特表 2024-532760 多重鎖キメラポリペプチド及び肝疾患の治療におけるその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-10

(54)【発明の名称】多重鎖キメラポリペプチド及び肝疾患の治療におけるその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20240903BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 27/12 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240903BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240903BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17 ZNA

A61P35/00

A61P1/16

A61P9/00

A61P11/00

A61P3/06

A61P9/12

A61P3/10

A61P25/28

A61P15/00

A61P19/02

A61P1/18

A61P25/00

A61P9/10

A61P27/12

A61P29/00

A61P43/00 111

C07K19/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024508340

(86)(22)【出願日】2022-08-11

(85)【翻訳文提出日】2024-03-25

(86)【国際出願番号】 US2022074855

(87)【国際公開番号】W WO2023019215

(87)【国際公開日】2023-02-16

(31)【優先権主張番号】63/232,140

(32)【優先日】2021-08-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/330,757

(32)【優先日】2022-04-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521087117

【氏名又は名称】エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】ウォン ヒン シー．

(72)【発明者】

【氏名】チュー シャオユン

(72)【発明者】

【氏名】チャトゥルヴェーディー パラヴィ

(72)【発明者】

【氏名】ジョージ バーギーズ

(72)【発明者】

【氏名】シュレスタ ニラジ

(72)【発明者】

【氏名】ディー マイケル

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084BA02

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084BA44

4C084DC50

4C084MA05

4C084MA17

4C084MA66

4C084NA13

4C084NA14

4H045AA30

4H045BA41

4H045CA40

4H045EA20

(57)【要約】

本明細書では、多重鎖キメラポリペプチド、及び肝疾患の治療におけるその使用が提供される。
【選択図】図３２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象における肝疾患又はメタボリックシンドロームを治療する方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項2】

前記肝疾患が、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記メタボリックシンドロームが、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬ）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）への進行、ＮＡＳＨから肝硬変への進行、及び肝硬変から肝細胞がんへの進行の速度のうちの１つ以上を低下させる方法であって、
ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ、又は肝硬変を有すると同定又は診断された対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項5】

ＮＡＦＬからＮＡＳＨへの進行速度の減少をもたらす、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

ＮＡＳＨから肝硬変への進行速度の減少をもたらす、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

肝硬変から肝細胞がんへの進行速度の減少をもたらす、請求項４に記載の方法。

【請求項8】

対象の肝臓における炎症を低減する方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項9】

対象の肝臓における糖新生を減少させる方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項10】

対象の肝臓における脂肪生成を減少させる方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項11】

対象の肝臓における肝細胞の老化を減少させる方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項12】

対象の肝臓における代謝機能を再平衡化する方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項13】

対象の肝臓における表１～４中の１つ以上の遺伝子の発現を調節する方法であって、
前記対象に、
（ａ）以下：
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び
（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン
を含む、第１のキメラポリペプチドと、
（ｂ）以下：
（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び
（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、第２のキメラポリペプチドと
を含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、
ここで、
前記第１のキメラポリペプチド及び前記第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ
前記第１の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合し、かつ前記第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、
前記方法。

【請求項14】

前記投与が、
ＡＣＳＳ１、ＲＥＴＮ、ＳＬＣ２Ａ４、ＰＤＫ４、ＰＮＰＬＡ３、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＣＡＶ１、ＥＮＤＯＤ１、ＲＥＧ３Ｇ、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ２Ｂ、ＳＣＧＢ３Ａ１、ＧＬＹＣＡＭ１、ＩＧＨＧ２Ｃ、ＩＧＫＣ、ＬＴＦ、ＭＳ４Ａ１、ＪＣＨＡＩＮ、ＣＤ１９、ＩＧＨＭ、ＩＦＩ２７Ｌ２Ａ、ＡＣＫＲ３、ＬＳＰ１、ＰＭＥＰＡ１、ＣＯＲＯ１Ａ、ＧＰＸ３、ＭＹＨ８、ＮＰＰＡ、ＴＣＡＰ、ＦＬＮＣ、ＳＬＣ３６Ａ２、ＭＹＨ６、ＡＣＴＣ１、ＡＣＴＡ２、及びＴＰＭ２からなる群から選択される前記対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の前記対象における前記１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、減少
をもたらす、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記投与が、
ＳＬＣ３４Ａ２及びＣＩＳＨからなる群から選択される前記対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の前記対象における前記１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、増加
をもたらす、請求項１３又は１４に記載の方法。

【請求項16】

前記投与が、
ＣＳＦ３Ｒ、ＩＦＩ２７Ｌ２Ａ、ＧＭ１７０６６、ＧＮＬ３、ＦＡＢＰ１、ＧＭ１４３０３、ＡＵＲＫＡ、ＲＰＬ１４－ＰＳ１、ＱＴＲＴ２、Ｇ６ＰＣ、Ｃ８Ｂ、ＤＹＮＬＬ１、ＬＣＮ２、ＬＲＧ１、ＣＥＢＰＤ、ＣＯＬ４Ａ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＲＳＡＤ２、９３３０１６２Ｇ０２ＲＩＫ、ＰＩＮＸ１、ＳＲＡ１、ＳＰＡＴＡ２Ｌ、ＰＮＲＣ１、ＭＵＰ２０、ＩＬ６ＲＡ、ＡＰＯＡ１、ＩＬ１Ｂ、ＷＤＲ５４、ＣＴＣＦＬＯＳ、ＧＭ１６９７３、４６３２４２７Ｅ１３ＲＩＫ、ＩＧＨＧ２Ｂ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＳＥＬＥＮＢＰ２、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＮＥＸＮ、ＺＦＰ６５３、ＮＯＢ１、ＰＣＫ１、ＦＡＭ２５Ｃ、ＭＡＰＫ１５、ＧＭ１６５５１、ＥＳＭ１、ＲＰＬ３７ＲＴ、ＦＡＭ１３３Ｂ、ＰＤＥ８Ｂ、ＴＵＴ１、Ｓ１００Ａ１１、ＰＤＩＬＴ、ＰＰＡＲＤ、ＩＥＲ２、ＧＭ１５４０１、ＭＸ２、ＷＮＫ４、Ｇ０Ｓ２、ＢＣ００５５６１、ＡＡ９８６８６０、ＪＤＰ２、ＧＭ２６９８２、ＮＯＰ５８、ＡＣＴＢ、ＧＭ１４５８６、ＲＰＰ３８、ＧＭ１３４３６、ＮＴ５ＤＣ２、ＩＭＰＤＨ１、ＣＹＴＩＰ、ＡＩ８４６１４８、ＣＨＫＡ、ＧＭ３７９６３、ＮＲ０Ｂ２、ＣＹＰ４Ａ３２、ＡＬＫＢＨ２、ＦＡＵ－ＰＳ２、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＫＬＦ２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＧＭ１３３４１、ＩＧＨＭ、ＳＡＴＢ１、ＳＮＲＰＦ、ＤＮＡＳＥ１Ｌ２、ＣＤ３ＥＡＰ、ＧＭ２７８８、ＤＡＮＣＲ、ＺＦＰ６１２、ＮＯＰ５６、ＪＵＮＤ、ＩＤ１、ＨＳＰＢ１、ＫＬＨＤＣ８Ａ、ＫＬＦ１０、ＡＮＧＰＴ２、ＴＨＢＳ１、ＧＭ４４８９１、ＧＭ９７５２、ＡＢＬＩＭ３、ＰＴＧＥＳ、ＧＭ２８４３８、２４１０００２Ｆ２３ＲＩＫ、ＦＯＳＬ２、ＣＲＩＰ３、ＪＵＮ、ＡＬＡＳ１、ＧＭ２０００、ＲＨＯＣ、ＬＭＣＤ１、ＧＭ２０６１、ＧＭ４２５９５、ＧＭ１１４７８、ＩＫＺＦ２、ＰＮＬＤＣ１、ＣＯＭＴＤ１、ＳＮＯＲＡ３１、ＣＯＬ２０Ａ１、ＡＫＡＰ１２、Ｃ１ＱＴＮＦ１２、１８１００３２Ｏ０８ＲＩＫ、２３１００３３Ｐ０９ＲＩＫ、ＧＭ４７５２８、ＳＥＲＰＩＮＥ２、ＮＰＦＦ、ＳＥＲＰＩＮＡ３Ｋ、ＲＦＸＡＮＫ、ＩＧＫＶ５－３９、ＮＡＢ２、ＭＡＦＦ、ＣＥＰ８５、ＣＳＡＤ、ＬＴＢ４Ｒ１、１８１００１２Ｋ０８ＲＩＫ、ＢＣＬ７Ｃ、ＮＲＢＰ２、ＮＬＥ１、ＡＬＫＢＨ１、ＡＲＩＤ５Ａ、ＣＦＡＰ４３、ＧＭ４５７６７、ＣＤ８Ａ、ＰＰＲＣ１、ＧＭ２６８７０、ＴＭＣ７、ＢＣＬ６Ｂ、ＧＭ１６３４８、ＧＭ２６９８１、ＳＬＣ１６Ａ３、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＣＹＰ２Ｊ９、ＮＲ４Ａ２、ＭＭＰ９、ＭＩＲ１７ＨＧ、ＴＭＥＭ１９１Ｃ、ＰＣＤＨ１１Ｘ、ＨＩＬＰＤＡ、ＲＡＰＧＥＦ４、ＧＭ１７３００、ＳＬＣ２５Ａ４７、ＫＣＮＪ２、ＮＹＡＰ１、ＬＡＸ１、ＲＰＳ１９－ＰＳ３、ＨＥＳ１、ＲＧＳ１６、ＤＵＳＰ１、ＧＭ４３３２３、ＡＳＢ４、ＭＵＣ６、ＧＭ１５５０２、ＵＮＧ、ＦＯＸＱ１、ＧＭ１７９３６、ＵＢＥ２Ｃ、ＳＬＣ１６Ａ６、ＭＩＲ７０５２、ＮＬＲＰ１２、ＧＭ１４２８６、ＦＧＦ２１、ＫＬＦ５、ＧＭ３７９６９、ＰＦ４、ＧＭ２１７３８、ＨＯＴＡＩＲＭ１、ＧＭ６４９３、ＬＯＲ、ＭＦＳＤ２Ｂ、ＭＡＴＫ、ＳＹＮＥ４、ＧＭ４４６９４、ＴＲＢＣ１、ＧＭ３７２７４、ＰＬＮ、ＣＸＣＲ４、ＰＨＦ２４、ＳＮＯＲＤ１０４、ＳＥＲＰＩＮＡ７、ＲＧＳ４、ＴＣＩＭ、ＥＧＦＲ、ＧＭ３７７６０、ＦＢＸＬ２２、ＴＥＤＣ２、ＥＮＨＯ、ＧＭ２６９１７、ＧＭ４３７７５、４８３３４１１Ｃ０７ＲＩＫ、ＧＭ４５０５３、ＩＮＨＢＢ、ＯＰＮ３、ＳＮＨＧ１５、Ｂ２３０２０６Ｈ０７ＲＩＫ、ＫＣＮＥ３、ＧＭ４３３０５、Ｃ５３００４３Ｋ１６ＲＩＫ、ＫＬＦ４、ＬＥＰＲ、ＪＣＨＡＩＮ、ＴＳＫＵ、ＬＧＡＬＳ４、ＰＣＰ４Ｌ１、ＧＭ４４８２９、ＤＵＳＰ８、ＧＭ４４６２０、ＩＧＦＢＰ１、ＪＵＮＢ、ＧＭ３２０１７、ＧＭ２８１４、ＧＭ３７１４４、ＭＹＡＤＭＬ２ＯＳ、ＧＭ３７６６６、ＨＤＣ、ＳＬＦＮ４、Ａ５３００４１Ｍ０６ＲＩＫ、ＧＭ４３３５９、ＧＭ２６０２、ＧＭ１０２７７、ＦＡＭ２２２Ａ、ＦＯＸＡ３、ＡＯＣ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１Ｅ、ＣＴＸＮ１、ＲＡＰＧＥＦ４ＯＳ２、ＳＯＣＳ２、ＰＰＡＮ、ＰＲＫＡＧ２ＯＳ１、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＨＯＸＡ５、ＧＲＨＬ１、ＥＩＦ４ＥＢＰ３、ＯＳＧＩＮ１、ＧＭ２８５１３、ＭＡＰ３Ｋ６、ＳＬＣ３４Ａ２、Ｂ６３００１９Ａ１０ＲＩＫ、ＩＧＫＣ、ＰＬＩＮ４、ＡＮＧＰＴＬ４、ＤＵＳＰ５、ＥＧＲ１、ＧＭ４２５０７、ＧＭ１４２５７、ＡＰＯＬＤ１、ＩＥＲ３、ＺＢＴＢ１６、ＧＭ３７０３３、ＩＧＬＣ１、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＩＧＬＣ３、ＧＭ４５２４４、ＲＧＳ１、ＣＸＣＬ１、ＲＮＦ２２５、ＧＭ４４００５、ＡＮＫＲＤ３７、ＮＲ４Ａ１、ＧＭ８８９３、ＧＭ２６７６２、ＣＤＫＮ１Ａ、５３３０４０６Ｍ２３ＲＩＫ、ＩＧＬＶ１、ＩＧＫＶ３－２、ＦＯＳ、ＧＭ４３６３７、ＩＧＫＶ３－１０、Ｓ１００Ａ９、ＧＭ１５６２２、Ｓ１００Ａ８、ＭＴ１、ＲＥＴＮＬＧ、ＭＴ２、ＩＧＫＶ１９－９３、ＧＭ４５７７４、及びＳＥＲＰＩＮＡ４－ＰＳ１からなる群から選択される前記対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の前記対象における前記１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、減少
をもたらす、請求項１３に記載の方法。

【請求項17】

前記投与が、
ＤＢＰ、ＩＧＫＶ４－５５、ＰＥＲ３、ＭＵＰ－ＰＳ１０、ＧＰＡＭ、ＴＭＰＲＳＳ４、ＭＵＰ－ＰＳ１４、ＡＣ１６６０７８．１、ＭＵＰ－ＰＳ１２、ＧＭ２０６５、Ａ５３００２０Ｇ２０ＲＩＫ、ＡＣＳＳ２ＯＳ、ＤＣＬＫ３、ＫＬＦ１２、ＧＭ４４６６９、ＭＦＳＤ９、Ｂ４ＧＡＬＮＴ３、ＧＭ３７７６、ＴＭＥＭ１６７－ＰＳ１、ＫＲＴ２３、ＬＭＢＲＤ２、ＧＭ２２９３５、ＳＵＬＴ２Ａ－ＰＳ１、ＳＮＡＩ３、ＧＭ１５９０８、ＭＩＲ６３９２、ＡＣＳＳ２、ＮＲ１Ｄ１、ＢＣ０４９９８７、ＣＣＤＣ８５Ｃ、ＣＥＳ２Ｃ、ＡＣＰＰ、ＭＵＰ２、ＰＴＫ６、ＵＧＴ１Ａ５、１８１０００８Ｉ１８ＲＩＫ、ＩＬ２２ＲＡ１、ＡＣＳＳ３、ＡＤＮＰ、ＲＤＨ１６、ＳＮＴＢ１、４９３３４１１Ｋ１６ＲＩＫ、ＮＴＲＫ２、ＥＸＴＬ１、ＰＳＴＰＩＰ２、ＲＡＳＳＦ６、ＡＱＰ４、ＵＧＴ１Ａ９、ＰＲＯＭ１、ＺＦＰ６０８、ＦＡＭ１３Ａ、ＮＦＥ２、ＴＥＦ、ＴＮＦＡＩＰ８Ｌ３、ＳＣＤ１、ＭＭＤ２、ＳＹＮＥ３、ＡＣＬＹ、Ｃ３３００２１Ｆ２３ＲＩＫ、ＳＴＯＮ２、ＬＲＦＮ４、ＨＨＩＰＬ１、ＷＮＴ９Ｂ、ＮＲ１Ｄ２、１８１００４９Ｊ１７ＲＩＫ、ＰＤＰＲ、ＮＡ、ＧＭ４５８８４、ＳＬＣ２Ａ５、ＦＡＭ８３Ｆ、ＺＦＰ５２６、ＳＧＫ２、ＧＭ４３０８０、ＤＥＡＦ１、ＭＥ１、ＢＭＦ、ＷＤＦＹ２、ＡＤＣＹ９、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ１１、ＬＹＳＴ、ＬＲＴＭ１、ＯＡＴ、ＶＰＳ１３Ｃ、Ｅ３３００１１Ｏ２１ＲＩＫ、Ｐ２ＲＹ４、ＧＭ１１４３７、ＲＷＤＤ２Ａ、ＳＶＩＬ、ＥＣＨＤＣ１、ＴＲＩＭ１４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＴＲＨＤＥ、ＭＡＳＰ１、２９０００９７Ｃ１７ＲＩＫ、ＮＤＳＴ１、ＲＤＨ９、１１１０００２Ｌ０１ＲＩＫ、ＡＢＴＢ２、ＲＧＲ、ＡＣＡＣＢ、ＳＡＣＭ１Ｌ、ＤＹＲＫ２、ＲＯＢＯ１、ＧＭ４４７４４、ＥＩＦ４ＥＢＰ２、ＫＬＨＬ２４、ＣＹＰ２Ａ５、ＴＩＡＭ２、ＲＡＢ４３、ＧＭ１３８５５、９１３０４０９Ｉ２３ＲＩＫ、ＳＴＯＮ１、ＵＳＰ９Ｘ、ＵＧＴ３Ａ１、９０３０６１６Ｇ１２ＲＩＫ、ＤＯＣＫ８、ＫＬＢ、ＡＣＥ、ＶＬＤＬＲ、ＰＣＤＨＧＣ３、ＡＢＣＡ６、４９３２４２２Ｍ１７ＲＩＫ、ＧＭ４５８３８、ＦＡＲＰ２、ＧＭ４７２０５、ＳＰ４、ＵＧＴ１Ａ６Ｂ、ＫＬＨＬ２８、Ｄ１３００４３Ｋ２２ＲＩＫ、ＡＳＩＣ５、ＰＭ２０Ｄ２、Ａ１ＣＦ、ＳＯＲＢＳ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＧＭ１０６４２、ＵＴＰ１４Ｂ、ＧＭ３８３９４、ＡＦＰ、ＩＮＳＩＧ１、ＨＮＦ１ＡＯＳ２、ＭＥＴＴＬ４、ＬＳＳ、ＭＴＭＲ９、ＨＭＧＣＲ、ＧＤＡＰ１０、ＡＤＲＡ１Ａ、ＺＦＰ７７３、ＣＲＫＬ、ＣＨＲＮＥ、ＳＴＡＲＤ１３、ＣＲＹ２、ＦＡＤＳ２、ＣＯＧ５、ＦＶ１、ＲＣＡＮ２、ＡＢＣＢ１Ａ、ＰＰＡＲＡ、ＡＴＰ７Ａ、ＭＶＤ、２６１００３７Ｄ０２ＲＩＫ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＵＣＮＲ１、ＥＣＩ３、ＡＢＣＣ４、ＬＮＣＢＡＴＥ１、ＭＩＮＤＹ２、ＢＴＢＤ７、４９３３４０４Ｏ１２ＲＩＫ、ＡＢＣＤ１、ＦＭＮ１、ＦＮＩＰ２、ＡＢＨＤ１５、ＮＫＸ２－６、Ｃ７７０８０、ＧＭ４３６１１、ＳＧＴＢ、ＡＣＳＬ３、ＮＲ５Ａ２、ＦＡＭ１９８Ａ、ＫＣＴＤ７、ＡＣＡＣＡ、ＺＦＰ９５５Ｂ、ＳＵＬＴ２Ａ３、ＦＺＤ４、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ３Ａ５９、ＺＦＰ３５４Ｂ、ＴＮＦＳＦ１０、ＳＥＳＮ３、ＭＮ１、ＲＮＦ１５２、ＤＨＣＲ２４、ＳＰＨＫ２、ＳＹＴＬ５、ＧＭ６６５２、ＢＡＨＣＣ１、ＧＡＲＥＭ１、ＭＦＳＤ４Ａ、ＨＧＦ、ＧＭ３５７１、ＮＯＳ１ＡＰ、ＤＩＸＤＣ１、ＫＡＮＫ１、ＲＥＰＳ２、ＡＳＡＨ２、ＳＥＭＡ３Ｂ、ＲＮＦ１０３、ＺＣ３Ｈ１２Ｃ、ＣＤＳ２、ＤＣＵＮ１Ｄ４、２９０００２６Ａ０２ＲＩＫ、ＣＹＹＲ１、ＥＥＰＤ１、Ｐ２ＲＹ２、ＣＹＰ２Ｃ３９、ＳＥＣ２２Ｃ、ＥＨＨＡＤＨ、ＡＢＣＡ３、ＨＩＰＫ２、ＲＢＭ２０、ＧＲＡＭＤ４、ＦＣＨＳＤ２、ＭＯＢ３Ａ、ＨＭＧＮ３、ＫＬＨＤＣ７Ａ、ＶＣＰ－ＲＳ、ＴＥＲＴ、ＣＹＰ３Ａ４１Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＴＬＣＤ２、ＳＮＨＧ１１、ＳＯＲＬ１、ＧＰＲ１５７、ＤＮＡＪＡ４、ＴＭＥＭ２５３、ＴＡＣＯ１、ＳＰＡＴＡ５Ｌ１、ＲＨＢＧ、ＣＯＬ１５Ａ１、ＰＣＤＨ１２、ＩＲＳ１、ＡＳＣＣ３、ＫＩＦ１６Ｂ、及びＭＲ１からなる群から選択される前記対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の前記対象における前記１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、増加
をもたらす、請求項１３又は１６に記載の方法。

【請求項18】

前記対象が、肝疾患又はメタボリックシンドロームを有すると以前に同定又は診断されたことがある、請求項８～１１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記対象が、肝疾患を有すると以前に同定又は診断されたことがある、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記肝疾患が、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記対象が、メタボリックシンドロームを有すると以前に同定又は診断されたことがある、請求項１８に記載の方法。

【請求項22】

前記メタボリックシンドロームが、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記第１の標的結合ドメイン及び前記可溶性組織因子ドメインが、前記第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記第１のキメラポリペプチドが、前記第１のキメラポリペプチド中の前記第１の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列を更に含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記可溶性組織因子ドメイン、及び前記一対の親和性ドメインの前記第１のドメインが、前記第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記第１のキメラポリペプチドが、前記第１のキメラポリペプチド中の前記可溶性組織因子ドメインと前記一対の親和性ドメインの前記第１のドメインとの間にリンカー配列を更に含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記一対の親和性ドメインの前記第２のドメイン、及び前記第２の標的結合ドメインが、前記第２のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

第２のキメラポリペプチドが、前記第２のキメラポリペプチド中の前記一対の親和性ドメインの前記第２のドメインと前記第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列を更に含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の標的結合ドメインの一方又は両方が、抗原結合ドメインである、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の標的結合ドメインの一方又は両方が、可溶性インターロイキン又はサイトカイン受容体である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記第１のキメラポリペプチドが、１つ以上の追加の標的結合ドメインを更に含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記第２のキメラポリペプチドが、１つ以上の追加の標的結合ドメインを更に含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記可溶性組織因子ドメインが可溶性ヒト組織因子ドメインである、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号１と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

親和性ドメインの対が、ヒトＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５Ｒα）のアルファ鎖由来のスシドメイン、及び可溶性ＩＬ－１５である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記第１の標的結合ドメインが可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩを含む、請求項１～２８及び３０～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２と少なくとも８０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも８０％同一である第２の配列を含み、前記第１の配列及び第２の配列がリンカーによって分離されている、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２と少なくとも９０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも９０％同一である第２の配列を含む、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２の第１の配列及び配列番号２の第２の配列を含む、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記リンカーが配列番号３の配列を含む、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号４と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項３６に記載の方法。

【請求項42】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号４と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号４の配列を含む、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記第１のキメラポリペプチドが、配列番号６と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項３６に記載の方法。

【請求項45】

前記第１のキメラポリペプチドが、配列番号６と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記第１のキメラポリペプチドが配列番号６の配列を含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記第１のキメラポリペプチドが配列番号７の配列を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記第２の標的結合ドメインが可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩを含む、請求項１～２８及び３０～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２と少なくとも８０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも８０％同一である第２の配列を含み、前記第１の配列及び第２の配列がリンカーによって分離されている、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２と少なくとも９０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも９０％同一である第２の配列を含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２の第１の配列及び配列番号２の第２の配列を含む、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記リンカーが配列番号３の配列を含む、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記第２の標的結合ドメインが、配列番号４と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項54】

前記第２の標的結合ドメインが、配列番号４と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記第２の標的結合ドメインが、配列番号４の配列を含む、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記第２のキメラポリペプチドが、配列番号５と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項57】

前記第１のキメラポリペプチドが、配列番号６と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記第２のキメラポリペプチドが、配列番号５と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項59】

前記第２のキメラポリペプチドが配列番号５の配列を含む、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記第１のキメラポリペプチドが配列番号６の配列を含む、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記第２のキメラポリペプチドが配列番号８の配列を含む、請求項５９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月１１日に出願された米国特許出願第６３／２３２，１４０号及び２０２２年４月１３日に出願された米国特許出願第６３／３３０，７５７号に対する優先権を主張し、いずれの内容もその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、４７０３９－００２５ＷＯ１＿ＳＬ＿ＳＴ２６．ＸＭＬという名称のＸＭＬファイルとして電子的に提出された配列表を含む。２０２２年０８月９日に作成されたＸＭＬファイルは、８３，５０７バイトのサイズである。ＸＭＬファイル内のデータは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

技術分野
本開示は、バイオテクノロジーの分野に関し、より具体的には、抗原結合分子及び肝疾患の治療に関する。

【背景技術】

【0004】

背景
約４６ｋＤａの分子量を有する２６３アミノ酸の内在性膜糖タンパク質であり、外因性血液凝固経路のトリガータンパク質である組織因子（ＴＦ）は、インビボでの凝固の主要なイニシエーターである。組織因子は、通常は循環血液と接触せず、循環凝固セリンプロテアーゼ因子に曝露されると凝固カスケードを開始する。血管損傷は、組織因子を発現する内皮下細胞を露出させ、既存の血漿因子ＶＩＩａ（ＦＶＩＩａ）とのカルシウム依存性の高親和性複合体の形成をもたらす。セリンプロテアーゼＦＶＩＩａの組織因子への結合は、ＦＸａへのＦＸの及びＦＩＸａへのＦＩＸの迅速な切断を促進する。次いで、得られたＦＸａ及び活性膜表面のタンパク質分解活性は、少量のプロトロンビンをトロンビンに非効率的に変換する。ＦＸａによって生成されたトロンビンは、血小板活性化を開始し、微量のプロ補因子第Ｖ因子（ＦＶ）及び第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を活性化して、活性補因子、第Ｖａ因子（ＦＶａ）及び第ＶＩＩＩａ因子（ＦＶＩＩＩａ）にする。ＦＩＸａは、血小板表面上でＦＶＩＩＩａと複合体化して内因性テナーゼ複合体を形成し、これがＦＸａの迅速な生成をもたらす。ＦＸａはＦＶａと複合体を形成して、活性化された血小板表面上にプロトロンビナーゼ複合体を形成し、これがプロトロンビンのトロンビンへの迅速な切断をもたらす。

【0005】

組織因子－ＦＶＩＩａ複合体に加えて、最近の研究は、組織因子－ＦＶＩＩａ－ＦＸａ複合体がＦＶＩＩＩを活性化することができ、これが開始期の間に更なるレベルのＦＶＩＩＩａを提供することを示した。外因性経路は、限られた量のトロンビンの活性化を介して凝固を開始する際に最も重要であるが、内因性経路は、初期シグナルの劇的な増幅によって凝固を維持する。

【0006】

細胞表面上に発現される組織因子の多くは「暗号化」されており、凝固に完全に関与するためには「解読」されなければならない。細胞表面組織因子の「解読」のメカニズムは現時点ではまだ不明であるが、アニオン性リン脂質の露出がこのプロセスにおいて主要な役割を果たす。健康な細胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）などの陰イオン性リン脂質を原形質膜の内葉に能動的に隔離する。細胞の損傷、活性化、又はサイトゾルＣａ^２＋レベルの増加に続いて、この二重層の非対称性が失われ、外葉上のＰＳ曝露の増加をもたらし、これが細胞表面組織因子－ＦＶＩＩａ複合体の比活性を増加させる。ＰＳ曝露は、組織因子－ＦＶＩＩａ複合体によるＦＩＸ及びＦＸの活性化についての見かけのＫｍを減少させることが公知であるが、更なる機構としては、組織因子又は組織因子－ＦＶＩＩａの立体構造再編成及びその後の基質結合部位の曝露が挙げられ得る。

【発明の概要】

【0007】

概要
対象における肝疾患又はメタボリックシンドロームを治療する方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法が本明細書で提供される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0008】

非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬ）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）への進行、ＮＡＳＨから肝硬変への進行、及び肝硬変から肝細胞がんへの進行の速度のうちの１つ以上を低下させる方法であって、ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ、又は肝硬変を有すると同定又は診断された対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ＮＡＦＬからＮＡＳＨへの進行速度の減少をもたらす。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、ＮＡＳＨから肝硬変への進行速度の減少をもたらす。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、肝硬変から肝細胞がんへの進行速度の減少をもたらす。

