特表 2024-531339 アクリレート化合物を調製するためのパラジウムを含まない方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-29

(54)【発明の名称】アクリレート化合物を調製するためのパラジウムを含まない方法

(51)【国際特許分類】

   C07C 319/20 20060101AFI20240822BHJP

   C07C 321/28 20060101ALI20240822BHJP

   C07C 69/65 20060101ALI20240822BHJP

   C07C 67/343 20060101ALI20240822BHJP

   C12P 13/00 20060101ALI20240822BHJP

   B01J 23/22 20060101ALI20240822BHJP

   B01J 31/02 20060101ALI20240822BHJP

   B01J 31/06 20060101ALI20240822BHJP

   B01J 27/053 20060101ALI20240822BHJP

【ＦＩ】

C07C319/20

C07C321/28

C07C69/65

C07C67/343

C12P13/00

B01J23/22 Z

B01J31/02

B01J31/06 Z

B01J31/02 102Z

B01J27/053 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024509386

(86)(22)【出願日】2022-08-17

(85)【翻訳文提出日】2024-04-16

(86)【国際出願番号】 US2022040665

(87)【国際公開番号】W WO2023023201

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】63/234,927

(32)【優先日】2021-08-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500049716

【氏名又は名称】アムジエン・インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】オルティス，アドリアン

(72)【発明者】

【氏名】デルフラー，ヤイカ

(72)【発明者】

【氏名】バイダ，カリーナ・アール

【テーマコード（参考）】

4B064

4G169

4H006

【Ｆターム（参考）】

4B064AD61

4B064AE01

4B064AE61

4B064CA21

4B064CB17

4B064CD05

4B064CD11

4B064DA16

4G169AA06

4G169BA22B

4G169BA27B

4G169BA29B

4G169BB04B

4G169BB10B

4G169BC54B

4G169BD01B

4G169BD02B

4G169BD06B

4G169BE03B

4G169BE06B

4G169BE13B

4G169BE37B

4G169BE38B

4G169BE39B

4G169CB07

4G169DA02

4G169ED02

4G169FB06

4H006AA02

4H006AB84

4H006AC30

4H006BE02

4H006BM30

4H006BM71

4H006BU26

4H006KA31

4H006KC14

4H006TA04

4H006TB58

(57)【要約】

本発明は、貴金属（Ｐｄ／Ｐｔ／Ｒｈ／Ｒｕ）を含まない、好ましくはＰｄを含まない、式（１）：

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２及びＸは、本明細書で定義される通りである）の化合物又はその塩を調製するプロセスに関する。好ましくは、化合物はヨードアクリレート化合物である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（１）：

【化1】

（式中、
Ｘはハロ、ＣＮ、ＣＦ_３、又はＯＨであり；
Ｒ^１は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル；５、６、７、８、９又は１０員のアリール又はヘテロアリール；又は３、４、５、６、７、８、９若しくは１０員のシクロアルキル又はヘテロシクロアルキル基であり；
ここで、ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル基は、Ｏ、Ｎ又はＳから独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有することができ；
又は、シクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基中の炭素原子は、Ｃ＝Ｏ基の一部であってもよく；
Ｒ^２は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル又はベンジルから選択される）
を有する化合物又はその薬学的に許容される塩の調製プロセスであって、
（ａ）式（２）の化合物：

【化2】

（式中、前記Ｒ^１及びＲ^２は、化合物（１）において上に定義される通りである）を、溶媒－１中、亜硝酸塩の存在下で、酸ＨＡと接触させることと、
（ｂ）ハロゲン化剤、シアネート化剤、トリフルオロメチル化剤又はヒドロキシル化剤を、場合により溶媒－２の存在下で導入して、前記化合物（１）を形成することと
を含み；前記溶媒－１及び溶媒－２は、同一であっても異なっていてもよく、
前記化合物（２）が、パラジウム触媒を含まない方法で調製される、プロセス。

【請求項2】

前記化合物（２）を調製することをさらに含み、前記化合物（２）が、
（ｃ１）極性溶媒中、酸性塩ＨＡ^１の存在下で金属を活性化することと、式（３）の化合物：

【化3】

（式中、前記Ｒ^１及びＲ^２は、化合物（１）において上に定義される通りである）
を、前記活性化された金属と極性溶媒中で高温で接触させ、前記化合物（２）又はその塩を形成することと
を含み、
又は、代替的に、前記化合物（２）を調製することをさらに含み、
（ｃ２）前記式（３）の化合物を、場合により共溶媒の存在下で、水性緩衝溶液中で酵素還元剤と、少なくとも１つの触媒及び補助因子の存在下で反応させ、前記式（２）の化合物又はその塩を形成すること
を含む、請求項１に記載のプロセス。

【請求項3】

（ｃ１）極性溶媒中、酸性塩ＨＡ^１の存在下で金属を活性化することと、前記式（３）の化合物を前記活性化金属と高温で極性溶媒中で接触させ、前記化合物（２）又はその塩を形成することと
を含む、請求項２に記載のプロセス。

【請求項4】

（ｃ２）共溶媒の存在下で、水性緩衝剤中で酵素還元剤と、金属触媒、共触媒及び補助因子の存在下で、前記式（３）の化合物を接触させ、前記式（２）の化合物又はその塩を形成すること
を含む、請求項２に記載のプロセス。

【請求項5】

前記化合物（３）又はその塩を調製することをさらに含み、
（ｄ）式（４）の化合物：

【化4】

（式中、Ｘ_１はハロであり；前記Ｒ^１は、化合物（３）において上に定義される通りである）
を、塩基の存在下、有機溶媒中、高温でチオール剤と接触させ、化合物（３）又はその塩を形成すること
を含む、請求項２に記載のプロセス。

【請求項6】

前記化合物（４）を調製することをさらに含み、
（ｅ）式（５）の化合物：

【化5】

（式中、Ｘ_１は化合物（４）で定義されるハロである）を、アルケン化剤と接触させ、塩基の存在下、有機溶媒中で、前記化合物（４）又はその塩を形成すること
を含む、請求項５に記載のプロセス。

【請求項7】

（ａ）において、前記酸ＨＡがＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、ｐ－ＴｓＯＨ又はＨ_２ＳＯ_４である、請求項１～６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項8】

（ａ）において、前記溶媒－１が、水、ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、ＣＨ_３ＣＮ、若しくは（Ｃ_１～Ｃ_６）酢酸アルキル溶媒、又はそれらの混合物である、請求項１～７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項9】

（ｂ）において、前記ハロゲン化剤がハロゲン化金属塩であり、前記シアン化剤がＣｕＣＮであり、前記トリフルオロメチル化剤がＣｕＣＦ_３であり、前記ヒドロキシル化剤がＣｕ_２Ｏ／Ｃｕ（ＩＩ）である、請求項１～８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項10】

（ｂ）において、前記溶媒－２が、水、ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、ＣＨ_３ＣＮ、若しくは（Ｃ_１～Ｃ_６）酢酸アルキル溶媒、又はそれらの混合物である、請求項１～９のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項11】

（ｃ１）において、前記金属が、Ｆｅ^ｏ、Ｚｎ^ｏ、Ｐｄ^ｏ、Ｐｔ^ｏ、Ｒｕ^ｏ又はＲｈ^ｏから選択される、請求項２又は３、又は５～１０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項12】

（ｃ１）において、前記酸性塩ＨＡ^１が、塩化アンモニウム、酢酸又はＨＣｌである、請求項２又は３、又は５～１１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項13】

（ｃ１）において、前記極性溶媒が水、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルアルコール、又はそれらの混合物である、請求項２又は３、又は５～１２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項14】

（ｃ２）において、前記共溶媒がＤＭＳＯ又は水／ＤＭＳＯ混合物から選択される、請求項２又は４～１０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項15】

（ｃ２）において、前記緩衝剤が、リン酸塩、ＰＩＰＥＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ、ＢＩＣＩＮＥ、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳ、ＴＥＳ、ＣＡＰＳ、Ｋｐｉ又はＣＨＥＳから選択される、請求項２、４～１０又は１４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項16】

（ｃ２）において、前記酵素還元剤がニトロレダクターゼ酵素である、請求項２、４～１０、又は１４又は１５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項17】

（ｃ２）において、前記触媒が金属触媒及び共触媒であり；前記金属触媒が、Ｖ_２０_５、ＮＨ_３ＶＯ_４、Ｖ（ＩＶ）オキシドフタロシアニン、Ｖ（ＩＶ）オキシドビス（２，４－ペンタンジオネート）、バナジル硫酸水和物、Ｖ（Ｖ）オキシトリエトキシド、３％Ｖ／Ｃ、又はＶ（ＩＩＩ）２，４－ペンタンジオナートから選択されるバナジウム触媒である、請求項２、４～１０又は１４～１６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項18】

（ｃ２）において、前記反応がｐＨ７又はｐＨ８で行われる、請求項２、４～１０又は１４～１７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項19】

（ｃ２）の生成物が、ＨＣｌ塩若しくはＨＢｒ塩から選択されるハロゲン化物塩、又はメシレート塩、トシレート塩若しくはアリールスルホン酸塩から選択されるスルホン酸塩から選択される塩である、請求項２、４～１０又は１４～１８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項20】

（ｄ）において、化合物（４）及び（５）のそれぞれにおける前記Ｘ_１がフルオロ又はクロロである、請求項５～１９のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項21】

（ｄ）において、前記塩基が炭酸塩又はリン酸塩である、請求項５～２０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項22】

（ｄ）において、前記有機溶媒が、ＤＭＦ、ＤＭＡｃ又はＮＭＰから選択される、請求項５～２１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項23】

（ｄ）において、前記反応が低含水量条件下で行われ、過剰なチオール剤が使用されない、請求項５～２２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項24】

（ｅ）において、化合物（４）及び（５）のそれぞれにおける前記Ｘ_１がＦ又はＣｌである、請求項６～２３のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項25】

（ｅ）において、前記有機溶媒が、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ_３ＣＮ、ＴＥＡ、Ｎ－メチルモルホリン、又はそれらの混合物から選択される、請求項６～２４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項26】

化合物（１）中のＸがヨードである、請求項１～２５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項27】

化合物（１）及び（２）のそれぞれにおけるＸ_１がフルオロ又はクロロである、請求項１～２６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項28】

化合物（１）、（２）、（３）及び（４）のそれぞれにおけるＲ^１がメトキシ又はエトキシである、請求項１～２７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項29】

化合物（１）、（２）及び（３）のそれぞれにおけるＲ^２がベンジルである、請求項１～２８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項30】

前記式（１）の化合物を形成するために、以下の順序：
Ａ）工程（ｅ）；工程（ｄ）；工程（ｃ１）又は（ｃ２）；その後に工程（ａ）＋（ｂ）；
Ｂ）工程（ｄ）；工程（ｅ）；工程（ｃ１）又は（ｃ２）；その後に工程（ａ）＋（ｂ）；又は
Ｃ）工程（ｄ）；工程（ｃ１）又は（ｃ２）；工程（ｅ）；その後に工程（ａ）＋（ｂ）で行われる、請求項２、４～１０又は１４～１６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項31】

【化6】

（式中、Ｒ^１はエチルであり、Ｒ^２はベンジルである）である化合物、又はその塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、高い立体異性体比を有する、ヨードアクリレート化合物を含むアクリレート化合物のパラジウムを含まない調製のための新規な方法に関する。

【背景技術】

【0002】

本出願は、式（１）：

【化1】

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２及びＸは、以下に定義される通りである）を有する化合物、又はその塩を調製するための、貴金属、例えばＰｄ、Ｐｔ、Ｒｈ又はＲｕを含まない、好ましくはＰｄを含まないプロセスに関する。好ましくは、化合物は、エチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ヨードフェニル）アクリレート（化合物１ａ）を含むヨードアクリレート化合物である。

