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▶ ザ ウィリアムソン グループ リミテッド ライアビリティ カンパニーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-05
(54)【発明の名称】酸性組成物におけるフィコシアニンの改善された安定化
(51)【国際特許分類】
A23L 5/41 20160101AFI20240829BHJP
A23L 2/58 20060101ALI20240829BHJP
A23L 2/44 20060101ALI20240829BHJP
C07K 14/405 20060101ALN20240829BHJP
【ＦＩ】
A23L5/41
A23L2/00 M
A23L2/58
A23L2/00 P
C07K14/405 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024513314
(86)(22)【出願日】2022-08-24
(85)【翻訳文提出日】2024-04-12
(86)【国際出願番号】 IB2022000483
(87)【国際公開番号】W WO2023026097
(87)【国際公開日】2023-03-02
(31)【優先権主張番号】63/236,444
(32)【優先日】2021-08-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524069651
【氏名又は名称】ザ ウィリアムソン グループ リミテッド ライアビリティ カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100212509
【弁理士】
【氏名又は名称】太田 知子
(72)【発明者】
【氏名】クールバレ マチュー
(72)【発明者】
【氏名】アターヌ アクセル
(72)【発明者】
【氏名】カニャック オリヴィエ
(72)【発明者】
【氏名】アヴィレス ブライアン
(72)【発明者】
【氏名】ジャーヴィス ジェニファー ミシェル
(72)【発明者】
【氏名】ナンツ ジョディ レナー
【テーマコード（参考）】
4B018
4B117
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B018LB08
4B018MA08
4B018MB03
4B018MC04
4B117LC01
4B117LK08
4B117LK12
4B117LK13
4B117LK16
4B117LL03
4B117LP13
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA30
4H045EA01
4H045GA01
4H045GA45
(57)【要約】
本技術は、一般的に、安定化されたフィコシアニンを含む酸性組成物及びそのような酸性組成物を取得するための方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
フィコシアニンを含む酸性組成物であって、フィコシアニンが、約０．００１質量％～約０．１質量％の範囲の量で組成物中に存在する、酸性組成物。
【請求項2】
フィコシアニンが約０．００１質量％～約０．０５質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項１に記載の酸性組成物。
【請求項3】
フィコシアニンが約０．００１質量％～約０．０２５質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項１に記載の酸性組成物。
【請求項4】
フィコシアニンが約０．００２５質量％～約０．０１０質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項１に記載の酸性組成物。
【請求項5】
フィコシアニンが約０．００２５質量％～約０．００５質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項１に記載の酸性組成物。
【請求項6】
フィコシアニンが、そのアポタンパク質が配列番号１若しくは配列番号２のタンパク質又はその変異体を含むフィコビリタンパク質である、請求項１～５のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項7】
フィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１を含み、且つフィコシアニンのβ－サブユニットアポタンパク質が配列番号２又はその変異体を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項8】
α－サブユニットアポタンパク質が配列番号１からなり、且つβ－サブユニットアポタンパク質が配列番号２又はその変異体からなる、請求項７に記載の酸性組成物。
【請求項9】
フィコシアニンが、イデユコゴメ目（Ｃｙａｎｉｄｉａｌｅｓ）の藻類又は微細藻類から抽出される、請求項１～８のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項10】
フィコシアニンが、イデユコゴメ科（Ｃｙａｎｉｄｉａｃｅａｅ）の藻類又は微細藻類から抽出される、請求項１～８のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項11】
フィコシアニンが、ガルディエリア科（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ）の藻類又は微細藻類から抽出される、請求項１～８のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項12】
フィコシアニンが、シアニジオシゾン属（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ）、シアニジウム属（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）又はガルディエリア属（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）の藻類又は微細藻類から抽出される、請求項１～８のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項13】
フィコシアニンが、シアニジオシゾン・メロラエ（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ ｍｅｒｏｌａｅ）１０Ｄ、シアニジオシゾン・メロラエＤＢＶ２０１、シアニジウム・カルダリウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｃａｌｄａｒｉｕｍ）、シアニジウム・ダエダルム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｄａｅｄａｌｕｍ）、シアニジウム・マキシムム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｍａｘｉｍｕｍ）、シアニジウム・パルティツム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｐａｒｔｉｔｕｍ）、シアニジウム・ルムペンス（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｒｕｍｐｅｎｓ）、ガルディエリア・ダエダラ（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｄａｅｄａｌａ）、ガルディエリア・マキシマ（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、ガルディエリア・パルティタ（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｐａｒｔｉｔａ）、ガルディエリア・フレグレア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｐｈｌｅｇｒｅａ）、ガルディエリア・スルフラリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ）、優先的には生物種ガルディエリア・スルフラリア、シアニジウム・カルダリウム、及びシアニジオシゾン・メロラエから選択される生物種の藻類又は微細藻類から抽出される、請求項１～８のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項14】
フィコシアニンが酸性ｐＨ耐性フィコシアニンである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項15】
約４以下のｐＨを有する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項16】
約３超且つ約４以下のｐＨを有する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項17】
少なくとも１種の硫酸化多糖の量をさらに含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項18】
フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖が、約０．２０：１～約２０：１、好ましくは約０．２５：１～約１０：１又は約１：１～約１０：１、さらに好ましくは約０．３：１～約１．５：１の比率で組成物中に存在する、請求項１７に記載の酸性組成物。
【請求項19】
少なくとも１種の硫酸化多糖がカラギーナンである、請求項１７又は１８に記載の酸性組成物。
【請求項20】
カラギーナンが多硫酸化カラギーナンである、請求項１９に記載の酸性組成物。
【請求項21】
多硫酸化カラギーナンがλ－カラギーナンである、請求項２０に記載の酸性組成物。
【請求項22】
液体であることを特徴とする、請求項１～２１のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項23】
請求項２２に記載の酸性組成物を含む炭酸飲料。
【請求項24】
固体であることを特徴とする、請求項１～２１のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項25】
フィコシアニン含有量が０．２５ｍｇ／ｇ～２．５ｍｇ／ｇであることを特徴とする、請求項２４に記載の酸性組成物。
【請求項26】
フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む酸性組成物であって、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖が、約０．２０：１～約２０：１、好ましくは約０．２５：１～約１０：１の比率で、又は約１：１～約１０：１、さらに好ましくは約０．３：１～約１．５：１の比率で組成物中に存在する、酸性組成物。
【請求項27】
少なくとも１種の硫酸化多糖がカラギーナンである、請求項２６に記載の酸性組成物。
【請求項28】
カラギーナンが多硫酸化カラギーナンである、請求項２７に記載の酸性組成物。
【請求項29】
多硫酸化カラギーナンがλ－カラギーナンである、請求項２８に記載の酸性組成物。
【請求項30】
フィコシアニンが約０．０５質量％～約０．１質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項２６～２９のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項31】
少なくとも１種の硫酸化多糖が約０．００１質量％～０．１質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項32】
少なくとも１種の硫酸化多糖が約０．０５質量％～０．１質量％の範囲の量で組成物中に存在する、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項33】
フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖が約１：１～約４：１の比率で組成物中に存在する、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項34】
フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖が約１：１～約３：１の比率で組成物中に存在する、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項35】
フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖が約１：１～約２：１の比率で組成物中に存在する、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項36】
約４以下のｐＨを有する、請求項２６～３５のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項37】
約３超且つ約４以下のｐＨを有する、請求項２６～３５のいずれか１項に記載の酸性組成物。
【請求項38】
ガルディエリア属抽出物を含む酸性組成物であって、ガルディエリア属抽出物が約０．００４質量％～約０．４質量％の範囲の量で組成物中に存在する、酸性組成物。
【請求項39】
請求項１～２２及び２４～３８のいずれか１項に規定される酸性組成物を含む食品製品。
【請求項40】
約５０ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌの範囲の量で濃縮組成物中に存在するフィコシアニンを含む、濃縮液体組成物。
【請求項41】
フィコシアニンが約５００ｍｇ／Ｌ～約１０００ｍｇ／Ｌの範囲の量で濃縮組成物中に存在する、請求項４０に記載の濃縮液体組成物。
【請求項42】
少なくとも１種の硫酸化多糖をさらに含む、請求項４０又は４１に記載の濃縮液体組成物。
【請求項43】
少なくとも１種の硫酸化多糖がカラギーナンである、請求項４２に記載の濃縮液体組成物。
【請求項44】
カラギーナンがλ－カラギーナンである、請求項５６に記載の濃縮液体組成物。
【請求項45】
請求項５３～５７のいずれか１項に規定される濃縮液体組成物を含む食品製品。
【請求項46】
４未満のｐＨを有する、請求項３９又は４５に記載の食品製品。
【請求項47】
加熱され、且つ／又は光に曝露されたことを特徴とする、請求項３９、４５又は４６のいずれか１項に記載の食品製品。
【請求項48】
瞬間殺菌などの殺菌に供された、請求項３９及び４５～４７のいずれか１項に記載の食品製品。
【請求項49】
フィコシアニンが熱及び／又は光曝露に対して安定である、請求項１～２２及び２４のいずれか１項に記載の酸性組成物又は請求項４０～４５のいずれか１項に記載の濃縮液体。
【請求項50】
ａ）水中に少なくとも１種の硫酸化多糖を添加及び溶解させるステップ；並びにｂ）フィコシアニンを添加し、且つ少なくとも５のｐＨで、好ましくは５～１０のｐＨで溶解するまで混合するステップ
を含む、フィコシアニンの熱安定性及び／又は光安定性を改善するための方法。
【請求項51】
約３０℃～約９０℃の温度で、約３．６又は３．６未満のｐＨにおいて、水溶液中のフィコシアニンを加熱するステップを含む、緑色を生成するための方法であって、フィコシアニンが、シアニジオシゾン属、シアニジウム属又はガルディエリア属の藻類又は微細藻類から抽出される、方法。
【請求項52】
請求項５１に記載の方法を用いて取得される緑色フィコシアニン。
【請求項53】
請求項５０に記載の方法により安定化された、請求項５２に記載の緑色フィコシアニン。
【請求項54】
請求項５２に記載の緑色又は請求項５３に記載の安定化された緑色を含む製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本技術は一般的に、安定化されたフィコシアニンを含む酸性組成物及びそのような酸性組成物を取得するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
フィコシアニンは、それが添加される製品に青色を与える食品着色料である。スピルリナから抽出されたフィコシアニンは、現在ＦＤＡにより承認されている唯一の天然青色色素である（ＦＲ Ｄｏｃ Ｎｏ：２０１３－１９５５０）。フィコシアニンは、食品における青色色素としての使用のために、液体形態、又は粉末形態で販売される。
そのスピルリナ由来フィコシアニンは、しかしながら、５未満の酸性ｐＨで不安定であるという欠点を有し、このことは、着色の欠如及び沈殿をもたらし、これがその用途を限定する。最良の場合では、安定性の欠如はｐＨ４付近で起こる（スピルリナ由来フィコシアニンＬｉｎａｂｌｕｅ（登録商標）の技術的明細事項を参照されたい；http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html）。結果として、それに対してスピルリナ由来フィコシアニンを食品着色料として又はその抗酸化特性のために用いることができない多数の酸性食品組成物、特に、炭酸飲料及び非炭酸飲料がある。
スピルリナ由来フィコシアニンとは対照的に、ガルディエリア属（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）又はイデユコゴメ目（Ｃｙａｎｉｄｉｏｐｈｙｃａｅ）から抽出されたフィコシアニンが酸性ｐＨに耐える能力を有することが、参照により本明細書中に組み入れられる国際公開第２０１７／０５０９１８号において以前に実証された。
そのスピルリナ由来フィコシアニンは、しかしながら、５未満の酸性ｐＨで不安定であるという欠点を有し、このことは、着色の欠如及び沈殿をもたらし、これがその用途を限定する。最良の場合では、安定性の欠如はｐＨ４付近で起こる（スピルリナ由来フィコシアニンＬｉｎａｂｌｕｅ（登録商標）の技術的明細事項を参照されたい；http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html）。結果として、それに対してスピルリナ由来フィコシアニンを食品着色料として又はその抗酸化特性のために用いることができない多数の酸性食品組成物、特に、炭酸飲料及び非炭酸飲料がある。
スピルリナ由来フィコシアニンとは対照的に、ガルディエリア属（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）又はイデユコゴメ目（Ｃｙａｎｉｄｉｏｐｈｙｃａｅ）から抽出されたフィコシアニンが酸性ｐＨに耐える能力を有することが、参照により本明細書中に組み入れられる国際公開第２０１７／０５０９１８号において以前に実証された。
【0003】
しかしながら、酸性飲料中での工業的文脈におけるフィコシアニンの使用は、はるかに複雑である。実際に、殺菌中などの熱処理、及びそれに続く加速劣化試験後に、フィコシアニンの顕著な喪失があったこと、並びにそのような喪失は緑色の色調の出現を含む色の段階的変化を伴ったことが、試験により示されてきた。条件に応じて、これらの色相の変化は全面的である。この安定性の欠如は、製品の販売に関して問題であり得る。
λ－カラギーナンのような硫酸化多糖は、スピルリナ由来フィコシアニンの安定化に関して既に開示されてきた。しかしながら、食品組成物内に大量の添加物を添加することは適切ではない。
このことに鑑みて、酸性組成物、特に酸性飲料の文脈において、フィコシアニンを安定化するか又はフィコシアニンにより提供される着色を安定化する方法を特定することの必要性がある。
λ－カラギーナンのような硫酸化多糖は、スピルリナ由来フィコシアニンの安定化に関して既に開示されてきた。しかしながら、食品組成物内に大量の添加物を添加することは適切ではない。
このことに鑑みて、酸性組成物、特に酸性飲料の文脈において、フィコシアニンを安定化するか又はフィコシアニンにより提供される着色を安定化する方法を特定することの必要性がある。
【発明の概要】
【0004】
