特表 2024-532689 ヒドロキシエチルでキャップされたカチオン性ペプトイドを含む組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-10

(54)【発明の名称】ヒドロキシエチルでキャップされたカチオン性ペプトイドを含む組成物

(51)【国際特許分類】

   C07C 237/12 20060101AFI20240903BHJP

   C12N 15/33 20060101ALI20240903BHJP

   C12N 15/40 20060101ALI20240903BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20240903BHJP

   C12N 15/44 20060101ALI20240903BHJP

   C12N 15/88 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240903BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240903BHJP

【ＦＩ】

C07C237/12 CSP

C12N15/33

C12N15/40

C12N15/50

C12N15/44

C12N15/88 Z

A61P35/00

A61P37/04

A61P31/12

A61K47/18

A61K48/00

A61K31/7088

A61K31/7105

A61K31/711

A61K31/713

A61P35/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024506203

(86)(22)【出願日】2022-08-05

(85)【翻訳文提出日】2024-03-14

(86)【国際出願番号】 US2022039505

(87)【国際公開番号】W WO2023014931

(87)【国際公開日】2023-02-09

(31)【優先権主張番号】63/230,275

(32)【優先日】2021-08-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/234,190

(32)【優先日】2021-08-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】2029057

(32)【優先日】2021-08-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．テフロン

２．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521126302

【氏名又は名称】ナットクラッカー セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002848

【氏名又は名称】弁理士法人ＮＩＰ＆ＳＢＰＪ国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】マッキンレイ、コリン、ジェイムス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076AA12

4C076AA13

4C076AA16

4C076AA17

4C076AA22

4C076AA24

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB21

4C076BB22

4C076BB25

4C076BB29

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC35

4C076EE41

4C076FF68

4C084AA13

4C084MA05

4C084MA13

4C084MA17

4C084MA21

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA57

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA66

4C084NA10

4C084NA13

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZB331

4C084ZB332

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA13

4C086MA17

4C086MA21

4C086MA22

4C086MA23

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA56

4C086MA57

4C086MA59

4C086MA60

4C086MA66

4C086NA10

4C086NA13

4C086ZB09

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZB33

4H006AA01

4H006AA03

4H006AB20

4H006BN10

4H006BU32

4H006BV21

4H006BV22

(57)【要約】

本開示は、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを含む送達ビヒクル組成物、及び送達ビヒクルと核酸などのポリアニオン性化合物との複合体を提供する。本開示は、ポリアニオン性化合物（例えば、核酸）を細胞に送達するためなどの、送達ビヒクル組成物及び複合体を作製及び使用する方法を更に提供する。本開示はまた、本開示の送達ビヒクル複合体を用いて免疫応答を誘発する方法を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：

【化1】

（式中、
ｎが、１、２、３、４、５、又は６であり、
Ｒ^１が、Ｈ、Ｃ_１～３アルキル、又はヒドロキシエチルであり、
各Ｒ^２が、独立して、Ｃ_８～２４アルキル又はＣ_８～２４アルケニルである）の構造を有する化合物。

【請求項2】

ｎが、３である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

ｎが、４である、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^１が、Ｈである、請求項１～３に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^１が、エチル又はヒドロキシエチルである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

各Ｒ^２が、独立して、Ｃ_８～１８アルキル又はＣ_８～１８アルケニルである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

各Ｒ^２が、独立して、

【化2】

からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

各Ｒ^２が、独立して、

【化3】

からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

各Ｒ^２が、独立して、

【化4】

からなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

各Ｒ^２が、独立して、

【化5】

である、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

【化6】

からなる群から選択される構造を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項12】

構造：

【化7】

を有する、請求項１１に記載の化合物。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物の薬学的に許容される塩。

【請求項14】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物又は請求項１３に記載の塩を含む、送達ビヒクル組成物。

【請求項15】

前記組成物が、リン脂質、ステロール、及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上を更に含む、請求項１４に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項16】

前記組成物が、リン脂質、ステロール、及びＰＥＧ化脂質を含む、請求項１４に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項17】

前記組成物が、請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物又は請求項１３に記載の塩、並びにリン脂質、ステロール、及びＰＥＧ化脂質から本質的になる、請求項１４に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項18】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約３０モル％～約６０モル％の量で存在する、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項19】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約３５モル％～約５５モル％の量で存在する、請求項１８に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項20】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約３０モル％～約４５モル％の量で存在する、請求項１８に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項21】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約３５モル％～約３９モル％の量で存在する、請求項１８又は１９に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項22】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約３９モル％～約５２モル％の量で存在する、請求項１８又は１９に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項23】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約３０モル％～約３５モル％の量で存在する、請求項２０に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項24】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約４０モル％～約４５モル％の量で存在する、請求項２２に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項25】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約４２モル％～約４９モル％の量で存在する、請求項２２に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項26】

前記式（Ｉ）の化合物又は塩が、約５０モル％～約５２モル％の量で存在する、請求項２２に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項27】

前記組成物が、約３０モル％～約６０モル％の式（Ｉ）の前記化合物と、約３モル％～約２０モル％の前記リン脂質と、約２５モル％～約６０モル％の前記ステロールと、約１モル％～約５モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項28】

前記組成物が、約３５モル％～約５５モル％の式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、約５モル％～約１５モル％の前記リン脂質と、約３０モル％～約５５モル％の前記ステロールと、約１モル％～約３モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項２７に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項29】

前記組成物が、約３８モル％～約５２モル％の式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、約９モル％～約１２モル％の前記リン脂質と、約３５モル％～約５０モル％の前記ステロールと、約１モル％～約２モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項２８に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項30】

前記組成物が、約３０モル％～約４９モル％の式（Ｉ）の前記化合物と、約５モル％～約１５モル％の前記リン脂質と、約３０モル％～約５５モル％の前記ステロールと、約１モル％～約３モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項31】

前記組成物が、約３５モル％～約４９モル％の式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、約７モル％～約１２モル％の前記リン脂質と、約３５モル％～約５０モル％の前記ステロールと、約１モル％～約２モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項３０に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項32】

前記組成物が、約３０モル％～約４５モル％の式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、約７モル％～約１２モル％の前記リン脂質と、約４０モル％～約５５モル％の前記ステロールと、約１モル％～約３モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項３０に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項33】

前記組成物が、約３０モル％～約３５モル％の式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、約７モル％～約１２モル％の前記リン脂質と、約５０モル％～約５５モル％の前記ステロールと、約２モル％～約３モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項３０に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項34】

前記組成物が、約４０モル％～約４５モル％の式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、約７モル％～約１２モル％の前記リン脂質と、約４０モル％～約４５モル％の前記ステロールと、約１モル％～約２モル％の前記ＰＥＧ化脂質と、を含む、請求項３０に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項35】

前記リン脂質が、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１５～３４のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項36】

前記リン脂質が、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、又はそれらの組み合わせである、請求項３５に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項37】

前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、請求項３６に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項38】

前記ステロールが、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１５～３７のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項39】

ステロールが、コレステロールである、請求項３８に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項40】

前記ＰＥＧ化脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、ＰＥＧ修飾ステロール、及びＰＥＧ修飾リン脂質からなる群から選択される、請求項１５～３９のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項41】

前記ＰＥＧ修飾脂質が、ＰＥＧ修飾コレステロール、Ｎ－オクタノイル－スフィンゴシン－１－｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、Ｎ－パルミトイル－スフィンゴシン－１－｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、ＰＥＧ修飾ＤＭＰＥ（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＳＰＥ（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＰＰＥ（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＯＰＥ（ＤＯＰＥ－ＰＥＧ）、ジミリストイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、ジステアロイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、ジパルミトイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、ジオレオイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＯＧ－ＰＥＧ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４０に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項42】

前記ＰＥＧ修飾脂質が、ジミリストイルグリセロール－ポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）である、請求項４１に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項43】

約３８．２モル％の

【化8】

約１１．８モル％のＤＳＰＣ、約４８．２モル％のコレステロール、及び約１．９モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項44】

約４２．６モル％の

【化9】

約１０．９モル％のＤＳＰＣ、約４４．７モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項45】

約４８．２モル％の

【化10】

約９．９モル％のＤＳＰＣ、約４０．４モル％のコレステロール、及び約１．６モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項46】

約５１．３モル％の

【化11】

約９．３モル％のＤＳＰＣ、約３８モル％のコレステロール、及び約１．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項47】

約４４．４モル％の

【化12】

約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約４３．３モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項48】

約４４．４モル％の

【化13】

約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約４３．４モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項49】

約３３．１モル％の

【化14】

約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約５３．８モル％のコレステロール、及び約２．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、を含む、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物。

【請求項50】

請求項１４～４９のいずれか一項に記載の送達ビヒクル組成物、及びポリアニオン化合物を含む、送達ビヒクル複合体。

【請求項51】

式（Ｉ）の前記化合物又はその塩が、前記ポリアニオン化合物と複合体を形成している、請求項５０に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項52】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約５：１～約２５：１の質量比で存在する、請求項５１に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項53】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約７：１～約２０：１の質量比で存在する、請求項５２に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項54】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１０：１～約１７：１の質量比で存在する、請求項５３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項55】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１９：１の質量比で存在する、請求項５３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項56】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約２０：１の質量比で存在する、請求項５３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項57】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１０：１の質量比で存在する、請求項５４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項58】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１２：１の質量比で存在する、請求項５４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項59】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１３：１の質量比で存在する、請求項５４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項60】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１５：１の質量比で存在する、請求項５４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項61】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１７：１の質量比で存在する、請求項５４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項62】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約２：１～約１０：１の質量比で存在する、請求項５０～６１のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項63】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約２：１～約４：１の質量比で存在する、請求項６２に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項64】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約２：１～約３：１の質量比で存在する、請求項６２に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項65】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約４：１の質量比で存在する、請求項６３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項66】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約２．７：１の質量比で存在する、請求項６４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項67】

前記ステロールと、前記ポリアニオン性化合物とが、約５：１～約８：１の質量比で存在する、請求項５０～６６のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項68】

前記ステロールと、前記ポリアニオン性化合物とが、約５：１～約６：１の質量比で存在する、請求項５０～６７のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項69】

前記ステロールと、前記ポリアニオン性化合物とが、約５．４：１の質量比で存在する、請求項６８に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項70】

前記ステロールと、前記ポリアニオン性化合物とが、約８．１：１の質量比で存在する、請求項６７に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項71】

前記ステロールと、前記ポリアニオン性化合物とが、約６．７：１の質量比で存在する、請求項６７に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項72】

前記ＰＥＧ化脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約０．５：１～約２．５：１の質量比で存在する、請求項５０～７１のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項73】

前記ＰＥＧ化脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１：１～約２：１の質量比で存在する、請求項７２に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項74】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約２．１：１の質量比で存在する、請求項７２に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項75】

前記リン脂質と、前記ポリアニオン性化合物とが、約１．４：１の質量比で存在する、請求項７３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項76】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約１０：１の質量比を有する

【化15】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、約５．４：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５４、５７、６３、６４、６６～６９、７１～７３、及び７５のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項77】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約１２：１の質量比を有する

【化16】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、５．４：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５４、５８、６２～６４、６６～６９、７２、７３、及び７５のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項78】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約１５：１の質量比を有する

【化17】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、５．４：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５４、６０、６２～６４、６６～６９、７２、７３、及び７５のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項79】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約１７：１の質量比を有する

【化18】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、５．４：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５４、６１～６４、６６～６９、７２、７３、及び７５のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項80】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約１３：１の質量比を有する

【化19】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、５．４：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５４、５９、６２～６４、６６～６９、７２、７３、及び７５のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項81】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約１９：１の質量比を有する

【化20】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約４：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、約８．１：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．１：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５５、６２、６３、６５、６７～６９、及び７２～７４のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項82】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約９．７：１の質量比を有する

【化21】

前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、前記ポリアニオン性化合物に対して、約６．７：１の質量比を有するコレステロール、及び前記ポリアニオン性化合物に対して、約２．１：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む、請求項５０～５３、５７、６２～６４、６６～６８、及び７１～７４のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項83】

前記複合体が、約５０ｎｍ～約２００ｎｍの粒径及び／又は約０．２５未満の多分散指数（ＰＤＩ）を示す、請求項５０～８２のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項84】

前記複合体が、約６０ｎｍ～約１００ｎｍの粒径を示す、請求項８３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項85】

前記複合体が、約６０ｎｍ～約９０ｎｍの粒径を示す、請求項８４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項86】

前記複合体が、約１０５ｎｍ～約２００ｎｍの粒径を示す、請求項８３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項87】

前記送達ビヒクル複合体が、約１５５ｎｍ～約１９５ｎｍの粒径を示す、請求項８６に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項88】

前記ポリアニオン性化合物の少なくとも８０％が、４℃で４８日間の保存後に保持されるか、若しくは前記送達ビヒクル複合体が、４℃で４８日間の保存後に、その元のサイズの少なくとも８０％を保持するか、又はその両方である、請求項５０～８７のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項89】

前記ポリアニオン性化合物が、少なくとも１つの核酸を含む、請求項５０～８８のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項90】

前記少なくとも１つの核酸が、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はそれらの組み合わせを含む、請求項８９に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項91】

前記少なくとも１つの核酸が、ＲＮＡを含む、請求項９０に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項92】

前記ＲＮＡが、ペプチド、タンパク質、又は前述のものの機能的断片をコードするｍＲＮＡである、請求項９１に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項93】

前記ｍＲＮＡが、ウイルスペプチド、ウイルスタンパク質、又は前述のもののいずれかの機能的断片をコードする、請求項９２に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項94】

前記ｍＲＮＡが、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質又はその機能的断片をコードする、請求項９３に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項95】

前記ｍＲＮＡが、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質及び／若しくはＨＰＶ Ｅ７タンパク質、又は前述のものの機能的断片をコードする、請求項９４に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項96】

前記ｍＲＮＡが、ウイルススパイクタンパク質又はその機能的断片をコードする、請求項９５に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項97】

前記ｍＲＮＡが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質又はその機能的断片をコードする、請求項９６に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項98】

前記ｍＲＮＡが、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）又はその機能的断片をコードする、請求項９７に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項99】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質をコードするｍＲＮＡ及びインフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）をコードするｍＲＮＡ、又は前記の機能的断片を含む、請求項９８に記載の送達ビヒクル複合体。

【請求項100】

請求項５０～９９のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物。

【請求項101】

腫瘍内（ＩＴ）又は筋肉内（ＩＭ）組成物としての、請求項１００に記載の医薬組成物。

【請求項102】

免疫応答の誘導を必要とする対象におけるその誘導の方法であって、有効量の請求項７０～７９のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体、又は請求項１００若しくは１０１に記載の医薬製剤を前記対象に投与し、それによって前記対象において免疫応答を誘導することを含む、方法。

【請求項103】

ウイルス感染症の治療を必要とする対象におけるその治療の方法であって、有効量の請求項９２～１０１のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体、又は請求項１００若しくは１０１のいずれかに記載の医薬製剤を前記対象に投与し、それによって前記対象においてウイルス感染症を治療することを含む、方法。

【請求項104】

癌の治療を必要とする対象におけるその治療の方法であって、有効量の請求項９２～１０１のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体、又は請求項１００若しくは１０１のいずれかに記載の医薬製剤を前記対象に投与し、それによって前記対象において前記癌を治療することを含む、方法。

【請求項105】

前記癌が、子宮頸癌、頭頸部癌、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前立腺癌、肺癌、又はそれらの組み合わせである、請求項１０４に記載の方法。

【請求項106】

前記投与が、筋肉内送達、腫瘍内送達、静脈内送達、腹腔内送達、又は皮下送達による、請求項１０２～１０５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項107】

ポリアニオン性化合物を細胞に送達する方法であって、前記細胞を、請求項５０～９９のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体、又は請求項１００若しくは１０１に記載の医薬組成物に接触させることを含む、方法。

【請求項108】

前記細胞が、筋細胞、腫瘍細胞、又はそれらの組み合わせである、請求項１０７に記載の方法。

【請求項109】

前記ポリアニオン性化合物が、ペプチド、タンパク質、又は前述のいずれかの断片をコードするｍＲＮＡであり、前記細胞は、前記送達ビヒクル複合体に接触させた後に、前記ペプチド、前記タンパク質、又は前記断片を発現する、請求項１０７又は１０８に記載の方法。

【請求項110】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩を、前記ポリアニオン性化合物に接触させることを含む、請求項５０～９９のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体を形成する方法。

【請求項111】

式（Ｉ）の前記化合物又は前記塩を含む溶液を、前記ポリアニオン性化合物を含む溶液と混合することを含む、請求項１１０に記載の方法。

【請求項112】

請求項９２～１０１のいずれか一項に記載の送達ビヒクル複合体、又は請求項１００若しくは１０１のいずれか一項に記載の医薬製剤を含む、ワクチン。

【請求項113】

癌の治療に使用するための、請求項１１２に記載のワクチン。

【請求項114】

患者における癌を治療又は予防する方法であって、請求項１１２に記載のワクチンを、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項115】

前記癌が、子宮頸癌、頭頸部癌、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前立腺癌、肺癌、又はそれらの組み合わせである、請求項１１３に記載の使用のためのワクチン又は請求項１１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

（関連技術の説明）
治療用核酸、例えば、ｍＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、プラスミド、及び免疫刺激核酸は、遺伝子レベルでの疾患の予防及び治療に非常に有望である。しかし、核酸は、典型的には、血液中での急速な分解、腎クリアランス、不十分な細胞取り込み、及び非効率的なエンドソーム脱出を受ける。したがって、核酸が治療的に有用であるために、核酸を細胞核又はサイトゾルに送達するための安全かつ有効な系が必要とされる。オリゴヌクレオチドなどのポリアニオン性化合物の細胞送達及びインビボでの送達のための従来の方法には、ウイルスベクター、カチオン性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、及びポリカチオン性ポリマーが挙げられる。これらの送達系は、例えば、不十分な安定性、迅速なクリアランス、不十分な毒性、免疫応答に関する懸念、及びそれらのポリアニオン性カーゴの最適以下の発現などの制限によって悩まされ得る。

【発明の概要】

【0002】

核酸を細胞に送達するための安定で、安全で、有効な系が必要とされている。したがって、本開示は、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを含む送達ビヒクル組成物、及び送達ビヒクル組成物と例えば核酸などのポリアニオン性化合物との複合体に関する。本開示は更に、例えばｍＲＮＡなどのポリアニオン性化合物の細胞内送達のための送達ビヒクル組成物及び複合体を作製及び使用する方法、並びに本開示の複合体を用いて免疫応答を誘発する方法に関する。

【0003】

一態様では、本開示は、式（Ｉ）：

【0004】

【化1】

の構造を有する化合物を提供し、式中、ｎは、１、２、３、４、５、又は６であり、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１～３アルキル、又はヒドロキシエチルであり、各Ｒ^２は、独立して、Ｃ_８～２４アルキル又はＣ_８～２４アルケニルである。場合によっては、ｎは、３である。様々な場合では、ｎは、４である。いくつかの実装形態では、Ｒ^１はＨである。場合によっては、Ｒ^１はエチル又はヒドロキシエチルである。様々な場合では、Ｒ^２は独立して、Ｃ_８～１８アルキル又はＣ_８～１８アルケニルである。いくつかの実装形態では、各Ｒ^２は、

【0005】

【化2】

からなる群から選択される。様々な場合では、各Ｒ^２は、独立して、

【0006】

【化3】

からなる群から選択される。いくつかの実装形態では、Ｒ^２は、独立して、

【0007】

【化4】

からなる群から選択される。様々な実装形態では、各Ｒ^２は、

【0008】

【化5】

である。場合によっては、式（Ｉ）の化合物は、

【0009】

【化6】

からなる群から選択される構造を有する。様々な場合では、式（Ｉ）の化合物は、構造：

【0010】

【化7】

を有する。式（Ｉ）の化合物の、薬学的に許容される塩が、本明細書に更に開示される。

【0011】

本開示の別の一態様は、本明細書に開示される化合物又はその薬学的に許容される塩を含む送達ビヒクル組成物を提供する。いくつかの実装形態では、組成物は、リン脂質、ステロール、及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約３０モル％～約６０モル％の量で存在する。いくつかの実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約３５モル％～約５５モル％の量で存在する。様々な実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約３０モル％～約４５モル％の量で存在する。様々な実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約３５モル％～約３９モル％の量で存在する。場合によっては、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約３９モル％～約５２モル％の量で存在する。様々な実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約３０モル％～約３５モル％の量で存在する。様々な実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、送達ビヒクル組成物中に、約４０モル％～約４５モル％の量で存在する。様々な場合では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、約４２モル％～約４９モル％の量で存在する。いくつかの実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩は、約５０モル％～約５２モル％の量で存在する。

【0012】

様々な実装形態では、組成物は、リン脂質、ステロール、及びＰＥＧ化脂質を含む。場合によっては、組成物は、本明細書に開示される化合物又はその塩、リン脂質、ステロール、及びＰＥＧ化脂質から本質的になる。場合によっては、組成物は、約３０モル％～約６０モル％の式（Ｉ）の化合物、約３モル％～約２０モル％のリン脂質、約２５モル％～約６０モル％のステロール、及び約１モル％～約５モル％のＰＥＧ化脂質を含む。様々な場合では、当該組成物は、約３５モル％～約５５モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩、約５モル％～約１５モル％のリン脂質、約３０モル％～約５５モル％のステロール、及び約１モル％～約３モル％のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実装形態では、当該組成物は、約３８モル％～約５２モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩、約９モル％～約１２モル％のリン脂質、約３５モル％～約５０モル％のステロール、及び約１モル％～約２モル％のＰＥＧ化脂質を含む。様々な実装形態では、組成物は、約３０モル％～約４９モル％の式（Ｉ）の化合物、約５モル％～約１５モル％のリン脂質、約３０モル％～約５５モル％のステロール、及び約１モル％～約３モル％のＰＥＧ化脂質を含む。場合によっては、組成物は、約３５モル％～約４９モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩、約７モル％～約１２モル％のリン脂質、約３５モル％～約５０モル％のステロール、及び約１モル％～約２モル％のＰＥＧ化脂質を含む。場合によっては、組成物は、約３０モル％～約４５モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩、約７モル％～約１２モル％のリン脂質、約４０モル％～約５５モル％のステロール、及び約１モル％～約３モル％のＰＥＧ化脂質を含む。場合によっては、組成物は、約３０モル％～約３５モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩、約７モル％～約１２モル％のリン脂質、約５０モル％～約５５モル％のステロール、及び約２モル％～約３モル％のＰＥＧ化脂質を含む。場合によっては、組成物は、約４０モル％～約４５モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩、約７モル％～約１２モル％のリン脂質、約４０モル％～約４５モル％のステロール、及び約１モル％～約２モル％のＰＥＧ化脂質を含む。場合によっては、リン脂質は、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。場合によっては、リン脂質は、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、又はそれらの組み合わせである。様々な場合では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。いくつかの実装形態では、ステロールは、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。場合によっては、ステロールは、コレステロールである。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、ＰＥＧ修飾ステロール、及びＰＥＧ修飾リン脂質からなる群から選択される。様々な実装形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ修飾コレステロール、Ｎ－オクタノイル－スフィンゴシン－１－｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、Ｎ－パルミトイル－スフィンゴシン－１－｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、ＰＥＧ修飾ＤＭＰＥ（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＳＰＥ（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＰＰＥ（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＯＰＥ（ＤＯＰＥ－ＰＥＧ）、ジミリストイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、ジステアロイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、ジパルミトイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、ジオレオイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＯＧ－ＰＥＧ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。場合によっては、ＰＥＧ修飾脂質は、ジミリストイルグリセロール－ポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）である。様々な場合では、当該組成物は、約３８．２モル％の化合物１４０、約１１．８モル％のＤＳＰＣ、約４８．２モル％のコレステロール、及び約１．９モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。いくつかの実装形態では、組成物は、約４２．６モル％の化合物１４０、約１０．９モル％のＤＳＰＣ、約４４．７モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。いくつかの実装形態では、組成物は、約４８．２モル％の化合物１４０、約９．９モル％のＤＳＰＣ、約４０．４モル％のコレステロール、及び約１．６モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、組成物は、約５１．３モル％の化合物１４０、約９．３モル％のＤＳＰＣ、約３８モル％のコレステロール、及び約１．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、組成物は、約４４．４モル％の化合物１４０、約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約４３．３モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、組成物は、約４４．４モル％の化合物１４０、約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約４３．４モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、組成物は、約３３．１モル％の化合物１４０、約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約５３．８モル％のコレステロール、及び約２．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。