【0003】

既知の経路において、化合物（１）を出発物質化合物（２）から調製した。具体的には、Ｒ^１がエチルである化合物（１）であり；Ｒ^２がベンジルであり；ＸがＩである化合物（１）である化合物（１ａ）は；Ｒ^１がエチルであり、Ｒ^２がベンジルである化合物（２）である出発物質アニリンアクリレート化合物（２ａ）から調製された：

【化2】

【0004】

化合物（２ａ）の現在の調製は、以下のような背中合わせのパラジウム（Ｐｄ）媒介交差カップリング反応を用いる：

【化3】

商品製造コスト（ＣＯＧＭ）の５０％超はＰｄの使用に由来する。結果として、迅速な合成にもかかわらず、化合物（２ａ）のこの調製方法は、約ＵＳ＄８，０００／Ｋｇと非常に高価である。

【0005】

さらに、背中合わせのＰｄ変換の使用は、高いＰｄ充填量（６ｍｏｌ％及び５ｍｏｌ％）の必要性、及び下流でのＰｄ除去の困難さなどの堅牢性の課題をもたらす。

【0006】

コストを下げ、全体的なプロセスの堅牢性を改善するために、化合物（１ａ）又はその類似体を調製するための重要な中間体化合物として役立つ化合物（２ａ）を調製するための改善された新規な合成技術を開発する必要がある。

【0007】

本発明者らは、これらのコスト及び堅牢性の課題に対処するために、Ｐｄを含む高価な貴金属の全ての使用を排除する新規な合成経路を開発した。本発明の化合物（２）及び（２ａ）の改善された調製方法では、アミノ基は、安価な卑金属である鉄でニトロ基を還元することによって調製される。本発明者らは、化合物（２ａ）の収率を改善した、ニトロレダクターゼ酵素を用いた代替の新規な生物触媒ニトロ還元をさらに開発した。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、ハロアクリレート化合物を含むアクリレート化合物の合成のためのプラント規模において、貴金属触媒を含まず、好ましくはパラジウム金属触媒を含まず、改善され、より安全で、費用対効果が高く、操作が容易であるプロセスを提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

実施形態１において、本発明は、式（１）：

【化4】

を有する化合物又はその塩を形成するためのプロセスであって：
式中、
Ｘはハロ、ＣＮ、ＣＦ_３、又はＯＨであり；
Ｒ^１は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル；５、６、７、８、９又は１０員のアリール又はヘテロアリール；又は３、４、５、６、７、８、９若しくは１０員のシクロアルキル又はヘテロシクロアルキル基であり；
ここで、ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル基は、Ｏ、Ｎ又はＳから独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有することができ；
又は、シクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基中の炭素原子は、Ｃ＝Ｏ基の一部であってもよく；
Ｒ^２は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル又はベンジルから選択され；
（ａ）式（２）の化合物：

【化5】

（式中、前記Ｒ^１及びＲ^２は、化合物（１）において上に定義される通りである）を、溶媒－１中、亜硝酸塩の存在下で、酸ＨＡと接触させることと、
（ｂ）ハロゲン化剤（フッ素化剤、塩素化剤、臭素化剤又はヨウ素化剤を含む）、シアネート化剤、トリフルオロメチル化剤又はヒドロキシル化剤を、場合により溶媒－２の存在下で導入して、前記化合物（１）を形成することと
を含み；前記溶媒－１及び溶媒－２は、同一であっても異なっていてもよく；
前記化合物（２）は、パラジウム触媒を含まない方法で調製される、
プロセスを提供する。

【0010】

実施形態１の下位実施形態では、（ａ）において、前記酸ＨＡは、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、ｐ－ＴｓＯＨ又はＨ_２ＳＯ_４である。好ましくは、酸ＨＡはＨＣｌである。

【0011】

実施形態１のさらなる下位実施形態では、（ａ）において、前記溶媒－１は、水、ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、ＣＨ_３ＣＮ、又は（Ｃ_１～Ｃ_６）酢酸アルキル溶媒、又はそれらの混合物である。好ましくは、前記溶媒－１は酢酸エチル又は酢酸イソプロピルである。

【0012】

実施形態１のさらなる下位実施形態では、（ａ）において、前記亜硝酸塩はＮａＮＯ_２である。

【0013】

実施形態１のさらなる下位実施形態では、（ａ）において、前記低温は、－１０℃～１０℃；又は０℃～５℃である。好ましくは、０℃～５℃である。

【0014】

実施形態１のさらなる下位実施形態では、（ｂ）において、前記ハロゲン化剤は、ハロゲン化金属塩であり；前記シアン化剤はＣｕＣＮであり；前記トリフルオロメチル化剤はＣｕＣＦ_３であり；前記ヒドロキシル化剤はＣｕ_２Ｏ／Ｃｕ（ＩＩ）である。好ましくは、（ｂ）において、ハロゲン化剤が使用され、より好ましくは、前記ハロゲン化剤はＫＩ又はＣｕＩである。

【0015】

実施形態１のさらなる下位実施形態では、（ｂ）において、前記溶媒－２は、水、ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、ＣＨ_３ＣＮ、又は（Ｃ_１～Ｃ_６）酢酸アルキル溶媒、又はそれらの混合物である。好ましくは、（ｂ）において、前記溶媒－２は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルであり；より好ましくは酢酸イソプロピルである。

【0016】

実施形態２において、本発明は、実施形態１に記載のプロセスであって、前記化合物（２）を調製することをさらに含み、
（ｃ１）極性溶媒中、酸性塩ＨＡ^１の存在下で金属を活性化すること；及び式（３）の化合物：

【化6】

（式中、前記Ｒ^１及びＲ^２は、化合物（１）において上に定義される通りである）を、前記活性化された金属と極性溶媒中で高温で接触させて、前記化合物（２）又はその塩を形成することを含むプロセス；
又は代替的に、前記化合物（２）を調製することをさらに含み、
（ｃ２）前記式（３）の化合物を、場合により共溶媒の存在下で、水性緩衝溶液中で酵素還元剤と、少なくとも１つの触媒及び補助因子の存在下で反応させて、前記式（２）の化合物又はその塩を形成することを含む、プロセス
を提供する。

【0017】

実施形態３において、本発明は、前記化合物（２）を調製することをさらに含む、実施形態２に記載のプロセスであって、
（ｃ１）極性溶媒中、酸性塩ＨＡ^１の存在下で金属を活性化すること；前記式（３）の化合物を前記活性化金属と高温で極性溶媒中で接触させて、前記化合物（２）又はその塩を形成すること
を含む、プロセスを提供する。

【0018】

実施形態４において、本発明は、化合物（２）を調製することをさらに含む、実施形態２に記載のプロセスであって、
（ｃ２）共溶媒の存在下で、水性緩衝剤中で酵素還元剤と、金属触媒、共触媒及び補助因子の存在下で、前記式（３）の化合物を接触させて、前記式（２）の化合物又はその塩を形成すること
を含む、プロセスを提供する。

【0019】

実施形態２又は３のいずれかの下位実施形態では、（ｃ１）において、前記金属は、Ｆｅ^ｏ、Ｚｎ^ｏ、Ｐｄ^ｏ、Ｐｔ^ｏ、Ｒｕ^ｏ、又はＲｈ^ｏから選択される。好ましくは、前記金属はＦｅ^ｏである。

【0020】

実施形態２又は３のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ１）において、前記酸性塩ＨＡ^１は、塩化アンモニウム、酢酸、又はＨＣｌである。好ましくは、前記酸性塩ＨＡ^１は塩化アンモニウムである。

【0021】

実施形態２又は３のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ１）において、前記極性溶媒は、水、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルアルコール、又はそれらの混合物である。好ましくは、前記極性溶媒は水とエタノールの混合物である。

【0022】

実施形態２又は３のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ１）において、前記高温は５０℃～９０℃、又は７５℃～８０℃である。好ましくは、前記温度は７５℃～８０℃である。

【0023】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記共溶媒は、ＤＭＳＯ又は水／ＤＭＳＯ混合物から選択される。好ましくは、共溶媒は、２０ｖｏｌ％～３０ｖｏｌ％のＤＭＳＯである。より好ましくは、共溶媒は３０ｖｏｌ％のＤＭＳＯである。

【0024】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記緩衝剤は、リン酸塩、ＰＩＰＥＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ、ＢＩＣＩＮＥ、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳ、ＴＥＳ、ＣＡＰＳ、Ｋｐｉ又はＣＨＥＳから選択される。好ましくは、緩衝剤はＴＲＩＣＩＮＥである。

【0025】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記酵素還元剤はニトロレダクターゼ（ＮＲ）酵素である。好ましくは、酵素はＮＲ－５５である。

【0026】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記触媒は金属触媒及び共触媒であり；前記金属触媒は、Ｖ_２０_５、ＮＨ_３ＶＯ_４、Ｖ（ＩＶ）オキシドフタロシアニン、Ｖ（ＩＶ）オキシドビス（２，４－ペンタンジオナート）、バナジル硫酸塩水和物、Ｖ（Ｖ）オキシトリエトキシド、３％Ｖ／Ｃ、又はＶ（ＩＩＩ）２，４－ペンタンジオナートから選択されるバナジウム触媒である。

【0027】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記触媒は金属触媒及び共触媒であり；前記金属触媒はＶ_２０_５又はＮＨ_３ＶＯ_４であり、前記共触媒はＧＤＨ－１０１及び糖であり、前記補因子はＮＡＤＰ＋である。好ましくは、糖はデキストロース又はグルコースである。

【0028】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記反応はｐＨ７又は８で行われる。

【0029】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、前記共溶媒に溶解された前記式（３）の化合物を、前記水性緩衝溶液中で、金属触媒、共触媒及び補助因子の存在下で酵素還元剤にゆっくり添加する。好ましくは、前記金属触媒はバナジウム金属、より好ましくはＶ_２０_５又はＮＨ_３ＶＯ_４である。好ましくは、前記共触媒はＧＤＨ－１０１及び糖である。好ましくは、糖はデキストロース又はグルコースである。好ましくは、前記補因子はＮＡＤＰ＋である。

【0030】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）の生成物は、ＨＣｌ塩若しくはＨＢｒ塩から選択されるハロゲン化物塩、又はメシル酸塩、トシル酸塩若しくはアリールスルホン酸塩から選択されるスルホン酸塩から選択される塩である。好ましくは、塩はハロゲン化物塩、より好ましくはＨＣｌ塩である。（ｃ２）のより好ましい生成物は、

【化7】

である。

【0031】

実施形態２又は４のいずれかのさらなる下位実施形態では、（ｃ２）において、より好ましくは、反応は高温で行われる。好ましくは、温度は４０℃～５０℃の範囲である。より好ましくは、４３℃～４７℃である。最も好ましくは４５℃である。

【0032】

実施形態５において、本発明は、前記化合物（３）を調製することをさらに含む実施形態２に記載のプロセスであって、
（ｄ）式（４）の化合物：

【化8】

（式中、Ｘ_１は、ハロであり；前記Ｒ^１は、化合物（３）において上に定義される通りである）
を、塩基の存在下、有機溶媒中、高温でチオール剤と接触させ、化合物（３）又はその塩を形成することを含む、プロセスを提供する。

【0033】

実施形態５の下位実施形態において、（ｄ）において、化合物（４）及び（５）のそれぞれにおける前記Ｘ_１は、フルオロ又はクロロである。好ましくは、Ｘ_１はフルオロである。

【0034】

実施形態５のさらなる下位実施形態では、（ｄ）において、前記塩基は炭酸塩又はリン酸塩である。好ましくは、前記塩基はＣｓ_２ＣＯ_３又はＫ_３ＰＯ_４である。

【0035】

実施形態５のさらなる下位実施形態では、（ｄ）において、前記有機溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＡｃ又はＮＭＰから選択される。