様々な態様に従えば、本技術は、フィコシアニンを含む酸性組成物に関し、このとき、フィコシアニンは、約０．００１～約０．１質量％の範囲の量で組成物中に存在する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物を含む炭酸飲料に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物からなる炭酸飲料に関する。
本発明者らは、驚くべきことに、少量の硫酸化多糖を、酸性組成物中でフィコシアニンを安定化するために用いることができることを見出した。したがって、態様に従えば、本技術は、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む酸性組成物に関し、このとき、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖は、約０．２０：１～約２０：１、好ましくは約０．２５：１～約１０：１の比率で、又は約０．３：１～約１０：１、好ましくは約１：１～約１０：１、さらに好ましくは約０．３：１～約０．６：１、約０．９：１～約２．４：１又は約０．３：１～１．５の比率で、組成物中に存在する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物を含む炭酸飲料に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物からなる炭酸飲料に関する。
本発明者らは、驚くべきことに、少量の硫酸化多糖を、酸性組成物中でフィコシアニンを安定化するために用いることができることを見出した。したがって、態様に従えば、本技術は、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む酸性組成物に関し、このとき、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖は、約０．２０：１～約２０：１、好ましくは約０．２５：１～約１０：１の比率で、又は約０．３：１～約１０：１、好ましくは約１：１～約１０：１、さらに好ましくは約０．３：１～約０．６：１、約０．９：１～約２．４：１又は約０．３：１～１．５の比率で、組成物中に存在する。
【0005】
本技術は、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む酸性組成物に関し、このとき、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖は、約０．２５：１～約１：１の比率で組成物中に存在する。
別の実施形態では、本技術は、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む酸性組成物に関し、このとき、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖は、約０．２５：１、約０．３：１、約１：３、約０．５：１、約０．７５：１、約０．６：１、約１：１、約１．５：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１又は約６：１の比率で、組成物中に存在する。
様々な態様に従えば、本技術は、ガルディエリア属抽出物を含む酸性組成物に関し、このとき、ガルディエリア属抽出物は、約０．００４質量％～約０．４質量％の範囲の量で、組成物中に存在する。
別の実施形態では、本技術は、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む酸性組成物に関し、このとき、フィコシアニン及び少なくとも１種の硫酸化多糖は、約０．２５：１、約０．３：１、約１：３、約０．５：１、約０．７５：１、約０．６：１、約１：１、約１．５：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１又は約６：１の比率で、組成物中に存在する。
様々な態様に従えば、本技術は、ガルディエリア属抽出物を含む酸性組成物に関し、このとき、ガルディエリア属抽出物は、約０．００４質量％～約０．４質量％の範囲の量で、組成物中に存在する。
【0006】
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物を含む食品製品に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物からなる食品製品に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、約５０ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌの範囲の量で濃縮組成物中に存在するフィコシアニンを含む、濃縮液体組成物に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの濃縮液体組成物を含む食品製品に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの濃縮液体組成物からなる食品製品に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの酸性組成物からなる食品製品に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、約５０ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌの範囲の量で濃縮組成物中に存在するフィコシアニンを含む、濃縮液体組成物に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの濃縮液体組成物を含む食品製品に関する。
様々な態様に従えば、本技術は、本明細書中に規定される通りの濃縮液体組成物からなる食品製品に関する。
【0007】
本開示の他の態様及び特徴は、添付の図面と組み合わせた具体的な実施形態の以下の説明の再検討に際して、当業者に明らかであるであろう。
本開示中に記載される実施形態の全ての特徴は、相互に排他的でなく、且つ互いに組み合わせることができる。例えば、一実施形態の要素は、さらなる言及なしに他の実施形態において利用することができる。具体的な実施形態の詳細な説明が、以下の通りの添付の図面を参照して、下記で本明細書中に提供される。
本開示中に記載される実施形態の全ての特徴は、相互に排他的でなく、且つ互いに組み合わせることができる。例えば、一実施形態の要素は、さらなる言及なしに他の実施形態において利用することができる。具体的な実施形態の詳細な説明が、以下の通りの添付の図面を参照して、下記で本明細書中に提供される。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】０．１％、０．２％、又は０．４％ガルディエリア属抽出物を含み、且つ視覚的比較のために加熱後に全て０．１％まで希釈されたモデル飲料系における、４時間にわたるフィコシアニンの熱安定性試験の結果を示す写真である。
【図2A】ビタミンＣを含むか又は含まない、０．２％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料及び電解質飲料の第１シリーズにおけるフィコシアニンの８週間安定性を示す写真である。
【図2B】ビタミンＣを含むか又は含まない、０．２％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料及び電解質飲料の第１シリーズにおけるフィコシアニンの８週間安定性後の結果の表である。
【図3A】ビタミンＣを含むか又は含まない、０．２％及び０．４％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料の第２シリーズにおけるフィコシアニンの８週間安定性を示す写真である。
【図3B】ビタミンＣを含むか又は含まない、０．２％及び０．４％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料の第２シリーズにおけるフィコシアニンの８週間安定性後の結果の表である。
【図4】０．０１％及び０．０２％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料に対する安定性試験の結果を示す写真である。
【図5】０．０１％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料の安定性に対する高温短時間殺菌（ＨＴＳＴ、本出願において瞬間殺菌とも称される）殺菌の影響を示す写真である。
【図6】０．０１％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料の安定性に対するλ－カラギーナンの影響を示す写真である。
【図7】市販の飲料Ｇａｔｏｒａｄｅ（登録商標）及びＰｏｗｅｒａｄｅ（登録商標）（ｄＥ ＣＭＣ １．９９）に対するガルディエリア属抽出物－カラギーナン（５：１）含有飲料の比較を示す図である。
【図8】異なる比率のガルディエリア属抽出物：λ－カラギーナンを含む飲料のｄＥ ＣＭＣに対するＨＴＳＴ殺菌の影響を示すグラフである。
【図9】実施例１０ｔｅｒの異なる飲料のＨＴＳＴ後の平均ｄＥ ＣＭＣを提示するチャートである。
【図10】実施例１０ｔｅｒに従うＨＴＳＴの前（左側ボトル）及び後（右側ボトル）の異なる含有量のガルディエリア属抽出物（飲料の総質量に対して０．１質量％又は０．２質量％）を含む飲料の写真である。
【図11】実施例１０ｂｉｓ及び１０ｔｅｒに従う異なる飲料の光試験後の平均ｄＥ ＣＭＣを示すグラフ表示である。
【図12】実施例１０ｂｉｓ及び１０ｔｅｒに従う光試験前（左側ボトル）及び後（右側ボトル）の、ビタミンＣを含むか又は含まない、異なる含有量のガルディエリア属抽出物（飲料の総質量に対して０．１質量％又は０．２質量％）を含む数種類の飲料の写真である。
【図13】実施例１０ｔｅｒに従う異なる飲料の加速安定性試験後の平均ｄＥ ＣＭＣを提示するチャートである。
【図14】実施例１０ｔｅｒに従う加速安定性試験前（左側ボトル）及び後（右側ボトル）の異なる含有量のガルディエリア属抽出物（飲料の総質量に対して０．１質量％又は０．２質量％）を含む数種類の飲料の写真である。
【図15A】比率５：１で異なるｐＨにおいてガルディエリア属抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の写真である。
【図15B】比率５：１で異なるｐＨにおいてガルディエリア属抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の色彩測定の表である。
【図16A】比率５：１で異なるｐＨにおいてスピルリナ抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の写真である。
【図16B】比率５：１で異なるｐＨにおいてスピルリナ抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の色彩測定の表である。
【図17A】比率１：１で異なるｐＨにおいてガルディエリア属抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の写真である。
【図17B】比率１：１で異なるｐＨにおいてガルディエリア属抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の色彩測定の表である。
【図18A】比率１：１で異なるｐＨにおいてスピルリナ抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の写真である。
【図18B】比率１：１で異なるｐＨにおいてスピルリナ抽出物及びλ－カラギーナンを含む飲料の色彩測定の表である。
【図19】異なる含有量のλ－カラギーナン及び異なるｐＨを伴うガルディエリア属抽出物又はスピルリナ抽出物のいずれかを含む数種類の飲料のＨＴＳＴ後の平均ｄＥ ＣＭＣを提示するチャートである。
【図20】異なる含有量のλ－カラギーナン並びにｐＨ３．０及び４．０を伴うガルディエリア属抽出物又はスピルリナ抽出物のいずれかを含む数種類の飲料のＨＴＳＴ後の平均ｄＥ ＣＭＣを提示するチャートである。
【発明を実施するための形態】
【0009】
本技術は、下記でより詳細に説明される。この説明は、技術を遂行することができる異なる様式の全て、又は本技術に付加することができる全ての特徴の詳細な一覧であることは意図されない。例えば、１つの実施形態に関して例示される特徴を他の実施形態へと組み込むことができ、特定の実施形態に関して例示される特徴をその実施形態から削除することができる。加えて、本明細書中で示唆される様々な実施形態に対する多数の変形及び追加が、本開示に鑑みて当業者には明らかであろうし、それらの変形及び追加は本技術から逸脱しない。それゆえ、以下の説明は、技術の一部の特定の実施形態を例示することが意図され、且つその全ての並べ替え、組み合わせ及び変形を網羅的に特定することは意図されない。
本明細書中で用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、複数の参照物を含む。
終点による数値範囲の本明細書中での記述は、その範囲内に含まれる全ての数を含むことが意図される（例えば、１～５の記述は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、４．３２、及び５を含む）。
本明細書中で用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、複数の参照物を含む。
終点による数値範囲の本明細書中での記述は、その範囲内に含まれる全ての数を含むことが意図される（例えば、１～５の記述は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、４．３２、及び５を含む）。
【0010】
用語「約」は、明示的に又は明示的でなく本明細書中で用いられ、本明細書中に与えられる全ての量は実際に与えられる値を意味することが意図され、そのような所与の値に対する実験的且つ／又は測定条件に起因する等価物及び近似値をはじめとする、当技術分野の通常の技能に基づいて合理的に推測されるであろうそのような所与の値に対する近似値も意味することが意図される。例えば、所与の値又は範囲の文脈における用語「約」は、所与の値又は範囲の２０％以内、好ましくは１５％以内、より好ましくは１０％以内、より好ましくは９％以内、より好ましくは８％以内、より好ましくは７％以内、より好ましくは６％以内、及びより好ましくは５％以内である値又は範囲を意味する。
本明細書中で用いる場合の表現「及び／又は」は、他のものを含むか又は含まない２つの特定される特徴又は構成要素のうちの各々の具体的開示として受け取られるべきである。例えば、「Ａ及び／又はＢ」は、まさにそれぞれが本明細書中に個別に提示されるかの如く、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ並びに（ｉｉｉ）Ａ及びＢのうちの各々の具体的開示として受け取られるべきである。
本明細書中で用いる場合の表現「及び／又は」は、他のものを含むか又は含まない２つの特定される特徴又は構成要素のうちの各々の具体的開示として受け取られるべきである。例えば、「Ａ及び／又はＢ」は、まさにそれぞれが本明細書中に個別に提示されるかの如く、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ並びに（ｉｉｉ）Ａ及びＢのうちの各々の具体的開示として受け取られるべきである。
【0011】
本明細書中で用いる場合、用語「含む」は、単語に続く項目が含められるが、具体的に言及されない項目が除外されないことを意味するためにその非限定的な意味で用いられる。
本明細書中で用いる場合、表現「質量％」及び「％」は、別途定義されない限り、組成物の総質量に対する構成要素の質量％として定義される。
本技術の意味において、フィコシアニンの「安定性」とは、長期保存及び／又は熱処理下での酸性環境においてその色調、明度及び透明性を保持するその能力を意味する。
比較的少ない沈殿、比較的少ない不明瞭性及び／又は比較的顕著でない色変化が周囲温度での暗所又は明所における高温及び／又は長期保存への曝露後に観察される場合、フィコシアニンは改善されたか又は強化された安定性を有すると考えられる。沈殿及び不明瞭性は肉眼で観察することができ、且つ色変化は、λｍａｘ値を調べることによる分光学的（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｔｏｍｅｔｒｉｃ）方法により、又はｄＥ ＣＭＣを決定することにより比色法を介して追跡することができる。
本明細書中で用いる場合、表現「質量％」及び「％」は、別途定義されない限り、組成物の総質量に対する構成要素の質量％として定義される。
本技術の意味において、フィコシアニンの「安定性」とは、長期保存及び／又は熱処理下での酸性環境においてその色調、明度及び透明性を保持するその能力を意味する。
比較的少ない沈殿、比較的少ない不明瞭性及び／又は比較的顕著でない色変化が周囲温度での暗所又は明所における高温及び／又は長期保存への曝露後に観察される場合、フィコシアニンは改善されたか又は強化された安定性を有すると考えられる。沈殿及び不明瞭性は肉眼で観察することができ、且つ色変化は、λｍａｘ値を調べることによる分光学的（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｔｏｍｅｔｒｉｃ）方法により、又はｄＥ ＣＭＣを決定することにより比色法を介して追跡することができる。
【0012】
色調は、水溶液に関して分光光度計並びに半固体及び固体組成物に関してＤｉｇｉＥｙｅ色測定及びイメージングシステムを用いて測定される。ＣＩＥ Ｌ*ａ*ｂ*値及び色相角（ｈ）が算出される。測色計測定は、ＣＩＥ Ｌ*ａ*ｂ*が、（ＣＩＥＬＡＢ色空間）：
Ｌ*スケール：明対暗、小さな数（０～５０）は暗を示し、大きな数（５１～１００）は明を示す。
ａ*スケール：赤色対緑色、正の数は赤色を示し、負の数は緑色を示す。
ｂ*スケール：黄色対青色、正の数は黄色を示し、負の数は青色を示す。
を表す反対色説に基づく色の数値表示を提供する。
Ｌ*スケール：明対暗、小さな数（０～５０）は暗を示し、大きな数（５１～１００）は明を示す。
ａ*スケール：赤色対緑色、正の数は赤色を示し、負の数は緑色を示す。
ｂ*スケール：黄色対青色、正の数は黄色を示し、負の数は青色を示す。
を表す反対色説に基づく色の数値表示を提供する。
【0013】
【数1】
酸性条件においては、例えば、λ及びι－カラギーナンのような負に荷電した多硫酸化カラギーナンは、正に荷電したフィコシアニンとの複合体を形成し、凝集を妨げ、且つ色を安定化させるという仮説が立てられる。明らかな色調のシフトが、酸性条件において、例えば、ι及びλ－カラギーナンのような多硫酸化カラギーナンの添加に伴って観察される。
【0014】
一実施形態では、本技術は、最終生成物中で用いられるフィコシアニンの用量に応じて、着色作用がより顕著であったか又はより顕著でなかったことを示した実験に端を発する。直観に反して、組成物中に存在したフィコシアニンがより多い程、より高い不安定性が観察された。一方で、低濃度の使用では、色変化は限定され、ヒトの目に対して時には辛うじて可視的であった。
カラギーナンの添加がフィコシアニンの熱安定性を改善したこともまた決定された。一般的に、高温短時間殺菌（ＨＴＳＴ殺菌、瞬間殺菌とも称される）へと曝露される場合、フィコシアニンの色は薄くなる。
フィコシアニンとカラギーナンとを組み合わせることにより、飲料中で青色１号を置き換えるために用いることができた色調をつくり出すことが可能になることが、さらに決定された。特に、好ましい実施形態では；本技術に従う酸性組成物は、５：１の比率でのガルディエリア属フィコシアニン－カラギーナン（１．５：１ フィコシアニン：カラギーナン）を含み、ガルディエリア属飲料と青色１号飲料との間での２．５未満のｄＥ ＣＭＣを生じ、したがって、青色１号含有飲料の色と一致する色を与える。
