特表 2024-532159 アトピー性皮膚炎を治療するための融合タンパク質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-05

(54)【発明の名称】アトピー性皮膚炎を治療するための融合タンパク質

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20240829BHJP

   C07K 14/54 20060101ALI20240829BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240829BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20240829BHJP

   C12P 21/02 20060101ALN20240829BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C07K14/54

C07K16/18

C07K16/24

A61P17/00 171

A61P37/08

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K39/395 N

A61K31/519

A61K31/4439

C12P21/02 A

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024509415

(86)(22)【出願日】2022-08-19

(85)【翻訳文提出日】2024-04-10

(86)【国際出願番号】 EP2022073146

(87)【国際公開番号】W WO2023021170

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】63/235,259

(32)【優先日】2021-08-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/235,261

(32)【優先日】2021-08-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510000976

【氏名又は名称】インターベット インターナショナル ベー． フェー．

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100216839

【弁理士】

【氏名又は名称】大石 敏幸

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】モージー，モハマド

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，ユアンジェン

(72)【発明者】

【氏名】スタウファー，セス・ディー

(72)【発明者】

【氏名】チャオ，ジソン

【テーマコード（参考）】

4B064

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG01

4B064AG26

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZB131

4C084ZB132

4C084ZC202

4C084ZC422

4C084ZC611

4C084ZC612

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB42

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4C085GG08

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC36

4C086CB05

4C086GA02

4C086GA07

4C086GA08

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA13

4C086MA17

4C086MA21

4C086MA23

4C086MA35

4C086MA37

4C086MA44

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA56

4C086MA58

4C086MA59

4C086MA60

4C086MA63

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA89

4C086ZB13

4C086ZC61

4C086ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045DA01

4H045DA75

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、イヌインターロイキン－４に結合する融合タンパク質と、イヌインターロイキン－１３に結合する融合タンパク質との組み合わせを含む、イヌにおけるアトピー性皮膚炎を治療するための組成物を提供する。イヌインターロイキン－４に結合する融合タンパク質は、イヌインターロイキン－４受容体アルファの細胞外ドメインを含むのに対して、イヌインターロイキン－１３に結合する融合タンパク質は、イヌインターロイキン－１３受容体アルファ１の細胞外ドメインを含む。組成物は、イヌＩＬ－３１に対するまたはイヌＩＬ－３１Ｒαに対するモノクローナル抗体を更に含むことができる。本発明は更に、これらの組成物を使用してイヌアトピー性皮膚炎を治療する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一対のイヌインターロイキン－４受容体アルファ－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質（ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質）を含むホモ二量体と、一対のイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質（ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質）を含むホモ二量体とを含む組成物であって、
前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するイヌインターロイキン－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第１のイヌフラグメント結晶化可能領域（ｃＦｃ）とを含み、かつ
前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１（ｃＩＬ－１３Ｒα１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第２のｃＦｃとを含み、
前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが同じであるか、または異なるかのいずれかである、組成物。

【請求項2】

前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４または配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を個々に含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、第１のイヌヒンジ領域を更に含み、前記第１のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間のリンカーとして作用し、かつ
前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、第２のイヌヒンジ領域を更に含み、前記第２のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間のリンカーとして作用し、前記第１のイヌヒンジ領域および前記第２のイヌヒンジ領域が、同じであるか、または異なるかのいずれかである、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記第１のイヌヒンジ領域および前記第２のイヌヒンジ領域が、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を個々に含む、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤが、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％の同一性を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤが、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％の同一性を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記第１のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用し、かつ前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間の前記唯一のリンカーが、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列を含む、請求項３～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記第２のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用し、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間の前記唯一のリンカーが、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）を含む、請求項３～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列のみから構成される、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列のみから構成される、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号５、配列番号８、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号６および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

イヌインターロイキン－４受容体アルファ－ｃＦｃ融合タンパク質（ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ）およびインターロイキン－１３受容体アルファ１－ｃＦｃ融合タンパク質（ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ）を含むヘテロ二量体を含む組成物であって、
前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質が、イヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するイヌインターロイキン－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第１のｃＦｃとを含み、かつ
前記ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質が、イヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１（ｃＩＬ－１３Ｒα１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第２のｃＦｃとを含み、
前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが同じであるか、または異なるかのいずれかである、組成物。

【請求項16】

前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を個々に含む、請求項１５に記載の組成物。

【請求項17】

前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質が、第１のイヌヒンジ領域を更に含み、前記第１のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間のリンカーとして作用し、かつ
前記ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質が、第２のイヌヒンジ領域を更に含み、前記第２のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間のリンカーとして作用し、前記第１のイヌヒンジ領域および前記第２のイヌヒンジ領域が、同じであるか、または異なるかのいずれかである、請求項１５または１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記第１のイヌヒンジ領域および前記第２のイヌヒンジ領域が、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を個々に含む、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記第１のｃＦｃが、配列番号２および配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、かつＬ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含み、かつ前記第２のｃＦｃが、配列番号２および配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、かつＴ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含む、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃが配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ－１３Ｒα１が配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項１５～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記組成物が、イヌＩＬ－３１Ｒに対するイヌ化抗体およびイヌＩＬ－３１Ｒに対するイヌ抗体からなる群から選択される抗体を更に含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

イヌＩＬ－３１Ｒに対する前記イヌ化抗体が、
（ｉ）配列番号３３および配列番号３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８および配列番号３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに
（ｉｉ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖
からなる群から選択される、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害剤、またはＴＨ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子に対するアンタゴニストからなる群から選択される１つ以上の追加の成分を更に含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項24】

前記ＪＡＫ阻害剤が、以下からなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物

【化1】

（式中、Ｒ^１は、ヒドロキシで置換されていてもよいＣ_１～４アルキルおよびその薬学的に許容され得る塩である）、

【化2】

およびその薬学的に許容され得る塩、ならびに

【化3】

およびその薬学的に許容され得る塩。

【請求項25】

請求項１～２４のいずれか一項に記載の組成物を、アトピー性皮膚炎を有するイヌに投与することを含む、アトピー性皮膚炎を治療する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年７月２１日に作成されたＸＭＬファイルのファイル名は「２５２７０．ｘｍｌ」である。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出されたこの配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６３／２３５，２５９号（２０２１年８月２０日出願）および米国特許出願第６３／２３５，２６１号（２０２１年８月２０日出願）の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づく優先権を主張する。

【0003】

発明の分野
本発明は、イヌインターロイキン－４またはイヌインターロイキン－１３に結合する融合タンパク質を含む、イヌにおけるアトピー性皮膚炎を治療するための組成物に関する。組成物は、イヌアトピー性皮膚炎を治療するために使用することができる。

【背景技術】

【0004】

免疫系は、宿主を感染症および癌から保護するために協働して機能する常在および再循環する特殊な細胞のネットワークを含む。免疫系がこの機能を果たす能力は、白血球によって分泌され、まとめてインターロイキンと呼ばれるタンパク質群の生物学的活性に大きく依存する。よく研究されているインターロイキンの中には、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、およびインターロイキン－３１（ＩＬ－３１）として同定された３つの重要な分子がある。ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、特定の病原体（例えば、組織または管腔内に存在する寄生生物）に対する防御に必要な免疫応答の発生に関与する関連シグナル伝達経路における重要なサイトカインである。しかしながら、これらの２つのサイトカインは、ＩＬ－３１と共に、アトピー性皮膚炎を含むヒトおよび動物におけるアレルギー性疾患の病因にも関与している。

【0005】

アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、再発性の掻痒性および慢性炎症性皮膚疾患であり、ヒトにおける免疫系調節不全および表皮バリア異常を特徴とする。アトピー性皮膚炎の病理学的属性および免疫学的属性は、広範な調査の対象であった［Ｒａｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ＆Ａｌｌｅｒｇｙ－ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔ １０：４８６－４９６（２０１１）ａｎｄ Ｈａｒｓｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｓｕｒｇｅｒｙ ３２：１３２－１３９（２０１３）に概説されている］。アトピー性皮膚炎はまた、コンパニオンアニマル、特にイヌにおける一般的な状態であり、その有病率はイヌ集団の約１０～１５％であると推定されている。イヌおよびネコにおけるアトピー性皮膚炎の発病［Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄｓ １７２（８）：２０１－２０７（２０１３）に概説されている］は、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎の発病との有意な類似性を示し、これには、様々な免疫細胞による皮膚浸潤、ならびにＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－３１が優勢であることを含むＣＤ４^＋Ｔｈ２極性化サイトカイン環境が含まれる。

【0006】

ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、ＣＤ４^＋Ｔｈ２細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）、マクロファージ、肥満細胞および好塩基球を含む多くの細胞型によって分泌され得る密接に関連したタンパク質である。ＩＬ－４およびＩＬ－１３は、多くの重複する機能を示し、Ｔ細胞依存性体液性免疫応答の発生に重要である。ＩＬ－４およびＩＬ－１３の両方が、アトピー性皮膚炎に関与するシグナル伝達経路の一部である。ＩＬ－４は、共通γｃ鎖のモノマー（γｃ）およびＩＬ－４受容体アルファのモノマー（ＩＬ－４Ｒα）をそれぞれ含むヘテロ二量体受容体に結合し、ＩＬ－１３は、ＩＬ－１３受容体アルファ１のモノマー（ＩＬ１３Ｒα１）およびＩＬ－４Ｒαのモノマーをそれぞれ含むヘテロ二量体受容体に結合する。

【0007】

したがって、Ｔｈ２サイトカインＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－３１は、より良好な治療法を開発するための治療介入の対象であった。アトピー性皮膚炎の治療を補助することが証明されているおよび／またはそうすることが約束されていることが証明されている医薬としては、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤［例えば、米国特許第８，１３３，８９９号；米国特許第８，９８７，２８３号；国際公開第２０１８／１０８９６９号；米国特許出願公開第２０２０／０３３９５８５号を参照］、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害剤［例えば、米国特許第８，７５９，３６６号を参照］、およびＴＨ２細胞上で発現される化学誘引物質受容体相同分子に対するアンタゴニスト［例えば、米国特許第７，６９６，２２２号、米国特許第８，５４６，４２２号、米国特許第８，６３７，５４１号、および米国特許第８，５４６，４２２号を参照］を含む。さらに、米国特許出願公開第２０２０／００４８３２５号は、隣接するＩＬ－１３／ＩＬ－４受容体融合タンパク質を開示している。これらの融合タンパク質の設計は、ＩＬ－１３Ｒα１とＩＬ－４Ｒαとを、ＩＬ－１３Ｒα１がリンカーと呼ばれる非自己アミノ酸配列によってＩＬ－４Ｒαに連結され、隣接する受容体もまた第２の非自己アミノ酸リンカーを有する融合パートナーに連結され得る隣接した配置で一緒にする。特に、使用されるリンカーは、翻訳後修飾、例えばグリコシル化を受ける可能性も有する。

【0008】

タンパク質リガンドまたはそのタンパク質受容体のいずれかに結合することによって特定の経路におけるシグナル伝達を遮断するためのモノクローナル抗体の治療的使用は、広く成功していることが証明されている。実際、そのようなモノクローナル抗体は、ヒト生物製剤の急速な成長において重要な役割を果たしており、２０１７年現在、ヒト生物製剤市場の２５％超を主張している。２０１４年に最も売り上げが高かった２０の薬物のうち、６つはモノクローナル抗体であった［Ｃｈｕｎｇ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４９：ｅ３０４；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｅｍｍ．２０１７．４６（２０１７）］。この傾向は成長を続けている。ヒトＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）に対して生じたモノクローナル抗体が開発されており、これらの抗体のいくつかは、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を治療するためのそれらの治療効果について広範囲に試験されている［例えば、米国特許出願公開第２０１５／００１７１７６号Ａ１を参照］。１つのそのような抗体（デュピルマブ）は、マウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子で置き換えたトランスジェニックマウスの免疫化によって産生され、したがって、得られた抗体は、例えばヒト化マウス抗体とは対照的にヒト抗体である。

【0009】

モノクローナル抗体治療薬のコストが高いため、最初はヒト生物製剤に限定されていたが、最近、生産コストの大幅な削減により、イヌモノクローナル製品が利用可能になった。初期の兆候は、そのようなモノクローナル抗体もコンパニオンアニマル市場において主要な治療薬になる可能性が高いことを示唆している。例えば、ヒトＩＬ－３１受容体アルファ（ＩＬ－３１ＲＡ）に対する抗体が試験され、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎に関連する掻痒症に対して有意な効果を有することが見出された［Ｒｕｚｉｃｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３７６（９），８２６－８３５（２０１７）］。さらに、イヌＩＬ－３１に対する抗体は、イヌにおけるアトピー性皮膚炎に関連する掻痒症に対して有意な効果を有することが示されている［米国特許第８，７９０，６５１号；米国特許第１０，０９３，７３１号］。このイヌ化抗体は、イヌＩＬ－３１受容体（ｃＩＬ－３１Ｒ）へのｃＩＬ－３１の結合を遮断し、それにより、ｃＩＬ－３１／ｃＩＬ－３１Ｒシグナル伝達経路を遮断する。したがって、ＩＬ－３１がその受容体ＩＬ－３１ＲＡに結合するのを遮断することにより、アトピー性皮膚炎に伴う掻痒症が軽減される。しかしながら、単にｃＩＬ－３１／ｃＩＬ－３１Ｒシグナル伝達経路を遮断するだけでは、アトピー性皮膚炎の掻痒作用が改善されるだけであり、イヌＩＬ－４（ｃＩＬ－４）またはイヌＩＬ－１３（ｃＩＬ－１３）／イヌＩＬ－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）シグナル伝達経路によって引き起こされる付随する皮膚炎症を止めることはない。

【0010】

より最近では、イヌＩＬ－４Ｒαに対するイヌＩＬ－４の結合を遮断する、イヌＩＬ－４Ｒαに対するイヌ化抗体も開示されている［参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１８／０３４６５８０号］。これらの抗体は、イヌＩＬ－４Ｒα細胞外ドメイン（ＥＣＤ）によるコンベンショナルな、すなわち非トランスジェニックマウスの免疫化によって産生された。ＩＩ型ＩＬ－４受容体はＩＬ－４Ｒα鎖およびＩＬ－１３Ｒα１鎖からなるため、イヌＩＬ－４およびイヌＩＬ－１３の両方がＩＩ型イヌＩＬ－４受容体に結合するのを遮断することができ、それによってアトピー性皮膚炎に関連する炎症を遮断するのに役立つ、イヌＩＬ－４Ｒαに対する抗体が得られている。

【0011】

しかしながら、アトピー性皮膚炎に関連する掻痒症の治療における最近の成功および関連する炎症の治療に関する最近の有望な開示にもかかわらず、この状態に罹患している多くの対象は、皮膚炎症に対する有意な効果を伴う急速な抗掻痒作用の開始を経験していない。したがって、この満たされていない医学的ニーズに対処するための代替療法を設計する必要がある。

【0012】

本明細書における任意の参考文献の引用は、そのような参考文献が本出願に対する「従来技術」として利用可能であることの承認として解釈されるべきではない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0013】

