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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-05
(54)【発明の名称】抗ＣＤ３ヒト化抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240829BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240829BHJP
C07K 14/705 20060101ALI20240829BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240829BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20240829BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240829BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240829BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240829BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240829BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240829BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240829BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240829BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240829BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240829BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240829BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20240829BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240829BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240829BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20240829BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K16/46
C07K14/705
C07K19/00
C12N5/078
C12N5/10
C12N15/12
C12N15/13
C12N15/62 Z
C12N15/63 P
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
A61K39/395 N
A61K47/68
A61K39/395 L
A61K35/17
A61P35/00
G01N33/53 D
G01N33/531 A
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024514034
(86)(22)【出願日】2021-09-14
(85)【翻訳文提出日】2024-04-23
(86)【国際出願番号】 CN2021118264
(87)【国際公開番号】W WO2023029089
(87)【国際公開日】2023-03-09
(31)【優先権主張番号】202111028884.8
(32)【優先日】2021-09-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202111028883.3
(32)【優先日】2021-09-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523387747
【氏名又は名称】蘇州近岸蛋白質科技股▲ふん▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＮＯＶＯＰＲＯＴＥＩＮ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】Ｆｌｏｏｒ ３＆４，Ｎｏ．２２８ Ｙｕｎｃｈｕａｎｇ Ｒｏａｄ，Ｗｕｊｉａｎｇ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｚｏｎｅ，Ｓｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２１５２００，Ｃｈｉｎａ
(71)【出願人】
【識別番号】523387758
【氏名又は名称】上海近岸科技有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＮＯＶＯＰＲＯＴＥＩＮ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ（ＳＨＡＮＧＨＡＩ）ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】Ｆｌｏｏｒ ３，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １，Ｎｏ．１１ Ｊｉａｌｉｌｕｅ Ｒｏａｄ，Ｃｈｉｎａ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ，Ｐｕｄｏｎｇ Ｎｅｗ Ａｒｅａ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２０３，Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110000291
【氏名又は名称】弁理士法人コスモス国際特許商標事務所
(72)【発明者】
【氏名】朱 化星
(72)【発明者】
【氏名】宋 作偉
(72)【発明者】
【氏名】李 徳彬
(72)【発明者】
【氏名】于 福涛
(72)【発明者】
【氏名】秦 照峰
(72)【発明者】
【氏名】房 継旋
(72)【発明者】
【氏名】王 米
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA91Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4B065CA46
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF68
4C085AA14
4C085AA21
4C085AA25
4C085AA27
4C085BB11
4C085BB31
4C085DD62
4C085EE01
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB37
4C087BB65
4C087CA12
4C087NA13
4C087NA14
4C087ZB26
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、新規な抗ＣＤ３ヒト化抗体を提供する。前記抗ＣＤ３ヒト化抗体は特異的にヒトおよびサルＣＤ３タンパク質に結合することができ、良い生物活性を有する。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
本発明の第一の側面では、抗ＣＤ３ヒト化抗体であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有することを特徴とする抗体：（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１；
ここで、上記アミノ酸配列のうちの任意の一つのアミノ酸配列は、さらに、任意に少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経ており、ＣＤ３結合親和力を保持する誘導配列を含む。
【請求項2】
前記の抗体は重鎖および軽鎖を含み、中では、前記の抗体の重鎖は前記の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよびＶＨ－ＣＤＲを連結するための重鎖フレームワーク領域を、そして前記の抗体の軽鎖は前記の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲおよびＶＬ－ＣＤＲを連結するための軽鎖フレームワーク領域を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
前記の抗体は一本鎖抗体であることを特徴とする請求項１に記載の抗体。
【請求項4】
二重特異性抗体であって、第一抗原結合ドメインＤ１、および
第二抗原結合ドメインＤ２を含み、
ここで、Ｄ１は特異的に標的分子のＣＤ３タンパク質に結合し、Ｄ２は特異的に標的分子のＣＤ１９タンパク質に結合し、
ここで、前記Ｄ１は特異的にＣＤ３タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片で、
前記Ｄ２は特異的にＣＤ１９タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片で、
ここで、前記Ｄ１は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号 ６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１；
ここで、前記抗原結合断片の構造は、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ） Ｆｖ断片、（ｖ） ｓｃＦｖ分子、または（ｖｉ） ｄＡｂ断片からなる群から選ばれる
ことを特徴とする抗体。
【請求項5】
以下のものを有することを特徴とする組み換えタンパク質：（ｉ）請求項１に記載の抗体、または請求項４に記載の二重特異性抗体；および
（ｉｉ）任意の発現および／または精製を補助するタグ配列。
【請求項6】
ＣＡＲ構築物であって、前記のＣＡＲ構築物の抗原結合領域のｓｃＦｖ領域断片は特異的にＣＤ３に結合する結合領域で、かつ前記ｓｃＦｖ断片は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有することを特徴とするＣＡＲ構築物：（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
【請求項7】
外来の請求項６に記載のＣＡＲ構築物を発現することを特徴とする組み換え免疫細胞。
【請求項8】
以下のものを含有することを特徴とする抗体薬物複合体：（ａ）請求項１に記載の抗体、請求項４に記載の二重特異的抗体または請求項５に記載の組み換えタンパク質、あるいはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる、抗体部分；ならびに
（ｂ） 検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる、前記抗体部分と複合する複合部分。
【請求項9】
活性成分の使用であって、前記活性成分は請求項１に記載の抗体、請求項４に記載の二重特異性抗体、または請求項５に記載の組み換えタンパク質、請求項６に記載のＣＡＲ構築物、請求項７に記載の免疫細胞、請求項８に記載の抗体薬物複合体、あるいはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ、前記活性成分は、以下のことに用いられることを特徴とする使用：（ａ）検出試薬またはキットの製造、
（ｂ）ＣＤ３関連疾患を予防および／または治療する薬物または製剤の製造、ならびに／あるいは
（ｃ）ＣＤ３関連癌または腫瘍を予防および／または治療する薬物または製剤の製造。
【請求項10】
以下のものを含有することを特徴とする薬物組成物：（ｉ）請求項１に記載の抗体、請求項４に記載の抗体、または請求項５に記載の組み換えタンパク質、請求項６に記載のＣＡＲ構築物、請求項７に記載の免疫細胞、請求項８に記載の抗体薬物複合体、あるいはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる、活性成分；ならびに
（ｉｉ） 薬学的に許容される担体。
【請求項11】
以下の群から選ばれるポリペプチドをコードのするポリヌクレオチド：（１） 請求項１に記載の抗体；あるいは
（２） 請求項４に記載の二重特異性抗体；
（３） 請求項５に記載の組み換えタンパク質；
（４） 請求項６に記載のＣＡＲ構築物。
【請求項12】
請求項１１に記載のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする、ベクター。
【請求項13】
遺伝子工学化された宿主細胞であって、前記の宿主細胞は請求項１２に記載のベクターを含むか、あるいはゲノムに請求項１１に記載のポリヌクレオチドが組み込まれていることを特徴とする宿主細胞。
【請求項14】
体外で非診断的にサンプルにおけるＣＤ３タンパク質を検出する方法であって、以下の工程を含むことを特徴とする方法：（１） 体外において、前記サンプルを請求項１に記載の抗体と接触させる；
（２） 抗原－抗体複合体が形成したか検出し、ここで、複合体が形成したというのはサンプルにＣＤ３タンパク質が存在することを意味する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生物医薬の分野に関し、具体的に、抗ＣＤ３ヒト化抗体に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｔ細胞の活性化は免疫応答の刺激に非常に重要である。Ｔ細胞は免疫特異性を示し、大半の細胞免疫応答をガイドする。Ｔ細胞は抗体を分泌しないが、Ｂ細胞の抗体分泌に必要である。
【0003】
ＣＤ３はＴ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）と結合する、Ｔ細胞で発現される、ホモ二量体またはヘテロ二量体の抗原で、そしてＴ細胞の活性化に必要である。機能的ＣＤ３は４種類の異なる鎖（ε、ζ、δおよびγ）のうちの２種類からなる二量体である。ＣＤ３二量体の配列はγ／ε、δ／εおよびζ／ζを含む。ＣＤ３の抗体がＴ細胞においてＣＤ３を集めることで、ペプチドによって担持されるＭＨＣ分子のようにＴＣＲに関与する様態でＴ細胞を活性化させる。そのため、抗ＣＤ３抗体はＴ細胞の活性化作用に関する治療目的がある。また、ＣＤ３および標的抗原と結合できる二重特異性抗体は、Ｔ細胞の免疫反応を標的抗原を発現する細胞の組織および細胞にターゲッティングさせる治療用途において提案されている。
【0004】
現在、癌治療の臨床試験段階にある既存のＣＤ３に結合する二重特異性抗体は短い半減期および／または不確定な効果によって制限されている。特に有利な性質を有する抗ＣＤ３抗体を得るために、多くの試みが行われたが、今までのこれらの試みの中では、成功したものは限られている。
【0005】
そのため、本分野では、新規な抗ＣＤ３ヒト化抗体の開発が切望されている。
【発明の概要】
【0006】
本発明の目的は、新規な抗ＣＤ３ヒト化抗体を提供することにある。
【0007】
本発明の第一の側面では、抗ＣＤ３ヒト化抗体であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有するものを提供する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
【0008】
もう一つの好適な例において、上記アミノ酸配列のうちの任意の１つのアミノ酸配列は、さらに、任意に少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経ており、かつＣＤ３結合親和力を保持する誘導配列を含む。
【0009】
もう一つの好適な例において、前記付加、欠失、修飾および／または置換のアミノ酸の数は１－５個（たとえば１－３個、好ましくは１－２個、より好ましくは１個）である。
