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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-11
(54)【発明の名称】ＣＤ２８シェディング遮断剤
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240904BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240904BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240904BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240904BHJP
A61K 47/65 20170101ALI20240904BHJP
A61K 47/56 20170101ALI20240904BHJP
A61K 47/59 20170101ALI20240904BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240904BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240904BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240904BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240904BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240904BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240904BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240904BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240904BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240904BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20240904BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28
C07K16/46 ZNA
C12P21/08
A61K39/395 N
A61K47/65
A61K47/56
A61K47/59
A61P35/00
A61P37/08
A61P29/00
A61P29/00 101
A61P19/02
A61P17/02
A61P25/00
A61P3/10
A61P1/04
C12N15/13
C12N15/63 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024538512
(86)(22)【出願日】2022-09-06
(85)【翻訳文提出日】2024-04-18
(86)【国際出願番号】 IL2022050972
(87)【国際公開番号】W WO2023031943
(87)【国際公開日】2023-03-09
(31)【優先権主張番号】63/241,010
(32)【優先日】2021-09-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/241,011
(32)【優先日】2021-09-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/347,756
(32)【優先日】2022-06-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522359671
【氏名又は名称】ビオンド バイオロジックス リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】フリドマン－ドロール，アンナ
(72)【発明者】
【氏名】ガバイ，タル
(72)【発明者】
【氏名】ハキム，モッティ
(72)【発明者】
【氏名】チェン ゼルツバーグ，ライラック
(72)【発明者】
【氏名】ルコウィッツ，アヤラ
(72)【発明者】
【氏名】マンデル，イラナ
(72)【発明者】
【氏名】ベン－モシェ，テヒラ
(72)【発明者】
【氏名】サピール，ヤイール
(72)【発明者】
【氏名】シュルマン，アヴィドール
【テーマコード（参考）】
4B064
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE12
4B064DA01
4C076AA95
4C076CC27
4C076EE41
4C076EE59
4C085AA14
4C085AA38
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE06
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045GA26
(57)【要約】
ＣＤ２８切断を遮断する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が提供される。ｓｄＡｂおよび／または二量体剤を使用する方法ならびにｓｄＡｂおよび／または二量体剤を含む医薬組成物およびキットと同様に、二量体剤、少なくとも２つの膜ＣＤ２８結合剤も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
３つのＣＤＲを含む、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）であって、ＣＤＲ１が配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号２（ＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号３（ＤＬＹＧＳＤＹＷＤ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号６（ＤＭＩＥＱＱＷＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号７（ＤＴＨＲＧＶＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号９（ＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号１１（ＩＮＳＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号１２（ＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号１３（ＤＶＹＦＱＥＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号１４（ＩＮＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号１５（ＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号１６（ＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む；
ＣＤＲ１が配列番号１７（ＩＲＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号１８（ＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号１９（ＤＭＹＷＱＤＹＷＷ）に示されるアミノ酸配列を含む；または
ＣＤＲ１が配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号２０（ＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３が配列番号２１（ＤＨＨＨＳＤＷＷＴ）に示されるアミノ酸配列を含む；
単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）。
【請求項2】
ラクダ科動物抗体またはサメ抗体である、請求項１に記載のｓｄＡｂ。
【請求項3】
ＶＨＨ抗体である、請求項１または２に記載のｓｄＡｂ。
【請求項4】
Ｎ末端からＣＤＲ１までの配列が、Ｘ１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＸ２ＧＸ３ＳＬＲＬＳＣＸ４ＡＳＧＳＸ５Ｘ６Ｓ（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ１がＥまたはＱであり、Ｘ２がＡまたはＰであり、Ｘ３がＥまたはＧであり、Ｘ４がＡまたはＫであり、Ｘ５がＩ、ＬまたはＴであり、Ｘ６がＡまたはＦであり、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列が、ＷＹＲＱＡＰＧＸ７Ｘ８Ｘ９ＥＸ１０ＶＸ１１（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ７がＳまたはＫであり、Ｘ８がＱまたはＧであり、Ｘ９がＲまたはＬであり、Ｘ１０がＬまたはＲであり、Ｘ１１がＡ、ＳまたはＴのうちの１つであり、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列が、ＲＦＴＸ１１ＳＲＤＮＸ１２ＫＸ１３ＴＸ１４ＹＬＱＭＮＸ１５ＬＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９Ｘ２０ＶＹＹＣＶＶ（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ１１がＩまたはＶであり、Ｘ１２がＡまたはＳであり、Ｘ１３がＴまたはＮであり、Ｘ１４がＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ１５がＳまたはＮであり、Ｘ１６がＲ、ＫまたはＥであり、Ｘ１７がＰまたはＡであり、Ｘ１８がＥまたはＲであり、Ｘ１９がＴまたはＡであり、Ｘ２０がＡまたはＧであり、Ｃ末端からＣＤＲ３までの配列が、ＷＧＱＧＴＸ２１ＶＴＶＳＳ（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ２１がＱまたはＬである、請求項１～３のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項5】
Ｎ末端からＣＤＲ１までの配列が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳ（配列番号２２）からなり、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列が、ＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＸ（配列番号４８）からなり、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列が、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶ（配列番号２４）からなり、Ｃ末端からＣＤＲ３までの配列が、ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２５）からなり、式中、ＸがＡまたはＴである、請求項４に記載のｓｄＡｂ。
【請求項6】
以下からなる群から選択される配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ：ａ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２６）；
ｂ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＩＥＱＱＷＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２７）；
ｃ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＴＨＲＧＶＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２８）；
ｄ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２９）；
ｅ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＹＦＱＥＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３０）；
ｆ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３１）；
ｇ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３２）；
ｈ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）；
ｉ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）；
ｊ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）；
ｋ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）；
ｌ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）；
ｍ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３３）；
ｎ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７５）；
ｏ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）；
ｐ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７７）；
ｑ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７８）；または
ｒ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＨＨＨＳＤＷＷＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３４）。
【請求項7】
ＣＤ２８アゴニストではない、請求項１～６のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項8】
ＣＤ２８アンタゴニストではない、請求項１～７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項9】
ＣＤ２８アンタゴニストである、請求項１～７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項10】
前記薬剤が前記ｍＣＤ２８を分解せず、ｍＣＤ２８媒介免疫細胞活性化を阻害しない、請求項１～８のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項11】
前記薬剤がＣＤ２８のストーク領域内に結合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項12】
前記ストーク領域が、アミノ酸配列ＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号３５）またはＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ（配列番号３６）を含む、請求項１１に記載のｓｄＡｂ。
【請求項13】
前記ストーク領域が、アミノ酸配列ＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号３７）からなる、請求項１１または１２に記載のｓｄＡｂ。
【請求項14】
前記薬剤が、少なくとも１つのプロテアーゼのための切断部位で結合する、請求項１～１３のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項15】
前記薬剤が、少なくとも１つのプロテアーゼによるタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１～１４のいずれか一項に記載のｓｄＡｂ。
【請求項16】
前記少なくとも１つのプロテアーゼが、少なくとも１つのメタロプロテアーゼである、請求項１４または１５に記載のｓｄＡｂ。
【請求項17】
前記少なくとも１つのメタロプロテアーゼが、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－１３、またはそれらの組み合わせである、請求項１６に記載のｓｄＡｂ。
【請求項18】
少なくとも２つの膜ＣＤ２８（ｍＣＤ２８）結合単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、二量体剤であって、第１のｍＣＤ２８結合ｓｄＡｂがリンカーによって第２のｍＣＤ２８結合ｓｄＡｂに連結されている、二量体剤。
【請求項19】
前記第１のｓｄＡｂ、前記第２のｓｄＡｂ、またはその両方が、以下からなる群から選択される配列を含む、請求項１８に記載の二量体剤：ａ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４０）；
ｂ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＬＦＳＩＮＡＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＳＧＳＴＮＹＡＮＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＥＹＧＳＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９５）；および
ｃ．ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＲＶＡＡＩＴＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＥＰＲＤＡＧＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＥＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９６）。
【請求項20】
請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂを含む、請求項１８に記載の二量体剤。
【請求項21】
前記第１のｓｄＡｂおよび前記第２のｓｄＡｂが同じ配列を含む、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項22】
前記第１のｓｄＡｂおよび前記第２のｓｄＡｂが異なる配列を含む、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項23】
前記ｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項24】
二量体剤の一部ではない場合の前記第１のｓｄＡｂ、前記第２のｓｄＡｂまたはその両方がＣＤ２８アンタゴニストであり、前記二量体剤がＣＤ２８アンタゴニストではない、請求項１８～２３のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項25】
前記第１のｓｄＡｂを含む第１のポリペプチドと、前記第２のｓｄＡｂを含む第２のポリペプチドとを含み、前記リンカーが、前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとを連結する、請求項１８～２４のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項26】
前記第１のポリペプチドが、前記第１のｓｄＡｂの外側に第１の遊離システインアミノ酸を含み、前記第２のポリペプチドが、前記第２のｓｄＡｂの外側に第２の遊離システインアミノ酸を含み、前記リンカーが、前記第１の遊離システインアミノ酸および前記第２の遊離システインアミノ酸の間の結合を含む、請求項２５に記載の二量体剤。
【請求項27】
前記第１の遊離システイン、前記第２の遊離システイン、またはその両方がＣ末端アミノ酸である、請求項２６に記載の二量体剤。
【請求項28】
前記第１のポリペプチドが、前記第１のｓｄＡｂおよび第１の二量体化ドメインを含み、前記第２のポリペプチドが、前記第２のｓｄＡｂおよび第２の二量体化ドメインを含み、前記リンカーが、前記二量体化ドメイン、前記二量体化ドメイン間の結合、またはその両方を含む、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項29】
前記第１の二量体化ドメインが、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ヒンジドメインを含み、前記第２の二量体化ドメインが、第２のＩｇヒンジドメインを含み、前記リンカーが、前記第１のＩｇヒンジドメインと前記第２のＩｇヒンジドメインとの間にジスルフィド結合を含む、請求項２８に記載の二量体剤。
【請求項30】
前記第１のｓｄＡｂがＮ末端から前記第１の二量体化ドメインまでであるか、前記第２のｓｄＡｂがＮ末端から前記第２の二量体化ドメインまでであるか、またはその両方である、請求項２８または２９に記載の二量体剤。
【請求項31】
前記Ｉｇヒンジドメインが、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ（配列番号８３）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ（配列番号８５）を含むヒトＩｇヒンジドメインである、請求項２９または３０に記載の二量体剤。
【請求項32】
前記第１のｓｄＡｂがアミノ酸リンカーによって前記第１のＩｇヒンジドメインから分離されるか、前記第２のｓｄＡｂがアミノ酸リンカーによって前記第２のＩｇヒンジドメインから分離されるか、またはその両方である、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項33】
前記アミノ酸リンカーが可撓性リンカーである、請求項３２に記載の二量体剤。
【請求項34】
前記アミノ酸リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＥＧＧＧＳ）ｎ、（ＥＧＧＳ）ｎおよびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、ｎが１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である、請求項３２または３３に記載の二量体剤。
【請求項35】
前記第１の二量体化ドメイン、前記第２の二量体化ドメインまたは両方が、Ｉｇ重鎖のＣＨ２ドメインをさらに含む、請求項２８～３４のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項36】
前記第１の二量体化ドメイン、前記第２の二量体化ドメインまたは両方が、Ｉｇ重鎖のＣＨ３ドメインをさらに含む、請求項３５に記載の二量体剤。
【請求項37】
前記ヒンジドメインがＮ末端から前記ＣＨ２ドメインまでであり、前記ＣＨ２ドメインがＮ末端から前記ＣＨ３ドメインまでである、請求項３６に記載の二量体剤。
【請求項38】
前記二量体化ドメインが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）もしくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しないか、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣを減少させる少なくとも１つの変異を含む、請求項２７～３７のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項39】
前記二量体化ドメインが、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３９）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９２）を含む、請求項３８に記載の二量体剤。
【請求項40】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９３）を含む、請求項３９に記載の二量体剤。
【請求項41】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９４）を含む、請求項３９に記載の二量体剤。
【請求項42】
ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害しないか、または低度に阻害し、低度の阻害が、５０％未満の阻害を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項43】
前記リガンドが、ＣＤ８６、ＣＤ８０またはその両方である、請求項４２に記載の二量体剤。
【請求項44】
前記リンカーが化学的リンカーである、請求項１８～２５のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項45】
前記化学的リンカーが生体適合性ポリマーを含む、請求項４４に記載の二量体剤。
【請求項46】
前記生体適合性ポリマーがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項４５に記載の二量体剤。
【請求項47】
単一ポリペプチドを含み、前記単一ポリペプチドが、前記第１のｓｄＡｂのＮ末端から前記第２のｓｄＡｂまでを含み、１３個未満のアミノ酸のアミノ酸リンカーによって分離されている、請求項１８～２５のいずれか一項に記載の二量体剤であって、場合により、ＣＤ２８アンタゴニストではないか、ＣＤ２８へのリガンド結合を５０％未満阻害するか、またはその両方である、二量体剤。
【請求項48】
単一ポリペプチドを含み、前記単一ポリペプチドが、前記第１のｓｄＡｂのＮ末端から前記第２のｓｄＡｂまでを含み、１０個以上のアミノ酸のアミノ酸リンカーによって分離されている、請求項１８～２５のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項49】
前記アミノ酸リンカーが、正味の中性電荷を含む、請求項４８に記載の二量体剤。
【請求項50】
前記アミノ酸リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、およびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、ｎが１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である、請求項４８または４９に記載の二量体剤。
【請求項51】
前記アミノ酸リンカーが、正味の正電荷を含む、請求項４８に記載の二量体剤。
【請求項52】
前記アミノ酸リンカーが、（ＸＧＧＧＳ）ｎ、（ＸＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＸＳ）ｎ、およびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、Ｘが、Ｋ、ＲおよびＨから選択され、ｎが、１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項53】
ＸがＫである、請求項５２に記載の二量体剤。
【請求項54】
前記アミノ酸リンカーが、正味の負電荷を含む、請求項４８に記載の二量体剤。
【請求項55】
前記アミノ酸リンカーが、（ＸＧＧＧＳ）ｎ、（ＸＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＸＳ）ｎ、およびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、Ｘが、ＥおよびＤから選択され、ｎが、１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である、請求項４８～５４のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項56】
ＸがＥである、請求項５５に記載の二量体剤。
【請求項57】
前記アミノ酸リンカーが剛性リンカーである、請求項４８に記載の二量体剤。
【請求項58】
前記アミノ酸リンカーが、ＧＧＧＧＳＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９７）を含む、請求項５７に記載の二量体剤。
【請求項59】
前記アミノ酸リンカーが、最大で１００個のアミノ酸を含む、請求項４８～５８のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項60】
ＣＤ２８アンタゴニストである、請求項４８～５９のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項61】
ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害し、阻害が少なくとも５０％の阻害を含む、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の二量体剤。
【請求項62】
可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）レベルの低下を必要とする対象においてｓＣＤ２８レベルを低下させる方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項１８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤を前記対象に投与し、それによりｓＣＤ２８を低下させることを含む、方法。
【請求項63】
癌の治療および／または予防を必要とする対象において癌を治療および／または予防する方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項１８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤を前記対象に投与し、それにより癌を治療および／または予防することを含む、方法。
【請求項64】
ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法の改善を必要とする対象においてＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善する方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項１８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤を前記対象に投与し、それによりＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善することを含む、方法。
【請求項65】
前記対象が癌に罹患している、請求項６２または６４に記載の方法。
【請求項66】
前記癌が、黒色腫、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、腎癌、胃癌および結腸直腸癌から選択される、請求項６３または６５に記載の方法。
【請求項67】
前記癌が、レベルが上昇したｓＣＤ２８またはレベルが上昇しているｓＣＤ２８を含む、請求項６３、６５または６６に記載の方法。
【請求項68】
ｍＣＤ２８を分解しない、請求項６２～６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項69】
ｍＣＤ２８媒介免疫細胞活性化を低下させない、請求項６２～６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項70】
ｍＣＤ２８へのリガンド結合を阻害する方法であって、前記ｍＣＤ２８を請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項４８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤と接触させ、それによりｍＣＤ２８へのリガンド結合を阻害することを含む、方法。
【請求項71】
免疫応答の抑制を必要とする対象において免疫応答を抑制するための方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項４８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤を前記対象に投与し、それにより免疫応答を抑制することを含む、方法。
【請求項72】
前記二量体剤が、ｍＣＤ２８へのリガンド結合を阻害し、それにより免疫応答を抑制する、請求項７１に記載の方法。
【請求項73】
前記リガンドが、ＣＤ８６、ＣＤ８０またはその両方である、請求項７０または７２に記載の方法。
【請求項74】
前記対象が自己免疫疾患に罹患している、請求項６２～７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項75】
前記自己免疫疾患が、ループス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、ベーチェット病、大腸炎、潰瘍性大腸炎、糖尿病、グレーブス病および多発性硬化症からなる群から選択される、請求項７４に記載の方法。
【請求項76】
請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項１８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤と、薬学的に許容される担体、賦形剤またはアジュバントとを含む、医薬組成物。
【請求項77】
癌の治療および／もしくは予防に使用するため、またはＰＤ－１および／もしくはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善するための、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項１８～４７のいずれか一項に記載の二量体剤を含む、請求項７６に記載の医薬組成物。
【請求項78】
リガンドのｍＣＤ２８への結合の阻害に使用するため、または免疫応答を抑制するための、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｓｄＡｂまたは請求項４８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤を含む、請求項７６に記載の医薬組成物。
【請求項79】
請求項１～１７のいずれか一項に記載の少なくとも１つのｓｄＡｂまたは請求項１８～６１のいずれか一項に記載の二量体剤を含む、キット。
【請求項80】
ａ．抗ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１免疫療法；ならびにｂ．本発明の前記薬剤がＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法と共に使用するためのものであることを記載するラベル
のうち少なくとも１つをさらに含む、請求項７９に記載のキット。
【請求項81】
細胞の表面上のｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する二量体剤を生成する方法であって、ａ．ｉ．細胞表面のｍＣＤ２８に結合し、プロテアーゼによる前記ｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を得ること；
ｉｉ．前記薬剤の第１の部分を前記薬剤の第２の部分にリンカーを介して連結して、二量体剤を生成すること；
ｉｉｉ．プロテアーゼによる細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する前記二量体剤の能力を試験すること；および
ｉｖ．細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤を選択すること；
ならびに
ｂ．二量体剤をコードする１つ以上の核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、前記１つ以上の核酸配列が、
ｉ．細胞表面上のｍＣＤ２８に結合し、プロテアーゼによる前記ｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を得ること；
ｉｉ．前記薬剤の第１の部分を前記薬剤の第２の部分にリンカーを介して連結して、二量体剤を生成すること；
ｉｉｉ．プロテアーゼによる細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する前記二量体剤の能力を試験すること；および
ｉｖ．細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を選択すること
によって選択される二量体剤のものであること；
のうちの少なくとも１つを含み、
それによって、細胞の表面上のｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する薬剤を生成する、
方法。
【請求項82】
前記得られた薬剤がｓｄＡｂである、請求項８１に記載の方法。
【請求項83】
前記薬剤を得ることが、ａ．サメまたはラクダ科動物をＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントで免疫化し、前記免疫化された生物から抗体を収集すること、またはＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントに結合するための薬剤のライブラリーをスクリーニングし、結合する薬剤を選択すること；
ｂ．細胞表面上のｍＣＤ２８に結合する前記抗体または薬剤の結合を試験し、細胞表面上のｍＣＤ２８に結合する抗体または薬剤を選択すること；ならびに
ｃ．プロテアーゼおよび前記選択された抗体または薬剤、および細胞上の前記ｍＣＤ２８の切断を遮断するさらなる選択された抗体または薬剤の存在下で、細胞上のｍＣＤ２８の切断を試験すること
を含む、請求項８１または８２に記載の方法。
【請求項84】
前記細胞外ドメインまたはそのフラグメントが、ａ．二量体であるか、
ｂ．ＣＤ２８ストークドメインを含むか；または
ｃ．その両方である、
請求項８３に記載の方法。
【請求項85】
前記プロテアーゼが、ＭＭＰ－２およびＭＭＰ－１３から選択される、請求項８１～８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項86】
前記得られた二量体剤の存在下でｍＣＤ２８下流シグナル伝達をアッセイすること、およびｍＣＤ２８シグナル伝達に実質的にアゴナイズせず、実質的に拮抗もしない少なくとも１つの二量体剤を選択することをさらに含む、請求項８１～８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項87】
前記得られた二量体剤の存在下でｍＣＤ２８下流シグナル伝達をアッセイすること、およびｍＣＤ２８シグナル伝達に実質的に拮抗する少なくとも１つの二量体剤を選択することをさらに含む、請求項８１～８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項88】
請求項８１～８７のいずれか一項に記載の方法によって製造された二量体剤。
【請求項89】
請求項８８に記載の二量体剤と、薬学的に許容される担体、賦形剤またはアジュバントとを含む、医薬組成物。
【請求項90】
癌の治療および／もしくは予防に使用するため、またはＰＤ－１および／もしくはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善するための、請求項８６に記載の方法で製造された二量体剤を含む、請求項８９に記載の医薬組成物。
【請求項91】
リガンドのｍＣＤ２８への結合の阻害に使用するため、または免疫応答を抑制するための、請求項８７に記載の方法で製造された二量体剤を含む、請求項８９に記載の医薬組成物。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月６日に出願された米国仮特許出願第６３／２４１，０１０号、２０２１年９月６日に出願された米国仮特許出願第６３／２４１，０１１号、および２０２２年６月１日に出願された米国仮特許出願第６３／３４７，７５６号の優先権の利益を主張し、これらの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年９月６日に出願された米国仮特許出願第６３／２４１，０１０号、２０２１年９月６日に出願された米国仮特許出願第６３／２４１，０１１号、および２０２２年６月１日に出願された米国仮特許出願第６３／３４７，７５６号の優先権の利益を主張し、これらの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、免疫調節および免疫療法の分野にある。
【背景技術】
【0003】
適応免疫系は、主に抗原特異的ヘルパーＣＤ４＋および細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の刺激を調整することによって、病原体および癌細胞に対する調節および防御において重要な役割を果たす。抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるＴ細胞の永続的かつ持続的な活性化は、ｉ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と、ＡＰＣ上の主要な組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）によって提示されるペプチドとの係合；ならびにｉｉ）ＡＰＣによっても発現されるＢ７－１（ＣＤ８０）およびＢ７－２（ＣＤ８６）リガンドに結合するＴ細胞上の共刺激性ＣＤ２８受容体、を必要とする。ＣＤ２８共刺激の生物学的帰結は数多くあり、Ｔ細胞周期の制御、拡大、分化、ならびに免疫エフェクター機能を達成するために必要な閾値を低下させることによるＴＣＲ刺激の増幅を含む。
【0004】
国際特許出願公開第２０１９１７５８８５号は、可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）が、ＣＤ２８のストークドメインのタンパク質分解性切断、および原形質膜からのＣＤ２８の細胞外ドメインの能動的シェディング（active shedding）によって産生されることを開示している。このシェディングを阻害し、したがって免疫応答を増強する、ＣＤ２８に対する抗体の使用も開示される。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法の強化のおける、これらの抗体の使用も開示される。重要なことに、これらの抗体はまた、ＣＤ２８アゴニストまたはアンタゴニスト効果を有さず、したがって免疫活性化を無差別に増強せず、ＣＤ８６のそのリガンドＣＤ２８への結合を遮断することによる活性化を阻害しない。ＣＤ２８のタンパク質分解性シェディング（proteolytic shedding）を阻害し、免疫療法を増強し、ＣＤ２８アンタゴニストとして作用しない優れた分子が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際特許出願公開第２０１９１７５８８５号
【発明の概要】
【0006】
本発明は、ＣＤ２８切断を遮断する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を提供する。ｓｄＡｂを含む二量体剤、ｓｄＡｂおよび／または二量体剤を使用する方法、ならびにｓｄＡｂおよび／または二量体剤を含む医薬組成物およびキットも提供される。
【0007】
第１の態様によれば、３つのＣＤＲを含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が提供され、ここで
ＣＤＲ１は配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２（ＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号３（ＤＬＹＧＳＤＹＷＤ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号６（ＤＭＩＥＱＱＷＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号７（ＤＴＨＲＧＶＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号９（ＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号１１（ＩＮＳＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１２（ＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１３（ＤＶＹＦＱＥＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号１４（ＩＮＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１５（ＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１６（ＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号１７（ＩＲＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１８（ＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１９（ＤＭＹＷＱＤＹＷＷ）に示されるアミノ酸配列を含むか、または
ＣＤＲ１は配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２０（ＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号２１（ＤＨＨＨＳＤＷＷＴ）に示されるアミノ酸配列を含む。
