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特表2024-531492ＰＡＲＰ阻害剤に耐性のある患者のＴＨ－３０２による治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-08-29
(54)【発明の名称】ＰＡＲＰ阻害剤に耐性のある患者のＴＨ－３０２による治療
(51)【国際特許分類】
A61K 31/675 20060101AFI20240822BHJP
A61K 31/502 20060101ALI20240822BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240822BHJP
【ＦＩ】
A61K31/675
A61K31/502
A61P35/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024513162
(86)(22)【出願日】2022-08-26
(85)【翻訳文提出日】2024-04-08
(86)【国際出願番号】 CN2022115284
(87)【国際公開番号】W WO2023025312
(87)【国際公開日】2023-03-02
(31)【優先権主張番号】202110996009.2
(32)【優先日】2021-08-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517319271
【氏名又は名称】アセンタウィッツ ファーマシューティカルズ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002262
【氏名又は名称】ＴＲＹ国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】チ、テンヤン
(72)【発明者】
【氏名】リュウ、シン
(72)【発明者】
【氏名】デュアン、ジャンーシン
(72)【発明者】
【氏名】モン、ファンイン
(72)【発明者】
【氏名】リ、アンロン
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC50
4C086DA38
4C086GA07
4C086GA12
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明は、ＴＨ－３０２の単剤又は併用により、ＰＡＲＰ阻害剤に耐性のある患者を治療する治療方法、薬物、及びその製薬用途を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物の単剤または併用により、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療する治療方法であって、
【請求項2】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物とともに、ＰＡＲＰ阻害剤を併用して、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療する、請求項１に記載の治療方法。
【請求項3】
前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される、請求項１または２に記載の治療方法。
【請求項4】
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含む、請求項３に記載の治療方法。
【請求項5】
前記ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ、ルカパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タラゾパリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂからなる群より選択され、前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、膀胱癌からなる群より選択され、前記肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌であることが好ましい、請求項１または２に記載の治療方法。
【請求項6】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造を有する化合物から選択される、請求項１または２に記載の治療方法。
【請求項7】
下記の式の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物単剤により、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ耐性の卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌患者を治療する治療方法であって、
【請求項8】
下記の式の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物とともに、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂを併用して、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ耐性の卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌患者を治療する治療方法であって、
【請求項9】
治療方法であって、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２遺伝子変異の状況を検出するステップと、前記患者がＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２遺伝子変異を有する場合、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物単剤を使用して、又はＰＡＲＰ阻害剤を併用して治療するステップと、
を含み、
【請求項10】
前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである、請求項３、４、７、８、又は９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項11】
単剤で、またはＰＡＲＰ阻害剤と併用して、患者の癌を治療するための薬物の調製における、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物の使用であって、
ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択される、使用。
【請求項12】
前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される、請求項１１に記載の使用。
【請求項13】
前記ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含み、前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである、請求項１２に記載の使用。
【請求項14】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造を有する化合物から選択され、
前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項15】
ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療するための、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物であって、
【請求項16】
前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、好ましくは、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含む、請求項１５に記載の薬物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、癌の治療方法に関し、特に、ＰＡＲＰ阻害剤（ＰＡＲＰｉ）耐性の癌患者の治療方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ＰＡＲＰｉ薬物であるオラパリブＯｌａｐａｒｉｂの最初のヒト臨床試験では、ＰＡＲＰｉがＢＲＣＡ１／２変異を有する腫瘍細胞の増殖を阻害することができることが初めて実証されているが、これは主に、ＰＡＲＰ阻害剤がＰＡＲＰのＤＮＡ一本鎖損傷修復機能を阻害し得る結果、細胞内の大量の一本鎖ＤＮＡ損傷を適時に修復することができないという合成致死性理論（Ａｓｈｗｏｒｔｈ，Ａ．，＆Ｌｏｒｄ，ＣＪ．（２０１８）．Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｅｔｈａｌ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ：ｗｈａｔ’ｓ ｎｅｘｔ ａｆｔｅｒ ＰＡＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ？．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１５（９），５６４‐５７６．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５７１－０１８－００５５－６）に基づくものである。修復されない一本鎖ＤＮＡ損傷は複製フォークの崩壊を引き起こし、それによって二本鎖ＤＮＡ損傷を生じ、強い細胞毒性を有する二本鎖ＤＮＡ損傷は、ＢＲＣＡ１及びＢＲＣＡ２などのタンパク質によって共同で媒介される相同組換え修復（ＨＲ）経路を通じて正常細胞内で修復可能であるが、ＢＲＣＡ１／２が欠損した腫瘍細胞内では、二本鎖ＤＮＡ損傷は修復できず、腫瘍細胞の最終的な死につながる。ＰＡＲＰｉは、もともと放射線治療及び化学療法増感のために開発され、ＰＡＲＰｉがＢＲＣＡ１／２遺伝子欠損癌を治療するための単一の薬物として開発され得ることを支持する前臨床研究もある。よって、ＰＡＲＰｉ－ＢＲＣＡ仮説を検証するための最初の標的集団は、ＢＲＣＡ１／２生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡ１／２）キャリアを選定した。卵巣癌におけるＰＡＲＰｉの最初の研究登録集団は、いずれも以前プラチナベースの化学療法を受けたことがあり、そして研究では、プラチナ系の感受性がＰＡＲＰｉ応答に直接関連することが分かった（プラチナベースの化学療法剤はＤＮＡ架橋をもたらすＤＮＡ損傷剤であり、一部はＨＲ経路によって修復可能であるため、ＤＮＡ修復欠損腫瘍はプラチナベースの化学療法に対して感受性があると予想される）。別の２つのＰＡＲＰｉのニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂおよびルカパリルＲｕｃａｐａｒｉｂは、卵巣癌の治療において承認されており、ＦＤＡおよびＥＭＡは、ニラパリブによる維持療法を承認し（ＢＲＣＡ１／２の状態に関係なく）、ルカパリブも、ＢＲＣＡ１／２変異関連卵巣癌患者が２種類の化学療法プロトコルを受けた後の代替治療プロトコルとしてＦＤＡおよびＥＭＡによって登録されており、タラゾパリブも、ＢＲＣＡ変異／ＨＥＲ－２陰性転移性乳癌を治療するために、ＦＤＡによって承認されている（Ｍａｔｅｏ，Ｊ．，Ｌｏｒｄ，Ｃ．Ｊ．，Ｓｅｒｒａ，Ｖ．，Ｔｕｔｔ，Ａ．，Ｂａｌｍａnａ，Ｊ．，Ｃａｓｔｒｏｖｉｅｊｏ－Ｂｅｒｍｅｊｏ，Ｍ．，Ｃｒｕｚ，Ｃ．，Ｏａｋｎｉｎ，Ａ．，Ｋａｙｅ，Ｓ．Ｂ．，＆ ｄｅ Ｂｏｎｏ，Ｊ．Ｓ．（２０１９）．Ａ ｄｅｃａｄｅ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＰＡＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３０（９），１４３７‐１４４７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ａｎｎｏｎｃ／ｍｄｚ１９２）。
【0003】
ＰＡＲＰｉが臨床的に使用されるにつれて、ＰＡＲＰｉ耐性はその臨床使用における不可避の問題となり、ＢＲＣＡｍ（ＢＲＣＡ変異）卵巣癌患者の４０％超がＰＡＲＰｉの恩恵を受けられなかった。既存の研究から、相同組換え回復（Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ、ＨＲＲ）、ＤＮＡ複製フォーク保護、ＰＡＲＰｉ薬物動態の変化などは、ＰＡＲＰｉ薬物耐性をもたらす主要な原因であることが示されている。ＰＡＲＰｉ薬物耐性を克服し、ＰＡＲＰｉ薬物感受性を高めるために、様々な併用療法が開発されており、その多くは臨床的な段階に入っている。主に、ＰＡＲＰｉ－ＤＮＡアルキル化剤の併用、ＰＡＲＰｉ－腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ｏＨＳＶｓ）の併用、ＰＡＲＰｉ－イオン放射の併用、ＰＡＲＰｉ－免疫療法の併用、ＰＡＲＰｉ－ＨＳＰ９０阻害剤の併用、ＰＡＲＰｉ－ＷＥＥ１／ＡＴＲ阻害剤の併用、ＰＡＲＰｉ－ＤＮＭＴｉ阻害剤の併用、ＰＡＲＰｉ－ＣＤＫ阻害剤の併用等を含む（Ｈｅ Ｌｉ，Ｚｈａｏ－Ｙｉ Ｌｉｕ，Ｎａｙｉｙｕａｎ Ｗｕ，Ｙｏｎｇ－Ｃｈａｎｇ Ｃｈｅｎ，Ｑｕａｎ Ｃｈｅｎｇ ａｎｄ Ｊｉｎｇ Ｗａｎｇ．ＰＡＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ，２０２０ Ｊｕｎ２０；１９（１）：１０７．２０２０．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１２９４３－０２０－０１２２７－０；Ｒｏｓｅ，Ｍ．，Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｊ．Ｔ．，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ，Ｋ．，Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｄ．Ｊ．，＆Ｂｏｌｄｅｒｓｏｎ，Ｅ．（２０２０）．ＰＡＲＰ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ，８，５６４６０１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｃｅｌｌ．２０２０．５６４６０１）。
