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特表2024-531479凍結乾燥製剤溶液および凍結乾燥製剤、ならびにそれらの方法および使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-29
(54)【発明の名称】凍結乾燥製剤溶液および凍結乾燥製剤、ならびにそれらの方法および使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4168 20060101AFI20240822BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240822BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20240822BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240822BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240822BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4168
A61K9/08
A61K9/19
A61K47/10
A61K47/26
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024513054
(86)(22)【出願日】2022-08-26
(85)【翻訳文提出日】2024-04-26
(86)【国際出願番号】 CN2022115176
(87)【国際公開番号】W WO2023025291
(87)【国際公開日】2023-03-02
(31)【優先権主張番号】202110996128.8
(32)【優先日】2021-08-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517319271
【氏名又は名称】アセンタウィッツ ファーマシューティカルズ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000970
【氏名又は名称】弁理士法人 楓国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ユ ジビン
(72)【発明者】
【氏名】デュアン ジャンーシン
(72)【発明者】
【氏名】ツァイ シャオホン
(72)【発明者】
【氏名】ファン チィーロン
(72)【発明者】
【氏名】シェン グァンビン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA07
4C076AA29
4C076BB13
4C076CC27
4C076DD23D
4C076DD25Z
4C076DD37
4C076DD38
4C076DD67
4C076DD67D
4C076GG06
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC38
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA17
4C086MA44
4C086MA65
4C086MA66
4C086NA05
4C086ZB26
(57)【要約】
本発明では、凍結乾燥製剤溶液および凍結乾燥製剤、ならびにそれらの方法および使用を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式Ｉの化合物、水、およびｔｅｒｔ－ブタノールを含む溶液であって、【化15】
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、１ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である、
溶液。
【請求項2】
高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、下記式Ｉの化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、および賦形剤を含み、【化16】
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である、
溶液。
【請求項3】
前記式Ｉの化合物が、【化17】
【請求項4】
前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ以上１６０ｍｇ／ｍｌ以下であり、好ましくは、前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上５０ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上２５ｍｇ／ｍｌ以下であり、
より好ましくは、前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上１５ｍｇ／ｍｌ以下であり、
さらに好ましくは、前記溶液における前記式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上１０ｍｇ／ｍｌ以下である、
請求項１または２に記載の溶液。
【請求項5】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率が、１～９９％の範囲、好ましくは５～９５％の範囲、より好ましくは３０～６０％の範囲であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌの範囲、好ましくは３９．２５～７４５．７５ｍｇ／ｍｌの範囲、より好ましくは２３５．５～４７１ｍｇ／ｍｌの範囲である、
請求項１または２に記載の溶液。
【請求項6】
前記賦形剤が、（１つまたは複数の）糖類、（１つまたは複数の）ポリオール、（１つまたは複数の）ポリビニルピロリドン、（１つまたは複数の）タンパク質、（１つまたは複数の）ポロキサマー、またはこれらの組合せから選択され、前記（１つまたは複数の）糖類は、スクロース、デキストラン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、トレハロース、ラクトース、マルトース、およびグルコースから選択され、
前記（１つまたは複数の）ポリオールは、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、およびアドニトールから選択され、
前記（１つまたは複数の）タンパク質は、アルブミン、好ましくはウシ血清アルブミンおよびヒトアルブミンから選択され、
前記（１つまたは複数の）ポロキサマーは、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８８、およびポロキサマー４０７から選択される、
請求項２に記載の溶液。
【請求項7】
前記賦形剤がスクロースおよびマンニトールから選択され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、２０～３００ｍｇ／ｍｌの範囲、好ましくは４０～１００ｍｇ／ｍｌの範囲、より好ましくは６０～８０ｍｇ／ｍｌの範囲、さらに好ましくは６０～７０ｍｇ／ｍｌの範囲である、請求項２に記載の溶液。
【請求項8】
前記式Ｉの化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：（０．５～２０）の範囲、好ましくは１：（１～１５）の範囲、より好ましくは１：（２～１２．５）の範囲、さらに好ましくは１：（５～１０）の範囲である、請求項２に記載の溶液。
【請求項9】
塩酸、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、クエン酸、リン酸、乳酸、酒石酸、コハク酸、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、またはこれらの混合物から選択されるｐＨ調整剤をさらに含む、請求項１または２に記載の溶液。
【請求項10】
高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、およびスクロース、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、およびマンニトール
を含み、
【化18】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における前記式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌである、
溶液。
【請求項11】
高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、およびｐＨ調整剤、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、マンニトール、およびｐＨ調整剤
を含み、
【化19】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における前記式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌであり、
前記ｐＨ調整剤の含有量が、前記溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である、
溶液。
【請求項12】
高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、および重炭酸ナトリウム、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、マンニトール、および重炭酸ナトリウムからなり、
【化20】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における前記式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌであり、
前記重炭酸ナトリウムの含有量が、前記溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である、
溶液。
【請求項13】
前記溶液において、スクロースまたはマンニトールに対する化合物Ｉ－１の質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５である請求項１０、１１または１２に記載の溶液。
【請求項14】
下記式Ｉの化合物、賦形剤、および残留溶媒構成成分を含む凍結乾燥製剤であって、【化21】
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満であり、
前記残留溶媒構成成分は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールである、
凍結乾燥製剤。
【請求項15】
下記式Ｉの化合物、賦形剤、残留溶媒構成成分、およびｐＨ調整剤を含む凍結乾燥製剤であって、【化22】
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満であり、
前記残留溶媒構成成分は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールである、
凍結乾燥製剤。
【請求項16】
下記式Ｉの化合物および賦形剤を含む凍結乾燥製剤であって、【化23】
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満である、
凍結乾燥製剤。
【請求項17】
前記式Ｉの化合物が、【化24】
【請求項18】
請求項１４から１６のいずれかに記載の凍結乾燥製剤であって、前記賦形剤が、糖類、ポリオール、ポリビニルピロリドン、タンパク質、ポロキサマー、またはこれらの組合せであり、前記糖類は、スクロース、デキストラン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、トレハロース、ラクトース、マルトース、およびグルコースから選択され、
前記ポリオールは、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、およびアドニトールからなる群から選択され、
前記タンパク質は、アルブミン、好ましくはウシ血清アルブミンおよびヒトアルブミンから選択され、
前記ポロキサマーは、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８８、およびポロキサマー４０７から選択される、
凍結乾燥製剤。
【請求項19】
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２％以下、より好ましくは１％以下、さらに好ましくは０．５％以下であり、前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１％以下、より好ましくは０．５％以下である、
請求項１４から１８のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項20】
前記式Ｉの化合物と前記賦形剤との質量比率が１：（０．５～２０）、好ましくは１：（１～１５）、より好ましくは１：（２～１２．５）、さらに好ましくは１：（５～１０）である、請求項１４から１８のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項21】
請求項１４から１８のいずれかに記載の凍結乾燥製剤であって、前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、５．５５ｍｇ／ｃｍ３以上１７７．７７ｍｇ／ｃｍ３以下、好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上２７．７７ｍｇ／ｃｍ３以下、さらに好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上１６．６６ｍｇ／ｃｍ３以下、さらにより好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上１１．１１ｍｇ／ｃｍ３以下であり、または、
前記凍結乾燥製剤における前記式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上１４５．４５ｍｇ／ｃｍ３以下、好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上４５．４５ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上２２．７３ｍｇ／ｃｍ３以下、さらに好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上１３．６４ｍｇ／ｃｍ３以下、さらにより好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上９．０９ｍｇ／ｃｍ３以下である、
凍結乾燥製剤。
【請求項22】
下記化合物Ｉ－１、賦形剤、残留水および残留ｔｅｒｔ－ブタノールから本質的になる凍結乾燥製剤であって、【化25】
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記式Ｉ－１の化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５であり、
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２％以下、より好ましくは１％以下、さらに好ましくは０．５％以下であり、
前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１％以下、より好ましくは０．５％以下である、
凍結乾燥製剤。
【請求項23】
下記式の化合物、賦形剤、残留水、残留ｔｅｒｔ－ブタノール、およびｐＨ調整剤から本質的になる凍結乾燥製剤であって、【化26】
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記式Ｉ－１の化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５であり、
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２％以下、より好ましくは１％以下、さらに好ましくは０．５％以下であり、
前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１％以下、より好ましくは０．５％以下であり、
前記ｐＨ調整剤は重炭酸ナトリウムであり、その含有量が０．０１～０．１０ｍｇ／ｃｍ３の範囲である、
凍結乾燥製剤。
【請求項24】
下記式の化合物および賦形剤から本質的になる凍結乾燥製剤であって、【化27】
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記式Ｉ－１の化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５である、
凍結乾燥製剤。
【請求項25】
請求項１４から２４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤を含有する単位パッケージであって、以下の特徴、すなわち、前記凍結乾燥製剤は容量１０００ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が４０００～１６５００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量５００ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が２０００～８０００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量２５０ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が１０００～４０００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量１００ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が４００～２０００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量５０ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が５０～８００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量３０ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の含有量が１５０～６００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量２５ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が範囲１２５～５００ｍｇであり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量２０ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が１００～４００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量１８ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が９０～３６０ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量１５ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が７５～３００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量１０ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が５０～２００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量８ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が４０～１６０ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量７ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が３５～１４０ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量５ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が２５～１００ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量３ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が１５～６０ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量２ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が１０～４０ｍｇの範囲であり、または、
前記凍結乾燥製剤は容量１．５ｍｌの密封容器に含有され、前記凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、前記式Ｉの化合物の量が７．５～３０ｍｇの範囲である
特徴を有する、単位パッケージ。
【請求項26】
ＴＨ－３０２を含有する静脈注射用の注射剤であって、溶媒が水であり、溶質が、活性医薬成分ＴＨ－３０２、等張調整試薬、マンニトールまたはスクロース、ｔｅｒｔ－ブタノール、および重炭酸ナトリウムを含み、前記等張調整試薬は、グルコースおよび塩化ナトリウムから選択される、注射剤。
【請求項27】
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液を調製する方法であって、前記方法は、以下の手順、すなわち、手順１：規定量の活性医薬成分ＴＨ－３０２を秤量し、ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液に添加し、透明になるまで撹拌して第１の溶液を得た、
手順２：規定量のマンニトールまたはスクロースを適量の水に溶解し、透明になるまで撹拌して第２の溶液を得た、
手順３：前記第１の溶液と前記第２の溶液とを混合し、最後に残りの規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを添加し、次いで適量の水を所定の体積まで添加し、さらに規定量の重炭酸ナトリウムを添加し、撹拌しながら均一に混合した