【0009】

対象の肝臓における炎症を低減する方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。

【0010】

対象の肝臓における糖新生を減少させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。

【0011】

対象の肝臓における脂肪生成を減少させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。

【0012】

対象の肝臓における肝細胞性老化を減少させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。

【0013】

対象の肝臓における代謝機能を再平衡化させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。

【0014】

対象の肝臓における表１～４中の１つ以上の遺伝子の発現を調節する方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインが、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、投与は、ＡＣＳＳ１、ＲＥＴＮ、ＳＬＣ２Ａ４、ＰＤＫ４、ＰＮＰＬＡ３、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＣＡＶ１、ＥＮＤＯＤ１、ＲＥＧ３Ｇ、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ２Ｂ、ＳＣＧＢ３Ａ１、ＧＬＹＣＡＭ１、ＩＧＨＧ２Ｃ、ＩＧＫＣ、ＬＴＦ、ＭＳ４Ａ１、ＪＣＨＡＩＮ、ＣＤ１９、ＩＧＨＭ、ＩＦＩ２７Ｌ２Ａ、ＡＣＫＲ３、ＬＳＰ１、ＰＭＥＰＡ１、ＣＯＲＯ１Ａ、ＧＰＸ３、ＭＹＨ８、ＮＰＰＡ、ＴＣＡＰ、ＦＬＮＣ、ＳＬＣ３６Ａ２、ＭＹＨ６、ＡＣＴＣ１、ＡＣＴＡ２、及びＴＰＭ２からなる群から選択される対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、減少をもたらす。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、投与は、ＳＬＣ３４Ａ２及びＣＩＳＨからなる群から選択される対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、増加をもたらす。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、投与は、ＣＳＦ３Ｒ、ＩＦＩ２７Ｌ２Ａ、ＧＭ１７０６６、ＧＮＬ３、ＦＡＢＰ１、ＧＭ１４３０３、ＡＵＲＫＡ、ＲＰＬ１４－ＰＳ１、ＱＴＲＴ２、Ｇ６ＰＣ、Ｃ８Ｂ、ＤＹＮＬＬ１、ＬＣＮ２、ＬＲＧ１、ＣＥＢＰＤ、ＣＯＬ４Ａ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＲＳＡＤ２、９３３０１６２Ｇ０２ＲＩＫ、ＰＩＮＸ１、ＳＲＡ１、ＳＰＡＴＡ２Ｌ、ＰＮＲＣ１、ＭＵＰ２０、ＩＬ６ＲＡ、ＡＰＯＡ１、ＩＬ１Ｂ、ＷＤＲ５４、ＣＴＣＦＬＯＳ、ＧＭ１６９７３、４６３２４２７Ｅ１３ＲＩＫ、ＩＧＨＧ２Ｂ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＳＥＬＥＮＢＰ２、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＮＥＸＮ、ＺＦＰ６５３、ＮＯＢ１、ＰＣＫ１、ＦＡＭ２５Ｃ、ＭＡＰＫ１５、ＧＭ１６５５１、ＥＳＭ１、ＲＰＬ３７ＲＴ、ＦＡＭ１３３Ｂ、ＰＤＥ８Ｂ、ＴＵＴ１、Ｓ１００Ａ１１、ＰＤＩＬＴ、ＰＰＡＲＤ、ＩＥＲ２、ＧＭ１５４０１、ＭＸ２、ＷＮＫ４、Ｇ０Ｓ２、ＢＣ００５５６１、ＡＡ９８６８６０、ＪＤＰ２、ＧＭ２６９８２、ＮＯＰ５８、ＡＣＴＢ、ＧＭ１４５８６、ＲＰＰ３８、ＧＭ１３４３６、ＮＴ５ＤＣ２、ＩＭＰＤＨ１、ＣＹＴＩＰ、ＡＩ８４６１４８、ＣＨＫＡ、ＧＭ３７９６３、ＮＲ０Ｂ２、ＣＹＰ４Ａ３２、ＡＬＫＢＨ２、ＦＡＵ－ＰＳ２、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＫＬＦ２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＧＭ１３３４１、ＩＧＨＭ、ＳＡＴＢ１、ＳＮＲＰＦ、ＤＮＡＳＥ１Ｌ２、ＣＤ３ＥＡＰ、ＧＭ２７８８、ＤＡＮＣＲ、ＺＦＰ６１２、ＮＯＰ５６、ＪＵＮＤ、ＩＤ１、ＨＳＰＢ１、ＫＬＨＤＣ８Ａ、ＫＬＦ１０、ＡＮＧＰＴ２、ＴＨＢＳ１、ＧＭ４４８９１、ＧＭ９７５２、ＡＢＬＩＭ３、ＰＴＧＥＳ、ＧＭ２８４３８、２４１０００２Ｆ２３ＲＩＫ、ＦＯＳＬ２、ＣＲＩＰ３、ＪＵＮ、ＡＬＡＳ１、ＧＭ２０００、ＲＨＯＣ、ＬＭＣＤ１、ＧＭ２０６１、ＧＭ４２５９５、ＧＭ１１４７８、ＩＫＺＦ２、ＰＮＬＤＣ１、ＣＯＭＴＤ１、ＳＮＯＲＡ３１、ＣＯＬ２０Ａ１、ＡＫＡＰ１２、Ｃ１ＱＴＮＦ１２、１８１００３２Ｏ０８ＲＩＫ、２３１００３３Ｐ０９ＲＩＫ、ＧＭ４７５２８、ＳＥＲＰＩＮＥ２、ＮＰＦＦ、ＳＥＲＰＩＮＡ３Ｋ、ＲＦＸＡＮＫ、ＩＧＫＶ５－３９、ＮＡＢ２、ＭＡＦＦ、ＣＥＰ８５、ＣＳＡＤ、ＬＴＢ４Ｒ１、１８１００１２Ｋ０８ＲＩＫ、ＢＣＬ７Ｃ、ＮＲＢＰ２、ＮＬＥ１、ＡＬＫＢＨ１、ＡＲＩＤ５Ａ、ＣＦＡＰ４３、ＧＭ４５７６７、ＣＤ８Ａ、ＰＰＲＣ１、ＧＭ２６８７０、ＴＭＣ７、ＢＣＬ６Ｂ、ＧＭ１６３４８、ＧＭ２６９８１、ＳＬＣ１６Ａ３、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＣＹＰ２Ｊ９、ＮＲ４Ａ２、ＭＭＰ９、ＭＩＲ１７ＨＧ、ＴＭＥＭ１９１Ｃ、ＰＣＤＨ１１Ｘ、ＨＩＬＰＤＡ、ＲＡＰＧＥＦ４、ＧＭ１７３００、ＳＬＣ２５Ａ４７、ＫＣＮＪ２、ＮＹＡＰ１、ＬＡＸ１、ＲＰＳ１９－ＰＳ３、ＨＥＳ１、ＲＧＳ１６、ＤＵＳＰ１、ＧＭ４３３２３、ＡＳＢ４、ＭＵＣ６、ＧＭ１５５０２、ＵＮＧ、ＦＯＸＱ１、ＧＭ１７９３６、ＵＢＥ２Ｃ、ＳＬＣ１６Ａ６、ＭＩＲ７０５２、ＮＬＲＰ１２、ＧＭ１４２８６、ＦＧＦ２１、ＫＬＦ５、ＧＭ３７９６９、ＰＦ４、ＧＭ２１７３８、ＨＯＴＡＩＲＭ１、ＧＭ６４９３、ＬＯＲ、ＭＦＳＤ２Ｂ、ＭＡＴＫ、ＳＹＮＥ４、ＧＭ４４６９４、ＴＲＢＣ１、ＧＭ３７２７４、ＰＬＮ、ＣＸＣＲ４、ＰＨＦ２４、ＳＮＯＲＤ１０４、ＳＥＲＰＩＮＡ７、ＲＧＳ４、ＴＣＩＭ、ＥＧＦＲ、ＧＭ３７７６０、ＦＢＸＬ２２、ＴＥＤＣ２、ＥＮＨＯ、ＧＭ２６９１７、ＧＭ４３７７５、４８３３４１１Ｃ０７ＲＩＫ、ＧＭ４５０５３、ＩＮＨＢＢ、ＯＰＮ３、ＳＮＨＧ１５、Ｂ２３０２０６Ｈ０７ＲＩＫ、ＫＣＮＥ３、ＧＭ４３３０５、Ｃ５３００４３Ｋ１６ＲＩＫ、ＫＬＦ４、ＬＥＰＲ、ＪＣＨＡＩＮ、ＴＳＫＵ、ＬＧＡＬＳ４、ＰＣＰ４Ｌ１、ＧＭ４４８２９、ＤＵＳＰ８、ＧＭ４４６２０、ＩＧＦＢＰ１、ＪＵＮＢ、ＧＭ３２０１７、ＧＭ２８１４、ＧＭ３７１４４、ＭＹＡＤＭＬ２ＯＳ、ＧＭ３７６６６、ＨＤＣ、ＳＬＦＮ４、Ａ５３００４１Ｍ０６ＲＩＫ、ＧＭ４３３５９、ＧＭ２６０２、ＧＭ１０２７７、ＦＡＭ２２２Ａ、ＦＯＸＡ３、ＡＯＣ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１Ｅ、ＣＴＸＮ１、ＲＡＰＧＥＦ４ＯＳ２、ＳＯＣＳ２、ＰＰＡＮ、ＰＲＫＡＧ２ＯＳ１、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＨＯＸＡ５、ＧＲＨＬ１、ＥＩＦ４ＥＢＰ３、ＯＳＧＩＮ１、ＧＭ２８５１３、ＭＡＰ３Ｋ６、ＳＬＣ３４Ａ２、Ｂ６３００１９Ａ１０ＲＩＫ、ＩＧＫＣ、ＰＬＩＮ４、ＡＮＧＰＴＬ４、ＤＵＳＰ５、ＥＧＲ１、ＧＭ４２５０７、ＧＭ１４２５７、ＡＰＯＬＤ１、ＩＥＲ３、ＺＢＴＢ１６、ＧＭ３７０３３、ＩＧＬＣ１、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＩＧＬＣ３、ＧＭ４５２４４、ＲＧＳ１、ＣＸＣＬ１、ＲＮＦ２２５、ＧＭ４４００５、ＡＮＫＲＤ３７、ＮＲ４Ａ１、ＧＭ８８９３、ＧＭ２６７６２、ＣＤＫＮ１Ａ、５３３０４０６Ｍ２３ＲＩＫ、ＩＧＬＶ１、ＩＧＫＶ３－２、ＦＯＳ、ＧＭ４３６３７、ＩＧＫＶ３－１０、Ｓ１００Ａ９、ＧＭ１５６２２、Ｓ１００Ａ８、ＭＴ１、ＲＥＴＮＬＧ、ＭＴ２、ＩＧＫＶ１９－９３、ＧＭ４５７７４、及びＳＥＲＰＩＮＡ４－ＰＳ１からなる群から選択される対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、減少をもたらす。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、投与は、ＤＢＰ、ＩＧＫＶ４－５５、ＰＥＲ３、ＭＵＰ－ＰＳ１０、ＧＰＡＭ、ＴＭＰＲＳＳ４、ＭＵＰ－ＰＳ１４、ＡＣ１６６０７８．１、ＭＵＰ－ＰＳ１２、ＧＭ２０６５、Ａ５３００２０Ｇ２０ＲＩＫ、ＡＣＳＳ２ＯＳ、ＤＣＬＫ３、ＫＬＦ１２、ＧＭ４４６６９、ＭＦＳＤ９、Ｂ４ＧＡＬＮＴ３、ＧＭ３７７６、ＴＭＥＭ１６７－ＰＳ１、ＫＲＴ２３、ＬＭＢＲＤ２、ＧＭ２２９３５、ＳＵＬＴ２Ａ－ＰＳ１、ＳＮＡＩ３、ＧＭ１５９０８、ＭＩＲ６３９２、ＡＣＳＳ２、ＮＲ１Ｄ１、ＢＣ０４９９８７、ＣＣＤＣ８５Ｃ、ＣＥＳ２Ｃ、ＡＣＰＰ、ＭＵＰ２、ＰＴＫ６、ＵＧＴ１Ａ５、１８１０００８Ｉ１８ＲＩＫ、ＩＬ２２ＲＡ１、ＡＣＳＳ３、ＡＤＮＰ、ＲＤＨ１６、ＳＮＴＢ１、４９３３４１１Ｋ１６ＲＩＫ、ＮＴＲＫ２、ＥＸＴＬ１、ＰＳＴＰＩＰ２、ＲＡＳＳＦ６、ＡＱＰ４、ＵＧＴ１Ａ９、ＰＲＯＭ１、ＺＦＰ６０８、ＦＡＭ１３Ａ、ＮＦＥ２、ＴＥＦ、ＴＮＦＡＩＰ８Ｌ３、ＳＣＤ１、ＭＭＤ２、ＳＹＮＥ３、ＡＣＬＹ、Ｃ３３００２１Ｆ２３ＲＩＫ、ＳＴＯＮ２、ＬＲＦＮ４、ＨＨＩＰＬ１、ＷＮＴ９Ｂ、ＮＲ１Ｄ２、１８１００４９Ｊ１７ＲＩＫ、ＰＤＰＲ、ＮＡ、ＧＭ４５８８４、ＳＬＣ２Ａ５、ＦＡＭ８３Ｆ、ＺＦＰ５２６、ＳＧＫ２、ＧＭ４３０８０、ＤＥＡＦ１、ＭＥ１、ＢＭＦ、ＷＤＦＹ２、ＡＤＣＹ９、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ１１、ＬＹＳＴ、ＬＲＴＭ１、ＯＡＴ、ＶＰＳ１３Ｃ、Ｅ３３００１１Ｏ２１ＲＩＫ、Ｐ２ＲＹ４、ＧＭ１１４３７、ＲＷＤＤ２Ａ、ＳＶＩＬ、ＥＣＨＤＣ１、ＴＲＩＭ１４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＴＲＨＤＥ、ＭＡＳＰ１、２９０００９７Ｃ１７ＲＩＫ、ＮＤＳＴ１、ＲＤＨ９、１１１０００２Ｌ０１ＲＩＫ、ＡＢＴＢ２、ＲＧＲ、ＡＣＡＣＢ、ＳＡＣＭ１Ｌ、ＤＹＲＫ２、ＲＯＢＯ１、ＧＭ４４７４４、ＥＩＦ４ＥＢＰ２、ＫＬＨＬ２４、ＣＹＰ２Ａ５、ＴＩＡＭ２、ＲＡＢ４３、ＧＭ１３８５５、９１３０４０９Ｉ２３ＲＩＫ、ＳＴＯＮ１、ＵＳＰ９Ｘ、ＵＧＴ３Ａ１、９０３０６１６Ｇ１２ＲＩＫ、ＤＯＣＫ８、ＫＬＢ、ＡＣＥ、ＶＬＤＬＲ、ＰＣＤＨＧＣ３、ＡＢＣＡ６、４９３２４２２Ｍ１７ＲＩＫ、ＧＭ４５８３８、ＦＡＲＰ２、ＧＭ４７２０５、ＳＰ４、ＵＧＴ１Ａ６Ｂ、ＫＬＨＬ２８、Ｄ１３００４３Ｋ２２ＲＩＫ、ＡＳＩＣ５、ＰＭ２０Ｄ２、Ａ１ＣＦ、ＳＯＲＢＳ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＧＭ１０６４２、ＵＴＰ１４Ｂ、ＧＭ３８３９４、ＡＦＰ、ＩＮＳＩＧ１、ＨＮＦ１ＡＯＳ２、ＭＥＴＴＬ４、ＬＳＳ、ＭＴＭＲ９、ＨＭＧＣＲ、ＧＤＡＰ１０、ＡＤＲＡ１Ａ、ＺＦＰ７７３、ＣＲＫＬ、ＣＨＲＮＥ、ＳＴＡＲＤ１３、ＣＲＹ２、ＦＡＤＳ２、ＣＯＧ５、ＦＶ１、ＲＣＡＮ２、ＡＢＣＢ１Ａ、ＰＰＡＲＡ、ＡＴＰ７Ａ、ＭＶＤ、２６１００３７Ｄ０２ＲＩＫ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＵＣＮＲ１、ＥＣＩ３、ＡＢＣＣ４、ＬＮＣＢＡＴＥ１、ＭＩＮＤＹ２、ＢＴＢＤ７、４９３３４０４Ｏ１２ＲＩＫ、ＡＢＣＤ１、ＦＭＮ１、ＦＮＩＰ２、ＡＢＨＤ１５、ＮＫＸ２－６、Ｃ７７０８０、ＧＭ４３６１１、ＳＧＴＢ、ＡＣＳＬ３、ＮＲ５Ａ２、ＦＡＭ１９８Ａ、ＫＣＴＤ７、ＡＣＡＣＡ、ＺＦＰ９５５Ｂ、ＳＵＬＴ２Ａ３、ＦＺＤ４、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ３Ａ５９、ＺＦＰ３５４Ｂ、ＴＮＦＳＦ１０、ＳＥＳＮ３、ＭＮ１、ＲＮＦ１５２、ＤＨＣＲ２４、ＳＰＨＫ２、ＳＹＴＬ５、ＧＭ６６５２、ＢＡＨＣＣ１、ＧＡＲＥＭ１、ＭＦＳＤ４Ａ、ＨＧＦ、ＧＭ３５７１、ＮＯＳ１ＡＰ、ＤＩＸＤＣ１、ＫＡＮＫ１、ＲＥＰＳ２、ＡＳＡＨ２、ＳＥＭＡ３Ｂ、ＲＮＦ１０３、ＺＣ３Ｈ１２Ｃ、ＣＤＳ２、ＤＣＵＮ１Ｄ４、２９０００２６Ａ０２ＲＩＫ、ＣＹＹＲ１、ＥＥＰＤ１、Ｐ２ＲＹ２、ＣＹＰ２Ｃ３９、ＳＥＣ２２Ｃ、ＥＨＨＡＤＨ、ＡＢＣＡ３、ＨＩＰＫ２、ＲＢＭ２０、ＧＲＡＭＤ４、ＦＣＨＳＤ２、ＭＯＢ３Ａ、ＨＭＧＮ３、ＫＬＨＤＣ７Ａ、ＶＣＰ－ＲＳ、ＴＥＲＴ、ＣＹＰ３Ａ４１Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＴＬＣＤ２、ＳＮＨＧ１１、ＳＯＲＬ１、ＧＰＲ１５７、ＤＮＡＪＡ４、ＴＭＥＭ２５３、ＴＡＣＯ１、ＳＰＡＴＡ５Ｌ１、ＲＨＢＧ、ＣＯＬ１５Ａ１、ＰＣＤＨ１２、ＩＲＳ１、ＡＳＣＣ３、ＫＩＦ１６Ｂ、及びＭＲ１からなる群から選択される対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、増加をもたらす。

【0015】

本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、肝疾患又はメタボリックシンドロームを有すると以前に同定又は診断されたことがある。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、肝疾患を有すると以前に同定又は診断されたことがある。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドロームを有すると以前に同定又は診断されたことがある。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障からなる群から選択される。

【0016】

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び可溶性組織因子ドメインは、第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列を更に含む。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメイン、及び一対の親和性ドメインの第１のドメインは、第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチド中の第１のキメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメインと一対の親和性ドメインの第１のドメインとの間にリンカー配列を更に含む。

【0017】

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び第２の標的結合ドメインは、第２のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、第２のキメラポリペプチド中の一対の親和性ドメインの第２のドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列を更に含む。

【0018】

本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインの一方又は両方は、抗原結合ドメインである。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインの一方又は両方は、可溶性インターロイキン又はサイトカイン受容体である。

【0019】

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、１つ以上の追加の標的結合ドメインを更に含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、１つ以上の追加の標的結合ドメインを更に含む。

【0020】

本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性ヒト組織因子ドメインである。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号１と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、親和性ドメインの対は、ヒトＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５Ｒα）のアルファ鎖由来のスシドメイン、及び可溶性ＩＬ－１５である。

【0021】

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩを含む。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、配列番号２と少なくとも８０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも８０％同一である第２の配列を含み、第１及び第２の配列は、リンカーによって分離されている。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、配列番号２と少なくとも９０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも９０％同一である第２の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、配列番号２の第１の配列及び配列番号２の第２の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号３の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、配列番号４と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、配列番号４と少なくとも９０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインは、配列番号４の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、配列番号６と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、配列番号６と少なくとも９０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、配列番号６の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、配列番号７の配列を含む。

【0022】

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩを含む。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、配列番号２と少なくとも８０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも８０％同一である第２の配列を含み、第１及び第２の配列は、リンカーによって分離されている。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、配列番号２と少なくとも９０％同一である第１の配列、及び配列番号２と少なくとも９０％同一である第２の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、配列番号２の第１の配列及び配列番号２の第２の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号３の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、配列番号４と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、配列番号４と少なくとも９０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインは、配列番号４の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、配列番号５と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、配列番号６と少なくとも８０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、配列番号５と少なくとも９０％同一である配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、配列番号５の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、配列番号６の配列を含む。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、配列番号８の配列を含む。

【0023】

本明細書中で使用される場合、用語「キメラ」は、２つの異なる供給源（例えば、２つの異なる天然に存在するタンパク質、例えば、同じ種又は異なる種由来）に元々由来するアミノ酸配列（例えば、ドメイン）を含むポリペプチドをいう。例えば、キメラポリペプチドは、少なくとも２つの異なる天然に存在するヒトタンパク質由来のドメインを含むことができる。いくつかの例では、キメラポリペプチドは、合成配列（例えば、ｓｃＦｖ）であるドメインと、天然に存在するタンパク質（例えば、天然に存在するヒトタンパク質）に由来するドメインとを含み得る。いくつかの態様において、キメラポリペプチドは、合成配列である少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、２つの異なるｓｃＦｖ）を含むことができる。

【0024】

「抗原結合ドメイン」は、１つ以上の異なる抗原に特異的に結合することができる、１つ以上のタンパク質ドメイン（例えば、単一のポリペプチド由来のアミノ酸から形成されるか、又は２つ以上のポリペプチド（例えば、同じ又は異なるポリペプチド）由来のアミノ酸から形成される）である。いくつかの例において、抗原結合ドメインは、天然に存在する抗体のものと同様の特異性及び親和性で抗原又はエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体又はその断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、代替足場を含むことができる。抗原結合ドメインの非限定的な例は、本明細書に記載されている。抗原結合ドメインの更なる例は、当技術分野において公知である。

【0025】

「可溶性組織因子ドメイン」は、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを欠く野生型哺乳動物組織因子タンパク質（例えば、野生型ヒト組織因子タンパク質）のセグメントに対して少なくとも７０％の同一性（例えば、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は１００％の同一性）を有するポリペプチドを指す。可溶性組織因子ドメインの非限定的な例は、本明細書に記載されている。

【0026】

「可溶性インターロイキン受容体」という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、（例えば、生理学的条件下で、例えば、室温のリン酸緩衝生理食塩水中で）その天然リガンドのうちの１つ以上に結合することができる膜貫通ドメイン（及び任意選択で細胞内ドメイン）を欠くポリペプチドを指す。例えば、可溶性インターロイキン受容体は、野生型インターロイキン受容体の細胞外ドメインと少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）であり、その天然リガンドのうちの１つ以上に特異的に結合するその能力を保持するが、その膜貫通ドメインを欠く（及び任意選択で、その細胞内ドメインを更に欠く）配列を含むことができる。可溶性インターロイキン受容体の非限定的な例は、本明細書に記載されている。

【0027】

「可溶性サイトカイン受容体」という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、（例えば、生理学的条件下で、例えば、室温のリン酸緩衝生理食塩水中で）その天然リガンドのうちの１つ以上に結合することができる膜貫通ドメイン（及び任意選択で細胞内ドメイン）を欠くポリペプチドを指す。例えば、可溶性サイトカイン受容体は、野生型サイトカイン受容体の細胞外ドメインと少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）であり、その天然リガンドのうちの１つ以上に特異的に結合するその能力を保持するが、その膜貫通ドメインを欠く（任意選択で、その細胞内ドメインを更に欠く）配列を含むことができる。可溶性サイトカイン受容体の非限定的な例は、本明細書に記載されている。

【0028】

「抗体」という用語は、本明細書においてその最も広い意味で使用され、抗原又はエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含む特定のタイプの免疫グロブリン分子を含む。抗体は、具体的には、例えば、インタクトな抗体（例えば、インタクトな免疫グロブリン）、抗体断片、及び多重特異性抗体を含む。抗原結合ドメインの一例は、ＶＨ－ＶＬ二量体によって形成される抗原結合ドメインである。抗体の更なる例は、本明細書に記載される。抗体の更なる例は、当技術分野において公知である。

【0029】

「親和性」は、抗原結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原又はエピトープ）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「親和性」は、抗原結合ドメインのメンバーと抗原又はエピトープとの間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する動力学的成分は、以下により詳細に記載される。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））又はバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））を使用して決定することができる。抗原結合ドメイン及びその対応する抗原又はエピトープに対する親和性を決定するための更なる方法は、当技術分野において公知である。

【0030】

「多重鎖ポリペプチド」は、本明細書で使用される場合、２つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）のタンパク質鎖（例えば、少なくとも第１のキメラポリペプチド及び第２のポリペプチド）を含むポリペプチドを指し、２つ以上のタンパク質鎖は、非共有結合を介して会合して四次構造を形成する。

【0031】

「親和性ドメインの対」という用語は、１×１０^－７Ｍ未満のＫ_Ｄ（例えば、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、又は１×１０^－１１Ｍ未満）で互いに特異的に結合する２つの異なるタンパク質ドメインである。いくつかの例において、親和性ドメインの対は、一対の天然に存在するタンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、親和性ドメインの対は、一対の合成タンパク質であり得る。親和性ドメインの対の非限定的な例は、本明細書に記載されている。

【0032】

「エピトープ」という用語は、抗原結合ドメインに特異的に結合する抗原の部分を意味する。エピトープは、例えば、表面に接近可能なアミノ酸残基及び／又は糖側鎖からなり得、特定の三次元構造特性、並びに特定の電荷特性を有し得る。立体構造エピトープ及び非立体構造エピトープは、後者ではなく前者への結合が、変性溶媒の存在下で失われ得るという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含んでもよい。抗原結合ドメインが結合するエピトープを同定するための方法は、当技術分野において公知である。

【0033】

「免疫エフェクター細胞」は、哺乳動物における病原性細胞（例えば、がん細胞）を直接又は間接的に認識し、及び／又はその細胞静止若しくは細胞死を引き起こすことができる、哺乳動物の免疫系の細胞を指す。免疫エフェクター細胞の非限定的な例としては、マクロファージ、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球及びＴヘルパー細胞）、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、及び好酸球が挙げられる。免疫エフェクター細胞の更なる例は、当技術分野において公知である。

【0034】

「治療」という用語は、障害の少なくとも１つの症状を改善することを意味する。いくつかの例において、処置される障害はがんであり、がんの少なくとも１つの症状を改善することは、因子の異常な増殖、遺伝子発現、シグナル伝達、翻訳、及び／又は分泌を減少させることを含む。一般に、治療方法は、障害の少なくとも１つの症状を軽減する治療有効量の組成物を、そのような治療を必要とする対象、又はそのような治療を必要とすると決定された対象に投与することを含む。

【0035】

特段の記載がない限り、本明細書で用いられる全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野における当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明で使用するための方法及び材料が本明細書に記載されている。当技術分野で公知の他の適切な方法及び材料も使用することができる。材料、方法、及び実施例は、単に例示的なものであり、限定を意図したものではない。本明細書中で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリー、及び他の参考文献は、その全体が参考として組み込まれる。矛盾のある場合、定義を含め本明細書が適用される。

【0036】

本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】多重鎖キメラポリペプチド：（ｉ）第１の標的結合ドメイン（Ａ）、可溶性組織因子ドメイン、ドメインの親和性対の第１のドメイン（可溶性インターロイキンＩＬ－１５）、及び追加の標的結合ドメイン（Ｂ）を含む第１のキメラポリペプチド、並びに（ｉｉ）ドメインの親和性対の第２のドメイン（ＩＬ－１５受容体アルファスシドメイン）、第２の標的結合ドメイン（Ｃ）、及び追加の抗原結合ドメイン（Ｄ）を含む第２のキメラポリペプチドの例示的な図を示す。上の模式図は、親和性ドメインの対を介した第１及び第２のキメラポリペプチドの会合を示す。下の概略図は、第１及び第２のキメラポリペプチドにおけるドメインの順序を示す。

【図2】多重鎖キメラポリペプチド：（ｉ）第１の標的結合ドメイン（Ａ）、ＦＶＩＩａへの可溶性組織因子ドメインの結合を除去するための５つのアミノ酸置換を含む可溶性組織因子ドメイン、ドメインの親和性対の第１のドメイン（Ｄ８Ｎ又はＤ８Ａアミノ酸置換を含む可溶性インターロイキンＩＬ－１５）、及び追加の標的結合ドメイン（Ｂ）を含む、第１のキメラポリペプチド、並びに（ｉｉ）ドメインの親和性対の第２のドメイン（ＩＬ－１５受容体アルファスシドメイン）、第２の標的結合ドメイン（Ｃ）、及び追加の抗原結合ドメイン（Ｄ）を含む、第２のキメラポリペプチドの例示的な図を示す。上の模式図は、親和性ドメインの対を介した第１及び第２のキメラポリペプチドの会合を示す。下の概略図は、第１及び第２のキメラポリペプチドにおけるドメインの順序を示す。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかの他の実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性野生型ヒト組織因子ドメイン（野生型ヒト組織因子内の連続配列を含むか又はそれからなる）を含むか又はそれからなることができる。

【図3】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ構築物の概略図を示す。

【図4】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ構築物の更なる概略図を示す。

【図5】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＴＧＦＲ－ＦｃによるＴＧＦβ１阻害の結果を示す。

【図6】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ又は組換えＩＬ－１５を用いた３２Ｄβ細胞増殖アッセイの結果を示す。

【図7A】図７Ａ及び７Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ中のＩＬ－１５及びＴＧＦβＲＩＩを、対応する抗体を用いてＥＬＩＳＡを用いて検出した結果を示す。

【図7B】図７Ａの説明を参照のこと。

【図8】抗ＴＦ抗体樹脂上での結合及び溶出後のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓタンパク質含有細胞培養上清のクロマトグラフィプロファイルを示す折れ線グラフである。

【図9】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの分析ＳＥＣプロファイルを示す。

【図10】還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析された脱グリコシル化前後のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを示す。

【図11A】図１１Ａ及び１１Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置マウス及び対照処置マウスにおける脾臓重量及び免疫細胞種の割合を示す。図８５Ａは、ＰＢＳ対照と比較した、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける脾臓重量を示す。図８５Ｂは、ＰＢＳ対照と比較した、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＮＫ細胞の割合を示す。

【図11B】図１１Ａの説明を参照のこと。

【図12A】図１２Ａ及び１２Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置されたマウスにおける９２時間にわたる脾臓重量及び免疫刺激を示す。図８６Ａは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスの処置後１６、２４、４８、７２、及び９２時間目の脾臓重量を示す。図８６Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける処置の１６、２４、４８、７２、及び９２時間後の免疫細胞の割合を示す。

【図12B】図１２Ａの説明を参照のこと。

【図13A】図１３Ａ及び１３Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける経時的なＫｉ６７及びグランザイムＢ発現を示す。

【図13B】図１３Ａの説明を参照のこと。

【図14】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる脾細胞の細胞傷害性の増強を示す。

【図15】膵臓がんマウスモデルにおける、ＰＢＳ処置、化学治療単独、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ単独、又は化学治療及びＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの組合せに応答した腫瘍サイズの変化を示す。

【図16】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスから単離されたＮＫ細胞の細胞傷害性を示す。

【図17A】図１７Ａ～１７Ｃは、ウェスタン食餌を給餌され、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置されたＡｐｏＥ－／－マウスにおけるＴｒｅｇ、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のインビボ刺激を示す。

【図17B】図１７Ａの説明を参照のこと。

【図17C】図１７Ａの説明を参照のこと。

【図18A】図１８Ａ～１８Ｃは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓでの処置後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける免疫刺激を示す。

【図18B】図１８Ａの説明を参照のこと。

【図18C】図１８Ａの説明を参照のこと。

【図19A】図１９Ａ及び１９Ｂは、ウェスタン食餌を給餌され、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置されたＡｐｏＥ－／－マウスにおけるＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖のインビボ誘導を示す。

【図19B】図１９Ａの説明を参照のこと。

【図20A】図２０Ａ及び２０Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによるＮＫ細胞の処置後のＮＫ細胞の細胞傷害性の増強を示す。

【図20B】図２０Ａの説明を参照のこと。

【図21A】図２１Ａ及び２１Ｂは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓでのＮＫ細胞の処置後のＮＫ細胞のＡＤＣＣ活性の増強を示す。

【図21B】図２１Ａの説明を参照のこと。

【図22A】図２２Ａ～２２Ｈは、黒色腫マウスモデルにおける化学治療と組み合わせたＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋抗ＴＲＰ１（ＴＡ９９）の抗がん活性を示す。

【図22B】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図22C】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図22D】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図22E】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図22F】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図22G】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図22H】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図23A】図２３Ａ～２３Ｃは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる、ＡｐｏＥ－／－マウスにおけるウェスタン食餌誘発性高血糖の改善を示す。

【図23B】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図23C】図２２Ａの説明を参照のこと。

【図24】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したときのＣＤ４４ｈｉメモリーＴ細胞の上方制御を示す。

【図25】ｄｂ／ｄｂマウスの肝臓におけるＰＢＳ（対照群）又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群）の間で差次的に発現された遺伝子のＲＮＡ－ｓｅｑ分析を示す。

【図26】老齢マウス肝臓におけるＰＢＳ（対照群）又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群）間で差次的に発現された遺伝子のＲＮＡ－ｓｅｑ分析を示す。

【図27】ｄｂ／ｄｂマウスの肝臓のＲＮＡ－ｓｅｑ分析のボルケーノプロットを示す。

【図28】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）及びＰＢＳ陰性対照で処置したｄｂ／ｄｂマウスの肝臓のＲＮＡ－ｓｅｑ分析によって測定した、差次的に発現された遺伝子を表すヒートマップを示す。

【図29】老齢マウスの肝臓においてＲＮＡ－ｓｅｑによって測定された差次的に発現された老化関連遺伝子及び炎症関連遺伝子のヒートマップを示す。

【図30】ｄｂ／ｄｂマウスモデルにおけるＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）処置を調査するための研究設計の概略図を示す。

【図31】１０日目又は６０日目の対照と比較した、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）による処置後に定量的ＰＣＲによって測定された、肝臓におけるＩＬ１β、ＩＬ１α、ＰＡＩ－１、ＩＬ６、及びＴｎｆαの相対的ｍＲＮＡ発現を示す。

【図32】定量的ＰＣＲによって測定された、１２０日目における対照と比較した、１つ又は２つのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）用量による処置後の肝臓におけるＩＬ１β、ＩＬ１α、ＰＡＩ－１、ＩＬ６、及びＣｄｋｎ１ａの相対的なｍＲＮＡ発現を示す。

【図33】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）で処置した後の肝臓組織におけるＩＬ－１α、ＩＬ－６、ＩＬ－８のタンパクレベルのＥＬＩＳＡデータを、処置１２０日後の対照と比較して示す。

【図34】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）で処置した後の肝臓組織におけるＰＡＩ－１及びフィブロネクチンのタンパクレベルのＥＬＩＳＡデータを、処置の１２０日後の対照と比較して示す。

【図35】ＰＢＳ陰性対照と比較した、２用量のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）による処置後のｐ２１＋を発現する肝臓組織細胞の免疫蛍光染色を示す。

【図36】ＰＢＳのみの陰性対照のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）処置のいずれかを受けた老齢マウスの肝臓から生成されたＲＮＡ－ｓｅｑデータによって検出された差次的に発現された遺伝子のヒートマップを示す。

【図37】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）で処置した後のカニクイザル由来の血液中のＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｒｅｇ及びＣＤ１６＋ＮＫ細胞におけるＫｉ６７発現のフローサイトメトリー分析を示す。

【図38】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）で処置した後のカニクイザル由来の血液中のＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｒｅｇ及びＣＤ１６＋ＮＫ細胞の絶対数のフローサイトメトリー分析を示す。

【図39】ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置がｄｂ／ｄｂマウスにおいて免疫細胞集団を増強することを示す。

【図40】処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞の細胞傷害活性に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置又はＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置の効果を示す。

【図41】処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞のインターフェロン－γ産生に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置の効果及びインビトロαＣＤ３／ＣＤ２８刺激アッセイを示す。

【図42】処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞の解糖活性に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの効果を示す。

【図43】処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞のミトコンドリア呼吸に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの効果を示す。

【図44】処置後４日後のｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿ＴＧＦβ１及びＴＧＦβ２レベルに対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの効果を示す。

【図45】化学誘導肝損傷からのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＨＣＷ９２１８）の効果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0038】

詳細な説明
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、世界中で主要な慢性肝疾患として浮上しており、世界中で１０億人が罹患していると推定されている（Ｙｏｕｎｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ６９（６）：２６７２－２６８２，２０１９）。ＮＡＦＬＤは、単離された脂肪症の場合の非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬ）から、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、線維性ＮＡＳＨ、進行性線維症、肝硬変及び肝細胞がん（ＨＣＣ）までの範囲の一連の肝臓疾患を表す（Ｍｅｉｊｎｉｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＨＥＰ Ｒｅｐ．３（４）：１００３０１，２０２１）。

【0039】

ＮＡＦＬＤをもたらす代謝機構は、肝臓におけるエネルギー代謝の不均衡を反映する。肝臓が、主に炭水化物及び脂肪の形態の過剰なエネルギーをＣＯ_２に酸化することができないこと、又はそれを超低密度リポタンパク質として搬出することができないこと。これは、トリグリセリドとして肝臓におけるエネルギーの正味の蓄積をもたらし、これは、肥満個体及び脂肪異栄養症を有する個体におけるＮＡＦＬＤの広範な存在を説明する。メタボリックシンドローム及び前糖尿病に関連する最も初期の欠陥の１つである骨格筋インスリン抵抗性はまた、摂取されたグルコースを骨格筋グリコーゲン合成からＤＮＬのために肝臓へと逸らすことによって、肝臓のデノボ脂肪生成（ＤＮＬ）及び高トリグリセリド血症の増加を通じてＮＡＦＬＤの発症を促進することができる。グリコーゲンシンターゼのインスリン活性化が損なわれる肝臓インスリン抵抗性の発生（Ｌｏｏｍｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １８４（１０）：２５３７－２５６４，２０２１）は、グルコースを脂肪生成経路に向け直し、ＮＡＦＬＤを更に促進する。

【0040】

脂肪細胞機能不全はまた、ＮＡＦＬＤの発症を促進する。重度のＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨは先天性脂肪異栄養症の合併症であり、脂肪組織の欠如が肝臓に過剰な脂肪酸を貯蔵させ、重度のインスリン抵抗性をもたらす。脂肪肝の他の代謝性原因としては、（１）肝内脂肪分解の欠損、（２）トリグリセリド輸送の欠損、（３）肝臓ＤＮＬをもたらすグルコキナーゼ活性の増加、及び（４）肝臓ミトコンドリア／ペルオキシソームβ酸化の減少が挙げられる（Ｌｏｏｍｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １８４（１０）：２５３７－２５６４，２０２１）。

【0041】

肝細胞は、ＤＮＬ経路を介して新たな脂質を合成するときに脂肪を蓄積し始め、適応応答は、毒性脂質代謝産物の生成に対抗し、遊離の過剰な脂肪酸のバランスをとる（Ｐｉｃｃｉｎｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１６（３）：１６０－１７４，２０１９）。蓄積した毒性代謝産物は、肝臓の炎症状態を促進し、これは、増加した腸透過性及びディスバイオシスに由来するエンドトキシン、並びに炎症を起こした脂肪組織からのＩＬ－６及びＴＮＦの放出によって更に悪化する（Ｌｏｏｍｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １８４（１０）：２５３７－２５６４，２０２１；Ｙｋｉ－Ｊａｒｖｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．２０２１）。したがって、肝炎症性微小環境は、ＮＡＦＬＤの発症及びＨＣＣへの進行において重要な役割を果たす。更に、サイトカイン媒介性肝細胞傷害及び死の後に、肝前駆細胞集団の増殖が続き、これは、炎症環境において、肝星細胞における線維形成応答を誘導し、それによって肝線維症及びＮＡＳＨへの進行を促進する（Ｌｏｏｍｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １８４（１０）：２５３７－２５６４，２０２１）。最近、肝細胞の細胞老化もＮＡＦＬＤ発症の原因因子であることを示す証拠もある。

【0042】

ＮＡＦＬＤは、肝細胞における老化のいくつかのマーカー、例えば、老化に関連する損傷巣の増加、老化に関連する関連する拡張の増加及びより大きな核領域と関連している（Ｏｇｒｏｄｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．８：１５６９１，２０１７）。肝細胞の老化はまた、肝臓のミトコンドリアβ酸化を損なうことが示され、それによって脂肪酸の排除を妨げ、トリグリセリドの蓄積を促進する（Ｏｇｒｏｄｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．８：１５６９１，２０１７）。老化肝細胞の老化関連分泌表現型から分泌される炎症促進性因子のパラクリン効果は、正常な肝細胞の正常な代謝を破壊する（Ｌｏｏｍｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １８４（１０）：２５３７－２５６４，２０２１）。最後に、肝細胞性老化と脂肪肝との間の因果関係は、トランスジェニックマウス及び老化細胞除去カクテルを使用して解明された（Ｃｈｉｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．１６（１０）：７１８－７３５，２０１７）。

【0043】

本明細書において、本発明者らは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの皮下投与が、Ｄｂ／Ｄｂ及び自然老化マウスモデルにおいて、肝細胞の老化を排除し、肝臓の炎症微小環境を低下させ、肝臓の代謝機能を再バランスさせ、糖新生及び脂肪生成を減少させることができることを記載する。したがって、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓは、様々な肝疾患及びメタボリックシンドロームを治療する可能性を有する。

【0044】

肝疾患又はメタボリックシンドロームを有すると診断された対象において、肝疾患又はメタボリックシンドロームを処置する方法；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬ）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）への進行、ＮＡＳＨから肝硬変への進行、及び肝硬変から肝細胞がんへの進行の速度のうちの１つ以上を低下させる方法；肝臓における炎症を低減することを必要としていると同定された対象の肝臓における炎症を低減する方法；肝臓における糖新生を減少させることを必要とすると同定された対象の肝臓における糖新生を減少させる方法；肝臓における脂肪生成を減少させることを必要とすると同定された対象の肝臓における脂肪生成を減少させる方法；肝臓における肝細胞老化を減少させることを必要としていると同定された対象の肝臓における肝細胞老化を減少させる方法；肝臓における代謝機能を再平衡化することを必要としていると同定された対象の肝臓における代謝機能を再平衡化する方法；及び肝臓における表１～４中の１つ以上の遺伝子の発現を調節することを必要としていると同定された対象の肝臓における表１～４中の１つ以上の遺伝子の発現を調節する方法であって、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する、方法が本明細書で提供される。

【0045】

本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの例において、第１のキメラポリペプチド及び／又は第２のキメラポリペプチドの全長は、それぞれ独立して、約５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約５０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約９００アミノ酸、約１００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約８００アミノ酸、約１００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約７００アミノ酸、約１００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約６００アミノ酸、約１００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４００アミノ酸、約１００アミノ酸～約３８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約９００アミノ酸、約２００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約８００アミノ酸、約２００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約７００アミノ酸、約２００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約６００アミノ酸、約２００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約９００アミノ酸、約３００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約８００アミノ酸、約３００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約７００アミノ酸、約３００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約６００アミノ酸、約３００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３００アミノ酸～約３６０アミノ酸、約３００アミノ酸～約３４０アミノ酸、約３００アミノ酸～約３２０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約１５
００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約４００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約９００アミノ酸、約４００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約８００アミノ酸、約４００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約７００アミノ酸、約４００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約６００アミノ酸、約４００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約４００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約４００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約９００アミノ酸、約５００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約８００アミノ酸、約５００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約７００アミノ酸、約５００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約６００アミノ酸、約５００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約６００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約６００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約６００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約９００アミノ酸、約６００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約８００アミノ酸、約６００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約７００アミノ酸、約６００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約７００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約７００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約７００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約９００アミノ酸、約７００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約８００アミノ酸、約７００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約８００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約８００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約８００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８００アミノ酸～約９００アミノ酸、約８００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約９００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約９００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約９００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約９５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約１５００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１５００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１５００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２０００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２０００アミノ酸～約２５００アミノ酸、又は約２５００アミノ酸～約３０００アミノ酸であり得る。本明細書で提供される例示的な多重鎖キメラポリペプチドの図を図１及び２に示す。

【0046】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の第１の標的結合ドメインのいずれか）及び可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接している。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な第１の標的結合ドメインのいずれか）と可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカー配列又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。

【0047】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）及び一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な親和性ドメインの対のいずれかの例示的な第１のドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接している。本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な親和性ドメインの対のいずれかの例示的な第１のドメインのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。

【0048】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、一対の親和性ドメインの第２のドメイン（例えば、本明細書に記載の親和性ドメインの例示的な対のいずれかの例示的な第２のドメインのいずれか）及び第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な第２の標的結合ドメインのいずれか）は、第２のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、第２のキメラポリペプチド中の一対の親和性ドメインの第２のドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な親和性ドメインの対のいずれかの例示的な第２のドメインのいずれか）と第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な第２の標的結合ドメインのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。

【0049】

これらのキメラポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、及び方法の非限定的な態様は以下に記載されており、限定することなく任意の組合せで使用することができる。これらのキメラポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、及び方法の更なる局面は、当該分野で公知である。

【0050】

組織因子
ヒト組織因子は、以下の３つのドメインを含む２６３アミノ酸の膜貫通タンパク質である：（１）２１９アミノ酸のＮ末端細胞外ドメイン（残基１～２１９）；（２）２２アミノ酸膜貫通ドメイン（残基２２０～２４２）；及び（３）２１アミノ酸細胞質Ｃ末端テール（残基２４２～２６３）（（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別番号：Ｐ１３７２６）。細胞質尾部は、Ｓｅｒ２５３及びＳｅｒ２５８に２つのリン酸化部位、並びにＣｙｓ２４５に１つのＳ－パルミトイル化部位を含む。細胞質ドメインの欠失又は変異は、組織因子凝固活性に影響を及ぼさないことが見出された。組織因子は、Ｃｙｓ２４５でタンパク質の細胞内ドメインに１つのＳ－パルミトイル化部位を有する。Ｃｙｓ２４５は、細胞内ドメインのアミノ酸末端に位置し、膜表面に近い。組織因子膜貫通ドメインは、単一のα－ヘリックスから構成される。

【0051】

２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインから構成される組織因子の細胞外ドメインは、６アミノ酸リンカーを介して膜貫通ドメインに連結される。このリンカーは、組織因子細胞外ドメインをその膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインから分離するためのコンフォメーションの柔軟性を提供する。各組織因子フィブロネクチンＩＩＩ型モジュールは、３つの逆平行β鎖を含有する上部シートドメイン及び４つのβ鎖を含有する下部シートを有する２つの重複βシートから構成される。β鎖は、鎖βＡとβＢ、βＣとβＤ、及びβＥとβＦとの間のβループによって連結されており、これらは全て、２つのモジュールにおいてコンフォメーションが保存されている。β鎖を連結する３つの短いαヘリックスセグメントが存在する。組織因子のユニークな特徴は、β１０鎖とβ１１鎖との間の１７アミノ酸β－ヘアピンであり、これはフィブロネクチンスーパーファミリーの共通要素ではない。Ｎ末端ドメインはまた、β６Ｆとβ７Ｇとの間に１２アミノ酸ループを含み、これはＣ末端ドメインには存在せず、組織因子に特有である。このようなフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン構造は、タンパク質フォールドの免疫グロブリン様ファミリーの特徴であり、多種多様な細胞外タンパク質の間で保存されている。