ＣＤＲ１は配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２（ＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号３（ＤＬＹＧＳＤＹＷＤ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号６（ＤＭＩＥＱＱＷＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号７（ＤＴＨＲＧＶＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号９（ＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号１１（ＩＮＳＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１２（ＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１３（ＤＶＹＦＱＥＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号１４（ＩＮＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１５（ＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１６（ＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含むか、
ＣＤＲ１は配列番号１７（ＩＲＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１８（ＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１９（ＤＭＹＷＱＤＹＷＷ）に示されるアミノ酸配列を含むか、または
ＣＤＲ１は配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２０（ＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号２１（ＤＨＨＨＳＤＷＷＴ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0008】
いくつかの実施形態によれば、ｓｄＡｂはラクダ科動物抗体またはサメ抗体である。
【0009】
いくつかの実施形態によれば、ｓｄＡｂはＶＨＨ抗体である。
【0010】
いくつかの実施形態によれば、Ｎ末端からＣＤＲ１までの配列は、Ｘ１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＸ２ＧＸ３ＳＬＲＬＳＣＸ４ＡＳＧＳＸ５Ｘ６Ｓ（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＰであり、Ｘ３はＥまたはＧであり、Ｘ４はＡまたはＫであり、Ｘ５はＩ、ＬまたはＴであり、Ｘ６はＡまたはＦであり、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列は、ＷＹＲＱＡＰＧＸ７Ｘ８Ｘ９ＥＸ１０ＶＸ１１（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ７はＳまたはＫであり、Ｘ８はＱまたはＧであり、Ｘ９はＲまたはＬであり、Ｘ１０はＬまたはＲであり、Ｘ１１はＡ、ＳまたはＴのうちの１つであり、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列は、ＲＦＴＸ１１ＳＲＤＮＸ１２ＫＸ１３ＴＸ１４ＹＬＱＭＮＸ１５ＬＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９Ｘ２０ＶＹＹＣＶＶ（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ１１はＩまたはＶであり、Ｘ１２はＡまたはＳであり、Ｘ１３はＴまたはＮであり、Ｘ１４はＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ１５はＳまたはＮであり、Ｘ１６はＲ、ＫまたはＥであり、Ｘ１７はＰまたはＡであり、Ｘ１８はＥまたはＲであり、Ｘ１９はＴまたはＡであり、Ｘ２０はＡまたはＧであり、Ｃ末端からＣＤＲ３までの配列は、ＷＧＱＧＴＸ２１ＶＴＶＳＳ（配列番号Ｘ）からなり、式中、Ｘ２１はＱまたはＬである。
【0011】
いくつかの実施形態によれば、Ｎ末端からＣＤＲ１までの配列は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳ（配列番号２２）からなり、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列は、ＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＸ（配列番号４８）からなり、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶ（配列番号２４）からなり、Ｃ末端ＣＤＲ３までの配列は、ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２５）からなり、式中、ＸはＡまたはＴである。
【0012】
いくつかの実施形態によれば、ｓｄＡｂは、以下からなる群から選択される配列を含む：
ａ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２６）；
ｂ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＩＥＱＱＷＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２７）；
ｃ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＴＨＲＧＶＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２８）；
ｄ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２９）；
ｅ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＹＦＱＥＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３０）；
ｆ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３１）；
ｇ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３２）；
ｈ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）；
ｉ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）；
ｊ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）；
ｋ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）；
ｌ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）；
ｍ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３３）；
ｎ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７５）；
ｏ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）；
ｐ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７７）；
ｑ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７８）；または
ｒ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＨＨＨＳＤＷＷＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３４）。
ａ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２６）；
ｂ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＩＥＱＱＷＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２７）；
ｃ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＴＨＲＧＶＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２８）；
ｄ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２９）；
ｅ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＹＦＱＥＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３０）；
ｆ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３１）；
ｇ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３２）；
ｈ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）；
ｉ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）；
ｊ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）；
ｋ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）；
ｌ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）；
ｍ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３３）；
ｎ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７５）；
ｏ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）；
ｐ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７７）；
ｑ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７８）；または
ｒ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＨＨＨＳＤＷＷＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３４）。
【0013】
いくつかの実施形態によれば、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８アゴニストではない。
【0014】
いくつかの実施形態によれば、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８アンタゴニストではない。
【0015】
いくつかの実施形態によれば、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８アンタゴニストである。
【0016】
いくつかの実施形態によれば、薬剤は、ｍＣＤ２８を分解せず、ｍＣＤ２８媒介性の免疫細胞活性化も阻害しない。
【0017】
いくつかの実施形態によれば、薬剤はＣＤ２８のストーク領域内に結合する。
【0018】
いくつかの実施形態によれば、ストーク領域は、アミノ酸配列ＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号３５）またはＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ（配列番号３６）を含む。
【0019】
いくつかの実施形態によれば、ストーク領域は、アミノ酸配列ＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号３７）からなる。
【0020】
いくつかの実施形態によれば、薬剤は、少なくとも１つのプロテアーゼのための切断部位で結合する。
【0021】
いくつかの実施形態によれば、薬剤は、少なくとも１つのプロテアーゼによるタンパク質分解性切断を阻害する。
【0022】
いくつかの実施形態によれば、少なくとも１つのプロテアーゼは、少なくとも１つのメタロプロテアーゼである。
【0023】
いくつかの実施形態によれば、少なくとも１つのメタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－１３、またはそれらの組み合わせである。
【0024】
別の態様によれば、少なくとも２つの膜ＣＤ２８（ｍＣＤ２８）結合単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、第１のｍＣＤ２８結合ｓｄＡｂがリンカーによって第２のｍＣＤ２８結合ｓｄＡｂに連結されている、二量体剤が提供される。
【0025】
いくつかの実施形態によれば、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、以下からなる群から選択される配列を含む：
ａ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４０）；
ｂ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＬＦＳＩＮＡＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＳＧＳＴＮＹＡＮＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＥＹＧＳＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９５）；および
ｃ．ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＲＶＡＡＩＴＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＥＰＲＤＡＧＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＥＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９６）。
ａ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４０）；
ｂ．ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＬＦＳＩＮＡＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＳＧＳＴＮＹＡＮＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＥＹＧＳＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９５）；および
ｃ．ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＲＶＡＡＩＴＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＥＰＲＤＡＧＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＥＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９６）。
【0026】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、本発明のｓｄＡｂを含む。
【0027】
いくつかの実施形態によれば、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは同じ配列を含む。
【0028】
いくつかの実施形態によれば、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは異なる配列を含む。
【0029】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する。
【0030】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤の一部ではない場合の第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂまたはその両方は、ＣＤ２８アンタゴニストであり、二量体剤はＣＤ２８アンタゴニストではない。
【0031】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、第１のｓｄＡｂを含む第１のポリペプチドと、第２のｓｄＡｂを含む第２のポリペプチドとを含み、リンカーは、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを連結する。
【0032】
いくつかの実施形態によれば、第１のポリペプチドは、第１のｓｄＡｂの外側に第１の遊離システインアミノ酸を含み、第２のポリペプチドは、第２のｓｄＡｂの外側に第２の遊離システインアミノ酸を含み、リンカーは、第１および第２の遊離システインアミノ酸の間の結合を含む。
【0033】
いくつかの実施形態によれば、第１の遊離システイン、第２の遊離システインまたはその両方は、Ｃ末端アミノ酸である。
【0034】
いくつかの実施形態によれば、第１のポリペプチドは、第１のｓｄＡｂおよび第１の二量体化ドメインを含み、第２のポリペプチドは、第２のｓｄＡｂおよび第２の二量体化ドメインを含み、リンカーは、二量体化ドメイン、二量体化ドメイン間の結合、またはその両方を含む。
【0035】
いくつかの実施形態によれば、第１の二量体化ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ヒンジドメインを含み、第２の二量体化ドメインは、第２のＩｇヒンジドメインを含み、リンカーは、第１のＩｇヒンジドメインと第２のＩｇヒンジドメインとの間にジスルフィド結合を含む。
【0036】
いくつかの実施形態によれば、第１のｓｄＡｂがＮ末端から第１の二量体化ドメインまでであるか、第２のｓｄＡｂがＮ末端から第２の二量体化ドメインまでであるか、またはその両方である。
【0037】
いくつかの実施形態によれば、Ｉｇヒンジドメインは、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ（配列番号８３）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ（配列番号８５）を含むヒトＩｇヒンジドメインである。
【0038】
いくつかの実施形態によれば、第１のｓｄＡｂがアミノ酸リンカーによって第１のＩｇヒンジドメインから分離されるか、第２のｓｄＡｂがアミノ酸リンカーによって第２のＩｇヒンジドメインから分離されるか、またはその両方である。
【0039】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは可撓性リンカーである。
【0040】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＥＧＧＧＳ）ｎ、（ＥＧＧＳ）ｎおよびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である。
【0041】
いくつかの実施形態によれば、第１の二量体化ドメイン、第２の二量体化ドメインまたは両方は、Ｉｇ重鎖のＣＨ２ドメインをさらに含む。
【0042】
いくつかの実施形態によれば、第１の二量体化ドメイン、第２の二量体化ドメインまたは両方は、Ｉｇ重鎖のＣＨ３ドメインをさらに含む。
【0043】
いくつかの実施形態によれば、ヒンジドメインは、Ｎ末端からＣＨ２ドメインまでであり、ＣＨ２ドメインは、Ｎ末端からＣＨ３ドメインまでである。
【0044】
いくつかの実施形態によれば、二量体化ドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）もしくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しないか、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣを減少させる少なくとも１つの変異を含む。
【0045】
いくつかの実施形態によれば、二量体化ドメインは、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３９）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９２）を含む。
【0046】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９３）を含む。
【0047】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９４）を含む。
【0048】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害しないか、または低度に阻害し、低度の阻害は、５０％未満の阻害を含む。
【0049】
いくつかの実施形態によれば、リガンドは、ＣＤ８６、ＣＤ８０またはその両方である。
【0050】
いくつかの実施形態によれば、リンカーは化学的リンカーである。
【0051】
いくつかの実施形態によれば、化学的リンカーは、生体適合性ポリマーを含む。
【0052】
いくつかの実施形態によれば、生体適合性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【0053】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、単一のポリペプチドを含み、単一のポリペプチドは、第１のｓｄＡｂのＮ末端から第２のｓｄＡｂまでを含み、１３個未満のアミノ酸のアミノ酸リンカーによって分離されており、場合により、二量体剤はＣＤ２８アンタゴニストではないか、ＣＤ２８へのリガンド結合を５０％未満阻害するか、またはその両方である。
【0054】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、単一ポリペプチドを含み、単一ポリペプチドは、第１のｓｄＡｂのＮ末端から第２のｓｄＡｂまでを含み、１０個以上のアミノ酸のアミノ酸リンカーによって分離されている。
【0055】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは正味の中性電荷を含む。
【0056】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、およびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である。
【0057】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは正味の正電荷を含む。
【0058】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは、（ＸＧＧＧＳ）ｎ、（ＸＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＸＳ）ｎ、およびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、Ｘは、Ｋ、ＲおよびＨから選択され、ｎは、１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である。
【0059】
いくつかの実施形態によれば、ＸはＫである。
【0060】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは正味の負電荷を含む。
【0061】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは、（ＸＧＧＧＳ）ｎ、（ＸＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＸＳ）ｎ、およびそれらの組み合わせから選択される配列を含み、Ｘは、ＥおよびＤから選択され、ｎは、１、２、３、４、５、６、７および８から選択される整数である。
【0062】
いくつかの実施形態によれば、ＸはＥである。
【0063】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは剛性リンカーである。
【0064】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは、ＧＧＧＧＳＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９７）を含む。
【0065】
いくつかの実施形態によれば、アミノ酸リンカーは、最大で１００個のアミノ酸を含む。
【0066】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。
【0067】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害し、阻害は、少なくとも５０％の阻害を含む。
【0068】
別の態様によれば、可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）レベルの低下を必要とする対象においてｓＣＤ２８レベルを低下させる方法であって、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を対象に投与し、それによりｓＣＤ２８を低下させることを含む方法が提供される。
【0069】
別の態様によれば、癌の治療および／または予防を必要とする対象において癌を治療および／または予防する方法であって、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を対象に投与し、それにより癌を治療および／または予防することを含む方法が提供される。
【0070】
別の態様によれば、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法の改善を必要とする対象においてＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善する方法であって、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を対象に投与し、それによりＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善することを含む方法が提供される。
【0071】
いくつかの実施形態によれば、対象は癌に罹患している。
【0072】
いくつかの実施形態によれば、癌は、黒色腫、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、腎癌、胃癌および結腸直腸癌から選択される。
【0073】
いくつかの実施形態によれば、癌は、レベルが上昇したｓＣＤ２８またはレベルが上昇しているｓＣＤ２８を含む。
【0074】
いくつかの実施形態によれば、方法はｍＣＤ２８を分解しない。
【0075】
いくつかの実施形態によれば、方法は、ｍＣＤ２８媒介免疫細胞活性化を減少させない。
【0076】
別の態様によれば、ｍＣＤ２８へのリガンド結合を阻害する方法であって、ｍＣＤ２８を本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤と接触させ、それによりｍＣＤ２８へのリガンド結合を阻害することを含む方法が提供される。
【0077】
別の態様によれば、免疫応答の抑制を必要とする対象において免疫応答を抑制するための方法であって、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を対象に投与し、それにより免疫応答を抑制することを含む方法が提供される。
【0078】
いくつかの実施形態によれば、二量体剤は、ｍＣＤ２８へのリガンド結合を阻害し、それにより免疫応答を抑制する。
【0079】
いくつかの実施形態によれば、リガンドは、ＣＤ８６、ＣＤ８０またはその両方である。
【0080】
いくつかの実施形態によれば、対象は、自己免疫疾患に罹患している。
【0081】
いくつかの実施形態によれば、自己免疫疾患は、ループス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、ベーチェット病（Becht’s disease）、大腸炎、潰瘍性大腸炎、糖尿病、グレーブス病および多発性硬化症からなる群から選択される。
【0082】
別の態様によれば、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤と、薬学的に許容される担体、賦形剤またはアジュバントとを含む、医薬組成物が提供される。
【0083】
いくつかの実施形態によれば、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を含む本発明の医薬組成物は、癌の治療および／もしくは予防に使用するため、またはＰＤ－１および／もしくはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善するためのものである。
【0084】
いくつかの実施形態によれば、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を含む本発明の医薬組成物は、ｍＣＤ２８へのリガンド結合の阻害に使用するため、または免疫応答を抑制するためのものである。
【0085】
別の態様によれば、本発明の少なくとも１つのｓｄＡｂまたは本発明の二量体剤を含むキットが提供される。
【0086】
いくつかの実施形態によれば、キットは、以下のうちの少なくとも１つをさらに含む：
ａ．抗ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１免疫療法；および
ｂ．本発明の薬剤がＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法と共に使用するためのものであることを記載するラベル。
ａ．抗ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１免疫療法；および
ｂ．本発明の薬剤がＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法と共に使用するためのものであることを記載するラベル。
【0087】
別の態様によれば、細胞の表面上のｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する二量体剤を生成する方法が提供され、方法は、
ａ．ｉ．細胞表面のｍＣＤ２８に結合し、プロテアーゼによるｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を得ること；
ｉｉ．薬剤の第１の部分を薬剤の第２の部分にリンカーを介して連結して、二量体剤を生成すること；
ｉｉｉ．プロテアーゼによる細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤の能力を試験すること；および
ｉｖ．細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤を選択すること；
ならびに
ｂ．二量体剤をコードする１つ以上の核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、１つ以上の核酸配列が、
ｉ．細胞表面上のｍＣＤ２８に結合し、プロテアーゼによるｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を得ること；
ｉｉ．薬剤の第１の部分を薬剤の第２の部分にリンカーを介して連結して、二量体剤を生成すること；
ｉｉｉ．プロテアーゼによる細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤の能力を試験すること；および
ｉｖ．細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を選択することによって選択される二量体剤のものであること；
のうちの少なくとも１つを含み、
それによって、細胞の表面上のｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する薬剤を生成する。
ａ．ｉ．細胞表面のｍＣＤ２８に結合し、プロテアーゼによるｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を得ること；
ｉｉ．薬剤の第１の部分を薬剤の第２の部分にリンカーを介して連結して、二量体剤を生成すること；
ｉｉｉ．プロテアーゼによる細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤の能力を試験すること；および
ｉｖ．細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤を選択すること；
ならびに
ｂ．二量体剤をコードする１つ以上の核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、１つ以上の核酸配列が、
ｉ．細胞表面上のｍＣＤ２８に結合し、プロテアーゼによるｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を得ること；
ｉｉ．薬剤の第１の部分を薬剤の第２の部分にリンカーを介して連結して、二量体剤を生成すること；
ｉｉｉ．プロテアーゼによる細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤の能力を試験すること；および
ｉｖ．細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を遮断する薬剤を選択することによって選択される二量体剤のものであること；
のうちの少なくとも１つを含み、
それによって、細胞の表面上のｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する薬剤を生成する。
【0088】
いくつかの実施形態によれば、得られた薬剤はｓｄＡｂである。
【0089】
いくつかの実施形態によれば、薬剤を得ることは以下を含む：
ａ．サメまたはラクダ科動物をＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントで免疫化し、免疫化された生物から抗体を収集すること、またはＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントに結合するための薬剤のライブラリーをスクリーニングし、結合する薬剤を選択すること；
ｂ．細胞表面上のｍＣＤ２８に結合する抗体または薬剤の結合を試験し、細胞表面上のｍＣＤ２８に結合する抗体または薬剤を選択すること；ならびに
ｃ．プロテアーゼおよび選択された抗体または薬剤、および細胞上のｍＣＤ２８の切断を遮断するさらなる選択された抗体または薬剤の存在下で、細胞上のｍＣＤ２８の切断を試験すること。
ａ．サメまたはラクダ科動物をＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントで免疫化し、免疫化された生物から抗体を収集すること、またはＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントに結合するための薬剤のライブラリーをスクリーニングし、結合する薬剤を選択すること；
ｂ．細胞表面上のｍＣＤ２８に結合する抗体または薬剤の結合を試験し、細胞表面上のｍＣＤ２８に結合する抗体または薬剤を選択すること；ならびに
ｃ．プロテアーゼおよび選択された抗体または薬剤、および細胞上のｍＣＤ２８の切断を遮断するさらなる選択された抗体または薬剤の存在下で、細胞上のｍＣＤ２８の切断を試験すること。
【0090】
いくつかの実施形態によれば、上記細胞外ドメインまたはそのフラグメントは、
ａ．二量体であるか、
ｂ．ＣＤ２８ストークドメインを含むか；または
ｃ．その両方である。
ａ．二量体であるか、
ｂ．ＣＤ２８ストークドメインを含むか；または
ｃ．その両方である。
【0091】
いくつかの実施形態によれば、プロテアーゼは、ＭＭＰ－２およびＭＭＰ－１３から選択される。
【0092】
いくつかの実施形態によれば、方法は、得られた二量体剤の存在下でｍＣＤ２８下流シグナル伝達をアッセイすること、およびｍＣＤ２８シグナル伝達に実質的にアゴナイズもせず、実質的に拮抗もしない少なくとも１つの二量体剤を選択することをさらに含む。
【0093】
いくつかの実施形態によれば、方法は、得られた二量体剤の存在下でｍＣＤ２８下流シグナル伝達をアッセイすること、およびｍＣＤ２８シグナル伝達に実質的に拮抗する少なくとも１つの二量体剤を選択することをさらに含む。
【0094】
別の態様によれば、本発明の方法によって製造される二量体剤が提供される。
【0095】
別の態様によれば、本発明の二量体剤と、薬学的に許容される担体、賦形剤またはアジュバントとを含む、医薬組成物が提供される。
【0096】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法によって製造された二量体剤を含む本発明の医薬組成物は、癌の治療および／もしくは予防に使用するため、またはＰＤ－１および／もしくはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を改善するためのものである。
【0097】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法によって製造された二量体剤を含む本発明の医薬組成物は、ｍＣＤ２８へのリガンド結合の阻害に使用するため、または免疫応答を抑制するためのものである。
【0098】
本発明のさらなる実施形態および適用可能性の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明および特定の例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、本発明の精神および範囲内の様々な変更および修正がこの詳細な説明から当業者に明らかになるので、単なる例示として与えられていることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0099】
【0100】
【0101】
【0102】
【図4-1】図４Ａ－４Ｂ：（４Ａ）直接ＣＤ２８ ＥＩＡを使用した、ヒトＣＤ２８に対するＶＨＨ－ｈＩｇＧ４構築物、２Ａ１－ｈＦｃ、９Ｂ０３－ｈＦｃおよび１２Ａ０９－ｈＦｃの結合親和性の折れ線グラフ定量化。（４Ｂ）ヒトＣＤ３細胞への２Ａ１－ｈＦｃ、９Ｂ０３－ｈＦｃおよび１２Ａ０９－ｈＦｃ結合のヒストグラム（黒色ヒストグラム）。抗ヒトＩｇＧ検出抗体のバックグラウンドを灰色のヒストグラムで示す。
【図4-2】同上。
【0103】
【0104】
【0105】
【0106】
【図8】図８Ａ－８Ｂ：（８Ａ）ＭＣ３８細胞接種の６日前から開始する週に２回の１２Ａ０９－ｈＦｃによる処置（予防モデル）に応答した、ＭＣ－３８シンジェニック腫瘍モデルにおける腫瘍体積を示す線グラフ、（８Ｂ）ＭＣ３８細胞接種の６日後から開始する週に２回の９Ｂ０３－ｈＦｃによる処置（治療モデル）に応答した、ＭＣ－３８シンジェニック腫瘍モデルにおける腫瘍体積を示す線グラフ。抗ＰＤ１（ＲＭＰ１－１４）を、ＭＣ３８接種の６日後から開始して週２回投与した。ヒトＩｇＧ４およびラットＩｇＧ２ａを陰性対照とした。８Ａ：ｒＧ２ａ、ｎ＝１０；ａＰＤ１、ｎ＝１０；ＶＨＨ、ｎ＝１０８Ｂ：ｒＧ２ａ、ｎ＝１０；ａＰＤ１、ｎ＝１０；ＶＨＨ、ｎ＝１０ ＊＝０．０１４のｐＶａｌ
【0107】
【図9A】図９Ａ－９Ｂ：直接ＣＤ２８ ＥＩＡを使用した、ヒトＣＤ２８に対する（９Ａ）５つのヒト化１２Ａ０９－ｈＩｇＧ４構築物の結合親和性の折れ線グラフ定量化、および直接ＣＤ２８ ＥＩＡを使用した、ヒトＣＤ２８に対する（９Ｂ）１つのヒト化９Ｂ０３－ｈＩｇＧ４構築物の結合親和性の折れ線グラフ定量化。両方のグラフにおいて、結合を親バリアント（黒色線）と比較した。
【図9B】同上。
【0108】
【0109】
【図11-1】図１１Ａ－１１Ｈ：（１１Ａ－１１Ｂ）単鎖タンデム二量体剤の段階希釈による、組換えヒトＣＤ２８－Ｆｃ融合タンパク質への抗原結合を示す線グラフ。抗原をＭａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレートに固定した。二量体剤の連続希釈を予め形成し、種々の二量体剤のモル濃度を計算し、正規化して、各アッセイにおける活性部位の量を比較した。結合した抗体の検出を、抗ＶＨＨ－ＨＲＰ、およびＴＭＢによる発色を用いて行った。（１１Ｃ－１１Ｈ）ＳＥＢで刺激したＰＢＭＣの培養培地中で測定した可溶性ＣＤ２８のレベルの棒グラフ。ＭＭＰ阻害剤（ＴＭＩ－１、１μＭ）、無関係なＶＨＨの陰性対照、または様々な濃度（０．０２４μＭ～３μＭ）の（１１Ｃ）５ＧＳ、（１１Ｄ）１０ＧＳ、（１１Ｅ）２０ＧＳ、（１１Ｆ）２０Ｋ、（１１Ｇ）２０Ｅ、または（１１Ｈ）Ｈｅｌ２０二量体剤の様々な処置の、可溶性ＣＤ２８のレベルに対する効果を示す。上清中の可溶性ヒトＣＤ２８のレベルを、標準化サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ）を用いて定量した。
【図11-2】同上。
【図11-3】同上。
【図11-4】同上。
【0110】
【図12-1】図１２Ａ－１２Ｂ：ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ ６４７にコンジュゲートした二次抗ヒトＦｃ抗体を使用してＣＤ８６－Ｆｃ（２μｇ／ｍＬ）結合についてフローサイトメトリによって監視した、ヒトＣＤ２８を過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞のヒストグラム。監視は、（１２Ａ）中性可撓性リンカーまたは（１２Ｂ）荷電可撓性リンカー、または単鎖二量体剤を含有する剛性リンカーの存在下で行った。薄灰色線－二次抗体対照黒色線－ＣＤ８６－Ｆｃ陽性対照濃灰色線－二量体分子の存在下での結合
【図12-2】同上。
【図12-3】同上。
【図12-4】同上。
【0111】
【図13-1】図１３Ａ－１３Ｉ：（１３Ａ－１３Ｆ）無関係な陰性対照ＶＨＨ、ＣＤ８０のＣＤ２８との相互作用を遮断することが知られている陽性対照（ＰＣ）ＶＨＨ（ＰＣ）、および（１３Ａ）５ＧＳ、（１３Ｂ）１０ＧＳ、（１３Ｃ）２０ＧＳ、（１３Ｄ）２０Ｋ、（１３Ｅ）２０Ｅ、（１３Ｆ）Ｈｅｌ２０二量体剤の存在下で、ＣＤ２８共刺激のためのリガンドとしてのＣＤ８０を発現する人工抗原提示細胞として作用するＨＥＫ／ｓｃＯＫＴ３で、２４～４８時間刺激されたヒト単離ＣＤ９細胞からのＩＬ－２分泌の棒グラフ。（３Ｇ－３Ｉ）（１３Ｇ）５ＧＳ、（１３Ｈ）１０ＧＳ、（３Ｉ）２０ＧＳ二量体剤存在下での、同種異系混合リンパ球反応（ＭＬＲ、＋ｍＤＣ）における単離Ｔ細胞からのＩＦＮガンマ分泌の棒グラフ。
【図13-2】同上。
【図13-3】同上。
【図13-4】同上。
【図13-5】同上。
【0112】
【図14-1】図１４Ａ－１４Ｊ：（１４Ａ－１４Ｃ）：（１４Ａ）単一システイン二量体分子の段階希釈による組換えヒトＣＤ２８－Ｆｃ融合タンパク質への抗原結合を示す線グラフ、（１４Ｂ）ＰＥＧ結合二量体分子の段階希釈による組換えヒトＣＤ２８－Ｆｃ融合タンパク質への抗原結合を示す線グラフ、（１４Ｃ）Ｆｃ結合二量体分子の段階希釈による組換えヒトＣＤ２８－Ｆｃ融合タンパク質への抗原結合を示す線グラフ。 （１４Ｄ－１４Ｉ）ＳＥＢで刺激したＰＢＭＣの培養培地中で測定した可溶性ＣＤ２８のレベルの棒グラフ。無関係なＶＨＨの陰性対照、単量体２Ａ１（３μＭ）、または種々の濃度（０．０２４μＭ～３μＭ）の（１４Ｄ）２Ａ１－１Ｃ、（１４Ｅ）２Ａ１－１Ｃ－ｂｍＰ１１、（１４Ｆ）２Ａ１－Ｈｉｎｇｅ、（１４Ｇ）２Ａ１－ｈＦＣ、（１４Ｈ）２Ａ１－１５ＧＳ－ｈＦｃ、または（１４Ｉ）２Ａ１－２５ＧＳ－ｈＦｃ二量体剤の異なる処置の、可溶性ＣＤ２８のレベルに対する効果を示す。上清中の可溶性ヒトＣＤ２８のレベルを、標準化サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ）を用いて定量した。 （１４Ｊ）様々な非拮抗性二量体分子によってもたらされるＣＤ２８シェディング阻害（CD28-shedding inhibition）の要約散布図（Summary scatter plot）。
【図14-2】同上。
【図14-3】同上。
【図14-4】同上。
【図14-5】同上。
【図14-6】同上。
【0113】
【0114】
【図16-1】図１６Ａ－１６Ｂ：ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ ６４７にコンジュゲートした二次抗ヒトＦｃ抗体を使用してＣＤ８６－Ｆｃ（２μｇ／ｍＬ）結合についてフローサイトメトリによって監視した、ヒトＣＤ２８を過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞のヒストグラム。監視は、（１６Ａ）Ｃ末端リンカーまたは（１６Ｂ）二量体剤を含有するＩｇ系リンカーの存在下で行った。
【図16-2】同上。
【図16-3】同上。
【図16-4】同上。
【0115】
【図17-1】図１７Ａ－１７Ｆ：無関係な陰性対照ＶＨＨ、ＣＤ８６を遮断することが知られている陽性対照ＶＨＨ、および（１７Ａ）２Ａ１－Ｃ、（１７Ｂ）２Ａ１－１Ｃ－ｂｍＰ１１、（１７Ｃ）２Ａ１－Ｈｉｎｇｅ、（１７Ｄ）２Ａ１－ｈｕＦｃ、（１７Ｅ）２Ａ１－１５ＧＳ－ｈｕＦｃおよび（１７Ｆ）２Ａ１－２５ＧＳ－ｈｕＦｃ二量体剤の存在下で、ＣＤ２８共刺激のためのリガンドとしてのＣＤ８０を発現する人工抗原提示細胞として作用するＨＥＫ／ｓｃＯＫＴ３で、２４時間刺激されたヒト単離ＣＤ３細胞からのＩＬ－２分泌の棒グラフ。
【図17-2】同上。
【図17-3】同上。
【0116】
【図18-1】図１８Ａ－１８Ｆ：（１８Ａ－１８Ｅ）：（１８Ａ）２Ａ１－Ｃ、（１８Ｂ）２Ａ１－１Ｃ－ｂｍＰ１１、（１８Ｃ）２Ａ１－ｈｕＦｃ、（１８Ｄ）２Ａ１－１５ＧＳ－ｈｕＦｃおよび（１８Ｅ）２Ａ１－２５ＧＳ－ｈｕＦｃ二量体剤の存在下での、混合リンパ球反応（ＭＬＲ、＋ｍＤＣ）における単離Ｔ細胞からのＩＦＮガンマ分泌の棒グラフ。 （１８Ｆ）Ｔ細胞における免疫調節の全変化の散布図。
【図18-2】同上。
【図18-3】同上。
【発明を実施するための形態】
【0117】
