特表 2024-531419 線維性疾患の治療におけるアルファ－エノラーゼアンタゴニストの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-08-29

(54)【発明の名称】線維性疾患の治療におけるアルファ－エノラーゼアンタゴニストの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240822BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240822BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240822BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240822BHJP

   A61K 31/4418 20060101ALI20240822BHJP

   A61K 31/444 20060101ALI20240822BHJP

   A61K 31/44 20060101ALI20240822BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240822BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240822BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240822BHJP

   C07K 1/13 20060101ALI20240822BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240822BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240822BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240822BHJP

   C12N 15/88 20060101ALI20240822BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20240822BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61K47/68

A61P11/00

A61P9/00

A61P9/12

A61P1/16

A61P1/00

A61P19/02

A61P13/12

A61P17/00

A61P15/00

A61K31/4418

A61K31/444

A61K31/44

A61K45/00

C07K16/28 ZNA

C07K19/00

C07K1/13

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N15/88 Z

C12P21/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024510466

(86)(22)【出願日】2022-08-19

(85)【翻訳文提出日】2024-04-17

(86)【国際出願番号】 CN2022113767

(87)【国際公開番号】W WO2023020624

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】63/235,486

(32)【優先日】2021-08-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524063785

【氏名又は名称】ヒューニライフ バイオテクノロジー インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＨＵＮＩＬＩＦＥ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ， ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】６Ｆ－１， Ｎｏ．３０８， Ｓｅｃ．１， Ｎｅｉｈｕ Ｒｄ．， Ｎｅｉｈｕ Ｄｉｓｔ．， Ｔａｉｐｅｉ Ｃｉｔｙ， Ｔａｉｗａｎ １１４

(74)【代理人】

【識別番号】100113398

【弁理士】

【氏名又は名称】寺崎 直

(72)【発明者】

【氏名】ユアン， タ－トゥン

(72)【発明者】

【氏名】ホアン， ウェイ－チン

(72)【発明者】

【氏名】チュン， イ－チェ

(72)【発明者】

【氏名】チュアン， チ－フェン

(72)【発明者】

【氏名】チェン， マオ－リン

(72)【発明者】

【氏名】ホアン， ユン－ツァン

【テーマコード（参考）】

4B064

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG01

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4C076AA95

4C076EE59

4C084AA17

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA421

4C084ZA422

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA661

4C084ZA662

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA891

4C084ZA892

4C085AA14

4C085BB22

4C085CC02

4C085DD62

4C085EE03

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC17

4C086GA07

4C086GA08

4C086MA02

4C086MA05

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZA36

4C086ZA42

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZA89

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045BA70

4H045BA71

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、線維性疾患を治療するための医薬の製造における、有効量のアルファ－エノラーゼ（エノラーゼ－１、ＥＮＯ－１）アンタゴニストの使用に関する。ＥＮＯ－１アンタゴニストは、体重減少及び肺重量増加、並びに肺における線維化病変及びコラーゲン沈着を有意に抑制した。また、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、マウス初代肺筋線維芽細胞における細胞遊走、コラーゲン、及びＴＧＦ－βの分泌を有意に減少させた。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

線維性疾患を治療するための医薬を製造するための、有効量のアルファ－エノラーゼ（エノラーゼ－１、ＥＮＯ－１）アンタゴニストの使用。

【請求項2】

前記ＥＮＯ－１アンタゴニストは、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントである、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記ＥＮＯ－１アンタゴニストは、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む抗ＥＮＯ－１キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であり、前記抗原結合ドメインは、抗ＥＮＯ－１抗体の少なくとも一部である、請求項１に記載の使用。

【請求項4】

前記抗原結合ドメインは、配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＣＶＭＮ）、配列番号２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ）、配列番号３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ）、配列番号４（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ）、配列番号５（ＮＡＫＴＬＰＥ）、及び配列番号６（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ）に示されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の使用。

【請求項5】

前記抗原結合ドメインは、配列番号７（ＧＹＴＦＴＳＸＶＭＮ、ここで、Ｘは、システインを除く任意のアミノ酸）、配列番号２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ）、配列番号３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ）、配列番号４（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ）、配列番号５（ＮＡＫＴＬＰＥ）、及び配列番号６（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ）に示されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の使用。

【請求項6】

前記ヒンジ領域は、ＣＤ８アルファヒンジ領域（ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ：配列番号８）を含み、
任意に、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ膜貫通領域（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ：配列番号９）及び／又はＣＤ２８膜貫通領域（ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ：配列番号１０）を含み、
任意に、前記シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ：配列番号１１）を含み、
任意に、前記シグナル伝達ドメインは、更に、４－１ＢＢ、ＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＤＡＰ１０、ＯＸ４０、又はこれらの組み合わせを含み、
任意に、前記抗ＥＮＯ－１ ＣＡＲは、シグナルペプチドを更に含み、
任意に、前記シグナルペプチドは、ＩｇＧカッパ軽鎖シグナルペプチド、ＣＤ８アルファシグナルペプチド、ＧＭ－ＣＳＦシグナルペプチド、ＨＳＡシグナルペプチド、ＩｇＧ重鎖シグナルペプチド、ＩｇＧ軽鎖シグナルペプチド、ＣＤ３３シグナルペプチド、ＩＬ－２シグナルペプチド、又はインスリンシグナルペプチドを含む、
請求項３から請求項５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項7】

前記抗ＥＮＯ－１ ＣＡＲは、シグナルペプチド、抗ＥＮＯ－１抗体、ＣＤ８アルファヒンジ領域、ＣＤ８アルファ膜貫通領域、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ゼータを含む、請求項３から請求項５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項8】

前記ＥＮＯ－１アンタゴニストは、
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ（Ｉ）の一般式を有し、
Ａｂは、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントであり、Ｌは、リンカー又は直接結合であり、Ｄは、治療剤又は標識であり、ｍは、１～１２の整数である、ＥＮＯ－１に特異的に結合する免疫複合体である、請求項１に記載の使用。

【請求項9】

前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項８に記載の使用。

【請求項10】

前記抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はこれらの抗体フラグメントである、請求項８に記載の使用。

