特表 2024-531342 アデノシンキナーゼを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-29

(54)【発明の名称】アデノシンキナーゼを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20240822BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240822BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240822BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z ZNA

A61K48/00

A61K31/7105

A61P25/04

A61P25/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024509397

(86)(22)【出願日】2022-08-19

(85)【翻訳文提出日】2024-04-11

(86)【国際出願番号】 EP2022073188

(87)【国際公開番号】W WO2023021184

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】PA202170418

(32)【優先日】2021-08-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】DK

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523355791

【氏名又は名称】ニューミルナ セラピューティクス エーピーエス

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】カウッピネン，マルカス サカリ

(72)【発明者】

【氏名】ペダーセン，リッケ

(72)【発明者】

【氏名】ハンセン，スタイン ノーマン

(72)【発明者】

【氏名】クリットガード，ヘンリク ヴァルデマー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA06

4C084ZA08

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA06

4C086ZA08

(57)【要約】

【課題】
ある範囲の神経学的疾患、たとえば癲癇又は神経因性痛の処置に有用であるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【解決手段】
本発明は、アデノシンキナーゼｐｒｅ－ｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を提供する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた組成物及び神経学的疾患の処置方法が提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アデノシンキナーゼ転写物内の核酸配列に相補的な１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む治療用ＲＮＡ化合物。

【請求項2】

前記アデノシンキナーゼ転写物が配列番号１である、請求項１に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【請求項3】

前記化合物がＡＤＫｐｒｅ－ｍＲＮＡ（配列番号１）に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの親和性増強用ヌクレオチドアナログを有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート連結、ホスホジエステル連結、ホスホトリエステル連結、メチルホスホネート連結、又はホスホルアミデート連結のいずれかから選択される少なくとも１つのヌクレオシド間連結を含む、請求項１又は２に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【請求項4】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡＤＫ－Ｌ及びＡＤＫ－Ｓ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの両方に相補的である、請求項３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項5】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡＤＫ－Ｌ及びＡＤＫ－Ｓの発現をダウンレギュレートたとえばノックダウンする能力がある、請求項３又は４に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項6】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが１４～２０ヌクレオチド長の配列を含む、請求項３～５）のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項7】

前記親和性増強用ヌクレオチドアナログが、ＬＮＡ、トリシクロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’環状エチル（ｃＥＴ）、ＵＮＡ、２’－フルオロ及びコンフォメーショナル制限ヌクレオシド（ＣＲＮ）のリストから選択される、請求項３～６のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項8】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも１つのＬＮＡを含む、請求項３～７のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項9】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号１６４～２０５の１つに相補的である、請求項３～８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項10】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号８３～１６１のいずれか１つを含む又はそれからなる、請求項３～９のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項11】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号２～８０のいずれか１つである、請求項３～８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項12】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号４、配列番号１２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３７、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、又は配列番号８０のいずれか１つから選択される、請求項３～８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項13】

すべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであり、すべての修飾ヌクレオチドがＬＮＡたとえばベータ－ｄ－オキシＬＮＡであり、ＬＮＡシトシンが５－メチルシトシンである、請求項１０～１２のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項14】

細胞における又は個体における、たとえばヒト又は哺乳動物におけるＡＤＫ Ｌ／ＳなどのＡＤＫの発現を低減又はノックダウンする使用のための、請求項１若しくは２に記載の治療用ＲＮＡ化合物又は請求項３～１３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項15】

前記化合物が医薬剤としての使用のためのものである、請求項１若しくは２に記載の治療用ＲＮＡ化合物又は請求項３～１３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項16】

前記化合物が、ＣＮＳ又はＰＮＳ疾患の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、回復、先制処置、又は予防での使用のためのものである、請求項１若しくは２に記載の治療用ＲＮＡ化合物又は請求項３～１３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項17】

前記化合物が、癲癇又は神経因性痛の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、回復、先制処置、又は予防での使用のためのもの、癲癇又は神経因性痛の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置での使用のためのものである、請求項１若しくは２に記載の治療用ＲＮＡ化合物又は請求項３～１３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、アデノシンキナーゼを標的とする新規アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を提供する。この化合物は、癲癇又は神経因性痛などの神経学的疾患の処置に有用である。

【背景技術】

【0002】

背景
癲癇は、重篤な再発性自発性発作により特徴付けられる慢性神経学的障害であり、全世界で約５０００万人が罹患している。

【0003】

現在利用可能な抗癲癇薬剤は、患者の３分の２で発作を抑制するが、おそらく根底にある病理生理学的機能には影響を及ぼさない。癲癇患者の残りの３分の１は、薬剤抵抗性であるか又は現在利用可能な薬剤から重篤な副作用を受けるかのどちらかである。脳手術、迷走神経刺激、頭蓋内刺激、及びケト原性食事は、薬剤処置の十分な効果が得られない患者において発作を回避する代替手段となるが、限られた数の薬剤抵抗性癲癇患者にのみ利用可能であるにすぎず、そのため、大多数は、効能のある処置選択肢のない状態が継続する。

【0004】

癲癇の発生は、なかでもとくに、イオンチャネル及びニューロトランスミッターレセプターの発現改変、シナプティックリモデリング、炎症、グリオーシス、並びにニューロナル死が関与していると考えられる。しかしながら、細胞及び分子機序についての我々の理解は、不完全なままである。切除手術を除いて、癲癇を防止、修飾、又は治癒（「抗癲癇原性剤」）する処置は、まったく存在しない。同様に、癲癇重積ステータス（ＳＥ）又は脳損傷や癲癇の原因になる可能性の高い脳傷害たとえば脳卒中や外傷に続く後天性癲癇に対するかかる処置は、まったく存在しない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

したがって、癲癇、神経因性痛、及び脳損傷の原因になる可能性の高い他の神経学的傷害が発生するプロセスを特異的に標的とするとともに以上に挙げた問題のいくつかを克服する処置又は防止手段に対する高いニーズが満たされないまま存在する。

【課題を解決するための手段】

【0006】

アデノシン及びアデノシンキナーゼ
アデノシンは、脳の十分に特徴付けられた内因性抗痙攣剤及び発作ターミネーターである。アデノシンは、発作発生（発作原性）、癲癇の発生及びその進行（癲癇原性）に影響を及ぼす。アデノシン代謝の不適応性変化、特定的にはアストログリアル酵素アデノシンキナーゼ（ＡＤＫ）の発現増加は、癲癇原性でメジャーな役割を果たす。（Weltha et al, 2019, The role of adenosine in epilepsy, Brain Res Bull 2019 September, page 1-22.）

【0007】

ＡＤＫは、プリンヌクレオシドアデノシンの細胞内及び間質内濃度をレギュレートする際に中心的な役割を果たし、このことから効力のある心保護及びニューロン保護効果を呈する。アデノシンキナーゼの発現は、癲癇性発作又は脳卒中の後に脳内で迅速協調変化を受けて、アデノシンの急性サージをもたらし、このことから脳への損傷を最小限に抑える働きをする。Ｎ末端の異なる２つのＡＤＫアイソフォームが哺乳動物細胞で発現される。ロングアイソフォーム（ＡｄＫ－Ｌ）は、ＡｄＫ－ショート（ＡｄＫ－Ｓ）アイソフォームの最初の４つのアミノ酸の代わりにエキストラ２０～２１アミノ酸を含有する。ＡｄＫ－ＬのＮ末端伸長は、核局在化シグナルとして機能する。そのため、２つのアイソフォームのうち、ＡｄＫ－Ｌは核を標的とし、一方、ＡｄＫ－Ｓは細胞質に限局される。（Cui et al,2011,Molecular Characterization of Chinese Hamster Cells Mutants Affected in Adenosine Kinase and Showing Novel Genetic and Biochemical Characteristics,BMC Biochemistry 2011.）

【0008】

さらに、ＡＤＫ発現のディスレギュレーション及びその結果としてのアデノシンホメオスタシスの破壊は、広範にわたる神経学的及び神経精神医学的病理に関係する。脳では、ＡＤＫは、アストロサイトで主に発現され、アストログリアルＡＤＫは、癲癇発作の予測及び防止のための有望な標的である。アストログリオーシス及びＡＤＫの関連過剰発現はまた、側方液パーカッション傷害により誘発される重篤な外傷性脳傷害（ＴＢＩ）のラットモデルでも同定されてきた。さらに、ＡＤＫ発現レベルは、脳卒中の影響に対する脳の脆弱性をクリティカルに決定する。睡眠及び睡眠の強度もまた、アデノシン及びそのレセプターアゴニストにより増強され、一方、カフェインやテオフィリンなどのアンタゴニストは、覚醒を誘発する。Boisonらによれば、ＡＤＫの過剰発現と認知障害との関連は、ＡＤＫの過剰発現が確認されているか（癲癇）又は推測されているか（アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症）のどちらかである神経学的病態に対する病理学的関連付けとなりうる。統合失調症のアデノシン仮説は、アデノシンシグナリングの機能減退が統合失調症の病理生理学的機能に寄与しうると仮定する。糖尿病では、アデノシンホメオスタシスは、いくつかの組織でクリティカルに改変される。

【0009】

さらに、アデノシンレセプターシグナリングのホメオスタシスは、炎症のレギュレーション及び炎症促進性サイトカインの放出に決定的に重要である。また、アデノシンレセプターシグナリングのホメオスタシスは、ＩＢＤで慢性炎症性反応に対してクリティカルに有意である。癌でのアデノシン／ＡＤＫレギュラトリー系の役割は、癌のタイプに依存しうる。ＡＤＫ活性は、肝腫細胞で低減することが見いだされたことから、アデノシンの増加は、肝癌に対して選択有利性を提供しうることが示唆される。（Boison et al.,2013,Adenosine Kinase:Exploitation for Therapeutic Gain,Pharmacol Rev 65:906-943,July 2013.）

【0010】

アデノシンレセプター
阻害性アデノシンＡ１レセプターの活性化は、癲癇、慢性疼痛、及び脳虚血に有益であり、促進性Ａ２Ａレセプターの阻害は、強いニューロン保護作用を有する。（Boison et al,2008,Adenosine as a neuromodulator in neurological diseases,Curr Opin Pharmacol,2008 February.）

【0011】

アデノシンは、最も豊富な阻害性アデノシンＡ１レセプター（Ａ１Ｒ）及びそれほど豊富でないが広範にわたる促進性Ａ２ＡＲを介して作動するニューロモジュレーターである。Ａ１Ｒは、グルタメート放出を減少させニューロンを過分極するので、ニューロン保護に主要な役割を果たすと通常仮定される。（Rodrigo A.Cunha,2005,Neuroprotection by adenosine in the brain:From A1 receptor activation to A2A receptor blockade,Purinergic Signalling(2005)1:111-134.）

【0012】

アデノシンキナーゼを阻害することにより又は髄腔内選択的Ａ３ＡＲアゴニストでＡ３ＡＲを活性化することにより脊髄でのＡ３ＡＲシグナリングを回復すると、化学療法誘発神経因性痛（ＣＩＮＰ）の確立が防止される。（Wahlman et al,2018,Chemotherapy-induced pain is promoted by enhanced spinal adenosine kinase levels via astrocyte-dependent mechanisms,Pain.2018 Jun;159(6):1025-1034..）

【0013】

癲癇、ニューロン保護、及び精神医学的障害
アデノシンは、抗痙攣及びニューロン保護作用を有する。（Patodia et al,2020,Adenosine kinase and adenosine receptors A1R and A2AR in temporal lobe epilepsy are involved with hippocampal sclerosis and an association exists with risk factors for SUDEP,Epilepsia,page 787-797.）