【0013】

本明細書に更に開示されるのは、本明細書に記載の送達ビヒクル組成物と、ポリアニオン性化合物とを含む、送達ビヒクル複合体である。場合によっては、式（Ｉ）の化合物又はその塩は、ポリアニオン性化合物と複合体を形成している。様々な場合では、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約５：１～約２５：１の質量比で存在する。いくつかの実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約７：１～約２０：１の質量比で存在する。様々な場合では、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１０：１～約１７：１の質量比で存在する。場合によっては、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１９：１の質量比で存在する。場合によっては、式（Ｉ）の化合物又は、塩及びポリアニオン性化合物は、約２０：１の質量比で存在する。場合によっては、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１０：１の質量比で存在する。様々な場合では、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１２：１の質量比で存在する。式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１３：１の質量比で存在する。いくつかの実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１５：１の質量比で存在する。様々な実装形態では、式（Ｉ）の化合物又は塩、及びポリアニオン性化合物は、約１７：１の質量比で存在する。場合によっては、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約２：１～約１０：１の質量比で存在する。場合によっては、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約２：１～約４：１の質量比で存在する。様々な場合では、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約２：１～約３：１の質量比で存在する。様々な場合では、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約４．０：１の質量比で存在する。様々な場合では、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約２．７：１の質量比で存在する。いくつかの実装形態では、ステロール及びポリアニオン性化合物は、約５：１～約８：１の質量比で存在する。いくつかの実装形態では、ステロール及びポリアニオン性化合物は、約５：１～約６：１の質量比で存在する。様々な実装形態では、ステロール及びポリアニオン化合物は、約５．４：１の質量比で存在する。場合によっては、ステロール及びポリアニオン性化合物は、約８．１：１の質量比で存在する。場合によっては、ステロール及びポリアニオン性化合物は、約６．７：１の質量比で存在する。場合によっては、ＰＥＧ化脂質及びポリアニオン性化合物は、約０．５：１～約２．５：１の質量比で存在する。様々な場合では、ＰＥＧ化脂質及びポリアニオン性化合物は、約１：１～約２：１の質量比で存在する。場合によっては、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約２．１：１の質量比で存在する。場合によっては、リン脂質及びポリアニオン性化合物は、約１．４：１の質量比で存在する。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約１０：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、ポリアニオン性化合物に対して約５．４：１の質量比を有するコレステロール、及びポリアニオン性化合物に対して約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約１２：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、ポリアニオン性化合物に対して約５．４：１の質量比を有するコレステロール、及びポリアニオン性化合物に対して約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。場合によっては、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約１５：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、及びポリアニオン性化合物に対して約５．４：１の質量比を有するコレステロール、並びにポリアニオン性化合物に対して約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約１７：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、ポリアニオン性化合物に対して約５．４：１の質量比を有するコレステロール、及びポリアニオン性化合物に対して約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約１３：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、ポリアニオン性化合物に対して約５．４：１の質量比を有するコレステロール、及びポリアニオン性化合物に対して約１．４：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約１９：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約４．０：１の質量比を有するＤＳＰＣ、ポリアニオン性化合物に対して約５．４：１の質量比を有するコレステロール、及びポリアニオン性化合物に対して約２．１：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、ポリアニオン性化合物に対して約９．７：１の質量比を有する化合物１４０、ポリアニオン性化合物に対して約２．７：１の質量比を有するＤＳＰＣ、ポリアニオン性化合物に対して約６．７：１の質量比を有するコレステロール、及びポリアニオン性化合物に対して約２．１：１の質量比を有するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む。

【0014】

場合によっては、複合体は、約５０ｎｍ～約２００ｎｍの粒径及び／又は０．２５未満の多分散指数（ＰＤＩ）を示す。様々な場合では、複合体は、約６０ｎｍ～約１００ｎｍの粒径を示す。いくつかの実装形態では、複合体は、約６０ｎｍ～約９０ｎｍの粒径を示す。様々な実装形態では、複合体は、約１０５ｎｍ～約２００ｎｍの粒径を示す。様々な場合では、複合体は、約１５０ｎｍ～約２００ｎｍの粒径を示す。場合によっては、送達ビヒクル複合体は、約１０５ｎｍ～約２００ｎｍの粒径を示す。場合によっては、送達ビヒクル複合体は、約４０ｎｍ～約１１５ｎｍ、又は約５５ｎｍ～約９５ｎｍ、又は約７０～約８０ｎｍ、又は約７５ｎｍの粒径を示す。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、約１３５ｎｍ～約２２５ｎｍ、又は約１５５ｎｍ～約１９５ｎｍ、又は約１７０～約１８０ｎｍ、又は約１７５ｎｍの粒径を示す。様々な場合では、ポリアニオン性化合物の少なくとも８０％が、４℃で４８日間の保存後に保持されるか、又は送達ビヒクル複合体が、４℃で４８日間の保存後に、その元のサイズの少なくとも８０％を保持するか、又はその両方である。

【0015】

場合によっては、ポリアニオン性化合物は、少なくとも１つの核酸を含む。様々な場合では、少なくとも１つの核酸は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はそれらの組み合わせを含む。様々な場合では、少なくとも１つの核酸は、ＲＮＡを含む。いくつかの実装形態では、ＲＮＡは、ペプチド、タンパク質、又は前述の機能的断片をコードするｍＲＮＡである。様々な実装形態では、ｍＲＮＡは、ウイルスペプチド、ウイルスタンパク質、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。場合によっては、ｍＲＮＡは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質又はその機能的断片をコードする。様々な場合では、ｍＲＮＡは、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質及び／若しくはＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。場合によっては、ＨＰＶタンパク質は、ＨＰＶサブタイプＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６６、及び／又は６８に由来する。様々な場合では、ＨＰＶタンパク質は、ＨＰＶサブタイプＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８に由来する。場合によっては、ｍＲＮＡは、ウイルススパイクタンパク質又はその機能的断片をコードする。様々な場合では、ｍＲＮＡは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。場合によっては、ＲＮＡは、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルス０Ｃ４３（ＨＣｏＶ－０Ｃ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、又はヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３））をコードする。場合によっては、ｍＲＮＡは、インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。いくつかの実装形態では、インフルエンザＡウイルスは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、及びＨ１６からなる群から選択されるサブタイプのＨＡを有する。様々な実装形態では、インフルエンザサブタイプは、ＨＡ株Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、又はＨ５である。様々な場合では、１つのｍＲＮＡは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質をコードし、１つのｍＲＮＡは、インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。

【0016】

本開示の送達ビヒクル複合体と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書に更に開示される。場合によっては、医薬組成物は、腫瘍内（ＩＴ）又は筋肉内（ＩＭ）組成物である。

【0017】

また本明細書に開示されるのは、免疫応答の誘導を必要とする対象におけるその誘導の方法であって、有効量の本明細書に記載の送達ビヒクル複合体又は送達ビヒクル複合体を含む医薬製剤を対象に投与し、それによって対象において免疫応答を誘導することを含む方法である。本明細書に更に開示されるのは、ウイルス感染の治療を必要とする対象におけるその治療の方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の送達ビヒクル複合体又は送達ビヒクル複合体を含む医薬製剤を投与し、それによって対象におけるウイルス感染を治療することを含む方法である。また本明細書に開示されるのは、癌の治療を必要とする対象におけるその治療の方法であって、有効量の本明細書に記載の送達ビヒクル複合体又は送達ビヒクル複合体を含む医薬製剤を対象に投与し、それによって対象における癌を治療することを含む方法である。場合によっては、癌は、子宮頸癌、頭頸部癌、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前立腺癌、肺癌、又はそれらの組み合わせである。様々な場合では、投与は、筋肉内、腫瘍内、静脈内、腹腔内、又は皮下送達による。

【0018】

また、本明細書に開示されるのは、ポリアニオン性化合物を細胞に送達する方法であって、細胞を、本明細書に記載の送達ビヒクル複合体又は送達ビヒクル複合体を含む医薬製剤に接触させることを含む方法である。場合によっては、細胞は、筋細胞、腫瘍細胞、又はそれらの組み合わせである。場合によっては、ポリアニオン性化合物は、ペプチド、タンパク質、又は前述のいずれかの断片をコードするｍＲＮＡであり、細胞は、送達ビヒクル複合体と接触させた後に、ペプチド、タンパク質、又は断片を発現する。

【0019】

また本明細書に開示されるのは、式（Ｉ）の化合物又は塩を、ポリアニオン性化合物に接触させることを含む、本明細書に開示される送達ビヒクル複合体を形成する方法である。場合によっては、本方法は、式（Ｉ）の化合物又は塩を含む溶液を、ポリアニオン性化合物を含む溶液と混合することを含む。

【0020】

また本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される送達ビヒクル複合体又は本明細書に開示される医薬組成物を含むワクチンである。癌の治療における使用のための、本明細書に開示される送達ビヒクル複合体又は本明細書に開示される医薬組成物を含むワクチンも開示される。患者における癌を治療又は予防する方法であって、本明細書に開示される送達ビヒクル複合体又は本明細書に開示される医薬組成物を患者に投与することを含む方法も開示される。様々な場合では、癌は、子宮頸癌、頭頸部癌、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前立腺癌、肺癌、又はそれらの組み合わせである。

【0021】

前述の概念及び実装形態、並びに以下でより詳細に説明する追加の概念及び実装形態のすべての組み合わせは、本明細書で開示する本発明の主題の一部であると企図され、本明細書で説明する利益を達成するために任意の適切な組み合わせで使用され得ることを諒解されたい。具体的には、本開示の最後に現れる特許請求される主題のすべての組み合わせは、本明細書で開示される本発明の主題の一部であると企図される。

【0022】

更なる態様及び利点は、図面と併せて以下の詳細な説明を検討することから、当業者に明らかになるであろう。本明細書に開示される化合物及び方法は、様々な形態での実装が可能であるが、以下の説明は、特定の実装形態を含むが、それは、あくまでも、本開示が例示的であり、本開示を本明細書に記載される特定の実装形態に限定することを意図しないという理解の下で行われている。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1A】１０：１（製剤Ｆ２、表３を参照）、１２：１（製剤Ｆ６／１２、表３を参照）、１５：１（製剤Ｆ６／１５、表３を参照）、１７：１（製剤Ｆ６／１７、表３を参照）、及び１７：１（全スケーリング）（ｗｔ：ｗｔ）の質量比で、ホタルルシフェラーゼをコードするＲＮＡ（「Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡ」）と複合体化したカチオン性成分として化合物１４０を含む、送達ビヒクル複合体の粒径を示す。カチオン性成分の量が増加した送達ビヒクル複合体は、その結果、より小さい粒径をもたらした。「全スケーリング」条件では、送達ビヒクル組成物の成分のすべて（例えば、ＤＳＰＣ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を増加させて、ＤＶ－１４０－Ｆ６／１７複合体の１７：１比に一致させた。

【図1B】１０：１（Ｆ２、表３参照）、１２：１（Ｆ６／１２、表３参照）、１５：１（Ｆ６／１５、表３参照）、１７：１（Ｆ６／１７、表３参照）、２０：１、及び２５：１（ｗｔ：ｗｔ）の質量比で、ホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）をコードするＲＮＡと複合体化したカチオン性成分として化合物１４０を含む、送達ビヒクル複合体の封入パーセントを示す。カチオン性成分の量が増加した複合体は、より高い封入率をもたらした。

【図2】４℃で１７日間及び４８日間保存した後の、ＤＶ－１４０－Ｆ２及びＦ６製剤（ＤＶ－１４０－Ｆ６／１７）の粒径を示す。

【図3A】Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２及びＤＶ－１１２－Ｆ２の複合体を、２４時間のインビボ時点にわたって－２０℃、４℃、２５℃、及び３７℃の温度に供した後、及び凍結／融解サイクル（３×４℃／２５℃）にわたって供した後に得られた、粒径（図３Ａ）を示す。ＤＶ－１４０－Ｆ２は、すべての実験において、ＤＶ－１１２－Ｆ２よりも良好な安定性を示した。

【図3B】Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２及びＤＶ－１１２－Ｆ２の複合体を、２４時間のインビボ時点にわたって－２０℃、４℃、２５℃、及び３７℃の温度に供した後、及び凍結／融解サイクル（３×４℃／２５℃）にわたって供した後に得られた、多分散指数（図３Ｂ）を示す。ＤＶ－１４０－Ｆ２は、すべての実験において、ＤＶ－１１２－Ｆ２よりも良好な安定性を示した。

【図4】Ｆ２製剤又はＦ６製剤（Ｆ６／１７、表２、３、及び４を参照のこと）のいずれかにおいて、Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化したカチオン性成分として化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、又は１６２を含む送達ビヒクル複合体で（筋肉内注射（「ＩＭ」）を介して）処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける、ホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）のインビボでの発現を示す。データは、本開示の送達ビヒクル複合体が、インビボで、強いＦｌｕｃ発現を示すことを実証する。

【図5】１０：１（製剤Ｆ２）、１２：１（製剤Ｆ６／１２）、１５：１（製剤Ｆ６／１５）、１７：１（製剤Ｆ６／１７）、及び１７：１の質量比でＦｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化された化合物１４０を含む送達ビヒクル複合体で処置（ＩＭ）されたＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）のインビボ発現を示し、すべてスケーリングされている。本開示の送達ビヒクル複合体は、高いルシフェラーゼ発現を示す。

【図6】ヒドロキシエチルキャップを有さないカチオン性ペプトイドを含む送達ビヒクル複合体と比較した、Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）のインビボ発現を示す構造については表５を参照のこと。データは、本開示の送達ビヒクル複合体が、ヒドロキシエチルキャップを有するカチオン性ペプトイドを含まない同様の送達ビヒクル複合体よりも性能が優れていることを実証する。

【図7】Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２、並びに他の示された送達ビヒクル複合体表５を参照のことで腫瘍内（「ＩＴ」）処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＦｌｕｃ ｍＲＮＡのインビボ発現を示す。データは、本開示の送達ビヒクル複合体が、腫瘍内注射を介して強いＦｌｕｃ発現を誘発することを実証する。

【図8A】Ｅ１６及び／又はＥ１８由来のＨＰＶ Ｅ６及び／又はＨＰＶ Ｅ７をコードするｍＲＮＡ（「ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７ ＲＮＡ」）と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２（ＩＭ）で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいて惹起された細胞性免疫応答を示すグラフである。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７複合体は、ヒドロキシエチルキャップを有さないカチオン性成分を含む送達ビヒクル複合体と比較して、強い細胞応答を誘発した（表５を参照のこと）。

【図8B】ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７ ＲＮＡを含むＤＶ－１４０－Ｆ２（ＩＭを介して）で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいて誘発された体液性免疫応答を示すグラフである。ＤＶ－１４０－Ｆ２複合体は、ヒドロキシルキャップを有さないカチオン性成分を含む送達ビヒクル複合体と比較して、強いＩｇＧｒ応答を誘発した（表５を参照のこと）。

【図9A】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清（図９Ａ）及び肺（図９Ｂ）において、スパイク特異的抗体の産生を誘発し、中和抗体も誘導した（図９Ｃ）。

【図9B】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清（図９Ａ）及び肺（図９Ｂ）において、スパイク特異的抗体の産生を誘発し、中和抗体も誘導した（図９Ｃ）。

【図9C】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清（図９Ａ）及び肺（図９Ｂ）において、スパイク特異的抗体の産生を誘発し、中和抗体も誘導した（図９Ｃ）。

【図10A】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10B-1】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10B-2】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10C-1】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10C-2】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10C-3】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10D-1】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10D-2】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図10D-3】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で（ＩＭを介して）処置したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答を示す図である。部位特異的免疫応答を、脾細胞（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ－１及び図１０Ｂ－２）において評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２／ＣＯＶＩＤ複合体は、血清中の、スパイク特異的Ｔ細胞性応答抗体の産生を誘発した（ＣＤ８：図１０Ｃ－１、図１０Ｃ－２、図１０Ｃ－３；ＣＤ４：１０Ｄ－１、図１０Ｄ－２、図１０Ｄ－３）。

【図11A】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で処置（ＩＭ）した、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答（図１１Ａ）が、ｍＲＮＡ－１２７３で処置されたマウスにおいて報告された反応（図１１Ｂ）と同様であったことを示す図である。

【図11B】ＣＯＶＩＤ ＲＮＡの構築物と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２で処置（ＩＭ）した、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて誘発された免疫応答（図１１Ａ）が、ｍＲＮＡ－１２７３で処置されたマウスにおいて報告された反応（図１１Ｂ）と同様であったことを示す図である。

【図12A-1】ｆｌｕ血球凝集素（ＨＡ）をコードするＲＮＡ（Ｆｌｕ Ｈａ ＲＮＡ）と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２が、Ｆｌｕ ＨＡ特異的な体液応答（図１２Ａ－１及び図１２Ａ－２）及び細胞性応答（図１２Ｂ－１及び図１２Ｂ－２）を誘導したことを示し、かつスパイク蛋白及びＦｌｕ ＨＡの両方を標的とする混合ワクチンが、同様の、スパイク特異的であって、かつＦｌｕ ＨＡにも特異的な免疫応答（図１２Ａ－１、図１２Ａ－１、図１２Ｂ－１、図１２Ｂ－２）を誘導したことを示す図である。

【図12A-2】ｆｌｕ血球凝集素（ＨＡ）をコードするＲＮＡ（Ｆｌｕ Ｈａ ＲＮＡ）と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２が、Ｆｌｕ ＨＡ特異的な体液応答（図１２Ａ－１及び図１２Ａ－２）及び細胞性応答（図１２Ｂ－１及び図１２Ｂ－２）を誘導したことを示し、かつスパイク蛋白及びＦｌｕ ＨＡの両方を標的とする混合ワクチンが、同様の、スパイク特異的であって、かつＦｌｕ ＨＡにも特異的な免疫応答（図１２Ａ－１、図１２Ａ－１、図１２Ｂ－１、図１２Ｂ－２）を誘導したことを示す図である。

【図12B-1】ｆｌｕ血球凝集素（ＨＡ）をコードするＲＮＡ（Ｆｌｕ Ｈａ ＲＮＡ）と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２が、Ｆｌｕ ＨＡ特異的な体液応答（図１２Ａ－１及び図１２Ａ－２）及び細胞性応答（図１２Ｂ－１及び図１２Ｂ－２）を誘導したことを示し、かつスパイク蛋白及びＦｌｕ ＨＡの両方を標的とする混合ワクチンが、同様の、スパイク特異的であって、かつＦｌｕ ＨＡにも特異的な免疫応答（図１２Ａ－１、図１２Ａ－１、図１２Ｂ－１、図１２Ｂ－２）を誘導したことを示す図である。

【図12B-2】ｆｌｕ血球凝集素（ＨＡ）をコードするＲＮＡ（Ｆｌｕ Ｈａ ＲＮＡ）と複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２が、Ｆｌｕ ＨＡ特異的な体液応答（図１２Ａ－１及び図１２Ａ－２）及び細胞性応答（図１２Ｂ－１及び図１２Ｂ－２）を誘導したことを示し、かつスパイク蛋白及びＦｌｕ ＨＡの両方を標的とする混合ワクチンが、同様の、スパイク特異的であって、かつＦｌｕ ＨＡにも特異的な免疫応答（図１２Ａ－１、図１２Ａ－１、図１２Ｂ－１、図１２Ｂ－２）を誘導したことを示す図である。

【図13A】様々な送達ビヒクルを含むワクチン製剤で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫されたマウスにおける、スパイク特異的免疫グロブリン応答の比較を示すチャートである。送達ビヒクル１４０－Ｆ６．３は、３５日目に、市販の製剤ＳＭ－１０２及びＡＬＣ－０３１５と同等の性能を発揮した。

【図13B】様々な送達ビヒクルを含むワクチン製剤で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫されたマウスにおける、スパイク特異的Ｔ細胞性応答の比較を示すチャートである。送達ビヒクル１４０－Ｆ６．３は、市販の製剤ＳＭ－１０２及びＡＬＣ－０３１５と同等に性能を発揮した。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本明細書では、いくつかの例において、例えば、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを含む、ヒドロキシエチルでキャップされたカチオン性ペプトイドを含む送達ビヒクル組成物が開示される。本開示の送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物のヒドロキシエチルでキャップされた、第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドと核酸などのポリアニオン性化合物との間に、静電相互作用を形成して、送達ビヒクル複合体を形成することができ、その送達ビヒクル複合体においては、ポリアニオン性化合物が、複合体のカーゴとして機能する。送達ビヒクル複合体は、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）などのポリアニオン性化合物を細胞に送達するのに有用である。ポリアニオン性カーゴとしてｍＲＮＡを含む、本開示の送達ビヒクル複合体は、予想外に、インビトロ及びインビボの両方で優れたｍＲＮＡ発現を示す。送達ビヒクル複合体のｍＲＮＡが、例えば、ウイルス抗原をコードする場合、送達ビヒクル複合体は、体液性免疫応答及び細胞性免疫応答をインビボで誘発し得るので、ワクチンとして機能する。本明細書に開示される送達ビヒクル複合体は、それらが安定であり、良好な忍容性及び低い毒性を示すという点で、更に有利である。

【0025】

本明細書中で使用される場合、「ペプトイド」とは、ペプチド骨格の１つ以上の窒素原子が、側鎖によって置換されている、ペプチド模倣化合物をいう。本明細書中で使用される場合、「脂質化ペプトイド」又は「リピトイド」は、窒素原子上の側鎖の１つ以上が脂質を含むペプトイドをいう。本明細書で使用される場合、「ポリアニオン性」とは、少なくとも２つの負電荷を有する化合物（例えば、核酸）をいう。

【0026】

送達ビヒクル組成物
本開示のいくつかの例示的な送達ビヒクル組成物は、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを１つ以上含む。これらの正に荷電したペプトイドは、ポリアニオン性化合物（例えば、核酸）と会合して、送達ビヒクル複合体を形成し得る。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は：例えばリン脂質などの、アニオン性又は両性イオン性成分の１つ以上と、例えばステロールなどの中性脂質と、ＰＥＧ化脂質などの遮蔽脂質と、を更に含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、アニオン性又は両性イオン性成分（例えば、リン脂質）、中性脂質（例えば、ステロール）、及び遮蔽脂質（例えば、ＰＥＧ化脂質）を更に含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド、アニオン性又は両性イオン性成分（例えば、リン脂質）、中性脂質（例えば、ステロール）、及び遮蔽脂質（例えば、ＰＥＧ化脂質）から本質的になる。

【0027】

ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド成分
本開示の送達ビヒクル組成物は、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（「カチオン性成分」、「イオン性脂質」と呼ばれることもある）を含む。いくつかの実装形態では、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドは、式（Ｉ）の化合物：

【0028】

【化8】

（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６であり、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１～３アルキル、又はＣ_２～３ヒドロキシアルキルであり、各Ｒ^２は、独立して、Ｃ_８～２４アルキル又はＣ_８～２４アルケニルである。本明細書で使用される場合、「アルキル」は、１～３０個の炭素原子、例えば、１～４個（例えば、１、２、３、又は４個）の炭素原子を含有する、直鎖及び分岐鎖の飽和炭化水素基を指す。Ｃ_ｎという用語は、アルキル基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味する。例えば、Ｃ_３アルキルは、３個の炭素原子を有するアルキル基を指す。Ｃ_１～４アルキルは、全範囲（すなわち、１～４個の炭素原子）、並びにすべてのサブグループ（例えば、１～２、１～３、２～３、２～４、１、２、３、及び４個の炭素原子）を包含する数の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基の非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル（２－メチルプロピル）、及びｔ－ブチル（１，１－ジメチルエチル）が挙げられる。別段示されない限り、アルキル基は、非置換アルキル基又は置換アルキル基であり得る。本明細書で使用される場合、「ヒドロキシアルキル」は、ヒドロキシル基によって置換されている、本明細書で定義されるアルキル基を指す。例えば、「Ｃ_２ヒドロキシアルキル」又は「ヒドロキシエチル」は、構造：

【0029】

【化9】

を有する。本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、二重結合を有し、２～３０個の炭素原子、例えば、２～４個の炭素原子（例えば、１、２、３、又は４個）を含有する、直鎖及び分岐鎖炭化水素基を指す。Ｃ_ｎという用語は、アルケニル基が、「ｎ」個の炭素原子を有することを意味する。例えば、Ｃ_３アルケニルは、３個の炭素原子を有するアルケニル基を指す。Ｃ_２～Ｃ_４アルケニルは、全範囲（すなわち、２～４個の炭素原子）、並びにすべてのサブグループ（例えば、２～３、２～４、２、３、及び４個の炭素原子）を包含する炭素原子数を有するアルケニル基を指す。アルケニル基の非限定的な例としては、エテニル、プロペニル、及びブテニルが挙げられる。別段示されない限り、アルケニル基は、非置換アルケニル基又は置換アルケニル基であり得る。

【0030】

いくつかの実装形態では、ｎは、２～５である。様々な実装形態では、ｎは、３～４である。いくつかの実装形態では、ｎは、１である。様々な実装形態では、ｎは、２である。場合によっては、ｎは、３である。様々な場合では、ｎは、４である。いくつかの実装形態では、ｎは、５である。様々な実装形態では、ｎは、６である。

【0031】

いくつかの実装形態では、Ｒ^１は、Ｈである。様々な実装形態では、Ｒ^１は、Ｃ_１～３アルキルである。場合によっては、Ｒ^１は、メチル又はエチルである。いくつかの実装形態では、Ｒ^１は、エチルである。様々な実装形態では、Ｒ^１は、Ｃ_２～３ヒドロキシアルキルである。場合によっては、Ｒ^１は、

