特表 2024-531898 コロナウイルスに対する阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-03

(54)【発明の名称】コロナウイルスに対する阻害剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/519 20060101AFI20240827BHJP

   A61K 31/427 20060101ALI20240827BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240827BHJP

【ＦＩ】

A61K31/519

A61K31/427

A61P31/14

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024505323

(86)(22)【出願日】2022-08-12

(85)【翻訳文提出日】2024-03-22

(86)【国際出願番号】 US2022074929

(87)【国際公開番号】W WO2023023469

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】63/260,341

(32)【優先日】2021-08-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】500553730

【氏名又は名称】サウスウエスト リサーチ インスティテュート

【住所又は居所原語表記】６２２０ ＣＵＬＥＢＲＡ ＲＯＡＤ ＳＡＮ ＡＮＴ ＯＮＩＯ，ＴＥＸＡＳ ７８２３８ ＵＳＡ

(71)【出願人】

【識別番号】524037052

【氏名又は名称】ザ ガバメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ，アズ リプレゼンティッド バイ ザ セクレタリー オブ ジ アーミー

(71)【出願人】

【識別番号】510244570

【氏名又は名称】ザ ヘンリー エム．ジャクソン ファンデーション フォー ザ アドバンスメント オブ ミリタリー メディシン，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】ボフマン，ジョナサン エー．

(72)【発明者】

【氏名】グティエレス，ナディーン エム．

(72)【発明者】

【氏名】マクドナー，ジョセフ エー．

(72)【発明者】

【氏名】キャンベル，ロバート フランシス

(72)【発明者】

【氏名】ジョイス，マイケル ゴードン

(72)【発明者】

【氏名】パンチャル，レカー

(72)【発明者】

【氏名】サンカラ，ラジェシュワー

(72)【発明者】

【氏名】デュプランティエ，アレン

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB03

4C086CB05

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZB33

(57)【要約】

【課題】ＣＯＶＩＤ－１９で苦しむ対象を治療するための新しい医薬組成物及び方法の提示。
【解決手段】ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体によって引き起こされるＣＯＶＩＤ－１９の治療を、それを必要とする哺乳動物対象において行うための方法であって、以下の式の有効量の特定のピロロキナゾリン（化１）又はその薬学的に許容される塩を、任意選択で薬学的に許容されるキャリアにおいて、前記対象に投与することを含む方法。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体によって引き起こされるＣＯＶＩＤ－１９の治療を、それを必要とする哺乳動物対象において行うための方法であって、以下の式の有効量のピロロキナゾリン：

【化1】

式中、Ｘ_１及びＸ_２は、Ｈである又はＸ_１及びＸ_２が単結合によって互いに結合される場合、Ｘ_１及びＸ_２は、ＣＨ_２である又はＸ_１及びＸ_２が二重結合によって互いに結合される場合、Ｘ_１及びＸ_２は、独立してＣＨ若しくはＮである；
それぞれのＹは、独立してＣ又はＮである；
Ｚは、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ_２、ＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又は結合である；
Ｒ_１は、Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１～Ｃ_１０アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルである、式中、それぞれのＲ_１は、１～３つのＣｌ、Ｂｒ、Ｆ、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、シアノ、エチニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アシル、ニトロ又はトリフルオロメチルと任意選択で独立して置換される；
Ｒ_２及びＲ_３がつながれるＹがＮである場合、Ｒ_２及びＲ_３は、独立して一対の電子であり、Ｒ_２及びＲ_３がつながれるＹがＣである場合、独立してＨ、アルキル、アルケニル又はトリフルオロアルキルである；並びにＲ_２及びＲ_３は、一緒に６員環を形成してもよい；
Ｒ_４及びＲ_５は、独立してアミノ基である；
又はその薬学的に許容される塩を、任意選択で薬学的に許容されるキャリアにおいて、前記対象に投与することを含む方法。

