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▶ ノマド バイオサイエンス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-29
(54)【発明の名称】タウマチン及びブラゼインを含む甘味料ブレンド
(51)【国際特許分類】
A23L 27/00 20160101AFI20240822BHJP
A23L 27/12 20160101ALI20240822BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20240822BHJP
A23L 33/185 20160101ALI20240822BHJP
C12N 15/29 20060101ALN20240822BHJP
C07K 14/43 20060101ALN20240822BHJP
C07K 14/415 20060101ALN20240822BHJP
A61K 47/42 20170101ALN20240822BHJP
【ＦＩ】
A23L27/00 101
A23L27/12
A23L33/105
A23L33/185
C12N15/29 ZNA
C07K14/43
C07K14/415
A61K47/42
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024510292
(86)(22)【出願日】2022-08-22
(85)【翻訳文提出日】2024-04-19
(86)【国際出願番号】 EP2022073331
(87)【国際公開番号】W WO2023021218
(87)【国際公開日】2023-02-23
(31)【優先権主張番号】63/235,262
(32)【優先日】2021-08-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】519324385
【氏名又は名称】ノマド バイオサイエンス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100168631
【弁理士】
【氏名又は名称】佐々木 康匡
(72)【発明者】
【氏名】シュテファン アネット
(72)【発明者】
【氏名】ギリッチ アナトリ
(72)【発明者】
【氏名】グレバ ユリ
(72)【発明者】
【氏名】ハーン－レープマン ジモーネ
(72)【発明者】
【氏名】プロハスカ ハイケ
【テーマコード（参考）】
4B018
4B047
4C076
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B018LB01
4B018LB07
4B018LB08
4B018LB10
4B018LE01
4B018LE02
4B018LE03
4B018LE05
4B018MD20
4B018MD52
4B018ME01
4B018ME14
4B018MF01
4B018MF02
4B047LF02
4B047LF05
4B047LF07
4B047LF08
4B047LF09
4B047LF10
4B047LG18
4B047LG38
4B047LP01
4B047LP02
4C076EE41T
4C076FF52
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA20
4H045CA30
4H045EA02
4H045FA74
4H045GA10
4H045GA21
(57)【要約】
本発明は、タウマチン及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
タウマチン及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物。
【請求項2】
タウマチンが、タウマチンＩ、タウマチンＩＩ、タウマチンＡ及びタウマチンＢから選択され、及び／又はブラゼインが、タイプ１のブラゼイン及びタイプ３のブラゼインから選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
タウマチンが、タウマチンＩ又はタウマチンＩＩであり、ブラゼインが、タイプ１のブラゼイン及びタイプ３のブラゼインから選択され、好ましくは、タウマチンがタウマチンＩＩであり、より好ましくは、タウマチンがタウマチンＩＩであり、ブラゼインがタイプ３のブラゼインである、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
タウマチンが、タウマトコックス・ダニエリ（Ｔｈａｍａｕｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｄａｎｉｅｌｌｉｉ）から単離されず、及び／又はブラゼインがペンタジプランドラ・ブラッゼアナ・バイロン（Ｐｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａ ｂｒａｚｚｅａｎａ Ｂａｉｌｌｏｎ）から単離されない、請求項１～３のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項5】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンが約５質量％～約１５質量％の量で存在し、ブラゼインが約８５質量％～約９５質量％の量で存在する、請求項１～４のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項6】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンＩＩが約５質量％～約１５質量％の量で存在し、ブラゼインが約８５質量％～約９５質量％の量で存在する、請求項１～５のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項7】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンが約８質量％～約１２質量％、好ましくは約７質量％の量で存在し、ブラゼインが約８８～９２質量％、好ましくは約９３質量％の量で存在する、請求項１～５のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項8】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンＩＩが約８質量％～約１２質量％、好ましくは約７質量％の量で存在し、ブラゼインが約８８～９２質量％、好ましくは約９３質量％の量で存在する、請求項１～５のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項9】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンＩＩが約１７質量％の量で存在し、ブラゼインが約８３質量％の量で存在する、請求項１～４のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項10】
組成物が、タウマチン又はブラゼイン以外にタウマトコックス（Ｔｈａｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）又はペンタジプランドラ（Ｐｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａ）属の生物のいずれかに起源を持つタンパク質を０．００１％未満含有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項11】
９０％を超える純度のタウマチンＩＩ及び９０％を超える純度のブラゼインを含む、甘味料又は風味改良組成物。
【請求項12】
９０％を超える純度のタウマチンＩＩが、タウマトコックス・ダニエリ（Ｔｈａｍａｕｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｄａｎｉｅｌｌｉｉ）から単離されず、及び／又は９０％を超える純度のブラゼインが、ペンタジプランドラ・ブラッゼアナ・バイロン（Ｐｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａ ｂｒａｚｚｅａｎａ Ｂａｉｌｌｏｎ）から単離されない、請求項１１に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項13】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンＩＩが約５質量％～約１５質量％の量で存在し、ブラゼインが約８５質量％～約９５質量％の量で存在する、請求項１１又は１２に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項14】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンＩＩが約７質量％の量で存在し、ブラゼインが約９３質量％の量で存在する、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項15】
組成物のタウマチン及びブラゼイン構成成分の組み合わせ質量に対して、タウマチンＩＩが約１７質量％の量で存在し、ブラゼインが約８３質量％の量で存在する、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項16】
組成物が、タウマチン又はブラゼイン以外にタウマトコックス（Ｔｈａｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）又はペンタジプランドラ（Ｐｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａ）属の生物のいずれかに起源を持つタンパク質を０．００１％未満含有する、請求項１１～１５のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物。