【0036】

実施形態５のさらなる下位実施形態では、（ｄ）において、前記高温は５０℃～８５℃；又は６５℃～８０℃である。好ましくは、前記温度は７０℃である。

【0037】

実施形態５のさらなる下位実施形態では、（ｄ）において、前記チオール剤は、Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２ＳＨ又は（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル－ＳＨ、例えばＣＨ３ＳＨである。好ましくは、前記チオール剤はＣ_６Ｈ_５ＣＨ_２ＳＨである。

【0038】

実施形態５のさらなる下位実施形態では、（ｄ）において、前記反応は低含水量条件下で行われ、後処理における硫黄の発生を回避するために過剰のチオール剤の使用は回避される。好ましくは、含水量濃度は１０００ｐｐｍ未満に維持される。好ましくは、チオール剤は０．９０当量～１．１当量である。好ましい下位実施形態では、後処理において硫黄は生成されなかった。

【0039】

実施形態６では、本発明は、前記化合物（４）又はその塩の調製をさらに含む、実施形態５に記載のプロセスであって、
（ｅ）式（５）の化合物：

【化9】

（式中、Ｘ_１は化合物（４）で定義されるハロである）を、アルケン化剤と接触させ、塩基の存在下、有機溶媒中で、前記化合物（４）又はその塩を形成すること
を含む、プロセスを提供する。

【0040】

実施形態６の下位実施形態では、（ｅ）において、化合物（４）及び（５）のそれぞれにおける前記Ｘ_１は、Ｆ又はＣｌである。

【0041】

実施形態６のさらなる下位実施形態では、（ｅ）において、前記アルケニル化剤は、Ｗｉｔｔｉｇ試薬（トリフェニルホスホニウムイリド又はエチル２－（ジエトキシホスホリル）アセテートを含む）又はＨｏｒｎｅｒ－Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ－Ｅｍｍｏｎｓ（ＨＷＥ）試薬である。好ましくは、アルケニル化剤はＷｉｔｔｉｇ試薬である。より好ましくは、エチル２－（ジエトキシホスホリル）アセテートである。

【0042】

実施形態６のさらなる下位実施形態では、（ｅ）において、前記有機溶媒は、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ_３ＣＮ、ＴＥＡ、Ｎ－メチルモルホリン、又はその混合物から選択される。好ましくは、溶媒はＣＨ_３ＣＮである。

【0043】

実施形態６のさらなる下位実施形態では、（ｅ）において、前記ハロゲン化物塩は、ＬｉＣｌ又はＬｉＢｒから選択される。好ましくは、ハロゲン化物塩はＬｉＣｌである。

【0044】

実施形態７では、本発明は、化合物（１）中のＸがヨードである、上記実施形態１、２、３、４、５、若しくは６、又はその任意の下位実施形態のいずれかに記載のプロセスを提供する。

【0045】

実施形態８では、本発明は、化合物（１）及び（２）のそれぞれにおけるＸ_１がフルオロ又はクロロである、上記の実施形態１、２、３、４、５、６、若しくは７、又はそれらの任意の下位実施形態のいずれかに記載のプロセスを提供する。

【0046】

実施形態９では、本発明は、化合物（１）、（２）、（３）、及び（４）のそれぞれにおけるＲ^１がメトキシ又はエトキシである、上記の実施形態１、２、３、４、５、６、７、若しくは８、又はその任意の下位実施形態のいずれかに記載のプロセスを提供する。

【0047】

実施形態１０では、本発明は、化合物（１）、（２）及び（３）のそれぞれにおけるＲ^２がベンジルである、上記の実施形態１、２、３、４、５、６、７、８若しくは９、又はそれらの任意の下位実施形態のいずれかに記載のプロセスを提供する。

【0048】

実施形態１１では、本発明は、上記の実施形態１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９、又はその任意の下位実施形態のいずれかに記載のプロセスであって、前記化合物（１）が以下の反応順序：（ｅ）、（ｄ）、（ｃ１）、次いで（ａ）及び（ｂ）；又は（ｅ）、（ｄ）、（ｃ２）、次いで（ａ）及び（ｂ）によって得られるプロセスを提供する。

【0049】

代替的に、下位実施形態では、前記化合物（１）は、以下の順序の反応：（ｅ）、（ｄ）、（ｃ１）、次いで（ａ）及び（ｂ）；又は（ｅ）、（ｄ）、（ｃ２）、次いで（ａ）及び（ｂ）によって得られる。

【0050】

代替的に、下位実施形態では、前記化合物（１）は、以下の順序の反応：（ｄ）、（ｃ１）、（ｅ）、次いで（ａ）及び（ｂ）；又は（ｄ）、（ｃ２）、（ｅ）、次いで（ａ）及び（ｂ）によって得られる。

【0051】

実施形態１１において、本発明は、

【化10】

（式中、Ｒ^１はエチルであり；Ｒ^２はベンジルである）である化合物；又はその塩を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0052】

特に明記しない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される以下の用語は、本出願の目的のために定義され、以下の意味を有する。

【0053】

「アルケン化剤」とは、カルボニル基をアルケン基に変換する剤を意味する。そのようなアルケン化剤の２つの例は、「Ｈｏｒｎｅｒ－Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ－Ｅｍｍｏｎｓ（ＨＷＥ）剤」及び「Ｗｉｔｔｉｇ剤」である。例えば、Ｗｉｔｔｉｇ反応は、以下のようにホスホランを使用してα、β－不飽和ケトンを共役アルケンに変換する。

【化11】

Ｗｉｔｔｉｇ反応はＺアルケンを産生する。Ｈｏｒｎｅｒ－Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ－Ｅｍｍｏｎｓ（ＨＷＥ）反応は、Ｅアルケンを与えるＷｉｔｔｉｇ反応の変形である。Ｚ及びＥアルケンは、当技術分野の当業者によって広く理解されているように、アルケン基中の２つのより高い優先基の相対位置を指す。より高い優先基がアルケン基の同じ側にある場合、アルケンはＺ－アルケン（ドイツ語；ｚｕｓａｍｍｅｎ＝同じ（ｔｏｇｅｔｈｅｒ））と呼ばれる。より高い優先基がアルケン基の反対側にある場合、アルケンはＥ－アルケン（ドイツ語；ｅｎｔｇｅｇｅｎ＝反対（ｏｐｐｏｓｉｔｅ））と呼ばれる。

【0054】

「（Ｃ_α－Ｃ_β）アルキル」は、１～６個の炭素原子の直鎖飽和一価炭化水素ラジカル又は３～６個の炭素原子の分岐飽和一価炭化水素ラジカル、例えば、メチル、エチル、プロピル、２－プロピル、ブチル（全ての異性体形態を含む）、ペンチル（すべての異性体形態を含む）などを意味する。

【0055】

「アミノ」は－ＮＨ_２を意味する。

【0056】

「（Ｃ_α～Ｃ_β）アルコキシ」は、Ｒが上で定義されるアルキル、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ又は２－プロポキシ、ｎ－、イソ－又はｔｅｒｔ－ブトキシなどである－ＯＲラジカルを意味する。

【0057】

「（Ｃ_α～Ｃ_β）シクロアルキル」は、１個又は２個の炭素原子がオキソ基で置き換えられていてもよい、３～１０個の炭素原子の環状飽和一価炭化水素ラジカル、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルなどを意味する。

【0058】

「カルボキシ」は－ＣＯＯＨを意味する。

【0059】

「ＧＤＨ－１０１」は、ＮＡＤ＋及びＮＡＤＰ＋補因子の両方を受け入れ、最大５０℃の温度で活性であるグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）酵素触媒を意味する。ＧＤＨは、Ｄ－グルコースのＤ－グルコラクトンへの酸化を触媒し、次いで、ＮＡＤ^＋又はＮＡＤＰ^＋をそれぞれＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨに還元する。この反応の生成物であるＤ－グルコラトンは、水中でグルコン酸に自発的且つ不可逆的に加水分解し、したがって還元されたＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの形成を促進する。ＧＤＨ－１０１は、Ｍａｔｔｈｅｙ．ｃｏｍで市販されている。

【0060】

「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。

【0061】

本発明はまた、式（１）の化合物の保護された誘導体を含む。例えば、式（１）の化合物がヒドロキシ、カルボキシ、チオール又は窒素原子を含む任意の基などの基を含む場合、これらの基は適切な保護基で保護することができる。適切な保護基の包括的なリストは、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９９）（その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に見ることができる。式（１）の化合物の保護誘導体は、当技術分野で周知の方法によって調製することができる。

【0062】

化合物の「塩」は、薬学的に許容され、親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。このような塩としては：
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；又はギ酸、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４－クロロベンゼンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’－メチレンビス－（３－ヒドロキシ－２－エン－１－カルボン酸）、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等の有機酸と共に形成された酸付加塩；又は親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン若しくはアルミニウムイオンで置換されている場合；又は、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミンなどの有機塩基と配位する場合に形成される塩が挙げられる。薬学的に許容される塩は非毒性であると理解される。適切な薬学的に許容される塩に関するさらなる情報は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８５に見出すことができる。

【0063】

「オキソ」又は「カルボニル」は＝（Ｏ）基を意味する。

【0064】

「任意選択」又は「場合により」は、続いて記載された事象又は状況が起こってもよいが、起こらなくてもよいこと、及びその説明が、その事象又は状況が起こる場合と、起こらない場合とを含むことを意味する。例えば、「アルキル基で置換されていてもよいヘテロシクリル基」とは、アルキルが存在していてもよいが、存在していなくてもよいことを意味し、ヘテロシクリル基がアルキル基で置換されている場合、ヘテロシクリル基がアルキルで置換されていない場合を含む。

【0065】

「貴金属触媒」とは、化学プロセスをスピードアップする能力のために化学産業で広く使用されている貴金属を意味する。貴金属としては、金（Ａｕ）、パラジウム（Ｐｄ）、白金（Ｐｔ）、ロジウム（Ｒｈ）、ルテニウム（Ｒｕ）、及び銀（Ａｕ）などが挙げられる。

【0066】

一般的な実験手順：
本発明の方法は、以下の方法Ａ又は方法Ｂのいずれかに従って実施することができ：式中、Ｒ^１；Ｒ^２；Ｘ；及びＸ_１はそれぞれ上に定義される通りである：

【0067】

【表1】

【0068】

上記の方法Ａ及びＢは：工程（ｅ）：Ｈｏｒｎｅｒ－Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ－Ｅｍｍｏｎｓ（ＨＷＥ）；工程（ｄ）：アリール置換（Ｓ_ＮＡｒ）；工程（ｃ１）：金属媒介又は（ｃ２）：酵素媒介ニトロ還元；及び工程（ａ）＋（ｂ）：ハロゲン化を含む。

【0069】

当技術分野の当業者であれば、本発明の上記方法Ａ及び方法Ｂは様々な順序で実行することができ、上記の一般的な手順に記載されたステップの順序に限定されないことを理解するであろう。本発明者らは、本発明の反応工程の順序は様々であり得ることを企図している。例えば、上記の方法Ａ及びＢを以下：工程（ｄ）Ｓ_ＮＡｒ工程；工程（ｅ）：ＨＷＥ工程；工程（ｃ１）又は（ｃ２）：金属媒介又は酵素媒介ニトロ還元；その後に工程（ａ）＋（ｂ）：ハロゲン化による化合物（１）の形成のように行うことができることを当技術分野の当業者は理解するであろう。

【0070】

代替的に、上記の方法Ａ及びＢを以下：工程（ｄ）：Ｓ_ＮＡｒ；工程（ｃ１）又は（ｃ２）：金属媒介又は酵素媒介ニトロ還元；工程（ｅ）：ＨＷＥ；その後に工程（ａ）＋（ｂ）：ハロゲン化による化合物（１）の形成のように行うことができることを当技術分野の当業者は理解するであろう。

【0071】

工程（ｅ）：ＨＷＥ：ＨＷＥステップ（ｅ）は高速工程であり、１時間未満で完了することができる。これはまた、典型的には高収率の化合物（４）生成物を生成する清浄工程である。