【特許文献1】米国特許第８，１３３，８９９号

【特許文献2】米国特許第８，９８７，２８３号

【特許文献3】国際公開第２０１８／１０８９６９号

【特許文献4】米国特許出願公開第２０２０／０３３９５８５号

【特許文献5】米国特許第８，７５９，３６６号

【特許文献6】米国特許第７，６９６，２２２号

【特許文献7】米国特許第８，５４６，４２２号

【特許文献8】米国特許第８，６３７，５４１号

【特許文献9】米国特許出願公開第２０２０／００４８３２５号

【特許文献10】米国特許出願公開第２０１５／００１７１７６号

【特許文献11】米国特許第８，７９０，６５１号

【特許文献12】米国特許第１０，０９３，７３１号

【特許文献13】米国特許出願公開第２０１８／０３４６５８０号

【非特許文献】

【0014】

【非特許文献1】Ｒａｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ＆Ａｌｌｅｒｇｙ－ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔ １０：４８６－４９６（２０１１）

【非特許文献2】Ｈａｒｓｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｓｕｒｇｅｒｙ ３２：１３２－１３９（２０１３）

【非特許文献3】Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄｓ １７２（８）：２０１－２０７（２０１３）

【非特許文献4】Ｃｈｕｎｇ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４９：ｅ３０４；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｅｍｍ．２０１７．４６（２０１７）

【非特許文献5】Ｒｕｚｉｃｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３７６（９），８２６－８３５（２０１７）

【発明の概要】

【0015】

本発明は、アトピー性皮膚炎を治療するために使用され得る組成物を提供する。組成物は、イヌＩＬ－４に結合する融合タンパク質を、イヌＩＬ－１３に結合する融合タンパク質と共に含み得る。特有の実施形態では、組成物は、一対のイヌインターロイキン－４受容体アルファ－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質（ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質）を含むホモ二量体と、一対のイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質（ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質）とを含むホモ二量体とを含み、一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するイヌインターロイキン－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）またはそのフラグメントの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と、ｃＦｃ（本明細書では第１のｃＦｃとして示される）とを含み、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の対の各々が、イヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１（ｃＩＬ－１３Ｒα１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、ｃＦｃ（本明細書では第２のｃＦｃとして示される）とを含む。特定の実施形態では、第１のｃＦｃおよび第２のｃＦｃは、同じである。他の実施形態では、第１のｃＦｃと第２のｃＦｃは、異なる。

【0016】

ホモ二量体組成物の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0017】

ホモ二量体組成物の特定の実施形態では、第２のｃＦｃが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特有の実施形態では、第１のｃＦｃおよび第２のｃＦｃは、同じである。他の実施形態では、第１のｃＦｃと第２のｃＦｃは、異なる。

【0018】

ホモ二量体組成物の特定の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌヒンジ領域（本明細書では第１のイヌヒンジ領域として示される）を更に含む。関連する実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌヒンジ領域（本明細書では第２のイヌヒンジ領域として示される）を更に含む。特有の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは同じである。他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは異なる。イヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間のリンカーとして、およびｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間のリンカーとして作用することができる。

【0019】

ホモ二量体組成物の特有の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0020】

ホモ二量体組成物の特定の実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特有の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは同じである。他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは異なる。特定の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＡ由来である。他の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＢに由来する。更に他の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＣ由来である。更に他の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＤ由来である。

【0021】

組成物の特定の実施形態では、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を含む。他の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤは、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を含む。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％の同一性を含み、かつｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤは、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％の同一性を含む。

【0022】

ホモ二量体組成物の具体的な実施形態ではでは、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用する。他の特定の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用する。

【0023】

ホモ二量体組成物のより具体的な実施形態では、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）中のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）中のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用し、第２のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用する。

【0024】

ホモ二量体組成物の特有の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）アミノ酸配列と同一のアミノ酸配列のみから構成される。関連する実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）アミノ酸配列と同一のアミノ酸配列のみから構成される。具体的な実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質およびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の両方は、イヌにおいて天然に見られるアミノ酸配列のみから構成され、その天然に存在する変異体を含む。

【0025】

ホモ二量体組成物の特定の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特有の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。

【0026】

ホモ二量体組成物の具体的な実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特有の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。

【0027】

本発明の別の態様では、組成物は、イヌインターロイキン－４受容体アルファ－ｃＦｃ融合タンパク質（ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ）およびインターロイキン－１３受容体アルファ１－ｃＦｃ融合タンパク質（ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ）を含むヘテロ二量体を含む。ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するイヌインターロイキン－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、ｃＦｃ（本明細書では第１のｃＦｃと表記する）とを含むのに対して、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１（ｃＩＬ－１３Ｒα１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、ｃＦｃ（本明細書では第２のｃＦｃと表記する）とを含む。特有の実施形態では、第１のｃＦｃ（すなわち、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質に含まれる）および第２のｃＦｃ（すなわち、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃに含まれる）の両方が、それらのヘテロ二量体会合を促進するように特異的に遺伝子改変されたＩｇＧ－Ｂである。

【0028】

したがって、ヘテロ二量体組成物の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。

【0029】

ヘテロ二量体組成物の他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。

【0030】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含む。

【0031】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗのアミノ酸置換を更に含む。

【0032】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。

【0033】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｓ／Ｌ１３４Ａ／Ｙ１７５Ｖ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｔ１３２Ｗ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。

【0034】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。

【0035】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｄ１６７Ｋ／Ｅ１２２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｄ／Ｒ１６０Ｄのアミノ酸置換を更に含む。

【0036】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含む。

【0037】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｔ／Ｔ１６２Ｆのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１３０Ｈ／Ｆ１７３Ａのアミノ酸置換を更に含む。

【0038】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含む。

【0039】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１７７Ｒのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｆ１７３Ｌのアミノ酸置換を更に含む。

【0040】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。

【0041】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。

【0042】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含む。

【0043】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｓ１１３Ｒ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔ／Ｓ１２０Ｃのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｅ／Ｋ１７７Ｗ／Ｙ１１５Ｃのアミノ酸置換を更に含む。

【0044】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含む。

【0045】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２３Ｎ／Ｄ１６７Ｖ／Ｆ１７３Ｔのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１３６Ｅ／Ｋ１７７Ｗのアミノ酸置換を更に含む。

【0046】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。

【0047】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｑ１１１Ｒ／Ｓ１１３Ｒ／Ｔ１３２Ｖ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｋ１２６Ｄ／Ｄ１６７Ｍ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。

【0048】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含む。

【0049】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｇ／Ｅ１２３Ｄ／Ｓ１３０Ｑ／Ｙ１７５Ａのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｙ１１５Ｓ／Ｋ１３６Ｙ／Ｔ１３２Ｍ／Ｋ１７７Ｖのアミノ酸置換を更に含む。

【0050】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含む。

【0051】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｋ／Ｔ１３２Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１１７Ｄ／Ｌ１３４Ｅのアミノ酸置換を更に含む。

【0052】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含む。

【0053】

ヘテロ二量体組成物の更に他の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含む。ヘテロ二量体組成物の更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｅ１２２Ｑ／Ｓ１３０Ｋのアミノ酸置換を更に含むアミノ酸配列を含み、一方、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、Ｌ１３４Ｄ／Ｋ１３６Ｓのアミノ酸置換を更に含む。

【0054】

ヘテロ二量体を含む組成物のより具体的な実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。

【0055】

ヘテロ二量体組成物の特有の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のｃＦｃは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0056】

ヘテロ二量体組成物の特定の実施形態では、第２のｃＦｃが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第２のｃＦｃは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特有の実施形態では、第１のｃＦｃおよび第２のｃＦｃは、同じである。他の実施形態では、第１のｃＦｃと第２のｃＦｃは、異なる。

【0057】

ヘテロ二量体組成物の特定の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌヒンジ領域（本明細書では第１のイヌヒンジ領域として示される）を更に含む。関連する実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌヒンジ領域（本明細書では第２のイヌヒンジ領域として示される）を更に含む。特有の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは同じである。他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは異なる。イヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間のリンカーとして、およびｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間のリンカーとして作用することができる。

【0058】

ヘテロ二量体組成物の特有の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0059】

ヘテロ二量体組成物の特定の実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。更なる他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特有の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは同じである。他の実施形態では、第１のイヌヒンジ領域と第２のイヌヒンジ領域とは異なる。特定の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＡ由来である。他の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＢに由来する。更に他の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＣ由来である。更に他の実施形態では、イヌヒンジ領域およびｃＦｃは両方ともＩｇＧＤ由来である。

【0060】

ヘテロ二量体組成物の具体的な実施形態ではでは、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用する。他の特定の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、第２のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用する。ヘテロ二量体組成物のより具体的な実施形態では、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）中のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーは、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）中のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、第１のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用し、第２のイヌヒンジ領域は、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤと第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用する。

【0061】

本発明の組成物のいずれも、抗掻痒抗体を更に含むことができる。特有の実施形態では、抗掻痒抗体は、イヌ抗体である。より特有の実施形態では、抗掻痒抗体は、イヌインターロイキン－３１（ｃＩＬ－３１）に対するイヌ抗体である。他の実施形態では、抗掻痒抗体は、イヌ化抗体である。特有の実施形態では、イヌ化抗掻痒抗体は、ｃＩＬ－３１に対する抗体である。より特有の実施形態では、ｃＩＬ－３１に対するイヌ化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。代替的な実施形態では、ｃＩＬ－３１に対するイヌ化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0062】

組成物の他の実施形態では、抗掻痒抗体は、イヌインターロイキン－３１Ｒ（ｃＩＬ－３１Ｒ）に対するイヌ抗体である。特定の実施形態では、抗掻痒抗体は、ｃＩＬ－３１Ｒに対するイヌ化抗体である。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－３１Ｒに対するイヌ化抗体は、配列番号２６または配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２９、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。更なる他の実施形態では、ｃＩＬ－３１Ｒに対するイヌ化抗体は、配列番号３３または配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８または配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－３１Ｒに対するイヌ化抗体は、配列番号４１、配列番号４２または配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４５、配列番号４６または配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0063】

本発明の組成物のいずれもまた、１つ以上の追加の治療成分を更に含むことができる。特有の実施形態では、追加の治療成分は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤である。他の実施形態では、追加の治療成分は、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害剤である。更に他の実施形態では、追加の治療成分は、ＴＨ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子に対するアンタゴニストである。

【0064】

具体的な実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、

【化1】

（式中、Ｒ^１は、ヒドロキシで置換されていてもよいＣ_１～４アルキル）、およびその薬学的に許容され得る塩である。

【0065】

代替的な実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、

【化2】

およびその薬学的に許容され得る塩である。

【0066】

更に他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、

【化3】

およびその薬学的に許容され得る塩である。

【0067】

本発明は更に、本発明の組成物のいずれかをアトピー性皮膚炎を有するイヌに投与することを含む、アトピー性皮膚炎を治療する方法を含む。

【0068】

本発明のこれらおよび他の態様は、以下の図面の簡単な説明および詳細な説明を参照することによってよりよく理解されよう。

【図面の簡単な説明】

【0069】

【図1】図１は、ＥＬＩＳＡによって評価される、キメラ抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体およびイヌ化抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体の結合活性を示す。キメララット／イヌ４４Ｅ２［●］。イヌ化４４Ｅ２：Ｈ２ｋ１［■］、Ｈ２ｋ２［▲］、Ｈ５ｋ１［▼］、およびＨ５ｋ２［◆］。

【図2】図２は、ＥＬＩＳＡによって評価される、キメラ抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体およびイヌ化抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体の結合活性を示す。キメララット／イヌ：１０Ａ１２［●］。イヌ化１０Ａ１２：Ｈ１Ｌ５［■］およびＨ２Ｌ６［▲］。

【図3】図３は、ＥＬＩＳＡによって評価される、キメラ抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体および対応するイヌ化抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体の結合活性を示す。キメララット／イヌ２８Ｆ１２。イヌ化２８Ｆ１２：Ｈ１ｋ３［■］、Ｈ２ｋ２［▲］、およびＨ２ｋ３［▼］。

【発明を実施するための形態】

【0070】

上記のタンパク質リガンドまたはそのタンパク質受容体のいずれかに結合することによって特異的経路におけるシグナル伝達を遮断するためのモノクローナル抗体の成功した治療的使用は、イヌＩＬ－４受容体アルファに対するイヌ化抗体を生成する推進力であった。したがって、マウス抗体をｃＩＬ－４Ｒαに対して産生させ、次いで、イヌ化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ｃＩＬ－４Ｒαとその２つの天然リガンド、すなわちｃＩＬ－４またはｃＩＬ－１３のいずれかとの結合を効果的に遮断することが示された。しかしながら、驚くべきことに、イヌ化マウスｃＩＬ－４Ｒα抗体をイヌに投与した後、治療したイヌにおいて異常に多量のいわゆる抗薬物抗体（ＡＤＡ）が検出された。更に予想外なことに、この問題は、試験した複数の異なるイヌ化マウスｃＩＬ－４Ｒα抗体について生じた。
ＡＤＡの誘導は、治療薬としてのモノクローナル抗体の開発における実質的な障害である。ＡＤＡは、動物対象に投与される治療用抗体（すなわち、薬物）に対して動物対象によって形成される抗体である。それらは、典型的には、治療用抗体の生物学的活性を中和し、および／またはそれらが投与される動物対象の全身循環からの治療用抗体の迅速なクリアランスをもたらす。ＡＤＡの問題は、抗体が最初に１つの種、例えばマウスまたはラットで生成されるが、第２の種、例えばイヌの治療用抗体を作製するために使用される場合、より深刻になり、これは、イヌ化マウスまたはラット抗体が構築される方法である。

【0071】

さらに、対応するイヌ化ラット抗体において標的イヌタンパク質に対する選択されたラット抗体の強い結合親和性を保持するために、一般に、マウスまたはラットＣＤＲのアミノ酸配列だけでなく、マウスまたはラット抗体のアミノ酸配列からの追加のアミノ酸残基も含めることが必要である。これらの追加のアミノ酸は、逆突然変異と呼ばれる。逆突然変異は、ＣＤＲの三次元構造を維持し、それによって、イヌ化マウスまたはラット抗体におけるイヌ標的タンパク質に対するマウスまたはラット抗体の強い結合親和性の保持を促進するのに役立つ。しかしながら、マウスまたはラットのアミノ酸残基の数を治療用のイヌ化マウスまたはラット抗体に増加させること、すなわち、マウスまたはラットのＣＤＲおよび関連する逆突然変異の付加によって、その抗体が治療されているイヌの免疫系によって外来として認識される可能性も増加し、ＡＤＡが生じる。

【0072】

上記のように、ＡＤＡの発生はほとんどの治療用抗体に共通の問題であるが、ＡＤＡの発生は通常、治療されている抗体の比較的小さな亜集団で起こるため、一般に管理可能な問題と見なされる。しかしながら、驚くべきことに、ＡＤＡを示したイヌ化マウスｃＩＬ－４Ｒα抗体で治療されたイヌの数は、予想外に多いことが判明した。この驚くべき結果の説明を任意の特定の分子機構に限定するものではないが、後になってみれば、ｃＩＬ－４Ｒαが抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現されるという事実が重要な因子であり得る。したがって、治療的にイヌ化されたｃＩＬ－４Ｒα抗体のＡＰＣのｃＩＬ－４Ｒαへの結合は、結合したｃＩＬ－４Ｒαの内在化をもたらし得る。これに続いて、イヌ化抗体のマウスＣＤＲ（またはマウスＣＤＲおよびマウス逆突然変異）を含有する配列を有するタンパク質フラグメントがイヌＴ細胞にその後提示され、これにより、治療動物においてＡＤＡのより高い誘導が観察され得る。