【0032】

【化10】

（ヒドロキシエチル）である。様々な場合では、Ｒ^１は、エチル又はヒドロキシエチルである。

【0033】

いくつかの実装形態では、各Ｒ^２は、独立して、Ｃ_８～１８アルキル又はＣ_８～１８アルケニルである。様々な実装形態では、各Ｒ^２は独立して、Ｃ_８～１６アルキル又はＣ_{１０～１８}アルケニルである。場合によっては、各Ｒ^２は、独立して、Ｃ_{１０～１２}アルキル又はＣ_{１０～１８}アルケニルである。いくつかの実装形態では、各Ｒ^２は、独立して、Ｃ_８～１８アルキル、Ｃ_８～１６アルキル、Ｃ_８～１４アルキル、又はＣ_８～１２アルキルである。様々な実装形態では、各Ｒ^２は、独立して、

【0034】

【化11】

からなる群から選択される。場合によっては、各Ｒ^２は、独立して、

【0035】

【化12】

からなる群から選択される。様々な場合では、各Ｒ^２は、独立して、

【0036】

【化13】

からなる群から選択される。いくつかの実装形態では、各Ｒ^２は、独立して、

【0037】

【化14】

である。

【0038】

いくつかの実装形態では、ｎは、４であり、Ｒ^１はＨであり、各Ｒ^２は、

【0039】

【化15】

である。

【0040】

企図される式（Ｉ）の化合物としては、表１に列挙される化合物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0041】

【表1-1】

【0042】

【表1-2】

【0043】

いくつかの実装形態では、式（Ｉ）の化合物は、化合物１４０である。

【0044】

本開示の化合物は、それらの化学構造及び／又は化学名によって本明細書において定義される。化合物が化学構造及び化学名の両方によって言及され、化学構造及び化学名が矛盾する場合、化学構造が化合物が何であるかを決定するものとする。

【0045】

別段示されない限り、本明細書に描かれる構造はまた、構造のすべての異性体（例えば、鏡像異性体、ジアステレオマー、シス－トランス、配座異性体、及び回転異性体）形態を含むことが意図されている。例えば、各不斉中心についてのＲ配置及びＳ配置、（Ｚ）及び（Ｅ）二重結合異性体、並びに（Ｚ）及び（Ｅ）配座異性体は、異性体の１つのみが具体的に示されていない限り、本開示に含まれる。したがって、本化合物の単一の立体化学異性体並びに鏡像異性体、ジアステレオマー異性体、シス／トランス異性体、配座異性体、及び回転異性体、を混合した混合物は、本開示の範囲内である。場合によっては、本明細書に開示される化合物は、立体異性体である。「立体異性体」は、１つ以上の立体中心のキラリティが異なる化合物を指す。立体異性体としては、エナンチオマー及びジアステレオマーが挙げられる。本明細書に開示される化合物は、単一の立体異性体として、又は立体異性体の混合物として存在し得る。本明細書に示される化合物の立体化学は、別段記載されない限り、絶対的ではなく相対的な立体化学を示す。本明細書に示されるように、単一の立体異性体、単一のジアステレオマー、又は単一のエナンチオマーは、少なくとも５０％を超える示された立体異性体、ジアステレオマー、又はエナンチオマーであり、場合によっては、少なくとも９０％又は９５％の、示された立体異性体、ジアステレオマー、又はエナンチオマーである化合物を指す。

【0046】

本明細書に記載の化合物は、遊離形態で存在することができるか、又は適切な場合、薬学的に許容される塩として存在することができる。本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能な塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の副作用（例えば、毒性、刺激、アレルギー応答など）を伴わずに、ヒト及び下等動物の組織に接触させて使用するために適切であり、そして合理的な利益／リスク比に見合う、化合物の塩をいう。薬学的に許容される塩は、当技術分野において周知である。本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩としては、適切な無機及び有機の酸及び塩基に由来するものが挙げられる。これらの塩は、化合物の最終的な単離及び精製の間に、インサイチュで調製され得る。薬学的に受容可能な非毒性酸付加塩の例は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸）若しくは有機酸（例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、又はマロン酸）を用いて、又は、例えばイオン交換のような、当該分野で使用される他の方法を使用することによって、形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩としては、アジペート、アルギネート、アスコルベート、アスパルテート、ベンゼンスルホネート、ベンゾエート、ビスルフェート、ボレート、ブチレート、カンホレート、カンファースルホネート、シトレート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エタンスルホネート、ホルメート、フマレート、グルコヘプトネート、グリセロホスフェート、グルコネート、グルタメート、ヘミスルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロヨージド、２－ヒドロキシ－エタンスルホネート、ラクトビオネート、ラクテート、ラウレート、ラウリルスルフェート、マレート、マレエート、マロネート、メタンスルホネート、２－ナフタレンスルホネート、ニコチネート、ニトレート、オレエート、オキサレート、パルミテート、パモエート、ペクチネート、ペルスルフェート、３－フェニルプロピオネート、ホスフェート、ピカレート、ピバレート、プロピオネート、ステアレート、スクシネート、スルフェート、タルトレート、チオシアネート、ｐ－トルエンスルホネート、ウンデカノエート、バレレートの塩などが挙げられる。カルボン酸又は他の酸性官能基を含有する化合物の塩は、適切な塩基と反応させることによって調製することができる。このような塩には、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩、Ｎ^＋（Ｃ_１～４アルキル）_４塩、及び有機塩基の塩、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、モルホリン、ピリジン、ピペリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、２－ヒドロキシエチルアミン、ビス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、トリ－（２－ヒドロキシエチル）アミン、プロカイン、ジベンジルピペリジン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ，Ｎ’－ビスデヒドロアビエチルアミン、グルカミン、Ｎ－メチルグルカミン、コリジン、キニーネ、キノリン、及び塩基性アミノ酸、例えばリジン及びアルギニンの塩が含まれるが、これらに限定されない。本開示はまた、本明細書に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化を想定する。水溶性又は油溶性又は分散性生成物は、このような四級化によって得ることができる。代表的なアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。更なる薬学的に許容可能な塩としては、適切な場合、対イオン（例えば、ハライド、ヒドロキシド、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ニトレート、低級アルキルスルホネート及びアリールスルホネート）を使用して形成される、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。

【0047】

実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約２５モル％～約７０モル％の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。単位「モル％」又は「モル率」は、送達ビヒクル組成物の特定の成分のモル数を、送達ビヒクル組成物中のすべての成分の総モル数で割り、１００％を掛けたものを指す。ポリアニオン性カーゴは、送達ビヒクル組成物の総モル数の一部として計算されない。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３０モル％～約６０モル％、又は約３５モル％～約５５モル％、又は約３０モル％～約４５モル％、又は約３５モル％～約４０モル％、又は約４５モル％～約６０モル％、又は約５０モル％～約５５モル％、又は約３８モル％～約５２モル％、又は約３８モル％、又は約５２モル％の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約５０モル％未満の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを含み、例えば、約４９モル％未満、約４８モル％未満、約４７モル％未満、約４６モル％未満、約４５モル％未満、約４４モル％未満、約４３モル％未満、約４２モル％未満、約４１モル％未満、約４０モル％未満、約３９モル％未満、約３８モル％未満、約３７モル％未満、約３６モル％未満、約３５モル％未満、約３４モル％未満、約３３モル％未満、約３２モル％未満、約３１モル％未満、約３０モル％未満；かつ約２０モル％超、約２１モル％超、約２２モル％超、約２３モル％超、約２４モル％超、約２５モル％超、約２６モル％超、約２７モル％超、約２８モル％超、約２９モル％超、約３０モル％超、約３１モル％超、約３３モル％超、約３４モル％超、約３５モル％超、約３６モル％超、約３８モル％超、約３９モル％超、約４０モル％超、約４１モル％超、約４２モル％超、約４３モル％超、又は約４４モル％超の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドなどを含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約５０モル％未満、例えば、約４９モル％未満、約４８モル％未満、約４７モル％未満、約４６モル％未満、約４５モル％未満、約４４モル％未満、約４３モル％未満、約４２モル％未満、約４１モル％未満、約４０モル％未満、約３９モル％未満、約３８モル％未満、約３７モル％未満、約３６モル％未満、約３５モル％未満、約３４モル％未満、約３３モル％未満、約３２モル％未満、約３１モル％未満、約３０モル％未満；かつ約２０モル％超、約２１モル％超、約２２モル％超、約２３モル％超、約２４モル％超、約２５モル％超、約２６モル％超、約２７モル％超、約２８モル％超、約２９モル％超、約３０モル％超、約３１モル％超、約３３モル％超、約３４モル％超、約３５モル％超、約３６モル％超、約３８モル％超、約３９モル％超、約４０モル％超の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドなどを含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３０モル％～約４９．５モル％、又は約３０モル％～約４５モル％、又は約３０モル％～約３５モル％、又は約４０モル％～約４５モル％、又は約３５モル％～約４９モル％、又は約３６モル％～約４８モル％、又は約３８モル％～約４５モル％、又は約３８モル％～約４２モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３０モル％～約４９．５モル％又は約３５モル％～約４９モル％又は約３６モル％～約４８モル％又は約３８モル％～約４５モル％又は約３８モル％～約４２モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３０モル％～約３５モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約４０モル％～約４５モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３５モル％～約３９モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。様々な場合では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３９モル％～約５２モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約４２モル％～約４９モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約５０モル％～約５２モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３０モル％、約３１モル％、約３２モル％、約３３モル％、約３４モル％、約３５モル％、約３６モル％、約３７モル％、約３８モル％、約３９モル％、約４０モル％、約４１モル％、約４２モル％、約４３モル％、約４４モル％、又は約４５モル％のヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）を含む。

【0048】

アニオン性／双性イオン性成分
いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、アニオン性又は双性イオン性である成分（「アニオン性／双性イオン性成分」）を更に含む。アニオン性／双性イオン性成分は、カーゴの比に影響を及ぼすことなく、かつ／又はエンドソームにおける低ｐＨでのプロトン化を介した粒子若しくは送達ビヒクルエンドソーム脱出に寄与することなく、送達ビヒクル組成物から形成される粒子若しくは送達ビヒクル複合体のゼータ電位を緩衝することができる。双性イオン性成分は、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイド及びポリアニオン性カーゴ化合物の両方と相互作用することによって、粒子を緊密に保持する更なる機能を果たすことができる。アニオン性成分はまた、粒子又は送達ビヒクルのコア－シェル構造の形成を可能にし得るが、ここで、最初に正味の正のゼータ電位粒子が作製され（例えば、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドとカーゴとを正の＋／－電荷比で混合することによって）、次いでこれがアニオン性成分でコーティングされる。これらの負に荷電した多成分系粒子は、正に荷電したものよりも細網内皮系（ＲＥＳ）クリアランスを良好に回避する。

【0049】

送達ビヒクル組成物の適切なアニオン性及び双性イオン性成分の例は、国際特許出願公開第２０２０／０６９４４２号及び国際特許出願公開第２０２０／０６９４４５号に記載されており、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実装形態では、双性イオン性成分は、１つ以上のリン脂質を含む。リン脂質は、溶液中の複合体に更なる安定化を提供することができ、かつ、それらの両親媒性特性及び細胞膜を破壊する能力によって、細胞のエンドサイトーシスを促進することができる。

【0050】

いくつかの実装形態では、１つ以上のリン脂質は、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される。場合によっては、リン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＥ、又はそれらの組み合わせである。様々な実装形態では、リン脂質はＤＳＰＣである。様々な場合では、リン脂質は、ＤＯＰＥである。

【0051】

実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１モル％～約４０モル％のリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥ）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約３モル％～約３０モル％、又は約５モル％～約１５モル％、又は約５モル％～約１０モル％、又は約１０モル％～約１５モル％、又は約９モル％～約１２モル％、又は約７モル％～約１１モル％、又は約７モル％～約１２モル％、又は約１０モル％～約１４モル％、又は約９モル％、又は約１２モル％のリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥ）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１０モル％～約１１モル％のリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥ）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１０．０モル％、約１０．１モル％、約１０．２モル％、約１０．３モル％、約１０．４モル％、約１０．５モル％、約１０．６モル％、約１０．７モル％、約１０．８モル％、約１０．９モル％、又は約１１．０モル％のリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥ）を含む。

【0052】

中性脂質成分
いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、中性脂質である成分（「中性脂質成分」）を更に含む。中性脂質成分は、多成分送達系のインビボでのクリアランスを促進するために、分解又は加水分解するように設計することができる。意図される中性脂質成分としては、例えば、天然に存在する脂質、及びペプトイドのＮ位に脂質部分を含む脂質化ペプトイドが挙げられる。脂質化ペトイド（petoid）の更なる例は、国際特許出願公開第２０２０／０６９４４２号及び国際特許出願公開第２０２０／０６９４４５号に記載されており、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0053】

場合によっては、送達ビヒクル組成物の中性脂質成分は、１つ以上のステロールを含む。いくつかの実装形態では、１つ以上のステロールは、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。場合によっては、ステロールはコレステロールを含む。実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１０モル％～約８０モル％のステロール（例えば、コレステロール）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約２０モル％～約７０モル％、又は約２５モル％～約６０モル％、又は約３０モル％～約５５モル％、又は約３５モル％～約５０モル％、又は約２５モル％～約４５モル％、又は約４０モル％～約６０モル％、又は約３０モル％～約４０モル％、又は約４５モル％～約５５モル％、又は約３５モル％、又は約５０モル％のステロール（例えば、コレステロール）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約４０モル％～約５５モル％、又は約４０モル％～約４５モル％、又は約５０モル％～約５５モル％のステロール（例えば、コレステロール）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約４０モル％、約４１モル％、約４２モル％、約４３モル％、約４４モル％、約４５モル％、約４６モル％、約４７モル％、約４８モル％、約４９モル％、約５０モル％、約５１モル％、約５２モル％、約５３モル％、約５４モル％、又は約５５モル％のステロール（例えば、コレステロール）を含む。

【0054】

遮蔽成分
いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、遮蔽成分を更に含む。遮蔽成分は、立体障壁として機能することによって粒子又は送達ビヒクルのインビボでの安定性を増加させ、その結果、循環半減期を改善することができる。好適な遮蔽成分の例は、国際特許出願公開第２０２０／０６９４４２号及び国際特許出願公開第２０２０／０６９４４５号に記載されており、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0055】

いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、１つ以上のＰＥＧ化脂質を含む。本明細書中で使用される場合、「ＰＥＧ化脂質」は、ポリエチレングリコール部分に共有結合した、任意の脂質又は脂質様化合物を含む。ＰＥＧ化脂質に好適な脂質部分としては、例えば、非置換であっても置換され得る分岐鎖若しくは直鎖脂肪族部分、又は非置換であっても置換され得る脂肪酸、ステロール、及びイソプレノイドを含む天然脂質化合物に由来する部分を挙げることができる。

【0056】

いくつかの実装形態では、脂質部分は、約６～約５０個の炭素原子又は約１０～約５０個の炭素原子を有する、分岐鎖又は直鎖脂肪族部分を含み得る。脂肪族部分は、いくつかの実装形態では、１つ以上のヘテロ原子、及び／又は１つ以上の二重又は三重結合（すなわち、飽和又は一価若しくは多価不飽和）を含むことができる。場合によっては、脂質部分は、脂肪族の直鎖又は分岐鎖部分を含み得、各疎水性のテールは独立して、約８～約３０個の炭素原子又は約６～約３０個の炭素原子を有し、脂肪族部分は、非置換又は置換され得る。様々な実装形態では、脂質部分は、例えば、脂肪酸及び脂肪アルコールに由来する脂肪族炭素鎖を含み得る。いくつかの実装形態では、各脂質部分は、独立して、Ｃ_８～Ｃ_２４アルキル又はＣ_８～Ｃ_２４アルケニルであり、ここで、Ｃ_８～Ｃ_２４アルケニルは、場合によっては、一価不飽和又は多価不飽和であり得る。

【0057】

本開示の実装形態において使用される天然脂質部分は、例えば、リン脂質、グリセリド（例えば、ジグリセリド又はトリグリセリドなど）、グリコシルグリセリド、スフィンゴ脂質、セラミド、並びに飽和及び不飽和ステロール、イソプレノイド、並びに他の同様の天然脂質に由来し得る。

【0058】

他の適切な脂質部分としては、任意選択的に置換されたアリール又はアリールアルキル部分などの親油性芳香族基を挙げることができ、それらとしては例えば、ナフタレニル又はエチルベンジル、又はエステル官能基を含む脂質、例えばステロールエステル及びワックスエステルが挙げられる。

【0059】

いくつかの実装形態では、１つ以上のＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾ステロールを含む。様々な実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾コレステロールを含む。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ就職セラミド脂質である。場合によっては、ＰＥＧ修飾セラミンは、Ｎ－オクタノイル－スフィンゴシン－１－｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝及びＮ－パルミトイル－スフィンゴシン－１－｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、並びにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0060】

いくつかの実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾リン脂質であり、そのリン脂質は、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される。様々な実装形態では、リン脂質はＤＯＰＥである。

【0061】

いくつかの実装形態では、１つ以上のＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールを含む。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾ＤＭＰＥ（ＤＭＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＳＰＥ（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、ＰＥＧ修飾ＤＰＰＥ（ＤＰＰＥ－ＰＥＧ）、及びＰＥＧ修飾ＤＯＰＥ（ＤＯＰＥ－ＰＥＧ）からなる群から選択されるＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールである。

【0062】

様々な実装形態では、ＰＥＧ化脂質は、ジミリストイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、ジステアロイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、ジパルミトイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、及びジオレオイルグリセロール－ポリエチレングリコール（ＤＯＧ－ＰＥＧ）からなる群から選択される。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧである。

【0063】

前述のＰＥＧ化脂質におけるＰＥＧ鎖の分子量は、送達ビヒクル組成物の特性を最適化するために、所望のように調整することができる。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ鎖は、３５０～６０００ｇ／モル、１，０００～５０００ｇ／モル、又は２０００～５０００ｇ／モル、又は約１，０００～３０００ｇ／モル、又は約１５００～４０００ｇ／モルの分子量を有する。場合によっては、ＰＥＧ脂質のＰＥＧ鎖は約３５０ｇ／モル、５００ｇ／モル、６００ｇ／モル、７５０ｇ／モル、１，０００ｇ／モル、２，０００ｇ／モル、３，０００ｇ／モル、５，０００ｇ／モル、又は１０，０００ｇ／モルの分子量を有する。いくつかの実装形態では、ＰＥＧ化脂質のＰＥＧ鎖は約５００ｇ／モル、７５０ｇ／モル、１，０００ｇ／モル、２，０００ｇ／モル又は５，０００ｇ／モルの分子量を有する。ＰＥＧ鎖は、分岐鎖状又は直鎖状であり得る。場合によっては、ＰＥＧ化脂質は、ジミリストイルグルセロール－ポリエチレングリコール２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）である。

【0064】

実装形態では、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１モル％～約５モル％のＰＥＧ化脂質（例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１モル％～約３モル％、又は約１モル％～約２モル％、又は約２モル％～約５モル％、又は約０．５モル％～約１．５モル％、又は約１．５モル％～約２．５モル％、又は約１．５モル％～約２．０モル％、又は約２．０モル％～約２．５モル％、又は約１モル％、又は約１．５モル％、又は約２モル％、又は約２．５モル％、又は約３モル％、又は約３．５モル％、又は約４モル％、又は約５モル％のＰＥＧ化脂質（例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１モル％～約３モル％、又は約１モル％～約２モル％、又は約２モル％～約５モル％、又は約０．５モル％～約１．５モル％、又は約１．５モル％～約２．５モル％、又は約１モル％、又は約１．５モル％、又は約２モル％、又は約２．５モル％、又は約３モル％、又は約３．５モル％、又は約４モル％、又は約５モル％のＰＥＧ化脂質（例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物中の成分の総モル数に基づいて、約１．５モル％、１．６モル％、１．７モル％、１．８モル％、１．９モル％、２．０モル％、２．１モル％、２．２モル％、２．３モル％、２．４モル％、又は約２．５モル％のＰＥＧ化脂質（例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を含む。

【0065】

代表的な実施例
非限定的な送達ビヒクルの組み合わせを以下に記載する。先に記載したように、単位「モル％」又は「モル率」は、送達ビヒクル組成物の特定の成分のモル数を、送達ビヒクル組成物中の全成分の総モル数で割り、１００％を掛けたものを指す。

【0066】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、少なくとも９９モル％のカチオン性成分及び約１モル％未満の遮蔽成分を含む（例えば、表２中の式Ｆ１Ａ）。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、約２０モル％未満のカチオン性成分、約５モル％未満の遮蔽成分、及び約７５モル％を超える、アニオン性／双性イオン性成分と中性脂質成分との混合物を含む（例えば、表２の式Ｆ２Ａ及び式Ｆ４Ａ）。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、約３０～約４５モル％のカチオン性成分、約５０～約７０モル％の、アニオン性／双性イオン性成分と中性脂質成分との混合物、及び約１．５～約４．５モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２中の式Ｆ３Ａ及び式Ｆ５Ａ）。様々な場合では、送達ビヒクル組成物は、約１５～約３５モル％のカチオン性成分、約６０～約８０モル％の、アニオン性／双性イオン性成分と中性脂質成分との混合物、及び約１．５～約３．０モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２の式Ｆ２Ａ及び式Ｆ３Ａ）。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約１５～約３５モル％のカチオン性成分、約１０～約２０モル％のアニオン性／双性イオン性成分、約５０～約６５モル％の中性脂質成分、及び約１．５～約３．０モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２中の式Ｆ２Ａ及び式Ｆ３Ａ）。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約１０～約２０モル％のカチオン性成分、約７５～約８９モル％の脂質成分、及び約１～約５モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２の式Ｆ４Ａ）。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、約４０～約５０モル％のカチオン性成分、約５０～約５９モル％のアニオン性／双性イオン性成分、及び約１～約５モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２中の式Ｆ５Ａ）。様々な場合では、送達ビヒクル組成物は、約３０～約５０モル％のカチオン性成分、約５０～約７０モル％の中性脂質成分、及び約１～約５モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２中の式Ｆ６Ａ）。様々な場合では、送達ビヒクル組成物は、約４０～約４５モル％のカチオン性成分、約５０～約６０モル％の、アニオン性／双性イオン性成分と中性脂質成分との混合物、及び約１．５～約２．０モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２の式Ｆ６．１及び式Ｆ６．２）。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４０～約４５モル％のカチオン性成分、約１０～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分、約４０～約４５モル％の中性脂質成分、及び約１．５～約２．０モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２中の式Ｆ６．１及び式Ｆ６．２）。様々な場合では、送達ビヒクル組成物は、約３０～約３５モル％のカチオン性成分、約６０～約７０モル％の、アニオン性／双性イオン性成分と中性脂質成分との混合物、及び約２．０～約３．０モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２の式Ｆ６．３）。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３０～約３５モル％のカチオン性成分、約１０～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分、約５０～約５５モル％の中性脂質成分、及び約２．０～約３．０モル％の遮蔽成分を含む（例えば、表２の式Ｆ６．３）。カチオン性成分は、例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。

【0067】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３０モル％～約６０モル％（例えば、約３５モル％～約３９モル％、又は約３９モル％～約５２モル％、又は約４２モル％～約４９モル％、又は約５０モル％～約５２モル％）のカチオン性成分と、約３モル％～約２０モル％のアニオン性／双性イオン性成分と；約２５モル％～約６０モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約５モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３５～約５５モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３０モル％～約５５モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３８～約５２モル％のカチオン性成分と、約９～約１２モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３５モル％～約５０モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約２モル％の遮蔽成分と、を含む。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、約３０モル％～約４９モル％の式（Ｉ）の化合物と、約５モル％～約１５モル％のリン脂質と、約３０モル％～約５５モル％のステロールと、約１モル％～約３モル％のＰＥＧ化脂質と、を含む。場合によっては、組成物は、約３５モル％～約４９モル％の式（Ｉ）の化合物又は塩と、約７モル％～約１２モル％のリン脂質と、約３５モル％～約５０モル％のステロールと、約１モル％～約２モル％のＰＥＧ化脂質と、を含む。カチオン性成分は、例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。

【0068】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３０モル％～約４５モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４０モル％～約６０モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約５モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３５モル％～約４０モル％のカチオン性成分と、約８モル％～約１２モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４５モル％～約５０モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３８．２モル％のカチオン性成分と、約１１．８モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４８．２モル％の中性脂質化合物と、約１．９モル％の遮蔽成分（「製剤Ｆ２」）と、を含む。カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、以下の表２に示される製剤Ｆ２を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３８．２モル％の化合物１４０、約１１．８モル％のＤＳＰＣ、約４８．２モル％のコレステロール、及び約１．９モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ－２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ２」）。

【0069】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４５～約５５モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３５モル％～約５５モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約５モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４８モル％～約５２モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１２モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３８モル％～約４２モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約５１．３モル％のカチオン性成分と、約９．３モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３８．０モル％の中性脂質化合物と、約１．５モル％の遮蔽成分（「Ｆ６／１７型」）と、を含む。カチオン性成分は、例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、以下の表２に示される製剤Ｆ６／１７を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約５１．３モル％の化合物１４０、約９．３モル％のＤＳＰＣ、約３８．０モル％のコレステロール、及び約１．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６／１７」）。

