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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-10
(54)【発明の名称】眼疾患モデルの構築方法とその使用
(51)【国際特許分類】
A01K 67/027 20240101AFI20240903BHJP
C12N 5/071 20100101ALI20240903BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20240903BHJP
C12N 1/10 20060101ALN20240903BHJP
C12N 1/14 20060101ALN20240903BHJP
C12N 1/20 20060101ALN20240903BHJP
C12N 7/00 20060101ALN20240903BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20240903BHJP
【ＦＩ】
A01K67/027
C12N5/071
C12Q1/02
C12N1/10
C12N1/14
C12N1/20 A
C12N7/00
C12N15/09 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024504252
(86)(22)【出願日】2022-08-24
(85)【翻訳文提出日】2024-03-22
(86)【国際出願番号】 CN2022114537
(87)【国際公開番号】W WO2023035949
(87)【国際公開日】2023-03-16
(31)【優先権主張番号】202111057929.4
(32)【優先日】2021-09-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521198985
【氏名又は名称】珠海岐微生物科技有限公司
【氏名又は名称原語表記】Ｓｍｉｌｅｂｉｏｔｅｋ Ｚｈｕｈａｉ Ｌｉｍｉｔｅｄ
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １０３， Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １， ３６ Ｄｏｕｋｏｕ Ｒｏａｄ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐａｒｋ ｏｆ Ｃｏ－ｏｐｅｒａｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ａｎｄ Ｍａｃａｏ， Ｈｅｎｇｑｉｎ Ｎｅｗ Ａｒｅａ Ｚｈｕｈａｉ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１９０００ （ＣＮ）
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100152331
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 拓
(74)【代理人】
【識別番号】100213517
【弁理士】
【氏名又は名称】韓 明花
(72)【発明者】
【氏名】魏来
【テーマコード（参考）】
4B063
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QA18
4B063QQ02
4B063QQ06
4B063QQ07
4B063QQ08
4B063QQ10
4B063QQ12
4B063QQ13
4B063QR32
4B063QR35
4B063QR48
4B063QR50
4B063QR72
4B063QR75
4B063QR76
4B063QR77
4B063QR79
4B063QR80
4B063QR90
4B063QS40
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA86X
4B065AA90X
4B065AC20
4B065CA46
4B065CA60
(57)【要約】
微生物をモデルキャリアに感染させることを含む眼疾患モデルの構築方法を提供する。また、この方法で製造された微生物に感染した眼モデルキャリアを提供する。前記眼モデルキャリアは、眼疾患の研究や眼疾患治療薬のスクリーニングに使用することができる。前記眼疾患は網膜変性症であり、前記微生物は腸内細菌または腸内細菌と同一の細菌である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
眼疾患モデルまたはモデルキャリアに微生物を感染させることを含む眼疾患モデルまたはモデルキャリアを構築する方法。
【請求項2】
前記の感染させることは、微生物と直接的に接触させることまたは微生物と間接的に接触させることを含み、前記の微生物と間接的に接触させることが、眼と微生物との間に網膜関門が存在することであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記微生物は同一個体の腸内細菌に由来するか、またはそれと同一のものであることを特徴とする、請求項１または２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項4】
前記眼疾患は網膜変性症を含み、好ましくは、前記網膜変性症は進行性網膜変性症であり、より好ましくは、前記網膜変性症は遺伝性網膜変性症であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
前記眼疾患は眼部の炎症を含み、好ましくは、前記眼部炎症は網膜炎を含むことを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
前記モデルは、非ヒト動物であり、好ましくはサル、イヌ、チンパンジー、ラット、マウスであることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
前記モデルキャリアは細胞、組織または器官から選択され、前記組織または器官は非ヒト動物由来であり、前記細胞はヒトまたは非ヒト動物の初代細胞または細胞株由来であり、前記組織または器官は非ヒト動物由来またはヒト幹細胞の成長により得られた眼組織または器官由来であることを特徴とする、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
前記モデルまたはモデルキャリア内の眼部遺伝子に病原性変異が存在し、好ましくは、前記の病原性変異が生じた眼部遺伝子は、以下の１つまたは２つ以上の遺伝子が変異したことを含むことを特徴とする、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法：ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ９、ＡＣＢＤ５、ＡＣＯ２、ＡＣＯ２、ＡＣＴＧ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＨＩ１、ＡＩＰＬ１、ＡＬＭＳ１、ＡＭＹ２Ｂ、ＡＰＣ、ＡＲＦＧＥＦ１、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ６、ＡＲＭＣ９、ＡＴＯＨ７、Ｂ９Ｄ１、ＢＡＧ３、ＢＢＳ１、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ５、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＣＤ３、ＣＡ４、ＣＡＢＰ４、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＢＳ、ＣＣ２Ｄ２Ａ、ＣＤＨ２３、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ１、ＣＥＭＩＰ２、ＣＥＰ１０４、ＣＥＰ２５０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ４１、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＦＡＰ４１８、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＣＮ７、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ８、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＮＭ４、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＰ、ＣＰ、ＣＰＬＡＮＥ１、ＣＲＢ１、ＥＲＣＣ４、ＣＳＰＰ１、ＣＴＮＮＡ１、ＣＹＰ４Ｖ２、ＤＨＤＤＳ、ＤＹＮＣ２Ｈ１、ＤＹＮＣ２Ｉ１、ＤＹＮＣ２Ｉ２、ＥＮＰＰ１、ＥＲＣＣ４、ＥＶＣ２、ＥＹＳ、ＥＹＳ、Ｆ５、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ１、ＦＫＲＰ、ＦＫＴＮ、ＦＬＧ、ＦＬＶＣＲ１、ＦＯＸＥ３、ＦＵＺ、ＧＬＢ１、ＧＭＰＰＢ、ＧＮＡＴ１、ＧＲＫ１、ＧＲＭ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＡＤＨＡ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＰＳ３、ＨＰＳ５、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１２２、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ４３、ＩＦＴ５２、ＩＦＴ７４、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８１、ＩＦＴ８８、ＩＫＢＫＧ、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＩＮＰＰ５Ｅ、ＩＮＴＵ、ＩＱＣＢ１、ＩＱＣＥ、ＩＲＥＢ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＶ２、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＩＡＡ０７５３、ＫＩＦ７、ＫＩＺ、ＫＩＺ－ＡＳ１、ＫＬＨＬ７、ＫＲＩＴ１、ＬＢＲ、ＬＣＡ５、ＬＯＣ１０１９２７１５７、ＬＯＣ１１１３６５２０４、ＬＲＰ２、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ３、ＭＡＴＫ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＳ１、ＭＰＤＺ、ＭＴ－ＡＴＰ６、ＭＴ－ＣＯ３、ＭＴ－ＴＥ、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴＨＦＲ、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＰＨＰ１、ＮＲ２Ｅ３、ＯＣＡ２、ＯＴＸ２、ＰＡＮＫ２、ＰＡＸ６、ＰＣＡＲＥ、ＰＣＤＨ１５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ２６、ＰＥＸ６、ＰＨＦ３、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＫＤ２、ＰＬＡ２Ｇ５、ＰＯＣ５、ＰＯＭＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＧＲ、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＯＭ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＲＳ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＣＡＰＥＲ、ＳＤＣＣＡＧ８、ＳＩＸ６、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＴＭ、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＧ１７、ＳＰＡＴＡ７、ＳＰＧ１１、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ２、ＴＭＥＭ１０７、ＴＭＥＭ２３７、ＴＭＥＭ６７、ＴＯＧＡＲＡＭ１、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＰＰ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ１、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ５９－ＩＦＴ８０、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ－ＡＳ１、ＶＡＣ１４、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ－ＡＳ１、ＶＨＬ、ＶＰＳ１３Ｂ、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ３５、ＷＤＲ７３、ＹＡＲＳ１、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＮＦ４０８の１つまたは２つ以上の組み合わせ。
【請求項9】
前記モデルまたはモデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子は、以下の１つまたは２つ以上の変異を含むことを特徴とする、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法：ｃ．１０７Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１１ｄｅｌＴ、ｃ．１３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２５７＿２５８ｄｕｐＴＧ、ｃ．２５８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４２８＿４３２ｄｅｌＧＡＴＴＣ、ｃ．４３０Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７０Ｇ＞Ｃ、ｃ．４８１ｄｕｐＧ、ｃ．４８２Ｃ＞Ｔ、ｃ．５８４Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、ｃ．７１７＿７１８ｉｎｓＧ、ｃ．７５０Ｔ＞Ｇ、ｃ．９１５Ｔ＞Ａ、ｃ．９２９Ｇ＞Ａ、ｃ．９３６Ｔ＞Ｇ、ｃ．９９８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０８４Ｃ＞Ｔ、ｃ．１１２５Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．１２０８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１２６９Ｃ＞Ａ、ｃ．１２９８Ａ＞Ｇ、ｃ．１３１３Ｇ＞Ａ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１６０４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１６９０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、ｃ．１７５０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７６０Ｇ＞Ａ、ｃ．１８３４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１９６３ｄｅｌＣ、ｃ．２０２５Ｇ＞Ｔ、ｃ．２０４２Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８Ｇ＞Ｃ、ｃ．２１２９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２１８５＿２１８６ｉｎｓＡｌｕ、ｃ．２２１９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２４５＿２２４７ｄｅｌ ３ｂｐ（ＴＣＡ）、ｃ．２２５８Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、およびｃ．２３６５＿２３６７ｄｅｌ ＡＡＴ，インフレーム欠失、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、ｃ．２４３８＿２４３９ｉｎｓ＞１００Ａ、ｃ．２４４１＿２４４２ｄｅｌ、ｃ．２４６５Ｇ＞Ａ、ｃ．２４７９Ｇ＞Ｔ、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、ｃ．２５０９Ｇ＞Ｃ、ｃ．２５３６Ｇ＞Ａ、ｃ．２５４８＿２５５１ｄｅｌＧＧＣＴ、ｃ．２５４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、ｃ．２６１１＿２６１３ｉｎｓＴ、ｃ．２６７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．２６７６ｄｅｌＧ、ｃ．２６８１Ａ＞Ｇ、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、ｃ．２８１６Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、ｃ．２８５３ｄｕｐＴ、ｃ．２８８４＿２８８６ｄｅｌＴＴＡ、ｃ．２９５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２９６６Ｔ＞Ｃ、ｃ．２９８３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３００２Ａ＞Ｔ、ｃ．３００８Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３５Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ａ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ｔ、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２１２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ／Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３３１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３４２７ｄｅｌＴ、ｃ．３４８２Ａ＞Ｇ、ｃ．３４９３Ｔ＞Ｃ、ｃ．３６５５Ｔ＞Ｇ、ｃ．３５４１Ｔ＞Ｃ、ｃ．３５４２ｄｕｐＧ、ｃ．３５９３Ａ＞Ｇ、ｃ．３６１３Ｇ＞Ａ、ｃ．３６５３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６５９＿３６６０ｄｅｌｉｎｓＡ、ｃ．３６６４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３６６８Ｇ＞Ｃ、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．３７１３＿３７１６ｄｕｐ、ｃ．３８７９Ｇ＞Ａ、ｃ．３９１４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３９４９Ａ＞Ｃ、ｃ．３９６１Ｔ＞Ａ、ｃ．３９８８ｄｅｌＧ、ｃ．３９８８Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９５Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３９９７Ｇ＞Ｔ、ｃ．４０９４Ｃ＞Ａ、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、ｃ．４１４２Ｃ＞Ｔ、ｃ．４１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．３８７８＋１Ｇ＞Ｔ、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．４００５＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．４００６－２Ａ＞Ｇ、ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１９Ｇ＞Ａ、ｃ．６１４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４７２Ａ＞Ｔ、ｃ．１９０３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２８０９Ｇ＞Ａ、ｃ．３１０３Ｃ＞Ｔ、ｃ．４０８２Ｇ＞Ａ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、ｃ．８６６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１４６３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２０３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２３０６＿２３０７ＧＣ＞ＡＧ、ｃ．２３０６Ｇ＞Ａ、ｃ．２７１４Ｇ＞Ａ、ｃ．２８７５Ｇ＞Ａ、ｃ．３９９２Ｇ＞Ａ。
【請求項10】
前記モデルまたはモデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子はＲｄ８変異を含むことを特徴とする、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記変異は、ホモ接合体変異またはヘテロ接合体変異であることを特徴とする、請求項９または１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記モデルまたはモデルキャリアの遺伝子変異は、先天的なものであるか、または、遺伝子組換え操作によって後天的に得られることを特徴とする、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
前記疾患モデルが、結腸上皮バリア機能障害および／または関連する結腸壁の炎症を有することを特徴とする、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記微生物は、細菌、古細菌、原生生物、真菌またはウイルスのうちの１種または２種以上の組み合わせであり、好ましくは、前記微生物は細菌であり、前記細菌は、アナエロスティペス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メガモナス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、ニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）、オシリバクター（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、タツメラ（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、マンヘミア属（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ）、フィブロバクター属（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒ）、プレボテーラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、アクチノマイセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、ヒメノバクター属（Ｈｙｍｅｎｏｂａｃｔｅｒ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、ティセレラ属（Ｔｉｓｓｉｅｒｅｌｌａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ポルフィロモナス属（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）、アゾスピリルム属（Ａｚｏｓｐｉｒａ）、アクイマリナ属（Ａｑｕｉｍａｒｉｎａ）、アクロモバクター属（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）、アシドチオバシラス属（Ａｃｉｄｉｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、マリノバクター属（Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、アクチノスポランギウム属（Ａｃｔｉｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、メタノブレビバクター（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、フランキア属（Ｆｒａｎｋｉａ）、アネロプラズマ属（Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ）、コプロコッカス属（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）から選ばれる１つまたは２つ以上であることを特徴とする、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記細菌は、アナエロスティペス・ハドラス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ ｈａｄｒｕｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ニトロソモナス属Ｉｓ７９Ａ３（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｓｐ．Ｉｓ７９Ａ３）、オシリバクター・バレリシゲネス（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ ｖａｌｅｒｉｃｉｇｅｎｅｓ）、タツメラ属 ＴＡ１（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ ｓｐ．ＴＡ１）、メガモナス・ファニフォーミス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、チオバシラス・デニトリフィカンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、クロストリジウム・テタニ、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・ボツリヌス、アシネトバクター・カルコアセチカス、アシネトバクター・ルヴォフィイ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・ヘモリティカス、アシネトバクター・ジュニイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、化膿レンサ球菌、溶連菌、フィブロバクター・サクシノゲネス、フィブロバクター・インテスティナリス、ポルフィロモナス・アサッカロリティカ、ポルフィロモナス・エンドドンタリス、ポルフィロモナス・ジンジビカニス、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・コリ、カンピロバクター・ラリ、カンピロバクター・ウプサリエンシス、カンピロバクター・コンシサス、カンピロバクター・フェタス、アクチノマイセス・イスラエリイ、アクチノマイセス・ナエスランディイ、アクチノマイセス・オドントリティカス、アクチノマイセス・ビスコーサス、アクチノマイセス・ノウイイ、エシェリキア・コリ、エシェリキア・ブラタエ、エシェリキア・フェルグソニー、エシェリキア・ヘルマンニ、エシェリキア・ブルネリス、ティセレラ・プラエアキュータ、クレブシエラ・ニューモニエ、クレブシエラ・オザエナエ、アゾスピリルム・ブラシレンセ、アクロモバクター、チオバチルス・デニトリフィカンス、チオバチルス・フェロオキシダンス、チオバチルス・チオオキシダンス、チオバチルス・ネアポリタナス、バークホルデリア、マイコバクテリウム・マリナム、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ヒオディセンテリア、ビブリオ・メチニコフィイ、ルミノコッカス・アルブス、ルミノコッカス・フラベファシエンス、メタノブレビバクター・ルミナンチウム、志賀赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、ボイド赤痢菌、ソンネ赤痢菌、フランキア、コプロコッカス・オイタクツス、ストレプトマイセス・アルブス、シュードモナス・メンドシナ、ミクロコッカス・セデンタリウス、アリサイクリフィルス・デニトリフィカンス、アクロモバクター・キシロソキシダンス、スフィンゴモナス、マイコバクテリウム・アブセサス、アルスロバクター・アウレッセンス、プレボテーラ、シノリゾビウム・メディカエ、酸性酵母、スタフィロコッカス・エピデルミディス、シュードモナス・エルギノーサ、黄色ブドウ球菌、スタフィロコッカス・ヘモリティカス、シュードモナス・プチダ、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、バチルス・セレウス、バチルス・メガテリウム、ラクトバチルス・ロイテリ、ガードネレラ・バジナリス、蜂エンテロコッカス・フェシウム、サイトファーガ・ハッチンソニイ、バチルス・リケニフォルミス、キサントモナス・オリザエ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセチカス、コマモナス・テストステロニ、マイコバクテリウム・カンサシイ、バチルス・チューリンギエンシス、シトロバクター・コセリ、ディアドバクター・フェルメンタンス、セラチア・マルセッセンス、スフィンゴモナス・ウィッティチイ、クレブシエラ・ニューモニアエ、シュードモナス・フルオレッセンス、ラルストニア・ピケッティ、ラクトバチルス・クリスパータス、バークホルデリア、ラクトバチルス・デルブレッキイ、メイオサーマス・シルバヌス（Ｍｅｉｏｔｈｅｒｍｕｓ ｓｉｌｖａｎｕｓ）（Ｄ）、大腸菌、ミクロコッカス・ルテウス、枯草菌、コリネバクテリウム・アウリムコスム、フィネゴルディア・マグナから選ばれる１つまたは２つ以上であることを特徴とする、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