【0073】

ＡＤＡを示すイヌ化マウスｃＩＬ－４Ｒα抗体で治療したイヌの数が増加した原因にかかわらず、その発見は、ｃＩＬ－４またはｃＩＬ－１３／ｃＩＬ－４Ｒαシグナル伝達経路を遮断するための代替戦略の評価につながった。１つの可能性のある代替戦略は、上記のようにイヌＩＬ－４受容体およびイヌＩＬ－１３受容体の両方の一部であるｃＩＬ－４Ｒαではなく、ｃＩＬ－４およびｃＩＬ－１３を直接遮断することである。この目的を達成するための可能な方法論は、ＩＬ－４およびＩＬ－１３の２つの天然に存在する結合パートナーの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、すなわち、それぞれＩＬ－４ＲαのＥＣＤおよびＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤの使用によるものであろう。

【0074】

使用され得る現在一般的な方法論は、ＩＬ－４ＲαのＥＣＤおよびＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤの両方を含む隣接二重特異性融合タンパク質の使用であろう。隣接二重特異性融合タンパク質は、２つの別個のタンパク質分子を合成することを必要とするのではなく、単一の治療用タンパク質分子の合成を可能にする等、明確な利点を有する。さらに、隣接二重特異性ｃＩＬ－１３Ｒα１およびｃＩＬ－４Ｒα融合タンパク質の場合のように、二重特異性融合タンパク質の２つの機能的成分が機能的に関連している場合、第１の機能的成分（例えば、ｃＩＬ－１３Ｒα１）の結合が第２の機能的成分（例えば、ｃＩＬ－４Ｒα）の結合を促進すると予想されるので、相乗効果が予想されるであろう。隣接したＩＬ－１３／ＩＬ－４受容体融合タンパク質を使用するそのような戦略の１つが提案されている［米国特許出願公開第２０２０／００４８３２５号を参照］。そのような融合タンパク質の設計は、ＩＬ－１３Ｒα１とＩＬ－４Ｒαとを、ＩＬ－１３Ｒα１がＩＬ－４Ｒαに連結されている隣接した配置で一緒にする。さらに、隣接する受容体は、第２のリンカーで融合パートナーに連結されてもよい。しかしながら、そのような方法論の重大な欠点は、そのようなリンカーの使用であり、これは、融合した受容体の一般に非天然の構成要素であり、それにより、ＡＤＡ形成を誘導し得る潜在的ネオエピトープをもたらし得る。さらに、使用されるリンカーは、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）を受ける可能性を更に有し、これは潜在的に変化した構造を有する変異体分子を作成することができ、これは次にＡＤＡ形成を更にもたらし得る。

【0075】

二重特異性融合タンパク質を作製するための代替方法は、ＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤおよびＩＬ－４ＲαのＥＣＤの融合タンパク質の二重特異性ヘテロ二量体［国際公開第２０２０／０８６８８６号］の使用である。さらに別の推定戦略は、ＩＬ－１３ Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体と組み合わせたＩＬ－４ Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体を組み込んだイヌＦｃ融合タンパク質の使用である。いずれの場合も、これらのＥＣＤをイヌＩｇＧ（ｃＦｃ）、すなわちＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣまたはＩｇＧＤと融合させることができる。より好ましくは、融合タンパク質は、イヌＩｇＧヒンジ領域またはそのフラグメントを含むことができる。ＥＣＤとのｃＦｃを含めることには、（ｉ）融合タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長すること、および（ｉｉ）アフィニティークロマトグラフィーによる融合タンパク質の精製を補助することの２つの主な利点がある。したがって、ＩＬ－４ＲαまたはＩＬ－１３Ｒα１のいずれかのＥＣＤは、イヌＩｇＧヒンジ領域およびイヌＩｇＧ（ｃＦｃ）と融合することができる。特定の代替法では、得られた融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順序で、ｃＩＬ－１３Ｒα１、またはまたはｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤと、イヌヒンジ領域と、ｃＦｃとを含む。国際公開第０１／７７３３２号は、ＩＬ－１３Ｒα２およびイヌＩｇＧ Ｆｃ配列を含有するＦｃ融合タンパク質を開示している。しかしながら、これらのタンパク質は、ＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤとイヌＩｇＧ Ｆｃとの間にリンカーとして非自己グリシン残基（Ｇ）の挿入を含み、その後にイヌＩｇＧのＣＨ１ドメインからの９アミノ酸残基が続く。グリシルリンカーもＣＨ１ドメインからの９アミノ酸残基のストレッチも、本発明のＦｃ融合タンパク質には存在しない。国際公開第０１／７７３３２号に開示されているＦｃ融合タンパク質のように、グリシン残基の後にセリン残基が存在することは、融合タンパク質が細胞培養系で発現される場合に、融合タンパク質の酵素的グリコシル化の機会を生み出し、それにより、セリン残基上にある程度のレベルのグリコシル化を有する変異体分子の生成をもたらし得る。これは、工業規模での製造可能性の観点から望ましくない。さらに、ネイティブイヌＩｇＧ配列の一部ではないグリシン残基の挿入は、イヌの免疫系によって認識され、融合タンパク質に対する抗体の産生を刺激することができるネオエピトープを作成する可能性を作り出す。そのような抗体は、融合タンパク質の治療的有用性を無効にする可能性がある。

【0076】

したがって、本発明のｃＦｃ融合タンパク質の１つの利点は、それらが非自己アミノ酸リンカーを導入せず、それによって、治療された動物においてＡＤＡをもたらす可能性を最小限に抑えることである。いくつかの例外はあるが、^１融合ドメインを接続する非自己アミノ酸リンカーの非存在は、融合タンパク質ドメインの低収率、低効力および／またはミスフォールディングをもたらすことが一般に認められており、驚くべきことに、イヌヒンジ領域を有するｃＩＬ－４Ｒα、またはｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤおよびｃＦｃを含む融合タンパク質は、非自己アミノ酸リンカーを使用しなかったとしても、首尾よく産生および精製された。したがって、以下に示すように、これらの融合タンパク質は、治療価値が高いこと、およびＡＤＡリスクが低下していることの両方が証明された。

【0077】

さらに、アトピー性皮膚炎のためのより良好な治療法の必要性に応答して、本発明はまた、アトピー性皮膚炎に関与するｃＩＬ－４／ｃＩＬ－１３およびｃＩＬ－３１シグナル伝達経路の同時調節を達成して、皮膚炎症に対する有意な効果および皮膚バリア機能の改善を伴う抗掻痒作用の迅速な開始をもたらすことができる製剤および方法論を提供する。これらの製剤は、イヌＩＬ－３１Ｒαに結合するイヌ化ラット抗体と共に、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体およびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の使用、代替的には、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質およびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質のヘテロ二量体の使用を組み合わせる。

【0078】

したがって、本発明は、ｃＩＬ－４およびｃＩＬ－１３にそれぞれ結合し、これらのサイトカインのそれぞれの受容体への結合を遮断するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質およびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体およびヘテロ二量体の組成物を提供する。さらに、本発明は、ｃＩＬ－３１またはｃＩＬ－３１ Ｒに結合し、ｃＩＬ－３１のｃＩＬ－３１受容体への結合を遮断するイヌまたはイヌ化抗体を更に含む組成物を提供する。これらの組成物は、イヌのアトピー性皮膚炎を治療するために使用することができる。

【0079】

^１特定のヒトタンパク質、例えば、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）として公知のヒトＴＮＦＲ－ＦｃおよびＢＥＬＡＴＡＣＥＰＴ（登録商標）として公知のヒトＣＴＬＡ－４－Ｆｃを含むＦｃ融合タンパク質は、リンカーを含まない。

【0080】

略語
本発明の詳細な説明および実施例を通して、以下の略語を使用する。
ＡＤＣＣ 抗体依存性細胞傷害
ＣＤＣ 補体依存性細胞毒性
ＣＤＲ Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して定義される、免疫グロブリン可変領域中の相補性決定領域
ｃＦｃ イヌフラグメント結晶化可能領域
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣
ＥＣ５０ ５０％の有効性または結合をもたらす濃度
ＥＣＤ 細胞外ドメイン
ＥＬＩＳＡ 酵素結合免疫吸着アッセイ
ＦＲ 抗体フレームワーク領域：ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域。
ＨＲＰ セイヨウワサビペルオキシダーゼ
ＩＣ５０ ５０％阻害をもたらす濃度
ＩｇＧ 免疫グロブリンＧ
Ｋａｂａｔ Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔによって開拓された免疫グロブリンのアラインメントおよびナンバリングシステム［Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）］
ｍＡｂ モノクローナル抗体（ＭａｂまたはＭＡｂも同様）
ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応
ＰＫ 薬物動態
Ｖ領域 異なる抗体間で配列が可変であるＩｇＧ鎖のセグメント。
ＶＨ 免疫グロブリン重鎖可変領域
ＶＬ 免疫グロブリン軽鎖可変領域
Ｖｌ 免疫グロブリンラムダ軽鎖可変領域
Ｖｋ 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域

【0081】

定義
本発明がより容易に理解され得るように、特定の技術的および科学的用語を以下に具体的に定義する。本明細書の他の箇所で具体的に定義されていない限り、本明細書で使用される他の全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。

【0082】

添付の特許請求の範囲を含む本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」等の単語の単数形は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、それらの対応する複数の言及を含む。

【0083】

「活性化」は、細胞または受容体に適用される場合、文脈または明示的に別段の指示がない限り、リガンドによる細胞または受容体の活性化または治療を指す。「リガンド」は、天然および合成リガンド、例えば、サイトカイン、サイトカイン変異体、類縁体、ムテイン、および抗体に由来する結合化合物を包含する。「リガンド」はまた、小分子、例えばサイトカインのペプチド模倣物および抗体のペプチド模倣物も包含する。「活性化」は、内部機構ならびに外部または環境因子によって調節される細胞活性化を指し得る。

【0084】

「投与」および「治療」は、動物、例えばイヌ被験体、細胞、組織、器官または生物学的流体に適用される場合、外因性の医薬、治療、診断剤または組成物と、動物、例えばイヌ対象、細胞、組織、器官または生物学的流体との接触を指す。細胞の治療は、細胞への試薬の接触、ならびに流体が細胞と接触している流体への試薬の接触を包含する。

【0085】

「投与」および「治療」はまた、例えば、試薬、診断、結合化合物または別の細胞による細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏでの治療を意味する。「対象」という用語は、任意の生物、好ましくは動物、より好ましくは哺乳動物（例えば、イヌ、ネコまたはヒト）、最も好ましくはイヌを含む。

【0086】

「治療する」または「治療」は、治療剤、例えば本発明のｃＦｃ融合タンパク質を含む組成物を、１つ以上の症状を有するか、または薬剤が治療活性を有する状態を有すると疑われるイヌ対象または患者の内部または外部に投与することを意味する。

【0087】

典型的には、治療剤は、治療された対象または集団における１つ以上の疾患／状態症状を、任意の臨床的に測定可能な程度までそのような（１または複数の）症状の退縮を誘導するか、またはそのような症状の進行を阻害することによるかどうかにかかわらず、緩和および／または改善するのに有効な量で投与される。任意の特定の疾患／状態症状を緩和するのに有効な治療剤の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、患者の疾患状態、年齢および体重（例えば、イヌ）、ならびに対象において所望の応答を誘発する医薬組成物の能力等の要因に従って変動し得る。疾患／状態症状が緩和または改善されたかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために獣医または他の熟練したヘルスケア提供者によって通常使用される任意の臨床測定によって評価することができる。本発明の実施形態（例えば、治療方法または製造品）は、全ての対象において（１または複数の）標的疾患／状態症状を軽減するのに有効ではないかもしれないが、それは、当該分野で公知の任意の統計学的検定、例えば、スチューデントのｔ検定、カイ二乗検定、マン・ホイットニーによるＵ検定、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ検定）、ヨンクヒール・タープストラ検定およびウィルコクソン検定によって決定されるように、統計学的に有意な数の対象において（１または複数の）標的疾患／状態症状を軽減するはずである。

【0088】

ヒト、獣医学的（例えば、イヌ）または研究対象に適用される「治療」は、治療的処置ならびに研究および診断の用途を指す。ヒト、獣医学的（例えば、イヌ）、もしくは研究対象、または細胞、組織、もしくは器官に適用される「治療」は、本発明の抗体および／または融合タンパク質と、例えばイヌもしくは他の動物対象、細胞、組織、生理学的区画、または生理学的流体との接触を包含する。

【0089】

本明細書で使用される場合、「ネコ」という用語は、ネコ科の任意のメンバーを指す。このファミリーのメンバーには、野生、動物園、および家庭のメンバー（イエネコ、純血および／または雑種コンパニオンキャット、ショーキャット、実験室キャット、クローンキャット、および野生または野生のキャットを含む）が含まれる。

【0090】

本明細書で使用される場合、「イヌ」という用語は、特に明記しない限り、全ての家畜イヌ、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）またはイヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）を含む。

【0091】

イヌＩｇＧの４つの既知のＩｇＧ重鎖サブタイプおよび２つの既知の軽鎖サブタイプが存在する。４つのＩｇＧ重鎖は、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤと呼ばれる。これらの重鎖は、ＩｇＧ－Ａ（またはＩｇＧＡ）、ＩｇＧ－Ｂ（またはＩｇＧＢ）、ＩｇＧ－Ｃ（またはＩｇＧＣ）およびＩｇＧ－Ｄ（またはＩｇＧＤ）と呼ばれるイヌＩｇＧの４つの異なるサブクラスを表す。各重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）と、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と呼ばれる３つの定常ドメインとからなる。ＣＨ１ドメインは、「ヒンジ」または代替的には「ヒンジ領域」と呼ばれるアミノ酸配列を介してＣＨ２ドメインに接続している。これらの４つの重鎖ＩｇＧのＤＮＡおよびアミノ酸配列は、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．［Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８０：２５９－２７０（２００１）］によって最初に同定された。これらの重鎖ＩｇＧのアミノ酸およびＤＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースからも入手可能である。例えば、ＩｇＧ－Ａ重鎖のアミノ酸配列はアクセッション番号ＡＡＬ３５３０１．１を有し、ＩｇＧ－Ｂはアクセッション番号ＡＡＬ３５３０２．１を有し、ＩｇＧ－Ｃはアクセッション番号ＡＡＬ３５３０３．１を有し、ＩｇＧ－Ｄはアクセッション番号（ＡＡＬ３５３０４．１）を有する。イヌ抗体はまた、２種類の軽鎖、カッパおよびラムダを含有する。これらの軽鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ Ｄａｔａｂａｓｅから入手することができる。例えば、カッパ軽鎖アミノ酸配列はアクセッション番号ＡＢＹ ５７２８９．１を有し、ラムダ軽鎖はアクセッション番号ＡＢＹ ５５５６９．１を有する。

【0092】

「Ｆｃ領域」または単に「Ｆｃ」と略記される「フラグメント結晶化可能領域」は、Ｆｃ受容体と呼ばれる細胞表面受容体と相互作用する抗体のＣＨ２－ＣＨ３部分に対応する。本明細書で使用される場合、「イヌフラグメント結晶化可能領域」は、「ｃＦｃ領域」または単に「ｃＦｃ」と互換的に省略され、イヌ抗体由来のイヌフラグメント結晶化可能領域に対応する。４つのイヌＩｇＧの各々のイヌフラグメント結晶化可能領域（ｃＦｃ）は、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．［Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８０：２５９－２７０（２００１）；ｓｅｅ ａｌｓｏ，Ｂｅｒｇｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１５７：３１－４１（２０１４）］によって最初に記載された。