【請求項17】
低減カロリー製品を製造する方法であって、請求項１～１６のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物を、食品製品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ用製品又は化粧品に添加することを含む、方法。
【請求項18】
請求項１～１６のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物の約１．２ｐｐｍ～約２１０ｐｐｍの間の使用レベルの添加を含む、食品、飲料、栄養製品、化粧品又は医薬品。
【請求項19】
請求項１～１６のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物の約４０ｐｐｍの使用レベルの添加を含む、食品、飲料、栄養製品、化粧品又は医薬品。
【請求項20】
請求項１～１６のいずれか１項に記載の甘味料又は風味改良組成物の約１０ｐｐｍの使用レベルの添加を含む、食品、飲料、栄養製品、化粧品又は医薬品。
【請求項21】
第１の部分として、タウマチン、又はタウマチンを含む組成物と、第２の部分として、ブラゼイン、又はブラゼインを含む組成物とを含む、キット・オブ・パーツ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、甘味相乗効果を有し、甘味タンパク質のタウマチン、例えばタウマチンＩＩ及びブラゼインを含む改善された官能特性を有する低カロリー甘味料組成物に関する。本発明は、また、上記甘味料組成物を含む食品及び飲料製品、並びに低減カロリー製品を製造する方法にも関する。本発明は、また、タウマチン、例えばタウマチンＩＩ及びブラゼイン、例えばタイプ３のブラゼインを含むキット・オブ・パーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）にも関する。
【背景技術】
【0002】
大部分の食品及び飲料製品は、栄養性甘味料、例えば、スクロース（「糖」若しくは「砂糖」と一般に称される）、グルコース、フルクトース、コーンシロップ、高フルクトースコーンシロップ等、又は高強度甘味料、例えば、アスパルテーム、スクラロース（ｓｕｃｒａｌｏｓｅ）、アセスルファム（ａｃｅｓｕｌｆａｍｅ）Ｋ、サッカリン、シクラメート、ステビオールグリコシド等を含有する。そのような甘味料は、例えば、風味バランス、甘味の質、苦味及び不快な味（ｏｆｆ ｔａｓｔｅ）の欠如、望ましい経時的プロファイル（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｐｒｏｆｉｌｅ）、並びに望ましい口当たり（ｍｏｕｔｈｆｅｅｌ）の観点から、甘味及び好ましい感覚反応を供給する。
糖等の栄養性甘味料により提供される好ましい味覚及び機能特性にもかかわらず、フルカロリー甘味料の過剰摂取は、食事関連健康問題の増加、例えば、肥満、心臓疾患、代謝障害及び歯の問題に長い間関連してきた。この憂慮すべき傾向により、より健康的な生活様式に適応し、食事における栄養性甘味料のレベルを低減する重要性を消費者が次第に意識するようになってきた。
近年、天然起源の低又はゼロカロリー甘味料の開発に特に焦点を合わせた、栄養性甘味料の代替品を利用する消費者製品が相当増加している。事実、北米において、天然の高強度低カロリー甘味料を利用する多数の新製品の発売が増加して、人工甘味新製品の発売を上回っており、一方で栄養性甘味製品の発売は、徐々に減少している。
糖等の栄養性甘味料により提供される好ましい味覚及び機能特性にもかかわらず、フルカロリー甘味料の過剰摂取は、食事関連健康問題の増加、例えば、肥満、心臓疾患、代謝障害及び歯の問題に長い間関連してきた。この憂慮すべき傾向により、より健康的な生活様式に適応し、食事における栄養性甘味料のレベルを低減する重要性を消費者が次第に意識するようになってきた。
近年、天然起源の低又はゼロカロリー甘味料の開発に特に焦点を合わせた、栄養性甘味料の代替品を利用する消費者製品が相当増加している。事実、北米において、天然の高強度低カロリー甘味料を利用する多数の新製品の発売が増加して、人工甘味新製品の発売を上回っており、一方で栄養性甘味製品の発売は、徐々に減少している。
【0003】
栄養性又は人工甘味料の理想的な代替品は、より少ないカロリーで望ましい味覚の性質を有し、持続的に生産することができ、明確に理解される代謝及び安全使用の履歴を有し、費用効果のある甘味料である。この増大する要求を満たすために、市場には、従来の栄養性甘味料に代わる可能な候補で溢れ返っている。しかし残念なことに、市場に提供された多くの低又はゼロカロリー代替品は、必要な特徴の１つ又は全てを欠いており、多くの場合に苦味又は不快な味を示す。したがって、提案された甘味料の多くが栄養性甘味料の理想的な代替品ではない。
非常に数少ない公知の甘味タンパク質の１つであるタウマチンは、カテンフェ（Ｋａｔｅｍｆｅ）果実に見出され、甘味料及び風味改良剤（ｆｌａｖｏｒ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）として周知である。しかし、カテンフェ果実は容易に栽培されず、タウマチン市場での持続可能性は不十分であり、費用が高くなる。加えて、カテンフェ果実からのタウマチンは、タウマチンタンパク質の混合物であり、これらのうちのいくつか、例えばタウマチンＩＩはより優れた官能特性を有し、これらのうちのいくつかは好ましい官能特性を有しない。このことは、カテンフェ果実からのタウマチンが天然物であり、品質に加えてタウマチンの割合も変動するので、さらに複雑になる。さらに、タウマチン単独ではスクロースの５％溶液と同等の甘味を提供する場合には良好な味覚特性を有するが、より高い甘味濃度では、苦味、金属性又は医薬品の匂いなどの不快な味の特性という難点がある。近年の技術進歩により、周知の農産物作物におけるこのタンパク質の一過性発現を介してタウマチンの生産が可能になり、ばらつきや混ざりが排除され、使用費用が低減され、混合タウマチンに対して改善された官能特性を有するタウマチンＩＩの容易に利用可能な供給源をもたらしている。しかし、より高い甘味濃度では、商品作物発現によるタウマチンＩＩは、依然として不快な味の特性という難点があり、よって他の甘味料との組み合わせが必要になる。
非常に数少ない公知の甘味タンパク質の１つであるタウマチンは、カテンフェ（Ｋａｔｅｍｆｅ）果実に見出され、甘味料及び風味改良剤（ｆｌａｖｏｒ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）として周知である。しかし、カテンフェ果実は容易に栽培されず、タウマチン市場での持続可能性は不十分であり、費用が高くなる。加えて、カテンフェ果実からのタウマチンは、タウマチンタンパク質の混合物であり、これらのうちのいくつか、例えばタウマチンＩＩはより優れた官能特性を有し、これらのうちのいくつかは好ましい官能特性を有しない。このことは、カテンフェ果実からのタウマチンが天然物であり、品質に加えてタウマチンの割合も変動するので、さらに複雑になる。さらに、タウマチン単独ではスクロースの５％溶液と同等の甘味を提供する場合には良好な味覚特性を有するが、より高い甘味濃度では、苦味、金属性又は医薬品の匂いなどの不快な味の特性という難点がある。近年の技術進歩により、周知の農産物作物におけるこのタンパク質の一過性発現を介してタウマチンの生産が可能になり、ばらつきや混ざりが排除され、使用費用が低減され、混合タウマチンに対して改善された官能特性を有するタウマチンＩＩの容易に利用可能な供給源をもたらしている。しかし、より高い甘味濃度では、商品作物発現によるタウマチンＩＩは、依然として不快な味の特性という難点があり、よって他の甘味料との組み合わせが必要になる。
【0004】
ブラゼインもタウマチンと同様に非常に数少ない公知の甘味タンパク質の１つであり、果実由来である。ブラゼインは、西アフリカで見出されたウーブリ（Ｏｕｂｌｉ）果実（ペンタジプランドラ・ブラッゼアナ・バイロン（Ｐｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａ ｂｒａｚｚｅａｎａ Ｂａｉｌｌｏｎ））に由来する。ブラゼインは、その優れた甘味特徴にもかかわらず、主に長引く甘味及びウーブリ果実栽培の困難さが原因で意味のある方法による商品化に未だに成功してない。この後者の制限は、発酵を介した微生物による異種生産によって軽減することができる。ブラゼインは、極めて熱安定性があるので付加利益を有する。しかし、長引く甘味及び遅延した経時的プロファイルは、ブラゼインそれ自体を独立型甘味料として適切なものにしていない。
したがって、高甘味レベルで製品の官能要求を満たす、タンパク質甘味料から構成される独立型甘味溶液が存在していない。低又はゼロカロリーを有し、使用制限がないが、好ましい味覚特徴もまた有し、持続可能であり、高い可溶性、及び良好な使用費用を有する、栄養性甘味料に対する天然起源の改善された代替物を提供する必要性が依然として存在する。
したがって、高甘味レベルで製品の官能要求を満たす、タンパク質甘味料から構成される独立型甘味溶液が存在していない。低又はゼロカロリーを有し、使用制限がないが、好ましい味覚特徴もまた有し、持続可能であり、高い可溶性、及び良好な使用費用を有する、栄養性甘味料に対する天然起源の改善された代替物を提供する必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、天然起源のタンパク質甘味料、許容される使用費用、好ましい官能特性、安全使用の履歴及び低カロリー含有量を含む甘味料又は風味改良組成物を提供することによって、上述の問題に解決策を提供しようとするものである。本発明は、また、他の天然起源高強度甘味料と比較したとき、甘味相乗効果、不快な味又は不快な風味の低減、望ましい経時的プロファイルを有する甘味料組成物を提供しようとするものである。