【0072】

工程（ｄ）：Ｓ_ＮＡｒ：含水量、Ｃｓ_２ＣＯ_３の電荷、及びＢｎ－ＳＨの電荷は、Ｓ_ＮＡｒ工程において非常に重要なパラメータである。観察された中間体化合物及び観察されたビス付加不純物化合物を駆動して化合物（３）生成物を形成するためには、高温及び長い反応時間（１０時間～１２時間）が必要である。中間体化合物及びビス付加不純物化合物は、いずれも結晶化により容易にパージすることができる。

【0073】

【表2】

【0074】

工程（ｃ１）：Ｆｅ^０は、化合物（２）を調製するための金属媒介ニトロ還元工程で使用される好ましい金属である。これは、有害物質であり、活性化は非常に発熱性である。したがって、鉄活性化工程は、化合物（３）を反応混合物に添加する前に行うことが好ましい。

【0075】

工程（ａ）＋（ｂ）：ハロゲン化工程において、チオ硫酸塩クエンチは、以下のように単離された化合物（１）を汚染する元素状硫黄（Ｓ８）の生成をもたらした：
Ｓ_２Ｏ_３ ^２－＋Ｈ^＋→ＨＳＯ_３ ^－＋Ｓ（ｓ）

【0076】

硫黄の存在は、ハロゲン化工程の様々なバッチで変化することが観察された。本発明者は、Ｎａ－チオ硫酸塩（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３）をＮａ－重亜硫酸塩（ＮａＨＳＯ_３）又はアスコルビン酸で置き換えることにより、硫黄生成が排除され、Ｃ－Ｎ結合形成における再現性及び迅速な速度論が再確立されることを見出した。

【0077】

本発明者らは、反応温度（５℃以下）を制御し、反応不活性を制御し、上で定義された溶媒／ＡＱ混合物（ＴＨＦ、ＣＨ_３ＣＮ、ＥｔＯＡｃ、ｉＰＡｃ）を利用することによって、重要なプロセス不純物を抑制する戦略を見出した。これらのパラメータを使用することにより、以下の重要なプロセス不純物が最小化され、単離時に容易にパージされた。重要な不純物及び副生成物を表１に示す。

【0078】

【表3】

【0079】

工程（ｃ２）：生体触媒ニトロ還元工程：
本生体触媒ニトロ還元工程の反応機構は、一般に以下のように示される：

【化12】

【0080】

バナジウム金属触媒及び反応時間
本発明者は、バナジウム金属触媒が存在しない場合、以下の構造を有するより多くのヒドロキシルアミン（ＨＡ）副生成物（ｍ／ｚ＝３２９）：

【化13】

が、反応混合物のＬＣＭＳ及びＮＭＲスペクトルによって証明されるように、形成されることを見出した。表２は、２ｍｇ／ｍＬの酵素負荷速度で金属バナジウム触媒添加剤あり及びなしで化合物（２ａ）を形成するために様々な酵素触媒を用いて行われた１９の反応条件を列挙した。

【0081】

エントリ＃１～１０の反応プロトコル：ＮＲ－５５（５ｍｇ）を含むＪｏｈｎｓｏｎ Ｍａｔｔｅｙニトロレダクターゼキットから得た様々なニトロレダクターゼ（ＮＲ）酵素を２ｍｌエッペンドルフチューブに秤量した。緩衝剤のストック溶液を調製した：ＫＰｉ（２５０ｍＭ、ｐＨ７、グルコース（１００ｍＭ）、ＮＡＤＰ＋（ｌｍＭ）、ＧＤＨ（１ｍｇ・ｍＬ－１）を、５０μＬの基質ストック溶液（反応あたり２５ｍＭ）及び５０μＬのストックＶ_２０_５（反応あたり２ｍＭ）と共に各酵素（４００μＬ）に添加した。反応物を３５℃、３５０ｒｐｍで一晩撹拌した。

【0082】

エントリ＃１１～１４の反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ＋（３．７ｍｇ）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に秤量した。４．０ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ７，２５０ｍＭ）及び４６ｍｇの化合物（３ａ）及び５００μｌのストックＶ_２０_５（２ｍＭの最終濃度）を含有する１ｍｌのＤＭＳＯ（２０ｖｏｌ％）をチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル中１０００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、５時間後（エントリ＃１１～１２）及び２４時間後（エントリ＃１３～１４）にサンプリングした。

【0083】

エントリ＃１５～１８の反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（１８０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ＋（３．７ｍｇ）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に秤量した。４．０ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ７，２５０ｍＭ）及び９２ｍｇの化合物（３ａ）及び５００μｌのストックＶ_２０_５（２ｍＭの最終濃度）を含有する１ｍｌのＤＭＳＯ（２０ｖｏｌ％又は３０ｖｏｌ％）をチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル中１０００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、５時間後（エントリ＃１５－１８）及び２４時間後（エントリ＃１５Ａ－１８Ａ）にサンプリングした。

【0084】

【表4】

【0085】

改良されたＨＰＬＣ法を開発し、この方法を使用して後続の反応を分析した。ＮＲ－５をＶ _２０_５の有無で試験し、異なる時点で分析して、この方法が短寿命反応中間体を検出するのに適しているかどうかを確認した。反応物を１時間、５時間及び７２時間でサンプリングした。

【0086】

１時間後、バナジウムとの反応はさらなるピークを示さなかったが、バナジウムなしでは、３．９８分の新しいピーク（ヒドロキシルアミン）が現れた。５時間後、バナジウムが存在する場合と存在しない場合の両方で新しいピークが観察された。少数の反応中間体化合物が観察された。興味深いことに、７２時間後、両反応はアニリン化合物（２ａ）への変換の増加を示し、３．９９分でのピーク（ヒドロキシルアミン）が減少した。３．９９分のピークはヒドロキシルアミンであり、５．０６分のピークはニトロソ化合物である。ＬＣＭＳにより、ニトロソ及びヒドロキシルアミンに対応する３２８及び３３０のｍ／ｚが得られると考えられる。その後の８．１８分の溶出ピークにより、ｍ／ｚ＝６６１＝［Ｍ＋Ｎａ］＋が得られ、これはアゾキシ副産物の質量に相当する。

【0087】

本発明者らはさらに、バナジウム触媒を含む及び含まないＮＲ－５５酵素を、２ｍｇ／ｍＬの負荷速度で５ｍｌスケールで試験し（エントリ＃１１～１４を参照）、以前に観察されたように、バナジウムが初期生成物分布に影響を及ぼすことを見出した。最も注目すべきことに、５時間後、Ｖ_２Ｏ_５の非存在下では、ヒドロキシルアミン（８２％）及びわずか７％のアニリンの実質的な蓄積があったが、バナジウムでは、３７％のヒドロキシルアミン及び３９％のアニリンが形成された（エントリ＃１１～１２参照）。

【0088】

２４時間後、残留したヒドロキシルアミンの量は、バナジウムの有無にかかわらず無視できる程度であり、これにより、ヒドロキシルアミンのアニリン中間体及びニトロ中間体への自発的な変換（別名不均化又はＤＰ）が起こっていることが支持される。

【0089】

しかし、バナジウムを含まない反応では、アゾキシ化合物と判断される他の副生成物の生成量は４２％と、はるかに多いことが見出された。より低い触媒負荷量では、バナジウムの役割がはるかに顕著であった。これは、不均化及びニトロソ還元の両方の速度が低下し、これらの中間体の蓄積が互いに結合してアゾキシ化合物を形成することによって引き起こされると考えられる。

【0090】

本発明者らは、２ｍｇ／ｍＬ負荷速度を維持しながら基質濃度を５０ｍＭ（１８ｇ／Ｌ）スケールに倍増することによって、バナジウム触媒の存在下及び非存在下でＮＲ－５５酵素をさらに試験した（エントリ＃１５～１８参照）。２０ｖｏｌ％及び３０ｖｏｌ％のＤＭＳＯの両方を、このより高い基質濃度での比較のために試験した。

【0091】

５時間後、バナジウム非存在下（エントリ１５及び１６を参照）では、それぞれ７７％及び８１％ヒドロキシルアミンが形成されることが分かった。バナジウムを含有する反応により、より少量のヒドロキシルアミンを生じたが、依然としてかなり顕著な量の４８％～５１％が生じた。これは、２５ｍＭのより低い基質濃度で実行された以前の反応と比較して約１０％高かった。バナジウムの存在下では、５時間後に約２０％以上のアニリン化合物（２ａ）が形成された（エントリ１７及び１８参照）。バナジウムの量は、不均化が有効であるには低すぎることが明らかになった。

【0092】

反応エントリＮｏ．１７及び１８を２４時間後に再びサンプリングし（エントリ番号１７Ａ及び１８Ａを参照）、２ｍＭバナジウムを反応エントリＮｏ．１５及び１６に添加して、不均化がどれだけ迅速に起こるかを学習した（エントリ番号１５Ａ及び１６Ａを参照）。

【0093】

本発明者らは、予想外にも、２４時間後、バナジウムを５時間でエントリ番号１５Ａ及び１６Ａに添加した後、エントリ番号１５Ａ、１６Ａ、１７Ａ及び１８Ａが全く同等であり、すなわち、４１％～５３％のアニリン（２ａ）が得られたことを見出した。ＨＰＬＣは、アゾキシ化合物が２６％～３５％の濃度で存在したことを示す。

【0094】

より高い基質濃度は、２４時間後に約１０％より高いアゾキシ化合物への変換をもたらし、２４時間後に依然としてニトロ出発物質化合物（３ａ）が残っていることが見出された。ヒドロキシルアミン化合物のより高い蓄積は、反応の終わりまでにより多くのアゾキシ化合物を与えるようであった。ＨＰＬＣは、バナジウム添加の劇的な効果を示した。ヒドロキシルアミン化合物のバルクをアニリン（２ａ）及びニトロソに変換し、次いで、ヒドロキシルアミンと反応させてアゾキシ化合物を形成した。バナジウムの添加の３０分後に、第２のＨＰＬＣトレースを回収した。

【0095】

５ｍｌ中１８４ｍｇに等しい１００ｍＭ基質濃度（３７ｇ／Ｌ）を試験することによって反応を強化した。出発物質をシリンジポンプを介して１．５ｍｌ／ｈの速度で添加した（エントリ＃１９を参照）。小さなものはこの濃度ではあまりよく撹拌しないため、より大きなスターラーバーを使用した。しかし、これにより、反応の終了までに撹拌子上に粘着性ガムが蓄積した。４時間後、６３％のアニリン（３ａ）が生成し、予想外に、ヒドロキシルアミンは形成されなかった。２４時間後、６６％のアニリン（３ａ）及び７％のアゾキシが形成されたが、１７％のニトロ出発物質（２ａ）が残存した。反応はこのより高い基質濃度で行われたが、反応容器、撹拌の種類及び物質移動は、撹拌子上の粘着性ガムの蓄積を回避するために考慮する必要がある。

【0096】

反応条件に対するｐＨ効果：
本発明者らは、ｐＨ７及び８で本還元反応を試験した。ｐＨ６をさらに試験して、ｐＨがアゾキシ形成に及ぼす影響を学習した。

【0097】

反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ^＋（３．７ｍｇ）及びＶ_２Ｏ_５（０．１当量）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。４．０ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ６，２５０ｍＭ）及び４６ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１ｍｌ（２０％）ＤＭＳＯをチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で１０００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、２４時間後にサンプリングした。様々なｐＨでの様々な反応条件を表３に列挙する。

【0098】

【表5】

【0099】

ｐＨ６では、非常に高いレベルのアゾキシが、２４時間の反応時間後にわずか２５ｍＭ（３３％）で形成されることが分かった。したがって、ｐＨ７及び８が好ましい。

【0100】

シリンジポンプ添加：
反応中間体の蓄積を回避することが、アゾキシ形成の量を減少させるために重要であると思われた。蓄積を回避する１つの方法は、フェドバッチ法で出発材料を添加することである。