【0070】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３０モル％～約４９モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３０モル％～約５５モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４８モル％～約５２モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１２モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３８モル％～約４２モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４２．６モル％のカチオン性成分と、約１０．０モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４４．７モル％の中性脂質化合物と、約１．７モル％の成分と、を含む。カチオン性成分は、例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、以下の表２に示される製剤Ｆ６／１２又は製剤Ｆ６／１５を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４２．６モル％の化合物１４０、約１０．９モル％のＤＳＰＣ、約４４．７モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６／１２」）。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４８．１モル％の化合物１４０、約９．９モル％のＤＳＰＣ、約４０．４モル％のコレステロール、及び約１．６モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６／１５」）。

【0071】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４０モル％～約４９モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３０モル％～約５５モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４２モル％～約４６モル％のカチオン性成分と、約７モル％～約１２モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４１モル％～約４５モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約２モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４４．４モル％のカチオン性成分と、約１０．６モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４３．３モル％の中性脂質化合物と、約１．７モル％の成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４４．４モル％のカチオン性成分と、約１０．６モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約４３．４モル％の中性脂質化合物と、約１．７モル％の成分と、を含む。カチオン性成分は、例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、以下の表２に示されるＦ６．１又はＦ６．２を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４４．４モル％の化合物１４０、約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約４３．３モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６．１」）。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約４４．４モル％の化合物１４０、約１０．６モル％のＤＳＰＣ、約４３．４モル％のコレステロール、及び約１．７モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６．２」）。

【0072】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３０モル％～約３９モル％のカチオン性成分と、約５モル％～約１５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約３０モル％～約５５モル％の中性脂質化合物と、約１モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３０モル％～約３５モル％のカチオン性成分と、約７モル％～約１２モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約５０モル％～約５５モル％の中性脂質化合物と、約２モル％～約３モル％の遮蔽成分と、を含む。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３３．１モル％のカチオン性成分と、約１０．５モル％のアニオン性／双性イオン性成分と、約５３．８モル％の中性脂質化合物と、約２．５モル％の成分と、を含む。カチオン性成分は、例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、及び１６２などの表１に列挙される化合物）の任意のものなどの、本明細書に記載される任意のカチオン性成分であり得る。いくつかの実装形態では、カチオン性化合物は、化合物１４０である。アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書に記載される任意のアニオン性／双性イオン性成分（例えば、リン脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＳＰＣ又はＤＯＰＥである。中性脂質成分は、本明細書に記載される任意の中性脂質（例えば、ステロール）であり得る。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。遮蔽成分は、本明細書に記載される任意の遮蔽成分（例えば、ＰＥＧ化脂質）であり得る。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、以下の表２に示されるＦ６．３を含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、約３３．１モル％の化合物１４０、約１０．５モル％のＤＳＰＣ、約５３．８モル％のコレステロール、及び約２．５モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６．１」）。

【0073】

カチオン性成分としての化合物１４０（モル％によって特徴付けられる）に基づく、本開示の送達ビヒクル組成物の非限定的な例は、以下の表２に見出すことができる。

【0074】

【表2】

【0075】

場合によっては、送達ビヒクル組成物は、Ｆ６．１、Ｆ６．２、又はＦ６．３である。場合によっては、送達ビヒクル組成物は、Ｆ１Ａ、Ｆ２Ａ、Ｆ３Ａ、Ｆ４Ａ、Ｆ５Ａ、Ｆ６Ａ、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６／１２、Ｆ６／１５、又はＦ６／１７である。

【0076】

送達ビヒクル複合体（ＤＶ）
本明細書に開示される送達ビヒクル組成物は、送達ビヒクル組成物のカチオン性成分とポリアニオン性化合物との間の静電相互作用を介して、１つ以上のポリアニオン性化合物（例えば、核酸）と複合体を形成することができる。したがって、送達ビヒクル複合体とは、本明細書に開示される送達ビヒクル組成物と、ポリアニオン性化合物とを含む、混合物を指す。複合体は、場合によっては、多量のカーゴ封入を可能にし、安定であり、インビボでの優れた効率及び耐容性を示す。したがって、送達ビヒクル複合体は、その中に封入されたポリアニオン性カーゴを標的細胞に輸送するための送達ビヒクルとして有用である。追加的又は大体的に、送達ビヒクル複合体は、非アニオン性カーゴを含むことができる。したがって、本開示の別の一態様は、（１）本明細書で前述した送達ビヒクル組成物、及び（２）ポリアニオン性化合物（又はカーゴ）、を含む送達ビヒクル複合体に関する。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、１つのポリアニオン性化合物（例えば、１つのＲＮＡ）と複合体を形成する。様々な実装形態では、送達ビヒクル組成物は、２つの異なるポリアニオン化合物（例えば、２つの異なるＲＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡ）と複合体を形成する。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物は、３つ以上の異なるポリアニオン性化合物（例えば、３、４、又は５つの異なるＲＮＡ）と複合体化する。場合によっては、多成分送達ビヒクル系は、ＤＮＡ及びＲＮＡ（例えば、抗原性ＲＮＡ及びアジュバントＤＮＡ、例えばＣｐＧ）から選択される１つ以上の核酸と複合体を形成する。

【0077】

本明細書に記載の送達ビヒクル複合体は、複合体中のカーゴ（例えば、ポリアニオン性化合物）に対する送達ビヒクル組成物の成分の１つの相対質量比によって特徴付けることができる。送達ビヒクル複合体中の成分の質量比は、複合体を調製する際に使用される各成分のストック溶液の既知の濃度及び容量に基づいて、容易に計算され得る。更に、非アニオン性カーゴが送達ビヒクル複合体中に存在する場合、質量比は、全カーゴに対する送達ビヒクル成分の相対量を、カチオン対アニオンの比率（これは、非アニオン性材料を考慮に入れていない）よりも正確に表すことができる。具体的には、成分の質量比は、系中のこの特定の成分の質量の系中の「カーゴ」の質量に対する比率を指す。「カーゴ」は、系中に存在する全ポリアニオン化合物（複数可）を指し得る。一例では、ポリアニオン性化合物（複数可）は、核酸（複数可）を指し得る。一例では、ポリアニオン性化合物は、少なくとも１つのタンパク質をコードするｍＲＮＡを指す。

【0078】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約０．５：１～約２０：１、約０．５：１～約１０：１、約０．５：１～約５：１、約１：１～約２０：１、約１：１～約１０：１、約１：１～約５：１、約２：１～約２０：１、約２：１～約１０：１、又は約２：１～約５：１の質量比を有する。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約２：１～約５：１の質量比を有する。また更に他の実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約３：１の質量比を有する。他の実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約１９：１の質量比を有する。他の実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約２０：１の質量比を有する。他の実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約１３：１の質量比を有する。他の実装形態では、送達ビヒクル複合体のカチオン性成分及びポリアニオン性化合物は、約１０：１の質量比を有する。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物、例えば、表１に列挙される化合物（例えば、化合物１４０）であり得る。

【0079】

送達ビヒクル複合体が、ポリアニオン性化合物又はカーゴとして核酸を含む特定の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約０．５：１～約２０：１、又は約０．５：１～約１０：１、又は約０．５：１～約５：１、又は約１：１～約２０：１、又は約１：１～約１０：１、又は約１：１～約５：１、又は約２：１～約２０：１、又は約２：１～約１０：１、又は約２：１～約５：１である。特定の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約２：１～約５：１である。また更に他の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は約３：１である。他の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１９：１である。他の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約２０：１である。他の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１３：１である。他の実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１０：１である。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物、例えば、表１に列挙される化合物（例えば、化合物１４０）であり得る。

【0080】

いくつかの実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約５：１～約２５：１、又は約７：１～約２０：１、又は約１０：１～約１７：１、又は約９．５：１～約１０．５：１、又は約１１：１～約１７：１である。様々な実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約２０：１である。様々な実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１９：１である。いくつかの実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１７：１である。様々な実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１５：１である。様々な実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１３：１である。様々な実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１２：１である。様々な実装形態では、カチオン性成分と核酸との質量比は、約１０：１である。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、表１に列挙される化合物などの、本明細書において先に記載される式（Ｉ）の化合物であり得る。様々な実装形態では、カチオン性成分は、化合物１４０である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。

【0081】

場合によっては、アニオン性／双性イオン性成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約２：１～約１０：１、又は約２：１～約３：１、又は約２：１～約４：１、又は約５：１～約１０：１である。場合によっては、アニオン性／双性イオン性成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約２：１～約１０：１、又は約２：１～約３：１、又は約５：１～約１０：１である。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約４：１である。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約２．７：１である。いくつかの実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、本明細書で前述したように、リン脂質であり得る。様々な実装形態では、アニオン性／双性イオン性成分は、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、又はそれらの組み合わせである。場合によっては、アニオン性／双性イオン性成分はＤＳＰＣである。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。

【0082】

場合によっては、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約５：１～約８：１、又は約４：１～約７：１、又は約５：１～約６：１、又は約１：１～約５：１である。場合によっては、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約４：１～約７：１、又は約５：１～約６：１、又は約１：１～約５：１である。いくつかの実装形態では、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約５．４：１である。いくつかの実装形態では、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約８．１：１である。いくつかの実装形態では、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約６．７：１である。いくつかの実装形態では、中性脂質成分は、本明細書で前述したステロールであり得る。様々な実装形態では、中性脂質成分は、コレステロールである。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。

【0083】

場合によっては、遮蔽成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約０．５：１～約２．５：１、又は約１：１～約２：１、又は約２：１～約３：１である。いくつかの実装形態では、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約２．１：１である。いくつかの実装形態では、中性脂質成分とポリアニオン性化合物との質量比は、約１．４：１である。いくつかの実装形態では、遮蔽成分は、本明細書で前述したように、ＰＥＧ化脂質であり得る。様々な実装形態では、遮蔽成分は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。

【0084】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約１０：１の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．７：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約５．４：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約１．４：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「製剤Ｆ２」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分は、コレステロールであり、遮蔽成分は、ＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性化合物は、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約１０：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約５．４：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約１．４の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ２」）。

【0085】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約１７：１の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．７：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約５．４：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約１．４：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「製剤Ｆ６／１７」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分はコレステロールであり、遮蔽成分はＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約１７：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約５．４：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約１．４の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６／１７」）。

【0086】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約１２：１の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．７：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約５．４：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約１．４：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「製剤Ｆ６／１２」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分は、コレステロールであり、遮蔽成分は、ＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約１２：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約５．４：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約１．４の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６／１２」）。

【0087】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約１５：１の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．７：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約５．４：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約１．４：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「製剤Ｆ６／１５」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分は、コレステロールであり、遮蔽成分は、ＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約１５：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約５．４：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約１．４の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６／１５」）。

【0088】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約１３：１の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．７：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約５．４：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約１．４：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「Ｆ６．１」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分は、コレステロールであり、遮蔽成分は、ＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約１３：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約５．４：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約１．４の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６．１」）。

【0089】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約１９：１の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約４．０：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約８．１：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．１：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「Ｆ６．２」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分は、コレステロールであり、遮蔽成分は、ＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約１９：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約４．０：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約８．１：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約２．１の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６．２」）。

【0090】

いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、約９．７の質量比のカチオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．７：１の質量比のアニオン性／双性イオン性成分及びポリアニオン性カーゴと、約６．７：１の質量比の中性脂質成分及びポリアニオン性カーゴと、約２．１：１の質量比の遮蔽成分及びポリアニオン性カーゴと、を含む（「Ｆ６．３」）。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物であり、アニオン性／双性イオン性成分は、リン脂質であり、中性脂質成分は、コレステロールであり、遮蔽成分は、ＰＥＧ化脂質である。いくつかの実装形態では、ポリアニオン性カーゴは、ＲＮＡなどの核酸である。様々な実装形態では、送達ビヒクル複合体は、核酸に対して約９．７：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約６．７：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約２．１の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む（「ＤＶ－１４０－Ｆ６．３」）。

【0091】

更に他の実装形態では、送達ビヒクル複合体中に存在するポリアニオン性カーゴの量は、１つ以上のポリアニオン性カーゴ化合物に対する、送達ビヒクル組成物（例えば、ヒドロキシエチルでキャップされた脂質化カチオン性ペプトイド、リン脂質、コレステロール、及び／又は遮蔽成分を合わせた全体）の質量比によって特徴付けられ得る。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル組成物対１つ以上のポリアニオン性カーゴ化合物の質量比は、約０．５：１～約２０：１、約０．５：１～約１０：１、約０．５：１～約５：１、約１：１～約２０：１、約１：１～約１０：１、約１：１～約５：１、約２：１～約２０：１、約２：１～約１０：１、又は約２：１～約５：１である。特定の実装形態では、送達ビヒクル組成物対１つ以上のポリアニオン性カーゴ化合物の質量比は、約５：１～約８：１又は約６：１～約７：１である。

【0092】

いくつかの実装形態では、本明細書に記載される送達ビヒクル複合体は、核酸カーゴ上のアニオン性リン酸基の数に対する、送達ビヒクル組成物のカチオン性成分上のカチオン性基の数の比によって特徴付けられ得る。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性成分及び核酸を、約０．５：１～約２０：１、約０．５：１～約１０：１、約０．５：１～約５：１、約１：１～約２０：１、約１：１～約１０：１、約１：１～約５：１、約２：１～約２０：１、約２：１～約１０：１、又は約２：１～約５：１、又は約３：１～約８：１、又は約３：１～約７：１、又は約３：１～約４：１、又は約４：１～約５：１、又は約６：１～約７：１、又は約７：１～約８：１の、カチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性成分及び核酸を、約０．５：１～約２０：１、約０．５：１～約１０：１、約０．５：１～約５：１、約１：１～約２０：１、約１：１～約１０：１、約１：１～約５：１、約２：１～約２０：１、約２：１～約１０：１、又は約２：１～約５：１、又は約３：１～約７：１、又は約３：１～約４：１、又は約６：１～約７：１の、カチオン対アニオンの電荷比で含む。特定の実施態様では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性成分及び核酸を、約２：１～約５：１のカチオン対アニオンの電荷比で含む。また更に他の実施態様では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性化合物及び核酸を、約３：１の、カチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性化合物及び核酸を、約３．７：１のカチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性化合物及び核酸を、約６．４：１のカチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性化合物及び核酸を、約４．８：１のカチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性化合物及び核酸を、約７．２：１のカチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、カチオン性化合物及び核酸を、約３．６：１のカチオン対アニオンの電荷比で含む。いくつかの実装形態では、カチオン性成分は、式（Ｉ）の化合物、例えば、表１に列挙される化合物などである。例えば、式（Ｉ）の化合物は、化合物１４０であり得る。

【0093】

質量比及び電荷比によって特徴付けられる、送達ビヒクル組成物の非限定的な例は、以下の表３に見出すことができる。

【0094】

【表3】

【0095】

送達ビヒクル複合体の特徴付け
本明細書中に開示される送達ビヒクル複合体は、種々の異なるパラメータ（例えば、粒径、多分散性指数、及びカーゴの封入パーセント）によって特徴付けられ得る。一実施態様では、送達ビヒクル複合体はナノ粒子に類似しており、送達ビヒクル組成物によって封入されている少なくとも１種のポリアニオン化合物（以下で更に説明する）を含む。一実施態様では、そのような複合体は、少なくとも１つのｍＲＮＡを封入する送達ビヒクル組成物を含むｍＲＮＡナノ粒子である。

【0096】

いくつかの実装形態では、本明細書に開示される送達ビヒクル複合体は、３００ｎｍ未満、又は２７５ｎｍ未満、又は２５０ｎｍ未満、又は２２５ｎｍ未満、又は２００ｎｍ未満、又は１７５ｎｍ未満、又は１５０ｎｍ未満、又は１２５ｎｍ未満、又は１００ｎｍ未満、又は９０ｎｍ未満、又は８０ｎｍ未満、又は７０ｎｍ未満、又は６０ｎｍ未満、又は５０ｎｍ未満、又は４０ｎｍ未満の、平均直径を有し得る。いくつかの実装形態では、本明細書に開示される送達ビヒクル複合体は、直径約４０ｎｍ～約２００ｎｍ、又は約５０ｎｍ～約１７５ｎｍ、又は約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、又は約６０ｎｍ～約１５０ｎｍ、又は約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、又は約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、又は約７０ｎｍ～約１２５ｎｍ、又は約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、又は約７０ｎｍ～約９０ｎｍ、又は約７５ｎｍ～約９５ｎｍ、又は約８０ｎｍ～約１１０ｎｍ、又は約９０ｎｍ～約１２５ｎｍ、又は約７０ｎｍ～約９０ｎｍのサイズの範囲であり得る。別の一実施態様では、複合体は、直径が約１００ｎｍ超、例えば、約１０５ｎｍ～約２５０ｎｍ、約１１０ｎｍ～約２２０ｎｍ、約１５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１１０ｎｍ～約２００ｎｍのサイズを有し得る。一実施態様では、複合体は、直径約１０５ｎｍ～約２００ｎｍのサイズを有し得る。場合によっては、送達ビヒクル複合体は、約４０ｎｍ～約１１５ｎｍ、又は約５５ｎｍ～約９５ｎｍ、又は約７０～約８０ｎｍ、又は約７５ｎｍの粒径を示す。様々な場合では、送達ビヒクル複合体は、約１３５ｎｍ～約２２５ｎｍ、又は約１５５ｎｍ～約１９５ｎｍ、又は約１７０～約１８０ｎｍ、又は約１７５ｎｍの粒径を示す。場合によっては、粒径は、複合体を調製するために使用される方法（例えば、マイクロ流体デバイスを介して、又は手によって）に依存する。粒径／直径は、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって決定することができ、実施例４に記載されている。

【0097】

いくつかの実装形態では、本開示の送達ビヒクル複合体は、約０．３、０．２５、０．２、０．１９、０．１８、０．１７、０．１６、０．１５、０．１４、０．１３、０．１２、０．１１、又は０．１０未満の、多分散性指数（ＰＤＩ）を示す。

【0098】

いくつかの実装形態では、核酸（例えば、ＲＮＡ）カーゴの少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が、送達ビヒクル複合体中に完全に封入される。送達ビヒクル複合体内に封入されたｍＲＮＡの割合は、実施例４に記載されるように、改変ＲｉｂｏＧｒｅｅｎアッセイを使用して決定され得る。

【0099】

以下の表４は、本開示の例示的な組成物の特徴付けデータを提供する。送達ビヒクル複合体の命名法は、カチオン性成分として使用される式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１４０、１４６、１５１、１５２、１６０、１６１、又は１６２）、並びに表２及び３からの製剤（「製剤」）名（例えば、製剤Ｆ２又は製剤Ｆ６（例えば、Ｆ６／１２、Ｆ６／１５、Ｆ６／１７）を指す。例えば、ＤＶ－１４０－Ｆ６／１７は、核酸に対して約１７：１の質量比の化合物１４０と、核酸に対して約２．７：１の質量比のＤＳＰＣと、核酸に対して約５．４：１の質量比のコレステロールと、核酸に対して約１．４の質量比のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００と、を含む送達ビヒクル複合体を指す。表４、図１Ａ及び図１Ｂに示されるように、本開示の送達ビヒクル複合体は、核酸カーゴの高い封入性を可能にする小さい単分散粒子の形成を有利に可能にする。

【0100】

以下の表５は、カチオン性成分が式（Ｉ）の化合物ではない比較組成物についての構造データを提供する。ＭＣ３は、市販のカチオン性脂質ＤＬＩＮ－ＭＣ３－ＤＭＡを指す。

【0101】

【表4】

【0102】

【表5-1】

【0103】

【表5-2】

【0104】

【表5-3】

【0105】

本開示の送達ビヒクル複合体は、良好な保存安定性を示す。例えば、ＤＶ－１４０－Ｆ２及びＤＶ－１４０－Ｆ６／１７はそれぞれ、４℃で１７日間又は４８日間保存した場合でも、粒径又は封入性において変化を示さなかった。図２を参照されたい。別の一例として、ＤＶ－１４０－Ｆ２は、２４時間のインビボ時点にわたって－２０℃、４℃、２５℃、及び３７～４０℃で保存した場合、ＤＶ－１１２－Ｆ２よりも優れた安定性を示し、凍結／解凍サイクル（３回）に曝露した場合にも、ＤＶ－１１２－Ｆ２よりも良好な安定性を示した。図３Ａ及び図３Ｂを参照されたい。したがって、いくつかの実装形態では、本開示の送達ビヒクル複合体は、４℃～１０℃で少なくとも１０日間、例えば少なくとも２０日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、又はそれ以上保存した後に、ポリアニオン性化合物の少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は１００％を保持する。一実施態様では、複合体は、４℃で４８日間、前述のレベルのポリアニオン化合物ｆを保持する。更に、場合によっては、本開示の送達ビヒクル複合体は、４℃で少なくとも１０日間、例えば、少なくとも２０日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、又はそれ以上保存した後に、それらの元のサイズの少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は１００％を保持する。一実施態様では、送達ビヒクル複合体は、４℃又は４８日間の保存後に前述のサイズを保持する。

【0106】

本明細書に開示される送達ビヒクル複合体はまた、全身毒性又は有害事象を伴わずに、高用量及び低用量で十分に許容されることが判明している。実施例５を参照されたい。

【0107】

他の送達ビヒクル複合体成分
本明細書中に記載される送達ビヒクル複合体は、特定の用途のために複合体を微調整するための、更なる成分を含み得る。成分の例としては、限定されるものではないが、エンドソーム脱出を促進するものが挙げられ得るが、その具体例には、緩衝アミン又はポリアミン、含窒素複素環基及び／又は含窒素ヘテロアリール基、例えば、イミダゾール類、ピロール類、ピリジン類、ピリミジン類等、マレイン酸誘導体、又は膜溶解性ペプチドが挙げられる。

【0108】

送達ビヒクル複合体はまた、任意で、系の表面上に部分を含み得る。標的化部分は、ペプチド、抗体模倣物、核酸（例えば、アプタマー）、ポリペプチド（例えば、抗体）、糖タンパク質、小分子、炭水化物、又は脂質であり得る。標的化部分の非限定的な例としては、例えば、ソマトスタチン、オクトレオチド、ＬＨＲＨ、ＥＧＦＲ結合ペプチド、ＲＧＤ含有ペプチドなどの、ペプチド、例えば、フィブロネクチンドメインなどのタンパク質足場、アプチド若しくは二座ペプチド、単一ドメイン抗体、安定なｓｃＦｖ、又は二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、核酸（例えば、アプタマー）、ポリペプチド（例えば、抗体若しくはその断片）、糖タンパク質、小分子、炭水化物、又は脂質が挙げられる。標的化部分は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は人工核酸のいずれかであるアプタマー；小分子；例えば、マンノース、ガラクトース、アラビノースなどの、炭水化物；例えば、アスコルビン酸、ナイアシン、パントテン酸、カルニチン、イノシトール、ピリドキサール、リポ酸、葉酸（葉酸塩）、リボフラビン、ビオチン、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、Ｅ、及びＫなどの、ビタミン；細胞表面受容体に結合するタンパク質又はペプチド、例えば、トロンボスポンジン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、アネキシンＶ、インターフェロン、サイトカイン、トランスフェリン、ＧＭ－ＣＳＦ（顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）に対する受容体、又は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、及び上皮成長因子（ＥＧＦ）などの増殖因子に対する受容体などであり得る。

【0109】

送達ビヒクル複合体はまた、任意選択的に、送達ビヒクル複合体に組み込まれた小分子薬物又は他の生物製剤を含み得る。非限定的な例としては、血液脳関門を破壊するか、又は細胞取り込みを増強する薬物；細胞内輸送又はエンドソーム脱出に影響を及ぼす薬物；又は送達ビヒクル複合体がワクチンとして使用される場合に、抗原提示に影響を及ぼす免疫調節物質である薬物を組み込むことが挙げられる。

【0110】

ポリアニオン性化合物
本開示の送達ビヒクル複合体は、細胞などのインビボの標的に、複合体によって送達され得る、１つ以上のポリアニオン化合物（ポリアニオンカーゴ）を含み得る。ポリアニオン性化合物は、静電相互作用を介して送達ビヒクル複合体のカチオン性成分（例えば、化合物１４０などの式（Ｉ）の化合物）と複合体化することができる。

【0111】

いくつかの実装形態では、ポリアニオン性化合物は、核酸を含む。核酸は、本明細書で使用される場合、天然に存在する核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又はそれらのハイブリッド）と、天然に存在しない核酸とを含む。非天然アミノ酸の非限定的な例は、非天然骨格、ホスホロチオエートなどの修飾骨格結合、非天然若しくは修飾塩基、並びに／又は非天然及び修飾末端を含むものである。例示的な核酸としては、ゲノムＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、プラスミド、及び免疫刺激核酸が挙げられる。