【0014】

アデノシンキナーゼインヒビターを用いた局所アデノシン増強療法は、動物モデル及び各種病因の難治性癲癇患者から切除されたヒト脳組織の両方で発作の低減に有効であることが証明されている。発作を低減することに加えて、アデノシン増強療法はまた、休眠、認知、又は鬱のような併存症を緩和することも可能である。ＡＤＫが低減されたトランスジェニックマウスは、急性脳傷害により誘発される癲癇原性に対して抵抗性があった。（Wang et al, 2020, Role of Adenosine Kinase Inhibitor in Adenosine Augmentation Therapy for Epilepsy: A Potential Novel Drug for Epilepsy, Current Drug Targets, abstract.）

【0015】

Boison et al.2006によれば、アデノシンは、ニューロン保護及び抗痙攣の性質を有する脳の活動の阻害性モジュレーターである。そのため、アデノシンの細胞ベース送達は、癲癇及び脳卒中の新規な療法としてかなり有望視されている。（Boison et al,2013,Adenosine kinase,epilepsy and stroke:mechanisms and therapies,Trends Pharmacol Sci,Abstract.）アデノシンキナーゼはまた、神経精神医学的疾患に関連する成人期の挙動を媒介する発生的役割も果たす。（Osborne et al,2018,Developmental role of adenosine kinase for the expression of sex-dependent neuropsychiatric behaviour,Neuropharmacology,2018 Octoberds Pharmacol Sci,Abstract）統合失調症、自閉症、ＡＤＨＤ

【0016】

アデノシンキナーゼの薬理学的阻害によるアデノシンの増強は、マウスにおいて抗精神病様活性を発揮することが、Hai-Ying Shen et al 2012による試験で分かった。さらに、トランスジェニックマウスにおけるＡＤＫの過剰発現は、統合失調症に関連する注意障害に関連付けられた。（Hai-Ying Shen et al 2012,Adenosine augmentation ameliorates psychotic and cognitive endophenotypes of schizophrenia,J Clin Invest,page 2567-2577.）

【0017】

疼痛
Otsuguro et al.2015によれば、アデノシンキナーゼインヒビターは、疼痛を抑制するための潜在的候補である。（Otsuguro et al,.2015,An adenosine kinase inhibitor,ABT-702,inhibits spinal nociceptive transmission by adenosine release via equilibrative nucleoside transporters in rat,neuropharmacology volume 97,abstract.）アデノシンキナーゼのインヒビターは、組織興奮性亢進部位で阻害性ニューロモジュレーターアデノシンの細胞外濃度を増強し、疼痛及び炎症の動物モデルにおいて抗侵害受容作用を生じる。さらに、アデノシンキナーゼインヒビターは特異的抗痛覚過敏作用を生じる。（Jarvis et al,2002,Comparison of the ability of adenosine kinase inhibitors and adenosine receptor agonists to attenuate thermal hyperalgesia and reduce motor performance in rats,Pharmacology Biochemistry and Behavior vol 73,abstract.）

【0018】

アデノシンキナーゼインヒビターは、痛覚のさまざまな動物モデルにおいて抗侵害受容活性を示しており、新規アデノシンキナーゼインヒビターＡ－１３４９７４は、触覚性アロディニアを強力に低減する。（Zhu et al,2001,A-134974:a novel adenosine kinase inhibitor,relieves tactile allodynia via spinal sites of action in peripheral nerve injured rats,Brain Research vol 905,abstract.）アデノシンキナーゼインヒビターはまた、動物モデルにおいて有効な抗侵害受容、抗炎症、及び抗痙攣活性を提供することが示されていることから、疼痛、炎症、癲癇、ならび場合により細胞性外傷及び炎症に関連する他の中枢及び末梢神経系疾患に対するその潜在的治療有用性が示唆される。（Gomtsyan et al,2004,Non-nucleoside inhibitors of adenosine kinase,Current Pharmaceutical Design,abstract.）

【0019】

Bauser et al.2004によれば、アデノシンキナーゼ阻害は、いくつかの病態、たとえば、神経変性、発作、虚血、炎症、及び疼痛に対する魅力的治療アプローチである。（Bauser er al,2004,Discovery and optimization of 2-aryl oxazolo-pyrimidines as adenosine kinase inhibitors using liquid phase parallel synthesis,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,abstract.）

【0020】

脳炎
ラスムッセン脳炎は、大脳皮質及び他の構造部、最も注目すべきは海馬の片側性炎症、進行性認知衰退、並びに薬剤抵抗性焦点性癲癇により特徴付けられる稀な神経学的障害である。Luanらは、アデノシンキナーゼの過剰発現がラスムッセン脳炎の共通の病理学的ホールマークであること、及びラスムッセン脳炎でのニューロナルＡ１Ｒのアップレギュレーションが発作の広がりの防止にきわめて重要であることを提案している。さらに、アデノシンは、抗痙攣及び抗炎症作用を有するとともに癲癇に続発して認知が障害されたときに認知機能を回復することができる内因性ニューロモジュレーターとして作用する。アデノシンホメオスタシスの破壊は、癲癇、炎症、及び認知機能不全に関連付けられてきた。アデノシンレセプター及びメジャーアデノシン除去性酵素ＡＤＫの改変は、癲癇でのアデノシンホメオスタシスの破壊に寄与することが証明されている。（Luan et al,2017,Upregulation of Neuronal Adenosine A1 Receptor in Human Rasmussen Encephalitis,J Neuropathol Exp Neurol vol 76,page 720-731.）

【0021】

血管発生
アデノシンキナーゼを標的として細胞内アデノシンを上昇させると、ｉｎ ｖｉｔｒｏで内皮増殖及び遊走が促進され、さらにはｅｘ ｖｉｖｏで血管発芽が促進される。そのほか、内皮特異的アデノシンキナーゼノックアウトマウスは、網膜血管発生を増加させ、創傷治癒を加速し、及び後肢虚血傷害から保護された。（Xu et al.,2017,Intracellular adenosine regulates epigenetic programming in endothelial cells to promote angiogenesis,EMBO Molecular Medicine,page 1263-1278.）

【0022】

癌
アデノシンキナーゼは、グリオーマ進行に関与すること、及び腫瘍周囲組織中のアデノシンキナーゼレベルの増加は、グリオーマでの癲癇に関連付けられうることが、Huang et al 2015による試験で示唆された。（Huang et al, 2015, Adenosine deaminase and adenosine kinase expression in human glioma and their correlation with glioma-associated epilepsy, Molecular Medicine Reports 12, page 6509-6516.）

【0023】

糖尿病、炎症、心血管障害、腎障害、及び肺障害
Pye et al 2014によれば、アデノシンは、アデノシンＡ２Ａレセプターの活性化を介して心血管疾患で抗炎症作用を提供するが、アデノシンの生理学的作用は、アデノシンキナーゼによるそのリン酸化に起因して限定される可能性がある。アデノシンキナーゼインヒビターＡＢＹ７０２による処置は、糖尿病マウスにおいて血中グルコースレベルを低減し、糖尿病マウスにおいてアルブミン尿及び糸球体傷害マーカー、ネフリン尿及びポドカリキシン排泄レベルを低減した。さらに、酸化的ストレスの指標が低減された。（Pye et al, 2014,Adenosine Kinase Inhibition Protects The Kidney Against Streptozotocin-Induced Diabetes Through Anti-inflammatory and Anti-oxidant Mechanisms,Pharmacol Res.）

【0024】

Ａ１アデノシンレセプターの活性化は、腎血行動態改変を改善して尿細管壊死を減少させることにより急性腎傷害から保護し、その阻害は、慢性腎疾患モードで毒素又は薬剤代謝物の除去を促進しうる。（Ｐandey et al,2021,”Adenosine an old player with new possibilities in kidney diseases”:Preclinical evidences and clinical perspectives,Life Sciences vol 265,abstract.）

【0025】

神経因性痛、脳卒中、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、睡眠促進など、多くの治療領域では、アデノシン機能のモジュレーションは、治療選択肢とみなされてきた。（Knutsen et al,2007,Therapeutic Areas I:Central Nervous System,Pain,Metabolic Syndrome,Urology,Gastrointestinal and Cardiovascular,Comprehensive Medicinal Chemistry II,2007,https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/adenosine-kinase-inhibitor,accessed 21-4-2021.）

【0026】

発明の概要
神経学的疾患の改善された処置に対する高いメディカルニーズが満たされないまま存在する。というのは、そうした疾患の多くは、十分に処置することができず、現在利用可能な処置は、重篤な副作用の原因になるからである。本発明の化合物は、ＡＤＫの効力のあるインヒビターであるので、癲癇などの神経学的疾患の処置に有用である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、ＡＤＫのショート及びロングアイソフォームの両方を阻害する。

【図面の簡単な説明】

【0027】

図の説明

【図1】ノックダウンの最高レベルから最低レベルまでのＡＤＫ－ＬＳノックダウン効能に基づくＡＤＫ－ＬＳアンチセンスオリゴヌクレオチドのランキング。水平点線は、モック処置コントロール細胞（ＡＤＫ－ＬＳのノックダウンまったくなし）でのＡＤＫ－ＬＳのレベルを描く。黒色線は７０％ノックダウン及び灰色線は８０％ノックダウンを表す。垂直点線は、さらなる試験のために選択されたＡＤＫ－ＬＳアンチセンスオリゴヌクレオチドに対するカットオフを示す。ｎ，Ｎ＝１，１～２、平均値±ＳＥＭ。

【図2】ノックダウンの最高レベルから最低レベルまでのＡＤＫ－ＬＳノックダウン効能に基づいて選択されたＡＤＫ－ＬＳアンチセンスオリゴヌクレオチドのランキング。水平点線は、モック処置コントロール細胞（ＡＤＫ－ＬＳのノックダウンまったくなし）でのＡＤＫ－ＬＳのレベルを描く。また、灰色線は８０％ノックダウンを示す。ｎ，Ｎ＝２，３～４、平均値±ＳＥＭ。

【図3】用量－応答試験。水平点線は、モック処置コントロール細胞（ＡＤＫ－ＬＳのノックダウンまったくなし）でのＡＤＫ－ＬＳのレベルを描き、灰色線は、８０％ノックダウンを示す。ｎ，Ｎ＝１～２，２～４、平均値±ＳＥＭ。

【図4】用量－応答曲線及びＩＣ_５０値、３パラメーター非線形曲線当てはめ、ｎ，Ｎ＝２，４、すべての技術的レプリケートが描かれている。水平点線は５０％ノックダウンを表す。

【図5】配列番号２１で処置された細胞の差次的遺伝子発現解析。ボルケーノプロットは、差次的発現の有意性と共に、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置及びモック処置群間のＲＮＡ発現の変化を相関させて、配列番号２１及びモック処置細胞間の転写物のレベルを示す。ｘ軸は発現の相対変化を表し、一方、ｙ軸は有意性を表す。各ドットは特異的転写物を表す。黒色ドットは非有意変化を表し、一方、灰色ドットは有意値を提示する。ＡＤＫは黒色リングでハイライトされる。ｎ＝３

【図6】配列番号７１で処置された細胞の差次的遺伝子発現解析。ボルケーノプロットは、差次的発現の有意性と共に、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置及びモック処置群間のＲＮＡ発現の変化を相関させて、配列番号７１及びモック処置細胞間の転写物のレベルを示す。ｘ軸は発現の相対変化を表し、一方、ｙ軸は有意性を表す。各ドットは特異的転写物を表す。黒色ドットは非有意変化を表し、一方、灰色ドットは有意値を提示する。ＡＤＫは黒色リングでハイライトされる。ｎ＝３