手順を含み、
高薬物負荷の前記凍結乾燥製剤の前記溶液における前記活性医薬成分ＴＨ－３０２の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ超５００ｍｇ／ｍｌ以下であり、
高薬物負荷の前記凍結乾燥製剤の前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率が１～９９％の範囲であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌの範囲であり、
高薬物負荷の前記凍結乾燥製剤の前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、２０～３００ｍｇ／ｍｌの範囲であり、
高薬物負荷の前記凍結乾燥製剤の前記溶液におけるＴＨ－３０２と、スクロースまたはマンニトールとの質量比率が、１：（０．５～２０）の範囲であり、
前記ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率が、３０～９０％の範囲であり、
高薬物負荷の前記凍結乾燥製剤の前記溶液における重炭酸ナトリウムの含有量が、０．０１～０．１０ｍｇ／ｍｌの範囲である、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液を調製する方法。
【請求項28】
高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製する方法であって、前記方法は、以下の手順、すなわち、予備凍結乾燥：請求項１から１３のいずれか一項に記載の溶液を適量、凍結乾燥システムに入れ、予備凍結乾燥するが、この予備凍結乾燥プロセスは、温度を一定時間０℃に保持し、温度を一定時間－２０～－５５℃に保持することを含み、
一次乾燥：前記予備凍結乾燥の後、温度を－１０～１０℃まで上げ、その温度を一定時間保持し、真空状態を維持することにより乾燥を行い、
二次乾燥：前記一次乾燥の後、温度を２０～４０℃まで上げ、その温度を一定時間保持し、真空状態を維持することにより乾燥を行う
手順を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＴＨ－３０２を用いた凍結乾燥製剤の開発に関し、医薬製剤の技術分野に属する。
【背景技術】
【0002】
ＴＨ－３０２、すなわち２－ニトロイミダゾールのプロドラッグは、２００６年にスレッショルド・ファーマシューティカルズ社（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）の研究者らによって設計、合成され、高い細胞毒性を有する選択的な低酸素活性化ＤＮＡのアルキル化剤（国際公開第２００７００２９３１号、Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ ａｌｋｙｌａｔｏｒ ｐｒｏｄｒｕｇｓ）である。ＴＨ－３０２は、腫瘍の低酸素領域において、または酸による活性化により、アルキル化剤活性を有するジブロモイソホスファミドクロルメチンに変換され得るが、正常酸素圧または正常なｐＨの条件下ではほとんど不活性である。
【0003】
スレッショルド・ファーマシューティカルズ社の研究者らは、２００７年に予備凍結乾燥製剤および注射製剤を設計、開発し（国際公開第２００８０８３１０１号、Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ ａｌｋｙｌａｔｏｒ ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ）、それを第Ｉ相臨床試験で投与した。
【0004】
ＴＨ－３０２（１００ｍｇ）およびスクロース（１ｇ）の溶液（２０ｍＬ）を凍結乾燥バイアルに添加し、凍結乾燥して、薬物負荷が５ｍｇ／ｃｍ３未満のＴＨ－３０２の凍結乾燥単位投薬剤が製造された。ヒトに投与するために、この単位投薬剤は５％デキストロース注射剤に溶解され、この溶液の適量が患者に投与された。
【0005】
ＴＨ－３０２を無水エタノールに溶解して、５％ＴＨ－３０２を含有する医薬的に許容される液体製剤が製造された。本明細書で用いる場合、５％ＴＨ－３０２の溶液は、１００ｍＬの溶媒（例えばエタノール）に５ｇのＴＨ－３０２を含有する。
【0006】
ＴＨ－３０２の第Ｉ相臨床試験におけるヒト患者のためのフォローアップ投薬計画では、凍結乾燥製剤が使用されている。注射用のＴＨ－３０２凍結乾燥製剤は、１００ｍＬのガラスバイアルにおいて、薬物負荷が１００ｍｇ／１００ｍｌで調製され、２～８℃の制御温度下で貯蔵される。使用時には、凍結乾燥製剤を含有するバイアルに５％デキストロース２５０ｍＬが注入され、３０分以内に注入ポンプを介して静脈内に注入された。
【0007】
スレッショルド・ファーマシューティカルズ社の研究者らは、２００９年に注射製剤を設計、開発した（国際公開第２０１００４８３３０号、Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｕｓｉｎｇ ｈｙｐｏｘｉａ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇｓ）。
【0008】
５０ｍｇ／ｍｌ～約３００ｍｇ／ｍｌのＴＨ－３０２、非イオン性界面活性剤（ツイーン８０など）、およびキャリアとしてエタノールを含有する液体製剤はさらに、ジメチルアセトアミドを含有し得る。
【0009】
臨床試験は２００７年から開始されて現在まで続けられており、多種の固形腫瘍および血液がんを網羅し、投与計画も多様である。様々な用量のＴＨ－３０２が単独で、または他のがん治療薬と組み合わせて使用されている。現在、米国で登録されている種々のがんおよび腫瘍を治療する治療薬としてＴＨ－３０２を使用した２７の臨床試験がある（ＮＣＴ０２４０２０６２、ＮＣＴ０２０２０２２６、ＮＣＴ０２０７６２３０、ＮＣＴ０１３８１８２２、ＮＣＴ０２０９３９６２、ＮＣＴ０１４４００８８、ＮＣＴ０２２５５１１０、ＮＣＴ０２３４２３７９、ＮＣＴ０１８６４５３８、ＮＣＴ０１１４９９１５、ＮＣＴ０２４３３６３９、ＮＣＴ００７４３３７９、ＮＣＴ０１４８５０４２、ＮＣＴ０１７２１９４１、ＮＣＴ０２０４７５００、ＮＣＴ００７４２９６３、ＮＣＴ０１４９７４４４、ＮＣＴ００４９５１４４、ＮＣＴ０１７４６９７９、ＮＣＴ０１１４４４５５、ＮＣＴ０１４０３６１０、ＮＣＴ０１５２２８７２、ＮＣＴ０１８３３５４６、ＮＣＴ０２５９８６８７、ＮＣＴ０３０９８１６０、ＮＣＴ０２４９６８３２、ＮＣＴ０２７１２５６７）。これらの臨床試験により、ＴＨ－３０２が広域スペクトルの抗がん薬候補であることが示されている。
【0010】
上述の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験を実施した結果、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社の研究者らは、種々の適応症を治療するためのＴＨ－３０２の有効量が以下の通りであることを見出した（国際公開第２０１２１３５７５７号、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ）。
【0011】
静脈注射を介して投与される１日用量は１２０ｍｇ／ｍ２～４６０ｍｇ／ｍ２、および
静脈注射を介して投与される週間用量は４８０ｍｇ／ｍ２～約６７０ｍｇ／ｍ２、または例えば５７５ｍｇ／ｍ２。
静脈注射を介して投与される週間用量は４８０ｍｇ／ｍ２～約６７０ｍｇ／ｍ２、または例えば５７５ｍｇ／ｍ２。
【0012】
上記の有効量によると、普通の人（身長：１７５ｃｍ、体重：７５ｋｇ）の場合、それに相当する等価体表面積ＢＳＡ（ｂｏｄｙ ｓｕｒｆａｃｅ ａｒｅａ）（ｍ２）＝（［身長（ｃｍ）×体重（ｋｇ）］／３６００）１／２＝１．９０となるため、それに対応する用量は２２８～１２７３ｍｇである。この場合、薬物負荷が５ｍｇ／ｃｍ３未満の凍結乾燥製剤を使用すると（５０ｍｌの凍結乾燥バイアルに１００ｍｇのＴＨ－３０２および１ｇのスクロースを含有する水溶液２０ｍＬを添加し凍結乾燥して、ＴＨ－３０２の凍結乾燥単位投薬剤を製造すると、薬物負荷は５ｍｇ／ｃｍ３未満である）、少なくとも３バイアルが必要であり、より高い用量で使用すると、１３バイアルが必要になる可能性がある。これは臨床使用には不都合であり得、患者にとって過度に高い薬物治療費を伴うことでもある。
【0013】
上記の理由から、後続の第ＩＩ／ＩＩＩ相臨床試験のほとんどにおいて、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社の研究者らは、濃縮注射剤を使用してきた（国際公開第２０１５０１３４４８号、Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ａｎｄ ａ ｔａｘａｎｅ）。
【0014】
試験で使用するためのＴＨ－３０２（投与のための溶液用濃縮物）は、ＴＨ－３０２の滅菌液体製剤である。それは、７０％無水エタノール、２５％ジメチルアセトアミド、および５％ポリソルベート８０を用いて製剤化される。ＴＨ－３０２は、ゴム栓とフリップ・オフ・シールが付いた１０ｍＬガラスバイアルで、提供者によって供給される。ＴＨ－３０２医薬品は、透明で、無色から薄い黄色の溶液であり、可視微粒子を本質的に含まない。シングルユースの各バイアルは、ＴＨ－３０２の名目上の総量が６５０ｍｇの場合、（１００ｍｇ／ｍＬに相当する）ＴＨ－３０２医薬品の名目充填体積６．５ｍＬを含有しており、明確にラベルが付けられる。そのラベルには、ロット番号、投与経路、必要とされる貯蔵条件、提供者の名前、および適用される規制によって必要とされる適当な予防ラベルが記載されている。薬局のマニュアルに従って、投与前の希釈が必要である。
【0015】
ＴＨ－３０２医薬品は、所望の最終濃度を得るために、投与ごとに、市販の５％デキストロース水溶液で、総体積５００ｍＬ（総用量が≧１０００ｍｇの場合は１０００ｍＬ）に投与前に希釈される。ＴＨ－３０２の各用量は、ジ（２－エチルヘキシル）フタラート（ｄｉ（２－ｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ）ｐｈｔｈａｌａｔｅ：ＤＥＨＰ）を含有していない５％デキストロース水溶液（無ＤＥＨＰ）を用いて調製され、ＤＥＨＰを含有していない静脈注入の投与器具を使用して、静脈点滴を介して投与される。
【0016】
明らかに、臨床試験において薬物負荷が１００ｍｇ／ｍｌの濃縮注射剤を使用する方が、薬物負荷が５ｍｇ／ｃｍ３未満の凍結乾燥製剤を使用するよりも都合がよい。前者の場合、ほとんどの患者の投薬要件を満たすのに１０ｍｌゲージのバイアルで十分であるが、後者の場合、ほとんどの患者の薬物治療要件を満たすには、１００ｍｌゲージの通常使用されるバイアルが１３本必要である。
【0017】
しかし、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社の研究者らは、薬物負荷が１００ｍｇ／ｍｌの上述の濃縮注射剤（すなわち、７０％無水エタノール、２５％ジメチルアセトアミドおよび５％ポリソルベート８０を用いて製剤化したＴＨ－３０２の濃縮注射剤）には、多量のジメチルアセトアミドが含有されていることを見出した。薬物の溶解度を高め、注射剤の安定性を向上させることができるこのアジュバントは、人体への注入後にアレルギーを引き起こしやすい（国際公開第２０１５０１３４４８号、Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ａｎｄ ａ ｔａｘａｎｅ）。
【0018】
ＴＨ－３０２の投与反応（主にジメチルアセトアミドによって誘発される）が観察されている。この反応は、ステロイドおよび抗ヒスタミン剤の治療に反応した唇の腫れとじんま疹を特徴としている。デキサメタゾン（または同等物）などのステロイドを、投与前の制吐薬投与計画に含めることが推奨されている。過敏症の症状および兆候としては、発熱、筋肉痛、頭痛、発疹、かゆみ、じんま疹、血管浮腫、胸部不快感、呼吸困難、咳、チアノーゼ、および低血圧が挙げられる。上記反応の性質と重症度により、治療の中止が必要とされる場合は、その反応が免疫グロブリンＥ媒介のプロセスであり得るか否かを決定すべきである。アナフィラキシーまたはアナフィラキシー様の反応を示唆する上気道閉塞または低血圧などの症状がある場合は、抗ヒスタミン剤（例えばジフェンヒドラミン２５～５０ｍｇの経口、筋肉内もしくは低速静注、または同等物）および低用量のステロイド（例えばヒドロコルチゾン、１００ｍｇの静注、または同等物）による治療を、必要に応じて研究者らが検討すべきである。事象が明らかにアナフィラキシーである場合は、標準治療と同様に、エピネフリン（１／１０００、０．３～０．５ｍＬの皮下投与、または同等物）も検討すべきである。気管支痙攣の場合は、吸入β作動剤を検討すべきである。特異体質反応はまた、重症度に応じて、抗ヒスタミン剤および低用量のステロイドで治療してもよい。ＴＨ－３０２の投与に対する反応は、同様の方法で評価および治療すべきである。ＴＨ－３０２に対する全ての反応について、研究者らはメディカルモニターに相談して、将来の治療のための適当な行動方針を決定すべきである。
【0019】
高濃度の濃縮ＴＨ－３０２注射剤により、凍結乾燥製剤における低薬物負荷の問題は解決された。しかし、有害反応を引き起こす可能性のある上述のアジュバントの使用により、臨床試験において関連する有害反応が発生して、患者に対する薬物治療の危険性が高まる可能性がある。
【0020】
凍結乾燥の前に水およびスクロースの溶液にＴＨ－３０２を溶解することによって現在まで開発されてきた凍結乾燥製剤は、他のアジュバントを含まない。しかし、凍結乾燥前の溶液の薬物含有量が低すぎるため、臨床試験や後続の商業生産または販売における使用要件を満たし得る高薬物負荷の凍結乾燥製剤を得ることは不可能である。
【0021】
上述の課題を実際に解決するためには、当該分野の技術者によって、高薬物負荷のＴＨ－３０２の凍結乾燥製剤、およびそのような凍結乾燥製剤用の溶液が開発されることが、なお必要とされている。
【発明の概要】
【0022】
本発明の発明者らは、多くの実験と継続的な最適化の結果、ＴＨ－３０２および他の同様の薬物を含有する凍結乾燥製剤を製造するための新しい高薬物濃度溶液の製剤処方、および関連する凍結乾燥製剤、ならびにその方法を提案した。
【0023】
本発明の本質の理解を容易にするために、以下に、発明者らの研究プロセスを簡単に説明する。
【0024】
溶媒およびアジュバントの適切な組合せをスクリーニングして高濃度
（ＴＨ－３０２）溶液を調製するために、本発明者らは、最初、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社が開発した薬物負荷が１００ｍｇ／ｍｌの濃縮注射剤、すなわち、７０％無水エタノール、２５％ジメチルアセトアミドおよび５％ポリソルベート８０を用いて製剤化したＴＨ－３０２の濃縮注射剤を改変することを考えた。
【化1】
【0025】
溶媒として無水エタノールおよび水を直接使用し、スクロースを添加した場合、得られた溶液は凍結乾燥することができず、粘性油しか得られない場合もあれば、溶液の薬物含有量の増加が限定的で、要件を満たすことができない場合もあることが見出された。したがって、研究者らは、エタノール＋水という単純なスキームは放棄した。
【0026】
溶媒として無水エタノールおよび水を直接使用し、スクロースまたは他の賦形剤を添加し、添加する可溶化剤（ＰＥＧ、ツイーン、スパンなど）の種類と量を調整した場合は、可溶化剤を少量添加することで溶解度を高めることができるが、その増加は非常に限定的であることが見出された。したがって、高薬物負荷の要件を満たすことができない。
【0027】
研究者らはまた、ｐＨ値が溶解度に影響し得ることを考慮して、種々の単一の従来の緩衝溶液において、ＴＨ－３０２の溶解度についても検討した。溶液のｐＨ値はＴＨ－３０２の溶解度にほとんど影響を及ぼさないことが見出された。ｐＨ値を調整することによって、水溶液におけるＴＨ－３０２の溶解度を向上させることはできない。様々な添加物を有する様々なｐＨ値の水溶液におけるＴＨ－３０２の溶解度データを、下記表１に示す。
【0028】
【表1】
【0029】
本発明者らは、多数の実験を行うことにより、スレッショルドに従って、単にエタノール、様々なｐＨ値の水溶液、またはエタノール＋水を溶媒として使用するだけでは、凍結乾燥を介して高薬物負荷のＴＨ－３０２凍結乾燥製剤を作製するための要件を満たす高溶解度溶液を開発することは不可能であることを確認した。
【0030】
本発明者らは、多くの試みの結果、水またはｔｅｒｔ－ブタノール単独では、ＴＨ－３０２の溶解度は低いことを見出した。しかし、本発明者らは、意外にも、水とｔｅｒｔ－ブタノールとの混合溶媒ではＴＨ－３０２の溶解度が非常に高められること、およびその溶媒の混合比率に溶解度がかなり依存していることを見出した。ｔｅｒｔ－ブタノール＋水またはｔｅｒｔ－ブタノール＋エタノールの様々な混合溶媒におけるＴＨ－３０２の溶解度データを、下記表２に示す。
【0031】
【表2】
【0032】
ｔｅｒｔ－ブタノールは無色の結晶であり、過冷却されやすく、少量の水の存在下で液体になる。樟脳のような臭いがあり、吸湿性がある。その中国名としては、２－メチル－２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、トリメチルメタノールなどが挙げられる。ｔｅｒｔ－ブタノールは融点が２５．７℃なので、室温では無色で透き通った液体または無色の結晶である。
【0033】
一般的に言えば、ｔｅｒｔ－ブタノールは以下の性質を有する。
【0034】
１．高凍結点。純粋なｔｅｒｔ－ブタノールは室温（２５℃）で結晶化する場合があり、水と混合した後、氷点下数度で凍結させることもできる。純粋なｔｅｒｔ－ブタノールもｔｅｒｔ－ブタノールと水との混合物も、既存の凍結乾燥機内で完全に凍結させることができる。
【0035】
２．ｔｅｒｔ－ブタノールは蒸気圧が比較的高い。蒸気圧が高いと昇華に有利で、凍結乾燥時間が短くて済む。
【0036】
３．ｔｅｒｔ－ブタノールは、任意の比率で水と混合することができる。これは、一部の脂溶性薬物の水での溶解度を高めることができるため、極めて重要である。水溶液中で不安定な一部の薬物については、適量のｔｅｒｔ－ブタノールを添加することで、薬物の分解を抑制し、安定性を向上させることができる。
【0037】
４．ｔｅｒｔ－ブタノールは凍結乾燥が容易で、製剤中の残留含有量が少ない。凍結乾燥中、ｔｅｒｔ－ブタノールのほとんどが１回の乾燥段階で昇華し得るため、製剤中のその残留含有量は非常に低い。
【0038】
５．ｔｅｒｔ－ブタノールは凍結中に針状の結晶を形成するため、溶質の結晶化モードを変化させ、昇華を促進することができる。少量のｔｅｒｔ－ブタノールを水に添加したときに形成されるｔｅｒｔ－ブタノール－水共溶媒は、水の結晶化状態を変化させることができ、凍結中に形成される針状の結晶は大きな表面積を有する。氷の結晶の昇華により管状のチャネルが残り、これが水蒸気に対する流動抵抗を大きく低減し、昇華速度を著しく増加させる。したがって、ｔｅｒｔ－ブタノールを使用して、フリーズドライプロセス中の物質移動を加速させることができる。
【0039】
上記性質の観点から、高濃度の式Ｉの化合物を含む溶液を調製するために、溶媒としてｔｅｒｔ－ブタノール＋水を使用することができ、ｔｅｒｔ－ブタノール自体も、その固有の特性から、凍結乾燥用のアジュバントとしての使用に適していることがわかる。
【0040】
表２に示すｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒に関する結果から、ＴＨ－３０２は水溶液における溶解度が比較的低いと推測することができる。ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの濃度が増加するにつれてこの活性医薬成分の溶解度は増加し、７０％ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）で最も高い溶解度に達し、そしてさらにｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの濃度が増加するにつれて溶解度は低下すると推定される。
【0041】
これに鑑み、本発明者らは、本発明による溶媒としてｔｅｒｔ－ブタノール＋水を使用し、適切な（１つまたは複数の）賦形剤を添加することにより、高濃度ＴＨ－３０２の溶液を得るスキームを提案し、さらに、ＴＨ－３０２の高薬物負荷を有する凍結乾燥製剤、またはこの製剤に基づいたその類似体を開発した。
【0042】
本発明者らはさらに、様々な体積比率のｔｅｒｔ－ブタノールを有する溶媒がＴＨ－３０２の溶解度に及ぼす影響を調べる実験を実施した。得られた溶解度データを下記表３に示す。
【0043】
【表3】
【0044】
上記の予備実験に基づき、本発明は、ＴＨ－３０２またはその類似体を含有する以下の高濃度溶液を提供する。
【0045】
溶液は、下記式Ｉの化合物、水、およびｔｅｒｔ－ブタノールを含み、
式中、Ｒは、それぞれ独立して、Ｈ、－ＣＨ３、および－ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、それぞれ独立して、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭｓ、およびＯＴｓから選択され、
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、１ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である。
【化2】
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、１ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である。
【0046】
さらに、本発明はまた、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、下記式Ｉの化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、および賦形剤を含む溶液を提供し、
式中、Ｒは、それぞれ独立して、Ｈ、－ＣＨ３、および－ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、それぞれ独立して、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭｓ、およびＯＴｓから選択され、
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ以上１６０ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上５０ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上２５ｍｇ／ｍｌ以下であり、