【0101】

化合物（３ａ）基質をＤＭＳＯに溶解し、シリンジポンプを介して１ｍｌ／ｈの流量で１時間にわたって添加した。このバナジウム塩はより良好な溶解度及びわずかにより良好な変換率を示したので、５０ｍＭの基質濃度、２ｍｇ／ｍＬの触媒担持量、２０ｖｏｌ％のＤＭＳＯ及びＮＨ_４ＶＯ_３（０．１当量）を使用した。本発明者らは、１時間の終わりに、基質添加が完了した後にサンプルを採取し、反応中間体の蓄積がないことを見出した。さらに１時間後、アニリン化合物（２ａ）への８０％の変換が達成され、わずか８％のアゾキシがＨＰＬＣで観察された。フェドバッチアプローチ及びより可溶性のバナジウム源は、反応結果に対してプラスの効果を示した。

【0102】

シリンジポンプを介した０．２５ｍｌ／ｈの基質添加のより遅い流速を試験し、２時間の反応時間後、基質の半分を添加し、主に化合物（３ａ）（５８％）及びアニリン化合物（２）（３９％）並びに非常に少量の反応中間体で、反応は非常にクリーンに見えた。しかし、残りの基質を添加した後、２４時間後、反応は完全には変換しなかった。ＮＲ試薬又はＧＤＨ試薬には安定性の問題がある可能性があり、おそらく酵素の一方は、この後、２０％ＤＭＳＯ中４５℃で不活性である。より高い添加速度が好ましい。

【0103】

金属触媒：量及び他の金属試験：
触媒としてのバナジウム金属の代わりに鉄及び銅を試験した。しかしながら、バナジウムが好ましい触媒であることが見出された。バナジウム及び金を以下の反応プロトコルの下でさらに試験した：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ^＋（３．７ｍｇ）及びＶ／Ａｕ（０．５当量）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。４．０ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ６，２５０ｍＭ）及び４６ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１ｍｌ（２０％）ＤＭＳＯをチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で１０００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、３０分後にサンプリングした。

【0104】

【表6】

【0105】

３０分後、Ｖ（ＩＩＩ）２，４－ペンタンジオネートは、アニリン（２ａ）（６１％）及びわずか６％のヒドロキシルアミン化合物（表４、エントリ７参照）への良好な変換を示した。塩化金（ＩＩＩ）は、上記のプロトコルの下で反応を完全に阻害することが見出され、反応中間体のいずれも痕跡さえ示さなかった（エントリ６）。

【0106】

反応を継続し、５時間後及び２４時間後に試料を再度採取した。結果を以下の表５及び表６に示す：

【0107】

【表7】

【0108】

５時間後、Ｖ（ＩＩＩ）２，４－ペンタンジオネートは、アニリン化合物（２ａ）への６６％の変換をもたらした（エントリ７）。５時間後、バナジウムオキシトリエトキシドを用いた結果は、バナジウム（ＩＩＩ）アセチルアセトネートと同程度に見えた。バナジウム（ＩＶ）アセチルアセトネート（エントリ２）及びバナジウム担持炭素（エントリ５）によるニトロソ中間体の有意な（１９％）蓄積があった。

【0109】

【表8】

【0110】

２４時間後、バナジウム（ＩＩＩ）ペンタンジオネート及びバナジウム（Ｖ）オキシトリエトキシドは、アニリン化合物（２ａ）への最も高い変換を示した。

【0111】

本発明者らは、バナジウム金属触媒の量を０．１当量から増から１．０当量に増加させ、金属触媒の量が不均化速度に影響を及ぼすかどうかを調べた。さらに、バナジウムの代替源であるＮＨ_３ＶＯ_４を試験した。ＮＨ_３ＶＯ_４は、Ｖ_２０_５と比較してより高い溶解度を有することが分かった。

【0112】

反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ＋（３．７ｍｇ）及びＶ_２０_５（０．１～１．０当量）又はＮＨ_３ＶＯ_４（０．１～１．０当量）を、スターラーバー（ＦｉｓｈｅｒＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に秤量した。４．０ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ７、２５０ｍＭ）及び４６ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１ｍｌのＤＭＳＯ（２０ｖｏｌ％）をチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で１０００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、２４時間後にサンプリングした。

【0113】

【表9】

【0114】

酵素触媒：ニトロレダクターゼ（ＮＲ）及び共溶媒
本発明者は、先の実験において、１０ｖｏｌ％のＤＭＳＯを共溶媒として使用したが、ストック溶液を水性反応条件に添加すると、溶液が濁り、出発物質がＤＭＳＯにあまり溶解しないことを示唆することを見出した。これらの実験では、１０％ＤＭＳＯを用いたＨＰＬＣにより４０％超の変換を与えた酵素を、共溶媒としての１０％トルエン中で試験した。反応の初期段階では、透明な二相系が存在し、水層は透明であった。１時間後、水層は白濁し、一晩振盪した後、溶液は完全に白濁した。

【0115】

反応プロトコル：ＮＲ（５ｍｇ）を２ｍｌエッペンドルフチューブに秤量した。緩衝剤のストック溶液を調製した：ＫＰｉ（２５０ｍＭ、ｐＨ７、グルコース（１００ｍＭ）、ＮＡＤＰ＋（１ｍＭ）、ＧＤＨ（１ｍｇ／ｍｌ^－１）を、トルエン中の基質原液５０μｌ（反応あたり２５ｍＭ）及びストックＶ_２０_５ ５０μｌ（反応あたり２ｍＭ）と共に各酵素（４００μｌ）に添加した。反応物を３５℃で２４時間撹拌した。反応物を１ｍｌのＭｅＣＮで希釈し、ボルテックスし、遠心分離し、１ｍｌのアリコートを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。変換は、２５４ｎｍでの補正されていないＬＣＡＰに基づく。種々のニトロレダクターゼ酵素触媒を用いて１７の反応条件を実施して、化合物（２ａ）を形成した。出発物質の溶解度及び物質移動は、反応を制限すると考えられる。

【0116】

上記の反応条件下で、本発明者らは、他のニロレダクターゼ酵素がアニリン化合物（２ａ）に少なくとも３０％以上の変換を与えることを見出した。

【0117】

４５℃のより高い反応温度での共溶媒スクリーニング：
溶解度を高める１つの方法は、反応をより高い温度で実行することである。ＮＲ－５５は、好熱性生物に由来するキット酵素である。典型的には、これらの酵素は、より高い温度に耐えることができ、より大量の共溶媒に対してより弾力的である。ＮＲ－５５を、ＤＭＳＯ及びトルエン（１０～３０ｖｏｌ％）、ｐＨ７において、４５℃のより高い温度で試験した。混合を助けるために、１０００ｒｐｍの高い撹拌速度を使用して、Ｒａｄｌｅｙのカルーセルを使用して５ｍｌスケールで反応を行った。

【0118】

反応プロトコル：ＮＲ－５５（５０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ＋（３．７ｍｇ）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えた６個のＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。１０ｖｏｌ％共溶媒の場合、４．５ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ７，２５０ｍＭ）をチューブに添加し、４６ｍｇの化合物（３ａ）及び５００μｌのＶ_２０_５（２ｍＭ最終濃度）を含有する０．５ｍｌのＤＭＳＯを添加した。反応混合物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で１０００ｒｐｍで撹拌し、２４時間４５℃に加熱した。次いで、混合物をアセトニトリル５ｍｌで希釈し、撹拌し、遠心分離し、ＨＰＬＣによって分析した。２０及び３０ｖｏｌ％については、それに応じて体積を調整した。

【0119】

表８は、トルエン及び共溶媒としてのＤＭＳＯを４５℃で試験して化合物（２ａ）を形成するために行った６つの反応条件を列挙している。

【0120】

【表10】

【0121】

ＮＲ－５５は、共溶媒としてトルエンを用いた場合、所望のアニリン（２ａ）に対して非常に低い変換率を与えることが見出された（表８、エントリ１～３）。しかし、２０～３０ｖｏｌ％のＤＭＳＯでは、ニトロ化合物（３ａ）は完全に消費され、高レベルのアニリン（２ａ）形成が観察された（２５４ ｎｍでのＬＣＡＰによる８２～８４％、表８、エントリ５及び６）。１０ｖｏｌ％のＤＭＳＯのみを使用した場合、出発物質の１７％が依然として残っており、基質溶解度が反応において重要な役割を果たすことを示唆している。これらの変換はまた、これまでに見られたものよりもはるかに高く、より高い体積の共溶媒、より効率的な撹拌及びより高い温度の組合せが反応に有益であり得ることを示唆している。反応エントリ番号５をさらにＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ×２）で抽出し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、ＨＰＬＣ及びＮＭＲによって再分析して、反応サンプリングが反応混合物の代表であることを確認した。

【0122】

２０％～３０％体積のＤＭＳＯを使用することが成功したことを考慮して、本発明者らは、ＮＲ－５５及びＮＲ－５を、触媒負荷量を減少させ（１０００ｒｐｍ）、ｐＨ７及び８で並行して試験し、反応温度を４５℃に維持した。反応物を５時間後にサンプリングし、次いで２４時間後に再度サンプリングした。

【0123】

反応プロトコル：ＮＲ－５又はＮＲ－５５（１０～５０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、及びＮＡＤＰ＋（３．７ｍｇ）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えた１２個のＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。４ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ７又は８，２５０ｍＭ）をチューブに添加し、４６ｍｇの化合物（３ａ）及び５００μｌのＶ_２０_５（２ｍＭの最終濃度）を含有する１ｍｌのＤＭＳＯを添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル中１０００ｒｐｍで撹拌し、５時間及び２４時間４５℃に加熱した。反応試料Ａ１００μｌアリコート反応試料を採取し、５００μｌのＭｅＣＮを添加し、ボルテックスし、遠心分離し、ＨＰＬＣによって分析した。一部のニトロ化合物（３ａ）が残存していることが確認されたが、ショルダーピークであった。

【0124】

５時間後、ＮＲ－５５は、ＮＲ－５と比較して、好ましくは２ｍｇ／ｍＬの基質負荷速度で出発化合物（３ａ）を消費すると考えられた。

【0125】

以下の反応プロトコルの下で、３５℃のより低い温度をさらに試験した：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（９０ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ^＋（３．７ｍｇ）及びＮＨ_４ＶＯ_３（１当量）を、スターラーバー（Ｆｉｓｈｅｒ ＰＴＦＥ円筒形、１０×６ｍＭ）を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。３．５ｍｌのリン酸緩衝剤（ｐＨ７、２５０ｍＭ）及び４６ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１．５ｍｌ（２０％）ＤＭＳＯを、シリンジポンプ添加によって１．５ｍｌ／時の速度でチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で１０００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、１、２、４及び２４時間後にサンプリングした。

【0126】

反応は３５℃の反応温度で起こることがわかった。６％の化合物（３ａ）が残留していることが見出され、２４時間の反応の終了時に１５％のアゾキシが見出された。

【0127】

緩衝剤試験：
反応は、これまで、最も一般的な緩衝剤の１つであり、スケールアップするのに経済的である、リン酸緩剤中でのみ実施していた。緩衝剤スクリーニングを実施して、いずれかの代替物がより良好な反応ププロファイルを与えるかどうかを調べた。１０の緩衝剤を、２５ｍＭの基質濃度及び様々なｐＨ条件を使用して、１００ｍＭ濃度で並行してスクリーニングした。

【0128】

反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（９６ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ^＋（３．７ｍｇ）及びＮＨ_４ＶＯ_３（１５ｍｇ、１当量）を、スターラーバーを備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に秤量した。３．５ｍｌの緩衝剤（ｐＨ５～１０、１００ｍＭ）及び４６ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１．５ｍｌ（３０％）のＤＭＳＯ。反応物を４５℃に加熱し、２時間後及び２４時間後にサンプリングした。

