９ＳＰ：ＲＰ比（それは望まれない１：９ＲＰ：ＳＰ比で硫化生成物を生成するおそれがある）で環状Ｈ－ホスホネートが生成され、初期に形成された速度論的生成物は所望の環状ＳＰ－Ｈ－ホスホネートであり、且つ平衡は、望まれないジアステレオマー優位であることが示された。所望の速度論的生成物を保存するために、我々は、２，６－ルチジン及びＤＣＭを探求した。というのは、両方ともピリジンとは対照的にエピマー化の速度を低減することが示されているからである。５ｅｑｕｉｖ．の２，６－ルチジンの存在下でＤＣＭ中で閉環を実施すると、所望のジアステレオマー優位の初期１９：１比で環状Ｈ－ホスホネートを与えた（約１０ｍｉｎ後に）。反応は、この系ではより緩徐であり、完了に達するのに約１５ｍｉｎが必要とされたが、これは、１時間放置後、環状Ｈ－ホスホネートで依然として見られた１５：１ＳＰ：ＲＰ比により立証される高度に抑制されたエピマー化により相殺された。１時間後、反応物を硫化し、所望のジアステレオマー優位で約１０：１比で生成物を与えた。通常、最終硫化混合物は、７５～８０％の所望の生成物を含有し（３１Ｐ－ＮＭＲに基づく）、残部は、ホスフィット領域（＞１１０ｐｐｍ）及び生成物領域（約５０ｐｐｍ）の望まれないジアステレオマー及び少量の不純物、さらにはわずかながらの量の出発材料である。他の通常使用されるカップリング剤の１つであるジフェニルクロロホスフェート（ＤＰＣＰ）もまた試したが、同一のジアステレオマー比を与え、利益を提供しなかった。大過剰のカップリング剤は、とくにＤＰＣＰの場合、いくつかの副生成物がより多く顕在化されるので、回避されるべきである。１．３ｅｑｕｉｖ．のＰｖ－Ｃｌを用いた場合、完全変換にもさらには偶発水に対して耐性のある反応を与えるうえにも十分であることが見いだされた。

【0120】

ＳＰ：ＲＰ－Ｈ－ホスホネートを硫化するとき、我々は、５０％過剰の硫黄及びＥｔ３Ｎで十分であることを見いだした。元素硫黄以外の他の硫化剤は評価しなかった。好適な硫化タイミングは、Ｐｖ－Ｃｌの添加後の異なる時点で硫黄及びＥｔ３Ｎを含有するバイアルに反応アリコートを添加することにより決定した。硫黄を仕込んだ後、未反応中間体を４５分放置したところ、もはや時間はジアステレオマー比の劣化に関連しなかった。しかしながら、硫黄／Ｅｔ３Ｎの添加後、反応混合物は数晩にわたり安定であった。抽出による後処理及び残留硫黄を沈殿させるためのアセトニトリルへの溶媒交換の後、濾過及び蒸発により、粘性油として粗生成物を与えた。いくつかの溶媒のスクリーニングにもかかわらず、この粗製物からのトリエチルアンモニウム塩としての生成物の結晶化は、不成功であった。我々は、取扱いがより簡単である不純及びアモルファス固体として１Ｍ ＨＢｒ（ａｑ）の添加により生成物の沈殿を強制可能であった。

【0121】

２’－保護ＡＰＩの脱保護。溶媒としてのＭｅＣＮ、ＴＨＦ、ジオキサン、及びＥｔＯＨ中のＥｔ３Ｎ・３ＨＦを用いた脱保護は、有益であることが証明された。２’－シリルは、観測可能な副反応をまったく伴うことなく除去され、我々は、喜ばしいことに、標的ｃＧＭＰＳ １ａが３日間にわたり継続して沈殿し、母液は、望まれないジアステレオマー及び他の不純物で富化されることを見いだした。我々は、溶媒としてＴＨＦを探究することを選んだ。というのは、それが母液への最小損失を与えたからである。粗生成物は、ＬＣによりほとんど純粋な淡黄色結晶性塩であった。しかしながら、その１Ｈスペクトルは、真空乾燥にもかかわらず、２当量のトリエチルアンモニウムの存在を明らかにした。１９Ｆ ＮＭＲは、おそらくトリエチルアンモニウムフルオリドであるフルオリド複合体の存在を示す－１６２ｐｐｍ付近に広幅のピークを示した。ＭｅＣＮ中の再スラリーは、フルオリド、過剰Ｅｔ３Ｎ、さらにはすべての色を除去し、粗形態で生成物を生成した（約１％の望まれないジアステレオマー）。エタノールは、好適な再結晶化溶媒であることが見いだされ、生成物は、結晶性ヘミエタノール溶媒和物として回収された。この溶媒和物は、安定であり、真空乾燥にもかかわらずインタクト状態を維持し、加熱したとき、熱量測定分析は、吸熱もサンプル質量損失も示さなかった。粗生成物は、明らかな分解を伴うことなく２０体積の沸騰ＥｔＯＨに可溶であるので、冷却再結晶化を実施可能である。このため、ＬＣ純度＞９９．９％の結晶性白色粉末として目標化合物が得られた。適正構造及びコンフォメーションの確認は、その分光学的データと以前に調製された材料のものとの比較に基づく。