【図7】ＡＤＫ（両方のアイソフォーム）に対する規格化ｍＲＮＡ発現値、ｎ＝３

【図8】スプライストランスクリプトーム（細胞質、列１～４）内及び非スプライストランスクリプトーム（核、列５～８）内のすべての潜在的標的部位を予測するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド配列番号２１の潜在的オフターゲットのｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析。これは、１）上述したアンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号２１）に対する標的ｍＲＮＡ中の完全マッチ結合性部位、及び２）１、２、３、又は４ミスマッチ（ＩＮＤＥＬ）を有する結合性部位に対して行われた。得られた予測オフターゲットのリストをＲＮＡシーケンシングデータと比較して（上の表、３ｎＭ、及び下の表、３０ｎＭ）、予測オフターゲットｍＲＮＡ（行１）のいずれかがデータセットで発現されたか（行２）を決定し、その次に、発現オフターゲット転写物のいずれかが差次的発現されたか（行３）並びにかかる転写物がデータセットでアップレギュレートされたか（行４及び５）又はダウンレギュレートされたか（行６及び７）をアセスした。

【図9】スプライストランスクリプトーム（細胞質、列１～４）内及び非スプライストランスクリプトーム（核、列５～８）内のすべての潜在的標的部位を予測するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド配列番号７１の潜在的オフターゲットのｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析。これは、１）上述したアンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号７１）に対する標的ｍＲＮＡ中の完全マッチ結合性部位、及び２）１、２、３、又は４ミスマッチ（ＩＮＤＥＬ）を有する結合性部位に対して行われた。得られた予測オフターゲットのリストをＲＮＡシーケンシングデータと比較して（上の表、３ｎＭ、及び下の表、３０ｎＭ）、予測オフターゲットｍＲＮＡ（行１）のいずれかがデータセットで発現されたか（行２）を決定し、その次に、発現オフターゲット転写物のいずれかが差次的発現されたか（行３）並びにかかる転写物がデータセットでアップレギュレートされたか（行４及び５）又はダウンレギュレートされたか（行６及び７）をアセスした。

【発明を実施するための形態】

【0028】

発明の詳細な説明
本発明の実施形態の記載では、明確さを期して特定用語体系を利用する。しかしながら、本発明は、そのように選択された特定用語に限定することが意図されるものではなく、各特定用語は、類似の目的を達成すべく同様に機能するすべての技術的均等物を含むものと理解される。

【0029】

「治療有効量」又は「有効量」又は有効用量」という用語は、その作用剤を必要とする個体に所望の治療効果を付与する治療剤の量を意味する。有効量は、処置される個体の健康及び身体状態、処置される個体の分類学的群、組成物の処方、投与方法、個体の医学的病態のアセスメント、並びに他の関連因子に依存して個体間で変動しうる。

【0030】

「処置」という用語は、治療用医薬剤のいずれか、本明細書では、所与の疾患の１つ以上の症状又は特徴を部分的又は完全に治癒又は低減するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むものの投与を意味する。

【0031】

「アデノシンキナーゼ転写物」という用語は、本発明との関連では、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ又はアデノシンキナーゼのアイソフォームの少なくとも１つをコードする他の転写物である。すなわち、アデノシンキナーゼｐｒｅ－ｍＲＮＡである配列番号１。

【0032】

本明細書で用いられる「化合物」という用語は、本発明に係るオリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。いくつかの実施形態では、化合物は、本発明のオリゴヌクレオチド以外の他の要素を含みうる。かかる他の要素は、非限定的例では、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされた又は他の方法で結合された送達媒質でありうる。

【0033】

「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応する領域又はセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にするヌクレオ塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。いくつかの事例では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは「ミックスマー」であり、いくつかの事例では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは「ギャップマー」である。

【0034】

「ミックスマー」は、ＬＮＡなどのヌクレオシドアナログとＤＮＡヌクレオシドとのミックスを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、ただし、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、４又は５ＤＮＡヌクレオチド以下の連続ストレッチなどの複数のヌクレオシドを有する内部領域を含まない。ミックスマーは、ＲＮＡｓｅＨなどのＲＮＡｓｅをリクルートする能力はなく、むしろ標的ＲＮＡに結合してその正常機能をブロックすることによりその作用を発揮する。

【0035】

「ギャップマー」は、ＬＮＡヌクレオシドなどの親和性増強用ヌクレオチドアナログを含むヌクレオチドのストレッチがフランキングするヌクレオシドの少なくとも６又は７ＤＮＡヌクレオチドの連続ストレッチを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドである。ギャップマーは、ＲＮＡｓｅＨなどのＲＮＡｓｅをリクルートする能力があり、内部領域を構成するヌクレオシドは、外部ウィングを構成する１つ又は複数のヌクレオシドから化学的に識別可能である。

【0036】

「ヌクレオシドアナログ」は、たとえば、Freier&Altmann;Nucl.Acid.Res.,1997,25,4429-4443及びUhlmann;Curr.Opinion in Drug Development,2000,3(2),293-213に記載されており、好適な好ましいヌクレオシドアナログの例は、国際公開第２００７／０３１０９１号（本願をもって参照により組み込まれる）により提供される。

【0037】

「５－メチルシトシン」は、５’位に装着されたメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５－メチルシトシンは、アンチセンスオリゴヌクレオチド中のシトシンを置き換えることが多い修飾ヌクレオ塩基である。本発明のオリゴヌクレオチドでは、シトシンを５－メチルシトシンで置き換えることは本発明の範囲内である。

【0038】

「２’－Ｏ－メトキシエチル」（同様に２’－ＭＯＥ及び２’－Ｏ（ＣＨ～）～－ＯＣＨ３）は、フラノース環の２’位のＯ－メトキシ－エチル修飾を意味する。

【0039】

「２’－ＭＯＥヌクレオシド」（同様に２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシド）は、２’－ＭＯＥ修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

【0040】

「ロック核酸」又は「ＬＮＡ」は、アクセス不能ＲＮＡといわれることが多く、修飾ＲＮＡヌクレオ塩基である。ＬＮＡヌクレオ塩基のリボース部分は、２’酸素と４’炭素とを接続するエキストラブリッジで修飾される。ＬＮＡオリゴヌクレオチドは、伝統的ＤＮＡ又はＲＮＡオリゴヌクレオチドと比較して、その相補鎖に対する実質的に増加した親和性を呈する。いくつかの態様では、二環式ヌクレオシドアナログはＬＮＡヌクレオチドであり、したがって、これらの用語は互換的に用いられうるとともに、かかる実施形態では、両方ともリボース糖環のＣ２’とＣ４’との間のリンカー基（たとえば、ブリッジ）の存在により特徴付けられる。本発明との関連で用いられたとき、「ＬＮＡ単位」、「ＬＮＡモノマー」、「ＬＮＡ残基」、「ロック核酸単位」、「ロック核酸モノマー」、又は「ロック核酸残基」という用語は、二環式ヌクレオシドアナログを意味する。ＬＮＡ単位は、とくに、国際公開第９９／１４２２６号、国際公開第００／５６７４６号、国際公開第００／５６７４８号、国際公開第０１／２５２４８号、国際公開第０２／２８８７５号、国際公開第０３／００６４７５号、国際公開第２０１５／０７１３８８号、及び国際公開第０３／０９５４６７号に記載されている。

【0041】

「ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ」は好ましいＬＮＡバリアントである。

【0042】

「二環式核酸」又は「ＢＮＡ」又は「ＢＮＡヌクレオシド」は、ヌクレオシド糖単位の４’及び２’位間で２個の炭素原子を接続するブリッジを有することにより二環式糖を形成する核酸モノマーを意味する。かかる二環式糖の例としては、限定されるものではないが、Ａ）ｐｔ－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－０－２’）ＬＮＡ、（Ｂ）Ｐ－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－０－２’）ＬＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－０－２’）ＬＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’－ＣＨ２－０－Ｎ（Ｒ）－２’）ＬＮＡ、及び（Ｅ）オキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－０－２’）ＬＮＡが挙げられる。

【0043】

本明細書で用いられる場合、ＬＮＡ化合物は、限定されるものではないが、糖の４’位と２’位との間に少なくとも１つのブリッジを有する化合物を含む。ただし、ブリッジの各々は、独立して、－［Ｃ（Ｒ～）（Ｒ２）］，，－，－、－Ｃ（Ｒ～）＝Ｃ（Ｒ２）－、－Ｃ（Ｒ～）＝Ｎ、－Ｃ（＝ＮＲＥＭ）－、－Ｃ（＝０）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－０－、－Ｓｉ（Ｒｉ）ｑ－、－Ｓ（＝０）－－、及びＮ（Ｒ＆）－（式中、ｘは、０、１、又は２であり、ｎは、１、２、３、又は４であり、各Ｒ＆及びＲ２は、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ≫Ｃ≫アルキル、置換Ｃ≫である）から独立して選択される１又は２～４連結基を含み、２’酸素原子と４’炭素原子とを接続する（－ＣＨｚ－）基に対しては、メチレンオキシ（４’－ＣＨ＆－０－２’）ＬＮＡという用語が用いられる。

【0044】

さらに、この位置にエチレン架橋基を有する二環式糖部分の場合、エチレンオキシ（４’－ＣＨ＆ＣＨ＆－０－２’）ＬＮＡが用いられる。本明細書で用いられる場合、ｎ－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ＆－０－２’）、メチレンオキシ（４’－ＣＨ＆－０－２’）ＬＮＡの異性体もまた、ＬＮＡの定義に包含される。

【0045】

いくつかの実施形態では、ヌクレオシド単位は、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、アルファ－Ｌ－オキシ－ＬＮＡ、ベータ－Ｄ－アミノ－ＬＮＡ、アルファ－Ｌ－アミノ－ＬＮＡ、ベータ－Ｄ－チオ－ＬＮＡ、アルファ－Ｌ－チオ－ＬＮＡ、５’－メチル－ＬＮＡ、ベータ－Ｄ－ＥＮＡ、及びアルファ－Ｌ－ＥＮＡのリストから選択されるＬＮＡ単位である。

【0046】

「ｃＥｔ」又は「拘束エチル」は、４’－炭素と２’－炭素とを接続するブリッジを含む二環式糖部分を意味し、ブリッジは、式：４’－ＣＨ（ＣＨｑ）－０－２’を有する。

【0047】

「拘束エチルヌクレオシド」（同様にｃＥｔヌクレオシド）は、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－０－２’ブリッジを含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔ及びいくつかのその性質は、Pallan et al.Chem Commun(Camb).2012,August 25;48(66):8195-8197に記載されている。

【0048】

「トリシクロ（ｔｃ）－ＤＮＡ」は、ＤＮＡ及びＲＮＡへの増強された結合性を示すコンフォメーショナル拘束ＤＮＡアナログの一クラスに属する。構造及び生成方法は、Renneberg et al.Nucleic Acids Res.2002 Jul 1;30(13):2751-2757に見られうる。

【0049】

本明細書で参照される「２’－フルオロ」は、糖環の２’位にフルオロ基を含むヌクレオシドである。２’－フッ素化ヌクレオチドは、Peng et al. J Fluor Chem. 2008 September; 129(9): 743-766に記載されている。

【0050】

本明細書で参照される「２’－Ｏ－メチル」は、糖環の２’位に－ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドである。