より好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上１５ｍｇ／ｍｌ以下であり、
さらに好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上１０ｍｇ／ｍｌ以下である。
【化3】
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ以上１６０ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上５０ｍｇ／ｍｌ以下であり、
好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上２５ｍｇ／ｍｌ以下であり、
より好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上１５ｍｇ／ｍｌ以下であり、
さらに好ましくは、前記溶液における式Ｉの化合物の含有量が、８ｍｇ／ｍｌ以上１０ｍｇ／ｍｌ以下である。
【0047】
水とｔｅｒｔ－ブタノールとは任意の比率で混和し得るので、ＴＨ－３０２および他の同様の化合物の溶解度を向上させるために、前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率は１～９９％、好ましくは５～９５％、より好ましくは３０～６０％であり、または、
前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量は、７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは３９．２５～７４５．７５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは２３５．５～４７１ｍｇ／ｍｌである。
前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量は、７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは３９．２５～７４５．７５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは２３５．５～４７１ｍｇ／ｍｌである。
【0048】
ここで、前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率１％～９９％は、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノール含有量７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌに相当し、具体的には、前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率が１％の場合、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノール含有量は７．８５ｍｇ／ｍｌである。変換係数は、ｔｅｒｔ－ブタノールの密度である。ここで、出願人が使用したｔｅｒｔ－ブタノールの密度は０．７８５ｇ／ｍｌである。実際には、様々な製造業者のｔｅｒｔ－ブタノール製品の密度は、異なる温度下で異なっており、一般的に０．７７５～０．７８６ｇ／ｍＬの間である。
【0049】
本発明による高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液は、少なくとも１つの賦形剤を含む。
【0050】
「医薬的に許容される賦形剤」という用語は、製剤中の活性医薬成分の安定性に寄与し得る任意の添加剤またはキャリアを指す。凍結乾燥製剤の調製プロセス中に、凍結乾燥に使用するための溶液に賦形剤または凍結乾燥保護剤を添加することが不可欠である。
【0051】
薬物溶液には、真空中で首尾よくフリーズドライできるものもあるが、凍結乾燥後すぐに崩壊するか、または溶けて油性物質になる可能性があるものもある。特定の薬物溶液を首尾よく凍結乾燥することにより安定した凍結乾燥製剤を得るためには、薬物と反応しないいくつかの賦形剤を添加する必要がある。このような賦形剤自体は、凍結乾燥プロセスの昇華段階では昇華されず、代わりに、直接凍結乾燥されて骨格になり、そのため形態を与える役割を果たすことができる。薬物は直接、骨格の間隙に吸着するか間隙を充填することができる。または、賦形剤は、凍結乾燥製品の溶解度および安定性を向上させることができ、もしくは、凍結乾燥製品が美的形状などを有することを可能にし得る。液体製剤にはいくつかの追加的物質を追加する必要がある。追加的物質は総称して「凍結乾燥保護剤」と呼ばれ、充填剤、増量剤、賦形剤、緩衝剤、基材、骨格などと呼ばれることもある。一般に、凍結乾燥保護剤は、薬物溶液に対して化学的に不活性でなければならない。
【0052】
凍結乾燥保護剤は、その化学的性質に応じて、以下のカテゴリーに分類することができる。
【0053】
調合物：脱脂乳、ゼラチン、タンパク質およびそれらの加水分解物、ペプチド、酵母、ブロス、デキストリン、メチルセルロース、血清、ペプトンなど。塩：チオ硫酸ナトリウム、乳酸カルシウム、グルタミン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、酢酸アンモニウム、塩化アンモニウムなど。糖類：スクロース、ラクトース、マルトース、グルコース、ラフィノース、フルクトース、ヘキソースなど。アルコール：ソルビトール、エタノール、グリセリン、マンニトール、イノシトール、キシリトールなど。酸：クエン酸、リン酸、酒石酸、アミノ酸、エチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＥＤＴＡ）など。塩基：水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウムなど。ポリマー：デキストラン、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ：ＰＶＰ）、ポロキサマーなど。その他：ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、チオ尿素など。
【0054】
上述のポリマーの重合度（分子量）は広い範囲にわたる。例として、ポリソルベートおよびポリエチレングリコールに言及する。
【0055】
ポリソルベートは、平均分子量が約５００ｇ／ｍｏｌ～約１９００ｇ／ｍｏｌの範囲であり得、好ましくは約８００ｇ／ｍｏｌ～約１６００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは約１０００ｇ／ｍｏｌ～約１４００ｇ／ｍｏｌである。ポリソルベートの非限定的な例としては、ポリソルベート－２０、ポリソルベート－２１、ポリソルベート－４０、ポリソルベート－６０、ポリソルベート－６１、ポリソルベート－６５、ポリソルベート－８１、ポリソルベート－８５、およびポリソルベート－１２０が挙げられる。好ましいポリソルベートとしては、ポリソルベート－２０、ポリソルベート－８０、およびこれらの混合物が挙げられる。
【0056】
ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ：ＰＥＧ）は、平均分子量が約２００ｇ／ｍｏｌ～約６００ｇ／ｍｏｌの範囲であり得、好ましくは約２００ｇ／ｍｏｌ～約５００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは約２００ｇ／ｍｏｌ～約４００ｇ／ｍｏｌである。ＰＥＧの非限定的な例としては、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５４０、およびＰＥＧ６００が挙げられる。
【0057】
ポロキサマーは、ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｃＨの一般式を有し、式中、ａおよびｃは２～１３０の範囲であり、ｂは１５～６７の範囲である。ポロキサマーは、ポリオキシエチレンを８１．８±１．９％含有し、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンエーテルのブロック共重合体である。ポロキサマーには、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８８、およびポロキサマー４０７の様々な商標があり、これらは様々な分子量のポリマーに対応しており、例えばポロキサマー１８８は、分子量が７６８０～９５１０である。
【0058】
凍結乾燥保護剤は多くの機能を果たすが、具体的には以下のようにまとめられる。
【0059】
細菌およびウイルスなどの微生物は、特定の培地で増殖し、繁殖する必要がある。しかし、微生物は培地から分離されにくいため、これらの培地では首尾よく凍結乾燥される可能性がある。培地の例としては、ブロス、脱脂乳、およびタンパク質などがある。
【0060】
一部の凍結乾燥製剤は濃度が非常に低く、乾燥物の含有量が少量である。凍結乾燥中、乾燥した構成成分は昇華気流によって取り出される。薬物濃度および乾燥物の含有量を増やして、凍結乾燥製品が比較的理想的な凝集体を形成できるようにするためには、充填剤を添加して固形物の濃度を特定の範囲内に保つ必要がある。この充填剤または賦形剤としては、スクロース、ラクトース、イノシトール、脱脂乳、加水分解タンパク質、デキストラン、ソルビトール、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが挙げられる。
【0061】
一部の生物学的活性物質は特に壊れやすく、フリーズドライ中の物理的または化学的な要因により、損傷する可能性がある。したがって、いくつかの防護剤（例えば、ジメチルスルホキシド、グリセロール、デキストラン、糖類、およびＰＶＰ）を添加して、フリーズドライ中の損傷を軽減する必要がある。
【0062】
特定の物質（例えば、マンニトール、グリシン、デキストラン、キシリトール、およびＰＶＰ）を添加することにより、製品の分解温度を上げ、凍結乾燥を容易にすることができる。
【0063】
凍結乾燥を促進するために凍結乾燥製剤のｐＨを変化させて共晶点を上昇させるには、重炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどを添加してもよい。
【0064】
製品の貯蔵安定性を向上させ、貯蔵温度を上げ、貯蔵期間を長くする目的で、ビタミンＣ、ビタミンＥ、アミノ酸、チオ硫酸ナトリウム、チオ尿素、レシチンおよび加水分解タンパク質などの酸化防止剤をいくつか添加してもよい。
【0065】
特定の物質（例えば、アミノ酸、ビタミンＫ、ビタミンＣ、チオ尿素、亜硫酸化合物、アスパラギン酸ナトリウム）を添加することにより、フリーラジカルを除去し、凍結乾燥製品の安定性を高めることができる。
【0066】
単一化合物で、凍結乾燥保護剤（賦形剤）として複数の役割を果たし得ることがわかる。
【0067】
本発明の薬物の特性により、凍結乾燥保護剤（賦形剤）は、糖類、ポリオール、ポリビニルピロリドン、タンパク質、ポロキサマー、またはこれらの組合せから選択される。
【0068】
糖類は、スクロース、デキストラン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、トレハロース、ラクトース、マルトース、およびグルコースから選択される。
【0069】
ポリオールは、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリソルベート、およびアドニトールからなる群から選択される。
【0070】
タンパク質は、アルブミン、好ましくはウシ血清アルブミンおよびヒトアルブミンから選択される。
【0071】
ポロキサマーは、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８８、およびポロキサマー４０７から選択される。
【0072】
好ましくは、賦形剤は、ＰＶＰ Ｋ１２、スクロース、マンニトール、アルブミン、またはこれらの組合せから選択される。
【0073】
一般的に言えば、同じ種類の賦形剤を組み合わせることができ、互いに反応せず、かつ薬物と反応しない賦形剤どうしを組み合わせることができる。この組合せは、薬物適合性の要件を満たすべきである。
【0074】
特に、賦形剤はスクロースおよびマンニトールから選択され、溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量は、２０～３００ｍｇ／ｍｌの範囲、好ましくは４０～１００ｍｇ／ｍｌの範囲、より好ましくは６０～８０ｍｇ／ｍｌの範囲、さらに好ましくは６０～７０ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【0075】
一般的にはスクロースとマンニトールのうちの一方のみを使用するが、一部の特殊な場合には、スクロースとマンニトールとを混合して使用することもできる。本発明の好ましい態様では、マンニトールまたはスクロースのみが使用される。
【0076】
同様に、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液におけるＴＨ－３０２と（１つまたは複数の）賦形剤との質量比率は、１：（０．５～２０）の範囲、好ましくは１：（１～１５）の範囲、より好ましくは１：（２～１２．５）の範囲、さらに好ましくは１：（５～１０）の範囲である。
【0077】
賦形剤に対するＴＨ－３０２および同様の他の化合物の質量比率は、凍結乾燥用の溶液の薬物負荷の比率である。上述の賦形剤（凍結乾燥保護剤、充填剤、または骨格）の凍結乾燥状態により、凍結乾燥後の凍結乾燥体が、（１つまたは複数の）賦形剤から得られた骨格を有しており、（１つまたは複数の）薬物が、その骨格に吸着または装填されることが理解されよう。したがって、凍結乾燥前の薬物溶液の薬物負荷比率、すなわち、（１つまたは複数の）賦形剤に対するＴＨ－３０２の質量比率は、重要な指標である。
【0078】
適当な薬物負荷比率とは、凍結乾燥製剤を凍結乾燥した後、薬物が骨格に均一に吸着され、そして薬物が骨格の間隙および細孔表面に良好に分布し、そのため、後続の（５％デキストロース注射剤、生理食塩液などを用いた）再構成の間に、凍結乾燥製剤が迅速かつ良好に溶解して、注射投与にむけて準備され得ることを意味する。
【0079】
「医薬的に許容される緩衝剤」とは、溶液のｐＨ値をほぼ一定のレベルに維持することを可能にし、溶液中の活性医薬成分の安定性を向上させるために使用される弱酸または弱塩基を指す。
【0080】
本発明による高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液はまた、少なくとも１つの緩衝剤を含むこともでき、緩衝剤は、クエン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、乳酸リチウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、乳酸カルシウム、リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸カルシウム、マレイン酸リチウム、マレイン酸ナトリウム、マレイン酸カリウム、マレイン酸カルシウム、酒石酸リチウム、酒石酸ナトリウム、酒石酸カリウム、酒石酸カルシウム、コハク酸リチウム、コハク酸ナトリウム、コハク酸カリウム、コハク酸カルシウム、酢酸リチウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸カルシウム、またはこれらの混合物からなる群から選択される。
【0081】
好ましくは、本発明による高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液に使用される緩衝剤は、少なくとも１つのクエン酸緩衝剤である。適切なクエン酸緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸リチウム一水和物、クエン酸ナトリウム一水和物、クエン酸カリウム一水和物、クエン酸カルシウム一水和物、クエン酸リチウム二水和物、クエン酸ナトリウム二水和物、クエン酸カリウム二水和物、クエン酸カルシウム二水和物、クエン酸リチウム三水和物、クエン酸ナトリウム三水和物、クエン酸カリウム三水和物、クエン酸カルシウム三水和物、クエン酸リチウム四水和物、クエン酸ナトリウム四水和物、クエン酸カリウム四水和物、クエン酸カルシウム四水和物、クエン酸リチウム五水和物、クエン酸ナトリウム五水和物、クエン酸カリウム五水和物、クエン酸カルシウム五水和物、クエン酸リチウム六水和物、クエン酸ナトリウム六水和物、クエン酸カリウム六水和物、クエン酸カルシウム六水和物、クエン酸リチウム七水和物、クエン酸ナトリウム七水和物、クエン酸カリウム七水和物、クエン酸カルシウム七水和物が挙げられる。
【0082】
本発明による高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液はまた、少なくとも１つのｐＨ調整剤を含むこともできる。
【0083】
本発明のｐＨ調整剤とは、酸またはアルカリで変化するｐＨを適当に調整するために使用される緩衝物質または緩衝溶液を指す。ｐＨ調整剤としては、塩酸、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、リン酸、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、もしくはリン酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、またはこれらの混合物が挙げられるが、それらに限定されない。添加するｐＨ調整剤の含有量は、溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である。
【0084】
ＴＨ－３０２およびその類似体が普通は酸性である（化合物の調製プロセスが酸性環境およびわずかな加水分解を伴い、調製または購入される活性医薬成分は酸性である）ため、ｐＨ調整剤は、好ましくは、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、重炭酸ナトリウム、および炭酸ナトリウムまたはアルカリ塩などの塩基から選択される。
【0085】
当然、ＴＨ－３０２およびその類似体のｐＨは、他の要因によりアルカリ性であることもあり得る。この場合、ｐＨを調整するために、酸または酸性塩（硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウムなど）を添加する必要がある。
【0086】
下記式Ｉの化合物は、
から選択され、より好ましくはＴＨ－３０２である。
【化4】
【0087】
式Ｉの化合物の具体的な合成方法およびそれに対応するスペクトルデータは、国際公開第２００７００２９３１号（中国特許出願公開第１０１５０１０５４号に相当）に開示されており、これは、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0088】
式Ｉの化合物および上記の具体的な３つの化合物に関連する生理化学的特性および生物活性については、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社が所有する特許（国際公開第２０１６０１１１９５号、同２００４０８７０７５号、同２００７００２９３１号、同２００８１５１２５３号、同２００９０１８１６３号、同２００９０３３１６５号、同２０１００４８３３０号、同２０１２１４２５２０号、同２００８０８３１０１号、同２０２０００７１０６号、同２０２０１１８２５１号、同２０１４１６９０３５号、同２０１３１１６３８５号、同２０１９１７３７９９号、同２０１６０８１５４７号、同２０１４０６２８５６号、同２０１５０６９４８９号、同２０１２００６０３２号、同２０１８０２６６０６号、同２０１００４８３３０号、同２０１５１７１６４７号、同２０１３０９６６８７号、同２０１３１２６５３９号、同２０１３０９６６８４号、同２０１２００９２８８号、同２０１２１４５６８４号、同２０１６０１４３９０号、同２０１９０５５７８６号、同２０１２１３５７５７号、同２０１５０１３４４８号、同２０１６０１１３２８号、同２０１３１７７６３３号、同２０１６０１１１９５号、および同２０１５０５１９２１号など）を参考にしていただきたい。これらは、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0089】
上記３つの好ましい化合物は、ＴＨ－３０２と同じかまたは同様の生理化学的特性を有する。
【0090】
本発明は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、およびスクロース、
または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、およびマンニトール
を含み、
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌである、
溶液を提供する。
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、およびスクロース、
または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、およびマンニトール
を含み、
【化5】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌである、
溶液を提供する。
【0091】
本発明は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、およびｐＨ調整剤、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、マンニトール、およびｐＨ調整剤
を含み、
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌであり、
ｐＨ調整剤の含有量が、前記溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である、
溶液を提供する。
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、およびｐＨ調整剤、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、マンニトール、およびｐＨ調整剤
を含み、
【化6】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌであり、
ｐＨ調整剤の含有量が、前記溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である、
溶液を提供する。
【0092】
