特表 2024-532516 ＭＯＧ結合タンパク質及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-05

(54)【発明の名称】ＭＯＧ結合タンパク質及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20240829BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240829BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240829BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240829BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240829BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240829BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240829BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18

C07K19/00 ZNA

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N5/10

A61K35/17

A61P25/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024514335

(86)(22)【出願日】2022-09-02

(85)【翻訳文提出日】2024-03-01

(86)【国際出願番号】 US2022075956

(87)【国際公開番号】W WO2023035002

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】63/240,626

(32)【優先日】2021-09-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523443180

【氏名又は名称】サンガモ セラピューティクス，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】アベル，トビアス

(72)【発明者】

【氏名】デ ラ ロサ，マウルス

(72)【発明者】

【氏名】デュモン，セリーヌ

(72)【発明者】

【氏名】フェナルド，デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】フリケシュ，ジハネ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087CA04

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZA01

4C087ZA02

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＭＯＧに結合することができる新規のタンパク質（例えば、抗体またはその断片）の開発、及び制御性免疫細胞の細胞表面に発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）への当該タンパク質の抗原結合部分の包含に関する。これらは、脱髄を低減または予防するため、再髄鞘化を誘導するため、及び多発性硬化症などの炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療するための貴重な治療ツールを提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）結合タンパク質であって、
（ｉ）それぞれ、配列番号３～５を含む相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１～３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または配列番号３～５のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＨＣＤＲと、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号６～８を含むＬＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、または配列番号６～８のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＬＣＤＲと、を含む、前記ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）結合タンパク質。

【請求項2】

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）結合タンパク質であって、
（ｉ）それぞれ、配列番号３～５を有する相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１～３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号６～８を有するＬＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、前記ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）結合タンパク質。

【請求項3】

前記ＶＨが、配列番号１１またはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含み、
前記ＶＬが、配列番号９またはそれと少なくとも約９０％同一である任意のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項4】

前記ＶＨが、配列番号１１を含み、
前記ＶＬが、配列番号９を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項5】

前記タンパク質が、一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である、請求項１～４のいずれか１項に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項6】

前記タンパク質が、配列番号１２を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）またはそれと少なくとも約９５％同一である任意のアミノ酸配列である、請求項５に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項7】

前記タンパク質が、配列番号１２を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である、請求項５または６に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項8】

前記タンパク質が、配列番号５１を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）またはそれと少なくとも約９５％同一である任意のアミノ酸配列である、請求項５に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項9】

前記タンパク質が、配列番号５１を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である、請求項５または８に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項10】

前記タンパク質が、マウス、カニクイザル、及びヒトＭＯＧと結合することができる、先行請求項のいずれか１項に記載のＭＯＧ結合タンパク質。

【請求項11】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＯＧ結合タンパク質を含む細胞外ドメインと、
（ｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、を含む、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項12】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、
任意選択で配列番号１５もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び／または
任意選択で配列番号１６もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む、請求項１１に記載のＣＡＲ。

【請求項13】

前記膜貫通ドメインが、任意選択で配列番号１４またはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ８に由来する、請求項１１または１２に記載のＣＡＲ。

【請求項14】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）請求項５～１０のいずれか１項に定義される抗ＭＯＧ ｓｃＦｖと、
（ｉｉ）任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む、細胞内シグナル伝達ドメインと、
（ｖ）任意選択で、配列番号２を任意選択で含むタグと、
（ｖｉ）任意選択で、配列番号１を任意選択で含むリーダー配列と、を含む、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項15】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）任意選択で配列番号１２含む、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、
（ｖ）任意選択で、配列番号２を任意選択で含むタグと、
（ｖｉ）任意選択で、配列番号１を任意選択で含むリーダー配列と、を含む、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項16】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）任意選択で配列番号５１含む、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、
（ｖ）任意選択で、配列番号２を任意選択で含むタグと、
（ｖｉ）任意選択で、配列番号１を任意選択で含むリーダー配列と、を含む、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項17】

前記細胞外ドメインまたは抗ＭＯＧ ｓｃＦｖが、配列番号１２の配列を含む、請求項１１～１５のいずれか１項に記載のＣＡＲ。

【請求項18】

前記細胞外ドメインまたは抗ＭＯＧ ｓｃＦｖが、配列番号５１の配列を含む、請求項１１～１４及び１６のいずれか１項に記載のＣＡＲ。

【請求項19】

請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＯＧ結合タンパク質、または請求項１１～１８のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする、核酸分子。

【請求項20】

請求項１９に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項21】

請求項１１～１８のいずれか１項に記載のＣＡＲを発現するか、または請求項１９に記載の核酸分子もしくは請求項２０に記載のベクターを含む、制御性免疫細胞。

【請求項22】

前記制御性免疫細胞が、制御性Ｔ細胞である、請求項２１に記載の制御性免疫細胞。

【請求項23】

単離されたヒトＴ細胞であって、前記Ｔ細胞が、請求項１９に記載の核酸分子または請求項２０に記載のベクターを含む、前記単離されたヒトＴ細胞。

【請求項24】

制御性免疫細胞の集団であって、前記集団が、請求項２１または２２に定義される複数の細胞を含む、前記制御性免疫細胞の集団。

【請求項25】

請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞または請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団を含む、組成物。

【請求項26】

薬剤として使用するための、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

脱髄疾患／障害、特に自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物。

【請求項28】

ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特にＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物。

【請求項29】

炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療する際に使用するためのものであり、好ましくは、前記炎症性ＣＮＳ疾患／障害が、多発性硬化症であり、より好ましくは、前記多発性硬化症が、
（ｉ）再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、
（ｉｉ）一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）、または
（ｉｉｉ）二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）である、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物。

【請求項30】

自己抗原及び／または自己抗体によって引き起こされるか、または悪化する脱髄障害を治療する際に使用するための、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物。

【請求項31】

ＣＮＳの脱髄を含む炎症及び／または損傷を低減または予防する際に使用するための、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物。

【請求項32】

障害または疾患を治療することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項２１もしくは２２に記載の制御性免疫細胞、請求項２４に記載の制御性免疫細胞の集団、または請求項２５に記載の組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。

【請求項33】

前記疾患または障害が、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特に、ＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものである、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記疾患または障害が、自己抗原及び／または自己抗体によって引き起こされるか、または悪化する脱髄障害である、請求項３２に記載の方法。

【請求項35】

前記方法が、ＣＮＳの脱髄を含む炎症及び／または損傷を低減または予防するためのものである、請求項３２に記載の方法。

【請求項36】

前記方法が、炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療するためのものであり、好ましくは、前記炎症性ＣＮＳ疾患／障害が、多発性硬化症であり、より好ましくは、前記多発性硬化症が、
（ｉ）再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、
（ｉｉ）一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）、または
（ｉｉｉ）二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）である、請求項３２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月３日に出願された米国特許出願第６３／２４０，６２６号の優先権を主張するものである。本優先権出願の開示は、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、かつ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２２年９月２日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、０２５２９７＿ＷＯ０４０＿ＳＬ．ｘｍｌという名前で、サイズは９６，５４６バイトである。

【背景技術】

【0003】

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）は、主に中枢神経系（ＣＮＳ）に見出される糖タンパク質である。ＭＯＧは、ミエリン形成オリゴデンドロサイトの表面に見出され、ミエリン鞘の構成要素であり、脳、視神経、及び脊髄の神経線維を囲む保護被覆である。

【0004】

脱髄疾患は、ミエリン鞘に損傷または破壊（脱髄）をもたらす任意の状態である。ミエリン鞘が損傷すると、神経インパルスが遅くなるか、または停止し、神経学的症状を引き起こす。そのような症状は、単離された場合、臨床的に孤立した症候群（ＣＩＳ）として定義される。ＣＩＳを経験する個体は、多発性硬化症（ＭＳ）を発症する場合もあれば、しない場合もある。

【0005】

ＭＳは、中枢神経系の最も一般的な脱髄疾患であり、炎症、脱髄、及び神経変性の複数の領域によって特徴付けられる。ＭＳには、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）、及び二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）の３つの主なタイプがある。ＭＳの初期段階では、神経損傷は、ミエリンエピトープを認識し、かつミエリン鞘を攻撃し、ミエリン発現細胞の破壊をもたらす身体の免疫系の自己反応性Ｔ細胞に起因して生じると考えられる。患者の大部分は、最初は比較的良性の再発寛解型疾患経過（ＲＲＭＳ）を呈する。一部は最終的に二次進行型（ＳＰＭＳ）に変換される。より少ない割合の患者は、一次進行（ＰＰＭＳ）を発症し、発症からいかなる寛解の回復段階もなく疾患進行においてゆっくりと悪化する。

【0006】

Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）は、免疫寛容を確立及び維持し、かつ炎症後の様々な免疫応答を抑制することにおいて積極的な役割を果たす。Ｔｒｅｇの枯渇は、免疫応答誘発性疾患からの自然回復を阻害することができ、これらの細胞の移行は、疾患の重症度を低減することができる。ヒトＴｒｅｇは、免疫ホメオスタシスの維持において重要な役割を果たし、したがって、多様な臨床状態において治療手段として使用され得る。これらはまた、治療的状況において抗原特異的免疫調節を付与するために利用することができる強力な免疫抑制特性を有する。

【0007】

マウスＭＯＧを標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現した操作されたＣＮＳ標的化制御性Ｔ細胞は、Ｆｒａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１２，９：１１２でインビトロ及びＥＡＥマウスにおいて評価された。

【0008】

中枢神経系の炎症性疾患／障害、特にＭＳなどの自己抗原及び／または抗抗体によって引き起こされるか、または悪化する脱髄障害に対する効果的な治療が必要とされているままである。

【発明の概要】

【0009】

本発明は、炎症部位におけるＭＯＧの結合に基づいて、炎症部位における制御性免疫細胞を活性化する新規のツールの開発に関する。より具体的には、本発明者らは、ＭＯＧに結合することができる新規のタンパク質（例えば、抗体またはその断片）を本明細書に開示する。制御性免疫細胞の細胞表面に発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に、当該タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）の抗原結合部分を含めることにより、ＭＯＧへの結合時に、ＣＮＳにおけるこれらの操作された細胞の活性化が可能になる。したがって、これらの操作された制御性免疫細胞は、脱髄を低減または予防するため、再髄鞘化を誘導するため、及びＭＳなどの炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療するための貴重な治療ツールとなる。

【0010】

したがって、本発明は、予期しない特性と有利な特性との組み合わせを有する新しいタンパク質（例えば、抗体またはその断片）に関する。したがって、本発明は、予期しない特性と有利な特性との組み合わせを有する、ＭＯＧを標的とする新しいキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（本明細書では「抗ＭＯＧ ＣＡＲ」と称される）に更に関する。更に、ＭＯＧを標的とする新しいキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する新しいＴｒｅｇ（本明細書では「ＣＡＲ－ＭＯＧ Ｔｒｅｇ」と称される）が提供される。本発明は、脱髄を低減または予防するため、再髄鞘化を誘導するため、及びＭＳなどの炎症性ＣＮＳ疾患／障害の治療のための治療剤及び方法を更に提供する。

【0011】

第１の態様では、本発明は、それぞれ、配列番号３～５を含む相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１～３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または配列番号３～５のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＨＣＤＲと、それぞれ、配列番号６～８を含むＬＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、または配列番号６～８のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＬＣＤＲと、を含むＭＯＧ結合タンパク質を提供する。

【0012】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、それぞれ、配列番号３～５を有する相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１～３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、それぞれ、配列番号６～８を有するＬＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。一実施形態では、ＶＨは、配列番号１１またはそれと少なくとも約９０％同一である任意のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９またはそれと少なくとも約９０％同一である任意のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ＶＨは、配列番号１１を含み、ＶＬは、配列番号９を含む。

【0013】

更なる実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。より好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１２またはそれと少なくとも約９５％同一である任意のアミノ酸配列を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。より好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１２を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。より好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。より好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号５１またはそれと少なくとも約９５％同一である任意のアミノ酸配列を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。より好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号５１を含む一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。より好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を有する一本鎖可変断片（抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ）である。

【0014】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、マウス及びヒトミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）と結合することができる。好ましくは、ＭＯＧ結合タンパク質は、カニクイザルミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）と結合することもできる。

【0015】

第２の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＭＯＧ抗体のＭＯＧ ｓｃＦｖまたは抗原結合断片を含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。

【0016】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、任意選択で配列番号１５もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び／または任意選択で配列番号１６もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む。好ましくは、膜貫通ドメインは、任意選択で配列番号１４またはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ８に由来する。

【0017】

好ましい実施形態では、ＣＡＲは、本発明による抗ＭＯＧ ｓｃＦｖと、任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン及び任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、任意選択でタグ及び／またはリーダー配列と、を含む。

【0018】

好ましい実施形態では、ＣＡＲは、任意選択で配列番号１２を含む、本発明による抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、任意選択で、配列番号２を任意選択で含むタグと、任意選択で、配列番号１を任意選択で含むリーダー配列と、を含む。

【0019】

好ましい実施形態では、ＣＡＲは、任意選択で配列番号５１を含む、本発明による抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、任意選択で、配列番号２を任意選択で含むタグと、任意選択で、配列番号１を任意選択で含むリーダー配列と、を含む。

【0020】

第３の態様では、本発明は、本発明によるＭＯＧ結合タンパク質、または本発明によるＣＡＲをコードする、核酸分子を提供する。

【0021】

第４の態様では、本発明は、本発明による核酸分子を含むベクターを提供する。

【0022】

第５の態様では、本発明は、本発明によるＣＡＲを発現するか、または本発明による核酸分子を含む、制御性免疫細胞を提供する。一実施形態では、制御性免疫細胞は、制御性Ｔ細胞である。

【0023】

本発明はまた、単離されたヒトＴ細胞を提供し、Ｔ細胞は、本発明による核酸分子を含む。

【0024】

本発明は更に、制御性免疫細胞の集団を提供し、集団は、本明細書で定義される複数の細胞を含む。

【0025】

第６の態様では、本発明は、本発明による制御性免疫細胞または本発明による制御性免疫細胞の集団を含む、組成物を提供する。

【0026】

第７の態様では、本発明は、薬剤として使用するための、本発明による制御性免疫細胞または本発明による制御性免疫細胞の集団を提供する。

【0027】

本発明はまた、脱髄疾患／障害、特に自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞、本発明による制御性免疫細胞の集団、または本発明による組成物を提供する。

【0028】

本発明は、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特にＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞、本発明による制御性免疫細胞の集団、または本発明による組成物を更に提供する。

【0029】

本発明は、炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞、本発明による制御性免疫細胞の集団、または本発明による組成物を更に提供する。一実施形態では、炎症性ＣＮＳ疾患／障害は、多発性硬化症である。一実施形態では、多発性硬化症は、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）である。別の実施形態では、多発性硬化症は、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）である。別の実施形態では、多発性硬化症は、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）である。

【0030】

本発明は、自己抗原及び／または自己抗体によって引き起こされるか、または悪化する脱髄障害を治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞、本発明による制御性免疫細胞の集団、または本発明による組成物を更に提供する。

【0031】

本発明は、ＣＮＳの脱髄を含む炎症及び／または損傷を低減または予防する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞、本発明による制御性免疫細胞の集団、または本発明による組成物を更に提供する。

【0032】

本発明は、障害または疾患を治療することを必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、本明細書に記載の制御性免疫細胞、本明細書に記載の制御性免疫細胞の集団、または本明細書に記載の制御性免疫細胞もしくは制御性免疫細胞の集団を含む組成物を当該患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特に、ＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものである。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、自己抗原及び／または自己抗体によって引き起こされるか、または悪化する脱髄障害である。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＮＳの脱髄を含む炎症及び／または損傷を低減または予防するためのものである。いくつかの実施形態では、方法は、炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療するためのものであり、好ましくは、炎症性ＣＮＳ疾患／障害は、多発性硬化症であり、より好ましくは、多発性硬化症は、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）、または二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）である。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】ヒト抗ＭＯＧキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物（「ＣＡＲ １」）の概略図を表す。図１の抗ＭＯＧ ＣＡＲ構築物は、ヒト／マウスＭＯＧに対して指向されるｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジ（ＣＤ８リンカー）、ヒトＣＤ２８（ＣＤ２８ ＴＭ）に由来する膜貫通ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３Ｚ）を含む。

【図2】マウス抗ＭＯＧキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の概略図を表す。図２の抗ＭＯＧ ＣＡＲ構築物は、ヒト／マウスＭＯＧに対して指向されるｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジ（ＣＤ８リンカー）、マウスＣＤ２８（ＣＤ２８ ＴＭ）に由来する膜貫通ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３Ｚ）を含む。

【図3】ＧＦＰ発現によって評価される形質導入効率及びタンパク質Ｌによって評価されるヒト細胞表面におけるＣＡＲ発現を示すフローサイトメトリーのドットプロットである。

