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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-05
(54)【発明の名称】血友病Ａの治療における使用のための修飾コロイド粒子
(51)【国際特許分類】
A61K 47/24 20060101AFI20240829BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20240829BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240829BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20240829BHJP
A61K 9/127 20060101ALI20240829BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20240829BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240829BHJP
A61K 38/37 20060101ALI20240829BHJP
【ＦＩ】
A61K47/24
A61P7/04
A61K47/10
A61K47/34
A61K9/127
A61K9/10
A61K47/26
A61K38/37
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024509471
(86)(22)【出願日】2022-08-17
(85)【翻訳文提出日】2024-04-16
(86)【国際出願番号】 EP2022073013
(87)【国際公開番号】W WO2023021115
(87)【国際公開日】2023-02-23
(31)【優先権主張番号】2111758.5
(32)【優先日】2021-08-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】512279958
【氏名又は名称】カンタブ バイオファーマシューティカルズ パテンツ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000671
【氏名又は名称】ＩＢＣ一番町弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ウォルフ－ギャラウェイ，リチャード
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
【Ｆターム（参考）】
4C076AA16
4C076AA19
4C076AA95
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC14
4C076DD09
4C076DD15
4C076DD63
4C076EE23
4C076EE24
4C076FF16
4C076FF31
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA44
4C084DC15
4C084MA21
4C084MA24
4C084MA66
4C084NA12
4C084NA13
4C084ZA531
4C084ZA532
(57)【要約】
本発明は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を用いて以前に治療されていない患者または最小限に治療された患者における血友病Ａの治療のための、コロイド粒子の使用に関する。本発明は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を用いて以前に治療されていない患者または最小限に治療された患者における血友病Ａを治療するための、コロイド粒子を含む組成物、方法、キット、および剤形にも関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質と、（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質とを含むコロイド粒子を含む組成物であって、前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含み、
前記対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある、
組成物。
【請求項2】
前記生体適合性親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸からなる群から選択される、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項3】
前記生体適合性親水性ポリマーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項１または請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項4】
前記ポリエチレングリコールは、約５００～約５０００ダルトンの分子量を有する、請求項３に記載の使用のための組成物。
【請求項5】
前記ポリエチレングリコールは、約２０００ダルトンまたは約５０００ダルトンの分子量を有する、請求項４に記載の使用のための組成物。
【請求項6】
前記リン脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）である、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項7】
前記リン脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）またはＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）である、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項8】
前記ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）である、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項9】
９０～９９：１０～１のモル比で前記第１の両親媒性脂質および前記第２の両親媒性脂質を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項10】
９７：３のモル比で前記第１の両親媒性脂質および前記第２の両親媒性脂質を含む、請求項９に記載の使用のための組成物。
【請求項11】
前記コロイド粒子は、（ｉｉｉ）ポリオキシエチレンソルビタン、ポリヒドロキシエチレンステアレート、およびポリヒドロキシエチレンラウリルエーテルからなる群から選択される非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項12】
前記非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートである、請求項１１に記載の使用のための組成物。
【請求項13】
前記コロイドは、３０：１～２：１ｗ／ｗの比で前記第１の両親媒性脂質および前記第２の両親媒性脂質対前記非イオン性界面活性剤を含む、請求項１１または請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項14】
１０～４０：１：０～４ｗ／ｗの比で前記第１の両親媒性脂質対前記第２の両親媒性脂質対前記非イオン性界面活性剤を含む、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項15】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子をさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項16】
１～９０：１の化学量論比で前記コロイド粒子および前記第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む、請求項１５に記載の使用のための組成物。
【請求項17】
１０～２０：１または５～１０：１の化学量論比で前記コロイド粒子および前記第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む、請求項１５または請求項１６に記載の使用のための組成物。
【請求項18】
前記血友病Ａは先天性血友病Ａ（ｃＨＡ）である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項19】
前記血友病Ａは後天性血友病Ａ（ａＨＡ）である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項20】
治療活性化合物をさらに含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項21】
賦形剤、希釈剤、またはアジュバントをさらに含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項22】
前記対象は小児対象である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項23】
前記対象はＦＶＩＩＩ療法を受けたことがない、請求項１から２２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項24】
（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質と、（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質とを含むコロイド粒子を含む組成物を投与する工程を含む、対象における血友病Ａを治療する方法であって、前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含み、
前記対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある、
方法。
【請求項25】
前記生体適合性親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記生体適合性親水性ポリマーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項２４または請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記ポリエチレングリコールは、約５００～約５０００ダルトンの分子量を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記ポリエチレングリコールは、約２０００ダルトンまたは約５０００ダルトンの分子量を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記リン脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）である、請求項２４から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記リン脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）またはＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）である、請求項２４から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）である、請求項２４から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項２４から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記組成物は第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子をさらに含む、請求項２４から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を別個にまたは後続して投与するさらなる工程を含む、請求項２４から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記血友病Ａは先天性血友病Ａ（ｃＨＡ）である、請求項２４から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記血友病Ａは後天性血友病Ａ（ａＨＡ）である、請求項２４から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記対象は小児対象である、請求項２４から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記対象はＦＶＩＩＩ療法を受けたことがない、請求項２４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）コロイド粒子を含む組成物、および（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を含むキットであって、前記対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがあり、前記コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含み、
前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む、
キット。
【請求項40】
前記コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項41】
対象における血友病Ａの治療における別個の、同時の、または後続の使用のための、（ｉ）コロイド粒子を含む組成物、および（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を含むキットであって、前記対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがあり、前記コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含み、
前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む、
キット。
【請求項42】
前記コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項４１に記載のキット。
【請求項43】
対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質と、（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質とを含むコロイド粒子を含む医薬組成物の剤形であって、前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含み、
前記対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある、
剤形。
【請求項44】
前記コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項４３に記載の剤形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を用いて以前に治療されていない患者または最小限に治療された患者における血友病Ａの治療のための、コロイド粒子の使用に関する。コロイド粒子は、第１および第２の両親媒性脂質を含み、第２の両親媒性脂質は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分であり得る。本発明は、コロイド粒子を含む組成物、方法、キット、および剤形にも関する。
【背景技術】
【0002】
血液凝固につながる凝固カスケードは、損傷の場合に凝血の安全な形成を可能にする調節性フィードバックメカニズムと連動して、多くの異なるタンパク質および因子を伴う多工程の過程である。血友病等の血液の障害において、これらの因子の１種または複数は、欠陥があり得または不在であり得、欠陥のあるまたは低品質の凝血につながる。
【0003】
血友病Ａにおいて、凝血第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、不在である（重度の血友病）または低いレベルにある（中等度および軽度の血友病）。
【0004】
ＦＶＩＩＩは、凝固カスケードの「内因性」経路における主たるタンパク質であり、それは、ＦＶＩＩＩａに活性化された場合、ＦＩＸａと結合して内因性「テナーゼ」複合体を形成し、それはＦＸからＦＸａへの変換を加速させ、それはプロトロンビンからトロンビンへの変換に参加し、それはフィブリノーゲンをフィブリンに変換し、それは凝血を形成する。
【0005】
ＦＸからＦＸａへの変換は、「外因性」開始経路によっても媒介され得る。組織因子（ＴＦ）とＦＶＩＩａとの外因性テナーゼ複合体（ＴＦ－ＦＶＩＩａ）の形成は、凝血カスケードを開始させ、トロンビンの産生につながり、それはＦＶＩＩＩからＦＶＩＩＩａへの活性化も触媒する。しかしながら、外因性経路は、内因性経路よりも効率が低い。
【0006】
ＦＶＩＩＩの不在下で、カスケードは、ＦＸからＦＸａのへ変換を触媒するのに外因性経路のみに依存しなければならないことから、凝固カスケードははるかによりゆっくりと進む。
【0007】
内在性ＦＶＩＩＩの不在下で、彼らの凝血能を回復させるために、血漿由来または組み換えのいずれかにかかわらず補充ＦＶＩＩＩを患者に投与することはよく行われる実践である。患者は、外在性ＦＶＩＩＩに対する（先天性血友病Ａ－ｃＨＡ）または彼ら自身のＦＶＩＩＩに対する（後天性血友病Ａ－ａＨＡ）抗体（阻害剤）を発生させ得る。該タンパク質は、阻害剤抗体によって結合され、中和され、循環から迅速に取り除かれることから、阻害剤の存在は、外在性ＦＶＩＩＩで患者を治療する有効性を低下させ、補充ヒトＦＶＩＩＩを用いた予防的治療を非常に困難にするまたは通常不可能にする。ＦＶＩＩＩの準最適な分量とは、たとえ凝血が仮に形成され得るとしても、それはゆっくりと形成される、または形成され次第迅速に壊れる低品質のものであることを意味する。
【0008】
現在、阻害剤の発生に対処する２つの主な方法：阻害剤寛容誘導（ＩＴＩ）の使用、または迂回療法の使用が存在する。ＩＴＩは、患者が通常の投薬レジメンに戻ることを可能にするという目標を有して、数カ月にわたるＦＶＩＩＩの大量の反復投薬を利用して、ＦＶＩＩＩに対して免疫系において寛容を誘導する。療法は必ずしも有効ではなく、数カ月にわたるＦＶＩＩＩの反復の高用量注射は、患者にとって不快でもあり、極めて費用もかかり、相当な医療制度費用になる。
【0009】
迂回療法は、増幅相を完全に「迂回する」ことによって、阻害剤の問題を回避する。これらの療法は、付加的なＦＶＩＩａ（例えば、ＮｏｖｏＳｅｖｅｎ）を供給することによって外因性経路を簡単にブーストし得る、またはＦＶＩＩＩの不在下でカスケードをブーストする活性および不活性化因子の混合物、例えばＦＥＩＢＡ（ＦＶＩＩａ、ＦＩＸ、ＦＩＸａ、ＦＸ、ＦＸａ、プロトロンビン、およびトロンビンの混合物）を供給し得る。より最近の開発は、二重特異性抗体の使用によりＦＩＸａとＦＸとを一つにまとめることにおいて、ＦＶＩＩＩａの役割を置き換えようと試みている。
【0010】
