(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-05
(54)【発明の名称】液相合成のための化合物及び方法
(51)【国際特許分類】
C07C 229/08 20060101AFI20240829BHJP
C07K 1/02 20060101ALI20240829BHJP
C07K 1/10 20060101ALI20240829BHJP
C07K 7/08 20060101ALI20240829BHJP
C07C 237/08 20060101ALI20240829BHJP
C07C 231/02 20060101ALI20240829BHJP
【ＦＩ】
C07C229/08 CSP
C07K1/02 ZNA
C07K1/10
C07K7/08
C07C237/08
C07C231/02
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024512131
(86)(22)【出願日】2022-08-23
(85)【翻訳文提出日】2024-02-22
(86)【国際出願番号】 US2022075307
(87)【国際公開番号】W WO2023028466
(87)【国際公開日】2023-03-02
(31)【優先権主張番号】63/260,496
(32)【優先日】2021-08-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】コパック，マイケル ユージーン
(72)【発明者】
【氏名】リー，ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ムルジンスキ，エミリー スザンヌ
(72)【発明者】
【氏名】ルスタギ，ビニータ
(72)【発明者】
【氏名】サリム，ヘバ アズミー ファヒム イブラヒム
【テーマコード（参考）】
4H006
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H006AA01
4H006AA02
4H006AB84
4H006AC53
4H006BB20
4H006BJ50
4H006BP10
4H006BP30
4H006BV21
4H006BV22
4H045AA20
4H045BA09
4H045FA30
4H045FA31
4H045FA61
4H045GA21
(57)【要約】
本開示は、式１の親水性リンカー化合物：
【化１】
を含み、
また、液相合成におけるそれらの使用方法を記載する。式１において、本明細書に記載されるように、「ｍ」は０～２０であり、「ｎ」は１～５０であり、「Ｚ」はリンカー化合物である。
【選択図】なし
【化１】
また、液相合成におけるそれらの使用方法を記載する。式１において、本明細書に記載されるように、「ｍ」は０～２０であり、「ｎ」は１～５０であり、「Ｚ」はリンカー化合物である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式の化合物であって、【化1】
【請求項2】
Ｚが、【化2】
【請求項3】
前記化合物が、【化3】
【請求項4】
前記化合物が、【化4】
【請求項5】
前記化合物が、【化5】
【請求項6】
前記化合物が、【化6】
【請求項7】
前記化合物が、【化7】
【請求項8】
「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～５０である、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～１０である、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
「ｍ」が１であり、「ｎ」が２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項11】
前記化合物が、液相合成に使用される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項12】
前記液相合成が、液相ペプチド合成（Liquid Phase Peptide Synthesis、ＬＰＰＳ）である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項13】
前記化合物が親水性である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物であって、「Ｚ」が、任意で保護されたアミノ酸と共有結合を形成する官能基であり、これが次に、１つ以上の任意で保護されたアミノ酸又はペプチドへの反復脱保護及びカップリング工程を受けることができ、次に、得られたポリペプチド生成物を、化学変換によって前記「Ｚ」基から遊離させることができる、化合物。
【請求項15】
配列番号１の、ペプチド。
【請求項16】
液相ペプチド合成を使用して配列番号１のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号２のペプチドを得ることと、を含む、配列番号２のペプチドの調製方法。
【請求項17】
配列番号３の、ペプチド。
【請求項18】
液相ペプチド合成を使用して配列番号３のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号３のペプチドを酸で処理して、配列番号４のペプチドを得ることと、を含む、配列番号４のペプチドの調製方法。
【請求項19】
配列番号５の、ペプチド。
【請求項20】
配列番号６の、ペプチド。
【請求項21】
液相ペプチド合成を使用して配列番号６のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号６のペプチドを酸で処理して、配列番号７のペプチドを得ることと、を含む、配列番号７のペプチドの調製方法。
【請求項22】
配列番号８の、ペプチド。
【請求項23】
配列番号９の、ペプチド。
【請求項24】
液相ペプチド合成を使用して配列番号９のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号１０のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１０のペプチドの調製方法。
【請求項25】
配列番号１１の、ペプチド。
【請求項26】
配列番号１２の、ペプチド。
【請求項27】
配列番号１４の、ペプチド。
【請求項28】
配列番号１５の、ペプチド。
【請求項29】
配列番号１６の、ペプチド。
【請求項30】
配列番号１７の、ペプチド。
【請求項31】
配列番号１８の、ペプチド。
【請求項32】
液相ペプチド合成を使用して、配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを酸で処理して、配列番号１３のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１３のペプチドの調製方法。
【請求項33】
配列番号１９の、ペプチド。
【請求項34】
配列番号２０の、ペプチド。
【請求項35】
配列番号２１の、ペプチド。
【請求項36】
配列番号２２の、ペプチド。
【請求項37】
配列番号２３の、ペプチド。
【請求項38】
下記式【化8】
液相合成を使用して前記化合物を調製することを含み、前記液相合成が、ＡＥＥＡ含有分子を請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物にカップリングさせることを含む、方法。
【請求項39】
ａ．Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨを、請求項１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、ｂ．工程ａからの前記生成物に第２のＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｄ．工程ｃの前記生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｅ．酸を用いて、工程ｄの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＯＨを、請求項１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、ｂ．工程ａの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記得られた生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｄ．酸を用いて、工程ｃの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項41】
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＯＨを、請求項１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、ｂ．Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（２Ｓ）－２－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］ペンタンジオエートを、工程ａの前記得られた生成物にカップリングさせることと、
ｃ．酸を用いて、工程ｂの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項42】
以下の化合物。【化9】
【請求項43】
以下の化合物。【化10】
【請求項44】
以下の化合物。【化11】
【請求項45】
配列番号３２のペプチドを調製するための方法であって、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、前記ペプチド配列の一部又は全部を調製することを含む、方法。
【請求項46】
配列番号１９のペプチドと配列番号７のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２０のペプチドを調製するための方法。
【請求項47】
配列番号２１のペプチドと配列番号１０のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２２のペプチドを調製するための方法。
【請求項48】
以下の工程：ａ．請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、配列番号１９のペプチドを調製する工程と、
ｂ．前記配列番号１９のペプチドを配列番号７のペプチドにカップリングさせて、配列番号２０のペプチドを生成する工程と、
ｃ．前記配列番号２０のペプチドを脱保護して、配列番号２１のペプチドを生成する工程と、
ｄ．配列番号１０のペプチドを前記配列番号２１のペプチドにカップリングさせる工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを脱保護して、配列番号２２のペプチドを生成する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
【請求項49】
以下の工程：ｆ．個々のアミノ酸、ペプチドフラグメント、又はそれらの混合物をカップリングさせることによって、工程ｅからの前記配列番号２２のペプチドを伸長させる工程と、
ｇ．前記得られたペプチドを酸で処理する工程と、
ｈ．前記得られたペプチドを脱保護する工程と、を更に含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
以下の工程：ａ．配列番号２４のペプチドを、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物とカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｂ．工程ａからの前記ペプチドを、配列番号２５のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｃ．工程ｂからの前記ペプチドを、配列番号２６のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｄ．工程ｃからの前記ペプチドを、配列番号２７のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを、配列番号２８のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｆ．工程ｅからの前記ペプチドを、配列番号２９のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｇ．工程ｆからの前記ペプチドを、配列番号３０のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｈ．工程ｇの前記ペプチドを、配列番号３１のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表と共に提出されている。配列表は、２０２２年８月２２日に作成された「Ｘ２２４９２配列表」というタイトルのファイルとして提供され、サイズは９２キロバイトである。ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
ポリペプチド及びアミノ酸配列の化学合成は、アミノ酸が配列中で互いに結合される反復プロセスによって、達成される。本プロセスは、成長するペプチド鎖のＣ末端又はＮ末端のいずれかの脱保護、そこへの保護されたアミノ酸のカップリング、次に、新たに結合されたアミノ酸の脱保護（これは、配列中の次のカップリングのために、それを調製する）の反復プロセスを伴う。アミノ酸カップリング及び脱保護の工程が何度も繰り返されるこの反復プロセスは、化学合成における主要な課題、すなわち、その他の反応構成成分（溶媒、未反応の出発物質及び試薬、並びに望ましくない反応副生成物）から所望の合成生成物を分離する課題を拡大する。
【0003】
ペプチド固相合成法（「Solid Phase Peptide Synthesis、ＳＰＰＳ」）は、ポリペプチド及びアミノ酸配列を合成するために最も一般的に使用される方法及びシステムである。ＳＰＰＳは、活性化アミノ酸を固体支持体にカップリングさせることを伴う。本固体支持体は、通常、（ＮＨ２基などで）官能化されたポリマー樹脂ビーズである。次のアミノ酸（一般に、Ｆｍｏｃ、ＢＯＣ又はその他の保護基によって保護されたＮＨ２末端を有する）を樹脂と反応させ、それによって、樹脂上の官能化基が末端アミノ酸の活性化ＣＯＯＨ基と反応して結合するようにする。このようにして、末端アミノ酸は、樹脂に共有結合する。
【0004】
次いで、次工程において、末端アミノ酸のＮＨ２末端を脱保護し、それによって、次の反応のために、そのＮＨ２基を露出させる。したがって、新しいアミノ酸が導入される。この新しいアミノ酸は、保護基（Ｆｍｏｃ、ＢＯＣ、又は別の保護基など）を介して保護されたＮＨ２末端を有する。したがって、この新しいアミノ酸が追加された際に、新しいアミノ酸からの活性化エステルが末端アミノ酸の新たに脱保護されたＮＨ２基と反応し、それによって、これら２種のアミノ酸が、一緒にカップリングされる。この新しいアミノ酸がカップリングされると、続いて脱保護され、次のアミノ酸と反応し得る保護されたＮＨ２基を同様に有する。この繰り返される反復プロセスを何度も行うことにより、全アミノ酸配列が構築され得る。配列全体が構築されると、配列を樹脂から分離（切断）して脱保護し、それによって、アミノ酸配列が生成され得る。（本プロセスを介して追加される様々なアミノ酸（Ｒ１、Ｒ２等）の側鎖は、ＢＯＣ、ｔ－ブチル、又はトリチル等の基を介してオルソゴナルに保護されて、このような側鎖がアミノ酸合成プロセス中に反応しないようにしてもよい。当業者は、このような側鎖又はその他の基が合成プロセス中にどのように構築され得、保護され得、その後脱保護され得るか、を理解するであろう。
【0005】
ＳＰＰＳプロセスの各工程において、成長するポリペプチドは固体支持体に付着したままであるが、これは、相分離によってその他の反応構成成分から分離されたままである。固体支持体は、固体支持体に付着している間に所望の生成物の濾過による分離を可能にすることによって、分離を容易にする。ＳＰＰＳは商業的に使用されており、依然としてペプチド合成における標準である。しかしながら、それは高価であり、時間がかかり、必要とされる大規模な樹脂洗浄によって高レベルのプロセス廃棄物を発生させるという欠点を有する。追加される各アミノ酸は脱保護及びカップリングされる必要があるが、これは困難であり、通常は大量の溶媒が使用される。樹脂から残留試薬を除去するために、各反応後に複数回の溶媒洗浄が必要とされることが多い。製造設備におけるサイクル時間は、１日当たり約１回の、アミノ酸カップリング及び脱保護のサイクルであり得る。更に悪いことに、これらの溶媒の多くは、環境に優しくない。また、ＳＰＰＳにおける相分離は、高い生成物純度を得る際に、困難を提示する。成長するポリペプチドはその他の反応構成成分と同じ相にないために、反応速度は液相よりも遅く、凝集などの望ましくない副反応を最小限に抑えながら、所望の生成物への変換を最大にすることは困難であり得る。不均一系反応混合物の反応モニタリング及び最適化は、特に、高速液体クロマトグラフィ（「High-Performance Liquid Chromatography、ＨＰＬＣ」）などの、分析物が均一な液体流に溶解されることを必要とする分析方法を使用する場合、困難であり得る。
【0006】
ＳＰＰＳとは対照的に、液相ペプチド合成（「Liquid Phase Peptide Synthesis、ＬＰＰＳ」）は、ポリペプチドが均一な反応条件で調製される方法を指す。これは、ＳＰＰＳにおいて使用されるものと同様の反復脱保護及びカップリングプロセスにおいてポリペプチドが調製され得る可溶性ポリマー支持体部分を含む合成方法を含むことができる。脱保護及びカップリング反応を均一溶液相で生じさせることによって、ＬＰＰＳは、ＳＰＰＳに関与する困難のいくつかを克服することができる。一般に、ＬＰＰＳは、必要とする溶媒、出発物質、及び試薬がより少ないことによって、ＳＰＰＳよりも実質的に効率的であり得る。また、液相反応速度は、相境界で生じる反応と比較して、より速くなり得る。これは、反応最適化の努力を容易にすることができ、例えば、成長中のポリペプチドにおけるアミノ酸残基のラセミ化を最小限に抑えるために、脱保護工程をより短い時間で、又はより穏やかな反応条件下で行うことを可能にする。ＬＰＰＳはまた、例えば、質量分析法と組み合わせたＨＰＬＣ（「HPLC coupled with mass spectrometry、ＬＣＭＳ」）によって、反応を直接モニタリングすることを可能にするが、ここで、可溶性ポリマー支持体に結合した生成物は、類似のＳＰＰＳプロセスよりも、むしろより単純に検出及び定量されることができる。
【0007】
ＳＰＰＳと比較したＬＰＰＳにおける利点にもかかわらず、ＬＰＰＳ戦略を首尾よく実装することは、困難であり得る。所望の生成物を単離し、それをその他の反応構成成分及び望ましくない副生成物から効率的に分離するという問題が、残っている。そのために、液相反応混合物からのポリペプチド生成物の分離を可能にする多くの戦略が用いられてきた。疎水性可溶性リンカー系は、タグ補助ＬＰＰＳ支持体として開発されている例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｄ．ら（２０１７年）Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ１２９：７９１１－７９１５及び米国特許出願公開第２０１８／０２１５７８２号を参照のこと）。これらのリンカー系を使用して、ペプチドはリンカー上で伸長されることができ、次に、副生成物は、沈殿又は抽出水性ワークアップのいずれかによって除去される。しかしながら、ペプチド鎖が伸長するにつれて溶解性の問題が主要な問題となる、ペプチドの長さなどのいくつかの重要な制限があることが、見出された。なお、水性洗浄は、試薬及び副生成物を除去する際に限られた有効性を有し得るため、純度の課題が存在し得る。これらの構成成分は、下流の合成工程を妨害する場合があり、好ましくない付加及び欠失をもたらし得る。更に、有機層中の残留水が多いと、ペプチドカップリングに悪影響を及ぼす可能性があり、脱水工程の追加が必要になる場合がある。
【0008】
親水性リンカー系は、疎水性リンカー系と比較して、重要な利点を提供することができる。これらの系において、リンカーは、より環境に優しい有機溶媒を用いた単純な抽出によって反応副生成物を除去することを可能にする親水性「タグ」を特徴とする。ポリエチレングリコール（Polyethylene glycol、ＰＥＧ）は、液相ペプチド合成のための親水性支持体として報告されている（例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｐ．Ｍ．；Ｚｈｅｌｅｖａ、Ｄ．Ｉ．（２００２年）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ８：５２９－５４２を参照のこと）。しかしながら、これらの用途に使用されるＰＥＧ誘導体は、多くの場合、多分散性であり、固定分子量を欠く。可変ＰＥＧ鎖長は、高分子量ＰＥＧ共役結合生成物の分析及び精製において、複雑さを生じ得る。したがって、特にペプチドの商業的製造において、これらの欠点に対処するＬＰＰＳのための固定分子量を有する新しい親水性リンカー系を見出すことが改善点となるであろう。このような系が長いペプチド（１５－ｍｅｒ以上）の液相ペプチド合成法を可能にすることができれば、更なる進歩となるであろう。実際に、本実施形態は、タグ支援ＬＰＰＳのための親水性リンカー系、及び商業規模でのペプチドの合成のためのその使用方法を、具体的に提供する。このような方法及びシステムが、本明細書に開示される。
【発明の概要】
【0009】
本実施形態は、ＬＰＰＳなどの液相有機合成のための親水性リンカー構築物として有用な固定分子量の化合物を提供する。本開示の化合物は、リンカーに結合した反復ヘテロ二官能性ＰＥＧ様単位を特徴とし、リンカー上に、カップリング（例えば、アミノ酸カップリング）及び脱保護工程を介して、ポリペプチド又はその他の分子を構築することができる。特に、本開示の化合物は、反復合成工程、例えば、アミノ酸カップリング及び脱保護工程を通して、ポリペプチド又はその他の分子を構築するために、使用されることができる。
【0010】
本開示の一実施形態は、式１の親水性リンカー化合物を含む。
式中、「ｍ」は０～２０であり、「ｎ」は１～５０であり、「Ｚ」はリンカー基である。「Ｚ」は、アミノ酸などの任意で保護された化合物と共有結合を形成し得る官能基であり、これは次に、アミノ酸又はペプチドなどの１種以上の任意で保護された化合物への反復脱保護及びカップリング工程を受けることができ、次に、ポリペプチド生成物などの得られた生成物を、化学変換によって、「Ｚ」基から遊離させることができる。
【化1】
【0011】
本開示の別の実施形態は、「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～５０である式１の化合物を含む。本開示の別の実施形態は、「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～１０である式１の化合物を含む。本開示の別の実施形態は、「ｍ」が１であり、「ｎ」が２～１０である式１の化合物を含む。
【0012】
本開示の更なる実施形態は、「Ｚ」が
から選択され、「ｍ」及び「ｎ」が、上で定義した通りである、式１の化合物を含む。
【化2】
【0013】
本開示の親水性リンカーは、ペプチド及びその他の化合物の合成に有用であり、ここで、アミノ酸又はペプチドフラグメントなどの化合物の活性化エステルは、式１のリンカーの遊離アルコール－ＯＨ又はアミン－ＮＨ２上に、最初にカップリングされる。その後、化合物（例えば、ペプチド）は、中間脱保護の後に連続して、個々の分子構成成分（例えば、アミノ酸又はペプチドフラグメント）の活性化エステルをカップリングさせることによって成長する。完成した化合物、例えば、ペプチドは、酸性条件でリンカーから切断される。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本実施形態は、固定分子量を有するＬＰＰＳ系などの液相合成系で使用するための、親水性リンカー化合物を提供する。ＬＰＰＳに使用される場合、開示された化合物は、長いペプチド（１５－ｍｅｒ以上）の液相ペプチド合成を可能にする。実際、本実施形態は、特に、ＬＰＰＳなどの液相合成のための親水性リンカー系、及び商業規模での分子又はペプチドの合成のための、その使用方法を提供する。
