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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-05
(54)【発明の名称】抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/24 20060101AFI20240829BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240829BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240829BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240829BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240829BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240829BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240829BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240829BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240829BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240829BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240829BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240829BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20240829BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240829BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240829BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240829BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240829BHJP
【ＦＩ】
C07K16/24 ZNA
C12N15/13
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 N
A61P43/00 111
A61P37/08
A61P11/06
A61P17/00
A61P11/02
A61P27/02
A61P1/04
A61P29/00
A61P37/06
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024514001
(86)(22)【出願日】2021-12-09
(85)【翻訳文提出日】2024-03-01
(86)【国際出願番号】 CN2021136757
(87)【国際公開番号】W WO2023029281
(87)【国際公開日】2023-03-09
(31)【優先権主張番号】202111031653.2
(32)【優先日】2021-09-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520451681
【氏名又は名称】江蘇▲筌▼信生物医薬股▲分▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＱＹＵＮＳ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １３１０，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １，Ｎｏ．９０７ Ｙａｏｃｈｅｎｇ Ａｖｅｎｕｅ，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２２５３００，Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100108903
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 和広
(74)【代理人】
【識別番号】100123593
【弁理士】
【氏名又は名称】関根 宣夫
(74)【代理人】
【識別番号】100208225
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 修二郎
(74)【代理人】
【識別番号】100217179
【弁理士】
【氏名又は名称】村上 智史
(74)【代理人】
【識別番号】100227592
【弁理士】
【氏名又は名称】孔 詩麒
(72)【発明者】
【氏名】裘霽宛
(72)【発明者】
【氏名】孔永
(72)【発明者】
【氏名】陳衛
(72)【発明者】
【氏名】喬懷耀
(72)【発明者】
【氏名】呉亦亮
(72)【発明者】
【氏名】陳涛
(72)【発明者】
【氏名】呉美娟
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE12
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA88X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085BB11
4C085CC01
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
本出願は、抗ヒト胸腺間質リンホポエチン（ＴＳＬＰ）モノクローナル抗体及びその使用を提供し、このモノクローナル抗体はヒトＴＳＬＰに対して高い親和性を有し、中和活性を有しており、ＴＳＬＰが媒介する関連疾患の予防または治療に使用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）とを含む、抗ヒト胸腺間質リンホポエチン（ＴＳＬＰ）モノクローナル抗体であって、前記ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１に示され；
前記ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号２に示され；
前記ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号３に示され；
前記ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号４に示され；
前記ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号５に示され；及び
前記ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号６に示される、前記モノクローナル抗体。
【請求項2】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示され、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示される、ことを特徴とする請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項3】
請求項１または２に記載のモノクローナル抗体をコードする、ことを特徴とする単離された核酸。
【請求項4】
請求項３に記載の核酸を含む、ことを特徴とする宿主細胞。
【請求項5】
請求項４に記載の宿主細胞を培養して請求項１または２に記載のモノクローナル抗体を産生することを含む、ことを特徴とするモノクローナル抗体を産生する方法。
【請求項6】
請求項１または２に記載のモノクローナル抗体及び薬学的に許容される担体を含む、ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項7】
ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患の治療に使用される、ことを特徴とする請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患は、アレルギー性喘息、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎線維症、及び炎症性腸疾患などである、ことを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項9】
ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患を治療するための薬剤の調製における請求項１または２に記載のモノクローナル抗体の使用。
【請求項10】
前記ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患は、アレルギー性喘息、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎線維症、及び炎症性腸疾患などである、ことを特徴とする請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、抗体医薬の分野に関する。具体的には、本出願は、ヒト胸腺間質リンホポエチン（ＴＳＬＰ）に対するモノクローナル抗体及びその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