【0122】

２．４ 実験
８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノグアノシン（２）。８－ブロモグアノシン（６８３ｇ、１．８６ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（３．４１Ｌ、５ｖｏｌ．）及びＤＢＵ（７０６ｇ、２．５ｅｑ．、４．６４ｍｏｌ）中に溶解させた。
２－ブロモアセトフェノン（４４３ｇ、１．５ｅｑ．、２．２３ｍｏｌ）をほぼ２５℃に保たれた反応混合物に３０分間にわたり滴状に仕込んだ。濃酢酸（３３４ｇ、３ｅｑ．、５．５７ｍｏｌ）の添加前、反応物を１ｈ撹拌した。反応混合物に水（２．７Ｌ、４ｖｏｌ．）を徐々に添加することにより生成物を沈殿させ、濾過し、水（５．５Ｌ、８ｖｏｌ）続いてＭｅＣＮ（５．５Ｌ、８ｖｏｌ．）で洗浄した。
８０℃で５ｈ真空乾燥した後、ヌクレオシド２（６１３ｇ、７１．５％）を白色結晶性固体として回収した。ＭＳ（ｍ－Ｈ）ｍ／ｚ：４６０．０２５７、実測値：４６０．０２５９（ＥＳ－）。

【0123】

８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノ－２’，５’－ジトリイソプロピルシリルオキシグアノシン（３）。出発ヌクレオシド２（４８０ｇ、０．９９ｍｏｌ）をＤＭＦ（２．４Ｌ、５ｖｏｌ．）中に懸濁させた。イミダゾール（３３６ｇ、５ｅｑ．、４．９３ｍｏｌ）、続いてＴＩＰＳ－Ｃｌ（９５１ｇ、５ｅｑ．、０．５４ｍｍｏｌ）をサスペンジョンに添加し、出発材料を徐々に溶解させた。混合物を一晩撹拌した後、水（１７８ｍＬ、１０ｅｑ．、９．８７ｍｏｌ）でクエンチし、その後、トルエン（７．２Ｌ、１５ｖｏｌ．）で希釈した有機相を水（３×２．４Ｌ）で洗浄し、蒸発させた。得られた粗油にｉ－ＰｒＯＡｃ（２．４Ｌ、５ｖｏｌ．）を添加し、一晩撹拌した。固形分を濾過し、１ケーク体積（６７２ｍＬ）のｉ－ＰｒＯＡｃで洗浄し、３５℃で一晩真空乾燥させ、白色結晶性固体として二保護ヌクレオシド３（４６２．４ｇ、５８．４％）を与えた。ＭＳ（ｍ－Ｈ）ｍ／ｚ：
７７２．２９２５、実測値：７７２．２９５０（ＥＳ－）。

【0124】

８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノ－２’－トリイソプロピルシリルオキシグアノシン（４）。２’，５’－ジシリル化ヌクレオシド３（４６１ｇ、０．５７ｍｏｌ）をＤＣＭ（４．６１Ｌ、１０ｖｏｌ．）中に溶解させた。ＴＦＡ（２３１ｍＬ、０．５ｖｏｌ．）及び水（９２２ｍＬ、２ｖｏｌ．）をベッセル中に仕込み、一晩撹拌した。混合物を３５％ａｑ．アンモニア（０．２５ｖｏｌ．）で中和し、パックセライトに通して濾過することにより過加水分解副生成物を除去し、ＤＣＭ（９２２ｍＬ、２ｖｏｌ．）で洗浄した。有機相を水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、蒸発させて粗固形分を与え、ＭｅＣＮ（３．２３Ｌ、７ｖｏｌ．）中に一晩再懸濁させた。濾過及びＭｅＣＮ（４６１ｍＬ、１ｖｏｌ．）による固形分の洗浄、続いて３５℃で一晩真空乾燥を行って、白色結晶性固体として一保護ヌクレオシド４（２５７ｇ、７４．２％）を与えた。ＭＳ（ｍ－Ｈ）ｍ／ｚ：６１６．１５９１、実測値：６１６．１６１５（ＥＳ－）。

