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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-03
(54)【発明の名称】新規の抗ＳＩＲＰＡ抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240827BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240827BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240827BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240827BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240827BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240827BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240827BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240827BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240827BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240827BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240827BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240827BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240827BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240827BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240827BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240827BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240827BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240827BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240827BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20240827BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20240827BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240827BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240827BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240827BHJP
G01N 33/577 20060101ALI20240827BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240827BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K19/00
C12N15/13
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 N
A61K39/395 T
A61K39/395 Y
A61P35/00
A61P31/00
A61P29/00
A61P37/06
A61P37/02
A61P25/00
A61P7/00
A61P9/10 101
A61P3/04
A61P3/10
A61P19/02
A61P17/00
A61P35/02
A61P43/00 121
A61K45/00
A61P11/00
A61P21/04
A61P1/00
A61P11/06
A61P29/00 101
A61P17/06
G01N33/53 D
G01N33/577 B
C07K16/46
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024505469
(86)(22)【出願日】2022-07-28
(85)【翻訳文提出日】2024-03-28
(86)【国際出願番号】 US2022074286
(87)【国際公開番号】W WO2023010100
(87)【国際公開日】2023-02-02
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/109041
(32)【優先日】2021-07-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/104562
(32)【優先日】2022-07-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520502972
【氏名又は名称】エルピサイエンス（スーチョウ）・バイオファーマ，リミテッド
(71)【出願人】
【識別番号】520502983
【氏名又は名称】エルピサイエンス・バイオファーマ，リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100163784
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 健志
(72)【発明者】
【氏名】ルー，ホンタオ
(72)【発明者】
【氏名】ニウ，シャオフェン
(72)【発明者】
【氏名】ワン，フェンリー
(72)【発明者】
【氏名】ワン，チュンニェン
(72)【発明者】
【氏名】チャオ，ジンフェン
(72)【発明者】
【氏名】シン，ロウメイ
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ハイイン
(72)【発明者】
【氏名】ユー，ジンフェン
(72)【発明者】
【氏名】リー，レイ
(72)【発明者】
【氏名】ウー，ジーハオ
(72)【発明者】
【氏名】ガオ，ルイ
(72)【発明者】
【氏名】チウ，ヤンシェン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA02
4B064CA05
4B064CA06
4B064CA08
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BC01
4B065CA44
4B065CA46
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZA02
4C084ZA36
4C084ZA45
4C084ZA59
4C084ZA66
4C084ZA70
4C084ZA89
4C084ZA94
4C084ZA96
4C084ZB07
4C084ZB08
4C084ZB11
4C084ZB15
4C084ZB26
4C084ZB27
4C084ZB32
4C084ZC35
4C084ZC75
4C085AA14
4C085AA16
4C085AA25
4C085AA27
4C085BB01
4C085BB11
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB43
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片、これらをコードする単離されたポリヌクレオチド、これらを含む医薬組成物、およびそれらの使用を提供する。
【選択図】図１－１
【選択図】図１－１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに／またはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、ａ）ＨＣＤＲ１が、ＤＹＹＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＦＩＫＮＥＡＮＧＹＴＴＥＳＳＡＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＹＤＹＹＧＳＮＹＮＷＹＦＤＡ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＬＡＳＫＲＨＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＬＱＨＷＩＨＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
ｂ）ＨＣＤＲ１が、Ｘ １ ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＲＩＤＰＥＤＸ ２ ＥＸ ３ ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＧＸ １８ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、Ｘ ６ ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含み、
ｃ）ＨＣＤＲ１が、ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ １９ ＴＸ ７ ＡＤＤＦＸ ８ Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＤＰＨＸ ９ ＹＧＸ １０ ＳＰＡＷＦＸ １１ Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、Ｘ １２ ＡＳＱＸ １３ ＶＧＩＸ １４ ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＳＡＳＮＲＸ １５ Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＹＳＸ １６ ＹＰＸ １７ Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含み、
ｄ）ＨＣＤＲ１が、ＥＹＶＬＳ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＧＴＳＮＬＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＷＳＧＹＰＷＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１がＡまたはＤであり、Ｘ２がＧまたはＡであり、Ｘ３がＴまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＹであり、Ｘ５がＥまたはＡであり、Ｘ６がＹまたはＨであり、Ｘ７がＹまたはＣであり、Ｘ８がＫまたはＱであり、Ｘ９がＹまたはＳであり、Ｘ１０がＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１がＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２がＥまたはＫであり、Ｘ１３がＮまたはＩであり、Ｘ１４がＳまたはＡであり、Ｘ１５がＹまたはＦであり、Ｘ１６がＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７がＦまたはＬであり、Ｘ１８がＳまたは不在であり、Ｘ１９がＳまたはＰである、上記抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項2】
ａ）ＨＣＤＲ１が、Ｘ１ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはｂ）ＨＣＤＲ２が、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＣＤＲ３が、ＧＸ１８Ｘ４Ｘ５Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｄ）ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＣＤＲ２が、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＣＤＲ３が、Ｘ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１がＡまたはＤであり、Ｘ２がＧまたはＡであり、Ｘ３がＴまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＹであり、Ｘ５がＥまたはＡであり、Ｘ６がＹまたはＨであり、Ｘ１８がＳまたは不在である、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項3】
ａ）ＨＣＤＲ１が、ＡＹＹＭＨ（配列番号７）もしくはＤＹＹＭＨ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはｂ）ＨＣＤＲ２が、ＲＩＤＰＥＤＧＥＳＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号８）、ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１４）、およびＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＣＤＲ３が、ＧＳＹＥＹ（配列番号９）もしくはＧＬＡＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｄ）ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＣＤＲ２が、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＣＤＲ３が、ＹＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）もしくはＨＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項4】
ａ）ＨＣＤＲ１が、ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはｂ）ＨＣＤＲ２が、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ１９ＴＸ７ＡＤＤＦＸ８Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＣＤＲ３が、ＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｄ）ＬＣＤＲ１が、Ｘ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＣＤＲ２が、ＳＡＳＮＲＸ１５Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＣＤＲ３が、ＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ７がＹまたはＣであり、Ｘ８がＫまたはＱであり、Ｘ９がＹまたはＳであり、Ｘ１０がＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１がＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２がＥまたはＫであり、Ｘ１３がＮまたはＩであり、Ｘ１４がＳまたはＡであり、Ｘ１５がＹまたはＦであり、Ｘ１６がＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７がＦまたはＬであり、Ｘ１９がＳまたはＰである、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項5】
ａ）ＨＣＤＲ１が、ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはｂ）ＨＣＤＲ２が、ＷＩＮＴＹＳＧＶＳＴＣＡＤＤＦＫＧ（配列番号２３）、ＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＤＦＱＧ（配列番号２８）、およびＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＣＤＲ３が、ＤＰＨＳＹＧＮＳＰＡＷＦＰＹ（配列番号２４）、ＤＰＨＹＹＧＴＳＰＡＷＦＡＹ（配列番号２９）、およびＤＰＨＹＹＧＳＳＰＡＷＦＶＹ（配列番号３４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｄ）ＬＣＤＲ１が、ＫＡＳＱＮＶＧＩＳＶＡ（配列番号２５）、ＫＡＳＱＩＶＧＩＡＶＡ（配列番号３０）、およびＥＡＳＱＩＶＧＩＡＶＡ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＣＤＲ２が、ＳＡＳＮＲＹＴ（配列番号２６）およびＳＡＳＮＲＦＴ（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＣＤＲ３が、ＱＱＹＳＳＹＰＬＴ（配列番号２７）、ＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３２）、およびＱＱＹＳＡＹＰＦＴ（配列番号３７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項6】
重鎖可変領域が、ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４もしくは配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３４の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ３
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項7】
軽鎖可変領域が、ａ）配列番号４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項8】
ａ）ＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６の配列を含むか、またはｂ）ＨＣＤＲ１が配列番号７の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号８の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号９の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１０の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号１２の配列を含むか、または
ｃ）ＨＣＤＲ１が配列番号１３の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１４もしくは配列番号１７の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１０の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号１６の配列を含むか、または
ｄ）ＨＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２３の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２４の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２５の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号２６の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２７の配列を含むか、または
ｅ）ＨＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２８の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号３０の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号３１の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３２の配列を含むか、または
ｆ）ＨＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３３の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３４の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号３５の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号２６の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３７の配列を含むか、または
ｇ）ＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号４４の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号４５の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４６の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号４７の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号４８の配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項9】
重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４のうちの１つもしくは複数、ならびに／または軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４のうちの１つもしくは複数をさらに含み、ａ）ＨＦＲ１が、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号８４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｂ）ＨＦＲ２が、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＦＲ３配列が、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８５）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｄ）ＨＦＲ４が、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＦＲ１が、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＦＲ２が、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｇ）ＬＦＲ３が、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｈ）ＬＦＲ４が、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
Ｘ２０がＡまたはＶであり、Ｘ２１がＮまたはＤであり、Ｘ２２がＹまたはＦである、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項10】
ａ）ＨＦＲ１が、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号８３）もしくはＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号７３）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／またはｂ）ＨＦＲ２が、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＦＲ３配列が、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号７５）もしくはＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８２）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｄ）ＨＦＲ４が、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＦＲ１が、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＦＲ２が、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｇ）ＬＦＲ３が、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号７９）もしくはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｈ）ＬＦＲ４が、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項11】
重鎖可変領域が、配列番号６３、配列番号６５、および配列番号６７からなる群から選択される配列、ならびに少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項12】
軽鎖可変領域が、配列番号６４および配列番号６６からなる群から選択される配列、ならびに少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項13】
ａ）重鎖可変領域が配列番号４９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５０の配列を含むか、またはｂ）重鎖可変領域が配列番号５１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５２の配列を含むか、または
ｃ）重鎖可変領域が配列番号５３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５４の配列を含むか、または
ｄ）重鎖可変領域が配列番号５５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５６の配列を含むか、または
ｅ）重鎖可変領域が配列番号５７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５８の配列を含むか、または
ｆ）重鎖可変領域が配列番号５９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６０の配列を含むか、または
ｇ）重鎖可変領域が配列番号６１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６２の配列を含むか、または
ｈ）重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｉ）重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６６の配列を含むか、または
ｊ）重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｋ）重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｌ）重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６６の配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項14】
１つまたは複数のアミノ酸残基の置換または修飾をさらに含み、しかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項15】
前記置換または修飾のうちの少なくとも１つが、重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域のＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数の中、および／または非ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数の中にある、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項16】
Ｆｃ領域、任意選択でヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ領域、または任意選択でヒトＩｇＧのＦｃ領域をさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項17】
Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ４に由来する、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項18】
ヒトＩｇＧ４に由来するＦｃ領域が、Ｓ２２８Ｐの変異および／またはＬ２３５Ｅの変異を含む、請求項１７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項19】
ヒト化されている、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項20】
モノクローナル抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、組換え抗体、キメラ抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項21】
ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、多重特異的抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項22】
ａ）ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができること、ｂ）競合的ＥＬＩＳＡによって測定して、１０ｎＭ以下（もしくは５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳによって測定して、０．６ｎＭ以下（もしくは０．５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができること、
ｃ）ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができること、
ｄ）競合的ＥＬＩＳＡによって測定して、１０ｎＭ以下（もしくは５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳによって測定して、０．８ｎＭ以下（もしくは０．７ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができること、
ｅ）Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖に対して有意な阻害を有さないこと、
ｆ）ＣＤ４７により媒介されるＳＩＲＰアルファへのＳＨＰ１の動員をブロックすることができること、
ｇ）標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させることができること、
ｈ）ＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬ（配列番号３６）、ＳＧＡＧＴＥＬ（配列番号７２）、ＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳ（配列番号８７）、およびＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹ（配列番号９０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むエピトープに結合することができること、
からなる群から選択される、１つまたは複数の特性を有する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項23】
ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５４の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項24】
ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項25】
ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６２の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項26】
二重特異的である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項27】
ＳＩＲＰα以外の第２の抗原と特異的に結合することができる、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項28】
第２の抗原が、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、感染性微生物の抗原である、請求項２７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項29】
ＳＩＲＰα上の第２のエピトープに特異的に結合することができる、請求項２７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項30】
１つまたは複数のコンジュゲート部分に連結された、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項31】
コンジュゲート部分がクリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、精製部分、またはその他の抗がん薬物を含む、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項32】
請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項33】
請求項１～３２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項34】
請求項３３に記載の単離されたポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項35】
請求項３４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項36】
請求項３４に記載のベクターが発現される条件下で請求項３５に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を発現する方法。
【請求項37】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてファゴサイトーシスを誘導する方法であって、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物の存在下において、標的細胞を、任意選択で該標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、上記方法。
【請求項38】
対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、対象に、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物を、標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で投与するステップを含む、上記方法。
【請求項39】
対象における標的細胞に対する標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させる方法であって、対象に、標的抗体と組み合わせて、治療有効量の請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物を投与して、それにより、標的細胞に対する標的抗体のＡＤＣＰを増加させるステップを含み、
該標的抗体が、標的細胞上に発現される標的抗原に結合する、上記方法。
【請求項40】
対象における標的細胞のファゴサイトーシスの誘導により利益を得ることができる疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減する方法であって、対象に、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項41】
対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減する方法であって、対象に、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、上記方法。
【請求項42】
標的細胞が、ＣＤ４７発現細胞である、請求項３７～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
標的細胞が、がん細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞である、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
標的抗原が、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、感染性微生物の抗原である、請求項３９に記載の方法。
【請求項45】
抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４または配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項３９～４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
前記疾患、障害、または状態が、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、または関節炎である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項47】
がんが、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、頭頚部扁平上皮細胞癌、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫、ＴまたはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、および腺癌である、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
がんがＣＤ４７陽性がんである、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項49】
対象が、ヒトである、請求項３７～４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
前記投与が経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下、または筋肉内投与を介する、請求項３７～４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項51】
治療有効量の追加の治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項３７～５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
追加の治療剤が、化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、サイトカイン、抗感染剤、および抗炎症剤からなる群から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項53】
請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物、および標的細胞上に発現される標的抗原に結合する標的抗体を含む、キット。
【請求項54】
標的抗原が、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、または感染物質表面抗原である、請求項５３に記載のキット。
【請求項55】
追加の治療剤をさらに含む、請求項５３または５４に記載のキット。
【請求項56】
ＳＩＲＰα陽性細胞を請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物に曝露するステップを含む、ＳＩＲＰα陽性細胞におけるＳＩＲＰαの活性を調節する方法。
【請求項57】
前記細胞がファゴサイトーシス細胞である、請求項５６に記載の方法。
【請求項58】
試料を請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップ、および該試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法。
【請求項59】
ｉ）対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するため、ｉｉ）対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するため、
ｉｉ）対象における標的細胞に対する標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させるため
の医薬の製造における、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項60】
対象における疾患、障害、または状態の処置において標的抗体を強化する方法であって、対象に、標的抗体と組み合わせて、治療有効量の請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項３２に記載の医薬組成物を投与して、それにより、対象における疾患、障害、または状態の処置において標的抗体を強化するステップを含む、上記方法。
【請求項61】
前記疾患、障害、または状態が、免疫関連疾患もしくは障害、腫瘍およびがん、自己免疫疾患、または感染性疾患である、請求項６０に記載の方法。
【請求項62】
免疫関連疾患または障害が、全身性エリテマトーデス、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節症（たとえば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患を伴う孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット病、分類不能型脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、および若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠症候群、虚血再灌流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、または炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項63】
腫瘍およびがんが、固形腫瘍または血液悪性腫瘍であり、任意選択で、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頚部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞がん、および他の血液悪性腫瘍、たとえば、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、ならびにＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽細胞性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌、およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、たとえば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹部神経膠腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ＴもしくはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、ならびに腺癌、またはこれらの転移からなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
[001]本開示は一般に、新規の抗ＳＩＲＰα抗体に関する。
【背景技術】
【0002】
[002]シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）は、骨髄系細胞および樹状細胞に主として発現される阻害性受容体である。ＳＩＲＰαに加えて、ＳＩＲＰファミリーにはまた、ＳＩＲＰβおよびＳＩＲＰγを含め、いくつかの他の膜貫通糖タンパク質も含まれる。ＳＩＲＰファミリーのそれぞれのメンバーは、別個の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインとともに、３つの類似の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む。ＣＤ４７は、細胞外のＮ末端側ＩｇＶドメイン、５つの膜貫通ドメイン、および短いＣ末端側の細胞内尾部を有する、広範に発現される膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰαの細胞リガンドとしての機能を果たす。ＣＤ４７がＳＩＲＰαに結合することにより、ファゴサイトーシスを抑制する「私を食べないで」のシグナルが送達され、食細胞上のＳＩＲＰαのＣＤ４７媒介性係合をブロックすることにより、「私を食べて」のシグナルを有する生細胞の除去を引き起こすことができる。腫瘍細胞は、マクロファージ媒介性破壊を回避するために、ＣＤ４７を過剰発現していることが多い。ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用は、マクロファージ媒介性ファゴサイトーシスの調節に関与していることが示されている（Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８（１２）：１３１３－１３２３，２００７）。広範な前臨床モデルでは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする治療法により、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるがん細胞のファゴサイトーシスおよびｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍免疫応答を刺激する。現在、ＣＤ４７を標的とする複数の薬剤（抗ＣＤ４７抗体およびＳＩＲＰα融合タンパク質）が、臨床試験へと進んでいる。しかしながら、これらの薬剤は、溶血性貧血および血小板減少症と関連付けられている。安全性の問題に加えて、ＣＤ４７の普遍的な発現もまた、抗原シンクを引き起こし得、これにより有効性の低減がもたらされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0003】
