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特表2024-533181放射線および／または抗がん治療補助療法としてアデノシン二リン酸リボースの活用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-12
(54)【発明の名称】放射線および／または抗がん治療補助療法としてアデノシン二リン酸リボースの活用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/7076 20060101AFI20240905BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20240905BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240905BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240905BHJP
【ＦＩ】
A61K31/7076
A61P35/00
A61P35/04
A61P43/00 121
A61K45/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024514036
(86)(22)【出願日】2022-09-02
(85)【翻訳文提出日】2024-02-29
(86)【国際出願番号】 KR2022013186
(87)【国際公開番号】W WO2023038368
(87)【国際公開日】2023-03-16
(31)【優先権主張番号】10-2021-0118942
(32)【優先日】2021-09-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524077988
【氏名又は名称】パールズインマイアーズ・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＰＥＡＲＬＳＩＮＭＩＲＥＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】チョン，クンヨン
(72)【発明者】
【氏名】パク，ミンヒ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084NA05
4C084ZB072
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC412
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA18
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086MA55
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明は、アデノシン二リン酸リボース（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｒｉｂｏｓｅ；ＡＤＰ－Ｒｉｂｏｓｅ）を利用した抗がん療法に関し、具体的に、ＡＤＰ－リボースの単独抗がん療法および抗がん剤または放射線との併用療法などに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む、抗がん用組成物。
【請求項2】
がんは、脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん、胃がんおよび卵巣がんからなる群から選択された１種以上の固形がんである、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
がんは、転移性がんである、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
がん細胞内ＡＤＰ－リボース蓄積を誘導することで、がん細胞生化学作用撹乱を誘発するものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む、放射線療法の抗がん補助剤。
【請求項6】
放射線敏感度を向上させるものである、請求項５に記載の抗がん補助剤。
【請求項7】
（ｉ）ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩および（ｉｉ）第２抗がん剤を含む、抗がん組成物。
【請求項8】
第２抗がん剤は、細胞毒性抗がん剤、標的抗がん剤および免疫抗がん剤からなる群から選択された１種以上である、請求項７に記載の組成物。
【請求項9】
第２抗がん剤は、細胞毒性抗がん剤である、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
細胞毒性抗がん剤は、アルキル化剤であり、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩は、アルキル化剤に対する敏感性を増進させるものである、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
第２抗がん剤は、標的抗がん剤である、請求項８に記載の組成物。
【請求項12】
標的抗がん剤は、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２からなる群から選択された１種以上のターゲットを標的する標的抗がん剤であり、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩は、前記標的抗がん剤に対する敏感性を増進させるものである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
標的抗がん剤は、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ抑制剤である、請求項１２に記載の脳がんまたは肝がん治療用組成物。
【請求項14】
標的抗がん剤は、ＥＧＦＲ抑制剤である、請求項１２に記載の肺がん治療用組成物。
【請求項15】
標的抗がん剤は、ＨＥＲ２抑制剤である、請求項１２に記載の乳房がん治療用組成物。
【請求項16】
第２抗がん剤は、免疫抗がん剤である、請求項８に記載の組成物。