【請求項11】

前記治療剤は、抗線維化剤、免疫調節剤、放射性同位体、及び毒素を含む、請求項８に記載の使用。

【請求項12】

前記抗線維化剤は、ピルフェニドン若しくはニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ等の受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断剤、又はＣＴＧＦ阻害剤、又は潜在性ＴＧＦ－β複合体の活性化因子を含むＴＧＦ－β及びＢＭＰ活性化経路、例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１又は細胞表面インテグリン、ＴＧＦ３受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）又はＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びこれらのリガンド、例えば、ＴＧＦ３、アクチビン、インヒビン、ノーダル、抗ミジレリアンホルモン、ＧＤＦ又はＢＭＰ、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体とも呼ばれる）、又は制御性あるいは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性正準経路の成分、又はＭＡＰＫシグナル伝達の様々なブランチ、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール－３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦ－β誘導性ＥＭＴプロセスを含むＳＭＡＤ非依存性又は非共有性経路のメンバー、又はＨｈリガンドまたは標的遺伝子を含む正準及び非正準ヘッジホッグシグナル伝達経路、又はＷＮＴ経路の何らかのメンバー、又はＴＧＦ－βシグナル伝達に影響を与えやすいノッチ経路を阻害しやすい抗線維化化合物を含む、請求項８に記載の使用。

【請求項13】

前記標識は、診断試薬又は画像化試薬を含む、請求項８に記載の使用。

【請求項14】

前記抗体は、
ＨＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＣＶＭＮ：配列番号１）、
ＨＣＤＲ２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ：配列番号２）、及び
ＨＣＤＲ３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ：配列番号３）を含む３つの相補的領域を有する重鎖可変ドメインと、
ＬＣＤＲ１（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ：配列番号４）、
ＬＣＤＲ２（ＮＡＫＴＬＰＥ：配列番号５）、及び
ＬＣＤＲ３（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ：配列番号：６）を含む３つの相補的領域を有する軽鎖可変ドメインとを含む、
請求項８に記載の使用。

【請求項15】

前記抗体は、
ＨＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＸＶＭＮ、ここで、Ｘは、システインを除く任意のアミノ酸：配列番号７）、
ＨＣＤＲ２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ：配列番号２）、及び
ＨＣＤＲ３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ：配列番号３）を含む３つの相補的領域を有する重鎖可変ドメインと、
ＬＣＤＲ１（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ：配列番号４）、
ＬＣＤＲ２（ＮＡＫＴＬＰＥ：配列番号５）、及び
ＬＣＤＲ３（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ：配列番号６）を含む３つの相補的領域を有する軽鎖可変ドメインとを含む、
請求項８に記載の使用。

【請求項16】

前記ＥＮＯ－１アンタゴニストは、細胞内に送達され、細胞内タンパク質又はペプチドとして発現される核酸である、請求項１に記載の使用。

【請求項17】

前記ＥＮＯ１アンタゴニストは、分泌型、非分泌型、又はこれらの組み合わせである、請求項１６に記載の使用。

【請求項18】

前記ＥＮＯ－１アンタゴニストは、ウイルスベクター、ポリマー、及び／又はリポソームを介して送達される、請求項１６に記載の使用。

【請求項19】

前記線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺高血圧症、肺線維症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、間質性肺疾患、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、心内膜線維症、縦隔線維症、後腹膜線維症、進行性巨大線維症（石炭労働者塵肺の合併症）、腎性全身性線維症、クローン病、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、神経線維腫症、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ－Ｐｕｄｌａｋ症候群、糖尿病性腎症、腎線維症、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、高血圧関連腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、放射線誘発性線維症、子宮平滑筋腫（子宮筋腫）、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、肝線維症、肝硬変、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染、慢性臓器移植拒絶反応、皮膚の線維化状態、ケロイド瘢痕、デュプイトレン拘縮、エーラス－ダンロス症候群、表皮水疱性ジストロフィカ、口腔粘膜下線維症、又は線維増殖性障害を含む、請求項１に記載の使用。

【請求項20】

線維性疾患を治療するための方法であって、
有効量のアルファ－エノラーゼ（エノラーゼ－１、ＥＮＯ－１）アンタゴニストを、これを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項21】

前記線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺高血圧症、肺線維症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、間質性肺疾患、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、心内膜線維症、縦隔線維症、後腹膜線維症、進行性巨大線維症（石炭労働者塵肺の合併症）、腎性全身性線維症、クローン病、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、神経線維腫症、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ－Ｐｕｄｌａｋ症候群、糖尿病性腎症、腎線維症、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、高血圧関連腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、放射線誘発性線維症、子宮平滑筋腫（子宮筋腫）、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、肝線維症、肝硬変、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染、慢性臓器移植拒絶反応、皮膚の線維化状態、ケロイド瘢痕、デュプイトレン拘縮、エーラス－ダンロス症候群、表皮水疱性ジストロフィカ、口腔粘膜下線維症、又は線維増殖性障害を含む、
請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

線維性疾患の治療に使用するための、請求項１から請求項１８のいずれか一項に記載のＥＮＯ－１アンタゴニスト。

【請求項23】

前記線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺高血圧症、肺線維症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、間質性肺疾患、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、心内膜線維症、縦隔線維症、後腹膜線維症、進行性巨大線維症（石炭労働者塵肺の合併症）、腎性全身性線維症、クローン病、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、神経線維腫症、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ－Ｐｕｄｌａｋ症候群、糖尿病性腎症、腎線維症、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、高血圧関連腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、放射線誘発性線維症、子宮平滑筋腫（子宮筋腫）、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、肝線維症、肝硬変、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染、慢性臓器移植拒絶反応、皮膚の線維化状態、ケロイド瘢痕、デュプイトレン拘縮、エーラス－ダンロス症候群、表皮水疱性ジストロフィカ、口腔粘膜下線維症、又は線維増殖性障害を含む、
請求項２２に記載の使用のためのＥＮＯ－１アンタゴニスト。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