【0004】
ＴＨ－３０２（Ｅｖｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ、エボホスファミド、ｃａｓ番号９１８６３３－８７－１）は、米国Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ社によって開発された、２－ニトロイミダゾール誘発性の酸素欠乏活性化プロドラッグ（ＨＡＰ）ブロモイソホスファミドである。不活性ＴＨ－３０２プロドラッグは、酸素欠乏の場合に、毒性の高いＢｒ－ＩＰＭを放出し得る。ＴＨ－３０２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの幅広い生物学的活性と特異的な酸素欠乏選択的活性化活性を有し、Ｈ２ＡＸリン酸化、ＤＮＡ架橋活性を誘導し、細胞周期停止を引き起こすため、この化合物は、多数の製薬会社および科学研究機関によって抗癌薬物の開発が行われている。
【0005】
Ｍｅｎｇ Ｆ Ｙ（孟繁英）らの研究論文では、ＴＨ－３０２は、種々の腫瘍に対して幅広い活性を有し、優れた低酸素選択性による活性増強効果を有することが示されている。研究によれば、低酸素条件下の３２人の癌細胞株のＴＨ－３０２のインビトロ細胞毒性はいずれも正常酸素条件下よりも明らかに強いことが示されており、この化合物は低酸素条件下の癌細胞に対して選択的な細胞毒性を有することが示されている。一電子還元酵素（ＰＯＲ）を過剰発現させたヒト由来の細胞を用いて、酸素欠乏条件下での一電子還元酵素依存的なＴＨ－３０２の活性増強原理が実証された。下記反応式１に示す通りである。
【0006】
シトクロムＰ４５０酸化還元酵素はプロドラッグＴＨ－３０２を還元して中間体ラジカルアニオンを生成し、ラジカルアニオンは不安定で細胞毒性の細胞毒素Ｂｒ－ＩＰＭに分解されて作用する。このステップの重要な過程は、一電子還元プロセスであり、研究によれば、酸素の存在が一電子還元プロセスを逆転させること、すなわち、酸素の存在が一電子還元プロセスを妨害することが実証されたため、ＴＨ－３０２は、酸素欠乏環境下でのみ、還元されてより強い細胞毒性を生じることが可能である。塩基除去修復、ヌクレオチド除去修復、非相同末端連結修復または相同末端連結修復を欠損した細胞株を含む、チャイニーズハムスター卵巣細胞に基づくＤＮＡ修復突然変異細胞株（この細胞株は相同依存性修復を欠く細胞株である）をさらに使用して、ＴＨ－３０２のインビトロ細胞毒性を検出した。研究によれば、相同末端連結修復を個別に欠損するか、又は相同末端連結修復とヌクレオチド除去修復とを共同に欠損する細胞株は、ＴＨ－３０２低酸素感受性を著しく増強した。しかし、塩基除去修復、ヌクレオチド除去修復、または非相同末端連結修復を個別に欠損した細胞株は、ＴＨ－３０２感受性に影響を与えない。この発見と一致して、ＴＨ－３０２感受性の増強は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２及びＦＡＮＣＡを欠くインビトロ細胞実験でも観察された。かつ臨床試験においても、ＴＨ－３０２がＢＲＣＡ遺伝子変異を有する患者に対してより良好な治療効果を有することが観察された（Ｍｅｎｇ Ｆ，Ｅｖａｎｓ Ｊ Ｗ，Ｂｈｕｐａｔｈｉ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ＴＨ－３０２．［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１２，１１（３）：７４０；Ｃｏｎｒｏｙ，Ｍ．，Ｂｏｒａｄ，Ｍ．Ｊ．，＆Ｂｒｙｃｅ，Ａ．Ｈ．（２０１７）．Ｈｙｐｏｘｉａ－Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ａｌｋｙｌａｔｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ＢＲＣＡ１－Ｍｕｔａｎｔ Ｏｖａｒｉａｎ Ｓｅｒｏｕｓ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｕｒｅｕｓ，９（７），ｅ１５１７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７５９／ｃｕｒｅｕｓ．１５１７；ＷＯ２０１５０１３４４８Ａ１，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉ ｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ａｎｄ Ａ ｔａｘａｎｅ；ＷＯ２０２０００７１０６Ａ１、エボホスファミドの抗癌医薬用途）。
【0007】
ＴＨ－３０２の作用メカニズムに関するこれらの研究、特にＢＲＣＡ変異に対するＴＨ－３０２の特別な感受性が開示された事実は、ＴＨ－３０２薬物が併用することによりＰＡＲＰｉの薬物耐性という欠点を克服し得ることを示唆している。
【0008】
しかし、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３１６７７出願（公開番号ＷＯ２０１２１３５７５７Ａ２、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ、出願人、米国Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ社）では、Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄの研究者は、ＴＨ－３０２とＰＡＲＰｉ候補薬物ＡＢＴ－８８８（すなわち、Ｖｅｌｉｐａｒｉｂ、ＣＡＳ：９１２４４４－００－９）を使用して、インビトロで併用の研究を行った。
【0009】
異なる癌細胞を、ＡＢＴ－８８８で、正常酸素下で１時間前処理し、次いで、正常酸素下または低酸素下でＴＨ－３０２と共にさらに２時間インキュベートした。ＡＢＴ－８８８の存在下で３日間インキュベートした後、アルマーブルーを用いて細胞生存率を測定した。結果は、以下の表の通りである。
Ｈ４６０細胞株（ヒト大細胞肺癌細胞）の結果：
ＨＣＴ１１６細胞株（ヒト結腸癌細胞）の結果：
Ａ３７５細胞株（ヒト悪性黒色腫細胞）の結果：
Ｈ４６０細胞株（ヒト大細胞肺癌細胞）の結果：
【0010】
上記の結果は、インビトロ細胞実験において、ＴＨ－３０２とＡＢＴ－８８８の併用は相加効果がないこと、すなわち、ＴＨ－３０２活性がＡＢＴ－８８８の存在によって実質的に影響されないことを示している。
【0011】
しかしながら、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０６５０６５号（公開ＷＯ２０２０１１８２５１Ａ２、発明の名称：Ｈｙｐｏｘｉａ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｔｈｅｒｅｏｆ ｗｉｔｈ ａ ｐａｒｐ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｏｆ）には、低酸素活性化薬物又はそのプロドラッグ（例えば、ａｐａｚｉｑｕｏｎｅ，ＡＱ４Ｎ，ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ，ｅｖｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ（ＴＨ－３０２），ｎｉｍｏｒａｚｏｌｅ，ｐｉｍｏｎｉｄａｚｏｌｅ，ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ，ＰＲ－１０４，ｔａｒｌｏｘｏｔｉｎｉｂ，ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ（チラパザミン））をＰＡＲＰｉと併用することで相加効果があることが開示されており、特に、チラパザミンとオラパリブの動物体内での併用投与試験も開示されており、結果として、チラパザミン又はＰＡＲＰｉを用いる単一投与プロトコルと比較して、低酸素活性化抗癌プロドラッグであるチラパザミンとＰＡＲＰｉオラパリブとの併用投与プロトコルは、ＰＤＸ動物モデルにおける腫瘍の増殖速度を有意に遅延させること、すなわち、低酸素活性化抗癌薬物とＰＡＲＰとの併用が相加効果を有することが示されている。
【0012】
つまり、様々な研究の試験において、低酸素活性化抗癌プロドラッグとＰＡＲＰｉとの併用が相加効果を有するかどうかについては、依然として論争があり、これは相加効果の複雑さを示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0013】
出願人の研究者は、薬効試験において、ＴＨ－３０２とＰＡＲＰｉの併用が一部の動物体内腫瘍増殖阻害試験において相加効果を示すことを見出した。これは２０１２年Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ社が行ったインビトロ細胞実験結果とは全く異なるものであった。このため出願人はさらに研究を行い、ＴＨ－３０２単剤がＰＡＲＰｉ耐性の癌モデルに対して優れた治療効果を有するという予想外の結果をさらに得た。
【課題を解決するための手段】
【0014】
本願は、実験結果に基づいて、以下の癌の治療方法を提供する。
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物の単剤または併用により、ＰＡＲＰｉ耐性の癌、腫瘍患者を治療する治療方法を提供する。
式中、ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択される。
式（I）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物とともに、ＰＡＲＰ阻害剤を併用して、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療する治療方法を提供する。
式中、ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択される。
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物の単剤または併用により、ＰＡＲＰｉ耐性の癌、腫瘍患者を治療する治療方法を提供する。
式（I）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物とともに、ＰＡＲＰ阻害剤を併用して、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療する治療方法を提供する。
【0015】
本明細書に記載される薬物は、薬品または製剤を指し、調製された薬品は特定の用量範囲の有効成分である式（I）の酸素欠乏活性化化合物、その塩、もしくは溶媒和物を含む、および／または調製された薬物は特定の剤形、特定の投与様式で投与される。
【0016】
調製された薬品、薬物、製剤は、薬学的に許容される補助剤または賦形剤をさらに含んでもよい。前記薬物は、臨床的に投与される任意の剤形、例えば、錠剤、坐剤、分散錠、腸溶錠、チュアブル錠、口腔内崩壊錠、カプセル剤、糖衣剤、顆粒剤、乾燥粉末剤、経口液剤、注射用小容量注射剤、注射用凍結乾燥粉末注射剤または大容量非経口剤であり得る。具体的な剤形および投与様式に応じて、前記薬物における薬学的に許容される補助剤または賦形剤は、希釈剤、可溶化剤、崩壊剤、懸濁剤、滑沢剤、連結剤、充填剤、香味剤、甘味剤、抗酸化剤、界面活性剤、保存剤、カプセル剤、および色素などのうちの一種または数種を含んでもよい。
【0017】
【0018】
【0019】
「癌」とは、攻撃によって局所的に、かつ転移によって全身的に拡張され得る、潜在的に無制限に増殖し得る白血病、リンパ腫、癌、および他の悪性腫瘍（固形腫瘍を含む）を指す。
【0020】
【0021】
ＰＡＲＰは、ポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（Ｐｏｌｙ ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ＰＡＲＰ）と総称される酵素である。ＰＡＲＰはＤＮＡ修復酵素であり、ＤＮＡ修復経路において重要な役割を果たす。ＤＮＡが損傷及び切断されるとＰＡＲＰが活性化され、これは、ＤＮＡ損傷の分子受容体として作用し、ＤＮＡ切断部位を認識、連結し、さらにレセプタータンパク質のポリＡＤＰリボシル化を活性化、触媒する作用を有し、ＤＮＡ修復プロセスに関与する。
【0022】
ＰＡＲＰ阻害剤はＰＡＲＰ酵素の働きを阻害することで、これら「修理工」に相当するＰＡＲＰ酵素を正常に働かせないようにするものであり、ＤＮＡの損傷が修復されず、細胞は死滅する。
【0023】
細胞はＰＡＲＰという「修理工」だけではないので、ＰＡＲＰが問題となっても、細胞のＤＮＡ損傷は次工程に持ち込まれ、別の「修理工」が待機しているので、ＤＮＡを修復することができる。ＢＲＣＡ遺伝子が産生を担うタンパク質は、この別の「修理工」の重要なメンバーである。正常細胞には、この二重の保険のメカニズムが有る、つまり、ＰＡＲＰ阻害剤が一方の保険を破壊しても、もう一方の保険は依然として働き得るため、細胞は死滅しない。
【0024】
しかしながら、ＢＲＣＡ遺伝子変異を有する卵巣癌細胞又は乳癌細胞では、ＢＲＣＡという「修理工」は、もはや正常に機能できない。もちろん、ＰＡＲＰグループは機能し続けるため、癌細胞が死滅することはない。
【0025】
ＰＡＲＰ阻害剤が癌細胞に特異的に入ると、ＰＡＲＰ酵素の活性が阻害され正常に働かなくなり、癌細胞のＤＮＡが修復できなくなる。これにより、ＰＡＲＰ阻害剤は、正常細胞を死滅させることなく、癌細胞のみを死滅させる作用を奏する。
【0026】
ＰＡＲＰ阻害剤＋ＢＲＣＡ遺伝子変異が同時に起こると、２つの異なる遺伝子（ＢＲＣＡ）またはタンパク質（ＰＲＡＰ）が同時に変化すると細胞死が引き起こされる、いわゆる「合成致死（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｌｅｔｈａｌｉｔｙ）」が発生するが、この２つの遺伝子／タンパク質の中で一方のみが異常であれば、細胞死は引き起こされない。
ＰＡＲＰ阻害剤とは、ＰＡＲＰ酵素に対して阻害作用がある化合物であり、ＰＡＲＰ酵素活性を阻害できる物質はすべてＰＡＲＰ阻害剤である。
ＰＡＲＰ阻害剤とは、ＰＡＲＰ酵素に対して阻害作用がある化合物であり、ＰＡＲＰ酵素活性を阻害できる物質はすべてＰＡＲＰ阻害剤である。
【0027】
