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▶ ヴィロジェン バイオテック カナダ リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-05
(54)【発明の名称】操作された腫瘍溶解性ヘルペスウイルス
(51)【国際特許分類】
C12N 7/01 20060101AFI20240829BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240829BHJP
C12N 15/869 20060101ALI20240829BHJP
A61K 35/763 20150101ALI20240829BHJP
A61K 35/761 20150101ALI20240829BHJP
A61K 35/766 20150101ALI20240829BHJP
A61K 35/768 20150101ALI20240829BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20240829BHJP
A61K 51/04 20060101ALI20240829BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240829BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240829BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20240829BHJP
【ＦＩ】
C12N7/01 ZNA
C12N5/10
C12N15/869 Z
A61K35/763
A61K35/761
A61K35/766
A61K35/768
A61K35/76
A61K51/04 200
A61P35/02
A61P35/00
C12N15/113 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024537310
(86)(22)【出願日】2022-08-31
(85)【翻訳文提出日】2024-04-24
(86)【国際出願番号】 US2022075767
(87)【国際公開番号】W WO2023034867
(87)【国際公開日】2023-03-09
(31)【優先権主張番号】63/238,997
(32)【優先日】2021-08-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/278,569
(32)【優先日】2021-11-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/301,419
(32)【優先日】2022-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524076213
【氏名又は名称】ヴィロジェン バイオテック カナダ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】フロイド， ミシェル
(72)【発明者】
【氏名】グレージック， ピーター
(72)【発明者】
【氏名】ケネディ， エドワード エム．
(72)【発明者】
【氏名】ファーカリー， テリー
(72)【発明者】
【氏名】ラーナー， ロレーナ
(72)【発明者】
【氏名】フォー， ソニア
(72)【発明者】
【氏名】ストラスディー， クレイグ エー．
(72)【発明者】
【氏名】クエバ， クリストフ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B065AA95X
4B065AB01
4B065AC14
4B065AC20
4B065BA02
4B065CA23
4B065CA44
4B065CA46
4C085HH03
4C085KA30
4C085KB99
4C085LL18
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC83
4C087CA12
4C087MA24
4C087MA38
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZB26
4C087ZB27
(57)【要約】
本開示は、神経膠芽腫などのがんの治療及び予防のための組換え腫瘍溶解性ウイルスベクターに関する。腫瘍溶解性ウイルスベクターは、ウイルス複製制限のためのｍｉＲＮＡ標的配列（複数可）、１つ以上のペイロード分子をコードする導入遺伝子（複数可）、再標的化ドメイン、ＵＬ３０遺伝子及びＵＬ２３遺伝子の両方の変異（複数可）、ならびに合胞体変異を有するタンパク質及び合胞体変異を有しない対応タンパク質という特徴のうちの１つ以上を含む。
【選択図】図２６Ａ
【選択図】図２６Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換えヘルペスウイルスであって、前記組換えヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、（ａ）１つ以上の導入遺伝子を含み、任意選択で、前記導入遺伝子（複数可）のオープンリーディングフレーム（複数可）（ＯＲＦ）が、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、
（ｂ）１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｃ）再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）であって、変異を含む、前記ＤＰＣＳをコードするＵＬ３０ウイルス遺伝子と、チミジンキナーゼ（ＴＫ）であって、変異を含む、前記ＴＫをコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子とを含む、
（ｅ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、
（ｆ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、
（ｇ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、
（ｈ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、ならびに／あるいは
（ｉ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、前記組換えヘルペスウイルス。
【請求項2】
前記組換えヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記１つ以上の導入遺伝子を含み、前記１つ以上の導入遺伝子が、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ）、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）、ヒアルロニダーゼ－１（ＨＹＡＬ１）、ヘモタキシス阻害タンパク質（ＣＨＰ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２１（ＣＣＬ２１）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、ＣＤ４７アンタゴニスト、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）アンタゴニスト、プログラム死－１（ＰＤ１）アンタゴニスト、骨髄系細胞に発現するトリガー受容体－２（ＴＲＥＭ２）アンタゴニスト、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のペイロードタンパク質をコードする、請求項１に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項3】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含むか、またはそれらからなる、請求項２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項4】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、請求項３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項5】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＴＸを含む生体分子を含む、請求項３または４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項6】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が、表４～７に列記されるペイロードタンパク質の組み合わせのうちの１つを含むか、またはそれからなる、請求項２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項7】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、請求項２～６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項8】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＡＤＡ２を含む、請求項２～７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項9】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＹＡＬ１を含む、請求項２～８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項10】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＨＰを含む、請求項２～９のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項11】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＣＬ２１を含む、請求項２～１０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項12】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＩＬ－１２を含む、請求項２～１１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項13】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＤ４７アンタゴニストを含む、請求項２～１２のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項14】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＧＦβアンタゴニストを含む、請求項２～１３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項15】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＰＤ１アンタゴニストを含む、請求項２～１４のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項16】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む、請求項２～１５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項17】
前記アンタゴニストが抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２～１６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項18】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＴＸを含む生体分子を含む、請求項２～１７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項19】
前記ＣＴＸを含む生体分子が、Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質に特異的に結合するＴ細胞エンゲージャー部分を更に含む、請求項５または１８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項20】
前記Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質がＣＤ３である、請求項１９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項21】
前記Ｔ細胞エンゲージャー部分が、配列番号９１４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項22】
前記ＣＴＸが、配列番号９１３と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項23】
（ｉ）前記ＨＰＧＤが、配列番号８７５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）前記ＡＤＡ２が、配列番号８７７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）前記ＨＹＡＬ１が、配列番号８７８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｖ）前記ＣＨＰが、配列番号８８０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖ）前記ＣＣＬ２１が、配列番号８８１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖｉ）前記ＩＬ－１２が、配列番号８８３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットアルファ、及び配列番号８８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットベータを含む、
（ｖｉｉ）前記ＣＤ４７アンタゴニストが、配列番号８９５のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号８９６のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号８９７のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８８７もしくは８８８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉｉ）前記ＴＧＦβアンタゴニストが、配列番号８９８のＣＤＲ１、配列番号８９９のＣＤＲ２、及び配列番号９００のＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９０１のＣＤＲ１、配列番号９０２のＣＤＲ２、及び配列番号９０３のＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、任意選択で、前記ＴＧＦβアンタゴニストが、配列番号８８９または８９０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｘ）前記ＰＤ１アンタゴニストが、配列番号９０４のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号９０５のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号９０６のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８９１もしくは８９２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、ならびに／あるいは
（ｘ）前記ＣＴＸを含む生体分子が、配列番号９１５または９１６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２～２２のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項24】
前記導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項25】
前記導入遺伝子（複数可）の全てのＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、請求項２４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項26】
ＩＬ－１２、前記ＰＤ１アンタゴニスト、前記ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、ＨＰＧＤ、及び／または前記ＣＴＸを含む生体分子をコードする前記導入遺伝子（複数可）のＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、請求項２４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項27】
前記導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現が、対照組換えヘルペスウイルス中に約５２％のＧ／Ｃ含有量を有する対照ＯＲＦによってコードされる前記ペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、または少なくとも１０倍高く、任意選択で、前記対照ＯＲＦがホモサピエンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される、請求項２４～２６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項28】
前記導入遺伝子（複数可）のＯＲＦ（複数可）が、アナエロミュクソバクテル・デハロゲナンス（Ａｎａｅｒｏｍｙｘｏｂａｃｔｅｒ ｄｅｈａｌｏｇｅｎａｎｓ）のコドン使用に基づいてコドン最適化される、請求項２４～２７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項29】
前記導入遺伝子（複数可）が抗体またはその抗原結合断片をコードする、請求項２４～２８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項30】
前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、請求項２９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項31】
前記抗体またはその抗原結合断片が単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に由来するＶＨＨドメインを含む、請求項２９または３０に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項32】
前記抗体またはその抗原結合断片がＩｇＧ－Ｆｃを含み、任意選択で、前記ＩｇＧがＩｇＧ１である、請求項３０または３１に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項33】
前記ＰＤ１アンタゴニストをコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、請求項２３及び２９～３２のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項34】
前記ＣＴＸを含む生体分子をコードする前記導入遺伝子が、配列番号９４０または９４１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、請求項２３及び２９～３３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項35】
サイトカイン、ケモカイン、受容体、受容体リガンド、酵素、及び／またはレポータータンパク質をコードする前記導入遺伝子（複数可）を含む、請求項２４～３４のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項36】
ＩＬ－１２をコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、請求項２３または３５に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項37】
ＨＰＧＤをコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、請求項２３及び３５～３６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項38】
ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項39】
ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、請求項３８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項40】
ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、請求項３８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項41】
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、請求項３８～４０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項42】
第１のウイルス遺伝子に挿入された第１のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第１のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項３８～４１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項43】
前記第１のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される、請求項４２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項44】
前記第１のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８５９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、請求項４２または４３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項45】
前記第１のウイルス遺伝子がＩＣＰ８である、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項46】
第２のウイルス遺伝子に挿入された第２のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項47】
前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１２２－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）として配置される、請求項４６に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項48】
前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８５８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、請求項４６または４７に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項49】
前記第２のウイルス遺伝子がＩＣＰ４である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項50】
前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセットを前記ウイルスゲノムの両方のＩＣＰ４ウイルス遺伝子内に含む、請求項４９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項51】
１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を前記ウイルスゲノムの両方のＩＣＰ４ウイルス遺伝子内に含み、任意選択で、前記ｍｉＲＮＡ標的配列が両方の前記ＩＣＰ４ウイルス遺伝子内で同じである、請求項１～５０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項52】
第３のウイルス遺伝子に挿入された第３のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項53】
前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される、請求項５２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項54】
前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８７３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、請求項５２または５３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項55】
第３のウイルス遺伝子に挿入された第３のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項56】
前記第３のウイルス遺伝子がＩＣＰ２７である、請求項５２～５５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項57】
第４のウイルス遺伝子に挿入された第４のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、（ｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｉｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、または
（ｉｉｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項３８～５６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項58】
第４のウイルス遺伝子に挿入された第４のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項３８～５６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項59】
前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（１４５－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される、請求項５８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項60】
前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８７４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、請求項５８または５９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項61】
前記第４のウイルス遺伝子がＵＬ８である、請求項５７～６０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項62】
前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが各々、前記ｍｉＲＮＡ標的配列の各々の少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのコピーを含む、請求項４２～６１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項63】
前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが各々、前記ｍｉＲＮＡ標的配列の各々の３つのコピーを含む、請求項４２～６１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項64】
前記組換えＨＳＶの複製が、がん性細胞における前記組換えＨＳＶの複製と比較して、非がん性細胞において減少し、任意選択で、前記がん性細胞が神経膠芽腫細胞である、請求項３８～６３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項65】
前記非がん性細胞が、神経細胞、上衣細胞、乏突起膠細胞、内皮細胞、肝細胞、星状膠細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項６４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項66】
前記非がん性細胞が星状膠細胞である、請求項６４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項67】
（ａ）前記ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６７を含むか、もしくはそれらからなる、（ｂ）前記ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６８を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｃ）前記ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６９を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｄ）前記ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８０４を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｅ）前記ｍｉＲ－１２４－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８０５を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｆ）前記ｍｉＲ－１２８Ｔの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７０を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｇ）前記ｍｉＲ－１２９－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８１３を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｈ）前記ｍｉＲ－１２９－２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７１を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｉ）前記ｍｉＲ－１３２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７２を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｊ）前記ｍｉＲ－１３７－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８１９を含むか、もしくはそれらからなる、及び／または
（ｋ）前記ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８２３を含むか、もしくはそれらからなる、請求項３８～６６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項68】
前記再標的化ドメインをコードする前記ポリヌクレオチドを含み、前記再標的化ドメインが、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合する、請求項１～６７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項69】
前記再標的化ドメインをコードする前記ポリヌクレオチドが、糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）をコードするＵＳ６遺伝子のオープンリーディングフレームに挿入される、請求項６８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項70】
前記再標的化ドメインをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号９２１のアミノ酸６～２４に対応するアミノ酸配列をコードするＵＳ６遺伝子領域を置き換える、請求項６９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項71】
前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質が、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、またはそれらの組み合わせを含む、請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項72】
前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質が、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を含む、請求項６８～７１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項73】
前記再標的化ドメインが、前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質に特異的に結合することができるノッチンペプチドを含む、請求項６８～７２のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項74】
前記再標的化ドメインが、５０個以下、４５個以下、４０個以下、または３５個以下のアミノ酸を含む、請求項７３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項75】
前記再標的化ドメインが、配列番号９２２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７３または７４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項76】
前記再標的化ドメインが、前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質に特異的に結合することができる免疫グロブリンドメインを含む、請求項６８～７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項77】
前記再標的化ドメインが、重鎖のみ抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）または新規抗原受容体免疫グロブリンの可変ドメイン（Ｖ－ＮＡＲ）の結合ドメインまたはそれに由来する結合ドメインを含む、請求項６８～７６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項78】
前記再標的化ドメインが、１５０個以下、１４０個以下、または１３０個以下のアミノ酸を含む、請求項７６または７７に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項79】
前記再標的化ドメインが、配列番号９２３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７６～７８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項80】
前記ヘルペスウイルスが、前記標的タンパク質を発現する前記標的細胞に感染することができる、請求項６８～７９のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項81】
前記ヘルペスウイルスが、ネクチン－１発現を有しない細胞に感染することができ、任意選択で、前記細胞がＶｅｒｏ細胞である、請求項６８～８０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項82】
前記変異を含む前記ＤＰＣＳをコードする前記ＵＬ３０ウイルス遺伝子及び前記変異を含む前記ＴＫをコードする前記ＵＬ２３ウイルス遺伝子を含む、請求項１～８１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項83】
前記ＤＰＣＳにおける前記変異が、前記ヘルペスウイルスのＤＮＡ複製忠実度を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも５倍増加させる、請求項８２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項84】
前記ＤＰＣＳにおける前記変異が、配列番号９１７のＬ７７４に対応するアミノ酸位置にあり、好ましくは、前記変異がアミノ酸置換である、請求項８２または８３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項85】
前記ＤＰＣＳにおける前記変異が、配列番号９１７のＬ７７４Ｆに対応する前記アミノ酸置換である、請求項８４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項86】
前記ＤＰＣＳが、前記ＤＰＣＳにおける前記変異を除いて、配列番号９１７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項８２～８５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項87】
アシクロビルのＩＣ５０が前記ヘルペスウイルスに対して０．５ｕｇ／ｍｌ未満、１．０ｕｇ／ｍｌ未満、１．５ｕｇ／ｍｌ未満、または２．０ｕｇ／ｍｌ未満である、請求項８２～８６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項88】
前記ＴＫにおける前記変異が、前記ヘルペスウイルスに対するアシクロビルのＩＣ５０を少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍減少させる、請求項８２～８７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項89】
前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＬ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、及び／またはＬ１６９に対応する１つ以上のアミノ酸位置にあり、好ましくは、前記変異がアミノ酸置換である、請求項８２～８８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項90】
前記ＴＫにおける前記変異が、（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項８９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項91】
前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換を含む、請求項８２～９０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項92】
前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ａ、及びＡ１６８Ｆに対応するアミノ酸置換を含む、請求項８２～９０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項93】
前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｎに対応するアミノ酸置換を含む、請求項８２～９０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項94】
前記ＴＫが、前記ＴＫにおける前記変異を除いて、配列番号９１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項８２～９３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項95】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、（ｉ）前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢ、及び／または前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、
（ｉｉ）前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫ、及び／または前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨ、及び／または前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、
（ｉｖ）前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０、及び／または前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、ならびに/あるいは
（ｖ）前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４、及び／または前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、請求項１～９４のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項96】
前記第１のｇＢが内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされ、前記第２のｇＢが外因性発現カセットによってコードされる、請求項９５に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項97】
前記第１のｇＢが外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のｇＢが内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされる、請求項９５に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項98】
前記第１のｇＫが内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされ、前記第２のｇＫが外因性発現カセットによってコードされる、請求項９５～９７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項99】
前記第１のｇＫが外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のｇＫが内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされる、請求項９５～９７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項100】
前記第１のｇＨが内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされ、前記第２のｇＨが外因性発現カセットによってコードされる、請求項９５～９９のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項101】
前記第１のｇＨが外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のｇＨが内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされる、請求項９５～９９のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項102】
前記第１のＵＬ２０が内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされ、前記第２のＵＬ２０が外因性発現カセットによってコードされる、請求項９５～１０１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項103】
前記第１のＵＬ２０が外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のＵＬ２０が内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされる、請求項９５～１０１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項104】
前記第１のＵＬ２４が内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされ、前記第２のＵＬ２４が外因性発現カセットによってコードされる、請求項９５～１０３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項105】
前記第１のＵＬ２４が外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のＵＬ２４が内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされる、請求項９５～１０３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項106】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＢをコードするが、前記第２のｇＢをコードしない、請求項９５～１０５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項107】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＫをコードするが、前記第２のｇＫをコードしない、請求項９５～１０６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項108】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＨをコードするが、前記第２のｇＨをコードしない、請求項９５～１０７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項109】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２０をコードするが、前記第２のＵＬ２０をコードしない、請求項９５～１０８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項110】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２４をコードするが、前記第２のＵＬ２４をコードしない、請求項９５～１０９のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項111】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＢ及び前記第１のｇＫをコードし、任意選択で、前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが前記第１のｇＨ及び前記第１のＵＬ２４を更にコードする、請求項９５～１１０のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項112】
前記外因性発現カセットがＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間領域に位置する、請求項９６～１１１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項113】
前記外因性発現カセットがＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置する、請求項９６～１１１のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項114】
前記組換えヘルペスウイルスががん細胞において合胞体表現型を呈する、請求項９５～１１３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項115】
請求項９５～１１４のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルスをコードする組換え核酸を含む、細胞。
【請求項116】
組換えヘルペスウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、（ｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードする、
（ｉｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードする、
（ｉｖ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードする、及び／あるいは
（ｖ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードする、前記細胞。
【請求項117】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、請求項１１６に記載の細胞。
【請求項118】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードする、請求項１１６に記載の細胞。
【請求項119】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、請求項１１６～１１８のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項120】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードする、請求項１１６～１１８のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項121】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、請求項１１６～１２０のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項122】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードする、請求項１１６～１２０のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項123】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、請求項１１６～１２２のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項124】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードする、請求項１１６～１２２のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項125】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、請求項１１６～１２４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項126】
前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードする、請求項１１６～１２４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項127】
前記組換えヘルペスウイルスが、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＨコードウイルス遺伝子の単一コピー、ＵＬ２０ウイルス遺伝子の単一コピー、及び／またはＵＬ２４ウイルス遺伝子の単一コピーを含む、請求項１１６～１２６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項128】
前記第１の核酸及び前記第２の核酸が単一のポリヌクレオチド分子内に含まれる、請求項１１６～１２７のいずれかに記載の細胞。
【請求項129】
前記第１の核酸及び前記第２の核酸が２つの異なるポリヌクレオチド分子内に含まれる、請求項１１６～１２７のいずれかに記載の細胞。
【請求項130】
前記細胞がＶｅｒｏ細胞である、請求項１１５～１２９のいずれかに記載の細胞。
【請求項131】
前記ｇＢ合胞体変異が、配列番号９１９のＲ７９６、Ｒ８００、Ｔ８１３、Ｌ８１７、Ｓ８５４、Ａ８５５、Ｒ８５８、もしくはＡ８７４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間への挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、Ｃ末端に対するＴ８７７の欠失、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９５～１１４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３０のいずれかに記載の細胞。
【請求項132】
前記ｇＢ合胞体変異が、配列番号９１９のＲ７９６Ｃ、Ｒ８００Ｗ、Ｔ８１３Ｉ、Ｌ８１７Ｈ、Ｌ８１７Ｐ、Ｓ８５４Ｆ、Ａ８５５Ｖ、Ｒ８５８Ｃ、Ｒ８５８Ｈ、Ａ８７４Ｐに対応する１つ以上の変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間へのＶＮもしくはＶＮＶＮの挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、またはＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む、請求項９５～１１４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３０のいずれかに記載の細胞。
【請求項133】
前記ｇＢ合胞体変異が、配列番号９１９に従うＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む、請求項９５～１１４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３０のいずれかに記載の細胞。
【請求項134】
前記第１のｇＢ及び／または前記第２のｇＢが、配列番号９１９のＤ２８５Ｎ及び／またはＡ５４９Ｔに対応する変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３３のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３３のいずれかに記載の細胞。
【請求項135】
前記ｇＫ合胞体変異が、配列番号９２０のＰ３３、Ａ４０、Ｌ８６、Ｄ９９、Ａ１１１、Ｌ１１８、Ｔ１２１、Ｃ２４３、Ｌ３０４、Ｉ３０７、またはＲ３１０に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３４のいずれかに記載の細胞。
【請求項136】
前記ｇＫ合胞体変異が、配列番号９２０のＰ３３Ｓ、Ａ４０Ｖ、Ａ４０Ｔ、Ｌ８６Ｐ、Ｄ９９Ｎ、Ａ１１１Ｖ、Ｌ１１８Ｑ、Ｔ１２１Ｉ、Ｃ２４３Ｙ、Ｌ３０４Ｐ、Ｉ３０７Ｎ、またはＲ３１０Ｌに対応する１つ以上の変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３４のいずれかに記載の細胞。
【請求項137】
前記ｇＫ合胞体変異が、配列番号９２０に従うＩ３０７Ｎを含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３４のいずれかに記載の細胞。
【請求項138】
前記ｇＨ合胞体変異が、配列番号９４３のＮ７５３またはＡ７７８に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３７のいずれかに記載の細胞。
【請求項139】
前記ｇＨ合胞体変異が、配列番号９４３のＮ７５３ＫまたはＡ７７８Ｖに対応する１つ以上の変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３７のいずれかに記載の細胞。
【請求項140】
前記ＵＬ２０合胞体変異が、配列番号９４４のＹ４９、Ｓ５０、Ｒ５１、Ｒ２０９、Ｔ２１２、Ｒ２１３に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３９のいずれかに記載の細胞。
【請求項141】
前記ＵＬ２０合胞体変異が、配列番号９４４のＹ４９Ａ、Ｓ５０Ａ、Ｒ５１Ａ、Ｒ２０９Ａ、Ｔ２１２Ａ、Ｒ２１３Ａに対応する１つ以上の変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１３９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１３９のいずれかに記載の細胞。
【請求項142】
前記ＵＬ２４合胞体変異が、配列番号９４２のＴ６４、Ｒ６３、またはＶ６４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１４１のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４１のいずれかに記載の細胞。
【請求項143】
前記ＵＬ２４合胞体変異が、配列番号９４２のＴ６４Ｇ、Ｒ６３Ｖ、またはＶ６４Ｓに対応する１つ以上の変異を含む、請求項９５～１１４及び１３１～１４１のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４１のいずれかに記載の細胞。
【請求項144】
前記第１のｇＢをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、請求項９５～１１４及び１３１～１４３のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４３のいずれかに記載の細胞。
【請求項145】
前記第２のｇＢをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、請求項９５～１１４及び１３１～１４３のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４３のいずれかに記載の細胞。
【請求項146】
前記第１のｇＫをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、請求項９５～１１４及び１３１～１４５のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４５のいずれかに記載の細胞。
【請求項147】
前記第２のｇＫをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、請求項９５～１１４及び１３１～１４５のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４５のいずれかに記載の細胞。
【請求項148】
前記組換えヘルペスウイルスの収量が、前記第２のｇＢ、前記第２のｇＫ、前記第２のｇＨ、前記第２のＵＬ２０、または前記第２のＵＬ２４をコードしない対照ヘルペスウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、請求項９５～１１４及び１３１～１４７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４７のいずれかに記載の細胞。
【請求項149】
前記第１のｇＢをコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項９５～１１４及び１３１～１４８のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４８のいずれかに記載の細胞。
【請求項150】
前記第１のｇＫをコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項９５～１１４及び１３１～１４９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１４９のいずれかに記載の細胞。
【請求項151】
前記第１のｇＨをコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項９５～１１４及び１３１～１５０のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１５０のいずれかに記載の細胞。
【請求項152】
前記第１のＵＬ２０をコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項９５～１１４及び１３１～１５１のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１５１のいずれかに記載の細胞。
【請求項153】
前記第１のＵＬ２４をコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項９５～１１４及び１３１～１５２のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１５２のいずれかに記載の細胞。
【請求項154】
前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも１つを含む、請求項１４９～１５３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１４９～１５３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項155】
前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも２つを含む、請求項１４９～１５３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１４９～１５３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項156】
前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐを含む、請求項１４９～１５３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１４９～１５３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項157】
前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが、４ｂｐスペーサーによって分離された前記ｍｉＲＮＡの各々の前記標的配列の少なくとも３つのコピーまたは少なくとも４つのコピーを含む、請求項１４９～１５６のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項158】
前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが前記遺伝子の３’ＵＴＲに位置する、請求項１４９～１５７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項159】
前記ｍｉＲＮＡの前記標的配列が前記ｍｉＲＮＡの逆相補配列を含むか、またはそれらからなる、請求項１４９～１５８のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項160】
前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが配列番号９３０のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１４９～１５９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項161】
前記組換えヘルペスウイルスの収量が、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照ヘルペスウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、請求項１４９～１６０のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項162】
組換えヘルペスウイルスであって、請求項１１５～１６１のいずれかに記載の細胞を培養することと、前記細胞の培養物から前記組換えヘルペスウイルスを回収することとによって産生される、前記組換えヘルペスウイルス。
【請求項163】
組換えヘルペスウイルスであって、前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、配列番号９２０のＩ３０７Ｎに対応する合胞体変異を含むｇＫをコードする、前記組換えヘルペスウイルス。
【請求項164】
前記ヘルペスウイルスがアルファヘルペスウイルスである、請求項１～１１４及び１３１～１６３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１６１のいずれかに記載の細胞。
【請求項165】
前記アルファヘルペスウイルスが単純ヘルペスウイルスである、請求項１６４に記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項166】
前記単純ヘルペスウイルスが単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）である、請求項１６５に記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項167】
前記組換えヘルペスウイルスが腫瘍溶解性である、請求項１～１１４及び１３１～１６６のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１１５～１６１及び１６４～１６６のいずれかに記載の細胞。
【請求項168】
前記組換えヘルペスウイルスが配列番号８５７に従う脳炎ＨＳＶ分離株に由来し、任意選択で、前記組換えヘルペスウイルスが、配列番号８５７と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、請求項１６４～１６７のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項169】
前記組換えヘルペスウイルスは順行性輸送に欠陥がある、請求項１６４～１６８のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【請求項170】
ＵＬ３７ウイルス遺伝子に変異を含む、請求項１～１１４及び１３１～１６９のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項171】
前記ＵＬ３７ウイルス遺伝子が、配列番号８５６のＱ４０３、Ｅ４５２、Ｑ４５５、Ｑ５１１、及びＲ５１５に対応する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または５つ全てのアミノ酸位置に変異を含むＵＬ３７タンパク質をコードする、請求項１７０に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項172】
前記ＵＬ３７ウイルス遺伝子の前記変異が、配列番号８５６に従うＱ４０３Ａ、Ｅ４５２Ａ、Ｑ４５５Ａ、Ｑ５１１Ａ、及びＲ５１５Ａを含む、請求項１７１に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項173】
配列番号９１９のＡ５４９Ｔ／Ｄ２８５Ｎに対応する変異を含むｇＢをコードする、請求項１～１１４及び１３１～１７２のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項174】
前記組換えヘルペスウイルスが、ＩＣＰ６、ＩＣＰ３４．５、及び／またはＩＣＰ４７の機能を保持する、請求項１～１１４及び１３１～１７３のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項175】
前記１つ以上の導入遺伝子がＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に挿入される、請求項１～１１４及び１３１～１７４のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項176】
ＨＰＧＤ、ＡＤＡ２、ＨＹＡＬ１、ＣＨＰ、ＣＣＬ２１、ＩＬ－１２、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＴＧＦβアンタゴニスト、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のペイロードタンパク質をコードする１つ以上の導入遺伝子を含む、組換えウイルス。
【請求項177】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含むか、またはそれらからなる、請求項１７６に記載の組換えウイルス。
【請求項178】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、請求項１７７に記載の組換えウイルス。
【請求項179】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＴＸを含む生体分子を含む、請求項１７７または１７８に記載の組換えウイルス。
【請求項180】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が、表４～７に列記されるペイロードタンパク質の組み合わせのうちの１つを含むか、またはそれらからなる、請求項１７６に記載の組換えウイルス。
【請求項181】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、請求項１７６～１８０のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項182】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＡＤＡ２を含む、請求項１７６～１８１のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項183】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＹＡＬ１を含む、請求項１７６～１８２のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項184】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＨＰを含む、請求項１７６～１８３のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項185】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＣＬ２１を含む、請求項１７６～１８４のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項186】
前記１つ以上のペイロードタンパク質がＩＬ－１２を含む、請求項１７６～１８５のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項187】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＤ４７アンタゴニストを含む、請求項１７６～１８６のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項188】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＧＦβアンタゴニストを含む、請求項１７６～１８７のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項189】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＰＤ１アンタゴニストを含む、請求項１７６～１８８のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項190】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む、請求項１７６～１８９のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項191】
前記アンタゴニストが抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１７６～１９０のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項192】
前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＴＸを含む生体分子を含む、請求項１７６～１９１のいずれか１項に記載の組換えウイルス。
【請求項193】
前記ＣＴＸを含む生体分子が、Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質に特異的に結合するＴ細胞エンゲージャー部分を更に含む、請求項１７９または１９２に記載の組換えウイルス。
【請求項194】
前記Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質がＣＤ３である、請求項１９３に記載の組換えウイルス。
【請求項195】
組換えウイルスであって、（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記組換えウイルス。
【請求項196】
ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、請求項１９５に記載の組換えウイルス。
【請求項197】
組換えウイルスであって、前記組換えウイルスのウイルスゲノムが、合胞体変異を含むタンパク質及び前記合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードする、前記組換えウイルス。
【請求項198】
前記合胞体変異を含む前記タンパク質と前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が、前記合胞体変異を除いて、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を共有する、請求項１９７に記載の組換えウイルス。
【請求項199】
前記合胞体変異を含む前記タンパク質が内因性ウイルス遺伝子によってコードされ、前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が外因性発現カセットによってコードされる、請求項１９７または１９８に記載の組換えウイルス。
【請求項200】
前記合胞体変異を含む前記タンパク質が外因性発現カセットによってコードされ、前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が内因性ウイルス遺伝子によってコードされる、請求項１９７または１９８に記載の組換えウイルス。
【請求項201】
前記合胞体変異を含む前記タンパク質及び前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質の両方が、１つの外因性発現カセットによってコードされるか、または異なる外因性発現カセットによってコードされる、請求項１９７または１９８に記載の組換えウイルス。
【請求項202】
請求項１９７～２０１のいずれか１項に記載の組換えウイルスをコードする組換え核酸を含む、細胞。
【請求項203】
組換えウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、前記組換えウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含むタンパク質をコードし、
前記第２の核酸が前記合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードする、前記細胞。
【請求項204】
前記合胞体変異を含む前記タンパク質と前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が、前記合胞体変異を除いて、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を共有する、請求項２０３に記載の細胞。
【請求項205】
前記ウイルスの収量が、前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質をコードしない対照ウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、請求項１９７～２０１のいずれか１項に記載の組換えウイルス、または請求項２０２～２０４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項206】
前記合胞体変異を含む前記タンパク質をコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、請求項１９７～２０１及び２０５のいずれか１項に記載の組換えウイルス、または請求項２０２～２０５のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項207】
前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐから選択されるｍｉＲＮＡのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全てを含む、請求項２０６に記載の組換えウイルスまたは細胞。
【請求項208】
前記組換えウイルスの収量が、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照ウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、請求項２０６または２０７に記載の組換えウイルスまたは細胞。
【請求項209】
組換えウイルスであって、請求項２０２～２０８のいずれかに記載の細胞を培養することと、前記細胞の培養物から前記組換えヘルペスウイルスを回収することとによって産生される、前記組換えウイルス。
【請求項210】
前記組換えウイルスが、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルス、またはコクサッキーウイルスに由来する、請求項１７６～２０１及び２０５～２０９のいずれか１項に記載の組換えウイルス、または請求項２０２～２０８のいずれかに記載の細胞。
【請求項211】
前記組換えウイルスが腫瘍溶解性である、請求項１７６～２０１及び２０５～２１０のいずれか１項に記載の組換えウイルス、または請求項２０２～２０８のいずれかに記載の細胞。
【請求項212】
請求項１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１項に記載の組換えウイルスをコードする、核酸分子。
【請求項213】
前記核酸分子がＤＮＡである、請求項２１２に記載の核酸分子。
【請求項214】
前記核酸分子がＲＮＡである、請求項２１２に記載の核酸分子。
【請求項215】
請求項１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、または請求項１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１項に記載の組換えウイルスを含む、ウイルスストック。
【請求項216】
請求項２１２～２１４のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、粒子。
【請求項217】
前記粒子が、ナノ粒子、エキソソーム、リポソーム、及びリポプレックスからなる群から選択される、請求項２１６に記載の粒子。
【請求項218】
前記粒子が脂質ナノ粒子である、請求項２１６に記載の粒子。
【請求項219】
真核細胞を前記粒子と接触させることにより、前記真核細胞による感染性ウイルス粒子の産生がもたらされる、請求項２１６～２１８のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項220】
医薬組成物であって、（ｉ）請求項１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、請求項１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１項に記載の組換えウイルス、請求項２１２～２１４のいずれか１項に記載の核酸分子、または請求項２１６～２１９のいずれか１項に記載の粒子と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、前記医薬組成物。
【請求項221】
がん性細胞を死滅させる方法であって、前記がん性細胞を、請求項１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、請求項１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１項に記載の組換えウイルス、請求項２１６～２１９のいずれか１項に記載の粒子、または請求項２２０に記載の医薬組成物に、前記ウイルスまたは前記粒子を前記がん性細胞に感染させ、かつ前記ウイルスを前記がん性細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露させることを含み、前記がん性細胞内での前記ウイルスの複製により、細胞死がもたらされる、前記方法。