【請求項17】
ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む化学療法に対する、抗がん補助剤。
【請求項18】
抗がん薬物療法および抗がん補助剤の投与は、同時または異時に遂行されるものである、請求項１７に記載の抗がん補助剤。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アデノシン二リン酸リボース（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｒｉｂｏｓｅ；ＡＤＰ－Ｒｉｂｏｓｅ）を利用した抗がん療法に関し、具体的に、ＡＤＰ－リボースの単独抗がん療法および抗がん剤または放射線との併用療法などに関する。
【背景技術】
【0002】
放射線療法は、Ｘ線などの強力なエネルギービームを使用して、がん細胞を殺すがん治療法である。放射線を処理する間、高エネルギービームが機器から出て、身体の正確な箇所に向かってビームを照準して治療される。放射線療法は、細胞の成長と分裂を制御する遺伝物質（ＤＮＡなど）を破壊することで、細胞を損傷させる。放射線療法の最終的な目標は、可能な正常且つ健康な組織を避けて、がん組織を目標にして破壊することである。コンピュータ技術の発展により、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）および磁気共鳴映像（ＭＲＩ）スキャンを開発して正常的な組織の損傷を減らすために、標的腫瘍を正確に計算し出すことができる。強度調節放射線療法および陽性子ビーム療法は、腫瘍を効率的に除去し、正常機関に対する損傷を最小化するために、様々な方向に光子および陽性子ビームを少ない誤差で標的に照準する方式で遂行され、この方法を通じて、放射線治療による副作用は多く減少する傾向にある。しかし、治療技術の改善にもかかわらず、多数の患者は、がん細胞の放射線に対する固有耐性によって治療後にがんが容易に再発する問題が生じる。
【0003】
化学療法は、がん細胞を殺すために、薬物を使用するすべての抗がん剤治療を称する。化学療法は、単一薬物または様々な薬物の組み合わせで構成されることができ、静脈、筋肉、皮下を通じて投与されるか、体腔内に注射されるか、錠剤形態で経口に伝達されることができる。化学療法は、がんと戦う薬物が血液を通じて広がり、元のがんと遠くのがん（転移性）細胞を殺すか、または除去することができるように、身体のすべての部位を循環するという点で、手術や放射線療法と異なる。がん診断を受けたすべてのヒトの半分以上が化学療法を受ける。しかし、がん化学療法を通じた治療時の障害物のうち一つが薬物に対する副作用の念慮である。化学療法は、身体で速やかに成長して分裂するすべての細胞に影響を及ぼすことができ、ここには、骨髄の新たな血液細胞または口、胃、皮膚、毛髪および生殖器官の細胞を含む正常細胞が含まれる。化学療法が正常細胞を損傷させると、副作用が発生する。副作用の発生有無とその深刻度は、薬物の類型および最初の治療周期から次の治療周期までの反応によって異なり得るが、特に、薬物の用量とも密接な関連がある。副作用が酷くなると、治療が直ちに中断されなければならず、正常且つ健康な細胞が回復した後、副作用が漸進的に改善する傾向にある。時々化学療法は、消えない長期間の副作用を誘発することがあり、ここには、心臓、肺、神経、腎臓または生殖器官損傷が含まれ得る。
【0004】
進行性がん患者が必須に経験しなければならない治療過程で予期せぬ耐性で初期治療の失敗を経験することもあり、治療に対する耐性なしに放射線や抗がん療法などの治療を持続的に進行することができるとしても、甘受しなければならない様々な大小の多様な副作用の負担はかなり大きい。放射線治療の場合は、治療によって誘導される抗がん効果を持続的に維持するための方法であって、低酸素環境で誘導されるがん特異的遺伝子の抑制やＤＮＡを修復に活用される多様な分子生物学的、遺伝的要因を調節するための試みがあったが、放射線治療効果を増進させるか、耐性克服のための知られている療法は、放射線治療と併用する際に基本的に放射線治療によって現れる塩症、胃腸障害、悪心、嘔吐、下痢などの副作用をさらに悪化させる可能性が共存するため、積極的な使用に制限があり、根本的な放射線治療の敏感度の増進や耐性克服のための療法として明確に認められていない。化学療法の場合は、治療で効能に比べて甘受しなければならない副作用を減らすための方法であって、投与用量を減少させることが最も確かな方法であるが、療法の特性上、副作用によって用量を減量すること自体が、治療の失敗と考えられることがある。よって、現在まで知られている方法を通じた成績は満足できず、これを克服するための部分は、医学的に未充足のニーズ（ｕｎｍｅｔ ｎｅｅｄｓ）に十分に該当し、かなり解決し難い課題として残っている。
【0005】
アデノシン二リン酸リボースまたはＡＤＰ－リボースは、ＮＡＤ（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）に由来する生体物質であって、細胞内でＡＤＰ－リボシル化（ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ）の単位分子に翻訳後修飾（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）に関与するものと知られている。外部ＮＡＤの悪性腫瘍または感染性疾患に対する用途は、ＷＯ９９／１２９５１に一部開示されており、外部ＡＤＰ－リボースのアデノウイルス－関連疾患または病態または粘膜炎に対する用途もまた、ＷＯ２０１７／１４３１１３またはＷＯ０３／０９９２９７に一部開示されている。しかし、前記文献は、ＡＤＰ－リボースの具体的な抗がん用途または抗がん補助用途を開示していない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明の目的は、アデノシン二リン酸リボース（ＡＤＰ－リボース）を活用して、抗がん療法の効能を改善することである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