サイトカインと免疫細胞は、特異的生理学的メカニズムや経路、例えばさまざまな炎症性疾患を引き起こす経路を媒介する。ヒト胸腺間質リンホポエチン（ＴＳＬＰ）は、ヒト上皮細胞によって産生されるＩＬ－７様のサイトカインであり、Ｂ細胞の分化を促進し、胸腺細胞や成熟Ｔ細胞を共刺激することもできる。ＴＳＬＰは、ヒトＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（ＤＣ）上の特異的ヘテロ二量体受容体に結合する。この受容体ヘテロ二量体は、一般的なγ様受容体鎖（ＴＳＬＰ受容体；ＴＳＬＰＲ）とＩＬ－７Ｒ－α鎖のヘテロ二量体から構成される。例えば、Ｔｏｎｏｚｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．ＣｅｌｌＧｅｎｅｔ．９３：２３－２５，２００１；Ｐａｎｄｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：５９－６４，２０００；Ｌ．Ｓ．Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：６５９－６７０，２０００；Ｒｅｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３３６－３４３，２００１を参照されたい。受容体に結合したリガンドは、ＤＣがＴＨ２誘引化学因子、ＴＡＲＣ（胸腺及び活性化調節化学因子）及びＭＤＣ（マクロファージ由来化学因子）を分泌するように誘導する。ＴＳＬＰはまた、強力なＤＣ活性化、天然ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖、及びその後のＴＨ２表現型への極性化も誘導し、アレルギー誘発性（ｐｒｏ－ａｌｌｅｒｇｉｃ）サイトカインであるインターロイキン４（ＩＬ－４）、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、及び腫瘍壊死因子－αを生成する。
【0003】
ＴＳＬＰシグナルがＳＴＡＴ５転写因子の活性化を引き起こすことも判明した。さらに、急性及び慢性のアトピー性皮膚炎患者の皮膚創傷においてＴＳＬＰが過剰発現していることが報告されており、ＴＳＬＰの発現が体内のアレルギー性炎症に関連していることが示されている。皮膚ケラチノサイトに加えて、気管支上皮細胞、平滑筋、肺線維芽細胞でも高レベルのＴＳＬＰ発現が発見されており、呼吸器アレルギーの適応症におけるＴＳＬＰの役割の可能性を裏付けている。さらに、ＩｇＥを介して活性化されたマスト細胞は非常に高レベルのＴＳＬＰを発現し、これは、ＴＨ２表現型の維持に関与している可能性のあるメカニズムである。
【0004】
西洋諸国では人口の約２０％が、喘息、鼻炎、アトピー性皮膚炎、及び食物アレルギーを含むアレルギー疾患などの炎症性疾患を患っている。アトピー性皮膚炎患者の５０％～８０％が喘息やアレルギー性鼻炎を患っているか、発症している。現在のところ、アレルギー誘発性喘息、アトピー性皮膚炎、及びアレルギー性鼻炎を治療する治療法はない。喘息に対するβ－２アドレナリン受容体拮抗薬、アトピー性皮膚炎に対するエリデル（Ｅｌｉｄｅｌ）、アレルギー性鼻炎に対するＨ１抗ヒスタミン薬などの現在の治療法は、これらの兆候を標的にしている。したがって、当技術分野では、これらの炎症性疾患、特にアレルギー性炎症に対するより良い治療法に対するニーズが高まっている。本出願は、この問題及びその他の問題に対処する。
【発明の概要】
【0005】
本出願は、新しい抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体、当該モノクローナル抗体を含む医薬組成物、及び当該モノクローナル抗体の製薬用途を提供することを目的とする。
【0006】
本出願の技術案は下記通りである。
【0007】
１．３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）とを含む、抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体であって、
前記ＣＤＲ－Ｈ１（本明細書では、ＣＤＲ－Ｈ１は重鎖ＣＤＲ１を表す）のアミノ酸配列は配列番号１（ＳＹＹＭＳ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｈ２（本明細書では、ＣＤＲ－Ｈ２は重鎖ＣＤＲ２を表す）のアミノ酸配列は配列番号２（ＦＩＳＹＧＧＳＡＹＨＡＴＷＡＱＧ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｈ３（本明細書では、ＣＤＲ－Ｈ３は重鎖ＣＤＲ３を表す）のアミノ酸配列は配列番号３（ＥＦＲＳＭＴＹＧＡＥＷＧＩ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｌ１（本明細書では、ＣＤＲ－Ｌ１は軽鎖ＣＤＲ１を表す）のアミノ酸配列は配列番号４（ＱＡＳＥＳＩＹＤＴＬＡ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｌ２（本明細書では、ＣＤＲ－Ｌ２は軽鎖ＣＤＲ２を表す）のアミノ酸配列は配列番号５（ＳＡＳＳＬＡＳ）に示され；及び
前記ＣＤＲ－Ｌ３（本明細書では、ＣＤＲ－Ｌ３は軽鎖ＣＤＲ３を表す）のアミノ酸配列は配列番号６（ＱＱＧＹＴＭＰＤＶＤＫＮＰ）に示される、前記モノクローナル抗体。
前記ＣＤＲ－Ｈ１（本明細書では、ＣＤＲ－Ｈ１は重鎖ＣＤＲ１を表す）のアミノ酸配列は配列番号１（ＳＹＹＭＳ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｈ２（本明細書では、ＣＤＲ－Ｈ２は重鎖ＣＤＲ２を表す）のアミノ酸配列は配列番号２（ＦＩＳＹＧＧＳＡＹＨＡＴＷＡＱＧ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｈ３（本明細書では、ＣＤＲ－Ｈ３は重鎖ＣＤＲ３を表す）のアミノ酸配列は配列番号３（ＥＦＲＳＭＴＹＧＡＥＷＧＩ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｌ１（本明細書では、ＣＤＲ－Ｌ１は軽鎖ＣＤＲ１を表す）のアミノ酸配列は配列番号４（ＱＡＳＥＳＩＹＤＴＬＡ）に示され；
前記ＣＤＲ－Ｌ２（本明細書では、ＣＤＲ－Ｌ２は軽鎖ＣＤＲ２を表す）のアミノ酸配列は配列番号５（ＳＡＳＳＬＡＳ）に示され；及び
前記ＣＤＲ－Ｌ３（本明細書では、ＣＤＲ－Ｌ３は軽鎖ＣＤＲ３を表す）のアミノ酸配列は配列番号６（ＱＱＧＹＴＭＰＤＶＤＫＮＰ）に示される、前記モノクローナル抗体。
【0008】
２．重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示され、そのアミノ酸配列はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＳＹＧＧＳＡＹＨＡＴＷＡＱＧＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＦＲＳＭＴＹＧＡＥＷＧＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示され、そのアミノ酸配列はＡＹＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＳＩＹＤＴＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＳＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＭＰＤＶＤＫＮＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫである、項１に記載のモノクローナル抗体。
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示され、そのアミノ酸配列はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＳＹＧＧＳＡＹＨＡＴＷＡＱＧＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＦＲＳＭＴＹＧＡＥＷＧＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示され、そのアミノ酸配列はＡＹＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＳＩＹＤＴＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＳＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＭＰＤＶＤＫＮＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫである、項１に記載のモノクローナル抗体。
【0009】
３．前記いずれか一項に記載のモノクローナル抗体をコードする、単離された核酸。
【0010】
４．項３に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【0011】
前記核酸はベクター上に存在することができる。ベクターは、任意のタイプ、例えば、発現ベクターなどの組換えベクターであってもよい。複数の宿主細胞のいずれかを使用できる。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。別の実施形態では、宿主細胞は真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞である。