本発明は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液であって、前記溶液は、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、および重炭酸ナトリウム、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、マンニトール、および重炭酸ナトリウム
からなり、
水およびｔｅｒｔ－ブタノールは混合溶媒として使用され、
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌであり、
重炭酸ナトリウムの含有量が、前記溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である、
溶液を提供する。
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、および重炭酸ナトリウム、または、
下記式Ｉ－１の化合物、水、ｔｅｒｔ－ブタノール、マンニトール、および重炭酸ナトリウム
からなり、
【化7】
前記溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積含有量が、３０％、４０％、もしくは６０％であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、２３５．５、３１４または４７１ｍｇ／ｍｌであり、
前記溶液における式Ｉ－１の化合物の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであり、
スクロースまたはマンニトールは賦形剤として使用され、前記溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌであり、
重炭酸ナトリウムの含有量が、前記溶液のｐＨ値が４～９の範囲、好ましくは６～８の範囲となる量である、
溶液を提供する。
【0093】
上述の高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液において、前記化合物とスクロースまたはマンニトールとの質量比率は、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５である。
【0094】
当然、緩衝剤、ｐＨ調整剤、または凍結乾燥製剤用の他の補助材料を、上記の説明に従い、かつ式Ｉの具体的な化合物の特性に応じて、添加することもできる。
【0095】
明らかに、溶液を調製する間の容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して他の物質（環境物質）が検出された場合、それらの物質は、上記のような補助材料の範疇には属さない。同様に、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース／マンニトール、および式Ｉの化合物の原料には、不純物、または環境に関与する他の物質（環境物質）が必然的に混入している。これらの不純物または環境物質も、補助材料の前記範疇には含まれない。
【0096】
容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して検出されるその他全ての物質（環境物質）、ならびに不純物、または環境に含まれ（環境物質）、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース／マンニトール、および式Ｉの化合物の原料に必然的に混入するその他の物質の含有量は、法定制限内であるか、または、それらに対応する製品の品質基準（医薬グレード、医療グレードもしくは同等の品質基準）に準拠すべきである。
【0097】
明らかに、溶液を調製する間の容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して他の物質（環境物質）が検出された場合、それらの物質は、上記のような補助材料の範疇には属さない。同様に、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース／マンニトール、重炭酸ナトリウム、および式Ｉの化合物の原料には、不純物、または環境に関与する他の物質（環境物質）が必然的に混入している。これらの不純物または環境物質も、補助材料の前記範疇には含まれない。
【0098】
容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して検出されるその他全ての物質（環境物質）、ならびに不純物、または環境に含まれ（環境物質）、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース／マンニトール、および式Ｉの化合物の原料に必然的に混入するその他の物質の含有量は、法定制限内であるか、または、それらに対応する製品の品質基準（医薬グレード、医療グレードもしくは同等の品質基準）に準拠すべきである。
【0099】
したがって、上述の「・・・からなる」という表現は、調製中に意図的または人為的に添加される物質を指す（これらの物質は含有されることが不可欠であり、分析試験機器によって検出することができる）。これらの物質に加えて、意図的または人為的に添加される他の物質はない。しかし、それでも微量の不純物、環境物質などは必然的に存在する。
【0100】
上記の内容は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液の構成物（製剤処方）について説明しており、以下に、その溶液の使用について簡単に記載する。
【0101】
上記で提供した溶液は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための中間半製品として使用されるだけであり、臨床製剤には使用できない。一般的に言えば、前記溶液は、製造現場で使用するために直ちに調製される。すなわち、前記溶液は液体製剤化容器内で調製され、凍結乾燥バイアルに直接充填され、次いで、凍結乾燥のために、バッチで凍結乾燥する製造設備に送られる。
【0102】
したがって、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液は、調製後および凍結乾燥設備で凍結乾燥されるための製造および待機プロセスの間、安定であることが確保されるべきであり、室温で少なくとも８時間、好ましくは２４時間さらには７２時間または１２０時間、安定であるべきである。
【0103】
これは、前記溶液を、調製後に濾過、充填してから、凍結乾燥のために凍結乾燥機に送る必要があるためである。濾過および充填は、普通は８～１２時間以内で完了し、一般的に室温で行われる。これに反して、後続の凍結乾燥は低温で実施され、バイアルに充填された大量の薬液を設定低温（－２０℃～－５５℃）まで冷却するには、大規模な凍結乾燥機または凍結乾燥システムで２０～６０時間かかる。したがって、凍結乾燥製剤用の薬物溶液は、特定の時間内、室温で安定であるべきである。実験の結果、本発明者らは、本発明が提供するＴＨ－３０２の凍結乾燥製剤用の薬物溶液が、適当な安定性を有することを確認した。
【0104】
本発明はまた、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための溶液の使用を提供する。前記溶液は、凍結乾燥製剤溶液としての使用に適しており、凍結乾燥プロセスによる凍結乾燥製剤の調製に使用される。
【0105】
本発明は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための上述の溶液に基づいて、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を提供することができる。
【0106】
凍結乾燥製剤は、凍結乾燥プロセスにより、凍結乾燥製剤溶液として、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための上述の溶液を使用して調製される。
【0107】
凍結乾燥製剤は、下記式Ｉの化合物、賦形剤、および残留溶媒構成成分を含み、
式中、Ｒは、それぞれ独立して、Ｈ、－ＣＨ３、および－ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、それぞれ独立して、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭｓ、およびＯＴｓから選択され、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満であり、
残留溶媒構成成分は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールである。
【化8】
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満であり、
残留溶媒構成成分は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールである。
【0108】
凍結乾燥製剤は、下記式Ｉの化合物、賦形剤、残留溶媒構成成分、およびｐＨ調整剤を含み、
式中、Ｒは、それぞれ独立して、Ｈ、－ＣＨ３、および－ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、それぞれ独立して、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭｓ、およびＯＴｓから選択され、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満であり、
残留溶媒構成成分は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールである。
【化9】
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満であり、
残留溶媒構成成分は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールである。
【0109】
凍結乾燥製剤は、下記式Ｉの化合物および賦形剤を含み、
式中、Ｒは、それぞれ独立して、Ｈ、－ＣＨ３、および－ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、それぞれ独立して、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭｓ、およびＯＴｓから選択され、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満である。
【化10】
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であり、もしくは、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であり、または、
前記凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率が、４．３９％以上６６．６６％未満である。
【0110】
ここで、凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が５ｍｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下であることと、凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷が４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満であることは、２つの異なる状況を表している。
【0111】
広範な実験の結果、出願人らは、５０ｍｌバイアルで２５ｍｌの最大充填量を使用する場合、凍結乾燥製剤を得るために、高薬物負荷の上述の凍結乾燥製剤溶液を凍結乾燥する様々な凍結乾燥プロセスについて、予備凍結乾燥溶液の体積と凍結乾燥された製剤固体の外部体積との間に、１０％未満の変化があることを見出した。体積は、凍結乾燥後の凍結乾燥ケーキの膨張により１０％増加する場合があり、または粉末ケーキの崩壊により１０％減少する場合がある。凍結乾燥前の高薬物負荷の凍結乾燥製剤溶液における式Ｉの化合物の含有量が５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下であり、最大変化が１０％であることに基づくと、体積は、膨張によって元の体積の１．１倍になり、または、崩壊によって元の体積の９０％になると計算される。凍結乾燥後の崩壊した粉末ケーキの体積が元の体積の９０％であることを例にとると、ここでの粉末ケーキの最大薬物負荷は、５／０．９＝５．５５～５００／０．９＝５５５．５５と計算される。プロセスによっては、体積が変化しない状況があり得る。この場合、薬物負荷は５～５００の範囲である。上記の２つの範囲を組み合わせると、５～５５５．５５になる。すなわち、凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷は、５ｇ／ｃｍ３超５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下である。
【0112】
同様に、凍結乾燥ケーキの膨張により体積が増加した場合、凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷は、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上５００ｍｇ／ｃｍ３未満である。
【0113】
本発明が提供する凍結乾燥製剤の薬物負荷とは、単位体積当たりに含有される活性医薬成分としての式Ｉの化合物の量を指す。ここでの体積とは、単位パッケージ化キットにおいて、薬物の内部空隙を含む、薬物の総外部体積を指す。例えば、１００ｍｌの凍結乾燥バイアル中の２０ｍｌの凍結乾燥溶液には、５００ｍｇの薬物が含有される。予備凍結乾燥溶液を凍結乾燥した後、２０ｍｌの溶液は、疎性および多孔性の凍結乾燥製剤に凍結される。凍結乾燥バイアルの内部空間の底面積をｓとして測定し、凍結乾燥バイアル中の凍結乾燥製剤の高さをｈとして測定した場合、この単位パッケージ化された凍結乾燥製剤の総外部体積はｓｈである。５００ｍｇの活性医薬成分が装填されているため、その薬物負荷は（５００／ｓｈ）ｍｇ／ｃｍ３である。一般的に、ｓｈの値は約２０ｃｍ３になる。凍結乾燥後の体積は、膨張により２０ｃｍ３超である場合があり、または、崩壊により２０ｃｍ３未満である場合がある。
【0114】
特定の単位パッケージにパッケージ化された凍結乾燥製剤の薬物負荷を決定する場合、最初に、上述した総外部体積ｓｈを測定および計算し、次いで、単位パッケージにパッケージ化された全ての凍結乾燥製剤を直接溶解し、その中に含有される薬物の質量Ｍを測定する。そうすると、本発明の凍結乾燥製剤の（単位体積当たりの）薬物負荷＝Ｍ／ｓｈとなる。
【0115】
ここで、凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量百分率は、４．３９％以上６６．６６％未満である。これは、活性医薬成分（ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ：ＡＰＩ）含有量および賦形剤の含有量、ならびに凍結乾燥製剤中の残留ｔｅｒｔ－ブタノールおよび残留水に基づいて変換することができる。
【0116】
凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量含有量とは、凍結乾燥製剤の総質量に対する薬物の百分率を指す。これは以下の操作に従って測定および計算することができる。
【0117】
特定の単位パッケージにパッケージ化された凍結乾燥製剤の薬物の質量含有量を測定する場合、最初に、単位パッケージの中の凍結乾燥製剤の質量Ｍ１を秤量し、次いで、単位パッケージの中の全ての凍結乾燥製剤を直接溶解し、その中に含有される薬物の質量Ｍを測定する。溶解後に洗浄、オーブン乾燥および秤量した空のバイアル瓶およびパッケージ化キャップの総質量をＭ２とした場合、凍結乾燥製剤の総質量はＭ１－Ｍ２となるので、本発明による凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の質量含有量＝Ｍ／（Ｍ１－Ｍ２）となる。
【0118】
上述の凍結乾燥製剤において、式Ｉの化合物は、
から選択され、好ましくはＴＨ－３０２である。
【化11】
【0119】
賦形剤は、糖類、ポリオール、ポリビニルピロリドン、タンパク質、ポロキサマー、またはこれらの組合せから選択され、
糖類は、スクロース、デキストラン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、トレハロース、ラクトース、マルトース、およびグルコースから選択され、
ポリオールは、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、およびアドニトールからなる群から選択され、
タンパク質は、アルブミン、好ましくはウシ血清アルブミンおよびヒトアルブミンから選択され、
ポロキサマーは、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８８、およびポロキサマー４０７から選択される。
糖類は、スクロース、デキストラン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、トレハロース、ラクトース、マルトース、およびグルコースから選択され、
ポリオールは、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、およびアドニトールからなる群から選択され、
タンパク質は、アルブミン、好ましくはウシ血清アルブミンおよびヒトアルブミンから選択され、
ポロキサマーは、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８８、およびポロキサマー４０７から選択される。
【0120】
前記溶液を凍結乾燥した後、溶媒である水およびｔｅｒｔ－ブタノールを昇華させる。したがって、凍結乾燥製剤は、残存する薬物および賦形剤を含有するだけである。
【0121】
明らかに、凍結乾燥の昇華プロセスの間に水およびｔｅｒｔ－ブタノールを完全に除去することは不可能であるため、水およびｔｅｒｔ－ブタノールの残留物が必然的に含まれる。実際、水およびｔｅｒｔ－ブタノールの残留量は、凍結乾燥製剤の重要な品質指標である。残留量が少ないほど、凍結乾燥製剤の品質および安定性が良好になり、そのような製剤を投与した後に、患者が有害反応を経験することが少なくなる。残留量の最小化は、凍結乾燥プロセスを調整することによって達成することができる。しかし、残留物を完全に回避することはできない。
【0122】
それでもなお、凍結乾燥時間を長くし、乾燥温度を上げることによって、製品の品質要件に準拠すると同時に、コストに関係なく、水およびｔｅｒｔ－ブタノールの含有量を検出限界未満に低減することは、技術的に可能である。この場合、凍結乾燥製剤は、水およびｔｅｒｔ－ブタノールをほとんど含まないと考えることができる。
【0123】
製造コストおよび貯蔵安定性を考慮すると、水およびｔｅｒｔ－ブタノールについては、それぞれ以下のように適当な残留含有量がある。残留水の含有量は、６質量％以下、好ましくは２％以下、より好ましくは１％以下、さらに好ましくは０．５％以下である。残留ｔｅｒｔ－ブタノール含有量は、１．７５質量％以下、好ましくは１％以下、より好ましくは０．５％以下である。
【0124】
当然、緩衝剤、ｐＨ調整剤、または凍結乾燥製剤用の他の補助材料を、上記の説明に従い、かつ式Ｉの具体的な化合物の特性と組み合わせて添加することもできる。これに対応して、緩衝剤、ｐＨ調整剤、または凍結乾燥用の他のアジュバントを凍結乾燥製剤が含有することも検出される。
【0125】
明らかに、昇華によって除去することができない他の物質（環境物質）が、容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して検出された場合、それらの物質は、上記のような補助材料の範疇には属さない。同様に、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、および式Ｉの化合物の原料には、不純物、または環境に関与する他の物質（環境物質）が必然的に混入しており、それらは昇華によって除去することができないものである。これらの不純物または環境物質も、補助材料の前記範疇には含まれない。
【0126】
昇華によって除去することができず、容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して検出されるその他全ての物質（環境物質）、または、昇華によって除去することができず、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース／マンニトール、および式Ｉの化合物の原料に必然的に混入する不純物または環境に関与する他の物質（環境物質）の含有量は、法定制限内であるか、または、それらに対応する製品の品質基準（医薬グレード、医療グレードもしくは同等の品質基準）に準拠すべきである。
【0127】
「下記式Ｉの化合物および賦形剤を含む」とは、凍結乾燥製剤が、不可避の残留水および残留ｔｅｒｔ－ブタノールに加えて、式Ｉの化合物、賦形剤、および上述の残留環境物質を含有することが検出可能であることを意味する。また、凍結乾燥製剤は、他のアジュバントを含有することもできる。
【0128】
式Ｉの化合物と賦形剤との質量比率は、１：（０．５～２０）の範囲、好ましくは１：（１～１５）の範囲、より好ましくは１：（２～１２．５）の範囲、さらに好ましくは１：（５～１０）の範囲である。
【0129】
凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷は、５．５５ｍｇ／ｃｍ３以上１７７．７７ｍｇ／ｃｍ３以下、好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上５５．５５ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上２７．７７ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上１６．６６ｍｇ／ｃｍ３以下、さらにより好ましくは８．８８ｍｇ／ｃｍ３以上１１．１１ｍｇ／ｃｍ３以下であり、または、
凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷は、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上１４５．４５ｍｇ／ｃｍ３以下、好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上４５．４５ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上２２．７３ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上１３．６４ｍｇ／ｃｍ３以下、さらにより好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上９．０９ｍｇ／ｃｍ３以下である。