前記目的達成のために、本発明者らが研究努力した結果、ＡＤＰ－リボースががん細胞内に蓄積されると、がん細胞内ＡＤＰ－リボースの恒常性が崩れる生化学作用撹乱によって抗がん効果を発揮することができ、放射線療法および／または化学療法に対する敏感性が顕著に向上し得ることを確認して、本発明を完成した。よって、本発明は、抗がん治療のためのＡＤＰ－リボースの使用方法、抗がん治療のための放射線療法および／または抗がん療法とＡＤＰ－リボースの併用方法、抗がん治療のためのＡＤＰ－リボース製剤などを提供する。
【0008】
１．抗がん治療のためのＡＤＰ－リボースの使用
【0009】
本発明者らは、ＡＤＰ－リボースの抗がん効果を多様な固形がん腫から具体的に確認することで、本発明を完成した。したがって、本発明は、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む抗がん用組成物；治療的有効量のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、がん治療方法；がんの予防または治療のためのＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩の用途；または抗がん剤の製造のためのＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩の用途を提供する。
【0010】
ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩
本発明において、ＡＤＰ－リボースまたはアデノシン二リン酸リボースは、下記化学式１で表示される化合物である。
本発明において、ＡＤＰ－リボースまたはアデノシン二リン酸リボースは、下記化学式１で表示される化合物である。
【化1】
【0011】
ＡＤＰ－リボースの製造方法は、本発明の属する技術分野に公知になっている。一実施態様において、ＡＤＰ－リボースは、アルカリ性塩基の存在下にニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）の加水分解を通じて合成されることができる。また、ＡＤＰ－リボースは、これに相応する塩基の金属イオンの一価または二価塩の形態で単離されることができる。または、ＡＤＰ－リボースは、精製された原料で商業的に入手できる（ＣＡＳ Ｎｕｍｂｅｒ：６８４１４－１８－６）。
【0012】
本発明において、薬学的に許容可能な塩は、製薬業界で通常的に使用される塩を意味し、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リチウム、銅、マンガン、亜鉛、鉄などを始めとした無機イオンの塩と塩酸、リン酸、硫酸のような無機酸の塩があり、その外にアスコルビン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、グリコール酸、コハク酸、プロピオン酸、酢酸、オロト酸、アセチルサリチル酸のような有機酸の塩などとリジン、アルギニン、グアニジンなどのアミノ酸塩がある。また薬学的な反応、精製および分離過程で使用され得るテトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、テトラプロピルアンモニウム、テトラブチルアンモニウム、ベンジルトリメチルアンモニウム、ベンゼトニウムなどの有機イオンの塩がある。ただし、列挙されたそれらの塩によって、本発明において意味する塩の種類が限定されるものではない。好ましくは、本発明において、ＡＤＰ－リボースの薬学的に許容可能な塩は、ＡＤＰ－リボースのリチウム塩（モノおよびジ－リチウム塩を含む）ではない。
【0013】
本発明において、ＡＤＰ－リボースは、ポリ－ＡＤＰ－リボース（Ｐｏｌｙ－ＡＤＰＲ）のようなＡＤＰ－リボースの前駆薬物形態で使用されることができる。例えば、ＡＤＰ－リボースの前駆薬物は、化学式１で表示されるＡＤＰ－リボース内末端リボース部分の一つ以上のヒドロキシル基とカルボン酸、アミノ酸、脂肪酸またはこれらの組み合わせが縮合されて形成されることができる。
【0014】
ＡＤＰ－リボースの抗がん効果
本発明者らは、本発明の抗がん組成物ががん細胞内ＡＤＰ－リボースを蓄積させ、がん細胞生化学作用の撹乱を誘発することで、抗がん効果を発揮するという点を見つけた。
本発明者らは、本発明の抗がん組成物ががん細胞内ＡＤＰ－リボースを蓄積させ、がん細胞生化学作用の撹乱を誘発することで、抗がん効果を発揮するという点を見つけた。
【0015】
具体的に、本発明者らは、各種固形がん（脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん）細胞株にＡＤＰ－リボース（数～数十μＭ濃度）を処理する場合、がん細胞内ＡＤＰ－リボース濃度が顕著に増加するということを確認した（実施例１；図１）。特に、抗がん療法の一つとして使用される放射線照射時にがん細胞内ＡＤＰ－リボースの濃度が一時的にのみ（数時間）増加したが、外部ＡＤＰ－リボース処理時にがん細胞内のＡＤＰ－リボース濃度は、放射線照射時と比べて顕著に、そして持続的に上昇することを確認した（実施例７；図１７）。
【0016】
本発明者らは、ＡＤＰ－リボースをがん細胞内部に人為的に蓄積させる場合、がん細胞で維持されるＡＤＰ－リボースの生化学的恒常性を崩壊させることで、効果的な抗がん効果を発揮することができるものと予想した。これを具体的に確認した結果、ＡＤＰ－リボースが低濃度（数～数十μＭ濃度）で各種固形がん（脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん、胃がん、卵巣がん）に対して顕著な抗がん効果を示すことを確認した（実施例２；図２～９、実施例４；図１２～１４）。
【0017】
これを通じて、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩は、がん治療のために有用に活用され得ることを確認した。
【0018】
本発明において、がんは、悪性腫瘍または新生物とも呼ばれる細胞の死滅調節と関連する疾病であって、正常的な細胞死滅均衡が崩れて細胞が過多増殖するようになることで生じる状態または疾病を指称する。このような非正常的な過多増殖細胞は、場合によって、周囲組織および臓器に侵入して腫塊を形成し、体内の正常的な構造を破壊するか、変形させる。
【0019】