【請求項222】
前記細胞がインビトロまたはインビボにある、請求項２２１に記載の方法。
【請求項223】
前記がん性細胞が、非がん性細胞における前記１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができるｍｉＲＮＡの発現と比較して、前記ｍｉＲＮＡの発現の低下を有する、請求項２２１または２２２に記載の方法。
【請求項224】
前記ウイルスの複製が、前記１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができる前記ｍｉＲの発現の低下を有する前記がん性細胞内で増加するか、または維持される、請求項２２１～２２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項225】
前記がん性細胞が、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）の細胞である、請求項２２１～２２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項226】
前記がん性細胞が神経膠芽腫細胞である、請求項２２１～２２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項227】
がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、前記対象に、請求項１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス、請求項１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１項に記載の組換えウイルス、請求項２１６～２１９のいずれか１項に記載の粒子、または請求項２２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項228】
前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が、静脈内、皮下、腫瘍内、筋肉内、または鼻腔内投与される、請求項２２７に記載の方法。
【請求項229】
前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が腫瘍内投与される、請求項２２７に記載の方法。
【請求項230】
前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が静脈内投与される、請求項２２７に記載の方法。
【請求項231】
前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が１回のみ投与される、請求項２２７～２３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項232】
前記がんが、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される、請求項２２７～２３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項233】
前記がんが神経膠芽腫である、請求項２２７～２３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項234】
請求項１１５～１６０及び２０２～２０８のいずれかに記載の細胞を含む、細胞株。
【請求項235】
組換えヘルペスウイルスを産生する方法であって、請求項１１５～１６０及び２０２～２０８のいずれかに記載の細胞または請求項２３４に記載の細胞株を培養することと、前記細胞の培養物から前記組換えヘルペスウイルスを回収することと、を含む、前記方法。
【請求項236】
前記ヘルペスウイルスの感染部位をイメージングするために小分子と組み合わせて使用するための、請求項８２～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルス。
【請求項237】
ヘルペスウイルスの感染部位をインビボでイメージングする方法であって、請求項８２～１１４及び１３１～１７５のいずれか１項に記載の組換えヘルペスウイルスと、小分子と、を投与することを含む、前記方法。
【請求項238】
前記小分子が放射性同位体標識アシクロビルであり、任意選択で、前記放射性同位体標識がフッ素－１８（１８Ｆ）標識を含む、請求項２３６に記載の使用するための組換えウイルス、または請求項２３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月３１日に出願された米国仮出願第６３／２３８，９９７号、２０２１年１１月１２日に出願された米国仮出願第６３／２７８，５６９号、及び２０２２年１月２０日に出願された米国仮出願第６３／３０１，４１９号の利益を主張するものであり、これらは全て、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年８月３１日に出願された米国仮出願第６３／２３８，９９７号、２０２１年１１月１２日に出願された米国仮出願第６３／２７８，５６９号、及び２０２２年１月２０日に出願された米国仮出願第６３／３０１，４１９号の利益を主張するものであり、これらは全て、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
電子配列表の参照
電子配列表の内容（ＯＮＣＲ＿０２２＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２６．ｘｍｌ、サイズ：１，３１５，４５４バイト、作成日：２０２２年８月３０日）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
電子配列表の内容（ＯＮＣＲ＿０２２＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２６．ｘｍｌ、サイズ：１，３１５，４５４バイト、作成日：２０２２年８月３０日）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0003】
分野
本開示は、がんの治療及び予防のための組換えウイルスベクターに関する。いくつかの実施形態では、本開示は、神経膠芽腫を治療するための腫瘍溶解性ＨＳＶベクターに関する。
本開示は、がんの治療及び予防のための組換えウイルスベクターに関する。いくつかの実施形態では、本開示は、神経膠芽腫を治療するための腫瘍溶解性ＨＳＶベクターに関する。
【背景技術】
【0004】
背景
腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）などの腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞に優先的に感染し、がん治療のための複数の前臨床研究及び臨床研究に使用されている。しかしながら、安全性プロファイルの向上、抗腫瘍活性の長期化、及び免疫抑制性腫瘍微小環境を克服する能力の向上の必要性を含む、多くの障害が依然として存在する。
腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）などの腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞に優先的に感染し、がん治療のための複数の前臨床研究及び臨床研究に使用されている。しかしながら、安全性プロファイルの向上、抗腫瘍活性の長期化、及び免疫抑制性腫瘍微小環境を克服する能力の向上の必要性を含む、多くの障害が依然として存在する。
【0005】
神経膠芽腫（ＧＢＭ）は、成人における最も一般的な種類の原発性脳腫瘍であり、５年全生存率は６．８％である。ＧＢＭの治療的介入は、３つの主要な障害である、血液脳関門によって阻害される薬物送達、各腫瘍内に共存する少なくとも３つの分子サブタイプを有する高度な腫瘍内不均一性、及び強い免疫抑制性腫瘍微小環境を克服しなければならない。
【0006】
改善された腫瘍溶解性ウイルスベクターが当該技術分野で依然として必要とされている。本開示は、かかる改善された腫瘍溶解性ウイルスベクターなどを提供する。
【発明の概要】
【0007】
概要
一態様では、本開示は、組換えヘルペスウイルスであって、本組換えヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、
（ａ）１つ以上の導入遺伝子を含み、任意選択で、導入遺伝子（複数可）のオープンリーディングフレーム（複数可）（ＯＲＦ）が、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、
（ｂ）１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｃ）再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）であって、変異を含む、ＤＰＣＳをコードするＵＬ３０ウイルス遺伝子と、チミジンキナーゼ（ＴＫ）であって、変異を含む、ＴＫをコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子とを含む、
（ｅ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードする、
（ｆ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードする、
（ｇ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードする、
（ｈ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｉ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードする、組換えヘルペスウイルスを提供する。
一態様では、本開示は、組換えヘルペスウイルスであって、本組換えヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、
（ａ）１つ以上の導入遺伝子を含み、任意選択で、導入遺伝子（複数可）のオープンリーディングフレーム（複数可）（ＯＲＦ）が、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、
（ｂ）１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｃ）再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）であって、変異を含む、ＤＰＣＳをコードするＵＬ３０ウイルス遺伝子と、チミジンキナーゼ（ＴＫ）であって、変異を含む、ＴＫをコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子とを含む、
（ｅ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードする、
（ｆ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードする、
（ｇ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードする、
（ｈ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｉ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードする、組換えヘルペスウイルスを提供する。
【0008】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ）、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）、ヒアルロニダーゼ－１（ＨＹＡＬ１）、ヘモタキシス阻害タンパク質（ＣＨＰ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２１（ＣＣＬ２１）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、ＣＤ４７アンタゴニスト、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）アンタゴニスト、プログラム死－１（ＰＤ１）アンタゴニスト、骨髄系細胞に発現するトリガー受容体－２（ＴＲＥＭ２）アンタゴニスト、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のペイロードタンパク質をコードする１つ以上の導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＨＰＧＤを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＴＸを含む生体分子を含む。
【0009】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、本開示の表４～７に列記されるペイロードタンパク質の組み合わせのうちの１つを含むか、またはそれらからなる。
【0010】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＨＰＧＤを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＡＤＡ２を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＨＹＡＬ１を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＨＰを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＣＬ２１を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＩＬ－１２を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＤ４７アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＴＧＦβアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＰＤ１アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＴＸを含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子は、Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質に特異的に結合するＴ細胞エンゲージャー部分を更に含む。いくつかの実施形態では、 Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質は、ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分は、配列番号９１４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸは、配列番号９１３と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【0011】
いくつかの実施形態では、ＨＰＧＤは、配列番号８７５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＤＡ２は、配列番号８７７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＹＡＬ１は、配列番号８７８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨＰは、配列番号８８０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ２１は、配列番号８８１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２は、配列番号８８３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットアルファ、及び配列番号８８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットベータを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７アンタゴニストは、配列番号８９５のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号８９６のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号８９７のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８８７もしくは８８８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβアンタゴニストは、配列番号８９８のＣＤＲ１、配列番号８９９のＣＤＲ２、及び配列番号９００のＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９０１のＣＤＲ１、配列番号９０２のＣＤＲ２、及び配列番号９０３のＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβアンタゴニストは、配列番号８８９または８９０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ１アンタゴニストは、配列番号９０４のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号９０５のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号９０６のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８９１もしくは８９２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２アンタゴニストは、配列番号９０７のＣＤＲ１、配列番号９０８のＣＤＲ２、配列番号９０９のＣＤＲ３、及び／または配列番号８９３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９１０のＣＤＲ１、配列番号９１１のＣＤＲ２、配列番号９１２のＣＤＲ３、及び／または配列番号８９４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子は、配列番号９１５または９１６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【0012】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子（複数可）の全てのＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、ＨＰＧＤ、及び／またはＣＴＸを含む生体分子をコードする導入遺伝子（複数可）のＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現は、対照組換えヘルペスウイルス中に約５２％のＧ／Ｃ含有量を有する対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、または少なくとも１０倍高い。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、ホモサピエンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子（複数可）のＯＲＦ（複数可）は、アナエロミュクソバクテル・デハロゲナンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子（複数可）は、抗体またはその抗原結合断片をコードする。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２アンタゴニストをコードする導入遺伝子は、配列番号９３８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に由来するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ－Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＰＤ１アンタゴニストをコードする導入遺伝子は、配列番号９３７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子をコードする導入遺伝子は、配列番号９４０または９４１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子（複数可）は、サイトカイン、ケモカイン、受容体、受容体リガンド、酵素、及び／またはレポータータンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２をコードする導入遺伝子は、配列番号９３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＧＤをコードする導入遺伝子は、配列番号９３９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。
【0013】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0015】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、第１のウイルス遺伝子に挿入された第１のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、第１のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第１のｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される。いくつかの実施形態では、第１のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のウイルス遺伝子は、ＩＣＰ８である。
【0016】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、第２のウイルス遺伝子に挿入された第２のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、第２のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第２のｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１２２－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）として配置される。いくつかの実施形態では、第２のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のウイルス遺伝子は、ＩＣＰ４である。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、第２のｍｉＲ－ＴＳカセットをウイルスゲノムの両方のＩＣＰ４ウイルス遺伝子内に含む。
【0017】
一態様では、本開示は、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列をウイルスゲノムの両方のＩＣＰ４ウイルス遺伝子内に含む組換えヘルペスウイルスを提供する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ標的配列は、両方の当該ＩＣＰ４ウイルス遺伝子内で同じである。
【0018】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、第３のウイルス遺伝子に挿入された第３のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、第３のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第３のｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される。いくつかの実施形態では、第３のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、第３のウイルス遺伝子に挿入された第３のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、第３のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第３のウイルス遺伝子は、ＩＣＰ２７である。
【0019】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、第４のウイルス遺伝子に挿入された第４のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、
（ｉ）第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｉｉ）第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、または
（ｉｉｉ）第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。
いくつかの実施形態では、第４のｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、第４のｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、（１４５－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される。いくつかの実施形態では、第４のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第４のウイルス遺伝子は、ＵＬ８である。
（ｉ）第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｉｉ）第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、または
（ｉｉｉ）第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。
いくつかの実施形態では、第４のｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、第４のｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、（１４５－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される。いくつかの実施形態では、第４のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第４のウイルス遺伝子は、ＵＬ８である。
【0020】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは各々、ｍｉＲＮＡ標的配列の各々の少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは各々、ｍｉＲＮＡ標的配列の各々の３つのコピーを含む。
【0021】
いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶの複製は、がん性細胞における組換えＨＳＶの複製と比較して、非がん性細胞において減少する。いくつかの実施形態では、がん性細胞は、神経膠芽腫細胞である。いくつかの実施形態では、非がん性細胞は、神経細胞、上衣細胞、乏突起膠細胞、内皮細胞、肝細胞、星状膠細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、非がん性細胞は、星状膠細胞である。
【0022】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８６７を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８６８を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８６９を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８０４を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２４－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８０５を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２８Ｔの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７０を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８１３を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８７１を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８７２を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３７－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８１９を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、配列番号８２３を含むか、またはそれらからなる。
【0023】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含み、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）をコードするＵＳ６遺伝子のオープンリーディングフレームに挿入される。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号９２１のアミノ酸６～２４に対応するアミノ酸配列をコードするＵＳ６遺伝子領域を置き換える。いくつかの実施形態では、標的細胞によって発現される標的タンパク質は、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、標的細胞によって発現される標的タンパク質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合することができるノッチンペプチドを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、５０個以下、４５個以下、４０個以下、または３５個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、配列番号９２２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合することができる免疫グロブリンドメインを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、重鎖のみ抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）または新規抗原受容体免疫グロブリンの可変ドメイン（Ｖ－ＮＡＲ）の結合ドメインまたはそれに由来する結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、１５０個以下、１４０個以下、または１３０個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、配列番号９２３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、標的タンパク質を発現する標的細胞に感染することができる。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、ネクチン－１発現を有しない細胞に感染することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｖｅｒｏ細胞である。
【0024】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、変異を含むＤＰＣＳをコードするＵＬ３０ウイルス遺伝子及び変異を含むＴＫをコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、ヘルペスウイルスのＤＮＡ複製忠実度を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも５倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、配列番号９１７のＬ７７４に対応するアミノ酸位置にある。いくつかの実施形態では、変異は、アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、配列番号９１７のＬ７７４Ｆに対応するアミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳは、ＤＰＣＳの変異を除いて、配列番号９１７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アシクロビルのＩＣ５０は、ヘルペスウイルスに対して０．５ｕｇ／ｍｌ未満、１．０ｕｇ／ｍｌ未満、１．５ｕｇ／ｍｌ未満、または２．０ｕｇ／ｍｌ未満である。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、ヘルペスウイルスに対するアシクロビルのＩＣ５０を少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍減少させる。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、及び／またはＬ１６９に対応する１つ以上のアミノ酸位置にある。いくつかの実施形態では、変異は、アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、
（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ａ、及びＡ１６８Ｆに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｎに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫは、ＴＫの変異を除いて、配列番号９１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ａ、及びＡ１６８Ｆに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｎに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫは、ＴＫの変異を除いて、配列番号９１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【0025】
いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、
（ｉ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードする、
（ｉｉ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードする、
（ｉｖ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードする。
いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされ、第２のｇＢは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＢは、内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＫは、内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされ、第２のｇＫは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＫは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＫは、内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＨは、内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされ、第２のｇＨは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＨは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＨは、内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０は、内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされ、第２のＵＬ２０は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０は、外因性発現カセットによってコードされ、第２のＵＬ２０は、内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４は、内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされ、第２のＵＬ２４は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４は、外因性発現カセットによってコードされ、第２のＵＬ２４は、内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされる。
（ｉ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードする、
（ｉｉ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードする、
（ｉｖ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードする。
いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされ、第２のｇＢは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＢは、内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＫは、内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされ、第２のｇＫは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＫは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＫは、内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＨは、内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされ、第２のｇＨは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＨは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＨは、内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０は、内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされ、第２のＵＬ２０は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０は、外因性発現カセットによってコードされ、第２のＵＬ２０は、内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４は、内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされ、第２のＵＬ２４は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４は、外因性発現カセットによってコードされ、第２のＵＬ２４は、内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされる。
【0026】
いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＢをコードするが、第２のｇＢをコードしない。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＫをコードするが、第２のｇＫをコードしない。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＨをコードするが、第２のｇＨをコードしない。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２０をコードするが、第２のＵＬ２０をコードしない。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２４をコードするが、第２のＵＬ２４をコードしない。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＢ及び第１のｇＫをコードし、任意選択で、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが第１のｇＨ及び第１のＵＬ２４を更にコードする。
【0027】
いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間領域に位置する。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置する。
【0028】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、がん細胞において合胞体表現型を呈する。
【0029】
一態様では、本開示は、本開示の組換えヘルペスウイルスをコードする組換え核酸を含む細胞を提供する。
【0030】
一態様では、本開示は、組換えヘルペスウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、
（ｉ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードし、第２の核酸が、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードし、第２の核酸が、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードする、
（ｉｉ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードし、第２の核酸が、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードし、第２の核酸が、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードし、第２の核酸が、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードし、第２の核酸が、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードする、
（ｉｖ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードし、第２の核酸が、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードし、第２の核酸が、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードし、第２の核酸が、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードし、第２の核酸が、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードする、細胞を提供する。
いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードし、第２の核酸は、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードし、第２の核酸は、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードし、第２の核酸は、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードし、第２の核酸は、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードし、第２の核酸は、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードし、第２の核酸は、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードし、第２の核酸は、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードし、第２の核酸は、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードし、第２の核酸は、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードし、第２の核酸は、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードする。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＨコードウイルス遺伝子の単一コピー、ＵＬ２０ウイルス遺伝子の単一コピー、及び／またはＵＬ２４ウイルス遺伝子の単一コピーを含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、単一のポリヌクレオチド分子内に含まれる。いくつかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、２つの異なるポリヌクレオチド分子内に含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｖｅｒｏ細胞である。
（ｉ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードし、第２の核酸が、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードし、第２の核酸が、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードする、
（ｉｉ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードし、第２の核酸が、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードし、第２の核酸が、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードし、第２の核酸が、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードし、第２の核酸が、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードする、
（ｉｖ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードし、第２の核酸が、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードし、第２の核酸が、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードし、第２の核酸が、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードするか、またはヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードし、第２の核酸が、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードする、細胞を提供する。
いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードし、第２の核酸は、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢをコードし、第２の核酸は、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードし、第２の核酸は、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫをコードし、第２の核酸は、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードし、第２の核酸は、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨをコードし、第２の核酸は、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨをコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードし、第２の核酸は、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０をコードし、第２の核酸は、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０をコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードし、第２の核酸は、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードする。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４をコードし、第２の核酸は、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４をコードする。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＨコードウイルス遺伝子の単一コピー、ＵＬ２０ウイルス遺伝子の単一コピー、及び／またはＵＬ２４ウイルス遺伝子の単一コピーを含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、単一のポリヌクレオチド分子内に含まれる。いくつかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、２つの異なるポリヌクレオチド分子内に含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｖｅｒｏ細胞である。
【0031】
いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６、Ｒ８００、Ｔ８１３、Ｌ８１７、Ｓ８５４、Ａ８５５、Ｒ８５８、もしくはＡ８７４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間への挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、Ｃ末端に対するＴ８７７の欠失、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６Ｃ、Ｒ８００Ｗ、Ｔ８１３Ｉ、Ｌ８１７Ｈ、Ｌ８１７Ｐ、Ｓ８５４Ｆ、Ａ８５５Ｖ、Ｒ８５８Ｃ、Ｒ８５８Ｈ、Ａ８７４Ｐに対応する１つ以上の変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間へのＶＮもしくはＶＮＶＮの挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、またはＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９に従うＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む。いくつかの実施形態では、第１のｇＢ及び／または第２のｇＢは、配列番号９１９のＤ２８５Ｎ及び／またはＡ５４９Ｔに対応する変異を含む。
【0032】
いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＰ３３、Ａ４０、Ｌ８６、Ｄ９９、Ａ１１１、Ｌ１１８、Ｔ１２１、Ｃ２４３、Ｌ３０４、Ｉ３０７、またはＲ３１０に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＰ３３Ｓ、Ａ４０Ｖ、Ａ４０Ｔ、Ｌ８６Ｐ、Ｄ９９Ｎ、Ａ１１１Ｖ、Ｌ１１８Ｑ、Ｔ１２１Ｉ、Ｃ２４３Ｙ、Ｌ３０４Ｐ、Ｉ３０７Ｎ、またはＲ３１０Ｌに対応する１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０に従うＩ３０７Ｎを含む。
【0033】
いくつかの実施形態では、ｇＨ合胞体変異は、配列番号９４３のＮ７５３またはＡ７７８に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＨ合胞体変異は、配列番号９４３のＮ７５３ＫまたはＡ７７８Ｖに対応する１つ以上の変異を含む。
【0034】
いくつかの実施形態では、ＵＬ２０合胞体変異は、配列番号９４４のＹ４９、Ｓ５０、Ｒ５１、Ｒ２０９、Ｔ２１２、Ｒ２１３に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２０合胞体変異は、配列番号９４４のＹ４９Ａ、Ｓ５０Ａ、Ｒ５１Ａ、Ｒ２０９Ａ、Ｔ２１２Ａ、Ｒ２１３Ａに対応する１つ以上の変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む。
【0035】
いくつかの実施形態では、ＵＬ２４合胞体変異は、配列番号９４２のＴ６４、Ｒ６３、またはＶ６４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２４合胞体変異は、配列番号９４２のＴ６４Ｇ、Ｒ６３Ｖ、またはＶ６４Ｓに対応する１つ以上の変異を含む。
【0036】
いくつかの実施形態では、第１のｇＢをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第２のｇＢをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第１のｇＫをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第２のｇＫをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。
【0037】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスの収量は、第２のｇＢ、第２のｇＫ、第２のｇＨ、第２のＵＬ２０、または第２のＵＬ２４をコードしない対照ヘルペスウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【0038】
いくつかの実施形態では、第１のｇＢをコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第１のｇＫをコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第１のｇＨをコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０をコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４をコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。
【0039】
いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも２つを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、４ｂｐスペーサーによって分離されたｍｉＲＮＡの各々の標的配列の少なくとも３つのコピーまたは少なくとも４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、遺伝子の３’ＵＴＲに位置する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡの標的配列は、ｍｉＲＮＡの逆相補配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号９３０のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスの収量は、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照ヘルペスウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【0040】
一態様では、本開示は、組換えヘルペスウイルスであって、本開示の細胞を培養することと、細胞の培養物から本組換えヘルペスウイルスを回収することとによって産生される、組換えヘルペスウイルスを提供する。
【0041】
一態様では、本開示は、組換えヘルペスウイルスであって、ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、配列番号９２０のＩ３０７Ｎに対応する合胞体変異を含むｇＫをコードする、組換えヘルペスウイルスを提供する。
【0042】
いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、アルファヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、アルファヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）である。
【0043】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、腫瘍溶解性である。
【0044】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、配列番号８５７に従う脳炎ＨＳＶ分離株に由来する。いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、配列番号８５７と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。
【0045】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、順行性輸送に欠陥がある。
【0046】
いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスは、ＵＬ３７ウイルス遺伝子に変異を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ３７ウイルス遺伝子は、配列番号８５６のＱ４０３、Ｅ４５２、Ｑ４５５、Ｑ５１１、及びＲ５１５に対応する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または５つ全てのアミノ酸位置に変異を含むＵＬ３７タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＵＬ３７ウイルス遺伝子の変異は、配列番号８５６に従うＱ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａを含む。
【0047】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、配列番号９１９のＡ５４９Ｔ／Ｄ２８５Ｎに対応する変異を含むｇＢをコードする。
【0048】
いくつかの実施形態では、本組換えヘルペスウイルスは、ＩＣＰ６、ＩＣＰ３４．５、及び／またはＩＣＰ４７の機能を保持する。
【0049】
いくつかの実施形態では、１つ以上の導入遺伝子は、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に挿入される。
【0050】
一態様では、本開示は、ＨＰＧＤ、ＡＤＡ２、ＨＹＡＬ１、ＣＨＰ、ＣＣＬ２１、ＩＬ－１２、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＴＧＦβアンタゴニスト、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のペイロードタンパク質をコードする１つ以上の導入遺伝子を含む、組換えウイルスを提供する。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＨＰＧＤを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＴＸを含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、表４～７に列記されるペイロードタンパク質の組み合わせのうちの１つを含むか、またはそれらからなる。
【0051】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＨＰＧＤを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＡＤＡ２を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＨＹＡＬ１を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＨＰを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＣＬ２１を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＩＬ－１２を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＤ４７アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＴＧＦβアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＰＤ１アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロードタンパク質は、ＣＴＸを含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子は、Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質に特異的に結合するＴ細胞エンゲージャー部分を更に含む。いくつかの実施形態では、 Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質は、ＣＤ３である。
【0052】
一態様では、本開示は、組換えウイルスであって、
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、組換えウイルスを提供する。
いくつかの実施形態では、本組換えウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、組換えウイルスを提供する。
いくつかの実施形態では、本組換えウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0053】
一態様では、本開示は、組換えウイルスであって、本組換えウイルスのウイルスゲノムが、合胞体変異を含むタンパク質及び合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードする、組換えウイルスを提供する。いくつかの実施形態では、合胞体変異を含むタンパク質と合胞体変異を含まない対応タンパク質は、合胞体変異を除いて、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、合胞体変異を含むタンパク質は、内因性ウイルス遺伝子によってコードされ、合胞体変異を含まない対応タンパク質は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、合胞体変異を含むタンパク質は、外因性発現カセットによってコードされ、合胞体変異を含まない対応タンパク質は、内因性ウイルス遺伝子によってコードされる。いくつかの実施形態では、合胞体変異を含むタンパク質及び合胞体変異を含まない対応タンパク質の両方が、１つの外因性発現カセットによってコードされるか、または異なる外因性発現カセットによってコードされる。
【0054】
一態様では、本開示は、本開示の組換えウイルスをコードする組換え核酸を含む細胞を提供する。
【0055】
一態様では、本開示は、組換えウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、本組換えウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含むタンパク質をコードし、第２の核酸が合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードする、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、合胞体変異を含むタンパク質と合胞体変異を含まない対応タンパク質は、合胞体変異を除いて、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を共有する。
【0056】
いくつかの実施形態では、本組換えウイルスの収量は、合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードしない対照ウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【0057】
いくつかの実施形態では、合胞体変異を含むタンパク質をコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐから選択されるｍｉＲＮＡのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全てを含む。いくつかの実施形態では、本組換えウイルスの収量は、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照ウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【0058】
いくつかの実施形態では、本組換えウイルスは、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルス、またはコクサッキーウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、本組換えウイルスは、腫瘍溶解性である。
【0059】
一態様では、本開示は、組換えウイルスであって、本開示の細胞を培養することと、細胞の培養物から本組換えヘルペスウイルスを回収することとによって産生される、組換えウイルスを提供する。
【0060】
一態様では、本開示は、本開示の組換えヘルペスウイルスまたは本開示の組換えウイルスをコードする核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡである。
【0061】
一態様では、本開示は、本開示の組換えヘルペスウイルスまたは本開示の組換えウイルスを含むウイルスストックを提供する。
【0062】
一態様では、本開示は、本開示の核酸分子を含む粒子を提供する。いくつかの実施形態では、粒子は、ナノ粒子、エキソソーム、リポソーム、及びリポプレックスからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、粒子は、脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、真核細胞を粒子と接触させることにより、真核細胞による感染性ウイルス粒子の産生がもたらされる。
【0063】
一態様では、本開示は、
（ｉ）本開示の組換えヘルペスウイルス、本開示の組換えウイルス、本開示の核酸分子、または本開示の粒子と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。
（ｉ）本開示の組換えヘルペスウイルス、本開示の組換えウイルス、本開示の核酸分子、または本開示の粒子と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。
【0064】
一態様では、本開示は、がん性細胞を死滅させる方法であって、がん性細胞を、本開示の組換えヘルペスウイルス、本開示の組換えウイルス、本開示の核酸分子、もしくは本開示の粒子、または本開示の医薬組成物に、ウイルスまたは粒子を当該がん性細胞に感染させ、かつウイルスを当該がん性細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露させることを含み、がん性細胞内でのウイルスの複製により、細胞死がもたらされる、方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、インビトロまたはインビボにある。いくつかの実施形態では、がん性細胞が、非がん性細胞における１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができるｍｉＲＮＡの発現と比較して、ｍｉＲＮＡの発現の低下を有する。いくつかの実施形態では、ウイルスの複製は、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができるｍｉＲの発現の低下を有するがん性細胞内で増加するか、または維持される。いくつかの実施形態では、がん性細胞は、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）の細胞である。いくつかの実施形態では、がん性細胞は、神経膠芽腫細胞である。
【0065】
一態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、本開示の組換えヘルペスウイルス、本開示の組換えウイルス、本開示の核酸分子、もしくは本開示の粒子、または本開示の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ウイルス、粒子、または組成物は、静脈内、皮下、腫瘍内、筋肉内、または鼻腔内投与される。いくつかの実施形態では、ウイルス、粒子、または組成物は、腫瘍内投与される。いくつかの実施形態では、ウイルス、粒子、または組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ウイルス、粒子、または組成物は、１回のみ投与される。いくつかの実施形態では、がんは、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。
【0066】
一態様では、本開示は、本開示の細胞を含む細胞株を提供する。
【0067】
一態様では、本開示は、組換えヘルペスウイルスを産生する方法であって、本開示の細胞または本開示の細胞株を培養することと、細胞の培養物から本組換えヘルペスウイルスを回収することとを含む、方法を提供する。
【0068】
一態様では、本開示は、ヘルペスウイルスの感染部位をイメージングするために小分子と組み合わせた本開示の組換えヘルペスウイルスの使用を提供する。
【0069】
一態様では、本開示は、ヘルペスウイルスの感染部位をインビボでイメージングする方法であって、本開示の組換えヘルペスウイルスと、小分子と、を投与することを含む、方法を提供する。
【0070】
いくつかの実施形態では、小分子は、放射性同位体標識アシクロビルである。いくつかの実施形態では、放射性同位体標識は、フッ素－１８（１８Ｆ）標識を含む。
【図面の簡単な説明】
【0071】
【図1】本開示のＨＳＶ骨格ベクターの非限定的な例の構成を示す概略図である。ＣＡＧ：ＣＡＧプロモーター、ｒＢＧ：ウサギベータグロビンポリアデニル化シグナル、ＢＦＰ：青色蛍光タンパク質、ＤＴＡ：ジフテリア毒素サブユニットＡ。
【0072】
【図2A】正常脳細胞及び神経膠芽腫細胞における各々の指示したｍｉＲＮＡの発現レベルを示すプロットである。
【図2B】上衣細胞における各々の指示したｍｉＲＮＡの発現レベルを示すプロットである。
【図2C】（ａ）左上：神経細胞におけるｍｉＲ－１２４－３ｐ ｍｉＲＮＡ発現レベル、（ｂ）右上：乏突起膠細胞におけるｍｉＲ－１２４－３ｐ ｍｉＲＮＡ発現レベル、（ｃ）左下：上衣細胞の位置を示すＣｃｄｃ１５３発現レベル、（ｄ）右下：上衣細胞におけるｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ ｍｉＲＮＡ発現レベル。
【0073】
【図3A】様々なウイルス遺伝子におけるｍｉＲ－ＴＳカセットの例示的な設計、ならびに各々の対応するｍｉＲＮＡが高度に発現されるＣＮＳ細胞型を示す。
【図3B】指示したｍｉＲＮＡ模倣物の存在下でのＨＳＶベクター１ｍＬ当たりのプラーク形成単位（ｐｆｕ）の数を示すプロットである。
【図3C】様々なウイルス遺伝子におけるｍｉＲ－ＴＳカセットの別の例示的な設計、ならびに各々の対応するｍｉＲＮＡが高度に発現されるＣＮＳ細胞型を示す。ｍｉＲ－Ｔカセットは各々、三連で組み立てられた４つのｍｉＲ標的配列を組み込んでおり、最大活性のためにＲＮＡ二次構造を最小化するアルゴリズムを使用して設計されている。
【0074】
【図4A】ｙ軸上のＰＦＵによって測定した、経時的なＶｅｒｏ細胞における指示したＨＳＶベクターの増殖を示すプロットである。
【図4B】ｙ軸上のＰＦＵによって測定した、経時的なＶｅｒｏ細胞における指示したＨＳＶベクターの増殖を示すプロットである。
【0075】
【図5A】指示したＨＳＶベクターの頭蓋内注射（１日目）後のマウスの全生存率（％）を示すプロットである。
【図5B】指示したＨＳＶベクターの頭蓋内注射（１日目）後のマウスの体重変化（％）を示すプロットである。
【0076】
【図6A】各々のｍｉＲＮＡ標的配列の保護細胞型を示す。
【図6B】指示したＨＳＶ遺伝子のために設計されたｍｉＲ－ＴＳカセットを示す。
【図6C】指示したカセット内のｍｉＲ標的配列の構成を示す。
【図6D】様々なｍｉＲＮＡ模倣物の存在下での指示したｍｉＲ－ＴＳカセットの調節制御下のルシフェラーゼの相対発現レベルを示す。
【0077】
【図7A】指示したｍｉＲＮＡ模倣物の存在下でのＡ４３１細胞におけるＯＮＣＲ－２１６９のウイルス収量を示す。
【図7B】Ｖｅｒｏ細胞における指示したＨＳＶウイルスの非減弱型増殖を示す。
【図7C】指示したＨＳＶウイルスを注射した雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの体重変化を示す。
【0078】
【図8】指示したＨＳＶウイルス構築物の設計を示す概略図である。ＫＰＩ：インテグリンに結合するノッチンペプチド、ＶＥ：ＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合するＶＨＨナノボディ。ＵＬ２３ ＳＲ３９：Ｌ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍ組み合わせ変異を含むチミジンキナーゼをコードするＵＬ２３。ｇＢ Ｎ／Ｔ：Ｄ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ二重変異を含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするＵＬ２７。ＵＬ３０ ＨｉＦｉ：Ｌ７７４Ｆ変異を含むＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニットをコードするＵＬ３０。ＵＬ３７ Ｒ２：「Ｒ２」組み合わせ変異（Ｑ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ）を含むテグメントタンパク質をコードするＵＬ３７。ＨＳＶ構築物は、両方のＩＣＰ４遺伝子座にｍｉＲ－Ｔ ３０６０カセット（配列番号８５８）、ＩＣＰ８遺伝子座にｍｉＲ－Ｔ ９９１９カセット（配列番号８５９）、ＩＣＰ２７遺伝子座にｍｉＲ－Ｔ ３０１２カセット（配列番号８７３）、ＵＬ８遺伝子座にｍｉＲ－Ｔ ３０９６カセット（配列番号８７４）、ならびにＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域にｍＣｈｅｒｒｙ－Ｆｌｕｃ発現カセットを更に含む。
【0079】
【0080】
【図10】様々な神経膠芽腫細胞株における指示したウイルスを用いた増殖アッセイの結果を示す。
【0081】
【図11】代表的なＧＢＭコアの免疫組織化学結果を示す。
【0082】
【図12】ＯＮＣＲ－１０１２ウイルス構築物の概略図である。
【0083】
【図13】指示したウイルスを培養したときの複数の継代にわたる配列バリアントの数を示す図である。
【0084】
【0085】
【図15A】指示したウイルスに対するアシクロビルの異なる濃度での相対プラーク力価を示す図である。
【図15B】指示したウイルスに対するアシクロビルの異なる濃度での残りのプラークのパーセンテージを示す図である。
【0086】
【図16】指示したウイルスに対するアシクロビルの異なる濃度での残りのプラークのパーセンテージ、ならびに計算したＩＣ５０値を示す図である。
【0087】
【0088】
【図18A】内因性遺伝子座由来の野生型ｇＫと、ｃＤＮＡカセット由来の合胞体ｇＫ変異体との共発現を示す概略図である。
【図18B】内因性遺伝子座由来の合胞体ｇＢ変異体と、ｃＤＮＡカセット由来の非合胞体ｇＢとの共発現を示す概略図である。
【図18C】ＯＮＣＲ－１４２ウイルス構築物を示す概略図である。
【図18D】指示したＨＳＶ構築物のウイルス収量及び合胞体表現型を示す表である。
【0089】
【図19A】Ｖｅｒｏ細胞における遺伝子発現を減弱させるためのｍｉＲ－Ｔ２３１０カセットを示す概略図である。
【図19B】ｃＤＮＡカセットにおける合胞体ｇＫ変異体のｍｉＲ－Ｔ２３１０媒介発現制御の設計を示す概略図である。
【図19C】内因性遺伝子座における合胞体ｇＢ変異体のｍｉＲ－Ｔ２３１０媒介発現制御の設計を示す概略図である。
【図19D】それぞれ、ＵＬ３－ＵＬ４またはＵＬ５０－ＵＬ５１のいずれかの遺伝子間遺伝子座における内因性ｇＢ及びｇＫ遺伝子座ならびにｃＤＮＡ発現カセットの相対位置を含む、ＯＮＣＲ－２１１２及びＯＮＣＲ－２００８ウイルス構築物を示す概略図を含む。
【図19E】指示したＨＳＶ構築物のウイルス収量及び合胞体表現型を示す表である。
【0090】
【図20】ＯＲＦ内の指示したＧ／Ｃ含有量を有するｍＩＬ１２または抗ＰＤ１ペイロードをコードする導入遺伝子のタンパク質発現レベルを示す図表である。導入遺伝子（複数可）を腫瘍溶解性ＨＳＶ（ＯＮＣＲ－ＧＢＭ）の骨格に挿入した。
【0091】
【図21A】スクリーニング実験におけるペイロード（複数可）を発現するために使用したＨＳＶ骨格を示す概略図である。ｌｏｘＰ－ＢＡＣレプリコンは、ＵＬ３７－ＵＬ３８遺伝子間領域に位置し、ペイロード（複数可）用のｃＤＮＡ発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間領域に位置する。ＩＣＰ２７遺伝子座は、ｍｉＲ－１２８、ｍｉＲ－１２９ａ、及びｍｉＲ－１２２のｍｉＲＮＡ標的配列を含み、ＩＣＰ４遺伝子座は、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１、及びｍｉＲ－１４３のｍｉＲＮＡ標的配列を含み、ＩＣＰ３４．５遺伝子座は、ｍｉＲ－１２８＊、ｍｉＲ－２０４、及びｍｉＲ－２１９の標的配列を含む。ウイルス骨格は、ｇＢにおけるＤ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ変異、ｇＣに挿入されたｅＧＦＲ、及び変異体ＵＳ１２を更に含む。
【図21B】指示した各ＨＳＶのペイロード分子（複数可）を示す表である。ｃＤＮＡペイロードは、ハイブリッドＣＡＧプロモーター及びウサギｂ－グロビンポリアデニル化シグナルを利用して導入遺伝子発現を制御する、ＯＮＣＲ－１４２のＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に挿入したカセットから発現される。
【0092】
【図22A】同所性ＣＴ２Ａ細胞株モデルにおける指示したＨＳＶベクターの腫瘍内注射後のマウスの経時的な全生存率（％）を示すプロットである。
【図22B】同所性ｍネクチン１発現ＧＬ２６１細胞株モデルにおける指示したＨＳＶベクターの腫瘍内注射後のマウスの経時的な全生存率（％）を示すプロットである。
【図22C】ＧＬ２６１モデルを使用した再負荷研究を示すプロットである。
【図22D】ＣＴ２Ａモデルにおける様々な免疫細胞のパーセンテージを示すプロットである。
【図22E】指示した腫瘍溶解性ウイルスの投与後の免疫細胞数を示すプロットを含む。
【0093】
【図23】全生存率（％）によって測定した、同所性ｍネクチン１発現ＧＬ２６１細胞株モデルにおけるＩＬ１２及び抗ＰＤ１抗体ペイロードをコードするＯＮＣＲ－ＧＢＭベクターの用量反応効果を示すプロットである。
【0094】
【図24A】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24B】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24C】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24D】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24E】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24F】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24G】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24H】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24I】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【図24J】様々なペイロード分子をコードする指示したＨＳＶ組み合わせを投与したＧＬ２６１モデルマウスの生存プロットを示す。
【0095】
【図25A】ｇＤにインテグリン標的化ノッチンペプチドを含むＯＮＣＲ－２１８３のＨＳＶ構築物設計を示す概略図である。
【図25B】ペイロード組み合わせを発現するための発現カセットの概略図を示す。ｒＢＧ ｐＡ：ウサギベータグロビン遺伝子ポリアデニル化シグナル、ＣＡＧ：ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶ：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＵＢＣ ｐＡ：ヒトユビキチンＣ遺伝子ポリアデニル化シグナル、ＣＯＸＩＶ ｐＡ：ヒトシトクロムオキシダーゼＩＶ遺伝子ポリアデニル化シグナル、ＧＡＰＤＨ：ヒトグリセルアルデヒド－３－リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、ＥＦ１ａ：ＥＦ－１αプロモーター、ＥＩＦ４Ａ１ ｐＡ：真核生物開始因子４Ａ－ＩポリＡ。