カラギーナンの添加がフィコシアニンの熱安定性を改善したこともまた決定された。一般的に、高温短時間殺菌（ＨＴＳＴ殺菌、瞬間殺菌とも称される）へと曝露される場合、フィコシアニンの色は薄くなる。
フィコシアニンとカラギーナンとを組み合わせることにより、飲料中で青色１号を置き換えるために用いることができた色調をつくり出すことが可能になることが、さらに決定された。特に、好ましい実施形態では；本技術に従う酸性組成物は、５：１の比率でのガルディエリア属フィコシアニン－カラギーナン（１．５：１ フィコシアニン：カラギーナン）を含み、ガルディエリア属飲料と青色１号飲料との間での２．５未満のｄＥ ＣＭＣを生じ、したがって、青色１号含有飲料の色と一致する色を与える。
【0015】
濃縮フィコシアニン（例えば、典型的には約０．３％～約１０％フィコシアニンを含む組成物）を酸性条件下で加熱した場合、緑色の抽出物が形成されること、及びこの緑色の抽出物は食品及び飲料用途で用いることができたことが、さらに決定された。つまり、本技術はまた、イデユコゴメ目の、好ましくはシアニジオシゾン属（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ）、シアニジウム属（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）又はガルディエリア属の、さらに好ましくは生物種ガルディエリア・スルフラリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｓｕｌｐｈｕｒａｒｉａ）、シアニジウム・カルダリウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｃａｌｄａｒｉｕｍ）、又はシアニジオシゾン・メロラエ（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ ｍｅｒｏｌａｅ）由来の藻類又は微細藻類から抽出されたフィコシアニンに基づいて緑色を生成するための方法にも関する。一部の実施形態では、本技術において有用なフィコシアニンは、ガルディエリア科（Ｇａｌｄｉｅｒｉａｃｅａｅ）から抽出された、一部の例ではガルディエリア属から抽出されたフィコシアニンであり得る。一部の例では、フィコシアニンはガルディエリア属抽出物の成分である。
【0016】
典型的には、粉末中の着色料は、Ｅ１０＝１８０の着色料の１０％希釈の吸光度を示すために、約２５％～約３０％のフィコシアニンを含む。例示目的のために、１ｇのガルディエリア属抽出物は、水、転化糖、スクロース、及び／又はマルトデキストリンなどの少なくとも１種の希釈剤と混合された、約０．２５～約０．３０ｇのフィコシアニンを含むであろう。
一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、抽出されたフィコシアニンである。フィコシアニンは、当技術分野で公知のプロトコール、例えば、参照により本明細書中に組み入れられる国際公開第２０２０／１４４３３１号に記載されるものなどのプロトコールを用いて、ガルディエリア属から抽出することができる。
一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、抽出されたフィコシアニンである。一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、単離されたフィコシアニンである。本明細書中で用いる場合、用語「抽出された」及び「単離された」とは、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％若しくは約９８％を超える純度又は約９９％を超える純度をもたらす、例えば、クロマトグラフィー、蒸留、抽出、又は類似の技術を用いて、天然供給源から（例えば、ガルディエリア属から）単離された化合物を意味する。
一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、抽出されたフィコシアニンである。フィコシアニンは、当技術分野で公知のプロトコール、例えば、参照により本明細書中に組み入れられる国際公開第２０２０／１４４３３１号に記載されるものなどのプロトコールを用いて、ガルディエリア属から抽出することができる。
一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、抽出されたフィコシアニンである。一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、単離されたフィコシアニンである。本明細書中で用いる場合、用語「抽出された」及び「単離された」とは、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％若しくは約９８％を超える純度又は約９９％を超える純度をもたらす、例えば、クロマトグラフィー、蒸留、抽出、又は類似の技術を用いて、天然供給源から（例えば、ガルディエリア属から）単離された化合物を意味する。
【0017】
一部の実施形態では、本技術のフィコシアニンは、精製されたフィコシアニン、特にフィコシアニンの精製された抽出物である。「精製された抽出物」とは、フィコシアニンを保持しながら、その水溶性要素（タンパク質、イオン、糖）のうちの一部分が、限定するものではないが、当業者に公知の方法である限外ろ過、中空糸ろ過、又はイオン交換クロマトグラフィーなどの液体分離方法により除去されている、粗抽出物を意味する。一部の実施形態では、本明細書中で用いる場合のガルディエリア属抽出物は、精製されたガルディエリア属抽出物である。
本明細書中、以下では短く「フィコシアニン」と称される総フィコシアニン含有量は、Ｃ－フィコシアニン及び存在する場合にアロフィコシアニンの合計である。
本明細書中、以下では短く「フィコシアニン」と称される総フィコシアニン含有量は、Ｃ－フィコシアニン及び存在する場合にアロフィコシアニンの合計である。
【0018】
一部の実施形態では、本明細書中に開示される「精製された」化合物は、７０％超の純度を有する。一部の実施形態では、本明細書中に開示される「精製された」化合物は、８０％超の純度を有する。一部の実施形態では、本明細書中に開示される「精製された」化合物は、９０％超の純度、９５％超の純度、又は９８％超の純度を有する。
【0019】
フィコシアニンは、発色団に共有結合したアポタンパク質から構成されるα及びβサブユニットを含むフィコビリタンパク質である。異なるフィコシアニンは、それらのα－及びβ－サブユニットアポタンパク質の配列により本質的に区別される。
特定の実施形態に従えば、本技術の酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１（登録番号ＹＰ＿００９０５１１７９．１）を含み、且つそのβ－サブユニットアポタンパク質が配列番号２（登録番号ＹＰ＿００９０５１１８０．１）又はその変異体を含む、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
一部の実施形態では、本技術は、フィコシアニンを含む酸性組成物に関する。一部の実施形態では、酸性組成物は、抽出されたフィコシアニン、単離されたフィコシアニン又は精製されたフィコシアニンを含む。
特定の実施形態に従えば、本技術の酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１（登録番号ＹＰ＿００９０５１１７９．１）を含み、且つそのβ－サブユニットアポタンパク質が配列番号２（登録番号ＹＰ＿００９０５１１８０．１）又はその変異体を含む、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
一部の実施形態では、本技術は、フィコシアニンを含む酸性組成物に関する。一部の実施形態では、酸性組成物は、抽出されたフィコシアニン、単離されたフィコシアニン又は精製されたフィコシアニンを含む。
【0020】
本技術の酸性組成物は、固体、ペースト状、又は液体であり得る酸性食品組成物であり得る。一部の例では、酸性食品組成物は炭酸飲料である。一部の他の例では、酸性食品組成物は、限定するものではないが、ヨーグルトなどの乳製品である。
酸性組成物、特に酸性食品組成物とは、本技術に従えば、４．０以下のｐＨを有する、有利には約２．５～約３．５、有利には約３．０超且つ約４．０以下のｐＨを有する組成物を意味する。
一部の実施形態では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１（登録番号ＹＰ＿００９０５１１７９．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有し、且つそのβ－サブユニットアポタンパク質が配列番号２（登録番号ＹＰ＿００９０５１１８０．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有する、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
酸性組成物、特に酸性食品組成物とは、本技術に従えば、４．０以下のｐＨを有する、有利には約２．５～約３．５、有利には約３．０超且つ約４．０以下のｐＨを有する組成物を意味する。
一部の実施形態では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１（登録番号ＹＰ＿００９０５１１７９．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有し、且つそのβ－サブユニットアポタンパク質が配列番号２（登録番号ＹＰ＿００９０５１１８０．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有する、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
【0021】
一部の実施形態では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、Ｃ－フィコシアニンと組み合わせたアロフィコシアニンをさらに含むことができる。
一部の例では、当該アロフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質は、配列番号３（登録番号ＹＰ＿００９０５１１０３．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有し、且つβ－サブユニットアポタンパク質は配列番号４（ＹＰ＿００９０５１１０４．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有する。
一部の実施形態では、当該アロフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質は、配列番号３（登録番号ＹＰ＿００９０５１１０３．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体からなり、且つβ－サブユニットアポタンパク質は配列番号４（ＹＰ＿００９０５１１０４．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体からなる。
一部の例では、当該アロフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質は、配列番号３（登録番号ＹＰ＿００９０５１１０３．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有し、且つβ－サブユニットアポタンパク質は配列番号４（ＹＰ＿００９０５１１０４．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体を有する。
一部の実施形態では、当該アロフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質は、配列番号３（登録番号ＹＰ＿００９０５１１０３．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体からなり、且つβ－サブユニットアポタンパク質は配列番号４（ＹＰ＿００９０５１１０４．１）に示されるアミノ酸配列又はその変異体からなる。
【0022】
タンパク質の特性は、とりわけ、そのアミノ酸組成及びその等電点（ｐＩ）に依存する。等電点は、タンパク質が正味電荷を帯びない溶液のｐＨ、又は、言い換えれば、分子が電気的に中性であり、且つタンパク質が互いに引き付け合い、凝集及び沈殿する傾向にあるｐＨである。その等電点を超えるｐＨでは、タンパク質は負に荷電し、且つ互いに反発する傾向を有する。
Patrickios and Yamasaki（Polypeptide Amino Acid Composition and Isoelectric Point. II. Comparison between Experiment and Theory. Analytical Biochemistry. 231, 1, 1995: 82-91.1995）により記載されるコンピュータによる手順を用いる様々なタンパク質の等電点の比較解析は、理論的計算と実験的に観察される酸性ｐＨ耐性との間での一定の相関を示す。
Patrickios and Yamasaki（Polypeptide Amino Acid Composition and Isoelectric Point. II. Comparison between Experiment and Theory. Analytical Biochemistry. 231, 1, 1995: 82-91.1995）により記載されるコンピュータによる手順を用いる様々なタンパク質の等電点の比較解析は、理論的計算と実験的に観察される酸性ｐＨ耐性との間での一定の相関を示す。
【0023】
本出願人により行われた研究は、フィコシアニンの酸性ｐＨ耐性が、当該フィコシアニンのαサブユニットのアミノ酸配列に関連付けられる場合があることを示す。さらに、フィコシアニンのαサブユニットのアミノ酸配列内で、最初の２６個のアミノ酸の同一性が特に重要であるように見えることが注記される。これは、シアニジオシゾン属、シアニジウム属又はガルディエリア属の微細藻類株の、より詳細には株ガルディエリア・スルフラリア、シアニジウム・カルダリウム、及びシアニジオシゾン・メロラエの培養により取得されるフィコシアニンの場合に特に当てはまる。
一部の実施形態では、本技術の組成物は、その少なくとも１つのアポタンパク質、特にα－サブユニットのものが、酸性ｐＨにおいてより良好な安定性を可能にする低い等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニンを含むことができる。低い等電点とは、３以下の、優先的には２．５以下の、より優先的には２．２以下の等電点を意味する。一部の実施形態では、本技術の組成物は、その少なくとも１つのアポタンパク質、特にα－サブユニットのものが、３以下の、優先的には２．５以下の、より優先的には２．２以下の等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニンを含むことができる。
一部の実施形態では、本技術の組成物は、その少なくとも１つのアポタンパク質、特にα－サブユニットのものが、酸性ｐＨにおいてより良好な安定性を可能にする低い等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニンを含むことができる。低い等電点とは、３以下の、優先的には２．５以下の、より優先的には２．２以下の等電点を意味する。一部の実施形態では、本技術の組成物は、その少なくとも１つのアポタンパク質、特にα－サブユニットのものが、３以下の、優先的には２．５以下の、より優先的には２．２以下の等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニンを含むことができる。
【0024】
酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が低い等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニン、より詳細にはそのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１に示されるアミノ酸配列、又はその変異体を含み得る少なくとも１種のフィコシアニンを含むことができる。
一部の実施形態では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が低い等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニン、より詳細にはそのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１に示されるアミノ酸配列、又はその変異体からなる少なくとも１種のフィコシアニンを含む。
本明細書中で用いる場合、用語「変異体」とは、参照配列に対応するタンパク質配列を意味し、この場合は、参照配列の１つ若しくは複数のアミノ酸の１つ若しくは複数の置換、挿入又は欠失により改変され、且つ当該参照配列と同じ機能的特性、特に酸性環境における同じ安定性を有する、配列番号１又は配列番号２又は配列番号４により表されるタンパク質を意味する。
一部の実施形態では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、そのα－サブユニットアポタンパク質が低い等電点を有し得る少なくとも１種のフィコシアニン、より詳細にはそのα－サブユニットアポタンパク質が配列番号１に示されるアミノ酸配列、又はその変異体からなる少なくとも１種のフィコシアニンを含む。
本明細書中で用いる場合、用語「変異体」とは、参照配列に対応するタンパク質配列を意味し、この場合は、参照配列の１つ若しくは複数のアミノ酸の１つ若しくは複数の置換、挿入又は欠失により改変され、且つ当該参照配列と同じ機能的特性、特に酸性環境における同じ安定性を有する、配列番号１又は配列番号２又は配列番号４により表されるタンパク質を意味する。
【0025】
一部の例では、本技術の変異体は、フィコシアニンのα－サブユニットとの少なくとも約８３％の配列同一性、及びフィコシアニンのβサブユニットとの少なくとも約８２％の配列同一性を有する。一部の他の例では。一部の例では、本技術の変異体は、α（配列番号１）及びβ（配列番号２）サブユニットとの少なくとも約９０％の同一性、好ましくは、α（配列番号１）及びβ（配列番号２）サブユニットとの少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する。
同様に、アロフィコシアニンに関して、変異体は、アロフィコシアニンのαサブユニットとの少なくとも約８９％の配列同一性、及びアロフィコシアニンのβサブユニットとの少なくとも約９０％の配列同一性を有する。
当業者は、自由に使うことができる一般的な方法、特に、ＢＬＡＳＴＰプログラム（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）を用いて、タンパク質配列同一性を測定する方法を知っている。
同様に、アロフィコシアニンに関して、変異体は、アロフィコシアニンのαサブユニットとの少なくとも約８９％の配列同一性、及びアロフィコシアニンのβサブユニットとの少なくとも約９０％の配列同一性を有する。
当業者は、自由に使うことができる一般的な方法、特に、ＢＬＡＳＴＰプログラム（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）を用いて、タンパク質配列同一性を測定する方法を知っている。
【0026】
本技術により包含される変異体の正体は、酸性ｐＨにおける安定性試験により、例えば、本出願の実施例中に提示される試験などの試験を行うことにより、変異体が元のアミノ酸配列と同じ構造的及び機能的特性を保持することを検証することによるなど、当技術分野で公知の方法を用いて特定することができる。