眼疾患のモデルキャリアであって、前記眼疾患は、前記モデルキャリアに微生物を感染することによって引き起こされ、好ましくは、前記モデルキャリアは、細胞、組織または器官から選択され、さらに好ましくは、前記細胞は、ヒトまたは非ヒト動物の初代細胞または細胞株由来であり、前記組織または器官は、非ヒト動物に由来するか、またはヒト幹細胞の成長によって得られた眼組織または器官由来である眼疾患のモデルキャリア。
【請求項17】
前記眼疾患は網膜変性症を含み、好ましくは、前記網膜変性症は進行性網膜変性症であり、より好ましくは、前記網膜変性症は遺伝性網膜変性症であることを特徴とする、請求項１６に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項18】
前記眼疾患は眼部炎症を含み、好ましくは、前記眼部炎症は網膜炎を含むことを特徴とする、請求項１６または１７のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項19】
前記微生物は同一個体の腸内細菌に由来するか、またはそれと同一のものであることを特徴とする、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項20】
前記モデルキャリアには、以下の１つまたは２つ以上の遺伝子が変異していることを特徴とする、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア：ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ９、ＡＣＢＤ５、ＡＣＯ２、ＡＣＯ２、ＡＣＴＧ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＨＩ１、ＡＩＰＬ１、ＡＬＭＳ１、ＡＭＹ２Ｂ、ＡＰＣ、ＡＲＦＧＥＦ１、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ６、ＡＲＭＣ９、ＡＴＯＨ７、Ｂ９Ｄ１、ＢＡＧ３、ＢＢＳ１、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ５、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＣＤ３、ＣＡ４、ＣＡＢＰ４、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＢＳ、ＣＣ２Ｄ２Ａ、ＣＤＨ２３、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ１、ＣＥＭＩＰ２、ＣＥＰ１０４、ＣＥＰ２５０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ４１、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＦＡＰ４１８、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＣＮ７、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ８、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＮＭ４、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＰ、ＣＰ、ＣＰＬＡＮＥ１、ＣＲＢ１、ＥＲＣＣ４、ＣＳＰＰ１、ＣＴＮＮＡ１、ＣＹＰ４Ｖ２、ＤＨＤＤＳ、ＤＹＮＣ２Ｈ１、ＤＹＮＣ２Ｉ１、ＤＹＮＣ２Ｉ２、ＥＮＰＰ１、ＥＲＣＣ４、ＥＶＣ２、ＥＹＳ、ＥＹＳ、Ｆ５、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ１、ＦＫＲＰ、ＦＫＴＮ、ＦＬＧ、ＦＬＶＣＲ１、ＦＯＸＥ３、ＦＵＺ、ＧＬＢ１、ＧＭＰＰＢ、ＧＮＡＴ１、ＧＲＫ１、ＧＲＭ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＡＤＨＡ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＰＳ３、ＨＰＳ５、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１２２、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ４３、ＩＦＴ５２、ＩＦＴ７４、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８１、ＩＦＴ８８、ＩＫＢＫＧ、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＩＮＰＰ５Ｅ、ＩＮＴＵ、ＩＱＣＢ１、ＩＱＣＥ、ＩＲＥＢ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＶ２、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＩＡＡ０７５３、ＫＩＦ７、ＫＩＺ、ＫＩＺ－ＡＳ１、ＫＬＨＬ７、ＫＲＩＴ１、ＬＢＲ、ＬＣＡ５、ＬＯＣ１０１９２７１５７、ＬＯＣ１１１３６５２０４、ＬＲＰ２、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ３、ＭＡＴＫ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＳ１、ＭＰＤＺ、ＭＴ－ＡＴＰ６、ＭＴ－ＣＯ３、ＭＴ－ＴＥ、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴＨＦＲ、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＰＨＰ１、ＮＲ２Ｅ３、ＯＣＡ２、ＯＴＸ２、ＰＡＮＫ２、ＰＡＸ６、ＰＣＡＲＥ、ＰＣＤＨ１５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ２６、ＰＥＸ６、ＰＨＦ３、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＫＤ２、ＰＬＡ２Ｇ５、ＰＯＣ５、ＰＯＭＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＧＲ、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＯＭ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＲＳ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＣＡＰＥＲ、ＳＤＣＣＡＧ８、ＳＩＸ６、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＴＭ、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＧ１７、ＳＰＡＴＡ７、ＳＰＧ１１、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ２、ＴＭＥＭ１０７、ＴＭＥＭ２３７、ＴＭＥＭ６７、ＴＯＧＡＲＡＭ１、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＰＰ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ１、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ５９－ＩＦＴ８０、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ－ＡＳ１、ＶＡＣ１４、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ－ＡＳ１、ＶＨＬ、ＶＰＳ１３Ｂ、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ３５、ＷＤＲ７３、ＹＡＲＳ１、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＮＦ４０８の１つまたは２つ以上の組み合わせ。
【請求項21】
前記モデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子変異は、以下の１つまたは２つ以上の変異を含むことを特徴とする、請求項１６～２０のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア：ｃ．１０７Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１１ｄｅｌＴ、ｃ．１３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２５７＿２５８ｄｕｐＴＧ、ｃ．２５８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４２８＿４３２ｄｅｌＧＡＴＴＣ、ｃ．４３０Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７０Ｇ＞Ｃ、ｃ．４８１ｄｕｐＧ、ｃ．４８２Ｃ＞Ｔ、ｃ．５８４Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、ｃ．７１７＿７１８ｉｎｓＧ、ｃ．７５０Ｔ＞Ｇ、ｃ．９１５Ｔ＞Ａ、ｃ．９２９Ｇ＞Ａ、ｃ．９３６Ｔ＞Ｇ、ｃ．９９８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０８４Ｃ＞Ｔ、ｃ．１１２５Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．１２０８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１２６９Ｃ＞Ａ、ｃ．１２９８Ａ＞Ｇ、ｃ．１３１３Ｇ＞Ａ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１６０４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１６９０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、ｃ．１７５０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７６０Ｇ＞Ａ、ｃ．１８３４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１９６３ｄｅｌＣ、ｃ．２０２５Ｇ＞Ｔ、ｃ．２０４２Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８Ｇ＞Ｃ、ｃ．２１２９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２１８５＿２１８６ｉｎｓＡｌｕ、ｃ．２２１９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２４５＿２２４７ｄｅｌ ３ｂｐ（ＴＣＡ）、ｃ．２２５８Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、ｃ．２３６５＿２３６７ｄｅｌ ＡＡＴ，インフレーム欠失、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、ｃ．２４３８＿２４３９ｉｎｓ＞１００Ａ、ｃ．２４４１＿２４４２ｄｅｌ、ｃ．２４６５Ｇ＞Ａ、ｃ．２４７９Ｇ＞Ｔ、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、ｃ．２５０９Ｇ＞Ｃ、ｃ．２５３６Ｇ＞Ａ、ｃ．２５４８＿２５５１ｄｅｌＧＧＣＴ、ｃ．２５４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、ｃ．２６１１＿２６１３ｉｎｓＴ、ｃ．２６７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．２６７６ｄｅｌＧ、ｃ．２６８１Ａ＞Ｇ、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、ｃ．２８１６Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、ｃ．２８５３ｄｕｐＴ、ｃ．２８８４＿２８８６ｄｅｌＴＴＡ、ｃ．２９５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２９６６Ｔ＞Ｃ、ｃ．２９８３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３００２Ａ＞Ｔ、ｃ．３００８Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３５Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ａ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ｔ、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２１２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ／Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３３１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３４２７ｄｅｌＴ、ｃ．３４８２Ａ＞Ｇ、ｃ．３４９３Ｔ＞Ｃ、ｃ．３６５５Ｔ＞Ｇ、ｃ．３５４１Ｔ＞Ｃ、ｃ．３５４２ｄｕｐＧ、ｃ．３５９３Ａ＞Ｇ、ｃ．３６１３Ｇ＞Ａ、ｃ．３６５３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６５９＿３６６０ｄｅｌｉｎｓＡ、ｃ．３６６４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３６６８Ｇ＞Ｃ、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．３７１３＿３７１６ｄｕｐ、ｃ．３８７９Ｇ＞Ａ、ｃ．３９１４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３９４９Ａ＞Ｃ、ｃ．３９６１Ｔ＞Ａ、ｃ．３９８８ｄｅｌＧ、ｃ．３９８８Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９５Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３９９７Ｇ＞Ｔ、ｃ．４０９４Ｃ＞Ａ、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、ｃ．４１４２Ｃ＞Ｔ、ｃ．４１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．３８７８＋１Ｇ＞Ｔ、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．４００５＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．４００６－２Ａ＞Ｇ、ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１９Ｇ＞Ａ、ｃ．６１４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４７２Ａ＞Ｔ、ｃ．１９０３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２８０９Ｇ＞Ａ、ｃ．３１０３Ｃ＞Ｔ、ｃ．４０８２Ｇ＞Ａ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、ｃ．８６６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１４６３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２０３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２３０６＿２３０７ＧＣ＞ＡＧ、ｃ．２３０６Ｇ＞Ａ、ｃ．２７１４Ｇ＞Ａ、ｃ．２８７５Ｇ＞Ａ、ｃ．３９９２Ｇ＞Ａ。
【請求項22】
前記モデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子の変異がＲｄ８変異であることを特徴とする、請求項１６～２１のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項23】
前記変異は、ホモ接合体変異またはヘテロ接合体変異であることを特徴とする、請求項１６～２２のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項24】
前記変異が、前記モデルキャリアが先天的なものであるか、または遺伝子組換え操作によって後天的に獲得されたものであることを特徴とする、請求項１６～２３のいずれか一項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項25】
前記非ヒト動物は、結腸上皮バリア機能障害および／または関連する結腸壁の炎症を有することを特徴とする、請求項１６～２４のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項26】
前記微生物は、細菌、古細菌、原生生物、真菌またはウイルスのうちの１種または２種以上の組み合わせであり、好ましくは、前記微生物は細菌であり、前記細菌は、アナエロスティペス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メガモナス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、ニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）、オシリバクター（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、タツメラ（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、マンヘミア属（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ）、フィブロバクター属（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒ）、プレボテーラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、アクチノマイセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、ヒメノバクター属（Ｈｙｍｅｎｏｂａｃｔｅｒ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、ティセレラ属（Ｔｉｓｓｉｅｒｅｌｌａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ポルフィロモナス属（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）、アゾスピラ属（Ａｚｏｓｐｉｒａ）、アクイマリナ属（Ａｑｕｉｍａｒｉｎａ）、アクロモバクター属（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）、アシドチオバシラス属（Ａｃｉｄｉｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、マリノバクター属（Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、アクチノスポランギウム属（Ａｃｔｉｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、メタノブレビバクター（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、フランキア属（Ｆｒａｎｋｉａ）、アネロプラズマ属（Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ）、コプロコッカス属（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）から選ばれる１つまたは２つ以上であることを特徴とする、請求項１６～２５のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項27】
前記細菌は、アナエロスティペス・ハドラス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ ｈａｄｒｕｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ニトロソモナス属Ｉｓ７９Ａ３（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｓｐ．Ｉｓ７９Ａ３）、オシリバクター・バレリシゲネス（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ ｖａｌｅｒｉｃｉｇｅｎｅｓ）、タツメラ属 ＴＡ１（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ ｓｐ．ＴＡ１）、メガモナス・ファニフォーミス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、チオバシラス・デニトリフィカンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、クロストリジウム・テタニ、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・ボツリヌス、アシネトバクター・カルコアセチカス、アシネトバクター・ルヴォフィイ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・ヘモリティカス、アシネトバクター・ジュニイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、化膿レンサ球菌、溶連菌、フィブロバクター・サクシノゲネス、フィブロバクター・インテスティナリス、ポルフィロモナス・アサッカロリティカ、ポルフィロモナス・エンドドンタリス、ポルフィロモナス・ジンジビカニス、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・コリ、カンピロバクター・ラリ、カンピロバクター・ウプサリエンシス、カンピロバクター・コンシサス、カンピロバクター・フェタス、アクチノマイセス・イスラエリイ、アクチノマイセス・ナエスランディイ、アクチノマイセス・オドントリティカス、アクチノマイセス・ビスコーサス、アクチノマイセス・ノウイイ、エシェリキア・コリ、エシェリキア・ブラタエ、エシェリキア・フェルグソニー、エシェリキア・ヘルマンニ、エシェリキア・ブルネリス、ティセレラ・プラエアキュータ、クレブシエラ・ニューモニエ、クレブシエラ・オザエナエ、アゾスピリルム・ブラシレンセ、アクロモバクター、チオバチルス・デニトリフィカンス、チオバチルス・フェロオキシダンス、チオバチルス・チオオキシダンス、チオバチルス・ネアポリタナス、バークホルデリア、マイコバクテリウム・マリナム、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ヒオディセンテリア、ビブリオ・メチニコフィイ、ルミノコッカス・アルブス、ルミノコッカス・フラベファシエンス、メタノブレビバクター・ルミナンチウム、志賀赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、ボイド赤痢菌、ソンネ赤痢菌、フランキア、コプロコッカス・オイタクツス、ストレプトマイセス・アルブス、シュードモナス・メンドシナ、ミクロコッカス・セデンタリウス、アリサイクリフィルス・デニトリフィカンス、アクロモバクター・キシロソキシダンス、スフィンゴモナス、マイコバクテリウム・アブセサス、アルスロバクター・アウレッセンス、プレボテーラ、シノリゾビウム・メディカエ、酸性酵母、スタフィロコッカス・エピデルミディス、シュードモナス・エルギノーサ、黄色ブドウ球菌、スタフィロコッカス・ヘモリティカス、シュードモナス・プチダ、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、バチルス・セレウス、バチルス・メガテリウム、ラクトバチルス・ロイテリ、ガードネレラ・バジナリス、蜂エンテロコッカス・フェシウム、サイトファーガ・ハッチンソニイ、バチルス・リケニフォルミス、キサントモナス・オリザエ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセチカス、コマモナス・テストステロニ、マイコバクテリウム・カンサシイ、バチルス・チューリンギエンシス、シトロバクター・コセリ、ディアドバクター・フェルメンタンス、セラチア・マルセッセンス、スフィンゴモナス・ウィッティチイ、クレブシエラ・ニューモニアエ、シュードモナス・フルオレッセンス、ラルストニア・ピケッティ、ラクトバチルス・クリスパータス、バークホルデリア、ラクトバチルス・デルブレッキイ、メイオサーマス・シルバヌス（Ｍｅｉｏｔｈｅｒｍｕｓ ｓｉｌｖａｎｕｓ）（Ｄ）、大腸菌、ミクロコッカス・ルテウス、枯草菌、コリネバクテリウム・アウリムコスム、フィネゴルディア・マグナから選ばれる１つまたは２つ以上であることを特徴とする、請求項１６～２６のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項28】
前記眼疾患モデルキャリアが、請求項１～１５の方法に従って得られることを特徴とする、請求項１６～２７のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項29】
前記眼疾患モデルキャリアが、請求項１～１５の方法によって構築された眼疾患モデルに由来することを特徴とする、請求項１６～２８に記載の眼疾患モデルキャリア。
【請求項30】
請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法によって調製した眼疾患モデル、請求項１６～２９のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリアの眼疾患の標的治療薬におけるスクリーニングへの使用。
【請求項31】
前記標的治療が眼疾患に関連する遺伝子を標的とすることを特徴とする、請求項３０に記載の使用。
【請求項32】