【図25C】指示したＨＳＶを投与したＧＬ２６１またはＣＴ２Ａモデルにおけるマウスの全生存プロットを示す。
【0096】
【図26A】ｇＤにＥＧＦＲ標的化ＶＨＨを含むＯＮＣＲ－２２０４のＨＳＶ構築物設計を示す概略図である。
【発明を実施するための形態】
【0097】
詳細な説明
本開示は、がん細胞に対する改善された特異性／有効性ならびにより低いオフターゲット感染及び毒性を含む、先行技術のものと比較して優れた特性を呈する組換えウイルスベクターを提供する。ウイルスベクターの組換え操作には、
－ ウイルスベクター複製をがん細胞に制限するマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットの挿入、
－ ペイロード分子（例えば、抗腫瘍免疫応答を調節するもの）のうちの１つ以上をコードする導入遺伝子の挿入、
－ タンパク質発現レベルを増加させるための遺伝子のコドン最適化、
－ 特定のタンパク質（複数可）を発現するがん細胞のウイルス感染を可能にする再標的化ドメインの挿入、
－ ウイルス融合性を増加させる合胞体変異の導入、及び／または
－ 複製忠実度及び／またはアシクロビルに対する感受性を改善する変異の導入が含まれる。
本開示は、がん細胞に対する改善された特異性／有効性ならびにより低いオフターゲット感染及び毒性を含む、先行技術のものと比較して優れた特性を呈する組換えウイルスベクターを提供する。ウイルスベクターの組換え操作には、
－ ウイルスベクター複製をがん細胞に制限するマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットの挿入、
－ ペイロード分子（例えば、抗腫瘍免疫応答を調節するもの）のうちの１つ以上をコードする導入遺伝子の挿入、
－ タンパク質発現レベルを増加させるための遺伝子のコドン最適化、
－ 特定のタンパク質（複数可）を発現するがん細胞のウイルス感染を可能にする再標的化ドメインの挿入、
－ ウイルス融合性を増加させる合胞体変異の導入、及び／または
－ 複製忠実度及び／またはアシクロビルに対する感受性を改善する変異の導入が含まれる。
【0098】
ウイルスベクターの組成物、ならびにがん細胞の死滅及びがん治療における使用方法が、本明細書に更に提供される。
【0099】
腫瘍溶解性ウイルスの使用は、健常細胞が非特異的にウイルス感染するリスクを伴い、非がん性細胞及び組織の死をもたらす。しかしながら、ウイルスを遺伝子操作して、正常組織とがん組織との間で差別的に発現される経路、タンパク質、遺伝子、及び／またはｍｉＲＮＡを利用することにより、腫瘍溶解性ウイルスの特異性を向上させることができる。かかる遺伝子操作の非限定的な例としては、ｍｉＲＮＡ標的配列（複数可）の挿入及び再標的化ドメインが挙げられる。
【0100】
ウイルスベクターの安全性プロファイルも、ウイルスの複製忠実度及び／またはアシクロビルなどの抗ウイルス薬に対する感受性を改善するための追加の遺伝子操作によって改善することができる。
【0101】
本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞に対する宿主免疫応答を刺激するタンパク質を発現して、腫瘍の免疫抑制性微小環境を修飾し、及び／または腫瘍全体にわたるウイルス拡散を促進し、それにより、それらの治療有効性を向上させることもできる。加えて、導入遺伝子は、タンパク質の発現レベルを増加させる（例えば、Ｇ／Ｃ含有量を上昇させる）ためにコドン最適化され得る。
【0102】
したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、単回注射（例えば、腫瘍内注射）後にインビボでがん（例えば、神経膠芽腫）に対する生産的かつ持続的な抗腫瘍免疫応答を刺激することができる組換えウイルスベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本組換えウイルスベクターは、神経膠芽腫細胞の効率的な腫瘍溶解のために操作される。
【0103】
いくつかの実施形態では、本組換えウイルスベクターは、組換えＨＳＶベクターである。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶベクターは、ＣＮＳで複製する能力が証明されたＨＳＶ分離株に由来する。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、神経細胞における順行性輸送及び逆行性輸送に欠陥がある。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＩＣＰ４７、ＩＣＰ３４．５、及び／またはＩＣＰ６遺伝子機能を保持する。
【0104】
【0105】
本明細書で使用される節の見出しは、単に編成目的のためであり、記載の主題を限定するものとして解釈されるべきではない。特許、特許出願、論文、書籍、及び論説を含むが、これらに限定されない、本明細書で引用される全ての文書または文書の一部は、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に明確に組み込まれる。組み込まれる文書または文書の一部のうちの１つ以上が本出願における用語の定義と矛盾する用語を定義する場合、本出願に記載の定義が優先される。しかしながら、本明細書で引用されるいずれの参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願の言及も、それらが有効な先行技術を構成するか、または世界中のあらゆる国における共通の一般知識の一部を形成するという認識でも、いかなる形態の示唆でもなく、そのように解釈されるべきではない。
【0106】
定義
本明細書において、いずれの濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲も、別段の指示がない限り、列挙される範囲内のあらゆる整数の値を含み、かつ適切な場合にはその分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）も含むと理解されるべきである。本明細書で使用される「ａ」及び「ａｎ」という用語は、別段の指示がない限り、列挙される構成成分のうちの「１つ以上」を指すことを理解されたい。代替物（例えば、「または」）の使用は、代替物の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されたい。本明細書で使用される場合、「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」という用語は、同義に使用される。本明細書で使用される場合、「複数」とは、１つ以上の構成要素（例えば、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列）を指し得る。
本明細書において、いずれの濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲も、別段の指示がない限り、列挙される範囲内のあらゆる整数の値を含み、かつ適切な場合にはその分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）も含むと理解されるべきである。本明細書で使用される「ａ」及び「ａｎ」という用語は、別段の指示がない限り、列挙される構成成分のうちの「１つ以上」を指すことを理解されたい。代替物（例えば、「または」）の使用は、代替物の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されたい。本明細書で使用される場合、「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」という用語は、同義に使用される。本明細書で使用される場合、「複数」とは、１つ以上の構成要素（例えば、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列）を指し得る。
【0107】
本出願で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、等価物として使用される。本出願で使用されるいずれの数詞も、約／およその有無にかかわらず、関連技術分野の当業者によって理解される任意の通常の変動を包含するよう意図されている。ある特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り（かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、記載の参照値のいずれかの方向の（より大きいまたはより小さい）１０％以内にある値の範囲を指す。
【0108】
「減少する」または「低減する」とは、参照値と比較して、少なくとも５％、例えば、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％の特定の値の減少または低減を指す。特定の値の減少または低減は、参照値と比較したその値の倍数変化、例えば、参照値と比較して少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、１０００倍以上の減少として表すこともできる。
【0109】
「増加する」とは、参照値と比較した特定の値の少なくとも５％、例えば５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、１００、２００、３００、４００、５００％、またはそれ以上の増加を指す。特定の値の増加は、参照値と比較したその値の倍数変化、例えば、参照値のレベルと比較して少なくとも１倍、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、１０００倍以上の増加として表すこともできる。
【0110】
「配列同一性」という用語は、同じであり、かつ同じ相対位置にある２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の塩基またはアミノ酸のパーセンテージを指す。したがって、あるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列と比較して、ある特定のパーセンテージの配列同一性を有する。配列比較の場合、典型的には、１つの配列が参照配列として機能し、試験配列が参照配列と比較される。「参照配列」という用語は、試験配列が比較される分子を指す。
【0111】
「相補的」とは、天然に存在するまたは天然に存在しない（例えば、上記のように修飾された）塩基（ヌクレオシド）またはその類似体を含む２つの配列間の塩基スタッキング及び特異的水素結合による対合の能力を指す。例えば、核酸のある位置の塩基が、標的の対応する位置の塩基と水素結合することができる場合、これらの塩基は、その位置で互いに相補的であるとみなされる。核酸は、普遍的塩基、または水素結合に正にも負にも寄与しない不活性脱塩基スペーサーを含むことができる。塩基対合には、標準のワトソン－クリック塩基対合及び非ワトソン－クリック塩基対合（例えば、ゆらぎ塩基対合及びフーグスティーン塩基対合）の両方が含まれ得る。相補的塩基対合の場合、アデノシン型塩基（Ａ）がチミジン型塩基（Ｔ）またはウラシル型塩基（Ｕ）に相補的であり、シトシン型塩基（Ｃ）がグアノシン型塩基（Ｇ）に相補的であり、３－ニトロピロールまたは５－ニトロインドールなどの普遍的塩基が、任意のＡ、Ｃ、Ｕ、またはＴにハイブリダイズし、それらに相補的であると考えられていることが理解される。Ｎｉｃｈｏｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９４；３６９：４９２－４９３及びＬｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９４；２２：４０３９－４０４３。イノシン（Ｉ）も、当該技術分野において普遍的塩基であると考えられており、いずれのＡ、Ｃ、Ｕ、またはＴにも相補的であると考えられている。Ｗａｔｋｉｎｓ ａｎｄ ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５；３３（１９）：６２５８－６２６７を参照されたい。
【0112】
「作動可能に連結された」とは、そのように記載された構成要素が、それらの意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。例えば、プロモーターがポリヌクレオチド配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロモーターはポリヌクレオチド配列に作動可能に連結されている。
【0113】
「対象」という用語は、例えば、哺乳動物などの動物を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、霊長類である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施例では、対象は、畜牛、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ブタなどの畜産動物、またはイヌ及びネコなどの飼い慣らされた動物である。いくつかの実施形態では（例えば、特に研究の文脈で）、対象は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター）、ウサギ、霊長類、または近交系ブタのようなブタなどである。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【0114】
「有効量」という用語は、特定の生理学的効果をもたらすのに必要な薬剤または組成物の量（例えば、特定の生理学的効果を増加させる、活性化する、及び／または増強するのに必要な量）を指す。特定の薬剤の有効量は、質量／体積、細胞数／体積、粒子／体積、（薬剤の質量）／（対象の質量）、細胞数／（対象の質量）、または粒子／（対象の質量）などの薬剤の性質に基づいて、様々な方法で表され得る。特定の薬剤の有効量は、参照レベルと最大応答レベルとの間の中間にある特定の生理学的応答の大きさをもたらす薬剤の濃度を指す半最大有効濃度（ＥＣ５０）として表され得る。
【0115】
「薬学的に許容される」という語句は、本明細書では、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、ヒト及び動物の組織と接触させる際に使用するのに好適であり、妥当なベネフィット／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すように用いられる。
【0116】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤」には、ヒト及び／または飼い慣らされた動物における使用に許容されるものとして米国食品医薬品局によって承認されている、任意のアジュバント、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、風味向上剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、界面活性剤、及び／または乳化剤が含まれるが、これらに限定されない。
【0117】
本明細書で使用される場合、「腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、がん細胞に優先的に感染するように修飾されているか、またはがん細胞に自然に優先的に感染するウイルスを指す。
【0118】
「マイクロＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」、及び「ｍｉＲ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、分解または翻訳抑制のためにそれらの標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を指示することによって遺伝子発現を調節する、主に約２１～２５ヌクレオチド長の小さい非コード内因性ＲＮＡを指す。
【0119】
本明細書で使用される「必須ウイルス遺伝子」とは、ウイルス複製、ウイルスパッケージング、またはウイルス感染性などの１つ以上の必須ウイルス機能に必要なウイルス遺伝子を指す。
【0120】
「ベクター」という用語は、別の核酸分子を輸送または運搬することができる核酸分子を指すために本明細書で使用される。輸送された核酸は、一般に、ベクター核酸分子に連結される、例えば、挿入される。ベクターは、細胞内で自律複製を指示する配列を含み得るか、または宿主細胞ＤＮＡへの組み込みを可能にするのに十分な配列を含み得る。
【0121】
分子生化学及び細胞生化学における一般的方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ＨａＲＢｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ ２００１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄ．（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ １９９９）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｂｏｌｌａｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ １９９６）、Ｎｏｎｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９９）、Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ（Ｋａｐｌｉｆｔ ＆ Ｌｏｅｗｙ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９５）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ（Ｉ．Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９７）、及びＣｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄｏｙｌｅ ＆ Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ １９９８）などの標準の教本で見つけることができ、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0122】
腫瘍溶解性ウイルス
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルス、またはコクサッキーウイルスを含むが、これらに限定されない、腫瘍溶解性ウイルスの例は、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ＨＳＶである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、組換えウイルスベクターまたは腫瘍溶解性ベクターと称される。
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルス、またはコクサッキーウイルスを含むが、これらに限定されない、腫瘍溶解性ウイルスの例は、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ＨＳＶである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、組換えウイルスベクターまたは腫瘍溶解性ベクターと称される。
【0123】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２））、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルス、またはコクサッキーウイルスである。特定の実施形態では、本組換えウイルスベクターは、参照により全体が組み込まれる国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０６６０４２号に記載の腫瘍選択的ベクターを複製することができるＨＳＶである。
【0124】
ＨＳＶベースのベクター及びそれらを構築するための方法は、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，０７８，０２９号、同第６，２６１，５５２号、同第５，９９８，１７４号、同第５，８７９，９３４号、同第５，８４９，５７２号、同第５，８４９，５７１号、同第５，８３７，５３２号、同第５，８０４，４１３号、及び同第５，６５８，７２４号、ならびに国際特許出願第ＷＯ９１／０２７８８号、同第ＷＯ９６／０４３９４号、同第ＷＯ９８／１５６３７号、及び同第ＷＯ９９／０６５８３号に記載されている。ＨＳＶの配列が公開されており（ＮＣＢＩ受入番号ＮＣ＿００１８０６、ＭｃＧｏｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ，６９（ＰＴ ７），１５３１－１５７４（１９８８）も参照されたい）、これは、本開示のＨＳＶベースのベクターの設計を容易にし得る。いくつかの事例では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、ＩＣＰ４７遺伝子のプロモーターとともに、二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、及びＩＣＰ４の各々１つのコピーを含む内部反復（接合）領域の欠失を含む。いくつかの事例では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＣＰ４７遺伝子のプロモーターとともに、二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、及びＩＣＰ４の各々１つのコピーを含む内部反復（接合）領域を保持する単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である。
【0125】
ある特定の実施形態では、本開示の組換えウイルスベクターは、直接感染及び／または側方拡散のいずれかによる細胞への侵入の増強を呈するＨＳＶである。一態様では、本開示のＨＳＶベクターは、ＨＳＶ感染の典型的なメディエーター以外（例えば、ネクチン－１、ＨＶＥＭ、またはヘパラン硫酸／コンドロイチン硫酸プロテオグリカン以外）の細胞タンパク質との相互作用により細胞に直接感染することができる。ある特定の実施形態では、本開示の組換えウイルスベクターは、ＨＳＶであり、非標準の受容体を介したベクター侵入を容易にするｇＢまたはｇＨ遺伝子の変異を更に含む。別の態様では、本開示は、ｇＤ受容体を欠く細胞などのＨＳＶ側方拡散に典型的に耐性を示す細胞において側方拡散を呈する変異ｇＨ糖タンパク質を更に含むＨＳＶベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本開示のＨＳＶベクターは、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１３／００９６１８６号に記載の変異ｇＢまたはｇＨタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の態様では、ＨＳＶベクター中の変異侵入タンパク質は、ｇＢ、ｇＨなどのウイルス侵入に関与する糖タンパク質であり、変異ＨＳＶベクターは、両方の変異バージョンを含むことができる。しかしながら、変異侵入タンパク質は、ＨＳＶベクターの細胞への侵入に影響を及ぼすあらゆるタンパク質とすることができる。ある特定の実施形態では、変異侵入タンパク質はｇＤ以外であるが、ＨＳＶベクターは、変異ｇＤ、例えば、リガンドまたは他の所望の変異を含むものを追加で含むことができる。本発明のＨＳＶベクターにおける使用のためのｇＢまたはｇＨ糖タンパク質の非限定的な変異は、以下の残基、ｇＢ：Ｄ２８５、ｇＢ：Ａ５４９、ｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３、及びｇＨ：Ａ７７８のうちの１つ以上に生じる。いくつかの実施形態では、本発明のＨＳＶベクターは、ｇＢ：Ｄ２８５及びｇＢ：Ａ５４９の両方、ｇＨ：Ｎ７５３及びｇＨ：Ａ７７８の両方、及び／またはｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３、及びｇＨ：Ａ７７８の各々に変異を含む。ある特定の実施形態では、ＨＳＶベクターは、かかる変異のうちの２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上）を含み、ＨＳＶベクターは、これらの残基のうちの５つ全てに変異を含むことができる。一実施形態では、ＨＳＶベクターは、ｇＢ：２８５、ｇＢ；５４９、ｇＨ：７５３、及びｇＨ：７７８に変異を有する。これらの変異は、本明細書において、ＨＳＶ－１株ＫＯＳ誘導体Ｋ２６ＧＦＰのｇＤ、ｇＢ、及びｇＨ遺伝子のコドン（アミノ酸）番号付けに関連して参照される。Ｋ２６ＧＦＰのｇＢ及びｇＨの配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（＃ＡＦ３１１７４０（参照により本明細書に組み込まれる））に開示されるｇＢ及び以下の表１に示されるｇＨ（ＧｅｎＢａｎｋ＃Ｘ０３８９６（参照により本明細書に組み込まれる））の配列とは異なる。
【表1】
【0126】
しかしながら、Ｋ２６ＧＦＰは、ＧｅｎＢａｎｋ Ｘ０３８９６のヌクレオチド２，０７９～２，１０２に対応する遺伝子領域に追加の差異を含み得る。したがって、ＫＯＳ誘導体Ｋ２６ＧＦＰまたはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ３１１７４０のいずれかの配列が、本明細書で論じられるｇＢ変異の参照配列として機能することができることが理解される。また、ＫＯＳ誘導体Ｋ２６ＧＦＰまたはＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｘ０３８９６のいずれかの配列は、本明細書で論じられるｇＨ変異の参照配列として機能することができる。しかしながら、本開示のＨＳＶベクターは、いずれのＨＳＶ株のｇＢ及びｇＨにも相同変異を含み得る。
【0127】
いくつかの態様では、ＨＳＶベクターに含めるための侵入タンパク質の変異は、置換変異であるが、変異は、置換変異に限定されない。ある特定の実施形態では、ＨＳＶベクターに使用するための変異ｇＢまたはｇＨ糖タンパク質は、ｇＢ：Ｄ２８５Ｎ、ｇＢ：Ａ５４９Ｔ、ｇＢ：Ｓ６６８Ｎ、ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ、ｇＨ：Ａ７７８Ｖからなる置換変異の群から選択される。ある特定の態様では、ＨＳＶベクターは、これらの置換（かかる置換のうちの２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、または全て））の組み合わせを含み、ｇＢ：Ｄ２８５Ｎ／ｇＢ：Ａ５４９Ｔ二重変異体、ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ／ｇＨ：Ａ７７８Ｖ二重変異体、及びｇＢ：Ｓ６６８Ｎ／ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ／ｇＨ：Ａ７７８Ｖ三重変異体が、実施形態の例である。一実施形態では、ＨＳＶベクターは、ｇＢ：Ｄ２８５Ｎ／ｇＢ：Ａ５４９Ｔ／ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ／ｇＨ：Ａ７７８Ｖを含む。
【0128】
ある特定の態様では、ＨＳＶベクターは、変異ｇＢ及び／または変異ｇＨ糖タンパク質を含み、糖タンパク質の変異は、少なくとも２つの残基における置換変異であり、ベクターがＨＳＶ－１ Ｋ２６ＧＦＰである場合、少なくとも２つの残基は、ｇＢ：Ｄ２８５、ｇＢ：Ａ５４９、ｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３、及びｇＨ：Ａ７７８からなる群から選択されるか、またはベクターが相同ＨＳＶである場合、少なくとも２つの残基は、ｇＢ：Ｄ２８５、ｇＢ：Ａ５４９、ｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３、及びｇＨ：Ａ７７８と相関するアミノ酸から選択され、ここで、ｇＢ：Ｄ２８５残基がＶＹＰＹＸＥＦＶＬ（配列番号８３８）のＸと相関し、ｇＢ：Ａ５４９残基がＫＬＮＰＮＸＩＡＳ（配列番号８３９）のＸと相関し、ｇＢ：Ｓ６６８残基がＩＴＴＶＸＴＦＩＤ（配列番号８４０）のＸと相関し、ｇＨ：Ｎ７５３残基がＶＤＴＤＸＴＱＱＱ（配列番号８４１）のＸと相関し、ｇＨ：Ａ７７８残基がＶＰＳＴＸＬＬＬＦ（配列番号８４２）のＸと相関し、ＨＳＶベクターがＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２ベクターである。
【0129】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ＨＳＶウイルスは、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／１４１３２０号及びＲｉｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌｏｓ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，２０１７，１３（１２），ｅ１００６７４１に記載のものなどの神経細胞のＨＳＶ感染を減少させるＵＬ３７遺伝子の１つ以上の変異を含む。
【0130】
いくつかの実施形態では、本開示のＨＳＶは、デアミダーゼ活性を有するＵＬ３７内部テグメントタンパク質をコードするＵＬ３７ウイルス遺伝子の変異を含む。ＵＬ３７タンパク質の機能には、ウイルス放出中の細胞質二次エンベロープの調節、二次エンベロープが生じる宿主トランスゴルジネットワーク（ＴＧＮ）への輸送のための大型テグメントタンパク質／ＬＴＰを介したカプシドとの相互作用、ウイルスアセンブリ複合体におけるテグメンテーション及びカプシド蓄積の調節、ウイルスｄｓＲＮＡを感知する機能を抑制する宿主ＤＤＸ５８／ＲＩＧ－Ｉの脱アミド化、及び／またはｃＧＡＭＰ合成及び下流先天性免疫活性化を廃止する宿主ｃＧＡＳの脱アミド化が含まれ得る。
【0131】
いくつかの実施形態では、ＵＬ３７ウイルス遺伝子は、配列番号８５６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するＵＬ３７タンパク質をコードする。
【0132】
いくつかの実施形態では、ＵＬ３７ウイルス遺伝子は、配列番号８５６のＱ４０３、Ｅ４５２、Ｑ４５５、Ｑ５１１、及びＲ５１５に対応するアミノ酸位置のうちの１、２、３、４、または５位に変異を含むＵＬ３７タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異は、アラニン置換である。いくつかの実施形態では、ＵＬ３７ウイルス遺伝子は、配列番号８５６のＱ４０３、Ｅ４５２、Ｑ４５５、Ｑ５１１、及びＲ５１５に対応するアミノ酸位置のうちの全てに変異を含むＵＬ３７タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＵＬ３７ウイルス遺伝子は、配列番号８５６に従う変異Ｑ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａを含むＵＬ３７タンパク質をコードする。
【0133】
いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、配列番号８５７（ＨＳＶ株ＭａｃＩｎｔｙｒｅの完全ゲノム配列、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＭＮ１３６５２３．１、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）カタログ番号ＶＲ－３９）に従う脳炎ＨＳＶ分離株に由来する。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、本開示による組換えＨＳＶに明示的に操作される変異（複数可）（置換、挿入、及び／または欠失）を除いて、配列番号８５７と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。
【0134】
いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、順行性輸送に欠陥がある。
【0135】
いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＩＣＰ６、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、またはそれらの任意の組み合わせの機能を保持する。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＩＣＰ６の機能を保持する。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＩＣＰ３４．５の機能を保持する。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＩＣＰ４７の機能を保持する。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＩＣＰ６、ＩＣＰ３４．５、及びＩＣＰ４７遺伝子の機能を保持する。
【0136】
いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＵＬ４０－ＵＬ４１遺伝子間領域に挿入された細菌人工染色体配列を含む。いくつかの実施形態では、本組換えＨＳＶは、ＵＬ３７－ＵＬ３８遺伝子間領域に挿入された細菌人工染色体配列を含む。
【0137】
いくつかの実施形態では、本組換えウイルスは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に挿入された外因性発現カセット（例えば、ペイロード分子発現カセット）を含む。いくつかの実施形態では、本組換えウイルスは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間領域に挿入された外因性発現カセット（例えば、ペイロード分子発現カセット）を含む。いくつかの実施形態では、組換えウイルスは、ＵＬ４０－ＵＬ４１遺伝子間領域に挿入された外因性発現カセット（例えば、ペイロード分子発現カセット）を含む。いくつかの実施形態では、組換えウイルスは、ＵＬ３７－ＵＬ３８遺伝子間領域に挿入された外因性発現カセット（例えば、ペイロード分子発現カセット）を含む。
【0138】
ｍｉＲＮＡ減弱型腫瘍溶解性ウイルス
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）は、分解または翻訳抑制のためにそれらの標的メッセンジャーＲＮＡを指示することによって遺伝子発現を調節する低分子非コード内因性ＲＮＡである。ｍｉＲは、正常な細胞プロセスと密接に関連しており、それ故に、ｍｉＲＮＡの調節解除は、がんを含む幅広い疾患に寄与する。多くのｍｉＲ遺伝子が、がん関連ゲノム領域または脆弱部位に位置しており、ｍｉＲががんに極めて重要な役割を果たすという証拠を更に強化する。ｍｉＲは、正常組織と比較してがん組織に差次的に発現され、腫瘍発生と因果関係がある可能性がある。多様な腫瘍型におけるこの差次的ｍｉＲ発現を利用することにより、本明細書に記載のがん治療薬が広域スペクトル安全性及び有効性プロファイルを有するようになり、ここで、腫瘍溶解性ウイルス複製が特定のｍｉＲまたはｍｉＲ群の発現に基づいて調節される。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）は、分解または翻訳抑制のためにそれらの標的メッセンジャーＲＮＡを指示することによって遺伝子発現を調節する低分子非コード内因性ＲＮＡである。ｍｉＲは、正常な細胞プロセスと密接に関連しており、それ故に、ｍｉＲＮＡの調節解除は、がんを含む幅広い疾患に寄与する。多くのｍｉＲ遺伝子が、がん関連ゲノム領域または脆弱部位に位置しており、ｍｉＲががんに極めて重要な役割を果たすという証拠を更に強化する。ｍｉＲは、正常組織と比較してがん組織に差次的に発現され、腫瘍発生と因果関係がある可能性がある。多様な腫瘍型におけるこの差次的ｍｉＲ発現を利用することにより、本明細書に記載のがん治療薬が広域スペクトル安全性及び有効性プロファイルを有するようになり、ここで、腫瘍溶解性ウイルス複製が特定のｍｉＲまたはｍｉＲ群の発現に基づいて調節される。
【0139】
いくつかの態様では、本開示は、差次的ｍｉＲ発現プロファイルを利用して、ｍｉＲ標的配列をウイルス複製に必要な１つ以上の遺伝子に組み込むことにより、ウイルスベクター複製を腫瘍細胞に効果的に制限する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスベクターは、１つ以上のウイルス遺伝子に組み込まれるｍｉＲ標的配列の２つ、３つ、４つ、またはそれ以上のコピーを含む。
【0140】
特に、本開示は、中枢神経系の複数の細胞型をウイルス溶解から保護するｍｉＲ減弱戦略が、神経膠芽腫の治療における腫瘍溶解性ウイルスの治療有効性を増強することを認識する。これは、神経細胞、上衣細胞、乏突起膠細胞、星状膠細胞、肝細胞、及び／または内皮細胞をウイルス溶解から保護すると同時に、腫瘍細胞におけるウイルス複製及びウイルス溶解を可能にするための戦略によって本開示に例示される。したがって、いくつかの実施形態では、本組換えウイルスベクターは、正常なＣＮＳ細胞（例えば、神経細胞、上衣細胞、乏突起膠細胞、星状膠細胞）におけるウイルス複製を制限するためのｍｉＲ減弱戦略を使用して安全性のために操作される。
【0141】
いくつかの実施形態では、本開示は、腫瘍溶解性ウイルスであって、１つ以上のマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）標的配列の１つ以上のコピーが１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入される、腫瘍溶解性ウイルスを提供する。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルス遺伝子は、ウイルス複製に必要な必須ウイルス遺伝子である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ標的配列の挿入は、中枢神経系（ＣＮＳ）の正常細胞におけるウイルス複製を制限し、それ故に、増強された安全性プロファイルを提供することができる。
【0142】
ｍｉＲは、複数のがん型を含む広範囲の疾患状態において差次的に発現される。重要なことに、ｍｉＲＮＡは、正常組織と比較してがん組織で差次的に発現し、それらを広範囲のがんの標的化メカニズムとして機能することを可能にする。発がん、悪性形質転換、または転移に（正または負のいずれかで）関連するｍｉＲＮＡは、「ｏｎｃｏｍｉＲ」として知られている。
【0143】
いくつかの態様では、特定のｏｎｃｏｍｉＲの発現レベルは、特定のがんの発生または維持と正の関連がある。かかるｍｉＲは、本明細書では「発がん性ｍｉＲ」と称される。いくつかの実施形態では、発がん性ｍｉＲの発現は、がん性細胞もしくは組織において、非がん性対照細胞（すなわち、正常対照もしくは健常対照）で観察される発現レベルと比較して増加するか、または異なるがん型由来のがん性細胞で観察される発現レベルと比較して増加する。いくつかの実施形態では、発がん性ｍｉＲの発現は、非がん性対照細胞または異なるがん型由来のがん性細胞における発がん性ｍｉＲの発現と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％、またはそれ以上増加する。いくつかの態様では、がん性細胞または組織は、非がん性対照細胞または組織で発現されない発がん性ｍｉＲを発現し得る。がん組織で頻繁に過剰発現される発がん性ｍｉＲＮＡの例には、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－１５５、及びｍｉＲ－１７－９２が挙げられるが、これらに限定されない。発がん性ｍｉＲの追加の例が表１３に列記される。
【0144】
いくつかの態様では、特定のｏｎｃｏｍｉＲの発現は、特定のがん及び／または転移の発生または維持と負の関連がある。かかるｏｎｃｏｍｉＲは、それらの発現ががんの発生を予防または抑制するため、本明細書では「腫瘍抑制ｍｉＲ」または「腫瘍抑制性ｍｉＲ」と称される。いくつかの実施形態では、腫瘍抑制ｍｉＲＮＡの発現は、がん性細胞もしくは組織において、非がん性対照細胞（すなわち、正常対象もしくは健常対照）で観察される発現レベルと比較して減少するか、または異なるがん型に由来するがん性細胞で観察される腫瘍抑制ｍｉＲＮＡの発現レベルと比較して減少する。例えば、がん性細胞における腫瘍抑制ｍｉＲＮＡの発現は、非がん性対照細胞または異なるがん種に由来するがん性細胞における腫瘍抑制ｍｉＲＮＡの発現と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％減少し得る。いくつかの態様では、非がん性対照細胞は、がん性細胞で発現されない腫瘍抑制ｍｉＲＮＡを発現し得る。腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡの例としては、ｍｉＲ－１２２、ｍｉＲ－１８４、ｍｉＲ－３４ａ、ｌｅｔ７ａ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１２５ａ、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－２３３－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１２７ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１３４－３ｐ、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－５５９、ｍｉＲ－２１３、ｍｉＲ－３１－５ｐ、ｍｉＲ－２０５ｐ、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１６－１、ｍｉＲ－３４、ならびにｌｅｔ－７ファミリーのｍｉＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍抑制性ｍｉＲの追加の例が表１２及び表１４に列記される。
【0145】
がんの病原は、不均一な多遺伝子性プロセスである。したがって、特定の経路の活性化及び特定の遺伝子の発現は、ある状況ではがん発生をもたらす場合があり、異なる状況では活性化または発現されたときに明確に異なる結果または反対の結果をもたらす場合がある。したがって、特定の遺伝子またはｍｉＲを「がん遺伝子」もしくは「発がん性ｍｉＲ」として、または「腫瘍抑制因子」もしくは「腫瘍抑制性ｍｉＲ」として特徴付けることは、二項区別ではなく、がん型に応じて異なる。例えば、１つのｍｉＲＮＡの発現が特定のがんで増加し、そのがんの発生に関連し得る一方で、同じｍｉＲＮＡの発現が別のがんで減少し、そのがんの発生の予防に関連し得る。しかしながら、いくつかのｍｉＲＮＡは、がん型とは無関係に発がん性ｍｉＲＮＡとして機能し得る。例えば、いくつかのｍｉＲＮＡは、腫瘍抑制遺伝子のｍＲＮＡ転写物を分解の標的とし、それにより、腫瘍抑制タンパク質の発現を低下させる。例えば、ｍｉＲ－１５２ｂは、大多数の血液悪性腫瘍で発がん性ｍｉＲとして機能するが、多くの固形腫瘍では腫瘍抑制性ｍｉＲとして機能する。更に、特定のｍｉＲは、がん性細胞及び非がん性細胞の両方で高度に発現される場合がある。例えば、ｍｉＲ－１５５は、正常細胞で高度に発現され、マクロファージ極性化に重要な役割を果たすが、がん細胞でも高度に発現される。したがって、本明細書に記載のｍｉＲ減弱型、ゲノム編集、微小環境リモデリング腫瘍溶解性ウイルスの開発は、ある細胞集団または組織における別の細胞集団または組織と比較した特定のｍｉＲまたはｍｉＲ群の差次的発現に基づく。当業者であれば、腫瘍抑制性ｍｉＲという用語が、概して、がん性細胞または組織と比較して非がん性細胞または組織で高度に発現されるｍｉＲを指すことを理解し、発がん性ｍｉＲという用語が、概して、非がん性細胞または組織と比較してがん性細胞または組織で高度に発現されるｍｉＲを指すことを理解するであろう。当業者であれば、あるがん型において腫瘍抑制性ｍｉＲと特徴付けられたｍｉＲが、別のがん型において腫瘍抑制性ｍｉＲとして機能する場合も機能しない場合もあることを更に理解し、あるがん種において発がん性ｍｉＲとして特徴付けられたｍｉＲが、別のがん種において発がん性ｍｉＲとして機能する場合も機能しない場合もあることを更に理解するであろう。
【0146】
表１０は、１２個の選択ｏｎｃｏｍｉＲ（９個の腫瘍抑制ｍｉＲＮＡ及び３個の発がん性ｍｉＲＮＡ）と多数のがんとの間の関係を示す。３，４１０のｏｎｃｏｍｉＲ－がん関係のリストが表１１に示される。ｍｉＲＮＡは、細胞増殖及びアポトーシスの制御に関与するタンパク質の多くの転写物を調節する。調節されるタンパク質には、従来のがん原タンパク質、ならびにＲａｓ、Ｍｙｃ、Ｂｃｌ２、ＰＴＥＮ、及びｐ５３などの腫瘍抑制因子が含まれる。したがって、ｍｉＲＮＡの異常発現は、多くの場合、がんの発生に関与し、発がん性ｍｉＲＮＡを阻害するか、または枯渇した腫瘍抑制ｍｉＲＮＡを置き換えるかのいずれかによって、治療的に修正することができる。更に、がん性細胞と非がん性細胞との間の特定のｏｎｃｏｍｉＲの差次的発現は、がん治療薬をがん細胞に特異的に標的化する手段として利用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスベクターは、ウイルスゲノムへのｍｉＲＮＡ標的配列の挿入を含むことができ、それにより、ウイルスベクター複製をがん細胞または腫瘍細胞に制限する、及び／または１つ以上のポリヌクレオチドがウイルスゲノムに組み込まれ、それらの産物（複数可）が発がん性ｍｉＲＮＡの機能を破壊する。
【0147】
本開示の一態様は、１つ以上の必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む組換え腫瘍溶解性ウイルス（またはウイルスベクター）を含む。ある特定の実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入されたｍｉＲＮＡ標的配列を含み得る。正常（非がん性）細胞で発現されるｍｉＲＮＡは、かかる標的配列に結合し、ｍｉＲＮＡ標的配列を含むウイルス遺伝子の発現を抑制し、それにより、健常な非がん性細胞でのウイルス複製を制限することができる。かかる組換え腫瘍溶解性ウイルスは、それらが、ｍｉＲを発現しないか、またはｍｉＲの発現の低下を有する細胞と比較して、組み込まれたｍｉＲ標的配列に結合することができる１つ以上のｍｉＲＮＡを発現する細胞において減少または減弱したウイルス複製を示すため、本明細書では「ｍｉＲ減弱型」または「複製制限型」と称される。ウイルス複製に必要な重要な遺伝子にｍｉＲＮＡ標的配列を組み込むことにより、ウイルス複製は、ｍｉＲＮＡを発現する正常な二倍体細胞において条件付きで抑制され得、ｍｉＲＮＡを発現しない細胞において正常に進行することができる。かかる実施形態では、正常な非がん性細胞は、本組換えウイルスベクターによって感染の溶解効果から保護される。
【0148】
ある特定の実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列は、１つ以上の必須ウイルス遺伝子の５’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び／または３’ＵＴＲに組み込まれる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、ウイルス複製に必要なウイルス遺伝子には、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、ガンマ－３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、及び／またはＵＳ１２のうちのいずれかが含まれる。ある特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、１つ以上の必須ウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに組み込まれる１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＵＬ８、ＵＬ４２、ＵＬ１９、及びＩＣＰ３４．５のうちの１つ以上に組み込まれる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＵＬ８、ＵＬ４２、ＵＬ１９、及びＩＣＰ３４．５のうちの１つ以上の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに組み込まれる。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８のうちの１つ以上の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに組み込まれる。
【0149】
ｍｉＲＮＡ標的配列カセット
動物において、ｍｉＲＮＡの遺伝子は、一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）に転写され、その後、クラス２ ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素であるＤｒｏｓｈａによって核内でプロセシングされて、前駆体ｍｉＲＮＡ（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）ヘアピンを形成する。ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡヘアピンは細胞質に輸送され、そこで、ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素であるＤｉｃｅｒによって切断される。このエンドリボヌクレアーゼは、ヘアピンの５’末端及び３’末端と相互作用し、３’アームと５’アームを連結するループを切断し、約２２ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡ分子をもたらす。二本鎖のいずれかの鎖が機能的ｍｉＲＮＡとして機能する可能性があり得るが、典型的には、ｍｉＲＮＡの一本の鎖が分解され、一本の鎖のみがアルゴノート（Ａｇｏ）タンパク質にロードされて、ｍｉＲＮＡとそのｍＲＮＡ標的が相互作用するエフェクターＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を産生する（Ｗａｈｉｄ ｅｔ ａｌ．，１８０３：１１，２０１０，１２３１－１２４３）。
動物において、ｍｉＲＮＡの遺伝子は、一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）に転写され、その後、クラス２ ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素であるＤｒｏｓｈａによって核内でプロセシングされて、前駆体ｍｉＲＮＡ（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）ヘアピンを形成する。ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡヘアピンは細胞質に輸送され、そこで、ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素であるＤｉｃｅｒによって切断される。このエンドリボヌクレアーゼは、ヘアピンの５’末端及び３’末端と相互作用し、３’アームと５’アームを連結するループを切断し、約２２ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡ分子をもたらす。二本鎖のいずれかの鎖が機能的ｍｉＲＮＡとして機能する可能性があり得るが、典型的には、ｍｉＲＮＡの一本の鎖が分解され、一本の鎖のみがアルゴノート（Ａｇｏ）タンパク質にロードされて、ｍｉＲＮＡとそのｍＲＮＡ標的が相互作用するエフェクターＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を産生する（Ｗａｈｉｄ ｅｔ ａｌ．，１８０３：１１，２０１０，１２３１－１２４３）。
【0150】
本明細書において、特定のｍｉＲＮＡをコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ番号が後に続く「ＭＩＲ」として言及される。中間体ヘアピンｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ分子は、ｍｉＲＮＡ番号が後に続く「ｍｉｒ－」として言及され、成熟一本鎖ｍｉＲＮＡ分子は、ｍｉＲＮＡ番号が後に続く「ｍｉＲ－」として言及される。例えば、「ＭＩＲ１２２」は、ヘアピンｍｉｒ－１２２ ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ分子をコードする遺伝子を指し、その後、これが成熟ｍｉＲ－１２２分子にプロセシングされる。ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡのヘアピン構造により、２つの成熟マイクロＲＮＡが同じｐｒｅ－ｍｉＲＮＡの反対側のアームに由来することが可能である。いくつかの事例では、発現データは、一方の鎖を主に発現されたｍｉＲＮＡとして、他方の鎖を副産物として明確に識別する。かかる事例では、成熟ｍｉＲＮＡ配列には、ｍｉＲ－＃＃（主産物）及びｍｉＲ－＃＃＊（前駆体の反対側のアーム由来の副産物）の形態の名称が割り当てられる。例えば、ｍｉｒ－５６の主産物及び副産物は、それぞれ、ｍｉＲ－５６及びｍｉＲ－５６＊として表される。既存のデータが、どの配列が優勢な配列であるかを決定するのに十分でない場合、またはそれらがおおよそ同様の量で見出される場合、２つの成熟ｍｉＲＮＡ産物は、ｍｉＲ－＃＃－５ｐ（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡヘアピンの５’アーム由来）及びｍｉＲ－＃＃－３ｐ（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡヘアピンの３’アーム由来）として表される。例えば、ｍｉｒ－１４２の２つの成熟ｍｉＲＮＡ産物は、ｍｉＲ－１４２－５ｐ及びｍｉＲ－１４２－３ｐとして表される。それらがｐｒｅ－ｍｉＲＮＡヘアピンの反対側の末端に由来するため、特定のｍｉＲＮＡの－３ｐ産物及び－５ｐ産物は、異なるＲＮＡ配列を含み、それ故に、異なる標的配列を認識する。
【0151】
本明細書において、ｍｉＲＮＡ標的配列は、「ｍｉＲ標的配列カセット」または「ｍｉＲ－ＴＳカセット」の形態で、１つ以上の必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入される。１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含み、かつウイルス遺伝子の特定の遺伝子座に挿入することができるポリヌクレオチド配列を指すｍｉＲ－ＴＳカセット。転写された場合、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含むウイルス遺伝子のｍＲＮＡ転写物は、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも４つのｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、４つのｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0152】
ｍｉＲ－ＴＳカセットが２つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むいくつかの実施形態では、これらの２つ以上の標的配列は、ｍｉＲ－ＴＳカセットの全長（ｍ）が、ｍｉＲＮＡ標的配列の平均長さ（ｎ）にカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列の総数（ｙ）を乗じた値＋リンカー配列の平均長さ（ｌ）にカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列の総数＋１（ｙ＋１）を乗じた値以下になるように配置される。したがって、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さ（ｍ）は、式：ｍ≦（ｎ×ｙ）＋（ｌ×（ｙ＋１））で表すことができ、式中、ｎがｍｉＲＮＡ標的配列の平均長さであり、ｌがリンカー配列の平均長さであり、ｙがｍｉＲ－ＴＳカセット内の標的配列の総数である）。例証的な例として、ｍｉＲ－ＴＳカセットが平均長さ２１ｎｔ（ｎ）を有する４つのｍｉＲＮＡ標的配列（ｙ）を含み、かつリンカー配列の平均長さが４～２５ｎｔ（ｌ）である場合、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さ（ｍ）は、約１０４ｎｔ～約２０５ｎｔである。
【0153】
本明細書で使用される場合、ｍｉＲ－ＴＳカセットの「長さ」は、任意の介在配列を含む、ポリヌクレオチド中の第１のｍｉＲ－ＴＳの５’ヌクレオチドから最後のｍｉＲ－ＴＳの３’ヌクレオチドまでのヌクレオチドの総数（二本鎖ポリヌクレオチドの塩基対）として定義される。重複しないｍｉＲ－ＴＳの場合、ｍｉＲ－ＴＳカセットの最小長さは、ｍｉＲ－ＴＳの長さの合計である。スペーサーは、長さを増加させる。スペーサー長さの選択は、カセット内の追加のヌクレオチドの数を決定する。より長いスペーサーは、より短いスペーサーよりもカセットの長さを増加させる。ｍｉＲ－ＴＳがインターリーブされたときにより短いスペーサー（０、１、２、３、４、５、または６ｎｔの短さ）を使用することができる（互いに隣接する同じｍｉＲＮＡのｍｉ－ＴＳの数を最小限に抑える）ことを認識することにより（インターリーブされたｍｉＲ－ＴＳは他のｍｉＲ－ＴＳ間の空間を増加させる機能を果たす）、本発明者は、同じｍｉＲＮＡのｍｉＲ－ＴＳがタンデムで配列される、例えば、１つのタイプ４つの後に次のタイプ４つが続くｍｉＲ－ＴＳカセットにおいて可能な長さよりも短いｍｉＲ－ＴＳカセットを生成することが可能であると決定した。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さは、１０００ｎｔ未満である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さは、９００ｎｔ未満、８００ｎｔ未満、７００ｎｔ未満、６００ｎｔ未満、５００ｎｔ未満、４００ｎｔ未満、３００ｎｔ未満、２００ｎｔ未満、１００ｎｔ未満、または５０ｎｔ未満である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さは、４００ｎｔ未満、３９０ｎｔ未満、３８０ｎｔ未満、３７０ｎｔ未満、３６０ｎｔ未満、３５０ｎｔ未満、３４０ｎｔ未満、３３０ｎｔ未満、または３２０ｎｔ未満である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さは、３２０ｎｔ未満である。
【0154】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットの長さは、ｍｉＲ－ＴＳ部位の数の２６、２７、２８、２９、または３０ｎｔ倍未満、ｍｉＲ－ＴＳ部位の数の約３０ｎｔ倍未満、ｍｉＲ－ＴＳ部位の数の約３５ｎｔ倍未満、またはｍｉＲ－ＴＳ部位の数の約４０ｎｔ倍未満である。
【0155】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含み、複数のｍｉＲＮＡ標的配列における各々のｍｉＲＮＡ標的配列は、同じｍｉＲＮＡの標的配列である。例えば、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、同じｍｉＲ標的配列の２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピーを含み得る。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、同じｍｉＲ標的配列の２～６つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、同じｍｉＲ標的配列の４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、同じｍｉＲ標的配列の３つのコピーを含む。
【0156】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含み、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、少なくとも２つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲＮＡ標的配列の１つ以上のコピー及び第２のｍｉＲＮＡ標的配列の１つ以上のコピーであり得る。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピー、及び第２のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピー、及び第２のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、少なくとも３つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピー、第２のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピー、及び第３のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピー、第２のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピー、及び第３のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピー、第２のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピー、及び第３のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、少なくとも４つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピー、第２のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピー、第３のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピー、及び第４のｍｉＲ標的配列の１つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピー、第２のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピー、第３のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピー、及び第４のｍｉＲ標的配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピー、第２のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピー、第３のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピー、及び第４のｍｉＲ標的配列の３つまたは４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、第１のｍｉＲ標的配列の３つのコピー、第２のｍｉＲ標的配列の３つのコピー、第３のｍｉＲ標的配列の３つのコピー、及び第４のｍｉＲ標的配列の３つのコピーを含む。
【0157】
ｍｉＲ－ＴＳカセットが複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含むいくつかの態様では、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、介在核酸配列なしでタンデムで配置され得る。いくつかの態様では、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、リンカー配列によって分離され得る。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５個、またはそれ以上のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、約４～約２０個のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列は約４～約１６個のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、４個のヌクレオチドを含む。例証的な実施形態として、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上の以下のサブユニット：（ａ）第１のｍｉＲＮＡ標的配列－リンカー－第２のｍｉＲＮＡ標的配列を含み得、ここで、隣接するサブユニットは、追加のリンカー配列によって分離される。いくつかの実施形態では、第１のｍｉＲＮＡ標的配列及び第２のｍｉＲＮＡ標的配列は、同じｍｉＲＮＡの標的である。いくつかの実施形態では、第１のｍｉＲＮＡ標的配列及び第２のｍｉＲＮＡ標的配列は、異なるｍｉＲＮＡの標的である。
【0158】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号１～８０３及び８６１～８６６から選択される配列の逆相補体と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号１～８０３及び８６１～８６６から選択される配列の逆相補体を含むか、またはそれからなるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0159】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８０４～８３７及び８６７～８７２のうちのいずれか１つを含むか、またはそれからなるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0160】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２２－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２２－５ｐ標的配列は、配列番号８０４と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２２－５ｐ標的配列は、配列番号８０４を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４に１つ以上のｍｉＲ－１２２－５ｐ標的配列を含む。
【0161】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列は、配列番号８０５と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列は、配列番号８０５を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４及びＩＣＰ８の両方に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８及びＩＣＰ２７の両方に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４及びＩＣＰ２７の両方に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、及びＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－１２４－３ｐ標的配列を含む。
【0162】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８０６と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８０６を含むか、またはそれからなる。
【0163】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２６－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２６－３ｐ標的配列は、配列番号８０７または配列番号８０８と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２６－３ｐ標的配列は、配列番号８０７または配列番号８０８を含むか、またはそれからなる。
【0164】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２７ａ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２７ａ－３ｐ標的配列は、配列番号８０９と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２７ａ－３ｐ標的配列は、配列番号８０９を含むか、またはそれからなる。
【0165】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２８－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２８－３ｐ標的配列は、配列番号８１０または配列番号８１１と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２８－３ｐ標的配列は、配列番号８１０または配列番号８１１を含むか、またはそれからなる。
【0166】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２９－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－３ｐ標的配列は、配列番号８１２と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－３ｐ標的配列は、配列番号８１２を含むか、またはそれからなる。
【0167】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２９－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－５ｐ標的配列は、配列番号８１３と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－５ｐ標的配列は、配列番号８１３を含むか、またはそれからなる。
【0168】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３０ｂ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３０ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８１４と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３０ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８１４を含むか、またはそれからなる。
【0169】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３０ｂ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３０ｂ－５ｐ標的配列は、配列番号８１５と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３０ｂ－５ｐ標的配列は、配列番号８１５を含むか、またはそれからなる。
【0170】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３３ａ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３３ａ－３ｐ標的配列は、配列番号８１６と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３３ａ－３ｐ標的配列は、配列番号８１６を含むか、またはそれからなる。
【0171】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３３ｂ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３３ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８１７と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３３ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８１７を含むか、またはそれからなる。
【0172】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３４－３ｐ標的配列は、配列番号８１８と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３４－３ｐ標的配列は、配列番号８１８を含むか、またはそれからなる。
【0173】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３７－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３７－３ｐ標的配列は、配列番号８１９と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３７－３ｐ標的配列は、配列番号８１９を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４に１つ以上のｍｉＲ－１３７－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－１３７－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４及びＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－１３７－３ｐ標的配列を含む。
【0174】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１－３ｐ標的配列は、配列番号８２０と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１－３ｐ標的配列は、配列番号８２０を含むか、またはそれからなる。
【0175】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１４３－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４３－３ｐ標的配列は、配列番号８２１と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４３－３ｐ標的配列は、配列番号８２１を含むか、またはそれからなる。
【0176】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１４５－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４５－３ｐ標的配列は、配列番号８２２と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４５－３ｐ標的配列は、配列番号８２２を含むか、またはそれからなる。
【0177】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１４５－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４５－５ｐ標的配列は、配列番号８２３と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４５－５ｐ標的配列は、配列番号８２３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－１４５－５ｐ標的配列を含む。
【0178】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１８４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１８４－３ｐ標的配列は、配列番号８２４と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１８４－３ｐ標的配列は、配列番号８２４を含むか、またはそれからなる。
【0179】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ標的配列は、配列番号８２５と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ標的配列は、配列番号８２５を含むか、またはそれからなる。
【0180】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８２６と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８２６を含むか、またはそれからなる。
【0181】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－２０４－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２０４－５ｐ標的配列は、配列番号８２７と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２０４－５ｐ標的配列は、配列番号８２７を含むか、またはそれからなる。
【0182】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－２０８ｂ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２０８ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８２８と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２０８ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８２８を含むか、またはそれからなる。
【0183】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－２１４－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２１４－３ｐ標的配列は、配列番号８２９と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２１４－３ｐ標的配列は、配列番号８２９を含むか、またはそれからなる。
【0184】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－２１７－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２１７－５ｐ標的配列は、配列番号８３０と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２１７－５ｐ標的配列は、配列番号８３０を含むか、またはそれからなる。
【0185】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－２１９ａ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２１９ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８３１と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２１９ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８３１を含むか、またはそれからなる。
【0186】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－２２３－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２２３－３ｐ標的配列は、配列番号８３２と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２２３－３ｐ標的配列は、配列番号８３２を含むか、またはそれからなる。
【0187】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－３４ａ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８３３と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８３３を含むか、またはそれからなる。
【0188】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－４５１ａ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－４５１ａ標的配列は、配列番号８３４と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－４５１ａ標的配列は、配列番号８３４を含むか、またはそれからなる。
【0189】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－５５９－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－５５９－５ｐ標的配列は、配列番号８３５と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－５５９－５ｐ標的配列は、配列番号８３５を含むか、またはそれからなる。
【0190】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－Ｌｅｔ－７ａ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－Ｌｅｔ－７ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８３６と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－Ｌｅｔ－７ａ－５ｐ標的配列は、配列番号８３６を含むか、またはそれからなる。
【0191】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－９－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－９－５ｐ標的配列は、配列番号８３７と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－９－５ｐ標的配列は、配列番号８３７を含むか、またはそれからなる。
【0192】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ標的配列は、配列番号８６７と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ標的配列は、配列番号８６７を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ標的配列を含む。