凍結乾燥製剤における式Ｉの化合物の薬物負荷は、４．５５ｍｇ／ｃｍ３以上１４５．４５ｍｇ／ｃｍ３以下、好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上４５．４５ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上２２．７３ｍｇ／ｃｍ３以下、より好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上１３．６４ｍｇ／ｃｍ３以下、さらにより好ましくは７．２７ｍｇ／ｃｍ３以上９．０９ｍｇ／ｃｍ３以下である。
【0130】
ここで述べた上記２つの状況について、前者は、凍結乾燥後、崩壊により体積が小さくなる状況を指し、後者は、膨張により体積が大きくなる状況を指す。
【0131】
凍結乾燥製剤は、本質的に、下記式Ｉ－１の化合物、賦形剤、残留水、および残留ｔｅｒｔ－ブタノールからなり、
前記凍結乾燥製剤における前記化合物の薬物負荷が、６．６６、７．７７、８．３３、８．８８、９．４４、１１．１１、１３．８８、１６．６６、２２．２２もしくは２７．７７ｍｇ／ｃｍ３であり、または、前記凍結乾燥製剤における前記化合物の薬物負荷が、５．４５、６．３６、６．８２、７．２７、７．７３、９．０９、１１．３６、１３．６４、１８．１８もしくは２２．７３ｍｇ／ｃｍ３であり、
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：７、１：８、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５であり、
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下であり、
前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下である。
【化12】
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：７、１：８、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５であり、
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下であり、
前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下である。
【0132】
凍結乾燥製剤は、本質的に、下記式Ｉ－１の化合物、賦形剤、残留水、残留ｔｅｒｔ－ブタノール、およびｐＨ調整剤からなり、
前記凍結乾燥製剤における前記化合物の薬物負荷が、６．６６、７．７７、８．３３、８．８８、９．４４、１１．１１、１３．８８、１６．６６、２２．２２もしくは２７．７７ｍｇ／ｃｍ３であり、または、前記凍結乾燥製剤における前記化合物Ｉ－１の薬物負荷が、５．４５、６．３６、６．８２、７．２７、７．７３、９．０９、１１．３６、１３．６４、１８．１８もしくは２２．７３ｍｇ／ｃｍ３であり、
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５であり、
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下であり、
前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下であり、
前記ｐＨ調整剤は重炭酸ナトリウムであり、０．０１～０．１０ｍｇ／ｃｍ３の量で存在する。
【化13】
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
前記化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５であり、
前記残留水の含有量が、６質量％以下、好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下であり、
前記残留ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、１．７５質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下であり、
前記ｐＨ調整剤は重炭酸ナトリウムであり、０．０１～０．１０ｍｇ／ｃｍ３の量で存在する。
【0133】
凍結乾燥製剤は、本質的に、下記式の化合物および賦形剤からなり、
式Ｉ－１の化合物の薬物負荷が、６．６６、７．７７、８．３３、８．８８、９．４４、１１．１１、１３．８８、１６．６６、２２．２２もしくは２７．７７ｍｇ／ｃｍ３であり、または、式Ｉ－１の化合物の薬物負荷が、５．４５、６．３６、６．８２、７．２７、７．７３、９．０９、１１．３６、１３．６４、１８．１８もしくは２２．７３ｍｇ／ｃｍ３であり、
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
式Ｉ－１の化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５である。
【化14】
前記賦形剤は、スクロースまたはマンニトールであり、
式Ｉ－１の化合物と前記賦形剤との質量比率が、１：２、１：３、１：３．５、１：４、１：５、１：５．３３３、１：５．６、１：６、１：１．６７、１：７、１：８、１：８、１：８．２３５、１：８．７５、または１：９．３７５である。
【0134】
明らかに、昇華によって除去することができない他の物質（環境物質）が、溶液を調製する間の容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して検出された場合、それらの物質は、上記のような補助材料の範疇には属さない。同様に、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース、および式Ｉの化合物の原料には、不純物、または環境に関与する他の物質（環境物質）が必然的に混入しており、それらは昇華によって除去することができないものである。これらの不純物または環境物質も、補助材料の前記範疇には含まれない。
【0135】
昇華によって除去することができず、容器、管および器具との接触、またはそれらの汚染に起因して検出されるその他全ての物質（環境物質）、ならびに、昇華によって除去することができず、ｔｅｒｔ－ブタノール、スクロース／マンニトール、および式Ｉの化合物の原料に必然的に混入する不純物または環境に関与する他の物質（環境物質）の含有量は、法定制限内であるか、または、それらに対応する製品の品質基準（医薬グレード、医療グレードまたは同等の品質基準）に準拠すべきである。
【0136】
「下記式Ｉの化合物および賦形剤を含む」とは、凍結乾燥製剤が、不可避の残留水および残留ｔｅｒｔ－ブタノールに加えて、式Ｉの化合物、賦形剤、および上述の残留環境物質を含有することが検出可能であることを意味する。また、凍結乾燥製剤は、他のアジュバントを含有することもできる。
【0137】
「下記式Ｉの化合物および賦形剤から本質的になる」とは、凍結乾燥製剤が、不可避の残留水および残留ｔｅｒｔ－ブタノールに加えて、式Ｉの化合物、賦形剤、および上述の残留環境物質を含有するだけであることが検出可能であることを意味する。そのような構成成分を除いて、凍結乾燥製剤は、他の物質を含んでいない。
【0138】
本発明は、高薬物負荷の凍結乾燥製剤を調製するための上述の溶液を使用することにより、凍結乾燥プロセスを経て調製される凍結乾燥製剤を提供する。
【0139】
医薬製剤およびその凍結乾燥粉末は、医薬分野で通常使用される容器に貯蔵することができ、この容器には、プラスチック容器またはガラス容器、例えば、標準的なＵＳＰＩタイプのホウケイ酸ガラス容器が含まれ得る。例えば、使用する容器は、注射器またはバイアルであってもよい。
【0140】
本出願の背景技術部分に記載の、動物モデル実験および臨床試験で使用された式Ｉの化合物の投与量によれば、毎回投与される化合物の投与量は、様々な種（ヒトおよび他の動物）で、または様々な適応症に対して、または様々な患者で使用される場合、異なり得ることがうかがえる。その投与量は、最小量の数ミリグラムから最大量の数万ミリグラムまで及ぶ場合がある。単位用量パッケージにより、または組み合わせた複数の単位用量パッケージにより、特定の投与についての投与量が満たされ得ることが最も好ましい。したがって、上記を考慮して、我々は、様々な種について、または様々な適応症に対して、単位パッケージ当たりの凍結乾燥製剤の適切な投与量について推奨した。
【0141】
本発明はまた、前記凍結乾燥製剤を含有する以下の製剤単位パッケージも提供する。
【0142】
凍結乾燥製剤は容量１０００ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が４０００～１６５００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量５００ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が２０００～８０００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２５０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１０００～４０００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１００ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が４００～２０００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量５０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が５０～８００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量３０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１５０～６００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１２５～５００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１００～４００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１８ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が９０～３６０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が７５～３００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が５０～２００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量８ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が４０～１６０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量７ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が３５～１４０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が２５～１００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量３ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１５～６０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１０～４０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１．５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が７．５～３０ｍｇである。
凍結乾燥製剤は容量５００ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が２０００～８０００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２５０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１０００～４０００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１００ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が４００～２０００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量５０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が５０～８００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量３０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１５０～６００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１２５～５００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１００～４００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１８ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が９０～３６０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が７５～３００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１０ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が５０～２００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量８ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が４０～１６０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量７ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が３５～１４０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が２５～１００ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量３ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１５～６０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量２ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が１０～４０ｍｇであり、または、
凍結乾燥製剤は容量１．５ｍｌの密封容器に含有され、凍結乾燥製剤の体積が、該密封容器の体積の１／５～２／３、好ましくは１／３～１／２であり、式Ｉの化合物の量が７．５～３０ｍｇである。
【0143】
これらの少用量は、ヒト、もしくはブタ、ラット、およびイヌなどの同等サイズの動物、または小型で軽量の他の動物のうち、幼体にとって適当である。適応症は限定されない。
【0144】
本発明が提供する凍結乾燥製剤は、静脈注入によって投与されることが推奨される。したがって、薬物溶液を再構成する必要がある。再構成には、一般的に、生理食塩液（０．９％）またはグルコース注射剤（５％）が選択される。この目的のために、本発明は、溶媒が水であり、ＴＨ－３０２を含有する静脈注射用の注射剤を提供する。溶質は、活性医薬成分ＴＨ－３０２、等張調整試薬、マンニトールまたはスクロース、ｔｅｒｔ－ブタノール、および重炭酸ナトリウムを含み、等張調整試薬は、グルコースおよび塩化ナトリウムから選択される。
【0145】
本発明はまた、高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液を調製する方法であって、前記方法は、以下の手順、すなわち、
手順１：規定量の活性医薬成分ＴＨ－３０２を秤量し、ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液に添加し、透明になるまで撹拌して第１の溶液を得た、
手順２：規定量のマンニトールまたはスクロースを適量の水に溶解し、透明になるまで撹拌して第２の溶液を得た、
手順３：第１の溶液と第２の溶液とを混合し、最後に規定量のｔｅｒｔ－ブタノールの残りを添加し、次いで適量の水を所定の体積まで添加し、さらに規定量の重炭酸ナトリウムを添加し、撹拌しながら均一に混合した
手順を含み、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液における活性医薬成分ＴＨ－３０２の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ超５００ｍｇ／ｍｌ以下であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率が１～９９％の範囲であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌの範囲であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、２０～３００ｍｇ／ｍｌの範囲であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液におけるＴＨ－３０２と、スクロースまたはマンニトールとの質量比率が、１：（０．５～２０）の範囲であり、
ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率が、３０～９０％の範囲であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液における重炭酸ナトリウムの含有量が、０．０１～０．１０ｍｇ／ｍｌの範囲である、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液を調製する方法を提供する。
手順１：規定量の活性医薬成分ＴＨ－３０２を秤量し、ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液に添加し、透明になるまで撹拌して第１の溶液を得た、
手順２：規定量のマンニトールまたはスクロースを適量の水に溶解し、透明になるまで撹拌して第２の溶液を得た、
手順３：第１の溶液と第２の溶液とを混合し、最後に規定量のｔｅｒｔ－ブタノールの残りを添加し、次いで適量の水を所定の体積まで添加し、さらに規定量の重炭酸ナトリウムを添加し、撹拌しながら均一に混合した
手順を含み、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液における活性医薬成分ＴＨ－３０２の含有量が、５ｍｇ／ｍｌ超５００ｍｇ／ｍｌ以下であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率が１～９９％の範囲であり、または、前記溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌの範囲であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量が、２０～３００ｍｇ／ｍｌの範囲であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液におけるＴＨ－３０２と、スクロースまたはマンニトールとの質量比率が、１：（０．５～２０）の範囲であり、
ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率が、３０～９０％の範囲であり、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液における重炭酸ナトリウムの含有量が、０．０１～０．１０ｍｇ／ｍｌの範囲である、
高薬物負荷の凍結乾燥製剤の溶液を調製する方法を提供する。
【0146】
本発明は、本明細書において、本凍結乾燥製剤を調製するプロセスを提供する。
【0147】
高薬物負荷の本凍結乾燥製剤を調製する方法は、以下の手順を含む。
【0148】
予備凍結乾燥：上記の薬物溶液を凍結乾燥システムに入れ、予備凍結乾燥するが、この予備凍結乾燥の手順は、温度を一定時間０℃に保持し、温度を一定時間－２０℃～－５５℃に保持することを含む。
【0149】
一次乾燥：予備凍結乾燥の後、温度を－１０～１０℃の範囲の温度まで上げ、その温度を一定時間保持し、真空状態を維持することにより乾燥を行う。
【0150】
二次乾燥：一次乾燥の後、温度を２０～４０℃の範囲の温度まで上げ、その温度を一定時間保持し、真空状態を維持することにより乾燥を行う。
【0151】
上記の説明からわかるように、凍結乾燥製剤は、溶液を凍結乾燥ボトル（バイアル）に直接充填し、凍結乾燥装置で直接凍結乾燥することによって得た。したがって、サブパッケージ化の工程がない。そのため、単位パッケージはまさに、それに相当する凍結乾燥ボトルパッケージである。パッケージ化ゲージは、凍結乾燥バイアルのゲージと密接に関連している。
【0152】
特に、本出願に記載されている数には、±１０％の誤差があり得る。すなわち、その記載の数の１０％を加算または減算して記載されている数は、本出願に記録された数の範囲内であるとみなされるべきである。換言すれば、本出願において、例えば「含有量が５ｍｇ／ｍｌ超であるが５００ｍｇ／ｍｌ以下である」という文言を記載する場合、実際に測定された含有量範囲が４．５ｍｇ／ｍｌ超５５０ｍｇ／ｍｌ以下であることも当然、上記範囲と同等であると判断されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【0153】
【図1】様々なｔｅｒｔ－ブタノール質量比率のｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるＴＨ－３０２の溶解度曲線を示す。
