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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-12
(54)【発明の名称】抗ＢＴＮ３Ａ治療に対するレスポンダーの選択
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240905BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240905BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240905BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240905BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
A61P35/00
A61P37/04
A61K39/395 U
A61K39/395 N
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024512096
(86)(22)【出願日】2022-09-15
(85)【翻訳文提出日】2024-04-19
(86)【国際出願番号】 EP2022075608
(87)【国際公開番号】W WO2023041622
(87)【国際公開日】2023-03-23
(31)【優先権主張番号】21306272.2
(32)【優先日】2021-09-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520098187
【氏名又は名称】イムチェック セラピューティクス エスエーエス
【氏名又は名称原語表記】ＩＭＣＨＥＣＫ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＳＡＳ
(74)【代理人】
【識別番号】100107456
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 成人
(74)【代理人】
【識別番号】100162352
【弁理士】
【氏名又は名称】酒巻 順一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100123995
【弁理士】
【氏名又は名称】野田 雅一
(72)【発明者】
【氏名】バレンティン， エマニュエル
(72)【発明者】
【氏名】フローナ， ポール
(72)【発明者】
【氏名】デ ガサート， オード
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB31
4C085CC23
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、薬学分野に関する。より詳細には、本開示は、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象は、前記対象における血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた治療に選択されている、単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体に関する。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象は、前記対象における血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた治療に選択されている、単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項2】
ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、５０００個細胞／ｍＬよりも高い、１００００個細胞／ｍＬよりも高い、又は２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、前記対象は選択される、請求項１に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項3】
前記対象が、黒色腫、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、膀胱がん、前立腺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部扁平上皮がん、及び尿路上皮がんから典型的に選択される固形腫瘍を有する対象であり、好ましくは頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）及び卵巣がんから選択される固形腫瘍を有する対象である、請求項１又は２に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項4】
前記対象が、例えば急性骨髄性白血病及び／又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択される血液学的悪性腫瘍を有する対象である、請求項１又は２に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項5】
表面プラズモン共鳴によって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは５ｎＭ以下のＫＤで、ヒトＢＴＮ３Ａポリペプチドに結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項6】
前記抗体が、活性化マーカーＣＤ６９の表面発現によって測定される０．１μｇ／ｍｌを下回る、好ましくは０．０１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣにおけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化をインビトロで誘導する、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項7】
前記抗体が、脱顆粒アッセイにおいて測定される５μｇ／ｍｌを下回る、好ましくは１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養においてＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項8】
変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域を含み、前記変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域が、野生型ＩｇＧ１アイソタイプ定常領域を有する対応する抗体と比較した場合、Ｆｃγ受容体への結合なし又は結合の減少を付与する、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項9】
前記変異体ＩｇＧ１定常領域が、ＩｇＧ１トリプル変異体Ｌ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓである、請求項８に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項10】
配列番号１２のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、配列番号１４のＨＣＤＲ３、配列番号１５のＬＣＤＲ１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項11】
配列番号１の可変重鎖ポリペプチドＶＨ及び配列番号２の可変軽鎖ポリペプチドＶＬ、典型的には配列番号４の全長重鎖及び配列番号６の全長軽鎖を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項12】
ＩＬ－２若しくはＩＬ－１５、又はそれらのペグ化バリアント等のサイトカインとの組合せで投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項13】
抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えばペムブロリズマブとの組合せで投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項14】
前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、各投薬７～２００ｍｇ、例えば２０～７５ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、好ましくは第２の投薬が、第１の投薬の少なくとも１５日後、典型的には約２１日後に投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項15】
それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象が、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１治療に対して再発性又は難治性腫瘍を有しており、前記対象が、治療有効量の前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体との組合せで治療有効量の抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１剤を投与される、単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項16】
前記腫瘍が、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び頭頸部扁平上皮癌からなる群から特に選択される固形腫瘍である、請求項１５に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【請求項17】
前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含み、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内であり、対象が、治療有効量のペムブロリズマブとともに投与される、請求項１５又は１６に記載の使用のための単離された抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、薬学分野に関する。より詳細には、本開示は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いてがん障害を治療する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
末梢血は、技術的に獲得しやすく、加工しやすく、より長い期間にわたって繰り返し入手され得、十分なサンプル容積を大抵提供する。これらの理由で、末梢血は、腫瘍患者における免疫集団モニタリングのための利用率が高い材料である（Ｓｃｈｎｅｌｌら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ２０１８、６、２５）。それとは反対に、腫瘍組織に浸潤する種々の免疫細胞を入手すること及び表現型解析することは、依然として技術的に難しいままである（Ｍａｉｂａｃｈら、２０２０、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０２０；１１：２１０５；Ｌａｒａら、２０１９、Ｎａｔｕｒｅ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ９：１７５８９）。
【0003】
免疫系の多様性に富む動的な性質、表現型の変化を考えると、末梢免疫細胞の機能及び代謝は、腫瘍内で生じている変化を代表するものであるとは一般的に考えられない（Ｓｃｈｎｅｌｌら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ２０１８、６、２５；Ｍａｉｂａｃｈら、２０２０、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０２０；１１：２１０５）。
【0004】
加えて、種々の免疫細胞集団の末梢血における頻度又は絶対計数と、腫瘍性組織におけるそれら免疫細胞集団それぞれの浸潤との間の明確な相関は記載されていない。このことは、ＮＫ細胞又はガンマデルタＴ細胞等、自然免疫細胞集団に特に当てはまる。
【0005】
国際公開第２０２０／０２５７０３号は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の細胞溶解機能、サイトカイン産生、及び／又は増殖を活性化し、それによって、がん患者において観察される免疫抑制性メカニズムを克服する免疫療法剤として使用されることができる抗ＢＴＮ３Ａ抗体（活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体）を開示する。
【0006】
本発明者らは、末梢血におけるγδ Ｔ細胞の絶対計数と、腫瘍性組織におけるγδ Ｔ細胞の活性化との間の相関の証拠をここで提供し、それによって、末梢血におけるγδ Ｔ細胞の絶対計数に基づき、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた治療に対するレスポンダーを選択する可能性を高める。
【0007】
本発明者らは、抗ＰＤ１抗体を用いた先行免疫療法を受けたことがある、難治性又は再発性腫瘍を有する患者における、抗ＢＴＮ３Ａ抗体及び抗ＰＤ１抗体を用いた併用療法に対する臨床効力の証拠を初めて更に提供する。
【発明の概要】
【0008】
本開示の第１の態様は、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象は、前記対象における血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた前記治療に選択されている、単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体に関する。具体的な実施形態において、ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が５０００個細胞／ｍＬよりも高い、１００００個細胞／ｍＬよりも高い、又は２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、前記対象は前記治療に選択されている。
【0009】
本開示の別の態様は、それを必要とするヒト対象における固形腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象は、前記対象からの固形腫瘍生検における腫瘍ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた前記治療に選択されている、単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体に関する。具体的な実施形態において、腫瘍ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、前記対象は前記治療に選択されている。
【0010】
本開示は、治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記ヒト対象は、前記対象における血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療に選択されている、方法にも関する。
【0011】
本開示は、治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記ヒト対象は、前記対象の腫瘍生検におけるベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療に選択されている、方法にも関する。
【0012】
別の態様は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療に適格性がある対象を選択するための方法であって、前記方法は、前記対象における血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を評価するステップを含む、方法に向けられる。
【0013】
別の態様は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療に適格性がある対象を選択するための方法であって、前記方法は、前記対象の腫瘍生検におけるベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度を評価するステップを含む、方法に向けられる。
【0014】
本開示は、治療有効量の抗ＰＤ１／ＰＤＬ１治療との組合せで、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａを投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記対象は、先行抗ＰＤ１／ＰＤＬ１治療の後に再発性又は難治性腫瘍を有している、方法に更に関する。
【0015】
Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａを投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記腫瘍は、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び頭頸部扁平上皮癌からなる群から選択される固形腫瘍である、方法が本明細書に更に開示される。
【0016】
好ましい実施形態において、前記活性化ＢＴＮ３Ａ抗体は、本明細書に記載されるｍＡｂ１、又はｍＡｂ１の６つのＣＤＲを有するその機能的バリアントである。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1A】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、免疫活性化及びＩＦＮｇ産生は、ＩＣＴ０１用量及びベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞絶対計数の両方に関係することを示す図である。患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、Ｄ０＋２４時間）をフローサイトメトリーによって査定した。ＩＣＴ０１ Ｃｍａｘを超高感度ＰＫアッセイ（Ｃｈｉｍｅｒａ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によってアッセイした。循環サイトカインレベルを商業的キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって査定した。ＩＦＮγ倍変化を、ＩＦＮγ ＡＵＣ（Ｄ０、Ｄ＋３０分間、Ｄ０＋４時間、及びＤ＋２４時間の時点を使用した）とＩＦＮγベースラインＡＵＣとの間の比として規定した。スピアマン相関。パネルＡ：ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞の％、パネルＢ：ＰＤ－Ｌ１陽性顆粒球の％、パネルＣ：ＩＦＮγ倍変化。
【図1B】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、免疫活性化及びＩＦＮｇ産生は、ＩＣＴ０１用量及びベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞絶対計数の両方に関係することを示す図である。患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、Ｄ０＋２４時間）をフローサイトメトリーによって査定した。ＩＣＴ０１ Ｃｍａｘを超高感度ＰＫアッセイ（Ｃｈｉｍｅｒａ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によってアッセイした。循環サイトカインレベルを商業的キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって査定した。ＩＦＮγ倍変化を、ＩＦＮγ ＡＵＣ（Ｄ０、Ｄ＋３０分間、Ｄ０＋４時間、及びＤ＋２４時間の時点を使用した）とＩＦＮγベースラインＡＵＣとの間の比として規定した。スピアマン相関。パネルＡ：ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞の％、パネルＢ：ＰＤ－Ｌ１陽性顆粒球の％、パネルＣ：ＩＦＮγ倍変化。
【図1C】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、免疫活性化及びＩＦＮｇ産生は、ＩＣＴ０１用量及びベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞絶対計数の両方に関係することを示す図である。患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、Ｄ０＋２４時間）をフローサイトメトリーによって査定した。ＩＣＴ０１ Ｃｍａｘを超高感度ＰＫアッセイ（Ｃｈｉｍｅｒａ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によってアッセイした。循環サイトカインレベルを商業的キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって査定した。ＩＦＮγ倍変化を、ＩＦＮγ ＡＵＣ（Ｄ０、Ｄ＋３０分間、Ｄ０＋４時間、及びＤ＋２４時間の時点を使用した）とＩＦＮγベースラインＡＵＣとの間の比として規定した。スピアマン相関。パネルＡ：ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞の％、パネルＢ：ＰＤ－Ｌ１陽性顆粒球の％、パネルＣ：ＩＦＮγ倍変化。
【図2A】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、ＩＣＴ０１後の腫瘍性免疫浸潤及び活性化の増加は、ベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数に関係することを示す図である。パネルＡ：ＩＣＴ０１投与前の患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）。パネルＢ：使用可能な良質の生検ペアを用いた、群Ａ及びＣからのすべての患者における、多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。パネルＣ～Ｅ：多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。患者集団は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数、２００００個細胞／ｍＬカットオフに従って分けられている。
【図2B】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、ＩＣＴ０１後の腫瘍性免疫浸潤及び活性化の増加は、ベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数に関係することを示す図である。パネルＡ：ＩＣＴ０１投与前の患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）。パネルＢ：使用可能な良質の生検ペアを用いた、群Ａ及びＣからのすべての患者における、多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。パネルＣ～Ｅ：多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。患者集団は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数、２００００個細胞／ｍＬカットオフに従って分けられている。
【図2C】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、ＩＣＴ０１後の腫瘍性免疫浸潤及び活性化の増加は、ベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数に関係することを示す図である。パネルＡ：ＩＣＴ０１投与前の患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）。パネルＢ：使用可能な良質の生検ペアを用いた、群Ａ及びＣからのすべての患者における、多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。パネルＣ～Ｅ：多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。患者集団は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数、２００００個細胞／ｍＬカットオフに従って分けられている。
【図2D】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、ＩＣＴ０１後の腫瘍性免疫浸潤及び活性化の増加は、ベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数に関係することを示す図である。パネルＡ：ＩＣＴ０１投与前の患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）。パネルＢ：使用可能な良質の生検ペアを用いた、群Ａ及びＣからのすべての患者における、多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。パネルＣ～Ｅ：多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。患者集団は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数、２００００個細胞／ｍＬカットオフに従って分けられている。
【図2E】ＥＶＩＣＴＩＯＮにおいて、ＩＣＴ０１後の腫瘍性免疫浸潤及び活性化の増加は、ベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数に関係することを示す図である。パネルＡ：ＩＣＴ０１投与前の患者の血中におけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）。パネルＢ：使用可能な良質の生検ペアを用いた、群Ａ及びＣからのすべての患者における、多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。パネルＣ～Ｅ：多重定量的ＩＨＣ（デジタル病理学、Ｖｅｒａｃｙｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって査定された種々の表現型についての腫瘍細胞密度（個細胞／ｍｍ２）のＬｏｇ１０倍変化（治療後対治療前生検）。患者集団は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数、２００００個細胞／ｍＬカットオフに従って分けられている。
【図3】腫瘍におけるＶγ９ＴＣＲ＋細胞は、循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数に関係することを示す図である。Ｖγ９ＴＣＲ＋のベースライン腫瘍細胞密度を、デジタル病理学、定量的ＩＨＣ（個細胞／ｍｍ２）によって査定した。ＩＣＴ０１投与前の患者の血中における、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり）。スピアマン相関。
【図4A】ＩＣＴ０１は、ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者におけるＰＤ－１発現を増加させることを示す図である。Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のＩＣＴ０１誘導性活性化は、ＥＶＩＣＴＩＯＮの群Ａ（図４Ａ）及び群Ｂ（図４Ｂ）において治療されたがん患者において、ＰＤ－１の表面発現（凍結生検に対するフローサイトメトリー、用量コホートあたりの平均）を増加させる。二元配置ＡＮＯＶＡ及びホルム・シダックの多重比較検定。
【図4B】ＩＣＴ０１は、ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者におけるＰＤ－１発現を増加させることを示す図である。Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のＩＣＴ０１誘導性活性化は、ＥＶＩＣＴＩＯＮの群Ａ（図４Ａ）及び群Ｂ（図４Ｂ）において治療されたがん患者において、ＰＤ－１の表面発現（凍結生検に対するフローサイトメトリー、用量コホートあたりの平均）を増加させる。二元配置ＡＮＯＶＡ及びホルム・シダックの多重比較検定。