【0012】
５．項４に記載の宿主細胞を培養して前記いずれか一項に記載のモノクローナル抗体を産生することを含む、モノクローナル抗体を産生する方法。
【0013】
前記方法は、適切な宿主細胞内において前記抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体をコードする組換えベクターを発現させ、それによって前記モノクローナル抗体を産生することを含む。特定の実施形態では、前記方法は、前記抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、それによって前記核酸を発現させることを含む。前記方法は、宿主細胞培養物または宿主細胞培養培地から前記抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体を回収することをさらに含み得る。
【0014】
６．前記いずれか一項に記載のモノクローナル抗体及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【0015】
前記医薬組成物は、追加の治療剤（例えば、異なる抗ヒトＴＳＬＰ抗体をさらに含んでもよい。
【0016】
７．ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患の治療に使用される、項６に記載の医薬組成物。
【0017】
８．前記ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患は、アレルギー性喘息、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎線維症、及び炎症性腸疾患などである、項７に記載の医薬組成物。
【0018】
９．ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患を治療するための薬剤の調製における前記いずれか一項に記載のモノクローナル抗体の使用。
【0019】
１０．前記ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患は、アレルギー性喘息、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎線維症、及び炎症性腸疾患などである、項９に記載の使用。
【0020】
１１．前記いずれか一項に記載のモノクローナル抗体または前記いずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする被験者に投与することを含む、
ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患を治療する方法。
ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患を治療する方法。
【0021】
１２．前記ＴＳＬＰ媒介シグナル伝達に関連する疾患は、アレルギー性喘息、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎線維症、及び炎症性腸疾患などである、項１１に記載の方法。
【発明の効果】
【0022】
本発明は、新しい抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体を提供する。これは、従来技術の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体（テゼペルマブは、アムジェン／アストラゼネカが開発したＴＳＬＰを標的とするモノクローナル抗体薬であり、重症喘息治療のためのテゼペルマブの第ＩＩＩ相臨床試験ナビゲーターは成功している）と比較して、ＴＳＬＰに対する結合親和性が同等であり、細胞レベルでの中和活性はテゼペルマブよりも優れている。
【0023】
本出願のモノクローナル抗体は、細胞レベルでテゼペルマブ（特許公開の配列発現に従って調製）よりも優れた中和活性を示し、関連疾患の予防及び治療において良好な臨床効果を示すことが期待されている。
【図面の簡単な説明】
【0024】
添付の図面は、本出願をより良く理解するために使用されるものであり、本出願を不当に限定するものではない。
【発明の詳細】
【0025】
以下に本出願の例示的な実施形態を説明する。理解を容易にするために本出願の実施形態の様々な詳細を含めて説明するが、それらは単なる例示であると考えられるべきである。したがって、当業者であれば、本出願の範囲及び精神から逸脱することなく、本明細書に記載の実施形態にさまざまな変更及び修正を加えることができることを認識するであろう。また、明確さと簡潔さのために、以下の説明では周知の機能及び構成の説明を省略する。
【0026】
本明細書に記載されている科学技術用語は、当業者が一般に理解している用語と同じ意味を有するが、矛盾する場合には、本明細書の定義に準ずる。
【0027】
一般的にいえば、本明細書で使用されている用語は、以下の意味を有する。
【0028】
本明細書において、「単離された」抗体とは、その自然環境の成分から分離された抗体をいう。ある一部の実施形態では、抗体を９５％または９９％を超える純度に精製し、前記純度は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等電集束（ＩＥＦ）、毛細管電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって確定される。抗体の純度を評価する方法のレビューについて、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
【0029】
本明細書において、「モノクローナル抗体」とは、実質的に相同な抗体の群から得られた抗体のことであり、すなわち、該群を構成する各抗体は同一であり、及び／または同じエピトープに結合する。可能な変異体抗体（例えば、自然に存在する変異を含むものまたはモノクローナル抗体の製品の製造過程において発生するもの）を除き、このような変異体は一般に微量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含む典型的なポリクローナル抗体製品と違って、モノクローナル抗体製品における各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。よって、修飾語「モノクローナル」とは、前記抗体が実質的に相同な抗体群から得られる特徴を示し、いずれか特定の方法で調製する必要のある抗体と解釈すべきではない。例えば、本出願のモノクローナル抗体は複数の技術によって製造することができ、前記技術は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限られていない。本明細書は、このような方法、及びモノクローナル抗体を調製するその他の例示的な方法を記載している。
【0030】
本明細書において、「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別途説明する場合を除き、本明細書で使用されている「結合親和性」とは、結合パートナーメンバー（例えば、抗体と抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に平衡解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本分野で既知の常用方法によって測定することができる。
【0031】
本明細書において、ヒト胸腺間質リンホポエチン（Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｉｃ Ｓｔｒｏｍａｌ Ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ、ＴＳＬＰ）とはヒト由来のサイトカインを表し、そのアミノ酸配列を配列番号９に示し、ここで、下線部分は、シグナルペプチドを表す。
配列番号９：
ＭＦＰＦＡＬＬＹＶＬＳＶＳＦＲＫＩＦＩＬＱＬＶＧＬＶＬＴＹＤＦＴＮＣＤＦＥＫＩＫＡＡＹＬＳＴＩＳＫＤＬＩＴＹＭＳＧＴＫＳＴＥＦＮＮＴＶＳＣＳＮＲＰＨＣＬＴＥＩＱＳＬＴＦＮＰＴＡＧＣＡＳＬＡＫＥＭＦＡＭＫＴＫＡＡＬＡＩＷＣＰＧＹＳＥＴＱＩＮＡＴＱＡＭＫＫＲＲＫＲＫＶＴＴＮＫＣＬＥＱＶＳＱＬＱＧＬＷＲＲＦＮＲＰＬＬＫＱＱ
配列番号９：
ＭＦＰＦＡＬＬＹＶＬＳＶＳＦＲＫＩＦＩＬＱＬＶＧＬＶＬＴＹＤＦＴＮＣＤＦＥＫＩＫＡＡＹＬＳＴＩＳＫＤＬＩＴＹＭＳＧＴＫＳＴＥＦＮＮＴＶＳＣＳＮＲＰＨＣＬＴＥＩＱＳＬＴＦＮＰＴＡＧＣＡＳＬＡＫＥＭＦＡＭＫＴＫＡＡＬＡＩＷＣＰＧＹＳＥＴＱＩＮＡＴＱＡＭＫＫＲＲＫＲＫＶＴＴＮＫＣＬＥＱＶＳＱＬＱＧＬＷＲＲＦＮＲＰＬＬＫＱＱ
【0032】
本明細書において、「抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体」とは、ヒトＴＳＬＰを標的とする診断薬及び／または治療薬として使用できるように、十分な親和性でヒトＴＳＬＰに結合することができるモノクローナル抗体を意味する。
【0033】
本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体は、標的の無関係なタンパク質に結合しない。ここで、「無関係なタンパク質」とは、標的としてのヒトＴＳＬＰ以外のタンパク質をいい、ここで、「結合しない」とは、本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体と、その標的となるヒトＴＳＬＰとの結合能を１００％とした場合、本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体のその無関係なタンパク質への結合能は１０％未満であり、例えば９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％または０であることを指す。