【0193】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８６８と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ標的配列は、配列番号８６８を含むか、またはそれからなる。
【0194】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列は、配列番号８６９と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列は、配列番号８６９を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８に１つ以上のｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８及びＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ２７及びＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８及びＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列を含む。
【0195】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２８Ｔ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２８Ｔ標的配列は、配列番号８７０と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２８Ｔ標的配列は、配列番号８７０を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４に１つ以上のｍｉＲ－１２８Ｔ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－１２８Ｔ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ４及びＩＣＰ２７に１つ以上のｍｉＲ－１２８Ｔ標的配列を含む。
【0196】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１２９－２－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ標的配列は、配列番号８７１と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ標的配列は、配列番号８７１を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８に１つ以上のｍｉＲ－１２９－２－３ｐ標的配列を含む。
【0197】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ－ＴＳカセットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのｍｉＲ－１３２－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３２－３ｐ標的配列は、配列番号８７２と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１３２－３ｐ標的配列は、配列番号８７２を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８に１つ以上のｍｉＲ－１３２－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－１３２－３ｐ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のウイルスは、ＩＣＰ８及びＵＬ８に１つ以上のｍｉＲ－１３２－３ｐ標的配列を含む。
【0198】
以下の表２は、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスにおけるｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができる例示的なｍｉＲＮＡの配列を提供する。追加のｍｉＲＮＡ配列が配列番号３３～８０３に提供される。
【表2-1】
【表2-2】
【0199】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、カセットがウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入されることを可能にする１つ以上の追加のポリヌクレオチド配列を含む。例えば、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ウイルスゲノム内の所望の位置で核酸配列に相補的な５’末端及び３’末端上に短いポリヌクレオチド配列を更に含み得る。かかる配列は、本明細書では「相同性アーム」と称され、ウイルスゲノム内の特定の位置へのｍｉＲ－ＴＳカセットの挿入を容易にする。
【0200】
いくつかの実施形態では、開示されるｍｉＲ－ＴＳカセットは、異なるｍｉＲＮＡに各々対応する２つ以上の複数のｍｉＲ－ＴＳを含み、ｍｉＲ－ＴＳは、腫瘍溶解性ウイルスから多様な細胞型または臓器を保護するように選択される。いくつかの実施形態では、複数のｍｉＲ－ＴＳは、互いにタンデムではなくインターリーブされる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、短い（例えば、４～１５ｎｔ長の）スペーサーを有し、よりコンパクトなカセットになる。いくつかの実施形態では、スペーサーは、４ｎｔ長である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－ＴＳの活性を阻害するＲＮＡ二次構造を有しない（またはＲＮＡ二次構造の減少を有する）。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、発がん、悪性形質転換、または転移に関連するｍｉＲＮＡ（すなわち、「ｏｎｃｏｍｉＲ」）のシード配列を含まない（またはシード配列の減少を有する）。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ポリアデニル化部位を含まない（またはポリアデニル化部位の減少を有する）。
【0201】
ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む腫瘍溶解性ウイルス
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、１つの必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれた１つのｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、組換え腫瘍溶解性ウイルスが１つの必須ウイルス遺伝子座に組み込まれた複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含むように、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含み得、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は各々、組換え腫瘍溶解性ウイルスが必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれた同じｍｉＲＮＡ標的配列の複数の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上の）コピーを含むように、同じｍｉＲＮＡの標的である。例えば、いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ＨＳＶは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ３０、ＵＬ３９／４０、またはＵＬ４２のうちの１つに挿入された２、３、４、５、６、またはそれ以上の標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ＨＳＶは、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ３０、ＵＬ３９／４０、またはＵＬ４２のうちの１つに挿入された２、３、４、またはそれ以上の標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ＨＳＶは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ８、またはＵＬ９のうちの１つに挿入された２、３、４、５、６、またはそれ以上の標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、１つの必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれた１つのｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、組換え腫瘍溶解性ウイルスが１つの必須ウイルス遺伝子座に組み込まれた複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含むように、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、複数のｍｉＲＮＡ標的配列を含み得、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は各々、組換え腫瘍溶解性ウイルスが必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれた同じｍｉＲＮＡ標的配列の複数の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上の）コピーを含むように、同じｍｉＲＮＡの標的である。例えば、いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ＨＳＶは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ３０、ＵＬ３９／４０、またはＵＬ４２のうちの１つに挿入された２、３、４、５、６、またはそれ以上の標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ＨＳＶは、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ３０、ＵＬ３９／４０、またはＵＬ４２のうちの１つに挿入された２、３、４、またはそれ以上の標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ＨＳＶは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ８、またはＵＬ９のうちの１つに挿入された２、３、４、５、６、またはそれ以上の標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。
【0202】
いくつかの実施形態では、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、組換え腫瘍溶解性ウイルスが必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれた少なくとも２、３、または４つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列の１つ以上のコピーを含むように、少なくとも２つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列、少なくとも３つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列、または少なくとも４つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0203】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスゲノムの３’または５’非翻訳領域（ＵＴＲ）に組み込まれた１つのｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。かかる実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、組換え腫瘍溶解性ウイルスがウイルスゲノムの３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲに組み込まれたｍｉＲＮＡ標的配列の１つのコピーを含むように、ｍｉＲＮＡ標的配列の１つのコピーを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、組換えＨＳＶは、ウイルス遺伝子の３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲに挿入されたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。
【0204】
いくつかの態様では、複数のｍｉＲＮＡ標的配列は、組換え腫瘍溶解性ウイルスがウイルス遺伝子の３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲに組み込まれた少なくとも２、３、または４つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列の１つ以上のコピーを含むように、少なくとも２つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列、少なくとも３つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列、または少なくとも４つの異なるｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0205】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、２つ以上の必須ウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、２つ以上の必須ウイルス遺伝子は、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ３０、ＵＬ３９／４０、またはＵＬ４２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、２つ以上の必須ウイルス遺伝子は、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ３０、ＵＬ３９／４０、またはＵＬ４２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、２つ以上の必須ウイルス遺伝子は、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ８、またはＵＬ９からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスはＨＳＶであり、２つ以上の必須ウイルス遺伝子は、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４、ＩＣＰ３４．５、ＵＬ８、及びＵＬ４２からなる群から選択される。
【0206】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８から選択される１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８から選択される２つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８から選択される３つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、ウイルス遺伝子ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８の全ての遺伝子座に組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、ウイルス遺伝子ＩＣＰ４及びＩＣＰ８の各々の遺伝子座に組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、ＩＣＰ４の両方のコピーに組み込まれたｍｉＲ－ＴＳカセットを含み得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ヘルペスウイルスは、組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である。
【0207】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である。
【0208】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、脳内の正常細胞よりも神経膠芽腫細胞で低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。かかるｍｉＲＮＡの非限定的な例が以下の表３に列記される。
【表3】
【0209】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、神経細胞よりも神経膠芽腫細胞でより低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐを含む。
【0210】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、上衣細胞よりも神経膠芽腫細胞でより低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ及びｍｉＲ－３４ｃ－５ｐを含む。
【0211】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、乏突起膠細胞よりも神経膠芽腫細胞でより低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ及びｍｉＲ－１３２－３ｐを含む。
【0212】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、星状膠細胞よりも神経膠芽腫細胞でより低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせである。
【0213】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、内皮細胞よりも神経膠芽腫細胞でより低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１４５－５ｐを含む。
【0214】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、肝細胞よりも神経膠芽腫細胞でより低い発現を有するｍｉＲＮＡの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、かかるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２２－５ｐを含む。
【0215】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、または
（ｆ）（ａ）～（ｅ）の任意の組み合わせを含む。
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、または
（ｆ）（ａ）～（ｅ）の任意の組み合わせを含む。
【0216】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、または
（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを含む。
（ａ）ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、または
（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを含む。
【0217】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、または
（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせを含む。
（ａ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、もしくはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、または
（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせを含む。
【0218】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0219】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｄ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
（ａ）ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｄ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0220】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、
（ａ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｄ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
（ａ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｄ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。
【0221】
いくつかの実施形態では、標的配列は、正常な脳組織で発現されるが、腫瘍組織（例えば、神経膠芽腫）では発現されないｍｉＲＮＡに対するものである。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡは、脳内、例えば、神経細胞、乏突起膠細胞、上衣細胞、及び／または内皮細胞で広範に発現される。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ標的配列は、１つ以上のウイルス遺伝子に挿入される。いくつかの実施形態では、ウイルス遺伝子（複数可）は、ＲＮＡ干渉に対するそれらの感受性に基づいて選択された。かかるウイルス遺伝子（複数可）をスクリーニング及び選択するための方法の説明は、例えば、米国特許出願公開第２０２０／０２０６２８５号で見つけることができ、その内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ干渉に感受性のある候補ウイルス遺伝子（複数可）から、ウイルス複製に必須のウイルス遺伝子（複数可）を、ｍｉＲＮＡ標的配列（複数可）を挿入するために選択した。いくつかの実施形態では、ウイルス遺伝子（複数可）は、ウイルスゲノムの複製前に、ウイルスライフサイクルの初期に発現された。いくつかの実施形態では、１つの特定のｍｉＲＮＡの標的配列を２つ以上のウイルス遺伝子（例えば、２つの異なる必須ウイルス遺伝子）に挿入して、そのｍｉＲＮＡの高発現を有する対応する正常細胞の保護のためにより深いカバレッジを確実にする。
【0222】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２４－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３２－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＩＣＰ８ウイルス遺伝子に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、以下のように配置される：
（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５９と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５９のポリヌクレオチド配列を含む。
（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５９と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５９のポリヌクレオチド配列を含む。
【0223】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２２－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２４－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２８Ｔの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３７－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＩＣＰ４ウイルス遺伝子に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ウイルスゲノム中のＩＣＰ４ウイルス遺伝子の両方のコピーに組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、以下のように配置される：
（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１２２－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５８のポリヌクレオチド配列を含む。
（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１２２－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８５８のポリヌクレオチド配列を含む。
【0224】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２４－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２８Ｔの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３７－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＩＣＰ２７ウイルス遺伝子に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、以下のように配置される：
（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７３のポリヌクレオチド配列を含む。
（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７３のポリヌクレオチド配列を含む。
【0225】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２８Ｔの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３７－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＩＣＰ２７ウイルス遺伝子に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、以下のように配置される：
（３４ｂ－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｂ－３ｐ）－（１３７－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（３４ｂ－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８６０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８６０のポリヌクレオチド配列を含む。
（３４ｂ－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｂ－３ｐ）－（１３７－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（３４ｂ－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８６０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８６０のポリヌクレオチド配列を含む。
【0226】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３２－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１４５－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＵＬ８ウイルス遺伝子に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、以下のように配置される：
（１４５－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７４のポリヌクレオチド配列を含む。
（１４５－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号８７４のポリヌクレオチド配列を含む。
【0227】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１２９－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１４５－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＵＬ８ウイルス遺伝子に組み込まれる。
【0228】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３２－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１４５－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＵＬ８ウイルス遺伝子に組み込まれる。
【0229】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１３２－３ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－１４５－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、または３つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、本組換えＨＳＶのＵＬ８ウイルス遺伝子に組み込まれる。
【0230】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍｉＲ減弱型腫瘍溶解性ウイルスは、組み込まれたｍｉＲ標的配列のうちの１つ以上に結合することができるｍｉＲを発現する細胞におけるウイルス複製の減少をもたらす。「ウイルス複製」とは、所与の時間内に特定の細胞または細胞集団に生じるウイルス複製サイクルの総数を指す。いくつかの実施形態では、ウイルス複製は、所与の時間量にわたって存在する総ウイルス力価を評価することによって、または存在するウイルスゲノムコピーの数を評価することによって（例えば、配列決定することによって）直接測定することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、蛍光レポーターなどの検出可能な標識を追加で含み得る。かかる実施形態では、ウイルス複製は、レポーター遺伝子の蛍光強度またはレポーター遺伝子を発現する細胞の数を測定することによって評価することができる。いくつかの実施形態では、ウイルス複製は、所与の時間にわたって生存細胞の数を評価することによって間接的に測定することができる。例えば、ウイルス複製のレベルは、経時的な生存細胞の数と逆相関すると想定されるであろう。
【0231】
本明細書で使用される「ウイルス複製の減少」とは、第２の細胞または第２の細胞集団と比較して、第１の細胞または第１の細胞集団でより低いウイルス複製のレベルを指す。いくつかの実施形態では、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウイルス複製のレベルは、第２の細胞または細胞集団におけるウイルス複製のレベルと比較して、少なくとも５％低下する。いくつかの実施形態では、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウイルス複製のレベルは、第２の細胞または細胞集団におけるウイルス複製のレベルと比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上低下する。いくつかの実施形態では、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウイルス複製は、第２の細胞または細胞集団におけるウイルス複製と比較して、完全に阻害される。
【0232】
いくつかの実施形態では、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウイルス複製の減少は、複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子に組み込まれた１つ以上のｍｉＲ標的配列に結合することができるｍｉＲの発現と相関する。したがって、いくつかの実施形態では、組み込まれたｍｉＲ標的配列に対応するｍｉＲの発現は、複製遺伝子の発現を阻害するか、または減少させ、それにより、ウイルス複製を阻害するか、または減少させる。いくつかの実施形態では、第２の細胞または第２の細胞集団は、ｍｉＲを発現しないか、またはｍｉＲの発現レベルの低下を有する。いくつかの実施形態では、組み込まれたｍｉＲ標的配列に対応するｍｉＲの（例えば、がん細胞における）発現の欠如または低下は、ウイルス複製の進行を可能にする。いくつかの実施形態では、第２の細胞または細胞集団におけるｍｉＲの発現レベルは、第１の細胞または集団におけるｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５％低い。いくつかの実施形態では、第２の細胞または細胞集団におけるｍｉＲの発現レベルは、第１の細胞または集団におけるｍｉＲの発現レベルと比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上減少する。いくつかの実施形態では、第２の細胞は、ｍｉＲを発現しない。特定の実施形態では、第１の細胞は、非がん性細胞であり、第２の細胞は、がん性細胞である。
【0233】
いくつかの実施形態では、複製制限ウイルスベクター（例えば、ｍｉＲ減弱型ウイルスベクター）は、神経膠芽腫を治療するために使用される。
【0234】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１３６－３ｐ、ｍｉＲ－４３２－５ｐ、ｍｉＲ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１２７－３ｐ、ｍｉＲ－３７９－５ｐ、ｍｉＲ－４９３－５ｐ、ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｍｉＲ－１３６－５ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－４８７ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３７０－３ｐ、ｍｉＲ－４１０－３ｐ、ｍｉＲ－４３１－３ｐ、ｍｉＲ－４４８５－３ｐ、ｍｉＲ－４４８５－５ｐ、ｍｉＲ－１２７－５ｐ、ｍｉＲ－４０９－３ｐ、ｍｉＲ－３３８－３ｐ、ｍｉＲ－５５９、ｍｉＲ－４１１－５ｐ、ｍｉＲ－１３３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－３７６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－７５８－３ｐ、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１１８０、ｍｉＲ－１２３６、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１２８０、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１４１、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１８ａ、ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２３ｂ、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－２９ｃ、ｍｉＲ－３２０ｃ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３７０、ｍｉＲ－４０９－３ｐ、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４５１、ｍｉＲ－４９０－５ｐ、ｍｉＲ－４９３、ｍｉＲ－５７６－３ｐ、及び／またはｍｉＲ－９９ａの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、膀胱癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0235】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１２５１－５ｐ、ｍｉＲ－２１９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１９ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－４４８、ｍｉＲ－１３８－２－３ｐ、ｍｉＲ－４９０－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－１－３ｐ、ｍｉＲ－１２６４、ｍｉＲ－３９４３、ｍｉＲ－４９０－３ｐ、ｍｉＲ－３８３－５ｐ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２８－２－５ｐ、ｍｉＲ－１３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１－３ｐ、ｍｉＲ－８８５－３ｐ、ｍｉＲ－１２４－５ｐ、ｍｉＲ－７５９、ｍｉＲ－７１５８－３ｐ、ｍｉＲ－７７０－５ｐ、ｍｉＲ－１３５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－８８５－５ｐ、ｌｅｔ－７ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１０６ａ、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２４ａ、ｍｉＲ－１２５ａ、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２７－３ｐ、ｍｉＲ－１２８、ｍｉＲ－１２９、ｍｉＲ－１３６、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１３９－５ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１４９、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２１２－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－５ｐ、ｍｉＲ－２２２、ｍｉＲ－２９ｂ、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－３１８９－３ｐ、ｍｉＲ－３２０、ｍｉＲ－３２０ａ、ｍｉＲ－３２６、ｍｉＲ－３３０、ｍｉＲ－３３１－３ｐ、ｍｉＲ－３４０、ｍｉＲ－３４２、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３７６ａ、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－４８３－５ｐ、ｍｉＲ－５０３、ｍｉＲ－５７７、ｍｉＲ－６６３、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－７－５ｐ、ｍｉＲ－８７３、ｌｅｔ－７ａ、ｌｅｔ－７ｆ、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－１２２、ｍｉＲ－１２４－５ｐ、ｍｉＲ－１３９、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１４６ｂ、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－１８１ａ－１、ｍｉＲ－１８１ａ－２、ｍｉＲ－１８１ｂ、ｍｉＲ－１８１ｂ－１、ｍｉＲ－１８１ｂ－２、ｍｉＲ－１８１ｃ、ｍｉＲ－１８１ｄ、ｍｉＲ－１８４、ｍｉＲ－１８５、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０４、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２３ｂ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２７ａ、ｍｉＲ－２９ｃ、ｍｉＲ－３２８、ｍｉＲ－３４ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－３８３、ｍｉＲ－４５１、ｍｉＲ－４５２、ｍｉＲ－４９５、ｍｉＲ－５８４、ｍｉＲ－６２２、ｍｉＲ－６５６、ｍｉＲ－９８、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１８１ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｂ、及び／またはｍｉＲ－３１８９－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、脳癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。ある特定の実施形態では、脳癌は、星細胞腫、神経膠芽腫、または神経膠腫である。
【0236】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－５６８３、ｍｉＲ－３１９５、ｍｉＲ－３１８２、ｍｉＲ－１２７１－５ｐ、ｍｉＲ－２０４－５ｐ、ｍｉＲ－４０９－５ｐ、ｍｉＲ－１３６－５ｐ、ｍｉＲ－５１４ａ－５ｐ、ｍｉＲ－５５９、ｍｉＲ－４８３－３ｐ、ｍｉＲ－１－３ｐ、ｍｉＲ－６０８０、ｍｉＲ－１４４－３ｐ、ｍｉＲ－１０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－６１３０、ｍｉＲ－６０８９、ｍｉＲ－２０３ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－４２６６、ｍｉＲ－４３２７、ｍｉＲ－５６９４、ｍｉＲ－１９３ｂ、ｌｅｔ－７ａ、ｌｅｔ－７ａ－１、ｌｅｔ－７ａ－２、ｌｅｔ－７ａ－３、ｌｅｔ－７ｂ、ｌｅｔ－７ｃ、ｌｅｔ－７ｄ、ｌｅｔ－７ｅ、ｌｅｔ－７ｆ－１、ｌｅｔ－７ｆ－２、ｌｅｔ－７ｇ、ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－１０ａ、ｍｉＲ－１０ｂ、ｍｉＲ－１２２、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５８、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１２７、ｍｉＲ－１２９、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－１３２、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１４６ｂ、ｍｉＲ－１４７、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１４９、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－１８２６、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－１８５、ｍｉＲ－１９１、ｍｉＲ－１９３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２１１、ｍｉＲ－２１６ｂ、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－３００、ｍｉＲ－３０ａ、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｍｉＲ－３３ｂ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－３７４ａ、ｍｉＲ－３７９、ｍｉＲ－３８１、ｍｉＲ－３８３、ｍｉＲ－４２５、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４５０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４９４、ｍｉＲ－４９５、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－５０２－５ｐ、ｍｉＲ－５１７ａ、ｍｉＲ－５７４－３ｐ、ｍｉＲ－６３８、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－７２０、ｍｉＲ－８７３、ｍｉＲ－８７４、ｍｉＲ－９２ａ、ｍｉＲ－９８、ｍｉＲ－９９ａ、ｍｍｕ－ｍｉＲ－２９０－３ｐ、及び／またはｍｍｕ－ｍｉＲ－２９０－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、乳癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0237】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３４２－３ｐ、ｍｉＲ－３７２、ｍｉＲ－４２４、ｍｉＲ－４９１－５ｐ、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－９９ａ、ｍｉＲ－９９ｂ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－８８６－５ｐ、ｍｉＲ－１０６ａ、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－２９ａ、及び／またはｍｉＲ－３７５の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、子宮頸癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0238】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１３３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４９０－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－６５５－３ｐ、ｍｉＲ－３７６ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－３６９－５ｐ、ｍｉＲ－４９０－３ｐ、ｍｉＲ－４３２－５ｐ、ｍｉＲ－４８７ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４２－３ｐ、ｍｉＲ－２２３－３ｐ、ｍｉＲ－１３６－３ｐ、ｍｉＲ－１３６－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－１－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１２７－３ｐ、ｍｉＲ－１３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１４５－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｌｅｔ－７ａ－１、ｌｅｔ－７ａ－２、ｌｅｔ－７ａ－３、ｌｅｔ－７ｂ、ｌｅｔ－７ｃ、ｌｅｔ－７ｄ、ｌｅｔ－７ｅ、ｌｅｔ－７ｆ－１、ｌｅｔ－７ｆ－２、ｌｅｔ－７ｇ、ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－２１５、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２５、ｍｉＲ－３０２ａ、ｍｉＲ－３２０、ｍｉＲ－３２０ａ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－３６５、ｍｉＲ－３７３、ｍｉＲ－４２４、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４５５、ｍｉＲ－４８４、ｍｉＲ－５０２、ｍｉＲ－５０３、ｍｉＲ－９３、ｍｉＲ－９８、ｍｉＲ－１８６、ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６２７、ｌｅｔ－７ａ、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５ａ、ｍｉＲ－１２９、ｍｉＲ－１２９５ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０７、ｍｉＲ－１３０ｂ、ｍｉＲ－１３２、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１３９、ｍｉＲ－１３９－５ｐ、ｍｉＲ－１４０－５ｐ、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１４８ｂ、ｍｉＲ－１４９、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１５４、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１８ａ、ｍｉＲ－１９１、ｍｉＲ－１９３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－１９６ａ、ｍｉＲ－１９８、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０４－５ｐ、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２１２、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２２４、ｍｉＲ－２４－３ｐ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２７ａ、ｍｉＲ－２８－３ｐ、ｍｉＲ－２８－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｂ、ｍｉＲ－３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ、ｍｉＲ－３２８、ｍｉＲ－３３８－３ｐ、ｍｉＲ－３４２、ｍｉＲ－３４５、ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３６１－５ｐ、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－３７８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３７８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４０９－３ｐ、ｍｉＲ－４２２ａ、ｍｉＲ－４４８７、ｍｉＲ－４８３、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－４９８、ｍｉＲ－５１８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－５５１ａ、ｍｉＲ－５７４－５ｐ、ｍｉＲ－６２５、ｍｉＲ－６３８、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－９６－５ｐ、ｍｉＲ－２０２－３ｐ、ｍｉＲ－３０ａ、及び／またはｍｉＲ－４５１の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、結腸癌または大腸癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0239】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－１３０ｂ、ｍｉＲ－１３４、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－３０１ａ、ｍｉＲ－３０１ｂ、ｍｉＲ－３０ｃ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－４２４、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－５４３、及び／またはｍｉＲ－３４ｂの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、子宮内膜癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0240】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１６－１、ｍｉＲ－１６－１－３ｐ、ｍｉＲ－１６－２、ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－１８１ｂ、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２９ｂ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－４２４、ｍｉＲ－１０ａ、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ－１５１、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－２２７８、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－３０ｅ、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－３２６、ｍｉＲ－５６４、ｍｉＲ－２７ａ、ｌｅｔ－７ｂ、ｍｉＲ－１２４ａ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｌｅｔ－７ｃ、ｍｉＲ－１７、ｍｉＲ－２０ａ、ｍｉＲ－２９ａ、ｍｉＲ－３０ｃ、ｍｉＲ－７２０、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－３４２、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－２０２、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｃ、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１９３ｂ、ｍｉＲ－１９９ａ、ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－１３７、及び／またはｍｉＲ－１９７の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、血液癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。いくつかの実施形態では、血液癌は、白血病、リンパ腫、または骨髄腫である。
【0241】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１８２６、ｍｉＲ－１９９ａ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－５０８－３ｐ、ｍｉＲ－５０９－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ、ｌｅｔ－７ｄ、ｍｉＲ－１０６ａ＊、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１２８５、ｍｉＲ－１２９－３ｐ、ｍｉＲ－１２９１、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３５ａ、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１４１、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１８２－５ｐ、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２８－５ｐ、ｍｉＲ－３０ａ、ｍｉＲ－３０ｃ、ｍｉＲ－３０ｄ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－５０９－５ｐ、ｍｉＲ－６４６、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｌｅｔ－７ｂ、ｌｅｔ－７ｃ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２０４、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３７７、及び／またはｍｉＲ－５０６の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、腎臓癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0242】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ－７ａ－１、ｌｅｔ－７ａ－２、ｌｅｔ－７ａ－３、ｌｅｔ－７ｂ、ｌｅｔ－７ｃ、ｌｅｔ－７ｄ、ｌｅｔ－７ｅ、ｌｅｔ－７ｆ、ｌｅｔ－７ｆ－１、ｌｅｔ－７ｆ－２、ｌｅｔ－７ｇ、ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１０５、ｍｉＲ－１２２、ｍｉＲ－１２２ａ、ｍｉＲ－１２３６、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１２７、ｍｉＲ－１２７１、ｍｉＲ－１２８－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－１３０ｂ、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３４、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１３９、ｍｉＲ－１３９－５ｐ、ｍｉＲ－１４０－５ｐ、ｍｉＲ－１４１、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１４８ｂ、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１８１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１８５、ｍｉＲ－１８８－５ｐ、ｍｉＲ－１９３ｂ、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－１９５－５ｐ、ｍｉＲ－１９７、ｍｉＲ－１９８、ｍｉＲ－１９９ａ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２０２、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０４－３ｐ、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０ａ、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２１－３ｐ、ｍｉＲ－２１１、ｍｉＲ－２１２、ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２１９－５ｐ、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２９ａ、ｍｉＲ－２９ｂ－１、ｍｉＲ－２９ｂ－２、ｍｉＲ－２９ｃ、ｍｉＲ－３０２ｂ、ｍｉＲ－３０２ｃ、ｍｉＲ－３０ａ、ｍｉＲ－３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３３８－３ｐ、ｍｉＲ－３３ａ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３６５、ｍｉＲ－３７０、ｍｉＲ－３７２、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－３７６ａ、ｍｉＲ－３７７、ｍｉＲ－４２２ａ、ｍｉＲ－４２４、ｍｉＲ－４２４－５ｐ、ｍｉＲ－４３３、ｍｉＲ－４４５８、ｍｉＲ－４４８、ｍｉＲ－４５０ａ、ｍｉＲ－４５１、ｍｉＲ－４８５－５ｐ、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－５０３、ｍｉＲ－５０６、ｍｉＲ－５１９ｄ、ｍｉＲ－５２０ａ、ｍｉＲ－５２０ｂ、ｍｉＲ－５２０ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－５８２－５ｐ、ｍｉＲ－５９０－５ｐ、ｍｉＲ－６１０、ｍｉＲ－６１２、ｍｉＲ－６２５、ｍｉＲ－６３７、ｍｉＲ－６７５、ｍｉＲ－７、ｍｉＲ－８７７、ｍｉＲ－９４０、ｍｉＲ－９４１、ｍｉＲ－９８、ｍｉＲ－９９ａ、ｍｉＲ－１３２、及び／またはｍｉＲ－３１の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、肝臓癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。いくつかの実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌である。
【0243】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１２６－５ｐ、ｍｉＲ－１２６６－３ｐ、ｍｉＲ－６１３０、ｍｉＲ－６０８０、ｍｉＲ－５１１－５ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１４５－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１２９７、ｍｉＲ－１４１、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２９ｂ、ｍｉＲ－３８１、ｍｉＲ－４０９－３ｐ、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４５１、ｍｉＲ－５１１、ｍｉＲ－９９ａ、ｌｅｔ－７ａ－１、ｌｅｔ－７ａ－２、ｌｅｔ－７ａ－３、ｌｅｔ－７ｂ、ｌｅｔ－７ｃ、ｌｅｔ－７ｄ、ｌｅｔ－７ｅ、ｌｅｔ－７ｆ－１、ｌｅｔ－７ｆ－２、ｌｅｔ－７ｇ、ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１４６９、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ－１６－１、ｍｉＲ－１６－２、ｍｉＲ－１８２、ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－１９５、ｍｉＲ－１９８、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２９ｃ、ｍｉＲ－３３ａ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－３６５、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－４４９ｂ、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉＲ－５４５、ｍｉＲ－６１０、ｍｉＲ－６１４、ｍｉＲ－６３０、ｍｉＲ－６６０、ｍｉＲ－７５１５、ｍｉＲ－９５００、ｍｉＲ－９８、ｍｉＲ－９９ｂ、ｍｉＲ－１３３ａ、ｌｅｔ－７ａ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０６ａ、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１２６＊、ｍｉＲ－１２９、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１４０、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４６ｂ、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１４８ｂ、ｍｉＲ－１４９、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１５４、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－１、ｍｉＲ－１８１ａ－２、ｍｉＲ－１８１ｂ、ｍｉＲ－１８１ｂ－１、ｍｉＲ－１８１ｂ－２、ｍｉＲ－１８１ｃ、ｍｉＲ－１８１ｄ、ｍｉＲ－１８４、ｍｉＲ－１８６、ｍｉＲ－１９３ｂ、ｍｉＲ－１９９ａ、ｍｉＲ－２０４、ｍｉＲ－２１２、ｍｉＲ－２２１、ｍｉＲ－２２４、ｍｉＲ－２７ａ、ｍｉＲ－２７ｂ、ｍｉＲ－２９ａ、ｍｉＲ－３０ａ、ｍｉＲ－３０ｂ、ｍｉＲ－３０ｃ、ｍｉＲ－３０ｄ、ｍｉＲ－３０ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－３２、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３３８－３ｐ、ｍｉＲ－３４０、ｍｉＲ－３４２－３ｐ、ｍｉＲ－３６１－３ｐ、ｍｉＲ－３７３、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－４５００、ｍｉＲ－４７８２－３ｐ、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－５０３、ｍｉＲ－５１２－３ｐ、ｍｉＲ－５２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－５２６ｂ、ｍｉＲ－６２５＊、及び／またはｍｉＲ－９６の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、肺癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0244】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ－７ｂ、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２８０、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１４６ｂ、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１７、ｍｉＲ－１８４、ｍｉＲ－１８５、ｍｉＲ－１８ｂ、ｍｉＲ－１９３ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０４、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０ａ、ｍｉＲ－２１１、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－３３ａ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－３７６ａ、ｍｉＲ－３７６ｃ、ｍｉＲ－５７３、ｍｉＲ－７－５ｐ、ｍｉＲ－９、及び／またはｍｉＲ－９８の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、黒色腫を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0245】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ－７ｄ、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－４９４、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５０、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１２７１、ｍｉＲ－１３６、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４７、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２２０ａ、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２９ａ、ｍｉＲ－３２、ｍｉＲ－３２３－５ｐ、ｍｉＲ－３２９、ｍｉＲ－３３８、ｍｉＲ－３７０、ｍｉＲ－４１０、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４３３、ｍｉＲ－４９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－５０３、ｍｉＲ－５０６、ｍｉＲ－６３２、ｍｉＲ－６４６、ｍｉＲ－６６８、ｍｉＲ－８７７、及び／またはｍｉＲ－９の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、口腔癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0246】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ｂ、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１４１、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１９９ａ、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２１２、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－４０９－３ｐ、ｍｉＲ－４１１、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４３２、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－４９４、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－４９８、ｍｉＲ－５１９ｄ、ｍｉＲ－６５５、ｍｉＲ－９、ｍｉＲ－９８、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－５３２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４ａ、ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９３ａ、及び／またはｍｉＲ－７の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、卵巣癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0247】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－２１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－８０２、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－１４５－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－２１６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４３２－５ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３６－３ｐ、ｍｉＲ－２１６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３６－５ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１２７－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－５５９、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－４５０７、ｍｉＲ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１４８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１１８１、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２４７、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１４１、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１４８ａ、ｍｉＲ－１４８ｂ、ｍｉＲ－１５０＊、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１９８、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２１４、ｍｉＲ－２１６ａ、ｍｉＲ－２９ｃ、ｍｉＲ－３３５、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－３７３、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－４１０、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－６１５－５ｐ、ｍｉＲ－６３０、ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１３２、ｌｅｔ－７ａ、ｌｅｔ－７ａ－１、ｌｅｔ－７ａ－２、ｌｅｔ－７ａ－３、ｌｅｔ－７ｂ、ｌｅｔ－７ｃ、ｌｅｔ－７ｄ、ｌｅｔ－７ｅ、ｌｅｔ－７ｆ－１、ｌｅｔ－７ｆ－２、ｌｅｔ－７ｇ、ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１３５ａ、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－３３７、ｍｉＲ－４９４、及び／またはｍｉＲ－９８の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、膵臓癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0248】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ－７ａ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｃ、ｍｉＲ－１００、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１０５、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２８、ｍｉＲ－１２９６、ｍｉＲ－１３０ｂ、ｍｉＲ－１３３ａ－１、ｍｉＲ－１３３ａ－２、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１３５ａ、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１５４、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１８７、ｍｉＲ－１８８－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２０３、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２１２、ｍｉＲ－２１８、ｍｉＲ－２２１、ｍｉＲ－２２４、ｍｉＲ－２３ａ、ｍｉＲ－２３ｂ、ｍｉＲ－２５、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２９ｂ、ｍｉＲ－３０２ａ、ｍｉＲ－３０ａ、ｍｉＲ－３０ｂ、ｍｉＲ－３０ｃ－１、ｍｉＲ－３０ｃ－２、ｍｉＲ－３０ｄ、ｍｉＲ－３０ｅ、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－３３０、ｍｉＲ－３３１－３ｐ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－３７４ｂ、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－４７２３－５ｐ、ｍｉＲ－４９７、ｍｉＲ－６２８－５ｐ、ｍｉＲ－６４２ａ－５ｐ、ｍｉＲ－７６５、及び／またはｍｉＲ－９４０の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、前立腺癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0249】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ－１０１、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－２０４、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３６５ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４８６－３ｐ、及び／またはｍｉＲ－５３２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、網膜芽細胞腫を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【0250】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは単純ヘルペスウイルスであり、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子は、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ガンマ－３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、及びＵＳ１２からなる群から選択される。
【0251】
ペイロード分子
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、ペイロード分子をコードするポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用される場合、「ペイロード分子」とは、ウイルスの治療有効性を更に増強することができる分子を指す。本開示における使用に好適なペイロード分子としては、抗原結合分子、例えば、抗体またはその抗原結合断片、サイトカイン、ケモカイン、可溶性受容体、細胞表面受容体リガンド、二分ペプチド、酵素、及び核酸（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンタゴミル、リボザイム、アパタマー、デコイオリゴヌクレオチド、またはアンタゴミル）が挙げられる。ペイロード分子の性質は、疾患の種類及び所望される治療結果によって異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、ペイロード分子をコードするポリヌクレオチド配列の３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲに組み込まれる。かかる実施形態では、ペイロードの翻訳及びその後の発現は、対応するｍｉＲＮＡが発現される細胞では生じないか、または実質的に減少する。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、治療用ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の３’ＵＴＲ及び／または５’ ＵＴＲに挿入される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、ペイロード分子をコードするポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用される場合、「ペイロード分子」とは、ウイルスの治療有効性を更に増強することができる分子を指す。本開示における使用に好適なペイロード分子としては、抗原結合分子、例えば、抗体またはその抗原結合断片、サイトカイン、ケモカイン、可溶性受容体、細胞表面受容体リガンド、二分ペプチド、酵素、及び核酸（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンタゴミル、リボザイム、アパタマー、デコイオリゴヌクレオチド、またはアンタゴミル）が挙げられる。ペイロード分子の性質は、疾患の種類及び所望される治療結果によって異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、ペイロード分子をコードするポリヌクレオチド配列の３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲに組み込まれる。かかる実施形態では、ペイロードの翻訳及びその後の発現は、対応するｍｉＲＮＡが発現される細胞では生じないか、または実質的に減少する。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、治療用ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の３’ＵＴＲ及び／または５’ ＵＴＲに挿入される。
【0252】
いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、ペイロードタンパク質を含むか、またはそれからなる。