[003]新規の抗ＳＩＲＰα抗体へのニーズが依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【0004】
[004]本開示を通して、冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、本明細書において、その冠詞の文法的目的物の１つまたはそれ超（即ち、少なくとも１つ）を意味するために用いられる。例として、「抗体」は１つの抗体または２つ以上の抗体を意味する。
【0005】
[005]一態様では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに／またはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、
ａ）ＨＣＤＲ１が、ＤＹＹＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＦＩＫＮＥＡＮＧＹＴＴＥＳＳＡＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＹＤＹＹＧＳＮＹＮＷＹＦＤＡ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＬＡＳＫＲＨＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＬＱＨＷＩＨＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
ｂ）ＨＣＤＲ１が、Ｘ １ ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＲＩＤＰＥＤＸ ２ ＥＸ ３ ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＧＸ １８ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、Ｘ ６ ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含み、
ｃ）ＨＣＤＲ１が、ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ １９ ＴＸ ７ ＡＤＤＦＸ ８ Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＤＰＨＸ ９ ＹＧＸ １０ ＳＰＡＷＦＸ １１ Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、Ｘ １２ ＡＳＱＸ １３ ＶＧＩＸ １４ ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＳＡＳＮＲＸ １５ Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＹＳＸ １６ ＹＰＸ １７ Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含み、
ｄ）ＨＣＤＲ１が、ＥＹＶＬＳ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＧＴＳＮＬＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＷＳＧＹＰＷＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１がＡまたはＤであり、Ｘ２がＧまたはＡであり、Ｘ３がＴまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＹであり、Ｘ５がＥまたはＡであり、Ｘ６がＹまたはＨであり、Ｘ７がＹまたはＣであり、Ｘ８がＫまたはＱであり、Ｘ９がＹまたはＳであり、Ｘ１０がＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１がＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２がＥまたはＫであり、Ｘ１３がＮまたはＩであり、Ｘ１４がＳまたはＡであり、Ｘ１５がＹまたはＦであり、Ｘ１６がＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７がＦまたはＬであり、Ｘ１８がＳまたは不在であり、Ｘ１９がＳまたはＰである、
抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ａ）ＨＣＤＲ１が、ＤＹＹＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＦＩＫＮＥＡＮＧＹＴＴＥＳＳＡＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＹＤＹＹＧＳＮＹＮＷＹＦＤＡ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＬＡＳＫＲＨＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＬＱＨＷＩＨＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、
ｂ）ＨＣＤＲ１が、Ｘ １ ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＲＩＤＰＥＤＸ ２ ＥＸ ３ ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＧＸ １８ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、Ｘ ６ ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含み、
ｃ）ＨＣＤＲ１が、ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ １９ ＴＸ ７ ＡＤＤＦＸ ８ Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＤＰＨＸ ９ ＹＧＸ １０ ＳＰＡＷＦＸ １１ Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、Ｘ １２ ＡＳＱＸ １３ ＶＧＩＸ １４ ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＳＡＳＮＲＸ １５ Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＹＳＸ １６ ＹＰＸ １７ Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含み、
ｄ）ＨＣＤＲ１が、ＥＹＶＬＳ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ２が、ＥＩＹＰＧＴＩＴＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＨＣＤＲ３が、ＦＹＤＹＤＧＧＷＦＡＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ１が、ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＤＬＨ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ２が、ＧＴＳＮＬＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＷＳＧＹＰＷＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１がＡまたはＤであり、Ｘ２がＧまたはＡであり、Ｘ３がＴまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＹであり、Ｘ５がＥまたはＡであり、Ｘ６がＹまたはＨであり、Ｘ７がＹまたはＣであり、Ｘ８がＫまたはＱであり、Ｘ９がＹまたはＳであり、Ｘ１０がＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１がＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２がＥまたはＫであり、Ｘ１３がＮまたはＩであり、Ｘ１４がＳまたはＡであり、Ｘ１５がＹまたはＦであり、Ｘ１６がＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７がＦまたはＬであり、Ｘ１８がＳまたは不在であり、Ｘ１９がＳまたはＰである、
抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0006】
[006]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）Ｘ１ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、および／または
ｂ）ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および／または
ｃ）ＧＸ１８Ｘ４Ｘ５Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、および／または
ｄ）ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、および／または
ｅ）ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および／または
ｆ）Ｘ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含み、Ｘ１はＡまたはＤであり、Ｘ２はＧまたはＡであり、Ｘ３はＴまたはＳであり、Ｘ４はＬまたはＹであり、Ｘ５はＥまたはＡであり、Ｘ６はＹまたはＨであり、Ｘ１８はＳまたは不在である。
ａ）Ｘ１ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、および／または
ｂ）ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および／または
ｃ）ＧＸ１８Ｘ４Ｘ５Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、および／または
ｄ）ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、および／または
ｅ）ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および／または
ｆ）Ｘ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含み、Ｘ１はＡまたはＤであり、Ｘ２はＧまたはＡであり、Ｘ３はＴまたはＳであり、Ｘ４はＬまたはＹであり、Ｘ５はＥまたはＡであり、Ｘ６はＹまたはＨであり、Ｘ１８はＳまたは不在である。
【0007】
[007]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）ＡＹＹＭＨ（配列番号７）もしくはＤＹＹＭＨ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ならびに／または
ｂ）ＲＩＤＰＥＤＧＥＳＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号８）、ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１４）、およびＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、ならびに／または
ｃ）ＧＳＹＥＹ（配列番号９）もしくはＧＬＡＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または
ｄ）ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ならびに／または
ｅ）ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、ならびに／または
ｆ）ＹＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）もしくはＨＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
ａ）ＡＹＹＭＨ（配列番号７）もしくはＤＹＹＭＨ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ならびに／または
ｂ）ＲＩＤＰＥＤＧＥＳＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号８）、ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１４）、およびＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、ならびに／または
ｃ）ＧＳＹＥＹ（配列番号９）もしくはＧＬＡＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または
ｄ）ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ならびに／または
ｅ）ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、ならびに／または
ｆ）ＹＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）もしくはＨＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0008】
[008]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、および／または
ｂ）ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ１９ＴＸ７ＡＤＤＦＸ８Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および／または
ｃ）ＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、および／または
ｄ）Ｘ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、および／または
ｅ）ＳＡＳＮＲＸ１５Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および／または
ｆ）ＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含み、Ｘ７はＹまたはＣであり、Ｘ８はＫまたはＱであり、Ｘ９はＹまたはＳであり、Ｘ１０はＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１はＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２はＥまたはＫであり、Ｘ１３はＮまたはＩであり、Ｘ１４はＳまたはＡであり、Ｘ１５はＹまたはＦであり、Ｘ１６はＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７はＦまたはＬであり、Ｘ１９はＳまたはＰである。
ａ）ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、および／または
ｂ）ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ１９ＴＸ７ＡＤＤＦＸ８Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および／または
ｃ）ＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、および／または
ｄ）Ｘ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、および／または
ｅ）ＳＡＳＮＲＸ１５Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および／または
ｆ）ＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含み、Ｘ７はＹまたはＣであり、Ｘ８はＫまたはＱであり、Ｘ９はＹまたはＳであり、Ｘ１０はＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１はＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２はＥまたはＫであり、Ｘ１３はＮまたはＩであり、Ｘ１４はＳまたはＡであり、Ｘ１５はＹまたはＦであり、Ｘ１６はＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７はＦまたはＬであり、Ｘ１９はＳまたはＰである。
【0009】
[009]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ならびに／または
ｂ）ＷＩＮＴＹＳＧＶＳＴＣＡＤＤＦＫＧ（配列番号２３）、ＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＤＦＱＧ（配列番号２８）、およびＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、ならびに／または
ｃ）ＤＰＨＳＹＧＮＳＰＡＷＦＰＹ（配列番号２４）、ＤＰＨＹＹＧＴＳＰＡＷＦＡＹ（配列番号２９）、およびＤＰＨＹＹＧＳＳＰＡＷＦＶＹ（配列番号３４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または
ｄ）ＫＡＳＱＮＶＧＩＳＶＡ（配列番号２５）、ＫＡＳＱＩＶＧＩＡＶＡ（配列番号３０）、およびＥＡＳＱＩＶＧＩＡＶＡ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ならびに／または
ｅ）ＳＡＳＮＲＹＴ（配列番号２６）およびＳＡＳＮＲＦＴ（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、ならびに／または
ｆ）ＱＱＹＳＳＹＰＬＴ（配列番号２７）、ＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３２）、およびＱＱＹＳＡＹＰＦＴ（配列番号３７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
ａ）ＴＹＧＭＳ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ならびに／または
ｂ）ＷＩＮＴＹＳＧＶＳＴＣＡＤＤＦＫＧ（配列番号２３）、ＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＤＦＱＧ（配列番号２８）、およびＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、ならびに／または
ｃ）ＤＰＨＳＹＧＮＳＰＡＷＦＰＹ（配列番号２４）、ＤＰＨＹＹＧＴＳＰＡＷＦＡＹ（配列番号２９）、およびＤＰＨＹＹＧＳＳＰＡＷＦＶＹ（配列番号３４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または
ｄ）ＫＡＳＱＮＶＧＩＳＶＡ（配列番号２５）、ＫＡＳＱＩＶＧＩＡＶＡ（配列番号３０）、およびＥＡＳＱＩＶＧＩＡＶＡ（配列番号３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ならびに／または
ｅ）ＳＡＳＮＲＹＴ（配列番号２６）およびＳＡＳＮＲＦＴ（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、ならびに／または
ｆ）ＱＱＹＳＳＹＰＬＴ（配列番号２７）、ＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３２）、およびＱＱＹＳＡＹＰＦＴ（配列番号３７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0010】
[0010]ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、
ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４もしくは配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３４の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ３
を含む。
ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４もしくは配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３４の配列を含むＨＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ３
を含む。
【0011】
[0011]ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、
ａ）配列番号４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
ａ）配列番号４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0012】
[0012]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４もしくは配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｂ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｃ）配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４もしくは配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｄ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｅ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｆ）配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８の配列を含むＬＣＤＲ３
を含む。
【0013】
[0013]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４のうちの１つもしくは複数、ならびに／または軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４のうちの１つもしくは複数をさらに含み、ここで、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号８４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８５）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
Ｘ２０はＡまたはＶであり、Ｘ２１はＮまたはＤであり、Ｘ２２はＹまたはＦである。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号８４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８５）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
Ｘ２０はＡまたはＶであり、Ｘ２１はＮまたはＤであり、Ｘ２２はＹまたはＦである。
【0014】
[0014]ある特定の実施形態では、
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号８３）もしくはＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号７３）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号７５）もしくはＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８２）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号７９）もしくはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む。
ａ）ＨＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫ（配列番号８３）もしくはＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫ（配列番号７３）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号７５）もしくはＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８２）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｅ）ＬＦＲ１は、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号７９）もしくはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、かつ／または
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）もしくはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む。
【0015】
[0015]ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号６３、配列番号６５、および配列番号６７からなる群から選択される配列、ならびに少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む。
【0016】
[0016]ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号６４、および配列番号６６からなる群から選択される配列、ならびに少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む。
【0017】
[0017]ある特定の実施形態では、
ａ）重鎖可変領域が配列番号４９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５０の配列を含むか、または
ｂ）重鎖可変領域が配列番号５１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５２の配列を含むか、または
ｃ）重鎖可変領域が配列番号５３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５４の配列を含むか、または
ｄ）重鎖可変領域が配列番号５５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５６の配列を含むか、または
ｅ）重鎖可変領域が配列番号５７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５８の配列を含むか、または
ｆ）重鎖可変領域が配列番号５９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６０の配列を含むか、または
ｇ）重鎖可変領域が配列番号６１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６２の配列を含むか、または
ｈ）重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｉ）重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６６の配列を含むか、または
ｊ）重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｋ）重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｌ）重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６６の配列を含む。
ａ）重鎖可変領域が配列番号４９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５０の配列を含むか、または
ｂ）重鎖可変領域が配列番号５１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５２の配列を含むか、または
ｃ）重鎖可変領域が配列番号５３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５４の配列を含むか、または
ｄ）重鎖可変領域が配列番号５５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５６の配列を含むか、または
ｅ）重鎖可変領域が配列番号５７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号５８の配列を含むか、または
ｆ）重鎖可変領域が配列番号５９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６０の配列を含むか、または
ｇ）重鎖可変領域が配列番号６１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６２の配列を含むか、または
ｈ）重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｉ）重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６６の配列を含むか、または
ｊ）重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｋ）重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６４の配列を含むか、または
ｌ）重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号６６の配列を含む。
【0018】
[0018]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換または修飾をさらに含み、しかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している。
【0019】
[0019]ある特定の実施形態では、置換または修飾のうち少なくとも１つは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＣＤＲ配列の１つもしくは複数の中、および／または非ＣＤＲ配列の１つもしくは複数の中にある。
【0020】
[0020]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃ領域、任意選択でヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ領域、または任意選択でヒトＩｇＧのＦｃ領域をさらに含む。
【0021】
[0021]ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４に由来する。
[0022]ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４に由来するＦｃ領域は、Ｓ２２８Ｐの変異および／またはＬ２３５Ｅの変異を含む。
[0022]ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４に由来するＦｃ領域は、Ｓ２２８Ｐの変異および／またはＬ２３５Ｅの変異を含む。
【0022】
[0023]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト化されている。
[0024]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、組換え抗体、キメラ抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質である。
[0024]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、組換え抗体、キメラ抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質である。
【0023】
[0025]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、多重特異的抗体、ラクダ化単鎖ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である。
【0024】
[0026]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができること、
ｂ）競合的ＥＬＩＳＡによって測定して１０ｎＭ以下（もしくは５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳによって測定して０．６ｎＭ以下（もしくは０．５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができること、
ｃ）ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができること、
ｄ）競合的ＥＬＩＳＡによって測定して１０ｎＭ以下（もしくは５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳによって測定して０．８ｎＭ以下（もしくは０．７ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができること、
ｅ）Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖に対して有意な阻害を有さないこと、
ｆ）ＣＤ４７により媒介されるＳＩＲＰアルファへのＳＨＰ１の動員をブロックすることができること、
ｇ）標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させることができること、
ｈ）ＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬ（配列番号３６）、ＳＧＡＧＴＥＬ（配列番号７２）、ＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳ（配列番号８７）、およびＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹ（配列番号９０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むエピトープに結合することができること、
からなる群から選択される１つまたは複数の特性を有する。
ａ）ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができること、
ｂ）競合的ＥＬＩＳＡによって測定して１０ｎＭ以下（もしくは５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳによって測定して０．６ｎＭ以下（もしくは０．５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができること、
ｃ）ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができること、
ｄ）競合的ＥＬＩＳＡによって測定して１０ｎＭ以下（もしくは５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳによって測定して０．８ｎＭ以下（もしくは０．７ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができること、
ｅ）Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖に対して有意な阻害を有さないこと、
ｆ）ＣＤ４７により媒介されるＳＩＲＰアルファへのＳＨＰ１の動員をブロックすることができること、
ｇ）標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させることができること、
ｈ）ＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬ（配列番号３６）、ＳＧＡＧＴＥＬ（配列番号７２）、ＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳ（配列番号８７）、およびＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹ（配列番号９０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むエピトープに結合することができること、
からなる群から選択される１つまたは複数の特性を有する。
【0025】
[0027]別の態様では、本開示はまた、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５４の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0026】
[0028]別の態様では、本開示はまた、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0027】
[0029]別の態様では、本開示はまた、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６２の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0028】
[0030]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異的である。
[0031]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα以外の第２の抗原と特異的に結合することができる。
[0031]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα以外の第２の抗原と特異的に結合することができる。
【0029】
[0032]ある特定の実施形態では、第２の抗原は、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、感染性微生物の抗原である。
[0033]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα上の第２のエピトープに特異的に結合することができる。
[0033]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα上の第２のエピトープに特異的に結合することができる。
【0030】
[0034]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分に連結されている。
[0035]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分はクリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、精製部分、またはその他の抗がん薬物を含む。
[0035]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分はクリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、精製部分、またはその他の抗がん薬物を含む。
【0031】
[0036]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。
[0037]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドも提供する。
[0037]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【0032】
[0038]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供される単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
[0039]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供されるベクターを含む宿主細胞を提供する。
[0039]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供されるベクターを含む宿主細胞を提供する。
【0033】
[0040]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を発現させる方法であって、本明細書で提供される宿主細胞を、本明細書で提供されるベクターが発現される条件下で培養するステップを含む、方法を提供する。
【0034】
[0041]別の態様では、本開示はまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてファゴサイトーシスを誘導する方法であって、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物の存在下において、標的細胞を、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、方法を提供する。
【0035】
[0042]別の態様では、本開示はまた、対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、対象に、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物を、標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で投与するステップを含む、方法を提供する。
【0036】
[0043]別の態様では、本開示はまた、対象における標的細胞に対する標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させる方法であって、
対象に、標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物を投与して、それにより、標的細胞に対する標的抗体のＡＤＣＰを増加させるステップを含み、
標的抗体が、標的細胞上に発現される標的抗原に結合する、
方法を提供する。
対象に、標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物を投与して、それにより、標的細胞に対する標的抗体のＡＤＣＰを増加させるステップを含み、
標的抗体が、標的細胞上に発現される標的抗原に結合する、
方法を提供する。
【0037】
[0044]別の態様では、本開示はまた、対象における標的細胞のファゴサイトーシスの誘導により利益を得ることができる疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減する方法であって、対象に、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【0038】
[0045]別の態様では、本開示はまた、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減する方法であって、対象に、任意選択で標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【0039】
[0046]ある特定の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４７発現細胞である。
[0047]ある特定の実施形態では、標的細胞は、がん細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞である。
[0047]ある特定の実施形態では、標的細胞は、がん細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞である。
【0040】
[0048]ある特定の実施形態では、標的抗原は、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、感染性微生物の抗原である。
[0049]ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４または配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
[0049]ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４または配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
【0041】
[0050]ある特定の実施形態では、疾患、障害、または状態は、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、または関節炎である。
【0042】
[0051]ある特定の実施形態では、がんは、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、頭頚部扁平上皮細胞癌、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫、ＴまたはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、および腺癌である。
【0043】
[0052]ある特定の実施形態では、がんは、ＣＤ４７陽性がんである。
[0053]ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
[0054]ある特定の実施形態では、投与は経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下、または筋肉内の投与である。
[0053]ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
[0054]ある特定の実施形態では、投与は経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下、または筋肉内の投与である。
【0044】
[0055]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、治療有効量の追加の治療剤を投与するステップをさらに含む。
