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特表2024-532540二機能性融合タンパク質およびその用途

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-05

(54)【発明の名称】二機能性融合タンパク質およびその用途

(51)【国際特許分類】

C07K 19/00 20060101AFI20240829BHJP

C12N 15/62 20060101ALI20240829BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20240829BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20240829BHJP

C12N 1/15 20060101ALI20240829BHJP

C12N 1/19 20060101ALI20240829BHJP

C12N 1/21 20060101ALI20240829BHJP

A61P 11/00 20060101ALI20240829BHJP

A61P 1/16 20060101ALI20240829BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20240829BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20240829BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20240829BHJP

A61P 37/06 20060101ALI20240829BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20240829BHJP

A61K 38/19 20060101ALI20240829BHJP

C12N 15/13 20060101ALN20240829BHJP

C12N 15/12 20060101ALN20240829BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

A61P11/00

A61P1/16

A61P13/12

A61P29/00

A61P35/00

A61P37/06

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K38/19

C12N15/13

C12N15/12

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024514514

(86)(22)【出願日】2022-09-02

(85)【翻訳文提出日】2024-04-25

(86)【国際出願番号】 CN2022116919

(87)【国際公開番号】W WO2023030511

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/116558

(32)【優先日】2021-09-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524082753

【氏名又は名称】パルモンジーン（ホンコン）、カンパニー、リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＰＵＬＭＯＮＧＥＮＥ（ＨＯＮＧＫＯＮＧ）ＣＯ．，ＬＩＭＩＴＥＤ

(71)【出願人】

【識別番号】524082764

【氏名又は名称】ナン、タン

【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＴＡＮＧ

(74)【代理人】

【識別番号】110003421

【氏名又は名称】弁理士法人フィールズ国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ナン、タン

(72)【発明者】

【氏名】ジェンホワ、スイ

(72)【発明者】

【氏名】シンミン、リウ

(72)【発明者】

【氏名】ナンムン、ソン

(72)【発明者】

【氏名】ルイ、ザオ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA06

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA41

4C084CA53

4C084DA01

4C084NA14

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB261

4C084ZB262

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC01

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＴＧＦβリガンドおよびＡＲＥＧの両方を標的とし、且つＴＧＦβおよびＡＲＥＧシグナル伝達を同時にブロッキングする、二機能性融合タンパク質を提供する。本発明は、当該二機能性融合タンパク質をコードする核酸分子、当該二機能性融合タンパク質を産生するための発現ベクター、当該二機能性融合タンパク質を産生するための宿主細胞、ならびに当該二機能性融合タンパク質を調製および／または特徴付けるための方法をさらに提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

二機能性融合タンパク質であって、
少なくとも二つのドメインを含み、前記二つのドメインは、ＡＲＥＧもしくはその断片、および／またはＴＧＦβリガンドもしくはその断片に結合することができることを特徴とする、前記二機能性融合タンパク質。

【請求項2】

第１のドメインおよび第２のドメインを含み、ここで、前記第１のドメインは、ＡＲＥＧまたはその断片に結合することができ、前記第２のドメインは、ＴＧＦβリガンドまたはその断片に結合することができることを特徴とする
請求項１に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項3】

前記第１のドメインは、ＡＲＥＧもしくはその断片に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、前記第２のドメインは、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＲＩＩ）の細胞外ドメインまたはその変異体の一部を含むことを特徴とする
請求項２に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項4】

前記抗体またはその抗原結合断片は、ＡＲＥＧ、好ましくはヒトＡＲＥＧおよびマウスＡＲＥＧの両方に結合できる抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片であるか、あるいは、前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒトＡＲＥＧに結合することができ、マウスＡＲＥＧに対して弱い交差反応性を有するか、または交差反応性を有さないことを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項5】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒト抗ＡＲＥＧ抗体、ネズミ抗ＡＲＥＧ抗体、キメラ抗ＡＲＥＧ抗体、またはヒト化抗ＡＲＥＧ抗体であり、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ネズミｍＡｂ、キメラｍＡｂまたはヒト化ｍＡｂであることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項6】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、可溶性形態のＡＲＥＧに結合することができ、好ましくは、可溶性形態のＡＲＥＧの上皮成長因子（ＥＧＦ）様ドメインに結合することができ、より好ましくは、可溶性形態のＡＲＥＧのＥＧＦ様ドメイン内のＣ末端に結合することができることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項7】

【請求項8】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、
（１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＧＹＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）、ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＳＧＬＮＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、
（２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＳＹＮＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＫＮＮＫＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、
（３）ＨＣＤＲ１：ＳＨＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＶＤＴＫＦＤＰ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）、ＬＣＤＲ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、ＬＣＤＲ２：ＳＮＮＱＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、ＬＣＤＲ３：ＥＶＷＤＤＳＬＮＧＰＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、
（４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（５）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＲＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＥＤＧＴＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３１）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＥＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（６）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＬＲＫＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＱＤＧＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（７）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＮＱＥＧＥＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３５）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（８）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（９）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１０）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４１）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４３）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１３）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４５）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４７）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１５）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＣＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４８）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＣＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４９）、
（１６）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５１）、
（１７）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５２）、
（１８）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５３）、
（１９）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５４）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、
（２０）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、および
（２１）（１）～（２０）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、ただし、
そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択されることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項9】

【請求項10】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：５７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０、
（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：５８およびＳＥＱＩＤＮＯ：７１、
（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５９およびＳＥＱＩＤＮＯ：７２、
（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６０およびＳＥＱＩＤＮＯ：７３、
（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６１およびＳＥＱＩＤＮＯ：７４、
（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６２およびＳＥＱＩＤＮＯ：７５、
（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６３およびＳＥＱＩＤＮＯ：７６、
（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６４およびＳＥＱＩＤＮＯ：７７、
（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６５およびＳＥＱＩＤＮＯ：７８、
（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、
（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８０、
（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８１、
（１３）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、
（１４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８２、
（１５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８３、
（１６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６８およびＳＥＱＩＤＮＯ：８４、
（１７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８５、
（１８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８６、
（１９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８７、
（２０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８８、
（２１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８９、および
（２２）それぞれ（１）～（２１）のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持する二つのアミノ酸配列からなる群から選択されることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項11】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのアイソタイプまたはその変異体、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のアイソタイプまたはその変異体であることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項12】

前記第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体を含むことを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項13】

前記変異体は、点突然変異および／または欠失を含むことを特徴とする
請求項１２に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項14】

前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
請求項１２に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項15】

前記点突然変異は、Ｋ７、Ｔ１６、Ｄ１７、Ｒ３４、Ｒ６６、Ｋ６７、Ｋ１０３およびＫ１０４から選択される位置での一つまたは複数の点突然変異を含み、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
請求項１３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項16】

前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｔ１６Ｓ、Ｄ１７Ｎ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される一つまたは複数の部位突然変異を含み、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
請求項１３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項17】

前記点突然変異は、Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎ、Ｋ７ＱおよびＤ１７Ｎ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７ＱおよびＲ３４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、ならびにＫ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択されることを特徴とする
請求項１３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項18】

前記変異体は、４～２１個のアミノ酸のＮ末端欠失、好ましくは４個のアミノ酸、７個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１７個のアミノ酸および２１個のアミノ酸のＮ末端欠失を有し、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
請求項１３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項19】

前記変異体は、点突然変異Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎ、ならびに７個のアミノ酸のＮ末端欠失を含むことを特徴とする
請求項１３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項20】

前記第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７に示されるようなアミノ酸配列のいずれか一つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７のいずれか一つと少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
請求項１２に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項21】

前記第１のドメインのＣ末端は、リンカー、好ましくはリンカーペプチドを介して前記第２のドメインのＮ末端に融合され、その逆も同様であることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項22】

前記抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端は、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に直接またはリンカーを介して融合されるか、あるいは前記抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端は、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に直接またはリンカーを介して連結されることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項23】

前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、それは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体に直接またはリンカーを介して連結されることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項24】

前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＮ末端は、直接またはリンカーを介して、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に連結されるか、あるいは、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖のＣ末端は、直接またはリンカーを介して、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に連結されることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項25】

前記リンカーは、式（Ｇ_４Ｓ）_ｎ、（Ｇ_４Ｓ）_ｎＧ、Ｓ（Ｇ_４Ｓ）_ｎＧ、ＳＧ（ＥＡＡＡＫ）_ｎＳＧ、Ｓ（ＧＥＧＥＳ）ｎＧまたは（ＥＡＡＡＫ）_ｎで表されるリンカーペプチドを含み、ここで、ｎは、１～５の整数であり、好ましくは、前記リンカーペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０８～１１７のいずれか一つに示されるアミノ酸配列を有することを特徴とする
請求項２１～２４のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項26】

前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＣ末端は、リンカーを介して前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインのＮ末端に連結され、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９に示されるのいずれか一つのアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９のいずれか一つと少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項27】

抗ＡＲＥＧ抗体の軽鎖をさらに含むことを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項28】

ヘテロ四量体形態であることを特徴とする
請求項２に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項29】

単離された核酸分子であって、
請求項１－２８のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質をコードすることを特徴とする、前記単離された核酸分子。

【請求項30】

発現ベクターであって、
請求項２９に記載の単離された核酸分子を含むことを特徴とする、前記発現ベクター。

【請求項31】

宿主細胞であって、
請求項２９に記載の単離された核酸分子または請求項３０に記載の発現ベクターを含むことを特徴とする、前記宿主細胞。

【請求項32】

請求項１～２８のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質を調製する方法であって、
請求項３１に記載の宿主細胞を培養する段階を含むことを特徴とする、前記請求項１～２８のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質を調製する方法。

【請求項33】

医薬組成物であって、
請求項１～２８のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、前記医薬組成物。

【請求項34】

被験者における線維性疾患、癌および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための、請求項１～２８のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質、請求項２９に記載の単離された核酸分子または請求項３３に記載の医薬組成物の用途であって、
好ましくは、前記線維性疾患は、腎線維症、肝線維症、肺線維症、特に特発性肺線維症（ＩＰＦ）を含むが、これらに限定されないことを特徴とする、前記用途。

【請求項35】

被験者における線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための方法であって、
被験者に治療有効量の請求項１～２８のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質または請求項３３に記載の医薬組成物を投与することを含み、好ましくは、前記線維性疾患は、腎線維症、肝線維症、肺線維症を含むが、これらに限定されないことを特徴とする、前記被験者における線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）は、生理学的および病理学的条件下で重要な役割を果たす多面発現性サイトカインである。ＴＧＦβ異性体、即ちβ１、β２およびβ３は、約２５ｋＤａのホモ二量体ポリペプチドである。これらのリガンドは、細胞表面受容体（トランスフォーミング成長因子β受容体Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（ＴＲＩ、ＴＲＩＩ、ＴＲＩＩＩ）を含む）ならびにＳＭＡＤ２および３等の細胞内ＳＭＡＤエフェクタータンパク質を通じてシグナルを伝達する。シグナルの伝達は、細胞の生存、増殖、分化、細胞の運動性および細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の産生等を含む、細胞プロセスに影響を与える。

【0002】

ＴＧＦβは、線維形成の中心的な調節因子であると考えられる。研究によると、ＴＧＦβ１は、筋線維芽細胞を活性化し、過剰なＥＣＭ成分を産生し且つＥＣＭ分解を阻害することにより、複数の臓器で線維症を誘導することが示される。ＴＧＦβシグナル伝達をブロッキングすると、肺、肝臓および腎臓を含む多くの臓器における異常なリモデリングおよび瘢痕の形成を予防および阻害することができる。ＴＧＦβは、免疫系において重要な役割を果たすことも示されており、自然免疫応答および適応性免疫応答の両方において最も効果的な免疫阻害因子の一つであると考えられる。さらに、ＴＧＦβは、腫瘍細胞および／腫瘍環境に直接作用することにより、特定の癌において腫瘍促進活性を示すことが報告されている。

