特表2024-531390ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３ＲＮＡを含むｍＲＮＡワクチンおよびその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-29
(54)【発明の名称】ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３ＲＮＡを含むｍＲＮＡワクチンおよびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/19 20060101AFI20240822BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240822BHJP
C12N 15/24 20060101ALI20240822BHJP
C12N 15/31 20060101ALI20240822BHJP
C12N 15/88 20060101ALI20240822BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240822BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240822BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240822BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20240822BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240822BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240822BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240822BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20240822BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240822BHJP
A61P 11/04 20060101ALI20240822BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240822BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240822BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240822BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240822BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240822BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20240822BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240822BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240822BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240822BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240822BHJP
【ＦＩ】
C12N15/19 ZNA
C12N15/12
C12N15/24
C12N15/31
C12N15/88 Z
A61P29/00
A61P11/06
A61P37/08
A61P11/02
A61P27/02
A61P1/04
A61P17/00
A61P17/04
A61P11/00
A61P11/04
A61P37/06
A61P37/02
A61P1/16
A61P35/00
A61P43/00 105
A61P31/20
A61P31/14
A61P35/02
A61P3/04
A61K48/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024510340
(86)(22)【出願日】2022-08-19
(85)【翻訳文提出日】2024-04-18
(86)【国際出願番号】 EP2022073222
(87)【国際公開番号】W WO2023021195
(87)【国際公開日】2023-02-23
(31)【優先権主張番号】21306131.0
(32)【優先日】2021-08-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】63/235,351
(32)【優先日】2021-08-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513140880
【氏名又は名称】ネオヴァクス
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】ドルーエ，ベアトリス
(72)【発明者】
【氏名】デリン，オリヴィエ
(72)【発明者】
【氏名】ファンジェ，ベルナール
(72)【発明者】
【氏名】ゴティエ，フローリアン
(72)【発明者】
【氏名】セラ，ヴィンセント
【テーマコード（参考）】
4C084
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084MA17
4C084MA24
4C084MA28
4C084MA31
4C084MA60
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZA341
4C084ZA342
4C084ZA591
4C084ZA592
4C084ZA621
4C084ZA622
4C084ZA681
4C084ZA682
4C084ZA701
4C084ZA702
4C084ZA751
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4C084ZA892
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4C084ZB072
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4C084ZB112
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4C084ZB212
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZB331
4C084ZB332
(57)【要約】
本発明は、異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の発現または活性に関連する障害、特に喘息、アトピー性皮膚炎およびアレルギー障害を治療するまたは予防するための、少なくとも１つのサイトカイン（好ましくは、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、またはそれらの断片）をコードする少なくとも１つのＲＮＡ分子および少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む、ｍＲＮＡワクチンに関する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
少なくとも１つのＲＮＡ分子を含む組成物であって、前記少なくとも１つのＲＮＡ分子が、－少なくとも１つのサイトカイン、または少なくとも１つのその断片もしくはエピトープであって、好ましくは前記少なくとも１つのサイトカインが、インターロイキン－４（ＩＬ－４）および／またはインターロイキン－１３（ＩＬ－１３）である、少なくとも１つのサイトカイン、または少なくとも１つのその断片もしくはエピトープと、
－少なくとも１つのＴ細胞エピトープと、
－任意により少なくとも１つのスペーサー、
を含む少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする、組成物。
【請求項2】
前記少なくとも１つのサイトカインが、ＩＬ－４である、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記ＩＬ－４断片が、配列番号７～１０、１３～１６、９４～９７および１０９～１１２からなる群から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
前記少なくとも１つのサイトカインが、ＩＬ－１３である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
前記ＩＬ－１３断片が、配列番号２５～２８、３５～３８、１１９～１２２および１２９～１３２からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項6】
前記少なくとも１つのＲＮＡ分子が、ＩＬ－４またはその少なくとも１つの断片もしくはエピトープならびにＩＬ－１３またはその少なくとも１つの断片もしくはエピトープをコードする、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
前記少なくとも１つのＴ細胞エピトープが、ＣＲＭ１９７、ジフテリアおよび破傷風エピトープの組み合わせ（ＴｐＤ）、破傷風毒素（ＴＴ）のエピトープ、ユニバーサルＣＤ４ポリエピトープ、それらのバリアントおよび断片からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
前記少なくとも１つのスペーサーが、ＰＭＧＬＰ、カテプシン切断部位、アミノ酸ダブレット、ＧＰ、ＧＰＧＰＧ、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、１～４の範囲である）、ＬＧ、ＡＳＧ、ＫＧおよびＲＲからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
前記少なくとも１つのＲＮＡ分子が、好ましくはナノ粒子中で、リポソーム中でまたはウイルス様粒子中で、カプセル化される、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項11】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物と任意により少なくとも１つのアジュバントを含むワクチン組成物。
【請求項12】
医薬品としての使用のための請求項１～９いずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
炎症性障害を治療することにおける使用のための、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物、請求項１０または１１に記載の医薬組成物もしくはワクチン組成物であって、好ましくは前記障害が、異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の発現または活性と関連する、組成物、医薬組成物またはワクチン組成物。
【請求項14】
前記炎症性障害が、喘息（アレルギー性または非アレルギー性のいずれか）、アレルギー症状（例えば、食物アレルギー、毒液アレルギー、動物アレルギー、薬物アレルギー、アナフィラキシー、高ＩｇＥ症候群、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎およびアレルギー性腸胃炎など）、アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹（慢性特発性蕁麻疹および慢性自然発生性蕁麻疹を含む）、湿疹など）、水疱性類天疱瘡、呼吸器障害（アレルギー性および非アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）など）、鼻ポリープ症および気道炎症を伴う他の状態（例えば、好酸球増加症、嚢胞性線維症および肺線維症を含む線維症および過剰な粘液産生、全身性硬化症（ＳＳｃ）など）；炎症性および／または自己免疫性の障害または状態、胃腸の障害または状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および好酸球性食道炎（ＥＥ）、ならびに好酸球媒介胃腸疾患、潰瘍性大腸炎、およびクローン病など）；全身性エリテマトーデス、肝臓の障害または状態（例えば、肝硬変、および肝細胞癌など）、強皮症；線維性疾患または障害（例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスにより引き起こされる線維症など）など）、強皮症；固形腫瘍または白血病などの癌（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病など）、神経膠芽腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫など）および肥満細胞症からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用のための組成物、医薬組成物またはワクチン。
【請求項15】
前記炎症性障害が、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、食物アレルギー、鼻ポリープ症および好酸球性食道炎からなる群から選択され、好ましくは前記炎症性障害が、アレルギー、喘息、またはアトピー性皮膚炎である、請求項１３または１４に記載の使用のための組成物、医薬組成物またはワクチン。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の発現または活性に関連する障害、特に喘息、アトピー性皮膚炎およびアレルギー障害を治療するためのｍＲＮＡワクチンおよびその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
アレルギー障害は、複数の遺伝的要因および環境的要因の相互作用により生じる複雑な疾患である。過去数十年間において観察されたアレルギーの増加は、同時期に起こった環境変化により主に説明される。すべてのアレルギーの中でも、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、および食物アレルギーは、主要な公衆衛生上の問題である。２０５０年までに世界人口の半数がアレルギー疾患に罹患すると推定されている。このように、アレルギー疾患の増加は、世界中で重要な健康問題となっており、その結果、重大な社会経済的負担が生じ、これに対する効果的な長期治療法はまだない。
【0003】
アレルギー障害の病原は、免疫系がアレルゲンにさらされることにより生じる。このような曝露は、耐性の崩壊の原因であると考えられており、インターロイキン４（ＩＬ－４）およびインターロイキン１３（ＩＬ－１３）などの２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）サイトカインの産生、高レベルの免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体、ならびに炎症組織内の免疫細胞の浸潤および拡大を特徴とする２型免疫応答をもたらす。マスト細胞、好塩基球、および好酸球は、ヒスタミンなどのあらかじめ形成された炎症性メディエーターを含む細胞質顆粒の放出に特に関与する。
【0004】
ＩＬ－４およびＩＬ－１３サイトカインはしたがって、アレルギー障害の病原において重要な役割を果たす。いずれのサイトカインも、アレルギー障害の病原に長く関連しており、その生物学的機能に基づき治療上重要なサイトカインである。ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、類似の構造を呈し、１つの受容体サブユニット（ＩＬ－４Ｒα）を共有する。しかし、それらの多くの類似点にもかかわらず、ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、アレルギーにおいて重複しない機能を果たしていると考えられている。
【0005】
ＩＬ－４は、アレルギーの発症に関与する多面性サイトカインであり（ＧｏｕｒＮ．＆Ｗｉｌｌｓ－ＫａｒｐＭ．，２０１５）、ＩＬ－４レベルの上昇が喘息患者の血清中および気管支肺胞洗浄液中で観察されている。ＩＬ－４は、アレルギー発症の初期段階において、特異的に作用すると考えられている。ＩＬ－４の重要な役割は、例えば、ＩｇＥ産生の誘導、ＩｇＥ受容体発現の上方制御、およびナイーブ０型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０）のＴｈ２リンパ球への分化などの、アレルギーを駆動する複数の効果にある。
【0006】
対照的に、ＩＬ－１３は、アレルギー反応のエフェクターおよび後期段階において、より深く関与している（Ｇｏｕｒ Ｎ．＆Ｗｉｌｌｓ－Ｋａｒｐ Ｍ．，２０１５）。ＩＬ－１３は、これらに限定されないが、気道過敏症、粘液産生、気道平滑筋変化および上皮下線維症を含む、アレルギー疾患の主な症状を誘導するのに十分であることが示されている。
【0007】
したがって、ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、アレルギー治療の有望な治療標的であり、特に長期的な治療効果を達成するために、これらの分子をブロックする現在の戦略を改善する明らかな必要がある。
【0008】
近年では、アレルギーを治療するまたは予防するための新しい治療法が開発されている。受動免疫に基づくこれらの治療は、アレルギーに関与する病原因子を特異的に標的とする。例えば、ＩＬ－４およびＩＬ－１３またはそれらの受容体に対する組換え抗体の使用が、当該技術分野で記載されている。しかし、組換え抗体の使用は、高いコスト、反復注射を行う必要性、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の出現または他の副作用の潜在的なリスクにより制限されている。
【0009】
ＲＮＡワクチンは、１９９０年に新しい治療の観点として現れた。大きな利点は、他のタイプのワクチン（例えば、弱毒化ウイルスおよびＤＮＡベースのワクチン）と比較して、ワクチンとしてのＲＮＡの使用と関連し得る。実際に、ＲＮＡワクチンの使用は、変異原性または感染のリスクがないため、より安全であり得る。さらに、ＲＮＡの免疫原性は、ｉｎ ｖｉｖｏ送達前に調節され得る。ワクチン接種プロセスのより高い効率がまた、ＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ修飾によって得られ得、それによりその安定性および翻訳性を向上させる。最後に、ＲＮＡワクチンは、非常に迅速にかつ低コストで産生され得る。
【0010】
しかし、ワクチンとしてＲＮＡを使用するためには、多くの困難、特にＲＮＡの不安定性、高い自然免疫原性、およびＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏ送達などを克服する必要がある。
【0011】
本発明において、出願人は、自己タンパク質（すなわち、ＩＬ－４およびＩＬ－１３）に対する抗体の産生を誘導するために使用され得るＲＮＡワクチンを提供し、その一方で、通常のｍＲＮＡワクチンは、接種対象による非自己タンパク質に対する抗体の産生を誘導する。特に、本発明で開示されるＲＮＡワクチンは、実質的な毒性なしに、受け取る対象において自己タンパク質に対する抗体の産生を効率的に誘導する。
【0012】
出願人はしたがって、本明細書において、ＩＬ－４およびＩＬ－１３（またはその断片）から選択されるサイトカインおよびＴ細胞エピトープをコードするＲＮＡ配列を含む新規ＲＮＡワクチンを提供する。この新規ｍＲＮＡワクチンは、特に喘息、アトピー性皮膚炎、およびアレルギー障害などの炎症性障害を治療するために、特に興味深い。
【発明の概要】
【0013】
本発明は、少なくとも１つのＲＮＡ分子を含む組成物に関し、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、
－少なくとも１つのサイトカイン、または少なくとも１つのその断片もしくはエピトープであって、好ましくは少なくとも１つのサイトカインは、インターロイキン－４（ＩＬ－４）および／またはインターロイキン－１３（ＩＬ－１３）である、少なくとも１つのサイトカイン、または少なくとも１つのその断片もしくはエピトープと、
－少なくとも１つのＴ細胞エピトープと、
－任意により、少なくとも１つのスペーサー、
を含む少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする。
－少なくとも１つのサイトカイン、または少なくとも１つのその断片もしくはエピトープであって、好ましくは少なくとも１つのサイトカインは、インターロイキン－４（ＩＬ－４）および／またはインターロイキン－１３（ＩＬ－１３）である、少なくとも１つのサイトカイン、または少なくとも１つのその断片もしくはエピトープと、
－少なくとも１つのＴ細胞エピトープと、
－任意により、少なくとも１つのスペーサー、
を含む少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする。
【0014】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－４である。
【0015】
一実施形態では、ＩＬ－４断片は、配列番号７～１０、１３－１６、９４～９７および１０９～１１２からなる群から選択される。
【0016】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－１３である。
【0017】
一実施形態では、ＩＬ－１３断片は、配列番号２５～２８、３５～３８、１１９～１２２および１２９～１３２を含むかまたはそれらからなる群から選択される。
【0018】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＩＬ－４またはその少なくとも１つの断片もしくはエピトープ、およびＩＬ－１３またはその少なくとも１つの断片もしくはエピトープをコードする。
【0019】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、ＣＲＭ１９７、ジフテリアおよび破傷風エピトープの組み合わせ（ＴｐＤ）、破傷風毒素（ＴＴ）のエピトープ、ユニバーサルＣＤ４ポリエピトープ、それらのバリアントおよび断片を含むかまたはそれらからなる群から選択される。
【0020】
一実施形態では、少なくとも１つのスペーサーは、ＰＭＧＬＰ、カテプシン切断部位、アミノ酸ダブレット、ＧＰ、ＧＰＧＰＧ、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、１～４の範囲である）、ＬＧ、ＡＳＧ、ＫＧ、およびＲＲを含むかそれらからなる群から選択される。
【0021】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、好ましくはナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中に、リポソーム中に、またはウイルス様粒子中にカプセル化される。
【0022】
本発明はさらに、本明細書に記載の組成物および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【0023】
本発明の別の目的は、上記の組成物および任意により少なくとも１つのアジュバントを含むワクチン組成物である。
【0024】
本発明の別の目的は、医薬品としての使用のための本明細書に記載の組成物である。
【0025】
本発明はさらに、炎症性障害を治療することにおける使用のための、本明細書に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン組成物に関し、好ましくは、本障害は、異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の発現または活性と関連する。
【0026】
一実施形態では、炎症性障害は、喘息（アレルギー性または非アレルギー性のいずれか）、アレルギー症状（例えば、食物アレルギー、毒液アレルギー、動物アレルギー、薬物アレルギー、高ＩｇＥ症候群、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎およびアレルギー性腸胃炎など）、アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹（慢性特発性蕁麻疹および慢性自然発生性蕁麻疹を含む）、湿疹など）、水疱性類天疱瘡、呼吸器障害（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）など）、鼻ポリープ症、および気道炎症を伴う他の状態（例えば、好酸球増加症、線維症、および過剰な粘液産生、例えば、嚢胞性線維症および肺線維症、全身性硬化症（ＳＳｃ）など）；炎症性および／または自己免疫性の障害または状態、胃腸の障害または状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および好酸球性食道炎（ＥＥ）、ならびに好酸球媒介胃腸疾患、潰瘍性大腸炎、およびクローン病など）；全身性エリテマトーデス、肝臓の障害または状態（例えば、肝硬変、および肝細胞癌）、強皮症；線維性疾患または障害（例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる線維症など）、強皮症；固形腫瘍または癌、例えば、白血病（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病など）、神経膠芽腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫など）および肥満細胞症を含むかそれらからなる群から選択される。一実施形態では、炎症性障害は、喘息（アレルギー性または非アレルギー性のいずれか）、アレルギー症状（例えば、食物アレルギー、毒液アレルギー、動物アレルギー、薬物アレルギー、アナフィラキシー、高ＩｇＥ症候群、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎およびアレルギー性腸胃炎など）、アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹（慢性特発性蕁麻疹および慢性自然発生性蕁麻疹、湿疹など）、水疱性類天疱瘡、呼吸器障害（アレルギー性および非アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）など）、鼻ポリープ症、および気道炎症を伴う他の状態（例えば、好酸球増加症、線維症、および過剰な粘液産生、例えば、嚢胞性線維症および肺線維症、全身性硬化症（ＳＳｃ）など）；炎症性および／または自己免疫性の障害または状態、胃腸の障害または状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および好酸球性食道炎（ＥＥ）、ならびに好酸球媒介胃腸疾患、潰瘍性大腸炎、およびクローン病など）；全身性エリテマトーデス、肝臓の障害または状態（例えば、肝硬変、および肝細胞癌）、強皮症；線維性疾患または障害（例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる線維症など）、強皮症；固形腫瘍または癌、例えば、白血病（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病など）、神経膠芽腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫など）および肥満細胞症を含むかそれらからなる群から選択される。
【0027】
一実施形態では、炎症性障害は、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、食物アレルギー、鼻ポリープ、および好酸球性食道炎を含むかまたはそれらからなる群から選択され、好ましくは上記炎症性障害は、アレルギー、喘息、またはアトピー性皮膚炎である。
【0028】
定義
本発明において、以下の用語は、以下の意味を有する：
本発明において、以下の用語は、以下の意味を有する：
【0029】
本明細書で使用されるとき、用語「約」は、量、時間的持続時間などの測定可能な値を指す場合、そのような変動が開示される方法を実施するために適切であるために、指定された値から±２０％、場合によっては±１０％、または場合によっては±５％、または場合によっては、±１％、または場合によっては±０．１％の変動を包含すること意味する。
【0030】
本明細書において使用される、「アジュバント」は、本発明の組成物の免疫原性を増強する物質である。アジュバントはしばしば、免疫応答を高めるために与えられ、当業者に周知である。
【0031】
本明細書で使用される、用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、その表面上で主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化される外来抗原を提示するアクセサリー細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）などの免疫系細胞を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用して、これらの複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原のプロセシングを行い、Ｔ細胞にそれらを提示する。
【0032】
本明細書で使用される、用語「由来する」は、第１の分子と第２の分子の間の関係を示す。それは一般に、第１の分子と第２の分子の間の構造的類似性を指し、第２の分子に由来する第１の分子に対するプロセスまたは供給源の制限を暗示しないかまたはそれらの制限を含まない。
【0033】
本明細書で使用される、用語「エピトープ」は、それに抗体またはＭＨＣ分子またはその任意の結合断片が結合するタンパク質上に位置する、アミノ酸の特定の配置を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループで構成され、特定の三次元構造特性および特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、直鎖状（もしくは連続的）または立体配座であってもよく、すなわち、必ずしも隣接していなくてもよいタンパク質の様々な領域にあるアミノ酸の２つ以上の配列に関わる。
【0034】
特に、本明細書で使用される、用語「Ｔ細胞エピトープ」は、ＭＨＣタイプＩＩ分子により提示されると、ＴＣＲ（特にＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ２細胞）によって発現される）により認識され結合され得るエピトープを指す。一実施形態では、ＴＣＲを発現するＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ２細胞）であり、ＴＣＲへのＴ細胞エピトープの結合は、Ｔ細胞の活性化を誘導し、それにより上記Ｔ細胞による炎症誘発性分子の産生をもたらす。