本発明の抗がん組成物によって緩和、軽減または治療され得るがんは、生化学作用過程の撹乱によって、増殖、浸潤、転移などが抑制されることができる限り、特にこれに制限されないが、細胞内ＡＤＰ－リボース生化学作用の撹乱によって、増殖、浸潤、転移などが抑制され得る固形がんであることが好ましい。前記固形がんは、乳房がん、子宮頸部がん、神経膠腫、脳がん、黒色腫、頭頸部がん、肺がん、膀胱がん、前立腺がん、白血病、腎臓がん、肝がん、結腸がん、直腸がん、大腸がん、膵臓がん、胃がん、胆嚢がん、卵巣がん、リンパ腫、骨肉腫、子宮がん、口腔がん、気管支がん、鼻咽頭がん、喉頭がん、皮膚がん、扁平上皮細胞がん、甲状腺がん、副甲状腺がんまたは尿管がんであってよいが、これに制限されない。前記がんは、特定遺伝子が突然変異されたがんであってよい。好ましくは、前記固形がんは、脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん、胃がんおよび卵巣がんからなる群から選択された１種以上である。
【0020】
本発明において、がんは、原発性がんと転移性がんを含む。本発明の抗がん組成物は、がん細胞の浸透および転移能力抑制に効果的である。具体的に、本発明者らは、ＡＤＰ－リボースが低濃度（数～数十μＭ濃度）で転移がん（膵臓がん、乳房がん）に対する顕著な抗がん効果を示すことを確認した（実施例３；図１０および１１）。よって、本発明の組成物は、固形がん、特に、転移性固形がん（例えば、転移性膵臓がん、乳房がん）の治療に有用に活用されることができる。
【0021】
投与経路、用法および用量
本発明に係る抗がん組成物は、目的組織に到達できる限り、如何なる一般的な投与経路を通じても投与されることができる。例えば、目的とするところによって、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経皮パッチ投与、経口投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与などの経路を通じて投与されることができる。経口投与時には、剤形化されていない形態または活性成分をコーティングするか、胃における分解から保護されるように剤形化された形態または経口用パッチ形態で口腔内に投与されることができる。また、本発明の抗がん組成物は、活性成分が標的がん細胞に移動することができる任意の装置によって投与されることができる。
本発明に係る抗がん組成物は、目的組織に到達できる限り、如何なる一般的な投与経路を通じても投与されることができる。例えば、目的とするところによって、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経皮パッチ投与、経口投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与などの経路を通じて投与されることができる。経口投与時には、剤形化されていない形態または活性成分をコーティングするか、胃における分解から保護されるように剤形化された形態または経口用パッチ形態で口腔内に投与されることができる。また、本発明の抗がん組成物は、活性成分が標的がん細胞に移動することができる任意の装置によって投与されることができる。
【0022】
具体的に、本発明者らは、マウスを対象とする動物実験を通じて、ＡＤＰ－リボースを皮下注射、静脈注射または口腔投与する場合、各種固形がん（膵臓がん、腎臓がん、膵臓がん）に対して抗がん効果を示すことを確認した（実施例４；図１２～１４）。
【0023】
本発明に係る抗がん組成物は、治療的有効量で投与されることができ、これは、医学的治療または予防に適用可能な合理的な受益／危険割合で疾患を治療または予防するに十分な量を意味する。治療的有効量水準は、疾患の重症度、薬物の活性、患者の年齢、体重、健康、性別、患者の薬物に対する敏感度、使用された本発明組成物の投与時間、投与経路および排出割合、治療期間、使用された本発明の組成物と配合または同時に使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野によく知られている要素によって決定されることができる。本発明の抗がん組成物は、一日一回～数回に分けて投与されることができる。
【0024】
本発明の抗がん組成物は、単独投与されるか、１種以上の抗がん療法と併用されることができる。併用投与される場合、前記１種以上の抗がん療法は、化学療法、免疫抗がん療法、放射線療法、手術、ナノ医学、またはこれらの組み合わせを含み、ＡＤＰ－リボースの抗がん効果が増進され得る抗がん療法であれば、その種類および回数に特に制限されない。例えば、本発明の抗がん組成物は、手術前後の補助療法に使用されることができ、後述されるように、放射線療法および／または抗がん療法と同時にまたは前後に併用されることができる。
【0025】
２．抗がん治療のための放射線療法とＡＤＰ－リボースの併用
本発明者らは、放射線療法とＡＤＰ－リボースを併用する場合、抗がん治療の効果が顕著に相乗することを見つけた。したがって、本発明は、放射線療法と併用されるＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む抗がん組成物；治療的有効量のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与することと放射線療法を併用するがんの治療方法；ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む放射線療法の抗がん補助剤；ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む放射線敏感化剤；または放射線療法の補助剤として、前記ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩の用途を提供する。
本発明者らは、放射線療法とＡＤＰ－リボースを併用する場合、抗がん治療の効果が顕著に相乗することを見つけた。したがって、本発明は、放射線療法と併用されるＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む抗がん組成物；治療的有効量のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与することと放射線療法を併用するがんの治療方法；ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む放射線療法の抗がん補助剤；ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む放射線敏感化剤；または放射線療法の補助剤として、前記ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩の用途を提供する。