本発明は、いくつかの実施形態では、ＣＤ２８切断を遮断する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を提供する。少なくとも２つの膜ＣＤ２８（ｍＣＤ２８）結合単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む二量体剤も提供される。ｓｄＡｂおよび／または二量体剤を投与することを含む治療方法、ならびにｓｄＡｂおよび／または二量体剤を含む組成物およびキットも提供される。
【0118】
ｓｄＡｂ
【0119】
第１の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２（ＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号３（ＤＬＹＧＳＤＹＷＤ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0120】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号６（ＤＭＩＥＱＱＷＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0121】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号４（ＩＮＡＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号５（ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号７（ＤＴＨＲＧＶＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0122】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号９（ＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0123】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号１１（ＩＮＳＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１２（ＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１３（ＤＶＹＦＱＥＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0124】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号１４（ＩＮＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１５（ＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0125】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号８（ＩＫＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１６（ＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１０（ＤＶＴＫＥＤＹＷＹ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0126】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号１７（ＩＲＴＭＡ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１８（ＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１９（ＤＭＹＷＱＤＹＷＷ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0127】
別の態様によって、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むｓｄＡｂが提供され、ＣＤＲ１は配列番号１（ＩＮＳＭＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２０（ＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号２１（ＤＨＨＨＳＤＷＷＴ）に示されるアミノ酸配列を含む。
【0128】
本明細書で使用される場合、「単一ドメイン抗体」、「ナノボディ」、「ＤＡＲＰｉｎ」および「ＶＨＨ抗体」という用語は同義語であり、互換的に使用され、単一単量体可変ドメインからなる抗体フラグメントを指す。ＳｄＡｂは、抗体と同様に特異的抗原に選択的に結合することができる。しかしながら、それらはわずか１２～１５ｋＤａの分子量を有し、したがって完全抗体、Ｆａｂフラグメントまたは単鎖抗体よりもはるかに小さい。その小さいサイズおよび抗原結合が３つのＣＤＲのみに依存することに起因して、単一ドメイン抗体、具体的にはＶＨＨの結合機構は凸状の形状であり、そのエピトープに片側のみから結合し、したがって、膜固定ＣＤ２８のストーク領域のようなタンパク質裂に見られるような、限定された溶媒露出を特徴とするエピトープに結合するのにより適している。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはラクダ科動物抗体である。いくつかの実施形態では、ラクダ科動物は、ラクダ、アルパカまたはラマである。いくつかの実施形態では、ラクダ科動物はラクダである。いくつかの実施形態では、ラクダ科動物はアルパカである。いくつかの実施形態では、ラクダ科動物はラマである。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはサメ抗体である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは分子中の第１のｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは分子中の第２のｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、分子は、本発明の二量体分子である。
【0129】
また、本明細書において既に示されているように、ナノボディのアミノ酸残基は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０００ Ｊｕｎ．２３；２４０（１－２）：１８５－１９５の記事においてラクダ由来のＶＨＨドメインに適用されるように、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１）によってもたらされた、ＶＨのための一般的なナンバリングにしたがってナンバリングされるか、または本明細書で称される。このナンバリングによれば、ナノボディのＦＲ１は位置１～３０のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ１は位置３１～３５のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ２は位置３６～４９のアミノ酸を含み、ナノボディのＣＤＲ２は位置５０～６５のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ３は位置６６～９４のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ３は位置９５～１０２のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ４は位置１０３～１１３のアミノ酸残基を含む。これに関して、ＶＨドメインおよびＶＨＨドメインについて当技術分野で周知であるように、ＣＤＲのそれぞれにおけるアミノ酸残基の総数は変動する可能性があり、Ｋａｂａｔナンバリングによって示されるアミノ酸残基の総数に対応しない場合があることに留意すべきである（すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従う１つ以上の位置が実際の配列に占有されていなくてもよく、または実際の配列がＫａｂａｔナンバリングによって許容される数よりも多くのアミノ酸残基を含んでもよい）。これは、一般に、Ｋａｂａｔによるナンバリングは、実際の配列中のアミノ酸残基の実際のナンバリングに対応しない場合があることを意味する。しかしながら、一般に、Ｋａｂａｔのナンバリングによれば、ＣＤＲ中のアミノ酸残基の数に関係なく、Ｋａｂａｔナンバリングに従う位置１がＦＲ１の開始に対応し、その逆も同様であり、Ｋａｂａｔナンバリングに従う位置３６がＦＲ２の開始に対応し、その逆も同様であり、Ｋａｂａｔナンバリングに従う位置６６がＦＲ３の開始に対応し、その逆も同様であり、Ｋａｂａｔナンバリングに従う位置１０３がＦＲ４の開始に対応し、その逆も同様であると言える。
【0130】
ラクダ科動物のＶＨＨドメインおよびナノボディにも類似の様式で適用することができる、ＶＨドメインのアミノ酸残基をナンバリングするための代替方法は、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３（１９８９））によって記載される方法、いわゆる「ＡｂＭ定義」およびいわゆる「接触定義」である。しかしながら、本明細書、態様および図では、特に指示しない限り、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ａｎｄ ＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓによってＶＨＨドメインに適用される通りに、Ｋａｂａｔによるナンバリングに従う。
【0131】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはＣＤ２８に結合する。いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８は哺乳動物ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８はヒトＣＤ２８である。いくつかの実施形態によれば、ヒトＣＤ２８は、アミノ酸配列：ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号４２）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、成熟ＣＤ２８はシグナルペプチドを欠き、配列：ＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号４３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８シグナルペプチドは、ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧ（配列番号４１）を含むかまたはそれからなる。
【0132】
いくつかの実施形態では、完全長ヒトＣＤ２８をコードするＤＮＡコード配列は、配列：ＡＴＧＣＴＣＡＧＧＣＴＧＣＴＣＴＴＧＧＣＴＣＴＣＡＡＣＴＴＡＴＴＣＣＣＴＴＣＡＡＴＴＣＡＡＧＴＡＡＣＡＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＧＣＣＣＡＴＧＣＴＴＧＴＡＧＣＧＴＡＣＧＡＣＡＡＴＧＣＧＧＴＣＡＡＣＣＴＴＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＴＣＴＴＣＴＣＡＡＧＧＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＡＧＴＧＣＴＧＴＧＧＡＡＧＴＣＴＧＴＧＴＴＧＴＡＴＡＴＧＧＧＡＡＴＴＡＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＴＴＴＡＣＴＣＡＡＡＡＡＣＧＧＧＧＴＴＣＡＡＣＴＧＴＧＡＴＧＧＧＡＡＡＴＴＧＧＧＣＡＡＴＧＡＡＴＣＡＧＴＧＡＣＡＴＴＣＴＡＣＣＴＣＣＡＧＡＡＴＴＴＧＴＡＴＧＴＴＡＡＣＣＡＡＡＣＡＧＡＴＡＴＴＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＴＧＡ（配列番号４４）を含む。
【0133】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８は膜ＣＤ２８（membranal CD28）（ｍＣＤ２８）である。いくつかの実施形態では、膜ＣＤ２８は膜ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、ｍＣＤ２８は細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、ｍＣＤ２８は膜中にある。
【0134】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８は細胞外ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８はＣＤ２８の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８のＥＣＤは、ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号４５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８のＥＣＤは、配列番号４５からなる。いくつかの実施形態では、ＥＣＤは、ＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号４６）を含む。いくつかの実施形態では、ＥＣＤは、配列番号４６からなる。いくつかの実施形態では、ＥＣＤは二量体である。いくつかの実施形態では、ＥＣＤは、ストークドメインを含む。
【0135】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２８は、ＣＤ２８のストークドメインである。いくつかの実施形態では、第１のＣＤ２８結合ｓｄＡｂはストークドメインに結合する。いくつかの実施形態では、第２のＣＤ２８結合ｓｄＡｂはストークドメインに結合する。いくつかの実施形態では、第１および第２のＣＤ２８結合ｓｄＡｂの両方がストークドメインに結合する。いくつかの実施形態では、ストークドメインは、ストーク領域である。いくつかの実施形態では、ストーク領域は、アミノ酸配列ＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号３５）を含む。いくつかの実施形態では、ストーク領域は、アミノ酸配列ＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ（配列番号３６）を含む。いくつかの実施形態では、ストーク領域は、アミノ酸配列ＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号３７）を含む。いくつかの実施形態では、ストーク領域は、配列番号３５からなる。いくつかの実施形態では、ストーク領域は、配列番号３６からなる。いくつかの実施形態では、ストーク領域は、配列番号３７からなる。
【0136】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する。本明細書で使用される場合、「タンパク質分解性切断を阻害する」とは、ｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断の何らかの減少を指す。いくつかの実施形態では、阻害は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９９または１００％の切断の減少である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の阻害により、免疫細胞上のｍＣＤ２８のレベルが維持される。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の阻害により、免疫細胞上のｍＣＤ２８のレベルが増加する。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の阻害により、免疫刺激に十分なｍＣＤ２８のレベルが維持される。
【0137】
いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の減少とは、少なくとも１つのプロテアーゼによる切断の減少である。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の減少とは、少なくとも１つのメタロプロテアーゼによる切断の減少である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１７、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１７、ＭＭＰ－１３またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはＭＭＰ－２である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２またはＭＭＰ－１３である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはＭＭＰ－２である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－１３またはそれらの組み合わせである。
【0138】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、少なくとも１つのプロテアーゼによるタンパク質分解性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはメタロプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはマトリックスメタロプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはセリンプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはシステインプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはトレオニンプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはセリン、システインまたはトレオニンプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはアスパラギン酸プロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはグルタミン酸プロテアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、システインおよびトレオニンプロテアーゼから選択される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはアスパラギン酸ペプチドリアーゼである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはシェダーゼである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはエキソペプチダーゼである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはエンドペプチダーゼである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、エキソペプチダーゼまたはエンドペプチダーゼである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは亜鉛触媒される。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはコバルト触媒される。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはマトリックスメタロプロテイナーゼ－２（ＭＭＰ－２）である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはマトリックスメタロプロテイナーゼ－１３（ＭＭＰ－１３）である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはＡＤＡＭ１０である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼはＡＤＡＭ１７である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＡＤＡＭ１０、ＭＭＰ－２、および／またはＡＤＡＭ１７である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＡＤＡＭ１０、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－１３および／またはＡＤＡＭ１７である。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１７、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、メタロプロテアーゼは、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１７、またはそれらの組み合わせである。
【0139】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは切断部位に結合する。いくつかの実施形態では、切断部位はストーク領域内にある。いくつかの実施形態では、切断部位は切断モチーフである。いくつかの実施形態では、ＭＭＰ－２切断モチーフはＰＸＸ／Ｘであり、最後のＸは疎水性残基である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８中のＰＸＸ／ＸモチーフはＰＳＰ／Ｌである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、配列番号４２のアミノ酸１４２～１４５（ＰＳＰＬ）である。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、配列番号４３のアミノ酸１２７～１３０（ＰＳＰＬ）である。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、配列番号３７のアミノ酸９～１２（ＰＳＰＬ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、切断部位へのプロテアーゼの接近を阻止する。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｍＣＤ２８のストークドメイン内のＰＳＰＬに結合する。
【0140】
いくつかの実施形態では、切断部位はロイシンの前にある。いくつかの実施形態では、切断部位はバリンの前にある。いくつかの実施形態では、切断部位は芳香族アミノ酸の前にある。いくつかの実施形態では、切断部位は、ロイシン、バリンおよび／または芳香族アミノ酸の前にある。いくつかの実施形態では、芳香族アミノ酸は、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンおよびヒスチジンから選択される。いくつかの実施形態では、切断部位は、配列番号２９のヒスチジン１３４、バリン１３５、ヒスチジン１３９、ロイシン１４０、ロイシン１４５、およびフェニルアラニン１４６のいずれか一つの前にある。いくつかの実施形態では、切断部位は、配列番号４２のヒスチジン１３４、バリン１３５、ヒスチジン１３９、ロイシン１４０、ロイシン１４５、またはフェニルアラニン１４６の前にある。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、切断部位は、配列番号４２のロイシン１４５の前である。いくつかの実施形態では、切断部位は、配列番号４３のロイシン１２７の前である。
【0141】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはアンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８のアンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、直接的なアンタゴニストである。
【0142】
「アンタゴニスト」という用語は、一般に、アゴニストと同じ部位または別の部位で受容体に結合し、受容体を活性化せず、天然リガンドによる受容体の活性化の妨害または阻止、および受容体アゴニストによる受容体の活性化の妨害または阻止のうちの１つ以上を行う分子、化合物または薬剤を指す。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはＣＤ２８に結合し、受容体の活性化を遮断する。いくつかの実施形態では、薬剤および／またはｓｄＡｂは、ＣＤ８６による活性化を遮断しない。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤ８６による活性化を遮断する。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８へのリガンドの結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害しない。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害する。いくつかの実施形態において、阻害は実質的に阻害である。いくつかの実施形態では、実質的は有意である。いくつかの実施形態では、実質的な拮抗作用は、低阻害よりも大きい。いくつかの実施形態において、実質的なアンタゴニストではない薬剤は、阻害しないかまたは低度に阻害する。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤ２８へのリガンドの結合を低度に阻害する。いくつかの実施形態において、低度の阻害は、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、７または５％未満の阻害を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態において、低度の阻害は、５０％未満の阻害を含む。いくつかの実施形態において、低度の阻害は、３５％未満の阻害を含む。いくつかの実施形態において、低度の阻害は、２０％未満の阻害を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８リガンドは、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳＬから選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８リガンドはＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８リガンドはＣＤ８０である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８リガンドはＩＣＯＳＬである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６はＣＤ８６－Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０はＣＤ８０－Ｆｃである。
【0143】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはＣＤ２８のアゴニストではない。いくつかの実施形態では、アゴニストは直接的なアゴニストである。「アゴニスト」という用語は、一般に、受容体に結合し、受容体を完全にまたは部分的に活性化する分子、化合物または薬剤を指す。いくつかの実施形態において、アゴニストは、天然リガンドと同じ部位で結合する。いくつかの実施形態において、アゴニストは、天然リガンドの結合部位とは異なるアロステリック部位に結合する。
【0144】
本明細書で使用される場合、「直接的なアゴニスト／アンタゴニスト」は、受容体（ｍＣＤ２８）に結合し、結合によってその分子によるシグナル伝達を増加／減少させる分子を指す。ｍＣＤ２８の場合、アゴニストはｍＣＤ２８に結合し、結合により細胞内のｍＣＤ２８シグナル伝達を増加させる。いくつかの実施形態では、アゴニストはＴ細胞活性化を増加させる。いくつかの実施形態では、アゴニストはＴ細胞増殖を増加させる。いくつかの実施形態において、アゴニストは、炎症誘発性サイトカイン分泌を増加させる。炎症誘発性サイトカインは当技術分野で周知であり、活性化Ｔ細胞によって分泌されることが知られている。炎症誘発性サイトカインの例としては、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－２およびＩＬ－６が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、炎症誘発性サイトカインはＩＦＮγである。いくつかの実施形態では、炎症誘発性サイトカインはＩＬ－２である。ｍＣＤ２８の場合、アンタゴニストはｍＣＤ２８に結合し、結合により細胞内のｍＣＤ２８シグナル伝達を減少させる。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、Ｔ細胞活性化を減少させ、Ｔ細胞増殖を減少させ、かつ／または炎症誘発性サイトカイン分泌を減少させる。受容体のシグナル伝達を、そのリガンドと接触させること、阻害剤と接触させること、共受容体と接触させること、または受容体シグナル伝達を改変するために問題の受容体以外の任意の分子と接触させることによって達成する分子は、直接的なアゴニスト／アンタゴニストとは見なされない。いくつかの実施形態では、本発明のｓｄＡｂは、可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）の産生を（ｍＣＤ２８の切断を阻害することによって）減少させる。いくつかの実施形態では、本発明の薬剤は、可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）の産生を（ｍＣＤ２８の切断を阻害することによって）減少させる。ｓＣＤ２８は、ＣＤ２８リガンドに結合することによってデコイとして作用することができ、したがってｍＣＤ２８に拮抗することができる。それを除去すると、細胞上のｍＣＤ２８を介したシグナル伝達の増加が可能になる。結果としてｍＣＤ２８シグナル伝達が増加するが、薬剤は、ｍＣＤ２８へのその結合が受容体シグナル伝達を増加させない場合、ｍＣＤ２８アゴニストまたは直接的なアゴニストではない。
【0145】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ｍＣＤ２８のリガンド結合ドメインに結合しない。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、リガンド結合ドメインへの接近を隠さず、または阻害しない。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ｓＣＤ２８のＩｇＶドメインに結合せず、それへの接近を隠さず、または遮断しない。いくつかの実施形態では、ＩｇＶドメインはリガンド結合ドメインである。いくつかの実施形態において、リガンド結合ドメインは、配列番号４２のアミノ酸２８～１３７を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、アミノ酸配列ＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧ（配列番号４７）を含むか、またはそれからなる。
【0146】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、Ｎ末端からＣＤＲ１まで配列Ｘ１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＸ２ＧＸ３ＳＬＲＬＳＣＸ４ＡＳＧＳＸ５Ｘ６Ｓ（配列番号７９）を含み、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＰであり、Ｘ３はＥまたはＧであり、Ｘ４はＡまたはＫであり、Ｘ５はＩ、ＬまたはＴであり、Ｘ６はＡまたはＦである。いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣＤＲ１までの配列は、配列番号７９からなる。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、Ｎ末端からＣＤＲ１まで配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳ（配列番号２２）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７９は、配列番号２２である。いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣＤＲ１までの配列は、配列番号２２からなる。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列ＷＹＲＱＡＰＧＸ７Ｘ８Ｘ９ＥＸ１０ＶＸ１１（配列番号８０）を含み、Ｘ７はＳまたはＫであり、Ｘ８はＱまたはＧであり、Ｘ９はＲまたはＬであり、Ｘ１０はＬまたはＲであり、Ｘ１１はＡ、Ｓ、またはＴのいずれか１つある。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列は、配列番号７９からなる。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列ＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＸ（配列番号４８）を含み、ＸはＡまたはＴである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間の配列は、配列番号４８からなる。いくつかの実施形態では、配列番号８０は、配列番号４８である。いくつかの実施形態では、配列番号４８は、ＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡ（配列番号２３）である。いくつかの実施形態では、配列番号４８は、ＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴ（配列番号４９）である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列ＲＦＴＸ１１ＳＲＤＮＸ１２ＫＸ１３ＴＸ１４ＹＬＱＭＮＸ１５ＬＸ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９Ｘ２０ＶＹＹＣＶＶ（配列番号８１）を含み、Ｘ１１はＩまたはＶであり、Ｘ１２はＡまたはＳであり、Ｘ１３はＴまたはＮであり、Ｘ１４はＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ１５はＳまたはＮであり、Ｘ１６はＲ、ＫまたはＥであり、Ｘ１７はＰまたはＡであり、Ｘ１８はＥまたはＲであり、Ｘ１９はＴまたはＡであり、Ｘ２０はＡまたはＧである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列は、配列番号８１からなる。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶ（配列番号２４）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号８１は、配列番号２４である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間の配列は、配列番号２４からなる。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、Ｃ末端からＣＤＲ３まで配列ＷＧＱＧＴＸ２１ＶＴＶＳＳ（配列番号８２）を含み、Ｘ２１はＱまたはＬである。いくつかの実施形態では、Ｃ末端からＣＤＲ３までの配列は、配列番号８２からなる。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、Ｃ末端からＣＤＲ３まで配列ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２５）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号８２は、配列番号２５である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端からＣＤＲ３までの配列は、配列番号２５からなる。
【0147】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２６）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２６からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２６は、ＶＨＨ ５Ａ３のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号２６のＣＤＲを含む。
【0148】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＩＥＱＱＷＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２７）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２７からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２７は、ＶＨＨ ６Ｂ３のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号２７のＣＤＲを含む。
【0149】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＴＨＲＧＶＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２８）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２８からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２８は、ＶＨＨ ６Ｂ１０のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２８と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号２８のＣＤＲを含む。
【0150】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２９）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２９からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２９は、ＶＨＨ １０Ｅ１のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号２９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号２９のＣＤＲを含む。
【0151】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＹＦＱＥＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３０）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３０からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３０は、ＶＨＨ １１Ｅ１１のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３０と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号３０のＣＤＲを含む。
【0152】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３１）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３１からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３１は、ＶＨＨ １１Ｇ１１のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号３１のＣＤＲを含む。
【0153】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３２）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３２からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３２は、ＶＨＨ １２Ａ９のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号３２のＣＤＲを含む。
【0154】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７０は、１２Ａ０９＿ＶＨＨ４のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７０からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７０と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７０のＣＤＲを含む。
【0155】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７１は、１２Ａ９＿ＶＨＨ１２のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７１からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７１のＣＤＲを含む。
【0156】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７２は、１２Ａ０９＿ＶＨＨ１６のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７２からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７２のＣＤＲを含む。
【0157】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７３は、１２Ａ９＿ＶＨＨ１７のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７３からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７３のＣＤＲを含む。
【0158】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７４は、１２Ａ０９＿ＶＨＨ１８のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７４からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７４のＣＤＲを含む。
【0159】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３３からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３３は、ＶＨＨ ９Ｂ３のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号３３のＣＤＲを含む。
【0160】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７５）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７５は、９Ｂ０３＿ＶＨＨ１のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７５からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７５のＣＤＲを含む。
【0161】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７６は、９Ｂ０３＿ＶＨＨ１２のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７６からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７６のＣＤＲを含む。
【0162】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＳＴＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７７）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７７は、９Ｂ０３＿ＶＨＨ１９のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７７からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７７のＣＤＲを含む。
【0163】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＳＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７８）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７８は、９Ｂ０３＿ＶＨＨ２０のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７８からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号７８と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号７８のＣＤＲを含む。