先天性血友病Ａまたは後天性血友病Ａのいずれかを治療するための、補充ＦＶＩＩＩの使用は、臨床実践においてよく確立されている。しかしながら、そのような産物の効力は、一部の患者に存在している阻害性抗体の出現に起因して限定され、それは、外在的に送達された第ＶＩＩＩ因子の有効性を低下させる。阻害剤は、彼らが受ける外在性ＦＶＩＩＩに対する応答として、先天性血友病Ａ罹患者（「阻害剤患者」）の２５～３５％において生じ；後天性血友病Ａでは、患者は自己免疫に起因して彼ら自身のＦＶＩＩＩに対する阻害剤を発生させることから、疾患が生じる。
【0011】
野生型ＦＶＩＩＩ分子は、６個のドメイン：Ａ１－Ａ２－Ｂ－Ａ３－Ｃ１－Ｃ２に編成された２３３２個のアミノ酸を含む。Ａ１－Ａ２－Ｂドメインは、一緒になって、「重鎖」（ＨＣ）を含み、Ａ３－Ｃ１－Ｃ２ドメインは「軽鎖」（ＬＣ）を含み、これらの鎖は非共有結合的に連結される。生命体において、ＦＶＩＩＩは、通常、循環中でフォンビルブランド因子（ＶＷＦ）と結び付くであろう。ＶＷＦはＦＶＩＩＩの輸送を促し、ＦＶＩＩＩを時期尚早な不活性化およびクリアランスから保護する（Ｍａｎｎｕｃｃｉ，Ｐ．Ｍ．ら（２０１４）Ｎｏｖｅｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＦＶＩＩＩ／ＶＷＦ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ．２０（補足６）、２～１６．）。ＶＷＦとの結び付きは、免疫原性の低下、阻害剤の存在下での効力、および免疫寛容治療における実用性とも関連する。ＶＷＦを含有する血漿由来ＦＶＩＩＩ（ｐｄＦＶＩＩＩ）の商業的濃縮物の使用は、ＳＩＰＰＥＴ治験において、ＦＶＩＩＩの組み換え濃縮物（ｒＦＶＩＩＩ）よりも免疫原性が低いことが示された（Ｐｅｙｖａｎｄｉ，Ｆ．ら（２０１６）Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩＩ ａｎｄ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ａ、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３７４、２０５４～６４）。ｐｄＦＶＩＩＩ濃縮物の免疫原性の低下はＶＷＦシャペロンと関連し、それは、ＦＶＩＩＩ分子上の重大なエピトープを覆い、かつ／または樹状細胞によるそのエンドサイトーシスを阻止すると考えられる（Ａｓｔｅｒｍａｒｋ，Ｊ．（２０１５）ＦＶＩＩＩ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ａｖｏｉｄａｎｃｅ．Ｂｌｏｏｄ．１２５（１３）、２０４５～５１）。また、組み換えＦＶＩＩＩ分子は、これらの分子の大部分はヒト化されず、非ヒト細胞株において産生され、それらの免疫原性を潜在的に増強する非ヒトグリカンエピトープの存在をもたらすという付加的な複雑性を有する。
【0012】
ＦＶＩＩＩにおけるこれらのエピトープに対する阻害剤の発生は、依然として血友病治療の最も頻度の高い副作用である（Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇら（２０２０）．ＩＴＩ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｓ ｎｏｔ ａ ｆｉｒｓｔ－ｃｈｏｉｃｅ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ａ ａｎｄ ｌｏｗ－ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｒｏｍ ａ ＰｅｄＮｅｔ ｓｔｕｄｙ．Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ．１２０、１１６６～１１７２）。リスクは、最高４０％の全発生率を有して、以前に治療されていない患者（ＰＵＰ）において高く（同書）、ＦＶＩＩＩ活性を不活性化し、これらの患者を保護するのに代替的でかつ費用のかかる方策を要する。一部の患者において、長くかつ費用のかかる技法である免疫寛容誘導療法の使用は、阻害剤を根絶し得るが、該技法はすべての患者に対して働くわけではなく、彼らが補充ＦＶＩＩＩ療法を使用するのを妨げる。阻害剤発生のリスクは、補充ＦＶＩＩＩへの最初の２０日間の曝露日（ＥＤ）の間に最も高く、最高７５ＥＤ持続する（Ｌｉｅｓｎｅｒ，Ｒ．Ｊ．ら（２０２１）Ｓｉｍｏｃｔｏｃｏｇ ａｌｆａ（Ｎｕｗｉｑ（商標））ｉｎ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ａ：ｆｉｎａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＮｕＰｒｏｔｅｃｔ ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．オンライン）。患者は、この期間にわたって阻害剤の発生に関してモニターされなければならない。
【0013】
これらの以前に治療されていない患者が、阻害剤をさらに発生させる見込みを低下させるために、始まりから免疫原性である可能性が低いＦＶＩＩＩ療法で治療され得るならば、明らかに好ましいであろう。
【0014】
それゆえ、阻害剤をさらに発生させる見込みを低下させる非免疫原性ＦＶＩＩＩ補充療法の必要性がある。
【0015】
それゆえ、本発明は、ＦＶＩＩＩで治療された場合に、エピトープ遮蔽および半減期延長の組合せによって、以前に治療されていないおよび最小限に治療された患者における阻害剤の発生のリスクを下げるための、血友病Ａの治療における使用のための、ＰＥＧ化コロイド粒子を提供する。
【0016】
ＰＥＧ化リポソームは、阻害剤が発生しやすいモデルにおいて抗ＦＶＩＩＩ抗体の生成を阻止するように見え、ならびに用量／投薬間隔を低下させることを可能にすることが発見されている。
【0017】
このことは、以前に治療されていない患者（ＰＵＰ）および最小限に治療された患者（ＭＴＰ－第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日（ＥＤ））を治療するより安全な方法を提供する。
【発明の概要】
【0018】
本発明は、ＦＶＩＩＩに欠損を有する、およびＦＶＩＩＩに対する阻害剤を有しない血友病患者を治療するための、コロイド粒子を含む組成物、方法、キット、および剤形を提供する。組成物、方法、キット、および剤形は、非イオン性界面活性剤および／またはＦＶＩＩＩを任意選択でさらに含み得る。
【0019】
本発明の第１の態様において、対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含むコロイド粒子を含む組成物であって、前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む、組成物が提供される。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。
【0020】
生体適合性親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸からなる群から選択され得、好ましくは、生体適合性親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ポリエチレングリコールは、約５００～約５０００ダルトン、好ましくは約２０００ダルトンまたは約５０００ダルトンの分子量を有し得る。
【0021】
第２の両親媒性脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）またはＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）等のＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）であり得る。
【0022】
ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）であり得る。
【0023】
第１の両親媒性脂質および第２の両親媒性脂質は、１００：３または９７：３等、９０～１１０：１０～１、または９０～９９：１０～１のモル比にあり得る。
【0024】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン、ポリヒドロキシエチレンステアレート、およびポリヒドロキシエチレンラウリルエーテルからなる群から選択され得る。非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートであり得る。コロイド粒子は、３０：１～２：１ｗ／ｗの比で第１の両親媒性脂質および第２の両親媒性脂質対非イオン性界面活性剤を含み得る（｛第１の両親媒性脂質＋第２の両親媒性脂質｝：｛非イオン性界面活性剤｝）。
【0025】
第１の両親媒性脂質対第２の両親媒性脂質対非イオン性界面活性剤は、１０～４０：１：０～４ｗ／ｗの比にあり得る（｛第１の両親媒性脂質｝：｛第２の両親媒性脂質｝：｛非イオン性界面活性剤｝）。
【0026】
組成物は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子をさらに含み得る。コロイド粒子および第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子は、１０～２０：１または５～１０：１等、１～９０：１の化学量論比にあり得る。
【0027】
血友病Ａは、先天性血友病Ａ（ｃＨＡ）または後天性血友病Ａ（ａＨＡ）であり得る。
【0028】
組成物は、治療活性化合物をさらに含み得る。組成物は、賦形剤、希釈剤、および／またはアジュバントもさらに含み得る。
【0029】
対象は小児患者であり得る。対象は、ＦＶＩＩＩ療法を受けたことがなくてもよい。
【0030】
本発明の組成物は、すぐに使用できる水性懸濁液に製剤化され得る、または組成物は、凍結乾燥製剤として調製され得る。本発明の凍結乾燥製剤は、同様に提供される適切な希釈剤、アジュバント、または賦形剤、例えば生理学的に許容される緩衝剤と併せて、別個の剤形として供給され得る。本明細書に記載されるように、そのような組成物は、別個の剤形として第ＶＩＩＩ因子を付加的に含み得る、または本明細書に記載されるコロイド粒子とともに製剤化され得る。
【0031】
本発明の第２の態様において、コロイド粒子を含む組成物を投与する工程を含む、対象における血友病Ａを治療する方法が提供される。コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含む。第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。
【0032】
生体適合性親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸からなる群から選択され得、好ましくは、生体適合性親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ポリエチレングリコールは、約５００～約５０００ダルトン、好ましくは約２０００ダルトンまたは約５０００ダルトンの分子量を有し得る。
【0033】
第２の両親媒性脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）またはＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）等のＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）であり得る。
【0034】
ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）であり得る。
【0035】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0036】
方法の組成物は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子をさらに含み得る。代替的に、方法は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を別個にまたは後続して投与するさらなる工程を含み得る。
【0037】
血友病Ａは、先天性血友病Ａ（ｃＨＡ）または後天性血友病Ａ（ａＨＡ）であり得る。
【0038】
対象は小児患者であり得る。対象は、ＦＶＩＩＩ療法を受けたことがなくてもよい。
【0039】
本発明の第３の態様において、対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）コロイド粒子を含む組成物、および（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を含むキットが提供される。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含む第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。
【0040】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0041】
本発明の第４の態様において、対象における血友病Ａの治療における別個の、同時の、または後続の使用のための、（ｉ）コロイド粒子を含む組成物、および（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を含むキットが提供される。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質と、（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質とを含む。第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。
【0042】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0043】
本発明の第５の態様において、対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含むコロイド粒子を含む医薬組成物の剤形であって、前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む、剤形が提供される。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。
【0044】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0045】
本発明は、ＦＶＩＩＩに欠損を有する、およびＦＶＩＩＩに対する阻害剤を有しない血友病患者に適している。
【0046】
一実施形態において、方法は、以前に治療されていない患者が阻害剤を発生させる見込みを最小限に抑えるための、軽度、中等度、または重度の血友病Ａを有する、以前に治療されていない患者（ＰＵＰ）または最小限に治療された患者（ＭＴＰ）を治療するためのものである。
【0047】
別の実施形態において、方法は、阻害剤の再発を阻止するための、阻害剤が発生しやすいと以前に示されたことがあるが現在は阻害剤なしである患者を治療するためのものである。
【0048】
一実施形態において、方法は、阻害剤の再発を阻止するための、以前に阻害剤を発生させたことがあるが、免疫寛容誘導療法の経過後、今は阻害剤なしである患者を治療するためのものである。
【0049】
別の実施形態において、方法は、免疫系のさらなる刺激を阻止する免疫寛容誘導療法を受けている患者を治療するためのものである。
【0050】
一実施形態において、方法は、まだ阻害剤を発生させたことがない、および彼らのＦＶＩＩＩ補充療法に対して阻害剤を発生させる彼らのリスクを下げることを望む、軽度、中等度、または重度の血友病Ａ患者を治療するためのものである。
【発明を実施するための形態】
【0051】
本発明は、対象における血友病Ａの治療における使用のための、コロイド粒子を含む組成物、方法、キット、および剤形であって、対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある、組成物、方法、キット、および剤形を提供する。
【0052】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法は、患者／対象に対する、彼らの凝血能を回復させるための、血漿由来または組み換えのＦＶＩＩＩ等の第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）補充療法であり得る。患者／対象が阻害剤を発生させたことがある場合、患者／対象は、「迂回」療法または阻害剤寛容誘導（ＩＴＩ）療法等の療法を受け得る。迂回療法は、ＦＶＩＩａ（例えば、ＮｏｖｏＳｅｖｅｎ）、または活性および不活性化因子の混合物、例えばＦＥＩＢＡ（ＦＶＩＩａ、ＦＩＸ、ＦＩＸａ、ＦＸ、ＦＸａ、プロトロンビン、およびトロンビンの混合物）を含む。阻害剤寛容誘導（ＩＴＩ）は、数カ月にわたるＦＶＩＩＩの大量の反復投薬を利用して、ＦＶＩＩＩに対して免疫系において寛容を誘導する。
【0053】
ＦＶＩＩＩに対する阻害剤または抗体阻害剤とは、ＦＶＩＩＩに対する、抗体阻害剤または中和抗体としても互換可能に知られる、抗体を指す。抗体は、内在性ＦＶＩＩＩに対する自己抗体、または外在性ＦＶＩＩＩに対する抗体であり得る。
【0054】
上で記載される第１の態様によれば、コロイド粒子は、（ｉ）第１の両親媒性脂質、および（ｉｉ）第２の両親媒性脂質を含む。第１の両親媒性脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分である。ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分の適切な例は、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）であり得る。第２の両親媒性脂質は、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分である。ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の適切な例は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノール－３５アミン（ＤＳＰＥ）であり得る。アミノプロパンジオールジステアロイル（ＤＳ）脂質は、両親媒性脂質でもあるカルバメート連結非荷電リポポリマーである。ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の他の例は、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、およびＤＯＰＥを含む。
【0055】
本発明のコロイド粒子は、典型的に、脂質小胞またはリポソームの形態にあり、当技術分野において周知である。本明細書におけるコロイド粒子への言及は、文脈が別様に指定しない限り、リポソームおよび脂質小胞を含む。
【0056】
第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分である。
【0057】