本技術のポリペプチドは、その機能を実質的に変化させることなく、少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失により改変することができる。例えば、別の化学的に同等なアミノ酸による所与の位置でのアミノ酸の置換は、タンパク質の特性に実質的に影響を及ぼさない配列変化の公知の例である。これらの「保存的」置換は、以下のアミノ酸の群内での交換として定義することができる：ｉ）Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；ｉｉ）Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；ｉｉｉ）Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；ｉｖ）Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；及びｖ）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。
本技術のポリペプチドは、その機能を実質的に変化させることなく、少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失により改変することができる。例えば、別の化学的に同等なアミノ酸による所与の位置でのアミノ酸の置換は、タンパク質の特性に実質的に影響を及ぼさない配列変化の公知の例である。これらの「保存的」置換は、以下のアミノ酸の群内での交換として定義することができる：ｉ）Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；ｉｉ）Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；ｉｉｉ）Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；ｉｖ）Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；及びｖ）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。
【0027】
したがって、本技術に従うＣ－フィコシアニン及び／又はアロフィコシアニンのアポタンパク質の変異体は、対応する参照配列に対して１～３０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。一部の例では、本技術に従うＣ－フィコシアニン及び／又はアロフィコシアニンのアポタンパク質の変異体は、対応する参照配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。一部の例では、フィコシアニンのα及び／又はβサブユニットの変異体は、参照タンパク質の特性及び上記で述べられる相同性／同一性パーセントを保持する。
【0028】
一部の実施形態では、置換、挿入及び／又は欠失に由来する本技術の酸性組成物中で有用なフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～２７箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
一部の実施形態では、参照配列の置換、挿入及び／又は欠失に由来する本技術の酸性組成物中で有用なフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体及び本技術に従う酸性組成物中で有用なフィコシアニンのβ－サブユニットアポタンパク質変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～３０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
一部の実施形態では、参照配列の置換、挿入及び／又は欠失に由来する本技術の酸性組成物中で有用なフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体及び本技術に従う酸性組成物中で有用なフィコシアニンのβ－サブユニットアポタンパク質変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～３０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
【0029】
一部の実施形態では、置換、挿入及び／又は欠失に由来する本技術の酸性組成物中で有用なＣ－フィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体、本技術に従う酸性組成物中で有用なアロフィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～２４箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
一部の実施形態では、置換、挿入及び／又は欠失に由来する本技術の酸性組成物中で有用なＣ－フィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体、本技術に従う酸性組成物中で有用なアロフィコシアニンのβ－サブユニットアポタンパク質変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～２０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
考慮される参照配列（フィコシアニンα及び／若しくはβサブユニット並びに／又はアロフィコシアニンα及び／若しくはβサブユニット）にかかわらず、当該サブユニットの変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～１５箇所のアミノ酸の差異、好ましくは１～１０箇所のアミノ酸の差異、特に１又は２又は３又は４又は５又は６又は７又は８又は９又は１０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
一部の実施形態では、置換、挿入及び／又は欠失に由来する本技術の酸性組成物中で有用なＣ－フィコシアニンのα－サブユニットアポタンパク質変異体、本技術に従う酸性組成物中で有用なアロフィコシアニンのβ－サブユニットアポタンパク質変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～２０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
考慮される参照配列（フィコシアニンα及び／若しくはβサブユニット並びに／又はアロフィコシアニンα及び／若しくはβサブユニット）にかかわらず、当該サブユニットの変異体は、得られる変異体が参照タンパク質の特性及び上記で述べられる同一性パーセントを保持する限り、対応する参照配列に対して１～１５箇所のアミノ酸の差異、好ましくは１～１０箇所のアミノ酸の差異、特に１又は２又は３又は４又は５又は６又は７又は８又は９又は１０箇所のアミノ酸の差異を含むことができる。
【0030】
一部の実施形態では、酸性組成物中で、特に酸性食品組成物中で、単独で又はアロフィコシアニン若しくはその変異体と組み合わせて有用な、Ｃ－フィコシアニン又はその変異体は、Ｃ－フィコシアニン若しくは対象となるその変異体を天然に発現する天然生物の培養により、又は当該Ｃ－フィコシアニン若しくはその変異体を産生するその能力に関して選択された、Ｃ－フィコシアニン若しくは対象となるその変異体を発現するために遺伝学的に形質転換された生物の培養により、取得することができる。本技術に従う組成物中で有用なＣ－フィコシアニン又は対象となるその変異体を天然に発現する天然生物の例としては、イデユコゴメ目の藻類又は微細藻類が挙げられる。イデユコゴメ目は、イデユコゴメ科（Ｃｙａｎｉｄｉａｃｅａｅ）及びガルディエリア科を含み、これら自体がシアニジオシゾン属、シアニジウム属及びガルディエリア属へと細分され、そのメンバーとしては、とりわけ、生物種シアニジオシゾン・メロラエ１０Ｄ、シアニジオシゾン・メロラエＤＢＶ２０１、シアニジウム・カルダリウム、シアニジウム・ダエダルム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｄａｅｄａｌｕｍ）、シアニジウム・マキシムム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｍａｘｉｍｕｍ）、シアニジウム・パルティツム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｐａｒｔｉｔｕｍ）、シアニジウム・ルムペンス（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ ｒｕｍｐｅｎｓ）、ガルディエリア・ダエダラ（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｄａｅｄａｌａ）、ガルディエリア・マキシマ（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、ガルディエリア・パルティタ（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｐａｒｔｉｔａ）、ガルディエリア・フレグレア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ ｐｈｌｅｇｒｅａ）、及びガルディエリア・スルフラリアが挙げられる。株ガルディエリア・スルフラリア（シアニジウム・カルダリウムとも称される）に特に言及することができる。
【0031】
したがって、本技術の実施形態に従えば、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、イデユコゴメ目の藻類又は微細藻類などの天然生物由来、特にイデユコゴメ科又はガルディエリア科の天然生物由来の酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。一部の例では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、有利にはシアニジウム属及びガルディエリア属の生物種から選択される、シアニジオシゾン属、シアニジウム属、ガルディエリア属に属する天然生物由来の酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。一部の他の例では、酸性組成物、特に酸性食品組成物は、生物種シアニジオシゾン・メロラエ１０Ｄ、シアニジオシゾン・メロラエＤＢＶ２０１、シアニジウム・カルダリウム、シアニジウム・ダエダルム、シアニジウム・マキシムム、シアニジウム・パルティツム、シアニジウム・ルムペンス、ガルディエリア・ダエダラ、ガルディエリア・マキシマ、ガルディエリア・パルティタ、ガルディエリア・フレグレア、ガルディエリア・スルフラリアから選択される天然生物由来の酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。
一部のさらなる例では、本技術に従う酸性食品組成物は、ガルディエリア・スルフラリア、シアニジウム・カルダリウム又はシアニジオシゾン・メロラエなどの天然微細藻類由来の酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。より優先的には、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンは、ガルディエリア・スルフラリア及びシアニジウム・カルダリウムから選択される天然微細藻類に由来する。
一部のさらなる例では、本技術に従う酸性食品組成物は、ガルディエリア・スルフラリア、シアニジウム・カルダリウム又はシアニジオシゾン・メロラエなどの天然微細藻類由来の酸性ｐＨ耐性フィコシアニンを含む。より優先的には、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンは、ガルディエリア・スルフラリア及びシアニジウム・カルダリウムから選択される天然微細藻類に由来する。
【0032】
当該フィコシアニン又はその変異体を産生するその能力に関して選択された、フィコシアニン又は対象となるその変異体を発現するために形質転換された生物の例として、発色団の産生のために及びアポタンパク質に対するその結合性のために必要な生合成経路もまた含む、配列番号１及び／又は配列番号２及び／又は配列番号３及び／又は配列番号４のアポタンパク質を発現するように形質転換された微生物に言及することができる。本技術に従う食品組成物中で用いられるＣ－フィコシアニン及び／又はアロフィコシアニンを産生するために改変されることができる微生物として、酵母に特に言及することができる。本技術に従う組成物中で有用なフィコシアニンを産生することができる天然及び／又は改変型生物を培養するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、当業者に周知のイデユコゴメ目のイデユコゴメ科又はガルディエリア科の培養は、混合栄養様式で行うことができ、色素の生合成のために光が通常必要とされる。そのような工業的培養は、大規模（すなわち、１，０００リットル、１０，０００リットル、２０，０００リットル、１００，０００リットル）発酵器中で行うことができる。培養は、当業者に公知の条件下で行うことができる。培養は、バッチ様式、フェドバッチ様式又は連続様式で行うことができる。
【0033】
本技術に従う組成物中で有用なフィコシアニンは、約４００ｎｍ～約５５０ｎｍ、又は約４２０ｎｍ～約５００ｎｍ、又は約４３０～約４８０ｎｍ、又は約４５５ｎｍの波長を有する光を伴う混合栄養様式で培養された、上記で規定される通りのイデユコゴメ目の藻類の培養により取得されるバイオマスから抽出することができる。これは、前記波長の光を含む広域スペクトルを有する「白色」光であり得る。これはまた、前記波長からなる狭域スペクトルでもあり得る。混合栄養様式でのイデユコゴメ目バイオマスの工業的調製のためのそのような方法、及びそのようにして得られるバイオマスは、その内容が参照により本明細書中に組み入れられる、特許出願ＦＲ １５ ５９０７２号において特に記載される。
【0034】
本技術の目的は、その中でフィコシアニンが酸性ｐＨにおける改善又は強化された安定性を示す酸性組成物を提供することである。酸性組成物とは、本技術に従えば、鉱酸又は有機酸及びフィコシアニンを含むあらゆる組成物を意味する。当該組成物は、酸性ｐＨを有し、且つそれに対して酸性ｐＨ耐性フィコシアニンが組み込まれる、流動性若しくは粘性の液体、ペースト状又は固体であり得る。酸性ｐＨにおける「改善」又は「強化」された安定性とは、フィコシアニンを含有する溶液の熱及び／又は保存処理に際して、色強度がより良好に維持されることを意味する。強化は、λｍａｘ値を追跡する分光学的（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｔｏｍｅｔｒｉｃ）方法を介して、又はｄＥ ＣＭＣを追跡する比色法を介して、測定することができる。
【0035】
水性液体組成物に関して、ｐＨは、通常の様式で測定される。非水性液体組成物に関して又はペースト状若しくは固体組成物に関して、ｐＨは、鉱酸又は有機酸及びフィコシアニンをはじめとする、その中に含有される可溶性化合物を溶解するために十分な量の水の中での組成物の溶解後に測定される。本技術の組成物中で用いることができる鉱酸の例としては、限定するものではないが、炭酸、リン酸、塩酸、硫酸、過塩素酸、スルホン酸及び硝酸が挙げられる。他の例としては、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、及びコハク酸などの有機酸が挙げられる。
一部の実施形態では、本技術に従う組成物は、ゲル形態でもよい水性液体組成物、又は水溶液中又は水を含む固体若しくはペースト状組成物中に溶解するために設計されているペースト状若しくは固体組成物である。本技術の他の実施形態に従えば、酸性組成物は、湿潤環境中で利用及び／又は保存することが意図されるペースト状又は固体組成物である。
一部の実施形態では、本技術に従う組成物は、ゲル形態でもよい水性液体組成物、又は水溶液中又は水を含む固体若しくはペースト状組成物中に溶解するために設計されているペースト状若しくは固体組成物である。本技術の他の実施形態に従えば、酸性組成物は、湿潤環境中で利用及び／又は保存することが意図されるペースト状又は固体組成物である。
【0036】
酸性食品組成物とは、本技術に従えば、ヒト又は動物により摂取されるために設計され、且つ先行する定義の範囲内に入るあらゆる組成物を意味する。栄養補給食品酸性組成物は、本技術の文脈内で酸性食品組成物の定義の範囲内に入ると考えられなければならない。
本技術に従う酸性食品組成物は、当業者に周知である。酸性食品組成物は、ヒト又は動物に利益を与えるそれらの栄養供給に関して又はそれらの健康特性に関して特定される活性化合物と関連付けられる構造的成分を含み得る担体を含むことができる。本技術に従う酸性食品組成物はまた、食感付与剤、香味料、保存料、又は当業者に周知のあらゆる成分などの食品添加物も含むことができる。担体は、水及び／又はタンパク質及び／又は脂質及び／又は繊維及び／又は糖を含むことができる。担体の成分は、構造特性のみを有することができるが、それらの栄養供給に関して一般的に公知である。
本技術に従う酸性食品組成物は、当業者に周知である。酸性食品組成物は、ヒト又は動物に利益を与えるそれらの栄養供給に関して又はそれらの健康特性に関して特定される活性化合物と関連付けられる構造的成分を含み得る担体を含むことができる。本技術に従う酸性食品組成物はまた、食感付与剤、香味料、保存料、又は当業者に周知のあらゆる成分などの食品添加物も含むことができる。担体は、水及び／又はタンパク質及び／又は脂質及び／又は繊維及び／又は糖を含むことができる。担体の成分は、構造特性のみを有することができるが、それらの栄養供給に関して一般的に公知である。
【0037】
本技術に従う酸性食品組成物は、即時使用可であるか、又は食用食品を調製するために固体、ペースト状若しくは液体調製物へと添加される対象である食品添加物の形態であり得る。
食品組成物に関して、酸は、食品に対して認可された酸化剤のリスト、特に、炭酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸、及びクエン酸から選択することができる。
本技術に従う非食品酸性組成物に関して、それらはとりわけ、医薬組成物、獣医学的組成物又は化粧組成物であり得、公知且つそのような組成物中で用いられるあらゆる添加物及び／又は活性薬剤をさらに含むことができる。
食品組成物に関して、酸は、食品に対して認可された酸化剤のリスト、特に、炭酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸、及びクエン酸から選択することができる。
本技術に従う非食品酸性組成物に関して、それらはとりわけ、医薬組成物、獣医学的組成物又は化粧組成物であり得、公知且つそのような組成物中で用いられるあらゆる添加物及び／又は活性薬剤をさらに含むことができる。
【0038】
本技術に従う固体、液体又はペースト状酸性組成物において、フィコシアニンは、例えば、粉末形態で組み込まれることができる。当該酸性組成物、特に当該酸性食品組成物は、つまり、クリーム、ゲル、フォーム、ペースト等などのあらゆる公知の慣用の形態にあることができる。固体食品組成物の例としては、ケーキ又はビスケット、調理用の乾燥食品、可溶性粉末、ゼラチン状固体組成物（ゼリー）、フォーム等が挙げられる。
本技術に従えば、当該液体酸性組成物は、その中にフィコシアニンが溶解される水性組成物であり得る。液体酸性組成物は、即時使用組成物の形態、或いは、特に、摂取される対象であるか又はその調製のため若しくはその摂取のためのいずれかで固体食品へと添加される対象である、希釈用の液体濃縮物、例えば、その色を与えるためにケーキへと適用される対象である濃縮液体「トッピング」組成物であり得る。これらの濃縮組成物のうちで、アルコールを含有してもよいシロップに言及することができる。