[0056]ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、サイトカイン、抗感染剤、および抗炎症剤からなる群から選択される。
[0056]ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、サイトカイン、抗感染剤、および抗炎症剤からなる群から選択される。
【0045】
[0057]別の態様では、本開示はまた、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物、および標的細胞上に発現される標的抗原に結合する標的抗体を含む、キットを提供する。
【0046】
[0058]ある特定の実施形態では、標的抗原は、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、または感染物質表面抗原である。
[0059]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるキットは、追加の治療剤をさらに含む。
[0059]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるキットは、追加の治療剤をさらに含む。
【0047】
[0060]別の態様では、本開示はまた、ＳＩＲＰα陽性細胞におけるＳＩＲＰαの活性を調節する方法であって、ＳＩＲＰα陽性細胞を、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物に曝露するステップを含む、方法を提供する。
【0048】
[0061]ある特定の実施形態では、細胞は、ファゴサイトーシス細胞である。
[0062]別の態様では、本開示はまた、試料を本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片と接触させるステップ、ならびに試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法も提供する。
[0062]別の態様では、本開示はまた、試料を本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片と接触させるステップ、ならびに試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法も提供する。
【0049】
[0063]別の態様では、本開示はまた、
ｉ）対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するため、
ｉｉ）対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するため、
ｉｉ）対象における標的細胞に対する標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させるため
の医薬品の製造における、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物の使用を提供する。
ｉ）対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するため、
ｉｉ）対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するため、
ｉｉ）対象における標的細胞に対する標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させるため
の医薬品の製造における、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物の使用を提供する。
【0050】
[0064]別の態様では、本開示はまた、対象における疾患、障害、または状態の処置において標的抗体を強化する方法であって、対象に、標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片または本明細書で提供される医薬組成物を投与して、それにより、対象における疾患、障害、または状態の処置において標的抗体を強化するステップを含む、方法を提供する。
【0051】
[0065]ある特定の実施形態では、疾患、障害、または状態は、免疫関連疾患もしくは障害、腫瘍およびがん、自己免疫疾患、または感染性疾患である。
[0066]ある特定の実施形態では、免疫関連疾患または障害は、全身性エリテマトーデス、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節症（たとえば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患を伴う孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット病、分類不能型脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、および若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠症候群、虚血再灌流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、または炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される。
[0066]ある特定の実施形態では、免疫関連疾患または障害は、全身性エリテマトーデス、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節症（たとえば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患を伴う孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット病、分類不能型脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、および若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠症候群、虚血再灌流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、または炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される。
【0052】
[0067]ある特定の実施形態では、腫瘍およびがんは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍であり、任意選択で、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頚部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞がん、および他の血液悪性腫瘍、たとえば、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、ならびにＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽細胞性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌、およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、たとえば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹部神経膠腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ＴもしくはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、ならびに腺癌、またはこれらの転移からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【0053】
【図1-1】[0068]図１は、抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、０１５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４（図１Ａ）、０７１ｃ、０７３ｃ（図１Ｂ）のＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１細胞に対する、および００５ｃ（図１Ｃ）の２９３Ｆ－ヒトＳＩＲＰα ｖ１細胞に対する、ＦＡＣＳ結合曲線を示す。
【図1-2】同上。
【図1-3】同上。
【図2-1】[0069]図２は、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ２細胞に対する抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、０１５ｃ、０４２ｃ、０７１ｃ、０７３ｃ、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４（図２Ａ）、０２５ｃ、０５９ｃ、００５ｃ、ＨＥＦＬＢ（図２Ｂ）のＦＡＣＳ結合曲線を示す。
【図2-2】同上。
【図3-1】[0070]図３は、抗ＳＩＲＰα抗体のＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰβ細胞に対するＦＡＣＳ結合曲線（図３Ｃ）、ならびにそれらの組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図３Ａおよび３Ｂ）およびヒトＳＩＲＰβｌ ＥＣＤ（図３Ｄおよび３Ｅ）に対するＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。
【図3-2】同上。
【図3-3】同上。
【図4-1】[0071]図４は、抗ＳＩＲＰα抗体の２９３Ｆ－ヒトＳＩＲＰγ細胞に対するＦＡＣＳ結合曲線（図４Ａおよび図４Ｂ）、ならびにそれらの組換えタンパク質カニクイザルＳＩＲＰγ ＥＣＤに対するＥＬＩＳＡ結合曲線（図４Ｃ）を示す。
【図4-2】同上。
【図5-1】[0072]図５は、抗ＳＩＲＰα抗体の組換えタンパク質Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤに対するＥＬＩＳＡ結合（図５Ａ）、ならびにそれらのＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα細胞に対するＦＡＣＳ結合曲線（図５Ｂおよび図５Ｃ）を示す。
【図5-2】同上。
【図6】[0073]図６は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した、抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、０１５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、０７３ｃ、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４（図６Ａ）、０２５ｃ、００５ｃ、０５９ｃ（図６Ｂ）のＣＤ４７とＳＩＲＰα ｖ１との相互作用のブロッキング活性を示す。
【図7】[0074]図７は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した、抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ、０５９ｃ（図７Ａ）、０２５ｃ、０１５ｃ、０４２ｃ、０７１ｃ、０７３ｃ、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４（図７Ｂ）のＣＤ４７とＳＩＲＰα ｖ２との相互作用のブロッキング活性を示す。
【図8-2】同上。
【図9-1】[0076]図９は、ＨＤＸ－ＭＳによって測定した、抗ＳＩＲＰα抗体０２５ｃ（図９Ａ）、０４２ｃ（図９Ｂ）、０７３ｃ（図９Ｃ）、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４（図９Ｄ）、ＨＥＦＬＢ（図９Ｅ）の可能性のある結合エピトープを示す。
【図9-2】同上。
【図9-3】同上。
【図9-4】同上。
【図10-1】[0077]図１０は、示される抗体の存在下におけるヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞（図１０Ａ）、ＤＬＤ１細胞（図１０Ｂ）、ならびにＲａｊｉ／ＰＤ－Ｌ１細胞（図１０Ｃおよび図１０Ｄ）のファゴサイトーシスを示す。
【図10-2】同上。
【図10-3】同上。
【図11-1】[0078]図１１は、示される抗体の存在下におけるヒトＭ０分極化マクロファージ（図１１Ａ）またはヒトＭ１分極化マクロファージ（図１１Ｂ）によるＲａｊｉ／ＰＤ－Ｌ１細胞のファゴサイトーシスを示す。
【図11-2】同上。
【図12-1】[0079]図１２は、抗ＳＩＲＰα処置および抗ＣＬＤＮ１８．２処置の組合せの活性を評価するｉｎ ｖｉｖｏ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。図１２Ａは、研究の終了時におけるそれぞれの腫瘍の重量を示し、図１２Ｂは、それぞれの研究群の平均腫瘍体積成長曲線を示し、図１２Ｃは、それぞれの腫瘍の個別の体積成長曲線を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図12-2】同上。
【図12-3】同上。
【図12-4】同上。
【図12-5】同上。
【図12-6】同上。
【図12-7】同上。
【図13-1】[0080]図１３は、抗ＳＩＲＰα抗体の存在下における同種樹状細胞により刺激されたＴ細胞のＩＦＮγ分泌（図１３Ａ）、ＣＤ４＋ Ｔ細胞（図１３Ｂ）およびＣＤ８＋ Ｔ細胞（図１３Ｃ）の増殖比を示す。
【図13-2】同上。
【図14-1】[0081]図１４は、ヒト化抗体の、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１細胞（図１４Ａ）、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ２細胞（図１４Ｂ）、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰβ細胞（図１４Ｃ）、および２９３Ｆ－ＳＩＲＰγ細胞（図１４Ｄ）に対するＦＡＣＳ結合曲線を示す。
【図14-2】同上。
【図15】[0082]図１５は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した、ヒト化抗体のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性を示す。（図１５Ａ）ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ１との相互作用のブロッキング、（図１５Ｂ）ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ２との相互作用のブロッキング。
【図16】[0083]図１６は、競合的ＦＡＣＳアッセイによって測定した、ヒト化抗体のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性を示す。（図１６Ａ）ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ１との相互作用のブロッキング、（図１６Ｂ）ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ２との相互作用のブロッキング。
【図18-1】[0085]図１８は、示される抗体の存在下におけるヒトマクロファージによるＲａｊｉ／ＰＤ－Ｌ１細胞のファゴサイトーシスを示す。（図１８Ａ、図１８Ｃ、および図１８Ｅ）抗ＳＩＲＰα抗体に加えて抗ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下における、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１（Ａ）、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ２／ｖ２（Ｃ）、またはＳＩＲＰＡヘテロ接合性ｖ１／ｖ２（Ｅ）ドナーに由来するヒトマクロファージによるＲａｊｉ／ＰＤ－Ｌ１細胞のファゴサイトーシス、（図１８Ｂおよび図１８Ｄ）抗ＳＩＲＰα抗体に加えてリツキシマブの存在下における、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１（Ｂ）またはＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ２／ｖ２（Ｄ）ドナーのヒトマクロファージによるＲａｊｉ／ＰＤ－Ｌ１細胞のファゴサイトーシス。
【図18-2】同上。
【図18-3】同上。
【図18-4】同上。
【図18-5】同上。
【発明を実施するための形態】
【0054】
[0086]本発明の詳細な説明
[0087]以下の本開示の記述は、本開示の種々の実施形態を説明することを意図しているのみである。したがって、議論する特定の改変は本開示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本開示の範囲から逸脱することなしに種々の等価物、変更、および改変ができることは、当業者には明らかであり、そのような等価の実施形態が本明細書に含まれるべきことが理解される。出版物、特許、および特許出願を含む本明細書で引用した全ての参照文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
[0087]以下の本開示の記述は、本開示の種々の実施形態を説明することを意図しているのみである。したがって、議論する特定の改変は本開示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本開示の範囲から逸脱することなしに種々の等価物、変更、および改変ができることは、当業者には明らかであり、そのような等価の実施形態が本明細書に含まれるべきことが理解される。出版物、特許、および特許出願を含む本明細書で引用した全ての参照文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【0055】
[0088]定義
[0089]本明細書で用いる用語「抗体」は、特定の抗原に結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価抗体、一価抗体、多重特異的抗体、または二重特異的抗体を含む。天然のインタクトな抗体は２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物の重鎖はアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューに分類され、それぞれの重鎖は可変領域（ＶＨ）ならびに第１、第２、第３、および任意選択で第４の定常領域（それぞれＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）からなる。哺乳動物の軽鎖はλまたはκと分類され、それぞれの軽鎖は可変領域（ＶＬ）および定常領域からなる。抗体は「Ｙ」の形状を有し、Ｙの軸はジスルフィド結合を介して互いに結合した２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなる。Ｙのそれぞれのアームは、１本の軽鎖の可変および定常領域に結合した１本の重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は抗原の結合に関与している。両方の鎖の可変領域は一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループを含む。本明細書で開示する抗体および抗原結合性断片のＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの規則によって定義され、または同定されてよい（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７－８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７：５５－７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１（３），（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｃｈａｐｔｅｒ ２６，４８１－５１４，（２０１５））。３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存され、高度に可変性のループを支持するスキャフォールドを形成するフレームワーク領域（ＦＲ）（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４を含む軽鎖ＦＲ、ならびにＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４を含む重鎖ＦＲ）として知られる隣接する区間の間に挿入されている。重鎖および軽鎖の定常領域は抗原結合には関与しないが、種々のエフェクター機能を呈する。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り付けられる。抗体の５つの主なクラスまたはアイソタイプはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、これらはそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミュー重鎖の存在によって特徴付けられる。主な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、またはＩｇＡ２（アルファ２重鎖）等のサブクラスに分割される。
[0089]本明細書で用いる用語「抗体」は、特定の抗原に結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価抗体、一価抗体、多重特異的抗体、または二重特異的抗体を含む。天然のインタクトな抗体は２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物の重鎖はアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューに分類され、それぞれの重鎖は可変領域（ＶＨ）ならびに第１、第２、第３、および任意選択で第４の定常領域（それぞれＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）からなる。哺乳動物の軽鎖はλまたはκと分類され、それぞれの軽鎖は可変領域（ＶＬ）および定常領域からなる。抗体は「Ｙ」の形状を有し、Ｙの軸はジスルフィド結合を介して互いに結合した２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなる。Ｙのそれぞれのアームは、１本の軽鎖の可変および定常領域に結合した１本の重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は抗原の結合に関与している。両方の鎖の可変領域は一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループを含む。本明細書で開示する抗体および抗原結合性断片のＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの規則によって定義され、または同定されてよい（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７－８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７：５５－７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１（３），（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｃｈａｐｔｅｒ ２６，４８１－５１４，（２０１５））。３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存され、高度に可変性のループを支持するスキャフォールドを形成するフレームワーク領域（ＦＲ）（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４を含む軽鎖ＦＲ、ならびにＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４を含む重鎖ＦＲ）として知られる隣接する区間の間に挿入されている。重鎖および軽鎖の定常領域は抗原結合には関与しないが、種々のエフェクター機能を呈する。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り付けられる。抗体の５つの主なクラスまたはアイソタイプはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、これらはそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミュー重鎖の存在によって特徴付けられる。主な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、またはＩｇＡ２（アルファ２重鎖）等のサブクラスに分割される。
【0056】
[0090]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体はその任意の抗原結合性断片を包含する。本明細書で用いる用語「抗原結合性断片」は、１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体の一部から形成された抗体断片、または抗原に結合するが、インタクトな天然の抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を意味する。抗原結合性断片の例には、限定なく、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、二重特異的抗体、多重特異的抗体、ラクダ化単鎖ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体が含まれる。抗原結合性断片は、親抗体が結合する同じ抗原に結合することができる。
【0057】
[0091]「Ｆａｂ」は、抗体に関して、ジスルフィド結合によって単一の重鎖の可変領域および第１の定常領域に結合した単一の軽鎖（可変領域と定常領域の両方）からなる抗体の部分を意味する。
【0058】
[0092]「Ｆａｂ’」は、ヒンジ領域の一部を含むＦａｂ断片を意味する。
[0093]「Ｆ（ａｂ’）２」は、Ｆａｂ’のダイマーを意味する。
[0094]「Ｆｃ」は、抗体（たとえばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＤアイソタイプ）に関して、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２および第３の定常ドメインに結合した第１の重鎖の第２および第３の定常ドメインからなる抗体の部分を意味する。ＩｇＭおよびＩｇＥアイソタイプの抗体に関するＦｃは、第４の定常ドメインをさらに含む。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）等の種々のエフェクター機能に関与しているが、抗原結合には機能しない。
[0093]「Ｆ（ａｂ’）２」は、Ｆａｂ’のダイマーを意味する。
[0094]「Ｆｃ」は、抗体（たとえばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＤアイソタイプ）に関して、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２および第３の定常ドメインに結合した第１の重鎖の第２および第３の定常ドメインからなる抗体の部分を意味する。ＩｇＭおよびＩｇＥアイソタイプの抗体に関するＦｃは、第４の定常ドメインをさらに含む。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）等の種々のエフェクター機能に関与しているが、抗原結合には機能しない。
【0059】
[0095]「Ｆｖ」は、抗体に関して、完全な抗原結合部位を担う抗体の最小断片を意味する。Ｆｖ断片は、単一の重鎖の可変領域に結合した単一の軽鎖の可変領域からなる。
[0096]「単鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」は、直接またはペプチドリンカー配列を介して相互に連結された軽鎖可変領域および重鎖可変領域からなる操作された抗体を意味する（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８５：５８７９（１９８８））。
[0096]「単鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」は、直接またはペプチドリンカー配列を介して相互に連結された軽鎖可変領域および重鎖可変領域からなる操作された抗体を意味する（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８５：５８７９（１９８８））。
【0060】
[0097]「単鎖Ｆｖ－Ｆｃ抗体」または「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」は、抗体のＦｃ領域に連結されたｓｃＦｖからなる操作された抗体を意味する。
[0098]「ラクダ化単鎖ドメイン抗体」、「重鎖抗体」、または「ＨＣＡｂ」は、２つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない抗体を意味する（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ １０；２３１（１－２）：２５－３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７－３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体はもともとラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびリャマ）に由来する。ラクダ化抗体は軽鎖を有しないが、真正の抗原結合能力を有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ ３；３６３（６４２８）：４４６－８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９－４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３－１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生成される既知の最小の抗原結合単位を表す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０－８．Ｅｐｕｂ ２００７ Ｊｕｎ １５（２００７））。
[0098]「ラクダ化単鎖ドメイン抗体」、「重鎖抗体」、または「ＨＣＡｂ」は、２つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない抗体を意味する（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ １０；２３１（１－２）：２５－３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７－３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体はもともとラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびリャマ）に由来する。ラクダ化抗体は軽鎖を有しないが、真正の抗原結合能力を有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ ３；３６３（６４２８）：４４６－８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９－４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３－１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生成される既知の最小の抗原結合単位を表す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０－８．Ｅｐｕｂ ２００７ Ｊｕｎ １５（２００７））。
【0061】
[0099]「ナノボディ」は、重鎖抗体のＶＨＨドメインおよび２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３からなる抗体断片を意味する。
[00100]「ダイアボディ」または「ｄＡｂ」には、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片が含まれ、断片は同じポリペプチド鎖の中でＶＬドメインに連結されたＶＨドメインを含む（ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）（たとえばＨｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｊｕｌ １５；９０（１４）：６４４４－８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照）。同じ鎖の中の２つのドメインの間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは別の鎖の相補的なドメインと対を形成することを強制され、それにより２つの抗原結合部位が創出される。抗原結合部位は同じまたは異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る。ある特定の実施形態では、「二重特異的ｄｓダイアボディ」は、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的とするダイアボディである。
[00100]「ダイアボディ」または「ｄＡｂ」には、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片が含まれ、断片は同じポリペプチド鎖の中でＶＬドメインに連結されたＶＨドメインを含む（ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）（たとえばＨｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｊｕｌ １５；９０（１４）：６４４４－８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照）。同じ鎖の中の２つのドメインの間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは別の鎖の相補的なドメインと対を形成することを強制され、それにより２つの抗原結合部位が創出される。抗原結合部位は同じまたは異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る。ある特定の実施形態では、「二重特異的ｄｓダイアボディ」は、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的とするダイアボディである。
【0062】
[00101]「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含む抗体断片を意味する。ある例では、２つ以上のＶＨドメインがペプチドリンカーと共有結合的に接合されて、二価または多価のドメイン抗体が創出される。二価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同じまたは異なる抗原を標的とし得る。
【0063】
[00102]本明細書で用いる用語「価」は、所与の分子の中の特定した数の抗原結合部位の存在を意味する。用語「一価」は、ただ一つの単一の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合性断片を意味し、用語「多価」は、複数の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合性断片を意味する。したがって、用語「二価」、「四価」、および「六価」は、抗原結合性分子の中のそれぞれ２つの結合部位、４つの結合部位、および６つの結合部位の存在を示す。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は二価である。
【0064】
[00103]本明細書で用いる場合、「二重特異的」抗体は、２つの異なるモノクローナル抗体に由来する断片を有し、２つの異なるエピトープに結合することができる人工の抗体を意味する。２つのエピトープは同じ抗原の上に存在してもよく、または２つの異なる抗原の上に存在してもよい。
【0065】
[00104]ある特定の実施形態では、「ｓｃＦｖダイマー」は、別のＶＨ－ＶＬ部分と二量化した（ペプチドリンカーによって二量化された）ＶＨ－ＶＬを含む二価ダイアボディまたは二重特異的ｓｃＦｖ（ＢｓＦｖ）であり、それにより１つの部分のＶＨが他の部分のＶＬと協調して、同じ抗原（またはエピトープ）または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とすることができる２つの結合部位を形成する。他の実施形態では、「ｓｃＦｖダイマー」は、（ペプチドリンカーによって連結された）ＶＬ１－ＶＨ２と会合した（これもペプチドリンカーによって連結した）ＶＨ１－ＶＬ２を含む二重特異的ダイアボディであり、それによりＶＨ１とＶＬ１が協調し、ＶＨ２とＶＬ２が協調して、それぞれの協調した対が異なる抗原特異性を有する。
【0066】
[00105]「ｄｓＦｖ」は、単一の軽鎖の可変領域と単一の重鎖の可変領域との間の連結がジスルフィド結合であるジスルフィド安定化Ｆｖ断片を意味する。一部の実施形態では、「（ｄｓＦｖ）２」または「（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）」は、３つのペプチド鎖、即ちペプチドリンカー（たとえば長い可撓性リンカー）によって連結され、ジスルフィド架橋を介してそれぞれ２つのＶＬ部分に結合した２つのＶＨ部分を含む。一部の実施形態では、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’は、ジスルフィドで対を形成したそれぞれの重鎖および軽鎖が異なる抗原特異性を有する二重特異的である。
【0067】
[00106]本明細書で用いる用語「キメラ」は、１つの種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部と、異なる種に由来する重鎖および／または軽鎖の残りとを有する抗体または抗原結合性断片を意味する。説明的な例では、キメラ抗体はヒトに由来する定常領域と、マウス等の非ヒト動物に由来する可変領域とを含んでよい。一部の実施形態では、非ヒト動物は哺乳動物、たとえばマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターである。
【0068】
[00107]本明細書で用いる用語「ヒト化」は、抗体または抗原結合性断片が非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、および適用される場合にはヒトに由来する定常領域を含むことを意味する。
【0069】
[00108]本明細書で用いる用語「親和性」は、免疫グロブリン分子（即ち抗体）またはその断片と抗原との間の非共有結合相互作用の強さを意味する。
[00109]本明細書で用いる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、たとえば抗体と抗原のような２つの分子の間の非ランダム結合反応を意味する。特異的結合は、たとえば抗原と抗原結合性分子との間の結合が平衡に達したときのＫＤ値、即ち解離速度と会合速度との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）によって表される結合親和性において特徴付けることができる。ＫＤは、それだけに限らないが、表面プラスモン共鳴法、ミクロスケールサーモフォレーシス法、ＨＰＬＣ－ＭＳ法、およびフローサイトメトリー（ＦＡＣＳなど）法を含む当技術分野で既知の任意の従来法を用いて決定してよい。１０－６Ｍ以下（たとえば５×１０－７Ｍ以下、２×１０－７Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、２×１０－８Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、４×１０－９Ｍ以下、３×１０－９Ｍ以下、２×１０－９Ｍ以下、または１０－９Ｍ以下）のＫＤ値は、抗体またはその抗原結合性断片とＳＩＲＰα（たとえばヒトＳＩＲＰα）との間の特異的結合を示し得る。
[00109]本明細書で用いる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、たとえば抗体と抗原のような２つの分子の間の非ランダム結合反応を意味する。特異的結合は、たとえば抗原と抗原結合性分子との間の結合が平衡に達したときのＫＤ値、即ち解離速度と会合速度との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）によって表される結合親和性において特徴付けることができる。ＫＤは、それだけに限らないが、表面プラスモン共鳴法、ミクロスケールサーモフォレーシス法、ＨＰＬＣ－ＭＳ法、およびフローサイトメトリー（ＦＡＣＳなど）法を含む当技術分野で既知の任意の従来法を用いて決定してよい。１０－６Ｍ以下（たとえば５×１０－７Ｍ以下、２×１０－７Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、２×１０－８Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、４×１０－９Ｍ以下、３×１０－９Ｍ以下、２×１０－９Ｍ以下、または１０－９Ｍ以下）のＫＤ値は、抗体またはその抗原結合性断片とＳＩＲＰα（たとえばヒトＳＩＲＰα）との間の特異的結合を示し得る。
【0070】
[00110]本明細書で用いる「ヒトＳＩＲＰαとの結合について競合する」能力は、第１の抗体または抗原結合性断片の、ヒトＳＩＲＰαと第２の抗ＳＩＲＰα抗体との間の結合相互作用を何らかの検出可能な程度で阻害する能力を意味する。ある特定の実施形態では、ヒトＳＩＲＰαとの結合について競合する抗体または抗原結合性断片は、ヒトＳＩＲＰαと第２の抗ヒトＳＩＲＰα抗体との間の結合相互作用を少なくとも８５％、または少なくとも９０％阻害する。ある特定の実施形態では、この阻害は９５％より大きく、または９９％より大きくてよい。
【0071】
[0077]本明細書で用いる用語「エピトープ」は、それに抗体が結合する抗原の上の特定の原子またはアミノ酸の群を意味する。２つの抗体が抗原に対して競合的結合を示せば、それらは抗原の中の同じまたは密接に関連したエピトープに結合し得る。エピトープは線状またはコンフォメーション状（即ち、隔たれたアミノ酸残基を含む）であってよい。たとえば、抗体または抗原結合性断片が参照抗体の抗原への結合を少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％ブロックすれば、その抗体または抗原結合性断片は、参照抗体と同じ／密接に関連したエピトープと結合するとみなしてよい。
【0072】
[0078]本明細書で用いる用語「アミノ酸」は、それぞれのアミノ酸に特有の側鎖とともにアミン（－ＮＨ２）およびカルボキシル（－ＣＯＯＨ）官能基を含む有機化合物を意味する。本開示においてアミノ酸の名称は標準的な１文字または３文字のコードとして表すこともでき、それらを以下に要約する。
【0073】
【表1】
【0074】
[0079]アミノ酸配列に関する「保存的置換」は、アミノ酸残基を、同様の物理化学的特性を有する側鎖を有する異なるアミノ酸残基で置き換えることを意味する。たとえば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ）の間で、中性親水性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＣｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、およびＧｌｎ）の間で、酸性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＡｓｐ、Ｇｌｕ）の間で、塩基性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＨｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）の間で、または芳香族側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＴｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）の間で行うことができる。当技術分野で既知のように、保存的置換は通常、タンパク質のコンフォメーション構造において顕著な変化を生じず、したがってタンパク質の生物学的活性を保持することができる。
【0075】
[0080]本明細書で用いる用語「相同」は、最適に整列させたときに別の配列と少なくとも６０％（たとえば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（またはその相補的ストランド）またはアミノ酸配列を意味する。
【0076】
[0081]アミノ酸配列（または核酸配列）に関する「配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要な場合には同一のアミノ酸（または核酸）の数が最大になるようにギャップを導入した後の、参照配列におけるアミノ酸（または核酸）残基と同一である候補配列におけるアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージとして定義される。換言すれば、アミノ酸配列（または核酸配列）の配列同一性パーセント（％）は、比較する参照配列に関して同一であるアミノ酸残基（または塩基）の数を、候補配列または参照配列のどちらか短い方におけるアミノ酸残基（または塩基）の全数で除することによって計算することができる。アミノ酸残基の保存的置換は、同一の残基とみなしてもよく、みなさなくてもよい。アミノ酸（または核酸）の配列同一性パーセントを計算するための整列は、たとえばＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイトから入手可能、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９７）も参照されたい）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトから入手可能、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３－４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７－８（２００７）も参照されたい）、およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公衆利用可能なツールを用いて達成することができる。当業者であれば、ツールによって提供されるデフォルトパラメーターを用いてもよく、またはたとえば好適なアルゴリズムを選択することによって整列のために適切なパラメーターをカスタマイズしてもよい。