【図5A】ＩＣＴ０１／ペムブロリズマブ治療は、複数の免疫細胞集団の活性化及び遊走を誘導することを示す図である。種々の時点における、フローサイトメトリーによって査定された、患者の血中におけるベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり、ベースラインの％）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、陽性の％）。パネルＡ：Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞、パネルＢ：ＮＫ細胞、パネルＣ：ＣＤ８ Ｔ細胞、及びパネルＤ：顆粒球。
【図5B】ＩＣＴ０１／ペムブロリズマブ治療は、複数の免疫細胞集団の活性化及び遊走を誘導することを示す図である。種々の時点における、フローサイトメトリーによって査定された、患者の血中におけるベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり、ベースラインの％）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、陽性の％）。パネルＡ：Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞、パネルＢ：ＮＫ細胞、パネルＣ：ＣＤ８ Ｔ細胞、及びパネルＤ：顆粒球。
【図5C】ＩＣＴ０１／ペムブロリズマブ治療は、複数の免疫細胞集団の活性化及び遊走を誘導することを示す図である。種々の時点における、フローサイトメトリーによって査定された、患者の血中におけるベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり、ベースラインの％）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、陽性の％）。パネルＡ：Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞、パネルＢ：ＮＫ細胞、パネルＣ：ＣＤ８ Ｔ細胞、及びパネルＤ：顆粒球。
【図5D】ＩＣＴ０１／ペムブロリズマブ治療は、複数の免疫細胞集団の活性化及び遊走を誘導することを示す図である。種々の時点における、フローサイトメトリーによって査定された、患者の血中におけるベースライン絶対数（ミリリットルの血液あたり、ベースラインの％）及び活性化マーカー（ＣＤ６９及びＰＤ－Ｌ１、陽性の％）。パネルＡ：Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞、パネルＢ：ＮＫ細胞、パネルＣ：ＣＤ８ Ｔ細胞、及びパネルＤ：顆粒球。
【発明を実施するための形態】
【0018】
定義
本開示がより容易に理解されることができるために、ある特定の用語がまず定義される。付加的な定義は、詳細な説明を通して明記される。
本開示がより容易に理解されることができるために、ある特定の用語がまず定義される。付加的な定義は、詳細な説明を通して明記される。
【0019】
本明細書において使用するとき、「ＢＴＮ３Ａ」という用語は、当技術分野におけるその用語の一般的意味を有する。具体的な実施形態において、該用語は、配列番号１８のＢＴＮ３Ａ１、配列番号１９のＢＴＮ３Ａ２、又は配列番号２０のＢＴＮ３Ａ３のいずれかを含む、ヒトＢＴＮ３Ａポリペプチドを指す。
【0020】
本明細書において使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を指す。そのため、抗体という用語は、抗体分子全体だけでなく、抗体フラグメント並びに抗体のバリアント（誘導体を含む）も包含する。
【0021】
齧歯類及び霊長類の自然抗体において、２本の重鎖はジスルフィド結合によって互いに連結され、各重鎖はジスルフィド結合によって軽鎖に連結される。２つのタイプの軽鎖、ラムダ（λ）及びカッパ（κ）がある。抗体分子の機能的活性を決定する５つの主な重鎖クラス（又はアイソタイプ）がある：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥ。各鎖は、個別の配列ドメインを含有する。典型的なＩｇＧ抗体において、軽鎖は、２つのドメインである可変ドメイン（ＶＬ）及び定常ドメイン（ＣＬ）を含む。重鎖は、４つのドメインである可変ドメイン（ＶＨ）及び３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３、集合的にＣＨと称される）を含む。軽（ＶＬ）及び重（ＶＨ）鎖の両方の可変領域は、抗原への結合認識及び特異性を決定する。軽（ＣＬ）及び重（ＣＨ）鎖の定常領域ドメインは、抗体鎖会合、分泌、経胎盤流動、補体結合、及びＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合等、重要な生物学的特性を付与する。
【0022】
Ｆｖフラグメントとは、免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端部分であり、１本の軽鎖及び１本の重鎖の可変部分からなる。抗体の特異性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の構造的相補性にある。抗体結合部位は、主に超可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）由来のものである残基から構成される。時折、非超可変領域又はフレームワーク領域（ＦＲ）由来の残基が、抗体結合部位に参加し得る、又は全体的ドメイン構造、ゆえに結合部位に影響を与え得る。相補性決定領域又はＣＤＲとは、天然免疫グロブリン結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性及び特異性を一緒に規定するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖のそれぞれは、それぞれＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、及びＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３と指定される３つのＣＤＲを有する。それゆえ、抗原結合部位は、重鎖及び軽鎖Ｖ領域のそれぞれ由来のＣＤＲセットを含む６つのＣＤＲを典型的に含む。フレームワーク領域（ＦＲ）とは、ＣＤＲの間に介在するアミノ酸配列を指す。したがって、軽鎖及び重鎖の可変領域は、以下の配列：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４という４つのフレームワーク領域及び３つのＣＤＲを典型的に含む。
【0023】
抗体可変ドメインにおける残基は、Ｋａｂａｔらによって考案されたシステムに従って従来的に番号付けされる。このシステムは、Ｋａｂａｔら、１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、ＵＳＡ（Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＤＩＡＮＥ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、以降「Ｋａｂａｔら」）に明記される。この番号付けシステムが本明細書において使用される。Ｋａｂａｔ残基指定は、配列番号の配列におけるアミノ酸残基の直線的番号付けと必ずしも直接対応しない。実際の直線的アミノ酸配列は、フレームワーク領域か相補性決定領域（ＣＤＲ）かどうかにかかわらず、基本的な可変ドメイン構造の構造的構成要素の短縮又はそれへの挿入に対応する厳格なＫａｂａｔ番号付けにおけるよりも、数個の又は付加的なアミノ酸を含有することがある。残基の正しいＫａｂａｔ番号付けは、「標準的」Ｋａｂａｔ番号付け配列を有する抗体の配列における相同の残基のアライメントによって、所与の抗体に対して決定されることができる。重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って、残基３１～３５（Ｈ－ＣＤＲ１）、残基５０～６５（Ｈ－ＣＤＲ２）、及び残基９５～１０２（Ｈ－ＣＤＲ３）に位置する。軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って、残基２４～３４（Ｌ－ＣＤＲ１）、残基５０～５６（Ｌ－ＣＤＲ２）、及び残基８９～９７（Ｌ－ＣＤＲ３）に位置する。
【0024】
本明細書において使用するとき、抗ＢＴＮ３Ａ抗体とは、ＢＴＮ３Ａポリペプチドに特異的に結合する抗体である。
【0025】
本明細書において使用するとき、「に特異的に結合する」という用語は、ＢＴＮ３Ａポリペプチド等の抗原に提示されたエピトープに検出可能に結合する抗体の能力を指す。一部の実施形態において、該用語は、下の実施例に記載されるように、フローサイトメトリーによる結合アッセイにおいて測定される、好ましくは５０μｇ／ｍｌを下回る、より好ましくは１０μｇ／ｍｌを下回るＥＣ５０で、末梢血骨髄細胞（ＰＢＭＣ）に発現されるヒトＢＴＮ３Ａに結合する抗体を指すことを意図される。他の実施形態において、該用語は、実施例に記載されるように、マルチサイクル速度論分析によって測定される１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、又は１０ｐＭ以下のＫＤで、抗原（例えば、ＢＴＮ３Ａポリペプチド）に結合する抗体を指すことを意図される。
【0026】
本明細書において使用される「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含んでいない抗体を指す（例えば、ＢＴＮ３Ａに特異的に結合する単離された抗体は、ＢＴＮ３Ａ以外の他の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含んでいない）。しかしながら、ＢＴＮ３Ａに特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来の関連するＢＴＮ３Ａ分子等、他の抗原に対する交差反応性を有してもよい。更に、単離された抗体は、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含んでいなくてもよい。
【0027】
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を呈示する。
【0028】
「抗原を認識する抗体」及び「抗原に対する特異性を有する抗体」という語句は、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と本明細書において互換可能に使用される。
【0029】
本明細書において使用される「Ｋａｓｓｏｃ」又は「Ｋａ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことを意図され、一方で、本明細書において使用される「Ｋｄｉｓ」又は「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことを意図される。
【0030】
本明細書において使用される「ＫＤ」という用語は、Ｋｄ対Ｋａの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から獲得され、モル濃度（Ｍ）として表現される解離定数を指すことを意図される。抗体に対するＫＤ値は、当技術分野において十分に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴を使用する、又はビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ）（登録商標）システム等のバイオセンサーシステムを使用することによるものである。
【0031】
特異性は、他の非関連分子への非特異的結合に対して、特異的抗原への結合における親和性／アビディティーの、例えば約１０：１、約２０：１、約５０：１、約１００：１、１０．０００：１、又はそれを上回る比によって更に示され得る（この場合、特異的抗原はＢＴＮ３Ａポリペプチドである）。本明細書において使用される「親和性」という用語は、エピトープへの抗体の結合の強度を意味する。
【0032】
本明細書において使用するとき、「活性化抗体」という用語は、エフェクター細胞の免疫機能を直接的に又は間接的に誘導し得る抗体を指す。特に、本明細書において使用するとき、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、下の実施例に記載されるように、脱顆粒アッセイにおいて測定される５μｇ／ｍｌを下回る、好ましくは１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養において、γδ Ｔ細胞、典型的にはＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する能力を少なくとも有する。
【0033】
本明細書において使用するとき、「対象」という用語は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等、哺乳類及び非哺乳類を含む。好ましい実施形態において、対象はヒト対象である。
【0034】
本明細書において使用するとき、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」という用語は、（１）疾患を阻害すること；例えば、疾患、病状、又は障害の病理学又は症状学を経験している又は呈示している個体における疾患、病状、又は障害を阻害すること（すなわち、病理学及び／又は症状学のさらなる発達を食い止めること）；及び（２）疾患を改善すること；例えば、疾患の重症度を減少させること又は疾患の１つ若しくは複数の症状を低下させること若しくは緩和すること等、疾患、病状、又は障害の病理学又は症状学を経験している又は呈示している個体における疾患、病状、又は障害を改善すること（すなわち、病理学及び／又は症状学を反転させること）、のうちの１つ又は複数を指す。特に、腫瘍の治療に関して、「治療」という用語は、腫瘍の成長の阻害、又は腫瘍のサイズの低下を指してもよい。
【0035】
本明細書において使用するとき、「血中Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数」とは、例えば実施例に記載されるように、キャリブレーションビーズを伴う標準的フローサイトメトリー法によって決定される、対象のある特定の容積の血液サンプルにおいて循環するＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の絶対数を指す。
【0036】
本明細書において使用するとき、「腫瘍Ｖγ９＋ Ｔ細胞密度」とは、例えば実施例に記載されるように、モノクローナル抗体７Ｂ６等、Ｖγ９ＴＣＲに特異的に結合する抗体を用いた免疫組織化学によって決定される、対象のある特定の容積の腫瘍生検におけるｍｍ２あたりの細胞の数を指す。
【0037】
本明細書において使用するとき、「併用療法」、「共投与」、「組合せ投与」、又は「付随投与」とは、少なくとも２種の治療剤の組合せ投与を指し、第１の作用物質、典型的には活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（例えば、ｍＡｂ１）は、それを必要とする同じ対象において、第２の作用物質、例えば抗ＰＤ－１抗体（例えば、ペムブロリズマブ）と同じ時間に又は時間間隔内で別個に投与され、これらの時間間隔は、組合せパートナーが、障害、例えばがんを治療することに対して協調的な又は相乗的な効果を示すことを可能にする。これらの送達の方法は、本明細書に記載される範囲内にあるものの、該用語は、治療剤が同じ時間に投与されなければならないこと、及び／又は送達のために一緒に製剤化されなければならないことを暗示することを意図されない。活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、１種又は複数の他の付加的な治療法又は治療剤と同時に、その前に、又はその後に投与され得る。該用語は、作用物質が、必ずしも投与の同じ経路によって投与されない治療レジメンを包含することも目的としている。
【0038】
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療を必要とする対象
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の細胞溶解機能、サイトカイン産生、及び／又は増殖を活性化し得、それによって、がん患者において観察される免疫抑制性メカニズムを克服するために使用されることができる（ＷＯ２０２０／０２５７０３）。
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の細胞溶解機能、サイトカイン産生、及び／又は増殖を活性化し得、それによって、がん患者において観察される免疫抑制性メカニズムを克服するために使用されることができる（ＷＯ２０２０／０２５７０３）。
【0039】
本明細書において使用するとき、「がん」という用語は、自律的成長の能力を有する細胞を有する過剰増殖性及び新生物性疾患状態、すなわち、急速に増殖する細胞成長によって特徴付けられる異常な状態又は病状を指す。過剰増殖性及び新生物性疾患状態は、病理性、すなわち疾患状態を特徴付ける若しくは構成する、として分類されることがある、又は非病理性、すなわち正常からの逸脱であるが疾患状態を伴わない、として分類されることがある。該用語は、組織病理学タイプ又は侵襲性の期にかかわらず、すべてのタイプのがん性成長又は発がん過程、転移性組織又は悪性形質転換した細胞、組織、若しくは臓器を含むことを目的としている。
【0040】
「がん」又は「新生物」という用語は、肺、乳房、甲状腺、リンパ、消化管、及び尿生殖路に影響を及ぼすもの等、様々な臓器系の悪性腫瘍、並びに大部分の結腸がん、腎細胞癌、前立腺がん、及び／又は精巣腫瘍等の悪性腫瘍を含む腺癌、肺の非小細胞癌、小腸のがん、並びに食道のがんを含む。
【0041】
がんは、典型的に、固形腫瘍がん（非血液学的悪性腫瘍）及び血液学的悪性腫瘍に分けられることができる。
【0042】
血液学的悪性腫瘍の例は、Ｂ細胞リンパ系新生物、Ｔ細胞リンパ系新生物、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性（Ｄｉｆｆｕｌｅ）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＬＣ）等のＢ－ＮＨＬ、Ｔ－ＮＨＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ＮＫ細胞リンパ系新生物、及び急性骨髄性白血病を含めた骨髄細胞系統新生物を含むが、それらに限定されるわけではない。
【0043】
非血液学的がんの例は、結腸直腸がん、乳がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、脳腫瘍、前立腺がん、頭頸部がん（例えば、ＨＮＳＣＣ）、膵臓がん、膀胱がん、結腸直腸がん、骨がん、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、口腔がん、食道がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸がん、精巣がん、尿路上皮がん、及び皮膚がん（例えば、黒色腫）を含むが、それらに限定されるわけではない。
【0044】
具体的な実施形態において、抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療を必要とする前記対象は、再発性／難治性固形腫瘍を有している。より具体的な実施形態において、前記対象は、進行期、再発性／難治性固形腫瘍を有している。
【0045】
より具体的な実施形態において、前記対象は、抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１抗体等の抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１剤、典型的にはイピリムマブ、ニボルマブ、又はペムブロリズマブを用いた治療の後に再発性／難治性固形腫瘍を有している。より具体的な実施形態において、抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１剤を用いた治療の後に再発性／難治性固形腫瘍を有する前記対象はまた、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び／又は頭頸部扁平上皮癌を有する対象からも選択される。
【0046】
以前の実施形態と組み合わせられてもよい他の具体的な実施形態において、抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療を必要とする前記対象は、卵巣がんに罹患している。
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療
本明細書において使用するとき、「活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療」は、任意選択で他の治療用化合物との組合せで、治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を活性成分として投与することを含む、任意の療法的治療に関する。
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療
本明細書において使用するとき、「活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療」は、任意選択で他の治療用化合物との組合せで、治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を活性成分として投与することを含む、任意の療法的治療に関する。
【0047】
そのような活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療の好ましい例は、国際公開第２０１２／８０３５１号及び国際公開第２０２０／０２５７０３号に記載される。
【0048】
具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、例えば上で言及される疾患の治療又は阻止のために、単独の活性構成成分として、又は他の薬物と併せて投与されてもよい。
【0049】
具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、抗新生物剤との組合せで投与されてもよい。
【0050】
他の具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、細胞療法（特に、γδ Ｔ細胞療法）との組合せで投与されてもよい。
【0051】
他の具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、免疫サイトカイン（特に、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ）との組合せで投与されてもよい。
【0052】
他の具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、免疫チェックポイント阻害剤（特に、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＬＡＧ－３、抗ＴＩＬ－３抗体、又は他の抗ＰＤ１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１剤）等の免疫療法薬とともに投与されてもよい。
【0053】
本明細書において使用するとき、「細胞療法」という用語は、それを必要とする対象への少なくとも治療有効量の細胞組成物のインビボ投与を含む療法を指す。患者に投与される細胞は、同種又は自家であってもよい。「γδ Ｔ細胞療法」という用語は、細胞組成物が活性成分としてγδ Ｔ細胞、特にＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞を含む細胞療法を指す。具体的な実施形態において、前記Ｖγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞は、γδ Ｔ細胞アゴニストを用いてエクスビボで増大及び／又は活性化されている。
【0054】
細胞療法製品とは、治療目的のために前記対象に投与される細胞組成物を指す。前記細胞療法製品は、治療高効率用量の細胞、及び任意選択で付加的な賦形剤、アジュバント、又は他の薬学的に許容できるキャリアを含む。
【0055】
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（例えば、下で記載されるｍＡｂ１）との組合せで投与されてもよい抗新生物剤の例は、限定されることなく、アルキル化剤（シクロホスファミド、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔａｍｉｎｅ）、クロラムブシル、メルファラン、ニトロソウレア、テモゾロミド等）、アントラサイクリン（ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン等）、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル等）、エポチロン、トポイソメラーゼＩの阻害剤（イリノテカン又はトポテカン等）、トポイソメラーゼＩＩの阻害剤（エトポシド、テニポシド、又はタフルポシド等）、ヌクレオチド類似体及び前駆類似体（アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル（ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキサート、又はチオグアニン等）、ペプチド抗生物質（カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチン等）、レチノイド（トレチノイン、アリトレチノイン、ベキサロテン等）、ビンカアルカロイド及び誘導体（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン等）、キナーゼ阻害剤等の標的療法（イブルチニブ、イデラリシブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、ビスモデギブ等）、プロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ等）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ボリノスタット又はロミデプシン等）を含んでもよい。
【0056】
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（例えば、下で記載されるｍＡｂ１）との組合せで投与されてもよい免疫療法剤の例は、限定されることなく、ホスホアンチゲン（例えば、ゾレドロン酸又は他のビスホスホネート）、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、及びサイトカイン（インターロイキン２（ＩＬ－２）（Ｃｈｏｕｄｈｒｙ Ｈら、２０１８、Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．２０１８年５月６日）、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）（Ｐａｔｉｄａｒ Ｍら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２０１６年１０月；３１：４９～５９）、インターロイキン２１（ＩＬ－２１）（Ｃａｃｃａｍｏ Ｎ．ら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１２；７（７）：ｅ４１９４０）、又はインターロイキン３３（ＩＬ－３３）（Ｄｕａｕｌｔ Ｃら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６年１月１日；１９６（１）：４９３～５０２）等）、若しくはそれらの組み換え形態及びそれらの誘導体、又はリンパ球活性（例えば、増殖又はサイトカイン産生又は代謝変化）を誘導し得る任意のサイトカインを含む。誘導体という用語は、ペグ化（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖へのコンジュゲーション）、アミノ酸欠失、置換、若しくは挿入等の変異、又は強化剤との会合（例えば、ＩＬ－１５が付加的に変異している（ａｓｎ７２ａｓｐ）、ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒａ複合体であって、その変異は、この複合体をＩＬ－２及びＩＬ－１５Ｒβγスーパーアゴニストにする生物学的活性を更に増加させる（Ｒｈｏｄｅ ＰＲら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１６；４（１）：４９～６０））に依存し得る任意のサイトカイン改変に使用される（Ｂａｒｒｏｓｏ－Ｓｏｕｓａ Ｒら、Ｃｕｒｒ Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ．２０１８年１１月１５日；２１（１）：１）。