【0003】

抗ＴＧＦβ療法は、線維症、特定の癌および他の疾患に対して開発されている。ＴＧＦβ阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、受容体キナーゼ活性を阻害する小分子、ＴＧＦβリガンドまたは受容体に対するモノクローナル抗体、ならびにエンジニアリングによりＴＧＦβトラップを有する二機能タンパク質を含む。具体的には、ＴＧＦβトラップは、これらの受容体の細胞外ドメインの人工二量体化によるＴＧＦβ受容体のエンジニアリング修正を含む。

【0004】

アンフィレグリン（ＡＲＥＧ）は、上皮成長因子（ＥＧＦ）ファミリーの低親和性リガンドである。ＡＲＥＧタンパク質は、２５２個のアミノ酸の膜貫通前駆体から合成され、細胞膜プロテアーゼ、主にＴＡＣＥ（腫瘍壊死因子－α－インベルターゼ）によって細胞外ドメイン内でタンパク質加水分解的切断が行われる。次に、成熟した可溶性ＡＲＥＧは、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に直接結合することで下流のシグナル伝達を活性化する。これにより、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を含む主な細胞内シグナル伝達カスケードを引き起こし、細胞の生存、増殖および運動を制御する。

【0005】

肺線維症モデルおよび特発性肺線維症（ＩＰＦ）患者において、ＡＲＥＧは、ＩＩ型肺胞細胞（ＡＴ２ｓ）で特異的に上方制御される。ＡＲＥＧが肺線維症の発症に必要かつ十分であることを証明する報告もある。具体的には、進行性肺線維症モデルにいて、ＡＲＥＧの発現レベルを低下させると、肺線維症の発症を顕著に軽減される。マウスＡＴ２ｓにおけるＡＲＥＧの過剰発現は、肺のリモデリングおよび線維症変化を誘発する。さらに、ＡＲＥＧの発現レベルは、肝臓および腎線維症で上方制御され、ＡＲＥＧは、肝臓、腎臓および皮膚線維症の発症において必要であることが報告されている。従って、ＡＲＥＧは、線維化促進因子として、肺線維症だけでなく、他の臓器の線維症にとっても魅力的なターゲットポイントである。

【0006】

ＡＲＥＧ－ＥＧＦＲシグナル伝達は、免疫系および腫瘍形成にも役割を果たす。ＡＲＥＧは、炎症条件下で様々な免疫細胞で発現される。様々な種類の免疫細胞におけるＡＲＥＧの存在、およびこれらの免疫細胞の活性化パターンは、免疫由来のＡＲＥＧが２型免疫媒介性（Ｔｈ２）抗性および寛容メカニズムに関与していることを示唆する。さらに、ＡＲＥＧは、様々な癌で上方制御される。機能研究によると、ＡＲＥＧは、特定の癌において癌原遺伝子として機能することが証明する。これらの発見は、ＡＲＥＧ活性を標的とすることが、慢性炎症関連疾患および癌の治療に対する新しいアプローチとなる可能性があることを示唆する。

【0007】

しかしながら、これまでのところ、それぞれ抗ＴＧＦβおよび抗ＡＲＥＧ活性を有する二つの別々の薬物の組み合わせ、またはＴＧＦβとＡＲＥＧとの療法を阻害する能力を同時に有する単一の二機能タンパク質を送達する治療法は、上記疾患（線維症、癌、および慢性炎症に関連する疾患を含む）の病症の治療に関して提案および検証されていない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、ＴＧＦβリガンドおよびＡＲＥＧを同時に標的とし、且つＴＧＦβおよびＡＲＥＧのシグナル伝達を同時にブロッキングする、二機能性融合タンパク質を提供する。前記二機能性融合タンパク質は、腎線維症、肝線維症および肺線維症、特にＩＰＦを含むがこれに限定されない線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患を治療する理想的な候補物である。本出願は、二機能性融合タンパク質をコードする核酸分子、二機能性融合タンパク質を産生するための発現ベクター、当該二機能性融合タンパク質を産生するための宿主細胞、ならびに当該二機能性融合タンパク質を調製および／または特徴付けるための方法をさらに提供する。本発明は、腎線維症、肝線維症および肺線維症、特にＩＰＦを含むがこれらに限定されない線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患等の疾患を治療、予防および／または診断するための前記二機能性融合タンパク質の用途をさらに提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

第１の態様において、本発明は、二機能性融合タンパク質を提供し、それは、少なくとも二つのドメインを含み、前記ドメインは、ＡＲＥＧまたはその断片に結合することができ、および／またはＴＧＦβリガンドまたはその断片に結合することができる。

【0010】

いくつかの実施形態において、二機能性融合タンパク質は、第１のドメインおよび第２のドメインを含み、ここで、第１のドメインは、ＡＲＥＧまたはその断片に結合することができ、第２のドメインは、ＴＧＦβリガンドまたはその断片にキレートすることができる。

【0011】

いくつかの実施形態において、第１のドメインは、ＡＲＥＧまたはその断片に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、第２のドメインは、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＲＩＩ）の細胞外ドメインまたはその変異体の少なくとも一部である。

【0012】

いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＡＲＥＧ（ｈＡＲＥＧ）およびマウスＡＲＥＧ（ｍＡＲＥＧ）の両方に結合できる抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片である。

【0013】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒト抗ＡＲＥＧ抗体、ネズミ抗ＡＲＥＧ抗体、キメラ抗ＡＲＥＧ抗体またはヒト化抗ＡＲＥＧ抗体である。

【0014】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、可溶性形態のＡＲＥＧに結合することができる。好ましくは、抗ＡＲＥＧ抗体は、可溶性形態のＡＲＥＧのＥＧＦ様ドメインに結合することができる。

【0015】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、単鎖抗体、ジスルフィド結合したＦｖ、ＤＡＲＴ、ダイアボディー、ＶＬまたはＶＨドメインを含む断片である。前記断片は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦｖまたはｓｃＦｖであり得る。前記断片は、特異的抗原と結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する、免疫グロブリン可変領域を含む任意の合成タンパク質または遺伝子操作されたタンパク質も含む。構造に関係なく、抗体断片は、完全な抗体によって識別される同一抗原に結合する。

【0016】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、

【0017】

ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるＨＣＤＲ３、（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：６に示されるＨＣＤＲ３、（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるＨＣＤＲ３、（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０所示ＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：９所示ＨＣＤＲ３、（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示されるＨＣＤＲ３、（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示されるＨＣＤＲ３、（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示されるＨＣＤＲ３、（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０に示されるＨＣＤＲ３、（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示されるＨＣＤＲ３、（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９に示されるＨＣＤＲ３、（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ３、および（１３）（１）～（１２）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３であるが、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択され、ならびに
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：２１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示されるＬＣＤＲ３、（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：２１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４に示されるＬＣＤＲ３、（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２６に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示されるＬＣＤＲ３、（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：３１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：３３に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：３６に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：３９に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：４１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：４３に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：３９に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１３）ＳＥＱＩＤＮＯ：４５に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６に示されるＬＣＤＲ３、（１４）ＳＥＱＩＤＮＯ：４７に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６に示されるＬＣＤＲ３、（１５）ＳＥＱＩＤＮＯ：４８に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４９に示されるＬＣＤＲ３、（１６）ＳＥＱＩＤＮＯ：５０に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５１に示されるＬＣＤＲ３、（１７）ＳＥＱＩＤＮＯ：５０に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５２に示されるＬＣＤＲ３、（１８）ＳＥＱＩＤＮＯ：５０に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３に示されるＬＣＤＲ３、（１９）ＳＥＱＩＤＮＯ：５４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５に示されるＬＣＤＲ３、（２０）ＳＥＱＩＤＮＯ：５６に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５に示されるＬＣＤＲ３、および（２１）（１）～（２０）に示されるようなＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択される。

【0018】

一実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、

【0019】

ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示されるＬＣＤＲ３、（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４に示されるＬＣＤＲ３、（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：６に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２６に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示されるＬＣＤＲ３、（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：３１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示されるＬＣＤＲ３、（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：３９に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：３９に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３８に示されるＬＣＤＲ３、（１３）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４５に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６に示されるＬＣＤＲ３、（１４）ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６に示されるＬＣＤＲ３、（１５）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４８に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４９に示されるＬＣＤＲ３、（１６）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５１に示されるＬＣＤＲ３、（１７）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５２に示されるＬＣＤＲ３、（１８）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３に示されるＬＣＤＲ３、（１９）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５４に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５に示されるＬＣＤＲ３、（２０）ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５に示されるＬＣＤＲ３、および（２１）（１）～（２０）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択される。

【0020】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７～６９から選択されるアミノ酸配列およびＳＥＱＩＤＮＯ：５７～６９のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持するアミノ酸配列を有し、ならびに
ここで、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０～８９から選択されるアミノ酸配列およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０～８９のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持するアミノ酸配列を有する。

【0021】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：５７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０、（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：５８およびＳＥＱＩＤＮＯ：７１、（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５９およびＳＥＱＩＤＮＯ：７２、（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６０およびＳＥＱＩＤＮＯ：７３、（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６１およびＳＥＱＩＤＮＯ：７４、（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６２およびＳＥＱＩＤＮＯ：７５、（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６３およびＳＥＱＩＤＮＯ：７６、（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６４およびＳＥＱＩＤＮＯ：７７、（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６５およびＳＥＱＩＤＮＯ：７８、（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８０、（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８１、（１３）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、（１４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８２、（１５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８３、（１６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６８およびＳＥＱＩＤＮＯ：８４、（１７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８５、（１８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８６、（１９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８７、（２０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８８、（２１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８９ならびに（２２）それぞれ（１）～（２１）のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持する二つのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0022】

いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのアイソタイプまたはその変異体である。いくつかの実施形態において、本発明による抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のアイソタイプまたはその変異体である。

【0023】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ネズミｍＡｂ、ヒト化ｍＡｂまたはキメラｍＡｂである。

【0024】

好ましくは、本発明のヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ヒト定常領域に由来する定常領域からなる。

【0025】

好ましくは、本発明のヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、κまたはλ軽鎖定常領域に由来するヒト軽鎖定常領域を有する。

【0026】

好ましくは、本発明のヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域に由来するヒト重鎖定常領域を有する。

【0027】

いくつかの実施形態において、第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体である。

【0028】

いくつかの実施形態において、ＴＲＩＩ細胞外ドメインの変異体は、点突然変異および／または欠失を含む変異体である。

【0029】

いくつかの実施形態において、ＴＲＩＩの細胞外ドメインは、Ｎ末端からＣ末端までのアミノ酸番号が１～１３６であるＳＥＱＩＤＮＯ：９０に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。

【0030】

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までの番号に基づいて、点突然変異は、Ｋ７、Ｔ１６、Ｄ１７、Ｒ３４、Ｒ６６、Ｋ６７、Ｋ１０３およびＫ１０４から選択される一つまたは複数の点突然変異を含む。

【0031】

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までの番号に基づいて、点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｔ１６Ｓ、Ｄ１７Ｎ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される一つまたは複数の点突然変異を含む。

【0032】

いくつかの実施形態において、点突然変異は、Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎを含む。

【0033】

いくつかの実施形態において、点突然変異は、Ｋ７ＱおよびＤ１７Ｎを含む。

【0034】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑを含む。

【0035】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｒ３４Ｓを含む。

【0036】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｒ３４Ｈを含む。

【0037】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓを含む。

【0038】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓを含む。

【0039】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７ＱおよびＲ３４Ｓを含む。

【0040】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓを含む。

【0041】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓを含む。

【0042】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓを含む。

【0043】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓを含む。

【0044】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３Ｓ、Ｋ１０４Ｓを含む。

【0045】

いくつかの実施形態において、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓを含む。

【0046】

いくつかの実施形態において、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される一つまたは二つの突然変異を有するＴＲＩＩ細胞外ドメインの変異体は、二機能性融合タンパク質のスプライシングの減少を示す。