【0077】
[0082]本明細書で用いる「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域の、Ｃ１複合体およびＦｃ受容体等のそのエフェクターへの結合に帰せられる生物学的活性を意味する。例示的なエフェクター機能には、抗体とＣ１複合体上のＣ１ｑとの相互作用によって媒介される補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体のＦｃ領域のエフェクター細胞上のＦｃ受容体への結合によって媒介される抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）、およびファゴサイトーシスが含まれる。エフェクター機能は、Ｆｃ受容体結合アッセイ、Ｃ１ｑ結合アッセイ、および細胞溶解アッセイ等の種々のアッセイを用いて評価することができる。
【0078】
[0083]「単離された」物質は、天然の状態から人の手によって改変されている。「単離された」組成物または物質が天然に生じるならば、それはその元の環境から変化しもしくは除去されているか、またはその両方である。たとえば、生きている動物の中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離されて」いないが、同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、その天然の状態において共存する物質から十分に分離されて実質的に純粋な状態で存在するならば、「単離されて」いる。「単離された核酸配列」は、単離された核酸分子の配列を意味する。ある特定の実施形態では、「単離された抗体またはその抗原結合性断片」は、電気泳動法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリ電気泳動等）またはクロマトグラフィー法（イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣ）によって決定して少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の純度を有する抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
【0079】
[0084]本明細書で用いる用語「ベクター」は、その中に遺伝要素が作動可能に挿入され、その遺伝要素の発現が生じて、それにより、その遺伝要素によってコードされるタンパク質、ＲＮＡ、またはＤＮＡが産生され、またはその遺伝要素が複製されるビヒクルを意味する。ベクターは、宿主細胞をトランスフォーム、トランスデュース、またはトランスフェクトして、それが宿主細胞の中に運搬する遺伝要素の発現を生じさせるために用い得る。ベクターの例には、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）等の人工染色体、ラムダファージまたはＭ１３ファージ等のバクテリオファージ、および動物ウイルスが含まれる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能な要素、およびレポーター遺伝子等の発現を制御するための種々の要素を含んでよい。さらに、ベクターは複製の起点を含んでよい。ベクターは、ウイルス粒子、リポソーム、またはタンパク質コーティングを含むがこれらに限定されない、ベクターの細胞内への進入を補助する物質を含んでもよい。ベクターは発現ベクターまたはクローニングベクターであってよい。本開示は、抗体またはその抗原結合性断片をコードする本明細書で提供される核酸配列、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および少なくとも１つの選択マーカーを含むベクター（たとえば発現ベクター）を提供する。
【0080】
[0085]本明細書で用いる語句「宿主細胞」は、その中に外来のポリヌクレオチドおよび／またはベクターを導入することができ、またはこれらが導入された細胞を意味する。
[0086]用語「対象」は、ヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、たとえば哺乳動物および非ヒト霊長類、マウス、ラット、ネコ、ウサギ、ヒツジ、イヌ、雌ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類等の非哺乳動物を含む。注記した場合を除いて、用語「患者」または「対象」は、本明細書では相互交換可能に用いられる。
[0086]用語「対象」は、ヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、たとえば哺乳動物および非ヒト霊長類、マウス、ラット、ネコ、ウサギ、ヒツジ、イヌ、雌ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類等の非哺乳動物を含む。注記した場合を除いて、用語「患者」または「対象」は、本明細書では相互交換可能に用いられる。
【0081】
[0087]用語「抗腫瘍活性」は、腫瘍細胞の増殖、生存性、または転移活性の低減を意味する。たとえば、抗腫瘍活性は、治療のない対照と比較して、治療中に生じる異常な細胞の増殖速度の低下、または腫瘍のサイズの安定性もしくは低減、あるいは治療による長期生存によって示すことができる。そのような活性は、異種移植モデル、同種移植モデル、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）モデル、および抗腫瘍活性を検討するための当技術分野で既知のその他のモデルを含むがこれらに限らない許容されたｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍モデルを用いて評価することができる。
【0082】
[0088]本明細書で用いる疾患、障害、もしくは状態を「処置すること」またはそれらの「処置」は、疾患、障害、もしくは状態を防止しまたは軽減すること、疾患、障害、もしくは状態の発症または発生速度を遅くすること、疾患、障害、もしくは状態を発生させるリスクを低減すること、疾患、障害、もしくは状態に関連する症状の発生を防止しまたは遅延させること、疾患、障害、もしくは状態に関連する症状を低減しまたは終止させること、疾患、障害、もしくは状態を完全にまたは部分的に寛解させること、疾患、障害、もしくは状態を治癒させること、またはそれらのいくつかの組合せを含む。
【0083】
[0089]用語「診断」、「診断する」、または「診断すること」は、ＳＩＲＰα関連疾患の同定のような、病的な状態、疾患、または状態の同定を意味し、または特定の処置レジメンによって恩恵を受ける可能性のあるＳＩＲＰα関連疾患を有する対象の同定を意味する。一部の実施形態では、診断はＳＩＲＰαの異常な量または活性の同定を含む。一部の実施形態では、診断は対象におけるがんまたは自己免疫疾患の同定を意味する。
【0084】
[0090]本明細書で用いる場合、用語「生物学的試料」または「試料」は、目的の対象から得られまたは由来し、たとえば物理的、生化学的、化学的、および／または生理学的特徴に基づいて特徴付けおよび／または同定される、細胞および／またはその他の分子実体を含む生物学的組成物を意味する。生物学的試料は、当業者には既知の任意の方法によって得られる対象の細胞、組織、臓器、および／または生物学的流体を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、生物学的試料は流体試料である。一部の実施形態では、流体試料は全血、血漿、血清、粘液（鼻漏および痰を含む）、腹水、胸膜液、胸水、唾液、尿、滑液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、胸腔穿刺液、腹部の液、腹水、または心嚢液である。一部の実施形態では、生物学的試料は対象の心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、皮膚、または血管から得られる組織または細胞である。
【0085】
[0091]「ＳＩＲＰα」は、本明細書で使用される場合、主として骨髄系細胞、樹状細胞によって発現され、幹細胞またはニューロンによっても発現される、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）ファミリーの調節性膜糖タンパク質を指す。ＳＩＲＰαの構造には、細胞外ドメインおよび細胞質ドメインが含まれる。ＳＩＲＰαの細胞外ドメインは、１つの膜遠位側Ｉｇ可変様（ＩｇＶ）フォールドおよび２つの膜近位側Ｉｇ定常様（ＩｇＣ）フォールドからなる。ＳＩＲＰαのＩｇＶドメインは、ＣＤ４７の細胞外Ｉｇドメインの結合を担う。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰαは、ヒトＳＩＲＰαである。ヒトＳＩＲＰαをコードする遺伝子は、多型遺伝子であり、複数のバリアントがヒト集団において説明されている。最も一般的なタンパク質バリアントは、ＳＩＲＰα ｖ１およびＳＩＲＰα ｖ２（受託番号ＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）およびＣＡＡ７１４０３）である。本明細書で使用されるＳＩＲＰαは、他の動物種、たとえば、とりわけマウスおよびカニクイザルに由来し得る。ハツカネズミ（マウス）ＳＩＲＰαタンパク質の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０３１５７３またはＢＡＡ２０３７６．１またはＢＡＡ１３５２１．１に開示されている。カニクイザル（サル）ＳＩＲＰαタンパク質の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１２７１６７９に開示されている。
【0086】
[0092]ＳＩＲＰαに加えて、ＳＩＲＰファミリーにはまた、ＳＩＲＰβおよびＳＩＲＰγを含め、いくつかの他の膜貫通糖タンパク質も含まれる。ＳＩＲＰファミリーのそれぞれのメンバーは、別個の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインとともに、３つの類似の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む。ＳＩＲＰベータ遺伝子によってコードされる「ＳＩＲＰβ」は、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２またはＤＡＰ１２と称される膜貫通タンパク質とのその会合を通じて、その細胞質尾部の細胞内シグナル伝達によって正のシグナルを生成する。ＤＡＰ１２の細胞質尾部は、ＳＩＲＰβ１を活性化機序に連結させる免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する。ＳＩＲＰｇとも名付けられる「ＳＩＲＰγ」は、ＳＩＲＰＧ遺伝子によってコードされ、細胞外ＩｇドメインはＳＩＲＰαおよびＳＩＲＰβに高度に相同であるが、ＳＩＲＰγの細胞質尾部は異なる。ＳＩＲＰγもまた、ＣＤ４７に結合することが示されているが、ＳＩＲＰαよりも親和性は低い。
【0087】
[0093]用語「抗ＳＩＲＰα抗体」は、ＳＩＲＰα（たとえばヒトまたはサルのＳＩＲＰα）に特異的に結合することができる抗体を意味する。用語「抗ヒトＳＩＲＰα抗体」は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合することができる抗体を意味する。
【0088】
[0094]本明細書で用いる「ＳＩＲＰα関連」の疾患、障害、または状態は、ＳＩＲＰαの増加したまたは減少した発現または活性によって惹起され、悪化され、またはその他に関連する任意の疾患または状態を意味する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態は、たとえば自己免疫疾患等の免疫関連障害である。一部の実施形態では、ＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態は、たとえばがん等の過剰な細胞の増殖に関連する障害である。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα関連の疾患または状態は、ＳＩＲＰα遺伝子および／またはＳＩＲＰαシグネチャー遺伝子の発現または過剰発現を特徴とする。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα関連疾患または状態は、ＣＤ４７の発現または過剰発現を特徴とする。
【0089】
[0095]用語「薬学的に許容される」は、指定した担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤、および／または塩が一般に、その製剤を構成する他の成分と化学的におよび／または物理的に適合性があり、その受容者に生理学的に適合性があることを示す。
【0090】
[0096]「ＳＩＲＰα陽性細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の表面上にＳＩＲＰαを発現する細胞（たとえば、ファゴサイトーシス細胞）を指す。一部の実施形態では、「ＳＩＲＰα陽性細胞」は、細胞の表面上にＳＩＲＰβまたはＳＩＲＰγも発現し得る。
【0091】
[0097]抗ＳＩＲＰα抗体
[0098]本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＳＩＲＰαに特異的に結合することができる。
[0098]本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＳＩＲＰαに特異的に結合することができる。
【0092】
[0099]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、バイオレイヤーインターフェロメトリー技術（Ｏｃｔｅｔシステム）を使用して、１０－７Ｍ以下、８×１０－８Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、２×１０－８Ｍ以下、８×１０－９Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、２×１０－９Ｍ以下、１０－９Ｍ以下、８×１０－１０Ｍ以下、７×１０－１０Ｍ以下、または６×１０－１０Ｍ以下、または５×１０－１０Ｍ以下、または４×１０－１０Ｍ以下のＫＤ値で、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。Ｏｃｔｅｔシステムは、バイオレイヤーインターフェロメトリー（ＢＬＩ）技術に基づいており、たとえば、Ｓｕｌｔａｎａ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｃｉｅｎｃｅ，０２ Ｆｅｂ ２０１５，７９：１９．２５．１－１９．２５．２６を参照されたい。ある特定の実施形態では、ＫＤ値は、本開示の実施例５．２．５に記載される方法によって測定される。
【0093】
[00100]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片のヒトＳＩＲＰαへの結合は、「５０％効果濃度」（ＥＣ５０）値によっても表すことができる。ＥＣ５０値は、その最大の結合の５０％が観察される抗体の濃度を意味する。ＥＣ５０値は当技術分野で既知の結合アッセイ、たとえば酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等の直接または間接結合アッセイ、フローサイトメトリーアッセイ、およびその他の結合アッセイによって測定することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定して、０．５ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０９ｎＭ以下、０．０８ｎＭ以下、０．０７ｎＭ以下、０．０６ｎＭ以下、または０．０５ｎＭ以下のＥＣ５０（即ち、５０％結合濃度）で、ヒトＳＩＲＰα ｖ１またはヒトＳＩＲＰα ｖ２に特異的に結合する。
【0094】
[00101]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、４ｎＭ以下（たとえば、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下、１．０ｎＭ以下）のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ１に特異的に結合する。
【0095】
[00102]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、１２．１ｎＭ以下（たとえば、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下）のＥＣ５０で、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に特異的に結合する。
【0096】
[00103]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、マウスＳＩＲＰαへの特異的結合を有さない。マウスＳＩＲＰαへの「特異的結合を有さない」抗体またはその抗原結合性断片は、マウスＳＩＲＰαに対して検出可能な結合を示さないもの、または同等のアッセイ条件下において対照抗体のものと同程度のレベルでマウスＳＩＲＰαに対して結合を示すものである。対照抗体は、マウスＳＩＲＰαに結合しないことが知られている任意の抗体であり得る。
【0097】
[00104]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、４０ｎＭ以下（たとえば、３０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下）のＥＣ５０で、ＳＩＲＰβに特異的に結合する。
【0098】
[00105]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、３ｎＭ以下（たとえば、２ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下）のＥＣ５０で、ＳＩＲＰβ ＥＣＤに特異的に結合する。
【0099】
[00106]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、８０ｎＭ以下（たとえば、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下）のＥＣ５０で、ＳＩＲＰγに結合する。
【0100】
[00107]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができる。２つの相互作用する分子間の「相互作用を完全にブロックする」とは、抗体が、２つの相互作用する分子間の結合を少なくとも８０％阻害することができるか、または２つの分子の相互作用によって誘導されるシグナル伝達を少なくとも５０％阻害することができることを意味する。ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用によって誘導されるシグナル伝達は、ＳＩＲＰ－アルファの細胞内部分（たとえば、Ｃ末端尾部）へのＳＨＰ１動員を特徴とし得る。
【0101】
[00108]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の結合の少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％をブロックすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、競合的ＦＡＣＳアッセイによって測定して、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の結合の少なくとも９７％または少なくとも９８％をブロックすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して４ｎＭ以下（もしくは３ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳアッセイによって測定して０．６ｎＭ以下（もしくは０．５ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ１とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができる。
【0102】
[00109]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用を完全にブロックすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の結合の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、または９８％をブロックすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、競合的ＦＡＣＳアッセイによって測定して、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の結合の少なくとも９８％または少なくとも９９％をブロックすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して５５ｎＭ以下（もしくは６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、３ｎＭ以下、もしくは２ｎＭ以下）のＩＣ５０で、または競合的ＦＡＣＳアッセイによって測定して、３ｎＭ以下（もしくは２ｎＭ以下）のＩＣ５０で、ＳＩＲＰ－アルファｖ２とＣＤ４７との間の相互作用をブロックすることができる。
【0103】
[00110]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との相互作用によって誘導されるシグナル伝達の少なくとも５０％、６０％、７０％、または８０％をブロックすることができる。
【0104】
[00111]ある特定の実施形態では、抗体は、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の相互作用によって誘導されるシグナル伝達をブロックし得るが、ＳＩＲＰ－アルファとＣＤ４７との間の結合を有意にブロックしない。換言すれば、ＳＩＲＰ－アルファおよびＣＤ４７は、そのような抗ＳＩＲＰ－アルファ抗体の存在下において互いに結合することができるが、それらは、シグナル伝達における有効性が低くなる。
【0105】
[00112]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖に対して有意な阻害を有さない。ＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用を通じた抗原提示細胞へのヒトＴ細胞の付着は、Ｔ細胞増殖を共刺激することが報告されている。Ｔ細胞増殖は、当該技術分野において公知の方法を使用して、たとえば、本開示の実施例４．２．９に記載されるものなどのＴ細胞増殖アッセイによって、たとえば、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）標識化を使用して増殖集団を判定することによって、判定することができる。本開示に示されるように、ヒトＳＩＲＰγに対する結合活性に関係なく、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を有意に低減させることも、ＩＦＮγ分泌に影響を及ぼすこともない。
【0106】
[00113]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖に対して、対照抗体（たとえば、ＳＩＲＰαに結合せず、Ｔ細胞増殖に影響を及ぼさないことが知られている抗体）で得られる対照レベルと比べて、５０％以下（または４０％以下、３０％以下、２０％以下、もしくは１０％以下）の阻害を示す。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖、またはＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖に対して、検出可能な阻害を示さない。
【0107】
[00114]ある特定の実施形態では、単剤としての本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ある特定のＣＤ４７発現細胞、たとえば、Ｒａｊｉ細胞のファゴサイトーシスを誘導しない。
【0108】
[00115]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させることができる。ある特定の実施形態では、標的抗体は、標的細胞上に発現される標的抗原に結合し、標的細胞に対する標的抗体のＡＤＣＰ作用が、増加される。ある特定の実施形態では、標的細胞はまた、ＣＤ４７を発現する。
【0109】
[00116]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むエピトープに結合することができる。
【0110】
[00117]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＧＡＧＴＥＬ（配列番号７２）および／またはＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むエピトープに結合することができる。
【0111】
[00118]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含むエピトープに結合することができる。
【0112】
[00119]例示的な抗ＳＩＲＰα抗体
[00120]ある特定の実施形態では、本開示は、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０７１、０７３、および／または０５９の１つまたは複数の（たとえば１、２、３、４、５、または６つの）ＣＤＲ配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０７１、０７３、および／または０５９のキメラ抗体、ヒト化抗体、抗体誘導体、および抗体バリアントを提供する。
[00120]ある特定の実施形態では、本開示は、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０７１、０７３、および／または０５９の１つまたは複数の（たとえば１、２、３、４、５、または６つの）ＣＤＲ配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０７１、０７３、および／または０５９のキメラ抗体、ヒト化抗体、抗体誘導体、および抗体バリアントを提供する。
【0113】
[00121]本明細書で用いる抗体「００５」および「００５ｃ」は、それぞれ、配列番号４９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0114】
[00122]本明細書で用いる抗体「０１５」および「０１５ｃ」は、それぞれ、配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0115】
[00123]本明細書で用いる抗体「０２５」および「０２５ｃ」は、それぞれ、配列番号５３の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５４の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0116】
[00124]本明細書で用いる抗体「０４２」および「０４２ｃ」は、それぞれ、配列番号５５の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５６の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0117】
[00125]本明細書で用いる抗体「０５９」および「０５９ｃ」は、それぞれ、配列番号５７の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0118】
[00126]本明細書で用いる抗体「０７１」および「０７１ｃ」は、それぞれ、配列番号５９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６０の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0119】
[00127]本明細書で用いる抗体「０７３」および「０７３ｃ」は、それぞれ、配列番号６１の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６２の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナルハイブリドーマ抗体およびキメラ抗体を意味する。
【0120】
[00128]以下の表１は、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０７１、０７３、０５９、００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３のＣＤＲのアミノ酸配列を示す。表１におけるＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔの規則によって定義または同定されたものであるが、当業者であれば、ＣＤＲが、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、もしくはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉなどの他の規則を使用して定義されてもよいか、または２つ以上の規則を使用した混合様式で定義されてもよいことを理解することができる。以下の表２は、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０７１、０７３、０５９、００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３の重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を示す。
【0121】
[00129]
【0122】
【表2-1】
【0123】
【表2-2】
【0124】
Ｘ１はＡまたはＤであり、Ｘ２はＧまたはＡであり、Ｘ３はＴまたはＳであり、Ｘ４はＬまたはＹであり、Ｘ５はＥまたはＡであり、Ｘ６はＹまたはＨであり、Ｘ７はＹまたはＣであり、Ｘ８はＫまたはＱであり、Ｘ９はＹまたはＳであり、Ｘ１０はＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１はＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２はＥまたはＫであり、Ｘ１３はＮまたはＩであり、Ｘ１４はＳまたはＡであり、Ｘ１５はＹまたはＦであり、Ｘ１６はＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７はＦまたはＬであり、Ｘ１８はＳまたは不在であり、Ｘ１９はＳまたはＰである。
【0125】
[00130]
【0126】
【表3-1】
【0127】
【表3-2】
【0128】
[00131]抗体００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、０７３、００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３のそれぞれがＳＩＲＰαに結合することができ、抗原結合特異性が一次的にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域によって提供されることを考えれば、抗体００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、０７３、００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の配列は「混合および整合されて」（即ち、異なる抗体のＣＤＲは混合および整合され得るが、それぞれの抗体はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含まなくてはならない）、本開示の抗ＳＩＲＰα結合分子を創出することができる。そのような「混合および整合された」抗体のＳＩＲＰα結合は、上記および実施例に記載した結合アッセイを用いて試験することができる。好ましくは、ＶＨ ＣＤＲ配列が混合および整合される場合には、特定のＶＨ配列からのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３配列は、構造的に同様のＣＤＲ配列で置き換えられる。同様に、ＶＬ ＣＤＲ配列が混合および整合される場合には、特定のＶＬ配列からのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、および／またはＬＣＤＲ３配列は、好ましくは構造的に同様のＣＤＲ配列で置き換えられる。モノクローナルハイブリドーマ抗体００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、および０７３、またはキメラ抗体００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃについて１つまたは複数のＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ領域配列を本明細書で開示されるＣＤＲ配列からの構造的に同様の配列で置換することによって、新規のＶＨおよびＶＬ配列が創出され得ることは、当業者には容易に明白になる。
【0129】
[00132]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１、７、１３、１８、２２および４３からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２、８、１４、１７、１９、２３、２８、３３、３８および４４からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３、９、１５、２０、２４、２９、３４、３９および４５からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号４、１０、２５、３０、３５、４０および４６からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５、１１、２６、３１、４１および４７からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６、１２、１６、２１、２７、３２、３７、４２および４８からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0130】
[00133]ある特定の実施形態では、本開示は、Ｘ１ＹＹＭＨ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＲＩＤＰＥＤＸ２ＥＸ３ＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、ＧＸ１８Ｘ４Ｘ５Ｙ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、およびＸ６ＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み、Ｘ１がＡまたはＤであり、Ｘ２がＧまたはＡであり、Ｘ３がＴまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＹであり、Ｘ５がＥまたはＡであり、Ｘ６がＹまたはＨであり、Ｘ１８がＳまたは不在である、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0131】
[00134]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号７および１３からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ１、ならびに／または配列番号８、１４、および１７からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ２、ならびに／または配列番号９および１５からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、ならびに／または配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、ならびに／または配列番号１２および１６からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0132】
[00135]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＷＩＮＴＹＳＧＶＸ１９ＴＸ７ＡＤＤＦＸ８Ｇ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、ＤＰＨＸ９ＹＧＸ１０ＳＰＡＷＦＸ１１Ｙ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、Ｘ１２ＡＳＱＸ１３ＶＧＩＸ１４ＶＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＳＡＳＮＲＸ１５Ｔ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＳＸ１６ＹＰＸ１７Ｔ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み、Ｘ７がＹまたはＣであり、Ｘ８がＫまたはＱであり、Ｘ９がＹまたはＳであり、Ｘ１０がＮまたはＴまたはＳであり、Ｘ１１がＰまたはＡまたはＶであり、Ｘ１２がＥまたはＫであり、Ｘ１３がＮまたはＩであり、Ｘ１４がＳまたはＡであり、Ｘ１５がＹまたはＦであり、Ｘ１６がＳまたはＴまたはＡであり、Ｘ１７がＦまたはＬであり、Ｘ１９がＳまたはＰである、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0133】
[00136]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、ならびに／または配列番号２３、２８、および３３からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ２、ならびに／または配列番号２４、２９、および３４からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２５、３０、および３５の配列を含むＬＣＤＲ１、ならびに／または配列番号３１および２６からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ２、ならびに／または配列番号２７、３２、および３７からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0134】
[00137]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0135】
[00138]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0136】
[00139]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４または１７の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0137】
[00140]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0138】
[00141]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２８の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0139】
[00142]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0140】
[00143]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４４の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４８の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
【0141】
[00144]ＣＤＲは抗原結合に関与していることが知られている。しかし、６つのＣＤＲの全てが不可欠または不変ではないことが見出されている。換言すれば、ＳＩＲＰαへの特異的な結合特異性および／または親和性を実質的に保持しながら、抗ＳＩＲＰα抗体００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、および０７３、または抗ＳＩＲＰαキメラ抗体００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃにおける１つまたは複数のＣＤＲを置き換える、または変更する、または修飾することが可能である。
【0142】
[00145]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、その抗体およびその抗原結合性断片がＳＩＲＰαに特異的に結合することができる限り、好適なフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。上の表１で提供したＣＤＲ配列はマウス抗体から得られるが、これらは組換え手法等の当技術分野で既知の好適な方法を用いてとりわけマウス、ヒト、ラット、ウサギ等の任意の好適な種の任意の好適なＦＲ配列にグラフトすることができる。
【0143】
[00146]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および抗原結合性断片は、ヒト化される。ヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトにおけるその低減した免疫原性において望ましい。ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトまたは実質的にヒトのＦＲ配列にグラフトされているので、その可変領域においてキメラである。抗体または抗原結合性断片のヒト化は本質的に、非ヒト（マウス等）ＣＤＲ遺伝子をヒト免疫グロブリン遺伝子中の対応するヒトＣＤＲ遺伝子で置換することによって実施することができる（たとえばＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６を参照されたい）。
【0144】
[00147]この目的を達成するために、当技術分野で既知の方法を用いて好適なヒト重鎖および軽鎖の可変ドメインを選択することができる。説明的な例では、「ベストフィット」アプローチを用いることができ、ここでは非ヒト（たとえばげっ歯類）抗体の可変ドメイン配列が既知のヒト可変ドメイン配列に対してスクリーニングまたはＢＬＡＳＴ処理され、非ヒトクエリー配列に最も近いヒト配列が同定され、非ヒトＣＤＲ配列をグラフトするためのヒトスキャフォールドとして用いられる（たとえばＳｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１を参照されたい）。あるいは、非ヒトＣＤＲのグラフト化のために、全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワークを用いてもよい（たとえばＣａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照されたい）。
【0145】
[00148]以下の表３は、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、およびｈｕ０２５．０６０と表記される、抗体０２５の５つのヒト化抗体のＣＤＲアミノ酸配列を示す。ＣＤＲの境界部は、Ｋａｂａｔの慣例によって定義または特定した。以下の表３は、５つのヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、およびｈｕ０２５．０６０の６つのＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表４は、５つのヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、およびｈｕ０２５．０６０の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を示す。以下の表５は、５つのヒト化抗体ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、およびｈｕ０２５．０６０のＦＲアミノ酸配列を示す。
【0146】
[00149]
【0147】
【表4】
【0148】
[00150]
【0149】
【表5】
【0150】
[00151]
【0151】
【表6-1】
【0152】
【表6-2】
【0153】
Ｘ２０はＡまたはＶであり、Ｘ２１はＮまたはＤであり、Ｘ２２はＹまたはＦである。
[00152]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的に全てのヒト配列からなっている。一部の実施形態では、可変領域ＦＲおよび存在する場合には定常領域は、完全にまたは実質的にヒト免疫グロブリン配列からのものである。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列は異なるヒト免疫グロブリン遺伝子由来でよく、たとえばＦＲ配列は１つのヒト抗体由来であり、定常領域は別のヒト抗体に由来する。一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖ＨＦＲ１～４、および／または軽鎖ＬＦＲ１～４を含む。
[00152]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的に全てのヒト配列からなっている。一部の実施形態では、可変領域ＦＲおよび存在する場合には定常領域は、完全にまたは実質的にヒト免疫グロブリン配列からのものである。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列は異なるヒト免疫グロブリン遺伝子由来でよく、たとえばＦＲ配列は１つのヒト抗体由来であり、定常領域は別のヒト抗体に由来する。一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖ＨＦＲ１～４、および／または軽鎖ＬＦＲ１～４を含む。
【0154】