【図4】第１の拡大サイクルの終わりに本発明のＣＡＲ－ＭＯＧを用いて、形質導入されたかまたはされていない（非形質導入のためのＮＴ）をモニタリングするグラフである。Ｔｒｅｇ細胞を、ヒトＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、及びＣＴＬＡ－４に対して指向される抗体で標識した。ＦＯＸＰ３及びＨｅｌｉｏｓ転写因子の検出のために、核内標識を行った（Ａ）。エラーバーは、合計１０個のＴｒｅｇドナーを含む４つの独立した実験からの平均±ＳＥＭを表す。

【図5】合計８個のＴｒｅｇドナーを含む３つの独立した実験からの、培地のみでの活性化の不在下（ＮｏＡｃｔ）、またはＣＡＲ（ＭＯＧコーティングされたビーズの添加を介して）もしくはＴＣＲ（抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８でコーティングされたビーズを介して；３／２８）による２４時間刺激後のいずれかでのヒトＴｒｅｇ活性化状態（ＣＤ６９発現によって測定され、ＧＦＰ発現上でゲーティングされた）を示すグラフである。ＭＯＧビーズ上での結合は、ＣＡＲ媒介性活性化を示す。ＣＤ３／ＣＤ２８との結合は、ＴＣＲ媒介性活性化を示す。対照細胞はＣＡＲを有さず、代わりにＧＦＰを発現する。対照細胞は、ＭＯＧの存在下で結合及び活性化を示さない。ＣＤ３－ＣＤ２８対照は、細胞がそれらのＴＣＲにより活性化され得ることを確実にするために実行される。

【図6】本発明のＣＡＲ－ＭＯＧを発現するＴｒｅｇ細胞が効率的なＣＡＲ媒介性抑制活性を呈することを示すグラフの組み合わせである。対照細胞はＣＡＲを有さず、代わりにＧＦＰを発現する。任意の活性化の不在下（灰色の曲線）、またはＭＯＧ誘発性ＣＡＲ活性化後（赤色の曲線）、またはＴＣＲ誘発性活性化後（青色の曲線）でＣＡＲ－ＭＯＧによって媒介される接触依存性抑制を、フローサイトメトリーを使用して従来のＴ細胞（Ｔｃｏｎｖ）の増殖を測定することによって評価した。エラーバーは、合計７個のＴｒｅｇドナーを含む４つの独立した実験からの平均±ＳＥＭを表す。

【図7】マウス細胞表面におけるＮＧＦＲ発現によって評価される形質導入効率を示すフローサイトメトリーのドットプロットである。

【図8】７日間の拡大後のＮＴ細胞と比較した、マウスＣＡＲ Ｔｒｅｇ細胞の表現型ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋を示すフローサイトメトリーのドットプロットである。

【図9】４つの独立した実験からの、培地のみでの活性化の不在下（Ｎｏ Ａｃｔ）、またはＴＣＲ（抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８でコーティングされたビーズ）を介した、もしくはＣＡＲ（ＭＯＧコーティングされたビーズの添加を介して）による２４時間刺激後のいずれかでのマウスＴｒｅｇ細胞活性化状態（ＣＤ６９発現によって測定され、ＮＧＦＲ陽性細胞上でゲートされた）を示すグラフである。ＭＯＧビーズ上での結合は、ＣＡＲ媒介性活性化を示す。ＣＤ３／ＣＤ２８との結合は、ＴＣＲ媒介性活性化を示す。ＣＡＲ対照細胞は、結合のための抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む切断ＣＡＲを有するが、細胞内シグナル伝達ドメインを有さない。ＣＡＲ対照細胞は、ＭＯＧの存在下で活性化を示さない。ＣＤ３－ＣＤ２８対照は、細胞がそれらのＴＣＲにより活性化され得ることを確実にするために実行される。

【図10】Ａは、ＣＡＲ対照細胞と比較した、ＣＮＳにおけるマウスＣＡＲ Ｔｒｅｇの活性化（ＣＤ６９の％）及び増殖（Ｋｉ６７の％）を示すグラフの組み合わせである。ＣＡＲ ＭＯＧを有する細胞は、ＮＧＦＲ＋細胞であり、対照は、ＮＧＦＲ－細胞である。Ｂは、脾臓細胞と比較した、ＣＮＳにおけるマウスＣＡＲ Ｔｒｅｇの活性化（ＣＤ６９の％）及び増殖（Ｋｉ６７の％）を示すグラフの組み合わせである。

【図11】Ａは、本発明による抗ＭＯＧ ＣＡＲである「ＣＡＲ １」を含む、いくつかの抗ＭＯＧ ＣＡＲのＴｒｅｇ細胞活性化状態（ＣＤ６９発現によって測定され、ＮＧＦＲ陽性細胞上でゲートされる）を示すグラフである。Ｂは、切断された対照ＣＡＲ（ＭＯＧ ｓｃＦｖ及び非シグナル伝達エンドドメイン）で形質導入されたＣＡＲ Ｔｒｅｇの活性化レベルに対する、５日後にＭＯＧ ＣＡＲを注射された動物のＣＮＳ（「ショートＥＡＥモデル」）における活性化マーカーＣＤ６９、ＣＤ７１、ＬＡＰ、及び増殖マーカーＫｉ６７のインビボでの増加倍率を示す。

【図12】異なる用量のヒト（黒色の線）またはマウス（灰色の点線）でコーティングされたＭＯＧに応答する、ヒトＭＯＧ ＣＡＲ Ｔｒｅｇのインビトロでの活性化レベルを示す。活性化は、早期活性化マーカーＣＤ６９の発現レベルを見ることによるフローサイトメトリーによって測定される。

【図13】フローサイトメトリーを使用した細胞ベースの結合アッセイによって評価される、異なる種（ヒト、マウス、及びカニクイザル）からのＭＯＧタンパク質に対する反応性を示す。ＭＯＧ－ＣＡＲ発現酵母細胞を、ｓｃＦＶ発現を検出するために蛍光標識抗ｍｙｃ抗体とともに、それぞれのビオチン化ＭＯＧタンパク質の示される濃度で共インキュベートした（左）。ｓｃＦＶ／ＭＯＧ二重陽性細胞を測定することによって結合を定量化した（右）。

【図14】Ａ及びＢは、本開示のＣＡＲ ＭＯＧ Ｔｒｅｇを、ＥＡＥが病原性細胞によって誘導されたマウスに投与する例示的な研究を示す。

【図15】本開示のＭＯＧ ＣＡＲで処置したＥＡＥマウスに由来する細胞のＭＯＧペプチド刺激後に、ＩＦＮ－ガンマ陽性細胞が決定される例示的な研究を示す。

【発明を実施するための形態】

【0034】

定義
本開示において、以下の用語は、以下の意味を有する。
量、一時的な持続時間などの測定可能な値を指すときの「約」は、そのような変動が開示される方法を実行するのに適切であるため、特定の値から±２０％またはいくつかの例では±１０％、またはいくつかの例では±５％、またはいくつかの例では±１％、またはいくつかの例では±０．１％の変動を包含することを意味する。好ましくは、本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記載された基準値に類似する値を指す。ある特定の実施形態では、用語は、別途明記されない限り、または別途文脈から明らかでない限り、記載された基準値のいずれかの方向（上回るまたは下回る）において、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下に収まる値の範囲を指す。

【0035】

「親和性」は、タンパク質（例えば、抗体）－抗原複合体の強度を定義するために使用される。親和性は、エピトープとタンパク質（例えば、抗体）上の抗原結合部位との間の相互作用の強度を測定する。それは、親和性定数Ｋ_ａによって、または解離定数Ｋ_Ｄによって表され得る。タンパク質（例えば、抗体）は、Ｋ_Ｄが≦１μＭ、好ましくは、≦１００ｎＭまたは≦１０ｎＭであるとき、抗原に特異的に結合すると言われている。Ｋ_Ｄは、例えば、ＩＢＩＳ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＩＢＩＳ ＭＸ９６ ＳＰＲシステム、Ｂｉｏ－ＲａｄのＰｒｏｔｅＯｎ（商標）ＸＰＲ３６ ＳＰＲシステム、またはＦｏｒｔｅＢｉｏのＯｃｔｅｔ（商標）システムを使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標））またはバイオレイヤー干渉法によって測定することができる。

【0036】

「抗体」または「免疫グロブリン」は、本明細書に使用される場合、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む四量体を指す。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成され、カッパ（κ）軽鎖またはラムダ（λ）軽鎖であり得る。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）からなる。ＣＨのアミノ酸配列に基づいて、抗体は、異なるアイソタイプ：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭに割り当てることができる。ＩｇＧ及びＩｇＡアイソタイプは、サブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けられる。ＶＨとＶＬとの対合は、単一の抗原結合部位を形成する。一実施形態では、本発明の抗ＭＯＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体などのＩｇＧ抗体であり得る。

【0037】

「抗原結合断片」は、本明細書で使用される場合、抗体全体よりも少ないアミノ酸残基を含むが、抗体全体の抗原（例えば、ＭＯＧ）に依然として結合することができるままである抗体の部分もしくは領域、または誘導体を指す。抗原結合断片は、一切限定されないが、一本鎖抗体、Ｆｖ（例えば、ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）’_２、Ｆｄ、脱フコシル化抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディを包含する。

【0038】

「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、免疫細胞（例えば、制御性免疫細胞）で発現されたときに、標的リガンドに対する特異性及び細胞内シグナル生成を細胞に提供するタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、二量体化分子の存在時に、ポリペプチドを互いに結合することができ、例えば、リガンド結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合することができる、二量体化スイッチを含む一連のポリペプチドを含む。一実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端に任意選択のリーダー配列を含み、リーダー配列は、細胞処理及びキメラ抗原受容体の細胞膜への局在化中に切断される。

【0039】

相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）内に見出される非連続抗原結合部位を意味する。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．（１９９１）Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔナンバリングスキーム」）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，ＪＭＢ（１９９７）２７３：９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム」）、またはそれらの組み合わせによって記載されるものを含む、いくつかの周知のスキームのうちのいずれかを使用して決定され得る。より最近では、ユニバーサルナンバリングシステムが開発されており、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９９）２７：２０９－２１２）を広く採用している。一実施形態では、本明細書におけるＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）に従って定義されている。ＶＨドメインのＣＤＲは、本明細書において、ＨＣＤＲドメインとして標識され得る。ＶＬドメインのＣＤＲは、ＬＣＤＲドメインとして標識され得る。ＶＨドメインのＣＤＲ１～３は、それぞれ、ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨとして、またはそれぞれ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３として標識され得る。ＶＬドメインのＣＤＲ１～３は、それぞれ、ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬとして、またはそれぞれ、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３として標識され得る。

【0040】

「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、これらに限定されないが、増殖などのＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーで表すことができる：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び活性化ＮＫ細胞受容体。

【0041】

「エピトープ」は、抗体またはその抗原結合断片が結合するタンパク質上に位置するアミノ酸の特定の配置を指す。エピトープは、しばしば、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。エピトープは、線形（または連続）または立体構造であり得、すなわち、必ずしも連続していなくてもよい抗原の様々な領域におけるアミノ酸の２つ以上の配列を含む。

【0042】

「発現ベクター」は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のための十分なシス作用性エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、またはインビトロ発現系において供給され得る。発現ベクターは、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸またはリポソームに含まれる）、及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含む、当該技術分野で既知の全てのものを含む。

【0043】

「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」、及び「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖のＣ末端断片、例えば、他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体の場合はα、δ、ε、及びμ）におけるヒトガンマ重鎖もしくはその対応する配列の約アミノ酸（ａａ）２３０～約ａａ４５０、またはその天然発生型アロタイプを指す。

【0044】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、タイトな非共有結合の１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、かつ抗体に抗原結合特異性を付与する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖から各々３つのループ）を発する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識及び結合する能力を有するが、結合部位全体よりも低い親和性である。

【0045】

「同一性」または「同一である」は、２つ以上のアミノ酸配列間、または２つ以上の核酸配列間の関係を説明するために本明細書で使用される場合、比較される配列間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によってアドレス指定されたギャップアライメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列のうちのより小さいものの間の同一の一致の割合を測定する。関連するアミノ酸配列または核酸配列の同一性は、既知の方法によって容易に計算することができる。そのような方法としては、これらに限定されないが、Ｌｅｓｋ Ａ．Ｍ．（１９８８）．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｓｍｉｔｈ Ｄ．Ｗ．（１９９３）．Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ ｐｒｏｊｅｃｔｓ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｇｒｉｆｆｉｎ Ａ．Ｍ．＆Ｇｒｉｆｆｉｎ Ｈ．Ｇ．（１９９４）．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １．Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ Ｇ．（１９８７）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｒｅａｓｕｒｅ ｔｒｏｖｅ ｏｒ ｔｒｉｖｉａｌ ｐｕｒｓｕｉｔ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ Ｍ．Ｒ．＆Ｄｅｖｅｒｅｕｘ Ｊ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｒｉｍｅｒ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ：Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｒｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌ Ｍａｔｈ．（１９８８）４８（５）：１０７３－８２に記載されているものが挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験された配列間で最大の一致を与えるように設計される。同一性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法としては、ＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９８４）１２（１ Ｐｔ １）：３８７－９５）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（１９９０）２１５（３）：４０３－１０）を含む、ＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及び他のソース（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４）から公的に利用可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一性を決定するために使用され得る。

【0046】

「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、本明細書で使用される場合、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、キメラ受容体含有細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。キメラ受容体Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性、抑制活性、制御活性、及びヘルパー活性が挙げられ得る。

【0047】

「単離された抗体」は、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＭＯＧと特異的に結合する単離された抗体は、ＭＯＧ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ＭＯＧと特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＭＯＧ分子などの他の抗原に対して交差反応性を有し得る。更に、単離された抗体は、他の細胞物質及び／または化学物質、特に、限定されないが、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性成分を含む、抗体の治療的使用を妨げるものを実質的に含まない場合がある。本明細書における単離された抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体などのＩｇＧ抗体であり得る。

【0048】

「単離された核酸」は、本明細書で使用される場合、他のゲノムＤＮＡ配列、ならびに天然配列に自然に付随するリボソーム及びポリメラーゼなどのタンパク質または複合体から実質的に分離された核酸を指すことが意図される。この用語は、その天然発生型の環境から除去された核酸配列を包含し、組換えまたはクローンＤＮＡ単離物と、化学的に合成された類似体または異種系によって生物学的に合成された類似体とを含む。実質的に純粋な核酸は、核酸の単離された形態を含む。

【0049】

これは、元々単離された核酸を指し、後に人の手によって単離された核酸に追加された遺伝子または配列を排除しない。

【0050】

「対象」は、免疫応答が誘発され得る生物（例えば、哺乳動物、ヒト）を含むことが意図される。一実施形態では、対象は、医療の受け入れを待っているか、または医療を受けているか、または医療処置の対象であった／である／であろう、または例えば、炎症性もしくは自己免疫状態などの標的化された疾患または状態の発症についてモニタリングされる、「患者」、すなわち、温血動物、より好ましくはヒトであり得る。一実施形態では、対象は、成人（例えば、１８歳を超える対象）である。別の実施形態では、対象は、子供（例えば、１８歳未満の対象）である。一実施形態では、対象は、男性である。別の実施形態では、対象は、女性である。一実施形態では、対象は、自己免疫及び／または炎症性疾患または障害に罹患し、好ましくは診断される。一実施形態では、対象は、自己免疫及び／または炎症性疾患または障害を発症するリスクがある。リスク因子の例としては、これらに限定されないが、自己免疫及び／または炎症性疾患または障害の遺伝的素因、または家族歴が挙げられる。

【0051】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、抗体軽鎖（ＶＬ）の可変ドメイン及び抗体重鎖（ＶＨ）の可変ドメインを含むタンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変ドメインは、例えば、合成リンカー、例えば、短い可撓性ポリペプチドリンカーを介して連続して連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することができ、ｓｃＦｖは、それが由来する無傷の抗体の特異性を保持する。指定されない限り、本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬ及びＶＨ可変ドメインを有してもよく、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでもよいか、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでもよい。一実施形態では、本抗原結合断片は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。

【0052】

「治療有効量」とは、標的に著しい陰性または有害な副作用を引き起こすことなく、（１）疾患、障害、もしくは状態の発症を遅延もしくは予防すること、（２）疾患、障害、もしくは状態のうちの１つ以上の症状の進行、悪化、または悪化を遅延もしくは停止すること、（３）疾患、障害、もしくは状態の症状の改善をもたらすこと、（４）疾患、障害、もしくは状態の重症度または発生率を低減すること、または（５）疾患、障害、もしくは状態を治癒することを目的とする、本明細書に記載の抗体のレベルまたは量を指す。治療有効量は、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）作用のために、疾患、障害、または状態の発症前に投与されてもよい。代替的にまたは追加的に、治療有効量は、治療的作用のために、疾患、障害、または状態の発症後に投与されてもよい。