本技術に従えば、当該液体酸性組成物は、その中にフィコシアニンが溶解される水性組成物であり得る。液体酸性組成物は、即時使用組成物の形態、或いは、特に、摂取される対象であるか又はその調製のため若しくはその摂取のためのいずれかで固体食品へと添加される対象である、希釈用の液体濃縮物、例えば、その色を与えるためにケーキへと適用される対象である濃縮液体「トッピング」組成物であり得る。これらの濃縮組成物のうちで、アルコールを含有してもよいシロップに言及することができる。
【0039】
本技術に従う液体酸性組成物は、様々な粘度のものであり得、且つ増粘剤、ゲル化剤などの添加物、及び当業者に公知且つ液体食品組成物の調製に対して典型的である他の構造化添加物を含むことができる。
本技術の一実施形態に従えば、液体食品組成物は、炭酸酸性飲料である。ソーダ、ジュース、スポーツドリンク、エナジードリンク、リカバリードリンク等に特に言及することができる。これらの飲料の組成は、当業者に周知であり、且つ特に、糖、無機塩、食品添加物、溶存ガス等を含むことができる。本技術に従う飲料は、通常利用される着色料が、本技術に従う酸性ｐＨ耐性フィコシアニンにより完全又は部分的に置き換えられている、慣用の酸性飲料である。
本技術の一実施形態に従えば、液体食品組成物は、炭酸酸性飲料である。ソーダ、ジュース、スポーツドリンク、エナジードリンク、リカバリードリンク等に特に言及することができる。これらの飲料の組成は、当業者に周知であり、且つ特に、糖、無機塩、食品添加物、溶存ガス等を含むことができる。本技術に従う飲料は、通常利用される着色料が、本技術に従う酸性ｐＨ耐性フィコシアニンにより完全又は部分的に置き換えられている、慣用の酸性飲料である。
【0040】
本発明者らは、直観に反して、より多くのフィコシアニンが組成物中で濃縮される程、安定性が低くなり、したがって、最終製品の色がより多く変化することを見出した。したがって、より色鮮やかな製品を得るためには、フィコシアニン、特にＣ－フィコシアニン含有量を減少させること、言い換えれば、製品の色を増加させるために着色料の量を減少させることが推奨される。
一部の実施形態では、フィコシアニンは、本明細書中、以下では「低含有量」とも称される、フィコシアニンの改善された安定化を可能にする量で、本技術の酸性組成物中に存在する。一部の例では、フィコシアニンは、約０．００１～約０．１質量％、又は約０．００１～約０．０５質量％、又は約０．００１～約０．０２５質量％、又は約０．００２５～約０．０１０質量％、又は約０．００２５～約０．００５質量％の範囲の量で、酸性組成物中に存在する。一部の例では、フィコシアニンは、約２．５ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌ、約２５ｍｇ／Ｌ～約３００ｍｇ／Ｌ、又は約５０ｍｇ／Ｌ～約１００ｍｇ／Ｌの範囲の量で、酸性組成物中に存在する。これらの実施形態の一部の遂行では、酸性組成物は、液体酸性組成物である。
一部の実施形態では、フィコシアニンは、本明細書中、以下では「低含有量」とも称される、フィコシアニンの改善された安定化を可能にする量で、本技術の酸性組成物中に存在する。一部の例では、フィコシアニンは、約０．００１～約０．１質量％、又は約０．００１～約０．０５質量％、又は約０．００１～約０．０２５質量％、又は約０．００２５～約０．０１０質量％、又は約０．００２５～約０．００５質量％の範囲の量で、酸性組成物中に存在する。一部の例では、フィコシアニンは、約２．５ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌ、約２５ｍｇ／Ｌ～約３００ｍｇ／Ｌ、又は約５０ｍｇ／Ｌ～約１００ｍｇ／Ｌの範囲の量で、酸性組成物中に存在する。これらの実施形態の一部の遂行では、酸性組成物は、液体酸性組成物である。
【0041】
酸性組成物が即時使用飲料タイプである実施形態では、フィコシアニン含有量は、約２５ｍｇ／Ｌ～約３００ｍｇ／Ｌ、又は約５０ｍｇ／Ｌ～約１００ｍｇ／Ｌの範囲であり得る。
酸性組成物が使用前の希釈のための濃縮液体組成物（例えば、シロップ）である実施形態では、フィコシアニン含有量は、約５０ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌ、又は約５００ｍｇ／Ｌ～約１０００ｍｇ／Ｌの範囲であり得る。
酸性組成物が固体組成物である実施形態では、フィコシアニン含有量は、約０．０１ｍｇ／ｇ～約１０ｍｇ／ｇ、又は約０．１ｍｇ／ｇ～約５．０ｍｇ／ｇ、又は約０．２５ｍｇ／ｇ～約２．５ｍｇ／ｇの範囲であり得る。
一部の実施形態では、ガルディエリア属抽出物は、フィコシアニンの改善された安定性を可能にする量で、本技術の酸性組成物中に存在する。一部の例では、ガルディエリア属抽出物は、約０．００４～約０．４質量％、又は約０．００４～約０．２質量％、又は約０．００４～約０．１質量％、又は約０．０１～約０．０４質量％、又は約０．０１～約０．０２質量％の範囲の量で、酸性組成物中に存在する。一部の例では、ガルディエリア属抽出物は、約１０ｍｇ／Ｌ～約１０ｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ～約１２００ｍｇ／Ｌ、又は約２００ｍｇ／Ｌ～約４００ｍｇ／Ｌの範囲の量で、酸性組成物中に存在する。これらの実施形態の一部の遂行では、酸性組成物は、液体酸性組成物である。
酸性組成物が使用前の希釈のための濃縮液体組成物（例えば、シロップ）である実施形態では、フィコシアニン含有量は、約５０ｍｇ／Ｌ～約２５００ｍｇ／Ｌ、又は約５００ｍｇ／Ｌ～約１０００ｍｇ／Ｌの範囲であり得る。
酸性組成物が固体組成物である実施形態では、フィコシアニン含有量は、約０．０１ｍｇ／ｇ～約１０ｍｇ／ｇ、又は約０．１ｍｇ／ｇ～約５．０ｍｇ／ｇ、又は約０．２５ｍｇ／ｇ～約２．５ｍｇ／ｇの範囲であり得る。
一部の実施形態では、ガルディエリア属抽出物は、フィコシアニンの改善された安定性を可能にする量で、本技術の酸性組成物中に存在する。一部の例では、ガルディエリア属抽出物は、約０．００４～約０．４質量％、又は約０．００４～約０．２質量％、又は約０．００４～約０．１質量％、又は約０．０１～約０．０４質量％、又は約０．０１～約０．０２質量％の範囲の量で、酸性組成物中に存在する。一部の例では、ガルディエリア属抽出物は、約１０ｍｇ／Ｌ～約１０ｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ～約１２００ｍｇ／Ｌ、又は約２００ｍｇ／Ｌ～約４００ｍｇ／Ｌの範囲の量で、酸性組成物中に存在する。これらの実施形態の一部の遂行では、酸性組成物は、液体酸性組成物である。
【0042】
酸性組成物が即時使用飲料タイプである実施形態では、ガルディエリア属抽出物含有量は、約１００ｍｇ／Ｌ～約１２００ｍｇ／Ｌ、又は約２００ｍｇ／Ｌ～約４００ｍｇ／Ｌの範囲であり得る。
酸性組成物が使用前の希釈のための濃縮液体組成物（例えば、シロップ）である実施形態では、ガルディエリア属抽出物含有量は、約２００ｍｇ／Ｌ～約１０ｇ／Ｌ、又は約２０００ｍｇ／Ｌ～約４０００ｍｇ／Ｌの範囲であり得る。
酸性組成物が固体組成物である実施形態では、ガルディエリア属抽出物含有量は、約０．０４ｍｇ／ｇ～約４０ｍｇ／ｇ、又は約０．４ｍｇ／ｇ～約２０ｍｇ／ｇ、又は約１ｍｇ／ｇ～約１０ｍｇ／ｇの範囲であり得る。
酸性組成物が使用前の希釈のための濃縮液体組成物（例えば、シロップ）である実施形態では、ガルディエリア属抽出物含有量は、約２００ｍｇ／Ｌ～約１０ｇ／Ｌ、又は約２０００ｍｇ／Ｌ～約４０００ｍｇ／Ｌの範囲であり得る。
酸性組成物が固体組成物である実施形態では、ガルディエリア属抽出物含有量は、約０．０４ｍｇ／ｇ～約４０ｍｇ／ｇ、又は約０．４ｍｇ／ｇ～約２０ｍｇ／ｇ、又は約１ｍｇ／ｇ～約１０ｍｇ／ｇの範囲であり得る。
【0043】
一部の実施形態では、本技術の組成物は、１つ又は複数の硫酸化多糖をさらに含む。一部の例では、１つ又は複数の硫酸化多糖は、多硫酸化カラギーナンである。カラギーナンは海藻に由来し、渦巻き型らせん状構造を形成することができる非常に柔軟な分子である。カラギーナンは、反復ガラクトース単位を含む直鎖状多糖として特徴付けられる。カラギーナンは、硫酸化度により分類される。一硫酸化カラギーナンの例は、ｋ－カラギーナン、ｇ－カラギーナン及びо－カラギーナンである。二硫酸化カラギーナンの例は、ｉ－カラギーナン、ｄ－カラギーナン、ｍ－カラギーナン及びｑ－カラギーナンである。三硫酸化カラギーナンの例は、ｌ－カラギーナン及びｖ－カラギーナンである。
【0044】
多硫酸化カラギーナンは、二糖単位当たり少なくとも２個の硫酸基、好ましくは２個又は３個の硫酸基を含有するカラギーナンである。本技術において用いることができる多硫酸化カラギーナンの例としては、限定するものではないが、ｉ－カラギーナン、ｄ－カラギーナン、ｍ－カラギーナン、０－カラギーナン、ｌ－カラギーナン及びｖ－カラギーナン、ｉ－カラギーナンの加水分解生成物、ｄ－カラギーナンの加水分解生成物、ｍ－カラギーナンの加水分解生成物、０－カラギーナンの加水分解生成物、ｌ－カラギーナンの加水分解生成物及びｖ－カラギーナンの加水分解生成物が挙げられ；ｉ－カラギーナン及びｌ－カラギーナン、及びそれらの加水分解生成物がより好ましく、ｌ－カラギーナン及び加水分解型ｌ－カラギーナンが最も好ましい。
一部の実施形態では、本技術の組成物のカラギーナン含有量は、約０．００６質量％～約０．６質量％、又は約０．０２質量％～約０．５質量％、又は０．０３質量％～約０．４質量％、又は約０．０５質量％～約０．３質量％、又は約０．００５質量％～約０．１質量％、又は約０．００１質量％～約０．１質量％、又は約０．０５質量％～約０．１質量％の範囲である。
一部の実施形態では、本技術の組成物のカラギーナン含有量は、約０．００６質量％～約０．６質量％、又は約０．０２質量％～約０．５質量％、又は０．０３質量％～約０．４質量％、又は約０．０５質量％～約０．３質量％、又は約０．００５質量％～約０．１質量％、又は約０．００１質量％～約０．１質量％、又は約０．０５質量％～約０．１質量％の範囲である。
【0045】
一部の実施形態では、本技術の酸性組成物中に存在するフィコシアニン抽出物とカラギーナンとの質量比は、組成物の含水量及びｐＨに依存する。少なくとも約４５質量％且つ最大で約９５質量％の高い含水量では、フィコシアニン抽出物（約２５％～約３０％フィコシアニンを含有するフィコシアニン抽出物）とカラギーナンとの間の質量比（フィコシアニン抽出物：カラギーナン）は、約１：１～約１０：１、又は約１：１～約５：１、又は約１：１～約４：１、又は約１：１～約３：１、又は約１：１～約２：１の範囲である。一部の実施形態では、この高含水量での組成物のｐＨは、約２．０～約３．７、又は約２．２～約３．５、又は約２．３～約３．３の範囲である。
少なくとも１５且つ４５質量％未満の水の低い含水量では、フィコシアニン抽出物（約２５％～約３０％フィコシアニンを含有するフィコシアニン抽出物）とカラギーナンとの間の質量比は、少なくとも約２且つ約２．５未満のｐＨにおいて、１：１．５、好ましくは１：１～１０：１の範囲である。フィコシアニンとカラギーナンとの間の質量比は、少なくとも約２．５且つ約２．９未満のｐＨにおいて、約１：２、好ましくは１：１～約１０：１の範囲であり、フィコシアニン抽出物とカラギーナンとの間の質量比は、少なくとも約２．９且つ約４未満のｐＨにおいて、約１：１～約１０：１の範囲である。フィコシアニン及びカラギーナンは、好ましくは、液体原料中に溶解される。溶解されるとは、フィコシアニン及びカラギーナンが水溶液中に留まる場合を意味する。溶液は目視で透明であり、沈殿物又は浮遊粒子を示さない。
少なくとも１５且つ４５質量％未満の水の低い含水量では、フィコシアニン抽出物（約２５％～約３０％フィコシアニンを含有するフィコシアニン抽出物）とカラギーナンとの間の質量比は、少なくとも約２且つ約２．５未満のｐＨにおいて、１：１．５、好ましくは１：１～１０：１の範囲である。フィコシアニンとカラギーナンとの間の質量比は、少なくとも約２．５且つ約２．９未満のｐＨにおいて、約１：２、好ましくは１：１～約１０：１の範囲であり、フィコシアニン抽出物とカラギーナンとの間の質量比は、少なくとも約２．９且つ約４未満のｐＨにおいて、約１：１～約１０：１の範囲である。フィコシアニン及びカラギーナンは、好ましくは、液体原料中に溶解される。溶解されるとは、フィコシアニン及びカラギーナンが水溶液中に留まる場合を意味する。溶液は目視で透明であり、沈殿物又は浮遊粒子を示さない。
【0046】
フィコシアニン構成が色調に影響を及ぼすことが公知である。ｐＨが低下し、且つＣ－フィコシアニンの平衡が単量体へとシフトする場合、色調は、暗青色から青緑色へとシフトする（Buchweitz, 2016）。一般的に、３．９以下のｐＨ値では、Ｃ－フィコシアニンの平衡は単量体へとシフトする。色性能は、色彩測定（ＣＩＥ Ｌ*ａ*ｂ*及びｈ値、上記を参照されたい）及び青色吸光度の合計を用いて評価される。
あらゆる理論に拘泥することなく、酸性条件においては、例えば、λ及びι－カラギーナンのような負に荷電した多硫酸化カラギーナンは、正に荷電したフィコシアニンとの複合体を形成し、凝集を妨げ、且つ色を安定化させるという仮説が立てられる。しかしながら、明らかな色調のシフトが、酸性条件において、特に２．６～４．０のｐＨで、例えば、ι及びλ－カラギーナンのような多硫酸化カラギーナンの添加に伴って観察される。カラギーナンの添加は、より明るく（より高いＬ*）且つより青色でない／より黄色（より高いｂ*）へと色調をシフトさせる。
あらゆる理論に拘泥することなく、酸性条件においては、例えば、λ及びι－カラギーナンのような負に荷電した多硫酸化カラギーナンは、正に荷電したフィコシアニンとの複合体を形成し、凝集を妨げ、且つ色を安定化させるという仮説が立てられる。しかしながら、明らかな色調のシフトが、酸性条件において、特に２．６～４．０のｐＨで、例えば、ι及びλ－カラギーナンのような多硫酸化カラギーナンの添加に伴って観察される。カラギーナンの添加は、より明るく（より高いＬ*）且つより青色でない／より黄色（より高いｂ*）へと色調をシフトさせる。
【0047】
測光測定から生来型フィコシアニン含有量（ｍｇ／ｍＬ）を算出するためのフィコシアニン決定のための標準的方法が、Yoshikawa & Belay (2008)により確立された。この方法は、６２０ｎｍ及び６５０ｎｍでの吸光度測定並びにｐＨ６．０でのこれらの波長におけるＣ－フィコシアニン及びアロフィコシアニンの吸光係数に依存する。多硫酸化カラギーナンの添加は、フィコシアニンピークの形状を変化させ、一部の場合には、ピーク最大値は、６２０ｎｍから６６０～６７０ｎｍへとシフトする。６２０ｎｍ及び６５０ｎｍでの吸光度測定のみを用いるフィコシアニン含有量の算出は、多硫酸化カラギーナンを含有する溶液に関してフィコシアニン含有量を低く見積もるであろう。つまり、色の保持の大きさを決定するために、Ａ６２０ｎｍ～Ａ７５０ｎｍ、Ａ６５０ｎｍ～Ａ７５０ｎｍ、及びＡ６６７ｎｍ～７５０ｎｍでの青色吸光度測定の合計が算出され、且つ用いられる。スピルリナ抽出物中の総フィコシアニン含有量は、下記に列挙されるｐＨ６．０でのYoshikawa & Belay (2008)の方法を用いて算出される。
【0048】
【数2】
【0049】
組成物に添加されるＣ－フィコシアニンの量を決定するために、ガルディエリア属抽出物の投与量レベルに、ガルディエリア属抽出物中の総Ｃ－フィコシアニン含有量を乗算する。
一部の実施形態では、液体組成物のフィコシアニン含有量は、約０．００１質量％～約０．１質量％、又は約０．００３質量％～約０．５質量％、又は約０．００７質量％～約０．４質量％、又は約０．０１質量％～約０．４質量％である。
スピルリナ抽出物を含有するフィコシアニンに伴う困難性は、酸性化された水性系に対する適用である。スピルリナタンパク質（フィコシアニンを含む）は、ｐＨが約２．７～約６．０である場合に溶液から沈殿する。沈殿は、即時又は数週間後に起こる場合があり、これは、溶液の粘度、イオン強度、添加の順序、温度、及びｐＨなどの因子に依存する。凝集／沈殿は、視覚的に評価され、且つ退色に対する原因であり得る。酸性化及び／又は加工後の７５０ｎｍでの高い吸光度は、タンパク質凝集／沈殿に対する強い可能性を示すことができる。
一部の実施形態では、液体組成物のフィコシアニン含有量は、約０．００１質量％～約０．１質量％、又は約０．００３質量％～約０．５質量％、又は約０．００７質量％～約０．４質量％、又は約０．０１質量％～約０．４質量％である。
スピルリナ抽出物を含有するフィコシアニンに伴う困難性は、酸性化された水性系に対する適用である。スピルリナタンパク質（フィコシアニンを含む）は、ｐＨが約２．７～約６．０である場合に溶液から沈殿する。沈殿は、即時又は数週間後に起こる場合があり、これは、溶液の粘度、イオン強度、添加の順序、温度、及びｐＨなどの因子に依存する。凝集／沈殿は、視覚的に評価され、且つ退色に対する原因であり得る。酸性化及び／又は加工後の７５０ｎｍでの高い吸光度は、タンパク質凝集／沈殿に対する強い可能性を示すことができる。
【0050】
一部の実施形態では、技術に従う酸性組成物は、３．９、３．８、３．７、３．６、３．５、３．４、３．３、３．２、３．１、３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１未満のｐＨを有し、さらに好ましくは、ｐＨは、２．０以上である。
３．０超且つ４．０以下のｐＨにおける０．３：１～０．６：１の比率でのガルディエリア属由来の低含有量のフィコシアニンと少なくとも１種の硫酸化多糖、特にλ－カラギーナンとの組み合わせが、特に有利である。
３．０超且つ４．０以下のｐＨにおける０．３：１～０．６：１の比率でのガルディエリア属由来の低含有量のフィコシアニンと少なくとも１種の硫酸化多糖、特にλ－カラギーナンとの組み合わせが、特に有利である。
【0051】
一部の実施形態では、本技術の組成物は、例えば、甘味料、安定化剤、キレート剤、酸、タンパク質、塩、香料、ビタミン、無機物、色素、増粘剤及び保存料などの追加の成分を含む。
本技術の組成物は、フィコシアニン含有量に起因する青色の色を有し得るが、青色に基づく他の色を、組成物内で他の色素を混合することによって得ることができる。組成物は、サフロミン（ベニバナ）、アントシアニン、カロテノイド、ベタニン、アナトー、リコペン、クルクミン及びクロロフィルなどの他の色素を含有することができる。色素は、例えば、サフロミンを用いて緑色などの他の色へと混ぜ合わせるために、青色のフィコシアニン含有組成物へと添加することができる。
本技術の組成物は、フィコシアニン含有量に起因する青色の色を有し得るが、青色に基づく他の色を、組成物内で他の色素を混合することによって得ることができる。組成物は、サフロミン（ベニバナ）、アントシアニン、カロテノイド、ベタニン、アナトー、リコペン、クルクミン及びクロロフィルなどの他の色素を含有することができる。色素は、例えば、サフロミンを用いて緑色などの他の色へと混ぜ合わせるために、青色のフィコシアニン含有組成物へと添加することができる。
【0052】
甘味料の例は、転化糖、スクロース、ブドウ糖果糖液糖、コーンシロップ、フルクトース、グルコース、トレハロース、ラクトース、ハチミツ、アガベ、ステビア、スクラロース、アスパルテーム、ネオテーム、アセスルファムカリウム、ラカンカ、又はサッカリンである。保存料の例は、塩、ソルビン酸、安息香酸、ナタマイシン、ナイシン及び亜硫酸塩である。塩の例は、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、又は銅などの正に荷電したカチオンと、例えば、酢酸イオン、炭酸イオン、塩化物イオン、クエン酸イオン、酸化物イオン、リン酸イオン、ソルビン酸イオン、安息香酸イオン、ヘキサメタリン酸イオン又は硫酸イオンのような塩形成性アニオンとを用いて形成させることができるイオン性化合物である。酸の例は、リン酸、クエン酸、硫酸、リンゴ酸、アジピン酸、酒石酸又は酸性ピロリン酸ナトリウムである。増粘剤の例は、ゼラチン、デンプン、ペクチン、コンニャク、又は寒天である。
【0053】