【0010】
もう一つの好適な例において、前記の少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経ており、かつＣＤ３に結合する親和力を保持する誘導配列は、相同性または配列同一性が少なくとも９６％のアミノ酸配列である。もう一つの好適な例において、前記の抗体は重鎖および軽鎖を含み、中では、前記の抗体の重鎖は前記の３つの重鎖ＣＤＲおよび重鎖に連結するための重鎖フレームワーク領域を、そして前記の抗体の軽鎖は前記の３つの軽鎖ＣＤＲおよび軽鎖に連結するための軽鎖フレームワーク領域を含む。
【0011】
もう一つの好適な例において、前記重鎖可変領域の配列は配列番号７で示される。
【0012】
もう一つの好適な例において、前記の抗体の重鎖は、さらに、重鎖定常領域を含む。
【0013】
もう一つの好適な例において、前記の重鎖定常領域はヒト由来のもの、マウス由来のものまたはウサギ由来のもので、好ましくはヒト由来のものである。
【0014】
もう一つの好適な例において、前記軽鎖可変領域の配列は配列番号８で示される。
【0015】
もう一つの好適な例において、前記抗体の軽鎖は、さらに、軽鎖定常領域を含む。
【0016】
もう一つの好適な例において、前記の軽鎖定常領域はヒト由来のもの、マウス由来のものまたはウサギ由来のもので、好ましくはヒト由来のものである。
【0017】
もう一つの好適な例において、前記の抗体とヒトＣＤ３εポリペプチドの結合のＫｄは≦２５０ｎＭ、好ましくは≦１００ｎＭ、好ましくは≦１５ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、より好ましくは≦５ｎＭである。
【0018】
もう一つの好適な例において、前記の抗体は特異的にＣＤ３に結合する。
【0019】
もう一つの好適な例において、前記のＣＤ３はヒトまたはカニクイザル由来のものである。
【0020】
もう一つの好適な例において、前記のＣＤ３はＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ３δまたはＣＤ３γで、好ましくは、前記のＣＤ３はＣＤ３εまたはＣＤ３γである。
【0021】
もう一つの好適な例において、前記の抗体は特異的にヒトＣＤ３εまたはカニクイザルＣＤ３εに結合するか、前記の抗体は特異的にヒトＣＤ３γまたはカニクイザルＣＤ３γに結合する。
【0022】
もう一つの好適な例において、前記の抗体は二本鎖抗体、または一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。
【0023】
もう一つの好適な例において、前記の抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む一本鎖抗体であって、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
【0024】
もう一つの好適な例において、前記の一本鎖抗体は順に軽鎖可変領域、リンカーおよび重鎖可変領域を含むか、あるいは順に重鎖可変領域、リンカーおよび軽鎖可変領域を含む。
【0025】
もう一つの好適な例において、前記のリンカーは（Ｇ４Ｓ）ｎで、ここで、ｎは１－５の整数で、好ましくはリンカーは（Ｇ４Ｓ）３である。
【0026】
もう一つの好適な例において、前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号３２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号３３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する。
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する。
【0027】
もう一つの好適な例において、前記の一本鎖抗体の配列は以下の群から選ばれる：
配列番号３４、配列番号９、配列番号２２、配列番号１９または配列番号２４。
配列番号３４、配列番号９、配列番号２２、配列番号１９または配列番号２４。
【0028】
もう一つの好適な例において、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３２、７、１２、１７、２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列相同性または配列同一性を有する。
【0029】
もう一つの好適な例において、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３３、８、１３、１８、２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列相同性または配列同一性を有する。
【0030】
もう一つの好適な例において、前記の抗体はモノクローナル抗体である。
【0031】
もう一つの好適な例において、前記の抗体は単特異性、二重特異性、または三重特異性抗体である。
【0032】
もう一つの好適な例において、前記の二重特異性抗体は以下のものを含む：
（１）本発明の第一の側面に記載の抗ＣＤ３抗体；
（２）ほかの標的に結合する抗体。
（１）本発明の第一の側面に記載の抗ＣＤ３抗体；
（２）ほかの標的に結合する抗体。
【0033】
もう一つの好適な例において、前記ほかの標的は、ＢＣＭＡ、ＥＧＦＲ、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ３、ＨＥＲ２、ＰＭＳＡ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４７、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤＬ１からなる群から選ばれる。
【0034】
もう一つの好適な例において、前記二重特異性抗体は、
第一抗原結合ドメイン（Ｄ１）、および
第二抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含み、
ここで、Ｄ１は特異的に標的分子のＣＤ３タンパク質に結合し、
Ｄ２は特異的に標的分子のＣＤ１９タンパク質に結合し、
ここで、前記Ｄ１は特異的にＣＤ３タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片で、
前記Ｄ２は特異的にＣＤ１９タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片で、
ここで、前記Ｄ１は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１；
ここで、前記抗原結合断片の構造は、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ） Ｆｖ断片、（ｖ） ｓｃＦｖ分子、または（ｖｉ） ｄＡｂ断片からなる群から選ばれる。
第一抗原結合ドメイン（Ｄ１）、および
第二抗原結合ドメイン（Ｄ２）を含み、
ここで、Ｄ１は特異的に標的分子のＣＤ３タンパク質に結合し、
Ｄ２は特異的に標的分子のＣＤ１９タンパク質に結合し、
ここで、前記Ｄ１は特異的にＣＤ３タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片で、
前記Ｄ２は特異的にＣＤ１９タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片で、
ここで、前記Ｄ１は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１；
ここで、前記抗原結合断片の構造は、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ） Ｆｖ断片、（ｖ） ｓｃＦｖ分子、または（ｖｉ） ｄＡｂ断片からなる群から選ばれる。
【0035】
もう一つの好適な例において、前記Ｄ１および／または前記Ｄ２は一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。
【0036】
もう一つの好適な例において、前記Ｄ１と前記Ｄ２はリンカーを介して連結しており、好ましくは、前記リンカーは柔軟性リンカーである。
【0037】
もう一つの好適な例において、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎで、ここで、ｎは１－５の整数で、好ましくはリンカーはＧＧＧＧＳである。
【0038】
もう一つの好適な例において、前記Ｄ１は抗ＣＤ３一本鎖抗体で、そしてＤ２は抗ＣＤ１９一本鎖抗体である。
【0039】
もう一つの好適な例において、前記の抗ＣＤ３一本鎖抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域は配列番号３２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号３３で示されるアミノ酸配列を含有し；
前記の重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する。
前記の重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する。
【0040】
もう一つの好適な例において、前記の二重特異性抗体の配列は配列番号３７で示される。
【0041】
本発明の第二の側面では、以下のものを有する組み換えタンパク質を提供する：
（ｉ）本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体；ならびに
（ｉｉ）任意の発現および／または精製を補助するタグ配列。
（ｉ）本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体；ならびに
（ｉｉ）任意の発現および／または精製を補助するタグ配列。
【0042】
もう一つの好適な例において、前記のタグ配列は６Ｈｉｓタグを含む。
【0043】
もう一つの好適な例において、前記の組み換えタンパク質（またはポリペプチド）は融合タンパク質を含む。
【0044】
もう一つの好適な例において、前記の組み換えタンパク質は、単量体、二量体、または多量体である。
【0045】
もう一つの好適な例において、前記の組み換えタンパク質は単特異性、二重特異性、または三重特異性組み換えタンパク質である。
【0046】
もう一つの好適な例において、前記の組み換えタンパク質は、さらに、前記エレメント（ｉ）と融合した別の融合エレメント（または融合ポリペプチド断片）を含む。
【0047】
もう一つの好適な例において、前記組み換えタンパク質は、
（ｉ）以下の群から選ばれる抗体：
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号３２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号３３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する；
ならびに
（ｉｉ） 任意の発現および／または精製を補助するタグ配列。
（ｉ）以下の群から選ばれる抗体：
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号３２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号３３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する；
ならびに
（ｉｉ） 任意の発現および／または精製を補助するタグ配列。
【0048】
本発明の第三の側面では、ＣＡＲ構築物であって、前記のＣＡＲ構築物の抗原結合領域のｓｃＦｖ領域断片は特異的にＣＤ３に結合する結合領域で、かつ前記ｓｃＦｖ断片は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
【0049】
本発明の第四の側面では、組み換えの免疫細胞であって、外来の本発明の第三の側面に記載のＣＡＲ構築物を発現する免疫細胞を提供する。
【0050】
もう一つの好適な例において、前記の免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞からなる群から選ばれる。
【0051】
もう一つの好適な例において、前記の免疫細胞はヒトまたはヒト以外の哺乳動物（たとえばマウス）由来のものである。
【0052】
本発明の第五の側面では、以下のものを含む抗体薬物複合体を提供する：
（ａ）本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異的抗体、あるいは本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質、あるいはこれらの組み合わせ；ならびに
（ｂ） 検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる、前記抗体部分とカップリングするカップリング部分。
（ａ）本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異的抗体、あるいは本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質、あるいはこれらの組み合わせ；ならびに
（ｂ） 検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる、前記抗体部分とカップリングするカップリング部分。
【0053】
もう一つの好適な例において、前記の抗体部分と前記のカップリング部分は化学結合またはリンカーを介してカップリングしている。
【0054】
本発明の第六の側面では、活性成分の使用であって、前記活性成分は本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体、あるいは本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質、本発明の第三の側面に記載のＣＡＲ構築物、本発明の第四の側面に記載の免疫細胞、本発明の第五の側面に記載の抗体薬物複合体、あるいはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ、以下のことに用いられる使用を提供する：
（ａ）検出試薬またはキットの製造；
（ｂ）ＣＤ３関連疾患を予防および／または治療する薬物または製剤の製造；ならびに／あるいは
（ｃ）ＣＤ３関連癌または腫瘍を予防および／または治療する薬物または製剤の製造。
（ａ）検出試薬またはキットの製造；
（ｂ）ＣＤ３関連疾患を予防および／または治療する薬物または製剤の製造；ならびに／あるいは
（ｃ）ＣＤ３関連癌または腫瘍を予防および／または治療する薬物または製剤の製造。
【0055】
もう一つの好適な例において、前記癌または腫瘍は、肺癌、メラノーマ、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、睾丸腺癌、食道癌、胃腸癌、肝臓癌、リンパ腫、骨髄腫、白血病からなる群から選ばれる。
【0056】
本発明の第七の側面では、以下のものを含有する薬物組成物を提供する：
（ｉ） 本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体、あるいは本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質、本発明の第三の側面に記載のＣＡＲ構築物、本発明の第四の側面に記載の免疫細胞、本発明の第五の側面に記載の抗体薬物複合体、あるいはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる活性成分；ならびに
（ｉｉ） 薬学的に許容される担体。
（ｉ） 本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体、あるいは本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質、本発明の第三の側面に記載のＣＡＲ構築物、本発明の第四の側面に記載の免疫細胞、本発明の第五の側面に記載の抗体薬物複合体、あるいはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる活性成分；ならびに