関連出願との相互参照
本出願は、２０２１年８月２０日に出願された米国仮出願第６３／２３５，４８６号の優先権の利益を主張するものであり、この仮出願は、あらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。

【0002】

発明の背景
発明の分野
本開示は、線維性疾患及び結合組織障害の分野に関する。より具体的には、本開示は、線維性疾患、特に特発性肺線維症の治療及び／又は予防のためのアルファ－エノラーゼ（エノラーゼ－１、ＥＮＯ－１）アンタゴニストの使用に関する。

【0003】

背景技術
線維性疾患は、臓器又は組織において、修復過程又は反応過程で過剰な線維性結合組織が形成されることを含む。このような線維性疾患には、特発性肺線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ＩＰＦ）、肺高血圧症、肺線維症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、間質性肺疾患、非特異性間質性肺炎（ｎｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ：ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ｕｓｕａｌ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ：ＵＩＰ）、心内膜線維症、縦隔線維症、後腹膜線維症、進行性巨大線維症（石炭労働者塵肺の合併症）、腎性全身性線維症、クローン病、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、神経線維腫症、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ－Ｐｕｄｌａｋ症候群、糖尿病性腎症、腎線維症、肥大型心筋症（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ：ＨＣＭ）、高血圧関連腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ｆｏｃａｌ ｓｅｇｍｅｎｔａｌ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ＦＳＧＳ）、放射線誘発性線維症、子宮平滑筋腫（子宮筋腫）、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、肝線維症、肝硬変、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染、慢性臓器移植拒絶反応、皮膚の線維化状態、ケロイド瘢痕、デュプイトレン（Ｄｕｐｕｙｔｒｅｎ）拘縮、エーラス－ダンロス（Ｅｈｌｅｒｓ－Ｄａｎｌｏｓ）症候群、表皮水疱性ジストロフィカ、口腔粘膜下線維症、および線維増殖性障害等が含まれる。

【0004】

ＥＮＯ－１は、多機能性タンパク質であり、当初は解糖経路の重要な酵素として発見されたものである。正常な状態では、ＥＮＯ－１は、細胞質に発現する。しかしながら、ＥＮＯ－１は、プラスミノーゲン受容体として多くの癌細胞の細胞表面や、好中球、リンパ球、単球等の活性化された造血細胞上でも発現することが見出されている。プラスミノーゲンレセプタータンパク質のアップレギュレーションは、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化システムのカスケード反応を誘導し、細胞外マトリックスの分解をもたらすことが知られている。

【発明の概要】

【0005】

本開示は、ＥＮＯ－１を標的とするアルファ－エノラーゼ（エノラーゼ－１、ＥＮＯ－１）アンタゴニスト、及びその使用に関し、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、抗原結合構造ドメインとして、ＥＮＯ－１、例えば、ヒトＥＮＯ－１抗体に対する結合能を有し、ＥＮＯ－１の生物学的効果を中和する。ＥＮＯ－１アンタゴニストは、遊離ＥＮＯ－１タンパク質及び細胞表面上のＥＮＯ－１タンパク質に結合でき、線維性疾患の治療において重要な適用展望を有する。

【0006】

本開示の特定の実施形態において、線維化疾患又は障害は、ＥＮＯ－１タンパク質の異常な活性化又は発現から生じる任意の状態であってもよい。このような疾患の例としては、肝臓、腸、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、陰茎、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆道、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節、眼、胃の線維症、又はこれらの組み合わせが挙げられる。

【0007】

本開示の特定の実施形態では、線維性疾患又は障害として、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺高血圧症、肺線維症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、間質性肺疾患、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、心内膜線維症、縦隔線維症、後腹膜線維症、進行性巨大線維症（石炭労働者塵肺の合併症）、腎性全身性線維症、クローン病、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、神経線維腫症、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ－Ｐｕｄｌａｋ症候群、糖尿病性腎症、腎線維症、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、高血圧関連腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、放射線誘発性線維症、子宮平滑筋腫（子宮筋腫）、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、肝線維症、肝硬変、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染、慢性臓器移植拒絶反応、皮膚の線維化状態、ケロイド瘢痕、デュプイトレン拘縮、エーラス－ダンロス症候群、表皮水疱性ジストロフィカ、口腔粘膜下線維症、および線維増殖性障害を挙げうる。好ましい実施形態において、線維性疾患又は障害として、特発性肺線維症、肺高血圧症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腎線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、又は全身性硬化症を挙げうる。

【0008】

本開示のいくつかの実施形態において、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントでありうる。本開示のいくつかの実施形態において、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む、抗ＥＮＯ－１キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であってもよく、ここで抗原結合ドメインは、抗ＥＮＯ－１抗体の少なくとも一部である。

【0009】

本開示のいくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＣＶＭＮ）、配列番号２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ）、配列番号３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ）、配列番号４（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ）、配列番号５（ＮＡＫＴＬＰＥ）、及び配列番号６（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ）に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。好ましくは、抗体は、ＨＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＣＶＭＮ：配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ：配列番号２）、及びＨＣＤＲ３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ：配列番号３）の３つの相補的領域を有する重鎖可変ドメインと、ＬＣＤＲ１（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ：配列番号４）、ＬＣＤＲ２（ＮＡＫＴＬＰＥ：配列番号５）、及びＬＣＤＲ３（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ：配列番号：６）の３つの相補的領域を有する軽鎖可変ドメインとを含んでいてもよい。

【0010】

本開示の他の実施形態において、抗原結合ドメインは、配列番号７（ＧＹＴＦＴＳＸＶＭＮ、ここで、Ｘは、システインを除く任意のアミノ酸）、配列番号２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ）、配列番号３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ）、配列番号４（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ）、配列番号５（ＮＡＫＴＬＰＥ）、及び配列番号６（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ）のアミノ酸配列を含んでもよい。好ましくは、抗体は、ＨＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＸＶＭＮ、ここで、Ｘは、システインを除く任意のアミノ酸：配列番号７）、ＨＣＤＲ２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ：配列番号２）、及びＨＣＤＲ３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ：配列番号３）の３つの相補的領域を有する重鎖可変ドメインと、ＬＣＤＲ１（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ：配列番号４）、ＬＣＤＲ２（ＮＡＫＴＬＰＥ：配列番号５）、及びＬＣＤＲ３（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ：配列番号６）の３つの相補的領域を有する軽鎖可変ドメインとを含んでもよい。