【0047】

いくつかの実施形態において、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される突然変異を有するＴＲＩＩ細胞外ドメインの変異体は、スプライシングの減少を示す。

【0048】

いくつかの実施形態において、突然変異Ｋ７Ｑを有するＴＲＩＩ細胞外ドメインの変異体は、スプライシングの顕著な減少を示す。

【0049】

いくつかの実施形態において、ＴＲＩＩ細胞外ドメインの変異体は、Ｎ末端欠失を有する変異体であり、好ましくは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までのアミノ酸番号に基づいて、４個のアミノ酸、７個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１７個のアミノ酸および２１個のアミノ酸の欠失がある。

【0050】

いくつかの実施形態において、ＴＲＩＩ細胞外ドメインの変異体は、点突然変異Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎを含み、且つＮ末端の７個のアミノ酸欠失を有する変異体である。

【0051】

いくつかの実施形態において、第２のドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７のいずれか一つに示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７のいずれか一つと少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体である。

【0052】

いくつかの実施形態において、第１のドメインのＣ末端は、リンカーを介して第２のドメインのＮ末端に連結されるか、あるいはその逆も同様である。

【0053】

リンカーは、小分子、ＰＥＧポリマーまたはリンカーペプチドであり得る。好ましくは、前記リンカーは、リンカーペプチドである。

【0054】

いくつかの実施形態において、第１のドメインおよび第２のドメインは、２～約３０個のアミノ酸、好ましくは６～２６個のアミノ酸の短いリンカーペプチドに連結される。リンカーは、柔軟性を高めるためにグリシンを豊富に含むか、可溶性を高めるためにセリン、スレオニン、グルタミン酸、アラニンまたはリジンを含むことができ、また抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端をＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に連結することができるか、あるいはその逆も同様である。リンカーペプチドは、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ、（Ｇ_４Ｓ）_ｎＧ、Ｓ（Ｇ_４Ｓ）_ｎＧ、ＳＧ（ＥＡＡＡＫ）_ｎＳＧ、Ｓ（ＧＥＧＥＳ）ｎＧ、（ＥＡＡＡＫ）_ｎから選択されることができ、ここで、ｎは、１～５の整数である。いくつかの実施形態において、リンカーは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０８～１１７から選択されるアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端、好ましくは重鎖のＣ末端は、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に直接連結されるか、またはリンカーてペプチドを介してに連結され、その逆も同様である。

【0055】

いくつかの実施形態において、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端、好ましくは重鎖のＮ末端は、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に直接連結されるか、またはリンカーてペプチドを介してに連結され、その逆も同様である。

【0056】

このような二機能性融合タンパク質は、リンカーの導入にもかかわらず、依然として元の免疫グロブリンの特異性を保持する。

【0057】

いくつかの実施形態において、本発明による二機能性融合タンパク質は、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体に直接連結された、またはリンカーを介して連結された抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖、好ましくは重鎖を含む。

【0058】

いくつかの実施形態において、本発明による二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖、好ましくは重鎖を含み、そのＮ末端は、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に直接連結されるか、またはリンカーを介して連結される。

【0059】

いくつかの実施形態において、本発明による二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖、好ましくは重鎖を含み、そのＣ末端は、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に直接連結されるか、またはリンカーを介して連結される。

【0060】

いくつかの実施形態において、本発明による二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＣ末端は、リンカーを介して、ＴＲＩＩの細胞外ドメインのＮ末端に連結される。いくつかの実施形態において、本発明による二機能性融合タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９のいずれか一つに示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９のいずれか一つと少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0061】

好ましくは、本発明による二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の軽鎖をさらに含む。

【0062】

本発明による二機能性融合タンパク質は、ヘテロ四量体の形態である。

【0063】

いくつかの実施形態において、抗ＡＲＥＧ抗体のＦｃ領域は、ヒンジ（Ｈｉｎｇｅ）部分、ＣＨ３部分およびＣＨ２部分を含むことができる。

【0064】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヘテロ二量体化、好ましくは二つの重鎖のヘテロ二量体化を促進するドメインをさらに含むことができる。

【0065】

いくつかの実施形態において、定常領域は、半減期の延長、安定性の向上、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの増加または減少を目的とする、様々な修飾を含む。

【0066】

本発明による二機能性融合タンパク質は、抗ＴＧＦβおよび抗ＡＲＥＧ活性を同時に有し、ＴＧＦβおよびＡＲＥＧを同時に阻害する能力を有し、ＴＧＦβおよびＡＲＥＧに関連する経路を同時にブロッキングすることができ、また線維症、癌、および慢性炎症に関連する疾患等の疾患を含む病症をより効果的に軽減および治療することができる。特に、本発明による二機能性融合タンパク質は、ＴＧＦβリガンドに結合できるＴＲＩＩの細胞外ドメインの少なくとも一部と、ならびにＡＲＥＧに結合して中和する抗体または抗原結合断片とを有する。当該二機能タンパク質は、ＴＧＦβおよびＡＲＥＧシグナル伝達を同時にブロッキングすることができる。従って、本発明の二機能性融合タンパク質は、線維性疾患（腎線維症、肝線維症、肺線維症、特にＩＰＦを含むがこれらに限定されない）、癌、ならびに慢性炎症に関連する疾患の治療に使用されることができる。

【0067】

第２の態様において、本発明は、第１の態様の二機能性融合タンパク質をコードする、単離された核酸を提供する。

【0068】

第３の態様において、本発明は、第２の態様の単離された核酸を含む、発現ベクターを提供する。

【0069】

第４の態様において、本発明は、第２の態様の単離された核酸または第３の態様の発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。

【0070】

宿主細胞は、第３の態様の発現ベクターが、担持された核酸を第１の態様の二機能性融合タンパク質に安定に発現できる限り、当技術分野における従来の宿主細胞である。好ましくは、宿主細胞は、原核細胞および／または真核細胞であり、原核細胞は、好ましくは、ＴＧ１、ＢＬ２１等の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞であり、また真核細胞は、好ましくはは、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞または派生された細胞株である。本発明の宿主細胞は、第３の態様の発現ベクターをトランスフェクションすることによって取得されることができる。トランスフェクション法は、当技術分野における従来のトランスフェクション法であり、好ましくは、化学的トランスフェクション法、ヒートショック法またはエレクトロポレーション法である。

【0071】

第５の態様において、本発明は、第１の態様的二機能性融合タンパク質を調製する方法を提供する。

【0072】

いくつかの実施形態において、当該方法は、第４の態様の宿主細胞を培養する段階を含む。

【0073】

第６の態様において、本発明は、第１の態様の二機能性融合タンパク質および薬学的に許容されるベクターを含む、医薬組成物を提供する。

【0074】

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、他の小分子薬物または抗体またはポリペプチド等の他の成分を有効成分として含む。

【0075】

医薬組成物は、非経口、注射または経口によって投与される。医薬組成物は、例えば水溶液、非水溶液または懸濁液、粉末、錠剤、カプセル、顆粒、注射剤または注入剤等の固体、半固体または液体形態等の投与に適した形態である。医薬組成物は、血管内、皮下、腹腔内、筋肉内、吸入、鼻腔内、気道点滴注入または胸腔内点滴注入によって投与される。医薬組成物は、経鼻投与、くも膜下腔内投与、髄内投与または脳室内投与等のエアロゾル剤またはスプレー剤の形態で投与されるか、経皮投与、局所投与、経腸投与、膣内投与、舌下投与または直腸内投与によって投与される。

【0076】

いくつかの実施形態において、二機能性融合タンパク質および一種または複数種の他の有効成分を同時にまたは順次に投与する。

【0077】

第７の態様において、本発明は、被験者における線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患の予防、治療および／または診断における、第１の態様的二機能性融合タンパク質、第２の態様的単離された核酸および第６の態様的医薬組成物の用途を提供する。線維性疾患は、腎線維症、肝線維症および肺線維症、特にＩＰＦをふくむが、これらに限定されない。

【0078】

第９の態様において、本発明は、被験者における線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための方法を提供し、当該方法は、被験者に治療有効量の第１の態様の二機能性融合タンパク質を投与することを含む。線維性疾患は、腎線維症、肝線維症および肺線維症、特にＩＰＦを含むが、これらに限定されない。

【発明の効果】

【0079】

本発明の二機能性融合タンパク質は、次のような技術的効果を有する。

【0080】

１．ＴＧＦβおよびＡＲＥＧのアンタゴニストとして、

【0081】

２．単一の二機能タンパク質として、ＴＧＦβおよびＡＲＥＧを阻害する能力を有し、線維症発症の二つの駆動因子を効果的にブロッキングし、相乗効果を引き起こして、組織線維症、特に肺線維症を治療し、

【0082】

３．単一の二機能タンパク質として、ＴＧＦβおよびＡＲＥＧのシグナル伝達を同時にブロッキングし、

【0083】

４．単一の二機能タンパク質として、ＴＧＦβおよびＡＲＥＧ二特異的に結合し、

【0084】

５．ＡＲＥＧ誘導性ｐＥＧＦＲを阻害する能力を有し、

【0085】

６．ＴＧＦβリガンドに結合する能力を有し、それによってＴＧＦβシグナル伝達経路の下流の活性化を阻害し、

【0086】

７．Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される一つまたは二つの突然変異を有するＴＲＩＩ細胞外ドメイン変異体を二機能性融合タンパク質は、二機能性融合タンパク質のスプライシングの減少を示し、

【0087】

８．Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される突然変異を有するＴＲＩＩ細胞外ドメイン変異体を含む二機能性融合タンパク質は、スプライシングの減少を示し、

【0088】

９．突然変異Ｋ７Ｑを有するＴＲＩＩ細胞外ドメイン変異体を含む二機能性融合タンパク質は、スプライシングの顕著な減少を示し、

【0089】

１０．ＴＲＩＩ細胞外ドメイン変異体を含む二機能性融合タンパク質は、ここで、Ｎ末端欠失を有する変異体であり、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までのアミノ酸番号に基づいて、４個のアミノ酸、７個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１７個のアミノ酸または２１個のアミノ酸Ｎ末端の欠失を有する、より良好な安定性およびより少ないスプライシングを示す。

【0090】

定義：

【0091】

トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）は、生理学的および病理学的条件下で重要な役割を果たす多面発現性サイトカインである。ＴＧＦβ異性体、即ちβ１、β２およびβ３は、約２５ｋＤａのホモ二量体ポリペプチドである。これらのリガンドは、細胞表面受容体（トランスフォーミング成長因子β受容体Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（ＴＲＩ、ＴＲＩＩ、ＴＲＩＩＩ）を含む）、ならびにＳＭＡＤ２および３等の細胞内ＳＭＡＤエフェクタータンパク質を介してシグナルを伝達する。シグナルの伝達は、細胞の生存、増殖、分化、細胞の運動および細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の産生等、一連の細胞プロセスに影響を与える。

【0092】

アンフィレグリン、ＡＲＥＧは、上皮成長因子（ＥＧＦ）ファミリーの低親和性リガンドである。ＡＲＥＧタンパク質は、２５２個のアミノ酸の膜貫通前駆体から合成され、それは、細胞膜プロテアーゼ、主にＴＡＣＥ（腫瘍壊死因子－α－インベルターゼ）によってその細胞外ドメイン内でタンパク質を加水分解的に切断される。次に、成熟した可溶性ＡＲＥＧは、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に直接結合することで下流のシグナル伝達を活性化する。これにより、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を含む主な細胞内シグナルカスケードを引き起こして、細胞の生存、増殖および運動を制御する。

【0093】

本明細書で使用されるように、「ａ」および「ａｎ」という冠詞は、本明細書の一つまたは複数の文法的オブジェクト（例えば、少なくとも一つ）を指す。

【0094】

文脈上明確に別段の指示をしない限り、「または」という用語は、本明細書では「および／または」という用語を意味するために使用され、「およびまたは」と交換可能に使用されることができる。