【0253】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、ＨＰＧＤ、ＡＤＡ２、ＨＹＡＬ１、ＣＨＰ、ＣＣＬ２１、ＩＬ－１２、抗ＣＤ４７、抗ＴＧＦβ、抗ＰＤ１、抗ＴＲＥＭ２、ＣＴＸ－ＢｉＴＥ、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つ以上のペイロードタンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ヒアルロニダーゼ－１（ＨＹＡＬ１）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、走化性阻害タンパク質（ＣＨＰ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２１（ＣＣＬ２１）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、クロロトキシン二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＣＴＸ－ＢｉＴＥ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＣＤ４７アンタゴニスト（抗ＣＤ４７）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＴＧＦβアンタゴニスト（抗ＴＧＦβ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＰＤ－１アンタゴニスト（抗ＰＤ１）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＴＲＥＭ２（骨髄系細胞に発現されるトリガー受容体２）アンタゴニスト（抗ＴＲＥＭ２）を含む。
【0254】
本明細書で使用される場合、「アンタゴニスト」という用語は、標的タンパク質に結合し、かつ標的タンパク質の活性を部分的または完全に遮断するか、阻害するか、減少させるか、または中和することができる分子を指す。アンタゴニストの非限定的な例としては、抗体またはその抗原結合断片、アプタマー、ペプチド、及び設計されたアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、標的タンパク質に結合してそれを阻害する抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片には、完全長免疫グロブリン、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、ナノボディ、または多重特異性抗体が含まれる。
【0255】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ）を含む。ＨＰＧＤの例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ１５４２８（ヒト）及びＱ８ＶＣＣ１（マウス）で見つけることができる。いくつかの実施形態では、ＨＰＧＤポリペプチドは、配列番号８７５の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＧＤポリペプチドは、配列番号８７５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＧＤポリペプチドは、配列番号８７６の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＰＧＤポリペプチドは、配列番号８７６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0256】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）を含む。ＡＤＡ２の例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｑ９ＮＺＫ５（ヒト）で見つけることができる。いくつかの実施形態では、ＡＤＡ２ポリペプチドは、配列番号８７７の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＤＡ２ポリペプチドは、配列番号８７７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0257】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ヒアルロニダーゼ－１（ＨＹＡＬ１）を含む。ＨＹＡＬ１の例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｑ１２７９４（ヒト）及びＱ９１ＺＪ９（マウス）で見つけることができる。いくつかの実施形態では、ＨＹＡＬ１ポリペプチドは、配列番号８７８の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＹＡＬ１ポリペプチドは、配列番号８７８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＹＡＬ１ポリペプチドは、配列番号８７９の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＹＡＬ１ポリペプチドは、配列番号８７９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0258】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、走化性阻害タンパク質（ＣＨＰ）を含む。ＣＨＰの例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ａ６ＱＩＧ７（黄色ブドウ球菌）で見つけることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨＰポリペプチドは、配列番号８８０の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＨＰポリペプチドは、配列番号８８０のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0259】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２１（ＣＣＬ２１）を含む。ＣＣＬ２１の例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｏ００５８５（ヒト）及びＰ８４４４４（マウス）で見つけることができる。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ２１ポリペプチドは、配列番号８８１の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ２１ポリペプチドは、配列番号８８１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ２１ポリペプチドは、配列番号８８２の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ２１ポリペプチドは、配列番号８８２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0260】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）を含む。ＩＬ－１２は、２つのジスルフィド結合サブユニットであるＩＬ－１２サブユニットアルファ（ＩＬ－１２ａ）及びＩＬ－１２サブユニットベータ（ＩＬ－１２ｂ）を含む。ＩＬ－１２ａの例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ２９４５９（ヒト）及びＰ４３４３１（マウス）で見つけることができる。ＩＬ－１２ｂの例示的なポリペプチド配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ２９４６０（ヒト）及びＰ４３４３２（マウス）で見つけることができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ａポリペプチドは、配列番号８８３の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ａポリペプチドは、配列番号８８３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ｂポリペプチドは、配列番号８８４の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ｂポリペプチドは、配列番号８８４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ａポリペプチドは、配列番号８８５の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ａポリペプチドは、配列番号８８５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ｂポリペプチドは、配列番号８８６の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ｂポリペプチドは、配列番号８８６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0261】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＣＤ４７アンタゴニスト（抗ＣＤ４７）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７は、抗ＣＤ４７ ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号８８７の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号８８７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７は、抗ＣＤ４７ ＶＨＨドメイン及びＩｇＧ１－Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号８８８の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号８８８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７は、配列番号８８８の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変ドメインまたはＶＨＨドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＧＩＩＦＫＩＮＤ（配列番号８９５）
ＣＤＲ２：ＳＴＧＧＤＥＡ（配列番号８９６）
ＣＤＲ３：ＴＡＶＩＳＴＤＲＤＧＴＥ（配列番号８９７）
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８９５～８９７に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインまたはＶＨＨドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＧＩＩＦＫＩＮＤ（配列番号８９５）
ＣＤＲ２：ＳＴＧＧＤＥＡ（配列番号８９６）
ＣＤＲ３：ＴＡＶＩＳＴＤＲＤＧＴＥ（配列番号８９７）
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８９５～８９７に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインまたはＶＨＨドメインＣＤＲを含む。
【0262】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＴＧＦβアンタゴニスト（抗ＴＧＦβ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβは、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβは、抗ＴＧＦβ ｓｃＦｖドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβポリペプチドは、配列番号８８９の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβポリペプチドは、配列番号８８９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβは、抗ＴＧＦβ ｓｃＦｖドメイン及びＩｇＧ１－Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβポリペプチドは、配列番号８９０の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβポリペプチドは、配列番号８９０のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβは、配列番号８９０の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＳＳＮＶ（配列番号８９８）
ＣＤＲ２：ＭＧＧＶＩＰＩＶＤＩＡＮ（配列番号８９９）
ＣＤＲ３：ＡＳＴＬＧＬＶＬＤＡＭＤＹ（配列番号９００）
いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８９８～９００に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、以下の軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１ ＱＳＬＧＳＳＹＬＡ（配列番号９０１）
ＣＤＲ２ ＧＡＳＳＲＡＰ（配列番号９０２）
ＣＤＲ３ ＱＱＹＡＤＳＰＩＴ（配列番号９０３）
いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０１～９０３に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＳＳＮＶ（配列番号８９８）
ＣＤＲ２：ＭＧＧＶＩＰＩＶＤＩＡＮ（配列番号８９９）
ＣＤＲ３：ＡＳＴＬＧＬＶＬＤＡＭＤＹ（配列番号９００）
いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８９８～９００に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、以下の軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１ ＱＳＬＧＳＳＹＬＡ（配列番号９０１）
ＣＤＲ２ ＧＡＳＳＲＡＰ（配列番号９０２）
ＣＤＲ３ ＱＱＹＡＤＳＰＩＴ（配列番号９０３）
いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０１～９０３に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
【0263】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＰＤ－１アンタゴニスト（抗ＰＤ１）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１は、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１は、抗ＰＤ１ ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１ポリペプチドは、配列番号８９１の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１ポリペプチドは、配列番号８９１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１は、抗ＰＤ１ ＶＨＨドメイン及びＩｇＧ１－Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１ポリペプチドは、配列番号８９２の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１ポリペプチドは、配列番号８９２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１は、配列番号８９２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変ドメインまたはＶＨＨドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＤＳＩＤＳＬＶＮ（配列番号９０４）
ＣＤＲ２：ＩＡＴＹＩＴＨＹ（配列番号９０５）
ＣＤＲ３：ＹＡＲＮＩＩＶＤＹ（配列番号９０６）
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０４～９０６に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインまたはＶＨＨドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＤＳＩＤＳＬＶＮ（配列番号９０４）
ＣＤＲ２：ＩＡＴＹＩＴＨＹ（配列番号９０５）
ＣＤＲ３：ＹＡＲＮＩＩＶＤＹ（配列番号９０６）
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０４～９０６に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインまたはＶＨＨドメインＣＤＲを含む。
【0264】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト（抗ＴＲＥＭ２）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２は、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体重鎖ポリペプチドは、配列番号８９３の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体重鎖ポリペプチドは、配列番号８９３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体軽鎖ポリペプチドは、配列番号８９４の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体軽鎖ポリペプチドは、配列番号８９４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号８９３及び８９４の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＤＹＡ（配列番号９０７）
ＣＤＲ２：ＩＳＴＹＳＳＮＴ（配列番号９０８）
ＣＤＲ３：ＡＲＤＤＧＨＹＶＹＡＭＤＹ（配列番号９０９）
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０７～９０９に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、以下の軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１ ＫＳＬＬＮＳＤＧＦＴＹ（配列番号９１０）
ＣＤＲ２ ＬＶＳ（配列番号９１１）
ＣＤＲ３ ＦＱＳＮＹＬＹＴ（配列番号９１２）
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９１０～９１２に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＤＹＡ（配列番号９０７）
ＣＤＲ２：ＩＳＴＹＳＳＮＴ（配列番号９０８）
ＣＤＲ３：ＡＲＤＤＧＨＹＶＹＡＭＤＹ（配列番号９０９）
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０７～９０９に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、以下の軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
ＣＤＲ１ ＫＳＬＬＮＳＤＧＦＴＹ（配列番号９１０）
ＣＤＲ２ ＬＶＳ（配列番号９１１）
ＣＤＲ３ ＦＱＳＮＹＬＹＴ（配列番号９１２）
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９１０～９１２に従うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３に最大１、最大２、または最大３個のアミノ酸変異を有する軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。
【0265】
いくつかの実施形態では、１つ以上のペイロード分子は、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸは、スコーピオンＣＴＸである。いくつかの実施形態では、ＣＴＸポリペプチドは、配列番号９１３の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＴＸポリペプチドは、配列番号９１３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＴＸは、小コンダクタンス塩化物チャネルを遮断し、神経膠腫細胞に優先的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子は、抗体断片も含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子は、Ｆｃドメイン（すなわち、ＣＴＸ－Ｆｃ）も含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸを含む生体分子は、Ｔ細胞エンゲージャー部分も含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分は、Ｔ細胞の表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分は、ＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合Ｔ細胞エンゲージャー部分は、配列番号９１４の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合Ｔ細胞エンゲージャー部分は、配列番号９１４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。ＣＴＸが神経膠腫細胞上の塩化物チャネルに結合するため、ＣＴＸ及びＴ細胞エンゲージャー部分を含む生体分子は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（すなわち、ＣＴＸ－ＢｉＴＥ）である。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ－ＢｉＴＥは、配列番号９１５の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ－ＢｉＴＥは、配列番号９１５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ－ＢｉＴＥは、配列番号９１６の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＴＸ－ＢｉＴＥは、配列番号９１６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【0266】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、以下の表４に列記される組み合わせのうちのいずれかを含む２つ以上のペイロード分子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。
【表4】
【0267】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、以下の表５に列記される組み合わせのうちのいずれかを含む３つ以上のペイロード分子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。
【表5-1】
【表5-2】
【表5-3】
【0268】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、以下の表６に列記される組み合わせのうちのいずれかを含む４つ以上のペイロード分子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。
【表6-1】
【表6-2】
【表6-3】
【表6-4】
【表6-5】
【表6-6】
【表6-7】
【0269】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、以下の表７に列記される組み合わせのうちのいずれかを含む５つ以上のペイロード分子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。
【表7-1】
【表7-2】
【表7-3】
【表7-4】
【表7-5】
【表7-6】
【表7-7】
【表7-8】
【表7-9】
【表7-10】
【表7-11】
【表7-12】
【表7-13】
【0270】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、内因性ｍｉＲＮＡ、遺伝子、もしくはメタロプロテイナーゼ組織阻害剤（ＴＩＭＰ）の発現を低下させるか、またはその機能を阻害するペイロード分子をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。かかる組換え腫瘍溶解性ウイルスは、本明細書では「ゲノム編集」または「微小環境リモデリング」ウイルスまたはベクターと称される。コードされたタンパク質またはオリゴヌクレオチドは、タンパク質（例えば、ＴＩＭＰ）を分解の標的とすること（例えば、ユビキチン化及びプロテオソーム分解によって、またはリソソーム分解の標的とすること）、同族受容体との相互作用を遮断すること（例えば、抗体もしくはその抗原結合断片またはペプチド阻害剤を遮断すること）、メッセンジャーＲＮＡ転写物（例えば、短干渉ＲＮＡもしくは短ヘアピンＲＮＡ）を分解すること、及び／または特定のｍｉＲＮＡ、遺伝子、もしくはタンパク質をコードするゲノムＤＮＡ配列を改変すること（例えば、エンドヌクレアーゼによって）を含む任意の数の方法で、ｍｉＲＮＡ、遺伝子、もしくはＴＩＭＰの発現を低下させるか、またはその機能を阻害し得る。
【0271】
特定の実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、発がんまたは転移に関与するｍｉＲまたは遺伝子（例えば、発がん性ｍｉＲまたはがん遺伝子）の発現を低下させる。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、発がん性ｍｉＲＮＡであるｍｉＲＮＡ（例えば、表１３に列記されるｍｉＲＮＡのうちの１つ以上）の発現または機能を低下させるペイロード分子をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、発がん性ｍｉＲＮＡの発現または機能を低下させるタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、複数の発がん性ｍｉＲＮＡの発現または機能を低下させる複数のタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１７－９２の発現を低下させ、肺癌（例えば、小細胞肺癌）の治療に使用される。他の実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－２２１及び／またはｍｉＲ－２１の発現を低下させ、神経膠芽腫を治療するために使用される。ある特定の実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１５５及び／またはｍｉＲ－１７－９２の発現を低下させ、リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、または慢性リンパ球性白血病）を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－２２１、ｍｉＲ－２２２、及び／またはｍｉＲ－１４６の発現を低下させ、甲状腺癌を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－３７２及び／またはｍｉＲ－３７３の発現を低下させ、精巣癌（例えば、精巣胚細胞腫瘍）を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１８及び／またはｍｉＲ－２２４の発現を低下させ、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）を治療するために使用される。
【0272】
一部の実施形態では、本明細書に記載の組換えウイルスベクターは、腫瘍細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を分解するペイロード分子をコードするポリヌクレオチドを含み、これにより、いくつかの態様では、ウイルス拡散の増強がもたらされる。マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、亜鉛依存性プロテアーゼであり、それらの活性に基づいて、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロムライシン、及びマトリライシンに分類される。これらのプロテアーゼは、一般に、酵素前駆体（チモーゲン）として分泌され、プロペプチドプロドメインのタンパク質分解除去によって活性化される。がんにおいてＭＭＰが果たす主要な役割は、ＥＣＭの分解であり、これにより、腫瘍浸潤及び転移が促進される。ＭＭＰは、腫瘍進行、上皮間葉転換（ＥＭＴ）、及び血管新生にも関与する。ＭＭＰは、ｍｉＲ、ならびに４つのプロテアーゼ阻害剤（ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３、及びＴＩＭＰ４）のファミリーを含むＴＩＭＰによって調節される。本開示の組換えウイルスベクターを用いてＭＭＰファミリーを負に調節するｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰを破壊することによって広範囲の腫瘍微小環境を分解することができる。これらの相互作用の多くは、複数のＭＭＰが単一のｍｉＲＮＡによって調節されることを示し、例えば、ｌｅｔ－７がＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰ－１４を調節し、ｍｉＲ－１４３がＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰ－１３を調節し、ｍｉＲ－２１８がＭＭＰ－２、ＭＭＰ－７、及びＭＭＰ－９を調節する。更に、大多数のＭＭＰが単一のＴＩＭＰマスタースイッチによって調節され得、例えば、ＴＩＭＰ１は、既知のＭＭＰのほぼ全てを阻害することが知られており、広範囲の細胞型において細胞増殖も促進し、ＴＩＭＰ２は、ＭＭＰ－１４及びＭＭＰ－２と相互作用する。
【0273】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、特に腫瘍微小環境において、細胞外マトリックスを改変することができるか、または細胞外マトリックスを改変する経路を調節することができるｍｉＲＮＡの発現または機能を低下させるタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用される微小環境リモデリングｍｉＲは、ｍｉＲを指す。いくつかの実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、１つの微小環境リモデリングｍｉＲの発現または機能を低下させる。いくつかの実施形態では、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上の微小環境リモデリングｍｉＲの発現または機能を低下させる。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、複数の微小環境リモデリングｍｉＲの発現または機能を低下させる複数のタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする複数のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の戦略を本開示の組換えウイルスベクターが利用して、ＭＭＰを負に調節するｍｉＲまたはＴＩＭＰの発現または機能をノックダウンまたは破壊することができる。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３、及びＴＩＭＰ４から選択されるＴＩＭＰの発現を低下させる。
【0274】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、宿主細胞ゲノムにおける遺伝子の発現または機能を低下させるタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、遺伝子は、発がん性遺伝子である。いくつかの態様では、遺伝子は、発がん性ｍｉＲ（例えば、表１３に列記されるｍｉＲＮＡ）、微小環境リモデリングｍｉＲ、またはＥＣＭ分解の負の調節因子（例えば、ＴＩＭＰ）をコードする。遺伝子発現及び／または機能の低下は、転写レベルで（例えば、ゲノムＤＮＡ配列を変異させる、欠失させる、もしくはサイレンシングすることによって）または翻訳レベルで（例えば、ｍＲＮＡ分解による遺伝子産物の産生を阻害することによって）達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、遺伝子配列の変異、欠失、または転写抑制を可能にすることによって遺伝子の発現または機能を低下させるヌクレアーゼをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ヌクレアーゼは、クラスター化された規則的な間隔の短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）から選択される。非限定的な例では、ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９－ＨＦ１、ＳｐＣａｓ９－ＨＦ２、ＳｐＣａｓ９－ＨＦ３、ＳｐＣａｓ９－ＨＦ４、ＳａＣａｓ９、ＦｎＣｐｆ、ＦｎＣａｓ９、ｅＳｐＣａｓ９、Ｃ２Ｃ１、Ｃ２Ｃ３、Ｃｐｆ１、Ｃａｓｌ、ＣａｓｌＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（別名、Ｃｓｎｌ及びＣｓｘ１２）、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙｌ、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅｌ、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃｌ、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒｌ、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂｌ、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘｌ７、Ｃｓｘｌ４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘｌ、Ｃｓｘｌ５、Ｃｓｆｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、及びＣｓｆ４から選択される。
【0275】
本開示の組換えウイルスベクターは、哺乳類ゲノム工学に使用することができる細菌系に基づいて操作されたヌクレアーゼ系であるＣＲＩＳＰＲ（クラスター化された規則的な間隔の短いパリンドロームリピート）／Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ関連）ヌクレアーゼ系を利用し得る。一般に、この系は、Ｃａｓヌクレアーゼ及びガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む。ｇＲＮＡは、標的ゲノムＤＮＡ配列に特異的なｃｒｉｓｐｒ－ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）及びＣａｓ結合を促進するｔｒａｃｒ－ＲＮＡ（ｔｒＲＮＡ）の２つの部分からなる。ｃｒＲＮＡ及びｔｒＲＮＡは、別個のＲＮＡオリゴヌクレオチドとして存在しても同じＲＮＡオリゴヌクレオチドで存在してもよく、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と称される。本明細書で使用される場合、「ガイドＲＮＡ」または「ｇＲＮＡ」という用語は、個々のｔｒＲＮＡと個々のｃｒＲＮＡまたはｓｇＲＮＡのいずれかとの組み合わせを指す。例えば、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６－８２１、Ｃｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９－８２３、Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８２３－８２６、Ｑｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｅｌｌ １５２：１１７３－１１８３、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．（２０１３），ｅＬｉｆｅ ２：ｅ００４７１、Ｄａｖｉｄ Ｓｅｇａｌ（２０１３）ｅＬｉｆｅ ２：ｅ００５６３、Ｒａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ８（１１）：２２８１－２３０８、Ｚｅｔｓｃｈｅ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ １６３（３）：７５９－７７１、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０２５０９７号、同第ＷＯ２００８／０２１２０７号、同第ＷＯ２０１０／０１１９６１号、同第ＷＯ２０１０／０５４１０８号、同第ＷＯ２０１０／０５４１５４号、同第ＷＯ２０１２／０５４７２６号、同第ＷＯ２０１２／１４９４７０号、同第ＷＯ２０１２／１６４５６５号、同第ＷＯ２０１３／０９８２４４号、同第ＷＯ２０１３／１２６７９４号、同第ＷＯ２０１３／１４１６８０号、及び同第ＷＯ２０１３／１４２５７８号、米国特許公開第２０１０－００９３６１７号、同第２０１３－００１１８２８号、同第２０１０－０２５７６３８号、同第２０１０－００７６０５７号、同第２０１１－０２１７７３９号、同第２０１１－０３００５３８号、同第２０１３－０２８８２５１号、及び同第２０１２－０２７７１２０号、ならびに米国特許第８，５４６，５５３号を参照されたい。
【0276】
Ｉ型系及びＩＩＩ型系を含む複数のクラス１ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系が特定され、機能的に詳細に特徴付けられており、エフェクター複合体の複雑な構造及び動態を明らかにした（Ｂｒｏｕｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００８、Ｍａｒｒａｆｆｉｎｉ ａｎｄ Ｓｏｎｔｈｅｉｍｅｒ，２００８、Ｈａｌｅ ｅｔ ａｌ．，２００９、Ｓｉｎｋｕｎａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１３、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４、Ｍｕｌｅｐａｔｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。加えて、Ｃａｓ９ファミリーの相同ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをエフェクターとして用いるいくつかのクラス２－ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系も特定され、実験的に特徴付けられている（Ｂａｒｒａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００７、Ｇａｒｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．，２０１０、Ｄｅｌｔｃｈｅｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１１、Ｓａｐｒａｎａｕｓｋａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，２０１２、Ｇａｓｉｕｎａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。最近、第２の推定クラス２－Ｖ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系がいくつかの細菌ゲノムで特定されている。推定Ｖ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系は、Ｃｐｆ１（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ及びＦｒａｎｃｉｓｅｌｌａ由来ＣＲＩＳＰＲ１）と呼ばれる、約１，３００個の大きいアミノ酸タンパク質を含む。
【0277】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰを標的とするｔｒＲＮＡ及びｃｒＲＮＡをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを更に含む。いくつかの事例では、ｔｒＲＮＡ及びｃｒＲＮＡをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、ウイルスゲノムの遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、合成インスレーターまたは天然ウイルス（例えば、ＨＳＶ）インスレーターを含むインスレート配列である。ある特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは単純ヘルペスウイルスであり、ＲＮＡ結合部位をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、内部反復接合領域（二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、ＩＣＰ４、及びＩＣＰ４７プロモーターの各々の１つのコピーを含む）、ＩＣＰ０、ＬＡＴ、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ガンマ－３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、及びＵＳ１２を含む１つ以上の遺伝子座に、またはそれらの間に挿入される。一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、ＲＮＡ結合部位をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドがＵＬ３オープンリーディングフレームとＵＬ４オープンリーディングフレームとの間の遺伝子座に挿入される。
【0278】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、抗腫瘍免疫応答を活性化または増強するペイロード分子をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、サイトカイン、ケモカイン、抗体またはその抗原結合断片、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。例えば、いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、免疫チェックポイント受容体（例えば、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＰＤ１、ＰＤＬ１など）に結合してそれを阻害する抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、抗ＰＤ１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤＬ１抗体もしくはその抗原結合断片、または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片である。
【0279】
いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、ＰＤ１アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ１アンタゴニストは、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＰＤ１アンタゴニストは、抗ＰＤ１ナノボディである。
【0280】
いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、ＩＬ１２を含む。
【0281】
いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、細胞表面受容体に結合してそれを活性化するタンパク質である。例えば、いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、４１ＢＢＬの細胞外ドメイン、ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメイン、ＦＬＴ３Ｌなどの内因性細胞表面リガンドを含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＴＮＦα、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２１、ＩＬ－３５、ＴＧＦβなど）、またはケモカイン（例えば、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１３、もしくはＸＣＬ１）である。
【0282】
いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、活性化受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＩＩａ、ＦｃγＩＩＩａ、共刺激受容体など）に結合してそれを活性化するタンパク質である。特定の実施形態では、このタンパク質は、ＥｐＣＡＭ、葉酸、Ａ２Ａ、抗ＦＧＦ２、抗ＦＧＦＲ／ＦＧＦＲ２ｂ、抗ＳＥＭＡ４Ｄ、ＣＤ１３７、ＣＤ２００、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＳＦ－１Ｒ、エンドセリンＢ受容体、ＩＳＲＥ７、ＬＦＡ－１、ＮＧ２（別名、ＳＰＥＧ４）、ＳＭＡＤ、ＳＴＩＮＧ、及びＶＣＡＭ１から選択される。
【0283】
ある特定の実施形態では、ｍｉＲＮＡ、遺伝子、またはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドは、組換え腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムの遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、合成インスレーターまたは天然ウイルス（例えば、ＨＳＶ）インスレーターを含むインスレート配列である。ある特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは単純ヘルペスウイルスであり、ＲＮＡ結合部位をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、内部反復接合領域を含む１つ以上の遺伝子座に、またはそれらの間に挿入される（二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、ＩＣＰ４、及びＩＣＰ４７プロモーター）、ＩＣＰ０、ＬＡＴ、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ガンマ－３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、及びＵＳ１２の各々の１つのコピーを含む。一実施形態では、ウイルスは単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、少なくとも１つのポリヌクレオチドがＵＬ３オープンリーディングフレームとＵＬ４オープンリーディングフレームとの間の遺伝子座に挿入される。
【0284】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ＧＢＭにおける骨髄系細胞による免疫抑制を阻害するペイロード分子をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＴＧＦβアンタゴニスト、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）、走化性阻害タンパク質（ＣＨＰ）、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ）、精子接着分子１（ＳＰＡＭ１／ＨＹＡＬ５）、またはクロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、ＣＤ４７アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７アンタゴニストは、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、ＴＧＦβアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβアンタゴニストは、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）を含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、走化性阻害タンパク質（ＣＨＰ／ＣＨＩＰＳ）を含む。いくつかの実施形態では、走化性阻害タンパク質は、黄色ブドウ球菌に由来する。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ／ＰＧＤＨ）を含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、精子接着分子１（ＳＰＡＭ１／ＨＹＡＬ５）を含む。いくつかの実施形態では、ペイロード分子は、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＸは、スコーピオンＣＴＸである。いくつかの実施形態では、クロロトキシンを含む生体分子は、抗体断片も含む。いくつかの実施形態では、クロロトキシンを含む生体分子は、Ｆｃドメイン（すなわち、ＣＴＸ－Ｆｃ）も含む。いくつかの実施形態では、クロロトキシンを含む生体分子は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）または二重特異性軽Ｔ細胞エンゲージャー（ＬｉＴＥ）（すなわち、ＣＴＸ－ＢｉＴＥもしくはＣＴＸ－ＬｉＴＥ）も含む。
【0285】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。Ｍｅｔｚ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ，２５（１０）：５７１－８０，２０１２）に記載のものなどのプロテアーゼ活性化抗体は、保護キャップのプロテアーゼ切断後に活性化され、標的にのみ結合する。いくつかの事例では、腫瘍微小環境は、周囲の健常組織から十分に分化した一連のプロテアーゼを有する。例えば、プロテアーゼカテプシンＢは、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、大腸癌、胃癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、及び甲状腺癌を含む多数のがんで過剰発現される。ヒト細胞によって合成されたプロテアーゼの完全なリストからなるヒトデグラドームは、（最大数から最小数の順に）メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、セリン、システイン、トレオニン、及びアスパラギン酸プロテアーゼの大きく分けて５つのクラスに分類される少なくとも５６９個のプロテアーゼで構成されている（Ｌｏｐｅｚ－Ｏｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，７（１０）：８００－８，２００７）。特に、ＭＭＰによって特異的に切断されるプロテアーゼ抗体は、ＭＭＰが細胞外領域及び細胞周囲領域に存在するため、本明細書に記載の組換えウイルスベクターを腫瘍微小環境に標的化する優れた手段として機能することができる。
【0286】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼ活性化抗体は、ウイルス糖タンパク質エンベロープに組み込まれる。プロテアーゼ活性化抗体を本開示の組換えウイルスベクター（例えば、ＨＳＶベクター）の糖タンパク質エンベロープに組み込んで、治療指数を増加させ、オフターゲット感染を減少させることができる。ＨＳＶベクターの場合、いくつかの実施形態では、糖タンパク質は、ｇＣまたはｇＤであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、プロテアーゼ活性化抗体をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ活性化抗体は、システインカテプシン、アスパラギン酸カテプシン、カリクレイン（ｈＫ）、セリンプロテアーゼ、カスパーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ならびにディスインテグリン及びメタロプロテアーゼ（ＡＤＡＭ）から選択されるプロテアーゼによって活性化される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、カテプシンＫ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＥ、カテプシンＤ、ｈＫ１、ＰＳＡ（ｈＫ３）、ｈＫ１０、ｈＫ１５、ｕＰＡ、ｕＰＡＲ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－１６、ＭＭＰ－１７、ＭＭＰ－１８、ＭＭＰ－１９、ＭＭＰ－２０、ＭＭＰ－２１、ＭＭＰ－２３Ａ、ＭＭＰ－２３Ｂ、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－２５、ＭＭＰ－２６、ＭＭＰ－２７、またはＭＭＰ－２８から選択される。
【0287】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ活性化抗体は、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現されるタンパク質に結合する。ある特定の態様では、プロテアーゼ活性化抗体は、ＮＫＧ２Ｄ、ｃ－ｍｅｔ、ＨＧＦＲ、ＣＤ８、ヘパラン硫酸、ＶＳＰＧ４（別名、ＮＧ２）、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＣＸＣＲ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＬＣ－３、アネキシンＩＩ、ヒトトランスフェリン受容体、またはＥｐＣＡＭに結合する。ある特定の事例では、複数のプロテアーゼ活性化抗体を単一のウイルスベクター粒子に組み込んで、多様な腫瘍組織型が標的化されることを確実にすることができる。例えば、少なくとも１、２、３、４、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のプロテアーゼ活性化抗体がウイルス糖タンパク質エンベロープに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のプロテアーゼ活性化抗体をコードする少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現される第１のタンパク質に結合する第１のプロテアーゼ活性化抗体と、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現される第２のタンパク質に結合する第２のプロテアーゼ活性化抗体とを含む。更なる実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現される複数のタンパク質に結合する複数のプロテアーゼ活性化抗体を含む。腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であるプロテアーゼ活性化抗体を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、完全長免疫グロブリン、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体、または多重特異性抗体である抗体を含む。
【0288】
いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要な１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上のマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列、１つ以上のタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチド（ここで、このタンパク質またはオリゴヌクレオチドが、ｍｉＲ、遺伝子、またはＴＩＭＰの発現を低下させるか、またはその機能を阻害する）、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん性細胞におけるウイルス複製に必要なウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピー、及び／または発がん性ｍｉＲＮＡもしくは発がん性遺伝子の発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌクレオチド、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞におけるウイルス複製に必要なウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピー、及び／または発がん性ｍｉＲＮＡもしくは発がん性遺伝子の発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。更なる実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞におけるウイルス複製に必要なウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピー、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。一実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞におけるウイルス複製に必要なウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列の複数のコピー、及び／または発がん性ｍｉＲＮＡもしくは発がん性遺伝子の発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌクレオチド、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。いくつかの特定の実施形態では、本段落に記載の腫瘍溶解性ウイルスは単純ヘルペスウイルスであり、非がん性細胞におけるウイルス複製に必要なウイルス遺伝子は、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ガンマ－３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、及びＵＳ１２である。
【0289】
ある特定の態様では、本開示は、発がん性ｍｉＲＮＡまたは発がん性遺伝子の発現を低下させることを標的としたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌクレオチドと、微小環境リモデリングｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチドとを含む組換え腫瘍溶解性ウイルスに関する。他の実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、発がん性ｍｉＲＮＡまたは発がん性遺伝子の発現を低下させることを標的としたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体とを含む。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、微小環境リモデリングｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体とを含む。一実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、発がん性ｍｉＲＮＡもしくは発がん性遺伝子の発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌクレオチド、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩＭＰの発現を低下させることを標的としたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。
【0290】
コドン最適化及びＯＲＦ Ｇ／Ｃ含有量
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、比較的高いＧ／Ｃ含有量を有する１つ以上の導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、比較的高いＧ／Ｃ含有量を有する１つ以上の導入遺伝子を含む。
【0291】
いずれの特定の理論にも束縛されるものではないが、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ、別名、コード領域）において比較的高いＧ／Ｃ含有量を有する導入遺伝子（複数可）が、本開示の組換えヘルペスウイルスに組み込まれたときに、ＯＲＦにおいてより低いＧ／Ｃ含有量を有する導入遺伝子と比較して、対応するペイロード分子の有意により高い発現を有することが企図される。
【0292】
本明細書で使用される場合、「グアノシン／シトシン含有量」または「Ｇ／Ｃ含有量」という用語は、グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）のいずれかであるＤＮＡまたはＲＮＡ分子中の窒素含有塩基のパーセンテージを指す。
【0293】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の導入遺伝子のＯＲＦのＧ／Ｃ含有量は、対応する野生型（非修飾）コード領域のＧ／Ｃ含有量と比較して増加する。ＯＲＦのコードされたアミノ酸配列は、好ましくは、対応する野生型（非修飾）コード領域のコードされたアミノ酸配列と比較して修飾されていない。これは、コドン最適化によって達成することができる。コドン最適化のための方法は、当該技術分野で既知である。
【0294】
本明細書に定義される修飾ＲＮＡのコード領域によってコードされるアミノ酸に応じて、野生型ＯＲＦのＧ／Ｃ含有量と比較してＧ／Ｃ含有量を増加させるためのＯＲＦの修飾の様々な可能性が存在する。
【0295】
いくつかの実施形態では、ＧまたはＣヌクレオチドのみを含むコドンによってコードされるアミノ酸の場合、コドンの修飾は必要ではない。いくつかの実施形態では、Ｐｒｏのコドン（ＣＣＣまたはＣＣＧ）、Ａｒｇのコドン（ＣＧＣまたはＣＧＧ）、Ａｌａのコドン（ＧＣＣまたはＧＣＧ）、及びＧｌｙのコドン（ＧＧＣまたはＧＧＧ）は、修飾を必要としない。
【0296】
いくつかの実施形態では、Ａ及び／またはＴ／Ｕヌクレオチドを含むコドンは、同じアミノ酸をコードするが、Ａ及び／またはＴ／Ｕを含まない他のコドンの置換によって修飾され得る。例えば、
－ Ｐｒｏのコドンは、ＣＣＴまたはＣＣＡからＣＣＣまたはＣＣＧに修飾され得る。
－ Ａｒｇのコドンは、ＣＧＴまたはＣＧＡまたはＡＧＡまたはＡＧＧからＣＧＣまたはＣＧＧに修飾され得る。
－ Ａｌａのコドンは、ＧＣＴまたはＧＣＡからＧＣＣまたはＧＣＧに修飾され得る。
－ Ｇｌｙのコドンは、ＧＧＴまたはＧＧＡからＧＧＣまたはＧＧＧに修飾され得る。
－ Ｐｒｏのコドンは、ＣＣＴまたはＣＣＡからＣＣＣまたはＣＣＧに修飾され得る。
－ Ａｒｇのコドンは、ＣＧＴまたはＣＧＡまたはＡＧＡまたはＡＧＧからＣＧＣまたはＣＧＧに修飾され得る。
－ Ａｌａのコドンは、ＧＣＴまたはＧＣＡからＧＣＣまたはＧＣＧに修飾され得る。
－ Ｇｌｙのコドンは、ＧＧＴまたはＧＧＡからＧＧＣまたはＧＧＧに修飾され得る。
【0297】
いくつかの実施形態では、ＡまたはＴ／Ｕヌクレオチドをコドンから除去することはできないが、より低い含有量のＡ及び／またはＴ／Ｕヌクレオチドを含むコドンを使用することによってＡ及びＴ／Ｕ含有量を減少させることが可能である。例えば、
－ Ｐｈｅのコドンは、ＴＴＴからＴＴＣに修飾され得る。
－ Ｌｅｕのコドンは、ＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、またはＣＴＡからＣＴＣまたはＣＴＧに修飾され得る。
－ Ｓｅｒのコドンは、ＴＣＴまたはＴＣＡまたはＡＧＴからＴＣＣ、ＴＣＧ、またはＡＧＣに修飾され得る。
－ Ｔｙｒのコドンは、ＴＡＴからＴＡＣに修飾され得る。
－ Ｃｙｓのコドンは、ＴＧＴからＴＧＣに修飾され得る。
－ Ｈｉｓのコドンは、ＣＡＴからＣＡＣに修飾され得る。
－ Ｇｌｎのコドンは、ＣＡＡからＣＡＧに修飾され得る。
－ Ｉｌｅのコドンは、ＡＴＴまたはＡＴＡからＡＴＣに修飾され得る。
－ Ｔｈｒのコドンは、ＡＣＴまたはＡＣＡからＡＣＣまたはＡＣＧに修飾され得る。
－ Ａｓｎのコドンは、ＡＡＴからＡＡＣに修飾され得る。
－ Ｌｙｓのコドンは、ＡＡＡからＡＡＧに修飾され得る。
－ Ｖａｌのコドンは、ＧＴＴまたはＧＴＡからＧＴＣまたはＧＴＧに修飾され得る。
－ Ａｓｐのコドンは、ＧＡＴからＧＡＣに修飾され得る。
－ Ｇｌｕのコドンは、ＧＡＡからＧＡＧに修飾され得る。
－終止コドンＵＡＡは、ＴＡＧまたはＴＧＡに修飾され得る。
－ Ｐｈｅのコドンは、ＴＴＴからＴＴＣに修飾され得る。
－ Ｌｅｕのコドンは、ＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、またはＣＴＡからＣＴＣまたはＣＴＧに修飾され得る。
－ Ｓｅｒのコドンは、ＴＣＴまたはＴＣＡまたはＡＧＴからＴＣＣ、ＴＣＧ、またはＡＧＣに修飾され得る。
－ Ｔｙｒのコドンは、ＴＡＴからＴＡＣに修飾され得る。
－ Ｃｙｓのコドンは、ＴＧＴからＴＧＣに修飾され得る。
－ Ｈｉｓのコドンは、ＣＡＴからＣＡＣに修飾され得る。
－ Ｇｌｎのコドンは、ＣＡＡからＣＡＧに修飾され得る。
－ Ｉｌｅのコドンは、ＡＴＴまたはＡＴＡからＡＴＣに修飾され得る。
－ Ｔｈｒのコドンは、ＡＣＴまたはＡＣＡからＡＣＣまたはＡＣＧに修飾され得る。
－ Ａｓｎのコドンは、ＡＡＴからＡＡＣに修飾され得る。
－ Ｌｙｓのコドンは、ＡＡＡからＡＡＧに修飾され得る。
－ Ｖａｌのコドンは、ＧＴＴまたはＧＴＡからＧＴＣまたはＧＴＧに修飾され得る。
－ Ａｓｐのコドンは、ＧＡＴからＧＡＣに修飾され得る。
－ Ｇｌｕのコドンは、ＧＡＡからＧＡＧに修飾され得る。
－終止コドンＵＡＡは、ＴＡＧまたはＴＧＡに修飾され得る。
【0298】
いくつかの実施形態では、Ｍｅｔのコドン（ＡＴＧ）及びＴｒｐのコドン（ＴＧＧ）は修飾されない。
【0299】
上に列記された置換は、開始配列（例えば、野生型ＯＲＦ）と比較して、ＯＲＦのコード領域のＧ／Ｃ含有量を増加させるために、個別にまたは任意の可能な組み合わせでのいずれかで使用することができる。
【0300】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の導入遺伝子のＯＲＦのＧ／Ｃ含有量は、野生型コード領域または開始ＯＲＦ配列のＧ／Ｃ含有量と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、または少なくとも３０％増加する。いくつかの実施形態では、１つ以上の導入遺伝子のＯＲＦ内の置換可能なコドンの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または更には１００％が置換され、それにより、当該ＯＲＦのＧ／Ｃ含有量が増加する。
【0301】
いくつかの実施形態では、コドン最適化は、ＯＲＦ内に存在する「希少コドン」を除去し、それを、細胞内で比較的頻繁に存在し、かつ比較的希少なｔＲＮＡと同じアミノ酸を運搬するｔＲＮＡをコードするコドンによって置き換えることを更に含む。どのｔＲＮＡが細胞内で比較的頻繁に生じるか、かつ対照的にどのｔＲＮＡが比較的稀にしか生じないかは、当業者に知られている。例えば、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる、Ａｋａｓｈｉ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．２００１，１１（６）：６６０－６６６を参照されたい。
【0302】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも６０％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも６１％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも６２％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも６３％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも５９％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、または少なくとも７０％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦは、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、または約７０％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）の少なくとも１つのＯＲＦは、５６％～５７％、５７％～５８％、５８％～５９％、５９％～６０％、６０％～６１％、６１％～６２％、６２％～６３％、６３％～６４％、６４％～６５％、６５％～６６％、６６％～６７％、６７％～６８％、６８％～６９％、６９％～７０％、５６％～５８％、５７％～５９％、５８％～６０％、５９％～６１％、６０％～６２％、６１％～６３％、６２％～６４％、６３％～６５％、６４％～６６％、６５％～６７％、６６％～６８％、６７％～６９％、６８％～７０％、５６％～５９％、５７％～６０％、５８％～６１％、５９％～６２％、６０％～６３％、６１％～６４％、６２％～６５％、６３％～６６％、６４％～６７％、６５％～６８％、６６％～６９％、６７％～７０％、５６％～６０％、５７％～６１％、５８％～６２％、５９％～６３％、６０％～６４％、６１％～６５％、６２％～６６％、６３％～６７％、６４％～６８％、６５％～６９％、６６％～７０％、５６％～６１％、５７％～６２％、５８％～６３％、５９％～６４％、６０％～６５％、６１％～６６％、６２％～６７％、６３％～６８％、６４％～６９％、６５％～７０％、５６％～６２％、５７％～６３％、５８％～６４％、５９％～６５％、６０％～６６％、６１％～６７％、６２％～６８％、６３％～６９％、６４％～７０％、５６％～６３％、５７％～６４％、５８％～６５％、５９％～６６％、６０％～６７％、６１％～６８％、６２％～６９％、６３％～７０％、５６％～６４％、５７％～６５％、５８％～６６％、５９％～６７％、６０％～６８％、６１％～６９％、６２％～７０％、５６％～６５％、５７％～６６％、５８％～６７％、５９％～６８％、６０％～６９％、６１％～７０％、５６％～６６％、５７％～６７％、５８％～６８％、５９％～６９％、６０％～７０％、５６％～６７％、５７％～６８％、５８％～６９％、５９％～７０％、５６％～６８％、５７％～６９％、５８％～７０％、５６％～６９％、５７％～７０％、または５６％～７０％のＧ／Ｃ含有率を有する。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つの導入遺伝子、少なくとも６つの導入遺伝子である。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１個の導入遺伝子である。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、全ての導入遺伝子である。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－１２をコードする１つ以上の導入遺伝子、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、ＨＰＧＤ、及び／またはＣＴＸを含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－１２をコードする導入遺伝子、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－１２をコードする導入遺伝子、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、及びＨＰＧＤを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－１２をコードする導入遺伝子、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、及びＣＴＸを含む生体分子を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスの導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－１２をコードする導入遺伝子、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、ＨＰＧＤ、及びＣＴＸを含む生体分子を含む。
【0303】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスにおける導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロード分子の発現は、対照腫瘍溶解性ウイルスにおける同じペイロード分子をコードする対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、または少なくとも１０倍高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロード分子の発現は、対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも２倍高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロード分子の発現は、対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも３倍高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロード分子の発現は、対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも５倍高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロード分子の発現は、対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも８倍高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロード分子の発現は、対照ＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも１０倍高い。当業者であれば、適切な対照ＯＲＦ／対照ウイルスを容易に認識するであろう。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、ペイロードタンパク質をコードする野生型ポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、ホモサピエンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、５５％以下、５４％以下、５３％以下、５２％以下、５１％以下、５０％以下、４９％以下、４８％以下、または４７％以下のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、約５５％、約５４％、約５３％、約５２％、約５１％、約５０％、約４９％、約４８％、または約４７％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、約５０％のＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、対照ＯＲＦは、約５２％のＧ／Ｃ含有量を有する。
【0304】
いくつかの実施形態では、１つ以上の導入遺伝子（複数可）のＯＲＦ（複数可）は、アリールハロ呼吸（ａｒｙｌ－ｈａｌｏｒｅｓｐｉｒｉｎｇ）通性嫌気性粘液細菌のコドン使用に基づいてコドン最適化される。いくつかの実施形態では、１つ以上の導入遺伝子（複数可）のＯＲＦ（複数可）は、アナエロミュクソバクテル・デハロゲナンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される。
【0305】
いくつかの実施形態では、高Ｇ／Ｃ含有量ＯＲＦのうちの１つ以上は、抗体またはその抗原結合断片をコードする。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に由来するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ－Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＯＲＦは、ＴＲＥＭ２結合抗体またはその抗原結合断片をコードし、配列番号９３８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＲＦは、ＰＤ１アンタゴニストをコードし、配列番号９３７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＲＦは、ＣＴＸを含む生体分子をコードし、配列番号９４０または９４１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。
【0306】
いくつかの実施形態では、高Ｇ／Ｃ含有量ＯＲＦのうちの１つ以上は、サイトカイン、ケモカイン、受容体、受容体リガンド、酵素、及び／またはレポータータンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＯＲＦは、ＩＬ－１２をコードし、配列番号９３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＲＦは、ＨＰＧＤをコードし、配列番号９３９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。
【0307】
再標的化
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、再標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスタンパク質（例えば、ｇＤ）のうちの１つに挿入された再標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞である。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、腫瘍溶解性ウイルスが標的細胞に感染することを可能にするか、またはその能力を増強する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、再標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスタンパク質（例えば、ｇＤ）のうちの１つに挿入された再標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞である。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、腫瘍溶解性ウイルスが標的細胞に感染することを可能にするか、またはその能力を増強する。
【0308】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、腫瘍溶解性ウイルスが再標的化ドメインを有しない対照腫瘍溶解性ウイルスに耐性を示す標的細胞に感染することを可能にする。例えば、ネクチン－１は、単純ヘルペスウイルスの侵入受容体である。ネクチン－１発現を有しない（または最小限しか有しない）細胞は、通常、ＨＳＶに耐性を示す。ネクチン－１発現及び単純ヘルペスウイルス感染の更なる考察は、例えば、Ｇｕｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｖｉｒｏｌ．２００６；５０（１）：５９－６６、Ｉｓｈｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２０１９）１３４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ＿１）：３２４２、Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．（２０１８）８：１３９３０、及びＡｌａｙｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ．（２０２０）；１０：５０９５で見つけることができ、これらの各々の内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0309】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメインをＨＳＶに組み込むことにより、ウイルスが、標的タンパク質を発現するがネクチン－１は発現しない細胞に感染することが可能になる。
【0310】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメインを腫瘍溶解性ウイルスに挿入するために、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドがウイルスのウイルスゲノムの対応する領域に組み込まれる。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）をコードするＵＳ６遺伝子のオープンリーディングフレームに挿入される。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号９２１のアミノ酸６～２４に対応するアミノ酸配列をコードするＵＳ６遺伝子領域を置き換える。
【0311】