一般に、本発明は、タウマチン及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。タウマチンは、タウマチンＩ、タウマチンＩＩ、タウマチンＡ及びタウマチンＢから選択され得る。ブラゼインは、タイプ１のブラゼイン、タイプ２のブラゼイン及びタイプ３のブラゼインから選択され得る。一実施形態において、タウマチンは、タウマチンＩ又はタウマチンＩＩであり、ブラゼインは、タイプ１のブラゼイン及びタイプ３のブラゼインから選択され、好ましくは、タウマチンはタウマチンＩＩであり、ブラゼインはタイプ２のブラゼインである。
第一の態様において、本発明は、９０％を超える純度のタウマチンＩＩ及び９０％を超える純度のブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。第二の態様において、本発明は、タウマチンＩＩ及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。
一般に、本発明は、タウマチン及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。タウマチンは、タウマチンＩ、タウマチンＩＩ、タウマチンＡ及びタウマチンＢから選択され得る。ブラゼインは、タイプ１のブラゼイン、タイプ２のブラゼイン及びタイプ３のブラゼインから選択され得る。一実施形態において、タウマチンは、タウマチンＩ又はタウマチンＩＩであり、ブラゼインは、タイプ１のブラゼイン及びタイプ３のブラゼインから選択され、好ましくは、タウマチンはタウマチンＩＩであり、ブラゼインはタイプ２のブラゼインである。
第一の態様において、本発明は、９０％を超える純度のタウマチンＩＩ及び９０％を超える純度のブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。第二の態様において、本発明は、タウマチンＩＩ及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物を提供する。
【0006】
本発明の一実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、組成物のタウマチン及びブラゼイン部分を組み合わせた総質量に対して、約５質量％～約２０質量％の量で９０％を超える純度のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び約８０質量％～約９５質量％の量で９０％を超える純度のブラゼインを含む。
本発明の別の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、組成物のタウマチン及びブラゼイン部分を組み合わせた総質量に対して、約５質量％～約２０質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約８０質量％～約９５質量％の量のブラゼインを含む。
別の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、甘味又は風味改良組成物のタウマチン及びブラゼイン部分の組み合わせ質量に対して、約１５質量％の量で９０％を超える純度のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び約８５質量％の量のブラゼインを含む。
さらなる実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、甘味又は風味改良組成物のタウマチン及びブラゼイン部分の組み合わせ質量に対して、約１５質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約８５質量％の量のブラゼインを含む。
本発明の別の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、組成物のタウマチン及びブラゼイン部分を組み合わせた総質量に対して、約５質量％～約２０質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約８０質量％～約９５質量％の量のブラゼインを含む。
別の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、甘味又は風味改良組成物のタウマチン及びブラゼイン部分の組み合わせ質量に対して、約１５質量％の量で９０％を超える純度のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び約８５質量％の量のブラゼインを含む。
さらなる実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、甘味又は風味改良組成物のタウマチン及びブラゼイン部分の組み合わせ質量に対して、約１５質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約８５質量％の量のブラゼインを含む。
【0007】
別の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、甘味又は風味改良組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の組み合わせ質量に対して、約１０質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約９０質量％の量のブラゼインを含む。
一部の実施形態において、組成物に利用されるタウマチンＩＩ部分は、組成物の全タウマチンＩＩ部分の質量に対して９０％を超える純度である。加えて、組成物に利用されるブラゼイン部分は、組成物の全ブラゼイン部分の質量に対して９０％を超える純度である。
一部の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、別の甘味添加剤、安定化若しくは可溶化溶媒、増量剤、風味剤及び／又は安定剤をさらに含む。
本発明のさらなる態様は、本発明の甘味料又は風味改良組成物を含む食品又は飲料製品を提供する。
別の実施形態において、得られる食品又は飲料製品に使用される甘味料又は風味改良組成物は、食品又は飲料製品中に約０．２ｐｐｍ～約１０ｐｐｍの濃度でタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び食品又は飲料製品中に約１ｐｐｍ～約２００ｐｐｍの濃度でブラゼインを、食品又は飲料製品中に含む。甘味料又は風味改良組成物の組み合わせたタウマチン及びブラゼインの総濃度は、得られる食品又は飲料製品中に約１．２ｐｐｍ～約２１０ｐｐｍである。
一部の実施形態において、組成物に利用されるタウマチンＩＩ部分は、組成物の全タウマチンＩＩ部分の質量に対して９０％を超える純度である。加えて、組成物に利用されるブラゼイン部分は、組成物の全ブラゼイン部分の質量に対して９０％を超える純度である。
一部の実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、別の甘味添加剤、安定化若しくは可溶化溶媒、増量剤、風味剤及び／又は安定剤をさらに含む。
本発明のさらなる態様は、本発明の甘味料又は風味改良組成物を含む食品又は飲料製品を提供する。
別の実施形態において、得られる食品又は飲料製品に使用される甘味料又は風味改良組成物は、食品又は飲料製品中に約０．２ｐｐｍ～約１０ｐｐｍの濃度でタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び食品又は飲料製品中に約１ｐｐｍ～約２００ｐｐｍの濃度でブラゼインを、食品又は飲料製品中に含む。甘味料又は風味改良組成物の組み合わせたタウマチン及びブラゼインの総濃度は、得られる食品又は飲料製品中に約１．２ｐｐｍ～約２１０ｐｐｍである。
【0008】
本発明のさらなる態様は、少なくとも１種の他の成分を伴う本発明の甘味料組成物を含む卓上甘味料を提供する。
本発明のさらなる態様は、本発明の甘味料組成物を含む増量剤、本発明の甘味料組成物を含むコーティング剤、本発明の甘味料組成物を含む化粧品、本発明の甘味料組成物を含む医薬品、本発明の甘味料組成物を含む栄養製品、及び本発明の甘味料組成物を含むスポーツ用製品を提供する。
本発明の別の態様は、食品製品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ用製品又は化粧品における、本発明の甘味料又は風味改良組成物の使用を提供する。本発明の別の態様は、増量剤としての本発明の甘味料組成物の使用を提供する。本発明の別の態様は、コーティング剤としての本発明の甘味料組成物の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、第１の部分として、タウマチン、又はタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩを含む組成物及び第２の部分として、ブラゼイン、又はブラゼインを含む組成物を含む、キット・オブ・パーツを提供する。好ましい実施形態は、上記に記載された通りである。
本発明のさらなる態様は、本発明の甘味料組成物を含む増量剤、本発明の甘味料組成物を含むコーティング剤、本発明の甘味料組成物を含む化粧品、本発明の甘味料組成物を含む医薬品、本発明の甘味料組成物を含む栄養製品、及び本発明の甘味料組成物を含むスポーツ用製品を提供する。