【0011】

本開示のいくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８アルファヒンジ領域（ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ：配列番号８）を含んでいてもよく、オプションとして、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ膜貫通領域（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ：配列番号９）及び／又はＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ：配列番号１０）を含んでいてもよく、オプションとして、前記シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ：配列番号１１）を含んでいてもよく、オプションとして、前記シグナル伝達ドメインは、更に、４－１ＢＢ、ＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＤＡＰ１０、ＯＸ４０、又はこれらの組み合わせを含んでいてもよく、オプションとして、前記抗ＥＮＯ－１ ＣＡＲは、シグナルペプチドを更に含んでいてもよく、オプションとして、前記シグナルペプチドは、ＩｇＧカッパ軽鎖シグナルペプチド、ＣＤ８アルファシグナルペプチド、ＧＭ－ＣＳＦシグナルペプチド、ＨＳＡシグナルペプチド、ＩｇＧ重鎖シグナルペプチド、ＩｇＧ軽鎖シグナルペプチド、ＣＤ３３シグナルペプチド、ＩＬ－２シグナルペプチド、又はインスリンシグナルペプチドを含んでもよい。

【0012】

本開示のいくつかの実施形態において、抗ＥＮＯ－１ ＣＡＲは、シグナルペプチド、抗ＥＮＯ－１抗体、ＣＤ８アルファヒンジ領域、ＣＤ８アルファ膜貫通領域、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ゼータを含んでもよい。

【0013】

本開示のいくつかの実施形態において、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、ＥＮＯ－１に特異的に結合する免疫複合体であってもよく、Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ（Ｉ）の一般式を有し、ここで、Ａｂは、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントであり、Ｌは、リンカー又は直接結合であり、Ｄは、治療剤又は標識であり、ｍは、１～１２の整数である。抗体は、好ましくは、モノクローナル抗体であってもよい。抗体は、好ましくは、マウス抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はこれらの抗体フラグメントであってもよい。

【0014】

本開示の特定の実施形態において、治療剤は、抗線維化剤、免疫調節剤、放射性同位体、及び毒素を含んでもよい。好ましくは、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、既知の抗線維化活性を有する少なくとも１つの治療的に活性な薬剤と組み合わせて使用でき、その薬剤は、ピルフェニドン又は受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ＲＴＫＩ）、例えば、ニンテダニブ（Ｎｉｎｔｅｄａｎｉｂ）、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）及び他のＲＴＫＩ等、又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断剤、又はＣＴＧＦ阻害剤、又は潜在性ＴＧＦ－β複合体の活性化因子を含むＴＧＦ－β及びＢＭＰ活性化経路、例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１又は細胞表面インテグリン、ＴＧＦ３受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）又はＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びこれらのリガンド、例えば、ＴＧＦ３、アクチビン、インヒビン、ノーダル（Ｎｏｄａｌ）、抗ミジレリアンホルモン、ＧＤＦ又はＢＭＰ、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体とも呼ばれる）、又は制御性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性正準経路の成分、又はＭＡＰＫシグナル伝達の様々なブランチ、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール－３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦ－β－誘導性ＥＭＴプロセスを含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非共有性経路のメンバー、又はＨｈリガンドまたは標的遺伝子を含む正準及び非正準ヘッジホッグシグナル伝達経路、又はＷＮＴ経路の何らかのメンバー、又はＴＧＦ－βシグナル伝達に影響を与えやすいノッチ経路を阻害しやすい抗線維化化合物から選択される。

【0015】

本開示のいくつかの実施形態において、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、経口、非経口、頬、膣、直腸、吸入、気腹、舌下、筋肉内、皮下、局所、鼻内、腹腔内、胸腔内、静脈内、硬膜外、髄腔内、又は脳室内経路によって、又は関節への注射によって投与できる。

【0016】

本開示のいくつかの実施形態において、対象は、哺乳動物である。好ましい一実施形態において、対象は、ヒトである。

【0017】

本開示のいくつかの実施形態において、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、細胞に送達され、ペプチドの細胞内タンパク質として発現される核酸、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡであることがあり得る。例えば、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、例えば、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントとして転写及び翻訳できる核酸であることがあり得る。更に、核酸は、分泌シグナルペプチドを有することも有さないこともあり得、したがって、核酸から転写及び翻訳されるタンパク質又はペプチドは、分泌、非分泌又はこれらの組み合わせであることがあり得る。本開示のいくつかの実施形態において、核酸は、任意の公知の方法又は媒体、例えば、ウイルスベクター、ポリマー、又はリポソームを介して対象に送達できる。本開示のいくつかの実施形態において、核酸は、公知の修飾ヌクレオチド、例えば、擬似ＵＴＰ、１－Ｍｅ擬似ＵＴＰ、５－メトキシＵＴＰ、Ｎ１－エチル擬似ＵＴＰ、５－メチルＣＴＰ、又はＮ４－アセチルＣＴＰで置換され、発現効率を高めてもよい。

【0018】

先行技術と比較して、ここに開示する発明は、以下の有益な効果を有する。本開示によれば、ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの実験により、ＥＮＯ－１アンタゴニスト、例えば、ＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７の抗線維化効果及び抗炎症効果が証明される。すなわち、ＥＮＯ－１アンタゴニストは、線維性疾患、例えば、ＩＰＦに対する潜在的な治療法である。

【0019】

薬学的に有効な量は、患者の状態、年齢、疾患状態、投与経路等のような多くの因子に依存し、そのような有効な量は、過度な実験を行うことなく、日常診療においてこれらの因子に基づいて決定されうることは、当業者は理解するであろう。

【0020】

ここに開示する本発明の他の態様は、以下の説明により明らかになる。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】ヒト線維症肺及びブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）誘発肺線維症マウスモデルの肺におけるＥＮＯ－１の過剰発現を示す図である。詳細は、例２に記載されている。