【0052】

チモーゲンＦＶＩＩは、いったん組織に結合して活性組織因子－ＦＶＩＩａ複合体を形成すると、限定タンパク質分解によって迅速にＦＶＩＩａに変換される。約０．１ｎＭ（血漿ＦＶＩＩの１％）の濃度で酵素として循環するＦＶＩＩａは、組織因子に直接結合することもできる。組織因子－ＦＶＩＩａ複合体上の組織因子とＦＶＩＩａとの間のアロステリック相互作用は、ＦＶＩＩａの酵素活性を大きく増加させる：小さな発色性ペプチジル基質の加水分解速度の約２０～１００倍の増加、及び天然高分子基質ＦＩＸ及びＦＸの活性化速度のほぼ１００万倍の増加。組織因子への結合時のＦＶＩＩａの活性部位のアロステリック活性化に呼応して、リン脂質二重層上の組織形成因子－ＦＶＩＩａ錯体（すなわち、膜表面上のホスファチジル－Ｌ－セリンの露出時）は、Ｃａ^２＋依存的にＦＩＸ又はＦＸ活性化の速度を更に１，０００倍増加させる。遊離ＦＶＩＩａと比較して、組織因子－ＦＶＩＩａ－リン脂質複合体によるＦＸ活性化のおよそ１００万倍の全体的な増加は、凝固カスケードの重要な制御点である。

【0053】

ＦＶＩＩは、Ｎ末端γ－カルボキシグルタミン酸リッチ（ＧＬＡ）ドメイン、２つの上皮成長因子様ドメイン（ＥＧＦ１及びＥＦＧ２）、及びＣ末端セリンプロテアーゼドメインを有する、４０６個のアミノ酸残基からなる約５０ｋＤａの単鎖ポリペプチドである。ＦＶＩＩは、ＥＧＦ２とプロテアーゼドメインとの間の短いリンカー領域中のＩｌｅ－^１５４－Ａｒｇ^１５２結合の特異的タンパク質分解切断によってＦＶＩＩａに活性化される。この切断は、Ｃｙｓ^１３５及びＣｙｓ^２６２の単一ジスルフィド結合によって一緒に保持されている軽鎖及び重鎖をもたらす。ＦＶＩＩａは、そのＮ末端ＧＬＡドメインを介してＣａ^２＋依存的にリン脂質膜に結合する。ＧＬＡドメインのすぐＣ末端には、芳香族スタック及び２つのＥＧＦドメインがある。芳香族スタックは、単一のＣａ^２＋イオンに結合するＥＧＦ１ドメインにＧＬＡを接続する。このＣａ^２＋結合部位の占有は、ＦＶＩＩａアミド分解活性及び組織因子会合を増加させる。触媒三つ組は、Ｈｉｓ^１９３、Ａｓｐ^２４２、及びＳｅｒ^３４４からなり、ＦＶＩＩａプロテアーゼドメイン内の単一Ｃａ^２＋イオンの結合は、その触媒活性にとって重要である。ＦＶＩＩのＦＶＩＩａへのタンパク質分解活性化は、Ｉｌｅ^１５３で新たに形成されたアミノ末端を遊離させ、折り返され、活性化ポケットに挿入され、Ａｓｐ^３４３のカルボキシレートと塩橋を形成してオキシアニオンホールを生成する。この塩橋の形成は、ＦＶＩＩａ活性にとって重要である。しかし、遊離ＦＶＩＩａでは、タンパク質分解活性化の際にオキシアニオンホール形成は起こらない。結果として、ＦＶＩＩａは、血漿プロテアーゼ阻害剤によってほとんど認識されないチモーゲン様状態で循環し、約９０分の半減期で循環することを可能にする。

【0054】

膜表面上のＦＶＩＩａ活性部位の組織因子媒介位置決めは、同族基質に対するＦＶＩＩａにとって重要である。遊離ＦＶＩＩａは、その活性部位が膜表面の約８０Å上に位置する状態で膜に結合した場合、安定な伸長構造をとる。ＦＶＩＩａが組織因子に結合すると、ＦＶａ活性部位は、膜に約６Å近く再配置される。この調節は、ＦＶＩＩａ触媒三連構造と標的基質切断部位との適切な整列を補助し得る。ＧＬＡドメインのないＦＶＩＩａを使用して、活性部位が依然として膜上の同様の距離に位置していることが示されており、組織因子が、ＦＶＩＩａ－膜相互作用の非存在下でさえ、ＦＶＩＩａ活性部位の位置決めを完全に支持することができることを実証している。更なるデータは、組織因子細胞外ドメインが何らかの方法で膜表面に係留されている限り、組織因子が完全なＦＶＩＩａタンパク質分解活性を支持することを示した。しかしながら、ＦＶＩＩａの活性部位を膜表面の８０Åより上に上げると、組織因子－ＦＶＩＩａ複合体がＦＸを活性化する能力が大幅に低下したが、組織因子－ＦＶＩＩａアミド分解活性は減少しなかった。

【0055】

アラニンスキャニング変異誘発は、ＦＶＩＩａとの相互作用のための組織因子細胞外ドメインにおける特定のアミノ酸側鎖の役割を評価するために使用されてきた（Ｇｉｂｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３（４７）：１４００３－１４０１０，１９９４；Ｓｃｈｕｌｌｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９（３０）：１９３９９－１９４０３，１９９４）。アラニン置換は、アラニン置換がＦＶＩＩａ結合について５～１０倍低い親和性を引き起こす限られた数の残基位置を同定した。これらの残基側鎖のほとんどは、高分子リガンド相互作用と一致して、結晶構造において溶媒に十分に曝露されていることが見出された。ＦＶＩＩａリガンド結合部位は、２つのモジュール間の境界の広範な領域にわたって位置する。Ｃモジュールにおいて、突出するＢ－Ｃループ上に位置する残基Ａｒｇ^１３５及びＰｈｅ^１４０は、ＦＶＩＩａとの独立した接触を提供する。Ｌｅｕ^１３３は、フィンガー様構造の基部に位置し、２つのモジュール間の間隙に詰め込まれている。これは、Ｌｙｓ^２０、Ｔｈｒ^６０、Ａｓｐ^５８、及びＩｌｅ^２２からなる重要な結合残基の主要なクラスターへの連続性を提供する。Ｔｈｒ^６０は部分的にのみ溶媒に露出しており、リガンドと有意に接触するのではなく局所的な構造的役割を果たしている可能性がある。結合部位は、Ｇｌｕ^２４及びＧｌｎ^１１０、並びに潜在的により遠い残基Ｖａｌ^２０７を含むモジュール間角の凹側に伸長する。結合領域は、Ａｓｐ５８から、Ｌｙｓ^４８、Ｌｙｓ^４６、Ｇｌｎ^３７、Ａｓｐ^４４、及びＴｒｐ^４５によって形成される凸状表面領域に及ぶ。Ｔｒｐ^４５及びＡｓｐ^４４は、独立してＦＶＩＩａと相互作用せず、このことは、Ｔｒｐ^４５位置での変異効果が、隣接するＡｓｐ^４４及びＧｌｎ^３７側鎖の局所的パッキングのためのこの側鎖の構造的重要性を反映し得ることを示す。相互作用領域は更に、２つの表面露出芳香族残基Ｐｈｅ^７６及びＴｙｒ^７８を含み、これらはＮモジュール中の疎水性クラスターの一部を形成する。

【0056】

組織因子－ＦＶＩＩａの既知の生理学的基質は、ＦＶＩＩ、ＦＩＸ、及びＦＸ並びにある種のプロテイナーゼ活性化受容体である。変異分析は、変異した場合に、小さなペプチジル基質に対する完全なＦＶＩＩａアミド分解活性を支持するが、高分子基質（すなわち、ＦＶＩＩ、ＦＩＸ、及びＦＸ）活性化を支持するそれらの能力が欠損している多数の残基を同定した（Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７（３１）：２２２０６－２２２１０，１９９２；Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７（９）：６３７５－６３８１，１９９２；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１（３６）：２１７５２－２１７５７，１９９６；Ｋｉｒｃｈｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３９（２５）：７３８０－７３８７，２０００）。残基１５９～１６５の組織因子ループ領域、及びこの柔軟なループ内又はそれに隣接する残基は、組織因子－ＦＶＩＩａ複合体のタンパク質分解活性に重要であることが示されている。これは、ＦＶＩＩａ活性部位からかなり離れている組織因子の提案された基質結合エキソサイト領域を規定する。わずかにかさ高い残基アラニンによるグリシン残基の置換は、組織因子－ＦＶＩＩａタンパク質分解活性を有意に損なう。このことは、グリシンによって与えられる柔軟性が、組織因子高分子基質認識のための残基１５９～１６５のループ重要であることを示唆している。

【0057】

残基Ｌｙｓ^１６５及びＬｙｓ^１６６も、基質認識及び結合に重要であることが実証されている。これらの残基のいずれかのアラニンへの変異は、組織因子補因子機能の有意な減少を生じる。Ｌｙｓ^１６５及びＬｙｓ^１６６は互いに反対向きであり、Ｌｙｓ^１６５はほとんどの組織因子－ＦＶＩＩａ構造においてＦＶＩＩａの方を指し、Ｌｙｓ^１６６は結晶構造における基質結合エキソサイト領域の方を指す。ＦＶＩＩａのＬｙｓ^１６５とＧｌａ^３５との間の推定塩橋形成は、ＦＶＩＩａのＧＬＡドメインとの組織因子相互作用が基質認識を調節するという考えを支持する。これらの結果は、組織因子外部ドメインのＣ末端部分が、ＦＩＸ及びＦＸのＧＬＡ－ドメイン、可能な隣接ＥＧＦ１ドメインと直接相互作用すること、並びにＦＶＩＩａ ＧＬＡ－ドメインの存在が、これらの相互作用を直接又は間接的に調節し得ることを示唆する。

【0058】

可溶性組織因子ドメイン
本明細書に記載のポリペプチド、組成物、又は方法のいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、シグナル配列、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを欠く野生型組織因子ポリペプチドであり得る。いくつかの例において、可溶性組織因子ドメインは、野生型組織因子ポリペプチドが、シグナル配列、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを欠き、選択されたアミノ酸において更に改変されている組織因子変異体であり得る。いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは可溶性ヒト組織因子ドメインであり得る。いくつかの例において、可溶性組織因子ドメインは、可溶性マウス組織因子ドメインであり得る。いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは可溶性ラット組織因子ドメインであり得る。可溶性ヒト組織因子ドメイン、マウス可溶性組織因子ドメイン、ラット可溶性組織因子ドメイン、及び変異体可溶性組織因子ドメインの非限定的な例を以下に示す。

【0059】

例示的な可溶性ヒト組織因子ドメイン（配列番号１）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ

【0060】

可溶性ヒト組織因子ドメインをコードする例示的な核酸（配列番号９）
ＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧ

【0061】

例示的な変異体可溶性ヒト組織因子ドメイン（配列番号１０）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＡＴＡＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＡＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＡＲＮＮＴＡＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ

【0062】

例示的な変異体可溶性ヒト組織因子ドメイン（配列番号１１）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＡＴＡＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＡＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＡＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＡＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＡＲＮＮＴＡＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ

【0063】

例示的な可溶性マウス組織因子ドメイン（配列番号１２）
ａｇｉｐｅｋａｆｎｌｔｗｉｓｔｄｆｋｔｉｌｅｗｑｐｋｐｔｎｙｔｙｔｖｑｉｓｄｒｓｒｎｗｋｎｋｃｆｓｔｔｄｔｅｃｄｌｔｄｅｉｖｋｄｖｔｗａｙｅａｋｖｌｓｖｐｒｒｎｓｖｈｇｄｇｄｑｌｖｉｈｇｅｅｐｐｆｔｎａｐ ｋｆｌｐｙｒｄｔｎｌｇｑｐｖｉｑｑｆｅｑｄｇｒｋｌｎｖｖｖｋｄｓｌｔｌｖｒｋｎｇｔｆｌｔｌｒｑｖｆｇｋｄｌｇｙｉｉｔｙｒｋｇｓｓｔｇｋｋｔｎｉｔｎｔｎｅｆｓｉｄｖｅｅｇｖｓｙｃｆｆｖｑａｍｉｆｓｒｋｔｎｑｎｓｐｇｓｓｔｖｃｔｅｑｗｋｓｆｌｇｅ

【0064】

例示的な可溶性ラット組織因子ドメイン（配列番号１３）
ａｇｔｐｐｇｋａｆｎｌｔｗｉｓｔｄｆｋｔｉｌｅｗｑｐｋｐｔｎｙｔｙｔｖｑｉｓｄｒｓｒｎｗｋｙｋｃｔｇｔｔｄｔｅｃｄｌｔｄｅｉｖｋｄｖｎｗｔｙｅａｒｖｌｓｖｐｗｒｎｓｔｈｇｋｅｔｌｆｇｔｈｇｅｅｐｐｆｔｎａｒｋｆｌｐｙｒｄｔｋｉｇｑｐｖｉｑｋｙｅｑｇｇｔｋｌｋｖｔｖｋｄｓｆｔｌｖｒｋｎｇｔｆｌｔｌｒｑｖｆｇｎｄｌｇｙｉｌｔｙｒｋｄｓｓｔｇｒｋｔｎｔｔｈｔｎｅｆｌｉｄｖｅｋｇｖｓｙｃｆｆａｑａｖｉｆｓｒｋｔｎｈｋｓｐｅｓｉｔｋｃｔｅｑｗｋｓｖｌｇｅ

【0065】

いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、配列番号１、１０、１１、１２、又は１３と少なくとも７０％同一、少なくとも７２％同一、少なくとも７４％同一、少なくとも７６％同一、少なくとも７８％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一である配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、そのＮ末端から１～２０個のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０個）が除去された、及び／又はそのＣ末端から１～２０個のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０個）が除去された、配列番号１、１０、１１、１２、若しくは１３の配列を含むことができる。

【0066】

当技術分野で理解され得るように、当業者は、異なる哺乳動物種間で保存されているアミノ酸の変異がタンパク質の活性及び／又は構造安定性を低下させる可能性がより高い一方で、異なる哺乳動物種間で保存されていないアミノ酸の変異はタンパク質の活性及び／又は構造安定性を低下させる可能性がより低いことを理解するであろう。

【0067】

本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの例において、可溶性組織因子ドメインは、第ＶＩＩａ因子に結合することができない。本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの例において、可溶性組織因子ドメインは、不活性第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換しない。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、哺乳動物において血液凝固を刺激しない。

【0068】

いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは可溶性ヒト組織因子ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは可溶性マウス組織因子ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは可溶性ラット組織因子ドメインであり得る。

【0069】

いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置２０に対応するアミノ酸位置におけるリジン；成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置２２に対応するアミノ酸位置のイソロイシン；成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置４５に対応するアミノ酸位置のトリプトファン；成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置５８に対応するアミノ酸位置のアスパラギン酸；成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置９４に対応するアミノ酸位置におけるチロシン；成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置１３５に対応するアミノ酸位置にあるアルギニン；及び成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸位置１４０に対応するアミノ酸位置にあるフェニルアラニンのうちの１つ以上（２、３、４、５、６、又は７）を含まない。いくつかの実施形態では、変異可溶性組織因子は、配列番号１０又は配列番号１１のアミノ酸配列を有する。

【0070】

いくつかの例において、可溶性組織因子ドメインは、配列番号９と少なくとも７０％同一、少なくとも７２％同一、少なくとも７４％同一、少なくとも７６％同一、少なくとも７８％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一である配列を含む核酸によってコードされ得る。

【0071】

いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、約２０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約２０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約２０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約３０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約３０アミノ酸～約２００アミノ酸、約３０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１００アミノ酸、約３０アミノ酸～約９５アミノ酸、約３０アミノ酸～約９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約８５アミノ酸、約３０アミノ酸～約８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約７５アミノ酸、約３０アミノ酸～約７０アミノ酸、約３０アミノ酸～約６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約４０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約４０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約４０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約４０アミノ酸～約２００アミノ酸、約４０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１００アミノ酸、約４０アミノ酸～約９５アミノ酸、約４０アミノ酸～約９０アミノ酸、約４０アミノ酸～約８５アミノ酸、約４０アミノ酸～約８０アミノ酸、約４０アミノ酸～約７５アミノ酸、約４０アミノ酸～約７０アミノ酸、約４０アミノ酸～約６０アミノ酸、約４０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約５０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約５０アミノ酸～約９５アミノ酸、約５０アミノ酸～約９０アミノ酸、約５０アミノ酸～約８５アミノ酸、約５０アミノ酸～約８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７５アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約６０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約６０アミノ酸～約２００アミノ酸、約６０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１００アミノ酸、約６０アミノ酸～約９５アミノ酸、約６０アミノ酸～約９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約８５アミノ酸、約６０アミノ酸～約８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約７５アミノ酸、約６０アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約７０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約７０アミノ酸～約２００アミノ酸、約７０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１００アミノ酸、約７０アミノ酸～約９５アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約８５アミノ酸、約７０アミノ酸～約８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約８０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約８０アミノ酸～約２００アミノ酸、約８０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１００アミノ酸、約８０アミノ酸～約９５アミノ酸、約８０アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約９０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約９０アミノ酸～約２００アミノ酸、約９０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１００アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１００アミノ酸～約２００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１１５
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【0072】

リンカー配列
いくつかの実施形態では、リンカー配列は、フレキシブルリンカー配列であり得る。使用することができるリンカー配列の非限定的な例は、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２７（１０）：３２５－３３０，２０１４；Ｐｒｉｙａｎｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７，２０１３に記載されている。いくつかの例では、リンカー配列は合成リンカー配列である。

【0073】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のリンカー配列（例えば、同じ又は異なるリンカー配列、例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を含むことができる。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のリンカー配列（例えば、同じ又は異なるリンカー配列、例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を含むことができる。

【0074】

いくつかの実施形態では、リンカー配列は、１アミノ酸～約１００アミノ酸、１アミノ酸～約９０アミノ酸、１アミノ酸～約８０アミノ酸、１アミノ酸～約７０アミノ酸、１アミノ酸～約６０アミノ酸、１アミノ酸～約５０アミノ酸、１アミノ酸～約４５アミノ酸、１アミノ酸～約４０アミノ酸、１アミノ酸～約３５アミノ酸、１アミノ酸～約３０アミノ酸、１アミノ酸～約２５アミノ酸、１アミノ酸～約２４アミノ酸、１アミノ酸～約２２アミノ酸、１アミノ酸～約２０アミノ酸、１アミノ酸～約１８アミノ酸、１アミノ酸～約１６アミノ酸、１アミノ酸～約１４アミノ酸、１アミノ酸～約１２アミノ酸、１アミノ酸～約１０アミノ酸、１アミノ酸～約８アミノ酸、１アミノ酸～約６アミノ酸、１アミノ酸～約４アミノ酸、約２アミノ酸～約１００アミノ酸、約２アミノ酸～約９０アミノ酸、約２アミノ酸～約８０アミノ酸、約２アミノ酸～約７０アミノ酸、約２アミノ酸～約６０アミノ酸、約２アミノ酸～約５０アミノ酸、約２アミノ酸～約４５アミノ酸、約２アミノ酸～約４０アミノ酸、約２アミノ酸～約３５アミノ酸、約２アミノ酸～約３０アミノ酸、約２アミノ酸～約２５アミノ酸、約２アミノ酸～約２４アミノ酸、約２アミノ酸～約２２アミノ酸、約２アミノ酸～約２０アミノ酸、約２アミノ酸～約１８アミノ酸、約２アミノ酸～約１６アミノ酸、約２アミノ酸～約１４アミノ酸、約２アミノ酸～約１２アミノ酸、約２アミノ酸～約１０アミノ酸、約２アミノ酸～約８アミノ酸、約２アミノ酸～約６アミノ酸、約２アミノ酸～約４アミノ酸、約４アミノ酸～約１００アミノ酸、約４アミノ酸～約９０アミノ酸、約４アミノ酸～約８０アミノ酸、約４アミノ酸～約７０アミノ酸、約４アミノ酸～約６０アミノ酸、約４アミノ酸～約５０アミノ酸、約４アミノ酸～約４５アミノ酸、約４アミノ酸～約４０アミノ酸、約４アミノ酸～約３５アミノ酸、約４アミノ酸～約３０アミノ酸、約４アミノ酸～約２５アミノ酸、約４アミノ酸～約２４アミノ酸、約４アミノ酸～約２２アミノ酸、約４アミノ酸～約２０アミノ酸、約４アミノ酸～約１８アミノ酸、約４アミノ酸～約１６アミノ酸、約４アミノ酸～約１４アミノ酸、約４アミノ酸～約１２アミノ酸、約４アミノ酸～約１０アミノ酸、約４アミノ酸～約８アミノ酸、約４アミノ酸～約６アミノ酸、約６アミノ酸～約１００アミノ酸、約６アミノ酸～約９０アミノ酸、約６アミノ酸～約８０アミノ酸、約６アミノ酸～約７０アミノ酸、約６アミノ酸～約６０アミノ酸、約６アミノ酸～約５０アミノ酸、約６アミノ酸～約４５アミノ酸、約６アミノ酸～約４０アミノ酸、約６アミノ酸～約３５アミノ酸、約６アミノ酸～約３０アミノ酸、約６アミノ酸～約２５アミノ酸、約６アミノ酸～約２４アミノ酸、約６アミノ酸～約２２アミノ酸、約６アミノ酸～約２０アミノ酸、約６アミノ酸～約１８アミノ酸、約６アミノ酸～約１６アミノ酸、約６アミノ酸～約１４アミノ酸、約６アミノ酸～約１２アミノ酸、約６アミノ酸～約１０アミノ酸、約６アミノ酸～約８アミノ酸、約８アミノ酸～約１００アミノ酸、約８アミノ酸～約９０アミノ酸、約８アミノ酸～約８０アミノ酸、約８アミノ酸～約７０アミノ酸、約８アミノ酸～約６０アミノ酸、約８アミノ酸～約５０アミノ酸、約８アミノ酸～約４５アミノ酸、約８アミノ酸～約４０アミノ酸、約８アミノ酸～約３５アミノ酸、約８アミノ酸～約３０アミノ酸、約８アミノ酸～約２５アミノ酸、約８アミノ酸～約２４アミノ酸、約８アミノ酸～約２２アミノ酸、約８アミノ酸～約２０アミノ酸、約８アミノ酸～約１８アミノ酸、約８アミノ酸～約１６アミノ酸、約８アミノ酸～約１４アミノ酸、約８アミノ酸～約１２アミノ酸、約８アミノ酸～約１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１０アミノ酸～約９０アミノ酸、約１０アミノ酸～約８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約７０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５アミノ酸、約１０アミノ酸～約４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２４アミノ酸、約１０アミノ酸～約２２アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１８アミノ酸、約１０アミノ酸～約１６アミノ酸、約１０アミノ酸～約１４アミノ酸、約１０アミノ酸～約１２アミノ酸、約１２アミノ酸～約１００アミノ酸、約１２アミノ酸～約９０アミノ酸、約１２アミノ酸～約８０アミノ酸、約１２アミノ酸～約７０アミノ酸、約１２アミノ酸～約６０アミノ酸、約１２アミノ酸～約５０アミノ酸、約１２アミノ酸～約４５アミノ酸、約１２アミノ酸～約４０アミノ酸、約１２アミノ酸～約３５アミノ酸、約１２アミノ酸～約３０アミノ酸、約１２アミノ酸～約２５アミノ酸、約１２アミノ酸～約２４アミノ酸、約１２アミノ酸～約２２アミノ酸、約１２アミノ酸～約２０アミノ酸、約１２アミノ酸～約１８アミノ酸、約１２アミノ酸～約１６アミノ酸、約１２アミノ酸～約１４アミノ酸、約１４アミノ酸～約１００アミノ酸、約１４アミノ酸～約９０アミノ酸、約１４アミノ酸～約８０アミノ酸、約１４アミノ酸～約７０アミノ酸、約１４アミノ酸～約６０アミノ酸、約１４アミノ酸～約５０アミノ酸、約１４アミノ酸～約４５アミノ酸、約１４アミノ酸～約４０アミノ酸、約１４アミノ酸～約３５アミノ酸、約１４アミノ酸～約３０アミノ酸、約１４アミノ酸～約２５アミノ酸、約１４アミノ酸～約２４アミノ酸、約１４アミノ酸～約２２アミノ酸、約１４アミノ酸～約２０アミノ酸、約１４アミノ酸～約１８アミノ酸、約１４アミノ酸～約１６アミノ酸、約１６アミノ酸～約１００アミノ酸、約１６アミノ酸～約９０アミノ酸、約１６アミノ酸～約８０アミノ酸、約１６アミノ酸～約７０アミノ酸、約１６アミノ酸～約６０アミノ酸、約１６アミノ酸～約５０アミノ酸、約１６アミノ酸～約４５アミノ酸、約１６アミノ酸～約４０アミノ酸、約１６アミノ酸～約３５アミノ酸、約１６アミノ酸～約３０アミノ酸、約１６アミノ酸～約２５アミノ酸、約１６アミノ酸～約２４アミノ酸、約１６アミノ酸～約２２アミノ酸、約１６アミノ酸～約２０アミノ酸、約１６アミノ酸～約１８アミノ酸、約１８アミノ酸～約１００アミノ酸、約１８アミノ酸～約９０アミノ酸、約１８アミノ酸～約８０アミノ酸、約１８アミノ酸～約７０アミノ酸、約１８アミノ酸～約６０アミノ酸、約１８アミノ酸～約５０アミノ酸、約１８アミノ酸～約４５アミノ酸、約１８アミノ酸～約４０アミノ酸、約１８アミノ酸～約３５アミノ酸、約１８アミノ酸～約３０アミノ酸、約１８アミノ酸～約２５アミノ酸、約１８アミノ酸～約２４アミノ酸、約１８アミノ酸～約２２アミノ酸、約１８アミノ酸～約２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２５アミノ酸、約２０アミノ酸～約２４アミノ酸、約２０アミノ酸～約２２アミノ酸、約２２アミノ酸～約１００アミノ酸、約２２アミノ酸～約９０アミノ酸、約２２アミノ酸～約８０アミノ酸、約２２アミノ酸～約７０アミノ酸、約２２アミノ酸～約６０アミノ酸、約２２アミノ酸～約５０アミノ酸、約２２アミノ酸～約４５アミノ酸、約２２アミノ酸～約４０アミノ酸、約２２アミノ酸～約３５アミノ酸、約２２アミノ酸～約３０アミノ酸、約２２アミノ酸～約２５アミノ酸、約２２アミノ酸～約２４アミノ酸、約２５アミノ酸～約１００アミノ酸、約２５アミノ酸～約９０アミノ酸、約２５アミノ酸～約８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約７０アミノ酸、約２５アミノ酸～約６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約４５アミノ酸、約２５アミノ酸～約４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約３５アミノ酸、約２５アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１００アミノ酸、約３０アミノ酸～約９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約７０アミノ酸、約３０アミノ酸～約６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約４５アミノ酸、約３０アミノ酸～約４０アミノ酸、約３０アミノ酸～約３５アミノ酸、約３５アミノ酸～約１００アミノ酸、約３５アミノ酸～約９０アミノ酸、約３５アミノ酸～約８０アミノ酸、約３５アミノ酸～約７０アミノ酸、約３５アミノ酸～約６０アミノ酸、約３５アミノ酸～約５０アミノ酸、約３５アミノ酸～約４５アミノ酸、約３５アミノ酸～約４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１００アミノ酸、約４０アミノ酸～約９０アミノ酸、約４０アミノ酸～約８０アミノ酸、約４０アミノ酸～約７０アミノ酸、約４０アミノ酸～約６０アミノ酸、約４０アミノ酸～約５０アミノ酸、約４０アミノ酸～約４５アミノ酸、約４５アミノ酸～約１００アミノ酸、約４５アミノ酸～約９０アミノ酸、約４５アミノ酸～約８０アミノ酸、約４５アミノ酸～約７０アミノ酸、約４５アミノ酸～約６０アミノ酸、約４５アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約５０アミノ酸～約９０アミノ酸、約５０アミノ酸～約８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１００アミノ酸、約６０アミノ酸～約９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１００アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１００アミノ酸、約８０アミノ酸～約９０アミノ酸、又は約９０アミノ酸～約１００アミノ酸の全長を有することができる。

【0075】

いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）残基が豊富である。いくつかの実施形態では、リンカーは、セリン（Ｓｅｒ又はＳ）残基が豊富である。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン及びセリン残基が豊富である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のグリシン－セリン残基対（ＧＳ）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個又はそれ以上のＧＳ対を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＳ）配列、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個以上のＧＧＧＳ配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＧＳ）配列、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０又はそれ以上のＧＧＧＧＳ配列を有する。いくつかの態様において、リンカーは、１つ以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（ＧＧＳＧ）配列、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個又はそれ以上のＧＧＳＧ配列を有する。

【0076】

いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３）を含み得るか、又はそれからなり得る。いくつかの態様において、リンカー配列は、ＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴ（配列番号１４）を含むか又はそれからなる核酸によってコードされ得る。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１５）を含むか、又はそれからなり得る。

【0077】

標的結合ドメイン
本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び／又は追加の１つ若しくは複数の標的結合ドメインは、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の若しくは当技術分野で公知の例示的な抗原結合ドメインのいずれか）、又はＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合する可溶性インターロイキン若しくはサイトカイン受容体（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性インターロイキン受容体若しくは可溶性サイトカイン受容体のいずれか）であり得る。

【0078】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び／又は１つ若しくは複数の追加の標的結合ドメインは、それぞれ独立して、約５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５アミノ酸～約９００アミノ酸、約５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５アミノ酸～約８００アミノ酸、約５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５アミノ酸～約７００アミノ酸、約５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５アミノ酸～約６００アミノ酸、約５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５アミノ酸～約５００アミノ酸、約５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約５アミノ酸～約４００アミノ酸、約５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約５アミノ酸～約３００アミノ酸、約５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約５アミノ酸～約２００アミノ酸、約５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約５アミノ酸～約１００アミノ酸、約５アミノ酸～約９５アミノ酸、約５アミノ酸～約９０アミノ酸、約５アミノ酸～約８５アミノ酸、約５アミノ酸～約８０アミノ酸、約５アミノ酸～約７５アミノ酸、約５アミノ酸～約７０アミノ酸、約５アミノ酸～約６５アミノ酸、約５アミノ酸～約６０アミノ酸、約５アミノ酸～約５５アミノ酸、約５アミノ酸～約５０アミノ酸、約５アミノ酸～約４５アミノ酸、約５アミノ酸～約４０アミノ酸、約５アミノ酸～約３５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約２０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１０アミノ酸～約９５アミノ酸、約１０アミノ酸～約９０アミノ酸、約１０アミノ酸～約８５アミノ酸、約１０アミノ酸～約８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約７５アミノ酸、約１０アミノ酸～約７０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６５アミノ酸、約１０アミノ酸～約６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５５アミノ酸、約１０アミノ酸～約５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５アミノ酸、約１０アミノ酸～約４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１００アミノ酸、約１５アミノ酸～約９５アミノ酸、約１５アミノ酸～約９０アミノ酸、約１５アミノ酸～約８５アミノ酸、約１５アミノ酸～約８０アミノ酸、約１５アミノ酸～約７５アミノ酸、約１５アミノ酸～約７０アミノ酸、約１５アミノ酸～約６５アミノ酸、約１５アミノ酸～約６０アミノ酸、約１５アミノ酸～約５５アミノ酸、約１５アミノ酸～約５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約４５アミノ酸、約１５アミノ酸～約４０アミノ酸、約１５アミノ酸～約３５アミノ酸、約１５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２５アミノ酸、約１５アミノ酸～約２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６５アミノ酸、約２０アミノ酸～約６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５５アミノ酸、約２０アミノ酸～約５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約９００アミノ酸、約２５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約８００アミノ酸、約２５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約７００アミノ酸、約２５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約６００アミノ酸、約２５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約５００アミノ酸、約２５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約４００アミノ酸、約２５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約３００アミノ酸、約２５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２００アミノ酸、約２５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１００アミノ酸、約２５アミノ酸～約９５アミノ酸、約２５アミノ酸～約９０アミノ酸、約２５アミノ酸～約８５アミノ酸、約２５アミノ酸～約８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約７５アミノ酸、約２５アミノ酸～約７０アミノ酸、約２５アミノ酸～約６５アミノ酸、約２５アミノ酸～約６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約５５アミノ酸、約２５アミノ酸～約５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約４５アミノ酸、約２５アミノ酸～約４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約３５アミノ酸、約２５アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約３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８５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１９５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２００アミノ酸、約２００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約９００アミノ酸、約２００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約８００アミノ酸、約２００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約７００アミノ酸、約２００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約６００アミノ酸、約２００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約９００アミノ酸、約３００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約８００アミノ酸、約３００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約７００アミノ酸、約３００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約６００アミノ酸、約３００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約４００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約９００アミノ酸、約４００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約８００アミノ酸、約４００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約７００アミノ酸、約４００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約６００アミノ酸、約４００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約９００アミノ酸、約５００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約８００アミノ酸、約５００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約７００アミノ酸、約５００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約６００アミノ酸、約５００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約６００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約９００アミノ酸、約６００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約８００アミノ酸、約６００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約７００アミノ酸、約６００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約７００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約９００アミノ酸、約７００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約８００アミノ酸、約７００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約８００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８００アミノ酸～約９００アミノ酸、約８００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約９００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約９５０アミノ酸、又は約９５０アミノ酸～約１０００アミノ酸のアミノ酸の総数を有し得る。

【0079】

本明細書に記載の任意の標的結合ドメインは、１×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１２Ｍ未満、又は１×１０^－１３Ｍ未満の解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）でＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合タンパク質構築物は、約１×１０^－３Ｍ～約１×１０^－５Ｍ、約１×１０^－４Ｍ～約１×１０^－６Ｍ、約１×１０^－５Ｍ～約１×１０^－７Ｍ、約１×１０^－６Ｍ～約１×１０^－８Ｍ、約１×１０^－７Ｍ～約１×１０^－９Ｍ、約１×１０^－８Ｍ～約１×１０^－１０Ｍ、又は約１×１０^－９Ｍ～約１×１０^－１１Ｍ（両端を含む）のＫ_Ｄで同定抗原に結合することができる。