本発明の別の態様は、食品製品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ用製品又は化粧品における、本発明の甘味料又は風味改良組成物の使用を提供する。本発明の別の態様は、増量剤としての本発明の甘味料組成物の使用を提供する。本発明の別の態様は、コーティング剤としての本発明の甘味料組成物の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、第１の部分として、タウマチン、又はタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩを含む組成物及び第２の部分として、ブラゼイン、又はブラゼインを含む組成物を含む、キット・オブ・パーツを提供する。好ましい実施形態は、上記に記載された通りである。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図1】ブラゼインタイプ３の発現のためのｐＮＭＤ５２７０１構築物のＴ－ＤＮＡ領域を概略的に示す図である。発現ベクターは、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）に基づいている。ＲＢ及びＬＢは、二成分ベクターのＴ－ＤＮＡの右側及び左側の境界を示す。Ｐａｃｔ２：シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）アクチン２遺伝子のプロモーター；ｏ：ＴＶＣＶ（カブ葉脈透化ウイルス（ｔｕｒｎｉｐ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ））の５’末端；ＲｄＲｐ：ｃｒ－ＴＭＶ（アブラナ科感染性トバモウイルス（ｃｒｕｃｉｆｅｒ－ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｔｏｂａｍｏｖｉｒｕｓ））のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）；ＭＰ：ｃｒ－ＴＭＶの移行タンパク質ＯＲＦ；ＴＰ：イネアルファアミラーゼ３Ａのアポプラスト標的化プレ配列；Ｂｒａ３：成熟ブラゼインタイプ３のコード配列；Ｎ：ｃｒ－ＴＭＶの３’非翻訳領域；Ｔ：アグロバクテリウムノパリンシンターゼターミネーター；ＲｄＲｐ及びＭＰ ＯＲＦの灰色セグメントを中断する白色セグメントは、植物細胞の細胞質にＲＮＡレプリコン形成の可能性を増加するために、これらのＯＲＦに挿入されたイントロンを示し、このことは、国際公開第２００５０４９８３９号に記載されている。
【図2】タウマチンＩＩ、ブラゼイン及びこれらの組み合わせの甘味知覚の平均の総計を示す図である。水中５％スクロース溶液を甘味対照として使用した。
【発明を実施するための形態】
【0010】
本発明は、タウマチン、特にタウマチンＩＩが、驚くべきことに、他のタウマチンから高度に精製され、ブラゼインと組み合わせた場合に独自の特徴を有するという発見に基づいている。タウマチンは、カテンフェ果実（タウマトコックス・ダニエリ（Ｔｈａｕｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｎｉｅｌｌｉｉ））の幾つかのアイソフォームとして天然に存在する。よって、タウマチンという用語は、一般的であり、タウマチンのあらゆるアイソフォーム、又は２種以上のアイソフォームの混合物に関する。これらのアイソフォームは、異なるレベルの甘味、長引く甘味及び不快な味を有する。タウマチンＩＩは、否定的な官能特性のほとんどない最高品質の甘味を有するアイソフォームである。したがって、タウマチンＩＩが本発明の好ましいタウマチンである。しかし、タウマチンアイソフォームの天然カテンフェ果実抽出混合物からタウマチンＩＩを分離又は濃縮することは困難である。しかし、本発明では、タウマチンＩＩ、好ましくは９０質量％を超える純度のタウマチンＩＩを、持続可能な農産物作物における一過性組み換え発現により単離することによって利用している。このことは、最良のアイソフォームのタウマチンＩＩのみを生産し、それを持続可能な方法で行うという二重の利益を有する。タウマチンＩＩを含むタウマチンの一過性組み換え発現は、当該技術に公知であり、例えば、国際公開第２０２２／０１２９２６号に記載されている。
【0011】
驚くべきことに、タウマチン、特にタウマチンＩＩ、好ましくは９０％を超える純度のタウマチンＩＩをブラゼインと組み合わせた場合、組成物は、改善された味質、より高い相対的甘味又は甘味相乗効果を有し、同時に全体的にタンパク質によって甘味付けされている。これは、許容可能な官能特性及び使用費用を有する、タンパク質だけからなる甘味混合物の最初の例である。追加的に、甘味料組成物の相対的甘味は、組成物の個々の構成成分で計算された甘味より大きく、さらに、個々の構成成分の否定的な味覚特質は、特に、個々の構成成分に関連し得る苦味及び／又は望ましくない経時的プロファイルに関して、最終組成物において低減されている。加えて、使用時にゼロに近いカロリーに寄与する各構成成分のおかげで、甘味料組成物はゼロカロリー又は低カロリーである。さらに、組成物により示された甘味相乗効果の結果として、所定のレベルの甘味を提供するのに必要な組成物の量は、相乗効果の非存在下で予想されるものを下回り、それによって費用及びカロリーの両方のさらなる低減を可能にする。よって、本発明の甘味料組成物は、増強された甘味を提供し、不快な味を低減することにより風味バランスを改善し、より望ましい経時的プロファイルを提供し、一方で同時に、個々に使用される従来の栄養性甘味料又は他の天然の高強度甘味料の甘味同等量と比較して、カロリー及び費用に有意な低減を可能にする。
【0012】
本発明の甘味料又は風味改良組成物を使用することにより、別々に使用される個々の構成成分と比較したとき、食品又は飲料製品への増加した甘味の送達を可能にする。この増強された甘味は、より少ない量の甘味料をこれらの製品に使用することができ、したがって、使用費用が低減されることを意味する。
一般論として、本発明は、タウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物に関する。本明細書において、一般用語「タウマチン」は、タウマチンアイソフォームＩ、ＩＩ、Ａ及びＢの１つ又は複数のいずれかを指す。用語「タウマチンＩ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号１）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＮＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＳＧＩＣＫＴＧＤＣＧＧＬＬＲＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＮＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
用語「タウマチンＩＩ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号２）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＫＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＲＧＩＣＲＴＧＤＣＧＧＬＬＱＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＤＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
用語「タウマチンＡ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号３）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＮＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＳＧＩＣＫＴＧＤＣＧＧＬＬＲＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＤＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
用語「タウマチンＢ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号４）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＫＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＳＧＩＣＫＴＧＤＣＧＧＬＬＲＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＤＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
タウマチンは、本発明において、単独で使用してもよく、又は２種以上を一緒に使用してもよい。例えば、タウマチンＡ及びタウマチンＢを組み合わせて使用してもよい。或いは、タウマチンＩ及びタウマチンＩＩを組み合わせて使用してもよい。２種以上のタウマチンの混合物を使用する場合、ブラゼインとのあらゆる量又は比は、特に記述されない限り、２種以上のタウマンの組み合わせを指す。しかし、タウマチンＩＩは、甘味料として最も好ましい官能特性を有するので、タウマチンＩＩが好ましく、単独タウマチンとしてのタウマチンＩＩの使用が最も好ましい。