【0015】
上記のように、本親水性リンカー化合物は、上記で概説した式１の化合物であってもよい。好ましい具体例としては、以下のものが挙げられる。
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【0016】
本明細書に記載される親水性リンカー化合物を使用する液相合成は、アミド結合を介して（すなわち、１つの分子上のカルボニル基の別の分子のアミノ基への縮合を介して）カップリングされた化合物を結合させるために使用されることができる。ペプチド合成は、ペプチド結合が１つのアミノ酸のカルボキシル基の別のアミノ酸のアミノ基への縮合反応から生じるので、本明細書に記載される親水性リンカー分子及び方法の明確な使用である。したがって、アミド結合を含有する化合物は、分子を結合させるためのカップリング及び脱保護反応の反復を通して結合されることができるが、これは、完了時に、合成中に使用される支持体から放出されなければならない。具体的には、利用可能なカルボン酸基を有するＦｍｏｃ基によって保護されたアミノ基を有する分子を、本明細書に記載される親水性リンカー分子上にカップリングさせることができる。次に、得られた分子は、Ｆｍｏｃ基を除去することによって脱保護されることができ、分子の得られた保護されていないアミノ基は、利用可能なアミノ基を有する更なる分子上の利用可能なカルボン酸基にカップリングされることができる。実施例２１～実施例２４は、本明細書に記載される親水性リンカー分子を使用する非ペプチド分子の液相合成を示す。
【0017】
ＳＰＰＳ及びＬＰＰＳの両方によるペプチド調製は、ペプチドを伸長させるためのカップリング及び脱保護反応の反復を通して進行するが、これは、完了時に、合成中に使用される支持体から放出されなければならない。なお、合成において使用されるアミノ酸又はペプチドフラグメント出発物質は、多くの場合、カップリング工程中の選択性を確実にするのに役立つ側鎖保護基を有する。側鎖保護基は、ペプチド伸長プロセスにおける脱保護工程中に使用される条件に対して安定であるように、選択される。例えば、ＦＭＯＣ基（Fluorenyl Methyl Oxy Carbonyl、フルオレニルメチルオキシカルボニル基）は、アミノ酸出発物質中のアミノ基を保護するために使用されることができ、第二級アミン塩基で容易に除去される。対照的に、ＢＯＣ（But Oxy Carbonyl）及びトリフェニルメチル（トリチル）保護基は、ペプチド伸長中にＦＭＯＣ基を除去するために典型的に使用される塩基性条件下で安定であり、完了時に強有機酸で除去されることができる。いくつかのペプチド合成リンカーは、アミノ酸側鎖脱保護に使用されるのと同じ条件下で切断されることができる。これは「ハード（hard）」切断法と称され、ペプチド伸長が完了した際に、ペプチドは同時に脱保護され、樹脂から切断される。複雑な合成戦略は、側鎖脱保護の条件にオルゴソナルな条件下で切断が発生することを可能にするリンカー化学の注意深い選択によって、可能になり得る。これは、「ソフト（soft）」切断法と称され、ペプチドは、側鎖保護基の一部又は全部が依然として完全な状態で樹脂から切断される。
【0018】
本開示の親水性リンカーは、「ハード」及び「ソフト」切断法を利用する合成プロセスにおいて、使用されることができる。「ソフト」切断合成戦略を使用することにより、例えば、合成されたペプチドを、より複雑なペプチドのハイブリッドフラグメントベースの合成において、出発物質としての使用を可能にすることができる。更に、ハイブリッドＳＰＰＳ／ＬＰＰＳプロセスは、本明細書に記載される親水性リンカーを使用する収束ペプチド合成戦略の一部として、実施されることができる。ペプチドフラグメントは、ＳＰＰＳを使用して構築され得、それらの固体支持体から切断され得、単離され得、また任意で精製され得、次に、ＬＰＰＳを使用して親水性リンカーに結合されたペプチド上にそれらをカップリングさせることによって、結合されることができる。本収束ハイブリッドＳＰＰＳ／ＬＰＰＳ戦略は、完全にＳＰＰＳであるプロセスと比較して、スケールアップ時により実用的かつ効率的であり得る。
【0019】
フラグメントベースの収束ペプチド合成戦略はまた、本明細書に記載される親水性リンカーを使用して、ＬＰＰＳを用いて実施されることができる。この場合、ペプチドフラグメントは、ＬＰＰＳを使用して構築され、親水性リンカー支持体から切断され、単離され、また任意で精製され、次に、ＬＰＰＳを使用して親水性リンカーに結合されたペプチド上にそれらをカップリングさせることによって、結合される。
【0020】
本開示の親水性リンカー化合物はまた、膜強化ペプチド合成（Membrane-Enhanced Peptide Synthesis、ＭＥＰＳ）を促進するリンカー系の一部として使用されることができる。ＭＥＰＳを中心に構築された合成戦略は、その他の反応構成成分からの成長ペプチドの膜ベースの分離（又は膜分離精製法）を使用する。ＬＰＰＳ戦略におけるＭＥＰＳの実用的な実施は、例えば、有機溶媒ナノ濾過（Organic Solvent Nanofiltration、ＯＳＮ）を使用して、反応が行われる同じ有機溶媒中でこの分離が実施されることを可能にするシステムの使用によって促進される。このような膜ベースの分離技術は、成長するペプチドとその他の反応構成成分との間のサイズの差によって、分離を達成する。そのために、「ナノスター（nanostar）」ハブ構造を、成長するペプチドの分子サイズを増大させるものの、それ自体は緻密であり、容易に合成されるＬＰＰＳ支持体として使用することができる（例えば、Ｙｅｏ，Ｊ．ら（２０２１年）Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ ６０：７７８６－７７９５を参照のこと）。芳香族ハブ構造は、ペプチド合成リンカーが結合され得る中心結合点として機能することができる。これらのハブ構造はまた、例えば、ＵＨＰＬＣ－ＭＳ（Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry、超高速液体クロマトグラフィ質量分析法）による反応モニタリングに有用な追加のＵＶ発色団として機能することができる。ナノスターハブは、成長する合成ペプチドとその他の反応構成成分との間の質量差を増大させ、透析濾過効率を増加させる。
【0021】
本開示の親水性リンカー化合物は、ＭＥＰＳベースの戦略の一部として使用されることができる。特に、本開示の親水性リンカー化合物を連結して、ナノスターハブを形成することができる。スキーム１は、Ｒｉｎｋ型リンカー又はＷａｎｇ型リンカーのいずれかを中心フェニル環に連結するポリエチレングリコール鎖を特徴とする、以前に開示されたナノスター構造の合成を示す（Ｙｅｏ，２０２１年）。
【0022】
【化7】
【0023】
スキーム１のナノスター構造２と同様に、本明細書に記載の式１の化合物をナノスターハブに結合させて、例えば、式２の化合物を得ることもできる。
式中、「Ｚ」は、
であり、
ｍは０、１、２、又は３であり、ｎは１～１０であり、ｐは２又は３である。特に、「Ｚ」が、
であり、
ｍが１であり、ｎが２、４、６、８、又は１０であり、ｐが２又は３である、式２のナノスター化合物を調製し得る。
【化8】
【化9】
ｍは０、１、２、又は３であり、ｎは１～１０であり、ｐは２又は３である。特に、「Ｚ」が、
【化10】
ｍが１であり、ｎが２、４、６、８、又は１０であり、ｐが２又は３である、式２のナノスター化合物を調製し得る。
【0024】
本開示ではまた、「分枝鎖状」親水性リンカー化合物もまた企図されており、リンカーは、ペプチド結合基に結合した２つ以上の親水性官能基を特徴とする。分岐鎖状親水性リンカー系は、式３の化合物を含み得る。
式中、「Ｚ」は、任意で保護されたアミノ酸と共有結合を形成し得る官能基を表し、これは次に、１つ以上の任意で保護されたアミノ酸又はペプチドへの反復脱保護及びカップリング工程を受け得、次に、得られたポリペプチド生成物は、化学変換によって「Ｚ」基から遊離させることができ、ｍは０、１、２、又は３であり、ｎは１～１０であり、ｐは２又は３である。特に、式３ａ、式３ｂ、及び式３ｃの分岐鎖状化合物を調製し得る。
式中、「ｋ」は１であり、「ｍ」は１であり、「ｑ」は１であり、「ｌ」、「ｎ」、及び「ｔ」は、それぞれ独立して、２、４、６、８、又は１０である。
【化11】
【化12】
【0025】
流動化学プロセスの大規模な実施を可能にする技術では、近年、著しく進歩してきている。流動化学において、試薬及び反応物は、通常管又はパイプを通して、連続的に流れる混合物中に一緒にポンプで送り込まれる。従来のバッチプロセスと比較した場合、流動化学戦略を化学製造プロセスに導入することによって、顕著な利点が実現され得る。流動化学戦略は、圧力、温度、及び反応時間などの反応パラメータに対する制御を容易にする。反応混合物を管に通すことによって、例えば、混合物は、管の高い表面積に曝露され、それによって、反応への又は反応からの熱流束が増加し、それによって、急速な加熱又は冷却が可能になる。流通反応装置は加圧され得るが、大気圧で沸点を超えて加熱し、反応速度を増加させることができる。従来のバッチプロセスは、混合及び熱伝達速度のためにスケールアップ時に複雑になる可能性があるが、流動化学プロセスは、これらのパラメータに対する高度な制御をより容易に維持することができる。なお、移動流中で反応を実施することによって、少量の高エネルギー中間体のみが、プロセスの過程中の任意の時間に生成され、それに関連する安全性リスクを減少させる。
【0026】
流動化学原理は、ＳＰＰＳ及びＬＰＰＳなどの液相合成系の両方に適用されてきた。ＳＰＰＳでは、充填床流動システムが大規模及び小規模の両方で調査されており、このようなシステムは自動化に非常に適している。ＬＰＰＳでは、固定化された試薬及びマイクロリアクタが、小規模でペプチドフラグメントを作製するために使用されている（例えば、Ｂａｘｅｎｄａｌｅ、Ｉ．Ｒ．ら（２００６年）Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ４８３５－４８３７、及びＦｕｓｅ、Ｓ．ら（２０１４年）Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ ５３：８５１－８５５を参照のこと）、及び連続式撹拌槽型反応器（Continuous Stirred-Tank Reactor、ＣＳＴＲ）技術が、ジ－及びトリペプチド生成物の大規模調製に適用されている（例えば、Ｊｏｌｌｅｙ，Ｋ．Ｅ．ら（２０１７年）Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２１：１５５７－１５６５を参照のこと）。
【0027】
本開示の親水性リンカー化合物は、ＬＰＰＳなどの流動化学液相プロセスを可能にするのに、特に有用である。溶液中で親水性リンカーにカップリングされた成長分子、例えばペプチドに対する、カップリング及び脱保護反応の急速な反応速度は、流動化学プロセスの実施にとって好ましい特徴である。望ましくない副生成物及び未反応出発物質から所望の反応生成物を分離する溶液相流動化学において、問題が残っている。本明細書に開示される親水性リンカー化合物を使用するペプチドなどの分子の調製は溶液中で行われるが、所望の生成物の単離は相分離で行われ、連続的な液－液分離（例えば、ミキサ－セトラ又は連続流遠心分離機による）の使用を可能にする。
【0028】
従来の固相ペプチド合成では、例えば、洗浄、カップリング、脱保護などの工程で、ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、ジメチルアセトアミド、及びジクロロメタンなどの有毒溶媒が大量に利用されており、産業衛生や環境保護に課題を有している。この理由から、ペプチド合成において使用するための、より環境に優しい（すなわち、「より環境負荷が少ない」）代替溶媒の開発に、強い関心が寄せられている。本明細書に記載される方法は、このようなより環境負荷が少ない溶媒を使用することができる。より環境負荷が少ない洗浄溶媒の実施例としては、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ＭＴＢＥ（Methyl Tert-Butyl Ether、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル）及びＣＰＭＥ（Cyclopentyl Methyl Ether、シクロペンチルメチルエーテル）が挙げられる。本明細書に記載されるカップリング反応は、ＤＭＳＯなどのより環境負荷が少ない溶媒中でも発生し得る。
【0029】
本明細書中で使用される場合、用語「アミノ酸（amino acid）」とは、カルボン酸官能基（－ＣＯ２Ｈ）及びアミン官能基（－ＮＨ２）を含む有機化合物を指す。アミノ酸は、グリシン、Ｌ－アラニン、及びＬ－フェニルアラニンなどのタンパク質生成物（すなわち、翻訳中に生合成的にタンパク質に組み込まれる）であり得、３－アミノイソ酪酸及び８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸などの非タンパク質生成物であり得る。
【0030】
本明細書で使用される場合、用語「親水性リンカー（hydrophilic linker）」とは、カップリング（例えば、アミノ酸カップリング）及び脱保護工程を通してポリペプチドなどの分子を構築することができ、水に対して高い親和性を有する１つ以上の官能基を特徴とする化学部分を指す。
【0031】
本明細書中で使用される場合、用語「流動化学（flow chemistry）」とは、連続的に流動する流れにおいて化学反応を実施することを指す。
【0032】
本明細書で使用される場合、用語「ナノスター（nanostar）」とは、コア有機化学構造が、生体高分子鎖を構築することができる２つ以上のリンカーのための中心結合点（又は「ハブ（hub）」）として機能する、生体高分子（例えば、ポリペプチド）の合成に使用されるリンカー構築概念を指す。ポリペプチドの構築のためのナノスター構造が、記載されている（Ｙｅｏ，Ｊ．ら（２０２１年）Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ ６０：７７８６－７７９５を参照のこと）。
【0033】
本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド（peptide）」又は「ポリペプチド（polypeptide）」とは、アミノ酸のポリマー鎖を指す。これらのアミノ酸は、修飾アミノ酸を含む天然アミノ酸又は合成アミノ酸であり得る。本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド」及び「ポリペプチド」は、交換可能に使用される。
【0034】
本明細書中で使用される特定の略語は、以下のように定義される：「ＡＥＥＡ」とは、２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）アセチルを指し、「Ａｉｂ」とは、２－アミノイソ酪酸を指し、「Ｂｏｃ」とは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを指し、「ＣＡＤ」とは、荷電化粒子検出器（Charged Aerosol Detector）を指し、「ＤＣＭ」とは、ジクロロメタンを指し、「ＤＥＰＢＴ」とは、３－（ジエトキシホスホリルオキシ）－１，２，３－ベンゾトリアジン－４（３Ｈ）－オンを指し、「ＤＩＣ」とは、ジイソプロピルカルボジイミドを指し、「ＤＩＥＡ」とは、ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＦ」とは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」とは、ジメチルスルホキシドを指し、「ＤＶＢ」とは、ジビニルベンゼンを指し、「ＥＤＣ」とは、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドを指し、「ＥＳＭＳ」とは、エレクトロスプレー質量分析法（Electro Spray Mass Spectrometry）を指し、「Ｆｍｏｃ」とは、フルオレニルメチルオキシカルボニルを指し、「Ｆｍｏｃ－Ｓｕｂｅｒｏｌ」とは、５－Ｆｍｏｃ－アミノ－２－カルボキシメトキシ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテンを指し、「ＨＭＰＡ」とは、４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ酢酸を指し、「ＨＭＰＢ」とは、４－（４－ヒドロキシメチル－３－メトキシフェノキシ）酪酸を指し、「ＬＣＭＳ」とは、液体クロマトグラフィ質量分析法を指し、「ＬＰＰＳ」とは、液相ペプチド合成を指し、「ＭＴＢＥ」とは、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを指し、「ｏｘｙｍａ」とは、シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルを指し、「ＰＥＧ」とは、ポリエチレングリコールを指し、「ＰｙＢｏｐ」とは、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＰｙＯｘｉｍ」とは、［（Ｅ）－（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデン）アミノ］オキシ－トリピロリジン－１－イルホスファニウムを指し、ヘキサフルオロホスフェート、「ＳＰＰＳ」とは、固相ペプチド合成を指し、「ｔＢｕ」とは、ｔｅｒｔ－ブチルを指し、「ＴＦＡ」とは、トリフルオロ酢酸を指し、「Ｔｒｔ」とは、トリチルを指し、「ＵＰＬＣ」とは、超高速液体クロマトグラフィを指す。
【0035】
【化13】
【0036】
スキーム２は、親水性リンカー化合物８の調製を示し、ここで、「Ｘ」は、化学的に不安定な－ＯＨ又は－ＮＨ２を有する官能基を表すが、これは、任意で保護されたアミノ酸に対して（それぞれ）エステル結合又はアミド結合を形成することができ、これは、次に、反復脱保護及び１つ以上の任意で保護されたアミノ酸又はペプチドへのカップリング工程を受けることができ、次に、得られたポリペプチド生成物は、化学変換を介して「Ｘ」基から遊離させることができる。
【0037】
化合物８は、スキーム１において、Ｆｍｏｃ保護基戦略を使用する固相合成によって調製される。本合成は、自動ペプチド合成機で、部分的に又は全体的に実行されることができる。工程１において、Ｆｍｏｃ－Ｓｉｅｂｅｒ（ジーバ）アミド樹脂１をピペリジンで脱保護し、次に、工程２において、アミドカップリング条件（例えば、Ｏｘｙｍａ及びＤＩＣ）を使用して、Ｆｍｏｃ保護中間体２とカップリングさせて、中間体３を得る。工程３（ピペリジンを使用する脱保護）及び工程４（アミドカップリング条件、例えば、ＰｙＯｘｉｍ及び有機塩基を使用する、Ｆｍｏｃ保護中間体２とのアミドカップリング）の反復サイクルにより、中間体４が得られるが、このサイクルは、「ｎ」マイナス１回繰り返されて、一緒にカップリングされた「ｎ」モノマー単位を達成する。工程５において、中間体４は、ピペリジンで脱保護され、次に、工程６において、中間体５又は中間体６のいずれかとの（例えば、ＰｙＯｘｉｍ及び有機塩基を用いた）アミドカップリングを受けて、中間体７が得られる。中間体７がＦｍｏｃ保護窒素を有する場合、工程７において、ピペリジンを使用して脱保護される。最後に、親水性リンカー化合物８を、酸性条件下で（例えば、ＴＦＡを使用して）Ｓｉｅｂｅｒ樹脂から切断する。
【0038】
【化14】
【0039】
スキーム３は、窒素を有し、その上にアミノ酸のポリマー鎖が構築され、次に、酸性条件下でリンカーから切断され得る親水性リンカー化合物９を使用したアミノ酸のポリマー鎖の伸長を示す。工程１において、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸１０を、ＤＭＦ又はＤＭＳＯなどの極性非プロトン性有機溶媒中でアミドカップリング条件（例えば、ＰｙＯｘｉｍ及び有機塩基）を使用して、親水性リンカー化合物９とカップリングさせて、第１のカップリング中間体１１を得る。反応が完了した際に、ＭＴＢＥなどの極性の低い非プロトン性溶媒を追加し、その結果、カップリングした中間体１１が反応混合物から沈殿する。沈殿物は（例えば、遠心分離及び上澄みのデカントによって）バルク反応混合物から分離され、任意で、不溶性である溶媒（例えば、ＭＴＢＥ）でこれを再度処理することによって洗浄され、続いて（例えば、遠心分離及び上澄みのデカントによって）沈殿物が分離される。このようにして、中間体１１を反応混合物から単離し、反応溶媒、未反応出発物質、及び反応廃棄物の大部分から分離する。工程２において、中間体１１を、ピペリジンを使用して脱保護し、沈殿／生成物分離／任意の洗浄手順を実施し、次に、工程３において、次の保護アミノ酸（１２）を、アミドカップリング条件（例えば、ＰｙＯｘｉｍ及び有機塩基）を使用してカップリングさせ、続いて、沈殿／生成物分離／任意の洗浄手順を行って中間体１３を得る。この時点で、中間体１３が、（例えば、スキーム６に概説されるように）その他の化学変換に供され得る。末端窒素保護基が－Ｆｍｏｃであり、ポリマー鎖伸長を継続する場合、工程２及び３を、保護されたアミノ酸（例えば、１４）を用いて順番に反復して繰り返して、中間体１５を得る。
【0040】
【化15】
【0041】
スキーム４は、酸素を有し、その上にアミノ酸のポリマー鎖が構築され、次に、酸性条件下でリンカーから切断されることができる、親水性リンカー化合物１６を使用したアミノ酸のポリマー鎖の伸長を示す。本プロセスの工程は、工程１が（試薬、例えば、ＰｙＢＯＰ／有機塩基又はＤＩＣ／ＤＭＡＰを使用して行われる）エステル化工程であることを除いて、スキーム３に概説される工程と類似している。スキーム３（それぞれ、工程２及び３）に概説されているように、脱保護及び保護アミノ酸とのカップリング工程を繰り返すことにより、ポリマー化合物１７が得られる。
【0042】
【化16】
【0043】
スキーム５は、酸素によって接続されたリンカーから伸長アミノ酸ポリマーを切断するための、３つの経路を示す。これらのリンカーから切断される場合、アミノ酸ポリマーは、そのＣ末端に遊離カルボン酸（－ＣＯ２Ｈ）を有する。
【0044】
第１の経路では、工程１ｂにおいて、化合物１７は、酸性条件下（例えば、ＤＣＭ中で２～５％のＴＦＡ）で「ソフト」切断を受け、アミノ酸ポリマー由来のリンカーを加水分解することによってＣ末端でカルボン酸基が得られ、Ｎ末端保護基（及びＲ１、Ｒ２、Ｒ３等に存在し得るその他の保護基）を、化合物１８中で完全な状態のままにする。ピリジンなどの塩基で中和した後、水性後処理を行うと、親水性リンカーの大部分が１８から分離される。次に、Ｎ末端の保護基を完全な状態にして、１８を、例えば、フラグメントベースのペプチド合成戦略の一部として、別のアミンとカップリングさせることができる。
【0045】
第２の経路では、工程１ａにおいて、Ｎ末端保護基が好適な条件下で除去されて（－Ｆｍｏｃ保護の場合、ピペリジンが使用される）、１９が得られる。工程２ｂにおいて、アミノ酸ポリマーをリンカーから加水分解し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３等に存在し得る保護基を完全な状態のまま残す条件下で（例えば、ＤＣＭ中で２～５％のＴＦＡを使用して）２０を得ることができるか、又は酸不安定性保護基の全体的な脱保護を、例えば、ＴＦＡ、トリイソプロピルシラン、１，２－エタンジチオール、及び水の混合物（８５：５：５：５ｖ／ｖ比）を使用する「ハード」切断条件下で達成することができる。
【0046】
第３の経路において、中間体１９は、工程２ａにおいて、アミドカップリング条件下でカルボン酸２１とカップリングされて、２２が得られる（例えば、ＤＥＰＢＴ及び有機塩基、又は２１は、有機塩基を使用して、スクシンイミジルエステルとして反応することができる）。工程３において、化合物２３は、上記で概説した「ハード」又は「ソフト」切断のいずれかを使用して、親水性リンカーから切断される。