【0080】

本明細書に記載のいずれかの標的結合ドメインは、ＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、ＴＧＦ－β）のリガンドに、約１ｐＭ～約３０ｎＭのＫ_Ｄで結合することができる。（例えば、約１ｐＭ～約２５ｎＭ、約１ｐＭ～約２０ｎＭ、約１ｐＭ～約１５ｎＭ、約１ｐＭ～約１０ｎＭ、約１ｐＭ～約５ｎＭ、約１ｐＭ～約２ｎＭ、約１ｐＭ～約１ｎＭ、約１ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１ｐＭ～約９００ｐＭ、約１ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１ｐＭ～約８００ｐＭ、約１ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１ｐＭ～約７００ｐＭ、約１ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１ｐＭ～約６００ｐＭ、約１ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１ｐＭ～約５００ｐＭ、約１ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１ｐＭ～約４００ｐＭ、約１ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１ｐＭ～約３００ｐＭ、約１ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１ｐＭ～約２００ｐＭ、約１ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１ｐＭ～約１００ｐＭ、約１ｐＭ～約９０ｐＭ、約１ｐＭ～約８０ｐＭ、約１ｐＭ～約７０ｐＭ、約１ｐＭ～約６０ｐＭ、約１ｐＭ～約５０ｐＭ、約１ｐＭ～約４０ｐＭ、約１ｐＭ～約３０ｐＭ、約１ｐＭ～約２０ｐＭ、約１ｐＭ～約１０ｐＭ、約１ｐＭ～約５ｐＭ、約１ｐＭ～約４ｐＭ、約１ｐＭ～約３ｐＭ、約１ｐＭ～約２ｐＭ、約２ｐＭ～約３０ｎＭ、約２ｐＭ～約２５ｎＭ、約２ｐＭ～約２０ｎＭ、約２ｐＭ～約１５ｎＭ、約２ｐＭ～約１０ｎＭ、約２ｐＭ～約５ｎＭ、約２ｐＭ～約２ｎＭ、約２ｐＭ～約１ｎＭ、約２ｐＭ～約９５０ｐＭ、約２ｐＭ～約９００ｐＭ、約２ｐＭ～約８５０ｐＭ、約２ｐＭ～約８００ｐＭ、約２ｐＭ～約７５０ｐＭ、約２ｐＭ～約７００ｐＭ、約２ｐＭ～約６５０ｐＭ、約２ｐＭ～約６００ｐＭ、約２ｐＭ～約５５０ｐＭ、約２ｐＭ～約５００ｐＭ、約２ｐＭ～約４５０ｐＭ、約２ｐＭ～約４００ｐＭ、約２ｐＭ～約３５０ｐＭ、約２ｐＭ～約３００ｐＭ、約２ｐＭ～約２５０ｐＭ、約２ｐＭ～約２００ｐＭ、約２ｐＭ～約１５０ｐＭ、約２ｐＭ～約１００ｐＭ、約２ｐＭ～約９０ｐＭ、約２ｐＭ～約８０ｐＭ、約２ｐＭ～約７０ｐＭ、約２ｐＭ～約６０ｐＭ、約２ｐＭ～約５０ｐＭ、約２ｐＭ～約４０ｐＭ、約２ｐＭ～約３０ｐＭ、約２ｐＭ～約２０ｐＭ、約２ｐＭ～約１０ｐＭ、約２ｐＭ～約５ｐＭ、約２ｐＭ～約４ｐＭ、約２ｐＭ～約３ｐＭ、約５ｐＭ～約３０ｎＭ、約５ｐＭ～約２５ｎＭ、約５ｐＭ～約２０ｎＭ、約５ｐＭ～約１５ｎＭ、約５ｐＭ～約１０ｎＭ、約５ｐＭ～約５ｎＭ、約５ｐＭ～約２ｎＭ、約５ｐＭ～約１ｎＭ、約５ｐＭ～約９５０ｐＭ、約５ｐＭ～約９００ｐＭ、約５ｐＭ～約８５０ｐＭ、約５ｐＭ～約８００ｐＭ、約５ｐＭ～約７５０ｐＭ、約５ｐＭ～約７００ｐＭ、約５ｐＭ～約６５０ｐＭ、約５ｐＭ～約６００ｐＭ、約５ｐＭ～約５５０ｐＭ、約５ｐＭ～約５００ｐＭ、約５ｐＭ～約４５０ｐＭ、約５ｐＭ～約４００ｐＭ、約５ｐＭ～約３５０ｐＭ、約５ｐＭ～約３００ｐＭ、約５ｐＭ～約２５０ｐＭ、約５ｐＭ～約２００ｐＭ、約５ｐＭ～約１５０ｐＭ、約５ｐＭ～約１００ｐＭ、約５ｐＭ～約９０ｐＭ、約５ｐＭ～約８０ｐＭ、約５ｐＭ～約７０ｐＭ、約５ｐＭ～約６０ｐＭ、約５ｐＭ～約５０ｐＭ、約５ｐＭ～約４０ｐＭ、約５ｐＭ～約３０ｐＭ、約５ｐＭ～約２０ｐＭ、約５ｐＭ～約１０ｐＭ、約１０ｐＭ～約３０ｎＭ、約１０ｐＭ～約２５ｎＭ、約１０ｐＭ～約２０ｎＭ、約１０ｐＭ～約１５ｎＭ、約１０ｐＭ～約１０ｎＭ、約１０ｐＭ～約５ｎＭ、約１０ｐＭ～約２ｎＭ、約１０ｐＭ～約１ｎＭ、約１０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約８００ｐＭ、約１０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約７００ｐＭ、約１０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約６００ｐＭ、約１０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１０ｐＭ～約９０ｐＭ、約１０ｐＭ～約８０ｐＭ、約１０ｐＭ～約７０ｐＭ、約１０ｐＭ～約６０ｐＭ、約１０ｐＭ～約５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約４０ｐＭ、約１０ｐＭ～約３０ｐＭ、約１０ｐＭ～約２０ｐＭ、約１５ｐＭ～約３０ｎＭ、約１５ｐＭ～約２５ｎＭ、約１５ｐＭ～約２０ｎＭ、約１５ｐＭ～約１５ｎＭ、約１５ｐＭ～約１０ｎＭ、約１５ｐＭ～約５ｎＭ、約１５ｐＭ～約２ｎＭ、約１５ｐＭ～約１ｎＭ、約１５ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約９００ｐＭ、約１５ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約８００ｐＭ、約１５ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約７００ｐＭ、約１５ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約６００ｐＭ、約１５ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約５００ｐＭ、約１５ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約４００ｐＭ、約１５ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約２００ｐＭ、約１５ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約１００ｐＭ、約１５ｐＭ～約９０ｐＭ、約１５ｐＭ～約８０ｐＭ、約１５ｐＭ～約７０ｐＭ、約１５ｐＭ～約６０ｐＭ、約１５ｐＭ～約５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約４０ｐＭ、約１５ｐＭ～約３０ｐＭ、約１５ｐＭ～約２０ｐＭ、約２０ｐＭ～約３０ｎＭ、約２０ｐＭ～約２５ｎＭ、約２０ｐＭ～約２０ｎＭ、約２０ｐＭ～約１５ｎＭ、約２０ｐＭ～約１０ｎＭ、約２０ｐＭ～約５ｎＭ、約２０ｐＭ～約２ｎＭ、約２０ｐＭ～約１ｎＭ、約２０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約９００ｐＭ、約２０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約８００ｐＭ、約２０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約７００ｐＭ、約２０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約６００ｐＭ、約２０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約５００ｐＭ、約２０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約４００ｐＭ、約２０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約３００ｐＭ、約２０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約２０ｐＭ、約２００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２０ｐＭ～約９０ｐＭ、約２０ｐＭ～約８０ｐＭ、約２０ｐＭ～約７０ｐＭ、約２０ｐＭ～約６０ｐＭ、約２０ｐＭ～約５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約４０ｐＭ、約２０ｐＭ～約３０ｐＭ、約３０ｐＭ～約３０ｎＭ、約３０ｐＭ～約２５ｎＭ、約３０ｐＭ～約３０ｎＭ、約３０ｐＭ～約１５ｎＭ、約３０ｐＭ～約１０ｎＭ、約３０ｐＭ～約５ｎＭ、約３０ｐＭ～約２ｎＭ、約３０ｐＭ～約１ｎＭ、約３０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約９００ｐＭ、約３０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約８００ｐＭ、約３０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約７００ｐＭ、約３０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約６００ｐＭ、約３０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約５００ｐＭ、約３０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約４００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約３０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約１００ｐＭ、約３０ｐＭ～約９０ｐＭ、約３０ｐＭ～約８０ｐＭ、約３０ｐＭ～約７０ｐＭ、約３０ｐＭ～約６０ｐＭ、約３０ｐＭ～約５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約４０ｐＭ、約４０ｐＭ～約３０ｎＭ、約４０ｐＭ～約２５ｎＭ、約４０ｐＭ～約３０ｎＭ、約４０ｐＭ～約１５ｎＭ、約４０ｐＭ～約１０ｎＭ、約４０ｐＭ～約５ｎＭ、約４０ｐＭ～約２ｎＭ、約４０ｐＭ～約１ｎＭ、約４０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約９００ｐＭ、約４０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約８００ｐＭ、約４０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約７００ｐＭ、約４０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約６００ｐＭ、約４０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約５００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約４０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約２００ｐＭ、約４０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約１００ｐＭ、約４０ｐＭ～約９０ｐＭ、約４０ｐＭ～約８０ｐＭ、約４０ｐＭ～約７０ｐＭ、約４０ｐＭ～約６０ｐＭ、約４０ｐＭ～約５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約５０ｐＭ～約２５ｎＭ、約５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約５０ｐＭ～約１５ｎＭ、約５０ｐＭ～約１０ｎＭ、約５０ｐＭ～約５ｎＭ、約５０ｐＭ～約２ｎＭ、約５０ｐＭ～約１ｎＭ、約５０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約９００ｐＭ、約５０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約５０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約７００ｐＭ、約５０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約５０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約５０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約５０ｐＭ～約９０ｐＭ、約５０ｐＭ～約８０ｐＭ、約５０ｐＭ～約７０ｐＭ、約５０ｐＭ～約６０ｐＭ、約６０ｐＭ～約３０ｎＭ、約６０ｐＭ～約２５ｎＭ、約６０ｐＭ～約３０ｎＭ、約６０ｐＭ～約１５ｎＭ、約６０ｐＭ～約１０ｎＭ、約６０ｐＭ～約５ｎＭ、約６０ｐＭ～約２ｎＭ、約６０ｐＭ～約１ｎＭ、約６０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約９００ｐＭ、約６０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約８００ｐＭ、約６０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約７００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約６０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約４００ｐＭ、約６０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約３００ｐＭ、約６０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約２００ｐＭ、約６０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約１００ｐＭ、約６０ｐＭ～約９０ｐＭ、約６０ｐＭ～約８０ｐＭ、約６０ｐＭ～約７０ｐＭ、約７０ｐＭ～約３０ｎＭ、約７０ｐＭ～約２５ｎＭ、約７０ｐＭ～約３０ｎＭ、約７０ｐＭ～約１５ｎＭ、約７０ｐＭ～約１０ｎＭ、約７０ｐＭ～約５ｎＭ、約７０ｐＭ～約２ｎＭ、約７０ｐＭ～約１ｎＭ、約７０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約９００ｐＭ、約７０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約８００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約７０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約５００ｐＭ、約７０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約４００ｐＭ、約７０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約３００ｐＭ、約７０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約２００ｐＭ、約７０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約１００ｐＭ、約７０ｐＭ～約９０ｐＭ、約７０ｐＭ～約８０ｐＭ、約８０ｐＭ～約３０ｎＭ、約８０ｐＭ～約２５ｎＭ、約８０ｐＭ～約３０ｎＭ、約８０ｐＭ～約１５ｎＭ、約８０ｐＭ～約１０ｎＭ、約８０ｐＭ～約５ｎＭ、約８０ｐＭ～約２ｎＭ、約８０ｐＭ～約１ｎＭ、約８０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約９００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約８０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約６００ｐＭ、約８０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約５００ｐＭ、約８０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約４００ｐＭ、約８０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約３００ｐＭ、約８０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約２００ｐＭ、約８０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約１００ｐＭ、約８０ｐＭ～約９０ｐＭ、約９０ｐＭ～約３０ｎＭ、約９０ｐＭ～約２５ｎＭ、約９０ｐＭ～約３０ｎＭ、約９０ｐＭ～約１５ｎＭ、約９０ｐＭ～約１０ｎＭ、約９０ｐＭ～約５ｎＭ、約９０ｐＭ～約２ｎＭ、約９０ｐＭ～約１ｎＭ、約９０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約９０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約７００ｐＭ、約９０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約６００ｐＭ、約９０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約５００ｐＭ、約９０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約４００ｐＭ、約９０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約３
００ｐＭ、約９０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約２００ｐＭ、約９０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１００ｐＭ～約３０ｎＭ、約１００ｐＭ～約２５ｎＭ、約１００ｐＭ～約３０ｎＭ、約１００ｐＭ～約１５ｎＭ、約１００ｐＭ～約１０ｎＭ、約１００ｐＭ～約５ｎＭ、約１００ｐＭ～約２ｎＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約１００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約８００ｐＭ、約１００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約７００ｐＭ、約１００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約６００ｐＭ、約１００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約５００ｐＭ、約１００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約４００ｐＭ、約１００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約３００ｐＭ、約１００ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約２００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約１５０ｐＭ～約２５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１０ｎＭ、約１５０ｐＭ～約５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約２ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１ｎＭ、約１５０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約７００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約２００ｐＭ～約３０ｎＭ、約２００ｐＭ～約２５ｎＭ、約２００ｐＭ～約３０ｎＭ、約２００ｐＭ～約１５ｎＭ、約２００ｐＭ～約１０ｎＭ、約２００ｐＭ～約５ｎＭ、約２００ｐＭ～約２ｎＭ、約２００ｐＭ～約１ｎＭ、約２００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約９００ｐＭ、約２００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約８００ｐＭ、約２００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約７００ｐＭ、約２００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約６００ｐＭ、約２００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約５００ｐＭ、約２００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約４００ｐＭ、約２００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約３００ｐＭ、約２００ｐＭ～約２５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約３０ｎＭ、約３００ｐＭ～約２５ｎＭ、約３００ｐＭ～約３０ｎＭ、約３００ｐＭ～約１５ｎＭ、約３００ｐＭ～約１０ｎＭ、約３００ｐＭ～約５ｎＭ、約３００ｐＭ～約２ｎＭ、約３００ｐＭ～約１ｎＭ、約３００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約９００ｐＭ、約３００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約８００ｐＭ、約３００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約７００ｐＭ、約３００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約６００ｐＭ、約３００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約５００ｐＭ、約３００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約４００ｐＭ、約３００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約３０ｎＭ、約４００ｐＭ～約２５ｎＭ、約４００ｐＭ～約３０ｎＭ、約４００ｐＭ～約１５ｎＭ、約４００ｐＭ～約１０ｎＭ、約４００ｐＭ～約５ｎＭ、約４００ｐＭ～約２ｎＭ、約４００ｐＭ～約１ｎＭ、約４００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約９００ｐＭ、約４００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約８００ｐＭ、約４００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約７００ｐＭ、約４００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約６００ｐＭ、約４００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約５００ｐＭ、約５００ｐＭ～約３０ｎＭ、約５００ｐＭ～約２５ｎＭ、約５００ｐＭ～約３０ｎＭ、約５００ｐＭ～約１５ｎＭ、約５００ｐＭ～約１０ｎＭ、約５００ｐＭ～約５ｎＭ、約５００ｐＭ～約２ｎＭ、約５００ｐＭ～約１ｎＭ、約５００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約９００ｐＭ、約５００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約８００ｐＭ、約５００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約７００ｐＭ、約５００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約６００ｐＭ、約５００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約３０ｎＭ、約６００ｐＭ～約２５ｎＭ、約６００ｐＭ～約３０ｎＭ、約６００ｐＭ～約１５ｎＭ、約６００ｐＭ～約１０ｎＭ、約６００ｐＭ～約５ｎＭ、約６００ｐＭ～約２ｎＭ、約６００ｐＭ～約１ｎＭ、約６００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約９００ｐＭ、約６００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約８００ｐＭ、約６００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約７００ｐＭ、約６００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約７００ｐＭ～約３０ｎＭ、約７００ｐＭ～約２５ｎＭ、約７００ｐＭ～約３０ｎＭ、約７００ｐＭ～約１５ｎＭ、約７００ｐＭ～約１０ｎＭ、約７００ｐＭ～約５ｎＭ、約７００ｐＭ～約２ｎＭ、約７００ｐＭ～約１ｎＭ、約７００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約７００ｐＭ～約９００ｐＭ、約７００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約７００ｐＭ～約８００ｐＭ、約７００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約８００ｐＭ～約３０ｎＭ、約８００ｐＭ～約２５ｎＭ、約８００ｐＭ～約３０ｎＭ、約８００ｐＭ～約１５ｎＭ、約８００ｐＭ～約１０ｎＭ、約８００ｐＭ～約５ｎＭ、約８００ｐＭ～約２ｎＭ、約８００ｐＭ～約１ｎＭ、約８００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約８００ｐＭ～約９００ｐＭ、約８００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約９００ｐＭ～約３０ｎＭ、約９００ｐＭ～約２５ｎＭ、約９００ｐＭ～約３０ｎＭ、約９００ｐＭ～約１５ｎＭ、約９００ｐＭ～約１０ｎＭ、約９００ｐＭ～約５ｎＭ、約９００ｐＭ～約２ｎＭ、約９００ｐＭ～約１ｎＭ、約９００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１ｎＭ～約３０ｎＭ、約１ｎＭ～約２５ｎＭ、約１ｎＭ～約２０ｎＭ、約１ｎＭ～約１５ｎＭ、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約２ｎＭ～約３０ｎＭ、約２ｎＭ～約２５ｎＭ、約２ｎＭ～約２０ｎＭ、約２ｎＭ～約１５ｎＭ、約２ｎＭ～約１０ｎＭ、約２ｎＭ～約５ｎＭ、約４ｎＭ～約３０ｎＭ、約４ｎＭ～約２５ｎＭ、約４ｎＭ～約２０ｎＭ、約４ｎＭ～約１５ｎＭ、約４ｎＭ～約１０ｎＭ、約４ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約３０ｎＭ、約５ｎＭ～約２５ｎＭ、約５ｎＭ～約２０ｎＭ、約５ｎＭ～約１５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約３０ｎＭ、約１０ｎＭ～約２５ｎＭ、約１０ｎＭ～約２０ｎＭ、約１０ｎＭ～約１５ｎＭ、約１５ｎＭ～約３０ｎＭ、約１５ｎＭ～約２５ｎＭ、約１５ｎＭ～約２０ｎＭ、約２０ｎＭ～約３０ｎＭ、及び約２０ｎＭ～約２５ｎＭ）。

【0081】

本明細書に記載の標的結合ドメインのいずれも、約１ｎＭ～約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ～約９ｎＭ、約１ｎＭ～約８ｎＭ、約１ｎＭ～約７ｎＭ、約１ｎＭ～約６ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約１ｎＭ～約４ｎＭ、約１ｎＭ～約３ｎＭ、約１ｎＭ～約２ｎＭ、約２ｎＭ～約１０ｎＭ、約２ｎＭ～約９ｎＭ、約２ｎＭ～約８ｎＭ、約２ｎＭ～約７ｎＭ、約２ｎＭ～約６ｎＭ、約２ｎＭ～約５ｎＭ、約２ｎＭ～約４ｎＭ、約２ｎＭ～約３ｎＭ、約３ｎＭ～約１０ｎＭ、約３ｎＭ～約９ｎＭ、約３ｎＭ～約８ｎＭ、約３ｎＭ～約７ｎＭ、約３ｎＭ～約６ｎＭ、約３ｎＭ～約５ｎＭ、約３ｎＭ～約４ｎＭ、約４ｎＭ～約１０ｎＭ、約４ｎＭ～約９ｎＭ、約４ｎＭ～約８ｎＭ、約４ｎＭ～約７ｎＭ、約４ｎＭ～約６ｎＭ、約４ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約５ｎＭ～約９ｎＭ、約５ｎＭ～約８ｎＭ、約５ｎＭ～約７ｎＭ、約５ｎＭ～約６ｎＭ、約６ｎＭ～約１０ｎＭ、約６ｎＭ～約９ｎＭ、約６ｎＭ～約８ｎＭ、約６ｎＭ～約７ｎＭ、約７ｎＭ～約１０ｎＭ、約７ｎＭ～約９ｎＭ、約７ｎＭ～約８ｎＭ、約８ｎＭ～約１０ｎＭ、約８ｎＭ～約９ｎＭ、及び約９ｎＭ～約１０ｎＭ）のＫ_Ｄを有するＴＧＦβＲＩＩのリガンドに結合し得る。

【0082】

当技術分野で公知の様々な異なる方法を使用して、本明細書に記載の抗原結合タンパク質構築物のいずれかのＫ_Ｄ値を決定することができる（例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、フィルター結合アッセイ、表面プラズモン共鳴、及び生体分子結合動態アッセイなど）。

【0083】

抗原結合ドメイン
本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、同じ抗原に特異的に結合する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、同じエピトープに特異的に結合する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。

【0084】

本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、異なる抗原に特異的に結合する。

【0085】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインの一方又は両方は、抗原結合ドメインである。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、それぞれ抗原結合ドメインである。

【0086】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ又はＶＮＡＲドメイン）を含むか、又はそれである。

【0087】

一部の例では、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメインのいずれか）は、ＴＧＦ－βＲＩＩのリガンドに特異的に結合することができる（例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ ２０２１／００６１８９７、ＵＳ ２０２０／０３９９３５８、ＵＳ ２０２０／０３９２２２１、ＵＳ ２０１９／０３１５８５０、及びＵＳ ２０１９／０１７７４０６に記載のＴＧＦ－βに特異的に結合することができる抗原結合ドメインを参照されたい）。

【0088】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかに存在する抗原結合ドメインは、それぞれ独立して、ＶＨＨドメイン、ＶＮＡＲドメイン、及びｓｃＦｖからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗原結合性ドメインのいずれかは、ＢｉＴｅ、（ｓｃＦｖ）_２、ナノボディ、ナノボディ－ＨＳＡ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ（Ｄｉａｂｏｄｙ）、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、ＨＳＡｂｏｄｙ、ｓｃダイアボディ－ＨＡＳ、又はタンデム－ｓｃＦｖである。多重鎖キメラポリペプチドのいずれかにおいて使用することができる抗原結合ドメインの更なる例は、当技術分野において公知である。

【0089】

ＶＨＨドメインは、ラクダ科動物において見出すことができる単一単量体可変抗体ドメインである。ＶＮＡＲドメインは、軟骨魚類において見出すことができる単一単量体可変抗体ドメインである。ＶＨＨドメイン及びＶ_ＮＡＲドメインの非限定的な態様は、例えば、Ｃｒｏｍｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５：２５４３－２５５７，２０１６；Ｄｅ Ｇｅｎｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１８７－１９８，２００６；Ｄｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：２６３－２７０，２０１４；Ｋｉｊａｎｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ １０：１６１－１７４，２０１５；Ｋｏｖａｌｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：１５２７－１５３９，２０１４；Ｋｒａｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．３８：２１－２８，２０１６；Ｍｕｊｉｃ－Ｄｅｌｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３５：２４７－２５５，２０１４；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７－３０２，２００１；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０－２３５，２００１；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８２：７７５－７９７，２０１３；Ｒａｈｂａｒｉｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．４０：２９９－３３８，２０１１；Ｖａｎ Ａｕｄｅｎｈｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ８：４０－４８，２０１６；Ｖａｎ Ｂｏｃｋｓｔａｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ １０：１２１２－１２２４，２００９；Ｖｉｎｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９１１：１５－２６，２０１２、ａｎｄ Ｗｅｓｏｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８：１５７－１７４，２００９に記載されている。

【0090】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチド中の抗原結合ドメインのそれぞれは、両方ともＶＨＨドメインであるか、又は少なくとも１つの抗原結合ドメインがＶＨＨドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチド中の抗原結合ドメインのそれぞれは、両方ともＶＮＡＲドメインであるか、又は少なくとも１つの抗原結合ドメインがＶＮＡＲドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチド中の抗原結合ドメインのそれぞれは、両方ともｓｃＦｖドメインであるか、又は少なくとも１つの抗原結合ドメインがｓｃＦｖドメインである。

【0091】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチド中に存在するポリペプチドのうちの２つ又はそれを超えるポリペプチドは、本明細書中に記載される抗原結合ドメインのいずれか、例えば、抗体の抗原結合断片（例えば、本明細書中に記載される抗体の抗原結合断片のいずれか）、ＶＨＨ－ｓｃＡｂ、ＶＨＨ－Ｆａｂ、Ｄｕａｌ ｓｃＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、ｃｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ツーインワン）、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール共通軽鎖、ノブインホールアセンブリ、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ－ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、ＤＶＩ－ＩｇＧ、ダイアボディ－ＣＨ ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２－ｓｃＦｖ_２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、４価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、イントラボディ、ドック及びロック、ｌｍｍＴＡＣ、ＩｇＧ－ＩｇＧコンジュゲート、Ｃｏｖ－Ｘ－Ｂｏｄｙ及びｓｃＦｖ １－ＰＥＧ－ｓｃＦｖ_２を形成するために集合することができる（例えば、非共有結合的に集合する）。例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７：９５－１０６，２０１５を参照されたく、これらの要素の説明のために、これらと共に、その全体が組み込まれる。抗体の抗原結合断片の非限定的な例としては、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片及びＦａｂ’断片が挙げられる。抗体の抗原結合断片の更なる例は、ＩｇＧの抗原結合断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の抗原結合断片）（例えば、ヒト又はヒト化ＩｇＧの抗原結合断片、例えば、ヒト又はヒト化ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）；ＩｇＡの抗原結合性断片（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２の抗原結合性断片）（例えば、ヒト又はヒト化ＩｇＡの抗原結合性断片、例えば、ヒト又はヒト化ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）；ＩｇＤの抗原結合断片（例えば、ヒト又はヒト化ＩｇＤの抗原結合断片）；ＩｇＥの抗原結合性断片（例えば、ヒトＩｇＥ又はヒト化ＩｇＥの抗原結合性断片）；又はＩｇＭの抗原結合断片（例えば、ヒト又はヒト化ＩｇＭの抗原結合断片）である。

【0092】

「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合二量体を含む。

【0093】

「Ｆａｂ」断片は、Ｆｖ断片の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）を含む。

【0094】

「Ｆ（ａｂ’）_２」断片は、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ断片を含む。

【0095】

「二重可変ドメイン免疫グロブリン」又は「ＤＶＤ－Ｉｇ」は、例えば、ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８９９：１４５－１５６，２０１２；Ｊａｋｏｂ ｅｔ ａｌ．，ＭＡＢｓ ５：３５８－３６３，２０１３；及び米国特許第７６１２１８１号；同第８，２５８，２６８号；同第８，５８６，７１４号；同第８，７１６，４５０号；同第８，７２２，８５５号；同第８７３５５４６号；及び同第８８２２６４５号に記載されている多価及び多重特異性結合タンパク質を指し、これらはそれぞれ、その全体が参照により組み込まれる。

【0096】

ＤＡＲＴは、例えばＧａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １３：７９９－８０１，２０１４に記載されている。

【0097】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗原結合ドメインのいずれかは、タンパク質、炭水化物、脂質、及びこれらの組合せからなる群から選択される抗原に結合することができる。

【0098】

抗原結合ドメインの更なる例及び態様は、当技術分野において公知である。

【0099】

可溶性受容体
本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインの一方又は両方は、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体又はリガンド受容体である。いくつかの実施形態では、可溶性受容体は、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）である（Ｙｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９４（９）：１１４０－１１５１，２０１６に記載されているものを参照されたい）、又は可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ（例えば、Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｃｅｎｔａ ５７：３２０，２０１７に記載されているものを参照されたい）。

【0100】

可溶性インターロイキン受容体及び可溶性サイトカイン受容体の更なる例は、当該分野で公知である。

【0101】

追加の標的結合ドメイン
多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）を更に含み、１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの例示的な第１のドメインのいずれか）との間に位置する。いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と、１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載される例示的な標的結合ドメインのいずれか）との間のリンカー配列（例えば、本明細書に記載される例示的なリンカー配列のいずれか）、及び／又は１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載されるか又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）と、一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な親和性ドメインの対の本明細書に記載される例示的な第１のドメインのいずれか）との間のリンカー配列（例えば、本明細書に記載されるか、当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含み得る。

【0102】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端に、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の追加の標的結合ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチド中の一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載の親和性ドメインの例示的な対のいずれかの本明細書に記載の例示的な第１のドメインのいずれか）に直接隣接する。いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）と、一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの本明細書に記載される例示的な第１のドメインのいずれか）との間に、リンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチド中の第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）に直接隣接する。いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）と第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。

【0103】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメインの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチドのＮ及び／又はＣ末端に配置され、１つ以上の追加の標的結合ドメインの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチド中の可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載の親和性ドメインの例示的な対のいずれかの例示的な第１のドメインのいずれか）との間に位置する。いくつかの実施形態では、Ｎ末端に配置された１つ以上の追加の標的結合ドメインの少なくとも１つの追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチド中の第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）又は一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの本明細書に記載される例示的な第１のドメインのいずれか）に直接隣接する。いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の少なくとも１つの追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）と第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）又は一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの本明細書に記載される例示的な第１のドメインのいずれか）との間に配置されたリンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知のリンカー配列のいずれか）を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端に配置された１つ以上の追加の標的結合ドメインの少なくとも１つの追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、第１のキメラポリペプチド中の第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）又は一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの例示的な第１のドメインのいずれか）に直接隣接する。いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の少なくとも１つの追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）と第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）又は一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの本明細書に記載される例示的な第１のドメインのいずれか）との間に配置されたリンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知のリンカー配列のいずれか）を更に含む。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載される第１のドメインのいずれか又は本明細書に記載される例示的な親和性ドメインの対のいずれか）との間に位置する１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）は、可溶性組織因子ドメイン、及び／又は一対の親和性ドメインの第１のドメインに直接隣接する。いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、（ｉ）可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と一対の親和性ドメインの第１のドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な親和性ドメインの対のいずれかの例示的な第１のドメインのいずれか）との間に位置する、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれか）と１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つ（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメイン）との間、及び／又は（ｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメインと、可溶性組織因子ドメインと一対の親和性ドメインの第１のドメインとの間に位置する、一対の親和性ドメインの第１のドメインと１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの少なくとも１つとの間、に配置されたリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。

【0104】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、第２のキメラポリペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端に、１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又は１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な標的結合ドメインのいずれか）を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）のうちの少なくとも１つは、第２のキメラポリペプチド中の一対の親和性ドメインの第２のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの例示的な第２のドメインのいずれか）に直接隣接する。いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、第２のキメラポリペプチド中の１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）のうちの少なくとも１つと、一対の親和性ドメインの第２のドメイン（例えば、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかの本明細書に記載される第２のドメインのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）のうちの少なくとも１つは、第２のキメラポリペプチド中の第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の標的結合ドメインのいずれか）に直接隣接する。いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、第２のキメラポリペプチド中の１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）のうちの少なくとも１つと第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な標的結合ドメインのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的なリンカー配列のいずれか）を更に含む。

【0105】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０以上）は、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０以上）は、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０以上）は、同じアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインはそれぞれ、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインはそれぞれ、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインはそれぞれ、同じアミノ酸配列を含む。

【0106】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインは、異なる抗原に特異的に結合する。本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０以上）は、抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、及び１つ以上の追加の標的結合ドメインはそれぞれ、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体）である。

【0107】

親和性ドメインの対
いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、１）一対の親和性ドメインの第１のドメインを含む第１のキメラポリペプチド、及び２）一対の親和性ドメインの第２のドメインを含む第２のキメラポリペプチドを含み、その結果、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドは、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合する。いくつかの態様において、親和性ドメインの対は、ヒトＩＬ－１５受容体（ＩＬ１５Ｒα）のアルファ鎖由来のスシドメイン、及び可溶性ＩＬ－１５である。短いコンセンサス反復又は１型糖タンパク質モチーフとしても知られるスシドメインは、タンパク質－タンパク質相互作用における一般的なモチーフである。スシドメインは、補体成分Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｈ因子、及びＣ２ｍ、並びに非免疫学的分子ＸＩＩＩ因子及びβ２－糖タンパク質を含む多くのタンパク質結合分子上で同定されている。典型的なスシドメインは、約６０アミノ酸残基を有し、４つのシステインを含有する（Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎ，Ｐａｃ．Ｓｙｍｐ Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔ．２０００：１５５－６７）。第１のシステインは第３のシステインとジスルフィド結合を形成することができ、第２のシステインは第４のシステインとジスルフィド架橋を形成することができる。親和性ドメインの対の一方のメンバーが可溶性ＩＬ－１５であるいくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ１５は、Ｄ８Ｎ又はＤ８Ａアミノ酸置換を有する。親和性ドメインの対の一方のメンバーがヒトＩＬ－１５受容体（ＩＬ１５Ｒα）のアルファ鎖であるいくつかの実施形態では、ヒトＩＬ１５Ｒαは成熟全長ＩＬ１５Ｒαである。いくつかの実施形態では、親和性ドメインの対は、バルナーゼ及びバーンスターである。いくつかの実施形態では、親和性ドメインの対は、ＰＫＡ及びＡＫＡＰである。いくつかの実施形態では、親和性ドメインの対は、変異ＲＮａｓｅ Ｉ断片に基づくアダプター／ドッキングタグモジュール（Ｒｏｓｓｉ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１０３：６８４１－６８４６，２００６；Ｓｈａｒｋｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：５２８２－５２９０，２００８；Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ．３３：４７４－４８１，２０１２）又はタンパク質シンタキシン、シナプトタグミン、シナプトブレビン、及びＳＮＡＰ２５の相互作用に基づくＳＮＡＲＥモジュール（Ｄｅｙｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４８６－１４９２，２００３）である。

【0108】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチドは、一対の親和性ドメインの第１のドメインを含み、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチドは、一対の親和性ドメインの第２のドメインを含み、ここで、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び一対の親和性ドメインの第２のドメインは、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）が１×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１２Ｍ未満、又は１×１０^－１３Ｍ未満で互いにに結合する。いくつかの実施形態では、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び一対の親和性ドメインの第２のドメインは、Ｋ_Ｄが、約１ｘ１０^－４Ｍ～約１ｘ１０^－６Ｍ、約１ｘ１０^－５Ｍ～約１ｘ１０^－７Ｍ、約１ｘ１０^－６Ｍ～約１ｘ１０^－８Ｍ、約１ｘ１０^－７Ｍ～約１ｘ１０^－９Ｍ、約１ｘ１０^－８Ｍ～約１ｘ１０^－１０Ｍ、約１ｘ１０^－９Ｍ～約１ｘ１０^－１１Ｍ、約１ｘ１０^－１０Ｍ～約１ｘ１０^－１２Ｍ、約１ｘ１０^－１１Ｍ～約１ｘ１０^－１３Ｍ、約１ｘ１０^－４Ｍ～約１ｘ１０^－５Ｍ、約１ｘ１０^－５Ｍ～約１ｘ１０^－６Ｍ、約１ｘ１０^－６Ｍ～約１ｘ１０^－７Ｍ、約１ｘ１０^－７Ｍ～約１ｘ１０^－８Ｍ、約１ｘ１０^－８Ｍ～約１ｘ１０^－９Ｍ、約１ｘ１０^－９Ｍ～約１ｘ１０^－１０Ｍ、約１ｘ１０^－１０Ｍ～約１ｘ１０^－１１Ｍ、約１ｘ１０^－１１Ｍ～約１ｘ１０^－１２Ｍ、又は約１ｘ１０^－１２Ｍ～約１ｘ１０^－１３Ｍ（両端を含む）で互いに結合する。当技術分野で公知の様々な異なる方法のいずれかを使用して、一対の親和性ドメインの第１のドメインと一対の親和性ドメインの第２のドメインとの結合のＫ_Ｄ値を決定することができる（例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、フィルター結合アッセイ、表面プラズモン共鳴及び生体分子結合速度論アッセイなど）。

【0109】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチドは、一対の親和性ドメインの第１のドメインを含み、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチドは、一対の親和性ドメインの第２のドメインを含み、一対の親和性ドメインの第１のドメイン、一対の親和性ドメインの第２のドメイン、又はその両方は、約１０～１００アミノ酸長である。例えば、一対の親和性ドメインの第１のドメイン、一対の親和性ドメインの第２のドメイン、又はその両方は、約１０～１００アミノ酸長、約１５～１００アミノ酸長、約２０～１００アミノ酸長、約２５～１００アミノ酸長、約３０～１００アミノ酸長、約３５～１００アミノ酸長、約４０～１００アミノ酸長、約４５～１００アミノ酸長、約５０～１００アミノ酸長、約５５～１００アミノ酸長、約６０～１００アミノ酸長、約６５～１００アミノ酸長、約７０～１００アミノ酸長、約７５～１００アミノ酸長、約８０～１００アミノ酸長、約８５～１００アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約９５～１００アミノ酸長、約１０～９５アミノ酸長、約１０～９０アミノ酸長、約１０～８５アミノ酸長、約１０～８０アミノ酸長、約１０～７５アミノ酸長、約１０～７０アミノ酸長、約１０～６５アミノ酸長、約１０～６０アミノ酸長、約１０～５５アミノ酸長、約１０～５０アミノ酸長、約１０～４５アミノ酸長、約１０～４０アミノ酸長、約１０～３５アミノ酸長、約１０～３０アミノ酸長、約１０～２５アミノ酸長、約１０～２０アミノ酸長、約１０～１５アミノ酸長、約２０～３０アミノ酸長、約３０～４０アミノ酸長、約４０～５０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、約６０～７０アミノ酸長、約７０～８０アミノ酸長、約８０～９０アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約２０～９０アミノ酸長、約３０～８０アミノ酸長、約４０～７０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、又はその間の任意の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、一対の親和性ドメインの第１のドメイン、一対の親和性ドメインの第２のドメイン、又はその両方は、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００アミノ酸長である。

【0110】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される一対の親和性ドメインの第１及び／又は第２のドメインのいずれも、一対の親和性ドメインの第１及び／又は第２のドメインの機能がインタクトなままである限り、そのＮ末端及び／又はＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上のアミノ酸）を含むことができる。例えば、ヒトＩＬ－１５受容体（ＩＬ１５Ｒα）のアルファ鎖由来のスシドメインは、可溶性ＩＬ－１５に結合する能力を依然として保持しながら、Ｎ末端及び／又はＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含むことができる。加えて、又は代替的に、可溶性ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５受容体（ＩＬ１５Ｒα）のα鎖由来のスシドメインに結合する能力を依然として保持しながら、Ｎ末端及び／又はＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含み得る。

【0111】

ＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ１５Ｒα）のアルファ鎖由来のスシドメインの非限定的な例は、ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号１６）と少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一である配列を含み得る。いくつかの態様において、ＩＬ１５Ｒαのアルファ鎖由来のスシドメインは、ＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号１７）を含むヌクレオチド配列によってコードされ得る。

【0112】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１５は、ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１８）と少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１５は、ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号１９）の配列を含む核酸によってコードされ得る。

【0113】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１５は、Ｄ８Ｎアミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｄ８Ｎ変異体を有する可溶性ＩＬ－１５（ＩＬ１５Ｄ８Ｎ）は、ＮＷＶＮＶＩＳＮＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号７０）と少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｄ８Ｎ変異体を有する可溶性ＩＬ－１５（ＩＬ１５Ｄ８Ｎ）は、ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＡＣＴＴＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴ（配列番号７１）の配列を含む核酸によってコードされ得る。

【0114】

シグナル配列
いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端にシグナル配列を含む第１のキメラポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端にシグナル配列を含む第２のキメラポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド及び多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチドの両方が、シグナル配列を含む。当業者によって理解されるように、シグナル配列は、タンパク質を分泌経路に方向付ける、多数の内因的に産生されたタンパク質のＮ末端に存在するアミノ酸配列である（例えば、タンパク質は、特定の細胞内小器官に存在するように、細胞膜に存在するように、又は細胞から分泌されるように方向付けられる）。シグナル配列は不均一であり、それらの一次アミノ酸配列が大きく異なる。しかしながら、シグナル配列は、典型的には１６～３０アミノ酸長であり、親水性の、通常は正に荷電したＮ末端領域、中央疎水性ドメイン、及びシグナルペプチダーゼの切断部位を含むＣ末端領域を含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、アミノ酸配列ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ（配列番号２０）を有するシグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、配列ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ（配列番号２１）、ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＣＡＣＡＴＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＡＧＣ（配列番号２２）、又はＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ（配列番号２３）によってコードされるシグナル配列を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、アミノ酸ＭＫＣＬＬＹＬＡＦＬＦＬＧＶＮＣ（配列番号２４）を有する単一配列を含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、アミノ酸配列ＭＧＱＩＶＴＭＦＥＡＬＰＨＩＩＤＥＶＩＮＩＶＩＩＶＬＩＩＩＴＳＩＫＡＶＹＮＦＡＴＣＧＩＬＡＬＶＳＦＬＦＬＡＧＲＳＣＧ（配列番号２５）を有する単一配列を含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、アミノ酸配列ＭＰＮＨＱＳＧＳＰＴＧＳＳＤＬＬＬＳＧＫＫＱＲＰＨＬＡＬＲＲＫＲＲＲＥＭＲＫＩＮＲＫＶＲＲＭＮＬＡＰＩＫＥＫＴＡＷＱＨＬＱＡＬＩＳＥＡＥＥＶＬＫＴＳＱＴＰＱＮＳＬＴＬＦＬＡＬＬＳＶＬＧＰＰＶＴＧ（配列番号２６）を有する単一配列を含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、アミノ酸配列ＭＤＳＫＧＳＳＱＫＧＳＲＬＬＬＬＬＶＶＳＮＬＬＬＣＱＧＶＶＳ（配列番号２７）を有する単一配列を含む。当業者は、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド及び／又は第２のキメラポリペプチドにおける使用のための他の適切なシグナル配列を認識するであろう。