一般論として、本発明は、タウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及びブラゼインを含む甘味料又は風味改良組成物に関する。本明細書において、一般用語「タウマチン」は、タウマチンアイソフォームＩ、ＩＩ、Ａ及びＢの１つ又は複数のいずれかを指す。用語「タウマチンＩ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号１）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＮＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＳＧＩＣＫＴＧＤＣＧＧＬＬＲＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＮＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
用語「タウマチンＩＩ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号２）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＫＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＲＧＩＣＲＴＧＤＣＧＧＬＬＱＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＤＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
用語「タウマチンＡ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号３）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＮＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＳＧＩＣＫＴＧＤＣＧＧＬＬＲＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＤＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
用語「タウマチンＢ」は、以下のアミノ酸配列（配列番号４）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＡＴＦＥＩＶＮＲＣＳＹＴＶＷＡＡＡＳＫＧＤＡＡＬＤＡＧＧＲＱＬＮＳＧＥＳＷＴＩＮＶＥＰＧＴＫＧＧＫＩＷＡＲＴＤＣＹＦＤＤＳＧＳＧＩＣＫＴＧＤＣＧＧＬＬＲＣＫＲＦＧＲＰＰＴＴＬＡＥＦＳＬＮＱＹＧＫＤＹＩＤＩＳＮＩＫＧＦＮＶＰＭＤＦＳＰＴＴＲＧＣＲＧＶＲＣＡＡＤＩＶＧＱＣＰＡＫＬＫＡＰＧＧＧＣＮＤＡＣＴＶＦＱＴＳＥＹＣＣＴＴＧＫＣＧＰＴＥＹＳＲＦＦＫＲＬＣＰＤＡＦＳＹＶＬＤＫＰＴＴＶＴＣＰＧＳＳＮＹＲＶＴＦＣＰＴＡ
タウマチンは、本発明において、単独で使用してもよく、又は２種以上を一緒に使用してもよい。例えば、タウマチンＡ及びタウマチンＢを組み合わせて使用してもよい。或いは、タウマチンＩ及びタウマチンＩＩを組み合わせて使用してもよい。２種以上のタウマチンの混合物を使用する場合、ブラゼインとのあらゆる量又は比は、特に記述されない限り、２種以上のタウマンの組み合わせを指す。しかし、タウマチンＩＩは、甘味料として最も好ましい官能特性を有するので、タウマチンＩＩが好ましく、単独タウマチンとしてのタウマチンＩＩの使用が最も好ましい。
【0013】
用語「ブラゼイン」は、一般的であり、タイプ１、タイプ２及びタイプ３のブラゼインのうちの１つ、２つ又は３つのいずれかを指す。ブラゼインは、西アフリカの植物ペンタジプランドラ・ブラッゼアナ（Ｐｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａ ｂｒａｚｚｅａｎａ）由来の熱安定性甘味タンパク質である。ブラゼインは、４個の分子内ジスルフィド架橋を有する６．５ｋＤａの一本鎖ポリペプチドである。３つの形態のブラゼインが天然源に見出されている。これらは、Ｎ末端アミノ酸残基のみが異なっている。タイプ２のブラゼインは、Ｎ末端にグルタミン（Ｑ）を含有する予測される５４アミノ酸翻訳産物に相当する。この形態は短命であり、それは、Ｎ末端グルタミンがピログルタミン酸への天然の変換を受けて、タイプ１のブラゼインをもたらし、Ｎ末端グルタミン（Ｑ）（又はピログルタミン酸（ｐｙｒＥ））の損失が、５３アミノ酸タイプ３ブラゼインを生じるからである。最後の２つの種のみが成熟果実に検出される（タイプ１のおよそ８０％及びタイプ３のおよそ２０％）。甘味強度は形態間で変わり、タイプ３形態は、タイプ１形態の少なくとも２倍の甘さである。したがって、タイプ３のブラゼインが好ましい。
タイプ１のブラゼインは、以下のアミノ酸配列（配列番号５）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ｐｙｒＥＤＫＣＫＫＶＹＥＮＹＰＶＳＫＣＱＬＡＮＱＣＮＹＤＣＫＬＤＫＨＡＲＳＧＥＣＦＹＤＥＫＲＮＬＱＣＩＣＤＹＣＥＹ
タイプ３のブラゼインは、以下のアミノ酸配列（配列番号６）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＤＫＣＫＫＶＹＥＮＹＰＶＳＫＣＱＬＡＮＱＣＮＹＤＣＫＬＤＫＨＡＲＳＧＥＣＦＹＤＥＫＲＮＬＱＣＩＣＤＹＣＥＹ
タイプ２のブラゼインは、以下のアミノ酸配列（配列番号７）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＱＤＫＣＫＫＶＹＥＮＹＰＶＳＫＣＱＬＡＮＱＣＮＹＤＣＫＬＤＫＨＡＲＳＧＥＣＦＹＤＥＫＲＮＬＱＣＩＣＤＹＣＥＹ
ブラゼインは、本発明において、単独で又は一緒に使用してもよい。例えば、タイプ１とタイプ３のブラゼインを組み合わせて使用してもよい。しかし、本明細書においてタイプ３のブラゼインが好ましく、単独ブラゼインとしてのタイプ３のブラゼインの使用は、特に、単独タウマチンとしてのタウマチンＩＩとの組み合わせにおいて最も好ましい。
タイプ１のブラゼインは、以下のアミノ酸配列（配列番号５）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ｐｙｒＥＤＫＣＫＫＶＹＥＮＹＰＶＳＫＣＱＬＡＮＱＣＮＹＤＣＫＬＤＫＨＡＲＳＧＥＣＦＹＤＥＫＲＮＬＱＣＩＣＤＹＣＥＹ
タイプ３のブラゼインは、以下のアミノ酸配列（配列番号６）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＤＫＣＫＫＶＹＥＮＹＰＶＳＫＣＱＬＡＮＱＣＮＹＤＣＫＬＤＫＨＡＲＳＧＥＣＦＹＤＥＫＲＮＬＱＣＩＣＤＹＣＥＹ
タイプ２のブラゼインは、以下のアミノ酸配列（配列番号７）のオリゴペプチド又はタンパク質を指す。
ＱＤＫＣＫＫＶＹＥＮＹＰＶＳＫＣＱＬＡＮＱＣＮＹＤＣＫＬＤＫＨＡＲＳＧＥＣＦＹＤＥＫＲＮＬＱＣＩＣＤＹＣＥＹ
ブラゼインは、本発明において、単独で又は一緒に使用してもよい。例えば、タイプ１とタイプ３のブラゼインを組み合わせて使用してもよい。しかし、本明細書においてタイプ３のブラゼインが好ましく、単独ブラゼインとしてのタイプ３のブラゼインの使用は、特に、単独タウマチンとしてのタウマチンＩＩとの組み合わせにおいて最も好ましい。
【0014】
組成物、糖又は甘味料の「経時的プロファイル」という用語は、本明細書で使用されるとき、前記組成物、糖又は甘味料の経時的な知覚甘味強度の測定である。望ましい又は有利な経時的プロファイルは、甘味が急速に観察され、スクロースの甘味に類似して短い残存を有するものである。
用語「スクロース同等値」又は「ＳＥＶ」は、本明細書で使用されるとき、スクロースの甘味に関連する甘味料と同等の甘味を指す。例えば、ＳＥＶ値が５の甘味料は、スクロースの５質量％溶液に類似した甘味を有する。
用語「低カロリー」は、本明細書で使用されるとき、習慣的に消費される基準量（ＲＡＣＣ）あたり及び表示された１食分あたり４０カロリー以下を有する甘味料を指す。
質量％で提示された全ての量は、特に記述されない限り、乾燥固体（ｄａ）基準で引用される。
用語「スクロース同等値」又は「ＳＥＶ」は、本明細書で使用されるとき、スクロースの甘味に関連する甘味料と同等の甘味を指す。例えば、ＳＥＶ値が５の甘味料は、スクロースの５質量％溶液に類似した甘味を有する。
用語「低カロリー」は、本明細書で使用されるとき、習慣的に消費される基準量（ＲＡＣＣ）あたり及び表示された１食分あたり４０カロリー以下を有する甘味料を指す。
質量％で提示された全ての量は、特に記述されない限り、乾燥固体（ｄａ）基準で引用される。
【0015】
本発明の一実施形態において、甘味料又は風味改良組成物は、組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の組み合わせ質量に対して、約５質量％～約２０質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約８０質量％～約９５質量％の量のブラゼインを含む。甘味料又は風味改良組成物のブラゼイン及びタウマチン部分は、最終食品又は飲料組成物の約０．０００１２質量％（１．２ｐｐｍ）～約０．０２１質量％（２１０ｐｐｍ）の間を占める。
【0016】