【0051】

本明細書で参照される「コンフォメーショナル制限ヌクレオシド」（ＣＲＮ）及びその合成方法は、国際公開第２０１３／０３６８６８号（本願をもって参照により組み込まれる）に記載されている。ＣＲＮは、ＬＮＡに類似して化学ブリッジがリボースのＣ２’とＣ４’炭素を接続する糖修飾ヌクレオシドである。しかしながら、ＣＲＮのＣ２’－Ｃ４’ブリッジは、ＬＮＡ分子のものよりも１炭素長い。ＣＲＮのリボースの化学ブリッジは、固定位置にリボースをロックし、ひいてはヌクレオ塩基及びホスフェート基のフレキシビリティーを制限する。ＲＮＡ又はＤＮＡベースオリゴヌクレオチド内のＣＲＮ置換は、ハイブリダイゼーション親和性の増加及びヌクレアーゼ分解抵抗性の増強という利点を有する。

【0052】

「アンロック核酸」又は「ＵＮＡ」は、本明細書で参照される場合、典型的には、リボースのＣ２－Ｃ３Ｃ－Ｃ結合が除去されてアンロック「糖」残基を形成したアンロック核酸である（Fluiter et al.,Mol.Biosyst.,2009,10,1039（本出願をもって参照により組み込まれる）及びSnead et al.Molecular Therapy--Nucleic Acids(2013)2,e103;を参照されたい）。

【0053】

「治療用ＲＮＡ化合物」は、本発明との関連では、標的ＲＮＡに相補的な連続ヌクレオチド配列を含む化合物である。治療用ＲＮＡ化合物は、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ若しくはｄｓＲＮＡ）又は一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドでありうる。標的ＲＮＡに結合することにより、治療用ＲＮＡ化合物は、標的ＲＮＡの発現をブロック又はモジュレートする能力がある。治療用ＲＮＡ化合物は、親和性増強用ヌクレオチドアナログにより又は化合物の安定性を増加させるヌクレオチド間結合により化学修飾されうる。治療用ＲＮＡ化合物はまた、免疫刺激を阻害するためにメチル化シトシンを含みうる。

【0054】

「モチーフ」は、本発明との関連では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの非修飾配列である。配列番号８３～１６１は、配列番号２～８０の修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物のモチーフ配列である。

【0055】

「標的領域」は、１つ以上のアンチセンス化合物が標的とする標的核酸の部分を意味する。標的領域は本発明の一部である。すなわち、配列番号１６４～２０５は、本発明に係る治療用アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とするのに好適な配列を有する標的領域である。

【0056】

本明細書で用いられる「標的化送達」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが特異的組織若しくは細胞での効率的送達を促進するように製剤化されているか、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドがたとえば標的化用部分を含むように他の形で修飾されているか、又は特異的標的細胞での取込みを促進するように他の形で修飾されているか、のどれかである送達を意味する。

【0057】

本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アデノシンキナーゼ（ＡＤＫ）を標的とするように設計される。本明細書で用いられる「アデノシンキナーゼ関連神経学的疾患」という用語は、疾患病理がアデノシンキナーゼ活性のアップレギュレーションに関連するか又はアデノシンキナーゼ活性のダウンレギュレーションが疾患の処置に有益である疾患を意味する。

【0058】

化合物
ヒトＡＤＫ遺伝子は１４転写物をコードし、そのうち１０はタンパク質をコードするので、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡの潜在的標的である。いくつかのＡＳＯは、ＡＤＫｐｒｅ－ｍＲＮＡ（配列番号１）を標的とするように設計された。

【0059】

その最広義の意味では、本発明は、アデノシンキナーゼ（ＡＤＫ）ｐｒｅ－ｍＲＮＡ（配列番号１）に相補的な１０～３０ヌクレオチド長の配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡを提供する。ただし、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの親和性増強用ヌクレオチドアナログを含み、及び前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１ホスホロチオエート又は類似ヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結に対する代替手段を有し、たとえば、骨格は、別のタイプの骨格、たとえば、ホスホジエステル連結、ホスホトリエステル連結、メチルホスホネート連結、ホスホルアミデート連結、又はそれらの組合せでありうる。好ましい実施形態では、代替ヌクレオシド骨格は、アンチセンスオリゴヌクレオチドのメディカル使用に好適である。

【0060】

いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２つ以上のタンパク質コーディングＡＤＫ形態を標的とするように設計される。好ましい実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも２つのタンパク質コーディングＡＤＫ ＲＮＡを標的とするように設計される。最も好ましい実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくともＡＤＫ－Ｓ及びＡＤＫ－Ｌの発現をダウンレギュレートするために、たとえば、ノックダウンするために、ＡＤＫｐｒｅ－ｍＲＮＡを標的とするように設計される。

【0061】

たとえば、ＡＳＯは、配列番号１のヌクレオチド２６１３８～２６１５８（配列番号１６４）、２８８５４～２８８７１（配列番号１６５）、３１５９１～３１６１２（配列番号１６６）、４９６１８～４９６４８（配列番号１６７）、７３３３５～７３３５０（配列番号１６８）、１０７４０１～１０７４２０（配列番号１６９）、１２０６８１～１２０６９８（配列番号１７０）、１３１０６６～１３１０８５（配列番号１７１）、１３１１０２～１３１１２１（配列番号１７２）、１５７２７９～１５７３００（配列番号１７３）、１６３４６５～１６３４９５（配列番号１７４）、１８２０５３～１８２０６９（配列番号１７５）、２２９８２５～２２９８４３（配列番号１７６）、２３０３１６～２３０３３２（配列番号１７７）、２３０３８８～２３０４０５（配列番号１７８）、２３０４８４～２３０５０５（配列番号１７９）、２４３０３６～２４３０５５（配列番号１８０）、２４３０７５～２４３０９０（配列番号１８１）、２６６８０８～２６６８２３（配列番号１８２）、２６７３７４～２６７３９３（配列番号１８３）、２６７６１５～２６７６３４（配列番号１８４）、２８８２４７～２８８２６６（配列番号１８５）、３０２２８６～３０２３０５（配列番号１８６）、３７０３１２～３７０３３１（配列番号１８７）、３７４１９０～３７４２０６（配列番号１８８）、４０４９７１～４０４９９０（配列番号１８９）、４０５０２５～４０５０４４（配列番号１９０）、４１１５２３～４１１５４１（配列番号１９１）、４３１６５６～４３１６７３（配列番号１９２）、４３４５８６～４３４６０５（配列番号１９３）、４３８１４７～４３８１８９（配列番号１９４）、４３８３４０～４３８３５９（配列番号１９５）、４４１０１６～４４１０３５（配列番号１９６）、４４９１７３～４４９１９４（配列番号１９７）、４５１６５４～４５１６８６（配列番号１９８）、４９４６７６～４９４６９６（配列番号１９９）、５１２５０８～５１２５２７（配列番号２００）、５１２５４４～５１２５６３（配列番号２０１）、５１９０５４～５１９０７１（配列番号２０２）、５３１９８４～５３２００３（配列番号２０３）、５３２７８４～５３２８２２（配列番号２０４）及び５４０１６４～５５７６１１（配列番号２０５）を標的とするように構築された。ＡＳＯの例示的配列は、表１に記載されている。ＡＳＯは、標的ＲＮＡ切断用のＲＮＡｓｅＨをリクルートするギャップマーとなるように設計された。いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１６４～２０５のいずれか１つに相補的である。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１６４～２０５のいずれか１つに相補的であり、ＡＤＫ－Ｌ及びＡＤＫ－Ｓの両方の発現をモジュレート、ダウンレギュレート、又はノックダウンする能力がある。いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号８３～１６１のいずれか１つから選択されるモチーフからなるか又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号８３～１６１のいずれか１つから選択されるモチーフからなるか又はそれらを含み、少なくとも１つの親和性修飾用ヌクレオチドアナログ及び少なくとも１つの改変ヌクレオシド間結合たとえばホスホロチオエート結合を含む。

【0062】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーであり、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも５連続ＤＮＡヌクレオチドの連続ストレッチを含有する。メディカル目的のアンチセンスオリゴヌクレオチドのサイズが重要であり、そのため、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、かかる使用に有用となるように設計される。いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは１０～３０ヌクレオチド長であり、いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは１４～２０、たとえば１４～１９ヌクレオチド長である。

【0063】

アンチセンスオリゴヌクレオチドの効能は、安定性、標的ＲＮＡへの親和性、及び他の因子に依存する。アンチセンスオリゴヌクレオチド中のＬＮＡなどの親和性増強用ヌクレオシドアナログの存在は、かかる利点を提供する。好ましい実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに使用される親和性増強用ヌクレオチドアナログは、ＬＮＡ、トリシクロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’環状エチル（ｃＥＴ）、ＵＮＡ、２’フルオロ、及びコンフォメーショナル制限ヌクレオシド（ＣＲＮ）のリストから選択される。いくつかの実施形態では、かかるオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡと、ＤＮＡと、トリシクロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’環状エチル（ｃＥＴ）、ＵＮＡ、２’フルオロ、及びコンフォメーショナル制限ヌクレオシド（ＣＲＮ）の１つ以上と、の組合せを含みうる。

【0064】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＬＮＡを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０～５５％ＬＮＡを含む。いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ／ＤＮＡオリゴであるが、トリシクロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’環状エチル（ｃＥＴ）、ＵＮＡ、２’フルオロ、及びコンフォメーショナル制限ヌクレオシド（ＣＲＮ）のいずれか１つである１つ以上のヌクレオシドをさらに含む。

【0065】

いくつかの好ましい実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドはＬＮＡを含み、ＬＮＡはベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである。

【0066】

表１は、選択配列に対するＡＳＯ設計の非限定的例を含有する。同方法は、本明細書に開示されるいずれの他の配列にも適用可能である。ギャップマーは、ロック核酸ＬＮＡ（大文字）を含有するように構築された。たとえば、ギャップマーは、５’末端及び３’末端にベータ－デオキシＬＮＡを有しうるとともに、ホスホロチオエート骨格を有しうる。しかし、ＬＮＡはまた、いずれかの他のヌクレオチドアナログでも置換されうるとともに、骨格は、他のタイプの骨格でありうる｛たとえば、ホスホジエステル連結、ホスホトリエステル連結、メチルホスホネート連結、ホスホルアミデート連結、又はそれらの組合せ）。表１の化合物名称では、大文字は、修飾ヌクレオチド、たとえば、ＬＮＡヌクレオチド（ベータ－Ｄ－オキシ、アルファ－Ｌ－オキシ、ベータ－Ｄ－アミノ、若しくはベータ－Ｄ－チオＬＮＡ、又は他の修飾ヌクレオチド、たとえば、ｃＥｔ、ｃＭＯＥ、ＵＮＡ、若しくはＥＮＡのどれか）を表し、小文字は、ＤＮＡヌクレオチドを表す。そのため、ＴＣＴｔｔｃｃｔａｃｔｔａａＧＧ（配列番号３０）により表される配列は、５’－Ｔ及び３’－Ｇを有する３－１１－２ １６ｍｅｒ修飾ヌクレオチド－ＤＮＡ－修飾ヌクレオチドギャップマー、たとえば、３－１１－２ＬＮＡ－ＤＮＡ－ＬＮＡギャップマーを表す。いくつかのＡＳＯは、本明細書の他の箇所に記載の交互フランクギャップマーでありうる。いくつかの実施形態では、９ヌクレオチドギャップを有する交互フランクギャップマーの選択例は、配列番号５、２１、及び５１である。