【0164】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＨＨＨＳＤＷＷＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号３４）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３４からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３４は、ＶＨＨ ９Ａ７のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、配列番号３４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号３４のＣＤＲを含む。
【0165】
免疫刺激の目的のために、例えば癌の治療の文脈では、ｓｄＡｂは非拮抗的であるか、または本発明の薬剤に導入され、拮抗効果が失われるかまたは許容可能な低レベルに低下する限り、拮抗的であってもよいことが当業者によって理解されるであろう。免疫阻害の目的のために、例えば自己免疫疾患の文脈では、ｓｄＡｂは拮抗的であってもよい。
【0166】
薬剤
【0167】
別の態様により、少なくとも２つのＣＤ２８結合単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む薬剤が提供される。
【0168】
いくつかの実施形態では、薬剤は、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのｓｄＡｂが本発明のｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは本発明のｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第２のｓｄＡｂは本発明のｓｄＡｂである。
【0169】
いくつかの実施形態では、本発明の２つのｓｄＡｂがリンカーによって連結されている。いくつかの実施形態では、本発明の第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂがリンカーによって連結されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは、リンカーによって第２のｓｄＡｂに連結されている。いくつかの実施形態では、この連結によって本発明の薬剤が製造された。
【0170】
いくつかの実施形態では、薬剤は二量体剤である。本明細書で使用される場合、「二量体」という用語は、２つのより単純な分子、例えば単量体を含む薬剤を指す。いくつかの実施形態では、二量体剤は２つのｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノパラトピック（ｍｏｎｏｐａｒａｔｏｐｉｃ）である。本明細書中で使用されるとき、用語「モノパラトピック（ｍｏｎｏｐａｒａｔｏｐｉｃ）」とは、ただ１つのエピトープを標的とする薬剤のことを指す。いくつかの実施形態では、薬剤は２つのｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、二量体はホモ二量体である。いくつかの実施形態では、二量体はヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は２つの同一のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは同じ配列を含む。いくつかの実施形態では、配列はアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、薬剤は２つの異なるｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは異なる配列を含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは同じＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは異なるＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂの標的エピトープはＣＤ２８ストーク領域である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂの標的エピトープはＣＤ２８切断部位である。いくつかの実施形態では、標的エピトープはＣＤ２８プロテアーゼ媒介シェディングの部位（the site of CD28 protease mediated shedding）である。
【0171】
いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８のタンパク質分解性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノマーとしてのｓｄＡｂと比較して、タンパク質分解性切断の阻害に優れている。いくつかの実施形態において、優位性は、阻害の増加を含む。いくつかの実施形態では、増加は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、または５００％の増加である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【0172】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２８のアンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、各ｓｄＡｂは、薬剤の一部ではない場合、ＣＤ２８のアンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、薬剤の一部ではない場合の第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂまたはその両方はアンタゴニストであり、薬剤はＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、各ｓｄＡｂは、薬剤の一部ではない場合、アンタゴニストであり、薬剤はＣＤ２８のアンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、薬剤および／またはｓｄＡｂはＣＤ２８に結合するが、受容体を活性化しないか、またはその活性化を遮断する。いくつかの実施形態では、薬剤および／またはｓｄＡｂは、ＣＤ２８へのリガンドの結合を遮断しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２８へのリガンドの結合を阻害しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２８へのリガンドの結合を低度に阻害する。
【0173】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２８のアゴニストではない。いくつかの実施形態では、各ｓｄＡｂは、薬剤の一部ではない場合、ＣＤ２８のアゴニストではない。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｍＣＤ２８のリガンド結合ドメインに結合しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、リガンド結合ドメインへの接近を隠さず、または阻害しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８のＩｇＶドメインに結合せず、それへの接近を隠さず、または遮断しない。
【0174】
いくつかの実施形態では、薬剤は、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は２つの同一のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは同じ配列を含む。いくつかの実施形態では、配列はアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、薬剤は２つの異なるｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは異なる配列を含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは同じＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは異なるＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂの標的エピトープはＣＤ２８ストーク領域である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂの標的エピトープはＣＤ２８切断部位である。いくつかの実施形態では、標的エピトープはＣＤ２８プロテアーゼ媒介シェディングの部位である。
【0175】
いくつかの実施形態では、薬剤は、少なくとも２つのｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、複数のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、少なくとも２、３、４、５、６または７つのｓｄＡｂを含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は２つのｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは同じｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは同じ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは異なるｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは異なる配列を含む。
【0176】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは、同じｍＣＤ２８分子を結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは、単一のｍＣＤ２８分子を結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは、異なるＣＤ２８分子を結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは第１のＣＤ２８分子に結合し、第２のｓｄＡｂは第２のＣＤ２８分子に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＣＤ２８分子および第２のＣＤ２８分子は同じ分子である。いくつかの実施形態では、第１のＣＤ２８分子および第２のＣＤ２８分子は異なる分子である。
【0177】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４０）を含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号４０からなる。いくつかの実施形態では、配列番号４０は、ＶＨＨ ２Ａ１のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号４０と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。
【0178】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＬＦＳＩＮＡＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＳＧＳＴＮＹＡＮＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＥＹＧＳＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９５）を含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号９５からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号９５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号９５のＣＤＲを含む。
【0179】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、アミノ酸配列ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＲＶＡＡＩＴＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＥＰＲＤＡＧＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＥＤＹＷＩＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号９６からなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂ、またはその両方は、配列番号９６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号９６のＣＤＲを含む。
【0180】
いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂまたは両方は、３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＩＮＡＭＧ（配列番号４）を含み、ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）を含み、ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＤＬＹＧＳＤＹＷＤ（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１のＣＤＲは、配列番号３～５である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂまたは両方は、３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＩＮＡＭＡ（配列番号９８）を含み、ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＡＩＴＳＳＧＳＴＮＹＡＮＳＶＫＧ（配列番号９９）を含み、ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＤＥＹＧＳＤＹＷＩ（配列番号１００）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号９５のＣＤＲは、配列番号９８～１００である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ、第２のｓｄＡｂまたは両方は、３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＩＮＡＭＧ（配列番号４）を含み、ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＡＩＴＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０１）を含み、ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＤＬＹＧＥＤＹＷＩ（配列番号１０２）を含む。いくつかの実施形態では、配列番号９６のＣＤＲは、配列番号４、１０１および１０２である。
【0181】
細胞上のｍＣＤ２８に結合し、タンパク質分解性切断およびｓＣＤ２８シェディングを阻害する任意のｓｄＡｂを本発明のｓｄＡｂとして使用できることが当業者によって理解されるであろう。免疫刺激の目的のために、例えば癌の文脈では、ｓｄＡｂは非拮抗的であるか、または本発明の薬剤に導入され、拮抗効果が失われるかまたは許容可能な低レベルに低下する限り、拮抗的であってもよい。免疫阻害の目的のために、例えば自己免疫疾患の文脈では、ｓｄＡｂは拮抗的であってもよく、または本発明の薬剤の一部になれば拮抗的になることもできる。
【0182】
いくつかの実施形態では、２つのＣＤ２８結合ｓｄＡｂは、リンカーによって連結されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは、リンカーによって連結されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは、リンカーによって第２のｓｄＡｂに連結されている。
【0183】
ポリペプチド二量体
【0184】
いくつかの実施形態では、薬剤は、第１のｓｄＡｂを含む第１のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、第２のｓｄＡｂを含む第２のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを連結する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドはポリペプチド鎖である。いくつかの実施形態では、薬剤は、リンカーによって連結された第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、２つのポリペプチドを有する薬剤はＣＤ２８アンタゴニストではない。
【0185】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドはシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドはシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドはシグナルペプチドを欠いている。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドはシグナルペプチドを欠いている。薬剤の活性形態はシグナルペプチドを含まないが、細胞内でポリペプチドを発現させるためには、シグナルペプチドを含むポリペプチドを作製して、細胞からのポリペプチドの分泌を促進することが必要であり得ることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、Ｉｇシグナルペプチドである。本発明のポリペプチドの作製を可能にする、任意のシグナルペプチドを使用することができる。
【0186】
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために交換可能に使用される。別の実施形態では、本明細書で使用される「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、天然ペプチド、ペプチド模倣物（典型的には非ペプチド結合または他の合成修飾を含む）ならびにペプチド類似体、ペプトイドおよびセミペプトイドまたはそれらの任意の組み合わせを包含する。別の実施形態では、記載されるペプチドポリペプチドおよびタンパク質は、それらを体内でより安定にするか、またはより多く細胞に浸透できるようにする修飾を有する。一実施形態では、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、天然に存在するアミノ酸ポリマーに適用される。別の実施形態では、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学的類似体である、アミノ酸ポリマーに適用される。
【0187】
いくつかの実施形態において、連結は、Ｃ末端からＣ末端までの連結である。いくつかの実施形態において、Ｃ末端は、ポリペプチドの最大Ｃ末端アミノ酸における連結である。いくつかの実施形態において、Ｃ末端は、ポリペプチドの最大Ｃ末端ドメインにおける連結である。いくつかの実施形態において、連結は、Ｃ末端ドメインからＣ末端ドメインまでである。
【0188】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のシステインアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のシステインアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、システインは遊離システインである。いくつかの実施形態では、システインはｓｄＡｂの外側にある。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ｓｄＡｂの外側にシステインを含む。いくつかの実施形態では、システインはＣ末端システインである。いくつかの実施形態では、システインはＮ末端システインである。いくつかの実施形態では、システインはＣ末端アミノ酸である。いくつかの実施形態では、システインはＣ末端ドメインにある。いくつかの実施形態では、システインはＣ末端からｓｄＡｂまでのドメインにある。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはＮ末端からシステインまでである。いくつかの実施形態では、連結は、第１のシステインと第２のシステインとの間の結合を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは結合である。いくつかの実施形態では、結合はジスルフィド結合である。いくつかの実施形態では、結合は、各ポリペプチド中の最大のＣ末端システインの間にある。
【0189】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＣ（配列番号１１３）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１１３からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１３を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１３からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１３の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１３の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号１１３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。
【0190】
いくつかの実施形態では、配列番号１１３またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１１３またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0191】
いくつかの実施形態では、連結されたシステインを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、それぞれがＣ末端遊離システインを有する２つのポリペプチドを含み、遊離システインが連結されている薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0192】
いくつかの実施形態では、リンカーは化学的リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは人工リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸リンカーではない。いくつかの実施形態では、リンカーは結合だけではない。いくつかの実施形態では、リンカーは生体適合性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、生体適合性ポリマーは、少なくとも部分的に生分解性である。いくつかの実施形態では、生体適合性ポリマーは、ポリグリコールエーテル、ポリエステル、ポリアミド、またはそれらの任意の組み合わせであるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリグリコールエーテルは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、本発明のリンカーはＰＥＧを含む。いくつかの実施形態において、本発明のリンカーは、１００Ｄａ～５０００Ｄａ（その間の任意の範囲を含む）のＭｎを特徴とするＰＥＧを含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、少なくともＰＥＧの１０反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、少なくとも１つのＰＥＧの反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１のＰＥＧの反復を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、少なくともＰＥＧの１１反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、ＰＥＧの１１反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、図５に提供されるリンカーである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、マレイミド－Ｎ－（ＣＨ２）２－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）２－（Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２）ｎ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）２－Ｎ－マレイミドを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰＥＧリンカーは、Ｎ－（ＣＨ２）２－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）２－（Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２）ｎ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）２－Ｎを含むか、またはそれからなる。
【0193】
いくつかの実施形態では、化学的リンカーによって連結されたシステインを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、それぞれが化学的リンカーによって連結されたシステインを含む２つのポリペプチドからなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、化学的リンカーはシステインに連結されている。いくつかの実施形態では、化学的リンカーは、第１および第２のシステインを連結する。いくつかの実施形態では、化学的リンカーは、マレイミド反応性基によってシステインに連結されている。いくつかの実施形態では、反応は、ポリペプチド中のチオールに対するものである。いくつかの実施形態では、反応は、システイン中のチオールに対するものである。化学的リンカーを生成し、それらをポリペプチドに結合させる方法は当技術分野で周知であり、任意のそのような方法を使用して本発明の薬剤を製造することができる。
【0194】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の二量体化ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、第２の二量体化ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｃ末端からｓｄＡｂまでである。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｎ末端からｓｄＡｂまでである。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、Ｎ末端から二量体化ドメインまでである。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｃ末端ドメインである。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、システインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは二量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、二量体化ドメイン間の結合を含む。いくつかの実施形態では、結合はジスルフィド結合である。
【0195】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインと二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、二量化する能力が構成されて二量化する。いくつかの実施形態では、二量体化は、生理学的条件下で行われる。いくつかの実施形態では、二量体化は体液内である。いくつかの実施形態では、体液は血液である。いくつかの実施形態では、体液は血漿である。いくつかの実施形態では、体液は血清である。いくつかの実施形態では、二量体化は対象内である。いくつかの実施形態では、二量体化はインビボである。いくつかの実施形態では、二量体化はインビトロである。
【0196】
本明細書で使用される場合、「二量体化ドメイン」という用語は、別のアミノ酸配列（他の二量体化ドメイン）と接触するとそれに結合して二量体を形成するアミノ酸配列を指す。二量体化ドメインは、多くのタンパク質配列が互いに結合することが知られているため、当技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、二量体化は、二量体化ドメイン間の共有結合の形成を含む。いくつかの実施形態では、二量体化は静電結合を含む。いくつかの実施形態では、二量体化は静電結合を含まない。いくつかの実施形態では、二量体化は可逆的である。いくつかの実施形態では、二量体化は不可逆的である。いくつかの実施形態では、二量体化は、二量体化ドメイン間を形成する結合を含む。いくつかの実施形態では、結合は化学結合である。いくつかの実施形態では、結合はジスルフィド結合である。いくつかの実施形態では、結合はペプチド結合である。二量体化ドメインの例としては、いくつか例を挙げると、抗体重鎖のヒンジドメイン、抗体重／軽鎖のＣＨ１／ＣＬドメイン、およびＴＣＲアルファ／ベータのＥＣＤドメインが挙げられる。
【0197】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、免疫グロブリン（Ｉｇ）ヒンジドメインを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、第１の二量体化ドメインは、第１のＩｇヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、第２の二量体化ドメインは、第２のＩｇヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインは重鎖ヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、ＩｇはヒトＩｇある。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭから選択される。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ２である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１およびＩｇＧ３から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはヒトＩｇＧである。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、両方ともＩｇヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは同一である。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、少なくとも９５％同一である。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９９または１００％同一である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【0198】
いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインは、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬ（配列番号３８）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインは、配列番号３８からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジドメインは、配列番号３８を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインは、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ（配列番号８３）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインは、配列番号８３からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジドメインは、配列番号８３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号５０）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号５０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジは、配列番号５０を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＰＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＡＡＡ（配列番号５１）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号５１のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２ヒンジは、配列番号５１を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＰＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰ（配列番号８４）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２ヒンジは、配列番号８４を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号５２）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号５２のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジは、配列番号５２を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ（配列番号８５）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジは、配列番号８５を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号８６）を含む。配列番号８５は、当技術分野で周知のＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ変異を含む。配列番号８５は、変異を含む配列番号８６である。これらの変異は、凝集を減少させ、安定性を高め、エフェクター機能を低下させることが知られている。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジは、配列番号８６を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号５３）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ３ヒンジは、配列番号５３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＰＸＣＰ（配列番号５４）モチーフを含む。いくつかの実施形態では、配列番号５４は、ヒンジドメインコアである。いくつかの実施形態では、配列番号５４のＸはＰおよびＲから選択される。いくつかの実施形態では、配列番号５４はＣＰＰＣＰ（配列番号５５）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１コアは、配列番号５５からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２コアは、配列番号５５を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２コアは、ＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号８７）からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４コアは、配列番号５５を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、配列番号５４は、ＣＰＲＣＰ（配列番号５６）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ３コアは、配列番号５６を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、配列番号５４は、ＣＰＳＣＰ（配列番号８８）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４コアは、配列番号８８を含むか、またはそれからなる。したがって、配列番号５４に見出されるヒンジドメインのシステインは、ジスルフィド結合および二量体化に必要であることが理解されよう。
【0199】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬ（配列番号１１４）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１１４からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１４を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１４からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１４の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１４の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号１１４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。
【0200】
いくつかの実施形態では、配列番号１１４またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１１４またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0201】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＩｇのＣＨ２ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、Ｉｇ重鎖のものである。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＩｇのＣＨ３ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｉｇ重鎖のものである。いくつかの実施形態では、第１の二量体化ドメインは、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはその両方を含む。いくつかの実施形態では、第２の二量体化ドメインは、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはその両方を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇはＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＩｇはＩｇＧ２である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１は修飾ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ３は修飾ＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、修飾は、エフェクター機能を低下させるように修飾される。いくつかの実施形態では、修飾は、エフェクター機能を無効にするように修飾される。いくつかの実施形態では、修飾はＰＧ－ＬＡＬＡ修飾である。
【0202】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｆｃドメインからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。
【0203】
いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号５７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号５７からなる。いくつかの実施形態では、配列番号５７は、ＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号５８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号５８からなる。いくつかの実施形態では、配列番号５８は、ＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号５７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号５８と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチド配列の二量体を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号８９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号８９からなる。いくつかの実施形態では、配列番号８９は、ＩｇＧ４ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号８９からなる。いくつかの実施形態では、配列番号８９は、ＩｇＧ４ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号８９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号８９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチド配列の二量体を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【0204】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号５９からなる。いくつかの実施形態では、配列番号５９は、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号５９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号９０からなる。いくつかの実施形態では、配列番号９０は、ＩｇＧ４ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号９０と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【0205】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６０）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号６０からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１のＦｃドメインは、配列番号６０を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号６０と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号９１からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４のＦｃドメインは、配列番号９１を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号９１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、配列番号９１は、Ｓ１０のＰへの変異を含む。いくつかの実施形態では、配列番号９１は、Ｌ１７のＥへの変異を含む。
【0206】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導しない。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しない。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを誘導しないように構成される。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを低減させるように構成される。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインはエフェクター機能を有しない。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、低下したエフェクター機能を含む。いくつかの実施形態において、二量体化ドメインは、エフェクター機能を低下させるかまたは無効にする少なくとも１つの変異を含む。いくつかの実施形態において、二量体化ドメインは、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを減少させる少なくとも１つの変異を含む。いくつかの実施形態において、二量体化ドメインは、エフェクター機能を低下させる少なくとも１つの変異を含む。いくつかの実施形態では、減少したＣＤＣ、ＡＤＣＣまたはエフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣまたはエフェクター機能を減少させる少なくとも１つの変異を含む。