【0035】
本明細書で使用される、用語「Ｂ細胞エピトープ」は、Ｂ細胞微小環境で可溶性分子として存在する場合、Ｂ細胞により発現されるＢ細胞受容体（ＢＣＲ）により認識され結合され得る、または様々な細胞型の表面で提示されるとＢＣＲを介して架橋され得る、エピトープを指す。一実施形態では、ＢＣＲへのＢ細胞エピトープの結合は、Ｂ細胞の活性化を誘導し、それにより上記Ｂ細胞による特異的抗体のその活性化および産生をもたらす。
【0036】
本明細書で使用される、用語「免疫応答」は、生物体内で起こる反応、特に外来エレメントに応答して起こる反応を指す。それはしたがって、例えばリンパ球（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞を含む、Ｂ細胞およびＴ細胞など）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞など）、ナチュラルキラー細胞、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、および顆粒球など）、および上記の細胞または肝臓によって産生される巨大分子（これらに限定されないが、抗体、サイトカインおよび補体を含む）、の作用を指し得る。用語「免疫応答」は、本明細書で使用される場合、Ｔ細胞媒介性免疫応答および／またはＢ細胞媒介性免疫応答をしたがって含む。
【0037】
本明細書で使用される、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、またはそれらの混合物から選択される少なくとも１つのサイトカインの「生物学的活性を阻害する」または「生物学的活性を中和する」抗体は、その抗体の不在下でのサイトカインの活性のレベルと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％またはそれより多くそのサイトカインの活性を阻害する抗体を指すと意図される。サイトカインの活性を評価するために使用され得る機能アッセイの例は、当技術分野でよく知られている。
【0038】
本明細書で使用される、用語「薬学的に許容される賦形剤」は、動物、特に哺乳動物、好ましくはヒトに投与されたときに、有害な反応、アレルギー反応または他の不都合な反応を生じない賦形剤を指す。賦形剤としては、任意のあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に許容される賦形剤はしたがって、非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、封入材料、または任意のタイプの製剤補助剤を指し得る。ヒト投与のために、調製物は、ＦＤＡまたはＥＭＡなどの規制当局が要求する滅菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の基準を満たす必要がある。
【0039】
本明細書で使用される、用語「対象」は、免疫応答を誘発できる生物（例えば、哺乳動物、特にヒト、霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジなど）を含むと意図される。一実施形態では、対象は、ヒトである。一実施形態では、対象は、すなわち、医療を受けるのを待機しているもしくは受けている、または医療処置の対象であった、もしくは対象である、もしくは対象となる、例えば、炎症性障害などの標的とされる疾患または状態の発症について監視されている「患者」、温血動物、好ましくはヒトであり得る。一実施形態では、対象は、成人（例えば、１８歳を超える対象）である。別の実施形態では、対象は、小児（例えば、１８歳未満の対象）である。一実施形態では、対象は、雄である。別の実施形態では、対象は、雌である。一実施形態では、対象は、炎症性障害に罹患している、好ましくは炎症性障害と診断されている。一実施形態では、対象は、炎症性障害を発症するリスクがある。危険因子の例としては、これらに限定されないが、遺伝的素因、または炎症性障害の家族歴が挙げられる。
【0040】
本明細書で使用される用語「治療的に有効な量」は、特定の生物学的結果を達成するのに有効な、本明細書に記載の組成物の量を指す。したがって、用語「治療的に有効な量」は、標的に重大な負の副作用または有害な副作用を引き起こすことなく、（１）標的とされる疾患もしくは状態の発症を遅延させるもしくは予防すること、（２）標的とされる疾患もしくは状態の１つ以上の症状の進行、悪化、または崩壊を減速させるもしくは停止すること、（３）標的とされる疾患もしくは状態の症状の改善をもたらすこと、（４）標的とされる疾患もしくは状態の重症度もしくは発生率を低下させること、または（５）標的とされる疾患もしくは状態を治癒すること、を目的とする組成物のレベルまたは量を意味する。治療的に有効な量は、予防的または防止的な作用のために、標的とされる疾患または状態の発症の前に投与され得る。代替的にまたは追加的に、治療的に有効な量は、治療作用のために、標的とされる疾患または状態の開始後に投与され得る。
【0041】
本明細書で使用される、用語「治療」または「治療すること」は、治療的治療および予防的または防止的な措置の両方を指し、この目的は、標的とされる疾患または状態を防止するかまたは減速させる（軽減する）ことである。治療が必要なものには、すでにその状態を有するもの、その状態を有する傾向にあるもの、またはその状態を予防する必要があるものが挙げられる。治療量の本明細書に記載の組成物を受けた後に、対象が、以下の１つ以上において観察可能なおよび／または測定可能な改善を示す場合、対象は、疾患または状態について、うまく「治療され」ている：病原性細胞の数の減少；病原性である全細胞の割合の低下；特定の状態に関連する症状の１つ以上のある程度の軽減；罹患率および死亡率の低下；ならびに／または生活の質の問題の改善。治療の奏功および状態の改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られているルーチン手順により容易に測定可能である。
【発明を実施するための形態】
【0042】
本発明は、少なくとも１つのＲＮＡ分子、または少なくとも１つのＲＮＡ分子を含む組成物に関し、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、（ｉ）少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片のアミノ酸配列、（ｉｉ）少なくとも１つのＴ細胞エピトープのアミノ酸配列、および任意により（ｉｉｉ）少なくとも１つのスペーサーのアミノ酸配列、をコードする。
【0043】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、１つのアミノ酸鎖中に、（ｉ）少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片のアミノ酸配列、（ｉｉ）少なくとも１つのＴ細胞エピトープのアミノ酸配列、および任意により（ｉｉｉ）少なくとも１つのスペーサーのアミノ酸配列、を含む単一のタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0044】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、１つのアミノ酸鎖中に、Ｎ末端からＣ末端へと（ｉ）少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片のアミノ酸配列、任意により（ｉｉ）少なくとも１つのスペーサーのアミノ酸配列、および（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴ細胞エピトープのアミノ酸配列、を含む単一のタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。一実施形態では、単一のタンパク質構築物は、好ましくはＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む。
【0045】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと、（ｉ）少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片をコードする配列、任意により（ｉｉ）少なくとも１つのスペーサーをコードする配列、および（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴ細胞エピトープをコードする配列、を含む。一実施形態では、ＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列を、好ましくは５’にさらに含む。
【0046】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、少なくとも１つのサイトカインに由来するＴ細胞エピトープではない。より好ましくは、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、少なくとも１つのサイトカインとは別の生物体に由来する。
【0047】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片は、治療される対象と同じ生物体に由来する。例えば、ＲＮＡ分子がヒトを治療するために使用されると意図される場合、少なくとも１つのサイトカインまたはその断片は、ヒト（天然のまたは組換えのいずれかの）である。
【0048】
したがって、一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、２つのドメインを含むものとして記載され得る：第１のドメインは、少なくとも１つのサイトカインまたはその断片をコードし（ここで、少なくとも１つのサイトカインは好ましくは、治療される対象と同じ生物体に由来する－したがってこのドメインは、「自己ドメイン」として定義され得る）、第２のドメインは、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む（好ましくは少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、治療される対象とは別の生物体に由来する－したがってこのドメインは、「非自己ドメイン」として定義され得る）。
【0049】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、上記少なくとも１つのサイトカインまたはその断片の少なくとも１つのエピトープをコードする。一実施形態では、上記少なくとも１つのエピトープは、Ｂ細胞エピトープである。別の実施形態では、上記少なくとも１つのエピトープは、Ｔ細胞エピトープである。
【0050】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、低下されたサイトカイン活性を有するサイトカインまたはその断片をコードする。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、サイトカイン活性の低下は、天然の活性を有するサイトカインの発現の誘導が毒性を誘導し得るため、特に関連性があり得る。実際に、一実施形態では、本発明は、異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３活性に関連する疾患を治療すること、およびＲＮＡ分子を投与することを目的とし、機能的ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の増加された発現量をもたらし、重篤な副作用を引き起こし得る。
【0051】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子によりコードされるサイトカインまたはその断片の残存サイトカイン活性は、それが由来するサイトカインについて測定されるサイトカイン活性の８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、またはそれ未満である。サイトカイン活性を測定するために使用され得るアッセイは、当技術分野において周知されている。
【0052】
一実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－４またはＩＬ－１３であり、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子によりコードされるサイトカインまたはその断片の残存サイトカイン活性は、試験Ａの条件で測定され得る。試験Ａは、例えば、約４８時間のインキュベーション後に、ＣＴＬＬ－２細胞上で、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子でトランスフェクトされた細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）の上清（好ましくは、上清は、トランスフェクション２４時間後に収集される）の段階希釈により誘導される増殖活性の測定に基づくｉｎ ｖｉｔｒｏ試験である。細胞増殖を測定するための方法は、当該分野でよく知られており、限定されないが、ＭＴＳ／ＰＭＳアッセイ（基質の添加および４時間のインキュベーション後の４９０ｎｍでの光学密度の読み取りを含む）を含む。試験Ａの例を、実施例２に示す。
【0053】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子によりコードされるサイトカインまたはその断片の残存サイトカイン活性は、試験Ａの条件で測定される場合、同じ希釈で、それが由来するサイトカインについて測定されるサイトカイン活性の８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、またはそれ未満である。
【0054】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本出願人は、少なくとも１つのＲＮＡ分子が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで産生され標的細胞（例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞など）にｉｎ ｖｉｖｏで送達された後、少なくとも１つのタンパク質またはペプチドのこれらの細胞中での産生をもたらすことを示唆する。ペプチド（複数可）またはタンパク質（複数可）は次いで、細胞外コンパートメント中で細胞により分泌されるか、プロテアソームにより分解され、小胞体中へとプロセシングされて、エピトープを生成し、これらのエピトープは、その後ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子により細胞膜上に提示される。
【0055】
ＭＨＣクラスＩＩ分子を介するＩＬ－４および／またはＩＬ－１３エピトープ（本発明のＲＮＡ構築物からの）の提示は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化をもたらし得、それは次いでＢリンパ球を活性化し、それにより上記エピトープ（複数可）に特異的な抗体の産生をもたらす。さらに、ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３エピトープはまた、ＭＨＣクラスＩ分子により提示され得、細胞傷害性抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を誘導し得、次いでそれらの細胞表面で同じ抗原を発現する細胞を溶解し得る。さらに、ＭＨＣ分子による本発明のＲＮＡ分子の第２のドメインのＴ細胞エピトープの提示は、ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３エピトープの提示後に誘導される免疫応答を増加させ得る。
【0056】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ｍＲＮＡ分子、好ましくは少なくとも１つのサイトカインまたはその断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーをコードする複製しないｍＲＮＡ分子である。
【0057】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインまたはその断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーは、異なるｍＲＮＡ分子によりコードされる。一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインまたはその断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーは、１つのｍＲＮＡ分子によりコードされる。一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインまたはその断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーは、単一のタンパク質構築物、好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物に含まれる。
【0058】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－４である。
【0059】
一実施形態では、ＩＬ－４は、哺乳動物のＩＬ－４に由来する。
【0060】
一実施形態では、ＩＬ－４は、哺乳動物ＩＬ－４のバリアントであり、ここで、上記バリアントは、それが由来する哺乳動物ＩＬ－４と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きい同一性を示す。
【0061】
本明細書で使用される、用語「同一性」または「同一である」は、２つ以上の核酸配列または２つ以上のポリペプチドの配列間の関係で使用される場合、それぞれ、２つ以上の核酸残基またはアミノ酸残基のストリング間の一致数により決定される核酸配列またはポリペプチド間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により指定されたギャップアラインメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列の小さい方の間の同一の一致の割合（パーセント）を測定する。関連する核酸配列またはポリペプチドの同一性は、既知の方法により容易に計算できる。このような方法としては、これらに限定されないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載のものが挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験対象の配列間で最大の一致が得られるように設計される。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラムに記述される。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ、ＣｌｕｓｔａｌＯ（Ｓｉｅｖｅｒｓ Ｆ．，ｅｔ ａｌ ２０１１），ｔｈｅ ＧＣＧ ｐｒｏｇｒａｍ ｐａｃｋａｇｅ，例えばＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．＼２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））が挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の情報源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，前出）から公開されている。周知のＳｍｉｔｈＷａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一性を決定するためにを使用されてよい。
【0062】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－４の断片、例えば、それらが由来するＩＬ－４分子の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０または１２５個のアミノ酸（好ましくは、連続アミノ酸）を含むＩＬ－４の断片などである。
【0063】
一実施形態では、ＩＬ－４の断片は、エピトープを含み得るか、またはエピトープからなり得る。一実施形態では、ＩＬ－４の断片は、ＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなる。ＩＬ－４のエピトープの例を、以下に示す。
【0064】
一実施形態では、ＩＬ－４は、全長ＩＬ－４である。
【0065】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－４は、ヒトＩＬ－４である。ヒトＩＬ－４は、配列番号１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０５１１２－１）の配列を有する。
【0066】
配列番号１HKCDITLQEIIKTLNSLTEQKTLCTELTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKDTRCLGATAQQFHRHKQLIRFLKRLDRNLWGLAGLNSCPVKEANQSTLENFLERLKTIMREKYSKCSS
【0067】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、ヒトＩＬ－４をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ヒトＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号２、または配列番号２と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0068】
配列番号２
CACAAGUGCGACAUCACCCUGCAGGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAGACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGACAUCUUCGCCGCCAGCAAGAACACCACCGAGAAGGAGACCUUCUGCCGCGCCGCCACCGUGCUGCGCCAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCCGCUGCCUGGGCGCCACCGCCCAGCAGUUCCACCGCCACAAGCAGCUGAUCCGCUUCCUGAAGCGCCUGGACCGCAACCUGUGGGGCCUGGCCGGCCUGAACAGCUGCCCCGUGAAGGAGGCCAACCAGAGCACCCUGGAGAACUUCCUGGAGCGCCUGAAGACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGC
CACAAGUGCGACAUCACCCUGCAGGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAGACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGACAUCUUCGCCGCCAGCAAGAACACCACCGAGAAGGAGACCUUCUGCCGCGCCGCCACCGUGCUGCGCCAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCCGCUGCCUGGGCGCCACCGCCCAGCAGUUCCACCGCCACAAGCAGCUGAUCCGCUUCCUGAAGCGCCUGGACCGCAACCUGUGGGGCCUGGCCGGCCUGAACAGCUGCCCCGUGAAGGAGGCCAACCAGAGCACCCUGGAGAACUUCCUGGAGCGCCUGAAGACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGC
【0069】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－４サイトカイン断片は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0070】
ヒトＩＬ－４のエピトープの例としては、これらに限定されないが、以下が挙げられる：ＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴ（配列番号３）、ＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹ（配列番号４）、ＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧ（配列番号５）およびＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣ（配列番号６）。
【0071】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６を含む。
【0072】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それにより、上記ペプチドに環状立体構造を与える。
【0073】
ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＣ（配列番号７）、ＣＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＣ（配列番号８）、ＣＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＣ（配列番号９）およびＣＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣ（配列番号１０）が挙げられる。
【0074】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０を含む。
【0075】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にヒトＩＬ－４またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のヒトＩＬ－４タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0076】
一実施形態では、シグナルペプチドは、ヒトＩＬ－４のシグナルペプチドであり、好ましくは配列番号１０３（ＭＧＬＴＳＱＬＬＰＰＬＦＦＬＬＡＣＡＧＮＦＶＨＧ）の配列を含むか、またはそれからなり、ＲＮＡ配列の配列番号１０４（ＡＵＧＧＧＣＣＵＧＡＣＣＡＧＣＣＡＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＣＣＣＣＵＧＵＵＣＵＵＣＣＵＧＣＵＧＧＣＣＵＧＣＧＣＣＧＧＣＡＡＣＵＵＣＧＵＧＣＡＣＧＧＣ）によりコードされ得る。
【0077】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、これらに限定されないが、以下の配列を有するペプチドが挙げられる：
－MKWVTFISLLFLFSSAYS(配列番号:88、血清アルブミンプレプロタンパク質由来)
－MQLLSCIALILALV(配列番号:89、ヒトIL-2由来)
－MGVKVLFALICIAVAEA(配列番号:90、ガウシアルシフェラーゼ由来):
－MAFLWLLSCWALLGTTFG(配列番号:91、ヒトキモトリプシノーゲン由来)；
－MWWRLWWLLLLLLLLWPMVWA(配列番号:92)および
－MNLLLILTFVAAAVA(配列番号:93、ヒトトリプシノーゲン-2由来)。
－MKWVTFISLLFLFSSAYS(配列番号:88、血清アルブミンプレプロタンパク質由来)
－MQLLSCIALILALV(配列番号:89、ヒトIL-2由来)
－MGVKVLFALICIAVAEA(配列番号:90、ガウシアルシフェラーゼ由来):
－MAFLWLLSCWALLGTTFG(配列番号:91、ヒトキモトリプシノーゲン由来)；
－MWWRLWWLLLLLLLLWPMVWA(配列番号:92)および
－MNLLLILTFVAAAVA(配列番号:93、ヒトトリプシノーゲン-2由来)。
【0078】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、これらに限定されないが、配列番号７８、８４、１１７、１２７、１３７、１４０および１４２が挙げられる。
【0079】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－４は、マウスＩＬ－４である。マウスＩＬ－４は、配列番号１１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０７７５０－１）を有する。
【0080】
配列番号:11
HIHGCDKNHLREIIGILNEVTGEGTPCTEMDVPNVLTATKNTTESELVCRASKVLRIFYLKHGKTPCLKKNSSVLMELQRLFRAFRCLDSSISCTMNESKSTSLKDFLESLKSIMQMDYS
HIHGCDKNHLREIIGILNEVTGEGTPCTEMDVPNVLTATKNTTESELVCRASKVLRIFYLKHGKTPCLKKNSSVLMELQRLFRAFRCLDSSISCTMNESKSTSLKDFLESLKSIMQMDYS
【0081】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、マウスＩＬ－４をコードする配列を含む。マウスＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号１２、または配列番号１２と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0082】
配列番号:12
CACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGC
CACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGC
【0083】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－４サイトカイン断片は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0084】
マウスＩＬ－４のエピトープの例としては、これらに限定されないが、ＬＲＥＩＩＧＩＬＮＥＶＴＧＥＧＴＰＣＴＥＭＤ（配列番号１３）、ＳＥＬＶＣＲＡＳＫＶＬＲＩＦＹ（配列番号１４）、ＳＳＶＬＭＥＬＱＲＬＦＲＡＦＲＣＬＤＳ（配列番号１５）およびＬＫＤＦＬＥＳＬＫＳＩＭＱＭＤＹＳ（配列番号１６）が挙げられる。