【0047】
【化17】
【0048】
スキーム６は、窒素によって連結されたリンカーから伸長アミノ酸ポリマーを切断するための、２つの経路を示す。これらのリンカーから切断される場合、アミノ酸ポリマーは、そのＣ末端に一級アミド（－ＣＯＮＨ２）を有する。
【0049】
第１の経路では、工程１ａにおいて（保護基が－Ｆｍｏｃの場合に、ピペリジンを使用して）中間体２４上のＮ末端保護基を除去して２５を得た後に、「ソフト」切断条件（例えば、ＤＣＭ中で２～５％のＴＦＡ）を使用して、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３等の保護基を完全な状態のままにするか、又は「ハード」切断条件（例えば、８５：５：５：５のＴＦＡ、トリイソプロピルシラン、１，２－エタンジチオール、及び水）を使用して、酸不安定性のＲ１、Ｒ２、Ｒ３等の保護基を除去して、２６を得るか、のいずれかで、親水性リンカーからの切断が酸性条件下で達成される。中間体２４のＮ末端保護基が－Ｂｏｃなどの酸不安定性保護基である場合、工程１ａ及び工程２ｂは、「ハード」切断条件下にてワンポットで達成されることができる。
【0050】
第２の経路において、２５は、工程２ａにおいて、アミドカップリング条件下でカルボン酸２７とカップリングされて、２８が得られる（例えば、ＤＥＰＢＴ及び有機塩基、又は２７は、有機塩基を使用して、スクシンイミジルエステルとして反応することができる）。工程３において、化合物２９は、上記で概説した「ハード」又は「ソフト」切断のいずれかを使用して、親水性リンカーから切断される。
【実施例】
【0051】
以下の実施例は、本開示の種々の実施形態を更に説明し、本開示の化合物の典型的な合成を表す。試薬及び出発物質は、容易に入手可能であるか、当業者によって容易に合成されてもよい。実施例は、限定ではなく例示のために記載され、当業者によって様々な変更が行われ得ることを理解すべきである。
【0052】
ＬＣＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１２００液体クロマトグラフィシステムで実施される。クロマトグラフィ条件－カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ（登録商標）Ｃ１８ １５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ、使用した勾配は、５～９５％の溶媒Ｂであった。溶媒Ａを、２０～３０分間実行し、流量：０．５ｍＬ／分、カラム温度：４０℃～５０℃、溶媒Ａ：水中で０．２％のＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル。エレクトロスプレー質量分析測定（Electro Spray Mass Spectrometry measurements、ＥＳＭＳ）は、クロマトグラフィシステムに接続された質量選択検出器四重極質量分析法（Mass Selective Detector quadrupole mass spectrometer）で実施された。
【0053】
実施例１
２－（４－アミノ（２，４－ジメトキシフェニル）メチル）フェノキシ）－Ｎ－（５３－アミノ－８，１７，２６，３５，４４，５３－ヘキサオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３，３９，４２，４８，５１－ドデカオキサ－９，１８，２７，３６，４５－ペンタアザトリペンタコンチル）アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２］の調製。
２－（４－アミノ（２，４－ジメトキシフェニル）メチル）フェノキシ）－Ｎ－（５３－アミノ－８，１７，２６，３５，４４，５３－ヘキサオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３，３９，４２，４８，５１－ドデカオキサ－９，１８，２７，３６，４５－ペンタアザトリペンタコンチル）アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２］の調製。
【化18】
【0054】
標題化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂（置換０．８、スチレン１％のＤＶＢ、１００～２００メッシュ）から出発して、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．社製）でのＦｍｏｃ戦略を使用する固相合成によって、調製した。
【0055】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上でのＡＥＥＡ単位のカップリング：Ｆｍｏｃ－Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂上での（ＡＥＥＡ）６の調製を、０．５ｍｍｏｌスケールで、９バッチで実施した（合計４．５ｍｍｏｌ）。各バッチについて、樹脂を、それぞれ１０分間にわたるＤＭＦ（１０ｍＬ）の２回の洗浄を使用して、膨潤させた。次に、脱保護及びカップリングサイクルを、以下のように実施した。樹脂をＤＭＦ（９ｍＬで２分間）で洗浄し、ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを使用して脱保護し（７ｍＬで５分間、次に９ｍＬで２５分間）、ＤＭＦで洗浄し（９ｍＬで１分間、６回繰り返し）、Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ［ＤＭＦ中で０．３７５ＭのＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ（４ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ、３当量）、Ｏｘｙｍａ（０．７５０Ｍ、２ｍＬ、３当量）、ＤＩＣ（０．６６０Ｍ、２．５ｍＬ、３．３当量）］とカップリングさせて、窒素ガスを吹き込むことによって１時間４５分混合して、最後に反応容器を排液し、ＤＭＦで洗浄した（９ｍＬで３０秒間、３回繰り返し）。本脱保護及びカップリングサイクルを、合計６回繰り返して、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上にＦｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）６を得た。最後のＤＭＦ洗浄の後、樹脂をＤＣＭで洗浄し、窒素流下で４時間乾燥させた（１０ｍＬで１分間、５回繰り返し）。本方法で調製した各バッチについてのＳｉｅｂｅｒ樹脂上のＦｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）６の平均収量は、１．１５６ｇであった。
【0056】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上の（ＡＥＥＡ）６へのＲｉｎｋ基のカップリング：Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上のＦｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）６の一部（１．１ｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦで膨潤させ（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）、ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを使用して脱保護し（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）、次に、ＤＭＦで洗浄した（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）。ＤＭＦ（９ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｒｉｎｋリンカー（ｐ－［α－［１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－メトキシホルムアミド］－２，４－ジメトキシベンジル］－フェノキシ酢酸、０．８１ｇ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）、ＰｙＯｘｉｍ（０．７９ｇ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＥＡ（０．５２ｍＬ、０．３９ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、６．０当量）の溶液を反応容器に追加し、窒素ガスを吹き込むことによって２時間混合した。反応容器を排液し、ＤＭＦで洗浄し（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）、次に、ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを用いて脱保護した（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）。樹脂を、ＤＭＦで洗浄した（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）。最後のＤＭＦ洗浄後、樹脂をＤＣＭで洗浄し（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）、窒素流下で４時間乾燥させて、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上に１．２１ｇのＲｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６を得た。
【0057】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂からのＲｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２の切断：Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上のＲｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６（１．２１ｇ）を、ＤＣＭ（１２ｍＬ）中で５％のＴＦＡと３０分間混合し、濾過し、追加のＤＣＭで洗浄した。濾液をＤＩＥＡで中和し、減圧下で濃縮した。得られた油状物をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、ＭＴＢＥ（３０ｍＬ）を追加した後、混合物を３０００ｒｐｍで３分間遠心分離した。上澄みを再度デカントし、新鮮なＭＴＢＥ（３０ｍＬ）を追加し、次に、混合物を、再度３０００ｒｐｍで３分間遠心分離した。上澄みを再度デカントし、標題化合物を油状沈殿物として残した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１８８．５（Ｍ＋Ｈ＋）。
【0058】
実施例２
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）８－ＮＨ２］の調製
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）８－ＮＨ２］の調製
【化19】
【0059】
Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋリンカーへのカップリングの前に８個のＡＥＥＡ単位を固体支持体にカップリングさせる、本質的に実施例１に記載される手順を使用する固相合成によって、標題化合物を調製した。Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上の（ＡＥＥＡ）８にＦｍｏｃ－Ｒｉｎｋリンカーをカップリングした後、Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）８－ＮＨ２を、ＤＣＭ中で２％のＴＦＡを用いて樹脂から切断した（５容量で２０分間、５回繰り返し）。合わせた濾液をＤＩＥＡで中和し、溶液を蒸発させた。ＤＭＦを追加し（２容量）、続いてＭＴＢＥを追加して、相分離を開始させた。混合物を遠心分離し、上澄みを除去して、Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）８－ＮＨ２を油状物質として残した。最終Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中で３０％のピペリジンで除去し、続いてＭＴＢＥを追加して、相分離を開始させた。上澄みを除去して、標題化合物を油状物として得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ７３９．５（Ｍ＋２Ｈ＋／２）
【0060】
実施例３
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
【化20】
【0061】
Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋリンカーへのカップリングの前に１０個のＡＥＥＡ単位を固体支持体にカップリングさせる、本質的に実施例１に記載される手順を使用する固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１７６８．８（Ｍ＋Ｈ＋）
【0062】
実施例４
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２］の調製
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２］の調製
【化21】
【0063】
Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋリンカーへのカップリングの前に４個のＡＥＥＡ単位を固体支持体にカップリングさせる、本質的に実施例１に記載される手順を使用する固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ８９７．４［（Ｍ＋Ｈ＋］。
【0064】
実施例５
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－［アミノ－（２，４－ジメトキシフェニル）メチル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
【化22】
【0065】
Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋリンカーへのカップリングの前に２個のＡＥＥＡ単位を固体支持体にカップリングさせる、本質的に実施例１に記載される手順を使用する固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ６０７．３［（Ｍ＋Ｈ＋］。
【0066】
実施例６
Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキシ－エトキシ）エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチル－４－［４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシ－フェノキシ］ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２－］の調製
Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキシ－エトキシ）エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチル－４－［４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシ－フェノキシ］ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２－］の調製
【化23】
【0067】
本質的に実施例１に記載される手順を使用して、１０個のＡＥＥＡ単位をＳｉｅｂｅｒ樹脂上に結合させた。最後のＡＥＥＡ単位を樹脂上にカップリングさせた後、それをＤＣＭで洗浄し、窒素流下で４時間乾燥させた。樹脂の一部（０．５０ｍｍｏｌ）を、本質的に実施例１に記載されるように、ＤＭＦ中で２０％のピペリジンで脱保護し、次に樹脂をＤＣＭ（１１．４ｍＬ）に懸濁し、ＴＦＡを追加した（０．６ｍＬ）。懸濁液を、２５℃で３０分間混合し、次に濾過し、ＤＣＭで洗浄した。濾液をＤＩＥＡで中和し、減圧下で濃縮した。得られた油を、ＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、次に、ＭＴＢＥを追加した（３０ｍＬ）。混合物を遠心分離し、上澄みを除去し、（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２を油として遠心分離管中に残した。
【0068】
（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２を含有する遠心分離管に、ＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）中のＤＥＰＢＴ（１５０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＭＰＢ（１２０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（０．１７４ｍＬ、１２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を追加し、溶液を５分間静置した後、それを管に追加した。得られた混合物を振盪器上に置き、２時間混合し、次にＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を追加して、相分離を誘導した。混合物を遠心分離し（２５００ｒｐｍで３分間）、上澄みを廃棄した。新鮮なＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を管に追加し、遠心分離し（２５００ｒｐｍで３分間）、上澄みを廃棄すると、標題化合物が油状物として残った。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１７１２．７０（Ｍ＋Ｎａ－１Ｈ）。
【0069】
実施例７
Ｎ－（１７－アミノ－８，１７－ジオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９－アザヘプタデシル）－４－（４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシフェノキシ）ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
Ｎ－（１７－アミノ－８，１７－ジオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９－アザヘプタデシル）－４－（４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシフェノキシ）ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
【化24】
【0070】
ＨＭＰＢを、（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２にカップリングさせてＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２を得たことを除いて、本質的に実施例６に記載される標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ５５２．３（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0071】
実施例８
Ｎ－（３５－アミノ－８，１７，２６，３５－テトラオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３－オクタオキサ－９，１８，２７－トリアザペンタトリアコンチル）－４－（４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシフェノキシ）ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２］の調製
Ｎ－（３５－アミノ－８，１７，２６，３５－テトラオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３－オクタオキサ－９，１８，２７－トリアザペンタトリアコンチル）－４－（４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシフェノキシ）ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２］の調製
【化25】
【0072】
ＨＭＰＢを、（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２にカップリングさせてＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２を得たことを除いて、本質的に実施例６に記載される標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ８４２．４（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0073】
実施例９
Ｎ－（５３－アミノ－８，１７，２６，３５，４４，５３－ヘキサオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３，３９，４２，４８，５１－ドデカオキサ－９，１８，２７，３６，４５－ペンタアザトリペンタコンチル）－４－（４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシフェノキシ）ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２］の調製
Ｎ－（５３－アミノ－８，１７，２６，３５，４４，５３－ヘキサオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３，３９，４２，４８，５１－ドデカオキサ－９，１８，２７，３６，４５－ペンタアザトリペンタコンチル）－４－（４－（ヒドロキシメチル）－３－メトキシフェノキシ）ブタンアミド［ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２］の調製
【化26】
【0074】
ＨＭＰＢを、（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２にカップリングさせてＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２を得たことを除いて、本質的に実施例６に記載される標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１３２．５（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0075】
実施例１０
２－（（５－アミノ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アンヌレン－３－イル）オキシ）－Ｎ－（５３－アミノ－８，１７，２６，３５，４４，５３－ヘキサオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３，３９，４２，４８，５１－ドデカオキサ－９，１８，２７，３６，４５－ペンタアザトリペンタコンチル）アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ６－ＮＨ２］の調製