好ましくは、本発明の甘味料組成物は、組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の総質量に対して、約５質量％、５．５質量％、６質量％、６．５質量％、７質量％、７．５質量％、８質量％、８．５質量％、９質量％、９．５質量％、１０質量％、１０．５質量％、１１質量％、１１．５質量％、１２質量％、１２．５質量％、１３質量％、１３．５質量％、１４質量％、１４．５質量％、１５質量％、１５．５質量％、１６質量％、１６．５質量％、１７質量％、１７．５質量％、１８質量％、１８．５質量％、１９質量％、１９．５質量％又は２０質量％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ（好ましくは＞９０％の純度）を含み、約８０質量％、８０．５質量％、８１質量％、８１．５質量％、８２質量％、８２．５質量％、８３質量％、８３．５質量％、８４質量％、８４．５質量％、８５質量％、８５．５質量％、８６質量％、８６．５質量％、８７質量％、８７．５質量％、８８質量％、８８．５質量％、８９質量％、８９．５質量％、９０質量％、９０．５質量％、９１質量％、９１．５質量％、９２質量％、９２．５質量％、９３質量％、９３．５質量％、９４質量％、９４．５質量％又は９５質量％の量のブラゼイン（好ましくは＞９０％の純度）を含む。好ましくは、甘味料又は風味改良組成物は、最終食品又は飲料組成物の約１．２ｐｐｍ、２ｐｐｍ、３ｐｐｍ、４ｐｐｍ、５ｐｐｍ、６ｐｐｍ、７ｐｐｍ、８ｐｐｍ、９ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、１５ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、２５ｐｐｍ、３０ｐｐｍ、３５ｐｐｍ、４０ｐｐｍ、４５ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、５５ｐｐｍ、６０ｐｐｍ、７０ｐｐｍ、８０ｐｐｍ、９０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、１１０ｐｐｍ、１２０ｐｐｍ、１３０ｐｐｍ、１４０ｐｐｍ、１５０ｐｐｍ、１６０ｐｐｍ、１７０ｐｐｍ、１８０ｐｐｍ、１９０ｐｐｍ、２００ｐｐｍ又は２１０ｐｐｍの質量で、最終食品又は飲料組成物に使用される。
【0017】
本発明の好ましい実施形態において、甘味料組成物は、組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の総質量に対して、約１５質量％（好ましくは、約１０質量％～約２０質量％）の量で９０％を超える純度のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び約８５質量％（好ましくは、約８０質量％～約９０質量％）の量で９０％を超える純度のブラゼインを含む。本発明の別の好ましい実施形態において、甘味料組成物は、組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の総質量に対して、約１５質量％（好ましくは、約１０質量％～約２０質量％）の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約８５質量％（好ましくは、約８０質量％～約９０質量％）の量のブラゼインを含む。これらの実施形態において、ブラゼインはタイプ３のブラゼインであり得る。
【0018】
代替的な実施形態において、甘味料組成物は、組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の総質量に対して、約７質量％（好ましくは、約５質量％～約１０質量％又は約６質量％～約８質量％）の量で９０％を超える純度のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ、及び約９３質量％（好ましくは、９０質量％～約９５質量％又は約９２質量％～約９４質量％）の量のブラゼインを含む。代替的な実施形態において、甘味料組成物は、組成物のブラゼイン及びタウマチン部分の総質量に対して、約７質量％（好ましくは、約５質量％～約１０質量％又は約６質量％～約８質量％）の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ及び約９３質量％（好ましくは、９０質量％～約９５質量％又は約９２質量％～約９４質量％）の量のブラゼインを含む。これらの実施形態において、ブラゼインはタイプ３のブラゼインであり得る。
【0019】
有利なことに、甘味料組成物は、相対的糖同等値（ＳＥＶ）に関して付加甘味のパーセンテージで、約５０％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ（好ましくは、９０％を超える純度の）及び約５０％の量のブラゼインを含む。代替的な実施形態において、甘味料組成物は、相対的糖同等値（ＳＥＶ）に関して付加甘味のパーセンテージで、約３０％の量のタウマチン、好ましくはタウマチンＩＩ（好ましくは、９０％を超える純度の）及び約７０％の量のブラゼイン、好ましくは９０％を超える純度のブラゼインを含む。これらの実施形態において、ブラゼインはタイプ３のブラゼインであり得る。一部の実施形態において、甘味料組成物は、甘味改善添加剤、増量剤、風味剤及び／又は安定剤をさらに含んでもよい。
【0020】
本発明のさらなる態様は、本発明の甘味料又は風味改良組成物を含む食品製品を提供する。食品製品の非限定例には、菓子製品、デザート製品、例えば、ヨーグルト、アイスクリーム、ビスケット及びケーキ、シリアル製品、焼き菓子、冷凍乳製品、食肉、乳製品、香辛料、スナックバー、スープ、ドレッシング、ミックス、調理食品、ベビーフード、ダイエット調理品、シロップ、食品コーティング、ドライフルーツ、ソース、グレイビー、ジャム／ゼリー等が含まれ、とりわけ、低減糖又は低糖製品のものが含まれる。食品製品は、動物飼料製品であってもよい。本発明の食品製品は、製品の表面に形成されたコーティング又は糖衣として甘味料組成物を含んでもよい。コーティングは、食品製品の風味を改善し、同様にその貯蔵寿命も改善する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料又は風味改良組成物を含む飲料製品を提供する。飲料製品の非限定例には、炭酸飲料、非炭酸飲料、フルーツ味飲料、フルーツジュース、茶、ミルク、コーヒーが含まれ、とりわけ、低減糖又は低糖製品のものが含まれる。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料又は風味改良組成物を含む飲料製品を提供する。飲料製品の非限定例には、炭酸飲料、非炭酸飲料、フルーツ味飲料、フルーツジュース、茶、ミルク、コーヒーが含まれ、とりわけ、低減糖又は低糖製品のものが含まれる。
【0021】
本発明のさらなる態様は、本発明の甘味料組成物を含む卓上甘味料を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む増量剤を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含むコーティング剤を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む医薬品を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む栄養製品又はスポーツ用製品を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む化粧品を提供する。
食品製品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ用製品又は化粧品に存在する本発明の甘味料組成物の量は、甘味料組成物に存在する甘味料のタイプ及び量、並びに食品又は飲料製品の所望の甘味に応じて左右されることが理解される。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む増量剤を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含むコーティング剤を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む医薬品を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む栄養製品又はスポーツ用製品を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の甘味料組成物を含む化粧品を提供する。
食品製品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ用製品又は化粧品に存在する本発明の甘味料組成物の量は、甘味料組成物に存在する甘味料のタイプ及び量、並びに食品又は飲料製品の所望の甘味に応じて左右されることが理解される。
【0022】
本発明の代替的な態様は、食品製品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ用製品又は化粧品における、増量剤又はコーティング剤としての本発明の甘味料又は風味改良組成物の使用を提供する。
甘味料又は風味改良組成物は、あらゆる物理的形態に、例えば、水若しくはグリコールなどの溶媒に溶解された形態、シロップとしての形態、粉末形態、錠剤形態、顆粒形態、溶液中の形態、又は飲料及び食品製品を含むあらゆる他の適切な形態に配合され得る。
下記の実施例に概説されているように、本発明の甘味料組成物は、個々の構成成分に基づいて予測される値より大きなスクロース同等値（ＳＥＶ）を示す。したがって、本発明の甘味料組成物は甘味相乗効果を表す。
甘味料又は風味改良組成物は、あらゆる物理的形態に、例えば、水若しくはグリコールなどの溶媒に溶解された形態、シロップとしての形態、粉末形態、錠剤形態、顆粒形態、溶液中の形態、又は飲料及び食品製品を含むあらゆる他の適切な形態に配合され得る。
下記の実施例に概説されているように、本発明の甘味料組成物は、個々の構成成分に基づいて予測される値より大きなスクロース同等値（ＳＥＶ）を示す。したがって、本発明の甘味料組成物は甘味相乗効果を表す。
【実施例】
【0023】
以下の実施例は、単なる例示であり、いかなる方法によっても限定的であることを意図しない。
【0024】
（産生例：ブラゼインを発現する方法）