【請求項2】

前記ピロロキナゾリンは、７－（２－（トリフルオロメチル）ベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ピロロキナゾリンは、７－（２－メチルベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記ピロロキナゾリンは、４－（（１，３－ジアミノ－８－メチル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－７－イル）メチル）ベンゾニトリルを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記ピロロキナゾリンは、７－アリル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記ピロロキナゾリンは、７－（２－（フルオロベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記ピロロキナゾリンは、７－（ピリジン－３－イルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記ピロロキナゾリンは、７－（ピリジン－４－イルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

前記ピロロキナゾリンは、７－（ピリジン－２－イルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記ピロロキナゾリンは、７－（シクロヘキシルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

７－アリル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンを含む、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体に対する抗ウイルス薬。

【請求項12】

ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体によって引き起こされるＣＯＶＩＤ－１９の治療を、それを必要とする哺乳動物対象において行うための方法であって、以下の式の有効量のチアゾール：

【化2】

式中、Ｒ_１及びＲ_２は、独立してＨ又はＣｌである；
又はその薬学的に許容される塩を、任意選択で薬学的に許容されるキャリアにおいて、前記対象に投与することを含む方法。

【請求項13】

前記チアゾールは、（２，４－ジフェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノンを含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記チアゾールは、（４－（４－クロロフェニル）－２－フェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノンを含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項15】

前記チアゾールは、（２－（４－クロロフェニル）－４－フェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノンを含む、請求項１２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

連邦政府による資金提供を受けた研究又は開発に関する陳述
本発明は、米国陸軍医療研究開発指揮部（United States Army Medical Research and Development Command）によって認められたＷ８１ＸＷＨ－１８－２－００４０の下で政府の支援によりなされたものである。政府は、本発明においてある一定の権利を有する。

【0002】

分野
本発明は、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びそれぞれの変異体に対する阻害剤に関し、このような呼吸器疾患で苦しむ対象を治療するための方法を含む。

【背景技術】

【0003】

背景
コロナウイルス病－１９（ＣＯＶＩＤ－１９）は、世界的な大流行を招いた。ＣＯＶＩＤ－１９は、報告によれば、２０１９年末以降にWuhan（Hubei Province、China）において最初に確認され、国際ウイルス分類委員会（International Committee on Taxonomy of Viruses）（ＩＴＶＣ）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶに対する類似性により、コロナウイルス病－１９をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と名づけた。

【0004】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、さまざまな構造タンパク質及び非構造タンパク質をコードすることが知られている。タンパク質は、その上、ウイルスが宿主内部に侵入し、複製する能力を助ける。非構造タンパク質は、メインプロテアーゼＭ^ｐｒｏとしても知られている３－キモトリプシン様プロテアーゼ（３ＣＬ^ｐｒｏ）を含み、それゆえ、医薬の開発に有望な標的として特定された。Ｍ^ｐｒｏの阻害は、ウイルスが複製するのを妨害し、ゆえに、有望な抗コロナウイルス戦略に匹敵するであろう。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

したがって、本発明は、ＣＯＶＩＤ－１９で苦しむ対象を治療するための新しい医薬組成物及び方法を提示する。医薬組成物は、好ましくは、ＣＯＶＩＤ－１９ウイルスメインプロテアーゼＭ^ｐｒｏを標的にし、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体などの多様なＣＯＶ種に対して効果的である。

【図面の簡単な説明】

【0006】

図面の簡単な説明

【図1】図１は、化合物１：７－（２－（トリフルオロメチル）ベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについての用量反応曲線を示す図である。

【図2】図２は、化合物２：７－（２－メチルベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについての用量反応曲線を示す図である。

【図3】図３は、化合物３：４－（（１，３－ジアミノ－８－メチル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－７－イル）メチル）ベンゾニトリルについての用量反応曲線を示す図である。

【図4】図４は、化合物４：７－アリル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについての用量反応曲線を示す図である。