２－（（５－アミノ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アンヌレン－３－イル）オキシ）－Ｎ－（５３－アミノ－８，１７，２６，３５，４４，５３－ヘキサオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３，３９，４２，４８，５１－ドデカオキサ－９，１８，２７，３６，４５－ペンタアザトリペンタコンチル）アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ６－ＮＨ２］の調製
【化27】
【0076】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上の（ＡＥＥＡ）６へのＲａｍａｇｅ基のカップリング：Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上のＦｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）６の一部（９８６．８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌをＤＭＦで膨潤させ（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）、ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを使用して脱保護し（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）、次に、ＤＭＦで洗浄した（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）。ＤＭＦ中のＦｍｏｃ－Ｓｕｂｅｒｏｌ（０．７６ｇ，１．５ｍｍｏｌ，３．０当量）の溶液：ＤＭＳＯ（４：１、５ｍＬ）を反応容器に追加し、続いてＯｘｙｍａ（ＤＭＦ中０．７５０Ｍ、２ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）及びＤＩＣ（ＤＭＦ中０．６６０ Ｍ、２．５ｍＬ、１．６５ｍｍｏｌ、３．３当量）を追加し、窒素ガスを吹き込むことによって４時間混合した。反応容器を排液し、ＤＭＦで洗浄し（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）、次にＤＭＦ中で２０％のピペリジンを使用して脱保護した（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）。樹脂を、ＤＭＦで洗浄した（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）。最後のＤＭＦ洗浄後、樹脂をＤＣＭで洗浄し（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）、窒素流下で４時間乾燥させて、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上に１．２１ｇのＲｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６を得た。
【0077】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂からのＲａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２の切断：Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２を、ＤＣＭ中で２％のＴＦＡを使用し、更なる処理の前に反応物を３０分間ではなく１０分間撹拌したことを除いて、本質的に実施例１に記載されるＳｉｅｂｅｒ樹脂から切断した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１５３．５５（Ｍ＋Ｈ）。
【0078】
実施例１１
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［（１１－アミノ－６，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［１，２－ｅ：１’，２’－ｆ］［７］アンヌレン－２－イル）オキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［（１１－アミノ－６，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［１，２－ｅ：１’，２’－ｆ］［７］アンヌレン－２－イル）オキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
【化28】
【0079】
実施例１０に記載される手順を使用して、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上でＦｍｏｃ－Ｓｕｂｅｒｏｌを（ＡＥＥＡ）１０にカップリングさせる固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１７３３．８（Ｍ＋Ｈ）。
【0080】
実施例１２
２－（（５－アミノ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アンヌレン－３－イル）オキシ）－Ｎ－（３５－アミノ－８，１７，２６，３５－テトラオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３－オクタオキサ－９，１８，２７－トリアザペンタトリアコンチル）アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ４－ＮＨ２］の調製
２－（（５－アミノ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アンヌレン－３－イル）オキシ）－Ｎ－（３５－アミノ－８，１７，２６，３５－テトラオキソ－３，６，１２，１５，２１，２４，３０，３３－オクタオキサ－９，１８，２７－トリアザペンタトリアコンチル）アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ４－ＮＨ２］の調製
【化29】
【0081】
実施例１０に記載される手順を使用して、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上でＦｍｏｃ－Ｓｕｂｅｒｏｌを（ＡＥＥＡ）４にカップリングさせる固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ８６３．４（Ｍ＋Ｈ）。
【0082】
実施例１３
２－（（５－アミノ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アンヌレン－３－イル）オキシ）－Ｎ－（１７－アミノ－８，１７－ジオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９－アザヘプタデシル）アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
２－（（５－アミノ－１０，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アンヌレン－３－イル）オキシ）－Ｎ－（１７－アミノ－８，１７－ジオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９－アザヘプタデシル）アセトアミド［Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
【化30】
【0083】
実施例１０に記載される手順を使用して、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上でＦｍｏｃ－Ｓｕｂｅｒｏｌを（ＡＥＥＡ）２にカップリングさせる固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ５９５．３（Ｍ＋Ｎａ）。
【0084】
実施例１４
Ｎ－（２－（２－（２－アミノ－２－オキソエトキシ）エトキシ）エチル）－２－（２－（２－（２－（４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ）アセトアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド［ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
Ｎ－（２－（２－（２－アミノ－２－オキソエトキシ）エトキシ）エチル）－２－（２－（２－（２－（４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ）アセトアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド［ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２］の調製
【化31】
【0085】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上の（ＡＥＥＡ）２へのＨＭＰＡ基のカップリング：Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上のＦｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２の一部（８４５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌをＤＭＦで膨潤させ（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）、ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを使用して脱保護し（１０ｍＬで２０分間、３回繰り返し）、次に、ＤＭＦで洗浄した（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）。ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＨＭＰＡ（９１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＤＩＥＡ（０．１７４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．０当量）及びＤＥＰＢＴ（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を反応容器に追加し、窒素ガスを吹き込むことによって２時間混合した。反応容器を排液し、ＤＭＦで洗浄し（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）、次にＤＣＭで洗浄し（１０ｍＬで２分間、５回繰り返し）、窒素流下で４時間乾燥させて、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上に９０８．６ｍｇのＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２を得た。
【0086】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂からのＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２の切断：ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２を、本質的に実施例１に記載されるようにＳｉｅｂｅｒ樹脂から切断して、標題化合物を得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ４７２．２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【0087】
実施例１５
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－（ヒドロキシメチル）］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［４－（ヒドロキシメチル）］フェノキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセトアミド［ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
【化32】
【0088】
実施例１４に記載される手順を使用して、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂上でＨＭＰＡを（ＡＥＥＡ）１０にカップリングさせる固相合成によって、標題化合物を調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１６３２．７（Ｍ＋Ｈ）。
【0089】
実施例１６－Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２－及びリンカーからの「ハード」切断を用いた液相ペプチド合成
配列番号１の１９－ｍｅｒペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
配列番号１の１９－ｍｅｒペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
【化33】
【0090】
Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２上のアミノ酸鎖の伸長：Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（０．５ｍｍｏｌ）、ＰｙＯｘｉｍ（０．５ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。溶液を１分間混合し、次に、Ｒｉｎｋリンカー（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２（実施例１で調製、０．１６ｍｍｏｌ）を追加した。反応溶液を１０分間混合し、次に、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）を追加した。混合物を３２５０ｒｐｍで遠心分離し、上澄みを廃棄した。残った物質をＤＭＦ（１ｍＬ）中で３０％のピペリジンと５分間混合した。５分間混合した後、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）を追加した。混合物を遠心分離し、上澄みを廃棄した。ＬＣＭＳは、各遠心分離工程においてＭＴＢＥ含有上澄み中に生成物が存在しないことを確認した。
【0091】
アミノ酸カップリング及び脱保護工程を繰り返し、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（ｔＢｕで保護された側鎖－ＯＨ及び－ＣＯ２Ｈ基）を、配列番号１に示すように、Ｃ末端からＮ末端の順にカップリングした。ＤＭＦ及びＤＭＳＯは、ペプチド構築物が１５アミノ酸以下である場合に、アミノ酸カップリング及び脱保護工程のための反応溶媒として交換可能であった。ペプチド長が１５アミノ酸を超える場合、反応溶媒としてＤＭＳＯが好ましかった。配列番号１における最後のアラニン残基カップリングが完了した際に、最後のＦｍｏｃ基を、上記の３０％のピペリジン／ＤＭＦ脱保護反応条件を使用して除去した。生成物を凍結乾燥して、配列番号１のペプチド（残留溶媒を含む、０．６１２ｍｇ）を得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１６９７．７（Ｍ＋２Ｈ＋／２）、１１３２．０（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。粗単離重量は、液相合成中のＭＴＢＥによる相分離工程中に、生成物が上澄み中に失われないことを示すＬＣＭＳデータを示す。
【0092】
リンカーからのペプチドの「ハード」切断：可溶性リンカー及び保護基を除去するために、配列番号１のペプチドを、ＴＦＡ：トリイソプロピルシラン：１，２－エタンジチオール：水（８５：５：５：５のｖ／ｖ比）を含有する溶液中、２５℃で２時間撹拌し、これにより、次の配列を有するペプチドを得た。
ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２（配列番号２）
ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２（配列番号２）
【0093】
配列番号２のペプチドをＭＴＢＥで沈殿させ（反応体積と比較して１０：１のＭＴＢＥ）、上記のように遠心分離し、次に、真空中で乾燥させた。高分解能ＭＳ ｍ／ｚ実測値９４４．４７８３（荷電状態＋２、中性質量１８８６．９４２６）、理論的中性質量１８８６．９４１４。
【0094】
実施例１７－Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２－及びリンカーからの「ソフト」切断を用いた液相ペプチド合成
Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上での配列番号３の調製：本質的に実施例１６に記載される手順を使用して、配列番号３のペプチドを、３．０ｍｍｏｌのＲａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２へのＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨのカップリングから開始し、続いてＦｍｏｃ脱保護を行う液相ペプチド合成によって調製した。残りのＦｍｏｃ保護アミノ酸（ｔＢｕで保護された側鎖－ＯＨ基）を、配列番号３に示すように、Ｃ末端からＮ末端への順序でカップリング／脱保護した。Ｐｒｏ（７）及びＰｒｏ（８）を、二量体（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－ＯＨ）として組み込んだ。ＰｙＢＯＰは、ＰｙＯｘｉｍと互換的に使用され得る。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ９１３．１（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。
Ｒａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上での配列番号３の調製：本質的に実施例１６に記載される手順を使用して、配列番号３のペプチドを、３．０ｍｍｏｌのＲａｍａｇｅ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２へのＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨのカップリングから開始し、続いてＦｍｏｃ脱保護を行う液相ペプチド合成によって調製した。残りのＦｍｏｃ保護アミノ酸（ｔＢｕで保護された側鎖－ＯＨ基）を、配列番号３に示すように、Ｃ末端からＮ末端への順序でカップリング／脱保護した。Ｐｒｏ（７）及びＰｒｏ（８）を、二量体（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－ＯＨ）として組み込んだ。ＰｙＢＯＰは、ＰｙＯｘｉｍと互換的に使用され得る。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ９１３．１（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。
【化34】
【0095】
リンカーからのペプチドのソフト切断：配列番号３のペプチドに、ＤＣＭ中で２％のＴＦＡ（１０体積）を追加し、反応物を室温で３０分間培養した。反応物を１当量のピリジンを使用して中和し、反応混合物を減圧下で濃縮した。出発物質が生成物中に観察されるが、これに、２０容量の、ＤＣＭ中で２％のＴＦＡを追加した。混合物を室温で３０分間培養し、ピリジンで中和し、再度減圧下で濃縮した。残留物に５％のＴＦＡのＤＣＭ溶液（５０容量）を追加した。４０分後、溶液をピリジンで中和し、減圧下で濃縮して、配列番号４の粗ペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１０４２．５０（Ｍ＋Ｎａ＋）。
Ｇ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＮＨ２（配列番号４）
Ｇ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＮＨ２（配列番号４）
【0096】
実施例１８－Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２－を用いた液相ペプチド合成
【化35】
【0097】
配列番号５のペプチドを、本質的に実施例１６に記載されるように、液相ペプチド合成における支持体として、Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２を使用して調製した。ＭＴＢＥを最終Ｆｍｏｃ脱保護反応混合物に追加し、次に、混合物を遠心分離した。上澄みを廃棄し、配列番号５のペプチドを、油状沈殿物として得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１６３１．８（Ｍ＋Ｎａ＋）、１６０９．８（Ｍ＋Ｈ＋）、８０５．５（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0098】
実施例１９－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２－及びリンカーからの「ソフト」切断を用いた液相ペプチド合成
配列番号６のペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
配列番号６のペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
【化36】
【0099】
ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上のアミノ酸鎖の伸長：ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．２３８８ｇ、０．８０３２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．４１８ｇ、０．８０３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．２０７ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を追加した。それを１分間混合し、ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（０．４３７２ｇ、０．２６７８ｍｍｏｌ）に追加し、９０分間混合し、続いてＭＴＢＥ（４０ｍＬ）を追加した。混合物を、室温、３０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上澄みをデカントした。この洗浄を３回繰り返し、底部油層を残した。カップリング手順をもう一度繰り返し、次に、得られた油状物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中で１０％のピペリジンと１５分間混合した。ＭＴＢＥを追加し（２０ｍＬ）、得られた混合物を、上記と同様の方法で遠心分離した。１０％のピペリジン／ＤＭＦ脱保護手順をもう一度実施し、底部油層を得た。
【0100】