生体適合性親水性ポリマーの目的は、コロイド粒子を立体的に安定化し、ゆえにインビトロにおいてコロイド粒子の融合を阻止し、コロイド粒子がインビボにおいて細網内皮系による吸着を逃れるのを可能にすることである。生体適合性親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸からなる群から選択され得る。生体適合性親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る。ポリエチレングリコールは、分岐状または非分岐状であり得る。生体適合性ポリマーは、約１００Ｄａ、２５０Ｄａ、３５０Ｄａ、５５０Ｄａ、７５０Ｄａ、１０００Ｄａ、１５００Ｄａ、２０００Ｄａ、２５００Ｄａ、３０００Ｄａ、３５００Ｄａ、４０００Ｄａ、４５００Ｄａ、５０００Ｄａ、５５００Ｄａ、６０００Ｄａ、６５００Ｄａ、７０００Ｄａ、７５００Ｄａ、８０００Ｄａ、８５００Ｄａ、９５００Ｄａ、および１０，０００Ｄａの好ましい値を有して、約１００～約１０，０００Ｄａ、適切には約２０００～約５０００Ｄａの分子量を有し得る。生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質の適切な例は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）等のＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）であり得る。
【0058】
第１の両親媒性脂質および第２の両親媒性脂質は、９０～１１０：１０～１、９０～１００：１０～１、９０～９９：１０～１、９３～９９：７～１、９５～９９：５～１、適切には１００：３、１００：３、９９：３、９８：３、９７：３、９６：３、または９５：３のモル比で提供され得る。９７．３というモル比は、３２．４：１というモル比としても表現され得、同じように１００：３というモル比は、３３．２：１というモル比として表現され得る。第１の両親媒性脂質および第２の両親媒性脂質の比は、重量／重量比、例えば１：１～２０：１ｗ／ｗ、適切には２：１～１２：１ｗ／ｗまたは４：１～９：１ｗ／ｗ、例えば４：１、５：１、６：１、９：１、または１２：１ｗ／ｗとしても表現され得る。適切には、組成物は、９０～９９：１０～１、９３～９９：７～１、９５～９９：５～１、適切には９７：３のモル比（ＰＯＰＣ：ＤＳＰＥ）の、パルミトイル－オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）と１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノール－アミン（ＤＳＰＥ）との混合物から構成されるコロイド粒子を含み得る。重量／重量比として表現すると、これは、例えば１：１～２０：１ｗ／ｗ、適切には２：１～１２：１ｗ／ｗ、例えば４：１、５：１、６：１、９：１、または２：１ｗ／ｗであり得る。
【0059】
１つの例では、コロイド粒子は、９７：３モル比または９：１ｗ／ｗ比の、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））から構成され得る。
【0060】
コロイド粒子は、０．０５～０．０．３μｍ径、適切には０．１、０．１５、０．２、または０．２５ミクロン（μｍ）前後に及ぶ平均粒子サイズ（平均的粒子サイズ）を有し得る。平均的粒子サイズ（平均粒子サイズ）は、１００～１３０ナノメートル（ｎｍ）、適切には１１０～１２０ｎｍ、１１２～１１８ｎｍ、１５０～１７０ｎｍ、１５５～１６５ｎｍ、より適切には１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、または１７０ｎｍであり得る。
【0061】
平均粒子サイズは、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｕｌｔｒａ ＺＳＵ ５７００を使用して測定され得る。この機器は光散乱によって粒子サイズを判定し、レーザー光からの後方散乱がサンプルに差し込み、衝突粒子が１７３°の角度で検出される（１７３°は、それ自身のほぼ後部であり、それゆえ後方散乱という用語）。粒子のブラウン運動は、光を種々の強度で散乱させる。ブラウン運動の速さは粒子サイズに関係するため、粒子サイズは、ストークス・アインシュタインの関係性により推測され得る。
【0062】
平均粒子サイズは、コロイド粒子の平均径に対応する。粒子サイズ測定との関連で引き合いに出される多分散性指数（ＰＤＩ）は、コロイド粒子の平均径周辺の分布の大きさに対応する。例えば、本発明において、多分散性指数は、最大０．２、適切には０．１５、０．１２、０．１、または０．５であり得る。
【0063】
ＰＤＩは、標準偏差／平均の平方、すなわちＰＤＩ＝（ｓ／ｍ）２として計算される。
【0064】
平均粒子サイズおよび多分散性指数から、標準偏差が計算され得る。標準偏差の２倍は、粒子サイズ周辺の９５％信頼区間、すなわちサンプルにおけるコロイド粒子の９５％が存在する域の計算を容易にする。
【0065】
適切には、９５％平均粒子サイズは、５０～５００ｎｍ、適切には５０～２９０ｎｍ、５０～２８５ｎｍ、６５～２６５ｎｍ、６５～２６０ｎｍ、６５～１８０ｎｍ、６５～１７５ｎｍ、６５～１７０ｎｍ、６５～１６５ｎｍ、６５～１６０ｎｍ、より適切には６５～１７３ｎｍ、６４～１６１ｎｍ、６５～２６３ｎｍ、または５４～２８２ｎｍであり得る。
【0066】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤等の界面活性剤をさらに含み得る。非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン、ポリヒドロキシエチレンステアレート、およびポリヒドロキシエチレンラウリルエーテルからなる群から選択され得る。非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはＴｗｅｅｎ８０としても公知）であり得る。第１の両親媒性脂質および第２の両親媒性脂質対非イオン性界面活性剤は、３０：１～２：１ｗ／ｗ、適切には２５：１、２０：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、または５：１ｗ／ｗ（｛第１の両親媒性脂質＋第２の両親媒性脂質｝：｛非イオン性界面活性剤｝）の比で提供され得る。モル比として表現すると、これは、例えば１０～２０：１、１２～１８：１、１４～１６：１、適切には１４：１、１５：１、または１６：１であり得る。界面活性剤濃度は、０．２５重量％～５重量％、例えば１％～３％、１～２％であり得、一部の例示的な値は、０．４７％、０．８５％、または３．５％であり得る。
【0067】
非イオン性界面活性剤はＰＥＧ化もされ得る。ＰＥＧ化非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはＴｗｅｅｎ８０としても公知）であり得る。ポリエチレングリコールは、分岐状または非分岐状であり得る。生体適合性ポリマーは、約１００Ｄａ、２５０Ｄａ、３５０Ｄａ、５５０Ｄａ、７５０Ｄａ、１０００Ｄａ、１５００Ｄａ、２０００Ｄａ、２５００Ｄａ、３０００Ｄａ、３５００Ｄａ、４０００Ｄａ、４５００Ｄａ、５０００Ｄａ、５５００Ｄａ、６０００Ｄａ、６５００Ｄａ、７０００Ｄａ、７５００Ｄａ、８０００Ｄａ、８５００Ｄａ、９５００Ｄａ、および１０，０００Ｄａの好ましい値を有して、約１００～約１０，０００Ｄａ、適切には約２０００～約５０００Ｄａの分子量を有し得る。
【0068】
非イオン性界面活性剤は、コロイド粒子と結び付けられ得る、コロイド粒子の脂質二重膜に組み入れられ得る、コロイド粒子の脂質二重膜の外層に組み入れられ得る、またはコロイド粒子の内層脂質二重膜に組み入れられ得る。
【0069】
したがって、第１の両親媒性脂質対第２の両親媒性脂質対非イオン性界面活性剤は、２～１０：１：０～２、３～９：１：０．５～１．５、４～９：１：０．５～１ｗ／ｗ、適切には９：１：０、９：１：１、４：１：０、または４：１：０．５ｗ／ｗ（｛第１の両親媒性脂質｝：｛第２の両親媒性脂質｝：｛非イオン性界面活性剤｝）の比で提供され得る。モル比として表現すると、これは、例えば３０～４０：１：０～５、３０～３５：１：０～２．５、３０～３５：１：０～２．５、適切には３３：１：０、３３：１：２、または３２：１：３であり得る。
【0070】
組成物は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子またはその断片をさらに含み得る。組成物が第ＶＩＩＩ因子の断片を含む場合、第ＶＩＩＩ因子断片は、適切には、断片が、生物学的活性、または天然の第ＶＩＩＩ因子分子と実質的に同じ生物学的活性を保持する活性断片であり得る。例えば、１種のそのような活性断片は、Ｂドメイン短縮第ＶＩＩＩ因子である。組成物は、天然の血液因子およびその断片の両方を含み得ることがさらに可能である。コロイド粒子および第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子は、１０～２０：１および５～１０：１等、１～９０：１、適切には２～９０：１、５～８５：１、６～１０：１、７～８：１、７．５～２０：１、１０～８０：１、１０～１５：１、１０～１６：１、１０～２０：１、１３～１９：１、１５～１６：１、１５～７５：１、２０～７０：１、２５～６５：１、３０～６０：１、３５～５５：１、４０～５０：１の化学量論比で提供され得る。代替的に表現すると、コロイド粒子および第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子は、１５．５：１、１３：１、８：１、７．７：１、７：１等、１：１、２：１、５：１、７．５：１、１０：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２２：１、２５：１、２６：１、２７：１、２８：１、２９：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、８６：１、９０：１の化学量論比で提供され得る。全長ＦＶＩＩＩ分子に関してより具体的には、化学量論比は、１０：１～１９：１、および任意選択で１０～１５：１または５～１０：１、および任意選択で７．５：１であり得る。ベータドメイン欠失またはベータドメイン短縮ＦＶＩＩＩ分子に関して、域は、１３～１９：１、および任意選択で１０～１６：１または６～１０：１、および任意選択で８：１であり得る。
【0071】
理論によって拘束されることを望むことなく、組成物に存在する過度のコロイド粒子は、遊離コロイド粒子を、他の中核になる血液因子（例えば、血友病Ａの場合にはＦＶＩＩおよびＦＩＸ）に可逆的に結合させるのに十分な量にあり、それは、粒子と結び付いたある量の第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）とともに、投与後に血小板に捕捉されかつ可逆的に結合されて、血小板で因子を濃縮し得、外因性血液凝固経路をブーストし得るという推定がある。
【0072】
第ＶＩＩＩ因子は、任意の適切な供給源由来であり得、分子生物学的技法を使用した組み換えＤＮＡ技術によって産生される組み換えタンパク質であり得る、もしくは化学的に合成され得る、もしくは哺乳類の母乳においてトランスジェニック的に産生され得る、または第ＶＩＩＩ因子は、天然の供給源から単離され得る（例えば、血漿から精製される）。適切には、第ＶＩＩＩ因子は、ヒト第ＶＩＩＩ因子等の哺乳類第ＶＩＩＩ因子である。
【0073】
第ＶＩＩＩ因子等の血液因子は、表面付着の特性によって特徴付けられる。これは、酵素および補因子が、カスケードにおける他の参加者に、血小板の表面に、および損傷の部位における組織に付着することを要する凝固カスケードの必要な特質である。凝血が損傷の部位にとどまり、漂流して危険な血栓形成を引き起こさないことが特に重要である。第ＶＩＩＩ因子等の血液因子は、任意のガラスおよびプラスチック表面に過度に吸着するであろうことから、この特性は、薬物産物の製剤化において課題を提示する。実践的観点から、これは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）等の非イオン性界面活性剤の大量使用によって軽減される。
【0074】
コロイド粒子対第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子の化学量論比を判定するために、以下の計算が実施されるべきである。第１に、ＦＶＩＩＩのＩＵあたりのＦＶＩＩＩの分子が判定されるべきである。注記、ＦＶＩＩＩの質量は、ＦＶＩＩＩの変異型（例えば、全長対βドメイン欠失）に応じて変動する。第２に、コロイド粒子のグラムあたりの粒子の数が判定されるべきである。最後に、化学量論比がそれに従って判定され得る。３５ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ（ベータドメイン欠失および全長の両方）および２２ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐを用いた例となる計算は、以下のとおりである：
計算例１、ベータドメイン欠失ｒＦＶＩＩＩ
計算例１、ベータドメイン欠失ｒＦＶＩＩＩ
【0075】
【表1】
【0076】
計算例２、全長ｒＦＶＩＩＩ
【0077】
【表2】
【0078】
組成物は、さらなる治療活性化合物または分子、例えば抗炎症薬、鎮痛剤、もしくは抗生物質、または第ＶＩＩＩ因子の活性を促進し得るもしくは増強し得る他の薬学的活性剤を含み得る。
【0079】
組成物は、任意の適切な賦形剤、希釈剤、および／またはアジュバントをさらに含み得る。緩衝剤等の適切な希釈剤は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水溶性塩、および適切な酸とともに製剤化され得る。適切な緩衝溶液は、アミノ酸（例えば、ヒスチジン）、無機酸（例えば、クエン酸、乳酸、コハク酸、クエン酸、およびリン酸からなる群から選択される酸）の塩、およびアルカリ金属またはアルカリ土類金属、（例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、またはクエン酸ナトリウムとして例示される、ナトリウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、リチウム塩、またはカルシウム塩）を含み得るが、それらに限定されない。そのような賦形剤、緩衝剤、および／またはアジュバントの例は、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、および／またはクエン酸ナトリウムを含む。他の生物学的緩衝剤は、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳ等を含み得る。
【0080】
適切な水性クエン酸塩緩衝液は、クエン酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸カリウム緩衝液、例えば５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液であり得る。適切なリン酸塩緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液、例えば２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液であり得る。
【0081】
組成物に対する適切なｐＨ値は、例えばｐＨ５．０～ｐＨ９．０、適切にはｐＨ６．７～ｐＨ７．４、またはｐＨ６．８、ｐＨ６．９、ｐＨ７．０、ｐＨ７．２等、インビボにおける投与のための、任意の一般的に許容されるｐＨ値を含む。ｐＨは、適切な酸またはアルカリ、例えば塩酸を用いて、それに応じて調整され得る。
【0082】
本発明の組成物は、すぐに使用できる水性懸濁液に製剤化され得る、または組成物は、凍結乾燥製剤として調製され得る。本発明の凍結乾燥製剤は、同様に提供される適切な希釈剤、アジュバント、または賦形剤、例えば生理学的に許容される緩衝剤と併せて、別個の剤形として供給され得る。本明細書に記載されるように、そのような組成物は、別個の剤形として第ＶＩＩＩ因子を付加的に含み得る、または本明細書に記載されるコロイド粒子とともに製剤化され得る。典型的には、再構成のために、凍結乾燥された第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）のバイアル、およびコロイド粒子（ＰＥＧＬｉｐ）溶液の別個のバイアルが提供されるであろう。
【0083】
コロイド粒子は、水性クエン酸塩緩衝液中９％（ｗ／ｖ）総脂質の懸濁液として保管され得、適切には、粒子は、７％、６％、５％、４％（ｗ／ｖ）総脂質の懸濁液として保管され得る。外在性第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の要される濃度が患者に対してわかり次第、バルク溶液を、必要な場合には５０ｍＭクエン酸ナトリウム溶液で希釈して、コロイド粒子の濃度を調整し得、それにより、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）が添加される場合、コロイド粒子対第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子の所望の比が獲得される。
【0084】
第ＶＩＩＩ因子は、完全に外在性であり得、例えば阻害剤を有する重度の血友病患者の場合には、注射の前に本発明とともに製剤化され得、その使用に関して、それは血漿濃縮物に由来し得る、または組み換えで産生され得る。代替的に、患者が第ＶＩＩＩ因子を自己製造する一部の能力を保持する場合（例えば、軽度もしくは中等度血友病患者、または後天性血友病を有する患者）、より低い量の外在性第ＶＩＩＩ因子が投与されるであろう、または外在性第ＶＩＩＩ因子は投与されないであろう。
【0085】
理論によって拘束されることを望むことなく、組成物に存在する過度のコロイド粒子は、遊離コロイド粒子を、他の中核になる血液因子（例えば、血友病Ａの場合にはＦＶＩＩおよびＦＩＸ）に可逆的に結合させるのに十分な量にあり、それは、粒子と結び付いたある量の第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）とともに、投与後に血小板に捕捉されかつ可逆的に結合されて、血小板で因子を濃縮し得、外因性血液凝固経路をブーストし得るという推定がある。
【0086】
注射されると、コロイド粒子は、血小板の表面に可逆的に結合し、他の膜と融合するであろう。コロイド粒子がすでに外在性第ＶＩＩＩ因子と結合している場合、これは、血小板の表面で第ＶＩＩＩ因子を濃縮すると考えられ、一部は、血小板内に貪食され得、または産生されるＴＦ担持凝固促進性微粒子ともしくはその中で結び付き得、阻害剤およびまた通常のクリアランスメカニズムから該タンパク質を保護し、例えばＬＲＰ－１、該タンパク質により長い半減期を付与する。中等度または軽度の血友病を有する患者において、コロイド粒子は、任意の循環第ＶＩＩＩ因子も捕捉すると考えられ、血小板でもしくはその中で、または生じたＴＦ担持凝固促進性微粒子の中でそれを濃縮する。注射時に第ＶＩＩＩ因子と結び付いていないコロイド粒子は、血小板の表面でＦＶＩＩならびに他の内在性血液因子（例えば、ＦＩＸ）を捕捉しかつ濃縮し始め、これらと、産生された任意のＴＦ担持凝固促進性微粒子とを結び付け始めると考えられ；接着した因子を有しない粒子も血小板の表面に結合しかつ融合し、凝血カスケードの混乱の間に血小板反応面で、ＴＦ担持凝固促進性微粒子を形成もし、活性形態、ＦＶＩＩａ、およびＦＩＸａを含めたさらなる因子を捕捉しかつ濃縮する日和見性トラップとして作用もすることも実現可能である。
【0087】
通常では、内皮への損傷時、組織因子はＦＶＩＩをＦＶＩＩａに変換し、それと結合する。次いで、ＴＦ－ＦＶＩＩａ複合体は、活性化血小板の表面へ移動しかつその表面に結合し、ＦＸをＦＸａに変換し始めて、プロトロンビンを切断してトロンビンを生成し、その過程は、ＦＸａがＦＶＩＩａ（活性化血小板から放出された）と複合して、プロトロンビナーゼ複合体を形成する場合に最適化され、それは、活性化血小板およびそれらに由来するＴＦ担持凝固促進性微粒子の曝露された膜表面でも会合する。本発明は、ＦＶＩＩをこの反応面にごく接近して置き、それは、多くのＴＦ担持凝固促進性微粒子に粉砕されていてもよい。ゆえに、ＦＶＩＩａ（コロイド粒子、ゆえに血小板および微粒子に結合したままである）への変換、およびＴＦ－ＦＶＩＩａ複合体の形成は、２つの重要でかつ即時の効果を有して、血小板およびそれらの微粒子の反応面で生じる：
