特表 2024-532512 ＴＹＫ２／ＪＡＫ１シュードキナーゼドメイン阻害剤としての化合物ならびに合成および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-05

(54)【発明の名称】ＴＹＫ２／ＪＡＫ１シュードキナーゼドメイン阻害剤としての化合物ならびに合成および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 403/12 20060101AFI20240829BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 31/501 20060101ALI20240829BHJP

   C07D 401/14 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20240829BHJP

   C07D 413/12 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240829BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240829BHJP

【ＦＩ】

C07D403/12 CSP

A61P43/00 111

A61P29/00

A61P37/02

A61P17/06

A61P1/00

A61P19/02

A61P17/00

A61P17/14

A61P31/12

A61P35/00

A61P25/00

A61P3/10

A61P11/00

A61P1/16

A61P27/02

A61K31/501

C07D401/14

A61K31/4439

C07D413/12

A61P25/28

A61P13/12

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024514097

(86)(22)【出願日】2022-08-30

(85)【翻訳文提出日】2024-04-18

(86)【国際出願番号】 CN2022115930

(87)【国際公開番号】W WO2023030335

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】202111013061.8

(32)【優先日】2021-08-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524079085

【氏名又は名称】チョーチヤン ウェンダ ファーマシューティカル テクノロジー カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114557

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 英仁

(74)【代理人】

【識別番号】100078868

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 登夫

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ネンホイ

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC41

4C086BC60

4C086BC71

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA09

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA16

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZA92

4C086ZA96

4C086ZB07

4C086ZB08

4C086ZB11

4C086ZB26

4C086ZB33

4C086ZC20

4C086ZC35

(57)【要約】

本発明は、ＴＹＫ２ ＪＡＫ１シュードキナーゼドメイン阻害剤としての化合物ならびに合成および使用方法を提供する。具体的には、化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、前記化合物は、式Ａで表され、各基は、本明細書で定義されたとおりである。
【化１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
前記化合物は、式Ａで表され、

【化1】

ここで、
環Ａｒは、５員複素芳香環であり、前記５員複素芳香環は、任意選択で、ハロゲン、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－６ヒドロキシアルキル基、置換または非置換の－Ｃ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基、置換または非置換の－Ｃ_１－４アルキレン－Ｓ－Ｃ_１－６アルキル基からなる群から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され、
Ｙは、ＣＨまたはＮであり、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
Ｒ_３は、Ｈ、ハロゲン、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、ヒドロキシ基、置換または非置換のＣ_１－６アルコキシ基、置換または非置換のＣ_１－６アルキルチオ基からなる群から選択され、
Ｒ_４は、存在しないか、あるいはハロゲン、置換または非置換のＣ_１－３アルキル基からなる群から選択される１または２個の置換基を表し、
Ｗ_１ａおよびＷ_１ｂは、それぞれ独立して、なし（ｎｕｌｌ）（単結合）、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＣＯ－、－ＮＲ_５－からなる群から選択され、Ｗ_１ａおよびＷ_１ｂのうちの少なくとも一つは、なしではなく、
Ｗ_２ａおよびＷ_２ｂは、それぞれ独立して、なし（単結合）、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＣＯ－、－ＮＲ_５－からなる群から選択され、Ｗ_２ａおよびＷ_２ｂのうちの少なくとも一つは、なしではなく、
Ｒ_５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－４アルキル基からなる群から選択され、
特に明記しない限り、前記置換とは、基中の一つまたは複数の水素が、ハロゲン、Ｃ_１－４アルキル基、Ｃ_１－４ハロゲン化アルキル基からなる群から選択される置換基で置換されることを指すことを特徴とする
化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
前記化合物は、式Ｉで表され、

【化2】

ここで、
Ｒ_１は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－６ヒドロキシアルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｓ－Ｃ_１－６アルキル基からなる群から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、Ｎからなる群から選択され、
ＺがＯまたはＳである場合、Ｒ_２は、存在せず、ＺがＮである場合、Ｒ_２は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基からなる群から選択され、
Ｙは、ＣＨまたはＮであり、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
特に明記しない限り、前記置換とは、基中の一つまたは複数の水素が、ハロゲン、Ｃ_１－４アルキル基、Ｃ_１－４ハロゲン化アルキル基からなる群から選択される置換基で置換されることを指すことを特徴とする
化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

ＺがＯまたはＳである場合、Ｒ_２は、存在せず、ＺがＮである場合、Ｒ_２は、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基であることを特徴とする
請求項２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_１は、Ｈであり、Ｚは、Ｎであり、Ｒ_２は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基からなる群から選択されることを特徴とする
請求項２に記載の化合物。

【請求項5】

前記化合物は、式Ｉａまたは式Ｉｂで表されることを特徴とする
請求項２に記載の化合物。

【化3】

【請求項6】

前記化合物は、表Ａから選択される化合物であることを特徴とする
請求項１または２に記載の化合物。

【表1】

【請求項7】

医薬組成物であって、
（ｉ）請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤を含むことを特徴とする
医薬組成物。

【請求項8】

（ｉ）ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患を治療または予防するための薬物および／または（ｉｉ）ＴＹＫ２／ＪＡＫ１阻害剤の調製における、請求項１または２に記載の化合物または請求項６に記載の医薬組成物の使用。

【請求項9】

前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、炎症、自己免疫性疾患、またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする
請求項８に記載の使用。

【請求項10】

前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介疾患は、乾癬、エリテマトーデス、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、関節炎、皮膚炎、ループス腎炎、多発性硬化症およびアルツハイマー病のような神経性炎症、強直性脊椎炎、化膿性汗腺炎、呼吸器疾患、糖尿病、炎症性眼疾患、肝炎、心血管疾患、全身性硬化症、臓器移植、円形脱毛症、ニキビ、湿疹、白斑、シェーグレン症候群、ウイルス性炎症、癌またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする
請求項８に記載の使用。

【請求項11】

化合物の調製方法であって、
前記化合物は、請求項２に記載の化合物であり、前記調製方法は、
式ＩＩで表される中間体を

【化4】

と反応させて、前記化合物を得るステップを含むことを特徴とする
化合物の調製方法。

【化5】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医療分野に属し、具体的には、ＴＹＫ２シュードキナーゼ（Ｐｓｅｕｄｏｋｉｎａｓｅ、ＪＨ２）ドメイン阻害剤としての化合物ならびに合成方法および使用に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）は、様々なサイトカインのシグナル伝達および活性化を媒介する、細胞内の非受容体チロシンキナーゼである。ＪＡＫキナーゼファミリーは、ＪＡＫ１、２、３、ＴＹＫ２の四つのサブタイプに分かれ、各サブタイプは、それぞれ異なるタイプのサイトカインシグナル伝達経路を媒介し、ＪＡＫ１、２、ＴＹＫ２は、人体の様々な組織の細胞で発現され、ＪＡＫ３は、主に様々な造血組織の細胞で発現される。

【0003】

ＴＹＫ２は、ＩＦＮ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２およびＩＬ－２３等のサイトカインの機能を媒介する、ＪＡＫファミリーの中で最も早く発見されたサブタイプであり、研究では、ＴＹＫ２欠失突然変異がアレルギー、自己免疫および炎症等の免疫性疾患の発生を効果的に阻害できることが示される。ＩＬ－２３は、乾癬の発生および進行において重要な役割を果たし、最新の研究では、乾癬の発病メカニズムは、内因性の未知の抗原が抗原提示細胞ＡＰＣを活性化してＩＬ－２３を分泌し、ＩＬ－２３は、Ｔｈｌ７細胞を活性化してＩＬ－１７等のサイトカインを分泌することにより、ケラチノサイトの分化分裂およびＩＬ－２３の分泌を誘発し、さらに炎症およびケラチノサイトの増殖を刺激して乾癬を引き起こす。ＴＹＫ２およびＪＡＫ２は、ＩＬ－２３の下流のシグナル伝達経路を共同で媒介し、ＪＡＫ２を阻害すると、貧血および他の血液関連副作用を引き起こす可能性があるため、ＪＡＫ２の阻害を回避しながらＴＹＫ２を阻害することは、ＩＬ－２３シグナル伝達経路を阻害するための良好な策略である。最初の経口トファシチニブ（Ｔｏｆａｃｉｔｉｎｉｂ）は、非選択的ＪＡＫ阻害剤に属し、ＪＡＫ１、２、３、ＴＹＫ２に対して顕著な阻害活性を有し、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）部位に結合する触媒ドメイン（ＪＨ１または「ＪＡＫタンパク質の相同性１ドメイン」）を部位特異的に阻害することができ、ＡＴＰをブロッキングすることで、下流のキナーゼの触媒活性によるリン酸化、およびこれにより生じる経路シグナル伝達を防止することができる。トファシチニブは、ＪＡＫ１、２、３、ＴＹＫ２のような他のサブタイプの活性を阻害することで治療効果を増加させるが、感染、結核、腫瘍、貧血、肝障害およびコレステロールの増加を含む不良反応等の重篤な副作用をもたらす。ＪＡＫ２活性は、赤血球の分化および脂質代謝に関連しているため、上記貧血などの不良反応の一部は、ＪＡＫ２に対するトファシチニブの選択性の欠如に関連し、当該薬物の非選択的阻害によって引き起こされると考えられる。