[00153]一部の実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、それが由来する元のヒト免疫グロブリンと同じアミノ酸配列を含んでよい。一部の実施形態では、ヒトＦＲの１つまたは複数のアミノ酸残基は、親の非ヒト抗体からの対応する残基で置換される。これは、ある特定の実施形態ではヒト化抗体またはその断片を非ヒト親抗体の構造に密接に近似させ、それによって結合特性を最適化（たとえば結合親和性を増大）させるために望ましい。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＦＲ配列のそれぞれにおいて１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸残基の置換、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインの全てのＦＲ配列において１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸残基の置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸残基におけるそのような変化は、重鎖ＦＲ領域にのみ、軽鎖ＦＲ領域にのみ、または両方の鎖に存在し得る。ある特定の実施形態では、ヒトＦＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸はランダムに変異して結合親和性を増大させる。ある特定の実施形態では、ヒトＦＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸は親の非ヒト抗体の対応するアミノ酸に復帰変異して結合親和性を増大させる。
【0155】
[00154]ある特定の実施形態では、本開示はまた、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＸ２０ＳＧＦＮＩＫ（配列番号８４）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ１、ＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７４）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ２、ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＸ２１ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＤＲ（配列番号８５）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ３、およびＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ４を含み、Ｘ２０がＡまたはＶであり、Ｘ２１がＮまたはＤである、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
【0156】
[00155]ある特定の実施形態では、本開示はまた、ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７７）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ１、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号７８）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ２、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＸ２２ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８６）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ３、およびＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ４を含み、Ｘ２２がＹまたはＦである、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
【0157】
[00156]ある特定の実施形態では、本開示はまた、配列番号７３および８３からなる群から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ１、配列番号７４の配列を含む重鎖ＨＦＲ２、配列番号７５および８２からなる群から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ３、ならびに配列番号７６の配列を含む重鎖ＨＦＲ４、ならびに／または配列番号７７からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ１、配列番号７８からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ２、配列番号７９および８１からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ３、ならびに配列番号８０からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ４を含む、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
【0158】
[00157]ある特定の実施形態では、本開示はまた、ｈｕ０２５．０２１－ＶＨ／ｈｕ０２５．０２３－ＶＨ（配列番号６３）、ｈｕ０２５．０３３－ＶＨ（配列番号６５）、およびｈｕ０２５．０５９－ＶＨ／ｈｕ０２５．０６０－ＶＨ（配列番号６７）からなる群から選択される重鎖可変領域に含まれるＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、および／またはＨＦＲ４配列を含む、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
【0159】
[00158]ある特定の実施形態では、本開示は、ｈｕ０２５．０２１－ＶＬ／ｈｕ０２５．０３３－ＶＬ／ｈｕ０２５．０５９－ＶＬ（配列番号６４）、およびｈｕ０２５．０２３－ＶＬ／ｈｕ０２５．０６０－ＶＬ（配列番号６６）からなる群から選択される軽鎖可変領域に含まれるＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、および／またはＬＦＲ４配列を含む、ヒト化抗ＳＩＲＰαおよびその抗原結合性断片をも提供する。
【0160】
[00159]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片は、配列番号６３、配列番号６５、および配列番号６７からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列、ならびに／または配列番号６４、および配列番号６６からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【0161】
[00160]本開示はまた、
１）配列番号６３の重鎖可変領域および配列番号６４の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０２１」、
２）配列番号６３の重鎖可変領域および配列番号６６の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０２３」、
３）配列番号６５の重鎖可変領域および配列番号６４の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０３３」、
４）配列番号６７の重鎖可変領域および配列番号６４の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０５９」、ならびに
５）配列番号６７の重鎖可変領域および配列番号６６の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０６０」
を含む０２５の例示的なヒト化抗体を提供する。
１）配列番号６３の重鎖可変領域および配列番号６４の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０２１」、
２）配列番号６３の重鎖可変領域および配列番号６６の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０２３」、
３）配列番号６５の重鎖可変領域および配列番号６４の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０３３」、
４）配列番号６７の重鎖可変領域および配列番号６４の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０５９」、ならびに
５）配列番号６７の重鎖可変領域および配列番号６６の軽鎖可変領域を含む抗体「ｈｕ０２５．０６０」
を含む０２５の例示的なヒト化抗体を提供する。
【0162】
[00161]これらの例示的なヒト化抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰαに対する特異的な結合能力または親和性を保持しており、その観点において親のマウス抗体０２５と少なくとも同程度またはそれより優れていた。詳細な情報は、実施例５．２に提供される。
【0163】
[00162]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、および／または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む。一実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書で提供される重鎖可変ドメインの全てまたは一部からなる単鎖ドメイン抗体である。そのような単鎖ドメイン抗体のさらなる情報は当技術分野で利用可能である（たとえば米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
【0164】
[00163]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）の定常領域をさらに含み、これは任意選択で重鎖および／または軽鎖の定常領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、重鎖定常領域はＣＨ１、ヒンジ、および／またはＣＨ２－ＣＨ３領域（または任意選択でＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４領域）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖定常領域はＣκまたはＣλを含む。本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片の定常領域は、野生型の定常領域の配列と同一であってもよく、１つまたは複数の変異において異なってもよい。
【0165】
[00164]ある特定の実施形態では、重鎖定常領域はＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および抗体の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）等のエフェクター機能を媒介することが知られている。異なるＩｇアイソタイプのＦｃ領域はエフェクター機能を誘導する異なる能力を有する。たとえば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３のＦｃ領域は、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４のＦｃ領域より効果的にＡＤＣＣとＣＤＣの両方を誘導することが認識されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを誘導することができるＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのＦｃ領域を含み、あるいはエフェクター機能が低減しまたは枯渇したＩｇＧ４もしくはＩｇＧ２アイソタイプの定常領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域または他の野生型ヒトＩｇＧ４対立遺伝子を含む。
【0166】
[00165]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、低減されたエフェクター機能を有する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦｃ領域を含み、エフェクター機能を低減または排除するために１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。ＩｇＧ１におけるそのような置換の例は、２３４、２３５、２３７、および２３８、２６８、２９７、３０９、３３０、および３３１からなる群から選択される位置におけるものであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片はＩｇＧ１アイソタイプのものであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓからなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸の置換、およびそれらの任意の組合せを含む。
【0167】
[00166]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ２アイソタイプのものであり、エフェクター機能を低減または排除するために、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸の置換、およびそれらの任意の組合せ（たとえばＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ）を含む。
【0168】
[00167]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものであり、エフェクター機能を低減または排除するために１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。ＩｇＧ４におけるそのような置換の例は、２２８、２３４、２３５、２３７、２３８、２６５、２９７、３２２、３２９、および３３１からなる群から選択される位置におけるものであり得る。そのような置換の例としては、限定することなく、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｐ３２９Ｇ、Ｋ３２２Ｑ、Ｐ３３１Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、およびそれらの任意の組合せが挙げられる。
【0169】
[00168]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものであり、２２８および２３５の１つまたは複数の点に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものであり、Ｆｃ領域にＳ２２８Ｐの変異を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものであり、Ｆｃ領域にＬ２３５Ｅの変異を含む。
【0170】
[00169]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片はＩｇＧ２／ＩｇＧ４交差アイソタイプのものである。ＩｇＧ２／ＩｇＧ４交差アイソタイプの例はＲｏｔｈｅｒ ＲＰ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５：１２５６－１２６４（２００７）に記載されている。
【0171】
[00170]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、診断用および／または治療用に提供するために十分なＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を有する。
【0172】
[00171]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質であってよい。組換え抗体は、動物体内でなくｉｎ ｖｉｔｒｏで組換え法を用いて調製された抗体である。
【0173】
[00172]ある特定の実施形態では、本開示は、ＳＩＲＰαとの結合について本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0174】
[00173]ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５４の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0175】
[00174]ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0176】
[00175]ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号６１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６２の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0177】
[00176]ある特定の実施形態では、本開示は、ＨＥＦＬＢまたはｈｕ１Ｈ９Ｇ４によって結合されるものとは異なるエピトープに結合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0178】
[00177]本明細書で用いる「ＨＥＦＬＢ」は、配列番号６８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
【0179】
[00178]本明細書で用いる「ｈｕ１Ｈ９Ｇ４」は、配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
【0180】
[00179]表６は、ＨＥＦＬＢおよびｈｕ１Ｈ９Ｇ４のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を示す。
[00180]
[00180]
【0181】
【表7】
【0182】
[00181]抗体バリアント
[00182]本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で提供される抗体配列の種々のバリアントをも包含する。
[00182]本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で提供される抗体配列の種々のバリアントをも包含する。
【0183】
[00183]ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、上の表１および表３で提供したＣＤＲ配列の１つもしくは複数、上の表２および表４で提供した重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域の非ＣＤＲ配列の１つもしくは複数、ならびに／または定常領域（たとえばＦｃ領域）における１つまたは複数の修飾または置換を含む。そのようなバリアントはＳＩＲＰαに対するそれらの親抗体の結合特異性を保持しているが、修飾または置換によって与えられる１つまたは複数の望ましい特性を有する。たとえば、抗体バリアントは、改善された抗原結合親和性、改善されたグリコシル化パターン、低減されたグリコシル化のリスク、低減された脱アミノ化、低減されまたは枯渇したエフェクター機能、改善されたＦｃＲｎ受容体結合、増大した薬物動態学的半減期、ｐＨ感受性、および／またはコンジュゲート化に対する適合性（たとえば導入された１つまたは複数のシステイン残基）を有し得る。
【0184】
[00184]当技術分野で既知の方法、たとえば「アラニンスキャニング変異生成」を用いて親抗体配列をスクリーニングして、修飾しまたは置換するために好適なまたは好ましい残基を同定してよい（たとえばCunningham and Wells (1989) Science，244:1081-1085を参照されたい）。簡単には、標的の残基（たとえばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕ等の荷電残基）を同定し、中性または陰荷電のアミノ酸（たとえばアラニンまたはポリアラニン）で置き換えることができ、修飾された抗体を産生して目的の特性についてスクリーニングする。特定のアミノ酸の位置における置換によって目的の機能の変化が実証されれば、その位置を修飾または置換のための可能性のある残基として同定することができる。可能性のある残基は、異なる種類の残基（たとえばシステイン残基、陽荷電残基等）で置換することによってさらに評価してよい。
【0185】
[00185]親和性バリアント
[00186]抗体の親和性バリアントは、上の表１および表３で提供した１つもしくは複数のＣＤＲ配列、上の表５で提供した１つもしくは複数のＦＲ配列、または上の表２および表４で提供した重鎖または軽鎖の可変領域配列における修飾または置換を含んでよい。ＣＤＲ領域は可変領域において２つのＦＲ領域に隣接していることが当技術分野で公知であるので、ＦＲ配列は、上の表１および表３におけるＣＤＲ配列および上の表２および表４における可変領域配列に基づいて当業者によって容易に同定することができる。親和性バリアントはＳＩＲＰαに対する親抗体の特異的結合親和性を保持し、または親抗体よりも改善されたＳＩＲＰα特異的結合親和性さえも有する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ配列、ＦＲ配列、または可変領域配列における置換の少なくとも１つ（または全て）は、保存的置換を含む。
[00186]抗体の親和性バリアントは、上の表１および表３で提供した１つもしくは複数のＣＤＲ配列、上の表５で提供した１つもしくは複数のＦＲ配列、または上の表２および表４で提供した重鎖または軽鎖の可変領域配列における修飾または置換を含んでよい。ＣＤＲ領域は可変領域において２つのＦＲ領域に隣接していることが当技術分野で公知であるので、ＦＲ配列は、上の表１および表３におけるＣＤＲ配列および上の表２および表４における可変領域配列に基づいて当業者によって容易に同定することができる。親和性バリアントはＳＩＲＰαに対する親抗体の特異的結合親和性を保持し、または親抗体よりも改善されたＳＩＲＰα特異的結合親和性さえも有する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ配列、ＦＲ配列、または可変領域配列における置換の少なくとも１つ（または全て）は、保存的置換を含む。
【0186】
[00187]当業者であれば、上の表１および表３で提供したＣＤＲ配列、ならびに上の表２および表４で提供した可変領域配列において、１つまたは複数のアミノ酸残基が置換され、しかも得られる抗体もしくは抗原結合性断片がまだＳＩＲＰαに対する結合親和性もしくは結合容量を保持し、または改善された結合親和性もしくは容量さえも有することが理解される。この目的を達成するために、当技術分野で既知の種々の方法を用いることができる。たとえば、ファージディスプレイ技術を用いて抗体バリアント（ＦａｂまたはｓｃＦｖバリアント等）のライブラリーを生成して発現させ、次いでヒトＳＩＲＰαへの結合親和性についてスクリーニングすることができる。別の例として、コンピューターソフトウェアを用いて抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合を仮想的に模擬し、結合界面を形成する抗体上のアミノ酸残基を同定することができる。そのような残基は、結合親和性の低減を防止するために置換において避けるか、またはより強い結合を提供するために置換の標的としてもよい。
【0187】
[00188]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤＲ配列の１つもしくは複数において、および／またはＦＲ配列の１つもしくは複数において、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換を含む。ある特定の実施形態では、親和性バリアントは、ＣＤＲ配列中および／またはＦＲ配列中、合計で２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下の置換を含む。
【0188】
[00189]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、上の表１および表３に列挙したＣＤＲと少なくとも８０％（たとえば少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つ、２つ、または３つのＣＤＲ配列を含み、しかもその親抗体と同様またはそれより高いレベルでさえＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している。
【0189】
[00190]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、上の表２および表４に列挙した可変領域配列と少なくとも８０％（たとえば少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数の可変領域配列を含み、しかもその親抗体と同様またはそれより高いレベルでさえＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している。一部の実施形態では、上の表２および表４に列挙した可変領域配列において全部で１～１０個のアミノ酸が置換され、挿入され、または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外（たとえばＦＲの中）の領域で起こる。
【0190】
[00191]グリコシル化バリアント
[00192]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片のグリコシル化の程度を増加しまたは減少することによって得られるグリコシル化バリアントをも包含する。
[00192]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片のグリコシル化の程度を増加しまたは減少することによって得られるグリコシル化バリアントをも包含する。
【0191】
[00193]抗体またはその抗原結合性断片は、グリコシル化部位を導入しまたは除去する１つまたは複数の修飾を含んでよい。グリコシル化部位は、炭水化物部分（たとえばオリゴ糖構造）を結合することができる側鎖を有するアミノ酸残基である。抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ連結またはＯ連結である。Ｎ連結は、アスパラギン残基、たとえばアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－スレオニン等のトリペプチド配列においてＸがプロリンを除く任意のアミノ酸である、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を意味する。Ｏ連結グリコシル化は、糖、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を意味する。天然のグリコシル化部位の除去は、たとえば配列中に存在する上記のトリペプチド配列（Ｎ連結グリコシル化部位について）またはセリンもしくはスレオニン残基（Ｏ連結グリコシル化部位について）の１つが置換されるようにアミノ酸配列を改変することによって、便利に達成することができる。そのようなトリペプチド配列またはセリンもしくはスレオニン残基を導入することによって、新たなグリコシル化部位を同様に創出することができる。
【0192】
[00194]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、グリコシル化部位を除去するためにＮ２９７における変異（たとえば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｇ）を含む。
【0193】
[00195]システイン操作されたバリアント
[00196]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、導入された１つまたは複数の遊離のシステインアミノ酸残基を含む、システイン操作されたバリアントをも包含する。
[00196]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、導入された１つまたは複数の遊離のシステインアミノ酸残基を含む、システイン操作されたバリアントをも包含する。
【0194】
[00197]遊離のシステイン残基は、ジスルフィド架橋の部分ではない残基である。システイン操作されたバリアントは、操作されたシステインの部位で、たとえばマレイミドまたはハロアセチルによって、たとえば細胞毒性および／またはイメージング化合物、標識、またはとりわけ放射性同位体とコンジュゲートするために有用である。抗体またはその抗原結合性断片を操作して遊離のシステイン残基を導入する方法は当技術分野で既知であり、たとえばＷＯ２００６／０３４４８８を参照されたい。
【0195】
[00198]Ｆｃバリアント
[00199]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、たとえばＡＤＣＣおよびＣＤＣ等の改変されたエフェクター機能を提供するために、Ｆｃ領域および／またはヒンジ領域に１つまたは複数のアミノ酸残基の修飾または置換を含むＦｃバリアントをも包含する。抗体操作によってＡＤＣＣ活性を改変する方法は当技術分野において記載されており、たとえばＳｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１－６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８－８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５－ ７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１－５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５－４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９－３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７－２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６－３４７３を参照されたい。
[00199]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、たとえばＡＤＣＣおよびＣＤＣ等の改変されたエフェクター機能を提供するために、Ｆｃ領域および／またはヒンジ領域に１つまたは複数のアミノ酸残基の修飾または置換を含むＦｃバリアントをも包含する。抗体操作によってＡＤＣＣ活性を改変する方法は当技術分野において記載されており、たとえばＳｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１－６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８－８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５－ ７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１－５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５－４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９－３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７－２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６－３４７３を参照されたい。
【0196】
[00200]本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片のＣＤＣ活性は、たとえばＣ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善しまたは減退させることによって改変することもできる（たとえばＷＯ９９／５１６４２；Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号;米国特許第５，６２４，８２１号;ならびにＦｃ領域バリアントの他の例に関してはＷＯ９４／２９３５１を参照されたい）。Ｆｃ領域のアミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つまたは複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置き換えて、Ｃ１ｑの結合および／または低減されもしくは消失された補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を改変することができる（たとえばＩｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号を参照されたい）。１つまたは複数のアミノ酸置換を導入して、抗体の補体を固定する能力を改変することもできる（ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開ＷＯ ９４／２９３５１を参照されたい）。
【0197】
[00201]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのものであり得、本明細書で開示されるように、低減されたエフェクター機能を有する。
【0198】
[00202]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）へのｐＨ依存性結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。そのようなバリアントは酸性ｐＨでＦｃＲｎに結合してこれをリソソーム内での分解から逃れさせ、次いで転座して細胞外に放出されることを可能にするので、延長された薬物動態学的半減期を有することができる。抗体またはその抗原結合性断片を操作してＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法は当技術分野で公知であり、たとえばＶａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３－７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ １，Ｃｈａｐｔｅｒ ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９－３２７７（２０１０）；ａｎｄ Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６－３５６（２００６）を参照されたい。
【0199】
[00203]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃ領域の界面においてヘテロ二量化を容易にしおよび／または促進する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。これらの修飾は、第１のＦｃポリペプチドへの突出部の導入および第２のＦｃポリペプチドへの空洞の導入を含み、突出部が空洞の中に位置して第１および第２のＦｃポリペプチドの相互作用が促進され、ヘテロ二量体または複合体が形成される。これらの修飾を有する抗体を生成する方法は、たとえば米国特許第５，７３１，１６８号に記載されているように当技術分野で既知である。
【0200】
[00204]抗原結合性断片
[00205]抗ＳＩＲＰα抗原結合性断片も、本明細書で提供される。種々の型の抗原結合性断片が当技術分野で既知であり、たとえばそのＣＤＲが上の表１および表３に示され、可変配列が上の表２および表４に示される、例示的な抗体ならびにその種々のバリアント（親和性バリアント、グリコシル化バリアント、Ｆｃバリアント、システイン操作されたバリアント、その他）を含む本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体に基づいて開発することができる。
[00205]抗ＳＩＲＰα抗原結合性断片も、本明細書で提供される。種々の型の抗原結合性断片が当技術分野で既知であり、たとえばそのＣＤＲが上の表１および表３に示され、可変配列が上の表２および表４に示される、例示的な抗体ならびにその種々のバリアント（親和性バリアント、グリコシル化バリアント、Ｆｃバリアント、システイン操作されたバリアント、その他）を含む本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体に基づいて開発することができる。
【0201】
[00206]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗原結合性断片は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、多重特異的抗体、ラクダ化単鎖ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、および二価ドメイン抗体である。
【0202】
[00207]そのような抗原結合性断片の産生のために種々の手法を用いることができる。実例的な方法には、インタクトな抗体の酵素消化（たとえばＭｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、E.coli等の宿主細胞による組換え発現（たとえばＦａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体断片のため）、上で論じたファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（たとえばＳｃＦｖのため）、およびＦ（ａｂ’）２断片を形成するための２つのＦａｂ’－ＳＨ断片の化学的カップリング（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））が含まれる。抗体断片の産生のためのその他の手法は、当業者には明らかになる。
【0203】
[00208]ある特定の実施形態では、抗原結合性断片はｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの生成は、たとえばＷＯ ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および第５，５８７，４５８号に記載されている。ＳｃＦｖはアミノまたはカルボキシル末端でエフェクタータンパク質と融合して、融合タンパク質を提供することができる（たとえばＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編を参照されたい）。
【0204】
[00209]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、二価、四価、六価、または多価である。二価を超えるいずれの分子も多価と考えられ、たとえば三価、四価、六価等を包含する。
【0205】
[00210]二価分子は、２つの結合部位がいずれも同じ抗原または同じエピトープへの結合について特異的であれば、単一特異的である。これは、ある特定の実施形態では、抗原またはエピトープに対して一価の対応物よりも強い結合を提供する。同様に、多価分子も単一特異的であり得る。ある特定の実施形態では、二価または多価の抗原結合性部分において、結合部位の第１の価および結合部位の第２の価は構造的に同一である（即ち、同じ配列を有する）か、または構造的に異なる（即ち、同じ特異性であるが異なる配列を有する）。
【0206】
[00211]二価も、２つの結合部位が異なる抗原またはエピトープに特異的であれば、二重特異的であり得る。これは多価分子にもあてはまる。たとえば、三価分子は、２つの結合部位が第１の抗原（またはエピトープ）に対して単一特異的で、第３の結合部位が第２の抗原（またはエピトープ）に対して特異的であれば、二重特異的であり得る。
【0207】
[00212]二重特異的抗体
[00213]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異的である。
[00213]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異的である。
【0208】
[00214]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα以外の第２の抗原に特異的に結合することができる。ある特定の実施形態では、第２の抗原は、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、または感染物質表面抗原である。ある特定の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＧＰＣ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）からなる群から選択される。
【0209】
[00215]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異的抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα上の第２のエピトープに特異的に結合することができる。
[00216]コンジュゲート
[00217]一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分をさらに含む。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片に連結することができる。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片に結合することができる部分である。種々のコンジュゲート部分が本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片に連結され得ることが意図されている（たとえば「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。これらのコンジュゲート部分は、とりわけ共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体化、会合、ブレンド、または付加によって、抗体またはその抗原結合性断片に連結され得る。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、リンカーを介して１つまたは複数のコンジュゲートに連結することができる。
[00216]コンジュゲート
[00217]一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分をさらに含む。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片に連結することができる。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片に結合することができる部分である。種々のコンジュゲート部分が本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片に連結され得ることが意図されている（たとえば「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。これらのコンジュゲート部分は、とりわけ共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体化、会合、ブレンド、または付加によって、抗体またはその抗原結合性断片に連結され得る。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、リンカーを介して１つまたは複数のコンジュゲートに連結することができる。
【0210】
[00218]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、エピトープ結合部分の外に、１つまたは複数のコンジュゲート部分への結合に利用できる特定の部位を含むように操作してよい。たとえば、そのような部位は、コンジュゲート部分への共有結合リンケージを容易にする１つまたは複数の反応性アミノ酸残基、たとえばシステインまたはヒスチジン残基を含んでよい。
【0211】
[00219]ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、コンジュゲート部分に間接的に、または別のコンジュゲート部分を通して連結されてもよい。たとえば、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片をビオチンにコンジュゲートさせ、次いでアビジンにコンジュゲートした第２のコンジュゲートに間接的にコンジュゲートしてよい。一部の実施形態では、コンジュゲート部分は、クリアランス修飾剤（たとえば半減期を延長させるＰＥＧ等のポリマー）、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、検出可能な標識（たとえば発光標識、蛍光標識、酵素基質標識）、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、精製部分、またはその他の抗がん薬物を含む。
【0212】
[00220]「毒素」は、細胞に有害なまたは細胞に損傷を与えもしくはこれを殺す任意の薬剤であり得る。毒素の例には、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアンスラシンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、プロマイシンおよびそのアナログ、抗代謝物（たとえばメトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（たとえばメクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン、アンスラサイクリン類（たとえばダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生剤（たとえばダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシンおよびアンスラマイシン（ＡＭＣ））、抗有糸分裂剤（たとえばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、トポイソメラーゼ阻害剤、ならびにチューブリンバインダーが限定なく含まれる。
【0213】
[00221]検出可能な標識の例には、蛍光標識（たとえばフルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリスリン、またはテキサスレッド）、酵素基質標識（たとえばセイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルセリフェラーゼ類、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ類、またはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ）、放射性同位体（たとえば１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、および３２Ｐ、その他のランタニド）、発光標識、色素体部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子、または検出用の金が含まれてよい。
【0214】
[00222]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、抗体の半減期を延長することを補助するクリアランス修飾剤であり得る。説明的な例には、水溶性ポリマー、たとえばＰＥＧ、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、その他が含まれる。ポリマーは任意の分子量のものであってよく、分枝しても分枝しなくてもよい。抗体に結合されるポリマーの数は変動し、２つ以上のポリマーが結合される場合にはこれらは同じ分子または異なる分子であり得る。