【0085】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、または配列番号１６を含む。
【0086】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0087】
マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＬＲＥＩＩＧＩＬＮＥＶＴＧＥＧＴＰＣＴＥＭＤＣ（配列番号１７）、ＣＳＥＬＶＣＲＡＳＫＶＬＲＩＦＹＣ（配列番号１８）、ＣＳＳＶＬＭＥＬＱＲＬＦＲＡＦＲＣＬＤＳＣ（配列番号１９）およびＣＬＫＤＦＬＥＳＬＫＳＩＭＱＭＤＹＳＣ（配列番号２０）が挙げられる。
【0088】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、または配列番号２０を含む。
【0089】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にマウスＩＬ－４またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のマウスＩＬ－４タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0090】
一実施形態では、シグナルペプチドは、マウスＩＬ－４のシグナルペプチドであり、好ましくは配列番号１４０（ＭＧＬＮＰＱＬＶＶＩＬＬＦＦＬＥＣＴＲＳ）を含むか、またはそれからなり、これは、配列番号１４１（ＡＵＧＧＧＣＣＵＧＡＡＣＣＣＣＣＡＧＣＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＵＵＣＵＵＣＣ ＵＧＧＡＧＵＧＣＡＣＣＣＧＣＡＧＣ）のＲＮＡ配列によりコードされ得る。
【0091】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号７８、８４、１０３、１１７、１２７、１３７および１４２が挙げられる。
【0092】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－４は、イヌＩＬ－４である。イヌＩＬ－４は、配列番号２１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｏ７７７６２－１）を有する。
【0093】
配列番号:21
HNFNITIKEIIKMLNILTARNDSCMELTVKDVFTAPKNTSDKEIFCRAATVLRQIYTHNCSNRYLRGLYRNLSSMANKTCSMNEIKKSTLKDFLERLKVIMQKKYYRH
HNFNITIKEIIKMLNILTARNDSCMELTVKDVFTAPKNTSDKEIFCRAATVLRQIYTHNCSNRYLRGLYRNLSSMANKTCSMNEIKKSTLKDFLERLKVIMQKKYYRH
【0094】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、イヌＩＬ－４をコードする配列を含むか、またはそれからなる。イヌＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号２２、または配列番号２２と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0095】
配列番号:22
CACAACUUCAACAUCACCAUCAAGGAGAUCAUCAAGAUGCUGAACAUCCUGACCGCCCGCAACGACAGCUGCAUGGAGCUGACCGUGAAGGACGUGUUCACCGCCCCCAAGAACACCAGCGACAAGGAGAUCUUCUGCCGCGCCGCCACCGUGCUGCGCCAGAUCUACACCCACAACUGCAGCAACCGCUACCUGCGCGGCCUGUACCGCAACCUGAGCAGCAUGGCCAACAAGACCUGCAGCAUGAACGAGAUCAAGAAGAGCACCCUGAAGGACUUCCUGGAGCGCCUGAAGGUGAUCAUGCAGAAGAAGUACUACCGCCAC
CACAACUUCAACAUCACCAUCAAGGAGAUCAUCAAGAUGCUGAACAUCCUGACCGCCCGCAACGACAGCUGCAUGGAGCUGACCGUGAAGGACGUGUUCACCGCCCCCAAGAACACCAGCGACAAGGAGAUCUUCUGCCGCGCCGCCACCGUGCUGCGCCAGAUCUACACCCACAACUGCAGCAACCGCUACCUGCGCGGCCUGUACCGCAACCUGAGCAGCAUGGCCAACAAGACCUGCAGCAUGAACGAGAUCAAGAAGAGCACCCUGAAGGACUUCCUGGAGCGCCUGAAGGUGAUCAUGCAGAAGAAGUACUACCGCCAC
【0096】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－４サイトカイン断片は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0097】
イヌＩＬ－４のエピトープの例としては、これらに限定されないが、ＩＫＥＩＩＫＭＬＮＩＬＴＡＲＮＤＳＣＭＥＬＴ（配列番号９４）、ＫＥＩＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＩＹ（配列番号９５）、ＲＹＬＲＧＬＹＲＮＬＳＳＭＡＮ（配列番号９６）およびＬＫＤＦＬＥＲＬＫＶＩＭＱＫＫＹ（配列番号９７）が挙げられる。
【0098】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号９４～９７を含む。
【0099】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0100】
イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＩＫＥＩＩＫＭＬＮＩＬＴＡＲＮＤＳＣＭＥＬＴＣ（配列番号１０５）、ＣＫＥＩＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＩＹＣ（配列番号１０６）、ＣＲＹＬＲＧＬＹＲＮＬＳＳＭＡＮＣ（配列番号１０７）、およびＣＬＫＤＦＬＥＲＬＫＶＩＭＱＫＫＹＣ（配列番号１０８）が挙げられる。
【0101】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１０５～１０８を含む。
【0102】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にイヌＩＬ－４またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のイヌＩＬ－４タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0103】
一実施形態では、シグナルペプチドは、イヌＩＬ－４のシグナルペプチドであり、好ましくは、配列ＭＧＬＴＳＱＬＩＰＴＬＶＣＬＬＡＬＴＳＴＦＶＨＧ（配列番号７８）を含むか、またはそれからなり、これらは、ＲＮＡ配列ＡＵＧＧＧＣＣＵＧＡＣＣＡＧＣＣＡＧＣＵＧＡＵＣＣＣＣＡＣＣＣＵＧＧＵＧＵＧＣ ＣＵＧＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＣＡＧＣＡＣＣＵＵＣＧＵＧＣＡＣＧＧＣ（配列番号７９）によりコードされ得る。
【0104】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８４、１０３、１１７、１２７、１３７、１４０および１４２が挙げられる。
【0105】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－４は、ウマＩＬ－４である。ウマＩＬ－４は、配列番号９９（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４２２０２）を有する。
【0106】
配列番号:99
CKYDITLQEIIKTLNLTDGKGKNSCMELTVADAFGPKNTDGKEICRAAKVLQQYKRHDRSLIKECLSGLDRNLKGMANGTCCTVNEAKKSTLKDFLERLKTIMKEKYSKCS
CKYDITLQEIIKTLNLTDGKGKNSCMELTVADAFGPKNTDGKEICRAAKVLQQYKRHDRSLIKECLSGLDRNLKGMANGTCCTVNEAKKSTLKDFLERLKTIMKEKYSKCS
【0107】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、ウマＩＬ－４をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ウマＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号１００、または配列番号１００と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0108】
配列番号:100
UGCAAGUACGACAUCACCCUGCAGGAGAUCAUCAAGACCCUGAACCUGACCGACGGCAAGGGCAAGAACAGCUGCAUGGAGCUGACCGUGGCCGACGCCUUCGGCCCCAAGAACACCGACGGCAAGGAGAUCUGCCGCGCCGCCAAGGUGCUGCAGCAGUACAAGCGCCACGACCGCAGCCUGAUCAAGGAGUGCCUGAGCGGCCUGGACCGCAACCUGAAGGGCAUGGCCAACGGCACCUGCUGCACCGUGAACGAGGCCAAGAAGAGCACCCUGAAGGACUUCCUGGAGCGCCUGAAGACCAUCAUGAAGGAGAAGUACAGCAAGUGCAGC
UGCAAGUACGACAUCACCCUGCAGGAGAUCAUCAAGACCCUGAACCUGACCGACGGCAAGGGCAAGAACAGCUGCAUGGAGCUGACCGUGGCCGACGCCUUCGGCCCCAAGAACACCGACGGCAAGGAGAUCUGCCGCGCCGCCAAGGUGCUGCAGCAGUACAAGCGCCACGACCGCAGCCUGAUCAAGGAGUGCCUGAGCGGCCUGGACCGCAACCUGAAGGGCAUGGCCAACGGCACCUGCUGCACCGUGAACGAGGCCAAGAAGAGCACCCUGAAGGACUUCCUGGAGCGCCUGAAGACCAUCAUGAAGGAGAAGUACAGCAAGUGCAGC
【0109】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－４サイトカイン断片は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0110】
ウマＩＬ－４のエピトープの例としては、これらに限定されないが、ＬＱＥＩＩＫＴＬＮＬＴＤＧＫＧＫＮＳＣＭＥＬＴ（配列番号１０９）、ＫＥＩＣＲＡＡＫＶＬＱＱＹＫ（配列番号１１０）、ＲＳＬＩＫＥＣＬＳＧＬＤＲＮＬＫＧＭＡＮ（配列番号１１１）およびＬＫＤＦＬＥＲＬＫＴＩＭＫＥＫＹＳＫＣ（配列番号１１２）が挙げられる。
【0111】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１０９～１１２を含む。
【0112】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0113】
ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＬＱＥＩＩＫＴＬＮＬＴＤＧＫＧＫＮＳＣＭＥＬＴＣ（配列番号１１３）、ＣＫＥＩＣＲＡＡＫＶＬＱＱＹＫＣ（配列番号１１４）、ＣＲＳＬＩＫＥＣＬＳＧＬＤＲＮＬＫＧＭＡＮＣ（配列番号１１５）およびＣＬＫＤＦＬＥＲＬＫＴＩＭＫＥＫＹＳＫＣ（配列番号１１６）が挙げられる。
【0114】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１１３～１１６を含む。
【0115】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にウマＩＬ－４またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のウマＩＬ－４タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0116】
一実施形態では、シグナルペプチドはウマＩＬ－４のシグナルペプチドであり、好ましくは配列番号８４（ＭＧＬＴＹＱＬＬＰＡＬＶＣＬＬＡＣＴＳＦＩＱＧ）を含むかまたはこれらからなり、これは、配列番号８５（ＡＵＧＧＧＣＣＵＧＡＣＣＵＡＣＣＡＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＧＣＣＣＵＧＧＵＧＵＧＣＣＵＧ ＣＵＧＧＣＣＵＧＣＡＣＣＡＧＣＵＵＣＡＵＣＣＡＧＧＧＣ）のＲＮＡ配列によりコードされ得る。
【0117】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号７８、１０３、１１７、１２７、１３７、１４０および１４２が挙げられる。
【0118】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－１３である。
【0119】
一実施形態では、ＩＬ－１３は、哺乳動物のＩＬ－１３に由来する。
【0120】
一実施形態では、ＩＬ－１３は、哺乳動物ＩＬ－１３のバリアントであり、ここで、バリアントは、それが由来する哺乳動物ＩＬ－１３と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0121】
別の実施形態では、少なくとも１つのサイトカインは、ＩＬ－１３の断片、例えば、それらが由来するＩＬ－１３分子の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、または１２０個のアミノ酸（好ましくは、連続アミノ酸）を含むＩＬ－１３の断片など、である。
【0122】
一実施形態では、断片は、エピトープからなり得るか、またはエピトープを含み得る。一実施形態では、ＩＬ－１３の断片は、ＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなる。ＩＬ－１３のエピトープの例は、以下に列挙される。
【0123】
一実施形態では、ＩＬ－１３は、全長ＩＬ－１３である。
【0124】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－１３は、ヒトＩＬ－１３である。ヒトＩＬ－１３は、配列番号２３（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤ：Ｐ３５２２５－１）を有する。
【0125】
配列番号:23
LTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFN
LTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFN
【0126】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、ヒトＩＬ－１３タンパク質をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ヒトＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号２４、または配列番号２４と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0127】
配列番号:24
CUGACCUGCCUGGGCGGCUUCGCCAGCCCCGGCCCCGUGCCCCCCAGCACCGCCCUGCGCGAGCUGAUCGAGGAGCUGGUGAACAUCACCCAGAACCAGAAGGCCCCCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCAUCAACCUGACCGCCGGCAUGUACUGCGCCGCCCUGGAGAGCCUGAUCAACGUGAGCGGCUGCAGCGCCAUCGAGAAGACCCAGCGCAUGCUGAGCGGCUUCUGCCCCCACAAGGUGAGCGCCGGCCAGUUCAGCAGCCUGCACGUGCGCGACACCAAGAUCGAGGUGGCCCAGUUCGUGAAGGACCUGCUGCUGCACCUGAAGAAGCUGUUCCGCGAGGGCCGCUUCAAC
CUGACCUGCCUGGGCGGCUUCGCCAGCCCCGGCCCCGUGCCCCCCAGCACCGCCCUGCGCGAGCUGAUCGAGGAGCUGGUGAACAUCACCCAGAACCAGAAGGCCCCCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCAUCAACCUGACCGCCGGCAUGUACUGCGCCGCCCUGGAGAGCCUGAUCAACGUGAGCGGCUGCAGCGCCAUCGAGAAGACCCAGCGCAUGCUGAGCGGCUUCUGCCCCCACAAGGUGAGCGCCGGCCAGUUCAGCAGCCUGCACGUGCGCGACACCAAGAUCGAGGUGGCCCAGUUCGUGAAGGACCUGCUGCUGCACCUGAAGAAGCUGUUCCGCGAGGGCCGCUUCAAC
【0128】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１３サイトカイン断片は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドである。
【0129】
ヒトＩＬ－１３のエピトープの例としては、これらに限定されないが、ＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧ（配列番号２５）、ＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡ（配列番号２６）、ＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫ（配列番号２７）およびＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮ（配列番号２８）が挙げられる。
【0130】
したがって、一実施形態によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７または配列番号２８を含む。
【0131】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0132】
ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、以下が挙げられる：ＣＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧＣ（配列番号２９）、ＣＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡＣ（配列番号３０）、ＣＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫＣ（配列番号３１）およびＣＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮＣ（配列番号３２）。
【0133】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１または配列番号３２を含む。
【0134】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にヒトＩＬ－１３またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のヒトＩＬ－１３タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0135】
一実施形態では、シグナルペプチドは、ヒトＩＬ－１３のシグナルペプチドであり、好ましくは、配列番号１１７（ＭＨＰＬＬＮＰＬＬＬＡＬＧＬＭＡＬＬＬＴＴＶＩＡ）の配列を含むか、またはそれからなり、ＲＮＡ配列の配列番号１１８（ＡＵＧＣＡＣＣＣＣＣＵＧＣＵＧＡＡＣＣＣＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＧＣＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＡＵＧＧＣＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＡＣＣＡＣＣＧＵＧＡＵＣＧＣＣ）によりコードされ得る。
【0136】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号７８、８４、１０３、１２７、１３７、１４０および１４２が挙げられる。
【0137】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－１３は、マウスＩＬ－１３である。マウスＩＬ－１３は、配列番号３３（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２０１０９－１）を有する。
【0138】
配列番号:33
APGPVPRSVSLPLTLKELIEELSNITQDQTPLCNGSMVWSVDLAAGGFCVALDSLTNISNCNAIYRTQRILHGLCNRKAPTTVSSLPDTKIEVAHFITKLLSYTKQLFRHGPF
APGPVPRSVSLPLTLKELIEELSNITQDQTPLCNGSMVWSVDLAAGGFCVALDSLTNISNCNAIYRTQRILHGLCNRKAPTTVSSLPDTKIEVAHFITKLLSYTKQLFRHGPF
【0139】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、マウスＩＬ－１３をコードする配列を含むか、またはそれからなる。マウスＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号３４、または配列番号３４と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0140】
配列番号:34
GCCCCCGGCCCCGUGCCCAGGAGCGUGAGCCUGCCCCUGACCCUGAAGGAGCUGAUCGAGGAGCUGAGCAACAUCACCCAGGACCAGACCCCCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCGUGGACCUGGCCGCCGGCGGCUUCUGCGUGGCCCUGGACAGCCUGACCAACAUCAGCAACUGCAACGCCAUCUACAGGACCCAGAGGAUCCUGCACGGCCUGUGCAACAGGAAGGCCCCCACCACCGUGAGCAGCCUGCCCGACACCAAGAUCGAGGUGGCCCACUUCAUCACCAAGCUGCUGAGCUACACCAAGCAGCUGUUCAGGCACGGCCCCUUC
GCCCCCGGCCCCGUGCCCAGGAGCGUGAGCCUGCCCCUGACCCUGAAGGAGCUGAUCGAGGAGCUGAGCAACAUCACCCAGGACCAGACCCCCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCGUGGACCUGGCCGCCGGCGGCUUCUGCGUGGCCCUGGACAGCCUGACCAACAUCAGCAACUGCAACGCCAUCUACAGGACCCAGAGGAUCCUGCACGGCCUGUGCAACAGGAAGGCCCCCACCACCGUGAGCAGCCUGCCCGACACCAAGAUCGAGGUGGCCCACUUCAUCACCAAGCUGCUGAGCUACACCAAGCAGCUGUUCAGGCACGGCCCCUUC
【0141】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１３サイトカイン断片は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0142】
マウスＩＬ－１３のエピトープの例としては、ＬＫＥＬＩＥＥＬＳＮＩＴＱＤＱＴＰＬＣＮＧ（配列番号３５）、ＮＧＳＭＶＷＳＶＤＬＡＡＧＧＦＣＶ（配列番号３６）、ＡＧＧＦＣＶＡＬＤＳＬＴＮＩＳＮＣＮＡＩＹＲ（配列番号３７）およびＶＡＨＦＩＴＫＬＬＳＹＴＫＱＬＦＲＨＧＰＦ（配列番号３８）が挙げられる。
【0143】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７または配列番号３８を含む。
【0144】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0145】
マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＬＫＥＬＩＥＥＬＳＮＩＴＱＤＱＴＰＬＣＮＧＣ（配列番号３９）、ＣＮＧＳＭＶＷＳＶＤＬＡＡＧＧＦＣＶＣ（配列番号４０）、ＣＡＧＧＦＣＶＡＬＤＳＬＴＮＩＳＮＣＮＡＩＹＲＣ（配列番号４１）およびＣＶＡＨＦＩＴＫＬＬＳＹＴＫＱＬＦＲＨＧＰＦＣ（配列番号４２）が挙げられる。
【0146】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１または配列番号４２を含む。
【0147】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にマウスＩＬ－１３またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のマウスＩＬ－１３タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0148】
一実施形態では、シグナルペプチドは、マウスＩＬ－１３のシグナルペプチドであり、好ましくは、ＲＮＡ配列の配列番号１４３（ＡＵＧＧＣＣＣＵＧＵＧＧＧＵＧＡＣＣＧＣＣＧＵＧＣＵＧＧＣＣＣＵＧＧＣＣＵＧＣＣＵＧＧＧＣＧＧＣＣＵＧＧＣＣ）によりコードされ得る配列番号１４２（ＭＡＬＷＶＴＡＶＬＡＬＡＣＬＧＧＬＡ）の配列を含むか、またはこれらからなる。
【0149】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号７８、８４、１０３、１１７、１２７、１３７および１４０が挙げられる。
【0150】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－１３は、イヌＩＬ－１３である。イヌＩＬ－１３は、配列番号４３（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｑ９Ｎ０Ｗ９－１）を有する。
【0151】
配列番号:43
SPSPVTPSPTLKELIEELVNITQNQASLCNGSMVWSVNLTAGMYCAALESLINVSDCSAIQRTQRMLKALCSQKPAAGQISSERSRDTKIEVIQLVKNLLTYVRGVYRHGNFR
SPSPVTPSPTLKELIEELVNITQNQASLCNGSMVWSVNLTAGMYCAALESLINVSDCSAIQRTQRMLKALCSQKPAAGQISSERSRDTKIEVIQLVKNLLTYVRGVYRHGNFR
【0152】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、イヌＩＬ－１３をコードする配列を含むか、またはそれからなる。イヌＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号４４、または配列番号４４と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0153】
配列番号:44
AGCCCCAGCCCCGUGACCCCCAGCCCCACCCUGAAGGAGCUGAUCGAGGAGCUGGUGAACAUCACCCAGAACCAGGCCAGCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCGUGAACCUGACCGCCGGCAUGUACUGCGCCGCCCUGGAGAGCCUGAUCAACGUGAGCGACUGCAGCGCCAUCCAGCGCACCCAGCGCAUGCUGAAGGCCCUGUGCAGCCAGAAGCCCGCCGCCGGCCAGAUCAGCAGCGAGCGCAGCCGCGACACCAAGAUCGAGGUGAUCCAGCUGGUGAAGAACCUGCUGACCUACGUGCGCGGCGUGUACCGCCACGGCAACUUCCGC
AGCCCCAGCCCCGUGACCCCCAGCCCCACCCUGAAGGAGCUGAUCGAGGAGCUGGUGAACAUCACCCAGAACCAGGCCAGCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCGUGAACCUGACCGCCGGCAUGUACUGCGCCGCCCUGGAGAGCCUGAUCAACGUGAGCGACUGCAGCGCCAUCCAGCGCACCCAGCGCAUGCUGAAGGCCCUGUGCAGCCAGAAGCCCGCCGCCGGCCAGAUCAGCAGCGAGCGCAGCCGCGACACCAAGAUCGAGGUGAUCCAGCUGGUGAAGAACCUGCUGACCUACGUGCGCGGCGUGUACCGCCACGGCAACUUCCGC
【0154】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１３サイトカイン断片は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0155】
イヌＩＬ－１３のエピトープの例としては、これらに限定されないが、ＬＫＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＡＳＬＣＮＧ（配列番号１１９）、ＮＧＳＭＶＷＳＶＮＬＴＡＧＭＹＣＡ（配列番号１２０）、ＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＤＣＳＡＩＱＲ（配列番号１２１）およびＶＩＱＬＶＫＮＬＬＴＹＶＲＧＶＹＲＨＧＮＦ（配列番号１２２）が挙げられる。
【0156】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１１９～１２２を含む。
【0157】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0158】
イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＬＫＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＡＳＬＣＮＧＣ（配列番号１２３）、ＣＮＧＳＭＶＷＳＶＮＬＴＡＧＭＹＣＡＣ（配列番号１２４）、ＣＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＤＣＳＡＩＱＲＣ（配列番号１２５）およびＣＶＩＱＬＶＫＮＬＬＴＹＶＲＧＶＹＲＨＧＮＦＣ（配列番号１２６）が挙げられる。
【0159】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１２３～１２６を含む。
【0160】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にイヌＩＬ－１３またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のイヌＩＬ－１３タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0161】
一実施形態では、シグナルペプチドは、イヌＩＬ－１３のシグナルペプチドであり、好ましくはＭＡＬＷＬＴＶＶＩＡＬＴＣＬＧＧＬＡ（配列番号１２７）の配列を含むか、またはこれらからなり、これは、ＲＮＡ配列ＡＵＧＧＣＣＣＵＧＵＧＧＣＵＧＡＣＣＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＣＣＣＵＧＡＣＣＵＧＣＣＵＧＧＧＣＧＧＣＣＵＧＧＣＣ（配列番号１２８）の配列によりコードされ得る。
【0162】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号７８、８４、１０３、１１７、１３７、１４０および１４２が挙げられる。
【0163】
本発明の一実施形態では、ＩＬ－１３は、ウマＩＬ－１３である。ウマＩＬ－１３は、配列番号１０１（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤ：Ｂ６Ｃ８０２）を有する。
【0164】
配列番号:101
APLPSSMALKELIKELVNITQNQAPLCNGSMVWSVNLTADTYCRALESLSNVSTCSAIQNTRKMLTKLCPHQLSAGQVSSERARDTKIEVIVLVKDLLKNLRKIFHGGKHVDA
APLPSSMALKELIKELVNITQNQAPLCNGSMVWSVNLTADTYCRALESLSNVSTCSAIQNTRKMLTKLCPHQLSAGQVSSERARDTKIEVIVLVKDLLKNLRKIFHGGKHVDA
【0165】
一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインをコードするＲＮＡ配列は、ウマＩＬ－１３をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ウマＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号１０２、または配列番号１０２と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0166】
配列番号:102
GCCCCCCUGCCCAGCAGCAUGGCCCUGAAGGAGCUGAUCAAGGAGCUGGUGAACAUCACCCAGAACCAGGCCCCCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCGUGAACCUGACCGCCGACACCUACUGCCGCGCCCUGGAGAGCCUGAGCAACGUGAGCACCUGCAGCGCCAUCCAGAACACCCGCAAGAUGCUGACCAAGCUGUGCCCCCACCAGCUGAGCGCCGGCCAGGUGAGCAGCGAGCGCGCCCGCGACACCAAGAUCGAGGUGAUCGUGCUGGUGAAGGACCUGCUGAAGAACCUGCGCAAGAUCUUCCACGGCGGCAAGCACGUGGACGCC
GCCCCCCUGCCCAGCAGCAUGGCCCUGAAGGAGCUGAUCAAGGAGCUGGUGAACAUCACCCAGAACCAGGCCCCCCUGUGCAACGGCAGCAUGGUGUGGAGCGUGAACCUGACCGCCGACACCUACUGCCGCGCCCUGGAGAGCCUGAGCAACGUGAGCACCUGCAGCGCCAUCCAGAACACCCGCAAGAUGCUGACCAAGCUGUGCCCCCACCAGCUGAGCGCCGGCCAGGUGAGCAGCGAGCGCGCCCGCGACACCAAGAUCGAGGUGAUCGUGCUGGUGAAGGACCUGCUGAAGAACCUGCGCAAGAUCUUCCACGGCGGCAAGCACGUGGACGCC
【0167】
一実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１３サイトカイン断片は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むか、またはそれからなるペプチドである。
【0168】
ウマＩＬ－１３のエピトープの例としては、これらに限定されないが、ＬＫＥＬＩＫＥＬＶＮＩＴＱＮＱＡＰＬＣＮＧ（配列番号１２９）、ＮＧＳＭＶＷＳＶＮＬＴＡＤＴＹＣＲＡ（配列番号１３０）、ＡＤＴＹＣＲＡＬＥＳＬＳＮＶＳＴＣＳＡＩＱＮ（配列番号１３１）およびＶＩＶＬＶＫＤＬＬＫＮＬＲＫＩＦＨＧＧＫ（配列番号１３２）が挙げられる。
【0169】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１２９～１３２を含む。
【0170】
一実施形態では、１つ以上のシステイン残基（複数可）が、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの末端に付加される。一実施形態では、１つのシステイン残基が、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなるペプチドの各末端に付加され、それによりペプチドに環状立体構造を与える。
【0171】
ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含む環状ペプチドの例としては、これらに限定されないが、ＣＬＫＥＬＩＫＥＬＶＮＩＴＱＮＱＡＰＬＣＮＧＣ（配列番号１３３）、ＣＮＧＳＭＶＷＳＶＮＬＴＡＤＴＹＣＲＡＣ（配列番号１３４）、ＣＡＤＴＹＣＲＡＬＥＳＬＳＮＶＳＴＣＳＡＩＱＮＣ（配列番号１３５）およびＣＶＩＶＬＶＫＤＬＬＫＮＬＲＫＩＦＨＧＧＫＣ（配列番号１３６）が挙げられる。
【0172】
したがって、一実施形態によれば、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むかまたはそれからなる環状ペプチドをコードする１つ以上のＲＮＡ配列、例えば配列番号１３３～１３６を含む。
【0173】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ配列、特にウマＩＬ－１３またはその少なくとも１つの断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列は、シグナルペプチド、例えば天然のウマＩＬ－１３タンパク質のシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列をさらに含む。
【0174】
一実施形態では、シグナルペプチドは、ウマＩＬ－１３のシグナルペプチドであり、好ましくは配列番号１３７（ＭＡＬＷＬＴＡＶＩＡＬＡＣＬＧＧＬＡＳＰ）の配列を含むかまたはこれからなり、これは、配列番号１３８（ＡＵＧＧＣＣＣＵＧＵＧＧＣＵＧＡＣＣＧＣＣＧＵＧＡＵＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＵＧＣＣＵ ＧＧＧＣＧＧＣＣＵＧＧＣＣＡＧＣＣＣＣ）のＲＮＡ配列によりコードされ得る。
【0175】
本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号８８～９３が挙げられる。本発明で使用され得るシグナルペプチドの他の例としては、限定されないが、配列番号７８、８４、１０３、１１７、１２７、１４０および１４２が挙げられる。
【0176】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、（ｉ）ＩＬ－４、ＩＬ－４の少なくとも１つのバリアント、ＩＬ－４の少なくとも１つの断片、またはＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープ（特に、上記のペプチドの１つ）を含むかまたはそれらからなる少なくとも１つのアミノ酸配列、および（ｉｉ）ＩＬ－１３、ＩＬ－１３の少なくとも１つのバリアント、ＩＬ－１３の少なくとも１つの断片、またはＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープ（特に、上記のペプチドの１つ）を含むかまたはそれらからなる少なくとも１つのアミノ酸配列、をコードする。
【0177】
本発明によれば、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、少なくとも１つのＴ細胞エピトープをコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、１つのＴ細胞エピトープを含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、少なくとも２、３、４、５、または１０個のＴ細胞エピトープ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個以上のＴ細胞エピトープ）を含むアミノ酸配列をコードし、これらは、同一であっても異なっていてもよく、少なくとも１つのスペーサーにより共に連結されてもよい。スペーサーの例は、本明細書に列挙される。
【0178】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、優性Ｔ細胞エピトープ、すなわち、非ＨＬＡ制限であるエピトープである。一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、Ｔｈ２エピトープである。
【0179】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、ペプチドまたはタンパク質に含まれ、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質は、サイトカインまたはその断片とは異なる。
【0180】
Ｔ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドもしくはタンパク質の例は、これらに限定されないが、ＣＲＭ１９７、そのバリアントおよび断片（例えば、ＣＲＭ１９７（２９９－３１２）、ＣＲＭ１９７（４２５－４４０）、ＣＲＭ１９７（３００－４５０））、ジフテリアと破傷風エピトープとの組み合わせ（ＴｐＤ）、破傷風毒素（ＴＴ）のエピトープ、およびユニバーサルポリエピトープＣＤ４（例えば、Ｎ１０、Ｎ１９）を含むかまたはそれらからなる群を含む。
【0181】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＣＲＭ１９７、またはそのバリアントもしくは断片をコードするＲＮＡ配列を含む。ＣＲＭ１９７は、配列番号４８の配列を有するジフテリア毒素の非毒性変異体であり、一塩基置換（５２位におけるグリシンからグルタミン酸への変異）による毒性活性を有しない。
【0182】
配列番号:48
GADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKEFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKALSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRRSVGSSLSCINLDWDVIRDKTKTKIESLKEHGPIKNKMSESPNKTVSEEKAKQYLEEFHQTALEHPELSELKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETADNLEKTTAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKTQPFLHDGYAVSWNTVEDSIIRTGFQGESGHDIKITAENTPLPIAGVLLPTIPGKLDVNKSKTHISVNGRKIRMRCRAIDGDVTFCRPKSPVYVGNGVHANLHVAFHRSSSEKIHSNEISSDSIGVLGYQKTVDHTKVNSKLSLFFEIKS
GADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKEFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKALSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRRSVGSSLSCINLDWDVIRDKTKTKIESLKEHGPIKNKMSESPNKTVSEEKAKQYLEEFHQTALEHPELSELKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETADNLEKTTAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKTQPFLHDGYAVSWNTVEDSIIRTGFQGESGHDIKITAENTPLPIAGVLLPTIPGKLDVNKSKTHISVNGRKIRMRCRAIDGDVTFCRPKSPVYVGNGVHANLHVAFHRSSSEKIHSNEISSDSIGVLGYQKTVDHTKVNSKLSLFFEIKS
【0183】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＣＲＭ１９７のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、バリアントは、配列番号４８と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を呈する。一実施形態では、ＣＲＭ１９７のバリアントは、５２位のグリシンからグルタミン酸への変異（配列番号４８）を含み、したがって非毒性である。
【0184】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、全長ＣＲＭ１９７をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0185】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＣＲＭ１９７の断片をコードするＲＮＡ配列、例えば、配列番号４８から少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含む断片、をコードするＲＮＡ配列を含む。ＣＲＭ１９７の断片の具体例を、本明細書に列挙する。
【0186】
一実施形態では、ＣＲＭ１９７をコードするＲＮＡ配列は、配列番号４９、または配列番号４９と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0187】
配列番号:49
GGCGCCGACGACGUGGUGGACAGCAGCAAGAGCUUCGUGAUGGAGAACUUCAGCAGCUACCACGGCACCAAGCCCGGCUACGUGGACAGCAUCCAGAAGGGCAUCCAGAAGCCCAAGAGCGGCACCCAGGGCAACUACGACGACGACUGGAAGGAGUUCUACAGCACCGACAACAAGUACGACGCCGCCGGCUACAGCGUGGACAACGAGAACCCCCUGAGCGGCAAGGCCGGCGGCGUGGUGAAGGUGACCUACCCCGGCCUGACCAAGGUGCUGGCCCUGAAGGUGGACAACGCCGAGACCAUCAAGAAGGAGCUGGGCCUGAGCCUGACCGAGCCCCUGAUGGAGCAGGUGGGCACCGAGGAGUUCAUCAAGAGGUUCGGCGACGGCGCCAGCAGGGUGGUGCUGAGCCUGCCCUUCGCCGAGGGCAGCAGCAGCGUGGAGUACAUCAACAACUGGGAGCAGGCCAAGGCCCUGAGCGUGGAGCUGGAGAUCAACUUCGAGACCAGGGGCAAGAGGGGCCAGGACGCCAUGUACGAGUACAUGGCCCAGGCCUGCGCCGGCAACAGGGUGAGGAGGAGCGUGGGCAGCAGCCUGAGCUGCAUCAACCUGGACUGGGACGUGAUCAGGGACAAGACCAAGACCAAGAUCGAGAGCCUGAAGGAGCACGGCCCCAUCAAGAACAAGAUGAGCGAGAGCCCCAACAAGACCGUGAGCGAGGAGAAGGCCAAGCAGUACCUGGAGGAGUUCCACCAGACCGCCCUGGAGCACCCCGAGCUGAGCGAGCUGAAGACCGUGACCGGCACCAACCCCGUGUUCGCCGGCGCCAACUACGCCGCCUGGGCCGUGAACGUGGCCCAGGUGAUCGACAGCGAGACCGCCGACAACCUGGAGAAGACCACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUCAGCGUGAACGGCAGGAAGAUCAGGAUGAGGUGCAGGGCCAUCGACGGCGACGUGACCUUCUGCAGGCCCAAGAGCCCCGUGUACGUGGGCAACGGCGUGCACGCCAACCUGCACGUGGCCUUCCACAGGAGCAGCAGCGAAAAGAUCCACAGCAACGAGAUCAGCAGCGACAGCAUCGGCGUGCUGGGCUACCAGAAGACCGUGGACCACACCAAGGUGAACAGCAAGCUGAGCCUGUUCUUCGAGAUCAAGAGC
GGCGCCGACGACGUGGUGGACAGCAGCAAGAGCUUCGUGAUGGAGAACUUCAGCAGCUACCACGGCACCAAGCCCGGCUACGUGGACAGCAUCCAGAAGGGCAUCCAGAAGCCCAAGAGCGGCACCCAGGGCAACUACGACGACGACUGGAAGGAGUUCUACAGCACCGACAACAAGUACGACGCCGCCGGCUACAGCGUGGACAACGAGAACCCCCUGAGCGGCAAGGCCGGCGGCGUGGUGAAGGUGACCUACCCCGGCCUGACCAAGGUGCUGGCCCUGAAGGUGGACAACGCCGAGACCAUCAAGAAGGAGCUGGGCCUGAGCCUGACCGAGCCCCUGAUGGAGCAGGUGGGCACCGAGGAGUUCAUCAAGAGGUUCGGCGACGGCGCCAGCAGGGUGGUGCUGAGCCUGCCCUUCGCCGAGGGCAGCAGCAGCGUGGAGUACAUCAACAACUGGGAGCAGGCCAAGGCCCUGAGCGUGGAGCUGGAGAUCAACUUCGAGACCAGGGGCAAGAGGGGCCAGGACGCCAUGUACGAGUACAUGGCCCAGGCCUGCGCCGGCAACAGGGUGAGGAGGAGCGUGGGCAGCAGCCUGAGCUGCAUCAACCUGGACUGGGACGUGAUCAGGGACAAGACCAAGACCAAGAUCGAGAGCCUGAAGGAGCACGGCCCCAUCAAGAACAAGAUGAGCGAGAGCCCCAACAAGACCGUGAGCGAGGAGAAGGCCAAGCAGUACCUGGAGGAGUUCCACCAGACCGCCCUGGAGCACCCCGAGCUGAGCGAGCUGAAGACCGUGACCGGCACCAACCCCGUGUUCGCCGGCGCCAACUACGCCGCCUGGGCCGUGAACGUGGCCCAGGUGAUCGACAGCGAGACCGCCGACAACCUGGAGAAGACCACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUCAGCGUGAACGGCAGGAAGAUCAGGAUGAGGUGCAGGGCCAUCGACGGCGACGUGACCUUCUGCAGGCCCAAGAGCCCCGUGUACGUGGGCAACGGCGUGCACGCCAACCUGCACGUGGCCUUCCACAGGAGCAGCAGCGAAAAGAUCCACAGCAACGAGAUCAGCAGCGACAGCAUCGGCGUGCUGGGCUACCAGAAGACCGUGGACCACACCAAGGUGAACAGCAAGCUGAGCCUGUUCUUCGAGAUCAAGAGC
【0188】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号４８のアミノ酸２９９～アミノ酸３１２を含むか、またはそれらからなるＣＲＭ１９７の断片をコードするＲＮＡ配列を含む。配列番号４８のアミノ酸２９９～アミノ酸３１２からなるＣＲＭ１９７の断片は、ＣＲＭ１９７（２９９－３１２）と称され、配列番号５０（ＫＴＴＡＡＬＳＩＬＰＧＩＧＳ）の配列からなる。
【0189】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、配列番号５０のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、バリアントは、配列番号５０と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0190】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号５０の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含むか、またはそれらからなるＣＲＭ１９７（２９９－３１２）の断片をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0191】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドもしくはタンパク質をコードするＲＮＡ配列は、ＣＲＭ１９７（２９９－３１２）をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ＣＲＭ１９７（２９９－３１２）をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号５１、または配列番号５１（ＡＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＣＵＧＡＧＣＡＵＣＣＵＧＣＣＣＧＧＣＡＵＣＧＧＣＡＧＣ）と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0192】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号４８のアミノ酸４２５～アミノ酸４４０を含むかまたはそれらからなるＣＲＭ１９７の断片をコードするＲＮＡ配列を含む。配列番号４８のアミノ酸４２５～アミノ酸４４０からなるＣＲＭ１９７の断片は、ＣＲＭ１９７（４２５－４４０）と称され、配列番号５２（ＴＰＬＰＩＡＧＶＬＬＰＴＩＰＧＫ）の配列からなる。
【0193】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、配列番号５２のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、バリアントは、配列番号５２と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0194】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号５２の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含むかまたはそれらからなるＣＲＭ１９７（４２５－４４０）の断片をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0195】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドもしくはタンパク質をコードするＲＮＡ配列は、ＣＲＭ１９７（４２５－４４０）をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ＣＲＭ１９７（４２５－４４０）をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号５３、または配列番号５３（ＡＣＣＣＣＣＣＵＧＣＣＣＡＵＣＧＣＣＧＧＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＡＣＣＡＵＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧ）と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0196】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号４８のアミノ酸３００～アミノ酸４５０を含むかまたはそれらからなるＣＲＭ１９７の断片をコードするＲＮＡ配列を含む。配列番号４８のアミノ酸３００～アミノ酸４５０からなるＣＲＭ１９７の断片は、ＣＲＭ１９７（３００－４５０）と称され、配列番号４６の配列からなる。
【0197】
配列番号:46
TAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKTQPFLHDGYAVSWNTVEDSIIRTGFQGESGHDIKITAENTPLPIAGVLLPTIPGKLDVNKSKTHI
TAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKTQPFLHDGYAVSWNTVEDSIIRTGFQGESGHDIKITAENTPLPIAGVLLPTIPGKLDVNKSKTHI
【0198】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、配列番号４６のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、バリアントは、配列番号４６と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0199】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号４６の少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０または１４５個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含むかまたはそれらからなるＣＲＭ１９７（３００－４５０）の断片をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0200】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドもしくはタンパク質をコードするＲＮＡ配列は、ＣＲＭ１９７（３００－４５０）をコードする配列を含むか、またはそれからなる。ＣＲＭ１９７（３００－４５０）をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号４７、または配列番号４７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むか、またはそれらからなる。
【0201】
配列番号:47
ACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUC
ACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUC
【0202】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＴｐＤをコードするＲＮＡ配列を含む。ＴｐＤは、ジフテリアおよび破傷風エピトープの両方を含み、任意によりカテプシン切断部位を含む。
【0203】
一実施形態では、ＴｐＤは、配列番号５４（ＩＬＭＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＰＭＧＬＰＱＳＩＡＬＳＳＬＭＶＡＱ）の配列を含むかまたはそれからなる。
【0204】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号５４のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、バリアントは、配列番号５４と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を呈する。
【0205】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、全長ＴｐＤをコードするＲＮＡ配列を含む。全長ＴｐＤをコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号５５、または配列番号５５と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、もしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むかまたはそれらからなるＲＮＡ配列である。
【0206】
配列番号55
AUCCUGAUGCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCCCCAUGGGCCUGCCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAG
AUCCUGAUGCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCCCCAUGGGCCUGCCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAG
【0207】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＴｐＤの断片、例えば、配列番号５４からの少なくとも約５、１０、１５、２０、２５または３０個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含む断片など、をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0208】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、「ｐ２－スペーサー－ｐ３０」構築物をコードするＲＮＡ配列を含む。Ｐ２－スペーサー－ｐ３０は、破傷風毒素（ＴＴ）の２つのエピトープ、すなわちペプチドＰ２およびペプチドＰ３０、および少なくとも１つのスペーサーを含む、ペプチドである。