【図5】図５は、化合物５：（２，４－ジフェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノンについての用量反応曲線を示す図である。

【図6】図６は、化合物６：（４－（４－クロロフェニル）－２－フェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノンについての用量反応曲線を示す図である。

【図7】図７は、化合物７：（２－（４－クロロフェニル）－４－フェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノンについての用量反応曲線を示す図である。

【図8】図８は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物８の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図9】図９は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物８についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図10】図１０は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物９の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図11】図１１は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物９についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図12】図１２は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物１０の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図13】図１３は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物１０についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図14】図１４は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物１１の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図15】図１５は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物１１についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図16】図１６は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物１２の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【図17】図１７は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物１２についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0007】

詳細な説明
ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体で苦しむ対象を治療するための組成物及び方法が、提供される。本明細書における医薬組成物は、好ましくは、保存された結合部位を標的にしてもよい。本明細書において対象、個人、宿主又は患者を指す時は、同じ意味で用いられ、診断、治療、又は療法が所望される任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。治療は、哺乳動物における疾患の任意の治療であってもよく、関連する呼吸器疾患が生じるのを予防すること、疾患を阻害すること、その発症を抑えること又は疾患を軽減すること若しくは疾患の後退を引き起こすことを含む。

【0008】

Ｍ^ｐｒｏインビトロスクリーニングプロトコール
最初に、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２のメインプロテアーゼに対する新しい有望な阻害剤を特定するために、抗ウイルス活性について本明細書において特定された医薬のスクリーニングを行った。詳細には、小分子の一次スクリーニングを、２つ独立した反復試験のプレートにおいて１０μＭの単一の最終濃度で化合物をテストすることによって実行した。両方の反復実験プレートにおいて＞５０％の感染阻害及び細胞数における＜２０％の減少を示した化合物は、ヒットとみなされた。特定したヒットの効力及び選択指数を決定するために、化合物を、３０～０．０１μＭの範囲の濃度の３倍段階希釈による８点用量反応及び４回の反復試験においてテストした。Ｎ－ヒドロキシシチジン（ＮＨＣ）、既知の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２活性を有する抗ウイルス剤を、基準阻害剤として使用した。

【0009】

毒性株によるすべての感染は、ＣＤＣ及び米国陸軍安全規程（US Army safety regulations）に従ってＢＳＬ－３実験室において実行した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の小分子阻害剤を特定するために、ＶｅｒｏＥ６細胞（ATCC CRL-1586）を、３８４ウェルイメージングプレート（Aurora Microplates、ABE2-31101A）中に４０００細胞／ウェルの密度で播種した。翌日、細胞を、２時間化合物により前処理し、次いで、０．０１の感染多重度（ＭＯＩ）でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）に感染させた。感染の３２時間後に、細胞を、１０％ホルマリン中で固定した。ウイルス抗原を検出するために、蛍光免疫染色を実行し、ホルマリン固定細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）により３回洗浄し、次いで、５０μｌの組み合わせた細胞透過処理及び遮断バッファー（ＰＢＳ中３％ＢＳＡ、０．１％Triton X-100）と共に室温（ＲＴ）でインキューベートした。１時間後、遮断バッファーを、ＰＢＳ中で１：１０００に希釈した５０μｌ一次抗体溶液（SARS-CoV/SARS-CoV-2 Nucleocapsid Rabbit Mab、Sino Biological、Cat 40143-R001）と交換し、ＲＴで１時間結合させた。５０μｌ ＰＢＳによる２回の洗浄後、細胞を、Ａｌｅｘａ ４８８抗ウサギＩｇＧ（Invitrogen A11031）の１：５００希釈液により３０分間染色した。３０分後、細胞を、ＰＢＳにより３回洗浄した。最終ステップにおいて、ＰＢＳを、ウェル当たり５０μｌの１：１００００ Hoechst核染料（Invitrogen H3570）及び細胞質染色剤である５ｍｇ／ｍｌ HCS Cellmask Deep Red（Invitrogen H32721）、すべてＰＢＳにより希釈、と交換した。