【0053】

「治療すること」または「治療」または「緩和」は、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指し、目的は、標的とされる病理学的状態または障害を予防または減速（軽減）することである。治療を必要とする人には、既に障害を有する人、及び障害を有する傾向がある人、または障害が予防されることになる人が含まれる。一実施形態では、本開示による治療量の抗体または細胞を受けた後、対象が、以下：病原性細胞の数または割合の低減、治療される疾患または障害に関連する症状のうちの１つ以上のある程度の緩和、罹患率及び死亡率の低下、ならびに生活の質の問題の改善のうちの少なくとも１つを示す場合、対象は、疾患または障害に対して成功裏に「治療」される。疾患の成功した治療及び改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られている日常的な手順によって容易に測定可能である。

【0054】

「ゼータ」または代替的に「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」または「ＴＣＲ－ゼータ」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、または非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価残基として定義され、「ゼータ刺激ドメイン」または代替的に「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」または「ＴＣＲ－ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分である、ゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基、またはその機能的誘導体として定義される。一実施形態では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４またはその機能的オルソログである非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価残基を含む。

【0055】

Ｉ．抗原結合タンパク質
本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、ＭＯＧに結合することができる抗原結合タンパク質（以下、ＭＯＧ結合タンパク質と称される）である。本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合断片、特にｓｃＦｖであってもよい。

【0056】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、重鎖可変ドメインは、以下の重鎖ＨＣＤＲのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）。

【0057】

一実施形態では、本発明は、相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、重鎖可変ドメインは、以下の重鎖ＨＣＤＲのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）。

【0058】

一実施形態では、本発明は、相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、重鎖可変ドメインは、以下の重鎖ＨＣＤＲの３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）。

【0059】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、軽鎖可変ドメインは、以下の軽鎖ＬＣＤＲのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＬ：ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６）
ＣＤＲ２－ＶＬ：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）
ＣＤＲ３－ＶＬ：ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）。

【0060】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、重鎖可変ドメインは、以下の重鎖ＨＣＤＲのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含み、
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）
ここで、軽鎖可変ドメインは、以下の軽鎖ＬＣＤＲのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＬ：ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６）
ＣＤＲ２－ＶＬ：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）
ＣＤＲ３－ＶＬ：ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）。

【0061】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、
ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）を含む。

【0062】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）を有する。

【0063】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、
ＣＤＲ１－ＶＨは、アミノ酸配列ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）を含み、
ＣＤＲ２－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）を含み、
ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）を含み、
ＣＤＲ１－ＶＬは、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６を含み、
ＣＤＲ２－ＶＬは、アミノ酸配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）を含み、
ＣＤＲ３－ＶＬは、アミノ酸配列ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）を含む。

【0064】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、
ＣＤＲ１－ＶＨは、アミノ酸配列ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）を有し、
ＣＤＲ２－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）を有し、
ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）を有し、
ＣＤＲ１－ＶＬは、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６を有し、
ＣＤＲ２－ＶＬは、アミノ酸配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）を有し、
ＣＤＲ３－ＶＬは、アミノ酸配列ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）を有する。

【0065】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、
ＣＤＲ１－ＶＨは、アミノ酸配列ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ２－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ１－ＶＬは、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ２－ＶＬは、アミノ酸配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ３－ＶＬは、アミノ酸配列ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0066】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、
ＣＤＲ１－ＶＨは、アミノ酸配列ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
ＣＤＲ２－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
ＣＤＲ１－ＶＬは、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
ＣＤＲ２－ＶＬは、アミノ酸配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
ＣＤＲ３－ＶＬは、アミノ酸配列ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

【0067】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、
ＣＤＲ１－ＶＨは、アミノ酸配列ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）を有し、
ＣＤＲ２－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）を有し、
ＣＤＲ３－ＶＨは、アミノ酸配列ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）を有し、
ＣＤＲ１－ＶＬは、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６を有し、
ＣＤＲ２－ＶＬは、アミノ酸配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）を有し、
ＣＤＲ３－ＶＬは、アミノ酸配列ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）を有し、
ここで、ＶＨは、配列番号１１またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0068】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、ＶＨは、配列番号１１を含み、ＶＬは、配列番号９を含む。

【0069】

一実施形態では、本発明は、
－相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－相補的決定領域（ＬＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及びＣＤＲ３－ＶＬを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含むＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、
ここで、ＶＨは、配列番号１１のアミノ酸配列を有し、ＶＬは、配列番号９のアミノ酸配列を有する。

【0070】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはＤＡＲＰｉｎである。

【0071】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、抗ＭＯＧ抗体またはその抗原結合断片、特に一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

【0072】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を有する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり、ＶＨは、配列番号１１またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９またはそれと少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0073】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を有する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり、ＶＨは、配列番号１１を含み、ＶＬは、配列番号９を含む。

【0074】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１２またはそれと少なくとも約９０％同一である任意のアミノ酸配列を含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

【0075】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１２を含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

【0076】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号５１またはそれと少なくとも約９０％同一である任意のアミノ酸配列を含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

【0077】

一実施形態では、ＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号５１を含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

【0078】

抗体またはその抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、それ自体が、本明細書に記載の別のタンパク質に融合され得、それによって融合タンパク質を形成する。

【0079】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のタンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片、特にｓｃＦｖ）と同じＭＯＧ上のエピトープに結合するＭＯＧ結合タンパク質を更に提供する。

【0080】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片、特にｓｃＦｖ）との競合結合アッセイにおいて、ＭＯＧへの結合について競合するＭＯＧ結合タンパク質を更に提供する。

【0081】

本明細書の任意の箇所に記載される本発明のタンパク質、例えば、本発明のｓｃＦｖは、ＣＡＲ、具体的には本明細書に記載のＣＡＲの細胞外結合ドメインに含まれ得る。

【0082】

Ａ．ＭＯＧ結合タンパク質機能：抗原結合特異性及び親和性
本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、細胞表面に発現されるＭＯＧに結合することができる。本発明のＭＯＧ結合タンパク質はまた、可溶性ＭＯＧに結合することができる（すなわち、膜結合しない）。

【0083】

有利には、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、ヒト及びマウスＭＯＧの両方に結合することができることが見出されている。本発明のＭＯＧ結合タンパク質はまた、カニクイザルＭＯＧに結合することができる。この交差反応性は、マウス及びカニクイザルにおける前臨床研究の結果の外挿、ならびに薬物承認プロセスのためのヒト臨床研究に有益である。特に、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、ヒト及びマウスＭＯＧの両方に結合することができることが見出されている。

【0084】

本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、ヒトＭＯＧを認識し、それに結合する。ヒトＭＯＧは、８個のエクソン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３及びＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００２５４４．５）を含む１７７５ｂｐ長のｍＲＮＡによってコードされたタンパク質である。

【0085】

一実施形態では、本タンパク質は、ヒトＭＯＧのバリアントなどのＭＯＧバリアントを認識し、それに結合することができる。ＭＯＧのバリアントは、修飾ＭＯＧを指し、元の（野生型）ＭＯＧと比較して、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または以上のアミノ酸が欠失、付加、または置換される。

【0086】

ヒトＭＯＧのスプライスバリアントは、以前に特定されている。特に、ＭＯＧの１３の異なるアイソフォームが記載されている：アイソフォーム１（アルファ１としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－１を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム２（アルファ２としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－２を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム３（アルファ３としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－３を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム４（アルファ４としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－４を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム５（ベータ１としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｑ１６６５３－５を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム６（ベータ２としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－６を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム７（ベータ３としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－７を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム８（ベータ４としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－８を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム９（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－９を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム１０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－１０を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム１１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－１１を有するｍＲＮＡによってコードされる）、アイソフォーム１２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－１２を有するｍＲＮＡによってコードされる）、及びアイソフォーム１３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ１６６５３－１３を有するｍＲＮＡによってコードされる）。

【0087】

したがって、一実施形態では、本タンパク質は、アイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３、アイソフォーム４、アイソフォーム５、アイソフォーム６、アイソフォーム７、アイソフォーム８、アイソフォーム９、アイソフォーム１０、アイソフォーム１１、アイソフォーム１２、及びアイソフォーム１３を含む群から選択されるヒトＭＯＧの１つ以上のスプライスバリアントを認識し、それに結合することができる。

【0088】

一実施形態では、本発明のタンパク質、例えば、本発明のｓｃＦｖは、マウス及びヒトミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）の両方に結合することができる。したがって、ｓｃＦｖとマウス及びヒトＭＯＧとの交差反応性は、有利な特徴である。

【0089】

したがって、一実施形態では、タンパク質はまた、マウスＭＯＧ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ６１８８５）を認識し、それに結合する。

【0090】

一実施形態では、本タンパク質は、マウスＭＯＧのバリアントなどのＭＯＧバリアントを認識し、それに結合することができる。ＭＯＧのバリアントは、修飾ＭＯＧを指し、元の（野生型）ＭＯＧと比較して、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または以上のアミノ酸が欠失、付加、または置換される。

【0091】

有利には、本タンパク質は、ヒトＭＯＧ（すなわち、ヒトＭＯＧまたはヒトＭＯＧバリアント）及びマウスＭＯＧ（すなわち、マウスＭＯＧまたはマウスＭＯＧバリアント）を認識し、それに結合することができる。一実施形態では、本タンパク質は、ヒトＭＯＧ及びマウスＭＯＧバリアントを認識し、それに結合することができる。一実施形態では、本タンパク質は、ヒトＭＯＧバリアント及びマウスＭＯＧを認識し、それに結合することができる。一実施形態では、本発明のタンパク質は、ヒトＭＯＧバリアント及びマウスＭＯＧバリアントを認識し、それに結合することができる。

【0092】

一実施形態では、本発明のタンパク質、例えば、本発明のｓｃＦｖはまた、カニクイザルミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）に結合することができる。したがって、ｓｃＦｖとマウス、カニクイザル、及びヒトＭＯＧとの交差反応性は、有利な特徴である。

【0093】

したがって、一実施形態では、タンパク質はまた、カニクイザルＭＯＧ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｑ９ＢＧＳ７）を認識し、それに結合する。

【0094】

一実施形態では、本タンパク質は、カニクイザルＭＯＧのバリアントなどのカニクイザルバリアントを認識し、それに結合することができる。ＭＯＧのバリアントは、修飾ＭＯＧを指し、元の（野生型）ＭＯＧと比較して、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または以上のアミノ酸が欠失、付加、または置換される。

【0095】

有利には、本タンパク質は、ヒトＭＯＧ（すなわち、ヒトＭＯＧまたはヒトＭＯＧバリアント）、マウスＭＯＧ（すなわち、マウスＭＯＧまたはマウスＭＯＧバリアント）、及びカニクイザルＭＯＧ（すなわち、マウスＭＯＧまたはマウスＭＯＧバリアント）を認識し、それに結合することができる。

【0096】

Ｂ．タンパク質配列
１．ＣＤＲ配列
一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片、特にｓｃＦｖ）は、各々が相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ定義システムに従って決定される。

【0097】

一実施形態では、本タンパク質の重鎖は、以下の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）

【0098】

好ましい実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号３～５の全てを含む。一実施形態では、ＣＤＲ－ＶＨ１、ＣＤＲ２－ＶＨ、及び／またはＣＤＲ３－ＶＨのうちのいずれかは、それぞれ、配列番号３～５と比較して、１個、２個、３個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を含み得る。一実施形態では、ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及び／またはＣＤＲ３－ＶＨのうちのいずれかは、それぞれ、配列番号３～５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0099】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質の軽鎖は、以下の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＬ：ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６）
ＣＤＲ２－ＶＬ：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７）
ＣＤＲ３－ＶＬ：ＱＱＹＧＴＳＰＧＬＴ（配列番号８）

【0100】

好ましい実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号６～８の全てを含む。一実施形態では、ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及び／またはＣＤＲ３－ＶＬのうちのいずれかは、それぞれ、配列番号６～８と比較して、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を含み得る。一実施形態では、ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及び／またはＣＤＲ３－ＶＬのうちのいずれかは、それぞれ、配列番号６～８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0101】

本発明のタンパク質の一実施形態では、その重鎖ＨＣＤＲ１～３のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全ては、それぞれ、配列番号３～５を含み、その軽鎖ＬＣＤＲ１～３のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全ては、それぞれ、配列番号６～８を含む。

【0102】

好ましい実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、それぞれ、配列番号３～８の配列を有する重鎖ＨＣＤＲ１～３及び軽鎖ＬＣＤＲ１～３を含む。

【0103】

本発明のタンパク質の一実施形態では、ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及び／またはＣＤＲ３－ＶＨのうちのいずれかは、それぞれ、配列番号３～５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ１－ＶＬ、ＣＤＲ２－ＶＬ、及び／またはＣＤＲ３－ＶＬのうちのいずれかは、それぞれ、配列番号６～８と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有する。

【0104】

２．ＶＨ及びＶＬ配列
一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片、特にｓｃＦｖ）は、重鎖及び軽鎖を含む。

【0105】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１１を含むＶＨアミノ酸配列を有する。

【0106】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号１１からなるＶＨアミノ酸配列を有する。

【0107】

一実施形態では、ＶＨアミノ酸配列は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を有する配列番号１１を含む。

【0108】

一実施形態では、ＶＨアミノ酸配列は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を有する配列番号１１からなる。

【0109】

一実施形態では、ＶＨアミノ酸配列は、上に記載の重鎖ＨＣＤＲ（例えば、配列番号３～５）を含み、配列番号１１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有する。

【0110】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号９を含むＶＬアミノ酸配列を有する。

【0111】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、配列番号９からなるＶＬアミノ酸配列を有する。

【0112】

一実施形態では、ＶＬアミノ酸配列は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を有する配列番号９を含む。

【0113】

一実施形態では、ＶＬアミノ酸配列は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を有する配列番号９からなる。

【0114】

一実施形態では、ＶＬアミノ酸配列は、上に記載の軽鎖ＬＣＤＲ（例えば、配列番号６～８）を含み、配列番号９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有する。

【0115】

本発明は、本明細書に記載のＶＨのうちのいずれかと本明細書に記載のＶＬのうちのいずれかとの組み合わせを明示的に想定する。

【0116】

一実施形態では、ＶＨは、配列番号１１を含み、ＶＬは、配列番号９を含み、各々は、任意選択で、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換）を有する。

【0117】

一実施形態では、アミノ酸修飾は、挿入、欠失、または置換であり得る。一実施形態では、アミノ酸修飾は、修飾を含む抗体またはその抗原結合断片の結合特性に著しく影響を及ぼさない。特定の可変ドメイン及びＣＤＲ配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のアミノ酸挿入、欠失、及び／または置換を含み得る。

【0118】

一実施形態では、アミノ酸修飾は、好ましくは保存的アミノ酸で作製される置換である。保存的アミノ酸は、元のアミノ酸と同様の物理化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。したがって、本抗体または抗原結合断片のＣＤＲ及び／または可変ドメイン内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、修飾された抗体または抗原結合断片は、本明細書に記載のアッセイを使用して、保持された機能（例えば、ＭＯＧへの結合）について試験することができる。別の実施形態では、本抗体または抗原結合断片のＣＤＲ及び／または可変ドメイン内のアミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に同様のストリングで置き換えることができる。

【0119】

一実施形態では、ＶＨは、本明細書に定義され、かつ配列番号１１またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる少なくとも１つ（好ましくは３つ）の重鎖ＨＣＤＲを含み、ＶＬは、本明細書に定義され、かつ配列番号９またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる少なくとも１つ（好ましくは３つ）の軽鎖ＬＣＤＲを含む。

【0120】

一実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、上に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号３～８）を含み、それぞれ、配列番号１１及び９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を共有する。

【0121】

一実施形態では、ＶＨは、配列番号１１を含み、ＶＬは、配列番号９を含む。

【0122】

一実施形態では、ＶＨは、配列番号１１からなり、ＶＬは、配列番号９からなる。

【0123】

一実施形態では、ＶＨは、配列番号１１からなり、ＶＬは、配列番号９を含む。

【0124】

一実施形態では、ＶＨは、配列番号１１を含み、ＶＬは、配列番号９からなる。

【0125】

３．リンカー
一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片、特にｓｃＦｖ）は、そのＶＨ及びＶＬを連結するリンカー（本明細書ではＶＨ－ＶＬリンカーと称される）を含む。

【0126】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＬ、ＶＨ－ＶＬリンカー、及びＶＨを含む。別の実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、ＶＨ－ＶＬリンカー、及びＶＬを含む。

【0127】

一実施形態では、ＶＨ－ＶＬリンカーは、例えば、２～２０または２～１５個のアミノ酸の範囲の長さを有するペプチドリンカーである。

【0128】

例えば、グリシン－セリン二重鎖は、特に好適なリンカー（ＧＳリンカー）を提供する。一実施形態では、ＶＨ－ＶＬリンカーは、ＧＳリンカーである。ＧＳリンカーの例としては、これらに限定されないが、ＧＳリンカー、Ｇ_２Ｓリンカー（例えば、ＧＧＳ及び（ＧＧＳ）_２）、Ｇ_３Ｓリンカー、及びＧ_４Ｓリンカーが挙げられる。

【0129】

Ｇ_３Ｓリンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_ｎまたは（ＧＧＧＳ）_ｎを含み、式中、ｎは、１以上の正の整数（例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、またはｎ＝１０など）である。Ｇ_３Ｓリンカーの例としては、これらに限定されないが、ｎ＝１の場合、（ＧＧＧＳ）_１に対応するＧＧＧＳ（配列番号７１）、及び（ＧＧＧＳ）_４に対応するＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号７２）が挙げられる。