技術に従う組成物は、キレート剤とも称される場合がある、キレーターを含有することができる。キレーターは、キレートを形成することによりそれらが結合する分子／原子の化学的及び／又は物理的状態に影響を及ぼす結合性薬剤である。キレーターは、色の保持を改善することができ、多硫酸化カラギーナンと相乗的に作用することが見出されている。キレート剤は、合成化合物及び天然化合物であり得、エチレンジアミン四酢酸及び／又はそのＮａ、Ｋ、Ｃａ塩（ＥＤＴＡ）、Ｌ－グルタミン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸四ナトリウム塩（ＧＬＤＡ）、ヘキサメタリン酸ナトリウム、グルタチオン、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｅｉｏｎｅｉｎ）、２，３－ジメルカプト－１－プロパンスルホン酸（２，３－ｄｉｍｅｒａｐｔｏ－１－ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、クロレラ、ニンニク、コリアンダー、セレン、オオアザミ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、クエン酸塩、ブドウ種子抽出物、ケルセチン、及びリポ酸の群から特に選択される。好ましくは、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸及び／又はそのＮａ、Ｋ、Ｃａ塩（ＥＤＴＡ）並びにＬ－グルタミン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸四ナトリウム塩（ＧＬＤＡ）の群から選択される。ＥＤＴＡは、例えば、エチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二カリウム、及びエチレンジアミン四酢酸三カリウムのようなそのＮａ、Ｋ、Ｃａ塩と併せたエチレンジアミン四酢酸であると考えられる。エチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウムはＣａＮａ2 ＥＤＴＡと略され、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムはＮａ2 ＥＤＴＡと略され、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウムはＮａ4 ＥＤＴＡと略され、エチレンジアミン四酢酸二カリウムはＫ2 ＥＤＴＡと略され、及びエチレンジアミン四酢酸三カリウムはＫ3 ＥＤＴＡと略される。さらに好ましくは、キレート剤は、ビタミンＣ及び／又はＥＤＴＡである。キレート剤は、組成物中に約１～約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在することができる。１ｐｐｍのキレート剤は０．０００１質量％として理解されるべきであり；例えば、３０ｐｐｍのＥＤＴＡは０．００３質量％である。ＥＤＴＡは、約１０～約３００ｐｐｍ、又は（ｐｏｒ）約１５～約２００ｐｐｍ、又は約２０～約１００ｐｐｍの範囲の量で、組成物中に存在することができる。
【0054】
ＥＤＴＡ及びフィコシアニン（ガルディエリア属抽出物由来のフィコシアニンなど）は、好ましくは、約４：１～約１：２００、又は約２：１～約１：１２５、又は約１：１～約１：７５の質量比で、本技術の組成物内に存在する。
組成物は、典型的には、消費される前に輸送及び保存される。これらの組成物が腐敗せず、且つ消費に対して安全であることを確実にするために、熱プロセス、保存料、水分活性、又は上記の組み合わせのうちのいずれかが用いられる。
高温短時間（２１０℃、６秒間）加工時及び保存料がカラギーナンを含まない溶液に対して用いられる場合に、顕著な青色の退色が観察される。
組成物は、典型的には、消費される前に輸送及び保存される。これらの組成物が腐敗せず、且つ消費に対して安全であることを確実にするために、熱プロセス、保存料、水分活性、又は上記の組み合わせのうちのいずれかが用いられる。
高温短時間（２１０℃、６秒間）加工時及び保存料がカラギーナンを含まない溶液に対して用いられる場合に、顕著な青色の退色が観察される。
【0055】
組成物は、以下のステップ：ａ）水中に多硫酸化カラギーナンを添加及び溶解させ、目視観察により多硫酸化カラギーナンが溶解するまで混合するステップ；ｂ）フィコシアニン含有ガルディエリア属抽出物を添加し、少なくとも５のｐＨで、好ましくは５～１０のｐＨで溶解するまで混合するステップ；ｃ）酸又は酸化性成分を添加するステップ；ｄ）任意に、甘味料、香料、ビタミン、無機物、塩、緩衝剤、又は他の飲料成分を添加するステップ；ｅ）任意に、ＥＤＴＡなどのキレート剤を添加するステップ；ｆ）任意に、アントシアニンなどの他の色素を添加するステップ；ｇ）任意に、保存料などの添加物を添加するステップ；ｈ）少なくとも６５℃まで液体を熱的に処理するか；若しくは熱処理を伴わない低温充填、又はその２つの組み合わせによってａ）～ｈ）の混合物を処理するステップを含むプロセスに従って、取得することができる。フィコシアニン含有ガルディエリア属抽出物を、５．０以上のｐＨで、他の成分の存在下でもよい、溶解された多硫酸化カラギーナンに添加することが重要である。フィコシアニンを不安定化させ得る化合物のリストとしては、限定するものではないが、酸、アントシアニン、ベニバナ、及びアルコールが挙げられる。酸は加水分解型カラギーナンを調製するために用いることができるが、加水分解型カラギーナンの電荷は、フィコシアニンとの混合前に少なくとも５のｐＨまで中和されるべきである。
【0056】
フィコシアニンを不安定化させない成分を、プロセスのステップａ）の間又はその前に添加することができる。多硫酸化カラギーナンは、例えば、溶解を改善するために、スクロース又はマルトデキストリンなどの非酸性炭水化物と乾式混合することができる。ステップｃ）（酸又は酸性化成分の添加）は、ステップｄ）、ｅ）、又はｆ）の前又は後に行うことができる。ステップｈ）は、好ましくは、ステップａ）～ｇ）後に行われる。存在する場合、保存料（ステップｇ）は、好ましくは、保存料の溶解度制限に起因して、ステップａ）の前又はその間に添加される。
カラギーナンは、反復硫酸化ガラクトース単位を含む直鎖状多糖である。ガラクトース単位間のグリコシル結合は、熱及び酸による加水分解を受ける。加水分解された多硫酸化カラギーナンはまたフィコシアニンを安定化することも見出されているが、しかしながら、加水分解された多硫酸化カラギーナンの電荷は、フィコシアニンとの複合体化に先立って５超のｐＨへと中和されなければならない。加水分解型と未分解型の両方の多硫酸化カラギーナンは、沈殿を防止するために、フィコシアニンの添加に先立って５超のｐＨを有しなければならない。好ましくは、多硫酸化カラギーナンを含有する溶液のｐＨは、フィコシアニンの添加前に５～１０、より好ましくは５．５～９．９である。
カラギーナンは、反復硫酸化ガラクトース単位を含む直鎖状多糖である。ガラクトース単位間のグリコシル結合は、熱及び酸による加水分解を受ける。加水分解された多硫酸化カラギーナンはまたフィコシアニンを安定化することも見出されているが、しかしながら、加水分解された多硫酸化カラギーナンの電荷は、フィコシアニンとの複合体化に先立って５超のｐＨへと中和されなければならない。加水分解型と未分解型の両方の多硫酸化カラギーナンは、沈殿を防止するために、フィコシアニンの添加に先立って５超のｐＨを有しなければならない。好ましくは、多硫酸化カラギーナンを含有する溶液のｐＨは、フィコシアニンの添加前に５～１０、より好ましくは５．５～９．９である。
【0057】
本技術はまた、約３０℃～約９０℃の温度で、約３．６又は３．６未満のｐＨにおいて、水溶液中でフィコシアニンを加熱するステップを含む、緑色を生成するための方法にも関し、このとき、フィコシアニンは、イデユコゴメ目の、好ましくはシアニジオシゾン属、シアニジウム属又はガルディエリア属の、さらに好ましくは生物種ガルディエリア・スルフラリア、シアニジウム・カルダリウム、又はシアニジオシゾン・メロラエ由来の藻類又は微細藻類から抽出される。
好ましい実施形態では、水溶液は、約０．３％～約１０％のフィコシアニン、さらに好ましくは約０．１％～約１％のフィコシアニンを含む。
好ましい実施形態では、水溶液は、約０．３％～約１０％のフィコシアニン、さらに好ましくは約０．１％～約１％のフィコシアニンを含む。
【0058】
特定の実施形態では、緑色を生成するための方法は、加熱温度が、約３０℃～約９０℃、特に約３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、５１℃、５２℃、５３℃、５４℃、５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃、８０℃、８１℃、８２℃、８３℃、８４℃、８５℃、８６℃、８７℃、８８℃、８９℃、９０℃以上であることを特徴とする。さらに好ましくは、加熱温度は、約４０℃～約９０℃、特に約５０℃～約８５℃、さらにより好ましくは約６０℃～約８０℃である。
【0059】
特定の実施形態では、緑色を生成するための方法は、水溶液のｐＨが、好ましくは約２．０～４．０、さらに好ましくは３．０付近であることを特徴とする。
特定の実施形態に従えば、緑色を生成するための方法は、好ましくは、本明細書中に記載されるものの通りのアミノ酸配列、構造及び機能的特性を有する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンであるフィコシアニンの使用を含む。
緑色を生成するための方法の加熱ステップは、約１分間～約４８０分間、好ましくは約６０分間～約３６０分間、さらに好ましくは約１２０分間～約３００分間に含まれる継続時間を有し得る。温度が高い程、必要とされる継続時間が短いことが注記されるべきである。
特に好ましい実施形態では、緑色を生成するための方法は、約２００分間～約２８０分間にわたる約７０℃～８０℃の温度での加熱ステップを含む。
本技術はまた、この方法により取得される緑色にも関する。当該緑色は、したがって、緑色フィコシアニンとも称され、当該緑色フィコシアニンは、約１２０°～１９０°の色相角を有する。
特定の実施形態に従えば、緑色を生成するための方法は、好ましくは、本明細書中に記載されるものの通りのアミノ酸配列、構造及び機能的特性を有する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンであるフィコシアニンの使用を含む。
緑色を生成するための方法の加熱ステップは、約１分間～約４８０分間、好ましくは約６０分間～約３６０分間、さらに好ましくは約１２０分間～約３００分間に含まれる継続時間を有し得る。温度が高い程、必要とされる継続時間が短いことが注記されるべきである。
特に好ましい実施形態では、緑色を生成するための方法は、約２００分間～約２８０分間にわたる約７０℃～８０℃の温度での加熱ステップを含む。
本技術はまた、この方法により取得される緑色にも関する。当該緑色は、したがって、緑色フィコシアニンとも称され、当該緑色フィコシアニンは、約１２０°～１９０°の色相角を有する。
【0060】
別の実施形態では、本技術は、エチレンジアミン四酢酸及び／又はそのＮａ、Ｋ、Ｃａ塩（ＥＤＴＡ）、Ｌ－グルタミン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸四ナトリウム塩（ＧＬＤＡ）、ヘキサメタリン酸ナトリウム、グルタチオン、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｅｉｏｎｅｉｎ）、２，３－ジメルカプト－１－プロパンスルホン酸（２，３－ｄｉｍｅｒａｐｔｏ－１－ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、クロレラ、ニンニク、コリアンダー、セレン、オオアザミ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、クエン酸塩、ブドウ種子抽出物、ケルセチン、及びリポ酸の群から、好ましくはビタミンＣ及び／又はＥＤＴＡから選択される少なくとも１種のキレーターと当該色を混合するステップを含む、上記の方法によりフィコシアニンから取得される緑色を安定化するための方法に関する。
当技術分野においては、当業者は、ビタミンＣがフィコシアニンを不安定化させる可能性がある化合物であることに気付くことが注記されるべきである。したがって、本技術において、本発明者らが安定化剤としてビタミンＣを用いることは、特に驚くべきことである。
当技術分野においては、当業者は、ビタミンＣがフィコシアニンを不安定化させる可能性がある化合物であることに気付くことが注記されるべきである。したがって、本技術において、本発明者らが安定化剤としてビタミンＣを用いることは、特に驚くべきことである。
【0061】
好ましくは、上記の方法によりフィコシアニンから取得される緑色を安定化するための方法は、上記の通りの少なくとも１種の硫酸化多糖を添加するステップをさらに含む。
本技術は、上記の通りの方法によりフィコシアニンから取得される安定化された緑色に関する。
好ましくは、取得された安定化型緑色は、熱及び／又は光曝露下で安定である。
特定の実施形態では、安定化されているか又はされていない、技術に従う緑色は、固体、ペースト状、又は液体形態のいずれかにあり得る。
本技術はまた、上記の生成方法によりフィコシアニンから取得される緑色又は上記の安定化方法によりフィコシアニンから取得される安定化型緑色を含む製品にも関する。
本技術は、上記の通りの方法によりフィコシアニンから取得される安定化された緑色に関する。
好ましくは、取得された安定化型緑色は、熱及び／又は光曝露下で安定である。
特定の実施形態では、安定化されているか又はされていない、技術に従う緑色は、固体、ペースト状、又は液体形態のいずれかにあり得る。
本技術はまた、上記の生成方法によりフィコシアニンから取得される緑色又は上記の安定化方法によりフィコシアニンから取得される安定化型緑色を含む製品にも関する。
【0062】
一部の実施形態では、技術に従う酸性組成物、食品製品及び／又は濃縮液体は、緑色形態下のフィコシアニンを含むか又はそれに存する。
好ましい実施形態に従えば、当該緑色は、瞬間殺菌などの殺菌を受けたことがある。
別の態様に従えば、本技術は、ａ）水中に少なくとも１種の硫酸化多糖を添加及び溶解させるステップ、ｂ）、少なくとも５．０のｐＨ、好ましくは５．０～１０．０のｐＨにおいて、フィコシアニンを添加し、且つ溶解するまで混合するステップを含む、フィコシアニンの熱安定性及び／又は光安定性を改善するための方法に関する。
この方法に関して、一部の実施形態では、本技術の組成物は、上記の通りの１つ又は複数の硫酸化多糖を含む。
この方法に関して、フィコシアニンは、好ましくは、本明細書中に記載されるものの通りのアミノ酸配列、構造及び機能的特性を有する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンである。
この方法に関して、フィコシアニンは、技術に従う緑色フィコシアニンであり得る。
より高濃度において緑色へのシフトが起こることが、驚くべきことに観察された。したがって、本発明は、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、好ましくは約０．１％～約１０％のフィコシアニン、さらに好ましくは約０．１％～約１％のフィコシアニンなどの少なくとも０．１％のフィコシアニンを含む組成物に関する。好ましい実施形態では、フィコシアニンは、（ガルディエリア属フィコシアニン）である。当該組成物は、塩基性、中性又は酸性ｐＨを有することができる。
好ましい実施形態に従えば、当該緑色は、瞬間殺菌などの殺菌を受けたことがある。
別の態様に従えば、本技術は、ａ）水中に少なくとも１種の硫酸化多糖を添加及び溶解させるステップ、ｂ）、少なくとも５．０のｐＨ、好ましくは５．０～１０．０のｐＨにおいて、フィコシアニンを添加し、且つ溶解するまで混合するステップを含む、フィコシアニンの熱安定性及び／又は光安定性を改善するための方法に関する。
この方法に関して、一部の実施形態では、本技術の組成物は、上記の通りの１つ又は複数の硫酸化多糖を含む。
この方法に関して、フィコシアニンは、好ましくは、本明細書中に記載されるものの通りのアミノ酸配列、構造及び機能的特性を有する酸性ｐＨ耐性フィコシアニンである。
この方法に関して、フィコシアニンは、技術に従う緑色フィコシアニンであり得る。
より高濃度において緑色へのシフトが起こることが、驚くべきことに観察された。したがって、本発明は、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、好ましくは約０．１％～約１０％のフィコシアニン、さらに好ましくは約０．１％～約１％のフィコシアニンなどの少なくとも０．１％のフィコシアニンを含む組成物に関する。好ましい実施形態では、フィコシアニンは、（ガルディエリア属フィコシアニン）である。当該組成物は、塩基性、中性又は酸性ｐＨを有することができる。
【0063】
好ましくは、当該組成物は、酸性組成物、すなわち、４．０未満、好ましくは２．０～４．０のｐＨを有する組成物である。
技術は本明細書中に記載される特徴の全ての考えられる組み合わせに関し、特許請求の範囲中に存在する特徴の組み合わせが特に好ましいことが注記される。したがって、技術に従う組成物に関連する特徴の全ての組み合わせ、技術に従うプロセスに関連する特徴の全ての組み合わせ及び技術に従う組成物に関連する特徴の全ての組み合わせ並びに技術に従うプロセスに関連する特徴が本明細書中に記載されることが理解されるであろう。
本技術の利点のうちの１つは、以下の実施例において見て取ることができる通り、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンにより提供される着色が経時的により安定であるという事実に存在する。
本技術の他の態様及び特徴は、実施例及び図面を読み取ることから明らかになるであろう。
技術は本明細書中に記載される特徴の全ての考えられる組み合わせに関し、特許請求の範囲中に存在する特徴の組み合わせが特に好ましいことが注記される。したがって、技術に従う組成物に関連する特徴の全ての組み合わせ、技術に従うプロセスに関連する特徴の全ての組み合わせ及び技術に従う組成物に関連する特徴の全ての組み合わせ並びに技術に従うプロセスに関連する特徴が本明細書中に記載されることが理解されるであろう。
本技術の利点のうちの１つは、以下の実施例において見て取ることができる通り、酸性ｐＨ耐性フィコシアニンにより提供される着色が経時的により安定であるという事実に存在する。
本技術の他の態様及び特徴は、実施例及び図面を読み取ることから明らかになるであろう。
【実施例】
【0064】
（実施例１）
ガルディエリア・スルフラリア由来フィコシアニンの生成
株：ガルディエリア・スルフラリア（シアニジウム・カルダリウムとも称される）ＵＴＥＸ＃２９１９。バッチ培養培地：３０ｇ／Ｌグリセロール、８ｇ／Ｌ （ＮＨ4）2ＳＯ4、１ｇ／Ｌ ＫＨ2ＰＯ4、７１６ｍｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4、４４ｍｇ／Ｌ ＣａＣｌ2、３ｍＬ／ＬのＦｅ－ＥＤＴＡストック溶液（６．９ｇ／Ｌ ＦｅＳＯ4及び９．３ｇ／Ｌ ＥＤＴＡ－Ｎａ2）及び４ｍＬ／Ｌの微量金属溶液（３．０９ｇ／Ｌ ＥＤＴＡ－Ｎａ2；０．０８０ｇ／Ｌ ＣｕＳＯ4，５Ｈ2Ｏ；２．８６０ｇ／Ｌ Ｈ3ＢＯ3；１．８２０ｇ／Ｌ ＭｎＣｌ2；０．２２０ｇ／Ｌ ＺｎＳＯ4，７Ｈ2Ｏ）。
ガルディエリア・スルフラリア由来フィコシアニンの生成
株：ガルディエリア・スルフラリア（シアニジウム・カルダリウムとも称される）ＵＴＥＸ＃２９１９。バッチ培養培地：３０ｇ／Ｌグリセロール、８ｇ／Ｌ （ＮＨ4）2ＳＯ4、１ｇ／Ｌ ＫＨ2ＰＯ4、７１６ｍｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4、４４ｍｇ／Ｌ ＣａＣｌ2、３ｍＬ／ＬのＦｅ－ＥＤＴＡストック溶液（６．９ｇ／Ｌ ＦｅＳＯ4及び９．３ｇ／Ｌ ＥＤＴＡ－Ｎａ2）及び４ｍＬ／Ｌの微量金属溶液（３．０９ｇ／Ｌ ＥＤＴＡ－Ｎａ2；０．０８０ｇ／Ｌ ＣｕＳＯ4，５Ｈ2Ｏ；２．８６０ｇ／Ｌ Ｈ3ＢＯ3；１．８２０ｇ／Ｌ ＭｎＣｌ2；０．２２０ｇ／Ｌ ＺｎＳＯ4，７Ｈ2Ｏ）。
【0065】