【0057】
「ＩＬ－２」という用語は、その用語の一般的意味を有し、ヒトインターロイキン－２を指す。ＩＬ－２は、身体の天然の免疫応答の一部である。ＩＬ－２は、ＩＬ－２受容体に結合することによって、リンパ球活性を主に調節する。
【0058】
「ＩＬ－１５」という用語は、その用語の一般的意味を有し、ヒトインターロイキン－１５を指す。ＩＬ－２のように、ＩＬ－１５は結合し、ＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）及び共通のガンマ鎖（ガンマ－Ｃ、ＣＤ１３２）から構成される複合体を通じてシグナルを送る。ＩＬ－１５は、Ｔ及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化及び増殖を調節する。
【0059】
「ＩＬ－２１」という用語は、その用語の一般的意味を有し、ヒトインターロイキン－２１を指す。ＩＬ－２１は、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞傷害性を増強すること、形質細胞分化をモジュレートすること、並びにＴｒｅｇ細胞を阻害することを含むがそれらに限定されない、多面的特性の一因になっている。
【0060】
「ＩＬ－３３」という用語は、その用語の一般的意味を有し、ヒトインターロイキン－３３を指す。組織ストレス又はダメージがあると放出されるアラーミンと考えられるＩＬ－３３は、ＩＬ－１ファミリーのメンバーであり、ＳＴ２受容体に結合する。ＩＬ－３３は、ＴＨ１免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ｉＮＫＴ細胞、及びＣＤ８ Ｔリンパ球の有効な刺激因子として公知である。
【0061】
「ＰＤ－１」という用語は、当技術分野におけるその用語の一般的意味を有し、プログラム死－１受容体を指す。「ＰＤ－１」という用語は、ＣＤ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）、誘導性共刺激因子（ＩＣＯＳ）、並びにＢ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）を含む、受容体のＣＤ２８－Ｂ７シグナル伝達ファミリーに属する、Ｉ型膜貫通タンパク質も指す（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ＲＪら、２００５、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２３巻、５１５～５４８頁）。
【0062】
「抗ＰＤ－１抗体」若しくは「抗ＰＤ－１剤」、又は「抗ＰＤ－Ｌ１」という用語は、当技術分野におけるその用語の一般的意味を有し、それぞれＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に対する抗体又は結合親和性を有する他の結合化合物、及びＰＤ－１へのアンタゴニスト活性を指し、すなわち、抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－１剤、又は抗ＰＤ－Ｌ１は、ＰＤ－１に関係するシグナル変換カスケードを阻害し、ＰＤ－１リガンド結合（ＰＤ－Ｌ１；ＰＤ－Ｌ２）を阻害する。そのような抗ＰＤ－１抗体／剤又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体／剤は、受容体のＣＤ２８－Ｂ７シグナル伝達ファミリー（ＣＤ２８；ＣＴＬＡ－４；ＩＣＯＳ；ＢＴＬＡ）の他のサブタイプ又はアイソフォームとのその相互作用よりも大きな親和性及び効能を有して、それぞれＰＤ－１を優先的に不活性化する。化合物がＰＤ－１アンタゴニストであるかどうかを決定するためのテスト及びアッセイは、Ｓｈａａｂａｎｉ Ｓら（２０１５～２０１８）．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔ．２０１８年９月；２８（９）：６６５～６７８；Ｓｅｌｉｇｅｒ，Ｂ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．２０１９、８、２１６８に記載される等、当業者によって周知である。
【0063】
そのような抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１抗体の例は、限定されることなく、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、又はアテゾリズマブを含む。
【0064】
具体的な実施形態において、「抗ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１治療」は、それを必要とする対象において、治療有効量の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１剤、特に抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することを含む。
【0065】
そのような抗ＣＴＬＡ４抗体の例は、限定されることなく、イピリムマブを含む。
【0066】
具体的な実施形態において、「活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療」は、本明細書に規定される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療有効量、及び少なくとも１種の第２の薬物物質の、例えば付随した又は逐次的な共投与を含む、上で規定される方法を含み、前記第２の薬物物質は、免疫療法剤（抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、又は他の結合化合物等）、及び／或いはサイトカイン、例えば上で示される、例えばＩＬ－２若しくはＩＬ－１５、又はそれらの誘導体である。具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療は、本明細書に規定される抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体の治療有効量、及び抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体等の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１剤の治療有効量の共投与を含む。他の具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療は、任意選択でペムブロリズマブ等の抗ＰＤ１抗体との組合せでの、本明細書に規定される抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体の治療有効量、並びに、例えば上で示される、ＩＬ－２若しくはＩＬ－１５、又はそれらの誘導体、そのペグ化バリアント及びスーパーアゴニストバリアントの治療有効量の、例えば付随した又は逐次的な共投与を含む。
【0067】
具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は医薬組成物に製剤化される。例えば、医薬組成物は、緩衝剤、安定剤、抗酸化物質（ａｎｔｉｏｘｙｄａｎｔ）、界面活性剤、又は塩を含めた、１種又は複数の付加的な賦形剤を含んでもよい。
【0068】
一実施形態によれば、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を含む医薬組成物は、水溶液、例えば注射可能な製剤である。特定の実施形態によれば、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を含む医薬組成物は、注入用溶液である。静脈内又は皮下投与のための抗体製剤は、当技術分野において周知であり、例えばＲａｚｉｎｋｏｖら、Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ．２０１５年４月；２０（４）：４６８～８３に記載される。
【0069】
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を含む医薬組成物は、様々な濃度で製剤化され得る。例えば、製剤は、０．１μＭ～１ｍＭ、より好ましくは１μＭ～５００μＭ、５００μＭ～１ｍＭ、３００μＭ～７００μＭ、１μＭ～２００μＭ、１００μＭ～２００μＭ、２００μＭ～３００μＭ、３００μＭ～４００μＭ、４００μＭ～５００μＭ、５００μＭ～６００μＭ、６００μＭ～７００μＭ、８００μＭ～９００μＭ、又は９００μＭ～１ｍＭの濃度の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を含んでもよい。典型的に、製剤は、３００μＭ～７００μＭの濃度の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を含む。
【0070】
典型的に、ヒト患者における活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量は、投与あたり１００ｐｇ～７００ｍｇ（７０ｋｇの体重に基づき）の域にあるであろう。例えば、最大治療用量は、投与あたり０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１～５ｍｇ／ｋｇ又は１～５ｍｇ／ｋｇ又は０．１～２ｍｇ／ｋｇの域にあってもよい。そのような用量は、腫瘍医／医師によって決定される種々の間隔で投与されてもよく；例えば、用量は、毎日、週２回、毎週、隔週、３週間ごとに、又は毎月投与されてもよいことが解されるであろう。
【0071】
典型的に、具体的な実施形態において、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、典型的に２１日ごとに、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与される。
【0072】
例えば、単独療法としての活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（好ましくは、以降に記載されるｍＡｂ１）の静脈内投与のための適切な用量は、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、及び２００ｍｇから選択される。他の具体的な実施形態において、単独療法としての活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（好ましくは、ｍＡｂ１）の静脈内投与のための適切な用量は、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、及び２００ｍｇから選択される。より具体的な実施形態において、単独療法としての活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（好ましくは、ｍＡｂ１）の静脈内投与のための適切な用量は、投与あたり２０及び７５ｍｇから選択される。
【0073】
前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組合せで投与される具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の静脈内投与のための適切な用量は、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、及び２００ｍｇから選択される。抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、メーカーの承認された用量に従って投与されてもよい。例えば、本開示の方法の具体的な実施形態において、ペムブロリズマブ（キイトルーダ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ））は、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（好ましくは、ｍＡｂ１）との組合せで投与されてもよく、典型的に、ペムブロリズマブは２００ｍｇの用量で静脈内注入によって投与され、ｍＡｂ１は２０～７０ｍｇの用量で投与される。
【0074】
具体的な実施形態において、本開示の方法に従った使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（好ましくは、以降に記載されるｍＡｂ１）は、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、好ましくは第２の投薬は、第１の投薬の少なくとも１５日後、典型的には約２１日後に投与される。
【0075】
好ましい活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体
具体的な実施形態において、本開示の方法に従った使用のための前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、以下の特性のうちの１つ又は複数を有する：
（ｉ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、例えば下の実施例に記載されるように、ＳＰＲによって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１ｎＭ以下のＫＤでＢＴＮ３Ａに結合する；
（ｉｉ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、例えば下の実施例に記載されるように、ＳＰＲによって測定される１００ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１０ｎＭ以下のＫＤで、配列番号２１のカニクイザルＢＴＮ３Ａ１、配列番号２２のＢＴＮ３Ａ２、及び／又は配列番号２３のＢＴＮ３Ａ３に交差反応する；
（ｉｉｉ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、下の実施例に記載されるように、フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される５０μｇ／ｍｌ以下の、好ましくは１０μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣに結合する；
（ｉｖ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、下の実施例に記載されるように、脱顆粒アッセイにおいて測定される５μｇ／ｍｌを下回る、好ましくは１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養において、γδ－Ｔ細胞、典型的にはＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する。
具体的な実施形態において、本開示の方法に従った使用のための前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、以下の特性のうちの１つ又は複数を有する：
（ｉ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、例えば下の実施例に記載されるように、ＳＰＲによって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１ｎＭ以下のＫＤでＢＴＮ３Ａに結合する；
（ｉｉ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、例えば下の実施例に記載されるように、ＳＰＲによって測定される１００ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１０ｎＭ以下のＫＤで、配列番号２１のカニクイザルＢＴＮ３Ａ１、配列番号２２のＢＴＮ３Ａ２、及び／又は配列番号２３のＢＴＮ３Ａ３に交差反応する；
（ｉｉｉ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、下の実施例に記載されるように、フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される５０μｇ／ｍｌ以下の、好ましくは１０μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣに結合する；
（ｉｖ）活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、下の実施例に記載されるように、脱顆粒アッセイにおいて測定される５μｇ／ｍｌを下回る、好ましくは１μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養において、γδ－Ｔ細胞、典型的にはＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する。
【0076】
具体的な実施形態において、本開示の方法における使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の少なくとも同じ親和性（又は優れた親和性）を有しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。具体的な実施形態において、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、国際公開第２０１２／０８０３５１号に開示される親抗体ｍＡｂ７．２のヒト化抗体である。他の例は、国際公開第２０１２／０８０３５１号に開示される親抗体ｍＡｂ２０．１のヒト化抗体を含む。
【0077】
一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（又はその一部分）が、非ヒト抗体、例えばネズミ科ｍＡｂ７．２又はｍＡｂ２０．１に由来し、フレームワーク領域（ＦＲ）（又はその一部分）が、免疫原性を低下させる変異を有するネズミ科抗体配列に由来する、１つ又は複数の可変ドメインを含む。
【0078】
ヒト化抗体は、ヒト定常領域の少なくとも一部分も任意選択で含むであろう。
【0079】
具体的な実施形態において、本開示に従った活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、ヒト化サイレント抗体、典型的にはヒト化サイレントＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体である。
【0080】
本明細書において使用するとき、「サイレント」抗体という用語は、実施例に記載されるもの等の結合アッセイにおいて測定されるように、ＦｃγＲ結合及び／若しくはＣ１ｑ結合を呈しない、又は低いＦｃγＲ結合及び／若しくはＣ１ｑ結合を呈する抗体を指す。
【0081】
１つの実施形態において、「ＦｃγＲ及び／若しくはＣ１ｑ結合なし、又は低いＦｃγＲ及び／若しくはＣ１ｑ結合」という用語は、サイレント抗体が、野生型ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプを有する対応する抗体を用いて観察されるＦｃγＲ及び／又はＣ１ｑ結合の少なくとも５０％を下回る、例えば８０％を下回る、ＦｃγＲ及び／又はＣ１ｑ結合を呈することを意味する。
【0082】
本開示の方法における使用のための好ましい抗体は、ネズミ科ｍＡｂ７．２抗体の以下の６つのＣＤＲを含む重鎖及び軽鎖を有する抗体の使用を含む（国際公開第２０１２／８０７６９号にも開示される）。
【0083】
ｍＡｂ７．２の及びｍＡｂ２０．１のＶＨ ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１とも呼ばれる）、ＶＨ ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２とも呼ばれる）、ＶＨ ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ１とも呼ばれる）、ＶＬ ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１とも呼ばれる）、ＶＬ ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２とも呼ばれる）、ＶＬ ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３とも呼ばれる）のアミノ酸配列が表１に示され、ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ番号付け（Ｋａｂａｔら、１９９２、以降「Ｋａｂａｔら」）を使用して記述される。
【0084】
読みやすさのために、ＣＤＲ領域は、以降、それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と呼ばれる。
【0085】
【表1】
【0086】
より好ましい抗体は、表１に開示されるｍＡｂ７．２又はｍＡｂ２０．１の６つのＣＤＲを有するヒト化抗体を含む。
【0087】
他の具体的な実施形態において、本開示の方法は、国際公開第２０１２／８０７６９号に開示されるｍＡｂ２０．１抗体のＣＤＲを含む重鎖及び軽鎖を有する抗体の使用を含む。特に、より具体的な実施形態において、本開示の方法は、親ネズミ科ｍＡｂ２０．１の、ｍＡｂ２０．１抗体のＣＤＲを含むヒト化抗体の使用を含む。
【0088】
本開示の方法において使用されるヒト化抗体は、対応するネズミ科抗体と比較して、典型的にはｍＡｂ７．２又はｍＡｂ２０．１の対応するフレームワーク領域と比較して、抗体の免疫原性を減少させるために、ＶＨ及びＶＬ内のフレームワーク残基に加えられた改変を含んでもよい。
【0089】
１つの具体的な実施形態において、本開示の抗体は、親ネズミ科抗体ｍＡｂ７．２のヒト化モノクローナル抗体であって、ｍＡｂ７．２の６つのＣＤＲを有し、親ネズミ科ｍＡｂ７．２の元のネズミ科フレームワーク領域と比較した場合、ＶＨフレームワーク領域において、少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｖ５Ｑ；Ｖ１１Ｌ；Ｋ１２Ｖ；Ｒ６６Ｋ；Ｓ７４Ｆ；Ｉ７５Ｓ；Ｅ８１Ｑ；Ｓ８２ＡＲ；Ｒ８２ＢＳ；Ｒ８３Ｔ；Ｄ８５Ｅ；Ｔ８７Ｓ；Ｌ１０８Ｓを更に含み；Ｖκフレームワーク領域において、少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｔ５Ｎ；Ｖ１５Ｌ；Ｒ１８Ｔ；Ｖ１９Ｉ；Ｋ４２Ｎ；Ａ４３Ｉ；Ｄ７０Ｇ；Ｆ７３Ｌ；Ｑ１００Ｇを更に含むものある。
【0090】
別の具体的な実施形態において、本開示の抗体は、親ネズミ科抗体ｍＡｂ７．２のヒト化モノクローナル抗体であって、ｍＡｂ７．２と比較して、親ネズミ科ｍＡｂ７．２の元のネズミ科フレームワーク領域と比較した場合、ＶＨフレームワーク領域において、少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｖ５Ｑ；Ｖ１１Ｌ；Ｋ１２Ｖ；Ｒ６６Ｋ；Ｓ７４Ｆ；Ｉ７５Ｓ；Ｅ８１Ｑ；Ｓ８２ＡＲ；Ｒ８２ＢＳ；Ｒ８３Ｔ；Ｄ８５Ｅ；Ｔ８７Ｓ；Ｌ１０８Ｓを含み；Ｖκフレームワーク領域において、少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｔ５Ｎ；Ｖ１５Ｌ；Ｒ１８Ｔ；Ｖ１９Ｉ；Ｋ４２Ｎ；Ａ４３Ｉ；Ｓ６３Ｔ；Ｄ７０Ｇ；Ｆ７３Ｌ；Ｑ１００Ｇを含むものである。
より好ましい実施形態において、本開示の方法は、下の表２に記載される、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、及びｍＡｂ５からなる群から選択され、可変重鎖及び軽鎖アミノ酸配列、並びに任意選択でヒト定常領域（アイソタイプ）を含む、以下のヒト化組み換え抗体のうちの１種の使用を含む：
より好ましい実施形態において、本開示の方法は、下の表２に記載される、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、及びｍＡｂ５からなる群から選択され、可変重鎖及び軽鎖アミノ酸配列、並びに任意選択でヒト定常領域（アイソタイプ）を含む、以下のヒト化組み換え抗体のうちの１種の使用を含む：
【0091】
【表2】
【0092】
ｍＡｂ１～ｍＡｂ４及びｍＡｂ５を作出するために使用される、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、並びにそれらの変異体型ＩｇＧ１ Ｌ２４７Ｆ／Ｌ２４８Ｅ／Ｐ３５０Ｓ及びＩｇＧ４ Ｓ２４１Ｐ／Ｌ２４８Ｅの定常アイソタイプ領域の対応するアミノ酸及びヌクレオチドコード配列は、当技術分野において周知である（Ｏｇａｎｅｓｙａｎら、２００８；Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６４、７００～７０４；Ｒｅｄｄｙら、２０００；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４、１９２５～１９３３）。ＩｇＧに見出されるＣ末端リジンは天然に切断されることがあり、この改変は抗体の特性に影響を及ぼさない；そのため、この残基は、ｍＡｂ１～ｍＡｂ４及びｍＡｂ５の構築物において付加的に欠失されてもよい。
【0093】
ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、及びｍＡｂ５の全長軽鎖及び重鎖、並びに対応するコード配列は、下の表３に示される。
【0094】
【表3】
【0095】
以前の実施形態と組み合わせられてもよいある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、上で規定される抗体の抗体フラグメントである。
【0096】
本明細書において使用するとき、抗体フラグメントという用語は、元の抗体と、ＢＴＮ３Ａ標的に対する実質的に同じ機能的特性を有する抗原結合領域を維持する、抗体の任意のフラグメントを含む。
【0097】
抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ユニボディ、及びｓｃＦｖフラグメント、ダイアボディ、単一ドメイン又はナノボディ、並びに他のフラグメントを含むが、それらに限定されるわけではない。
【0098】
具体的な実施形態において、前記抗体フラグメントは、ｓｃＦｖフラグメントのＦａｂ等、１価の抗体である。
【0099】
「ダイアボディ」という用語は、フラグメントが、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを指す。同じ鎖の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対合し、２つの抗原結合部位を創出することを強いられる。
【0100】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべて若しくは一部分、又は軽鎖可変ドメインのすべて若しくは一部分を含む抗体フラグメントである。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【0101】
抗体フラグメントは、無傷抗体のタンパク質分解的消化、並びに本明細書に記載される組み換え宿主細胞による産生を含むがそれらに限定されない、多様な技法によって作製され得る。
【0102】
活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を産生するための方法
本開示の方法における使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（ａｎｔｏｂｉｄｅｓ）は、当技術分野において周知である、例えば組み換えＤＮＡ技法と遺伝子トランスフェクション法との組合せを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて産生され得る（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９、１２０２～１２０７）。