【0112】

いくつかの実装形態では、ポリアニオン性化合物は、ＲＮＡを含む。ＲＮＡは、化学的に修飾された又は修飾されていないＲＮＡ、一本鎖又は二本鎖ＲＮＡ、コード又は非コードＲＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡ、自己複製（レプリコン）ＲＮＡ（ｓｒＲＮＡ）、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、免疫刺激性ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、小ヘアピン（ｓｈ）ＲＮＡリボスイッチ、ＲＮＡアプタマー、ＲＮＡデコイ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。いくつかの実装形態では、核酸カーゴは、修飾ｍＲＮＡ、自己増幅ＲＮＡ、及び環状ＲＮＡを含むが、これらに限定されないＲＮＡである。いくつかの実装形態では、ＲＮＡは、コードＲＮＡを含む。

【0113】

ＲＮＡは、リボ核酸の通常の略語である。これは、核酸分子、すなわちヌクレオチドモノマーからなるポリマーである。これらのヌクレオチドは通常、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、ウリジン一リン酸（ＵＭＰ）、グアノシン一リン酸（ＧＭＰ）及びシチジン一リン酸（ＣＭＰ）モノマー又はそれらの類似体であり、これらはいわゆる骨格に沿って互いに連結されている。骨格は、第１の糖（すなわち、リボース）と、第２の隣接するモノマーのリン酸部分との間の、ホスホジエステル結合によって形成される。モノマーの特定の順序、すなわち、糖／リン酸骨格に連結された塩基の順序は、ＲＮＡ配列と呼ばれる。通常、ＲＮＡは、例えば細胞内での、ＤＮＡ配列の転写によって得ることができる。真核細胞では、転写は典型的には核又はミトコンドリア内で行われる。インビボでは、ＤＮＡの転写によって、通常、いわゆる未成熟ＲＮＡ（ｐｒｅ－ｍＲＮＡ、前駆体ｍＲＮＡ、又はヘテロ核ＲＮＡとも呼ばれる）が生じるが、通常は処理を行って、ｍＲＮＡと略されるいわゆるメッセンジャーＲＮＡにしなければならない。例えば真核生物における未成熟ＲＮＡの処理は、スプライシング、５’－キャッピング、ポリアデニル化、核又はミトコンドリアからの輸送などの、様々な異なる転写後修飾を含む。これらのプロセスの合計は、ＲＮＡの成熟とも呼ばれる。成熟メッセンジャーＲＮＡは、通常、特定のペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列に翻訳され得るヌクレオチド配列を提供する。典型的には、成熟ｍＲＮＡは、５’－キャップ、任意選択的に５’－ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、任意選択的に３’ＵＴＲ、及びポリ（Ａ）テールを含む。

【0114】

メッセンジャーＲＮＡに加えて、転写及び／又は翻訳の調節、並びに免疫刺激に関与し得る、いくつかの非コード型のＲＮＡが存在する。本開示内で、「ＲＮＡ」という用語は、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡ及びレプリコンＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）、リボザイム、アプタマー、リボスイッチ、免疫刺激／免疫刺激性ＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及びＰｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）などの、当技術分野で公知の任意のタイプの一本鎖（ｓｓＲＮＡ）又は二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子を更に包含する。

【0115】

５’－ＣＡＰ構造：５’－ＣＡＰは、典型的には、ｍＲＮＡ分子の５’末端に付加された修飾ヌクレオチド（ＣＡＰ類似体）、特にグアニンヌクレオチドである。特定の実装形態では、５’－ＣＡＰは、５’－５’－三リン酸結合（ｍ７ＧｐｐｐＮとも呼ばれる）を使用して付加される。５’－ＣＡＰ構造の更なる例としては、グリセリル、逆位デオキシ脱塩基残基（部分）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１－（β－Ｄ－エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’－チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ－ヌクレオチド、α－ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、トレオ－ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’－セコヌクレオチド、非環式３，４－ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’－３’－逆位ヌクレオチド部分、３’－３’－逆位脱塩基部分、３’－２’－逆位ヌクレオチド部分、３’－２’－逆位脱塩基部分、１，４－ブタンジオールホスフェート、３’－ホスホルアミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’－ホスフェート、３’－ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、又は架橋若しくは非架橋メチルホスホネート部分が挙げられる。これらの修飾５’－ＣＡＰ構造は、本開示の文脈において、本開示のＲＮＡ配列を修飾するために使用され得る。本開示の文脈において使用され得る更なる修飾５’－ＣＡＰ構造は、ＣＡＰ１（ｍ７ＧｐｐｐＮの隣接ヌクレオチドのリボースの更なるメチル化）、ＣＡＰ２（ｍ７ＧｐｐｐＮの下流の２番目ヌクレオチドのリボースの更なるメチル化）、ＣＡＰ３（ｍ７ＧｐｐｐＮの下流の３番目ヌクレオチドのリボースの更なるメチル化）、ＣＡＰ４（ｍ７ＧｐｐｐＮの下流の４番目ヌクレオチドのリボースの更なるメチル化）、ＡＲＣＡ（抗逆ＣＡＰ類似体）、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオエート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１－メチル－グアノシン、２’－フルオロ－グアノシン、７－デアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、及び２－アジド－グアノシンである。

【0116】

本開示の文脈において、５’キャップ構造はまた、キャップ類似体を使用して化学的ＲＮＡ合成又はＲＮＡのインビトロでの転写（共転写キャッピング）において形成され得る、又はキャップ構造は、キャッピング酵素（例えば、市販のキャッピングキット）を使用してインビトロで形成され得る。

【0117】

キャップ類似体は、ＲＮＡ分子の５’末端に組み込まれた場合に、翻訳若しくは局在化を促進し、かつ／又はＲＮＡ分子の分解を防止するという点で、キャップ機能性を有する非重合性ジヌクレオチドを指す。非重合性とは、キャップ類似体が５’三リン酸を有さず、したがって鋳型依存性ＲＮＡポリメラーゼによって３’方向に伸長することができないため、キャップ類似体が５’末端のみに組み込まれることを意味する。

【0118】

キャップ類似体としては、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７ＧｐｐｐＡ、ｍ７ＧｐｐｐＣ；非メチル化キャップ類似体（例えば、ＧｐｐｐＧ）；ジメチル化キャップ類似体（例えば、ｍ２，７ＧｐｐｐＧ）、トリメチル化キャップ類似体（例えば、ｍ２２７ＧｐｐｐＧ）、ジメチル化対称キャップ類似体（例えば、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ）、又は抗逆キャップ類似体（例えば、ＡＲＣＡ；ｍ７，２’ＯｍｅＧｐｐｐＧ、ｍ７，２’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ７，３’ＯｍｅＧｐｐｐＧ、ｍ７，３’ｄＧｐｐｐＧ及びそれらの四リン酸誘導体）からなる群から選択される化学構造が挙げられるが、これらに限定されない。Ｎ^７－（４－クロロフェノキシエチル）置換ジヌクレオチドキャップ類似体の合成が最近説明されている。

【0119】

「３’－ポリ（Ａ）テール」又は「ポリ（Ａ）配列」とも呼ばれるポリ（Ａ）テールは、典型的には、ｍＲＮＡの３’末端に付加された、最大約４００アデノシンヌクレオチド、例えば、約２５～約４００、約５０～約４００、約５０～約３００、約５０～約２５０、又は約６０～約２５０アデノシンヌクレオチドの、アデノシンヌクレオチドの長いホモポリマー配列である。本開示の特定の実装形態では、ｍＲＮＡ又はｓｒＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、ＲＮＡのインビトロでの転写によってＤＮＡ鋳型から誘導される。あるいは、ポリ（Ａ）配列はまた、ＤＮＡ前駆体から必ずしも転写されることなく、化学合成の一般的な方法によって、インビトロで得られ得る。更に、ポリ（Ａ）配列又はポリ（Ａ）テールは、ＲＮＡの酵素的ポリアデニル化によって生成され得る。

【0120】

安定化された核酸は、典型的には、インビボでの分解（例えば、エクソヌクレアーゼ若しくはエンドヌクレアーゼによる分解）及び／又は、エクスビボでの分解（例えば、組成物投与前の製造プロセスによる分解、例えば、投与される組成物の調製の過程における分解）に対する耐性を増加させる修飾を示す。ＲＮＡの安定化は、例えば、５’－ＣＡＰ構造、ポリ（Ａ）テール、又は任意の他のＵＴＲ修飾を提供することによって達成することができる。安定化は、骨格修飾（例えば、ホスホロチオエートなどの合成骨格の使用）又は核酸のＧ／Ｃ含量若しくはＣ含量の修正によっても達成することができる。核酸を安定化するため、又はそうでなければ核酸の機能を改善するために、様々な他の方法が当技術分野において公知であり、本開示の文脈で考えられる。したがって、組織における安定性及び／若しくはクリアランス、受容体取り込み及び／若しくは動態、細胞アクセス、翻訳機構への関与、ＲＮＡ半減期、翻訳効率、免疫回避、免疫誘導（ワクチンの場合）、タンパク質産生能、分泌効率（適用可能な場合）、循環へのアクセス可能性、タンパク質半減期、並びに／又は細胞の状態、機能及び／若しくは活性の調節のうちの、１つ以上を改善するように設計されたポリヌクレオチドが本明細書において提供される。

【0121】

５’－ＵＴＲは、典型的には、ＲＮＡの特定のセクションであると理解される。それは、ｍＲＮＡのオープンリーディングフレームの５’側に位置する。ｓｒＲＮＡの場合、オープンリーディングフレームはウイルス非構造タンパク質をコードするが、目的の配列はウイルスＲＮＡのサブゲノム断片中にコードされる。したがって、５’－ＵＴＲは、ｎｓＰ１オープンリーディングフレームの上流にある。更に、ｓｒＲＮＡのサブゲノムＲＮＡは、５’－ＵＴＲを有する。したがって、目的のタンパク質をコードする目的の配列を含有するサブゲノムＲＮＡは、５’－ＵＴＲを含有する。典型的には、５’－ＵＴＲは、転写開始部位から始まり、オープンリーディングフレームの開始コドンの１ヌクレオチド前で終わる。５’－ＵＴＲは、遺伝子発現を制御するためのエレメント（調節エレメントとも呼ばれる）を含み得る。このような調節エレメントは、例えば、リボソーム結合部位又は５’－末端オリゴピリミジントラクトであり得る。５’－ＵＴＲは、例えば、５’－ＣＡＰの付加によって転写後修飾され得る。本開示の文脈において、５’－ＵＴＲは、５’－ＣＡＰと開始コドンとの間に位置する成熟ｍＲＮＡ又はｓｒＲＮＡの配列に対応する。一実施態様では、５’－ＵＴＲは、５’－ＣＡＰの３’側に位置するヌクレオチドから、特定の実施態様では５’－ＣＡＰのすぐ３’側に位置するヌクレオチドから、タンパク質コード領域の開始コドンの５’側に位置するヌクレオチドまで、場合によってはタンパク質コード領域の開始コドンのすぐ５’側に位置するヌクレオチドまで延びる配列に対応する。成熟ｍＲＮＡ又はｓｒＲＮＡの５’－ＣＡＰのすぐ３’側に位置するヌクレオチドは、典型的には、転写開始部位に対応する。「～に対応する」という用語は、５’－ＵＴＲ配列が、５’－ＵＴＲ配列を定義するために使用されるｍＲＮＡ配列などのＲＮＡ配列、又はそのようなＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列であり得ることを意味する。本開示の文脈において、「ＮＹＥＳＯ１遺伝子の５’－ＵＴＲ」などの「遺伝子の５’－ＵＴＲ」という用語は、この遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ、すなわち、遺伝子の転写及び未成熟ｍＲＮＡの成熟によって得られるｍＲＮＡの５’－ＵＴＲに対応する配列である。「遺伝子の５’－ＵＴＲ」という用語は、５’－ＵＴＲのＤＮＡ配列及びＲＮＡ配列を包含する。

【0122】

一般に、「３’－ＵＴＲ」という用語は、オープンリーディングフレームの３’（すなわち、「下流」）に位置し、タンパク質に翻訳されない核酸分子の一部を指す。典型的には、３’－ＵＴＲは、タンパク質コード領域（オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）又はコード配列（ＣＤＳ））と、ｍＲＮＡのポリ（Ａ）配列との間に位置するＲＮＡの一部である。本開示の文脈において、３’－ＵＴＲという用語は、ＲＮＡが転写される鋳型においてコードされないが、成熟中に転写後に付加されるエレメント、例えばポリ（Ａ）配列も含み得る。ＲＮＡの３’－ＵＴＲは、アミノ酸配列には翻訳されない。

【0123】

ｓｒＲＮＡに関して、３’－ＵＴＲ配列は、一般にウイルスゲノムＲＮＡによってコードされ、ウイルスゲノムＲＮＡは、遺伝子発現プロセス中にそれぞれのｍＲＮＡに転写される。ゲノム配列は、最初に未成熟ｍＲＮＡに転写される。次いで、未成熟ｍＲＮＡは、成熟プロセスにおいて、成熟ｍＲＮＡへと更にプロセシングされる。この成熟プロセスは、５’キャッピングを含む。本開示の文脈において、３’－ＵＴＲは、成熟ｍＲＮＡ又はｓｒＲＮＡ（及びｓｒＲＮＡサブゲノムＲＮＡ）の配列に対応し、これは、タンパク質コード領域の終止コドン、好ましくは目的の配列のタンパク質コード領域の終止コドンのすぐ３’側と、ｍＲＮＡのポリ（Ａ）配列との間に位置する。「～に対応する」という用語は、３’－ＵＴＲ配列が、３’－ＵＴＲ配列を定義するために使用されるｍＲＮＡ配列などのＲＮＡ配列、又はそのようなＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列であり得ることを意味する。本開示の文脈において、「遺伝子の３’－ＵＴＲ」という用語は、この遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ、すなわち、遺伝子の転写及び未成熟ｍＲＮＡの成熟によって得られるｍＲＮＡの３’－ＵＴＲに対応する配列である。「遺伝子の３’－ＵＴＲ」という用語は、３’－ＵＴＲのＤＮＡ配列及びＲＮＡ配列（センス鎖及びアンチセンス鎖の両方、並びに成熟及び未成熟の両方）を包含する。

【0124】

本開示の特定の実施によれば、本明細書の送達ビヒクル複合体において使用するためのＲＮＡは、ペプチド（例えば、ポリペプチド）、又はタンパク質、又は前述のものの機能的断片をコードする少なくとも１つの領域を含むＲＮＡを含む。本明細書中で使用される場合、「機能的断片」とは、免疫応答を誘導する能力を保持するペプチド（例えば、ポリペプチド）又はタンパク質の断片をいう。一実施態様では、コードＲＮＡは、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡ、及び自己複製ＲＮＡからなる群から選択される。いくつかの実装形態では、ＲＮＡは、ウイルスペプチド（例えば、ウイルスポリペプチド）、ウイルスタンパク質、又は前述のものの機能的断片をコードする。様々な場合では、ＲＮＡは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。場合によっては、ＲＮＡは、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質（又はその変異体）、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質（又はその変異体）、それらの組み合わせ、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。場合によっては、ＨＰＶタンパク質は、ＨＰＶサブタイプＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６６、及び／又は６８に由来する。様々な場合では、ＨＰＶタンパク質は、ＨＰＶサブタイプＨＰＶ１６及び／又は１８に由来する。場合によっては、ＲＮＡは、ウイルススパイクタンパク質又はその機能的断片をコードする。場合によっては、ＲＮＡは、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルス０Ｃ４３（ＨＣｏＶ－０Ｃ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、及び／又はヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３））をコードする。様々な実装形態では、ＲＮＡは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。場合によっては、ＲＮＡは、インフルエンザタンパク質、その変異体、又は前述のいずれかの機能的断片をコードする。様々な実装形態では、ＲＮＡは、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）又はその機能的断片をコードする。いくつかの実装形態では、インフルエンザＡウイルスは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、及びＨ１６からなる群から選択されるサブタイプのＨＡを有する。様々な実装形態では、インフルエンザサブタイプは、ＨＡ株Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、又はＨ５である。いくつかの実装形態では、ＲＮＡは、前述の組み合わせをコードする。

【0125】

送達ビヒクル複合体のＲＮＡがコードし得る企図されるウイルスとしては、インフルエンザＡ型及びＢ型、ポリオウイルス、アデノウイルス、狂犬病ウイルス、ウシパラインフルエンザ３、ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳウイルス）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、イヌパラインフルエンザウイルス、ニューカッスル病ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型及び単純ヘルペスウイルス２型、ヒトパピローマウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、カポジ肉腫ウイルス、ヒトヘルペスウイルス－６、ヒトヘルペスウイルス－７、ヒトヘルペスウイルス－８、マカシンαヘルペスウイルス１、イヌヘルペスウイルス、ウマαヘルペスウイルス１、ウシαヘルペスウイルス１、ヒトヘルペスウイルス２、単純ヘルペスウイルス、ガンマヘルペスウイルス、七面鳥アルファヘルペスウイルス１、エボラウイルス、マールブルグウイルス、アルファウイルス、フラビウイルス、黄熱ウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、ジカウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、チクングニアウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、キサヌール森林病ウイルス、アルフルマ病ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、ルベオラウイルス、風疹ウイルス、ヒトパルボウイルスＢ１９、バリオラウイルス、アルファウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、アレナウイルス科ウイルス、ブニヤウイルス科ウイルス、フィロウイルス科ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、パラミクソウイルス科ウイルス、トガウイルス科ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、コロラドダニ熱ウイルス（コルチウイルス）、コクサッキーウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アストロウイルス、アデノウイルス、アデノウイルス、ヒトメタニューモウイルス又はコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ ＮＬ６３、ＨＫＵ１、２２９Ｅ、及びＯＣ４３）、ヒトパピローマウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、アルファウイルス、フラビウイルス、黄熱、デング熱、日本脳炎、西ナイルウイルス、ジカウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、チクングニアウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎、キサヌール森林病、アルフルマ病、オムスク出血熱、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、ルベオラウイルス、風疹ウイルス、ヒトパルボウイルスＢ１９、ヒトヘルペスウイルス６型、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、カポジ肉腫ウイルス、ヒトヘルペスウイルス７型、ヒトヘルペスウイルス８型、マカシンαヘルペスウイルス１型、イヌヘルペスウイルス、ウマαヘルペスウイルス１型、ウシαヘルペスウイルス１型、ヒトヘルペスウイルス２型、単純ヘルペスウイルス、ガンマヘルペスウイルス科、ガチョウαヘルペスウイルス１、バリオラ、アルファウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フィロウイルス科、フラビウイルス科、パラミクソウイルス科、又はトガウイルス科、フラビウイルス属（例えば、ジカウイルス）、コロラドダニ熱ウイルス（コルチウイルス）、コクサッキーウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アストロウイルス、アデノウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルスＡ、ヒトメタニューモウイルス、ライノウイルスコロナウイルス、バリセロウイルス、アデノ関連ウイルス、愛知ウイルス、オーストラリアコウモリリスウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマー森林ウイルス、ブニヤムウェラウイルス、ブニヤウイルスラクロス、ブニヤウイルスカツノウサギセルコピテクス・ヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングニアウイルス、コサウイルスＡ、カウポックスウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ドゥグベウイルス、ドゥベンヘージウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、ヨーロッパコウモリライサウイルス、ＧＢウイルスＣ／Ｇ型肝炎ウイルス、ハンタンウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス６８、７０、ヒトパピローマウイルス１、ヒトパピローマウイルス２、ヒトパピローマウイルス１６、１８、ヒトパラインフルエンザ、ヒトパルボウイルスＢ１９、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス、ヒトスパーマレトロウイルス、ヒトＴリンパ向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、イスファハンウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、ジュニンアレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガットウイルス、ラッサウイルス、ロードスデールウイルス、ルーピング病ウイルス、リンパ球性絨毛膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サル痘ウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オルフウイルス、オロプシュウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルス、プウマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロサウイルスＡ、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスＡ、サンドフライ熱シシリアンウイルス、サッポロウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス２、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、シミアンフォームウイルス、シミアンウイルス５、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介パウアッサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウクニエミウイルス、ワクチニアウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、バリオラウイルスベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＷＵポリオマウイルス、西ナイルウイルス、ヤーバサル腫瘍ウイルス、ヤーバ様疾患ウイルス、黄熱ウイルス、ジカウイルス、ウシヘルペスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、アデノウイルス科、ウシアデノウイルスＢＡｄＶ－９＝ヒトアデノウイルスＣ、アネロウイルス科（候補）、トルクテノウイルスＴＴＶ、ボルナウイルス科、ボルナ病ウイルスＢＤＶ、ブニヤウイルス科、アイノウイルス、キャッシュバレーウイルスＣＶＶ、クリミアコンゴ出血熱ウイルスＣＣＨＦ、ハンタンウイルスＨＴＮＶ、ジェームズタウンキャニオンウイルスＪＣＶ、ラクロスウイルスＬＡＣＶ、プウマラウイルス、リフトバレー熱ウイルスＲＶＦＶ、カリシウイルス科、ノロウイルス、サンミゲルアシカウイルスＳＭＳＶ－５、サーコウイルス科、ウシサーコウイルスＢＣＶ＝豚サーコウイルス２型の進化株ＰＣＶ－２、コロナウイルス科、ウシコロナウイルスＢＣｏＶ－１、ウシトロウイルスＢｔｏＶ、フラビウイルス科、ウシウイルス性下痢症ウイルスＢＶＤＶ、日本脳炎ウイルスＪＥＶ、キャサヌール森林病ウイルスＫＦＤＶ、跳躍病ウイルス、マレーバレー脳炎ウイルスＭＶＥ、セントルイス脳炎ウイルスＳＬＥＶ、ダニ媒介脳炎ウイルスＴＢＥＶ、ヴェセルスブロン－ウイルス、西ナイルウイルス（Ｋｕｎｊｉｎを含む）、ヘパウイルス科、Ｅ型肝炎ウイルスＨＥＶ、ヘルペスウイルス科、ウシヘルペスウイルスＢＨＶ－４、ウマヘルペスウイルスＥＨＶ－１、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルスＩＢＲ＝ＢＨＶ－１、疑似狂犬病ウイルスＰＲＶ、オルソミクソウイルス科、ドーリウイルス、インフルエンザＡウイルス、トゴトウイルスＴＨＯＶ、パピローマウイルス科、ウシ乳頭腫ウイルスＢＰＶ、パラミクソウイルス科、ウシパラインフルエンザウイルスＢＰＩＶ３、ウシ呼吸器合胞体ウイルスＢＲＳＶ、ペスト・デ・ペティ・ルミナンウイルスＰＰＲＶ、リンデルペストウイルスＲＰＶ、パルボウイルス科、ウシアデノ随伴ウイルスＢＡＡＶ、ウシホコウイルスＢＨｏＶ、ピコルナウイルス科、ウシエンテロウイルスＢＥＶ－１、ＢＥＶ－２、ウシコブウイルスＢＫＶ－１ Ｕ－１株、脳筋心筋炎ウイルスＥＭＣ、口蹄疫ウイルスＦＭＤＶ、セネカバレーウイルスＳＶＶ、ポリオマウイルス科、ウシポリオマウイルスＢＰｙＶ、ポックスウイルス科、アラカツバウイルス、ウシ丘疹性口内炎ウイルスＢＰＳＶ、カンタガロウイルス、牛痘ウイルス、偽牛痘ウイルスＰＣＰＶ、ワクシニアウイルス、レオウイルス科、バンナウイルスＢＡＶ、青舌ウイルスＢＴＶ、疫出血症ウイルスＥＨＤＶ、遼寧ウイルスＬＮＶ、レオウイルス、ロタウイルス、レトロウイルス科、ウシフォーミーウイルスＢＦＶ、ウシ白血病ウイルスＢＬＶ、ラブドウイルス科、ウシ儚熱ウイルスＢＥＦＶ、狂犬病ウイルス、水疱性口内炎ウイルスＶＳＶ、トガウイルス科、東部ウマ脳炎ウイルスＥＥＥＶ、ゲタウイルス、ロス川ウイルスＲＲＶ、シンドビスウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルスＶＥＥ、アネロウイルス科（提案されている科）、トルクテノウイルスＴＴＶ、ブニヤウイルス科、クリミアコンゴ出血熱ウイルスＣＣＨＦ、ハンタンウイルスＨＴＮＶ、ジェームズタウンキャニオンウイルスＪＣＶ、ラクロスウイルスＬＣＶ、カリシウイルス科、ノロウイルス、サンミゲルアシカウイルスＳＭＳＶ－５、サポウイルス、サルコウイルス科、豚サーコウイルスＰＣＶ－１ ＆ ＰＣＶ－２、コロナウイルス科、ウシコロナウイルスＢＣｏＶ－１、重症急性呼吸器症候群ウイルスＳＡＲＳ、伝染性胃腸炎ウイルスＴＧＥＶ、フィロウイルス科、エボラレストンウイルス、フラビウイルス科、ウシウイルス性下痢症ウイルスＢＶＤＶ、デングウイルス、イルヘウスウイルス、日本脳炎ウイルスＪＥＶ、舞踏病ウイルス、マレーバレー脳炎ウイルスＭＶＥ、ポワッサンウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルスＴＢＥＶ、ヴェセルスブロン－ウイルス、ウエストナイルウイルスＷＮＶ（Ｋｕｎｊｉｎを含む）、ヘパウイルス科、Ｅ型肝炎ウイルスＨＥＶ、ヘルペスウイルス科、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルスＩＢＲ＝ＢＨＶ－１、豚サイトメガロウイルスＰＣＭＶ（Ｂ．Ｐｏｔｔｓ私信）、疑似狂犬病ウイルスＰＲＶ、オルソミクソウイルス科、鳥インフルエンザウイルス（Ｈ５Ｎ１）、豚インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２）、パラミクソウイルス科、ウシパラインフルエンザウイルスＢＰＩＶ３、メナングルウイルスＭＥＮＶ、ニパウイルスＮｉＶ、反芻家畜ペストウイルスＰＰＲＶ、リンデルペストウイルスＲＰＶ、ティオマンウイルスＴＩＯＶ、パルボウイルス科、豚ホコウイルスＰＨｏＶ、豚パルボウイルスＰＰＶ、ピコルナウイルス科、脳心筋炎ウイルスＥＭＣ、口蹄疫ウイルスＦＭＤＶ、豚エンテロウイルスＰＥＶ－９ ＰＥＶ－１０、セネカバレーウイルスＳＶＶ、豚水胞病ウイルスＳＶＤＶ、レオウイルス科、バンナウイルスＢＡＶ、レオウイルス、ロタウイルス、レトロウイルス科、豚内在性レトロウイルスＰＥＲＶ、ラブドウイルス科、狂犬病ウイルス、水胞性口内炎ウイルスＶＳＶ、トガウイルス科、東部ウマ脳炎ウイルスＥＥＥＶ、ゲタウイルス、ロス川ウイルスＲＲＶ、ベネズエラウマ脳脊髄炎ＶＥＥが挙げられるが、これらに限定されない。