前記の眼疾患に関連する遺伝子が、以下の１つの遺伝子または２つ以上の遺伝子の組み合わせであることを特徴とする、請求項３０または３１のいずれか１項に記載の使用：ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ９、ＡＣＢＤ５、ＡＣＯ２、ＡＣＯ２、ＡＣＴＧ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＨＩ１、ＡＩＰＬ１、ＡＬＭＳ１、ＡＭＹ２Ｂ、ＡＰＣ、ＡＲＦＧＥＦ１、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ６、ＡＲＭＣ９、ＡＴＯＨ７、Ｂ９Ｄ１、ＢＡＧ３、ＢＢＳ１、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ５、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＣＤ３、ＣＡ４、ＣＡＢＰ４、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＢＳ、ＣＣ２Ｄ２Ａ、ＣＤＨ２３、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ１、ＣＥＭＩＰ２、ＣＥＰ１０４、ＣＥＰ２５０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ４１、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＦＡＰ４１８、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＣＮ７、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ８、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＮＭ４、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＰ、ＣＰ、ＣＰＬＡＮＥ１、ＣＲＢ１、ＥＲＣＣ４、ＣＳＰＰ１、ＣＴＮＮＡ１、ＣＹＰ４Ｖ２、ＤＨＤＤＳ、ＤＹＮＣ２Ｈ１、ＤＹＮＣ２Ｉ１、ＤＹＮＣ２Ｉ２、ＥＮＰＰ１、ＥＲＣＣ４、ＥＶＣ２、ＥＹＳ、ＥＹＳ、Ｆ５、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ１、ＦＫＲＰ、ＦＫＴＮ、ＦＬＧ、ＦＬＶＣＲ１、ＦＯＸＥ３、ＦＵＺ、ＧＬＢ１、ＧＭＰＰＢ、ＧＮＡＴ１、ＧＲＫ１、ＧＲＭ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＡＤＨＡ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＰＳ３、ＨＰＳ５、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１２２、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ４３、ＩＦＴ５２、ＩＦＴ７４、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８１、ＩＦＴ８８、ＩＫＢＫＧ、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＩＮＰＰ５Ｅ、ＩＮＴＵ、ＩＱＣＢ１、ＩＱＣＥ、ＩＲＥＢ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＶ２、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＩＡＡ０７５３、ＫＩＦ７、ＫＩＺ、ＫＩＺ－ＡＳ１、ＫＬＨＬ７、ＫＲＩＴ１、ＬＢＲ、ＬＣＡ５、ＬＯＣ１０１９２７１５７、ＬＯＣ１１１３６５２０４、ＬＲＰ２、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ３、ＭＡＴＫ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＳ１、ＭＰＤＺ、ＭＴ－ＡＴＰ６、ＭＴ－ＣＯ３、ＭＴ－ＴＥ、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴＨＦＲ、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＰＨＰ１、ＮＲ２Ｅ３、ＯＣＡ２、ＯＴＸ２、ＰＡＮＫ２、ＰＡＸ６、ＰＣＡＲＥ、ＰＣＤＨ１５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ２６、ＰＥＸ６、ＰＨＦ３、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＫＤ２、ＰＬＡ２Ｇ５、ＰＯＣ５、ＰＯＭＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＧＲ、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＯＭ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＲＳ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＣＡＰＥＲ、ＳＤＣＣＡＧ８、ＳＩＸ６、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＴＭ、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＧ１７、ＳＰＡＴＡ７、ＳＰＧ１１、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ２、ＴＭＥＭ１０７、ＴＭＥＭ２３７、ＴＭＥＭ６７、ＴＯＧＡＲＡＭ１、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＰＰ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ１、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ５９－ＩＦＴ８０、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ－ＡＳ１、ＶＡＣ１４、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ－ＡＳ１、ＶＨＬ、ＶＰＳ１３Ｂ、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ３５、ＷＤＲ７３、ＹＡＲＳ１、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＮＦ４０８。
【請求項33】
前記標的療法が、ＣＲＢ１遺伝子における以下の１つまたは２つ以上の変異を標的とすることを特徴とする、請求項３０～３２のいずれか１項に記載の使用：ｃ．２５７＿２５８ｄｕｐＴＧ、ｃ．２５８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４２８＿４３２ｄｅｌＧＡＴＴＣ、ｃ．４３０Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７０Ｇ＞Ｃ、ｃ．４８１ｄｕｐＧ、ｃ．４８２Ｃ＞Ｔ、ｃ．５８４Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、ｃ．７１７＿７１８ｉｎｓＧ、ｃ．７５０Ｔ＞Ｇ、ｃ．９１５Ｔ＞Ａ、ｃ．９２９Ｇ＞Ａ、ｃ．９３６Ｔ＞Ｇ、ｃ．９９８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０８４Ｃ＞Ｔ、ｃ．１１２５Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．１２０８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１２６９Ｃ＞Ａ、ｃ．１２９８Ａ＞Ｇ、ｃ．１３１３Ｇ＞Ａ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１６０４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１６９０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、ｃ．１７５０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７６０Ｇ＞Ａ、ｃ．１８３４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１９６３ｄｅｌＣ、ｃ．２０２５Ｇ＞Ｔ、ｃ．２０４２Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８Ｇ＞Ｃ、ｃ．２１２９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２１８５＿２１８６ｉｎｓＡｌｕ、ｃ．２２１９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２４５＿２２４７ｄｅｌ ３ｂｐ（ＴＣＡ）、ｃ．２２５８Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、ｃ．２３６５＿２３６７ｄｅｌ ＡＡＴ，インフレーム欠失、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、ｃ．２４３８＿２４３９ｉｎｓ＞１００Ａ、ｃ．２４４１＿２４４２ｄｅｌ、ｃ．２４６５Ｇ＞Ａ、ｃ．２４７９Ｇ＞Ｔ、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、ｃ．２５０９Ｇ＞Ｃ、ｃ．２５３６Ｇ＞Ａ、ｃ．２５４８＿２５５１ｄｅｌＧＧＣＴ、ｃ．２５４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、ｃ．２６１１＿２６１３ｉｎｓＴ、ｃ．２６７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．２６７６ｄｅｌＧ、ｃ．２６８１Ａ＞Ｇ、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、ｃ．２８１６Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、ｃ．２８５３ｄｕｐＴ、ｃ．２８８４＿２８８６ｄｅｌＴＴＡ、ｃ．２９５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２９６６Ｔ＞Ｃ、ｃ．２９８３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３００２Ａ＞Ｔ、ｃ．３００８Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３５Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ａ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ｔ、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２１２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ／Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３３１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３４２７ｄｅｌＴ、ｃ．３４８２Ａ＞Ｇ、ｃ．３４９３Ｔ＞Ｃ、ｃ．３６５５Ｔ＞Ｇ、ｃ．３５４１Ｔ＞Ｃ、ｃ．３５４２ｄｕｐＧ、ｃ．３５９３Ａ＞Ｇ、ｃ．３６１３Ｇ＞Ａ、ｃ．３６５３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６５９＿３６６０ｄｅｌｉｎｓＡ、ｃ．３６６４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３６６８Ｇ＞Ｃ、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．３７１３＿３７１６ｄｕｐ、ｃ．３８７９Ｇ＞Ａ、ｃ．３９１４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３９４９Ａ＞Ｃ、ｃ．３９６１Ｔ＞Ａ、ｃ．３９８８ｄｅｌＧ、ｃ．３９８８Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９５Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３９９７Ｇ＞Ｔ、ｃ．４０９４Ｃ＞Ａ、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、ｃ．４１４２Ｃ＞Ｔ、ｃ．４１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．３８７８＋１Ｇ＞Ｔ、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．４００５＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．４００６－２Ａ＞Ｇ、ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１９Ｇ＞Ａ、ｃ．６１４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４７２Ａ＞Ｔ、ｃ．１９０３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２８０９Ｇ＞Ａ、ｃ．３１０３Ｃ＞Ｔ、ｃ．４０８２Ｇ＞Ａ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、ｃ．８６６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１４６３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２０３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２３０６＿２３０７ＧＣ＞ＡＧ、ｃ．２３０６Ｇ＞Ａ、ｃ．２７１４Ｇ＞Ａ、ｃ．２８７５Ｇ＞Ａ、ｃ．３９９２Ｇ＞Ａ。
【請求項34】
前記標的治療薬が、修飾された細胞、タンパク質、請求項３２に記載の遺伝子を標的とするかまたは請求項３３に記載の変異部位を標的とするＲＮＡ、および／または請求項３２に記載の遺伝子を標的とするかまたは請求項３３に記載の変異部位を標的とするＲＮＡ ＤＮＡを含むことを特徴とする、請求項３０～３２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項35】
請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法によって調製した眼疾患モデル、請求項１６～２９のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリアの眼疾患に関する研究への使用。
【請求項36】
請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法によって調製した眼疾患モデル、請求項１６～２９のいずれか１項に記載の眼疾患モデルキャリアの眼疾患に関連する薬物のスクリーニングへの使用であって、前記薬物は、低分子薬、化学薬物、高分子薬、生物学的薬物または天然薬物（例えば、漢方薬または漢方薬抽出物）、細胞薬物、ＲＮＡ薬物、ＤＮＡ薬物の１つまたは２つ以上の組み合わせを含む使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、眼疾患の診断および治療の技術分野に属し、具体的には、眼疾患モデルの構築方法、および該方法により得られる眼疾患モデルおよびモデルキャリアの眼疾患の研究および治療薬におけるスクリーニングへの使用に関する。
【背景技術】
【0002】
遺伝性網膜変性症（ＩＲＤ）は、先進工業国の労働人口における視力低下の最も一般的な原因である遺伝性疾患である。遺伝性網膜変性症（ＩＲＤ）は、視細胞の進行性喪失を特徴とする遺伝性疾患であり、先天性黒内障（ＬＣＡ）、網膜色素変性症（ＲＰ）、早期発症型桿体－錐体ジストロフィー、桿体－桿体ジストロフィー、先天性停在性夜盲および色覚異常、スターガルト病などが含まれる（Ｂｒｏａｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７年）。これは先進工業国の労働人口における視力低下の最も一般的な原因であり、推定発症率は１：２０００である（Ｋｕｔｌｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０２０年）。遺伝的および臨床的異質性により、ＩＲＤｓの治療には高度に個別化された治療策が必要である。神経保護、遺伝子治療、細胞置換療法は、様々な段階のＩＲＤの治療法として提案されているが、現在までに、ＬＣＡの治療法としてＦＤＡから承認されたのは、ＲＰＥ６５遺伝子の変異を補正する遺伝子治療（Ｌｕｘｔｕｒｎａ）のみである（Ｂｏｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｉｋｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０２０年；Ｋｕｔｌｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０２０年）。
【0003】
ＩＲＤには２００以上の遺伝子が関連している。このうち、ＣＲＢ１遺伝子は、その変異がＬＣＡやＲＰを含む様々な眼科的表現型をもたらす重要な遺伝子として長期間にわたって認識されてきた（Ｅｈｒｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。ＣＲＢ１は、接着分子結合の重要な制御因子であり、細胞の極性確立と眼関門の完全性の維持に重要な役割を果たしている。ＩＲＤによって誘発されるＣＲＢ１変異の頻度は、世界的に見るとかなり差異がある。例えば、ＬＣＡ症例に見られるＣＲＢ１変異対立遺伝子の頻度は、米国で６．７％、カナダで１．７％、オランダで０％、スペインで１６．７％、中国で１１．５％であり（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｖａｌｌｅｓｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００７年；Ｚｅｒｎａｎｔ ｅｔ ａｌ．，２００５）、ＣＲＢ１は、ＬＣＡ、早期発症ＲＰ、非早期発症ＲＰの全てのスペイン人患者に見られる変異頻度が最も高い遺伝子である（Ｖａｌｌｅｓｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００７）。一般的に、ＣＲＢ１遺伝子変異は、世界的にはＲＰが４％、ＬＣＡが１０～１５％であると説明できる（Ｒｉｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２００６）。したがって、ＣＲＢ１による視力喪失を救済する治療アプローチが急務である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明の目的は、眼疾患モデルまたは眼疾患モデルキャリアの構築方法、特に網膜変性モデルまたはモデルキャリアの構築方法、および当該方法によって構築されたモデルまたはモデルキャリア、ならびに当該方法、疾患モデルおよび／または疾患モデルキャリアの眼疾患研究および関連医薬品におけるスクリーニングへの使用を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明の目的は、以下の技術的解決策によって達成される。
【0006】
本発明は、眼疾患モデルを構築する方法を提供し、前記方法は、眼疾患モデルに微生物を感染させることを含む。
【0007】
好ましくは、前記感染は、微生物と直接的に接触させることまたは微生物と間接的に接触させることを含む。１つの具体的な実施形態では、眼球が微生物に感染している眼疾患モデルは、非ヒト動物をＳＰＦ環境で飼育することによって得られる。
【0008】
好ましくは、前記微生物は同一個体の腸内細菌に由来するか、またはそれと同一のものである。
【0009】
好ましくは、前記眼疾患は網膜変性症を含み、より好ましくは、前記網膜変性症は進行性網膜変性症である。
【0010】
好ましくは、前記網膜変性症は遺伝性網膜変性症（ＩＲＤ）である。
【0011】
好ましくは、前記眼疾患は、ＬＣＡ、ＲＰ、ａｒＲＰ、ＥＯＲＤ、ＥＯＲＰ、ＰＰＲＰＥ、毛細血管拡張症（ｒｅｔｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）および／または眼底コロイデレミア（ｃｈｏｒｏｉｄｅｒｅｍｉａ ｌｉｋｅ ｆｕｎｄｕｓ）を含む。
【0012】
好ましくは、前記眼疾患は、例えばぶどう膜炎、緑内障、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、硝子体炎、脈絡膜炎、網膜炎、網膜血管炎、視神経炎といった眼部炎症性疾患、さらにはぶどう膜炎、ベーチェット病、フォークト・小柳・原田病、ぶどう膜炎、網膜症、交感神経性眼炎、白内障、結膜炎、緑内障などを含む。
【0013】
好ましくは、前記モデルは、非ヒト動物であり、好ましくはサル、イヌ、チンパンジー、ラット、マウスである。
【0014】
好ましくは、前記モデルキャリアは、細胞、組織または器官であり、前記細胞、組織または器官は、ヒトまたは非ヒト動物に由来する。
【0015】
好ましくは、前記細胞は、初代細胞または細胞株である。
【0016】
好ましくは、前記組織は、眼部組織であり、前記器官は、眼部器官である。
【0017】
好ましくは、前記組織または器官は、再生組織または器官である。
【0018】
好ましくは、前記モデルは、遺伝子の病原性変異を有する。
【0019】
好ましくは、病原性変異を有する前記遺伝子は、網膜関門の構造の維持に関連する遺伝子であり、前記網膜関門は、外側血管網膜関門および／または内側血管網膜関門である。
【0020】
好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアは、病原性の眼疾患関連遺伝子変異を有し、病原性の眼部遺伝子変異を有する前記遺伝子は、以下の１つまたは２つ以上の遺伝子の組み合わせから選ばれる：ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ９、ＡＣＢＤ５、ＡＣＯ２、ＡＣＯ２、ＡＣＴＧ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＨＩ１、ＡＩＰＬ１、ＡＬＭＳ１、ＡＭＹ２Ｂ、ＡＰＣ、ＡＲＦＧＥＦ１、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ６、ＡＲＭＣ９、ＡＴＯＨ７、Ｂ９Ｄ１、ＢＡＧ３、ＢＢＳ１、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ５、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＣＤ３、ＣＡ４、ＣＡＢＰ４、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＢＳ、ＣＣ２Ｄ２Ａ、ＣＤＨ２３、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ１、ＣＥＭＩＰ２、ＣＥＰ１０４、ＣＥＰ２５０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ４１、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＦＡＰ４１８、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＣＮ７、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ８、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＮＭ４、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＰ、ＣＰ、ＣＰＬＡＮＥ１、ＣＲＢ１、ＥＲＣＣ４、ＣＳＰＰ１、ＣＴＮＮＡ１、ＣＹＰ４Ｖ２、ＤＨＤＤＳ、ＤＹＮＣ２Ｈ１、ＤＹＮＣ２Ｉ１、ＤＹＮＣ２Ｉ２、ＥＮＰＰ１、ＥＲＣＣ４、ＥＶＣ２、ＥＹＳ、ＥＹＳ、Ｆ５、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ１、ＦＫＲＰ、ＦＫＴＮ、ＦＬＧ、ＦＬＶＣＲ１、ＦＯＸＥ３、ＦＵＺ、ＧＬＢ１、ＧＭＰＰＢ、ＧＮＡＴ１、ＧＲＫ１、ＧＲＭ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＡＤＨＡ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＰＳ３、ＨＰＳ５、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１２２、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ４３、ＩＦＴ５２、ＩＦＴ７４、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８１、ＩＦＴ８８、ＩＫＢＫＧ、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＩＮＰＰ５Ｅ、ＩＮＴＵ、ＩＱＣＢ１、ＩＱＣＥ、ＩＲＥＢ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＶ２、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＩＡＡ０７５３、ＫＩＦ７、ＫＩＺ、ＫＩＺ－ＡＳ１、ＫＬＨＬ７、ＫＲＩＴ１、ＬＢＲ、ＬＣＡ５、ＬＯＣ１０１９２７１５７、ＬＯＣ１１１３６５２０４、ＬＲＰ２、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ３、ＭＡＴＫ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＳ１、ＭＰＤＺ、ＭＴ－ＡＴＰ６、ＭＴ－ＣＯ３、ＭＴ－ＴＥ、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴＨＦＲ、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＰＨＰ１、ＮＲ２Ｅ３、ＯＣＡ２、ＯＴＸ２、ＰＡＮＫ２、ＰＡＸ６、ＰＣＡＲＥ、ＰＣＤＨ１５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ２６、ＰＥＸ６、ＰＨＦ３、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＫＤ２、ＰＬＡ２Ｇ５、ＰＯＣ５、ＰＯＭＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＧＲ、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＯＭ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＲＳ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＣＡＰＥＲ、ＳＤＣＣＡＧ８、ＳＩＸ６、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＴＭ、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＧ１７、ＳＰＡＴＡ７、ＳＰＧ１１、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ２、ＴＭＥＭ１０７、ＴＭＥＭ２３７、ＴＭＥＭ６７、ＴＯＧＡＲＡＭ１、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＰＰ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ１、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ５９－ＩＦＴ８０、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ－ＡＳ１、ＶＡＣ１４、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ－ＡＳ１、ＶＨＬ、ＶＰＳ１３Ｂ、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ３５、ＷＤＲ７３、ＹＡＲＳ１、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＮＦ４０８。
【0021】
１つの具体的な実施形態において、前記モデルまたはモデルキャリアは、病原性変異を有する眼疾患関連遺伝子にＣＲＢ１遺伝子を含む。
【0022】