【0130】

Ｇ_４Ｓリンカーの例としては、これらに限定されないが、ＧＧＧＧＳ（配列番号７３）に対応する（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７４）に対応する（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）_２、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０）に対応する（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）_３、及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７５）に対応する（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）_４が挙げられる。一実施形態では、リンカーは、配列番号１０である。

【0131】

本発明は、本明細書に記載の任意のＶＨ－ＶＬリンカーと、本明細書に記載の任意のＶＨ及びＶＬドメインとの組み合わせを明示的に想定する。

【0132】

４．タンパク質の種類
本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合断片であってもよい。本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、ヒト化抗体またはその抗原結合断片であってもよい。

【0133】

一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、例えば、一本鎖抗体、Ｆｖ（例えば、ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）’_２、Ｆｄ、脱フコシル化抗体、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディなどの抗体の抗原結合断片である。

【0134】

好ましい実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質は、ｓｃＦｖである。

【0135】

５．ｓｃＦｖ配列
本発明のｓｃＦｖは、有利には、マウス及びヒトミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）と結合することができる。

【0136】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、
－本明細書に定義され、かつ配列番号１１またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる少なくとも１つ（好ましくは３つ）の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
－本明細書に定義され、かつ配列番号９またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる少なくとも１つ（好ましくは３つ）の軽鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0137】

好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、
－それぞれ、配列番号３～５を含む相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１～３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、または配列番号３～５のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲと、
－それぞれ、配列番号６～８を含むＬＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、または配列番号６～８のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲと、を含む。

【0138】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１１またはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号９またはそれと少なくとも約９０％同一である任意のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１１を含むＶＨと、配列番号９を含むＶＬと、を含む。より好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１１からなるＶＨと、配列番号９からなるＶＬと、を含む。

【0139】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、本明細書に定義されるＣＤＲを含み、配列番号１２またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１２またはそれと少なくとも約９５％同一である任意のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１２を含む。より好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１２からなる。

【0140】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、本明細書に定義されるＣＤＲを含み、配列番号５１またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号５１またはそれと少なくとも約９５％同一である任意のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号５１を含む。より好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号５１からなる。

【0141】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号２３、または配列番号２３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0142】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号２３によってコードされる。

【0143】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬを連結する本明細書に定義されるＶＨ－ＶＬリンカーを更に含む。好ましくは、リンカーは、配列番号１０である。

【0144】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号７６、または配列番号７６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0145】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号７６によってコードされる。

【0146】

Ｃ．核酸
本発明のタンパク質をコードする単離された核酸を以下に開示する。

【0147】

一実施形態では、核酸は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質の少なくともＶＨまたはＶＬをコードする。一実施形態では、核酸は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質の軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）及び定常領域をコードする。一実施形態では、核酸は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質の重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）及び定常領域をコードする。一実施形態では、核酸は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質の重鎖及び軽鎖の両方をコードする。

【0148】

一実施形態では、本明細書の核酸は、本発明のタンパク質のＶＨをコードするヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなり、当該ヌクレオチド配列は、配列番号２２、またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するヌクレオチド配列である。

【0149】

一実施形態では、本明細書の核酸は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質のＶＬをコードする配列を含むか、またはそれからなり、当該ヌクレオチド配列は、配列番号２０またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するヌクレオチド配列である。

【0150】

一実施形態では、本明細書の核酸は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質のＶＨ及びＶＬをコードするヌクレオチド配列を含む。更なる実施形態では、本明細書の核酸は、配列番号２２及び２０を含む。

【0151】

一実施形態では、本明細書の核酸は、ＶＬコード配列とＶＨコード配列との間のリンカーヌクレオチド配列を更に含む。更なる実施形態では、リンカーヌクレオチド配列は、配列番号２１を含むか、またはそれからなる。

【0152】

一実施形態では、本明細書の核酸は、配列番号２３またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなる。

【0153】

一実施形態では、本明細書の核酸は、配列番号７６またはそれと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなる。

【0154】

Ｄ．本発明のタンパク質の産生
本発明はまた、本発明のＭＯＧ結合タンパク質を発現するためのベクター及びベクターを使用してタンパク質を産生する方法を提供する。

【0155】

一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの宿主生物において機能する複製起源、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位、１つ以上の選択可能なマーカー、及び任意選択でエンハンサーを含む。

【0156】

哺乳動物細胞の発現ベクターに使用されるプロモーター及びエンハンサーの例としては、これらに限定されないが、ＳＶ４０の初期プロモーターとエンハンサー、ＬＴＲプロモーター、及びモロニーマウス白血病ウイルスのエンハンサー、ならびに免疫グロブリンＨ鎖のプロモーター及びエンハンサーが挙げられる。転写調節配列の追加の例については、以下も参照されたい。

【0157】

本発明は、本明細書に記載の本発明のＭＯＧ結合タンパク質を産生及び精製する方法を更に提供する。一実施形態では、方法は、
－インビボまたはエクスビボで、タンパク質の発現カセットを含む発現ベクターをコンピテント宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞及びＮＳ０細胞などの哺乳動物細胞）に導入することと、
－インビトロまたはエクスビボで、形質転換された宿主細胞を、タンパク質の発現に好適な条件下で培養することと、
－任意選択で、当該タンパク質を発現及び／または分泌する細胞を選択することと、
－細胞培養物から発現されたタンパク質を回収することと、
－任意選択で、回収されたタンパク質を精製することと、を含む。

【0158】

タンパク質、特に抗体または抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ）を精製する方法は、当該技術分野で周知であり、限定されないが、タンパク質Ａ－セファロース、ゲル電気泳動、及びクロマトグラフィー（例えば、タンパク質Ｌアガロース上のアフィニティークロマトグラフィーなどのアフィニティークロマトグラフィー）を含む。

【0159】

ＩＩ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
特定の目的の本発明のタンパク質は、ＣＡＲでの使用に好適である。制御性免疫細胞によって発現されるＣＡＲで使用される場合、本発明のタンパク質は、細胞表面で発現される。

【0160】

したがって、本発明は、本発明のタンパク質を含むＣＡＲに更に関する。ＣＡＲは、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合タンパク質、例えば、本明細書に記載の抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはＤＡＲＰｉｎを含む細胞外結合ドメインを含む。

【0161】

本発明のＣＡＲでの使用に好適な本発明のタンパク質は、それぞれ、配列番号３～５を含む重鎖の相補的決定領域（ＨＣＤＲ）１～３、または配列番号３～５のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲを含む。好ましくは、本発明のＣＡＲで使用するための本発明のタンパク質は、それぞれ、配列番号６～８を含む軽鎖の相補的決定領域（ＬＣＤＲ）１～３、または配列番号６～８のうちの１つと少なくとも約９０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲを更に含む。

【0162】

一実施形態では、本発明は、本発明のＣＡＲで使用するためのＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、タンパク質は、相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、ここで、重鎖可変ドメインは、以下の重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）。

【0163】

一実施形態では、本発明は、本発明のＣＡＲで使用するためのＭＯＧ結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を提供し、タンパク質は、相補的決定領域（ＨＣＤＲ）ＣＤＲ１－ＶＨ、ＣＤＲ２－ＶＨ、及びＣＤＲ３－ＶＨを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、ここで、重鎖可変ドメインは、以下の重鎖ＣＤＲの３つ全てを含む：
ＣＤＲ１－ＶＨ：ＳＳＹＡＦＳ（配列番号３）
ＣＤＲ２－ＶＨ：ＲＩＶＰＶＶＧＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）
ＣＤＲ３－ＶＨ：ＲＥＲＬＹＡＧＹＹ（配列番号５）。

【0164】

一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはＤＡＲＰｉｎなどの抗原結合ドメインを含む標的結合ドメインを含む。

【0165】

Ａ．重要なことに、本発明のＣＡＲでの使用に好適な本発明のタンパク質は、安定しており、低い免疫原性を有する。好ましくは、本発明のＣＡＲでの使用に好適な本発明のタンパク質は、いかなる意図しない二次効果も有さない。ＣＡＲ
本発明の一態様では、ＭＯＧに特異的なＣＡＲが提供される。ＣＡＲは、（ｉ）本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合タンパク質、例えば、本明細書に記載のｓｃＦｖを含む細胞外結合ドメイン、（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメイン、（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン、（ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに（ｖ）任意選択で、タグ及び／またはリーダー配列を含み得る。一実施形態では、ＣＡＲは、例えば、２つのポリペプチドなどの１つ以上のポリペプチドを含む。

【0166】

本発明は、本明細書に開示される（ｉ）細胞外結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインのうちのいずれか及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0167】

本発明は、本明細書に開示される（ｉ）細胞外結合ドメイン、（ｉｉ）細胞外ヒンジドメイン、（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン、（ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに（ｖ）タグ及び／またはリーダー配列のうちのいずれか及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0168】

１．細胞外結合ドメイン
一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合タンパク質、例えば、本発明のｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはＤＡＲＰｉｎを含む。一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合ｓｃＦｖを含む。

【0169】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合タンパク質、例えば、本発明のｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、またはＤＡＲＰｉｎからなる。一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書の任意の箇所に記載される本発明のＭＯＧ結合ｓｃＦｖからなる。

【0170】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、各々は、３つの相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、ここで、重鎖ＨＣＤＲ１～３のうちの少なくとも１つは、それぞれ、配列番号３～５を有し、及び／または軽鎖ＬＣＤＲ１～３のうちの少なくとも１つは、それぞれ、配列番号６～８を有する。

【0171】

更なる実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、それぞれ、配列番号３～８の配列を有する重鎖ＨＣＤＲ１～３及び軽鎖ＬＣＤＲ１～３を含む。一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、配列番号１１の配列、または配列番号１１と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を有するＶＨと、配列番号９の配列、または配列番号９と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を有するＶＬと、を含む。

【0172】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＶＨとＶＬとの間にペプチドリンカーを有する抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含み、ペプチドリンカーは、配列番号１０またはそれと少なくとも約９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含む。

【0173】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＶＨとＶＬとの間にペプチドリンカーを有する抗ＭＯＧ ｓｃＦｖからなり、ペプチドリンカーは、配列番号１０またはそれと少なくとも約９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含む。

【0174】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、配列番号１２、またはそれと少なくとも約９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含む抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む。

【0175】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、配列番号１２、またはそれと少なくとも約９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含む抗ＭＯＧ ｓｃＦｖからなる。

【0176】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、配列番号５１、またはそれと少なくとも約９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含む抗ＭＯＧ ｓｃＦｖを含む。

【0177】

一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、配列番号５１、またはそれと少なくとも約９０％、９５％、もしくはそれ以上の同一性を有する配列を含む抗ＭＯＧ ｓｃＦｖからなる。

【0178】

２．ヒンジドメイン
一実施形態では、細胞外ＭＯＧ結合ドメインは、ヒンジドメインによって膜貫通ドメインに接続される。

【0179】

一実施形態では、ヒンジドメインは、約２～約１００個のアミノ酸の長さを有するペプチドである。

【0180】

一実施形態では、ヒンジドメインは、約２～約７５個のアミノ酸の範囲の長さを有するペプチドである。

【0181】

一実施形態では、ヒンジドメインは、約２～約２０個のアミノ酸の範囲の長さを有するペプチドである。

【0182】

一実施形態では、ヒンジドメインは、約２～約１５個のアミノ酸の範囲の長さを有するペプチドである。

【0183】

一実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジ（例えば、配列番号１３）に由来するアミノ酸配列、または配列番号１３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0184】

一実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジ（例えば、配列番号１３）に由来するアミノ酸配列、または配列番号１３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。

【0185】

一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１３を有するアミノ酸配列を含む。

【0186】

一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１３を有するアミノ酸配列からなる。

【0187】

一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号２４、または配列番号２４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるＣＤ８ヒンジである。

【0188】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載されるヒンジドメインと、本明細書の任意の箇所に記載される細胞外結合ドメインとの任意の及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0189】

３．膜貫通ドメイン
本ＣＡＲで使用され得る膜貫通ドメインの例としては、これらに限定されないが、Ｔ細胞受領体（ＴＣＲ）のアルファもしくはベータ鎖の膜貫通ドメイン、またはＣＤ２８、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３エプシロン、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤｌ ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＰＤ１、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及びＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインが挙げられる。

【0190】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１４）に由来するアミノ酸配列、または配列番号１４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0191】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１４）に由来するアミノ酸配列、または配列番号１４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。

【0192】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１４を有するアミノ酸配列を含む。

【0193】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１４を有するアミノ酸配列からなる。

【0194】

一実施形態では、タグは、配列番号２５、または配列番号２５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるＣＤ８膜貫通ドメインである。

【0195】

別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号２９）に由来するアミノ酸配列、または配列番号２９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、タグは、配列番号３０、または配列番号３０と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるＣＤ２８膜貫通ドメインである。

【0196】

別の実施形態では、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）膜貫通ドメイン（例えば、配列番号３１）に由来するアミノ酸配列、または配列番号３１と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、タグは、配列番号３２、または配列番号３２と少なくとも約９５（例えば、９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる４－１ＢＢ膜貫通ドメインである。

【0197】

別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＮＦＲ２膜貫通ドメイン（例えば、配列番号３３）に由来するアミノ酸配列、または配列番号３３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、タグは、配列番号３４、または配列番号３４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるＴＮＦＲ２膜貫通ドメインである。

【0198】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、完全に人工的であってもよく、例えば、バリン及びロイシンなどの主に疎水性アミノ酸を含み得る。

【0199】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載される膜貫通ドメインと、本明細書の任意の箇所に記載される細胞外結合ドメインとの任意の及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0200】

４．細胞内シグナル伝達ドメイン
一実施形態では、本ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、もしくは天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその機能的断片もしくは誘導体を含み得る。

【0201】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0202】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上のＴ細胞共刺激ドメインを含む。

【0203】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つのＴ細胞共刺激ドメイン及びＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0204】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つのＴ細胞共刺激ドメイン及びＴ細胞一次シグナル伝達ドメインからなる。

【0205】

別の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つのＴ細胞共刺激ドメイン及びＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0206】

別の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つのＴ細胞共刺激ドメイン及びＴ細胞一次シグナル伝達ドメインからなる。

【0207】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む。

【0208】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のＣＤ３ゼータ細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号１６と少なくとも約９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0209】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のＣＤ３ゼータ細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号１６と少なくとも約９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。

【0210】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のＣＤ３ゼータ細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。

【0211】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のＣＤ３ゼータ細胞内ドメインのアミノ酸配列からなる。

【0212】

一実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列を含む。

【0213】

一実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる。

【0214】

一実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２７、または配列番号２７と少なくとも約９５（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0215】

刺激的様式で作用するＴ細胞一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭＳ）として知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加または減少した）活性を有する変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化及び／または切断ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。

【0216】

一実施形態では、本ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと組み合わされたＴ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）を含む。

【0217】

共刺激シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子または免疫細胞上に発現される他の細胞表面分子の細胞内ドメインに由来し得る。共刺激シグナルドメインの例は、ＣＤ２８、ＣＤ２７、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＡＲＨＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２ｒａ、ＩＬ６Ｒａ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＬ－１３ＲＡ１／ＲＡ２、ＩＬ－３３Ｒ（ＩＬ１ＲＬ１）、ＩＬ－１０ＲＡ／ＲＢ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ（ＣＳＦ２ＲＢ）、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＣＤ９５、ＴＮＦＲ１（ＣＤ１２０ａ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＴＮＦＲ２（ＣＤ１２０ｂ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、ＴＧＦｂＲ１／２／３、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、共通ガンマ鎖、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及びそれらの任意の組み合わせの細胞内ドメインに由来するものであり得る。

【0218】

本発明の一実施形態では、本ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＴＮＦＲ２、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ４、及びＰＤ－１を含む群から選択されるＴ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。

【0219】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号１５）に由来するアミノ酸配列、または配列番号１５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0220】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメインに（例えば、配列番号１５）由来するアミノ酸配列、または配列番号１５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。

【0221】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列を含む。

【0222】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる。

【0223】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５を有するアミノ酸を含む。

【0224】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１５を有するアミノ酸からなる。

【0225】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号２６、または配列番号２６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0226】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号３５）に由来するアミノ酸配列、または配列番号３５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３６、または配列番号３６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0227】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号３７）に由来するアミノ酸配列、または配列番号３７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３８、または配列番号３８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0228】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ２細胞内ドメイン（例えば、配列番号３９）に由来するアミノ酸配列、または配列番号３９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個、または３個の修飾であるが、２０個、１０個、または５個以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号４０、または配列番号４０と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0229】

一実施形態では、本ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、
－配列番号１５のＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号１５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配と、
－配列番号１６のＣＤ３ゼータ細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号１６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列と、を含む。

【0230】

一実施形態では、本ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、互いにランダムな順序または指定された順序で連結され得る少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、Ｔ細胞共刺激分子の一次シグナル伝達ドメイン及び少なくとも１つの細胞内ドメイン）を含む。