本開示の方法における使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体（ａｎｔｏｂｉｄｅｓ）は、当技術分野において周知である、例えば組み換えＤＮＡ技法と遺伝子トランスフェクション法との組合せを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて産生され得る（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９、１２０２～１２０７）。
【0103】
１つの具体的な実施形態において、本開示に従ったクローニング又は発現ベクターは、適切なプロモーター配列に作動的に連結された、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、又はｍＡｂ５のうちのいずれか１種の重鎖及び軽鎖のコード配列の１つを含む。
【0104】
本開示の組み換え抗体を発現させるための哺乳類宿主細胞は、ＤＨＦＲ選択可能なマーカー（Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ、１９８２ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２、１３０４～１３１９に記載される）とともに使用されるｄｈｆｒ－チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、１９８０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７７、４２１６～４２２０に記載される）、ＣＨＯＫ１ ｄｈｆｒ＋細胞株、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、及びＳＰ２細胞、例えばＧＳ ＸｃｅｅｄＴＭ遺伝子発現システム（Ｌｏｎｚａ）を一緒に有するＧＳ ＣＨＯ細胞株を含めた、ＣＨＯ細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組み換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入された場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現に十分な期間宿主細胞を培養すること、及び任意選択で、宿主細胞が成長する培養培地への抗体の分泌によって産生される。抗体は、標準的タンパク質精製法を使用して、それら抗体の分泌の後に、例えば培養培地から回収及び精製され得る（Ｓｈｕｋｌａら、２００７、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８、２８～３９）。
【0105】
１つの具体的な実施形態において、本開示の宿主細胞は、適切なプロモーター配列に作動的に連結された、それぞれｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、又はｍＡｂ５の発現に適切なコード配列を有する発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞である。
【0106】
例えば、ｍＡｂ１の重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする配列番号８及び１０の核酸を少なくとも含む宿主細胞が、本開示の方法に従った使用のための抗体を産生するために使用される。
【0107】
後者の宿主細胞は、次いで、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、及びｍＡｂ５からなる群から典型的に選択される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の発現及び産生のための適切な条件下でそれぞれ更に培養されてもよい。
【0108】
代替的に、無細胞発現システムが、任意の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体、例えばｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３、ｍＡｂ４、及びｍＡｂ５の産生に使用されてもよい。典型的に、タンパク質又は抗体の無細胞発現の方法は、すでに記載されている（Ｓｔｅｃｈら、２０１７、Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．７、１２０３０）。
血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数又はＶγ９＋ Ｔ細胞密度を評価する
本開示の方法は、上で記載される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療に対する対象の応答のレベルを予測することを可能にする。ある特定の実施形態において、予測は、血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数の評価に基づく。他の実施形態において、予測は、患者の腫瘍の生検からのＶγ９＋ Ｔ細胞密度の評価に基づく。他の実施形態において、予測は、血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数及びＶγ９＋ Ｔ細胞密度の評価の両方に基づく。
血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数又はＶγ９＋ Ｔ細胞密度を評価する
本開示の方法は、上で記載される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療に対する対象の応答のレベルを予測することを可能にする。ある特定の実施形態において、予測は、血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数の評価に基づく。他の実施形態において、予測は、患者の腫瘍の生検からのＶγ９＋ Ｔ細胞密度の評価に基づく。他の実施形態において、予測は、血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数及びＶγ９＋ Ｔ細胞密度の評価の両方に基づく。
【0109】
本明細書において使用するとき、「予測する」という用語は、治療前に、前記治療に対する応答のレベルを、ある特定のレベルの確率（統計的に有意な）を有して決定することを可能にする方法を指す。したがって、「予測する」という用語は、必ずしも絶対的応答からならない。むしろ、予測は、選択ステップなしの患者集団における平均確率と比較して、患者がレスポンダーであるより高い確率を決定することを可能にする応答からなってもよい。
【0110】
本明細書において使用するとき、「活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療に対する応答」又は等しく「活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療に対する臨床応答」は、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療によって治療される対象となるがんの症状の少なくとも１つが、治療前の前記症状と比較して治療後に減少する場合に観察される。
【0111】
本明細書において使用するとき、「減少する」又は「増加する」という用語は、対照値の統計的に有意な減少又は増加、好ましくは、対照値の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９９％の減少又は増加を意味する。
【0112】
本発明の方法のある特定の実施形態によれば、患者は、治療前に、前記対象のある容積の血液サンプルにおいて決定される血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数の発現の評価に基づいて、レスポンダー又は非レスポンダーであると予測される。
【0113】
本発明の方法の他の実施形態によれば、患者は、治療前に、前記対象のある容積の腫瘍生検において決定されるＶγ９＋ Ｔ細胞密度の発現の評価に基づいて、レスポンダー又は非レスポンダーであると予測される。
【0114】
本明細書において使用される「レスポンダー」という用語は、非レスポンダー対象と比較して、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に対してより良好な臨床応答を示す又は示す可能性がある患者を意味する。一実施形態において、レスポンダーは、例えば、標準的腫瘍査定、例えば固形腫瘍に対するＲＥＣＩＳＴ、ｉＲＥＣＩＳＴ、若しくはＲＥＣＩＬ、又は血液学的適応症に対する他の標準的応答評価、例えばＣｈｅｓｏｎ／ＩＷＧによって決定される、腫瘍の有意なサイズ低下を示す又は示す可能性がある、がんに罹患している患者である。
【0115】
本開示のある特定の方法において、前記対象は、前記対象における血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた治療に選択されている。血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が高ければ高いほど、前記抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療に対する応答はより良好である。本開示の他の方法において、前記対象は、前記対象の腫瘍の生検からの腫瘍Ｖγ９＋ Ｔ細胞密度を評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた治療に選択されている。腫瘍ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が高ければ高いほど、前記抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療に対する応答はより良好である。
【0116】
本発明者らは、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体、典型的にはｍＡｂ１活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体に対するレスポンダーを選択するための予測マーカーとしての、血中基礎γδ Ｔ細胞計数又は腫瘍Ｖγ９＋ Ｔ細胞密度の使用についての臨床的証拠を実際に提供している。
【0117】
血液サンプルにおけるベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を決定するステップを含む方法
具体的な実施形態において、本開示の方法は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療で治療されるべき前記対象から得られた血液サンプルにおけるベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を決定するステップを含む。
具体的な実施形態において、本開示の方法は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療で治療されるべき前記対象から得られた血液サンプルにおけるベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を決定するステップを含む。
【0118】
本明細書において使用するとき、血液サンプルは、バキュテナー等、標準的な血液回収法によって得られる。
【0119】
血液サンプルにおけるγδ Ｔ細胞の数を決定することは、免疫表現型解析の任意のルーチン的技法によって達成されることができる。典型的に、キャリブレーション用のビーズを使用したルーチン的／標準的フローサイトメトリー法。特定のアッセイ及びその構成要素に対する適当な条件は、当業者に周知であろう。
【0120】
ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数についてのこの査定は、典型的に、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の最初の投与の４日未満、好ましくは４８時間未満、より好ましくは２４時間未満前に行われる。
【0121】
高いベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数は、より良好な応答を予測することが見込まれる。しかしながら、治療に対する適格性について患者を選択するために使用されるべき正確なベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数は、患者の臨床的パラメーター（例えば、年齢、性別、先行ラインの治療）、がん診断、及び使用されるプロトコール（特に、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、単独療法として、又は他の療法、典型的には抗ＰＤ１若しくは抗ＰＤＬ１療法との組合せで使用される場合）に特に応じて、当業者によって決定されることができる。
【0122】
具体的な実施形態において、ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、１０００個細胞／ｍＬ、２０００個細胞／ｍＬ、３０００個細胞／ｍＬ、４０００個細胞／ｍＬ、５０００個細胞／ｍＬ、６０００個細胞／ｍＬ、７０００個細胞／ｍＬ、８０００個細胞／ｍＬ、９０００個細胞／ｍＬ、１００００個細胞／ｍＬ、１１０００個細胞／ｍＬ、１２０００個細胞／ｍＬ、１３０００個細胞／ｍＬ、１４０００個細胞／ｍＬ、１５０００個細胞／ｍＬ、１６０００個細胞／ｍＬ、１７０００個細胞／ｍＬ、１８０００個細胞／ｍＬ、１９０００個細胞／ｍＬよりも高い、又は２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、前記対象は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に選択される。
【0123】
具体的な実施形態において、前記対象は、固形腫瘍を有するがんに罹患しており、ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、前記対象において２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療（典型的にはｍＡｂ１治療、好ましくは７～２００ｍｇに含まれる用量での２回以上の注射）に選択される。
【0124】
具体的な実施形態において、前記対象は卵巣がんに罹患しており、前記対象におけるベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療（典型的にはｍＡｂ１治療、好ましくは７～２００ｍｇに含まれる用量での２回以上の注射）に選択される。
【0125】
具体的な実施形態において、前記対象は頭頸部扁平上皮がんに罹患しており、ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、前記対象において２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療（典型的にはｍＡｂ１治療、好ましくは７～２００ｍｇに含まれる用量での２回以上の注射）に選択される。
【0126】
本開示は、それを必要とする活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に対する患者の適格性を査定ための方法であって、前記方法は、前記対象の血液サンプルにおけるベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を決定するステップを含み、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に適格性がある対象は、ある特定の参照値を上回る、典型的には１０００～２００００個細胞／ｍＬに定められるベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数を有する、方法にも関する。
腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度を決定するステップを含む方法
具体的な実施形態において、本開示の方法は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療で治療されるべき前記対象から得られた腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度を決定するステップを含む。
腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度を決定するステップを含む方法
具体的な実施形態において、本開示の方法は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体治療で治療されるべき前記対象から得られた腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度を決定するステップを含む。
【0127】
Ｖγ９＋ Ｔ細胞密度を決定することは、免疫表現型解析の任意のルーチン的技法によって達成されることができる。典型的に、Ｖγ９＋ Ｔ細胞密度は、例えば実施例に記載されるように、抗体７Ｂ６等、Ｖγ９＋ ＴＣＲに特異的に向けられたモノクローナル抗体を用いた腫瘍生検における免疫組織化学によって査定される。
【0128】
ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度についてのこの査定は、典型的に、それを必要とする前記対象への前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の最初の投与の４日未満、好ましくは４８時間未満、より好ましくは２４時間未満前に行われる。
【0129】
高いＶγ９＋ Ｔ細胞密度は、より良好な応答を予測することが見込まれる。しかしながら、治療に対する適格性について患者を選択するために使用されるべき正確なＶγ９＋ Ｔ細胞密度は、患者の臨床的パラメーター（例えば、年齢、性別、先行ラインの治療）、がん診断、及び使用されるプロトコール（特に、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、単独療法として、又は他の療法、典型的には抗ＰＤ１若しくは抗ＰＤＬ１療法との組合せで使用される場合）に特に応じて、当業者によって決定されることができる。
【0130】
具体的な実施形態において、ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、前記対象からの腫瘍生検において１個細胞／ｍｍ２、２個細胞／ｍｍ２、３個細胞／ｍｍ２、又は４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、前記対象は、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に選択される。
【0131】
具体的な実施形態において、前記対象は、固形腫瘍を有するがんに罹患しており、ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、前記対象からの腫瘍生検において３個細胞／ｍｍ２よりも高い又は４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療（典型的にはｍＡｂ１治療、好ましくは７～２００ｍｇに含まれる用量での２回以上の注射）に選択される。
【0132】
具体的な実施形態において、前記対象は卵巣がんに罹患しており、ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、前記対象からの腫瘍生検において３個細胞／ｍｍ２よりも高い又は４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療（典型的にはｍＡｂ１治療、好ましくは７～２００ｍｇに含まれる用量での２回以上の注射）に選択される。
【0133】
具体的な実施形態において、前記対象は頭頸部扁平上皮がんに罹患しており、ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、前記対象からの腫瘍生検において３個細胞／ｍｍ２よりも高い又は４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療（典型的にはｍＡｂ１治療、好ましくは７～２００ｍｇに含まれる用量での２回以上の注射）に選択される。
【0134】
本開示は、それを必要とする活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に対する患者の適格性を査定ための方法であって、前記方法は、前記対象の腫瘍生検におけるベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度を決定するステップを含み、活性化抗ＢＴＮ３Ａ治療に適格性がある対象は、前記対象からの腫瘍生検において決定される３個細胞／ｍｍ２よりも高い又は４個細胞／ｍｍ２よりも高いベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度を有する、方法にも関する。
【0135】
本開示の方法の具体的な実施形態
Ｅ１．それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象は、（ｉ）治療前の前記対象の血液サンプルにおける血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数、又は（ｉｉ）治療前の前記対象の腫瘍生検におけるベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度、のいずれかを評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた前記治療に選択されている、単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
Ｅ１．それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象は、（ｉ）治療前の前記対象の血液サンプルにおける血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数、又は（ｉｉ）治療前の前記対象の腫瘍生検におけるベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度、のいずれかを評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた前記治療に選択されている、単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0136】
Ｅ２．（ｉ）ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、血液サンプルにおいて決定される５０００個細胞／ｍＬよりも高い、１００００個細胞／ｍＬよりも高い、若しくは２００００個細胞／ｍＬよりも高い、又は（ｉｉ）ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、腫瘍生検において決定される２個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは３個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、前記対象は前記治療に選択されている、Ｅ１に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0137】
Ｅ３．前記対象が非血液学的がんに罹患している、Ｅ１又はＥ２に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0138】
Ｅ４．前記対象が、黒色腫、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、膀胱、前立腺、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）等の肺がん、頭頸部扁平上皮がん、及び尿路上皮がんから選択されるがんに罹患している、Ｅ３に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0139】
Ｅ５．前記対象が、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）又は卵巣がんに罹患している、Ｅ４に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0140】
Ｅ６．前記対象が再発性／難治性固形腫瘍を有している、Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0141】
Ｅ７．前記対象が血液学的悪性腫瘍に罹患している、Ｅ１又はＥ２に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0142】
Ｅ８．前記対象が、Ｂ細胞リンパ系新生物、Ｔ細胞リンパ系新生物、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ－ＮＨＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＬＣ）、Ｔ－ＮＨＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ＮＫ細胞リンパ系新生物、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含めた骨髄細胞系統新生物から選択される血液学的悪性腫瘍に罹患している、Ｅ７に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0143】
Ｅ９．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは５ｎＭ以下の、例えば５０ｐＭ～５ｎＭのＫＤで、ヒトＢＴＮ３Ａポリペプチドに結合する、Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0144】
Ｅ１０．ＳＰＲによって測定される１００ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１０ｎＭ以下のＫＤで、カニクイザルＢＴＮ３Ａに交差反応する、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0145】
Ｅ１１．活性化マーカーＣＤ６９の表面発現によって測定される０．１ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｐｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣにおけるＶγ９Ｖδ２－Ｔ細胞の活性化をインビトロで誘導する；又は脱顆粒アッセイにおいて測定される５ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｎｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養においてＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する、Ｅ１～Ｅ１０のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0146】
Ｅ１２．配列番号１２のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、配列番号１４のＨＣＤＲ３、配列番号１５のＬＣＤＲ１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0147】
Ｅ１３．ヒト化抗体である、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0148】
Ｅ１４．ＶＨフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｖ５Ｑ；Ｖ１１Ｌ；Ｋ１２Ｖ；Ｒ６６Ｋ；Ｓ７４Ｆ；Ｉ７５Ｓ；Ｅ８１Ｑ；Ｓ８２ＡＲ；Ｒ８２ＢＳ；Ｒ８３Ｔ；Ｄ８５Ｅ；Ｔ８７Ｓ；Ｌ１０８Ｓ；及びＶｋフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｔ５Ｎ；Ｖ１５Ｌ；Ｒ１８Ｔ；Ｖ１９Ｉ；Ｋ４２Ｎ；Ａ４３Ｉ；Ｄ７０Ｇ；Ｆ７３Ｌ；Ｑ１００Ｇを含む、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0149】