好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子における変異は、以下の１つまたは２つ以上の変異を含む：ｃ．１０７Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１１ｄｅｌＴ、ｃ．１３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２５７＿２５８ｄｕｐＴＧ、ｃ．２５８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４２８＿４３２ｄｅｌＧＡＴＴＣ、ｃ．４３０Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７０Ｇ＞Ｃ、ｃ．４８１ｄｕｐＧ、ｃ．４８２Ｃ＞Ｔ、ｃ．５８４Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、ｃ．７１７＿７１８ｉｎｓＧ、ｃ．７５０Ｔ＞Ｇ、ｃ．９１５Ｔ＞Ａ、ｃ．９２９Ｇ＞Ａ、ｃ．９３６Ｔ＞Ｇ、ｃ．９９８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０８４Ｃ＞Ｔ、ｃ．１１２５Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．１２０８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１２６９Ｃ＞Ａ、ｃ．１２９８Ａ＞Ｇ、ｃ．１３１３Ｇ＞Ａ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１６０４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１６９０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、ｃ．１７５０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７６０Ｇ＞Ａ、ｃ．１８３４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１９６３ｄｅｌＣ、ｃ．２０２５Ｇ＞Ｔ、ｃ．２０４２Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８Ｇ＞Ｃ、ｃ．２１２９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２１８５＿２１８６ｉｎｓＡｌｕ、ｃ．２２１９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２４５＿２２４７ｄｅｌ ３ｂｐ（ＴＣＡ）、ｃ．２２５８Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、ｃ．２３６５＿２３６７ｄｅｌ ＡＡＴ，インフレーム欠失、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、ｃ．２４３８＿２４３９ｉｎｓ＞１００Ａ、ｃ．２４４１＿２４４２ｄｅｌ、ｃ．２４６５Ｇ＞Ａ、ｃ．２４７９Ｇ＞Ｔ、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、ｃ．２５０９Ｇ＞Ｃ、ｃ．２５３６Ｇ＞Ａ、ｃ．２５４８＿２５５１ｄｅｌＧＧＣＴ、ｃ．２５４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、ｃ．２６１１＿２６１３ｉｎｓＴ、ｃ．２６７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．２６７６ｄｅｌＧ、ｃ．２６８１Ａ＞Ｇ、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、ｃ．２８１６Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、ｃ．２８５３ｄｕｐＴ、ｃ．２８８４＿２８８６ｄｅｌＴＴＡ、ｃ．２９５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２９６６Ｔ＞Ｃ、ｃ．２９８３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３００２Ａ＞Ｔ、ｃ．３００８Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３５Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ａ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ｔ、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２１２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ／Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３３１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３４２７ｄｅｌＴ、ｃ．３４８２Ａ＞Ｇ、ｃ．３４９３Ｔ＞Ｃ、ｃ．３６５５Ｔ＞Ｇ、ｃ．３５４１Ｔ＞Ｃ、ｃ．３５４２ｄｕｐＧ、ｃ．３５９３Ａ＞Ｇ、ｃ．３６１３Ｇ＞Ａ、ｃ．３６５３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６５９＿３６６０ｄｅｌｉｎｓＡ、ｃ．３６６４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３６６８Ｇ＞Ｃ、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．３７１３＿３７１６ｄｕｐ、ｃ．３８７９Ｇ＞Ａ、ｃ．３９１４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３９４９Ａ＞Ｃ、ｃ．３９６１Ｔ＞Ａ、ｃ．３９８８ｄｅｌＧ、ｃ．３９８８Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９５Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３９９７Ｇ＞Ｔ、ｃ．４０９４Ｃ＞Ａ、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、ｃ．４１４２Ｃ＞Ｔ、ｃ．４１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．３８７８＋１Ｇ＞Ｔ、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．４００５＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．４００６－２Ａ＞Ｇ、ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１９Ｇ＞Ａ、ｃ．６１４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４７２Ａ＞Ｔ、ｃ．１９０３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２８０９Ｇ＞Ａ、ｃ．３１０３Ｃ＞Ｔ、ｃ．４０８２Ｇ＞Ａ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、ｃ．８６６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１４６３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２０３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２３０６＿２３０７ＧＣ＞ＡＧ、ｃ．２３０６Ｇ＞Ａ、ｃ．２７１４Ｇ＞Ａ、ｃ．２８７５Ｇ＞Ａ、ｃ．３９９２Ｇ＞Ａ。
【0023】
より好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子における変異は、以下の１つまたは２つ以上の変異を含む：ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６８６Ｇ＞Ｃ、（ｐ．Ｃｙｓ１２２９Ｓｅｒ）、ｃ．２８４２＋１ｄｅｌｉｎｓＡＡ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ａｌａ１３５４Ｔｈｒ）、ｃ．３９９１Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ１３３１Ｃｙｓ）、ｃ．３０１４Ａ＞Ｔ、（ｐ．Ａｓｐ１００５Ｖａｌ）、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．２６８０＿２６８４ｄｅｌ、（ｐ．Ａｓｎ８９４ｆｓ）、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、（ｐ．Ｖａｌ５７８Ｇｌｕ）、ｃ．４５５Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ１５２Ｔｙｒ）、ｃ．３４６２＿３４６３ｄｅｌ、（ｐ．Ｃｙｓ１１５４＿Ｇｌｕ１１５５ｄｅｌｉｎｓＴｅｒ）、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ｇｌｎ１０１３Ｔｅｒ）、ｃ．２６７３Ｃ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ８９１Ｔｅｒ）、ｃ．２２３０Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ７４４Ｔｅｒ）、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、（ｐ．Ｇｌｙ１２２６Ｔｅｒ）、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４２Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｃｙｓ９４８Ａｒｇ）、ｃ．３９８８ｄｅｌ、（ｐ．Ｇｌｕ１３３０ｆｓ）、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、（ｐ．Ｐｒｏ８３６Ｔｈｒ）、ｃ．２２９１Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ａｒｇ７６４Ｈｉｓ）、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ５２６Ｔｅｒ）、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、（ｐ．Ｉｌｅ２０５ｆｓ）、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｌｅｕ１１０７Ｐｒｏ）、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ８９６Ｔｅｒ）、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｉｌｅ８５２Ｔｈｒ）、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｍｅｔ７４１Ｔｈｒ）、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ３８３Ｔｙｒ）、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ９４８Ｔｙｒ）、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、（ｐ．Ａｌａ１３７４ｆｓ）、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｇｌｙ１１０３Ａｒｇ）、ｃ．４８４Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｖａｌ１６２Ｍｅｔ）、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、（ｐ．Ｌｙｓ８０１Ｔｅｒ）、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ｔｈｒ７４５Ｍｅｔ）、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ７６４Ｃｙｓ）、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｍｅｔ１０４１Ｔｈｒ）。
【0024】
好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子における変異は、Ｒｄ８変異である。
【0025】
好ましくは、前記変異は、ホモ接合体変異またはヘテロ接合体変異である。
【0026】
好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアは、前記の遺伝子変異をインビボで先天的に有するか、または組換え遺伝子操作の結果として変異を獲得したものである。
【0027】
好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアは、内因性ＣＲＢ１遺伝子が欠失または発現していないヒト化ＣＲＢ１遺伝子またはヒトＣＲＢ１遺伝子をインビボで有する。
【0028】
好ましくは、前記非ヒト動物は、結腸上皮バリア機能障害および／または関連する結腸壁の炎症を有する。
【0029】
１つの具体的な実施例では、前記モデルにおいてオクルディンタンパク質が有意に欠失し、１つの具体的な実施例では、前記モデルにおいてオクルディンタンパク質が有意に欠失し、クローディン１の発現が明らかではない。
【0030】
前記微生物は、細菌、古細菌、原生生物、真菌またはウイルスのうちの１種または２種以上の組み合わせであり、好ましくは、前記微生物は細菌であり、前記細菌は、アナエロスティペス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メガモナス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、ニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）、オシリバクター（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、タツメラ（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、マンヘミア属（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ）、フィブロバクター属（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒ）、プレボテーラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、アクチノマイセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、ヒメノバクター属（Ｈｙｍｅｎｏｂａｃｔｅｒ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、ティセレラ属（Ｔｉｓｓｉｅｒｅｌｌａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ポルフィロモナス属（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）、アゾスピリルム属（Ａｚｏｓｐｉｒａ）、アクイマリナ属（Ａｑｕｉｍａｒｉｎａ）、アクロモバクター属（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）、アシドチオバシラス属（Ａｃｉｄｉｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、マリノバクター属（Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、アクチノスポランギウム属（Ａｃｔｉｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、メタノブレビバクター（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、フランキア属（Ｆｒａｎｋｉａ）、アネロプラズマ属（Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ）、コプロコッカス属（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）から選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0031】
具体的には、前記細菌は、アナエロスティペス・ハドラス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ ｈａｄｒｕｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ニトロソモナス属Ｉｓ７９Ａ３（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｓｐ．Ｉｓ７９Ａ３）、オシリバクター・バレリシゲネス（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ ｖａｌｅｒｉｃｉｇｅｎｅｓ）、タツメラ属 ＴＡ１（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ ｓｐ．ＴＡ１）、メガモナス・ファニフォーミス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、チオバシラス・デニトリフィカンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、クロストリジウム・テタニ、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・ボツリヌス、アシネトバクター・カルコアセチカス、アシネトバクター・ルヴォフィイ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・ヘモリティカス、アシネトバクター・ジュニイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、化膿レンサ球菌、溶連菌、フィブロバクター・サクシノゲネス、フィブロバクター・インテスティナリス、ポルフィロモナス・アサッカロリティカ、ポルフィロモナス・エンドドンタリス、ポルフィロモナス・ジンジビカニス、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・コリ、カンピロバクター・ラリ、カンピロバクター・ウプサリエンシス、カンピロバクター・コンシサス、カンピロバクター・フェタス、アクチノマイセス・イスラエリイ、アクチノマイセス・ナエスランディイ、アクチノマイセス・オドントリティカス、アクチノマイセス・ビスコーサス、アクチノマイセス・ノウイイ、エシェリキア・コリ、エシェリキア・ブラタエ、エシェリキア・フェルグソニー、エシェリキア・ヘルマンニ、エシェリキア・ブルネリス、ティセレラ・プラエアキュータ、クレブシエラ・ニューモニエ、クレブシエラ・オザエナエ、アゾスピリルム・ブラシレンセ、アクロモバクター、チオバチルス・デニトリフィカンス、チオバチルス・フェロオキシダンス、チオバチルス・チオオキシダンス、チオバチルス・ネアポリタナス、バークホルデリア、マイコバクテリウム・マリナム、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ヒオディセンテリア、ビブリオ・メチニコフィイ、ルミノコッカス・アルブス、ルミノコッカス・フラベファシエンス、メタノブレビバクター・ルミナンチウム、シゲラ、フレクスナー赤痢菌、ボイド赤痢菌、ソンネ赤痢菌、フランキア、コプロコッカス・オイタクツス、ストレプトマイセス・アルブス、シュードモナス・メンドシナ、ミクロコッカス・セデンタリウス、アリサイクリフィルス・デニトリフィカンス、アクロモバクター・キシロソキシダンス、スフィンゴモナス、マイコバクテリウム・アブセサス、アルスロバクター・アウレッセンス、プレボテーラ、シノリゾビウム・メディカエ、酸性酵母、スタフィロコッカス・エピデルミディス、シュードモナス・エルギノーサ、黄色ブドウ球菌、スタフィロコッカス・ヘモリティカス、シュードモナス・プチダ、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、バチルス・セレウス、バチルス・メガテリウム、ラクトバチルス・ロイテリ、ガードネレラ・バジナリス、蜂エンテロコッカス・フェシウム、サイトファーガ・ハッチンソニイ、バチルス・リケニフォルミス、キサントモナス・オリザエ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセチカス、コマモナス・テストステロニ、マイコバクテリウム・カンサシイ、バチルス・チューリンギエンシス、シトロバクター・コセリ、ディアドバクター・フェルメンタンス、セラチア・マルセッセンス、スフィンゴモナス・ウィッティチイ、クレブシエラ・ニューモニアエ、シュードモナス・フルオレッセンス、ラルストニア・ピケッティ、ラクトバチルス・クリスパータス、バークホルデリア、ラクトバチルス・デルブレッキイ、メイオサーマス・シルバヌス（Ｍｅｉｏｔｈｅｒｍｕｓ ｓｉｌｖａｎｕｓ）（Ｍｅｉｏｔｈｅｒｍｕｓ ｓｉｌｖａｎｕｓ）（Ｄ）、大腸菌、ミクロコッカス・ルテウス、枯草菌、コリネバクテリウム・アウリムコスム、フィネゴルディア・マグナから選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0032】
好ましくは、前記感染方法は、微生物をモデルキャリアの感染対象部位と直接的に接触させることまたは間接的に接触させることを含み、前記間接的に接触させることは、前記微生物と感染対象部位との間に血液網膜関門、好ましくは、外側血管網膜関門または内側血管網膜関門が存在することである。
【0033】
１つの具体的な実施形態では、前記感染方法は、末梢血を介して眼部に腸内細菌を感染させることを含む。具体的には、非ヒト動物モデルの腸管上皮バリアは顕著な損傷を受けて、腸内細菌が末梢血に入る。１つのモデル体内で、網膜関門も顕著な損傷を受けて、末梢血に入っている腸内細菌が網膜に感染する。１つの具体的な実施形態では、前記非ヒト動物モデルはＣＲＢ１遺伝子の変異を有し、１つの具体的な実施形態では、前記ＣＲＢ１遺伝子の変異はＲｄ８変異である。
【0034】
さらに、本発明は眼部炎症モデルを調製する方法を提供し、前記方法は微生物に感染した非ヒト動物をモデル化する。
【0035】
好ましくは、前記の眼部炎症は、腸内細菌叢または腸内細菌叢と同一の細菌叢によって引き起こされる。
【0036】
前記非ヒト動物は、上述したような動物である。
【0037】
前記微生物は、上述したような微生物である。
【0038】
さらに、本発明は、網膜変性疾患モデルを調製する方法を提供し、前記方法は、網膜変性に罹患している非ヒト動物に微生物を感染させることを含む。
【0039】
好ましくは、前記眼部炎症性網膜変性疾患は、上述したような網膜疾患である。
【0040】
前記非ヒト動物は、上述したような動物である。
【0041】
前記微生物は、上述したような微生物である。
【0042】
さらに、本発明は、眼部炎症を有するモデルキャリアを提供し、前記眼部炎症は微生物感染によって引き起こされる。
【0043】
好ましくは、前記微生物は同一個体の腸内細菌に由来するか、またはそれと同一のものである。
【0044】
好ましくは、前記眼疾患は網膜変性症を含み、より好ましくは、前記網膜変性症は進行性網膜変性症である。
【0045】
好ましくは、前記網膜変性症は遺伝性網膜変性症（ＩＲＤ）である。
【0046】
好ましくは、前記網膜変性症は、モデル動物自体の疾患であるか、または遺伝子操作によってモデル動物に網膜変性症を発症させたものである。
【0047】
好ましくは、前記眼疾患は、ＬＣＡ、ＲＰ、ａｒＲＰ、ＥＯＲＤ、ＥＯＲＰ、ＰＰＲＰＥ、毛細血管拡張症（ｒｅｔｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）および／または眼底コロイデレミア（ｃｈｏｒｏｉｄｅｒｅｍｉａ ｌｉｋｅ ｆｕｎｄｕｓ）を含む。
【0048】
好ましくは、前記眼疾患は、例えばぶどう膜炎、緑内障、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、硝子体炎、脈絡膜炎、網膜炎、網膜血管炎、視神経炎といった眼部炎症性疾患、さらにはぶどう膜炎、ベーチェット病、フォークト・小柳・原田病、ぶどう膜炎、網膜症、交感神経性眼炎、白内障、結膜炎、緑内障などを含む。
【0049】
好ましくは、前記モデルは、非ヒト動物であり、好ましくはサル、イヌ、チンパンジー、ラット、マウスである。
【0050】
好ましくは、前記モデルキャリアは、細胞、組織または器官であり、前記細胞、組織または器官は、ヒトまたは非ヒト動物に由来する。
【0051】
好ましくは、前記細胞は、初代細胞または細胞株である。
【0052】
好ましくは、前記組織は、眼部組織であり、前記器官は、眼部器官である。
【0053】
好ましくは、前記組織または器官は、再生組織または器官である。
【0054】
好ましくは、前記モデルは、遺伝子の病原性変異を有する。
【0055】
好ましくは、病原性変異を有する前記遺伝子は、網膜関門の構造の維持に関連する遺伝子であり、前記網膜関門は、外側血管網膜関門および／または内側血管網膜関門である。
【0056】
好ましくは、前記モデルキャリアには、以下の１つまたは２つ以上の遺伝子が変異している：ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ９、ＡＣＢＤ５、ＡＣＯ２、ＡＣＯ２、ＡＣＴＧ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＨＩ１、ＡＩＰＬ１、ＡＬＭＳ１、ＡＭＹ２Ｂ、ＡＰＣ、ＡＲＦＧＥＦ１、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ６、ＡＲＭＣ９、ＡＴＯＨ７、Ｂ９Ｄ１、ＢＡＧ３、ＢＢＳ１、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ５、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＣＤ３、ＣＡ４、ＣＡＢＰ４、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＢＳ、ＣＣ２Ｄ２Ａ、ＣＤＨ２３、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ１、ＣＥＭＩＰ２、ＣＥＰ１０４、ＣＥＰ２５０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ４１、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＦＡＰ４１８、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＣＮ７、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ８、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＮＭ４、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＰ、ＣＰ、ＣＰＬＡＮＥ１、ＣＲＢ１、ＥＲＣＣ４、ＣＳＰＰ１、ＣＴＮＮＡ１、ＣＹＰ４Ｖ２、ＤＨＤＤＳ、ＤＹＮＣ２Ｈ１、ＤＹＮＣ２Ｉ１、ＤＹＮＣ２Ｉ２、ＥＮＰＰ１、ＥＲＣＣ４、ＥＶＣ２、ＥＹＳ、ＥＹＳ、Ｆ５、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ１、ＦＫＲＰ、ＦＫＴＮ、ＦＬＧ、ＦＬＶＣＲ１、ＦＯＸＥ３、ＦＵＺ、ＧＬＢ１、ＧＭＰＰＢ、ＧＮＡＴ１、ＧＲＫ１、ＧＲＭ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＡＤＨＡ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＰＳ３、ＨＰＳ５、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１２２、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ４３、ＩＦＴ５２、ＩＦＴ７４、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８１、ＩＦＴ８８、ＩＫＢＫＧ、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＩＮＰＰ５Ｅ、ＩＮＴＵ、ＩＱＣＢ１、ＩＱＣＥ、ＩＲＥＢ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＶ２、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＩＡＡ０７５３、ＫＩＦ７、ＫＩＺ、ＫＩＺ－ＡＳ１、ＫＬＨＬ７、ＫＲＩＴ１、ＬＢＲ、ＬＣＡ５、ＬＯＣ１０１９２７１５７、ＬＯＣ１１１３６５２０４、ＬＲＰ２、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ３、ＭＡＴＫ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＳ１、ＭＰＤＺ、ＭＴ－ＡＴＰ６、ＭＴ－ＣＯ３、ＭＴ－ＴＥ、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴＨＦＲ、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＰＨＰ１、ＮＲ２Ｅ３、ＯＣＡ２、ＯＴＸ２、ＰＡＮＫ２、ＰＡＸ６、ＰＣＡＲＥ、ＰＣＤＨ１５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ２６、ＰＥＸ６、ＰＨＦ３、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＫＤ２、ＰＬＡ２Ｇ５、ＰＯＣ５、ＰＯＭＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＧＲ、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＯＭ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＲＳ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＣＡＰＥＲ、ＳＤＣＣＡＧ８、ＳＩＸ６、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＴＭ、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＧ１７、ＳＰＡＴＡ７、ＳＰＧ１１、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ２、ＴＭＥＭ１０７、ＴＭＥＭ２３７、ＴＭＥＭ６７、ＴＯＧＡＲＡＭ１、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＰＰ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ１、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ５９－ＩＦＴ８０、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ－ＡＳ１、ＶＡＣ１４、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ－ＡＳ１、ＶＨＬ、ＶＰＳ１３Ｂ、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ３５、ＷＤＲ７３、ＹＡＲＳ１、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＮＦ４０８の１つまたは２つ以上の組み合わせである。