【0095】

「約」および「およそ」とは、一般に、測定された性質または精度を考慮した測定量の許容可能な誤差レベルを指す。例示的な誤差レベルは、所与の値または数値範囲の２０％以内、典型的には１０％いない、より典型的には、５％いないである。

【0096】

本明細書に開示される製品および方法は、特定の配列またはそれと同一もしくは類似の配列を有するポリペプチドおよびポリヌクレオチドを含み、例えば、特定の配列と少なくとも約８５％または９５％の配列同一性（同一）を有する配列を有する。アミノ酸配列の文脈において、「８５％または９５％の配列同一性（同一）」という用語は、十分な数または最小限の数を含むアミノ酸残基が、ｉ）第２のアミノ酸配列中の整列アミノ酸残基と同一であるか、またはｉｉ）第１および第２のアミノ酸配列が共通のドメインおよび／または共通の機能活性を有することができるように、第２のアミノ酸配列における整列したアミノ酸残基の保存的置換である、本明細書では第１のアミノ酸配列を指すために使用される。例えば、参照配列（例えば、本明細書で提供される配列）と少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する共通のドメインを含むアミノ酸配列である。

【0097】

核酸の文脈において、「８５％または９５％の配列同一性（相同性）」という用語は、第１および第２のヌクレオチド配列が共通の機能活性を有するポリペプチドをコードするか、もしくは共通の構造ポリペプチドドメインまたは共通の機能ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列における整列したヌクレオチドと同一である十分な数または再上限の数のヌクレオチドを含む、本明細書では第１の核酸配列を指すために使用される。例えば、参照配列（例えば、本明細書で提供される配列）と少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列である。

【0098】

二つのアミノ酸配列または二つの核酸配列の同一性パーセントを決定するには、配列を最適な比較目的で整列させる（例えば、最適なアラインメントのために、第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップを導入し、また比較目的で非相同配列を無視することができる）。好ましい実施形態において、比較目的でアラインメントされた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、例えば少なくとも４０％、５０％、６０％、例えば少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列の一つの位置が第２の配列に対応する位置での同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子は、当該位置で同一である。

【0099】

「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。

【0100】

「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」または「ポリヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」という用語は、交換可能に使用される。

【0101】

本明細書で使用されるように、「抗体」という用語は、免疫グロブリン鎖またはその断片等の、少なくとも一つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を指す。「抗体」という用語は、例えば、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）を含むことを指す。一実施形態において、抗体は、全長抗体または全長免疫グロブリン鎖を含む。一実施形態において、抗体は、全長抗体の抗原結合または機能断片、または全長免疫グロブリン鎖を含む。本明細書で使用されるように、抗体が抗原に「結合」するということは、当業者には理解される。一実施形態において、抗体が抗原に結合する解離定数（ＫＤ）は、約１×１０^－５Ｍまたはそれ以下、１×１０^－６Ｍまたはそれ以下、または１×１０^－７Ｍまたはそれ以下である。

【0102】

例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＨと略記される）および軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＬと略記される）を含むことができる。一実施形態において、抗体は、重鎖および軽鎖、または重鎖および軽鎖からなる。別の例において、抗体は、二つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列および二つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列を含み、それによってＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体、ダイアボディー（Ｄａｂ）（二価および二重特異性）およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体等の二つの抗原結合部位を形成し、これらは、抗体全体を修飾することによって、または組換えＤＮＡ技術を使用した抗体のデノボ合成によって生成されることができる。これらの機能的な抗体断片は、それぞれの抗原または受容体に選択的に結合する能力を保持している。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含むがこれらに限定されない任意のクラスの抗体、ならびに任意のサブクラスの抗体（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）に由来することができる。抗体の製剤は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体またはインビトロ産生抗体であってもよい。抗体は、例えばＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有することができる。抗体は、例えばκまたはλから選択される軽鎖を有することができる。本明細書において、「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、「抗体」という用語と交換可能に使用される。

【0103】

本明細書で使用される「抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ等の抗体の一部である。抗体断片は、完全な抗体によって識別される同じ抗原に結合する。「抗体断片」という用語は、アプタマー、シュピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ）およびダイアボディーを含む。「抗体断片」という用語は、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する合成タンパク質または遺伝子操作されたタンパク質をさらに含む。

【0104】

抗体の抗原結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ部分から構成される一価断片のＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって接続された二つのＦａｂ断片を含む二価断片のＦ（ａｂ’）_２断片、（ｉｉｉ）ＶＨ部分およびＣＨ部分からなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶＬ部分およびＶＨ部分からなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨ部分からなるダイアボディー（ｄＡｂ）断片、（ｖｉ）ラクダ型またはラクダ化された可変部分、（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、（ｖｉｉｉ）単一部分抗体を含む。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技術を含む、任意の適切な方法を使用して得ることができ、またこれらの断片は、完全な抗体と同じ方法でその用途をスクリーニングすることができる。「抗体断片」という用語は、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する任意の合成タンパク質または遺伝子操作されたタンパク質をさらに含む。

【0105】

「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」とは、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。

【0106】

いくつかの態様において、前記領域は、２～約３０個のアミノ酸、好ましくは６～２６個のアミノ酸の短いリンカーにてペプチドを介して連結される。リンカーは、柔軟性を取得するためにグリシンを豊富に含むことができ、セリン、スレオニン、グルタミン酸、アラニンまたはリジンを含み、またリンカーは、抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片のＶＨのＮ末端をＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に連結することができ、あるいはその逆も同様である。

【0107】

軽鎖および重鎖は、「定常」領域および「可変」領域に分けられる。軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）および重鎖可変ドメイン（ＶＨ）は、抗原の識別および特異性を部分的に決定する。逆に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）は、分泌、胎盤経移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合等の重要な生物学的特性を与える。Ｎ末端部分は、可変領域ドメインであり、またＣ末端部分は、定常領域であり、ＣＨ３部分およびＣＬ部分は、実際にそれぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ基末端を含む。

【0108】

可変領域により、抗体は、抗原上のエピトープを選択的に識別および特異的に結合することができる。抗体のＶＬ部分およびＶＨ部分、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットは、結合して、三次元の抗原結合部位を限定する可変領域を形成する。このような四次抗体構造は、Ｙの各アームの末端で抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖（即ちＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のそれぞれの三つのＣＤＲによって限定される。

【0109】

本明細書で使用される「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変領域内の、抗原特異性および結合親和性を与えたアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態において、各重鎖可変領域には、三つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）が存在し、各軽鎖可変領域には、三つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）が存在する。

【0110】

所定のＣＤＲアミノ酸配列の正確な境界は、Ｋａｂａｔら（１９９１）、「ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（免疫学的タンパク質配列）」、第５版、ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ（国立衛生研究所公衆衛生局）、ベセスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）、ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）によって記載されている周知のプロトコールを使用して決定される。

【0111】

各ＶＨおよびＶＬは、通常、アミノ基末端からカルボキシ基末端までＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置される、三つのＣＤＲおよび四つのＦＲを含む。

【0112】

「被験者」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後または治療を必要とする任意の被験者、特に哺乳動物被験者を指す。哺乳動物は、ヒト、家畜、農場動物、動物園動物、スポーツ動物またはペット動物、例えば、イヌ、猫、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、乳牛等を含む。

【0113】

本明細書で使用されるように、「治療を必要とする患者」または「治療を必要とする被験者」という語句は、本開示の抗体または組成物の投与から恩恵を受ける被験者、例えば、哺乳動物被験者を含み、前記抗体または組成物は、例えば検出、診断手順および／または治療に使用される。

【0114】

本明細書で使用されるように、「エピトープ」という用語は、抗体と特異的に相互作用する抗原（例えば、ヒトＡＲＥＧ）の部分を指す。このような部分は、本明細書ではエピトープ決定基とも呼ばれ、通常、アミノ酸側鎖または糖側鎖等の用を含むか、またはその一部である。エピトープ決定基は、当技術分野で知られている方法、または本明細書に開示されている方法、例えば結晶学または水素－重水素交換によって定義されることができる。エピトープ決定基と特異的に相互作用する抗体上の少なくとも一つまたはいくつかの部分は、通常、ＣＤＲに位置する。通常、エピトープは、特定の三次元構造特徴を有する。通常、エピトープは、特定の電荷特性を有する。いくつかのエピトープは、線状エピトープであるが、別のいくつかのエピトープは、コンフォメーション・エピトープである。

【0115】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一の分子成分を有する抗体の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、ライブラリー選択、スクリーニングまたは組換え方法）によって調製されることができる。

【0116】

抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。他の実施形態において、抗体は、酵母ディスプレイ、ファージディスプレイまたはコンビナトリアル法によって、組換え的に産生されることができる。

【0117】

一実施形態において、抗体は、完全なヒト抗体（例えば、酵母ディスプレイによって産生される抗体、ファージディスプレイによって産生される抗体、またはヒト免疫グロブリン配列に対する抗体を産生するように遺伝子操作されたマウスで調製された抗体）、または例えばネズミ（マウスまたはラット）、ヤギ、霊長類動物（例えば、サル）またはラクダ抗体等の非ヒト抗体である。げっ歯類動物抗体を産生する方法は、当技術分野で知られている。

【0118】

ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウス（マウスシステムの代わりに）を使用して、ヒトモノクローナル抗体を産生することができる。目的の抗原またはその断片で免疫されたこれらのトランスジェニックマウスから得られた脾細胞は、エピトープに対して特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生成するために使用される。

【0119】

抗体は、可変領域またはその一部（例えば、ＣＤＲ）が非ヒト生物（例えば、ラットまたはマウス）において産生された抗体であり得る。キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体およびヒト化抗体は、本発明の範囲内である。ラットまたはマウス等の非ヒト生物で産生され、次いで例えば可変フレームワークまたは定常領域内で修飾されて、ヒトにおける抗原性を低下させる抗体は、すべて本発明の範囲内である。

【0120】

本発明の範囲には、特定のアミノ酸が置換、欠失または付加されたヒト化抗体をさらに含まれる。ドナーからアミノ酸を選択するための標準は、ＵＳ５５８５０８９号、例えばＵＳ５５８５０８９号、第１２～１６欄、例えばＵＳ５５８５０８９号の第１２～１６欄に記載され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。Ｐａｄｌａｎらは、１９９２年１２月２３日に開示されたＥＰ５１９５９６Ａ１に抗体ヒト化のための他の技術を記載した。

【0121】

他の実施形態において、抗体は、重鎖定常領域を有し、その重鎖定常領域は、例えばＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択され、特に、その重鎖定常領域は、例えばＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４（例えば、ヒト）から選択される。

【0122】

本発明の分子は、それらの機能に実質的な影響を及ぼさない追加の保存的または非必須アミノ酸置換を有することができることを理解されたい。

【0123】

表１に示されるように、「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置換する置換を指す。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野に置いて定義される。これらのファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン），非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐鎖側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリンおよびイソロイシン）、ならびに芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。

【0124】

【表1】

【図面の簡単な説明】

【0125】

【図1】例示的な抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質の構造を示す。

【0126】

【図2】異なるリンカーを有する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体におけるスプライシング物質の特徴付けを示す。

【0127】

【図3】抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩにおける切断ホットスポット（太字－斜体アルファベット）を示す。

【0128】

【図4】抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩにおけるＫ７突然変異（０１４）がスプライシングを減少させることを示す。

【0129】

【図5】抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体におけるＴＲＩＩのＮ末端欠失が重鎖スプライシングを減少させることを示す。

【0130】

【図6】抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩにおけるＴＲＩＩのＮ末端欠失（０１３、０１７、０２８、０２９、０３０）が重鎖スプライシングを減少させることを示す。