【0126】

いくつかの実装形態では、ＲＮＡは、アデノウイルス、アルファウイルス、カリシウイルス（例えば、カリシウイルスカプシド抗原）、コロナウイルスポリペプチド、ジステンパーウイルス、エボラウイルスポリペプチド、エンテロウイルス、フラビウイルス、肝炎ウイルス（ＡＥ）、ヘルペスウイルス、感染性腹膜炎ウイルス、白血病ウイルス、マールブルグウイルス、オルソミクソウイルス、パピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ペスチウイルス、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス）、ポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス）、狂犬病ウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、及びロタウイルスをコードする。特定の実装形態では、ＲＮＡは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＰＶ（例えば、ＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８由来のＥ６及び／又はＥ７）、又はインフルエンザ（例えば、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ））をコードする。

【0127】

いくつかの実装形態では、２つ以上の特定の核酸を一緒に組み合わせた送達は、治療用途に特に有用であり得る。例えば、いくつかの実装形態では、１つ以上のポリアニオン性カーゴ化合物は、ＣＲＩＳＰＲ配列としてのｓｇＲＮＡ（シングルガイドＲＮＡ）と、Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡとの組み合わせを含む。なお更なる実装形態では、核酸はまた、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９リボ核タンパク質複合体などのタンパク質と複合体化され得る。場合によっては、多成分送達ビヒクル系は、ＤＮＡ及びＲＮＡ（例えば、抗原性ＲＮＡ及びアジュバントＤＮＡ、例えばＣｐＧ）から選択される１つ以上の核酸と複合体を形成する。

【0128】

ポリヌクレオチド合成
所定の配列のポリヌクレオチドを作製する方法が周知である。固相合成法は、ポリリボヌクレオチド及びポリデオキシリボヌクレオチドの両方について公知である（ＤＮＡを合成する周知の方法はまた、ＲＮＡを合成するために有用である）。ポリリボヌクレオチドは、酵素的に調製することもできる。天然に存在しない核酸塩基も、同様にポリヌクレオチドに組み込むことができる。

【0129】

ＲＮＡを作製するための当技術分野において公知の任意の方法が、ＲＮＡを作製するために本明細書において企図される。ＲＮＡを作製するための例示的な方法としては、化学合成及びインビトロでの転写が挙げられるが、これらに限定されない。

【0130】

特定の実装形態では、本明細書の方法において使用するためのＲＮＡは、化学的に合成される。定義された化学構造を有するオリゴヌクレオチドの比較的短い断片の化学合成は、任意の所望の配列の特注のオリゴヌクレオチドへの、迅速かつ安価なアクセスを提供する。酵素は、ＤＮＡ及びＲＮＡを５’から３’への方向にのみ合成するが、化学オリゴヌクレオチド合成はこの制限を有さないものの、反対方向、すなわち３’から５’への方向に実施されることが最も多い。特定の実装形態では、このプロセスは、ホスホラミダイト法、及び保護されたヌクレオシド（Ａ、Ｃ、Ｇ、及びＵ）、又は化学的に修飾されたヌクレオシドに由来するホスホラミダイト構築ブロックを使用する固相合成として実装される。

【0131】

いくつかの実装形態では、修飾は、修飾核酸中、又は１つ以上の個々のヌクレオシド若しくはヌクレオチド中に含まれる。例えば、ヌクレオシドに対する修飾は、核酸塩基、糖、及び／又はヌクレオシド間結合に対する１つ以上の修飾を含んでもよい。少なくとも１つの修飾を有するいくつかの実装形態では、ポリヌクレオチドは、プソイドウリジン－α－チオ－ＭＰ、１－メチル－プソイドウリジン－α－チオ－ＭＰ、１－エチル－プソイドウリジン－ＭＰ、１－プロピル－プソイドウリジン－ＭＰ、１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－プソイドウリジン－ＭＰ、２－アミノ－アデニン－ＭＰ、キサントシン－ＭＰ、５－ブロモ－シチジン－ＭＰ、５－アミノアリル－シチジン－ＭＰ、又は２－アミノプリン－リボシド－ＭＰの、核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。

【0132】

少なくとも１つの修飾を有する他の実装形態では、ポリヌクレオチドは、プソイドウリジン－α－チオ－ＭＰ、１－メチル－プソイドウリジン－α－チオ－ＭＰ、又は５－ブロモ－シチジン－ＭＰの、核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。本開示における使用のために企図されるヌクレオシド及びヌクレオチド修飾は、当技術分野において公知である。

【0133】

所望のオリゴヌクレオチドを得るために、構築ブロックは、完全に自動化されたプロセスにおいて、生成物の配列によって必要とされる順序で、固相上の成長するオリゴヌクレオチド鎖に連続的にカップリングされる。鎖の組み立てが完了すると、生成物は固相から溶液に放出され、脱保護され、回収される。合成されるオリゴヌクレオチドの長さと共にエラーの数が増加するので、副反応の発生が、合成オリゴヌクレオチドの長さに実際的な限界（約２００ヌクレオチド残基まで）を設定する。生成物は、しばしばＨＰＬＣによって単離され、所望のオリゴヌクレオチドが高純度で得られる。

【0134】

特定の実装形態では、ＲＮＡは、インビトロ転写を用いて作製される。「ＲＮＡインビトロ転写」又は「インビトロ転写」という用語は、ＲＮＡが無細胞系（インビトロ）で合成されるプロセスに関する。ＤＮＡ、特にプラスミドＤＮＡは、ＲＮＡ転写物の生成のための鋳型として使用される。ＲＮＡは、適切なＤＮＡ鋳型のＤＮＡ依存性インビトロ転写によって得られ得るが、これは、特定の実装形態では、線状化プラスミドＤＮＡ鋳型である。インビトロ転写を制御するためのプロモータは、任意のＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼのための任意のプロモータであり得る。ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの特定の例は、Ｔ７、Ｔ３、及びＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼである。インビトロＲＮＡ転写のためのＤＮＡ鋳型は、核酸、特にインビトロ転写されるそれぞれのＲＮＡに対応するｃＤＮＡをクローニングし、それをインビトロ転写のための適切なベクター、例えばプラスミドＤＮＡに導入することによって得ることができる。本開示の一実施態様では、ＤＮＡ鋳型は、インビトロで転写される前に、適切な制限酵素で線状化される。ｃＤＮＡは、ｍＲＮＡの逆転写又は化学合成によって得ることができる。更に、インビトロＲＮＡ合成のためのＤＮＡ鋳型は、遺伝子合成によって得ることもできる。

【0135】

インビトロ転写のための方法は、当該分野で公知である。本方法で使用される試薬は、典型的には以下を含む：１）例えばバクテリオファージコードＲＮＡポリメラーゼなどの、そのそれぞれのＲＮＡポリメラーゼに対して高い結合親和性を有する、プロモータ配列を有する線状化ＤＮＡ鋳型；２）４つの塩基（アデニン、シトシン、グアニン、及びウラシル）に対する、リボヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）；３）場合によっては、上で定義したキャップ類似体（例えば、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（ｍ７Ｇ））；４）線状化ＤＮＡ鋳型内のプロモータ配列に結合することができるＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７、Ｔ３、又はＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ）；５）任意選択で、任意の混入リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）を不活性化するためのＲＮａｓｅ阻害剤；６）任意選択で、転写を阻害し得るピロリン酸を分解するためのピロホスファターゼ；７）ポリメラーゼの補因子として、Ｍｇ^２＋イオンを供給するＭｇＣｌ_２；８）適切なｐＨ値を維持するための緩衝液であって、抗酸化剤（例えば、ＤＴＴ）、及び／又はスペルミジンなどのポリアミンを最適濃度で含有することもできる緩衝液。

【0136】

送達ビヒクル複合体を作製する方法
送達ビヒクル複合体の成分は、それらの物理的、化学的、及び生物学的特性を調節するための様々な物理的及び／又は化学的方法によって調製することができる。これらは、水又は水混和性有機溶媒中の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドと、水又は水性緩衝液中の所望のポリアニオン性カーゴ化合物（例えば、オリゴヌクレオチド又は核酸）とを、素早く組み合わせることを含み得る。これらの方法は、ピペッティングによる成分の単純な混合、又は例えば、Ｔ－ミキサ、ボルテックスミキサ、若しくは他のカオス混合構造を伴うものなどの、マイクロ流体混合プロセスを含むことができる。いくつかの実装形態では、多成分送達系は、マイクロ流体プラットフォーム上で調製される。

【0137】

本明細書中に記載される送達ビヒクル複合体を調製するための特定のプロセス条件は、複合体の所望の物理的特性を提供するために適宜調整又は選択され得ることが理解されるべきである。例えば、最終組成物に影響を及ぼし得る送達系複合体の成分を混合するためのパラメータは、混合の順序、混合の温度、混合スピード／レート、流量、混合構造の物理的寸法、出発溶液の濃度、成分のモル比、及び使用される溶媒を含み得るが、これらに限定されない。

【0138】

送達ビヒクル複合体の製剤化は、多くの方法で達成することができる。場合によっては、すべての成分は、核酸カーゴの添加の前に予め混合され得るが、その結果、送達粒子全体にわたる成分の均一な分布をもたらし得る。

【0139】

他の場合には、成分を順次添加して、コア－シェル型構造を生成することができる。例えば、カチオン性成分を最初に添加して粒子縮合を開始し、続いて脂質成分を添加して粒子表面を標的細胞と会合させ、続いて遮蔽成分を添加して粒子凝集を防止することができる。例えば、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを、核酸カーゴと予備混合してコア構造を形成することができる。次いで、脂肪成分（例えば、リン脂質及びコレステロールを含む脂肪成分）を添加して、細胞／エンドソーム膜結合性に影響を与えることができる。遮蔽成分は主に多成分送達系の外側で有用であるので、この成分を最後に導入することができ、その結果、それは系の内部構造を破壊せず、むしろそれが形成された後に系のコーティングを提供する。

【0140】

複合体及び組成物中の更なる成分（例えば、ポリマー、界面活性剤、標的化部分、及び／又は賦形剤の更なる成分）は、核酸カーゴの主成分、カチオン性成分、脂質成分、及び遮蔽成分が合わせられる前、その間、又はその後に、残りの成分と混合され、組み合わせられ得る。

【0141】

したがって、式（Ｉ）の化合物又は塩をポリアニオン性化合物と接触させることを含む、本明細書で開示される送達ビヒクル複合体を形成する方法も、本明細書で提供される。いくつかの実装形態では、本方法は、式（Ｉ）の化合物又は塩を含む溶液を、ポリアニオン性化合物を含む溶液と混合することを含む。

【0142】

医薬製剤及び投与様式
本開示の送達ビヒクル複合体、及び有効量の１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物も、本明細書で提供される。「有効量」は、「治療有効量」及び「予防有効量」を含む。「治療有効量」という用語は、対象における疾患又は状態を治療及び／又は改善するのに有効な量を指す。「予防有効量」という用語は、対象における疾患又は状態を予防する、及び／又は実質的にその可能性を低減するのに有効な量を指す。本明細書中で使用される場合、「患者」及び「対象」という用語は、交換可能に使用され得るが、動物（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、及びヒツジ（すなわち、非ヒト動物）並びにヒト）を意味する。特定の患者又は対象は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。「患者」及び「対象」という用語は、男性（雄）及び女性（雌）を含む。本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、意図される投与形態に関して適切に選択され、従来の薬務と一致する、医薬品有効成分（ＡＰＩ）以外の任意の薬学的に許容される添加剤、担体、希釈剤、アジュバント、又は他の成分を意味する。

【0143】

本開示の複合体は、治療有効量で、対象又は患者に投与することができる。複合体は、単独で、又は薬学的に許容される組成物若しくは製剤の一部として投与することができる。更に、複合体は、例えばボーラス注射によって一度に、複数回に分けて投与することができ、又はある時間にわたって実質的に均一に送達することができる。化合物の用量は、経時的に変化し得るということにも留意されたい。

【0144】

本明細書に開示される送達ビヒクル複合体及び他の薬学的に活性な化合物は、所望であれば、任意の適切な経路によって、例えば、経口、直腸、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、若しくは皮下）、脳槽内、膣内、腹腔内、膀胱内、又は口腔、吸入、若しくは鼻腔スプレーとして、対象又は患者に投与することができる。投与は、全身的効果を提供するためであり得る（例えば、経腸的又は腸管外投与）。薬学的に活性な薬剤を投与するために当業者によって使用され得るすべての方法が企図される。

【0145】

非経口注射に適した組成物は、生理学的に許容される滅菌水性又は非水性溶液、分散液、懸濁液、又はエマルジョン、及び滅菌注射用溶液又は分散液に再構成するための滅菌粉末を含んでもよい。適切な水性及び非水性担体、希釈剤、溶媒、又はビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの適切な混合物、植物油（オリーブ油など）及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には、必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。

【0146】

これらの組成物はまた、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの、アジュバントを含有し得る。微生物汚染は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸など）を添加することによって防止され得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことも望ましい場合がある。注射用医薬組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によってもたらされ得る。

【0147】

医薬組成物は、無菌注射剤、水性懸濁液、又は油性懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、上述した適切な分散又は湿潤剤と懸濁化剤とを用いて、公知の技術に従って製剤化することができる。滅菌注射用調製剤はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液又は懸濁液、例えば１，３－ブタンジオール中の溶液であり得る。使用され得る受容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液、及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。更に、無菌の不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒体として従来から用いられている。この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無刺激性不揮発油が使用され得る。更に、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製に使用される。

【0148】

非経口投与のための組成物は、滅菌媒体中で投与される。使用されるビヒクル及び製剤中の薬物濃度に依存して、非経口製剤は、溶解した薬物を含有する懸濁液又は溶液のいずれかであり得る。例えば、局所麻酔剤、保存剤、及び緩衝剤などの、アジュバントを非経口組成物に添加することもできる。

【0149】

本開示の組成物がワクチンとして使用される場合、それは１つ以上の免疫アジュバントを含み得る。本明細書で使用される場合、「免疫アジュバント」という用語は、免疫原（例えば、ネオ抗原）とコンジュゲートして使用された場合に免疫応答を加速、延長、増強又は改変するように作用する化合物又は化合物の混合物を指す。アジュバントは、宿主に単独で投与される場合、非免疫原性であり得るが、別の抗原と共同して投与される場合、その抗原に対する宿主の免疫応答を増強する。具体的には、「アジュバント」及び「免疫学的アジュバント」という用語は、本開示において互換的に使用される。免疫応答の持続期間のアジュバント媒介性増強及び／又は延長は、以下の１つ以上を含むがこれらに限定されない、当該分野で公知の任意の方法によって評価され得る：（ｉ）アジュバント／抗原の組み合わせによる免疫化に応答して産生される抗体の数が、抗原単独による免疫化に応答して産生される抗体の数に対して増加すること、（ｉｉ）抗原又はアジュバントを認識するＴ細胞の数が、増加すること、及び（ｉｉｉ）１つ以上のサイトカインのレベルが増加すること。アジュバントは、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムを含むがこれらに限定されない、アルミニウム系アジュバント；サポニン、例えばステロイドサポニン及びトリテルペノイドサポニン；細菌フラジェリン、及び例えば、ＧＭ－ＣＳＦなどのいくつかのサイトカインであり得る。アジュバントの選択は、抗原、ワクチン、及び投与経路に依存し得る。

【0150】

いくつかの実装形態では、アジュバントは、自然免疫を調節するか、又は輸送及び提示を容易にすることによって、ワクチン抗原に対する適応免疫応答を改善する。アジュバントは、樹状細胞（ＤＣ）を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）に、直接的又は間接的に作用する。アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンドであってもよく、ＤＣに直接影響を及ぼして、適応免疫の強度、効力、速度、持続時間、バイアス、幅、及び範囲を変化させ得る。他の例において、アジュバントは、炎症促進性経路を介してシグナル伝達し、免疫細胞浸潤、抗原提示、及びエフェクター細胞成熟を促進し得る。このクラスのアジュバントには、無機塩、油エマルジョン、ナノ粒子、及び高分子電解質が含まれ、複雑な不均一構造を示すコロイド及び分子集合体を含む。一例において、組成物は、アジュバントとしてピドチモドを更に含む。別の一例において、組成物は、アジュバントとしてＣｐＧを更に含む。

【0151】

本開示の化合物は、約０．１～約３０００ｍｇ／日の範囲内の投与量レベルで対象又は患者に投与することができる。約７０ｋｇの体重を有する正常な成人については、体重１キログラム当たり約０．０１～約１００ｍｇの範囲内の投与量が典型的には十分である。使用される特定の投薬量及び投薬量範囲は、対象又は患者の要件、治療される状態又は疾患の重症度、及び投与される化合物の薬理学的活性を含むいくつかの因子に潜在的に依存し得る。特定の対象又は患者に対する用量範囲及び最適用量の決定は、当業者の範囲内である。

【0152】

使用方法
本明細書に開示される送達ビヒクル複合体は、複合体（又はカーゴ）のポリアニオン化合物を細胞に送達するために使用することができる。したがって、核酸（例えば、ＲＮＡ）などのポリアニオン性化合物を細胞に送達する方法であって、細胞を本明細書に開示される送達ビヒクル複合体又は医薬組成物と接触させることを含む方法が、本明細書に開示される。いくつかの実装形態では、細胞をインビトロで接触させることができる。細胞がインビトロで接触されるいくつかの実装形態では、細胞はＨｅＬａ細胞である。細胞がインビボで接触される他の実装形態では、本開示の多成分送達系は、哺乳動物である対象に投与される。哺乳動物である対象としては、ヒト又はマウスの対象が挙げられ得るが、これらに限定されない。細胞をエクスビボで接触させる更に他の実施態様では、細胞は、ヒト又はマウスである対象から得られる。場合によっては、細胞は、腫瘍細胞である。場合によっては、細胞は、筋細胞である。

【0153】

いくつかの実装形態では、１つ以上のポリアニオン性カーゴ化合物が、治療用途のために送達され得る。非限定的な治療用途としては、癌、感染症、自己免疫障害、及び神経障害が挙げられる。特定の実装形態では、多成分送達系及びポリアニオン性カーゴ化合物を含む複合体が、ワクチンとして使用される。遺伝的ワクチン接種、又は核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の患者への投与、及びそれに続くコードされた遺伝情報の転写及び／又は翻訳は、遺伝性遺伝子疾患だけでなく、自己免疫疾患、感染症、癌性又は腫瘍関連疾患、並びに炎症性疾患の治療及び／又は予防にも有用である。遺伝子ワクチン接種は、コロナウイルスの治療又は予防に有用である。これらの実体の大部分のワクチン標的は、コロナウイルスのスパイク（Ｓ）タンパク質であるが、これは、ウイルスの外側を覆い、宿主細胞への侵入に関与する高度にグリコシル化された三量体クラスＩ融合タンパク質である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１と高い構造的相同性を共有し、Ｓ１ドメイン、Ｓ２ドメイン、及び受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を含む、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体を介した宿主細胞へのウイルス侵入に不可欠ないくつかのサブユニットを含有する。したがって、Ｓタンパク質及びそのサブユニット、並びにこれらのドメイン内の接近可能なペプチド配列は、魅力的なワクチン抗原標的である。更に、癌細胞は抗原を発現し、疾患の発症によって証明されるように、腫瘍は一般的に宿主によって容易に認識及び排除されないので、遺伝子ワクチン接種は癌の治療において特に有用である。

【0154】

ワクチン。本開示の送達ビヒクル複合体は、ワクチンとしても有用であり、ポリアニオン性化合物は、免疫原、抗原、又はネオ抗原をコードし得るＲＮＡである。宿主の免疫系は、病原性微生物に対する防御応答を迅速かつ特異的に開始するための手段、及び悪性腫瘍の拒絶に寄与するための手段を提供する。免疫応答は、一般に、抗原に特異的な抗体が分化したＢリンパ球によって産生される体液性応答、及び種々のタイプのＴリンパ球が、種々のメカニズムによって抗原を排除する細胞媒介性応答を含むと、これまで説明されてきた。例えば、特異的抗原を認識することができるＣＤ４（ＣＤ４＋とも呼ばれる）ヘルパーＴ細胞は、サイトカインなどの可溶性メディエータを放出して、免疫系の更なる細胞を動員して免疫応答に関与させることによって応答し得る。ＣＤ８（ＣＤ８＋とも呼ばれる）細胞傷害性Ｔ細胞はまた、特異的抗原を認識することができ、かつ抗原を有する細胞又は粒子に結合して破壊又は損傷し得る。特に、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を含む細胞媒介性免疫応答は、腫瘍細胞及び微生物（例えば、ウイルス、細菌、又は寄生生物）に感染した細胞の排除に重要であり得る。本開示の送達ビヒクル複合体は、複合体のポリアニオン性化合物のうちの１つ以上が、ウイルスペプチド（例えば、ウイルスポリペプチド）、ウイルスタンパク質、又は前述のものの機能的断片をコードする場合、免疫応答を誘導することが判明している。例えば、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７（例えば、ＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８由来）癌遺伝子、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質の構築物、及び／又はインフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）をコードするｍＲＮＡと複合体化されたＤＶ－１４０－Ｆ２又はＤＶ－１４０－Ｆ６／１７のいずれかを含む送達ビヒクル複合体は、強い体液性及び細胞性免疫応答を誘発した。例えば、実施例８～９及び図８～１２を参照のこと。

【0155】

したがって、本開示は、免疫応答の誘導を必要とする対象におけるその誘導のための方法であって、有効量の本開示の送達ビヒクル複合体（例えば、抗原性組成物として製剤化されたもの）を対象に投与することを含む方法を含む。また本明細書には、ウイルス感染の治療を必要とする対象におけるその治療の方法であって、有効量の本開示の送達ビヒクル複合体を、対象に投与することを含む方法も開示される。いくつかの実装形態では、投与は、筋肉内、腫瘍内、静脈内、腹腔内、又は皮下送達による。

【0156】

様々な実装形態では、本開示の送達ビヒクル複合体（例えば、組成物、医薬製剤、又は抗原性組成物として製剤化されたもの）を対象に投与することで、送達ビヒクル複合体を投与されなかった対象において産生される抗体（例えば、中和抗体）の量と比較して、対象において産生されるウイルス抗原に対する抗体の量の増加をもたらし得る。いくつかの実装形態では、増加は、２倍増加、５倍増加、１０倍増加、５０倍増加、１００倍増加、２００倍増加、５００倍増加、７００倍増加、又は１０００倍の増加である。

【0157】

本開示の方法によって惹起される免疫応答は、一般に、抗体応答、好ましくは中和抗体応答、Ｔ細胞及びＢ細胞の成熟及び記憶、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、並びにＣＤ４＋、ＣＤ８＋などのＴ細胞媒介性応答を含む。本明細書に開示される、ウイルス抗原をコードするＲＮＡを含む送達ビヒクル複合体によって生成される免疫応答は、本明細書に記載されるように、ウイルス感染を認識し、好ましくは改善及び／又は中和する、免疫応答を生成する。抗原性組成物の投与（免疫化又はワクチン接種）後の抗体応答を評価するための方法は、当技術分野において公知であり、かつ／又は本明細書に説明されている。いくつかの実装形態では、免疫応答は、Ｔ細胞媒介性応答（例えば、増殖応答又はサイトカイン応答などの、ペプチド特異的応答）を含む。いくつかの実装形態では、免疫応答は、Ｂ細胞応答及びＴ細胞応答の両方を含む。抗原性組成物は、筋肉内注射、腫瘍内注射、皮下注射、皮内投与、及び例えば、経口又は鼻腔内などの、粘膜投与などのいくつかの適切な方法で投与することができる。更なる投与様式としては、静脈内、腹腔内、鼻腔内投与、膣内、直腸内、及び経口投与が挙げられるが、これらに限定されない。免疫化された対象における異なる投与経路の組み合わせ、例えば、筋肉内投与及び鼻腔内投与を同時に行うこともまた、本開示によって企図される。