【0057】
１つの具体的な実施形態において、前記モデルキャリアは、病原性変異を有する眼疾患関連遺伝子にＣＲＢ１遺伝子を含む。
【0058】
好ましくは、前記モデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子における変異は、以下の１つまたは２つ以上の変異を含む：ｃ．１０７Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１１ｄｅｌＴ、ｃ．１３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２５７＿２５８ｄｕｐＴＧ、ｃ．２５８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４２８＿４３２ｄｅｌＧＡＴＴＣ、ｃ．４３０Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７０Ｇ＞Ｃ、ｃ．４８１ｄｕｐＧ、ｃ．４８２Ｃ＞Ｔ、ｃ．５８４Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、ｃ．７１７＿７１８ｉｎｓＧ、ｃ．７５０Ｔ＞Ｇ、ｃ．９１５Ｔ＞Ａ、ｃ．９２９Ｇ＞Ａ、ｃ．９３６Ｔ＞Ｇ、ｃ．９９８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０８４Ｃ＞Ｔ、ｃ．１１２５Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．１２０８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１２６９Ｃ＞Ａ、ｃ．１２９８Ａ＞Ｇ、ｃ．１３１３Ｇ＞Ａ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１６０４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１６９０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、ｃ．１７５０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７６０Ｇ＞Ａ、ｃ．１８３４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１９６３ｄｅｌＣ、ｃ．２０２５Ｇ＞Ｔ、ｃ．２０４２Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８Ｇ＞Ｃ、ｃ．２１２９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２１８５＿２１８６ｉｎｓＡｌｕ、ｃ．２２１９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２４５＿２２４７ｄｅｌ ３ｂｐ（ＴＣＡ）、ｃ．２２５８Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、ｃ．２３６５＿２３６７ｄｅｌ ＡＡＴ，インフレーム欠失、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、ｃ．２４３８＿２４３９ｉｎｓ＞１００Ａ、ｃ．２４４１＿２４４２ｄｅｌ、ｃ．２４６５Ｇ＞Ａ、ｃ．２４７９Ｇ＞Ｔ、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、ｃ．２５０９Ｇ＞Ｃ、ｃ．２５３６Ｇ＞Ａ、ｃ．２５４８＿２５５１ｄｅｌＧＧＣＴ、ｃ．２５４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、ｃ．２６１１＿２６１３ｉｎｓＴ、ｃ．２６７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．２６７６ｄｅｌＧ、ｃ．２６８１Ａ＞Ｇ、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、ｃ．２８１６Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、ｃ．２８５３ｄｕｐＴ、ｃ．２８８４＿２８８６ｄｅｌＴＴＡ、ｃ．２９５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２９６６Ｔ＞Ｃ、ｃ．２９８３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３００２Ａ＞Ｔ、ｃ．３００８Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３５Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ａ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ｔ、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２１２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ／Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３３１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３４２７ｄｅｌＴ、ｃ．３４８２Ａ＞Ｇ、ｃ．３４９３Ｔ＞Ｃ、ｃ．３６５５Ｔ＞Ｇ、ｃ．３５４１Ｔ＞Ｃ、ｃ．３５４２ｄｕｐＧ、ｃ．３５９３Ａ＞Ｇ、ｃ．３６１３Ｇ＞Ａ、ｃ．３６５３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６５９＿３６６０ｄｅｌｉｎｓＡ、ｃ．３６６４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３６６８Ｇ＞Ｃ、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．３７１３＿３７１６ｄｕｐ、ｃ．３８７９Ｇ＞Ａ、ｃ．３９１４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３９４９Ａ＞Ｃ、ｃ．３９６１Ｔ＞Ａ、ｃ．３９８８ｄｅｌＧ、ｃ．３９８８Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９５Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３９９７Ｇ＞Ｔ、ｃ．４０９４Ｃ＞Ａ、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、ｃ．４１４２Ｃ＞Ｔ、ｃ．４１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．３８７８＋１Ｇ＞Ｔ、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．４００５＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．４００６－２Ａ＞Ｇ、ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１９Ｇ＞Ａ、ｃ．６１４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４７２Ａ＞Ｔ、ｃ．１９０３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２８０９Ｇ＞Ａ、ｃ．３１０３Ｃ＞Ｔ、ｃ．４０８２Ｇ＞Ａ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、ｃ．８６６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１４６３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２０３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２３０６＿２３０７ＧＣ＞ＡＧ、ｃ．２３０６Ｇ＞Ａ、ｃ．２７１４Ｇ＞Ａ、ｃ．２８７５Ｇ＞Ａ、ｃ．３９９２Ｇ＞Ａ。
【0059】
より好ましくは、前記モデルまたはモデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子における変異は、以下の１つまたは２つ以上の変異を含む：ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６８６Ｇ＞Ｃ、（ｐ．Ｃｙｓ１２２９Ｓｅｒ）、ｃ．２８４２＋１ｄｅｌｉｎｓＡＡ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ａｌａ１３５４Ｔｈｒ）、ｃ．３９９１Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ１３３１Ｃｙｓ）、ｃ．３０１４Ａ＞Ｔ、（ｐ．Ａｓｐ１００５Ｖａｌ）、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．２６８０＿２６８４ｄｅｌ、（ｐ．Ａｓｎ８９４ｆｓ）、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、（ｐ．Ｖａｌ５７８Ｇｌｕ）、ｃ．４５５Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ１５２Ｔｙｒ）、ｃ．３４６２＿３４６３ｄｅｌ、（ｐ．Ｃｙｓ１１５４＿Ｇｌｕ１１５５ｄｅｌｉｎｓＴｅｒ）、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ｇｌｎ１０１３Ｔｅｒ）、ｃ．２６７３Ｃ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ８９１Ｔｅｒ）、ｃ．２２３０Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ７４４Ｔｅｒ）、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、（ｐ．Ｇｌｙ１２２６Ｔｅｒ）、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４２Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｃｙｓ９４８Ａｒｇ）、ｃ．３９８８ｄｅｌ、（ｐ．Ｇｌｕ１３３０ｆｓ）、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、（ｐ．Ｐｒｏ８３６Ｔｈｒ）、ｃ．２２９１Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ａｒｇ７６４Ｈｉｓ）、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ５２６Ｔｅｒ）、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、（ｐ．Ｉｌｅ２０５ｆｓ）、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｌｅｕ１１０７Ｐｒｏ）、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ８９６Ｔｅｒ）、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｉｌｅ８５２Ｔｈｒ）、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｍｅｔ７４１Ｔｈｒ）、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ３８３Ｔｙｒ）、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｃｙｓ９４８Ｔｙｒ）、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、（ｐ．Ａｌａ１３７４ｆｓ）、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｇｌｙ１１０３Ａｒｇ）、ｃ．４８４Ｇ＞Ａ、（ｐ．Ｖａｌ１６２Ｍｅｔ）、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、（ｐ．Ｌｙｓ８０１Ｔｅｒ）、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ｔｈｒ７４５Ｍｅｔ）、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、（ｐ．Ａｒｇ７６４Ｃｙｓ）、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、（ｐ．Ｍｅｔ１０４１Ｔｈｒ）。
【0060】
好ましくは、前記モデルキャリアのＣＲＢ１遺伝子における変異は、Ｒｄ８変異である。
【0061】
好ましくは、前記変異は、ホモ接合体変異またはヘテロ接合体変異である。
【0062】
好ましくは、前記モデルキャリアは、前記の遺伝子変異をインビボで先天的に有するか、または組換え遺伝子操作の結果として変異を獲得したものである。
【0063】
好ましくは、前記モデルキャリアは、内因性ＣＲＢ１遺伝子が欠失または発現していないヒト化ＣＲＢ１遺伝子またはヒトＣＲＢ１遺伝子をインビボで有する。
【0064】
好ましくは、前記非ヒト動物は、結腸上皮バリア機能障害および／または関連する結腸壁の炎症を有する。
【0065】
１つの具体的な実施例では、前記モデルにおいてオクルディンタンパク質が有意に欠失し、１つの具体的な実施例では、前記モデルにおいてオクルディンタンパク質が有意に欠失し、クローディン１の発現が明らかではない。
【0066】
前記微生物は、細菌、古細菌、原生生物、真菌またはウイルスのうちの１種または２種以上の組み合わせであり、好ましくは、前記微生物は細菌であり、前記細菌は、アナエロスティペス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メガモナス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ）、ニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）、オシリバクター（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、タツメラ（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、マンヘミア属（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ）、フィブロバクター属（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒ）、プレボテーラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、アクチノマイセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、ヒメノバクター属（Ｈｙｍｅｎｏｂａｃｔｅｒ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、ティセレラ属（Ｔｉｓｓｉｅｒｅｌｌａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ポルフィロモナス属（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）、アゾスピリルム属（Ａｚｏｓｐｉｒａ）、アクイマリナ属（Ａｑｕｉｍａｒｉｎａ）、アクロモバクター属（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）、アシドチオバシラス属（Ａｃｉｄｉｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、マリノバクター属（Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、アクチノスポランギウム属（Ａｃｔｉｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、メタノブレビバクター（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、フランキア属（Ｆｒａｎｋｉａ）、アネロプラズマ属（Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ）、コプロコッカス属（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）から選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0067】
具体的には、前記細菌は、アナエロスティペス・ハドラス（Ａｎｅａｒｏｓｔｉｐｅｓ ｈａｄｒｕｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ニトロソモナス属Ｉｓ７９Ａ３（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｓｐ．Ｉｓ７９Ａ３）、オシリバクター・バレリシゲネス（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ ｖａｌｅｒｉｃｉｇｅｎｅｓ）、タツメラ属 ＴＡ１（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ ｓｐ．ＴＡ１）、メガモナス・ファニフォーミス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、チオバシラス・デニトリフィカンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、クロストリジウム・テタニ、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・ボツリヌス、アシネトバクター・カルコアセチカス、アシネトバクター・ルヴォフィイ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・ヘモリティカス、アシネトバクター・ジュニイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、化膿レンサ球菌、溶連菌、フィブロバクター・サクシノゲネス、フィブロバクター・インテスティナリス、ポルフィロモナス・アサッカロリティカ、ポルフィロモナス・エンドドンタリス、ポルフィロモナス・ジンジビカニス、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・コリ、カンピロバクター・ラリ、カンピロバクター・ウプサリエンシス、カンピロバクター・コンシサス、カンピロバクター・フェタス、アクチノマイセス・イスラエリイ、アクチノマイセス・ナエスランディイ、アクチノマイセス・オドントリティカス、アクチノマイセス・ビスコーサス、アクチノマイセス・ノウイイ、エシェリキア・コリ、エシェリキア・ブラタエ、エシェリキア・フェルグソニー、エシェリキア・ヘルマンニ、エシェリキア・ブルネリス、ティセレラ・プラエアキュータ、クレブシエラ・ニューモニエ、クレブシエラ・オザエナエ、アゾスピリルム・ブラシレンセ、アクロモバクター、チオバチルス・デニトリフィカンス、チオバチルス・フェロオキシダンス、チオバチルス・チオオキシダンス、チオバチルス・ネアポリタナス、バークホルデリア、マイコバクテリウム・マリナム、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ヒオディセンテリア、ビブリオ・メチニコフィイ、ルミノコッカス・アルブス、ルミノコッカス・フラベファシエンス、メタノブレビバクター・ルミナンチウム、志賀赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、ボイド赤痢菌、ソンネ赤痢菌、フランキア、コプロコッカス・オイタクツス、ストレプトマイセス・アルブス、シュードモナス・メンドシナ、ミクロコッカス・セデンタリウス、アリサイクリフィルス・デニトリフィカンス、アクロモバクター・キシロソキシダンス、スフィンゴモナス、マイコバクテリウム・アブセサス、アルスロバクター・アウレッセンス、プレボテーラ、シノリゾビウム・メディカエ、酸性酵母、スタフィロコッカス・エピデルミディス、シュードモナス・エルギノーサ、黄色ブドウ球菌、スタフィロコッカス・ヘモリティカス、シュードモナス・プチダ、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、バチルス・セレウス、バチルス・メガテリウム、ラクトバチルス・ロイテリ、ガードネレラ・バジナリス、蜂エンテロコッカス・フェシウム、サイトファーガ・ハッチンソニイ、バチルス・リケニフォルミス、キサントモナス・オリザエ、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセチカス、コマモナス・テストステロニ、マイコバクテリウム・カンサシイ、バチルス・チューリンギエンシス、シトロバクター・コセリ、ディアドバクター・フェルメンタンス、セラチア・マルセッセンス、スフィンゴモナス・ウィッティチイ、クレブシエラ・ニューモニアエ、シュードモナス・フルオレッセンス、ラルストニア・ピケッティ、ラクトバチルス・クリスパータス、バークホルデリア、ラクトバチルス・デルブレッキイ、メイオサーマス・シルバヌス（Ｍｅｉｏｔｈｅｒｍｕｓ ｓｉｌｖａｎｕｓ）（Ｄ）、大腸菌、ミクロコッカス・ルテウス、枯草菌、コリネバクテリウム・アウリムコスム、フィネゴルディア・マグナから選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0068】
好ましくは、前記感染方法は、微生物をモデルキャリアの感染対象部位と直接的に接触させることまたは間接的に接触させることを含み、前記間接的に接触させることは、前記微生物と感染対象部位との間に血液網膜関門、好ましくは、外側血管網膜関門または内側血管網膜関門が存在することである。
【0069】
１つの具体的な実施形態では、前記感染方法は、末梢血を介して眼部に腸内細菌を感染させることを含む。具体的には、非ヒト動物モデルの腸管上皮バリアは顕著な損傷を受けて、腸内細菌が末梢血に入る。１つのモデル体内で、網膜関門も顕著な損傷を受けて、末梢血に入っている腸内細菌が網膜に感染する。１つの具体的な実施形態では、前記非ヒト動物モデルはＣＲＢ１遺伝子の変異を有し、１つの具体的な実施形態では、前記ＣＲＢ１遺伝子の変異はＲｄ８変異である。
【0070】
前記炎症を有するモデルキャリアは、前記の方法によって調製した疾患モデルに由来するか、または、前記の非ヒト動物由来の眼部細胞、組織、または臓器に微生物を感染させることによって得られる。
【0071】
本発明は、眼疾患に対する標的療法の有効性の評価における上記方法の使用を提供し、前記眼疾患は、前述したような眼疾患を含む。
【0072】
１つの具体的な実施形態では、上述したモデルまたはモデルキャリアに、上述した遺伝子変異に対する標的療法を施し、標的療法を施したモデルまたはモデルキャリアと施さないモデルまたはモデルキャリアを２つのグループに分け、それぞれ上述した方法により眼疾患モデルを構築し、比較すると、標的療法を施したグループが眼疾患のモデル化に成功しなかった場合、標的療法が有益な効果を達成したことを示す。
【0073】
１つの具体的な実施形態では、前記標的療法は、以下の１つの遺伝子または２つ以上の遺伝子の組み合わせを標的とする：ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ９、ＡＣＢＤ５、ＡＣＯ２、ＡＣＯ２、ＡＣＴＧ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＨＩ１、ＡＩＰＬ１、ＡＬＭＳ１、ＡＭＹ２Ｂ、ＡＰＣ、ＡＲＦＧＥＦ１、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＡＲＬ６、ＡＲＭＣ９、ＡＴＯＨ７、Ｂ９Ｄ１、ＢＡＧ３、ＢＢＳ１、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ５、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＣＤ３、ＣＡ４、ＣＡＢＰ４、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＢＳ、ＣＣ２Ｄ２Ａ、ＣＤＨ２３、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ１、ＣＥＭＩＰ２、ＣＥＰ１０４、ＣＥＰ２５０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ４１、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＦＡＰ４１８、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＣＮ７、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ８、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＮＭ４、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＰ、ＣＰ、ＣＰＬＡＮＥ１、ＣＲＢ１、ＥＲＣＣ４、ＣＳＰＰ１、ＣＴＮＮＡ１、ＣＹＰ４Ｖ２、ＤＨＤＤＳ、ＤＹＮＣ２Ｈ１、ＤＹＮＣ２Ｉ１、ＤＹＮＣ２Ｉ２、ＥＮＰＰ１、ＥＲＣＣ４、ＥＶＣ２、ＥＹＳ、ＥＹＳ、Ｆ５、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ１、ＦＫＲＰ、ＦＫＴＮ、ＦＬＧ、ＦＬＶＣＲ１、ＦＯＸＥ３、ＦＵＺ、ＧＬＢ１、ＧＭＰＰＢ、ＧＮＡＴ１、ＧＲＫ１、ＧＲＭ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＡＤＨＡ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＰＳ３、ＨＰＳ５、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１２２、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ４３、ＩＦＴ５２、ＩＦＴ７４、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８０、ＩＦＴ８１、ＩＦＴ８８、ＩＫＢＫＧ、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＩＮＰＰ５Ｅ、ＩＮＴＵ、ＩＱＣＢ１、ＩＱＣＥ、ＩＲＥＢ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＶ２、ＫＩＡＡ０５８６、ＫＩＡＡ０７５３、ＫＩＦ７、ＫＩＺ、ＫＩＺ－ＡＳ１、ＫＬＨＬ７、ＫＲＩＴ１、ＬＢＲ、ＬＣＡ５、ＬＯＣ１０１９２７１５７、ＬＯＣ１１１３６５２０４、ＬＲＰ２、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ３、ＭＡＴＫ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＥＲＴＫ、ＭＫＳ１、ＭＰＤＺ、ＭＴ－ＡＴＰ６、ＭＴ－ＣＯ３、ＭＴ－ＴＥ、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴＨＦＲ、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＰＨＰ１、ＮＲ２Ｅ３、ＯＣＡ２、ＯＴＸ２、ＰＡＮＫ２、ＰＡＸ６、ＰＣＡＲＥ、ＰＣＤＨ１５、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ２６、ＰＥＸ６、ＰＨＦ３、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＫＤ２、ＰＬＡ２Ｇ５、ＰＯＣ５、ＰＯＭＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＧＲ、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＯＭ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＲＳ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＣＡＰＥＲ、ＳＤＣＣＡＧ８、ＳＩＸ６、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＴＭ、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＧ１７、ＳＰＡＴＡ７、ＳＰＧ１１、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ２、ＴＭＥＭ１０７、ＴＭＥＭ２３７、ＴＭＥＭ６７、ＴＯＧＡＲＡＭ１、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＰＰ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ１、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ５９－ＩＦＴ８０、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ２１Ｂ、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ２Ａ－ＡＳ１、ＶＡＣ１４、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ、ＶＣＡＮ－ＡＳ１、ＶＨＬ、ＶＰＳ１３Ｂ、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ１９、ＷＤＲ３５、ＷＤＲ７３、ＹＡＲＳ１、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＦＹＶＥ２６、ＺＮＦ４０８。