【0093】

本明細書で使用される場合、イヌインターロイキン－４受容体アルファ、イヌインターロイキン－１３受容体アルファ１、またはイヌインターロイキン－１３受容体アルファ２等の膜貫通インターロイキンの「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、細胞を取り囲む環境に自然に突出するインターロイキンタンパク質の部分を指す。ＥＣＤは、インターロイキンの膜貫通部分を含まない。イヌインターロイキン－４受容体アルファのＥＣＤは、イヌＩＬ－４に結合する。イヌインターロイキン－１３受容体アルファ１およびイヌインターロイキン－１３受容体アルファ２のＥＣＤは両方ともＩＬ－１３に結合する。

【0094】

本明細書で使用される場合、「人工タンパク質」および「人工タンパク質分子」は互換的に使用され、人工融合タンパク質等の天然には存在しないタンパク質（またはタンパク質の多量体、例えば二量体、ヘテロ二量体、四量体およびヘテロ四量体等）を示す。

【0095】

本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」は、ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上の異なるタンパク質由来のアミノ酸配列を含む人工タンパク質である。

【0096】

本明細書で使用される場合、「ｃＦｃ融合タンパク質」は、ヒンジ領域、例えばＩｇＧＢヒンジ領域－ＣＨ２－ＣＨ３を含むことができるＩｇＧ抗体のｃＦｃを別の生物学的に活性なタンパク質ドメインと結合させて、固有の構造および治療上の有用性を有する分子を生成する人工タンパク質である。例えば、イヌＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、イヌＩｇＧ Ｆｃ（ｃＦｃ）のＮ末端に連結されたイヌＩＬ－１３Ｒα１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。ＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤは、イヌヒンジ領域によってｃＦｃのＮ末端に連結され得る。本発明のｃＦｃ融合タンパク質は、ＩｇＧＢヒンジ領域およびＩｇＧＢ ｃＦｃの使用によって例示されるが、決してそのように限定されず、むしろ、それらは、ＩｇＧＡ、ＩｇＧＣおよびＩｇＧＤのｃＦｃを有し、ならびにＩｇＧＡ、ＩｇＧＣおよびＩｇＧＤのヒンジ領域を有してもよい対応する融合タンパク質を含む。したがって、イヌＦｃ融合タンパク質ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃは、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＡ－Ｆｃ、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＣ－ＦｃおよびｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＤ－Ｆｃも含むｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ属の１種である。

【0097】

本発明のｃＦｃ融合タンパク質の特定の成分（例えば、イヌＥＣＤ、イヌヒンジ領域、またはｃＦｃ）は、「イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む」は、イヌに見られる対応するタンパク質の領域の対応するアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列からなり、その天然に存在する変異体を含む。例えば、ｃＦｃ融合タンパク質の成分がｃＦｃ自体であり、ｃＦｃが「イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む」場合、ｃＦｃ融合タンパク質のｃＦｃ領域のアミノ酸配列は、イヌ抗体の天然に存在するイヌｃＦｃ領域またはその変異体のアミノ酸配列と同一である。

【0098】

本明細書で使用される場合、「イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列のみから構成される」ｃＦｃ融合タンパク質は、その天然に存在する変異体を含む、イヌに見られるタンパク質の対応する領域のアミノ酸配列と個々に同一のアミノ酸配列からなるｃＦｃ融合タンパク質の成分のみからなる。例えば、ｃＦｃ融合タンパク質が、３つの成分、すなわちイヌヒンジ領域によってｃＦｃのＮ末端に連結されたｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤからなるｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質であり、「イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列のみから構成」される場合、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の３つ全ての成分の個々のアミノ酸配列：（ｉ）ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤのアミノ酸配列、（ｉｉ）ｃＦｃのアミノ酸配列、および（ｉｉｉ）イヌヒンジ領域のアミノ酸配列は、イヌにおいて天然に見られるタンパク質（その天然に存在する変異体を含む）の対応する領域のアミノ酸配列と個々に同一である。

【0099】

本明細書で使用される場合、本発明のｃＦｃ融合タンパク質の「唯一のリンカー」という用語は、そのリンカーがそのｃＦｃ融合タンパク質における唯一のリンカーであることを示す。例えば、そのイヌヒンジ領域が、イヌヒンジ領域によってｃＦｃのＮ末端に連結されたｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤを含むｃＦｃ融合タンパク質によって含まれる唯一のリンカーである場合、そのイヌヒンジ領域は唯一のリンカーである。

【0100】

本明細書で使用される場合、「イヌインターロイキン－１３受容体アルファ１－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質」、「イヌインターロイキン－１３受容体アルファ１－ｃＦｃ融合タンパク質」、「イヌＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質」、または「ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質」は全て互換的に使用され、ペプチド結合を介してイヌＩｇＧ Ｆｃ（ｃＦｃ）に結合したｃＩＬ－１３Ｒα１［またはイヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するＥＣＤのフラグメント］の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。特有の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤ（またはｃＩＬ－１３に結合するＥＣＤのフラグメント）をｃＦｃに連結するイヌヒンジ領域を更に含む。ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、遺伝子工学を介してｃＦｃ（連結ヒンジ領域の有無にかかわらず）と共にｃＩＬ－１３Ｒα１ ＥＣＤ（またはｃＩＬ－１３に結合するＥＣＤのフラグメント）をコードする化学合成核酸から生成することができる。

【0101】

本明細書で使用される場合、「イヌインターロイキン－１３受容体アルファ２－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質」、「イヌインターロイキン－１３受容体アルファ２－ｃＦｃ融合タンパク質」、「イヌＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質」または「ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質」は全て互換的に使用され、ペプチド結合を介してイヌＩｇＧ Ｆｃ（ｃＦｃ）に結合したｃＩＬ－１３Ｒα２［またはイヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するＥＣＤのフラグメント］の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。特有の実施形態では、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質は、ｃＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤ（またはｃＩＬ－１３に結合するＥＣＤのフラグメント）をｃＦｃに連結するイヌヒンジ領域を更に含む。ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質は、遺伝子操作によってｃＦｃ（連結ヒンジ領域の有無にかかわらず）と共にｃＩＬ－１３Ｒα２ ＥＣＤ（またはｃＩＬ－１３に結合するＥＣＤのフラグメント）をコードする化学合成核酸から生成することができる。

【0102】

本明細書で使用される場合、「イヌインターロイキン－４受容体アルファ－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質」、「イヌインターロイキン－４受容体アルファ－ｃＦｃ融合タンパク質」、「イヌＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質」または「ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質」は全て互換的に使用され、ペプチド結合を介してイヌＩｇＧ Ｆｃ（ｃＦｃ）に結合したｃＩＬ－４Ｒα［またはイヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するＥＣＤのフラグメント］の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。特有の実施形態では、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤ（またはｃＩＬ－４に結合するＥＣＤのフラグメント）をｃＦｃに連結するイヌヒンジ領域を更に含む。ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、遺伝子工学を介してｃＦｃ（連結ヒンジ領域の有無にかかわらず）と共にｃＩＬ－４Ｒα ＥＣＤ（またはｃＩＬ－４に結合するＥＣＤのフラグメント）をコードする化学合成核酸から生成することができる。

【0103】

本明細書で使用される場合、「ｃＩＬ－４に結合するｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤのフラグメント」（または交換可能に、ｃＩＬ－４に結合するｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤの「そのフラグメント」）を含むｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で１００倍低いｃＩＬ－４に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で１０^２倍高い（例えば、１０^－９Ｍと比較して１０^－７Ｍ）。特定の実施形態では、ｃＩＬ－４に結合するｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤのフラグメントを含むｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で１０倍低いｃＩＬ－４に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で１０倍高い。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－４に結合するｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤのフラグメントを含むｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で５倍低いｃＩＬ－４に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で５倍高い。

【0104】

本明細書で使用される場合、「ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤのフラグメント」（または互換的に、ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤの「そのフラグメント」）を含むｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で１００倍低いｃＩＬ－１３に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で１０^２倍高い。特定の実施形態では、ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤのフラグメントを含むｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で１０倍低いｃＩＬ－１３に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で１０倍高い。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤのフラグメントを含むｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で５倍低いｃＩＬ－１３に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で５倍高い。

【0105】

本明細書で使用される場合、「ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤのフラグメント」（または互換的に、ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤの「そのフラグメント」）を含むｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で１００倍低いｃＩＬ－１３に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で１０^２倍高い。特定の実施形態では、ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤのフラグメントを含むｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で１０倍低いｃＩＬ－１３に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で１０倍高い。更に他の実施形態では、ｃＩＬ－１３に結合するｃＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤのフラグメントを含むｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質は、全長ＥＣＤを含む対応するｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質の結合親和性よりも最大で５倍低いｃＩＬ－１３に対する結合親和性を有する、すなわち、解離定数は最大で５倍高い。

【0106】

本明細書で使用される場合、本発明のイヌインターロイキン受容体－ｃＦｃ融合タンパク質の「ホモ二量体」は、同じＥＣＤ（または対応するリガンドに結合するそのＥＣＤのフラグメント）を最小限に有する２つの単量体融合タンパク質の二量体である。２つの単量体融合タンパク質はまた、一般に、同じｃＦｃおよび同じヒンジ領域を有する。例えば、イヌインターロイキン受容体－ｃＦｃ融合タンパク質がｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質である場合、ＥＣＤはＩＬ－４Ｒα ＥＣＤであり、リガンドはｃＩＬ－４である。ホモ二量体の２つのモノマーは、各モノマーのヒンジ領域内のシステイン残基によって形成されるジスルフィド結合によって一緒に保持される。例えば、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体は、２つのｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーを含み、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体は、２つのｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーを含む。

【0107】

本明細書で使用される場合、本発明のイヌインターロイキン受容体－ｃＦｃ融合タンパク質の「ヘテロ二量体」は、異なるＥＣＤ（またはそれぞれのＥＣＤの対応するリガンドに結合するそれぞれのＥＣＤのフラグメント）を有する２つの単量体融合タンパク質の二量体である。２つの単量体融合タンパク質は、一般に同じｃＦｃを有するが、特定の例では、２つの単量体を一緒に保つための修飾のためにわずかに異なり得る。例えば、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質およびｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質のヘテロ二量体は、１つのｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーおよび１つのｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーを含み、一方、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質およびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質のヘテロ二量体は、１つのｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーおよび１つのｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーを含む。そのような一実施形態は、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＺＷ－ＡおよびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ－ＺＷ－Ｂのヘテロ二量体であるｃＩＬ－４Ｒα－１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃである。別のそのような実施形態は、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＺＷ－ＡおよびｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ－ＺＷ－Ｂのヘテロ二量体であるｃＩＬ－４Ｒα－１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃである。

【0108】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、所望の生物学的活性を示す任意の形態の抗体を指す。抗体は、モノマー、二量体、またはより大きな多量体であり得る。したがって、それは最も広い意味で使用され、限定されないが、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、イヌ化抗体、完全イヌ抗体、キメラ抗体およびラクダ化単一ドメイン抗体を具体的に包含する。「親抗体」は、イヌ治療用抗体として使用するための抗体のイヌ化等の意図された使用のための抗体の改変の前に免疫系を抗原に曝露することによって得られる抗体である。

【0109】

本明細書で使用される場合、例えばイヌ受容体のその結合パートナー（リガンド）に対して「遮断」または「遮断している」または「結合を遮断する」本発明のｃＦｃ融合タンパク質または本発明で使用される抗体は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリー）で決定されるように、イヌ受容体のそのイヌリガンドへの結合、およびその逆の結合を（部分的または完全に）ブロックする抗体および／または融合タンパク質である。

【0110】

典型的には、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、その活性がモルベースで発現される場合、（親抗体と比較した場合）そのイヌ抗原結合活性の少なくとも１０％を保持する。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、親抗体としてイヌ抗原結合親和性の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％またはそれ以上を保持する。本発明の抗体または抗原に結合するフラグメントは、その生物学的活性を実質的に変化させない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異体」と呼ばれる）を含み得ることも意図される。

【0111】

「単離抗体」は、精製状態を指し、そのような文脈において、分子が、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物等の他の生物学的分子、または細胞残屑および増殖培地等の他の材料を実質的に含まないことを意味する。一般に、「単離」という用語は、本明細書に記載の結合化合物の実験的または治療的使用を実質的に妨げる量で存在しない限り、そのような材料が完全に存在しないこと、または水、緩衝液もしくは塩が存在しないことを指すことを意図しない。

【0112】

本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、第１の抗体由来の可変ドメインおよび第２の抗体由来の定常ドメインを有する抗体であり、第１および第２の抗体は異なる種に由来する［米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５（１９８４）］。典型的には、可変ドメインは、げっ歯類等の実験動物「親抗体」からの抗体から得られ、定常ドメイン配列は、動物対象抗体、例えばヒトまたはイヌから得られ、その結果、得られたキメラ抗体は、親（例えば、げっ歯類）抗体よりも、ヒトまたはイヌ対象においてそれぞれ有害な免疫応答を誘発する可能性が低くなる。

【0113】

本明細書で使用される場合、「イヌ化抗体」という用語は、イヌおよび非イヌ（例えば、ラット）抗体の両方からの配列を含む抗体の形態を指す。一般に、イヌ化抗体は、少なくとも１つ以上の、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非イヌ免疫グロブリン（例えば、以下に例示されるような６つのＣＤＲを含む）のものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全てまたは実質的に全て（および典型的には残りのフレームの全てまたは実質的に全て）がイヌ免疫グロブリン配列のものである。本明細書で例示されるように、イヌ化抗体は、イヌフレームまたは改変イヌフレームと共に、ラット抗イヌ抗原抗体由来の３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲの両方を含む。改変されたイヌフレームは、例えば、イヌ抗原へのその結合および／またはイヌ抗原の天然結合パートナーへのそのイヌ抗原の結合を遮断する能力を増加させるために、イヌ化抗体の有効性を更に最適化する、本明細書に例示される１つ以上のアミノ酸変化を含む。イヌＩＬ－３１およびＩＬ－３１Ｒαに結合するイヌ化マウスまたはラット抗イヌ抗体には、イヌＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣまたはＩｇＧＤ重鎖を含む本発明の抗体が含まれるが、これらに限定されない。

【0114】

各軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、インタクトな抗体は２つの結合部位を有する。二機能性抗体または二重特異性抗体を除いて、２つの結合部位は、一般に、同じである。

【0115】

典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは通常、フレームワーク領域によってアライメントされ、特定のエピトープへの結合を可能にする。一般に、Ｎ末端からＣ末端に向かって、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方が、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ［Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５^ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５（１９７８）；Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）］に従う。

【0116】

本明細書で使用される場合、「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基［すなわち、軽鎖可変ドメイン中のＣＤＲＬ１（またはＬＣＤＲ１）、ＣＤＲＬ２（またはＬＣＤＲ２）およびＣＤＲＬ３（またはＬＣＤＲ３）と、重鎖可変ドメイン中のＣＤＲＨ１（またはＨＣＤＲ１）、ＣＤＲＨ２（またはＨＣＤＲ２）およびＣＤＲＨ３（またはＨＣＤＲ３）］を含む。［抗体のＣＤＲ領域を配列によって定義する、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照；抗体のＣＤＲ領域を構造によって定義する、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）も参照］。