【0131】

【図7】抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１３、０２９および０３０の純度を示す。

【0132】

【図8】ｐＥＧＦＲに対する変異体０１０の阻害効果を示す。

【0133】

【図9】ＳＲＥレポーター遺伝子に対する変異体０１０、０１３および０３０の阻害を示す。

【0134】

【図10】変異体０１０、０１３および０３０がｐＳＭＡＤ２の核局在化をブロッキングすることを示す。

【0135】

【図11】変異体０１３がイムノブロットアッセイにおいてｐＳＭＡＤ２を阻害することを示す。

【0136】

【図12】ＳＢＥルシフェラーゼレポーター遺伝子測定におけるＴＧＦβシグナル伝達に対する変異体０１０、０１３および０３０の阻害効果を示す。

【0137】

【図13】二機能抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質がＡＲＥＧおよびＴＧＦβを同時に標的とすることを示す。

【0138】

【図14】変異体０１０、０１３および０３０の薬物動態特徴を示す。

【0139】

【図15】Ｃｄｃ４２ＡＴ２ヌル線維症モデルにおける抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質の有効性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0140】

特定の実施形態および例の説明は、限定ではなく例示として提供される。当業者であれば、実質的に同様の結果を生み出すために変更または修正されることができる様々な非重要なパラメーターを容易に認識するであろう。

【0141】

以下の表２は、異なる抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の構造を概略的に示す。

【0142】

【表2】

【実施例】

【0143】

実施例１．抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質の産生

【0144】

抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩは、抗ＡＲＥＧ抗体－トランスフォーミング成長因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＲＩＩ）細胞外ドメインの二機能タンパク質である。分子の軽鎖可変領域は、抗ＡＲＥＧ抗体の軽鎖可変領域（ＳＥＱＩＤＮｏ．：７０～８９）と同一である。分子の重鎖は、柔軟性リンカー（ＳＥＱＩＤＮｏ．：１０８、１０９、１１３および１１６～１１７）を介して可溶性ＴＲＩＩ（ＳＥＱＩＤＮｏ．：９０～１０７）のＮ末端に融合された抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ．：５７～６９）を含む融合タンパク質である。融合接合部では、抗体重鎖のＣ末端リジン残基は、タンパク質加水分解による切断を減少させるために、アラニンに突然変異する。

【0145】

以下の例示的な手順を使用して、プラスミドを構築する。

【0146】

ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（ＴＯＹＯＢＯ、ＫＯＤ－２０１）によって断片が増幅される。電気泳動後、１．５％アガロースゲルでＰＣＲ産物を分離し、ＤＮＡ精製キット（Ｍａｇｅｎ、Ｄ２１１１－０３）を使用して回収する。制限酵素を使用して断片およびベクターをそれぞれ消化し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ、Ｍ０２０２Ｌ）を使用して連結される。連結された構築物を、陽性クローン選択のために大腸菌Ｔｏｐ１０株（ＣＷＢＩＯ、ＣＷ０８０７）形質転換する。クローン化されたプラスミドは、真核生物の発現系でのタンパク質発現に使用される。

【0147】

以下の例示的な手順を使用して、タンパク質を生成する。

【0148】

１：１の比率で、重鎖および軽鎖を有する２種類の発現ベクターをＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｒ７９００７）にトランスフェクションする。トランスフェクションの前日に、２９３－Ｆ細胞を継代培養および増幅し、一晩増殖させる。トランスフェクション当日、遠心分離によって細胞を収集し、次いで将新鮮なＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現培地（Ｇｉｂｃｏ、１２３３６－０１８）に最終密度１．２×１０^６細胞／ｍＬになるまで再懸濁する。最終濃度１ｕｇ／ｍＬのプラスミドを、示されたモル比でポリエチレンイミン（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、２３９６６）で一時的に同時トランスフェクションする。トランスフェクションの５～６日後、細胞培養上清液を採取する。

【0149】

実施例２．異なるリンカーを有する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質の特徴付け

【0150】

例示的な抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質（ａｎｔｉ－ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ）００１、００５、００８および００９は、軽鎖（ＳＥＱＩＤＮｏ：７０～８９）、および異なるリンカー（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１２１）を介してＴＲＩＩに融合される重鎖を含む。二機能性融合タンパク質の構造は、図１に示されたとおりである。

【0151】

以下の例示的な手順を使用して、融合タンパク質のスプライシングを評価する。トランスフェクション後の融合タンパク質を収集し、次いでワンステッププロテインＡクロマトグラフィーによって精製される。すべてのサンプルを０．５ｍｇ／ｍＬの濃度に調節し、次いで安定性試験のために３７℃でインキュベートされる。サンプルは、還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって分析される。

【0152】

図２は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ後、すべてのサンプルで約２５ｋＤａおよび７０ｋＤａの二つのバンドが検出されたことを示す。この二つのバンドは、二機能タンパク質の軽鎖および重鎖を表わす。３７℃で２日間インキュベートした後、約５０～６０ｋＤａの追加のバンドがさらに検出され、これは、追加のインキュベーション後の変異体に様々なスプライシング物質が存在することを示す。

【0153】

実施例３．抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質の切断部位の測定

【0154】

異なるリンカーを有する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩは、様々な程度のスプライシングを示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上では異なる分子量の分として表される。従って、スプライシングの部位を決定するために、さらなる研究を実行する。

【0155】

０．５ｍｇ／ｍＬの００１または００９を３７℃でインキュベートする。２日間インキュベーション後、サンプルをゲルにロードする。スプライシングされた断片を分離して回収する。断片を質量分析（ＭＳ）によって分析する（ＬＴＱＯｒｂｉｔｒａｐ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。分析結果は、図３に示されるように、Ｌｙｓ７／Ｓｅｒ８、Ａｒｇ３４／Ｐｈｅ３５、Ａｒｇ６６／Ｌｙｓ６７およびＬｙｓ１０３／Ｌｙｓ１０４が、ＴＧＦβトラップスプライシングのホットスポットであることを示す。

【0156】

ｈｔｔｐｓ：／／ｗｅｂ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ＿ｃｕｔｔｅｒ／で潜在的な切断部位を予測する。これらの分析の結果は、Ｌｙｓ７／Ｓｅｒ８、Ａｒｇ３４／Ｐｈｅ３５、Ａｒｇ６６／Ｌｙｓ６７およびＬｙｓ１０３／Ｌｙｓ１０４も潜在的な切断部位であることを示す。

【0157】

実施例４．スプライシングを減少させる抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の研究

【0158】

スプライシングを顕著に減少するＴＲＩＩ含有分子を開発するために、ＴＲＩＩ突変異体（ＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７）を有する様々なトラップを設計した。

【0159】

例示的な抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩは、軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：８３）、およびＴＲＩＩ変異体に融合する重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２２～１３９）を含む。０１０は、野生型ＴＲＩＩ細胞外ドメインを有する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体である。０１４、０１５、０１６、０１７および０１８は、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体であり、ここで、ＴＲＩＩは、上記部位で一つまたは二つの突然変異を有する。精製されたサンプルを３７℃で３日間インキュベートする。実施例３に記載の方法によって、スプライシングされた物質を評価する。

【0160】

図４は、Ｋ７突然変異（０１４）が重鎖スプライシングの顕著に減少を示すことを示す。０１０と比較して、Ｒ３４（０１６）、Ｒ６６／Ｋ６７（０１７）およびＫ１０３／Ｋ１０４（０１８）突然変異も、スプライシングの減少を引き起こす。

【0161】

Ｋ７がスプライシングを媒介する最も重要な残基であることを考慮して、ＴＲＩＩのＮ末端の七つの残基を欠失した新しい変異体０２６を設計する。Ｋ７突然変異とＲ３４、Ｒ６６／Ｋ６７およびＫ１０３／Ｋ１０４突然変異との組み合わせも設計し（０１９、０２０、０２１、０２２、０２４、０２５および０２６）、スプライシング評価実施する。図５に示されるように、すべての変異体において、０２６は、３７℃で６日間インキュベーション後に最も少ないスプライシングを示す。

【0162】

点突然変異または点突然変異の組み合わせと比較して、欠失変異体０２６は、より良好な安定性を示す。従って、四つの残基欠失（０２７）、九つの残基欠失（０２８）、１３個の残基欠失（０２９）、１７個の残基欠失（０３０）および２１個の残基欠失（０１３）を含む、追加の欠失変異体を設計する。図６に示されるように、３７℃で５日間インキュベーション後、０２９、０３０および０１３は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて０１０より少ないスプライシング物を示す。

【0163】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の純度を評価する。図７は、０１３、０２９および０３０の例示的なマップを示す。精製後の純度は、９８％を超える。高分子量（ＨＭＷ）および低分子量（ＬＭＷ）のレベルは、２％未満である。

【0164】

実施例５．ＳＰＲによる抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体のＡＲＥＧおよびＴＧＦβへの結合の検出

【0165】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、ＡＲＥＧおよびＴＧＦβｓに対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の結合動態を特徴付ける。

【0166】

以下の例示的な手順を使用して、平衡解離定数を測定する。

【0167】

ＢｉａｃｏｒｅＴ２００機器（ＧＥＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＰＲ測定を実施する。サンプルをプロテインＡ／ＧＣＭ５バイオセンサーチップの表面に捕捉する。ヒトＴＧＦβ３（Ｒ＆Ｄ、２４３－Ｂ３－０１０）の様々な変異体への結合を検出する。段階希釈したＴＧＦβタンパク質を抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体に結合する表面に注射し、その後解離段階に入る。１対１のラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデル（ＢＩＡ評価ソフトウェア、ＧＥＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、結合速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）を計算する。ＫＤは、ｋｄとｋａとの比として計算される。

【0168】

表３に示されるように、０１０、０１３および０３０は、同様の動態でＴＧＦβ１／２／３およびＡＲＥＧに結合する。

【0169】

【表3】

【0170】

実施例６．リン酸化されたＥＧＦＲを検出することによる、ＥＧＦＲに対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の阻害効果の測定

【0171】

ＡＲＥＧは、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に結合し、且つ受容体の活性化を引き起こし、これは、リン酸化されたＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）によって測定されることができる。例示的な抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１０、およびＡＲＥＧによって誘導されたｐＥＧＦＲを阻害する能力を検出する。

【0172】

以下の例示的な手順を使用する。Ａ４３１細胞を２×１０^５細胞／ウェルで６ウェルプレートに接種し、３７°Ｃで一晩培養する。翌日、無血清培地を使用して細胞を２時間飢餓処理し、次いで１０ｎＭの組換えヒトＡＲＥＧ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、９６－１００－５５Ｂ－５０）および様々な濃度の抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体で１時間処理する。処理した的細胞を溶解し、サンプルをウェスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロッティングする。抗ｐＥＧＦＲ（Ａｂｃａｍ、ａｂ４０８１５）、抗ＥＧＦＲ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２２３２）および抗ＧＡＰＤＨ（ＮａｋａｓｕｇｉＪｉｎｑｉａｏ、ＴＡ－０８）を含む一次抗体を使用して、当該測定に使用する。

【0173】

図８は、変異体０１０がＡＲＥＧ誘導性ｐＥＧＦＲを５．５６ｎＭのＩＣ５０で阻害することを示す。当該データは、変異体０１０がＡＲＥＧ誘導性ＥＧＦＲ活性化を効果的にブロッキングできることを示す。

【0174】

実施例７．ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を介したルシフェラーゼレポーター遺伝子による抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の特徴付け

【0175】

血清応答レジメンと（ＳＲＥ）ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、ＡＲＥＧ－ＥＧＦＲ下流シグナル伝達に対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の阻害効果を検出する。当該レポーター遺伝子は、通常、ＥＧＦＲ－ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を評価するために使用される。