【0067】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドは、すべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合となるように設計される。いくつかの実施形態では、本発明は、一連の効力のあるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供し、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２～８０のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号４、配列番号１２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３７、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０それら自体のリストから選択されるアンチセンスオリゴヌクレオチド、さらにはかかるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むコンジュゲート、かかるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物、及び本願に記載の処置でのそれらの企図される使用を提供する。さらに、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた処置方法もまた、本発明に包含される。

【0068】

表１では、列挙されたＡＳＯは、常に５’→３’方向に描かれる。したがって、ＡＳＯの５’末端は、表中のｍＲＮＡ「エンド」番号にハイブリダイズし、ＡＳＯの３’末端は、表中のｐｒｅ－ｍＲＮＡ「スタート」番号にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号８３～１６１のいずれか１つのモチーフを含むか又はそれからなる。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、配列番号２～８０のいずれか１つの化合物を含むか又はそれからなる。

【0069】

【表1】

【0070】

【表2】

【0071】

【表3】

【0072】

「ＡＳＯ化合物」では、大文字は、ヌクレオチドアナログたとえばベータデオキシ－ＬＮＡなどのＬＮＡである。小文字はＤＮＡを表す。Ｃは５’メチル－シトシンでありうる。一実施形態では、配列番号２～８０のすべてのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートである。一実施形態では、配列番号２～８０のすべてのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートであり、大文字はベータデオキシＬＮＡなどのＬＮＡであり、小文字はＤＮＡを表し、Ｃは５’メチル－シトシンである。

【0073】

いくつかの実施形態では、本発明の化合物はｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、デオキシ－ヌクレオチド、３’－末端デオキシチミジン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－０－メチル修飾ヌクレオチド、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ－修飾ヌクレオチド、ロックヌクレオチド、アンロックヌクレオチド、コンフォメーショナル制限ヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ－修飾ヌクレオチド、２’－０－アリル－修飾されるヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル－修飾ヌクレオチド、２’－ヒドロキシ－修飾ヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’－０－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾ヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾ヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、５’－メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’－ホスフェート又は５’ホスフェートミミックを含むヌクレオチド、ビニルホスホネートを含むヌクレオチド、アデノシングリコール核酸（ＧＮＡ）を含むヌクレオチド、チミジン－グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ－異性体を含むヌクレオチド、２－ヒドロキシメチル－テトラヒドロフラン－５－ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシチミジン－３’ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシグアノシン－３’－ホスフェートを含むヌクレオチド、並びにコレステリル誘導体及びドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、並びにそれらの組合せの群から選択される。

【0074】

いくつかの実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡは、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ－修飾ヌクレオチド、３’－末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）、ロックヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ－修飾ヌクレオチド、２’－アルキル－修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、及び、非天然塩基を含むヌクレオチドから選択される修飾ヌクレオチドを含む。

【0075】

組成物及び使用
本発明の化合物は、本発明の医薬組成物などの組成物での使用のためのもの、医薬剤としての使用のためのもの、及び癲癇をはじめとする神経学的障害などの本明細書に開示される疾患の処置、緩和、回復、先制処置、予防、疾患修飾的又は治癒的処置のためのものである。いくつかの実施形態では、本発明の抗アデノシンキナーゼ化合物は、発作制御の改善並びに不安及び鬱及び認知障害の低減を含めて、疾患の防止、疾患修飾、治癒、症状低減を行う。

【0076】

本発明の化合物は、いくつかの実施形態では、アデノシンキナーゼ活性のモジュレーションが疾患又は疾患パラメーターの防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、予防、緩和、又は回復に有益な疾患である疾患の処置のための医薬組成物などの組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、処置、予防、緩和、又は回復は治癒的である。いくつかの実施形態では、処置、予防、緩和、又は回復は疾患修飾的である。いくつかの実施形態では、処置、予防、緩和又は回復は防止的である。

【0077】

化合物及び組成物により処置、緩和、回復、先制処置、又は予防的処置されうる疾患としては、非限定的例では、神経学的障害、神経変性障害、神経発達障害、又は精神医学的疾患をはじめとする中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系（ＰＮＳ）の疾患が挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、ニューロン保護剤としての使用のためのものである。

【0078】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、ＣＮＳ若しくはＰＮＳ疾患、神経学的障害、神経変性障害、神経発達障害、細胞性外傷及び炎症に関連する中枢及び末梢神経系疾患、ニューロナル損傷、海馬損傷、外傷性脳傷害、記憶障害、海馬硬化症、パーキンソン病、多発性硬化症、急性脊髄傷害、筋萎縮性側索硬化症、失調症、ベル麻痺、シャルコー・マリー・トゥース、頭痛、ホートン頭痛、片頭痛、ピック病、進行性核上性麻痺、多系変性、運動ニューロン疾患、ハンチントン病、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、皮質基底核変性症、原発性進行性失語症又はその症状若しくは影響の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0079】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、癲癇の処置での使用のためのものである。

【0080】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、発作の処置での使用のためのものである。

【0081】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、癲癇及び／又は発作、好ましくは、処置抵抗性癲癇、後天性、遺伝性、及び／又は特発性癲癇、療法抵抗性癲癇性症候群、薬剤抵抗性癲癇、薬学抵抗性焦点性癲癇、自発性発作、療法抵抗性発作、焦点性癲癇、全身性癲癇、又は癲癇重積ステータスの処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0082】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、癲癇、薬剤抵抗性癲癇、薬剤抵抗性焦点性癲癇、発作、自発性発作、療法抵抗性発作、焦点性癲癇、好ましくは、前記焦点性癲癇は、前頭葉、頭頂葉、後頭葉、又は側頭葉を焦点とする、全身性癲癇、好ましくは、前記全身性癲癇は、欠神、ミオクローニック発作、強直性間代性発作、強直性発作、無緊張性発作、間代性発作及び痙攣、癲癇重積ステータスの中から選択される、急性脳傷害により誘発される癲癇原性、常染色体優性夜間前頭葉癲癇、徐波睡眠期持続性棘徐波、ドラベ症候群、卒中後発生癲癇、癲癇性脳症、笑い癲癇、欠神、良性新生児発作、ジーボンス症候群、若年性ミオクローヌス癲癇、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、近心側頭葉癲癇、ミオクローニック失立癲癇、大田原症候群、パナイオトポロス症候群、ＰＣＤＨ１９症候群、中心側頭部棘波併発良性小児期癲癇、スタージ・ウェーバー症候群、症状性焦点性癲癇、一過性癲癇性健忘症及びウェスト症候群、及び／又は神経膠腫関連癲癇の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0083】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、疼痛の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものであり、好ましくは、前記疼痛は、慢性疼痛、神経因性痛、化学療法誘発神経因性痛、片頭痛、頭痛、痛覚過敏、アロディニア、及び／又は線維筋痛症である。

【0084】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、疼痛の処置での使用のためのものである。

【0085】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、疼痛、慢性疼痛、神経因性痛、化学療法誘発神経因性痛、前兆性片頭痛及び無前兆性片頭痛を含む片頭痛、原発性頭痛、緊張性頭痛、群発頭痛、ホートン頭痛、慢性連日性頭痛、副鼻洞頭痛、外傷後頭痛、運動時頭痛、持続性片側頭痛、睡眠時頭痛、痛覚過敏、熱痛覚過敏、アロディニア、触覚性アロディニア、及び／又は線維筋痛症の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0086】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、精神医学的障害、認知障害、睡眠障害、心血管障害、呼吸器障害、癌、腎障害、炎症、又は代謝障害の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0087】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、精神医学的障害、神経精神障害、不安症、鬱病、双極性障害、注意欠陥多動性障害、注意欠陥障害、自閉症、アスペルガー症、ツレット症、統合失調症、妄想型統合失調症、破瓜型統合失調症、緊張型統合失調症、鑑別不能型統合失調症、残遺型統合失調症、単純型統合失調症、又は特定不能型統合失調症の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0088】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、認知障害、認知障害、認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、前頭側頭型認知症、又はレビー小体認知症の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0089】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、睡眠障害の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0090】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、睡眠調節剤としての使用のためのものである。

【0091】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、睡眠促進での使用のためのものである。

【0092】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、心血管障害、末梢動脈疾患、術後心房細動、心不全、慢性心不全、脳内出血誘発脳傷害、脳卒中、脳虚血、又は虚血の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0093】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、呼吸器障害、喘息、又は慢性閉塞性肺疾患の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0094】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、癌、神経系癌、グリオーマ、膠芽細胞腫、肝癌、又は癌転移の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0095】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、腎障害、腎傷害、腎炎症、アルブミン尿、又は糸球体傷害の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0096】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、炎症の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0097】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、炎症性障害、酸化的ストレス、炎症、アポトーシス、関節炎、骨関節炎、関節リウマチ、及びこれらの病態に関連する疼痛、脳炎、髄膜炎、ヒトラスムッセン脳炎、大脳皮質及び／又は海馬の炎症、進行性認知衰退、結腸炎、潰瘍性結腸炎、又は炎症性腸疾患の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0098】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、代謝障害、好ましくは糖尿病、より好ましくは１型又は２型糖尿病の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0099】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、プラダー・ウィリー症候群、アンジェルマン症候群、神経線維腫症、血管発生関連疾患、血管発生促進、網膜障害、好ましくは糖尿病性レチノパチー又は聴力損失の処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである。

【0100】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、全身投与、髄腔内投与、ＣＮＳ中への脳室内投与、又は静脈内投与により投与される。

【0101】

いくつかの実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物は、本発明に係る疾患のいずれか１つの処置のための１つ以上の他の活性医薬成分との組合せでの使用のためのものである。

【0102】

ある実施形態によれば、本発明は、他の活性医薬成分が本発明に係る疾患の処置のために作製された成分である本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用に関する。

【0103】

ある実施形態によれば、本発明は、他の医薬成分がアンチセンスオリゴヌクレオチドである本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用に関する。

【0104】

ある実施形態によれば、本発明は、他の医薬成分がｍｉＲ－２７ｂ若しくはｍｉＲ－１３４又は両方を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドである本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用に関する。

【0105】

ある実施形態によれば、本発明は、有効投与量の本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。いくつかのかかる実施形態では、本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドはコンジュゲートされる。すなわち、送達媒体に、又は他の治療用分子に、又は本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドの効能をなんらかの形で増強する分子に、コンジュゲートされる。

【0106】

ある実施形態によれば、本発明は、有効投与量の本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物に関し、ただし、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、唯一の活性医薬成分である。

【0107】

いくつかの実施形態では、抗アデノシンキナーゼ化合物は、抗アデノシンキナーゼ組成物により処置されるある特定の疾患に対して他の療法と共に有利に使用されうる。いくつかの実施形態では、本発明の抗アデノシンキナーゼ化合物は、本願に挙げられる神経学的疾患に対する他の療法との組合せでの使用のためものである。

【0108】

いくつかの実施形態では、本発明の抗アデノシンキナーゼ化合物は、神経学的疾患、特定的には癲癇、疼痛、若しくは脳卒中、又はこれらの併存症の処置、緩和、回復、先制処置、予防、疾患修飾的又は治癒的処置のための他の療法との組合せにおける、神経学的疾患、特定的には癲癇、疼痛、又は脳卒中の処置、緩和、回復、先制処置、予防、疾患修飾的又は治癒的処置での使用のためものである。