アルファアミラーゼのイネ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）ＲＡｍｙ３Ａ遺伝子のＮ末端アポプラスト標的化プレ配列及び成熟ブラゼインタイプ３（配列番号８）のコード配列をコードする配列（配列番号９）の翻訳融合、続いて終止コドンを、ｐＮＭＤ０３５プラスミドに挿入し、ｐＮＭＤ５２７０１構築物をもたらした（図１）。配列番号１０は、ｐＮＭＤ５２７０１ベクターのＴ－ＤＮＡ領域のヌクレオチド配列である。
タイプ３のブラゼインのコード配列は、以下のヌクレオチド配列（配列番号８）を指す。
ｇａｃａａｇｔｇｃａａｇａａｇｇｔｃｔａｃｇａｇａａｃｔａｃｃｃｇｇｔｇｔｃｃａａｇｔｇｃｃａｇｃｔｇｇｃｃａａｃｃａｇｔｇｃａａｃｔａｃｇａｃｔｇｃａａｇｃｔｇｇａｃａａｇｃａｃｇｃｃｃｇｃｔｃｃｇｇｃｇａｇｔｇｃｔｔｃｔａｃｇａｃｇａｇａａｇｃｇｃａａｃｃｔｇｃａｇｔｇｃａｔｃｔｇｃｇａｃｔａｃｔｇｃｇａｇｔａｃｔａａ
タイプ３のブラゼインとイネアミラーゼのアポプラスト標的化プレ配列との翻訳融合は、以下のヌクレオチド配列（配列番号９）を指す。
Ａｔｇｇｇｇａａｇｃａａａｔｇｇｃｃｇｃｃｃｔｇｔｇｔｇｇｃｔｔｔｃｔｃｃｔｃｇｔｇｇｃｇｔｔｇｃｔｃｔｇｇｃｔｃａｃｇｃｃｃｇａｃｇｔｃｇｃｇｔｃａｇｇｔｇａｃａａｇｔｇｃａａｇａａｇｇｔｃｔａｃｇａｇａａｃｔａｃｃｃｇｇｔｇｔｃｃａａｇｔｇｃｃａｇｃｔｇｇｃｃａａｃｃａｇｔｇｃａａｃｔａｃｇａｃｔｇｃａａｇｃｔｇｇａｃａａｇｃａｃｇｃｃｃｇｃｔｃｃｇｇｃｇａｇｔｇｃｔｔｃｔａｃｇａｃｇａｇａａｇｃｇｃａａｃｃｔｇｃａｇｔｇｃａｔｃｔｇｃｇａｃｔａｃｔｇｃｇａｇｔａｃｔａａ
ベンサミアナタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）植物を温室で成長させ、タウマチンのために国際公開第２０２２／０１２９２６号に記載されているように真空浸潤を使用して、ｐＮＭＤ５２７０１構築物を有するアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｃｅ）細胞をトランスフェクトした。植物バイオマスを浸潤の７日後（７ｄｐｉ）に採取した。
ブラゼイン含有植物バイオマスを、２０ｍＭの酢酸Ｎａ ｐＨ４．０、３０ｍＭのＮａＣｌにより、緩衝剤とバイオマスの比の３：１でジューサーを使用して抽出した。緑色のジュースを５８℃で一晩インキュベートした。次いで、抽出物をＭｉｒａｃｌｏｔｈで濾過し、３μｍの孔径でフィルタープレスし（８フィルター）、０．７μｍのフィルターを使用してさらに除去した。
清澄抽出物を、ＣａｐｔｏＭＭＣ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）を備えたＡｋｔａ Ｓｙｓｔｅｍのカラムクロマトグラフィーを使用してさらに精製した。カラムを抽出緩衝剤で平衡にした。洗浄を、抽出緩衝剤（洗浄１）、１５％溶出緩衝剤（洗浄２）及び３５％溶出緩衝剤（洗浄３）を使用して実施した。溶出は、１００％溶出緩衝剤（１００ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4 ｐＨ７．５、１０ｍＭのＮａＣｌ）で実施した。
プールしたブラゼイン画分を、ＨｉＴｒａｐＱ ＦＦ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）を備えたカラムクロマトグラフィーを使用してさらに精製した。カラムを、３１ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4 ｐＨ７．５、３．１ｍＭのＮａＣｌで平衡にした。
カラムを２０ｍＭの酢酸Ｎａ ｐＨ４．０、３０ｍＭのＮａＣｌで洗浄した。流液及び洗浄画分を収集し、これらの画分がブラゼインを含有するので一緒に組み合わせた（陰性クロマトグラフィー）。カラムを、１０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4 ｐＨ７．５、１ｍＭのＮａＣｌでさらに溶出した。溶出画分を廃棄した。
プールしたブラゼイン含有画分を、１ｋＤａのＭｉｎｉｍａｔｅ（商標）ＦＦ膜（Ｐａｌｌ）を使用して一晩脱塩した。ブラゼイン溶液を、０．２２μｍのボトルトップフィルターでさらに滅菌濾過した。濃縮タンパク質を、Ａ２８０方法を使用して決定した。アリコートを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、キャピラリーゲル電気泳動及び質量分析方法を使用して純度及び完全性についてさらに分析した。ブラゼイン溶液を貯蔵のためにフリーズドライした。
アルファアミラーゼのイネ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）ＲＡｍｙ３Ａ遺伝子のＮ末端アポプラスト標的化プレ配列及び成熟ブラゼインタイプ３（配列番号８）のコード配列をコードする配列（配列番号９）の翻訳融合、続いて終止コドンを、ｐＮＭＤ０３５プラスミドに挿入し、ｐＮＭＤ５２７０１構築物をもたらした（図１）。配列番号１０は、ｐＮＭＤ５２７０１ベクターのＴ－ＤＮＡ領域のヌクレオチド配列である。
タイプ３のブラゼインのコード配列は、以下のヌクレオチド配列（配列番号８）を指す。
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タイプ３のブラゼインとイネアミラーゼのアポプラスト標的化プレ配列との翻訳融合は、以下のヌクレオチド配列（配列番号９）を指す。
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ベンサミアナタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）植物を温室で成長させ、タウマチンのために国際公開第２０２２／０１２９２６号に記載されているように真空浸潤を使用して、ｐＮＭＤ５２７０１構築物を有するアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｃｅ）細胞をトランスフェクトした。植物バイオマスを浸潤の７日後（７ｄｐｉ）に採取した。
ブラゼイン含有植物バイオマスを、２０ｍＭの酢酸Ｎａ ｐＨ４．０、３０ｍＭのＮａＣｌにより、緩衝剤とバイオマスの比の３：１でジューサーを使用して抽出した。緑色のジュースを５８℃で一晩インキュベートした。次いで、抽出物をＭｉｒａｃｌｏｔｈで濾過し、３μｍの孔径でフィルタープレスし（８フィルター）、０．７μｍのフィルターを使用してさらに除去した。
清澄抽出物を、ＣａｐｔｏＭＭＣ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）を備えたＡｋｔａ Ｓｙｓｔｅｍのカラムクロマトグラフィーを使用してさらに精製した。カラムを抽出緩衝剤で平衡にした。洗浄を、抽出緩衝剤（洗浄１）、１５％溶出緩衝剤（洗浄２）及び３５％溶出緩衝剤（洗浄３）を使用して実施した。溶出は、１００％溶出緩衝剤（１００ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4 ｐＨ７．５、１０ｍＭのＮａＣｌ）で実施した。
プールしたブラゼイン画分を、ＨｉＴｒａｐＱ ＦＦ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ）を備えたカラムクロマトグラフィーを使用してさらに精製した。カラムを、３１ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4 ｐＨ７．５、３．１ｍＭのＮａＣｌで平衡にした。
カラムを２０ｍＭの酢酸Ｎａ ｐＨ４．０、３０ｍＭのＮａＣｌで洗浄した。流液及び洗浄画分を収集し、これらの画分がブラゼインを含有するので一緒に組み合わせた（陰性クロマトグラフィー）。カラムを、１０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4 ｐＨ７．５、１ｍＭのＮａＣｌでさらに溶出した。溶出画分を廃棄した。
プールしたブラゼイン含有画分を、１ｋＤａのＭｉｎｉｍａｔｅ（商標）ＦＦ膜（Ｐａｌｌ）を使用して一晩脱塩した。ブラゼイン溶液を、０．２２μｍのボトルトップフィルターでさらに滅菌濾過した。濃縮タンパク質を、Ａ２８０方法を使用して決定した。アリコートを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、キャピラリーゲル電気泳動及び質量分析方法を使用して純度及び完全性についてさらに分析した。ブラゼイン溶液を貯蔵のためにフリーズドライした。
【0025】
（実施例１：本発明の組成物の甘味相乗効果の実証。）
ラウンドテーブル評価を６人の試験参加者によって実施した。中性ｐＨ水中の同等甘味５ＳＥＶ濃縮物を、タウマチンＩＩ（９０％を超える純度）及びブラゼインで作製した。これらの同等甘味溶液を５０％のタウマチンＩＩ及び５０％のブラゼインで混合し、個々の構成成分を比較した。試験組成物の構成成分を下記の表に記載する。混合組成は、甘味料用のビードラー混合公式（Ｂｅｉｄｌｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅ ｅｑｕａｔｉｏｎ）を使用して計算した。甘味料用のビードラー混合公式は以下の通りである。
ラウンドテーブル評価を６人の試験参加者によって実施した。中性ｐＨ水中の同等甘味５ＳＥＶ濃縮物を、タウマチンＩＩ（９０％を超える純度）及びブラゼインで作製した。これらの同等甘味溶液を５０％のタウマチンＩＩ及び５０％のブラゼインで混合し、個々の構成成分を比較した。試験組成物の構成成分を下記の表に記載する。混合組成は、甘味料用のビードラー混合公式（Ｂｅｉｄｌｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅ ｅｑｕａｔｉｏｎ）を使用して計算した。甘味料用のビードラー混合公式は以下の通りである。
【0026】