【0231】

任意選択で、ペプチドリンカーは、異なるシグナル伝達ドメインを接続するために使用され得る。一実施形態では、グリシン－セリン二重鎖（ＧＳ）は、好適なリンカーとして使用される。一実施形態では、単一のアミノ酸、例えば、アラニン（Ａ）またはグリシン（Ｇ）は、リンカーとして使用される。ペプチドリンカーの他の例は、上記のセクションＩに記載されている。

【0232】

一実施形態では、本ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上（例えば、２、３、４、５、またはそれ以上）の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、２つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載されるものなどのペプチドリンカーによって分離される。

【0233】

一実施形態では、本ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６）及びＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１５）を含む。

【0234】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載される細胞内シグナル伝達ドメインと、本明細書の任意の箇所に記載される細胞外結合ドメインとの任意の及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0235】

５．リーダー配列
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＭＯＧ特異的細胞外結合ドメインに対してＮ末端に位置するリーダー配列を更に含む。リーダー配列は、タンパク質がゴルジ複合体から分泌された後にＣＡＲタンパク質の細胞表面発現を可能にし得る。リーダー配列の非限定的な例は、配列番号１を含み得るか、またはそれからなり得るＣＤ８のリーダー配列である。好ましくは、リーダー配列は、配列番号１からなるＣＤ８のリーダー配列である。

【0236】

一実施形態では、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列は、ＣＤ８リーダー配列（例えば、配列番号１８）をコードするヌクレオチド配列、または配列番号１８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなる。

【0237】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載されるリーダー配列と、本明細書の任意の箇所に記載される細胞外結合ドメインとの任意の及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0238】

６．タグ
一実施形態では、ＣＡＲは、例えば、インビボでの品質管理、改良、及び追跡のためのタグを更に含む。当該タグは、ＣＡＲのＮ末端またはＣ末端に局在化してもよいか、またはＣＡＲポリペプチド内に内部的に局在してもよい。タグの例としては、これらに限定されないが、ヘマグルチニンタグ、ポリアルギニンタグ、ポリヒスチジンタグ、Ｍｙｃタグ、Ｓｔｒｅｐタグ、Ｓ－Ｔａｇ、ＨＡＴタグ、３ｘフラグタグ、カルモジュリン結合ペプチドタグ、ＳＢＰタグ、キチン結合ドメインタグ、ＧＳＴタグ、マルトース結合タンパク質タグ、蛍光タンパク質タグ、Ｔ７タグ、Ｖ５タグ、及びＸｐｒｅｓｓタグが挙げられる。

【0239】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＨＡタグ（配列番号２）を含む。一実施形態では、タグは、配列番号１９、または配列番号１９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0240】

本発明は、本明細書の任意の箇所に記載されるタグと、本明細書の任意の箇所に記載される細胞外結合ドメインとの任意の及び全ての組み合わせを明示的に想定する。

【0241】

７．例示的なＣＡＲ
本発明は、本発明によるＭＯＧ結合タンパク質（例えば、本発明によるｓｃＦｖ）を含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインと、を含むＣＡＲを提供する。

【0242】

一態様では、本発明は、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるドメイン）と、任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、膜貫通ドメインと、Ｔ細胞共刺激分子の単一の細胞内ドメインと、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを提供する。

【0243】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、任意選択で配列番号１５もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び／または任意選択で配列番号１６もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む。

【0244】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、任意選択で配列番号１４またはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ８に由来する。

【0245】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号１２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（例えば、配列番号１５）、及びＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６）を含む。

【0246】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号１２）、ＣＤ８のヒンジドメイン（例えば、配列番号１３）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（例えば、配列番号１５）、及びＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６）を含む。

【0247】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５６、または配列番号５６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５６を含む。

【0248】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５６、または配列番号５６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５６からなる。

【0249】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５７、または配列番号５７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５７を含む。

【0250】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５７、または配列番号５７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５７からなる。

【0251】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５８、または配列番号５８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５８を含む。

【0252】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５８、または配列番号５８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５８からなる。

【0253】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５９、または配列番号５９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５９を含む。

【0254】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５９、または配列番号５９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５９からなる。

【0255】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６０、または配列番号６０と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６０を含む。

【0256】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６０、または配列番号６０と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６０からなる。

【0257】

一実施形態では、ＣＡＲは、
（ｉ）任意選択で配列番号１２含む、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖと、
（ｉｉ）任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む、細胞内シグナル伝達ドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグ及び／またはリーダー配列と、を含む。

【0258】

別の態様では、本発明は、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるドメイン）と、任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、膜貫通ドメインと、Ｔ細胞共刺激分子の単一の細胞内ドメインと、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを提供する。

【0259】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、任意選択で配列番号１５もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び／または任意選択で配列番号１６もしくはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む。

【0260】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、任意選択で配列番号１４またはそれと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ８に由来する。

【0261】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号５１）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（例えば、配列番号１５）、及びＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６）を含む。

【0262】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号５１）、ＣＤ８のヒンジドメイン（例えば、配列番号１３）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（例えば、配列番号１５）、及びＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６）を含む。

【0263】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号１７、または配列番号１７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号１７を含む。

【0264】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号１７、または配列番号１７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号１７からなる。

【0265】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５２、または配列番号５２と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５２を含む。

【0266】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５２、または配列番号５２と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５２からなる。

【0267】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５３、または配列番号５３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５３を含む。

【0268】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５３、または配列番号５３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５３からなる。

【0269】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５４、または配列番号５４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５４を含む。

【0270】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５４、または配列番号５４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５４からなる。

【0271】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５５、または配列番号５５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５５を含む。

【0272】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びヒトＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号５５、または配列番号５５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号５５からなる。

【0273】

一実施形態では、ＣＡＲは、
（ｉ）任意選択で配列番号５１含む、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖと、
（ｉｉ）任意選択で配列番号１３を含む、ヒトＣＤ８に由来するヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）任意選択で配列番号１４を含む、ヒトＣＤ８に由来する膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）任意選択で配列番号１５を含むヒトＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、及び任意選択で配列番号１６を含むヒトＣＤ３ゼータドメインを含む、細胞内シグナル伝達ドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグ及び／またはリーダー配列と、を含む。

【0274】

８．マウスＣＡＲ
一態様では、本発明は、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるドメイン）と、任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、膜貫通ドメインと、Ｔ細胞共刺激分子の単一の細胞内ドメインと、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインと、を含むマウスＣＡＲを提供する。

【0275】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号１２）、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号４２）、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン（例えば、配列番号４３）、及びマウスＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号４４）を含む。ある特定の実施形態では、マウスＣＡＲはまた、マウスＣＤ８のヒンジドメイン（例えば、配列番号４１）を含み得る。上のドメインの任意の組み合わせを有するマウスＣＡＲが企図される。

【0276】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６５、または配列番号６５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６５を含む。

【0277】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６５、または配列番号６５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６５からなる。

【0278】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６６、または配列番号６６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６６を含む。

【0279】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６６、または配列番号６６と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６６からなる。

【0280】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６７、または配列番号６７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６７を含む。

【0281】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６７、または配列番号６７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６７からなる。

【0282】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６８、または配列番号６８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６８を含む。

【0283】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６８、または配列番号６８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６８からなる。

【0284】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号１２を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６９、または配列番号６９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６９を含む。

【0285】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６９、または配列番号６９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６９からなる。

【0286】

別の態様では、本発明は、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるドメイン）と、任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、膜貫通ドメインと、Ｔ細胞共刺激分子の単一の細胞内ドメインと、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインと、を含むマウスＣＡＲを提供する。

【0287】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、ＭＯＧ結合ドメイン（例えば、配列番号５１）、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号４２）、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン（例えば、配列番号４３）、及びマウスＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号４４）を含む。ある特定の実施形態では、マウスＣＡＲはまた、マウスＣＤ８のヒンジドメイン（例えば、配列番号４１）を含み得る。上のドメインの任意の組み合わせを有するマウスＣＡＲが企図される。

【0288】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号４５、または配列番号４５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号４５を含む。

【0289】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号４５、または配列番号４５と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号４５からなる。

【0290】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６１、または配列番号６１と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６１を含む。

【0291】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６１、または配列番号６１と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６１からなる。

【0292】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６２、または配列番号６２と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６２を含む。

【0293】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６２、または配列番号６２と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６２からなる。

【0294】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６３、または配列番号６３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６３を含む。

【0295】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６３、または配列番号６３と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６３からなる。

【0296】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、抗ＭＯＧ ｓｃＦｖ（例えば、配列番号５１を含むか、またはそれからなるｓｃＦｖ）、ＣＤ８のヒンジ領域、マウスＣＤ８の膜貫通ドメイン、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン、及びマウスＣＤ３ゼータの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６４、または配列番号６４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６４を含む。

【0297】

一実施形態では、当該ＣＡＲは、配列番号６４、または配列番号６４と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列からなる。好ましくは、当該ＣＡＲは、配列番号６４からなる。

【0298】

Ｂ．ＣＡＲをコードする核酸
本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸配列に関する。かかる核酸配列の例は、配列番号２８、またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンである。

【0299】

一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号２８またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号２８、または配列番号２８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0300】

一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号７７またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号７７、または配列番号７７と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0301】

一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号７８またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号７８、または配列番号７８と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0302】

一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号７９またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号７９、または配列番号７９と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0303】

一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号８０またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号８０、または配列番号８０と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0304】

一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号８１またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のヒトＣＡＲは、配列番号８１、または配列番号８１と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0305】

一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、配列番号５０またはその縮重もしくはコドン最適化バージョンによってコードされる。一実施形態では、本発明のマウスＣＡＲは、配列番号５０、または配列番号５０と少なくとも約９５％（例えば、約９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0306】

Ｃ．ＣＡＲを発現するためのベクター
本発明は、本明細書のＣＡＲをコードする核酸を含む発現ベクターを更に提供する。

【0307】

一実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、ＤＮＡである。一実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、ＲＮＡである。本発明で使用され得るベクターの例としては、これらに限定されないが、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、エピソーム、ウイルスベクター（例えば、動物ウイルス）が挙げられる。

【0308】

一実施形態では、発現ベクターは、プロモーター、エンハンサー、及び転写ターミネーターなどの制御エレメントを含んで、宿主細胞における導入遺伝子（例えば、ＣＡＲ）の発現を引き起こすか、またはその上に直接発現させることができる。ベクターはまた、１つ以上の選択可能なマーカーを含み得る。

【0309】

動物細胞の発現ベクターに使用されるプロモーター及びエンハンサーの例としては、これらに限定されないが、ＳＶ４０の初期プロモーターとエンハンサー、ＬＴＲプロモーター、及びモロニーマウス白血病ウイルスのエンハンサー、ならびに免疫グロブリンＨ鎖のプロモーター及びエンハンサーなどが挙げられる。好適な構成的プロモーターの他の例としては、これらに限定されないが、即時初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列、伸長因子ｌα（ＥＦ－ｌα）プロモーター、ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ＦＯＸＰ３由来プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス即時初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターが挙げられる。

【0310】

好適な誘導性プロモーターの例としては、これらに限定されないが、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、クメート（ｃｕｍａｔｅ）プロモーター、及びテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。

【0311】

好適な双方向プロモーターの例としては、これらに限定されないが、ｉ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはマウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）ゲノムに由来する第１の最小プロモーター配列、及びｉｉ）動物遺伝子に由来する完全有効プロモーター配列を含む双方向プロモーターが開示されている、参照により本明細書に組み込まれるＬｕｉｇｉ Ｎａｌｄｉｎｉの米国特許第８，５０１，４６４号によって記載されるプロモーターが挙げられる。

【0312】

好適なベクターの例としては、これらに限定されないが、ｐＡＧＥ１０７、ｐＡＧＥ１０３、ｐＨＳＧ２７４、ｐＫＣＲ、ｐＳＧ１ベータｄ２－４などが挙げられる。

【0313】

プラスミドの例としては、これらに限定されないが、複製起源を含む複製プラスミド、またはｐＵＣ、ｐｃＤＮＡ、ｐＢＲなどの統合プラスミドが挙げられる。

【0314】

哺乳動物細胞への遺伝子導入のために、いくつかのウイルスベースのシステムが開発されている。ウイルスベクターの例としては、これらに限定されないが、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターが挙げられる。

【0315】

レトロウイルスは、遺伝子送達系のための便利なプラットフォームを提供し得る。選択された遺伝子をベクターに挿入し、当該技術分野で既知の技術を使用してレトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。次いで、組換えウイルスを単離し、インビボまたはエクスビボのいずれかで対象の細胞に送達することができる。いくつかのレトロウイルス系は、当該技術分野で既知である。

【0316】

いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターは、当該技術分野で既知である。

【0317】

一実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。

【0318】

一実施形態では、ＡＡＶベクターが使用される。本明細書で使用される場合、「ＡＡＶ」という用語は、天然発生型形態及び操作された形態の両方の全ての血清型及びバリアントを包含する。例えば、この用語は、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ－１）、ＡＡＶ２型（ＡＡＶ－２）、ＡＡＶ３型（ＡＡＶ－３）、ＡＡＶ４型（ＡＡＶ－４）、ＡＡＶ５型（ＡＡＶ－５）、ＡＡＶ６型（ＡＡＶ－６）、ＡＡＶ７型（ＡＡＶ－７）、及びＡＡＶ８型（ＡＡＶ－８）、ならびにＡＡＶ９型（ＡＡＶ－９）を包含する。一実施形態では、ベクターは、ＡＡＶ６ベクターである。一実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ６カプシドを有するＡＡＶ及び別のＡＡＶ血清型に由来する組換えゲノム（例えば、ＡＡＶ２に由来するＩＴＲを有する）など擬似型ＡＡＶである。

【0319】

組換えウイルスは、パッケージング細胞をトランスフェクトすることによって、またはヘルパープラスミドもしくはウイルスを用いた一過性トランスフェクションによって、当該技術分野で既知の技術によって産生され得る。ウイルスパッケージング細胞の典型的な例には、ＰＡ３１７細胞、ＰｓｉＣＲＩＰ細胞、ＧＰｅｎｖ＋細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞などが含まれる。かかる複製欠陥のある組換えウイルスを産生するための詳細なプロトコルは、当該技術分野で見出され得る。昆虫細胞はまた、組換えＡＡＶなどの組換えウイルスを産生するために使用され得る。

【0320】

ＩＩＩ．ＣＡＲを発現する細胞
Ａ．制御性免疫細胞
本発明は、本明細書に記載のＣＡＲを細胞表面上に発現するように操作された制御性免疫細胞及び制御性免疫細胞集団に更に関する。

【0321】

本発明は、本発明によるＣＡＲを発現するか、または本発明による核酸分子もしくは本発明によるベクターを含む、制御性免疫細胞を提供する。

【0322】

一実施形態では、制御性免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、またはＮＫ Ｔ細胞である。一実施形態では、制御性免疫細胞は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低Ｔｒｅｇである。Ｆｏｘｐ３及びＨｅｌｉｏｓは、Ｔｒｅｇ細胞によって発現される転写因子であり、細胞の所望の表現型の維持を示す。したがって、好ましくは、Ｔｒｅｇは、高レベルのＦｏｘｐ３及び／またはＨｅｌｉｏｓを発現する（例えば、図４を参照されたい）。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、高レベルのＦｏｘｐ３を発現する。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、高レベルのＨｅｌｉｏｓを発現する。

【0323】

本発明はまた、単離されたヒトＴ細胞を提供し、Ｔ細胞は、本発明による核酸分子または本発明のベクターを含む。一実施形態では、制御性免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、またはＮＫ Ｔ細胞である。一実施形態では、単離されたヒトＴ細胞は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低Ｔｒｅｇである。好ましくは、Ｔｒｅｇは、高レベルのＦｏｘｐ３及び／またはＨｅｌｉｏｓを発現する。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、高レベルのＦｏｘｐ３を発現する。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、高レベルのＨｅｌｉｏｓを発現する。

【0324】

本発明はまた、本明細書に記載のＣＡＲを細胞表面上に発現するように操作された制御性免疫細胞を含むか、またはそれからなる、単離された及び／または実質的に精製された制御性免疫細胞集団、好ましくはＴ細胞集団に関する。

【0325】

本発明のＣＡＲを発現する制御性免疫細胞は、それらの表面上にＭＯＧを発現する中枢神経系の細胞を対象とする。制御性免疫細胞は、ＣＡＲを介してＭＯＧに局在化及び結合し、次いで、活性化される。このプロセスは、免疫細胞が自己免疫活性及び脱髄を引き起こす炎症を抑制し、それによって、自己免疫または炎症性疾患を治療することを可能にする。この意味で、制御性免疫細胞は、免疫攻撃に対するＭＯＧ発現細胞に対する保護シールドを提供するとみなされ得る。制御性免疫細胞はまた、神経病変の再髄鞘化を改善することができる。