いくつかの実施形態では、標的細胞によって発現される標的タンパク質は、１つ以上のインテグリンを含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、インテグリンα５β１を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、インテグリンαｖβ１を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、インテグリンαｖβ３を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、インテグリンαｖβ６を含む。
【0312】
いくつかの実施形態では、標的細胞によって発現される標的タンパク質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）またはその変異体を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＥＧＦＲを含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）を含む。ＥＧＦＲバリアントＩＩＩの説明は、例えば、Ｐａｄｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｏｎｃｏｌ．２０１５；５：５で見つけることができ、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0313】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合することができるノッチンペプチドを含む。ノッチンペプチド、または阻害剤シスチンノット（ＩＣＫ）は、分子内ノットを形成し、かつそれらに高温、酵素分解、過度のｐＨ及び機械的ストレスに対する構造的及び機能的耐性を付与する、少なくとも３つの織り合わされたジスルフィド架橋の存在を特徴とする超安定ミニタンパク質のファミリーである。典型的には、ノッチンは、約３０～５０残基長である。ノッチンの説明、及びノッチンの配列、構造、及び機能を格納するデータベース（ＫＮＯＴＴＩＮ）は、例えば、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１８ Ｊａｎ ４；４６（Ｄ１）：Ｄ４５４－Ｄ４５８で見つけることができ、その内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。いくつかの実施形態では、ノッチンを含む再標的化ドメインは、５０個以下、４５個以下、４０個以下、または３５個以下のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、ノッチンドメインは、Ｅｃｂａｌｌｉｕｍ ｅｌａｔｅｒｉｕｍトリプシン阻害剤ＩＩ（ＥＥＴＩ－ＩＩトリプシン阻害剤）に由来する。いくつかの実施形態では、ノッチンドメインは、配列番号９２２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ノッチンドメインは、１つ以上のインテグリン（例えば、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、またはそれらの組み合わせ）に結合する。
【0314】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合することができる免疫グロブリンドメインを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、重鎖のみ抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）または新規抗原受容体免疫グロブリンの可変断片（Ｖ－ＮＡＲ）の結合ドメインまたはそれに由来する結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、１５０個以下、１４０個以下、または１３０個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、１５０個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、１１０～１５０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、配列番号９２３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ノッチンドメインは、ＥＧＦＲ及び／またはその変異体（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）に結合する。
【0315】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、５０個以下、４５個以下、４０個以下、または３５個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、１５０個以下、１４０個以下、または１３０個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、再標的化ドメインは、１１０～１５０個のアミノ酸を含む。
【0316】
いくつかの実施形態では、再標的化ドメイン（及び／または再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチド）を含む腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）は、標的タンパク質を発現する標的細胞に感染することができる。いくつかの実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞である。いくつかの実施形態では、神経膠芽腫細胞は、ネクチン－１発現を有しない。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ネクチン－１発現を有しないＶｅｒｏ細胞（例えば、ネクチン－１ノックアウト細胞）である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ＥＧＦＲを発現する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ＥＧＦＲ変異体（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）を発現する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、１つ以上のインテグリン（例えば、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、またはそれらの組み合わせ）を発現する。
【0317】
複製忠実度及びアシクロビル感受性
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスゲノムの複製忠実度を増加させる変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＤＮＡポリメラーゼ内に位置する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスゲノムの複製忠実度を増加させる変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＤＮＡポリメラーゼ内に位置する。
【0318】
ヘルペスウイルスのＵＬ３０ウイルス遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）をコードする。いくつかの実施形態では、コードされたＤＰＣＳは、変異を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、ヘルペスウイルスの複製忠実度を増加させる。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、ヘルペスウイルスのＤＮＡ複製忠実度を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも５倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、ヘルペスウイルスのＤＮＡ複製忠実度を少なくとも１倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、配列番号９１７のＬ７７４に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、変異は、配列番号９１７のＬ７７４Ｆに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、コードされたＤＰＣＳは、配列番号９１７のＬ７７４に対応するアミノ酸位置の変異を除いて、配列番号９１７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。ＤＰＣＳ変異に関する考察は、例えば、Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２００４ Ｊａｎ；７８（２）：６５０－６５７で見つけることができ、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0319】
いくつかの実施形態では、ＤＰＣＳの変異は、複製忠実度を増加させるにもかかわらず、アシクロビル及びその類似体に対するヘルペスウイルスの感受性を望ましくないほど低下させる。アシクロビル及び／またはその類似体は、（例えば、ＣＮＳにおける非がん性細胞への）腫瘍溶解性ＨＳＶ（ｏＨＳＶ）感染の望ましくない播種を制御するための安全対策として使用することができる抗ＨＳＶ薬である。これらの薬は、インビボでＨＳＶ感染部位を見つけるためのイメージングツールとしても使用され得る。アシクロビル及びその類似体の更なる説明は、例えば、Ｋｌｙｓｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ ＭｅｄＣｈｅｍ．２０２０；２７（２４）：４１１８－４１３７で見つけることができ、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0320】
したがって、いくつかの実施形態では、本開示の組換えヘルペスウイルスは、アシクロビルに対するその感受性を部分的または完全に回復させるまたは更に増強する変異を更に含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＵＬ２３ウイルス遺伝子内に位置し、ＵＬ２３によってコードされるチミジンキナーゼ（ＴＫ）に変異をもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、及び／またはＬ１６９に対応する１つ以上のアミノ酸位置にある。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、及び／またはＬ１６９に対応するものから選択される２、３、４、または５個のアミノ酸位置にある。いくつかの実施形態では、変異（複数可）は、アミノ酸置換（複数可）である。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異（複数可）は、
（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ａ、及びＡ１６８Ｆに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｎに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫは、本段落に列挙されるＴＫ変異（複数可）を除いて、配列番号９１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。ＴＫ変異（複数可）についての更なる考察は、例えば、Ｂｌａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００１ Ａｐｒ １；６１（７）：３０２２－６で見つけることができ、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ａ、及びＡ１６８Ｆに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異は、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｎに対応するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＫは、本段落に列挙されるＴＫ変異（複数可）を除いて、配列番号９１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。ＴＫ変異（複数可）についての更なる考察は、例えば、Ｂｌａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００１ Ａｐｒ １；６１（７）：３０２２－６で見つけることができ、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0321】
アシクロビルの有効性は、アシクロビル（例えば、ＤＰＣＳ Ｌ７７４Ｆ変異を含むＨＳＶ）に対してより高い耐性を示す（例えば、高いＩＣ９０／ＩＣ５０を有する）ヘルペスウイルスに感染した細胞において有意に低下し得る。この問題は、ＨＳＶ－ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株などのアシクロビルに対して本質的に感受性が低い株に由来するＨＳＶにおいてより顕著であり得る。アシクロビルのバイオアベイラビリティは、経口投与された場合、ヒトの中枢神経系において約１．７６ｕｇ／ｍｌである。したがって、いくつかの実施形態では、本開示の組換えヘルペスウイルスは、０．５ｕｇ／ｍｌ未満、１．０ｕｇ／ｍｌ未満、１．５ｕｇ／ｍｌ未満、または２．０ｕｇ／ｍｌ未満のアシクロビルＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、本開示の組換えヘルペスウイルスは、０．５ｕｇ／ｍｌ未満のアシクロビルＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、本開示の組換えヘルペスウイルスは、０．４ｕｇ／ｍｌ未満のアシクロビルＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、本開示の組換えヘルペスウイルスは、０．３ｕｇ／ｍｌ未満のアシクロビルＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、本開示の組換えヘルペスウイルスは、０．２ｕｇ／ｍｌ未満のアシクロビルＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異（複数可）は、ヘルペスウイルスに対するアシクロビルのＩＣ５０を少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍減少させる。いくつかの実施形態では、ＴＫの変異（複数可）は、ヘルペスウイルスに対するアシクロビルのＩＣ５０を少なくとも１０倍減少させる。アシクロビルＩＣ９０／ＩＣ５０の決定は当該技術分野で既知であり、以下の実施例６にも記載されている。
【0322】
ＵＬ３０変異（複数可）によって引き起こされるアシクロビル耐性を回復させるためのこの解決策は、ＵＬ２３によってコードされるＴＫの相補的変異（複数可）が、ＴＫのかかる変異（複数可）が天然リガンドチミジンに対するＴＫの親和性を低下させる可能性が高いにもかかわらず、本明細書に記載のウイルスの適応性を損なわないという驚くべき発見に関連する（それ故に、当業者であれば、ＴＫがノックアウトまたはノックダウンされたときに観察されたものと同様に、代わりにより低いウイルス適応性を観察することを期待するであろう）。いずれの特定の理論にも束縛されるものではないが、ＴＫに導入された相補的変異（複数可）が、チミジン酵素産物の利用能を、変異ＤＰＣＳを再感作させて低レベルのアシクロビルをもたらすのに十分なレベルまで低下させるが、変異ＴＫが依然として変異ＤＰＣＳの複製忠実度及び全ウイルス適応性を維持するのに十分な酵素産物を提供すると仮定される。
【0323】
一態様では、本開示の組換えヘルペスウイルス及びアシクロビルなどの小分子は、インビボでヘルペスウイルスの感染部位（例えば、腫瘍部位）をイメージングする方法において一緒に使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、本開示の組換えヘルペスウイルス及び低分子（例えば、アシクロビル）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、小分子は、放射性同位体標識アシクロビルである。いくつかの実施形態では、放射性同位体標識は、フッ素－１８（１８Ｆ）標識を含む。
【0324】
合胞体変異体及びウイルス産生
一態様では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、増強された融合性を有する。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、標的細胞に感染すると、増強された融合性を有しない対照腫瘍溶解性ウイルスと比較して、より高い程度の合胞体形成を引き起こす。
一態様では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、増強された融合性を有する。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、標的細胞に感染すると、増強された融合性を有しない対照腫瘍溶解性ウイルスと比較して、より高い程度の合胞体形成を引き起こす。
【0325】
腫瘍溶解性ウイルスの場合、増強された融合性は、合胞体の形成をもたらす細胞間融合を誘導し、腫瘍細胞における腫瘍溶解及びウイルス拡散を改善し、免疫刺激性ＤＡＭＰ（損傷関連分子パターン）を放出することにより免疫原性を増強する。本明細書で使用される場合、「合胞体」という用語は、複数の核を有する大きい無細胞領域、すなわち、細胞質の多核領域として組織生検または組織培養試料中に現れる細胞間融合を指す。
【0326】
「合胞体変異」という用語は、合胞体形成を誘導するポリペプチドの能力を増加させる変異（すなわち、「増強された融合活性」または「増強された融合性」）を指す。いくつかの実施形態では、合胞体変異は、合胞体変異を有しない対照ポリペプチドと比較して、合胞体形成を誘導するポリペプチドの能力を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍増加させる。いくつかの実施形態では、合胞体変異は、合胞体変異を有しない対照ポリペプチドと比較して、合胞体形成を誘導するポリペプチドの能力を少なくとも１００％増加させる。合胞体形成の誘導は、合胞体を形成するように誘導される細胞の数に基づいて測定され得る。ポリペプチドの融合性（合胞体形成を誘導する能力）を測定するための方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｍｅｌａｎｃｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２００５ Ｊａｎ；７９（１）：２９９－３１３を参照されたく、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0327】
ＨＳＶの場合、ｇＫ、ｇＢ、ＵＬ２０、及び／またはＵＬ２４に合胞体変異（複数可）を導入することによる融合性の増強が、例えば、ＵＳ２０２１０３８６８０７及びＦａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ．２０１７ Ｍａｒ ３；７：４３７１２に記載されており、これらの各々の内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0328】
しかしながら、かかる増強された融合性は、多くの場合、ウイルス産生中にウイルス力価を低下させ、それ故に、それらの臨床応用を妨げる。この問題を克服するために、本開示の一態様は、ウイルス産生中に、融合性タンパク質（増強された融合性を有するタンパク質）の発現を制限し、代わりに増強された融合性を有しない対応タンパク質の発現を好む発現系に関する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質（増強された融合性を有するタンパク質）の発現を制限することは、産生細胞で発現される１つ以上のｍｉＲＮＡの標的配列を含むｍｉＲ－ＴＳカセットを、そのタンパク質をコードする遺伝子座に挿入することによって達成される。
【0329】
いくつかの実施形態では、増強された融合性を有しない対応タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされる導入遺伝子によって発現される。いくつかの実施形態では、増強された融合性を有しない対応タンパク質は、ウイルスゲノムから分離された産生細胞で導入遺伝子によって発現される。
【0330】
ＨＳＶなどのヘルペスウイルスの場合、いくつかの実施形態では、この戦略は、標的細胞に感染したときに合胞体形成を誘導するＨＳＶの能力を増強する１つ以上の変異（すなわち、合胞体変異（複数可））を含むｇＢ及び／またはｇＫタンパク質に適用することができる。いずれの特定の理論にも束縛されるものではないが、ｇＢ及び／またはｇＫにおけるこれらの合胞体変異が、ｇＢ／ｇＫ融合性タンパク質を活性化するのに必要な受容体会合閾値を低下させることによって作用し、これにより、ウイルス産生中に、ウイルス粒子の多くがｇＢ／ｇＫタンパク質を不活性融合後コンフォメーションで含むようになり、それ故に、ウイルス収量を低下させると仮定される。
【0331】
したがって、（例えば、Ｖｅｒｏ細胞における）ウイルス産生中のＨＳＶ合胞体変異体の収量を改善するために、ｇＢ及び／またはｇＫタンパク質の非合胞体バージョンならびに合胞体変異体の共発現を可能にする発現系を確立した。いくつかの実施形態では、この戦略は、活性コンフォメーションでより高い割合のｇＢ及び／またはｇＫタンパク質を含むウイルスエンベロープの生成を促進する。
【0332】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、第１のｇＢと、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＢとをコードする。いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、内因性ｇＢ遺伝子座によってコードされ、第２のｇＢは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＢは、内因性ｇＢ遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に位置する。
【0333】
いくつかの実施形態では、本開示のヘルペスウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、第１のｇＫと、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＫとをコードする。いくつかの実施形態では、第１のｇＫは、内因性ｇＫ遺伝子座によってコードされ、第２のｇＫは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＫは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＫは、内因性ｇＫ遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に位置する。
【0334】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２０と、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２０とをコードする。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０は、内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされ、第２のＵＬ２０は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２０は、外因性発現カセットによってコードされ、第２のＵＬ２０は、内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に位置する。
【0335】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムは、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、第１のｇＨと、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、第２のｇＨとをコードする。いくつかの実施形態では、第１のｇＨは、内因性ｇＨ遺伝子座によってコードされ、第２のｇＨは、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のｇＨは、外因性発現カセットによってコードされ、第２のｇＨは、内因性ｇＨ遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に位置する。
【0336】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムは、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、第１のＵＬ２４と、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、第２のＵＬ２４とをコードする。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４は、内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされ、第２のＵＬ２４は、外因性発現カセットによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のＵＬ２４は、外因性発現カセットによってコードされ、第２のＵＬ２４は、内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、外因性発現カセットは、ＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に位置する。
【0337】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞において増強された合胞体表現型を提示する。
【0338】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルス（例えば、１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＢ及び／またはｇＫと、合胞体変異を含まない第２のｇＢ及び／またはｇＫとをコードするウイルス）をコードする組換え核酸を含む細胞を提供する。
【0339】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＢをコードし、第２の核酸が合胞体変異を含まない第２のｇＢをコードする、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）は、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー及び／またはｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピーを含む。
【0340】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含まない第２のｇＢをコードし、第２の核酸が１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＢをコードする、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）は、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー及び／またはｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピーを含む。
【0341】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、本開示の腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＫをコードし、第２の核酸が合胞体変異を含まない第２のｇＫをコードする、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）は、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー及び／またはｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピーを含む。
【0342】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、本開示の腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含まない第２のｇＫをコードし、第２の核酸が１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＫをコードする、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）は、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー及び／またはｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピーを含む。
【0343】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＨをコードし、第２の核酸が合胞体変異を含まない第２のｇＨをコードする、細胞を提供する。
【0344】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含まない第２のｇＨをコードし、第２の核酸が１つ以上の合胞体変異を含む第１のｇＨをコードする、細胞を提供する。
【0345】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが１つ以上の合胞体変異を含む第１のＵＬ２０をコードし、第２の核酸が合胞体変異を含まない第２のＵＬ２０をコードする、細胞を提供する。
【0346】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含まない第２のＵＬ２０をコードし、第２の核酸が１つ以上の合胞体変異を含む第１のＵＬ２０をコードする、細胞を提供する。
【0347】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが１つ以上の合胞体変異を含む第１のＵＬ２４をコードし、第２の核酸が合胞体変異を含まない第２のＵＬ２４をコードする、細胞を提供する。
【0348】
一態様では、本開示は、本開示の腫瘍溶解性ウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含まない第２のＵＬ２４をコードし、第２の核酸が１つ以上の合胞体変異を含む第１のＵＬ２４をコードする、細胞を提供する。
【0349】
いくつかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、細胞内の単一のポリヌクレオチド分子内に含まれる。いくつかの実施形態では、第１の核酸及び第２の核酸は、細胞内の２つの異なるポリヌクレオチド分子内に含まれる。
【0350】
いくつかの実施形態では、細胞は、Ｖｅｒｏ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、インビトロでの腫瘍溶解性ウイルスの産生のためのものである。
【0351】
いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６、Ｒ８００、Ｔ８１３、Ｌ８１７、Ｓ８５４、Ａ８５５、Ｒ８５８、もしくはＡ８７４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間への挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、Ｃ末端に対するＴ８７７の欠失、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６Ｃ、Ｒ８００Ｗ、Ｔ８１３Ｉ、Ｌ８１７Ｈ、Ｌ８１７Ｐ、Ｓ８５４Ｆ、Ａ８５５Ｖ、Ｒ８５８Ｃ、Ｒ８５８Ｈ、Ａ８７４Ｐに対応する１つ以上の変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間へのＶＮもしくはＶＮＶＮの挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、またはＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６Ｃ、Ｒ８００Ｗ、Ｔ８１３Ｉ、Ｌ８１７Ｈ、Ｌ８１７Ｐ、Ｓ８５４Ｆ、Ａ８５５Ｖ、Ｒ８５８Ｃ、Ｒ８５８Ｈ、Ａ８７４Ｐに対応する変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間へのＶＮもしくはＶＮＶＮの挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、またはＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ７９６Ｃに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ８００に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ８００Ｗに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＴ８１３に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＴ８１３Ｉに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＬ８１７に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＬ８１７Ｈに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＬ８１７Ｐに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＳ８５４に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＳ８５４Ｆに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＡ８５５に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＡ８５５Ｖに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ８５８に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ８５８Ｃに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＲ８５８Ｈに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＡ８７４に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＡ８７４Ｐに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＥ８１６及びＬ８１７に対応するアミノ酸残基間に挿入を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＥ８１６とＬ８１７との間のＶＮの挿入に対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＥ８１６とＬ８１７との間のＶＮＶＮの挿入に対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＳ８６９～Ｃ末端に対応するアミノ酸残基の欠失を含む。いくつかの実施形態では、ｇＢ合胞体変異は、配列番号９１９のＴ８７７～Ｃ末端に対応するアミノ酸残基の欠失を含む。
【0352】
いくつかの実施形態では、第１のｇＢ及び第２のｇＢは、配列番号９１９のＤ２８５Ｎ及び／またはＡ５４９Ｔに対応する変異を更に含む。いくつかの実施形態では、第１のｇＢは、配列番号９１９のＤ２８５Ｎ及び／またはＡ５４９Ｔに対応する変異を更に含むが、第２のｇＢは含まない。いくつかの実施形態では、第２のｇＢは、配列番号９１９のＤ２８５Ｎ及び／またはＡ５４９Ｔに対応する変異を更に含むが、第１のｇＢは含まない。
【0353】
いくつかの実施形態では、第１のｇＢをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第１のｇＢをコードするオープンリーディングフレームは、ｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。
【0354】
いくつかの実施形態では、第２のｇＢをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第２のｇＢをコードするオープンリーディングフレームは、ｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。
【0355】
いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＰ３３、Ａ４０、Ｌ８６、Ｄ９９、Ａ１１１、Ｌ１１８、Ｔ１２１、Ｃ２４３、Ｌ３０４、Ｉ３０７、またはＲ３１０に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＰ３３Ｓ、Ａ４０Ｖ、Ａ４０Ｔ、Ｌ８６Ｐ、Ｄ９９Ｎ、Ａ１１１Ｖ、Ｌ１１８Ｑ、Ｔ１２１Ｉ、Ｃ２４３Ｙ、Ｌ３０４Ｐ、Ｉ３０７Ｎ、またはＲ３１０Ｌに対応する１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＰ３３に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＰ３３Ｓに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＡ４０に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＡ４０Ｖに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＡ４０Ｔに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＬ８６に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＬ８６Ｐに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＤ９９に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＤ９９Ｎに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＡ１１１に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＡ１１１Ｖに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＬ１１８に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＬ１１８Ｑに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＴ１２１に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＴ１２１Ｉに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＣ２４３に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＣ２４３Ｙに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＬ３０４に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＬ３０４Ｐに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＩ３０７に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＩ３０７Ｎに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＲ３１０に対応するアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＫ合胞体変異は、配列番号９２０のＲ３１０Ｌに対応する変異を含む。
【0356】
いくつかの実施形態では、第１のｇＫをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第１のｇＫをコードするオープンリーディングフレームは、ｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。
【0357】
いくつかの実施形態では、第２のｇＫをコードするオープンリーディングフレームは、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、第２のｇＫをコードするオープンリーディングフレームは、ｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される。
【0358】
いくつかの実施形態では、ｇＨ合胞体変異は、配列番号９４３のＮ７５３またはＡ７７８に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＨ合胞体変異は、配列番号９４３のＮ７５３ＫまたはＡ７７８Ｖに対応する１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ｇＨ合胞体変異は、配列番号９４３のＮ７５３Ｋ及びＡ７７８Ｖに対応する変異を含む。ｇＨ変異の追加の説明は、例えば、Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１３ Ｆｅｂ；８７（３）：１４３０－１４４２で見つけることができ、この内容は、あらゆる目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【0359】
いくつかの実施形態では、ＵＬ２０合胞体変異は、配列番号９４４のＹ４９Ａ、Ｓ５０Ａ、Ｒ５１Ａ、Ｒ２０９Ａ、Ｔ２１２Ａ、Ｒ２１３Ａに対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２０合胞体変異は、配列番号９４４のＹ４９Ａ、Ｓ５０Ａ、Ｒ５１Ａ、Ｒ２０９Ａ、Ｔ２１２Ａ、Ｒ２１３Ａに対応する１つ以上の変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２０合胞体変異は、配列番号９４４のＹ４９Ａ、Ｓ５０Ａ、及びＲ５１Ａに対応する変異を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２０合胞体変異は、配列番号９４４のＲ２０９Ａ、Ｔ２１２Ａ、及びＲ２１３Ａに対応する変異を含む。
【0360】
いくつかの実施形態では、ＵＬ２４合胞体変異は、配列番号９４２のＴ６４、Ｒ６３、またはＶ６４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２４合胞体変異は、配列番号９４２のＴ６４Ｇ、Ｒ６３Ｖ、またはＶ６４Ｓに対応する１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＵＬ２４合胞体変異は、配列番号９４２のＴ６４Ｇ、Ｒ６３Ｖ、及びＶ６４Ｓに対応する変異を含む。
【0361】
この戦略は、他のウイルスにも当てはめることができる。一般に、組換えウイルスが増強した融合性を有するように組換えウイルスによってコードされるタンパク質に合胞体変異を導入した場合、（ウイルスまたは産生細胞によってコードされる）合胞体変異を有しない対応タンパク質を共発現させることによって、産生細胞における組換えウイルスの産生収量を改善することができる。いずれかのタンパク質が内因性ウイルス遺伝子または外因性発現カセットによってコードされ得る。
【0362】
いくつかの実施形態では、増強された融合性を有しない対応タンパク質（例えば、合胞体変異を含まない第２のｇＢ及び／またはｇＫ）をコードする第２の核酸を含むウイルスまたは細胞に対する組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、増強された融合性を有しない対応タンパク質をコードしない対照腫瘍溶解性ウイルスまたは対照細胞の収量と比較して、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも２倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも３倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも５倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも８倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１０倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも２０倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも５０倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも２００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも５００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１０００倍増加する。
【0363】
いくつかの実施形態では、本開示の腫瘍溶解性ウイルスにおいて、融合性タンパク質（増強された融合性を有するタンパク質）をコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、インビトロでのウイルス産生のための細胞で高度に発現される。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、がん細胞）で発現を有しないか、または最小限の発現を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、がん細胞）と比較して、インビトロでのウイルス産生のための細胞で比較的より高い発現を有する。いくつかの実施形態では、インビトロでのウイルス産生のための細胞は、標的細胞（例えば、がん細胞）のレベルよりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高いレベルで１つ以上のｍｉＲＮＡを発現する。
【0364】
いくつかの実施形態では、第１のｇＢをコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、インビトロでのウイルス産生のための細胞で高度に発現される。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、がん細胞）で発現を有しないか、または最小限の発現を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、がん細胞）と比較して、インビトロでのウイルス産生のための細胞で比較的より高い発現を有する。いくつかの実施形態では、インビトロでのウイルス産生のための細胞は、標的細胞（例えば、がん細胞）のレベルよりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高いレベルで１つ以上のｍｉＲＮＡを発現する。
【0365】
いくつかの実施形態では、第１のｇＫをコードする遺伝子は、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、インビトロでのウイルス産生のための細胞で高度に発現される。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、がん細胞）で発現を有しないか、または最小限の発現を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、標的細胞（例えば、がん細胞）と比較して、インビトロでのウイルス産生のための細胞で比較的より高い発現を有する。いくつかの実施形態では、インビトロでのウイルス産生のための細胞は、標的細胞（例えば、がん細胞）のレベルよりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高いレベルで１つ以上のｍｉＲＮＡを発現する。
【0366】
いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－２９９－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－５８２－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも２つを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ及びｍｉＲ－２９９－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－２９９－５ｐ及びｍｉＲ－５８２－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ及びｍｉＲ－５８２－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ標的配列は、ｍｉＲＮＡの逆相補配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列は、配列番号９２７と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ標的配列は、配列番号９２７を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２９９－５ｐ標的配列は、配列番号９２８と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－２９９－５ｐ標的配列は、配列番号９２８を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－５８２－５ｐ標的配列は、配列番号９２９と最大４、最大３、最大２、または最大１ヌクレオチド（複数可）異なる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－５８２－５ｐ標的配列は、配列番号９２９を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、４ｂｐスペーサーによって分離されたｍｉＲＮＡの各々の標的配列の少なくとも３つのコピーまたは少なくとも４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、遺伝子（複数可）（例えば、ｇＢ及び／またはｇＫをコードする遺伝子（複数可））の３’ＵＴＲに位置する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡの標的配列は、ｍｉＲＮＡの逆相補配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、３、または４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－２９９－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、３、または４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、ｍｉＲ－５８２－５ｐの標的配列の少なくとも１、２、３、または４つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセット内のｍｉＲＮＡ標的配列は、以下のように配置される：
（２９９－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（２９９－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（２９９－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（２９９－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号９３０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号９３０のポリヌクレオチド配列を含む。
（２９９－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（２９９－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（２９９－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（２９９－５ｐ）－（５８２－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号９３０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットは、配列番号９３０のポリヌクレオチド配列を含む。
【0367】
一態様では、本開示は、融合性腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）であって、本開示の細胞を培養することと、細胞の培養物から融合性腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）を回収することとによって産生される、融合性腫瘍溶解性ウイルスを提供する。
【0368】
一態様では、本開示は、融合性腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）であって、ウイルスのウイルスゲノムが、配列番号９２０のＩ３０７Ｎに対応する合胞体変異を含むｇＫをコードする、融合性腫瘍溶解性ウイルスを提供する。いくつかの実施形態では、ｇＫは、配列番号９２０のＩ３０７Ｎに対応する合胞体変異を除いて、配列番号９２０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【0369】
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－ＴＳカセットの存在は、ウイルス産生のための細胞において、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照融合性タンパク質コード遺伝子の発現と比較して、融合性タンパク質（例えば、合胞体変異を含む第１のｇＢまたは第１のｇＫ）の発現を少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍減少させる。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも１倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも２倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも３倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも５倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも８倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも１０倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも２０倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも５０倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも１００倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも２００倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも５００倍減少する。いくつかの実施形態では、融合性タンパク質の発現は、少なくとも１０００倍減少する。
【0370】
いくつかの実施形態では、融合性タンパク質（例えば、合胞体変異を含む第１のｇＢまたは第１のｇＫ）をコードする遺伝子におけるｍｉＲ－ＴＳカセットを含むウイルスまたは細胞に対する組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照腫瘍溶解性ウイルスまたは対照細胞の収量と比較して、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも２倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも３倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも５倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも８倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１０倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも２０倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも５０倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも２００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも５００倍増加する。いくつかの実施形態では、組換え腫瘍溶解性ウイルスの収量は、少なくとも１０００倍増加する。
【0371】
粒子及び核酸
一態様では、本開示は、本開示のウイルスをコードする核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡである。いくつかの実施形態では、核酸分子のタイプ（ＤＮＡ ／ ＲＮＡ）は、ウイルスのタイプ（ＤＮＡウイルス／ ＲＮＡウイルス）と同じである。
一態様では、本開示は、本開示のウイルスをコードする核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡである。いくつかの実施形態では、核酸分子のタイプ（ＤＮＡ ／ ＲＮＡ）は、ウイルスのタイプ（ＤＮＡウイルス／ ＲＮＡウイルス）と同じである。
【0372】
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子は、粒子内に含まれる。いくつかの実施形態では、粒子は、非ウイルス粒子（例えば、ＬＮＰ）である。いくつかの実施形態では、粒子は、リポソーム、リポプレックス、ナノ粒子、ナノカプセル、微粒子、マイクロスフェア、脂質粒子、エキソソーム、小胞などの非組織由来の組成物である。いくつかの実施形態では、粒子は、非タンパク質性及び非免疫原性である。いくつかの実施形態では、粒子は、無機粒子である。いくつかの実施形態では、無機粒子は、金ナノ粒子（ＧＮＰ）、金ナノロッド（ＧＮＲ）、磁性ナノ粒子（ＭＮＰ）、磁性ナノチューブ（ＭＮＴ）、カーボンナノホーン（ＣＮＨ）、カーボンフラーレン、カーボンナノチューブ（ＣＮＴ）、リン酸カルシウムナノ粒子（ＣＰＮＰ）、メソポーラスシリカナノ粒子（ＭＳＮ）、シリカナノチューブ（ＳＮＴ）、または星状中空シリカナノ粒子（ＳＨＮＰ）である。
【0373】
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子のカプセル封入により、全身性抗ウイルス免疫応答を誘導することなくウイルスゲノムを送達することが可能になり、抗ウイルス抗体を中和する効果が軽減される。更に、本開示の核酸分子のカプセル封入により、ゲノムが分解から保護され、標的宿主細胞への導入が容易になる。いくつかの実施形態では、粒子は、ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、粒子は、脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、粒子は、エキソソームである。いくつかの実施形態では、粒子は、追加の核酸分子を含まない。いくつかの実施形態では、粒子は、ウイルスタンパク質を含まない。
【0374】
いくつかの実施形態では、本開示の粒子は、溶解性を向上させ、インビボでの凝集によって引き起こされる複雑な事態の可能性を回避し、かつ飲作用を促進するために、ナノスケールのサイズである。いくつかの実施形態では、粒子は、約１０００ｎｍ未満の平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約５００ｎｍ未満の平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約３０～約１００ｎｍ、約５０～約１００ｎｍ、または約７５～約１００ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約３０～約７５ｎｍまたは約３０～約５０ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約１００～約５００ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約２００～約４００ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約３５０ｎｍの平均サイズを有する。
【0375】
いくつかの実施形態では、粒子は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、トリグリセリド（例えば、トリステアリン）、ジグリセリド（例えば、バヘン酸グリセロール）、モノグリセリド（例えば、モノステアリン酸グリセロール）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、及びワックス（例えば、パルミチン酸セチル）などの１つ以上の脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、１つ以上のカチオン性脂質及び１つ以上のヘルパー脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、１つ以上のカチオン性脂質、コレステロール、及び１つ以上の中性脂質を含む。
【0376】
組成物及び使用方法
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを含むストック及び組成物に関する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを含むウイルスストックに関する。いくつかの実施形態では、ウイルスストックは、均質なストックである。ウイルスストックの調製及び分析は、当該技術分野で周知である。例えば、ウイルスストックは、ウイルスベクターを形質導入した細胞を含むローラーボトルで製造することができる。その後、ウイルスストックを連続ニコデンツ（ｎｙｃｏｄｅｎｚｅ）勾配で精製し、等分し、必要になるまで保管することができる。ウイルスストックは、主にウイルス遺伝子型ならびにウイルスストックの調製に使用されるプロトコル及び細胞株に応じて、力価にかなりのばらつきがある。
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを含むストック及び組成物に関する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを含むウイルスストックに関する。いくつかの実施形態では、ウイルスストックは、均質なストックである。ウイルスストックの調製及び分析は、当該技術分野で周知である。例えば、ウイルスストックは、ウイルスベクターを形質導入した細胞を含むローラーボトルで製造することができる。その後、ウイルスストックを連続ニコデンツ（ｎｙｃｏｄｅｎｚｅ）勾配で精製し、等分し、必要になるまで保管することができる。ウイルスストックは、主にウイルス遺伝子型ならびにウイルスストックの調製に使用されるプロトコル及び細胞株に応じて、力価にかなりのばらつきがある。
【0377】
特定の実施形態では、本明細書で企図されるウイルスストック（例えば、ＨＳＶベースのベクターウイルスストック）の力価は、少なくとも約１０５プラーク形成単位（ｐｆｕ）、例えば、少なくとも約１０６ｐｆｕまたは更により好ましくは少なくとも約１０７ｐｆｕである。ある特定の実施形態では、力価は、少なくとも約１０８ｐｆｕ、または少なくとも約１０９ｐｆｕとすることができ、少なくとも約１０１０ｐｆｕまたは少なくとも約１０１１ｐｆｕの高力価ストックが最も好ましい。
【0378】
本開示は、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスまたは核酸分子と、薬学的に許容される担体と、を含む組成物を更に企図する。「薬学的に許容される」という語句は、対象（例えば、ヒト）に投与されたときにアレルギー反応または同様の有害反応をもたらさない分子実体及び組成物を指す。本明細書で使用される「組成物」という用語は、対象及び／または細胞に投与または送達することができる、本明細書に記載の１つ以上の腫瘍溶解性ウイルスまたは核酸分子の製剤を指す。典型的には、製剤は、全ての生理学的に許容される組成物（その誘導体及び／またはプロドラッグ、溶媒和物、立体異性体、ラセミ体、または互変異性体を含む）を、任意の生理学的に許容される担体、希釈剤、及び／または賦形剤とともに含む。「治療用組成物」または「医薬組成物」（本明細書では互換的に使用される）とは、特定の疾患または障害の治療のために患者及び／または対象及び／または細胞に投与または送達することができる１つ以上の薬剤の組成物である。
【0379】
本明細書に開示される組成物は、中性形態または塩形態で製剤化され得る。「薬学的に許容される塩」には、酸付加塩及び塩基付加塩の両方が含まれる。薬学的に許容される塩には、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成されたもの）が含まれ、これらは、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、ならびに酢酸、２，２－ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４－アセトアミド安息香酸、樟脳酸、樟脳－１０－スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２－オキソ－グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４－アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などであるが、これらに限定されない有機酸と形成される。遊離カルボキシル基と形成された塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩などの無機塩基に由来することもできる。有機塩基に由来する塩には、一級、二級、及び三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピリジン、ポリアミン樹脂などの塩が含まれるが、これらに限定されない。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、及びカフェインである。製剤化されると、溶液は、剤形と適合性のある様式で、かつ治療有効量で投与される。製剤は、注射用溶液及び薬物放出カプセル剤などの様々な剤形で容易に投与される。
【0380】
本明細書で使用される場合、「担体」には、ありとあらゆる溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング剤、希釈剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝剤、担体溶液、懸濁液、コロイドなどが含まれる。医薬活性物質に対するかかる媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合性である場合を除いて、治療用組成物におけるその使用が企図される。補足的活性成分も本組成物に組み込むことができる。
【0381】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、ヒト及び／または飼い慣らされた動物における使用に許容されるものとして米国食品医薬品局によって承認されている、薬学的に許容される細胞培養培地及び／または乳化剤を含む、生理学的に適合性のある、任意のアジュバント、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、風味向上剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張剤、溶媒、界面活性剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれるが、これらに限定されない。例示的な薬学的に許容される担体には、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体、トラガカント、モルト、ゼラチン、タルク、カカオバター、ワックス、動物性及び植物性脂肪、パラフィン、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及びダイズ油などの油、プロピレングリコールなどのグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなどのポリオール、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル、寒天、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リンゲル溶液、エチルアルコール、リン酸緩衝液、ならびに医薬製剤に用いられる任意の他の適合性物質が含まれるが、これらに限定されない。任意の従来の媒体及び／または薬剤が本開示の薬剤と不適合性である場合を除いて、治療組成物におけるその使用が企図される。補足的活性成分も本組成物に組み込むことができる。
【0382】
湿潤剤、乳化剤、及び滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤及び香料、防腐剤、ならびに抗酸化剤も、本組成物中に存在することができる。
【0383】
薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤、及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート化剤が挙げられる。
【0384】
一実施形態では、担体を含む組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内もしくは動脈内）、腹腔内、または筋肉内投与に好適である。薬学的に許容される担体には、滅菌注射用溶液または分散液の即時調製用の滅菌水溶液または分散液及び滅菌粉末が含まれる。薬学的に活性な物質に対するかかる媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤がウイルスベクターまたは核酸分子と不適合性である場合を除いて、本開示の医薬組成物におけるその使用が企図される。
【0385】
本開示の組成物は、単独でまたは１つ以上の他の治療様式と組み合わせてのいずれかで、細胞または動物に投与するための薬学的に許容される溶液または生理学的に許容される溶液で製剤化された、本明細書に記載の１つ以上のポリペプチド、ポリヌクレオチド、それらを含むベクター、感染細胞などを含み得る。所望の場合、本開示の組成物が、例えば、サイトカイン、成長因子、ホルモン、小分子、または様々な薬学的に活性な薬剤などの他の薬剤と組み合わせて投与されてもよいことも理解される。本組成物中に同様に含まれ得る他の構成成分には、その追加の薬剤が意図された治療を果たす本組成物の能力に悪影響を及ぼさない限り、実質的に制限はない。
【0386】
本開示の医薬組成物において、薬学的に許容される賦形剤及び担体溶液の製剤は、様々な治療レジメンにおける本明細書に記載の特定の組成物の使用に好適な投与レジメン及び治療レジメンの開発と同様に、当業者に周知である。製剤化されると、溶液は、剤形と適合性のある様式で、かつ症状の改善または修復をもたらすのに治療的に有効な量で投与される。製剤は、経口摂取用溶液及び薬物放出カプセル剤などの様々な剤形で容易に投与される。治療される対象の状態に応じて、投薬量にいくらかの変動が生じ得る。いずれにせよ、投与を担当する者が個々の対象に適切な用量を決定することができる。更に、ヒトへの投与の場合、調製物は、ＦＤＡ生物製剤評価研究センターで定められている、無菌性、一般的安全性、及び純度の基準を満たすものである。投与経路は、必然的に、治療される疾患の位置及び性質によって異なり、例えば、真皮内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、真皮下、非経口、経鼻、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、気管内、腹腔内、腫瘍内、灌流、洗浄、直接注入、及び経口投与を含み得る。
【0387】
ある特定の事例では、例えば、米国特許第Ｎｏ．５，５４３，１５８号、米国特許第５，６４１，５１５号、及び米国特許第５，３９９，３６３号（各々参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる）に記載されるように、本明細書に開示される組成物、組換えウイルスベクター、及び核酸分子を非経口的、静脈内、筋肉内、または更には腹腔内送達することが望ましいであろう。活性化合物の溶液は、遊離塩基または薬理学的に許容される塩として、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合された水中で調製され得る。分散液も、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物中及び油中で調製することができる。通常の保存条件及び使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を阻止するための防腐剤を含む。
【0388】
注射使用に好適な医薬形態には、滅菌注射用溶液もしくは分散液の即時調製用の滅菌水溶液または分散液及び滅菌粉末が含まれる（米国特許第５，４６６，４６８号（参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる））。全ての事例において、この形態は、滅菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度に流体でなければならない。これは、製造条件及び保管条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、及び／または植物油を含む溶媒または分散媒とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することによって、分散液の場合には必要な粒径を維持することによって、かつ界面活性剤を使用することによって維持され得る。微生物作用の阻止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって促進することができる。多くの事例では、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の延長は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを本組成物で使用することによってもたらされ得る。活性成分としてタンパク質を含む水性組成物の調製は、当該技術分野で十分に理解されている。典型的には、かかる組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射物として調製され、注射前の液体中の溶液または懸濁液に好適な固体形態を調製することもできる。調製物を乳化することもできる。
【0389】
水溶液での非経口投与の場合、例えば、溶液を必要に応じて好適に緩衝化しなければならず、最初に十分な生理食塩水またはグルコースで液体希釈剤を等張にしなければならない。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に特に好適である。これに関連して、用いることができる無菌水性媒体は、本開示を考慮して、当業者に知られるであろう。例えば、ある投薬量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解させ、１０００ｍｌの皮下注入液に添加するか、または提案された注入部位に注入するかのいずれかが行われ得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照されたい）。治療される対象の状態に応じて、投薬量にいくらかの変動が必然的に生じる。いずれにせよ、投与を担当する者が個々の対象に適切な用量を決定する。更に、ヒトへの投与の場合、調製物は、ＦＤＡ生物製剤オフィスで定められている、無菌性、発熱性、一般的安全性、及び純度の基準を満たさなければならない。
【0390】
滅菌注射用溶液は、活性化合物を必要な量で上に列挙された様々な他の成分とともに適切な溶媒中に組み込み、その後、必要に応じて、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、様々な滅菌された活性成分を、塩基性分散媒と、上に列挙された成分のうちの必要な他の成分とを含む滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥技法であり、これにより、予め滅菌濾過した溶液から活性成分と任意の追加の所望の成分との粉末が得られる。
【0391】
ある特定の実施形態では、本組成物は、鼻腔内スプレー、吸入、及び／または他のエアゾール送達ビヒクルによって送達され得る。鼻腔用エアロゾルスプレーを介してポリヌクレオチド及びペプチド組成物を肺に直接送達するための方法は、例えば、米国特許第５，７５６，３５３号及び米国特許第５，８０４，２１２号（各々参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる）に記載されている。同様に、鼻腔内微粒子樹脂（Ｔａｋｅｎａｇａ ｅｔ ａｌ．，１９９８）及びリソホスファチジルグリセロール化合物（米国特許第５，７２５，８７１号（参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる））を使用した薬物の送達も、医薬品分野で周知である。同様に、ポリテトラフルオロエチレン支持マトリックスの形態での経粘膜薬物送達が、米国特許第５，７８０，０４５号（参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる）に記載されている。
【0392】
ある特定の実施形態では、送達は、本開示の組成物を好適な宿主細胞に導入するための、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、マイクロスフェア、脂質粒子、小胞の使用、任意選択で、ＣＰＰポリペプチドとの混合などによって行われ得る。特に、本開示の組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノ球体、ナノ粒子などのいずれかでカプセル封入された状態で送達用に製剤化され得る。かかる送達ビヒクルの製剤化及び使用は、既知の従来技法を使用して実行することができる。本開示の製剤及び組成物は、単独でまたは１つ以上の他の治療様式と組み合わせて、細胞または動物に投与するための薬学的に許容される溶液または生理学的に許容される溶液（例えば、培養培地）で製剤化された、本明細書に記載の１つ以上のポリペプチド、ポリヌクレオチド、及び小分子を含み得る。所望の場合、本開示の組成物が、例えば、細胞、他のタンパク質もしくはポリペプチド、または様々な薬学的に活性な薬剤などの他の薬剤と組み合わせて投与されてもよいことも理解される。
【0393】
特定の実施形態では、本開示による製剤または組成物は、本明細書に企図される、任意の数のポリヌクレオチドまたはウイルスベクターの組み合わせと接触した細胞を含む。
【0394】
ある特定の態様では、本開示は、ウイルスベクター系の送達に好適な製剤または組成物を提供する。
【0395】
エクスビボ送達用の例示的な製剤は、当該技術分野で既知の様々なトランスフェクション剤、例えば、リン酸カルシウム、エレクトロポレーション、熱ショック、及び様々なリポソーム製剤（すなわち、脂質媒介トランスフェクション）の使用も含み得る。リポソームは、水性流体の一部を閉じ込めた脂質二重層である。ＤＮＡは、カチオン性リポソームの外表面と（その電荷によって）自然に会合し、これらのリポソームは、細胞膜と相互作用するようになる。
【0396】
本開示の特定の実施形態は、他の製剤、例えば、医薬技術分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００に記載される製剤を含み得る。
【0397】
ある特定の態様では、本開示は、１つ以上の薬学的に許容される担体（添加剤）及び／または希釈剤（例えば、薬学的に許容される細胞培養培地）と一緒に製剤化された、治療有効量の本明細書に記載の１つ以上のウイルスベクターまたはポリヌクレオチドを含む薬学的に許容される組成物を提供する。本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、所望の生理学的及び／または生物学的結果を達成するのに必要な本明細書に記載の組成物または組換えウイルスの量を指す。ウイルス、ウイルスストック、または組成物の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する幹細胞及び前駆細胞の能力などの要因により異なり得る。治療有効量は、治療的に有益な効果がウイルスまたは形質導入された治療用細胞の任意の毒性効果または有害効果を上回る量である。「治療有効量」という用語は、対象（例えば、患者）を「治療する」のに有効な量を含む。治療有効量は、プラーク形成単位（ｐｆｕ）の総数（例えば、少なくとも１ｅ１～少なくとも１ｅ２０、具体的には約１ｅ４～約１ｅ１５、より具体的には約１ｅ６～約１ｅ１２ｐｆｕ）、またはウイルスゲノムの数（例えば、少なくとも１ｅ１～少なくとも１ｅ２０、具体的には約１ｅ４～約１ｅ１５、より具体的には約１ｅ６～約１ｅ１２ウイルスゲノム）によって定量され得る。当業者であれば、治療有効量が、投与されるウイルスの種類、製剤の性質、投与経路、治療される疾患の性質及び／または重症度、及び／または対象の全身健康状態及び幸福感により異なることを理解する。