【0004】

ＪＡＫ非選択的阻害剤の良好な治療効果および様々なターゲットポイントに関連する重篤な副作用を考慮すると、この分野では、ＪＡＫキナーゼファミリー阻害剤が緊急に必要とされ、当該阻害剤は、以前のＪＡＫ阻害剤の結合触媒ドメイン（ＪＨ１）の機能と区別され、シュードキナーゼ（ＪＨ２）ドメイン（例えば、ＴＹＫ２およびＪＡＫ１のＪＨ２）に選択的に結合され、シュードキナーゼ（ＪＨ２）ドメインの機能を阻害し、ＪＡＫ１、２、３、ＴＹＫ２またはそれらのキナーゼドメイン（ＪＨ１）のような他のサブタイプの阻害を回避し、ＴＹＫ２およびＪＡＫ１のシュードキナーゼ（ＪＨ２）阻害剤の安全性を増加させることで、乾癬、エリテマトーデス、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、関節炎、皮膚炎、ループス腎炎、多発性硬化症およびアルツハイマー病のような神経性炎症、強直性脊椎炎、化膿性汗腺炎、呼吸器疾患、糖尿病、炎症性眼疾患、肝炎、心血管疾患、全身性硬化症、臓器移植、円形脱毛症、ニキビ、湿疹、白斑、シェーグレン症候群、ウイルス性炎症、いくつかの癌等を含む、ＴＹＫ２およびＪＡＫ１シュードキナーゼ（ＪＨ２）ドメイン機能に関連する様々な自己免疫および炎症関連疾患の治療に使用されることができ、臨床応用の可能性が非常に高い。

【0005】

従って、この分野では、新規構造、高い安全性、優れた薬効を備えたＴＹＫ２シュードキナーゼ（ＪＨ２）ドメイン阻害剤の開発が急務となっている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明の目的は、新規構造、高い安全性、優れた薬効を備えたＴＹＫ２シュードキナーゼ（ＪＨ２）ドメイン阻害剤を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明の第１の態様は、化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、前記化合物は、式Ａで表され、

【化1】

ここで、
環Ａｒは、５員複素芳香環であり、前記５員複素芳香環は、任意選択で、ハロゲン、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－６ヒドロキシアルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｓ－Ｃ_１－６アルキル基からなる群から選択される１、２、３または４個の置換基で置換され、
Ｙは、ＣＨまたはＮであり、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
Ｒ_３は、Ｈ、ハロゲン、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、ヒドロキシ基、置換または非置換のＣ_１－６アルコキシ基、置換または非置換のＣ_１－６アルキルチオ基からなる群から選択され、
Ｒ_４は、存在しないか、あるいはハロゲン、置換または非置換のＣ_１－３アルキル基からなる群から選択される１または２個の置換基を表し、
Ｗ_１ａおよびＷ_１ｂは、それぞれ独立して、なし（ｎｕｌｌ）（単結合）、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＣＯ－、－ＮＲ_５－からなる群から選択され、Ｗ_１ａおよびＷ_１ｂのうちの少なくとも一つは、なしではなく、
Ｗ_２ａおよびＷ_２ｂは、それぞれ独立して、なし（単結合）、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＣＯ－、－ＮＲ_５－からなる群から選択され、Ｗ_２ａおよびＷ_２ｂのうちの少なくとも一つは、なしではなく、
Ｒ_５は、それぞれ独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－４アルキル基からなる群から選択され、
特に明記しない限り、前記置換とは、基中の一つまたは複数（例えば、１、２または３個）の水素が、ハロゲン、Ｃ_１－４アルキル基、Ｃ_１－４ハロゲン化アルキル基からなる群から選択される置換基で置換されることを指す。

【0008】

別の好ましい例において、前記５員ヘテロアリール基は、Ｏ、ＳおよびＮから選択される１、２または３個のヘテロ原子を含む環原子の５員ヘテロアリール基であり、好ましくは、前記５員ヘテロアリール基は、二つの窒素ヘテロ原子とＯ、ＳおよびＮから選択される０または１個のヘテロ原子とを含む５員ヘテロアリール基である。

【0009】

別の好ましい例において、前記５員ヘテロアリール基は、

【化2】

からなる群から選択される。

【0010】

別の好ましい例において、環Ａは、

【化3】

であり、ここで、Ｒ_１は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－６ヒドロキシアルキル基、置換または非置換の－Ｃ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基、置換または非置換の－Ｃ_１－４アルキレン－Ｓ－Ｃ_１－６アルキル基からなる群から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、Ｎからなる群から選択され、
ＺがＯまたはＳである場合、Ｒ_２は、存在せず、ＺがＮである場合、Ｒ_２は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基からなる群から選択される。

【0011】

別の好ましい例において、Ｒ_３は、置換または非置換のＣ_１－６アルコキシ基であり、好ましくは、Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルコキシ基であり、好ましくは、Ｒ_３は、メトキシ基である。

【0012】

別の好ましい例において、Ｒ_４は、存在しない。

【0013】

別の好ましい例において、Ｗ_１ａおよびＷ_１ｂは、それぞれ独立して、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＣＯ－、－ＮＲ_５－からなる群から選択される。

【0014】

別の好ましい例において、Ｗ_１ａおよびＷ_１ｂのうちの多くとも１つは、－Ｏ－であり、即ち、－Ｗ_１ａ－Ｗ_１ｂ－は、－Ｏ－Ｏ－ではない。

【0015】

別の好ましい例において、－Ｗ_１ａ－Ｗ_１ｂ－は、－ＮＲ_５－ＣＯ－であり、好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－である。

【0016】

別の好ましい例において、Ｗ_２ａおよびＷ_２ｂは、それぞれ独立して、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＣＯ－、－ＮＲ_５－からなる群から選択される。

【0017】

別の好ましい例において、Ｗ_２ａおよびＷ_２ｂのうちの多くとも１つは、－Ｏ－であり、即ち、－Ｗ_２ａ－Ｗ_２ｂ－は、－Ｏ－Ｏ－ではない。

【0018】

別の好ましい例において、－Ｗ_２ａ－Ｗ_２ｂ－は、－ＮＲ_５－ＣＯ－であり、好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－である。

【0019】

別の好ましい例において、前記化合物は、式Ａａまたは式Ａｂで表される。

【化4】

【0020】

別の好ましい例において、前記化合物は、式Ｉで表され、

【化5】

ここで、
Ｒ_１は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－６ヒドロキシアルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｓ－Ｃ_１－６アルキル基からなる群から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、Ｎからなる群から選択され、
ＺがＯまたはＳである場合、Ｒ_２は、存在せず、ＺがＮである場合、Ｒ_２は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基からなる群から選択され、
Ｙは、ＣＨまたはＮであり、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
特に明記しない限り、前記置換とは、基中の一つまたは複数（例えば、１、２または３個）の水素が、ハロゲン、Ｃ_１－４アルキル基、Ｃ_１－４ハロゲン化アルキル基からなる群から選択される置換基で置換されることを指す。