【0326】

有利には、良好な活性化（高いシグナル対バックグラウンド比）及び良好な抑制活性を示すことに加えて、本発明のＣＡＲを発現する制御性免疫細胞は、低いトニックシグナル伝達を有することが見出されている。本明細書で使用される「トニックシグナル伝達」という用語は、抗原非依存性の活性化バックグラウンドを指す。トニックシグナル伝達を測定するための方法は、当業者に周知であり、限定されないが、ＣＡＲ発現細胞の代謝活性を測定することと、受容体によって認識される抗原による刺激の不在下での細胞活性化の１つ以上の指標を測定することと、細胞老化（ａｇｉｎｇ）または細胞老化（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ）に関連する１つ以上の表現型変化を測定することと、抗原刺激の不在下での細胞周期の進行を決定することと、未修飾細胞のサイズと比較して、受容体を発現する細胞のサイズを測定することと、を含む。

【0327】

ＣＡＲ Ｔｒｅｇ細胞による、形質導入されていないＴｒｅｇ細胞と比較したＣＤ６９の自発的発現のモニタリングは、トニックシグナル伝達強度の決定を可能にする。

【0328】

本明細書に示されるように、本発明の当該ＣＡＲ構築物を発現する操作されたＴ細胞及び操作されたＴｒｅｇ細胞は、低トニックシグナル伝達を提示し、ＣＡＲ関与後、操作されたＴｒｅｇ細胞は、Ｔエフェクター細胞増殖に対する非常に効率的な抑制活性を示し、それによって、細胞療法に対するこれらのＴｒｅｇ細胞の利点を示す。

【0329】

一実施形態では、制御性免疫細胞集団、好ましくは、Ｔ細胞集団は、Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫ Ｔ細胞を含む。

【0330】

一実施形態では、制御性免疫細胞集団、好ましくは、Ｔ細胞集団は、Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫ Ｔ細胞からなる。

【0331】

一実施形態では、本発明のＴ細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。

【0332】

一実施形態では、本発明の細胞集団におけるＴｒｅｇ細胞は全て、本明細書に記載のＣＡＲを発現し、したがって、ＣＡＲ単一特異性（すなわち、全てのＴｒｅｇ細胞が同じ抗原（ＭＯＧ）を認識する）として定義され得る。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ単一特異性（すなわち、全てのＴｒｅｇ細胞は、それらのＴＣＲと同じ抗原を認識する）である。別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ多特異性（すなわち、Ｔｒｅｇ細胞は、それらのＴＣＲと異なる抗原を認識し得る）である。

【0333】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｔ（例えば、Ｔｒｅｇ）細胞によって発現されるとき、Ｔ細胞に、それらの細胞表面上にＭＯＧを発現する細胞に結合し、かつＭＯＧに結合することによって活性化される能力を付与する。

【0334】

ＭＯＧは、主に、ＣＮＳにおけるオリゴデンドロサイトによって発現される。

【0335】

したがって、本発明の制御性免疫細胞集団（例えば、本発明のＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）集団）は、再指向された制御性免疫細胞集団として定義され得る。本明細書で使用される場合、「再指向された」という用語は、本明細書に記載のＣＡＲを担持する制御性免疫細胞を指し、これは、制御性免疫細胞に、制御性免疫細胞が特異的であったであろうリガンドまたはそれによって活性されるリガンドとは異なるリガンドに結合し、それによって活性化される能力を付与する。

【0336】

一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、細胞傷害性ではない。

【0337】

一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、細胞傷害性である。

【0338】

一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低ＦＯＸＰ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ－β分泌性Ｔｈ３細胞、制御性ＮＫ Ｔ細胞、制御性γδ Ｔ細胞、制御性ＣＤ８^＋Ｔ細胞、及び二重陰性制御性Ｔ細胞を含む群から選択され得る。

【0339】

一実施形態では、制御性免疫細胞は、ＣＤ４^＋ Ｔｒｅｇ細胞である。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、胸腺由来Ｔｒｅｇまたは適応性もしくは誘導性Ｔｒｅｇである。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞、またはＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^－制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）である。

【0340】

一実施形態では、制御性免疫細胞は、ＣＤ８^＋ Ｔｒｅｇ細胞である。一実施形態では、ＣＤ８^＋ Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ８^＋ＣＤ２８^－ Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ１０３^＋ Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ８^＋ＦＯＸＰ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ１２２^＋ Ｔｒｅｇ細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、制御性細胞は、ＩＮＦγ^＋ＩＬ１０^＋ＩＬ３４^＋ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＣ^低Ｔｒｅｇ細胞である。

【0341】

一実施形態では、本発明の制御性免疫細胞は、ヒトＴｒｅｇ細胞である。

【0342】

一実施形態では、制御性免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴｒｅｇ細胞）は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞に由来する。

【0343】

本明細書で使用される場合、「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」という用語は、脱分化またはリプログラミングによって非多能性細胞（例えば、成人体細胞）に由来する多能性幹細胞を指す。特に、ｉＰＳＣは、特定の多能性関連遺伝子のセット（リプログラミング因子）を細胞に導入することによって得ることができる。リプログラミング因子は、例えば、転写因子Ｏｃｔ４（Ｐｏｕ５ｆ１）、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ、及びＫｌｆ４であり得る。

【0344】

一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低／－及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低／－ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－及びＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低及びＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低／－及びＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低／－ＣＤ４５ＲＡ^＋。

【0345】

一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^－及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低／－及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低／－ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高、例えば、ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^－及びＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高、例えば、ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低及びＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低ＣＤ４５ＲＡ^＋。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、以下の表現型を有する：ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高、例えば、ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低／－及びＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^高ＣＤ１２７^低／－ＣＤ４５ＲＡ^＋。

【0346】

一実施形態では、制御性免疫細胞（例えば、ＴまたはＴｒｅｇ細胞）は、自己細胞である。自己療法は、各患者のための「カスタム」製品である。別の実施形態では、制御性免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＴｒｅｇ細胞）は、同種異系細胞である。同種異系細胞は、多くの患者を治療するために使用される「既製の」製品を提供するために、同種異系療法で使用され得る。そのような事例では、細胞は、細胞に対する宿主拒絶反応（移植片拒絶反応）及び／または宿主に対する細胞の潜在的な攻撃（移植片対宿主病）を低減するように操作され得る。例として、細胞は、以下：（ｉ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲアルファ鎖またはベータ鎖）、（ｉｉ）多型主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩ分子（例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、もしくはＨＬＡ－Ｃ；ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、もしくはＨＬＡ－ＤＲ；またはβ２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ））、（ｉｉｉ）抗原プロセシングに関連するトランスポーター（例えば、ＴＡＰ－１またはＴＡＰ－２）、（ｉｖ）クラスＩＩ ＭＨＣトランスアクティベーター（ＣＩＩＴＡ）、（ｖ）マイナー組織適合抗原（ＭｉＨＡ；例えば、ＨＡ－１／Ａ２、ＨＡ－２、ＨＡ－３、ＨＡ－８、ＨＢ－１Ｈ、またはＨＢ－１Ｙ）、及び（ｖｉ）それらの任意の組み合わせのうちの１つ以上についてヌル遺伝子型を有するように操作され得る。

【0347】

分子の発現レベルは、フローサイトメトリー、免疫蛍光、または画像分析によって決定され得る。細胞内タンパク質を検出するために、フローサイトメトリー分析の前に、細胞を固定し、透過させてもよい。

【0348】

一実施形態では、細胞集団における分子の発現レベルは、分子を発現する細胞集団のパーセンテージによって示される（すなわち、分子の細胞「＋」）。分子を発現する細胞のパーセンテージは、ＦＡＣＳによって測定され得る。目的の細胞マーカーの発現レベルは、このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色された細胞集団からの細胞の中央蛍光強度（ＭＦＩ）と、無関係な特異性を有するが、同じアイソタイプ、同じ蛍光プローブであり、かつ同じ種に由来する蛍光標識抗体で染色された同じ細胞集団からの細胞（アイソタイプ対照と称される）の蛍光強度（ＦＩ）とを比較することによって決定され得る。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色し、かつアイソタイプ対照で染色した細胞よりも同等のＭＦＩまたは低いＭＦＩを示す集団からの細胞は、このマーカーを発現しておらず、次いで、（－）または陰性と指定される。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色し、かつアイソタイプ対照で染色した細胞よりも優れたＭＦＩ値を示す集団からの細胞は、このマーカーを発現しており、次いで、（＋）または陽性と指定される。

【0349】

「発現している」（すなわち、「陽性」または「＋」）及び「発現していない」（すなわち、「陰性」または「－」）という用語は、目的の細胞マーカーの発現レベルを指し、その中で、「＋」に対応する細胞マーカーの発現レベルは高いか、または中間であり、「＋／－」とも称され、「－」に対応する細胞マーカーの発現レベルがヌルである。「低い」または「低」または「低／－」という用語は、目的の細胞マーカーの発現レベルを指し、その中で、細胞マーカーの発現レベルは、全体として分析されている細胞集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して低い。より具体的には、「低」という用語は、１つ以上の他の異なる細胞集団よりも低いレベルで細胞マーカーを発現する異なる細胞集団を指す。「高い」または「高」または「高／－」という用語は、目的の細胞マーカーの発現レベルを指し、その中で、細胞マーカーの発現レベルは、全体として分析されている細胞集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して高い。一般に、染色強度の上位２、３、４、または５％の細胞は「高」と指定され、それらは集団の上位半分に属し、「＋」として分類される。蛍光強度の５０％未満に低下するそれらの細胞は、「低」細胞として指定され、５％未満は「－」細胞として指定される。

【0350】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｔｒｅｇ細胞によって発現されるとき、ＭＯＧに指向された他のＣＡＲ構築物と比較して、当該Ｔｒｅｇ細胞の活性化バックグラウンドの低減を可能にする。

【0351】

Ｂ．制御性免疫細胞の活性化
重要なことに、ＣＡＲがその標的に結合すると、制御性免疫細胞、好ましくは、Ｔ細胞、より好ましくは、Ｔｒｅｇ細胞、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低Ｔｒｅｇ細胞の活性化が、細胞がサイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－Ｂ）及びエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ細胞）の活性を抑制し、かつ末梢耐性を確立する他の可溶性メディエーターを放出するように、更に必要とされる。細胞はまた、例えば、ＣＴＬＡ４－ＣＤ８０／８６及びＬＡＧ３を介した細胞接触によって作用する。活性化が生理学的様式で起こるためには、細胞内のシグナル伝達が必要である。そのようなシグナル伝達を得ることは、ＣＡＲがその標的にどのように（例えば、どの位置または配置で）結合するかに依存するため、困難である。言い換えれば、ＭＯＧ＋オリゴデンドロサイトへの単なる結合は、機能的な制御性免疫細胞及びＣＮＳにおけるその保持を誘導するのに十分ではない。

【0352】

本発明者らは、本発明のＣＡＲを発現する調節免疫細胞、特にＴｒｅｇ細胞、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低Ｔｒｅｇ細胞が、ＭＯＧ提示細胞と結合することができるそれらの表面上にＭＯＧ結合ＣＡＲを提示することを示した。

【0353】

本発明のＣＡＲは、活性化なしの低ＣＤ６９発現（低トニック／バックグラウンド活性化）及び良好なＣＡＲ媒介活性化（高シグナル対バックグラウンド比）、例えば、活性化が少なくとも２倍増加することを含む、実施例に示されるような有利な特性の組み合わせを有する新しいＣＡＲである。図１１を参照されたい。

【0354】

本発明のＣＡＲは、マウス及びヒトＭＯＧタンパク質に結合することができる、新しい交差反応性ＣＡＲである。図１２を参照されたい。

【0355】

Ｔｒｅｇ細胞のＣＡＲ特異的活性化及びＴｒｅｇ細胞の低い活性化バックグラウンドを図５及び９に示す。本発明のＣＡＲ－ＭＯＧを発現するＴｒｅｇ細胞は、図６に示されるように、効率的なＣＡＲ媒介性抑制活性を呈する。重要なことに、ＣＡＲの活性化及び増殖は、ＣＮＳにおいて生じることが示され、図１０Ａ及び１０Ｂを参照されたい。

【0356】

ＩＶ．組成物、薬学的組成物、薬剤
一態様では、本発明はまた、本明細書に記載の本発明のＭＯＧ結合タンパク質（例えば、抗体またはその断片、特に、ｓｃＦｖ）を含む（本質的にそれからなること、及びそれからなることを含む）組成物を提供する。

【0357】

一態様では、本発明はまた、本発明のタンパク質をコードする核酸またはベクターを含む（本質的にそれからなること、及びそれからなることを含む）組成物を提供する。

【0358】

別の態様では、本発明は、本発明によるＣＡＲを含む制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団を含む（本質的にそれからなること、及びそれからなることを含む）組成物を提供する。一実施形態では、組成物は、本発明による制御性免疫細胞または本発明の制御性免疫細胞の集団を含む。

【0359】

一実施形態では、当該組成物は、薬学的組成物であり、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。

【0360】

したがって、本発明は、本発明によるＣＡＲを含む制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団と、薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物に更に関する。一実施形態では、薬学的組成物は、本発明によるＣＡＲを含む制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団と、薬学的に許容される賦形剤からなる。

【0361】

一実施形態では、本発明のＭＯＧ結合タンパク質（例えば、抗体またはその断片、特にｓｃＦｖ）、核酸もしくは発現ベクター、または制御性免疫細胞もしくは制御性免疫細胞集団は、当該組成物内で生物学的活性を有する唯一の治療剤または薬剤である。

【0362】

「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、緩衝剤、等張剤、安定化剤、防腐剤、吸収遅延剤などを指す。当該賦形剤は、ヒトなどの対象に投与された場合、有害反応、アレルギー反応、または他の不都合な反応を生じさせない。

【0363】

本発明の組成物に使用され得る薬学的に許容される賦形剤の例としては、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝剤（例えば、リン酸塩）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、または電解質（例えば、塩化ナトリウム、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、及び亜鉛塩）、及びポリエチレングリコールが挙げられる。

【0364】

一実施形態では、本発明による医薬組成物は、注射に薬学的に好適なビヒクルを含む。これらは、例えば、（例えば、リン酸一ナトリウムもしくはリン酸二ナトリウム；ナトリウム、カリウム、カルシウム、もしくは塩化マグネシウム；またはそのような塩の混合物を含む）等張性の滅菌生理食塩水、または滅菌水もしくは生理学的生理食塩水などの好適な担体を添加すると、注射可能な溶液の構成を可能にする乾燥（例えば、凍結乾燥）組成物であり得る。

【0365】

別の態様では、本発明は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質を含む（本質的にそれからからなること、及びそれからなることを含む）薬剤を提供する。

【0366】

本発明は、本発明のＣＡＲを発現する制御性免疫細胞の集団を含む（本質的にそれからなること、及びそれからなることを含む）薬剤を更に提供する。

【0367】

本発明は、本発明のＭＯＧ結合タンパク質をコードする核酸を含む薬剤を更に提供する。

【0368】

本発明は、本発明のベクターを含む薬剤を更に提供する。

【0369】

Ｖ．投与経路
例示的な投与形態としては、非経口、吸入スプレーによるもの、直腸、鼻、または埋め込まれたリザーバーを介するものが挙げられる。

【0370】

例示的な投与形態としては、限定されないが、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、腹腔内、肝臓内、病変内及び頭蓋内の注射または注入技術を含む注射、好ましくは、静脈内、髄腔内、または腹腔内注射、より好ましくは、静脈内注射が挙げられる。

【0371】

注射に適合される例示的な形態としては、これらに限定されないが、例えば、無菌水溶液、ゲル、分散液、エマルション、懸濁液、使用前に液体を添加する際に溶液または懸濁液を調製するために使用するのに好適な固体形態、例えば、粉末、リポソーム形態などが挙げられる。

【0372】

ＶＩ．投与量
しかしながら、治療上有効な量及び投与頻度は、健全な医学的判断の範囲内で担当医師によって決定されることが理解されるであろう。任意の特定の患者に対する特定の治療上有効な用量レベルは、治療されている疾患及び疾患の重症度；用いられる単離されたＭＯＧ結合タンパク質、核酸、発現ベクター、または制御性免疫細胞の活性；対象の年齢、体重、一般健康、性別、及び食事；用いられる特定の治療剤の投与時間、投与経路、及び排泄速度；治療の持続時間；用いられる特定の治療剤と併用してまたは同時に使用される薬物；ならびに医術において周知の同様の因子を含む様々な因子に依存する。例えば、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、十分に当該技術分野の範囲内である。各治療に必要な総用量は、複数回用量または単回用量で投与され得る。

【0373】

一実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、本発明の治療剤（例えば、制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団）の単回投与を受ける。

【0374】

一実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、本発明の治療剤（例えば、制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団）の少なくとも２回の投与を受ける。

【0375】

一実施形態では、本発明の治療剤（例えば、制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団）は、対象に週１回、月１回、または年１回投与される。

【0376】

一実施形態では、対象に投与される制御性免疫細胞の数は、約１０^２～約１０^９、約１０^３～約１０^８、約１０^４～約１０^７、または約１０^５～約１０^６の範囲である。