【0209】
一実施形態では、スペーサーは、１～２０個のアミノ酸を含む。一実施形態では、スペーサーは、２つのアミノ酸からなる。一実施形態では、スペーサーは、ＲＲからなる。
【0210】
一実施形態では、ｐ２－スペーサー－ｐ３０は、配列番号６３の配列からなるペプチド「ｐ２ＴＴ」、配列番号６２の配列からなるペプチド「ｐ３０ＴＴ」、および任意によりスペーサー（例えば、ＲＲなど）を含むかまたはそれらからなる。
【0211】
一実施形態では、ｐ２－スペーサー－ｐ３０は、構築物ｐ２－ＲＲ－ｐ３０を含むかまたはそれからなり、すなわち、構築物は、ペプチドｐ２ＴＴおよびｐ３０ＴＴおよびスペーサーＲＲを含むかまたはそれらからなり、配列番号５６の配列またはそのバリアントを有するかまたは含み、配列番号５６と好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する。ｐ２－ＲＲ－ｐ３０構築物。
【0212】
配列番号:56
QYIKANSKFIGITERRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEQY
QYIKANSKFIGITERRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEQY
【0213】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドもしくはタンパク質またはその断片は、全長ｐ２－ＲＲ－ｐ３０である。
【0214】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、または少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドもしくはタンパク質またはその断片は、配列番号５６からの少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３２、３５または３７個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含む、ｐ２－ＲＲ－ｐ３０の断片である。
【0215】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、ｐ２－ＲＲ－ｐ３０をコードするＲＮＡ配列を含む。ｐ２－ＲＲ－ｐ３０をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号５７、または配列番号５７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、もしくはそれより大きな同一性を有する配列を含むかまたはそれらからなる配列である。
【0216】
配列番号:57
CAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAGAGGAGGUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGCAGUAC
CAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAGAGGAGGUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGCAGUAC
【0217】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、１つ以上のユニバーサルなＣＤ４ポリエピトープをコードするＲＮＡ配列を含む。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、任意によりスペーサー（複数可）により連結される、少なくとも２つのユニバーサルなＣＤ４ポリエピトープをコードするＲＮＡ配列を含む。ユニバーサルなＣＤ４ポリエピトープの例としては、これらに限定されないが、配列番号５８～６７（表１）の配列を有するペプチドが挙げられる。スペーサーの例を本明細書で提供する。
【0218】
表１：ユニバーサルＣＤ４ポリエピトープのアミノ酸配列
【表1】
【0219】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、配列番号５８～６７から選択される配列のバリアントであり、ここで、バリアントは、配列番号５８～６７と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0220】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、表１に開示される全長のユニバーサルＣＤ４タンパク質ポリエピトープである。
【0221】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープは、配列番号５８～６０、６３、および６５～６７の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１または１２個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含むユニバーサルＣＤ４ポリエピトープの断片であるか、または配列番号６１～６２および６４の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６もしくは１７個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含むユニバーサルＣＤ４ポリエピトープの断片である。
【0222】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープをコードするＲＮＡ配列は、スペーサー（複数可）により任意により連結される、少なくとも２つのユニバーサルＣＤ４ポリエピトープをコードする配列を含むか、またはそれからなる。ユニバーサルＣＤ４ポリエピトープをコードするＲＮＡ配列の例としては、これらに限定されないが、配列番号６８～７７の配列を含むか、またはそれらからなるＲＮＡ配列が挙げられる（表２）。
【0223】
表２：ユニバーサルＣＤ４ポリエピトープのヌクレオチド配列
【表2】
【0224】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、任意によりスペーサーにより連結される、表１の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のユニバーサルＣＤ４ポリエピトープを含むアミノ酸配列をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0225】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、少なくとも２つの同一のまたは異なるユニバーサルＣＤ４ポリエピトープをコードするＲＮＡ配列を含む。
【0226】
一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、例えば、ＴＴならびに熱帯熱マラリア原虫、インフルエンザウイルスおよびＢ型肝炎ウイルス由来のタンパク質を含むがこれらに限定されない、病原体由来の抗原に由来する１０または１９個のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを（それぞれ）含むかまたはそれらからなるＮ１０、Ｎ１９などの、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むかまたはそれらからなる組換えペプチドまたはタンパク質をコードするＲＮＡ配列を含む（表１に列挙される）。
【0227】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、本明細書に記載される１０個のユニバーサルＣＤ４エピトープ（本明細書ではＮ１０と呼ばれる）をコードするＲＮＡ配列を含み、任意によりユニバーサルＣＤ４ポリエピトープは、スペーサーにより連結される。スペーサーの例は、本明細書に列挙される。
【0228】
Ｎ１０構築物の非限定的な例は、配列番号８０のペプチドである。
【0229】
配列番号:80
VSIDKFRIFCKANPKKGLKFIIKRYTPNNEIDSKGIREDNNITLKLDRCNNKGEKKIAKMEKASSVFNVVNKGFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEKGQYIKANSKFIGITEKGPHHTALRQAILCWGELMTLAKGPKYVKQNTLKLATKGFFLLTRILTIPQSLDKGYSGPLKAEIAQRLEDV
VSIDKFRIFCKANPKKGLKFIIKRYTPNNEIDSKGIREDNNITLKLDRCNNKGEKKIAKMEKASSVFNVVNKGFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEKGQYIKANSKFIGITEKGPHHTALRQAILCWGELMTLAKGPKYVKQNTLKLATKGFFLLTRILTIPQSLDKGYSGPLKAEIAQRLEDV
【0230】
一実施形態では、ＲＮＡ分子は、配列番号８０のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、上記バリアントは、配列番号８０と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を呈する。
【0231】
一実施形態では、ＲＮＡ分子は、全長Ｎ１０構築物をコードするＲＮＡ配列を含む。別の実施形態では、ＲＮＡ分子は、Ｎ１０の断片、例えば、配列番号８０からの少なくとも約１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０または１７５個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含む断片など、をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0232】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープをコードするＲＮＡ配列は、Ｎ１０をコードする配列を含むか、またはそれからなる。Ｎ１０をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号８１、または配列番号８１と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列、を含むかまたはそれらからなる配列である。
【0233】
配列番号:81
GUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGCUACAGCGGCCCCCUGAAGGCCGAGAUCGCCCAGAGGCUGGAGGACGUG
GUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGCUACAGCGGCCCCCUGAAGGCCGAGAUCGCCCAGAGGCUGGAGGACGUG
【0234】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、本明細書に記載される１９個のユニバーサルＣＤ４エピトープ（本明細書ではＮ１９と呼ばれる）をコードするＲＮＡ配列を含み、任意によりユニバーサルＣＤ４ポリエピトープは、スペーサーにより連結される。スペーサーの例は、本明細書に列挙される。
【0235】
Ｎ１９構築物の非限定的な例は、配列番号８２のペプチドである。
【0236】
配列番号:82
VSIDKFRIFCKANPKKGLKFIIKRYTPNNEIDSKGIREDNNITLKLDRCNNKGEKKIAKMEKASSVFNVVNKGFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEKGQYIKANSKFIGITEKGPHHTALRQAILCWGELMTLAKGPKYVKQNTLKLATKGFFLLTRILTIPQSLDKGYSGPLKAEIAQRLEDVKGVSIDKFRIFCKANPKKGLKFIIKRYTPNNEIDSKGIREDNNITLKLDRCNNKGEKKIAKMEKASSVFNVVNKGFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEKGQYIKANSKFIGITEKGPHHTALRQAILCWGELMTLAKGPKYVKQNTLKLATKGFFLLTRILTIPQSLDKG
VSIDKFRIFCKANPKKGLKFIIKRYTPNNEIDSKGIREDNNITLKLDRCNNKGEKKIAKMEKASSVFNVVNKGFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEKGQYIKANSKFIGITEKGPHHTALRQAILCWGELMTLAKGPKYVKQNTLKLATKGFFLLTRILTIPQSLDKGYSGPLKAEIAQRLEDVKGVSIDKFRIFCKANPKKGLKFIIKRYTPNNEIDSKGIREDNNITLKLDRCNNKGEKKIAKMEKASSVFNVVNKGFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEKGQYIKANSKFIGITEKGPHHTALRQAILCWGELMTLAKGPKYVKQNTLKLATKGFFLLTRILTIPQSLDKG
【0237】
一実施形態では、ＲＮＡ分子は、配列番号８２のバリアントをコードするＲＮＡ配列を含み、ここで、バリアントは、配列番号８２と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を呈する。
【0238】
一実施形態では、ＲＮＡ分子は、全長Ｎ１９構築物をコードするＲＮＡ配列を含む。別の実施形態では、ＲＮＡ分子は、Ｎ１９の断片、例えば、配列番号８２からの少なくとも約１０、１５、２０、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００または３３０個のアミノ酸（好ましくは連続アミノ酸）を含む断片など、をコードするＲＮＡ配列を含む。
【0239】
一実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞エピトープをコードするＲＮＡ配列は、Ｎ１９をコードする配列を含むか、またはそれからなる。Ｎ１９をコードするＲＮＡ配列の例は、配列番号８３、または配列番号８３と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のもしくはそれより大きな同一性を有する配列、を含むかまたはそれらからなる配列である。
【0240】
配列番号:83
GUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGCUACAGCGGCCCCCUGAAGGCCGAGAUCGCCCAGAGGCUGGAGGACGUGAAGGGCGUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGC
GUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGCUACAGCGGCCCCCUGAAGGCCGAGAUCGCCCAGAGGCUGGAGGACGUGAAGGGCGUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGC
【0241】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、スペーサーをコードする少なくとも１つのＲＮＡ配列を含む。一実施形態では、サイトカインは、スペーサーにより少なくとも１つのＴ細胞エピトープに連結される。一実施形態では、サイトカインは、１つ以上のスペーサー（例えば、１、２、３、４または５個の）により少なくとも１つのＴ細胞エピトープに連結される。スペーサーはまた、Ｔ細胞エピトープまたはサイトカイン断片を連結するために存在し得る。
【0242】
一実施形態では、スペーサーは、切断可能である。一実施形態では、スペーサーは、例えば、カテプシンなどのプロテアーゼにより切断可能である。
【0243】
一実施形態では、スペーサーは、切断可能でない。
【0244】
スペーサーの例としては、これらに限定されないが、ＰＭＧＬＰ（配列番号８６）、カテプシン切断部位、アミノ酸ダブレット、ＧＰ、ＬＧ、ＧＳ、ＧＰＧＰＧ（配列番号４５）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号９８）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、１～４の範囲である（配列番号１３９）ｎ））、ＡＳＧ、ＫＧ、ＲＲが挙げられる。
【0245】
一実施形態では、スペーサーは、ＰＭＧＬＰのアミノ酸配列（配列番号８６）を含むか、またはそれからなり、これらは、配列番号８７の核酸配列（ＣＣＣＡＵＧＧＧＣＣＵＧＣＣＣ）、または配列番号８７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされ得る。
【0246】
一実施形態では、例えば２～１０アミノ酸の範囲の長さを有する短いオリゴまたはポリペプチドスペーサーは、スペーサーを形成し得る。一実施形態では、リンカーは、２、３、４、または５個のアミノ酸からなる。
【0247】
短いスペーサーの例は、これらに限定されないが、ＧＰ、ＬＧ、ＡＳＧ、ＫＧ、およびＲＲを含む。
【0248】
一実施形態では、短いスペーサーＧＰ、ＬＧ、ＡＳＧ、ＲＲおよびＫＧはそれぞれ、表３に列挙されるＲＮＡ配列によりコードされ得る。
【0249】
表３：スペーサーアミノ酸配列
【表3】
【0250】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１０３の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１０３の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号１の配列を有するヒトＩＬ－４、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号４８の配列を有するＣＲＭ１９７、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0251】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号２のＲＮＡ配列）、およびＣＲＭ１９７（好ましくは配列番号４９のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１０４のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１０４の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号２の配列を有するヒトＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号４９の配列を有するＣＲＭ１９７、をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0252】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0253】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0254】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0255】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１０３の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１０３の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号１の配列を有するヒトＩＬ－４、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号５４の配列を有するＴｐＤを含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0256】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号２のＲＮＡ配列）、およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５５のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１０４のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１０４の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号２の配列を有するヒトＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号５５の配列を有するＴｐＤをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0257】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0258】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0259】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１０３の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端まで、好ましくは配列番号１０３の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号１の配列を有するヒトＩＬ－４、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号８２の配列を有するＮ１９構築物を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0260】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号２のＲＮＡ配列）、およびＮ１９構築物（好ましく配列番号８３の配列を有する）および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１０４のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１０４の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号２の配列を有するヒトＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号８３の配列を有するＮ１９構築物をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0261】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４（好ましくは配列番号１の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0262】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0263】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0264】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0265】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0266】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0267】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0268】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0269】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0270】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３、４、５、または６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0271】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１４０の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１４０の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号１１の配列を有するマウスＩＬ－４、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号４８の配列を有するＣＲＭ１９７、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0272】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１２のＲＮＡ配列）、およびＣＲＭ１９７（好ましくは配列番号４９のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１４１のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１４１の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号１２の配列を有するマウスＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号４９の配列を有するＣＲＭ１９７をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0273】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号１４６の配列を含むか、またはその配列からなる。
【0274】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号１４６のバリアントであり、ここで、バリアントは、それが由来する配列番号１４６と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0275】
配列番号:146
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCGGCCCCGGCGCCGACGACGUGGUGGACAGCAGCAAGAGCUUCGUGAUGGAGAACUUCAGCAGCUACCACGGCACCAAGCCCGGCUACGUGGACAGCAUCCAGAAGGGCAUCCAGAAGCCCAAGAGCGGCACCCAGGGCAACUACGACGACGACUGGAAGGAGUUCUACAGCACCGACAACAAGUACGACGCCGCCGGCUACAGCGUGGACAACGAGAACCCCCUGAGCGGCAAGGCCGGCGGCGUGGUGAAGGUGACCUACCCCGGCCUGACCAAGGUGCUGGCCCUGAAGGUGGACAACGCCGAGACCAUCAAGAAGGAGCUGGGCCUGAGCCUGACCGAGCCCCUGAUGGAGCAGGUGGGCACCGAGGAGUUCAUCAAGAGGUUCGGCGACGGCGCCAGCAGGGUGGUGCUGAGCCUGCCCUUCGCCGAGGGCAGCAGCAGCGUGGAGUACAUCAACAACUGGGAGCAGGCCAAGGCCCUGAGCGUGGAGCUGGAGAUCAACUUCGAGACCAGGGGCAAGAGGGGCCAGGACGCCAUGUACGAGUACAUGGCCCAGGCCUGCGCCGGCAACAGGGUGAGGAGGAGCGUGGGCAGCAGCCUGAGCUGCAUCAACCUGGACUGGGACGUGAUCAGGGACAAGACCAAGACCAAGAUCGAGAGCCUGAAGGAGCACGGCCCCAUCAAGAACAAGAUGAGCGAGAGCCCCAACAAGACCGUGAGCGAGGAGAAGGCCAAGCAGUACCUGGAGGAGUUCCACCAGACCGCCCUGGAGCACCCCGAGCUGAGCGAGCUGAAGACCGUGACCGGCACCAACCCCGUGUUCGCCGGCGCCAACUACGCCGCCUGGGCCGUGAACGUGGCCCAGGUGAUCGACAGCGAGACCGCCGACAACCUGGAGAAGACCACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUCAGCGUGAACGGCAGGAAGAUCAGGAUGAGGUGCAGGGCCAUCGACGGCGACGUGACCUUCUGCAGGCCCAAGAGCCCCGUGUACGUGGGCAACGGCGUGCACGCCAACCUGCACGUGGCCUUCCACAGGAGCAGCAGCGAAAAGAUCCACAGCAACGAGAUCAGCAGCGACAGCAUCGGCGUGCUGGGCUACCAGAAGACCGUGGACCACACCAAGGUGAACAGCAAGCUGAGCCUGUUCUUCGAGAUCAAGAGCUAG