培養条件：参照により本明細書中に組み入れられる特許国際公開第２０２０１６１２８０号に記載される通り、フェドバッチ様式でコンピュータ制御自動化システムを用いて、１ｍ3有効体積反応器において、培養が行われる。フィード培地に関して、炭素源の量は、培養の標的とされる乾燥質量に従って調整される。培地の全ての他の要素は、実施例中に規定されるバッチ培地に対して用いられる割合を考慮しながら添加される。培養ｐＨは、塩基（１４％アンモニア溶液（ｗＮＨ3／ｗ））及び／又は酸（４Ｎ硫酸溶液）を添加することにより調節される。培養温度は３７℃に設定される。細胞生育の追跡は８００ｎｍでの吸光度を測定することにより異なる時点で行われ、乾燥質量の測定はろ過により行われる。生育の終了時での培養の性能特性は、以下の表１にまとめられる。
【0066】
【表1】
乾燥物質１グラム当たりの細胞内フィコシアニン含有量の測定を、Modesteら、Toxicology Research and Applications VOL. 3, 1 - 13, 2019による抽出を用いて行い、Ｔｒｉｓ－Ｃｌバッファーによってリン酸バッファーを置き換えて、Yoshikawa and Beal, JOURNAL OF AOAC INTERNATIONAL VOL. 91, NO. 3, 2008により記載される方法を用いて測定した。
【0067】
（実施例２）
フィコシアニンの抽出
株ガルディエリア・スルフラリア（ＵＴＥＸ＃２９１９）及び／又はシアニジオシゾン・メロラエ（ＡＣＵＦ１９９）を、実施例１の条件下で培養した。続いて、フィコシアニンを、両方とも参照により本明細書中に組み入れられる、国際公開第２０２０／１６１２８０号及び同第２０１８／１７８３３号に記載されるプロトコールに従って抽出した。対象となるフィコシアニンに加えて他の水溶性タンパク質を含む抽出物（「フィコシアニン抽出物」又は「粗抽出物」とも称される）を取得した。フィコシアニン抽出物は、用いられる抽出及び／又は精製の方法に応じて、数種類の考えられる品質を有し得る。例えば、粗抽出物は、精製抽出物中で見出されるものよりも多量のフィコシアニン以外の水溶性タンパク質を含有するであろう。純度指数は従来、総タンパク質レベルを提示する芳香族アミノ酸の特異的吸光度である２８０ｎｍでのものに対する６１８ｎｍ（フィコシアニンの特異的吸光度）での溶液の吸光度の比率を算出することにより表される。この比率が低い程、溶液中のフィコシアニン以外のタンパク質の量が多い。粗抽出物を、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（登録商標）ＬａｂｓからのＫｒｏｓＦｌｏ（登録商標）接線流ろ過システムを用いて精製した。表２は、精製前後でのフィコシアニン抽出物の純度指数測定を示す。
フィコシアニンの抽出
株ガルディエリア・スルフラリア（ＵＴＥＸ＃２９１９）及び／又はシアニジオシゾン・メロラエ（ＡＣＵＦ１９９）を、実施例１の条件下で培養した。続いて、フィコシアニンを、両方とも参照により本明細書中に組み入れられる、国際公開第２０２０／１６１２８０号及び同第２０１８／１７８３３号に記載されるプロトコールに従って抽出した。対象となるフィコシアニンに加えて他の水溶性タンパク質を含む抽出物（「フィコシアニン抽出物」又は「粗抽出物」とも称される）を取得した。フィコシアニン抽出物は、用いられる抽出及び／又は精製の方法に応じて、数種類の考えられる品質を有し得る。例えば、粗抽出物は、精製抽出物中で見出されるものよりも多量のフィコシアニン以外の水溶性タンパク質を含有するであろう。純度指数は従来、総タンパク質レベルを提示する芳香族アミノ酸の特異的吸光度である２８０ｎｍでのものに対する６１８ｎｍ（フィコシアニンの特異的吸光度）での溶液の吸光度の比率を算出することにより表される。この比率が低い程、溶液中のフィコシアニン以外のタンパク質の量が多い。粗抽出物を、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（登録商標）ＬａｂｓからのＫｒｏｓＦｌｏ（登録商標）接線流ろ過システムを用いて精製した。表２は、精製前後でのフィコシアニン抽出物の純度指数測定を示す。
【0068】
【表2】
【0069】
（実施例３）
飲料中での４時間にわたるフィコシアニンの安定性
実施例１及び２に概要が示される通りのガルディエリア属由来の精製されたフィコシアニン抽出物を、異なる濃度のガルディエリア属抽出物（約２５％フィコシアニンを含有するガルディエリア属抽出物）が飲料の総質量の０．４％（すなわち、０．１０％フィコシアニン）、０．２％（すなわち、０．０５％フィコシアニン）、及び０．１％（すなわち、０．０２５％フィコシアニン）の量で添加された飲料モデル（水、７％スクロース、クエン酸ｐＨ３）中での安定性試験（４３℃で４時間）を行うために用いた。
陰性対照（４℃で維持）と４３℃処理サンプルとの間でのｄＥ ＣＭＣ値を用いて色差を測定して、安定性を評価した。モデル飲料を、３種類の異なるガルディエリア属抽出物濃度：０．１％、０．２％、及び０．４％で、すなわち、０．０３質量％、０．０６質量％及び０．１０質量％のフィコシアニンを７質量％グラニュー糖と併せて調製し、且つ５０％クエン酸溶液を用いてｐＨ３．０へと調整した。サンプルを、４時間にわたって４３℃オーブン中に置き、測色計上で測定してｄＥ ＣＭＣ値を取得した。ｄＥ ＣＭＣが２超である場合、色差はヒトの目により検出可能である。
飲料中での４時間にわたるフィコシアニンの安定性
実施例１及び２に概要が示される通りのガルディエリア属由来の精製されたフィコシアニン抽出物を、異なる濃度のガルディエリア属抽出物（約２５％フィコシアニンを含有するガルディエリア属抽出物）が飲料の総質量の０．４％（すなわち、０．１０％フィコシアニン）、０．２％（すなわち、０．０５％フィコシアニン）、及び０．１％（すなわち、０．０２５％フィコシアニン）の量で添加された飲料モデル（水、７％スクロース、クエン酸ｐＨ３）中での安定性試験（４３℃で４時間）を行うために用いた。
陰性対照（４℃で維持）と４３℃処理サンプルとの間でのｄＥ ＣＭＣ値を用いて色差を測定して、安定性を評価した。モデル飲料を、３種類の異なるガルディエリア属抽出物濃度：０．１％、０．２％、及び０．４％で、すなわち、０．０３質量％、０．０６質量％及び０．１０質量％のフィコシアニンを７質量％グラニュー糖と併せて調製し、且つ５０％クエン酸溶液を用いてｐＨ３．０へと調整した。サンプルを、４時間にわたって４３℃オーブン中に置き、測色計上で測定してｄＥ ＣＭＣ値を取得した。ｄＥ ＣＭＣが２超である場合、色差はヒトの目により検出可能である。
【0070】
この実験の結果は図１において提示され、視覚的比較のために熱処理後に０．１％へと希釈された全３種類の濃度を示す。左端の飲料は０．１％ｗ／ｗガルディエリア属抽出物であり、熱処理後に１．９の平均ｄＥ ＣＭＣを有した。中央の飲料は０．２％ｗ／ｗガルディエリア属抽出物であり、熱処理後に５．４７５の平均ｄＥ ＣＭＣを有した。右端の飲料は０．４％ｗ／ｗガルディエリア属抽出物であり、熱処理後に１６．４５の平均ｄＥ ＣＭＣを有した。これらの結果は、組成物中により多くのフィコシアニンが存在する程、生成物及び／又は着色の安定性が低いことを示す。
【0071】
（実施例４）
飲料の第１シリーズにおける８週間にわたるフィコシアニンの安定性
モデル飲料を、８週間の安定性に関して試験した。モデル飲料は、表３に提示される通りに調合した。表４は、示されるモデル飲料に関する電解質の含有量を示し、表５は、示されるモデル飲料に関する電解質混合物配合を示す。ガルディエリア属抽出物は、約３０％フィコシアニンを含有する。
飲料の第１シリーズにおける８週間にわたるフィコシアニンの安定性
モデル飲料を、８週間の安定性に関して試験した。モデル飲料は、表３に提示される通りに調合した。表４は、示されるモデル飲料に関する電解質の含有量を示し、表５は、示されるモデル飲料に関する電解質混合物配合を示す。ガルディエリア属抽出物は、約３０％フィコシアニンを含有する。
【0072】
【表3】
【0073】
【表4】
【0074】
【表5】
参照される飲料を、７５℃で３０秒間、ＨＴＳＴ殺菌（ＢｏｔｔｏｍＬｉｎｅ殺菌機、Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）を用いて殺菌し、続いて、氷浴中で冷却した。冷却後、飲料を、４℃（これは対照として機能した）、暗所における３２℃、暗所及び明所における２５℃を含む様々な温度で保存した。飲料を観察のために取り出し、８週間で撮影した。図２Ａ及び図２Ｂは、０．２％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料及び電解質飲料に対する安定性試験の結果を示す。０．２％でのガルディエリア属（Ｇａｌｄｅｒｉａ）を含む飲料保存中の顕著な変化。保存中の色相角における減少は、青色から緑色への色相のシフトを示し、したがって、青色は保存時間が増加するにつれて緑色のニュアンスを示すこと、及びより高い保存温度は緑色へのより大きなシフトを生じることを注記することができる。
【0075】
（実施例５）
飲料の第２シリーズにおける８週間にわたるフィコシアニンの安定性
モデル飲料を、８週間の安定性に関して試験した。モデル飲料は、表６に提示される通りに調合した。表７は、示されるモデル飲料に関する電解質混合物配合を示す。ガルディエリア属抽出物は、約３０％フィコシアニンを含有する。
飲料の第２シリーズにおける８週間にわたるフィコシアニンの安定性
モデル飲料を、８週間の安定性に関して試験した。モデル飲料は、表６に提示される通りに調合した。表７は、示されるモデル飲料に関する電解質混合物配合を示す。ガルディエリア属抽出物は、約３０％フィコシアニンを含有する。
【0076】
【表6】
【0077】
【表7】
図３Ａ及び図３Ｂは、０．２％及び０．４％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料に対する安定性試験の結果を示す。ビタミンＣの添加は、ビタミンＣ添加なしと比較して、暗色化（Ｌ*値における減少）を引き起こす。ビタミンＣを含むものとビタミンＣを含まないものとの間での明らかな色相の差異は、暗色化作用に起因すると考えられる。ビタミンＣの添加は、ガルディエリア属フィコシアニンに基づく色相に対する若干の保護的作用を示す。
【0078】
（実施例６）
ビタミンＣの非存在下での飲料における４週間にわたるフィコシアニンの安定性
ビタミンＣの非存在下での飲料におけるフィコシアニンの安定性を評価した。モデル飲料は、表８に提示される通りに調合した。上記の表７は、示されるモデル飲料に関する電解質混合物配合を示す。ガルディエリア属抽出物は、約３０％フィコシアニンを含有する。
ビタミンＣの非存在下での飲料における４週間にわたるフィコシアニンの安定性
ビタミンＣの非存在下での飲料におけるフィコシアニンの安定性を評価した。モデル飲料は、表８に提示される通りに調合した。上記の表７は、示されるモデル飲料に関する電解質混合物配合を示す。ガルディエリア属抽出物は、約３０％フィコシアニンを含有する。
【表8】
【0079】
参照される飲料を、７５℃で３０秒間、ＨＴＳＴ殺菌（ＢｏｔｔｏｍＬｉｎｅ殺菌機、Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）を用いて殺菌し、続いて、氷浴中で冷却した。冷却後、飲料を、４℃（これは対照として機能した）、暗所における３２℃、暗所及び明所における２５℃を含む様々な温度で保存した。飲料を観察のために取り出し、４週間で撮影した。図４Ａ及び図４Ｂは、０．０１％及び０．０２％ガルディエリア属抽出物を含むモデル飲料に対する安定性試験の結果を示す。色相角は、０．０２％及び０．０１％ガルディエリア属に関して４週間後に全ての保存条件に対して略一定のままであり、言い換えれば、ガルディエリア属が０．０１％及び０．０２％の濃度で用いられた場合、飲料の色における顕著な変化は観察されなかった。３未満のｄＥ ＣＭＣ値では、色変化は辛うじて可視的であった。不安定性を生じるメカニズムは本当には分かっていないが、酸ｐＨに関連付けられる。ｐＨが酸性である程、フィコシアニンは不安定である。
【0080】
（実施例７）
λ－カラギーナンと組み合わせたガルディエリア属抽出物の安定性
モデル飲料におけるガルディエリア属抽出物の安定性に対するλ－カラギーナンの作用を評価した。モデル飲料（対照）を、脱イオン水中へとグラニュー糖１２質量％、及び０．０５％のガルディエリア属抽出物粉末（ガルディエリア属抽出物は約３０％フィコシアニンを含有する）、すなわち、飲料の総質量と比較して０．０１５％のフィコシアニン、又は０．０１％のガルディエリア属抽出物粉末、すなわち、飲料の総質量と比較して０．００３％のフィコシアニンを溶解することにより、作製した。λ－カラギーナン粉末を、１．５：１のフィコシアニン：カラギーナン比を得るために、異なる濃度でモデル飲料へと添加した。続いて、飲料のｐＨを、５０％クエン酸を用いて３へと調整した。調製物を、瞬間殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。続いて、バイアルを（ｗｈｅｒｅ）直ちに氷水中に浸漬し、その後、測色計上で内容物を測定した。各飲料バイアルを８０℃浴中に４分間置き、続いて、氷浴中に４分間置いて、ＨＴＳＴ殺菌をシミュレーションした。続いて、ｄＥ ＣＭＣを測定し、退色を決定した。ｄＥ ＣＭＣが２超である場合、可視範囲内である。酸性飲料中のλ－カラギーナンの存在は、より良好な熱安定性及び青色１号に類似する色相を生じた。
λ－カラギーナンと組み合わせたガルディエリア属抽出物の安定性
モデル飲料におけるガルディエリア属抽出物の安定性に対するλ－カラギーナンの作用を評価した。モデル飲料（対照）を、脱イオン水中へとグラニュー糖１２質量％、及び０．０５％のガルディエリア属抽出物粉末（ガルディエリア属抽出物は約３０％フィコシアニンを含有する）、すなわち、飲料の総質量と比較して０．０１５％のフィコシアニン、又は０．０１％のガルディエリア属抽出物粉末、すなわち、飲料の総質量と比較して０．００３％のフィコシアニンを溶解することにより、作製した。λ－カラギーナン粉末を、１．５：１のフィコシアニン：カラギーナン比を得るために、異なる濃度でモデル飲料へと添加した。続いて、飲料のｐＨを、５０％クエン酸を用いて３へと調整した。調製物を、瞬間殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。続いて、バイアルを（ｗｈｅｒｅ）直ちに氷水中に浸漬し、その後、測色計上で内容物を測定した。各飲料バイアルを８０℃浴中に４分間置き、続いて、氷浴中に４分間置いて、ＨＴＳＴ殺菌をシミュレーションした。続いて、ｄＥ ＣＭＣを測定し、退色を決定した。ｄＥ ＣＭＣが２超である場合、可視範囲内である。酸性飲料中のλ－カラギーナンの存在は、より良好な熱安定性及び青色１号に類似する色相を生じた。
【0081】
図５及び図６は、瞬間殺菌に起因して生じる退色を示す。各写真は、左側の未加熱バイアル及び右側の加熱バイアルを有する。ガルディエリア属フィコシアニン：カラギーナン写真（右側）よりも大きな退色が、対照写真（左側）に対して見て取れる。このことは、λ－カラギーナンが、ガルディエリア属の安定化及び加熱条件における色の保護を助けることを確認する。ガルディエリア属０．０５％モデル飲料対照（左側）はＨＴＳＴ殺菌後に５．０のｄＥ ＣＭＣを有し、１．５：１比率（０．００１５％ガルディエリア属フィコシアニン：０．０１％カラギーナン）を示すガルディエリア属：カラギーナン（右側）はＨＴＳＴ殺菌後に３．４のｄＥ ＣＭＣを有する。これらの結果は、より高濃度のガルディエリア属がより安定性が低い生成物をもたらすこと、及びまたλ－カラギーナンが熱処理中にフィコシアニンに対して保護的作用を有することを示す。
【0082】
図７は、市販の飲料Ｇａｔｏｒａｄｅ（登録商標）及びＰｏｗｅｒａｄｅ（登録商標）に対するガルディエリア属フィコシアニン：カラギーナン（１．５：１）含有飲料の比較を示す（ｄＥ ＣＭＣ １．９９）。左側のバイアルは、青色Ｐｏｗｅｒａｄｅを含有する中央のバイアル及び青色Ｇａｔｏｒａｄｅを含有する右側のバイアルと比較して、１．５：１比率（０．０５％ガルディエリア属抽出物、０．０２５％カラギーナン）でのガルディエリア属フィコシアニン：カラギーナンモデル飲料を示す。ガルディエリア属飲料とＰｏｗｅｒａｄｅ及びＧａｔｏｒａｄｅ飲料との間で測定されたｄＥ ＣＭＣは、１．９９である。これは可視範囲内である。この低いｄｅＣＭＣ値は、青色１号含有飲料に対するガルディエリア属フィコシアニン：カラギーナン（１．５：１）飲料の色の一致を示す。
【0083】
（実施例８）
瞬間殺菌に際した異なる比率のフィコシアニン：カラギーナンの安定性
モデル飲料（対照）を、脱イオン水中へとグラニュー糖１２質量％及び様々な濃度の抽出物粉末を溶解し、５０％クエン酸溶液を用いてｐＨを３．０へと調整することにより、作製した。試験飲料は、異なる濃度でモデル飲料へとλ－カラギーナン粉末を添加し、続いて、５０％クエン酸を用いて３．０のｐＨへと飲料をさらに調整することにより、調製した。適用されたフィコシアニン及びカラギーナンの濃度は、下記の表９に提示される。
瞬間殺菌に際した異なる比率のフィコシアニン：カラギーナンの安定性
モデル飲料（対照）を、脱イオン水中へとグラニュー糖１２質量％及び様々な濃度の抽出物粉末を溶解し、５０％クエン酸溶液を用いてｐＨを３．０へと調整することにより、作製した。試験飲料は、異なる濃度でモデル飲料へとλ－カラギーナン粉末を添加し、続いて、５０％クエン酸を用いて３．０のｐＨへと飲料をさらに調整することにより、調製した。適用されたフィコシアニン及びカラギーナンの濃度は、下記の表９に提示される。
【0084】
【表9】
調製物を、瞬間殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。続いて、バイアルを（ｗｈｅｒｅ）直ちに氷水中に浸漬し、その後、測色計上で内容物を測定した。図８は、異なる比率のガルディエリア属フィコシアニン：λ－カラギーナンでの飲料のＨＴＳＴ殺菌を示す。２未満のｄＥ ＣＭＣ値が０．３：１、及び０．６：１の比率で見られ、このことは、ガルディエリア属：λ－カラギーナンの理想的な比率が約０．６：１～約０．３：１であることを示す。
【0085】
（実施例９）
瞬間殺菌に際したλ－カラギーナンと組み合わせたガルディエリア属抽出物の安定性
カラギーナンを含有しないモデル飲料（対照）を、脱イオン水中へとグラニュー糖を溶解させ、０．０５％濃度でのガルディエリア属粉末、すなわち、組成物の総質量と比較して０．０１５％のフィコシアニンを添加し、且つ５０％クエン酸溶液を用いて組成物のｐＨを３．０へと調整することにより調製した。試験飲料は、ガルディエリア属粉末とλ－カラギーナンとを５：１比率で混合し、脱イオン水へと１２質量％を達成するためにグラニュー糖を溶解させることにより作製した。続いて、５０％クエン酸を用いてｐＨを３．０へと調整した。調製物を、瞬間殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。続いて、バイアルを（ｗｈｅｒｅ）直ちに氷水中に浸漬し、その後、測色計上で内容物を測定した。表１０は、ｄＥ ＣＭＣ結果を提供する。結果は、モデル飲料カラギーナンが、熱処理中に色に対する保護的作用を有したことを示す。カラギーナンを含まないモデル飲料は４．３７の平均ｄＥ ＣＭＣを有し、これは左側の写真において見て取れる通りに可視範囲の外側であり、カラギーナンを含有する飲料は１．２２５の平均ｄＥ ＣＭＣを有し、このことは左側の写真において見て取れる通りに可視範囲内であることを示す。このことは、熱処理下でのフィコシアニン飲料におけるλ－カラギーナンの保護的作用をさらに証明する。
瞬間殺菌に際したλ－カラギーナンと組み合わせたガルディエリア属抽出物の安定性