【0125】

トリエチルアンモニウム ８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノ－２’－トリイソプロピルシリルオキシグアノシン－５’－Ｈ－ホスホン酸（５）。化合物４（２６２ｇ、０．４２ｍｏｌ）をＤＣＭ（４．９８Ｌ、１９ｖｏｌ．）及びピリジン（２６２ｍＬ、１ｖｏｌ．）に溶解させた。ジフェニルホスフィット（２９２ｇ、３ｅｑ．１．２５ｍｏｌ）を仕込み、反応物を混合した。２時間後、反応を水（２６２ｍＬ、１ｖｏｌ．）及びＥｔ３Ｎ（２６２ｍＬ、１ｖｏｌ．）でクエンチし、１時間撹拌した。混合物を水（２×２．５Ｌ）で洗浄し、有機相を２－プロパノール続いてエチルアセテートで共蒸発させた。粗製物をエチルアセテート（２．６２Ｌ、１０ｖｏｌ．）から再結晶し、固形分を濾過し、エチルアセテート（５２４ｍＬ、２ｖｏｌ．）で洗浄し、白色結晶性粉末としてモノエステル５（３１２ｇ、９０．０％）を与えた。ＭＳ（Ｍ－Ｅｔ３ＮＨ＋）ｍ／ｚ：６８０．１３０５、実測値：６８０．１３１５（ＥＳ－）。

【0126】

Ｒｐ－８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノ－２’－トリイソプロピルシリルオキシグアノシン－３’，５’－環状モノホスホロチオ酸（６）。２，６－ルチジン（１９９ｇ、５ｅｑ．１．８６ｍｏｌ）をＤＣＭ（６．２Ｌ、２０ｖｏｌ．）中の５（３１０ｇ、０．３７ｍｏｌ）の溶液に添加し、続いてピバロイルクロリド（６７ｍＬ、１．５ｅｑ．０．５６ｍｏｌ）を添加した。１時間撹拌した後、硫黄（１８ｇ、１．５ｅｑ．、０．５６ｍｏｌ）続いてトリエチルアミン（５６ｇ、１．５ｅｑ．、０．５６ｍｏｌ）をベッセルに仕込んだ。１時間後、溶液を水（２×１．２４Ｌ）で洗浄し、有機相を蒸発させた。残渣をＭｅＣＮ（１．５５Ｌ、５ｖｏｌ．）中で撹拌し、硫黄を黄色結晶として沈殿させ、それを濾別した。得られた濾液に臭化水素酸（３．１Ｌ、１０ｖｏｌ．、１Ｍ）を添加して粗固形分を沈殿させ、これを濾別し、ＭｅＣＮ（１．５５Ｌ、５ｖｏｌ．）中に再懸濁させ、濾過し、１ケーク体積のＭｅＣＮで洗浄した。溶媒残渣の除去により、粗白色固体としてチオリン酸６を与え、下記工程に使用した。ＭＳ（ｍ－Ｈ）ｍ／ｚ：６９４．０９２０、実測値：６９４．０９７８（ＥＳ－）。

【0127】

トリエチルアンモニウムＲｐ－８－ブロモ－β－フェニル－１，Ｎ２－エテノグアノシン－３’，５’－環状チオリン酸（１ａ）。トリエチルアミントリスヒドロフルオリド（６２０ｍＬ、２ｖｏｌ．）をＴＨＦ中（１．２４Ｌ、４ｖｏｌ．）の粗ホスホロチオ酸６の溶液に仕込んだ。混合物にシードし、撹拌し、三晩にわたり沈殿を形成した。固形分を濾別し、次いで、ＴＨＦ（５００ｍＬ、１．６ｖｏｌ．）で洗浄し、ＭｅＣＮ（９３０ｍＬ、３ｖｏｌ．）中に１ｈ再懸濁させ、その後、濾過し、１ケーク体積のＭｅＣＮで洗浄し、結晶性１ａを与えた。この材料を２０体積の９９％ＥｔＯＨから冷却再結晶化させ、続いて濾過し、１ケーク体積の同一物で洗浄し、純度＞９９．９％の白色結晶性粉末として標的ｃＧＭＰＳ １ａ（１２６．５ｇ、４９．５％、２ステップ）を与える。ＭＳ（Ｍ－Ｅｔ３ＮＨ＋）ｍ／ｚ：５３７．９５８６、実測値：５３７．９５８１（ＥＳ－）。

【0128】

２．５ 結論
クロマトグラフィーもキラル補助剤も使用しないｃＧＭＰＳ １ａの調製のための６ステップバッチプロセスを開発しアップスケールした。Ｈ－ホスホネートアプローチの使用により、所望のＲＰ環状チオリン酸を望まれないＳＰジアステレオマー１ｂに対して９：１の比で形成することを可能にした。所望の２’，５’－ジシリル化ヌクレオシドを３’，５’－異性体に対して印象的な８６：１４の比で与えるように最適化可能なリボース上のシリル保護ストラテジーを考案した。選択的結晶化は、すべての鍵を握るステップで可能であるだった。プロセスは、合計で１２６グラムの純度＞９９．９％の結晶性物質１ａを与えた（合計収率１３．８％）。

【図1】

【国際調査報告】