Ｅ１５．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域を含み、前記変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域が、野生型ＩｇＧ１アイソタイプ定常領域を有する対応する抗体と比較した場合、Ｆｃγ受容体への結合なし又は結合の減少を付与する、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0150】
Ｅ１６．配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号２の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ１～Ｅ１５のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0151】
Ｅ１７．配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号３の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ１～Ｅ１５のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0152】
Ｅ１８．サイレントＦｃ領域、典型的には変異体ＩｇＧ１定常領域又は変異体ＩｇＧ４定常領域を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0153】
Ｅ１９．前記変異体ＩｇＧ１定常領域が、ＩｇＧ１トリプル変異体Ｌ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓである、Ｅ１８に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0154】
Ｅ２０．前記変異体ＩｇＧ４定常領域が、ＩｇＧ４ダブル変異体Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅである、Ｅ１８に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0155】
Ｅ２１．配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0156】
Ｅ２２．配列番号４の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0157】
Ｅ２３．配列番号５の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0158】
Ｅ２４．配列番号５の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0159】
Ｅ２５．サイトカインとの組合せで投与される、Ｅ１～Ｅ２４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0160】
Ｅ２６．前記サイトカインが、ＩＬ２又はＩＬ１５アゴニストである、Ｅ２５に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0161】
Ｅ２７．免疫療法剤との組合せで投与される、Ｅ１～Ｅ２６のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0162】
Ｅ２８．前記免疫療法剤が、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、Ｅ２７に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0163】
Ｅ２９．前記抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、又はアテゾリズマブから選択され、好ましくはペムブロリズマブである、Ｅ２８に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0164】
Ｅ３０．（ｉ）抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、並びに（ｉｉ）ＩＬ２若しくはＩＬ１５アゴニスト等のサイトカイン、又はそれらの誘導体、ペグ化バリアント、及びそのスーパーアゴニストバリアントとの組合せで投与される、Ｅ２７に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0165】
Ｅ３１．活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内である、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0166】
Ｅ３２．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内である、Ｅ１～Ｅ３１のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0167】
Ｅ３３．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、好ましくは第２の投薬が、第１の投薬の少なくとも１５日後、典型的には約２１日後に投与される、Ｅ１～Ｅ３２のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0168】
Ｅ３４．７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ１～Ｅ３３のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0169】
Ｅ３５．ｍＡｂ１であり、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0170】
Ｅ３６．ｍＡｂ１であり、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えばペムブロリズマブとの組合せで、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0171】
Ｅ３７．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、前記対象が、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）又は卵巣がんに罹患しており、（ｉ）ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、血液サンプルにおいて決定される５０００個細胞／ｍＬよりも高い、１００００個細胞／ｍＬよりも高い、若しくは２００００個細胞／ｍＬよりも高い、又は（ｉｉ）ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、腫瘍生検において決定される２個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは３個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、前記対象は前記治療に選択されている、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0172】
Ｅ３８．治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記ヒト対象は、（ｉ）血液サンプルからの血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数、又は（ｉｉ）前記対象の腫瘍生検からのベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度、のいずれかを評価することによって、前記抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体治療に選択されている、方法。
【0173】
Ｅ３９．（ｉ）ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、５０００個細胞／ｍＬよりも高い、１００００個細胞／ｍＬよりも高い、若しくは２００００個細胞／ｍＬよりも高い、又は（ｉｉ）ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、腫瘍生検において決定される２個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは３個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは４個細胞／ｍｍ２よりも高い場合、前記対象は前記治療に選択されている、Ｅ３８に記載の方法。
【0174】
Ｅ４０．前記対象が非血液学的がんに罹患している、Ｅ３８又はＥ３９に記載の方法。
【0175】
Ｅ４１．前記対象が、黒色腫、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、膀胱、前立腺、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）等の肺がん、頭頸部扁平上皮がん、及び尿路上皮がんから選択されるがんに罹患している、Ｅ４０に記載の方法。
【0176】
Ｅ４２．前記対象が、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）又は卵巣がんに罹患している、Ｅ４０に記載の方法。
【0177】
Ｅ４３．前記対象が再発性／難治性固形腫瘍を有している、Ｅ３８～Ｅ４２のいずれか１つに記載の方法。
【0178】
Ｅ４４．前記対象が血液学的悪性腫瘍に罹患している、Ｅ３８～Ｅ４３のいずれか１つに記載の方法。
【0179】
Ｅ４５．前記対象が、Ｂ細胞リンパ系新生物、Ｔ細胞リンパ系新生物、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ－ＮＨＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＬＣ）、Ｔ－ＮＨＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ＮＫ細胞リンパ系新生物、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含めた骨髄細胞系統新生物から選択される血液学的悪性腫瘍に罹患している、Ｅ４４に記載の方法。
【0180】
Ｅ４６．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは５ｎＭ以下の、例えば５０ｐＭ～５ｎＭのＫＤで、ヒトＢＴＮ３Ａポリペプチドに結合する、Ｅ３８～Ｅ４５のいずれか１つに記載の方法。
【0181】
Ｅ４７．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、ＳＰＲによって測定される１００ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１０ｎＭ以下のＫＤで、カニクイザルＢＴＮ３Ａに交差反応する、Ｅ３８～Ｅ４６のいずれか１つに記載の方法。
【0182】
Ｅ４８．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、活性化マーカーＣＤ６９の表面発現によって測定される０．１ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｐｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣにおけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化をインビトロで誘導する、Ｅ３８～Ｅ４７のいずれか１つに記載の方法。
【0183】
Ｅ４９．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、脱顆粒アッセイにおいて測定される５ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｎｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養においてＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する、Ｅ３８～Ｅ４８のいずれか１つに記載の方法。
【0184】
Ｅ５０．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号１２のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、配列番号１４のＨＣＤＲ３、配列番号１５のＬＣＤＲ１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む、Ｅ３８～Ｅ４９のいずれか１つに記載の方法。
【0185】
Ｅ５１．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がヒト化抗体である、Ｅ３８～Ｅ５０のいずれか１つに記載の方法。
【0186】
Ｅ５２．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、ＶＨフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｖ５Ｑ；Ｖ１１Ｌ；Ｋ１２Ｖ；Ｒ６６Ｋ；Ｓ７４Ｆ；Ｉ７５Ｓ；Ｅ８１Ｑ；Ｓ８２ＡＲ；Ｒ８２ＢＳ；Ｒ８３Ｔ；Ｄ８５Ｅ；Ｔ８７Ｓ；Ｌ１０８Ｓ；及びＶｋフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｔ５Ｎ；Ｖ１５Ｌ；Ｒ１８Ｔ；Ｖ１９Ｉ；Ｋ４２Ｎ；Ａ４３Ｉ；Ｄ７０Ｇ；Ｆ７３Ｌ；Ｑ１００Ｇを含む、Ｅ５１に記載の方法。
【0187】
Ｅ５３．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域を含み、前記変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域が、野生型ＩｇＧ１アイソタイプ定常領域を有する対応する抗体と比較した場合、Ｆｃｇ受容体への結合なし又は結合の減少を付与する、Ｅ３８～Ｅ５１のいずれか１つに記載の方法。
【0188】
Ｅ５４．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号２の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ３８～Ｅ５３のいずれか１つに記載の方法。
【0189】
Ｅ５５．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号３の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ３８～Ｅ５３のいずれか１つに記載の方法。
【0190】
Ｅ５６．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、サイレントＦｃ領域、典型的には変異体ＩｇＧ１定常領域又は変異体ＩｇＧ４定常領域を含む、Ｅ３８～Ｅ５５のいずれか１つに記載の方法。
【0191】
Ｅ５７．前記変異体ＩｇＧ１定常領域が、ＩｇＧ１トリプル変異体Ｌ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓである、Ｅ５６に記載の方法。
【0192】
Ｅ５８．前記変異体ＩｇＧ４定常領域が、ＩｇＧ４ダブル変異体Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅである、Ｅ５６に記載の方法。
【0193】
Ｅ５９．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ３８～Ｅ５８のいずれか１つに記載の方法。
【0194】
Ｅ６０．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ３８～Ｅ５８のいずれか１つに記載の方法。
【0195】
Ｅ６１．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号５の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ３８～Ｅ５８のいずれか１つに記載の方法。
【0196】
Ｅ６２．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号５の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ３８～Ｅ５８のいずれか１つに記載の方法。
【0197】
Ｅ６３．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、サイトカインとの組合せで投与される、Ｅ３８～Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
【0198】
Ｅ６４．前記サイトカインが、ＩＬ２又はＩＬ１５アゴニストである、Ｅ６３に記載の方法。
【0199】
Ｅ６５．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、免疫療法剤との組合せで投与される、Ｅ３８～Ｅ６４のいずれか１つに記載の方法。
【0200】
Ｅ６６．前記免疫療法剤が、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、Ｅ６５に記載の方法。
【0201】
Ｅ６７．前記抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、又はアテゾリズマブから選択され、好ましくはペムブロリズマブである、Ｅ６６に記載の方法。
【0202】
Ｅ６８．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、（ｉ）抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、並びに（ｉｉ）ＩＬ２若しくはＩＬ１５アゴニスト等のサイトカイン、又はそれらの誘導体、ペグ化バリアント、及びそのスーパーアゴニストバリアントとの組合せで投与される、Ｅ６６に記載の方法。
【0203】
Ｅ６９．活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内である、Ｅ３８～Ｅ６８のいずれか１つに記載の方法。
【0204】
Ｅ７０．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内である、Ｅ６９に記載の方法。
【0205】
Ｅ７１．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、典型的に第２の投薬が、第１の投薬の少なくとも１５日後、例えば第１の投薬の２１日後に投与される、Ｅ３８～Ｅ７０のいずれか１つに記載の方法。
【0206】
Ｅ７２．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ３８～Ｅ７１のいずれか１つに記載の方法。
【0207】
Ｅ７３．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、好ましくは第２の投薬が、第１の投薬の少なくとも１５日後、典型的には約２１日後に投与される、Ｅ３８～Ｅ７２のいずれか１つに記載の方法。
【0208】
Ｅ７４．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ３８～Ｅ７３のいずれか１つに記載の方法。
【0209】
Ｅ７５．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えばペムブロリズマブとの組合せで、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ３８～Ｅ７４のいずれか１つに記載の方法。
【0210】
Ｅ７６．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がｍＡｂ１であり、前記対象が、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）又は卵巣がんに罹患しており、ベースライン循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数が、５０００個細胞／ｍＬよりも高い、１００００個細胞／ｍＬよりも高い、又は２００００個細胞／ｍＬよりも高い場合、前記対象は前記治療に選択されている、Ｅ３８～Ｅ７５のいずれか１つに記載の方法。
【0211】
Ｅ７７．それを必要とする対象を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の使用であって、前記対象は、（ｉ）本明細書を通して本明細書に記載されるように、前記対象の血液サンプルにおける血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数；又は（ｉｉ）本明細書を通して本明細書に記載されるように、ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、前記対象の腫瘍生検において決定される２個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは３個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは４個細胞／ｍｍ２よりも高い、のいずれかを評価することによって、前記治療に選択されている、使用。
【0212】
Ｅ７８．それを必要とする対象における、本明細書に開示される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体を用いた治療に対する適格性を決定する方法であって、（ｉ）本明細書を通して本明細書に記載されるように、前記対象の血液サンプルにおける血中ベースラインＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞計数；又は（ｉｉ）本明細書を通して本明細書に記載されるように、ベースラインＶγ９＋ Ｔ細胞密度が、前記対象の腫瘍生検において決定される２個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは３個細胞／ｍｍ２よりも高い、若しくは４個細胞／ｍｍ２よりも高い、のいずれかを評価するステップを含む、方法。
【0213】
Ｅ７９．それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記対象が、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１治療の後に再発性又は難治性腫瘍を有しており、前記対象が、治療有効量の前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体との組合せで、治療有効量の抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１剤を投与される、単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0214】
Ｅ８０．それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記腫瘍が、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び頭頸部扁平上皮癌からなる群から特に選択される固形腫瘍である、単離された活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0215】
Ｅ８１．血液学的悪性腫瘍を治療することにおける使用のための、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体であって、前記血液学的悪性腫瘍が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫及び急性骨髄性白血病から選択される、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0216】
Ｅ８２．それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療することにおける使用のためであり、前記腫瘍が、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び頭頸部扁平上皮癌からなる群から特に選択される固形腫瘍である、Ｅ７９に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0217】
Ｅ８３．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは５ｎＭ以下の、例えば５０ｐＭ～５ｎＭのＫＤで、ヒトＢＴＮ３Ａポリペプチドに結合する、Ｅ７９～Ｅ８２のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0218】
Ｅ８４．ＳＰＲによって測定される１００ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１０ｎＭ以下のＫＤで、カニクイザルＢＴＮ３Ａに交差反応する、Ｅ７９～Ｅ８３のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0219】
Ｅ８５．活性化マーカーＣＤ６９の表面発現によって測定される０．１ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｐｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣにおけるＶγ９Ｖδ２－Ｔ細胞の活性化をインビトロで誘導する、Ｅ７９～Ｅ８４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0220】
Ｅ８６．前記抗体が、脱顆粒アッセイにおいて測定される５ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｎｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養においてＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する、Ｅ７９～Ｅ８５のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0221】
Ｅ８７．配列番号１２のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、配列番号１４のＨＣＤＲ３、配列番号１５のＬＣＤＲ１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む、Ｅ７９～Ｅ８６のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0222】
Ｅ８８．ヒト化抗体である、Ｅ７９～Ｅ８７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0223】
Ｅ８９．ＶＨフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｖ５Ｑ；Ｖ１１Ｌ；Ｋ１２Ｖ；Ｒ６６Ｋ；Ｓ７４Ｆ；Ｉ７５Ｓ；Ｅ８１Ｑ；Ｓ８２ＡＲ；Ｒ８２ＢＳ；Ｒ８３Ｔ；Ｄ８５Ｅ；Ｔ８７Ｓ；Ｌ１０８Ｓ；及びＶｋフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｔ５Ｎ；Ｖ１５Ｌ；Ｒ１８Ｔ；Ｖ１９Ｉ；Ｋ４２Ｎ；Ａ４３Ｉ；Ｄ７０Ｇ；Ｆ７３Ｌ；Ｑ１００Ｇを含む、Ｅ７９～Ｅ８８のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0224】
Ｅ９０．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域を含み、前記変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域が、野生型ＩｇＧ１アイソタイプ定常領域を有する対応する抗体と比較した場合、Ｆｃγ受容体への結合なし又は結合の減少を付与する、Ｅ７９～Ｅ８９のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0225】
Ｅ９１．配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号２の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ７９～Ｅ９０のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0226】