【0215】
[00223]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は磁気ビーズ等の精製部分であり得る。
[00224]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、コンジュゲートのための基礎として用いられる。
[00224]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、コンジュゲートのための基礎として用いられる。
【0216】
[00225]ポリヌクレオチドおよび組換え方法
[00226]本開示は、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。本明細書で用いる用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）およびそのポリマーを意味する。他に指示しなければ、特定のポリヌクレオチド配列は、その保存的に修飾されたバリアント（たとえば縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、および相補的配列をも黙示的に包含し、ならびに明白に示された配列を包含する。具体的には、縮重コドン置換は、その中の１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合された塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４）を参照されたい）。
[00226]本開示は、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。本明細書で用いる用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）およびそのポリマーを意味する。他に指示しなければ、特定のポリヌクレオチド配列は、その保存的に修飾されたバリアント（たとえば縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、および相補的配列をも黙示的に包含し、ならびに明白に示された配列を包含する。具体的には、縮重コドン置換は、その中の１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合された塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４）を参照されたい）。
【0217】
[00227]モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（たとえば抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）容易に単離され、シーケンシングされる。コードするＤＮＡは、合成法によって得てもよい。
【0218】
[00228]抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドは、当技術分野で既知の組換え手法を用いて、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のためにベクターに挿入することができる。多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には一般に、それだけに限らないが、以下の１つまたは複数が含まれる。シグナル配列、複製の起源、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および転写終止配列。
【0219】
[00229]本開示は、本明細書で提供される単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、抗体またはその抗原結合性断片、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および少なくとも１つの選択マーカーをコードする。ベクターの例には、それだけに限らないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（たとえばヘルペスシンプレックスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス（たとえばＳＶ４０）、ラムダファージ、およびＭ１３ファージ、プラスミドｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ－Ｈｙｇ－ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ－ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ２．１、ｐＥＦ－１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ－Ｂｏｓ等が含まれる。
【0220】
[00230]抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入することができる。本明細書におけるベクター中でのクローニングまたはＤＮＡ発現に適した宿主細胞は、原核細胞、酵母、または上述の高等な真核細胞である。この目的に適した原核細胞には、グラム陰性またはグラム陽性の生命体等の真正細菌、たとえばエシェリキア属、たとえば大腸菌等の腸内細菌科、エンテロバクター属、エルウィニア属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ属、たとえばＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、セラチア属、たとえばＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、およびシゲラ属、ならびにＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ等のバチルス属、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ等のシュードモナス属、ならびにストレプトミセス属が含まれる。
【0221】
[00231]原核細胞に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗ＳＩＲＰα抗体コーディングベクターのための好適なクローニングまたは発現用の宿主である。低級真核宿主微生物の中で、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたは一般的な製パン用酵母が最も一般に使用されている。しかし、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、たとえばＫ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、およびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ等のクルイベロミセス宿主、ヤロウィア（ＥＰ ４０２，２２６）、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＥＰ １８３，０７０）、カンジダ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ（ＥＰ ２４４，２３４）、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ等のシュワニオミセス、およびたとえばＮｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ等の糸状菌、ならびにＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒ等のアスペルギルス属の宿主等の他の多数の属、種、および株が一般に利用可能であり、本明細書で有用である。
【0222】
[00232]本明細書で提供されるグリコシル化抗体またはその抗原結合性断片の発現のために好適な宿主細胞は、多細胞生命体に由来する。無脊椎動物の細胞の例には、植物および昆虫の細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株およびバリアント、ならびにＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（毛虫）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ミバエ）、およびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ等の宿主からの対応する許容される昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、たとえばＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ－１バリアントおよびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ＮＰＶのＢｍ－５株は公に利用可能であり、そのようなウイルスは本発明に従って本明細書のウイルスとして、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために用いてよい。木綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、およびタバコの植物細胞培養も宿主として利用することができる。
【0223】
[00233]しかし、関心は脊椎動物細胞において最大であり、培養における脊椎動物細胞の増殖（組織培養）が通常の手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例には、ＳＶ４０でトランスフォームされたサル腎ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎株（懸濁培養における増殖のためにサブクローニングした２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））、サル腎細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞(Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）)、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、ならびにヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）がある。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳ０、２９３等の哺乳動物培養細胞株、およびそれらの誘導体である。
【0224】
[00234]宿主細胞は、抗ＳＩＲＰα抗体の産生のための上記の発現またはクローニング用のベクターによってトランスフォームされ、プロモーターの誘導、トランスフォーマントの選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適するように修飾された従来の栄養培地中で培養される。別の実施形態では、抗体は当技術分野で既知の相同組換えによって産生してよい。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を産生することができる。
【0225】
[00235]本開示はまた、本開示のベクターが発現される条件下で、本開示で提供される宿主細胞を培養するステップを含む、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を発現する方法を提供する。本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を産生するために用いる宿主細胞は、種々の培地中で培養してよい。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびＤｕｌｂｅｃｃｏのＭｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）等の市販の培地は、宿主細胞を培養するために好適である。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、第４，６５７，８６６号、第４，９２７，７６２号、第４，５６０，６５５号、もしくは第５，１２２，４６９号、ＷＯ ９０／０３４３０、ＷＯ ８７／００１９５、または米国特許Ｒｅ．３０，９８５に記載された培地のいずれも、宿主細胞の培養培地として用いてよい。これらの培地のいずれにも、ホルモンおよび／またはその他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮細胞成長殖因子等）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジン等）、抗生剤（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物等）、微量元素（通常マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、およびグルコースもしくは当量のエネルギー源を必要に応じて補ってよい。当業者に既知の他の任意の必要な補助物も、適切な濃度で含んでよい。温度、ｐＨ、その他の培養条件は、発現のために選択した宿主細胞とともに既に用いられたものであり、当業者には明白になる。
【0226】
[00236]組換え手法を用いる場合には、抗体は細胞内で、細胞膜周辺腔で、産生され、または培地中に直接分泌することができる。抗体が細胞内で産生される場合には、第１のステップとして、宿主細胞または溶解した断片の粒子状のデブリは、たとえば遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２）は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離する手順を記載している。簡単には、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下に約３０分かけて細胞ペーストを解凍する。細胞デブリは遠心分離によって除去することができる。抗体が培地中に分泌される場合には、そのような発現システムからの上清を、一般に市販のタンパク質濃縮フィルター、たとえばＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅのＰｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを用いてまず濃縮する。タンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦ等のプロテアーゼ阻害剤を前記ステップのいずれにも含ませ、外来の夾雑物の増殖を防止するために抗生剤を含ませてよい。
【0227】
[00237]細胞から調製した抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、たとえばヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥセルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈降、塩析、およびアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製することができ、アフィニティクロマトグラフィーが好ましい精製手法である。
【0228】
[00238]ある特定の実施形態では、固相に固定化されたプロテインＡが、抗体およびその抗原結合性断片の免疫アフィニティ精製のために用いられる。アフィニティリガンドとしてのプロテインＡの好適性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンのＦｃドメインの種およびアイソタイプによる。プロテインＡは、ヒトガンマ１、ガンマ２、またはガンマ４の重鎖に基づく抗体を精製するために用いることができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３（１９８３））。全てのマウスアイソタイプおよびヒトガンマ３についてはプロテインＧが推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７ １５７５（１９８６））。アフィニティリガンドが結合するマトリックスはアガロースであることが最も多いが、他のマトリックスも利用可能である。制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースによって達成されるよりも速い流量および短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合には、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。イオン交換カラム上の分別、エタノール沈降、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）上のクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）上のクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈降等のタンパク質精製のための他の手法も、回収すべき抗体に応じて利用可能である。
【0229】
[00239]任意の予備的な精製ステップに続いて、目的の抗体および夾雑物を含む混合物を、約２．５～４．５のｐＨで溶出緩衝液を用い、好ましくは低い塩濃度（たとえば約０～０．２５Ｍの塩）で実施する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供してよい。
【0230】
[00240]医薬組成物
[00241]本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片および１つもしくは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
[00241]本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片および１つもしくは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【0231】
[00242]本明細書で開示する医薬組成物における使用のための薬学的に許容される担体には、たとえば薬学的に許容される液体、ゲル、もしくは固体の担体、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗微生物剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁／分散剤、隔離剤もしくはキレート化剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤、または非毒性補助物質、当技術分野で既知の他の成分、またはそれらの種々の組合せが含まれ得る。
【0232】
[00243]好適な成分には、たとえば抗酸化剤、充填材、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、保存剤、滑剤、香味剤、増粘剤、着色剤、乳化剤、または糖およびシクロデキストリン等の安定剤が含まれ得る。好適な抗酸化剤には、たとえばメチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、および／またはプロピルガレートが含まれ得る。本明細書で開示したように、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片およびコンジュゲートを含む組成物におけるメチオニン等の１つもしくは複数の抗酸化剤の含有により、抗体またはその抗原結合性断片の酸化が低減される。この酸化の低減によって結合親和性の喪失が防止されまたは低減され、それにより抗体の安定性が改善され、保存期間が最大化される。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で開示した１つもしくは複数の抗体またはその抗原結合性断片およびメチオニン等の１つもしくは複数の抗酸化剤を含む医薬組成物が提供される。抗体または抗原結合性断片をメチオニン等の１つもしくは複数の抗酸化剤と混合することによって、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片の酸化を防止し、保存期間を延長し、および／または効率を改善する方法がさらに提供される。
【0233】
[00244]さらに説明すると、薬学的に許容される担体には、たとえば注射用塩化ナトリウム、リンゲル注射液、等張デキストロース注射液、注射用滅菌水、もしくはデキストロースおよびラクテート化リンゲル注射液等の水性ビヒクル、植物由来の固定化油、綿実油、コーン油、ゴマ油、またはピーナツ油等の非水性ビヒクル、静細菌性または静真菌性の濃度の抗微生物剤、塩化ナトリウムもしくはデキストロース等の等張剤、リン酸塩もしくはクエン酸塩等の緩衝剤、重硫酸ナトリウム等の抗酸化剤、プロカイン塩酸塩等の局所麻酔剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、もしくはポリビニルピロリドン等の懸濁分散剤、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（ＴＷＥＥＮ－８０）等の乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）もしくはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）等の隔離剤もしくはキレート化剤、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸が含まれ得る。多数回投与用容器中の医薬組成物には、フェノール類もしくはクレゾール類、水銀化合物、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、および塩化ベンゼトニウムを含む、担体として利用される抗微生物剤を添加してよい。好適な賦形剤には、たとえば水、食塩液、デキストロース、グリセロール、またはエタノールが含まれ得る。好適な非毒性補助物質には、たとえば湿潤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解促進剤、または酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、もしくはシクロデキストリン等の薬剤が含まれ得る。
【0234】
[00245]医薬組成物は、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、ピル、カプセル、錠剤、持続放出製剤、または粉末であり得る。経口製剤には、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体が含まれ得る。
【0235】
[00246]ある特定の実施形態では、医薬組成物は注射可能な組成物に製剤化される。注射可能な医薬組成物は、たとえば液体溶液、懸濁液、エマルジョン、を生成するために好適な液体溶液、懸濁液、エマルジョン、または固体形態等の任意の従来の形態で調製してよい。注射用の調製物には、即時注射可能な無菌かつ／または非発熱性の溶液、皮下注射用錠剤を含む使用直前に溶媒と即時混合できる凍結乾燥粉末等の無菌の乾燥した可溶性製品、即時注射可能な無菌の懸濁液、使用直前にビヒクルと即時混合できる無菌の乾燥した不溶性製品、ならびに無菌かつ／または非発熱性のエマルジョンが含まれ得る。溶液は水性または非水性であってよい。
【0236】
[00247]ある特定の実施形態では、単位用量の調製物がアンプル、バイアル、または針付きシリンジの中に包装される。非経口投与のための全ての調製物は、当技術分野で知られており実践されているように、無菌かつ非発熱性であるべきである。
【0237】
[00248]ある特定の実施形態では、無菌の凍結乾燥された粉末は、本明細書で開示した抗体または抗原結合性断片を好適な溶媒に溶解することによって調製される。溶媒は、粉末または粉末から調製される再構成された溶液の安定性またはその他の薬理学的要素を改善する賦形剤を含んでよい。用い得る賦形剤には、それだけに限らないが、水、デキストロース、ソルビタール、フルクトース、コーンシラップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、またはその他の好適な薬剤が含まれる。溶媒は、一実施形態ではほぼ中性のｐＨで、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはカリウム、またはその他の当業者には既知のそのような緩衝剤等の緩衝剤を含んでよい。引き続く溶液の無菌濾過およびそれに続く当業者には既知の標準的条件下における凍結乾燥によって、望ましい製剤が提供される。一実施形態では、得られる溶液は凍結乾燥のためのバイアルに分注される。各バイアルは、抗ＳＩＲＰα抗体もしくはその抗原結合性断片、またはその組成物の単一用量または多回用量を含み得る。用量または用量の組に必要な量より少量（たとえば約１０％）多くバイアルを過剰充填することは、正確な試料取り出しおよび正確な投与を容易にするために許容される。凍結乾燥された粉末は、約４℃～室温等の適切な条件下で保存することができる。
【0238】
[00249]凍結乾燥された粉末を注射用水で再構成することによって、非経口投与における使用のための製剤が提供される。一実施形態では、再構成のために、無菌かつ／もしくは非発熱性の水またはその他の好適な液体担体を、凍結乾燥された粉末に添加する。正確な量は与えられる選択した療法に依存し、実験的に決定することができる。
【0239】
[00250]キット
[00251]ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。
[00251]ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。
【0240】
[00252]ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片、および標的細胞上に発現される標的抗原に結合する標的抗体を含む、キットを提供する。ある特定の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４７を発現する、腫瘍細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞であり得る。
【0241】
[00253]ある特定の実施形態では、標的抗原は、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、または感染物質表面抗原である。
[00254]ある特定の実施形態では、キットは、追加の治療剤をさらに含む。追加の治療剤は、抗がん治療剤、抗炎症剤、または抗感染剤であり得る。
[00254]ある特定の実施形態では、キットは、追加の治療剤をさらに含む。追加の治療剤は、抗がん治療剤、抗炎症剤、または抗感染剤であり得る。
【0242】
[00255]ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、抗がん薬物、放射線療法、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法、細胞療法、遺伝子療法、ホルモン療法、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、およびサイトカインからなる群から選択される。
【0243】
[00256]そのようなキットは、当業者には容易に明白になるように、所望であればたとえば１つもしくは複数の薬学的に許容される担体を含む容器、追加の容器、その他の種々の従来の医薬キット成分の１つまた複数をさらに含み得る。投与すべき成分の量を示す、挿入物またはラベルとしての説明書、投与のためのガイドライン、および／または成分を混合するためのガイドラインも、キットに含ませることができる。
【0244】
[00257]使用の方法
[00258]別の態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の存在下において、標的細胞を、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、方法を提供する。
[00258]別の態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の存在下において、標的細胞を、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、方法を提供する。
【0245】
[00259]別の態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体の存在下において、標的細胞を、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、方法を提供する。
【0246】
[00260]一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４７発現細胞である。
[00261]一態様では、本開示は、対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、対象に、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を、標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で投与するステップを含む、方法を提供する。
[00261]一態様では、本開示は、対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、対象に、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を、標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で投与するステップを含む、方法を提供する。
【0247】
[00262]一態様では、本開示は、対象において標的細胞のファゴサイトーシスを誘導する方法であって、対象に、標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を、標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で投与するステップを含む、方法を提供する。
【0248】
[00263]一態様では、本開示は、対象における標的細胞に対する標的抗体の抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）作用を増加させる方法であって、対象に、Ｆｃ領域を有する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を、投与して、それにより、標的細胞に対する標的抗体のＡＤＣＰを増加させるステップを含み、標的抗体が、標的細胞上に発現される標的抗原に結合する、方法を提供する。ある特定の実施形態では、標的抗体は、標的細胞上に発現される標的抗原に結合し、標的細胞に対する標的抗体のＡＤＣＰ作用が、増加される。標的細胞は、ＣＤ４７を発現する、腫瘍細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞であり得る。
【0249】
[00264]一態様では、本開示は、対象における疾患、障害、または状態の処置において標的抗体（たとえば、抗ＣＤ２０抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗クローディン１８．２抗体）を強化する方法であって、対象に、標的抗体（たとえば、抗ＣＤ２０抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗クローディン１８．２抗体）と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を投与して、それにより、対象における疾患、障害、または状態の処置において標的抗体を強化するステップを含む、方法を提供する。本明細書で用いる場合、用語「強化する」または「強化すること」は、治療有効性を増加させることを意味する。
【0250】
[00265]ある特定の実施形態では、標的抗体は、Ｆｃ領域を有する。ある特定の実施形態では、疾患、障害、または状態は、免疫関連疾患もしくは障害、腫瘍およびがん、自己免疫疾患、または感染性疾患である。ある特定の実施形態では、免疫関連疾患または障害は、全身性エリテマトーデス、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、脈管炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、クローン病、喘息、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、脊椎関節症（たとえば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患を伴う孤発性急性腸炎性関節炎、反応性関節炎、ベーチェット病、分類不能型脊椎関節症、前部ブドウ膜炎、および若年性特発性関節炎）、多発性硬化症、子宮内膜症、糸球体腎炎、敗血症、糖尿病、急性冠症候群、虚血再灌流、乾癬、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、強皮症、または炎症性自己免疫性筋炎からなる群から選択される。
【0251】
[00266]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法によって処置可能な状態または障害には、腫瘍およびがんが含まれる。がんおよび腫瘍の例としては、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頚部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞がん、および他の血液悪性腫瘍、たとえば、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、ならびにＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽細胞性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌、およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、たとえば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹部神経膠腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ＴもしくはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、ならびに腺癌、またはこれらの転移が挙げられる。
【0252】
[00267]別の態様では、本開示はまた、対象における標的細胞のファゴサイトーシスの誘導により利益を得ることができる疾患、障害、または状態を処置する方法であって、対象に、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【0253】
[00268]別の態様では、本開示はまた、対象における標的細胞のファゴサイトーシスの誘導により利益を得ることができる疾患、障害、または状態を処置する方法であって、対象に、標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【0254】
[00269]別の態様では、本開示はまた、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置する方法であって、対象に、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【0255】
[00270]別の態様では、本開示はまた、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置する方法であって、対象に、ＳＩＲＰα関連の疾患と関連する標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する標的抗体と組み合わせて、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【0256】
[00271]一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４７発現細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞を含む。
[00272]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片が、標的抗体と組み合わせて使用される場合、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、非標的細胞（たとえば、標的抗原を発現しないもの）よりも、標的細胞の選択的なファゴサイトーシスを誘導することができる。
[00272]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片が、標的抗体と組み合わせて使用される場合、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、非標的細胞（たとえば、標的抗原を発現しないもの）よりも、標的細胞の選択的なファゴサイトーシスを誘導することができる。
【0257】
[00273]一部の実施形態では、標的細胞は、標的抗原を発現する。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍抗原、腫瘍表面抗原、炎症性抗原、または感染性微生物の抗原である。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍抗原（たとえば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、たとえばネオ抗原）、または感染細胞上に提示される抗原（たとえば、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ））であり得る。
【0258】
[00274]一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、対象は、ＳＩＲＰα ｖ１ホモ接合性である。一部の実施形態では、対象は、ＳＩＲＰα ｖ２ホモ接合性である。一部の実施形態では、対象は、ＳＩＲＰα ｖ１／ｖ２ヘテロ接合性である。
【0259】
[00275]一部の実施形態では、対象は、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、および関節炎からなる群から選択される疾患、障害、または状態を有する。
【0260】
[00276]一部の実施形態では、がんは、ＣＤ４７陽性がんである。一部の実施形態では、処置しようとする対象は、ＣＤ４７陽性がんを有すると同定されている。本明細書で使用される「ＣＤ４７陽性」がんは、がん細胞においてＣＤ４７タンパク質を発現すること、またはがん細胞において、正常細胞において予想されるよりも有意に高いレベルでＣＤ４７を発現することを特徴とするがんを指す。目的とされる生物学的試料におけるＣＤ４７の存在および／または量は、生物学的試料が由来する対象が、抗ＳＩＲＰα抗体に応答し得る可能性が高いかどうかを示し得る。様々な方法を使用して、対象から得られた試験生物学的試料におけるＣＤ４７の存在および／または量を決定することができる。たとえば、試験生物学的試料を、発現されるＣＤ４７タンパク質に結合しそれを検出する抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合性断片に曝露してもよい。あるいは、ＣＤ４７はまた、ｑＰＣＲ、逆転写酵素ＰＣＲ、マイクロアレイ、ＳＡＧＥ、ＦＩＳＨなどの方法を使用して、核酸発現レベルで検出することもできる。一部の実施形態では、試験試料は、がん細胞もしくは組織、または腫瘍浸潤性免疫細胞に由来する。ある特定の実施形態では、試験生物学的試料におけるＣＤ４７の存在または上方制御されたレベルは、応答性の尤度を示す。「上方制御された」という用語は、本明細書で使用される場合、同じ方法を使用して検出した参照試料におけるＣＤ４７の発現レベルと比較して、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、またはそれ以上の、試験試料中のＣＤ４７の発現レベルにおける全体的な増加を指す。参照試料は、健常個体もしくは非罹患個体から得られた対照試料、または試験試料が得られた同じ個体から得られた健常試料もしくは非罹患試料であり得る。たとえば、参照試料は、試験試料（たとえば、腫瘍）に隣接したまたはその付近の非疾患試料であり得る。参照レベルは、任意選択で別の遺伝子（たとえば、ハウスキーピング遺伝子）の発現レベルに対して正規化された、同じ組織型の正常細胞において見出されるＣＤ４７発現レベルであり得る。あるいは、参照レベルは、健常対象において見出されるＣＤ４７発現レベルであってもよい。参照試料は、健常個体もしくは非罹患個体から得られた対照試料、または試験試料が得られた同じ個体から得られた健常試料もしくは非罹患試料であり得る。一部の実施形態では、参照は、目的の試験または判定と実質的に同時に試験および／または判定される。一部の実施形態では、参照は、任意選択で有形媒体において具現化された、ヒストリカル参照である。典型的には、当業者には理解されるように、参照は、評価するものと比較可能な条件下または状況下において、判定または特徴付けられる。
【0261】
[00277]これらの実施形態のある特定のものでは、標的抗体または１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、その標的抗体または１つもしくは複数の追加の治療剤と同時に投与してよく、あるいはこれらの実施形態のある特定のものでは、抗体またはその抗原結合性断片および標的抗体または追加の治療剤は、同じ医薬組成物の一部として投与してもよい。しかしながら、標的抗体または追加の治療剤と「組み合わせて」投与される抗体またはその抗原結合性断片は、その薬剤と同時にまたは同じ組成物中で投与されなくてもよい。標的抗体または別の薬剤の前にまたはその後に投与される抗体またはその抗原結合性断片は、その抗体または抗原結合性断片および標的抗体または第２の薬剤が異なる経路を介して投与されたとしても、その語句が本明細書で使用されれば、その薬剤と「組み合わせて」投与されたと考えられる。可能な場合には、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて投与される標的抗体または追加の治療剤は、その追加の治療剤の製品情報シートに列挙されたスケジュールに従って、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７版；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７版（２００２年１１月）もしくは当該技術分野で公知のプロトコルに従って、投与される。
【0262】
[00278]別の態様では、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片、および／または本明細書で提供される医薬組成物を、疾患、障害、または状態の処置を必要とする対象に投与するステップを含む、ＳＩＲＰαの活性を調節することによる恩恵を受ける対象における疾患、障害、または状態を処置する方法が提供される。ある特定の実施形態では、疾患または状態は、ＳＩＲＰαに関連する疾患、障害、または状態である。
【0263】
[00279]本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片の治療有効量は、たとえば体重、年齢、過去の病歴、現在の投薬、対象の健康状態および交差反応の可能性、アレルギー、感受性、および有害な副反応、ならびに投与経路および疾患発生の程度等の当技術分野で既知の種々の因子に依存する。用量は、これらのおよびその他の状況または要求によって指示されるように、当事者（たとえば医師または獣医師）によって比例的に低減されまたは増加されてよい。
【0264】
[00280]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの治療有効用量で投与してよい。ある特定の実施形態では、投与用量は処置の経過にわたって変化してよい。たとえばある特定の実施形態では、初期の投与用量は引き続く投与用量より高くてよい。ある特定の実施形態では、投与用量は対象の反応に応じて処置の経過にわたって変動してよい。
【0265】
[00281]投薬レジメンは、最適の所望の応答（たとえば治療応答）が提供されるように調整してよい。たとえば、単一用量を投与してもよく、いくつかに分割した用量を経時的に投与してもよい。
【0266】
[00282]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、当技術分野で既知の任意の経路、たとえば非経口（たとえば皮下、腹腔内、静脈内注入を含む静脈内、筋肉内、または皮内注射）または非－非経口（たとえば経口、鼻内、眼内、舌下腺、直腸、または局所）経路によって投与してよい。
【0267】
[00283]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または治療有効量の追加の治療剤と組み合わせて、投与してよい。たとえば、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合性断片は、追加の治療剤、たとえば化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、およびサイトカインと組み合わせて投与してよい。
【0268】
[00284]本明細書で用いる用語「免疫療法」は、免疫系を刺激してがん等の疾患と闘わせるか、一般的な方法で免疫系を強化する療法の型を意味する。免疫療法の例には、チェックポイント調節剤、養子細胞移植、サイトカイン、腫瘍溶解性ウイルス、および治療用ワクチンが限定なく含まれる。
【0269】
[00285]「標的療法」は、がんに関連する特定の分子、たとえばがん細胞には存在するが正常な細胞には存在しない、もしくはがん細胞でより豊富に存在する特定のタンパク質、またはがんの成長および生存に寄与するがん微小環境における標的分子に作用する療法の型である。標的療法は治療剤を腫瘍に標的させ、それにより正常組織を治療剤の影響から救う。
【0270】
[00286]別の態様では、本開示は、ＳＩＲＰα陽性細胞を本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片に曝露するステップを含む、ＳＩＲＰα陽性細胞におけるＳＩＲＰαの活性を調節する方法をさらに提供する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰα陽性細胞はファゴサイトーシス細胞（たとえば、マクロファージ）である。
【0271】