【0010】

ウイルス感染を定量化するために、イメージを、１０×空気対物レンズ（air objective）を使用してPerkin Elmer Operaクアッド励起共焦点顕微鏡（quad-excitation confocal microscope）（モデル５０２５）を使用し、取得した。核、ウイルス核タンパク質及び細胞質は、それぞれ４０５、４８８及び６４０ｎｍチャネルを使用して検出した。ウイルス陽性細胞は、細胞質マスク（cytoplasmic mask）によって示される境界内の４８８励起シグナルの存在によって特定した。強度カットオフは、非感染対照ウェルにおけるバックグラウンド蛍光の強度によって決定し、個別の実験ごとに補正した。アッセイの頑健性は、プレートごとのＺ’値を（Ji-Hu Zhang J,Thomas D.Y.Chung and Kevin R.Oldenburg,A Simple Statistical Parameter for Use in Evaluation and Validation of High Throughput Screening Assays,J.of Biomolecular Screening,4:67,1999）以下の式を使用して計算することによって決定した：
（Ｚ’＝（１－（３×シグナル_ｍａｘ（中立（neutral）／感染のみの対照）のＳＴＤＥＶ＋３×ＳＴＤＥＶシグナル_ｍｉｎ（阻害剤／感染なしの対照））／ＡＢＳ（平均シグナル_ｍａｘ－シグナル_ｍｉｎの平均））。

【0011】

Ｚ’＞０．５を有するプレートは、データ解析を検討した。化合物の存在下におけるウイルス感染阻害及び細胞毒性のパーセントを決定するために、Acapellaにより生成した細胞データを、Spotfireにインポートする（視覚的解析統計ソフトウェア、Perkin Elmer Inc.、MA）。感染対照（感染及びＤＭＳＯ処理）ウェルと比べてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の５０％を超える阻害を見せた化合物及び感染対照と比べて細胞数を２０％超低下させなかった化合物は、「ヒット」とみなした。ヒット化合物は、次いで、用量反応アッセイのために選択した。

【0012】

化合物の効力（ＥＣ_５０、ＥＣ_９０）、細胞毒性（ＣＣ_５０）及び選択指数（ＳＩ）を決定するために、用量反応曲線解析は、GeneDataソフトウェアを使用し、曲線あてはめ手法にLevenberg-Marquardtアルゴリズム（ＬＭＡ）を適用して実行した。あてはめ手法は、Ｒ^２＞０．８である場合に許容されるとみなされる。

【0013】

上記から、ピロロキナゾリン（pyrroloquinazoline）のファミリーに属している上位の候補を、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体の阻害剤として特定した。これらのピロロキナゾリン又はその薬学的に許容される塩は、下記の式Ｉにおいて特定される：

【化1】

式中、
Ｘ_１及びＸ_２は、Ｈである又はＸ_１及びＸ_２が単結合によって互いに結合される場合、Ｘ_１及びＸ_２は、ＣＨ_２である又はＸ_１及びＸ_２が二重結合によって互いに結合される場合、Ｘ_１及びＸ_２は、独立してＣＨ若しくはＮである；
それぞれのＹは、独立してＣ又はＮである；
Ｚは、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ_２、ＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２又は結合である；
Ｒ_１は、Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１～Ｃ_１０アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルである、
式中、それぞれのＲ_１は、１～３つのＣｌ、Ｂｒ、Ｆ、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、シアノ、エチニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アシル、ニトロ又はトリフルオロメチルと任意選択で独立して置換される；
Ｒ_２及びＲ_３がつながれるＹがＮである場合、Ｒ_２及びＲ_３は、独立して一対の電子であり、Ｒ_２及びＲ_３がつながれるＹがＣである場合、独立してＨ、アルキル、アルケニル又はトリフルオロアルキルである；並びにＲ_２及びＲ_３は、一緒に６員環を形成してもよい；並びに
Ｒ_４及びＲ_５は、独立してアミノ基である。