１）ＦＸからＦＸａへの限局性変換であって、これらの血小板およびＴＦ担持凝固促進性微粒子表面でも、それはＦＶと結合して（「プロトロンビナーゼ複合体」）、高度に限局性のトロンビンバーストを生じさせ、それはフィブリンの産生を開始もし、増幅相を触媒もするであろう、限局性変換；ならびに同時に、
２）ＦＩＸからＦＩＸａへの限局性変換であって、それは次いで、コロイド粒子により共局在化しているＦＶＩＩＩと結び付いて、同じ膜表面でテナーゼ複合体を形成し得、ゆえに、上の（１）において目下強化された開始相からのトロンビンによって触媒されている増幅相を増大しかつ最適化する、限局性変換。代替的にかつ付加的に、コロイド粒子膜は、代用テナーゼ複合体を形成し得、引き付け、ＦＸをＦＸａに変換する。
１）ＦＸからＦＸａへの限局性変換であって、これらの血小板およびＴＦ担持凝固促進性微粒子表面でも、それはＦＶと結合して（「プロトロンビナーゼ複合体」）、高度に限局性のトロンビンバーストを生じさせ、それはフィブリンの産生を開始もし、増幅相を触媒もするであろう、限局性変換；ならびに同時に、
２）ＦＩＸからＦＩＸａへの限局性変換であって、それは次いで、コロイド粒子により共局在化しているＦＶＩＩＩと結び付いて、同じ膜表面でテナーゼ複合体を形成し得、ゆえに、上の（１）において目下強化された開始相からのトロンビンによって触媒されている増幅相を増大しかつ最適化する、限局性変換。代替的にかつ付加的に、コロイド粒子膜は、代用テナーゼ複合体を形成し得、引き付け、ＦＸをＦＸａに変換する。
【0088】
凝血カスケードが開始しかつフィブリンが産生され次第、血小板は通常では凝固してフィブリンメッシュを塞ぐ。血小板と結合しかつ融合するコロイド粒子の能力は、メッシュにおいて一緒に血小板の付着性を強めることにおいてここで果たす最終的な役割を有して、凝血を安定化する。
【0089】
本発明は、限定された量のＦＶＩＩＩおよびＦＶＩＩＩに対する阻害剤の両方の存在下で、ＦＸからＦＸａへの変換を向上させる複数のやり方で作用し得る。第１に、ＦＩＸａとのテナーゼ複合体を形成し得る限定された量のＦＶＩＩＩの潜在性を保護し、増強し、かつ最大限に高めて、ＦＸからＦＸａへの変換を触媒することによって；第２に、ＦＶＩＩＩの作用を模倣しかつＦＩＸａに結合して、代用テナーゼ複合体を提供して、ＦＸからＦＸａへの変換を触媒することによって；第３に、ＴＦ担持凝固促進性微粒子の産生により、およびＦＶＩＩ／ＦＶＩＩａを濃縮して、外因性テナーゼ複合体によるＦＸからＦＸａへの変換を刺激することの両方により、外因性経路を上方調節することによって；ならびに最後に、上方調節された外因性経路を介して、ＦＩＸからＦＩＸａへの変換を増強して、内因性テナーゼ複合体の形成を増大させることによって。これらの作用を通じて、本発明は、内因性経路のテナーゼ複合体におけるＦＶＩＩＩの活性を保護し、保存し、かつ最大限に高め、一方で、テナーゼ複合体におけるＦＶＩＩＩａの機能性を模倣し、また外因性経路の上方調節を通じてその経路を同時に迂回することによる、複数の作用の様態を有する。
【0090】
コロイド粒子は、外因性経路を介してＦＸからＦＸａへの変換を増強する迂回剤として、ならびにＦＶＩＩＩの保護およびＦＩＸ／ＦＩＸａを濃縮することの両方により内因性経路を増幅する、二重の作用を有し、テナーゼ複合体の形成を加速させる、またはＦＩＸａとＦＶＩＩＩ非依存的テナーゼ複合体を形成する。増強された開始（外因性）および増幅（内因性）相は、一緒になって、とりわけ阻害性抗体の存在下における、そのような低下した量の第ＶＩＩＩ因子を用いて通常考え得るであろうよりも、凝血のより迅速な始まり、およびより硬い凝血に結合され得るフィブリンのより速い生成の両方を可能にし、患者の出血のより速い解決につながる。
【0091】
本発明は、ゆえに、血小板表面でおよび血小板の内側で内在性および外在性第ＶＩＩＩ因子の両方の正しい量を濃縮するために、コロイド粒子の能力、および特にコロイド粒子対第ＶＩＩＩ因子のその特異的製剤比の両方に依存し、ならびにＴＦ担持凝固促進性微粒子の産生を刺激し、それにより、凝血カスケードのＴＦ－ＦＶＩＩａ中心の開始相および増幅相の両方とも、血友病Ａ）の場合には第ＶＩＩＩ因子に対する阻害剤の存在下で、限定された量の第ＶＩＩＩ因子を用いて、トロンビン生成の始まりを加速させる相乗効果とともに最適化される。
【0092】
注射された外在性第ＶＩＩＩ因子は、阻害剤および通常のクリアランスメカニズムの両方による分解から保護されるため、ならびに血小板で因子を濃縮しかつＴＦ担持凝固促進性微粒子の効果を加速させることの両方により、より良質な凝血がより速く形成されるため、本発明は、遺伝子療法による血小板における異所性ＦＶＩＩＩの産生によって見出される、第ＶＩＩＩ因子を供給する他の方法と比べて第ＶＩＩＩ因子倹約的であろう。この利益は、患者にとってより少量のまたはより低頻度の注射として現れると考えられ、既定の治療の順守を増加させ、偶発的および場合によっては致命的な出血の可能性を減少させる。
【0093】
遺伝子療法により血小板において異所的にＦＶＩＩＩを産生しようとする試みの成功とは異なり、本発明は、血小板でおよび血小板中で、外在性第ＶＩＩＩ因子および内在性因子（ＦＶＩＩ／ＦＶＩＩａおよびＦＩＸ／ＦＩＸａ）を濃縮するものの、それは、ウイルス媒介性導入遺伝子療法の長い開発プログラム、規制の負担、または不可逆的性質を要しない。
【0094】
治療される対象となる疾患において、正常なレベルよりも低くある限定された量の第ＶＩＩＩ因子の効果を濃縮しかつ増幅することによって（例えば、血友病Ａ（ＨＡ）の場合にはＦＶＩＩＩ）、本発明は、第ＶＩＩＩ因子倹約的であると考えられ、血友病患者において、および特に、第ＶＩＩＩ因子を、それらの阻害性抗体が該タンパク質を破壊し、それらを非保護の状態にするであろうことから、通常では投与され得ない阻害剤患者において、より低い用量が投与されることを可能にし、かつ／または止血を達成するために通常要される注射の回数を低下させると予測される。
【0095】
新規の操作された第ＶＩＩＩ因子分子もしくはこれらの分子の模倣体またはそれらの活性化形態を作り出す手法とは異なり、本発明は、分子内、例えば組み換えヒトＦＶＩＩＩ（ｒｈＦＶＩＩＩ）に外来配列を操作する必要なく、任意の現在の血漿由来のまたは組み換えの第ＶＩＩＩ因子とともに使用され得る。このことは、新規の認識されていないタンパク質に対して生じる免疫調節応答の危険性を低下させる。
【0096】
これらの手法、すなわち血小板におけるＦＶＩＩＩの産生または模倣体の使用の両方とは異なり、本発明は、外因性の加速的経路の外在的に適用された構成要素を濃縮するだけでなく、内在性因子を濃縮もしかつＴＦ担持凝固促進性微粒子の産生を刺激もして、迅速なトロンビンバーストに対する内因性経路、および外因性経路の他の主要な構成要素（ＦＩＸａ）の局所的生成を増幅し、それは、第ＶＩＩＩ因子レベルは再度落ちることから、トロンビン産生の共通の経路を推進し続け得る、新規でかつ非常に必要な二重の作用を有する。
【0097】
本発明の使用は、遊離第ＶＩＩＩ因子と比べて第ＶＩＩＩ因子倹約的である。このことは、患者にとってより多くの利便性（より少量の注射）、より良好な順守（予防的注射のより少ない失念）、およびより良好な医療経済学（より低費用の第ＶＩＩＩ因子、血友病患者が順守しておらず出血を有した場合の、より低い緊急度の注入）を意味する。
【0098】
第ＶＩＩＩ因子の標準的な血漿由来の形態または組み換えで産生された形態の使用を可能にすることによって、本発明が、阻害剤を有する血友病Ａ患者においてＦＶＩＩＩを用いた予防的治療を可能にすることに対する費用効果の高い解決策を可能にすることは究極の目的である。
【0099】
本発明の使用は、阻害剤を有する血友病患者において、迂回剤としての外在性ＦＶＩＩａの使用と比べて倹約的である。本発明は、患者自身のＦＶＩＩを使用するだけでなく、血小板でこれを濃縮もしかつＴＦ担持凝固促進性微粒子の産生を刺激もして、ＦＶＩＩの有効性を最大限に高め、ゆえに外在性ＦＶＩＩａの費用、および該タンパク質の過剰摂取に起因した血栓性反応の任意の懸念を回避する。
【0100】
組成物は、注射または注入によって、好ましくは静脈内、皮下、皮内、または筋肉内に投与され得る。注射は、組成物の単回投薬の投与を含む。注入は、長期間にわたる組成物の投与を含む。
【0101】
本発明の組成物は、１日あたり少なくとも１回、１日あたり少なくとも２回、１週間あたり約１回、１週間あたり約２回、２週間あたり約１回、または１カ月あたり約１回の投与のためのものであり得る。組成物は、また、ＦＶＩＩＩの血中濃度を一貫したレベルで維持させる間隔で投与され得かつ／または再投薬され得、患者の血中におけるＦＶＩＩＩの濃度が、治療量以下のまたは治療上非関連のレベルに到達するまで再投薬するのを待つ必要なく、継続的で、一定で、かつ予測可能な治療効果を提供する。伝統的実践では、「健常なレベル」または治療上有効な／関連するレベルのＦＶＩＩＩが血流になおも存在する間、ＦＶＩＩＩの後続投薬は、通常では対象に与えられない。ゆえに、本発明は、予防にとってより理想的に適している、血流におけるより一貫した治療レベルのＦＶＩＩＩを提供する。
【0102】
対象の血中におけるＦＶＩＩＩの治療量以下のまたは治療上非関連のレベルは、患者が、２０分間以下、１５分間以下、または１２分間以下の全血凝固時間を維持することができない場合であると特徴付けられ得る。
【0103】
本発明は、患者が、多くとも（ｎｏ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ）２０分間、多くとも１５分間、または多くとも１２分間の全血凝固時間を維持することができる組成物を提供する。
【0104】
生体適合性ポリマーで誘導体化されたコロイド粒子（リポソーム）を伴った血液因子の製剤は、上手く皮下投与され得、血友病に罹患した対象に治療有効用量の血液因子をもたらし得ることが驚くべきことに見出された。
【0105】
本発明の実施例において、ＰＥＧは、血液因子との結び付きの前に、小胞形成の間にコロイド粒子内に組み入れられる。血液因子上の特異的アミノ酸配列が、リポソームの外側にあるＰＥＧ分子のカルバメート官能基に非共有結合的に結合し得ると思われる。
【0106】
コロイド粒子は血液因子をカプセル化しない。血液因子は、リポソームの外面上のポリマー鎖と非共有結合的に相互作用し、ポリマー鎖を活性化する化学反応は行われない。血液因子と生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリポソームとの間の相互作用の性質は、イオン性相互作用、疎水性相互作用、水素結合、およびファンデルワールス力等の任意の非共有結合性メカニズムによるものであり得る（Ａｒａｋａｗａ，Ｔ．およびＴｉｍａｓｈｅｆｆ，Ｓ．Ｎ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４：６７５６～６７６２（１９８５）；Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．およびＬｅｅ，Ｌ．Ｌ．Ｙ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２２６：６２５～６３１（１９８１））。そのようなポリマーの例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
【0107】
親水性ポリマーで誘導体化された脂質を形成する小胞を調製するために、多様な公知のカップリング反応が使用され得る。例えば、ポリマー（ＰＥＧ等）は、塩化シアヌル基を通じて、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）等の脂質に誘導体化され得る。代替的に、キャップ付きＰＥＧをカルボニルジイミダゾールカップリング試薬で活性化して、活性化イミダゾール化合物を形成し得る。カルバメート連結化合物は、ＭＰＥＧ（メトキシＰＥＧ）の末端ヒドロキシルとクロロギ酸ｐ－ニトロフェニルとを反応させて炭酸ｐ－ニトロフェニルを得ることによって調製され得る。次いで、この産物を１－アミノ－２，３－プロパンジオールと反応させて、カルバメート中間体を得る。ジオールのヒドロキシル基をアシル化して最終産物を得る。ＷＯ０１／０５８７３に記載されるように、１－アミノ－２，３－プロパンジオールの代わりにグリセロールを使用した同様の合成を使用して、カルボネート連結産物を産生し得る。他の反応が周知であり、例えばＵＳ５，０１３，５５６に記載される。
【0108】
コロイド粒子（リポソーム）は、様々なパラメーターに従って分類され得る。例えば、ラメラのサイズおよび数（構造的パラメーター）をパラメーターとして使用する場合には、３種の主要なタイプのリポソームが記載され得る：多重層小胞（ＭＬＶ）、小さな単層小胞（ＳＵＶ）、および大きな単層小胞（ＬＷ）。
【0109】
ＭＬＶは、それらのゲル－液晶相転移温度（Ｔｍ）よりも上で、乾燥リン脂質の水和時に自然発生的に形成される種である。ＭＬＶのサイズは不均一であり、それらの構造は、交互の同心円状の水層および脂質層のタマネギの皮に似ている。
【0110】
ＳＵＶは、超音波処理、または押出、高圧ホモジナイゼーション、もしくは高剪断混合等の他の方法によってＭＬＶから形成され、単一層である。それらは、高い表面対容積比を有する最も小さな種であり、それゆえ、脂質の重量に対して最も低い捕捉容積の水性空間を有する。
【0111】
第３のタイプのリポソームＬＵＶは、大きな水性コンパートメントおよび単一（単層）のまたはごくわずかな（オリゴラメラの）脂質層を有する。さらなる詳細は、Ｄ．ＬｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇおよびＹ．Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ、「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ」、第３３巻、３３７～４６２頁（１９８８）に開示される。
【0112】
本明細書において使用されるとき、「搭載」という用語は、搭載される対象となるバイオポリマー物質の任意の種類の相互作用、例えば、バイオポリマー物質の押出の有無にかかわらない、カプセル化、付着（小胞の内壁または外壁への）、または壁内への埋め込み等の相互作用を意味する。
【0113】
本明細書において使用されかつ上で示されるとき、「リポソーム」という用語は、コロイド粒子を指し、自然発生的にまたは非自然発生的に小胞を生じ得る任意の両親媒性化合物のすべての球体または小胞、例えば少なくとも１個のアシル基が、複雑なリン酸エステルによって置き換えられているリン脂質を含むことを意図される。リポソームは、ガラス状態から液晶までの任意の物理的状態で存在し得る。ほとんどのトリアシルグリセリドが適切であり、本発明における使用に適切な最も一般的なリン脂質は、レシチン（ホスファチジルコリン（ＰＣ）とも称される）であり、それは、リン酸のコリンエステルに連結した、ステアリン酸、パルミチン酸、およびオレイン酸のジグリセリドの混合物である。レシチンは、卵、大豆、および動物組織（脳、心臓等）等、すべての動物および植物に見出され、合成でも産生され得る。リン脂質の供給源またはその合成の方法は重大ではなく、任意の天然に存在するまたは合成のホスファチドが使用され得る。
【0114】
具体的なホスファチドの例は、Ｌ－ａ－（ジステアロイル）レシチン、Ｌ－ａ－（ジパルミトイル）レシチン、Ｌ－ａ－ホスファチジン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｅ ａｃｉｄ）、Ｌ－ａ－（ジラウロイル）－ホスファチジン酸、Ｌ－ａ（ジミリストイル）ホスファチジン酸、Ｌ－ａ（ジオレオイル）ホスファチジン酸、ＤＬ－ａ（ジ－パルミトイル）ホスファチジン酸、Ｌ－ａ（ジステアロイル）ホスファチジン酸、および脳、肝臓、卵黄、心臓、大豆等から、または合成で調製された様々なタイプのＬ－ａ－ホスファチジルコリン、ならびにその塩である。他の適切な修飾は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）における脂肪アシル残基架橋剤の制御性過酸化、およびそれら自身で、またはＰＣのアルキル類似体等のＰＣと混合された場合にミセルを形成する双性イオン性両親媒性物質（ａｍｐｈｉｐａｔｈａｔｅ）を含む。
【0115】
リン脂質は、純度が変動し得、完全にまたは部分的に水素化もされ得る。水素化は、不要な過酸化のレベルを低下させ、パッキングおよび漏出をもたらすゲル－液体／結晶相転移温度（Ｔｍ）を修正しかつ制御する。
【0116】
リポソームは、様々な生物学的流体を含む任意の特異的貯蔵庫の要件に「合わせ」られ得、凝集またはクロマトグラフ分離なしでそれらの安定性を維持し、注射される流体中に十分に分散しかつ懸濁されたままの状態である。インサイチューにおける流動性は、組成、温度、塩分濃度、２価イオン、およびタンパク質の存在に起因して変化する。リポソームは、任意の他の溶媒または界面活性剤の有無にかかわらず使用され得る。
【0117】
一般的に適切な脂質は、少なくとも、卵または大豆ＰＣにおけるアシル鎖構成要素の転移温度（Ｔｍ）に関して特徴的であるアシル鎖組成を有し得る、すなわち１本の鎖が飽和でありかつ１本が不飽和である、または両方が不飽和である。しかしながら、２本の飽和鎖を使用する可能性が除外されない。
【0118】
リポソームは、これらが、不安定性および／または凝集および／またはクロマトグラフ分離を誘導しない限りにおいて、他の脂質構成要素を含有し得る。これは、ルーチン実験によって判定され得る。
【0119】
ＰＥＧ化リン脂質は、コロイド粒子の表面に物理的に接着され得る、またはコロイド粒子の膜に挿入され得る。ポリマーは、それゆえ、コロイド粒子に共有結合され得る。
【0120】
単層または多重層である修飾コロイド粒子を産生するための多様な方法が公知であり、使用可能である（ＬｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇおよびＢａｒｅｎｈｏｌｚ、（１９８８）を参照されたい）：
１．リン脂質の薄膜を水性媒体で水和し、その後に機械的振とうおよび／もしくは超音波照射および／もしくは適切なフィルターを通した押出が続く；
２．適切な有機溶媒中でのリン脂質の溶解、水性媒体との混合、その後に溶媒の除去が続く；
３．その臨界点を上回る気体の使用（すなわち、フロン、およびＣＯ２、またはＣＯ２と他のガス状炭化水素との混合物等の他の気体）、または
４．脂質洗剤混合ミセルを調製し、次いで洗剤の濃度を、リポソームが形成されるその臨界濃度を下回るレベルまで下げる。
１．リン脂質の薄膜を水性媒体で水和し、その後に機械的振とうおよび／もしくは超音波照射および／もしくは適切なフィルターを通した押出が続く；
２．適切な有機溶媒中でのリン脂質の溶解、水性媒体との混合、その後に溶媒の除去が続く；
３．その臨界点を上回る気体の使用（すなわち、フロン、およびＣＯ２、またはＣＯ２と他のガス状炭化水素との混合物等の他の気体）、または
４．脂質洗剤混合ミセルを調製し、次いで洗剤の濃度を、リポソームが形成されるその臨界濃度を下回るレベルまで下げる。
【0121】
一般的に、そのような方法は、約０．０２～１０μｍ以上の不均一なサイズを有するコロイド粒子を産生する。比較的小さくかつサイズが十分に規定されるコロイド粒子が、本発明における使用に好ましいことから、「コロイド粒子小型化」として規定される第２のプロセシング工程は、コロイド粒子懸濁液のサイズおよびサイズ不均一性を低下させるために使用され得る。
【0122】