【0022】

【図2】ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける体重減少及び肺重量増加を抑制するＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｖｏ抗線維症効果を示す図である。詳細は、例３に記載されている。

【0023】

【図3】ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける肺切片のＡｓｈｃｒｏｆｔスコア及び炎症スコアを減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｖｏ抗線維化効果を示す図である。詳細は、例３に記載されている。

【0024】

【図4】ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウス由来の肺のコラーゲン及び気管支肺胞洗浄液中のＴＧＦ－βを減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｖｏ抗線維症効果を示す図である。詳細は、例３に記載されている。

【0025】

【図5】ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウス由来の肺における筋線維芽細胞（アルファ－ＳＭＡ陽性）を減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｖｏ抗線維化効果を示す図である。詳細は、例３に記載されている。

【0026】

【図6】ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウス由来の肺における単球及び好中球の動員を減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｖｏ抗炎症効果を示す図である。詳細は、例３に記載されている。

【0027】

【図7】ＴＧＦ－β刺激初代マウス及びヒト肺線維芽細胞の遊走を減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗線維化効果を示す図である。詳細は、例４に記載されている。

【0028】

【図8】ＴＧＦ－β１刺激初代ヒト正常線維芽細胞におけるコラーゲン、ＴＧＦ－β１、及びＶＥＧＦ分泌を減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗線維化効果を示す図である。詳細は、例４に記載されている。

【0029】

【図9】初代ヒトＩＰＦ線維芽細胞におけるコラーゲン、ＴＧＦ－β１及びＶＥＧＦ分泌を減少させるＥＮＯ－１ ｍＡｂ ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗線維化効果を示す図である。詳細は、例４に記載されている。

【発明を実施するための形態】

【0030】

全般的な定義

【0031】

本発明の実施には、特に断りのない限り、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ及び免疫学の従来技術を用いるが、これらは、当業者の技術範囲内である。このような技術は、文献で十分に説明されている。例えば、「Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)」、「DNA Cloning, Volumes I and II (D. N. Glover ed., 1985)」、「Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987)」、「Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986)」、「B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984)」、「the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)」、「Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory)」、「Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al. eds.), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987)」、「Antibodies: A Laboratory Manual, by Harlow and Lane s (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988)」、及び「Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986)」等の文献がある。

【0032】

「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、最も広い意味で互換的に使用され、モノクローナル抗体（例えば、完全長又はインタクトモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り、二重特異性抗体）を含み、特定の抗体フラグメント（本明細書でより詳細に記載される）も含まれ得る。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化及び／又はアフィニティー成熟であることがあり得る。

【0033】

「可変（ｖａｒｉａｂｌｅ）」という用語は、抗体間で可変ドメインの特定の部分の配列が広範に異なり、その部分が、特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性に使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。これは、いずれも軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメイン内の相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ：ＣＤＲ）又は超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ：ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブの重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ領域からなり、大部分がベータシート構造をとり、３つのＣＤＲによって連結され、ベータシート構造を連結するループを形成し、場合によってはベータシート構造の一部を形成する。各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接して保持され、もう一方の鎖のＣＤＲとともに抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（「Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)」参照）。定数ドメインは、抗体と抗原の結合には、直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与等、様々なエフェクター機能を示す。

【0034】

抗体は、完全長であることもでき、抗原結合部分を有する抗体のフラグメント（又は複数のフラグメント）を含むこともでき、これには、以下に限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二価ｓｃＦｖ（ｂｉ－ｓｃＦｖ）、三価ｓｃＦｖ（ｔｒｉ－ｓｃＦｖ）、Ｆｄ、ｄＡｂフラグメント（例えば、「Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ， ３４１ ：５４４－５４６ （１９８９）」、ＣＤＲ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体分子、抗体断片から形成される多特異性抗体が含まれる。また、組換え法を用いて抗体フラグメントを接合することにより産生される一本鎖抗体又は合成リンカーも本発明に包含される。この点は、「Bird et al. Science, 1988, 242:423-426. Huston et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85:5879-5883」に記載されている。

【0035】

ここで、「治療」とは、治療される個体又は細胞の自然経過を変化させようとする臨床的介入を意味し、予防のため又は臨床病理学的処置の経過中に行うことができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的結果の軽減、炎症及び／又は組織／器官損傷の予防又は軽減、疾患の進行速度の低減、疾患状態の改善又は緩和、並びに寛解又は予後の改善が挙げられる。幾つかの実施形態において、本開示の抗体は、疾患又は障害の発症を遅延させるために使用される。

【0036】

「個体」又は「対象」は、脊椎動物である。いくつかの実施形態では、脊椎動物は、哺乳動物である。哺乳動物としては、以下に限定されるものではないが、農業動物（牛等）、競技動物、ペット（ネコ、イヌ、ウマ等）、霊長類、マウス、ラット等が挙げられる。特定の実施形態において、脊椎動物は、ヒトである。

【0037】

「有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な投与量及び期間において有効な量をいう。なお、本開示の物質／分子の「有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重等のファクター、並びに個体において所望の応答を引き出すための物質／分子の能力に応じて変化し得る。また、有効量とは、治療上有益な作用が、物質／分子の毒性又は有害作用を上回る量である。一実施形態では、抗ＥＮＯ－１抗体の有効量は、１～１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、５～１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１０～５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇである。

【0038】

本明細書で使用する「治療剤」という用語は、細胞の機能を阻害若しくは阻止し、及び／又は細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、抗線維化剤、放射性同位体（例えば、²¹¹Ａｔ、¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、⁹⁰Ｙ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁵³Ｓｍ、²¹²Ｂｉ、³²Ｐ、⁶⁰Ｃ、及びルテチウム－１７７、ストロンチウム－８９及びサマリウム（¹⁵³Ｓｍ）の放射性同位体）、免疫調節剤、及び毒素を含み、毒素としては、例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の低分子毒素又は酵素活性毒素等の毒素、並びにこれらの合成類似体及び誘導体が挙げられる。