[00287]別の態様では、本開示は、試料を本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片と接触させるステップ、および試料中のＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、試料中のＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法を提供する。
【0272】
[00288]別の態様では、本開示は、ａ）対象から得た試料を本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片と接触させるステップ、ｂ）試料中のＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップ、およびｃ）ＳＩＲＰαの存在または量を対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、またはステータスの存在または状態と相関させるステップを含む、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断する方法を提供する。
【0273】
[00289]別の態様では、本開示は、ＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態の検出に有用な、任意選択で検出可能な部分とコンジュゲートした、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。キットは、使用説明書をさらに含んでよい。
【0274】
[00290]別の態様では、本開示は、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するための医薬の製造における、およびＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断するための診断試薬の製造における、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の使用をも提供する。
【0275】
[00291]以下の実施例は、特許請求する発明をより良く説明するために提供され、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。以下に記載する全ての特定の組成物、材料、および方法は全体としてまたは部分的に、本発明の範囲に含まれる。これらの特定の組成物、材料、および方法は本発明を限定することを意図しておらず、本発明の範囲に含まれる特定の実施形態を説明するのみである。当業者であれば、発明の能力を行使することなく、また本発明の範囲から逸脱せずに、等価の組成物、材料、および方法を開発することができる。本発明の境界内に留まりつつ、本明細書に記載した手順の中で多くの変形を行うことができることが理解されよう。そのような変形が本発明の範囲に含まれることは、本発明者らの意図である。
【実施例】
【0276】
実施例１．試薬の生成
[00260]１．１．参照抗体の生成
[00261]抗ＳＩＲＰα参照抗体ＨＥＦＬＢ（米国出願公開第ＵＳ２０１４０２４２０９５号を参照されたい）またはｈｕ１Ｈ９Ｇ４（国際公開第ＷＯ２０１９／０２３３４７号Ａｌを参照されたい）の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒトＩｇＧ定常領域を発現するベクターにクローニングした。ＨＥＦＬＢおよびｈｕ１Ｈ９Ｇ４の可変領域アミノ酸配列は、本開示の表６に示される。発現プラスミドをトランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、３７℃で５日間、培養した。次いで、培養培地を収集し、遠心分離して細胞ペレットを除去した。回収した上清をプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーで精製した。ＨＥＦＬＢおよびｈｕ１Ｈ９Ｇ４は、いずれも、定常領域にＳ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。
[00260]１．１．参照抗体の生成
[00261]抗ＳＩＲＰα参照抗体ＨＥＦＬＢ（米国出願公開第ＵＳ２０１４０２４２０９５号を参照されたい）またはｈｕ１Ｈ９Ｇ４（国際公開第ＷＯ２０１９／０２３３４７号Ａｌを参照されたい）の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒトＩｇＧ定常領域を発現するベクターにクローニングした。ＨＥＦＬＢおよびｈｕ１Ｈ９Ｇ４の可変領域アミノ酸配列は、本開示の表６に示される。発現プラスミドをトランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、３７℃で５日間、培養した。次いで、培養培地を収集し、遠心分離して細胞ペレットを除去した。回収した上清をプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーで精製した。ＨＥＦＬＢおよびｈｕ１Ｈ９Ｇ４は、いずれも、定常領域にＳ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。
【0277】
[00262]１．２．ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβおよびＳＩＲＰγ安定発現細胞株の生成
[00263]全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１（ＮＰ＿５４２９７０）、ヒトＳＩＲＰβ（Ｏ００２４１）、カニクイザルＳＩＲＰα（ＮＰ＿００１２７１６７９）、またはＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα（ＮＰ＿０３１５７３）をコードするＤＮＡ配列を、それぞれ、ｐＩＲＥＳベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）にクローニングした。ヒトＳＩＲＰγ（Ｑ９Ｐ１Ｗ８）発現プラスミドを、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（ＨＧ１６１１１－ＣＦ）から購入した。
[00263]全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１（ＮＰ＿５４２９７０）、ヒトＳＩＲＰβ（Ｏ００２４１）、カニクイザルＳＩＲＰα（ＮＰ＿００１２７１６７９）、またはＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα（ＮＰ＿０３１５７３）をコードするＤＮＡ配列を、それぞれ、ｐＩＲＥＳベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）にクローニングした。ヒトＳＩＲＰγ（Ｑ９Ｐ１Ｗ８）発現プラスミドを、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（ＨＧ１６１１１－ＣＦ）から購入した。
【0278】
[00264]ヒトＳＩＲＰα ｖ１またはヒトＳＩＲＰγ発現プラスミドをトランスフェクトした２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、選択的に培養し、安定なクローンを得、それを確認した。
【0279】
[00265]類似の方式で、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰβ、カニクイザルＳＩＲＰα、またはＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＨＯＫ１細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、選択的に培養し、安定なクローンを得、それを確認した。
【0280】
[00266]外来ヒトＳＩＲＰα ｖ２（ＣＡＡ７１４０３．１）を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞株を、ＫＹｉｎｎｏ（ＫＣ－１７２０）から購入した。
[00267]１．３．組換えタンパク質の生成
[00268]組換えタンパク質ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ｈＦｃ）タグ化ヒトＣＤ４７細胞外ドメイン（ＥＣＤ、ＮＰ＿００１７６８．１、Ｍ１－Ｅ１４１）、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（ＮＰ＿５４２９７０、Ｍ１－Ｒ３７０）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（ＣＡＡ７１４０３．１、Ｍ１－Ｒ３６９）、またはヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（Ｑ９Ｐ１Ｗ８、Ｍ１－Ｐ３６０）を、Ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒによって生成した。組換えタンパク質６ｘＨｉｓタグ化Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰβＬ ＥＣＤ（ＮＰ＿００１１２９３１６．１）、およびマウスヒトＩｇＧ Ｆｃ（ｍＦｃ）タグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎから購入した。組換えタンパク質６ｘＨｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（Ｏ００２４１）を、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。
[00267]１．３．組換えタンパク質の生成
[00268]組換えタンパク質ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ｈＦｃ）タグ化ヒトＣＤ４７細胞外ドメイン（ＥＣＤ、ＮＰ＿００１７６８．１、Ｍ１－Ｅ１４１）、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（ＮＰ＿５４２９７０、Ｍ１－Ｒ３７０）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（ＣＡＡ７１４０３．１、Ｍ１－Ｒ３６９）、またはヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（Ｑ９Ｐ１Ｗ８、Ｍ１－Ｐ３６０）を、Ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒによって生成した。組換えタンパク質６ｘＨｉｓタグ化Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰβＬ ＥＣＤ（ＮＰ＿００１１２９３１６．１）、およびマウスヒトＩｇＧ Ｆｃ（ｍＦｃ）タグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎから購入した。組換えタンパク質６ｘＨｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（Ｏ００２４１）を、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。
【0281】
実施例２．抗体の生成
[00269]２．１．タンパク質免疫化のための免疫原の調製
[00270]ｈＦｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、タンパク質免疫化のための免疫原として使用した（実施例１．３を参照されたい）。
[00269]２．１．タンパク質免疫化のための免疫原の調製
[00270]ｈＦｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、タンパク質免疫化のための免疫原として使用した（実施例１．３を参照されたい）。
【0282】
[00271]２．２．細胞免疫化のための免疫原の調製
[00272]ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を、細胞免疫化のための免疫原として使用した（実施例１．２を参照されたい）。
[00272]ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を、細胞免疫化のための免疫原として使用した（実施例１．２を参照されたい）。
【0283】
[00273]２．３．遺伝子免疫化のための免疫原の調製
[00274]全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１タンパク質（ＮＰ＿５４２９７０）をコードするＤＮＡ配列を、ｐＣＰベクター（Ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒ）にクローニングした。次いで、調製したプラスミドを、遺伝子免疫化のための免疫原としてコロイド金ブレット（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）上にコーティングした。
[00274]全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１タンパク質（ＮＰ＿５４２９７０）をコードするＤＮＡ配列を、ｐＣＰベクター（Ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒ）にクローニングした。次いで、調製したプラスミドを、遺伝子免疫化のための免疫原としてコロイド金ブレット（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）上にコーティングした。
【0284】
[00275]２．４．免疫化
[00276]Ｂａｌｂ／ｃおよびＳＪＬ／Ｊマウス（ＳＬＡＣ）に、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を使用したタンパク質免疫化、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を使用した細胞免疫化、およびヒトＳＩＲＰα ｖ１発現プラスミドをコーティングした金ブレットを使用した遺伝子免疫化という３つの異なる戦略によって、免疫化を行った。ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイおよびヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を用いたＦＡＣＳアッセイを使用して、免疫化したマウスの血清力価を検出した。血清力価が高かったマウスを、ハイブリドーマ融合のために選択した。
[00276]Ｂａｌｂ／ｃおよびＳＪＬ／Ｊマウス（ＳＬＡＣ）に、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を使用したタンパク質免疫化、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を使用した細胞免疫化、およびヒトＳＩＲＰα ｖ１発現プラスミドをコーティングした金ブレットを使用した遺伝子免疫化という３つの異なる戦略によって、免疫化を行った。ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイおよびヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を用いたＦＡＣＳアッセイを使用して、免疫化したマウスの血清力価を検出した。血清力価が高かったマウスを、ハイブリドーマ融合のために選択した。
【0285】
[00277]２．５．ハイブリドーマの生成
[00278]最後の追加免疫の５日後に、マウスを屠殺し、脾細胞を収集した。１％（ｖ／ｖ）のＮＨ４ＯＨを添加して、赤血球を溶解させた。次いで、洗浄した脾細胞を、高効率電気融合またはＰＥＧ方法によって、ＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ）と融合させた。細胞融合の後、融合した細胞を、２０％ ＦＢＳおよび１％ ＨＡＴを含有する２００μｌのＤＭＥＭ培地とともに、２×１０４個の細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。
[00278]最後の追加免疫の５日後に、マウスを屠殺し、脾細胞を収集した。１％（ｖ／ｖ）のＮＨ４ＯＨを添加して、赤血球を溶解させた。次いで、洗浄した脾細胞を、高効率電気融合またはＰＥＧ方法によって、ＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ）と融合させた。細胞融合の後、融合した細胞を、２０％ ＦＢＳおよび１％ ＨＡＴを含有する２００μｌのＤＭＥＭ培地とともに、２×１０４個の細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。
【0286】
[00279]２．６．ハイブリドーマのスクリーニング
[00280]融合の１０～１２日後に、融合プレートを、主として、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイまたはヒトＳＩＲＰα ｖ１およびｖ２を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を用いたＡｃｕｍｅｎアッセイ（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）によって、スクリーニングした。二次スクリーニングのために、陽性ウェルから得られたハイブリドーマ細胞を増幅させて２４ウェルプレートに入れた。二次スクリーニングにおいて、結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイおよびヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を用いたＦＡＣＳアッセイによって、評価した。異なるヒトＳＩＲＰαバリアントに対して上位の結合活性を有するクローンを、サブクローニングに選択した。加えて、ヒトＳＩＲＰα／β／γに対する特異性、種間交差反応性、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性もまた、ハイブリドーマの特徴付けのために、二次スクリーニングにおいて検出した（特徴付けアッセイ方法については実施例３を参照されたい）。
[00280]融合の１０～１２日後に、融合プレートを、主として、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイまたはヒトＳＩＲＰα ｖ１およびｖ２を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を用いたＡｃｕｍｅｎアッセイ（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）によって、スクリーニングした。二次スクリーニングのために、陽性ウェルから得られたハイブリドーマ細胞を増幅させて２４ウェルプレートに入れた。二次スクリーニングにおいて、結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイおよびヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を用いたＦＡＣＳアッセイによって、評価した。異なるヒトＳＩＲＰαバリアントに対して上位の結合活性を有するクローンを、サブクローニングに選択した。加えて、ヒトＳＩＲＰα／β／γに対する特異性、種間交差反応性、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性もまた、ハイブリドーマの特徴付けのために、二次スクリーニングにおいて検出した（特徴付けアッセイ方法については実施例３を参照されたい）。
【0287】
[00281]２．７．ハイブリドーマのサブクローン
[00282]それぞれの選択したクローンのハイブリドーマ細胞を、限界希釈によって、１つの細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに播種した。プレートを、ハイブリドーマの一次スクリーニングと同じ方式でスクリーニングした（実施例２．６を参照されたい）。陽性単一クローンを選択し、ハイブリドーマの二次スクリーニングと同じ方式で特徴付けを行った（実施例２．６を参照されたい）。次いで、上位の結合活性を有するモノクローナルハイブリドーマ細胞株を、さらなるハイブリドーマ抗体産生、特徴付け、およびシーケンシングのために得た。合計７つの抗体クローンを、機能性ヒットとして同定し、これらのクローンから精製したハイブリドーマ抗体に、それぞれ、００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、および０７３として割り当てた（実施例３）。
[00282]それぞれの選択したクローンのハイブリドーマ細胞を、限界希釈によって、１つの細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに播種した。プレートを、ハイブリドーマの一次スクリーニングと同じ方式でスクリーニングした（実施例２．６を参照されたい）。陽性単一クローンを選択し、ハイブリドーマの二次スクリーニングと同じ方式で特徴付けを行った（実施例２．６を参照されたい）。次いで、上位の結合活性を有するモノクローナルハイブリドーマ細胞株を、さらなるハイブリドーマ抗体産生、特徴付け、およびシーケンシングのために得た。合計７つの抗体クローンを、機能性ヒットとして同定し、これらのクローンから精製したハイブリドーマ抗体に、それぞれ、００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、および０７３として割り当てた（実施例３）。
【0288】
実施例３．抗体の特徴付け
[00283]３．１．ハイブリドーマ抗体の産生および精製
[00284]約１４日間の培養の後に、ハイブリドーマ細胞培養培地を収集し、遠心分離して、細胞を除去した。０．２２μｍのＰＥＳ膜を通して濾過し、ｐＨを７．４に調整した後、回収した上清を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラム（ＧＥ）にロードした。抗体を、０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）によって溶出させた後、即座にＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を使用して中和した。ＰＢＳ緩衝液で透析した後、抗体濃度を、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）によって判定した。タンパク質の純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＰＬＣ－ＳＥＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって評価した。内毒素レベルを、Ｅｎｄｏｃｈｒｏｍｅ－Ｋキット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を用いて検出した。
[00283]３．１．ハイブリドーマ抗体の産生および精製
[00284]約１４日間の培養の後に、ハイブリドーマ細胞培養培地を収集し、遠心分離して、細胞を除去した。０．２２μｍのＰＥＳ膜を通して濾過し、ｐＨを７．４に調整した後、回収した上清を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラム（ＧＥ）にロードした。抗体を、０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）によって溶出させた後、即座にＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を使用して中和した。ＰＢＳ緩衝液で透析した後、抗体濃度を、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）によって判定した。タンパク質の純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＰＬＣ－ＳＥＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって評価した。内毒素レベルを、Ｅｎｄｏｃｈｒｏｍｅ－Ｋキット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を用いて検出した。
【0289】
[00285]３．２．結合特異性の検出
[00286]精製したハイブリドーマ抗体のヒトＳＩＲＰαバリアントに対する結合特異性を、組換えタンパク質Ｆｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤおよびヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤを使用して、ＥＬＩＳＡアッセイによって検出した。簡単に述べると、抗体を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングした抗原とともに、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した抗マウスＩｇＧ二次Ａｂ（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用してＥＣ５０を計算した。ＨＥＦＬＢおよび７つの機能性抗体の結合特異性特性を、表８に要約する。ＨＥＦＬＢを除き、試験した全ての抗体が、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびヒトＳＩＲＰα ｖ２の両方に結合する。ＨＥＦＬＢは、ヒトＳＩＲＰα ｖ１にのみ結合することができ、ヒトＳＩＲＰα ｖ２には結合できない。
[00286]精製したハイブリドーマ抗体のヒトＳＩＲＰαバリアントに対する結合特異性を、組換えタンパク質Ｆｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤおよびヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤを使用して、ＥＬＩＳＡアッセイによって検出した。簡単に述べると、抗体を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングした抗原とともに、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した抗マウスＩｇＧ二次Ａｂ（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用してＥＣ５０を計算した。ＨＥＦＬＢおよび７つの機能性抗体の結合特異性特性を、表８に要約する。ＨＥＦＬＢを除き、試験した全ての抗体が、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびヒトＳＩＲＰα ｖ２の両方に結合する。ＨＥＦＬＢは、ヒトＳＩＲＰα ｖ１にのみ結合することができ、ヒトＳＩＲＰα ｖ２には結合できない。
【0290】
[00287]３．３．種間交差反応性の検出
[00288]精製したハイブリドーマ抗体のヒト、カニクイザル、およびマウスＳＩＲＰαに対する種間交差反応性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα、およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαを安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって判定した。簡単に述べると、抗体を、２×１０５個の標的細胞とともに、４℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、蛍光標識した抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加し、４℃で１時間インキュベートした。幾何学的中央値蛍光強度を検出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用してＥＣ５０を計算した。ＨＥＦＬＢおよび７つの機能性抗体の種間交差反応性特性を、表８に要約する。ＨＥＦＬＢを除き、試験した全ての抗体が、カニクイザルＳＩＲＰαに結合することができる。試験した抗体のいずれもが、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに結合することができない。
[00288]精製したハイブリドーマ抗体のヒト、カニクイザル、およびマウスＳＩＲＰαに対する種間交差反応性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα、およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαを安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって判定した。簡単に述べると、抗体を、２×１０５個の標的細胞とともに、４℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、蛍光標識した抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加し、４℃で１時間インキュベートした。幾何学的中央値蛍光強度を検出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用してＥＣ５０を計算した。ＨＥＦＬＢおよび７つの機能性抗体の種間交差反応性特性を、表８に要約する。ＨＥＦＬＢを除き、試験した全ての抗体が、カニクイザルＳＩＲＰαに結合することができる。試験した抗体のいずれもが、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに結合することができない。
【0291】
[00289]３．４．ＣＤ４７／ＳＩＲＰαの相互作用のブロッキング活性の検出
[00290]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、精製したハイブリドーマ抗体が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうかを判定した。簡単に述べると、抗体およびビオチン標識した可溶性ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングしたヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰで標識したストレプトアビジン（ＨＲＰ－ＳＡ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。ＥＬＩＳＡのマイクロプレートにコーティングしたヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質へのビオチン標識したヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質の結合のブロックによって、ブロッキング比を判定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表８に要約する。００５を除き、試験した全ての抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ１との相互作用をブロックすることができる。
[00290]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、精製したハイブリドーマ抗体が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうかを判定した。簡単に述べると、抗体およびビオチン標識した可溶性ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングしたヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰで標識したストレプトアビジン（ＨＲＰ－ＳＡ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。ＥＬＩＳＡのマイクロプレートにコーティングしたヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質へのビオチン標識したヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質の結合のブロックによって、ブロッキング比を判定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表８に要約する。００５を除き、試験した全ての抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ１との相互作用をブロックすることができる。
【0292】
[00291]３．５．赤血球凝集活性の検出
[00292]抗ＣＤ４７抗体は、赤血球（ＲＢＣ）凝集を促進し得、これは、安全性に関するリスクにつながる可能性がある。精製したハイブリドーマ抗体の赤血球凝集活性について試験した。簡単に述べると、ヒトＲＢＣを、ＰＢＳ中に１０％に希釈し、１００ｎＭの抗体の存在下において、３７℃で１時間インキュベートした。赤血球凝集の根拠は、赤血球凝集していないＲＢＣのはっきりとした赤い点（ｐｕｎｃｔｕａｔｅ ｒｅｄ ｄｏｔ）と比較してぼんやりと現れる、定まっていないＲＢＣの存在によって示される。赤血球凝集インデックスは、抗体の存在下におけるＲＢＣペレットの面積を定量し、抗体の不在下におけるものに対して正規化することによって判定した。表８に要約されるように、７つ全ての機能性抗体は、赤血球凝集活性を示さなかった。
[00292]抗ＣＤ４７抗体は、赤血球（ＲＢＣ）凝集を促進し得、これは、安全性に関するリスクにつながる可能性がある。精製したハイブリドーマ抗体の赤血球凝集活性について試験した。簡単に述べると、ヒトＲＢＣを、ＰＢＳ中に１０％に希釈し、１００ｎＭの抗体の存在下において、３７℃で１時間インキュベートした。赤血球凝集の根拠は、赤血球凝集していないＲＢＣのはっきりとした赤い点（ｐｕｎｃｔｕａｔｅ ｒｅｄ ｄｏｔ）と比較してぼんやりと現れる、定まっていないＲＢＣの存在によって示される。赤血球凝集インデックスは、抗体の存在下におけるＲＢＣペレットの面積を定量し、抗体の不在下におけるものに対して正規化することによって判定した。表８に要約されるように、７つ全ての機能性抗体は、赤血球凝集活性を示さなかった。
【0293】
[00293]３．６．ＳＨＰ－１動員の検出
[00294]精製したハイブリドーマ抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達をブロックする有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１動員アッセイによって評価した（図８Ａ）。全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１を、そのＣ末端に融合されたベータ－ｇａｌ断片（ＥＤ）を有するように操作し、ＳＨＰ－１のＳＨ２ドメインを、相補的なベータ－ｇａｌ断片（ＥＡ）を有するように操作した。これらのコンストラクトを、Ｋ５６２細胞において安定に発現させた。ヒトＣＤ４７発現細胞との共培養を通じたリガンド結合は、ＳＩＲＰα－ＥＤ融合タンパク質のリン酸化をもたらし、ＳＨＰ－１－ＥＡの動員を引き起こし、これにより、活性なベータ－ｇａｌ酵素の創出が強制される。この活性酵素は、基質を加水分解して、レポーター活性の尺度として化学発光を創出する。ブロッキング比を、ベータ－ｇａｌ酵素活性のブロックによって判定した。表８に要約されるように、抗ＳＩＲＰαハイブリドーマ抗体００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、および０７３は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達を強力に破壊した。これらの７つの抗体は、機能性ヒットであると考えられた。
[00294]精製したハイブリドーマ抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達をブロックする有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１動員アッセイによって評価した（図８Ａ）。全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１を、そのＣ末端に融合されたベータ－ｇａｌ断片（ＥＤ）を有するように操作し、ＳＨＰ－１のＳＨ２ドメインを、相補的なベータ－ｇａｌ断片（ＥＡ）を有するように操作した。これらのコンストラクトを、Ｋ５６２細胞において安定に発現させた。ヒトＣＤ４７発現細胞との共培養を通じたリガンド結合は、ＳＩＲＰα－ＥＤ融合タンパク質のリン酸化をもたらし、ＳＨＰ－１－ＥＡの動員を引き起こし、これにより、活性なベータ－ｇａｌ酵素の創出が強制される。この活性酵素は、基質を加水分解して、レポーター活性の尺度として化学発光を創出する。ブロッキング比を、ベータ－ｇａｌ酵素活性のブロックによって判定した。表８に要約されるように、抗ＳＩＲＰαハイブリドーマ抗体００５、０１５、０２５、０４２、０５９、０７１、および０７３は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達を強力に破壊した。これらの７つの抗体は、機能性ヒットであると考えられた。
【0294】
[00295]３．７．ハイブリドーマのシーケンシング
[00296]モノクローナルハイブリドーマ細胞から単離した総ＲＮＡを、ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ逆転写酵素の技術マニュアルに従ってアイソタイプ特異的アンチセンスプライマーまたはユニバーサルプライマーのいずれかを使用してｃＤＮＡに逆転写した。次いで、ｃＤＮＡを鋳型として使用して、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔのｃＤＮＡ末端の高速増幅（ＲＡＣＥ、rapid amplification of cDNA ends）の標準操作手順（ＳＯＰ）に従って、重鎖および軽鎖の抗体断片を増幅させた。増幅させた抗体断片を、標準的なクローニングベクターに別個にクローニングした。コロニーＰＣＲを行って、正しいサイズのインサートを有するクローンに関してスクリーニングし、インサート断片を、ＤＮＡシーケンシングによって分析した。最後に、コンセンサス配列を、重鎖および軽鎖の抗体可変領域として同定した。
[00296]モノクローナルハイブリドーマ細胞から単離した総ＲＮＡを、ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ逆転写酵素の技術マニュアルに従ってアイソタイプ特異的アンチセンスプライマーまたはユニバーサルプライマーのいずれかを使用してｃＤＮＡに逆転写した。次いで、ｃＤＮＡを鋳型として使用して、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔのｃＤＮＡ末端の高速増幅（ＲＡＣＥ、rapid amplification of cDNA ends）の標準操作手順（ＳＯＰ）に従って、重鎖および軽鎖の抗体断片を増幅させた。増幅させた抗体断片を、標準的なクローニングベクターに別個にクローニングした。コロニーＰＣＲを行って、正しいサイズのインサートを有するクローンに関してスクリーニングし、インサート断片を、ＤＮＡシーケンシングによって分析した。最後に、コンセンサス配列を、重鎖および軽鎖の抗体可変領域として同定した。
【0295】
実施例４．キメラ抗体の生成および特徴付け
[00297]４．１．キメラ抗体の生成および産生
[00298]ハイブリドーマシーケンシング結果に応じて、マウス抗ＳＩＲＰα機能性ヒットを、特徴付けのためにＳ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体に変換した。簡単に述べると、重鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を有するｐｃＤＮＡ３．４－ｈＩｇＧ４Ｐベクター（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）にクローニングした。軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒトカッパ軽鎖定常領域を有するｐｃＤＮＡ３．４－ｈＩｇＧｋベクター（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）にクローニングした。抗体重鎖および軽鎖発現プラスミドを共トランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、３７℃で５日間増殖させた。結果として得られるキメラ抗体は、本明細書において、００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃと称され、ここで、接尾辞「ｃ」は、キメラを示す。
[00297]４．１．キメラ抗体の生成および産生
[00298]ハイブリドーマシーケンシング結果に応じて、マウス抗ＳＩＲＰα機能性ヒットを、特徴付けのためにＳ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体に変換した。簡単に述べると、重鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を有するｐｃＤＮＡ３．４－ｈＩｇＧ４Ｐベクター（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）にクローニングした。軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒトカッパ軽鎖定常領域を有するｐｃＤＮＡ３．４－ｈＩｇＧｋベクター（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）にクローニングした。抗体重鎖および軽鎖発現プラスミドを共トランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、３７℃で５日間増殖させた。結果として得られるキメラ抗体は、本明細書において、００５ｃ、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃと称され、ここで、接尾辞「ｃ」は、キメラを示す。
【0296】
[00299]４．２．キメラ抗体の特徴付け
[00300]４．２．１結合特異性の検出
[00301]精製したキメラ抗体のヒトＳＩＲＰαバリアントに対する結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞（図１Ａおよび１Ｂ）または２９３Ｆ細胞（図１Ｃ）、ならびにヒトＳＩＲＰα ｖ２を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞（図２Ａおよび２Ｂ）を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって検出した。図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示されるように、試験した全ての抗体が、細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ１に強力に結合する。図２に示されるように、ＨＥＦＬＢを除き、試験した全ての抗体が、細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ２に結合する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表９に要約する。
[00300]４．２．１結合特異性の検出
[00301]精製したキメラ抗体のヒトＳＩＲＰαバリアントに対する結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞（図１Ａおよび１Ｂ）または２９３Ｆ細胞（図１Ｃ）、ならびにヒトＳＩＲＰα ｖ２を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞（図２Ａおよび２Ｂ）を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって検出した。図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示されるように、試験した全ての抗体が、細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ１に強力に結合する。図２に示されるように、ＨＥＦＬＢを除き、試験した全ての抗体が、細胞表面ヒトＳＩＲＰα ｖ２に結合する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表９に要約する。
【0297】
[00302]精製したキメラ抗体のＳＩＲＰβおよびＳＩＲＰβｌに対する結合活性を、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図３Ａおよび３Ｂ）、ヒトＳＩＲＰβｌ ＥＣＤ（図３Ｄおよび３Ｅ）を使用してＥＬＩＳＡアッセイによって、ならびにヒトＳＩＲＰβ（図３Ｃ）を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用してＦＡＣＳアッセイによって、検出した。図３Ａ～３Ｃに示されるように、試験した全ての抗体が、異なるレベルでヒトＳＩＲＰβに結合し、中でも０４２ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃは、弱い結合を有した。図３Ｄおよび３Ｅに示されるように、試験した全ての抗体が、ヒトＳＩＲＰβｌに強力に結合した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表１０に要約する。
【0298】
[00303]精製したキメラ抗体のＳＩＲＰγに対する結合活性を、組換えタンパク質カニクイザルＳＩＲＰγ ＥＣＤを使用してＦＡＣＳアッセイによって（図４Ｃ）、ヒトＳＩＲＰγを安定に発現する２９３Ｆ細胞を使用してＦＡＣＳアッセイによって（図４Ａおよび４Ｂ）検出した。図４Ａおよび４Ｂに示されるように、試験した全ての抗体が、異なるレベルでヒトＳＩＲＰγに結合し、中でも０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃは、非常に弱い結合を有する。図４Ｃに示されるように、００５ｃ、０４２ｃ、および０７３ｃは、カニクイザルＳＩＲＰγに対する非常に弱い結合を有し、これは、ヒトＳＩＲＰγに対する結合活性と相関性がある。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表１１に要約する。
【0299】
[00304]４．２．２種間交差反応性の検出
[00305]精製したキメラ抗体の種間交差反応性を、組換えタンパク質Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤを使用してＥＬＩＳＡアッセイによって（図５Ａ）、カニクイザルＳＩＲＰαを安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用してＦＡＣＳアッセイによって（図５Ｂおよび５Ｃ）検出した。試験した全ての抗体が、異なるレベルでカニクイザルＳＩＲＰαに結合するが、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに対する種間交差反応性は有さない。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表１２に要約する。