【0129】

２時間後及び２４時間後に反応試料を採取した。結果を以下の表９及び表１０に示す。

【0130】

【表11】

【0131】

【表12】

【0132】

本発明者らは、２４時間後、ＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤が８９％の化合物（２ａ）生成物、８％のアゾキシ及びわずか４％の出発物質（３ａ）を生成することを見出した（表１０、エントリ６）。酢酸塩及びＰＩＰＥＳ緩衝剤剤、化合物（２ａ）への最も低い変換をもたらした（エントリ１及び２）。ＢＩＣＩＮＥ、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳ及びＣＨＥＳも、２４時間後に化合物（２ａ）への７０％を超える変換で良好に機能した。

【0133】

以下は、本発明の反応に使用された緩衝剤の化学構造である。

【0134】

【表13】

【0135】

本発明者らは、出発物質化合物（３ａ）を流加しながらＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤（１００ｍＭ）中で反応を行った。この反応ではｐＨ制御を使用せず、反応の進行に伴ってｐＨがどの程度低下したか、及びそれが有し得る効果を確認した。

【0136】

反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（３８６ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ^＋（３．７ｍｇ）及びＮＨ_４ＶＯ_３（１当量）を、スターラーバーを備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。３．５ｍｌのＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤（ｐＨ８、１００ｍＭ）及び１８４ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１．５ｍｌ（３０％）ＤＭＳＯを１．５ｍｌ／時の速度でシリンジポンプ添加によってチューブに添加した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で５００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、２、４及び２４時間後にサンプリングした。

【0137】

【表14】

【0138】

１００ｍＭのＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤は、低レベルのアゾキシ形成（２％）をもたらすことが見出された。反応終了時にｐＨを測定し、ｐＨ５．７に低下させた。反応混合物は均質ではなく、溶液からスターラーバー上に沈殿する油性ゴム及びチューブの壁上にいくらかの黄色固体があるように見えた。反応後、反応混合物をバイアルに移し、遠心分離し、水性及びペレットの両方を分析して組成を理解した。さらに、スターラーバーガム及び黄色沈殿物をアセトニトリルに溶解し、ＨＰＬＣによって分析した。懸濁液中の固体は９０％アニリン化合物（２ａ）であることが明らかになった。スターラーバー及びガラスの壁の両方が、より多くのニトロ出発物質（３ａ）を含有し、ガムもまたニトロソ中間体の一部を捕捉していた。

【0139】

２５０ｍＭ強度のＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤中で反応を繰り返し、反応中にｐＨが低下したときにＮａＯＨ（１０Ｍ）を手動で添加し、反応全体を通してｐＨを８に維持した。

【0140】

反応プロトコル：ＮＲ－５５（１０ｍｇ）、グルコース（３８６ｍｇ）、ＧＤＨ－１０１（５ｍｇ）、ＮＡＤＰ^＋（３．７ｍｇ）及びＮＨ_４ＶＯ_３（１当量）を、撹拌棒を備えたＲａｄｌｅｙｓカルーセル管に計量した。３．５ｍｌのＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤（ｐＨ８、２５０ｍＭ）及び１８４ｍｇの化合物（３ａ）を含有する１．５ｍｌ（３０％）ＤＭＳＯを１．５ｍｌ／時の速度でシリンジポンプ添加によってチューブに添加した。１０ＭのＮａＯＨ（約７０μＬ）を使用してｐＨを８に維持した。反応物をＲａｄｌｅｙｓカルーセル内で５００ｒｐｍで撹拌し、４５℃に加熱し、１、３、５及び２４時間後にサンプリングした。

【0141】

２４時間後、ＨＰＬＣ分析により、反応組成物は８４％アニリン化合物２ａ、３％アゾキシ及び４％ニトロであった。壁上に沈殿物が見られ、油性ゴムがスターラーバーに固まっていた。

【0142】

【表15】

【0143】

上記の反応条件に基づいて、本発明者らは、ニトロ芳香族化合物（３ａ）をアニリン化合物（２ａ）に変換するために、ニトロ還元触媒反応を多くの異なる条件下で行うことができることを示した。使用され得る反応条件の変数には、（１）ニトロレダクターゼ酵素、好ましくはＮＲ－５５；（２）反応温度、好ましくは４５℃；（３）溶媒及び溶媒濃度、好ましくは３０ｖｏｌ％ＤＭＳＯ；（５）２ｍｇ／ｍＬ触媒担持率；（６）金属触媒、好ましくはバナジウム金属、例えばＶ_２０_５又はＮＨ_３ＶＯ_４が含まれるが、これらに限定されない。基質添加への供給浴アプローチは、高濃度の可溶性バナジウム金属源と相まって、ヒドロキシルアミン及びニトロソ中間体の蓄積を最小限に抑え、アゾキシ形成の減少をもたらした。これらの副生成物化合物を、（７）緩衝剤、好ましくはＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤を使用することによってさらに還元した。反応は、２ｇ／Ｌの触媒担持率で４０ｇ／Ｌの基質濃度で１ｇスケールで実証された。

【0144】

本発明者らは、限定因子が出発物質の低い溶解度であると考えられ、これがスターラーバー上に粘着性ガムの形成をもたらすため、撹拌機構を含む適切な反応器タイプを使用することによってニトロ還元反応をさらに強化することができることを理解している。したがって、スターラーバー上の粘着性ガムの蓄積を回避するための様々な反応器タイプの使用は、本発明の範囲内であると考えられる。さらに、出発物質の溶解性を助けるための第２の共溶媒、界面活性剤又は深共晶溶媒／イオン液体の使用は、したがって、本発明の範囲内であると考えられる。

【0145】

本発明者らはさらに、ヒドロキシルアミン化合物の不均化速度が、酵素の非存在下でのアゾキシ副生成物の形成を最小限に抑えるための鍵であることを理解している。したがって、ヒドロキシルアミン化合物の不均化速度を最適化するための様々な方法の使用は、本発明の範囲内であると考えられる。

【0146】

本発明者らは、ＴＲＩＣＩＮＥ緩衝剤中の不均化が速く現れることをさらに理解している。したがって、バナジウム金属触媒の使用量を１当量未満に低減することは、本発明の範囲内であると考えられる。

【0147】

本発明者らは、ワンポット反応が長期的に重要であり得ることをさらに理解する。したがって、ニトロレダクターゼ酵素の固定化は本発明の範囲内であると考えられる。

【0148】

次に、本発明を以下の具体的な実施例を参照して説明する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではなく、例示的な方法でのみ機能するものとする。

【0149】

以下の略語は、説明及び添付の特許請求の範囲を通して使用され、それらは以下の意味を有する。

【0150】

「ＡＰ」は面積パーセントを意味し、液体又は気体のクロマトグラムによって測定されるピーク下の面積を指す。ＡＰは、サンプル中の化合物濃度の関数である。以下はＧＣ報告の例であり、％面積は指定された化合物のそれぞれのＡＰを表す：

【0151】

【表16】

【0152】

「Ａｒ」はアリールを意味する。

【0153】

「ｃｍｐ」は１つ以上の化合物を意味する。

【0154】

「ＣＨ_３ＣＮ」又は「ＭｅＣＮ」はアセトニトリルを意味する。

【0155】

「ＣＰＭＥ」はシクロプロピルメチルエーテルを意味する。

【0156】

「ＤＭＡｃ」又は「ＤＭＡ」はジメチルアセトアミドを意味する。

【0157】

「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを意味する。

【0158】

「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味する。

【0159】

「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味する。

【0160】

「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味する。

【0161】

「ｈ」は時間を意味する。

【0162】

「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィを意味する。

【0163】

「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを意味する。

【0164】

「ＩＰＡｃ」は酢酸イソプロピルを意味する。

【0165】

「ＩＰＣ」は工程内制御を意味し、工程開発中に行われる日常点検である。工程内制御の機能は、製品がその仕様に適合することを確実にするための製造工程の監視及び必要に応じた適合である。例えば、目標生成物変換率が９８％である場合、ＩＰＣが失敗すると、より長い保持反応時間又は追加の試薬充填などの手段が実行される。

【0166】

「ＫＦ」はカールフィッシャー滴定値を意味し、カールフィッシャー滴定値は、カールフィッシャー滴定装置によって測定される各分析物中に存在する水の量を決定するために容量滴定又は電量滴定を使用する滴定法である。本明細書に描写される合成経路で使用される化学物質には、例えば、溶媒、試薬、及び触媒が含まれる。上記の方法はまた、最終的に化合物の合成を可能にするために、本明細書に具体的に記載される工程の前又は後に、適切な保護基を付加又は除去する工程をさらに含み得る。所望の化合物を与えるために、様々な合成段階を代替的な順番又は順序で実施し得る。適用可能な化合物を合成するのに有用な合成化学変換及び保護基方法論（保護及び脱保護）は当技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９９）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９４）；Ｌ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）及びその後続版に記載されているものが挙げられる。

【0167】

「ＬＣＭＳ」は液体クロマトグラフィ質量分析を意味する。

【0168】

「ＬｉＣｌ」は塩化リチウムを意味する。

【0169】

「ＭＩＢＫ」はメチルイソブチルケトンを意味する。

【0170】

「ｍｉｎｓ」は分を意味する。

【0171】

「ＭＳＡ」はメタンスルホン酸（ＭｅＳＯ_３Ｈ）を意味する。

【0172】

「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを意味する。

【0173】

「ＮＭＰ」はＮ－メチル－２－ピロリドンを意味する。

【0174】

「Ｐｈ」はフェニルを意味する。

【0175】

「ｐｐｍ」は濃度の単位である百万分率を意味する。

【0176】

「ｒｔ」又は「ＲＴ」は室温を意味する。

【0177】

「ｔｅｍｐ」は温度を意味する。

【0178】

「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味する。

【実施例】

【0179】

実験手順

【化14】

【0180】

実施例１：
工程（ｅ）：エチル（Ｅ）－３－（５－フルオロ－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物４ａ）の調製

【化15】

【0181】

反応手順：不活性容器Ａを窒素ガス下で３回パージした。反応器ジャケット温度を２５±５℃に設定した。アセトニトリル（７．０Ｖ、３４３ｋｇ）を容器Ａに添加し、引き続いてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン／ヒューニッヒ塩基（ＤＩＥＡ）（１．１当量、５２．１ｋｇ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。次いで、ＬｉＣｌ（２．０当量、３１．１ｋｇ）を添加し、混合物を再び１０分間撹拌した。次いで、温度を０℃の内部温度に達するまで冷却した。次いで、内部温度を０℃～５℃に維持しながら、ホスホリル試薬（ＰＲ）エチル２－（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．０５当量、８６．２ｋｇ）を混合物に添加した。温度のゆっくりした上昇が観察され、反応液は白く濁っていた。次いで、反応混合物を内温２５℃に達するまで加熱し、２５℃で３０分間撹拌した。次いで、反応混合物を内部温度０℃に達するまで冷却した。次いで、出発材料化合物５－フルオロ－２－ニトロベンズアルデヒド（化合物５ａ、１．０当量、６２．０ｋｇ）を、内部温度を０℃～５℃の間に維持しながらゆっくりと添加した。温度のゆっくりした上昇が観察され、反応流体は白濁から褐色の透明色に変化した。次いで、反応混合物を内温２５℃に達するまで加熱し、混合物を２５℃で２時間撹拌した。反応流体が褐色から白色に変化することが観察され、これは増粘した。ＨＰＬＣは、出発物質（５ａ）が消費され、約９７．０％（２２０ｎｍ）の生成物エチル（Ｅ）－３－（５－フルオロ－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物４ａ、３．２１６分）が形成されたことを示した。次いで、水（１．０Ｖ、６２．０Ｌ）を混合物に添加し、反応流体は濃い白色から褐色透明に変化した。混合物を１０分間撹拌した。