【0176】

以下の例示的な手順を使用する。ＳＲＥルシフェラーゼレポーター遺伝子を構築し、Ｌｉｐｏ３０００トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌ３０００－０１５）を使用して、９６ウェルプレートのＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクションする。各ウェルに内部対照としてＴＫ－Ｒｅｎｉｌｌａプラスミドを共のトランスフェクションする。トランスフェクションの６時間後、細胞を血清飢餓処理し、次いで組換えヒトＡＲＥＧ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、９６－１００－５５Ｂ－５０）および抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体で６時間処理する。Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼ測定システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｅ２９４０）を使用して、処理されたルシフェラーゼシグナルを検出する。

【0177】

図９は、０１０、０１３および０３０を含む抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体が、ＡＲＥＧ誘導性ＳＲＥレポーター遺伝子の発現を約２５ｎＭのＩＣ９９で阻害することを示す。当該データは、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体がＡＲＥＧ誘導性ＥＧＦＲ－ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を効果的に阻害できることを示す。

【0178】

実施例８．ｐＳＭＡＤ２核局在化によるＴＧＦβシグナル伝達に対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の阻害効果の評価

【0179】

抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質におけるトランスフォーミング成長因子β受容体ＩＩの細胞外ドメインは、ＴＧＦβリガンドにキレートするように設計され、それによってＴＧＦβシグナル伝達経路の下流活性化を阻害する。リン酸化されたＳＭＡＤ２（ｐＳＭＡＤ２）の核局在化は、当該経路の活性化を評価するために頻繁に使用される。ｐＳＭＡＤ２免疫蛍光染色を使用して、ｐＳＭＡＤ２核局在化、即ち、ＴＧＦβシグナル活性化に対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の影響を検出する。

【0180】

以下の例示的な手順を使用して、ｐＳＭＡＤ２の核局在化を検出する。Ａ５４９細胞をウェルあたり５０００細胞の密度で９６ウェルマイクロウェルプレートに接種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用して３７℃で一晩培養する。翌日、まず細胞を血清飢餓処理し、次いでそれぞれ０．０７８ｎＭのＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ、２４０－Ｂ－１０１）、ならびに０．３９ｎＭおよび１．９５ｎＭの抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体で６時間処理する。細胞をＰＢＳですすぎ、固定し、抗ｐＳＭＡＤ２抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１８３３８）を使用して４°Ｃで一晩染色する。翌日、二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、７１１－０６４－１５２）を適用後にＥｌｉｔｅＡＢＣキット（ＶＥＣＴＯＲ、ＰＫ－６１００）を使用してサンプルを３０分間処理し、次いでチラミドフルオレセインで染色する（Ｐｅｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、ＦＰ１０１３）。パーキンエルマー（Ｐｅｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）のＯｐｅｒａＬＸの２０倍空気レンズを使用して蛍光画像を取得する。

【0181】

図１０に示されるように、１．９５ｎＭの抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１０、０１３および０３０は、１ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ１によって誘導されるｐＳＭＡＤ２核局在化を効果的にブロッキングし、これは、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１０、０１３および０３０がＴＧＦβ２に結合およびキレートし、下流のＴＧＦβシグナル伝達を阻害することを示す。

【0182】

実施例９．ｐＳＭＡＤ２免疫ブロッティング法による、ＴＧＦβシグナル伝達に対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の阻害効果の測定および定量化

【0183】

Ｗｅｓｔｅｒｎブロッティング（ＷＢ）によって示されたｐＳＭＡＤ２タンパク質の発現レベルも、ＴＧＦβ１に対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の阻害効果を定量的に測定するために使用される。

【0184】

以下の例示的な手順を使用する。Ａ５４９細胞を２×１０^５細胞／ウェルで６ウェルプレートに接種し、３７°Ｃで一晩培養する。翌日、無血清培地を使用して細胞を２時間飢餓処理し、組換えヒトＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ、２４０－Ｂ－１０１）および異なる濃度の抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩを使用して２時間処理する。処理した細胞を溶解し、サンプルをＷｅｓｔｅｒｎブロッティング分析する。一次抗体は、抗ｐＳＭＡＤ２（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１８３３８）、抗ＳＭＡＤ２／３（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８６８５）および抗ＧＡＰＤＨ（ＮａｋａｓｕｇｉＪｉｎｑｉａｏ、ＴＡ－０８）を含む。

【0185】

図１１は、培養物に１ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ１を添加する場合、変異体０３０が０．０３４ｎＭのＩＣ５０でｐＳＭＡＤ２を阻害することを示す。当該データは、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ的ＴＲＩＩ－ＥＣＤ部分がＴＧＦβ１等のリガンドを効果的に捕捉し、下流のシグナル伝達の活性化を阻害できることを示す。

【0186】

実施例１０．ＳＢＥレポーター遺伝子による、ＴＧＦβシグナル伝達に対する抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の阻害効果の定量化および測定

【0187】

ＳＭＡＤ結合レジメント（ＳＢＥ）ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、ＴＧＦβ下流シグナル伝達に対する例示的な抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１０、０１３および０３０の阻害効果をさらに定量化および測定する。当該レポーター遺伝子は、ＴＧＦβシグナル伝達の活性を評価するために頻繁に使用される。

【0188】

以下の例示的な手順を使用する。ＳＢＥルシフェラーゼレポーター遺伝子を構築し、Ｌｉｐｏ３０００トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌ３０００－０１５）を使用して９６ウェルプレートのＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクションする。各ウェルに内部対照としてＴＫＲｅｎｉｌｌａプラスミドを共のトランスフェクションする。トランスフェクションの６時間後、細胞を血清飢餓処理し、次いでヒトＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ，２４０－Ｂ－１０１）および抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩを使用して６時間処理する。次いでＤｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼ測定システム（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ２９４０）を使用して、処理されたルシフェラーゼシグナルを検出する。

【0189】

図１２に示されるように、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１０、０１３および０３０は、すべてＴＧＦβ１（０．０１５ｎＭ）のＳＢＥレポーター遺伝子の誘導をブロッキングし、ＩＣ５０は、それぞれ０．０４５ｎＭ、０．０８５ｎＭおよび０．０６ｎＭである。

【0190】

実施例１１．ＡＲＥＧおよびＴＧＦβを同時に標的とする抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体

【0191】

抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質とは、一つの分子を通じてＡＲＥＧおよびＴＧＦβリガンドを同時に標的とするすることを指す。これを試験するために、主に細胞膜に結合するＡＲＥＧ－ＥＧＦ様ドメインを過剰発現する、ＣＨＯ－ｈＡＲＥＧ細胞株を構築する。抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩをＣＨＯ－ｈＡＲＥＧ細胞に添加する場合、二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ部分を介して膜ＡＲＥＧ－ＥＧＦ様ドメインに結合する。膜結合二機能分子は、遊離のＴＧＦβリガンドを捕捉することによって、ＴＧＦβシグナル伝達の活性化をブロッキングすることもできる。

【0192】

以下の例示的な手順を使用する。ＣＨＯおよびＣＨＯ－ｈＡＲＥＧ細胞を収集し、ウェルあたり８０００細胞の密度で９６ウェルマイクロウェルプレートにおける１０％ＦＢＳが添加されたＤＭＥＭに接種する。ウェルプレートを３７℃のＣＯ_２インキュベーターで一晩インキュベートする。翌日、細胞を無血清ＤＭＥＭで４時間飢餓処理し、次いで１０ｎＭ変異体を含むＤＭＥＭで２時間処理する。遊離変異体を洗い流した後、０．０７８ｎＭのＴＧＦβ１を加え、ＣＯ_２インキュベーターで細胞とともに１時間インキュベートする。処理後、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、４％ＰＦＡで固定し、次いで抗ｐＳＭＡＤ２抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１８３３８）で染色する。染色後、Ｐｅｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒのハイコンテント細胞分析システムの２０倍空気レンズを使用して、蛍光画像を取得する。

【0193】

図１３は、変異体０１０、０１３および０３０がＴＧＦβ１誘導性シグナル伝達を効果的にブロッキングし、同時にＡＲＥＧに結合し、これは、二機能融合分子がＡＲＥＧおよびＴＧＦβシグナル伝達を同時にブロッキングできることが実証される。

【0194】

実施例１２．マウスにおける抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体の薬物動態

【0195】

Ｃ５７／Ｂｌ６マウスに、単一用量の抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体０１０、０１３および０３０を投与し、容量は、１５ｍｇ／ｋｇである。投与前、投与後３時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、１２０時間、１６８時間、３３６時間および５０４時間に血液サンプルを採取する。標準的なプロトコルを使用して、血清サンプルを分離し、次いで分析まで-60℃以下で保存した。

【0196】

分析プログラムは、以下のとおりである。

【0197】

１）コーティング：各ウェルに１００μＬの３μｇ／ｍＬストレプトアビジン（Ｓｉｇｍａ、Ｓ４７６２）を加え、次いでウェルプレートを密閉し、２～８°Ｃで一晩インキュベートする。

【0198】

２）ブロッキング：ウェルの内容物を廃棄し、各ウェルを３００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄し、ウェルプレートを乾燥させる。各ウェルに、１００μＬのビオチン化ＡＲＥＧ－ｈＦｃ（希釈緩衝液において、濃度は１μｇ／ｍＬである）を加える。ウェルプレートを密閉し、３０°Ｃで約１時間インキュベートする。

【0199】

３）サンプルの添加：ウェルの内容物を捨て、各ウェルを３００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄し、ウェルプレートを乾燥させる。血清サンプルおよび検量線サンプルを希釈緩衝液で希釈する。次に、１００μＬの各処理サンプルをウェルプレートの各ウェルに添加する。ウェルプレートを密閉し、３０°Ｃで約１時間インキュベートする。

【0200】

４）抗ＴＲＩＩ抗体作業溶液の添加：ウェルの内容物を廃棄する。各ウェルを３００μＬの洗浄緩衝液で６回洗浄し、ウェルプレートを乾燥させる。１００μＬの５μｇ／ｍＬ抗ＴＲＩＩ抗体作業溶液をウェルプレートの各ウェルに添加し、３０°Ｃで約１時間インキュベートする。

【0201】

５）抗体検出作業溶液の添加：ウェルの内容物を廃棄する。各ウェルを３００μＬの洗浄緩衝液で６回洗浄し、ウェルプレートを乾燥させる。１００μＬの抗体検出作業溶液をウェルプレートの各ウェルに加え、３０°Ｃで約０．５時間インキュベートする。

【0202】

６）発色：ウェルの内容物を廃棄する。各ウェルを３００μＬの洗浄緩衝液で６回洗浄し、ウェルプレートを乾燥させる。各ウェルに１００μＬの基質溶液を加える。ウェルプレートを室温の暗所で１０分間インキュベートする。

【0203】

７）プレートの読み取り：各ウェルに５０μＬの停止溶液を加え、３０分間内にプレートリーダーを使用して４５０ｎｍの波長でウェルプレートを読み取り、参照波長は、６３０ｎｍに設定される。

【0204】

８）結果出力：キャリブレーション濃度をＸ軸、対応する吸光度（ＯＤ）値（ＯＤ４５０ｎｍ～ＯＤ６３０ｎｍ、空白を控除なし）をＹ軸として、キャリブレーション標準曲線を描き、サンプル濃度を計算する。

【0205】

図１４に示されるように、１５ｍｇ／ｋｇの単一用量で０１０、０１３および０３０を腹腔内注射した後、これらの変異体は、同様のＣｍａｘ（２００～２５０μｇ／ｍｌ）、および約４～１0日の半減期を示す。

【0206】

実施例１３．抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質のインビボ有効性

【0207】

代替分子を使用して、進行性肺線維症の動物モデルで抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質のインビボ有効性を実証する。当該動物モデルにおいて、ＩＩ型肺胞細胞（ＡＴ２ｓ）におけるＣｄｃ４２（細胞分裂制御タンパク質４２のホモログであるＣＤＣ４２をコードする）の欠失は、肺切除術（ＰＮＸ）誘発性肺損傷後のマウスで肺胞再生障害および進行性肺線維症を引き起こす。当該モデル（以下でＣｄｃ４２ＡＴ２ヌルモデルと略記する）における線維症は、周縁部から中心部への進行性の瘢痕形成を特徴とし、ＩＰＦ患者に見られる疾患の進行を再現する。Ｃｄｃ４２ＡＴ２欠失マウスは、線維症の進行に悩まされ、これらの動物の体重は、顕著に減少され、生存率も顕著に低くなる。抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質は、軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４１）、およびリンカーを介してＴＲＩＩに融合する重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２）を含み、ここで、抗ＡＲＥＧは、動物モデルにおけるＡＲＥＧに特異的に結合する。