【0039】

「線維化状態」、「線維増殖状態」、「線維化疾患」、「線維増殖性疾患」、「線維化障害」、及び「線維増殖性障害」は、交換可能に使用され、線維芽細胞の調節不全な増殖若しくは活性及び／又はコラーゲン性組織の病理学的若しくは過剰な蓄積を特徴とする状態、疾患、又は障害を指す。通常、このような疾患、障害又は状態は、いずれも、抗線維化作用を有する化合物の投与による治療が可能である。線維性疾患としては、以下に限定されるものではないが、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺高血圧症、肺線維症、肺気腫、非アルコール性脂肪肝炎、膵線維症、腸線維症、心線維症、骨髄線維症、関節線維症、間質性肺疾患、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、心内膜線維症、縦隔線維症、後腹膜線維症、進行性巨大線維症（石炭労働者塵肺の合併症）、腎性全身性線維症、クローン病、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、神経線維腫症、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ－Ｐｕｄｌａｋ症候群、糖尿病性腎症、腎線維症、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、高血圧関連腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、放射線誘発性線維症、子宮平滑筋腫（子宮筋腫）、アルコール性肝疾患、肝脂肪症、肝線維症、肝硬変、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染、慢性臓器移植拒絶反応、皮膚の線維化状態、ケロイド瘢痕、デュプイトレン拘縮、エーラス－ダンロス症候群、表皮水疱性ジストロフィカ、口腔粘膜下線維症、又は線維増殖性障害等が挙げられる。

【0040】

ここで使用する「特発性肺線維症」という用語は、慢性炎症プロセスの結果であると考えられる、慢性、進行性、及び通常は、致死性の肺疾患を指す。

【0041】

ここで使用する「抗線維化剤」という用語は、抗線維化作用を有することが知られている物質を指す。この用語は、ピルフェニドン又は受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、例えば、ニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ等、又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断剤、又はＣＴＧＦ阻害剤、又は潜在性ＴＧＦ－β複合体の活性化因子を含むＴＧＦ－β及びＢＭＰ活性化経路、例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１又は細胞表面インテグリン、ＴＧＦ３受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）又はＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びこれらのリガンド、例えば、ＴＧＦ３、アクチビン、インヒビン、ノーダル、抗ミジレリアンホルモン、ＧＤＦ又はＢＭＰ、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体とも呼ばれる）、又は制御性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性正準経路の成分、又はＭＡＰＫシグナル伝達の様々なブランチ、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール－３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦ－β誘導性ＥＭＴプロセスを含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非共有性経路のメンバー、又はＨｈリガンドまたは標的遺伝子を含む正準及び非正準ヘッジホッグシグナル伝達経路、又はＷＮＴ経路の何らかのメンバー、又はＴＧＦ－βシグナル伝達に影響を与えやすいノッチ経路を阻害しやすい抗線維化化合物から選択される。

【0042】

本開示の医薬は、局所的又は全身的に適用しうる。また、本開示の医薬は、組み合わせて、又は補因子とともに投与してもよい。本開示の医薬は、本開示の医薬が標的部位に通常存在する物質である場合、正常レベルを回復させるのに十分な量で投与してもよく、又は標的部位において正常レベルを上回るようにレベルを上昇させる量で投与してもよい。

【0043】

本開示の医薬は、外因性供給源から標的部位に供給してもよく、標的部位の細胞又は標的部位と同じ生物の細胞によってｉｎ ｖｉｖｏで産生してもよい。

【0044】

本開示の医薬は、任意の生理学的に適切な製剤であってよい。これらは、注射によって、局所的に、吸入によって、経口的に、又は任意の他の有効な手段によって生物に投与してもよい。

【0045】

また、過剰な線維症の形成及び維持を抑制又は阻害するための上述した医薬及び方法は、不適切な線維症の形成を抑制又は阻害するために使用してもよい。例えば、これらによって、肝臓、腎臓、肺、心臓及び心膜、眼、皮膚、口、膵臓、胃腸管、脳、乳房、骨髄、骨、泌尿生殖器、腫瘍、又は創傷に生じる状態を治療又は予防しうる。

【0046】

一般に、これらは、以下に限定されるものではないが、関節リウマチ、ループス（ｌｕｐｕｓ）、病原性線維症、線維化疾患、日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）感染後に形成されるような線維化病変、放射線損傷、自己免疫疾患、ライム病、化学療法誘発性線維症、ＨＩＶ又は感染誘発性巣状硬化症、脊椎手術瘢痕による不全背部症候群、腹部癒着術後瘢痕、及び線維嚢胞形成を含む状態に起因する線維症を治療又は予防するものであってもよい。

【0047】

本開示の実施形態は、ＥＮＯ－１抗体を含む抗体－薬物複合体、及び線維性疾患の治療におけるこれらの使用に関する。ＥＮＯ－１は、多機能性タンパク質であり、プラスミノーゲンレセプターとして多くの癌細胞の細胞表面に発現し、及び好中球、リンパ球、単球等の活性化された造血細胞上に発現することが見出されている。したがって、ＥＮＯ－１に対する抗体に基づくＡＤＣは、診断薬及び／又は治療剤として有用であり得る。

【0048】

しかしながら、治療用抗体の速やかな内在化やＡＤＣＣ活性の欠如は、抗体の無効性や耐性に帰結する可能性がある。したがって、抗ＥＮＯ－１系治療剤の治療効果を高める必要がある。１つの手法は、ペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）を抗ＥＮＯ－１抗体と結合させることである（すなわち、抗体－薬物複合体）。

【0049】

本開示の実施形態において、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントは、薬物、診断薬、又は治療剤に結合させてもよい。したがって、本明細書で使用する「抗体－薬物複合体」（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ：ＡＤＣ）という用語は、ペイロード（薬物、診断薬、又は治療剤であることができる）に結合された抗体部分（抗体全体又はその結合フラグメントであることができる）を意味してもよい。例示的なＡＤＣは、ＷＯ２０２１／２２８０４４Ａ１に記載されており、その内容は、参照によりその全体が本願に援用される。

【0050】

線維性疾患を治療する方法

【0051】

本開示は、線維性疾患、例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を治療する方法を提供する。この方法は、一般に、これを必要とする対象に、有効量のアルファ－エノラーゼ（エノラーゼ－１、ＥＮＯ－１）アンタゴニストを投与することを含む。