【0182】

【表17】

【0183】

後処理手順：１０ｋｇのスケール及び６２ｋｇのスケールを後処理のために組み合わせた。メチルターシャリーブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（３．０Ｖ、１６０ｋｇ）を混合物に添加した。２相を分離し、水層をＭＴＢＥ（２．０Ｖ、１２０ｋｇ）で１回抽出した。次いで、有機相を合わせ、飽和ＮＨ_４ＯＡｃ（２．０Ｖ、１６０ｋｇ）で洗浄した。次いで、有機層を約３．０Ｖに濃縮した。

【0184】

蒸留手順：酢酸イソプロピル（ｉＰＡＣ）（１９２ｋｇ）を混合物に添加し、常圧蒸留によって約３．０Ｖに濃縮した。これを２回行い、溶媒交換の完了及び水の除去を確実にした。

【0185】

単離手順：ｎ－ヘプタン（１０Ｖ、４９２ｋｇ）を添加し、混合物を内部温度が－１０℃になるまで冷却した。次いで、混合物を－１０℃で６時間撹拌した。固体を濾過し、濾過ケークをｎ－ヘプタン（２．０Ｖ、９８ｋｇ）で洗浄し、－１０℃まで冷却した。次いで、固体をＮ_２ガス下で乾燥させた。白色固体；（８７．６ｋｇ、純度９９．３％、収率７８．３％；ＱＮＭＲ：９１．８％）。Ｍｐ：５９℃。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ８．１５－８．１０（ｍ，２Ｈ），７．３２－７．２１（ｍ，２Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．

【0186】

実施例２：
工程（ｄ）：エチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物３ａ）の調製

【化16】

【0187】

反応手順：不活性容器Ａを窒素ガス下で３回パージした。反応器ジャケット温度を２５±５℃に設定し、ＤＭＦ（５．０Ｖ、３３７．５Ｌ）を容器Ａに投入し、容器を再び窒素ガスで３回パージした。次いで、出発物質化合物エチル（Ｅ）－３－（５－フルオロ－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物２ａ、１．０当量、６７．５ｋｇ）を添加し、混合物を２０分間撹拌した。Ｃｓ_２ＣＯ_３（１．０当量、８６．５ｋｇ）をゆっくり添加し、反応液が黄色から黒色に変化することが観察された。混合物を２０分間撹拌し、容器を再び窒素ガス下で３回パージした。チオール試薬（ＴＲ）化合物フェニルメタンチオール（１．０当量、３３．６ｋｇ）を混合物にゆっくり添加し、発熱反応のために温度がゆっくり上昇した。混合物を１０分間撹拌し、ＫＦ（ＫＦ：０．１２％）によって確認した。次いで、混合物を内温７５℃に達するまで加熱し、７５℃で１２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、出発物質である化合物（４ａ）が消費され（３．２１６分）、約９２．６％の生成物（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物（３ａ）、４．１３９分）が形成されたことを示した。次いで、水（５．０Ｖ、３３７．５Ｌ）を添加し、反応流体が濃い白色から褐色透明に変化することが観察された。次いで、混合物を１０分間撹拌した。

【0188】

【表18】

【0189】

後処理手順：２０ｋｇのスケール及び６７．５ｋｇのスケールを後処理のために組み合わせた。メチルターシャリーブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（５．０Ｖ、６７５Ｌ）を混合物に添加した。２相を分離し、水層をＭＴＢＥ（３．０Ｖ、４０５Ｌ）で１回抽出した。次いで、有機相を合わせ、水（５．０Ｖ、６７５Ｌ）で洗浄した。次いで、有機層を約３．０Ｖに濃縮した。

【0190】

蒸留手順：酢酸イソプロピル（ＩＰＡＣ）（１９２ｋｇ）を混合物に添加し、加熱によって約３．０Ｖに濃縮した。

【0191】

単離手順：ｎ－ヘプタン（９．０Ｖ、１２１５Ｌ）を添加し、混合物を２５℃で６時間撹拌した。固体を濾過し、濾過ケークをｎ－ヘプタン（２．０Ｖ、２７０Ｌ）で洗浄した。次いで、固体をＮ_２ガス下で乾燥させた。黄色固体；１０２ｋｇ、純度９７．２％、収率８６．０％）。Ｍｐ：７３℃。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ８．１１（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９－７．２７（ｍ，７Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．２５（ｓ，２Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．

【0192】

実施例３ａ：
工程（ｃ１）：鉄及びＮＨ_４Ｃｌ還元によるエチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物２ａ）の調製

【化17】

【0193】

３つの反応を並行して行った。（３４．０ｋｇ×３）

【0194】

反応手順：不活性容器温度を含む反応器ジャケットを２５±５℃に設定した。ＥｔＯＨ（４．０Ｖ、１３６Ｌ）を容器に投入した。次いで、水（２．０Ｖ、６８．０Ｌ）を容器に添加し、続いてＮＨ_４Ｃｌ（５．０当量、２６．５ｋｇ）を添加した。次いで、混合物を１０分間撹拌した。次いで、Ｆｅ^０（３．０当量、１６．６ｋｇ）をゆっくり添加し、混合物を１０分間撹拌した。次いで、混合物を内部温度７０℃に達するまで加熱した。内部温度を約７０℃～８０℃に維持しながら、出発物質エチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物３ａ、１．０当量、３４．０ｋｇ）を３時間かけて小分けで添加した。温度上昇は遅かった。混合物を８０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、出発物質である化合物（３ａ）が消費され、約９３．６％の生成物であるエチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物（２ａ）、３．７６２分）が形成されたことを示した。次いで、反応混合物を、内部温度が３０℃に達するまで冷却した。表１５は、反応により、高純度で８２％及び８２．５％の収率の化合物（２ａ）が得られたことを示す。

【0195】

【表19】

【0196】

後処理手順：上記で行われた３つの反応を後処理のために組み合わせた。次いで、ＥｔＯＡｃ（３．０Ｖ、１０２Ｌ）を添加し、次いで、反応混合物を３０分間撹拌した。次いで、懸濁液をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）パッドで濾過し、濾過ケークを酢酸エチル（６．０Ｖ、２０４Ｌ）で洗浄した。有機相を合わせ、水（２．０Ｖ×２、１９０Ｌ×２本）で洗浄し、ＫＦによって確認した。（ＫＦ：６．６０％）．酢酸イソプロピルもまた、ＥｔＯＡｃに代わる溶媒として使用した。

【0197】

単離工程：結晶化手順上記の後処理工程から得られた固体をｎ－ヘプタン（９．０Ｖ、８５７Ｌ）でさらに洗浄した。次いで、混合物を内部温度が６０℃に達するまで加熱し、６０℃で１時間撹拌した。次いで、混合物を内部温度２５℃まで冷却し、２５℃で１２時間撹拌した。次いで、固体を濾過し、濾過ケークをｎ－ヘプタン（２．０Ｖ、１９０Ｌ）で洗浄した。次いで、固体をＮ_２ガス下で乾燥させた。黄色固体（８１．０ｋｇ、純度９８．７％、収率８２．５％、ＱＮＭＲ ９２．６％）。Ｍｐ：９１^ｏＣ。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．６９（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３０－７．１１（ｍ，７Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．９４（ｓ，２Ｈ），１．３４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）．

【0198】

【表20】

【0199】

実施例３ｂ：
工程（ｃ２）：酵素還元によるエチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物２ａ）の調製

【化18】

【0200】

Ｔｒｉｃｉｎｅ緩衝剤の調製：３３０ｍＭｏｌのＴｒｉｃｉｎｅ緩衝剤を、５４ｇのトリシン及び９００ｍｌの水を使用して調製した。ｐＨを１０ＮのＮａＯＨでｐＨ＝８．０に調整した。

【0201】

化合物（２ａ）及び（２ａ－ＨＣｌ塩）の調製：
５００ｍｌフラスコに、出発物質である化合物（３ａ）、２５．００ｇ、６６．０８ｍＭｏｌ、９５質量％）及びＤＭＳＯ（７．５ｍｌ／ｇ、２６４０ｍＭｏｌ、１００質量％）を添加した。混合物を３０分間撹拌して、全ての固体を溶解した。

【0202】

別の１Ｌ反応器に、メタバナジン酸アンモニウム（１．００当量、６６．０８ｍＭｏｌ、１００質量％）、ＮＲ－５５酵素（０．１０ｇ／ｇ、１００質量％）、デキストロース（４．５当量、２９７．４ｍＭｏｌ、１００質量％）、ＧＤＨ－１０１（０．０２５ｇ／ｇ、１００質量％）、β－ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸二ナトリウム塩（０．０４０ｇ／ｇ、１．２４５ｍＭｏｌ、９８質量％）、及び４４０ｍｌの上記トリシン緩衝剤（１７．５体積、ｐＨ＝８．０、３３０ｍＭｏｌ）を添加した。反応器を約４０℃～４５℃に加熱し、次いで、基質のＤＭＳＯ溶液を、シリンジポンプを使用して１．５時間にわたってゆっくり添加した。添加が完了すると、反応のｐＨを確認し、ｐＨ＝６．５であることが分かった。次いで、１０ＮのＮａＯＨを使用してｐＨを８．０に調整した。ＩＰＣのためにサンプルを採取した。一晩８８％変換。

【0203】

次いで、さらなるβ－ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸二ナトリウム塩（０．０１ｇ／ｇ、０．３１１２ｍＭｏｌ、９８質量％）及びＧＤＨ－１０１（０．０１ｇ／ｇ、１００質量％）を反応混合物に添加し、撹拌をさらに４８時間続けた。次いで、反応混合物を濾過して粗黄色固体を得た。

【0204】

後処理及び単離手順：溶液を濾過し、水で洗浄した。粗固体を４５℃で１５体積のメチルＴＨＦを用いて一晩スラリー化した。次いで、スラリーをＣＥＬＩＴＥで濾過し、油状物に濃縮した。次いで、油を２０体積のメチルＴＨＦで希釈し、ＣＰＭＥ（１．５当量、９９．１２ｍＭｏｌ、３ｍｏｌ／Ｌ）中のＨＣｌを室温で添加した。次いで、混合物を２時間撹拌し、次いで、濾過し、メチルＴＨＦ、次いでＭＴＢＥで洗浄した。２１．１ｇの化合物（２ａのＨＣｌ塩）を単離した。１００ｗｔ％。９９．２８ＡＰ。収率９１．５％。Ｍｐ：１５５℃。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ）δ ９．４１（ｓ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），７．３６－７．２０（ｍ，７Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），（ｍ，５Ｈ），４．２７（ｓ，１Ｈ），４．２０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），（ｓ，１Ｈ），１．２７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．

【0205】

実施例４：
工程（ａ）＋（ｂ）：エチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ヨードフェニル）アクリレート（化合物１ａ）の調製

【化19】

【0206】

反応手順：不活性容器Ａを窒素ガス下で３回パージした。反応器ジャケット温度を２５±５℃に設定した。酢酸イソプロピル（１５．０Ｖ、８２５Ｌ）を容器Ａに仕込んだ。次いで、出発物質エチル（Ｅ）－３－（５－（ベンジルチオ）－２－ニトロフェニル）アクリレート（化合物（２ａ）、１．０当量、５５．０ｋｇ）を加えた後、ＨＣｌ（１．５Ｍ、５．０当量、５８５Ｌ）を加えた。次いで、混合物を２０分間撹拌し、反応流体が透明な黄色から黄色の濁りに変化することが観察された。次いで、混合物を０℃～５℃の内部温度に達するまで冷却した。ＮａＮＯ_２（２．０当量、２４．２ｋｇ）を含むＨ_２Ｏ（１．０Ｖ、５５．０Ｌ）を、内部温度０℃～５℃でゆっくりと添加し、一方、内部温度はゆっくりと上昇した（発熱）。混合物を０℃～５℃で２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、出発物質である化合物（２ａ）が消費されたことを示した。