【0207】
ＩｇＧ２およびＩｇＧ４のエフェクター機能は大幅に低下しており、一般に本質的に細胞傷害性ではないことが当業者には知られているであろう。さらに、ＩｇＧ４中のＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅなどの変異は、エフェクター機能をさらに低下させることが知られている。さらに、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３の細胞傷害性／エフェクター機能を低下させる変異は、当技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、少なくとも１つの変異を含む。いくつかの実施形態において、変異は複数の変異である。いくつかの実施形態では、変異は細胞傷害性を低下させる。いくつかの実施形態では、変異は安定性を向上させる。いくつかの実施形態では、変異は凝集を減少させる。いくつかの実施形態では、細胞傷害性を低下させる複数の変異はＰＧ－ＬＡＬＡ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のプロリン３２９のグリシンへの変異である（Ｐ３２９Ｇ）。いくつかの実施形態において、ＰからＧへの変異は、配列番号６０のＰ１０９のＧへの変異である。いくつかの実施形態において、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のロイシン２３４のアラニンへの変異である（Ｌ２３４Ａ）。いくつかの実施形態において、ＬからＡへの変異は、配列番号６０のＬ１４のＡへの変異である。いくつかの実施形態において、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のロイシン２３５のアラニンへの変異である（Ｌ２３５Ａ）。いくつかの実施形態では、ＬからＡへの変異は、配列番号６０のＬ１５のＡへの変異である。いくつかの実施形態では、複数の変異は、配列番号６０のＰ１０９Ｇ、Ｌ１４ＡおよびＬ１５Ａを含む。いくつかの実施形態において、複数の変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む。ＩｇＧ３重鎖または非ヒトＩｇＧ１の重鎖において並行変異が実行され得ることも、当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施態様では、変異は、ＩｇＧ４ヒト重鎖のロイシン２３５のグルタミン酸への変異である（Ｌ２３５Ｅ）。いくつかの実施態様では、変異は、ＩｇＧ４ヒト重鎖のセリン２２８のプロリンへの変異である（Ｓ２２８Ｐ）。本明細書に示される数は、可変ドメインを含む全長ＩｇＧに関連することが理解されよう。数は、ＩｇＧのＦｃ部分内においてのみ、これらのアミノ酸の位置に対応するようにシフトされ得る。
【0208】
いくつかの実施形態では、細胞傷害性および／またはエフェクター機能の低下を含む二量体化ドメインは、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３９）を含む。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、配列番号３９を含む。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、配列番号３９からなる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、配列番号３９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、細胞傷害性および／またはエフェクター機能の低下を含む二量体化ドメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９２）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号９２からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４のＦｃドメインは、配列番号９２を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号９２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、位置１０にＰを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、位置１７にＥを含む。
【0209】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂおよび二量体化ドメインは、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチド結合である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第１の二量体化ドメインは、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、第２のｓｄＡｂおよび第２の二量体化ドメインは、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、両方のポリペプチドがリンカーを含む。いくつかの実施形態では、いずれかがリンカーを含む。
【0210】
いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは可撓性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは親水性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列ＧＳを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列ＡＡＡ（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列（ＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列（ＧＳＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列（ＥＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸配列（ＥＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは整数である。いくつかの実施形態において、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から選択される整数である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態において、ｎは１である。いくつかの実施形態において、ｎは２である。いくつかの実施形態において、ｎは３である。いくつかの実施形態において、ｎは４である。いくつかの実施形態において、ｎは５である。いくつかの実施形態において、ｎは７である。
【0211】
いくつかの実施形態において、ｎは８である。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のアミノ酸を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１つのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも５つのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも８つのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１３のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１８のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも２５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも３５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大で２５、２８、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０または１００のアミノ酸を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大で２５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大で２８のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大で３５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大で５０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１～５０、１～２８、１～２５、１～１８、１～１５、１～１３、１～１０、５～５０、５～２８、５～２５、５～１８、５～１５、５～１３、５～１０、１０～５０、１０～２８、１０～２５、１０～１８、１０～１５、１０～１３、１５～５０、１５～２８、１５～２５、１５～１８、２５～５０および２８～５０のアミノ酸を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１５～２５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１５～３５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、２５～３５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１８～２８のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０～２５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１３～２８のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０～２０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１３～２３のアミノ酸を含む。リンカー中の反復の数の増加に加えて、Ｎ末端およびＣ末端は、さらなる塩基、例えばさらなるＧおよび／またはＡｓも含み得ることが当業者によって理解されるであろう。
【0212】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１６）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１１６からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１６を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１６からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１６の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１６の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号１１６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１１６のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0213】
いくつかの実施形態では、配列番号１１６またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１１６またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0214】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１７）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１１７からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１７を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１７からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１７の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１７の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号１１７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１１７のＧ２５４、Ａ１５９およびＡ１６０を含む。
【0215】
いくつかの実施形態では、配列番号１１７またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１１７またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0216】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１５）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１１５からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１５を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１１５からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１５の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１５の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号１１５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号１１５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１１５のＧ１１５６、Ａ１３１およびＡ１３２を含む。
【0217】
いくつかの実施形態では、配列番号１１５またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１１５またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0218】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＥＫＬＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６１）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６１からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６１を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６１からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６１の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６１の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号２６のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６１のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0219】
いくつかの実施形態では、配列番号６１またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６１またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0220】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＩＥＱＱＷＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６２）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６２からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６２を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６２からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６２の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６２の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号２７のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６２のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0221】
いくつかの実施形態では、配列番号６２またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６２またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0222】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＴＨＲＧＶＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６３）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６３からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６３を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６３からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６３の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６３の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号２８のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６３のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0223】
いくつかの実施形態では、配列番号６３またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６３またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0224】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＹＩＫＥＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６４）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６４からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６４を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６４からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６４の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６４の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号２９のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６４のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0225】
いくつかの実施形態では、配列番号６４またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６４またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0226】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＮＡＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＹＦＱＥＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６５）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６５からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６５を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６５からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６５の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６５の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３０のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６５のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0227】
いくつかの実施形態では、配列番号６５またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６５またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0228】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＮＳＩＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６６）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６６からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６６を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６６からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６６の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６６の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３１のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６６のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0229】
いくつかの実施形態では、配列番号６６またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６６またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0230】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６７）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６７からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６７を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６７からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６７の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６７の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３２のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６７のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0231】
いくつかの実施形態では、配列番号６７またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６７またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0232】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６８）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６８からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６８を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６８からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６８の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６８の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６８と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６８と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３３のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６８のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0233】
いくつかの実施形態では、配列番号６８またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６８またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0234】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＤＲＳＥＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＨＨＨＳＤＷＷＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６９）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６９からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６９を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６９からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６９の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６９の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号６９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号６９と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３４のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ホモログを有する配列は、ＦｃドメインのＰからＧへの変異、ＬからＡへの変異およびＬからＡへの変異を含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号６９のＧ２４４、Ａ１４９およびＡ１５０を含む。
【0235】
いくつかの実施形態では、配列番号６９またはそのホモログを含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号６９またはそのホモログの二量体からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８アンタゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0236】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＫＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＴＡＩＡＳＤＮＲＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＶＴＫＥＤＹＷＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９３）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号９３からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号９３を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号９３からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号９３の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号９３の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号９３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号９３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３２のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号８、配列番号１６および配列番号１０のＣＤＲを含む。配列番号Ｘのアミノ酸１～１１５は、配列番号７０～７４のいずれかで置き換えることができることが当業者によって理解されるであろう。
【0237】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＲＴＭＡＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＲＥＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＭＹＷＱＤＹＷＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９４）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号９４からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号９４を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号９４からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号９４の二量体を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号９３の二量体からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその両方は、配列番号９４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、配列番号９４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有するポリペプチドの二量体を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号３３のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９のＣＤＲを含む。配列番号Ｘのアミノ酸１～１１５は、配列番号７５～７８のいずれかで置き換えることができることが当業者によって理解されるであろう。
【0238】
いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８の機能および／またはシグナル伝達を調節しない。いくつかの実施形態では、薬剤はｍＣＤ２８を分解しない。いくつかの実施形態では、薬剤はｍＣＤ２８分解を引き起こさないか、または促進しない。いくつかの実施形態では、シグナル伝達はｍＣＤ２８媒介性の免疫細胞活性化である。いくつかの実施形態では、薬剤は免疫細胞活性化を阻害しない。いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８受容体の内在化または再利用を誘導しない。ｍＣＤ２８を介した共刺激は、Ｔ細胞の免疫活性化に不可欠である。タンパク質分解性切断は、膜内に残っているタンパク質の膜貫通部分および細胞質部分からＣＤ２８の細胞外領域のリガンド結合ドメインを除去した。したがって、切断されたＣＤ２８はシグナル伝達することができず、Ｔ細胞活性化に寄与することができない。したがって、切断を遮断し、アンタゴニストでもある薬剤は、ｍＣＤ２８を活性化させない。同様に、切断を遮断するがアゴニストでもある薬剤は、異常なＴ細胞活性化、および潜在的には自己免疫応答を誘導する可能性がある。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗ＣＤ２８抗体ＭＡＢ３４２ではない。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗ＣＤ２８抗体クローン＃３７４０７ではない。
【0239】
いくつかの実施形態では、薬剤は免疫細胞上のｍＣＤ２８の表面レベルを低下させない。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｍＣＤ２８の表面レベルを５０、４０、３０、２５、２０、１５、１０、７、５、３、２または１％未満低下させる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
【0240】
いくつかの実施形態では、薬剤の細胞への結合は、細胞を死滅させない。いくつかの実施形態では、薬剤の細胞への結合は、細胞の死滅をもたらさない。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しない。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを誘導しない。
【0241】
単鎖剤
【0242】
いくつかの実施形態では、薬剤は、単一ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、単鎖剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、単一ポリペプチドからなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは、第２のｓｄＡｂまでのＮ末端である。いくつかの実施形態では、第２のｓｄＡｂは、第１のｓｄＡｂまでのＮ末端である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは、第２のｓｄＡｂまでのＣ末端である。いくつかの実施形態では、第２のｓｄＡｂは、第１のｓｄＡｂまでのＣ末端である。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドのＮ末端はｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドのＣ末端はｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、Ｎ末端ドメイン、Ｃ末端ドメインまたは両方がｓｄＡｂである。
【0243】
いくつかの実施形態では、２つのｓｄＡｂは、アミノ酸リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂおよび第２のｓｄＡｂは、リンカーによって分離されている。
【0244】
いくつかの実施形態では、リンカーは短リンカーである。いくつかの実施形態では、短リンカーは、１０未満のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、１３未満のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、１０以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、１３以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、最大で５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３のアミノ酸を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、短リンカーは、５以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、８以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、最大で５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、最大で８のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、最大で９のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは、最大で１２のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、短リンカーは可撓性リンカーである。いくつかの実施形態では、短リンカーはＧＧＧＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、短リンカーは１つのＧＧＧＧＳを含む。いくつかの実施形態において、短リンカーは、ｎが整数である（ＧＧＧＧＳ）ｎを含む。いくつかの実施形態では、短リンカーはＡＡＡＧＧＧＧＳを含む。いくつかの実施形態において、ｎは１または２である。いくつかの実施形態において、ｎは１である。いくつかの実施形態では、短リンカーはＡＡＡＧＧＧＧＳからなる。
【0245】
いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）を含む。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列番号１０３からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０３を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０３からなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドまたは薬剤は、配列番号１０３と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、本発明の他のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、本発明の他のｓｄＡｂは、２Ａ１の位置にある。
【0246】
いくつかの実施形態では、短リンカーを有する単鎖剤はＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１０３を含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、配列番号１０３からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストではない。いくつかの実施形態では、アゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0247】
いくつかの実施形態では、リンカーは長リンカーである。いくつかの実施形態では、長リンカーは、１０以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、１３以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、少なくとも１０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８のアミノ酸を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、長リンカーは、１５以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、１８以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、少なくとも１５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、少なくとも１８のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、少なくとも２０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、少なくとも２３のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、２０以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは、２３以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、長リンカーは可撓性リンカーである。いくつかの実施形態において、長リンカーは、ｎが整数である（ＧＧＧＧＳ）ｎを含む。いくつかの実施形態において、長リンカーは、ｎが整数であるＡＡＡ（ＧＧＧＧＳ）ｎを含む。いくつかの実施形態において、ｎは２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態において、ｎは２である。いくつかの実施形態において、ｎは３である。いくつかの実施形態において、ｎは４である。いくつかの実施形態では、長リンカーは、ＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４６）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、長リンカーは、ＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０９）を含むか、またはそれからなる。
【0248】
いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０４）を含む。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列番号１０４からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０４を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０４からなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドまたは薬剤は、配列番号１０４と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、本発明のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｓｄＡｂは、２Ａ１の位置にある。
【0249】
いくつかの実施形態では、長リンカーを有する単鎖剤はＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０４を含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０４からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0250】
いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０５）を含む。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列番号１０５からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０５を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０５からなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドまたは薬剤は、配列番号１０５と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、本発明のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｓｄＡｂは、２Ａ１の位置にある。