（ｉｉ） 薬学的に許容される担体。
【0057】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は液体製剤である。
【0058】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は注射剤である。
【0059】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は腫瘍を治療する薬物の製造に用いられ、前記の腫瘍は、肺癌、メラノーマ、結腸癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、睾丸腺癌、食道癌、胃腸癌、肝臓癌、リンパ腫、骨髄腫、白血病からなる群から選ばれる。
【0060】
本発明の第八の側面では、以下の群から選ばれるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：
（１） 本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体；あるいは
（２） 本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質；
（３） 本発明の第三の側面に記載のＣＡＲ構築物。
（１） 本発明の第一の側面に記載の抗体またはその二重特異性抗体；あるいは
（２） 本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質；
（３） 本発明の第三の側面に記載のＣＡＲ構築物。
【0061】
本発明の第九の側面では、本発明の第八の側面に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【0062】
もう一つの好適な例において、前記のベクターは、細菌プラスミド、ファージ、酵母プラスミド、植物細胞ウイルス、哺乳動物細胞ウイルス、たとえばアデノウイルス、レトロウイルス、またはほかのベクターを含む。
【0063】
本発明の第十の側面では、遺伝子工学化された宿主細胞であって、本発明の第九の側面に記載のベクターを含むか、あるいはゲノムに本発明の第八の側面に記載のポリヌクレオチドが組み込まれた宿主細胞を提供する。
【0064】
もう一つの好適な例において、前記の宿主細胞は哺乳動物細胞、または原核細胞である。
【0065】
もう一つの好適な例において、前記の哺乳動物細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。
【0066】
もう一つの好適な例において、前記の原核細胞は大腸菌である。
【0067】
本発明の第十一の側面では、体外で非診断的にサンプルにおけるＣＤ３タンパク質を検出する方法であって、以下の工程を含む方法を提供する：
（１） 体外において、前記サンプルを本発明の第一の側面に記載の抗体と接触させる；
（２） 抗原－抗体複合体が形成したか検出し、ここで、複合体が形成したというのはサンプルにＣＤ３タンパク質が存在することを意味する。
（１） 体外において、前記サンプルを本発明の第一の側面に記載の抗体と接触させる；
（２） 抗原－抗体複合体が形成したか検出し、ここで、複合体が形成したというのはサンプルにＣＤ３タンパク質が存在することを意味する。
【0068】
本発明の第十二の側面では、下地シート（支持プレート）と、本発明の第一の側面に記載の抗体または本発明の第九の側面に記載の抗体薬物複合体を含有する測定バーとを含む検出プレートを提供する。
【0069】
本発明の第十三の側面では、キットであって、
（１） 本発明の第一の側面に記載の抗体を含有する第一の容器、および／または
（２） 本発明の第一の側面に記載の抗体に対する二次抗体を含有する第二の容器を含むか、
あるいは、本発明の第十二の側面に記載の検出プレートを含有するキットを提供する。
（１） 本発明の第一の側面に記載の抗体を含有する第一の容器、および／または
（２） 本発明の第一の側面に記載の抗体に対する二次抗体を含有する第二の容器を含むか、
あるいは、本発明の第十二の側面に記載の検出プレートを含有するキットを提供する。
【0070】
本発明の第十四の側面では、組み換えポリペプチドの製造方法であって、以下の工程を含む方法を提供する：
（ａ） 発現に適切な条件において、本発明の第十の側面に記載の宿主細胞を培養する；
（ｂ） 培養物から、本発明の第一の側面に記載の抗体または本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質である、組み換えポリペプチドを単離する。
（ａ） 発現に適切な条件において、本発明の第十の側面に記載の宿主細胞を培養する；
（ｂ） 培養物から、本発明の第一の側面に記載の抗体または本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質である、組み換えポリペプチドを単離する。
【0071】
本発明の第十五の側面では、ＣＤ３分子に関連する疾患を治療する方法であって、抑制または治療が必要な対象に本発明の第一の側面に記載の抗体または本発明の第二の側面に記載の組み換えタンパク質または本発明の第七の側面に記載の薬物組成物を施用する工程を含む方法を提供する。
【0072】
もう一つの好適な例において、前記のＣＤ３分子に関連する疾患は腫瘍または臓器移植に拮抗する免疫拒絶反応を含む。
【0073】
もう一つの好適な例において、前記の対象は哺乳動物（ヒトを含む）である。
【0074】
もちろん、本発明の範囲内において、本発明の上記の各技術特徴および下記（たとえば実施例）の具体的に記述された各技術特徴は互いに組合せ、新しい、または好適な技術方案を構成できることが理解される。紙数に限りがあるため、ここで逐一説明しない。
【図面の簡単な説明】
【0075】
【図1】ＥＬＩＳＡによって測定されたＣＤ３抗体と組み換えヒトＣＤ３の親和の図を示す。
【図2】ＥＬＩＳＡによって測定されたＣＤ３抗体と組み換えサルＣＤ３の親和の図を示す。
【図3】ｆｏｒｔｅｂｉｏによって検出されたＣＤ３全長抗体とヒトＣＤ３Ｅタンパク質の親和の図を示すが、ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥはそれぞれＣＤ３全長抗体ＣＱ５３、ＣＱ５２、ＣＱ５１、ＣＱ５０、ＣＱ５４とヒトＣＤ３Ｅタンパク質の親和の図である。
【図4】ＥＬＩＳＡによって検出されたＣＤ３全長抗体とサルＣＤ３Ｅタンパク質の親和の図を示すが、ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥはそれぞれＣＤ３全長抗体ＣＱ５３、ＣＱ５２、ＣＱ５１、ＣＱ５０、ＣＱ５４とサルＣＤ３Ｅタンパク質の親和の図である。
【図5】ＣＤ３全長抗体とＪｕｒｋａｔ細胞の親和の図を示すが、ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥはそれぞれＣＤ３全長抗体ＣＱ５３、ＣＱ５２、ＣＱ５１、ＣＱ５０、ＣＱ５４とＪｕｒｋａｔ細胞の親和の図である。
【図6】ＣＤ３全長抗体とＯＫＴ３の競争ＥＬＩＳＡ検出の図を示すが、ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥはそれぞれＣＤ３全長抗体ＣＱ５３、ＣＱ５２、ＣＱ５１、ＣＱ５０、ＣＱ５４とＯＫＴ３の競争ＥＬＩＳＡ検出の図である。
【図7】ＣＤ３抗体によって誘導されたＣＤ６９発現の変化の図を示すが、ここで、ＮＣは陰性対照である。
【図8】ＣＤ３抗体によって誘導されたＰＢＭＣ活性化によるＩＦＮγ分泌の図を示すが、ここで、ＮＣは陰性対照である。
【図9】ｆｏｒｔｅｂｉｏによって検出された二重特異性抗体とヒトＣＤ３Ｅ（Ａ）およびＣＤ１９（Ｂ）タンパク質の親和の図を示す。
【図10】ＥＬＩＳＡによって測定された二重特異性抗体（ＳＣ３０ＡおよびＢＬＭＯＡ）とサルＣＤ３Ｅタンパク質の親和の図を示す。
【図11】ＣＤ３抗体によって誘導されたＣＤ６９発現の変化の図を示すが、ここで、ＮＣは陰性対照である。
【図12】フローサイトメトリーによって検出された二重特異性抗体（ＳＣ３０ＡおよびＢＬＭＯＡ）の腫瘍細胞に対する殺傷効率の図を示す。
【図13】ウェルの蛍光スキャンによって表されたＲａｊｉ－ＧＦＰの残留の図を示す。
【図14】二重特異性抗体のＰＢＭＣ腫瘍細胞に対する直接殺傷効率の図を示す。
【図15】ＰＢＭＣ増殖実験の図を示す。
【図16】レポーター遺伝子によって検出されたＳＣ３０Ａシグナルの標的細胞に対する依存を示すが、ＲＬＵは相対光単位である。
【図17】レポーター遺伝子によって検出されたＳＣ３０Ａの活性の図を示すが、ＲＬＵは相対光単位である。
【発明を実施するための形態】
【0076】
本発明者は幅広く深く研究したところ、意外に、高い生物活性のＣＤ３抗体を得た。実験では、本発明のＣＤ３抗体はヒトおよびサルＣＤ３に特異的に結合することができることが示された。本発明のＣＤ３抗体は、さらに、標的抗原ＣＤ１９に結合する抗体またはその結合断片と二重特異性抗体を構築し、より高い腫瘍殺傷活性を持たせ、そしてＴ細胞の免疫反応を標的抗原を発現する細胞の組織および細胞にターゲッティングさせる治療用途を実現させることができる。また、本発明の二重特異性抗体の活性化は標的細胞に依存し、安全性がある。これに基づき、本発明を完成させた。
【0077】
用語
本明細書で用いられるように、用語「投与」および「処理」とは外因性薬物、治療剤、診断剤または組成物を動物、ヒト、被験者、細胞、組織、器官または生物流体に応用することである。「投与」および「処理」とは治療、薬物動態学、診断、研究および実験方法でもよい。細胞の処理は、試薬と細胞の接触、および試薬と流体の接触、流体と細胞の接触を含む。また、「投与」および「処理」とは、試薬、診断、結合組成物または別の細胞を通してインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）およびエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）で処理することも意味する。「処理」は、ヒト、動物または研究の被験者に応用される場合、治療処理、予防または予防性処理、研究および診断を指し、ＣＤ３抗体とヒトまたは動物、被験者、細胞、組織、生理的コンパートメントまたは生理流体の接触を含む。
本明細書で用いられるように、用語「投与」および「処理」とは外因性薬物、治療剤、診断剤または組成物を動物、ヒト、被験者、細胞、組織、器官または生物流体に応用することである。「投与」および「処理」とは治療、薬物動態学、診断、研究および実験方法でもよい。細胞の処理は、試薬と細胞の接触、および試薬と流体の接触、流体と細胞の接触を含む。また、「投与」および「処理」とは、試薬、診断、結合組成物または別の細胞を通してインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）およびエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）で処理することも意味する。「処理」は、ヒト、動物または研究の被験者に応用される場合、治療処理、予防または予防性処理、研究および診断を指し、ＣＤ３抗体とヒトまたは動物、被験者、細胞、組織、生理的コンパートメントまたは生理流体の接触を含む。
【0078】
本明細書で用いられるように、用語「治療」とは患者に本発明のＣＤ３抗体およびその組成物の任意の一つを含む内用または外用の治療剤を投与することで、前記患者は一つまたは複数の疾患症状を有し、既知の前記治療剤はこれらの症状に治療作用を有する。通常、有効に一つまたは複数の疾患症状を緩和する治療剤の量（治療有効量）で患者に投与する。
【0079】
本明細書で用いられるように、用語「任意」または「任意に」はその後に記載されるイベントや状況はありうるが、必須ではない。たとえば、「任意に１～３個の抗体の重鎖可変領域を含む」とは、特定の配列の抗体の重鎖可変領域が存在してもよいが、必ずしも存在しなくてもよく、１個、２個または３個でもよい。
【0080】
抗体
本明細書で用いられるように、用語「抗体」とは免疫グロブリンのことで、２本の同様の重鎖および２本の同様の軽鎖がジスルフィド結合を介して連結してなる４本ペプチド鎖の構造である。免疫グロブリンの重鎖定常領域のアミノ酸の構成および配列順序により、その抗原性が異なる。よって、免疫グロブリンは５種類に分かれ、あるいは免疫グロブリンの異なるクラス、すなわち、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥと呼ばれ、異なるクラスの免疫グロブリンの重鎖定常領域に応じて、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。ＩｇＧは免疫グロブリンのうち最も重要な種類で、化学構造および生物機能によって、またＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４といった４つのサブクラスに分かれる。軽鎖は定常領域によってκ鎖またｈλ鎖に分かれる。各クラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造は本分野の技術者熟知である。
本明細書で用いられるように、用語「抗体」とは免疫グロブリンのことで、２本の同様の重鎖および２本の同様の軽鎖がジスルフィド結合を介して連結してなる４本ペプチド鎖の構造である。免疫グロブリンの重鎖定常領域のアミノ酸の構成および配列順序により、その抗原性が異なる。よって、免疫グロブリンは５種類に分かれ、あるいは免疫グロブリンの異なるクラス、すなわち、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥと呼ばれ、異なるクラスの免疫グロブリンの重鎖定常領域に応じて、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。ＩｇＧは免疫グロブリンのうち最も重要な種類で、化学構造および生物機能によって、またＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４といった４つのサブクラスに分かれる。軽鎖は定常領域によってκ鎖またｈλ鎖に分かれる。各クラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造は本分野の技術者熟知である。
【0081】
抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端に近い約１１０のアミノ酸の配列は大きく異なり、可変領域（Ｖ領域）で、Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列は相対的に安定で、定常領域（Ｃ領域）である。可変領域は３つの超可変領域（ＨＶＲ）および４つの配列が相対的に保存的なＦＲ領域（ＦＲ）を含む。４つのＦＲのアミノ酸配列が相対的に保存的で、直接結合反応に関与しない。３つの超可変領域は、抗体の特異性を決定し、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域からなり、アミノ末端からカルボキシ末端までＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で並ぶ。軽鎖の３つのＣＤＲ領域、すなわち、軽鎖超可変領域（ＬＣＤＲ）はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を、重鎖の３つのＣＤＲ領域、すなわち、重鎖超可変領域（ＨＣＤＲ）はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を指す。発明に記載の抗体または抗原結合断片のＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域のＣＤＲのアミノ酸残基は数および位置において既知のＫａｂａｔ番号付け（ＬＣＤＲ１－３、ＨＣＤＲ２－３）、またはｋａｂａｔおよびｃｈｏｔｈｉａの番号付け（ＨＣＤＲ１）に準ずる。天然の重鎖および軽鎖の可変領域における４つのＦＲ領域は基本的にβシート構造となっており、連結ループを形成する３つのＣＤＲで連結され、場合によって部分βシート構造となる４つのＦＲ領域が含まれる。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域で密接し、かつ他方の鎖のＣＤＲと一緒に抗体の抗原結合部位を形成している。同類の抗体のアミノ酸配列の比較によってどのアミノ酸がＦＲあるいはＣＤＲ領域を構成するか確認することができる。定常領域は、抗体と抗原との結合には直接関与しないが、たとえば抗体の抗体依存細胞毒性に参与するなどの異なるエフェクター機能を示す。