【0021】

別の好ましい例において、Ｚは、Ｏ、Ｎからなる群から選択される。

【0022】

別の好ましい例において、ＺがＯまたはＳである場合、Ｒ_２は、存在せず、ＺがＮである場合、Ｒ_２は、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基である（好ましくは、メチル基である）。

【0023】

別の好ましい例において、Ｒ_１は、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基であり、好ましくは、Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３である。

【0024】

別の好ましい例において、Ｒ_１は、Ｈであり、Ｚは、Ｎであり、Ｒ_２は、Ｈ、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基からなる群から選択される（好ましくは、Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基、より好ましくは、Ｒ_２メチル基である）。

【0025】

別の好ましい例において、Ｒ_１は、置換または非置換のＣ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－６ヒドロキシアルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｓ－Ｃ_１－６アルキル基からなる群から選択され（好ましくは、Ｒ_１は、置換または非置換のＣ_１－４アルキレン－Ｏ－Ｃ_１－６アルキル基であり、より好ましくは、Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３である）、Ｚは、Ｏ、Ｓからなる群から選択され（好ましくは、Ｚは、Ｏである）、Ｒ_２は、存在しない。

【0026】

別の好ましい例において、Ｙは、ＣＨまたはＮである。

【0027】

別の好ましい例において、Ｘは、ＣＨまたはＮである。

【0028】

別の好ましい例において、前記化合物は、式Ｉａまたは式Ｉｂで表される。

【化6】

【0029】

別の好ましい例において、前記化合物は、表Ａから選択される化合物である。

【表1】

【0030】

本発明の第２の態様は、（ｉ）第１の態様に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。

【0031】

本発明の第３の態様は、（ｉ）ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患を治療または予防するための薬物および／または（ｉｉ）ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１阻害剤の調製における、第１の態様に記載の化合物または第２の態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。

【0032】

別の好ましい例において、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１とは、ＴＹＫ２またはＪＡＫ１または両者の組み合わせを指す。

【0033】

別の好ましい例において、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、ＴＹＫ２によって媒介される疾患またはＪＡＫ１によって媒介される疾患またはＴＹＫ２およびＪＡＫ１の両方によって媒介される疾患である。

【0034】

別の好ましい例において、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１阻害剤とは、ＴＹＫ２阻害剤またはＪＡＫ１阻害剤またはＴＹＫ２およびＪＡＫ１阻害剤を指す。

【0035】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、ＩＬ－２３、ＩＬ－１２および／またはＩＦＮαに関連する疾患である。

【0036】

別の好ましい例において、前記化合物は、ＴＹＫ２－ＪＨ２および／またはＪＡＫ－ＪＨ２を選択的阻害することによって、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患を治療または予防する。

【0037】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、炎症、自己免疫性疾患、またはそれらの組み合わせを含む。

【0038】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介疾患は、乾癬、エリテマトーデス、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、関節炎、皮膚炎、ループス腎炎、多発性硬化症およびアルツハイマー病のような神経性炎症、強直性脊椎炎、化膿性汗腺炎、呼吸器疾患、糖尿病、炎症性眼疾患、肝炎、心血管疾患、全身性硬化症、臓器移植、円形脱毛症、ニキビ、湿疹、白斑、シェーグレン症候群、ウイルス性炎症、癌またはそれらの組み合わせを含む。

【0039】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１阻害剤は、選択的ＴＹＫ２－ＪＨ２および／またはＪＡＫ１－ＪＨ２阻害剤である。

【0040】

本発明の第４の態様は、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１を選択的阻害する方法を提供し、前記方法は、対象を第１の態様に記載の化合物と接触させ、それによりＴＹＫ２－ＪＨ２および／またはＪＡＫ１－ＪＨ２を介して対象におけるＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１活性を阻害することを含む。

【0041】

別の好ましい例において、前記対象は、細胞である。

【0042】

別の好ましい例において、前記対象は、ＴＹＫ２キナーゼおよび／またはＪＡＫ１キナーゼである。

【0043】

別の好ましい例において、前記阻害は、ＴＹＫ２－ＪＨ２および／またはＪＡＫ１－ＪＨ２に対する選択的阻害である。

【0044】

別の好ましい例において、前記方法は、インビトロで非治療的である。

【0045】

本発明の第５の態様は、必要とする人に安全有効量の第１の態様に記載の化合物または第２の態様に記載の医薬組成物を投与し、それによりＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患を治療または予防するステップを含む、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患を治療または予防するための方法を提供する。

【0046】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、ＩＬ－２３、ＩＬ－１２および／またはＩＦＮαに関連する疾患である。

【0047】

別の好ましい例において、前記化合物は、ＴＹＫ２－ＪＨ２および／またはＪＡＫ１－ＪＨ２を選択的阻害することによって、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患を治療または予防する。

【0048】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、炎症、自己免疫性疾患、またはそれらの組み合わせを含む。

【0049】

別の好ましい例において、前記ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患は、乾癬、エリテマトーデス、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、関節炎、皮膚炎、ループス腎炎、多発性硬化症およびアルツハイマー病のような神経性炎症、強直性脊椎炎、化膿性汗腺炎、呼吸器疾患、糖尿病、炎症性眼疾患、肝炎、心血管疾患、全身性硬化症、臓器移植、円形脱毛症、ニキビ、湿疹、白斑、シェーグレン症候群、癌、ウイルス性炎症またはそれらの組み合わせを含む。

【0050】

本発明の第６の態様は、化合物の調製方法を提供し、前記化合物は、第１の態様に記載の式Ｉに示されるような化合物であり、前記調製方法は、式ＩＩに示されるような中間体を

【化7】

と反応させて前記化合物を得るステップを含む。

【化8】

【発明の効果】

【0051】

本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説明される各技術的特徴との間を、互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることに理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。

【発明を実施するための形態】

【0052】

本発明者らは、広範囲かつ綿密な研究の結果、特定の新規構造を有する化合物、即ち、５員ヘテロアリール基（環Ａｒ）および

【化9】

構造を有する化合物が、ＴＹＫ２シュードキナーゼ（ＪＨ２）およびＪＡＫ１シュードキナーゼ（ＪＨ２）ドメインに対して優れた選択的阻害活性を有することが予想外に発見した。これに基づいて、本発明者らは、本発明を完成させた。

【0053】

用語
本明細書で説明されるように、「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。対応的に、「ハロゲン化」とは、基中の水素原子がＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩで置換されることを指す。

【0054】

特に明記しない限り、「アルキル基」という用語は、それ自体または別の置換基の一部として、指定された数の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖炭化水素基（即ち、Ｃ_１－６は、１～６個の炭素を表わす）を指す。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｔ－ブチル基、イソブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基等を含む。

【0055】

「シクロアルキル基」という用語は、指定された数の環原子を有する（例えば、Ｃ_３－６シクロアルキル基は、３～６個の環原子を有する）完全に飽和した炭化水素環を指す。「シクロアルキル基」とは、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン等の二環式および多環式炭化水素環もさす。

【0056】

「アルキレン基」という用語は、それ自体または別の置換基の一部として、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ（ＣＨ_３）－、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２－または－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－等のアルカンから誘導された二価の基を指す。アルキル基（またはアルキレン基）は、通常、１～４個の炭素原子を有する。類似的に、「アルケニレン基」または「アルキニレン」は、それぞれ二重結合または三重結合を有する不飽和形態の「アルキレン基」を指す。

【0057】

特に明記しない限り、本明細書において、「ヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）およびケイ素（Ｓｉ）を含むことを意図する。

【0058】

本明細書で提供される化合物に関しては、置換基（通常は、Ｒ基である）から環（例えば、ベンゼン、ピリジン等の芳香環）の中心への結合は、環の任意の利用可能な頂点での結合を提供する結合を指すと理解される。

【0059】

本明細書で使用されるように、「含有」、「含む」または「包括」という用語は、本発明の混合物または組成物中で様々な成分を一緒に使用できることを示す。従って、「主に…からなる」および「からなる」という用語は、「含有」という用語に含まれる。

【0060】

本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される」成分という用語は、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激およびアレルギー反応）がない、即ち、合理的な利益／リスク比を有する、ヒトおよび／または動物への使用に適した物質を指す。