【0158】

癌。様々な癌（例えば、子宮頸癌）を、本開示の送達ビヒクル複合体によって送達されるポリアニオン性カーゴ化合物で治療することができる。実施例８に示されるように、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７（ＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８由来のもの）をコードするｍＲＮＡと複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２は、強い細胞性免疫応答及び体液性免疫応答の両方を誘発し、本開示の送達ビヒクル複合体が、癌を治療する能力を有することを示す。本明細書中で使用される場合、「癌」という用語は、周辺組織に侵入し、そして新しい身体部位に転移する傾向がある未分化細胞の増殖によって特徴付けられる、任意の種々の悪性新生物をいい、そしてまた、このような悪性新生物増殖によって特徴付けられる病理学的状態をいう。癌は、腫瘍又は血液悪性腫瘍であり得るが、その例として、限定されないが、すべてのタイプのリンパ腫／白血病、癌腫及び肉腫、例えば、肛門、膀胱、胆管、骨、脳、乳房、子宮頸部、結腸／直腸、子宮内膜、食道、眼、胆嚢、頭頸部、肝臓、腎臓、喉頭、肺、縦隔（胸部）、口、卵巣、膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、小腸、胃、骨髄、尾骨、睾丸、甲状腺、及び子宮に見出される、癌又は腫瘍が挙げられる。

【0159】

非限定的な例として、治療され得る癌腫としては、急性顆粒球性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、腺癌、腺肉腫、副腎癌、副腎皮質癌、肛門癌、退形成性星細胞腫、血管肉腫、虫垂癌、星細胞腫、基底細胞癌、Ｂ細胞リンパ腫）、胆管癌、膀胱癌、骨癌、腸癌、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、胆管癌、軟骨肉腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、大腸癌、大腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚リンパ腫、皮膚黒色腫、びまん性星細胞腫、非浸潤性乳管癌、子宮内膜癌、上衣腫、上皮肉腫、食道癌、ユーイング肉腫、肝外胆管癌、眼癌、卵管癌、線維肉腫、胆嚢癌、胃癌、消化管癌、消化管カルチノイド癌、消化管間質腫瘍、一般、胚細胞腫瘍、多形膠芽腫、神経膠腫、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、血管内皮腫、ホジキンリンパ腫、ホジキン病、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、炎症性乳癌、腸癌、肝内胆管癌、浸潤性／浸潤性乳癌、膵島細胞癌、顎癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、平滑筋肉腫、髄膜下転移、白血病、口唇癌、脂肪肉腫、肝癌、非浸潤性小葉癌、低悪性度星細胞腫、肺癌、リンパ節癌、リンパ腫、男性乳癌、髄様癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、間葉系軟骨肉腫、間葉系、中皮腫、転移性乳癌、転移性黒色腫、転移性扁平上皮頸部癌、混合グリオーマ、口腔癌、粘液性癌、粘膜黒色腫、多発性骨髄腫、鼻腔癌、上咽頭癌、頸部癌、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、麦粒腫、眼癌、眼黒色腫、乏突起膠腫、口腔癌、口腔癌、中咽頭癌，骨原性肉腫，骨肉腫，卵巣癌，卵巣上皮癌，卵巣胚細胞腫瘍，卵巣原発腹膜癌，卵巣性索間質腫瘍，パジェット病，膵臓癌，乳頭癌，副鼻腔癌，副甲状腺癌，骨盤癌，陰茎癌，末梢神経癌、腹膜癌、咽頭癌、褐色細胞腫、小球性星細胞腫、松果体腫瘍、松果体芽細胞腫、下垂体癌、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂癌、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、骨肉腫、肉腫、軟部組織癌、子宮肉腫、副鼻腔癌、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部肉腫、脊髄癌、脊柱癌、脊髄癌、脊髄腫瘍、扁平上皮癌、胃癌、滑膜肉腫、Ｔ細胞リンパ腫）、精巣癌、咽頭癌、胸腺腫／胸腺癌、甲状腺癌、舌癌、扁桃癌、移行細胞癌、移行細胞癌、三重陰性乳癌、尿管癌、尿管癌、尿道癌、子宮腺癌、子宮体癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌が挙げられ得る。

【0160】

いくつかの実装形態では、本開示の送達ビヒクル複合体は、子宮頸癌、頭頸部癌、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前立腺癌、及び肺癌からなる群から選択される癌を治療するために使用される。いくつかの実装形態では、送達ビヒクル複合体は、子宮頸癌を治療するために使用することができる。

【0161】

感染症。いくつかの実装形態では、本開示の送達ビヒクル複合体は、微生物感染、例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、又は寄生虫感染などの、感染性疾患を治療するために使用される。感染性疾患の非限定的な例としては、肝炎（ＨＢＶ感染又はＨＣＶ感染など）、ＲＳＶ、インフルエンザ、アデノウイルス、ライノウイルス、又は他のウイルス感染が挙げられる。

【0162】

自己免疫疾患。様々な自己免疫疾患及び自己免疫関連疾患を、本開示の送達ビヒクル複合体で治療することができる。本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」という用語は、身体が、それ自体の組織を攻撃する抗体を産生する疾患を指す。非限定的な例として、自己免疫疾病は、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、アガマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経失調症、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全症、自己免疫性内耳症（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性じんま疹、軸索・神経性神経障害、バロ病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労症候群^＊＊、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、クローン病、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、本態性混合型リオグロブリン血症、脱髄性神経炎、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デービック病（視神経脊髄炎）、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エバンス症候群、線維筋痛症^＊＊、線維性肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）（以前はウェゲナー肉芽腫症と呼ばれていた）、バセドウ病、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ－ションレイン紫斑病、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節性リポ蛋白、封入体筋炎、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎、川崎症候群、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、苔癬性硬化症、苔癬性結膜炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ループス（ＳＬＥ）、ライム病（慢性）、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ムーレン潰瘍、ミュシャ・ハーバーマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、眼球瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回文性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌性小児自己免疫性神経精神疾患）、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリーロンベルグ症候群、パーソンネージ・ターナー症候群、末梢扁平上皮炎、天疱瘡、末梢神経障害、脳脊髄周囲炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、Ｉ型・ＩＩ型・ＩＩＩ型自己免疫性多発性関節炎症候群、リューマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、プロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、純赤血球無形成症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、レストレスレッグス症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子・精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感神経性眼症、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ－ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化性結合組織病（ＵＣＴＤ）、ぶどう膜炎、血管炎、小水疱性皮膚症、白斑、及びウェゲナー肉芽腫症（現在は多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）と呼ばれている）であり得る。

【0163】

神経学的疾患。様々な神経疾患が、本開示の送達ビヒクル系で治療され得る。非限定的な例として、神経疾患は、透明帯欠損症、酸性リパーゼ病、酸性マルターゼ欠乏症、後天性てんかん様失語症、急性播種性脳脊髄炎、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、胼胝形成不全、無神経症、アイカルディ症候群、アイカルディ－グティエール症候群障害、ＡＩＤＳ－神経学的合併症、アレキサンダー病、アルパース病、交代性片麻痺、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質症候群、失語症、失行症、くも膜嚢腫、くも膜炎、アーノルド－キアリ奇形、動静脈奇形、アスペルガー症候群、運動失調症、脊髄拡張症、運動失調症及び小脳変性症又は脊髄小脳変性症、心房細動及び脳卒中、注意欠陥多動性障害、自閉スペクトラム症、自律神経機能障害、中隔弛緩の欠如、酸性リパーゼ病、酸性マルターゼ欠乏症、後天性てんかん様失語症、急性散在性脳脊髄炎、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、脳梁欠損症、失認、アイカルディ症候群、アイカルディ－痛風性症候群障害、ＡＩＤＳ－神経学的合併症、アレキサンダー病、アルパース病、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔、アディー症候群、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質抗体症候群、失語症、アプラ、くも膜嚢胞、くも膜炎、アーノルド－キリ奇形、動静脈奇形、アスペルガー症候群、運動失調、毛細血管拡張性運動失調症、運動失調及び小脳又は脊髄小脳変性症、心房性細動及び脳卒中、注意欠陥多動性障害、自閉症スペクトラム障害、自律神経失調症、背部痛、バース症候群、バッテン病、ベッカー筋緊張症、ベーチェット病、ベル麻痺、良性本態性眼瞼けいれん、良性巣状筋萎縮症、良性頭蓋内圧亢進症、ベルンハルト－ロート症候群、ビンスワンガー病、眼瞼けいれん、ブロッホ－ザルツバーガー症候群、腕神経叢出生時損傷、腕神経叢損傷、ブラッドベリー－エグルストン症候群、脳及び脊髄腫瘍、脳動脈瘤、脳損傷、ブラウン－セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、皮質下梗塞及び白質脳症を伴う脳常染色体優性動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）、カナヴァン病、手根管症候群、カウザルギー、海綿腫、海綿状血管腫、海綿状奇形、中心性頸髄症候群、中枢性頚髄症候群、中枢性疼痛症候群、中枢性橋髄融解症、頭部障害、セラミダーゼ欠損症、小脳変性症、小脳低形成、脳動脈瘤脳動脈硬化症、脳萎縮症、脳性脚気、脳空洞奇形、脳巨人症、脳低酸素症、脳性麻痺、脳－眼－顔－骨格症候群（ＣＯＦＳ）、シャルコー・マリー・トゥース病、キアリ奇形、コレステロールエステル貯蔵症、舞踏病、コレオアカントサイトーシス、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性起立性不耐症、慢性疼痛、コケイン症候群ＩＩ型、コフィン・ローリー症候群、巨頭症、昏睡状態、複雑性局所疼痛症候群、先天性顔面神経麻痺、先天性ミオパチー、先天性血管空洞奇形、皮質基底細胞変性症、頭蓋動脈炎、頭蓋縫合症、クリー脳炎、クロイツフェルト－ヤコブ病、累積外傷障害、クッシング症候群、サイトメガロース性封入体症、サイトメガロウイルス感染症、ダンシングアイズ－ダンシングフット症候群、ダンディ－ウォーカー症候群、ドーソン病、デ・モルシエ症候群、デジェリン－クランプケ麻痺、認知症、認知症－多発性不全麻痺、認知症－意味性、皮質下認知症、レビー小体型認知症、歯状小脳失調症、歯管萎縮症、皮膚筋炎、発達性運動障害、デービック症候群、糖尿病性神経障害、びまん性硬化症、ドラベ症候群、自律神経失調症、書字障害、失読症、嚥下障害、失行症、脊髄小脳筋運動障害、進行性脊髄小脳運動障害、ジストニア、早期小児てんかん性脳症、空洞症候群、脳炎、嗜眠性脳炎、脳脊髄症、脳症、脳症（家族性小児）、脳三叉神経血管腫症、てんかん、てんかん性片麻痺、エルプ麻痺、エルプ－デュシェンヌ及びデジェリーヌ－クルンプケ麻痺、本態性振戦、伸展性脊髄融解症、ファブリー病、Ｆａｈｒ症候群、失神、家族性自律神経失調症、家族性血管腫、家族性特発性基底核石灰化症、家族性周期性麻痺、家族性痙性麻痺、ファーバー病、熱性けいれん、線維筋異形成、フィッシャー症候群、フロッピーインファント症候群、下垂足、フリードライヒ失調症、前頭側頭型認知症、ゴーシェ病、全身性ガングリオシドーシス、ゲルストマン症候群、ゲルストマン－シュトラウスラー－シャインカー病、巨大軸索性神経障害、巨大細胞動脈炎、巨大細胞封入体病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、舌咽神経痛、グリコーゲン貯蔵症、ギラン・バレー症候群、ハレルヴォルデン－シュパッツ病、頭部外傷、頭痛、連続性半頭症、半顔面けいれん、間欠性片麻痺、遺伝性神経障害、遺伝性痙性対麻痺、多発性神経萎縮性遺伝病、帯状疱疹、耳性帯状疱疹、平山症候群、ホームズ－アディー症候群、ホロ脳症、ＨＴＬＶ－１関連脊髄症、ヒューズ症候群、ハンチントン病、水頭症、水頭症－正常圧水頭症、水脊髄症、副腎皮質刺激ホルモン分泌過多症、過眠症、過緊張症、低酸素症、免疫介在性脳脊髄炎、封入体筋炎、ピグメンティ失禁、小児低身長症、小児神経軸索性ジストロフィー、小児フィタン酸貯蔵症、小児レフスム病、小児けいれん、炎症性ミオパチー、小児麻痺、腸リポジストロフィー、頭蓋内嚢胞、頭蓋内圧亢進症、アイザック症候群、ジュベール症候群、カーンズ－セイル症候群、ケネディ病、キンズボーン症候群、クライン－レヴィン症候群、クリッペル－フェイル症候群、クリッペル－トレノネー症候群（ＫＴＳ）、クリューバー－ビュシー症候群、コルサコフ健忘症状症候群、クラッベ病、クーゲルベルク－ウェランダー病、クル、ランバート－イートン筋無力症候群、ランダウ－クレフナー症候群、外側大腿皮膚神経陥入症、外側髄質症候群、学習障害、リー病、レノックス－ガストー症候群、レッシュ－ナイハン症候群、ロイコジストロフィー、レビン－クリッチリー症候群、レビー小体型認知症、脂質貯蔵症、リポイド蛋白症、裂頭症、ロックイン症候群、ルー・ゲーリッグ病、ループス－神経学的後遺症、ライム病－神経学的合併症、マチャド－ヨーゼフ病、黄斑脳症、巨大無脳症、メルカーソン－ローゼンタール症候群、髄膜炎、髄膜炎及び脳炎、メンケス病、感覚鈍麻、メタクロマチック白質ジストロフィー、小頭症、片頭痛、ミラーフィッシャー症候群、小脳卒中、ミトコンドリアミオパチー、メビウス症候群、単髄性筋萎縮症、運動ニューロン疾患、もやもや病、ムコ脂質症、ムコ多糖症、多発性梗塞性認知症、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、多系統萎縮症、起立性低血圧を伴う多系統萎縮症、筋ジストロフィー、筋無力症－先天性、重症筋無力症、ミエリン破砕性びまん性硬化症、ミオクローヌス、ミオパチー、ミオパチー－先天性、ミオパチー－細胞毒性、ミオトニア、先天性ミオトニア、ナルコレプシー、神経赤血球症、脳鉄蓄積を伴う神経変性、神経線維腫症、神経遮断薬悪性症候群、エイズの神経学的合併症、ライム病の神経学的合併症、サイトメガロウイルス感染の神経学的結果、ポンペ病の神経学的症状、ループスの神経学的後遺症、視神経脊髄炎、神経筋強直症、神経セロイドリポフスチン症、神経細胞移行障害、ニューロパチー－遺伝性、神経サルコイドーシス、神経梅毒、神経毒性、海綿状母斑、ニーマン－ピック病、オサリヴァン－マクラウド症候群、後頭神経痛、大田原症候群、錐体外路小脳萎縮症、眼球クローヌスミオクローヌス、起立性低血圧、使いすぎ症候群、疼痛－慢性、パントテン酸キナーゼ関連神経変性、腫瘍随伴症候群、感覚鈍麻、パーキンソン病、発作性コレオアテトーシス、発作性頭重症、パリー－ロンバーグ、ペリザエウス－メルツバッハー病、ペーナ・ショケールＩＩ症候群、神経周囲嚢胞、周期性麻痺、末梢神経障害、脳室周囲白質軟化症、持続性植物状態、広汎性発達障害、フィタン酸貯蔵症、ピック病、挟まれた神経、梨状筋症候群、下垂体腫瘍、多発性筋炎、ポンペ病、ポレンセファリー、ポリオ後症候群、帯状疱疹後神経痛、感染後脳脊髄炎、姿勢低血圧、姿勢起立性頻脈症候群、姿勢頻脈症候群、原発性歯列萎縮症、原発性側索硬化症、原発性進行性失語症、進行性疾患、進行性半側顔面萎縮症、進行性運動失調症、進行性多巣性白質脳症、進行性硬化性ポリオジストロフィー、進行性核上性麻痺、プロソパグノジア、疑似トーチ症候群、偽トキソプラズマ症症候群、偽性頭蓋内圧亢進症、心因性運動、ラムジーハント症候群Ｉ、ラムジーハント症候群ＩＩ、ラスムッセン脳炎、反射性交感神経性ジストロフィー症候群、レフサム病、レフサム病－小児、反復性運動障害、反復性ストレス傷害、レストレスレッグス症候群、レトロウイルス関連脊髄症、レット症候群、ライ症候群、リウマチ性脳炎、ライリーデイ症候群、仙骨神経根嚢胞、舞踏病、唾液腺疾患、サンドホフ病、シルダー病、統合失調症、ザイテルベルガー病、発作障害、意味性認知症、セプト－オプティック異形成、乳児期重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）、揺さぶられっ子症候群、帯状疱疹、シャイ・ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、睡眠時無呼吸症候群、睡眠症候群、ソトス症候群、痙縮、二分脊椎、脊髄梗塞、脊髄損傷、脊髄腫瘍、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳萎縮症、脊髄小脳変性症、スティール－リチャードソン－オルゼウスキー症候群、スティッフパーソン症候群、線条体変性症、脳卒中、スタージ・ウェーバー症候群、亜急性硬化性全脳炎、皮質下動脈硬化性脳症、短時間持続型片側性神経型（ＳＵＮＣＴ）頭痛、嚥下障害、シデナム舞踏病、同調症、梅毒性脊髄硬化症、水脊髄空洞症、脊髄空洞症、全身性エリテマトーデス、背部タブ、遅発性ジスキネジア、タルロフ嚢胞、テイ－サックス病、側頭動脈炎、脊髄繋留症候群、トムセン筋強直症、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパチー、チック・ドゥールー、トッド麻痺、トゥレット症候群、一過性脳虚血発作、伝達性海綿状脳症、横断性脊髄炎、外傷性脳損傷、振戦、三叉神経痛、熱帯性痙性対麻痺、トロイヤー症候群、結節性硬化症、血管勃起性腫瘍、中枢及び末梢神経系の血管炎症候群、フォン－エコーノモ病、フォンヒッペル－リンダウ病（ＶＨＬ）、フォンレックリングハウゼン病、ワレンベルグ症候群、ウェルドニッヒ・ホフマン病、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウエスト症候群、むち打ち症、ウィップル病、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ウォルマン病、Ｘ－連鎖性脊髄及び球脊髄性筋萎縮症。

【0164】

人体に対して実施される方法の特許付与を禁止する管轄区域においては、ヒト対象又は患者への組成物の「投与」の意味は、ヒト対象又は患者が、任意の技術（例えば、経口、吸入、局所適用、注射、挿入など）によって自己投与する規制物質を処方することに限定されるものとする。特許可能な主題を定義する法律又は規則と一致する最も広い妥当な解釈が意図される。人体に対して実施される方法の特許付与を禁止しない管轄区域では、組成物の「投与」は、人体に対して実施される方法及び前述の活動の両方を含む。

【実施例】

【0165】

以下の実施例は、例示のために提供され、本開示の範囲を限定することを意図しない。

【0166】

実施例１－第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドの一般的合成
本明細書に開示される第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドを合成するための一般的なプロトコルは、国際特許出願公開第２０２０／０６９４４２号及び国際特許出願公開第２０２０／０６９４４５号（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に見出され得る。以下の実施例は、第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドの合成のための一般的プロトコルを説明する。

【0167】

すべてのポリマーは、ブロモ酢酸及び第一級アミンを用いて合成した。Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋアミド樹脂を固体支持体として使用した。樹脂上のＦｍｏｃ基を、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で脱保護した。次いで、アミノ樹脂をブロモ酢酸でアミド化した。アミド化に続いて、第一級アミンで臭化物を求核置換することにより、α－炭素のアミノ化を行った。２つの工程を連続的に繰り返して、所望のカチオン性ペプチド配列を生成した。

【0168】

すべての反応及び洗浄は、特に別段示されない限り室温で行った。樹脂の洗浄とは、洗浄溶媒（通常、ＤＭＦ又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ））を樹脂に添加し、均一なスラリーが得られるように樹脂を撹拌し、続いて樹脂から溶媒を完全に排出させることを指す。樹脂が乾燥しているように見えるまで、反応容器のフリット底を通して真空濾過することによって溶媒を除去した。すべての合成において、樹脂スラリーを、フリット容器の底を通してアルゴンを泡立たせることによって撹拌した。

【0169】

最初の樹脂脱保護。フリット反応容器にＦｍｏｃ－Ｒｉｎｋアミド樹脂を充填した。ＤＭＦを樹脂に添加し、この溶液を撹拌して樹脂を膨潤させた。次いで、ＤＭＦを排出させた。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを樹脂に添加し、樹脂を撹拌し、樹脂を排出することによって、Ｆｍｏｃ基を除去した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを樹脂に添加し、１５分間撹拌し、次いで排液した。次いで、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。

【0170】

アシル化／アミド化。次いで、ＤＭＦ中のブロモ酢酸を樹脂に添加し、続いてＤＭＦ中のＮ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を添加することによって、脱ブロック化アミンをアシル化した。この溶液を室温で３０分間撹拌し、次いで排液した。この工程を２回繰り返した。次いで、樹脂をＤＭＦで２回、ＤＭＳＯで１回洗浄した。これが、完了した反応サイクル１回分であった。

【0171】

求核置換／アミノ化。アシル化樹脂を、所望の第一級又は第二級アミンで処理して、α－炭素上の臭素脱離基で求核置換を行った。所望のペプチド配列が得られるまで、このアシル化／置換サイクルを繰り返した。

【0172】

樹脂からのペプチド切断。乾燥した樹脂を、テフロン被覆マイクロ撹拌棒を含むガラスシンチレーションバイアルに入れ、水中９５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。溶液を２０分間撹拌し、次いでポリエチレンフリットを取り付けた固相抽出（ＳＰＥ）カラムを通して、ポリプロピレンコニカル遠心分離管中に濾過した。樹脂を、１ｍＬの９５％ＴＦＡで洗浄した。次いで、合わせた濾液を、１：１のアセトニトリル：水によって３回凍結乾燥させた。凍結乾燥したペプチドを、水中５％のアセトニトリル中に、５ｍＭの濃度になるように再溶解させた。

【0173】

精製及び特徴付け。再溶解させた粗ペプチドを、分取ＨＰＬＣにより精製した。精製されたペプチドを、ＬＣ－ＭＳ分析によって特徴付けた。

【0174】

実施例２－ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化カチオン性ペプトイドの合成
実施例１に記載のサブモノマー法により、ブロモ酢酸及びＮ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を用いて、ヒドロキシエチルでキャップ化脂質化ペプトイドを合成した。ポリスチレン担持ＭＢＨＡ Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋアミド（２００ｍｇの代表スケール、０．６４ｍｍｏｌ／ｇローディング、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）樹脂を固体支持体として使用した。ブロモアセチル化のために、樹脂を０．８Ｍのブロモ酢酸及び０．８ＭのＮ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）の１：１混合物と、１５分間にわたり組み合わせた。アミン置換を、ＤＭＦ中のアミンの１Ｍ溶液を用いて、４５分間行った。合成後、粗ペプトイドを、９５：２．５：２．５の比率の、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：水：トリイソプロピルシランの混合物５ｍＬを使用して、室温で４０分間樹脂から切断した。樹脂を濾過により除去し、濾液を真空遠心分離機を用いて濃縮させた。粗ペプトイドを、Ｃ４カラム及び６０～９５％ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ Ｓｅｌｅｋｔ）によって、更に精製した。得られた精製物の識別と純度についてのアッセイを行った。その際、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムに、Ａｃｑｕｉｔｙ Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ ＵＶ検出器と、Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ２質量分析計とを装着し、５～９５％勾配のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＢＥＨ Ｃ４カラムを用いた。選択されたペプトイドを、Ｗａｔｅｒｓ ２４８９ ＵＶ／可視検出器を備えた分取Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ１５０ＬＣシステムによって、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ＢＥＨ３００ Ｐｒｅｐ Ｃ４カラムを、０．１％ＴＦＡを含む水中４０～８５％アセトニトリル勾配を用いて、３０分間にわたって更に精製した。

【0175】

実施例３－送達ビヒクル複合体の合成
合成。ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化ペプトイドを、核酸などのポリアニオン化合物と組み合わせて、送達ビヒクル複合体を形成する。この送達ビヒクル複合体は、治療及び／又は予防目的で、インビトロ又はインビボで評価することができるものである。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、アミノ－脂質化ペプトイドのカチオン性部分（複数可）は、主に静電相互作用を介して、ポリアニオン性カーゴ（例えば、核酸カーゴ）の、負に荷電したホスホジエステル骨格に結合し、混合コアセルベート複合体を形成する。ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化ペプトイド上の脂質鎖どうしの間の疎水性相互作用は、微粒子形成を安定化し、膜会合を補助するように作用し得る。