【0074】
１つの具体的な実施形態では、前記標的療法は、ＣＲＢ１遺伝子における以下の１つまたは２つ以上の変異を標的とする：ｃ．２５７＿２５８ｄｕｐＴＧ、ｃ．２５８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４２８＿４３２ｄｅｌＧＡＴＴＣ、ｃ．４３０Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７０Ｇ＞Ｃ、ｃ．４８１ｄｕｐＧ、ｃ．４８２Ｃ＞Ｔ、ｃ．５８４Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１３＿６１９ｄｅｌ、ｃ．７１７＿７１８ｉｎｓＧ、ｃ．７５０Ｔ＞Ｇ、ｃ．９１５Ｔ＞Ａ、ｃ．９２９Ｇ＞Ａ、ｃ．９３６Ｔ＞Ｇ、ｃ．９９８Ｇ＞Ａ、ｃ．１０８４Ｃ＞Ｔ、ｃ．１１２５Ｃ＞Ｇ、ｃ．１１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．１２０８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１２６９Ｃ＞Ａ、ｃ．１２９８Ａ＞Ｇ、ｃ．１３１３Ｇ＞Ａ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．１５７６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１６０４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１６９０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７３３Ｔ＞Ａ、ｃ．１７５０Ｇ＞Ｔ、ｃ．１７６０Ｇ＞Ａ、ｃ．１８３４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１９６３ｄｅｌＣ、ｃ．２０２５Ｇ＞Ｔ、ｃ．２０４２Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８Ｇ＞Ｃ、ｃ．２１２９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２１８５＿２１８６ｉｎｓＡｌｕ、ｃ．２２１９Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２３４Ｃ＞Ｔ、ｃ．２２４５＿２２４７ｄｅｌ ３ｂｐ（ＴＣＡ）、ｃ．２２５８Ｔ＞Ｃ、ｃ．２２９０Ｃ＞Ｔ、ｃ．２３６５＿２３６７ｄｅｌ ＡＡＴ，インフレーム欠失、ｃ．２４０１Ａ＞Ｔ、ｃ．２４３８＿２４３９ｉｎｓ＞１００Ａ、ｃ．２４４１＿２４４２ｄｅｌ、ｃ．２４６５Ｇ＞Ａ、ｃ．２４７９Ｇ＞Ｔ、ｃ．２５０６Ｃ＞Ａ、ｃ．２５０９Ｇ＞Ｃ、ｃ．２５３６Ｇ＞Ａ、ｃ．２５４８＿２５５１ｄｅｌＧＧＣＴ、ｃ．２５４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２５５５Ｔ＞Ｃ、ｃ．２６１１＿２６１３ｉｎｓＴ、ｃ．２６７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．２６７６ｄｅｌＧ、ｃ．２６８１Ａ＞Ｇ、ｃ．２６８８Ｔ＞Ａ、ｃ．２８１６Ｇ＞Ａ、ｃ．２８４３Ｇ＞Ａ、ｃ．２８５３ｄｕｐＴ、ｃ．２８８４＿２８８６ｄｅｌＴＴＡ、ｃ．２９５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２９６６Ｔ＞Ｃ、ｃ．２９８３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３００２Ａ＞Ｔ、ｃ．３００８Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３５Ｔ＞Ｃ、ｃ．３０３７Ｃ＞Ｔ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ａ、ｃ．３０７４Ｇ＞Ｔ、ｃ．３１２２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２１２Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｃ、ｃ．３２９９Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３０７Ｇ＞Ａ／Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｃ、ｃ．３３２０Ｔ＞Ｇ、ｃ．３３３１Ｇ＞Ｔ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３３４３＿３３５２ｄｅｌ、ｃ．３３４７ｄｅｌＴ、ｃ．３４２７ｄｅｌＴ、ｃ．３４８２Ａ＞Ｇ、ｃ．３４９３Ｔ＞Ｃ、ｃ．３６５５Ｔ＞Ｇ、ｃ．３５４１Ｔ＞Ｃ、ｃ．３５４２ｄｕｐＧ、ｃ．３５９３Ａ＞Ｇ、ｃ．３６１３Ｇ＞Ａ、ｃ．３６５３Ｇ＞Ｔ、ｃ．３６５９＿３６６０ｄｅｌｉｎｓＡ、ｃ．３６６４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３６６８Ｇ＞Ｃ、ｃ．３６７６Ｇ＞Ｔ、ｃ．３７１３＿３７１６ｄｕｐ、ｃ．３８７９Ｇ＞Ａ、ｃ．３９１４Ｃ＞Ｔ、ｃ．３９４９Ａ＞Ｃ、ｃ．３９６１Ｔ＞Ａ、ｃ．３９８８ｄｅｌＧ、ｃ．３９８８Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９５Ｇ＞Ｔ、ｃ．３９９６Ｃ＞Ａ、ｃ．３９９７Ｇ＞Ｔ、ｃ．４０９４Ｃ＞Ａ、ｃ．４１２１＿４１３０ｄｅｌ、ｃ．４１４２Ｃ＞Ｔ、ｃ．４１４８Ｇ＞Ａ、ｃ．２１２８＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．２８４２＋５Ｇ＞Ａ、ｃ．３８７８＋１Ｇ＞Ｔ、ｃ．４００５＋１Ｇ＞Ａ、ｃ．４００５＋２Ｔ＞Ｇ、ｃ．４００６－２Ａ＞Ｇ、ｃ．４００６－１Ｇ＞Ｔ、ｃ．６１９Ｇ＞Ａ、ｃ．６１４Ｔ＞Ｃ、ｃ．１４７２Ａ＞Ｔ、ｃ．１９０３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２８０９Ｇ＞Ａ、ｃ．３１０３Ｃ＞Ｔ、ｃ．４０８２Ｇ＞Ａ、ｃ．４０６０Ｇ＞Ａ、ｃ．８６６Ｃ＞Ｔ、ｃ．１４６３Ｔ＞Ｃ、ｃ．２０３５Ｃ＞Ｇ、ｃ．２３０６＿２３０７ＧＣ＞ＡＧ、ｃ．２３０６Ｇ＞Ａ、ｃ．２７１４Ｇ＞Ａ、ｃ．２８７５Ｇ＞Ａ、ｃ．３９９２Ｇ＞Ａ。
【0075】
１つの具体的な実施形態において、前記標的治療薬は、修飾された細胞、修飾されたタンパク質、上述したような遺伝子または上述したような変異部位を標的とするＲＮＡ、および／または上述したような遺伝子または上述したような変異部位を標的とするＤＮＡを含む。
【0076】
本発明は、眼疾患に関連する研究において、上述したような方法によって製造した疾患モデルの使用を提供する。前記眼疾患は、上述したような眼疾患を含む。前記研究には、遺伝性網膜変性症に関連する疾患と腸内細菌叢との相互応答などが含まれる。
【0077】
１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルは１つの腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異が細胞によって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルは１つの腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異がＲＮＡによって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルは、２つ以上の腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異が細胞によって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は、低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルは２つの腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異がＲＮＡによって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。
【0078】
好ましくは、前記病原性変異は、上述したような遺伝子に発生するか、または、前記病原性変異は、上述したようなＣＲＢ遺伝子の変異である。
【0079】
本発明は、眼疾患に関連する研究において、上述した方法によって製造した疾患モデルキャリアの使用を提供する。前記眼疾患は、上述したような眼疾患を含む。前記研究には、遺伝性網膜変性症に関連する疾患と腸内細菌叢との相乗効果などが含まれる。
【0080】
１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルキャリアは１つの腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異が細胞によって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルキャリアは１つの腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異がＲＮＡによって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルキャリアは、２つ以上の腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異が細胞によって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は、低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルキャリアは２つの腸内細菌を感染しており、それが有する病原性変異がＲＮＡによって治療される場合、薬物の投与および非投与の有効性が観察され、前記薬物は低分子薬であり、好ましくは広域抗生物質または感染細菌を標的とする抗生物質である。
【0081】
好ましくは、前記病原性変異は、上述したような遺伝子に発生するか、または、前記病原性変異は、上述したようなＣＲＢ遺伝子の変異である。
【0082】
本発明は、眼疾患に関連する薬物のスクリーニングにおいて、上述したような疾患モデルまたは疾患モデルキャリアの使用を提供する。前記薬物は、低分子薬、化学薬物、高分子薬、生物学的薬物または天然薬物（例えば、漢方薬または漢方薬抽出物）、細胞薬物、ＲＮＡ薬物、ＤＮＡ薬物のうちの１つまたは２つ以上の組み合わせを含む。
【0083】
前記眼疾患は、上述したような眼疾患を含む。
【0084】
好ましくは、低分子化合物は抗生物質であり、前記抗生物質は当業者に一般的に知られている広域抗生物質である。
【0085】
好ましくは、前記低分子化合物は、特定の細菌を標的とする非広域抗生物質である。
【0086】
好ましくは、前記細胞は修飾された免疫細胞、例えばＴ細胞、Ｂ細胞または幹細胞の１つまたは２つ以上の組み合わせを含む。
【0087】
好ましくは、前記ＲＮＡは、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＡＳＯおよび／またはレプリコンＲＮＡを含む。
【0088】
１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルまたは疾患モデルキャリアに標的治療を施すとともに、標的治療を施した疾患モデルまたは疾患モデルキャリアと標的治療を施していない疾患モデルまたは疾患モデルキャリアに上述したような薬物を投与または非投与とし、複数の群における炎症の進行を観察し、標的治療薬の有効性を評価する。
【0089】
１つの具体的な実施形態において、前記疾患モデルまたは疾患モデルキャリアに標的治療を施すとともに、標的治療を施した疾患モデルまたは疾患モデルキャリアと標的治療を施していない疾患モデルまたは疾患モデルキャリアに上述したような薬物を投与または非投与とし、複数の群における炎症の進行を観察し、低分子薬の有効性を評価する。
【0090】
本発明に係わる化学薬物は、β－ラクタム系抗生物質（ペニシリン類、セファロスポリン類、チエナマイシン類、モノバクタム類、β－ラクタマーゼ阻害剤、メトキシペニシリン類などを含む）、アミノグリコシド系抗生物質（ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネオマイシン、リボスタマイシン、ミクロノマイシン、アストロマイシンなどを含む）、テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、クロルテトラサイクリンおよびドキシサイクリンなどを含む）、クロラムフェニコール系抗生物質（クロラムフェニコール、チアンフェニコールなどを含む）、マクロライド系抗生物質（エリスロマイシン、ロイコマイシン、エリスロマイシンエストレート、アセチルスピラマイシン、ミデカマイシン、ジョサマイシン、アジスロマイシン等を含む）、グリコペプチド系抗生物質（バンコマイシン、ノルバンコマイシン、テイコプラニン等を含む）、キノロン系抗生物質（ノルフロキサシン、オフロキサシン、シプロフロキサシン、ペフロキサシン、ガチフロキサシンを含む）、ニトロイミダゾール系抗生物質（メトロニダゾール、チニダゾール、オルニダゾール等を含む）、リファマイシン系抗生物質（リファンピシンなどを含む）、エキノカンジン系抗生物質、ポリエン系抗生物質、ピリミジン系抗生物質、アリルアミン系抗生物質、アゾール系抗生物質、他の抗生物質（ホスホマイシン、カプレオマイシン、サイクロセリン、リンコマイシン、クリンダマイシン、マイトマイシン、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、アドリアマイシン、イソニアジド、ピラジナミド、シクロスポリンなど）から選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0091】
本発明に係わる生物学的薬物は抗菌性ペプチドであり、前記抗菌性ペプチドは、昆虫抗菌性ペプチド、例えば、鱗翅目抗菌性ペプチド、双翅目抗菌性ペプチド、鞘翅目抗菌性ペプチド、蜻蛉目抗菌性ペプチド、膜翅目抗菌性ペプチド、カイコ抗菌性ペプチドなど；哺乳類抗菌性ペプチド、例えば、ブタ抗菌性ペプチド、ヒツジ抗菌性ペプチド、ウシ抗菌性ペプチド、ヒト抗菌性ペプチドなど；両生類抗菌性ペプチド：マガイニンなど；魚類、軟体動物、甲殻類動物由来の抗菌性ペプチド：ミナミウシノシタ抗菌性ペプチド、ナマズ抗菌性ペプチド、イガイ抗菌性ペプチド、エビ抗菌性ペプチドなど；植物抗菌性ペプチド：チオニンなど；細菌抗菌性ペプチド：バシトラシン、グラミシジン、ポリミキシン、およびナイシンなどから選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0092】
本発明に係わる天然薬物は、オウギ、オウセイ、トウキ、サンシチ、ハクボウコン、ダイオウタン、ウコン、バイモ、ヨクイニン、ホウハンゲ、ウタンコボク（Ｃａｌｃｉｎｅｄａｎｃｉｅｎｔ ｉｎｋ）、タンジン、ムラサキ、バンランコン、ギョセイソウ、キンギンカ、オウレン、オウゴン、ホコウエイ、バシケン、サンザシ、タイセイヨウ、レンギョウ、インチン、センシンレン、サイコ、ニシキソウ、ビャクブ、タイサン、オウバク、トチュウ、シンピ、ジャショウシ、オウレン、ゴバイシ、シカジチョウ、ウバイ、カンゾウ、セキリュウヒ、ゴミシ、ソウカクシ、カシ、クジン、ドキンピ、インヨウカク、セイコウ、またはこれらの抽出物から選ばれる１つまたは２つ以上である。
【0093】
本発明に係わる薬物は、経口薬、注射薬または外用薬であってよく、前記外用薬は、粘膜投与薬物を含み、好ましくは点眼投与薬物である。
【0094】
本発明に係わる薬物の剤形は、溶液、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射液、粉末、注射用粉末、パッチ剤、コーティング剤または粘膜投与製剤であってよく、前記粘膜投与製剤は、好ましくは点眼液、眼軟膏または眼用スプレー剤等である。
【図面の簡単な説明】
【0095】
【図1】Ｃｒｂ１ｒｄ８／ｒｄ８（ｒｄ８）－ＳＰＦマウスの遺伝子型と表現型である。そのうち、図１Ａは、Ｃｒｂ１ｒｄ８／ｒｄ８（ｒｄ８）マウスとＣｒｂ１ｗｔ／ｗｔ（Ｃ５７ＢＬ／Ｊ，「ｗｔ」と略称する。）マウスの遺伝子型ゲル電気泳動図である。図１Ｂは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスの代表的な眼底写真であり、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜鼻下側に典型的な白斑が認められた。図１Ｃは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスのＥ１８における両眼の病理学的変化を検出するためのＨ＆Ｅ染色である。
【図2】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスにおける網膜異常と網膜症の潜在的メカニズムである。そのうち、図２Ａは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスのＥ１８、Ｐ１２（開眼前）、Ｐ１５（開眼後）、８週（８Ｗ）における両眼の病理学的変化を検出するためのＨ＆Ｅ染色である。Ｒｄ８マウスは、進行性の網膜形成不全（シワや花輪）や変性を含む典型的な網膜異常を示したが、ＷＴマウスは、正常な網膜構造を示した。図２Ｂは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスのＥ１８、Ｐ１２、Ｐ１５、８Ｗにおける眼球の損傷の有無の統計データである。典型的な病変は、Ｐ１２、Ｐ１５、８ＷにおけるＲｄ８マウスの全ての網膜に見られたが、ＷＴ－ＳＰＦマウスには１つも見られなかった。ＷＴ－ＳＰＦは、Ｅ１８、Ｐ１２、Ｐ１５、８Ｗで各群ｎ＝６であり、Ｒｄ８－ＳＰＦは、Ｅ１８でｎ＝３２、Ｐ１２でｎ＝６、Ｐ１５でｎ＝８であった。図２Ｃは、Ｒｄ８マウスの網膜の上部（病変なし）領域と下部（病変あり）領域におけるＤＥＧｓのボルケーノプロット解析である。Ｓｌａｍｆ１（シグナル伝達リンパ球活性化分子ファミリーメンバー１）とＮｃｆ４（好中球細胞質因子）は、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜症で増殖の倍率が最も高い２つの遺伝子である。図２Ｄは、ＤＥＧｓのＩＰＡ機能解析である。図２Ｅは、免疫蛍光染色でＲｄ８マウスの網膜病変部にＩＢＡ１＋ミクログリア（赤色）が多数認められたことを示している。
【図3】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜の上部領域および下部領域における遺伝子発現プロファイルを比較したＲＮＡ配列解析である。そのうち、図３Ａは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの上部（病変なし）領域と下部（病変あり）領域を示したグラフである。図３Ｂは、ＲＮＡ－ｓｅｑ解析の結果として、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの発現には、網膜の上部領域と下部領域で少なくとも２倍の差があったことを示している（Ｐ＜０．０５）。図３Ｃは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜の上部領域と下部領域における１７９ ＤＥＧｓの発現パターンを示している。
【図4】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜病変内の細菌の同定である。そのうち、図４Ａは、主座標分析（ＰＣｏＡ）であり、Ｒｄ８マウスの網膜組織内の細菌組成がＷＴマウスと有意に異なることを示している。図４Ｂは、メタゲノムシーケンス解析によるＲｄ８マウスの網膜の上部（Ｓ）および下部（Ｉ）組織の微生物種組成の同定（ｎ＝４）である。図４Ｃは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウス（４週齢）の網膜細菌１６ｓｒＤＮＡとｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙの蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション検出である。図４Ｄは、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）によるＲｄ８マウスの網膜病変内の細菌分布（陽性対照は大腸菌群である。）である。
【図5】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスにおける網膜接着結合の破壊である。そのうち、図５Ａは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜におけるＣＲＢ１（赤色）の免疫蛍光染色を示し、ＢＭはブルッフ膜、ＣＣは絨毛毛細血管、ＢＬは基底膜である。図５Ｂは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜の外膜の接着結合の透過型電子顕微鏡観察を示し、赤い矢印は接着結合、ＡＪは接着結合、ＯＬＭは外膜、ＯＮＬは外核層、ＩＳは内膜を意味する。図５Ｃは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜色素上皮（ＲＰＥ）における基底層の接着溶解、絨毛毛細血管基底層の歪み、コラーゲン層の乱れを透過型電子顕微鏡で観察した結果であり、ＣＣは絨毛毛細血管、ＣＨは脈絡膜、ＢＬは基底膜を意味する。図５Ｄは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスにおけるブルッフ膜の厚さを統計解析した結果であり、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１であった。
【図6A】透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）で示したＲｄ８－ＳＰＦマウスの外膜（ＯＬＭ）における接着結合切断（ＡＪ）と外核層（ＯＮＬ）である。
【図6B】透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）で示したＲｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスのブルッフ膜の厚さである。
【図7】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスにおける結腸上皮バリア機能障害およびそれに伴う炎症である。そのうち、図７Ａは、Ｒｄ８およびＷＴマウスの胃腸の異なる部位におけるＲｄ８網内細菌の相対的な存在量を示す（ｎ＝５）。図７Ｂ～Ｄは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスの結腸細胞におけるＣＲＢ１タンパク質（Ｂ）、ファロイジン（Ｃ）およびオクルディン（Ｄ）の免疫蛍光染色を示す。図７Ｅは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスにおけるオクルディンの相対強度の統計解析である。図７Ｆは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスの結腸上皮細胞におけるクローディン１発現のウェスタンブロット検出である。図７Ｇは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスにおけるクローディン１の相対強度の統計解析である。図７Ｈは、透過型電子顕微鏡で観察したＲｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスの結腸上皮間の接着結合および密着結合である。図７Ｉ～Ｌは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスにおける上皮微絨毛の数（Ｉ）、微絨毛の長さ（Ｊ）、微絨毛の幅（Ｋ）、および完全な接着結合の総数（Ｌ）の統計解析である。図７Ｍ～Ｎは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスにおけるＴｎｆａ、Ｉｌ１ｂ、Ｉｌ１２ａ、（Ｍ）、およびムチン２（Ｎ）のｍＲＮＡ発現レベルの比較である。
【図8】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの胃腸の異なる部位における細菌叢の微生物種組成である。そのうち、図８Ａ～Ｆは、Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ距離に基づくＷＴマウス（ｎ＝５）およびＲｄ８マウス（ｎ＝５）の胃（図８Ａ）、空腸（図８Ｂ）、回腸（図８Ｃ）、盲腸（図８Ｄ）、結腸（図８Ｅ）および直腸（図８Ｆ）を含む消化管サンプルの微生物種組成の主座標分析（ＰＣｏＡ）である。図８Ｇは、ＰＣｏＡによってＲｄ８マウスとＷＴ－ＳＰＦマウスの下部消化管（盲腸、結腸、直腸）の微生物組成（Ｈ～Ｊ）を組分けしてＲｄ８マウスとＷＴマウスの盲腸（Ｈ）、結腸（Ｉ）、直腸（Ｊ）におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの相対的存在量を比較する。データは平均値±ＳＥＭで示し、＊Ｐ＜０．０５である。
【図9】Ｒｄ８マウスの盲腸における密着結合と接着結合である。そのうち、図９Ａは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスの盲腸腸管細胞におけるＣＲＢ１タンパク質（緑）の免疫蛍光染色である。図９Ｂは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスの盲腸腸管細胞におけるオクルディン（赤）の免疫蛍光染色である。図９Ｃは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスのオクルディンの相対強度の統計解析であり、＊Ｐ＜０．０５である。図９Ｄは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスの盲腸におけるクローディン１発現のウェスタンブロット検出である。図９Ｅは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＷＴ－ＳＰＦマウスにおけるクローディン１の相対強度の統計解析であり、ＮＳは有意ではないことを表す。図９Ｆは、透過型電子顕微鏡検査により、盲腸の上皮バリアに正常な密着結合と接着結合が観察され、ＭＶはマイクロバブル、ＭＣはミトコンドリアである。