【0061】

特に明記しない限り、本発明において、出現されるすべての化合物は、単一のキラル化合物、または様々な異なるキラル化合物の混合物（即ち、セラミ体）等、考えられるすべての光学異性体を含むことを意図する。本発明のすべての化合物において、各キラル炭素原子は、任意選択でＲ配置またはＳ配置、またはＲ配置とＳ配置との混合物であり得る。

【0062】

本発明の特定の化合物は、不斉炭素原子（光学中心）または二重結合を有し、ラセミ体、ジアステレオマー、幾何異性体、位置異性体および単独の異性体（例えば、分離されたエナンチオマー）は、すべて本発明の範囲内に含まれるべきである。本明細書で提供される化合物が決定された立体化学（ＲまたはＳで表されるか、または波線または楔形結合を有する）を有する場合、当業者は、あれらの化合物が他の異性体を実質的に含まない（例えば、他の異性体を少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％および最多１００％含まない）と理解される。

【0063】

本発明の化合物は、そのような化合物を構成する一つまたは複数の同位体原子において、非天然な比率の原子同位体を含むこともできる。特性の同位体の非天然な比率は、議論される原子の自然に見出された量から当該原子の１００％までの量として定義される。例えば、化合物には、トリチウム（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）または炭素－１４（^１４Ｃ）等の放射性同位体、または重水素（^２Ｈ）または炭素－１３（^１３Ｃ）等の非放射性同位体が組み込まれることができる。本出願に記載のあれらの用途に加えて、このような同位体変異体は、追加の用途を提供することができる。例えば、本発明の化合物の同位体変異体は、診断的および／または造影試薬、または細胞毒性／放射線毒性治療剤としての追加の用途を有することができるが、これらに限定されない。さらに、本発明の化合物の同位体変異体は、改変された薬物動態学的および薬力学的特徴を有することができ、それにより治療中の安全性、忍容性、治療効果の向上に有利する可能性がある。放射性であるか否かにかかわらず、本発明の化合物のすべての同位体変異体は、すべて本発明の範囲内に含まれることが意図される。

【0064】

有効成分
本明細書で使用されるように、「本発明の化合物」という用語は、式（Ａ）または式（Ｉ）に示される化合物を指す。当該用語は、式（Ａ）または式（Ｉ）の化合物の様々な結晶形、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物をさらに含む。

【0065】

ここで、「薬学的に許容される塩」という用語は、薬物として使用するのに適した、本発明の化合物と酸または塩基とで形成された塩を指す。薬学的に許容される塩は、無機塩および有機塩である。好ましい塩は、本発明の化合物と酸とで形成された塩である。塩形成に適した酸は、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸（Ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、エタンスルホン酸（Ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ｐ－トルエンスルホン酸（ｐ－ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ベンゼンスルホン酸（Ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ナフタレンスルホン酸（Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）等の有機酸、ならびにプロリン酸、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸を含むが、これらに限定されない。別の好ましい塩は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩またはカルシウム塩）、例えばメチルアミン塩、エチルアミン塩、プロピルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ｔ－ブチルアミン塩、エチレンジアミン塩、ヒドロキシエチルアミン塩、ジヒドロキシエチルアミン塩、トリヒドロキシエチルアミン塩（Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ ｓａｌｔ）、ならびにそれぞれモルホリン、ピペラジン、リジンで形成されるアミン塩等のアンモニウム塩（例えば、低級アルカノールアンモニウム塩（Ａｌｋａｎｏｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓａｌｔ）および他の薬学的に許容されるアミン塩）等の、本発明の化合物と塩基とで形成された塩である。

【0066】

「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物が溶媒分子と配位して特定の比率の錯体を形成する。「水和物」とは、本発明の化合物が水と配位して形成された錯体を指す。

【0067】

さらに、本発明の化合物は、式（Ａ）または式（Ｉ）に示される化合物のプロドラッグも含む。「プロドラッグ」という用語は、それ自体が生物学的に活性または不活性である、可能性のあるそれ自体を含み、適切な方法で摂取すると、人体内で代謝または化学反応を受けて、式（Ａ）もしくは式（Ｉ）の化合物、または式（Ａ）もしくは式（Ｉ）の化合物で形成された塩または溶液に変換される。前記プロドラッグは、前記化合物のカルボン酸エステル、炭酸エステル、リン酸エステル、硝酸エステル、硫酸エステル、スルホンエステル、スルホキシドエステル、アミノ化合物、カルバメート、アゾ化合物、ホスホルアミド、グルコシド、エーテル、アセタール等の形態を含むが、これらに限定されない。

【0068】

調製方法
本明細書の他の部分では、本発明の式（Ａ）または式（Ｉ）の構造を有する化合物の調製方法をより具体的に説明するが、これらの具体的な方法は、本発明を何ら限定するものではない。本発明の化合物は、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の様々な合成方法を任意に組み合わせて便宜に調製することができ、このような組み合わせは、本発明の属する技術分野の当業者であれば容易に行うことができる。

【0069】

医薬組成物および投与方法
本発明の化合物は、ＴＹＫ２シュードキナーゼドメイン（ＪＨ２）およびＪＡＫ１のシュードキナーゼドメイン（ＪＨ２）に対して優れた選択的阻害活性を有するため、本発明の化合物およびその様々な結晶形、薬学的に許容される無機もしくは有機塩、水和物または溶媒和物、ならびに本発明の化合物を主要な有効成分として含有する医薬組成物は、ＴＹＫ２キナーゼまたはＪＡＫ１キナーゼまたはその両者によって媒介される疾患（即ち、ＴＹＫ２および／またはＪＡＫ１媒介性疾患）を治療、予防および緩和するために使用されることができる。先行技術によれば、本発明の化合物は、乾癬、エリテマトーデス、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、関節炎、皮膚炎、ループス腎炎、多発性硬化症およびアルツハイマー病のような神経性炎症、強直性脊椎炎、化膿性汗腺炎、呼吸器疾患、糖尿病、炎症性眼疾患、肝炎、心血管疾患、全身性硬化症、臓器移植、円形脱毛症、ニキビ、湿疹、白斑、シェーグレン症候群、ウイルス性炎症、いくつかの癌等が含まれる様々な自己免疫および炎症関連疾患等の疾患の治療に使用されることができる。

【0070】

本明細書において、「選択的」という用語は、指定された標的（例えば、ＴＹＫ２（ＪＨ２）、ＪＡＫ１（ＪＨ２））に対する活性または効力（例えば、阻害活性）が、他の標的（例えば、ＪＡＫ１、２、３（ＪＨ１）、および／またはＴＹＫ２（ＪＨ１））に対する活性または効力（阻害活性）よりも大きいことを指し、例えば、指定された標的（例えば、ＴＹＫ２（ＪＨ２））に対する活性または効力（例えば、阻害活性）は、他の標的（例えば、ＪＡＫ１、２、３（ＪＨ１）、および／またはＴＹＫ２（ＪＨ１））に対する活性または効力（例えば、阻害活性）の少なくとも５０倍である。例えば、ＩＣ５０値で阻害活性を定量する場合、ＩＣ５０_他／ＩＣ５０_{ＴＹＫ２／ＪＡＫ１－ＪＨ２}＞５０、ここで、ＩＣ５０_{ＴＹＫ２／ＪＡＫ１－ＪＨ２}とは、ＴＹＫ２－ＪＨ２（ＴＹＫ２のシュードキナーゼドメイン）またはＪＡＫ１－ＪＨ２（ＪＡＫ１のシュードキナーゼドメイン）に対する前記化合物の阻害活性ＩＣ５０（ｎＭ）を指し、ＩＣ５０_他とは、ＴＹＫ２－ＪＨ１（ＴＹＫ２のキナーゼドメイン）、ＪＡＫ１－ＪＨ１（ＪＡＫ１のキナーゼドメイン）、ＪＡＫ２－ＪＨ１（ＪＡＫ２のキナーゼドメイン）、ＪＡＫ３－ＪＨ１（ＪＡＫ３のキナーゼドメイン）等のキナーゼの一種または複数種に対する前記化合物の阻害活性ＩＣ５０（ｎＭ）を指す。

【0071】

本発明の医薬組成物は、安全有効量の範囲内の本発明の化合物またはその薬理学的に許容される塩および薬理学的に許容される賦形剤または担体を含む。ここで、「安全有効量」とは、深刻な副作用を引き起こさずに状態を大幅に改善するのに十分な化合物の量を指す。通常、医薬組成物は、１～２００ｍｇの本発明の化合物／剤、より好ましくは、１～５０ｍｇの本発明の化合物／剤を含む。好ましくは、前記「１剤」は、一つのカプセルまたは錠剤である。