Ｅ９２．配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号３の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ７９～Ｅ９０のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0227】
Ｅ９３．サイレントＦｃ領域、典型的には変異体ＩｇＧ１定常領域又は変異体ＩｇＧ４定常領域を含む、Ｅ７９～Ｅ９２のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0228】
Ｅ９４．前記変異体ＩｇＧ１定常領域が、ＩｇＧ１トリプル変異体Ｌ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓである、Ｅ９３に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0229】
Ｅ９５．配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ７９～Ｅ９４のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0230】
Ｅ９６．配列番号４の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ７９～Ｅ９５のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0231】
Ｅ９７．配列番号５の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ７９～Ｅ９６のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0232】
Ｅ９８．配列番号５の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ７９～Ｅ９７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0233】
Ｅ９９．サイトカインとの組合せで投与される、Ｅ７９～Ｅ９８のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0234】
Ｅ１００．前記サイトカインが、ＩＬ２又はＩＬ１５アゴニストである、Ｅ９９に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0235】
Ｅ１０１．免疫療法剤との組合せで投与される、Ｅ８０～Ｅ１００のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0236】
Ｅ１０２．抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体からなる群から選択される免疫療法剤との組合せで投与される、Ｅ７９～Ｅ１０１のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0237】
Ｅ１０３．ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、又はアテゾリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはペムブロリズマブとの組合せで投与される、Ｅ７９～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0238】
Ｅ１０４．活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内である、Ｅ７９～Ｅ１０３のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0239】
Ｅ１０５．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含み、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内であり、対象が、治療有効量のペムブロリズマブとともに投与される、Ｅ７９に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0240】
Ｅ１０６．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含み、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療単位用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内である、Ｅ８０に記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0241】
Ｅ１０７．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、好ましくは第２の投薬が、第１の投薬の少なくとも１５日後、典型的には約２１日後に投与される、Ｅ７９～Ｅ１０６のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0242】
Ｅ１０８．７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ７９～Ｅ１０７のいずれか１つに記載の使用のための活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体。
【0243】
Ｅ１０９．治療有効量の抗ＰＤ１／ＰＤＬ１治療との組合せで、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａを投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記対象が、抗ＰＤ１／ＰＤＬ１治療に対して再発性又は難治性腫瘍を有している、方法。
【0244】
Ｅ１１０．Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａを投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における腫瘍を治療するための方法であって、前記腫瘍が、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び頭頸部扁平上皮癌からなる群から特に選択される固形腫瘍である、方法。
【0245】
Ｅ１１１．Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する治療有効量の活性化抗ＢＴＮ３Ａを投与するステップを含む、それを必要とするヒト対象における血液学的悪性腫瘍を治療するための方法であって、前記血液学的悪性腫瘍が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫及び急性骨髄性白血病から選択される、方法。
【0246】
Ｅ１１２．前記腫瘍が、膀胱がん、黒色腫、非小細胞肺がん、及び脳転移からなる群から特に選択される固形腫瘍である、Ｅ１０９に記載の方法。
【0247】
Ｅ１１３．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される１０ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは５ｎＭ以下の、例えば５０ｐＭ～５ｎＭのＫＤで、ヒトＢＴＮ３Ａポリペプチドに結合する、Ｅ１０９～Ｅ１１２のいずれか１つに記載の方法。
【0248】
Ｅ１１４．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、ＳＰＲによって測定される１００ｎＭ以下のＫＤで、好ましくは１０ｎＭ以下のＫＤで、カニクイザルＢＴＮ３Ａに交差反応する、Ｅ１０９～Ｅ１１３のいずれか１つに記載の方法。
【0249】
Ｅ１１５．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、活性化マーカーＣＤ６９の表面発現によって測定される０．１ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｐｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ヒトＰＢＭＣにおけるＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化をインビトロで誘導する、Ｅ１０９～Ｅ１１４のいずれか１つに記載の方法。
【0250】
Ｅ１１６．前記抗体が、脱顆粒アッセイにおいて測定される５ｍｇ／ｍＬを下回る、好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下の、例えば１００ｎｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で、ＢＴＮ３発現細胞との共培養においてＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の活性化を誘導する、Ｅ１０９～Ｅ１１５のいずれか１つに記載の方法。
【0251】
Ｅ１１７．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号１２のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、配列番号１４のＨＣＤＲ３、配列番号１５のＬＣＤＲ１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む、Ｅ１０９～Ｅ１１６のいずれか１つに記載の方法。
【0252】
Ｅ１１８．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体がヒト化抗体である、Ｅ１０９～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
【0253】
Ｅ１１９．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、ＶＨフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｖ５Ｑ；Ｖ１１Ｌ；Ｋ１２Ｖ；Ｒ６６Ｋ；Ｓ７４Ｆ；Ｉ７５Ｓ；Ｅ８１Ｑ；Ｓ８２ＡＲ；Ｒ８２ＢＳ；Ｒ８３Ｔ；Ｄ８５Ｅ；Ｔ８７Ｓ；Ｌ１０８Ｓ；及びＶｋフレームワーク領域における少なくとも以下のアミノ酸変異：Ｔ５Ｎ；Ｖ１５Ｌ；Ｒ１８Ｔ；Ｖ１９Ｉ；Ｋ４２Ｎ；Ａ４３Ｉ；Ｄ７０Ｇ；Ｆ７３Ｌ；Ｑ１００Ｇを含む、Ｅ１０９～Ｅ１１８のいずれか１つに記載の方法。
【0254】
Ｅ１２０．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域を含み、前記変異体又は化学修飾されたＩｇＧ１定常領域が、野生型ＩｇＧ１アイソタイプ定常領域を有する対応する抗体と比較した場合、Ｆｃｇ受容体への結合なし又は結合の減少を付与する、Ｅ１０９～Ｅ１１９のいずれか１つに記載の方法。
【0255】
Ｅ１２１．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号２の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２０のいずれか１つに記載の方法。
【0256】
Ｅ１２２．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号３の可変軽鎖（ＶＬ）を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２０のいずれか１つに記載の方法。
【0257】
Ｅ１２３．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、サイレントＦｃ領域、典型的には変異体ＩｇＧ１定常領域又は変異体ＩｇＧ４定常領域を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２２のいずれか１つに記載の方法。
【0258】
Ｅ１２４．前記変異体ＩｇＧ１定常領域が、ＩｇＧ１トリプル変異体Ｌ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓである、Ｅ１０９～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の方法。
【0259】
Ｅ１２５．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の方法。
【0260】
Ｅ１２６．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の方法。
【0261】
Ｅ１２７．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号５の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の方法。
【0262】
Ｅ１２８．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号５の重鎖及び配列番号７の軽鎖を含む、Ｅ１０９～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の方法。
【0263】
Ｅ１２９．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、サイトカインとの組合せで投与される、Ｅ１０９～Ｅ１２８のいずれか１つに記載の方法。
【0264】
Ｅ１３０．前記サイトカインが、ＩＬ２又はＩＬ１５アゴニストである、Ｅ１２９に記載の方法。
【0265】
Ｅ１３１．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、免疫療法剤との組合せで投与される、Ｅ１０９～Ｅ１３０のいずれか１つに記載の方法。
【0266】
Ｅ１３２．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体からなる群から選択される免疫療法剤との組合せで投与される、Ｅ１０９～Ｅ１３１のいずれか１つに記載の方法。
【0267】
Ｅ１３３．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、又はアテゾリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはペムブロリズマブとの組合せで投与される、Ｅ１０９～Ｅ１３２のいずれか１つに記載の方法。
【0268】
Ｅ１３４．活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内である、Ｅ１０９～Ｅ１３３のいずれか１つに記載の方法。
【0269】
Ｅ１３５．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含み、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内であり、対象が、治療有効量のペムブロリズマブとともに投与される、Ｅ１０９～Ｅ１１２のいずれか１つに記載の方法。
【0270】
Ｅ１３６．前記抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、配列番号４の重鎖及び配列番号６の軽鎖を含み、活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の治療用量が、投与あたり７～２００ｍｇ以内、好ましくは２０～７５ｍｇ以内である、Ｅ１０９～Ｅ１１２のいずれか１つに記載の方法。
【0271】
Ｅ１３７．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、各投薬７～２００ｍｇに含まれる用量で少なくとも２回静脈内投与され、好ましくは第２の投薬が、第１の投薬の少なくとも１５日後、典型的には約２１日後に投与される、Ｅ１０９～Ｅ１３６のいずれか１つに記載の方法。
【0272】
Ｅ１３８．前記活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体が、７、１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７０、又は２００ｍｇから選択される用量で投与される、Ｅ１０９～Ｅ１３７のいずれか１つに記載の方法。
【0273】
Ｅ１３９．好ましくは有効量の抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１剤、例えばペムブロリズマブ等の抗ＰＤ１抗体との組合せで、本明細書に開示される活性化抗ＢＴＮ３Ａ抗体の有効量を投与するステップを含む、それを必要とする対象の腫瘍における免疫細胞浸潤を増強するための方法。
【0274】
Ｅ１４０．前記免疫細胞が、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む、Ｅ１３９に記載の方法。
【実施例】
【0275】
本開示に従った使用のための抗ＢＴＮ３Ａ活性化抗体を特徴付けする方法
１．１ 結合親和性アッセイ：マルチサイクル速度論アッセイ（ＳＰＲ）
マルチサイクル速度論分析は、ビアコアＴ２００エバリュエーション（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）ソフトウェアＶ２．０．１（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）をランするビアコアＴ２００（シリアル番号１９０９９１３）機器を使用して、抗ＢＴＮ３Ａ抗体に対して実施され得る。
１．１ 結合親和性アッセイ：マルチサイクル速度論アッセイ（ＳＰＲ）
マルチサイクル速度論分析は、ビアコアＴ２００エバリュエーション（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）ソフトウェアＶ２．０．１（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）をランするビアコアＴ２００（シリアル番号１９０９９１３）機器を使用して、抗ＢＴＮ３Ａ抗体に対して実施され得る。
【0276】
精製された抗体を、２％ＢＳＡ／ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌの濃度に希釈する。各サイクルの開始時に、各抗体を、約１４６．５ＲＵ（約５０ＲＵのＲＭａｘを得るための理論値）の密度で（ＲＬ）、プロテインＡに捕捉する。捕捉後、ＢＴＮ３Ａ１抗原（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ番号１５９７３－Ｈ０８Ｈ）のインジェクション前に、表面を安定させる。ＢＴＮ３Ａ１を、２５～０．７８ｎＭの２倍希釈域で、０．１％ＢＳＡ／ＨＢＳ－Ｐ＋（ランニング緩衝液）において滴定する。会合相を４００秒間、解離相を３５分間（２１００秒間）モニターする。速度論データを、任意の潜在的物質移動効果を最小限に抑えるために、５０μｌ／分の流速を使用して得る。各サイクルの終了時に、１０ｍＭグリシン－ＨＣＬ ｐＨ１．５の２回のインジェクションを使用して、プロテインＡ表面の再生を行う。２つのブランク（ＢＴＮ３Ａ１なし）、及び単一濃度の分析物の繰り返しを各テスト抗体に対して実施して、速度論サイクルにわたって表面及び分析物の安定性をチェックする。参照チャネルＦｃ１からのシグナルをＦｃ２、Ｆｃ３、及びＦｃ４のものから差し引いて、参照表面への非特異的結合の差を補正する。付加的に、ブランクランを各Ｆｃに対して差し引いて、ドリフト等の任意の抗原非依存的シグナル変動を補正する。グローバルＲＭａｘパラメーター及びバルクシグナルなし（一定ＲＩ＝０ＲＵ）を有する１対１結合数学的モデルを使用して、センサーグラムをフィッテイングさせる。
１．２ ヒトＰＢＭＣに対するフローサイトメトリーによる結合アッセイ
本開示に従った使用のための抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、健常ドナーの血液から単離されたヒトＰＢＭＣへのそれら抗体の結合についても特徴付けされることができる。ＰＢＭＣを、リンホプレップ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）（Ａｘｉｓ－ｓｈｉｅｌｄ、Ｄｕｎｄｅｅ、ＵＫ）密度遠心分離を使用して、バフィーコートから単離する。次いで、ＰＢＭＣを凍結し、要されるまで－８０℃で又は液体窒素において保管する。
１．２ ヒトＰＢＭＣに対するフローサイトメトリーによる結合アッセイ
本開示に従った使用のための抗ＢＴＮ３Ａ抗体は、健常ドナーの血液から単離されたヒトＰＢＭＣへのそれら抗体の結合についても特徴付けされることができる。ＰＢＭＣを、リンホプレップ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）（Ａｘｉｓ－ｓｈｉｅｌｄ、Ｄｕｎｄｅｅ、ＵＫ）密度遠心分離を使用して、バフィーコートから単離する。次いで、ＰＢＭＣを凍結し、要されるまで－８０℃で又は液体窒素において保管する。
【0277】
１×１０６個細胞／ｍｌの１００μｌ細胞を、新しいＵ型底９６ウェルプレートの各ウェルに移し、次いでプレートを遠心分離し、上清を捨てた。
【0278】
０．００１μｇ／ｍｌ～１５０μｇ／ｍｌの抗体の連続希釈を、ＰＢＳ ２ｍＭ ＥＤＴＡにおいて調製する。ヒトＰＢＭＣを、調製された５０μｌの希釈されたテスト抗体滴定シリーズに再懸濁した。
【0279】
暗所にて４℃における３０分間のインキュベーションの後、プレートを遠心分離し、１５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ２ｍＭ ＥＤＴＡで２回洗浄し、その後、ウェルを、ＰＢＳ ２ｍＭ ＥＤＴＡにおいて１／１００希釈されたヤギ抗ヒト抗体（ＰＥ標識された）、及び１／５００希釈されたライブ／デッド（Ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）近ＩＲから構成される５０μｌのミックスに再懸濁する。
【0280】
暗所にて４℃における１５分間のインキュベーションの後、プレートを遠心分離し、１５０μｌ／ウェルのＰＢＳ ２ｍＭ ＥＤＴＡで１回洗浄し、その後、ウェルを、２００μｌ ＰＢＳ ２ｍＭ ＥＤＴＡに再懸濁する。細胞をＢＤ ＬＳＲフォルテッサ（Ｆｏｒｔｅｓｓａ）サイトメーターで分析する。データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（バージョン１０、ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＵＳＡ）を使用して分析する。
【0281】
同じプロトコールを、カニクイザルＰＢＭＣに対して及びダウディバーキットリンパ腫細胞株に対して実施してもよい。
１．３ インビトロ機能効力：γδ－Ｔ細胞脱顆粒アッセイ
アッセイは、ダウディバーキットリンパ腫細胞株に対するγδ－Ｔ細胞脱顆粒に対する、抗ＢＴＮ３Ａ抗体の活性化又は阻害効果を測定することからなる（Ｈａｒｌｙら、２０１２）。γδ－Ｔ細胞を、ゾレドロン酸（１μＭ）及びＩＬ２（２００Ｕｉ／ｍｌ）とともに１１～１３日間培養することによって、健常ドナーのＰＢＭＣから増大させる。ＩＬ２を、５日目、８日目、及びその後２日ごとに添加する。γδ－Ｔ細胞のパーセンテージを培養の始動時に決定し、パーセンテージが少なくとも８０％に達するまで、培養の時間の間フローサイトメトリーによって査定する。凍結された又は新しいγδ－Ｔ細胞を、次いで、ダウディ細胞株に対する脱顆粒アッセイにおいて使用し（１：１のＥ：Ｔ比）、それによって、１０μｇ／ｍｌの７．２及び２０．１ヒト化バリアント及びそれらのキメラ型の存在下で、細胞を３７℃で４時間共培養する。ＰＭＡ（２０ｎｇ／ｍｌ）＋イオノマイシン（１μｇ／ｍｌ）による活性化は、γδ－Ｔ細胞脱顆粒に対する陽性対照として、培地のみは陰性対照として働いた。４時間の共インキュベーションの終了時に、細胞をフローサイトメトリーによって分析して、ＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ－１、リソソーム関連膜タンパク質－１）＋ＣＤ１０７ｂ（ＬＡＭＰ－２）に対して陽性のγδ－Ｔ細胞のパーセンテージを評価する。ＣＤ１０７は、活性化誘導性顆粒エキソサイトーシスの後に細胞表面に動員され、ゆえに、表面ＣＤ１０７の測定は、最近脱顆粒した細胞傷害性Ｔ細胞を特定するための高感度マーカーである。
１．３ インビトロ機能効力：γδ－Ｔ細胞脱顆粒アッセイ
アッセイは、ダウディバーキットリンパ腫細胞株に対するγδ－Ｔ細胞脱顆粒に対する、抗ＢＴＮ３Ａ抗体の活性化又は阻害効果を測定することからなる（Ｈａｒｌｙら、２０１２）。γδ－Ｔ細胞を、ゾレドロン酸（１μＭ）及びＩＬ２（２００Ｕｉ／ｍｌ）とともに１１～１３日間培養することによって、健常ドナーのＰＢＭＣから増大させる。ＩＬ２を、５日目、８日目、及びその後２日ごとに添加する。γδ－Ｔ細胞のパーセンテージを培養の始動時に決定し、パーセンテージが少なくとも８０％に達するまで、培養の時間の間フローサイトメトリーによって査定する。凍結された又は新しいγδ－Ｔ細胞を、次いで、ダウディ細胞株に対する脱顆粒アッセイにおいて使用し（１：１のＥ：Ｔ比）、それによって、１０μｇ／ｍｌの７．２及び２０．１ヒト化バリアント及びそれらのキメラ型の存在下で、細胞を３７℃で４時間共培養する。ＰＭＡ（２０ｎｇ／ｍｌ）＋イオノマイシン（１μｇ／ｍｌ）による活性化は、γδ－Ｔ細胞脱顆粒に対する陽性対照として、培地のみは陰性対照として働いた。４時間の共インキュベーションの終了時に、細胞をフローサイトメトリーによって分析して、ＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ－１、リソソーム関連膜タンパク質－１）＋ＣＤ１０７ｂ（ＬＡＭＰ－２）に対して陽性のγδ－Ｔ細胞のパーセンテージを評価する。ＣＤ１０７は、活性化誘導性顆粒エキソサイトーシスの後に細胞表面に動員され、ゆえに、表面ＣＤ１０７の測定は、最近脱顆粒した細胞傷害性Ｔ細胞を特定するための高感度マーカーである。
【0282】
ダウディ細胞の代わりに、標的細胞として患者から単離されたＡＭＬ芽球を使用して、同じプロトコールを実施してもよい。
【0283】
１．４ フローサイトメトリーによって絶対血中ベースラインγδ Ｔ細胞計数を決定する
γδ Ｔ細胞絶対計数の査定に関しては、新しい血液サンプル（１００μｌ）を、ＰＢＳ １％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）において調製された抗体（５０μｌ）、キャリブレーションビーズ（例えば、ＢＤ製のトルカウントビーズ（Ｔｒｕｃｏｕｎｔ ｂｅａｄｓ）、及び生存率マーカーのカクテルと混合する。サンプルを、暗所にて室温で２０分間インキュベートした。２ｍＬのあらかじめ温めた１×ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃４２０３０２）を添加し、ボルテックスし、さらなる２ｍＬの１×ＲＢＣ溶解緩衝液を添加し、それに続いて、暗所にて室温で１５分間インキュベートすることによって、赤血球（ＲＢＣ）を溶解した。ＰＢＳ １％ＦＢＳにおける洗浄の後、細胞ペレットを３００μＬのＰＢＳ １％ＦＢＳに再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳディーバ（Ｄｉｖａ）ソフトウェア（ｖ８．０）でのあらかじめ規定された適用設定を使用して、ＢＤ ＬＳＲフォルテッサＸ－２０で取得した。データを、方程式：（（ＭＦＩテスト－ＭＦＩ ＩＣ）／（ＭＦＩテスト投薬前－ＭＦＩ ＩＣ投薬前）×１００）を用いて正規化した。分析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ｖ１０．６）を使用して実施した。
γδ Ｔ細胞絶対計数の査定に関しては、新しい血液サンプル（１００μｌ）を、ＰＢＳ １％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）において調製された抗体（５０μｌ）、キャリブレーションビーズ（例えば、ＢＤ製のトルカウントビーズ（Ｔｒｕｃｏｕｎｔ ｂｅａｄｓ）、及び生存率マーカーのカクテルと混合する。サンプルを、暗所にて室温で２０分間インキュベートした。２ｍＬのあらかじめ温めた１×ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃４２０３０２）を添加し、ボルテックスし、さらなる２ｍＬの１×ＲＢＣ溶解緩衝液を添加し、それに続いて、暗所にて室温で１５分間インキュベートすることによって、赤血球（ＲＢＣ）を溶解した。ＰＢＳ １％ＦＢＳにおける洗浄の後、細胞ペレットを３００μＬのＰＢＳ １％ＦＢＳに再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳディーバ（Ｄｉｖａ）ソフトウェア（ｖ８．０）でのあらかじめ規定された適用設定を使用して、ＢＤ ＬＳＲフォルテッサＸ－２０で取得した。データを、方程式：（（ＭＦＩテスト－ＭＦＩ ＩＣ）／（ＭＦＩテスト投薬前－ＭＦＩ ＩＣ投薬前）×１００）を用いて正規化した。分析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ｖ１０．６）を使用して実施した。