【0052】

幾つかの実施形態において、方法において使用されるＥＮＯ－１アンタゴニストは、以下に限定されるものではないが、以下のいずれかを含んでもよい。
（１）抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメント。
（２）抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む、抗ＥＮＯ－１キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）。ここで、抗原結合ドメインは、抗ＥＮＯ－１抗体の少なくとも一部である。
（３）Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）の一般式を有し、ここで、Ａｂは、抗ＥＮＯ－１抗体又はその結合フラグメントであり、Ｌは、リンカー又は直接結合であり、Ｄは、治療剤又は標識であり、ｍは、１～１２の整数である、ＥＮＯ－１に特異的に結合する免疫複合体。
（４）細胞内に送達され、細胞内の抗ＥＮＯ－１抗体若しくはその結合フラグメント又は抗ＥＮＯ－１ ＣＡＲとして発現される、抗ＥＮＯ－１抗体若しくはその結合フラグメント又は抗ＥＮＯ－１ ＣＡＲの核酸。

【0053】

以下の具体的な例を用いて本開示の実施形態を説明する。これらの例は、説明のためのものであり、本開示の範囲から逸脱することなく他の改変及び変形が可能であることは、当業者は理解するであろう。

【実施例】

【0054】

例１．抗ＥＮＯ－１抗体の調製

【0055】

本開示の実施形態において、抗ＥＮＯ－１抗体を作製するための一般的方法は、ＥＮＯ－１に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得ることを含む。モノクローナル抗体を産生する方法は、当分野で公知であり、ここでは、詳述しない。簡単に説明すると、適切なアジュバントを伴う抗原（ＥＮＯ－１）チャレンジをマウスに行う。その後、免疫したマウスの脾臓細胞を採取し、ハイブリドーマと融合させる。陽性クローンについて、ＥＬＩＳＡ等の任意の公知の方法を使用して、ＥＮＯ－１抗原と結合するこれらの能力を識別してもよい。一実施形態において、抗ＥＮＯ－１抗体は、ＨｕＬ２１７である。

【0056】

抗体－薬物複合体は、ＥＮＯ－１を特異的に標的化できる。これらのＡＤＣは、ＥＮＯ－１に特異的に結合する任意の抗体を使用できる。例えば、特許請求される発明のＡＤＣは、マウス若しくはヒト化抗ＥＮＯ－１抗体、又はそのｓｃＦｖ若しくはＦａｂフラグメントを使用してもよい。例示的な、抗ＥＮＯ－１抗体、例えばＨｕＬ２１７は、ＨＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＣＶＭＮ：配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ：配列番号２）、及びＨＣＤＲ３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ：配列番号３）の３つの相補的領域を有する重鎖可変ドメインと、ＬＣＤＲ１（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ：配列番号４）、ＬＣＤＲ２（ＮＡＫＴＬＰＥ：配列番号５）、及びＬＣＤＲ３（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ：配列番号：６）の３つの相補的領域を有する軽鎖可変ドメインとを含みうる。別の例示的な抗ＥＮＯ－１抗体は、ＨＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＸＶＭＮ、ここで、Ｘは、システインを除く任意のアミノ酸：配列番号７）、ＨＣＤＲ２（ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ：配列番号２）、及びＨＣＤＲ３（ＥＧＦＹＹＧＮＦＤＮ：配列番号３）の３つの相補的領域を有する重鎖可変ドメインと、ＬＣＤＲ１（ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＴ：配列番号４）、ＬＣＤＲ２（ＮＡＫＴＬＰＥ：配列番号５）、及びＬＣＤＲ３（ＱＨＨＹＧＴＰＹＴ：配列番号６）の３つの相補的領域を有する軽鎖可変ドメインとを含みうる。

【0057】

本開示の実施形態において、抗体は、マウス抗体であってもよい。あるいは、抗体は、キメラ抗体（例えば、マウス可変領域に結合されたヒト定常領域）又はヒト化抗体（例えば、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域にグラフトされたマウスＣＤＲ）又は完全なヒト抗体であってもよい。

【0058】

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマからＣＤＲ配列を取得し、ＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列にクローニングしてヒト化抗体を産生することによりヒト化してもよい。ＣＤＲ配列の同定には、当分野で知られている一般的な方法を用いうる。本発明におけるＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームにより同定される。まず、抗ＥＮＯ－１のハイブリドーマ（例えば、マウスハイブリドーマ）を作製した。このようなハイブリドーマは、モノクローナル抗体を作製するための標準的なプロトコルで作製してもよい。次に、ハイブリドーマの全ＲＮＡを、例えば、ＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬を用いて単離した。次に、例えば、第一鎖ｃＤＮＡ合成キット（Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ）及びオリゴ（ｄＴ₂₀）プライマー又はＩｇ－３’定常領域プライマーを用いて、全ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。

【0059】

次に、免疫グロブリン遺伝子の重鎖及び軽鎖可変領域をｃＤＮＡからクローニングした。例えば、マウスハイブリドーマｃＤＮＡから、マウスＩｇ－５’プライマーセット（Ｎｏｖａｇｅｎ）を用いて、ＰＣＲにより、抗ＥＮＯ－１ｍＡｂのＶＨ及びＶＬ可変領域を増幅した。ＰＣＲ産生物は、ＣｌｏｎｅＪｅｔ（商標）ＰＣＲクローニングキット（Ｆｅｒｍｅｎｔｓ）を用いて適切なベクター（例えばｐＪＥＴ１．２ベクター）に直接クローニングしてもよい。ｐＪＥＴ１．２ベクターは、致死性挿入物（ｌｅｔｈａｌ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ）を含んでおり、目的の遺伝子がこの致死性領域にクローニングされた場合のみ、選択条件に耐える。これにより、組換えコロニーの選択が容易になる。最後に、組換えコロニーから目的のクローンを選別し、これらのクローンのＤＮＡを単離し、塩基配列を解析した。免疫グロブリン（ＩＧ）の塩基配列は、国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（ＩＧＭＴ）のウェブサイトで解析できる。