【0398】
本開示のいくつかの態様は、がん性細胞を死滅させる方法であって、がん性細胞を、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスまたはその組成物に、腫瘍溶解性ウイルスを当該がん性細胞に感染させ、かつ腫瘍溶解性ウイルスを当該がん性細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露することを含み、がん性細胞内での腫瘍溶解性ウイルスの複製により、細胞死がもたらされる、方法を包含する。ある特定の実施形態では、がん性細胞は、非がん性細胞と比較して、ｍｉＲの発現の低下を有する。いくつかの実施形態では、本方法によって死滅したがん細胞は、インビボにある。ある特定の実施形態では、本方法によって死滅したがん性細胞は、腫瘍内にある。
【0399】
本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、予防有効量または治療有効量の本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスストック、粒子、または組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。本明細書で使用される「対象」には、本明細書に開示される組換えウイルスベクター、組成物、及び方法を用いて治療することができる疾患、障害、または状態の症状を呈する任意の動物が含まれる。好適な対象（例えば、患者）としては、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、またはモルモットなど）、家畜（ウマまたはウシなど）、ならびに飼い慣らされた動物またはペット（ネコまたはイヌなど）が挙げられる。非ヒト霊長類、好ましくは、ヒト患者が含まれる。
【0400】
「投与」とは、本明細書では、腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスストック、もしくはその組成物を対象に導入すること、または腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスストック、もしくはその組成物を細胞及び／または組織と接触させることを指す。投与は、注射、灌注、吸入、摂取、電気浸透、血液透析、イオン泳動、及び当該技術分野で既知の他の方法によって行うことができる。投与経路は、必然的に、治療される疾患の位置及び性質により異なり、例えば、耳介、頬側、結膜、皮膚、歯、子宮頸管内、洞内（ｅｎｄｏｓｉｎｕｓｉａｌ）、気管内（ｅｎｄｏｔｒａｃｈｅａｌ）、腸内、硬膜外、間質、関節内、動脈内、腹部内、耳介内、胆汁内、気管支内、嚢内、空洞内、脳内、大槽内、角膜内、冠状内、冠内、頭蓋内、真皮内、円板内、管内（ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ）、十二指腸内、十二指腸内、硬膜内、心外膜内、表皮内、食道内、胃内、歯肉内、肝内、回腸内、病巣内、舌内、腔内、リンパ内、乳房内、髄内、髄膜内、筋肉内、鼻腔内、結節内、眼内、網内（ｉｎｔｒａｏｍｅｎｔｕｍ）、卵巣内、腹膜内、心膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、反芻胃内（ｉｎｔｒａｒｕｍｉｎａｌ）、洞内（ｉｎｔｒａｓｉｎａｌ）、脊髄内、滑液嚢内、腱内、精巣内、気管内（ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌ）、くも膜下腔内、胸腔内、管内（ｉｎｔｒａｔｕｂｕｌａｒ）、腫瘍内、鼓室内、子宮内、腹腔内、血管内、脳室内、膀胱内、前庭内、静脈内、硝子体内、喉頭、経鼻、経鼻胃、口腔、眼、中咽頭、非経口、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、関節周囲、硬膜周囲、神経周囲、歯周、呼吸器、後尿細管（ｒｅｔｒｏｔｕｂｕｌａｒ）、直腸、脊髄、くも膜下、結膜下、皮下、真皮下、歯肉下、舌下、粘膜下、網膜下、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経心内膜、経粘膜、経胎盤、経気管、経鼓室、尿管、尿道、及び／または膣灌流、洗浄、直接注射、ならびに経口投与を含み得る。
【0401】
本明細書で使用される「治療すること」及び「治療」という用語は、対象が疾患もしくは状態、または疾患もしくは状態の症状の改善を有するように、対象に、治療有効量の本明細書に記載の組換えウイルスまたはその組成物を投与することを指す。改善は、疾患もしくは状態、または疾患もしくは状態の症状のあらゆる改善または修復である。改善は、観察可能または測定可能な改善であるか、または対象の幸福感の全身感覚の改善であり得る。したがって、当業者であれば、治療が疾患状態を改善する可能性があるが、疾患の完全な治癒ではない可能性があることを認識する。「予防有効量」とは、所望の予防結果を達成するのに有効なウイルス、ウイルスストック、または組成物の量を指す。本明細書で使用される場合、「予防」とは、疾患症状の完全な予防、疾患症状の発生の遅延、または後続して発症する疾患症状の重症度の軽減を意味することができる。典型的には、予防用量が疾患の初期段階前または早期段階で対象に使用されるため、予防有効量は治療有効量未満であるが、必ずしもそうではない。
【0402】
本明細書における「がん」とは、典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を指すか、またはそれを説明する。がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、平滑筋肉腫、脊索腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍、中皮腫、滑膜腫、シュワン腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫、及び白血病またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例としては、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、扁平上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ）、肺癌、例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌、小細胞肺癌腫、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、例えば、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍、シュワン腫、及び他の癌腫、ならびに頭頸部癌が挙げられる。
【0403】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ）、ウイルスストック、または組成物は、肺癌（例えば、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）から選択されるがんを治療するために使用される。いくつかの実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。
【0404】
いくつかの実施形態では、がんは、非黒色腫皮膚癌である。非黒色腫皮膚癌は、黒色腫ではない皮膚に生じる全ての種類のがんを指す。いくつかの実施形態では、非黒色腫皮膚癌は、血管肉腫、基底細胞癌腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、皮脂癌、または皮膚扁平上皮癌である。
【0405】
ある特定の態様では、本開示は、本明細書に開示される図または実施形態のうちのいずれか１つに示される腫瘍溶解性ウイルスベクターに関する。
【0406】
更なる番号付けされた実施形態
本開示の更なる番号付けされた実施形態は、以下のように提供される。
本開示の更なる番号付けされた実施形態は、以下のように提供される。
【0407】
実施形態１．組換えヘルペスウイルスであって、前記組換えヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、
（ａ）１つ以上の導入遺伝子を含み、任意選択で、前記導入遺伝子（複数可）のオープンリーディングフレーム（複数可）（ＯＲＦ）が、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、
（ｂ）１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｃ）再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）であって、変異を含む、前記ＤＰＣＳをコードするＵＬ３０ウイルス遺伝子と、チミジンキナーゼ（ＴＫ）であって、変異を含む、前記ＴＫをコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子とを含む、
（ｅ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、
（ｆ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、
（ｇ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、
（ｈ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｉ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、前記組換えヘルペスウイルス。
（ａ）１つ以上の導入遺伝子を含み、任意選択で、前記導入遺伝子（複数可）のオープンリーディングフレーム（複数可）（ＯＲＦ）が、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、
（ｂ）１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｃ）再標的化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、
（ｄ）ＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）であって、変異を含む、前記ＤＰＣＳをコードするＵＬ３０ウイルス遺伝子と、チミジンキナーゼ（ＴＫ）であって、変異を含む、前記ＴＫをコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子とを含む、
（ｅ）第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢ、及び／または第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、
（ｆ）第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫ、及び／または第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、
（ｇ）第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨ、及び／または第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、
（ｈ）第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０、及び／または第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｉ）第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４、及び／または第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、前記組換えヘルペスウイルス。
【0408】
実施形態２．前記組換えヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記１つ以上の導入遺伝子を含み、前記１つ以上の導入遺伝子が、１５－ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ［ＮＡＤ（＋）］（ＨＰＧＤ）、アデノシンデアミナーゼ２（ＡＤＡ２）、ヒアルロニダーゼ－１（ＨＹＡＬ１）、ヘモタキシス阻害タンパク質（ＣＨＰ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン２１（ＣＣＬ２１）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、ＣＤ４７アンタゴニスト、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）アンタゴニスト、プログラム死－１（ＰＤ１）アンタゴニスト、骨髄系細胞に発現するトリガー受容体－２（ＴＲＥＭ２）アンタゴニスト、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のペイロードタンパク質をコードする、実施形態１に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0409】
実施形態３．前記１つ以上のペイロードタンパク質が、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含むか、またはそれらからなる、実施形態２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0410】
実施形態４．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、実施形態３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0411】
実施形態５．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＴＸを含む生体分子を含む、実施形態３または４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0412】
実施形態６．前記１つ以上のペイロードタンパク質が、表４～７に列記されるペイロードタンパク質の組み合わせのうちの１つを含むか、またはそれからなる、実施形態２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0413】
実施形態７．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、実施形態２～６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0414】
実施形態８．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＡＤＡ２を含む、実施形態２～７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0415】
実施形態９．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＹＡＬ１を含む、実施形態２～８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0416】
実施形態１０．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＨＰを含む、実施形態２～９のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0417】
実施形態１１．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＣＬ２１を含む、実施形態２～１０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0418】
実施形態１２．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＩＬ－１２を含む、実施形態２～１１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0419】
実施形態１３．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＤ４７アンタゴニストを含む、実施形態２～１２のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0420】
実施形態１４．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＧＦβアンタゴニストを含む、実施形態２～１３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0421】
実施形態１５．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＰＤ１アンタゴニストを含む、実施形態２～１４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0422】
実施形態１６．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む、実施形態２～１５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0423】
実施形態１７．前記アンタゴニストが抗体またはその抗原結合断片を含む、実施形態２～１６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0424】
実施形態１８．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＴＸを含む生体分子を含む、実施形態２～１７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0425】
実施形態１９．前記ＣＴＸを含む生体分子が、Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質に特異的に結合するＴ細胞エンゲージャー部分を更に含む、実施形態５または１８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0426】
実施形態２０．前記Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質がＣＤ３である、実施形態１９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0427】
実施形態２１．前記Ｔ細胞エンゲージャー部分が、配列番号９１４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0428】
実施形態２２．前記ＣＴＸが、配列番号９１３と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１８～２１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0429】
実施形態２３．
（ｉ）前記ＨＰＧＤが、配列番号８７５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉ）前記ＡＤＡ２が、配列番号８７７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）前記ＨＹＡＬ１が、配列番号８７８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｖ）前記ＣＨＰが、配列番号８８０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖ）前記ＣＣＬ２１が、配列番号８８１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖｉ）前記ＩＬ－１２が、配列番号８８３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットアルファ、及び配列番号８８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットベータを含む、
（ｖｉｉ）前記ＣＤ４７アンタゴニストが、配列番号８９５のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号８９６のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号８９７のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８８７もしくは８８８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉｉ）前記ＴＧＦβアンタゴニストが、配列番号８９８のＣＤＲ１、配列番号８９９のＣＤＲ２、及び配列番号９００のＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９０１のＣＤＲ１、配列番号９０２のＣＤＲ２、及び配列番号９０３のＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、任意選択で、前記ＴＧＦβアンタゴニストが、配列番号８８９または８９０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｘ）前記ＰＤ１アンタゴニストが、配列番号９０４のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号９０５のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号９０６のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８９１もしくは８９２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｘ）前記ＣＴＸを含む生体分子が、配列番号９１５または９１６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
及び／または、
（ｘｉ）前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストが、配列番号９０７のＣＤＲ１、配列番号９０８のＣＤＲ２、配列番号９０９のＣＤＲ３、及び／または配列番号８９３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９１０のＣＤＲ１、配列番号９１１のＣＤＲ２、配列番号９１２のＣＤＲ３、及び／または配列番号８９４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態２～２２のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
（ｉ）前記ＨＰＧＤが、配列番号８７５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉ）前記ＡＤＡ２が、配列番号８７７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）前記ＨＹＡＬ１が、配列番号８７８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｖ）前記ＣＨＰが、配列番号８８０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖ）前記ＣＣＬ２１が、配列番号８８１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖｉ）前記ＩＬ－１２が、配列番号８８３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットアルファ、及び配列番号８８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むサブユニットベータを含む、
（ｖｉｉ）前記ＣＤ４７アンタゴニストが、配列番号８９５のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号８９６のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号８９７のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８８７もしくは８８８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉｉ）前記ＴＧＦβアンタゴニストが、配列番号８９８のＣＤＲ１、配列番号８９９のＣＤＲ２、及び配列番号９００のＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９０１のＣＤＲ１、配列番号９０２のＣＤＲ２、及び配列番号９０３のＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、任意選択で、前記ＴＧＦβアンタゴニストが、配列番号８８９または８９０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｘ）前記ＰＤ１アンタゴニストが、配列番号９０４のＶＨＨ ＣＤＲ１、配列番号９０５のＶＨＨ ＣＤＲ２、配列番号９０６のＶＨＨ ＣＤＲ３、及び／または配列番号８９１もしくは８９２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｘ）前記ＣＴＸを含む生体分子が、配列番号９１５または９１６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、
及び／または、
（ｘｉ）前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストが、配列番号９０７のＣＤＲ１、配列番号９０８のＣＤＲ２、配列番号９０９のＣＤＲ３、及び／または配列番号８９３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び／または配列番号９１０のＣＤＲ１、配列番号９１１のＣＤＲ２、配列番号９１２のＣＤＲ３、及び／または配列番号８９４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態２～２２のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0430】
実施形態２４．前記導入遺伝子（複数可）のうちの少なくとも１つのＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0431】
実施形態２５．前記導入遺伝子（複数可）の全てのＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、実施形態２４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0432】
実施形態２６．ＩＬ－１２、前記ＰＤ１アンタゴニスト、前記ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、ＨＰＧＤ、及び／または前記ＣＴＸを含む生体分子をコードする前記導入遺伝子（複数可）のＯＲＦが、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、または少なくとも６４％のＧ／Ｃ含有量を有する、実施形態２４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0433】
実施形態２７．前記導入遺伝子のＯＲＦによってコードされるペイロードタンパク質の発現が、対照組換えヘルペスウイルス中に約５２％のＧ／Ｃ含有量を有する対照ＯＲＦによってコードされる前記ペイロードタンパク質の発現よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、または少なくとも１０倍高く、任意選択で、前記対照ＯＲＦがホモサピエンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される、実施形態２４～２６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0434】
実施形態２８．前記導入遺伝子（複数可）のＯＲＦ（複数可）が、アナエロミュクソバクテル・デハロゲナンスのコドン使用に基づいてコドン最適化される、実施形態２４～２７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0435】
実施形態２９．前記導入遺伝子（複数可）が抗体またはその抗原結合断片をコードする、実施形態２４～２８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0436】
実施形態３０．前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態２９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0437】
実施形態３０．１ 前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストをコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態２３、２９、及び３０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0438】
実施形態３１．前記抗体またはその抗原結合断片が単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に由来するＶＨＨドメインを含む、実施形態２９または３０に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0439】
実施形態３２．前記抗体またはその抗原結合断片がＩｇＧ－Ｆｃを含み、任意選択で、前記ＩｇＧがＩｇＧ１である、実施形態３０または３１に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0440】
実施形態３３．前記ＰＤ１アンタゴニストをコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態２３及び２９～３２のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0441】
実施形態３４．前記ＣＴＸを含む生体分子をコードする前記導入遺伝子が、配列番号９４０または９４１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態２３及び２９～３３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0442】
実施形態３５．サイトカイン、ケモカイン、受容体、受容体リガンド、酵素、及び／またはレポータータンパク質をコードする前記導入遺伝子（複数可）を含む、実施形態２４～３４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0443】
実施形態３６．ＩＬ－１２をコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態２３または３５に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0444】
実施形態３７．ＨＰＧＤをコードする前記導入遺伝子が、配列番号９３９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態２３及び３５～３６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0445】
実施形態３８．ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、実施形態１～３７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0446】
実施形態３９．ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、実施形態３８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0447】
実施形態４０．ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、実施形態３８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0448】
実施形態４１．
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、実施形態３８～４０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、実施形態３８～４０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0449】
実施形態４２．第１のウイルス遺伝子に挿入された第１のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第１のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～４１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0450】
実施形態４３．前記第１のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２９－２－３ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される、実施形態４２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0451】
実施形態４４．前記第１のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８５９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、実施形態４２または４３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0452】
実施形態４５．前記第１のウイルス遺伝子がＩＣＰ８である、実施形態４２～４４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0453】
実施形態４６．第２のウイルス遺伝子に挿入された第２のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～４５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0454】
実施形態４７．前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１２２－５ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２２－５ｐ）として配置される、実施形態４６に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0455】
実施形態４８．前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８５８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、実施形態４６または４７に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0456】
実施形態４９．前記第２のウイルス遺伝子がＩＣＰ４である、実施形態４６～４８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0457】
実施形態５０．前記第２のｍｉＲ－ＴＳカセットをウイルスゲノムの両方のＩＣＰ４ウイルス遺伝子内に含む、実施形態４９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0458】
実施形態５１．１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列をウイルスゲノムの両方のＩＣＰ４ウイルス遺伝子内に含み、任意選択で、前記ｍｉＲＮＡ標的配列が両方の前記ＩＣＰ４ウイルス遺伝子内で同じである、実施形態１～５０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0459】
実施形態５２．第３のウイルス遺伝子に挿入された第３のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～５１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0460】
実施形態５３．前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（１２８Ｔ）－（１３７－３ｐ）－（１２４－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される、実施形態５２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0461】
実施形態５４．前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８７３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、実施形態５２または５３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0462】
実施形態５５．第３のウイルス遺伝子に挿入された第３のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第３のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～５１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0463】
実施形態５６．前記第３のウイルス遺伝子がＩＣＰ２７である、実施形態５２～５５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0464】
実施形態５７．第４のウイルス遺伝子に挿入された第４のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、
（ｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｉｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、または
（ｉｉｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～５６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
（ｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、
（ｉｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、または
（ｉｉｉ）前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～５６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0465】
実施形態５８．第４のウイルス遺伝子に挿入された第４のｍｉＲ－ＴＳカセットであって、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐの各々の１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態３８～５６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0466】
実施形態５９．前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセット内の前記ｍｉＲＮＡ標的配列が、（１４５－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｂ－５ｐ）－（１４５－５ｐ）－（１３２－３ｐ）－（３４ｃ－５ｐ）として配置される、実施形態５８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0467】
実施形態６０．前記第４のｍｉＲ－ＴＳカセットが、配列番号８７４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列を含む、実施形態５８または５９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0468】
実施形態６１．前記第４のウイルス遺伝子がＵＬ８である、実施形態５７～６０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0469】
実施形態６２．前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが各々、前記ｍｉＲＮＡ標的配列の各々の少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのコピーを含む、実施形態４２～６１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0470】
実施形態６３．前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが各々、前記ｍｉＲＮＡ標的配列の各々の３つのコピーを含む、実施形態４２～６１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0471】
実施形態６４．前記組換えＨＳＶの複製が、がん性細胞における前記組換えＨＳＶの複製と比較して、非がん性細胞において減少し、任意選択で、前記がん性細胞が神経膠芽腫細胞である、実施形態３８～６３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0472】
実施形態６５．前記非がん性細胞が、神経細胞、上衣細胞、乏突起膠細胞、内皮細胞、肝細胞、星状膠細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態６４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0473】
実施形態６６．前記非がん性細胞が星状膠細胞である、実施形態６４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0474】
実施形態６７．
（ａ）前記ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６７を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｂ）前記ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６８を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｃ）前記ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６９を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｄ）前記ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８０４を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｅ）前記ｍｉＲ－１２４－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８０５を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｆ）前記ｍｉＲ－１２８Ｔの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７０を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｇ）前記ｍｉＲ－１２９－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８１３を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｈ）前記ｍｉＲ－１２９－２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７１を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｉ）前記ｍｉＲ－１３２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７２を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｊ）前記ｍｉＲ－１３７－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８１９を含むか、もしくはそれらからなる、及び／または
（ｋ）前記ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８２３を含むか、もしくはそれらからなる、実施形態３８～６６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
（ａ）前記ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６７を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｂ）前記ｍｉＲ－３４ｂ－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６８を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｃ）前記ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８６９を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｄ）前記ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８０４を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｅ）前記ｍｉＲ－１２４－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８０５を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｆ）前記ｍｉＲ－１２８Ｔの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７０を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｇ）前記ｍｉＲ－１２９－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８１３を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｈ）前記ｍｉＲ－１２９－２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７１を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｉ）前記ｍｉＲ－１３２－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８７２を含むか、もしくはそれらからなる、
（ｊ）前記ｍｉＲ－１３７－３ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８１９を含むか、もしくはそれらからなる、及び／または
（ｋ）前記ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列が、配列番号８２３を含むか、もしくはそれらからなる、実施形態３８～６６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0475】
実施形態６８．前記再標的化ドメインをコードする前記ポリヌクレオチドを含み、前記再標的化ドメインが、標的細胞によって発現される標的タンパク質に特異的に結合する、実施形態１～６７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0476】
実施形態６９．前記再標的化ドメインをコードする前記ポリヌクレオチドが、糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）をコードするＵＳ６遺伝子のオープンリーディングフレームに挿入される、実施形態６８に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0477】
実施形態７０．前記再標的化ドメインをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号９２１のアミノ酸６～２４に対応するアミノ酸配列をコードする前記ＵＳ６遺伝子領域を置き換える、実施形態６９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0478】
実施形態７１．前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質が、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ１、インテグリンαｖβ３、インテグリンαｖβ６、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態６８～７０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0479】
実施形態７２．前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質が、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を含む、実施形態６８～７１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0480】
実施形態７３．前記再標的化ドメインが、前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質に特異的に結合することができるノッチンペプチドを含む、実施形態６８～７２のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0481】
実施形態７４．前記再標的化ドメインが、５０個以下、４５個以下、４０個以下、または３５個以下のアミノ酸を含む、実施形態７３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0482】
実施形態７５．前記再標的化ドメインが、配列番号９２２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７３または７４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0483】
実施形態７６．前記再標的化ドメインが、前記標的細胞によって発現される前記標的タンパク質に特異的に結合することができる免疫グロブリンドメインを含む、実施形態６８～７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0484】
実施形態７７．前記再標的化ドメインが、重鎖のみ抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）または新規抗原受容体免疫グロブリンの可変ドメイン（Ｖ－ＮＡＲ）の結合ドメインまたはそれに由来する結合ドメインを含む、実施形態６８～７６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0485】
実施形態７８．前記再標的化ドメインが、１５０個以下、１４０個以下、または１３０個以下のアミノ酸を含む、実施形態７６または７７に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0486】
実施形態７９．前記再標的化ドメインが、配列番号９２３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７６～７８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0487】
実施形態８０．前記ヘルペスウイルスが、前記標的タンパク質を発現する前記標的細胞に感染することができる、実施形態６８～７９のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0488】
実施形態８１．前記ヘルペスウイルスが、ネクチン－１発現を有しない細胞に感染することができ、任意選択で、前記細胞がＶｅｒｏ細胞である、実施形態６８～８０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0489】
実施形態８２．前記変異を含む前記ＤＰＣＳをコードする前記ＵＬ３０ウイルス遺伝子及び前記変異を含む前記ＴＫをコードする前記ＵＬ２３ウイルス遺伝子を含む、実施形態１～８１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0490】
実施形態８３．前記ＤＰＣＳにおける前記変異が、前記ヘルペスウイルスのＤＮＡ複製忠実度を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも５倍増加させる、実施形態８２に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0491】
実施形態８４．前記ＤＰＣＳにおける前記変異が、配列番号９１７のＬ７７４に対応するアミノ酸位置にあり、好ましくは、前記変異がアミノ酸置換である、実施形態８２または８３に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0492】
実施形態８５．前記ＤＰＣＳにおける前記変異が、配列番号９１７のＬ７７４Ｆに対応する前記アミノ酸置換である、実施形態８４に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0493】
実施形態８６．前記ＤＰＣＳが、前記ＤＰＣＳにおける前記変異を除いて、配列番号９１７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態８２～８５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0494】
実施形態８７．アシクロビルのＩＣ５０が前記ヘルペスウイルスに対して０．５ｕｇ／ｍｌ未満、１．０ｕｇ／ｍｌ未満、１．５ｕｇ／ｍｌ未満、または２．０ｕｇ／ｍｌ未満である、実施形態８２～８６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0495】
実施形態８８．前記ＴＫにおける前記変異が、前記ヘルペスウイルスに対するアシクロビルのＩＣ５０を少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍減少させる、実施形態８２～８７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0496】
実施形態８９．前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＬ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、及び／またはＬ１６９に対応する１つ以上のアミノ酸位置にあり、好ましくは、前記変異がアミノ酸置換である、実施形態８２～８８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0497】
実施形態９０．前記ＴＫにおける前記変異が、
（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態８９に記載の組換えヘルペスウイルス。
（ａ）Ｌ１５９ＩもしくはＬ１５９Ｌ、
（ｂ）Ｉ１６０ＬもしくはＩ１６０Ｆ、
（ｃ）Ｆ１６１Ａ、Ｆ１６１Ｖ、Ｆ１６１Ｐ、もしくはＦ１６１Ｌ、
（ｄ）Ａ１６８Ｄ、Ａ１６８Ｙ、Ａ１６８Ｖ、もしくはＡ１６８Ｆ、及び／または
（ｅ）Ｌ１６９Ｆ、Ｌ１６９Ｙ、Ｌ１６９Ｌ、Ｌ１６９Ｉ、Ｌ１６９Ｍ、Ｌ１６９Ｎ、もしくはＬ１６９Ｋのうちの１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態８９に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0498】
実施形態９１．前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換を含む、実施形態８２～９０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0499】
実施形態９２．前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ａ、及びＡ１６８Ｆに対応するアミノ酸置換を含む、実施形態８２～９０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0500】
実施形態９３．前記ＴＫにおける前記変異が、配列番号９１８のＩ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｎに対応するアミノ酸置換を含む、実施形態８２～９０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0501】
実施形態９４．前記ＴＫが、前記ＴＫにおける前記変異を除いて、配列番号９１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態８２～９３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0502】
実施形態９５．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、
（ｉ）前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢ、及び／または前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、
（ｉｉ）前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫ、及び／または前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨ、及び／または前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、
（ｉｖ）前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０、及び／または前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４、及び／または前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
（ｉ）前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢ、及び／または前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、
（ｉｉ）前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫ、及び／または前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨ、及び／または前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、
（ｉｖ）前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０、及び／または前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４、及び／または前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0503】
実施形態９６．前記第１のｇＢが内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされ、前記第２のｇＢが外因性発現カセットによってコードされる、実施形態９５に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0504】
実施形態９７．前記第１のｇＢが外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のｇＢが内因性ｇＢコード遺伝子座によってコードされる、実施形態９５に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0505】
実施形態９８．前記第１のｇＫが内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされ、前記第２のｇＫが外因性発現カセットによってコードされる、実施形態９５～９７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0506】
実施形態９９．前記第１のｇＫが外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のｇＫが内因性ｇＫコード遺伝子座によってコードされる、実施形態９５～９７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0507】
実施形態１００．前記第１のｇＨが内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされ、前記第２のｇＨが外因性発現カセットによってコードされる、実施形態９５～９９のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0508】
実施形態１０１．前記第１のｇＨが外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のｇＨが内因性ｇＨコード遺伝子座によってコードされる、実施形態９５～９９のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0509】
実施形態１０２．前記第１のＵＬ２０が内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされ、前記第２のＵＬ２０が外因性発現カセットによってコードされる、実施形態９５～１０１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0510】
実施形態１０３．前記第１のＵＬ２０が外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のＵＬ２０が内因性ＵＬ２０遺伝子座によってコードされる、実施形態９５～１０１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0511】
実施形態１０４．前記第１のＵＬ２４が内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされ、前記第２のＵＬ２４が外因性発現カセットによってコードされる、実施形態９５～１０３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0512】
実施形態１０５．前記第１のＵＬ２４が外因性発現カセットによってコードされ、前記第２のＵＬ２４が内因性ＵＬ２４遺伝子座によってコードされる、実施形態９５～１０３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0513】
実施形態１０６．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＢをコードするが、前記第２のｇＢをコードしない、実施形態９５～１０５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0514】
実施形態１０７．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＫをコードするが、前記第２のｇＫをコードしない、実施形態９５～１０６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0515】
実施形態１０８．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＨをコードするが、前記第２のｇＨをコードしない、実施形態９５～１０７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0516】
実施形態１０９．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２０をコードするが、前記第２のＵＬ２０をコードしない、実施形態９５～１０８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0517】
実施形態１１０．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２４をコードするが、前記第２のＵＬ２４をコードしない、実施形態９５～１０９のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0518】
実施形態１１１．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＢ及び前記第１のｇＫをコードし、任意選択で、前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが前記第１のｇＨ及び前記第１のＵＬ２４を更にコードする、実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0519】
実施形態１１２．前記外因性発現カセットがＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間領域に位置する、実施形態９６～１１１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0520】
実施形態１１３．前記外因性発現カセットがＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置する、実施形態９６～１１１のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0521】
実施形態１１４．前記組換えヘルペスウイルスががん細胞において合胞体表現型を呈する、実施形態９５～１１３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0522】
実施形態１１５．実施形態９５～１１４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルスをコードする組換え核酸を含む、細胞。
【0523】
実施形態１１６．組換えヘルペスウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、
（ｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードする、
（ｉｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードする、
（ｉｖ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードする、前記細胞。
（ｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＢであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＢであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードする、
（ｉｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＫであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＫであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードする、
（ｉｉｉ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のｇＨであって、合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、第１のｇＨであって、合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードする、
（ｉｖ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２０であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、第１のＵＬ２０であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードする、及び／または
（ｖ）前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードするか、または前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、第２のＵＬ２４であって、合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、第１のＵＬ２４であって、合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードする、前記細胞。
【0524】
実施形態１１７．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードする、実施形態１１６に記載の細胞。
【0525】
実施形態１１８．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のｇＢであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＢをコードし、前記第２の核酸が、前記第１のｇＢであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＢをコードする、実施形態１１６に記載の細胞。
【0526】
実施形態１１９．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードする、実施形態１１６～１１８のいずれか１つに記載の細胞。
【0527】
実施形態１２０．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のｇＫであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＫをコードし、前記第２の核酸が、前記第１のｇＫであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＫをコードする、実施形態１１６～１１８のいずれか１つに記載の細胞。
【0528】
実施形態１２１．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードする、実施形態１１６～１２０のいずれか１つに記載の細胞。
【0529】
実施形態１２２．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のｇＨであって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のｇＨをコードし、前記第２の核酸が、前記第１のｇＨであって、前記合胞体変異を含む、前記第１のｇＨをコードする、実施形態１１６～１２０のいずれか１つに記載の細胞。
【0530】
実施形態１２３．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードする、実施形態１１６～１２２のいずれか１つに記載の細胞。
【0531】
実施形態１２４．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２０をコードし、前記第２の核酸が、前記第１のＵＬ２０であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２０をコードする、実施形態１１６～１２２のいずれか１つに記載の細胞。
【0532】
実施形態１２５．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードする、実施形態１１６～１２４のいずれか１つに記載の細胞。
【0533】
実施形態１２６．前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、前記第２のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含まない、前記第２のＵＬ２４をコードし、前記第２の核酸が、前記第１のＵＬ２４であって、前記合胞体変異を含む、前記第１のＵＬ２４をコードする、実施形態１１６～１２４のいずれか１つに記載の細胞。
【0534】
実施形態１２７．前記組換えヘルペスウイルスが、ｇＢコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＫコードウイルス遺伝子の単一コピー、ｇＨコードウイルス遺伝子の単一コピー、ＵＬ２０ウイルス遺伝子の単一コピー、及び／またはＵＬ２４ウイルス遺伝子の単一コピーを含む、実施形態１１６～１２６のいずれかに記載の細胞。
【0535】
実施形態１２８．前記第１の核酸及び前記第２の核酸が単一のポリヌクレオチド分子内に含まれる、実施形態１１６～１２７のいずれかに記載の細胞。
【0536】
実施形態１２９．前記第１の核酸及び前記第２の核酸が２つの異なるポリヌクレオチド分子内に含まれる、実施形態１１６～１２７のいずれかに記載の細胞。
【0537】
実施形態１３０．前記細胞がＶｅｒｏ細胞である、実施形態１１５～１２９のいずれかに記載の細胞。
【0538】
実施形態１３１．前記ｇＢ合胞体変異が、配列番号９１９のＲ７９６、Ｒ８００、Ｔ８１３、Ｌ８１７、Ｓ８５４、Ａ８５５、Ｒ８５８、もしくはＡ８７４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間への挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、Ｃ末端に対するＴ８７７の欠失、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態９５～１１４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３０のいずれかに記載の細胞。
【0539】
実施形態１３２．前記ｇＢ合胞体変異が、配列番号９１９のＲ７９６Ｃ、Ｒ８００Ｗ、Ｔ８１３Ｉ、Ｌ８１７Ｈ、Ｌ８１７Ｐ、Ｓ８５４Ｆ、Ａ８５５Ｖ、Ｒ８５８Ｃ、Ｒ８５８Ｈ、Ａ８７４Ｐに対応する１つ以上の変異、Ｅ８１６とＬ８１７との間へのＶＮもしくはＶＮＶＮの挿入、Ｃ末端に対するＳ８６９の欠失、またはＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む、実施形態９５～１１４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３０のいずれかに記載の細胞。
【0540】
実施形態１３３．前記ｇＢ合胞体変異が、配列番号９１９に従うＣ末端に対するＴ８７７の欠失を含む、実施形態９５～１１４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３０のいずれかに記載の細胞。
【0541】
実施形態１３４．前記第１のｇＢ及び／または前記第２のｇＢが、配列番号９１９のＤ２８５Ｎ及び／またはＡ５４９Ｔに対応する変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３３のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３３のいずれかに記載の細胞。
【0542】
実施形態１３５．前記ｇＫ合胞体変異が、配列番号９２０のＰ３３、Ａ４０、Ｌ８６、Ｄ９９、Ａ１１１、Ｌ１１８、Ｔ１２１、Ｃ２４３、Ｌ３０４、Ｉ３０７、またはＲ３１０に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３４のいずれかに記載の細胞。
【0543】
実施形態１３６．前記ｇＫ合胞体変異が、配列番号９２０のＰ３３Ｓ、Ａ４０Ｖ、Ａ４０Ｔ、Ｌ８６Ｐ、Ｄ９９Ｎ、Ａ１１１Ｖ、Ｌ１１８Ｑ、Ｔ１２１Ｉ、Ｃ２４３Ｙ、Ｌ３０４Ｐ、Ｉ３０７Ｎ、またはＲ３１０Ｌに対応する１つ以上の変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３４のいずれかに記載の細胞。
【0544】
実施形態１３７．前記ｇＫ合胞体変異が、配列番号９２０に従うＩ３０７Ｎを含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３４のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３４のいずれかに記載の細胞。
【0545】
実施形態１３８．前記ｇＨ合胞体変異が、配列番号９４３のＮ７５３またはＡ７７８に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３７のいずれかに記載の細胞。
【0546】
実施形態１３９．前記ｇＨ合胞体変異が、配列番号９４３のＮ７５３ＫまたはＡ７７８Ｖに対応する１つ以上の変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３７のいずれかに記載の細胞。
【0547】
実施形態１４０．前記ＵＬ２０合胞体変異が、配列番号９４４のＹ４９、Ｓ５０、Ｒ５１、Ｒ２０９、Ｔ２１２、Ｒ２１３に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３９のいずれかに記載の細胞。
【0548】
実施形態１４１．前記ＵＬ２０合胞体変異が、配列番号９４４のＹ４９Ａ、Ｓ５０Ａ、Ｒ５１Ａ、Ｒ２０９Ａ、Ｔ２１２Ａ、Ｒ２１３Ａに対応する１つ以上の変異、またはＮ２１７後のＣ末端欠失を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１３９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１３９のいずれかに記載の細胞。
【0549】
実施形態１４２．前記ＵＬ２４合胞体変異が、配列番号９４２のＴ６４、Ｒ６３、またはＶ６４に対応する１つ以上のアミノ酸残基での変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１４１のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４１のいずれかに記載の細胞。
【0550】
実施形態１４３．前記ＵＬ２４合胞体変異が、配列番号９４２のＴ６４Ｇ、Ｒ６３Ｖ、またはＶ６４Ｓに対応する１つ以上の変異を含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１４１のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４１のいずれかに記載の細胞。
【0551】
実施形態１４４．前記第１のｇＢをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、実施形態９５～１１４及び１３１～１４３のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４３のいずれかに記載の細胞。
【0552】
実施形態１４５．前記第２のｇＢをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、実施形態９５～１１４及び１３１～１４３のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４３のいずれかに記載の細胞。
【0553】
実施形態１４６．前記第１のｇＫをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、実施形態９５～１１４及び１３１～１４５のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４５のいずれかに記載の細胞。
【0554】
実施形態１４７．前記第２のｇＫをコードするオープンリーディングフレームが、ＣＭＶプロモーター及び／またはｂＧＨポリＡテールに作動可能に連結される、実施形態９５～１１４及び１３１～１４５のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４５のいずれかに記載の細胞。
【0555】
実施形態１４８．前記組換えヘルペスウイルスの収量が、前記第２のｇＢ、前記第２のｇＫ、前記第２のｇＨ、前記第２のＵＬ２０、または前記第２のＵＬ２４をコードしない対照ヘルペスウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、実施形態９５～１１４及び１３１～１４７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４７のいずれかに記載の細胞。
【0556】
実施形態１４９．前記第１のｇＢをコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１４８のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４８のいずれかに記載の細胞。
【0557】
実施形態１５０．前記第１のｇＫをコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１４９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１４９のいずれかに記載の細胞。
【0558】
実施形態１５１．前記第１のｇＨをコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１５０のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１５０のいずれかに記載の細胞。
【0559】