【図2】１１個の賦形剤を用いて調製した凍結乾燥製剤の５日間にわたる安定性曲線を示す。これらの曲線は、右端の円で識別して上から下に、ＰＥＧ２０００、Ｐ１８８、ＳＢＥＣＤ、マンニトール、ＤＳＰＥ－ＭＰＥＧ２０００、フルクトース、トレハロース、ＰＶＰＫ１２、スクロース、マルトースおよびラクトースをそれぞれ用いて調製した凍結乾燥製剤の曲線である。
【図3】スクロースおよびマンニトールを賦形剤として用いて調製した凍結乾燥製剤の１０日間にわたる安定性曲線を示す。図において、上の４つの曲線は、マンニトールを用いて調製した凍結乾燥製剤の曲線であり、下の４つの曲線は、スクロースを用いて調製した凍結乾燥製剤の曲線である。
【図4】１００ｍｇ／ｍｌスクロースおよび８０ｍｇ／ｍｌマンニトールを賦形剤として用いて調製した凍結乾燥試料の、高温４０℃および室温２５℃での安定性曲線を示す。横軸は日数を表し、縦軸は、ＨＰＬＣにより測定した純度を百分率で表す。
【図5】薬物溶液試料の写真を示す。薬物溶液試料は、薬物溶液試料を含有したボトルの底で、２－℃の環境で結晶化している。ラベルはモザイクで覆っている。
【図6】４つのバッチの凍結乾燥製剤の写真を示す。写真では、凍結乾燥製剤のバッチ０１、０２、０３および０４を、それぞれ左から右に示している。ラベルはモザイクで覆っている。
【図7】溶液を添加した後の再構成実験における５％デキストロース溶液４０ｍｌを有する４つのバッチの凍結乾燥製剤試料と、静置した後のそれらの試料との比較写真を示す。左の写真が溶液を添加した試料を示し、右の写真が静置した後の試料を示す。それぞれの写真で、左から右に、バッチ０１、０２、０３および０４がある。ラベルはモザイクで覆っている。
【図8】溶液を添加した後の再構成実験における５％デキストロース溶液５０ｍｌを有する４つのバッチの凍結乾燥製剤試料と、静置した後のそれらの試料との比較写真を示す。左の写真が溶液を添加した試料を示し、右の写真が静置した後の試料を示す。それぞれの写真で、左から右に、バッチ０１、０２、０３および０４がある。ラベルはモザイクで覆っている。
【図9】７つのバッチの凍結乾燥製剤の試料写真を示す。左から右に、バッチ０１～０７がある。ラベルはモザイクで覆っている。
【図10】実験室用凍結乾燥機のプレート上のバイアルの配置の概略図を示す。
【図11】凍結乾燥製剤試料の写真を示す。
【図12】凍結乾燥製剤において「ネックラッピング」を有する試料の写真を示す。ラベルはモザイクで覆っている。
【発明を実施するための形態】
【0154】
本発明を、具体例を挙げて以下に説明する。これらの実施例は、本発明を説明するために使用するにすぎず、その範囲を決して限定するものではないことを、当業者なら理解するであろう。
【0155】
「患者」と「個体」は互換的に使用され、がんの治療を必要とする哺乳類を指す。一般的に、患者はヒトである。一般的に、患者は、がんと診断されたヒトである。特定の実施形態では、「患者」または「個体」とは、薬物および治療法のスクリーニング、特徴付けおよび評価において使用される非ヒト哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、マウスまたはラットを指してもよい。
【0156】
「プロドラッグ」とは、投与または適用の後に、代謝または他の手段によって、少なくとも１つの特性に関して生物学的に活性またはより活性な化合物（または薬物）に変換される化合物を指す。プロドラッグは、薬物と比較して活性が低くまたは不活性となる手段で化学的に修飾されるが、その化学修飾は、そのプロドラッグが投与された後、代謝プロセスまたは他の生物学的プロセスによって、それに対応する薬物がそのプロドラッグから生成されるような修飾である。プロドラッグは、活性薬物と比較して、代謝安定性または輸送特性が変えられており、副作用が少なく、もしくは毒性が低く、または風味が改善されてもよい。プロドラッグは、それに対応する薬物以外の反応物を使用して合成されてもよい。
【0157】
「治療」または「患者の治療」とは、本発明に関連する薬物の治療有効量を患者に投与、使用または適用することを意味する。
【0158】
患者に薬物を「投与する」、「適用する」または「使用する」とは、直接の投与または適用を指し、薬物は、医療専門家によって患者に投与もしくは適用されてもよく、もしくは、自己投与もしくは適用されてもよく、かつ／または、薬物を処方する行為であってもよい間接的な投与もしくは適用を指す。例えば、患者に薬物の自己投与もしくは適用を指示するか、または患者に薬物の処方箋を提供する医師は、患者に薬物を投与または適用しているということである。
【0159】
薬物の「治療有効量」とは、がん患者に投与または適用された場合に、例えば、患者のがんの１つまたは複数の症候の軽減、寛解、緩和または消失といった意図された治療効果があるとされる薬物の量を指す。治療効果は、必ずしも１回分の用量を投与することによって生じるわけではなく、一連の用量を投与した後にのみ生じ得る。したがって、治療有効量の薬物は、１回または複数回以上投与または適用されてもよい。
【0160】
病状または患者の「治療」とは、有益または所望の（臨床結果を含む）結果を得るための措置を講じることを指す。本発明の目的のために、有益または所望の臨床結果としては、がんの１つまたは複数の症状の軽減または改善、病気の重症度の低減、病気の進行の遅延もしくは緩徐化、病態の改善、軽減もしくは安定化、またはその他の有益な結果が挙げられるが、これらに限定されない。がんの治療は、場合によっては部分応答または安定状態をもたらすことがある。
【0161】
「腫瘍細胞」とは、任意の適当な種、例えば、ネズミ科、イヌ科、ネコ科の動物、ウマまたはヒトなどの哺乳類の腫瘍細胞を指す。
【0162】
本発明の実施形態に関する以上の説明は、本発明を限定するものではない。当業者は、本発明に従って種々の改変および変更を行うことができ、本発明の趣旨を逸脱しない範囲でのいかなる改変および変更も、本発明に添付する特許請求の範囲に含まれるものとする。
【0163】
一般情報の説明
特に明記しなければ、以下の実験のそれぞれについて、測定または検査の方法、機器、およびその他の情報は、以下に挙げる通りである。
特に明記しなければ、以下の実験のそれぞれについて、測定または検査の方法、機器、およびその他の情報は、以下に挙げる通りである。
【0164】
メトラーＶ１０Ｓカールフィッシャー水分計を使用して、カールフィッシャーＫＦ法により含水量を測定した。
【0165】
ガスクロマトグラフィ（ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＧＣ）を使用して、残留溶媒ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量を測定した。使用する機器は、７６９６Ａ自動ヘッドスペースサンプラーおよびフレームイオン化検出器（Ｆｌａｍｅ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＦＩＤ）を備えたアジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）８８６０ガスクロマトグラフとした。クロマトグラフ用カラムは、ＤＢ－６２４を充填したキャピラリーカラムとした。ＧＣ試験パラメータは次の通りである。キャリアガスＮ２、入口温度１５０℃、検出器温度２００℃、分割比率２０：１、温度上昇プログラム：開始温度６０℃、温度を５分間保持、３０℃／分の速度で温度を２４０℃まで上昇、次いで６０℃で５分間実行、８５℃で２０分間ヘッドスペースのバランシング。
【0166】
高速液体クロマトグラフィ（ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＨＰＬＣ）を使用して、ＴＨ－３０２の含有量および濃度を測定した。使用する機器は、サーモ・ヴァンキッシュ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｖａｎｑｕｉｓｈ）高速液体クロマトグラフィとした。クロマトグラフ用カラムは、ＹＭＣパックＡＱ Ｃ１８ ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍとした。検出方法については、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社が保有する特許、国際公開第２００８０８３１０１号に記載のＨＰＬＣ法を参考にしていただきたい（詳細については、実施例２のＴＨ３０２のエタノール製剤を参照されたい）。
【0167】
特に明記しなければ、表に含まれる記号「／」は検出されなかったことを意味する。
【0168】
１．ＴＨ－３０２の溶解度実験
飽和溶液法による実験で溶解度を測定する。すなわち、固体ＴＨ－３０２を、不溶性物質または濁りが出るまで、溶媒に直接投入した。一定時間かけて清澄化した後、溶液を直接濾過した。ＴＨ－３０２の濃度を決定するために、清澄化した濾液を直接採取した。得られた濃度はまさに、この溶媒系におけるＴＨ－３０２の溶解度である。具体的な溶解度データについては、表１、表２、表３を参照していただきたい。
飽和溶液法による実験で溶解度を測定する。すなわち、固体ＴＨ－３０２を、不溶性物質または濁りが出るまで、溶媒に直接投入した。一定時間かけて清澄化した後、溶液を直接濾過した。ＴＨ－３０２の濃度を決定するために、清澄化した濾液を直接採取した。得られた濃度はまさに、この溶媒系におけるＴＨ－３０２の溶解度である。具体的な溶解度データについては、表１、表２、表３を参照していただきたい。
【0169】
ＴＨ－３０２の濃度（ｍｇ／ｍｌ）の測定方法については、スレッショルド・ファーマシューティカルズ社が保有する特許、国際公開第２００８０８３１０１号に記載のＨＰＬＣ法を参考にしていただきたい（（詳細については、実施例２のＴＨ３０２のエタノール製剤を参照されたい）。定量には、外部標準法を用いた。
【0170】
濃度が高すぎる場合は、ＨＰＬＣで正確に定量的に濃度を測定することができる程度まで、該当する透明溶液を最初に希釈しておくべきである。
【0171】
表３に示したデータにおけるｔｅｒｔ－ブタノールの質量比率をＸ軸とし、ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒におけるＴＨ－３０２の溶解度をＹ軸とすると、図１に示す関係曲線が得られた。この活性医薬薬物は、水溶液における溶解度が低い。ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの濃度が増加するにつれて、この活性医薬成分の溶解度は増加し続けた。７０％ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）で、この活性医薬薬物の溶解度は最高に達し、そして、ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの濃度が増加するにつれて溶解度は低下した。
【0172】
２．凍結乾燥製剤で使用する適切な種類の賦形剤（凍結乾燥保護剤）を選択するための実験
ＴＨ－３０２薬物を凍結乾燥するための賦形剤として通常使用される糖類、ポリオール、非イオン性ポリマー界面活性剤などの使用に関する実用可能性を探るために、凍結乾燥実験のために以下の賦形剤を選択して、それらの安定性を調べた。
ＴＨ－３０２薬物を凍結乾燥するための賦形剤として通常使用される糖類、ポリオール、非イオン性ポリマー界面活性剤などの使用に関する実用可能性を探るために、凍結乾燥実験のために以下の賦形剤を選択して、それらの安定性を調べた。
【0173】
糖類として、スクロース、ラクトース、マルトース、フルクトース、およびトレハロースを選択した。
【0174】
ポリオールとして、マンニトール、グリセロール、およびソルビトールを選択した。
【0175】
非イオン性ポリマー界面活性剤として、ＰＶＰＫ１２（分子量５５００のポリビニルピロリドン）、ＰＥＧ２０００（ポリエチレングリコール２０００）、Ｐ１８８（ポロキサマー、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンエーテルのブロック共重合体、製品番号：１８８）を選択した。
【0176】
その他：ＳＢＥＣＤ（ｓｕｌｆｏｂｕｔｙｌ ｅｔｈｅｒ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ：スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン）、およびＤＳＰＥ－ＭＰＥＧ２０００（ホスファチジルエタノールアミンペゴル）。
【0177】
下記表４に従って、凍結乾燥用の薬物溶液を製剤化した。
【0178】
【表4】
※ＰＥＧ２０００およびＰ１８８の防護剤を用いた実験群で使用した溶媒は、４０％ＴＢＡ／水である。
【0179】
ＴＨ－３０２活性医薬成分および凍結乾燥保護剤を、上述の製剤処方に従って秤量し、規定量のｔｅｒｔ－ブタノール溶液を添加、完全に溶解するまで均一に混合し、次いでサブパッケージ化し（５ｍｌバイアルに、各バイアルに１ｍｌの薬物溶液を投入、各製剤処方について８バイアル）、小型の高速凍結乾燥機で急速に凍結乾燥した。サブパッケージ化製剤を－８０℃の超低温冷蔵庫で約２．５時間予備凍結乾燥し、次いで、凍結乾燥機に約１０～９０時間入れて（－３０℃、絶対気圧０．１ｍｂａｒ）、凍結乾燥製剤を得た。
【0180】
実験結果
凍結乾燥粉末状態：溶媒として水を用いたものを除く全ての溶媒群で、白色の凍結乾燥粉末ケーキが首尾よく得られた。しかし、凍結乾燥機を０℃まで加熱した場合、グリセロール群において油性物質が生じた。
凍結乾燥粉末状態：溶媒として水を用いたものを除く全ての溶媒群で、白色の凍結乾燥粉末ケーキが首尾よく得られた。しかし、凍結乾燥機を０℃まで加熱した場合、グリセロール群において油性物質が生じた。
【0181】
再構成状態：ソルビトール群を除く全ての群について、再構成が成功した（一部の群では、振とう後に溶解した）。
【0182】
残存するスクロース、マンニトール、ラクトース、マルトース、フルクトース、ＰＶＰＫ１２、トレハロース、ＤＳＰＥ－ＭＰＥＧ２０００、ＳＢＥＣＤ、ＰＥＧ２０００およびＰ１８８の群について、高温加速安定性実験を行った。
【0183】
凍結乾燥製剤を凍結乾燥機から取り出した後、バイアルの１つを０℃で抜き出し、ＨＰＬＣによる純度、含水量、および活性医薬成分の残留溶媒の含有量を試験した。次いで、そのバイアルを４０℃の恒温器に入れた。ＨＰＬＣによる純度は、３日目および５日目にそれぞれ試験した。その結果を下記表５に示した。
【0184】
【0185】
実験の結論
一般的に言えば、注射用の凍結乾燥保護剤の選択には、以下の要因、すなわち良好な安定性、従来法による使用が可能であること、ならびに、薬効、薬物代謝と薬物動態（Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ：ＤＭＰＫ）および毒性に影響しないことを考慮に入れるべきである。図２の曲線を分析することによって、ＰＥＧ２０００は従来と異なる方法で使用されており、Ｐ１８８／ＳＢＥＣＤ／ＤＳＰＥ－ＭＰＥＧ２０００は、有効性、ＤＭＰＫ、および毒性効果に影響する可能性のあることがわかる。一般的に言えば、マンニトールは理想的な賦形剤であり、スクロースも進展の可能性がある（その量と凍結乾燥の条件を最適化することにより、安定性を向上させ、かつｔｅｒｔ－ブタノール残留物を低減させる可能性がある）。
一般的に言えば、注射用の凍結乾燥保護剤の選択には、以下の要因、すなわち良好な安定性、従来法による使用が可能であること、ならびに、薬効、薬物代謝と薬物動態（Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ：ＤＭＰＫ）および毒性に影響しないことを考慮に入れるべきである。図２の曲線を分析することによって、ＰＥＧ２０００は従来と異なる方法で使用されており、Ｐ１８８／ＳＢＥＣＤ／ＤＳＰＥ－ＭＰＥＧ２０００は、有効性、ＤＭＰＫ、および毒性効果に影響する可能性のあることがわかる。一般的に言えば、マンニトールは理想的な賦形剤であり、スクロースも進展の可能性がある（その量と凍結乾燥の条件を最適化することにより、安定性を向上させ、かつｔｅｒｔ－ブタノール残留物を低減させる可能性がある）。
【0186】
マンニトールおよびスクロースの安定性をさらに評価するために、マンニトールおよびスクロースの試料を１０日間貯蔵した後、ＨＰＬＣによる純度を試験し、その結果を、図３に示すように曲線にプロットした。
【0187】
図３の曲線を分析することにより、表４に示す予備配合条件下では、マンニトールを用いた製剤の安定性が、スクロースを用いた製剤よりも良好であることがわかる。
【0188】
３．様々な凍結乾燥保護剤（１００ｍｇ／ｍｌスクロースまたは８０ｍｇ／ｍｌマンニトール）が凍結乾燥粉末および再構成溶液の安定性に及ぼす影響を調べるための実験
本発明者らは、その経験と、同様の凍結乾燥製剤薬物の使用法に基づき、１００ｍｇ／ｍｌスクロースおよび８０ｍｇ／ｍｌマンニトールを賦形剤として使用することを最初に決定して、調製したＴＨ－３０２の凍結乾燥製剤の安定性および再構成した溶液の安定性を調べた。
本発明者らは、その経験と、同様の凍結乾燥製剤薬物の使用法に基づき、１００ｍｇ／ｍｌスクロースおよび８０ｍｇ／ｍｌマンニトールを賦形剤として使用することを最初に決定して、調製したＴＨ－３０２の凍結乾燥製剤の安定性および再構成した溶液の安定性を調べた。
【0189】
３．１ 凍結乾燥製剤の室温での貯蔵安定性、および高温での加速貯蔵安定性に関する実験
下記表６に従って、凍結乾燥用の薬物溶液を製剤化した。各群について、１バイアル当たり１ｍｌで４０バイアルを調製し、各製剤処方について合計４０ｍｌの薬物溶液を調製した。
下記表６に従って、凍結乾燥用の薬物溶液を製剤化した。各群について、１バイアル当たり１ｍｌで４０バイアルを調製し、各製剤処方について合計４０ｍｌの薬物溶液を調製した。
【0190】
【表6】
【0191】
薬物溶液の調製プロセス：
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を規定量の水に溶解し、完全に溶解させた。
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を規定量の水に溶解し、完全に溶解させた。
【0192】
２．規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを凍結乾燥保護剤水溶液に添加し、均一に混合した。次いで、規定量のＡＰＩを添加し、ＡＰＩが完全に溶解するまで撹拌した。
【0193】
３．スクロースを用いて製剤化した薬物溶液のｐＨを測定したところ４．２４であり、ＮａＨＣＯ３注射剤１０μＬでｐＨを６．４３に調整した。さらに注射剤１０μＬを添加して、ｐＨを７．１３に調整した。
【0194】
マンニトールを用いて製剤化した薬物溶液のｐＨを測定したところ４．６２であり、ＮａＨＣＯ３注射剤１２μＬでｐＨを７．３１に調整した。
【0195】
得られた溶液をポリフッ化ビニリデンフィルタ（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ ｆｌｕｏｒｉｄｅ：ＰＶＤＦ）で濾過し、１バイアル当たり１ｍｌでサブパッケージ化した。
【0196】
前述の「高速凍結乾燥」と同様の操作を用い、関連するパラメータを調整して凍結乾燥製剤を得た。
【0197】
凍結乾燥後、真空下でバイアルに栓をし、圧着キャップを付けた。凍結乾燥製剤を得た。凍結乾燥製剤中の残留溶媒および残留水を測定した。
【0198】
凍結乾燥製剤試料を２５℃または４０℃の恒温器に入れ、該当する日にＨＰＬＣにより純度を測定した。その結果を下記表７に示した。
【0199】
【0200】
表７および図４に示したデータを分析および比較することにより、マンニトールを賦形剤として用いた薬物溶液を使用して調製した凍結乾燥製剤試料の２５℃または４０℃での安定性は、スクロースを用いて製剤化したものよりも良好であると結論付けることができる。
【0201】
３．２ 凍結乾燥製剤の再構成安定性および組合せの実験
凍結乾燥粉末の１バイアルを抜き出し、デキストロース５質量％水溶液（ｄｅｘｔｒｏｓｅ ５％ ｂｙ ｍａｓｓ ｉｎ ｗａｔｅｒ：Ｄ５Ｗ）で溶解して、１ｍＬ当たり約５ｍｇのＡＰＩを含有する溶液を得た。次いで、得られた溶液を室温で放置した。溶液の色および透明度を、０、６および２４時間でそれぞれ決定した。その結果、全ての場合で、無色透明の透き通った溶液が観察されたことが示された。
凍結乾燥粉末の１バイアルを抜き出し、デキストロース５質量％水溶液（ｄｅｘｔｒｏｓｅ ５％ ｂｙ ｍａｓｓ ｉｎ ｗａｔｅｒ：Ｄ５Ｗ）で溶解して、１ｍＬ当たり約５ｍｇのＡＰＩを含有する溶液を得た。次いで、得られた溶液を室温で放置した。溶液の色および透明度を、０、６および２４時間でそれぞれ決定した。その結果、全ての場合で、無色透明の透き通った溶液が観察されたことが示された。
【0202】
その溶液を３０％アセトニトリル水溶液で、０時間、６時間、２４時間でそれぞれ希釈して、１ｍＬ当たり約１ｍｇのＡＰＩを含有する溶液にし、ＨＰＬＣによって純度を測定した。その結果を下記表８に示した。
【0203】
【表8】
【0204】
凍結乾燥粉末の１バイアルを抜き出し、Ｄ５Ｗで溶解して、１ｍＬ当たり約５ｍｇのＡＰＩを含有する溶液を得た。得られた溶液のｐＨ値および浸透圧を測定した。その結果を下記表９に示した。測定中に、５％デキストロース注射剤のｐＨ値および浸透圧も測定した。
【0205】
【表9】
【0206】
比較の結果、再構成した凍結乾燥製剤の安定性および組合せに関しては、１００ｍｇ／ｍｌスクロースを用いた製剤の結果と８０ｍｇ／ｍｌマンニトールを用いた製剤の結果との間に、大きな違いはないことが見出された。それらのいずれもが、要件を満たすことができる。
【0207】
室温および高温加速下での凍結乾燥製剤の貯蔵安定性実験と、再構成した凍結乾燥製剤の安定性および組合せの実験とを総合的に検討すると、既存の急速凍結乾燥プロセス条件下では、マンニトールを賦形剤として含有する薬物溶液を使用して調製した凍結乾燥製剤試料は、スクロースを用いて製剤化したものよりも２５℃および４０℃での安定性が良好であったが、５％デキストロース注射剤で再構成したものの安定性および組合せは、わずかに異なるだけであったことがわかる。
【0208】
４．中間薬物溶液のｐＨおよびＡＰＩ濃度が試料再構成に及ぼす影響を調べるための実験
下記表１０に従って、凍結乾燥用の薬物溶液を製剤化した。
下記表１０に従って、凍結乾燥用の薬物溶液を製剤化した。
【0209】
【表10】
【0210】
ｔｅｒｔ－ブタノールの密度はρ＝０．７８５ｇ／ｍｌである。したがって、薬物溶液２００ｍｌにおけるｔｅｒｔ－ブタノールの４０％体積比率は、ｔｅｒｔ－ブタノール体積８０ｍｌ、ｔｅｒｔ－ブタノール質量６２．８０ｇに相当する。
【0211】
薬物溶液の調製プロセス：
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を、規定量の約８０％の量の水に撹拌しながら溶解し、完全に溶解させた。
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を、規定量の約８０％の量の水に撹拌しながら溶解し、完全に溶解させた。