【0082】
本明細書で用いられるように、用語「抗原結合断片」とは抗原結合活性を有するＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、または単一のＦｖ断片である。Ｆｖ抗体は抗体の重鎖可変領域、軽鎖可変領域を含有するが、定常領域がなく、かつすべての抗原結合部位を有する最小の抗体断片である。一般的に、Ｆｖ抗体はさらにＶＨとＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーを含み、かつ抗原結合に必要な構造を形成することができる。抗原結合断片の非限定的な例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ） Ｆｖ断片、（ｖ） ｓｃＦｖ分子、（ｖｉ） ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域をなぞったアミノ酸残基からなる最小認識単位（たとえば、ＣＤＲ３ペプチドのような独立した相補性決定領域（ＣＤＲ））または制限されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを含む。本明細書で用いられるように、「抗原結合断片」という表現にはほかの工学化分子、たとえば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニ抗体、ナノ抗体（たとえば、１価ナノ抗体、２価ナノ抗体など）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）およびサメＩｇＮＡＲ可変ドメインも含まれている。
【0083】
本明細書で用いられるように、用語「抗原決定基」とは抗原における不連続の、本発明の抗体または抗原結合断片によって認識される立体空間部位である。
【0084】
本発明は、完全の抗体だけではなく、免疫活性を有する抗体の断片または抗体とほかの配列からなる融合タンパク質も含む。そのため、本発明は、さらに、前記抗体の断片、誘導体および類似体を含む。
【0085】
本発明において、抗体は当業者に熟知の技術によって製造されるマウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または全ヒト抗体を含む。組み換え抗体、たとえばキメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、ヒトの部分および非ヒトの部分を含み、本分野で熟知されるＤＮＡ組み換え技術によって製造することができる。
【0086】
本明細書で用いられるように、用語「モノクローナル抗体」とは単一の細胞由来のクローンから分泌される抗体である。モノクローナル抗体は、高度特異的で、単一のエピトープに対するものである。前記の細胞は、真核、原核またはファージのクローン細胞株でもよい。
【0087】
本明細書で用いられるように、用語「キメラ抗体」はネズミ由来抗体のＶ領域の遺伝子とヒト抗体のＣ領域の遺伝子をキメラ遺伝子に連接した後、ベクターに挿入し、宿主細胞に形質移入して発現される抗体分子である。親ネズミ抗体の高い特異性および親和力を残しつつ、ヒト由来断片に有効に生物学的効果・機能を仲介させる。
【0088】
本明細書で用いられるように、用語「ヒト化抗体」は、本発明のネズミ抗体の可変領域の改変形態で、非ヒト抗体（好ましくはマウスモノクローナル抗体）由来（または基本的にそれ由来）のＣＤＲ領域、および基本的にヒト由来抗体の配列からのＦＲ領域と定常領域を有し、すなわち、ネズミ抗体のＣＤＲ領域の配列を異種のヒト系抗体の骨格配列に接木する。ＣＤＲ配列は大半の抗体－抗原相互作用を担うため、発現ベクターを構築して特定の天然に存在する抗体の性質を模倣する組み換え抗体を発現することができる。
【0089】
本発明において、抗体は、単特異性、二重特異性、三重特異性、またはそれ以上の多重特異性でもよい。
【0090】
本発明において、本発明の抗体は、さらにその保存的変異体を含み、本発明の抗体のアミノ酸配列と比較すると、１０個以下、好ましくは８個以下、より好ましくは５個以下、最も好ましくは３個以下のアミノ酸が類似または近い性質を持つアミノ酸で置換されてなるポリペプチドをいう。これらの保存的突然変異のポリペプチドは、表Ａのようにアミノ酸の置換を行って生成することが好ましい。
【表0】
【0091】
抗ＣＤ３抗体
本明細書で用いられるように、用語「ＣＤ３」とは、一般的に、天然または組み換えのヒトＣＤ３、およびヒトＣＤ３の非ヒトホモログである。ＣＤ３はＴ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）と結合する、Ｔ細胞で発現される、ホモ二量体またはヘテロ二量体の抗原で、そしてＴ細胞の活性化に必要である。機能的ＣＤ３は４種類の異なる鎖（ε、ζ、δおよびγ）のうちの２種類からなる二量体である。ＣＤ３二量体の配列はγ／ε、δ／εおよびζ／ζを含む。そのため、非ヒト種由来のもの、たとえば、「マウスＣＤ３」、「サルＣＤ３」などと明言しない限り、「ＣＤ３」とはヒトＣＤ３を指す。
本明細書で用いられるように、用語「ＣＤ３」とは、一般的に、天然または組み換えのヒトＣＤ３、およびヒトＣＤ３の非ヒトホモログである。ＣＤ３はＴ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）と結合する、Ｔ細胞で発現される、ホモ二量体またはヘテロ二量体の抗原で、そしてＴ細胞の活性化に必要である。機能的ＣＤ３は４種類の異なる鎖（ε、ζ、δおよびγ）のうちの２種類からなる二量体である。ＣＤ３二量体の配列はγ／ε、δ／εおよびζ／ζを含む。そのため、非ヒト種由来のもの、たとえば、「マウスＣＤ３」、「サルＣＤ３」などと明言しない限り、「ＣＤ３」とはヒトＣＤ３を指す。
【0092】
本明細書で用いられるように、「ＣＤ３Ｅ」とはＣＤ３ε細胞外ドメイン（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ）を指す。
【0093】
本発明は、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）および連結するリンカーを含む、ＣＤ３に対する高特異性の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を提供する。
【0094】
また、本発明は、ＣＤ３に対する高特異性の抗体であって、重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖は重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を、前記軽鎖は軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を含有する抗体を提供する。
【0095】
好適に、前記の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は以下の群から選ばれる６つの相補性決定領域ＣＤＲを有する：
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
（Ａ５） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２９
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号３０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号３１；
（Ａ１） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ， 配列番号３
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３： ＶＬＷＮＳＮＲＷ， 配列番号６；
（Ａ２） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ， 配列番号１０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＧＲＷ， 配列番号１１；
（Ａ３） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ， 配列番号１５
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３： ＶＬＷＲＳＮＲＷ， 配列番号１６；あるいは
（Ａ４） 重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲおよび軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＶＬ－ＣＤＲ：
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ１： ＧＦＴＦＮＫＹＡ， 配列番号１
ｈｕＶＨ－ＣＤＲ２： ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ， 配列番号２
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３： ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ， 配列番号２０
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ１： ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ， 配列番号４
ｈｕＶＬ－ＣＤＲ２： ＧＴＫ， 配列番号５
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３： ＶＬＷＹＳＫＲＷ， 配列番号２１。
【0096】
好適に、前記の抗体の重鎖可変領域は配列番号３２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の抗体の軽鎖可変領域は配列番号３３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域の配列は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含み、そして前記の軽鎖可変領域の配列は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含み；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する。
前記の重鎖可変領域の配列は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含み、そして前記の軽鎖可変領域の配列は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含み；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含有し；あるいは
前記の重鎖可変領域は配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含有し、そして前記の軽鎖可変領域は配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含有する。
【0097】
ここで、上記アミノ酸配列のうちの任意の一つのアミノ酸配列が、さらに、少なくとも１個（たとえば１～５、１～３個、好ましくは１～２個、より好ましくは１個）のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経た、ＣＤ３結合親和力を有する配列を含む。
【0098】
もう一つの好適な例において、前記少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経た配列は、好適に、相同性が少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列である。
【0099】
本発明の抗体は二本鎖または一本鎖抗体でもよく、そして動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、より好ましくはヒト化抗体、ヒト－動物キメラ抗体、さらに好ましくは全ヒト化抗体から選ばれてもよい。
【0100】
本明細書で用いられるように、用語「ｓｃＦｖ」は一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔ、ｓｃＦｖ）で、抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域が、通常、１５～２５のアミノ酸からなる連結するリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を介して連結してなる。
【0101】
本明細書で用いられるように、用語「リンカー」とは、グロブリンのドメインに挿入され、二重可変領域交換グロブリンにフォールディングできるように軽鎖と重鎖のドメインに十分な可動性を提供する一つまたは複数のアミノ酸残基である。本発明において、好適なリンカーは一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）のＶＨとＶＬを連結するリンカー、またはｓｃＦｖを別の抗体の重鎖と連結するためのリンカーである。
【0102】
適切なリンカーの実例は、単一のグリシン（Ｇｌｙ）、またはセリン（Ｓｅｒ）残基を含むが、リンカーにおけるアミノ酸残基の標識および配列はリンカーにおける実現しようとする二次構造要素のタイプによって変わる。たとえば、（Ｇ４Ｓ）ｎで、ここで、ｎは１～５の整数である。
【0103】
本発明に係る抗体の誘導体は、一本鎖抗体、およびまたは抗体断片、たとえばＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２あるいは当該分野におけるほかの既知の抗体の誘導体など、ならびにＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体またはほかのサブタイプの抗体のうちの任意の一つまたは複数でもよい。
【0104】
ここで、前記動物は、哺乳動物、たとえばマウスが好ましい。
【0105】
本発明の抗体は、ヒトＣＤ３を標的とするネズミ由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ接木および／または修飾の抗体でもよい。
【0106】
本発明の一つの好適な実施例において、上記
配列番号１、配列番号２および配列番号３；
配列番号１、配列番号２および配列番号１０；
配列番号１、配列番号２および配列番号１５；
配列番号１、配列番号２および配列番号２０；あるいは
配列番号１、配列番号２および配列番号２９
のうちの任意の一つまたは複数の配列、あるいはこれらが少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経た、ＣＤ３結合親和力を有する配列は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ領域に位置する。
配列番号１、配列番号２および配列番号３；
配列番号１、配列番号２および配列番号１０；
配列番号１、配列番号２および配列番号１５；
配列番号１、配列番号２および配列番号２０；あるいは
配列番号１、配列番号２および配列番号２９