実施形態１５２．前記第１のＵＬ２０をコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１５１のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１５１のいずれかに記載の細胞。
【0560】
実施形態１５３．前記第１のＵＬ２４をコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態９５～１１４及び１３１～１５２のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１５２のいずれかに記載の細胞。
【0561】
実施形態１５４．前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも１つを含む、実施形態１４９～１５３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１４９～１５３のいずれか１つに記載の細胞。
【0562】
実施形態１５５．前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐのうちの少なくとも２つを含む、実施形態１４９～１５３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１４９～１５３のいずれか１つに記載の細胞。
【0563】
実施形態１５６．前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐを含む、実施形態１４９～１５３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１４９～１５３のいずれか１つに記載の細胞。
【0564】
実施形態１５７．前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが、４ｂｐスペーサーによって分離された前記ｍｉＲＮＡの各々の前記標的配列の少なくとも３つのコピーまたは少なくとも４つのコピーを含む、実施形態１４９～１５６のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0565】
実施形態１５８．前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが前記遺伝子の３’ＵＴＲに位置する、実施形態１４９～１５７のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0566】
実施形態１５９．前記ｍｉＲＮＡの前記標的配列が前記ｍｉＲＮＡの逆相補配列を含むか、またはそれらからなる、実施形態１４９～１５８のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0567】
実施形態１６０．前記ｍｉＲ－ＴＳカセットが配列番号９３０のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態１４９～１５９のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0568】
実施形態１６１．前記組換えヘルペスウイルスの収量が、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照ヘルペスウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、実施形態１４９～１６０のいずれかに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0569】
実施形態１６２．組換えヘルペスウイルスであって、実施形態１１５～１６１のいずれかに記載の細胞を培養することと、前記細胞の培養物から前記組換えヘルペスウイルスを回収することとによって産生される、前記組換えヘルペスウイルス。
【0570】
実施形態１６３．組換えヘルペスウイルスであって、前記ヘルペスウイルスのウイルスゲノムが、配列番号９２０のＩ３０７Ｎに対応する合胞体変異を含むｇＫをコードする、前記組換えヘルペスウイルス。
【0571】
実施形態１６４．前記ヘルペスウイルスがアルファヘルペスウイルスである、実施形態１～１１４及び１３１～１６３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１６１のいずれかに記載の細胞。
【0572】
実施形態１６５．前記アルファヘルペスウイルスが単純ヘルペスウイルスである、実施形態１６４に記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0573】
実施形態１６６．前記単純ヘルペスウイルスが単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）である、実施形態１６５に記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0574】
実施形態１６７．前記組換えヘルペスウイルスが腫瘍溶解性である、実施形態１～１１４及び１３１～１６６のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１１５～１６１及び１６４～１６６のいずれかに記載の細胞。
【0575】
実施形態１６８．前記組換えヘルペスウイルスが配列番号８５７に従う脳炎ＨＳＶ分離株に由来し、任意選択で、前記組換えヘルペスウイルスが、配列番号８５７と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、実施形態１６４～１６７のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0576】
実施形態１６９．前記組換えヘルペスウイルスは順行性輸送に欠陥がある、実施形態１６４～１６８のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルスまたは細胞。
【0577】
実施形態１７０．ＵＬ３７ウイルス遺伝子に変異を含む、実施形態１～１１４及び１３１～１６９のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0578】
実施形態１７１．前記ＵＬ３７ウイルス遺伝子が、配列番号８５６のＱ４０３、Ｅ４５２、Ｑ４５５、Ｑ５１１、及びＲ５１５に対応する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または５つ全てのアミノ酸位置に変異を含むＵＬ３７タンパク質をコードする、実施形態１７０に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0579】
実施形態１７２．前記ＵＬ３７ウイルス遺伝子の前記変異が、配列番号８５６に従うＱ４０３Ａ、Ｅ４５２Ａ、Ｑ４５５Ａ、Ｑ５１１Ａ、及びＲ５１５Ａを含む、実施形態１７１に記載の組換えヘルペスウイルス。
【0580】
実施形態１７３．配列番号９１９のＡ５４９Ｔ／Ｄ２８５Ｎに対応する変異を含むｇＢをコードする、実施形態１～１１４及び１３１～１７２のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0581】
実施形態１７４．前記組換えヘルペスウイルスが、ＩＣＰ６、ＩＣＰ３４．５、及び／またはＩＣＰ４７の機能を保持する、実施形態１～１１４及び１３１～１７３のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0582】
実施形態１７５．前記１つ以上の導入遺伝子がＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に挿入される、実施形態１～１１４及び１３１～１７４のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0583】
実施形態１７６．ＨＰＧＤ、ＡＤＡ２、ＨＹＡＬ１、ＣＨＰ、ＣＣＬ２１、ＩＬ－１２、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＴＧＦβアンタゴニスト、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト、クロロトキシン（ＣＴＸ）を含む生体分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のペイロードタンパク質をコードする１つ以上の導入遺伝子を含む、組換えウイルス。
【0584】
実施形態１７７．前記１つ以上のペイロードタンパク質が、ＩＬ－１２、ＰＤ１アンタゴニスト、及びＴＲＥＭ２アンタゴニストを含むか、またはそれらからなる、実施形態１７６に記載の組換えウイルス。
【0585】
実施形態１７８．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、実施形態１７７に記載の組換えウイルス。
【0586】
実施形態１７９．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＴＸを含む生体分子を含む、実施形態１７７または１７８に記載の組換えウイルス。
【0587】
実施形態１８０．前記１つ以上のペイロードタンパク質が、表４～７に列記されるペイロードタンパク質の組み合わせのうちの１つを含むか、またはそれらからなる、実施形態１７６に記載の組換えウイルス。
【0588】
実施形態１８１．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＰＧＤを含む、実施形態１７６～１８０のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0589】
実施形態１８２．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＡＤＡ２を含む、実施形態１７６～１８１のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0590】
実施形態１８３．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＨＹＡＬ１を含む、実施形態１７６～１８２のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0591】
実施形態１８４．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＨＰを含む、実施形態１７６～１８３のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0592】
実施形態１８５．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＣＣＬ２１を含む、実施形態１７６～１８４のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0593】
実施形態１８６．前記１つ以上のペイロードタンパク質がＩＬ－１２を含む、実施形態１７６～１８５のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0594】
実施形態１８７．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＤ４７アンタゴニストを含む、実施形態１７６～１８６のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0595】
実施形態１８８．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＧＦβアンタゴニストを含む、実施形態１７６～１８７のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0596】
実施形態１８９．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＰＤ１アンタゴニストを含む、実施形態１７６～１８８のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0597】
実施形態１９０．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＴＲＥＭ２アンタゴニストを含む、実施形態１７６～１８９のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0598】
実施形態１９１．前記アンタゴニストが抗体またはその抗原結合断片を含む、実施形態１７６～１９０のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0599】
実施形態１９２．前記１つ以上のペイロードタンパク質が前記ＣＴＸを含む生体分子を含む、実施形態１７６～１９１のいずれか１つに記載の組換えウイルス。
【0600】
実施形態１９３．前記ＣＴＸを含む生体分子が、Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質に特異的に結合するＴ細胞エンゲージャー部分を更に含む、実施形態１７９または１９２に記載の組換えウイルス。
【0601】
実施形態１９４．前記Ｔ細胞の表面に発現するタンパク質がＣＤ３である、実施形態１９３に記載の組換えウイルス。
【0602】
実施形態１９５．組換えウイルスであって、
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記組換えウイルス。
（ａ）ｍｉＲ－１２２－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｂ）ｍｉＲ－１４５－５ｐの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｃ）ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、
（ｄ）ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列、及び
（ｅ）ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含む、前記組換えウイルス。
【0603】
実施形態１９６．ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１４５－５ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む、実施形態１９５に記載の組換えウイルス。
【0604】
実施形態１９７．組換えウイルスであって、前記組換えウイルスのウイルスゲノムが、合胞体変異を含むタンパク質及び前記合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードする、前記組換えウイルス。
【0605】
実施形態１９８．前記合胞体変異を含む前記タンパク質と前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が、前記合胞体変異を除いて、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を共有する、実施形態１９７に記載の組換えウイルス。
【0606】
実施形態１９９．前記合胞体変異を含む前記タンパク質が内因性ウイルス遺伝子によってコードされ、前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が外因性発現カセットによってコードされる、実施形態１９７または１９８に記載の組換えウイルス。
【0607】
実施形態２００．前記合胞体変異を含む前記タンパク質が外因性発現カセットによってコードされ、前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が内因性ウイルス遺伝子によってコードされる、実施形態１９７または１９８に記載の組換えウイルス。
【0608】
実施形態２０１．前記合胞体変異を含む前記タンパク質及び前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質の両方が、１つの外因性発現カセットによってコードされるか、または異なる外因性発現カセットによってコードされる、実施形態１９７または１９８に記載の組換えウイルス。
【0609】
実施形態２０２．実施形態１９７～２０１のいずれか１つに記載の組換えウイルスをコードする組換え核酸を含む、細胞。
【0610】
実施形態２０３．組換えウイルスをコードする第１の核酸と、第２の核酸と、を含む細胞であって、前記組換えウイルスのウイルスゲノムが合胞体変異を含むタンパク質をコードし、前記第２の核酸が前記合胞体変異を含まない対応タンパク質をコードする、前記細胞。
【0611】
実施形態２０４．前記合胞体変異を含む前記タンパク質と前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質が、前記合胞体変異を除いて、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を共有する、実施形態２０３に記載の細胞。
【0612】
実施形態２０５．前記ウイルスの収量が、前記合胞体変異を含まない前記対応タンパク質をコードしない対照ウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、実施形態１９７～２０１のいずれか１つに記載の組換えウイルス、または実施形態２０２～２０４のいずれか１つに記載の細胞。
【0613】
実施形態２０６．前記合胞体変異を含む前記タンパク質をコードする遺伝子が、ｍｉＲＮＡ標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットであって、１つ以上のｍｉＲＮＡの１つ以上の標的配列を含む、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含む、実施形態１９７～２０１及び２０５のいずれか１つに記載の組換えウイルス、または実施形態２０２～２０５のいずれか１つに記載の細胞。
【0614】
実施形態２０７．前記１つ以上のｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐから選択されるｍｉＲＮＡのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全てを含む、実施形態２０６に記載の組換えウイルスまたは細胞。
【0615】
実施形態２０８．前記組換えウイルスの収量が、前記ｍｉＲ－ＴＳカセットを含まない対照ウイルスまたは対照細胞の収量よりも少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い、実施形態２０６または２０７に記載の組換えウイルスまたは細胞。
【0616】
実施形態２０９．組換えウイルスであって、実施形態２０２～２０８のいずれかに記載の細胞を培養することと、前記細胞の培養物から前記組換えヘルペスウイルスを回収することとによって産生される、前記組換えウイルス。
【0617】
実施形態２１０．前記組換えウイルスが、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルス、またはコクサッキーウイルスに由来する、実施形態１７６～２０１及び２０５～２０９のいずれか１つに記載の組換えウイルス、または実施形態２０２～２０８のいずれかに記載の細胞。
【0618】
実施形態２１１．前記組換えウイルスが腫瘍溶解性である、実施形態１７６～２０１及び２０５～２１０のいずれか１つに記載の組換えウイルス、または実施形態２０２～２０８のいずれかに記載の細胞。
【0619】
実施形態２１２．実施形態１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１つに記載の組換えウイルスをコードする、核酸分子。
【0620】
実施形態２１３．前記核酸分子がＤＮＡである、実施形態２１２に記載の核酸分子。
【0621】
実施形態２１４．前記核酸分子がＲＮＡである、実施形態２１２に記載の核酸分子。
【0622】
実施形態２１５．実施形態１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、または実施形態１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１つに記載の組換えウイルスを含む、ウイルスストック。
【0623】
実施形態２１６．実施形態２１２～２１４のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、粒子。
【0624】
実施形態２１７．前記粒子が、ナノ粒子、エキソソーム、リポソーム、及びリポプレックスからなる群から選択される、実施形態２１６に記載の粒子。
【0625】
実施形態２１８．前記粒子が脂質ナノ粒子である、実施形態２１６に記載の粒子。
【0626】
実施形態２１９．真核細胞を前記粒子と接触させることにより、前記真核細胞による感染性ウイルス粒子の産生がもたらされる、実施形態２１６～２１８のいずれか１つに記載の粒子。
【0627】
実施形態２２０．医薬組成物であって、
（ｉ）実施形態１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、実施形態１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１つに記載の組換えウイルス、実施形態２１２～２１４のいずれか１つに記載の核酸分子、または実施形態２１６～２１９のいずれか１つに記載の粒子と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、前記医薬組成物。
（ｉ）実施形態１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、実施形態１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１つに記載の組換えウイルス、実施形態２１２～２１４のいずれか１つに記載の核酸分子、または実施形態２１６～２１９のいずれか１つに記載の粒子と、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、前記医薬組成物。
【0628】
実施形態２２１．がん性細胞を死滅させる方法であって、前記がん性細胞を、実施形態１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、実施形態１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１つに記載の組換えウイルス、実施形態２１６～２１９のいずれか１つに記載の粒子、または実施形態２２０に記載の医薬組成物に、前記ウイルスまたは粒子を前記がん性細胞に感染させ、かつ前記ウイルスを前記がん性細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露させることを含み、前記がん性細胞内での前記ウイルスの複製により、細胞死がもたらされる、前記方法。
【0629】
実施形態２２２．前記細胞がインビトロまたはインビボにある、実施形態２２１に記載の方法。
【0630】
実施形態２２３．前記がん性細胞が、非がん性細胞における前記１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができるｍｉＲＮＡの発現と比較して、前記ｍｉＲＮＡの発現の低下を有する、実施形態２２１または２２２に記載の方法。
【0631】
実施形態２２４．前記ウイルスの複製が、前記１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列に結合することができる前記ｍｉＲの発現の低下を有する前記がん性細胞内で増加するか、または維持される、実施形態２２１～２２３のいずれか１つに記載の方法。
【0632】
実施形態２２５．前記がん性細胞が、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）の細胞である、実施形態２２１～２２４のいずれか１つに記載の方法。
【0633】
実施形態２２６．前記がん性細胞が神経膠芽腫細胞である、実施形態２２１～２２４のいずれか１つに記載の方法。
【0634】
実施形態２２７．がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、前記対象に、実施形態１～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス、実施形態１７６～２０１及び２０５～２１１のいずれか１つに記載の組換えウイルス、実施形態２１６～２１９のいずれか１つに記載の粒子、または実施形態２２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【0635】
実施形態２２８．前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が、静脈内、皮下、腫瘍内、筋肉内、または鼻腔内投与される、実施形態２２７に記載の方法。
【0636】
実施形態２２９．前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が腫瘍内投与される、実施形態２２７に記載の方法。
【0637】
実施形態２３０．前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が静脈内投与される、実施形態２２７に記載の方法。
【0638】
実施形態２３１．前記ウイルス、前記粒子、または前記組成物が１回のみ投与される、実施形態２２７～２３０のいずれか１つに記載の方法。
【0639】
実施形態２３２．前記がんが、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、非黒色腫皮膚癌、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される、実施形態２２７～２３１のいずれか１つに記載の方法。
【0640】
実施形態２３３．前記がんが神経膠芽腫である、実施形態２２７～２３１のいずれか１つに記載の方法。
【0641】
実施形態２３４．実施形態１１５～１６０及び２０２～２０８のいずれかに記載の細胞を含む、細胞株。
【0642】
実施形態２３５．組換えヘルペスウイルスを産生する方法であって、実施形態１１５～１６０及び２０２～２０８のいずれかに記載の細胞または実施形態２３４に記載の細胞株を培養することと、前記細胞の培養物から前記組換えヘルペスウイルスを回収することと、を含む、前記方法。
【0643】
実施形態２３６．前記ヘルペスウイルスの感染部位をイメージングするために小分子と組み合わせて使用するための、実施形態８２～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルス。
【0644】
実施形態２３７．ヘルペスウイルスの感染部位をインビボでイメージングする方法であって、実施形態８２～１１４及び１３１～１７５のいずれか１つに記載の組換えヘルペスウイルスと、小分子と、を投与することを含む、前記方法。
【0645】
実施形態２３８．前記小分子が放射性同位体標識アシクロビルであり、任意選択で、前記放射性同位体標識がフッ素－１８（１８Ｆ）標識を含む、実施形態２３６に記載の使用するための組換えウイルス、または実施形態２３７に記載の方法。
【実施例】
【0646】
以下の実施例は、本開示の様々な実施形態を例証することを目的とし、いかなる様式によっても本開示を限定するようには意図されていない。本実施例は、本明細書に記載の方法と併せて、例示的なものであり、本開示の範囲を限定するものとして意図されていない。特許請求の範囲によって定義される本開示の趣旨に包含される記載の実施形態に対する改正、修正、及び他の変更が具体的に企図される。
【0647】
実施例１－神経膠芽腫治療のためのＨＳＶ骨格の構築
ＨＳＶ骨格ベクター（「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ」と称する）を、順行性輸送に欠陥のある脳炎ＨＳＶ分離株（配列番号８５７）に基づいて操作した。図１で解説するように、修飾には、ＵＬ４０－ＵＬ４１ウイルス遺伝子間の遺伝子間領域に挿入した細菌人工染色体（ＢＡＣ）配列、細胞への侵入を増強するためのｇＢをコードするＵＬ２７ウイルス遺伝子に導入したＤ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ二重変異（「ＮＴ」変異）、逆行性輸送を破壊するためのＵＬ３７ウイルス遺伝子に導入したＱ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ組み合わせ変異（「Ｒ２」変異）が含まれた。ＩＣＰ４７遺伝子、ＩＣＰ３４．５遺伝子、及びＩＣＰ６遺伝子は改変しなかった。ペイロード分子（複数可）をコードするｃＤＮＡをＵＬ５０－ＵＬ５１ウイルス遺伝子間の遺伝子間領域に挿入してもよい。このＨＳＶ骨格に基づいて、いくつかのｍｉＲ減弱型組換えＨＳＶベクターを生成し、「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ」ＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４に挿入した配列番号８５８のｍｉＲ－ＴＳカセットを含み、「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ ＩＣＰ８－ｍｉＲＴ」ＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４に挿入した配列番号８５８のｍｉＲ－ＴＳカセット及びＩＣＰ８に挿入した配列番号８５９の追加のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。
ＨＳＶ骨格ベクター（「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ」と称する）を、順行性輸送に欠陥のある脳炎ＨＳＶ分離株（配列番号８５７）に基づいて操作した。図１で解説するように、修飾には、ＵＬ４０－ＵＬ４１ウイルス遺伝子間の遺伝子間領域に挿入した細菌人工染色体（ＢＡＣ）配列、細胞への侵入を増強するためのｇＢをコードするＵＬ２７ウイルス遺伝子に導入したＤ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ二重変異（「ＮＴ」変異）、逆行性輸送を破壊するためのＵＬ３７ウイルス遺伝子に導入したＱ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ組み合わせ変異（「Ｒ２」変異）が含まれた。ＩＣＰ４７遺伝子、ＩＣＰ３４．５遺伝子、及びＩＣＰ６遺伝子は改変しなかった。ペイロード分子（複数可）をコードするｃＤＮＡをＵＬ５０－ＵＬ５１ウイルス遺伝子間の遺伝子間領域に挿入してもよい。このＨＳＶ骨格に基づいて、いくつかのｍｉＲ減弱型組換えＨＳＶベクターを生成し、「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ」ＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４に挿入した配列番号８５８のｍｉＲ－ＴＳカセットを含み、「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ ＩＣＰ８－ｍｉＲＴ」ＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４に挿入した配列番号８５８のｍｉＲ－ＴＳカセット及びＩＣＰ８に挿入した配列番号８５９の追加のｍｉＲ－ＴＳカセットを含む。
【0648】
実施例２－ｍｉＲＮＡ標的配列カセットの操作
正常な脳細胞と比較して神経膠芽腫細胞における発現の低減を有するいくつかのｍｉＲＮＡを、精製した細胞集団を使用して特定した。図２Ａに示すように、かかるｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ－１２８－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐが含まれる。図２Ｂは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ及びｍｉＲ－３４ｂ－３ｐが上衣細胞において高度に発現したため、対応するｍｉＲ標的配列を使用して、上衣細胞における腫瘍溶解性ウイルスの複製を阻害することができたことを示す。次いで、かかる所見を、インサイチュハイブリダイゼーション及び／または抗体染色を使用して検証して、ｍｉＲＮＡ発現を特定の細胞型に局在化させた。例えば、図２Ｃの上列は、ｍｉＲ－１２４－３ｐが神経細胞で高度に発現したが、乏突起膠細胞では高度に発現しなかったことを示し、図２Ｃの下列は、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐが上衣細胞で高度に発現した（バイオマーカーＣｃｄｃ１５３の高発現を特徴とした）ことを示す。
正常な脳細胞と比較して神経膠芽腫細胞における発現の低減を有するいくつかのｍｉＲＮＡを、精製した細胞集団を使用して特定した。図２Ａに示すように、かかるｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ－１２８－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１３７－３ｐ、及びｍｉＲ－１３２－３ｐが含まれる。図２Ｂは、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ及びｍｉＲ－３４ｂ－３ｐが上衣細胞において高度に発現したため、対応するｍｉＲ標的配列を使用して、上衣細胞における腫瘍溶解性ウイルスの複製を阻害することができたことを示す。次いで、かかる所見を、インサイチュハイブリダイゼーション及び／または抗体染色を使用して検証して、ｍｉＲＮＡ発現を特定の細胞型に局在化させた。例えば、図２Ｃの上列は、ｍｉＲ－１２４－３ｐが神経細胞で高度に発現したが、乏突起膠細胞では高度に発現しなかったことを示し、図２Ｃの下列は、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐが上衣細胞で高度に発現した（バイオマーカーＣｃｄｃ１５３の高発現を特徴とした）ことを示す。
【0649】
インビトロ細胞実験を使用して、「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ ＩＣＰ８－ｍｉＲＴ」ＨＳＶベクターの複製を対応するｍｉＲＮＡによって減弱させることができるかを試験した。このＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４にｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２８Ｔ、及びｍｉＲ－１３７－３ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含み、ＩＣＰ２７にｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４－３ｐ、ｍｉＲ－１２９－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐのｍｉＲＮＡ標的配列を含む。ｍｉＲＮＡ媒介減弱を評価するために、対応するｍｉＲＮＡ模倣物を各々、ＨＳＶベクターに感染した細胞の上清に添加し、各条件下でのＨＳＶの複製能力をプラーク形成単位の最終カウントに基づいて分析した。図３Ｂに示すように、ＩＣＰ４またはＩＣＰ８へのｍｉＲＮＡ標的配列の挿入により、対応するｍｉＲＮＡの各々の存在下でのＨＳＶベクターのウイルス複製が効果的に抑制された。
【0650】
次に、上記の実施例１に記載されるように、操作したＨＳＶベクター「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ」及び「ＯＮＣＲ－ＧＢＭ ＩＣＰ４－ｍｉＲＴ ＩＣＰ８－ｍｉＲＴ」の増殖に対するｍｉＲ－ＴＳカセットの影響を試験するために成長速度研究を行った。これらのベクターを、Ｖｅｒｏ細胞及びＧＢＭ細胞における増殖について試験した。結果は、ｍｉＲ－ＴＳカセット（複数可）の挿入が、Ｖｅｒｏ細胞（図４Ａ及び図４Ｂ）ならびにＧＢＭ腫瘍細胞株（データ示さず）における増殖中の成長速度に最小限の影響しか及ぼさなかったことを示す。
【0651】
実施例３－ｍｉＲ減弱型ＨＳＶのインビボ研究は優れた安全性プロファイルを実証する
ｍｉＲ減弱型ＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスの安全性プロファイルを試験するためにインビボ実験を行った。実施例２のＯＮＣＲ－ＧＢＭベースのウイルスを成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスに頭蓋内注射し、全生存率（図５Ａ）及び体重変化（図５Ｂ）を監視した。結果は、ＩＣＰ４及びＩＣＰ８に挿入したＣＮＳ特異的ｍｉＲ標的配列を有するＯＮＣＲ－ＧＢＭウイルスが５×１０５ｐｆｕの用量で良好な耐容性を示すことを示した。比較として、約２０ｐｆｕの非減弱型ＯＮＣＲ－ＧＢＭの頭蓋内注射は致死的であった（データ示さず）。したがって、ＩＣＰ４遺伝子座及びＩＣＰ８遺伝子座の両方へのｍｉＲ－ＴＳカセットの挿入により、著しく低下した神経毒性及び１０，０００倍超の安全性／耐容性の増加がもたらされた。
ｍｉＲ減弱型ＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスの安全性プロファイルを試験するためにインビボ実験を行った。実施例２のＯＮＣＲ－ＧＢＭベースのウイルスを成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスに頭蓋内注射し、全生存率（図５Ａ）及び体重変化（図５Ｂ）を監視した。結果は、ＩＣＰ４及びＩＣＰ８に挿入したＣＮＳ特異的ｍｉＲ標的配列を有するＯＮＣＲ－ＧＢＭウイルスが５×１０５ｐｆｕの用量で良好な耐容性を示すことを示した。比較として、約２０ｐｆｕの非減弱型ＯＮＣＲ－ＧＢＭの頭蓋内注射は致死的であった（データ示さず）。したがって、ＩＣＰ４遺伝子座及びＩＣＰ８遺伝子座の両方へのｍｉＲ－ＴＳカセットの挿入により、著しく低下した神経毒性及び１０，０００倍超の安全性／耐容性の増加がもたらされた。
【0652】
実施例４－ｍｉＲ－ＴＳカセットの操作
ｍｉＲ－ＴＳカセットの設計：所望の細胞型（肝細胞、内皮細胞、神経細胞、上衣細胞、及び乏突起膠細胞）を保護するためのマイクロＲＮＡを、蛍光ハイブリダイゼーションアッセイ（ｎＣｏｕｎｔｅｒ ｍｉＲＮＡ発現キット、ｎａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｉｎｃ）を使用して直接定量することによって特定した（図６Ａ）。各々のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ標的配列を、ｍｉＲ－Ｔ ３０６０（配列番号８５８）、ｍｉＲ－Ｔ ９９１９（配列番号８５９）、ｍｉＲ－Ｔ ３０１２（配列番号８７３）、及びｍｉＲ－Ｔ ３０９６（配列番号８７４）の４つの個別のｍｉＲ－ＴＳカセットに構築した。各々のｍｉＲ－ＴＳカセットは、４つの異なるｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ標的配列の３つのコピーを含み（図６Ｂ）、隣接するｍｉＲＮＡ標的配列を４ｂｐスペーサーによって分離した。各々のカセット内のｍｉＲ－ＴＳ構成を図６Ｃに示す。
ｍｉＲ－ＴＳカセットの設計：所望の細胞型（肝細胞、内皮細胞、神経細胞、上衣細胞、及び乏突起膠細胞）を保護するためのマイクロＲＮＡを、蛍光ハイブリダイゼーションアッセイ（ｎＣｏｕｎｔｅｒ ｍｉＲＮＡ発現キット、ｎａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｉｎｃ）を使用して直接定量することによって特定した（図６Ａ）。各々のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ標的配列を、ｍｉＲ－Ｔ ３０６０（配列番号８５８）、ｍｉＲ－Ｔ ９９１９（配列番号８５９）、ｍｉＲ－Ｔ ３０１２（配列番号８７３）、及びｍｉＲ－Ｔ ３０９６（配列番号８７４）の４つの個別のｍｉＲ－ＴＳカセットに構築した。各々のｍｉＲ－ＴＳカセットは、４つの異なるｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ標的配列の３つのコピーを含み（図６Ｂ）、隣接するｍｉＲＮＡ標的配列を４ｂｐスペーサーによって分離した。各々のカセット内のｍｉＲ－ＴＳ構成を図６Ｃに示す。
【0653】
ｍｉＲ－ＴＳカセットの特徴付け：各々のｍｉＲ－ＴＳカセットを、ｐｓｉＣｈｅｃｋ２デュアルホタル／ウミシイタケルシフェラーゼレポーターベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）にサブクローニングして、ウミシイタケルシフェラーゼの発現を制御するが、ホタルルシフェラーゼの発現は制御しないようにした。各々の構築物を、指示したｍｉＲＮＡ模倣物（ｍｉｒＶａｎａ模倣物、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｉｎｃ，Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）とともにＨＥＫ２９３細胞に共トランスフェクトし、２日間インキュベートし、その後、各々のレポーター遺伝子の活性を、均一アッセイ（Ｄｕａｌ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ系、Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）を使用してアッセイした。各々のｍｉＲ－ＴＳカセットによって付与される減弱をウミシイタケルシフェラーゼ活性のホタルルシフェラーゼ活性に対する比率として計算し、陰性ｍｉＲＮＡ模倣物対照の減弱に対して正規化した。図６Ｄに示すように、ウミシイタケルシフェラーゼの発現は、指示したｍｉＲ－ＴＳカセットの各々の対応するマイクロＲＮＡの存在によって抑制された。
【0654】
ｍｉＲ－ＴＳ減弱型ＨＳＶのインビトロでの特徴付け：以下の表８及び図６Ｂに示すように、４つ全てのｍｉＲ－ＴＳカセットを対応するＨＳＶウイルス遺伝子に挿入して、ＨＳＶウイルスＯＮＣＲ－２１６９を生成した。Ａ４３１細胞に、７ｎＭの提示したｍｉＲＮＡ模倣物（ｍｉｒＶａｎａ模倣物、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）をトランスフェクトし、０．０３の感染多重度でＯＮＣＲ－２１６９を接種し、その後、５日間インキュベートして、ウイルスを増殖させた。細胞を採取し、その後、３つの急速凍結融解サイクルにより溶解して、ウイルスを放出した。溶解物を、Ｖｅｒｏ細胞単層上での段階希釈のプラークアッセイによってウイルス収量について分析した。図７Ａに示すように、ＯＮＣＲ－２１６９におけるｍｉＲ－ＴＳカセットのうちの少なくとも１つを標的とすることにより、指示したｍｉＲＮＡ模倣物は各々、ウイルス収量を有意に減少させ（主に１００倍超）、ｍｉＲＮＡ薬剤付加増殖減弱の成功を示した。
【表8】
【0655】
ウイルス増殖をマイクロＲＮＡ模倣物の不在下でも分析した。２つのＨＳＶ構築物を分析した。ＯＮＣＲ－２１４９は、ＩＣＰ４の両方のコピーにｍｉＲ－Ｔ３０６０カセットを有し、ＩＣＰ８にｍｉＲ－Ｔ９９１９カセットを有する。ＯＮＣＲ－２１６９は、ＩＣＰ２７のｍｉＲ－Ｔ３０１２にカセットを有し、ＵＬ８にｍｉＲ－Ｔ３０９６カセットを有するが、それ以外の点ではＯＮＣＲ－２１４９と同一である。Ｖｅｒｏ細胞単層を０．０３の感染多重度でウイルスに感染させ、その後、３日間インキュベートして、ウイルスを増殖させた。細胞を採取し、その後、３つの急速凍結融解サイクルにより溶解して、ウイルスを放出した。溶解物を、Ｖｅｒｏ細胞単層上での段階希釈のプラークアッセイによってウイルス収量について分析した。結果は、両方のウイルスが対応するマイクロＲＮＡ模倣物の不在下で同様の収量を有したことを示す（図７Ｂ）。
【0656】
ｍｉＲ－ＴＳ減弱型ＨＳＶのインビボでの特徴付け：１０週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、２ｕｌの指示したウイルス（ＯＮＣＲ－２１４９またはＯＮＣＲ－２１６９）を頭蓋内注射し、その後、神経毒性の徴候及びマウスの全体重の変化について毎日監視した。図７Ｃに示すように、いずれの処理群間にも統計的に有意な差は検出されず、ｍｉＲ－ＴＳカセットが対応するＨＳＶ構築物の毒性から脳内の正常細胞を保護することを実証した。以前の報告によると、ＨＳＶ ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株の致死量は、いくつかのマウス株で約２０ＰＦＵであった。したがって、ここでの結果は、ｍｉＲ－ＴＳカセットを含むこれらの操作したＨＳＶを元のＨＳＶ株よりも少なくとも５桁高い用量で投与することができることを示唆する。マウスの星状膠細胞及び乏突起膠細胞がＨＳＶに対してヒトの星状膠細胞及び乏突起膠細胞よりも高い耐性を示すことも注目に値し、それ故に、追加の安全域がヒト対象の治療に使用される腫瘍溶解性ＨＳＶに有益であり得る。したがって、更に高い用量（例えば、５ｅ６ ＰＦＵ）のＯＮＣＲ－２１４９ウイルス及びＯＮＣＲ－２１６９ウイルスが、ＯＮＣＲ－２１６９のＩＣＰ２７及びＵＬ８にｍｉＲ－ＴＳカセットを含めることによって提供される追加の保護を試験するために使用されるであろう。
【0657】
実施例５－再標的化ＨＳＶの操作
図８に示すように、２つのＨＳＶ構築物を、ＨＳＶを代替の細胞受容体に再標的化するように操作した。ウイルス骨格は、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＰ２７、及びＵＬ８にｍｉＲ－ＴＳカセットを含み、かつＵＬ２３、ＵＬ３０、ＵＬ３７、及びｇＢの指示した変異を含むＨＳＶ ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株のクローニング誘導体であるＯＮＣＲ－２１６９に基づいた。この図の右側に示すように、ｇＤのアミノ酸残基６～２４のコード領域、ＨＶＥＭ、及び３－Ｏ－Ｓ－ヘパラン硫酸結合ドメインを、ｉ）インテグリンに結合するノッチンペプチド（ＫＰＩ）またはｉｉ）ＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合するＶＨＨナノボディ（ＶＥ）のいずれかをコードする配列で置き換えることによって、再標的化変異をＵＳ６／ｇＤ遺伝子に組み込んだ。
図８に示すように、２つのＨＳＶ構築物を、ＨＳＶを代替の細胞受容体に再標的化するように操作した。ウイルス骨格は、ＩＣＰ４、ＩＣＰ８、ＩＰ２７、及びＵＬ８にｍｉＲ－ＴＳカセットを含み、かつＵＬ２３、ＵＬ３０、ＵＬ３７、及びｇＢの指示した変異を含むＨＳＶ ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株のクローニング誘導体であるＯＮＣＲ－２１６９に基づいた。この図の右側に示すように、ｇＤのアミノ酸残基６～２４のコード領域、ＨＶＥＭ、及び３－Ｏ－Ｓ－ヘパラン硫酸結合ドメインを、ｉ）インテグリンに結合するノッチンペプチド（ＫＰＩ）またはｉｉ）ＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合するＶＨＨナノボディ（ＶＥ）のいずれかをコードする配列で置き換えることによって、再標的化変異をＵＳ６／ｇＤ遺伝子に組み込んだ。
【0658】
操作した再標的化ＨＳＶを、異なるＶｅｒｏ細胞：通常のＶｅｒｏ細胞、及びネクチン－１ノックアウト（ＫＯ）を有するＶｅｒｏ細胞におけるそれらの増殖特性について試験した。細胞単層を１．０の感染多重度で指示したウイルスに感染させた。４８時間インキュベートした後、単層を固定し、クリスタルバイオレットで染色して、ウイルス増殖に関連するプラークを可視化した。図９Ａに示すように、ＯＮＣＲ－２１８１－ＫＰＩ変異体が、親ＨＳＶと同様に、Ｖｅｒｏ－ネクチン－１ノックアウト細胞においてその感染力を失った一方で、ＯＮＣＲ－２１８１－ＶＥ変異体は、Ｖｅｒｏ－ネクチン－１ノックアウト細胞においても感染力を保持した。別の増殖アッセイでは、Ｖｅｒｏ細胞単層及びＶｅｒｏ－ネクチン－１ノックアウト細胞単層を、０．１の感染多重度で指示したウイルスに感染させた。これらのウイルスの増殖を、自動倒立顕微鏡（ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｉｎｃ）を使用して約４８時間にわたってｍＣｈｅｒｒｙレポーター遺伝子発現を定量することによってアッセイした。図９Ｂに示すように、ｇＤ－ＫＰＩ変異及びｇＤ－ＶＥ変異はいずれもＶｅｒｏ細胞に改善された成長速度を付与したが、ｇＤ－ＶＥ変異体のみがＶｅｒｏ－ネクチン－１ノックアウト細胞株の増殖を促進した。したがって、ｇＤ－ＶＥ変異体は、ネクチン－１発現を有しない細胞に感染して増殖する能力を獲得した。
【0659】
次いで、操作した再標的化ＨＳＶを、神経膠芽腫細胞株におけるそれらの増殖特性について分析した。指示した神経膠芽腫がん細胞株の単層を、０．１の感染多重度で指示したウイルスに感染させた。これらのウイルスの増殖を、自動倒立顕微鏡（ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｉｎｃ）を使用して約４８時間にわたってｍＣｈｅｒｒｙレポーター遺伝子発現を定量することによってアッセイした。図１０に示すように、ｇＤ－ＫＰＩ変異及びｇＤ－ＶＥ変異は、ほとんどのアッセイした細胞株に改善された成長速度を付与した。
【0660】
原発性ヒト神経膠芽腫（ＧＢＭ）腫瘍におけるネクチン－１及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の発現をマイクロアレイによって分析した。以下の表９に示すように、高いネクチン－１発現を有するＧＢＭコアの有病率は、高いＥＧＦＲ発現を有するＧＢＭコアの有病率よりもはるかに低い。代表的なネクチン－１＋ＧＢＭコアを図１１に示す。発現データに基づいて、ＥＧＦＲ再標的化ＨＳＶは、より広範囲のＧＢＭ腫瘍により高い適用性を有する。
【表9】
【0661】
実施例６－ＨＳＶの複製忠実度及びアシクロビル感受性の改善
Ｌ７７４Ｆ変異をＯＮＣＲ－１０１０ウイルス構築物のＵＬ３０遺伝子に導入して、ＯＮＣＲ－１０１２ウイルス構築物を生成した（図１２）。両方のウイルスは、ペイロードカセット内で、ＵＬ４４／ｇＣプロモーターからＧＦＰレポーター遺伝子を発現し、ＣＭＶプロモーターからのｍＣｈｅｒｒｙレポーター遺伝子及びＦＬｕｃレポーター遺伝子を発現した。ＯＮＣＲ－１０１０ウイルス（ＵＬ３０－ＷＴ）及びＯＮＣＲ－１０１２ウイルス（ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ）を三重プラーク精製し、その後、３～５日毎にＶｅｒｏ細胞上で連続して増殖させた。ウイルスＤＮＡを継代数１、５、１０、１５、及び２０で精製して、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって分析した。シーケンシングデータを、その位置で１０００個未満の総リードを有し、かつデータセット内で１％未満で生じた全てのバリアントを除去し、その後、継代数１ですでに存在した全てのバリアントコールを除去することによって分析した。
Ｌ７７４Ｆ変異をＯＮＣＲ－１０１０ウイルス構築物のＵＬ３０遺伝子に導入して、ＯＮＣＲ－１０１２ウイルス構築物を生成した（図１２）。両方のウイルスは、ペイロードカセット内で、ＵＬ４４／ｇＣプロモーターからＧＦＰレポーター遺伝子を発現し、ＣＭＶプロモーターからのｍＣｈｅｒｒｙレポーター遺伝子及びＦＬｕｃレポーター遺伝子を発現した。ＯＮＣＲ－１０１０ウイルス（ＵＬ３０－ＷＴ）及びＯＮＣＲ－１０１２ウイルス（ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ）を三重プラーク精製し、その後、３～５日毎にＶｅｒｏ細胞上で連続して増殖させた。ウイルスＤＮＡを継代数１、５、１０、１５、及び２０で精製して、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって分析した。シーケンシングデータを、その位置で１０００個未満の総リードを有し、かつデータセット内で１％未満で生じた全てのバリアントを除去し、その後、継代数１ですでに存在した全てのバリアントコールを除去することによって分析した。
【0662】
図１３に示すように、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異は、ウイルスの変異頻度を、ＯＮＣＲ－１０１０対照における平均１．６３変異／継代から、ＯＮＣＲ－１０１２構築物における平均０．５６変異／継代に、有意に低下させた。ＯＮＣＲ－１０１０群では、３７個の変異のうちの２３個がコード領域に存在し、ＯＮＣＲ－１０１２群では、１６個の変異のうちの９個がコード領域に存在した。また、図１４Ａ及び図１４Ｂに示すように、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異は、ウイルス産生にほとんど影響を及ぼさなかった。
【0663】
しかしながら、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異は、ＨＳＶ構築物のアシクロビル感受性を低下させ、それ故に、その治療有効性を損なう可能性がある。アシクロビルは、ＨＳＶチミジンキナーゼ（ＴＫ）によるそのリン酸化を必要とするがんのＨＳＶ－ＴＫ媒介自殺遺伝子療法におけるプロドラッグとして使用することができる。アシクロビルに対するウイルス感受性を、増加濃度の薬物を無傷のＶｅｒｏ細胞単層に添加し、その後、標準用量のウイルスに感染させることによってアッセイした。Ｖｅｒｏ細胞単層を４日間インキュベートしてウイルスを増殖させ、その後、ウイルスを採取し、対応する溶解物をプラークアッセイによってウイルスについてアッセイした。ＩＣ９０を、未処理対照と比較してプラーク力価の９０％減少をもたらしたアシクロビルの量として計算した。図１５Ａに示すように、ＯＮＣＲ－１０１０に導入すると、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異により、アシクロビルのＩＣ９０が０．４３ｕｇ／ｍｌから１．８４ｕｇ／ｍｌに増加し、より低いアシクロビル感受性を示した。アシクロビルのバイオアベイラビリティが、経口投与した場合、ＣＮＳにおいて約１．７６ｕｇ／ｍｌであったため、アシクロビルの有効性は、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異を含むＨＳＶに感染した細胞において有意に低下する可能性がある。この問題は、ＨＳＶ－ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株などのアシクロビルに対して本質的に感受性が低いＨＳＶ株においてより顕著であり得る。図１５Ｂに示すように、ＨＳＶ－ＭａｃＩｎｔｙｒｅに由来するＯＮＣＲ－２１０７に導入すると、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異により、結果として得られたＯＮＣＲ－２１２３構築物がアシクロビル耐性になった。
【0664】
ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異を有するＨＳＶバリアントのアシクロビル感受性を改善するために、ＯＮＣＲ－０２１２３のＨＳＶチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）をコードするＵＬ２３ウイルス遺伝子に追加の変異を導入し、配列番号９１８のＬ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍに対応するアミノ酸置換をもたらした。図１６に示すように、これらのＵＬ２３変異は、ＵＬ３０－Ｌ７７４Ｆ変異を有するＨＳＶ－ＭａｃＩｎｔｙｒｅ由来のＯＮＣＲ－２１４０ウイルスのアシクロビル感受性を回復させた。図１７Ａ及び図１７Ｂに示すように、これらのＨＳＶ－ＴＫ変異は、ウイルス産生に有意に影響を及ぼさなかった。したがって、ＵＬ３０－Ｌ７７４ＦとこれらのＵＬ２３変異を組み合わせることにより、アシクロビル感受性を損なうことなく、複製忠実度の改善がもたらされる。
【0665】
実施例７－ウイルス産生中のＨＳＶ合胞体変異体の力価の改善
ＨＳＶ合胞体変異は、腫瘍細胞における腫瘍溶解及びウイルス拡散を改善し、免疫刺激性ＤＡＭＰを放出することにより免疫原性を増強する。しかしながら、これらの合胞体変異は、多くの場合、ウイルス産生中にウイルス力価を低下させ、それ故に、それらの臨床応用を妨げる。
ＨＳＶ合胞体変異は、腫瘍細胞における腫瘍溶解及びウイルス拡散を改善し、免疫刺激性ＤＡＭＰを放出することにより免疫原性を増強する。しかしながら、これらの合胞体変異は、多くの場合、ウイルス産生中にウイルス力価を低下させ、それ故に、それらの臨床応用を妨げる。
【0666】
したがって、（例えば、Ｖｅｒｏ細胞における）ウイルス産生中のＨＳＶ合胞体変異体の収量を改善するために、活性コンフォメーションでより高い割合のｇＢまたはｇＫを含むウイルスエンベロープの生成を促進する、ｇＢまたはｇＫタンパク質のいずれかの非合胞体バージョン及び合胞体変異体の共発現を可能にする発現系を確立した。
【0667】
図１８Ａ～１８Ｃは、ウイルス産生中のｇＢまたはｇＫのいずれかの非合胞体バリアント及び合胞体バリアントの両方の共発現を可能にした複数のウイルスベクター設計を示す。図１８Ａのウイルスベクター設計は、その内因性遺伝子座由来の野生型ｇＫと、ｃＤＮＡ発現カセット由来の哺乳類コドン最適化合胞体ｇＫ－Ｌ１１８Ｑ変異体との共発現を可能にした。この構成で生成された他の対には、「内因性野生型ｇＫ＋ｃＤＮＡカセット内の哺乳類コドン最適化合胞体ｇＫ－Ｉ３０７Ｎ変異体」及び「内因性非合胞体ｇＢ＋ｃＤＮＡカセット内の哺乳類コドン最適化合胞体ｇＢ－ｄ８７７ｃ変異体」が含まれた（ここで、合胞体ｇＢ－ｄ８７７ｃ変異は、アミノ酸Ｔ８７７から始まる全てのＣ末端残基の欠失を含むｇＢタンパク質を指す）。その一方で、図１８Ｂのウイルスベクター設計は、ウイルスゲノム内のその内因性遺伝子座由来の合胞体ｇＢ－ｄ８７７ｃ変異体と、ｃＤＮＡ発現カセット由来の哺乳類コドン最適化ｇＢとの共発現を可能にした。この構成で生成された他の対には、「内因性遺伝子座内の合胞体ｇＢ－Ｒ８５８Ｈ変異体＋ｃＤＮＡカセット内の哺乳類コドン最適化非合胞体ｇＢ」が含まれる。これらの全ての設計では、コードされたｇＢタンパク質は、ｇＢタンパク質が追加の合胞体変異（Ｒ８５８Ｈまたはｄ８７７ｃ）を含むかにかかわらず、Ｄ２８５Ｎ変異及びＡ５４９Ｔ変異を含んだ。ＯＮＣＲ－１４２ ＨＳＶ骨格を使用して、これらの全てのウイルスベクター設計の性能を評価した。図１８Ｃは、内因性ｇＢ及びｇＫ遺伝子座、ならびにＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間遺伝子座に挿入されるｃＤＮＡカセットの相対的位置を示す。
【0668】
各々のＨＳＶ構築物の産生収量を試験するために、Ｖｅｒｏ細胞に指示したウイルスを０．０３の感染多重度で接種し、その後、５日間インキュベートして、ウイルスを増殖させた。細胞を採取し、その後、３つの急速凍結融解サイクルにより溶解して、ウイルスを放出した。溶解物を、Ｖｅｒｏ細胞単層上での段階希釈のプラークアッセイによってウイルス収量及び合胞体形成について分析した。図１８Ｄに示すように、ウイルス増殖中の野生型変異体及び合胞体変異体の同時発現により、ＯＮＣＲ－２８３、ＯＮＣＲ－２８５、及びＯＮＣＲ－２８７を含む複数のベクターの産生収量が増加した。比較して、ｇＢまたはｇＫの対応する非合胞体コピーを含まない、ｇＢ－ｄ８７７ｃまたはｇＫ－Ｌ１１８Ｑのいずれかの合胞体変異を含むＨＳＶは、はるかに低いウイルス収量を有した（データ示さず）。加えて、ＯＮＣＲ－２８５以外、他の４つのＨＳＶ構築体は全て、合胞体表現型を提示した。
【0669】
ウイルス産生収量を更に改善するために、ｍｉＲＮＡ標的配列カセット（ｍｉＲ－ＴＳカセット）をｇＢまたはｇＫ合胞体変異体をコードする遺伝子座に挿入して、ウイルス産生中のｇＢまたはｇＫ合胞体変異体の発現を調節した。ｍｉＲ－ＴＳカセットは、Ｖｅｒｏ産生細胞株で高度に発現するが、腫瘍細胞では高度に発現しない、３つのｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９９－５ｐ、及びｍｉＲ－５８２－５ｐ）の標的配列を含んだ。これらの３つのマイクロＲＮＡを、蛍光ハイブリダイゼーションアッセイ（ｎＣｏｕｎｔｅｒ ｍｉＲＮＡ発現キット、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｉｎｃ）を使用してＶｅｒｏ細胞のＲＮＡ試料調製物を直接定量することによって特定した。結果として、Ｖｅｒｏ産生細胞では非合胞体ｇＢまたはｇＫの発現が好まれたが、腫瘍細胞では合胞体変異体の発現が好まれた。
【0670】
図１９Ａに示すように、ｍｉＲ－Ｔ２３１０と称されるこのｍｉＲ－ＴＳカセットは、４ｂｐスペーサーによって分離された各々のｍｉＲＮＡ標的配列（配列番号９３０）の４つのコピーからなった。対応するｍｉＲＮＡ標的配列（配列番号９２７～９２９）は、それぞれ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ（配列番号９２４）、ｍｉＲ－２９９－５ｐ（配列番号９２５）、及びｍｉＲ－５８２－５ｐ（配列番号９２６）の逆相補体である。図１９Ｂ及び図１９Ｃに示すように、ｍｉＲ－Ｔ２３１０カセットを、ｃＤＮＡカセットまたは内因性ＨＳＶ遺伝子座のいずれかに位置する、ｇＫまたはｇＢ合成変異体をコードする遺伝子座の３’ＵＴＲに挿入した。図１９Ｂの構成では、ＨＳＶは、その内因性遺伝子座に修飾されていないｇＫを含み、ｃＤＮＡ発現カセット内にｍｉＲ－Ｔ２３１０減弱型哺乳類コドン最適化合胞体ｇＫ－Ｉ３０７Ｎ変異体を含んだ。この構成で生成された他のｇＫ変異体には、ｍｉＲ－Ｔ２３１０減弱を有しない哺乳類コドン最適化ｇＫ－Ｉ３０７Ｎ、ｍｉＲ－Ｔ２３１０減弱を有するまたは有しない哺乳類コドン最適化ｇＫ－Ａ４０Ｖ、及びｍｉＲ－Ｔ２３１０減弱を有するまたは有しない哺乳類コドン最適化ｇＫ－Ｌ１１８Ｑが含まれた。図１９Ｃの構成では、ＨＳＶは、その内因性遺伝子座にｍｉＲ－Ｔ２３１０減弱型合胞体ｇＢ－ｄ８７７ｃ変異体を含み、ｃＤＮＡ発現カセット内に哺乳類コドン最適化非合胞体ｇＢを含んだ。同様に、その内因性遺伝子座に合胞体ｇＢ－ｄ８７７ｃ変異体を含むが、ｍｉＲ－Ｔ２３１０減弱を有しない別のＨＳＶ構築物も、この構成で生成された。
【0671】
ｍｉＲ－ＴＳカセット研究に使用したＨＳＶ骨格は、ｃＤＮＡカセット位置及びｌｏｘＰの位置が異なるが、それ以外の点では同一であるＯＮＣＲ－２１１２及びＯＮＣＲ－２００８であった（図１９Ｄ）。ＯＮＣＲ－２１１２ ＨＳＶ骨格を使用してｇＢ合胞体変異体構築物の性能を評価し、ＯＮＣＲ－２００８ ＨＳＶ骨格を使用してｇＫ合胞体変異体構築物の性能を評価した。
【0672】
各々のＨＳＶ構築物の産生収量を試験するために、Ｖｅｒｏ細胞に指示したウイルスを０．０３の感染多重度で接種し、その後、５日間インキュベートして、ウイルスを増殖させた。細胞を採取し、その後、３つの急速凍結融解サイクルにより溶解して、ウイルスを放出した。溶解物を、Ｖｅｒｏ細胞単層上での段階希釈のプラークアッセイによってウイルス収量及び合胞体形成について分析した。図１９Ｅに示すように、試験した全てのＨＳＶ構築物について、ウイルス増殖中の合胞体変異体のｍｉＲ－Ｔ減弱により、ウイルス産生収量が有意に増加し、それらは全て合胞体表現型を提示した。
【0673】
実施例８－導入遺伝子のコドン最適化
ＨＳＶ構築物中のコドン最適化導入遺伝子のタンパク質発現レベルに対するＧ／Ｃ含有量の影響を試験するために実験を行った。マウスＩＬ－１２（ｍＩＬ１２）及び抗ＰＤ１抗体をコードするいくつかのＯＲＦを試験した。これらのＯＲＦは、５２％～６４％の範囲の異なるＧ／Ｃ含有量を有する：
－配列番号９３１：Ｇ／Ｃ含有量：６４％、
－配列番号９３２：Ｇ／Ｃ含有量：６３％、
－配列番号９３３：Ｇ／Ｃ含有量：６０％、
－配列番号９３４：Ｇ／Ｃ含有量：５２％、
－配列番号９３５：Ｇ／Ｃ含有量：５２％（Ｔ２Ａ）。
ＨＳＶ構築物中のコドン最適化導入遺伝子のタンパク質発現レベルに対するＧ／Ｃ含有量の影響を試験するために実験を行った。マウスＩＬ－１２（ｍＩＬ１２）及び抗ＰＤ１抗体をコードするいくつかのＯＲＦを試験した。これらのＯＲＦは、５２％～６４％の範囲の異なるＧ／Ｃ含有量を有する：
－配列番号９３１：Ｇ／Ｃ含有量：６４％、
－配列番号９３２：Ｇ／Ｃ含有量：６３％、
－配列番号９３３：Ｇ／Ｃ含有量：６０％、
－配列番号９３４：Ｇ／Ｃ含有量：５２％、
－配列番号９３５：Ｇ／Ｃ含有量：５２％（Ｔ２Ａ）。
【0674】
これらのＯＲＦ内で、ｍＩＬ１２及び抗ＰＤ１抗体のコード配列を、フリン－Ｔ２Ａ切断ペプチドコード配列によって分離し、ｍＩＬ１２の２つのサブユニットを、ｍＩＬ１２の２つのサブユニットをフリン－Ｔ２Ａ切断ペプチドによって連結した５２％ＧＣ（Ｔ２Ａ）構築物（配列番号９３５）を除いて、１５ｍｅｒ ＧＳリンカーペプチドによって連結した。
【0675】
各々のＯＲＦを、ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域でＨＳＶウイルス構築物にクローニングし、タンパク質発現について試験した。図２０に示すように、導入遺伝子ＯＲＦ内のより高いＧ／Ｃ含有量がペイロード発現を増強し、ＩＬ－１２及び抗ＰＤ１抗体のタンパク質発現レベルが、哺乳類コドン最適化バージョンでの約５２％Ｇ／Ｃ含有量からＡ．デハロゲナンスコドン最適化バージョンでの約６３％Ｇ／Ｃ含有量に切り替えることによって、１０倍超増加した。より高いＧ／Ｃ含有量及び増加したタンパク質発現レベルの同様の相関が、２つのレポータータンパク質をコードするコドン最適化ＯＲＦでも観察された。したがって、より高いＯＲＦ Ｇ／Ｃ含有量（例えば、Ａ．デハロゲナンスのコドン使用に基づいて最適化したもの）は、ＨＳＶ構築物中の導入遺伝子（複数可）の発現レベルを増加させる。
【0676】
実施例９－神経膠芽腫を治療するためのペイロードを有する腫瘍溶解性ＨＳＶウイルス
神経膠芽腫に対する異なるペイロード分子をコードするＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスの有効性を試験するためにインビボ実験を行った。２つの同所性マウスモデルを使用した。一方の同所性モデルは、移植後のイメージングを可能にするＦＬｕｃを発現するように修飾したＣＴ２Ａ細胞を使用した。他方の同所性モデルは、ＨＳＶ感染を可能にするｍネクチン１を発現するように修飾し、かつ移植後のイメージングを可能にするＦＬｕｃを発現するようにも修飾したＧＬ２６１細胞を使用した。細胞を定位注射により１２週齢のＣ５７Ｂｌ６に頭蓋内移植し、１週間後、腫瘍に指示したウイルスを注射した。移植のためのプロトコルの簡単な説明は、Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２２，７２９－７４０（２０１９）に提供されている。
神経膠芽腫に対する異なるペイロード分子をコードするＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスの有効性を試験するためにインビボ実験を行った。２つの同所性マウスモデルを使用した。一方の同所性モデルは、移植後のイメージングを可能にするＦＬｕｃを発現するように修飾したＣＴ２Ａ細胞を使用した。他方の同所性モデルは、ＨＳＶ感染を可能にするｍネクチン１を発現するように修飾し、かつ移植後のイメージングを可能にするＦＬｕｃを発現するようにも修飾したＧＬ２６１細胞を使用した。細胞を定位注射により１２週齢のＣ５７Ｂｌ６に頭蓋内移植し、１週間後、腫瘍に指示したウイルスを注射した。移植のためのプロトコルの簡単な説明は、Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２２，７２９－７４０（２０１９）に提供されている。
【0677】
ペイロード分子（複数可）をコードするＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスを、ペイロード発現カセットをＵＬ３－ＵＬ４遺伝子間領域に挿入し、かつＢＡＣ配列をＵＬ３７－ＵＬ３８遺伝子間領域に挿入することによって構築した。ウイルス骨格（対照ウイルス）は、（ｉ）ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、及びＩＣＰ３４．５にｍｉＲ－Ｔ減弱カセットを有し、（ｉｉ）全内部反復領域欠失（ＤＪｏｉｎｔ）を有し、かつ（ｉｉｉ）ＵＳ１２、ｇＢ、及びｇＣに指示した変異を含むＨＳＶ ＫＯＳ株のクローニング誘導体であるＯＮＣＲ－１４２である。対照ウイルスは、ＢＡＣ配列のみを含み、ペイロード配列を含まなかった。図２１Ａを参照されたい。様々なＨＳＶ構築物中のペイロード分子（複数可）を図２１Ｂに示す。第１の組の実験では、マウスＩＬ－１２（ｍＩＬ－１２）及び／または抗ＰＤ－１抗体をコードするウイルスならびに対照ウイルスを各々、図２２Ａ及び図２２Ｂに従って指示した時間及び投薬量で腫瘍内注射した。結果は、いずれかのペイロード単独と比較して、ｍＩＬ１２及び抗ＰＤ１抗体の両方を発現するＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスが、動物モデルの生存期間を延長させる相乗効果を提示したことを示す。ｍＩＬ１２を発現するＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスも動物の生存期間を有意に延長させたが、ｍＩＬ１２及び抗ＰＤ１抗体の両方を発現するウイルスよりも効果が低かった。図２２Ｃに示すように、これらの動物は、ＧＬ２６１モデルにおける腫瘍細胞再負荷研究からも守られた。図２２Ｄは、ＣＴ２Ａモデルにおける様々な免疫細胞のパーセンテージを示す。図２２Ｅは、ｍＩＬ１２ペイロード及び抗ＰＤ１ペイロードの両方を有するＯＮＣＲ－ＧＢＭが、ＣＤ８ Ｔ細胞の動員及び活性化を刺激したことを示す。
【0678】
次いで、ＧＬ２６１同所性マウスモデルにおいてｍＩＬ１２及び抗ＰＤ１抗体の両方を発現するＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルス（ＯＮＣＲ－２７８）の用量反応関係を分析するために追加の実験を行った。図２３に示すように、結果は、ｍＩＬ１２及び抗ＰＤ１抗体の両方を発現するＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスの明確な用量反応を実証した。高用量は低用量よりも有効性が高かった。ＧＢＭの免疫抑制性腫瘍微小環境を調節する可能性に基づいて、代替のペイロード（例えば、抗体、サイトカイン、及び／または酵素）をコードするウイルスとの同時投与により、１×１０６ｐｆｕの中間の準最適用量を組み合わせスクリーニングでの使用に選択した。その後、ペイロードの組み合わせを同じＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスに組み込むことができた。
【0679】
組み合わせスクリーニングについて、ＧＬ２６１－ｌｕｃ－Ｎ１細胞を１２週齢のＣ５７Ｂｌ６マウスに頭蓋内移植し、１週間後、腫瘍に様々な候補ペイロードをコードするウイルスの組み合わせを注射した。結果を図２４Ａ～２４Ｊに示す。抗ＴＲＥＭ２－ＤＬＥペイロード、ＰＧＤＨペイロード、及びＣＴＸ－ｍＢｉＴＥペイロードは各々、ｍＩＬ１２ペイロード及び抗ＰＤ１ペイロードと共発現したときに改善された有効性を提供することが特定された。
【0680】
ペイロード組み合わせの有効性を、以下を含むＨＳＶ ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株のクローニング誘導体であるＯＮＣＲ－２１８３ ＨＳＶ骨格（図２５Ａ）でも試験した：
－ それぞれ、ＩＣＰ４（両方の遺伝子座）、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８における、ｍｉＲ－Ｔ減弱カセットｍｉＲ－Ｔ ３０６０（配列番号８５８）、ｍｉＲ－Ｔ ９９１９（配列番号８５９）、ｍｉＲ－Ｔ ３０１２（配列番号８７３）、及びｍｉＲ－Ｔ ３０９６（配列番号８７４）、
－ Ｌ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍ組み合わせ変異を含むチミジンキナーゼをコードするＵＬ２３、
－ Ｄ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ変異を含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするＵＬ２７、
－ Ｌ７７４Ｆ変異を含むＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）をコードするＵＬ３０、
－ 「Ｒ２」組み合わせ変異（Ｑ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ）を含むテグメントタンパク質をコードするＵＬ３７、
－ 配列番号９２１の天然アミノ酸残基６～２４をインテグリンに結合するノッチンペプチド（配列番号９２２）で置き換えた変異体ｇＤをコードするＵＳ６、
－ ＵＬ４０－ＵＬ４１遺伝子間領域に位置するｌｏｘＰ－ＢＡＣレプリコン、ならびに
－ ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置するｃＤＮＡ発現カセット。
－ それぞれ、ＩＣＰ４（両方の遺伝子座）、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８における、ｍｉＲ－Ｔ減弱カセットｍｉＲ－Ｔ ３０６０（配列番号８５８）、ｍｉＲ－Ｔ ９９１９（配列番号８５９）、ｍｉＲ－Ｔ ３０１２（配列番号８７３）、及びｍｉＲ－Ｔ ３０９６（配列番号８７４）、
－ Ｌ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍ組み合わせ変異を含むチミジンキナーゼをコードするＵＬ２３、
－ Ｄ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ変異を含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするＵＬ２７、
－ Ｌ７７４Ｆ変異を含むＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）をコードするＵＬ３０、
－ 「Ｒ２」組み合わせ変異（Ｑ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ）を含むテグメントタンパク質をコードするＵＬ３７、
－ 配列番号９２１の天然アミノ酸残基６～２４をインテグリンに結合するノッチンペプチド（配列番号９２２）で置き換えた変異体ｇＤをコードするＵＳ６、
－ ＵＬ４０－ＵＬ４１遺伝子間領域に位置するｌｏｘＰ－ＢＡＣレプリコン、ならびに
－ ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置するｃＤＮＡ発現カセット。
【0681】
ＨＳＶ構築物は、ｇＨ及びＵＬ２４をコードするウイルス遺伝子に合胞体変異を更に含む。例示的なｃＤＮＡ発現カセットを図２５Ｂに提供し、各々、ＯＮＣＲ－２１８３のＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に挿入して、ｉ） ＩＬ－１２、抗ＰＤ１、ＰＧＤＨ、及び抗ＴＲＥＭ２（ＯＮＣＲ－２２０５）、またはｉｉ）ＩＬ－１２、抗ＰＤ１、ＰＧＤＨ、ＣＴＸ－ＢｉＴＥ、及び抗ＴＲＥＭ２（ＯＮＣＲ－２２０６）の対応するペイロード組み合わせを発現するための組換えＨＳＶを作製することができる。これらのＨＳＶ構築物を各々、ＧＬ２６１モデル系及びＣＴ２Ａモデル系を使用して腫瘍阻害有効性について試験した。ＧＬ２６１－ｌｕｃ－Ｎ１またはＣＴ２Ａ－ｌｕｃ－Ｎ１細胞を１２週齢のＣ５７Ｂｌ６マウスに頭蓋内移植し、１週間後、腫瘍に指示したウイルスを注射した。図２５Ｃに示すように、ＯＮＣＲ－２２０５またはＯＮＣＲ－２２０６のいずれかにおけるペイロード組み合わせは、ＧＬ２６１モデル及びＣＴ２Ａモデルにおけるペイロードなし対照ＯＮＣＲ－２１８３と比較して優れた腫瘍阻害有効性を提供する。
【0682】
上記の実施例に基づいて、ＨＳＶ ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株に由来するＨＳＶ骨格であるＯＮＣＲ－２２０４を、以下を含む様々な設計特徴を組み込むように構築した（図２６Ａ）：
－ それぞれ、ＩＣＰ４（両方の遺伝子座）、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８における、ｍｉＲ－Ｔ減弱カセットｍｉＲ－Ｔ ３０６０（配列番号８５８）、ｍｉＲ－Ｔ ９９１９（配列番号８５９）、ｍｉＲ－Ｔ ３０１２（配列番号８７３）、及びｍｉＲ－Ｔ ３０９６（配列番号８７４）、
－ Ｌ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍ組み合わせ変異を含むチミジンキナーゼをコードするＵＬ２３、
－ Ｄ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ変異を含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするＵＬ２７、
－ Ｌ７７４Ｆ変異を含むＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）をコードするＵＬ３０、
－ 「Ｒ２」組み合わせ変異（Ｑ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ）を含むテグメントタンパク質をコードするＵＬ３７、
－ 配列番号９２１の天然アミノ酸残基６～２４をＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合するＶＨＨナノボディ（配列番号９２３）で置き換えた変異体ｇＤをコードするＵＳ６、
－ ＵＬ４０－ＵＬ４１遺伝子間領域に位置するｌｏｘＰ－ＢＡＣレプリコン、ならびに
－ ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置するｃＤＮＡ発現カセット。
－ それぞれ、ＩＣＰ４（両方の遺伝子座）、ＩＣＰ８、ＩＣＰ２７、及びＵＬ８における、ｍｉＲ－Ｔ減弱カセットｍｉＲ－Ｔ ３０６０（配列番号８５８）、ｍｉＲ－Ｔ ９９１９（配列番号８５９）、ｍｉＲ－Ｔ ３０１２（配列番号８７３）、及びｍｉＲ－Ｔ ３０９６（配列番号８７４）、
－ Ｌ１５９Ｉ、Ｉ１６０Ｆ、Ｆ１６１Ｌ、Ａ１６８Ｆ、及びＬ１６９Ｍ組み合わせ変異を含むチミジンキナーゼをコードするＵＬ２３、
－ Ｄ２８５Ｎ／Ａ５４９Ｔ変異を含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするＵＬ２７、
－ Ｌ７７４Ｆ変異を含むＤＮＡポリメラーゼ触媒サブユニット（ＤＰＣＳ）をコードするＵＬ３０、
－ 「Ｒ２」組み合わせ変異（Ｑ４０３Ａ／Ｅ４５２Ａ／Ｑ４５５Ａ／Ｑ５１１Ａ／Ｒ５１５Ａ）を含むテグメントタンパク質をコードするＵＬ３７、
－ 配列番号９２１の天然アミノ酸残基６～２４をＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合するＶＨＨナノボディ（配列番号９２３）で置き換えた変異体ｇＤをコードするＵＳ６、
－ ＵＬ４０－ＵＬ４１遺伝子間領域に位置するｌｏｘＰ－ＢＡＣレプリコン、ならびに
－ ＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間領域に位置するｃＤＮＡ発現カセット。
【0683】
ＨＳＶ構築物は、ｇＨ及びＵＬ２４をコードするウイルス遺伝子に合胞体変異を更に含む。例示的なｃＤＮＡ発現カセットを図２６Ｂに提供し、各々、ＯＮＣＲ－２２０４のＵＬ５０－ＵＬ５１遺伝子間遺伝子座に挿入して、ｉ） ＩＬ－１２、抗ＰＤ１、ＰＧＤＨ、及び抗ＴＲＥＭ２（ＯＮＣＲ－２２１８）、ｉｉ）ＩＬ－１２、抗ＰＤ１、ＰＧＤＨ、ＣＴＸ－ＢｉＴＥ、及び抗ＴＲＥＭ２（ＯＮＣＲ－２２１９）、またはｉｉｉ）ＩＬ－１２、抗ＰＤ１、ＣＴＸ－ＢｉＴＥ、及び抗ＴＲＥＭ２（ＯＮＣＲ－２２３３）の対応するペイロード組み合わせを発現するための組換えＨＳＶを作製することができる。これらのＨＳＶ構築物を各々、ＧＬ２６１－ｌｕｃ－Ｎ１及びＣＴ２Ａ－ｌｕｃ－Ｎ１頭蓋内同系ＧＢＭモデル系を使用して腫瘍阻害有効性について試験する。ＧＬ２６１－ｌｕｃ－Ｎ１またはＣＴ２Ａ－ｌｕｃ－Ｎ１細胞を１２週齢のＣ５７Ｂｌ６マウスに頭蓋内移植し、約７日後、腫瘍に指示したウイルスを注射し、ＯＮＣＲ－２１８３骨格ベースのＨＳＶ構築物について行った分析と同様に、これらのＨＳＶ構築物の生存利益を比較する。
【0684】
本開示の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されているが、かかる実施形態がほんの一例として提供されていることは当業者には明白であろう。本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更、及び置き換えを当業者が行うことができる。本明細書に記載の本開示の実施形態に対する様々な代替案が本開示を実施する際に用いられても良いことを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義し、かつこれらの特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにそれらの等価物が特許請求の範囲によって包含されることが意図されている。
【0685】
参照による組み込み
本明細書に引用される全ての参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願は、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書で引用されるいずれの参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願の言及も、それらが有効な先行技術を構成するか、または世界中のあらゆる国における共通の一般知識の一部を形成するという認識でも、いかなる形態の示唆でもなく、そのように解釈されるべきではない。
本明細書に引用される全ての参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願は、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書で引用されるいずれの参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願の言及も、それらが有効な先行技術を構成するか、または世界中のあらゆる国における共通の一般知識の一部を形成するという認識でも、いかなる形態の示唆でもなく、そのように解釈されるべきではない。
【表10-1】
【表10-2】
【表10-3】
【表11-1】
【表11-2】
【表11-3】
【表11-4】
【表11-5】
【表11-6】
【表11-7】
【表11-8】
【表11-9】
【表11-10】
【表11-11】
【表11-12】
【表11-13】
【表11-14】
【表11-15】
【表12-1】
【表12-2】
【表12-3】
【表12-4】
【表12-5】
【表12-6】
【表12-7】
【表12-8】
【表12-9】
【表13-1】
【表13-2】
【表13-3】
【表13-4】
【表13-5】
【表14-1】
【表14-2】
【表14-3】
【表14-4】
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14A】
【図14B】
【図15A】
【図15B】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18A】
【図18B】
【図18C】
【図18D】
【図19A】
【図19B】
【図19C】
【図19D】
【図19E】
【図20】
【図21A】
【図21B】
【図22A】
【図22B】
【図22C】
【図22D】
【図22E】
【図23】
【図24A】
【図24B】
【図24C】
【図24D】
【図24E】
【図24F】
【図24G】
【図24H】
【図24I】
【図24J】
【図25A】
【図25B】
【図25C】
【図26A】
【図26B】
【配列表】
【国際調査報告】