カラギーナンを含有しないモデル飲料（対照）を、脱イオン水中へとグラニュー糖を溶解させ、０．０５％濃度でのガルディエリア属粉末、すなわち、組成物の総質量と比較して０．０１５％のフィコシアニンを添加し、且つ５０％クエン酸溶液を用いて組成物のｐＨを３．０へと調整することにより調製した。試験飲料は、ガルディエリア属粉末とλ－カラギーナンとを５：１比率で混合し、脱イオン水へと１２質量％を達成するためにグラニュー糖を溶解させることにより作製した。続いて、５０％クエン酸を用いてｐＨを３．０へと調整した。調製物を、瞬間殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。続いて、バイアルを（ｗｈｅｒｅ）直ちに氷水中に浸漬し、その後、測色計上で内容物を測定した。表１０は、ｄＥ ＣＭＣ結果を提供する。結果は、モデル飲料カラギーナンが、熱処理中に色に対する保護的作用を有したことを示す。カラギーナンを含まないモデル飲料は４．３７の平均ｄＥ ＣＭＣを有し、これは左側の写真において見て取れる通りに可視範囲の外側であり、カラギーナンを含有する飲料は１．２２５の平均ｄＥ ＣＭＣを有し、このことは左側の写真において見て取れる通りに可視範囲内であることを示す。このことは、熱処理下でのフィコシアニン飲料におけるλ－カラギーナンの保護的作用をさらに証明する。
【0086】
【表10】
【0087】
（実施例１０）
飲料における使用のための緑色濃縮物の調製
ガルディエリア属抽出物を含む飲料における使用のために、緑色濃縮物を調製した。飲料を、以下の通りに調製した：飲料の総質量に対して１質量％ガルディエリア属（Ｇａｌｄｅｒｉａ）抽出物（粉末形態、０．３０質量％のフィコシアニン）を、ＤＩ水中に溶解し、５０％クエン酸を用いてｐＨ３．０へと調整し、４時間にわたって７５℃浴中に入れて、緑色液体を得た。続いて、この緑色液体を、１２％糖と共に２．５％濃度でモデル飲料系に添加した。
実験：加速保存寿命安定性に関して、４３℃オーブン中で緑色飲料の安定性を試験する。緑色飲料を４３℃オーブン中に置き、３及び４日間後に試験した。表１１は、加速保存寿命条件における緑色飲料を示す。４３℃オーブン中での３及び４日間後、緑色飲料は、それぞれ３．２２及び４．０７のｄＥ ＣＭＣを伴って、可視範囲の外側であった。一部の例では、組成物が緑色シフトを受ける後に、カラギーナンを組成物へと添加することができるであろう。
飲料における使用のための緑色濃縮物の調製
ガルディエリア属抽出物を含む飲料における使用のために、緑色濃縮物を調製した。飲料を、以下の通りに調製した：飲料の総質量に対して１質量％ガルディエリア属（Ｇａｌｄｅｒｉａ）抽出物（粉末形態、０．３０質量％のフィコシアニン）を、ＤＩ水中に溶解し、５０％クエン酸を用いてｐＨ３．０へと調整し、４時間にわたって７５℃浴中に入れて、緑色液体を得た。続いて、この緑色液体を、１２％糖と共に２．５％濃度でモデル飲料系に添加した。
実験：加速保存寿命安定性に関して、４３℃オーブン中で緑色飲料の安定性を試験する。緑色飲料を４３℃オーブン中に置き、３及び４日間後に試験した。表１１は、加速保存寿命条件における緑色飲料を示す。４３℃オーブン中での３及び４日間後、緑色飲料は、それぞれ３．２２及び４．０７のｄＥ ＣＭＣを伴って、可視範囲の外側であった。一部の例では、組成物が緑色シフトを受ける後に、カラギーナンを組成物へと添加することができるであろう。
【0088】
【表11】
【0089】
（実施例１０ｂｉｓ）
ガルディエリア属フィコシアニン及びビタミンＣを用いて調製された緑色飲料の安定性
緑色ガルディエリア属濃縮物は、以下の通りに調製される：
１．１％のガルディエリア属粉末を脱イオン水内に希釈する；
２．クエン酸を用いてｐＨを３．０へと調整する；
３．ステップ２で得られた組成物を、４時間にわたって７５℃水浴中で加熱する。
続いて、数種類のサンプルが、以下を含有するように既に取得された緑色抽出物を用いて調製される：
－ １２質量％の結晶性スクロース；並びに
－ ０．１質量％及び０．２質量％の緑色ガルディエリア属濃縮物又は０．０２質量％の粉末ガルディエリア属青色抽出物；並びに
－ 任意に、３００ｐｐｍのビタミンＣ。
標準的な青色ガルディエリア属抽出物と緑色ガルディエリア属抽出物との間で得られた色相を、表１２に示す。
ガルディエリア属フィコシアニン及びビタミンＣを用いて調製された緑色飲料の安定性
緑色ガルディエリア属濃縮物は、以下の通りに調製される：
１．１％のガルディエリア属粉末を脱イオン水内に希釈する；
２．クエン酸を用いてｐＨを３．０へと調整する；
３．ステップ２で得られた組成物を、４時間にわたって７５℃水浴中で加熱する。
続いて、数種類のサンプルが、以下を含有するように既に取得された緑色抽出物を用いて調製される：
－ １２質量％の結晶性スクロース；並びに
－ ０．１質量％及び０．２質量％の緑色ガルディエリア属濃縮物又は０．０２質量％の粉末ガルディエリア属青色抽出物；並びに
－ 任意に、３００ｐｐｍのビタミンＣ。
標準的な青色ガルディエリア属抽出物と緑色ガルディエリア属抽出物との間で得られた色相を、表１２に示す。
【0090】
【表12】
各サンプルが、Ｓｕｎｔｅｓｔ ＸＬＳ+において２時間の光処理の前後で、ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ測色計上でｄＥ ＣＭＣに関して試験される。光処理を受けたサンプルに関するｄＥ ＣＭＣを、図１１及び図１２に提示する。結果は、ビタミンＣが光処理における保護的作用を有したことを示す。
【0091】
（実施例１０ｔｅｒ）
ガルディエリア属フィコシアニンを用いて調製された緑色飲料の安定性
緑色ガルディエリア属濃縮物が、実施例１０ｂｉｓにおいて既に記載された通りに調製される。続いて、数種類のサンプルが、以下を含有するように既に取得された緑色抽出物を用いて調製される：
－ １２質量％の結晶性スクロース；並びに
－ ０．１質量％及び０．２質量％の緑色ガルディエリア属濃縮物又は０．０２質量％の粉末ガルディエリア属青色抽出物。各サンプルが、以下の処理の前後で、ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ測色計上でｄＥ ＣＭＣに関して試験される：
ＨＴＳＴ殺菌（８０℃、５分間）；光処理：Ｓｕｎｔｅｓｔ ＸＬＳ+において２時間；及び
加速熱安定性（４日間、４０℃オーブン）。
ガルディエリア属フィコシアニンを用いて調製された緑色飲料の安定性
緑色ガルディエリア属濃縮物が、実施例１０ｂｉｓにおいて既に記載された通りに調製される。続いて、数種類のサンプルが、以下を含有するように既に取得された緑色抽出物を用いて調製される：
－ １２質量％の結晶性スクロース；並びに
－ ０．１質量％及び０．２質量％の緑色ガルディエリア属濃縮物又は０．０２質量％の粉末ガルディエリア属青色抽出物。各サンプルが、以下の処理の前後で、ＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ測色計上でｄＥ ＣＭＣに関して試験される：
ＨＴＳＴ殺菌（８０℃、５分間）；光処理：Ｓｕｎｔｅｓｔ ＸＬＳ+において２時間；及び
加速熱安定性（４日間、４０℃オーブン）。
【0092】
ＨＴＳＴを受けたサンプルに関するｄＥ ＣＭＣを、図９及び図１０に提示する。これらの結果に鑑みて、緑色飲料は、青色のもの（対照）よりもＨＴＳＴにおいて安定である。光処理を受けたサンプルに関するｄＥ ＣＭＣを、図１１及び図１２に提示する。結果は、緑色飲料が、青色のもの（対照）よりも光において安定であることを示す。加速安定性処理を受けたサンプルに関するｄＥ ＣＭＣを、図１３及び図１４に提示する。飲料系における比較的低濃度の緑色は、青色対照飲料よりも安定であることを証明する。使用率と加速熱安定性との間に反比例関係が見られる。上記に鑑みて、緑色ガルディエリア属濃縮物飲料は、熱及び光の下で安定である。
【0093】
（実施例１１）
異なるｐＨ下でのλ－カラギーナンと組み合わせた様々なフィコシアニン抽出物の安定性
１２％糖を用いて飲料を作製し、５０％クエン酸溶液を用いてｐＨを調整した。色含有量は、０．０６％のガルディエリア属及びスピルリナ抽出物、すなわち、飲料の総質量と比較して０．０１８質量％のフィコシアニンであり、λ－カラギーナンを０．０１％及び０．０６％で添加した。「モデル」又は「対照」飲料は、添加されたカラギーナンを有しない。「そのまま」の飲料は、クエン酸を添加せずに調製された飲料である。適用されたフィコシアニン及びカラギーナンの個別の濃度は、下記の表１３に提示される。
異なるｐＨ下でのλ－カラギーナンと組み合わせた様々なフィコシアニン抽出物の安定性
１２％糖を用いて飲料を作製し、５０％クエン酸溶液を用いてｐＨを調整した。色含有量は、０．０６％のガルディエリア属及びスピルリナ抽出物、すなわち、飲料の総質量と比較して０．０１８質量％のフィコシアニンであり、λ－カラギーナンを０．０１％及び０．０６％で添加した。「モデル」又は「対照」飲料は、添加されたカラギーナンを有しない。「そのまま」の飲料は、クエン酸を添加せずに調製された飲料である。適用されたフィコシアニン及びカラギーナンの個別の濃度は、下記の表１３に提示される。
【0094】
【表13】
調製物を、ＨＴＳＴ殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。
以下の図１５Ａ～図１８Ｂは、熱処理前の様々なｐＨレベルでのカラギーナン飲料を示す。ガルディエリア属及びスピルリナの両方が、ｐＨが低下するにつれてカラギーナン系において緑色になり始めるが、ガルディエリア属カラギーナン飲料とスピルリナカラギーナン飲料との間で色調は異なり、ガルディエリア属は、スピルリナのものよりも黄色の色調を有する。熱処理の前でも、スピルリナ対照飲料はｐＨ３．５未満で沈殿し、濁っていたが、ガルディエリア属対照は透明であり、沈殿しなかった。
【0095】
ｄＥ ＣＭＣをＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ測色計上で測定し、図１９において報告した。これらの結果は、カラギーナンを含有する飲料が、カラギーナンを含有しない対照飲料よりも熱安定であることを示す。しかしながら、スピルリナ及びガルディエリア属飲料は、様々な出発ｐＨレベルで、カラギーナンの存在下において異なる挙動を示す。例えば、ｐＨ３．２では、０．３：１ガルディエリア属飲料はスピルリナ飲料よりも安定であり、ｐＨ４．３の「そのまま」のサンプルではその逆が当てはまる。
これらの結果は、ガルディエリア属抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料が、スピルリナ抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料よりも熱安定であることを示す。
これらの結果は、ガルディエリア属抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料が、スピルリナ抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料よりも熱安定であることを示す。
【0096】
さらに、ｐＨが３．０超且つ４．０以下である場合、ガルディエリア属由来フィコシアニン及びカラギーナンを含む酸性組成物は、スピルリナ由来フィコシアニンを含むものよりも熱処理下で安定でさえあると結論付けることができる。
【0097】
（実施例１２）
瞬間殺菌に際した異なる比率のフィコシアニン：カラギーナンの安定性
１２％糖を用いて飲料を作製し、５０％クエン酸溶液を用いてｐＨを３．０及び４．０へと調整した。色含有量は、０．０６％のガルディエリア属及びスピルリナ抽出物、すなわち、飲料の総質量と比較して０．０１８質量％のフィコシアニンであり、λ－カラギーナンを０．０１％及び０．０６％で添加した。適用されたフィコシアニン及びカラギーナンの個別の濃度は、既に提示された表１３と同じである。「モデル」又は「対照」飲料は、添加されたカラギーナンを有しない。
調製物を、ＨＴＳＴ殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。熱処理前には、カラギーナンを含むガルディエリア属ベースの飲料とスピルリナベースの飲料との間で色調が異なる。ガルディエリア属のものはスピルリナのものよりも黄色の色調を有する。ｄＥ ＣＭＣをＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ測色計上で測定し、図２０において報告した。図２０は、ｐＨ３．０及び４．０でのカラギーナンが添加されたガルディエリア属飲料とスピルリナ飲料との比較を示す。結果は、スピルリナ－カラギーナン含有飲料は、ｐＨ４．０で、同じｐＨでのガルディエリア属－カラギーナン飲料とは異なる挙動を示すことをさらに証明する。これらの結果は、ガルディエリア属抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料が、カラギーナンを含有しない対照飲料よりも、且つスピルリナ抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料よりも熱安定であることを示す。さらに、ｐＨが３．０超且つ４．０以下である場合、ガルディエリア属由来フィコシアニン及びカラギーナンを含む酸性組成物は、スピルリナ由来フィコシアニンを含むものよりも熱処理下で安定でさえあると結論付けることができる。
瞬間殺菌に際した異なる比率のフィコシアニン：カラギーナンの安定性
１２％糖を用いて飲料を作製し、５０％クエン酸溶液を用いてｐＨを３．０及び４．０へと調整した。色含有量は、０．０６％のガルディエリア属及びスピルリナ抽出物、すなわち、飲料の総質量と比較して０．０１８質量％のフィコシアニンであり、λ－カラギーナンを０．０１％及び０．０６％で添加した。適用されたフィコシアニン及びカラギーナンの個別の濃度は、既に提示された表１３と同じである。「モデル」又は「対照」飲料は、添加されたカラギーナンを有しない。
調製物を、ＨＴＳＴ殺菌を通した色変化に関して試験した。モデル飲料及びカラギーナン含有飲料を２０ｍＬシンチレーションバイアルに入れ、８０℃水浴中に４分間浸漬した。熱処理前には、カラギーナンを含むガルディエリア属ベースの飲料とスピルリナベースの飲料との間で色調が異なる。ガルディエリア属のものはスピルリナのものよりも黄色の色調を有する。ｄＥ ＣＭＣをＣｏｌｏｒＱｕｅｓｔ測色計上で測定し、図２０において報告した。図２０は、ｐＨ３．０及び４．０でのカラギーナンが添加されたガルディエリア属飲料とスピルリナ飲料との比較を示す。結果は、スピルリナ－カラギーナン含有飲料は、ｐＨ４．０で、同じｐＨでのガルディエリア属－カラギーナン飲料とは異なる挙動を示すことをさらに証明する。これらの結果は、ガルディエリア属抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料が、カラギーナンを含有しない対照飲料よりも、且つスピルリナ抽出物及びカラギーナンの両方を含有する飲料よりも熱安定であることを示す。さらに、ｐＨが３．０超且つ４．０以下である場合、ガルディエリア属由来フィコシアニン及びカラギーナンを含む酸性組成物は、スピルリナ由来フィコシアニンを含むものよりも熱処理下で安定でさえあると結論付けることができる。
【0098】
配列情報：
配列番号１：ＹＰ＿００９０５１１７９．１＝
1 mktpiteaia aadnqgrfls ntelqavngr yqraaaslea arsltsnaqr lingaaqavy
61 skfpytsqmp gpqyassavg kakcardigy ylrmvtyclv vggtgpmdey liagleeinr
121 tfdlspswyv ealnyvksnh glsgqaanea ntyidyaina ls
配列番号２：ＹＰ＿００９０５１１８０．１＝
1 mldafakvva qadargefls ntqldalskm vsegnkrldv vnritsnasa ivtnaaralf
61 seqpqliqpg gnaytnrrma aclrdmeiil ryvsyaiiag dssvlddrcl nglretyqal
121 gvpgasvavg vekmkdsaia iandpsgitt gdcsalmaev gtyfdraata vq
配列番号３：ＹＰ＿００９０５１１０３．１＝
1 msivtksivn adaearylsp geldriksfv lsgqrrlria qiltdnreri vkqagqqlfq
61 qrpdivspgg naygeemtat clrdldyylr lvtygvvagd ispieeiglv gvkemynslg
121 tpisavaegi kamknvacsl lsgddsaeag fyfdytigam q
配列番号４：ＹＰ＿００９０５１１０４．１＝
1 mqdaitavin tadvqgkyld nssieklkgy fqtgelrvra aatiaanaag iikdavaksl
61 lysditrpgg nmyttrryaa cirdldyylr yatysmlagd psildervln glketynslg
121 vpigatiqsi qamkevtssl vgseagkemg iyfdyicsgl s
配列番号１：ＹＰ＿００９０５１１７９．１＝
1 mktpiteaia aadnqgrfls ntelqavngr yqraaaslea arsltsnaqr lingaaqavy
61 skfpytsqmp gpqyassavg kakcardigy ylrmvtyclv vggtgpmdey liagleeinr
121 tfdlspswyv ealnyvksnh glsgqaanea ntyidyaina ls
配列番号２：ＹＰ＿００９０５１１８０．１＝
1 mldafakvva qadargefls ntqldalskm vsegnkrldv vnritsnasa ivtnaaralf
61 seqpqliqpg gnaytnrrma aclrdmeiil ryvsyaiiag dssvlddrcl nglretyqal
121 gvpgasvavg vekmkdsaia iandpsgitt gdcsalmaev gtyfdraata vq
配列番号３：ＹＰ＿００９０５１１０３．１＝
1 msivtksivn adaearylsp geldriksfv lsgqrrlria qiltdnreri vkqagqqlfq
61 qrpdivspgg naygeemtat clrdldyylr lvtygvvagd ispieeiglv gvkemynslg
121 tpisavaegi kamknvacsl lsgddsaeag fyfdytigam q
配列番号４：ＹＰ＿００９０５１１０４．１＝
1 mqdaitavin tadvqgkyld nssieklkgy fqtgelrvra aatiaanaag iikdavaksl
61 lysditrpgg nmyttrryaa cirdldyylr yatysmlagd psildervln glketynslg
121 vpigatiqsi qamkevtssl vgseagkemg iyfdyicsgl s
【0099】
本明細書中で引用される全ての参考文献、及びそれらの参考文献は、追加の若しくは代替的な詳細、特徴、及び／又は技術的背景の教示に関して適切である場合、それらの全体で本明細書中に参照により組み入れられる。
本開示が詳細に示され、且つ特定の実施形態を参照して記載されてきたが、上記で開示されたもの並びに他の特徴及び機能、又はそれらの代替の変形を、多数の他の異なる系又は適用へと望ましく組み合わせることができることが理解されるであろう。また、その様々な現在予見できないか若しくは予期せぬ代替物、変法、変形又はその中での改善を、その後に当業者により生成することができ、それらもまた以下の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
本開示が詳細に示され、且つ特定の実施形態を参照して記載されてきたが、上記で開示されたもの並びに他の特徴及び機能、又はそれらの代替の変形を、多数の他の異なる系又は適用へと望ましく組み合わせることができることが理解されるであろう。また、その様々な現在予見できないか若しくは予期せぬ代替物、変法、変形又はその中での改善を、その後に当業者により生成することができ、それらもまた以下の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15A】
【図15B】
【図16A】
【図16B】
【図17A】
【図17B】
【図18A】
【図18B】
【図19】
【図20】
【配列表】
【国際調査報告】