市販されている５つの薬物、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ、ルカパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タラゾパリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、および臨床第３相に入った薬物パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂからなる群より選択され、ここでＰＡＲＰ阻害剤は、実質的にＰＡＲＰ阻害剤の活性成分を含有する薬物を意味することは明らかである。
【0028】
タラゾパリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂは、有害又は有害と疑われる生殖系列ＢＲＣＡ突然変異（ｇＢＲＣＡｍ）ＨＥＲ２陰性の局所進行性又は転移性乳癌の成人に適用できる。市販の剤形は、０．２５ｍｇ／１ｍｇのタラゾパリブトシル酸カプセルであり、経口投与で１回１ｍｇ、１日１回、副作用が発生した場合には治療の中断または投薬量の減量を考慮する。
最初に副作用が発生した場合、経口用量を０．７５ｍｇ（０．２５ｍｇカプセル３つ）に減らし、１日１回とする。
２回目に副作用が発生した場合、経口用量を０．５ｍｇ（０．２５ｍｇカプセル２つ）に減らし、１日１回とする。
３回目に副作用が発生した場合、経口用量を０．２５ｍｇ（０．２５ｍｇカプセル１つ）に減らし、１日１回とする。
最初に副作用が発生した場合、経口用量を０．７５ｍｇ（０．２５ｍｇカプセル３つ）に減らし、１日１回とする。
２回目に副作用が発生した場合、経口用量を０．５ｍｇ（０．２５ｍｇカプセル２つ）に減らし、１日１回とする。
３回目に副作用が発生した場合、経口用量を０．２５ｍｇ（０．２５ｍｇカプセル１つ）に減らし、１日１回とする。
【0029】
ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂは、プラチナ感受性の再発性上皮性卵巣癌、卵管癌または原発性腹膜癌を患う成人患者がプラチナベース化学療法による完全寛解または部分寛解に達した後の維持治療に使用される。市販の剤形は、１００ｍｇのニラパリブトシル酸塩カプセルであり、疾患の進行または耐えられない副作用が発生するまで、１日１回３００ｍｇを経口投与し、副作用が発生した場合は治療の中断または用量の減量を考慮する。
用量の減量は、まず１日３カプセル（３００ｍｇ）から１日２カプセル（２００ｍｇ）に減少する。
さらなる用量の減量が必要な場合、２回目の用量を、１日２カプセル（２００ｍｇ）から１日１カプセル（１００ｍｇ）に減量してもよい。
薬物投与の中止や用量の減量が有害反応を制御できない場合、薬物の中止が推奨される。
用量の減量は、まず１日３カプセル（３００ｍｇ）から１日２カプセル（２００ｍｇ）に減少する。
さらなる用量の減量が必要な場合、２回目の用量を、１日２カプセル（２００ｍｇ）から１日１カプセル（１００ｍｇ）に減量してもよい。
薬物投与の中止や用量の減量が有害反応を制御できない場合、薬物の中止が推奨される。
【0030】
ルカパリブＲｕｃａｐａｒｉｂは、腫瘍に特定の遺伝子変異（有害ＢＲＣＡ）を有し、２種又は数種の化学療法薬物で治療されたことがある進行性卵巣癌女性に使用される。市販の剤形は、２００ｍｇ、２５０ｍｇおよび３００ｍｇの３つの錠剤である。推奨される用量は、６００ｍｇであり、１日２回経口投与し、食事を伴うまたは伴わない。治療は、疾患が進行するまたは毒性が許容されなくなるまで継続される。有害な反応については、治療の中断または用量の減量を考慮する。
【0031】
オラパリブＯｌａｐａｒｉｂは、生殖細胞系列または体細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍまたはｓＢＲＣＡｍ）を有する進行上皮性卵巣癌、卵管癌、または原発性腹膜癌の初期治療を受けた成人患者がプラチナベース化学療法による完全寛解または部分寛解に達した後の維持治療、プラチナ感受性の再発性上皮性卵巣癌、卵管癌または原発性腹膜癌を患う成人患者がプラチナベース化学療法による完全寛解または部分寛解に達した後の維持治療に使用される。市販の剤形は、１５０ｍｇおよび１００ｍｇの２つの錠剤である。推奨用量は、３００ｍｇ（１５０ｍｇの錠剤２錠）であり、１日２回、合計１日用量６００ｍｇに相当する。１００ｍｇ錠剤は用量減少時に使用される。
吐き気、嘔吐、下痢、貧血などの有害事象に対処するために、治療の中止または減量を考慮してもよい。
減量が必要な場合、推奨用量を２５０ｍｇ（１５０ｍｇ錠剤１錠、１００ｍｇ錠剤１錠）に減らし、１日２回（合計１日用量５００ｍｇに相当する）服用する。
さらなる減量が必要な場合、推奨用量は２００ｍｇ（１００ｍｇ錠剤２錠）に減らし、１日２回（合計１日用量４００ｍｇに相当する）服用する。
吐き気、嘔吐、下痢、貧血などの有害事象に対処するために、治療の中止または減量を考慮してもよい。
減量が必要な場合、推奨用量を２５０ｍｇ（１５０ｍｇ錠剤１錠、１００ｍｇ錠剤１錠）に減らし、１日２回（合計１日用量５００ｍｇに相当する）服用する。
さらなる減量が必要な場合、推奨用量は２００ｍｇ（１００ｍｇ錠剤２錠）に減らし、１日２回（合計１日用量４００ｍｇに相当する）服用する。
【0032】
フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂは、生殖細胞系列ＢＲＣＡ変異（ｇＢＲＣＡｍ）を伴う、過去に二次以上の化学療法を受けたプラチナ感受性再発性卵巣癌、卵管癌又は原発性腹膜癌患者の治療に使用される。市販の剤型は、５０ｍｇのカプセル剤である。
【0033】
他の研究中の臨床に入っているＰＡＲＰｉ候補薬物は、Ｗｅｂリンク ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ．ｃｏｍ／ＰＡＲＰ．ｈｔｍｌおよび関連する学術レビュー文献を参照されたい。
【0034】
１日当たり１２０ｍｇ／ｍ２～４６０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内投与する。
４８０ｍｇ／ｍ２～約６７０ｍｇ／ｍ２、又は、例えば、５７５ｍｇ／ｍ２の週用量で静脈内投与する。
【0035】
臨床試験に使用されるＴＨ－３０２（溶液に使用するための濃縮物）は、ＴＨ－３０２の滅菌液体製剤である。７０％無水エタノール、２５％ジメチルアセトアミド、５％ポリソルベート８０を用いて、ＴＨ－３０２を調製した。これは、ゴム栓およびｆｌｉｐ－ｏｆｆシールを有する１０ｍＬガラスバイアルで、スポンサーによって提供される。ＴＨ－３０２医薬品は、清澄な無色～淡黄色の溶液であり、可視粒子を実質的に含まない。公称総量６５０ｍｇのＴＨ－３０２について、各単回使用バイアルは、公称充填体積６．５ｍＬ（１００ｍｇ／ｍＬに相当する）のＴＨ－３０２医薬品を含有し、ロット番号、投与経路、必要な保管条件、スポンサーの名前、および適用可能な規定に必要とされる適切な警告マークを開示するラベルが明確に貼られている。投与前に薬局マニュアルに従って希釈する必要がある。
【0036】
投与前に、所望の最終濃度を得るために、市販の５％グルコース水溶液で希釈して総容量５００ｍＬ（≧１０００ｍｇの総用量に対して１０００ｍＬ）とした。各用量ＴＨ－３０２を、フタル酸ジ（２－エチルヘキシル）を含まない（ＤＥＨＰなしの）５％グルコース水溶液で調製し、ＤＥＨＰを含まない静脈内注入投与デバイスを使用して静脈内注入した。
もちろん、Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ社によって開発された凍結乾燥製剤を使用することもできる。
もちろん、Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ社によって開発された凍結乾燥製剤を使用することもできる。
【0037】
ＴＨ－３０２（１００ｍｇ）及びスクロース（１ｇ）の溶液（２０ｍＬ）を凍結乾燥バイアルに加え、凍結乾燥して、５ｍｇ／ｃｍ３未満の薬物負荷でＴＨ－３０２の凍結乾燥単位剤形を得る。ヒトへの投与を目的として、単位剤形を５％グルコース注射液に溶解し、適量の溶液を患者に投与する。
【0038】
ヒト患者を対象とした後続のＴＨ－３０２の第Ｉ相臨床試験投与プロトコルは、凍結乾燥製剤を用いて、１００ｍＬのガラスバイアル中で注射用の凍結乾燥製剤を調製し、１００ｍｇ／１００ｍＬの薬物負荷量で、２～８℃に制御された条件下で保存し、使用時に凍結乾燥製剤のバイアルに５％グルコース注射液２５０ｍＬを注射し、注入ポンプにより３０分以内で静脈内に点滴投与する。
【0039】
単剤は単剤療法である。併用は、併用療法である。単剤療法とは、１回の治療過程において１種のみの抗癌剤を使用することを意味する。併用療法とは、１つの治療過程において２種または２種以上の抗癌剤を同時にまたは順次に使用することを意味する。
【0040】
一般に、併用治療では、病態の特性、併用する薬剤の種類によって異なる投与量、投与サイクルを検討する必要があり、上記の状況に基づいてのみ、検討して得られた併用薬治療プロトコルは初めて、単剤治療よりも高い治療効果を得ることが可能である。
【0041】
単剤および併用療法プロトコルの薬物投与量、投与サイクルは、いずれも上記のＴＨ－３０２およびその類似化合物およびＰＡＲＰｉの投与量、投与プロトコルを参照して臨床試験により検討することが必要である。
さらに、前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷している。
関連する研究文献によれば、ＤＮＡ修復酵素の損傷は、
相同組換えＤＮＡ修復酵素（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
ヌクレオチド除去修復酵素（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
非相同末端リガーゼ（ｎｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｅｎｄ ｊｏｉｎｉｎｇ）の損傷、
塩基除去修復酵素（ｂａｓｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
ミスマッチ修復酵素（ｍｉｓｍａｔｃｈ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
ファンコニ貧血（Ｆａｎｃｏｎｉ’ｓ ａｎｅｍｉａ）経路修復酵素の損傷
から選択される１種または数種である。
さらに、前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷している。
関連する研究文献によれば、ＤＮＡ修復酵素の損傷は、
相同組換えＤＮＡ修復酵素（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
ヌクレオチド除去修復酵素（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
非相同末端リガーゼ（ｎｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｅｎｄ ｊｏｉｎｉｎｇ）の損傷、
塩基除去修復酵素（ｂａｓｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
ミスマッチ修復酵素（ｍｉｓｍａｔｃｈ ｒｅｐａｉｒ）の損傷、
ファンコニ貧血（Ｆａｎｃｏｎｉ’ｓ ａｎｅｍｉａ）経路修復酵素の損傷
から選択される１種または数種である。
【0042】
好ましくは、相同組換えＤＮＡ修復酵素の損傷、ヌクレオチド除去修復酵素の損傷、塩基除去修復酵素の損傷のいずれか一種または数種であり、より好ましくは、単独の相同組換えＤＮＡ修復酵素の損傷か、相同組換えＤＮＡ修復酵素の損傷とヌクレオチド除去修復酵素の両方の損傷である。
【0043】
更に、前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異は、市販の（付随する）診断キットによって検出することができる。
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異は、市販の（付随する）診断キットによって検出することができる。
【0044】
オラパリブＯｌａｐａｒｉｂメイト検出キットＢＲＡＣＡｎａｌｙｓｉｓＣＤｘによる遺伝子検出は、卵巣癌患者の血液サンプル中のＢＲＣＡ遺伝子変異を検出するために用いられる。
【0045】
ＢＲＣＡ１／２遺伝子変異検出キット（複合プローブアンカーシーケンシング法）は、卵巣癌及び乳癌と臨床的に診断された患者のＢＲＣＡ１／２遺伝子のエクソン領域及び近接したイントロン領域の生殖細胞系列の変異を定性的に検出するために用いられる。
【0046】
ヒトＢＲＣＡ１遺伝子およびＢＲＣＡ２遺伝子検出キット（可逆的末端終結シーケンジング法）は、ＰＡＲＰ阻害剤であるオラパリブの関連薬物ガイドに用いられる。
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含む。
式（I）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造の化合物から選択される。
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含む。
式（I）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造の化合物から選択される。
【0047】
さらに、前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌などから選択され、前記肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌であることが好ましい。
【0048】
治療方法であって、下記の式の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物単剤により、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ耐性の卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌患者を治療する。
【0049】
前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は、前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
【0050】
治療方法であって、下記の式の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物とともに、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂを併用して、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ耐性の卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌患者を治療する。