【0377】

一実施形態では、本発明の治療剤（例えば、制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団）は、それを必要とする対象に、別の活性剤と組み合わせて投与される。一実施形態では、当該他の活性剤は、炎症性ＣＮＳ疾患／障害、例えば、多発性硬化症の治療に使用され得る薬剤である。他の活性剤の例としては、これらに限定されないが、グルココルチコイド（限定されないが、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、ベドメタゾン、チキソコルトール、トリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、ブデソニド、またはフルドロコルチゾン）、ヒトサイトカインの抗体またはアンタゴニスト、分子（例えば、オファツムマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、オビヌツズマブなどの抗ＣＤ２０；アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２；ナタリズマブなどの抗α４β１インテグリン；ダクリズマブなどの抗ＣＤ２５；オピシヌマブなどの抗ＬＩＮＧＯ－１など）、インターフェロン－ベータ－１ａ、ペグインターフェロン－ベータ－１ａ、インターフェロン－ベータ－１ｂ、グラチラマー酢酸塩、ミトキサントロン、イブジラスト、シンバスタチン、ビオチン、ラキニモド、オザニモド、フィンゴリモド、シポニモド、ポネシモド、エボブルチニブテリフルノミド、フマル酸モノメチル、フマル酸ジメチル、フマル酸ジロキシメル、免疫調節剤（例えば、タクロリムス、シクロスポリン、メトトレキサート、サリドマイド、レフルノミド、及びクラドリビン、アザチオプリン、６－メルカプトプリンなどのプリンの類似体など）、及び血漿交換が挙げられる。

【0378】

一実施形態では、本発明の治療剤（例えば、制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団）の投与は、対象によって受けられる当該他の活性剤の量の低減を可能にする。

【0379】

一実施形態によれば、本発明の治療剤（例えば、制御性免疫細胞または制御性免疫細胞集団）は、他の活性剤の投与の前、それと同時に、またはその後に投与される。

【0380】

ＶＩＩ．治療上の使用
本発明は、薬剤として使用するための、本明細書の任意の箇所に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）に更に関する。

【0381】

本発明は、ＭＳなどの炎症性ＣＮＳ疾患／障害において使用するための、本明細書の任意の箇所に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）に更に関する。

【0382】

本発明は、脱髄疾患／障害、特に自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、本明細書の任意の箇所に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）に更に関する。

【0383】

本発明は、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特にＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、本明細書の任意の箇所に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）に更に関する。

【0384】

本発明は、ＣＮＳの炎症を低減または予防するための、本明細書の任意の箇所に記載されるような、本明細書の任意の箇所に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）に更に関する。本発明はまた、ＣＮＳの脱髄を含む損傷を低減または予防するための、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）に関する。本発明はまた、ＣＮＳの神経病変の再髄鞘化を誘導するための、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの、本明細書に記載の制御性免疫細胞）に関する。

【0385】

本発明は、本発明による制御性免疫細胞または薬剤として使用するための本明細書の任意の箇所に記載の本発明の制御性免疫細胞の集団を含む組成物に更に関する。

【0386】

本発明は、ＭＳなどの炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞または本明細書の任意の箇所に記載の本発明の制御性免疫細胞の集団を含む組成物に更に関する。

【0387】

本発明は、脱髄疾患／障害、特に自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞または本明細書の任意の箇所に記載の本発明の制御性免疫細胞の集団を含む組成物に更に関する。

【0388】

本発明は、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特にＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療する際に使用するための、本発明による制御性免疫細胞または本明細書の任意の箇所に記載の本発明の制御性免疫細胞の集団を含む組成物に更に関する。

【0389】

本発明は、ＣＮＳの脱髄を含む炎症及び／または損傷を低減または予防するための、本発明による制御性免疫細胞または本明細書の任意の箇所に記載の本発明の制御性免疫細胞の集団を含む組成物に更に関する。

【0390】

本発明は、疾患、障害、または疾患もしくは障害の症状を治療することを必要とする対象においてそれを行う方法に更に関し、方法は、本明細書の任意の箇所に記載のＣＡＲを発現する細胞集団（例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞などの本明細書に記載の制御性免疫細胞）を対象に投与することを含む。一実施形態では、方法は、炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療するための方法である。一実施形態では、方法は、脱髄疾患／障害、特に自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療するための方法である。一実施形態では、方法は、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特にＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療するための方法である。

【0391】

本発明は、疾患、障害、または疾患もしくは障害の症状を治療することを必要とする対象においてそれを行う方法に更に関し、方法は、本発明による制御性免疫細胞または本明細書の任意の箇所に記載の本発明の制御性免疫細胞の集団を含む組成物を対象に投与することを含む。一実施形態では、方法は、炎症性ＣＮＳ疾患／障害を治療するための方法である。一実施形態では、方法は、脱髄疾患／障害、特に自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療するための方法である。一実施形態では、方法は、ＭＯＧ関連疾患／障害（ＭＯＧＡＤ）、特にＭＯＧ関連炎症性疾患／障害、より具体的には自己抗体または自己反応性免疫細胞の存在に関連するものを治療するための方法である。

【0392】

本発明は、ＣＮＳの脱髄を含む炎症及び／または損傷を低減または予防することを必要とする対象においてそれを行うための方法に更に関する。

【0393】

本発明は、炎症性ＣＮＳ疾患／障害、例えば、多発性硬化症を治療することを必要とする対象においてそれを行うための細胞療法方法に更に関し、当該方法は、本明細書に記載の制御性免疫細胞、例えば、本明細書に記載のＴｒｅｇ細胞を対象に投与することを含む。

【0394】

一実施形態では、投与される制御性免疫細胞は、自己細胞であり、言い換えれば、細胞療法は、自己細胞療法である。本明細書で使用される場合、「自己」という用語は、後で再導入される同じ個体に由来する任意の材料を指す。

【0395】

一実施形態では、細胞療法は異種細胞療法である。本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、治療される対象に由来しないが、外部源、例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または死体起源の細胞に由来する任意の材料を指す。

【0396】

一実施形態では、細胞療法は、異種である。本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、材料が導入される対象と異なる種の対象に由来する任意の材料を指す。

【0397】

別の実施形態では、投与される制御性免疫細胞は同種異系細胞であり、言い換えれば、細胞療法は、同種異系細胞療法である。本明細書で使用される場合、「同種異系」という用語は、材料が導入される対象と同じ種の異なる対象に由来する任意の材料を指す。１つ以上の遺伝子座における遺伝子が同一でない場合、２つ以上の対象は、互いに同種異系であると言われる。更なる実施形態では、制御性免疫細胞は、健康なヒトドナーに由来する。

【0398】

炎症性ＣＮＳ疾患／障害の例としては、これらに限定されないが、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、自閉症スペクトラム障害、ラスムッセン脳炎、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）が挙げられる。

【0399】

好ましい炎症性ＣＮＳ疾患／障害は、多発性硬化症（ＭＳ）、臨床的に孤立した症候群（ＣＩＳ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、視神経炎、急性散在性脳脊髄炎、横断性脊髄炎、副腎白質ジストロフィー、白質消失病、及び風疹（Ｒｕｂｅｌｌａ）誘発性精神遅滞などの自己抗原及び／または自己抗体によって引き起こされるか、または悪化する脱髄障害である。より好ましい脱髄障害は、多発性硬化症（ＭＳ）及び視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である。ある特定の実施形態では、当該ＭＳは、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）、急性劇症多発性硬化症、及びＭＳが疑われる放射線学的に孤立した症候群（ＲＩＳ）から選択される。

【0400】

一実施形態では、炎症性ＣＮＳ疾患／障害は、臨床的に孤立した症候群（ＣＩＳ）である。

【0401】

一実施形態では、炎症性ＣＮＳ疾患／障害は、多発性硬化症（ＭＳ）である。

【0402】

一実施形態では、多発性硬化症は、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）である。

【0403】

一実施形態では、多発性硬化症は、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）である。

【0404】

一実施形態では、多発性硬化症は、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）である。

【0405】

ＶＩＩＩ．製造物品
本発明はまた、本発明による炎症性ＣＮＳ疾患／障害、例えば、多発性硬化症の治療に有用な材料を含む製造物品に関する。

【0406】

製造物品は、容器と、容器上のまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書とを含み得る。好適な容器としては、例えば、バッグ、ボトル、バイアル、シリンジ、パウチなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。

【0407】

製造物品、ラベル、または添付文書は、本発明のＴｒｅｇ細胞集団を患者に投与するための指示材料を更に含み得る。

【0408】

本発明は、本発明の制御性免疫細胞集団を含むキットを提供する。「キット」とは、本発明のＴｒｅｇ細胞集団を含む任意の製造物品（例えば、パッケージまたは容器）を意味することが意図されている。キットはまた、使用説明書を含んでもよい。

【0409】

本明細書で別途定義されない限り、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。本明細書に記載の方法及び材料に類似またはそれらと同等の方法及び材料もまた、本開示の実践または試験に使用することができるが、例示的な方法及び材料を以下に記載する。矛盾する場合には、本明細書が、定義を含めて優先される。一般に、本明細書に記載の医薬、医学、及び製薬化学、細胞生物学、分子と関連して使用される専門用語は、当該技術分野で周知であり、かつ一般的に使用されているものである。更に、文脈によって別段に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。本明細書及び実施形態全体を通して、「有する（ｈａｖｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語句、または「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、述べられている整数または整数の群を包含することを暗示するが、任意の他の整数または整数の群の除外を暗示ではないことが理解されるであろう。

【0410】

本開示がよりよく理解され得るように、以下の実施例が示される。これらの実施例は、例示の目的のためだけであり、いかなる方法でも本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【実施例】

【0411】

本発明は、以下の実施例によって更に例示される。

【0412】

材料及び方法
異なるＭＯＧバリアントへのＭＯＧ結合の決定
本発明のＭＯＧ－ＣＡＲを発現する酵母細胞を、ビオチン化ヒトＭＯＧ－Ｈｉｓ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ１６６５３）、マウスＭＯＧ－Ｈｉｓ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ６１８８５）（両方ともＲＮＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、または示された濃度で発現されたカニクイザルＭＯＧ－ＦＣタンパク質（Ｑ９ＢＧＳ７）哺乳動物細胞とともにインキュベートした。次いで、ｓｃＦＶ発現酵母細胞に結合したＭＯＧタンパク質を、フルオロフォアタグ付きストレプトアビジンを使用してフローサイトメトリーによって検出し、一方で、ｓｃＦＶ発現を、遺伝子的にコードされたＮ末端融合ＭＹＣタグの染色によって検出した。図１３を参照されたい。

【0413】

Ａ．ヒト細胞による経験
１．ヒトＰＢＭＣ単離
健康なドナーの血液は、Ｅｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ Ｆｒａｎｃａｉｓ ｄｕ Ｓａｎｇ（ＥＦＳ）によって収集される。採血の翌日、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によってバッフィーコートから単離し、これにより、顆粒球、血小板、及び残っている赤血球混入物質などの血液生成物の不要な画分の除去が可能になる。次いで、目的の細胞集団を以下のように単離した。

【0414】

２．ＦｏｘＰ３ Ｔｒｅｇ及びＣＤ４^＋ＣＤ２５^－の従来のヒトＴ細胞単離
ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^低Ｔｒｅｇを、製造業者の指示に従って、ヒトＣＤ４^＋ＣＤ１２７^低ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞単離キット（＃１８０６３；ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して単離した。簡潔には、ＣＤ２５^＋細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ ＲａｐｉｄＳｐｈｅｒｅｓ（商標）を使用して、カラムフリーの免疫磁気陽性選択により、４００～５００×１０^６個のＰＢＭＣから最初に単離した。次いで、結合した磁性粒子をＥａｓｙＳｅｐ（商標）単離ＣＤ２５^＋細胞から除去し、不要な非Ｔｒｅｇを枯渇のために標的化した。最終的な単離された画分は、高度に精製されたＣＤ４^＋ＣＤ１２７^低ＣＤ２５^＋細胞を含み、それらは高レベルのＦｏｘｐ３を発現し、すぐに下流用途に使用された。ＣＤ４^＋ＣＤ２５^－の従来のＴ細胞は、Ｔｒｅｇと並行して機能研究で使用するために、キット＃１８０６３（幹細胞）からＣＤ４^＋ＣＤ２５^－レスポンダーＴ細胞を単離するための任意選択のプロトコルを選択することによって単離した。

【0415】

３．単離されたヒトＴｒｅｇの活性化及び培養
単離されたＴｒｅｇ細胞を活性化し、９日間培養した。簡潔には、０日目に、Ｔｒｅｇ細胞（０．５×１０^６個）を、ヒトトランスフェリン（ＯＺＹＭＥ）を含むＸｖｉｖｏ１５無血清培地を用いて２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に培養し、１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２（Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘ）＋１００ｎＭのラパマイシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した。次いで、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化を、Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＤｙｎａｂｅａｄｓ（１ウェル当たり０．５×１０^６個のビーズ）で行った。２、４、及び７日目に、１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を補充した新鮮な培養培地を細胞に供給した。最後に、９日目に、細胞を回収し、計数し、再活性化した。

【0416】

４．レンチウイルスベクターの産生及び滴定
ＣＡＲ発現レンチウイルスベクター（ＬＶ）を、古典的な４プラスミドレンチウイルスシステムを使用して産生した。簡潔には、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｌｅｎｔｉ－Ｘ、Ｏｚｙｍｅ）を、ＣＡＲ発現移行ベクター、ＨＩＶ－１ Ｇａｇ／ｐｏｌ（ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ）を発現するプラスミド、ＨＩＶ－１ Ｒｅｖ（ｐＲＳＶ．Ｒｅｖ）、及びウイルスエンベロープについては、ヒトＴｒｅｇの形質導入のためのＶＳＶ－Ｇ糖タンパク質（ｐＭＤ２．Ｇ）（Ｄｉｄｉｅｒ Ｔｒｏｎｏ、ＥＰＦＬ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、及びマウスＴｒｅｇの形質導入のためのエコトロピックＭＬＶエンベロープ糖タンパク質（ｐＣＭＶ－Ｅｃｏ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．）でトランスフェクトした。トランスフェクションから２４時間後、ウイルス上清を採取し、遠心分離によって濃縮し、アリコートし、長期保存のために－８０℃で凍結した。ウイルス上清の連続希釈を用いて、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞株（ＶＳＶ－Ｇ擬似型の場合）またはＮＩＨ－３Ｔ３（ＥｃｏＭＬＶ擬似型の場合）の形質導入後に、１ミリリットル当たりの形質導入単位（ＴＵ／ｍＬ）で発現した感染力価を取得し、ＧＦＰ発現をモニタリングすることによって、４日後に形質導入効率を評価した。

【0417】

５．ヒトＴｒｅｇ形質導入プロトコル
Ｔｒｅｇを、キメラ受容体による活性化の２日後に形質導入した（以下を参照されたい）。簡潔には、形質導入を、１ｍＬ当たり２～５×１０^６個の形質導入単位（ＴＵ）を各ウェルに充填することによって実施した。３７℃で６時間後、ウイルス粒子をウォッシュアウトによって除去した。次いで、プレートを５％ＣＯ２で、３７℃でインキュベートした。形質導入の５日後、形質導入効率を分析した：遺伝子導入有効性は、フローサイトメトリーにおけるＧＦＰ陽性細胞のパーセンテージの分析によって測定された。

【0418】

６．形質導入に使用されるヒトＣＡＲ構築物。
ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）及びＣＤ２８の細胞内ドメインからなるＭＯＧ ＣＡＲを、ＣＤ３ζと並行して、ＭＯＧに対して指向されたｓｃＦｖと関連付けて設計する。本研究で使用される構築物を図１に列挙し、説明する。

【0419】

７．形質導入されたヒトＴｒｅｇの表現型分析
培養の９日目に、表１に列挙されるマーカーを使用して、フローサイトメトリーでＴｒｅｇ表現型を分析した。

【表1】

【0420】

８．ヒトＣＡＲの活性化アッセイ
活性化アッセイを、培養の９日目に行った。簡潔には、０．０５×１０^６個のＴｒｅｇを、９６Ｕボトムプレートに単独でもしくは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズの存在下で（１対１のＴｒｅｇ対ビーズ比で）、またはＭＯＧコーティングビーズ中に（１対１のＴｒｅｇ対ビーズ比で）、２００μｌの最終体積で播種した。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間後、細胞をＣＤ４及びＣＤ６９について染色し、次いで、フローサイトメトリーを使用して分析した。形質導入されていないＴｒｅｇ細胞と比較したＣＡＲ Ｔｒｅｇ細胞におけるＣＤ６９の自発的発現のモニタリングは、トニックシグナル伝達強度の決定を可能にする。