【0208】

マウス線維症モデルの詳細な生成は、以前に記載されている（ＷＯ２０２０２３７５８７Ａ１）。簡単に説明すると、Ｃｄｃ４２^{＿ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ}マウスをＳｐｃ－ＣｒｅＥＲ－ｒｔＴＡと交配する。ＡＴ２のＣｄｃ４２を特異的に削除するためにタモキシフェンを注射する。次に、これらのトランスジェニックマウスは、部分肺切除術（ＰＮＸ）を受けて左肺葉を切除し、それによって機械的張力を増加させて線維症を誘導する。ＰＮＸ後１４日目から開始し、Ｃｄｃ４２ＡＴ２ヌルマウスに、ＰＮＸ後６０日目まで、５日ごとに１５ｍｇ／ｋｇの用量で抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ代替分子を投与する。５日ごとに体重を測定する。代替分子による治療は、一貫して有効性を示し、これは、生存率の顕著な改善（Ｐ＝０．００８３、図１５Ａ）、体重減少の顕著な減少（Ｐ＜０．０００１、図１５Ｂ）、線維症スコアによって示される線維性病巣および面積の顕著な減少（Ｐ＜０．０００１、図１５Ｃ）として現わされる。従って、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩメカニズムは、線維症の進行を減少するのに十分である。

【0209】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【配列表】

2024532540000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-05-29

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２０９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0209】

議論
本発明者らは、構築された二機能抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ融合タンパク質が、１）ｐＥＧＦＲイムノブロットアッセイおよびＳＲＥレポーター遺伝子測定において、ＡＲＥＧ－ＥＧＦＲシグナル伝達を効果的にブロッキングし、ならびに２）免疫染色によって検出されるｐＳＭＡＤ２核局在化の防止、免疫ブロッティングによって検出されたＳＭＡＤ２リン酸化の現象、およびＴＧＦβ１誘導性ＳＢＥレポーター遺伝子の誘導の阻害等のＴＧＦβシグナル伝達を効果的に阻害することを実証する。さらに、本発明者らは、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ変異体がＡＲＥＧおよびＴＧＦβシグナル伝達を同時に標的とすることができることが発見された。これらの結果は、抗ＡＲＥＧ／ＴＲＩＩ二機能性融合タンパク質がＡＲＥＧおよびＴＧＦβシグナル伝達をブロッキングでき、線維症、慢性炎症および癌の治療分子として使用できることを総合的に示す。
本発明は以下の通りである。
［１］二機能性融合タンパク質であって、
少なくとも二つのドメインを含み、前記二つのドメインは、ＡＲＥＧもしくはその断片、および／またはＴＧＦβリガンドもしくはその断片に結合することができることを特徴とする、前記二機能性融合タンパク質。
［２］第１のドメインおよび第２のドメインを含み、ここで、前記第１のドメインは、ＡＲＥＧまたはその断片に結合することができ、前記第２のドメインは、ＴＧＦβリガンドまたはその断片に結合することができることを特徴とする
上記［１］に記載の二機能性融合タンパク質。
［３］前記第１のドメインは、ＡＲＥＧもしくはその断片に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、前記第２のドメインは、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＲＩＩ）の細胞外ドメインまたはその変異体の一部を含むことを特徴とする
上記［２］に記載の二機能性融合タンパク質。
［４］前記抗体またはその抗原結合断片は、ＡＲＥＧ、好ましくはヒトＡＲＥＧおよびマウスＡＲＥＧの両方に結合できる抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片であるか、あるいは、前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒトＡＲＥＧに結合することができ、マウスＡＲＥＧに対して弱い交差反応性を有するか、または交差反応性を有さないことを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［５］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒト抗ＡＲＥＧ抗体、ネズミ抗ＡＲＥＧ抗体、キメラ抗ＡＲＥＧ抗体、またはヒト化抗ＡＲＥＧ抗体であり、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ネズミｍＡｂ、キメラｍＡｂまたはヒト化ｍＡｂであることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［６］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、可溶性形態のＡＲＥＧに結合することができ、好ましくは、可溶性形態のＡＲＥＧの上皮成長因子（ＥＧＦ）様ドメインに結合することができ、より好ましくは、可溶性形態のＡＲＥＧのＥＧＦ様ドメイン内のＣ末端に結合することができることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［７］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、
（１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＧＹＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）、
（２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＳＹＮＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、
（３）ＨＣＤＲ１：ＳＨＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＶＤＴＫＦＤＰ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）、
（４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、
（５）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＲＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、
（６）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＬＲＫＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）、
（７）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、
（８）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、
（９）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、
（１０）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、
（１１）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＣＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、
（１２）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、および
（１３）（１）～（１２）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３であるが、ただし、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択され、且つ
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、
（１）ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＳＧＬＮＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、
（２）ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＫＮＮＫＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、
（３）ＬＣＤＲ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、ＬＣＤＲ２：ＳＮＮＱＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、ＬＣＤＲ３：ＥＶＷＤＤＳＬＮＧＰＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、
（４）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（５）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＥＤＧＴＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３１）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＥＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（６）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＱＤＧＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（７）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＮＱＥＧＥＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３５）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）；
（８）ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（９）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１０）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４１）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１１）ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４３）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１２）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１３）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４５）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１４）ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４７）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１５）ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４８）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＣＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４９）、
（１６）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５１）、
（１７）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５２）、
（１８）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５３）、
（１９）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５４）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、
（２０）ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、および
（２１）（１）～（２０）に示されるようなＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、ただし、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択されることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［８］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、
（１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＧＹＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）、ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＳＧＬＮＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、
（２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＳＹＮＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＫＮＮＫＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、
（３）ＨＣＤＲ１：ＳＨＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＶＤＴＫＦＤＰ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）、ＬＣＤＲ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、ＬＣＤＲ２：ＳＮＮＱＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、ＬＣＤＲ３：ＥＶＷＤＤＳＬＮＧＰＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、
（４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（５）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＲＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＥＤＧＴＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３１）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＥＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（６）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＬＲＫＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＱＤＧＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（７）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＮＱＥＧＥＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３５）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（８）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（９）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１０）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４１）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４３）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１３）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４５）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４７）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１５）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＣＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４８）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＣＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４９）、
（１６）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５１）、
（１７）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５２）、
（１８）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５３）、
（１９）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５４）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、
（２０）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、および
（２１）（１）～（２０）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、ただし、
そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択されることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［９］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ここで、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７～６９から選択されるアミノ酸配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５７～６９のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持するアミノ酸配列を有し、
ここで、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０～８９から選択されるアミノ酸配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０～８９のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持するアミノ酸配列を有することを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１０］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：５７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０、
（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：５８およびＳＥＱＩＤＮＯ：７１、
（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５９およびＳＥＱＩＤＮＯ：７２、
（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６０およびＳＥＱＩＤＮＯ：７３、
（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６１およびＳＥＱＩＤＮＯ：７４、
（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６２およびＳＥＱＩＤＮＯ：７５、
（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６３およびＳＥＱＩＤＮＯ：７６、
（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６４およびＳＥＱＩＤＮＯ：７７、
（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６５およびＳＥＱＩＤＮＯ：７８、
（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、
（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８０、
（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８１、
（１３）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、
（１４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８２、
（１５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８３、
（１６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６８およびＳＥＱＩＤＮＯ：８４、
（１７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８５、
（１８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８６、
（１９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８７、
（２０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８８、
（２１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８９、および
（２２）それぞれ（１）～（２１）のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持する二つのアミノ酸配列からなる群から選択されることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１１］前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのアイソタイプまたはその変異体、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のアイソタイプまたはその変異体であることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１２］前記第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体を含むことを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１３］前記変異体は、点突然変異および／または欠失を含むことを特徴とする
上記［１２］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１４］前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
上記［１２］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１５］前記点突然変異は、Ｋ７、Ｔ１６、Ｄ１７、Ｒ３４、Ｒ６６、Ｋ６７、Ｋ１０３およびＫ１０４から選択される位置での一つまたは複数の点突然変異を含み、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
上記［１３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１６］前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｔ１６Ｓ、Ｄ１７Ｎ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される一つまたは複数の部位突然変異を含み、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
上記［１３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１７］前記点突然変異は、Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎ、Ｋ７ＱおよびＤ１７Ｎ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７ＱおよびＲ３４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、ならびにＫ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択されることを特徴とする
上記［１３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１８］前記変異体は、４～２１個のアミノ酸のＮ末端欠失、好ましくは４個のアミノ酸、７個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１７個のアミノ酸および２１個のアミノ酸のＮ末端欠失を有し、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
上記［１３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［１９］前記変異体は、点突然変異Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎ、ならびに７個のアミノ酸のＮ末端欠失を含むことを特徴とする
上記［１３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２０］前記第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７に示されるようなアミノ酸配列のいずれか一つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７のいずれか一つと少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
上記［１２］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２１］前記第１のドメインのＣ末端は、リンカー、好ましくはリンカーペプチドを介して前記第２のドメインのＮ末端に融合され、その逆も同様であることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２２］前記抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端は、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に直接またはリンカーを介して融合されるか、あるいは前記抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端は、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に直接またはリンカーを介して連結されることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２３］前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、それは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体に直接またはリンカーを介して連結されることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２４］前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＮ末端は、直接またはリンカーを介して、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に連結されるか、あるいは、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖のＣ末端は、直接またはリンカーを介して、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に連結されることを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２５］前記リンカーは、式（Ｇ _４Ｓ） _ｎ、（Ｇ _４Ｓ） _ｎＧ、Ｓ（Ｇ _４Ｓ） _ｎＧ、ＳＧ（ＥＡＡＡＫ） _ｎＳＧ、Ｓ（ＧＥＧＥＳ）ｎＧまたは（ＥＡＡＡＫ） _ｎで表されるリンカーペプチドを含み、ここで、ｎは、１～５の整数であり、好ましくは、前記リンカーペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０８～１１７のいずれか一つに示されるアミノ酸配列を有することを特徴とする
上記［２１］～［２４］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質。
［２６］前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＣ末端は、リンカーを介して前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインのＮ末端に連結され、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９に示されるのいずれか一つのアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９のいずれか一つと少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２７］抗ＡＲＥＧ抗体の軽鎖をさらに含むことを特徴とする
上記［３］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２８］ヘテロ四量体形態であることを特徴とする
上記［２］に記載の二機能性融合タンパク質。
［２９］単離された核酸分子であって、
上記［１］－［２８］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質をコードすることを特徴とする、前記単離された核酸分子。
［３０］発現ベクターであって、
上記［２９］に記載の単離された核酸分子を含むことを特徴とする、前記発現ベクター。
［３１］宿主細胞であって、
上記［２９］に記載の単離された核酸分子または上記［３０］に記載の発現ベクターを含むことを特徴とする、前記宿主細胞。
［３２］上記［１］～［２８］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質を調製する方法であって、
上記［３１］に記載の宿主細胞を培養する段階を含むことを特徴とする、前記上記［１］～［２８］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質を調製する方法。
［３３］医薬組成物であって、上記［１］～［２８］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、前記医薬組成物。
［３４］被験者における線維性疾患、癌および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための、上記［１］～［２８］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質、上記［２９］に記載の単離された核酸分子または上記［３３］に記載の医薬組成物の用途であって、
好ましくは、前記線維性疾患は、腎線維症、肝線維症、肺線維症、特に特発性肺線維症（ＩＰＦ）を含むが、これらに限定されないことを特徴とする、前記用途。
［３５］被験者における線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための方法であって、
被験者に治療有効量の上記［１］～［２８］のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質または上記［３３］に記載の医薬組成物を投与することを含み、好ましくは、前記線維性疾患は、腎線維症、肝線維症、肺線維症を含むが、これらに限定されないことを特徴とする、前記被験者における線維性疾患、癌、および慢性炎症に関連する疾患を予防、治療および／または診断するための方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