【0051】
前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は、前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
【0052】
治療方法であって、
ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２遺伝子変異の状況を検出するステップと、
前記患者がＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２遺伝子変異を有する場合、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物単剤を使用して、又はＰＡＲＰ阻害剤を併用して治療するステップと、
を含む。
式中、ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択され、
好ましくは、前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルであり、
単剤で、またはＰＡＲＰ阻害剤と併用して、患者の癌を治療するための薬物の調製における、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物の使用。
前記患者はＰＡＲＰ阻害剤に耐性のある患者であり、
ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択される。
ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２遺伝子変異の状況を検出するステップと、
前記患者がＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２遺伝子変異を有する場合、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物単剤を使用して、又はＰＡＲＰ阻害剤を併用して治療するステップと、
を含む。
好ましくは、前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルであり、
単剤で、またはＰＡＲＰ阻害剤と併用して、患者の癌を治療するための薬物の調製における、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物の使用。
ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択される。
【0053】
上記の製薬用途において、前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は
前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異には、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び系変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異が含まれる。
前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異には、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び系変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異が含まれる。
【0054】
上記の製薬用途では、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造を有する化合物から選択され、
前記ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ、ルカパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タラゾパリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂからなる群より選択され、又は
前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択され、又は
前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである。
前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択され、又は
前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである。
【0055】
異なる腫瘍種間でＴＭＢ（Ｔｕｍｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｌｏａｄ （ｂｕｒｄｅｎ）、すなわち腫瘍遺伝子変異負荷）のレベルが異なるため、一般に、ＴＭＢが２０変異／Ｍｂ（Ｍｂは１００万塩基あたりを表す）を超えると高く、１０変異／ Ｍｂ未満では低く、中間であると中くらいであると考えられる。２０１７年の世界肺癌会議で、Ｃｈｅｃｋ Ｍａｔｅ－０３２という臨床試験結果がブリストル・マイヤーズ スクイブ株式会社（ＢＭＳ）によって公表された。これは、第Ｉ相の治療に失敗した進行性肺癌患者４０１人を対象とした第ＩＩ相臨床試験であり、ＰＤ－１阻害剤単独またはイピリンとの併用で治療を行った。ＴＭＢのレベルに従って、高ＴＭＢ、中ＴＭＢ、低ＴＭＢの３種類の患者に分け、併用療法を受けた集団において、３グループの有効率はそれぞれ６２％、２０％、２３％であり、高ＴＭＢの集団は３倍の有効率を有し、３グループの全生存期間の中央値は、それぞれ２２．０カ月、３．６カ月、３．４カ月であり、２２．０カ月と３．４カ月は６倍もの差があった。この試験は、異なるＴＭＢレベルが異なる癌治療薬に対する薬物の有効性に大きな影響を有することを証明した。
【0056】
本発明はさらに、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療するための、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物であって、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を単剤または併用により治療することができる薬物を提供する。
式中、ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯなどの脱離官能基から独立して選択される。
【0057】
好ましくは、前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は
前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される。
【0058】
好ましくは、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含む。
【0059】
特に、上記薬物において、式（I）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造の化合物から選択される。
前記ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ、ルカパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タラゾパリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂからなる群より選択され、又は
前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択され、又は
前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである。
前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択され、又は
前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである。
【0060】
上記薬物は、式（I）の酸素欠乏活性化化合物を含有するほか、医薬品、薬物、製剤の特徴に応じて、薬学的に許容される補助剤または賦形剤を添加する。前記薬物は、臨床的に投与される任意の剤形、例えば、錠剤、坐剤、分散錠、腸溶錠、チュアブル錠、口腔内崩壊錠、カプセル剤、糖衣剤、顆粒剤、乾燥粉末剤、経口液剤、注射用小容量注射剤、注射用凍結乾燥粉末注射剤または大容量非経口剤であり得る。具体的な剤形および投与方法に応じて、薬物における薬学的に許容される補助剤または賦形剤は、希釈剤、可溶化剤、崩壊剤、懸濁剤、滑沢剤、連結剤、充填剤、香味剤、甘味剤、抗酸化剤、界面活性剤、保存剤、カプセル剤、および色素などのうちの一種又は数種を含んでもよい。
これらの薬物を使用する場合、単独で使用するかＰＡＲＰｉと併用して治療することができる。
これらの薬物を使用する場合、単独で使用するかＰＡＲＰｉと併用して治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【0061】
【図1】図１は、正常酸素および低酸素条件下での、化合物ＴＨ－３０２およびチラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）のＣａｐａｎ－１細胞株に対する阻害率曲線である。ここで、ｃｏｎ．Ｌｏｇ（ｎＭ）は、ｎｍｏｌ／Ｌ単位での濃度値の１０を底とした対数値を表し、ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎは、阻害率を表す。
【発明を実施するための形態】
【0062】
以下、具体的な実施例を参照して本発明を説明する。当業者であれば、これらの実施例は、単に本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を制限するものではないことを理解するであろう。
【0063】
なお、下記の実施例における実験方法は、特に断らない限り、いずれも常法によるものである。用いられる薬材原料、試薬材料等は、特に断りのない限り、市販品として入手可能である。
【0064】
「患者」および「個体」は、癌治療を必要とする哺乳動物を指すために互換的に使用される。典型的には、患者はヒトである。典型的には、患者は、癌と診断されたヒトである。特定の実施例では、「患者」または「個体」は、薬物および治療のスクリーニング、特性評価、および評価に使用される非ヒト哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、マウス、またはラットを指すことができる。
【0065】
「プロドラッグ」は、投与後または施用後に代謝により、または別の方法により、少なくとも１つの特性に関して生物学的に活性または活性のより高い化合物（または薬物）に変換される化合物を指す。プロドラッグは、薬物と比較して、薬物に対してより低い活性または不活性であるように化学的に修飾されるが、化学的修飾は、プロドラッグ投与後に代謝または他の生物学的プロセスによって対応する薬物が生成されることを可能にする。プロドラッグは、活性薬物と比較して、変化した代謝安定性または送達特性、より少ない副作用、またはより低い毒性、または改善された風味を有することができる。プロドラッグは、対応する薬物以外の反応物質を使用して合成され得る。
「治療」または「患者を治療する」は、本発明に関連する治療有効量の薬物を患者に投与、使用、または施用することを意味する。
「治療」または「患者を治療する」は、本発明に関連する治療有効量の薬物を患者に投与、使用、または施用することを意味する。
【0066】
患者に対する薬物の「投与」または「施用」（使用）は、直接投与または施用（医療専門家によって患者に投与または施用されても、自己投与または施用されてもよい）、および／または間接投与または施用（薬物を処方する行動であってもよい）を意味する。例えば、患者に薬物を自己投与若しくは施用することを指示する、及び／又は患者に薬物の処方を提供する医師が患者に薬物を投与若しくは施用する。
【0067】
薬物の「治療有効量」は、癌患者に投与または施用、使用される場合、所望の治療効果（例えば、患者における一種または数種の癌の臨床症状の緩和、改善、寛解または除去）を有するであろう薬物の量を指す。治療効果は、１回の用量の投与または施用によって生じるとは限らず、一連の用量の投与または施用後にのみ生じ得る。したがって、治療有効量は、１回または複数回で投与または施用され得る。
【0068】
病症状態または患者の「治療」は、有益なまたは所望の結果（臨床結果を含む）を得るための措置を講じることを指す。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果は、一種または数種の癌の症状の緩和または改善、疾患重症度の軽減、疾患の進行の遅延または減速、疾患状態の改善、寛解または安定化、又は他の有益な結果を含むが、これらに限定されない。場合によっては、癌の治療は、疾患に部分的に反応しまたは安定化し得る。
「腫瘍細胞」は、任意の適切な種（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒト）の腫瘍細胞を指す。
「腫瘍細胞」は、任意の適切な種（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒト）の腫瘍細胞を指す。
【0069】
本発明の実施形態に関する上記の説明は、本発明を限定されるものではなく、当業者であれば、本発明の主旨を逸脱しない限り、本発明に基づいて様々な変更または変形を行うことができ、いずれも本発明の添付の特許請求の範囲に属する。
以下、本発明の具体的な実験を示す。
以下、本発明の具体的な実験を示す。
【0070】
本明細書に開示される試験過程における動物実験の試験プロトコル、任意の修正、動物福祉および施用は、いずれも所在地のＣＲＯ（合同研究組織）ＩＡＣＵＣ委員会によって審査、承認されている。試験過程で、動物福祉および実験操作はすべてＡＡＡＬＡＣの要求を満たす。
【0071】
（一）化合物ＴＨ－３０２のＢＲＣＡノックアウトおよび野生型腫瘍細胞におけるインビトロ細胞毒性比較
【0072】