【0117】

本明細書で使用される場合、「フレームワーク」または「ＦＲ」残基という用語は、本明細書でＣＤＲ残基として定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。

【0118】

本明細書で使用される場合、「イヌフレーム」という用語は、本明細書でＣＤＲ残基として定義される超可変領域残基以外のイヌ抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を指す。イヌ化抗体に関して、大部分の実施形態では、天然のイヌＣＤＲのアミノ酸配列は、両方の鎖において対応する外来ＣＤＲ（例えば、マウス抗体またはラット抗体由来のもの）で置き換えられる。イヌ抗体の重鎖および／または軽鎖は、例えば、下記に例示されるように、および／または、米国特許第１０，１０６，６０７号Ｂ２に開示されるように、イヌ抗体内の外来ＣＤＲのコンフォメーションを保存するために、および／または、Ｆｃ機能を改変するために、いくつかの外来非ＣＤＲ残基を含有してもよい。

【0119】

本明細書で使用される場合、「抗掻痒剤」は、かゆみを阻害、軽減、および／または予防する傾向がある化合物、高分子、および／または製剤である。抗掻痒剤は、口語的に痒み止め薬と呼ばれる。

【0120】

本明細書で使用される場合、「抗掻痒抗体」は、特にアトピー性皮膚炎に関して、ヒト、イヌおよび／またはネコ等の哺乳動物を含む動物において抗掻痒剤として作用することができる抗体である。特有の実施形態では、抗掻痒抗体は、ＩＬ－３１またはその受容体ＩＬ－３１Ｒα等のＩＬ－３１シグナル伝達経路の特定のタンパク質に結合する。抗掻痒抗体のその対応する抗原（例えば、ＩＬ－３１またはＩＬ－３１Ｒα）への結合は、例えばＩＬ－３１とＩＬ－３１Ｒαとの結合を阻害し、この経路の成功したシグナル伝達を妨害および／または防止し、それにより、ＩＬ－３１シグナル伝達経路によって引き起こされるそう痒を阻害、軽減および／または防止する。

【0121】

本明細書で使用される場合、「抗炎症剤」は、炎症を引き起こす体内の特定の物質の相互作用を遮断することによって炎症を軽減する化合物、高分子、および／または製剤である。抗炎症剤は、特にアトピー性皮膚炎に関して、ヒト、イヌおよび／またはネコ等の哺乳動物を含む動物において抗炎症剤として作用することができるｃＦｃ融合タンパク質であり得る。特有の実施形態では、抗炎症性ｃＦｃ融合タンパク質は、ＩＬ－４またはＩＬ－１３等のＩＬ－４／ＩＬ－１３シグナル伝達経路中の特定のタンパク質に結合する。抗炎症性ｃＦｃ融合タンパク質のその対応する抗原（例えば、ＩＬ－４）への結合は、例えばＩＬ－４とＩＬ－４Ｒαとの結合を阻害し、この経路のシグナル伝達を妨害および／または防止し、それによってアトピー性皮膚炎に関連する慢性炎症を妨害または防止する。ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体とｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質のホモ二量体との組み合わせは、アトピー性皮膚炎の治療において抗炎症剤として作用する。

【0122】

本明細書で使用される場合、「二重特異性融合タンパク質」は、隣接したタンパク質、例えばペプチド結合を介して互いに接合された２つの異なる生物学的に活性なタンパク質ドメイン、例えばｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤ、ｃＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤ、ｃＦｃおよび任意のリンカーであり得る人工タンパク質である。代替的には、二重特異性融合タンパク質は、２つの異なる生物学的に活性なタンパク質ドメインが、ペプチド結合を介して融合パートナーと個々に結合しているが、共有結合または非共有結合のいずれかであり得る非ペプチド結合によってヘテロ二量体融合タンパク質において結合しているヘテロ二量体融合タンパク質であり得る。例えば、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーおよびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質モノマーのヘテロ二量体等の異なるＥＣＤを有する２つの単量体融合タンパク質を組み合わせることによって形成されるヘテロ二量体。

【0123】

「相同性」とは、２つのポリヌクレオチド配列間または２つのポリペプチド配列が最適にアラインメントされている場合の２つのポリペプチド配列間の配列類似性を指す。２つの比較された配列の両方の位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合、例えば２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で相同である。相同性のパーセントは、２つの配列が共有する相同位置の数を比較した位置の総数で割って１００を掛けたものである。例えば、配列が最適にアラインメントされたときに、２つの配列中の１０個の位置のうち６個が一致または相同である場合、２つの配列は６０％相同である。一般に、比較は、２つの配列が最大パーセントの相同性を与えるようにアラインメントされたときに行われる。

【0124】

「単離された核酸分子」は、単離されたポリヌクレオチドが自然界で見出されるか、または自然界では連結されていないポリヌクレオチドに連結されているポリヌクレオチドの全部または一部に関連しない、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡもしくは合成起源またはそれらの何らかの組み合わせのＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。本開示の目的のために、特定のヌクレオチド配列「を含む核酸分子」はインタクトな染色体を包含しないことを理解されたい。指定された核酸配列「を含む」単離された核酸分子は、指定された配列に加えて、最大１０または更には最大２０またはそれを超える他のタンパク質もしくはその一部またはフラグメントのコード配列を含み得るか、または列挙された核酸配列のコード領域の発現を制御する作動可能に連結された調節配列を含み得るか、および／またはベクター配列を含み得る。

【0125】

「制御配列」という語句は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーターが含まれ、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれてもよい。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを使用することが公知である。

【0126】

核酸は、別の核酸配列と機能的関係にある場合、「作動可能に連結される」である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのためのＤＮＡに作動可能に連結されているか、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されているか、またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結される」とは、連結されているＤＮＡ配列が隣接していることを意味し、分泌リーダーの場合、隣接しており、読み取り段階にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。

【0127】

本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」および「細胞培養物」という表現は互換的に使用され、そのような呼称は全て子孫を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」という用語は、移入の回数にかかわらず、初代対象細胞およびそれに由来する培養物を含む。意図的または不注意な突然変異のために、全ての子孫が正確に同一のＤＮＡ含有量を有するわけではないことも理解される。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が含まれる。明確な指定が意図されている場合、それは文脈から明らかであろう。

【0128】

配列同一性は、２つの配列が最適にアラインメントされたときに、２つのポリペプチドのアミノ酸が等価な位置で同じである程度を指す。本明細書で使用される場合、両方の配列のアミノ酸残基が同一である場合、１つのアミノ酸配列は第２のアミノ酸配列に対して１００％「同一」である。したがって、２つのアミノ酸配列のアミノ酸残基の５０％が同一である場合、アミノ酸配列は第２のアミノ酸配列に対して５０％「同一」である。配列比較は、所与のタンパク質、例えばタンパク質、または比較されるポリペプチドの一部に含まれるアミノ酸残基の隣接ブロックにわたって行われる。特有の実施形態では、そうでなければ２つのアミノ酸配列間の対応関係を変化させ得る選択された欠失または挿入が考慮される。

【0129】

配列類似性には、同一の残基および同一でない生化学的に関連するアミノ酸が含まれる。同様の特性を共有し、交換可能であり得る生化学的に関連するアミノ酸。

【0130】

「保存的に改変された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質の生物学的活性を変化させることなく変化が頻繁に起こり得るような、類似の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、主鎖立体配座および剛性等）を有する他のアミノ酸によるタンパク質中のアミノ酸の置換を指す。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換が生物学的活性を実質的に変化させないことを認識する［例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．；１９８７）］。さらに、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換を下記の表Ａに直接示す。

【0131】

【表1】

【0132】

本発明の抗体の機能保存的変異体も本発明によって企図される。本明細書で使用される場合、「機能保存的変異体」は、抗原親和性および／または特異性等の所望の特性を変化させることなく１つ以上のアミノ酸残基が変化した抗体またはフラグメントを指す。そのような変異体としては、アミノ酸を、上記の表Ａの保存的アミノ酸置換等の同様の特性を有するもので置き換えることが挙げられるが、これらに限定されない。

【0133】

核酸
本発明は、本発明のｃＦｃ融合タンパク質、および本発明で使用される抗体（例えば、以下の実施例を参照）と共に本発明のｃＦｃ融合タンパク質を含む組成物を含む。

【0134】

提供されるｃＦｃ融合タンパク質をコードする核酸および本発明で使用される免疫グロブリンポリペプチドも本発明に含まれ、比較がＢＬＡＳＴアルゴリズムによって行われる場合、本明細書において提供されるイヌ化抗体のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一、好ましくは少なくとも約８０％同一、より好ましくは少なくとも約９０％同一、最も好ましくは少なくとも約９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）であるアミノ酸配列を含み、アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列間の最大一致を与えるように選択される。本発明は更に、融合タンパク質および／または免疫グロブリンポリペプチドをコードする核酸を提供し、比較がＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いて行われる場合、参照アミノ酸配列のいずれかと少なくとも約７０％の類似性、好ましくは少なくとも約８０％の類似性、より好ましくは少なくとも約９０％の類似性、最も好ましくは少なくとも約９５％の類似性（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）であるアミノ酸配列を含み、アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列間の最大一致を与えるように選択される。

【0135】

本明細書で使用される場合、ヌクレオチドおよびアミノ酸の配列同一性パーセントは、アライメントデフォルトパラメータおよび同一性のデフォルトパラメータを用いて、Ｃ、ＭａｃＶｅｃｔｏｒ（ＭａｃＶｅｃｔｏｒ，Ｉｎｃ．ノースカロライナ州ケアリー２７５１９）、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．、メリーランド州）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ ＰＬＣ（１９９６）およびＣｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズムを使用して決定することができる。これらの市販のプログラムを使用して、同じまたは類似のデフォルトパラメータを使用して配列類似性を決定することもできる。代替的には、例えば、デフォルトパラメータを使用するＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、ＧＣＧパッケージのプログラムマニュアル、バージョン７、ウィスコンシン州マディソン）パイルアッププログラムを使用して、デフォルトフィルタ条件下でのＡｄｖａｎｃｅｄ Ｂｌａｓｔ検索を使用することができる。

【0136】

以下の参考文献は、配列分析にしばしば使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関する：ＢＬＡＳＴ ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｇｉｓｈ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６－２７２（１９９３）；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１－１４１（１９９６）；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９９７）；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９－６５６（１９９７）；Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９－１６３（１９９３）；Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７－７０（１９９４）；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ ＳＣＯＲＩＮＧ ＳＹＳＴＥＭＳ：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．” ｉｎ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（ｅｄ．），ｐｐ．３４５－３５２，（１９７８）；Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．” ｉｎ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．”（１９７８），Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（ｅｄ．），ｐｐ．３５３－３５８（１９７８），Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５－５６５（１９９１）；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３：６６－７０（１９９１）；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５－１０９１９（１９９２）；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０－３００（１９９３）；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－２２６８（１９９０）；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５８７７（１９９３）；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２－２０３９（１９９４）；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．“Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．” ｉｎ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ，ｅｄ．），ｐｐ．１－１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９７）。

【0137】

本発明のｃＦｃ融合タンパク質（および本発明で使用される抗体）は、当技術分野で公知の方法によって組換え生産することができる。本明細書に開示される抗体またはフラグメントの発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含む。これらには、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ－２９３細胞およびいくつかの他の細胞株が含まれる。哺乳動物宿主細胞には、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスターの細胞が含まれる。どの細胞株が高い発現レベルを有するかを決定することによって、特に好ましい細胞株を選択する。使用され得る他の細胞株は、Ｓｆ９細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞等の昆虫細胞株である。重鎖またはその抗原結合部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合フラグメントをコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、またはより好ましくは、宿主細胞が成長している培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたって宿主細胞を培養することによって産生される。

【0138】

抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。さらに、産生細胞株からの本発明の抗体（またはそれからの他の部分）の発現は、いくつかの公知の技術を用いて増強することができる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、特定の条件下で発現を増強するための一般的なアプローチである。ＧＳ系は、欧州特許第０２１６８４６号、第０２５６０５５号、および第０３２３９９７号、ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号に関連して全体的または部分的に論じられている。

【0139】

医薬組成物および投与
本発明の抗体および／または融合タンパク質を含む医薬組成物または無菌組成物を調製するために、これらの抗体および／または融合タンパク質を薬学的に許容され得る担体または賦形剤と混合することができる［例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照］。

【0140】

治療剤および診断剤の製剤は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液の形態の許容され得る担体、賦形剤または安定剤と混合することによって調製され得る［例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ］。一実施形態では、本発明の抗体および／または融合タンパク質は、ｐＨ５～６の酢酸ナトリウム溶液中で適切な濃度に希釈され、等張性のためにＮａＣｌまたはスクロースが添加される。安定性を高めるために、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０等の追加の薬剤を添加してもよい。

【0141】

単独でまたは別の薬剤と組み合わせて投与される抗体組成物の毒性および治療有効性は、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ_５０（集団の５０％において治療有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数（ＬＤ_５０／ＥＤ_５０）である。特定の態様では、高い治療指数を示す抗体が望ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、イヌにおける使用のための投薬量の範囲を定式化する際に使用することができる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ_５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。

【0142】

投与様式は様々であり得る。適切な投与経路としては、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口、筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮、または動脈内が挙げられる。特有の実施形態では、本発明の抗体および／または融合タンパク質は、注射等の侵襲的経路によって投与することができる。本発明の更なる実施形態では、本発明の抗体および／または融合タンパク質、またはその医薬組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、または吸入によるエアロゾル送達によって投与される。非侵襲的経路（例えば、経口；例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も本発明の範囲内である。

【0143】

組成物は、当技術分野で公知の医療機器を用いて投与することができる。例えば、本発明の医薬組成物は、例えばプレフィルドシリンジまたは自動注射器を含む皮下注射針での注射によって投与することができる。本明細書に開示される医薬組成物はまた、無針皮下注射装置、例えば、米国特許第６，６２０，１３５号；第６，０９６，００２号；第５，３９９，１６３号；第５，３８３，８５１号；第５，３１２，３３５号；第５，０６４，４１３号；第４，９４１，８８０号；第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置を用いて投与されてもよい。

【0144】

本明細書に開示される医薬組成物はまた、注入によって投与され得る。医薬組成物を投与する周知のインプラントおよびモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号（制御された速度で薬剤を分配するための植込み型微量注入ポンプを開示する）；米国特許第４，４４７，２３３号（正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示する）；米国特許第４，４４７，２２４号（連続薬物送達のための可変流量植込み型注入装置を開示する）；米国特許第４，４３９，１９６号（マルチチャンバ区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示する）が挙げられる。他の多くのそのようなインプラント、送達システム、およびモジュールは、当業者に周知である。

【0145】

代替的には、本発明のｃＦｃ融合タンパク質（および場合により本発明で使用される抗体）を含む組成物を、全身的ではなく局所的に、しばしばデポー製剤または持続放出製剤で投与してもよい。