第１のドメインおよび第２のドメインを含む二機能性融合タンパク質であって、
前記第１のドメインは、ＡＲＥＧもしくはその断片に結合することができ、好ましくはＡＲＥＧもしくはその断片に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、
前記第２のドメインは、ＴＧＦβリガンドまたはその断片に結合することができ、好ましくはＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＲＩＩ）の細胞外ドメインまたはその変異体の一部を含むことを特徴とする、前記二機能性融合タンパク質。

【請求項2】

前記抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＡＲＥＧおよびマウスＡＲＥＧの両方に結合できるか、あるいは、前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒトＡＲＥＧに結合することができ、マウスＡＲＥＧに対して弱い交差反応性を有するか、または交差反応性を有さないことを特徴とし、および／または
前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ヒト抗ＡＲＥＧ抗体、ネズミ抗ＡＲＥＧ抗体、
キメラ抗ＡＲＥＧ抗体、またはヒト化抗ＡＲＥＧ抗体であり、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ネズミｍＡｂ、キメラｍＡｂまたはヒト化ｍＡｂであることを特徴とし、および／または
前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、可溶性形態のＡＲＥＧに結合することができ、
好ましくは、可溶性形態のＡＲＥＧの上皮成長因子（ＥＧＦ）様ドメインに結合すること
ができることを特徴とし、および／または
前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのア
イソタイプまたはその変異体、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のア
イソタイプまたはその変異体であることを特徴とする
請求項１に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項3】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、
（１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＧＹＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）、
（２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＳＹＮＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、
（３）ＨＣＤＲ１：ＳＨＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＶＤＴＫＦＤＰ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）、
（４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、
（５）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＲＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、
（６）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＬＲＫＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）、
（７）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、
（８）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、
（９）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、
（１０）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、
（１１）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＣＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、
（１２）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、および
（１３）（１）～（１２）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３であるが、ただし、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択され、且つ
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、
（１）ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＳＧＬＮＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、
（２）ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＫＮＮＫＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、
（３）ＬＣＤＲ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、ＬＣＤＲ２：ＳＮＮＱＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、ＬＣＤＲ３：ＥＶＷＤＤＳＬＮＧＰＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、
（４）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（５）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＥＤＧＴＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３１）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＥＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（６）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＱＤＧＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（７）ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＮＱＥＧＥＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３５）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）；
（８）ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（９）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１０）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４１）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１１）ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４３）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１２）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１３）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４５）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１４）ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４７）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１５）ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４８）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＣＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４９）、
（１６）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５１）、
（１７）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５２）、
（１８）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５３）、
（１９）ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５４）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、
（２０）ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、および
（２１）（１）～（２０）に示されるようなＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、ただし、そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択されることを特徴とし、
好ましくは、前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、
（１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＧＹＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）、ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＳＧＬＮＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）、
（２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＰＴＳＲＹＳＹＳＹＮＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）、ＬＣＤＲ１：ＴＧＮＳＮＮＶＧＤＱＧＡＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）、ＬＣＤＲ２：ＲＮＮＮＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）、ＬＣＤＲ３：ＳＴＷＤＫＮＮＫＳＶＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）、
（３）ＨＣＤＲ１：ＳＨＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）、ＨＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）、ＨＣＤＲ３：ＶＤＴＫＦＤＰ（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）、ＬＣＤＲ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）、ＬＣＤＲ２：ＳＮＮＱＲＰＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）、ＬＣＤＲ３：ＥＶＷＤＤＳＬＮＧＰＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）、
（４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（５）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＲＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＡＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＥＤＧＴＹＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３１）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＥＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（６）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＬＲＫＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＤＧＱＤＧＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（７）ＨＣＤＲ１：ＳＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）、ＨＣＤＲ３：ＱＧＰＩＹＹＧＮＹＹＹＧＭＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）、ＬＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＮＱＥＧＥＴＹＬＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３５）、ＬＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＤ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３４）、ＬＣＤＲ３：ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）、
（８）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（９）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１０）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４１）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１１）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＤＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＤＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４３）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１２）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＨＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３９）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＤＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８）、
（１３）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４５）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１４）ＨＣＤＲ１：ＳＹＡＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＧＳＨＴＹＹＰＥＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）、ＨＣＤＲ３：ＨＧＹＬＬＹＥＧＹＹＥＷＹＦＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＶＤＹＥＧＨＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４７）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＴＥＮＰＰＹＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４６）、
（１５）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＣＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４８）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３７）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＣＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４９）、
（１６）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＭ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５１）、
（１７）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５２）、
（１８）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＹＤＧＤＳＦＩＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５０）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＫＤＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４０）、ＬＣＤＲ３：ＨＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５３）、
（１９）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５４）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＬＱＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、
（２０）ＨＣＤＲ１：ＧＹＰＭＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）、ＨＣＤＲ２：ＴＩＳＴＧＡＲＨＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）、ＨＣＤＲ３：ＨＥＧＬＲＲＧＫＹＨＳＩＭＤＹ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）、ＬＣＤＲ１：ＫＳＳＱＳＩＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５６）、ＬＣＤＲ２：ＡＡＳＮＲＥＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４４）、ＬＣＤＲ３：ＱＱＳＮＥＤＰＹＶ（ＳＥＱＩＤＮＯ：５５）、および
（２１）（１）～（２０）に示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３であるが、ただし、
そのうちの少なくとも一つは、一つ、二つ、三つ、四つまたは五つのアミノ酸の付加、欠失、保存的アミノ酸置換またはその組み合わせを含むものからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項4】

前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ここで、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７～６９から選択されるアミノ酸配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５７～６９のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持するアミノ酸配列を有し、
ここで、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０～８９から選択されるアミノ酸配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０～８９のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持するアミノ酸配列を有することを特徴とし、
好ましくは、前記抗ＡＲＥＧ抗体またはその断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、
（１）ＳＥＱＩＤＮＯ：５７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７０、
（２）ＳＥＱＩＤＮＯ：５８およびＳＥＱＩＤＮＯ：７１、
（３）ＳＥＱＩＤＮＯ：５９およびＳＥＱＩＤＮＯ：７２、
（４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６０およびＳＥＱＩＤＮＯ：７３、
（５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６１およびＳＥＱＩＤＮＯ：７４、
（６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６２およびＳＥＱＩＤＮＯ：７５、
（７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６３およびＳＥＱＩＤＮＯ：７６、
（８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６４およびＳＥＱＩＤＮＯ：７７、
（９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６５およびＳＥＱＩＤＮＯ：７８、
（１０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、
（１１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８０、
（１２）ＳＥＱＩＤＮＯ：６６およびＳＥＱＩＤＮＯ：８１、
（１３）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：７９、
（１４）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８２、
（１５）ＳＥＱＩＤＮＯ：６７およびＳＥＱＩＤＮＯ：８３、
（１６）ＳＥＱＩＤＮＯ：６８およびＳＥＱＩＤＮＯ：８４、
（１７）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８５、
（１８）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８６、
（１９）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８７、
（２０）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８８、
（２１）ＳＥＱＩＤＮＯ：６９およびＳＥＱＩＤＮＯ：８９、および
（２２）それぞれ（１）～（２１）のいずれか一つと少なくとも９５％の配列同一性を有し且つエピトープ結合活性を保持する二つのアミノ酸配列からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項5】

前記第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体を含むことを特徴とし、好ましくは、前記変異体は点突然変異および／または欠失を含み、
好ましくは、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０に示されるアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とし、
好ましくは、前記点突然変異は、Ｋ７、Ｔ１６、Ｄ１７、Ｒ３４、Ｒ６６、Ｋ６７、Ｋ１０３およびＫ１０４から選択される位置での一つまたは複数の点突然変異を含み、その位置番号付け
は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とし、
好ましくは、前記点突然変異は、Ｋ７Ｑ、Ｔ１６Ｓ、Ｄ１７Ｎ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択される一つまたは複数の部位突然変異を含み、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とし、
より好ましくは、前記点突然変異は、Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎ、Ｋ７ＱおよびＤ１７Ｎ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ３４Ｈ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７ＱおよびＲ３４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６ＳおよびＫ６７Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、Ｋ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓ、Ｋ７Ｑ、Ｒ３４Ｓ、Ｒ６６Ｓ、Ｋ６７Ｓ、ならびにＫ１０３ＳおよびＫ１０４Ｓから選択されることを特徴とし、および／または、
好ましくは、前記変異体は、４～２１個のアミノ酸のＮ末端欠失、より好ましくは４個のアミノ酸、７個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１７個のアミノ酸および２１個のアミノ酸のＮ末端欠失を有し、その位置番号付けは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＮ末端からＣ末端までに基づくことを特徴とする
請求項１に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項6】

前記変異体は、点突然変異Ｔ１６ＳおよびＤ１７Ｎ、ならびに７個のアミノ酸のＮ末端欠失を含むことを特徴とする
請求項５に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項7】

前記第２のドメインは、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７に示されるようなアミノ酸配列のいずれか一つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０～１０７のいずれか一つと少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
請求項５に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項8】

前記抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端は、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に直接またはリンカーを介して融合されるか、あるいは前記抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端は、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に直接またはリンカーを介して連結されることを特徴とし、
好ましくは、前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＮ末端は、直接またはリンカーを介して、前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＣ末端に連結されるか、あるいは、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＣ末端は、直接またはリンカーを介して、ＴＲＩＩの細胞外ドメインまたはその変異体のＮ末端に連結されることを特徴とし、
好ましくは、前記二機能性融合タンパク質がさらに抗ＡＲＥＧ抗体の軽鎖を含む、および／またはへテロ四量体形態であることを特徴とする
請求項３に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項9】

【請求項10】

前記二機能性融合タンパク質は、抗ＡＲＥＧ抗体の重鎖を含み、そのＣ末端は、リンカーを介して前記ＴＲＩＩの細胞外ドメインのＮ末端に連結され、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９及び１４２に示されるいずれか一つのアミノ酸配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１８～１３９及び１４２のいずれか一つと少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする
請求項１に記載の二機能性融合タンパク質。

【請求項11】

単離された核酸分子であって、
請求項１－１０のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質をコードすることを特徴とする、前記単離された核酸分子。

【請求項12】

発現ベクターであって、
請求項１１に記載の単離された核酸分子を含むことを特徴とする、前記発現ベクター。

【請求項13】

宿主細胞であって、
請求項１１に記載の単離された核酸分子または請求項１２に記載の発現ベクターを含むことを特徴とする、前記宿主細胞。

【請求項14】

医薬組成物であって、
請求項１～１０のいずれか一つに記載の二機能性融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、前記医薬組成物。

【請求項15】

被験者における線維性疾患、癌および慢性炎症に関連する疾患の予防、治療および／または診断に使用するための、請求項１４に記載の医薬組成物であって、
好ましくは、前記線維性疾患は、腎線維症、肝線維症、肺線維症、特に特発性肺線維症（ＩＰＦ）を含むことを特徴とする、前記医薬組成物。

【国際調査報告】