【0117】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、約１０～１００アミノ酸長であるシグナル配列を含む。例えば、単一の配列は、約１０～１００アミノ酸長、約１５～１００アミノ酸長、約２０～１００アミノ酸長、約２５～１００アミノ酸長、約３０～１００アミノ酸長、約３５～１００アミノ酸長、約４０～１００アミノ酸長、約４５～１００アミノ酸長、約５０～１００アミノ酸長、約５５～１００アミノ酸長、約６０～１００アミノ酸長、約６５～１００アミノ酸長、約７０～１００アミノ酸長、約７５～１００アミノ酸長、約８０～１００アミノ酸長、約８５～１００アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約９５～１００アミノ酸長、約１０～９５アミノ酸長、約１０～９０アミノ酸長、約１０～８５アミノ酸長、約１０～８０アミノ酸長、約１０～７５アミノ酸長、約１０～７０アミノ酸長、約１０～６５アミノ酸長、約１０～６０アミノ酸長、約１０～５５アミノ酸長、約１０～５０アミノ酸長、約１０～４５アミノ酸長、約１０～４０アミノ酸長、約１０～３５アミノ酸長、約１０～３０アミノ酸長、約１０～２５アミノ酸長、約１０～２０アミノ酸長、約１０～１５アミノ酸長、約２０～３０アミノ酸長、約３０～４０アミノ酸長、約４０～５０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、約６０～７０アミノ酸長、約７０～８０アミノ酸長、約８０～９０アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約２０～９０アミノ酸長、約３０～８０アミノ酸長、約４０～７０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、又はその間の任意の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００アミノ酸長である。

【0118】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるシグナル配列のいずれかは、シグナル配列の機能がインタクトなままである限り、そのＮ末端及び／又はＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上のアミノ酸）を含み得る。例えば、アミノ酸ＭＫＣＬＬＹＬＡＦＬＦＬＧＶＮＣ（配列番号２８）を有するシグナル配列は、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方を分泌経路に向かわせる機能を依然として保持しながら、Ｎ末端又はＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含むことができる。

【0119】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、多重鎖キメラポリペプチドを細胞外空間に誘導するシグナル配列を含む。このような実施形態は、単離及び／又は精製が比較的容易な多重鎖キメラポリペプチドを産生するのに有用である。

【0120】

ペプチドタグ
いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、（例えば、第１のキメラポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に）ペプチドタグを含む第１のキメラポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、（例えば、第２のキメラポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に）ペプチドタグを含む第２のキメラポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド及び多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチドの両方が、ペプチドタグを含む。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、２つ以上のペプチドタグを含む。

【0121】

多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方に含まれ得る例示的なペプチドタグとしては、Ａｖｉタグ（ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ；配列番号２９）、カルモジュリンタグ（ＫＲＲＷＫＫＮＦＩＡＶＳＡＡＮＲＦＫＫＩＳＳＳＧＡＬ；配列番号３０）、ポリグルタミン酸タグ（ＥＥＥＥＥＥ；配列番号３１）、Ｅ－タグ（ＧＡＰＶＰＹＰＤＰＬＥＰＲ；配列番号３２）、ＦＬＡＧ－タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ；配列番号３３）、ＨＡ－タグ、ヘマグルチニン由来のペプチド（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号３４）、ｈｉｓタグ（ＨＨＨＨＨ（配列番号３５）；ＨＨＨＨＨＨ（配列番号３６）；ＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号３７）；ＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号３８）；ＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号３９）；又はＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号４０））、ｍｙｃ－タグ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ；配列番号４１）、ＮＥ－タグ（ＴＫＥＮＰＲＳＮＱＥＥＳＹＤＤＮＥＳ；配列番号４２）、Ｓ－タグ、（ＫＥＴＡＡＡＫＦＥＲＱＨＭＤＳ；配列番号４３）、ＳＢＰ－タグ（ＭＤＥＫＴＴＧＷＲＧＧＨＶＶＥＧＬＡＧＥＬＥＱＬＲＡＲＬＥＨＨＰＱＧＱＲＥＰ；配列番号４４）、Ｓｏｆタグ１（ＳＬＡＥＬＬＮＡＧＬＧＧＳ；配列番号４５）、Ｓｏｆｔタグ３（ＴＱＤＰＳＲＶＧ；配列番号４６）、Ｓｐｏｔ－タグ（ＰＤＲＶＲＡＶＳＨＷＳＳ；配列番号４７）、Ｓｔｒｅｐ－タグ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ；配列番号４８）、ＴＣタグ（ＣＣＰＧＣＣ；配列番号４９）、Ｔｙタグ（ＥＶＨＴＮＱＤＰＬＤ；配列番号５０）、Ｖ５タグ（ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴ；配列番号５１）、ＶＳＶ－タグ（ＹＴＤＩＥＭＮＲＬＧＫ；配列番号５２）、及びＸｐｒｅｓｓタグ（ＤＬＹＤＤＤＤＫ；配列番号５３）が挙げられる。いくつかの実施形態では、組織因子タンパク質はペプチドタグである。

【0122】

多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方に含まれ得るペプチドタグは、多重鎖キメラポリペプチドに関連する種々の適用のいずれかにおいて使用され得る。例えば、ペプチドタグは、多重鎖キメラポリペプチドの精製において使用され得る。１つの非限定的な例として、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド（例えば、組換え発現された第１のキメラポリペプチド）、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド（例えば、組換え発現された第２のキメラポリペプチド）、又はその両方は、ｍｙｃタグを含むことができ、ｍｙｃタグ付き第１のキメラポリペプチド、ｍｙｃタグ付き第２のキメラポリペプチド、又はその両方を含む多重鎖キメラポリペプチドは、ｍｙｃタグを認識する抗体を用いて精製することができる。ｍｙｃタグを認識する抗体の１つの非限定的な例は、市販されていないＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｂａｎｋから入手可能な９Ｅ１０である。別の非限定的な例として、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド（例えば、組換え発現された第１のキメラポリペプチド）、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド（例えば、組換え発現された第２のキメラポリペプチド）、又はその両方は、ヒスチジンタグを含むことができ、ヒスチジンタグ付き第１のキメラポリペプチド、ヒスチジンタグ付き第２のキメラポリペプチド、又はその両方を含む多重鎖キメラポリペプチドは、ニッケル又はコバルトキレートを使用して精製することができる。当業者は、多重鎖キメラポリペプチドを精製する際に使用するための他の適切なタグ及びこれらのタグに結合する作用物質を承知している。いくつかの実施形態では、ペプチドタグは、精製後に多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド及び／又は第２のキメラポリペプチドから除去される。いくつかの実施形態では、ペプチドタグは、精製後に多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド及び／又は第２のキメラポリペプチドから除去されない。

【0123】

多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又は両方に含まれ得るペプチドタグは、例えば、多重鎖キメラポリペプチドの免疫沈降、多重鎖キメラポリペプチドのイメージング（例えば、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、及び／又は免疫細胞化学を介して）、及び／又は多重鎖キメラポリペプチドの可溶化において使用され得る。

【0124】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方は、約１０～１００アミノ酸長であるペプチドタグを含む。例えば、ペプチドタグは、約１０～１００アミノ酸長、約１５～１００アミノ酸長、約２０～１００アミノ酸長、約２５～１００アミノ酸長、約３０～１００アミノ酸長、約３５～１００アミノ酸長、約４０～１００アミノ酸長、約４５～１００アミノ酸長、約５０～１００アミノ酸長、約５５～１００アミノ酸長、約６０～１００アミノ酸長、約６５～１００アミノ酸長、約７０～１００アミノ酸長、約７５～１００アミノ酸長、約８０～１００アミノ酸長、約８５～１００アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約９５～１００アミノ酸長、約１０～９５アミノ酸長、約１０～９０アミノ酸長、約１０～８５アミノ酸長、約１０～８０アミノ酸長、約１０～７５アミノ酸長、約１０～７０アミノ酸長、約１０～６５アミノ酸長、約１０～６０アミノ酸長、約１０～５５アミノ酸長、約１０～５０アミノ酸長、約１０～４５アミノ酸長、約１０～４０アミノ酸長、約１０～３５アミノ酸長、約１０～３０アミノ酸長、約１０～２５アミノ酸長、約１０～２０アミノ酸長、約１０～１５アミノ酸長、約２０～３０アミノ酸長、約３０～４０アミノ酸長、約４０～５０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、約６０～７０アミノ酸長、約７０～８０アミノ酸長、約８０～９０アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約２０～９０アミノ酸長、約３０～８０アミノ酸長、約４０～７０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、又はその間の任意の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドタグは、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００アミノ酸長である。

【0125】

多重鎖キメラポリペプチドの第１のキメラポリペプチド、多重鎖キメラポリペプチドの第２のキメラポリペプチド、又はその両方に含まれるペプチドタグは、任意の適切な長さであり得る。例えば、ペプチドタグは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれ以上のアミノ酸長であり得る。多重鎖キメラポリペプチドが２つ以上のペプチドタグを含む実施形態では、２つ以上のペプチドタグは、同じ又は異なる長さであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドタグのいずれかは、ペプチドタグの機能がインタクトなままである限り、Ｎ末端及び／又はＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上のアミノ酸）を含み得る。例えば、アミノ酸配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号５４）を有するｍｙｃタグは、抗体によって結合される能力を依然として保持しながら、１つ以上の追加のアミノ酸を（例えば、ペプチドタグのＮ末端及び／又はＣ末端に）含むことができる。

【0126】

例示的な多重鎖キメラポリペプチド
本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、それぞれ独立して、ＴＧＦ－βに特異的に結合する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの例において、第１の標的結合ドメイン及び可溶性組織因子ドメインは、第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの例において、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される例示的なリンカーのいずれか）を更に含む。

【0127】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメイン、及び一対の親和性ドメインの第１のドメインは、第１のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、第１のキメラポリペプチド中の可溶性組織因子ドメインと一対の親和性ドメインの第１のドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される例示的なリンカーのいずれか）を更に含む。

【0128】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び第２の標的結合ドメインは、第２のキメラポリペプチドにおいて互いに直接隣接する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、第２のキメラポリペプチド中の一対の親和性ドメインの第２のドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載される例示的なリンカーのいずれか）を更に含む。

【0129】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、本明細書に記載される例示的な可溶性組織因子ドメインのいずれかであり得る。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、親和性ドメインの対は、本明細書に記載される親和性ドメインの例示的な対のいずれかであり得る。

【0130】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、それぞれ独立して、ＴＧＦ－βに特異的に結合する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、同じエピトープに特異的に結合する。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。

【0131】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、可溶性ＴＧＦ－β受容体（例えば、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体、例えば、可溶性ヒトＴＧＦβＲＩＩ）である。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩは、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩの第１の配列及び可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩの第２の配列を含む。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩは、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩの第１の配列と可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩの第２の配列との間に配置されたリンカーを含む。これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの例において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３）を含む。

【0132】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩ受容体の第１の配列は、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含む：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ（配列番号２）。

【0133】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩ受容体の第２の配列は、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含む：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ（配列番号２）。

【0134】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩ受容体の第１の配列は、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴ（配列番号５５）。

【0135】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ヒトＴＧＦＲβＲＩＩ受容体の第２の配列は、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ（配列番号５６）。

【0136】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦ－β受容体は、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含む：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ（配列番号４）。

【0137】

これらの多重鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦ－β受容体は、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ（配列番号５７）。

【0138】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号６）。

【0139】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号５８）。

【0140】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号７）。

【0141】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号５９）。

【0142】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号５）。

【0143】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号６０）。

【0144】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号８）。

【0145】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号６１）。

【0146】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号６２）。

【0147】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号６３）。

【0148】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号６４）。

【0149】

いくつかの実施形態では、第１のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号６５）。

【0150】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＮＷＶＮＶＩＳＮＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号６６）。

【0151】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＣＣＣＡＣＣＧＣＡＣＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＣＧＧＴＧＡＡＴＡＡＣＧＡＣＡＴＧＡＴＡＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＡＡＡＴＴＴＴＧＴＧＡＴＧＴＧＡＧＡＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＣＴＧＴＧＴＧＧＣＴＧＴＡＴＧＧＡＧＡＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＡＡＣＡＣＴＡＧＡＧＡＣＡＧＴＴＴＧＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＴＡＴＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＡＡＡＧＴＧＣＡＴＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＧＴＧＣＡＡＴＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＧＡＣＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＴＣＡＧＧＣＡＣＴＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＧＣＡＴＡＴＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＣＴＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＣＴＧＴＴＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＴＡＡＧＴＣＡＧＧＡＧＡＴＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＡＡＴＧＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＡＧＡＧＴＧＴＧＡＣＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＧＣＡＣＧＧＧＴＣＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＧＧＣＡＧＧＧＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＴＡＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＣＴＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧＧＴＧＧＧＡＡＣＡＡＡＡＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＣＧＴＡＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＣＡＧＡＡＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＴＴＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＧＡＣＴＴＡＡＴＴＴＡＴＡＣＡＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＡＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＡＣＡＣＴＡＡＴＧＡＧＴＴＴＴＴＧＡＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＡＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＣＣＣＴＣＣＣＧＡＡＣＡＧＴＴＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＧＣＣＣＧＧＴＡＧＡＧＴＧＴＡＴＧＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＴＴＣＡＧＡＧＡＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＡＣＴＴＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴ（配列番号６７）。

【0152】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列を含むことができる：ＭＧＶＫＶＬＦＡＬＩＣＩＡＶＡＥＡＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＮＷＶＮＶＩＳＮＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号６８）。

【0153】

いくつかの実施形態では、第２のキメラポリペプチドは、以下と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、又は１００％同一）の配列によってコードされる：ＡＴＧＧＧＡＧＴＧＡＡＡＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＣＣＣＴＴＡＴＴＴＧＴＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＡＴＣＣＣＡＣＣＧＣＡＣＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＣＧＧＴＧＡＡＴＡＡＣＧＡＣＡＴＧＡＴＡＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＡＡＡＴＴＴＴＧＴＧＡＴＧＴＧＡＧＡＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＣＴＧＴＧＴＧＧＣＴＧＴＡＴＧＧＡＧＡＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＡＡＣＡＣＴＡＧＡＧＡＣＡＧＴＴＴＧＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＴＡＴＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＡＡＡＧＴＧＣＡＴＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＧＴＧＣＡＡＴＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＧＡＣＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＴＣＡＧＧＣＡＣＴＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＧＣＡＴＡＴＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＣＴＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＣＴＧＴＴＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＴＡＡＧＴＣＡＧＧＡＧＡＴＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＡＡＴＧＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＡＧＡＧＴＧＴＧＡＣＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＧＣＡＣＧＧＧＴＣＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＧＧＣＡＧＧＧＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＴＡＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＣＴＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧＧＴＧＧＧＡＡＣＡＡＡＡＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＣＧＴＡＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＣＡＧＡＡＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＴＴＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＧＡＣＴＴＡＡＴＴＴＡＴＡＣＡＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＡＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＡＣＡＣＴＡＡＴＧＡＧＴＴＴＴＴＧＡＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＡＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＣＣＣＴＣＣＣＧＡＡＣＡＧＴＴＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＧＣＣＣＧＧＴＡＧＡＧＴＧＴＡＴＧＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＴＴＣＡＧＡＧＡＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＡＣＴＴＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴ（配列番号６９）。

【0154】

組成物／キット
本明細書に記載される任意の多重鎖キメラポリペプチド、細胞のいずれか、又は核酸のいずれかのうちの少なくとも１つを含む組成物（例えば、医薬組成物）も本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、免疫細胞のいずれか（例えば、本明細書に記載される免疫細胞のいずれか、例えば、本明細書に記載される方法のいずれかを使用して産生される免疫細胞のいずれか）を含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、異なる投与経路（例えば、静脈内、皮下）のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）を含むことができる。

【0156】

医薬組成物の単回又は複数回投与は、例えば、対象によって必要とされ、許容される投与量及び頻度に応じて、それを必要とする対象に与えることができる。製剤は、状態、疾患又は症状を効果的に治療、予防又は改善するのに十分な量の活性剤を提供すべきである。

【0157】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチド、組成物、核酸、又は細胞（例えば、免疫細胞）のいずれかを含むキットも本明細書で提供される。いくつかの態様において、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明書を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される医薬組成物のいずれかの少なくとも１用量を含むことができる。

【0158】

核酸／ベクター
本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかをコードする核酸も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は第１のキメラポリペプチドをコードすることができ、第２の核酸は第２のキメラポリペプチドをコードすることができる。いくつかの実施形態では、単一の核酸が、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドの両方をコードすることができる。

【0159】

本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれかをコードする核酸のいずれかを含むベクターも本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、第１のベクターは、第１のキメラポリペプチドをコードする核酸を含むことができ、第２のベクターは、第２のキメラポリペプチドをコードする核酸を含むことができる。いくつかの実施形態では、単一のベクターは、第１のキメラポリペプチドをコードする第１の核酸及び第２のキメラポリペプチドをコードする第２の核酸を含むことができる。

【0160】

本明細書に記載されるベクターのいずれも、発現ベクターであり得る。例えば、発現ベクターは、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含み得る。

【0161】

ベクターの非限定的な例としては、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、及びウイルスベクター（例えば、任意のアデノウイルスベクター（例えば、ｐＳＶ又はｐＣＭＶベクター）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、及びレトロウイルスベクター）、並びに任意のＧａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクターが挙げられる。ベクターは、例えば、発現のために十分なシス作用性エレメントを含むことができ、発現のための他のエレメントは、宿主哺乳動物細胞によって、又はインビトロ発現系において供給され得る。当業者は、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかを作製するための適切なベクター及び哺乳動物細胞を選択することができる。

【0162】

細胞
本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかをコードする（例えば、第１及び第２のキメラポリペプチドの両方をコードする）、本明細書に記載される核酸のいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な細胞のいずれか）も本明細書に提供される。本明細書に記載される第１のキメラポリペプチドのいずれかをコードする本明細書に記載される核酸のいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な細胞のいずれか）も本明細書に提供される。本明細書に記載の第２のキメラポリペプチドのいずれかをコードする本明細書に記載の核酸のいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載の又は当技術分野で公知の例示的な細胞のいずれか）も提供される。

【0163】

本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかをコードする（例えば、第１及び第２のキメラポリペプチドの両方をコードする）、本明細書に記載されるベクターのいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な細胞のいずれか）も本明細書に提供される。本明細書に記載される第１のキメラポリペプチドのいずれかをコードする本明細書に記載されるベクターのいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な細胞のいずれか）も本明細書に提供される。本明細書に記載される第２のキメラポリペプチドのいずれかをコードする本明細書に記載されるベクターのいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載される又は当技術分野で公知の例示的な細胞のいずれか）も本明細書に提供される。

【0164】

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞は真核細胞であり得る。本明細書で使用される場合、「真核細胞」という用語は、別個の膜結合核を有する細胞を指す。このような細胞としては、例えば、哺乳動物（例えば、げっ歯類、非ヒト霊長類、又はヒト）、昆虫、真菌、又は植物細胞が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、真核細胞は、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）などの酵母細胞である。いくつかの態様において、真核細胞は、高等真核生物、例えば、哺乳動物、鳥類、植物、又は昆虫細胞である。哺乳動物細胞の非限定的な例としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞及びヒト胚性腎細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）が挙げられる。

【0165】

核酸及び発現ベクターを細胞（例えば、真核細胞）に導入する方法は、当技術分野において公知である。核酸を細胞に導入するために使用され得る方法の非限定的な例としては、リポフェクション、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマーベースのトランスフェクション、カチオン性ポリマートランスフェクション、細胞圧搾、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、インペールフェクション、流体力学的送達、マグネトフェクション、ウイルス形質導入（例えば、アデノウイルス及びレンチウイルス形質導入）、及びナノ粒子トランスフェクションが挙げられる。

【0166】

多重鎖キメラポリペプチドを産生する方法
多重鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で培養培地中で本明細書に記載される細胞のいずれかを培養すること；並びに細胞及び／又は培養培地から多重鎖キメラポリペプチドを回収することを含む、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれかを産生する方法も本明細書において提供される。

【0167】

本明細書に記載の任意の細胞を、第１のキメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で第１の培養培地中で培養することと、細胞及び／又は第１の培養培地から第１のキメラポリペプチドを回収することと、第２のキメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、本明細書に記載される細胞のいずれかを第２の培養培地中で培養することと、細胞及び／又は第２の培養培地から第２のキメラポリペプチドを回収することと、回収された第１のキメラポリペプチドと回収された第２のキメラポリペプチドとを組み合わせて（例えば、混合して）、多重鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）を形成することと、を含む本明細書に記載の任意の多重鎖キメラポリペプチドを産生する方法も本明細書で提供される。

【0168】

多重鎖キメラポリペプチド、第１のキメラポリペプチド、又は第２のキメラポリペプチドの、細胞（例えば、真核細胞）からの回収は、当技術分野で周知の技術（例えば、硫安沈殿、ペグ沈、イオン交換クロマトグラフィ（陰イオン又は陽イオン）、疎水性相互作用に基づくクロマトグラフィ、メタルアフィニティークロマトグラフィ、リガンドアフィニティークロマトグラフィ、及びサイズ排除クロマトグラフィ）を用いて行うことができる。

【0169】

細胞を培養する方法は、当技術分野において周知である。細胞は、増殖、分化及び成長に有利な条件下でインビトロで維持することができる。簡潔に述べると、細胞は、細胞（例えば、任意の細胞）を、細胞生存性及び増殖を支持するために必要な増殖因子及びサプリメントを含む細胞培養培地と接触させることによって培養することができる。

【0170】

本明細書に記載の方法のいずれかによって産生された多重鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載の多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）、第１のキメラポリペプチド（例えば、第１のキメラポリペプチドのいずれか）、又は第２のキメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載の第２のキメラポリペプチドのいずれか）も本明細書に提供される。

【0171】

老化細胞
老化は、表現型変化、アポトーシスに対する耐性、及び損傷感知シグナル伝達経路の活性化を伴う不可逆的増殖停止の形態である。細胞老化は、増殖する能力を失った培養ヒト線維芽細胞において最初に記載され、約５０回の集団倍加（ヘイフリック限界と呼ばれる）後に永続的な停止に達した。老化は、酸化的及び遺伝毒性ストレス、ＤＮＡ損傷、テロメア消耗、発がん性活性化、ミトコンドリア機能不全、又は化学療法剤を含む、広範囲の内因性及び外因性傷害によって誘導され得るストレス応答と考えられる。

【0172】

老化細胞は代謝的に活性のままであり、それらの分泌表現型を介して組織の止血、疾患及び老化に影響を及ぼし得る。老化は、生理学的プロセスと考えられており、創傷治癒、組織恒常性、再生、及び線維症制御の促進において重要である。例えば、老化細胞の一過性誘導は、創傷治癒中に観察され、創傷の回復に寄与する。おそらく、老化の最も重要な役割の１つは、腫瘍抑制におけるその役割である。しかしながら、老化細胞の蓄積はまた、老化及び加齢に関連する疾患及び状態を推進する。老化表現型はまた、慢性炎症応答を誘発し、その結果、慢性炎症状態を増大させて腫瘍増殖を促進することができる。老化と加齢との関連は、老化細胞が加齢組織に蓄積するという観察に最初に基づいた。トランスジェニックモデルの使用は、多くの年齢関連病理における老化細胞の系統的な検出を可能にした。老化細胞を選択的に排除する戦略は、老化細胞が実際に老化及び関連する病理において原因となる役割を果たすことができることを実証している。

【0173】

老化細胞は、形態、クロマチン組織化、遺伝子発現、及び代謝の変化を含む重要かつ独特の特性を示す。（ｉ）サイクリン依存性キナーゼの阻害剤であるｐ１６及びｐ２１の発現の増加、（ｉｉ）リソソーム活性のマーカーである老化関連β－ガラクトシダーゼの存在、（ｉｉｉ）老化関連ヘテロクロマチンフォーカスの出現及びラミンＢ１レベルの下方制御、（ｉｖ）抗アポトーシスＢＣＬファミリータンパク質の発現の増加によって引き起こされるアポトーシスに対する抵抗性、並びに（ｖ）ＣＤ２６（ＤＰＰ４）、ＣＤ３６（スカベンジャー受容体）、フォークヘッドボックス４（ＦＯＸＯ４）、及び分泌キャリア膜タンパク質４（ＳＣＡＭＰ４）の上方制御など、細胞老化に関連するいくつかの生化学的及び機能的特性が存在する。老化細胞はまた、炎症性シグネチャー、いわゆる老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）を発現する。ＳＡＳＰを介して、老化細胞は、細胞自律的様式で作用して老化を強化し（自己分泌効果）、微小環境と連絡してそれを改変する（パラ分泌効果）、広範な炎症性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－８）、増殖因子（ＴＧＦ－β）、ケモカイン（ＣＣＬ－２）、及びマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９）を産生する。ＳＡＳＰ因子は、老化監視、老化細胞の免疫媒介クリアランスを誘発することによって腫瘍抑制に寄与し得る。しかしながら、慢性炎症も腫瘍形成の既知の駆動因子であり、蓄積された証拠は、慢性ＳＡＳＰもがん及び加齢関連疾患をブーストし得ることを示す。

【0174】

老化細胞の分泌プロファイルは状況に依存する。例えば、ヒト線維芽細胞における異なるミトコンドリア機能不全によって誘導されるミトコンドリア機能不全関連老化（ＭｉＤＡＳ）は、ＩＬ－１依存性炎症因子が欠損しているＳＡＳＰの出現をもたらした。ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比の減少は、ｐ５３の活性化を介してＭｉＤＡＳを誘導するＡＭＰＫシグナル伝達を活性化した。結果として、ｐ５３は、炎症促進性ＳＡＳＰの重要な誘導因子であるＮＦ－κＢシグナル伝達を阻害した。対照的に、ヒト細胞における持続的なＤＮＡ損傷によって引き起こされた細胞老化は、炎症性ＳＡＳＰを誘導し、これは、血管拡張性失調症変異（ＡＴＭ）キナーゼの活性化に依存したが、ｐ５３の活性化には依存しなかった。特に、ＩＬ－６及びＩＬ－８の発現及び分泌レベルが増加した。異所性発現ｐ１６ＩＮＫ４ａ及びｐ２１ＣＩＰ１によって引き起こされる細胞の老化が、炎症性ＳＡＳＰを伴わないヒト線維芽細胞において老化表現型を誘導することも実証され、このことは、増殖停止自体がＳＡＳＰを刺激しなかったことを示す。

【0175】

老化の最も明確な特徴の１つは、安定な成長停止である。これは、２つの重要な経路、ｐ１６／Ｒｂ及びｐ５３／ｐ２１によって達成され、これらの両方は腫瘍抑制において中心的である。ＤＮＡ損傷は、以下をもたらす：（１）クロマチンにおけるγＨ２Ａｘ（ヒストンコード遺伝子）及び５３ＢＰ１（ＤＮＡ損傷応答に関与する）の高い沈着：これは、キナーゼカスケードの活性化をもたらし、最終的にｐ５３活性化をもたらす、並びに（２）ｐ１６ＩＮＫ４ａ及びＡＲＦ（両方ともＣＤＫＮ２Ａによってコードされる）及びＰ１５ＩＮＫ４ｂ（ＣＤＫＮ２Ｂによってコードされる）の活性化：ｐ５３は、サイクリン依存性キナーゼインヒビター（ｐ２１）の転写を誘導し、ｐ１６ＩＮＫ４ａ及びｐ１５ＩＮＫ４ｂの両方と共に、細胞周期進行のための遺伝子（ＣＤＫ４及びＣＤＫ６）をブロックする。これは最終的に網膜芽腫タンパク質（Ｒｂ）の低リン酸化及びＧ１期での細胞周期停止をもたらす。

【0176】

老化細胞を選択的に死滅させることは、正常な老化との関連でマウスの健康期間を有意に改善し、加齢に関連する疾患又はがん治療の結果を改善することが示されている（Ｏｖａｄｙａ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２８（４）：１２４７－１２５４，２０１８）。天然では、老化細胞は通常、自然免疫細胞によって除去される。老化の誘導は、損傷／変化した細胞の潜在的な増殖及び形質転換を防止するだけでなく、主にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（ＩＬ－１５及びＣＣＬ２など）及びマクロファージ（ＣＦＳ－１及びＣＣＬ２など）の化学誘引物質として機能するＳＡＳＰ因子の産生を介して組織修復にも有利に働く。これらの自然免疫細胞は、ストレスを受けた細胞を排除するための免疫監視機構を媒介する。老化細胞は通常、ＮＫ細胞活性化受容体ＮＫＧ２Ｄ及びＤＮＡＭ－１リガンドを上方制御し、これらはストレス誘導性リガンドのファミリーに属し、感染性疾患及び悪性腫瘍に対する第１線の免疫防御の重要な構成要素である。受容体が活性化されると、ＮＫ細胞は、その細胞溶解機構を介して老化細胞の死を特異的に誘導することができる。老化細胞の免疫監視におけるＮＫ細胞の関与は、肝線維症（Ｓａｇｉｖ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３２（１５）：１９７１－１９７７，２０１３）、肝細胞がん（Ｉａｎｎｅｌｌｏ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１０（１０）：２０５７－２０６９，２０１３）、多発性ミエローマ（Ｓｏｒｉａｎｉ，Ｂｌｏｏｄ １１３（１５）：３５０３－３５１１，２００９）、及びメバロン酸経路の機能不全によってストレスを受けたグリオーマ細胞（Ｃｉａｇｌｉａ，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １４２（１）：１７６－１９０，２０１８）において指摘されている。子宮内膜細胞は、急性細胞老化を受け、脱落膜細胞に分化しない。分化した脱落膜細胞は、ＩＬ－１５を分泌し、それによって、子宮ＮＫ細胞を動員して、未分化老化細胞を標的化し、排除し、したがって、子宮内膜を再構築し、若返らせるのに役立つ（Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，Ｅｌｉｆｅ ６：ｅ３１２７４，２０１７）。同様の機構で、肝線維症の間、ｐ５３発現老化肝サテライト細胞は、常在クッパーマクロファージ及び新たに浸潤したマクロファージの極性化を、老化細胞除去活性を示す炎症促進性Ｍ１表現型に向かって歪めた。Ｆ４／８０＋マクロファージは、分娩後子宮機能を維持するために、マウス子宮老化細胞のクリアランスにおいて重要な役割を果たすことが示されている。

【0177】

老化細胞は、主にＮＫＧ２Ｄ（ＮＫ細胞上で発現される）、ケモカイン、及び他のＳＡＳＰ因子に対するリガンドを上方制御することによって、ＮＫ細胞を動員する。肝線維症のインビボモデルは、活性化されたＮＫ細胞による老化細胞の有効なクリアランスを示している（Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，Ｃｅｌｌ １３４（４）：６５７－６６７，２００８）。研究は、肝線維症（（Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，Ｃｅｌｌ １３４（４）：６５７－６６７，２００８）、変形性関節症（Ｘｕ，Ｊ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ Ａ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ Ｍｅｄ Ｓｃｉ ７２（６）：７８０－７８５，２０１７）、及びパーキンソン病（Ｃｈｉｎｔａ，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ ２２（４）：９３０－９４０，２０１８）を含む老化を研究するための様々なモデルを記載している。老化細胞を研究するための動物モデルは、Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，Ｃｅｌｌ １３４（４）：６５７－６６７，２００８；Ｂａｋｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ４７９（７３７２）：２３２－２３６，２０１１；Ｆａｒｒ，Ｎａｔ Ｍｅｄ ２３（９）：１０７２－１０７９，２０１７；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５９２（１２）：２０８３－２０９７，２０１８；Ｘｕ，Ｎａｔ Ｍｅｄ ２４（８）：１２４６－１２５６，２０１８）に記載される。

【0178】

対象における肝疾患又はメタボリックシンドロームを治療する方法
対象における肝疾患又はメタボリックシンドロームを治療する方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患又はメタボリックシンドロームを有すると診断又は同定される。

【0179】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0180】

いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。肝疾患及びメタボリックシンドロームの治療を成功させるための方法は、当技術分野において公知である。

【0181】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0182】

ＮＡＦＬからＮＡＳＨへの進行速度、ＮＡＳＨから肝硬変への進行速度、及び肝硬変から肝細胞がんへの進行速度のうちの１つ以上を低下させる方法
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬ）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）への進行、ＮＡＳＨから肝硬変への進行、及び肝硬変から肝細胞がんへの進行の速度のうちの１つ以上を低下させる方法であって、ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ、又は肝硬変を有すると同定又は診断された対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。

【0183】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0184】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、治療前の進行速度又はＮＡＦＬを有すると同定され、治療を受けていない又は異なる治療を受けている類似の対象における進行速度と比較した、ＮＡＦＬからＮＡＳＨへの進行速度の減少（例えば、約１％の減少～約１００％の、約１％の減少～約９５％の減少、約１％の減少～約９０％の減少、約１％の減少～約８５％の減少、約１％の減少～約８０％の減少、約１％の減少～約７５％の減少、約１％の減少～約７０％の減少、約１％の減少～約６５％の減少、約１％の減少～約６０％の減少、約１％の減少～約５５％の減少、約１％の減少～約５０％の減少、約１％の減少～約４５％の減少、約１％の減少～約４０％の減少、約１％の減少～約３５％の減少、約１％の減少～約３０％の減少、約１％の減少～約２５％の減少、約１％の減少～約２０％の減少、約１％の減少～約１５％の減少、約１％の減少～約１０％の減少、約１％の減少～約５％の減少、約５％の減少～約１００％の減少、約５％の減少～約９５％の減少、約５％の減少～約９０％の減少、約５％の減少～約８５％の減少、約５％の減少～約８０％の減少、約５％の減少～約７５％の減少、約５％の減少～約７０％の減少、約５％の減少～約６５％の減少、約５％の減少～約６０％の減少、約５％の減少～約５５％の減少、約５％の減少～約５０％の減少、約５％の減少～約４５％の減少、約５％の減少～約４０％の減少、約５％の減少～約３５％の減少、約５％の減少～約３０％の減少、約５％の減少～約２５％の減少、約５％の減少～約２０％の減少、約５％の減少～約１５％の減少、約５％の減少～約１０％の減少、約１０％の減少～約１００％の減少、約１０％の減少～約９５％の減少、約１０％の減少～約９０％の減少、約１０％の減少～約８５％の減少、約１０％の減少～約８０％の減少、約１０％の減少～約７５％の減少、約１０％の減少～約７０％の減少、約１０％の減少～約６５％の減少、約１０％の減少～約６０％の減少、約１０％の減少～約５５％の減少、約１０％の減少～約５０％の減少、約１０％の減少～約４５％の減少、約１０％の減少～約４０％の減少、約１０％の減少～約３５％の減少、約１０％の減少～約３０％の減少、約１０％の減少～約２５％の減少、約１０％の減少～約２０％の減少、約１０％の減少～約１５％の減少、約１５％の減少～約１００％の減少、約１５％の減少～約９５％の減少、約１５％の減少～約９０％の減少、約１５％の減少～約８５％の減少、約１５％の減少～約８０％の減少、約１５％の減少～約７５％の減少、約１５％の減少～約７０％の減少、約１５％の減少～約６５％の減少、約１５％の減少～約６０％の減少、約１５％の減少～約５５％の減少、約１５％の減少～約５０％の減少、約１５％の減少～約４５％の減少、約１５％の減少～約４０％の減少、約１５％の減少～約３５％の減少、約１５％の減少～約３０％の減少、約１５％の減少～約２５％の減少、約１５％の減少～約２０％の減少、約２０％の減少～約１００％の減少、約２０％の減少～約９５％の減少、約２０％の減少～約９０％の減少、約２０％の減少～約８５％の減少、約２０％の減少～約８０％の減少、約２０％の減少～約７５％の減少、約２０％の減少～約７０％の減少、約２０％の減少～約６５％の減少、約２０％の減少～約６０％の減少、約２０％の減少～約５５％の減少、約２０％の減少～約５０％の減少、約２０％の減少～約４５％の減少、約２０％の減少～約４０％の減少、約２０％の減少～約３５％の減少、約２０％の減少～約３０％の減少、約２０％の減少～約２５％の減少、約２５％の減少～約１００％の減少、約２５％の減少～約９５％の減少、約２５％の減少～約９０％の減少、約２５％の減少～約８５％の減少、約２５％の減少～約８０％の減少、約２５％の減少～約７５％の減少、約２５％の減少～約７０％の減少、約２５％の減少～約６５％の減少、約２５％の減少～約６０％の減少、約２５％の減少～約５５％の減少、約２５％の減少～約５０％の減少、約２５％の減少～約４５％の減少、約２５％の減少～約４０％の減少、約２５％の減少～約３５％の減少、約２５％の減少～約３０％の減少、約３０％の減少～約１００％の減少、約３０％の減少～約９５％の減少、約３０％の減少～約９０％の減少、約３０％の減少～約８５％の減少、約３０％の減少～約８０％の減少、約３０％の減少～約７５％の減少、約３０％の減少～約７０％の減少、約３０％の減少～約６５％の減少、約３０％の減少～約６０％の減少、約３０％の減少～約５５％の減少、約３０％の減少～約５０％の減少、約３０％の減少～約４５％の減少、約３０％の減少～約４０％の減少、約３０％の減少～約３５％の減少、約３５％の減少～約１００％の減少、約３５％の減少～約９５％の減少、約３５％の減少～約９０％の減少、約３５％の減少～約８５％の減少、約３５％の減少～約８０％の減少、約３５％の減少～約７５％の減少、約３５％の減少～約７０％の減少、約３５％の減少～約６５％の減少、約３５％の減少～約６０％の減少、約３５％の減少～約５５％の減少、約３５％の減少～約５０％の減少、約３５％の減少～約４５％の減少、約３５％の減少～約４０％の減少、約４０％の減少～約１００％の減少、約４０％の減少～約９５％の減少、約４０％の減少～約９０％の減少、約４０％の減少～約８５％の減少、約４０％の減少～約８０％の減少、約４０％の減少～約７５％の減少、約４０％の減少～約７０％の減少、約４０％の減少～約６５％の減少、約４０％の減少～約６０％の減少、約４０％の減少～約５５％の減少、約４０％の減少～約５０％の減少、約４０％の減少～約４５％の減少、約４５％の減少～約１００％の減少、約４５％の減少～約９５％の減少、約４５％の減少～約９０％の減少、約４５％の減少～約８５％の減少、約４５％の減少～約８０％の減少、約４５％の減少～約７５％の減少、約４５％の減少～約７０％の減少、約４５％の減少～約６５％の減少、約４５％の減少～約６０％の減少、約４５％の減少～約５５％の減少、約４５％の減少～約５０％の減少、約５０％の減少～約１００％の減少、約５０％の減少～約９５％の減少、約５０％の減少～約９０％の減少、約５０％の減少～約８５％の減少、約５０％の減少～約８０％の減少、約５０％の減少～約７５％の減少、約５０％の減少～約７０％の減少、約５０％の減少～約６５％の減少、約５０％の減少～約６０％の減少、約５０％の減少～約５５％の減少、約５５％の減少～約１００％の減少、約５５％の減少～約９５％の減少、約５５％の減少～約９０％の減少、約５５％の減少～約８５％の減少、約５５％の減少～約８０％の減少、約５５％の減少～約７５％の減少、約５５％の減少～約７０％の減少、約５５％の減少～約６５％の減少、約５５％の減少～約６０％の減少、約６０％の減少～約１００％の減少、約６０％の減少～約９５％の減少、約６０％の減少～約９０％の減少、約６０％の減少～約８５％の減少、約６０％の減少～約８０％の減少、約６０％の減少～約７５％の減少、約６０％の減少～約７０％の減少、約６０％の減少～約６５％の減少、約６５％の減少～約１００％の減少、約６５％の減少～約９５％の減少、約６５％の減少～約９０％の減少、約６５％の減少～約８５％の減少、約６５％の減少～約８０％の減少、約６５％の減少～約７５％の減少、約６５％の減少～約７０％の減少、約７０％の減少～約１００％の減少、約７０％の減少～約９５％の減少、約７０％の減少～約９０％の減少、約７０％の減少～約８５％の減少、約７０％の減少～約８０％の減少、約７０％の減少～約７５％の減少、約７５％の減少～約１００％の減少、約７５％の減少～約９５％の減少、約７５％の減少～約９０％の減少、約７５％の減少～約８５％の減少、約７５％の減少～約８０％の減少、約８０％の減少～約１００％の減少、約８０％の減少～約９５％の減少、約８０％の減少～約９０％の減少、約８０％の減少～約８５％の減少、約８５％の減少～約１００％の減少、約８５％の減少～約９５％の減少、約８５％の減少～約９０％の減少、約９０％の減少～約１００％の減少、約９０％の減少～約９５％の減少、約９５％の減少～約１００％の減少、約９５％～約９９％）をもたらす。