残りのＦｍｏｃ保護アミノ酸（トリチルで保護されたグルタミン側鎖－ＣＯＮＨ２基、及び－Ｂｏｃで保護されたトリプトファン側鎖－ＮＨ基）を、配列番号６に示すように、Ｃ末端からＮ末端への順序で、上記の様式でカップリング／脱保護し、その後のカップリング反応物を９０分間の代わりに４５分間撹拌した。最後のアミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ）カップリング反応物を４５分間撹拌した後、酢酸イソプロピルを混合物に追加し、続いて遠心分離し、上記のようにＭＴＢＥで洗浄して、底部油層を標題化合物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ１５５６．１０（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0101】
リンカーからのペプチドのソフト切断：配列番号６のペプチドを、ＤＣＭ中で３％のＴＦＡとの３０分間の培養を２回使用して、本質的に実施例１７に記載されるソフト切断手順に供して、配列番号７のペプチドを得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ１５１９．６０（Ｍ＋Ｎａ＋）。
Ｆｍｏｃ－Ｆ－Ｖ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－Ａ－Ｇ－ＯＨ（配列番号７）
Ｆｍｏｃ－Ｆ－Ｖ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－Ａ－Ｇ－ＯＨ（配列番号７）
【0102】
実施例２０－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２－及びリンカーからの「ソフト」切断を用いた液相ペプチド合成
配列番号８のペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
配列番号８のペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
【化37】
【0103】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上のアミノ酸鎖の伸長：配列番号８のペプチドを、本質的に実施例１６に記載されるように調製し、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（トリチルで保護されたグルタミン側鎖－ＣＯＮＨ２基、及び－Ｂｏｃで保護されたトリプトファン側鎖－ＮＨ基）をカップリングし、次に、実施例１６に記載される様式で配列番号８に示すように、Ｃ末端からＮ末端への順序で脱保護して、配列番号８のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１５８５．７０（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0104】
配列番号７のペプチドを得るためのソフト切断：配列番号８のペプチドを、ＤＣＭ中で３％のＴＦＡ（２０容量）に溶解し、室温で３０分間培養した。反応混合物を１当量のピリジンで中和し、次に水で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮して、配列番号７のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１４９７．７（Ｍ＋Ｈ＋）。
【0105】
実施例２１
ｔｅｒｔ－ブチル２０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［４－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキソ－エトキシ）エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブトキシ］－２－メトキシ－フェニル］メトキシ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－２０－オキソ－イコサン酸［脂肪酸側鎖－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
ｔｅｒｔ－ブチル２０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［４－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキソ－エトキシ）エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブトキシ］－２－メトキシ－フェニル］メトキシ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－２０－オキソ－イコサン酸［脂肪酸側鎖－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
【化38】
【0106】
方法１［カップリング順序－（ＡＥＥＡ）２，γ－Ｇｌｕ，脂肪酸］：Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＯＨ（４．４９３ｇ、８．４６９ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（５１．７ｍｇ、０．４２３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１１ｍＬ）溶液に、ＤＩＣ（１．３３ｍＬ、８．４６９ｍｍｏｌ）を追加し、５分間静置した。ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（２．８２３ｍｍｏｌ）を溶液に追加し、これをＤＭＳＯ（３ｍＬ）ですすいだ。反応溶液を２時間混合し、その後、ＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加した。混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みをデカントし、新鮮なＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、次に混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、ＥｔＯＡｃ（４５ｍＬ）を追加し、次に混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、次に上澄みをデカントして、油状沈殿物を得た。３０％のピペリジン／ＤＭＦ（８ｍＬ）を油状沈殿物に追加し、１５分間混合した後、ＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加した。混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、次に、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを再度デカントし、油状沈殿物を残した。
【0107】
ＤＭＳＯ（９ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（１．２０１ｇ、２．８２３ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（１．４６９ｇ、２．８２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．９８３ｍＬ、５．６４ｍｍｏｌ）を追加した。溶液を５分間熟成させ、次に油状沈殿物に追加し、３０分間混合した。ＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みをデカントし、新鮮なＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みをデカントし、ＥｔＯＡｃ（４５ｍＬ）を追加し、次に、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを再度デカントすると、油状沈殿物が残った。３０％のピペリジン／ＤＭＦ（８ｍＬ）を油状沈殿物に追加し、１５分間混合した後、ＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加した。混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、次に、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを再度デカントし、油状沈殿物を残した。
【0108】
ＤＭＳＯ中の２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサン酸（１．１３ｇ、２．８３ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＤＥＰＢＴ（８４４．７ｍｇ、２．８２３ｍｍｏｌ、１．０当量）：トルエンの溶液（９：１、１０ｍＬ）に、ＤＩＥＡ（０．９８３ｍＬ、５．６４ｍｍｏｌ、２．０当量）を追加した。溶液を５分間熟成させ、次に油状沈殿物に追加し、３０分間混合した。ＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みをデカントし、新鮮なＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間再度遠心分離した。上澄みを再度デカントし、ＥｔＯＡｃ（４５ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、標題化合物を油状沈殿物として残した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１２７４．１０（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0109】
方法２［カップリング順序－ＡＥＥＡ）２、γ－Ｇｌｕ－脂肪酸のスクシンイミジルエステル］：Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＯＨを、同じスケールで上記のようにＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２にカップリングした。３０％のピペリジン／ＤＭＦの溶液（３ｍＬ）をＦｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２の油に追加し、１５分間混合した。ＭＴＢＥ（総容量４０ｍＬ）を反応物に追加し、混合物を遠心分離した（３０００ｒｐｍ×２分）。ＭＴＢＥをデカントし、ＤＭＳＯ（２ｍＬ）を油に追加し、それを溶解した。新鮮なＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加し、混合物をもう一度遠心分離し、ＭＴＢＥ層をデカントした。Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（２Ｓ）－２－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］ペンタンジオエート（５．７６ｇ、８．４６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ：トルエンの混合物（９：１比、５．４ｍＬのＤＭＳＯ＋０．６ｍＬのトルエン）に溶解した。ＤＩＥＡを追加し（３ｍＬ、１６．９２ｍｍｏｌ）、得られた溶液を５分間静置して予備活性化した。混合物を遠心管中のＡＥＥＡ２－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（２．８２ｍｍｏｌ）に３０分間追加した。ＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加し、混合物を遠心分離した（３０００ｒｐｍ×２分）。ＭＴＢＥ層を除去し、新鮮なＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加し、混合物をもう一度遠心分離した。上澄みを廃棄し、標題化合物を油状物として残した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１２７３．７０（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0110】
実施例２２
ソフト切断法による、２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸［脂肪酸側鎖］の調製
ソフト切断法による、２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸［脂肪酸側鎖］の調製
【化39】
【0111】
脂肪酸側鎖－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（実施例２１で調製、２５００ｍｇ）を、２％のＴＦＡ／トルエン溶液（１０容量、２５ｍＬ）に追加した。混合物を１０分間混合した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄みを回収し、ピリジン（ＴＦＡと等モル）で中和した。残った油状沈殿物にＭＴＢＥ（２５ｍＬ）を追加し、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄みを回収し、油状物に新鮮なＭＴＢＥ（２５ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。再度上澄みを回収し、油状沈殿物を得た。切断及び洗浄を、更に２回繰り返した。有機体を飽和ＮａＣｌ水溶液及び水で洗浄し、続いて、合わせた有機体を減圧下に濃縮して、標題化合物を得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ８７４（Ｍ＋Ｈ＋）。粗生成物を、ＵＰＬＣ－ＣＡＤ［カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ（登録商標）Ｃ１８ １５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ、カラム温度：５０℃、勾配－２１分間にわたる３０～９０％溶媒Ｂ：溶媒Ａ、流量－０．５ｍＬ／分、溶媒Ａ：水中で０．２％のＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル、検出器：フォトダイオードアレイＵＶ、ＣＡＤ］を使用して分析した。粗生成物は、６１．７１％の純度を示した。
【0112】
実施例２３
ｔｅｒｔ－ブチル２０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［４－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブトキシ］－２－メトキシ－フェニル］メトキシ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－２０－オキソ－イコサン酸［脂肪酸側鎖－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２］の調製
ｔｅｒｔ－ブチル２０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［４－［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブトキシ］－２－メトキシ－フェニル］メトキシ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－２０－オキソ－イコサン酸［脂肪酸側鎖－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２］の調製
【化40】
【0113】
ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中のＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ（１１５６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１８．４ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＣ（０．４７ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を追加した。得られた溶液を５分間放置して活性化し、次に、ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２（１ｍｍｏｌ）に追加した。反応混合物を振盪器上に置き、２時間混合した。ＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加してオイリングアウト（ｏｉｌｉｎｇ ｏｕｔ）を誘導し、混合物を遠心分離した（３０００ｒｐｍ×２分）。ＭＴＢＥ層を廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加した。混合物をもう一度遠心分離し、ＭＴＢＥを廃棄した。得られた油状物に、３０％のピペリジン／ＤＭＦ（３ｍＬ）を追加し、１５分間混合した。次に、ＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加し、混合物を遠心分離した（３０００ｒｐｍ×２分）。ＭＴＢＥ層をデカントし、ＤＭＳＯ（２ｍＬ）を油に追加してそれを溶解し、新鮮なＭＴＢＥ（総体積４０ｍＬ）を追加した。混合物をもう一度遠心分離し、ＭＴＢＥ層をデカントした。Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ（１１５６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（１５９８．１ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＳＯ（４ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡを追加し（１ｍＬ、６ｍｍｏｌ）、得られた溶液を、予備活性化のために５分間静置した。混合物を遠心分離管中のＡＥＥＡ－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２（１ｍｍｏｌ）に追加し、３０分間混合した。３０％のピペリジン／ＤＭＦ（３ｍＬ）を使用したＦｍｏｃ除去及びＭＴＢＥ洗浄を、上記のように実施した。Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（２Ｓ）－２－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］ペンタンジオエート（２０４０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ：トルエンの混合物（９：１比、２．７ｍＬのＤＭＳＯ＋０．３ｍＬのトルエン）に溶解した。ＤＩＥＡを追加し（１ｍＬ、６ｍｍｏｌ）、得られた溶液を、予備活性化のために５分間静置した。混合物を遠心管中のＡＥＥＡ２－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２（１ｍｍｏｌ）に３０分間追加した。次に、ＭＴＢＥ洗浄を繰り返して、油形成を誘導した。ＭＴＢＥを廃棄すると、標題化合物が油状沈殿物として残った。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１９６６．３（Ｍ＋Ｈ＋）。
【0114】
実施例２４
ｔｅｒｔ－ブチル２０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキソ－エトキシ）エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］フェニル］メトキシ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－２０－オキソ－イコサン酸［脂肪酸側鎖－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
ｔｅｒｔ－ブチル２０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノ－２－オキソ－エトキシ）エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］フェニル］メトキシ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－２０－オキソ－イコサン酸［脂肪酸側鎖－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２］の調製
【化41】
【0115】
ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中のＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ（５７８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（９．２ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＣ（０．２３５ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ）を追加した。溶液を５分間熟成させた後、ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（０．５００ｍｍｏｌ）に追加し、２時間混合した。ＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）－ＯＨを用いて上記のように第２のカップリングサイクルを実施し、２時間後、ＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、油状沈殿物を得た。３０％のピペリジン／ＤＭＦ（３ｍＬ）を油沈殿物に追加し、１５分間混合した。ＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、油状沈殿物を１ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、新鮮なＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加した。混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、次に上澄みをデカントして、油状沈殿物を得た。
【0116】
Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ（５８６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（７９１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４ｍＬ）中の溶液に、ＤＩＥＡ（０．５２３ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を追加した。溶液を５分間熟成させ、次に上記で得られた油状沈殿物に追加し、３０分間混合した。ＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物をもう一度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、油状沈殿物を得た。３０％のピペリジン／ＤＭＦ（３ｍｌ）を油沈殿物に追加し、１５分間混合した。ＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、次に、上澄みを廃棄した。新鮮なＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、（ＡＥＥＡ）２－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２の油状沈殿物を得た。
【0117】
Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨの第２のカップリングと同様の様式で、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕを、（ＡＥＥＡ）２－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上にカップリングし、次にＭＴＢＥを追加及び遠心分離し、次にＤＭＦ中で３０％のピペリジンで脱保護し、続いてＭＴＢＥを追加及び遠心分離して、Ｆｍｏｃ－γＧｌｕ－（ＡＥＥＡ）２－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２を油状沈殿物として得た。
【0118】
ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中の２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸（６００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）及びＰｙＢＯＰ（７８１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．５２３ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ、６．０当量）を追加した。溶液を５分間熟成させ、その間に活性化エステルが沈殿したので、トルエン（８ｍＬ）を追加し、次に更に５分間熟成させた。溶液を、Ｆｍｏｃ－γＧｌｕ－（ＡＥＥＡ）２－ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２に追加し、１時間混合した（反応混合物の完全な溶解は達成されなかった）。ＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、新鮮なＭＴＢＥ（１４ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、標題化合物を油状物として得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ２４８８．２（Ｍ＋Ｈ＋）、１２４５．５（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0119】
実施例２５－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２－及びリンカーからの「ソフト」切断を用いた液相ペプチド合成
【化42】
【0120】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上のアミノ酸鎖の伸長：Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ（１．９ｇ、６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（３６．８ｍｇ、０．３０１ｍｍｏｌ）の混合物を、４ｍＬのＤＭＳＯに溶解した。ＤＩＣ（０．９３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を混合物に追加し、予備活性化のために５分間静置した。本混合物を、ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２に追加し、混合物を室温で２時間振盪した。ＭＴＢＥを追加して混合物の体積を４０ｍＬにし、カップリング生成物Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２が油として沈殿する相変化を誘導した。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×２分）、ＭＴＢＥの上澄みをデカントした。追加のＭＴＢＥを油状沈殿物に追加して体積を４０ｍＬにし、混合物を遠心分離し、ＭＴＢＥの上澄みをデカントした。カップリング手順を、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨで２回繰り返して、完全なカップリングを達成した。
【0121】
ＤＭＦ（３ｍＬ）中で３０％のピペリジンを、得られた油状沈殿物に追加し、混合物を１５分間振盪した。次に、ＭＴＢＥを追加して、体積を４０ｍＬにし、油を沈殿させた。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×２分）、上澄みをデカントし、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）を油状沈殿物に追加した。ＭＴＢＥを追加して体積を４０ｍＬにし、混合物を再度遠心分離し、上澄みをデカントして、油状沈殿物を残した。
【0122】
アミノ酸カップリング及び脱保護工程を、本質的に実施例１６に記載したように繰り返し、最初に、（２Ｓ）－６－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸をカップリングし、次に、残りのＦｍｏｃ保護アミノ酸（ｔＢｕで保護されたアスパラギン酸側鎖－ＣＯ２Ｈ基、トリチルで保護されたグルタミン側鎖－ＮＨ２、及びリジン－ＮＨ２）をカップリングし、配列番号９に示すようにＣ末端からＮ末端の順に、ＰｙＯｘｉｍの代わりにＤＥＰＢＴを使用して、各カップリング手順で６０分間混合し、配列番号９のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１９６１．０８（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0123】
配列番号１０のペプチドを得るためのソフト切断：
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中で２％のＴＦＡ中の配列番号９のペプチド（０．３８ｍｍｏｌ、１．５ｇ）の混合物を、室温で３０分間培養した。次に、ピリジン（１当量）を追加して、反応混合物を中和した。反応混合物を水で洗浄し、有機層を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで洗浄し、次に再度ＤＣＭに溶解し、減圧下で濃縮して、配列番号１０のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１２５（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中で２％のＴＦＡ中の配列番号９のペプチド（０．３８ｍｍｏｌ、１．５ｇ）の混合物を、室温で３０分間培養した。次に、ピリジン（１当量）を追加して、反応混合物を中和した。反応混合物を水で洗浄し、有機層を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで洗浄し、次に再度ＤＣＭに溶解し、減圧下で濃縮して、配列番号１０のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１２５（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0124】
粗生成物を、ＵＰＬＣ－ＭＳ［カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ（登録商標）Ｃ１８ １５０×２．１ｍｍ、１．７ｍｍ、カラム温度：５０℃、勾配－２１分間にわたる３０～９０％溶媒Ｂ：溶媒Ａ、流量：０．５ｍＬ／分、溶媒Ａ：水中で０．２％のＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル、検出器：フォトダイオードアレイＵＶ、ＥＳＭＳ］を使用して分析した。粗ペプチドの純度は、７１．３１％であった。
【化43】
【0125】
実施例２６－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２の液相ペプチド合成
配列番号１１のペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
配列番号１１のペプチドを、以下のように液相ペプチド合成を使用して調製した。
【化44】
【0126】
Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ（４．２ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（７３．６ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＣ（１．５８ｇ、１．９６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を追加し、混合物を予備活性化のために５分間静置した。混合物をＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（４ｍｍｏｌ）に追加し、室温で２時間振盪した。ＭＴＢＥを追加して混合物の体積を４０ｍＬにし、カップリング生成物Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２が油として沈殿する相変化を誘導した。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、ＭＴＢＥの上澄みをデカントした。追加のＭＴＢＥを油状沈殿物に追加して体積を４０ｍＬにし、混合物を遠心分離し、ＭＴＢＥの上澄みをデカントした。カップリング手順を、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨで２回繰り返して、完全なカップリングを達成した。
【0127】
ＤＭＦ（３ｍＬ）中で３０％のピペリジンを、得られた油状沈殿物に追加し、混合物を１５分間振盪した。次に、ＭＴＢＥを追加して、体積を４０ｍＬにし、油を沈殿させた。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、上澄みをデカントし、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）を油状沈殿物に追加した。ＭＴＢＥを追加して体積を４０ｍＬにし、混合物を再度遠心分離し、上澄みをデカントして、油状沈殿物を残した。
【0128】
続くアミノ酸カップリング及び脱保護工程を、本質的に実施例１６に記載されるように繰り返し、配列番号１１に示すように、Ｃ末端からＮ末端への順に、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（ｔＢｕで保護された－ＯＨ及び－ＣＯ２Ｈ側鎖基）をカップリングして、配列番号１１のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１８９３（Ｍ＋２Ｈ＋／２）、１２６２（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。
【0129】
実施例２７－四量体ペプチドの液相合成及びＨＭＰＢベースのリンカーからの「ソフト」切断
【化45】
【0130】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上での四量体ペプチドの調製：配列番号１２のペプチドを、以下の変更を追加して、本質的に実施例１６に記載のように調製した：第１のアミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ）を、以下のようにＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２にカップリングし、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、ＤＩＣ、及びＤＭＡＰ（３：３：０．１５モル比）を、ＤＭＳＯに溶解し、１分間混合し、次に、ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２に追加した。２時間後、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）を追加して相分離を開始させた。混合物を３２５０ｒｐｍで遠心分離し、上澄みを廃棄した。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを用いて、上記のように第２のカップリングサイクルを実施し、２時間後、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）を追加して相分離を開始させた。混合物を３２５０ｒｐｍで遠心分離し、上澄みを廃棄した。Ｆｍｏｃ基を、３０％のピペリジン／ＤＭＦを使用して除去し、次に、その後のカップリング及び脱保護を、本質的に実施例１６に記載されるように実施して、配列番号１２のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ２３６０．１（Ｍ＋Ｎａ＋）、２３３８．１（Ｍ＋Ｈ＋）、１１６９．６（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0131】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２リンカーからの四量体ペプチドのソフト切断：
２つの方法を用いて、配列番号１２のペプチドを「ソフト」切断して、配列番号１３の保護された四量体ペプチドを得た。
Ｂｏｃ－Ｙ（ｔＢｕ）－Ａｉｂ－Ｅ（ｔＢｕ）－Ｇ－ＯＨ（配列番号１３）。
２つの方法を用いて、配列番号１２のペプチドを「ソフト」切断して、配列番号１３の保護された四量体ペプチドを得た。
Ｂｏｃ－Ｙ（ｔＢｕ）－Ａｉｂ－Ｅ（ｔＢｕ）－Ｇ－ＯＨ（配列番号１３）。
【0132】
方法１：配列番号１２のペプチドに、５％のＴＦＡ／ＤＣＭ溶液（１０体積）を追加した。３０分後、溶液をピリジンで中和し、１０％のＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を最少量のＤＭＦに溶解し、水（３容量）で希釈した。混合物をＭＴＢＥで３回抽出し、合わせた有機物を減圧下で濃縮して、配列番号１３のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ６８７．４（Ｍ＋Ｎａ＋）、６６５．４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【0133】
方法２：配列番号１２のペプチドに、２％のＴＦＡトルエン溶液（１０体積）を追加した。混合物を１０分間混合した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄みを回収し、ピリジン（ＴＦＡと等モル）で中和した。残った油状沈殿物にＭＴＢＥ（３ｍＬ）を追加し、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄みを回収し、油状物に新鮮なＭＴＢＥ（３ｍＬ）を追加し、混合物を再度３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。再度上澄みを回収し、油状沈殿物を得た。油沈殿物に対して、切断及び洗浄を更に２回繰り返した。合わせた有機上澄み混合物を飽和ＮａＣｌ水溶液及び水で洗浄し、続いて、合わせた有機物を減圧下で濃縮して、配列番号１３のペプチドを得た。
【化46】
【0134】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２上での四量体ペプチド調製：配列番号１４のペプチドを、ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２を使用して、本質的に上記のように調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１４８８．７（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0135】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）４－ＮＨ２リンカーからの四量体ペプチドのソフト切断：配列番号１４のペプチドに、３％のＴＦＡ／ＤＣＭ溶液（２０容積）を追加した。３０分後、溶液をピリジンで中和し、水で２回洗浄した。有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、これを減圧下で濃縮して、配列番号１３のペプチドを得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ６８７．４（Ｍ＋Ｎａ＋）、６６５．４（Ｍ＋Ｈ＋）。
【化47】
【0136】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２上での四量体ペプチド調製：配列番号１５のペプチドを、ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２を使用して、本質的に上記のように調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１９８．５（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【化48】
【0137】
ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２上での四量体ペプチド調製：配列番号１６のペプチドを、ＨＭＰＢ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２を使用して、本質的に上記のように調製した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１７７８．８（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0138】
実施例２８－四量体ペプチドの液相合成及びＨＭＰＡベースのリンカーからの「ソフト」切断
【化49】
【0139】
ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上での四量体ペプチド調製：ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（１４０ｍｇ、０．４７０８９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＣ（６０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及び２，４，６－トリメチルピリジン（０．１２５ｍＬ、０．９４５ｍｍｏｌ）を追加した。本溶液を、ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（２５６ｍｇ、０．１５６７９ｍｍｏｌ）に追加し、室温で２時間振盪した。ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）をそれに追加し、得られた混合物を遠心分離した（５０００ｒｐｍ×３分）。上澄みをデカントし、抽出ＭＴＢＥ洗浄を更に３回実施し、毎回デカントすることによって、上澄みから底部油層を分離した。上記のカップリング及び洗浄プロセスを、３回繰り返した。反応を完了させる。沈殿した油層を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中で２５％のピペリジンと２０分間混合し、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）で洗浄し、上記と同様の方法で３回遠心分離し、底部油層を残した。
【0140】
ＤＭＳＯ（７５０μＬ）及びアセトニトリル（７５０μＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（９０．７４ｍｇ、０．２１１１ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（１１２．５ｍｇ、０．２１１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（７４μＬ、０．４２４ｍｍｏｌ）を追加し、溶液を２分間混合した。この溶液を、上記の油沈殿物（０．１８０ｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）に追加し、室温で３０分間混合し、続いてＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を追加した。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、上澄みをデカントした。本抽出洗浄を２回実施し、毎回上澄みをデカントして、底部油層から分離した。１０％のピペリジン／ＤＭＦ（２ｍＬ）を油沈殿物に追加し、１５分間混合し、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）で洗浄し、上記と同様の方法で２回遠心分離し、底部油層を残した。
【0141】
Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ（６８．４ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（１１０．８ｍｇ、０．２０８０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（７５０ｍＬ）中の溶液に、ＤＩＰＥＡ（５５．０５μＬ、０．３１６ｍｍｏｌ）を追加した。溶液を２分間混合し、上記の油層（０．１９７ｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）に追加し、室温で３０分間混合した後、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を追加して油を沈殿させた。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、上澄みをデカントした。本抽出洗浄を２回行い、毎回デカンテーションによって、底部油層を上澄みから分離した。１０％のピペリジン／ＤＭＦ（２ｍＬ）を油状沈殿物に追加し、１５分間混合した。同様に、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）で洗浄し、上記のように２回遠心分離し、底部油層を残した。
【0142】
ＤＭＳＯ（７５０μＬ）及びアセトニトリル（７５０μＬ）中のＢｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（１０６．４ｍｇ、０．３１５３ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（１６６．３ｍｇ、０．３１５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（９１μＬ、０．３１６ｍｍｏｌ）を追加した。溶液を２分間混合し、上記の油層（２０１．０ｍｇ、０．１０２６ｍｍｏｌ）に追加し、室温で３０分間混合した後、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を追加して油を沈殿させた。混合物を遠心分離した（３０００ｒｐｍ×３分）。本抽出洗浄を２回行い、毎回デカンテーションによって、底部油層を上澄みから分離した。上記のカップリング及び洗浄プロセスを４回実施して反応を完了させ、配列番号１７のペプチドを油状物として得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ２２７９．１０（Ｍ＋Ｈ＋）、１１４０．２０（Ｍ＋２Ｈ＋／２）。
【0143】
ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２リンカーからの四量体ペプチドのソフト切断：配列番号１７のペプチド（１０２．３ｍｇ、０．０４４８８ｍｍｏｌ）に、１％のＴＦＡ（ＤＣＭ中、１．２２ｍＬ）を追加し、混合物を室温で１時間撹拌した。得られた溶液に、ピリジン（１０．６ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を追加した。混合物を水（４．５ｍＬ）で洗浄し、次に有機層を回収し、更に濃縮して、配列番号１３のペプチドを油状物として濃縮した。ＬＣＭＳは、反応が出発物質から生成物への３３％の変換まで進行したことを示した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ６６５．４０（Ｍ＋Ｈ＋）、６８７．３０（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0144】
ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２上での四量体ペプチドの調製：
【化50】
【0145】
ＤＭＳＯ（２．５ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（５２２．５ｍｇ、１．７５７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣ（２４９．７ｍｇ、１．６０９ｍｍｏｌ）及びシアノグリオキシル酸エチル－２－オキシム（２７２．４ｍｇ、１．８９８ｍｍｏｌ）を追加した。本溶液を、ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２（０．４１４３ｇ、０．８７８７ｍｍｏｌ）に追加し、溶液を室温で２時間混合し、続いて、ＭＴＢＥ（３０ｍＬ）を追加して油を沈殿させた。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、上澄みをデカントした。本抽出洗浄を３回行い、毎回デカンテーションによって、底部油層を上澄みから分離した。上記のカップリング及び洗浄プロセスを３回繰り返して、反応を完了させた。沈殿した油層を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中で１０％のピペリジンと２０分間混合し、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）で洗浄し、上記と同様の方法で遠心分離した。後者のＦｍｏｃ除去工程をもう一度行い、底部油層を得た。
【0146】
ＤＭＳＯ（３ｍＬ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（０．８４２ｇ、１．９８０ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（１．０５５ｇ、１．９８０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．５１６ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）を追加し、溶液を１分間混合した。この溶液を、上記の油沈殿物（０．５０４ｇ、０．９５４ｍｍｏｌ）に追加し、室温で４５分間混合し、続いてＭＴＢＥ（４０ｍＬ）を追加して、油を沈殿させた。混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、上澄みをデカントした。本抽出洗浄を２回実施し、毎回上澄みをデカントして、底部油層から分離した。カップリング及び洗浄工程を、もう一度繰り返した。１０％のピペリジン／ＤＭＦ（２ｍＬ）を油沈殿物に追加し、１５分間混合した。上記と同様の方法で洗浄し、底部油層を残した。
【0147】
ＤＭＳＯ（３ｍＬ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ（９７０ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（１．５７ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（７８２μＬ、４．４８ｍｍｏｌ）を追加し、溶液を１分間混合した。この溶液を、上記の油沈殿物（１．００１ｇ、１．４０２ｍｍｏｌ）に追加し、室温で４５分間混合し、次に混合物をＭＴＢＥで洗浄し、上記のように遠心分離した。１０％のピペリジン／ＤＭＦ（２ｍＬ）を油沈殿物に追加し、１５分間混合した。混合物をＭＴＢＥで洗浄し、上記のように遠心分離した。後者のＦｍｏｃ除去工程をもう一度行い、底部油層を得た。
【0148】
ＤＭＳＯ（３ｍＬ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）中のＢｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（１．６３ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）及びＰｙＯｘｉｍ（２．５５ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（１．１３ｍＬ、６．４８ｍｍｏｌ）を追加し、溶液を１分間混合した。この溶液を、上記の油沈殿物（１．２８９ｇ、１．６１３ｍｍｏｌ）に追加し、室温で６０分間混合し、次にそれをＭＴＢＥで洗浄し、上記のように遠心分離した。カップリング及びＭＴＢＥ洗浄工程をもう一度繰り返して、配列番号１８のペプチドを油として得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１１１８．５０（Ｍ＋Ｈ＋）、１１４０．５０（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【0149】
ＨＭＰＡ－（ＡＥＥＡ）２－ＮＨ２リンカーからの四量体ペプチドのソフト切断：配列番号１８のペプチド（５０ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）に、ＤＣＭ（０．８ｍＬ）中の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノール（２００μＬ、１．９１ｍｍｏｌ）の混合物を追加し、得られた混合物を、室温で２０分間撹拌した。ＡＣＮ（２ｍＬ）を追加し、反応混合物を減圧下で濃縮した。ＡＣＮ追加及び濃縮工程を、２回繰り返した。残渣を上記条件（１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノール及びＤＣＭ中で２０分間撹拌し、続いてＡＣＮを追加し、濃縮する）に２回供して、配列番号１３のペプチドを油状物として得た。ＬＣＭＳは、反応が出発物質から生成物への８％の変換まで進行したことを示した。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ６６４．４０（Ｍ＋）。
【0150】
実施例２９－Ｒｉｎｋリンカー－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２を使用した配列番号２２のペプチドの液相フラグメントベースの調製
液相フラグメントベースのアプローチによる配列番号２２のペプチドの合成が、本明細書に記載される。
液相フラグメントベースのアプローチによる配列番号２２のペプチドの合成が、本明細書に記載される。
【0151】
Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２上での配列番号１９のペプチドの調製：本質的に実施例１６に記載される手順を使用して、配列番号１９のペプチドを、０．０５ｍｍｏｌのＲｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）６－ＮＨ２へのＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨのカップリングから開始し、続いてＦｍｏｃ脱保護を行う液相ペプチド合成によって、調製した。残りのＦｍｏｃ保護アミノ酸（ｔＢｕで保護された側鎖－ＯＨ基）を、配列番号１９に示すように、Ｃ末端からＮ末端への順序でカップリング／脱保護した。
【化51】
【0152】
ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１０９５．７（Ｍ＋２Ｈ＋／２）、７３１．０（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。
【0153】
配列番号１９のペプチドへの配列番号７のペプチドのカップリング：ＤＭＳＯを反応溶媒として使用して、本質的に実施例１６に記載のカップリング手順を使用して、配列番号７のペプチドを配列番号１９のペプチド上にカップリングさせて、配列番号２０のペプチドを得た。反応物を、１分間の反応時間後にサンプリングし、ＬＣＭＳによって分析したところ、反応が完了していることが示された。
【化52】
【0154】
ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１８３５．９０（Ｍ＋２Ｈ＋／２）、１２２４．２０（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。ＤＭＳＯを反応溶媒として使用して、本質的に実施例１６に記載の脱保護手順を使用して、Ｎ末端Ｆｍｏｃ基を配列番号２０のペプチドから除去して、配列番号２１のペプチドを得た。
【化53】
【0155】
ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１７２４．９（Ｍ＋２Ｈ＋／２）、１１５０．２０（Ｍ＋３Ｈ＋／３）。
【0156】
配列番号２１のペプチドへの配列番号１０のペプチドのカップリング：配列番号１０のペプチド（０．０６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯを反応溶媒として使用して、本質的に実施例１６に記載のカップリング手順を使用して配列番号２１のペプチドにカップリングし、次に、ＤＭＳＯ中で３０％のピペリジンを使用して、本質的に実施例１６に記載の脱保護手順を使用してＦｍｏｃ基を除去して、配列番号２２のペプチドを得た。
【化54】
【0157】
ＥＳＭＳ ｍ／ｚ＝１８２０．１（Ｍ＋３Ｈ＋／３）、１３６５．３（Ｍ＋４Ｈ＋／４）。
【0158】
実施例３０
フラグメントベースのアプローチを使用する、Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２を用いた配列番号２３のペプチドの調製。
フラグメントベースのアプローチを使用する、Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２を用いた配列番号２３のペプチドの調製。
【化55】
【0159】
ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ（配列番号２４、０．２２９１ｇ、０．３３９５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．１７８１ｇ、０．３４２２ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（５４．１８６μＬ、０．３１１ｍｍｏｌ）を追加した。それを１分間混合し、Ｒｉｎｋ－（ＡＥＥＡ）１０－ＮＨ２（０．５００ｇ、０．３３８ｍｍｏｌ）に追加し、６０分間混合し、続いてＭＴＢＥ（１２ｍＬ）を追加して、油状沈殿物を得た。混合物を、室温で（３０００ｒｐｍ×３分間）遠心分離し、上澄みをデカントした。この洗浄を、もう１回繰り返した。油状沈殿物を、酢酸イソプロピル（２回、毎回１０ｍＬ）で、同様の方法で洗浄した。カップリングを、更に２回繰り返した。油層を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中で２０％のピペリジンと２０分間混合し、同様の方法でＭＴＢＥ（１２ｍＬ）及び酢酸イソプロピルで洗浄して、油状沈殿物を得た。
【0160】
ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－ＯＨ（配列番号２５、０．２２６２ｇ、０．３４５４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．１８０ｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（６０．３４μＬ、０．３４６ｍｍｏｌ）を追加した。溶液を１分間混合し、次に前工程からの油状沈殿物（０．５０７３ｇ、０．２３０３ｍｍｏｌ）に追加し、６０分間混合した。ＭＴＢＥ（１２ｍＬ）を追加し、油を沈殿させ、混合物を遠心分離し（３０００ｒｐｍ×３分）、上澄みをデカントした。油状沈殿物を上記のように、ＭＴＢＥ及び酢酸イソプロピルで２回洗浄した。カップリング反応を、更に２回繰り返した。油層を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中で２０％のピペリジンと２０分間混合し、沈殿させ、同様の方法でＭＴＢＥ（１２ｍＬ）及び酢酸イソプロピルで洗浄／遠心分離して、油状沈殿物を得た。
【0161】
本質的に先のカップリング及び脱保護について記載した方法で、以下のものを、前工程で単離した油状沈殿物に、順次カップリングさせた。
１．Ｆｍｏｃ－Ａ－Ｇ－Ｇ－Ｐ－ＯＨ（配列番号２６）、
２．Ｆｍｏｃ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－ＯＨ（配列番号２７）、
３．
４．Ｆｍｏｃ－Ｋ－Ｉ－Ａ－Ｑ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（配列番号２９）
５．Ｆｍｏｃ－Ｉ－Ａｉｂ－Ｌ－Ｄ（ｔＢｕ）－ＯＨ（配列番号３０）
６．Ｆｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｄ（ｔＢｕ）－Ｙ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ（配列番号３１）
１．Ｆｍｏｃ－Ａ－Ｇ－Ｇ－Ｐ－ＯＨ（配列番号２６）、
２．Ｆｍｏｃ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－ＯＨ（配列番号２７）、
３．
【化56】
５．Ｆｍｏｃ－Ｉ－Ａｉｂ－Ｌ－Ｄ（ｔＢｕ）－ＯＨ（配列番号３０）
６．Ｆｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｄ（ｔＢｕ）－Ｙ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ（配列番号３１）
【0162】
配列番号３１のペプチドをカップリングした後、ピペリジン／ＤＭＦ脱保護工程を実施し、ＭＴＢＥ／酢酸イソプロピル洗浄／遠心分離手順の後に、配列番号２３のペプチドを油として得た。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ１７５６．５０（Ｍ＋４Ｈ＋／４）。
【0163】
配列表
配列番号１
配列番号１
【化57】
【0164】
配列番号２
ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【0165】
配列番号３
【化58】
【0166】
配列番号４
Ｇ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＮＨ２
配列番号５
Ｇ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＮＨ２
配列番号５
【化59】
【0167】
配列番号６
【化60】
【0168】
配列番号７
Ｆｍｏｃ－Ｆ－Ｖ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－Ａ－Ｇ－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｆ－Ｖ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－Ａ－Ｇ－ＯＨ
【0169】
配列番号８
【化61】
【0170】
配列番号９
【化62】
【0171】
配列番号１０
【化63】
【0172】
配列番号１１
【化64】
【0173】
配列番号１２
【化65】
【0174】
配列番号１３
Ｂｏｃ－Ｙ（ｔＢｕ）－Ａｉｂ－Ｅ（ｔＢｕ）－Ｇ－ＯＨ
Ｂｏｃ－Ｙ（ｔＢｕ）－Ａｉｂ－Ｅ（ｔＢｕ）－Ｇ－ＯＨ
【0175】
配列番号１４
【化66】
【0176】
配列番号１５
【化67】
【0177】
配列番号１６
【化68】
【0178】
配列番号１７
【化69】
【0179】
配列番号１８
【化70】
【0180】
配列番号１９
【化71】
【0181】
配列番号２０
【化72】
【0182】
配列番号２１
【化73】
【0183】
配列番号２２
【化74】
【0184】
配列番号２３
【化75】
【0185】
配列番号２４
Ｆｍｏｃ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ
【0186】
配列番号２５
Ｆｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｇ－Ａ－ＯＨ
【0187】
配列番号２６
Ｆｍｏｃ－Ａ－Ｇ－Ｇ－Ｐ－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ａ－Ｇ－Ｇ－Ｐ－ＯＨ
【0188】
配列番号２７
Ｆｍｏｃ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｑ（Ｔｒｔ）－Ｗ（Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｉ－ＯＨ
【0189】
配列番号２８
【化76】
【0190】
配列番号２９
Ｆｍｏｃ－Ｋ－Ｉ－Ａ－Ｑ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｋ－Ｉ－Ａ－Ｑ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
【0191】
配列番号３０
Ｆｍｏｃ－Ｉ－Ａｉｂ－Ｌ－Ｄ（ｔＢｕ）－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｉ－Ａｉｂ－Ｌ－Ｄ（ｔＢｕ）－ＯＨ
【0192】
配列番号３１
Ｆｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｄ（ｔＢｕ）－Ｙ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ
Ｆｍｏｃ－Ｓ（ｔＢｕ）－Ｄ（ｔＢｕ）－Ｙ（ｔＢｕ）－Ｓ（ｔＢｕ）－ＯＨ
【0193】
配列番号３２
【化77】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-02-22
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式の化合物であって、【化1】
【請求項2】
Ｚが、【化2】
【請求項3】
前記化合物が、【化3】
【請求項4】
１）「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～５０であるか；２）「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～１０であるか；又は
３）「ｍ」が１であり、「ｎ」が２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、
請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
前記化合物が、液相合成に使用される、請求項１に記載の化合物。
【請求項6】
前記液相合成が、液相ペプチド合成（Liquid Phase Peptide Synthesis、ＬＰＰＳ）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項7】
前記化合物が親水性である、請求項１に記載の化合物。
【請求項8】
請求項１に記載の化合物であって、「Ｚ」が、任意で保護されたアミノ酸と共有結合を形成する官能基であり、これが次に、１つ以上の任意で保護されたアミノ酸又はペプチドへの反復脱保護及びカップリング工程を受けることができ、次に、得られたポリペプチド生成物を、化学変換によって前記「Ｚ」基から遊離させることができる、化合物。
【請求項9】
配列番号１、３、５、６、８、９、１１、１２、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、又は２３の、ペプチド。
【請求項10】
液相ペプチド合成を使用して配列番号１のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号２のペプチドを得ることと、を含む、配列番号２のペプチドの調製方法。
【請求項11】
液相ペプチド合成を使用して配列番号３のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号３のペプチドを酸で処理して、配列番号４のペプチドを得ることと、を含む、配列番号４のペプチドの調製方法。
【請求項12】
液相ペプチド合成を使用して配列番号６のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号６のペプチドを酸で処理して、配列番号７のペプチドを得ることと、を含む、配列番号７のペプチドの調製方法。
【請求項13】
液相ペプチド合成を使用して配列番号９のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号９のペプチドを酸で処理して、配列番号１０のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１０のペプチドの調製方法。
【請求項14】
液相ペプチド合成を使用して、配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを酸で処理して、配列番号１３のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１３のペプチドの調製方法。
【請求項15】
下記式【化4】
液相合成を使用して前記化合物を調製することを含み、前記液相合成が、ＡＥＥＡ含有分子を請求項１に記載の化合物にカップリングさせることを含む、方法。
【請求項16】
１）ａ．Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨを、請求項１に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．工程ａからの前記生成物に第２のＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｄ．工程ｃの前記生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｅ．酸を用いて、工程ｄの前記生成物から前記リンカー化合物を除去すること、
２）
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＯＨを、請求項１に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．工程ａの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記得られた生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｄ．酸を用いて、工程ｃの前記生成物から前記リンカー化合物を除去すること、又は
３）
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ）２－ＯＨを、請求項１に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（２Ｓ）－２－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］ペンタンジオエートを、工程ａの前記得られた生成物にカップリングさせることと、
ｃ．酸を用いて、工程ｂの前記生成物から前記リンカー化合物を除去すること
を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
以下の化合物。【化5】
【請求項18】
配列番号３２のペプチドを調製するための方法であって、請求項１に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、前記ペプチド配列の一部又は全部を調製することを含む、方法。