【図10】図１０Ａは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスにおける結腸上皮と密着結合（ＴＪ）との間の接着結合（ＡＪ）の透過型電子顕微鏡観察結果を示し、ＭＶはマイクロバブル、ＭＣはミトコンドリアである。図１０Ｂは、フローサイトメトリーによるＲｄ８マウスおよびＷＴマウスの末梢血中の蛍光＋細菌／細胞の頻度を示す。
【図11】Ｒｄ８－ＳＰＦマウスにおける腸管上皮バリア機能の破壊である。そのうち、図１１Ａは、腸管ＦＩＣＴ－デキストラン透過性アッセイにより、血清蛍光強度がＲｄ８マウスでＷＴマウスより有意に高かったことを示し、＊＊＊Ｐ＜０．００１である。図１１Ｂは、ｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙ標識による糞便微生物叢移植法を用いて、Ｒｄ８マウスとＷＴマウスの末梢血中の蛍光＋細菌／細胞の割合を比較し、＊Ｐ＜０．０５である。図１１Ｃ～Ｄは、蛍光顕微鏡（Ｃ）および免疫蛍光染色（Ｄ）の両方においてＲｄ８マウスの網膜症でｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙ＋細菌が検出された。図１１Ｆ～Ｇは、ＤＳＳ投与１３日後のＲｄ８マウスとＷＴマウスの結腸長、血清細菌１６ｓｒｒｎａ（Ｆ）および細菌ＬＰＳ（Ｇ）レベルの比較であり、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１である。図１１Ｈは、２．５％ＤＳＳで処置したＲｄ８（ｎ＝２０）マウスおよびＷＴ（ｎ＝１９）マウスの体重の毎日のモニタリングである。図１１Ｉは、２．５％ＤＳＳで処置したＲｄ８（ｎ＝２０）マウスおよびＷＴ（ｎ＝１９）マウスのカプランマイヤー曲線である。
【図12】Ｒｄ８ ＧＦマウスおよびＲｄ８ ＧＦ ＳＰＦマウスの網膜表現型である。そのうち、図１２Ａは、４週、８週、１２週、１６週におけるＲｄ８－ＳＰＦマウスおよびＲｄ８ ＧＦマウスの代表的な眼底画像を示す。図１２Ｂは、Ｅ１８、Ｐ１２、Ｐ１５、および８ＷにおけるＲｄ８－ＧＦマウスの両眼の網膜の組織学的観察を示す。図１２Ｃは、Ｒｄ８－ＧＦマウスの網膜の細菌１６ｓｒＤＮＡおよびｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙの蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション染色である。図１２Ｄは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウス、Ｒｄ８ ＧＦマウス、およびＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜におけるＩＢＡ１（赤）の免疫蛍光染色である。図１２Ｅは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウス、Ｒｄ８ ＧＦマウス、およびＷＴ－ＳＰＦマウスのＯＮＬにおけるＩＢＡ１＋ミクログリアのパーセンテージを示し、＊＊＊Ｐ＜０．００１であり、ＮＳは有意ではないことを表す。図１２Ｆは、Ｒｄ８－ＳＰＦマウス、Ｒｄ８－ＧＦマウスおよびＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜ＺＯ－１（赤）およびファロイジン（緑）タンパク質の免疫蛍光染色である。図１２Ｇは、Ｈ＆Ｅ染色により、生後ＳＰＦ環境で飼育したＲｄ８－ＧＦマウス（Ｒｄ８－ＧＦ－ＳＰＦマウス）におけるＰ１５および８Ｗ網膜症を検出した。
【発明を実施するための形態】
【0096】
以下、本発明の実施例における技術的解決手段を明確かつ完全に説明する。以下に記載される実施例では、Ｃｒｂ１遺伝子変異マウスをＳＰＦ環境下で飼育するモデル化方法のみを用い、網膜における局所的な炎症反応の存在および病変部位における細菌の存在を検証することにより、前記網膜モデルが細菌を感染していることを判定した。さらに次の実験により、前記細菌が腸からのものであることが検証された。この具体的な実施例は、他のモデル化方法、例えば、より複雑な微生物学的条件を有する環境での飼育、あるいは、腸内由来の微生物または腸内微生物と同じ微生物を眼組織に投与することで、眼組織を直接的または間接的に上述したような微生物と接触させること等を排除するものではない。
【0097】
説明した実施例は、本発明の実施例の一部に過ぎず、全てでないことは明らかである。本発明における実施例に基づき、当業者によって創造的な労力を要することなく得られる他の全ての実施例は、本発明の保護範囲に含まれる。
【0098】
１．マウス
Ｒｄ８変異を有するＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Ｃｒｂ１ｒｄ８／Ｒｄ８、「Ｒｄ８マウス」と名付ける。）およびＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｒｂ１ｗｔ／ｗｔ、「ｗｔマウス」と名付ける。）は、北京維通利華実験動物技術有限公司から購入し、中山眼科センターの動物施設で特定病原体フリー（ＳＰＦ）条件下で処置した。無菌（ＧＦ）ＲＤ８マウスは、孫中山大学第一附属病院の動物施設において、雌のＲＤ８マウスの胚から作製した。ＧＦマウスは無菌状態で維持され、ＧＦユニットの無菌性を保証するために、施設のスタッフにより糞便サンプルについて微生物および寄生虫を毎週検査された。マウスの遺伝子型は上述したように判定された（Ｍａｔｔａｐａｌｌｉｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。２系統のマウスのＣｒｂ１遺伝子型が確認された（図４Ａ）。全ての動物実験は、中山眼科センターの動物実験委員会の承認を得ており、かつ、「眼科および視覚研究における動物の使用に関するＡＲＶＯ声明」に準じる。
Ｒｄ８変異を有するＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Ｃｒｂ１ｒｄ８／Ｒｄ８、「Ｒｄ８マウス」と名付ける。）およびＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｒｂ１ｗｔ／ｗｔ、「ｗｔマウス」と名付ける。）は、北京維通利華実験動物技術有限公司から購入し、中山眼科センターの動物施設で特定病原体フリー（ＳＰＦ）条件下で処置した。無菌（ＧＦ）ＲＤ８マウスは、孫中山大学第一附属病院の動物施設において、雌のＲＤ８マウスの胚から作製した。ＧＦマウスは無菌状態で維持され、ＧＦユニットの無菌性を保証するために、施設のスタッフにより糞便サンプルについて微生物および寄生虫を毎週検査された。マウスの遺伝子型は上述したように判定された（Ｍａｔｔａｐａｌｌｉｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。２系統のマウスのＣｒｂ１遺伝子型が確認された（図４Ａ）。全ての動物実験は、中山眼科センターの動物実験委員会の承認を得ており、かつ、「眼科および視覚研究における動物の使用に関するＡＲＶＯ声明」に準じる。
【0099】
２．方法
２．１ グループ分け
マウスは頸椎脱臼により死なせ、眼球を摘出し、４℃のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で、２４時間固定した。サンプルをＰＢＳで３回洗浄し、一連のアルコールで脱水し、キシレンで２回脱水した後、パラフィンワックス内に包埋し、ミクロトーム（ＲＭ ２２３； Ｌｅｉｃａ，Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｈｅｓｓｅ－Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて１０μｍで連続スライスした。切片はヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。Ｈ＆Ｅ画像はＩｍａｇｅｒ．Ｚ２（Ｚｅｉｓｓ）で得た。
２．１ グループ分け
マウスは頸椎脱臼により死なせ、眼球を摘出し、４℃のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で、２４時間固定した。サンプルをＰＢＳで３回洗浄し、一連のアルコールで脱水し、キシレンで２回脱水した後、パラフィンワックス内に包埋し、ミクロトーム（ＲＭ ２２３； Ｌｅｉｃａ，Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｈｅｓｓｅ－Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて１０μｍで連続スライスした。切片はヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。Ｈ＆Ｅ画像はＩｍａｇｅｒ．Ｚ２（Ｚｅｉｓｓ）で得た。
【0100】
眼球を摘出し、４％ＰＦＡに室温で５分間放置した後、眼杯を剥離して４５分間固定し、結腸組織を摘出し、４％ＰＦＡに室温で４時間固定した後、ＰＢＳで洗浄し、分離した眼杯と結腸を３０％ショ糖で一晩浸潤させて凍結保護し、ＯＣＴ化合物（Ｃａｔ． ４５８３； ＳＡＫＵＲＡ，ＵＳＡ）に包埋し、スライスする前まで－８０℃で保存した。全ての免疫染色の目的で切片を１２μｍで切断した。
【0101】
組織切片を１０％ロバ血清／ＰＢＳＴ（０．１％ ｔｒｉｔｏｎｘ－１００／ＰＢＳ）で３０分間ブロックし、その後、一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳＴで洗浄後、蛍光染料標識二次抗体により、切片をインキュベートし、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ－Ｇ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）で固定した。ファロイジン（Ａ１２３７９；Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）染色は、二次抗体を省略した以外、同じ免疫組織化学的方法で行われた。ＡｐｏＴｏｍｅ（Ｚｅｉｓｓ）にＺｅｉｓｓ共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ８８０； Ｚｅｉｓｓ，Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とＩｍａｇｅｒ．Ｚ２を装着した。この研究で使用した主な抗体は、抗Ｃｒｂ１（ＰＡ５－６６３７３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ；１：５０）、抗Ｉｂａ１（ａｂ１７８８４６、Ａｂｃａｍ；１：５００）、抗－ＺＯ－１（６１－７３００、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ；１：５００）、抗Ｏｃｃｌｕｄｉｎ（ＯＣ－３Ｆ１０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１：２００）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ４８８ファロイジン（Ａ１２３７９、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ；１：５００）である。
【0102】
２．２ 眼底撮影
マウスは麻酔をかけられ、瞳孔が拡張した。ヒドロキシプロピルメチルセルロース点眼液を定期的に点眼し、角膜の湿潤を保った。マウス眼底写真はＭｉｃｒｏｎ ＩＶマウス眼底カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）により得られた。
マウスは麻酔をかけられ、瞳孔が拡張した。ヒドロキシプロピルメチルセルロース点眼液を定期的に点眼し、角膜の湿潤を保った。マウス眼底写真はＭｉｃｒｏｎ ＩＶマウス眼底カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）により得られた。
【0103】
２．３ 網膜上下部のＲＮＡ－ｓｅｑ解析
総ＲＮＡは、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅＴＭ全ＤＮＡ・ＲＮＡ精製キット（ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）を用いて網膜の上部および下部から抽出された。ＲＮＡ濃度は、Ｑｂｉｔ－ＲＮＡ－ＨＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｋｉｔを用いて測定した。ＶＡＨＴＳＴＭ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｓｅｑ （Ｈ／Ｍ／Ｒ） Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ｖａｚｙｍｅ，Ｃｈｉｎａ）を用いて、メーカー提供の標準プロトコールに従ってシーケンスライブラリーを調製し、ＭＧＩＳＥＱ ２０００ＲＳプラットフォームでシーケンスした。
総ＲＮＡは、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅＴＭ全ＤＮＡ・ＲＮＡ精製キット（ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）を用いて網膜の上部および下部から抽出された。ＲＮＡ濃度は、Ｑｂｉｔ－ＲＮＡ－ＨＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｋｉｔを用いて測定した。ＶＡＨＴＳＴＭ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｓｅｑ （Ｈ／Ｍ／Ｒ） Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ｖａｚｙｍｅ，Ｃｈｉｎａ）を用いて、メーカー提供の標準プロトコールに従ってシーケンスライブラリーを調製し、ＭＧＩＳＥＱ ２０００ＲＳプラットフォームでシーケンスした。
【0104】
オリジナルの測定値は、まずＦａｓｔＱＣ（ｖ０．１１．８）とｃｕｔａｄａｐｔ（ｖ１．１５）によって品質管理のために評価された。クリーンな測定値は、ＨＩＳＡＴ２（ｖ２．１．０）を用いてマウスゲノム（ｍｍ１０）とアライメントした。遺伝子発現データをＲソフトウェア（ｖ３．６．１）のＤＥＳｅｑ２パッケージにインポートし、差分発現解析を行った。差分発現遺伝子（ＤＥＧｓ）をＩｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｐａｔｈｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ （ＩＰＡ）にインポートし、機能濃縮解析を行った。
【0105】
２．４ メタゲノムシーケンス解析
網膜サンプルを収集し、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅＴＭ Ｉｎｔａｃｔ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）を用いてＤＮＡを抽出した。胃、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸の内容物を収集し、ＱＩＡａｍｐ ＰｏｗｅｒＦｅｃａｌ ＤＮＡ ｋｉｔ （ＱＩＡＧＥＮ）を用いてＤＮＡを抽出した。濃度を測定した後、メーカー提供の標準化されたプロトコールに従って、ＶＡＨＴＳＴＭ ＭＧＩ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｖａｚｙｍｅ、中国）を用いて、ＤＮＡシーケンスライブラリーを調製した。メタゲノムシーケンス解析は、ＭＧＩＳＥＱ－２０００ＲＳを用いて行った。オリジナルの測定値は、Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ（ｖ０．３６）およびＰＲＩＮＳＥＱ（ｖ０．２０．４）によって品質管理のためにフィルタリングした。マウスリードはＫｎｅａｄＤａｔａ（ｖ０．６．１）（ｈｔｔｐｓ：／／ｂｉｔｂｕｃｋｅｔ．ｏｒｇ／ｂｉｏｂａｋｅｒｙ／ｋｎｅａｄｄａｔａ）を用いて除去した。Ｋｒａｋｅｎ２（ｖ２．０．９）を使用して、マウス以外のクリアリードを事前に構築したＭｉｎｉＫｒａｋｅｎデータベースにマッピングする。分類結果は信頼度０．２０でスクリーニングした。ネガティブブランクコントロールをサンプルと一緒に処理した。ネガティブブランクコントロールグループに存在する全ての生物種が除去された。
網膜サンプルを収集し、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅＴＭ Ｉｎｔａｃｔ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）を用いてＤＮＡを抽出した。胃、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸の内容物を収集し、ＱＩＡａｍｐ ＰｏｗｅｒＦｅｃａｌ ＤＮＡ ｋｉｔ （ＱＩＡＧＥＮ）を用いてＤＮＡを抽出した。濃度を測定した後、メーカー提供の標準化されたプロトコールに従って、ＶＡＨＴＳＴＭ ＭＧＩ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｖａｚｙｍｅ、中国）を用いて、ＤＮＡシーケンスライブラリーを調製した。メタゲノムシーケンス解析は、ＭＧＩＳＥＱ－２０００ＲＳを用いて行った。オリジナルの測定値は、Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ（ｖ０．３６）およびＰＲＩＮＳＥＱ（ｖ０．２０．４）によって品質管理のためにフィルタリングした。マウスリードはＫｎｅａｄＤａｔａ（ｖ０．６．１）（ｈｔｔｐｓ：／／ｂｉｔｂｕｃｋｅｔ．ｏｒｇ／ｂｉｏｂａｋｅｒｙ／ｋｎｅａｄｄａｔａ）を用いて除去した。Ｋｒａｋｅｎ２（ｖ２．０．９）を使用して、マウス以外のクリアリードを事前に構築したＭｉｎｉＫｒａｋｅｎデータベースにマッピングする。分類結果は信頼度０．２０でスクリーニングした。ネガティブブランクコントロールをサンプルと一緒に処理した。ネガティブブランクコントロールグループに存在する全ての生物種が除去された。
【0106】
２．５ ＦＩＴＣ－デキストランｉｎ ｖｉｖｏ腸管透過性アッセイ
バリア機能を評価するために、ＦＩＴＣ標識デキストラン法を用いてｉｎ ｖｉｖｏ透過性アッセイを行った。餌と水を一晩除去し、８週齢のマウスに１００ｇ（体重）あたり５０ｍｇのＦＩＴＣ標識デキストラン（ＦＤ－７０；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を経口投与した。投与５時間後に血清を採取し、各サンプルの蛍光強度（励起、４９２ｎｍ；発光、５２５ｎｍ）を測定した。
バリア機能を評価するために、ＦＩＴＣ標識デキストラン法を用いてｉｎ ｖｉｖｏ透過性アッセイを行った。餌と水を一晩除去し、８週齢のマウスに１００ｇ（体重）あたり５０ｍｇのＦＩＴＣ標識デキストラン（ＦＤ－７０；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を経口投与した。投与５時間後に血清を採取し、各サンプルの蛍光強度（励起、４９２ｎｍ；発光、５２５ｎｍ）を測定した。
【0107】
２．６ フローサイトメトリー
ＷＴマウスとＲｄ８マウスを一晩絶食させ、大腸菌（ＲＦＰを安定して発現するように設計した。）を１ｘ１０９Ｅで胃内投与した。胃内投与６時間後に、マウスを安楽死させ、末梢血４００μＬをＡＣＫ溶解バッファー（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）４ｍＬの入ったチューブに静かにピペッティングし、ＲＴで３～５分間培養した。３００ｘｇで５分間遠心した後、細胞を固定・透過処理し（Ｃｙｔｏｆｉｘ／ｐｅｒｍ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）、フローサイトメトリー（ＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １０，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で分析した。
ＷＴマウスとＲｄ８マウスを一晩絶食させ、大腸菌（ＲＦＰを安定して発現するように設計した。）を１ｘ１０９Ｅで胃内投与した。胃内投与６時間後に、マウスを安楽死させ、末梢血４００μＬをＡＣＫ溶解バッファー（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）４ｍＬの入ったチューブに静かにピペッティングし、ＲＴで３～５分間培養した。３００ｘｇで５分間遠心した後、細胞を固定・透過処理し（Ｃｙｔｏｆｉｘ／ｐｅｒｍ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）、フローサイトメトリー（ＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １０，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で分析した。
【0108】
２．７ 電子顕微鏡組織作製
安楽死直後、結腸と眼球を収集し、リン酸緩衝グルタルアルデヒド・ホルムアルデヒド溶液に室温で１時間固定した。結腸は２ｍｍのブロックに切断した。前眼部を切除し、後眼部を２ｍｍ×２ｍｍのブロックに切断した。摘出した組織は新鮮な固定液に１２時間放置した後、１％四酸化オスミウムで固定し、脱水後、エポン・レジンに包埋した。光学顕微鏡下でトルイジンブルーで染色し、マイクロメートル厚の切片上で関心領域を事前にスクリーニングした。次に８０ｎｍの超音波画像を収集し、酢酸ウラニルとクエン酸鉛で再染色した。超音波処理した切片を透過型電子顕微鏡で観察した。
安楽死直後、結腸と眼球を収集し、リン酸緩衝グルタルアルデヒド・ホルムアルデヒド溶液に室温で１時間固定した。結腸は２ｍｍのブロックに切断した。前眼部を切除し、後眼部を２ｍｍ×２ｍｍのブロックに切断した。摘出した組織は新鮮な固定液に１２時間放置した後、１％四酸化オスミウムで固定し、脱水後、エポン・レジンに包埋した。光学顕微鏡下でトルイジンブルーで染色し、マイクロメートル厚の切片上で関心領域を事前にスクリーニングした。次に８０ｎｍの超音波画像を収集し、酢酸ウラニルとクエン酸鉛で再染色した。超音波処理した切片を透過型電子顕微鏡で観察した。
【0109】
２．８ 蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）
この研究では以下のオリゴヌクレオチドプローブを用いた：ＥＵＢ３３８，５’－ＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＴＡＧ－ＧＡＧＴ－３’（Ａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０）。プローブの５’末端には１つの一級アミノ基があり、これにテトラメチルローダミンイソチオシアネートが共有結合する。染料オリゴヌクレオチド結合体（１００μＭ）を－２０℃で保存した。
この研究では以下のオリゴヌクレオチドプローブを用いた：ＥＵＢ３３８，５’－ＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＴＡＧ－ＧＡＧＴ－３’（Ａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０）。プローブの５’末端には１つの一級アミノ基があり、これにテトラメチルローダミンイソチオシアネートが共有結合する。染料オリゴヌクレオチド結合体（１００μＭ）を－２０℃で保存した。
【0110】
仮固定した網膜切片をＤＥＰＣ処理ＰＢＳで３回リンスした。０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００／ＤＥＰＣ処理ＰＢＳで処理した後、切片をプローブ（５００ｎＭ）に３７℃で一晩ハイブリダイズさせ、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ－Ｇでマウントした。
【0111】
２．９ リアルタイム定量ＰＣＲによる結腸組織における遺伝子発現レベルの検出
新鮮なマウスの結腸組織（～１ｃｍ）を液体窒素内で急速凍結し、粉砕後、ＲＮＡ抽出溶解バッファーで溶解した。その後、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓキットを用いて総ＲＮＡを精製し、Ｔａｋａｒａ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴキットとｇＤＮＡイレーザーを用いてｃＤＮＡに逆転写した。対応する遺伝子の発現レベルをｑＰＣＲにより検出した。データはβ－アクチンで正規化した。
新鮮なマウスの結腸組織（～１ｃｍ）を液体窒素内で急速凍結し、粉砕後、ＲＮＡ抽出溶解バッファーで溶解した。その後、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓキットを用いて総ＲＮＡを精製し、Ｔａｋａｒａ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴキットとｇＤＮＡイレーザーを用いてｃＤＮＡに逆転写した。対応する遺伝子の発現レベルをｑＰＣＲにより検出した。データはβ－アクチンで正規化した。
【0112】
２．１０ ＱＰＣＲによる血漿中の１６ｓｒｒｎａ遺伝子レベルの定量測定
２．５％ＤＳＳで１３日間処理した後、ＷＴマウスとＲｄ８マウスの全血から血漿を単離した。約５０μＬの血漿を取り、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅＴＭ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ、米国）を用いて総核酸を分離した。沈殿した核酸を２０μＬのヌクレアーゼを含まない水に溶解した。ｑＰＣＲ分析（ＣｈａｍＱ－ＳＹＢＲ－Ｃｏｌｏｒ－ｑＰＣＲ－Ｍａｓｔｅｒ－Ｍｉｘ、Ｖａｚｙｍｅ、中国）は、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ９６システム（Ｒｏｃｈｅ、米国）を用いて行った。全てのサンプルのＤＮＡ濃度が極めて低かったため、各サンプルを同じ体積でテンプレートとして使用した（２０μＬ中４μＬ）。全細菌量は、以下のユニバーサル１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子プライマーを用いて測定した：２７Ｆ ５’－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３’，５３４Ｒ ５’－ＧＣＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧ－３’。
２．５％ＤＳＳで１３日間処理した後、ＷＴマウスとＲｄ８マウスの全血から血漿を単離した。約５０μＬの血漿を取り、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅＴＭ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ、米国）を用いて総核酸を分離した。沈殿した核酸を２０μＬのヌクレアーゼを含まない水に溶解した。ｑＰＣＲ分析（ＣｈａｍＱ－ＳＹＢＲ－Ｃｏｌｏｒ－ｑＰＣＲ－Ｍａｓｔｅｒ－Ｍｉｘ、Ｖａｚｙｍｅ、中国）は、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ９６システム（Ｒｏｃｈｅ、米国）を用いて行った。全てのサンプルのＤＮＡ濃度が極めて低かったため、各サンプルを同じ体積でテンプレートとして使用した（２０μＬ中４μＬ）。全細菌量は、以下のユニバーサル１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子プライマーを用いて測定した：２７Ｆ ５’－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３’，５３４Ｒ ５’－ＧＣＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧ－３’。
【0113】
２．１１ 酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
各サンプルは１００μＬの血漿で直接測定した。血漿中のＬＰＳ濃度は、酵素結合免疫吸着キット（ＳＥＢ５２６Ｇｅ；Ｃｌｏｕｄ－Ｃｌｏｎｅ Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）により測定した。
各サンプルは１００μＬの血漿で直接測定した。血漿中のＬＰＳ濃度は、酵素結合免疫吸着キット（ＳＥＢ５２６Ｇｅ；Ｃｌｏｕｄ－Ｃｌｏｎｅ Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）により測定した。