[00305]精製したキメラ抗体の種間交差反応性を、組換えタンパク質Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤを使用してＥＬＩＳＡアッセイによって（図５Ａ）、カニクイザルＳＩＲＰαを安定に発現するＣＨＯＫ１細胞を使用してＦＡＣＳアッセイによって（図５Ｂおよび５Ｃ）検出した。試験した全ての抗体が、異なるレベルでカニクイザルＳＩＲＰαに結合するが、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに対する種間交差反応性は有さない。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表１２に要約する。
【0300】
[00306]４．２．３．ＣＤ４７／ＳＩＲＰαの相互作用のブロッキング活性の検出
[00307]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、精製したキメラ抗体が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうかを判定した。簡単に述べると、抗体とｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質とを、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングしたヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａおよび６Ｂ）またはヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図７Ａおよび７Ｂ）組換えタンパク質とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰ標識した抗マウスＦｃ二次抗体（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。ＥＬＩＳＡのマイクロプレートにコーティングしたヒトＳＩＲＰα ＥＣＤ組換えタンパク質へのヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質の結合のブロックによって、ブロッキング比を判定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表１３に要約する。００５を除き、試験した全ての抗体が、ヒトＣＤ４７と異なるヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックすることができる。
[00307]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、精製したキメラ抗体が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができるかどうかを判定した。簡単に述べると、抗体とｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質とを、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングしたヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａおよび６Ｂ）またはヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図７Ａおよび７Ｂ）組換えタンパク質とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰ標識した抗マウスＦｃ二次抗体（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。ＥＬＩＳＡのマイクロプレートにコーティングしたヒトＳＩＲＰα ＥＣＤ組換えタンパク質へのヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質の結合のブロックによって、ブロッキング比を判定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表１３に要約する。００５を除き、試験した全ての抗体が、ヒトＣＤ４７と異なるヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックすることができる。
【0301】
[00308]４．２．４．ＳＨＰ－１動員アッセイ
[00309]精製したキメラ抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達をブロックする有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１動員アッセイによって評価した（図８Ｂ、実施例３．６に記載の方法を参照されたい）。ＩＣ５０および上位ブロッキング比を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算した。表１４に要約されるように、試験した全ての抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達を異なるレベルで破壊することができる。特に、００５ｃは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックしないが、ＣＤ４７結合によりもたらされるＳＩＲＰα細胞内尾部へのＳＨＰ－１動員を阻害することができる。
[00309]精製したキメラ抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達をブロックする有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１動員アッセイによって評価した（図８Ｂ、実施例３．６に記載の方法を参照されたい）。ＩＣ５０および上位ブロッキング比を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算した。表１４に要約されるように、試験した全ての抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達を異なるレベルで破壊することができる。特に、００５ｃは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックしないが、ＣＤ４７結合によりもたらされるＳＩＲＰα細胞内尾部へのＳＨＰ－１動員を阻害することができる。
【0302】
[00310]４．２．５．親和性の検出
[00311]精製したキメラ抗体を、バイオレイヤーインターフェロメトリー技術（Ｏｃｔｅｔ ｓｙｓｔｅｍ）を使用してヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に対する結合親和性に関して特徴付けた。会合および解離の曲線は１：１結合モデルに合致し、それぞれの抗体についてＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。それぞれの抗体についての親和性データＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を、表１５に要約する。
[00311]精製したキメラ抗体を、バイオレイヤーインターフェロメトリー技術（Ｏｃｔｅｔ ｓｙｓｔｅｍ）を使用してヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に対する結合親和性に関して特徴付けた。会合および解離の曲線は１：１結合モデルに合致し、それぞれの抗体についてＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。それぞれの抗体についての親和性データＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を、表１５に要約する。
【0303】
[00312]４．２．６．エピトープの分析
[00313]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを、精製したキメラ抗体のエピトープビニングに使用した。簡単に述べると、過剰な競合抗体およびｍＦｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングした抗体とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰ標識した抗マウスＦｃ二次抗体（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。競合比を計算した。ＳＩＲＰαとの結合について互いに競合し得る抗体は、関連する結合エピトープを有し得る。表１６に示されるように、０２５ｃは、ヒトＳＩＲＰαに対して、０４２ｃ、０７３ｃ、およびｈｕ１Ｈ９Ｇ４との競合的結合を示さなかったため、これは、異なるエピトープに結合し得ることが示された。０４２ｃ、０７３ｃ、およびｈｕ１Ｈ９Ｇ４の間の競合は、双方向ではなく、それらの結合エピトープは、関連しているが完全に同一ではない可能性があることが示された。
[00313]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを、精製したキメラ抗体のエピトープビニングに使用した。簡単に述べると、過剰な競合抗体およびｍＦｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングした抗体とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰ標識した抗マウスＦｃ二次抗体（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。競合比を計算した。ＳＩＲＰαとの結合について互いに競合し得る抗体は、関連する結合エピトープを有し得る。表１６に示されるように、０２５ｃは、ヒトＳＩＲＰαに対して、０４２ｃ、０７３ｃ、およびｈｕ１Ｈ９Ｇ４との競合的結合を示さなかったため、これは、異なるエピトープに結合し得ることが示された。０４２ｃ、０７３ｃ、およびｈｕ１Ｈ９Ｇ４の間の競合は、双方向ではなく、それらの結合エピトープは、関連しているが完全に同一ではない可能性があることが示された。
【0304】
[00314]０２５ｃ、０４２ｃ、０７３ｃ、ＨＥＦＬＢ、およびｈｕ１Ｈ９Ｇ４のエピトープマッピングを、さらに、水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を使用して行った。図９Ａに示されるように、０２５ｃ結合は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬの領域について低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸が、０２５ｃの結合に重要であり得ることが示された。図９Ｂに示されるように、０４２ｃ結合は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＳＧＡＧＴＥＬおよびＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳの２つの領域について低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸が、０４２ｃの結合に重要であり得ることが示された。図９Ｃに示されるように、０７３ｃ結合は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹの領域について低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸が、０７３ｃの結合に重要であり得ることが示された。特に、これらの３つの領域は、ＣＤ４７が結合するＳＩＲＰα ＥＣＤのＩｇＶドメインには位置しておらず、０４２ｃおよび０７３ｃが、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックするアロステリック抗体として機能し得るか、または０４２ｃおよび０７３ｃのブロッキング活性が立体障害作用であることを示す。図９Ｄに示されるように、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４結合は、Ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬの領域について低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸が、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４の結合に重要であり得ることが示された。図９Ｅに示されるように、ＨＥＦＬＢ結合は、ｈｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤのＶＧＰＩＱＷの領域について低い水素重水素交換比をもたらし、これらのアミノ酸が、ＨＥＦＬＢの結合に重要であり得ることが示された。
【0305】
[00315]競合的ＥＬＩＳＡデータおよびＨＤＸ－ＭＳデータをまとめると、０２５ｃ、０４２ｃ、および０７３ｃが、異なる結合エピトープを有し得、それらがまた参照抗体ｈｕ１Ｈ９Ｇ４およびＨＥＦＬＢとも異なると結論付けられる。
【0306】
[00316]４．２．７．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏファゴサイトーシスアッセイ
[00317]精製したキメラ抗体の機能有効性を、フローサイトメトリーに基づくファゴサイトーシスアッセイによって評価した。簡単に述べると、異なるＳＩＲＰＡ遺伝子型を有するＭ０非分極化またはＭ１分極化ヒト単球由来マクロファージを、試験した抗体の存在下において、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）標識したＣＤ４７発現がん細胞とともに共培養した。ファゴサイトーシスは、ｃｅｌｌ ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ色素について陽性であるマクロファージのパーセンテージを判定することによってアッセイした。非分極化マクロファージについては、末梢血単核細胞を、７～９日間、１０％ ＦＢＳおよび５０ｎｇ／ｍｌ Ｍ－ＣＳＦを補充した１６４０において１０ｃｍ組織培養プレートに播種した。接着細胞を、Ｍ０非分極化マクロファージとして回収した。Ｍ１分極化マクロファージについては、末梢血単核細胞を、５日間、１０％ ＦＢＳおよび５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ－ＣＳＦを補充した１６４０において１０ｃｍ組織培養プレートに播種した。５０ｕｇ／ｍｌのＩＦＮγおよび１００ｕｇ／ｍｌのＬＰＳを、追加の２～４日間の培養のために添加した。接着細胞を、Ｍ１分極化マクロファージとして回収した。
[00317]精製したキメラ抗体の機能有効性を、フローサイトメトリーに基づくファゴサイトーシスアッセイによって評価した。簡単に述べると、異なるＳＩＲＰＡ遺伝子型を有するＭ０非分極化またはＭ１分極化ヒト単球由来マクロファージを、試験した抗体の存在下において、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）標識したＣＤ４７発現がん細胞とともに共培養した。ファゴサイトーシスは、ｃｅｌｌ ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ色素について陽性であるマクロファージのパーセンテージを判定することによってアッセイした。非分極化マクロファージについては、末梢血単核細胞を、７～９日間、１０％ ＦＢＳおよび５０ｎｇ／ｍｌ Ｍ－ＣＳＦを補充した１６４０において１０ｃｍ組織培養プレートに播種した。接着細胞を、Ｍ０非分極化マクロファージとして回収した。Ｍ１分極化マクロファージについては、末梢血単核細胞を、５日間、１０％ ＦＢＳおよび５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ－ＣＳＦを補充した１６４０において１０ｃｍ組織培養プレートに播種した。５０ｕｇ／ｍｌのＩＦＮγおよび１００ｕｇ／ｍｌのＬＰＳを、追加の２～４日間の培養のために添加した。接着細胞を、Ｍ１分極化マクロファージとして回収した。
【0307】
[00318]図１０Ａに示されるように、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃは、ＳＩＲＰＡヘテロ接合性ｖ１／ｖ２個体から得られたＭ０マクロファージによるＲａｊｉ細胞の腫瘍細胞取り込みを増強させる単剤活性を示さなかった。しかしながら、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）の存在下において、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ２との間の相互作用をブロックする活性が弱い０５９ｃを除き、試験した全ての他の精製したキメラ抗体が、Ｒａｊｉ細胞のマクロファージに媒介される抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を増強させた。
【0308】
[00319]図１０Ｂに示されるように、０５９ｃを除き、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）の存在に関係なく、試験した全ての他の精製した抗体が、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ２／ｖ２個体から得られたＭ０マクロファージによるＤＬＤ－１細胞の腫瘍細胞取り込みを効果的に増強させた。
【0309】
[00320]ＳＩＲＰα抗体に加えてＰＤ－Ｌ１抗体の組合せを、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１（図１０Ｃ）またはｖ２／ｖ２（図１０Ｄ）個体から得られたＭ０マクロファージを使用してファゴサイトーシスアッセイにおいて試験した。ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下において、００５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、および０７３ｃは、ＰＤ－Ｌ１を安定に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを効果的に強化した。
【0310】
[00321]０２５ｃに加えてＰＤ－Ｌ１抗体Ｃ７１、および０２５ｃに加えてリツキシマブの組合せもまた、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１個体から得られたＭ０非分極化またはＭ１分極化マクロファージを使用してファゴサイトーシスにおいて試験した。Ｍ１分極化マクロファージ（図１１Ｂ）は、Ｍ０非分極化マクロファージ（図１１Ａ）と比較して弱いファゴサイトーシス能力を示した。マクロファージ分極化ステータスに関係なく、ＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの存在下において、０２５ｃは、ＰＤ－Ｌ１を安定に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを効果的に強化した。ＰＤ－Ｌ１重鎖抗体Ｃ７１は、以下に示されるＶＨアミノ酸配列を有する。
【0311】
[00322]抗ＰＤ－Ｌ１重鎖抗体Ｃ７１．ＶＨ、配列番号９１：
[00323]ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＳＧＧＳＬＫＬＳＣＡＧＳＧＦＴＥＳＡＧＦＭＶＷＨＲＱＶＰＧＫＥＲＥＬＶＡＬＩＡＴＰＳＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＩＲＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
[00324]これらのデータは、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片が、ある特定の腫瘍細胞の標的抗原に特異的な抗体と組み合わせて使用した場合に、そのような腫瘍細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを強化することを示唆する。
[00323]ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＳＧＧＳＬＫＬＳＣＡＧＳＧＦＴＥＳＡＧＦＭＶＷＨＲＱＶＰＧＫＥＲＥＬＶＡＬＩＡＴＰＳＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＩＲＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
[00324]これらのデータは、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片が、ある特定の腫瘍細胞の標的抗原に特異的な抗体と組み合わせて使用した場合に、そのような腫瘍細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを強化することを示唆する。
【0312】
[00325]４．２．８．Ｉｎ Ｖｉｖｏ抗腫瘍活性
[00326]ヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα二重ノックインマウスに、ヒトＣＤ４７およびヒトクローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）を安定に発現するＭＣ３８細胞を接種した。処置群は、ビヒクル（ＰＢＳ）、アイソタイプ対照、１ｋｇ当たり１０ｍｇ（ｍｐｋ）の抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）、および１０ｍｐｋの抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）に加えて３または１０ｍｐｋの抗ＳＩＲＰα ｍＡｂの組合せが含まれる。腫瘍が７０～７５ｍｍ３の平均体積に達したときに処置を開始した。マウスに、１週間に２回で５回、腹腔内（ＩＰ）投薬した。腫瘍体積を、１週間に２回測定した。最終投薬の３日後に、マウスを屠殺し、腫瘍を計量した。統計学的分析を、異なる処置群の平均腫瘍重量／体積をアイソタイプ対照群のものと比較する一方向または二方向ａｎｏｖａによって行った。図１２Ａおよび１２Ｂに示されるように、１０ｍｐｋの抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）に加えて１０ｍｐｋの抗ＳＩＲＰαの組合せは、ＭＣ３８腫瘍成長を有意に阻害した。１０ｍｐｋの０２５ｃの組合せ群では６つの腫瘍のうち６つ、３ｍｐｋの０４２ｃの組合せ群では６つの腫瘍のうち１つ、および１０ｍｐｋの０４２ｃの組合せ群では６つの腫瘍のうち２つが、縮小された（図１２Ｃ）。抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を、以下に示す。
[00326]ヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα二重ノックインマウスに、ヒトＣＤ４７およびヒトクローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）を安定に発現するＭＣ３８細胞を接種した。処置群は、ビヒクル（ＰＢＳ）、アイソタイプ対照、１ｋｇ当たり１０ｍｇ（ｍｐｋ）の抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）、および１０ｍｐｋの抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）に加えて３または１０ｍｐｋの抗ＳＩＲＰα ｍＡｂの組合せが含まれる。腫瘍が７０～７５ｍｍ３の平均体積に達したときに処置を開始した。マウスに、１週間に２回で５回、腹腔内（ＩＰ）投薬した。腫瘍体積を、１週間に２回測定した。最終投薬の３日後に、マウスを屠殺し、腫瘍を計量した。統計学的分析を、異なる処置群の平均腫瘍重量／体積をアイソタイプ対照群のものと比較する一方向または二方向ａｎｏｖａによって行った。図１２Ａおよび１２Ｂに示されるように、１０ｍｐｋの抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）に加えて１０ｍｐｋの抗ＳＩＲＰαの組合せは、ＭＣ３８腫瘍成長を有意に阻害した。１０ｍｐｋの０２５ｃの組合せ群では６つの腫瘍のうち６つ、３ｍｐｋの０４２ｃの組合せ群では６つの腫瘍のうち１つ、および１０ｍｐｋの０４２ｃの組合せ群では６つの腫瘍のうち２つが、縮小された（図１２Ｃ）。抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２）のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を、以下に示す。
【0313】
[00327]抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２） ＶＨ、配列番号８８
[00328]ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＷＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＩＮＰＴＮＡＲＳＮＹＮＥＫＦＫＫＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＩＹＹＧＮＳＦＡＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
[00329]抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２） ＶＬ、配列番号８９
[00330]ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＡＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＳＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＮＹＹＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
[00331]４．２．９．混合リンパ球反応アッセイ（ＭＬＲ）
[00332]ＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用を通じた抗原提示細胞へのヒトＴ細胞の結合は、Ｔ細胞増殖を共刺激することが報告された。精製したキメラ抗体のうちのいくつかは、ヒトＳＩＲＰγに強力に結合するため（図４）、Ｔ細胞の増殖および活性化を妨害する可能性を排除するために、精製したキメラ抗体を、ＭＬＲアッセイにおいて試験した。簡単に述べると、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔで標識したヒト初代Ｔ細胞を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成した同種成熟樹状細胞で５日間、刺激した。示される抗体を、試験の開始時から、飽和濃度（１００ｎＭ）で添加した。ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔの低い染色を使用して、増殖集団を判定した。ＩＦＮγ分泌は、ヒトＩＦＮガンマキット（Ｃｉｓｂｉｏ）で判定した。図１３に示されるように、ヒトＳＩＲＰγに対する結合活性とは関係なく、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃは、ＩＦＮγ分泌（図１３Ａ）、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖（図１３Ｂ）、およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖（図１３Ｃ）に対して有意な影響を示さなかった。予測されるように、抗ＳＩＲＰγ抗体ＬＳＢ２．２０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、Ｔ細胞活性化の強力な阻害剤である。特に、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４は、このアッセイにおいて、ＩＦＮγ分泌およびＴ細胞増殖の明白な阻害を示した。
[00328]ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＷＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＩＮＰＴＮＡＲＳＮＹＮＥＫＦＫＫＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＩＹＹＧＮＳＦＡＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
[00329]抗ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ（２２Ｅ１２） ＶＬ、配列番号８９
[00330]ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＡＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＳＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＮＹＹＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
[00331]４．２．９．混合リンパ球反応アッセイ（ＭＬＲ）
[00332]ＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用を通じた抗原提示細胞へのヒトＴ細胞の結合は、Ｔ細胞増殖を共刺激することが報告された。精製したキメラ抗体のうちのいくつかは、ヒトＳＩＲＰγに強力に結合するため（図４）、Ｔ細胞の増殖および活性化を妨害する可能性を排除するために、精製したキメラ抗体を、ＭＬＲアッセイにおいて試験した。簡単に述べると、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔで標識したヒト初代Ｔ細胞を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成した同種成熟樹状細胞で５日間、刺激した。示される抗体を、試験の開始時から、飽和濃度（１００ｎＭ）で添加した。ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔの低い染色を使用して、増殖集団を判定した。ＩＦＮγ分泌は、ヒトＩＦＮガンマキット（Ｃｉｓｂｉｏ）で判定した。図１３に示されるように、ヒトＳＩＲＰγに対する結合活性とは関係なく、０１５ｃ、０２５ｃ、０４２ｃ、０５９ｃ、０７１ｃ、および０７３ｃは、ＩＦＮγ分泌（図１３Ａ）、ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖（図１３Ｂ）、およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖（図１３Ｃ）に対して有意な影響を示さなかった。予測されるように、抗ＳＩＲＰγ抗体ＬＳＢ２．２０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、Ｔ細胞活性化の強力な阻害剤である。特に、ｈｕ１Ｈ９Ｇ４は、このアッセイにおいて、ＩＦＮγ分泌およびＴ細胞増殖の明白な阻害を示した。
【0314】
実施例５．抗体ヒト化
[00333]５．１．ヒト化
[00334]ＣＤＲグラフト化方法を、０２５ｃのヒト化に使用した。簡単に述べると、ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１およびＩＧＫＶ３－１１＊０１を、それぞれ、もともとのマウス抗体配列に対するそれらの相同性に基づいて、重鎖および軽鎖のヒト化鋳型としてまず選択した。ＣＤＲを、次いで、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのシステムの組合せを使用して定義した重鎖ＣＤＲ１を除き、Ｋａｂａｔの定義を使用して定義した。グラフトするために、可能性のあるホットスポットを除去したＣＤＲ、および異なる組合せの０２５ｃからのカノニカル残基を、鋳型にグラフトし、結果として得られたバリアント（定常領域にＳ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４抗体）を、９６ウェルの高スループットなタンパク質発現システムによって発現させた。産生された全てのバリアントを、ＦＡＣＳアッセイで試験して、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびヒトＳＩＲＰα ｖ２への上位結合物質を、さらなる特徴付けに選択した。良好な結合活性を有する得られたヒト化抗体は、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、およびｈｕ０２５．０６０と表記し、ここで、接頭辞「ｈｕ」は、「ヒト化」を示し、接尾辞の数字は、ヒト化抗体のシリアル番号を表す。
[00333]５．１．ヒト化
[00334]ＣＤＲグラフト化方法を、０２５ｃのヒト化に使用した。簡単に述べると、ＩＧＨＶ１－６９－２＊０１およびＩＧＫＶ３－１１＊０１を、それぞれ、もともとのマウス抗体配列に対するそれらの相同性に基づいて、重鎖および軽鎖のヒト化鋳型としてまず選択した。ＣＤＲを、次いで、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのシステムの組合せを使用して定義した重鎖ＣＤＲ１を除き、Ｋａｂａｔの定義を使用して定義した。グラフトするために、可能性のあるホットスポットを除去したＣＤＲ、および異なる組合せの０２５ｃからのカノニカル残基を、鋳型にグラフトし、結果として得られたバリアント（定常領域にＳ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４抗体）を、９６ウェルの高スループットなタンパク質発現システムによって発現させた。産生された全てのバリアントを、ＦＡＣＳアッセイで試験して、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびヒトＳＩＲＰα ｖ２への上位結合物質を、さらなる特徴付けに選択した。良好な結合活性を有する得られたヒト化抗体は、ｈｕ０２５．０２１、ｈｕ０２５．０２３、ｈｕ０２５．０３３、ｈｕ０２５．０５９、およびｈｕ０２５．０６０と表記し、ここで、接頭辞「ｈｕ」は、「ヒト化」を示し、接尾辞の数字は、ヒト化抗体のシリアル番号を表す。
【0315】
[00335]５．２．ヒト化抗体の特徴付け
[00336]５．２．１．結合特異性の検出
[00337]ヒト化抗体のヒトＳＩＲＰαバリアントに対する結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１（図１４Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２（図１４Ｂ）、またはヒトＳＩＲＰβ（図１４Ｃ）を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞、ヒトＳＩＲＰγを安定に発現する２９３Ｆ細胞（図１４Ｄ）を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって検出した。試験した全てのヒト化抗体は、親抗体０２５ｃと同様のＳＩＲＰファミリーメンバーへの結合活性を保持することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表１７に要約する。
[00336]５．２．１．結合特異性の検出
[00337]ヒト化抗体のヒトＳＩＲＰαバリアントに対する結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１（図１４Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２（図１４Ｂ）、またはヒトＳＩＲＰβ（図１４Ｃ）を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞、ヒトＳＩＲＰγを安定に発現する２９３Ｆ細胞（図１４Ｄ）を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって検出した。試験した全てのヒト化抗体は、親抗体０２５ｃと同様のＳＩＲＰファミリーメンバーへの結合活性を保持することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＥＣ５０および上位シグナルを、表１７に要約する。
【0316】
[00338]５．２．２．ＣＤ４７／ＳＩＲＰαの相互作用のブロッキング活性の検出
[00339]ヒト化抗体を、競合的ＥＬＩＳＡアッセイを用いてＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする能力に関して試験した（実施例４．２．３．に記載される方法を参照されたい）。図１５に示されるように、試験した全てのヒト化抗体は、親抗体０２５ｃと同様のヒトＣＤ４７と異なるヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックする活性を保持することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表１８に要約する。
[00339]ヒト化抗体を、競合的ＥＬＩＳＡアッセイを用いてＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする能力に関して試験した（実施例４．２．３．に記載される方法を参照されたい）。図１５に示されるように、試験した全てのヒト化抗体は、親抗体０２５ｃと同様のヒトＣＤ４７と異なるヒトＳＩＲＰαバリアントとの間の相互作用をブロックする活性を保持することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表１８に要約する。
【0317】
[00340]ヒト化抗体および参照抗体のブロッキング活性をさらに比較するために、競合的ＦＡＣＳアッセイもまた設定した。簡単に述べると、抗体とｍＦｃタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質とを、ヒトＳＩＲＰα ｖ１（図１６Ａ）またはヒトＳＩＲＰα ｖ２（図１６Ｂ）を安定に発現するＣＨＯＫ１細胞とともに共インキュベートした。洗浄した後、色素標識した抗マウスＦｃ二次抗体（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。蛍光強度を検出した。ＳＩＲＰαを発現するＣＨＯＫ１細胞へのヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質結合のブロックによって、ブロッキング比を判定した。Ｈｕ１Ｈ９Ｇ４は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα ｖ２との相互作用をブロックする弱い活性を示した。特に、ＨＥＦＬＢは、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に関してまったく機能しない。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表１９に要約する。
【0318】
[00341]５．２．４．ＳＨＰ－１動員アッセイ
[00342]ヒト化抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達をブロックする有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１動員アッセイによって評価した（図１７、実施例３．６に記載の方法を参照されたい）。試験した全てのヒト化抗体は、親抗体０２５ｃと同様のＣＤ４７結合により生じるＳＩＲＰα細胞内尾部へのＳＨＰ－１動員をブロックする活性を保持することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表２０に要約する。
[00342]ヒト化抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαに媒介される「私を食べないで」のシグナル伝達をブロックする有効性を、細胞に基づくＳＨＰ－１動員アッセイによって評価した（図１７、実施例３．６に記載の方法を参照されたい）。試験した全てのヒト化抗体は、親抗体０２５ｃと同様のＣＤ４７結合により生じるＳＩＲＰα細胞内尾部へのＳＨＰ－１動員をブロックする活性を保持することが確認された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９．０を使用して計算したＩＣ５０および上位ブロッキング比を、表２０に要約する。
【0319】
[00343]５．２．５．親和性の検出
[00344]ヒト化抗体を、表面プラズモン共鳴技術（Ｂｉａｃｏｒｅ ｓｙｓｔｅｍ）を使用してヒトＳＩＲＰα ｖ２、ヒトＳＩＲＰα ｖ１に対する結合親和性に関して特徴付けた。会合および解離の曲線は１：１結合モデルに合致し、それぞれの抗体についてＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。それぞれの抗体についての親和性データＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を、表２１に要約する。
[00344]ヒト化抗体を、表面プラズモン共鳴技術（Ｂｉａｃｏｒｅ ｓｙｓｔｅｍ）を使用してヒトＳＩＲＰα ｖ２、ヒトＳＩＲＰα ｖ１に対する結合親和性に関して特徴付けた。会合および解離の曲線は１：１結合モデルに合致し、それぞれの抗体についてＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。それぞれの抗体についての親和性データＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を、表２１に要約する。
【0320】
[00345]５．２．６．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏファゴサイトーシスアッセイ
[00346]ｉｎ ｖｉｔｒｏ機能検証のために、ＳＩＲＰα抗体に加えてＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの組合せを、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１（図１８Ａおよび１８Ｂ）、ｖ２／ｖ２（図１８Ｃおよび１８Ｄ）、またはヘテロ接合性ｖ１／ｖ２個体から得られたＭ０マクロファージを使用してファゴサイトーシスアッセイにおいて試験した（実施例４．２．７に記載される方法を参照されたい）。試験した全てのヒト化抗体は、ＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの存在下において、親抗体０２５ｃと同様の、ＰＤ－Ｌ１を安定に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを強化する活性を保持することが確認された。参照抗体および００５ｃもまた、これらのアッセイにおいて並列して試験した。図１８Ａおよび１８Ｂに示されるように、ＣＤ４７結合により生じるＳＩＲＰα細胞内尾部へのＳＨＰ－１動員をブロックすることができるがＣＤ４７とＳＩＰＲαとの相互作用をブロックしない００５ｃは、ＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの存在下において、ＰＤ－Ｌ１を安定に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを効果的に強化した。図１８Ｃ、１８Ｄ、および１８Ｅに示されるように、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に結合することができないＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ２／ｖ２およびヘテロ接合性ｖ１／ｖ２個体から得られたマクロファージに関してまったく機能しなかった。
[00346]ｉｎ ｖｉｔｒｏ機能検証のために、ＳＩＲＰα抗体に加えてＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの組合せを、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ１／ｖ１（図１８Ａおよび１８Ｂ）、ｖ２／ｖ２（図１８Ｃおよび１８Ｄ）、またはヘテロ接合性ｖ１／ｖ２個体から得られたＭ０マクロファージを使用してファゴサイトーシスアッセイにおいて試験した（実施例４．２．７に記載される方法を参照されたい）。試験した全てのヒト化抗体は、ＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの存在下において、親抗体０２５ｃと同様の、ＰＤ－Ｌ１を安定に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを強化する活性を保持することが確認された。参照抗体および００５ｃもまた、これらのアッセイにおいて並列して試験した。図１８Ａおよび１８Ｂに示されるように、ＣＤ４７結合により生じるＳＩＲＰα細胞内尾部へのＳＨＰ－１動員をブロックすることができるがＣＤ４７とＳＩＰＲαとの相互作用をブロックしない００５ｃは、ＰＤ－Ｌ１抗体またはリツキシマブの存在下において、ＰＤ－Ｌ１を安定に発現するＲａｊｉ細胞のマクロファージに媒介されるＡＤＣＰを効果的に強化した。図１８Ｃ、１８Ｄ、および１８Ｅに示されるように、ヒトＳＩＲＰα ｖ２に結合することができないＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰＡホモ接合性ｖ２／ｖ２およびヘテロ接合性ｖ１／ｖ２個体から得られたマクロファージに関してまったく機能しなかった。
【0321】
【表8】
【0322】
【表9】
【0323】
【表10】
【0324】
【表11】
【0325】
【表12】
【0326】
【表13】
【0327】
【表14】
【0328】
【表15】
【0329】
【表16】
【0330】
【表17】
【0331】
【表18】
【0332】
【表19】
【0333】
【表20】
【0334】
【表21】
【図1-1】
【図1-2】
【図1-3】
【図2-1】
【図2-2】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図4-1】
【図4-2】
【図5-1】
【図5-2】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【図9-1】
【図9-2】
【図9-3】
【図9-4】
【図10-1】
【図10-2】
【図10-3】
【図11-1】
【図11-2】
【図12-1】
【図12-2】
【図12-3】
【図12-4】
【図12-5】
【図12-6】
【図12-7】
【図13-1】
【図13-2】
【図14-1】
【図14-2】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18-1】
【図18-2】
【図18-3】
【図18-4】
【図18-5】
【配列表】
【国際調査報告】