【0060】

抗体の発現と精製

【0061】

抗体産生のために、単離されたクローンは、任意の適切な細胞で発現させてもよい。一例として、Ｆ２９３細胞（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に抗ＥＮＯ－１ｍＡｂ発現プラスミドをトランスフェクトし、７日間培養した。抗ＥＮＯ－１抗体は、プロテインＡアフィニティーカラム（ＧＥ）を用いて培養液から精製した。タンパク質濃度は、Ｂｉｏ－Ｒａｄタンパク質アッセイキットを用いて測定し、当分野で既知の手順又は製造業者の指示に従って、１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥで解析してもよい。

【0062】

例２．ヒト及びマウスの線維化肺におけるＥＮＯ－１の過剰発現

【0063】

この例では、ＥＮＯ－１免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を使用して、ＥＮＯ－１が線維化肺において異常に発現されるか否かを判定した。図１Ａに示す、ホルマリン固定、パラフィン包埋（ｆｏｒｍａｌｉｎ－ｆｉｘｅｄ， ｐａｒａｆｆｉｎ－ｅｍｂｅｄｄｅｄ：ＦＦＰＥ）肺組織サンプルは、商業的供給元から購入した。１個の正常ヒト肺ＦＦＰＥ組織切片は、ＢｉｏＣｈａｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ社（米国カリフォルニア州ニューアーク）及びＵＳ Ｂｉｏｍａｘ社（米国メリーランド州ダーウッド）から入手した。３個のヒト線維化肺ＦＦＰＥスライドは、ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（米国メリーランド州ロックビル）から入手した。ＥＮＯ－１の発現は、ヒト線維化肺では上昇したが、正常肺では上昇しなかった。定量的結果を図１Ｂに示す。

【0064】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症は、ヒトの線維性疾患である特発性肺線維症の最も一般的な実験モデルである。７～９週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスにブレオマイシン（３ｍｇ／ｋｇ）を単回気管内投与した。２１日後、肺をＥＮＯ－１ＩＨＣ染色のために採取した。図１Ｃは、偽薬群と比較して、ブレオマイシン群（ＢＬＭ）でＥＮＯ－１が過剰発現していることを示している。定量的結果を図１Ｄに示す。

【0065】

例３．ＥＮＯ－１抗体のＩＰＦ疾患モデル

【0066】

ＨｕＬ２１７をＣ５７ＢＬ／６マウスのブレオマイシン誘発肺線維症で評価した。７～９週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ブレオマイシン（３ｍｇ／ｋｇ）を単回気管内投与した。マウスを無作為に３群に分け、それぞれ４個体を偽薬群、７個体をブレオマイシン＋ビヒクル群又はブレオマイシン＋ＨｕＬ２１７群とした。ブレオマイシンチャレンジの日を０日目とした。ＨｕＬ２１７群のマウスは、１日目、７日目、１３日目及び１９日目に静脈内注射された。その結果、ＨｕＬ２１７の投与によって、ブレオマイシン群と比較して、体重減少及び肺重量増加（図２）、Ａｓｈｃｒｏｆｔ及び炎症スコア（図３）、並びに気管支肺胞洗浄液（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ：ＢＡＬＦ）中の肺コラーゲン含量及びＴＧＦ－βレベル（図４）を、減弱できたことが示された。更に、ＨｕＬ２１７治療によって、ブレオマイシン誘導マウスの肺における筋線維芽細胞の蓄積が減少した（図５）。ＨｕＬ２１７の抗炎症効果を調べるために、フローサイトメトリーを用いて、ＢＡＬＦにおける肺への単球及び好中球の動員を解析した。図６は、ＨｕＬ２１７（ブレオマイシン注射の２時間前に静脈内注射）が、４日目にブレオマイシン誘導マウスの肺への単球及び好中球の動員を減少させたことを示した。

【0067】

例４．肺線維芽細胞に対するＥＮＯ－１抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果

【0068】

初代マウス肺線維芽細胞を雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスから単離し、初代ヒト肺線維芽細胞をＬｏｎｚａ社（英国、ロンドン）から購入した。両方の細胞をＴＧＦ－βで処理して遊走を誘導した。図７は、ＨｕＬ２１７がＴＧＦ－βで処理した初代肺線維芽細胞の遊走能を用量依存的に低下させたことを示している。正常（ＮＨＬＦ）又はＩＰＦ患者（ＤＨＬＦ－ＩＰＦ）から単離した初代ヒト肺線維芽細胞を用いて、ＨｕＬ２１７のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗線維化作用を更に検証した。ＨｕＬ２１７は、ＴＧＦ－β刺激ＮＨＬＦ（図８）又はＤＨＬＦ－ＩＰＦ（図９）において、コラーゲン、ＴＧＦ－β１及びＶＥＧＦの分泌を用量依存的に減少させることができた。

【0069】

要約すると、ブレオマイシンマウスにおいて、ＨｕＬ２１７は、体重減少及び肺重量増加、並びに肺の線維化病変及びコラーゲン沈着を有意に減弱した。ＴＧＦ－β及び単球の上昇もまた、ＢＡＬＦにおいて減少した。ＨｕＬ２１７は、初代マウス肺筋線維芽細胞における細胞遊走、コラーゲン及びＴＧＦ－βの分泌を有意に減少させることができた。

【0070】

別段の定義がない限り、ここで使用する全ての専門用語及び科学用語並びに略語は、本発明の分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本発明を実施するために、ここに記載されるものと類似する又は等価な任意の組成物、方法、キット、及び情報を伝達するための手段を使用でき、ここでは、好ましい組成物、方法、キット、及び情報を伝達するための手段を開示している。

【0071】

ここで引用される全ての参考文献は、法が許す限り、参照によりここに援用される。これらの参考文献の考察は、単にこれらの著者によってなされた主張を要約することを意図している。いずれの参考文献（又は文献の一部）も、これらが先行技術であると認めるものではない。出願人は、引用された文献の正確性及び適切性に異議を唱える権利を留保する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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【国際調査報告】