【0034】
本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体は、他の動物種のＴＳＬＰに結合しない場合がある。ここで、「他の動物種」とは、マーモセット、カニクイザル、ブタ、イヌ、ウサギ、ラット、マウス、モルモットなどのヒト以外の動物種を指す。ここで、「結合しない」とは、本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体と、その標的となるヒトＴＳＬＰとの結合能を１００％とした場合、本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体のその他の動物種のＴＳＬＰへの結合能は１０％未満であり、例えば９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％または０であることを指す。
【0035】
本出願のヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。
【0036】
実験結果は、本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体が、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合できることを示している。
【0037】
本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体は、多くの生物学的活性において、市販されている同類のモノクローナル抗体製品と同等であるか、または市販されている同類のモノクローナル抗体製品よりも優れている。そのような生物学的活性として、例えば、ヒト、天然及びカニクイザルのＴＳＬＰ誘導細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を中和する活性、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるヒト全血及びヒトＰＢＭＣ細胞からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を中和する活性などが挙げられる。
【0038】
特定の実施形態では、本出願の抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０に示され、軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号１１に示される。
配列番号１０
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＳＹＧＧＳＡＹＨＡＴＷＡＱＧＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＦＲＳＭＴＹＧＡＥＷＧＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１１
ＡＹＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＳＩＹＤＴＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＳＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＭＰＤＶＤＫＮＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ここで、配列番号１０と１１はいずれもヒト化された配列である。
配列番号１０
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＳＹＧＧＳＡＹＨＡＴＷＡＱＧＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＦＲＳＭＴＹＧＡＥＷＧＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１１
ＡＹＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＥＳＩＹＤＴＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＳＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＭＰＤＶＤＫＮＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ここで、配列番号１０と１１はいずれもヒト化された配列である。
【0039】
本明細書において、「単離された」核酸とは、その自然環境の成分から分離された核酸分子を意味する。単離された核酸は、通常は核酸分子を含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、前記核酸分子は、染色体外、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【0040】
本明細書において、「抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする１つまたは複数の核酸分子を意味し、単一のベクターまたは別個のベクター中のそのような核酸分子、及び宿主細胞に存在する１つまたは複数の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
【0041】
本明細書において、「ベクター」とは、それに連結した別の核酸を増幅することができる核酸分子を意味する。この用語には、自己複製核酸構造であるベクター、及びそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある一部のベクターは、それらに操作可能に連結されている核酸の発現をガイドすることができる。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。
【0042】
本明細書において、「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は互いに置き換えて使用することができ、外因性核酸が導入された細胞を表し、そのような細胞の後代を含む。宿主細胞は、「形質転換体」と「形質転換細胞」とを含み、初代形質転換細胞とそれに由来する後代（継代数を問わず）とを含む。後代は、核酸内容物では親細胞と完全に同じでなくてもよく、変異を含んでもよい。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択された、同じ機能または生物学的活性を有する変異体後代は、本明細書に含まれている。
【0043】
本明細書において、「医薬組成物」とは、その中に含まれている活性成分の生物学的活性を有効にする形を取っており、製剤が投与される被験者に対して許容できない毒性を持つ追加の成分を含まない組成物のような製品を指す。
【0044】
本明細書において、「薬学的に許容される担体」とは、医薬組成物における活性成分以外の、被験者に対して無毒である成分を意味する。薬学的に許容される担体は、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤を含むが、これらに限られない。
【0045】
本明細書において、「モノクローナル抗体」は一般にヒト抗体であり、当業者に周知の技術を使用して調製することができる。例えば、ヒト抗体は一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－３７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。
【0046】
抗体は、抗原攻撃に応答して完全ヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷の抗体の産生を刺激するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製できる。これらの動物は通常、内因性免疫グロブリン遺伝子座が置き換えられ、染色体外に存在するか、動物にランダムに組み込まれているヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部またはすべてを含む。このようなトランスジェニック動物では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に不活性化されており、トランスジェニック動物からヒト抗体を取得する方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号に記載されているＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術、米国特許第５，７７０，４２９号に記載されているＨＵＭＡＢ（登録商標）技術、米国特許第７，０４１，８７０号に記載されているＫ－ＭＭＯＵＳＥ（登録商標）技術、及び米国特許出願公開番号ＵＳ２００７／００６１９００号に記載されているＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術をも参照されたい。このような動物から生成された無傷の抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域との組み合わせによってさらに修飾することができる。