コロイド粒子懸濁液のサイズを測って、約５μｍ未満のサイズ域、例えば＜０．４μｍにある小胞の選択的サイズ分布を達成し得る。本発明の１つの実施形態において、コロイド粒子は、約０．０３～０．４ミクロン（μｍ）、または０．０５～０．１５ミクロン（μｍ）、適切には０．１ミクロン（μｍ）前後の平均的粒子サイズ径を有する。
【0123】
この域にあるコロイド粒子は、適切なフィルターを通した濾過によって容易に滅菌され得る。より小さな小胞ほど、保管時に凝集する傾向がより低いことも示し、ゆえに、リポソームが静脈内にまたは皮下に注射される場合、潜在的に深刻な閉塞または詰まり問題を低下させる。最後に、サブミクロン域まで小型化されているリポソームは、より均一な分布を示す。
【0124】
いくつかの技法が、本発明に適切な様式で、コロイド粒子のサイズおよびサイズ不均一性を低下させるために使用可能である。標準的な水槽またはプローブ超音波装置によるコロイド粒子懸濁液の超音波照射は、サイズが０．０２～０．０８μｍの小さな単層小胞（ＳＵＶ）への漸進的サイズ低下をもたらす。
【0125】
ホモジナイゼーションは、大きなコロイド粒子をより小さなものに断片化するために剪断エネルギーに依存する別の方法である。典型的なホモジナイゼーション手順では、選択されたリポソームサイズ、典型的には０．１～０．５μｍが観察されるまで、コロイド粒子懸濁液を標準的エマルジョンホモジナイザーを通して再循環させる。両方法において、粒子サイズ分布は、従来のレーザービーム粒子サイズ判定によってモニターされ得る。
【0126】
小細孔ポリカーボネートフィルターまたは等価の膜を通したコロイド粒子の押出も、膜の細孔サイズに応じて、平均が約０．０２～５μｍの域にある、比較的十分に規定されたサイズ分布までコロイド粒子サイズを低下させるための有効な方法である。
【0127】
典型的に、所望のコロイド粒子サイズ分布が達成されるまで、懸濁液を１枚または２枚の積層膜を通して数回循環させる。コロイド粒子を連続してより小さな細孔膜を通して押出して、リポソームサイズの段階的低下を達成し得る。
【0128】
遠心分離および分子篩クロマトグラフィーは、１μｍ未満の選択閾値を下回る粒子サイズを有するリポソーム懸濁液を産生するために使用可能である他の方法である。これら２つのそれぞれの方法は、大きな粒子からより小さなものへの変換よりもむしろ、大きなリポソームの優先的除去を伴う。コロイド粒子収率は、それに応じて低下する。
【0129】
サイズ処理されたコロイド粒子懸濁液は、従来の０．４５μｍデプス膜フィルター等、約０．４μｍの粒子識別サイズを有する滅菌膜を通過することによって容易に滅菌され得る。リポソームは、凍結乾燥形態で安定であり、水中に取り込ませることによって使用の直前に再構成され得る。
【0130】
コロイド粒子を形成するための適切な脂質は、上で記載される。適切な例は、ジミリストイルホスファチジルコリン（ｄｉｍｉｒｙｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）（ＤＭＰＣ）および／またはジミリストイル（ｄｉｍｉｒｙｓｔｏｙｌ）－ホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）等のリン脂質、直接的にまたは部分的なもしくは完全な水素化が後に続く、部分的なまたは完全な精製の後に獲得される卵および大豆由来のリン脂質を含むが、それらに限定されない。
【0131】
以下の４つの方法は、ＷＯ９５／０４５２４に記載され、概して、本発明に従って使用されるコロイド粒子（リポソーム）の調製に適切である。
方法Ａ
ａ）水不混和性有機溶媒中で小胞を形成するのに適切な脂質等、両親媒性物質を混合する
ｂ）固体支持体の存在下で溶媒を除去し、代替的に、乾燥両親媒性物質またはその混合物が、直接任意の形態（粉末、顆粒等）で使用され得る、
ｃ）生理学的適合性溶液中のバイオポリマー物質の溶液に、工程ｂ）の産物を取り込ませる
ｄ）可溶化または分散特性を有する有機溶媒を添加する、ならびに
ｅ）バイオポリマー物質の機能を保持する条件下で、工程ｄ）において獲得された画分を乾燥させる。
方法Ａ
ａ）水不混和性有機溶媒中で小胞を形成するのに適切な脂質等、両親媒性物質を混合する
ｂ）固体支持体の存在下で溶媒を除去し、代替的に、乾燥両親媒性物質またはその混合物が、直接任意の形態（粉末、顆粒等）で使用され得る、
ｃ）生理学的適合性溶液中のバイオポリマー物質の溶液に、工程ｂ）の産物を取り込ませる
ｄ）可溶化または分散特性を有する有機溶媒を添加する、ならびに
ｅ）バイオポリマー物質の機能を保持する条件下で、工程ｄ）において獲得された画分を乾燥させる。
【0132】
方法Ａの工程ａ）に従って、上で挙げられる小胞を形成するのに適切な両親媒性物質を、水不混和性有機溶媒中で混合する。水不混和性有機溶媒は、フッ素化炭化水素、塩素化炭化水素等の極性プロトン性溶媒であり得る。
【0133】
本発明の方法の工程ｂ）において、溶媒を、固体支持体の存在下で除去する。固体支持体は、ビーズ様構造を有する不活性有機または無機材料であり得る。無機支持体材料の材料はガラスであり得、有機材料は、Ｔｅｆｌｏｎ（商標）または他の同様のポリマーであり得る。
【0134】
本発明の方法Ａの工程ｃ）は、生理学的適合性溶液中のカプセル化される対象となる物質の溶液に、工程ｂ）の産物を取り込ませるためのものである。
【0135】
生理学的適合性溶液は、重量で最高約１．５までの塩化ナトリウム溶液と等価であり得る。他の塩を、それらが、例えば凍結保護剤として生理学的に適合性である限りにおいて、使用することも可能である、例えば糖類および／またはアミノ酸。例えば、ラクトース、スクロース、またはトレハロースが、凍結保護剤として使用され得る。
【0136】
任意選択で、工程ａ）とｂ）との間に、工程ａ）の画分等のウイルス不活性化、滅菌、脱パイロジェン化、濾過の工程が提供され得る。これは、調製の初期段階で薬学的に許容される溶液を有するために有利であり得る。
【0137】
方法Ａの工程ｄ）は、可溶化または分散特性を有する有機溶媒を添加する工程である。
【0138】
有機溶媒は、水と混和性の有機極性プロトン性溶媒であり得る。第３級ブタノール（ｔｅｒｔ－ブタノール）等、アルキル鎖に１～５個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールも使用され得る。水と混和性の有機極性プロトン性溶媒の量は、リポソームに搭載される対象となる物質へのその干渉に強く依存している。例えば、タンパク質が搭載される対象となる場合、上限は、タンパク質の活性が影響を受ける溶媒の量によって設定される。これは、搭載される対象となる物質の性質によって強く変動し得る。例えば、凝血因子が第ＩＸ因子を含む場合には、ｔｅｒｔ－ブタノールのおよその量は３０％前後であり、一方で、第ＶＩＩＩ因子に関しては、１０％未満の量のｔｅｒｔ－ブタノールが適切である（第ＶＩＩＩ因子は、ｔｅｒｔ－ブタノールの影響にはるかに感受性が高い）。これらの例におけるｔｅｒｔ－ブタノールのパーセンテージは、最終濃度に対して計算される容積でのパーセントに基づく。
【0139】
任意選択で、工程ｄ）に続いて、工程ｄ）の後に得られた画分のウイルス不活性化滅菌、および／または分配が行われ得る。
【0140】
本発明の工程ｅ）は、搭載される対象となる物質の機能を保持する条件下で、工程ｄ）において獲得された画分を乾燥させる工程である。混合物を乾燥させるための１つの方法は凍結乾燥である。凍結乾燥は、凍結保護剤、例えばラクトースもしくは他のサッカリド、またはアミノ酸の存在下で行われ得る。代替的に、蒸発または噴霧乾燥が使用され得る。
【0141】
乾燥した残留物は、次いで、使用前に水性媒体に取り込まれ得る。固体の取り込み後、それは、それぞれのリポソームの分散体を形成する。水性媒体は生理食塩溶液を含有し得、形成された分散体は、必要な場合には、任意選択で適切なフィルターに通されて、リポソームを小型化し得る。適切には、リポソームは、０．０２～５μｍ、例えば＜０．４μｍの域にあるサイズを有し得る。
【0142】
方法Ａによって獲得可能なリポソームは、血液因子の高い搭載を示す。
【0143】
本発明の組成物は、方法Ａの工程ｃ）またはｄ）のいずれかの画分の単離によって獲得可能な中間産物でもあり得る。したがって、本発明の製剤は、分散体の形態の、水中に方法Ａの工程ｅ）の産物を取り込ませた後に獲得可能な水性分散体も含む（水性媒体中のリポソーム）。
【0144】
代替的に、本発明の医薬組成物は、方法Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥと称される以下の方法によっても獲得可能である。
方法Ｂ
この方法も、方法Ａの工程ａ）、ｂ）、およびｃ）を含む。しかしながら、方法Ａの工程ｄ）およびｅ）は省かれる。
方法Ｃ
方法Ｃでは、方法Ａの工程ｄ）は、凍結および融解サイクルによって置き換えられ、それは少なくとも２回反復される必要がある。この工程は、リポソームを産生する先行技術において周知である。
方法Ｄ
方法Ｄは、いかなる浸透性構成要素の使用も除外する。小胞の調製の工程である方法Ｄでは、搭載される対象となる物質の実質的に塩不含の溶液を混ぜる工程、およびこのようにして獲得された画分を共乾燥する工程を伴う。
方法Ｅ
方法Ｅは、上で記載される方法Ａ～Ｄよりも簡単である。それは、ｔｅｒｔ－ブタノール等の極性プロトン性水混和性溶媒に、リポソーム調製に使用される化合物（脂質酸化防止剤等）を溶解する工程を要する。次いで、この溶液を、血液因子を含有する水溶液または分散体と混合する。混合は、作用物質の生物学的および薬理学的活性を維持するために要される最適な容積比で実施される。
方法Ｂ
この方法も、方法Ａの工程ａ）、ｂ）、およびｃ）を含む。しかしながら、方法Ａの工程ｄ）およびｅ）は省かれる。
方法Ｃ
方法Ｃでは、方法Ａの工程ｄ）は、凍結および融解サイクルによって置き換えられ、それは少なくとも２回反復される必要がある。この工程は、リポソームを産生する先行技術において周知である。
方法Ｄ
方法Ｄは、いかなる浸透性構成要素の使用も除外する。小胞の調製の工程である方法Ｄでは、搭載される対象となる物質の実質的に塩不含の溶液を混ぜる工程、およびこのようにして獲得された画分を共乾燥する工程を伴う。
方法Ｅ
方法Ｅは、上で記載される方法Ａ～Ｄよりも簡単である。それは、ｔｅｒｔ－ブタノール等の極性プロトン性水混和性溶媒に、リポソーム調製に使用される化合物（脂質酸化防止剤等）を溶解する工程を要する。次いで、この溶液を、血液因子を含有する水溶液または分散体と混合する。混合は、作用物質の生物学的および薬理学的活性を維持するために要される最適な容積比で実施される。
【0145】
次いで、混合物を、凍結保護剤の存在または不在下で凍結乾燥する。リポソーム製剤の使用前に、再水和が要される。これらのリポソームは多重層であり、それらの小型化は、ＷＯ９５／０４５２４に記載される方法の１つによって達成され得る。
【0146】
本発明の第１の態様の対象における血友病Ａの治療における使用のための組成物は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法の５０日未満の曝露日を受けたことがある対象に使用され得る。例えば、対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法を受けたことがなくてもよく、そのような患者は、以前に治療されていない患者（ＰＵＰ）として知られる。例えば、対象は、合計９８日間１日おきに第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法を受けたことがあってもよく、それゆえ、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法の４９日間の曝露日を受けたことがある。
【0147】
以前に治療されていない患者（ＰＵＰ）は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法で治療されたことがない対象として定義される。ＰＵＰは、外在性ＦＶＩＩＩに対する中和抗体を発生させる最も高いリスクがある。そのような以前に治療されていない患者は、治療されていない患者、または第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法に対してナイーブである患者としても知られる。
【0148】
最小限に治療された患者（ＭＴＰ）は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法の５０日未満の曝露日を受けたことがある対象として定義される。ＭＴＰも、外在性ＦＶＩＩＩに対する中和抗体を発生させるリスクがある。
【0149】
以前に治療された患者（ＰＴＰ）は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法の５０日間を上回るまたはそれに等しい曝露日を受けたことがある対象として定義される。ＰＴＰは、外在性ＦＶＩＩＩに対する中和抗体を発生させる可能性が低い。
【0150】
本発明の第１の態様の対象における血友病Ａの治療における使用のための組成物は、小児対象に使用され得る。小児患者は、出生～１８歳の集団のその部分として欧州連合（ＥＵ）において定義される。小児集団は、いくつかのサブセットを包含する。小児患者の適用される年齢分類は：
・０～２７日間の満期前および満期新生児；
・１カ月～２３カ月の乳児（または幼児）；
・２歳～１１歳の子ども；および
・１２～１８歳未満の青少年。
（ｈｔｔｐ：／／ｅｃ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｈｅａｌｔｈ／ｓｉｔｅｓ／ｈｅａｌｔｈ／ｆｉｌｅｓ／ｆｉｌｅｓ／ｅｕｄｒａｌｅｘ／ｖｏｌ－１／２０１４ ｃ３３８ ０１／２０１４ ｃ３３８ ０１ ｅｎ．ｐｄｆを参照されたい）。
・０～２７日間の満期前および満期新生児；
・１カ月～２３カ月の乳児（または幼児）；
・２歳～１１歳の子ども；および
・１２～１８歳未満の青少年。
（ｈｔｔｐ：／／ｅｃ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｈｅａｌｔｈ／ｓｉｔｅｓ／ｈｅａｌｔｈ／ｆｉｌｅｓ／ｆｉｌｅｓ／ｅｕｄｒａｌｅｘ／ｖｏｌ－１／２０１４ ｃ３３８ ０１／２０１４ ｃ３３８ ０１ ｅｎ．ｐｄｆを参照されたい）。
【0151】
血友病Ａは、先天性血友病Ａ（ｃＨＡ）または後天性血友病Ａ（ａＨＡ）であり得る。先天性血友病は、凝血第ＶＩＩＩ因子の不在または低下したレベルによって特徴付けられる遺伝性出血性障害である。後天性血友病は、出血のいかなる個人のまたは家族の病歴なく、個体において自己抗体阻害剤の突然の産生がある自己免疫病態である。身体は、血友病Ａにおいて第ＶＩＩＩ因子に対する自己抗体を産生する。
【0152】
ＰＵＰまたはＭＴＰは、５ベセスダ単位未満のＦＶＩＩＩ阻害剤（抗体）活性も有し得、すなわち、患者は、ＦＶＩＩＩに対する阻害剤（抗体）の存在について試験で陽性を示している可能性がある。本発明を踏まえて、患者は、それゆえ、ＦＶＩＩＩ阻害剤（ＦＶＩＩＩに対する抗体）の存在について試験され得る。患者の血中の抗体阻害剤は、ベセスダ法を使用して定量され、患者における阻害剤（抗体）のレベルについて話す場合、専門的には「ベセスダ単位」を共通して使用する。５ベセスダ単位を上回る値のＦＶＩＩＩ阻害剤は、高力価の阻害剤と見なされる（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｍａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｅｎ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ－ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ／ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ－ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ－ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ－ｈｕｍａｎ－ｐｌａｓｍａ－ｄｅｒｉｖｅｄ－ｆａｃｔｏｒ－ｖｉｉｉ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ－ｒｅｖｉｓｉｏｎ－２＿ｅｎ．ｐｄｆを参照されたい）。
【0153】
本発明の第１の態様の対象における血友病Ａの治療における使用のための組成物は、５ベセスダ単位未満のＦＶＩＩＩ阻害剤（抗体）活性を有する対象の治療において使用され得る。
【0154】
ベセスダ単位（ＢＵ）は、血液凝固阻害剤活性の尺度である。実践的止血によれば、「１ベセスダ単位（Ｂｕ）とは、３７℃における２時間のインキュベーション後の正常血漿における１単位の第ＶＩＩＩ因子：Ｃの５０％を中和するであろう、血漿サンプルにおける阻害剤の量として定義される」（Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ，Ｈａｒｏｌｄ Ｒｏｂｅｒｔ（２０００）．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ、５８３頁）。１単位の第ＶＩＩＩ因子は、１ＩＵ／ｍＬの第ＶＩＩＩ因子に等しい。
【0155】
ベセスダアッセイは、試験血漿の希釈後に残る残留ＦＶＩＩＩ活性を測定することに基づく。アッセイは、３７℃で２時間インキュベートされた、試験血漿および正常血漿の試験混合物と、正常血漿および緩衝液の対照混合物との比較を要する。試験混合物における残留活性パーセントは、ベセスダ単位（ＢＵ）に変換される。
【0156】
ベセスダアッセイは、以下のとおりに実施される：
１．試験（患者）血漿の倍加希釈［通常１／２～１／１０２４］を、イミダゾール緩衝生理食塩水において作製し、等容積の正常血漿プールと３７℃でインキュベートする。ナイメゲン変法では、患者血漿の希釈は、第ＶＩＩＩ因子欠損血漿において作製される。
２．イミダゾール緩衝生理食塩水（または、ナイメゲン変法の場合、免疫枯渇した第ＶＩＩＩ因子欠損血漿）と混合された等容積の正常血漿からなる対照混合物を調製する。正常血漿プールは、約１００％［１００ＩＵ／ｄＬ］の第ＶＩＩＩ因子を含有するであろう。この混合物は、実際には、５０％［５０ＩＵ／ｄＬ］の第ＶＩＩＩ因子の開始濃度を有する（緩衝液を用いた５０：５０希釈を実施しているため）が、これは、同じ供給源および容積がすべてのインキュベーション混合物に添加されるため問題ではない。対照の使用は、インキュベーション期間の間の第ＶＩＩＩおよびＶ因子の劣化を補う。
３．インキュベーション期間の終わりに、残留第ＶＩＩＩ因子を、インキュベートされた対照を１００％［１００ＩＵ／ｄＬ］標準物質として使用した、標準的１段階ＡＰＴＴベースのアッセイを使用してアッセイする。
４．阻害剤濃度を、残留第ＶＩＩＩ因子活性対阻害剤単位のグラフから計算する。５０％に最も近いが３０～６０％域内にある残留第ＶＩＩＩ因子を与える試験血漿の希釈を、阻害剤の計算に選定する。各希釈に対する阻害剤力価を計算し、平均を取ることも可能である。＜２５％［２５ＩＵ／ｄＬ］または＞７５％［７５ＩＵ／ｄＬ］のいかなる残留第ＶＩＩＩ因子も、阻害剤レベルの計算に使用されるべきではない。
５．残留第ＶＩＩＩ因子活性が８０～１００％［８０～１００ＩＵ／ｄＬ］にある場合、サンプルは阻害剤を含有しない。
６．グラフから阻害剤力価を導き出し、希釈を掛けて最終力価を与える。既知の阻害剤力価の陽性対照血漿が含まれるべきである。
１．試験（患者）血漿の倍加希釈［通常１／２～１／１０２４］を、イミダゾール緩衝生理食塩水において作製し、等容積の正常血漿プールと３７℃でインキュベートする。ナイメゲン変法では、患者血漿の希釈は、第ＶＩＩＩ因子欠損血漿において作製される。