【0146】

投与レジメンは、治療用抗体および／またはｃＦｃ融合タンパク質の血清または組織ターンオーバー速度、症状のレベル、治療用抗体および／またはｃＦｃ融合タンパク質の免疫原性、ならびに生物学的マトリックス中の標的細胞の接近可能性を含むいくつかの因子に依存する。好ましくは、投与レジメンは、標的疾患／状態の改善をもたらすのと同時に望ましくない副作用を最小限に抑えるのに十分な治療用抗体および／またはｃＦｃ融合タンパク質を送達する。したがって、送達される生物学的製剤の量は、部分的には、特定の治療用抗体および／または融合タンパク質ならびに治療される状態の重症度に依存する。適切な用量の治療用抗体を選択する際の指針が利用可能である［例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ（１９９６）；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９１）；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９３）；Ｂａｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８（２００３）；Ｍｉｌｇｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３（１９９９）；Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２（２００１）；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９（２０００）；Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２（２００３）；Ｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２（２０００）］。

【0147】

適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られているまたは疑われるパラメータまたは因子を使用して、獣医によって行われる。一般に、用量は、最適用量よりも幾分少ない量で始まり、その後、任意の負の副作用に対して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、少しずつ増加する。重要な診断手段には、症状のものが含まれる。

【0148】

本発明のｃＦｃ融合タンパク質を含む組成物は、単独で、または本発明で使用される抗体と共に、連続注入によって、または例えば、毎日、週に１～７回、毎週、隔週、毎月、隔月、四半期ごと、半年ごと等に投与される用量によって提供され得る。用量は、例えば、静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、脳内、脊髄内、または吸入によって提供され得る。総毎週用量は、一般に少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上である［例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７－４３４（２００３）；Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２－１６９８（２００２）；Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１－４５６（１９９９）；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３－１４４（２００３）を参照］。イヌの血清中の本発明のｃＦｃ融合タンパク質の所定の標的濃度、例えば０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌ以上を達成するための用量も提供され得る。他の実施形態では、本発明のｃＦｃ融合タンパク質は、１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００または２５００ｍｇ／対象で、毎週、隔週、「４週間毎に」、毎月、隔月または四半期ごとに皮下または静脈内投与される。

【0149】

本明細書で使用される場合、「阻害する」または「治療する」または「治療」は、障害もしくは状態に関連する症状の発症の延期および／またはそのような障害もしくは状態の症状の重症度の低下を含む。この用語は更に、既存の制御されないまたは望ましくない症状を改善すること、追加の症状を予防すること、およびそのような症状の根本的な原因を改善または予防することを含む。したがって、この用語は、障害、状態および／もしくは症状を有するか、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発症する可能性を有する脊椎動物対象（例えば、イヌ）に有益な結果が与えられたことを意味する。

【0150】

本明細書で使用される場合、「治療有効量」、「治療有効用量」および「有効量」という用語は、単独でまたは追加の治療剤と組み合わせて細胞、組織または対象、例えばイヌに投与した場合に、疾患もしくは状態の１つ以上の症状またはそのような疾患もしくは状態の進行の測定可能な改善を引き起こすのに有効な本発明のｃＦｃ融合タンパク質の量を指す。治療有効用量は更に、症状の少なくとも部分的な改善、例えば関連する医学的状態の治療、治癒、予防もしくは改善、またはそのような状態の治療、治癒、予防もしくは改善の速度の増加をもたらすのに十分な抗体および／または融合タンパク質の量を指す。組み合わせに適用される場合、治療有効用量は、組み合わせて投与されるか、連続的に投与されるか、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす有効成分の組み合わせ量を指す。有効量の治療薬は、診断尺度またはパラメータの少なくとも１０％、通常、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％の改善をもたらすであろう。有効量はまた、症状の重症度を評価するために主観的尺度が使用される場合に主観的尺度の改善をもたらすことができる。

【0151】

他の併用療法
本発明のｃＦｃ融合タンパク質を含む組成物（本発明で使用される抗体を含むまたは含まない）は、１つ以上の追加の治療成分を含むことができる。治療成分のそのようなファミリーの１つは、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤である。このタイプの特有の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、

【化4】

（式中、Ｒ^１は、ヒドロキシで置換されていてもよいＣ_１～４アルキルである）の化学式およびその薬学的に許容され得る塩［米国特許第８，１３３，８９９号；米国特許第８，９８７，２８３号］を含む。より具体的には、ＪＡＫ阻害剤は、オクラシチニブであり、更により具体的には、オクラシニウムマレエートである。

【0152】

ＪＡＫ３と比較してＪＡＫ１を優先的に阻害する代替のＪＡＫ阻害剤は、１－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－シアノテトラヒドロピラン－３－イル］－３－［（２－フルオロ－６－メトキシ－４－ピリジル）アミノ］ピラゾール－４－カルボキサミドであり、

【化5】

の化学式、およびその薬学的に許容され得る塩［国際公開第２０１８／１０８９６９号を参照］を含む。

【0153】

更に別の代替のＪＡＫ阻害剤は、３－アゼチジンアセトニトリル、１－（シクロプロピルスルホニル）－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］－（供元：ＣＡＳ）｛１－（シクロプロパンスルホニル）－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル（供給元：ＵＳＡＮ Ｐｒｏｇｒａｍ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｕｌｔａｎｔ）とも呼ばれ、

【化6】

の化学式、およびその薬学的に許容され得る塩［米国特許出願公開第２０２０／０３３９５８５号を参照］を含む。

【0154】

本発明の組成物に添加され得る別の治療成分は、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害剤であり得る。そのようなＳＹＫ阻害剤の１つは、（１Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－４－｛５－［３－メチル－５－（４－メチル－ピリミジン－２－イルアミノ）－フェニル］－１，３－チアゾール－２－イル｝－シクロヘキサンカルボン酸またはその薬学的に許容され得る塩［例えば、米国特許第８，７５９，３６６号を参照］である。

【0155】

さらに、本発明の組成物に添加することができる更に別の治療成分は、

【化7】

の化学式およびその薬学的に許容され得る塩を含むＴＨ２細胞上で発現される化学誘引物質受容体相同分子に対するアンタゴニスト［米国特許第７，６９６，２２２号、米国特許第８，５４６，４２２号、米国特許第８，６３７，５４１号、国際公開第２０１０／０９９０３９号、国際公開第２０１０／０３１１８３号、および米国特許第８，５４６，４２２号も参照］であり得る。

【0156】

これらの追加の治療成分は、本発明の抗体および／または融合タンパク質を含む組成物の投与前、投与と併せて、または投与後に、イヌ対象に投与することができる。

【0157】

上記のＪＡＫ阻害剤、ＳＹＫ阻害剤、または化学誘引物質受容体相同分子の予防的または治療的用量の大きさは、当然のことながら、治療される状態の性質および重症度、ならびに特定の阻害剤およびその投与経路によって変化する。これはまた、個々のイヌの年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組み合わせおよび応答を含む様々な因子に従って変動する。一般に、１日用量は、イヌの体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～約１０ｍｇである。別の実施形態では、１日用量は、イヌの体重１ｋｇ当たり約０．２ｍｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、１日用量は、イヌの体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇである。一方、場合によっては、これらの制限外の投与量を使用する必要があり得る。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される宿主および特定の投与様式に応じて変化する。例えば、経口投与を意図した製剤は、全組成物の約５～約９９．９５パーセントで変動し得る適切で便利な量の担体材料と配合された０．０５ｍｇ～５ｇの活性剤を含有し得る。投薬単位形態は、一般に、約０．１ｍｇ～約０．４ｇの有効成分、典型的には０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇまたは４００ｍｇを含有する。

【0158】

［実施例］
［実施例１］
ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質
組換え融合タンパク質の生成：
下記の表２Ｂおよび表２Ｃに列挙される組換え融合タンパク質を、選択された融合タンパク質のための正確なアミノ酸配列をそれらに提供した後、商業的製造業者から得た。アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ等の公的に入手可能なタンパク質データベースから得ることができ、例えば、全長アミノ酸配列のアクセッション番号には、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）インターロイキン－４受容体サブユニットアルファアイソフォームＸ１のアクセッション番号ＸＰ＿０２２２７５６３６．１、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－１アイソフォームＸ２のアクセッション番号ＸＰ＿０３８３０６６３３．１、およびイヌ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２前駆体のアクセッション番号ＮＰ＿００１００３０７５．１が含まれる。典型的には、これらの融合タンパク質を組換え生産するために、イヌ融合タンパク質をコードするＤＮＡを化学合成し、次いで適切な発現ベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ３．４発現ベクター）にクローニングして、ＣＨＯまたはＨＥＫ－２９３細胞等の細胞内でタンパク質を生産する。したがって、市販の製造業者は、融合タンパク質のアミノ酸配列をコードする最適なヌクレオチド配列を選択し、核酸を化学的に合成し、対応する組換え融合タンパク質を産生する発現ベクターに核酸を挿入し、次いで発現した融合タンパク質を精製する。核酸配列は、典型的には、以下の工程を必要とするプロセスで商業的供給業者において製造される：
１．標的遺伝子配列に基づいて、約１００ヌクレオチドの長さを有するいくつかのオリゴヌクレオチドを設計および合成する（合成された重複オリゴヌクレオチドは、ＥＣＤ、ヒンジ領域、およびｃＦｃを含む）；
２．ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用してオリゴヌクレオチドを一緒に構築して全長遺伝子配列を得る；および
３．ＤＮＡゲル抽出キットを使用してＰＣＲ産物を精製し、その後のクローニング工程でインサートとして使用する。この場合、組換え融合タンパク質をＣＨＯ細胞で産生し、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して精製した。
本発明のｃＦｃ融合タンパク質をコードする核酸は、選択されたイヌインターロイキン受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメント、すなわちｃＩＬ－４Ｒα、ｃＩＬ－１３Ｒα１またはｃＩＬ－１３Ｒα２のコード配列、およびイヌＩｇＧヒンジ領域のコード配列をイヌＩｇＧ（ｃＦｃ）と共に含む。得られた融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順序で、ＥＣＤ、ヒンジ領域（太字）、およびｃＦｃを含む。ｃＦｃおよびヒンジ領域は、イヌＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣまたはＩｇＧＤに由来し得る。ｃＦｃ融合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期の延長を可能にするため、または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）もしくは補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）［例えば、米国特許第１０，１０６，６０７号Ｂ２を参照］等のいくつかのエフェクター機能を排除するためのアミノ酸置換を有してもよい。

【0159】

ホモ二量体の２つのモノマーは、各モノマーのヒンジ領域内のシステイン残基によって形成されるジスルフィド結合によって一緒に保持される。ホモ二量体タンパク質は、別個の宿主細胞（ＣＨＯ細胞等）で作製され、次いで、それらのそれぞれの産生細胞からの精製後に組み合わせることができる。ホモ二量体タンパク質は、ＩＶ、ＳＣ、ＩＰまたはＩＭ等の様々な経路を介してイヌに投与することができる。ホモ二量体タンパク質は、０．１ｕｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇまたはそれを超える範囲の用量で投与され得る。典型的には、ホモ二量体タンパク質は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与され得る。

【0160】

本発明のホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質の例は、以下のとおりである：
ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ［配列番号５］

【数1】

【0161】

ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ［配列番号６］

【数2】

【0162】

ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ［配列番号７］

【数3】

【0163】

［実施例２］
半減期が延長されたホモ二量体ｃＦｃ融合タンパク質
いわゆる新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）とＩｇＧ抗体との間の相互作用の構造および特徴を理解することは、ＩｇＧ抗体およびＦｃ融合タンパク質の血清半減期を改善する抗体またはＦｃ工学研究の基礎を提供した。タンパク質の血清半減期延長およびそのようなタンパク質の血清半減期を延長するアプローチの背後にある機構は、いくつかの研究者によって記載された［例えば、Ｋｏ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＤｒｕｇｓ ３５：１４７－１５７（２０２１）を参照］。半減期が延長された相同タンパク質は、上記の実施例１に記載されているように、所望のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列から合成され、組換え生産される。

【0164】

ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が延長された組換えｃＦｃ融合タンパク質の例を以下に提供する。これらの例では、イヌｃＦｃはＩｇＧＢであるが、本発明のｃＦｃ融合タンパク質における代替ｃＦｃ、すなわちＩｇＧＡ、ＩｇＧＣおよびＩｇＧＤの使用も本発明の一部である。

【0165】

イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃは、以下に提供される配列番号５１のアミノ酸配列を含むものとして、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．［Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，８０：２５９－２７０（２００１）］によって最初に定義された。

【0166】

【数4】

［配列番号５１］

【0167】

組換え融合タンパク質のｃＦｃ部分のアミノ酸配列は、弱酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ６．０）では野生型ｃＦｃよりも高い親和性結合をＦｃＲｎにもたらすと同時に、中性ｐＨ（例えば、ｐＨ７．０～７．２）では野生型ｃＦｃが示すものと同様の結合親和性を有するアミノ酸置換（太字および下線）を含む。各配列のヒンジ領域は太字であるが、下線が引かれていない。

【0168】

ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＹＴＥ［配列番号８］ＣＨ２ナンバリング（Ｌ１８Ｙ／Ａ２０Ｔ／Ｔ２２Ｅ）

【数5】

【0169】

ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＹＴＥ［配列番号９］ＣＨ２ナンバリング（Ｌ１８Ｙ／Ａ２０Ｔ／Ｔ２２Ｅ）

【数6】

【0170】

ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＹＴＥ［配列番号１０］ＣＨ２ナンバリング（Ｌ１８Ｙ／Ａ２０Ｔ／Ｔ２２Ｅ）

【数7】

【0171】

ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－Ｈ［配列番号１１］ＣＨ２ナンバリング（Ｎ２０２Ｈ）

【数8】

【0172】

ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＹＤ［配列番号１２］ＣＨ２ナンバリング（Ｌ１８Ｙ／Ｔ２２Ｄ）

【数9】

【0173】

ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＹＤ［配列番号１３］ＣＨ２ナンバリング（Ｌ１８Ｙ／Ｔ２２Ｄ）

【数10】

【0174】

太字のアミノ酸残基はヒンジ領域であり、太字および下線のアミノ酸残基は融合タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させるための置換である。

【0175】

［実施例３］
二重特異性Ｆｃ融合タンパク質
二重特異性ｃＦｃ融合タンパク質は、二重特異性ｃＦｃ融合タンパク質の２つのモノマーの各々が異なる標的タンパク質に結合するため、一般に、ホモ二量体ｃＦｃ融合タンパク質よりも良好な代替物と考えられる。理論的には、これにより、全体的な製造コストを大幅に低減することができる。したがって、生成された１つのそのような二重特異性ｃＦｃ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順序で、ＩＬ－１３Ｒα１のＥＣＤ、ＩｇＧＢのヒンジ領域およびＩｇＧＢのｃＦｃを含む第１のモノマーからなるヘテロ二量体を含んでいたのに対し、第２のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端の順序で、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤ、ＩｇＧＢのヒンジ領域およびＩｇＧＢのｃＦｃを含む。別の二重特異性ｃＦｃ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の順序で、ＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤ、ＩｇＧＢのヒンジ領域およびＩｇＧＢのｃＦｃを含む第１のモノマーからなるヘテロ二量体を含み、一方、第２のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端の順序で、ｃＩＬ－４ＲαのＥＣＤ、ＩｇＧＢのヒンジ領域およびＩｇＧＢのｃＦｃを含んでいた。