のうちの任意の一つまたは複数の配列、あるいはこれらが少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経た、ＣＤ３結合親和力を有する配列は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ領域に位置する。
【0107】
本発明の一つの好適な実施例において、上記
配列番号４、配列番号５および配列番号６；
配列番号４、配列番号５および配列番号１１；
配列番号４、配列番号５および配列番号１６；
配列番号４、配列番号５および配列番号２１；あるいは
配列番号３０、配列番号５および配列番号３１
のうちの任意の一つまたは複数の配列、あるいはこれらが少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経た、ＣＤ３結合親和力を有する配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ領域に位置する。
配列番号４、配列番号５および配列番号６；
配列番号４、配列番号５および配列番号１１；
配列番号４、配列番号５および配列番号１６；
配列番号４、配列番号５および配列番号２１；あるいは
配列番号３０、配列番号５および配列番号３１
のうちの任意の一つまたは複数の配列、あるいはこれらが少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、修飾および／または置換を経た、ＣＤ３結合親和力を有する配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ領域に位置する。
【0108】
本発明の上記内容において、前記付加、欠失、修飾および／または置換のアミノ酸数は、好ましくは元のアミノ酸配列の合計アミノ酸数の４０％以下、より好ましくは３５％以下、より好ましくは１～３３％、より好ましくは５～３０％、より好ましくは１０～２５％、より好ましくは１５～２０％である。
【0109】
本発明において、前記付加、欠失、修飾および／または置換のアミノ酸の数は、通常、１、２、３、４または５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１～２個、最も好ましくは１個である。
【0110】
本明細書で用いられるように、用語「二重特異性抗体」とは同時に特異的に２種類の抗原（標的）または２種類のエピトープに結合することができる抗体分子である。対称性により、二重特異性抗体は構造が対称と非対称の分子に分かれる。結合部位の数により、二重特異性抗体は２価、３価、４価および多価の分子に分かれる。
【0111】
本発明の抗体は、単特異性、二重特異性、三重特異性または多重特異性でもよい。たとえば、本発明の抗体はほかの標的に結合する抗体または活性断片とともに二重特異性抗体を形成してもよい。前記ほかの標的に結合する抗体はＣＤ１９、ＣＤ４７、ＣＤ７３、ＣＤ４７、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８を標的とする抗体またはその活性断片でもよい。
【0112】
本発明の一つの具体的な実施例において、本発明における抗ＣＤ３抗体はＣＤ１９に結合する抗体と二重特異性抗体を形成するが、ここで、構築されるＣＤ３とＣＤ１９を標的とする二重特異性抗体はＳＣ３０Ａと名付けられ、配列が配列番号３７で示される。
【0113】
抗体の製造
モノクローナル抗体の生成に適する方法のいずれも本発明の抗ＣＤ３抗体の生成に使用することができる。たとえば、連接または天然に存在するＣＤ３ホモ二量体またはその断片で動物を免疫させることができる。アジュバント、免疫刺激剤、重複免疫強化接種を含む、適切な免疫接種方法を使用してもよく、一つまたは複数の手段を使用してもよい。
モノクローナル抗体の生成に適する方法のいずれも本発明の抗ＣＤ３抗体の生成に使用することができる。たとえば、連接または天然に存在するＣＤ３ホモ二量体またはその断片で動物を免疫させることができる。アジュバント、免疫刺激剤、重複免疫強化接種を含む、適切な免疫接種方法を使用してもよく、一つまたは複数の手段を使用してもよい。
【0114】
適切な様態のＣＤ３のいずれも免疫原（抗原）とし、ＣＤ３に特異的な非ヒト抗体を生成し、前記抗体の生物学活性を選別するに使用することができる。刺激免疫原は全長の成熟ヒトＣＤ３でもよいが、天然のホモ二量体、または一つ／複数のエピトープを含むペプチドを含む。免疫原は単独で使用してもよく、あるいは本分野で既知の一つまたは複数の免疫原性補強剤と組み合わせて使用してもよい。免疫原は天然由来の精製されたもの、あるいは遺伝的に修飾された細胞において生成したものでもよい。免疫原をコードするＤＮＡは、ゲノム由来のものまたは非ゲノム由来のもの（たとえばｃＤＮＡ）でもよい。適切な遺伝ベクターで免疫原をコードするＤＮＡを発現することができるが、前記ベクターはアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、プラスミドおよび非ウイルスベクターを含むが、これらに限定されない。
【0115】
本発明の抗ヒトＣＤ３抗体を生成する例示的な方法は実施例１に記載する。
【0116】
ヒト化抗体は、任意の種類の免疫グロブリンから選ばれてもよいが、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む。本発明において、抗体はＩｇＧ抗体で、ＩｇＧ１サブタイプを使用する。下記実施例に記載の抗体の生物学的な測定・選別では、一定のドメイン配列が必要な配列の最適化を実現させ、必要な生物学活性を持たせることが容易である。
【0117】
同様に、何れの軽鎖も本明細書の化合物および方法において使用することができる。具体的に、κ鎖、λ鎖またはそのバリアントは本発明の化合物および方法において有用である。
【0118】
本発明の抗ヒトＣＤ３抗体をヒト化する例示的な方法は実施例２に記載する。
【0119】
本発明の抗体またはその断片のＤＮＡ分子の配列は、通常の技術で、たとえば、ＰＣＲ増幅あるいはゲノムライブラリースクリーニングなどの方法によって得ることができる。また、軽鎖および重鎖のコード配列を一体に融合し、一本鎖抗体を形成してもよい。
【0120】
関連の配列を獲得すれば、組み換え法で大量に関連配列を獲得することができる。この場合、通常、その配列をベクターにクローンした後、細胞に導入し、さらに通常の方法で増殖させた宿主細胞から関連配列を単離して得る。
【0121】
また、特に断片の長さが短い場合、人工合成の方法で関連配列を合成してもよい。通常、まず多数の小さい断片を合成し、そして連接させることにより、配列の長い断片を得ることができる。さらに、このＤＮＡ配列を本分野で周知の各種の既知のＤＮＡ分子（あるいはベクターなど）や細胞に導入してもよい。
【0122】
さらに、本発明は、上記の適当なＤＮＡ配列および適当なプロモーターあるいは制御配列を含むベクターに関する。これらのベクターは、タンパク質を発現するように、適当な宿主細胞の形質転換に用いることができる。
【0123】
宿主細胞は、原核細胞、たとえば細菌細胞、あるいは、低等真核細胞、たとえば酵母細胞、あるいは、高等真核細胞、たとえば哺乳動物細胞でもよい。好適な動物細胞は、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯ－Ｋ１、ＨＥＫ－２９３細胞を含むが、これらに限定されない。
【0124】
本発明に記載のＤＮＡ組み換えによる宿主細胞の形質転換の工程は本分野で熟知の技術で行ってもよい。得られる形質転換体は通常の方法で培養し、本発明の遺伝子がコードするポリペプチドを発現することができる。用いられる宿主細胞によって、通常の培地で適切な条件において培養する。
【0125】
通常、本発明の抗体の発現に適切な条件で、形質転換で得られた宿主細胞を培養する。そして、通常のグロブリンの精製工程、例えばプロテインＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、分子篩クロマトグラフィーやアフィニティークロマトグラフィーなどの本分野の技術者に熟知の通常の分離精製手段で精製し、本発明の抗体を得る。
【0126】
得られたモノクローナル抗体は、通常の手段で同定することができる。たとえば、モノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降、あるいは体外結合試験（たとえば放射免疫測定（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ））で測定することができる。
【0127】
抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）
また、本発明は本発明の抗体に基づいた抗体薬物複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）を提供する。
また、本発明は本発明の抗体に基づいた抗体薬物複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）を提供する。
【0128】
典型的に、前記抗体薬物複合体は前記抗体、およびエフェクター分子を含み、前記抗体と前記エフェクター分子がカップリング、好ましくは化学的にカップリングしている。ここで、前記エフェクター分子は治療活性を有する薬物が好ましい。また、前記エフェクター分子は毒素タンパク質、化学治療薬、小分子薬物または放射性核種のうちの一つまたは複数でもよい。
【0129】
本発明の抗体と前記エフェクター分子の間はカップリング剤によってカップリングしてもよい。前記のカップリング剤の例は、非選択性カップリング剤、カルボキシ基を利用するカップリング剤、ペプチド鎖、ジスルフィド結合を利用するカップリング剤のうちの任意の一つまたは複数でもよい。前記非選択性カップリング剤とは、エフェクター分子と抗体を共役結合させて連結する化合物、たとえばグルタルアルデヒドなどである。前記カルボキシ基を利用するカップリング剤は、シスアコニット酸無水物系カップリング剤（たとえばシスアコニット酸無水物）、アシルヒドラゾン系カップリング剤（カップリング部位はアシルヒドラゾンである）のうちの任意の一つまたは複数でもよい。
【0130】
抗体における一部の残基（たとえばＣｙｓやＬｙｓなど）は多くの機能基との連結に使用され、イメージング試薬（たとえば発色基や蛍光基）、診断試薬（たとえばＭＲＩ造影剤や放射性同位元素）、安定剤（たとえばエチレングリコール重合体）および治療剤を含む。抗体は機能剤にカップリングして抗体－機能剤の複合体を形成してもよい。機能剤（たとえば薬物、検出試薬、安定剤）は抗体にカップリング（共役結合）されている。機能剤は直接、またはリンカーを介して間接に抗体に連結してもよい。
【0131】
抗体は薬物がカップリングすることによって抗体薬物複合体（ＡＤＣ）になってもよい。典型的に、ＡＤＣは薬物と抗体の間に位置するリンカーを含む。リンカーは分解できるリンカーでもよく、分解できないリンカーでもよい。分解できるリンカーは、典型的に、細胞内の環境において分解しやすく、たとえば目的の部位で分解することにより、薬物が抗体から放出される。適切な分解できるリンカーは、たとえば、細胞内におけるプロテアーゼ（たとえばリソソームプロテアーゼやエンドソームプロテアーゼ）によって分解できるペプチジル含有リンカーを含む酵素によって分解されるリンカー、あるいはグルクロニダーゼによって分解できるグルクロン酸含有リンカーのような糖リンカーを含む。ペプチジルリンカーは、たとえばジペプチド、たとえばバリン－シトルリン、フェニルアラニン－リシンやバリン－アラニンを含んでもよい。ほかの適切な分解できるリンカーは、たとえば、ｐＨ感受性リンカー（たとえばｐＨが５．５未満になると加水分解するリンカー、たとえばヒドラゾンリンカー）および還元条件において分解できるリンカー（ジスルフィド結合リンカー）を含む。分解できないリンカーは典型的に抗体がプロテアーゼによって加水分解される条件において薬物を放出する。
【0132】
抗体に連結する前、リンカーはあるアミノ酸残基と反応できる活性反応基を有し、連結は活性反応基を介して実現する。チオール基に特異的な活性反応基が好ましく、たとえばマレイミド系化合物、ハロゲン化アミド（たとえばヨウ化、臭化または塩化のもの）、ハロゲン化エステル（たとえばヨウ化、臭化または塩化のもの）、ハロゲン化メチルケトン（たとえばヨウ化、臭化または塩化のもの）、ハロゲン化ベンジル（たとえばヨウ化、臭化または塩化のもの）、ビニルスルホン、ピリジルジスルフィド、水銀誘導体、たとえば３，６－ジ（水銀メチル）ジオキサン（対イオンは酢酸イオン、塩素イオンまたは硝酸イオンである）、およびポリメチレンジメチルスルフィドチオスルホネートを含む。リンカーは、たとえば、チオスクシンイミドを介して抗体に連結したマレイミドを含んでもよい。
【0133】
薬物は任意の細胞毒性薬物、細胞生長を抑制する薬物または免疫抑制薬物でもよい。実施形態において、リンカーは抗体と薬物を連結し、薬物はリンカーと結合できる機能性基を有する。たとえば、薬物はリンカーと結合できるアミノ基、カルボキシ基、チオール基、ヒドロキシ基、またはケトン基を有してもよい。薬物が直接リンカーに連結する場合、薬物は抗体に連結する前、反応する活性基を有する。
【0134】
有用な薬物の種類は、たとえば、抗チューブリン薬、ＤＮＡ副溝結合試薬、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化試薬、抗生物質、葉酸拮抗薬、抗代謝薬、化学療法増感剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどを含む。本発明において、薬物－リンカーは一つの簡単な工程でＡＤＣの形成に使用することができる。別の実施形態において、二機能性リンカー化合物は二工程または多工程の方法でＡＤＣの形成に使用することができる。たとえば、システイン残基が第一の工程でリンカーの反応活性部分と反応し、そして後の工程で、リンカーにおける機能性基が薬物と反応することで、ＡＤＣになる。
【0135】
通常、特異的に薬物部分における適切な反応活性基と反応しやすいように、リンカーにおける機能性基を選択する。非限定的な例として、アジ化合物に基づいた部分は特異的な薬物部分における反応性アルキニル基との反応に使用することができる。薬物はアジ基とアルキニル基の間の１，３－双極子を介して付加することで、リンカーに共役結合する。ほかの有用な機能性基は、たとえばケトン類およびアルデヒド類（ヒドラジド類およびアルコキシアミンとの反応に適する）、ホスフィン（アジ基との反応に適する）、イソシアネートおよびイソチオシアネート（アミン類およびアルコール類との反応に適する）、および活性化したエステル類、たとえばＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（アミン類およびアルコール類との反応に適する）を含む。これらおよびほかの連結手段は、たとえば「生物カップリング技術」、第二版（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）に記載されるように、当業者に熟知されている。当業者には、薬物部分およびリンカーの選択性反応について、相補対の反応活性機能基を選択する場合、当該相補対のいずれでも、リンカーにも薬物にも使用することができる。
【0136】
応用
本発明は、本発明の用途、たとえば診断製剤の製造、あるいはＣＤ３関連疾患を予防および／または治療する薬物の製造に使用される用途を提供する。前記ＣＤ３関連疾患は炎症疾患、自己免疫疾患などを含み、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患（たとえばクローン病、潰瘍性大腸炎など）、骨関節炎、関節リウマチ（ＲＡ）、リウマチ性関節炎または骨粗鬆症、炎症性線維化（たとえば強皮症、肺線維化および硬変）、喘息（アレルギー性喘息を）、アレルギー反応および癌を含むが、これらに限定されない。