【0212】
２．ｔｅｒｔ－ブタノールおよび残りの水に規定量のＡＰＩを添加し、撹拌しながら溶解した。
【0213】
３．上記２つの工程から得られた溶液を均一に混合した。
【0214】
４．その混合溶液を濾過した。０１および０２のバッチ用溶液のｐＨ値は調整しなかったが、０３および０４のバッチ用溶液のｐＨ値は７．０に調整した。
【0215】
５．充填：バッチ０１については１４ｍＬを充填、バッチ０２については１０．５ｍＬを充填、バッチ０３については１４ｍＬを充填、バッチ０４については１０．５ｍＬを充填。充填バイアルのゲージは５０ｍＬである。
【0216】
バッチ０１、０２、０３および０４のそれぞれからバイアル１つを医療グレードの冷蔵庫（２～８℃）に入れ、結晶化現象を観察したところ、下記図５に示すように、それらは全て異なる結晶化度を示すことが見出された。バッチ０１の結晶化上清と結晶の再構成溶液（５％デキストロース溶液で再構成）とを採取し、それらのＡＰＩ含有量を測定した。その結果を下記表１１に示した。
【0217】
【表11】
【0218】
上述の充填製剤を、真空凍結乾燥機で凍結乾燥した。凍結乾燥条件は、複数回で最適化したものを使用し、下記表１２に示した。凍結乾燥後、バイアルに真空下で栓をし、次いで圧着キャップを付けた。図６に示す凍結乾燥製剤を得た。
【0219】
【表12】
【0220】
上記の凍結乾燥製剤を、５％デキストロース溶液４０ｍｌおよび５０ｍｌでそれぞれ再構成した。その結果を下記表１３に示した。
【0221】
【表13】
【0222】
５％デキストロース溶液４０ｍＬで再構成した製剤の写真を図７に示したが、バッチ３（ＡＰＩ濃度は１５ｍｇ／ｍｌ、ｐＨを７．１３に調整）については、バイアルの壁に付着物はなく、バイアルの底にいくつかの不溶性粒子があった。一定時間放置したところ、溶液は透明になった。これにより、過度に高いＡＰＩの濃度は、凍結乾燥製剤の後の再構成にとって有害である可能性のあることが示された。
【0223】
５％デキストロース溶液５０ｍｌで再構成した製剤の写真を図８に示したが、バッチ３（ＡＰＩの濃度は１５ｍｇ／ｍｌ、ｐＨを７．０３に調整）については、バイアルの壁の付着物およびバイアルの底の不溶性粒子はなく、溶液は透明であった。これにより、再構成用溶液の体積を増やすと、再構成した凍結乾燥製剤を改善し得ることが示された。
【0224】
実験の結論
本発明者らは、実験結果を比較することにより、ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系におけるＡＰＩ（ＴＨ－３０２）の溶解度は１６０ｍｇ／ｍｌ以上になり得るものの、ＡＰＩの濃度は、以下の理由により、適切な範囲内とすべきであることを見出した。
本発明者らは、実験結果を比較することにより、ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系におけるＡＰＩ（ＴＨ－３０２）の溶解度は１６０ｍｇ／ｍｌ以上になり得るものの、ＡＰＩの濃度は、以下の理由により、適切な範囲内とすべきであることを見出した。
【0225】
第一に、ＡＰＩの濃度が過度に高いと、凍結乾燥プロセスの冷却処置の間に薬物溶液の結晶化および層化が生じ、それによって凍結乾燥プロセスが影響を受ける可能性がある。
【0226】
第二に、薬物の濃度が過度に高いと、再構成に影響し、再構成の失敗につながる可能性がある。
【0227】
したがって、ＡＰＩ濃度には適切な範囲がある。広範な実験の結果、本発明者らは、５～１６０ｍｇ／ｍｌの範囲が好適であり、またはさらに、ＡＰＩ濃度が８～５０ｍｇ／ｍｌであると、薬物溶液が安定し、かつ、続いて凍結乾燥された製剤の品質が良好になる得ることを見出した。
【0228】
５．ＡＰＩ濃度、凍結乾燥保護剤濃度、およびｔｅｒｔ－ブタノール濃度が、凍結乾燥粉末の残留溶媒に及ぼす影響を調べるための実験
ＡＰＩ濃度、凍結乾燥保護剤濃度、およびｔｅｒｔ－ブタノール濃度が、凍結乾燥粉末の残留溶媒に及ぼす影響を調べ、ブランクの凍結乾燥粉末を製剤化し、対照として使用した。
ＡＰＩ濃度、凍結乾燥保護剤濃度、およびｔｅｒｔ－ブタノール濃度が、凍結乾燥粉末の残留溶媒に及ぼす影響を調べ、ブランクの凍結乾燥粉末を製剤化し、対照として使用した。
【0229】
下記表１４に従って、凍結乾燥用の薬物溶液を調製した。各バッチについて１０バイアル、１バイアル当たり１ｍｌ、合計１０ｍＬ。
【0230】
【表14】
【0231】
薬物溶液の調製プロセス：
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を規定量の水に溶解し、完全に溶解させた。
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を規定量の水に溶解し、完全に溶解させた。
【0232】
２．バッチ０１、０２、０３および０４については、規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを凍結乾燥保護剤水溶液に添加し、均一に混合した。次いで、規定量のＡＰＩを添加し、ＡＰＩが完全に溶解するまで撹拌した。
【0233】
バッチ０５については、ｔｅｒｔ－ブタノールを添加しなかった。規定量のＡＰＩを添加し、ＡＰＩが完全に溶解するまで撹拌した。
【0234】
バッチ０６および０７については、規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを凍結乾燥保護剤水溶液に添加し、均一に混合した。これらにはＡＰＩを添加せず、ブランク対照として使用した。
【0235】
３．本実験では、ｐＨを調整せず、溶液を１バイアル当たり１ｍｌにサブパッケージ化した。
【0236】
上述のサブパッケージ化製剤を、－７０℃の冷蔵庫で３時間予備凍結乾燥し、次いで凍結乾燥機で６２時間乾燥した。凍結乾燥後、バイアルに真空下で栓をし、次いで圧着キャップを付けた。図９に示す凍結乾燥製剤を得た。
【0237】
その製剤に、再構成用のＤ５Ｗを注入した。バッチ０１～０７の全てについて、再構成は容易で、溶液は透明であった。
【0238】
凍結乾燥製剤試料を４０℃の恒温器に入れ、該当する日にＨＰＬＣにより純度を測定した。その結果を下記表１５に示した。
【0239】
【表15】
【0240】
０日目の試料のｔｅｒｔ－ブタノール（２バイアル）および水分（１バイアル）の含有量も測定した。その結果を下記表１６および表１７に示した。
【0241】
【表16】
【0242】
【表17】
【0243】
実験の結論
小型凍結乾燥機により調製した試料において、各バイアルの試料中のＴＢＡ残留物は異なるレベルであり、スクロースを用いて製剤化したものの残留ＴＢＡ含有量は、マンニトールを用いて調製したものよりも高かった。
小型凍結乾燥機により調製した試料において、各バイアルの試料中のＴＢＡ残留物は異なるレベルであり、スクロースを用いて製剤化したものの残留ＴＢＡ含有量は、マンニトールを用いて調製したものよりも高かった。
【0244】
４０℃の条件下では、スクロースを用いて製剤化したものでは関連物質の量が大幅に増加したが、マンニトールを用いて製剤化したものでは関連物質の量がわずかに増加したにすぎなかった。
【0245】
ＡＰＩ濃度は、凍結乾燥製剤における残留溶媒含有量とはあまり関係がない。同様に、凍結乾燥保護剤濃度は、凍結乾燥製剤における残留溶媒含有量とはあまり関係がない。
【0246】
ＡＰＩ濃度、凍結乾燥保護剤濃度、およびｔｅｒｔ－ブタノール濃度は全て、凍結乾燥製剤における残留溶媒含有量に影響する。比較すると、マンニトールを凍結乾燥賦形剤（凍結乾燥保護剤）として使用して得られた凍結乾燥製剤は残留レベルが低く、高温で加速された安定性実験では、マンニトールを用いて製剤化した製剤は、スクロースを用いて製剤化したものよりも安定性が良好である。
【0247】
６．様々なＡＰＩ濃度およびマンニトール濃度、様々な割合のｔｅｒｔ－ブタノール、ならびに様々な充填体積が試料再構成に及ぼす影響を調べるための実験
６．１ 様々なｐＨ値、および製剤（４０％ｔｅｒｔ－ブタノール＋６０ｍｇ／ｍｌマンニトール＋１０ｍｇ／ｍｌＡＰＩ）の充填量が試料再構成に及ぼす影響の調査
６００ｍｌ薬物溶液を表１８に従って調製した。
６．１ 様々なｐＨ値、および製剤（４０％ｔｅｒｔ－ブタノール＋６０ｍｇ／ｍｌマンニトール＋１０ｍｇ／ｍｌＡＰＩ）の充填量が試料再構成に及ぼす影響の調査
６００ｍｌ薬物溶液を表１８に従って調製した。
【0248】
【表18】
【0249】
ｔｅｒｔ－ブタノールの密度はρ＝０．７８５ｇ／ｍｌである。したがって、２４０ｍｌの体積は１８８．４ｇに相当する。
【0250】
薬物溶液の調製プロセス：
１．規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを凍結乾燥保護剤水溶液に撹拌しながら添加し、均一に混合した。次いで、規定量のＡＰＩを添加し、撹拌しながら溶解した。
１．規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを凍結乾燥保護剤水溶液に撹拌しながら添加し、均一に混合した。次いで、規定量のＡＰＩを添加し、撹拌しながら溶解した。
【0251】
２．滅菌フィルタカップを使用して濾過した。バッチ０１：３００ｍｌ、ｐＨ調整なし。バッチ０２：ｐＨ４．５８を７．０７に調整した。同時に、各バッチについて溶液６ｍｌを採取し、冷蔵庫（２～８℃）で貯蔵して、結晶化現象を観察した。
【0252】
３．充填：
１バイアル当たり２００ｍｇ：バッチ０１については、２１ｍＬを充填して６バイアルを得、バッチ０２については、２１ｍＬを充填して６バイアルを得た。
１バイアル当たり２００ｍｇ：バッチ０１については、２１ｍＬを充填して６バイアルを得、バッチ０２については、２１ｍＬを充填して６バイアルを得た。
【0253】
１バイアル当たり１５０ｍｇ：バッチ０１については、１６ｍＬを充填して６バイアルを得、バッチ０２については、１６ｍＬを充填して６バイアルを得た。
【0254】
１バイアル当たり１００ｍｇ：バッチ０１については、１０．５ｍＬを充填して６バイアルを得、バッチ０２については、１０．５ｍＬを充填して６バイアルを得た。
【0255】
６．２ 様々なｐＨ値、および製剤（３０％ｔｅｒｔ－ブタノール＋７０ｍｇ／ｍｌマンニトール＋１２．５ｍｇ／ｍｌＡＰＩ）の充填量が試料再構成に及ぼす影響の調査
薬物溶液６００ｍｌを表１９に従って調製した。
薬物溶液６００ｍｌを表１９に従って調製した。
【0256】
【表19】
【0257】
ｔｅｒｔ－ブタノールの密度はρ＝０．７８５ｇ／ｍｌであるので、ｔｅｒｔ－ブタノール１８０ｍｌに相当する質量は１４１．３ｇである。
【0258】
薬物溶液の調製プロセス：
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を、規定量程度の水に、完全に溶解するまで５００ｒｐｍで撹拌しながら溶解させた。
１．最初に、規定量の凍結乾燥保護剤を、規定量程度の水に、完全に溶解するまで５００ｒｐｍで撹拌しながら溶解させた。
【0259】
２．規定量のｔｅｒｔ－ブタノールを凍結乾燥保護剤水溶液に添加し、均一に混合した。次いで、規定量のＡＰＩを添加し、撹拌しながら溶解した。
【0260】
３．滅菌フィルタカップを使用して濾過した。バッチ０３：３００ｍｌ、ｐＨ調整なし。バッチ０４：ｐＨ４．６１を７．０１に調整した。同時に、各バッチについて溶液６ｍｌを採取し、冷蔵庫（２～８℃）で貯蔵して、結晶化現象を観察した。
【0261】
４．充填：
１バイアル当たり２００ｍｇ：バッチ０３については、１７ｍＬを充填して８バイアルを得、バッチ０４については、１７ｍＬを充填して８バイアルを得た。
１バイアル当たり２００ｍｇ：バッチ０３については、１７ｍＬを充填して８バイアルを得、バッチ０４については、１７ｍＬを充填して８バイアルを得た。
【0262】
１バイアル当たり１５０ｍｇ：バッチ０３については、１３ｍＬを充填して７バイアルを得、バッチ０４については、１３ｍＬを充填して７バイアルを得た。
【0263】
１バイアル当たり１００ｍｇ：バッチ０３については、８．５ｍＬを充填して８バイアルを得、バッチ０４については、８．５ｍＬを充填して８バイアルを得た。
【0264】
６．３ 予備凍結乾燥および凍結乾燥
上述のサブパッケージ化製剤を、真空凍結乾燥機内で凍結乾燥した。凍結乾燥は、表１２に挙げたパラメータを使用して行った。凍結乾燥後、バイアルに真空下で栓をし、次いで圧着キャップ付けた。凍結乾燥製剤を得た。
上述のサブパッケージ化製剤を、真空凍結乾燥機内で凍結乾燥した。凍結乾燥は、表１２に挙げたパラメータを使用して行った。凍結乾燥後、バイアルに真空下で栓をし、次いで圧着キャップ付けた。凍結乾燥製剤を得た。
【0265】
６．４ 実験結果
（１）中間薬物溶液における結晶化現象
バッチ０１および０２から溶液６ｍｌを採取し、冷蔵庫（２～８℃）に一定時間（２時間）貯蔵した。その結果、溶液は透明であり、結晶化は観察されなかった。
（１）中間薬物溶液における結晶化現象
バッチ０１および０２から溶液６ｍｌを採取し、冷蔵庫（２～８℃）に一定時間（２時間）貯蔵した。その結果、溶液は透明であり、結晶化は観察されなかった。
【0266】
バッチ０３および０４から溶液６ｍｌを採取し、冷蔵庫（２～８℃）に一定時間（２時間）貯蔵した。その結果、結晶化が観察された。
【0267】
（２）試料再構成
凍結乾燥製剤は全て白色のケーキ状固形物であった。
凍結乾燥製剤は全て白色のケーキ状固形物であった。
【0268】
試料の再構成に使用した溶媒、および再構成後の現象を、下記表２０に示した。
【0269】
【表20】
【0270】
常圧とは、バイアルのアルミニウムキャップとゴム栓を開けた後、バイアルが外部環境と連通しているときに、再構成のために、凍結乾燥製剤を含有するバイアルに精製水を注入した状況のことを意味する。常圧と記載されていない場合は、再構成のために、凍結乾燥製剤を含有するバイアルにシリンジを介して精製水を直接注入した状況のこと（この場合、バイアル内部の気圧は外部大気圧よりも低い）を意味する。
【0271】
バッチ０４からの試料（８．５ｍＬ、１３ｍＬ、および１７ｍＬ）を４０℃で１０日間貯蔵した後に採取し、次いで再構成した。その結果を下記表２１に示した。
【0272】
【表21】
【0273】
実験の簡単な概要：バッチ０４からの試料（８．５ｍｌ、１３ｍｌ、および１７ｍｌ）を４０℃で１０日間貯蔵しても、再構成に影響しない。試料についての再構成後の現象は、０日目の試料と大きな違いはない。
【0274】
実験の結論：
一般的に言えば、体積が固定された容器の場合、特定の範囲内でより少ない体積で充填した方が、その充填した薬物溶液から得られる凍結乾燥製剤を再構成することが容易になる。
一般的に言えば、体積が固定された容器の場合、特定の範囲内でより少ない体積で充填した方が、その充填した薬物溶液から得られる凍結乾燥製剤を再構成することが容易になる。
【0275】
薬物溶液のｐＨ値を調整すべきかどうかに関しては、相対的に、ｐＨ値を約７に調整することによって得られた凍結乾燥製剤は、再構成性能がより良好である。
【0276】
具体的な比較により、より低いＡＰＩ濃度およびより低いマンニトール含有量で得られた凍結乾燥製剤の方が、再構成が容易であったことがわかる。これにより、凍結乾燥製剤の薬物負荷を増やすためにＡＰＩ濃度およびマンニトールの投与量を増やすだけでは、再構成が困難になることが示唆された。再構成が容易で薬物負荷がより高い凍結乾燥薬物溶液を得るには、適切なＡＰＩ濃度およびマンニトール含有量を選択しなければならない。
【0277】
７．ｐＨが試料安定性に及ぼす影響を調べるための実験
ｐＨが試料安定性に及ぼす影響を調べた。
ｐＨが試料安定性に及ぼす影響を調べた。
【0278】
下記表２２に示す計画に従って、薬物溶液を調製した。総体積６５００ｍｌを調製した。各バイアルに２５ｍＬを充填し、合計で２６０バイアルを充填した。
【0279】
【表22】
【0280】
ｔｅｒｔ－ブタノールの密度はρ＝０．７８５ｇ／ｍｌであるので、１９５０ｍｌのｔｅｒｔ－ブタノールの質量は１５３０．７５ｇである。ＡＰＩの純度は９９．２６％である。
【0281】
凍結乾燥製剤の調製
１．溶液の調製
（１）７０％ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液の調製：ｔｅｒｔ－ブタノール３５０．８１ｇおよび水１５０．４２ｇを秤量することにより溶液を得た。
１．溶液の調製
（１）７０％ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液の調製：ｔｅｒｔ－ブタノール３５０．８１ｇおよび水１５０．４２ｇを秤量することにより溶液を得た。
【0282】
（２）予備溶解：規定量のＡＰＩを秤量し、撹拌条件下で７０％ｔｅｒｔ－ブタノール水溶液にＡＰＩを添加し、撹拌しながら溶解した。得られた溶液を、溶液Ａとして記録した。
【0283】
（３）撹拌条件下で、最初に、規定量のマンニトールを残りの水の７０％に溶解させた。得られた溶液を透明になるまで撹拌し、溶液Ｂとして記録した。
【0284】
（４）溶液Ａと溶液Ｂとを混合し、均一に撹拌した。次いで、その混合溶液に、残りの水および残りのｔｅｒｔ－ブタノールを、すすぎに使用した後に添加した。得られた中間薬物溶液のｐＨは５．６３であった。
【0285】
（５）その薬物溶液を３等分した。
【0286】
薬物溶液－０１：ｐＨは調整せず、室温で２４時間貯蔵した後にｐＨを測定したところ、４．７７であった。
【0287】
薬物溶液－０２：重炭酸ナトリウム２００μｌを添加し、ｐＨを測定したところ、６．６０（ｐＨは６．０～６．５の間）であった。室温で２４時間貯蔵した後にｐＨを測定したところ、５．２０であった。
【0288】
薬物溶液－０３：重炭酸ナトリウム１０００μｌを添加し、ｐＨを測定したところ、７．２０（ｐＨは７．０）であった。室温で２４時間貯蔵した後にｐＨを測定したところ、６．９０であった。０時間での中間薬物溶液と、室温で２４時間貯蔵した後の薬物溶液とをそれぞれ採取し、それらの含有量および関連物質について測定した。
【0289】
２．濾過
上記の溶液を、２５０ｍｌの滅菌フィルタカップを使用して濾過した。
上記の溶液を、２５０ｍｌの滅菌フィルタカップを使用して濾過した。
【0290】
３．充填
薬物溶液－０１バッチについては、２４．５ｇを充填して７８バイアルを得、バッチ０１として記録した。
薬物溶液－０１バッチについては、２４．５ｇを充填して７８バイアルを得、バッチ０１として記録した。
【0291】
薬物溶液－０２バッチについては、２４．５ｇを充填して７８バイアルを得、バッチ０２として記録した。
【0292】
薬物溶液－０３バッチについては、２４．５ｇを充填して７８バイアルを得、バッチ０３として記録した。
【0293】
４．半栓
パッケージの後、バイアルに半分栓をし、フリーズドライのために凍結乾燥機に入れた。
パッケージの後、バイアルに半分栓をし、フリーズドライのために凍結乾燥機に入れた。
【0294】
５．予備凍結乾燥および凍結乾燥
上述のサブパッケージ化製剤を、真空凍結乾燥機内で凍結乾燥した。この凍結乾燥機モデルにおけるバイアルの配置配列を図１０に示した。凍結乾燥は、表１２に挙げた凍結乾燥パラメータを用いて行った。凍結乾燥後、真空下でバイアルに栓をし、圧着キャップを付けた。凍結乾燥製剤を得た。取り出し前のプレート温度：５．０℃、高真空下でバイアルに手動で栓をした。
上述のサブパッケージ化製剤を、真空凍結乾燥機内で凍結乾燥した。この凍結乾燥機モデルにおけるバイアルの配置配列を図１０に示した。凍結乾燥は、表１２に挙げた凍結乾燥パラメータを用いて行った。凍結乾燥後、真空下でバイアルに栓をし、圧着キャップを付けた。凍結乾燥製剤を得た。取り出し前のプレート温度：５．０℃、高真空下でバイアルに手動で栓をした。
【0295】
実験結果
薬物溶液の試験結果を表２３に示した。
薬物溶液の試験結果を表２３に示した。
【0296】
【表23】
【0297】
凍結乾燥製剤試料の状態：白色のケーキ状固体。具体的な試料を図１１に示した。凍結乾燥機の中間部にあるバックボックスからの試料ボトルのボトルネックには、図１２に示すように、粉末がその周囲に付いていた。パッケージ中の誤った操作によって生じた可能性がある。
【0298】
（３）再構成試料の測定
様々なバッチおよび場所から凍結乾燥製剤をそれぞれ採取し、再構成した。その結果を下記表２４に示した。
様々なバッチおよび場所から凍結乾燥製剤をそれぞれ採取し、再構成した。その結果を下記表２４に示した。
【0299】
【表24】
【0300】
通常使用される静脈注入溶媒－生理食塩液による再構成効果をさらに調べるために、精製水で約５ｍｇ／ｍｌのＡＰＩ濃度に再構成した後、製剤を生理食塩液で０．５ｍｇ／ｍｌにさらに希釈した（５ｍｌを抜き出して、５０ｍｌの塩化ナトリウム注射剤に添加、０．５ｍｇ／ｍｌ）。透明な溶液を得、次いで、ｐＨ値および浸透圧データを測定した。その結果を下記表２５に示した。
【0301】
【表25】
【0302】
生理食塩液で再構成した後、様々な時間に試料を採取して、溶液におけるＡＰＩの純度をＨＰＬＣにより測定した。その結果を下記表２６に示した。
【0303】
【表26】
【0304】
（４）試料の溶媒残留物および安定性試験
凍結乾燥製剤試料を４０℃、２５℃および２～８℃の恒温器に入れ、該当する日にＨＰＬＣにより純度を測定した。その結果を下記表２７に示した。
凍結乾燥製剤試料を４０℃、２５℃および２～８℃の恒温器に入れ、該当する日にＨＰＬＣにより純度を測定した。その結果を下記表２７に示した。
【0305】
【表27】
【0306】
残留溶媒の試験
バッチ０１、バッチ０２およびバッチ０３の０日目の試料のｔｅｒｔ－ブタノール含有量（２バイアル）および含水量（２バイアル）を、それぞれ測定した。なお、フリーズドライ機プレートの中間部から試料を採取した。その結果を下記表２８に示す。
バッチ０１、バッチ０２およびバッチ０３の０日目の試料のｔｅｒｔ－ブタノール含有量（２バイアル）および含水量（２バイアル）を、それぞれ測定した。なお、フリーズドライ機プレートの中間部から試料を採取した。その結果を下記表２８に示す。
【0307】
【表28】
【0308】
８．凍結乾燥後に様々なｔｅｒｔ－ブタノール濃度、様々な賦形剤（スクロースまたはマンニトール）、様々な賦形剤量、様々な薬物含有量および様々なｐＨ値を有する溶液を用いて凍結乾燥した製剤の調製例
凍結乾燥製剤の品質指標としては、再構成、安定性および残留溶媒の３つの主要な調査指標が挙げられ、かつ、上記の実験から、影響因子としては、溶媒（ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒におけるｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率）、ＡＰＩ濃度、賦形剤の種類（マンニトールまたはスクロース）および量、ならびに薬物溶液のｐＨ値が挙げられることがわかり、これらを考慮して、本発明者らはいくつかの多因子実験を実施した。その結果を下記表２８に示した。