【0072】

「薬学的に許容される担体」とは、ヒトへの使用に適し、十分な純度および十分に低い毒性を有していなければならない、一つまたは複数の適合性固体または液体の充填剤またはゲル物質を指す。「適合性」とは、組成物の各成分が、本発明の化合物およびそれらの間で、化合物の効力を顕著に低下させることなく、互いにブレンドすることができることを指す。薬学的に許容される担体の一部の例としては、セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース等）、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム）、硫酸カルシウム、植物油（例えば、大豆油、ごま油、落花生油、オリーブ油等）、ポリオール（例えば、プロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトール等）、乳化剤（例えば、トゥイーン（登録商標））、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤、香味剤、安定剤、抗酸化剤、防腐剤、パイロジェンフリー水等を含む。

【0073】

本発明の化合物または医薬組成物の投与方式は、特に限定されず、代表的な投与方式は、経口、腫瘍内、直腸、非経口（静脈内、筋肉内または皮下）、および局所投与を含む（これらに限定されない）。

【0074】

経口投与用の固形剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤および顆粒剤を含む。これらの固形剤形において、活性化合物は、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム（ｄｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）等の少なくとも一つの従来の不活性賦形剤（または担体）と混合されるか、または（ａ）テンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または相溶化剤、（ｂ）ヒドロキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）、スクロースおよびアラビアゴム等の結合剤、（ｃ）グリセリン等の保湿剤、（ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモテンプンジャガイモデンプンまたはタピオカテンプンタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（ｅ）パラフィン等のリターダー、（ｆ）第四級アミン化合物等の吸収促進剤、（ｇ）セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｍｏｎｏｓｔｅａｒａｔｅ）等の湿潤剤、（ｈ）カオリン等の吸着剤、ならびに（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム）、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール（ｓｏｌｉｄ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ラウリル硫酸ナトリウム等の潤滑剤、またはその混合物等の成分と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤において、剤形は、緩衝剤も含むことができる。

【0075】

錠剤、シュガーピル、カプセル剤、丸剤および顆粒剤等の固形剤形は、腸溶性コーティングおよび当技術分野で公知の他の材料等の、コーティングおよびシェル材料を用いて調製することができる。それらは、乳白剤を含むことができ、また、このような組成物の活性化合物または化合物の放出は、消化管の特定の部分で遅延的な方式で放出することができる。使用可能な埋め込み成分の例としては、高分子物質およびワックスである。必要に応じて、活性化合物は、一つまたは複数の上記賦形剤とマイクロカプセルを形成することができる。

【0076】

経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容される乳濁液、溶液、懸濁液、シロップまたはチンキ剤を含む。活性化合物に加えて、液体剤形は、水または他の溶媒等の当技術分野で従来から使用される不活性希釈剤、および例えば、エタノール、イソプロパノール（ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ）、炭酸エチル（ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、酢酸エチル（Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、プロピレングリコール、１，３―ブタンジオール、ジメチルホルムアミド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）および油、特に綿実油（Ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ ｏｉｌ）、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、蓖麻子油およびごま油またはこれらの物質の混合物等の可溶化剤および乳化剤を含むことができる。

【0077】

これらの不活性希釈剤に加えて、組成物は、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤和香料等の補助剤も含むことができる。

【0078】

活性化合物に加えて、懸濁液は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよび脱水ソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメトキシドおよび寒天またはこれらの物質の混合物等の懸濁剤を含むことができる。

【0079】

非経口注射用の組成物は、生理学的に許容される滅菌含水または無水溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、および滅菌注射可能な溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含むことができる。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤は、水、エタノール、ポリオールおよびその適切な混合物を含む。

【0080】

局所投与に使用される本発明の化合物の剤形は、軟膏剤、粉末剤、パッチ剤、スプレー剤および吸入剤を含む。有効成分は、無菌条件下でで、生理学的に許容される担体および任意の防腐剤、緩衝剤、または必要に応じて必要となる可能性のある推進剤と一緒に混合される。

【0081】

本発明の化合物は、単独で、または他の薬学的に許容される化合物と併用して投与されることができる。

【0082】

医薬組成物が使用される場合、安全有効量の本発明の化合物が、治療を必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）に適用され、ここで、投与時の投与量は、考慮される有効用量であり、体重６０ｋｇの人の場合、一日量は、通常１～２００ｍｇ、好ましくは、１～５０ｍｇである。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状況等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。

【0083】

本発明の主な利点は、次のとおりである。
１．本発明の化合物は、優れた選択性を有する。非選択的ＪＡＫ阻害剤と比較して、本発明の化合物は、ＴＹＫ２およびＪＡＫ１のシュードキナーゼドメイン（ＪＨ２）に対して優れた阻害活性を有し、同時にキナーゼ機能を有するＪＨ１領域に対して阻害効果を示さない。従って、本発明のＴＹＫ２／ＪＡＫ１シュードキナーゼドメイン（ＪＨ２）選択的阻害剤は、より優れた安全性を有する。

【0084】

２．本発明の化合物は、優れた選択性を有する同時に優れた阻害活性を有する。

【0085】

以下、本発明は、具体的実施例と併せてさらに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において、具体的条件を示さない実験方法は、通常従来の条件または製造業者によって提案された条件に従う。特に明記されない限り、パーセンテージと部数とは、重量パーセンテージと重量部数とで計算される。

【0086】

調製実施例
実施例１：

【化10】

【0087】

ステップＡ

【化11】

【0088】

化合物１ａ（１．３ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をジオキサン（３５ｍＬ）に溶解させ、二ホウ酸ピナコール（２．４４ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１．２６ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）および［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリドジクロロメタン錯体（０．５３ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を順次に加え、窒素ガス保護下で、９０℃で５時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、室温に冷却し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル、２／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物１ｂ（６８０ｍｇ、４３．４％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ６．７９－６．７５．（ｍ，３Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，１２Ｈ）。ＭＳ：２４９．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0089】

ステップＢ

【化12】

【0090】

化合物１ｂ（３３０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）をジオキサン（１６ｍＬ）および水（４ｍＬ）に溶解させ、化合物１ｃ（２３３ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（８６３ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を順次に加え、窒素ガス保護下で、９０℃で６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、室温に冷却し、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル／酢酸エチル、１／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物１ｄ（２３０ｍｇ、８４．５％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ８．４７（ｓ，１Ｈ），６．９６－６．９４（ｍ，１Ｈ），６．８６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７５－６．７３（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ ：２０５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0091】

ステップＣ

【化13】

【0092】

化合物１ｄ（２１０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）および化合物１ｅ（２５８ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解させ、０℃でリチウムビストリメチルシリルアミド（ＴＨＦ中１Ｍ、３．１ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、室温で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物１ｆ（３４０ｍｇ、８７．８％）を得る。ＭＳ：３７７．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0093】

ステップＤ

【化14】

【0094】

化合物１ｆ（３１０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）および化合物１ｇ（１８３ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍＬ）に溶解させ、ＸａｎｔＰｈｏｓ（１４２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５３６ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）およびＸＰｈｏｓＰｄＧ２（６５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を順次に加え、窒素ガス保護下で、１１０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１～５／１、ｖ／ｖ）によって分離して、粗生成物１０５ｍｇを得る。粗生成物をＳＦＣ（Ｔｈａｒ ｐｒｅｐ ８０、カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－Ｈ ２５０ｍｍ×２０ｍｍ×５μｍ、改良剤：４０％メタノール（ＮＨ_４ＯＨ ０．２％）／６０％ ＣＯ_２、総流量：４０ｇ／ｍｉｎ、温度：４０℃）によって分離して、二つの異性体：化合物１Ｓ（４０ｍｇ、Ｒｔ：８．８５ｍｉｎ、ＯＲ：２０３．４、２４．５℃）および化合物１Ｒ（４４ｍｇ、Ｒｔ：１３．８１ｍｉｎ、ＯＲ：－２３７．６、２４．５℃）を得、総収率：２２．６％である。