【0109】

それにより、本発明の抗アデノシンキナーゼアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の他の療法との組合せでの使用のためのものである。いくつかの実施形態では、前記他の療法は、抗ｍｉＲ－２７ｂアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、前記他の療法は、抗ｍｉＲ－１３４アンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、前記他の療法は、ヒトなどの哺乳動物においてＮｒｆ－２／ＡＲＥ経路を誘発する。いくつかの実施形態では、抗アデノシンキナーゼアンチセンスオリゴヌクレオチド組成物は、抗ｍｉＲ２７ｂアンチセンスオリゴヌクレオチド、抗ｍｉＲ－１３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びＮｒｆ－２／ＡＲＥ経路誘発療法の１つ以上との組合せで使用されるべきである。

【0110】

いくつかの実施形態では、本発明のアデノシンキナーゼを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、それが唯一の活性成分である組成物で使用されるべきであり、いくつかの実施形態では、それは他の活性医薬成分を含む組成物での使用のためのものである。

【0111】

本発明は、本発明の抗アデノシンキナーゼアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を含み薬学的に許容可能な担体をさらに含む医薬組成物を提供する。

【0112】

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、唯一の活性医薬成分として抗アデノシンキナーゼアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に１つ以上の活性医薬成分が存在する。

【0113】

投与量
「有効投与量」という表現は、所望の効果を達成する薬剤の用量を表す。本発明との関連では、所望の効果は、アデノシンキナーゼの活性低下である。アデノシンキナーゼの活性低下は、たとえば、ＡＤＫｍＲＮＡ又はＡＤＫｐｒｅｍＲＮＡのどちらかの分解をもたらすオリゴヌクレオチドを使用したときにアデノシンキナーゼのレベルを測定することにより、測定可能である。

【0114】

本発明の化合物は、有効投与量での使用のためのものであり、組成物は、有効投与量の本発明の化合物を含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、各投与時に投与される化合物の投与量、たとえば、単位用量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。

【0116】

いくつかの実施形態では、有効用量は、逐次投与の投与量間の期間にわたりアデノシンキナーゼ又はその活性を有意レベルに、たとえば、被験者の治療的利益となるレベルにダウンレギュレートするのに十分な用量である。

【0117】

本発明の医薬組成物は、いくつかの実施形態では、初期投与量ビルドアップ相を提供するとともに、その後、疾患病理に依存して、被験者において、たとえば、被験者の標的組織で、疾患の処置が奏功する化合物濃度を維持する目的で維持投与量スキームが続きうる、投与のために作製されうる。投与量の有効性は、例として、疾患状態の指標となる疾患パラメーターの観測により測定されるうるか、又は標的組織に依存してアデノシンキナーゼ活性などの各種組織パラメーター又は代替例として血漿中の測定可能疾患状態依存パラメーターの観測により測定可能である。

【0118】

薬剤送達
各種送達システムは公知であり、本発明の治療剤を投与するために使用可能である。投与方法としては、限定されるものではないが、皮下投与、静脈内投与、非経口投与、鼻投与、肺内投与、直腸投与、膣投与、子宮内投与、尿道内投与、眼投与、耳投与、皮膚投与、真皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、硬膜外投与、脳室内投与、大脳内髄腔内投与、若しくは経口投与、又は脳若しくは脳脊髄液への直接投与が挙げられる。組成物は、いずれかの便利な経路により、たとえば、注入又はボーラス注射剤により、上皮又は粘膜皮膚組織（たとえば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を介して吸収により投与されうるとともに、他の生物学的活性剤を併用して又は併用せずに投与されうる。投与は、全身的又は局所的でありうる。そのほか、脳室内及び脊髄内投与を含めて、いずれかの好適な経路により中枢神経系に本発明の組成物を投与することが望ましいであろう。脳室内注射は、たとえば、オンマヤ又は他のリザーバーアプローチなどのリザーバーに装着された心室内カテーテルにより促進されうる。肺内投与もまた、たとえば、インヘラー又はネブライザー及びエーロゾル化剤入り製剤の使用により採用可能である。好ましくは、治療剤は、ＣＮＳ又はＰＮＳに送達される。

【0119】

送達手段としては、吸入送達、シリンジ又はミニ浸透圧ポンプによる筋肉への直接筋肉内送達、シリンジ又はミニ浸透圧ポンプにより腹膜に直接投与される腹腔内投与、シリンジにより皮膚下に直接投与される皮下投与、注射による又は浸透圧ポンプに装着された小型カテーテルを用いた脳室への直接投与の脳室内投与が挙げられる。さらに、筋肉内又は脊髄上に直接配置されるインプラント（たとえば、小型シリコンインプラント）を作製可能である。処置を必要とする領域に本発明の組成物を局所投与することが望ましいであろう。これは、たとえば、限定を目的としたものではないが、局所適用により、注射により、カテーテルを利用して、坐剤を利用して、又はインプラントを利用して達成されうるとともに、前記インプラントは、シラスティック膜などの膜又はファイバーを含めて、多孔性、非多孔性、又はゼラチン様材料でありうる。

【0120】

医薬組成物
本発明はまた、医薬組成物を提供する。かかる組成物は、治療有効量の治療剤、たとえば、治療有効量の本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ、たとえば、配列番号２～８０のいずれか１つと、薬学的に許容可能な担体と、を含みうる。「薬学的に許容可能」という用語は、規制機関により承認されたものとして定義されうる。規制機関は、たとえば、欧州医薬品庁、連邦政府若しくは州政府でありうるか、又は米国薬局方若しくは動物より特定的にはヒトにおける使用に関する他の一般に認められている薬局方に列挙されたものでありうる。「治療有効量」という用語は、障害又は疾患の発生又は存在の臨床的に有意な阻害、回復、又は逆転をもたらす治療剤の量として定義されうる。「担体」という用語は、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又は治療剤の投与に用いられる媒質を意味しうる。かかる医薬担体は、無菌液体、たとえば、石油起源、動物起源、植物起源、又は合成起源のものを含めて水及び油、たとえば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などでありうる。水は、医薬組成物が静脈内投与されるときの好ましい担体でありうる。生理食塩水溶液、水性デキストロース、及びグリセロール溶液もまた、液状担体として、とくに注射用溶液用として採用されうる。好適な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、穀粉、チョーク、シリカゲル、ナトリウムステアレート、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望により、湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤を含有しうる。こうした組成物は、溶液剤、サスペンジョン剤、エマルジョン剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、持続放出製剤などの形態をとりうる。組成物は、伝統的結合剤及びトリグリセリドなどの担体を用いて坐剤として製剤化されうる。経口製剤は、標準的担体、たとえば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、マグネシウムステアレート、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含みうる。かかる組成物は、患者に対して適正投与形態を提供するように好適量の担体と共に、治療有効量の治療剤、好ましくは精製形を含有しうる。製剤は、投与モードに適するものでありうる。静脈内投与用組成物は、無菌等張水性緩衝液の溶液でありうる。所要により、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位で疼痛を和らげるためにリグノカインなどの局所麻酔剤を含みうる。成分は、たとえば、活性剤の数量を記したアンプルやサシェなどのハーメチックシール容器に入れて、ドライ凍結乾燥粉末又は水フリー濃縮物として、別々に供給されうるか又はユニット製剤で混合一体化されうるかのどちらかである。組成物を注入により投与する場合、無菌医薬グレード水又は生理食塩水を含有する注入ボトルを用いてディスペンスされうる。組成物を注射により投与する場合、投与前に成分を混合しうるように、注射用無菌水又は生理食塩水のアンプルを提供しうる。

【実施例】

【0121】

実施例
実施例１．たとえば、ＬＮＡヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの合成は、文献で周知である。ＬＮＡモノマー及びオリゴヌクレオチド合成は、国際公開第２００７／１１２７５号の実施例１及び２で言及される方法を用いて実施されうる。ヒト又はラット血漿中のＬＮＡオリゴヌクレオチドの安定性のアセスメントは、国際公開第２００７／１１２７５４号の実施例４で言及される方法を用いて実施されうる。ＬＮＡ修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドによる培養細胞の処置は、国際公開第２００７／１１２７５号の実施例６で言及される方法を用いて実施されうる。

【0122】

実施例２．培養細胞及び組織からのＲＮＡ単離及び発現解析は、国際公開第２００７／１１２７５４号の実施例１０で言及される方法を用いて実施される。培養細胞及び組織からのＲＮＡｓｅｑベース転写プロファイリングは、（Djebali et al.Nature 489:101-108 or Chu et al.Nucleic Acid Ther.22:271-274 or Wang et al.Nature Reviews Genetics 10:57-63）で言及される方法を用いて実施される。

【0123】

実施例３：細胞培養
接着性ヒト乳腺癌細胞系MCF7（ECACC番号86012803）をATCC（カタログ番号HTB-22（商標））から購入し、Nunc（商標）EasYFlask（商標）細胞培養物フラスコ（カタログ番号159910,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）に入れて、１０％ウシ胎仔血清（カタログ番号F4135,Sigma Aldrich,St.Louis,MO,USA）、１％非必須アミノ酸（カタログ番号11140050,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）、１％Ｌ－グルタミン（カタログ番号G7513,Sigma Aldrich,St.Louis,MO,USA）、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（カタログ番号P4333,Sigma Aldrich,St.Louis,MO,USA）が供給されたイーグル最小必須培地（カタログ番号M2279,Sigma Aldrich,St.Louis,MO,USA）中で維持した。細胞を３７℃の加湿５％ＣＯ２インキュベーター中に保持し、週２回継代した。

【0124】

実施例４：アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物ライブラリーの一次スクリーニング
ロング及びショートアイソフォーム（ＡＤＫ－ＬＳ）両方のアデノシンキナーゼに、７９アンチセンスオリゴヌクレオチドのライブラリーを設計した。IDT（Coralville,Iowa,USA）によりアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成し、無菌条件下でヌクレアーゼフリー水（カタログ番号AM9938,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）で５００μＭのストック濃度に希釈した。再懸濁されたオリゴヌクレオチドを－２０℃で貯蔵した。

【0125】

トランスフェクションの前日、２４ウェルNunc（商標）Cell-Culture Treated Multidishes（カタログ番号142475, Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）にMCF7細胞を１．２５×１０^５細胞／ウェルで播種した。トランスフェクションの日、トランスフェクションの１時間前に細胞媒体を除去し、４７５μＬの維持培地を添加した。すべてのオリゴヌクレオチドをOpti-MEM（カタログ番号31985-070,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）で１０ｎＭの最終ウェル濃度に希釈した。Lipofectamine（商標）RNAiMAX（カタログ番号13778150,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）をOpti-MEMで１．５μＬの最終ウェル濃度に希釈した。等量のRNAiMAX及びアンチセンスオリゴヌクレオチド溶液を合わせて５分間インキュベートした後、２５μＬの混合物をウェルに添加した。実験コントロールとして、スクランブルコントロールオリゴヌクレオチド及びRNAiMAXモック処置された細胞の両方を使用した。トランスフェクションの４８時間後、製造業者の説明書に従ってRNeasyミニキット（カタログ番号74106,Qiagen,Hilden,Germany）を用いてＲＮＡ抽出を行った。ezDNase（商標）（カタログ番号11766051,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）によるｇＤＮＡ除去を含めて、ランダムヘキサマープライマー（カタログ番号SO142,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）を用いて、製造業者の説明書に従ってSuperscript IV逆転写酵素（カタログ番号18090010,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）を用いて、逆転写を行った。Integrated DNA Technologies（Newark,NJ,USA）により合成されたTaqmanアッセイ（表１）及びTaqMan（商標）Universal Master Mix II,no UNG（カタログ番号4440040,Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA）を用いて、製造業者の説明書に従って、QuantStudio 6 Flex（Applied Biosystems,Waltham,MA,USA）でｑＰＣＲを行った。すべてのアッセイをエクソンスパニングとなるように設計し、プライマーのブラストにより特異性を確認し、５段階希釈を用いてプライマーの効率を試験した。Hprt1をハウスキーピング遺伝子として使用した。使用されたＡＤＫアッセイは、すべてのｍＲＮＡバリアントを検出する。