凍結乾燥製剤の品質指標としては、再構成、安定性および残留溶媒の３つの主要な調査指標が挙げられ、かつ、上記の実験から、影響因子としては、溶媒（ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒におけるｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率）、ＡＰＩ濃度、賦形剤の種類（マンニトールまたはスクロース）および量、ならびに薬物溶液のｐＨ値が挙げられることがわかり、これらを考慮して、本発明者らはいくつかの多因子実験を実施した。その結果を下記表２８に示した。
【0309】
【表29】
【表29】
【表29】
ＴＢＡはｔｅｒｔ－ブタノールである。
【0310】
Ｍａｎｎｉｔｏｌはマンニトールである。
【0311】
Ｓｕｃｒｏｓｅはスクロースである。
【0312】
ＡＰＩは、活性医薬成分ＴＨ－３０２である。
【0313】
ＰＢＳは、リン酸緩衝生理食塩液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓａｌｉｎｅ）の略であり、ｐＨ値が約７．４で安定している。
【0314】
製剤処方における「３０％ＴＢＡ／７０Ｍａｎｎｉｔｏｌ／１０ＡＰＩ－ｐＨ７．０」とは、ｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率が３０％、マンニトールが７０ｍｇ／ｍｌ、ＡＰＩが１０ｍｇ／ｍｌ、ＮａＨＣＯ３を添加することにより調整したｐＨが７．０であることを意味する。調製方法は、上記の実施例で述べたものと同じにした。「４０％ＴＢＡ／６０Ｍａｎｎｉｔｏｌ／１０ＡＰＩ」とは、ｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率が４０％、マンニトールが６０ｍｇ／ｍｌ、ＡＰＩが１０ｍｇ／ｍｌで、ｐＨを調整していない（弱酸性）ことを意味し、他についても同様である。
【0315】
供給可能体積が１ｍＬのバッチの場合に５ｍＬバイアルを使用したことを除いて、５０ｍＬバイアルを使用した。
【0316】
実験の結論
１．上述の実験と組み合わせたｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系におけるＴＨ－３０２の溶解度データ、および上記の表２８に示す８５群の探索的実験結果から、化合物は、その含有量が５～５００ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、溶液中に安定して存在し得ることを推定または確認することができ、例えば、－８０℃で予備凍結乾燥する、絶対気圧をかなり低く、乾燥時間をより長く、また乾燥温度をより低くして凍結乾燥するなど、凍結乾燥パラメータを調整する必要がある得るものの、含有量が８ｍｇ／ｍｌ超２００ｍｇ／ｍｌ以下である場合に凍結乾燥が可能であることが、実験により実証された。好ましくは、溶液における式Ｉの化合物の含有量が８ｍｇ／ｍｌ以上２５ｍｇ／ｍｌ以下の場合、凍結乾燥製剤は、安定性がより良好であり、より再構成しやすい。溶液における式Ｉの化合物の含有量は、８ｍｇ／ｍｌ以上１５ｍｇ／ｍｌ以下である。このような含有量範囲は、凍結乾燥条件が比較的穏やかであり、かつ凍結乾燥サイクルがより短いことを意味する。溶液における式Ｉの化合物の含有量が８ｍｇ／ｍｌ以上１０ｍｇ／ｍｌ以下であることはさらに、本凍結乾燥製剤が、商業的に適切な凍結乾燥サイクルおよび低温条件下で、商業大規模生産の価値を有することを意味する。ＡＰＩ含有量が不適切であると、商業大量生産時に使用される大規模な凍結乾燥機内において、加熱温度が不均一であるためバイアルが破損するか、または粉末が噴霧状態になり、そのため、収率が、商業生産の許容レベルの９０％未満になる可能性がある。
１．上述の実験と組み合わせたｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系におけるＴＨ－３０２の溶解度データ、および上記の表２８に示す８５群の探索的実験結果から、化合物は、その含有量が５～５００ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、溶液中に安定して存在し得ることを推定または確認することができ、例えば、－８０℃で予備凍結乾燥する、絶対気圧をかなり低く、乾燥時間をより長く、また乾燥温度をより低くして凍結乾燥するなど、凍結乾燥パラメータを調整する必要がある得るものの、含有量が８ｍｇ／ｍｌ超２００ｍｇ／ｍｌ以下である場合に凍結乾燥が可能であることが、実験により実証された。好ましくは、溶液における式Ｉの化合物の含有量が８ｍｇ／ｍｌ以上２５ｍｇ／ｍｌ以下の場合、凍結乾燥製剤は、安定性がより良好であり、より再構成しやすい。溶液における式Ｉの化合物の含有量は、８ｍｇ／ｍｌ以上１５ｍｇ／ｍｌ以下である。このような含有量範囲は、凍結乾燥条件が比較的穏やかであり、かつ凍結乾燥サイクルがより短いことを意味する。溶液における式Ｉの化合物の含有量が８ｍｇ／ｍｌ以上１０ｍｇ／ｍｌ以下であることはさらに、本凍結乾燥製剤が、商業的に適切な凍結乾燥サイクルおよび低温条件下で、商業大規模生産の価値を有することを意味する。ＡＰＩ含有量が不適切であると、商業大量生産時に使用される大規模な凍結乾燥機内において、加熱温度が不均一であるためバイアルが破損するか、または粉末が噴霧状態になり、そのため、収率が、商業生産の許容レベルの９０％未満になる可能性がある。
【0317】
２．上記の実験と組み合わせたｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系におけるＴＨ－３０２の溶解度データ、および上記の表２８に示す８５群の探索的実験の結果から、溶液に対するｔｅｒｔ－ブタノールの体積百分率が１～９９％の場合、または、溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、（ｔｅｒｔ－ブタノールの密度が０．７８５ｇ／ｍｌであるという条件下で）７．８５～７７７．１５ｍｇ／ｍｌの場合、調製したＴＨ－３０２溶液が安定で透明であることを推定または確認することができ、例えば、予備凍結乾燥を－８０℃で行う、凍結乾燥中の絶対気圧を低くし、乾燥時間を長くし、また乾燥温度を低くするなど、凍結乾燥パラメータを調整する必要があり得るものの、実験により、体積比率が５～９５％であるか、または、溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノールの含有量が、（ｔｅｒｔ－ブタノールの密度が０．７８５ｇ／ｍｌであるという条件下で）３９．２５～７４５．７５ｍｇ／ｍｌである場合、凍結乾燥が可能であることが実証された。好ましくは、ｔｅｒｔ－ブタノールの体積比率が３０～６０％であるか、または、溶液におけるｔｅｒｔ－ブタノール含有量が、（ｔｅｒｔ－ブタノールの密度が０．７８５ｇ／ｍｌであるという条件下で）２３５．５～４７１ｍｇ／ｍｌである場合、凍結乾燥製剤は、安定性がより良好であり、より再構成しやすい。
【0318】
実際、ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系では、ｔｅｒｔ－ブタノール含有量が過度に高いと、後続のマンニトール／スクロースの溶解に影響し、マンニトール／スクロースが賦形剤として機能した上で、それらの量が、後続の凍結乾燥製剤の品質に直接影響する。マンニトール／スクロースの量が少なすぎると、薬物溶液が、凍結乾燥後に賦形剤骨格に均一に装填されることができなくなるか、またはさらに、凍結乾燥プロセスの乾燥段階の間に、凍結乾燥粉末ケーキが崩壊するか、もしくは凍結乾燥に失敗することになる。したがって、ＴＨ－３０２の溶解度を高めるという目的のためだけに、ｔｅｒｔ－ブタノールの含有量を不適当に増やすことはできない。
【0319】
３．上記実験と組み合わせたｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系におけるＴＨ－３０２の溶解度データ、および上記表２８に示した８５群の探索的実験の結果によれば、賦形剤としてマンニトール、ＰＥＧ２０００、Ｐ１８８、ＳＢＥＣＤ、ＤＳＰＥ－ＭＰＥＧ２０００、スクロースまたは他の同様の物質を使用した場合に、本凍結乾燥製剤が得られることがわかる。しかし、比較の結果、本凍結乾燥製剤自体の要因に加えて、例えば、慣行的に使用し市販することができるかどうか、かつ有効性、ＤＭＰＫおよび毒性に影響しないかどうかを総合的に考慮した結果、スクロースおよびマンニトールを使用することがより適当である。このような賦形剤を使用して調製された凍結乾燥製剤は、溶液中で適当な安定性（室温で持続時間が少なくとも２４時間）を有し、凍結乾燥製剤は安定であり、直ちに再構成することができ、注射製剤用賦形剤の要件を満たす製品を得ることが容易である。
【0320】
４．実際、上記の項目２で述べたところであるが、賦形剤としてのマンニトール／スクロースの含有量を多くすることは、必ずしも効果が良好になることを意味するものではない。つまり、賦形剤の量が多くなると、凍結乾燥した骨格がより多くの薬物を装填することができ、凍結乾燥生産、および凍結乾燥製剤の安定性の向上にも有益であるが、その安定性は、ｔｅｒｔ－ブタノール－水混合溶媒系における溶解度に影響される。マンニトール／スクロースの量が過度に多くなると、混合溶媒に完全に溶解することができなくなるか、または溶液が不安定になるため、予備凍結乾燥段階または冷却段階の間に沈殿が生じる可能性がある。したがって、凍結乾燥溶液で賦形剤として使用されるマンニトール／スクロースの量もまた、上述の要件を満たすのに適切な範囲内にあるべきである。
【0321】
本溶液におけるスクロースまたはマンニトールの含有量は、２０～３００ｍｇ／ｍｌである。このような範囲であれば、上記の要件、すなわち薬物溶液は安定であり、凍結乾燥プロセスの予備凍結乾燥段階または冷却段階の間に沈殿が生じにくいという要件を満たすことができる。含有量が４０～１００ｍｇ／ｍｌであることがさらに好ましく、安定性が良好な再構成溶液および凍結乾燥製剤を得ることが可能である。含有量が６０～７０ｍｇ／ｍｌであることがより好ましい。このような含有量範囲は、凍結乾燥条件が比較的穏やかであり、凍結乾燥サイクルが商業生産慣行（１０日未満、すなわち、１生産サイクルにつき２４０時間）に則してしていることを意味する。
【0322】
５．上記の項目２で述べたように、マンニトール／スクロースの量が過度に少ないと、凍結乾燥後に薬物溶液が賦形剤骨格に均一に装填されることができなくなるか、またはさらに、凍結乾燥プロセスの乾燥段階の間に凍結乾燥粉末ケーキが崩壊するか、もしくは凍結乾燥に失敗する可能性がある。そして、マンニトール／スクロースの量が過度に多いと、外観および安定性の良好な凍結乾燥製剤を製造することはできるものの、単位パッケージ当たりの凍結乾燥製剤における薬物ＴＨ－３０２の含有量が、商業販売および商業利用のための要件を満たすには少なすぎる可能性があることを意味する。したがって、マンニトール／スクロースと活性薬物との適切な比率が不可欠である。本溶液において、式Ｉの化合物と賦形剤との質量比率は、１：（０．５～２０）の範囲である。このような比率であれば、他の成分について上記の項目１～４で述べた要件を満たすことができ、調製される凍結乾燥製剤が良好な外観および安定性を有することを可能にし得る。好ましくは、質量比率が１：（２～１２．５）の範囲であると、再構成が容易な、より良好な凍結乾燥製剤を得ることができる。より好ましくは、質量比率が１：（５～１０）の範囲であると、調製される凍結乾燥製剤が優れた特性を有する。すなわち、凍結乾燥製剤は良好な安定性を有し、再構成が容易であり、穏やかな凍結乾燥条件および短い凍結乾燥サイクルを有する。
【0323】
６．実験現象により、凍結乾燥用の薬物溶液のｐＨ値が、その安定性および再構成の複雑性のレベル、ならびにそれに対応する凍結乾燥製剤の安定性に直接影響することが示された。実験により、薬物溶液にｐＨ調整剤（塩基または塩基性塩）を添加しなかった場合、薬物溶液は酸性になり、その酸性薬物溶液は安定性が悪くなり、それに対応する凍結乾燥製剤は再構成が不十分で安定性が低くなることが証明された。ｐＨ調整剤（塩基または塩基性塩）を添加した場合、これらを著しく改善することが可能であった。
【0324】
７．バイアル中の薬物溶液の充填体積もまた、複数の要因によって、最終的に凍結乾燥された粉末ケーキ（粉末は噴霧状態か、またはバイアルのボトルネックに付着している）の外観および再構成に影響する可能性があることに言及する価値がある。したがって、バイアル中の薬物溶液の充填体積とバイアルの体積との比率が適当でなければならない。上述の実験データおよび実際の生産慣行を考慮した結果、凍結乾燥薬物溶液の充填体積は密封容器の体積の１／３～１／２であり、それに対応する凍結乾燥製剤の体積は密封容器の体積の１／３～１／２であることが適当である。
【0325】
９．Ｄ５Ｗ溶液における薬物の飽和溶解度（強振とう条件下）
ＴＨ－３０２試料を約６０ｍｇの量で正確に秤量し、透明なバイアルに入れ、デキストロース５％水溶液（Ｄ５Ｗ）６ｍｌを添加した。得られた溶液を２分間激しく振とうし、溶解度－ストック溶液を得た。溶解度－ストック溶液は不溶性物質を含有していることが観察された。そこで、その溶解度－保存溶液を濾過したところ、溶解度－保存溶液は透明になった。濾過した濾液を室温で２４時間放置したところ、依然として透明であることが認められた。サンプリングおよび適当な希釈を行った後に、溶液の含有量をＨＰＬＣによって測定したところ、７．２５ｍｇ／ｍｌであった。この値はまさに、Ｄ５Ｗ溶液における薬物の飽和溶解度であった。
ＴＨ－３０２試料を約６０ｍｇの量で正確に秤量し、透明なバイアルに入れ、デキストロース５％水溶液（Ｄ５Ｗ）６ｍｌを添加した。得られた溶液を２分間激しく振とうし、溶解度－ストック溶液を得た。溶解度－ストック溶液は不溶性物質を含有していることが観察された。そこで、その溶解度－保存溶液を濾過したところ、溶解度－保存溶液は透明になった。濾過した濾液を室温で２４時間放置したところ、依然として透明であることが認められた。サンプリングおよび適当な希釈を行った後に、溶液の含有量をＨＰＬＣによって測定したところ、７．２５ｍｇ／ｍｌであった。この値はまさに、Ｄ５Ｗ溶液における薬物の飽和溶解度であった。
【0326】
このように、静脈投与用のＴＨ－３０２含有注射剤におけるＴＨ－３０２の濃度は、０～７．２５ｍｇ／ｍｌの範囲内であるべきことがわかる。実際、静脈注射剤に含有されるグルコースの等張性および浸透圧を考慮すると、静脈点滴の際の適切な注入処方を決定するには、さらなる研究が必要である。
【0327】
１０．５０ｍｌバイアルにおける薬物溶液の予備凍結乾燥および後凍結乾燥に関する高さ測定の統計結果（薬物負荷および薬物質量百分率の計算）
実験７の薬物溶液を充填した。５０ｍｌバイアルに薬物溶液２５ｍｌを充填し、薬物溶液を充填した後の液面高さを測定した。平均高さは２６．５ｍｍであった。凍結乾燥後、凍結乾燥機の様々なプレート位置にあるバイアルの凍結乾燥粉末ケーキの高さを測定し、充填前の２５ｍｌと比較した体積の違いを大まかに計算した。
実験７の薬物溶液を充填した。５０ｍｌバイアルに薬物溶液２５ｍｌを充填し、薬物溶液を充填した後の液面高さを測定した。平均高さは２６．５ｍｍであった。凍結乾燥後、凍結乾燥機の様々なプレート位置にあるバイアルの凍結乾燥粉末ケーキの高さを測定し、充填前の２５ｍｌと比較した体積の違いを大まかに計算した。
【0328】
複数バッチ実験では、凍結乾燥前の体積が凍結乾燥後に増加したバッチもあれば、減少したバッチもあり、ほとんど変化しないままのバッチもあった。凍結乾燥前後の液面をマークし、体積変化を統計的に分析することによって、体積の増大または減少の最大幅は１０％であることを見出した。すなわち、体積変化は±１０％以内である。
【0329】
凍結乾燥後に、凍結乾燥粉末ケーキの体積が１０％減少した場合において、
薬物溶液のＡＰＩ含有量が５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である場合、凍結乾燥後の凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は、５／０．９～５００／０．９、すなわち、５．５５～５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３であり、以下は、同じ方法で計算したものである。
薬物溶液のＡＰＩ含有量が５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である場合、凍結乾燥後の凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は、５／０．９～５００／０．９、すなわち、５．５５～５５５．５５ｍｇ／ｃｍ３であり、以下は、同じ方法で計算したものである。
【0330】
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が５～１６０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は５．５５～１７７．７７ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～５０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～５５．５５ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～２５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～２７．７７ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～１６．６６ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～１１．１１ｍｇ／ｃｍ３である。
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～５０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～５５．５５ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～２５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～２７．７７ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～１６．６６ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は８．８８～１１．１１ｍｇ／ｃｍ３である。
【0331】
薬物溶液の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであるとすると、凍結乾燥粉末ケーキのそれらに相当する薬物負荷は、６．６６、７．７７、８．３３、８．８８、９．４４、１１．１１、１３．８８、１６．６６、２２．２２または２７．７７ｍｇ／ｃｍ３である。
【0332】
凍結乾燥後に、凍結乾燥粉末ケーキの体積が１０％増加した場合において、
薬物溶液のＡＰＩ含有量が５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である場合、凍結乾燥後の凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は、５／１．１～５００／１．１、すなわち４．５５～４５４．５５ｍｇ／ｃｍ３であり、以下は、同じ方法で計算したものである。
薬物溶液のＡＰＩ含有量が５ｍｇ／ｍｌ以上５００ｍｇ／ｍｌ以下である場合、凍結乾燥後の凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は、５／１．１～５００／１．１、すなわち４．５５～４５４．５５ｍｇ／ｃｍ３であり、以下は、同じ方法で計算したものである。
【0333】
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が５～１６０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は４．５５～１４５．４５ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～５０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～４５．４５ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～２５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～２２．７３ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～１３．６４ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～９．０９ｍｇ／ｃｍ３である。
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～５０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～４５．４５ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～２５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～２２．７３ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１５ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～１３．６４ｍｇ／ｃｍ３であり、
薬物溶液における式Ｉの化合物の含有量が８～１０ｍｇ／ｍｌの範囲である場合、凍結乾燥粉末ケーキの薬物負荷は７．２７～９．０９ｍｇ／ｃｍ３である。
【0334】
薬物溶液の含有量が、６、７、７．５、８、８．５、１０、１２．５、１５、２０または２５ｍｇ／ｍｌであるとすると、凍結乾燥粉末ケーキのそれらに相当する薬物負荷は、５．４５、６．３６、６．８２、７．２７、７．７３、９．０９、１１．３６、１３．６４、１８．１８または２２．７３ｍｇ／ｃｍ３である。
【0335】
薬物溶液の凍結乾燥により得られた製剤は、ＡＰＩ薬物、賦形剤、ならびに残留ｔｅｒｔ－ブタノール溶媒および残留水を含有しており、出願人らが調製した凍結乾燥製剤におけるＡＰＩ薬物と賦形剤との質量比率は、１：（０．５～２０）の範囲であることから、最大で許容可能なｔｅｒｔ－ブタノール含有量は１．７５質量％であり、含水量は６質量％である。そのため、凍結乾燥製剤におけるＡＰＩ薬物の質量百分率による下限は（１／２０＋１）＊（１－６％－１．７５％）＝４．７６％＊９２．２５％＝４．３９％であり、上限は（１／０．５＋１）＊（１－０％－０％）＝６６．６６％である。すなわち、凍結乾燥製剤におけるＡＰＩ薬物の含有量は、４．３９％以上６６．６６％未満である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【国際調査報告】