【0095】

化合物１Ｓ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ １１．１０（ｓ，１Ｈ），１０．９６（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５０－７．４８（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．２４（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．３８（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．２９（ｍ，２Ｈ），０．８７－０．６９（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ：４５２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0096】

化合物１Ｒ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ １１．１０（ｓ，１Ｈ），１０．９６（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５０－７．４８（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．２４（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．３８（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．２９（ｍ，２Ｈ），０．８７－０．６９（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ：４５２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0097】

実施例２

【化15】

【0098】

ステップＡ

【化16】

【0099】

化合物２ａ（１０ｇ、５７．８２ｍｍｏｌ）を、０℃で２００ｍｌの濃硫酸を含む三口ボトルに加え、０℃で攪拌しながら９０％発煙濃硝酸（６ｇ、８６．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温条件で２０時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、反応液を３００ｍＬの氷水に注ぎ、酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、それぞれ水（２００ｍＬ×２）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２００ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、黄色固体化合物２ｂ（７．８ｇ、６１．９％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ：７．９９－７．９８（ｍ，１Ｈ），７．９３－７．９２（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ：２１９．０，２２１．０［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0100】

ステップＢ

【化17】

【0101】

化合物２ｂ（７．８ｇ、３５．７９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（９．８ｇ、７１．２４ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを含む２５０ｍｌの丸底フラスコに順次に加え、室温条件で１０分間攪拌し、ヨードメタン（１０．１ｇ、７１．２４ｍｍｏｌ）を加え、３０℃で２０時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、ろ過し、減圧下でろ液を濃縮する。１００ｍＬの水を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー （溶離液：石油エーテル／酢酸エチル、２０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、白色固体化合物２ｃ（４ｇ、４８．２％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣＬ３）：δ ｐｐｍ：８．０９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：２３３．０，２３５．０［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0102】

ステップＣ

【化18】

【0103】

化合物２ｃ（４ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）および鉄粉（４．８ｇ、８６ｍｍｏｌ）を、２０ｍＬのエタノール／２０ｍＬの酢酸／１０ｍＬの水を含む１００ｍＬの丸底フラスコに順次に加え、室温で２時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、ろ過し、減圧下でろ液を濃縮する。５０ｍＬの水を加え、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ＝１０に調節し、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、２０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物２ｄ（３ｇ、８６．０％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣＬ３）：δ ｐｐｍ：７．６０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：２０３．０，２０５．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0104】

ステップＤ

【化19】

【0105】

化合物２ｄ（２ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（１．２８ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１．０５ｇ、１．９ｍｍｏｌ）および亜鉛粉末（５８．５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）を含む１００ｍＬの丸底フラスコに加え、次いでトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０．９１ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で、１３０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（３００ｍＬ）を加えて希釈し、ろ過し、ろ液を酢酸エチル（３００ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル、１／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物２ｅ（０．９８ｇ、６５．９％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ ７．７１．（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７０．（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：１５０．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0106】

ステップＥ

【化20】

【0107】

化合物２ｅ（０．５ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）、化合物２ｆ（７４５ｍｇ、１０．０５ｍｍｏｌ）およびカリウムｔ－ブトキシド（１．５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）をキシレン（２０ｍＬ）に一度に加え、窒素ガス保護下で、１４０℃で３時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、室温に冷却し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物２ｇ（６０ｍｇ、８．７％）を得る。ＭＳ：２０５．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0108】

ステップＦ

【化21】

【0109】

化合物２ｇ（６０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）および化合物１ｅ（７３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解させ、－７８℃でリチウムビストリメチルシリルアミド（ＴＨＦ中１Ｍ、０．８８ｍＬ、０．８８ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、室温で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物２ｈ（４４ｍｇ、４０．１％）を得る。ＭＳ：３７８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0110】

ステップＧ

【化22】

【0111】

化合物２ｈ（４４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）および化合物１ｇ（３８．８ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０ｍＬ）に溶解させ、ＸａｎｔＰｈｏｓ（１３．５ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）およびＸＰｈｏｓ ＰｄＧ２（１８．１ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を順次に加え、窒素ガス保護下で、１２０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１～５／１、ｖ／ｖ）によって分離して、粗生成物６５ｍｇを得る。粗生成物をＳＦＣ（Ｔｈａｒ ｐｒｅｐ ８０、カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－Ｈ ２５０ｍｍ×２０ｍｍ×５μｍ、改良剤：４０％メタノール（ＮＨ_４ＯＨ ０．２％）／６０％ ＣＯ_２、総流量：４０ｇ／ｍｉｎ、温度：４０℃）によって分離して、二つの異性体：化合物２Ｓ（５．２ｍｇ、Ｒｔ：８．８５ｍｉｎ、ＯＲ：２３５．９、２７．１℃）および化合物２Ｒ（５．６ｍｇ、Ｒｔ：１２．６４ｍｉｎ、ＯＲ：－２３７．６、２７．１℃）を得、総収率：２１．７％である。

【0112】

化合物２Ｓ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ １２．４４（ｓ，１Ｈ），１１．１５（ｓ，１Ｈ），９．８９（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．１７－８．１６（ｍ，１Ｈ），７．５１－７．５０（ｍ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．４７（ｍ，１Ｈ），１．４７－１．３８（ｍ，２Ｈ），０．９２－０．８０（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ：４５３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0113】

化合物２Ｒ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ １２．４４（ｓ，１Ｈ），１１．１５（ｓ，１Ｈ），９．８９（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．１７－８．１６（ｍ，１Ｈ），７．５１－７．５０（ｍ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．４７（ｍ，１Ｈ），１．４７－１．３８（ｍ，２Ｈ），０．９２－０．８０（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ：４５３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0114】

実施例３

【化23】

【0115】

ステップＡ

【化24】

【0116】

化合物３ａ（１ｇ、３．１ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に加え、次いでヒドロキシルアミン水溶液（０．８２ｇ、５０％，１２．４ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物３ｂ（０．６１ｇ、５５．７％）を得る。ＭＳ：３５３．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0117】

ステップＢ

【化25】

【0118】

化合物３ｂ（３００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５７ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に加え、次いで塩化メトキシアセチル（１８４ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、室温で３時間攪拌する。その後１Ｎフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液（３．４ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）を加える。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物３ｃ（２６０ｍｇ、７５．１％）を得る。ＭＳ：４０８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0119】

ステップＣ

【化26】

【0120】

化合物３ｃ（２６０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）および２，４－ジメトキシベンジルアミン（２１３ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）に溶解させ、フッ化カリウム（１１０ｍｇ、１９ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で、１１０℃で４時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物３ｄ（２２０ｍｇ、６４．１％）を得る。ＭＳ：５３９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0121】

ステップＤ

【化27】

【0122】

化合物３ｄ（２２０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加え、窒素ガス保護下で、室温で４時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、減圧下で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ＝８に調節し、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物３ｅ（１４０ｍｇ、８８．０％）を得る。ＭＳ：３８８．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0123】

ステップＥ

【化28】

【0124】

化合物３ｅ（１１０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）およびピリジン（６７ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を１，２－ジクロロエタン（１０ｍＬ）に溶解させ、次いで化合物３ｆ（１１１ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、８０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／メタノール、１０／１－５／１、ｖ／ｖ）によって分離して、粗生成物５０ｍｇを得る。粗生成物をＳＦＣ（Ｔｈａｒ ｐｒｅｐ ８０、カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－Ｈ ２５０ｍｍ×２０ｍｍ×５μｍ、改良剤：４０％ メタノール（ＮＨ_４ＯＨ ０．２％）／６０％ ＣＯ_２、総流量：４０ｇ／ｍｉｎ、温度：４０ ℃））によって分離して、二つの異性体：化合物３Ｓ（１２ｍｇ、Ｒｔ：２．６０ｍｉｎ、ＯＲ：１４３．４、２５．０℃）および化合物３Ｒ（１１ｍｇ、Ｒｔ：３．０３ｍｉｎ、ＯＲ：－１３９．１、２５．０℃）を得、総収率：１７．０％である。

【0125】

化合物３Ｓ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ １１．１３（ｓ，１Ｈ），１１．０４（ｓ，１Ｈ），９．１３（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．７１－７．６６（ｍ，２Ｈ），７．４０－７．３６（ｍ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），２．４１－２．３９（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．３０（ｍ，２Ｈ），０．８４－０．６９（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ：４８３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0126】