【0126】

【表4】

【0127】

すべてのデータをMicrosoft Excelで計算し、Prismバージョン9.1.1（GraphPad, San Diego, CA, USA）で可視化した。参照としてRNAiMAXのみでモック処置された細胞を用いて、ΔΔＣｔ法を用いてｑＰＣＲ結果を解析した。ｎ＝１で２技術的レプリケートで第１のスクリーニングを行い（図１）、平均値±ＳＥＭとして描かれる。トップ１１候補を選び、図２に平均値±ＳＥＭとして描かれるフォローアップ実験（ｎ，Ｎ＝２，３～４）でＡＤＫ－ＬＳｍＲＮＡノックダウンのレベルを確認した。

【0128】

実施例５：選択アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＡＤＫ－ＬＳのノックダウン用量範囲
アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度が５、１、又は０．２ｎＭのどれかであったこと以外は実施例４と同様にトランスフェクション及びｑＰＣＲを行った。実験を繰り返して、各々１～２技術的レプリケートで１～２生物学的レプリケートを与えた。

【0129】

図３は、用量－応答試験の結果を示す。

【0130】

実施例６：培養細胞系での選択ＡＤＫ－ＬＳアンチセンスオリゴヌクレオチドのＩＣ_５０値の決定
３倍希釈で９０ｎＭ～０．００４ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度範囲で細胞をトランスフェクトした以外は実施例６と同様にトランスフェクション及びｑＰＣＲを行った。ｑＰＣＲにより決定されたＡＤＫ－ＬＳの相対レベルをGraphpad Prism（バージョン9.0.2,Graphpad GraphPad Software）でｌｏｇ（Ｍ）に対してプロットした。３パラメーター非線形当てはめを用いて用量－応答曲線を当てはめ、ｎＭ単位でＩＣ５０値を計算した。実験を繰り返して、各々２技術的レプリケートで２生物学的レプリケートを与えた。図４は、ＡＤＫ－ＬＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量－応答曲線及びＩＣ_５０値を示す。

【0131】

実施例７：培養細胞系でのＲＮＡシーケンシング
アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度がそれぞれ３及び３０ｎＭであったこと以外は以上の実験と同様に細胞のトランスフェクションを行った。実験を繰り返して３生物学的レプリケートを与えた。miRNeasyミニキット（カタログ番号217004、Qiagen）を用いて細胞ペレットからＲＮＡを単離し、ＲＮａｓｅフリーＤＮａｓｅセット（カタログ番号79254,Qiagen）を用いて汚染ゲノムＤＮＡを除去した。Bioanalyzer 2100（カタログ番号5067-1511,Agilent technologies,Santa Clara,CA,USA）上でＲＮＡナノチップを用いて最終ＲＮＡ品質を評価した。単離されたＲＮＡサンプルをｒＲＮＡ枯渇し、SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit-HI Mammalian（カタログ番号38229000,Takara Bio Europa）を用いてシーケンシング用として調製した。RiboGoneを用いてｒＲＮＡ枯渇を実施し、AMPure XPビーズ（カタログ番号A63881、Beckman Coulter,Brea,CA,USA）を用いて残留ＲＮＡを精製し、製造業者のプロトコルに従ってライブラリー構築を行った。Pippin Prep（Sage Science,Inc.Beverly,MA,USA）上で最終ライブラリーをサイズ選択し（１５０～５００ｂｐ）、Qubit及び高感度チップ（Agilent）を用いてBioanalyzer 2100上で品質管理し、KAPAライブラリー定量キット（Kapa Biosystems,Wilmington,MA,USA）を用いて定量した。Novogene（Cambridge,UK）でNovaseq 6000 S4上でＲＮＡシーケンシングを実施した。

【0132】

アダプター配列を除去しTrim Galore（バージョン0.4.1）を用いて２０未満のPhredスコアの低品質塩基をトリムすることにより、シーケンシングデータを前処理した。FastQC及びMultiQC¹を用いて品質管理を実施し高品質データを確保した。

【0133】

STAR^２を用いてヒトゲノム（hg19）にフィルターリードをマップすることにより、遺伝子発現の定量を実施した。ソフトウェアFeatureCountsを用いてリードの数を定量し、Gencode V37^３からの遺伝子アノテーションを用いて各遺伝子にマップした。ＲのDESeq2を用いて遺伝子発現レベル^４で差次的発現解析を実施した。参照^５のGGGenomeを用いてｉｎ ｓｉｌｌｉｃｏ解析により各アンチセンスオリゴヌクレオチドに対して予測遺伝子標的を見いだした。RefSeqからの成熟スプライスｍＲＮＡ配列（スプライス）及び非スプライスｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列（プレスプライス）の両方に対して各アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列をマッチさせ、合計３つまでの挿入、欠失、又はミスマッチを許容した。各アンチセンスオリゴヌクレオチドマッチに対して挿入、欠失、及びミスマッチの和を予測標的部位の品質を表す「距離」（ｄ）として表した。ｄ＝０は、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び（プレ）ｍＲＮＡとの間の結合の完全マッチを意味し、ｄ＝３は３つの挿入、欠失、又はミスマッチを意味する。予測ｍＲＮＡ及びｐｒｅ－ｍＲＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチド標的化をＲＮＡ－ｓｅｑからの遺伝子発現及び差次的発現解析と比較し、アンチセンスオリゴヌクレオチドオフ標的化に起因してどの遺伝子が差次的発現されるかを推定した。すべてプロッティングは、Rで行われた。

【0134】

１ Philip Ewels and others,‘MultiQC: Summarize Analysis Results for Multiple Tools and Samples in a Single Report’,Bioinformatics,32.19(2016),3047－48<https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btw354>.
２ Alexander Dobin and others,‘STAR: Ultrafast Universal RNA-Seq Aligner’,Bioinformatics,29.1(2013),15－21<https://doi.org/10.1093/bioinformatics/bts635>.
３ Yang Liao,Gordon K Smyth,and Wei Shi,‘FeatureCounts:An Efficient General Purpose Program for Assigning Sequence Reads to Genomic Features’,Bioinformatics,30.7(2014),923－30<https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btt656>.
４ Michael I Love,Wolfgang Huber,and Simon Anders,‘Moderated Estimation of Fold Change and Dispersion for RNA-Seq Data with DESeq2’,Genome Biology,15.12(2014),550<https://doi.org/10.1186/s13059-014-0550-8>.
５ Tokuyuki Yoshida and others,‘Evaluation of Off-Target Effects of Gapmer Antisense Oligonucleotides Using Human Cells’,Genes to Cells,24.12(2019),827－35<https://doi.org/https://doi.org/10.1111/gtc.12730>.

【0135】

ＡＤＫ発現に及ぼすアンチセンスオリゴヌクレオチド処置の影響を評価するために、発現レベルを規格化し、サンプル全体にわたり比較した（図７）。

【0136】

全トランスクリプトームに及ぼすＡＤＫ－ＬＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、差次的遺伝子発現解析を実施し、得られたデータをボルケーノプロットで可視化した（図５（配列番号２１）及び図６（配列番号７１））。

【0137】

ＲＮＡ発現の変化を１）トランスクリプトーム中の他の配列を標的とすることによる直接効果又は２）直接効果の下流の二次的結果のどちらかに帰属できるかを調べるために、１）スプライストランスクリプトーム（細胞質）内及び２）非スプライストランスクリプトーム（核）内のすべての潜在的標的部位を予測するアンチセンスオリゴヌクレオチド配列を用いて、初期ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析を実施した。これは、０、１、２、又は３挿入、欠失、又はミスマッチ（まとめて距離（ｄ）と呼ばれる）のどれかを有する標的部位に対して行われた。０の距離は、ＡＤＫ ＲＮＡに結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドのみで観測された。結果は図８（配列番号２１）及び図９（配列番号７１）に描かれる。

【0138】

実施形態
１ アデノシンキナーゼ転写物内の核酸配列に相補的な１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む治療用ＲＮＡ化合物。

【0139】

２ アデノシンキナーゼ転写物内の核酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％相補的である、実施形態１に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【0140】

３ アデノシンキナーゼ転写物が配列番号１である、実施形態１又は２に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【0141】

４ 治療用ＲＮＡ化合物が配列番号１６４～２０５のいずれか１つに相補的である、実施形態１～３に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【0142】

５ 化合物が、アデノシンキナーゼタンパク質を発現しているヒト細胞でアデノシンキナーゼタンパク質発現を低減する能力がある、実施形態１～４のいずれか一つに記載の治療用ＲＮＡ化合物

【0143】

６ ＡＤＫタンパク質発現が、化合物に暴露されていないヒト細胞でのＡＤＫタンパク質発現と比較して、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％低減される、実施形態５に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【0144】

７ ＡＤＫ転写物を発現しているヒト又は哺乳動物細胞でＡＤＫ転写物（たとえばｍＲＮＡ）発現を低減する能力がある、実施形態１～６のいずれか一つに記載の治療用ＲＮＡ化合物

【0145】

８ ＡＤＫ転写物発現が、化合物に暴露されていないヒト細胞でのＡＤＫ転写物発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％低減される、実施形態７に記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【0146】

９ 化合物がアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡである、実施形態１～８のいずれか一つに記載の治療用ＲＮＡ化合物。

【0147】

１０ アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡが１つ以上の親和性増強用ヌクレオシドアナログを含む、実施形態９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ。

【0148】

１１ アンチセンスオリゴヌクレオチド中のヌクレオシドアナログの１つ以上が、２’－０－アルキルＲＮＡ、２’－０－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－０－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロＡＮＡ、二環式ヌクレオシドアナログ（ＬＮＡ）、若しくはそれらの組合せを含む、又はｓｉＲＮＡ中のヌクレオシドアナログの１つ以上が、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ－修飾ヌクレオチド、３’－末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）、ロックヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ－修飾ヌクレオチド、２’－アルキル－修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、及び非天然塩基を含むヌクレオチドを含む、実施形態１０に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ。

【0149】

１２ １つ以上のヌクレオシドアナログが親和性増強用２’糖修飾ヌクレオシドである、実施形態１０又は１１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ

【0150】

１３ 親和性増強用２’糖修飾ヌクレオシドがＬＮＡである、実施形態１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ。

【0151】

１４ ＬＮＡが、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－０－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、ｕ－Ｌ－ＬＮＡ、Ｐ－ＤＬＮＡ、２’－０，４’－Ｃ－エチレン－ブリッジ核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらのいずれかの組合せからなる群から選択される、実施形態１３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ。

【0152】

１５ アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡが、１つ以上の５’－メチル－シトシンヌクレオ塩基を含む、実施形態１～１４のいずれか一つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ

【0153】

１６ アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの親和性増強用ヌクレオチドアナログを有する、１０～３０ヌクレオチド長の配列を含むＡＤＫｐｒｅ－ｍＲＮＡ（配列番号１）に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド

【0154】

１７ 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート、又はホスホジエステル連結、ホスホトリエステル連結、メチルホスホネート連結、又はホスホルアミデート連結のいずれかから選択される少なくとも１つのヌクレオシド間連結を含む、実施形態１６に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0155】

１８ アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡＤＫ－Ｌ及びＡＤＫ－Ｓｐｒｅ－ｍＲＮＡの両方に相補的である、実施形態１６又は１７）に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド

【0156】

１９ アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡＤＫ－Ｌ及びＡＤＫ－Ｓの発現をダウンレギュレートたとえばノックダウンする能力がある、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0157】

２０ 配列番号１６４～２０５のいずれかに相補的なモチーフを含む、実施形態１６～１９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0158】

２１ モチーフが配列番号８３～１６１のいずれか１つである、実施形態２０に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0159】

２２ アンチセンスオリゴヌクレオチドがギャップマーであり、少なくとも５連続ＤＮＡヌクレオチドのストレッチを含有する、実施形態１６～２１のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0160】

２３ アンチセンスオリゴヌクレオチドが１４～２０ヌクレオチド長の配列を含む、実施形態１６～２２のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0161】

２４ 親和性増強用ヌクレオチドアナログが、ＬＮＡ、トリシクロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’環状エチル（ｃＥＴ）、ＵＮＡ、２’フルオロ及びコンフォメーショナル制限ヌクレオシド（ＣＲＮ）のリストから選択される、実施形態１６～２３のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0162】

２５ アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも１ＬＮＡを含む、実施形態１６～２４のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0163】

２６ アンチセンスオリゴヌクレオチドが２０～５５％ＬＮＡを含む、実施形態１６～２５のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0164】

２７ アンチセンスオリゴヌクレオチドが、トリシクロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’環状エチル（ｃＥＴ）、ＵＮＡ、２’フルオロ、及びコンフォメーショナル制限ヌクレオシド（ＣＲＮ）のいずれか１つである１ヌクレオシド以上をさらに含む、実施形態２６に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0165】

２８ ＬＮＡがベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである、実施形態１６～２７のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0166】

２９ すべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり、すべての修飾シトシンが５’－メチル－シトシンである、実施形態１６～２８のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0167】

３０ アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２～８０のいずれか１つ、たとえば、配列番号４、配列番号１２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３７、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、又は配列番号８０のいずれか１つである、実施形態１６～２９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【0168】

３１ 実施形態１～１５に記載の治療用ＲＮＡ化合物又は実施形態１６～３０のいずれか一つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物。

【0169】

３２ 医薬剤としての使用のための、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物又は実施形態１６～３０のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は実施形態３１に記載の組成物。

【0170】

３３ 前記治療用ＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、又は組成物が、医薬剤としての使用のためのものである、好ましくは前記医薬剤が、ＡＤＫ活性の修飾が有益である疾患の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物又は実施形態１６～３０のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は実施形態３１に記載の組成物。

【0171】

３４ 前記治療用ＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、又は組成物が、細胞における又は個体における、たとえばヒト又は哺乳動物におけるＡＤＫ Ｌ／ＳなどのＡＤＫの発現を低減又はノックダウンする使用のためのものである、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物又は実施形態１６～３０のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は実施形態３１に記載の組成物。

【0172】

３５ 使用が、ＣＮＳ又はＰＮＳ疾患の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、回復、先制処置、又は予防のためのものである、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0173】

３６ 前記アンチセンスオリゴヌクレオチド又は前記組成物が、ＣＮＳ又はＰＮＳの疾患、たとえば、精神医学的神経学的障害、神経変性障害、又は神経発達障害の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0174】

３７ ニューロン保護剤としての使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0175】

３８ ＣＮＳ又はＰＮＳの疾患、精神医学的障害、神経学的障害、神経変性障害、神経発達障害、細胞性外傷及び炎症に関連する中枢及び末梢神経系疾患、ニューロナル損傷、海馬損傷、外傷性脳傷害、記憶障害、海馬硬化症、パーキンソン病、多発性硬化症、急性脊髄傷害、筋萎縮性側索硬化症、失調症、ベル麻痺、シャルコー・マリー・トゥース病、頭痛、ホートン頭痛、片頭痛、ピック病、進行性核上性麻痺、多系変性、運動ニューロン疾患、ハンチントン病、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、皮質基底核変性症、原発性進行性失語症又はその症状若しくは影響の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0176】

３９ 癲癇の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0177】

４０ 発作の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0178】

４１ 前記アンチセンスオリゴヌクレオチド又は前記組成物が、癲癇及び／又は発作、好ましくは、処置抵抗性癲癇、後天性、遺伝性、及び／又は特発性癲癇、療法抵抗性癲癇性症候群、薬剤抵抗性癲癇、薬学抵抗性焦点性癲癇、自発性発作、療法抵抗性発作、焦点性癲癇、全身性癲癇又は癲癇重積ステータスの防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものである、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0179】

４２ 癲癇、薬剤抵抗性癲癇、薬剤抵抗性焦点性癲癇、発作、自発性発作、療法抵抗性発作、焦点性癲癇、好ましくは、前記焦点性癲癇は、前頭葉、頭頂葉、後頭葉、又は側頭葉を焦点とする、全身性癲癇、好ましくは、前記全身性癲癇は、欠神、ミオクローニック発作、強直性間代性発作、強直性発作、無緊張性発作、間代性発作及び痙攣、癲癇重積ステータスの中から選択される、急性脳傷害により誘発される癲癇原性、常染色体優性夜間前頭葉癲癇、徐波睡眠期持続性棘徐波、ドラベ症候群、卒中後発生癲癇、癲癇性脳症、笑い癲癇、欠神、良性新生児発作、ジーボンス症候群、若年性ミオクローヌス癲癇、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、近心側頭葉癲癇、ミオクローニック失立癲癇、大田原症候群、パナイオトポロス症候群、ＰＣＤＨ１９症候群、中心側頭部棘波併発良性小児期癲癇、スタージ・ウェーバー症候群、症状性焦点性癲癇、一過性癲癇性健忘症及びウェスト症候群、及び／又は神経膠腫関連癲癇の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0180】

４３ 疼痛の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のためのものであり、好ましくは、前記疼痛が、慢性疼痛、神経因性痛、化学療法誘発神経因性痛、片頭痛、頭痛、痛覚過敏、アロディニア、及び／又は線維筋痛症である、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0181】

４４ 疼痛の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0182】

４５ 疼痛、慢性疼痛、神経因性痛、化学療法誘発神経因性痛、前兆性片頭痛及び無前兆性片頭痛を含む片頭痛、原発性頭痛、緊張性頭痛、群発頭痛、ホートン頭痛、慢性連日性頭痛、副鼻洞頭痛、外傷後頭痛、運動時頭痛、持続性片側頭痛、睡眠時頭痛、痛覚過敏、熱痛覚過敏、アロディニア、触覚性アロディニア、及び／又は線維筋痛症の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0183】

４６ 精神医学的障害、認知障害、睡眠障害、心血管障害、呼吸器障害、癌、腎障害、炎症、又は代謝障害の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0184】

４７ 精神医学的障害、神経精神障害、不安症、うつ病、双極性障害、注意欠陥多動性障害、注意欠陥障害、自閉症、アスペルガー症の、ツレット症、統合失調症、妄想型統合失調症、破瓜型統合失調症、緊張型統合失調症、鑑別不能型統合失調症、残遺型統合失調症、単純型統合失調症、又は不特定統合失調症の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0185】

４８ 認知障害、認知障害、認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、前頭側頭型認知症、又はレビー小体認知症の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0186】

４９ 睡眠障害の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0187】

５０ 睡眠調節剤としての使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0188】

５１ 睡眠促進での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0189】

５２ 心血管障害、末梢動脈疾患、術後心房細動、心不全、慢性心不全、脳内出血誘発脳傷害、脳卒中、脳虚血、又は虚血の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0190】

５３ 呼吸器障害、喘息、又は慢性閉塞性肺疾患の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0191】

５４ 癌、神経系癌、グリオーマ、膠芽細胞腫、肝癌、又は癌転移の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0192】

５５ 腎障害、腎傷害、腎炎症、アルブミン尿、又は糸球体傷害の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0193】

５６ 炎症の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0194】

５７ 炎症性障害、酸化的ストレス、炎症、アポトーシス、関節炎、骨関節炎、関節リウマチ、及び、これらの病態に関連する疼痛、脳炎、髄膜炎、ヒトラスムッセン脳炎、大脳皮質及び／又は海馬の炎症、進行性認知衰退、結腸炎、潰瘍性結腸炎、又は炎症性腸疾患の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0195】

５８ 代謝障害、好ましくは糖尿病、より好ましくは１型又は２型糖尿病の処置、緩和、先制防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0196】

５９ プラダー・ウィリー症候群、アンジェルマン症候群、神経線維腫症、血管発生関連疾患、血管発生促進、網膜障害、好ましくは糖尿病性レチノパチー又は聴力損失の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置、緩和、先制処置、又は予防での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0197】

６０ 前記アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物が、全身投与、皮下投与、鼻投与、髄腔内投与、ＣＮＳ中への脳室内投与、又は静脈内投与により投与される、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0198】

６１ 実施形態３３～６０のいずれか１つに記載の疾患のいずれかの防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置のための１つ以上の他の活性医薬成分との組合せでの使用のための、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0199】

６２ 他の活性医薬成分が、実施形態３３～６０のいずれか１つに記載の疾患の防止的、治癒的、又は疾患修飾的処置のために作製された成分である、実施形態６１に記載の使用。

【0200】

６３ 他の医薬成分が、ｍｉＲ－２７ｂ又はｍｉＲ－１３４を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドである、実施形態６１又は６２に記載の使用。

【0201】

６４ 有効投与量の実施形態１～６３のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。

【0202】

６５ 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが唯一の活性医薬成分である、有効投与量の実施形態１～６４のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、たとえばアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物。

【0203】

６６ 組成物が実施形態３３～６３のいずれか１つに記載の使用のためのものである、実施形態６４又は６５に記載の医薬組成物。

【0204】

６７ 組成物が髄腔内投与又は脳室内投与のためのものである、実施形態６４～６６のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0205】

６８ 前記組成物がポンプで投与され、好ましくは前記ポンプがミニポンプであり、より好ましくは前記ミニポンプがミニ浸透圧ポンプである、実施形態６７に記載の医薬組成物。

【0206】

６９ 前記組成物が心室内カテーテルにより促進される脳室内投与のためのものであり、好ましくは前記カテーテルがリザーバーに装着され、好ましくは前記リザーバーがオンマヤリザーバーである、実施形態６７～６９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0207】

７０ 前記組成物が、１日間、２日間、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、又は１２０日間のいずれか１つのインターバルで投与される、実施形態６４～６９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0208】

７１ 前記組成物が、１～２００日間、１０～１９０日間、２０～１８０日間、３０～１７０日間、４０～１６０日間、５０～１５０日間、６０～１４０日間、７０～１３０日間、８０～１２０日間、９０～１１０日間、又は好ましくは約１００日間のインターバルで投与される、実施形態６４～６８のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0209】

７２ 実施形態３３～６０のいずれか１つに記載の疾患を処置する方法での使用のための、実施形態１～３１のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物。

【0210】

７３ 実施形態１～３０のいずれか１つに記載の治療用ＲＮＡ化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、又は実施形態３１に記載の組成物、又は実施形態６４～７１のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用による、実施形態３３～６０のいずれか１つに記載の疾患の処置の方法。

【0211】

７４ 処置が防止的、治癒的、又は疾患修飾的のいずれか１つである、実施形態３３～６３のいずれか１つに記載の使用又は実施形態７３に記載の方法。

【0212】

７５ 実施形態１６～３０のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は実施形態３１に記載の組成物の使用により、実施形態３３～５９のいずれか１つに記載の疾患を診断する方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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【国際調査報告】