【0185】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、治療前の進行速度又はＮＡＳＨを有すると同定され、治療を受けていない若しくは異なる治療を受けている類似の対象における進行速度と比較して、ＮＡＳＨから肝硬変への進行速度の減少（例えば、約１％の減少から約１００％の減少、又は本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0186】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、治療前の進行速度、又は肝硬変を有すると同定され、治療を受けていないか若しくは異なる治療を受けている類似の対象における進行速度と比較して、肝硬変から肝細胞がんへの進行速度の減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0187】

対象の肝臓における炎症を低減する方法
対象の肝臓における炎症を低減させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、肝臓における炎症の低減を必要としていると特定される。対象の肝臓における炎症のレベルを決定するための方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、対象の肝臓における１つ以上の炎症性サイトカインの発現のレベルを検出することを含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0189】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、投与前の対象の肝臓における炎症のレベルと比較して、対象（例えば、本明細書に記載される対象のいずれか）の肝臓における炎症のレベルの減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0190】

いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）又はメタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0191】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0192】

対象の肝臓における糖新生を減少させる方法
対象の肝臓における糖新生を減少させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、肝臓における糖新生の減少を必要としていると同定される。対象の肝臓における糖新生のレベルを検出する方法は、当技術分野において公知である。

【0193】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0194】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、投与前の対象の肝臓における糖新生のレベルと比較して、対象（例えば、本明細書に記載される対象のいずれか）の肝臓における糖新生のレベルの減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0195】

いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）又はメタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0196】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0197】

対象の肝臓における脂肪生成を減少させる方法
対象の肝臓における脂肪生成を減少させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、肝臓における脂肪生成の減少を必要としていると特定される。対象の肝臓における脂肪生成のレベルを検出するための方法は、当技術分野において公知である。

【0198】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0199】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、投与前の対象の肝臓における脂肪生成のレベルと比較して、対象（例えば、本明細書に記載される対象のいずれか）の肝臓における脂肪生成のレベルの減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0200】

いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）又はメタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0201】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0202】

対象の肝臓における肝細胞の老化を減少させる方法
対象の肝臓における肝細胞性老化を減少させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、肝臓における肝細胞の老化の減少を必要としていると特定される。対象の肝臓における肝細胞の老化のレベルを決定するための方法は、当技術分野において公知である。

【0203】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0204】

いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、投与前の対象の肝臓における肝細胞の老化のレベルと比較して、対象（例えば、本明細書に記載されている対象のいずれか）の肝臓における肝細胞の老化のレベルの減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載されているこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0205】

いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）又はメタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0206】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0207】

対象の肝臓における代謝機能を再平衡化する方法
対象の肝臓における代謝機能を再平衡化させる方法であって、対象に、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインがＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）のリガンドに特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩ（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）のリガンドに特異的に結合する、方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、対象は、肝臓における代謝機能の再平衡化を必要としていると特定される。対象の肝臓における代謝機能の再平衡化を決定するための方法は、当技術分野において公知である。代謝機能の再平衡化の非限定的な実施形態としては、血糖値（例えば、対象におけるヘモグロビンＡ１ｃレベル又は空腹時血糖値）の正常化、インスリン抵抗性の低減、及びＲｅｔｎ（レジスチン）の遺伝子発現の正常化が挙げられる。

【0208】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0209】

いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）又はメタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0210】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0211】

対象の肝臓における表１～４中の１つ以上の遺伝子の発現を調節する方法
対象の肝臓における表１～４中の１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１５以上、２０以上、又は３０以上）の遺伝子の発現を調節する方法であって、（ａ）以下：（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、及び（ｉｉｉ）一対の親和性ドメインの第１のドメイン、を含む、第１のキメラポリペプチドと、（ｂ）以下：（ｉ）一対の親和性ドメインの第２のドメイン、及び（ｉｉ）第２の標的結合ドメイン、を含む、第２のキメラポリペプチドとを含む多重鎖キメラポリペプチドの治療有効量を投与することを含み、ここで、第１のキメラポリペプチド及び第２のキメラポリペプチドが、一対の親和性ドメインの第１のドメイン及び第２のドメインの結合を介して会合し、かつ、第１の標的結合ドメインが、ＧＦ－β受容体ＩＩのリガンド（ＴＧＦ－βＲＩＩ）に特異的に結合しかつ第２の標的結合ドメインがＴＧＦ－βＲＩＩのリガンド（例えば、本明細書中に記載される例示的な多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）に特異的に結合する、方法も提供される。いくつかの実施形態では、対象は、その肝臓において表１～４に列挙される１つ以上の遺伝子の発現の調節を必要としていると同定される。

【0212】

いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチドは、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、肝内投与、又は腹腔内投与を介して投与される。

【0213】

いくつかの実施形態では、投与は、ＡＣＳＳ１、ＲＥＴＮ、ＳＬＣ２Ａ４、ＰＤＫ４、ＰＮＰＬＡ３、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＣＡＶ１、ＥＮＤＯＤ１、ＲＥＧ３Ｇ、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ２Ｂ、ＳＣＧＢ３Ａ１、ＧＬＹＣＡＭ１、ＩＧＨＧ２Ｃ、ＩＧＫＣ、ＬＴＦ、ＭＳ４Ａ１、ＪＣＨＡＩＮ、ＣＤ１９、ＩＧＨＭ、ＩＦＩ２７Ｌ２Ａ、ＡＣＫＲ３、ＬＳＰ１、ＰＭＥＰＡ１、ＣＯＲＯ１Ａ、ＧＰＸ３、ＭＹＨ８、ＮＰＰＡ、ＴＣＡＰ、ＦＬＮＣ、ＳＬＣ３６Ａ２、ＭＹＨ６、ＡＣＴＣ１、ＡＣＴＡ２、及びＴＰＭ２の群から選択される対象の肝臓における１つ以上の（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１５以上、又は２０以上の）遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載されるこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0214】

いくつかの実施形態では、投与は、ＳＬＣ３４Ａ２及びＣＩＳＨからなる群から選択される対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、増加（例えば、約１％の増加～約５００％の増加、約１％の増加～約４００％の増加、約１％の増加～約３００％の増加、約１％の増加～約２００％の増加、約１％の増加～約１５０％の増加、約１％の増加～約１００％の増加、約１％の増加～約８０％の増加、約１％の増加～約６０％の増加、約１％の増加～約４０％の増加、約１％の増加～約２０％の増加、約１％の増加～約１０％の増加、約１％の増加～約５％の増加、約５％の増加～約５００％の増加、約５％の増加～約４００％の増加、約５％の増加～約３００％の増加、約５％の増加～約２００％の増加、約５％の増加～約１５０％の増加、約５％の増加～約１００％の増加、約５％の増加～約８０％の増加、約５％の増加～約６０％の増加、約５％の増加～約４０％の増加、約５％の増加～約２０％の増加、約５％の増加～約１０％の増加、約１０％の増加～約５００％の増加、約１０％の増加～約４００％の増加、約１０％の増加～約３００％の増加、約１０％の増加～約２００％の増加、約１０％の増加～約１５０％の増加、約１０％の増加～約１００％の増加、約１０％の増加～約８０％の増加、約１０％の増加～約６０％の増加、約１０％の増加～約４０％の増加、約１０％の増加～約２０％の増加、約２０％の増加～約５００％の増加、約２０％の増加～約４００％の増加、約２０％の増加～約３００％の増加、約２０％の増加～約２００％の増加、約２０％の増加～約１５０％の増加、約２０％の増加～約１００％の増加、約２０％の増加～約８０％の増加、約２０％の増加～約６０％の増加、約２０％の増加～約４０％の増加、約４０％の増加～約５００％の増加、約４０％の増加～約４００％の増加、約４０％の増加～約３００％の増加、約４０％の増加～約２００％の増加、約４０％の増加～約１５０％の増加、約４０％の増加～約１００％の増加、約４０％の増加～約８０％の増加、約４０％の増加～約６０％の増加、約６０％の増加～約５００％の増加、約６０％の増加～約４００％の増加、約６０％の増加～約３００％の増加、約６０％の増加～約２００％の増加、約６０％の増加～約１５０％の増加、約６０％の増加～約１００％の増加、約６０％の増加～約８０％の増加、約８０％の増加～約５００％の増加、約８０％の増加～約４００％の増加、約８０％の増加～約３００％の増加、約８０％の増加～約２００％の増加、約８０％の増加～約１５０％の増加、約８０％の増加～約１００％の増加、約１００％の増加～約５００％の増加、約１００％の増加～約４００％の増加、約１００％の増加～約３００％の増加、約１００％の増加～約２００％の増加、約１００％の増加～約１５０％の増加、約１５０％の増加～約５００％の増加、約１５０％の増加～約４００％の増加、約１５０％の増加～約３００％の増加、約１５０％の増加～約２００％の増加、約２００％の増加～約５００％の増加、約２００％の増加～約４００％の増加、約２００％の増加～約３００％の増加、約３００％の増加～約５００％の増加、約３００％の増加～約４００％の増加、又は約４００％の増加～約５００％の増加）をもたらす。

【0215】

いくつかの実施形態では、投与は、ＣＳＦ３Ｒ、ＩＦＩ２７Ｌ２Ａ、ＧＭ１７０６６、ＧＮＬ３、ＦＡＢＰ１、ＧＭ１４３０３、ＡＵＲＫＡ、ＲＰＬ１４－ＰＳ１、ＱＴＲＴ２、Ｇ６ＰＣ、Ｃ８Ｂ、ＤＹＮＬＬ１、ＬＣＮ２、ＬＲＧ１、ＣＥＢＰＤ、ＣＯＬ４Ａ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＲＳＡＤ２、９３３０１６２Ｇ０２ＲＩＫ、ＰＩＮＸ１、ＳＲＡ１、ＳＰＡＴＡ２Ｌ、ＰＮＲＣ１、ＭＵＰ２０、ＩＬ６ＲＡ、ＡＰＯＡ１、ＩＬ１Ｂ、ＷＤＲ５４、ＣＴＣＦＬＯＳ、ＧＭ１６９７３、４６３２４２７Ｅ１３ＲＩＫ、ＩＧＨＧ２Ｂ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＳＥＬＥＮＢＰ２、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＮＥＸＮ、ＺＦＰ６５３、ＮＯＢ１、ＰＣＫ１、ＦＡＭ２５Ｃ、ＭＡＰＫ１５、ＧＭ１６５５１、ＥＳＭ１、ＲＰＬ３７ＲＴ、ＦＡＭ１３３Ｂ、ＰＤＥ８Ｂ、ＴＵＴ１、Ｓ１００Ａ１１、ＰＤＩＬＴ、ＰＰＡＲＤ、ＩＥＲ２、ＧＭ１５４０１、ＭＸ２、ＷＮＫ４、Ｇ０Ｓ２、ＢＣ００５５６１、ＡＡ９８６８６０、ＪＤＰ２、ＧＭ２６９８２、ＮＯＰ５８、ＡＣＴＢ、ＧＭ１４５８６、ＲＰＰ３８、ＧＭ１３４３６、ＮＴ５ＤＣ２、ＩＭＰＤＨ１、ＣＹＴＩＰ、ＡＩ８４６１４８、ＣＨＫＡ、ＧＭ３７９６３、ＮＲ０Ｂ２、ＣＹＰ４Ａ３２、ＡＬＫＢＨ２、ＦＡＵ－ＰＳ２、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＫＬＦ２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＧＭ１３３４１、ＩＧＨＭ、ＳＡＴＢ１、ＳＮＲＰＦ、ＤＮＡＳＥ１Ｌ２、ＣＤ３ＥＡＰ、ＧＭ２７８８、ＤＡＮＣＲ、ＺＦＰ６１２、ＮＯＰ５６、ＪＵＮＤ、ＩＤ１、ＨＳＰＢ１、ＫＬＨＤＣ８Ａ、ＫＬＦ１０、ＡＮＧＰＴ２、ＴＨＢＳ１、ＧＭ４４８９１、ＧＭ９７５２、ＡＢＬＩＭ３、ＰＴＧＥＳ、ＧＭ２８４３８、２４１０００２Ｆ２３ＲＩＫ、ＦＯＳＬ２、ＣＲＩＰ３、ＪＵＮ、ＡＬＡＳ１、ＧＭ２０００、ＲＨＯＣ、ＬＭＣＤ１、ＧＭ２０６１、ＧＭ４２５９５、ＧＭ１１４７８、ＩＫＺＦ２、ＰＮＬＤＣ１、ＣＯＭＴＤ１、ＳＮＯＲＡ３１、ＣＯＬ２０Ａ１、ＡＫＡＰ１２、Ｃ１ＱＴＮＦ１２、１８１００３２Ｏ０８ＲＩＫ、２３１００３３Ｐ０９ＲＩＫ、ＧＭ４７５２８、ＳＥＲＰＩＮＥ２、ＮＰＦＦ、ＳＥＲＰＩＮＡ３Ｋ、ＲＦＸＡＮＫ、ＩＧＫＶ５－３９、ＮＡＢ２、ＭＡＦＦ、ＣＥＰ８５、ＣＳＡＤ、ＬＴＢ４Ｒ１、１８１００１２Ｋ０８ＲＩＫ、ＢＣＬ７Ｃ、ＮＲＢＰ２、ＮＬＥ１、ＡＬＫＢＨ１、ＡＲＩＤ５Ａ、ＣＦＡＰ４３、ＧＭ４５７６７、ＣＤ８Ａ、ＰＰＲＣ１、ＧＭ２６８７０、ＴＭＣ７、ＢＣＬ６Ｂ、ＧＭ１６３４８、ＧＭ２６９８１、ＳＬＣ１６Ａ３、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＣＹＰ２Ｊ９、ＮＲ４Ａ２、ＭＭＰ９、ＭＩＲ１７ＨＧ、ＴＭＥＭ１９１Ｃ、ＰＣＤＨ１１Ｘ、ＨＩＬＰＤＡ、ＲＡＰＧＥＦ４、ＧＭ１７３００、ＳＬＣ２５Ａ４７、ＫＣＮＪ２、ＮＹＡＰ１、ＬＡＸ１、ＲＰＳ１９－ＰＳ３、ＨＥＳ１、ＲＧＳ１６、ＤＵＳＰ１、ＧＭ４３３２３、ＡＳＢ４、ＭＵＣ６、ＧＭ１５５０２、ＵＮＧ、ＦＯＸＱ１、ＧＭ１７９３６、ＵＢＥ２Ｃ、ＳＬＣ１６Ａ６、ＭＩＲ７０５２、ＮＬＲＰ１２、ＧＭ１４２８６、ＦＧＦ２１、ＫＬＦ５、ＧＭ３７９６９、ＰＦ４、ＧＭ２１７３８、ＨＯＴＡＩＲＭ１、ＧＭ６４９３、ＬＯＲ、ＭＦＳＤ２Ｂ、ＭＡＴＫ、ＳＹＮＥ４、ＧＭ４４６９４、ＴＲＢＣ１、ＧＭ３７２７４、ＰＬＮ、ＣＸＣＲ４、ＰＨＦ２４、ＳＮＯＲＤ１０４、ＳＥＲＰＩＮＡ７、ＲＧＳ４、ＴＣＩＭ、ＥＧＦＲ、ＧＭ３７７６０、ＦＢＸＬ２２、ＴＥＤＣ２、ＥＮＨＯ、ＧＭ２６９１７、ＧＭ４３７７５、４８３３４１１Ｃ０７ＲＩＫ、ＧＭ４５０５３、ＩＮＨＢＢ、ＯＰＮ３、ＳＮＨＧ１５、Ｂ２３０２０６Ｈ０７ＲＩＫ、ＫＣＮＥ３、ＧＭ４３３０５、Ｃ５３００４３Ｋ１６ＲＩＫ、ＫＬＦ４、ＬＥＰＲ、ＪＣＨＡＩＮ、ＴＳＫＵ、ＬＧＡＬＳ４、ＰＣＰ４Ｌ１、ＧＭ４４８２９、ＤＵＳＰ８、ＧＭ４４６２０、ＩＧＦＢＰ１、ＪＵＮＢ、ＧＭ３２０１７、ＧＭ２８１４、ＧＭ３７１４４、ＭＹＡＤＭＬ２ＯＳ、ＧＭ３７６６６、ＨＤＣ、ＳＬＦＮ４、Ａ５３００４１Ｍ０６ＲＩＫ、ＧＭ４３３５９、ＧＭ２６０２、ＧＭ１０２７７、ＦＡＭ２２２Ａ、ＦＯＸＡ３、ＡＯＣ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１Ｅ、ＣＴＸＮ１、ＲＡＰＧＥＦ４ＯＳ２、ＳＯＣＳ２、ＰＰＡＮ、ＰＲＫＡＧ２ＯＳ１、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＨＯＸＡ５、ＧＲＨＬ１、ＥＩＦ４ＥＢＰ３、ＯＳＧＩＮ１、ＧＭ２８５１３、ＭＡＰ３Ｋ６、ＳＬＣ３４Ａ２、Ｂ６３００１９Ａ１０ＲＩＫ、ＩＧＫＣ、ＰＬＩＮ４、ＡＮＧＰＴＬ４、ＤＵＳＰ５、ＥＧＲ１、ＧＭ４２５０７、ＧＭ１４２５７、ＡＰＯＬＤ１、ＩＥＲ３、ＺＢＴＢ１６、ＧＭ３７０３３、ＩＧＬＣ１、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＩＧＬＣ３、ＧＭ４５２４４、ＲＧＳ１、ＣＸＣＬ１、ＲＮＦ２２５、ＧＭ４４００５、ＡＮＫＲＤ３７、ＮＲ４Ａ１、ＧＭ８８９３、ＧＭ２６７６２、ＣＤＫＮ１Ａ、５３３０４０６Ｍ２３ＲＩＫ、ＩＧＬＶ１、ＩＧＫＶ３－２、ＦＯＳ、ＧＭ４３６３７、ＩＧＫＶ３－１０、Ｓ１００Ａ９、ＧＭ１５６２２、Ｓ１００Ａ８、ＭＴ１、ＲＥＴＮＬＧ、ＭＴ２、ＩＧＫＶ１９－９３、ＧＭ４５７７４、及びＳＥＲＰＩＮＡ４－ＰＳ１からなる群から選択される対象の肝臓における１つ又は複数（例えば、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１５以上、２０以上、３０以上）の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、減少（例えば、約１％の減少～約１００％の減少、又は本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のいずれか）をもたらす。

【0216】

いくつかの実施形態では、投与は、ＤＢＰ、ＩＧＫＶ４－５５、ＰＥＲ３、ＭＵＰ－ＰＳ１０、ＧＰＡＭ、ＴＭＰＲＳＳ４、ＭＵＰ－ＰＳ１４、ＡＣ１６６０７８．１、ＭＵＰ－ＰＳ１２、ＧＭ２０６５、Ａ５３００２０Ｇ２０ＲＩＫ、ＡＣＳＳ２ＯＳ、ＤＣＬＫ３、ＫＬＦ１２、ＧＭ４４６６９、ＭＦＳＤ９、Ｂ４ＧＡＬＮＴ３、ＧＭ３７７６、ＴＭＥＭ１６７－ＰＳ１、ＫＲＴ２３、ＬＭＢＲＤ２、ＧＭ２２９３５、ＳＵＬＴ２Ａ－ＰＳ１、ＳＮＡＩ３、ＧＭ１５９０８、ＭＩＲ６３９２、ＡＣＳＳ２、ＮＲ１Ｄ１、ＢＣ０４９９８７、ＣＣＤＣ８５Ｃ、ＣＥＳ２Ｃ、ＡＣＰＰ、ＭＵＰ２、ＰＴＫ６、ＵＧＴ１Ａ５、１８１０００８Ｉ１８ＲＩＫ、ＩＬ２２ＲＡ１、ＡＣＳＳ３、ＡＤＮＰ、ＲＤＨ１６、ＳＮＴＢ１、４９３３４１１Ｋ１６ＲＩＫ、ＮＴＲＫ２、ＥＸＴＬ１、ＰＳＴＰＩＰ２、ＲＡＳＳＦ６、ＡＱＰ４、ＵＧＴ１Ａ９、ＰＲＯＭ１、ＺＦＰ６０８、ＦＡＭ１３Ａ、ＮＦＥ２、ＴＥＦ、ＴＮＦＡＩＰ８Ｌ３、ＳＣＤ１、ＭＭＤ２、ＳＹＮＥ３、ＡＣＬＹ、Ｃ３３００２１Ｆ２３ＲＩＫ、ＳＴＯＮ２、ＬＲＦＮ４、ＨＨＩＰＬ１、ＷＮＴ９Ｂ、ＮＲ１Ｄ２、１８１００４９Ｊ１７ＲＩＫ、ＰＤＰＲ、ＮＡ、ＧＭ４５８８４、ＳＬＣ２Ａ５、ＦＡＭ８３Ｆ、ＺＦＰ５２６、ＳＧＫ２、ＧＭ４３０８０、ＤＥＡＦ１、ＭＥ１、ＢＭＦ、ＷＤＦＹ２、ＡＤＣＹ９、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ１１、ＬＹＳＴ、ＬＲＴＭ１、ＯＡＴ、ＶＰＳ１３Ｃ、Ｅ３３００１１Ｏ２１ＲＩＫ、Ｐ２ＲＹ４、ＧＭ１１４３７、ＲＷＤＤ２Ａ、ＳＶＩＬ、ＥＣＨＤＣ１、ＴＲＩＭ１４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＴＲＨＤＥ、ＭＡＳＰ１、２９０００９７Ｃ１７ＲＩＫ、ＮＤＳＴ１、ＲＤＨ９、１１１０００２Ｌ０１ＲＩＫ、ＡＢＴＢ２、ＲＧＲ、ＡＣＡＣＢ、ＳＡＣＭ１Ｌ、ＤＹＲＫ２、ＲＯＢＯ１、ＧＭ４４７４４、ＥＩＦ４ＥＢＰ２、ＫＬＨＬ２４、ＣＹＰ２Ａ５、ＴＩＡＭ２、ＲＡＢ４３、ＧＭ１３８５５、９１３０４０９Ｉ２３ＲＩＫ、ＳＴＯＮ１、ＵＳＰ９Ｘ、ＵＧＴ３Ａ１、９０３０６１６Ｇ１２ＲＩＫ、ＤＯＣＫ８、ＫＬＢ、ＡＣＥ、ＶＬＤＬＲ、ＰＣＤＨＧＣ３、ＡＢＣＡ６、４９３２４２２Ｍ１７ＲＩＫ、ＧＭ４５８３８、ＦＡＲＰ２、ＧＭ４７２０５、ＳＰ４、ＵＧＴ１Ａ６Ｂ、ＫＬＨＬ２８、Ｄ１３００４３Ｋ２２ＲＩＫ、ＡＳＩＣ５、ＰＭ２０Ｄ２、Ａ１ＣＦ、ＳＯＲＢＳ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＧＭ１０６４２、ＵＴＰ１４Ｂ、ＧＭ３８３９４、ＡＦＰ、ＩＮＳＩＧ１、ＨＮＦ１ＡＯＳ２、ＭＥＴＴＬ４、ＬＳＳ、ＭＴＭＲ９、ＨＭＧＣＲ、ＧＤＡＰ１０、ＡＤＲＡ１Ａ、ＺＦＰ７７３、ＣＲＫＬ、ＣＨＲＮＥ、ＳＴＡＲＤ１３、ＣＲＹ２、ＦＡＤＳ２、ＣＯＧ５、ＦＶ１、ＲＣＡＮ２、ＡＢＣＢ１Ａ、ＰＰＡＲＡ、ＡＴＰ７Ａ、ＭＶＤ、２６１００３７Ｄ０２ＲＩＫ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＵＣＮＲ１、ＥＣＩ３、ＡＢＣＣ４、ＬＮＣＢＡＴＥ１、ＭＩＮＤＹ２、ＢＴＢＤ７、４９３３４０４Ｏ１２ＲＩＫ、ＡＢＣＤ１、ＦＭＮ１、ＦＮＩＰ２、ＡＢＨＤ１５、ＮＫＸ２－６、Ｃ７７０８０、ＧＭ４３６１１、ＳＧＴＢ、ＡＣＳＬ３、ＮＲ５Ａ２、ＦＡＭ１９８Ａ、ＫＣＴＤ７、ＡＣＡＣＡ、ＺＦＰ９５５Ｂ、ＳＵＬＴ２Ａ３、ＦＺＤ４、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ３Ａ５９、ＺＦＰ３５４Ｂ、ＴＮＦＳＦ１０、ＳＥＳＮ３、ＭＮ１、ＲＮＦ１５２、ＤＨＣＲ２４、ＳＰＨＫ２、ＳＹＴＬ５、ＧＭ６６５２、ＢＡＨＣＣ１、ＧＡＲＥＭ１、ＭＦＳＤ４Ａ、ＨＧＦ、ＧＭ３５７１、ＮＯＳ１ＡＰ、ＤＩＸＤＣ１、ＫＡＮＫ１、ＲＥＰＳ２、ＡＳＡＨ２、ＳＥＭＡ３Ｂ、ＲＮＦ１０３、ＺＣ３Ｈ１２Ｃ、ＣＤＳ２、ＤＣＵＮ１Ｄ４、２９０００２６Ａ０２ＲＩＫ、ＣＹＹＲ１、ＥＥＰＤ１、Ｐ２ＲＹ２、ＣＹＰ２Ｃ３９、ＳＥＣ２２Ｃ、ＥＨＨＡＤＨ、ＡＢＣＡ３、ＨＩＰＫ２、ＲＢＭ２０、ＧＲＡＭＤ４、ＦＣＨＳＤ２、ＭＯＢ３Ａ、ＨＭＧＮ３、ＫＬＨＤＣ７Ａ、ＶＣＰ－ＲＳ、ＴＥＲＴ、ＣＹＰ３Ａ４１Ｂ、ＡＲＬ１３Ｂ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＴＬＣＤ２、ＳＮＨＧ１１、ＳＯＲＬ１、ＧＰＲ１５７、ＤＮＡＪＡ４、ＴＭＥＭ２５３、ＴＡＣＯ１、ＳＰＡＴＡ５Ｌ１、ＲＨＢＧ、ＣＯＬ１５Ａ１、ＰＣＤＨ１２、ＩＲＳ１、ＡＳＣＣ３、ＫＩＦ１６Ｂ、及びＭＲ１からなる群から選択される対象の肝臓における１つ以上の遺伝子の発現の、投与前の対象における１つ以上の遺伝子の発現レベルと比較した、増加をもたらす。

【0217】

いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）又はメタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、肝疾患（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的な肝疾患のいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、肝疾患は、脂肪肝疾患、脂肪肝、急性肝性ポルフィリン症、アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、アルファ－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、良性肝腫瘍、胆管がん、胆道閉鎖症、バッド・キアリ症候群、肝硬変、クリグラー・ナジャー症候群、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、肝性脳症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝腎症候群、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、リソソーム酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、肝がん、新生児黄疸、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ）、ライ症候群、１型糖原病、及びウィルソン病の群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、メタボリックシンドローム（例えば、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の例示的なメタボリックシンドロームのいずれか）を有すると以前に同定又は診断されたことがある。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、冠動脈心疾患、肺疾患、胆嚢疾患、脂質異常症、高血圧症、２型糖尿病、認知症、がん、多嚢胞性卵巣症候群を含む婦人科異常、変形性関節症、膵炎、特発性頭蓋内圧亢進症、脳卒中、及び白内障の群から選択される。

【0218】

いくつかの実施形態では、対象は、２型真性糖尿病を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪萎縮を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪異栄養症を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、肝硬変を有すると以前に同定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有すると以前に特定又は診断されたことがない。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性脂肪性肝炎を有すると以前に同定又は診断されたことがない。

【0219】

追加の治療用物質
本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態は、治療有効量の１つ以上の追加の治療用物質を対象（例えば、本明細書に記載の対象のいずれか）に投与することを更に含むことができる。１つ以上の追加の治療用物質は、多重鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）と実質的に同時に対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載される多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）の投与前に、１つ以上の追加の治療用物質を対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、多重鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載多重鎖キメラポリペプチドのいずれか）を対象に投与した後に、１つ以上の追加の治療用物質を対象に投与することができる。

【0220】

追加の治療用物質の非限定的な例としては抗炎症剤、抗がん剤、活性化受容体アゴニスト、免疫チェックポイント阻害剤、ＨＬＡ特異的阻害性受容体を遮断するための作用物質、グルコゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ）３阻害剤、抗体、及びエクスビボ活性化免疫細胞が挙げられる。

【0221】

抗がん剤の非限定的な例としては、代謝拮抗薬（例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、メトトレキサート、６－チオグアニン、クラドリビン、ネララビン、ペントスタチン、又はペメトレキセド）、植物アルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、カンプトテシン、９－メトキシカンプトテシン、コロナリジン、タキソール、ナウクレオラルズ（ｎａｕｃｌｅａｏｒａｌｓ）、ジプレニル化インドールアルカロイド、モンタミン、シスキニイン、プロトベルベリン、ベルベリン、サンギナリン、ケレリトリン、ケリドニン、リリオデニン、クリボリン、β－カルボリン、アントフィン、チロホリン、クリプトレピン、ネオクリプトレピン、コリノリン、サンパンギン、カルバゾール、クリナミン、モンタニン、エリプチシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、テニソピド、イリノテカン、トポテカン、又はアクリドンアルカロイド）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ラクタシスチン、ジスルフィラム、エピガロカテキン－３－ガレート、マリゾミブ（サリノスポラミドＡ）、オプロゾミブ（ＯＮＸ－０９１２）、デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）、エポキソミシン、ＭＧ １３２、β－ヒドロキシβ－メチルブチレート、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、又はイキサゾミブ）、抗腫瘍抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、アクチノマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン又はブレオマイシン）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタット、パノビノスタット、ベリノスタット、ジビノスタット、アベキシノスタット、デプシペプチド、エンチノスタット、酪酸フェニル、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ダシノスタット、モセチノスタット、プラシノスタット、ニコチンアミド、カンビノール、テノビン１、テノビン６、シルチノール、リコリノスタット、テフィノスタット、ケベトリン、キシノスタット、レスミノスタット、タセジナリン、シダミド、又はセリシスタット）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、アキシチニブ、ダサチニブ、エンコラチニブ、エルロチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ及びスニチニブ）、及び化学療法剤（例えば、全トランス型レチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ドキシフルリジン、エポチロン、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ベムラフェニブ及びレナリドミド）が挙げられる。化学療法剤の更なる例としては、アルキル化剤、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、イホスファミド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、アルトレタミン、プロカルバジン、ダカルバジン、テモゾロミド、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンが挙げられる。

【0222】

活性化受容体アゴニストの非限定的な例としては、抗ＣＤ１６抗体（例えば、抗ＣＤ１６／ＣＤ３０二重特異性モノクローナル抗体（ＢｉＭＡＢ））及びＦｃベースの融合タンパク質を含む、ＮＫ細胞の細胞傷害性を活性化及び増強する受容体を活性化するための任意のアゴニストが挙げられる。チェックポイント阻害剤の非限定的な例としては、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ＭＥＤＩ０６８０）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、ＢＣＤ－１３５、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＣＢＴ－５０２、ＣＫ－３０１、ＣＳ１００１、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＭＤＸ－１１０５、ＭＳＢ２３１１、ＳＨＲ－１３１６、抗ＰＤ－Ｌ１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体ＫＮ０４６、抗ＰＤ－Ｌ１／ＴＧＦβＲＩＩ融合タンパク質Ｍ７８２４、抗ＰＤ－Ｌ１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体ＬＹ３４１５２４４、アテゾリズマブ、又はアベルマブ）、抗ＴＩＭ３抗体（例えば、ＴＳＲ－０２２、Ｓｙｍ０２３、又はＭＢＧ４５３）、及び抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ＡＧＥＮ１８８４、ＭＫ－１３０８、又は抗ＣＴＬＡ－４／ＯＸ４０二重特異性抗体ＡＴＯＲ－１０１５）が挙げられる。ＨＬＡ特異的阻害性受容体を遮断するための作用物質の非限定的な例としては、モナリズマブ（例えば、抗ＨＬＡ－Ｅ ＮＫＧ２Ａ阻害性受容体モノクローナル抗体）が挙げられる。ＧＳＫ３阻害剤の非限定的な例としては、チデグルシブ又はＣＨＩＲ９９０２１が挙げられる。更なる治療用物質として使用することができる抗体の非限定的な例としては、抗ＣＤ２６抗体（例えば、ＹＳ１１０）、抗ＣＤ３６抗体、及びＮＫ細胞上のＦｃ受容体（例えば、ＣＤ１６）に結合して活性化することができる任意の他の抗体又は抗体構築物が挙げられる。いくつかの実施形態では、更なる治療用物質は、インスリン又はメトホルミンであり得る。

【0223】

インビトロ活性化免疫細胞の非限定的な例としては、制御性Ｔ細胞、ＣＡＲ制御性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びＣＡＲ細胞傷害性Ｔ細胞が挙げられる。

【実施例】

【0224】

本発明を以下の実施例において更に説明するが、これらは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。

【0225】

実施例１．例示的な多重鎖キメラポリペプチドの構築及びその特性の評価
２つの多重鎖キメラポリペプチドを作製し、それらの特性を評価した。２つの多重鎖キメラポリペプチドの各々は、第１の標的結合ドメイン及びドメインの親和性対の第１のドメインに共有結合した可溶性組織因子ドメインを含む第１のキメラポリペプチドを含む。２つの多重鎖キメラポリペプチドのそれぞれにおける第２のキメラポリペプチドは、ドメインの親和性対の第２のドメイン、及び第２の標的結合ドメインを含む。

【0226】

多重鎖キメラポリペプチドの構築の基礎となる論理の説明
組織因子（ＴＦ）は、２３６アミノ酸残基を含有する安定な膜貫通タンパク質である。組織因子の短縮型組換え２１９アミノ酸細胞外ドメインは可溶性であり、細菌又は哺乳動物細胞において高レベルで発現されることが知られている。特定の理論に束縛されることを望むものではないが、本出願人らは、２１９－ａａ組織因子が、独特の多重鎖キメラポリペプチドの作製のためのコネクターリンカーとして使用され得ると推測した。

【0227】

可溶性組織因子ドメインを含む第１のキメラポリペプチドは、発酵ブロス中で増殖させたＣＨＯ細胞によって高レベルで産生された。これらの第１のキメラポリペプチドを、固体マトリックス上に結合させた抗組織因子モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって精製した。注目すべきことに、組織因子は、ＦＶＩＩａ及びＦＸに対する結合部位を含む。ＦＸに対する組織因子－ＦＶＩＩａ複合体の触媒活性は、組織因子がリン脂質二重層に固定されていない場合、約１００万倍低い。したがって、特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本出願人らは、第１のキメラポリペプチドの構築において膜貫通を伴わない組織因子の２１９－ａａの細胞外ドメインを使用することにより、第１のキメラポリペプチドにおける組織因子の凝固促進活性が排除され得ると推測した。２１９－ａａ組織因子の凝固促進活性を更に低減又は排除するために、組織因子における選択変異を、特にＦＶＩＩａ結合部位の結合エネルギーに寄与することが知られている７アミノ酸残基において作製することができる。

【0228】

記載されたキメラポリペプチドの結合相互作用の特徴決定
第１及び第２のキメラポリペプチドが互いに結合して多重鎖キメラポリペプチドを形成するかどうかを決定するために、インビトロで結合アッセイを行った。可溶性組織因子ドメインを含む第１のキメラポリペプチドが抗ＴＦ ｍＡｂによって認識及び結合されるかどうかを決定するために、インビトロ結合アッセイを行った。注目すべきことに、データは、変異組織因子タンパク質が、組織因子上のＦＸ結合部位に結合することが知られている抗ＴＦ ｍＡｂによって依然として認識され、選択的に結合されることを示した。ｓｃＦｖ又はサイトカインに共有結合した可溶性組織因子ドメインを含む第１のキメラポリペプチド（図１及び図２を参照のこと）が、機能的ｓｃＦｖ又はサイトカインを有するかどうかを決定するために、インビトロ結合アッセイを実施した。前述のアッセイからのデータは、予想される生物学的活性を有する精製された第１のキメラポリペプチドと一致した（例えば、ｓｃＦｖは、予想される標的抗原に選択的に結合するか、又はサイトカインは、予想される受容体若しくは結合タンパク質に選択的に結合する）。