化合物３Ｒ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ １１．１８（ｓ，１Ｈ），１１．０８（ｓ，１Ｈ），９．１８（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），７．７３－７．７０（ｍ，２Ｈ），７．４４－７．４０（ｍ，１Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），２．４５－２．４３（ｍ，１Ｈ），１．３８－１．３４（ｍ，２Ｈ），０．９０－０．７３（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ：４８３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0127】

実施例４

【化29】

【0128】

ステップＡ

【化30】

【0129】

化合物１ｄ（５００ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解させ、－７８℃でリチウムビストリメチルシリルアミド（ＴＨＦ中１Ｍ、７．４ｍＬ、７．４ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、－７８℃で１時間攪拌する。次いで化合物４ａ（５６１ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物４ｂ（７１０ｍｇ、７７．２％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣＬ３）：δ ｐｐｍ １０．６３（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７－７．２５（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：３７５．７，３７７．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0130】

ステップＢ

【化31】

【0131】

化合物４ｂ（３７０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）および２，４－ジメトキシベンジルアミン（３２９ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（２８６ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのジメチルスルホキシドを含む丸底フラスコに順次に加え、１２０℃で４８時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、酢酸エチル（４０ｍＬ）を加えて希釈し、それぞれ水（２０ｍＬ×２）および飽和食塩水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物４ｃ（２９０ｍｇ、５８．２％）を得る。ＭＳ：５０６．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0132】

ステップＣ

【化32】

【0133】

化合物４ｃ（２７０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を、５ｍＬのジクロロメタンを含む丸底フラスコに加え、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を滴下し、室温で２時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ＝８に調節し、ジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色油状化合物４ｄ（１７０ｍｇ、８９．５％）を得る。ＭＳ：３５６．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0134】

ステップＤ

【化33】

【0135】

化合物４ｄ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解させ、０℃でリチウムビストリメチルシリルアミド（ＴＨＦ中１Ｍ、０．６ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、０℃の室温で１時間攪拌する。次いで化合物３ｆ（３７ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、粗生成物２０ｍｇを得る。粗生成物をＳＦＣ（Ｔｈａｒ ｐｒｅｐ ８０、カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ－Ｈ ２５０ｍｍ×２０ｍｍ×５μｍ、改良剤：４０％メタノール（ＮＨ_４ＯＨ ０．２％）／６０％ＣＯ_２、総流量：４０ｇ／ｍｉｎ、温度：４０℃）によって分離して、二つの異性体：化合物４Ｓ（４．４ｍｇ、Ｒｔ：５．５９ｍｉｎ、ＯＲ：２２８．０、２４．５℃）および化合物４Ｒ（４．２ｍｇ、Ｒｔ：７．０７ｍｉｎ、ＯＲ：－１３９．４、２４．５℃）を得、総収率：１３．６％である。

【0136】

化合物４Ｓ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ｐｐｍ １０．７３（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｓ １Ｈ），７．７７－７．７５（ｍ，１Ｈ），７．５５－７．５２（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．２６（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．０４－２．０１（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），１．４７－１．４４（ｍ，１Ｈ），１．０６－１．０２（ｍ，１Ｈ），０．９７－０．９０（ｍ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ：４５１．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0137】

化合物４Ｒ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ｐｐｍ １０．７４（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｓ １Ｈ），７．７７－７．７５（ｍ，１Ｈ），７．５４－７．５３（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．２６（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．０５－２．０１（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），１．４７－１．４４（ｍ，１Ｈ），１．０６－１．０２（ｍ，１Ｈ），０．９７－０．９０（ｍ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ：４５１．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0138】

実施例５

【化34】

【0139】

ステップＡ

【化35】

【0140】

化合物２ｅ（３００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）をエタノール中（１０ｍＬ）に加え、次いで５０％ヒドロキシルアミン水溶液（５２８ｍｇ、８ｍｍｏｌ）を加え、４０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物５ａ（３１０ｍｇ、８５．０％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ９．６８（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｓ，２Ｈ），５．７６（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ：１８２．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0141】

ステップＢ

【化36】

【0142】

化合物５ａ（２２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２０２ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に加え、次いで塩化メトキシアセチル（２５９ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、室温で３時間攪拌する。次いでフッ化テトラブチルアンモニウム１Ｎテトラヒドロフラン溶液（３ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物５ｂ（１４０ｍｇ、４９．２％）を得る。ＬＣＭＳ：２３７．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0143】

ステップＣ

【化37】

【0144】

化合物５ｂ（１４０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）および化合物１ｅ（１６０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解させ、０℃で水素化ナトリウム（６０％，９２ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で、室温で４時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、ろ過して、黄色固体化合物５ｃ（１５０ｍｇ、６１．０％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ １２．６７（ｓ，１Ｈ），９．５０（ｓ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ：４０９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0145】

ステップＤ

【化38】

【0146】

化合物５ｃ（１５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）および２，４－ジメトキシベンジルアミン（１８０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）に溶解させ、フッ化カリウム（８４ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で、１１０℃で４時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物５ｄ（９０ｍｇ、４４．１％）を得る。ＬＣＭＳ：５３９．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0147】

ステップＥ

【化39】

【0148】

化合物５ｄ（９０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加え、窒素ガス保護下で、室温で４時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、減圧下で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ－８に調節し、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１、ｖ／ｖ）によって分離して、黄色固体化合物５ｅ（６０ｍｇ、９２．７％）を得る。ＬＣＭＳ：３９０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0149】

ステップＦ

【化40】

【0150】

化合物５ｅ（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびピリジン（３２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を１，２－ジクロロエタン（１０ｍＬ）に溶解させ、次いで化合物３ｆ（５２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素ガス保護下で、８０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー （ジクロロメタン／メタノール、１０／１－５／１、ｖ／ｖ）によって分離して、化合物５（異性体混合物、５ｍｇ、７．９％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ １２．５６（ｓ，１Ｈ），１１．２０（ｓ，１Ｈ），９．９０（ｓ，１Ｈ），９．２９（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｓ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），２．００－１．９９（ｍ，１Ｈ），１．４９－１．４７（ｍ，２Ｈ），０．９２－０．８０（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ：４８３．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0151】

実施例６

【化41】

【化42】

【0152】

化合物１ｆ（３１０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）および化合物６ａ（（Ｓ）－スピロ［２，２］ペンタン－１－カルボン酸、ＣＡＳ＃２４９５６３－５８－４から調製される）（１８３ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍＬ）に溶解させ、ＸａｎｔＰｈｏｓ（１４２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５３６ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）およびＸＰｈｏｓＰｄＧ２（６５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を順次に加え、窒素ガス保護下で、１１０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１－５／１、ｖ／ｖ）によって分離して、化合物１Ｓ（１０５ｍｇ）を得る。

【0153】

化合物１Ｓ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ １１．１０（ｓ，１Ｈ），１０．９６（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５０－７．４８（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．２４（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．３８（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．２９（ｍ，２Ｈ），０．８７－０．６９（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ：４５２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0154】

実施例７

【化43】

【化44】

【0155】

化合物１ｆ（３１０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）および化合物７ａ（（Ｒ）－スピロ［２，２］ペンタン－１－カルボン酸、ＣＡＳ＃ ２４９５６３－５３－９から調製される）（１８３ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍＬ）に溶解させ、ＸａｎｔＰｈｏｓ（１４２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５３６ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）およびＸＰｈｏｓＰｄＧ２（６５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を順次に加え、窒素ガス保護下で、１１０℃で１６時間攪拌する。ＬＣＭＳによってモニタリングし、反応完了後、水（２０ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、中圧迅速分取クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１０／１－５／１、ｖ／ｖ）によって分離して、化合物１Ｒ（１００ｍｇ）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ｐｐｍ １１．１０（ｓ，１Ｈ），１０．９６（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．６４－７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５０－７．４８（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．２４（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．３８（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．２９（ｍ，２Ｈ），０．８７－０．６９（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ：４５２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0156】