【0284】
１．５ 腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度を決定する
腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度の査定に関しては、ヒト患者からの生検サンプルを、治療前及び治療後２８日目に回収した。各時点で、生検の半分をパラフィンに包埋し、もう半分を最適な切削温度化合物（ＯＣＴ）において瞬間凍結した。免疫組織化学を、ボンドＲＸ自動染色機（Ｂｏｎｄ ＲＸ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｓｔａｉｎｅｒ）（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でＶｅｒａｃｙｔｅ（Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって実施し、画像を、ナノズーマーＸＲスキャナー（Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ ＸＲ ｓｃａｎｎｅｒ）（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を使用して取得した。簡潔には、新しい凍結サンプルの６μｍ厚切片を、亜鉛ホルマリンにおいてＲＴで５分間固定し、ブロッキングのための５％ヒト血清とともに３０分間インキュベートし、２μｇ／ｍＬの抗ｐａｎＢＴＮ３Ａ ｍＡｂ（クローン２０．１）又は抗Ｖγ９ＴＣＲ ｍＡｂ（クローン７Ｂ６、Ｈｕａｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００８、４２６～４３６頁）でＲＴにて４５分間染色した。抗原－抗体結合を、ボンドポリマーリファインＲＥＤ検出キット（Ｂｏｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｒｅｆｉｎｅ ＲＥＤ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ）（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて明らかにした。次いで、組織切片をヘマトキシリンで対比染色した。ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、δＴＣＲ（クローンＨ－４１）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＦｏｘＰ３、Ｋｉ６７、ＣＤ８、ＮＫｐ４６、及びグランザイムＢに対する多重免疫組織化学染色を、単一のＦＦＰＥスライドにて、Ｖｅｒａｃｙｔｅ製のブライトプレックス（Ｂｒｉｇｈｔｐｌｅｘ）を使用して実施した。簡潔には、パラフィン包埋された生検からの４μｍスライドを脱ろうし、エピトープ復元溶液Ｉ（Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｉ）（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で２０分間処理し、示されるｍＡｂで連続して染色した。抗原－抗体結合を、ＭＡＣＨ ２ ＨＲＰポリマー（Ｂｉｏｃａｒｅ）を使用して明らかにした。次いで、組織切片をインパクト（ＩｍｍＰＡＣＴ）（商標）ＡＭＥＣ Ｒｅｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ）で染色し、ヘマトキシリンで対比染色した。各染色サイクルの間、スライドをエタノールによってＡＭＥＣ脱染し、抗体を変性溶液で剥がした。画像を、染色の各サイクルの間で取得した。
腫瘍生検におけるＶγ９＋ Ｔ細胞密度の査定に関しては、ヒト患者からの生検サンプルを、治療前及び治療後２８日目に回収した。各時点で、生検の半分をパラフィンに包埋し、もう半分を最適な切削温度化合物（ＯＣＴ）において瞬間凍結した。免疫組織化学を、ボンドＲＸ自動染色機（Ｂｏｎｄ ＲＸ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｓｔａｉｎｅｒ）（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でＶｅｒａｃｙｔｅ（Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって実施し、画像を、ナノズーマーＸＲスキャナー（Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ ＸＲ ｓｃａｎｎｅｒ）（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を使用して取得した。簡潔には、新しい凍結サンプルの６μｍ厚切片を、亜鉛ホルマリンにおいてＲＴで５分間固定し、ブロッキングのための５％ヒト血清とともに３０分間インキュベートし、２μｇ／ｍＬの抗ｐａｎＢＴＮ３Ａ ｍＡｂ（クローン２０．１）又は抗Ｖγ９ＴＣＲ ｍＡｂ（クローン７Ｂ６、Ｈｕａｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００８、４２６～４３６頁）でＲＴにて４５分間染色した。抗原－抗体結合を、ボンドポリマーリファインＲＥＤ検出キット（Ｂｏｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｒｅｆｉｎｅ ＲＥＤ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ）（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて明らかにした。次いで、組織切片をヘマトキシリンで対比染色した。ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、δＴＣＲ（クローンＨ－４１）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＦｏｘＰ３、Ｋｉ６７、ＣＤ８、ＮＫｐ４６、及びグランザイムＢに対する多重免疫組織化学染色を、単一のＦＦＰＥスライドにて、Ｖｅｒａｃｙｔｅ製のブライトプレックス（Ｂｒｉｇｈｔｐｌｅｘ）を使用して実施した。簡潔には、パラフィン包埋された生検からの４μｍスライドを脱ろうし、エピトープ復元溶液Ｉ（Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｉ）（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で２０分間処理し、示されるｍＡｂで連続して染色した。抗原－抗体結合を、ＭＡＣＨ ２ ＨＲＰポリマー（Ｂｉｏｃａｒｅ）を使用して明らかにした。次いで、組織切片をインパクト（ＩｍｍＰＡＣＴ）（商標）ＡＭＥＣ Ｒｅｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ）で染色し、ヘマトキシリンで対比染色した。各染色サイクルの間、スライドをエタノールによってＡＭＥＣ脱染し、抗体を変性溶液で剥がした。画像を、染色の各サイクルの間で取得した。
【0285】
実施例１：臨床調査－概要
進行期、再発性／難治性がんを有する患者における、単独療法としての及び免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）との組合せでの、ＩＣＴ０１の静脈内用量の安全性、忍容性、及び活性を査定するための、ファーストインヒューマン２パート非盲検の臨床調査（ＥＶＩＣＴＩＯＮ調査）
進行期、再発性／難治性がんを有する患者における、単独療法としての及び免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）との組合せでの、ＩＣＴ０１の静脈内用量の安全性、忍容性、及び活性を査定するための、ファーストインヒューマン２パート非盲検の臨床調査（ＥＶＩＣＴＩＯＮ調査）
【0286】
調査薬物：ＩＣＴ０１；ヒトブチロフィリン－３Ａ（ＢＴＮ３Ａ）を標的にする、Ｆｃエフェクター機能を低下させるように操作された、ヒト化活性化抗ＢＴＮ３Ａ免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）。
【0287】
パート１目的：
主要：進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１の広範な静脈内（ＩＶ）用量の全体的な安全性及び忍容性プロファイルを特徴付けする。
主要：進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１の広範な静脈内（ＩＶ）用量の全体的な安全性及び忍容性プロファイルを特徴付けする。
【0288】
副次的：
１．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者に投与されるＩＶ ＩＣＴ０１の薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）を特徴付けする。
２．単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１に関する増大コホート（パート２）に対する推奨用量（複数可）を決定する。
３．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者に投与される場合の、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１の広範なＩＶ用量の予備的抗腫瘍活性を特徴付けする。
１．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者に投与されるＩＶ ＩＣＴ０１の薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）を特徴付けする。
２．単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１に関する増大コホート（パート２）に対する推奨用量（複数可）を決定する。
３．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者に投与される場合の、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１の広範なＩＶ用量の予備的抗腫瘍活性を特徴付けする。
【0289】
パート２目的：
主要；進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＶ ＩＣＴ０１の予備的抗腫瘍活性を特徴付けする。
主要；進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＶ ＩＣＴ０１の予備的抗腫瘍活性を特徴付けする。
【0290】
副次的：
１．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＶ ＩＣＴ０１の全体的な安全性及び忍容性を特徴付けする。
２．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者に投与されるＩＶ ＩＣＴ０１のＰＫ及びＰＤを特徴付けする。
１．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＶ ＩＣＴ０１の全体的な安全性及び忍容性を特徴付けする。
２．進行期、再発性／難治性固形腫瘍又は血液学的がんを有する患者に投与されるＩＶ ＩＣＴ０１のＰＫ及びＰＤを特徴付けする。
【0291】
調査デザイン：
この調査は、ＩＣＴ０１の安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ、及び抗腫瘍活性を特徴付けするための、第Ｉ／ＩＩａ相ファーストインヒューマン２パート非盲検調査である。パート１は、進行期、再発性／難治性がんを有する患者に２１日ごとに投与される単独療法としてのＩＶ ＩＣＴ０１の用量漸増であろう（群Ａ：混合固形腫瘍；群Ｂ：進行性血液学的悪性腫瘍）。ＩＶ ＩＣＴ０１とペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１；キイトルーダ（登録商標））との組合せは、群Ｃ（ペムブロリズマブを用いた治療に適格であるが、治療の間、応答を示さなかった、進行した、又は再発した腫瘍）において評価されるであろう。
この調査は、ＩＣＴ０１の安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ、及び抗腫瘍活性を特徴付けするための、第Ｉ／ＩＩａ相ファーストインヒューマン２パート非盲検調査である。パート１は、進行期、再発性／難治性がんを有する患者に２１日ごとに投与される単独療法としてのＩＶ ＩＣＴ０１の用量漸増であろう（群Ａ：混合固形腫瘍；群Ｂ：進行性血液学的悪性腫瘍）。ＩＶ ＩＣＴ０１とペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１；キイトルーダ（登録商標））との組合せは、群Ｃ（ペムブロリズマブを用いた治療に適格であるが、治療の間、応答を示さなかった、進行した、又は再発した腫瘍）において評価されるであろう。
【0292】
パート２は、２種の固形腫瘍適応症（群Ｄ＆Ｅ）又は血液学的悪性腫瘍（群Ｆ）における付加的な患者が、単独療法としての望ましいリスク／利益プロファイルを示しているパート１において特定されたＩＣＴ０１用量で治療されるであろう、調査の増大期である。群Ｇは、単一適応症における、ＩＣＴ０１（最高２つの用量レベル）とペムブロリズマブとの組合せの増大であろう。パート２における用量及び適応症についての最終的な仕様は、調査のこのパートを始める前に実質的改正（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ａｍｅｎｄｍｅｎｔ）によりプロトコールにおいて更新されるであろう。
【0293】
ＩＣＴ０１の投与の経路は、３０分間にわたるＩＶ注入であろう。
【0294】
ペムブロリズマブ（キイトルーダ（登録商標））は、承認された用量である２００ｍｇ ＩＶ ｑ ２１日の用量で、群Ｃにおけるすべての患者に使用されるであろう。メーカーによれば、キイトルーダの用量低下は推奨されない。キイトルーダを控えて又は中断して、付属書：ペムブロリズマブ（キイトルーダ（登録商標））ペムブロリズマブ（キイトルーダ（登録商標））製品特徴の概要に記載される有害反応を管理する。
【0295】
群Ｄ（卵巣がん）及びＥ（頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ））：ＩＣＴ０１の２つの用量レベルは、７ｍｇ及び２００ｍｇであり、該用量は両方とも、薬力学的に活性であり安全であることが示されている。各用量群は、適応症あたり２５人までの患者であろう。すべてのスクリーニング査定の完了後及び彼らの適格性の確定後、患者は、０日目に、ＩＣＴ０１の７ｍｇ又は２００ｍｇのいずれかに１：１比で無作為に割り当てられるであろう。
【0296】
群Ｆ及びＧ：各群に対する選択された患者集団及びＩＣＴ０１用量（複数可）を伝達するために、パート２を開始する前に実質的改正が提出されるであろう。
【0297】
患者は、３週間のスクリーニング期間の間に適格性について評価されるであろう。生検は、パート１におけるように回収されるであろう。患者は、群Ｄ、Ｅ、及びＦにおいて単独療法として、又は群Ｇにおいてペムブロリズマブとの組合せで、ＩＶ ＩＣＴ０１で２１日ごとに治療されるであろう。
【0298】
調査集団
パート１の組み入れ基準
以下の基準は、スクリーニング期間の間及びベースライン時にチェックされなければならない。調査に対象を含めるために、すべての組み入れ基準が満たされなければならない：
パート１の組み入れ基準
以下の基準は、スクリーニング期間の間及びベースライン時にチェックされなければならない。調査に対象を含めるために、すべての組み入れ基準が満たされなければならない：
【0299】
１）≧１８歳の男性又は女性
２）任意の調査関連のスクリーニング手順の実施前の、自らの意思で署名された書面のインフォームドコンセント
３）
ａ．群Ａ：膀胱、乳房、結腸直腸、胃、黒色腫、卵巣、前立腺、及びＰＤＡＣ
ｂ．群Ｂ：急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含めた、血液学的悪性腫瘍
ｃ．群Ｃ：黒色腫、膀胱、頭頸部ＳＣＣ、及び非小細胞肺がん（ペムブロリズマブに対して、米国＆欧州連合において承認された適応症）
を含めた、進行期又は再燃性がんの組織学的に又は細胞学的に確定された診断を有する再発性／難治性患者
４）ベースライン及び調査中の腫瘍生検を受けようとする積極的意思
５）≦１の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス
６）治験責任医師によって査定される＞３ヶ月間の平均余命
２）任意の調査関連のスクリーニング手順の実施前の、自らの意思で署名された書面のインフォームドコンセント
３）
ａ．群Ａ：膀胱、乳房、結腸直腸、胃、黒色腫、卵巣、前立腺、及びＰＤＡＣ
ｂ．群Ｂ：急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含めた、血液学的悪性腫瘍
ｃ．群Ｃ：黒色腫、膀胱、頭頸部ＳＣＣ、及び非小細胞肺がん（ペムブロリズマブに対して、米国＆欧州連合において承認された適応症）
を含めた、進行期又は再燃性がんの組織学的に又は細胞学的に確定された診断を有する再発性／難治性患者
４）ベースライン及び調査中の腫瘍生検を受けようとする積極的意思
５）≦１の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス
６）治験責任医師によって査定される＞３ヶ月間の平均余命
【0300】
７）臨床検査室：
ａ．血液学：
≧８．５ｇ／ｄＬ（５．２８ｍｍｏｌ／Ｌに等しい；輸血依存性又は非依存性）のヘモグロビン；
群Ａ／Ｃのみ：
≧７５×１０９／Ｌの血小板計数；
≧０．５×１０９／Ｌのリンパ球計数；
≧１．０×１０９／Ｌの絶対好中球計数；
ｂ．肝酵素：
≦２．５×正常の上限（ＵＬＮ）（肝転移の場合には、＜５×ＵＬＮ）のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）及びアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）；
≦１．５×ＵＬＮ（肝転移の場合には、＜２×ＵＬＮ）のビリルビン；
ｃ．腎機能：＜１．５×ＵＬＮの血清クレアチニン、又は≧１．５×ＵＬＮの血清クレアチニンに関しては、≧５０ｍＬ／分のクレアチニンクリアランス（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ及びＧａｕｌｔ）
ａ．血液学：
≧８．５ｇ／ｄＬ（５．２８ｍｍｏｌ／Ｌに等しい；輸血依存性又は非依存性）のヘモグロビン；
群Ａ／Ｃのみ：
≧７５×１０９／Ｌの血小板計数；
≧０．５×１０９／Ｌのリンパ球計数；
≧１．０×１０９／Ｌの絶対好中球計数；
ｂ．肝酵素：
≦２．５×正常の上限（ＵＬＮ）（肝転移の場合には、＜５×ＵＬＮ）のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）及びアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）；
≦１．５×ＵＬＮ（肝転移の場合には、＜２×ＵＬＮ）のビリルビン；
ｃ．腎機能：＜１．５×ＵＬＮの血清クレアチニン、又は≧１．５×ＵＬＮの血清クレアチニンに関しては、≧５０ｍＬ／分のクレアチニンクリアランス（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ及びＧａｕｌｔ）
【0301】
８）避妊対策
ａ．妊娠可能な女性は：
ｉ．調査薬物の最初の投薬の１週間以内に陰性の妊娠テストを有しなければならない
ｉｉ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、産児制限の高度に有効な方法（複数可）を一貫して正しく使用しなければならない
ｉｉｉ．調査の間及び調査の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、生殖補助の目的で卵（卵子、卵母細胞）を贈与しないことに同意しなければならない
ｉｖ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、授乳する計画はない及び妊娠する計画はないことに同意しなければならない
ｂ．性的に活発である男性は：
ｉ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、精子殺菌フォーム／ゲル／フィルム／クリーム／座薬を有するコンドームを使用することに同意しなければならない
ｉｉ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、精子を贈与しないことに同意しなければならない
ｉｉｉ．調査の間又は調査薬物の最後の投薬後５ヶ月以内に、子どもをもうける計画はないとしなければならない
ａ．妊娠可能な女性は：
ｉ．調査薬物の最初の投薬の１週間以内に陰性の妊娠テストを有しなければならない
ｉｉ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、産児制限の高度に有効な方法（複数可）を一貫して正しく使用しなければならない
ｉｉｉ．調査の間及び調査の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、生殖補助の目的で卵（卵子、卵母細胞）を贈与しないことに同意しなければならない
ｉｖ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、授乳する計画はない及び妊娠する計画はないことに同意しなければならない
ｂ．性的に活発である男性は：
ｉ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、精子殺菌フォーム／ゲル／フィルム／クリーム／座薬を有するコンドームを使用することに同意しなければならない
ｉｉ．調査の間及び調査薬物の最後の投薬後少なくとも５ヶ月間、精子を贈与しないことに同意しなければならない
ｉｉｉ．調査の間又は調査薬物の最後の投薬後５ヶ月以内に、子どもをもうける計画はないとしなければならない
【0302】
９）女性は授乳してはならない
１０）固形腫瘍における応答評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）／リンパ腫における応答評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）（ＲＥＣＩＬ）による少なくとも１つの測定可能な病変、又は＞５％の骨髄芽球
１１）患者は、治療する治験責任医師によって決定される、彼らの疾患に対する使用可能な標準ケアを有してはならない
１０）固形腫瘍における応答評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）／リンパ腫における応答評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）（ＲＥＣＩＬ）による少なくとも１つの測定可能な病変、又は＞５％の骨髄芽球
１１）患者は、治療する治験責任医師によって決定される、彼らの疾患に対する使用可能な標準ケアを有してはならない
【0303】
１２）ＩＣＴ０１組合せアームにおける患者は、ペムブロリズマブの承認されたパッケージラベルにおける適格性基準を満たさなければならず、以下の条件を満たさなければならない：
ａ．第一選択の患者であってはならない（すなわち、組み入れ基準＃１１を満たさなければならない）
ｂ．間質性肺疾患のいかなる病歴も又は進行中の間質性肺疾患も有してはならない
ｃ．アログラフト幹細胞移植を含めた、先行する前部臓器移植を受けたことがあってはならない
ａ．第一選択の患者であってはならない（すなわち、組み入れ基準＃１１を満たさなければならない）
ｂ．間質性肺疾患のいかなる病歴も又は進行中の間質性肺疾患も有してはならない
ｃ．アログラフト幹細胞移植を含めた、先行する前部臓器移植を受けたことがあってはならない
【0304】
パート２群Ｄ及びＥ：
１３）組み入れ基準＃３を置き換える：
ａ．群Ｄ：持続性又は再燃性の上皮性卵巣がん、原発性卵管がん、又は原発性腹膜がん；少なくとも１種の先行する全身性白金含有レジメンに失敗した
ｂ．群Ｅ：少なくとも１種の先行する全身性レジメンに失敗した、転移性又は切除不能な再燃性ＨＮＳＣＣ
を含めた、進行期又は再燃性がんの組織学的に又は細胞学的に確定された診断を有する再発性／難治性患者
１３）組み入れ基準＃３を置き換える：
ａ．群Ｄ：持続性又は再燃性の上皮性卵巣がん、原発性卵管がん、又は原発性腹膜がん；少なくとも１種の先行する全身性白金含有レジメンに失敗した
ｂ．群Ｅ：少なくとも１種の先行する全身性レジメンに失敗した、転移性又は切除不能な再燃性ＨＮＳＣＣ
を含めた、進行期又は再燃性がんの組織学的に又は細胞学的に確定された診断を有する再発性／難治性患者
【0305】
１４）組み入れ基準＃１１を置き換える：患者は、調査への登録前に、彼らのがんに対する少なくとも１つラインの治療を受けたことがなければならない
１５）スクリーニングの間、血液の≧２００００個細胞／ｍＬの循環γ９δ２ Ｔ細胞計数
１５）スクリーニングの間、血液の≧２００００個細胞／ｍＬの循環γ９δ２ Ｔ細胞計数
【0306】
統計分析
分析集団
安全性集団は、固形腫瘍、血液学的腫瘍を有する、ＩＣＴ０１、又はペムブロリズマブとの組合せでのＩＣＴ０１の少なくとも１回の投薬を受けたすべての患者からなり、併用療法患者のデータは別個に分析されるであろう。効力評価可能な集団は、（ｉ）ＩＣＴ０１（＞１ヶ月間の療法）又は（ｉｉ）ペムブロリズマブとの組合せでの、効力評価にバイアスをかける可能性があるいかなるプロトコール逸脱も有しないＩＣＴ０１、の少なくとも２回の投薬で治療されたすべての患者からなり、一方で、治療意図（ＩＴＴ）集団は探索目的に使用されるであろう。パート２に関して、効力評価可能な集団は、８週目抗腫瘍査定（例えば、ＲＥＣＩＳＴ）を有するすべての治療された患者からなるであろう。
分析集団
安全性集団は、固形腫瘍、血液学的腫瘍を有する、ＩＣＴ０１、又はペムブロリズマブとの組合せでのＩＣＴ０１の少なくとも１回の投薬を受けたすべての患者からなり、併用療法患者のデータは別個に分析されるであろう。効力評価可能な集団は、（ｉ）ＩＣＴ０１（＞１ヶ月間の療法）又は（ｉｉ）ペムブロリズマブとの組合せでの、効力評価にバイアスをかける可能性があるいかなるプロトコール逸脱も有しないＩＣＴ０１、の少なくとも２回の投薬で治療されたすべての患者からなり、一方で、治療意図（ＩＴＴ）集団は探索目的に使用されるであろう。パート２に関して、効力評価可能な集団は、８週目抗腫瘍査定（例えば、ＲＥＣＩＳＴ）を有するすべての治療された患者からなるであろう。
【0307】
主要評価項目
パート１．安全性及び忍容性の主要評価項目は、治療により発生した有害事象（ＴＥＡＥ）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、調査治療の中断につながるＴＥＡＥの発生率、重症度、及び関係性；並びに臨床検査室テストに関する臨床的に重大な所見、バイタルサイン、ＥＣＧ、及び身体検査によって、本調査において評価されるであろう（パート２における主たる副次的評価項目）。
パート１．安全性及び忍容性の主要評価項目は、治療により発生した有害事象（ＴＥＡＥ）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、調査治療の中断につながるＴＥＡＥの発生率、重症度、及び関係性；並びに臨床検査室テストに関する臨床的に重大な所見、バイタルサイン、ＥＣＧ、及び身体検査によって、本調査において評価されるであろう（パート２における主たる副次的評価項目）。
【0308】
パート２．ＲＥＣＩＳＴ、ＲＥＣＩＬのとおり、又は血液学的悪性腫瘍に対する疾患特異的標準（例えば、ＡＭＬに対するＣｈｅｓｏｎ／ＩＷＧ基準）のとおり、臨床応答基準を含む病勢コントロール率（Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒａｔｅ）（ＤＣＲ）。ＤＣＲは、完全奏功（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）／寛解（ＣＲ）＋不完全回復（ＣＲｉ）を有するＣＲ＋部分奏効（Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）／寛解（ＰＲ）＋安定（Ｓｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）の合計である。