【0207】

次いで、水（１．０Ｖ、５５．０Ｌ）中のＫＩ（２．５当量、７２．６ｋｇ）を、温度を０℃～５℃の間に維持しながら混合物にゆっくり添加し（わずかな発熱）、反応流体が黄色の濁りから褐色の透明に変化することが観察された。次いで、反応混合物を０℃～５℃の内部温度で５時間撹拌した。第２のＨＰＬＣは、約８９．８％の生成化合物（１ａ）が４．３６８分で形成されたことを示した。次いで、水中のＫ_３ＰＯ_４（５０．０％、５．０Ｖ、２７５Ｌ）溶液を添加して、反応混合物を０℃～５℃の内部温度でクエンチして、見かけのｐＨ＝１０を達成した。（緩やかな温度上昇）。

【0208】

別個の反応では、実施例３ｂの化合物（２ａ ＨＣｌ塩）生成物を実施例４の出発物質として、２ａと同じ反応条件下で使用した。

【0209】

【表21】

【0210】

【表22】

【0211】

後処理手順：（２ａ）スケール調製物５５．０ｋｇ及び１３．０ｋｇを後処理のために合わせた。

【0212】

反応物を亜硫酸水素ナトリウム（２．５当量、３．０Ｖ、１６５Ｌ）でクエンチした。（注：Ｎａ－チオ硫酸塩ではなくＮａ－重亜硫酸塩の使用は、後処理における元素状硫黄の形成を防止するのに重要である）。次いで、混合物を内部温度２５℃に達するまで加熱し、２５℃で３０分間撹拌した。層を分割し、有機相を水（５Ｖ、２７５Ｌ）で洗浄した。

【0213】

蒸留手順：有機相を約３Ｖ ＥｔＯＡｃまで蒸留した。次いで、混合物を内部温度が５０℃～５５℃に達するまで加熱し、メタノール（１２Ｖ、８１６Ｌ）を添加した。次いで、混合物を３０分間撹拌し、内部温度２５℃まで冷却した。次いで、混合物を２５℃で３時間撹拌した。次いで、混合物を内部温度０℃に達するまで冷却し、１２時間撹拌した。

【0214】

単離手順：混合物を濾過し、上記の蒸留工程から得られた固体を濾過し、濾過ケークをＭｅＯＨ（２．０Ｖ、１３６Ｌ）でさらに洗浄した。次いで、固体をＮ_２ガス下で乾燥させた。褐色固体；（５６．０ｋｇ；９９．０％純度；収率６６．２％）。Ｍｐ：７９℃。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．７９（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），
７．３２－７．２３（ｍ，５Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１０（ｓ，１Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．

【0215】

精製工程：粗生成物（純度８９．０％）。粗生成物を、５８℃に加熱し、０℃に冷却し、固体生成物を０℃で濾過することによって、ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（４：１）１０体積の混合物中で再スラリー化した。

【0216】

【表23】

【0217】

上記の発明は、明確化及び理解のために、例示及び例によってある程度詳細に説明されている。当業者は、変更及び修正が、添付の特許請求の範囲の範囲内で行われ得ることを理解している。したがって、上の記述は、例示であることが意図され、限定的なものではないことを理解されたい。したがって、本発明の範囲は、上の記載を参照して決定されるべきではなく、その代わりに、以下の添付の特許請求の範囲を、そのような特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに参照して決定されるべきである。

【0218】

本明細書に引用された全ての特許、特許出願、及び刊行物は、それぞれの個々の特許、特許出願、又は刊行物がそのように個別に示されているのと同じ程度に、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【手続補正書】

【提出日】2024-04-17

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（１）：

【化1】

（式中、
Ｘはハロ、ＣＮ、ＣＦ_３、又はＯＨであり；
Ｒ^１は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル；５、６、７、８、９又は１０員のアリール又はヘテロアリール；又は３、４、５、６、７、８、９若しくは１０員のシクロアルキル又はヘテロシクロアルキル基であり；
ここで、ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル基は、Ｏ、Ｎ又はＳから独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有することができ；
又は、シクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基中の炭素原子は、Ｃ＝Ｏ基の一部であってもよく；
Ｒ^２は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル又はベンジルから選択される）
を有する化合物又はその薬学的に許容される塩の調製プロセスであって、
（ａ）式（２）の化合物：

【化2】

（式中、前記Ｒ^１及びＲ^２は、化合物（１）において上に定義される通りである）を、溶媒－１中、亜硝酸塩の存在下で、酸ＨＡと接触させることと、
（ｂ）ハロゲン化剤、シアネート化剤、トリフルオロメチル化剤又はヒドロキシル化剤を、場合により溶媒－２の存在下で導入して、前記化合物（１）を形成することと
を含み；前記溶媒－１及び溶媒－２は、同一であっても異なっていてもよく、
前記化合物（２）が、パラジウム触媒を含まない方法で調製される、プロセス。

【請求項2】

前記化合物（２）を調製することをさらに含み、
（ｃ１）極性溶媒中、酸性塩ＨＡ^１の存在下で金属を活性化することと、式（３）の化合物：

【化3】

（式中、前記Ｒ^１及びＲ^２は、化合物（１）において上に定義される通りである）
を、前記活性化された金属と極性溶媒中で高温で接触させ、前記化合物（２）又はその塩を形成することと
を含むか；
又は、代替的に、前記化合物（２）を調製することをさらに含み、
（ｃ２）前記式（３）の化合物を、場合により共溶媒の存在下で、水性緩衝溶液中で酵素還元剤と、少なくとも１つの触媒及び補助因子の存在下で反応させ、前記式（２）の化合物又はその塩を形成すること
を含む、請求項１に記載のプロセス。

【請求項3】

（ｃ１）極性溶媒中、酸性塩ＨＡ^１の存在下で金属を活性化することと、前記式（３）の化合物を前記活性化金属と高温で極性溶媒中で接触させ、前記化合物（２）又はその塩を形成することと
を含む、請求項２に記載のプロセス。

【請求項4】

（ｃ２）共溶媒の存在下で、水性緩衝剤中で酵素還元剤と、金属触媒、共触媒及び補助因子の存在下で、前記式（３）の化合物を接触させ、前記式（２）の化合物又はその塩を形成すること
を含む、請求項２に記載のプロセス。

【請求項5】

前記化合物（３）又はその塩を調製することをさらに含み、
（ｄ）式（４）の化合物：

【化4】

（式中、Ｘ_１はハロであり；前記Ｒ^１は、化合物（３）において上に定義される通りである）
を、塩基の存在下、有機溶媒中、高温でチオール剤と接触させ、化合物（３）又はその塩を形成すること
を含む、請求項２に記載のプロセス。

【請求項6】

前記化合物（４）を調製することをさらに含み、
（ｅ）式（５）の化合物：

【化5】

（式中、Ｘ_１は化合物（４）で定義されるハロである）を、アルケン化剤と接触させ、塩基の存在下、有機溶媒中で、前記化合物（４）又はその塩を形成すること
を含む、請求項５に記載のプロセス。

【請求項7】

（ａ）において、
（ｉ）前記酸ＨＡが、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、ｐ－ＴｓＯＨ又はＨ_２ＳＯ_４であるか；又は
（ｉｉ）前記溶媒－１は、水、ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、ＣＨ _３ ＣＮ、又は（Ｃ _１ ～Ｃ _６ ）酢酸アルキル溶媒、又はそれらの混合物である、
請求項１～６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項8】

（ｂ）において、
（ｉ）前記ハロゲン化剤が、ハロゲン化金属塩であり；前記シアン化剤がＣｕＣＮであり；前記トリフルオロメチル化剤がＣｕＣＦ_３であり；前記ヒドロキシル化剤がＣｕ_２Ｏ／Ｃｕ（ＩＩ）であるか；又は
（ｉｉ）前記溶媒－２が、水、ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、ＣＨ _３ ＣＮ、又は（Ｃ _１ ～Ｃ _６ ）アルキルアセテート溶媒、又はその混合物である、
請求項１～７のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項9】

（ｃ１）において、
（ｉ）前記金属が、Ｆｅ^ｏ、Ｚｎ^ｏ、Ｐｄ^ｏ、Ｐｔ^ｏ、Ｒｕ^ｏ、又はＲｈ^ｏから選択されるか；
（ｉｉ）前記酸性塩ＨＡ ^１ が、塩化アンモニウム、酢酸、又はＨＣｌであるか；又は
（ｉｉｉ）前記極性溶媒が、水、（Ｃ _１ ～Ｃ _６ ）アルキルアルコール、又はそれらの混合物である、
請求項２～３及び５～８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項10】

（ｃ２）において、
（ｉ）前記共溶媒が、ＤＭＳＯ又は水／ＤＭＳＯ混合物から選択されるか；
（ｉｉ）前記緩衝剤が、リン酸塩、ＰＩＰＥＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ、ＢＩＣＩＮＥ、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳ、ＴＥＳ、ＣＡＰＳ、Ｋｐｉ又はＣＨＥＳから選択されるか；
（ｉｉｉ）前記酵素還元剤がニトロレダクターゼ酵素であるか；
（ｉｖ）前記触媒が金属触媒及び共触媒であり；前記金属触媒が、Ｖ _２ ０ _５ 、ＮＨ _３ ＶＯ _４ 、Ｖ（ＩＶ）オキシドフタロシアニン、Ｖ（ＩＶ）オキシドビス（２，４－ペンタンジオネート）、バナジル硫酸水和物、Ｖ（Ｖ）オキシトリエトキシド、３％Ｖ／Ｃ、又はＶ（ＩＩＩ）２，４－ペンタンジオネートから選択されるバナジウム触媒であるか；
（ｖ）前記反応が、ｐＨ７又はｐＨ８の間で行われるか；又は
（ｖｉ）（ｃ２）の前記生成物が、ＨＣｌ塩若しくはＨＢｒ塩から選択されるハロゲン化物塩、又はメシル酸塩、トシル酸塩若しくはアリールスルホン酸塩から選択されるスルホン酸塩から選択される塩である、
請求項２及び４～８のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項11】

（ｄ）において、
（ｉ）化合物（４）及び（５）のそれぞれにおける前記Ｘ_１が、フルオロ又はクロロであるか；
（ｉｉ）前記塩基が、炭酸塩又はリン酸塩であるか；
（ｉｉｉ）前記有機溶媒が、ＤＭＦ、ＤＭＡｃ又はＮＭＰから選択されるか；又は
（ｉｖ）反応が低含水量条件下で行われ、過剰なチオール剤が使用されない、
請求項５～１０のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項12】

（ｅ）において、
（ｉ）化合物（４）及び（５）のそれぞれにおける前記Ｘ_１が、Ｆ又はＣｌであるか；又は
（ｉｉ）前記有機溶媒が、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ _３ ＣＮ、ＴＥＡ、Ｎ－メチルモルホリン、又はその混合物から選択される、
請求項６～１１のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項13】

化合物（１）中のＸがヨードである、請求項１～１２のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項14】

化合物（１）及び（２）のそれぞれにおけるＸ_１がフルオロ又はクロロである、請求項１～１３のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項15】

化合物（１）、（２）、（３）及び（４）のそれぞれにおけるＲ^１がメトキシ又はエトキシである、請求項１～１４のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項16】

化合物（１）、（２）及び（３）のそれぞれにおけるＲ^２がベンジルである、請求項１～１５のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項17】

前記式（１）の化合物を形成するために、以下の順序：
Ａ）工程（ｅ）；工程（ｄ）；工程（ｃ１）又は（ｃ２）；その後に工程（ａ）＋（ｂ）；
Ｂ）工程（ｄ）；工程（ｅ）；工程（ｃ１）又は（ｃ２）；その後に工程（ａ）＋（ｂ）；又は
Ｃ）工程（ｄ）；工程（ｃ１）又は（ｃ２）；工程（ｅ）；その後に工程（ａ）＋（ｂ）で行われる、請求項１～１６のいずれか一項に記載のプロセス。

【請求項18】

【化6】

（式中、Ｒ^１はエチルであり、Ｒ^２はベンジルである）である化合物、又はその塩。

【国際調査報告】