試験実施例
試験例１：ＣＤ_３＋細胞におけるｐＳＴＡＴ５発現に対する化合物の阻害効果のＦＡＣＳ検出
１．実験材料および機器

【0157】

１．１．実験試薬
・ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ＃Ｄ２６５０－１００ｍＬ、室温で保存する。
・Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ＃５５８０５０、４℃で保存する。
・溶解／固定緩衝液、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ＃５５８０４９、室温で保存する。
・ＥＤＴＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ＃１５５７５－０３８、室温で保存する。
・ＰＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｃａｔ＃ＳＨ_３０２５６．０１、４℃で保存する。
・ＰＥマウス抗ヒトＣＤ_３、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ＃５５５３３３、４℃で保存する。
・マウス抗ヒトリン酸化ＳＴＡＴ５（ｐＹ６９４）（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ＃５６２０７６、４℃で保存する。
・ＩＦＮ－α、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ＃５９２７０２。

【0158】

１．２．実験消耗品
・マイクロプレート（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ）、９６ウェル、ＰＰ、ｖ字型ボトム、Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｃａｔ＃ＧＮ６５１２０１－１００ＥＡ。
・５ｍＬポリスチレンラウンドチューブ、ＦＡＬＣＯＮ、Ｃａｔ＃０４３１８０１１。
・９６スクエアホールストレージプレート、Ｔｈｅｒｍｏ、Ｃａｔ＃ＡＢ－０６６１。
・９６ウェルプレート、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃａｔ＃３５９９。

【0159】

１．３．機器
・ＣＯ_２細胞インキュベーター：ＭＣＯ－１５ＡＣ（Ｔｈｅｒｍｏ）。
・ピペット：０．２～１０μＬ、２０～２００μＬ、２００～１０００μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ）。
・マルチチャンネルピペット：０．２～１０μＬ、５～５０μＬ、２０～３００μＬ（Ｒａｉｎｉｎｇ）。
・遠心機：Ｔｈｅｒｍｏ遠心機ＳＴ ４０Ｒ、Ｔｈｅｒｍｏ ＬＥＧＥＮＤ Ｍｉｃｒｏ ２１Ｒ。
・水システム：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ－Ｑ参照システム。
・冷凍庫：ハイアール超低温冷凍庫。
・ハイアール４℃冷蔵庫。
・ハイアール－２０℃冷凍庫。
・渦電流：ＥＡＲＴＨ ＲＥＱＵＩＲＥＤ。
・製版機：ＱＩ ＬＩＮ ＢＥＩ ＥＲ、ＭＨ－２。
・フローサイトメーター：ＢＤ ＦＡＣＳ Ｖｅｒｓｅ ＴＭフローサイトメーター。

【0160】

２．実験方法
２．１．化合物の希釈
（１）実験当日、化合物をＤＭＳＯで１０ｍＭ溶液に配合し、ＤＭＳＯで１．５ｍＭに希釈し、８勾配濃度を３倍希釈する。
（２）５μＬの希釈化合物を１２０ｕｌの０．１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳ溶液に移す。
（３）陽性および陰性対照群を設定し、陽性対照および陰性対照群に０．２％ＤＭＳＯを加える。

【0161】

２．２．実験プロセス
（１）９６ウェル細胞培養プレートの各ウェルに５０万個、６７．５ｕＬの体積のヒトＰＢＭＣ細胞を加える。
（２）３．５ｕｌの希釈化合物を加え、均一に混合する。
（３）３７℃のインキュベーターで６０分間インキュベートする。
（４）ＩＦＮ－ａｌｐｈａを、０．１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳで６００ｎｇ／ｍＬに希釈し、ＰＥ－ａｎｔｉ－ｈＣＤ_３抗体を０．１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳで３倍に希釈する。上記６０分間インキュベート完了後、５ｕＬのウェルごとに希釈したＰＥ－ａｎｔｉ－ｈＣＤ_３抗体を加え、４ｕＬのウェルごとに希釈したＩＦＮ－ａｌｐｈａを加え、即ち、各ウェルのＩＦＮ－ａｌｐｈａの最終濃度は、３０ｎｇ／ｍＬである。
（５）３７℃のインキュベーターで３０分間インキュベートする。
（６）すべての細胞を９６ウェルの深いウェルプレートに移し、１ｍＬの３７℃で予熱した熱分解／固定緩衝液を加える。
（７）３７℃の暗所で１０分間インキュベートする。
（８）６００ｇで５分間遠心分離した後に上清を捨て、１ｍのＬＰＢＳを加えて２回洗浄し、且つ遠心分離する。
（９）細胞沈殿に１ｍＬのＰｅｒｍ緩衝液ＩＩＩを加える。
（１０）４の暗所で３０分間インキュベートする。
（１１）６００ｇで５分間遠心分離した後に上清を捨て、１ｍのＬＰＢＳを加えて２回洗浄し、且つ遠心分離する。
（１２）ＡＰＣ抗ヒトｐＳＴＡＴ５抗体を染色緩衝液で２００倍希釈し、１００ｕＬのウェルごとを細胞ウェルに加え、均一に混合する。
（１３）室温で４０分間インキュベートする。
（１４）染色緩衝液を加えてウェルあたり１ｍＬで２回洗浄し、６００ｇで５分間遠心分離する。
（１５）上清を捨てた後、細胞沈殿を３００ｕＬの染色緩衝液で再懸濁する。
（１６）フローサイトメーターにサンプルをロードして分析する。試験するサンプルのＩＣ_５０を取得する（表１）。

【0162】

【表2】

【0163】

試験例２：
ＪＡＫファミリー選択性の比較
１．実験方法

【0164】

１．１．シュードキナーゼ（ＪＨ２）の実験手順は、次のとおりである。
１．１．１．化合物を１０ｍＭの保存濃度になるようにＤＭＳＯに溶解する。
１．１．２．化合物希釈プレートで、２００倍の最終濃度の化合物濃度を配合し、２７倍希釈法に従って、最高濃度点から合計四つの濃度点まで希釈し、Ｅｃｈｏプレートに移す。
１．１．３．Ｅｃｈｏ機器を使用して、化合物をＥｃｈｏプレートから３８４ウェル実験プレートにパルスし、化合物が１１個の濃度点を有する３倍希釈マトリックスになる。
１．１．４．５ｕｌの３Ｘ ＴＹＫ２－ＪＨ２またはＪＡＫ１－ＪＨ２シュードキナーゼを３８４ウェル実験プレートに加える。
１．１．５．５ｕｌの３Ｘ Ｔｂを３８４ウェル実験プレートに加える。
１．１．６．５ｕｌの３Ｘ Ｔｒａｃｅｒを３８４ウェル実験プレートに加える。
１．１．７．３０秒間遠心分離し、室温で６０分間インキュベートする。
１．１．８．Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でシグナル値を読み取る。

【0165】

１．２．キナーゼ（ＪＨ１）実験手順は、次のとおりである。
１．２．１．化合物を１０ｍＭの保存濃度になるようにＤＭＳＯに溶解する。
１．２．２．化合物希釈プレートでは、１００倍の最終濃度の化合物濃度を配合し、２７倍希釈法に従って、最高濃度点から合計四つの濃度点まで希釈し、Ｅｃｈｏプレートに移す。
１．２．３．Ｅｃｈｏ機器を使用して、化合物をＥｃｈｏプレートから３８４実験プレートにパルスし、化合物が１１個の濃度点を有する３倍希釈マトリックスになる。
１．２．４．２Ｘキナーゼ作動液を配合し、ウェルあたり５ｕｌを３８４ウェル実験プレートに加え、化合物およびキナーゼを室温で１５分間インキュベートする。
１．２．５．５ｕｌの２Ｘ基質（ＡＴＰを含む）を３８４ウェルプレートに加える。
１．２．６．室温で４５分間インキュベートする。
１．２．７．検出試薬の混合液を３８４ウェルプレートに加え、３０秒間遠心分離し、室温で６０分間インキュベートする。
１．２．８．Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でシグナル値を読み取る。

【0166】

１．３．データ分析
１．３．１．ＸＬ－Ｆｉｔソフトウェアを使用してデータを分析して、化合物ＩＣ_５０を得、結果は、表２に示される。

【0167】

【表3】

【0168】

本発明で言及されたすべての文書は、あたかも各文書が個別に参照として引用されたかのように、本出願における参照として引用される。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も、本出願の添付の請求範囲によって定義される範囲に含まれる。

【国際調査報告】