ＴＨ－３０２は、酸素欠乏条件下で活性化され、細胞毒を放出し、さらに腫瘍細胞および腫瘍組織を死滅させることができる低分子プロドラッグである。ＴＨ－３０２とＢＲＣＡ病原性変異との関連性を細胞レベルでインビトロで評価するために、本発明者らは、ヒト結腸癌細胞株ＤＬＤ１及びＢＲＣＡ２タンパク質をノックアウトしたＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－腫瘍細胞株を選択して、酸素欠乏条件下で、ＢＲＣＡ２タンパク質の発現の有無により、前記２種類の腫瘍細胞株に対するＴＨ－３０２の殺傷能力に違いがあるかどうかを検出した。
【0073】
このクローン形成実験は、ＩＣ９０（９０％阻害濃度）値を、細胞に対する化合物ＴＨ－３０２殺傷能力を評価するために使用した。具体的な実験方法は以下の通りである。
【0074】
（１）細胞培養
ａ）ＤＬＤ１及びＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞をＲＰＭＩ培地で培養し、１０％ ＦＢＳ及び１％ダイアボディを加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。
ａ）ＤＬＤ１及びＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞をＲＰＭＩ培地で培養し、１０％ ＦＢＳ及び１％ダイアボディを加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。
【0075】
（２）細胞プレーティング
ａ）細胞を細胞飽和度が８０％～９０％になるまで培養し、必要量に達したら、細胞を回収した。
ｂ）対応する培地で懸濁させ、計数して、適切な密度の細胞懸濁液に調製した。
ｃ）細胞懸濁液を１０ｃｍガラス皿に加え、ＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞密度は３．０×１０５／皿であり、ＤＬＤ１細胞密度は３００／皿であった。
ｄ）細胞を３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで２日間培養した。
ａ）細胞を細胞飽和度が８０％～９０％になるまで培養し、必要量に達したら、細胞を回収した。
ｂ）対応する培地で懸濁させ、計数して、適切な密度の細胞懸濁液に調製した。
ｃ）細胞懸濁液を１０ｃｍガラス皿に加え、ＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞密度は３．０×１０５／皿であり、ＤＬＤ１細胞密度は３００／皿であった。
ｄ）細胞を３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで２日間培養した。
【0076】
（３）化合物の準備
化合物は実験要求に従って準備した。
化合物は実験要求に従って準備した。
【0077】
（４）化合物処理細胞
ａ）化合物を酸素含有量＜０．０１％（酸素欠乏）の条件下で３時間細胞を処理した。
ｂ）細胞を１×ＰＢＳで１回洗浄し、トリプシンで細胞を消化した後、細胞を計数した。
ｃ）細胞を３ｍＬの培地で懸濁させ、２０００／ウェルのＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞密度、３００／ウェルのＤＬＤ１細胞密度で、６ウェルプレートに接種した。
ｄ）細胞プレートを１０日間インキュベーターに置いた。
ｅ）培地を捨て、細胞を固定化した後、クリスタルバイオレットで４０ｍｉｎ染色した。
ｆ）Ｃｏｌｏｎｙ Ｃｏｕｎｔｅｒ（ＶＷＲ）を使用して細胞クローン計数を行い、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｓｏｆｔ．ｃｏｍ／ｗ／ｃａｌｃｕｓｙｎ．ｈｔｍ）に従ってＩＣ９０値を算出した。
上記の実験方法で得られた、二種類の細胞における被験化合物ＴＨ－３０２のＩＣ９０値を下記表１に示す。
ａ）化合物を酸素含有量＜０．０１％（酸素欠乏）の条件下で３時間細胞を処理した。
ｂ）細胞を１×ＰＢＳで１回洗浄し、トリプシンで細胞を消化した後、細胞を計数した。
ｃ）細胞を３ｍＬの培地で懸濁させ、２０００／ウェルのＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞密度、３００／ウェルのＤＬＤ１細胞密度で、６ウェルプレートに接種した。
ｄ）細胞プレートを１０日間インキュベーターに置いた。
ｅ）培地を捨て、細胞を固定化した後、クリスタルバイオレットで４０ｍｉｎ染色した。
ｆ）Ｃｏｌｏｎｙ Ｃｏｕｎｔｅｒ（ＶＷＲ）を使用して細胞クローン計数を行い、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｓｏｆｔ．ｃｏｍ／ｗ／ｃａｌｃｕｓｙｎ．ｈｔｍ）に従ってＩＣ９０値を算出した。
上記の実験方法で得られた、二種類の細胞における被験化合物ＴＨ－３０２のＩＣ９０値を下記表１に示す。
【0078】
【0079】
実験結果：化合物ＴＨ－３０２は、酸素欠乏により活性化された後、ＤＬＤ１野生型及びＢＲＣＡ２欠損のＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞のインビトロ細胞毒性に有意な差が生じる。野生型ＤＬＤ１のインビトロＩＣ９０値は、ＤＬＤ１－ＢＲＣＡ２－／－細胞と比較して７０倍増加した。上記結果は、酸素欠乏条件下で、ＢＲＣＡ２タンパク質の欠損により、ＤＬＤ１の細胞のＴＨ－３０２に対する感受性が著しく増加することを示している。
【0080】
（二）化合物ＴＨ－３０２／ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ（チラパザミン）のＣａｐａｎ－１／ＢｘＰｃ－３のインビトロ細胞増殖に対する影響実験
本出願人は、低酸素活性化抗癌プロドラッグＴＨ－３０２及びチラパザミンについて、それぞれ、正常酸素及び低酸素条件下で、Ｃａｐａｎ－１及びＢｘＰｃ－３細胞株のインビトロ細胞増殖阻害実験を特に研究した。Ｃａｐａｎ－１細胞株はＢＲＣＡ変異型細胞株であり、ＢｘＰｃ－３細胞株はＢＲＣＡ野生型、すなわち非ＢＲＣＡ変異型細胞株である。この実験により、同じく低酸素活性化抗癌プロドラッグであるＴＨ－３０２とチラパザミンのＢＲＣＡ変異に対する感受性の違いを検証した。
実験方法と実験データ、結果は以下の通りである。
実験方法
本出願人は、低酸素活性化抗癌プロドラッグＴＨ－３０２及びチラパザミンについて、それぞれ、正常酸素及び低酸素条件下で、Ｃａｐａｎ－１及びＢｘＰｃ－３細胞株のインビトロ細胞増殖阻害実験を特に研究した。Ｃａｐａｎ－１細胞株はＢＲＣＡ変異型細胞株であり、ＢｘＰｃ－３細胞株はＢＲＣＡ野生型、すなわち非ＢＲＣＡ変異型細胞株である。この実験により、同じく低酸素活性化抗癌プロドラッグであるＴＨ－３０２とチラパザミンのＢＲＣＡ変異に対する感受性の違いを検証した。
実験方法と実験データ、結果は以下の通りである。
実験方法
【0081】
１）Ｃａｐａｎ－１／ＢｘＰｃ－３細胞懸濁液を、２種類の２４ウェルプレートに、各ウェル４９５μＬ、細胞密度６×１０４／ウェルで加えた。グラスインサート（ｇｌａｓｓ ｉｎｓｅｒｔｓ）が挿入されている２４ウェルプレートは、酸素欠乏実験に使用し、普通のプラスチック２４ウェルプレートは、正常酸素実験に使用した。
２）細胞を３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩培養した。
３）化合物処理
低酸素条件：
低酸素ワークステーションを酸素欠乏環境（Ｏ２＜０．０１％）に調節し、酸素インジケーターを用いてワークステーションの酸素欠乏状態を確認した。
２４時間細胞をプレーティングした後、グラスインサート（ｇｌａｓｓ ｉｎｓｅｒｔｓ）を備えた２４ウェルプレートを低酸素ステーションに移した。
２４ウェルプレートをスクリューシェーカーにセットし、ウェルプレートカバーを開けて振り、５分間気体交換を行った。
単剤グループは、試験濃度の１００倍の化合物溶液を各ウェルに直接加えた。
正常酸素条件：
２４時間細胞をプレーティングした後、試験濃度１００倍の化合物溶液５μＬを各ウェルに加え、各実験グループ３ウェルにした。
単剤グループは、試験濃度の１００倍の化合物溶液を各ウェルに直接加えた。
２）細胞を３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩培養した。
３）化合物処理
低酸素条件：
低酸素ワークステーションを酸素欠乏環境（Ｏ２＜０．０１％）に調節し、酸素インジケーターを用いてワークステーションの酸素欠乏状態を確認した。
２４時間細胞をプレーティングした後、グラスインサート（ｇｌａｓｓ ｉｎｓｅｒｔｓ）を備えた２４ウェルプレートを低酸素ステーションに移した。
２４ウェルプレートをスクリューシェーカーにセットし、ウェルプレートカバーを開けて振り、５分間気体交換を行った。
単剤グループは、試験濃度の１００倍の化合物溶液を各ウェルに直接加えた。
正常酸素条件：
２４時間細胞をプレーティングした後、試験濃度１００倍の化合物溶液５μＬを各ウェルに加え、各実験グループ３ウェルにした。
単剤グループは、試験濃度の１００倍の化合物溶液を各ウェルに直接加えた。
【0082】
４）化合物を３時間処理した後、２４ウェルプレートの全てを、１ウェル当たり一回５００μＬずつ、完全培地で２回洗浄した。
５）Ｃａｐａｎ－１細胞培養プレートに１ウェル当たり完全培地１０００μＬを加え、ＢｘＰｃ－３細胞培養プレートに１ウェル当たり完全培地５００μＬを加えた。
６）３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターで７２時間放置した。
５）Ｃａｐａｎ－１細胞培養プレートに１ウェル当たり完全培地１０００μＬを加え、ＢｘＰｃ－３細胞培養プレートに１ウェル当たり完全培地５００μＬを加えた。
６）３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターで７２時間放置した。
【0083】
７）Ｃａｐａｎ－１細胞を１ウェル当たり８００μＬの培地を捨て、ＢｘＰｃ－３細胞を１ウェル当たり３００μＬの培地を捨て、５０μＬのＣＴＧを添加し、２ｍｉｎ均一に振盪し、室温遮光で１５分間放置した。
８）培地を２４ウェルプレートから、１ウェル当たり１００μＬを９６ウェルプレートに移した。
９）化学発光シグナル値を多機能マイクロプレートリーダーで読み取り、読み取り時間１０００ｍｓであった。
１０）ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ ｓｏｆｔｗａｒｅでＩＣ５０を計算し、化合物のＩＣ５０値（半数阻害濃度）を得た。
８）培地を２４ウェルプレートから、１ウェル当たり１００μＬを９６ウェルプレートに移した。
９）化学発光シグナル値を多機能マイクロプレートリーダーで読み取り、読み取り時間１０００ｍｓであった。
１０）ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ ｓｏｆｔｗａｒｅでＩＣ５０を計算し、化合物のＩＣ５０値（半数阻害濃度）を得た。
【0084】
実験データ
ＴＨ－３０２およびチラパザミンのＢＲＣＡ変異型Ｃａｐａｎ－１細胞株における正常酸素および低酸素条件下での細胞増殖阻害実験データを表２および３に示し、ＩＣ５０曲線を図１に示す。
ＴＨ－３０２およびチラパザミンのＢＲＣＡ変異型Ｃａｐａｎ－１細胞株における正常酸素および低酸素条件下での細胞増殖阻害実験データを表２および３に示し、ＩＣ５０曲線を図１に示す。
【0085】
【0086】
【0087】
ＴＨ－３０２及びチラパミンのＢＲＣＡ野生型ＢｘＰｃ－３細胞株における低酸素及び正常酸素条件下での細胞増殖阻害実験データを表４及び表５に示し、ＩＣ５０曲線を図２に示す。
【0088】
【0089】
【0090】
実験結果
上記の実験データでは、ＴＨ－３０２は酸素欠乏条件下で、ＢＲＣＡ変異Ｃａｐａｎ－１細胞株におけるＩＣ５０は０．８２μＭであり、ＢＲＣＡ野生型ＢｘＰｃ－３細胞株におけるＩＣ５０は３．０７μＭであり、両者には３．７倍の差があり、ＢＲＣＡ変異によりＴＨ－３０２が腫瘍細胞株に対してより強い増殖阻害活性を有するようになること、つまり、ＢＲＣＡ変異は腫瘍細胞のＴＨ－３０２薬物に対する感受性が増加することを示している。
上記の実験データでは、ＴＨ－３０２は酸素欠乏条件下で、ＢＲＣＡ変異Ｃａｐａｎ－１細胞株におけるＩＣ５０は０．８２μＭであり、ＢＲＣＡ野生型ＢｘＰｃ－３細胞株におけるＩＣ５０は３．０７μＭであり、両者には３．７倍の差があり、ＢＲＣＡ変異によりＴＨ－３０２が腫瘍細胞株に対してより強い増殖阻害活性を有するようになること、つまり、ＢＲＣＡ変異は腫瘍細胞のＴＨ－３０２薬物に対する感受性が増加することを示している。
【0091】
同じく酸素欠乏活性化抗癌プロドラッグであるチラパミンは、酸素欠乏条件下で、ＢＲＣＡ変異Ｃａｐａｎ－１細胞株におけるＩＣ５０は２９．０６μＭであり、野生型ＢＲｘＰｃ－３細胞株におけるＩＣ５０は３３．２３μＭであり、１．１倍の差であり、顕著な差異ではなく、チラパミンがＢＲＣＡ変異と関連性がないこと、つまり、ＢＲＣＡ変異はチラパミンの腫瘍細胞株に対する増殖阻害活性に有意に影響を及ぼさないこと、つまり、ＢＲＣＡ変異は腫瘍細胞のチラパミン薬物に対する感受性を増加させることができないことを示している。
【0092】
（三）ＴＨ－３０２のオラパリブＯｌａｐａｒｉｂ耐性の動物ＣＤＸ、ＰＤＸモデルにおける薬効及び安全性実験
３．１ ＴＨ－３０２のＯｌａｐａｒｉｂ耐性の膵臓癌Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルにおける薬効及び安全性評価
Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルは、ＢＲＣＡ２の病原性変異を有するＯｌａｐａｒｉｂ耐性モデルである。
各ＢＡＬＢ／ｃ雌ヌードマウスの右背下部に５×１０５Ｃａｐａｎ－１細胞を皮下接種し、細胞を１：１のＰＢＳとマトリゲル（０．１ｍｌ／匹）に再懸濁し、計６４匹の雌マウスに接種した。接種日は２０２１年０６月２３日であり、腫瘍の平均体積が１４０ｍｍ３に達してから、腫瘍の大きさに応じてランダムにグループ化した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇの単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ２）、ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ５）、ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇの単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ７）、および１０％無水エタノール＋１０％ポリオキシエチレン（３５）ヒマシ油＋８０％グルコース注射液Ｄ５Ｗ（ｐＨ７．４）溶媒対照グループの計７グループ、各グループ６匹のマウスに分けた。溶媒対照グループ、ＴＨ－３０２単剤及び併用グループは、いずれも尾静脈に投与し、週に１回、合計３週間投与した。試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂグループは、経口胃内投与し、１日１回、合計３０日間投与した。相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）によって治療効果の評価を行い、動物の体重変化及び死亡状況によって安全性評価を行った。