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCGGCCCCGGCGCCGACGACGUGGUGGACAGCAGCAAGAGCUUCGUGAUGGAGAACUUCAGCAGCUACCACGGCACCAAGCCCGGCUACGUGGACAGCAUCCAGAAGGGCAUCCAGAAGCCCAAGAGCGGCACCCAGGGCAACUACGACGACGACUGGAAGGAGUUCUACAGCACCGACAACAAGUACGACGCCGCCGGCUACAGCGUGGACAACGAGAACCCCCUGAGCGGCAAGGCCGGCGGCGUGGUGAAGGUGACCUACCCCGGCCUGACCAAGGUGCUGGCCCUGAAGGUGGACAACGCCGAGACCAUCAAGAAGGAGCUGGGCCUGAGCCUGACCGAGCCCCUGAUGGAGCAGGUGGGCACCGAGGAGUUCAUCAAGAGGUUCGGCGACGGCGCCAGCAGGGUGGUGCUGAGCCUGCCCUUCGCCGAGGGCAGCAGCAGCGUGGAGUACAUCAACAACUGGGAGCAGGCCAAGGCCCUGAGCGUGGAGCUGGAGAUCAACUUCGAGACCAGGGGCAAGAGGGGCCAGGACGCCAUGUACGAGUACAUGGCCCAGGCCUGCGCCGGCAACAGGGUGAGGAGGAGCGUGGGCAGCAGCCUGAGCUGCAUCAACCUGGACUGGGACGUGAUCAGGGACAAGACCAAGACCAAGAUCGAGAGCCUGAAGGAGCACGGCCCCAUCAAGAACAAGAUGAGCGAGAGCCCCAACAAGACCGUGAGCGAGGAGAAGGCCAAGCAGUACCUGGAGGAGUUCCACCAGACCGCCCUGGAGCACCCCGAGCUGAGCGAGCUGAAGACCGUGACCGGCACCAACCCCGUGUUCGCCGGCGCCAACUACGCCGCCUGGGCCGUGAACGUGGCCCAGGUGAUCGACAGCGAGACCGCCGACAACCUGGAGAAGACCACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUCAGCGUGAACGGCAGGAAGAUCAGGAUGAGGUGCAGGGCCAUCGACGGCGACGUGACCUUCUGCAGGCCCAAGAGCCCCGUGUACGUGGGCAACGGCGUGCACGCCAACCUGCACGUGGCCUUCCACAGGAGCAGCAGCGAAAAGAUCCACAGCAACGAGAUCAGCAGCGACAGCAUCGGCGUGCUGGGCUACCAGAAGACCGUGGACCACACCAAGGUGAACAGCAAGCUGAGCCUGUUCUUCGAGAUCAAGAGCUAG
【0276】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0277】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0278】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0279】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１４０の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１４０の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号１１の配列を有するマウスＩＬ－４、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号５４の配列を有するＴｐＤ、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0280】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１２のＲＮＡ配列）、およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５５のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１４１のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１４１の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号１２の配列を有するマウスＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号５５の配列を有するＴｐＤをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0281】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号１４４の配列を含むか、またはその配列からなる。
【0282】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号１４４のバリアントであり、ここで、バリアントは、それが由来する配列番号１４４と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0283】
配列番号:144
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCGGCCCCAUCCUGAUGCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCCCCAUGGGCCUGCCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGUAG
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCGGCCCCAUCCUGAUGCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCCCCAUGGGCCUGCCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGUAG
【0284】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0285】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0286】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１４０の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１４０の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号１１の配列を有するマウスＩＬ－４、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号８２の配列を有するＮ１９構築物、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0287】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１２のＲＮＡ配列）、およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８３の配列を有する）および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１４１のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１４１の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号１２の配列を有するマウスＩＬ－４をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号８３の配列を有するＮ１９構築物をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0288】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号１４５の配列を含むか、またはその配列からなる。
【0289】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、配列番号１４５のバリアントであり、ここで、バリアントは、それが由来する配列番号１４５と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の、またはそれより大きな同一性を示す。
【0290】
配列番号:145
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCGGCCCCGUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGCUACAGCGGCCCCCUGAAGGCCGAGAUCGCCCAGAGGCUGGAGGACGUGAAGGGCGUGAGCAUCGACAAGUUCAGGAUCUUCUGCAAGGCCAACCCCAAGAAGGGCCUGAAGUUCAUCAUCAAGAGGUACACCCCCAACAACGAGAUCGACAGCAAGGGCAUCAGGGAGGACAACAACAUCACCCUGAAGCUGGACAGGUGCAACAACAAGGGCGAAAAGAAGAUCGCCAAGAUGGAGAAGGCCAGCAGCGUGUUCAACGUGGUGAACAAGGGCUUCAACAACUUCACCGUGAGCUUCUGGCUGAGGGUGCCCAAGGUGAGCGCCAGCCACCUGGAGAAGGGCCAGUACAUCAAGGCCAACAGCAAGUUCAUCGGCAUCACCGAAAAGGGCCCCCACCACACCGCCCUGAGGCAGGCCAUCCUGUGCUGGGGCGAGCUGAUGACCCUGGCCAAGGGCCCCAAGUACGUGAAGCAGAACACCCUGAAGCUGGCCACCAAGGGCUUCUUCCUGCUGACCAGGAUCCUGACCAUCCCCCAGAGCCUGGACAAGGGCUAG
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【0291】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４（好ましくは配列番号１１の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0292】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0293】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0294】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0295】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0296】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0297】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0298】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0299】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0300】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１３、１４、１５、または１６から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0301】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0302】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0303】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0304】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0305】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0306】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0307】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0308】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0309】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４（好ましくは配列番号２１の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0310】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0311】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0312】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0313】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0314】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0315】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0316】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0317】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0318】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号９４、９５、９６、または９７から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0319】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0320】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0321】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0322】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0323】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0324】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0325】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0326】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0327】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４（好ましくは配列番号９９の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0328】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0329】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0330】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0331】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0332】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0333】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0334】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0335】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0336】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－４の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１０９、１１０、１１１、１１２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0337】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１１７の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１１７の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号２３の配列を有するヒトＩＬ－１３、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号４８の配列を有するＣＲＭ１９７、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0338】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２４のＲＮＡ配列）、およびＣＲＭ１９７（好ましくは配列番号４９のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１１８のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１１８の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号２４の配列を有するヒトＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号４９の配列を有するＣＲＭ１９７をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0339】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0340】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0341】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0342】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１１７の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１１７の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号２３の配列を有するヒトＩＬ－１３、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号５４の配列を有するＴｐＤ、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0343】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２４のＲＮＡ配列）、およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５５のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１１８のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１１８の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号２４の配列を有するヒトＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号５５の配列を有するＴｐＤをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0344】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0345】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0346】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１１７の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号１１７の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号２３の配列を有するヒトＩＬ－１３、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号８２の配列を有するＮ１９構築物、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0347】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２４のＲＮＡ配列）、およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８３の配列を有する）および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１１８のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１１８の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号２４の配列を有するヒトＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号８３の配列を有するＮ１９構築物をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0348】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３（好ましくは配列番号２３の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0349】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0350】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0351】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0352】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0353】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0354】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0355】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0356】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0357】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号２５、２６、２７または２８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0358】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１４２の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１４２の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号３３の配列を有するマウスＩＬ－１３、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号４８の配列を有するＣＲＭ１９７、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0359】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３４のＲＮＡ配列）、およびＣＲＭ１９７（好ましくは配列番号４９のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１４３のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１４３の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号３４の配列を有するマウスＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号４９の配列を有するＣＲＭ１９７をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0360】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0361】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0362】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0363】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むか、またはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１４２の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１４２の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号３３の配列を有するマウスＩＬ－１３、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号５４の配列を有するＴｐＤ、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0364】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３４のＲＮＡ配列）、およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５５のＲＮＡ配列）、および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１４３のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１４３の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号３４の配列を有するマウスＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号５５の配列を有するＴｐＤをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0365】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0366】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0367】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチド（好ましくは配列番号１４２の配列を有する）をさらにコードする。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、Ｎ末端からＣ末端へと、好ましくは配列番号１４２の配列を有するシグナルペプチド、好ましくは配列番号３３の配列を有するマウスＩＬ－１３、ＧＰスペーサー、および好ましくは配列番号８２の配列を有するＮ１９構築物、を含むかまたはそれらかなる１つのタンパク質構築物（好ましくは単一の一本鎖タンパク質構築物）をコードする。
【0368】
一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３４のＲＮＡ配列）、およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８３の配列を有する）および任意によりスペーサーをコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ＧＰスペーサーをコードする配列（好ましくはＲＮＡ配列ＧＧＣＣＣＣ）をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、シグナルペプチドをコードする配列（好ましくは配列番号１４３のＲＮＡ配列）をさらに含む。一実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、５’から３’へと：好ましくは配列番号１４３の配列を有するシグナルペプチドをコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列番号３４の配列を有するマウスＩＬ－１３をコードするＲＮＡ配列、好ましくは配列ＧＧＣＣＣＣを有するＧＰスペーサーをコードするＲＮＡ配列、および好ましくは配列番号８３の配列を有するＮ１９構築物をコードするＲＮＡ配列を含むかまたはそれらからなる。