【0251】
いくつかの実施形態では、配列番号１０５を含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０５からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0252】
いくつかの実施形態では、リンカーは正味の中性電荷を含む。いくつかの実施形態では、リンカーはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）およびセリン（Ｓ）残基からなる。いくつかの実施形態では、リンカーはアラニン、グリシンおよびセリン残基のみを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは荷電アミノ酸を欠く。
【0253】
いくつかの実施形態では、リンカーは荷電リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは正味電荷を含む。いくつかの実施形態では、荷電リンカーは正味の正電荷を含む。いくつかの実施形態では、荷電リンカーは正味の正電荷を含む。いくつかの実施形態では、正に帯電したリンカーは、少なくとも１つの正に帯電したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、正に荷電したアミノ酸は、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、荷電リンカーは正味の負電荷を含む。いくつかの実施形態では、負に帯電したリンカーは、少なくとも１つの負に帯電したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、負に荷電したアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）である。いくつかの実施形態では、帯電リンカーは、少なくとも１つの帯電アミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、荷電アミノ酸は、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＥまたはＤである。いくつかの実施形態において、荷電リンカーは、ｎが整数である（ＧＧＧＸＳ）ｎを含む。いくつかの実施形態において、荷電リンカーは、ｎが整数であるＡＡＡ（ＧＧＧＸＳ）ｎを含む。いくつかの実施形態において、Ｘは荷電アミノ酸である。いくつかの実施形態において、Ｘは正に荷電したアミノ酸である。いくつかの実施形態において、Ｘは負に荷電したアミノ酸である。いくつかの実施形態では、ＸはＫである。いくつかの実施形態では、ＸはＥである。いくつかの実施形態では、ｎは２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態において、ｎは２である。いくつかの実施形態において、ｎは３である。いくつかの実施形態において、ｎは４である。いくつかの実施形態では、荷電リンカーは、ＡＡＡＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳ（配列番号１１０）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、長リンカーは、ＡＡＡＧＧＧＥＳＧＧＧＥＳＧＧＧＥＳＧＧＧＥＳ（配列番号１１１）を含むか、またはそれからなる。
【0254】
いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列番号１０６からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０６を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０６からなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドまたは薬剤は、配列番号１０６と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、本発明のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｓｄＡｂは、２Ａ１の位置にある。
【0255】
いくつかの実施形態では、荷電リンカーを有する単鎖薬剤はＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、正に荷電したリンカーを有する単鎖薬剤はＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０６を含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０６からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0256】
いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＥＳＧＧＧＥＳＧＧＧＥＳＧＧＧＥＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０７）を含む。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列番号１０７からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０７を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０７からなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドまたは薬剤は、配列番号１０７と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、本発明のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｓｄＡｂは、２Ａ１の位置にある。
【0257】
いくつかの実施形態では、負に荷電したリンカーを有する単鎖薬剤はＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０７を含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０７からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0258】
いくつかの実施形態では、リンカーは剛性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは螺旋形リンカーである。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは螺旋形リンカーである。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは長い連結である。いくつかの実施形態において、剛性リンカーは、ｎが整数である（ＥＡＡＡＫ）ｎを含む。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは、ＧＧＧＧＳＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９７）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは、ＡＡＡＧＧＧＧＳＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１２）を含むか、またはそれからなる。
【0259】
いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＧＧＧＧＳＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０８）を含む。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドは、配列番号１０８からなる。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０８を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は配列番号１０８からなる。いくつかの実施形態では、単一ポリペプチドまたは薬剤は、配列番号１０８と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むか、またはそれからなる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、相同性を有する配列は、配列番号４０のＣＤＲを含む。
【0260】
いくつかの実施形態では、剛性リンカーを有する単鎖剤はＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０８を含む薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、配列番号１０８からなる薬剤は、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、実質的なアンタゴニストである。
【0261】
核酸分子
【0262】
別の態様により、本発明のｓｄＡｂをコードする核酸分子が提供される。
【0263】
別の態様により、本発明の薬剤をコードする核酸分子が提供される。
【0264】
いくつかの実施形態では、核酸分子は複数の核酸分子である。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、第１のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第２の核酸分子は、第２のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、単一の核酸分子は、第１および第２の両方のポリペプチドをコードする。
【0265】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、本発明のｓｄＡｂをコードするコード領域を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本発明の薬剤をコードするコード領域を含む。いくつかの実施形態では、薬剤をコードすることは、第１のポリペプチドをコードすることを含む。いくつかの実施形態では、薬剤をコードすることは、第２のポリペプチドをコードすることを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、第１および第２のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは同一であり、核酸分子は、ポリペプチドをコードする単一のコード領域を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は複数の核酸分子である。いくつかの実施形態では、複数は、第１のポリペプチドをコードする第１分子および第２のポリペプチドをコードする第２分子を含む。
【0266】
いくつかの実施形態では、核酸分子はベクターである。いくつかの実施形態において、ベクターは発現ベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターはプラスミドである。いくつかの実施形態では、ベクターは哺乳動物発現ベクターである。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、ベクターはヒト細胞における発現のためのものである。いくつかの実施形態では、ベクターは培養での発現のためのものである。いくつかの実施形態では、ベクターはインビトロ発現のためのものである。いくつかの実施形態では、ベクターはインビボ発現のためのものである。細胞内の薬剤をコードする核酸分子の発現は、当業者に周知である。それは、多くの方法の中でも、トランスフェクション、ウイルス感染、または細胞のゲノムの直接改変によって行うことができる。
【0267】
ベクター核酸配列は、一般に、細胞内での増殖のための少なくとも１つの複製起点と、場合によりさらなるエレメント、例えば異種ポリヌクレオチド配列、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性）、ポリアデニン配列とを含有する。
【0268】
ベクターは、非ウイルス法またはウイルス法を介して送達されるＤＮＡプラスミドであり得る。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはポックスウイルスベクターであり得る。プロモーターは、哺乳動物細胞において活性であり得る。プロモーターは、ウイルスプロモーターであり得る。
【0269】
いくつかの実施形態では、薬剤をコードする核酸配列は、プロモーターに作動可能に連結されている。用語「作動可能に連結された」は、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、ベクターが宿主細胞に導入されると、インビトロ転写／翻訳系において、または宿主細胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で、１つまたは複数の調節エレメントに連結されていることを意味することを意図している。いくつかの実施形態では、プロモーターは哺乳動物プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは標的細胞における発現のために構成されている。いくつかの実施形態では、標的細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【0270】
いくつかの実施形態では、ベクターは、エレクトロポレーション（例えば、Ｆｒｏｍ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２，５８２４（１９８５）に記載の通り）、ヒートショック、ウイルスベクターによる感染、小ビーズもしくは粒子のマトリックス内、または表面上のいずれかに核酸を含む小粒子による高速衝撃浸透（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２７．７０－７３（１９８７））等を含む、標準的な方法によって細胞に導入される。
【0271】
本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼ、すなわちＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の周りに集中している転写制御モジュールの群を指す。プロモーターは、それぞれがおよそ７～２０ｂｐのＤＮＡからなる、個別の機能モジュールから構成され、転写活性化因子またはリプレッサータンパク質のための１つ以上の認識部位を含む。
【0272】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ＲＮＡＰ ＩＩおよびＰｏｌ ＩＩ）によって転写される。ＲＮＡＰ ＩＩは、真核細胞に見られる酵素である。それは、ＤＮＡの転写を触媒して、ｍＲＮＡならびにほとんどのｓｎＲＮＡおよびマイクロＲＮＡの前駆体を合成する。
【0273】
いくつかの実施形態では、哺乳動物発現ベクターとしては、限定されないが、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（±）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（±）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１、Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能なｐＣＩ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅから入手可能なｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶおよびｐＢＫ－ＣＭＶ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能なｐＴＲＥＳ、およびそれらの誘導体が挙げられる。
【0274】
いくつかの実施形態では、レトロウイルスなどの真核生物ウイルス由来の調節エレメントを含有する発現ベクターが、本発明によって使用される。ＳＶ４０ベクターには、ｐＳＶＴ７およびｐＭＴ２が含まれる。いくつかの実施形態において、ウシパピローマウイルスに由来するベクターとしては、ｐＢＶ－１ＭＴＨＡが挙げられ、エプスタインバーウイルスに由来するベクターとしては、ｐＨＥＢＯおよびｐ２Ｏ５が挙げられる。他の例示的なベクターには、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、およびＳＶ－４０初期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞での発現に有効であることが示されている他のプロモーターの指示下で、タンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが含まれる。
【0275】
いくつかの実施形態では、組換えウイルスベクターがインビボ発現に使用され、それらは、ラテラル感染および標的特異性などの利点を提供する。一実施形態では、ラテラル感染は、例えばレトロウイルスのライフサイクルに固有であり、単一の感染細胞が、発芽して隣接細胞に感染する多くの後代ビリオンを発生させるプロセスである。一実施形態では、その結果、広い領域が急速に感染し、その大部分は、最初は元のウイルス粒子に感染していなかった。一実施形態では、横に拡散することができないウイルスベクターが作製される。一実施形態では、この特徴は、所望の目的が、特定の遺伝子を局所的な数の標的細胞にのみ導入することである場合に有用であり得る。
【0276】
様々な方法を使用して、本発明の発現ベクターを細胞に導入することができる。そのような方法は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９，１９９２）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９８９）、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ Ｍａｓｓ．（１９８８）、およびＧｉｌｂｏａ ｅｔ ａｔ．［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４（６）：５０４－５１２，１９８６］に記載され、例えば、安定または一過性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーションおよび組換えウイルスベクターによる感染が挙げられる。さらに、ポジティブ－ネガティブセレクション法については、米国特許第５，４６４，７６４号および５，４８７，９９２号を参照されたい。
【0277】
挿入された（ポリペプチドをコードする）コード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含有すること以外に、本発明の発現構築物は、発現されるポリペプチドの安定性、産生、精製、収率または活性を最適化するように操作された配列も含み得ることが理解されるであろう。
【0278】
組成物
【0279】
別の態様により、本発明のｓｄＡｂを含む組成物が提供される。
【0280】
別の態様により、本発明の薬剤を含む組成物が提供される。
【0281】
別の態様により、本発明の核酸分子を含む組成物が提供される。
【0282】
いくつかの実施形態では、組成物は医薬組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は治療用組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、治療的に許容される担体、賦形剤またはアジュバントを含む。
【0283】
本明細書で使用される場合、「担体」、「賦形剤」または「アジュバント」という用語は、活性薬剤ではない医薬組成物の任意の成分を指す。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、非毒性の不活性固体、半固体液体充填剤、希釈剤、封入材料、任意の種類の製剤補助剤、または単に滅菌水性媒体、例えば生理食塩水を指す。薬学的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの例は、糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース、デンプン、例えばコーンスターチおよびジャガイモデンプン、セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末トラガカント；麦芽、ゼラチン、タルク；賦形剤、例えばカカオバターおよび坐剤ワックス；油、例えば落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油；グリコール、例えばプロピレングリコール、ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル、例えばオレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天；緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水、リンゲル液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝液、ならびに医薬製剤に使用される他の非毒性の適合性物質である。本明細書で担体として機能することができる物質のいくつかの非限定的な例としては、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、ポリオール、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リン酸緩衝液、ココアバター（坐剤基剤）、乳化剤、ならびに他の医薬製剤に使用される他の非毒性の薬学的に適合性の物質が挙げられる。ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤および潤滑剤、ならびに着色剤、香味剤、賦形剤、安定剤、酸化防止剤、および保存剤も存在し得る。本明細書で企図される組成物を製剤化するために、任意の非毒性、不活性かつ有効な担体を使用することができる。これに関して適切な薬学的に許容される担体、賦形剤、および希釈剤は、当業者に周知であり、例えば、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｕｄａｖａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（２００１）；ｔｈｅ ＣＴＦＡ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００４）；および「Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ」、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ（これらの全ての内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。本発明の組成物に有用な薬学的に許容される賦形剤、担体および希釈剤の例としては、蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、ハンクス溶液およびＤＭＳＯが挙げられる。これらの追加の不活性成分、ならびに有効な製剤および投与手順は当技術分野で周知であり、標準的な教科書、例えばＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ ｔｈ Ｅｄ．，Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９０）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９０）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，（２００５）に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物はまた、リポソーム、ＩＳＣＯＭＳ、徐放性粒子、および血清中のペプチドまたはポリペプチドの半減期を延長する他のビヒクルなど、人工的に作製された構造に包含されてもよい。リポソームには、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、ラメラ層などが含まれる。本明細書に記載のペプチドと共に使用するためのリポソームは、一般に中性で負に帯電したリン脂質およびステロール、例えばコレステロールを含む標準的なベシクル形成脂質から形成される。脂質の選択は、一般に、リポソームサイズおよび血液中の安定性などを考慮して決定される。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに概説されているように、リポソームを調製するための様々な方法が利用可能であり、また、米国特許第４，２３５，８７１号、４，５０１，７２８号、４，８３７，０２８号、および５，０１９，３６９号も参照されたい。
【0284】
担体は、合計で、本明細書に提示される医薬組成物の約０．１重量％～約９９．９９９９９重量％を構成し得る。
【0285】
いくつかの実施形態では、組成物は、治療有効量のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、治療有効量の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、治療有効量の核酸分子を含む。本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、哺乳動物の疾患または障害を治療するのに有効な薬剤の量を指す。「治療有効量」という用語は、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投与量および期間で効果のある量を指す。正確な投与形態およびレジメンは、患者の状態に応じて医師によって決定される。
【0286】
いくつかの実施形態では、組成物は、対象への投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、全身投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、局所投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、局所投与は炎症部位への投与である。いくつかの実施形態では、局所投与は腫瘍内投与である。いくつかの実施形態では、局所投与は免疫応答部位への投与である。いくつかの実施形態では、免疫応答は自己免疫応答である。
【0287】
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与」などの用語は、健全な医療行為において、治療効果をもたらすような方法で活性剤を含有する組成物を対象に送達する任意の方法を指す。本主題の一態様は、治療有効量の本発明の薬剤の静脈内投与を、それを必要とする患者へ提供する。他の適切な投与経路としては、非経口、皮下、経口、筋肉内または腹腔内が挙げられ得る。
【0288】
治療方法
【0289】
別の態様によって、ｓＣＤ２８レベルの低下を必要とする対象においてｓＣＤ２８レベルを低下させる方法であって、本発明のｓｄＡｂ、本発明の薬剤または本発明の医薬組成物を対象に投与し、それによりｓＣＤ２８レベルを低下させることを含む方法が提供される。
【0290】
別の態様によって、細胞の表面上のＣＤ２８切断を減少させる方法であって、細胞を本発明のｓｄＡｂ、本発明の薬剤または本発明の医薬組成物に接触させ、それによりｓＣＤ２８レベルを低下させることを含む方法が提供される。
【0291】
別の態様によって、疾患の治療および／または予防を必要とする対象において疾患を治療および／または予防する方法であって、本発明のｓｄＡｂ、本発明の薬剤または本発明の医薬組成物を対象に投与し、それにより疾患を治療および／または予防することを含む方法が提供される。
【0292】
別の態様によって、免疫療法の改善を必要とする対象において免疫療法を改善する方法であって、本発明のｓｄＡｂ、本発明の薬剤または本発明の医薬組成物を対象に投与し、それにより免疫療法を改善することを含む方法が提供される。
【0293】
ｓＣＤ２８を減少させる、特にＣＤ２８切断を遮断する能力は、癌の有効な治療、免疫刺激を増加させる方法、および免疫療法の有効な後押しであることが実証されている。これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第２０１９／１７５８８５号および第２０２０１１１４４１号に実証されている。
【0294】
いくつかの実施形態では、免疫療法は、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの癌免疫療法である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法は、抗ＰＤ１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、治療はＰＤ－１チェックポイントの遮断を含む。いくつかの実施形態では、免疫療法は、同種異系、シンジェニックまたは自家免疫細胞を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫療法を必要とする対象は、癌に罹患している。
【0295】
本明細書で使用される場合、疾患、障害、または状態の「治療」または「治療すること」という用語は、その少なくとも１つの症状の緩和、その重症度の低下、またはその進行の阻害を包含する。治療は、疾患、障害または状態が完全に治癒することを意味する必要はない。有効な治療であるために、本明細書の有用な組成物は、疾患、障害、または状態の重症度を低下させるか、それに関連する症状の重症度を低下させるか、または患者または対象の生活の質を改善するだけでよい。
【0296】
いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は疾患に罹患している。いくつかの実施形態では、対象はそれを必要としている。いくつかの実施形態では、対象は免疫療法を必要としている。いくつかの実施形態では、対象は免疫療法で治療されている。
【0297】
いくつかの実施形態では、対象の血液は、上昇したレベルのｓＣＤ２８を含む。いくつかの実施形態では、対象の血液は、上昇したレベルのｓＣＤ２８を含み、その後低下する。いくつかの実施形態では、レベルは、健康な対象のものよりも高い。いくつかの実施形態では、対象のｓＣＤ２８レベルは、健康な対象のレベルよりも少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、または１０００％上昇している。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、レベルは、血液１ｍｌあたり５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｎｇを超えて上昇している。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、レベルは５ｎｇ／ｍｌ超に上昇している。いくつかの実施形態では、レベルは１０ｎｇ／ｍｌ超に上昇している。いくつかの実施形態では、レベルは２０ｎｇ／ｍｌ超に上昇している。いくつかの実施形態では、対象の血液は、血液１ｍｌ当たり少なくとも５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｎｇのｓＣＤ２８を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、対象の血液は、血液１ｍｌ当たり少なくとも５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｎｇのｓＣＤ２８を、減少される前に含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、対象の血液は、１ｍｌ当たり少なくとも５ｎｇのｓＣＤ２８を含む。いくつかの実施形態では、対象の血液は、１ｍｌ当たり少なくとも１０ｎｇのｓＣＤ２８を含む。いくつかの実施形態では、対象の血液は、１ｍｌ当たり少なくとも２０ｎｇのｓＣＤ２８を含む。いくつかの実施形態では、対象の血液は、１ｍｌ当たり少なくとも５ｎｇのｓＣＤ２８を、減少される前に含む。いくつかの実施形態では、対象の血液は、１ｍｌ当たり少なくとも１０ｎｇのｓＣＤ２８を、減少される前に含む。いくつかの実施形態では、対象の血液は、１ｍｌ当たり少なくとも２０ｎｇのｓＣＤ２８を、減少される前に含む。
【0298】
いくつかの実施形態では、対象は、ｓＣＤ２８の増加しているレベルを含む。いくつかの実施形態では、増加しているレベルは、血液中の増加しているレベルである。いくつかの実施形態では、増加は、第１の時点から第２の時点までである。いくつかの実施形態では、増加は、免疫療法による治療前から治療後までである。いくつかの実施形態では、増加は、疾患が進行するにつれて増大する。国際特許出願公開第２０２１／１１１４４２号（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）には、ｓＣＤ２８レベルが癌進行中および免疫療法中に増加し得ること、ならびに切断遮断剤を使用してそのような癌を治療することができることが示されている。
【0299】
いくつかの実施形態では、対象は癌に罹患している。いくつかの実施形態では、癌は免疫療法によって治療され得る。いくつかの実施形態では、癌は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法で治療され得る癌である。いくつかの実施形態では、対象はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法を受けたことがある。いくつかの実施形態では、対象はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に非応答である。いくつかの実施形態では、対象はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対してナイーブである。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法と共に行われる。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法の前に行われる。
【0300】
いくつかの実施形態では、方法は、別の免疫療法を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、別の免疫療法はチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ－４阻害剤である。いくつかの実施形態では、別の免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ベースの免疫療法である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲはＣＡＲ－Ｔである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲはＣＡＲ－ＮＫである。いくつかの実施形態では、別の免疫療法は癌ワクチンである。
【0301】
本明細書で使用される場合、「ＣＡＲ－Ｔ細胞」および「ＣＡＲ－ＮＫ細胞」という用語は操作された受容体を指し、それは、少なくとも１つの目的のタンパク質（例えば、エピジェネティック修飾剤での治療後に発現が増加した免疫原性タンパク質）に対する特異性を有し、免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞またはＮＫ細胞）上にグラフトされる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｔ細胞上にグラフトされたモノクローナル抗体の特異性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞上にグラフトされたモノクローナル抗体の特異性を有する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球および制御性Ｔ細胞から選択される。
【0302】
ＣＡＲ－ＴおよびＣＡＲ－ＮＫ細胞ならびにそれらのベクターは当技術分野において周知である。そのような細胞は、受容体が結合するタンパク質を標的とし、それに対して細胞傷害性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫ細胞は、少なくとも１つのウイルスタンパク質を標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫ細胞は、複数のウイルスタンパク質を標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫ細胞は、エピジェネティック修飾剤との接触により発現が増加したウイルスタンパク質を標的とする。
【0303】
ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築は当技術分野において周知である。１つの非限定的な例では、ウイルスタンパク質に対するモノクローナル抗体を作製し、次いで、抗体をコードするベクターを構築することができる。ベクターはまた、共刺激性シグナル領域を含むであろう。いくつかの実施形態では、共刺激性シグナル領域は、既知のＴ細胞またはＮＫ細胞刺激性分子の細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドのうちの少なくとも１つから選択される。いくつかの実施形態では、ベクターはＣＤ３Ｚシグナル伝達ドメインも含む。次いで、このベクターを、例えばレンチウイルス感染によってＴ細胞にトランスフェクトする。
【0304】
いくつかの実施形態では、癌は、上昇したｓＣＤ２８レベルを伴う癌である。いくつかの実施形態では、癌は、上昇したｓＣＤ２８レベルを有する対象に存在する。いくつかの実施形態では、癌は、高いｓＣＤ２８レベルを含む。いくつかの実施形態では、癌は、高いｓＣＤ２８レベルを有する対象に存在する。いくつかの実施形態では、上昇したｓＣＤ２８レベルおよび／または高いｓＣＤ２８レベルは、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｎｇ／ｍｌであり、かつ／またはそれを超えるレベルである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、癌は、高いｓＣＤ２８レベルを含む。いくつかの実施形態では、上昇したｓＣＤ２８レベルおよび／または高いｓＣＤ２８レベルは、健康な対象のレベルの５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００％であり、かつ／またはそれを超えるレベルである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、癌は乳癌ではない。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、腎癌、胃癌および結腸直腸癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、および結腸直腸癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、腎癌、胃癌または結腸直腸癌である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。癌の例には、脳癌、口腔癌、頭頸部癌、食道癌、肺癌、皮膚癌、肝臓癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、血液癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、甲状腺癌、子宮頸癌、卵巣癌、精巣癌、網膜芽細胞腫、胃癌、結腸直腸癌および子宮癌が含まれるが、これらに限定されない。
【0305】
いくつかの実施形態では、疾患は増殖性疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は癌である。いくつかの実施形態では、疾患は免疫刺激によって治療可能である。いくつかの実施形態では、疾患は、上昇したｓＣＤ２８レベルを含む。いくつかの実施形態では、疾患は、ｓＣＤ２８のレベルを増加させることを含む。いくつかの実施形態では、増加は経時的に増大する。いくつかの実施形態では、増加は、疾患の進行中に増大する。いくつかの実施形態では、疾患は感染性疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は免疫療法によって治療可能な疾患である。
【0306】
いくつかの実施形態では、方法はインビボで行われる。いくつかの実施形態では、方法はインビトロで行われる。いくつかの実施形態では、減少はインビボで行われる。いくつかの実施形態では、減少はインビトロで行われる。いくつかの実施形態では、減少は、対象から血液を取り出し、取り出された血液中のｓＣＤ２８レベルを低下させ、血液を対象に戻し、それによって対象のｓＣＤ２８を減少させることを含む。透析および血液浄化の方法は周知である。本発明は、ｓＣＤ２８をインビトロで一掃し、次いで血液を対象に戻すことによって実施することができる。
【0307】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７または９９％低下させる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを健康な個体のレベルまで低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを最大で１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｎｇ／ｍｌに低下させる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８血中レベルを最大５ｎｇ／ｍｌまで低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８血中レベルを最大１０ｎｇ／ｍｌまで低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８血中レベルを最大２０ｎｇ／ｍｌまで低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを健康な個体のレベルまで低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｎｇ／ｍｌ未満に低下させる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを５ｎｇ／ｍｌ未満に低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを１０ｎｇ／ｍｌ未満に低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ｓＣＤ２８レベルを２０ｎｇ／ｍｌ未満に低下させる。いくつかの実施形態では、低下または減少は、対象の血液、末梢血またはＴＭＥで起こる。いくつかの実施形態では、低下または減少は血液中で起こる。
【0308】
いくつかの実施形態では、ｓＣＤ２８レベルはＥＬＩＳＡによって測定される通りである。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡはサンドイッチＥＬＩＳＡである。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡは標準化サンドイッチＥＬＩＳＡである。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡはＢｅｎｄｅｒ ＭｅｄＳｙｓｔｅｍｓ ＥＬＩＳＡである。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡはＢｅｎｄｅｒ ＭｅｄＳｙｓｔｅｍｓ ＥＬＩＳＡキットＢＭＳ２９０である。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡは、本発明の薬剤を用いて行われる。
【0309】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８シェディング（CD28 shedding）を遮断することは、タンパク質分解性切断を遮断することを含む。いくつかの実施形態では、遮断は阻害することである。いくつかの実施形態では、遮断は減少させることである。
【0310】
本明細書で使用される場合、「タンパク質分解性切断を阻害する」とは、ｍＣＤ２８のタンパク質分解性切断の何らかの減少を指す。いくつかの実施形態では、阻害は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９９または１００％の切断の減少である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の阻害により、免疫細胞上のｍＣＤ２８のレベルが維持される。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の阻害により、免疫細胞上のｍＣＤ２８のレベルが増加する。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の阻害により、免疫刺激に十分なｍＣＤ２８のレベルが維持される。いくつかの実施形態では、タンパク質分解性切断の減少とは、少なくとも１つのプロテアーゼによる切断の減少である。
【0311】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ｍＣＤ２８を分解しないか、または分解に至らない。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫細胞上のｍＣＤ２８レベルを低下させない。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ｍＣＤ２８媒介免疫細胞活性化を減少させない。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象の免疫細胞上のｍＣＤ２８レベルを維持する。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象の免疫細胞上のｍＣＤ２８レベルを増加させる。