【0176】

送達ビヒクル複合体は、それらの物理的、化学的、及び生物学的特性を調節するために、当技術分野で公知の任意の物理的及び／又は化学的方法によって調製することができる。これらの方法は、典型的には、水中又は水混和性有機溶媒中の、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化ペプトイドと、水中又は水性緩衝液中のオリゴヌクレオチドとを、迅速に組み合わせることを伴う。これらの方法は、ピペッティングによる成分の単純な混合、又はＴ－ミキサ、ボルテックスミキサ、若しくは他のカオス混合構造を含むものなどのマイクロ流体混合プロセスを含むことができる。

【0177】

標準的な製剤では、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化ペプトイド及び更なる脂質が無水エタノール中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解されて、その結果、室温で安定な溶液が得られる。いくつかの実装形態では、溶液は、－２０℃で保存される。核酸カーゴを、１～２ｍｇ／ｍＬの最終濃度になるように、ＤＮａｓｅ又はＲＮａｓｅを含まない水に溶解させる。これらの溶液は、－２０℃又は－７８℃で長期間保存することができる。

【0178】

本明細書に開示される送達ビヒクル組成物を調製するために、ヒドロキシエチルでキャップされた第三級アミノ脂質化ペプトイド及び更なる脂質成分を、必要とされる質量比でエタノール相中で最初に予め混合する。核酸カーゴを、エタノール及び酸性緩衝液（１０ｍＭのリン酸塩／クエン酸塩、ｐＨ５．０）で希釈する。エタノール相及び水相を３：１の体積比で混合し、次いで直ちに１：１の体積比となるようにＰＢＳで希釈して、０．１μｇ／ｕＬの最終ｍＲＮＡ濃度を得た。前述の方法によって調製される、非限定的な例示的送達ビヒクル組成物としては、上記の表２に列挙される組成物（例えば、組成物Ｆ２、Ｆ６／１７、Ｆ６／１２、及びＦ６／１５）が挙げられる。

【0179】

送達ビヒクル組成物を、ポリアニオン性化合物、例えば、ホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク、その機能的断片、及び／又はその変異体をコードするＲＮＡ、及びＥ６／Ｅ７癌遺伝子（例えば、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８由来、その機能的断片、及び／又はその変異体）と、表３に示す比率で組み合わせて、送達ビヒクル複合体を形成し、この送達ビヒクル複合体を、治療及び／又は予防目的で、インビトロ又はインビボで評価した。表３中のｗ／ｗは、示された成分の、ｍＲＮＡに対する質量比である。

【0180】

実施例４－粒子の特徴付け
得られた送達ビヒクル複合体を、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって評価して、送達ビヒクル複合体内の、体積平均粒径／直径（ｎｍ）及びサイズ多分散性指数（ＰＤＩ）を決定した。

【0181】

粒径。粒径及びサイズ分布は、Ｗｙａｔｔ社製ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩＩを用いて測定した。一般に、製剤化した試料を１００μＬのＰＢＳで、２ｎｇ／ｕＬに希釈した。データは、相関関数のキュムラントフィットの流体力学的直径（ｎｍ単位）、及びその測定値の多分散性として報告される。カチオン性成分の量が増加した複合体は、結果としてより小さい粒径をもたらした。図１Ａを参照のこと。

【0182】

封入パーセント。Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡを含有する送達ビヒクル複合体内に封入されたｍＲＮＡの割合を、改良型ＲｉｂｏＧｒｅｅｎアッセイを使用して決定した。一般に、製剤化されたｍＲＮＡ試料を、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘを含む又は含まないＴｒｉｓ－ＥＤＴＡ緩衝液で、５００ｎｇ／ｍＬに希釈した。ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を、２００倍希釈で添加し、プレートを５分間インキュベートした。蛍光をＥｘ．８４０ｎｍ／Ｅｍ．５２０ｎｍで測定し、封入されたｍＲＮＡを、非溶解粒子対溶解粒子の蛍光の比をとることによって計算した。カチオン性成分の量を増やした複合体は、結果としてより高い封入化をもたらした。図１Ｂを参照のこと。

【0183】

粒子安定性。送達ビヒクル複合体を４℃で保存し、１７日後及び４８日後に、得られた粒子の粒径及び封入パーセントを決定した。複合体は、テストされた保存期間にわたって、粒径も封入率も有意に変化することはなかった。図２を参照のこと。

【0184】

それぞれＦｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化させたＤＶ－１４０－Ｆ２及びＤＶ－１１２－Ｆ２を、－２０℃、４℃、２５℃、及び３７～４０℃で保存し、複合体の粒径（図３Ａ）及び多分散性（図３Ｂ）を、２４時間のインビボ時点後、並びに凍結／融解サイクル（３回、４℃／２５℃）にわたって評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ２は、この実施例におけるすべての実験において、ＤＶ－１１２－Ｆ２よりも良好な安定性を示した。

【0185】

更なる実施例では、複合体ＤＶ－１４０－Ｆ２、ＤＶ－１４０－Ｆ６／１７、及びＤＶ－１１２－Ｆ２を、５℃の保存温度に供し、以下の表６の条件に従って、経時的に粒径及び封入率についてモニターした。

【0186】

【表6】

^＊毎月モニタリング、試料は０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。
＋毎週モニタリング、試料は濾過しない。
＃試料は、０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。

【0187】

実施例５－毒物学研究
ポリアニオン性成分としてｍＲＮＡを有する複合体ＤＶ－１４０－Ｆ２を、以下の表７に示すパラメータに従って、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．３ｍｇ／ｋｇの用量で、筋肉内注射によってラットに投与した。

【0188】

【表7】

【0189】

Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットモデルにおける、組織病理学、肉眼で見ての臓器評価、剖検、血液学、臨床化学、サイトカイン分析、体重、臨床観察、及び食物消費に対するＤＶ－１４０－Ｆ２の効果を、当該分野で周知の方法を使用して評価した（データは示さず）。結果を以下の表８に示す。

【0190】

【表8】

【0191】

Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡと複合体化したＤＶ－１４０－Ｆ２は、全身毒性又は有害事象を伴わずに、高用量及び低用量で十分に許容された。

【0192】

実施例６－送達ビヒクル複合体の有効性－インビトロでのホタルルシフェラーゼ発現
本明細書に開示される送達ビヒクル組成物と、ホタルルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡ）とを含む複合体の有効性を、ホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）レポータ遺伝子を培養細胞に送達するそれらの能力に基づいて、インビトロで評価した。代表的な実験では、送達ビヒクル組成物をＦｌｕｃ ｍＲＮＡと組み合わせ、得られた粒子を、培養したＨＥＫ－２９３細胞に５０ｎｇ／ウェルの用量で添加した（総体積は、１５０μＬ）。得られたルシフェラーゼ発現を、処理の６時間後及び１８時間後に発光プレートリーダーによって測定した。本開示の送達ビヒクル（例えば、ＤＶ－１４０－Ｆ２）は、高いルシフェラーゼ発現を示す。

【0193】

実施例７－インビボでのルシフェラーゼ発現
一般的な方法。すべての研究の前に、動物（例えば、マウス及び／又はラット）を使用前に最低３日間順応させた。動物を、温度及び湿度が制御された室内で、１２時間の光サイクルで維持した。健康チェックと、食物及び水のチェックとを毎日行った。

【0194】

注射は、注射部位に応じて２６～３０ゲージ針を使用して、皮下（５０～２００μＬ）、腹腔内（最大１０００μＬ）、静脈内（５０～２００μＬ）、筋肉内（５０μＬ）、又は腫瘍内（５０μＬ）に行った。動物は、すべての注射／移植についてイソフルラン麻酔下にあった。

【0195】

画像撮影のために、動物を麻酔下に置き、Ｄ－ルシフェリン（１５ｍｇ／ｍＬ）を体重１ｇ当たり１０μＬの用量で腹腔内に注射し、カメラチャンバに入れ、最大で３０分間撮影した。基質注射の１５分後に、画像化を行った。

【0196】

静脈内投与。本明細書に開示される送達ビヒクル複合体は、Ｂａｌｂ／ｃマウスへの、Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡのインビボでの複数の投与経路による投与に有効であった。一般に、送達系複合体を０．５ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射により投与し、得られた生物発光を６時間後に定量した。処置動物を屠殺し、目的の器官を解剖し、そして得られた生物発光を別々に定量することによって、器官特異的生物発光量を測定した。

【0197】

局所投与。ＩＶ投与に加えて、本明細書に記載の送達ビヒクル複合体はまた、腫瘍内（ＩＴ）、皮下（ＳＣ）、又は筋肉内（ＩＭ）の投与経路によるｍＲＮＡの局所投与にも有効である。これらの実施例について、ｍＲＮＡを、腫瘍内投与については０．１ｍｐｋ、又は皮下及び筋肉内投与については０．０１ｍｐｋの用量で投与し、得られた生物発光量を６時間後に測定した。

【0198】

本開示の送達ビヒクル複合体は、筋肉内注射を介して投与された場合（図４、図５、及び図６を参照）及び腫瘍内注射を介して投与された場合（図７を参照）に、高いルシフェラーゼ発現を示す。

【0199】

実施例８－子宮頸癌のためのＲＮＡベースのワクチン
癌に対するＲＮＡベースのワクチンとして作用する、本開示の送達ビヒクル複合体の有効性を評価した。

【0200】

細胞性応答。疾患モデルにおける本明細書に記載の送達ビヒクル複合体の有効性を、オボアルブミン（ＯＶＡ）又はＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７癌遺伝子（ＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８由来）のいずれかをコードするｍＲＮＡを代表的なペプトイドと共に製剤化し、このワクチンをＣ５７Ｂｌ／６マウスに投与することによって評価した。ワクチン候補を２回投与し、試験から０日目にプライムを投与し、７日目にブーストを投与した。１４日目に、蛍光ＭＨＣ－Ｉ四量体コンジュゲート（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）を用いて、末梢血中及び脾臓中の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを測定することによって、特徴付けられたエピトープに対して得られた免疫応答を決定した。ＤＶ－１４０－Ｆ２複合体は、試験された他の複合体と比較して強い細胞応答を誘発した。図８Ａを参照のこと。

【0201】

体液性応答。ワクチン候補に対する体液性応答を、Ｅ７－ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって評価した。簡潔に述べると、ＭａｘｉＳｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、１μｇ／ｍＬのＥ７－ｈｉｓタンパク質（Ａｂｃａｍ）を用いて、４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを洗浄し、１０％のＦＢＳでブロッキングした。血漿試料をブロッキング緩衝液（１０％ＦＣＳ）で、１：５の希釈率で希釈し、５つの１０倍希釈物をプレートに加えた。サンプルをプレートに添加し、４℃で一晩インキュベートした。検出は、ブロッキング緩衝液中１：１０００のロバ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ社製）を１時間使用し、次いで、ＨＲＰ基質で検出し、４５０ｎｍで読み取った。ＤＶ－１４０－Ｆ２複合体は、試験された他の複合体と比較して、強いＩｇＧｒ応答を誘発した。図８Ｂを参照のこと。

【0202】

実施例９－ＣＯＶＩＤ－１９のためのＲＮＡベースのワクチン
ＤＶ－１４０－Ｆ２を、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク（ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク）をコードするＲＮＡと複合体化し、その免疫応答を評価した。全長スパイクタンパク質の構築物を含むＤＶ－１４０－Ｆ２は、スパイクタンパク質に対して強い体液性応答及び細胞性応答を示した。更に、スパイク特異的抗体が、血清中及び肺中で検出され、スパイク特異的ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞が、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２を産生した。ＤＶ－１４０－Ｆ２複合体によって誘導される体液性応答及び細胞性応答の範囲は、ＭＲＮＡ－１２７３で処置されたマウスにおいて示される応答と同様である。更に、スパイクタンパク質とｆｌｕ血球凝集素（ＨＡ）のＲＮＡとの組み合わせは、ｆｌｕ ＨＡ及びスパイクタンパク質の両方に対する応答を誘導した。

【0203】

スパイク特異的中和抗体の誘導。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８）を、０日目及び２１日目に、異なる全長スパイク構築物（構築物#１、構築物#２、及び構築物#３）のＣＯＶＩＤ ＲＮＡと複合体化した１μｇのＤＶ－１４０－Ｆ２を、筋肉内投与して免疫化した。なお、このＣＯＶＩＤ ＲＮＡは、南アフリカ変異型及びイギリス変異型、基準全長スパイク、又はスクランブル由来のいくつかの突然変異を含むものである。水中油型スクアレンエマルジョン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社製Ａｄｄａｖａｘ）中の組換えスパイクタンパク質（１０μｇ）も、対照として含めた。血清及び気管支肺胞上皮洗浄液を、５０日目に回収した。血清（図９Ａ）及び肺（図９Ｂ）中のスパイク特異的抗体を、コーティングのためのスパイクの受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）領域及び抗マウスＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって評価した。吸光度を、ＯＤ４５０で測定した。カットオフとしてバックグラウンドの平均＋バックグラウンドウェルの５×ｓｔｄを使用して、血清について終点力価を計算した。血清中の中和抗体価を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社からのＳＡＲＳ－ＣｏＶ２サロゲートウイルス中和試験を使用して、取扱説明書に従って１：１００の希釈率で評価した（図９Ｃ）。ＤＶ－１４０－Ｆ２及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体は、スパイク特異的中和抗体を誘導した。スパイク特異的抗体は、血清において、かつ肺において検出することができる。

【0204】

スパイク特異的細胞性免疫応答の誘導。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８）を、０日目及び２１日目に、異なる全長スパイク構築物（構築物#１、構築物#２、及び構築物#３）のＣＯＶＩＤ ＲＮＡと複合体化した１μｇのＤＶ－１４０－Ｆ２を、筋肉内投与して免疫化した。なお、このＣＯＶＩＤ ＲＮＡは、南アフリカ変異型及びイギリス変異型、基準全長スパイク、又はスクランブル由来のいくつかの突然変異を含むものである。水中油型スクアレンエマルジョン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社製Ａｄｄａｖａｘ）中の組換えスパイクタンパク質（１０μｇ）も、対照として含めた。脾臓を５０日目に回収し、処理して単一の細胞懸濁液とした。ＩＦＮｇ ＥＬＩＳｐｏｔ（図１０Ａ）並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ２についての細胞内サイトカイン染色（図１０Ｂ）によって、全長スパイクについての重複ペプチドライブラリーを使用して脾細胞におけるスパイク特異的免疫応答を評価した。図１０Ｃも参照のこと。ＤＶ－１４０－Ｆ２及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体は、スパイク特異的Ｔ細胞性応答を誘導した。

【0205】

ＭＲＮＡ－１２７３及び本開示のワクチンによって誘導されたスパイク特異的力価の比較。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３２）を、０日目及び２１日目に、全長スパイク構築物（構築物#１、構築物#２、及び構築物#３）のＲＮＡと複合体化した１μｇのＤＶ－１４０－Ｆ２で、筋肉内投与して免疫化した。なお、このＣＯＶＩＤ ＲＮＡは、南アフリカ変異型及びイギリス変異型、又はスクランブルＲＮＡ対照由来のいくつかの突然変異を含むものである。５０日目に血清を採取した。血清中のスパイク特異的抗体を、コーティングのためのスパイクの受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）領域及び抗マウスＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって評価した。カットオフとしてバックグラウンドの平均＋バックグラウンドウェルの５×ｓｔｄを使用して、血清について終点力価を計算した。平均＋／－幾何標準偏差を示す。図１１Ａを参照。ＤＶ－１４０－Ｆ２及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合物は、マウスにおいて、様々なレベルのスパイク特異的抗体を誘導したが、これは、同様のレジメンでＭＲＮＡ－１２７３で処置されたマウスにおいて報告された応答の範囲内である。図１１Ｂ（Ｃｏｒｂｅｔｔ，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ５８６ ５６７－５７１（２０２０）からの図）を参照のこと。なお、上記は、スパイク特異的抗体が、ＭＲＮＡ－１２７３を用いた１回又は２回の投与後にＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘導したものである。

【0206】

インフルエンザとの混合ワクチン。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８）を、０日目及び２１日目に、全長スパイク、ｆｌｕ血球凝集素（ＨＡ）のＲＮＡと複合体化された、又はスクランブルされたＲＮＡと複合体化された１μｇのＤＶ－１４０－Ｆ２を筋肉内投与することで免疫化した。血清（図１２Ａ）及び脾臓（図１２Ｂ）を５０日目に採取した。体液性免疫応答：血清中のスパイク特異的（青色）及びｆｌｕ ＨＡ特異的（緑色）抗体をＥＬＩＳＡによって評価した。カットオフとしてバックグラウンドの平均＋バックグラウンドウェルの５×ｓｔｄを使用して、血清について終点力価を計算した。図１２Ａを参照のこと。細胞性免疫応答：免疫応答を、全長スパイク（青色）、ｆｌｕ ＨＡタンパク質（緑色）又は培地単独（ｕｎｓｔｉｍ、黄色）についての重複ペプチドライブラリーを使用して、細胞内サイトカイン染色によって脾細胞において評価した。図１２Ｂを参照のこと。ｆｌｕ ＨＡを標的とする本開示のワクチンは、ｆｌｕ ＨＡ特異的な、体液性免疫応答及び細胞性免疫応答を誘導する。スパイク及びｆｌｕ ＨＡの両方を標的とする混合ワクチンは、スパイク又はｆｌｕ ＨＡのいずれかを単独で標的とするいずれかのワクチンと同様のスパイク及びｆｌｕ ＨＡ特異的免疫応答を誘導する。

【0207】

実施例１０－ＣＯＶＩＤ－１９についてのＲＮＡベースのワクチンにおける送達ビヒクルの比較
様々な送達ビヒクル（ＭＣ３、市販のビヒクルＳＭ－１０２及びＡＬＣ－０３１５、ＤＶ－１４０－Ｆ６．１、ＤＶ－１４０－Ｆ６．３、並びに対照としてのＰＢＳ）を、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク（ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク）をコードするＲＮＡと複合体化し、それらの免疫応答を評価した。全長スパイクタンパク質の構築物を含むＤＶ－１４０－Ｆ６．１及びＤＶ－１４０－Ｆ６．３は、スパイクタンパク質に対して強い体液性応答及び細胞性応答を示した。ＤＶ－１４０－Ｆ６．３複合体によって誘導される、体液性応答の範囲及び細胞性応答の範囲は、市販のモデルナのビヒクルで処置したマウス及びファイザー社製のビヒクルで処置したマウスにおいて示される応答と同様である。

【0208】

スパイク特異的中和抗体の誘導。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８）を、０日目及び２１日目に、異なる全長スパイク構築物（構築物#１、構築物#２、及び構築物#３）のＣＯＶＩＤ ＲＮＡと複合体化した１μｇの送達ビヒクル（ＭＣ３、モデルナ社製の市販のビヒクル及びファイザー社製の市販のビヒクル、ＤＶ－１４０－Ｆ６．１、及びＤＶ－１４０－Ｆ６．３）を、筋肉内投与して免疫化した。なお、このＣＯＶＩＤ ＲＮＡは、南アフリカ変異型及びイギリス変異型、基準全長スパイク、又はスクランブル由来のいくつかの突然変異を含むものである。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の組換えスパイクタンパク質（１０μｇ）も対照として含めた。血清及び気管支肺胞上皮洗浄液を、３５日目に回収した。血清中のスパイク特異的抗体（図１３Ａ）を、コーティングのためのスパイクの受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）領域及び抗マウスＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって評価した。吸光度を、ＯＤ４５０で測定した。カットオフとしてバックグラウンドの平均＋バックグラウンドウェルの５×ｓｔｄを使用して、血清について終点力価を計算した。血清中の中和抗体価を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社からのＳＡＲＳ－ＣｏＶ２サロゲートウイルス中和試験を使用して、取扱説明書に従って１：１００の希釈率で評価した。ＤＶ－１４０－Ｆ６．１及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体と、ＤＶ－１４０－Ｆ６．３及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体とは、スパイク特異的中和抗体を誘導した。スパイク特異的抗体は、血清において、かつ肺において検出することができる。

【0209】

スパイク特異的細胞性免疫応答の誘導。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８）を、０日目及び２１日目に、異なる全長スパイク構築物（構築物#１、構築物#２、及び構築物#３）のＣＯＶＩＤ ＲＮＡと複合体化した１μｇの送達ビヒクル（ＭＣ３、モデルナ社製の市販のビヒクル及びファイザー社製の市販のビヒクル、ＤＶ－１４０－Ｆ６．１、及びＤＶ－１４０－Ｆ６．３）を、筋肉内投与して免疫化した。なお、このＣＯＶＩＤ ＲＮＡは、南アフリカ変異型及びイギリス変異型、基準全長スパイク、又はスクランブル由来のいくつかの突然変異を含むものである。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の組換えスパイクタンパク質（１０μｇ）も対照として含めた。脾臓を５０日目に回収し、処理して単一の細胞懸濁液とした。スパイク特異的免疫応答を、全長スパイクについての重複ペプチドライブラリーを使用し、ＩＦＮｇ ＥＬＩＳｐｏｔによって脾細胞において評価した（図１３Ｂ）。ＤＶ－１４０－Ｆ６．１及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体と、ＤＶ－１４０－Ｆ６．３及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体とは、スパイク特異的Ｔ細胞性応答を誘導し、ＤＶ－１４０－Ｆ６．３及びＣＯＶＩＤ ＲＮＡを含む複合体は、ＭＣ３よりも高く、市販のモデルナ社製ビヒクル及びファイザー社製ビヒクルに匹敵する応答を誘導した。

【0210】

実施例１０－有効性及び毒性研究
化合物１４０は、マウスによる有効性研究及びラットによる毒性研究において、十分に許容されるということが判明した。簡単に説明すると、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝８）を、０．０３若しくは０．３ｍｇ／ｋｇのＤＶ－１４０－Ｆ２又はＰＢＳビヒクル中で製剤化した対照のｍＲＮＡで処置した。注射を１３日間にわたって４回行い、後肢に筋肉内投与した。初回投与及び最終投与の６時間後、並びに最終投与の２週間後に、血液検査のために全血を採取し、臨床化学検査及びサイトカイン分析のために血清を採取した。更に、２匹の動物を、最終投与の６時間後及び最終投与の２週間後に屠殺し、肉眼による剖検を行った。組織サンプルを保持し、選択した臓器にて組織病理学検査を行った。

【0211】

【表9】

【0212】

前述の概念及び実装形態、並びに以下でより詳細に説明する追加の概念及び実装形態のすべての組み合わせは、本明細書で開示する本発明の主題の一部であると企図され、本明細書で説明する利益を達成するために、任意の適切な組み合わせで使用され得るということを諒解されたい。具体的には、本開示の最後に現れる特許請求される主題のすべての組み合わせは、本明細書で開示される本発明の主題の一部であると企図される。前述の説明は、理解を明確にするためだけに与えられており、本開示の範囲内の修正が当業者には明らかであり得るので、不必要な限定がそれから理解されるべきではない。

【0213】

本明細書全体を通して使用される「実質的に」、「およそ」、及び「約」という用語は、プロセスにおける変化などによる小さな変動を記載し計算に入れるために使用される。例えば、それらは、±５％以下、例えば±２％以下、例えば±１％以下、例えば±０．５％以下、例えば±０．２％以下、例えば±０．１％以下、例えば±０．０５％以下を指すことができる。

【0214】

本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む／備える（comprise、なおcomprises、comprisingなどの変形も同様」という用語は、記載された整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を含むことを意味するが、任意の他の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を排除することを意味するものではないと理解される。

【0215】

本明細書全体を通して、組成物が成分又は材料を含むものとして記載されている場合、組成物は、別段記載されない限り、列挙された成分又は材料の任意の組み合わせから本質的になるか、又はそれらからなることもできるということが企図される。同様に、方法が特定のステップを含むものとして記載されている場合、その方法はまた、別段の記載がない限り、列挙されたステップの任意の組み合わせから本質的になり得るか、又はそれらからなり得ることが企図される。本明細書に例示的に開示された開示は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素又はステップが存在しない下で、適切に実施され得る。

【0216】

本明細書に開示される方法及びその個々のステップの実施は、手動で、及び／又は電子機器の助けを借りて、若しくは電子機器によって提供される自動化を用いて行うことができる。特定の実装形態を参照し参照して説明されてきたが、当業者は、方法に関連付けられた行為を実行する他の方法が使用され得るということを容易に諒解されよう。例えば、様々なステップの順序は、本方法の範囲又は趣旨から逸脱することなく、様々なステップの順序を変更することができる。加えて、個々のステップのうちのいくつかは、組み合わせられる、省略される、又は追加のステップに更に細分されることができる。

【0217】

本明細書中で引用されるすべての特許、刊行物及び参考文献は、参照により、本明細書中に完全に援用される。本開示と、組み込まれた特許、刊行物及び参考文献との間に矛盾がある場合、本開示が優先されるべきである。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B-1】

【図10B-2】

【図10C-1】

【図10C-2】

【図10C-3】

【図10D-1】

【図10D-2】

【図10D-3】

【図11A】

【図11B】

【図12A-1】

【図12A-2】

【図12B-1】

【図12B-2】

【図13A】

【図13B】

【国際調査報告】