【請求項19】
配列番号１９のペプチドと配列番号７のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２０のペプチドを調製するための方法。
【請求項20】
配列番号２１のペプチドと配列番号１０のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２２のペプチドを調製するための方法。
【請求項21】
以下の工程：ａ．請求項１に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、配列番号１９のペプチドを調製する工程と、
ｂ．前記配列番号１９のペプチドを配列番号７のペプチドにカップリングさせて、配列番号２０のペプチドを生成する工程と、
ｃ．前記配列番号２０のペプチドを脱保護して、配列番号２１のペプチドを生成する工程と、
ｄ．配列番号１０のペプチドを前記配列番号２１のペプチドにカップリングさせる工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを脱保護して、配列番号２２のペプチドを生成する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
【請求項22】
以下の工程：ｆ．個々のアミノ酸、ペプチドフラグメント、又はそれらの混合物をカップリングさせることによって、工程ｅからの前記配列番号２２のペプチドを伸長させる工程と、
ｇ．前記得られたペプチドを酸で処理する工程と、
ｈ．前記得られたペプチドを脱保護する工程と、を更に含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
以下の工程：ａ．配列番号２４のペプチドを、請求項１に記載の化合物とカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｂ．工程ａからの前記ペプチドを、配列番号２５のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｃ．工程ｂからの前記ペプチドを、配列番号２６のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｄ．工程ｃからの前記ペプチドを、配列番号２７のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを、配列番号２８のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｆ．工程ｅからの前記ペプチドを、配列番号２９のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｇ．工程ｆからの前記ペプチドを、配列番号３０のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｈ．工程ｇの前記ペプチドを、配列番号３１のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0193】
配列番号３２
本願発明には以下の態様が含まれる。
［項目１］
下記式の化合物であって、
式中、「ｍ」が０～２０であり、「ｎ」が１～５０であり、「Ｚ」がリンカー化合物である、化合物。
［項目２］
Ｚが、
からなる群から選択される、項目１に記載の化合物。
［項目３］
前記化合物が、
である、項目２に記載の化合物。
［項目４］
前記化合物が、
である、項目２に記載の化合物。
［項目５］
前記化合物が、
である、項目２に記載の化合物。
［項目６］
前記化合物が、
である、項目２に記載の化合物。
［項目７］
前記化合物が、
である、項目２に記載の化合物。
［項目８］
「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～５０である、項目１～７のいずれか一項に記載の化合物。
［項目９］
「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～１０である、項目１～７のいずれか一項に記載の化合物。
［項目９］
「ｍ」が１であり、「ｎ」が２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、項目１～７のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１１]
前記化合物が、液相合成に使用される、項目１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１２]
前記液相合成が、液相ペプチド合成（Liquid Phase Peptide Synthesis、ＬＰＰＳ）である、項目１～１１のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１３]
前記化合物が親水性である、項目１～１２のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１４]
項目１～１３のいずれか一項に記載の化合物であって、「Ｚ」が、任意で保護されたアミノ酸と共有結合を形成する官能基であり、これが次に、１つ以上の任意で保護されたアミノ酸又はペプチドへの反復脱保護及びカップリング工程を受けることができ、次に、得られたポリペプチド生成物を、化学変換によって前記「Ｚ」基から遊離させることができる、化合物。
［項目１５]
配列番号１の、ペプチド。
［項目１６]
液相ペプチド合成を使用して配列番号１のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号２のペプチドを得ることと、を含む、配列番号２のペプチドの調製方法。
［項目１７］
配列番号３の、ペプチド。
［項目１８]
液相ペプチド合成を使用して配列番号３のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号３のペプチドを酸で処理して、配列番号４のペプチドを得ることと、を含む、配列番号４のペプチドの調製方法。
［項目１９]
配列番号５の、ペプチド。
［項目２０]
配列番号６の、ペプチド。
［項目２１]
液相ペプチド合成を使用して配列番号６のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号６のペプチドを酸で処理して、配列番号７のペプチドを得ることと、を含む、配列番号７のペプチドの調製方法。
［項目２２]
配列番号８の、ペプチド。
［項目２３]
配列番号９の、ペプチド。
［項目２４]
液相ペプチド合成を使用して配列番号９のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号１０のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１０のペプチドの調製方法。
［項目２５]
配列番号１１の、ペプチド。
［項目２６]
配列番号１２の、ペプチド。
［項目２７]
配列番号１４の、ペプチド。
［項目２８]
配列番号１５の、ペプチド。
［項目２９]
配列番号１６の、ペプチド。
［項目３０]
配列番号１７の、ペプチド。
［項目３１]
配列番号１８の、ペプチド。
［項目３２]
液相ペプチド合成を使用して、配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを酸で処理して、配列番号１３のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１３のペプチドの調製方法。
［項目３３]
配列番号１９の、ペプチド。
［項目３４]
配列番号２０の、ペプチド。
［項目３５]
配列番号２１の、ペプチド。
［項目３６]
配列番号２２の、ペプチド。
［項目３７]
配列番号２３の、ペプチド。
［項目３８]
下記式
の化合物を調製するための方法であって、
液相合成を使用して前記化合物を調製することを含み、前記液相合成が、ＡＥＥＡ含有分子を項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物にカップリングさせることを含む、方法。
［項目３９]
ａ．Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨを、項目１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．工程ａからの前記生成物に第２のＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｄ．工程ｃの前記生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｅ．酸を用いて、工程ｄの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、項目３８に記載の方法。
［項目４０]
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ） ２ －ＯＨを、項目１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．工程ａの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記得られた生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｄ．酸を用いて、工程ｃの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、項目３８に記載の方法。
［項目４１]
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ） ２ －ＯＨを、項目１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（２Ｓ）－２－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］ペンタンジオエートを、工程ａの前記得られた生成物にカップリングさせることと、
ｃ．酸を用いて、工程ｂの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、項目３８に記載の方法。
［項目４２]
以下の化合物。
［項目４３]
以下の化合物。
［項目４４]
以下の化合物。
［項目４５]
配列番号３２のペプチドを調製するための方法であって、項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、前記ペプチド配列の一部又は全部を調製することを含む、方法。
［項目４６]
配列番号１９のペプチドと配列番号７のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２０のペプチドを調製するための方法。
［項目４７]
配列番号２１のペプチドと配列番号１０のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２２のペプチドを調製するための方法。
［項目４８]
以下の工程：
ａ．項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、配列番号１９のペプチドを調製する工程と、
ｂ．前記配列番号１９のペプチドを配列番号７のペプチドにカップリングさせて、配列番号２０のペプチドを生成する工程と、
ｃ．前記配列番号２０のペプチドを脱保護して、配列番号２１のペプチドを生成する工程と、
ｄ．配列番号１０のペプチドを前記配列番号２１のペプチドにカップリングさせる工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを脱保護して、配列番号２２のペプチドを生成する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
［項目４９]
以下の工程：
ｆ．個々のアミノ酸、ペプチドフラグメント、又はそれらの混合物をカップリングさせることによって、工程ｅからの前記配列番号２２のペプチドを伸長させる工程と、
ｇ．前記得られたペプチドを酸で処理する工程と、
ｈ．前記得られたペプチドを脱保護する工程と、を更に含む、項目４８に記載の方法。
［項目５０]
以下の工程：
ａ．配列番号２４のペプチドを、項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物とカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｂ．工程ａからの前記ペプチドを、配列番号２５のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｃ．工程ｂからの前記ペプチドを、配列番号２６のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｄ．工程ｃからの前記ペプチドを、配列番号２７のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを、配列番号２８のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｆ．工程ｅからの前記ペプチドを、配列番号２９のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｇ．工程ｆからの前記ペプチドを、配列番号３０のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｈ．工程ｇの前記ペプチドを、配列番号３１のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
【化77】
本願発明には以下の態様が含まれる。
［項目１］
下記式の化合物であって、
【化78】
［項目２］
Ｚが、
【化79】
［項目３］
前記化合物が、
【化80】
［項目４］
前記化合物が、
【化81】
［項目５］
前記化合物が、
【化82】
［項目６］
前記化合物が、
【化83】
［項目７］
前記化合物が、
【化84】
［項目８］
「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～５０である、項目１～７のいずれか一項に記載の化合物。
［項目９］
「ｍ」が０、１、２、又は３であり、「ｎ」が１～１０である、項目１～７のいずれか一項に記載の化合物。
［項目９］
「ｍ」が１であり、「ｎ」が２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、項目１～７のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１１]
前記化合物が、液相合成に使用される、項目１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１２]
前記液相合成が、液相ペプチド合成（Liquid Phase Peptide Synthesis、ＬＰＰＳ）である、項目１～１１のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１３]
前記化合物が親水性である、項目１～１２のいずれか一項に記載の化合物。
［項目１４]
項目１～１３のいずれか一項に記載の化合物であって、「Ｚ」が、任意で保護されたアミノ酸と共有結合を形成する官能基であり、これが次に、１つ以上の任意で保護されたアミノ酸又はペプチドへの反復脱保護及びカップリング工程を受けることができ、次に、得られたポリペプチド生成物を、化学変換によって前記「Ｚ」基から遊離させることができる、化合物。
［項目１５]
配列番号１の、ペプチド。
［項目１６]
液相ペプチド合成を使用して配列番号１のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号２のペプチドを得ることと、を含む、配列番号２のペプチドの調製方法。
［項目１７］
配列番号３の、ペプチド。
［項目１８]
液相ペプチド合成を使用して配列番号３のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号３のペプチドを酸で処理して、配列番号４のペプチドを得ることと、を含む、配列番号４のペプチドの調製方法。
［項目１９]
配列番号５の、ペプチド。
［項目２０]
配列番号６の、ペプチド。
［項目２１]
液相ペプチド合成を使用して配列番号６のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号６のペプチドを酸で処理して、配列番号７のペプチドを得ることと、を含む、配列番号７のペプチドの調製方法。
［項目２２]
配列番号８の、ペプチド。
［項目２３]
配列番号９の、ペプチド。
［項目２４]
液相ペプチド合成を使用して配列番号９のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１のペプチドを酸で処理して、配列番号１０のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１０のペプチドの調製方法。
［項目２５]
配列番号１１の、ペプチド。
［項目２６]
配列番号１２の、ペプチド。
［項目２７]
配列番号１４の、ペプチド。
［項目２８]
配列番号１５の、ペプチド。
［項目２９]
配列番号１６の、ペプチド。
［項目３０]
配列番号１７の、ペプチド。
［項目３１]
配列番号１８の、ペプチド。
［項目３２]
液相ペプチド合成を使用して、配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを調製することと、次に、前記調製された配列番号１１、１２、１４、１５、１６、１７、又は１８のペプチドを酸で処理して、配列番号１３のペプチドを得ることと、を含む、配列番号１３のペプチドの調製方法。
［項目３３]
配列番号１９の、ペプチド。
［項目３４]
配列番号２０の、ペプチド。
［項目３５]
配列番号２１の、ペプチド。
［項目３６]
配列番号２２の、ペプチド。
［項目３７]
配列番号２３の、ペプチド。
［項目３８]
下記式
【化85】
液相合成を使用して前記化合物を調製することを含み、前記液相合成が、ＡＥＥＡ含有分子を項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物にカップリングさせることを含む、方法。
［項目３９]
ａ．Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨを、項目１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．工程ａからの前記生成物に第２のＦｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｄ．工程ｃの前記生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｅ．酸を用いて、工程ｄの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、項目３８に記載の方法。
［項目４０]
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ） ２ －ＯＨを、項目１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．工程ａの前記生成物にＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕをカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｃ．工程ｂの前記得られた生成物に２０－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２０－オキソイコサン酸をカップリングさせることと、
ｄ．酸を用いて、工程ｃの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、項目３８に記載の方法。
［項目４１]
ａ．Ｆｍｏｃ－（ＡＥＥＡ） ２ －ＯＨを、項目１～１４のいずれか一項に記載のリンカー化合物にカップリングさせ、得られた生成物を、塩基を使用して脱保護することと、
ｂ．Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（２Ｓ）－２－［（２０－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２０－オキソ－イコサノイル）アミノ］ペンタンジオエートを、工程ａの前記得られた生成物にカップリングさせることと、
ｃ．酸を用いて、工程ｂの前記生成物から前記リンカー化合物を除去することと、を含む、項目３８に記載の方法。
［項目４２]
以下の化合物。
【化86】
以下の化合物。
【化87】
以下の化合物。
【化88】
配列番号３２のペプチドを調製するための方法であって、項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、前記ペプチド配列の一部又は全部を調製することを含む、方法。
［項目４６]
配列番号１９のペプチドと配列番号７のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２０のペプチドを調製するための方法。
［項目４７]
配列番号２１のペプチドと配列番号１０のペプチドとをカップリングさせることを含む、配列番号２２のペプチドを調製するための方法。
［項目４８]
以下の工程：
ａ．項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物を使用する液相ペプチド合成によって、配列番号１９のペプチドを調製する工程と、
ｂ．前記配列番号１９のペプチドを配列番号７のペプチドにカップリングさせて、配列番号２０のペプチドを生成する工程と、
ｃ．前記配列番号２０のペプチドを脱保護して、配列番号２１のペプチドを生成する工程と、
ｄ．配列番号１０のペプチドを前記配列番号２１のペプチドにカップリングさせる工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを脱保護して、配列番号２２のペプチドを生成する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
［項目４９]
以下の工程：
ｆ．個々のアミノ酸、ペプチドフラグメント、又はそれらの混合物をカップリングさせることによって、工程ｅからの前記配列番号２２のペプチドを伸長させる工程と、
ｇ．前記得られたペプチドを酸で処理する工程と、
ｈ．前記得られたペプチドを脱保護する工程と、を更に含む、項目４８に記載の方法。
［項目５０]
以下の工程：
ａ．配列番号２４のペプチドを、項目１～１４のいずれか一項に記載の化合物とカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｂ．工程ａからの前記ペプチドを、配列番号２５のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｃ．工程ｂからの前記ペプチドを、配列番号２６のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｄ．工程ｃからの前記ペプチドを、配列番号２７のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｅ．工程ｄからの前記ペプチドを、配列番号２８のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｆ．工程ｅからの前記ペプチドを、配列番号２９のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｇ．工程ｆからの前記ペプチドを、配列番号３０のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、
ｈ．工程ｇの前記ペプチドを、配列番号３１のペプチドとカップリングさせ、得られたペプチドを脱保護する工程と、を含む、配列番号３２のペプチドを調製するための方法。
【国際調査報告】