【0047】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても産生することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生に使用されるヒト骨髄腫細胞及びマウス－ヒトハイブリッド骨髄腫細胞が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｄ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１－３００５（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ，Ｂ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７），ｐｐ．５１－６３；Ｂｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６－９５（１９９１）を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって産生されるヒト抗体は、Ｌｉ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：３５５７－３５６２（２００６）にも記載されている。他の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生成について記載）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）；２６５－２６８（ヒト－ヒトハイブリドーマについて記載）に記載されているものを含む。また、ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ，Ｈ．Ｐ．ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｓ．，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０：９２７－９３７（２００５）；Ｖｏｌｌｍｅｒｓ，Ｈ．Ｐ．ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７：１８５－１９１（２００５）にも記載されている。
【0048】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもでき、その後、そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。
【0049】
ヒト抗体は、自己抗体ライブラリーに基づいて選択することもできる。すなわち、ヒト抗体は、組み合わせライブラリーから所望の１つまたは複数の活性を有する抗体をスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、そのようなライブラリーから所望の結合特性を有する抗体をスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で知られている。この方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（２００１）に概説されており、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ、Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ａ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（２００３）；Ｓｉｄｈｕ，Ｓ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ，Ｃ．Ｖ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｆ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１：１２４６７－１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ，Ｃ．Ｖ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４：１１９－１３２（２００４）に記載されている。
【0050】
Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているように、一部のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子の完全なセットをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってそれぞれクローニングし、ファージライブラリー内でランダムに組み換え、その後、前記ファージライブラリー内で抗原結合ファージをスクリーニングする。ファージは通常、抗体フラグメントを単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントまたはＦａｂフラグメントとして表示する。免疫化されたソースからのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性の抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているように、免疫化されていないレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、免疫化の非存在下で多数の非自己抗原及び自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供することもできる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－３８８（１９９２）によって記載されているように、幹細胞から再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して可変性の高いＣＤＲ３領域をコードし、それらをインビトロで再構成することによって、免疫化されていないライブラリーを合成的に生成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公開文書としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号及び米国特許公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４、２００７／０２９２９３６及び２００９／０００２３６０が挙げられる。
【0051】
前記抗体はまた、二重特異性抗体などの多重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を持つモノクローナル抗体である。多重特異性抗体を生成するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ａ．Ｃ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７－５４０（１９８３）；ＷＯ９３／０８８２９；及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５－３６５９（１９９１）を参照）、及び「ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ－ｉｎｔｏ－ｃａｖｉｔｙ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が含まれるが、これらに限定されない。また、多重特異的抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子の生成のための操作された静電的操縦効果（国際公開第２００９／０８９００４号）、２つ以上の抗体またはフラグメントの架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びＢｒｅｎｎａｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３（１９８５）を参照）、ロイシンジッパーを使用した二重特異性抗体の生成(例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７－１５５３（１９９２）を参照）、二重特異性抗体フラグメントを生成するための「二重抗体」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８－５３７４（１９９４）を参照）、及び三重特異性抗体の調製（例えば、Ｔｕｔｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９（１９９１）に記載されたもの）によって生成することができる。
【0052】
本明細書に記載のモノクローナル抗体は、「タコ抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された改変抗体も含む（例えば、米国特許第２００６／００２５５７６号を参照）。
【0053】