【0114】
２．１２ Ｒｄ８マウス体内における蛍光ｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙ標識腸内細菌のコロニー形成
新鮮な糞便サンプルを、滅菌１ｘＰＢＳが入った５０ｍｌコニカルチューブに収集し、ホモジナイズするまで回転させた。内容物を０．２２μｍフィルター（ミリポア）でろ過して糞便残渣を除去し、腸内微生物叢を遠心分離した後、ＲＴでｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙとともに３０分間インキュベートした。ｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙで標識した腸内細菌をＰＢＳ中にて１ｘ１０８ｃｆｕ／マウスで胃内投与した。胃内投与２４時間後、マウスの網膜切片を採取し観察した。
新鮮な糞便サンプルを、滅菌１ｘＰＢＳが入った５０ｍｌコニカルチューブに収集し、ホモジナイズするまで回転させた。内容物を０．２２μｍフィルター（ミリポア）でろ過して糞便残渣を除去し、腸内微生物叢を遠心分離した後、ＲＴでｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙとともに３０分間インキュベートした。ｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙで標識した腸内細菌をＰＢＳ中にて１ｘ１０８ｃｆｕ／マウスで胃内投与した。胃内投与２４時間後、マウスの網膜切片を採取し観察した。
【0115】
２．１３ デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）による結腸炎の実験的研究
マウスに２．５％ＤＳＳ（ＭＷ ３６０００－５００００ｄ、Ｙｅａｓｅｎ、中国）を飲用水経由で長期経口投与することにより、腸炎を誘発した。体重は０日目から１３日目まで毎日モニターし、１３日目にマウスを殺し、結腸長を測定した。生存解析のために、マウスに２．５％ＤＳＳを飲用水で４３日間自由摂取させ、４３日間２４時間ごとにマウスの死亡状況をモニターした。
マウスに２．５％ＤＳＳ（ＭＷ ３６０００－５００００ｄ、Ｙｅａｓｅｎ、中国）を飲用水経由で長期経口投与することにより、腸炎を誘発した。体重は０日目から１３日目まで毎日モニターし、１３日目にマウスを殺し、結腸長を測定した。生存解析のために、マウスに２．５％ＤＳＳを飲用水で４３日間自由摂取させ、４３日間２４時間ごとにマウスの死亡状況をモニターした。
【0116】
２．１４ 腸内共生生物の枯渇
アンピシリンの広域抗生物質混合物（Ａ；１ｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ）、メトロニダゾール（Ｍ；１ｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ）、ネオマイシン（Ｎ；１ｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ）、バンコマイシン（Ｖ；５００ｍｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ（ＡＭＮＶ））を、妊娠中の雌マウスに飲料水として投与し、離乳後の仔マウスにも継続投与した。対照群のマウスは、同じラック上の従来の装置に入れられた。
アンピシリンの広域抗生物質混合物（Ａ；１ｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ）、メトロニダゾール（Ｍ；１ｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ）、ネオマイシン（Ｎ；１ｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ）、バンコマイシン（Ｖ；５００ｍｇ／Ｌ；Ｓｉｇｍａ（ＡＭＮＶ））を、妊娠中の雌マウスに飲料水として投与し、離乳後の仔マウスにも継続投与した。対照群のマウスは、同じラック上の従来の装置に入れられた。
【実施例】
【0117】
実施例１ モデル構築
Ｃｒｂ１ｒｄ８／ｒｄ８（ｒｄ８）マウスとＣｒｂ１ｗｔ／ｗｔ（Ｃ５７ＢＬ／Ｊ、「ｗｔ」と名付ける。）マウスの網膜の微小環境特性を観察した（図１Ａ）。特定の病原体（Ｒｄ８－ＳＰＦ）を含まない環境で飼育したＲｄ８マウスの表現型を観察したところ、眼底検査で下眼部鼻下側に白斑が認められ（図１Ｂ）、進行性の網膜形成不全（シワや花輪）、網膜の組織学的変性（Ｈ＆Ｅ染色）（図２Ａ）などを含む全ての典型的な網膜症状が認められた。その結果から、Ｒｄ８マウス３２匹中７匹が出生前に軽度の網膜形成不全（Ｅ１８）を発症した（図２Ａおよび図２Ｂ）。また、Ｅ１８での異常は全て片側性に発生した（図２Ａおよび図１Ｃ）。一方、網膜シワや花輪などの典型的な病変は、Ｐ１２（開眼前）、Ｐ１５（開眼後）および８週齢（８Ｗ）のＲｄ８マウスの全ての網膜で確認できたが、ＷＴ－ＳＰＦマウスでは一匹もなかった（図２Ａおよび図２Ｂ）。このデータから、Ｒｄ８マウスの網膜異常は胎児期Ｅ１８で既に発生しており、Ｃｒｂ１変異の遺伝的影響下で眼内環境が網膜の表現型を左右することが示された。
Ｃｒｂ１ｒｄ８／ｒｄ８（ｒｄ８）マウスとＣｒｂ１ｗｔ／ｗｔ（Ｃ５７ＢＬ／Ｊ、「ｗｔ」と名付ける。）マウスの網膜の微小環境特性を観察した（図１Ａ）。特定の病原体（Ｒｄ８－ＳＰＦ）を含まない環境で飼育したＲｄ８マウスの表現型を観察したところ、眼底検査で下眼部鼻下側に白斑が認められ（図１Ｂ）、進行性の網膜形成不全（シワや花輪）、網膜の組織学的変性（Ｈ＆Ｅ染色）（図２Ａ）などを含む全ての典型的な網膜症状が認められた。その結果から、Ｒｄ８マウス３２匹中７匹が出生前に軽度の網膜形成不全（Ｅ１８）を発症した（図２Ａおよび図２Ｂ）。また、Ｅ１８での異常は全て片側性に発生した（図２Ａおよび図１Ｃ）。一方、網膜シワや花輪などの典型的な病変は、Ｐ１２（開眼前）、Ｐ１５（開眼後）および８週齢（８Ｗ）のＲｄ８マウスの全ての網膜で確認できたが、ＷＴ－ＳＰＦマウスでは一匹もなかった（図２Ａおよび図２Ｂ）。このデータから、Ｒｄ８マウスの網膜異常は胎児期Ｅ１８で既に発生しており、Ｃｒｂ１変異の遺伝的影響下で眼内環境が網膜の表現型を左右することが示された。
【0118】
実施例２ モデル構築したマウス（Ｒｄ８－ＳＰＦ）の網膜における病変内病原体の存在とそれに関連する局所免疫応答の検出
Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの上領域（病変なし）と下領域（病変あり）における遺伝子発現プロファイルを比較するため、ＲＮＡ－ｓｅｑ技術を用いてトランスクリプトーム解析を行った（図３Ａ）。ＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜上領域と下領域との間で発現パターンに差（２倍変化、Ｐ＜０．０５）がある遺伝子を取り除いた後、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜上領域と下領域との間で発現に少なくとも２倍の差（Ｐ＜０．０５）がある遺伝子（ＤＥＧ）が１７９個見つかったことが示された（図３Ｂおよび図２Ｃ）。Ｒｄ８－ＳＰＦマウスでは、これら１７９個のＤＥＧのほとんどが欠損した下半区域で高発現していた（図３Ｃ）。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ （ＩＰＡ）ツールを用いたこれらのＤＥＧの機能解析から、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜症で高発現した全てのＤＥＧにおいて、細菌およびウイルスの認識に関与する遺伝子が有意に濃縮されていることが示された（図２Ｄ）。重要なことは、病変において最も高い乗数的増加を示した上位２つの遺伝子、Ｎｃｆ４とＳｌａｍｆ１は、ともに食細胞の抗菌応答の制御因子であったことである。このデータにより、Ｒｄ８網膜における病変内病原体とそれに関連する局所免疫応答の存在を示唆しており、これらの結果は、炎症促進機能を持つ遺伝子の濃縮発現（図２Ｄ）およびＩＢＡ１＋ミクログリアの網膜病変領域への浸潤（図２Ｅ）と組み合わされた。
Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの上領域（病変なし）と下領域（病変あり）における遺伝子発現プロファイルを比較するため、ＲＮＡ－ｓｅｑ技術を用いてトランスクリプトーム解析を行った（図３Ａ）。ＷＴ－ＳＰＦマウスの網膜上領域と下領域との間で発現パターンに差（２倍変化、Ｐ＜０．０５）がある遺伝子を取り除いた後、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜上領域と下領域との間で発現に少なくとも２倍の差（Ｐ＜０．０５）がある遺伝子（ＤＥＧ）が１７９個見つかったことが示された（図３Ｂおよび図２Ｃ）。Ｒｄ８－ＳＰＦマウスでは、これら１７９個のＤＥＧのほとんどが欠損した下半区域で高発現していた（図３Ｃ）。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ （ＩＰＡ）ツールを用いたこれらのＤＥＧの機能解析から、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜症で高発現した全てのＤＥＧにおいて、細菌およびウイルスの認識に関与する遺伝子が有意に濃縮されていることが示された（図２Ｄ）。重要なことは、病変において最も高い乗数的増加を示した上位２つの遺伝子、Ｎｃｆ４とＳｌａｍｆ１は、ともに食細胞の抗菌応答の制御因子であったことである。このデータにより、Ｒｄ８網膜における病変内病原体とそれに関連する局所免疫応答の存在を示唆しており、これらの結果は、炎症促進機能を持つ遺伝子の濃縮発現（図２Ｄ）およびＩＢＡ１＋ミクログリアの網膜病変領域への浸潤（図２Ｅ）と組み合わされた。
【0119】
実施例３ モデルを構築したマウスの網膜病変部位における細菌の存在の検出
ＷＴ－ＳＰＦマウス（ｎ＝５、４週齢）およびＲｄ８－ＳＰＦマウス（ｎ＝４、４週齢）の網膜組織について、メタゲノム解析を行った。分析の結果、ＷＴマウスとＲｄ８マウスの網膜には細菌ＤＮＡの含有量が極めて低く、品質管理と除染の全工程後にウイルスや真菌のＤＮＡは検出されなかった。しかし、図４Ａに示すように、主座標分析（ＰＣｏＡ）では、ＷＴ－ＳＰＦマウスとＲｄ８－ＳＰＦマウスの網膜の細菌組成に有意差があることが示された。重要なことは、Ｒｄ８－ＳＰＦ（ｎ＝４、４週齢）マウスの網膜の上部領域および下部領域のメタゲノム解析をさらに進めたところ、網膜の下部領域では、アナエロスティペス・ハドラス（Ａｎａｅｒｏｓｔｉｐｅｓ ｈａｄｒｕｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、メガモナス・ファニフォーミス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ニトロソモナス Ｉｓ７９Ａ３、オシリバクター属細菌（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、タツメラ属 ＴＡ１（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ ｓｐ．ＴＡ１）、チオバチルス・デニトリフィカンスを含む７つの細菌が有意に濃縮されていたことである（図４Ｂ）。網膜病変における細菌の存在を直接観察するために、Ｒｄ８－ＳＰＦマウス（４週齢）を蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）およびｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙ染色により、特にグラム陽性細菌の細胞壁を染色した。図４Ｃに示すように、細菌は病変部位でのみ検出されたが、正常な網膜領域では検出されなかった。病変部内の細菌の存在は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いてさらに確認された（図４Ｄ）。このデータにより、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜病変部に細菌が発見されることが分かった。
ＷＴ－ＳＰＦマウス（ｎ＝５、４週齢）およびＲｄ８－ＳＰＦマウス（ｎ＝４、４週齢）の網膜組織について、メタゲノム解析を行った。分析の結果、ＷＴマウスとＲｄ８マウスの網膜には細菌ＤＮＡの含有量が極めて低く、品質管理と除染の全工程後にウイルスや真菌のＤＮＡは検出されなかった。しかし、図４Ａに示すように、主座標分析（ＰＣｏＡ）では、ＷＴ－ＳＰＦマウスとＲｄ８－ＳＰＦマウスの網膜の細菌組成に有意差があることが示された。重要なことは、Ｒｄ８－ＳＰＦ（ｎ＝４、４週齢）マウスの網膜の上部領域および下部領域のメタゲノム解析をさらに進めたところ、網膜の下部領域では、アナエロスティペス・ハドラス（Ａｎａｅｒｏｓｔｉｐｅｓ ｈａｄｒｕｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、メガモナス・ファニフォーミス（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ニトロソモナス Ｉｓ７９Ａ３、オシリバクター属細菌（Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ）、タツメラ属 ＴＡ１（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ ｓｐ．ＴＡ１）、チオバチルス・デニトリフィカンスを含む７つの細菌が有意に濃縮されていたことである（図４Ｂ）。網膜病変における細菌の存在を直接観察するために、Ｒｄ８－ＳＰＦマウス（４週齢）を蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）およびｖａｎｃｏ－ｂｏｄｉｐｙ染色により、特にグラム陽性細菌の細胞壁を染色した。図４Ｃに示すように、細菌は病変部位でのみ検出されたが、正常な網膜領域では検出されなかった。病変部内の細菌の存在は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いてさらに確認された（図４Ｄ）。このデータにより、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜病変部に細菌が発見されることが分かった。
【0120】
実施例５ Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜の主な欠陥は外側血液網膜関門であることの証明
免疫蛍光染色のデータから、Ｒｄ８網膜の外膜ではＣＲＢ１タンパク質の発現が減少または消失していることが確認された（図５Ａ）。また、データから、ブルッフ膜ではＣＲＢ１タンパク質の弱い発現が確認された（図５Ａ）。透過型電子顕微鏡を用いると、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜病変部位では、外膜における接着結合の破壊が認められ、これは外核層の外側への移動と関連していた（図５Ｂおよび図６Ａ）。また、透過型電子顕微鏡では、Ｒｄ８－ＳＰＦ網膜の網膜色素上皮（ＲＰＥ）基底膜の接着結合の溶解と絨毛毛細血管基底膜の歪み、それらの間のコラーゲン層の乱れが観察されたが、いずれもＷＴ－ＳＰＦマウスでは見られなかった（図５Ｃおよび図６Ｂ）。これはＲｄ８－ＳＰＦマウスにおけるブルッフ膜の破裂とブルッフ膜の厚さの著しい減少と相関していた（図５Ｃ、図６Ｂ、図５Ｄ）。一方、透過型電子顕微鏡では、網膜毛細血管内皮細胞と網膜色素上皮細胞の間の密着結合に変化は見られなかった。したがって、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜における主な欠陥は、内側血管網膜関門ではなく、外側血管網膜関門であることが示唆された。
免疫蛍光染色のデータから、Ｒｄ８網膜の外膜ではＣＲＢ１タンパク質の発現が減少または消失していることが確認された（図５Ａ）。また、データから、ブルッフ膜ではＣＲＢ１タンパク質の弱い発現が確認された（図５Ａ）。透過型電子顕微鏡を用いると、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜病変部位では、外膜における接着結合の破壊が認められ、これは外核層の外側への移動と関連していた（図５Ｂおよび図６Ａ）。また、透過型電子顕微鏡では、Ｒｄ８－ＳＰＦ網膜の網膜色素上皮（ＲＰＥ）基底膜の接着結合の溶解と絨毛毛細血管基底膜の歪み、それらの間のコラーゲン層の乱れが観察されたが、いずれもＷＴ－ＳＰＦマウスでは見られなかった（図５Ｃおよび図６Ｂ）。これはＲｄ８－ＳＰＦマウスにおけるブルッフ膜の破裂とブルッフ膜の厚さの著しい減少と相関していた（図５Ｃ、図６Ｂ、図５Ｄ）。一方、透過型電子顕微鏡では、網膜毛細血管内皮細胞と網膜色素上皮細胞の間の密着結合に変化は見られなかった。したがって、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの網膜における主な欠陥は、内側血管網膜関門ではなく、外側血管網膜関門であることが示唆された。
【0121】
実施例６ 腸閉塞部位の微生物叢のメタゲノム解析
Ｒｄ８網膜で見つかった７つの細菌（図４Ｂ）は全て、以前はみな消化管（ＧＩ）細菌であった。そこで、ＷＴ－ＳＰＦマウス（ｎ＝５）とＲｄ８－ＳＰＦマウス（ｎ＝５）の消化管の異なる部位（胃、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸を含む）の微生物叢をメタゲノム解析した（図８Ａ～Ｆ）。Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの下部消化管における微生物組成は、ＷＴ－ＳＰＦマウスのそれとは著しく異なっていた（図８Ｇ）。Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｐｈｉｌａは、盲腸（図８Ｈ）、結腸（図８Ｉ）、直腸（図８Ｊ）のＷＴおよびＲｄ８腸内細菌叢で最も異なる細菌種として同定されたが、Ｒｄ８網膜では追跡されなかった（図４Ｂ）。実際、Ｒｄ８網膜の７つの細菌は全てＷＴマウスとＲｄ８マウスの下部消化管で検出され、盲腸の細菌数が最も多かった（図７Ａ）。しかし、Ｒｄ８マウスの上部消化管ではそれらはほとんど検出されなかった。これらのデータにより、これらの網膜細菌がＲｄ８－ＳＰＦマウスの消化管細菌叢には存在するが、ＷＴ－ＳＰＦマウスには存在しないことを示唆している。
Ｒｄ８網膜で見つかった７つの細菌（図４Ｂ）は全て、以前はみな消化管（ＧＩ）細菌であった。そこで、ＷＴ－ＳＰＦマウス（ｎ＝５）とＲｄ８－ＳＰＦマウス（ｎ＝５）の消化管の異なる部位（胃、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸を含む）の微生物叢をメタゲノム解析した（図８Ａ～Ｆ）。Ｒｄ８－ＳＰＦマウスの下部消化管における微生物組成は、ＷＴ－ＳＰＦマウスのそれとは著しく異なっていた（図８Ｇ）。Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｐｈｉｌａは、盲腸（図８Ｈ）、結腸（図８Ｉ）、直腸（図８Ｊ）のＷＴおよびＲｄ８腸内細菌叢で最も異なる細菌種として同定されたが、Ｒｄ８網膜では追跡されなかった（図４Ｂ）。実際、Ｒｄ８網膜の７つの細菌は全てＷＴマウスとＲｄ８マウスの下部消化管で検出され、盲腸の細菌数が最も多かった（図７Ａ）。しかし、Ｒｄ８マウスの上部消化管ではそれらはほとんど検出されなかった。これらのデータにより、これらの網膜細菌がＲｄ８－ＳＰＦマウスの消化管細菌叢には存在するが、ＷＴ－ＳＰＦマウスには存在しないことを示唆している。
【0122】
免疫蛍光染色により野生型マウスの盲腸腸管細胞におけるＣＲＢ１タンパク質の発現が確認されたが、Ｒｄ８マウスではその発現が有意に低下していた（図９Ａ）。ここで、Ｒｄ８マウスの盲腸では、オクルディン（図９Ｂ～Ｃ）の発現が有意に消失しており、クローディン１（図９Ｄ～Ｅ）の発現は明らかではなかった。さらに透過型電子顕微鏡では、盲腸の上皮バリアにおける正常な密着結合と接着結合は観察された（図９Ｆ）。
【0123】
実施例７ Ｒｄ８マウスの結腸におけるバリア欠損の存在を調べる
盲腸での結果と同様に、ＣＲＢ１タンパク質は結腸上皮細胞の先端面と基底面で有意に発現していた（図７Ｂ）。ＣＲＢ１タンパク質の欠損は、ファロイジン（図７Ｃ）とオクルディン（図７Ｄと図４Ｅ）の発現の有意な低下と関連していたが、クローディン１（図７Ｆと図４Ｇ）タンパク質の発現と関連していなかった。重要なことは、透過型電子顕微鏡を用いると、Ｒｄ８マウスでは密着結合が正常のようであったのに対し、ほとんどの細胞で結腸上皮間の接着結合が局在していないことが観察されたことである（図７Ｈおよび図Ｓ６Ａ）。変化した結合に加えて、Ｒｄ８マウスの結腸上皮ではミトコンドリア空胞化が観察された。上皮微絨毛の数は不変であったが（図７Ｉ）、Ｒｄ８マウスの微絨毛はより長く（図７Ｊ）、より細く（図７Ｋ）なり、完全な接着結合の総数はＷＴマウスと比較して有意に減少した（図７Ｌ）。結合と微絨毛の超微細構造の変化は、結腸壁におけるＩｌ１２ａの発現の有意な増加も伴っていた（図７Ｍ）が、Ｔｎｆａ、Ｉｌ１ｂおよびムチン２の発現に変化はなかった（図７Ｎ）。これらのデータを総合すると、Ｒｄ８マウスは結腸上皮バリア機能障害とそれに伴う結腸壁の炎症を起こしていることが示唆される。
盲腸での結果と同様に、ＣＲＢ１タンパク質は結腸上皮細胞の先端面と基底面で有意に発現していた（図７Ｂ）。ＣＲＢ１タンパク質の欠損は、ファロイジン（図７Ｃ）とオクルディン（図７Ｄと図４Ｅ）の発現の有意な低下と関連していたが、クローディン１（図７Ｆと図４Ｇ）タンパク質の発現と関連していなかった。重要なことは、透過型電子顕微鏡を用いると、Ｒｄ８マウスでは密着結合が正常のようであったのに対し、ほとんどの細胞で結腸上皮間の接着結合が局在していないことが観察されたことである（図７Ｈおよび図Ｓ６Ａ）。変化した結合に加えて、Ｒｄ８マウスの結腸上皮ではミトコンドリア空胞化が観察された。上皮微絨毛の数は不変であったが（図７Ｉ）、Ｒｄ８マウスの微絨毛はより長く（図７Ｊ）、より細く（図７Ｋ）なり、完全な接着結合の総数はＷＴマウスと比較して有意に減少した（図７Ｌ）。結合と微絨毛の超微細構造の変化は、結腸壁におけるＩｌ１２ａの発現の有意な増加も伴っていた（図７Ｍ）が、Ｔｎｆａ、Ｉｌ１ｂおよびムチン２の発現に変化はなかった（図７Ｎ）。これらのデータを総合すると、Ｒｄ８マウスは結腸上皮バリア機能障害とそれに伴う結腸壁の炎症を起こしていることが示唆される。
【0124】
実施例８ Ｒｄ８マウスにおいて、腸管上皮バリア機能障害が、腸管透過性の変化や末梢血流や網膜組織への微生物移行につながるかどうかを調べた。
ＷＴマウスとＲｄ８マウスで腸管ＦＩＣＴ－デキストラン透過性を測定した。図１１Ａに示すように、Ｒｄ８マウスの末梢血中の蛍光は、ＦＩＣＴ－デキストラン投与５時間後に、ＷＴマウスの血中蛍光強度と比較して有意に増加した。さらに、Ｖａｎｃｏｍｐｙ標識糞便微生物叢移植アッセイを用いると、糞便移植２４時間後のＲｄ８マウスの末梢血において、ＷＴマウスと比較して蛍光＋細菌／細胞の有意な増加が認められた（図１０Ｂおよび図１１Ｂ）。重要なのは、Ｖａｎｃｏｍｏｐｙ＋細菌の存在がＲｄ８マウスの網膜病変で検出可能であったが（図１１Ｃ）、ＷＴ網膜病変では検出されず（データを示さず）、Ｒｄ８マウスの網膜組織の免疫蛍光染色によってさらに確認された（図１１Ｄ）ことである。これらのデータにより、多糖分子や細菌細胞に対する腸管透過性の亢進が、腸管内腔から血流や網膜病変への細菌の移行につながることを示唆している。
ＷＴマウスとＲｄ８マウスで腸管ＦＩＣＴ－デキストラン透過性を測定した。図１１Ａに示すように、Ｒｄ８マウスの末梢血中の蛍光は、ＦＩＣＴ－デキストラン投与５時間後に、ＷＴマウスの血中蛍光強度と比較して有意に増加した。さらに、Ｖａｎｃｏｍｐｙ標識糞便微生物叢移植アッセイを用いると、糞便移植２４時間後のＲｄ８マウスの末梢血において、ＷＴマウスと比較して蛍光＋細菌／細胞の有意な増加が認められた（図１０Ｂおよび図１１Ｂ）。重要なのは、Ｖａｎｃｏｍｏｐｙ＋細菌の存在がＲｄ８マウスの網膜病変で検出可能であったが（図１１Ｃ）、ＷＴ網膜病変では検出されず（データを示さず）、Ｒｄ８マウスの網膜組織の免疫蛍光染色によってさらに確認された（図１１Ｄ）ことである。これらのデータにより、多糖分子や細菌細胞に対する腸管透過性の亢進が、腸管内腔から血流や網膜病変への細菌の移行につながることを示唆している。
【0125】
実施例９ 腸管透過性が高まった場合のＲｄ８の腸管ストレスに対する応答実験
ＷＴマウスとＲｄ８マウスを１．５％のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を含む飲用水に晒したところ、ＷＴマウスでは軽度の大腸炎を起こした。ＤＳＳ治療１３日後、Ｒｄ８マウスの結腸長は野生型マウスよりも有意に短くなっていた（図１１Ｅ）。Ｒｄ８マウスの血液中の細菌は野生型マウスの血液中の細菌よりも多く、血清中の細菌１６Ｓ ｒＲＮＡ（図１１Ｆ）および細菌ＬＰＳ（図１１Ｇ）レベルによって示された。
ＷＴマウスとＲｄ８マウスを１．５％のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を含む飲用水に晒したところ、ＷＴマウスでは軽度の大腸炎を起こした。ＤＳＳ治療１３日後、Ｒｄ８マウスの結腸長は野生型マウスよりも有意に短くなっていた（図１１Ｅ）。Ｒｄ８マウスの血液中の細菌は野生型マウスの血液中の細菌よりも多く、血清中の細菌１６Ｓ ｒＲＮＡ（図１１Ｆ）および細菌ＬＰＳ（図１１Ｇ）レベルによって示された。
【0126】
実施例１０ Ｒｄ８マウスの網膜表現型に対する細菌の逆転効果
Ｒｄ８マウスの網膜では、外側血管網膜関門や腸上皮関門の破壊によって生じた病変内の細菌が検出されたが、これらの細菌がＲｄ８マウスの網膜変性の原因なのか結果なのかは明らかではない。そこで、Ｒｄ８マウスを無菌（ＧＦ）条件下で再分離し、網膜変性表現型の変化について試験した。図１２Ａに示すように、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスで見られた網膜症（白斑）は、無菌Ｒｄ８（Ｒｄ８ ＧＦ）マウスではほとんど観察されなかった。Ｒｄ８－ＧＦマウスの網膜組織学では、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスで見られた典型的な病変（図２Ａおよび図１Ｃ）がなく、正常に発達している網膜組織（図１２Ｂ）が観察され、Ｒｄ８－ＧＦマウスに網膜変性がないことを実証した。Ｒｄ８ＧＦマウスで網膜細菌が検出されなかったこと（図１２Ｃ）は、Ｒｄ８ＧＦマウスでは網膜外核層（ＯＮＬ）（図１２Ｄおよび図１２Ｅ）のミクログリアが劇的に減少したことと相関しているが、ＺＯ－１およびファロイジン染色では、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＲｄ８ ＧＦマウスの両方で見られたように、外膜の破壊が見られた（図１２Ｆ）。さらに、出生後にＳＰＦ環境でＲｄ８ ＧＦマウスを飼育する（Ｒｄ８ ＧＦ ＳＰＦマウス）と、網膜症が再発した（図１２Ｇ）。これらのデータにより、Ｒｄ８マウスの網膜変性が細菌依存性であることを裏付けている。
Ｒｄ８マウスの網膜では、外側血管網膜関門や腸上皮関門の破壊によって生じた病変内の細菌が検出されたが、これらの細菌がＲｄ８マウスの網膜変性の原因なのか結果なのかは明らかではない。そこで、Ｒｄ８マウスを無菌（ＧＦ）条件下で再分離し、網膜変性表現型の変化について試験した。図１２Ａに示すように、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスで見られた網膜症（白斑）は、無菌Ｒｄ８（Ｒｄ８ ＧＦ）マウスではほとんど観察されなかった。Ｒｄ８－ＧＦマウスの網膜組織学では、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスで見られた典型的な病変（図２Ａおよび図１Ｃ）がなく、正常に発達している網膜組織（図１２Ｂ）が観察され、Ｒｄ８－ＧＦマウスに網膜変性がないことを実証した。Ｒｄ８ＧＦマウスで網膜細菌が検出されなかったこと（図１２Ｃ）は、Ｒｄ８ＧＦマウスでは網膜外核層（ＯＮＬ）（図１２Ｄおよび図１２Ｅ）のミクログリアが劇的に減少したことと相関しているが、ＺＯ－１およびファロイジン染色では、Ｒｄ８－ＳＰＦマウスとＲｄ８ ＧＦマウスの両方で見られたように、外膜の破壊が見られた（図１２Ｆ）。さらに、出生後にＳＰＦ環境でＲｄ８ ＧＦマウスを飼育する（Ｒｄ８ ＧＦ ＳＰＦマウス）と、網膜症が再発した（図１２Ｇ）。これらのデータにより、Ｒｄ８マウスの網膜変性が細菌依存性であることを裏付けている。
【0127】
上述の各実施例は、本発明の技術的解決策を説明するために使用されているに過ぎず、それらを限定するものではない。本発明は、上述の実施例を参照して詳細に説明されているが、当業者であれば、上述の実施例に記録された技術的解決策に修正を加えること、またはその中の技術的特徴の一部または全部に等価な置換を行うことが依然として可能であることを理解すべきであり、そのような修正または置換は、対応する技術的解決策を本発明の実施例の技術的解決策の範囲から逸脱させるものではない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【国際調査報告】