【0229】

加えて、互いに結合した第１及び第２のキメラポリペプチドを含む２つの多重鎖キメラポリペプチドを使用して行われた実験は、予想される標的結合活性を実証する（例えば、多重鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメインによって特異的に認識される標的及び第２の標的結合ドメインによって特異的に認識される標的に特異的に結合する）。

【0230】

前述の結果に基づいて、本出願人らは、可溶性組織因子コネクターリンカーが、ｓｃＦｖ、インターロイキン、サイトカイン、インターロイキン受容体、又はサイトカイン受容体のいずれかをコードするポリペプチドを、可溶性組織因子ドメインに対して、及び互いに対して三次元空間において適切に提示することを提供又は可能にし、その結果、それぞれが予想される生物学的特性及び活性を保持したと結論付けた。

【0231】

第１及び第２のキメラポリペプチドの両方が同時発現された場合、ヘテロ二量体複合体は、高レベルで発酵ブロス中に分泌された。複合体を捕捉し、アフィニティークロマトグラフィを用いて固体マトリックスに結合した抗ＴＦ ｍＡｂによって容易に精製した。これらの多重鎖キメラポリペプチドの第１及び第２の標的結合ドメインは、インビトロ結合アッセイによってアッセイされるように、それらの予想される生物学的活性を保持した。したがって、多重鎖キメラポリペプチドのアセンブリは、生物学的活性のためのドメインの適切な空間ディスプレイ及びフォールディングを提供する。重要なことに、多重鎖キメラポリペプチドの空間的配置は、組織因子上のＦＸ結合部位を妨害せず、これは、アフィニティー精製のための抗ＴＦ ｍＡｂの使用を可能にする。

【0232】

記載されたキメラポリペプチドの安定性の特徴決定
両方の精製多重鎖キメラポリペプチドは安定である。これらの多重鎖キメラポリペプチドは、ヒト血清中、３７℃で７２時間インキュベートした場合、構造的にインタクトであり、完全に生物学的に活性である。

【0233】

記載されたキメラポリペプチドの凝集する傾向の特徴決定
開発された両方の精製多重鎖キメラポリペプチドは、ＰＢＳ中で４℃で保存した場合に凝集体を形成しない。

【0234】

記載されたキメラポリペプチドの粘度の特徴決定
多重鎖キメラポリペプチドがＰＢＳ中５０ｍｇ／ｍＬもの高濃度で製剤化される場合、粘度の問題はない。

【0235】

多重鎖キメラポリペプチドプラットフォームの更なる適用
これらの研究からのデータは、本明細書に記載されるプラットフォーム技術が、接着分子、受容体、サイトカイン、リガンド、及びケモカインを含むがこれらに限定されない、本明細書に記載されるフォーマットのいずれかにおいて、抗体に由来する標的結合ドメインに融合され得る分子を作製するために利用され得ることを示す。適切な標的結合ドメインにより、得られた多重鎖キメラポリペプチドは、様々な免疫エフェクター細胞のコンジュゲーションを促進し、がん細胞、ウイルス感染細胞、又は老化細胞を含む標的細胞の破壊を媒介することができる。多重鎖キメラポリペプチド中の他のドメインは、標的細胞に対するエフェクター細胞の細胞傷害性を増強するために、免疫系を刺激し、活性化し、誘引する。

【0236】

実施例２：ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ融合タンパク質の生成及び特徴決定
ＴＧＦβ受容体ＩＩ／ＩＬ－１５ＲαＳｕ及びＴＧＦβ受容体ＩＩ／ＴＦ／ＩＬ－１５融合タンパク質を含む融合タンパク質複合体を生成した（図３及び図４）。ヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ（Ｉｌｅ２４－Ａｓｐ１５９）、組織因子２１９、及びＩＬ－１５配列をＵｎｉＰｒｏｔウェブサイトから入手し、これらの配列のＤＮＡをＧｅｎｅｗｉｚによって合成した。具体的には、２つのＴＧＦβ受容体ＩＩ配列をＧ４Ｓ（３）リンカーと連結してＴＧＦβ受容体ＩＩの一本鎖バージョンを生成し、次いで組織因子２１９のＮ末端コード領域、続いてＩＬ－１５のＮ末端コード領域に直接連結コード領域に連結する構築物を作製した。

【0237】

ＩＬ－１５のＮ末端に続く組織因子２１９のＮ末端に連結された２つのＴＧＦβ受容体ＩＩを含む構築物の核酸配列及びタンパク質配列を以下に示す。

【0238】

２つのＴＧＦβ受容体ＩＩ／ＴＦ／ＩＬ－１５構築物の核酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は、以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ
（２つのヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ断片）
ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ
（ヒト組織因子２１９）
ＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧ
（ヒトＩＬ－１５）
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号５９）

【0239】

ＴＧＦβ受容体ＩＩ／ＴＦ／ＩＬ－１５融合タンパク質のアミノ酸配列（リーダー配列を含む）は以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（ヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ）
ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ
（ヒト組織因子２１９）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ
（ヒトＩＬ－１５）
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号７）

【0240】

２つのＴＧＦβ受容体ＩＩを、Ｇｅｎｅｗｉｚによって合成されたＩＬ－１５ＲαＳｕ鎖に直接結合させることによっても、構築物を作製した。ＩＬ－１５ＲαＳｕのＮ末端に連結されたＴＧＦβ受容体ＩＩを含む構築物の核酸及びタンパク質配列を以下に示す。

【0241】

ＴＧＦβ受容体ＩＩ／ＩＬ－１５ ＲαＳｕ構築物の核酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は、以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ
（２つのヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ断片）
ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ
（ヒトＩＬ－１５Ｒαスシドメイン）
ＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号６１）

【0242】

２つのＴＧＦβ受容体ＩＩ／ＩＬ－１５ＲαＳｕ構築物のアミノ酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は、以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（２つのヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ細胞外ドメイン）
ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ
（ヒトＩＬ－１５Ｒαスシドメイン）
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号８）

【0243】

いくつかの場合において、リーダーペプチドは、インタクトなポリペプチドから切断されて、可溶性又は分泌され得る成熟形態を生成する。

【0244】

ＴＧＦβＲ／ＩＬ－１５ＲαＳｕ及びＴＧＦβＲ／ＴＦ／ＩＬ－１５構築物を、以前に記載されたように改変レトロウイルス発現ベクターにクローニングし（Ｈｕｇｈｅｓ ＭＳ，Ｙｕ ＹＹ，Ｄｕｄｌｅｙ ＭＥ，Ｚｈｅｎｇ Ｚ，Ｒｏｂｂｉｎｓ ＰＦ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ａ ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｍａｒｋｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｏｎｖｅｙｓ ｈｉｇｈｌｙ ａｃｔｉｖｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００５；１６：４５７－７２）、発現ベクターをＣＨＯ－Ｋ１細胞にトランスフェクトした。ＣＨＯ－Ｋ１細胞における２つの構築物の同時発現は、可溶性ＴＧＦβＲ／ＴＦ／ＩＬ－１５：ＴＧＦβＲ／ＩＬ－１５ＲαＳｕタンパク複合体（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓと呼ばれる）の形成及び分泌を可能にし、これは抗ＴＦ ＩｇＧ１親和性及び他のクロマトグラフィ法によって精製することができる。

【0245】

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＴＧＦβ細胞におけるＴＧＦβ１活性に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの効果
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓにおけるＴＧＦβＲＩＩの活性を評価するために、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＴＧＦβ細胞におけるＴＧＦβ１の活性に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの効果を分析した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＴＧＦβ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を、予め温めたＰＢＳで２回洗浄し、試験培地（ＤＭＥＭ、１０％熱不活性化ＦＣＳ、１×グルタミン、１×ａｎｔｉ－ａｎｔｉ、及び２×グルタミン）中に５×１０^５細胞／ｍＬで再懸濁した。平底９６ウェルプレートにおいて、５０μＬの細胞を各ウェルに添加し（２．５ｘ１０^４細胞／ウェル）、続いて５０μＬの０．１ｎＭ ＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。次いで、１：３連続希釈で調製したＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ又はＴＧＦＲ－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をプレートに添加して、２００μＬの総容量に到達させた。３７℃で２４時間インキュベートした後、４０μＬの誘導ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＴＧＦβ細胞上清を、平底９６ウェルプレート中の１６０μＬの予め温めたＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に添加し、３７℃で１～３時間インキュベートした。次いで、６２０～６５５ｎＭでプレートリーダー（Multiscan Sky）を使用してＯＤ値を決定した。各タンパク質試料のＩＣ_５０をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０４で計算した。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＴＧＦＲ－ＦｃのＩＣ_５０は、それぞれ２１６．９ｐＭ及び４６０．６ｐＭであった。これらの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓにおけるＴＧＦβＲＩＩドメインが、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＴＧＦβ細胞におけるＴＧＦβ１の活性を遮断することができることを示した（図５）。

【0246】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲ中のＩＬ－１５は、ＩＬ－２ Ｒβ及び共通γ鎖含有３２Ｄβ細胞増殖を促進する
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓにおけるＩＬ－１５の活性を評価するために、ＩＬ２Ｒβ及び共通γ鎖を発現する３２Ｄβ細胞を使用し、細胞増殖の促進に対するそれらの効果を評価して、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓのＩＬ－１５活性を組換えＩＬ－１５と比較した。ＩＬ－１５依存性３２Ｄβ細胞をＩＭＤＭ－１０％ＦＢＳで５回洗浄し、ウェルに２×１０^４細胞／ウェルで播種した。連続希釈したＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ又はＩＬ－１５を細胞に添加した（図６）。細胞を３７^ｏＣのＣＯ_２インキュベータ内で３日間インキュベートした。３日目に１０μＬのＷＳＴ１を各ウェルに添加し、３７^ｏＣのＣＯ_２インキュベータ内で更に３時間インキュベートすることによって、細胞増殖を検出した。４５０ｎｍでの吸光度を、生成されたホルマザン色素の量を分析することによって測定した。図５に示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＩＬ－１５は３２Ｄβ細胞増殖を促進し、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＩＬ－１５のＥＣ_５０はそれぞれ１９０１ｐＭ及び１０．６３ｐＭであった。

【0247】

ＥＬＩＳＡを用いた、対応する抗体によるＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ中のＩＬ－１５及びＴＧＦβＲＩＩドメインの検出
９６ウェルプレートを、Ｒ５（コーティング緩衝液）中の１００μＬ（８μｇ／ｍＬ）の抗ＴＦ ＩｇＧ１でコーティングし、室温（ＲＴ）で２時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、１００μＬのＰＢＳ中１％ＢＳＡでブロッキングした。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを１：３連続希釈で添加し、室温で６０分間インキュベートした。３回洗浄した後、５０ｎｇ／ｍＬのビオチン化抗ＩＬ－１５抗体（ＢＡＭ２４７、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）又は２００ｎｇ／ｍＬのビオチン化抗ＴＧＦβＲＩＩ抗体（ＢＡＦ２４１、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をウェルに添加し、室温で６０分間インキュベートした。次に、プレートを３回洗浄し、ウェル当たり１００μＬの０．２５μｇ／ｍＬのＨＲＰ－ＳＡ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加し、室温で３０分間インキュベートし、続いて４回洗浄し、１００μＬのＡＢＴＳと共に室温で２分間インキュベートした。４０５ｎｍでの吸光度を読み取った。図７Ａ及び７Ｂに示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓにおけるＩＬ－１５及びＴＧＦβＲＩＩドメインは、個々の抗体によって検出された。

【0248】

抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムからのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの精製溶出クロマトグラフ
細胞培養から回収したＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを、５カラム容量のＰＢＳで平衡化した抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムにロードした。試料ローディング後、カラムを５カラム容量のＰＢＳで洗浄し、続いて６カラム容量の０．１Ｍ酢酸（ｐＨ ２．９）で溶出した。２８０溶出ピークを収集し、次いで１Ｍ Ｔｒｉｓ塩基でｐＨ７．５～８．０に中和した。次いで、中和された試料を、３０ｋＤａ分子量カットオフを有するＡｍｉｃｏｎ遠心分離フィルターを使用してＰＢＳに緩衝液交換した。図８に示すように、抗ＴＦアフィニティーカラムは、融合パートナーとしてＴＦを含有するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓに結合した。緩衝液交換したタンパク質試料を、更なる生化学的分析及び生物学的活性試験のために２～８℃で保存した。各溶出後、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムを、６カラム容量の０．１Ｍグリシン（ｐＨ２．５）を用いてストリッピングした。次いで、カラムを、５カラム容量のＰＢＳ及び７カラム容量の２０％エタノールを使用して中和して保存した。抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムをＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステムに接続した。流速は、２ｍＬ／分であった溶出工程を除いた全ての工程について４ｍＬ／分であった。

【0249】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの分析用サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）分析
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬゲル濾過カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）をＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）に接続した。カラムを２カラム容量のＰＢＳで平衡化した。流速は０．７ｍＬ／分であった。ＰＢＳ中にＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを含有する試料を、キャピラリーループを使用してＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラムに注入し、ＳＥＣによって分析した。試料のＳＥＣクロマトグラフを図９に示す。ＳＥＣの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓについて４つのタンパク質ピークを示した。

【0250】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓタンパク質の純度及び分子量を決定するために、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムで精製したタンパク質試料を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（４～１２％ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル）電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法により還元条件下で分析した。電気泳動後、ゲルをＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅで約３０分間染色し、続いて精製水中で一晩脱色した。

【0251】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓタンパク質がＣＨＯ細胞における翻訳後に糖鎖付加を受けることを確認するために、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏｌａｂｓからのＰｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｍｉｘ ＩＩキット及び製造業者の指示を用いて脱グリコシル化実験を行った。図１０は、非脱グリコシル化（赤色の輪郭のレーン１）及び脱グリコシル化（黄色の輪郭のレーン２）状態の試料の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓタンパク質がＣＨＯ細胞中で発現された場合にグリコシル化されることを示した。脱グリコシル化後、精製試料は、還元ＳＤＳゲルにおいて予想される分子量（６９ｋＤａ及び３９ｋＤａ）を示した。レーンＭには、１０ｕｌのＳｅｅＢｌｕｅ Ｐｌｕｓ２予備染色標準をロードした。

【0252】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの免疫刺激活性
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓは、２つのＴＧＦβＲＩＩドメイン、ヒト組織因子２１９断片、及びヒトＩＬ－１５、の可溶性融合体である、第１のポリペプチドと、２つのＴＧＦβＲＩＩドメイン、及びヒトＩＬ－１５受容体アルファ鎖のスシドメイン、の可溶性融合体である、第２のポリペプチドと、を含む多重鎖ポリペプチド（本明細書に記載されるＡ型多重鎖ポリペプチド）である。

【0253】

野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、対照溶液又は０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、若しくは１０ｍｇ／ｋｇの用量のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓのいずれかで皮下処置した。処置の４日後、脾臓重量及び脾臓に存在する種々の免疫細胞型の割合を評価した。図１１Ａに示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける脾臓重量は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの投与量の増加とともに増加した。更に、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける脾臓重量は、それぞれ、対照溶液で処置したマウスと比較して高かった。更に、対照処置マウス及びＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置マウスの脾臓内に存在するＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞の割合を評価した。図１１Ｂに示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置されたマウスの脾臓において、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の割合は両方とも、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの投与量の増加とともに増加した。特に、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合は、対照処置マウスと比較して、０．３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおいてより高く、ＮＫ細胞の割合は、対照処置マウスと比較して、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおいてより高かった。これらの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが脾臓内の免疫細胞、特にＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を刺激することができることを実証する。

【0254】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ分子の薬物動態を野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。マウスを３ｍｇ／ｋｇの用量のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで皮下処置した。マウス血液を様々な時点で尾静脈から採取し、血清を調製した。マウス血清中のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ濃度をＥＬＩＳＡ（捕捉：抗ヒト組織因子抗体；検出：ビオチン化抗ヒトＴＧＦβ受容体抗体、続いてペルオキシダーゼコンジュゲートストレプトアビジン及びＡＢＴＳ基質）で決定した。結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの半減期がＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて１２．６６時間であることを示した。

【0255】

マウスにおける経時的なＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの免疫刺激活性を評価するために、マウス脾細胞を調製した。図１２Ａに示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける脾臓重量は、処置後４８時間で増加し、経時的に増加し続けた。更に、対照処置マウス及びＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置マウスの脾臓内に存在するＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及びＣＤ１９^＋Ｂ細胞の割合を評価した。図１２Ｂに示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置されたマウスの脾臓において、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の割合は両方とも、処置の４８時間後に増加し、単回用量処置の後に経時的にますます高かった。これらの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが脾臓内の免疫細胞、特にＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を刺激することができることを更に実証する。

【0256】

更に、脾細胞のＫｉ６７発現に基づく免疫細胞の動的増殖及びグランザイムＢ発現に基づく細胞傷害能を、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの単回投与（３ｍｇ／ｋｇ）後にマウスから単離した脾細胞において評価した。図１３Ａ及び１３Ｂに示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置されたマウスの脾臓において、ＮＫ細胞によるＫｉ６７及びグランザイムＢの発現は、処置の２４時間後に増加し、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞のその発現は両方とも、単回用量処置の４８時間後及びその後の時点で増加した。これらの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の数を増加させるだけでなく、これらの細胞の細胞傷害性も増強することを実証する。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの単回投与処置は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を少なくとも４日間増殖させた。

【0257】

腫瘍細胞に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置マウス由来の脾細胞の細胞傷害性も評価した。マウスモロニー白血病細胞（Ｙａｃ－１）をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔで標識し、腫瘍標的細胞として使用した。脾細胞を、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）処置マウス脾臓から、処置後の様々な時点で調製し、エフェクター細胞として使用した。標的細胞をエフェクター細胞とＥ：Ｔ比＝１０：１で混合し、３７℃で２０時間インキュベートした。標的細胞生存率を、フローサイトメトリーを使用して、ヨウ化プロピジウム陽性のバイオレット標識Ｙａｃ－１細胞の分析によって評価した。Ｙａｃ－１腫瘍阻害の割合を、式、（１－［実験試料中の生存Ｙａｃ－１細胞数］／［脾細胞を含まない試料中の生存Ｙａｃ－１細胞数］）×１００を用いて計算した。図１４に示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置マウスからの脾細胞は、対照マウス脾細胞よりもＹａｃ－１細胞に対してより強い細胞傷害性を有していた。

【0258】

化学療法及び／又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓに応答した腫瘍サイズ分析
膵臓がん細胞（ＳＷ１９９０、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２１７２）をＣ５７ＢＬ／６ ｓｃｉｄマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、００１９１３、２×１０^６細胞／マウス、１００μＬのＨＢＳＳ中）に皮下（ｓ．ｃ．）注射して、膵臓がんマウスモデルを確立した。腫瘍細胞注射の２週間後、これらのマウスにおいて、アブラキサン（Ｃｅｌｇｅｎｅ、６８８１７－１３４、５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）及びゲムシタビン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｇ６４２３、４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の組合せを腹腔内で化学療法を開始し、続いてＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．）を用いて２日間免疫療法を行った。上記の手順を１治療サイクルとみなし、更に３サイクル繰り返した（１サイクル／週）。対照群は、ＰＢＳ、化学療法薬（ゲムシタビン及びアブラキサン）、又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ単独を受けたＳＷ１９９０注射マウスとして設定した。処置サイクルと共に、各動物の腫瘍サイズを測定し、ＳＷ１９９０細胞を注射してから２ヶ月後に実験が終了するまで１日おきに記録した。腫瘍体積の測定を群ごとに分析し、結果は、化学治療及びＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの組合せを受けた動物が、ＰＢＳ群と比較して有意に小さい腫瘍を有したが、化学治療もＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ治療も単独では組合せほど十分に機能しなかったことを示した（図１５）。

【0259】

インビトロ老化Ｂ１６Ｆ１０黒色腫モデル
次に、活性化マウスＮＫ細胞による老化Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞のインビトロ死滅を評価した。Ｂ１６Ｆ１０老化細胞（Ｂ１６Ｆ１０－ＳＮＣ）細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅバイオレットで標識し、異なるＥ：Ｔ比のインビトロ２ｔ２活性化マウスＮＫ細胞（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ １０ｍｇ／ｋｇを４日間注射したＣ５７ＢＬ／６マウスの脾臓から単離した）と共に１６時間インキュベートした。細胞をトリプシン処置し、洗浄し、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）溶液を含有する完全培地に再懸濁した。細胞傷害性をフローサイトメトリーによって評価した（図１６）。

【0260】

実施例３：ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲによるインビボでのＮＫ細胞の刺激
ウェスタン食餌を与えられたＡｐｏＥ^－／－マウスにおける免疫刺激に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ構築物の効果を決定するために、一連の実験を行った。これらの実験では、６週齢の雌Ｂ６．１２９Ｐ２－ＡｐｏＥ^{ｔｍ１Ｕｎｃ}／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、及び１５％デンプン（ＴＤ８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含有するウェスタン食餌を与えた。ウェスタン食餌の８週間後、マウスにＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを３ｍｇ／ｋｇで皮下注射した。処置の３日後、マウスを１６時間絶食させ、次いで、血液試料を後眼窩静脈叢穿刺を介して採取した。血液を１０μＬの０．５ＭのＥＤＴＡと混合し、２０μＬの血液をリンパ球サブセット分析のために採取した。赤血球をＡＣＫ（０．１５Ｍ ＮＨ_４Ｃｌ、１．０ｍＭ ＫＨＣＯ_３、０．１ｍＭ Ｎａ_２ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で溶解し、リンパ球を抗マウスＣＤ８α及び抗マウスＮＫ１．１抗体で、ＦＡＣＳ染色緩衝液（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）中４℃で３０分間染色した。細胞を１回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａで分析した。Ｔｒｅｇ染色のために、ＡＣＫ処置血液リンパ球を、抗マウスＣＤ４抗体及び抗マウスＣＤ２５抗体を用いて、ＦＡＣＳ染色緩衝液中、４℃で３０分間染色した。細胞を１回洗浄し、固定／透過処置作業溶液中に再懸濁し、室温で６０分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、透過化緩衝液に再懸濁した。試料を室温で５分間、３００～４００×ｇで遠心分離し、次いで上清を廃棄した。細胞ペレットを残りの体積に再懸濁し、体積を１×透過化緩衝液で約１００μＬに調整した。抗Ｆｏｘｐ３抗体を細胞に添加し、細胞を室温で３０分間インキュベートした。透過化緩衝液（２００μＬ）を細胞に添加し、細胞を３００～４００×ｇで５分間、室温で遠心分離した。細胞をフローサイトメトリー染色緩衝液に再懸濁し、フローサイトメータで分析した。図１７Ａ～１７Ｃは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる処置が、ウェスタン食餌を与えたＡｐｏＥ^－／－マウスにおけるＮＫ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合を増加させたことを示す。

【0261】

実施例４：インビボでの免疫細胞の増殖の誘導
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける免疫刺激に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ構築物の効果を決定するために、一連の実験を行った。これらの実験において、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、対照溶液（ＰＢＳ）又は０．１、０．３、１、３、及び１０ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで皮下処置した。処置マウスを処置後４日目に安楽死させた。脾臓重量を測定し、脾細胞懸濁液を調製した。脾細胞懸濁液を、コンジュゲート抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、及び抗ＮＫ １．１（ＮＫ）抗体で染色した。細胞を増殖マーカーＫｉ６７について更に染色した。図１８Ａは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける脾臓重量が、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの投与量の増加とともに増加したことを示す。更に、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置したマウスにおける脾臓重量は、対照溶液のみで処置したマウスと比較して高かった。ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の割合は両方とも、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの投与量の増加とともに増加した（図１８Ｂ）。最後に、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓは、試験したＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの全ての用量で、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の両方において細胞増殖マーカーＫｉ６７の発現を有意に上方制御した（図１８Ｃ）。これらの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の両方の増殖を誘導したことを実証する。

【0262】

ウェスタン食餌を与えられたＡｐｏＥ^－／－マウスにおける免疫刺激に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ構築物の効果を決定するために、一連の実験を行った。これらの実験では、６週齢の雌Ｂ６．１２９Ｐ２－ＡｐｏＥ^{ｔｍ１Ｕｎｃ}／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、及び１５％デンプン（ＴＤ８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含有するウェスタン食餌を与えた。ウェスタン食餌の８週間後、マウスにＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを３ｍｇ／ｋｇで皮下注射した。処置の３日後、マウスを１６時間絶食させ、次いで、血液試料を後眼窩静脈叢穿刺を介して収集した。血液を１０μＬの０．５ ＭのＥＤＴＡと混合し、２０μＬの血液をリンパ球サブセット分析のために採取した。赤血球をＡＣＫ（０．１５ Ｍ ＮＨ_４Ｃｌ、１．０ｍＭ ＫＨＣＯ_３、０．１ｍＭ Ｎａ_２ＥＤＴＡ、ｐＨ ７．４）で溶解し、リンパ球を抗マウスＣＤ８α及び抗マウスＮＫ１．１抗体で、ＦＡＣＳ染色緩衝液（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）中４℃で３０分間染色した。細胞を１回洗浄し、固定緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号４２０８０１）中に室温で２０分間再懸濁した。細胞を３５０×ｇで５分間遠心分離し、固定した細胞をＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ Ｃａｔ＃４２１００２）に再懸濁し、次いで３５０×ｇで５分間遠心分離した。次いで、細胞を抗Ｋｉ６７抗体で室温にて２０分間染色した。細胞をＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで２回洗浄し、３５０×ｇで５分間遠心分離した。次いで、細胞をＦＡＣＳ染色緩衝液に再懸濁した。リンパ球サブセットをＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａで分析した。図１９Ａ及び１９Ｂに記載されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによるＡｐｏＥ^－／－マウスの処置は、ＮＫ及びＣＤ８^＋Ｔ細胞における増殖（Ｋｉ６７陽性染色）を誘導した。

【0263】

実施例５：多重鎖構築物での処置後のＮＫ媒介性細胞傷害性
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによるＮＫ細胞の処置がＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するかどうかを決定するために、一連の実験を行った。これらの実験において、ヒトＤａｕｄｉ Ｂリンパ腫細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識し、腫瘍標的細胞として使用した。マウスＮＫエフェクター細胞を、３ｍｇ／ｋｇでのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ皮下処置の４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６雌マウス脾臓の磁気セルソーティング法（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用するＮＫ１．１陽性選択により単離した。ヒトＮＫエフェクター細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ／ヒトＮＫ細胞試薬（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてヒト血液バフィーコートに由来する末梢血単核細胞から単離した。標的細胞（ヒトＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞）を、エフェクター細胞（マウスＮＫエフェクター細胞又はヒトＮＫエフェクター細胞のいずれか）と、５０ｎＭ ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが存在する状態又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが存在しない状態（対照）で混合し、３７℃で、マウスＮＫ細胞については４４時間、ヒトＮＫ細胞については２０時間インキュベートした。標的細胞（Ｄａｕｄｉ）生存率を、フローサイトメトリーを使用して、ヨウ化プロピジウム陽性ＣＴＶ標識細胞の分析によって評価した。Ｄａｕｄｉ阻害の割合を、式（１－実験試料中の生存腫瘍細胞数／ＮＫ細胞を含まない試料中の生存腫瘍細胞数）×１００を使用して計算した。図２０は、マウス（図２０Ａ）及びヒト（図２０Ｂ）ＮＫ細胞が、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによるＮＫ細胞活性化後に、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ活性化の非存在下よりもＤａｕｄｉ Ｂ細胞に対して有意に強い細胞傷害性を有したことを示す。

【0264】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる処置後のマウス及びヒトＮＫ細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を決定するために、一連の実験を行った。これらの実験において、ヒトＤａｕｄｉ Ｂリンパ腫細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識し、腫瘍標的細胞として使用した。マウスＮＫエフェクター細胞を、３ｍｇ／ｋｇでのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ皮下処置の４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６雌マウス脾臓の磁気セルソーティング法（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用するＮＫ１．１陽性選択により単離した。ヒトＮＫエフェクター細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ／ヒトＮＫ細胞試薬（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてヒト血液バフィーコートに由来する末梢血単核細胞から単離した。標的細胞（Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞）を、エフェクター細胞（マウスＮＫエフェクター細胞又はヒトＮＫエフェクター細胞のいずれか）と、抗ＣＤ２０抗体（１０ｎＭ Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）の存在及び５０ｎＭ ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの存在又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（対照）の非存在下で混合し、３７℃で、マウスＮＫ細胞については４４時間、ヒトＮＫ細胞については２０時間インキュベートした。Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞は、抗ＣＤ２０抗体に対するＣＤ２０標的を発現する。インキュベーション後、フローサイトメトリーを使用して、ヨウ化プロピジウム陽性ＣＴＶ標識標的細胞を分析することによって、標的細胞生存率を評価した。Ｄａｕｄｉ阻害の割合を、式（１－実験試料中の生存腫瘍細胞数／ＮＫ細胞を含まない試料中の生存腫瘍細胞数）×１００を使用して計算した。図２１は、マウスＮＫ細胞（図２１Ａ）及びヒトＮＫ細胞（図２１Ｂ）が、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによるＮＫ細胞活性化後に、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ活性化の非存在下よりも、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞に対して強いＡＤＣＣ活性を有したことを示す。

【0265】

実施例６：がんの治療
黒色腫マウスモデルにおける化学治療と組み合わせたＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋抗ＴＲＰ１（ＴＡ９９）の抗ガン活性を評価するために、一連の実験を行った。これらの実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに０．５×１０^６個のＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。マウスを、１日目、４日目、及び７日目にドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）（ＤＴＸ）の３回投与で処置し、続いて９日目にＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＴＲＰ１抗体ＴＡ９９（２００μｇ）の組合せ免疫療法の単回投与で処置した。図２２Ａは、治療レジメンの概略図を示す。腫瘍成長をキャリパー測定によってモニターし、腫瘍体積を、式Ｖ＝（Ｌ×Ｗ^２）／２を使用して計算し、式中、Ｌは最大腫瘍直径であり、Ｗは垂直腫瘍直径である。図２２Ｂは、ＤＴＸ＋ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋ＴＡ９９による処置が、生理食塩水対照群及びＤＴＸ処置群と比較して、腫瘍増殖を有意に減少させたことを示す（Ｎ＝１０、^＊＊＊＊ｐ＜０．００１、多重ｔ検定分析）。

【0266】

Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける免疫細胞サブセットを評価するために、末梢血分析を行った。これらの実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０細胞を注射し、ＤＴＸ、ＤＴＸ＋ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋ＴＡ９９、又は生理食塩水で処置した。ＤＴＸ＋ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋ＴＡ９９群については免疫療法後２日目、５日目及び８日目に、ＤＴＸ群及び生理食塩水群については腫瘍注射後１１日目に、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を有するマウスの顎下腺から採血した。ＲＢＣをＡＣＫ溶解緩衝液中で溶解し、リンパ球を洗浄し、抗ＮＫ １．１、抗ＣＤ８、及び抗ＣＤ４抗体で染色した。細胞をフローサイトメトリー（Ｃｅｌｅｓｔａ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。図２２Ｃ～２２Ｅは、ＤＴＸ＋ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋ＴＡ９９処置が、生理食塩水及びＤＴＸ処置群と比較して、腫瘍におけるＮＫ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の増加を誘導したことを示す。

【0267】

１７日目に、Ｔｒｉｚｏｌを使用して、生理食塩水、ＤＴＸ又はＤＴＸ＋ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋ＴＡ９９で処置したマウスの腫瘍から全ＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡ（１μｇ）を、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用するｃＤＮＡ合成のために使用した。老化細胞マーカーである（Ｆ）ｐ２１（Ｇ）ＤＰＰ４及び（Ｈ）ＩＬ６のためのＦＡＭ標識された予め設計されたプライマーを使用して、ＣＦＸ９６ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いてリアルタイムＰＣＲを行った。ハウスキーピング遺伝子１８ＳリボソームＲＮＡを内部対照として使用して、発現レベルの変動性を正規化した。１８Ｓ ｒＲＮＡに対する各標的ｍＲＮＡの発現を、ΔＣｔ＝Ｃｔ_標的－Ｃｔ_１８Ｓである２^{－Δ（ΔＣｔ）}としてのＣｔに基づいて計算した。データは、生理食塩水対照と比較した変化倍率として提示される。図２２Ｆ～２２Ｈは、ＤＴＸ処置が老化腫瘍細胞の増加を誘導し、その後、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ＋ＴＡ９９免疫療法による処置後に減少したことを示す。

【0268】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによるＡｐｏＥ^－／－マウスにおけるウェスタン食餌誘発性高血糖の改善を調べるために、一連の実験を行った。これらの実験では、６週齢の雌Ｂ６．１２９Ｐ２－ＡｐｏＥ^{ｔｍ１Ｕｎｃ}／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、及び１５％デンプン（ＴＤ８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含有するウェスタン食餌を与えた。ウェスタン食餌の８週間後、マウスにＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを３ｍｇ／ｋｇで皮下注射した。処置の３日後、マウスを１６時間絶食させ、次いで、血液試料を後眼窩静脈叢穿刺を介して収集した。血中グルコースを、グルコースメーター（ＯｎｅＴｏｕｃｈ ＵｌｔｒａＭｉｎｉ）及び一滴の新鮮な血液を使用したＧｅｎＵｌｔｉｍａｔｅｄ試験片を用いて検出した。図２３Ａに示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、西洋型食餌によって誘導された高血糖を低減した。血漿インスリン及びレジスチンレベルを、Ｅｖｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＭｏｕｓｅ Ｒａｔ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ａｒｒａｙを用いて分析した。以下の式を使用してＨＯＭＡ－ＩＲを計算した：恒常性モデル評価－インスリン抵抗性＝グルコース（ｍｇ／ｄＬ）^＊インスリン（ｍＵ／ｍＬ）／４０５。図２３Ｂに示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、非処置群と比較してインスリン抵抗性を減少させた。

【0269】

実施例７：ＣＤ４４メモリーＴ細胞の上方制御
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲで処置した際のＣＤ４４メモリーＴ細胞の上方制御を評価するために、一連の実験を行った。これらの実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで皮下処置した。処置したマウスを安楽死させ、処置の４日後（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ）に単一脾細胞懸濁液を調製した。調製した脾細胞を蛍光色素結合抗ＣＤ４、抗ＣＤ８及び抗ＣＤ４４抗体で染色し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞又はＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ４４^ｈｉｇｈＴ細胞の割合をフローサイトメトリーで分析した。結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞上のメモリーマーカーＣＤ４４の発現を上方制御したことを示す（図２４）。これらの知見は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓがマウスＴ細胞を誘導して記憶Ｔ細胞に分化させることができたことを示す。

【0270】

実施例８：ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓでの処置後のｄｂ／ｄｂマウスの肝臓におけるトランスクリプトームの制御
５週齢の雄ＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ（ｄｂ／ｄｂ）マウスに標準固形飼料を与え、飲料水を自由摂取させた。６週齢で、マウスを無作為に対照群及び処置群に割り当てた（ｎ＝５／群）。処置群は、６週齢及び１２週齢で３ｍｇ／ｋｇの皮下注射によってＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓを受けたが、対照群はビヒクル（ＰＢＳ）のみを受けた。研究終了時（２回目の投与の４週間後）に、マウスを安楽死させ、肝臓を回収した。肝臓の半分をＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でホモジナイズし、全組織ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）で精製した。抽出したＲＮＡ試料を、Ｑｕｂｉｔ ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して定量化し、ＲＮＡ完全性を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ ４２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して確認した。

【0271】

Ｉｌｌｕｍｉｎａ用のＮＥＢＮｅｘｔ Ｕｌｔｒａ ＩＩ ＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔを製造業者（ＮＥＢ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）の指示に従って使用して、ＲＮＡ配列決定ライブラリを調製した。簡単に説明すると、まずｍＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）ビーズで濃縮した。濃縮されたｍＲＮＡを９４℃で１５分間断片化した。続いて、第１鎖及び第２鎖ｃＤＮＡを合成した。ｃＤＮＡ断片を末端修復し、３’末端でアデニル化し、ユニバーサルアダプターをｃＤＮＡ断片にライゲーションした後、インデックス付加及びサイクル制限ＰＣＲによるライブラリ濃縮を行った。配列決定ライブラリをＡｇｉｌｅｎｔ ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で検証し、Ｑｕｂｉｔ ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用することによって、並びに定量的ＰＣＲ（ＫＡＰＡ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）によって定量化した。

【0272】

配列決定ライブラリを１つのフローセルレーン上にクラスター化した。クラスター化後、フローセルを、製造業者の指示に従ってＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ装置（４０００又は同等物）にロードした。２×１５０ｂｐのペアエンド（ＰＥ）構成を使用して試料を配列決定した。ＨｉＳｅｑ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＨＣＳ）によって画像分析及び塩基呼び出しを行った。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑから生成された生配列データ（．ｂｃｌファイル）をｆａｓｔｑファイルに変換し、Ｉｌｌｕｍｉｎａのｂｃｌ２ｆａｓｔｑ ２．１７ソフトウェアを使用して逆多重化した。１つのミスマッチを、インデックス配列同定のために許容した。

【0273】

Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ ｖ．０．３６を使用して、配列リードをトリミングして、可能性のあるアダプター配列及び低品質のヌクレオチドを除去した。トリミングされたリードを、ＳＴＡＲアライナｖ．２．５．２ｂを使用して、ＥＮＳＥＭＢＬ上で利用可能なハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）ＧＲＣｍ３８参照ゲノムにマッピングした。ＳＴＡＲアライナは、スプライス部位を検出し、それらを組み込んでリード配列全体の整列を助けるスプライスアライナである。ＢＡＭファイルは、この工程の結果として生成された。

【0274】

Ｓｕｂｒｅａｄパッケージｖ．１．５．２からのｆｅａｔｕｒｅＣｏｕｎｔを使用することによって、固有の遺伝子ヒットカウントを計算した。ヒットカウントを要約し、注釈ファイルのｇｅｎｅ＿ｉｄ特徴を使用して報告した。エクソン領域内に含まれるユニークリードのみをカウントした。鎖特異的ライブラリ調製を実施した場合、リードを鎖特異的に計数した。

【0275】

遺伝子ヒットカウントの抽出後、遺伝子ヒットカウント表を下流の差次的発現分析に使用した。ＤＥＳｅｑ２を使用して、試料の処置特異的群間の遺伝子発現の比較を行った。Ｗａｌｄ検定を使用して、ｐ値及びｌｏｇ２変化倍率を生成した。調整されたｐ値＜０．０５及び絶対ｌｏｇ２変化倍率＞１を有する遺伝子を、各比較について差次的に発現された遺伝子と呼んだ。

【0276】

統計的に有意な遺伝子セットについて、ソフトウェアＧｅｎｅＳＣＦ ｖ．１．１－ｐ２を実行することによって、遺伝子オントロジー分析を行った。ｍｇｉ ＧＯリストを使用して、遺伝子のセットをそれらの生物学的プロセスに基づいてクラスター化し、それらの統計的有意性を決定した。