本明細書の抗体はまた、ＷＯ２００９／０８０２５１、ＷＯ２００９／０８０２５２、ＷＯ２００９／０８０２５３、ＷＯ２００９／０８０２５４、ＷＯ２０１０／１１２１９３、ＷＯ２０１０／１１５５８９、ＷＯ２０１０／１３６１７２、ＷＯ２０１０／１４５７９２、及びＷＯ２０１０／１４５７９３、ＷＯ２０１１／１１７３３０、ＷＯ２０１２／０２５５２５、ＷＯ２０１２／０２５５３０、ＷＯ２０１３／０２６８３５、ＷＯ２０１３／０２６８３１、ＷＯ２０１３／１６４３２５、またはＷＯ２０１３／１７４８７３に記載の多重特異性抗体も含むことができる。
【0054】
本明細書に記載のモノクローナル抗体は、例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合には、抗体変異体であってもよい。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。このような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／または挿入、及び／または置換を含む。最終構築物が抗原結合などの所望の特性を有する限り、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行って最終構築物を得ることができる。したがって、特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供され、置換変異の対象部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれ、例えば、アミノ酸置換を対象抗体に導入し、保持／改善された抗原結合性、低下した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣなど、必要な活性を有する生成物をスクリーニングすることができる。
【実施例】
【0055】
以下の実施例で使用した実験方法は、特別な要件がない限り、すべて一般的な方法である。
【0056】
以下の実施例で使用した材料、試薬などは、特に断りのない限り、すべて市販されているものを入手することができる。
【0057】
実施例１ 抗ヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体ＱＸ００８Ｎの調製
ニュージーランドウサギの免疫のために、ヒト胸腺間質リンホポエチン（ｈＴＳＬＰ）を上海近岸科技有限公司から購入し、Ｂ細胞クローニング技術を使用して抗原結合特異的抗体クローンを得、さらにヒトＴＳＬＰ阻害活性を有する、ヒトＴＳＬＰに結合するモノクローナル抗体をスクリーニングした。Ｂｉｎｄｉｎｇ ＥＬＩＳＡ及びＢｌｏｃｋｉｎｇ ＥＬＩＳＡを利用して細胞上清を検出し、ターゲットクローンを選択した。上記の免疫及びスクリーニングプロセスは、商業会社に依頼されて完成された。
ニュージーランドウサギの免疫のために、ヒト胸腺間質リンホポエチン（ｈＴＳＬＰ）を上海近岸科技有限公司から購入し、Ｂ細胞クローニング技術を使用して抗原結合特異的抗体クローンを得、さらにヒトＴＳＬＰ阻害活性を有する、ヒトＴＳＬＰに結合するモノクローナル抗体をスクリーニングした。Ｂｉｎｄｉｎｇ ＥＬＩＳＡ及びＢｌｏｃｋｉｎｇ ＥＬＩＳＡを利用して細胞上清を検出し、ターゲットクローンを選択した。上記の免疫及びスクリーニングプロセスは、商業会社に依頼されて完成された。
【0058】
組換え発現のために７のクローンを選択してシーケンシングした。測定した結果、８Ｇ２が最も優れた細胞中和活性を有することが判明した。したがって、８Ｇ２クローンをヒト化した。ＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔを使用してヒトＩｇＧ生殖系列配列（Ｇｅｒｍｌｉｎｅ）の同一性アラインメントを行い、ＩｇＧＨＶ３－６６＊０１を重鎖ＣＤＲ移植テンプレートとして選択して、８Ｇ２クローン重鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２）、及びＣＤＲ－Ｈ３（配列番号３））をＩｇＧＨＶ３－６６＊０１のフレームワーク領域に移植し、ＩＧＫＶ１－１２＊０１を選択して軽鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、８Ｇ２クローン軽鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ－Ｌ２（配列番号５）、及びＣＤＲ－Ｌ３（配列番号６））をＩＧＫＶ１－１２＊０１のフレームワーク領域に移植した。フレームワーク領域の特定の部位に対して復帰変異を行って本出願のモノクローナル抗体ＱＸ００８Ｎ可変領域を得た。最後に、ヒト化された重鎖可変領域の配列は配列番号７に示され、ヒト化された軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示される。
【0059】
上記の重鎖可変領域（配列番号７）の遺伝子及び軽鎖可変領域（配列番号８）の遺伝子は、ＰＣＲ増幅により得られた。ＨｉｎｄＩＩＩとＮｈｅＩを使用して重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、ＨｉｎｄＩＩＩとＢｓｉＷＩを使用して軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫを二重消化させ、インフュージョンリコンビナーゼを使用して、ＰＣＲ増幅遺伝子を、対応する発現プラスミドに挿入し、重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨ－８Ｇ２ＶＨ－Ｈｕ２７及び軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫ－８Ｇ２ＶＫ－Ｈｕ１４を構築した。
【0060】
ＰＣＲ増幅した可変領域遺伝子フラグメント及び二重消化されたプラスミドを核酸電気泳動で検出した結果を図１に示す。図１の結果から分かるように、抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅の結果、及び重鎖と軽鎖の発現プラスミドを二重消化させた結果、重鎖と軽鎖のプラスミドのサイズは約１００００ｂｐであり、重鎖可変領域は約４７７ｂｐであり、軽鎖可変領域は約４４７ｂｐである。
【0061】
配列が正しい重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨ－８Ｇ２ＶＨ－Ｈｕ２７（それによって発現される重鎖のアミノ酸配列は配列番号１０に示される）と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫ－８Ｇ２ＶＫ－Ｈｕ１４（それによって発現される軽鎖のアミノ酸配列は配列番号１１に示される）をＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を同時トランスフェクションした。トランスフェクションの前日、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を３×１０６細胞／ｍｌに希釈して、トランスフェクション前の継代を行った。トランスフェクション当日、細胞密度を６×１０６細胞／ｍｌに希釈し、トランスフェクションのために２５ｍｌの細胞を１２５ｍｌの振とうフラスコに入れた。トランスフェクションと発現のプロセスを図２に示す。
【0062】
トランスフェクション後６日目に、培養上清を採取し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａを使用してワンステップで精製した。精製された抗体をＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出し、ＱＸ００８Ｎ（ＨＺＤ８Ｇ２－５７）と名付けた。当該抗体をタンパク質電気泳動で検出した結果を図３に示す。タンパク質電気泳動は変性還元ゲルで検出され、図３に示される結果から分かるように、２つのバンドがあり、２つのバンドのサイズはそれぞれ約５０ｋＤａと２５ｋＤａであり、重鎖（４９．３ｋＤａ）と軽鎖（２３．６ｋＤａ）の理論上の分子量と一致している。
【0063】
実施例２ 平衡解離定数（ＫＤ）の測定
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用してＱＸ００８Ｎ（ＨＺＤ８Ｇ２－５７）とヒトＴＳＬＰの親和性を検出し、すべてのプロセスを２５℃で行った。市販のＰｒｏｔｅｉｎ Ａタンパク質チップを使用し、Ｒｍａｘが約５０ＲＵ、捕捉流量が１０μｌ／分になるように、捕捉法によって適切な量の抗体を固定した。抗原を段階的に希釈し、機器の流量を３０μｌ／分に切り替え、濃度が低いものから高いものへの順番で参照チャネルと抗体固定チャネルを流し、ネガティブ対照として緩衝液を流した。各結合と解離が完了した後、ｐＨ１．５グリシンでチップを再生した。機器に付属されているソフトウェアを使用して、Ｋｉｎｅｔｉｃｓ項目における１：１結合モデルに従ってフィッティングさせ、抗体の結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄ、及び平衡解離定数ＫＤの値を計算した。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用してＱＸ００８Ｎ（ＨＺＤ８Ｇ２－５７）とヒトＴＳＬＰの親和性を検出し、すべてのプロセスを２５℃で行った。市販のＰｒｏｔｅｉｎ Ａタンパク質チップを使用し、Ｒｍａｘが約５０ＲＵ、捕捉流量が１０μｌ／分になるように、捕捉法によって適切な量の抗体を固定した。抗原を段階的に希釈し、機器の流量を３０μｌ／分に切り替え、濃度が低いものから高いものへの順番で参照チャネルと抗体固定チャネルを流し、ネガティブ対照として緩衝液を流した。各結合と解離が完了した後、ｐＨ１．５グリシンでチップを再生した。機器に付属されているソフトウェアを使用して、Ｋｉｎｅｔｉｃｓ項目における１：１結合モデルに従ってフィッティングさせ、抗体の結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄ、及び平衡解離定数ＫＤの値を計算した。