３．１ ＴＨ－３０２のＯｌａｐａｒｉｂ耐性の膵臓癌Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルにおける薬効及び安全性評価
Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルは、ＢＲＣＡ２の病原性変異を有するＯｌａｐａｒｉｂ耐性モデルである。
各ＢＡＬＢ／ｃ雌ヌードマウスの右背下部に５×１０５Ｃａｐａｎ－１細胞を皮下接種し、細胞を１：１のＰＢＳとマトリゲル（０．１ｍｌ／匹）に再懸濁し、計６４匹の雌マウスに接種した。接種日は２０２１年０６月２３日であり、腫瘍の平均体積が１４０ｍｍ３に達してから、腫瘍の大きさに応じてランダムにグループ化した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇの単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ２）、ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ５）、ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇの単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ７）、および１０％無水エタノール＋１０％ポリオキシエチレン（３５）ヒマシ油＋８０％グルコース注射液Ｄ５Ｗ（ｐＨ７．４）溶媒対照グループの計７グループ、各グループ６匹のマウスに分けた。溶媒対照グループ、ＴＨ－３０２単剤及び併用グループは、いずれも尾静脈に投与し、週に１回、合計３週間投与した。試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂグループは、経口胃内投与し、１日１回、合計３０日間投与した。相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）によって治療効果の評価を行い、動物の体重変化及び死亡状況によって安全性評価を行った。
【0093】
試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ２）治療グループは、腫瘍細胞接種後３５日目に腫瘍阻害効果がなく、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は－７．１％であり、対照グループと比較して統計的に有意な差はなかった（ｐ＞０．０５）。Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇの併用治療グループ（Ｇｒｏｕｐ５）は、腫瘍細胞接種後３５日目に有意な腫瘍阻害効果を示し、統計的に対照グループと比較して有意な差（ｐ＜０．００１）を示し、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は８４．４７％であった。ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇ単剤治療グループ（Ｇｒｏｕｐ７）は、腫瘍細胞接種後３５日目（Ｄａｙ３５）に有意な腫瘍阻害効果を示し、対照グループと比較して統計的に有意差（ｐ＜０．００１）を示し、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は８７．６６％であった。ＴＨ－３０２の単剤グループは、ＯｌａｐａｒｉｂとＴＨ－３０２の併用治療グループと比較して、腫瘍阻害効果に有意差を示さなかった（ｐ＞０．０５）。試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ、ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇの単剤グループ、およびＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇの併用グループのいずれにおいても、マウスの体重は有意に低下せず、耐性は良好であった。
各グループの具体的な投与プロトコルを以下の表６に示す。
各グループの具体的な投与プロトコルを以下の表６に示す。
【0094】
【0095】
【0096】
【0097】
表８：相対腫瘍増殖率、Ｔ／Ｃ％は、特定の時点における治療グループおよび対照グループの相対腫瘍体積または腫瘍重量の百分率の値である。計算式は以下の通りである。
【0098】
Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療グループの平均ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：溶媒対照グループの平均ＲＴＶ；ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、Ｖ０はグループ分けしたときの動物の腫瘍体積であり、Ｖｔは治療後のこの動物の腫瘍体積である）。
【0099】
相対腫瘍阻害率、ＴＧＩ（％）について、計算式はＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％である。（Ｔ及びＣはそれぞれ特定の時点における治療グループと対照グループの平均相対腫瘍体積（ＲＴＶ）である。
【0100】
【0101】
【0102】
【0103】
実験データを分析すると、治療効果がわかる。
【0104】
１．Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルは、確かにＯｌａｐａｒｉｂ抵抗モデルであり、Ｏｌａｐａｒｉｂは、このモデルの腫瘍増殖に対して阻害効果を有していない、つまり、Ｏｌａｐａｒｉｂに対して耐性がある。
２．ＴＨ－３０２の単剤は、Ｏｌａｐａｒｉｂ抵抗性膵臓癌に対して良好な治療効果を有する（ＴＧＩは８２．６７％）。
３．ＴＨ－３０２とＯｌａｐａｒｉｂの併用は、Ｏｌａｐａｒｉｂ抵抗性膵臓癌に対して良好な治療効果を有する（ＴＧＩは８７．４３％）。
４．ＴＨ－３０２単剤グループは、ＯｌａｐａｒｉｂとＴＨ－３０２の併用治療グループと比較して、腫瘍阻害効果がわずかに高かったが、有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。
２．ＴＨ－３０２の単剤は、Ｏｌａｐａｒｉｂ抵抗性膵臓癌に対して良好な治療効果を有する（ＴＧＩは８２．６７％）。
３．ＴＨ－３０２とＯｌａｐａｒｉｂの併用は、Ｏｌａｐａｒｉｂ抵抗性膵臓癌に対して良好な治療効果を有する（ＴＧＩは８７．４３％）。
４．ＴＨ－３０２単剤グループは、ＯｌａｐａｒｉｂとＴＨ－３０２の併用治療グループと比較して、腫瘍阻害効果がわずかに高かったが、有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。
【0105】
実験データを分析した結果、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ、ＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇグループ、並びにＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとＴＨ－３０２ ７５ｍｇ／ｋｇの併用グループのいずれのマウスにおいても、体重の有意な低下はなく、耐性は良好であることが分かった。
【0106】
本発明者らは、Ｏｌａｐａｒｉｂ耐性の膵臓癌Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルにおいて、ＴＨ－３０２についてさらに鋭意研究を行い、（１）ＴＨ－３０２の単剤治療グループが、腫瘍阻害効果の用量依存性を示すこと、（２）ＯｌａｐａｒｉｂとＴＨ－３０２の併用の特定の用量の組み合わせが、腫瘍阻害効果の相乗効果を示し得ることを見出した。
【0107】
本発明者らは、Ｏｌａｐａｒｉｂ耐性の肺癌ＬＵ６４２９ＰＤＸモデル、膀胱癌ＢＬ３３２５ＰＤＸモデルにおけるＴＨ－３０２の薬効および安全性を同時に研究した。
さらなる研究プロトコルおよび実験データを以下に記載する。
さらなる研究プロトコルおよび実験データを以下に記載する。
【0108】
３．２ Ｏｌａｐａｒｉｂ耐性の膵臓癌Ｃａｐａｎ－１ＣＤＸモデルにおけるＴＨ－３０２の薬効及び安全性のさらなる研究
プロトコル：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにヒト由来膵臓癌Ｃａｐａｎ－１細胞を皮下接種し、ヒト由来膵臓癌皮下移植モデルを確立した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ２）、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ３，ＱＤ）、ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ４）、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）、ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ６）、ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ７）、並びに１０％無水エタノール＋１０％ポリオキシエチレン（３５）ヒマシ油＋８０％グルコース注射液Ｄ５Ｗ（ｐＨ７．４）溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ１）の計７グループに分け、各グループマウス６匹とした。溶媒対照グループ、ＴＨ－３０２の各試験薬はいずれも尾静脈注射で投与した。ただし、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ３，ＱＤ）は、１日１回、３日間連続的に投与し、４日間休止し、更に２週間休止し、さらに、３日間連続で毎日投与した。ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ４，ＱＷ）、５０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）、２５ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ６，ＱＷ）の単剤グループ、およびＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ７）におけるＴＨ－３０２は、いずれも週１回、計３週間投与した。各グループの試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂはいずれも経口胃内投与であり、１日１回、計３０日間投与した。具体的なヒト膵臓癌Ｃａｐａｎ－１動物モデルにおける投与経路、用量、及びプロトコルを表１２に示す。
プロトコル：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにヒト由来膵臓癌Ｃａｐａｎ－１細胞を皮下接種し、ヒト由来膵臓癌皮下移植モデルを確立した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ２）、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ３，ＱＤ）、ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ４）、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）、ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ６）、ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ７）、並びに１０％無水エタノール＋１０％ポリオキシエチレン（３５）ヒマシ油＋８０％グルコース注射液Ｄ５Ｗ（ｐＨ７．４）溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ１）の計７グループに分け、各グループマウス６匹とした。溶媒対照グループ、ＴＨ－３０２の各試験薬はいずれも尾静脈注射で投与した。ただし、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ３，ＱＤ）は、１日１回、３日間連続的に投与し、４日間休止し、更に２週間休止し、さらに、３日間連続で毎日投与した。ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ４，ＱＷ）、５０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）、２５ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ６，ＱＷ）の単剤グループ、およびＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ７）におけるＴＨ－３０２は、いずれも週１回、計３週間投与した。各グループの試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂはいずれも経口胃内投与であり、１日１回、計３０日間投与した。具体的なヒト膵臓癌Ｃａｐａｎ－１動物モデルにおける投与経路、用量、及びプロトコルを表１２に示す。
【0109】
【0110】
表１３に示すように、治療グループと対照グループそれぞれの腫瘍増殖状況を異なる試験日に記録した。対応する各グループのマウス腫瘍体積の増殖グラフを図７に示す。相対腫瘍増殖率及び相対腫瘍阻害率に基づいて効能を評価し、各グループの薬効解析を表１４に示す。治療グループと対照グループの投与後体重変化を記録し、ヒト由来膵臓癌Ｃａｐａｎ－１皮下モデルにおける各グループの安全性を検討し、４３日目のマウス体重変化率の結果を表１５に示し、各治療グループの体重の経時変化グラフを図８に示す。