【0014】

本発明は、それゆえ、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及び中東呼吸症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）並びにそれぞれの変異体の治療を、それを必要とする哺乳動物対象において行うための方法であって、ウイルスメインプロテアーゼＭ^ｐｒｏを標的にする（と相互作用する）方法に関する。方法は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を、任意選択で薬学的に許容されるキャリアにおいて、対象に投与することを含む。薬学的に許容されるキャリアは、溶液又は懸濁液などの、経口投与に適した剤形を含んでいてもよい。剤形は、錠剤、カプセル又はゲルキャップ（gel cap）などの固形剤であってもよい。薬学的に許容されるキャリアは、静脈内送達に適した製剤を含んでいてもよい。

【0015】

投与は、対象のウイルス量（ＰＣＲを介して評価することができる）における低下、対象のウイルス感染症状（例えば熱、酸素飽和度の減少、息切れ、呼吸困難、疲労、筋肉痛、体の痛み、胸痛若しくは胸部圧迫感、頭痛、味覚消失、嗅覚消失、咽頭痛、うっ血、吐き気、嘔吐、下痢、混乱、咳又は発疹）の一つ以上及び／又は臨床状態における改善を提供すると考えられる。臨床状態は、WHO Ordinal Scale for Clinical Improvementを利用して評価されてもよい。

【0016】

好ましくは、本明細書における式Ｉにおける抗ウイルス薬は、以下を含む。
１．化合物１：以下の一般的な構造を有する７－（２－（トリフルオロメチル）ベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミン：

【化2】

２．化合物２：以下の一般的な構造を有する７－（２－メチルベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミン：

【化3】

３．化合物３：以下の一般的な構造を有する４－（（１，３－ジアミノ－８－メチル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－７－イル）メチル）ベンゾニトリル：

【化4】

４．化合物４：以下の一般的な構造を有する７－アリル－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミン：

【化5】

【0017】

下記の表１は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に対する上述の化合物についての効力（ＥＣ_５０、ＥＣ_９０）、細胞毒性（ＣＣ_５０）及びＳＩ（選択指数＝ＣＣ_５０／ＥＣ_５０）に関するデータを提供する。ＥＣ_５０は、最大の反応の半分を提供する用量を指す。ＥＣ_９０は、最大の反応の９０％を提供する用量を指す。ＣＣ_５０は、５０％の細胞生存率の低下に必要とされる濃度である。化合物１～４についての用量反応曲線を、それぞれ図１～４に提供する。

【0018】

【表1】

【0019】

加えて、上記のスクリーニングプロトコールから、チアゾールのファミリーに属している上位の候補を、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｃｏｖｉｄ－１９）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びにそれぞれの変異体のメインプロテアーゼ（Ｍ^ｐｒｏ）に対する阻害剤として特定した。これらを、下記の式ＩＩにおいて特定する：

【化6】

【0020】

上記の式において、Ｒ_１及びＲ_２は、独立してＨ又はＣｌである。加えて、上記のチアゾールは、その薬学的に許容される塩を含み、任意選択で薬学的に許容されるキャリア中のものであってもよいと考えられる。

【0021】

好ましくは、本明細書における式ＩＩにおける抗ウイルス薬は、以下を含む。
５．化合物５：以下の一般的な構造を有する（２，４－ジフェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノン：

【化7】

６．化合物６：以下の一般的な構造を有する（４－（４－クロロフェニル）－２－フェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノン：

【化8】

７．化合物７：以下の一般的な構造を有する（２－（４－クロロフェニル）－４－フェニルチアゾール－５－イル）（（３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メタノン：