【0064】
また、ＱＸ００８Ｎ（ＨＺＤ８Ｇ２－５７）と、すでに臨床第ＩＩＩ相に入ったヒトＴＳＬＰモノクローナル抗体、すなわちテゼペルマブとの親和性を比較した。既知の抗体に対する検出方法は、ＱＸ００８Ｎに対する検出方法と同じであった。結果を表１に示す。ここで、テゼペルマブは、特許ＵＳ２０１１０２７４６８７Ａ１によって提供されるＡ５配列に基づき、発現プラスミドを構築して、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を一時的にトランスフェクトすることによって発明者に作成された。
【0065】
【表1】
【0066】
実施例３ ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を中和するＱＸ００８Ｎ及びテゼペルマブの活性
ＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してヒトＴＳＬＰが媒介する細胞内シグナル分子ＳＴＡＴ５リン酸化に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。培地中の細胞をウェルあたり４×１０４細胞で９６ウェルに播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。プレインキュベートした抗体とヒトＴＳＬＰの混合液を細胞に添加し、ここで、ＱＸ００８Ｎの最終濃度範囲は０～５０ｎｇ／ｍｌ、テゼペルマブの最終濃度範囲は０～４００ｎｇ／ｍｌ、ＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであった。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔ検出試薬１２０μｌを各ウェルに添加し、３０分間反応させた後、各ウェルから１００μｌを白色９６ウェルプレートに採取し、発光蛍光シグナル値を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図４に示す。
ＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してヒトＴＳＬＰが媒介する細胞内シグナル分子ＳＴＡＴ５リン酸化に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。培地中の細胞をウェルあたり４×１０４細胞で９６ウェルに播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。プレインキュベートした抗体とヒトＴＳＬＰの混合液を細胞に添加し、ここで、ＱＸ００８Ｎの最終濃度範囲は０～５０ｎｇ／ｍｌ、テゼペルマブの最終濃度範囲は０～４００ｎｇ／ｍｌ、ＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであった。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔ検出試薬１２０μｌを各ウェルに添加し、３０分間反応させた後、各ウェルから１００μｌを白色９６ウェルプレートに採取し、発光蛍光シグナル値を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図４に示す。
【0067】
図４に示す結果から分かるように、ＱＸ００８Ｎは、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害でき、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害するＱＸ００８Ｎの活性のＩＣ５０は０．８３７ｎｇ／ｍｌであるに対して、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害するテゼペルマブの活性のＩＣ５０は３．８ｎｇ／ｍｌであった。
【0068】
実施例４ 天然ＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を中和するＱＸ００８Ｎ及びテゼペルマブの活性
ＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介して天然ＴＳＬＰが媒介する細胞内シグナル伝達分子ＳＴＡＴ５リン酸化に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。培地中の細胞をウェルあたり４×１０４細胞で９６ウェルに播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。プレインキュベートした抗体と天然ＴＳＬＰの混合液を細胞に添加し、ここで、ＱＸ００８Ｎの最終濃度範囲は０～５０ｎｇ／ｍｌ、テゼペルマブの最終濃度範囲は０～４００ｎｇ／ｍｌ、天然ＴＳＬＰの最終濃度は原液から６２．５倍希釈したものであった。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔ検出試薬１２０μｌを各ウェルに添加し、３０分間反応させた後、各ウェルから１００μｌを白色９６ウェルプレートに採取し、発光蛍光シグナル値を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図５に示す。
ＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介して天然ＴＳＬＰが媒介する細胞内シグナル伝達分子ＳＴＡＴ５リン酸化に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。培地中の細胞をウェルあたり４×１０４細胞で９６ウェルに播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。プレインキュベートした抗体と天然ＴＳＬＰの混合液を細胞に添加し、ここで、ＱＸ００８Ｎの最終濃度範囲は０～５０ｎｇ／ｍｌ、テゼペルマブの最終濃度範囲は０～４００ｎｇ／ｍｌ、天然ＴＳＬＰの最終濃度は原液から６２．５倍希釈したものであった。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔ検出試薬１２０μｌを各ウェルに添加し、３０分間反応させた後、各ウェルから１００μｌを白色９６ウェルプレートに採取し、発光蛍光シグナル値を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図５に示す。
【0069】
図５に示す結果から分かるように、ＱＸ００８Ｎは、天然ＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害でき、天然ＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害するＱＸ００８Ｎの活性のＩＣ５０は０．４６２ｎｇ／ｍｌであるに対して、天然ＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害するテゼペルマブの活性のＩＣ５０は１．４５ｎｇ／ｍｌであった。
【0070】
実施例５ カニクイザルＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を中和するＱＸ００８Ｎ及びテゼペルマブの活性
ＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してカニクイザルＴＳＬＰが媒介する細胞内シグナル伝達分子ＳＴＡＴ５リン酸化に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。培地中の細胞をウェルあたり４×１０４細胞で９６ウェルに播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。プレインキュベートした抗体とカニクイザルＴＳＬＰの混合液を細胞に添加し、ここで、ＱＸ００８Ｎの最終濃度範囲は０～５０ｎｇ／ｍｌ、テゼペルマブの最終濃度範囲は０～４００ｎｇ／ｍｌ、カニクイザルＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであった。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔ検出試薬１２０μｌを各ウェルに添加し、３０分間反応させた後、各ウェルから１００μｌを白色９６ウェルプレートに採取し、発光蛍光シグナル値を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図６に示す。
ＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してカニクイザルＴＳＬＰが媒介する細胞内シグナル伝達分子ＳＴＡＴ５リン酸化に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。培地中の細胞をウェルあたり４×１０４細胞で９６ウェルに播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。プレインキュベートした抗体とカニクイザルＴＳＬＰの混合液を細胞に添加し、ここで、ＱＸ００８Ｎの最終濃度範囲は０～５０ｎｇ／ｍｌ、テゼペルマブの最終濃度範囲は０～４００ｎｇ／ｍｌ、カニクイザルＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであった。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、ＯＮＥ－Ｇｌｏ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔ検出試薬１２０μｌを各ウェルに添加し、３０分間反応させた後、各ウェルから１００μｌを白色９６ウェルプレートに採取し、発光蛍光シグナル値を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図６に示す。