２．イミダゾール緩衝生理食塩水（または、ナイメゲン変法の場合、免疫枯渇した第ＶＩＩＩ因子欠損血漿）と混合された等容積の正常血漿からなる対照混合物を調製する。正常血漿プールは、約１００％［１００ＩＵ／ｄＬ］の第ＶＩＩＩ因子を含有するであろう。この混合物は、実際には、５０％［５０ＩＵ／ｄＬ］の第ＶＩＩＩ因子の開始濃度を有する（緩衝液を用いた５０：５０希釈を実施しているため）が、これは、同じ供給源および容積がすべてのインキュベーション混合物に添加されるため問題ではない。対照の使用は、インキュベーション期間の間の第ＶＩＩＩおよびＶ因子の劣化を補う。
３．インキュベーション期間の終わりに、残留第ＶＩＩＩ因子を、インキュベートされた対照を１００％［１００ＩＵ／ｄＬ］標準物質として使用した、標準的１段階ＡＰＴＴベースのアッセイを使用してアッセイする。
４．阻害剤濃度を、残留第ＶＩＩＩ因子活性対阻害剤単位のグラフから計算する。５０％に最も近いが３０～６０％域内にある残留第ＶＩＩＩ因子を与える試験血漿の希釈を、阻害剤の計算に選定する。各希釈に対する阻害剤力価を計算し、平均を取ることも可能である。＜２５％［２５ＩＵ／ｄＬ］または＞７５％［７５ＩＵ／ｄＬ］のいかなる残留第ＶＩＩＩ因子も、阻害剤レベルの計算に使用されるべきではない。
５．残留第ＶＩＩＩ因子活性が８０～１００％［８０～１００ＩＵ／ｄＬ］にある場合、サンプルは阻害剤を含有しない。
６．グラフから阻害剤力価を導き出し、希釈を掛けて最終力価を与える。既知の阻害剤力価の陽性対照血漿が含まれるべきである。
【0157】
血液凝固カスケードにおける活性のレベルは、任意の適切なアッセイ、例えば全血凝固時間（ＷＢＣＴ）試験、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、またはＲＯＴＥＭによって測定され得る。１段階および２段階／発色アッセイにおいて、主にアッセイ方法は分光光度法を伴い、そのためサンプルは透明である必要があるため、血液サンプルは、細胞断片を除去するために遠心分離によって調製される必要がある。下の包括的な凝血アッセイは、凝血の物理的形成の時間経過を査定し、ゆえに、凝血に寄与するすべての構成要素、例えば血小板が含まれることから、「本物の生命体」により近い。
【0158】
全血凝固時間（ＷＢＣＴ）試験は、全血が、外部環境、通常ガラスチューブまたはディッシュにおいて凝血を形成するのにかかる時間を測定する。ＷＢＣＴは、回収の直後に採取され、２本のガラスチューブに分けられた２ｍｌの全血を用いて査定され得る。これら２本のチューブを、次いで３７℃の水槽に置き、穏やかに傾転させることによっておよそ２０～３０秒ごとにチェックする。チューブを水平に転倒させることができ、血漿の流出がなく、固形の凝血が保持される場合、凝血が判定される。
【0159】
活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）試験は、凝血経路の一部のパラメーターを測定する。それは、血友病においておよび静脈内ヘパリン療法によって異常に上昇する。ＡＰＴＴは、静脈由来の数ミリリットルの血液を要する。ＡＰＴＴ時間は、「内因性経路」として公知の凝血系の一部についての尺度である。ＡＰＴＴ値は、検査室試験において生じる特異的凝血過程に関する秒単位の時間である。この結果は、正常血液の「対照」サンプルと必ず比較される。試験サンプルが、対照サンプルよりも長くかかる場合、それは、内因性経路における凝血機能の減少を示す。一般的な内科療法は、通常、４５～７０秒間の規模のＡＰＴＴの域を目指すが、値は、試験対正常の比、例えば正常の１．５倍としても表現され得る。ヘパリン治療の不在下における高いＡＰＴＴは、血友病に起因し得、それはさらなる試験を要し得る。
【0160】
ＲＯＴＥＭ（回転式トロンボエラストメトリー）は、ＲＯＴＥＭ Ｄｅｌｔａ ２．７．２システムを使用して、ＮＡＴＥＭアッセイにより血液サンプルの凝固能を査定する（再石灰化のみによって活性化される）。測定に関しては、２０ｕＬのＣａＣｌ２および３４０ｕＬのクエン酸全血サンプルを装置に置く。アッセイは、新たな血液サンプルを採取した１５分以内に実施される。アッセイは、他の中でも凝血時間（ＣＴ－血液が凝血を始める時間）、凝血形成時間（ＣＦＴ－最大凝血硬度までの時間）を含めた、凝血の形成の間に多数の統計値をもたらす。
【0161】
本発明は、対象が、２０分間未満、１５分間未満、または適切には１２分間未満の全血凝固時間を維持することを可能にする組成物を提供する。
【0162】
以下は、ＦＶＩＩＩ濃度を査定するための発色アッセイ（「２段階アッセイ」と呼ばれることもある）を記載する。
【0163】
ＦＶＩＩＩ血漿活性は、以下のような供給された方法の修正を有して、Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ Ｃｏａｍａｔｉｃ Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩＩ発色アッセイ（Ｄｉａｐｈａｒｍａ、Ｋ８２２５８５）を使用して判定され得る：
ｉ．血漿サンプル希釈との比較可能性をもたらすための、ＦＶＩＩＩ標準物質調製におけるある量のナイーブ血漿の内包、
ｉｉ．各試験品目に特異的なＦＶＩＩＩ標準物質の使用（Ｎｕｗｉｑ（商標）またはＦａｃｔａｎｅ（商標））、
ｉｉｉ．２つの標準曲線域内への付加的なＦＶＩＩＩ活性値の内包。
Ｎｕｗｉｑ（商標）およびＦａｃｔａｎｅ（商標）ＦＶＩＩＩ標準物質ストック溶液の調製：
各試験品目のバイアルは、精製水で１００ＩＵ／ｍｌに再構成され得、－７０℃にて小さなアリコートで冷凍されて保管され得、アリコートは、アッセイの日に３７℃で融解され得る。調査試験品目に適当なストック溶液が、対応する血漿サンプルの分析に使用される。
ｉ．血漿サンプル希釈との比較可能性をもたらすための、ＦＶＩＩＩ標準物質調製におけるある量のナイーブ血漿の内包、
ｉｉ．各試験品目に特異的なＦＶＩＩＩ標準物質の使用（Ｎｕｗｉｑ（商標）またはＦａｃｔａｎｅ（商標））、
ｉｉｉ．２つの標準曲線域内への付加的なＦＶＩＩＩ活性値の内包。
Ｎｕｗｉｑ（商標）およびＦａｃｔａｎｅ（商標）ＦＶＩＩＩ標準物質ストック溶液の調製：
各試験品目のバイアルは、精製水で１００ＩＵ／ｍｌに再構成され得、－７０℃にて小さなアリコートで冷凍されて保管され得、アリコートは、アッセイの日に３７℃で融解され得る。調査試験品目に適当なストック溶液が、対応する血漿サンプルの分析に使用される。
【0164】
概略的アッセイ方法は、以下のとおりであった：
１．Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩＩ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｐｌａｓｍａ（ｎａｔｉｖｅ；Ｄｉａｐｈａｒｍａ ５１５４００７）のバイアルを、１ｍｌ精製水中で新たに再構成した、
２．０．９９０ｍＬ ＦＶＩＩＩ欠損血漿への０．０１０ｍＬの適当なＦＶＩＩＩ標準物質ストック溶液（１００ＩＵ／ｍｌ）の添加によって、ＦＶＩＩＩ標準物質ワーキングストック溶液（１ＩＵ／ｍＬ）を新たに調製した、
３．ＣｏａｍａｔｉｃキットＦａｃｔｏｒ試薬、Ｓ－２７６５＋Ｉ－２５８１基質、および緩衝液ワーキング溶液を、キット使用説明書に従って調製し、３７℃に予熱した、
４．２０％酢酸停止溶液を調製した、
５．調査サンプルに適当なＦＶＩＩＩ域を使用して、ＦＶＩＩＩワーキングストック溶液（１ＩＵ／ｍｌ）から標準曲線を作成した（表１および２を参照されたい、
６．各試験血漿サンプルの１つのアリコートを、３７℃で急速に融解した。
７．２５μｌの融解された試験血漿サンプルを、２０００μｌの緩衝液ワーキング溶液で希釈した。
８．５０μｌの希釈されたＦＶＩＩＩ標準物質および希釈された試験血漿サンプルを、プレートマップに従って９６ウェルプレートのウェルに添加し、３７℃で４分間インキュベートした。
９．５０μＩのＦａｃｔｏｒ試薬を各ウェルに添加し、３７℃で２分間（高域の標準曲線）または３７℃で４分間（低域の標準曲線）インキュベートした。
１０．５０μｌのＳ－２７６５＋Ｉ－２５８１基質を各ウェルに添加し、３７℃で２分間（高域の標準曲線）または３７℃で１０分間（低域の標準曲線）インキュベートした。
１１．５０μｌの２０％酢酸停止溶液を各ウェルに添加した。ウェル内の色はわずかに黄色になり、光学密度を吸光度４０５ｎｍでマイクロプレートリーダーによって測定した。
１２．最良にフィットした線形曲線を使用して、ＦＶＩＩＩ標準物質活性（ＩＵ／ｍｌ）を４０５ｎｍにおける吸光度に対してプロットした。
１３．試験血漿サンプル吸光度を標準曲線に対して読み取り、ＦＶＩＩＩ活性をＩＵ／ｍｌ単位で報告した。
１４．平均（および、個々の調査において示される場合には中央値）ＦＶＩＩＩ活性結果を、各時点における３つのマウス試験血漿サンプルから計算し、データを薬物動態学的分析に供した。
１．Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩＩ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｐｌａｓｍａ（ｎａｔｉｖｅ；Ｄｉａｐｈａｒｍａ ５１５４００７）のバイアルを、１ｍｌ精製水中で新たに再構成した、
２．０．９９０ｍＬ ＦＶＩＩＩ欠損血漿への０．０１０ｍＬの適当なＦＶＩＩＩ標準物質ストック溶液（１００ＩＵ／ｍｌ）の添加によって、ＦＶＩＩＩ標準物質ワーキングストック溶液（１ＩＵ／ｍＬ）を新たに調製した、
３．ＣｏａｍａｔｉｃキットＦａｃｔｏｒ試薬、Ｓ－２７６５＋Ｉ－２５８１基質、および緩衝液ワーキング溶液を、キット使用説明書に従って調製し、３７℃に予熱した、
４．２０％酢酸停止溶液を調製した、
５．調査サンプルに適当なＦＶＩＩＩ域を使用して、ＦＶＩＩＩワーキングストック溶液（１ＩＵ／ｍｌ）から標準曲線を作成した（表１および２を参照されたい、
６．各試験血漿サンプルの１つのアリコートを、３７℃で急速に融解した。
７．２５μｌの融解された試験血漿サンプルを、２０００μｌの緩衝液ワーキング溶液で希釈した。
８．５０μｌの希釈されたＦＶＩＩＩ標準物質および希釈された試験血漿サンプルを、プレートマップに従って９６ウェルプレートのウェルに添加し、３７℃で４分間インキュベートした。
９．５０μＩのＦａｃｔｏｒ試薬を各ウェルに添加し、３７℃で２分間（高域の標準曲線）または３７℃で４分間（低域の標準曲線）インキュベートした。
１０．５０μｌのＳ－２７６５＋Ｉ－２５８１基質を各ウェルに添加し、３７℃で２分間（高域の標準曲線）または３７℃で１０分間（低域の標準曲線）インキュベートした。
１１．５０μｌの２０％酢酸停止溶液を各ウェルに添加した。ウェル内の色はわずかに黄色になり、光学密度を吸光度４０５ｎｍでマイクロプレートリーダーによって測定した。
１２．最良にフィットした線形曲線を使用して、ＦＶＩＩＩ標準物質活性（ＩＵ／ｍｌ）を４０５ｎｍにおける吸光度に対してプロットした。
１３．試験血漿サンプル吸光度を標準曲線に対して読み取り、ＦＶＩＩＩ活性をＩＵ／ｍｌ単位で報告した。
１４．平均（および、個々の調査において示される場合には中央値）ＦＶＩＩＩ活性結果を、各時点における３つのマウス試験血漿サンプルから計算し、データを薬物動態学的分析に供した。
【0165】
ＦＶＩＩＩ濃度を査定するためのさらなる試験は、以下のものを含む：
発色性ＦＶＩＩＩ活性アッセイ
Ｂｉｏｐｈｅｎ ＦＶＩＩＩ：ＣアッセイキットＲｅｆ＃２２１４０６を、アッセイ緩衝液に１：１０で希釈された血漿サンプルとともに使用し、Ｎｕｗｉｑ（商標）およびヒト血漿参照標準曲線の両方に対してランした。各曲線を、イヌＦＶＩＩＩ欠損血漿の連続希釈、次いでアッセイ緩衝液における１：１０希釈によって作成した。両曲線における標準域は０．００３～０．４Ｕ／ｍＬであり、線形域は０．１３～１．００Ｕ／ｍＬであった。アッセイをキットプロトコールのとおりに実施した。
１段階第ＶＩＩＩ因子アッセイ－Ｓｉｅｍｅｎｓ ＢＣＳ－ＸＰシステム
２．５％イヌＦＶＩＩＩ欠損血漿を含有するオーレンベロナール緩衝液に希釈された正常イヌプール血漿を使用して作成されたイヌＦＶＩＩＩ参照曲線に対して、サンプルを測定した。曲線の域は５～２００％である。血漿サンプルをオーレンベロナール緩衝液に１：１０で希釈し、ＦＶＩＩＩ欠損血漿と混合し、次いでＡｃｔｉｎ ＦＳを添加した。３分間のインキュベーションの後、ＣａＣｌ２での活性化を開始し、凝血するまでの時間を４０５ｎｍで測定した。
発色性ＦＶＩＩＩ活性アッセイ
Ｂｉｏｐｈｅｎ ＦＶＩＩＩ：ＣアッセイキットＲｅｆ＃２２１４０６を、アッセイ緩衝液に１：１０で希釈された血漿サンプルとともに使用し、Ｎｕｗｉｑ（商標）およびヒト血漿参照標準曲線の両方に対してランした。各曲線を、イヌＦＶＩＩＩ欠損血漿の連続希釈、次いでアッセイ緩衝液における１：１０希釈によって作成した。両曲線における標準域は０．００３～０．４Ｕ／ｍＬであり、線形域は０．１３～１．００Ｕ／ｍＬであった。アッセイをキットプロトコールのとおりに実施した。
１段階第ＶＩＩＩ因子アッセイ－Ｓｉｅｍｅｎｓ ＢＣＳ－ＸＰシステム
２．５％イヌＦＶＩＩＩ欠損血漿を含有するオーレンベロナール緩衝液に希釈された正常イヌプール血漿を使用して作成されたイヌＦＶＩＩＩ参照曲線に対して、サンプルを測定した。曲線の域は５～２００％である。血漿サンプルをオーレンベロナール緩衝液に１：１０で希釈し、ＦＶＩＩＩ欠損血漿と混合し、次いでＡｃｔｉｎ ＦＳを添加した。３分間のインキュベーションの後、ＣａＣｌ２での活性化を開始し、凝血するまでの時間を４０５ｎｍで測定した。
【0166】
上で記載される第２の態様によれば、対象における血友病Ａを治療する方法は、コロイド粒子を含む組成物を投与する工程を含む。コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含む。第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。
【0167】
生体適合性親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸からなる群から選択され得、好ましくは、生体適合性親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ポリエチレングリコールは、約５００～約５０００ダルトン、好ましくは約２０００ダルトンまたは５０００ダルトンの分子量を有し得る。
【0168】
ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）であり得る。
【0169】
第２の両親媒性脂質は、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）またはＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）等のＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）であり得る。
【0170】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0171】
組成物は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子をさらに含み得る。代替的に、方法は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を別個にまたは後続して投与するさらなる工程を含み得る。
【0172】
コロイド粒子を含む組成物および第ＶＩＩＩ因子を含む組成物は、治療レジメンの一部として投与され得る。適切には、第ＶＩＩＩ因子を含む組成物が患者に投与され得、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５～１２０、１５～６０、１５～３０分後に、コロイド粒子を含む組成物が患者に投与される。コロイド粒子を含む組成物および第ＶＩＩＩ因子を含む組成物は、適切には、２～２１日間、４～１４日間、４～７日間等、２、３、４、５、６、７、１４、２１日ごとに、ＦＶＩＩＩの血中濃度を一貫したレベルで維持させる間隔で投与され得かつ／または再投薬され得、患者の血中におけるＦＶＩＩＩの濃度が、治療量以下のまたは治療上非関連のレベルに到達するまで再投薬するのを待つ必要なく、継続的で、一定で、かつ予測可能な治療効果を提供する。例えば、第ＶＩＩＩ因子を含む組成物は、コロイド粒子を含む組成物が患者に投与される１５分前に患者に投与され得、２工程の投与は４～５日ごとに反復される。
【0173】
代替的に、コロイド粒子および第ＶＩＩＩ因子を含む組成物は、適切には、２～２１日間、４～１４日間、４～７日間等、２、３、４、５、６、７、１４、２１日ごとに、ＦＶＩＩＩの血中濃度を一貫したレベルで維持させる間隔で投与され得かつ／または再投薬され得、患者の血中におけるＦＶＩＩＩの濃度が、治療量以下のまたは治療上非関連のレベルに到達するまで再投薬するのを待つ必要なく、継続的で、一定で、かつ予測可能な治療効果を提供する。
【0174】
そのような治療レジメンは、血友病Ａに罹患した患者を治療するために要されるＦＶＩＩＩの量を低下させる。
【0175】
血友病Ａは、先天性血友病Ａ（ｃＨＡ）または後天性血友病Ａ（ａＨＡ）であり得る。
【0176】
対象は小児患者であり得る。対象は、ＦＶＩＩＩ療法を受けたことがなくてもよい。
【0177】
本発明は、対象における血友病Ａの治療のための医薬の製造における、コロイド粒子を含む組成物の使用であって、対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある、使用も含む。
【0178】
上で記載される第３の態様によれば、キットは、対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）コロイド粒子を含む組成物、および（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を含む。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質から構成される。第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。
【0179】
本発明の凍結乾燥製剤は、同様に提供される適切な希釈剤、アジュバント、または賦形剤、例えば生理学的に許容される緩衝剤と併せて、別個の剤形として供給され得る。キットのコロイド粒子および／または第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、凍結乾燥製剤として提供され得る。代替的に、キットの第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は凍結乾燥製剤として提供され得、コロイド粒子は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の再構成のための溶液として提供され得る。本明細書に記載されるように、そのような組成物は、別個の剤形として第ＶＩＩＩ因子を付加的に含み得る、または本明細書に記載されるコロイド粒子とともに製剤化され得る。ＦＶＩＩＩの凍結乾燥形態は、５００ＩＵバイアルで提供され得る。キットのコロイド粒子および／または第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、すぐに使用できる水性形態で提供され得る。
【0180】
コロイド粒子は、非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0181】
キットは、任意選択で、使用のための使用説明書も含む。
【0182】
上で記載される第４の態様によれば、キットは、対象における血友病Ａの治療における別個の、同時の、または後続の使用のための、（ｉ）コロイド粒子を含む組成物、および（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子を含む組成物を含む。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。コロイド粒子は、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質から構成される。第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。