【0176】

二重特異性融合タンパク質を形成するためには、２つのＦｃ融合タンパク質のホモ二量体よりもヘテロ二量体の形成を促進するために、各結合パートナーの融合タンパク質のＦｃ部分にアミノ酸置換を行うことが重要である。ヘテロ二量体形成を促進するために使用され得るイヌＦｃ融合タンパク質のＦｃ部分における特定のアミノ酸置換のいくつかの可能性のある方法または組み合わせを以下の表１に提供する。これらの置換は、Ｆｃのヘテロ二量体化のためのノブ・イントゥ・ホール法に有利であるか、またはヘテロ二量体化を可能にするための異なるＦｃ鎖間の静電引力に有利である［これらのアミノ酸置換の包括的な考察については、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，１５４：３８－５０（２０１９）ａｎｄ Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ＆Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，ＭＡＢＳ，９：１８２－２１２（２０１７）を参照］。

【0177】

１つの二重特異性融合タンパク質ｃＩＬ－４Ｒα－１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃは、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－ＡおよびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－Ｂのヘテロ二量体である。別の二重特異性融合タンパク質ｃＩＬ－４Ｒα－１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃは、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－Ａと、

【0178】

ｃＩＬ－１３ Ｒα２－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－Ｂとのヘテロ二量体である。

【0179】

【表2】

【0180】

本発明の二重特異性Ｆｃ融合タンパク質のモノマーの例を以下に列挙し、アミノ酸置換を太字および下線で示す：

【0181】

ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－Ａ［配列番号１８］

【数11】

【0182】

ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－Ｂ［配列番号１９］

【数12】

【0183】

ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＩｇＧＢ－Ｆｃ－ＺＷ－Ｂ［配列番号２０］

【数13】

【0184】

４つのイヌＩｇＧの従来技術のアミノ酸配列：
ｃＩｇＧＡ［配列番号１］従来技術

【数14】

【0185】

ｃＩｇＧＢ［配列番号２］従来技術

【数15】

【0186】

ｃＩｇＧＣ［配列番号３］従来技術

【数16】

【0187】

ｃＩｇＧＤ［配列番号４］従来技術

【数17】

【0188】

４つのイヌＩｇＧのイヌＩｇＧヒンジ領域の従来技術のアミノ酸配列：
ｃＩｇＧＡヒンジ領域［配列番号２１］従来技術

【数18】

【0189】

ｃＩｇＧＢヒンジ領域［配列番号２２］従来技術

【数19】

^２このトレオニン（Ｔ）は、アラニン（Ａ）としても同定されている。

【0190】

ｃＩｇＧＣヒンジ領域［配列番号２３］従来技術

【数20】

【0191】

ｃＩｇＧＤヒンジ領域［配列番号２４］従来技術

【数21】

【0192】

ｃＩＬ－４Ｒα、ｃＩＬ－１３Ｒα１およびｃＩＬ－１３Ｒα２のＥＣＤの従来技術のアミノ酸配列
ｃＩＬ－４Ｒα［配列番号４８］従来技術

【数22】

【0193】

ｃＩＬ－１３Ｒα１［配列番号４９］従来技術

【数23】

【0194】

ｃＩＬ－１３Ｒα２［配列番号５０］従来技術

【数24】

【0195】

【表3】

【0196】

【表4】

【0197】

【表5】

【0198】

［実施例４］
Ｆｃ融合タンパク質のイヌＩＬ－４およびＩＬ－１３への結合
方法：
以下の表３および表４に提供されるｃＦｃ融合タンパク質の結合定数を、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＨＴＸを使用して決定した。全ての動態測定を、ＳＡ（登録商標）バイオセンサおよびＤＡＴＡ ＡＣＱＵＩＳＩＴＩＯＮ（登録商標）１２．０ソフトウェアを使用してＯＣＴＥＴ（登録商標）ＨＴＸによって行った。１０μｇ／ｍＬのビオチン標識抗原、イヌＩＬ－４（ｃＩＬ－４）またはイヌＩＬ－１３（ｃＩＬ－１３）のいずれかをＳＡ（登録商標）バイオセンサに１２０秒間ロードした。次に、ブロッキング相のために、バイオセンサを１×ｐＨ７．０のＴＢＳ／カゼイン緩衝液に６０秒間入れた。会合段階のために、抗原をロードしたバイオセンサを、１×ｐＨ７．０のＴＢＳ／カゼイン緩衝液中のｃＩＬ－４抗原またはｃＩＬ－１３抗原を認識する１μＭから１５．６ｎＭまでの野生型受容体Ｆｃ融合物、二重特異性受容体Ｆｃ融合物またはＦｃＲｎ変異体受容体Ｆｃ融合物の２倍連続希釈物に３０秒間入れた。最後のウェルは緩衝液のみであり、そのセンサを参照センサの減算に使用した。最後に、バイオセンサを１×ｐＨ７．０のＴＢＳ／カゼイン緩衝液に１２０秒間入れて解離相とした。次いで、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ １２．０ソフトウェアを使用して結果を分析し、１：１結合モデルを使用して曲線をフィッティングした。

【0199】

結果：
ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃおよびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ、ならびにｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃホモ二量体およびヘテロ二量体融合タンパク質の会合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄｉｓ）および解離定数（ＫＤ）を以下の表３および表４に示す。以下の表３から分かるように、ｃＩＬ－４を有する改変されていないｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃホモ二量体の結合定数（ＫＤ）は、約１×１０^－１２Ｍであった。顕著に対照的に、ｃＩＬ－４を有するヘテロ二量体二重特異性ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃのＫＤは、約１０，０００倍高かった（約１×１０^－８Ｍ）。換言すれば、ホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃは、ヘテロ二量体二重特異性ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃよりも約４桁強くｃＩＬ－４に結合する。注目すべきことに、改変されたホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＨのイヌＩＬ－４（１×１０^－１０）への結合についてのＫＤは、改変されていないｃＩＬ－４Ｒα－Ｆｃホモ二量体のＫＤよりもおよそ２桁高く、改変されたホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＹＴＥのｃＩＬ－４（１×１０^－１１）への結合のＫＤは、改変されたホモ二量体のＫＤよりもおよそ１桁高かった。さらに、ｃＩＬ－４へのヘテロ二量体二重特異性ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃの結合は、このアッセイによって検出不能であった。したがって、ホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃを改変してその半減期を増加させると、ホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＮＨおよびｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＹＴＥそれぞれに対するｃＩＬ－４に対する親和性が約１０～１００倍低下したが、ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃヘテロ二量体は、改変されていないｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃホモ二量体と比較してｃＩＬ－４に対する親和性が約４桁低下したことを示し、二量体ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃのｃＩＬ－４に対する親和性は非常に低く、この実験手順では検出できなかった。

【0200】

【表6】

【0201】

ｃＩＬ－１３との改変されていないｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃの結合定数（ＫＤ）は、約５×１０^－９Ｍ（以下の表４を参照）であった。ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃを改変してその半減期を更に増加させる、すなわちｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ－ＹＴＥを作製すると、ｃＩＬ－１３に対する親和性が約４倍減少し、すなわちＫＤが２×１０^－８Ｍに増加した。特に、ヘテロ二量体二重特異性ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃは、改変されていないＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃよりも８倍強いｃＩＬ－１３（約４×１０^－１０Ｍ、以下の表４を参照）結合を示した。これは、ｃＩＬ－４に全く同じヘテロ二量体が結合する場合とは直接対照的であり、上記で指摘したように、結合は、対応するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃホモ二量体に対してほぼ４桁減少した（上記の表３を参照）。これらの結果は、ヘテロ二量体を形成すると、ヘテロ二量体の２つの個々のモノマーのそれぞれの結合パートナーに対する結合親和性に劇的な差が生じ得ることを示している。

【0202】

以下の表４から、改変されていないｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃは、約７．５×１０^－１３ＭのＫＤを有するｃＩＬ－１３に極めて強く結合することが明らかである。実際、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃホモ二量体とｃＩＬ－１３との結合は、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃホモ二量体とｃＩＬ－１３との結合よりも３～４桁強い。ｃＩＬ－１３ Ｒα２－ｃＦｃをｃＩＬ－１３ Ｒα２－ｃＦｃ－ＹＴＥまたはｃＩＬ－１３ Ｒα２－ｃＦｃ－ＹＤのいずれかに改変してその半減期を延ばすと、ｃＩＬ－１３に対する結合親和性がわずかに増加した、すなわちＫＤが二分の一（約４．０×１０^－１３Ｍまで）減少した。驚くべきことに、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ－ＹＴＥまたはｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ－ＹＤの両方のホモ二量体は、約４×１０^－９Ｍ（以下の表４を参照）のＫＤを有するヘテロ二量体二重特異性ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃよりも約４桁強くｃＩＬ－１３に結合する。

【0203】

【表7】

【0204】

要約すると、ＩＬ－４に対する結合親和性は、ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃのホモ二量体が、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ－ＺＷ－ＢまたはｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃ－ＺＷ－Ｂのいずれかを含むｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ－ＺＷ－Ａのヘテロ二量体で置き換えられ、それぞれｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃおよびｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃを形成する場合に有意に低下するが、親和性の低下は、ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃヘテロ二量体の場合に実質的に大きい。一方、ＩＬ－１３の対応する結合親和性は、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃのホモ二量体がｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃヘテロ二量体で置き換えられた場合に増大し、一方、ＩＬ－１３の結合親和性は、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃのホモ二量体がｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃヘテロ二量体で置き換えられた場合に実質的に低下する。

【0205】

［実施例５］
ｃＦｃ融合タンパク質によるＳＴＡＴ－６リン酸化の阻害
ＤＨ８２細胞におけるＳＴＡＴ－６リン酸化の阻害によって測定される、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達を遮断するｃＦｃ融合タンパク質の能力を以下のように決定した：

【0206】

材料：
１． 活発に増殖しているＤＨ８２細胞：Ｍｅｒｃｋ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｌｏｔ：６２８－０１１、２４Ｏｃｔ１４
２． ＨＢＳＳ、１Ｘ：Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ２１－０２２－ＣＭ
３． ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ｐ－ＳＴＡＴ６（Ｔｙｒ６４１）アッセイキット：Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログＡＬＳＵ－ＰＳＴ６－Ａ１０Ｋ
４． 組換えイヌＩＬ－４：Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ：７５２－ＣＬ／ＣＦ
５ａ． ＩＬ－４研究のためのｃＦｃ融合タンパク質試料
（ｉ）ｃＩＬ４Ｒα－ｃＦｃ
（ｉｉ）ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃ
（ｉｉｉ）ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃ
５ｂ． ＩＬ－１３研究のためのｃＦｃ融合タンパク質試料：
（ｉ）ｃＩＬ１３Ｒα１－ｃＦｃ
（ｉｉ）ｃＩＬ１３Ｒα２－ｃＦｃ
（ｉｉｉ）ｃＩＬ４Ｒ－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃ
（ｉｖ）ｃＩＬ４Ｒ－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃ
６． Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（登録商標）Ｅｎｖｉｓｉｏｎについて

【0207】

方法：
１． 組織培養プレートにウェルあたり１×１０^５個のＤＨ８２細胞（２．５×１０^５細胞／ｍＬの密度で４０μＬ）を播種し、３７℃で２時間インキュベートした。
２． ｃＦｃ融合タンパク質を２０００ｎＭ（ウェル中の最終濃度５００ｎＭ）に予備希釈し、次いで、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で３倍段階希釈した。ＤＨ８２細胞を含む組織培養プレート上のそれぞれの位置に２０μＬ／ウェルを移すことによってタンパク質を添加した。
３． （ａ）イヌＩＬ－４をＨＢＳＳ中１０ｎｇ／ｍＬ（ウェル中２．５ｎｇ／ｍＬ）に希釈し、プレートの各ウェルに２０μＬ添加した。プレートを３７℃で１５分間インキュベートするか、または、代替的に、
（ｂ）イヌＩＬ－１３をＨＢＳＳ中２０ｎｇ／ｍＬ（ウェル中５ｎｇ／ｍＬ）に希釈し、２０μＬをプレートの各ウェルに添加した。プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。
４． プレートをインキュベーターから取り出し、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ｐ－ＳＴＡＴ－６アッセイキットからの２０μＬの４×溶解緩衝液をプレートの各ウェルに加えた。プレートを３５０ｒｐｍのプレートシェーカー上で室温にて１０分間撹拌した。
５． アクセプターミックスをＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ｐ－ＳＴＡＴ６アッセイキットから調製し、１ウェル当たり１５μＬを、９６ウェルの１／２エリアプレート中の３０μＬの細胞溶解物に添加した。プレートを密封し、３５０ｒｐｍで２分間撹拌し、次いで、室温で１時間インキュベートした。
６． ドナーミックスを、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ｐ－ＳＴＡＴ６アッセイキットから、照明を抑えた実験室で調製し、１５μＬ／ウェルを各プレートに添加した。プレートを密封し、箔で覆い、３５０ｒｐｍで２分間撹拌し、次いで、室温で１時間インキュベートした。
７． プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（登録商標）ＥｎＶｉｓｏｎのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ設定を使用して読み取った。

【0208】

結果：
（ａ）ＤＨ８２におけるｃＩＬ４Ｒα－ｃＦｃ、ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃ、およびｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃによるｃＩＬ－４媒介ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害についてのＩＣ５０を以下の表５Ａに提供する。見て分かるように、ホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃおよびヘテロ二量体二重特異性ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ－１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃの両方が、それぞれ約８０ｐＭおよび約５０ｐＭの濃度でＩＬ－４媒介ＳＴＡＴ６リン酸化の５０％を阻害するのに対して、ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ－１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃは、ｃＩＬ４Ｒα－ｃＦｃまたはｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃのいずれよりも３桁超高い濃度（すなわち、約０．２μＭ）でｃＩＬ－４媒介ＳＴＡＴ６リン酸化の５０％を阻害する。興味深いことに、ヘテロ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ１３Ｒ２αコンストラクトとは直接対照的に、ヘテロ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ１３Ｒ１αコンストラクトは、ホモ二量体ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃよりもｃＩＬ－４（表４を参照）に対して強くないにしても、少なくとも同様に結合し、この関係は表５ＡのＩＣ_５０データと一致する。

【0209】

（ｂ）ＤＨ８２細胞におけるｃＩＬ１３Ｒα１－ｃＦｃ、ｃＩＬ１３Ｒα２－ｃＦｃ、ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃ、およびｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃによるｃＩＬ－１３介在性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害についてのＩＣ_５０を以下の表５Ｂに提供する。見て分かるように、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃは、約１６５ｐＭの濃度でｃＩＬ－１３媒介ＳＴＡＴ６リン酸化の５０％を阻害するが、ｃＩＬ１３Ｒα１－ｃＦｃ、ｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃ、およびｃＩＬ４Ｒα－ＩＬ１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃは全て、ナノモル濃度をはるかに超えるｃＩＬ－１３媒介ＳＴＡＴ６リン酸化の５０％を阻害する。したがって、ｃＩＬ－１３介在性ＳＴＡＴ６リン酸化の５０％を阻害するｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ－１３Ｒα１＿ＺＷ１－ｃＦｃの濃度は、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃの場合よりも６倍低いが、依然としてｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃの場合よりも約２０倍高いのに対して、ｃＩＬ－１３介在性ＳＴＡＴ６リン酸化の５０％を阻害するｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ－１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃの濃度は、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃの場合よりも約２００倍高い。したがって、改変されていないｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃホモ二量体は、驚くべきことに、ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ－１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃよりもｃＩＬ－１３により強く結合する（上記の表４を参照）だけでなく、ｃＩＬ－４Ｒα－ＩＬ－１３Ｒα２＿ＺＷ１－ｃＦｃについて見出される濃度よりも実質的に低い濃度でｃＩＬ－１３媒介ＳＴＡＴ６リン酸化も一貫して阻害する（以下の表５Ｂを参照）。