【0026】
本発明において、放射線療法の抗がん補助剤とは、放射線療法前後に投与される場合、放射線療法の抗がん効果を改善、向上または増大させることができる製剤を意味する。
【0027】
放射線療法
本発明において、用語「放射線療法」は、がん細胞を死滅させるための目的であって、がん細胞または腫瘍組織に放射線を照射する治療行為を言う。一般的に、切開不可能または手術不可能な腫瘍、または腫瘍転移を制御するための標準治療法であって、標的部位に伝達された放射線が再生性細胞（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｃｅｌｌ）の死滅を招くという原理に基づく。本発明において、放射線抗がん治療は、イオン化放射線療法（ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）、電磁気放射線療法（ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｒａｄｉａｔｉｏｎ）、近接放射線療法（ｂｒａｃｈｙｔｈｅｒａｐｙ）または外部放射線療法（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｂｅａｍ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）であってよいが、これに制限されるものではない。
本発明において、用語「放射線療法」は、がん細胞を死滅させるための目的であって、がん細胞または腫瘍組織に放射線を照射する治療行為を言う。一般的に、切開不可能または手術不可能な腫瘍、または腫瘍転移を制御するための標準治療法であって、標的部位に伝達された放射線が再生性細胞（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｃｅｌｌ）の死滅を招くという原理に基づく。本発明において、放射線抗がん治療は、イオン化放射線療法（ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）、電磁気放射線療法（ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｒａｄｉａｔｉｏｎ）、近接放射線療法（ｂｒａｃｈｙｔｈｅｒａｐｙ）または外部放射線療法（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｂｅａｍ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）であってよいが、これに制限されるものではない。
【0028】
本発明に係るＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、放射線療法と併用される場合、相乗的抗がん効果を示すので、放射線療法に対する抗がん補助剤または放射線敏感度を向上させる放射線敏感化剤として有用に活用されることができ、適用可能ながんの種類に特に制限されない。一例として、前記がんは、脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん、胃がん、または卵巣がんのような固形がんであってよいが、これに制限されるものではない。
【0029】
一実施様態として、前記固形がんは、放射線療法に対して耐性を示すものであってよい。放射線治療の抗がん効果は、ＤＮＡ切断の形成で示されるため、放射線治療に対する耐性は、一般的に放射線治療によって誘導されるＤＮＡ損傷を修復できる機序によって決定される。放射線治療の抗がん効能を相乗させる方法として、ＤＮＡ修復機序抑制のための多くの試みがあり、破壊されたＤＮＡ鎖の修理が遮断されると、放射線治療の感度が高くなり得る。ＤＮＡ損傷の二つの主要形態は、ＳＳＢ（Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｒａｎｄ Ｂｒｅａｋｓ）とＤＳＢ（Ｄｏｕｂｌｅ Ｓｔｒａｎｄ Ｂｒｅａｋｓ）である。よって、ＳＳＢおよびＤＳＢを対象とする二つの修復経路の範疇で説明することができる。ＢＥＲ（Ｂａｓｅ Ｅｘｃｉｓｉｏｎ Ｒｅｐａｉｒ）は、選択された類型のＤＮＡ ＳＳＢの修復に関与する様々な経路のうち一つである。
【0030】
ＰＡＲＰ１は、ＡＤＰ－リボシル化（ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ）と知られている工程を通じて、ＤＮＡ ＳＳＢのＢＥＲで重要な役割を果たす。核においてＰＡＲＰ１は、ＳＳＢ ＤＮＡの損傷を感知し、修理のためにＳＳＢ部位にＡＤＰ－リボシル化を通じてＤＮＡ修復複合体を募集する。ＰＡＲＰ－１活性によるＡＤＰ－リボシル化を通じて合成されたポリ－ＡＤＰ－リボースの過蓄積は、最終的に細胞の死滅に繋がるため、がん細胞は、この現象を防ぐためにＰＡＲＧやＡＲＨ３などのようなプロテアソームを通じてポリ－ＡＤＰ－リボースの分解を活性化して、生存シグナル伝達活動を活性化する。本発明者らは、がん細胞内ＡＤＰ－リボースやＡＤＰ－リボース重合体の蓄積ががん細胞のこのような生化学的生存機序を撹乱させることができる媒介体として作用することができ、放射線治療耐性を克服する重要な抗がん補助剤として活用できることに着眼した。
【0031】
本発明の具体的な一実施例においては、それぞれ異なるがん種で低線量の放射線照射とともに、本発明のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を併用処理した場合、すべてのがん種で放射線治療に対する反応性が増進されることを確認した。したがって、本発明のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩は、放射線治療の反応を増進させることができ、抗がん補助用途として非常に有用に使用されることができ、放射線を耐性線量で照射しても、優れた抗がん活性を有するので、放射線によって発生し得る副作用を最小化することができる。