【0421】

９．ヒトＴ細胞増殖の抑制アッセイ
抑制アッセイを、培養の９日目に行った。簡潔には、Ｔｒｅｇを回収し、計数し、抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズ（１対１のＴｒｅｇ対ビーズ比）を使用してＴＣＲを通して、またはＭＯＧコーティングビーズ（１対１のＴｒｅｇ対ビーズ比）を使用してＣＡＲを通してのいずれかで活性化したか、または活性化せずに維持して、それらの自発的抑制活性を評価した。並行して、同種異系Ｔｃｏｎｖを解凍し、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で染色し、（３対１のＴｃｏｎｖ対ビーズ比で）抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズで活性化した。翌日、ビーズをＴｃｏｎｖから除去した後、非活性化または活性化Ｔｒｅｇ（非形質導入または形質導入）との共培養を行った。３日目に、細胞を採取し、ＣＴＶ希釈の決定を通じて、フローサイトメトリーによってＴｃｏｎｖの増殖を評価した。Ｔｃｏｎｖ増殖の阻害のパーセンテージを以下のように計算した。

【数1】

【0422】

Ｂ．マウス細胞による経験
１．マウスＴｒｅｇの単離
Ｃ５７／Ｂｌ６から脾臓を採取し、細胞ストレーナーを通してマッシュアップして、単一の細胞懸濁液を得る。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇを、製造業者の指示に従ってＥａｓｙＳｅｐ（商標）マウスＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞単離キットＩＩ（＃１８７８３；ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して単離した。簡潔には、ＣＤ４＋細胞を最初に、カラムフリーの免疫磁気陰性選択によって脾臓細胞から事前濃縮した。次いで、磁性粒子に結合するＣＤ２５を認識する抗体を含むＣＤ２５陽性選択カクテルを使用して、ＣＤ２５＋を選択する。単離された細胞は、細胞培養のために直ちに利用可能である。

【0423】

２．単離されたマウスＴｒｅｇの活性化及び培養
単離されたＴｒｅｇ細胞を活性化し、最大８日間培養した。簡潔には、０日目に、Ｔｒｅｇ細胞（０，５．１０^６個）を、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭの非必須アミノ酸、１％のペニシリン－ストレプトアビジン、及び１０００Ｕ／ｍＬのＲｅｃ ｈｕＩＬ２及び５０ｎＭのラパマイシンを補充した５μＭの２－ベータメルカプト－エタノール（ＲＰＭＩ１０）を含むＲＰＭＩを含む２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に培養した。次いで、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化を、Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＤｙｎａｂｅａｄｓマウスＴ活性化剤（２：１、ビーズ：細胞比）を用いて行った。２、４、及び６日目に、細胞を計数し、１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２及びＲａｐａを補充した新鮮な培養培地を供給した（４日目にのみ）。

【0424】

３．マウスＴｒｅｇ形質導入プロトコル
Ｔｒｅｇを、キメラ受容体による活性化の２日後に形質導入した。簡潔には、形質導入を、ＣＡＲベクター１ｍＬ当たり２×１０^７個の形質導入単位（ＴＵ）を各ウェルに、及び１５μｇ／ｍＬのプロトランスデューシンＢ（ＰＴＤＢ）を充填することによって実施した。ＰＴＤＢ及びベクターを３７℃で５分間混合した後、Ｔｒｅｇに添加する。スピノキュレーションは、３２℃、１０００ｇで９０分行う。３７℃で４時間後、ウイルス粒子及びＰＴＤＢをウォッシュアウトによって除去し、ＩＬ－２（１０００Ｕ／ｍｌ）を含む新鮮な培地を添加する。次いで、プレートを５％ＣＯ２で、３７℃でインキュベートした。形質導入の４～５日後、形質導入効率を分析した：遺伝子導入有効性は、フローサイトメトリーにおけるＮＧＦＲ陽性細胞のパーセンテージの分析によって測定された。

【0425】

４．形質導入に使用されるマウスＣＡＲ構築物
ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）及びＣＤ２８の細胞内ドメインからなるＭＯＧ ＣＡＲを、ＣＤ３ζと並行して、ＭＯＧに対して指向されたｓｃＦｖと関連付けて設計する。本研究で使用される構築物を図２に列挙し、説明する。

【0426】

５．形質導入されたマウスＴｒｅｇの表現型分析
培養の６～７日目に、表２に列挙されるマーカーを使用して、フローサイトメトリーでＴｒｅｇ表現型を分析した。

【表2】

【0427】

６．マウスＣＡＲの活性化アッセイ
活性化アッセイを、培養の７日目に行った。簡潔には、０．０５×１０^６個のＴｒｅｇを、９６Ｕボトムプレートに単独でもしくは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３コーティングビーズの存在下で（１対１のＴｒｅｇ対ビーズ比で）、またはＭＯＧコーティングビーズ中に（１対１のＴｒｅｇ対ビーズ比で）、２００μｌの最終体積で播種した。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間後、細胞をＣＤ４及びＣＤ６９について染色し、次いで、フローサイトメトリーを使用して分析した。対照Ｔｒｅｇ細胞と比較したＣＡＲ Ｔｒｅｇ細胞におけるＣＤ６９の自発的発現のモニタリングは、トニックシグナル伝達強度の決定を可能にする。

【0428】

７．マウスＣＡＲのインビボ活性化アッセイ：ショートモデル
ＭＯＧ ＣＡＲが標的器官（中枢神経系：ＣＮＳ）に入り、そこで活性化及び増殖することができるかどうかを判定するために、ＥＡＥを使用したショートモデルを開発した。簡潔には、雌マウスを、ＭＯＧペプチド＋ＣＦＡを含むエマルションで免疫化して、疾患を誘発した。Ｐｅｒｔｕｓｉｓ毒素（ＰＴＸ）の腹腔内注射を０日目及び２日目に行い、血液脳関門（ＢＢＢ）の開放を助けた。疾患の発症時（免疫化から９～１１日後）に、ＭＯＧ ＣＡＲ及びＣＡＲ対照Ｔｒｅｇを静脈内注射した。５日後、マウスを犠牲にし、流入領域リンパ節（ｄＬＮ）及びＣＮＳを採取し、フローサイトメトリーによって分析して、細胞の活性化（ＣＤ６９、ＬＡＰ、及びＣＤ７１）、及び増殖（Ｋｉ６７）を評価した。

【0429】

８．マウスＥＡＥモデルにおけるマウスＣＡＲのインビボ有効性アッセイ
ドナーマウスを、標準的なプロトコルを使用してＣＦＡ／ＭＯＧエマルションで免疫化した。各マウスを、ＭＯＧペプチド及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｈ３７Ｒａ）を含む合計１００μｌのＣＦＡエマルションで尾の基部及び脇腹に皮下で免疫化した。１４日後、マウスを犠牲にし、脾臓及びＬＮを採取し、次いで、粉砕した。脾臓細胞を分極カクテルで培養して、ＭＯＧ特異的病原性細胞を増強した。３日後、これらの細胞を採取し、雌ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６マウスに注射して、ＥＡＥ（２５×１０^６個の細胞／マウス）を誘発した。本開示のマウスＣＡＲ ＭＯＧ Ｔｒｅｇ、ＣＡＲ対照Ｔｒｅｇ、または生理食塩水を、病原性細胞の２４時間後に静脈内注射した。疾患の進行は、以下の基準を使用してＥＡＥスコアリングに基づいて評価した：０（正常）、１（部分的に四肢の尾）、２（麻痺した尾）、３（後肢の衰弱または協調運動障害）、４（後肢の麻痺）、４．５（前肢の衰弱を伴う後肢の麻痺）、及び５（瀕死または死亡）。臨床スコア及び体重（ＢＷ）は、６日目から１５日目まで隔日で測定する。偏った結果を回避するために、二重盲検試験の一部としてＥＡＥスコアリングを行った。

【0430】

１５日後、マウスを犠牲にし、ＣＮＳ細胞を採取し、粉砕した。コラゲナーゼ消化を３７℃で３０分間行い、続いて、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配を用いて、ＣＮＳに浸潤した免疫細胞を単離した。これらの細胞を、ＭＯＧペプチド（１０μｇ／ｍＬ）を含む完全なＲＰＭＩ培地中で一晩インキュベートして、ＭＯＧ特異的細胞を刺激した。１６時間後、上清を回収し、ブレフェルジンＡを培地に添加して、サイトカイン分泌を停止する。次いで、細胞を細胞染色緩衝液ですすぎ、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴで取得する前に細胞内サイトカインについて染色する。

【0431】

結果
Ａ．ヒト細胞による経験
１．細胞表面における形質導入効率及びＣＡＲ発現
形質導入効率は、ＧＦＰ陽性細胞発現のパーセンテージによって評価し、ＣＡＲ発現は、免疫グロブリンカッパ軽鎖結合タンパク質である組換えタンパク質Ｌを使用してモニタリングした。生データの一例として、形質導入されていない細胞（ＮＴ）と比較した、形質導入効率のパーセンテージ及び細胞表面でＣＡＲを発現した形質導入された細胞のパーセンテージの結果を図３に示す。

【0432】

２．新しいｓｃＦｖは、良好なＴｒｅｇ表現型安定性を強調した。
一般に、操作されたＴ細胞の主な問題は、特にＣＡＲの高い発現が望ましくない抗原非依存性ＣＡＲ活性化に関連付けられていることが示されているため、所望の表現型の維持を確実にすることである（Ｆｒｉｇａｕｌｔ，２０１５）。Ｔｒｅｇ同一性に関連するマーカーのパネルを分析して、Ｔｒｅｇ表現型が、拡大及びＣＡＲ関与中に変化するかどうかを確認した。ここで、Ｈｅｌｉｏｓ及びＦｏｘＰ３の発現ならびにＴｒｅｇ表現型に関連する他のマーカーの維持を、ＦｏｘＰ３ Ｔｒｅｇで確認した（図４）。ＭＯＧ ＣＡＲ－Ｔｒｅｇは、９日目に、拡大後にＦＯＸＰ３及びＨｅｌｉｏｓの高い発現を維持した。

【0433】

３．新しいｓｃＦｖ由来のＣＡＲは、ＣＡＲ特異的活性化を維持する
活性化の低いバックグラウンドは、両方の構築物で観察され、本発明のＣＡＲ－ＭＯＧは、ＭＯＧビーズによって特異的に活性化される（図５）。

【0434】

４．新しいｓｃＦＶを含むＭＯＧ ＣＡＲは、効率的なＣＡＲ媒介性抑制活性を呈する。
新しいｓｃＦＶを有するＣＡＲ－ＭＯＧ構築物について、ＣＡＲ対照と比較した抑制活性のＣＡＲ特異的トリガーが観察された（図６）。

【0435】

５．ＭＯＧ ＣＡＲ Ｔｒｅｇは、マウスまたはヒトＭＯＧに応答して活性化を示す。
ヒト及びマウスＭＯＧによる活性化後のＭＯＧ ＣＡＲ－ＴｒｅｇにおけるＣＤ６９発現のレベルを分析することによって、本発明のｓｃＦｖの交差反応性が示された。ヒト及びマウスＭＯＧ標的の両方に応答して同じ活性化曲線が観察された（図１２）。

【0436】

Ｂ．マウス細胞による経験
１．形質導入効率
形質導入効率を、ＮＧＦＲ陽性細胞発現のパーセンテージによって評価した。生データの一例として、非形質導入細胞（ＮＴ）と比較した形質導入効率のパーセンテージの結果を図７に示す。

【0437】

２．新しいｓｃＦｖは、良好なＴｒｅｇ表現型を強調した
Ｔｒｅｇ同一性に関連するマーカーのパネル（表２）を分析して、Ｔｒｅｇ表現型が、拡大及びＣＡＲ関与中に変化するかどうかを確認した。ここで、単離後７日目のＦｏｘＰ３の維持をＴｒｅｇで確認した（図８）。ＭＯＧ ＣＡＲ－Ｔｒｅｇｓは、拡大後にＦＯＸＰ３の高い発現を維持し、細胞の６０～７０％がＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋である。

【0438】

３．新しいｓｃＦｖ由来のＣＡＲは、ＣＡＲ特異的活性化を維持する
活性化の低いバックグラウンドは、構築物の両方で観察され、ＭＯＧ ＣＡＲは、ＭＯＧビーズによって特異的に活性化された（図９）。

【0439】

図１１Ａは、フローサイトメトリーによる早期活性化マーカーＣＤ６９の発現レベルによって測定された場合の、ＭＯＧコーティングビーズ（黒色のバー）対対照ビーズ（白色のバー）による、いくつかの異なるＭＯＧ－ＣＡＲ（ＮＧＦＲ＋細胞）で形質導入されたマウスＴｒｅｇのインビトロでの活性化レベルを示す。ＣＡＲ １は、図９で使用されるのと同じＭＯＧ ＣＡＲ構築物であり、本発明の例示的な構築物である。ＣＡＲ２～６は、比較ＭＯＧ ＣＡＲ構築物である。

【0440】

点線は、非活性化基準ＭＯＧ－ＣＡＲ（トニックシグナル伝達）のＣＤ６９発現の閾値を表す。箱は、標的抗原ＭＯＧ（最良のシグナル対ノイズ比）による低レベルのトニックシグナル伝達及び高レベルの活性化を示す２つの最良の候補を強調表示する。図１１Ａの表は、活性化後のＭＯＧ ＣＡＲ Ｔｒｅｇ上のＣＤ６９発現の増加倍率を示す。ＨＬＡ－Ａ２ ＣＡＲを、アッセイにおいて陽性対照として使用した。

【0441】

図１１Ｂは、切断された対照ＣＡＲ（ＭＯＧ ｓｃＦｖ及び非シグナル伝達エンドドメイン）で形質導入されたＣＡＲ Ｔｒｅｇの活性化レベルに対する、５日後にＭＯＧ ＣＡＲを注射された動物のＣＮＳ（「ショートＥＡＥモデル」）における活性化マーカーＣＤ６９、ＣＤ７１、ＬＡＰ、及び増殖マーカーＫｉ６７のインビボでの増加倍率を示す。

【0442】

４．マウスＣＡＲのインビボ活性化アッセイ：ショートモデル－ＭＯＧ ＣＡＲ ＴｒｅｇがＣＮＳに入り、そこで活性化及び増殖する。
マウスＭＯＧ ＣＡＲ Ｔｒｅｇの静脈内注射の６日後、ＮＧＦＲ＋及びＮＧＦＲ－Ｔｒｅｇの活性化及び増殖を、ＣＮＳ及び脾臓におけるフローサイトメトリーによって分析した（図１０Ａ及び１０Ｂ）。ＣＡＲ－ＭＯＧ Ｔｒｅｇ（ＮＧＦＲ＋細胞）は、対照Ｔｒｅｇ（ＮＧＦＲ－細胞）と比較してＣＮＳにおいてより活性化され、ＣＮＳにおける増殖に関して、ＣＡＲ－ＭＯＧ Ｔｒｅｇは、対照Ｔｒｅｇと比較してＫｉ６７のより高い発現を示していた（図１０Ａ）。ＣＮＳにおけるＣＡＲ－ＭＯＧ Ｔｒｅｇの活性化及び増殖を脾臓と比較して見たところ、ＣＡＲ－ＭＯＧ Ｔｒｅｇは、ＣＮＳにおいて、脾臓においてよりも高いレベルのＣＤ６９（活性化）及びＫｉ６７（増殖）を示した（図１０Ｂ）。

【0443】

５．マウスＥＡＥモデルにおける本開示のＭＯＧ ＣＡＲ Ｔｒｅｇの例示的なインビボ有効性
本開示の本発明のＣＡＲ ＭＯＧ Ｔｒｅｇ細胞の機能的インビボ有効性を示すためのこの例示的な研究では、Ｃ５７Ｂｌ６マウスにおいて養子移植ＥＡＥを使用した。ＭＯＧにより誘導を指向するための代替として、ＥＡＥは、これらの抗原で免疫化されたマウスからのインビトロＣＮＳ抗原活性化リンパ球の養子移入によって、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいても誘導され得る。図１４Ａ及び１４Ｂに示されるように、病原性細胞を注射したマウスは、重度の麻痺の兆候を示している。病原性細胞注射の２４時間後に本開示のＣＡＲ ＭＯＧ Ｔｒｅｇで処置したマウスは、生理食塩水またはＣＡＲ対照（Ｃｔｒｌ）群と比較して、より低い臨床スコア（図１４Ａ）及び疾患発生の遅延（図１４Ｂ）を示している。

【0444】

図１５に示されるように、本開示のＭＯＧ ＣＡＲ、対照ＣＡＲ、または生理食塩水で処理したマウス由来のＩＦＮｇ陽性ＣＮＳ細胞のパーセンテージを、ＭＯＧペプチドによるエクスビボ刺激後に測定した。マウスの犠牲後、ＣＮＳ由来の細胞をＭＯＧペプチド（１０μｇ／ｍＬ）とともに一晩インキュベートした。１６時間後、ＢＦＡを培地に添加し、細胞内染色を行った。エラーバーは、１５匹のマウス／群を含む２つの独立した実験からの平均±ＳＥＭを表す。この例示的な研究では、本開示のＭＯＧ ＣＡＲで処理されたマウス由来のＣＮＳ細胞は、生理食塩水またはＣＡＲ対照で処理されたマウス由来の細胞と比較して、ＭＯＧペプチドインキュベーション後のＩＦＮ－ガンマ陽性細胞のより低いパーセンテージを示した。

【0445】

配列表

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【配列表】

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【国際調査報告】