【0111】
相対腫瘍増殖率、Ｔ／Ｃ％は、特定の時点における治療グループおよび対照グループの相対腫瘍体積または腫瘍重量の百分率の値である。計算式は以下の通りである。
【0112】
Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療グループの平均ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：溶媒対照グループの平均ＲＴＶ；ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、Ｖ０はグループ分けしたときの動物の腫瘍体積であり、Ｖｔは治療後の動物の腫瘍体積である）。
またはＴ／Ｃ％＝ＴＴＷ／ＣＴＷ×１００％（ＴＴＷ：治療グループの実験終了時の平均腫瘍重量、ＣＴＷ：溶媒対照グループの実験終了時の平均腫瘍重量）。
またはＴ／Ｃ％＝ＴＴＷ／ＣＴＷ×１００％（ＴＴＷ：治療グループの実験終了時の平均腫瘍重量、ＣＴＷ：溶媒対照グループの実験終了時の平均腫瘍重量）。
【0113】
相対腫瘍阻害率、ＴＧＩ（％）について、計算式はＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％である。（Ｔ及びＣはそれぞれ特定の時点における治療グループと対照グループの相対腫瘍体積（ＲＴＶ）または腫瘍重量（ＴＷ）である。
【0114】
【0115】
【0116】
【0117】
上記データは以下のことを示している。
溶媒対照グループのマウスは、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）に平均腫瘍体積が１３０１．３８ｍｍ３であった。試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ ２）治療グループのマウスは、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が８４６．８６ｍｍ３であり、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）が３７．４３％であり、対照グループと比較して統計的に有意差はない（ｐ＞０．０５）。
溶媒対照グループのマウスは、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）に平均腫瘍体積が１３０１．３８ｍｍ３であった。試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ ２）治療グループのマウスは、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が８４６．８６ｍｍ３であり、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）が３７．４３％であり、対照グループと比較して統計的に有意差はない（ｐ＞０．０５）。
【0118】
試験薬ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ治療グループ（Ｇｒｏｕｐ３，ＱＤ）は、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が１４６．９９ｍｍ３であり、対照グループと比較して統計的に有意な差があり（ｐ＜０．００１）、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は８９．１７％であった。試験薬ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ治療グループ（Ｇｒｏｕｐ４）は、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が１２４．６８ｍｍ３であり、対照グループと比較して統計的に有意な差があり（ｐ＜０．００１）、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は９０．８９％であった。試験薬ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ治療グループ（Ｇｒｏｕｐ５、ＱＷ）は、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が２６３．４５ｍｍ３であり、対照グループと比較して統計的に有意な差があり（ｐ＜０．００１）、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は８０．１８％であり、腫瘍完全阻害率は３３．３％であった。試験薬ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇ治療グループ（Ｇｒｏｕｐ６）は、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が１５２１．３３ｍｍ３であり、対照グループと比較して統計的に有意な差がなく（ｐ＞０．０５）、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は－２１．５９％であった。Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇの併用治療グループ（Ｇｒｏｕｐ７）は、腫瘍細胞接種後４３日目（Ｄａｙ４３）の平均腫瘍体積が３７８．５６ｍｍ３であり、対照グループと比較して統計的に有意な差を示し（ｐ＜０．００１）、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は７４．３６％であった。
【0119】
ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ４）、５０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）及び２５ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ６）の単剤治療グループは、薬物腫瘍阻害効果の用量依存性を示した。ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ４，ＱＷ）、５０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）の単剤治療グループは、ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇ単剤治療グループ（Ｇｒｏｕｐ６，ＱＷ）と比較して統計的に有意な差があった（ｐはいずれも＜０．００１）。
【0120】
Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇの併用治療グループ（Ｇｒｏｕｐ７）は、Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ２）及びＴＨ－３０２２５ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ６）よりも抗腫瘍効果が優れ、統計的に有意な差があり（ｐ＜０．０５及びｐ ＜０．００１）、ＯｌａｐａｒｉｂとＴＨ－３０２の併用の特定の用量組合せは、腫瘍阻害効果の相乗効果を示す可能性がある。
【0121】
試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ２）、ＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ６）、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ３，ＱＤ）、ＴＨ－３０２ ５０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ５，ＱＷ）、ＴＨ－３０２ １００ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ４）、Ｏｌａｐａｒｉｂ １００ｍｇ／ｋｇとＴＨ－３０２ ２５ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ７）、溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ１）のいずれのマウスも、有意な体重減少はなく、良好な耐性を示した。
【0122】
３．３ Ｏｌａｐａｒｉｂ耐性の肺癌ＬＵ６４２９ＰＤＸモデルにおけるＴＨ－３０２の薬効および安全性評価
ＬＵ６４２９ＰＤＸモデルは、ＢＲＣＡ２の病原性変異を有するＯｌａｐａｒｉｂ耐性モデルである。
プロトコル：Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ雌マウスにＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９腫瘍塊を皮下接種し、ヒト肺癌皮下移植腫瘍モデルを確立した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０２）、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０３）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０４）、ＴＨ－３０２ ２０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０５）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ０６）、およびグルコース注射液溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ０１）に分けた。この試験は、計６グループ、各グループ６匹のマウスであり、溶媒対照グループおよびＴＨ－３０２はいずれも尾静脈に投与し、週１回計３週間投与した。Ｏｌａｐａｒｉｂは、胃に投与し、１日１回、計２８日間投与した。具体的なＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９の動物モデルにおける投与経路、用量、およびプロトコルを表１６に示す。
ＬＵ６４２９ＰＤＸモデルは、ＢＲＣＡ２の病原性変異を有するＯｌａｐａｒｉｂ耐性モデルである。
プロトコル：Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ雌マウスにＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９腫瘍塊を皮下接種し、ヒト肺癌皮下移植腫瘍モデルを確立した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０２）、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０３）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０４）、ＴＨ－３０２ ２０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０５）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ０６）、およびグルコース注射液溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ０１）に分けた。この試験は、計６グループ、各グループ６匹のマウスであり、溶媒対照グループおよびＴＨ－３０２はいずれも尾静脈に投与し、週１回計３週間投与した。Ｏｌａｐａｒｉｂは、胃に投与し、１日１回、計２８日間投与した。具体的なＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９の動物モデルにおける投与経路、用量、およびプロトコルを表１６に示す。
【0123】
【0124】
表１７に示すように、治療グループと対照グループそれぞれの腫瘍増殖状況を異なる日に記録した。対応する各グループのマウス腫瘍体積の増殖グラフを図９に示す。相対腫瘍増殖率及び相対腫瘍阻害率により効能を評価し、各グループの薬効分析を表１８に示す。治療グループと対照グループの投与後の体重変化を記録し、ＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９皮下モデルにおける各グループの安全性を検討した。マウス体重変化の２５日目の結果を表１９に示し、各治療グループの体重の経時変化のグラフを図１０に示す。
【0125】
【0126】
【0127】
【0128】
上記データは以下のことを示している。
Ｏｌａｐａｒｉｂ単独投与グループは腫瘍阻害作用がなく、肺癌ＬＵ６４２９ＰＤＸモデルはＯｌａｐａｒｉｂに耐性を示した。８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇの用量での試験薬ＴＨ－３０２単独治療グループ、及び４０ｍｇ／ｋｇでのＴＨ－３０２と５０ｍｇ／ｋｇでのＯｌａｐａｒｉｂとの併用治療グループは、本研究においていずれもＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９皮下モデルに対して有意な抗腫瘍増殖効果を有した。ここで、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ０３）用量治療グループの１匹のマウスの腫瘍は完全に除去され、除去率は１６．７％であった。試験薬ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、及び２０ｍｇ／ｋｇ治療グループの間で、統計的に有意な差があり（ｐ ＜０．０５）、用量依存性を示した。ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用治療効果は、Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループよりも有意に優れていたが、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループと比較してわずかに優れ、差は小さくて有意ではなかった。
各試験薬治療グループのマウスは治療期間中、マウスの体重が減少せず、耐性は良好であった。