【数1】
この実験で分析した試験製品を下記の表１に記載する。
製品情報
【0027】
【表1】
（実施例２）
個々の甘味料の定量的分析及びラウンドテーブル評価を試験参加者によって実施した。中性ｐＨ水中の同等甘味５ＳＥＶ濃縮物を、タウマチンＩＩ（９０％を超える純度）及びブラゼイン（９０％を超える純度）で作製した。これらの同等甘味溶液を５０％のタウマチンＩＩ及び５０％のブラゼインで混合し、個々の構成成分を比較した。全ての溶液にコードを付け、参加者から盲検にした。参加者には、５％スクロース溶液を対照として使用して、各溶液の甘味の質（１０が最高の甘味の質である）及び望ましくない特質（１０が最も望ましくないものである）の１～１０のスケールによる定量的評価を提出するように要請した。
【0028】
【表2】
驚くべきことに、タウマチンＩＩとブラゼインの混合物は、有意に良好な甘味の質及び低減された不快な味を有した。
（実施例３：タンパク質甘味料のラベル付け。）
様々な甘味料の混合物を組み合わせ、高品質の甘味を維持する能力、並びにタンパク質甘味料及び天然起源の甘味料のみによって甘味付けできる能力について査定した。
【0029】
【表3】
【0030】
本発明者たちは、タンパク質甘味料が、様々な市販の人工又は天然甘味料の甘味の質と同等のもの又はこれらより優れた甘味の質を提供することを実証した。
（実施例４：タウマチンＩＩ、ブラゼイン及びこれらの混合物の総甘味知覚の分析）
組み換えタウマチンＩＩ（配列番号２）及びブラゼインタイプ３（配列番号６）タンパク質を、対応するコード配列を有するタバコモザイクウイルスのエタノール誘導性レプリコン遺伝子導入タバコ（Ｎｃｏｔｉａｎａ）植物から精製した。組み換えタンパク質発現は、植物に希釈エタノール溶液を噴霧することによって達成した。タウマチンＩＩタンパク質を、カラムクロマトグラフィーを使用して植物バイオマスから精製した。タウマチンＩＩ産生では、上流及び下流プロセスの詳細は、国際公開第２０２２／０１２９２６号に記載されている。ブラゼインタンパク質を、産生例に記載された方法と同様の方法で産生した。
７ｐｐｍの組み換えタウマチンＩＩ水溶液及び３０ｐｐｍのブラゼイン水溶液、並びに半分の濃度（３．５ｐｐｍのタウマチンＩＩ／１５ｐｐｍのブラゼイン）で両方を一緒に混合したものを、総甘味知覚について分析した。５％スクロース溶液を甘味対照として使用した。風味及び後味を、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ記述的調査方法で訓練を受けたＢｒｉｓａｎ Ｇｒｏｕｐ（米国イリノイ州オーランドパーク）の訓練された感覚パネルの８人によって査定した。甘味強度は、１５ポイントスペクトルスケールで等級付けし、０＝なし及び１５＝非常に強力、である。製品を室温で評価した。製品を３桁コードで盲検にし、無作為化した。試料の間に休憩を入れて、疲労を軽減させた。参加者には強度スコアを決定するために全ての参照が利用可能であった。風味及び後味のデータを個々のデータとして収集した。全ての試料が吐き出された。試料を単項順次均衡設計（ｍｏｎａｄｉｃ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｂａｌａｎｃｅｄ ｄｅｓｉｇｎ）により盲検で提示した。試料データの２つの複製を収集した。
参加者は、試験溶液への曝露の直後（口の中に０～５秒）及び製品が依然として口の中にある間の１５秒間に総甘味強度を評価した。参加者は、また、口の中の製品を評価した後（吐き出した後）の３０秒間及び６０秒間の製品の後味も評価した。
直後の甘味知覚を分析するため、参加者は、溶液を一口吸い込んだ直後に甘味強度を評価した（０～５秒以内に評価した）。製品の総甘味を、甘味の基本的味覚と高強度甘味料芳香特質との合計として定義した。甘味の基本的味覚は、スクロース及び他の糖、例えば、フルクトース、グルコース等により刺激された舌による味覚と定義した。高強度甘味料芳香は、あらゆる非スクロース甘味料、例えば、アスパルテーム、Ａｃｅ－Ｋ、Ｒｅｂ Ａ、ステビア及びスクラロースに固有の軽い芳香として意義した。
図２は、タウマチンＩＩ、ブラゼイン及びこれらの組み合わせの甘味知覚の平均の総計に関するデータを要約したものである。ミックスに使用されたそれぞれの濃度で個々の構成成分の付加甘味に予想されたものと比較して、より高い総甘味がミックスにおいて見出された。この効果は、１５秒目から始まって、より際立っている。このデータは、タウマチンＩＩとブラゼインの間の相乗効果を支持している。ブラゼインは、また、タウマチンＩＩの甘味発生をあまり急激にしないので、混合物に改善された甘味経時的プロファイルを提供する。
（実施例４：タウマチンＩＩ、ブラゼイン及びこれらの混合物の総甘味知覚の分析）
組み換えタウマチンＩＩ（配列番号２）及びブラゼインタイプ３（配列番号６）タンパク質を、対応するコード配列を有するタバコモザイクウイルスのエタノール誘導性レプリコン遺伝子導入タバコ（Ｎｃｏｔｉａｎａ）植物から精製した。組み換えタンパク質発現は、植物に希釈エタノール溶液を噴霧することによって達成した。タウマチンＩＩタンパク質を、カラムクロマトグラフィーを使用して植物バイオマスから精製した。タウマチンＩＩ産生では、上流及び下流プロセスの詳細は、国際公開第２０２２／０１２９２６号に記載されている。ブラゼインタンパク質を、産生例に記載された方法と同様の方法で産生した。
７ｐｐｍの組み換えタウマチンＩＩ水溶液及び３０ｐｐｍのブラゼイン水溶液、並びに半分の濃度（３．５ｐｐｍのタウマチンＩＩ／１５ｐｐｍのブラゼイン）で両方を一緒に混合したものを、総甘味知覚について分析した。５％スクロース溶液を甘味対照として使用した。風味及び後味を、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ記述的調査方法で訓練を受けたＢｒｉｓａｎ Ｇｒｏｕｐ（米国イリノイ州オーランドパーク）の訓練された感覚パネルの８人によって査定した。甘味強度は、１５ポイントスペクトルスケールで等級付けし、０＝なし及び１５＝非常に強力、である。製品を室温で評価した。製品を３桁コードで盲検にし、無作為化した。試料の間に休憩を入れて、疲労を軽減させた。参加者には強度スコアを決定するために全ての参照が利用可能であった。風味及び後味のデータを個々のデータとして収集した。全ての試料が吐き出された。試料を単項順次均衡設計（ｍｏｎａｄｉｃ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｂａｌａｎｃｅｄ ｄｅｓｉｇｎ）により盲検で提示した。試料データの２つの複製を収集した。
参加者は、試験溶液への曝露の直後（口の中に０～５秒）及び製品が依然として口の中にある間の１５秒間に総甘味強度を評価した。参加者は、また、口の中の製品を評価した後（吐き出した後）の３０秒間及び６０秒間の製品の後味も評価した。
直後の甘味知覚を分析するため、参加者は、溶液を一口吸い込んだ直後に甘味強度を評価した（０～５秒以内に評価した）。製品の総甘味を、甘味の基本的味覚と高強度甘味料芳香特質との合計として定義した。甘味の基本的味覚は、スクロース及び他の糖、例えば、フルクトース、グルコース等により刺激された舌による味覚と定義した。高強度甘味料芳香は、あらゆる非スクロース甘味料、例えば、アスパルテーム、Ａｃｅ－Ｋ、Ｒｅｂ Ａ、ステビア及びスクラロースに固有の軽い芳香として意義した。
図２は、タウマチンＩＩ、ブラゼイン及びこれらの組み合わせの甘味知覚の平均の総計に関するデータを要約したものである。ミックスに使用されたそれぞれの濃度で個々の構成成分の付加甘味に予想されたものと比較して、より高い総甘味がミックスにおいて見出された。この効果は、１５秒目から始まって、より際立っている。このデータは、タウマチンＩＩとブラゼインの間の相乗効果を支持している。ブラゼインは、また、タウマチンＩＩの甘味発生をあまり急激にしないので、混合物に改善された甘味経時的プロファイルを提供する。
【0031】
（結論）
本発明の甘味料又は風味改良組成物は、高く許容される甘味の質を示し、全体的に天然起源タンパク質甘味料から構成され、許容可能な使用費用を有し、それに対して、考えられる他の甘味料ブレンドでこれらの特質を有するものはない。驚くべきことに、本発明の甘味料又は風味改良組成物は、味質の実質的な改善及び望ましくない官能特性の同時低減に加えて、有意な甘味料相乗効果も有する。本発明は、特定の実施形態を参照して本明細書に例証及び記載されているが、本発明は、示されている詳細に限定されることを意図しない。むしろ、特許請求の範囲の範囲及び均等物の範囲内で、本発明を逸脱することなく、様々な変更を詳細に行うことができる。
本発明の甘味料又は風味改良組成物は、高く許容される甘味の質を示し、全体的に天然起源タンパク質甘味料から構成され、許容可能な使用費用を有し、それに対して、考えられる他の甘味料ブレンドでこれらの特質を有するものはない。驚くべきことに、本発明の甘味料又は風味改良組成物は、味質の実質的な改善及び望ましくない官能特性の同時低減に加えて、有意な甘味料相乗効果も有する。本発明は、特定の実施形態を参照して本明細書に例証及び記載されているが、本発明は、示されている詳細に限定されることを意図しない。むしろ、特許請求の範囲の範囲及び均等物の範囲内で、本発明を逸脱することなく、様々な変更を詳細に行うことができる。
【0032】
（さらなる配列表）
配列番号１０は、ｐＮＭＤ５２７０１ベクターのＴ－ＤＮＡ領域のヌクレオチド配列である。
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配列番号１０は、ｐＮＭＤ５２７０１ベクターのＴ－ＤＮＡ領域のヌクレオチド配列である。
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【図1】
【図2】
【配列表】
【国際調査報告】