【0183】
本発明の凍結乾燥製剤は、同様に提供される適切な希釈剤、アジュバント、または賦形剤、例えば生理学的に許容される緩衝剤と併せて、別個の剤形として供給され得る。キットのコロイド粒子および／または第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、凍結乾燥製剤として提供され得る。代替的に、キットの第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は凍結乾燥製剤として提供され得、コロイド粒子は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の再構成のための溶液として提供され得る。本明細書に記載されるように、そのような組成物は、別個の剤形として第ＶＩＩＩ因子を付加的に含み得る、または本明細書に記載されるコロイド粒子とともに製剤化され得る。ＦＶＩＩＩの凍結乾燥形態は、５００ＩＵバイアルで提供され得る。キットのコロイド粒子および／または第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、すぐに使用できる水性形態で提供され得る。
【0184】
コロイド粒子は、（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0185】
キットは、任意選択で、使用のための使用説明書も含む。
【0186】
上で記載される第５の態様によれば、医薬組成物の剤形は、対象における血友病Ａの治療における使用のための、（ｉ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびに（ｉｉ）ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質を含むコロイド粒子を含み、前記第２の両親媒性脂質は、生体適合性親水性ポリマーで誘導体化されたリン脂質部分を含む。対象は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある。
【0187】
コロイド粒子は、非イオン性界面活性剤をさらに含み得る。
【0188】
剤形は、患者に対する適当な用量を含有する適切な容器またはバイアルとして、例えば２５０ＩＵ、５００ＩＵ、７５０ＩＵ、または１０００ＩＵバイアルとして提供され得る。剤形は、錠剤としてまたは液体形態でも提供され得る。剤形は、凍結乾燥形態にもあり得る。
【0189】
本発明によって実証される驚くべき技術的効果は、免疫応答、および抗ＦＶＩＩＩ抗体の後続の産生を通常では誘発するであろう、ＦＶＩＩＩのエピトープを覆うことによって達成される。
【0190】
理論によって拘束されることを望むことなく、これらの利益は、ＦＶＩＩＩのＡ３ドメインへのＰＥＧＬｉｐの非共有結合的結び付きに由来し、ゆえに、身体の免疫系による認識から、ＦＶＩＩＩの軽鎖ドメインにおけるエピトープを守り；かつ／または樹状細胞によるＦＶＩＩＩのエンドサイトーシスを阻止すると考えられる。付加的なＰＥＧの導入は、付加的な結合部位を提供し、リポソーム上にＦＶＩＩＩを潜在的に濃縮する。
【0191】
付加的なＰＥＧは、より大きな水和球体を提供し、それは、結び付いたＦＶＩＩＩに通常のクリアランスメカニズムからのより大きな遮蔽を提供し、ＦＶＩＩＩの循環半減期を増加させることによって、長期間の止血制御を与える。より大きな遮蔽ほど、抗体阻害剤からのＦＶＩＩＩ上のエピトープのより良好な遮蔽も提供し得、ＦＶＩＩＩに対する阻害剤（抗体）を有する患者における産物の使用を容易にする。
【0192】
ＦＶＩＩＩのＡ３ドメイン領域へのリポソームの結合は、ＦＶＩＩＩのＣ１＆Ｃ２ドメインを自由にＶＷＦに結合できる状態にし、これが提供する付加的な保護を有する。
【0193】
ＦＶＩＩＩを担持するＰＥＧ化リポソームの融合体は、血小板と融合しまたは血小板によって取り入れられると考えられ、後者の活性化において役割を果たし得、組織因子担持凝固促進性微粒子を作り出し、それは外因性経路を上方調節し得かつ凝血形成を加速させ得ると思われる。リポソームに付加的なＰＥＧ担持脂質または界面活性剤を導入することは、血小板膜を不安定化し得、この活性化をさらに速め得る。
【0194】
この効果は、組み換えＦＶＩＩＩ分子においてより顕著であり、それは、野生型ＦＶＩＩＩにおけるこれらのエピトープを天然には保護するであろうＶＷＦとともに典型的には投与されない。
【0195】
エピトープの保護に加えて、ＰＥＧＬｉｐとの結び付きは、通常のタンパク質分解クリアランスメカニズムからＦＶＩＩＩを保護することによってＦＶＩＩＩの半減期を延長もし得、投薬間隔を延長し、経時的なＦＶＩＩＩへの患者の総曝露を低下させる。
【0196】
驚くべき観察結果は、以下のとおり記載される：
臨床試験を立案して、阻害剤を有する患者におけるＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩの使用を検討し、組合せは、既存の抗体がＦＶＩＩＩを攻撃するのを阻止するであろうと期待した。既存の抗体を有する患者と同様に、ＦＶＩＩＩを提示された場合に抗体を発生させた病歴を有するが、現在は抗体を呈していない一部の患者が含まれた。
臨床試験を立案して、阻害剤を有する患者におけるＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩの使用を検討し、組合せは、既存の抗体がＦＶＩＩＩを攻撃するのを阻止するであろうと期待した。既存の抗体を有する患者と同様に、ＦＶＩＩＩを提示された場合に抗体を発生させた病歴を有するが、現在は抗体を呈していない一部の患者が含まれた。
【0197】
これらの患者は、１５：１～１６：１のコロイド粒子対ＦＶＩＩＩ分子比を有するＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩ組合せを提示された場合に、新しい抗体を発生させないことが驚くべきことに見出され、ＰＥＧＬｉｐは、樹状／Ｂ細胞からエピトープを守り得、かつ／またはＦＶＩＩＩのエンドサイトーシスを阻止し得ることを暗示した。
【0198】
１５：１～１６：１のコロイド粒子対ＦＶＩＩＩ分子比を有する対照としてのＰＥＧＬｉｐ＋ヒトＦＶＩＩＩを用いたＩＶ投薬を伴って、血友病Ａイヌにおいても実験を行った。動物の免疫系は、天然には、抗体を産生することによって外来（ヒト）タンパク質に対して反応することから、そのような実験は通常困難である。驚くべきことに、この場合、動物は、それがＰＥＧＬｉｐの存在下で投与された場合、ヒトタンパク質に対する抗体を産生しなかった。
【0199】
したがって、ＦＶＩＩＩとの組合せでのＰＥＧＬｉｐの使用は、
・抗体を産生した病歴を有する、および適用されたｒＦＶＩＩＩに対して抗体を産生したはずである対象において、
・ＰＥＧＬｉｐとの組合せで外来タンパク質（ｒＦＶＩＩＩ）を提示された場合の非ヒト対象において、
抗体の生成を阻止する。
・抗体を産生した病歴を有する、および適用されたｒＦＶＩＩＩに対して抗体を産生したはずである対象において、
・ＰＥＧＬｉｐとの組合せで外来タンパク質（ｒＦＶＩＩＩ）を提示された場合の非ヒト対象において、
抗体の生成を阻止する。
【0200】
それゆえ、ＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩが、病歴的にそのような応答を呈しやすい患者／対象において抗体応答を誘発し得ない場合、ＦＶＩＩＩに対する抗体を産生したことがない、以前に治療されていない対象（ほぼ例外なく小児対象）におけるＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩの使用は、阻害剤患者の出現を阻止するはずである。
【0201】
本発明に従って、以下のサンプルを作製しかつ試験する：
１．ＰＥＧはＰＥＧ－２０００である、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ対ＰＯＰＣのより高い比を含む一連のコロイド粒子（ＰＥＧＬｉｐ）。
２．ＰＥＧはＰＥＧ－５０００である、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ対ＰＯＰＣの比を含む一連のコロイド粒子（ＰＥＧＬｉｐ）。
３．ポリソルベート８０をさらに含む、ポイント１．およびポイント２．に従ったコロイド粒子。
４．ＤＳＰＥ－ＰＥＧ対ＰＯＰＣのより高い比および／または高い分子量ＰＥＧを含む一連のコロイド粒子（Ｆ－ＰＥＧＬｉｐ）。
１．ＰＥＧはＰＥＧ－２０００である、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ対ＰＯＰＣのより高い比を含む一連のコロイド粒子（ＰＥＧＬｉｐ）。
２．ＰＥＧはＰＥＧ－５０００である、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ対ＰＯＰＣの比を含む一連のコロイド粒子（ＰＥＧＬｉｐ）。
３．ポリソルベート８０をさらに含む、ポイント１．およびポイント２．に従ったコロイド粒子。
４．ＤＳＰＥ－ＰＥＧ対ＰＯＰＣのより高い比および／または高い分子量ＰＥＧを含む一連のコロイド粒子（Ｆ－ＰＥＧＬｉｐ）。
【0202】
ある特定の実施形態において、以下の製剤が提供される：
１５～１６：１製剤
１５～１６：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに製剤化された、９％懸濁での５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
７～８：１製剤
７～８：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに９％懸濁で製剤化された、５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
１５～１６：１製剤
１５～１６：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに製剤化された、９％懸濁での５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
７～８：１製剤
７～８：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに９％懸濁で製剤化された、５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
【0203】
代替的な実施形態において、以下の製剤が提供される：
１５～１６：１製剤
１５～１６：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに製剤化された、９％懸濁での５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））、および９：１ｗ／ｗ比（ＰＯＰＣ＋ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００）：ポリソルベート８０）のポリソルベート８０から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
７～８：１製剤
７～８：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに９％懸濁で製剤化された、５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））、および９：１ｗ／ｗ比（ＰＯＰＣ＋ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００）：ポリソルベート８０）のポリソルベート８０から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
１５～１６：１製剤
１５～１６：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに製剤化された、９％懸濁での５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））、および９：１ｗ／ｗ比（ＰＯＰＣ＋ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００）：ポリソルベート８０）のポリソルベート８０から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
７～８：１製剤
７～８：１のＰＥＧＬｉｐ粒子対ＦＶＩＩＩ分子の比の、ＦＶＩＩＩ（Ｎｕｗｉｑ（商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＡＧ）とともに９％懸濁で製剤化された、５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００））、および９：１ｗ／ｗ比（ＰＯＰＣ＋ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００）：ポリソルベート８０）のポリソルベート８０から構成されたＰＥＧＬｉｐ粒子。
【0204】
本発明の１つの特定の実施形態において、以下のような、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある対象における血友病Ａの治療における使用のための組成物が提供される：
・９７：３モル比（９：１ｗ／ｗ）の、ホスファチジルコリン部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびにホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質、例えば、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００））、またはより重いＰＥＧ化脂質の等価のモル比が使用される場合には重量補正比、例えば４：１～５：１のｗ／ｗ比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）から構成されたコロイド粒子。
・緩衝剤等の希釈剤（適切には、生理学的に許容されるｐＨ、例えばｐＨ６．５～７．２の）、例えば、任意選択で５０ｍＭの濃度のクエン酸塩緩衝液。
・９７：３モル比（９：１ｗ／ｗ）の、ホスファチジルコリン部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびにホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質、例えば、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００））、またはより重いＰＥＧ化脂質の等価のモル比が使用される場合には重量補正比、例えば４：１～５：１のｗ／ｗ比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）から構成されたコロイド粒子。
・緩衝剤等の希釈剤（適切には、生理学的に許容されるｐＨ、例えばｐＨ６．５～７．２の）、例えば、任意選択で５０ｍＭの濃度のクエン酸塩緩衝液。
【0205】
代替的な実施形態において、以下のような、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）療法への５０日未満の曝露日を受けたことがある対象における血友病Ａの治療における使用のための組成物が提供される：
・９７：３モル比（９：１ｗ／ｗ）の、ホスファチジルコリン部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびにホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質、例えば、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、またはより重いＰＥＧ化脂質の等価のモル比が使用される場合には重量補正比、例えば４：１～５：１のｗ／ｗ比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）から構成されたコロイド粒子。ポリオキシエチレンソルビタン、ポリヒドロキシエチレンステアレート、およびポリヒドロキシエチレンラウリルエーテルからなる群から選択される非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートをさらに含むコロイド粒子。
・緩衝剤等の希釈剤（適切には、生理学的に許容されるｐＨ、例えばｐＨ６．５～７．２の）、例えば、任意選択で５０ｍＭの濃度のクエン酸塩緩衝液。
・９７：３モル比（９：１ｗ／ｗ）の、ホスファチジルコリン部分を含む第１の両親媒性脂質、ならびにホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）からなる群から選択されるリン脂質部分を含む第２の両親媒性脂質、例えば、９７：３モル比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、またはより重いＰＥＧ化脂質の等価のモル比が使用される場合には重量補正比、例えば４：１～５：１のｗ／ｗ比の１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）およびＮ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－５０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００）から構成されたコロイド粒子。ポリオキシエチレンソルビタン、ポリヒドロキシエチレンステアレート、およびポリヒドロキシエチレンラウリルエーテルからなる群から選択される非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートをさらに含むコロイド粒子。
・緩衝剤等の希釈剤（適切には、生理学的に許容されるｐＨ、例えばｐＨ６．５～７．２の）、例えば、任意選択で５０ｍＭの濃度のクエン酸塩緩衝液。
【0206】
本発明の第２のおよび後続の態様に関する好ましい特質は、必要な変更を加えて、第１の態様に関するとおりである。
【0207】
本発明は、ここで、単なる例示の目的のために提示され、本発明に対する限定として解釈されるべきではない以下の実施例を参照して記載されるであろう。参照は、以下の図面に対してもなされる：
【図面の簡単な説明】
【0208】
【実施例】
【0209】
実施例は、ＰＥＧＬｉｐの以下の製剤を使用する。
【0210】
【表3】
【0211】
実施例１
血友病イヌにおけるＩＶおよびＳＣ投与されたＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの調査
試験品目：
ＦＶＩＩＩ：Ｎｕｗｉｑ（商標）（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ、５００ＩＵバイアル）；ＰＥＧＬｉｐ：５０ｍＭクエン酸塩緩衝液ｐＨ６．７中、９％ＰＥＧ化リポソーム（バッチ１９－７４０）
ＳｕｂｃｕｔＡｔｅ（Ｎｕｗｉｑ（商標）ＦＶＩＩＩの５００ＩＵバイアルあたり３．５ｍｌ ９％ＰＥＧＬｉｐ：１４３ＩＵ／ｍｌ ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ）
方法：
ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの静脈内投与