【0032】
具体的に、本発明者らは、各種固形がんでＡＤＰ－リボース処理によって放射線照射時に上昇するがん細胞内ＡＤＰ－リボース濃度以上に細胞内ＡＤＰ－リボース濃度上昇を維持させることができることを確認した（実施例７；図１７）。放射線照射による抗がん効果は、遺伝物質の損傷による死滅作用を通じて期待することができるが、がん細胞は、これを克服するために、ＡＤＰ－リボシル化を通じてＤＮＡの鎖を持続的に修復する。しかし、図１７から見られるように、放射線照射によって破壊されたＤＮＡ鎖の修復作用のために、一時的にのみ増加するＡＤＰ－リボースを持続的に蓄積されるように補助すると、がん細胞のＤＮＡ修復過程で生化学的撹乱を起こして、放射線治療の相乗した抗がん効果を期待することができ、放射線治療の耐性克服および副作用減少のための減少した線量での抗がん放射線活用可能性を期待することができる。
【0033】
さらに、本発明者らは、放射線療法とＡＤＰ－リボース投与と放射線併用時に各種固形がん（脳がん、肺がん、膵臓がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん）に対する相乗的抗がん効果を示すことを確認した（実施例８；図１８、実施例９；図１９）。
【0034】
投与経路、用法および用量
放射線照射療法は、一般的に放射線吸収線量（Ｇｒａｙ；Ｇｙ）、時間および分類面で定義され、腫瘍学者によって控え目に定義されなければならない。患者が収容できる放射線量は、多様な考慮事項によって左右されるが、２つの最も重要なものは、身体の他の決定的な構造または長期に対する腫瘍の位置および腫瘍が広がった程度である。放射線療法を受けている患者治療の典型的な過程はこれに制限されないが、例えば、１週間に５日間、１日１回線量を約１．８～２．０Ｇｙに、患者に投与された総線量が１０～８０Ｇｙにして、１～６週の期間にわたった治療スケジュールであってよく、１－１０ｃＧｙまたは５－４０ｃＧｙ数十回など、低い濃度の放射線で多回分画する治療スケジュールであってよい。
放射線照射療法は、一般的に放射線吸収線量（Ｇｒａｙ；Ｇｙ）、時間および分類面で定義され、腫瘍学者によって控え目に定義されなければならない。患者が収容できる放射線量は、多様な考慮事項によって左右されるが、２つの最も重要なものは、身体の他の決定的な構造または長期に対する腫瘍の位置および腫瘍が広がった程度である。放射線療法を受けている患者治療の典型的な過程はこれに制限されないが、例えば、１週間に５日間、１日１回線量を約１．８～２．０Ｇｙに、患者に投与された総線量が１０～８０Ｇｙにして、１～６週の期間にわたった治療スケジュールであってよく、１－１０ｃＧｙまたは５－４０ｃＧｙ数十回など、低い濃度の放射線で多回分画する治療スケジュールであってよい。
【0035】
本発明者らは、腫瘍マウスモデルを対象に２Ｇｙ線量の放射線療法とＡＤＰ－リボース投与を併用する場合、各種固形がんに対する相乗的抗がん効果を示すことを確認した（実施例８；図１８、実施例９；図１９）。しかし、本発明の抗がん組成物と併用され得る放射線療法の放射線吸収線量は、これに制限されず、１回線量は、１～１０Ｇｙに、総線量を約１～１００Ｇｙにすることができるが、これに制限されない。例えば、患者に照射される総放射線量は、約１ｃＧｙ～約１００Ｇｙまたは約１ｃＧｙ～約５０Ｇｙであってよい。一部具体例において、個体は、放射線療法を受けており、および／または受けることができる。放射線療法は、１週～１０週間、週当り５日投与される一つ以上の放射線治療を含むことができる。当業者が理解するように、放射線療法は、特定期間（例えば、１－１０週）にわたることができ、個体に連続して投与されず、却って断続的に投与されることができる。
【0036】
放射線療法と併用されるＡＤＰ－リボースの投与経路、用法および用量は、上述したとおりであり、直接的な放射線療法前または後に投与されることができる。また、後述するように、化学療法を併用することができる。
【0037】
３．抗がん治療のための化学療法とＡＤＰ－リボースの併用
本発明者らは、化学療法とＡＤＰ－リボースを併用する場合、抗がん治療の効果が顕著に相乗することを見つけた。したがって、本発明は、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む化学療法の抗がん補助剤または敏感化剤；（ｉ）ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩および（ｉｉ）第２抗がん剤を含む抗がん用組成物または組み合わせ物；治療的有効量のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩および第２抗がん剤を併用投与することを含む、がん治療方法；がんの予防または治療のための化学療法の抗がん補助剤または敏感化剤として、前記ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩の用途を提供する。
本発明者らは、化学療法とＡＤＰ－リボースを併用する場合、抗がん治療の効果が顕著に相乗することを見つけた。したがって、本発明は、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む化学療法の抗がん補助剤または敏感化剤；（ｉ）ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩および（ｉｉ）第２抗がん剤を含む抗がん用組成物または組み合わせ物；治療的有効量のＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩および第２抗がん剤を併用投与することを含む、がん治療方法；がんの予防または治療のための化学療法の抗がん補助剤または敏感化剤として、前記ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩の用途を提供する。
【0038】
本発明において、化学療法の抗がん補助剤は、抗がん剤の抗がん効果を改善、向上または増大させ得る製剤であって、抗がん剤とともに使用される場合、前記抗がん剤の抗がん効果を改善、向上または増大させることができる製剤を意味する。
【0039】
ＡＤＰ－リボースと併用されることができる抗がん剤