本発明は、本発明の用途、たとえば診断製剤の製造、あるいはＣＤ３関連疾患を予防および／または治療する薬物の製造に使用される用途を提供する。前記ＣＤ３関連疾患は炎症疾患、自己免疫疾患などを含み、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患（たとえばクローン病、潰瘍性大腸炎など）、骨関節炎、関節リウマチ（ＲＡ）、リウマチ性関節炎または骨粗鬆症、炎症性線維化（たとえば強皮症、肺線維化および硬変）、喘息（アレルギー性喘息を）、アレルギー反応および癌を含むが、これらに限定されない。
【0137】
薬物組成物
さらに、本発明は組成物を提供する。好適な例において、前記の組成物は薬物組成物で、上記の抗体またはその活性断片あるいはその融合タンパク質またはそのＡＤＣまたは相応するＣＡＲ－Ｔ細胞と、薬学的に許容される担体とを含有する。通常、これらの物質を無毒で不活性で薬学的に許容される水系担体で配合し、ｐＨ値は配合される物質の性質および治療しようとする疾患にもよるが、ｐＨ値は通常５～８程度、好ましくは６～８程度である。配合された薬物組成物は通常の経路で給与することができ、腫瘍内、腹膜内、静脈内、あるいは局部給与が含まれるが、これらに限定されない。
さらに、本発明は組成物を提供する。好適な例において、前記の組成物は薬物組成物で、上記の抗体またはその活性断片あるいはその融合タンパク質またはそのＡＤＣまたは相応するＣＡＲ－Ｔ細胞と、薬学的に許容される担体とを含有する。通常、これらの物質を無毒で不活性で薬学的に許容される水系担体で配合し、ｐＨ値は配合される物質の性質および治療しようとする疾患にもよるが、ｐＨ値は通常５～８程度、好ましくは６～８程度である。配合された薬物組成物は通常の経路で給与することができ、腫瘍内、腹膜内、静脈内、あるいは局部給与が含まれるが、これらに限定されない。
【0138】
本発明に係る抗体は、ヌクレオチド配列によって細胞内で発現されて細胞治療に使用してもよく、たとえば、前記抗体はキメラ抗原受容体Ｔ細胞免疫療法（ＣＡＲ－Ｔ）などに使用することができる。
【0139】
本発明の薬物組成物はそのままＣＤ３タンパク質分子との結合に使用することができるため、ＣＤ３関連疾患の予防および治療に有用である。また、ほかの治療剤と併用してもよい。
【0140】
本発明の薬物組成物は、安全有効量（たとえば０．００１～９９ｗｔ％、好ましくは０．０１～９０ｗｔ％、より好ましくは０．１～８０ｗｔ％）の本発明の上記のモノクローナル抗体（またはその複合体）と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む。このような担体は、食塩水、緩衝液、ブドウ糖、水、グリセリン、エタノール、およびこれらの組み合せを含むが、これらに限定されない。薬物の製剤は投与形態に相応する。本発明の薬物組成物は、注射剤としてもよく、たとえば生理食塩水またはブドウ糖およびほかの助剤を含有する水溶液で通常の方法によって製造することができる。薬物組成物は、注射剤、溶液の場合、無菌条件で製造する。活性成分の投与量は治療有効量、たとえば毎日約１μｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重である。また、本発明のポリペプチドはほかの治療剤と併用することが出来る。
【0141】
薬物組成物の使用時、安全有効量の薬物組成物を哺乳動物に施用するが、その安全有効量は、通常、少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重で、かつ多くの場合、約５０ｍｇ／ｋｇ体重未満で、好ましくは当該投与量が約１０μｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重である。勿論、具体的な投与量は、さらに投与の様態、患者の健康状況などの要素を考えるべきで、すべて熟練の医者の技能範囲以内である。
【0142】
検出用途およびキット
本発明の抗体は検出に有用で、たとえば検体を検出することによって診断情報を提供することができる。
本発明の抗体は検出に有用で、たとえば検体を検出することによって診断情報を提供することができる。
【0143】
本発明において、使用される検体（サンプル）は細胞、組織検体および生検標本を含む。本発明で用いられる用語「生検」は当業者に既知のすべての種類の生検を含む。そのため、本発明で使用される生検は、たとえば内視鏡方法あるいは器官の穿刺または針刺しによって調製された組織検体を含む。
【0144】
本発明で使用される検体は固定または保存された細胞または組織検体を含む。
【0145】
また、本発明は、本発明の抗体（またはその断片）を含有するキットを提供するが、本発明の一つの好適な例において、前記のキットはさらに容器、使用説明書、緩衝液などを含む。好適な例において、本発明の抗体は検出プレートに固定されてもよい。
【0146】
本発明の主な利点は以下のものを含む。
（１）本発明のＣＤ３抗体は特異的にＣＤ３に結合し、高い生物活性を有する。
（２）本発明のＣＤ３抗体はほかの抗体と二重特異性抗体を構築することができる。
（１）本発明のＣＤ３抗体は特異的にＣＤ３に結合し、高い生物活性を有する。
（２）本発明のＣＤ３抗体はほかの抗体と二重特異性抗体を構築することができる。
【0147】
以下、具体的な実施例を合わせ、さらに本発明を陳述する。これらの実施例は本発明を説明するために用いられるものだけで、本発明の範囲の制限にはならないと理解されるものである。以下の実施例で詳細な条件が示されていない実験方法は、通常、たとえばＳａｍｂｒｏｏｋら、「モレキュラー・クローニング：研究室マニュアル」（ニューヨーク、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版社、１９８９） に記載の条件などの通常の条件に、あるいは、メーカーのお薦めの条件に従う。特に断らない限り、％と部は、重量で計算された。
【実施例1】
【0148】
ヒト化ＣＤ３モノクローナル抗体の生成
組み換えヒトＣＤ３Ｅタンパク質（Ｃ００Ｅ、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）でＢａｌｂ／Ｃマウスを免疫させ、免疫完了後、Ｂ細胞を取ってファージディスプレイライブラリーを構築し、スクリーニングによって候補抗体を得、構造シミュレーションおよびロジカルな設計により、一連のヒト化抗体を得た。得られたヒト化抗体の重鎖可変領域はｈｕＶＨ１、ｈｕＶＨ２、ｈｕＶＨ３およびｈｕＶＨ４で、得られたヒト化抗体の軽鎖可変領域はｈｕＶＬ１、ｈｕＶＬ２、ｈｕＶＬ３およびｈｕＶＬ４である。ヒト化配列のＶＨとＶＬは（Ｇ４Ｓ）３リンカーを介して連結し、Ｃ末端に６ＨＩＳタグが付加され、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）の様態に構築し、大腸菌によって発現させ、ニッケルカラムによって精製して一本鎖抗体のタンパク質を得た。得られたヒト化抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列およびＣＤＲは以下の通りである。
組み換えヒトＣＤ３Ｅタンパク質（Ｃ００Ｅ、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）でＢａｌｂ／Ｃマウスを免疫させ、免疫完了後、Ｂ細胞を取ってファージディスプレイライブラリーを構築し、スクリーニングによって候補抗体を得、構造シミュレーションおよびロジカルな設計により、一連のヒト化抗体を得た。得られたヒト化抗体の重鎖可変領域はｈｕＶＨ１、ｈｕＶＨ２、ｈｕＶＨ３およびｈｕＶＨ４で、得られたヒト化抗体の軽鎖可変領域はｈｕＶＬ１、ｈｕＶＬ２、ｈｕＶＬ３およびｈｕＶＬ４である。ヒト化配列のＶＨとＶＬは（Ｇ４Ｓ）３リンカーを介して連結し、Ｃ末端に６ＨＩＳタグが付加され、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）の様態に構築し、大腸菌によって発現させ、ニッケルカラムによって精製して一本鎖抗体のタンパク質を得た。得られたヒト化抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列およびＣＤＲは以下の通りである。
【0149】
ここで、ＶＨ－ＣＤＲ１およびＶＨ－ＣＤＲ２はいずれも同様で、配列が以下の通りである。
【0150】
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＮＫＹＡ （配列番号１）
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ （配列番号２）
ＶＨ－ＣＤＲ３の配列はいずれも異なり、配列が以下の通りである。
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３：ＨＧＮＬＱＮＳＹＩＳＹＷＡＹ （配列番号２９）
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ （配列番号３）
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ （配列番号１０）
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ （配列番号１５）
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ （配列番号２０）
ここで、ｈｕＶＬ１－ＶＬ４のＶＬ－ＣＤＲ１はいずれも同様で、配列が以下の通りである。
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴ （配列番号２）
ＶＨ－ＣＤＲ３の配列はいずれも異なり、配列が以下の通りである。
ｈｕＶＨ５－ＣＤＲ３：ＨＧＮＬＱＮＳＹＩＳＹＷＡＹ （配列番号２９）
ｈｕＶＨ４－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹ （配列番号３）
ｈｕＶＨ３－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹ （配列番号１０）
ｈｕＶＨ２－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹ （配列番号１５）
ｈｕＶＨ１－ＣＤＲ３：ＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹ （配列番号２０）
ここで、ｈｕＶＬ１－ＶＬ４のＶＬ－ＣＤＲ１はいずれも同様で、配列が以下の通りである。
【0151】
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＴＧＡＶＴＳＧＮＹ （配列番号４）
ｈｕＶＬ５のＶＬ５－ＣＤＲ１は変わり、配列が以下の通りである。
ｈｕＶＬ５のＶＬ５－ＣＤＲ１は変わり、配列が以下の通りである。
【0152】
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ１：ＴＧＰＶＴＧＧＮＹ （配列番号３０）
ここで、ｈｕＶＬ１－ＶＬ５のＶＬ－ＣＤＲ２はいずれも同様で、配列が以下の通りである。
ここで、ｈｕＶＬ１－ＶＬ５のＶＬ－ＣＤＲ２はいずれも同様で、配列が以下の通りである。
【0153】
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＧＴＫ （配列番号５）
ＶＬ－ＣＤＲ３の配列はいずれも異なり、配列が以下の通りである。
ＶＬ－ＣＤＲ３の配列はいずれも異なり、配列が以下の通りである。
【0154】
ｈｕＶＬ５－ＣＤＲ３：ＶＬＷＥＳＮＲＷ （配列番号３１）
ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３：ＶＬＷＹＳＫＲＷ （配列番号６）
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３：ＶＬＷＲＳＮＲＷ （配列番号１１）
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３：ＶＬＷＹＳＧＲＷ （配列番号１６）
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３：ＶＬＷＮＳＮＲＷ （配列番号２１）
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ５ （配列番号３２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＬＱＮＳＹＩＳＹＷＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ４ （配列番号７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ３ （配列番号１２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ２ （配列番号１７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ１ （配列番号２２）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ５ （配列番号３３）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ４ （配列番号８）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ３ （配列番号１３）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ２ （配列番号１８）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ１ （配列番号２３）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ５ＶＬ５（配列番号３４）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ４ＶＬ４（配列番号９）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ３ＶＬ３（配列番号１４）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ２ＶＬ２（配列番号１９）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ１ＶＬ１（配列番号２４）
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ｈｕＶＬ４－ＣＤＲ３：ＶＬＷＹＳＫＲＷ （配列番号６）
ｈｕＶＬ３－ＣＤＲ３：ＶＬＷＲＳＮＲＷ （配列番号１１）
ｈｕＶＬ２－ＣＤＲ３：ＶＬＷＹＳＧＲＷ （配列番号１６）
ｈｕＶＬ１－ＣＤＲ３：ＶＬＷＮＳＮＲＷ （配列番号２１）
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ５ （配列番号３２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＬＱＮＳＹＩＳＹＷＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ４ （配列番号７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＥＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ３ （配列番号１２）
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ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ２ （配列番号１７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＱＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域ｈｕＶＨ１ （配列番号２２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＴＹＩＳＹＷＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ５ （配列番号３３）