Ｏｌａｐａｒｉｂ単独投与グループは腫瘍阻害作用がなく、肺癌ＬＵ６４２９ＰＤＸモデルはＯｌａｐａｒｉｂに耐性を示した。８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇの用量での試験薬ＴＨ－３０２単独治療グループ、及び４０ｍｇ／ｋｇでのＴＨ－３０２と５０ｍｇ／ｋｇでのＯｌａｐａｒｉｂとの併用治療グループは、本研究においていずれもＨｕＰｒｉｍｅR肺癌ＬＵ６４２９皮下モデルに対して有意な抗腫瘍増殖効果を有した。ここで、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ（Ｇｒｏｕｐ０３）用量治療グループの１匹のマウスの腫瘍は完全に除去され、除去率は１６．７％であった。試験薬ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、及び２０ｍｇ／ｋｇ治療グループの間で、統計的に有意な差があり（ｐ ＜０．０５）、用量依存性を示した。ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用治療効果は、Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループよりも有意に優れていたが、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループと比較してわずかに優れ、差は小さくて有意ではなかった。
各試験薬治療グループのマウスは治療期間中、マウスの体重が減少せず、耐性は良好であった。
【0129】
３．４ Ｏｌａｐａｒｉｂ耐性の膀胱癌ＢＬ３３２５ＰＤＸモデルにおけるＴＨ－３０２の薬効および安全性評価
ＢＬ３３２５ＰＤＸモデルは、ＢＲＣＡ２の病原性変異を伴うＯｌａｐａｒｉｂ耐性モデルである。
プロトコル：Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ雌マウスにＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５腫瘍塊を皮下接種して、ヒト膀胱癌皮下移植腫瘍モデルを確立した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０２）、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０３）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０４）、ＴＨ－３０２ ２０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０５）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ０６）、およびグルコース注射溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ０１）に分けた。この研究は、計６グループ、各グループ６匹のマウスであり、溶媒対照グループおよびＴＨ－３０２はいずれも尾静脈に投与し、週１回計３週間投与し、Ｏｌａｐａｒｉｂは胃に投与し、１日１回、計３０日間投与した。具体的なＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５動物モデルにおける投与経路、用量及びプロトコルを表２０に示す。
ＢＬ３３２５ＰＤＸモデルは、ＢＲＣＡ２の病原性変異を伴うＯｌａｐａｒｉｂ耐性モデルである。
プロトコル：Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ雌マウスにＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５腫瘍塊を皮下接種して、ヒト膀胱癌皮下移植腫瘍モデルを確立した。試験は、試験薬Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０２）、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０３）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０４）、ＴＨ－３０２ ２０ｍｇ／ｋｇ単剤グループ（Ｇｒｏｕｐ０５）、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用グループ（Ｇｒｏｕｐ０６）、およびグルコース注射溶媒対照グループ（Ｇｒｏｕｐ０１）に分けた。この研究は、計６グループ、各グループ６匹のマウスであり、溶媒対照グループおよびＴＨ－３０２はいずれも尾静脈に投与し、週１回計３週間投与し、Ｏｌａｐａｒｉｂは胃に投与し、１日１回、計３０日間投与した。具体的なＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５動物モデルにおける投与経路、用量及びプロトコルを表２０に示す。
【0130】
【0131】
備考：１．投与体積１０μＬ／ｇ、２．ＱＤ×３０：３０日間連続的に１日１回投与、３．ＱＷ×３：３週間連続的に週１回投与、４．Ｉ．ｖ．は尾静脈投与、ｐ．ｏ．は胃への投与。
【0132】
治療グループと対照グループそれぞれの腫瘍増殖を異なる試験日に記録し、表２１に示すように、対応する各グループのマウス腫瘍体積の増殖グラフを図１１に示す。相対腫瘍増殖率及び相対腫瘍阻害率に基づいて効能を評価し、各グループの薬効分析を表２２に示す。治療グループと対照グループの投与後の体重変化を記録し、ＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５皮下モデルにおける各グループの安全性を検討した。マウス体重変化の３５日目の結果を表２３に示し、各治療グループの体重の経時変化のグラフを図１２に示す。
【0133】
【0134】
【0135】
【0136】
上記データは以下のことを示している。
８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇの用量での試験薬ＴＨ－３０２の単独治療グループ及びＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用治療グループはいずれも、ＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５皮下モデルに対して有意な抗腫瘍増殖効果を有し、Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単独治療では有意な腫瘍阻害効果を示さなかった。ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇは２０ｍｇ／ｋｇ用量グループと比較して、腫瘍阻害効果に統計的な差異があり、これは、ＴＨ－３０２によるＢＬ３３２５腫瘍増殖の阻害が用量依存的であることを示している。ここで、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ治療グループ（Ｇｒｏｕｐ０３）の１匹のマウスの腫瘍は完全に除去され、除去率は１６．７％であった。ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用治療効果は、Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループよりも有意に優れており、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループより優れ、かつ差異が有意であった。
各試験薬治療グループのマウスは治療期間中、マウスの体重が減少せず、耐性は良好であった。
８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇの用量での試験薬ＴＨ－３０２の単独治療グループ及びＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用治療グループはいずれも、ＨｕＰｒｉｍｅR膀胱癌ＢＬ３３２５皮下モデルに対して有意な抗腫瘍増殖効果を有し、Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単独治療では有意な腫瘍阻害効果を示さなかった。ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇは２０ｍｇ／ｋｇ用量グループと比較して、腫瘍阻害効果に統計的な差異があり、これは、ＴＨ－３０２によるＢＬ３３２５腫瘍増殖の阻害が用量依存的であることを示している。ここで、ＴＨ－３０２ ８０ｍｇ／ｋｇ治療グループ（Ｇｒｏｕｐ０３）の１匹のマウスの腫瘍は完全に除去され、除去率は１６．７％であった。ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇとＯｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇの併用治療効果は、Ｏｌａｐａｒｉｂ ５０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループよりも有意に優れており、ＴＨ－３０２ ４０ｍｇ／ｋｇ単独治療グループより優れ、かつ差異が有意であった。
各試験薬治療グループのマウスは治療期間中、マウスの体重が減少せず、耐性は良好であった。
【0137】
本願の実施例で選択したＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂであるが、ルカルパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タプラゾリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂなどは、同じくＰＡＲＰ阻害剤であり、作用メカニズムはオラパリブＯｌａｐａｒｉｂと類似しており、いずれも損傷ＤＮＡの修復に関与する酵素を遮断する作用を発揮することから、ルカルパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タプラゾリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂなどのＰＡＲＰｉは、上記実験におけるオラパリブＯｌａｐａｒｉｂと類似した腫瘍阻害効果を有すると推定できる。
ＴＨ－３０２は酸素欠乏活性化ＤＮＡアルキル化剤であり、請求項１に記載の一般式の化合物である。
ＴＨ－３０２は酸素欠乏活性化ＤＮＡアルキル化剤であり、請求項１に記載の一般式の化合物である。
【0138】
ＴＨ－３０２と同様のメカニズムが関連特許出願において実証されているので、そのような化合物がＴＨ－３０２と同様の効果を有することは十分に予測可能である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【手続補正書】
【提出日】2024-04-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
単剤で、またはＰＡＲＰ阻害剤と併用して、患者の癌を治療するための薬物の調製における、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物の使用であって、
ＲはそれぞれＨ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３から独立して選択され、ＸはそれぞれＣｌ、Ｂｒ、ＭｓＯ、ＴｓＯの脱離官能基から独立して選択される、使用。
【請求項2】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物とともに、ＰＡＲＰ阻害剤を併用して、ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療する、請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項4】
前記ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含み、前記遺伝子変異のＴＭＢ（腫瘍遺伝子変異量）は中レベルである、請求項１に記載の使用。
【請求項5】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造を有する化合物から選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項6】
前記ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ、ルカパリブＲｕｃａｐａｒｉｂ、ニラパリブＮｉｒａｐａｒｉｂ、タラゾパリブＴａｌａｚｏｐａｒｉｂ、フルゾパリブＦｌｕｚｏｐａｒｉｂ、パミパリブＰａｍｉｐａｒｉｂからなる群より選択され、又は前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項7】
下記の式の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物単剤により、オラパリブＯｌａｐａｒｉｂ耐性の卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌患者を治療する治療方法であって、
【請求項8】
ＰＡＲＰ阻害剤耐性の癌、腫瘍患者を治療するための、式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物を含有する薬物であって、
【請求項9】
前記患者のＤＮＡ修復酵素は損傷しているか、又は前記患者の腫瘍又は癌組織は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、又は
前記患者は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２に対応する遺伝子のいずれか一方又は両方の遺伝子変異を有することが検出され、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異は、生殖細胞系列の変異（ｇＢＲＣＡｍ）及び体細胞系列の変異（ｓＢＲＣＡｍ）のＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２変異を含む、請求項８に記載の薬物。
【請求項10】
式（Ｉ）の酸素欠乏活性化化合物は、以下の構造を有する化合物から選択され、
前記癌、腫瘍は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、卵管癌、原発性腹膜癌、胃癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、膀胱癌からなる群より選択される、請求項８に記載の使用。
【国際調査報告】