【0312】
いくつかの実施形態では、減少は、ｓＣＤ２８の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、または９９％の減少である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、減少は血清ｓＣＤ２８中である。いくつかの実施形態では、減少はｓＣＤ２８の血中レベルにある。いくつかの実施形態では、減少は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるｓＣＤ２８のレベルにある。
【0313】
いくつかの実施形態では、免疫活性化の増加、疾患の治療、および／または免疫療法の改善の方法は、アンタゴニストではない薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化の増加、疾患の治療、および／または免疫療法の改善の方法は、実質的に拮抗しない薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、疾患は免疫活性化の増加によって治療可能な疾患である。
【0314】
別の態様によって、ＣＤ２８へのリガンド結合を阻害する方法であって、ＣＤ２８を本発明のｓｄＡｂまたは本発明の組成物と接触させ、それによりリガンド結合を阻害することを含む方法が提供される。
【0315】
別の態様によって、免疫応答の抑制を必要とする対象において免疫応答を抑制する方法であって、本発明のｓｄＡｂまたは本発明の組成物を対象に投与し、それにより免疫応答を抑制することを含む方法が提供される。
【0316】
ＣＤ２８の阻害が免疫刺激を遮断し、自己免疫疾患を治療するために使用できることは当技術分野で周知である。さらに、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第２０２０／１８３４７１号は、ｓＣＤ２８レベルの増加およびＣＤ２８阻害が治療上有効な様式であることを実証している。いくつかの実施形態において、リガンド結合を阻害することは、免疫応答を抑制することを含む。
【0317】
いくつかの実施形態では、薬剤はＴ細胞活性化を減少させる。いくつかの実施形態では、薬剤はＴ細胞増殖を減少させる。いくつかの実施形態では、薬剤はＴ細胞のクラスター形成を減少させる。いくつかの実施形態において、薬剤は、抗炎症性サイトカイン分泌を増加させる。抗炎症性サイトカインは当技術分野で周知である。抗炎症性サイトカインの非限定例としては、ＩＬ－１０およびＴＧＦβが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、薬剤は、炎症誘発性サイトカイン分泌を減少させる。いくつかの実施形態では、炎症誘発性サイトカインはＩＦＮγである。
【0318】
いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８の機能および／またはシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８の機能および／またはシグナル伝達を低下させる。いくつかの実施形態では、薬剤はＣＤ２８活性化を減少させる。いくつかの実施形態では、シグナル伝達はＣＤ２８媒介性の免疫応答である。いくつかの実施形態では、薬剤は免疫抑制を増加または促進する。
【0319】
本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、身体が病原体または異常から自身を防御するために行う任意の応答を指す。一実施形態では、免疫応答は、免疫細胞を媒介または必要とする応答を含む。
【0320】
一実施形態では、免疫応答は、免疫系または免疫系のメディエーターを活性化または阻害する任意の応答を含む。別の実施形態では、免疫応答の活性化は、免疫細胞の活性化を含む。別の実施形態では、免疫細胞の活性化は、免疫細胞のサブセットの増殖をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞の活性化は、活性化された細胞による免疫学的メディエーターの分泌増加をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞の活性化は、病原体、外来細胞、疾患細胞、それらから誘導もしくは分泌される分子、またはそれらの任意の組み合わせの貪食および／または破壊をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞の活性化は、隣接細胞、例えば限定されないが、ウイルスに感染した細胞の貪食および／または破壊をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞の活性化は、宿主細胞、それらから誘導もしくは分泌される分子、またはそれらの任意の組み合わせの貪食および／または破壊をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞の活性化は、特定の分子、エピトープ、病原体、またはそれらの任意の組み合わせに対する抗体の分泌の活性化をもたらす。
【0321】
いくつかの実施形態では、免疫応答は細胞傷害性応答である。本明細書で使用される場合、細胞傷害性応答は、細胞溶解および／または他の損傷をもたらす、補体系の活性化を含む応答を指す。いくつかの実施形態では、免疫応答は体液性応答であり、すなわち抗体の産生および分泌を伴う。いくつかの実施形態では、免疫応答は自然免疫応答であり、すなわち自然免疫系に関わる。いくつかの実施形態では、免疫応答は獲得免疫応答であり、すなわち獲得免疫応答を含む。
【0322】
いくつかの実施形態では、対象は、グラフトレシピエントまたは生着の候補である。いくつかの実施形態では、グラフトは、単独細胞、細胞懸濁液、器官、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、グラフトは自家グラフトである。いくつかの実施形態では、グラフトはシンジェニックグラフトである。いくつかの実施形態では、グラフトは同種異系グラフトである。いくつかの実施形態では、グラフトは異種移植片である。いくつかの実施形態では、グラフトは造血グラフトである。いくつかの実施形態では、グラフトは造血幹細胞を含む。いくつかの実施形態では、グラフトは非造血グラフトである。
【0323】
いくつかの実施形態では、対象は、アレルギーまたはアレルギー反応に悩まされている。いくつかの実施形態では、アレルギー反応は、感染性疾患または障害に起因する。いくつかの実施形態では、アレルギー反応は、感染性疾患または障害の症状である。いくつかの実施形態では、アレルギー反応は、感染性疾患または障害とは無関係である。いくつかの実施形態では、アレルギー反応は、感染性疾患または障害に並行して刺激される。
【0324】
いくつかの実施形態では、対象は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）に罹患している。本明細書中で使用されるとき、「サイトカイン放出症候群」とは、他の疾患または感染の合併症に起因する全身性炎症反応症候群のことを指す。一実施形態では、ＣＲＳは、モノクローナル抗体薬物などの（例えば、有害作用）免疫療法によって誘導されるか、またはそれから生じる。一実施形態では、ＣＲＳは、養子Ｔ細胞療法によって誘導されるか、またはそれから生じる。本明細書で使用される場合、「ＣＲＳ」および「サイトカインストーム」という用語は交換可能である。
【0325】
いくつかの実施形態では、対象は、感染性疾患に罹患している。感染性疾患の非限定的な例としては、尿路感染症、胃腸感染症、腸炎、サルモネラ症、下痢、非結核性抗酸菌感染症、レジオネラ病、院内肺炎、皮膚感染症、コレラ、敗血症性ショック、歯周炎、感染症、副鼻腔炎、菌血症、新生児感染症、肺炎、心内膜炎、骨髄炎、毒性ショック症候群、熱傷様皮膚症候群、および食中毒が挙げられるが、これらに限定されない。
【0326】
いくつかの実施形態では、対象は、自己免疫疾患に罹患している。本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」という用語は、対象自身の組織または組織構成要素（例えば、細胞およびそれによって産生または分泌される分子）に対する免疫応答、または対象に本質的に有害ではない抗原に対する免疫応答に起因する任意の疾患または障害を指す。いくつかの実施形態では、対象は、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患している。自己免疫疾患の例としては、アカラシア、アジソン病、成人スチル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性眼炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、軸索性神経障害（ＡＭＡＮ）、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病（ＣＤ）、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）または好酸球性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、線維性肺胞炎、巨細胞炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ－シェンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠性ヘルペスまたは妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）（アクネ病）、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、間質性膀胱炎（ＩＣ）、若年性関節炎、若年性筋炎（ＪＭ）、川崎病、ランバート－イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、狼瘡、慢性ライム病、メニエル病、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムチャ・ハーバーマン病、多巣性運動神経障害（ＭＭＮ）またはＭＭＮＣＢ、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児狼瘡、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼性瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、扁平部炎（末梢ブドウ膜炎）、乾癬性ターナー症候群、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脊髄炎、悪性貧血（ＰＡ）、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性症候群Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球ろう（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群（ＲＬＳ）、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群（ＳＰＳ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハンツ症候群（ＴＨＳ）、横断性脊髄炎、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、未分化結合組織病（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、血管炎、白斑およびフォークト・小柳・原田病が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、ループス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、ベーチェット病、大腸炎、潰瘍性大腸炎、糖尿病、グレーブス病および多発性硬化症から選択される。
【0327】
いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１つの他の免疫抑制療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫抑制療法は免疫抑制薬である。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬は免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬は、リガンドに結合するｓＣＤ２８またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願ＷＯ２０２０／１８３４７１号に提供されているｓＣＤ２８安定化剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬はステロイドである。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬はカルシニューリン阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬は抗増殖剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制薬はｍＴＯＲ阻害剤である。免疫抑制薬は当技術分野で周知であり、任意のそのような治療を使用することができる。免疫抑制薬の例としては、プレドニゾン、シロリムス、タクロリムス、シクロスポリン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸ナトリウム、アザチオプリン、レナリドミド、ポマリドミド、メトトレキサート、アザチオプリンおよびサリドマイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【0328】
いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、上昇したｓＣＤ２８レベルを伴う自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、高いｓＣＤ２８レベルを含む。いくつかの実施形態では、上昇したｓＣＤ２８レベルおよび／または高いｓＣＤ２８レベルは、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｎｇ／ｍｌであり、かつ／またはそれを超えるレベルである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、高いｓＣＤ２８レベルを含む。いくつかの実施形態では、上昇したｓＣＤ２８レベルおよび／または高いｓＣＤ２８レベルは、健康な対象のレベルの５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００％であり、かつ／またはそれを超えるレベルである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、ｓＣＤ２８の上昇したレベルを含まない。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、ｓＣＤ２８の高いレベルを含まない。いくつかの実施形態では、高レベルおよび／または上昇したレベルは、健康な対象と比較した場合である。
【0329】
いくつかの実施形態では、対象は、健康な対象と比較して上昇したｓＣＤ２８レベルを有する。いくつかの実施形態では、対象は、健康な対象と比較して上昇していないｓＣＤ２８レベルを有する。いくつかの実施形態では、対象および健康な対象は、同等のｓＣＤ２８レベルを有する。いくつかの実施形態では、上昇していないｓＣＤ２８レベルまたは健康な対象と同等のｓＣＤ２８レベルを有する対象は、健康な対象よりも０～５％未満多いｓＣＤ２８を有する。いくつかの実施形態では、上昇していないｓＣＤ２８レベルまたは健康な対象と同等のｓＣＤ２８レベルを有する対象は、５ｎｇ／ｍｌ未満のｓＣＤ２８を含む。
【0330】
いくつかの実施形態では、上昇したｓＣＤ２８レベルを有する対象は、健康な対象のレベルを少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、または１，０００％を越えて、またはそれらの間の任意の値および範囲で上昇した血中ｓＣＤ２８レベルを含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、血中ｓＣＤ２８レベルは、健康な対象のレベルよりも５～２５％、１０～５０％、２５～７５％、５０～１２５％、１００～２５０％、２００～５５０％、５００～７５０％、または７００～１，０００％上昇している。いくつかの実施形態では、上昇したｓＣＤ２８レベルを有する対象は、血液１ｍｌ当たり、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｎｇを超えて上昇したレベルを含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。いくつかの実施形態では、レベルは５ｎｇ／ｍｌ超に上昇している。いくつかの実施形態では、レベルは１０ｎｇ／ｍｌ超に上昇している。
【0331】
別の態様により、本発明の治療方法による治療に適した対象を選択する方法が提供され、方法は、対象および／または癌のｓＣＤ２８レベルを測定することを含み、所定の閾値を超えるｓＣＤ２８レベルは、対象が本発明の方法による治療に適していることを示す。
【0332】
いくつかの実施形態では、本方法は、ｓＣＤ２８レベルの上昇を確認することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ｓＣＤ２８レベルを測定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｓＣＤ２８レベルは対象におけるレベルである。いくつかの実施形態では、ｓＣＤ２８レベルは癌におけるレベルである。いくつかの実施形態では、ｓＣＤ２８レベルは対象からの試料におけるレベルである。いくつかの実施形態では、試料は体液である。いくつかの実施形態では、所定の閾値は、健康な対象におけるレベルである。いくつかの実施形態では、所定の閾値は、それを超えると高いレベルおよび／または上昇したレベルとなる閾値である。いくつかの実施形態では、所定の閾値は５ｎｇ／ｍｌである。
【0333】
別の態様により、癌の治療および／または予防に使用するための本発明のｓｄＡｂ、本発明の薬剤または本発明の医薬組成物が提供される。
【0334】
別の態様により、免疫療法の改善に使用するための本発明のｓｄＡｂ、本発明の薬剤または本発明の医薬組成物が提供される。
【0335】
別の態様により、免疫応答の抑制に使用するための本発明のｓｄＡｂ、または本発明の医薬組成物が提供される。
【0336】
キット
【0337】
別の態様により、本発明の少なくとも１つのｓｄＡｂまたは本発明の少なくとも１つの薬剤を含むキットが提供される。
【0338】
いくつかの実施形態では、キットは、少なくとも１つの本発明の組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは少なくとも１つの免疫療法をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、本発明の薬剤が免疫療法と共に使用するためのものであることを記載するラベルを含む。いくつかの実施形態では、キットは、免疫療法が本発明の薬剤と共に使用するためのものであることを記載するラベルを含む。
【0339】
製造方法
【0340】
別の態様により、本発明の薬剤を生成する方法であって、
ｉ．ＣＤ２８に結合し、切断を遮断するｓｄＡｂを得ること；および
ｉｉ．リンカーを介してｓｄＡｂの第１の部分をｓｄＡｂの第２の部分に連結して、二量体剤を作製することを含み；
それによって薬剤を製造する方法を提供する。
ｉ．ＣＤ２８に結合し、切断を遮断するｓｄＡｂを得ること；および
ｉｉ．リンカーを介してｓｄＡｂの第１の部分をｓｄＡｂの第２の部分に連結して、二量体剤を作製することを含み；
それによって薬剤を製造する方法を提供する。
【0341】
別の態様により、本発明の薬剤を生成するための方法であって、二量体剤をコードする１つ以上の核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することを含み、１つ以上の核酸配列が、
ｉ．ＣＤ２８に結合し、切断を遮断するｓｄＡｂを得ること；および
ｉｉ．リンカーを介してｓｄＡｂの第１の部分をｓｄＡｂの第２の部分に連結して、二量体剤を作製すること；
によって選択された二量体剤のものであり、それによって薬剤を製造する方法を提供する。
ｉ．ＣＤ２８に結合し、切断を遮断するｓｄＡｂを得ること；および
ｉｉ．リンカーを介してｓｄＡｂの第１の部分をｓｄＡｂの第２の部分に連結して、二量体剤を作製すること；
によって選択された二量体剤のものであり、それによって薬剤を製造する方法を提供する。
【0342】
いくつかの実施形態では、薬剤はｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはｍＣＤ２８を結合する。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは細胞上のｍＣＤ２８を結合する。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは細胞表面上のｍＣＤ２８を結合する。いくつかの実施形態では、切断はプロテアーゼによるものである。いくつかの実施形態では、方法は、切断を遮断する二量体剤の能力を試験することをさらに含む。いくつかの実施形態では、選択する方法は、切断を遮断する二量体剤の能力を試験することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、選択する方法は、ＣＤ２８の切断を遮断する二量体剤を選択することをさらに含む。
【0343】
いくつかの実施形態では、切断を遮断するｓｄＡｂの能力を試験することは、以下に記載される方法による。いくつかの実施形態では、切断を遮断するｓｄＡｂの能力を試験することは、ｓｄＡｂ、プロテアーゼ、およびＣＤ２８の細胞外ドメインまたは切断部位を含むそのフラグメントを混合することを含む。いくつかの実施形態では、試験は、ＣＤ２８またはそのフラグメントの細胞外ドメインを配列決定して、トランケーションおよび／または切断について調べることをさらに含む。いくつかの実施形態では、試験は、ＣＤ２８の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを、切断によるサイズ変化を測定するために十分に感受性であるゲルに流すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、試験は、薬剤およびプロテアーゼの存在下で、ｍＣＤ２８を発現する細胞からのｓＣＤ２８の産生を測定することをさらに含む。
【0344】
いくつかの実施形態では、得られるｓｄＡｂは、ＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、得られるｓｄＡｂは、ＣＤ２８へのリガンドの結合を遮断または阻害する。いくつかの実施形態では、得られるｓｄＡｂは、ＣＤ２８媒介免疫活性化を遮断または阻害する。いくつかの実施形態では、方法は、ｓｄＡｂによって引き起こされる拮抗作用、遮断および／または阻害を確認することをさらに含む。
【0345】
いくつかの実施形態では、方法は、宿主細胞から薬剤を単離および／または抽出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、宿主細胞の培養培地から薬剤を単離および／または抽出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、宿主細胞または宿主細胞の培養培地から薬剤を精製することをさらに含む。
【0346】
いくつかの実施形態では、薬剤を得ることは、サメまたはラクダ科動物を前記ＣＤ２８細胞外ドメインまたはそのフラグメントで免疫化すること、および前記免疫化された生物から抗体を収集することを含む。いくつかの実施形態では、薬剤を得ることは、ＣＤ２８細胞外ドメインまたはそのフラグメントへの結合について薬剤のライブラリーをスクリーニングし、結合する薬剤を選択することを含む。
【0347】
いくつかの実施形態では、抗体を回収することは、免疫化されたサメまたはラクダ科動物の脾臓からＢ細胞を抽出することを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、メラノーマ細胞と融合されてハイブリドーマを生成する。いくつかの実施形態では、抗体はハイブリドーマの培養培地から回収される。いくつかの実施形態では、薬剤を得ることは、生物をＣＤ２８細胞外ドメインまたはそのフラグメントで免疫化すること、および免疫化された生物から抗体を収集することを含む。いくつかの実施形態では、生物はマウスである。いくつかの実施形態では、生物は、ウサギ、マウス、ラット、サメ、ラクダ科動物、ニワトリ、ヤギおよびファージから選択される。いくつかの実施形態では、ラクダ科動物は、ラクダおよびラマから選択される。いくつかの実施形態では、回収することは、血液を採取することを含む。いくつかの実施形態では、回収することは、
ａ．免疫された生物の脾臓からＢ細胞を抽出すること；
ｂ．抽出されたＢ細胞をミエローマ細胞と融合させてハイブリドーマを作製すること；および
ｃ．ハイブリドーマから抗体を回収すること、を含む。
ａ．免疫された生物の脾臓からＢ細胞を抽出すること；
ｂ．抽出されたＢ細胞をミエローマ細胞と融合させてハイブリドーマを作製すること；および
ｃ．ハイブリドーマから抗体を回収すること、を含む。
【0348】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂを得ることは、ＣＤ２８細胞外ドメインまたはそのフラグメントへの結合についてｓｄＡｂのライブラリーをスクリーニングし、そのように結合するｓｄＡｂを選択することを含む。いくつかの実施形態では、薬剤を得ることは、ＣＤ２８細胞外ドメインまたはそのフラグメントへの結合について薬剤のライブラリーをスクリーニングし、そのように結合する薬剤を選択することを含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂを得ることは、ＣＤ２８細胞外ドメインまたはそのフラグメントへの結合についてｓｄＡｂのライブラリーをスクリーニングし、そのように結合するｓｄＡｂを選択することを含む。いくつかの実施形態では、ライブラリーはファージディスプレイライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーは脾臓Ｂ細胞に由来する免疫化ライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーはＶＨＨ抗体のライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーは単一ドメインまたはナノボディのライブラリーである。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂを得ることは、ｓｄＡｂを配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂを得ることは、ｓｄＡｂの組換え形態を作製することを含む。いくつかの実施形態では、組換え形態は、ｓｄＡｂの配列から作製される。いくつかの実施形態では、方法は、ｓｄＡｂをヒト化することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂを得ることは、ｓｄＡｂを配列決定することを含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂを得ることは、ｓｄＡｂの組換え形態を作製することを含む。いくつかの実施形態では、組換え形態は、ｓｄＡｂの配列から作製される。いくつかの実施形態では、方法は、ｓｄＡｂをヒト化することをさらに含む。
【0349】
いくつかの実施形態では、本方法は、ｍＣＤ２８への薬剤またはｓｄＡｂの結合を試験することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｍＣＤ２８は細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、方法は、ｍＣＤ２８に結合するｓｄＡｂまたは薬剤を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、プロテアーゼの存在下で細胞表面上のｍＣＤ２８の切断を試験することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、プロテアーゼによるｍＣＤ２８の切断を遮断または阻害する薬剤またはｓｄＡｂを選択することをさらに含む。
【0350】
いくつかの実施形態では、ある部分はｓｄＡｂのコピーである。いくつかの実施形態では、その部分は、単一コピーである。いくつかの実施形態では、その部分は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態では、その部分は、本発明のｓｄＡｂである。
【0351】
いくつかの実施形態では、方法は、得られた二量体剤の存在下でｍＣＤ２８下流シグナル伝達をアッセイすることをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ｍＣＤ２８シグナル伝達を実質的にアゴナイズしない少なくとも１つの二量体剤を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ｍＣＤ２８シグナル伝達に実質的に拮抗しない少なくとも１つの二量体剤を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ｍＣＤ２８シグナル伝達に拮抗する少なくとも１つの二量体剤を選択することを含む。癌治療の場合、ＣＤ２８シグナル伝達をアゴナイズすることは有害ではないかもしれないが、シグナル伝達に拮抗することは非効果的であることが当業者によって理解されるであろう。自己免疫疾患または他の状態を治療するためには、免疫抑制拮抗作用から利益を得ることは有利であり、ＣＤ２８シグナル伝達をアゴナイズすることは逆効果であることがさらに理解されよう。アゴニズムおよび拮抗作用を測定する方法は当技術分野で周知であり、さらに以下に提供される。
【0352】
別の態様によって、本発明の方法によって製造される二量体剤が提供される。
【0353】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、値と組み合わせた場合、基準値の±１０％を指す。例えば、約１０００ナノメートル（ｎｍ）の長さは、１０００ｎｍ±１００ｎｍの長さを指す。
【0354】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ポリヌクレオチド」への言及は、複数のそのようなポリヌクレオチドを含み、「ポリペプチド」への言及は、当業者に公知の１つまたは複数のポリペプチドおよびその等価物などへの言及を含む。特許請求は、任意の要素を除外するように起草され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の要素の列挙に関連して「専ら」、「のみ」などのような排他的な用語を使用するための、または「否定的」限定を使用するための先行詞としての役割を果たすことを意図している。
【0355】
「Ａ、Ｂ、およびＣなどのうちの少なくとも１つ」に類似した慣例が使用される場合、一般に、そのような構成は、当業者が慣例を理解するであろうという意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣのうちの少なくとも１つを有するシステム」は、これらに限定されないが、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢとを一緒に、ＡとＣとを一緒に、ＢとＣとを一緒に、および／またはＡとＢとＣとを一緒に有するシステムなどを含む）。２つ以上の代替的な用語を提示する実質的に任意の選言的な単語および／または句は、明細書、特許請求の範囲、または図面のいずれかにかかわらず、用語の１つ、用語のいずれか、または両方の用語を含む可能性を考慮すると理解されるべきであることが当業者によってさらに理解されるであろう。例えば、「ＡまたはＢ」という語句は、「Ａ」または「Ｂ」または「ＡおよびＢ」の可能性を含むと理解される。
【0356】
明確にするために別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で説明されている本発明の様々な特徴は、別個にまたは任意の適切な部分的組み合わせで提供されてもよい。本発明に関連する実施形態のすべての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、あたかもそれぞれおよびすべての組み合わせが個別に明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。さらに、様々な実施形態およびその要素のすべての部分的組み合わせもまた、本発明によって具体的に包含され、あたかもそのような部分的組み合わせのそれぞれおよびすべてが個別に明示的に本明細書に開示されているかのように本明細書に開示される。
【0357】
本発明のさらなる目的、利点、および新規な特徴は、限定することを意図するものではない以下の実施例を検討することによって当業者に明らかになるであろう。さらに、本明細書で上に描写され、以下の特許請求の範囲の項で請求される本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、以下の実施例において実験的裏付けを見出す。
【0358】
本明細書で上に描写され、以下の特許請求の範囲の項で請求される本発明の様々な実施形態および態様は、以下の実施例において実験的裏付けを見出す。
【実施例】
【0359】
一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される実験室手順には、分子、生化学、微生物学および組換えＤＮＡ技術が含まれる。そのような技術は文献で十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．，ｅｄ．（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」 Ｖｏｌｓ．１－４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号、４，６８３，２０２号、４，８０１，５３１号、５，１９２，６５９号および５，２７２，０５７号に示される方法論；「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙによる「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ（ｅｄｓ），「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたい（これらの全ては参照により組み込まれる）。他の一般的な参考文献がこの文書全体にわたって提供される。
【0360】
材料および方法
組換え２Ａ１構築物の作製－合成コドン最適化遺伝子を、関連するｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターにサブクローニングした。一過性トランスフェクトＥｘｐｉＣＨＯ細胞から２Ａ１構築物を作製し、タンデム構築物については固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、ＦｃキメラについてはＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ、またはｄｉ－ＶＨＨ２ ２Ａ１構築物についてはＡｍｓｐｈｅｒｅ Ａ３によって精製した。１×ＰＢＳ ｐＨ７．４中のタンパク質調製物を、非還元条件下での正確な鎖の存在についてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、調製物内の単量体形態の定量について分析サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって分析した。
組換え２Ａ１構築物の作製－合成コドン最適化遺伝子を、関連するｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターにサブクローニングした。一過性トランスフェクトＥｘｐｉＣＨＯ細胞から２Ａ１構築物を作製し、タンデム構築物については固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、ＦｃキメラについてはＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ、またはｄｉ－ＶＨＨ２ ２Ａ１構築物についてはＡｍｓｐｈｅｒｅ Ａ３によって精製した。１×ＰＢＳ ｐＨ７．４中のタンパク質調製物を、非還元条件下での正確な鎖の存在についてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、調製物内の単量体形態の定量について分析サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって分析した。
【0361】
組換えナノボディの作製－合成コドン最適化遺伝子を、関連するｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターにサブクローニングした。一過性トランスフェクトＥｘｐｉＣＨＯ細胞からナノボディ構築物を作製し、タンデム構築物については固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、ＦｃキメラについてはＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａによって精製した。１×ＰＢＳ ｐＨ７．４中のタンパク質調製物を、非還元条件下での正確な鎖の存在についてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、調製物内の単量体形態の定量について分析サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって分析した。
【0362】
親２Ａ１分子の化学修飾－Ｃ末端システインを有する２Ａ１構築物（２Ａ１－１Ｃ）を、Ｂｉｓ－Ｍａｌ－ＰＥＧ１１化学部分（Ｂｒｏａｄｐｈａｒｍ、カタログ番号ＢＰ－２２１５１）とインキュベートした。トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号第７５２５９号）を反応前に添加して、二量体内容物を分解した。反応の完了後、混合物をＳＰカチオン交換カラムに充填して、過剰の試薬および未反応物質を除去した。Ｖｉｖａ－スピン濃縮器を使用して調製物をＰＢＳ脱塩し、コンジュゲーション検証のために質量分析によって分析した。
【0363】
サイトカインＥＬＩＳＡ－市販のＥＬＩＳＡキットを、ヒトインターフェロンガンマ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４３０１０３）、ヒトインターロイキン２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４３１８０２）およびヒトＣＤ２８（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号ＤＹ３４２）の量の定量に使用した。細胞増殖および生存率（ＭＴＴアッセイ）を、結果の妥当性を保証するために実施し、製造者の説明書（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号１１４６５００７００１）に従って実施した。
【0364】
直接ＣＤ２８ ＥＩＡ－特に明記しない限り、Ｃｏｒｎｉｎｇ高結合プレートまたは同等物をスクリーニングに使用した。各ウェルを３００ｎｇのヒトＣＤ２８－Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号３４２－ＣＤ）でコーティングした。プレートを、ＰＢＳ中の１％カゼインを使用して、室温（ＲＴ）で１時間ブロッキング処理した。プレートをＰＢＳＴを使用して４回洗浄し、Ｆｃキメラについてロバ抗ヒトＩｇＧ ＦＣ ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号７０９－０３５－０９８）で、タンデム二量体ＶＨＨヒンジ構築物についてＨＲＰコンジュゲートウサギ抗ラクダＶＨＨカクテル（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ａ０２０１６）で、またはマウス抗ヒトＩｇＧ４ ｐＦｃ’ ＨＲＰ（ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９９８１７）により検出した後に、調査したナノボディ／薬剤とインキュベートした。
【0365】
細胞株およびヒト免疫細胞の単離－ＰＢＭＣを、標準的なリンパ球分離培地（ＭＢＰ、カタログ番号８５０４９４）を使用して健康なドナーの新鮮な血液試料から単離した。健康なドナーの新鮮血液試料から、ＲｏｓｓｅｔｔｅＳＥＰ（商標）ヒトＴ細胞濃縮キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ、カタログ番号１５０６１）を用いてネガティブセレクション法によりＣＤ３細胞を単離した。健康なドナーの新鮮血液試料から、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒト単球濃縮キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ、カタログ番号１７９５２）を用いてネガティブセレクション法により単球を単離した。すべての細胞を、１０％ ＨＩ－ＦＣＳおよびｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ混合物を補充した完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で増殖させた。
【0366】
トランスフェクション－ＣＤ２８－ＦＬ（完全長ＣＤ２８転写物をコードする）、ＣＤ８０－ＦＬ（完全長ＣＤ８０転写物をコードする）およびｓｃＯＫＴ３－ＣＤ１４（ＣＤ１４細胞外ドメインに融合したマウス抗ＣＤ３ ＯＫＴ３クローンの単鎖ＦＶ部分をコードする）プラスミドを、ＤＮＡ配列をＰＣＤＮＡ３．１ベクターにクローニングすることによって作製した。ＪｅｔＰｅｉトランスフェクション試薬（ＰｏｌｙＰｌｕｓ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｓ）を使用してトランスフェクションを行った。Ｇ４１８および／またはヒグロマイシン含有培地中で安定なトランスフェクタントを選択した。
【0367】
樹状細胞分化－単球を、３日目および６日目に更新された増殖因子を含むＲＰＭＩ培地中、１×１０＾６／ｍＬの密度で培養した。未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）を、５０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２１５－ＧＭ）および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２０４－ＩＬ）によって６日間誘導した。必要に応じて、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｌ４３９１）および２０ｎｇ／ｍＬのインターフェロン－ガンマ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２８５－ＩＦ）を４８時間添加することによって、ｉＤＣを成熟樹状細胞にさらに分化させた。生成された細胞集団を、関連マーカーのＦＡＣＳ分析および特徴的なサイトカインの分泌の分析によって、示された表現型について試験した。
【0368】
可溶性ＣＤ２８を生成するためのＰＢＭＣのＳＥＢ活性化－０．１×１０＾６のＰＢＭＣを、９６ウェルプレート中、示された濃度の様々な処理およびプロテアーゼ阻害剤あり／なしで、１０～５０ｎｇ／ｍＬのＳＥＢ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｓ４８８１）で７日間、３７°Ｃで刺激した。アッセイは、ＦＣＳおよびｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ混合物を補充した完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で行った。使用されるプロテアーゼ阻害剤は、ＴＭＩ－１（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＰＺ０３３６）である。ＣＤ２８シェディングの阻害が示されている場合、以下の式：１００－（ｓＣＤ２８３μＭ／ｓＣＤ２８ｂａｓａｌ＊１００）を使用して計算されている。
【0369】
同種異系混合リンパ球反応－示された濃度での処理の有無にかかわらず、０．１×１０＾６のＴ細胞を、異なるドナー由来の０．２×１０＾４の成熟樹状細胞と３７°Ｃで２４～９６時間混合した。アッセイは、１０％ ＦＣＳおよびｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ混合物を補充した完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で行った。記載されている場合、ＶＨＨ＃３Ｃ０４（ヒトＨＥＲ２に対して増殖させた）を「無関係な対照」として使用し、ＶＨＨ＃１２Ｂ０９を、ＣＤ２８アンタゴニスト効果を有するナノボディについての「陽性対照」として使用した。
【0370】
ＨＥＫ／ＣＤ８０／ｓｃＯＫＴ３人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ－ＣＤ８０）でのＴ細胞刺激－１×１０＾５の単離ＣＤ３ Ｔ細胞（健康なドナー由来）を、０．５×１０＾４のマイトマイシン処理ａＡＰＣ－ＣＤ８０（ＣＤ８０およびｓｃＯＫＴ３－ＣＤ１４キメラプラスミドで安定にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞）で３７°Ｃにて２４～７２時間刺激した。ＣＤ２８を標的とするＶＨＨまたは対照の処理を、可溶性形態で示される濃度で加えた。記載されている場合、ＶＨＨ＃３Ｃ０４（ヒトＨＥＲ２に対して増殖させた）を「無関係な対照」として使用し、ＶＨＨ＃１２Ｂ０９を、ＣＤ２８アンタゴニスト効果を有するナノボディについての「陽性対照」として使用した。アッセイは、１０％ ＦＣＳおよびｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ混合物を補充した完全ＲＰＭＩ－１６４０培地で行った。