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＰＶＴＧＧＮＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＶＬＷＥＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ４ （配列番号８）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ３ （配列番号１３）
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ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ２ （配列番号１８）
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＶＬＷＲＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域ｈｕＶＬ１ （配列番号２３）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ５ＶＬ５（配列番号３４）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ４ＶＬ４（配列番号９）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ３ＶＬ３（配列番号１４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＩＳＹＷＲＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＮＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＶＬＷＹＳＧＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ２ＶＬ２（配列番号１９）
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ヒト化ＣＤ３一本鎖抗体ｈｕＶＨ１ＶＬ１（配列番号２４）
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【実施例2】
【0155】
ＣＤ３抗体の親和性検出
本実施例は主に一本鎖抗体の様態のＣＤ３抗体とヒトおよびサル組み換えＣＤ３Ｅタンパク質の親和の検出の状況を記述する。
本実施例は主に一本鎖抗体の様態のＣＤ３抗体とヒトおよびサル組み換えＣＤ３Ｅタンパク質の親和の検出の状況を記述する。
【0156】
２．１ ヒトＣＤ３タンパク質との親和
ＥＬＩＳＡによってＣＤ３抗体と組み換えｈＣＤ３タンパク質（ＣＰ１９、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）の親和を測定し、組み換えｈＣＤ３をプレートにコーティングし、ＣＤ３抗体を１０倍勾配（２０μｇ／ｍｌから）で希釈したが、図１を参照する。
ＥＬＩＳＡによってＣＤ３抗体と組み換えｈＣＤ３タンパク質（ＣＰ１９、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）の親和を測定し、組み換えｈＣＤ３をプレートにコーティングし、ＣＤ３抗体を１０倍勾配（２０μｇ／ｍｌから）で希釈したが、図１を参照する。
【0157】
算出されたＥＣ５０の結果を表１に示す。
【表1】
【0158】
２．２ サルＣＤ３タンパク質との親和
ＥＬＩＳＡによってＣＤ３抗体と組み換えサルＣＤ３タンパク質（ＣＷ０７、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）の親和を測定し、組み換えサルＣＤ３をプレートにコーティングし、ＣＤ３抗体を１０倍勾配（２０μｇ／ｍｌから）で希釈したが、図２を参照する。
ＥＬＩＳＡによってＣＤ３抗体と組み換えサルＣＤ３タンパク質（ＣＷ０７、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）の親和を測定し、組み換えサルＣＤ３をプレートにコーティングし、ＣＤ３抗体を１０倍勾配（２０μｇ／ｍｌから）で希釈したが、図２を参照する。
【0159】
算出されたＥＣ５０の結果を表２に示す。
【表2】
【実施例3】
【0160】
全長抗体およびｈｕＶＨ５ＶＬ５の二重特異性抗体の構築
ＣＤ３の全長抗体を構築し、重鎖可変領域と重鎖定常領域ｈＩｇＧ１を融合させ、軽鎖可変領域と軽鎖定常領域κ鎖を融合させた。得られたＣＤ３の全長抗体はそれぞれＣＱ５０（ｈｕＶＨ１およびｈｕＶＬ１を含む）、ＣＱ５１（ｈｕＶＨ２およびｈｕＶＬ２を含む）、ＣＱ５２（ｈｕＶＨ３およびｈｕＶＬ３を含む）、ＣＱ５３（ｈｕＶＨ４およびｈｕＶＬ４を含む）およびＣＱ５４（ｈｕＶＨ５およびｈｕＶＬ５）である。市販薬品のＯＫＴ３の可変領域を選んでｈＩｇＧ１と融合させ、対照抗体とした。関連配列は以下の通りである。
ＣＤ３の全長抗体を構築し、重鎖可変領域と重鎖定常領域ｈＩｇＧ１を融合させ、軽鎖可変領域と軽鎖定常領域κ鎖を融合させた。得られたＣＤ３の全長抗体はそれぞれＣＱ５０（ｈｕＶＨ１およびｈｕＶＬ１を含む）、ＣＱ５１（ｈｕＶＨ２およびｈｕＶＬ２を含む）、ＣＱ５２（ｈｕＶＨ３およびｈｕＶＬ３を含む）、ＣＱ５３（ｈｕＶＨ４およびｈｕＶＬ４を含む）およびＣＱ５４（ｈｕＶＨ５およびｈｕＶＬ５）である。市販薬品のＯＫＴ３の可変領域を選んでｈＩｇＧ１と融合させ、対照抗体とした。関連配列は以下の通りである。
【0161】
ＣＤ３全長抗体ＣＱ５４の重鎖（配列番号３５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＫＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＨＧＮＬＱＮＳＹＩＳＹＷＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＣＤ３全長抗体ＣＱ５４の軽鎖（配列番号３６）
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ｈＩｇＧ１定常領域（配列番号２５）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
κ鎖定常領域（配列番号２６）
ＬＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＯＫＴ３抗体の重鎖（配列番号２７）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＧＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＯＫＴ３抗体の軽鎖（配列番号２８）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＡＤＴＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
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ＣＤ３全長抗体ＣＱ５４の軽鎖（配列番号３６）
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＰＶＴＧＧＮＹＰＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＫＦＬＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＶＬＷＥＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ｈＩｇＧ１定常領域（配列番号２５）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
κ鎖定常領域（配列番号２６）
ＬＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＯＫＴ３抗体の重鎖（配列番号２７）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＧＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＯＫＴ３抗体の軽鎖（配列番号２８）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＡＤＴＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
【0162】
ＣＤ３抗体の現在の主な応用は二重特異性抗体およびアゴニスト性抗体にあるため、ヒト化ＣＤ３抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列（ｈｕＶＨ５およびｈｕＶＬ５）を利用し、柔軟性リンカー（ＧＧＧＧＳ）を介してＣＤ１９抗体のｓｃＦｖと連結し、ＣＤ３とＣＤ１９を標的とする二重特異性抗体を構築したが、ＳＣ３０Ａと名付けた。ここで、ＣＤ１９はＡｍｇｅｎの市販の二重特異性抗体系薬物ブリナツモマブ（ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）由来のもので、同時にブリナツモマブ（ＢＬＭＯＡと名付けた）を構築して対照抗体とした。
【0163】
ＣＤ３とＣＤ１９の二重特異性抗体ＳＣ３０Ａ（配列番号３７）
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ＢＬＭＯＡ（配列番号３８）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＬＮＷＹＱＱＩＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＶＳＧＩＰＰＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＫＶＤＡＡＴＹＨＣＱＱＳＴＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＷＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＥＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＥＴＴＴＶＧＲＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＤＩＫＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＶＥＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＶＤＤＩＱＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＶＡＳＧＶＰＹＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
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ＢＬＭＯＡ（配列番号３８）
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【実施例4】
【0164】
全長抗体の親和力の検出
本実施例は全長抗体とヒト・サルタンパク質の結合、およびヒトＣＤ３＋細胞系Ｊｕｒｋａｔとの親和の状況に関する。
本実施例は全長抗体とヒト・サルタンパク質の結合、およびヒトＣＤ３＋細胞系Ｊｕｒｋａｔとの親和の状況に関する。
【0165】
４．１ Ｆｏｒｔｅｂｉｏによる全長ＣＤ３抗体とヒトＣＤ３Ｅタンパク質の親和の検出
ｆｏｒｔｅｂｉｏの方法を使用し、プロテインＡセンサーを選択し、ＣＤ３抗体を固定化させ、ＣＤ３Ｅを勾配希釈し、１００ｎＭから７段の勾配で２倍希釈し、親和力を検出したが、図３に示す。
ｆｏｒｔｅｂｉｏの方法を使用し、プロテインＡセンサーを選択し、ＣＤ３抗体を固定化させ、ＣＤ３Ｅを勾配希釈し、１００ｎＭから７段の勾配で２倍希釈し、親和力を検出したが、図３に示す。
【0166】
算出された親和力は表３に示す。
算出されたＣＱ５０の親和力は５．１６×１０－８Ｍで、ＣＱ５１の親和力は６．２４×１０－８Ｍで、
ＣＱ５２の親和力は３．１１×１０－９Ｍで、ＣＱ５３の親和力は２．０２×１０－９Ｍで、
ＣＱ５３の親和力は０．９７×１０－９Ｍである。
【表3】
算出されたＣＱ５０の親和力は５．１６×１０－８Ｍで、ＣＱ５１の親和力は６．２４×１０－８Ｍで、
ＣＱ５２の親和力は３．１１×１０－９Ｍで、ＣＱ５３の親和力は２．０２×１０－９Ｍで、
ＣＱ５３の親和力は０．９７×１０－９Ｍである。
【0167】
４．２ ＥＬＩＳＡによる全長ＣＤ３抗体とサルＣＤ３Ｅの結合の検出
結果を図４に示す。
結果を図４に示す。
【0168】
ＣＱ５０で検出されたＥＣ５０＝０．２００４μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５１で検出されたＥＣ５０＝０．３３８５μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５２で検出されたＥＣ５０＝０．１９５μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５３で検出されたＥＣ５０＝０．０８２３μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５４で検出されたＥＣ５０＝０．３７５μｇ／ｍｌである。
ＣＱ５１で検出されたＥＣ５０＝０．３３８５μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５２で検出されたＥＣ５０＝０．１９５μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５３で検出されたＥＣ５０＝０．０８２３μｇ／ｍｌで、
ＣＱ５４で検出されたＥＣ５０＝０．３７５μｇ／ｍｌである。
【0169】
検出結果から、ＣＱ５０、ＣＱ５１、ＣＱ５２、ＣＱ５３およびＣＱ５４はサルＣＤ３Ｅに結合できたが、ＯＫＴ３に結合できなかったことが示された。
【0170】
４．３ ヒトＣＤ３陽性細胞との結合
４×１０５個のＪｕｒｋａｔ細胞を取り、勾配希釈されたＣＤ３抗体を入れ、１ｈインキュベートした後、ＰＢＳで３回洗浄し、Ａｎｔｉ－ｈＦＣ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙから購入）を入れ、フローサイトメーターにセットして検出した。結果から作成されたＳ曲線は図５を参照する。
４×１０５個のＪｕｒｋａｔ細胞を取り、勾配希釈されたＣＤ３抗体を入れ、１ｈインキュベートした後、ＰＢＳで３回洗浄し、Ａｎｔｉ－ｈＦＣ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙから購入）を入れ、フローサイトメーターにセットして検出した。結果から作成されたＳ曲線は図５を参照する。
【0171】
ＥＣ５０を計算したところ、
ＣＱ５０は０．０１９４７μｇ／ｍｌで、ＯＫＴ３は０．０１μｇ／ｍｌで、両者は細胞との親和が大きく変わらない。
ＣＱ５０は０．０１９４７μｇ／ｍｌで、ＯＫＴ３は０．０１μｇ／ｍｌで、両者は細胞との親和が大きく変わらない。
【0172】
ＣＱ５１は０．０１５８μｇ／ｍｌで、ＯＫＴ３は０．０１μｇ／ｍｌで、両者は細胞との親和が大きく変わらない。
【0173】
ＣＱ５２は０．０２１６７μｇ／ｍｌで、ＯＫＴ３は０．０１μｇ／ｍｌで、両者は細胞との親和が大きく変わらない。
【0174】
ＣＱ５３は０．０１３μｇ／ｍｌで、ＯＫＴ３は０．０１μｇ／ｍｌで、両者は細胞との親和が大きく変わらない。
【0175】
ＣＱ５４は０．０２３μｇ／ｍｌで、ＯＫＴ３は０．０１μｇ／ｍｌで、両者は細胞との親和が大きく変わらない。
【実施例5】
【0176】
全長ＣＤ３抗体のエピトープの初歩的な測定