【0071】
図６に示す結果から分かるように、ＱＸ００８Ｎは、カニクイザルＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害でき、カニクイザルＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害するＱＸ００８Ｎの活性のＩＣ５０は０．８８９ｎｇ／ｍｌであるに対して、カニクイザルＴＳＬＰによって誘導されるＳＷ７５６－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害するテゼペルマブの活性のＩＣ５０は１．８８ｎｇ／ｍｌであった。
【0072】
実施例６ ヒトＴＳＬＰによって誘導されるヒト全血からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を中和するＱＸ００８Ｎ及びテゼペルマブの活性
ヒト全血を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してヒトＴＳＬＰが誘導するＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。全血を１００μl／ウェルで９６ウェルプレートに加え、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一時的に保存し、プレインキュベートした抗体とヒトＴＳＬＰの混合液を全血に添加し、ここで、抗体の最終濃度範囲は０～１０μｇ／ｍｌ、ヒトＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであり、ＩＬ－３３は最終濃度０．５ｎｇ／ｍｌで添加した。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で４８時間培養した。細胞培養上清を回収し、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて上清中のＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）の発現を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図７に示す。
ヒト全血を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してヒトＴＳＬＰが誘導するＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。全血を１００μl／ウェルで９６ウェルプレートに加え、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一時的に保存し、プレインキュベートした抗体とヒトＴＳＬＰの混合液を全血に添加し、ここで、抗体の最終濃度範囲は０～１０μｇ／ｍｌ、ヒトＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであり、ＩＬ－３３は最終濃度０．５ｎｇ／ｍｌで添加した。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で４８時間培養した。細胞培養上清を回収し、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて上清中のＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）の発現を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図７に示す。
【0073】
図７に示す結果から分かるように、ＱＸ００８Ｎは、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるヒト全血からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を阻害でき、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるヒト全血からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を阻害するＱＸ００８Ｎの活性のＩＣ５０は０．８３９ｎｇ／ｍｌであるに対して、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるヒト全血からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を阻害するテゼペルマブの活性のＩＣ５０は２３．９ｎｇ／ｍｌであった。
【0074】
実施例７ ヒトＴＳＬＰによって誘導されるヒトＰＢＭＣ細胞からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を中和するＱＸ００８Ｎ及びテゼペルマブの活性
ヒトＰＢＭＣ細胞を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してヒトＴＳＬＰが誘導するＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。密度勾配遠心分離によりＰＢＭＣを分離し、ＰＢＭＣを３０００００個／ウェルで９６ウェルプレートに加え、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一時的に保存し、プレインキュベートした抗体とヒトＴＳＬＰの混合液をＰＢＭＣに添加し、ここで、抗体の最終濃度範囲は０～１０μｇ／ｍｌ、ヒトＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであり、ＩＬ－３３は最終濃度０．５ｎｇ／ｍｌで添加した。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で４８時間培養した。細胞培養上清を回収し、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて上清中のＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）の発現を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図８に示す。
ヒトＰＢＭＣ細胞を使用して、ＴＳＬＰＲ－ＩＬ－７Ｒを介してヒトＴＳＬＰが誘導するＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出に拮抗するＱＸ００８Ｎの活性を測定した。密度勾配遠心分離によりＰＢＭＣを分離し、ＰＢＭＣを３０００００個／ウェルで９６ウェルプレートに加え、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で一時的に保存し、プレインキュベートした抗体とヒトＴＳＬＰの混合液をＰＢＭＣに添加し、ここで、抗体の最終濃度範囲は０～１０μｇ／ｍｌ、ヒトＴＳＬＰの最終濃度は０．５ｎｇ／ｍｌであり、ＩＬ－３３は最終濃度０．５ｎｇ／ｍｌで添加した。次いで、３７℃及び５％ＣＯ２の条件下で４８時間培養した。細胞培養上清を回収し、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて上清中のＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）の発現を検出して用量反応曲線を描き、抗体の拮抗活性を解析した。その用量反応曲線を図８に示す。
【0075】
図８に示す結果から分かるように、ＱＸ００８Ｎは、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＰＢＭＣ細胞からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を阻害でき、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＰＢＭＣ細胞からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を阻害するＱＸ００８Ｎの活性のＩＣ５０は７７．１ｎｇ／ｍｌであるに対して、ヒトＴＳＬＰによって誘導されるＰＢＭＣ細胞からのＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）放出を阻害するテゼペルマブの活性のＩＣ５０は２１６ｎｇ／ｍｌであった。
【0076】
以上、本出願の実施形態について説明したが、本出願は上記の特定の実施形態及び応用分野に限定されるものではなく、上記の特定の実施形態は、限定的なものではなく、単なる例示及び教示に過ぎない。本明細書の教示の下で、本出願の特許請求の範囲の保護範囲から逸脱することなく、当業者は多くの形態を作成することもでき、それらはすべて本出願の保護に含まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】
【国際調査報告】