【0371】
ＣＤ８６を遮断するＦＡＣＳ－ヒトＣＤ２８で安定にトランスフェクトした０．２５×１０＾６のＨＥＫ２９３細胞を、２μｇ／ｍｌビオチン化ＣＤ８６－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１４１－Ｂ２）と共に、抗ＣＤ２８シェディングクローン＃２Ａ１を用いずに、または様々なフォーマットで３μＭの固定濃度で用いて室温で３０分間インキュベートした。細胞を、フルオロフォアにコンジュゲートしたストレプトアビジン（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号０１６－１３０－０８４）を１：５００希釈で氷上で２０分間用いて、二次結合のために洗浄および採取した。インキュベーションは、９６ウェルＵ底プレート中１００μＬの体積で行った。細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、分析のために１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液のＦＡＣＳチューブに移した。細胞を、Ｇａｌｌｉｏｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ用のＫａｌｕｚａを使用して、Ｇａｌｌｉｏｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。
【0372】
ＣＤ３細胞上のフローサイトメトリー－健康なドナー由来の２．５×１０５のＣＤ３細胞を、記載された濃度の示される構築物あり／なしで３７°Ｃで３０分間インキュベートした。インキュベーションは、９６ウェルＵ底プレート中１００μＬの体積で行った。細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（０．０５％ ＢＳＡを含むＰＢＳ）で２回洗浄した。試験した構築物の細胞への結合を、Ｎａｎｏ－Ｓｅｃｏｎｄａｒｙアルパカ抗ヒトＩｇＧ組換えＶＨＨ Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ６４７抗体（Ｃｈｒｏｍｏｔｅｋ、カタログ番号ｓｒｂＡＦ６４７－１）とのインキュベーション（氷上で３０分）によって評価した。インキュベーションは、製造業者が推奨する濃度を適用して１００μＬの体積で暗所で行った。インキュベーション後、細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、ＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。
【0373】
ＭＣ－３８シンジェニック腫瘍モデル－ＭＣ３８腫瘍細胞をＤＭＥＭ中で培養し、ヒト化ＣＤ２８トランスジェニックＣ５７／Ｂｌ６マウス（ｇｅｎＯｗａｙ）（ｎ＝１０の５つの群）に皮下移植した（０．５×１０＾６細胞）。接種の６日後、各群のマウスを抗ＰＤ１（ＲＭＰ１－１４）で、シェディング遮断剤有り／無しで週に２回（２００μｇ／マウス）、合計６回の注射で処置した。予防モデルを設定するために、ＭＣ－３８接種前にマウスの１つの群にシェディング遮断薬も注射した（２００μｇ／マウス、２回）。アイソタイプ対照として、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂヒトＩｇＧ４（ＢＥ０３４９－ＢｉｏＸｃｅｌｌ）またはラットＩｇＧ２ａ（２Ａ３）を使用した。腫瘍体積を、較正されたキャリパーによって週に３回測定した。
【0374】
ＶＨＨ親和性成熟－親モノクローナル抗ＣＤ２８ ＶＨＨ＃２Ａ０１ラマ抗体を親和性成熟させるために、相補性決定領域（ＣＤＲ）残基を、三量体／プライマーミックスを使用する合理的突然変異誘発によってランダム化した。ライブラリー設計は、代表するアミノ酸のヒトおよびラマの自然多様性に基づいた（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｎａｉｖｅ Ｆａｂ ｌｉｂｒａｒｙ」、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌｓ，２０１７，４０（９）：６５５－６６６；Ｚｅｍｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｍｕｒｉｎｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ＣＤＲ－Ｈ３ ｉｎｔｅｒｖａｌｓ ｏｆ ｅｑｕａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｅｘｈｉｂｉｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒ ｉｎ ｔｈｅｉｒ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００３，３３４：７３３－７４９；およびＴｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ａ ｆｕｌｌｙ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｈｕｍａｎ Ｆａｂ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｉｂｒａｒｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｆｉｘｅｄ ＶＨ／ＶＬ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｐａｉｒｉｎｇｓ ｗｉｔｈ ｆａｖｏｒａｂｌｅ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ」、ｍＡｂｓ ２０１３５：４４５－４７０、これらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。多数の重複オリゴヌクレオチドを使用してＰＣＲ遺伝子アセンブリプロトコルを実施して、ＣＤＲ多様性を導入した。ＰＣＲ産物をｐＤＣＬ１ファージミドにクローニングして、それぞれ８．０Ｅ＋７～１．０Ｅ＋０９の最終サイズを有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ１＋ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関する変異を含む、４つの異なるファージライブラリーを作製した。ライブラリーを配列決定によってＱＣｅした。親和性成熟バリアントについてスクリーニングして、溶液選択を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＴ１磁気ビーズ上に捕捉されたビオチン化組換えヒトＣＤ２８－ＦｃまたはヒトＣＤ２８ストーク領域二量体ペプチドに対して行った。選択の４サイクルを、抗原濃度を減少させ、かつ溶液中の遊離抗原を増加させて実施して、オフレートキネティクスが改善されたバリアントを達成した。バックグラウンドを減少させるために、ヒトＩｇＧによる対抗選択を行った。濃縮されたＣＤＲ１－３バリアントを、配列決定、ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡにおける抗原結合、およびＣＤ２８シェディング遮断活性における効率によって検証した。ＣＤＲ１～３の特定の位置における有益な残基変異を採取し、互いにランダム化して、コンビナトリアルライブラリーのリードパネルを作成した。コンビナトリアルライブラリーを、厳密性を高めながらヒト抗原に対する４サイクルの溶液中選択に供した。２０個のバリアントを単離し、ＣＤ２８免疫調節およびＣＤ２８シェディング遮断活性について詳細に特徴付けた。６つの最上位性能クローンを親和性決定のためにさらに特徴付け、Ｆｃキメラとして作製した。
【0375】
ＶＨＨヒト化－ＶＨＨクローンのタンパク質モデルを分析して、抗体の立体配座および結合に重要な残基を同定する。ＭＨＣクラスＩＩ結合を評価するためのインシリコツール、およびエクスビボＴ細胞免疫原性アッセイを使用して以前にスクリーニングされた抗体セグメントを含むデータベースと共にこの情報を使用して、Ｔ細胞エピトープが回避されることを目的として、一連のヒト化重鎖ＶＨＨ領域配列をヒトＶ領域配列のセグメントから設計する。
【0376】
Ｂｉａｃｏｒｅ－ＶＨＨ＃２Ａ０１親和性成熟ライブラリーに由来する親和性クローンを、ＣＭ５ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップに固定化したＣＤ２８－Ｆｃを使用して決定した。２００ｎＭから１２．５ｎＭまでの分析物（ＶＨＨクローン）の５段階希釈を使用して、多サイクルキネティクス測定を行った。動態学的パラメータおよび親和性値は、二重（ブランクチャネルおよびブランク試料）減算を導入することによって、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ ２００ Ｅ評価ソフトウェア３．１の１：１結合モデルを使用して計算した。
【0377】
実施例１：単一ドメイン抗体の親和性成熟
３つの単一ドメインＶＨＨ抗体は、ＣＤ２８細胞外ドメインのストークドメインに対して以前に生成され、細胞の表面からの膜ＣＤ２８の切断を阻止するのに有効であることが見出された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ／ＩＬ２０２０／０５０２９７を参照されたい）。３つすべてのＶＨＨは、ＣＤ２８シグナル伝達に実質的にアゴナイズせず、実質的に拮抗もしないことが見出された。ＶＨＨ ２Ａ１は、最も高度に研究され、最も効果的な分子であるので、相補性決定領域（ＣＤＲ）の親和性成熟のために選択された。
３つの単一ドメインＶＨＨ抗体は、ＣＤ２８細胞外ドメインのストークドメインに対して以前に生成され、細胞の表面からの膜ＣＤ２８の切断を阻止するのに有効であることが見出された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ／ＩＬ２０２０／０５０２９７を参照されたい）。３つすべてのＶＨＨは、ＣＤ２８シグナル伝達に実質的にアゴナイズせず、実質的に拮抗もしないことが見出された。ＶＨＨ ２Ａ１は、最も高度に研究され、最も効果的な分子であるので、相補性決定領域（ＣＤＲ）の親和性成熟のために選択された。
【0378】
２Ａ１の完全な配列は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＱＲＥＬＶＡＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＶＶＤＬＹＧＳＤＹＷＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４０）である。これには、ＩＮＡＭＧ（配列番号４）のＣＤＲ１、ＡＩＳＧＧＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）のＣＤＲ２およびＤＬＹＧＳＤＹＷＤ（配列番号３）のＣＤＲ３が含まれる。
【0379】
親ＶＨＨ＃２Ａ１ラマ抗体を親和性成熟させるために、ＣＤＲ残基を、三量体／プライマーミックスを使用する合理的突然変異誘発によってランダム化した。ライブラリー設計は、代表されるアミノ酸のヒトおよびラマの自然多様性に基づいていた。多数の重複オリゴヌクレオチドを使用してＰＣＲ遺伝子アセンブリプロトコルを実施して、ＣＤＲ多様性を導入した。ＰＣＲ産物をｐＤＣＬ１ファージミドにクローニングして、それぞれ８．０Ｅ＋７～１．０Ｅ＋０９の最終サイズを有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ１＋ＣＤＲ２およびＣＤＲ３における変異を含む、４つの異なるファージライブラリーを作製した。ライブラリーを配列決定によって品質管理した。親和性成熟バリアントの溶液中選択のためのスクリーニングを、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＴ１磁気ビーズ上に捕捉されたビオチン化組換えヒトＣＤ２８－ＦｃまたはヒトＣＤ２８ストーク領域二量体ペプチドに対して行った。選択の４サイクルを、ビーズ上の抗原濃度を減少させ、かつ溶液中の遊離抗原を増加させて実施して、オフレートキネティクスが改善されたバリアントを達成した。バックグラウンドを減少させるために、ヒトＩｇＧによる対抗選択を行った。濃縮されたＣＤＲ１－３バリアントを、配列決定、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡにおける抗原結合、およびＣＤ２８シェディング遮断活性における効率によって検証した。ＣＤＲ１～３の特定の位置における有益な残基変異を採取し、互いにランダム化して、コンビナトリアルライブラリーのリードパネルを作成した。コンビナトリアルライブラリーを、厳密性を高めながらヒト抗原に対する４サイクルの溶液中選択に供した。作製したバリアントの配列を表１に示し、各バリアントのＣＤＲを表２に示し、９つのＶＨＨクローンのうち７つの親和定数を表３に要約する。
【0380】
【表1】
【0381】
【表2】
【0382】
【表3】
【0383】
３つの親和性成熟バリアントを１回目の突然変異誘発から選択し、１つはそれぞれＣＤＲ１＋ＣＤＲ２変異を有し（５Ａ３）、２つはＣＤＲ３変異を有する（６Ｂ３および６Ｂ１０）。コンビナトリアルライブラリーから２０個のバリアントを単離し、ＣＤ２８免疫調節およびＣＤ２８シェディング遮断活性について詳細に特徴付けた。ＣＤ２８結合およびＣＤ２８シェディングの遮断に基づく６つの最良の候補を選択した。６つすべてが、遮断に関して親ＶＨＨよりも優れていることが分かった（図１、２つの代表的なバリアント、５Ａ３および６Ｂ１０を示す）。しかしながら、下流のシグナル伝達を混合リンパ球反応（ＭＬＲ）で試験した場合、親和性成熟ＶＨＨは、特に高濃度で強い拮抗効果をもたらし、炎症促進性サイトカイン分泌を減少させた（図２、２つの代表的なバリアント、５Ａ３および６Ｂ１０を示す）。
【0384】
切断の遮断は、免疫阻害性の可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）のレベルを低下させ、したがって免疫細胞活性化を増加させる。しかしながら、切断遮断剤が活性化リガンド（例えば、ＣＤ８６、ＣＤ８０）へのＣＤ２８の結合も阻害する場合、この拮抗効果は逆の結果をもたらし、免疫細胞活性化を阻害する。したがって、拮抗効果をもたらしたこれらの分子は、免疫刺激には有用でないかもしれないが、自己免疫疾患などの免疫過剰活性化の状態では使用され得る。
【0385】
実施例２：二量体結合剤はＣＤ２８拮抗効果を低下させる
驚くべきことに、二量体結合剤内に単量体ｓｄＡｂを含めると、それらの結合効率を高めるだけでなく、拮抗効果も低下させることができることが発見された。したがって、親和性成熟バリアントをＦｃキメラ分子に含め、ＣＤ２８シグナル伝達に対する効果についてアッセイした。
驚くべきことに、二量体結合剤内に単量体ｓｄＡｂを含めると、それらの結合効率を高めるだけでなく、拮抗効果も低下させることができることが発見された。したがって、親和性成熟バリアントをＦｃキメラ分子に含め、ＣＤ２８シグナル伝達に対する効果についてアッセイした。
【0386】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ鎖（配列番号３９、エフェクター機能が低下したＦｃ）の上流にｓｄＡｂをクローニングすることによって、Ｆｃキメラ分子を生成した。可撓性アミノ酸リンカー（１５アミノ酸ＧＧＧＧＳリンカー；簡潔さのために、ＧＧＧＧＳ反復リンカーは、以下、ＧＳリンカーと呼ばれる）を、ＦｃのｓｄＡｂのＣ末端とＮ末端との間に挿入した。これらの二量体剤をＭＬＲ実験で試験した。驚くべきことに、Ｆｃドメインを含めると、単量体ｓｄＡｂで見られた拮抗効果が消滅した（図３、２つの代表的なバリアント、５Ａ３および６Ｂ１０を示す）。したがって、これらの二量体剤は、ｓＣＤ２８産生を減少させ、膜ＣＤ２８（ｍＣＤ２８）活性化を妨害しないので、非常に有効な免疫刺激剤である。
【0387】
実施例３：親和性成熟クローン１２Ａ０９－Ｆｃおよび９Ｂ０３－ＦｃはｍＣＤ２８切断を阻害する
次に、Ｆｃに融合した親和性成熟クローンのＣＤ２８に結合する能力を試験した。１２Ａ９および９Ｂ３クローンをヒトＩｇＧ４のＦｃ鎖の上流にクローニングした。ＩｇＧ４は、一般に非細胞傷害性Ｆｃであるので選択された。細胞傷害性をさらに低下させ、安定性を増強／凝集を減少させるために、ＩｇＧ４鎖に２点変異（Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ）を生成した。２５アミノ酸リンカー（ＧＧＧＧＳｘ５）をＶＨＨとＦｃとの間に挿入した。これらの２つの分子のＣＤ２８への結合を、親ＶＨＨ構築物の結合と比較した。予想されるように、２つの親和性成熟ＶＨＨを含む構築物は、溶液中（図４Ａ）および細胞表面上（図４Ｂ）において著しくより良好にＣＤ２８に結合した。
次に、Ｆｃに融合した親和性成熟クローンのＣＤ２８に結合する能力を試験した。１２Ａ９および９Ｂ３クローンをヒトＩｇＧ４のＦｃ鎖の上流にクローニングした。ＩｇＧ４は、一般に非細胞傷害性Ｆｃであるので選択された。細胞傷害性をさらに低下させ、安定性を増強／凝集を減少させるために、ＩｇＧ４鎖に２点変異（Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ）を生成した。２５アミノ酸リンカー（ＧＧＧＧＳｘ５）をＶＨＨとＦｃとの間に挿入した。これらの２つの分子のＣＤ２８への結合を、親ＶＨＨ構築物の結合と比較した。予想されるように、２つの親和性成熟ＶＨＨを含む構築物は、溶液中（図４Ａ）および細胞表面上（図４Ｂ）において著しくより良好にＣＤ２８に結合した。
【0388】
細胞表面のｍＣＤ２８に実際に結合し、切断を遮断する二量体融合タンパク質の能力を試験した。ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を活性化し、ＣＤ２８切断およびｓＣＤ２８シェディングを誘導する。親ＶＨＨ（２Ａ１、濃度１００ｎｍ）を含む二量体分子の添加は、ｓＣＤ２８産生を減少させ、真の表面結合および切断の遮断を示す（図５Ａ～図５Ｂ）。１２Ａ９－２５ＧＳ－ｈＩｇＧ４（図５Ａ）および９Ｂ３－２５ＧＳ－ｈＩｇＧ４（図５Ｂ）の両方が親分子に勝り、用量依存的にＣＤ２８切断の強力な阻害をもたらした。
【0389】
実施例４：二量体結合剤は反発的ではない
二量体結合剤が単量体ＶＨＨよりも高い親和性でＣＤ２８に結合し、改善されたＣＤ２８切断遮断をもたらし、ＣＤ２８に対して拮抗作用をもたらさないことを確認して、これらの薬剤が反発的に作用する可能性を試験した。単離されたヒトＣＤ３細胞を、ｓｃＯＫＴ３（抗ＣＤ３）を過剰発現するＡ３７５細胞株の細胞で２日間刺激した。この刺激は、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体、陽性対照としての役割を果たすクローン２８．２、陰性対照としての役割を果たす無関係のヒトＩｇＧ５、またはＦｃキメラ親和性成熟クローンＶＨＨ（２５アミノ酸リンカー）の存在下で行った。上清中に分泌されたヒトＩＬ－２の濃度を、標準化サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて定量した。予想通り、クローン２８．２は強力なＩＬ－２分泌をもたらしたが、Ｆｃキメラは有意な反発的効果を示さなかった（図６Ａ～６Ｂ、クローン１２Ａ９および９Ｂ３を示す）。
二量体結合剤が単量体ＶＨＨよりも高い親和性でＣＤ２８に結合し、改善されたＣＤ２８切断遮断をもたらし、ＣＤ２８に対して拮抗作用をもたらさないことを確認して、これらの薬剤が反発的に作用する可能性を試験した。単離されたヒトＣＤ３細胞を、ｓｃＯＫＴ３（抗ＣＤ３）を過剰発現するＡ３７５細胞株の細胞で２日間刺激した。この刺激は、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体、陽性対照としての役割を果たすクローン２８．２、陰性対照としての役割を果たす無関係のヒトＩｇＧ５、またはＦｃキメラ親和性成熟クローンＶＨＨ（２５アミノ酸リンカー）の存在下で行った。上清中に分泌されたヒトＩＬ－２の濃度を、標準化サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて定量した。予想通り、クローン２８．２は強力なＩＬ－２分泌をもたらしたが、Ｆｃキメラは有意な反発的効果を示さなかった（図６Ａ～６Ｂ、クローン１２Ａ９および９Ｂ３を示す）。
【0390】
実施例５：リンカー長の検査
１５アミノ酸ＧＧＧＧＳリンカーおよび２５アミノ酸ＧＧＧＧＳリンカー（本明細書全体を通してＧＳリンカーと呼ぶ）の両方が有効な切断遮断をもたらしたので、リンカーの最適サイズを調査した。ＶＨＨ１２Ａ９のＦｃキメラバリアントを、ＦｃモジュールとＶＨＨモジュールとの間で異なる長さの可撓性リンカーを用いて作製した。１０アミノ酸～３５のリンカーを調査した。ＳＥＢ活性化ＰＢＭＣを再度使用して、細胞表面からのＣＤ２８切断を測定した。キメラ分子を２つの異なる濃度（１００ｎＭおよび３００ｎＭ）でＰＢＭＣに導入し、ｓＣＤ２８レベルを測定した。両方の濃度で、リンカーの長さが増すほどシェディング阻害のレベルが向上し、２５アミノ酸以上のリンカーが９０％を超えるシェディング阻害をもたらすことが明らかに観察された（図７）。３５アミノ酸リンカーで最大のシェディング阻害が達成されたので、さらに長いリンカーを使用する理由はない。
１５アミノ酸ＧＧＧＧＳリンカーおよび２５アミノ酸ＧＧＧＧＳリンカー（本明細書全体を通してＧＳリンカーと呼ぶ）の両方が有効な切断遮断をもたらしたので、リンカーの最適サイズを調査した。ＶＨＨ１２Ａ９のＦｃキメラバリアントを、ＦｃモジュールとＶＨＨモジュールとの間で異なる長さの可撓性リンカーを用いて作製した。１０アミノ酸～３５のリンカーを調査した。ＳＥＢ活性化ＰＢＭＣを再度使用して、細胞表面からのＣＤ２８切断を測定した。キメラ分子を２つの異なる濃度（１００ｎＭおよび３００ｎＭ）でＰＢＭＣに導入し、ｓＣＤ２８レベルを測定した。両方の濃度で、リンカーの長さが増すほどシェディング阻害のレベルが向上し、２５アミノ酸以上のリンカーが９０％を超えるシェディング阻害をもたらすことが明らかに観察された（図７）。３５アミノ酸リンカーで最大のシェディング阻害が達成されたので、さらに長いリンカーを使用する理由はない。
【0391】
実施例６：インビボ検査
これらの二量体ＶＨＨ構築物の治療可能性を、ＭＣ３８腫瘍細胞をヒト化ＣＤ２８トランスジェニックマウスに皮下移植した、ＭＣ－３８シンジェニックモデルにおいてインビボでさらに調べた。移植６日後に開始した抗ＰＤ１（ＲＭＰ１－１４）処置は、対応するアイソタイプ対照（ｒＧ２ａはＰＤ－１抗体のラットアイソタイプ対照である）と比較して腫瘍成長の速度を遅らせた（図８Ａ～図８Ｂ）。驚くべきことに、抗ＰＤ１処置と組み合わせた、癌細胞の移植の５日前の１２Ａ９－２５ＧＳ－ｈＩｇＧ４による予防的処置は、癌成長の完全な予防につながった（図８Ａ）。全ての癌細胞をマウスの免疫系によって死滅させ、さらに３０日目まで癌が検出されなかった。移植後の併用処置（両方とも６日目）は腫瘍成長を有意に遅らせ、抗ＰＤ１のみによる処置よりも優れていた（図８Ｂ）。これらのインビボ結果は、二量体剤がＣＤ２８に対して拮抗効果を有さないことをさらに裏付ける。そのような効果は腫瘍成長をもたらし、収縮／予防をもたらさないからである。したがって、これらの薬剤が細胞表面からのＣＤ２８切断を遮断し、それを、強固な癌治療につながるＣＤ２８機能に拮抗することなく行うことは、完全に明らかである。
これらの二量体ＶＨＨ構築物の治療可能性を、ＭＣ３８腫瘍細胞をヒト化ＣＤ２８トランスジェニックマウスに皮下移植した、ＭＣ－３８シンジェニックモデルにおいてインビボでさらに調べた。移植６日後に開始した抗ＰＤ１（ＲＭＰ１－１４）処置は、対応するアイソタイプ対照（ｒＧ２ａはＰＤ－１抗体のラットアイソタイプ対照である）と比較して腫瘍成長の速度を遅らせた（図８Ａ～図８Ｂ）。驚くべきことに、抗ＰＤ１処置と組み合わせた、癌細胞の移植の５日前の１２Ａ９－２５ＧＳ－ｈＩｇＧ４による予防的処置は、癌成長の完全な予防につながった（図８Ａ）。全ての癌細胞をマウスの免疫系によって死滅させ、さらに３０日目まで癌が検出されなかった。移植後の併用処置（両方とも６日目）は腫瘍成長を有意に遅らせ、抗ＰＤ１のみによる処置よりも優れていた（図８Ｂ）。これらのインビボ結果は、二量体剤がＣＤ２８に対して拮抗効果を有さないことをさらに裏付ける。そのような効果は腫瘍成長をもたらし、収縮／予防をもたらさないからである。したがって、これらの薬剤が細胞表面からのＣＤ２８切断を遮断し、それを、強固な癌治療につながるＣＤ２８機能に拮抗することなく行うことは、完全に明らかである。
【0392】
実施例７：ＶＨＨヒト化
ＶＨＨクローンのうちの２つ、１２Ａ９および９Ｂ３を、ＶＨＨのラクダ科動物バックボーンが除去されるようにさらにヒト化した。この目的のために、重鎖ＶＨＨ領域のタンパク質モデルを分析して、抗体の立体配座および結合に重要な残基を同定した。この情報をインシリコ技術（ツール１：ＭＨＣクラスＩＩ結合の評価、ツール２：エクスビボＴ細胞免疫原性アッセイを使用して以前にスクリーニングされた抗体セグメントを含むデータベース）と共に使用して、Ｔ細胞エピトープが回避されることを目的として、一連のヒト化重鎖ＶＨＨ領域配列をヒトＶ領域配列のセグメントから設計した。５つのクローンを１２Ａ９に、４つのクローンを９Ｂ３に与えた。これらのクローンの配列を表４に示す。
ＶＨＨクローンのうちの２つ、１２Ａ９および９Ｂ３を、ＶＨＨのラクダ科動物バックボーンが除去されるようにさらにヒト化した。この目的のために、重鎖ＶＨＨ領域のタンパク質モデルを分析して、抗体の立体配座および結合に重要な残基を同定した。この情報をインシリコ技術（ツール１：ＭＨＣクラスＩＩ結合の評価、ツール２：エクスビボＴ細胞免疫原性アッセイを使用して以前にスクリーニングされた抗体セグメントを含むデータベース）と共に使用して、Ｔ細胞エピトープが回避されることを目的として、一連のヒト化重鎖ＶＨＨ領域配列をヒトＶ領域配列のセグメントから設計した。５つのクローンを１２Ａ９に、４つのクローンを９Ｂ３に与えた。これらのクローンの配列を表４に示す。
【0393】
【表4】
【0394】
二量体結合剤も、ヒト化ＶＨＨバリアントを用いて製造した。５つの１２Ａ９ヒト化バリアントおよび１つの９Ｂ３ヒト化バリアントを、２５アミノ酸ＧＳ可撓性リンカーを介してヒトＩｇＧ４ Ｆｃに連結した。ヒト化バリアントキメラのヒトＣＤ２８への結合を、以前と同様に直接ＣＤ２８ ＥＩＡを使用して確認した。試験した５つ１２Ａ９ヒト化バリアントおよび試験した１つの９Ｂ３ヒト化バリアントはすべて、少なくともそれらの親（ラクダ科動物）バリアントキメラと同様にＣＤ２８に結合した（図９Ａ～図９Ｂ）。実際、１２Ａ９－ＶＨＨ１８－２５ＧＳ－ｈｕＦｃおよび１２Ａ９－ＶＨＨ４－２５ＧＳ－ｈｕＦｃは両方とも、親１２Ａ９ ＶＨＨキメラよりも測定可能に優れていた。ヒト化バリアントを含む６つの二量体剤および親ＶＨＨを含む薬剤の親和定数を表５に要約する。
【0395】
【表5】
【0396】
細胞表面上のＣＤ２８への結合も以前と同様に評価した。ＣＤ３細胞を、アイソタイプ対照、ヒト化ＶＨＨキメラまたは親ＶＨＨキメラ（３００ｎＭ）の存在下でＦＡＣＳによって分析した。これらの様々な薬剤について測定された平均蛍光強度を表６および７に要約する。ヒト化ＶＨＨキメラのすべてが、親ＶＨＨキメラと少なくとも同程度に良好な結合剤であり、実際に、１２Ａ０９－ＶＨＨ１２－２５ＧＳ－ｈｕＦｃ、１２Ａ０９－ＶＨＨ１６－２５ＧＳ－ｈｕＦｃ（ヒト化）、および１２Ａ０９－ＶＨＨ１７－２５ＧＳ－ｈｕＦｃは、親構築物の３倍の蛍光を生成した。
【0397】
【表6】
【0398】
【表7】
【0399】
ＣＤ２８シェディングを遮断するヒト化バリアントキメラの能力も調べた。ＰＭＢＣを、ヒト化バリアントの存在下で先のようにＳＥＢで刺激した。Ｆｃキメラの試験した５つの１２Ａ９ヒト化バリアントおよび試験した１つの９Ｂ３ヒト化バリアントはすべて、少なくとも親バリアントキメラと同様に、細胞表面からのＣＤ２８シェディングを遮断した（図１０Ａ～図１０Ｂ）。実際、ヒト化バリアントは、特に中間濃度でシェディング遮断をわずかに改善し、１２Ａ９－ＶＨＨ１２、１２Ａ９－ＶＨＨ１６および１２Ａ９－ＶＨＨ１７は、親ＶＨＨを上回る改善を示した（図１０Ａ）。
【0400】
実施例８：二量体単鎖ｓｄＡｂ分子の生成
３つの単一ドメインＶＨＨ抗体は、ＣＤ２８細胞外ドメインのストークドメインに対して以前に生成され、細胞の表面からの膜ＣＤ２８の切断を阻止するのに有効であることが見出された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ／ＩＬ２０２０／０５０２９７を参照されたい）。３つすべてのＶＨＨは、ＣＤ２８シグナル伝達に実質的にアゴナイズせず、実質的に拮抗もしないことが見出された。これらの単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）の配列を表８に提供し、これらのｓｄＡｂのＣＤＲを表９に提供する。
３つの単一ドメインＶＨＨ抗体は、ＣＤ２８細胞外ドメインのストークドメインに対して以前に生成され、細胞の表面からの膜ＣＤ２８の切断を阻止するのに有効であることが見出された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ／ＩＬ２０２０／０５０２９７を参照されたい）。３つすべてのＶＨＨは、ＣＤ２８シグナル伝達に実質的にアゴナイズせず、実質的に拮抗もしないことが見出された。これらの単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）の配列を表８に提供し、これらのｓｄＡｂのＣＤＲを表９に提供する。
【0401】
【表8】
【0402】
【表9】
【0403】
切断を遮断するＶＨＨの特異性および有効性を改善するために、ＶＨＨの２コピーを含む二量体剤を生成することにした。ＶＨＨ ２Ａ１が最も効果的な切断遮断剤であることが判明したので、それを二量体分子に含めるために選択した。
【0404】
第１の２Ａ１のＣ末端がペプチドリンカーを介して第２の２Ａ１のＮ末端に接続されている、単鎖タンデム二量体構築物を最初に生成した。最初に、可撓性（Ｇ４Ｓ）リンカーを試験した。二量体単鎖分子を、１回、２回または４回のリンカー反復で作製した。様々な単鎖分子の配列を表１０に要約する。これらの二量体構築物を、Ｆｃバックボーンに融合した組換えＣＤ２８への結合について試験し、対照としての単量体２Ａ１と比較した。非常に短い５アミノ酸リンカーは、ＣＤ２８に対する親和性を増加させず、単量体２Ａ１と同等であった（図１１Ａ）。対照的に、１０または２０アミノ酸リンカーは、モノマーと比較して結合の増加をもたらした（図１１Ａ）。ＥＣ５０の違いを表１１に要約する。
【0405】
【表10】
【0406】
【表11】
【0407】
切断に対する効果を細胞において直接測定した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を健康なドナーから収集し、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）で刺激して免疫細胞を活性化し、強力なレベルのｓＣＤ２８を産生した。汎メタロプロテアーゼ阻害剤ＴＭＩまたは単量体２Ａ１（３μＭ）の添加は両方ともｓＣＤ２８レベルを大幅に低下させたが、無関係のＶＨＨは効果が無かった（図１１Ｃ－１１Ｅ）。２０ＧＳ構築物は、試験した最低濃度でもＴＭＩ阻害剤および単量体２Ａ１と同程度に強力であり、より高い濃度ではｓＣＤ２８産生をほぼ消失させ、それが単量体よりも強力な切断阻害剤であることを示している（図１１Ｅ）。１０ＧＳ構築物は、最低濃度ではそれほど効果的ではなかったが、濃度を上げると、やはりＣＤ２８切断を本質的に消失させ、依然として単量体よりもかなり優れていた（図１１Ｄ）。結合データに基づいて予想されるように、５ＧＳ構築物は最も効果が低かったが、高濃度では、ＴＭＩ阻害剤および単量体よりわずかに優れていた（図１１Ｃ）。これらの結果は、単鎖二量体分子が、ＶＨＨの単量体形態以上に、ｓＣＤ２８産生の遮断に有効であることを示している。
【0408】
次に、これらの単鎖二量体剤を試験して、それらがＣＤ２８に対して拮抗作用を生じるかどうかを調べた。切断の遮断は、免疫阻害性の可溶性ＣＤ２８（ｓＣＤ２８）のレベルを低下させ、したがって免疫細胞活性化を増加させるであろう。しかしながら、切断遮断剤が活性化リガンド（例えば、ＣＤ８６）へのＣＤ２８の結合も阻害する場合、この拮抗効果は逆の結果をもたらし、免疫細胞活性化を阻害する。ＶＨＨ ２Ａ１は、拮抗効果を生じないことが知られており、ヒトＣＤ２８を過剰発現するＨＥＫ細胞への組換えＣＤ８６の結合を遮断しなかった（図１２Ａ）。予想外にも、１０または２０アミノ酸リンカーを有する単鎖二量体分子は、ＣＤ８６結合を強力に阻害し、結合は７５％超を阻害した（図１２Ａ）。短リンカーは、ＣＤ８６結合を実質的に阻害せず、単量体２Ａ１とほぼ同様に見えた（図１２Ａ）。
【0409】
拮抗効果は、リンカーとＣＤ２８のリガンド結合領域との間の相互作用によって引き起こされると仮定された。この相互作用を回避するために、２つの追加の単鎖二量体剤を作製した。これらの分子では、４つのＧ４Ｓ反復を有する２０アミノ酸長のリンカーは、４つおきのＧが荷電アミノ酸で置換されている。１つの構築物においてリンカーは、リジンアミノ酸で置換されるグリシンアミノ酸で正にされ（２０Ｋ）、他においてリンカーは、グルタミン酸アミノ酸で置換されるグリシンアミノ酸で負にされた（２０Ｅ）。荷電アミノ酸は、ＣＤ２８細胞外ドメインからの静電反発をもたらし、したがって、拮抗効果を無効にすると仮定された。３つ目の新しい単鎖二量体剤も作製したが、可撓性リンカーの代わりに剛性螺旋形リンカーを使用した（Ｈｅｌ２０）。これらの二量体剤の配列を表１０に示す。
【0410】
これらの分子で同じ結合アッセイを繰り返し、２０ＧＳ剤および単量体２Ａ１分子を対照として使用した（図１１Ｂ）。使用されるリンカーの電荷または剛性にかかわらず、全ての長リンカー構築物は同様に挙動し、単量体２Ａ１と比較して優れた標的結合をもたらした。実際、２つの荷電リンカーおよび剛性リンカー構築物は、実際には２０ＧＳ分子よりわずかに優れていた（図１１Ｂ）。これらの構築物のＥＣ５０値を表１２に要約する。新しい薬剤もすべて、予想通りにｓＣＤ２８産生を阻害した（図１１Ｆ－１１Ｈ）。
【0411】
【表12】
【0412】
すべての新しいリンカー分子が依然として切断遮断の増強を実証したので、ＣＤ２８－ＣＤ８６結合に対する拮抗効果について先と同様に試験した。予想されたものとは対照的に、３つの新しいリンカー分子はすべて、堅固なＣＤ８６遮断をもたらし、阻害レベルは可撓性２０アミノ酸リンカーに匹敵した（図１２Ｂ）。これらの結果は、リンカーの構造にかかわらず、Ｃ末端をＮ末端に連結したタンデムＶＨＨを有する単鎖ＶＨＨ二量体に使用されるより長いリンカーは、ＣＤ８６結合の遮断を常にもたらすことを示している。
【0413】
実施例９：単鎖二量体タンデム剤の機能分析
観察されたＣＤ８６遮断の機能的効果をさらに調査した。単離されたＴ細胞を人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ、ＣＤ８０およびｓｃＯＫＴ３を発現するＨＥＫ細胞）で刺激し、ＩＬ－２分泌を測定した。これは、無関係のＶＨＨ、ＣＤ８６結合を遮断することが知られているＶＨＨ、および様々な濃度の単鎖二量体剤の存在下で行った（図１３Ａ～１３Ｆ）。予想通り、遮断結果に基づいて、５ＧＳ剤はＩＬ－２分泌に影響を及ぼさなかった（図１３Ａ）。しかしながら２０ＧＳ構築物は、低濃度（図１３Ｃ）であってもＣＤ８６によって引き起こされるＩＬ－２分泌の誘導をほぼ完全に消失させ、１０ＧＳ構築物は、低濃度でＩＬ－２分泌を約５０％減少させる中間効果をもたらし、高濃度では減少は約８０％まで増加した（図１３Ｂ）。他の３つの２０アミノ酸リンカー構築物もまた、ＩＬ－２分泌の堅固な阻害をもたらしたが（図１３Ｄ～１３Ｆ）、剛性リンカー構築物は、最大阻害が生じるためにより高い濃度を必要とした（図１３Ｆ）。インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）分泌を混合リンパ球反応において測定した場合、同様の結果が観察された（図１３Ｇ－１３Ｉ）。拮抗効果をもたらすこれらの分子は、免疫刺激には有用でないかもしれないが、自己免疫疾患などの免疫過剰活性化の状態では使用され得る。
観察されたＣＤ８６遮断の機能的効果をさらに調査した。単離されたＴ細胞を人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ、ＣＤ８０およびｓｃＯＫＴ３を発現するＨＥＫ細胞）で刺激し、ＩＬ－２分泌を測定した。これは、無関係のＶＨＨ、ＣＤ８６結合を遮断することが知られているＶＨＨ、および様々な濃度の単鎖二量体剤の存在下で行った（図１３Ａ～１３Ｆ）。予想通り、遮断結果に基づいて、５ＧＳ剤はＩＬ－２分泌に影響を及ぼさなかった（図１３Ａ）。しかしながら２０ＧＳ構築物は、低濃度（図１３Ｃ）であってもＣＤ８６によって引き起こされるＩＬ－２分泌の誘導をほぼ完全に消失させ、１０ＧＳ構築物は、低濃度でＩＬ－２分泌を約５０％減少させる中間効果をもたらし、高濃度では減少は約８０％まで増加した（図１３Ｂ）。他の３つの２０アミノ酸リンカー構築物もまた、ＩＬ－２分泌の堅固な阻害をもたらしたが（図１３Ｄ～１３Ｆ）、剛性リンカー構築物は、最大阻害が生じるためにより高い濃度を必要とした（図１３Ｆ）。インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）分泌を混合リンパ球反応において測定した場合、同様の結果が観察された（図１３Ｇ－１３Ｉ）。拮抗効果をもたらすこれらの分子は、免疫刺激には有用でないかもしれないが、自己免疫疾患などの免疫過剰活性化の状態では使用され得る。
【0414】
実施例１０：Ｃ末端結合のみを有する二量体剤の生成
５アミノ酸リンカーを除いて、ｓｄＡｂがＣ末端をＮ末端に連結した単鎖剤のすべてが拮抗効果をもたらしたので、新しい二量体剤を設計した。この次の薬剤セットでは、両方のｓｄＡｂまでのＣ末端領域間に常に連結が生成された。最初に、Ｃ末端システイン残基を、２つの遊離システインの間にジスルフィド結合を形成することによって二量体化することができる２Ａ１の配列（２Ａ１－Ｃ、配列番号１１３）に付加した。所望されるように、二量体２Ａ１－Ｃは、単量体２Ａ１よりも低い濃度で組換えＣＤ２８－Ｆｃに結合した（図１４Ａ）。ＥＣ５０値を表１３に要約する。より長いリンカーを用いて同様の分子も生成された。システインの遊離チオール（マレイミド）に対する反応性を有し、短い離散性ＰＥＧ鎖（ＰＥＧ１１）に基づく化学的リンカーを使用して、２つのシステインを連結した（図１５、２Ａ１－１Ｃ－ｂｍｐ１１）。この分子はまた、ＣＤ２８への優れた結合を示した（図１４Ｂ）。ＥＣ５０値を表１４に要約する。
５アミノ酸リンカーを除いて、ｓｄＡｂがＣ末端をＮ末端に連結した単鎖剤のすべてが拮抗効果をもたらしたので、新しい二量体剤を設計した。この次の薬剤セットでは、両方のｓｄＡｂまでのＣ末端領域間に常に連結が生成された。最初に、Ｃ末端システイン残基を、２つの遊離システインの間にジスルフィド結合を形成することによって二量体化することができる２Ａ１の配列（２Ａ１－Ｃ、配列番号１１３）に付加した。所望されるように、二量体２Ａ１－Ｃは、単量体２Ａ１よりも低い濃度で組換えＣＤ２８－Ｆｃに結合した（図１４Ａ）。ＥＣ５０値を表１３に要約する。より長いリンカーを用いて同様の分子も生成された。システインの遊離チオール（マレイミド）に対する反応性を有し、短い離散性ＰＥＧ鎖（ＰＥＧ１１）に基づく化学的リンカーを使用して、２つのシステインを連結した（図１５、２Ａ１－１Ｃ－ｂｍｐ１１）。この分子はまた、ＣＤ２８への優れた結合を示した（図１４Ｂ）。ＥＣ５０値を表１４に要約する。
【0415】
【表13】
【0416】
【表14】
【0417】
Ｃ末端システインへの代替アプローチは、Ｃ末端二量体化ドメインを使用することである。免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖のヒンジ領域は、主に重鎖二量体化を担ういくつかのシステイン残基を有する。そのため、単一のシステインを付加する代わりに、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬ、配列番号３８）をＶＨＨ ２Ａ１（２Ａ１－ヒンジ、配列番号１１４）の下流に挿入した。同様に、重鎖のより多くのＣ末端領域（ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、配列番号３９）もヒンジの下流に付加した（２Ａ１－ｈｕＦＣ、配列番号１１５）。ＰＧ－ＬＡＬＡ変異を重鎖に組み込み、エフェクター機能を低下させた。ＦｃがＶＨＨ結合を妨害しないことを確実にするために、ＶＨＨとヒンジとの間に可撓性リンカーを用いて他の２つの薬剤を作製した（２Ａ１－１５ＧＳ－ｈｕＦＣ、配列番号１１６；２Ａ１－２５ＧＳ－ｈｕＦＣ、配列番号１１７）。これらの分子はすべて、ＣＤ２８への結合を改善することが見出され、より長いリンカーが最良の結果をもたらした（図１４Ｃ）。ＥＣ５０値を表１５に要約する。
【0418】
【表15】
【0419】
以前と同様に、ｓＣＤ２８の産生を阻害する二量体剤の能力も試験した。２Ａ１－Ｃ構築物は、その最低濃度では切断を阻害しなかったが、同じ濃度で、単量体２Ａ１よりも優れていることが見出された（図１４Ｄ）。同様に、ＰＥＧ系リンカーを有する２Ａ１も、同じ濃度で適用した場合の単量体２Ａ１よりも優れていた（図１４Ｅ）。２Ａ１－ヒンジ剤は、２Ａ１モノマーと同等のレベルのみであるが、ｓＣＤ２８産生を阻害した（図１４Ｆ）。対照的に、完全Ｆｃを有する二量体分子は、ＴＭＩ阻害剤と同等であり、単量体２Ａ１よりも優れたｓＣＤ２８阻害をもたらした（図１４Ｇ）。可撓性リンカーを含む薬剤は両方とも、リンカーを含まないＦｃ分子と同等に機能した（図１４Ｈ－図１４Ｉ）。これらの分子によってもたらされるシェディング遮断の改善は、３μＭの二量体剤で処置した３つの異なるＰＢＭＣドナーからの結果を示す図１４Ｊに要約されている。
【0420】
実施例１１：Ｃ末端結合のみを有する二量体剤は拮抗作用が少ない
二量体分子の最初のバッチは予想外にＣＤ２８アンタゴニストであったので、二量体分子の新しいバッチも試験した。Ｃ末端分子は、ジスルフィド結合によって接続されているか、またはＰＥＧベース系リンカーと接続されているかにかかわらず、両方とも最小のＣＤ８６遮断を示したが、以前に試験されたＮ－Ｃ結合二量体分子よりもはるかに優れたレベルであった（図１６Ａ）。二量体化のためにヒンジ領域を利用する分子は、さらに良好な結果をもたらした（図１６Ｂ）。これらの分子はすべて、ＣＤ８６結合を有意に阻害せず、単量体モノマーと同等であり、したがってＣＤ２８アンタゴニストであるようには全く見えなかった。それらをＣＤ２８に対する反発的効果についてさらに試験したが、何ら認められなかった（データは示さず）。これらすべてが一緒になって、それらを理想的なＣＤ２８シェディング遮断剤、したがって免疫刺激分子にする。
二量体分子の最初のバッチは予想外にＣＤ２８アンタゴニストであったので、二量体分子の新しいバッチも試験した。Ｃ末端分子は、ジスルフィド結合によって接続されているか、またはＰＥＧベース系リンカーと接続されているかにかかわらず、両方とも最小のＣＤ８６遮断を示したが、以前に試験されたＮ－Ｃ結合二量体分子よりもはるかに優れたレベルであった（図１６Ａ）。二量体化のためにヒンジ領域を利用する分子は、さらに良好な結果をもたらした（図１６Ｂ）。これらの分子はすべて、ＣＤ８６結合を有意に阻害せず、単量体モノマーと同等であり、したがってＣＤ２８アンタゴニストであるようには全く見えなかった。それらをＣＤ２８に対する反発的効果についてさらに試験したが、何ら認められなかった（データは示さず）。これらすべてが一緒になって、それらを理想的なＣＤ２８シェディング遮断剤、したがって免疫刺激分子にする。
【0421】
拮抗効果の欠如は、より生理学的に関連する状況でさらに確認された。以前と同様に、Ｔ細胞からの炎症促進性サイトカインの分泌を、直接的なａＡＰＣ刺激（図１７Ａ～１７Ｆ）を用いて調べ、ＭＬＲの状況において調べた（図１８Ａ～１８Ｅ）。２Ａ１－Ｃ二量体剤は、ＩＬ－２レベルの穏やかな用量依存的減少をもたらした（図１７Ａ）。ＭＬＲでも同様の結果が観察された（図１８Ａ）。ＰＥＧ系リンカーの使用は同様の結果を示し、高濃度でのみ軽度の阻害が観察された（図１７Ｂおよび図１８Ｂ）。ここでも、Ｆｃ系の薬剤は拮抗効果を示さなかった。２Ａ１－ヒンジ二量体剤は、ＩＬ－２分泌への影響を示さなかった（図１７Ｃ）。リンカーを有しないヒトＦｃ分子もまた、ＩＬ－２分泌に対する影響を何ら示さず（図１７Ｄ）、ＩＦＮｇ分泌の阻害もしなかった（図１８Ｃ）。リンカーを有するＦｃ二量体剤は、全く拮抗効果がなく、まさに良好であった（図１７Ｅ～１７Ｆ、図１８Ｄ～１８Ｅ）。Ｔ細胞活性に対する全効果を図１８Ｆに要約しており、これは４人の異なるドナー由来の細胞を用いたＭＬＲアッセイの結果を示す。Ｃ末端リンカーを使用した分子、特にヒンジまたはＦｃなどの二量体化ドメインを有する分子はすべて、切断も遮断しながら実質的な拮抗効果をもたらさないことに成功し、それらは過剰なｓＣＤ２８産生の状況における免疫刺激に理想的であった。
【0422】
本発明をその特定の実施形態と併せて説明してきたが、多くの代替形態、修正形態および変形形態が当業者には明らかであることは明らかである。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および広い範囲に含まれるすべてのそのような代替形態、修正形態および変形形態を包含することが意図されている。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4-1】
【図4-2】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11-1】
【図11-2】
【図11-3】
【図11-4】
【図12-1】
【図12-2】
【図12-3】
【図12-4】
【図13-1】
【図13-2】
【図13-3】
【図13-4】
【図13-5】
【図14-1】
【図14-2】
【図14-3】
【図14-4】
【図14-5】
【図14-6】
【図15】
【図16-1】
【図16-2】
【図16-3】
【図16-4】
【図17-1】
【図17-2】
【図17-3】
【図18-1】
【図18-2】
【図18-3】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-05-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】