全長ＣＤ３抗体とＯＫＴ３が機能的に大きく変わらないことから、本実施例は主に全長ＣＤ３抗体とＯＫＴ３抗体はＣＤ３Ｅに結合するエピトープが一致するか調べた。具体的に、全長ＣＤ３抗体でプレートをコーティングし、所定の量のＨＩＳタグのＣＤ３Ｅ（Ｃ５７８ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）タンパク質を入れ、ＥＬＩＳＡによって検出されたＥＣ９０値を参考に、勾配希釈されたＯＫＴ３抗体を入れ、抗ＨＩＳ二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入）を入れて検出したが、結果を図６に示す。
全長ＣＤ３抗体とＯＫＴ３が機能的に大きく変わらないことから、本実施例は主に全長ＣＤ３抗体とＯＫＴ３抗体はＣＤ３Ｅに結合するエピトープが一致するか調べた。具体的に、全長ＣＤ３抗体でプレートをコーティングし、所定の量のＨＩＳタグのＣＤ３Ｅ（Ｃ５７８ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）タンパク質を入れ、ＥＬＩＳＡによって検出されたＥＣ９０値を参考に、勾配希釈されたＯＫＴ３抗体を入れ、抗ＨＩＳ二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入）を入れて検出したが、結果を図６に示す。
【0177】
結果から、ＣＱ５０とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５１とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５２とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５３とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５４とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致しない。
ＣＱ５１とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５２とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５３とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致せず、
ＣＱ５４とＯＫＴ３の間に競争関係がなく、二つの抗体のエピトープが一致しない。
【実施例6】
【0178】
全長抗体によって誘導されるＰＢＭＣの活性化
本実施例は、ＣＤ３抗体でＰＢＭＣを活性化させて培養する際の、早期Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９の発現およびＩＦＮγ分泌における変化に関する。具体的に、リンパ球分離液で志願者のＰＢＭＣを分離し、１×１０６／ｍｌの密度で９６ウェルプレートに接種し、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体を入れ、一晩培養し、フローサイトメトリーによってＣＤ６９＋Ｔ細胞の比率を検出した。結果を下記図７に示す。
本実施例は、ＣＤ３抗体でＰＢＭＣを活性化させて培養する際の、早期Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９の発現およびＩＦＮγ分泌における変化に関する。具体的に、リンパ球分離液で志願者のＰＢＭＣを分離し、１×１０６／ｍｌの密度で９６ウェルプレートに接種し、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体を入れ、一晩培養し、フローサイトメトリーによってＣＤ６９＋Ｔ細胞の比率を検出した。結果を下記図７に示す。
【0179】
結果から、ＯＫＴ３およびＣＱ５４はいずれもＴ細胞を活性化させることができ、かつＣＤ６９陽性率において、ＣＱ５４は活性化後の陽性率が６５．８％、ＯＫＴ３は６２．５％に達し、二つの抗体はＴ細胞の早期活性化において大きく変わらないことが示された。
【0180】
ＰＢＭＣを分離した後、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体を入れ、培養して２４ｈおよび４８ｈでサンプリングし、ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡキットによってＩＦＮγの発現を検出したが、結果を図８に示す。
【0181】
結果から、ＣＱ５４とＯＫＴ３はＩＦＮγ分泌の誘導において、効果が大きく変わらないことがわかった。
【実施例7】
【0182】
二重特異性抗体の親和力の検出
本実施例は二重特異性抗体のヒトの二つの標的タンパク質との結合、サルＣＤ３タンパク質との結合に関する。
本実施例は二重特異性抗体のヒトの二つの標的タンパク質との結合、サルＣＤ３タンパク質との結合に関する。
【0183】
ｆｏｒｔｅｂｉｏの方法を使用し、プロテインＡセンサーを選択し、それぞれＦＣタグの組み換えヒトＣＤ３Ｅ（ＣＰ１９ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびヒトＣＤ１９（Ｃ５７２ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）を固定化させ、二重特異性抗体ＳＣ３０Ａを勾配希釈し、検出された親和力の図は図９（ＡおよびＢ）に示す。
【0184】
算出された親和力は表４に示す。
【表4】
【0185】
結果から、二重特異性抗体ＳＣ３０Ａは二つの標的のいずれにも親和性があることが示された。
【0186】
ＥＬＩＳＡによって二重特異性抗体（ＳＣ３０ＡおよびＢＬＭＯＡ）とサルＣＤ３Ｅの結合を検出したが、結果を図１０に示す。
【0187】
検出結果から、ＳＣ３０ＡはサルＣＤ３Ｅに結合することができ、検出されたＥＣ５０＝１．２４３μｇ／ｍｌで、参照分子ＢＬＭＯＡは結合できなかったことが示された。
【実施例8】
【0188】
二重特異性抗体によるＰＢＭＣの早期活性化の誘導
本実施例は、ＣＤ３の二重特異性抗体でＰＢＭＣを活性化させて培養する際の、早期Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９の発現の変化に関する。具体的に、リンパ球分離液で志願者のＰＢＭＣを分離し、１×１０６／ｍｌの密度で９６ウェルプレートに接種し、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体を入れ、一晩培養し、フローサイトメトリーによってＣＤ６９＋Ｔ細胞の比率を検出した。結果を図１１に示す。
本実施例は、ＣＤ３の二重特異性抗体でＰＢＭＣを活性化させて培養する際の、早期Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９の発現の変化に関する。具体的に、リンパ球分離液で志願者のＰＢＭＣを分離し、１×１０６／ｍｌの密度で９６ウェルプレートに接種し、１０ｎｇ／ｍｌのＣＤ３抗体を入れ、一晩培養し、フローサイトメトリーによってＣＤ６９＋Ｔ細胞の比率を検出した。結果を図１１に示す。
【0189】
結果から、ＳＣ３０ＡおよびＢＬＭＯＡはいずれもＴ細胞を活性化させることができ、かつＣＤ６９陽性率において、ＳＣ３０Ａは活性化後の陽性率が２０．７％、ＢＬＭＯＡは２１．９％に達し、二つの抗体はＴ細胞の早期活性化において大きく変わらないことが示された。
【実施例9】
【0190】
二重特異性抗体が仲介する腫瘍細胞に対する殺傷
本実施例は、Ｔ細胞の活性化と非活性化の場合の、二重特異性抗体が仲介するＴ細胞によるＣＤ１９＋腫瘍細胞Ｒａｊｉに対する殺傷の状況に関する。具体的に、志願者の全血を取り、リンパ球分離液でＰＢＭＣを分離し、１０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－２培養細胞を入れ、３日ごとに細胞を計数し、培養して１０日目で、細胞の表現型を検出し、ＣＤ３＋細胞の比率が９０超になったことを確認し、エフェクター標的比２：１で活性化されたＰＢＭＣおよびＲａｊｉ－ＧＦＰ細胞を入れ、同時に勾配希釈された二重特異性抗体を入れ、濃度がそれぞれ５０ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌおよび５００ｐｇ／ｍｌであった。一晩殺傷させ、フローサイトメトリーおよび蛍光スキャンの手段により、殺傷効果を検出した。
本実施例は、Ｔ細胞の活性化と非活性化の場合の、二重特異性抗体が仲介するＴ細胞によるＣＤ１９＋腫瘍細胞Ｒａｊｉに対する殺傷の状況に関する。具体的に、志願者の全血を取り、リンパ球分離液でＰＢＭＣを分離し、１０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－２培養細胞を入れ、３日ごとに細胞を計数し、培養して１０日目で、細胞の表現型を検出し、ＣＤ３＋細胞の比率が９０超になったことを確認し、エフェクター標的比２：１で活性化されたＰＢＭＣおよびＲａｊｉ－ＧＦＰ細胞を入れ、同時に勾配希釈された二重特異性抗体を入れ、濃度がそれぞれ５０ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌおよび５００ｐｇ／ｍｌであった。一晩殺傷させ、フローサイトメトリーおよび蛍光スキャンの手段により、殺傷効果を検出した。
【0191】
９．１ フローサイトメトリーによる検出
結果は図１２および表５に示すように、５０ｎｇ／ｍｌの実験では、三名の志願者の実験結果で、ＢＬＭＯＡとＳＣ３０Ａは大きく変わらなかったが、５００ｐｇ／ｍｌの実験では、ＢＬＭＯＡが仲介する殺傷の最終的に残ったＲａｊｉ－ＧＦＰの比率がそれぞれ６．９％、１９．９％、２．８％で、一方、ＳＣ３０Ａ群では、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの残留はそれぞれ０．３％、２．０％および０．０％で、５ｎｇ／ｍｌの実験では、ＢＬＭＯＡが仲介する殺傷の最終的に残ったＲａｊｉ－ＧＦＰの比率がそれぞれ１．６％、６．８％、０．６％で、ＳＣ３０Ａ群では、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの残留はそれぞれ０．３％、１．４％および０．０％であった。
結果は図１２および表５に示すように、５０ｎｇ／ｍｌの実験では、三名の志願者の実験結果で、ＢＬＭＯＡとＳＣ３０Ａは大きく変わらなかったが、５００ｐｇ／ｍｌの実験では、ＢＬＭＯＡが仲介する殺傷の最終的に残ったＲａｊｉ－ＧＦＰの比率がそれぞれ６．９％、１９．９％、２．８％で、一方、ＳＣ３０Ａ群では、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの残留はそれぞれ０．３％、２．０％および０．０％で、５ｎｇ／ｍｌの実験では、ＢＬＭＯＡが仲介する殺傷の最終的に残ったＲａｊｉ－ＧＦＰの比率がそれぞれ１．６％、６．８％、０．６％で、ＳＣ３０Ａ群では、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの残留はそれぞれ０．３％、１．４％および０．０％であった。
【表5】
【0192】
上記のように、ＳＣ３０Ａは活性化ＰＢＭＣによる腫瘍細胞の殺傷の仲介において、ＢＬＭＯＡよりも優れたことが示された。
【0193】
９．２ 蛍光スキャンによる検出
全ウェルを蛍光スキャンし、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの残留を観察した。
全ウェルを蛍光スキャンし、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの残留を観察した。
【0194】
結果は図１３に示すように、図における明るい白斑は緑色の蛍光で、明らかに、５００ｐｇ／ｍｌのＢＬＭＯＡ処理では、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの明るい白斑が多く残ったが、５００ｐｇ／ｍｌのＳＣ３０Ａ処理では、Ｒａｊｉ－ＧＦＰの明るい白斑がほとんど観察されなかったことがわかる。そのため、ＳＣ３０Ａが仲介する殺傷能力がＢＬＭＯＡよりも良い。
【0195】
分離されたＰＢＭＣは、活性化されていない場合、そのままエフェクター標的比５：１でＲａｊｉ－ＧＦＰと混合し、同時に勾配希釈された二重特異性抗体を入れ、濃度がそれぞれ５０ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌおよび５００ｐｇ／ｍｌであった。４８ｈ殺傷させ、殺傷効率の図は図１４に示す。
【実施例10】
【0196】
Ｂ細胞の二重特異性抗体が仲介するＰＢＭＣ活性化への影響
本実施例は二重特異性抗体の安全性の研究に関し、標的細胞の存在と不在の二つの状態において、二重特異性抗体のＴ細胞に対する活性化の様子を観察した。具体的に、ＰＢＭＣを分離し、ＣＤ１９抗体でコーティングされた磁気ビーズを使用し、ＰＢＭＣにおけるＣＤ１９＋Ｂ細胞を分離・除去し、Ｂ細胞－ＰＢＭＣ群を作り、同時にそれに基づき、５％のＲａｊｉ細胞を補充し、Ｂ細胞－ＰＢＭＣ Ｒａｊｉ群を作り、何らの処理もない正常なＰＢＭＣ群とともにいずれもＳＣ３０Ａを入れて培養し、５日培養した後、細胞を計数し、細胞増殖の状況を検出した。結果は図１５に記載の通りである。
本実施例は二重特異性抗体の安全性の研究に関し、標的細胞の存在と不在の二つの状態において、二重特異性抗体のＴ細胞に対する活性化の様子を観察した。具体的に、ＰＢＭＣを分離し、ＣＤ１９抗体でコーティングされた磁気ビーズを使用し、ＰＢＭＣにおけるＣＤ１９＋Ｂ細胞を分離・除去し、Ｂ細胞－ＰＢＭＣ群を作り、同時にそれに基づき、５％のＲａｊｉ細胞を補充し、Ｂ細胞－ＰＢＭＣ Ｒａｊｉ群を作り、何らの処理もない正常なＰＢＭＣ群とともにいずれもＳＣ３０Ａを入れて培養し、５日培養した後、細胞を計数し、細胞増殖の状況を検出した。結果は図１５に記載の通りである。
【0197】
上記結果から、ＳＣ３０ＡのＰＢＭＣに対する活性化は標的細胞に依存することが示された。
【実施例11】
【0198】
二重特異性抗体が仲介する細胞内シグナルの標的細胞への依存
本実施例は二重特異性抗体によって誘導されるＴ細胞におけるＮＦＡＴ転写因子の下流シグナルの変化の様子、および当該シグナルもＣＤ１９＋細胞に依存するかということに関する。具体的に、１株のＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃレポーター遺伝子細胞（ＸＣＣ２０ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）を構築し、当該細胞に４０ｎｇ／ｍｌのＳＣ３０Ａを入れ、一つの群では標的細胞Ｒａｊｉを入れ、一つの群では標的細胞を入れず、４ｈ反応させた後、細胞を分解させてルシフェラーゼの活性を検出した。検出結果は図１６に示す。
本実施例は二重特異性抗体によって誘導されるＴ細胞におけるＮＦＡＴ転写因子の下流シグナルの変化の様子、および当該シグナルもＣＤ１９＋細胞に依存するかということに関する。具体的に、１株のＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃレポーター遺伝子細胞（ＸＣＣ２０ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）を構築し、当該細胞に４０ｎｇ／ｍｌのＳＣ３０Ａを入れ、一つの群では標的細胞Ｒａｊｉを入れ、一つの群では標的細胞を入れず、４ｈ反応させた後、細胞を分解させてルシフェラーゼの活性を検出した。検出結果は図１６に示す。
【0199】
実験結果から、Ｒａｊｉ細胞を入れた場合、シグナルが明らかにＲａｊｉを入れなかった場合よりも強く、ＳＣ３０Ａの活性化シグナルが標的細胞に依存することがわかる。
【0200】
標的細胞を含有する場合、ＳＣ３０Ａの活性を検出したが、結果を図１７に示す。
【0201】
レポーター遺伝子法により、ＳＣ３０Ａの活性を検出し、算出されたＥＣ５０が１．３５９ｎｇ／ｍｌであった。
【0202】
各文献がそれぞれ単独に引用されるように、本発明に係るすべての文献は本出願で参考として引用する。また、本発明の上記の内容を読み終わった後、当業者が本発明を各種の変動や修正をすることができるが、それらの等価の形態のものは本発明の請求の範囲に含まれることが理解されるはずである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【配列表】
【国際調査報告】