本発明において、化学療法は、１種以上の化学療法剤を抗がん剤として使用するがん治療方法である。本発明において、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩と併用されることができる第２抗がん剤は、がんの種類と進行程度によって、がんの完治、調節、症状緩和のために適切な種類を選択することができ、例えば、細胞毒性抗がん剤、標的抗がん剤、免疫抗がん剤、代謝抗がん剤またはこれらの組み合わせから選択された１種以上であってよい。
本発明において、化学療法は、１種以上の化学療法剤を抗がん剤として使用するがん治療方法である。本発明において、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩と併用されることができる第２抗がん剤は、がんの種類と進行程度によって、がんの完治、調節、症状緩和のために適切な種類を選択することができ、例えば、細胞毒性抗がん剤、標的抗がん剤、免疫抗がん剤、代謝抗がん剤またはこれらの組み合わせから選択された１種以上であってよい。
【0040】
本発明において、細胞毒性抗がん剤は、正常細胞に比べて速い速度で無分別に分裂するがん細胞を攻撃して抗がん効果を示す薬物であって、その意味は、本発明の属する技術分野において通常的に使用されるものと同じである。前記細胞毒性抗がん剤は、アルキル化剤、抗代謝剤（ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ）、天然物抗がん剤を含む。
【0041】
前記アルキル化剤は、窒素マスタード（例えば、シクロホスファミド、クロルメチン、ウラムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、ベンダムスチンなど）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、プロカルバジンなど）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシンなど）、白金基盤アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、ジシクロプラチン、エプタプラチン、ロバプラチン、ミリプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、トリプラチンテトラニトラートなど）を挙げることができるが、これに制限されない。アルキル化剤は、がん細胞内ＤＮＡに結合してＤＮＡ構造を損傷させることで、がん細胞の破壊を誘発することができる。
【0042】
前記抗代謝剤（ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ）は、ピリミジン誘導体（例えば、５－フルオロウラシル、カペシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、フルダラビンなど）、フォレート誘導体（例えば、メトトレキサート、ペメトレキセドなど）、プリン誘導体（例えば、メルカプトプリンなど）を挙げることができるが、これに制限されない。抗代謝剤は、ＤＮＡ複製および細胞生存に必要な代謝を抑制することで、がん細胞死滅を誘導することができる。
【0043】
前記天然物抗がん剤としては、トポイソメラーゼ抑制剤（カンプトテシン、エピポドフィロトキシン、タキサン系列薬物）、抗生剤（例えば、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、マイトマイシン、フレオマイシン、イダルビシン、ミトキサントロンＨＣｌなど）を挙げることができるが、これに制限されない。
【0044】
本発明において、標的抗がん剤は、がんの成長に関与するターゲットタンパク質（受容体または酵素）を抑制することで、がん細胞の死滅を誘導する抗がん剤であって、その意味は、本発明の属する技術分野において通常的に使用されるものと同じである。前記標的抗がん剤は、標的タンパク質（チロシンキナーゼなど）抑制低分子化合物および単クローン抗体を含む。
【0045】
本発明において、標的抗がん剤は、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、およびＨＥＲ２からなる群から選択された１種以上のターゲットを標的する受容体チロシンキナーゼ抑制剤であってよい。
【0046】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる標的抗がん剤は、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ抑制剤である。本発明において、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ抑制剤は、アキシチニブ（ａｘｉｔｉｎｉｂ）、カボザンチニブ（ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ）、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、レンバチニブ（ｌｅｎｖａｔｉｎｉｂ）、パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）、レゴラフェニブ（ｒｅｇｏｒａｆｅｎｉｂ）、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）のような低分子化合物とともに、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、ラニビズマブ（ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）のような単クローン抗体を挙げることができるが、これに制限されない。本発明において、ＡＤＰ－リボースとＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ抑制剤の併用投与によって治療され得るがんは固形がんであり、好ましくは、脳がんまたは肝がんである。