【0369】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３（好ましくは配列番号３３の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0370】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0371】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0372】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0373】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0374】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0375】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0376】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0377】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0378】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、マウスＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号３５、３６、３７または３８から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0379】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0380】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0381】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0382】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0383】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0384】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0385】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0386】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0387】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３（好ましくは配列番号４３の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0388】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0389】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0390】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0391】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0392】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0393】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0394】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0395】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0396】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、イヌＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１１９、１２０、１２１または１２２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0397】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0398】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0399】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0400】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0401】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0402】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0403】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0404】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0405】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３（好ましくは配列番号１０１の配列を有する）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0406】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（配列番号４８）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0407】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（２９９－３１２）（配列番号５０）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0408】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（４２５－４４０）（配列番号５２）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0409】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＣＲＭ１９７（３００－４５０）（配列番号４６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0410】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＴｐＤ（好ましくは配列番号５４の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0411】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびｐ２－ＲＲ－ｐ３０（ＴＴ）（配列番号５６）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0412】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１０構築物（好ましくは配列番号８０の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0413】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）およびＮ１９構築物（好ましくは配列番号８２の配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0414】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ウマＩＬ－１３の少なくとも１つのエピトープを含むペプチド（好ましくは配列番号１２９、１３０、１３１または１３２から選択される配列を有するかまたは含むペプチド）および少なくとも１つのＣＤ４ポリエピトープ（好ましくは配列番号５８～６７からなる群から選択される配列を有する）、および任意によりスペーサーを含むかまたはそれらからなるアミノ酸配列をコードする。
【0415】
一実施形態では、安定性および／または翻訳効率を促進する能力を有する化学構造を含む本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子もまた、使用されてよい。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、好ましくは５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲを含む。一実施形態では、５’ＵＴＲは、０～３０００ヌクレオチド長である。５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲは、発現される遺伝子（例えば、ＩＬ－４またはＩＬ－１３）の天然に存在する内因性の５’および３’ＵＴＲであってよい。あるいは、目的の遺伝子に対し内因性でないＵＴＲ配列が、フォワードプライマーおよびリバースプライマー中にＵＴＲ配列を組み込むことにより、または鋳型の他の任意の修飾により付加され得る。発現される遺伝子にとって内因性でないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を修飾するために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列中のＡＵリッチエレメントはｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが、知られている。
【0416】
一実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含み得る。一実施形態では、５’ＵＴＲは、そのＲＮＡゲノムが細胞中で安定である、ＲＮＡウイルスに由来し得る。
【0417】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、細胞中のリボソーム結合、翻訳の開始、およびｍＲＮＡの安定性を決定する５’末端のキャップおよび３’ポリ（Ａ）テールの両方を有する。
【0418】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、ポリ（Ａ）テールを含む。ポリ（Ａ）テールは、ＲＮＡに安定性をもたらし、それらの分解を減少させる。一般に、ポリ（Ａ）テールの長さは、ＲＮＡの安定性と正に相関する。一実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、１００～５０００個のアデノシンである。
【0419】
さらに、３’末端への異なる化学基の付着は、ｍＲＮＡの安定性を上昇させ得る。そのような付着物は、修飾された／人工のヌクレオチド、アプタマーおよび他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰ類似体を、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テール中に組み込むことができる。ＡＴＰ類似体は、ＲＮＡの安定性をさらに上昇させ得る。
【0420】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、５’キャップを含む。ＲＮＡでの５’キャップは、ＲＮＡ分子に安定性をもたらし得る。
【0421】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列、特にｍＲＮＡへのキャップ非依存性のリボソーム結合を開始し翻訳の開始を促進する、ウイルスの配列、染色体の配列、または人工的に設計された配列を含む。
【0422】
ＧＣ含有量は、ｍＲＮＡの安定性の調節に、または二次構造の減少にも関与する。ＧＣ含量の富化は、ｍＲＮＡの安定性およびｉｎ ｖｉｖｏでのタンパク質翻訳を最適化し増加させ得る。一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子は、最適化されたＧＣ含量を含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、高いＧＣ含量を含む。
【0423】
一実施形態では、ＲＮＡ配列は、少なくとも１つの、好ましくはすべてのウリジン残基を１－メチルプソイドウリジン残基により置換するように修飾される。
【0424】
一実施形態では、ＲＮＡは、裸のＲＮＡではなく、標的細胞中への送達のために製剤化される。
【0425】
組成物は、リポフェクション、ソノポレーション、マイクロインジェクション、バイオリスティック、ビロソーム、リポソーム、脂質ナノ粒子、免疫リポソーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート体、ウイルス様粒子および人工ビリオンなどの周知の方法により標的細胞中に送達され得る。
【0426】
非ウイルス送達システムが利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。脂質製剤の使用が、宿主細胞への核酸の導入のために企図される（ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏ）。別の態様では、核酸は、脂質と会合され得る。脂質と会合される核酸は、リポソームの水性の内部にカプセル化されるか、リポソームの脂質二重層内に散在されるか、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と会合される連結分子を介してリポソームに付着されるか、リポソームに封入されるか、リポソームと複合体を形成するか、脂質を含む溶液に分散されるか、脂質と混合されるか、脂質と組み合わされるか、脂質中に懸濁液として含まれるか、ミセルに含まれるか、もしくはミセルと複合体を形成するか、または他の方法で脂質と会合されてよい。脂質／ＲＮＡ会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、ミセルとして、または「崩壊した」構造を有する、二層構造で存在し得る。それらはまた単に、溶液中に散在し、サイズまたは形状が均一でない凝集体をおそらく形成する。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る、脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質中に天然に存在する脂肪滴ならびに、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体を含む、化合物のクラスを含む。一実施形態では、送達ビヒクルは、ＬＮＰと呼ばれ得る、脂質ナノ粒子である。
【0427】
使用に好適な脂質は、商業的供給源から入手可能である。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから入手でき、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から入手でき、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから入手でき；ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）から入手できる。
【0428】
「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成により形成される様々な単層のおよび多層の脂質ビヒクルを包含する総称である。リポソームは、リン脂質二重膜および内部水性媒体を備えた小胞構造を有するとして特徴付けられ得る。多重膜リポソームは、水性媒体により分離される複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液中に懸濁されると自発的に形成する。脂質成分は、閉鎖構造を形成する前に自己再配列され、脂質二重層間に水および溶解した溶質を封入する。しかし、溶液中で通常の小胞構造とは異なる構造を有する組成物もまた、包含される。例えば、脂質は、ミセル構造をとるか、または脂質分子の不均一な凝集体として単に存在し得る。リポフェクタミン－核酸複合体およびリピドット（ｌｉｐｉｄｏｔ）もまた、企図される。
【0429】
一実施形態では、組成物は、医薬組成物であり、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。したがって、本発明はさらに、少なくとも１つのＲＮＡ分子と少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、それらから本質的になる、またはそれらからなる医薬組成物に関し、ここで、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーのアミノ酸配列をコードする。
【0430】
本発明の医薬組成物に使用され得る薬学的に許容される賦形剤としては、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。
【0431】
一実施形態では、本発明の組成物は、医薬品であるか、または医薬品としての使用のためのものである。したがって、本発明はさらに、少なくとも１つのＲＮＡ分子を含む、それから本質的になる、または少なくとも１つのＲＮＡ分子からなる医薬品に関し、ここで、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、上記の少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーをコードする。
【0432】
本発明はさらに、医薬品としての使用のための少なくとも１つのＲＮＡ分子に関し、少なくとも１つのＲＮＡ分子は、少なくとも１つのサイトカインまたはサイトカイン断片、少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、および任意により少なくとも１つのスペーサーをコードする。
【0433】
本明細書で使用される場合、医薬組成物または医薬品に関し、用語「本質的にからなる」は、本発明の組成物または少なくとも１つのＲＮＡ分子が、医薬組成物または医薬品内で生物学的活性を有する唯一の治療剤または剤であることを意味する。
【0434】
一実施形態では、本発明の医薬組成物または医薬品は、ＩＬ－４またはその断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ分子、および任意により少なくとも１つのスペーサーにより連結される少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むか、または本質的にそれらからなる。
【0435】
一実施形態では、本発明の医薬組成物または医薬品は、ＩＬ－１３またはその断片をコードする少なくとも１つのＲＮＡ分子、および任意により少なくとも１つのスペーサーにより連結される少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むか、または本質的にそれらからなる。
【0436】
一実施形態では、本発明の医薬組成物または医薬品は、ＩＬ－４およびＩＬ－１３の両方（またはそれらの断片）をコードする少なくとも１つのＲＮＡ分子、および任意によりスペーサーにより連結される少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むか、または本質的にそれらからなる。一実施形態では、本発明の医薬組成物または医薬品は、（ｉ）ＩＬ－４（またはその断片）をコードする少なくとも１つのＲＮＡ分子およびスペーサーにより任意により連結される少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１３（またはその断片）をコードする少なくとも１つのＲＮＡ分子、およびスペーサーにより任意により連結される少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、を含むか、または本質的にそれらからなる。
【0437】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子を含む組成物は、ワクチン組成物である。本発明の一実施形態では、本発明のワクチン組成物は、少なくとも１種のアジュバントを含む。本発明の一実施形態では、本発明のワクチン組成物は、いずれのアジュバントも含まない。
【0438】
本発明はさらに、本発明の組成物の製剤、医薬組成物、医薬品またはワクチンに関し、組成物、医薬組成物、医薬品またはワクチンは、アジュバント添加される。一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、医薬品またはワクチンはしたがって、１種以上のアジュバントを含む。
【0439】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、またはワクチン組成物は、注射により、局所的に（例えば、経皮送達により）、直腸的に、経鼻的に、または経膣的に投与され得る（または投与のためのもの）。
【0440】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物は、注射に適した形態である。したがって、一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物は、筋肉内、腹腔内、または皮下注射により対象に注射される（または注射用である）。
【0441】
注射用途に好適な形態の例として、これらに限定されないが、注入可能な滅菌溶液または滅菌分散液を即時調製するための滅菌水溶液または滅菌分散液および滅菌粉末が挙げられる。微生物の混入に対する防止は、組成物中に防腐剤、例えば、様々な抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）、を添加することによりもたらされ得る。一実施形態では、注射中の痛みを軽減するために、等張化剤、例えば、糖または塩化ナトリウム、を含めることが好ましい場合がある。一実施形態では、注射用組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン、の組成物中での使用によりもたらされ得る。
【0442】
一実施形態では、本発明の凍結乾燥ワクチン組成物を、注射用水に溶解し、穏やかに混合する。次に、上記の免疫アジュバントを、加える。混合物を、穏やかに混合し、好適なシリンジに充填する。本発明はしたがってまた、本発明のワクチン組成物を充填されたかまたはプレフィルドされたシリンジを含む、医療デバイスにも関する。
【0443】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物は、局所投与に適合された形態である。局所投与に適合された形態の例としては、これらに限定されないが、ポリマーパッチ、または制御放出パッチなどが挙げられる。
【0444】
別の実施形態では、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物は、直腸投与に適合された形態である。直腸投与に適合された形態の例としては、これらに限定されないが、坐剤、マイクロ浣腸剤、浣腸剤、ゲル、腸フォーム剤、クリーム、軟膏などが挙げられる。
【0445】
本発明はさらに、対象における炎症性障害を治療するための、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、または本発明の組成物、医薬組成物、医薬品、もしくはワクチン組成物に関する。
【0446】
したがって、本発明はさらに、対象における炎症性障害を治療するための方法に関し、本方法は、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物を対象に投与することを含む。
【0447】
本発明はさらに、対象においてＩＬ－４、ＩＬ－１３、またはその両方に対する免疫応答を誘導するための方法に関し、本方法は、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物を対象に投与することを含む。
【0448】
本発明はさらに、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、またはその両方の生物学的活性を阻害するかまたは生物学的活性を中和する抗体の産生を対象において誘導するための方法に関し、本方法は、本発明の少なくとも１つのＲＮＡ分子、組成物、医薬組成物、医薬品、またはワクチン組成物を対象に投与することを含む。一実施形態では、抗体は、ポリクローナル抗体である。
【0449】
一実施形態では、対象は、炎症性障害、特に異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の発現または活性に関連する障害に罹患している、好ましくは診断される。
【0450】
一実施形態では、対象は、ヒトである。好ましくは、この実施形態によれば、本発明の組成物に含まれる少なくとも１つのサイトカインは、ヒトのものである。
【0451】
一実施形態では、それを必要とする対象は、これらに限定されないが、家畜、または農業的価値のある動物（例えば、畜牛、雌牛、バイソン、ブタ（ｐｉｇ）、ブタ（ｓｗｉｎｅ）、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ロバ、アルパカ、ラマ、シカ、ヘラジカ（ｅｌｋ）、ヘラジカ（ｍｏｏｓｅ）、ダチョウ、エミュー、アヒル、ガチョウ、鶏、ヤマウズラ、ウズラ、キジ、ミンク、サケ、タラ、ナマズ、ニシン、マス、バス、パーチ、ヒラメ、サメ、マグロ、カニ、ロブスター、ザリガニ、カタツムリ、貝、カキなど）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、げっ歯類、魚、ヘビなど）、および非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、ゴリラ、およびオランウータンを含む大型類人猿、；テナガザルを含む、小型類人猿；旧世界ザル；新世界ザル；およびメガネザル、キツネザル、およびロリスを含む、原猿類、など）を含む、非ヒト動物である。
【0452】
一実施形態では、炎症性障害は、異常なＩＬ－４および／またはＩＬ－１３の発現または活性に関連する障害である。
【0453】
炎症性障害の例としては、これらに限定されないが、喘息（アレルギー性または非アレルギー性のいずれか）、アレルギー症状（例えば、食物アレルギー、毒液アレルギー、ネコアレルギー、薬物アレルギー、高ＩｇＥ症候群、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎およびアレルギー性腸胃炎など）、アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹（慢性特発性蕁麻疹および慢性自然発生性蕁麻疹を含む）、湿疹など）、水疱性類天疱瘡、呼吸器障害（アレルギー性および非アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）など）、鼻ポリープ症および気道炎症を伴う他の状態（例えば、好酸球増加症、線維症、および過剰な粘液産生、例えば、嚢胞性線維症および肺線維症、全身性硬化症（ＳＳｃ）など）；炎症性および／または自己免疫性の障害または状態、胃腸の障害または状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および好酸球性食道炎（ＥＥ）、ならびに好酸球媒介胃腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病および全身性エリテマトーデスなど）；全身性エリテマトーデス、肝臓の障害または状態（例えば、肝硬変、および肝細胞癌など）、強皮症；線維性疾患または障害（例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスにより引き起こされる線維症など）、強皮症；固形腫瘍または白血病などの癌（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病など）、神経膠芽腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫など）および肥満細胞症が挙げられる。
【0454】
一実施形態では、炎症性障害は、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、食物アレルギー、鼻ポリープ症、および好酸球性食道炎を含む群から選択される。
【0455】
一実施形態では、炎症性障害は、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、および食物アレルギーを含む群から選択される。
【0456】
一実施形態では、炎症性障害は、アレルギー、喘息、またはアトピー性皮膚炎である。
【0457】
一実施形態では、炎症性障害は、アレルギー性喘息である。
【0458】
一実施形態では、炎症性障害は、固形腫瘍である。一実施形態において、本発明の方法は、固形腫瘍からの転移を予防するためのものである。
【0459】
一実施形態では、治療は、ある期間にわたる単回投与または複数回投与からなる。
【0460】
本発明の一実施形態では、治療される対象は、上記の組成物の治療的有効量を少なくとも１回投与される。
【0461】
本発明の別の実施形態では、治療される対象は、ＩＬ－４に対する抗体の量が対象から得られた血清サンプル中で検出できない場合、本明細書中上記の組成物の治療的有効量をさらに投与されてよい。
【0462】
本発明の別の実施形態では、治療される対象は、ＩＬ－１３に対する抗体の量が対象から得られた血清サンプル中で検出できない場合、本明細書中上記の組成物の治療的有効量をさらに投与されてよい。
【0463】
本発明の別の実施形態では、治療される対象は、ＩＬ－４およびＩＬ－１３に対する抗体の量が対象から得られた血清サンプル中で検出できない場合、本明細書中上記の組成物の治療的有効量をさらに投与されてよい。
【図面の簡単な説明】
【0464】
【図1】本発明によるＩＬ－４ ＲＮＡ構築物のマップである。ＥＰ：エピトープ；ＥＰＸ：複数のエピトープの存在（Ｘ個のエピトープが存在する）；ＦＬ：全長。
【図2】本発明によるＩＬ－４ ＲＮＡ構築物のマップである。ＥＰ：エピトープ；ＥＰＸ：複数のエピトープの存在（Ｘ個のエピトープが存在する）；ＦＬ：全長。
【図3】本発明のＩＬ－１３ ＲＮＡ構築物のマップである。ＥＰ：エピトープ；ＥＰＸ：複数のエピトープの存在（Ｘ個のエピトープが存在する）；ＦＬ：全長。
【図4】本発明のＩＬ－１３ ＲＮＡ構築物のマップである。ＥＰ：エピトープ；ＥＰＸ：複数のエピトープの存在（Ｘ個のエピトープが存在する）；ＦＬ：全長。
【図5】トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞におけるｍｕＩＬ４およびＣＲＭのｉｎ ｖｉｔｒｏタンパク質発現を示すグラフの組み合わせである。タンパク質の発現を、ＬＮＰ／ｍＲＮＡトランスフェクションの２４時間後にフローサイトメトリーにより測定した。ＬＮＰ／ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４（白い四角）、ＬＮＰ／ｍＲＮＡ－ＣＲＭ（斜線付き四角）、ＬＮＰ／ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤ（薄灰色の四角）、ＬＮＰ／ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９（濃灰色）およびＬＮＰ／ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ（黒い四角）を、試験した。
【図5A】ｍｕＩＬ４を発現する細胞の割合を示すグラフである。
【図5B】ＣＲＭを発現する細胞の割合を示すグラフである。
【図5C】発現される細胞におけるｍｕＩＬ４の蛍光強度（ＭＦＩ）の中央値を示すグラフである。（ｎ＝２）平均範囲。