【0210】

【表8】

【0211】

【表9】

【0212】

以下の表６は、得られた結果を要約しており、様々な結合パートナーの解離定数をそれぞれのＩＣ_５０と相関する。見て分かるように、最適なサイトカイントラップは、ｃＩＬ－１３Ｒα２－ｃＦｃのホモ二量体を有するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃのホモ二量体であるが、ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃのホモ二量体を有するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃのホモ二量体およびｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃを有するｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃのヘテロ二量体の両方も実行可能な代替物であると思われる。

【0213】

【表10】

【0214】

［実施例６］
イヌＩＬ－３１に対する従来技術のイヌ化抗体
本発明において有用であり得る抗体は、米国特許第９，２０６，２５３号Ｂ２および米国特許第１０，１５０，８１０号Ｂ２に記載されているものである。好ましくは、これらの抗体は、以下の軽鎖および重鎖配列を有する：

【0215】

マウス抗体クローンＭ１４およびイヌＩｇＧ－Ｂからのイヌ化重鎖配列：
［配列番号１４］従来技術

【数25】

【0216】

マウス抗体クローンＭ１４およびイヌ軽鎖定常領域由来のイヌ化軽鎖配列：［配列番号１５］従来技術

【数26】

【0217】

Ｚ－ＨＣ：イヌ化重鎖配列：［配列番号１６］従来技術

【数27】

【0218】

Ｚ－ＬＣ：イヌ化軽鎖配列：［配列番号１７］従来技術

【数28】

【0219】

【表11】

【0220】

［実施例７］
ＩＬ－３１Ｒαに対するイヌ化抗体
イヌＩＬ－３１Ｒαに対するラットモノクローナル抗体：
イヌＩＬ－３１Ｒαに対するモノクローナル抗体を、（毎回２５μｇの抗原／動物を使用して）イヌＩＬ－３１Ｒαの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）でラットを３～４週間にわたって複数回免疫することによって産生させた。免疫後、血清を各動物から回収し、ＥＬＩＳＡによってイヌＩＬ－３１Ｒα ＥＣＤに対して試験した。最も高いＩＬ－３１Ｒα ＥＣＤ反応性を有する動物のリンパ節細胞を骨髄腫ＳＰ２／０細胞株と融合させて、ハイブリドーマを産生した。融合の約１０日後、成長中のハイブリドーマ由来の上清を、ＩＬ－３１Ｒα ＥＣＤタンパク質被覆プレート上で、以下に記載されるプロトコルを使用してＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。３つのラットモノクローナル抗体、４４Ｅ３、１０Ａ１２および２８Ｆ１２をイヌ化のために選択した。これらのイヌ化抗体は、イヌＩＬ－３１Ｒαに強固に結合する。

【0221】

ＥＬＩＳＡの手順：
１． ９６ウェルのハーフエリアプレートを、２５μＬ／ウェルのＩＬ－３１Ｒα（ＰＢＳ緩衝液中１μｇ／ｍＬ）でコーティングする。プレートを４℃で一晩インキュベートする。
２． プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する
３． ブロッキング緩衝液（５％ＦＢＳを含むＰＢＳ）により、２５ｕｌ／ウェルでプレートを室温で３０分間ブロッキングする。
４． ２５ｕｌ／ウェルハイブリドーマ上清を９６ウェルプレートに移し、室温で６０分間インキュベートする。
５． ＰＢＳＴによってプレートを３回洗浄する。
６． ２５ｕｌ／ウェルの抗ラットＩｇＧ－ＨＲＰコンジュゲート、ブロッキング緩衝液中１：４０００希釈液をプレートに添加し、室温で６０分間インキュベートする。
７． プレートをＰＢＳＴで５回洗浄する。
８． ２０～３０分間の比色反応のために、ＴＭＢ系試薬をプレートに添加する。
９． ０．１６Ｍ硫酸で反応を停止する。
１０． プレートリーダーによってプレートを読み取る。

【0222】

これらの手順を使用して、イヌＩＬ－３１Ｒαと反応するいくつかのハイブリドーマ分泌抗体を同定した。
イヌ化抗体の作製およびイヌＩＬ－３１Ｒαへのイヌ化抗体の結合：
イヌＩＬ－３１Ｒαと反応性の選択されたラット抗体のＨＣおよびＬＣのヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を決定した。各抗体について３つのＨＣ ＣＤＲおよび３つのＬＣ ＣＤＲを表すアミノ酸配列も決定した。これらのＣＤＲを使用して、イヌＩＬ－３１Ｒα ＥＣＤに結合するイヌ化抗体を開発した。ＩＬ－３１Ｒαに対するイヌ化抗体の結合を以下のようにＥＬＩＳＡによって決定した：

【0223】

材料：
１． 抗イヌＩｇＧ（ｃＦｃ特異的）－ペルオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＳＡＢ３７００１０９－１．５ＭＧ）
２． ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ基質（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号３４０２８）
３． ＰＢＳ ｐＨ７．４（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号１００１０００１）
４． Ｔｗｅｅｎ２０を含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｔ９０３９－１０ＰＡＫ）

【0224】

方法：
１． １μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェルのＰＢＳ緩衝液中のｃＩＬ－３１Ｒαによって免疫プレートをコーティングする。プレートを３７℃で１～２時間または４℃で一晩インキュベートする。
２． ＴＢＳＴ緩衝液でプレートを３回洗浄する。
３． ブロッキング緩衝液（ＴＢＳＴ中０．５％ＢＳＡ）によってプレートを室温で４５～６０分間ブロッキングする。
４． 抗ｃＩＬ３１－Ｒα抗体を希釈プレート中のブロッキング緩衝液で三倍希釈し、希釈した抗体をｃＩＬ－３１Ｒα被覆プレートに移し、室温で４５～６０分間インキュベートする。
５． ＴＢＳＴでプレートを３回洗浄する。
６． １：２０００希釈ＨＲＰコンジュゲート抗イヌＩｇＧ Ｆｃをプレートに添加し、室温で４５～６０分間インキュベートする。
７． ＴＢＳＴによってプレートを３回洗浄する。
８． ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ基質を比色反応のためにプレートに１０～１５分間添加する。
９． １Ｍ Ｈ_３ＰＯ_４によって反応を停止させる。
１０． プレートを４５０ｎＭでプレートリーダーによって読み取る。

【0225】

結果：
図１は、ＥＬＩＳＡによって評価される、関連するキメラ抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体およびイヌ化抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体の結合活性を示す。ラット抗体４４Ｅ２の異なる設計をＥＬＩＳＡで評価した。ＥＬＩＳＡの結果は、全てのイヌ化抗体が、キメラ４４Ｅ２抗体のＥＣ５０に類似するＥＣ５０でイヌＩＬ－３１Ｒαに結合するが、ｃ４４Ｅ２ Ｈ５ｋ１は、対応するキメラ４４Ｅ２抗体のＥＣ５０に最も類似するＥＣ５０でイヌＩＬ－３１Ｒαに結合することを示している。

【0226】

図２は、ＥＬＩＳＡによって評価される、関連するキメラ抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体およびイヌ化抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体の結合活性を示す。ラット抗体１０Ａ１２の異なる設計をＥＬＩＳＡで評価した。ＥＬＩＳＡの結果は、イヌ化抗体の１つ（ｃ１０Ａ１２ Ｈ２Ｌ６）が、対応するキメラ１０Ａ１２抗体のＥＣ５０よりも更に低いＥＣ５０でイヌＩＬ－３１Ｒαに結合することを示している。

【0227】

図３は、ＥＬＩＳＡによって評価される、関連するキメラ抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体およびイヌ化抗イヌＩＬ－３１Ｒα抗体の結合活性を示す。ラット抗体２８Ｆ１２の異なる設計をＥＬＩＳＡで評価した。ＥＬＩＳＡの結果は、イヌ化抗体がイヌＩＬ－３１Ｒαに結合し、キメラ２８Ｆ１２抗体のＥＣ５０よりも更に低いＥＣ５０を有することを示している。

【0228】

以下は、本発明のキメラ抗体（ラット－イヌ）およびイヌ化抗体のアミノ酸配列の例である。ＣＤＲを表すアミノ酸に下線を引く。

【0229】

ｒ１０Ａ１２ＶＨ－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号２５］

【数29】

【0230】

ｃ１０Ａ１２ＶＨ１－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号２６］

【数30】

【0231】

ｃ１０Ａ１２ＶＨ２－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号２７］

【数31】

【0232】

ｒ１０Ａ１２ＶＬ－ｃＣｌ［配列番号２８］

【数32】

【0233】

ｃ１０Ａ１２ＶＬ４－ｃＣｌ［配列番号２９］

【数33】

【0234】

ｃ１０Ａ１２ＶＬ５－ｃＣｌ［配列番号３０］

【数34】

【0235】

ｃ１０Ａ１２ＶＬ６－ｃＣｌ［配列番号３１］

【数35】

【0236】

ｒ２８Ｆ１２ＶＨ－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号３２］

【数36】

【0237】

ｃ２８Ｆ１２ＶＨ１－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号３３］

【数37】

【0238】

ｃ２８Ｆ１２ＶＨ２－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号３４］

【数38】

【0239】

ｒ２８Ｆ１２ＶＬ－ｃＣｋ［配列番号３５］

【数39】

【0240】

ｃ２８Ｆ１２ＶＬ１－ｃＣｋ［配列番号３６］

【数40】

【0241】

ｃ２８Ｆ１２ＶＬ２－ｃＣｋ［配列番号３７］

【数41】

【0242】

ｃ２８Ｆ１２ＶＬ３－ｃＣｋ［配列番号３８］

【数42】

【0243】

ｃ２８Ｆ１２ＶＬ４－ｃＣｋ［配列番号３９］

【数43】

【0244】

ｒ４４Ｅ２ＶＨ－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号４０］

【数44】

【0245】

ｃ４４Ｅ２ＶＨ１－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号４１］

【数45】

【0246】

ｃ４４Ｅ２ＶＨ４－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号４２］

【数46】

【0247】

ｃ４４Ｅ２ＶＨ５－ｃＩｇＧＢｍ［配列番号４３］

【数47】

【0248】

ｒ４４Ｅ２ＶＬ－ｃＣｋ［配列番号４４］

【数48】

【0249】

ｃ４４Ｅ２ＶＬ１－ｃＣｋ［配列番号４５］

【数49】

【0250】

ｃ４４Ｅ２ＶＬ２－ｃＣｋ［配列番号４６］

【数50】

【0251】

ｃ４４Ｅ２ＶＬ４－ｃＣｋ［配列番号４７］

【数51】

【0252】

【表12】

【0253】

【表13】

【0254】

本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の様々な変更は、前述の説明から当業者には明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-04-17

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

イヌインターロイキン－４受容体アルファ－ｃＦｃ融合タンパク質（ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ）およびインターロイキン－１３受容体アルファ１－ｃＦｃ融合タンパク質（ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ）を含むヘテロ二量体を含む組成物であって、
前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質が、イヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するイヌインターロイキン－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第１のｃＦｃとを含み、かつ
前記ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質が、イヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１（ｃＩＬ－１３Ｒα１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第２のｃＦｃとを含み、
前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが同じであるか、または異なるかのいずれかである、組成物。

【請求項2】

一対のイヌインターロイキン－４受容体アルファ－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質（ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質）を含むホモ二量体と、一対のイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１－イヌフラグメント結晶化可能領域融合タンパク質（ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質）を含むホモ二量体とを含む組成物であって、
前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌインターロイキン－４（ｃＩＬ－４）に結合するイヌインターロイキン－４受容体アルファ（ｃＩＬ－４Ｒα）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第１のイヌフラグメント結晶化可能領域（ｃＦｃ）とを含み、かつ
前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、イヌインターロイキン－１３（ｃＩＬ－１３）に結合するイヌインターロイキン－１３受容体アルファ１（ｃＩＬ－１３Ｒα１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントと、第２のｃＦｃとを含み、
前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが同じであるか、または異なるかのいずれかである、組成物。

【請求項3】

前記第１のｃＦｃおよび前記第２のｃＦｃが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を個々に含む、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質が、第１のイヌヒンジ領域を更に含み、前記第１のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間のリンカーとして作用し、かつ
前記ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質が、第２のイヌヒンジ領域を更に含み、前記第２のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間のリンカーとして作用し、前記第１のイヌヒンジ領域および前記第２のイヌヒンジ領域が、同じであるか、または異なるかのいずれかである、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記第１のイヌヒンジ領域および前記第２のイヌヒンジ領域が、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を個々に含む、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記第１のｃＦｃが、配列番号２および配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、かつＬ１１７Ｙ／Ｆ１７３Ａ／Ｙ１７５Ｖのアミノ酸置換を更に含み、かつ
前記第２のｃＦｃが、配列番号２および配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有し、かつＴ１３２Ｌ／Ｒ１６０Ｌ／Ｔ１６２Ｗのアミノ酸置換を更に含む、
請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤが、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％の同一性を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤが、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％の同一性を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記第１のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用し、かつ前記ｃＩＬ－４Ｒαの前記ＥＣＤと前記第１のｃＦｃとの間の前記唯一のリンカーが、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列を含む、請求項４～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記第２のイヌヒンジ領域が、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間の唯一のリンカーとして作用し、前記ｃＩＬ－１３Ｒα１の前記ＥＣＤと前記第２のｃＦｃとの間の前記唯一のリンカーが、イヌにおいて天然に見られるタンパク質中のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）を含む、請求項４～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質が、イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列のみから構成される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記ｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質が、イヌにおいて天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列（その天然に存在する変異体を含む）と同一のアミノ酸配列のみから構成される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記ヘテロ二量体において、前記ｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃが配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃが配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項１、３～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記ホモ二量体において、前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２～１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

前記一対のｃＩＬ－４Ｒα－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号５、配列番号８、配列番号１１および配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記ホモ二量体において、前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記一対のｃＩＬ－１３Ｒα１－ｃＦｃ融合タンパク質の各々が、配列番号６および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記組成物が、イヌＩＬ－３１Ｒに対するイヌ化抗体およびイヌＩＬ－３１Ｒに対するイヌ抗体からなる群から選択される抗体を更に含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項19】

イヌＩＬ－３１Ｒに対する前記イヌ化抗体が、
（ｉ）配列番号３３および配列番号３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８および配列番号３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに
（ｉｉ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖
からなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害剤、またはＴＨ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子に対するアンタゴニストからなる群から選択される１つ以上の追加の成分を更に含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記ＪＡＫ阻害剤が、以下からなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物

【化1】

（式中、Ｒ^１は、ヒドロキシで置換されていてもよいＣ_１～４アルキルおよびその薬学的に許容され得る塩である）、

【化2】

およびその薬学的に許容され得る塩、ならびに

【化3】

およびその薬学的に許容され得る塩。

【請求項22】

請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物を、アトピー性皮膚炎を有するイヌに投与することを含む、アトピー性皮膚炎を治療する方法。

【請求項23】

イヌにおいて、アトピー性皮膚炎の治療に使用するための、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項24】

イヌにおいて、アトピー性皮膚炎の治療に使用するための医薬の調製における、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物の使用。

【国際調査報告】