【化9】

【0022】

下記の表２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に対する上述の化合物についての効力（ＥＣ_５０、ＥＣ_９０）、細胞毒性（ＣＣ_５０）及びＳＩ（選択指数＝ＣＣ_５０／ＥＣ_５０）に関するデータを提供する。化合物５～７についての用量反応曲線を、それぞれ図５～７に提供する。

【0023】

【表2】

【0024】

上記に加えて、薬物動態学的（ＰＫ）試験を、本明細書において言及されるピロロキナゾリンの追加の代表的な化合物に対して終えた。より詳細には、薬物動態学的試験を、以下の構造を有する化合物８、７－（２－（フルオロベンジル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについて行った。

【化10】

【0025】

それゆえ、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物８の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する図８を参照されたい。図９は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物８についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。下記の表３は、このデータの概要を提供する。

【0026】

【表3】

【0027】

それゆえ、上記からわかるように、化合物８は、比較的忍容性が良好であり、血漿及び肺の両方において、有意な割合の時間、ＥＣ９０を上回る濃度レベルを達成した。

【0028】

ＰＫ試験を、次に、以下の構造を有する化合物９、７－（ピリジン－３－イルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについて行った。

【化11】

【0029】

それゆえ、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物９の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する図１０を参照されたい。図１１は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物９についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。下記の表４は、このデータの概要を提供する。

【0030】

【表4】

【0031】

それゆえ、上記からわかるように、化合物９もまた、比較的忍容性が良好であり、血漿及び肺の両方において、有意な割合の時間、ＥＣ９０を上回る濃度レベルを達成した。

【0032】

ＰＫ試験を、次に、以下の構造を有する化合物１０、７－（ピリジン－４－イルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについて行った。

【化12】

【0033】

投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物１０の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する図１２を参照されたい。図１３は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物１０についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。下記の表５は、このデータの概要を提供する。

【0034】

【表5】

【0035】

それゆえ、上記からわかるように、化合物１０もまた、比較的忍容性が良好であり、血漿及び肺の両方において、有意な割合の時間、ＥＣ９０を上回る濃度レベルを達成した。

【0036】

ＰＫ試験を、次に、以下の構造を有する化合物１１、７－（ピリジン－２－イルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについて行った。

【化13】

【0037】

投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物１１の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する図１４を参照されたい。図１５は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の２５ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物１１についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。下記の表６は、このデータの概要を提供する。

【0038】

【表6】

【0039】

それゆえ、上記からわかるように、化合物１１もまた、比較的忍容性が良好であり、血漿及び肺の両方において、有意な割合の時間、ＥＣ９０を上回る濃度レベルを達成した。

【0040】

ＰＫ試験を、次に、以下の構造を有する化合物１２、７－（シクロヘキシルメチル）－７Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］キナゾリン－１，３－ジアミンについて行った。

【化14】

【0041】

投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の化合物１２の投薬についての血漿における動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する図１６を参照されたい。図１７は、投薬後０、０．５、１、２、４、８、１２時間から３６時間までの時点の１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、１日２回の肺における同じく化合物１２についての動物（マウス）化合物濃度対時間の図を提供する。下記の表７は、このデータの概要を提供する。

【0042】

【表7】

【0043】

それゆえ、上記からわかるように、化合物１２もまた、比較的忍容性が良好であり、血漿及び肺の両方において、有意な割合の時間、ＥＣ９０を上回る濃度レベルを達成した。

【0044】

下記の表７は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に対する化合物８～１２についての効力（ＥＣ_５０、ＥＣ_９０）、細胞毒性（ＣＣ_５０）及びＳＩ（選択指数＝ＣＣ_５０／ＥＣ_５０）に関するデータを提供する。

【0045】

【表8】

【0046】

前述の本発明が、はっきりと理解されるために例示及び実施例によっていくらか詳細に記載されたが、本発明の教示を考慮すれば、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく、いくらかの変更及び改変がなされてもよいことは、当業者に直ちに明らかになる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【国際調査報告】