【図6】本発明の少なくとも１つのＲＮＡ構築物でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清におけるｍｕＩＬ４のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を示す。タンパク質活性を、ＬＮＰ／ｍＲＮＡトランスフェクションの２４時間後に、ＨＥＫ２９３細胞上清における増殖バイオアッセイで測定した。ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４（白色）、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤ（薄灰色）、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ（黒色）、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９（濃灰色）、およびｍＲＮＡ－ＣＲＭ（斜線の円）トランスフェクションの上清を、試験した。サンプル希釈度に対応させて４９０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）を示す。（ｎ＝２）平均範囲。
【図7】Ｉｎ ｖｉｖｏ試験のスキームを示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｄ０、Ｄ７、およびＤ２８に、１０μｇＬＮＰ／ｍＲＮＡの３回の筋肉内（ＩＭ）免疫を受けた（矢印）。血液サンプルを、誘導された時点で採取した。
【図8】ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＬＮＰ／ｍＲＮＡの筋肉内注射後の血清サンプル中のｍｕＩＬ４に対する中和抗体の誘導を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｄ０、Ｄ７、Ｄ２８に、ＬＮＰ内で１０μｇのｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４（白丸）、ｍＲＮＡ－ＣＲＭ（斜線付き丸）、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤ（薄灰色丸）、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９（濃灰色丸）、またはｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ（黒丸）の３回のＩＭ免疫を受けた。バーは、中央値を示す。ｍｕＩＬ４に対する最大半中和力価により示される中和能力を、最初の投与後のＤ２１、Ｄ４１、Ｄ６２およびＤ８０に測定した。ＣＲＭ、ｍｕＩＬ４－Ｎ１９、およびｍｕＩＬ４－ＣＲＭについて、ｎ＝１０／群。ｍｕＩＬ４－ＴｐＤについて、ｎ＝９、ｍｕＩＬ４について、ｎ＝２。
【図9】ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＬＮＰ／ｍＲＮＡの筋肉内注射後の動物生存曲線を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＬＮＰ内で１０μｇのｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４（中止線）、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤ（灰色線）、ｍＲＮＡ－ＣＲＭ、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９およびｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ（黒線）のＤ０、Ｄ７、Ｄ２８での３回のＩＭ免疫を受けた。カプランマイヤー生存曲線を示す（ｎ＝１０／群）。
【0465】
実施例
ＲＮＡの構築
ＲＮＡの構築
【0466】
ＩＬ－４（全長またはそのエピトープ）をコードするＲＮＡ分子、スペーサーおよび少なくとも１つのＴ細胞エピトープに対応する本発明による構築物を、図１および２ならびに表４および５に示す。
【0467】
表４：ＩＬ－４全長サイトカインをコードするＲＮＡ構築物
【表4】
【0468】
表５：ＩＬ－４エピトープをコードするＲＮＡ構築物
【表5】
【0469】
ＩＬ－１３（全長またはそのエピトープ）をコードするＲＮＡ分子、スペーサーおよび少なくとも１つのＴ細胞エピトープに対応する本発明による構築物を、図３および４ならびに表６および７に示す。
【0470】
表６：ＩＬ－１３全長サイトカインをコードするＲＮＡ構築物
【表6】
【0471】
表７：ＩＬ－１３エピトープをコードするＲＮＡ構築物
【表7】
【0472】
実施例１
材料および方法
マウス
ＩＬ４ＲＡ／ＩＬ１３／ＩＬ４ヒト化マウス系統（ｈＩＬ－４／ｈＩＬ－１３ＫＩ；ｈＩＬ－４ＲαＫＩ）および雌ＢＡＬＢ／ｃＪＲｊマウスを、以下の実験に使用した（Ｃｏｎｄｅｅｔ ａｌ．，２０２１）。
材料および方法
マウス
ＩＬ４ＲＡ／ＩＬ１３／ＩＬ４ヒト化マウス系統（ｈＩＬ－４／ｈＩＬ－１３ＫＩ；ｈＩＬ－４ＲαＫＩ）および雌ＢＡＬＢ／ｃＪＲｊマウスを、以下の実験に使用した（Ｃｏｎｄｅｅｔ ａｌ．，２０２１）。
【0473】
ＩＬ－４およびＩＬ－１３による鼻腔内チャレンジ。
ｈＩＬ－４／ｈＩＬ－１３ＫＩ；ｈＩＬ－４ＲαＫＩマウスを、ＩＬ－４もしくはＩＬ－１３をコードする配列を含む本発明のｍＲＮＡ構築物、または対照としてのＰＢＳに曝露した。屠殺後に、ＢＡＬ好酸球数の分析を実施した。
ｈＩＬ－４／ｈＩＬ－１３ＫＩ；ｈＩＬ－４ＲαＫＩマウスを、ＩＬ－４もしくはＩＬ－１３をコードする配列を含む本発明のｍＲＮＡ構築物、または対照としてのＰＢＳに曝露した。屠殺後に、ＢＡＬ好酸球数の分析を実施した。
【0474】
マウスおよびヒトのＩＬ－４およびＩＬ－１３、ならびにＴ細胞エピトープに対する抗体の定量化。
本発明のｍＲＮＡワクチンの免疫原性を、ＥＬＩＳＡシステムを使用して、ワクチン接種後に異なる時点で収集した血清中のマウスＩＬ－４、ヒトＩＬ－４、マウスＩＬ－１３、ヒトＩＬ－１３、およびＴ細胞エピトープ（複数可）に対する抗体を評価することにより判定した。
本発明のｍＲＮＡワクチンの免疫原性を、ＥＬＩＳＡシステムを使用して、ワクチン接種後に異なる時点で収集した血清中のマウスＩＬ－４、ヒトＩＬ－４、マウスＩＬ－１３、ヒトＩＬ－１３、およびＴ細胞エピトープ（複数可）に対する抗体を評価することにより判定した。
【0475】
ワクチン接種されたマウス由来の血清中のＩＬ－４およびＩＬ－１３に対する中和能力の評価。
抗マウスＩＬ－４抗体、抗マウスＩＬ－１３抗体、抗ヒトＩＬ－４抗体、および抗ヒトＩＬ－１３抗体の中和能力を、製造業者の指示から適応させて、例えばＣＴＬＬ－２細胞増殖アッセイ（ＥＣＡＣＣ，ｒｅｆ．９３０４２６１０，バッチ番号：１２Ｋ００６）、またはＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－４／ＩＬ－１３レポーター遺伝子細胞株バイオアッセイ（Ｉｎ ｖｉｖｏＧｅｎ，ｈｋｂ－ｉｌ４１３，バッチ番号：Ｘ１４－３７－０１）を用いて評価した。
抗マウスＩＬ－４抗体、抗マウスＩＬ－１３抗体、抗ヒトＩＬ－４抗体、および抗ヒトＩＬ－１３抗体の中和能力を、製造業者の指示から適応させて、例えばＣＴＬＬ－２細胞増殖アッセイ（ＥＣＡＣＣ，ｒｅｆ．９３０４２６１０，バッチ番号：１２Ｋ００６）、またはＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－４／ＩＬ－１３レポーター遺伝子細胞株バイオアッセイ（Ｉｎ ｖｉｖｏＧｅｎ，ｈｋｂ－ｉｌ４１３，バッチ番号：Ｘ１４－３７－０１）を用いて評価した。
【0476】
実施例２
材料および方法
ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ機能性
ＬＮＰ中にカプセル化されたマウスＩＬ４（ｍｕ－ＩＬ４）、ＣＲＭ、または融合タンパク質ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＣＲＭ、ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＴｐＤ、またはｍｕＩＬ４－ＧＰ－Ｎ１９をコードするｍＲＮＡ３μｇを、ＯｐｔｉＭＥＭ無血清培地で希釈し、完全培地中の６ｘ１０５個のＨＥＫ２９３細胞に添加した。一晩インキュベート後に、細胞を、回収し、固定し、内部染色キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で透過処理した。ｍｕＩＬ４およびＣＲＭ１９７の細胞内発現を、モノクローナル抗マウスＩＬ－４ＰＥコンジュゲート体（クローンＢＶＤ４－１Ｄ１１）および抗マウスＩｇＧ１－ＡＰＣコンジュゲート体により検出される抗ジフテリア毒素ＩｇＧ１（クローン８Ｇ１）で細胞を染色することにより評価した。発現を、フローサイトメトリーにより評価した。
材料および方法
ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ機能性
ＬＮＰ中にカプセル化されたマウスＩＬ４（ｍｕ－ＩＬ４）、ＣＲＭ、または融合タンパク質ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＣＲＭ、ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＴｐＤ、またはｍｕＩＬ４－ＧＰ－Ｎ１９をコードするｍＲＮＡ３μｇを、ＯｐｔｉＭＥＭ無血清培地で希釈し、完全培地中の６ｘ１０５個のＨＥＫ２９３細胞に添加した。一晩インキュベート後に、細胞を、回収し、固定し、内部染色キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で透過処理した。ｍｕＩＬ４およびＣＲＭ１９７の細胞内発現を、モノクローナル抗マウスＩＬ－４ＰＥコンジュゲート体（クローンＢＶＤ４－１Ｄ１１）および抗マウスＩｇＧ１－ＡＰＣコンジュゲート体により検出される抗ジフテリア毒素ＩｇＧ１（クローン８Ｇ１）で細胞を染色することにより評価した。発現を、フローサイトメトリーにより評価した。
【0477】
トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清中のｍｕＩＬ４のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性。
本発明のｍＲＮＡでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清を、トランスフェクションの２４時間後に収集し、ｍｕＩＬ４増殖活性を、ＣＴＬＬ－２細胞アッセイを使用して評価した。簡潔に言えば、ＣＴＬＬ－２細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－２の存在下にて完全ＲＰＭＩ－１６４０培地中で成長させた。活性バイオアッセイのためには、ヒトＩＬ－２を、上清中に存在する潜在性ｍｕ－ＩＬ４に置き換えた。したがって、潜在的ｍｕ－ＩＬ４は、ＣＴＬＬ－２の成長を誘導する。
本発明のｍＲＮＡでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清を、トランスフェクションの２４時間後に収集し、ｍｕＩＬ４増殖活性を、ＣＴＬＬ－２細胞アッセイを使用して評価した。簡潔に言えば、ＣＴＬＬ－２細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－２の存在下にて完全ＲＰＭＩ－１６４０培地中で成長させた。活性バイオアッセイのためには、ヒトＩＬ－２を、上清中に存在する潜在性ｍｕ－ＩＬ４に置き換えた。したがって、潜在的ｍｕ－ＩＬ４は、ＣＴＬＬ－２の成長を誘導する。
【0478】
上清サンプルを、培養プレート中に選択した希釈率かつＲＰＭＩ－１６４０培地＋ＦＢＳ［１０％（ｖ／ｖ）］中の２倍連続希釈で添加した。Ｍｕ－ＩＬ４タンパク質を、陽性対照として使用し、１０ｎｇ／ｍｌで始まる標準曲線を使用した。次に２０，０００個のＣＴＬＬ－２細胞を、すべてのウェルに添加した。４８時間のインキュベーション後に、細胞生存率を、４０μｌの基質を添加することにより、ＭＴＳ／ＰＭＳアッセイにより定量した。光学密度（ＯＤ）を、４９０ｎｍで、４時間インキュベート後に読み取った。
【0479】
ＬＮＰ／ｍＲＮＡの筋肉内注射後のｍｕＩＬ４に対する中和抗体のｉｎ ｖｉｖｏ生成。
生後５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウスを、Ｊａｎｖｉｅｒｓ ｌａｂｓ（Ｓａｉｎｔ Ｂｅｒｔｈｅｖｉｎ，Ｆｒａｎｃｅ）から入手した。投与前の採血を、最初の免疫化の７日前に行った。動物に、０日目、７日目、および２８日目に、ｍｕＩＬ４、ＣＲＭ、または融合タンパク質ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＴｐＤ、ｍｕＩＬ４－ＧＰ－Ｎ１９およびｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＣＲＭをコードする１０μｇのｍＲＮＡを含むＬＮＰ５０μｌを筋肉内（ＩＭ）経路により注射した。血液を、２１日目、４１日目、６２日目、および８０日目に採取した。ｍｕＩＬ－４に対する中和能力を、ＣＴＬＬ－２細胞に対し行われるバイオアッセイ試験を使用して評価した。
生後５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウスを、Ｊａｎｖｉｅｒｓ ｌａｂｓ（Ｓａｉｎｔ Ｂｅｒｔｈｅｖｉｎ，Ｆｒａｎｃｅ）から入手した。投与前の採血を、最初の免疫化の７日前に行った。動物に、０日目、７日目、および２８日目に、ｍｕＩＬ４、ＣＲＭ、または融合タンパク質ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＴｐＤ、ｍｕＩＬ４－ＧＰ－Ｎ１９およびｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＣＲＭをコードする１０μｇのｍＲＮＡを含むＬＮＰ５０μｌを筋肉内（ＩＭ）経路により注射した。血液を、２１日目、４１日目、６２日目、および８０日目に採取した。ｍｕＩＬ－４に対する中和能力を、ＣＴＬＬ－２細胞に対し行われるバイオアッセイ試験を使用して評価した。
【0480】
簡潔に言えば、細胞を、ヒトＩＬ２の存在下で成長させ、中和バイオアッセイのために、ヒトＩＬ２を、ｍｕ－ＩＬ４に置き換えた。したがって、免疫化後に誘導される潜在的抗ｍｕＩＬ－４中和抗体は、ＣＴＬＬ－２の成長を妨げる。
【0481】
血清サンプルを、最終希釈率１／２００で添加し、陽性対照のポリクローナル抗ｍｕ－ＩＬ４抗体（ＡＦ－４０４－ＮＡ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｅ）を、最終濃度１μｇ／ｍＬで添加した。すべてのサンプルを、ＲＰＭＩ－１６４０培地＋ＦＢＳ［１０％（ｖ／ｖ）］で２倍連続希釈した。Ｍｕ－ＩＬ４を、血清サンプルおよび対照に２ｎｇ／ｍＬで添加し、次いで室温で１時間インキュベートした。次に、２０，０００個のＣＴＬＬ－２細胞を、プレインキュベートしたサンプル（血清またはｍｕＩＬ－４を含む陽性対照）に添加した。４８時間のインキュベーション後に、細胞生存率を、ＭＴＳ／ＰＭＳアッセイにより定量した。
【0482】
ＮＣ５０の結果を、その最大値が２ｎｇ／ｍＬのｍｕ－ＩＬ４とＣＴＬＬ－２細胞のインキュベーションにより定義されるｍｕ－ＩＬ４活性の５０％を中和する血清希釈係数（ｄｉｌ－１）として表した。ＮＣ５０を、５０％のｍｕ－ＩＬ４活性をもたらす血清希釈を補間することにより決定する。
【0483】
構築物
５つの異なるｍＲＮＡ構築物を使用した。マウスＩＬ－４を、３つの異なるＴ細胞エピトープ：ＴｐＤ（配列番号：１４４）、Ｎ１９（配列番号：１４５）およびＣＲＭ１９７（配列番号：１４６）に結合させた。ＲＮＡ－ＩＬ４（配列番号：１４７）およびＲＮＡ－ＣＲＭ（配列番号：１４８）を、両方とも対照として使用した。
５つの異なるｍＲＮＡ構築物を使用した。マウスＩＬ－４を、３つの異なるＴ細胞エピトープ：ＴｐＤ（配列番号：１４４）、Ｎ１９（配列番号：１４５）およびＣＲＭ１９７（配列番号：１４６）に結合させた。ＲＮＡ－ＩＬ４（配列番号：１４７）およびＲＮＡ－ＣＲＭ（配列番号：１４８）を、両方とも対照として使用した。
【0484】
配列番号:147
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCUAG
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCCACAUCCACGGCUGCGACAAGAACCACCUGAGGGAGAUCAUCGGCAUCCUGAACGAGGUGACCGGCGAGGGCACCCCCUGCACCGAGAUGGACGUGCCCAACGUGCUGACCGCCACCAAGAACACCACCGAGAGCGAGCUGGUGUGCAGGGCCAGCAAGGUGCUGAGGAUCUUCUACCUGAAGCACGGCAAGACCCCCUGCCUGAAGAAGAACAGCAGCGUGCUGAUGGAGCUGCAGAGGCUGUUCAGGGCCUUCAGGUGCCUGGACAGCAGCAUCAGCUGCACCAUGAACGAGAGCAAGAGCACCAGCCUGAAGGACUUCCUGGAGAGCCUGAAGAGCAUCAUGCAGAUGGACUACAGCUAG
【0485】
配列番号:148
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCGGCGCCGACGACGUGGUGGACAGCAGCAAGAGCUUCGUGAUGGAGAACUUCAGCAGCUACCACGGCACCAAGCCCGGCUACGUGGACAGCAUCCAGAAGGGCAUCCAGAAGCCCAAGAGCGGCACCCAGGGCAACUACGACGACGACUGGAAGGAGUUCUACAGCACCGACAACAAGUACGACGCCGCCGGCUACAGCGUGGACAACGAGAACCCCCUGAGCGGCAAGGCCGGCGGCGUGGUGAAGGUGACCUACCCCGGCCUGACCAAGGUGCUGGCCCUGAAGGUGGACAACGCCGAGACCAUCAAGAAGGAGCUGGGCCUGAGCCUGACCGAGCCCCUGAUGGAGCAGGUGGGCACCGAGGAGUUCAUCAAGAGGUUCGGCGACGGCGCCAGCAGGGUGGUGCUGAGCCUGCCCUUCGCCGAGGGCAGCAGCAGCGUGGAGUACAUCAACAACUGGGAGCAGGCCAAGGCCCUGAGCGUGGAGCUGGAGAUCAACUUCGAGACCAGGGGCAAGAGGGGCCAGGACGCCAUGUACGAGUACAUGGCCCAGGCCUGCGCCGGCAACAGGGUGAGGAGGAGCGUGGGCAGCAGCCUGAGCUGCAUCAACCUGGACUGGGACGUGAUCAGGGACAAGACCAAGACCAAGAUCGAGAGCCUGAAGGAGCACGGCCCCAUCAAGAACAAGAUGAGCGAGAGCCCCAACAAGACCGUGAGCGAGGAGAAGGCCAAGCAGUACCUGGAGGAGUUCCACCAGACCGCCCUGGAGCACCCCGAGCUGAGCGAGCUGAAGACCGUGACCGGCACCAACCCCGUGUUCGCCGGCGCCAACUACGCCGCCUGGGCCGUGAACGUGGCCCAGGUGAUCGACAGCGAGACCGCCGACAACCUGGAGAAGACCACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUCAGCGUGAACGGCAGGAAGAUCAGGAUGAGGUGCAGGGCCAUCGACGGCGACGUGACCUUCUGCAGGCCCAAGAGCCCCGUGUACGUGGGCAACGGCGUGCACGCCAACCUGCACGUGGCCUUCCACAGGAGCAGCAGCGAAAAGAUCCACAGCAACGAGAUCAGCAGCGACAGCAUCGGCGUGCUGGGCUACCAGAAGACCGUGGACCACACCAAGGUGAACAGCAAGCUGAGCCUGUUCUUCGAGAUCAAGAGCUAG
AUGGGCCUGAACCCCCAGCUGGUGGUGAUCCUGCUGUUCUUCCUGGAGUGCACCAGGAGCGGCGCCGACGACGUGGUGGACAGCAGCAAGAGCUUCGUGAUGGAGAACUUCAGCAGCUACCACGGCACCAAGCCCGGCUACGUGGACAGCAUCCAGAAGGGCAUCCAGAAGCCCAAGAGCGGCACCCAGGGCAACUACGACGACGACUGGAAGGAGUUCUACAGCACCGACAACAAGUACGACGCCGCCGGCUACAGCGUGGACAACGAGAACCCCCUGAGCGGCAAGGCCGGCGGCGUGGUGAAGGUGACCUACCCCGGCCUGACCAAGGUGCUGGCCCUGAAGGUGGACAACGCCGAGACCAUCAAGAAGGAGCUGGGCCUGAGCCUGACCGAGCCCCUGAUGGAGCAGGUGGGCACCGAGGAGUUCAUCAAGAGGUUCGGCGACGGCGCCAGCAGGGUGGUGCUGAGCCUGCCCUUCGCCGAGGGCAGCAGCAGCGUGGAGUACAUCAACAACUGGGAGCAGGCCAAGGCCCUGAGCGUGGAGCUGGAGAUCAACUUCGAGACCAGGGGCAAGAGGGGCCAGGACGCCAUGUACGAGUACAUGGCCCAGGCCUGCGCCGGCAACAGGGUGAGGAGGAGCGUGGGCAGCAGCCUGAGCUGCAUCAACCUGGACUGGGACGUGAUCAGGGACAAGACCAAGACCAAGAUCGAGAGCCUGAAGGAGCACGGCCCCAUCAAGAACAAGAUGAGCGAGAGCCCCAACAAGACCGUGAGCGAGGAGAAGGCCAAGCAGUACCUGGAGGAGUUCCACCAGACCGCCCUGGAGCACCCCGAGCUGAGCGAGCUGAAGACCGUGACCGGCACCAACCCCGUGUUCGCCGGCGCCAACUACGCCGCCUGGGCCGUGAACGUGGCCCAGGUGAUCGACAGCGAGACCGCCGACAACCUGGAGAAGACCACCGCCGCCCUGAGCAUCCUGCCCGGCAUCGGCAGCGUGAUGGGCAUCGCCGACGGCGCCGUGCACCACAACACCGAGGAGAUCGUGGCCCAGAGCAUCGCCCUGAGCAGCCUGAUGGUGGCCCAGGCCAUCCCCCUGGUGGGCGAGCUGGUGGACAUCGGCUUCGCCGCCUACAACUUCGUGGAGAGCAUCAUCAACCUGUUCCAGGUGGUGCACAACAGCUACAACAGGCCCGCCUACAGCCCCGGCCACAAGACCCAGCCCUUCCUGCACGACGGCUACGCCGUGAGCUGGAACACCGUGGAGGACAGCAUCAUCAGGACCGGCUUCCAGGGCGAGAGCGGCCACGACAUCAAGAUCACCGCCGAGAACACCCCCCUGCCCAUCGCCGGCGUGCUGCUGCCCACCAUCCCCGGCAAGCUGGACGUGAACAAGAGCAAGACCCACAUCAGCGUGAACGGCAGGAAGAUCAGGAUGAGGUGCAGGGCCAUCGACGGCGACGUGACCUUCUGCAGGCCCAAGAGCCCCGUGUACGUGGGCAACGGCGUGCACGCCAACCUGCACGUGGCCUUCCACAGGAGCAGCAGCGAAAAGAUCCACAGCAACGAGAUCAGCAGCGACAGCAUCGGCGUGCUGGGCUACCAGAAGACCGUGGACCACACCAAGGUGAACAGCAAGCUGAGCCUGUUCUUCGAGAUCAAGAGCUAG
【0486】
結果
トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞におけるｍｕＩＬ４およびＣＲＭのｉｎ ｖｉｔｒｏタンパク質発現
トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞におけるｍｕＩＬ４およびＣＲＭのｉｎ ｖｉｔｒｏタンパク質発現
【0487】
ｍｕＩＬ４発現が、ｍＲＮＡ－ＣＲＭのみをトランスフェクトした条件（斜線付き四角）を除き、すべての試験条件において観察され、ＩＬ４を発現する細胞の割合は８０％を超えた（図５Ａ）。ＣＲＭの発現は、ＣＲＭおよびｍｕＩＬ４－ＣＲＭ条件で観察された（図５Ｂ）。ＨＥＫ２９３細胞におけるｍｕＩＬ４のＭＦＩは、ｍｕＩＬ４、ｍｕＩＬ４－ＴｐＤおよびｍｕＩＬ４－Ｎ１９と比較して、ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ（黒い四角）では、２～４倍高かった（図５Ｃ）。
【0488】
トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清中のｍｕＩＬ４のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
図６に示すとおり、最も高いｍｕ－ＩＬ－４活性が、ｍＲＮＡ－ＩＬ４をトランスフェクトした細胞で観察された。ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清で測定されたｍｕＩＬ４活性は、より低かった。最後に、ｍｕ－ＩＬ４活性は、ｍＲＮＡ－ＣＲＭでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清中では検出されなかった。ウエスタンブロットにより観察されたように（データは示さず）、実質的に等量のｍＩＬ４タンパク質が、異なる条件（ｍＲＮＡ－ＣＲＭ条件を除く）において、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清中で定量された。したがって、図６で観察されたｍｕＩＬ４活性のｉｎ ｖｉｔｒｏ差は、ｍｕＩＬ４タンパク質量の差によるものではなく、その代わり、天然マウスＩＬ４と比較して、本発明のＲＮＡ構築物を用いて得られたタンパク質の低い活性によるものである。
図６に示すとおり、最も高いｍｕ－ＩＬ－４活性が、ｍＲＮＡ－ＩＬ４をトランスフェクトした細胞で観察された。ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清で測定されたｍｕＩＬ４活性は、より低かった。最後に、ｍｕ－ＩＬ４活性は、ｍＲＮＡ－ＣＲＭでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清中では検出されなかった。ウエスタンブロットにより観察されたように（データは示さず）、実質的に等量のｍＩＬ４タンパク質が、異なる条件（ｍＲＮＡ－ＣＲＭ条件を除く）において、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清中で定量された。したがって、図６で観察されたｍｕＩＬ４活性のｉｎ ｖｉｔｒｏ差は、ｍｕＩＬ４タンパク質量の差によるものではなく、その代わり、天然マウスＩＬ４と比較して、本発明のＲＮＡ構築物を用いて得られたタンパク質の低い活性によるものである。
【0489】
ＢＡＬＢ／ｃマウスでのＬＮＰ／ｍＲＮＡの筋肉内注射後の血清サンプル中のｍｕＩＬ４に対する中和抗体の分析
５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃ ＢｙＪマウスに、０日目、７日目、および２８日目に、ｍｕＩＬ４、ＣＲＭ、または融合タンパク質ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＴｐＤ、ｍｕＩＬ４－ＧＰ－Ｎ１９およびｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＣＲＭをコードする１０μｇのｍＲＮＡを含むＬＮＰ５０μｌを筋肉内（ＩＭ）経路により注射した。血液を、２１日目、４１日目、６２日目、８０日目および試験終了時（１０４日目）に採取し（図７）、中和抗体の存在を、これらのマウスの血清中で評価した。
５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃ ＢｙＪマウスに、０日目、７日目、および２８日目に、ｍｕＩＬ４、ＣＲＭ、または融合タンパク質ｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＴｐＤ、ｍｕＩＬ４－ＧＰ－Ｎ１９およびｍｕＩＬ４－ＧＰ－ＣＲＭをコードする１０μｇのｍＲＮＡを含むＬＮＰ５０μｌを筋肉内（ＩＭ）経路により注射した。血液を、２１日目、４１日目、６２日目、８０日目および試験終了時（１０４日目）に採取し（図７）、中和抗体の存在を、これらのマウスの血清中で評価した。
【0490】
ｍｕＩＬ４に対する中和抗体が、ＬＮＰ内のｍｕＩＬ４－ＴｐＤ、ｍｕＩＬ４－Ｎ１９およびｍｕＩＬ４－ＣＲＭをコードする１０μｇのｍＲＮＡで３回免疫したマウスにおいて、４１日目から検出された。４１日目に、７／９、６／１０および８／１０の応答が、それぞれＬＮＰ内でｍｕＩＬ４－ＴｐＤ、ｍｕＩＬ４－Ｎ１９、およびｍｕＩＬ４－ＣＲＭをコードするｍＲＮＡを投与した群において検出された（ＮＣ５０＞２００ｄｉｌ－１）。６２日目に、さらに１匹のマウスが、ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ群において陽性であることが判明したが、中央値は、すべての群において低下し始めており、応答のピークが４１日目頃に達したことをおそらく示している。中和能力の高いマウスを除き、ＮＣ５０は、６２日目と８０日目の間で減少せず、中央値は、６２日目～８０日目でほぼ同等であり、ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ群では、７２６～７７５、ｍｕＩＬ４－Ｎ１９群では、３０２～２６６、ｍｕＩＬ４－ＴｐＤ群では、４８１～６０５であった。ｍｕＩＬ４中和抗体は、いずれの時点においても、ｍｕＩＬ４およびＣＲＭ群において検出されなかった（図８および表８）。
【0491】
表８：２１、４１、６２、および８０日目でのＣＲＭ、ｍｕＩＬ４、ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ、ｍｕＩＬ４－Ｎ１９およびｍｕＩＬ４－ＣＲＭ群についてのｍｕＩＬ４を中和する能力のＮＣ５０（Ｄｉｌ－１）中央値。
【表8】
【0492】
ｍＲＮＡ－ＣＲＭ、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＣＲＭ、およびｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－Ｎ１９をカプセル化するＬＮＰを注射したすべての動物は、８０日目に生存していた（１００％）。ＬＮＰ内のｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４－ＴｐＤを投与されたマウスの生存率は、１匹の単離されたマウスの死亡により９０％に低下する。最後に、２０％のみの生存率が、８０日目にＬＮＰ内のｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４を受けた群で観察され、マウスの６０％が、２ラウンドの免疫化（Ｄ０およびＤ７）後に死亡した（図９）。この結果は、本発明に記載のｍＲＮＡ構築物では観察されなかった、ｍＲＮＡ－ｍｕＩＬ４の毒性を示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】
【国際調査報告】