【0309】
副次的評価項目
パート１では、予備的抗腫瘍活性評価項目は、ＲＥＣＩＳＴ、ＲＥＣＩＬのとおり、又は血液学的適応症における疾患特異的標準（例えば、ＡＭＬに対するＣｈｅｓｏｎ／ＩＷＧ基準）のとおり、ＤＣＲ及び客観的奏効率（ＯＲＲ）であろう。固形腫瘍における免疫療法応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）は探索的と考えられるであろう。
パート１では、予備的抗腫瘍活性評価項目は、ＲＥＣＩＳＴ、ＲＥＣＩＬのとおり、又は血液学的適応症における疾患特異的標準（例えば、ＡＭＬに対するＣｈｅｓｏｎ／ＩＷＧ基準）のとおり、ＤＣＲ及び客観的奏効率（ＯＲＲ）であろう。固形腫瘍における免疫療法応答評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）は探索的と考えられるであろう。
【0310】
パート２では、ＲＥＣＩＳＴ、ＲＥＣＩＬのとおり、又は血液学的悪性腫瘍に対する疾患特異的標準（例えば、ＡＭＬに対するＣｈｅｓｏｎ／ＩＷＧ基準）のとおり、客観的奏効率（ＯＲＲ）。客観的奏効率は、完全奏功／寛解（ＣＲ）＋不完全回復（ＣＲｉ）を有するＣＲ＋部分奏効／寛解（ＰＲ）の合計である。ｉＲＥＣＩＳＴは探索的であろう。
【0311】
付加的な副次的評価項目は、安全性及び忍容性、無増悪期間（ｔｉｍｅ ｔｏ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）（ＴＴＰ）、並びに無増悪生存期間（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ－ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ）（ＰＦＳ）を含む。
【0312】
パート１及び２において、ＩＣＴ０１のＰＫパラメーター（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ、ｔ１／２、クリアランスを含む）は、用量レベルによって算出されるであろう。同じようにＩＣＴ０１のＰＤ活性（用量及び患者集団による）は、末梢血におけるγ９δ２ Ｔ細胞及び他の免疫細胞の計数及び活性化状態、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、並びに腫瘍生検、循環サイトカインレベル（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１７ａ、及びＭＣＰ－１を含む）、並びに腫瘍生検及びＰＢＭＣにおけるＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、及び他の免疫細胞マーカーの発現の、ベースラインからの変化を含むであろう。
【0313】
腫瘍生検からのベースラインＢＴＮ３Ａ発現及びγδ Ｔ細胞、並びに循環におけるベースラインγδ Ｔ細胞及びＢＴＮ３Ａ発現は、特徴付けされ、ＰＤ及び臨床応答分析に共変量として使用されるであろう。
【0314】
ＩＣＴ０１の活性用量レベルを決定するための主要なＰＤ活性尺度は、フローサイトメトリーによって測定される、循環γδ Ｔ細胞の、ベースラインからの減少及び活性化の増加であろう。
【0315】
実施例２：レスポンダーを選択するための予測マーカーとしてのγδ Ｔ細胞計数又はＶγ９＋ Ｔ細胞密度の使用についての臨床的証拠
材料及び方法
患者及び臨床試験
ＥＶＩＣＴＩＯＮ（ＮＣＴ０４２４３４９９）は、進行期、再発性／難治性がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１（ネズミ科ｍＡｂ７．２に由来するヒト化抗体）のＩＶ用量の安全性、忍容性、薬物動態、薬力学、及び抗腫瘍活性を査定するための、ファーストインヒューマン２パート非盲検の臨床調査である。成人患者は、適格性がある彼らのがんに対するすべての使用可能な標準ケアに失敗していなければならず、試験の組合せアームにおける患者を除いて、試験の間に他の抗がん療法を受けてはならない。患者は、３週間ごとにＩＣＴ０１（域：２０μｇ～２００ｍｇ）を受け、安全対策、全血に対する免疫表現型解析、及び血清サイトカイン分析のために、複数の時点で血液サンプルが回収される。
材料及び方法
患者及び臨床試験
ＥＶＩＣＴＩＯＮ（ＮＣＴ０４２４３４９９）は、進行期、再発性／難治性がんを有する患者における、単独療法としての及びペムブロリズマブとの組合せでの、ＩＣＴ０１（ネズミ科ｍＡｂ７．２に由来するヒト化抗体）のＩＶ用量の安全性、忍容性、薬物動態、薬力学、及び抗腫瘍活性を査定するための、ファーストインヒューマン２パート非盲検の臨床調査である。成人患者は、適格性がある彼らのがんに対するすべての使用可能な標準ケアに失敗していなければならず、試験の組合せアームにおける患者を除いて、試験の間に他の抗がん療法を受けてはならない。患者は、３週間ごとにＩＣＴ０１（域：２０μｇ～２００ｍｇ）を受け、安全対策、全血に対する免疫表現型解析、及び血清サイトカイン分析のために、複数の時点で血液サンプルが回収される。
【0316】
腫瘍生検をベースライン時及び２８日目に回収し、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞及び抗腫瘍免疫の他のマーカーに対して免疫組織化学によって染色する。
【0317】
多重サイトカインアッセイ
血清サイトカインレベル（ＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１３、ＴＮＦα）を、メーカーの使用説明書に従って、ＭＳＤ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）プラットフォームを使用して測定した。
血清サイトカインレベル（ＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１３、ＴＮＦα）を、メーカーの使用説明書に従って、ＭＳＤ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）プラットフォームを使用して測定した。
【0318】
フローサイトメトリー分析
ＩＣＴ０１投薬後の標的占有率（ＴＯ）の査定に関しては、新しい血液サンプル（１００μｌ）を、ＰＢＳ １％ＦＢＳにおいて調製された抗体（５０μｌ）の、抗ＣＤ４５、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１９、抗ＢＴＮ３Ａ ＩＣＴ０１競合ｍＡｂ（クローン２０．１）、抗ＢＴＮ３Ａ ＩＣＴ０１非競合ｍＡｂ（クローン１０３．２）、及び生存率マーカーを含有するカクテルと混合した。抗ＢＴＮ３Ａがそれら抗体それぞれのアイソタイプ対照によって置き換えられた第２のミックスを並行して使用した。サンプルを、暗所にてＲＴで２０分間インキュベートした。２ｍＬのあらかじめ温めた１×ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃４２０３０２）を添加し、ボルテックスし、さらなる２ｍＬの１×ＲＢＣ溶解緩衝液を添加し、それに続いて、暗所にてＲＴで１５分間インキュベートすることによって、ＲＢＣを溶解した。ＰＢＳ １％ＦＢＳにおける洗浄の後、細胞ペレットを３００μＬのＰＢＳ １％ＦＢＳに再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳディーバソフトウェア（ｖ８．０）でのあらかじめ規定された適用設定を使用して、ＢＤ ＬＳＲフォルテッサＸ－２０で取得した。データを、方程式：（（ＭＦＩテスト－ＭＦＩ ＩＣ）／（ＭＦＩテスト投薬前－ＭＦＩ ＩＣ投薬前）×１００）を用いて正規化した。検証された１３カラーパネルを用いた同じ手順を使用して、免疫表現型解析を実施した。分析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ｖ１０．６）を使用して実施した。
ＩＣＴ０１投薬後の標的占有率（ＴＯ）の査定に関しては、新しい血液サンプル（１００μｌ）を、ＰＢＳ １％ＦＢＳにおいて調製された抗体（５０μｌ）の、抗ＣＤ４５、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１９、抗ＢＴＮ３Ａ ＩＣＴ０１競合ｍＡｂ（クローン２０．１）、抗ＢＴＮ３Ａ ＩＣＴ０１非競合ｍＡｂ（クローン１０３．２）、及び生存率マーカーを含有するカクテルと混合した。抗ＢＴＮ３Ａがそれら抗体それぞれのアイソタイプ対照によって置き換えられた第２のミックスを並行して使用した。サンプルを、暗所にてＲＴで２０分間インキュベートした。２ｍＬのあらかじめ温めた１×ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃４２０３０２）を添加し、ボルテックスし、さらなる２ｍＬの１×ＲＢＣ溶解緩衝液を添加し、それに続いて、暗所にてＲＴで１５分間インキュベートすることによって、ＲＢＣを溶解した。ＰＢＳ １％ＦＢＳにおける洗浄の後、細胞ペレットを３００μＬのＰＢＳ １％ＦＢＳに再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳディーバソフトウェア（ｖ８．０）でのあらかじめ規定された適用設定を使用して、ＢＤ ＬＳＲフォルテッサＸ－２０で取得した。データを、方程式：（（ＭＦＩテスト－ＭＦＩ ＩＣ）／（ＭＦＩテスト投薬前－ＭＦＩ ＩＣ投薬前）×１００）を用いて正規化した。検証された１３カラーパネルを用いた同じ手順を使用して、免疫表現型解析を実施した。分析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ｖ１０．６）を使用して実施した。
【0319】
免疫組織化学
ＥＶＩＣＴＩＯＮ臨床試験からの生検サンプルを、治療前及び治療後２８日目に回収した。各時点で、生検の半分をパラフィンに包埋し、もう半分を最適な切削温度化合物（ＯＣＴ）において瞬間凍結した。免疫組織化学を、ボンドＲＸ自動染色機（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でＶｅｒａｃｙｔｅ（Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって実施し、画像を、ナノズーマーＸＲスキャナー（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を使用して取得した。簡潔には、新しい凍結サンプルの６μｍ厚切片を、亜鉛ホルマリンにおいてＲＴで５分間固定し、ブロッキングのための５％ヒト血清とともに３０分間インキュベートし、２μｇ／ｍＬの抗ｐａｎＢＴＮ３Ａ ｍＡｂ（クローン２０．１）又は抗Ｖγ９ＴＣＲ ｍＡｂ（Ｈｕａｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００８、４２６～４３６頁に記載されるクローン７Ｂ６）でＲＴにて４５分間染色した。抗原－抗体結合を、ボンドポリマーリファインＲＥＤ検出キット（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて明らかにした。次いで、組織切片をヘマトキシリンで対比染色した。ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、δＴＣＲ（クローンＨ－４１）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＦｏｘＰ３、Ｋｉ６７、ＣＤ８、ＮＫｐ４６、及びグランザイムＢに対する多重免疫組織化学染色を、単一のＦＦＰＥスライドにて、Ｖｅｒａｃｙｔｅ製のブライトプレックスを使用して実施した。簡潔には、パラフィン包埋された生検からの４μｍスライドを脱ろうし、エピトープ復元溶液Ｉ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で２０分間処理し、示されるｍＡｂで連続して染色した。抗原－抗体結合を、ＭＡＣＨ ２ ＨＲＰポリマー（Ｂｉｏｃａｒｅ）を使用して明らかにした。次いで、組織切片をインパクト（商標）ＡＭＥＣ Ｒｅｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ）で染色し、ヘマトキシリンで対比染色した。各染色サイクルの間、スライドをエタノールによってＡＭＥＣ脱染し、抗体を変性溶液で剥がした。画像を、染色の各サイクルの間で取得した。
ＥＶＩＣＴＩＯＮ臨床試験からの生検サンプルを、治療前及び治療後２８日目に回収した。各時点で、生検の半分をパラフィンに包埋し、もう半分を最適な切削温度化合物（ＯＣＴ）において瞬間凍結した。免疫組織化学を、ボンドＲＸ自動染色機（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でＶｅｒａｃｙｔｅ（Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって実施し、画像を、ナノズーマーＸＲスキャナー（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を使用して取得した。簡潔には、新しい凍結サンプルの６μｍ厚切片を、亜鉛ホルマリンにおいてＲＴで５分間固定し、ブロッキングのための５％ヒト血清とともに３０分間インキュベートし、２μｇ／ｍＬの抗ｐａｎＢＴＮ３Ａ ｍＡｂ（クローン２０．１）又は抗Ｖγ９ＴＣＲ ｍＡｂ（Ｈｕａｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００８、４２６～４３６頁に記載されるクローン７Ｂ６）でＲＴにて４５分間染色した。抗原－抗体結合を、ボンドポリマーリファインＲＥＤ検出キット（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて明らかにした。次いで、組織切片をヘマトキシリンで対比染色した。ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、δＴＣＲ（クローンＨ－４１）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＦｏｘＰ３、Ｋｉ６７、ＣＤ８、ＮＫｐ４６、及びグランザイムＢに対する多重免疫組織化学染色を、単一のＦＦＰＥスライドにて、Ｖｅｒａｃｙｔｅ製のブライトプレックスを使用して実施した。簡潔には、パラフィン包埋された生検からの４μｍスライドを脱ろうし、エピトープ復元溶液Ｉ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で２０分間処理し、示されるｍＡｂで連続して染色した。抗原－抗体結合を、ＭＡＣＨ ２ ＨＲＰポリマー（Ｂｉｏｃａｒｅ）を使用して明らかにした。次いで、組織切片をインパクト（商標）ＡＭＥＣ Ｒｅｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ）で染色し、ヘマトキシリンで対比染色した。各染色サイクルの間、スライドをエタノールによってＡＭＥＣ脱染し、抗体を変性溶液で剥がした。画像を、染色の各サイクルの間で取得した。
【0320】
結果
１．ベースラインγδ Ｔ細胞計数は、末梢血におけるＣＤ８ Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び顆粒球の抗ＢＴＮ３Ａ抗体媒介性活性化と相関する
ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者からの血液サンプルを、治療前（ベースライン）、並びにＩＣＴ０１注入の３０分、１、７、及び２１日後に得た。免疫表現型解析を実施して、顆粒球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８ ａｂ Ｔ細胞、並びにＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞サブセットを含む）の絶対数及び頻度、並びにそれら細胞の活性化状態（ＣＤ６９及び／又はＰＤＬ－１表面発現）を査定した。
１．ベースラインγδ Ｔ細胞計数は、末梢血におけるＣＤ８ Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び顆粒球の抗ＢＴＮ３Ａ抗体媒介性活性化と相関する
ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者からの血液サンプルを、治療前（ベースライン）、並びにＩＣＴ０１注入の３０分、１、７、及び２１日後に得た。免疫表現型解析を実施して、顆粒球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８ ａｂ Ｔ細胞、並びにＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞サブセットを含む）の絶対数及び頻度、並びにそれら細胞の活性化状態（ＣＤ６９及び／又はＰＤＬ－１表面発現）を査定した。
【0321】
すべての患者において、ＩＣＴ０１は、投薬の早くも４時間後に、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞の数及び頻度の両方の下降を誘導した。Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞レベルは、０．０７～２０ｍｇ ＩＣＴ０１を受けた患者において７日目～２１日目にベースラインに次第に戻り、その一方で、それらのレベルは、≧７５ｍｇの用量を投薬された患者において依然として非常に低いままである。ＣＤ６９表面発現の査定は、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞が、大部分のＩＣＴ０１治療を受けた患者において、ＩＣＴ０１投薬後に活性化プロファイルを持つことを示した。≧７ｍｇ ＩＣＴ０１を受けた患者において、ＮＫ、従来のγδ Ｔ細胞及びＢ細胞数は、投薬の３０分後一定して減少し、１日後ベースラインと比較して依然として低いままであり、すべてのコホートにおいて７日目にベースライン近くに回復した。この減少は、より低い程度で、ＮＫ及びＣＤ８ Ｔ細胞に対する活性化プロファイル（ＣＤ６９表面染色によって査定される）と関連している。加えて、顆粒球でのＰＤＬ－１発現の増加が、≧７ｍｇ ＩＣＴ０１を投薬された患者において一貫して観察される。
【0322】
本調査において査定された種々の免疫サブセットのベースライン数と相関する場合（スピアマン順位）、ＮＫ、ＣＤ８ Ｔ細胞、及び顆粒球活性化は、他の免疫対応物とではなく、循環Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のベースライン数と有意に関連しているように見え、Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞のＩＣＴ０１媒介性活性化の副次的効果を示唆した。
【0323】
ＥＶＩＣＴＩＯＮ試験からの群Ａ、Ｂ、及びＣの５５人の患者において、ＩＣＴ０１後のＮＫ細胞（ＣＤ６９陽性）の活性化は、ＩＣＴ０１曝露及びベースラインｇ９ｄ２ Ｔ細胞計数の両方に強く関係した（スピアマンｒ＝０．５６、ｐ＜０．０００１）（図１Ａを参照されたい）。
【0324】
顆粒球（ＰＤ－Ｌ１陽性）の活性化も、ＩＣＴ０１曝露及びベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数の両方に強く関係した（スピアマンｒ＝０．５５、ｐ＜０．０００１）（図１Ｂを参照されたい）。
【0325】
２．ベースラインγδ Ｔ細胞計数は、サイトカインのインビボ抗ＢＴＮ３Ａ抗体媒介性産生と相関する
サイトカインの循環濃度を、治療前、並びにＩＣＴ０１治療の３０分、４時間、１、７、及び２１日後に、ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者の血清においてＭＳＤプラットフォームを使用して定量した。ピーク濃度は、ピークがＩＣＴ０１投薬の３０分後に観察されたＴＮＦａを除いて、大部分のサイトカインに関してＩＣＴ０１投薬の４時間後に観察された。
サイトカインの循環濃度を、治療前、並びにＩＣＴ０１治療の３０分、４時間、１、７、及び２１日後に、ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者の血清においてＭＳＤプラットフォームを使用して定量した。ピーク濃度は、ピークがＩＣＴ０１投薬の３０分後に観察されたＴＮＦａを除いて、大部分のサイトカインに関してＩＣＴ０１投薬の４時間後に観察された。
【0326】
ベースライン時の循環γ９δ２ Ｔ細胞絶対計数と、ＩＣＴ０１投薬後の血清サイトカイン及びケモカインとの間の強い関係性が、ＩＦＮγ、ＴＮＦａ、ＩＬ－６、ＩＬ－８及びＩＬ－１ｂ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、並びにＩＬ－１２に関して観察された。
【0327】
ＥＶＩＣＴＩＯＮ試験からの群Ａ、Ｂ、及びＣの７５人の患者において、ＩＣＴ０１投薬後の最初の２４時間における循環ＩＦＮｇレベルの増加は、ＩＣＴ０１曝露及びベースラインγ９δ２ Ｔ細胞計数の両方に強く関係した（スピアマンｒ＝０．７９、ｐ＜０．０００１）（図１Ｃを参照されたい）。
【0328】
３．ベースラインγδ Ｔ細胞計数は、腫瘍における抗ＢＴＮ３Ａ抗体媒介性免疫腫瘍浸潤及び活性化と関連している
腫瘍性免疫浸潤を、デジタル病理学（ブライトプレックスプラットフォーム、ＨａｌｉｏＤＸ、Ｌｕｍｉｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）と連動した多重ＩＨＣ、及び遺伝子発現プロファイリング（ｎＣｏｕｎｔｅｒ ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇプラットフォーム）の両方を使用して、治療前及び治療後の腫瘍生検において評価した。
腫瘍性免疫浸潤を、デジタル病理学（ブライトプレックスプラットフォーム、ＨａｌｉｏＤＸ、Ｌｕｍｉｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）と連動した多重ＩＨＣ、及び遺伝子発現プロファイリング（ｎＣｏｕｎｔｅｒ ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇプラットフォーム）の両方を使用して、治療前及び治療後の腫瘍生検において評価した。
【0329】
治療後対治療前生検における種々の免疫細胞集団の細胞密度の変化を比較した場合、ベースライン時に最も高い末梢血Ｖガンマ９ Ｔ細胞絶対計数を有する患者は、治療後生検において免疫浸潤及び活性化の増加に傾く（図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ、及び２Ｅを参照されたい）。
【0330】
それらの結果は、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇプラットフォームを使用した遺伝子発現分析によって裏付けられた。治療後生検におけるより高い免疫浸潤及び活性化の明確な傾向が、ベースライン時に高いＶガンマ９ Ｔ細胞計数を有する患者において観察された（示されず）。
【0331】
４．ベースラインｇｄ Ｔ細胞計数は、腫瘍におけるＶｇ９＋ Ｔ細胞密度と相関する
ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者からの血液サンプルを、治療前（ベースライン）に得た。免疫表現型解析を実施して、絶対数Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞を査定した。Ｖγ９ＴＣＲ陽性Ｔ細胞密度を、デジタル病理学（ＨａｌｉｏＤＸ、Ｌｕｍｉｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）と連動した、新しい凍結切片に対するＩＨＣを使用して、治療前生検において評価した。
ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者からの血液サンプルを、治療前（ベースライン）に得た。免疫表現型解析を実施して、絶対数Ｖγ９Ｖδ２ Ｔ細胞を査定した。Ｖγ９ＴＣＲ陽性Ｔ細胞密度を、デジタル病理学（ＨａｌｉｏＤＸ、Ｌｕｍｉｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）と連動した、新しい凍結切片に対するＩＨＣを使用して、治療前生検において評価した。
【0332】
ベースライン時の血中Ｖγ９Ｔ＋細胞絶対計数とベースライン腫瘍生検におけるＶγ９＋細胞密度との間の相関の傾向（スピアマンｒ＝０．５１２６、ｐ＝０．００２７、ｎ＝３２）が観察され（図３を参照されたい）、ベースライン時に、Ｖγ９腫瘍性浸潤は、血中におけるそのサブセットの絶対計数に関係することを示唆した。
【0333】
実施例３：抗ＰＤ１／ＰＤＬ１治療後の、難治性又は再発性腫瘍を有する患者における固形腫瘍についての、抗ＰＤ１抗体との組合せでＩＣＴ０１を用いた治療の臨床的証拠
１．ＩＣＴ０１は、ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者におけるＰＤ－１発現を増加させる
凍結生検に対するフローサイトメトリーは、γ９δ２ Ｔ細胞のＩＣＴ０１誘導性活性化が、ＥＶＩＣＴＩＯＮの群Ａ（図４Ａ）及び群Ｂ（図４Ｂ）において治療されたがん患者において、ＰＤ－１の表面発現（用量コホートあたりの平均が描写される）を増加させることを示した。
１．ＩＣＴ０１は、ＥＶＩＣＴＩＯＮ患者におけるＰＤ－１発現を増加させる
凍結生検に対するフローサイトメトリーは、γ９δ２ Ｔ細胞のＩＣＴ０１誘導性活性化が、ＥＶＩＣＴＩＯＮの群Ａ（図４Ａ）及び群Ｂ（図４Ｂ）において治療されたがん患者において、ＰＤ－１の表面発現（用量コホートあたりの平均が描写される）を増加させることを示した。
【0334】
二元配置ＡＮＯＶＡ及びホルム・シダックの多重比較検定
【0335】
２．ＩＣＴ０１／ペムブロリズマブ治療後の複数の免疫細胞集団の活性化及び遊走
ＥＶＩＣＴＩＯＮ群Ｃにおいて、フローサイトメトリー分析は、γ９δ２Ｔ細胞が投薬後迅速に遊走し、テストされたすべての用量でほぼ１００％の遊走が観察され、効果の継続期間は用量依存的であり（絶対細胞数、ベースラインの％、図５Ａ、左のパネル）、２４時間の時点で活性化の増加を有する（ＣＤ６９陽性の％、図５Ａ、右のパネル）ことを示した。
ＥＶＩＣＴＩＯＮ群Ｃにおいて、フローサイトメトリー分析は、γ９δ２Ｔ細胞が投薬後迅速に遊走し、テストされたすべての用量でほぼ１００％の遊走が観察され、効果の継続期間は用量依存的であり（絶対細胞数、ベースラインの％、図５Ａ、左のパネル）、２４時間の時点で活性化の増加を有する（ＣＤ６９陽性の％、図５Ａ、右のパネル）ことを示した。
【0336】
【0337】
血液からの遊走は最小限であったものの、顆粒球の活性化がすべての用量で観察された（図５Ｄ）。
【0338】
γ９δ２Ｔ細胞に対するピーク効果は治療の３０分後に観察され、一方でＣＤ８及びＮＫ細胞に対するピーク効果は治療の２４時間後に観察された。これらのデータは、本発明者らがサイトカイン媒介性であると特定している、これらの効果を生み出すために要される、γ９δ２Ｔ細胞活性化の後のステップがあることを示唆する。
【0339】
３．臨床活性
ＥＶＩＣＴＩＯＮ試験の群Ｃの漸増相において、ＩＣＴ０１＋ペムブロリズマブの組合せは、観察されるいかなるＤＬＴ又は安全性懸念もなく、忍容性良好であった。
ＥＶＩＣＴＩＯＮ試験の群Ｃの漸増相において、ＩＣＴ０１＋ペムブロリズマブの組合せは、観察されるいかなるＤＬＴ又は安全性懸念もなく、忍容性良好であった。
【0340】
最もよく見られるＴＥＡＥは、ペムブロリズマブに対するよく記載される事象であるＩＲＲと一貫している。免疫関連ＡＥＳＩは報告されなかった。
【0341】
血中におけるγ９δ２Ｔ細胞の活性化＆遊走は、投薬後３０分以内にすべてのＩＣＴ０１用量で観察された。加えて、血中におけるＣＤ８ Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化＆遊走は、≧７ｍｇ ＩＣＴ０１の用量で観察され、活性化γ９δ２Ｔ細胞からのＩＦＮγ及びＴＮＦαの放出によって媒介されるように見える。末梢免疫活性化は、γδ、ＣＤ３、及びＣＤ８ Ｔ細胞による腫瘍の浸潤によって反映された。
【0342】
これらのＣＰＩ失敗患者における臨床応答は、２ｍｇもの低さのＩＣＴ０１用量で、複数の異なる固形腫瘍にわたって観察され、作用の相補的メカニズムが、抗腫瘍免疫応答の増加につながることを示唆した。
【0343】
実施例４：本発明を実践するための有用な配列
【表4】
【0344】
【表5】
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図2E】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【配列表】
【国際調査報告】