５０ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ、３１．５ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび５０ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ（１６：１のコロイド粒子：ＦＶＩＩＩ分子比）のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ投薬を、ゆっくりとした橈側皮静脈注入によって血友病Ａイヌ（カナダ、キングストンにおけるクィーンズ大学）に投与した。全血凝固時間（ＷＢＣＴ）、回転式トロンボエラストメトリー（ＲＯＴＥＭ）分析、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性レベル、全血算（ＣＢＣ）、および血液化学のために、静脈血サンプルを、３０分間、２、４、８、１２、２４、３２、４８、および５６時間の時点で橈側皮静脈から採血した。血液を、処理の１および２週間後におけるベセスダアッセイのためにも回収した。
皮下投与
２００ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ、１２６ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび２００ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ（１６：１のコロイド粒子：ＦＶＩＩＩ分子比）のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ投薬を、首筋における皮下（ＳＱ）注射によって血友病Ａイヌ（カナダ、キングストンにおけるクィーンズ大学）に投与した。全血凝固時間（ＷＢＣＴ）、回転式トロンボエラストメトリー（ＲＯＴＥＭ）分析、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性レベル、全血算（ＣＢＣ）、および血液化学のために、１、２、４、８、１２、２４、３２、４８、および７２時間の時点で橈側皮静脈から採血した。血液を、処理の１および２週間後におけるベセスダアッセイのためにも回収した。
結果：
凝固補正
静脈内ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの単回投薬は、投与の３０分後から凝血時間を実質的に低下させ、この効果は、５６時間後にベースラインに戻らなかった。皮下投与されるＦＶＩＩＩは、最小限に生体利用可能であり、凝血時間を低下させるのに無効であると通常では予想されるであろう。対照的にかつ驚くべきことに、この実験における皮下ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩは、迅速に生体利用可能であり、１時間の時点における最初の査定から凝血時間を低下させた。
生体利用率および半減期
生体利用率および半減期を、全血凝固時間（ＷＢＣＴ）によってまたはＲＯＴＥＭ（凝血時間（ＣＴ）＋凝血形成時間（ＣＦＴ）によって査定される、投薬後最初の４８時間にわたる凝血時間低下（ＣＴＲ）の減衰に目を向けることによって分析した。
血友病イヌにおけるＩＶおよびＳＣ投与されたＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの調査
試験品目：
ＦＶＩＩＩ：Ｎｕｗｉｑ（商標）（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ、５００ＩＵバイアル）；ＰＥＧＬｉｐ：５０ｍＭクエン酸塩緩衝液ｐＨ６．７中、９％ＰＥＧ化リポソーム（バッチ１９－７４０）
ＳｕｂｃｕｔＡｔｅ（Ｎｕｗｉｑ（商標）ＦＶＩＩＩの５００ＩＵバイアルあたり３．５ｍｌ ９％ＰＥＧＬｉｐ：１４３ＩＵ／ｍｌ ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ）
方法：
ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの静脈内投与
５０ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ、３１．５ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび５０ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ（１６：１のコロイド粒子：ＦＶＩＩＩ分子比）のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ投薬を、ゆっくりとした橈側皮静脈注入によって血友病Ａイヌ（カナダ、キングストンにおけるクィーンズ大学）に投与した。全血凝固時間（ＷＢＣＴ）、回転式トロンボエラストメトリー（ＲＯＴＥＭ）分析、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性レベル、全血算（ＣＢＣ）、および血液化学のために、静脈血サンプルを、３０分間、２、４、８、１２、２４、３２、４８、および５６時間の時点で橈側皮静脈から採血した。血液を、処理の１および２週間後におけるベセスダアッセイのためにも回収した。
皮下投与
２００ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ、１２６ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび２００ＩＵ／ｋｇ ＦＶＩＩＩ（１６：１のコロイド粒子：ＦＶＩＩＩ分子比）のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ投薬を、首筋における皮下（ＳＱ）注射によって血友病Ａイヌ（カナダ、キングストンにおけるクィーンズ大学）に投与した。全血凝固時間（ＷＢＣＴ）、回転式トロンボエラストメトリー（ＲＯＴＥＭ）分析、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性レベル、全血算（ＣＢＣ）、および血液化学のために、１、２、４、８、１２、２４、３２、４８、および７２時間の時点で橈側皮静脈から採血した。血液を、処理の１および２週間後におけるベセスダアッセイのためにも回収した。
結果：
凝固補正
静脈内ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの単回投薬は、投与の３０分後から凝血時間を実質的に低下させ、この効果は、５６時間後にベースラインに戻らなかった。皮下投与されるＦＶＩＩＩは、最小限に生体利用可能であり、凝血時間を低下させるのに無効であると通常では予想されるであろう。対照的にかつ驚くべきことに、この実験における皮下ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩは、迅速に生体利用可能であり、１時間の時点における最初の査定から凝血時間を低下させた。
生体利用率および半減期
生体利用率および半減期を、全血凝固時間（ＷＢＣＴ）によってまたはＲＯＴＥＭ（凝血時間（ＣＴ）＋凝血形成時間（ＣＦＴ）によって査定される、投薬後最初の４８時間にわたる凝血時間低下（ＣＴＲ）の減衰に目を向けることによって分析した。
【0212】
最高２３％までの生体利用率が、ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩの皮下投薬に関して計算された。ＷＢＣＴによって測定されるＳＣ投薬を除いて、半減期の推定量は、１５．１～１７．１時間というＮｕｗｉｑ（商標）半減期の文献推定量をはるかに超えた。表１を参照されたい。
【0213】
生体利用率と半減期との組合せは、本発明者らが、投薬サイズおよび投薬間隔を含む潜在的な皮下投薬レジメンを推進するのを可能にし、それは、ＦＶＩＩＩレベルが危険なレベルまで減少するのを阻止するであろう（図１を参照されたい）。
【0214】
【表4】
【0215】
阻害剤生成
ＩＶ注射されたヒトＦＶＩＩＩを用いた通常の実践では、このコロニーにおける血友病イヌは、ＦＶＩＩＩ投薬の１０日間～４週間後に様々な力価の抗ヒトＦＶＩＩＩ抗体を必ず発生させるであろう。しかしながら、この調査報告において、ＩＶ投薬された対象は、阻害剤を発生させなかった。これは驚くべきことであり、ヒトタンパク質を投薬された動物にとって極めて珍しいことである。
ＩＶ注射されたヒトＦＶＩＩＩを用いた通常の実践では、このコロニーにおける血友病イヌは、ＦＶＩＩＩ投薬の１０日間～４週間後に様々な力価の抗ヒトＦＶＩＩＩ抗体を必ず発生させるであろう。しかしながら、この調査報告において、ＩＶ投薬された対象は、阻害剤を発生させなかった。これは驚くべきことであり、ヒトタンパク質を投薬された動物にとって極めて珍しいことである。
【0216】
ＳＣ投薬された動物は、４～１７ＢＵという低レベルの阻害剤を発生させたが、これは、静脈内投薬を用いて典型的に予想されるであろう（典型的に５０～１００ＢＵ）よりも、および免疫原性組織に単回大容積で送達されている異なる種由来のタンパク質の２００ＩＵ／ｋｇという大用量のバックグラウンドに対して低い。このことは、ＳＣ投与された単回高用量のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩでさえ、ｒｈＦＶＩＩＩ単独の等価のＩＶ投薬を用いて予想され得るよりも免疫原性が低かったことを示唆し得る。
【0217】
これらの驚くべき結果は、ＦＶＩＩＩ活性を損なうことなくかつ該タンパク質上のエピトープを修飾することなく、ＦＶＩＩＩとの共投与剤としてのＰＥＧＬｉｐの使用は、免疫原性応答が通常では予想されるであろう対象において阻害剤の生成を阻止し得るまたは低下させ得ることを示唆する。このことは、ＰＥＧＬｉｐとＦＶＩＩＩとの共投与が、後者の免疫原性を低下させ、それを、まだ阻害剤を発生させたことがない、以前に治療されていない患者または最小限に治療された患者に与えるより安全な代替策にすることを示唆する。
【0218】
実施例２
ＳｅｌｅｃｔＡｔｅ（商標）臨床調査
調査は、規定された比のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩが、阻害剤患者において凝固を回復させることを実証するために進行中である。
ＳｅｌｅｃｔＡｔｅ（商標）臨床調査
調査は、規定された比のＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩが、阻害剤患者において凝固を回復させることを実証するために進行中である。
【0219】
阻害剤が発生しやすいＨＡ患者は、ＰＥＧＬｉＰ：ＦＶＩＩＩを注射された場合に阻害剤を生成せず、一方で凝固補正をなおも示した。
【0220】
ＦＶＩＩＩに対する抗体阻害剤を生成した病歴を有する４人の重度の血友病患者が、治験を受けた。彼らの病歴に起因して、これらの患者は、彼らが阻害剤を生成するリスクに起因して、予防的療法として補充ＦＶＩＩＩを受けることができない。治験において、これらの患者のうちの３人は、当初阻害剤なしを提示し、１人は低い力価（＜５ＢＵ）を提示した。すべての患者に、２２ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび３５ＩＵ／ｋｇ組み換えヒト化ＦＶＩＩＩのＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩ（１５：１～１６：１の小胞：ＦＶＩＩＩ比）を投薬した。査定の最初の週にわたって、すべての患者は、相当な凝固補正を経験し、続く６週間にわたって平均で６日（域４～７日）ごとに彼らに投薬することを可能にした。６週間にわたる週１回ベースでの再投薬にもかかわらず、阻害剤なしを提示した３人の阻害剤が発生しやすい患者の誰も、治療に対して阻害剤を生成しなかった。低力価の阻害剤を提示した１人の患者は、最初の段階の間にわずかな臨床的に重要ではない上昇を経験し、それは、第２相での反復投薬の間に実際には低下した。阻害剤が発生しやすい個体においてＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩが阻害剤生成を刺激することができないことは、以前に治療されていない患者または最小限に治療された患者の治療に例外的に適切な産物を作製して、これらの脆弱な個体において阻害剤の生成を阻止するであろうことが提唱される。
【0221】
【表5】
【0222】
実施例３
阻害剤が発生しやすいおよび阻害剤を提示している患者におけるＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩの臨床調査
第２相臨床調査に着手して、阻害剤が発生しやすい患者において阻害剤の産生を刺激することなく、または阻害剤を提示している患者において阻害剤力価の増加を引き起こすことなく、ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩが、阻害剤が発生しやすいおよび阻害剤を提示している患者において凝固を回復させることを実証した。調査は、実施例２に記載される知見を踏まえた。
阻害剤が発生しやすいおよび阻害剤を提示している患者におけるＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩの臨床調査
第２相臨床調査に着手して、阻害剤が発生しやすい患者において阻害剤の産生を刺激することなく、または阻害剤を提示している患者において阻害剤力価の増加を引き起こすことなく、ＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩが、阻害剤が発生しやすいおよび阻害剤を提示している患者において凝固を回復させることを実証した。調査は、実施例２に記載される知見を踏まえた。
【0223】
スクリーニング時に阻害剤を有した、または臨床記録が彼らはＦＶＩＩＩへの曝露で阻害剤を発生させやすいことを示した重度のＨＡ患者は、ＰＥＧＬｉＰ＋ＦＶＩＩＩ（ＰＬＰ－００＋シモクトコグアルファ）を注射された場合に、それぞれ彼らの阻害剤力価を増加させずまたは阻害剤を生成せず、一方で凝固補正および出血頻度の低下をなおも示した
ＦＶＩＩＩに対する抗体阻害剤を生成した病歴を有する１３人の重度の血友病患者が、治験を受けた。彼らの病歴に起因して、これらの患者のうちの８人は、彼らが阻害剤を生成するリスクに起因して、予防的療法として補充ＦＶＩＩＩを受けることができない。他の５人の患者は、活性な阻害剤力価（平均２．４ベセスダ単位）をスクリーニング時に提示した。すべての患者に、２２ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび３５ＩＵ／ｋｇ組み換えヒト化ＦＶＩＩＩのＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩ（シモクトコグアルファ）（１５：１～１６：１のコロイド粒子：ＦＶＩＩＩ比）を投薬した。査定の最初の週にわたって、すべての患者は、相当な凝固補正を経験し、投薬間隔の相当な延長を表す（シモクトコグアルファに関する通常の投薬間隔は、１日おきまたは週あたり２～３回である）、続く６週間にわたって平均で５．５日（域３．０～７．４日）ごとに彼らに投薬することを可能にした。このより低い投薬の頻度にもかかわらず、出血性事象は患者において有意に低下し、平均的な月の出血率は、月あたり平均１回（年あたり１２．３回）から月あたり０．３回（年あたり３．２回）に落ちた。
ＦＶＩＩＩに対する抗体阻害剤を生成した病歴を有する１３人の重度の血友病患者が、治験を受けた。彼らの病歴に起因して、これらの患者のうちの８人は、彼らが阻害剤を生成するリスクに起因して、予防的療法として補充ＦＶＩＩＩを受けることができない。他の５人の患者は、活性な阻害剤力価（平均２．４ベセスダ単位）をスクリーニング時に提示した。すべての患者に、２２ｍｇ／ｋｇ ＰＥＧＬｉｐおよび３５ＩＵ／ｋｇ組み換えヒト化ＦＶＩＩＩのＰＥＧＬｉｐ＋ＦＶＩＩＩ（シモクトコグアルファ）（１５：１～１６：１のコロイド粒子：ＦＶＩＩＩ比）を投薬した。査定の最初の週にわたって、すべての患者は、相当な凝固補正を経験し、投薬間隔の相当な延長を表す（シモクトコグアルファに関する通常の投薬間隔は、１日おきまたは週あたり２～３回である）、続く６週間にわたって平均で５．５日（域３．０～７．４日）ごとに彼らに投薬することを可能にした。このより低い投薬の頻度にもかかわらず、出血性事象は患者において有意に低下し、平均的な月の出血率は、月あたり平均１回（年あたり１２．３回）から月あたり０．３回（年あたり３．２回）に落ちた。
【0224】
６週間にわたる週１回ベースでの再投薬にもかかわらず、阻害剤なしを提示した８人の阻害剤が発生しやすい患者の誰も、治療に対して阻害剤を生成しなかった。加えて、阻害剤を提示した５人の患者は、その治験の６週間の予防的段階の間に阻害剤力価の有意な上昇を経験しなかった。阻害剤を提示するおよび阻害剤が発生しやすい患者に対する治療と同様に、阻害剤が発生しやすい個体においてＰＥＧＬｉｐ－ＦＶＩＩＩが阻害剤生成を刺激することができないことは、以前に治療されていない患者または最小限に治療された患者の治療に例外的に適切な産物を付加的に作製して、これらの脆弱な個体において阻害剤の生成を阻止するであろうことが提唱される。
【0225】
【表6】
【0226】
結論：
１５：１～１６：１の比のＰＥＧＬｉＰ対ＦＶＩＩＩは両方とも、さらなる相当量の阻害剤の産生を刺激することなく、ＦＶＩＩＩに対する阻害剤を有する患者において、ならびにＦＶＩＩＩに対する阻害剤を発生させやすい患者において、出血性事象のリスクを下げる。
１５：１～１６：１の比のＰＥＧＬｉＰ対ＦＶＩＩＩは両方とも、さらなる相当量の阻害剤の産生を刺激することなく、ＦＶＩＩＩに対する阻害剤を有する患者において、ならびにＦＶＩＩＩに対する阻害剤を発生させやすい患者において、出血性事象のリスクを下げる。
【0227】
実施例４
非阻害剤患者におけるＦＶＩＩＩのＰＥＧＬｉｐ増強の臨床調査
第２相臨床調査に着手して、ＦＶＩＩＩの予防的投薬の後に注射されたＰＥＧＬｉｐが、ＦＶＩＩＩの予防的投薬の投薬間隔を安全に延長させ、一方で出血性エピソードをなおも阻止し、ゆえにＦＶＩＩＩへの患者の曝露を低下させることを実証した。
非阻害剤患者におけるＦＶＩＩＩのＰＥＧＬｉｐ増強の臨床調査
第２相臨床調査に着手して、ＦＶＩＩＩの予防的投薬の後に注射されたＰＥＧＬｉｐが、ＦＶＩＩＩの予防的投薬の投薬間隔を安全に延長させ、一方で出血性エピソードをなおも阻止し、ゆえにＦＶＩＩＩへの患者の曝露を低下させることを実証した。
【0228】
阻害剤を有しない１４人の重度の血友病患者。すべての患者に、３５ＩＵ／ｋｇのＦＶＩＩＩ（シモクトコグアルファ）を静脈内に投薬し、その１５分後に２２ｍｇ／ｋｇのＰＥＧＬｉｐの単回静脈内注入が続いた。
【0229】
査定の最初の週にわたって、すべての患者は、相当な凝固補正を経験し、投薬間隔の相当な延長を表す（シモクトコグアルファに関する通常の投薬間隔は、１日おきまたは週あたり２～３回である）、続く６週間にわたって平均で４．９日（域３．１～７．３日）ごとに彼らに投薬することを可能にした。
【0230】
このより低い投薬の頻度にもかかわらず、出血性事象は患者において有意に低下し、平均的な月の出血率は、月あたり平均１．１０回（年あたり１３．２１回）から月あたり０．１８回（年あたり２．２１回）に落ちた。
【0231】
６週間の予防的治療にわたって、患者の誰もＦＶＩＩＩに対する阻害剤を発生させなかった。
【0232】
患者の通常の標準ケアＦＶＩＩＩに後続して注射される場合の、そのＦＶＩＩＩの投薬間隔をこのようにして延長させるＰＥＧＬｉｐの能力は、以前に治療されていない／最小限に治療された患者に対するＦＶＩＩＩへの曝露の回数を半減させ得、免疫原性応答を発生させる可能性を低下させることが提唱される。
【0233】
【表7】
【図1】
【国際調査報告】