【0277】

選択的にスプライシングされた転写物の発現レベルを推定するために、スプライスバリアントヒットカウントを、ゲノムにマッピングされたＲＮＡ－ｓｅｑリードから抽出した。ＤＥＸＳｅｑを使用して、遺伝子のエクソン（及び接合部）上のリードカウントの有意差について試験することによって、２つ以上の試料を有する群について、差次的にスプライシングされた遺伝子を同定した。１つの試料のみを有する群について、エキソンヒットカウント表を提供した。

【0278】

下方制御又は上方制御された有意な遺伝子を、機能に従って４つの群に分けた。ヒートマップは、遺伝子機能に従ってＧｒａｐｈＰａｄを用いて構築した。図２５並びに表１及び２に示されるように、グルコース制御に関与する６つの遺伝子がダウンレギュレートされ、老化制御に関連する３つの遺伝子が下方制御され、１つの遺伝子が上方制御され、炎症に関与する１９個の遺伝子は、１個の遺伝子を除いて大部分がダウンレギュレートされ、血管制御に関連する９個の遺伝子がダウンレギュレートされた。

【0279】

グルコースを制御する６つの遺伝子のうち、そのうちの４つ（Ｐｄｋ４、Ｐｎｐｌａ３、Ｇａｄｄ４５ｂ、及びＰｐａｒｇｃ１ａ）が糖新生に関連していた。これらの４つの遺伝子の下方制御は、糖新生の減少を引き起こし得、従って循環グルコースを減少させ得る。Ｒｅｔｎの下方制御は、インスリン抵抗性の減少に関連していた。Ｓｌｃ２ａ４の下方制御は、脂肪組織に輸送されるグルコースを遅くし、筋肉を刺激し得る。

【0280】

Ｓｌｃ３４ａ２の上方制御と共にＣａｖ１及びＥｎｄｏｄ１の下方制御は、細胞増殖を促進し、老化を減少させる。Ａｃｓｓ１の下方制御は、グルコース非依存性酢酸媒介細胞生存及び腫瘍増殖を減少させ得る。

【0281】

１８個の遺伝子の下方制御及びＣｉｓｈの上方制御は、炎症応答に関与する細胞及び分子の下方制御に関連する。血管制御に関連する９つの遺伝子の下方制御は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置によって変化した肝臓における異なる血管環境を反映し得る。

【0282】

これらの知見は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が、ｄｂ／ｄｂマウスの肝臓におけるグルコース制御、老化、炎症、及び血管制御に関連する遺伝子発現を抑制することを示す。

【0283】

（表１）ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓでの処置後のｄｂ／ｄｂマウスの肝臓におけるトランスシプトームの制御

【0284】

（表２）ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓでの処置後のｄｂ／ｄｂマウスの肝臓におけるトランスクリプトームの制御

【0285】

実施例９－老齢マウス肝臓におけるＰＢＳ（対照群）又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群）の間で差次的に発現された遺伝子のＲＮＡ－ｓｅｑ分析
Ｃ５７ＢＬ／６、７６週齢マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを、温度及び光が制御された環境中に収容した。マウスを２つの群に分け、ＰＢＳ（ＰＢＳ対照群）又は３ｍｇ／ｋｇの用量のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群）のいずれかで皮下処置した。処置後６０日目に、マウスを安楽死させ、肝臓を採取した。採取した肝臓を、１．７ｍＬエッペンドルフチューブ中で液体窒素中に保存した。試料を、１ｍＬのＴｒｉｚｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）中でホモジナイザーを使用することによってホモジナイズした。ホモジナイズした組織を新鮮なエッペンドルフチューブに移した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ＃７４１０６）を製造業者の指示に従って使用して、全ＲＮＡを抽出した。

【0286】

ライブラリ調製、配列決定反応及びバイオインフォマティクス分析を、ＧＥＮＥＷＩＺ，ＬＬＣ．（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ，ＵＳＡ）で以下のように行った。ポリＡ選択及びＨｉＳｅｑ配列決定を伴うライブラリ調製抽出されたＲＮＡ試料を、Ｑｕｂｉｔ ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して定量化し、ＲＮＡ完全性を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ ４２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して確認した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ用のＮＥＢＮｅｘｔ Ｕｌｔｒａ ＩＩ ＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔを製造業者（ＮＥＢ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）の指示に従って使用して、ＲＮＡ配列決定ライブラリを調製した。簡単に説明すると、まずｍＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）ビーズで濃縮した。濃縮されたｍＲＮＡを９４℃で１５分間断片化した。続いて、第１鎖及び第２鎖ｃＤＮＡを合成し、ｃＤＮＡ断片を末端修復し、３’末端でアデニル化した。ユニバーサルアダプターをｃＤＮＡ断片にライゲーションし、続いてインデックス付加及びサイクル制限ＰＣＲによるライブラリ濃縮を行った。配列決定ライブラリをＡｇｉｌｅｎｔ ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で検証し、Ｑｕｂｉｔ ２．０ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用することによって、並びに定量的ＰＣＲ（ＫＡＰＡ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）によって定量化した。配列決定ライブラリを１つのフローセルレーン上にクラスター化した。クラスター化後、フローセルを、製造業者の指示に従ってＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ装置（４０００又は同等物）にロードした。２×１５０ｂｐのペアエンド（ＰＥ）構成を使用して試料を配列決定した。ＨｉＳｅｑ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＨＣＳ）によって画像分析及び塩基呼び出しを行った。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑから生成された生配列データ（．ｂｃｌファイル）をｆａｓｔｑファイルに変換し、Ｉｌｌｕｍｉｎａのｂｃｌ２ｆａｓｔｑ ２．１７ソフトウェアを使用して逆多重化した。１つのミスマッチを、インデックス配列同定のために許容した。Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ ｖ．０．３６を使用して、配列リードをトリミングして、可能性のあるアダプター配列及び低品質のヌクレオチドを除去した。トリミングされたリードを、ＳＴＡＲアライナｖ．２．５．２ｂを使用して、ＥＮＳＥＭＢＬ上で利用可能なハツカネズミＧＲＣｍ３８参照ゲノムにマッピングした。ＳＴＡＲアライナは、スプライス部位を検出し、それらを組み込んでリード配列全体の整列を助けるスプライスアライナである。ＢＡＭファイルは、この工程の結果として生成された。Ｓｕｂｒｅａｄパッケージｖ．１．５．２からのｆｅａｔｕｒｅ ｃｏｕｎｔを使用することによって、固有の遺伝子ヒットカウントを計算した。ヒットカウントを要約し、注釈ファイルのｇｅｎｅ＿ｉｄ特徴を使用して報告した。エクソン領域内に含まれるユニークリードのみをカウントした。鎖特異的ライブラリ調製を実施した場合、リードを鎖特異的に計数した。遺伝子ヒットカウントの抽出後、遺伝子ヒットカウント表を下流の差次的発現分析に使用した。ＤＥＳｅｑ２を使用して、試料の処置特異的群間の遺伝子発現の比較を行った。Ｗａｌｄ検定を使用して、ｐ値及びｌｏｇ２変化倍率を生成した。調整されたｐ値＜０．０５及び絶対ｌｏｇ２変化倍率＞１を有する遺伝子を、各比較について差次的に発現された遺伝子と呼んだ。統計的に有意な遺伝子セットについて、ソフトウェアＧｅｎｅＳＣＦ ｖ．１．１－ｐ２を実行することによって、遺伝子オントロジー分析を行った。ｍｇｉ ＧＯリストを使用して、遺伝子のセットをそれらの生物学的プロセスに基づいてクラスター化し、それらの統計的有意性を決定した。選択的にスプライシングされた転写物の発現レベルを推定するために、スプライスバリアントヒットカウントを、ゲノムにマッピングされたＲＮＡ－ｓｅｑリードから抽出した。ＤＥＸＳｅｑを使用して、遺伝子のエクソン（及び接合部）上のリードカウントの有意差について試験することによって、２つ以上の試料を有する群について、差次的にスプライシングされた遺伝子を同定した。１つの試料のみを有する群について、エキソンヒットカウント表を提供した。

【0287】

下方制御又は上方制御された有意な遺伝子を、機能に従って４つの群に分けた。平均変化倍率は、実験群を平均対照群で割ることによって計算した。ヒートマップは、遺伝子機能に従ってＧｒａｐｈＰａｄを用いて構築した。図２６並びに表３及び４に示されるように、ほとんどの老化及び炎症遺伝子は、ＰＢＳ対照群と比較して、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置群の肝臓において下方制御された。

【0288】

（表３）老齢マウス肝臓におけるＰＢＳ（対照群）又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群）の間で差次的に発現された遺伝子のＲＮＡ－ｓｅｑ分析

【0289】

（表４）老齢マウス肝臓におけるＰＢＳ（対照群）又はＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群）の間で差次的に発現された遺伝子のＲＮＡ－ｓｅｑ分析

【0290】

実施例１０：ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、肝臓における糖代謝、脂質代謝、及びアミノ酸代謝に関連する遺伝子を下方制御する
ＩＩ型糖尿病（Ｔ２Ｄ）が代謝疾患であり、肝臓が身体エネルギー代謝を支配する重要な代謝臓器であるという事実を考慮して、ｄｂ／ｄｂマウスの肝臓に対するＲＮＡ－ｓｅｑ分析をＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置後に行った。差次的に発現された肝臓遺伝子は、処置ｄｂ／ｄｂマウス及び未処置対照ｄｂ／ｄｂマウスにおいて検出された。図２７に示すように、１つの遺伝子が上方制御され、３２の遺伝子が下方制御され、これらを一緒に機能に基づいて４つのクラスターにグループ分けした。グルコース、脂肪、又はアミノ酸代謝に関連する８つの遺伝子の発現は、図２８に示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置後の肝臓において有意に減少した。例えば、レジスチン（Ｒｅｔｎ）は、トール様受容体４シグナル伝達経路を部分的に介してマウスにおいてインスリン抵抗性を誘導することが示されており、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置後のＲｅｔｎの下方制御は、インスリン抵抗性の低減に寄与し得る。図２８に示されるように、細胞老化に関連する遺伝子、Ｃａｖ１、Ｅｎｄｏｄ１、Ｐｄｋ４、及びＧａｄｄ４５ｂの発現もまた、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置後に下方制御され、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が肝臓における老化細胞レベルを減少させ得ることを示す。図２８に示すように、１４個の炎症誘発性遺伝子が下方制御され、１個の遺伝子が上方制御され（Ｃｉｓｈ）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が肝炎を低減したことが示された。図２８に示すように、血管制御に関連する９つの遺伝子の発現も減少した。この結果は更に、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＳＮＣ及びＳＡＳＰの減少が、糖尿病における血管の健康に好ましい影響を与え得ることを示す。総合すると、これらのＲＮＡ－ｓｅｑ結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が、細胞の老化、ＳＡＳＰ、及び代謝機能不全によって誘導される糖新生を減少させて、グルコースの代謝、代謝恒常性を改善し、Ｔ２Ｄ ｄｂ／ｄｂマウスの肝臓における無菌性炎症を低下させることを示す。

【0291】

実施例１１：老化関連遺伝子は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置された老齢マウスの肝臓において下方制御される
末梢器官の老化細胞（ＳＮＣ）及び老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の効果を調査するために、老齢マウス（７６週齢）における炎症及び老化関連遺伝子の発現をＲＮＡ－ｓｅｑによって調べた。老齢マウスに、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）又はＰＢＳ（陰性対照）の１回又は２回のいずれかの皮下投与を行った。ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を、全体的な転写変化を決定するために、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の６０又は９０日後に単離された肝臓に対して行った。有意な差次的に発現された遺伝子を、それらの遺伝子オントロジーによってクラスター化し、遺伝子オントロジータームの富化を、Ｆｉｓｈｅｒ正確確率検定（ＧｅｎｅＳＣＦ ｖ１．１－ｐ２）を使用して試験した。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置した老齢マウスの肝臓は、ＰＢＳ処置マウスと比較して、合計５３９の差次的に発現したｍＲＮＡを有する遺伝子発現の有意な変化を示した。図２９に示されるように、ＲＮＡ－ｓｅｑ分析は、Ｃｄｋｎ１ａ、Ｎｌｅ１、Ｊｕｎｄ、Ｓｅｍａ３ｂ、Ｂｃｌ６、Ｂｃｌ７ｃ及びＧａｄｄ４５βを含む遺伝子の有意な下方制御、並びに老化及び炎症関連遺伝子（例えば、サイトカイン：Ｉｌ６ｒα、Ｉｌ１α、Ｉｌ－６、Ｔｎｆα、Ｓ１００ａ８、Ｓ１００ａ９、Ｓ１００ａ１１、Ｌｃｎ２、Ｒｅｔｎｌｇ、Ｉｎｈｂｂ；ケモカイン：Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｒ４、Ｍｔ１、及びＭｔ２；メタロプロテイナーゼ：Ｍｍｐ９；遺伝子発現及びシグナル伝達経路：例えば、Ｃｅｂｐｄ、Ｋｌｆ１２、Ｅｇｒ１、Ｅｇｆｒ、Ｇａｄｄ４５β、Ｇａｄｄ４５ｇ、Ｐｐａｒα、Ｐｐａｒδ、Ｆｏｓ、Ｆｏｓｌ２、Ｊｕｎ、Ｊｕｎｂ、Ｍａｐｋ１５、Ａｄｃｙ９）の上方制御を示した。

【0292】

実施例１２：ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓで処置した老齢マウスの末梢器官における細胞老化
老齢マウスの末梢器官における細胞老化及び老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の影響を更に分析するために、ｑＲＴ－ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、及び免疫蛍光研究を、選択されたマーカーについて行った。図３０に示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の１用量又は２用量のいずれかを老齢マウスに与えた。図３１に示すように、単回用量ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の１０日後又は６０日後のいずれかの老齢マウスの肝臓のｑＲＴ－ＰＣＲ分析は、ＰＢＳ対照マウスと比較して、細胞老化及びＳＡＳＰシグネチャー遺伝子、ＰＡＩ－１、Ｉｌ１ａ、Ｉｌ６、Ｉｌ１β、及びＴｎｆａについての遺伝子発現の有意な減少を示した。図３２に示すように、２用量ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲ処置はまた、処置開始後１２０日目に、対照群に対して、肝臓におけるＩｌ１ａ、Ｃｄｋｎ１ａ、ＰＡＩ、Ｉｌ１ｂ、及びＩｌ６転写物の有意な減少をもたらした。図３３に示すように、肝臓ＩＬ－１α、ＩＬ－６及びＩＬ－８の減少も、ＥＬＩＳＡによってタンパク質レベルで観察された。図３４に示されるように、２用量処置レジメンにおいて、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる処置は、バイオマーカーＰＡＩ－１及びフィブロネクチンを低下させ、これは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる処置が老齢マウスにおける肝線維症を減少させることができることを示し、実施例１０のＲＮＡ－ｓｅｑ研究において観察されたＣｏｌ４ａ３及びＣｏｌ２０ａ１発現の有意な下方制御と一致する。図３５に示すように、老齢マウス肝臓切片の免疫蛍光染色により、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置で減少したｐ２１＋ＳＮＣｓの蓄積が確認された。

【0293】

老齢マウスの肝臓における遺伝子発現に対するＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の老化細胞除去活性及び老化細胞阻害（ｓｅｎｏｍｏｒｐｈｉｃ）活性の持続性を更に調べるために、ＲＮＡ－ｓｅｑ研究を行った。老化及び炎症関連（ＳＡＳＰ）遺伝子の有意な下方制御（例えば、Ｃｄｋｎ１ａ）又は上方制御（例えば、Ｔｅｒｔ）（例えば、サイトカイン：Ｉｌ７、Ｉｌ１５、Ｉｌ１８、Ｓ１００ｇ、Ｓ１００ａ１、Ｓ１００ａ４、Ｓ１００ａ６、Ｓ１００ａ１０、Ｓ１００ａ１６、Ｓ１００ｇ；ケモカイン：Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、Ｃｃｌ６、Ｃｃｌ７、Ｃｃｌ８、Ｃｃｌ９、Ｃｃｌ２４、Ｃｃｌ２５、Ｃｃｌ２７、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ１１；金属タンパク質：Ｍｍｐ１２、Ｍｍｐ１３、Ｍｍｐ２７；遺伝子発現及びシグナル伝達経路：Ｋｌｆ１、Ｋｌｆ３、Ｋｌｆ７、Ｋｌｆ９、Ｋｌｆ１３、Ｅｇｒ１、Ｐｐａｒα、Ｊｕｎ、Ｆｏｓｌ２；Ｍａｐｋ３、Ｍａｐｋ６、Ｍａｐｋ７、Ｍａｐｋ９、Ｍａｐｋ１２、Ｍａｐｋ１５、Ａｄｃｙ１、Ａｄｃｙ３、Ａｄｃｙ５、Ａｄｃｙ６、Ａｄｃｙ９、Ａｄｃｙ１０）、並びに肝臓機能に関連する遺伝子（例えば、Ｄｂｐ、Ｔｅｆ）及び免疫刺激に関連する遺伝子（例えば、Ｌｙｓｔ、Ｓｅｓｎ２、Ｓｅｓｎ３）が、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置後に観察された。これらのＲＮＡ－ｓｅｑ研究の結果を、図３６のヒートマップとして示す。

【0294】

実施例１３：若齢及び老齢マウスの肝臓におけるＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲの老化細胞除去機能及び老化細胞阻害機能
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲのＴＧＦβＲＩＩ成分が老化細胞除去機能及び老化細胞阻害機能を示すかどうかを更に評価するために、若齢マウス及び老齢マウスを単回用量のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲで処置し、処置の１０日後に肝臓のＲＮＡ－ｓｅｑ分析を行った。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、肝臓におけるＣｄｋｎ１ａ及び多くの概日時計遺伝子の発現を有意に低下させた。処置の１２０日後のＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓの影響の比較も行った。図３６に示すように、処置マウスの肝臓のＲＮＡ－ｓｅｑ分析は、ＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲではなくＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲがＣｄｋｎ １ ａ発現の下方制御を維持し、両方の処置がＰＢＳ処置と比較してＴｅｒｔ遺伝子発現を上方制御し続けたことを示した。興味深いことに、ＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置又は対照群と比較して、概日分子時計活性化因子遺伝子Ａｒｎｔｌ及びＮｐａｓ２を有意に増加させた。ＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓは免疫細胞の増殖を活性化も促進もしなかったことから、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓのＴＧＦβＲＩＩ成分によるＴＧＦ－βの直接的な中和が、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの老化細胞除去活性及び老化細胞阻害活性に寄与し得ることが示唆される。これはまた、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓのＩＬ－１５成分が長期間持続する老化細胞除去活性を提供することを示唆する。

【0295】

まとめると、これらの実施例は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が、ＳＮＣ及びＳＡＳＰに関連する遺伝子を永続的に減少させ、自然に老化したマウスにおける免疫活性を増強することを示す。それはまた、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置が、自然に老化したマウスの肝細胞の代謝機能、線維症、及び概日リズムを改善することを示唆する。

【0296】

実施例１４：ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、安全であり、マウス及び非ヒト霊長類において耐容性がある
ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の短期及び長期毒性試験を、マウス及び非ヒト霊長類において実施した。１日目及び１５日目の２回用量の５～１００ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの皮下投与は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＧＬＰ毒性試験において良好な耐容性を示し、死亡は観察されず、臨床徴候及び臨床病理における試験物質に関連する変化はなかった。カニクイザルにおけるＧＬＰ毒性試験において、１日目及び１５日目に２回の用量で１～１０ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの皮下投与もまた、良好な耐容性を示した。臨床徴候、体重、眼科学、ＥＣＧ、血圧、又は肉眼的病状において、試験物質に関連する変化はなかった。血清中のＭＣＰ－１の用量依存的増加並びにＴＧＦβ１及びＴＧＦβ２の減少が観察された。免疫表現型検査は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓが、Ｋｉ６７＋細胞の割合並びにＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｔｒｅｇ及びＣＤ１６＋ＮＫ細胞の絶対数の用量依存的増加を誘導したことを示した（図３７及び３８）。カニクイザルにおける複数回用量皮下ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ投与の副作用は、１０ｍｇ／ｋｇという高い用量レベルであっても観察されなかった。

【0297】

薬物動態分析は、カニクイザルにおいて１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇで皮下投与されたＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓについて１２～２１時間の半減期を示した。結果はまた、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓへの曝露が、１４日間隔での反復投与後にＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの明らかな蓄積を伴わずに、用量依存的様式で血清レベルを増加させたことを確認する。

【0298】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの活性及び耐容性も、自然に老化したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。３ｍｇ／ｋｇのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲ（Ｎ＝２０）又はＰＢＳ（対照；Ｎ＝２０）で皮下処置された７６週齢マウスを、体重及び全生存の変化について毎週観察した。その後の研究では、９０週齢のマウスを、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの皮下３ｍｇ／ｋｇ用量で４５日間隔で２回処置した。血液を様々な時点で採取して、免疫細胞サブセット頻度を評価した。予想通り、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、処置４週間後にベースラインに戻った血液中のＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の割合の有意な増加を媒介した。

【0299】

ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、治療用量（３ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に高い用量レベルで、マウス及び非ヒト霊長類によって十分に耐容性を示された。自然に老化したマウスの健康範囲に対して観察されたＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置の長期有害効果もなかった。

【0300】

実施例１５．ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて免疫細胞集団を増強する
Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）からの５週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウス［ＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７^ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊ（Ｄｏｃｋ７^ｍの野生型、Ｌｅｐｒ^ｄｂのホモ接合型）、株＃０００６４２］に、標準的な食餌（Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ２０１８ Ｔｅｋｌａｄ ｇｌｏｂａｌ １８％ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｏｄｅｎｔ ｄｉｅｔ，Ｅｎｖｉｇｏ）を与え、飲料水を自由摂取させた。マウスを以下のように３群に分けた。ＰＢＳ対照群（ｎ＝６）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。マウスを、ＰＢＳ、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）で皮下処置した。マウスを安楽死させ、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液に処置した。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる処置後の免疫細胞の異なるサブセットを評価するために、単一細胞懸濁液を調製した。ＲＢＣを、室温で５分間、ＡＣＫ緩衝液中で溶解した。残りの細胞をＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ＢＳＡ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及び０．００１％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含む１×ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ））中で洗浄した。脾臓における異なるタイプの免疫細胞を評価するために、細胞表面ＣＤ３、ＣＤ４５、ＣＤ８及びＮＫ１．１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に特異的な抗体を用いて、細胞を室温で３０分間染色した。表面染色後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ＢＳＡ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及び０．００１％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含む１×ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ））中で洗浄した（１５００ ＲＰＭ、室温で５分間）。２回洗浄した後、細胞を固定緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリー（Ｃｅｌｅｓｔａ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。図３９の結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓによる処置が、総脾細胞を増加させ、脾サブセットにおけるＣＤ３^＋ＣＤ８^＋、ＣＤ３^－ＮＫ１．１^＋、及びＣＤ３^＋ＣＤ４５^＋免疫細胞の割合も増加させるが、ＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓによる処置は、これらの細胞集団の割合に影響を及ぼさなかったことを示す。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置はまた、セントラルメモリー細胞集団及びエフェクターメモリー細胞集団を増加させる（図３９）。これらの結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓのＩＬ－１５活性が、ｄｂ／ｄｂマウスの血中のＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増加に関与し、ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋、ＣＤ３^－ＮＫ１．１^＋、及びＣＤ３^＋ＣＤ４５^＋免疫細胞を増殖させることができることを示唆する。

【0301】

実施例１６．ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞の細胞傷害活性を増強する
５週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを、温度及び光が制御された環境中に収容した。マウスを以下のように３群に分けた。生理食塩水対照群（ｎ＝５）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝５）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。マウスを、ＰＢＳ、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）で皮下処置した。マウスを安楽死させ、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液に処置した。Ｙａｃ－１細胞に対する脾細胞の細胞傷害活性を評価するために、単細胞懸濁液を調製した。Ｙａｃ－１細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔで標識し、脾細胞と混合し（Ｅ：Ｔ ２０：１）、２０時間インキュベートした。細胞を洗浄し、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）溶液（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有する完全培地に再懸濁した。細胞傷害性は、前述のようにフローサイトメトリーによって評価した。

【0302】

図４０の結果は、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓでの処置が、ＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置脾細胞と比較して、脾細胞の細胞傷害活性を有意に増加させることを示す。

【0303】

実施例１７．ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、処置後４日目及びインビトロαＣＤ３／ＣＤ２８刺激アッセイ後のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞のＩＦＮ－γ産生を増強する
５週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを、温度及び光が制御された環境中に収容した。マウスを以下のように３群に分けた。生理食塩水対照群（ｎ＝５）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝５）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。マウスを、ＰＢＳ、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）で皮下処置した。マウスを安楽死させ、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液に処置した。単一細胞懸濁液を９６ウェルＵ底プレートに２×１０^５細胞／ウェルで播種し、１：１のビーズ対細胞比でＭｉｌｔｙｅｎｉ Ｔ細胞活性化／増殖キットで刺激した。細胞を４日間培養し、上清を回収して、Ｍａｇｐｉｘ多重サイトカインアッセイを用いて放出されたＴＮＦ－α又はＩＦＮ－γサイトカインを測定した。

【0304】

図４１のデータは、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓの両方が、処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウス及びインビトロαＣＤ３／ＣＤ２８刺激アッセイにおいて脾細胞のインターフェロン－γ産生を増強することを示す。

【0305】

実施例１８．ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞の解糖活性を増強する
５週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを、温度及び光が制御された環境中に収容した。マウスを以下のように３群に分けた。生理食塩水対照群（ｎ＝５）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝５）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。マウスを、ＰＢＳ、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）で皮下処置した。マウスを４日目に安楽死させ、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液に処置した。脾細胞の解糖活性を測定するために単一細胞懸濁液を調製し、細胞を洗浄し、ｓｅａｈｏｒｓｅ培地に再懸濁し、４×１０^６細胞／ｍＬに再懸濁した。細胞を、解糖ストレス試験のために、２ｍＭのＬ－グルタミンを補充したＳｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ ＲＰＭＩ培地（ｐＨ ７．４）中のＣｅｌｌ－ＴａｋコーティングＳｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＸＦｅ９６培養プレートに５０μｌ／ウェルで播種した。細胞を３７℃で３０分間プレートに付着させた。更に、１３０μｌのアッセイ培地をプレートの各ウェルに加えた（バックグラウンドウェルも）。プレートを３７℃、非ＣＯ_２インキュベータ中で１時間インキュベートした。解糖ストレス試験のために、較正プレートは、Ｓｅａｈｏｒｓｅアッセイ培地中で調製したグルコース／オリゴマイシン／２ＤＧの１０×溶液を含有し、２０μＬのグルコース／オリゴマイシン／２ＤＧを細胞外フラックスプレートの各ポートに添加し、これを一晩較正した。解糖ストレス試験は、細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）に基づき、解糖、解糖能力及び解糖予備能を含む解糖機能の３つの重要なパラメータを測定する。完全ＥＣＡＲ分析は、４つの段階：非解糖酸性化（薬物なし）、解糖（１０ｍＭグルコース）、最大解糖誘導／解糖能力（２μＭオリゴマイシン）、及び解糖リザーブ（１００ｍＭ ２－ＤＧ）からなった。実験の終わりに、データをＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍファイルとしてエクスポートした。ＸＦ解糖ストレス試験レポート作成装置は、ＷａｖｅデータからＸＦ細胞解糖ストレス試験パラメータを自動的に計算した。Ｗａｖｅソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用してデータを分析した。

【0306】

図４２に示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ療法の４日後にｄｂ／ｄｂマウスから単離された脾細胞は、生理食塩水又はＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置群の脾細胞と比較した場合、基礎糖分解、能力、及び保存率の増強を示した。

【0307】

実施例１９．ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける脾細胞のミトコンドリア呼吸を増強する
５週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを、温度及び光が制御された環境中に収容した。マウスを以下のように３群に分けた。生理食塩水対照群（ｎ＝５）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝５）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。マウスを、ＰＢＳ、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）で皮下処置した。マウスを４日目に安楽死させ、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液に処置した。脾細胞の解糖活性を測定するために単一細胞懸濁液を調製し、細胞を洗浄し、ｓｅａｈｏｒｓｅ培地に再懸濁し、４×１０^６細胞／ｍＬに再懸濁した。細胞を、解糖ストレス試験のために、２ｍＭのＬ－グルタミンを補充したＳｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ ＲＰＭＩ培地（ｐＨ ７．４）中のＣｅｌｌ－ＴａｋコーティングＳｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＸＦｅ９６培養プレートに５０μｌ／ウェルで播種した。細胞を３７℃で３０分間プレートに付着させた。更に、１３０μｌのアッセイ培地をプレートの各ウェルに加えた（バックグラウンドウェルも）。プレートを３７℃の非ＣＯ_２インキュベータ中で１時間インキュベートした。ミトコンドリアストレス試験のために、較正プレートは、Ｓｅａｈｏｒｓｅアッセイ培地中で調製したオリゴマイシン／ＦＣＣＰ／ロテノンの１０×溶液を含有し、２０μＬのオリゴマイシン、ＦＣＣＰ及びロテノンを、一晩較正した細胞外フラックスプレートの各ポートに添加した。ＸＦｅ９６ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｆｌｕｘ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して酸素消費速度（ＯＣＲ）を測定した。完全なＯＣＲ分析は、４つの段階からなった：基礎呼吸（薬物なし）、ＡＴＰ関連呼吸／プロトン漏出（１．５μＭ ｍＭオリゴマイシン）、最大呼吸（２μＭ ＦＣＣＰ）、及び予備呼吸（０．５μＭロテノン）。実験の終わりに、データをＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍファイルとしてエクスポートした。ＸＦミトコンドリアストレス試験レポート作成部は、ＥｘｃｅｌにエクスポートされたＷａｖｅデータからＸＦミトコンドリアストレス試験パラメータを自動的に計算する。Ｗａｖｅソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用してデータを分析した。

【0308】

図４３に示されるように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ療法の４日後にｄｂ／ｄｂマウスから単離された脾細胞は、生理食塩水又はＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置群の脾細胞と比較した場合、基礎呼吸、ミトコンドリア呼吸、能力、及びＡＴＰ産生の増強を示した。

【0309】

実施例２０．ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置は、処置後１日目のｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿ＴＧＦβ１及びＴＧＦβ２レベルを減少させる
５週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを、温度及び光が制御された環境中に収容した。マウスを以下のように３群に分けた。生理食塩水対照群（ｎ＝５）、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝５）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。マウスを、ＰＢＳ、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ（３ｍｇ／ｋｇ）で皮下処置した。血液を顎下静脈からＥＤＴＡを含有するチューブに採取し、血漿を遠心分離によって単離した。血漿中ＴＧＦ－βレベルを、サイトカインアレイ、ＴＧＦβ３－ｐｌｅｘ（ＴＧＦβ１－３）（Ｅｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｌｇａｒｙ，ＡＬ，Ｃａｎａｄａ）を用いて分析した。図４４に示されるように、血漿中ＴＧＦβ１レベル及び血漿中ＴＧＦβ２レベルは、ＰＢＳ又はＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓ処置群と比較して、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ処置後４日目のｄｂ／ｄｂマウスにおいて減少した。

【0310】

実施例２１．ＴＧＦＲｔ１５ ^＊ －ＴＧＦＲｓの生成
ＴＧＦＲ／ＩＬ１５ＲαＳｕ及びＴＧＦＲ／ＴＦ／ＩＬ－１５Ｄ８Ｎ融合タンパク質を含む融合タンパク質複合体を生成した。ヒトＴＧＦ－ｂ受容体（ＴＧＦＲ）、ＩＬ－１５アルファ受容体スシドメイン（ＩＬ１５ＲａＳｕ）、組織因子（ＴＦ）、及びＤ８Ｎ変異体を有するＩＬ－１５（ＩＬ１５Ｄ８Ｎ）配列を、ＧｅｎＢａｎｋウェブサイトから入手し、これらの配列のＤＮＡ断片をＧｅｎｅｗｉｚによって合成した。具体的には、ＴＧＦＲ配列をＩＬ１５ＲａＳｕのＮ末端コード領域に連結し、ＴＧＦＲ配列を組織因子２１９のＮ末端に連結し、続いてＩＬ－１５Ｄ８ＮのＮ末端コード領域に連結する構築物を作製した。

【0311】

ＴＧＦＲ／ＩＬ１５ＲαＳｕ構築物の核酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は、以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ
（一本鎖ヒトＴＧＦ－β受容体ＩＩホモ二量体）
ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ
（ＩＬ１５受容体α鎖のスシドメイン）
ＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＡＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＣＣＡＡＣＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＧＧ（配列番号６１）

【0312】

ＴＧＦＲ／ＴＦ／ＩＬ１５Ｄ８Ｎ構築物の核酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は、以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＧＧＡＧＴＧＡＡＡＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＣＣＣＴＴＡＴＴＴＧＴＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣ
（単鎖ヒトＴＧＦ－β受容体ＩＩホモ二量体）
ＡＴＣＣＣＡＣＣＧＣＡＣＧＴＴＣＡＧＡＡＧＴＣＧＧＴＧＡＡＴＡＡＣＧＡＣＡＴＧＡＴＡＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＡＡＡＴＴＴＴＧＴＧＡＴＧＴＧＡＧＡＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＣＴＧＴＧＴＧＧＣＴＧＴＡＴＧＧＡＧＡＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＡＡＣＡＣＴＡＧＡＧＡＣＡＧＴＴＴＧＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＴＡＴＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＡＡＡＧＴＧＣＡＴＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＧＴＧＣＡＡＴＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＧＡＣＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ
（ヒト組織因子２１９）
ＴＣＡＧＧＣＡＣＴＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＧＣＡＴＡＴＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＣＴＡＡＴＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＣＴＧＴＴＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＴＡＡＧＴＣＡＧＧＡＧＡＴＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＡＡＴＧＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＡＧＡＧＴＧＴＧＡＣＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＧＣＡＣＧＧＧＴＣＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＧＧＣＡＧＧＧＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＴＡＴＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＣＴＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧＧＴＧＧＧＡＡＣＡＡＡＡＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＣＧＴＡＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＣＡＧＡＡＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＴＴＴＣＣＴＡＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＧＡＣＴＴＡＡＴＴＴＡＴＡＣＡＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＡＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＡＣＡＣＴＡＡＴＧＡＧＴＴＴＴＴＧＡＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＡＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＣＣＣＴＣＣＣＧＡＡＣＡＧＴＴＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＧＣＣＣＧＧＴＡＧＡＧＴＧＴＡＴＧＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＴＴＣＡＧＡＧＡＡ
（ヒトＩＬ－１５Ｄ８Ｎ）
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＡＣＴＴＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴ

【0313】

ＴＧＦＲ／ＩＬ１５ＲａＳｕ融合タンパク質のアミノ酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（一本鎖ヒトＴＧＦ－β受容体ＩＩホモ二量体）
ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ
（ヒトＩＬ－１５受容体αスシドメイン）
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲ（配列番号８）

【0314】

ＴＧＦＲ／ＴＦ／ＩＬ１５Ｄ８Ｎ融合タンパク質のアミノ酸配列（シグナルペプチド配列を含む）は以下の通りである。
（シグナルペプチド）
ＭＧＶＫＶＬＦＡＬＩＣＩＡＶＡＥＡ
（一本鎖ヒトＴＧＦ－β受容体ＩＩホモ二量体）
ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ
（組織因子）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ
（ＩＬ－１５Ｄ８Ｎ）
ＮＷＶＮＶＩＳＮＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号６８）

【0315】

以前に記載されているように（Ｈｕｇｈｅｓ ＭＳ，Ｙｕ ＹＹ，Ｄｕｄｌｅｙ ＭＥ，Ｚｈｅｎｇ Ｚ，Ｒｏｂｂｉｎｓ ＰＦ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ）、ＴＧＦＲ／ＩＬ１５ＲαＳｕ及びＴＧＦＲ／ＴＦ／ＩＬ－１５Ｄ８Ｎ構築物を改変レトロウイルス発現ベクターにクローニングした。発現ベクターをＣＨＯ－Ｋ１細胞にトランスフェクトした。ＣＨＯ－Ｋ１細胞における２つの構築物の同時発現は、抗ＴＦ親和性によって精製することができる可溶性ＴＧＦＲ／ＩＬ１５ＲαＳｕ－ＴＧＦＲ／ＴＦ／ＩＬ－１５Ｄ８Ｎタンパク複合体（ＴＧＦＲｔ１５^＊－ＴＧＦＲｓと呼ばれる）の形成及び分泌を可能にした。

【0316】

実施例２２．化学的に誘導された肝臓損傷からのＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓの保護
Ｂ６Ｃ３Ｆ１雄マウスをＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを以下のように２群に分けた。生理食塩水対照群（ｎ＝６）及びＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓ群（ｎ＝６）。全てのマウス（１４日齢）を、研究０日目（ＳＤ０）にＤＥＮ（１ｍｇ／ｋｇ、ジエチルニトロソアミン）で腹膜処置した。ＣＣｌ_４（０．２ｍＬ／ｋｇ、四塩化炭素）を８週齢のマウスに腹腔内注射し（ＳＤ４２）、更に１４週間まで週に２回治療を続けた。ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓをＳＤ４３及びＳＤ７１に皮下注射した（３ｍｇ／ｋｇ）。処置マウスをＳＤ１６１に安楽死させ、肝臓を採取し、４％ホルマリン中に包埋した。肝臓切片をヘマトキシリン及びエオシンで染色した。腫瘍、脂肪症及び肝細胞バルーニングを光学顕微鏡下で検査した。肝損傷の重症度は、軽度（１）、中等度（２）及び重度（３）として表した。対応のないｔ検定によってＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９を使用して統計分析を行った。各試験について、０．０５未満のＰ値を統計的に有意であるとみなした。図４５に示すように、ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲｓは、Ｂ６Ｃ３Ｆ１マウスにおいて、ＤＥＮ及びＣＣｌ_４によって誘導された肝腫瘍の発生及び成長、脂肪症並びに肝細胞バルーニングを有意に阻害した。

【0317】

他の実施形態
本発明を、発明を実施するための形態と併せて説明してきたが、前述の説明は、例示を意図したものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図19A】

【図19B】

【図20A】

【図20B】

【図21A】

【図21B】

【図22A】

【図22B】

【図22C】

【図22D】

【図22E】

【図22F】

【図22G】

【図22H】

【図23A】

【図23B】

【図23C】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【配列表】

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【国際調査報告】