【0047】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる標的抗がん剤は、ＥＧＦＲ抑制剤である。本発明において、ＥＧＦＲ抑制剤は、オシメルチニブ（ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、アファチニブ（ａｆａｔｉｎｉｂ）、ブリグチニブ（ｂｒｉｇａｔｉｎｉｂ）、イコチニブ（ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）のような低分子化合物とともに、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ザルツムマブ（ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）、ニモツズマブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、マツズマブ（ｍａｔｕｚｕｍａｂ）のような単クローン抗体を挙げることができるが、これに制限されない。本発明において、ＡＤＰ－リボースとＥＧＦＲ抑制剤の併用投与によって治療され得るがんは固形がんであり、好ましくは、肺がんである。
【0048】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる標的抗がん剤は、ＨＥＲ２抑制剤である。本発明において、ＨＥＲ２抑制剤は、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ネラチニブ（ｎｅｒａｔｉｎｉｂ）、アファチニブ（ａｆａｔｉｎｉｂ）のような低分子化合物とともに、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、マルジェツキシマブ（ｍａｒｇｅｔｕｘｉｍａｂ）のような単クローン抗体を挙げることができるが、これに制限されない。本発明において、ＡＤＰ－リボースとＨＥＲ２抑制剤の併用投与によって治療され得るがんは固形がんであり、好ましくは、乳房がんである。
【0049】
以外にも、本発明の標的抗がん剤はまた、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）のようなＢｃｒ－Ａｂｌ標的抗がん剤；ボスチニブ（ｂｏｓｕｔｉｎｉｂ）のようなＳｒｃ標的抗がん剤；レスタウルチニブ（ｌｅｓｔａｕｒｔｉｎｉｂ）、ルキソリチニブ（ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ）、パクリチニブ（ｐａｃｒｉｔｉｎｉｂ）のようなＪＡＫ標的抗がん剤；コビメチニブ（ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ）、セルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、トラメチニブ（ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ）、ビニメチニブ（ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）のようなＭＡＰ２ Ｋｉｎａｓｅ標的抗がん剤；セリチビン（ｃｅｒｉｔｉｂｉｎ）、クリゾチニブ（ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）のようなＭＥＬ４－ＡＬＫ標的抗がん剤などを含むことができる。
【0050】
本発明の第２抗がん剤は、１種以上の細胞毒性抗がん剤および／または標的抗がん剤の組み合わせであってよく、これらは、同時にまたは異時に投与されてよい。例えば、前記第２抗がん剤は、ナイトロジェンマスタード、イマチニブ、オキサリプラチン、リツキシマブ、エルロチニブ、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、スニチニブ、カルボプラチン、ソラフェニブ、ベバシズマブ、シスプラチン、セツキシマブ、ビスカムアルバム、アスパラギナーゼ、トレチノイン、ヒドロキシカルバミド、ダサチニブ、エストラムスチン、ゲムツズマブ オゾガマイシン、イブリツモマブ チウキセタン、ヘプタプラチン、メチルアミノレブリン酸、アムサクリン、アレムツズマブ、プロカルバジン、アルプロスタジル、硝酸ホルミウムキトサン、ゲムシタビン、ドキシフルリジン、ペメトレキセド、テガフール、カペシタビン、ギメラシン、オテラシル、アザシチジン、メトトレキサート、ウラシル、シタラビン、フルオロウラシル、フルダラビン、エノシタビン、デシタビン、メルカプトプリン、チオグアニン、クラドリビン、カルモフール、ラルチトレキセド、ドセタキセル、パクリタキセル、イリノテカン、ベロテカン、トポテカン、ビノレルビン、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、テニポシド、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、マイトマイシン、ブレロマイシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ピラルビシン、アクラルビシン、ペプロマイシン、テモゾロミド、ブスルファン、イホスファミド、シクロホスファミド、メルファラン、アルトレタミン、ダカルバジン、チオテパ、ニムスチン、クロラムブシル、ミトラクトール、ロムスチンおよびカルムスチンからなる群から選択された１種以上であってよいが、これに制限されない。
【0051】
本発明において、免疫抗がん療法（ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）は、免疫抗がん剤を通じて人体の免疫系を活性化させて、がん細胞と戦わせるがん治療方法である。本発明において、免疫抗がん剤は、免疫チェックポイント抑制剤、免疫細胞治療剤、抗がんワクチン、抗体－薬物接合体を含み、がんの種類と進行程度によって、がんの完治、調節、症状緩和のために適切な種類を選択することができる。
【0052】
一実施態様において、免疫抗がん剤は、免疫チェックポイント抑制剤であってよく、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＣＤ２８抗体、ＫＩＲ抗体、ＴＣＲ抗体、ＬＡＧ－３抗体、ＴＩＭ－３抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、Ａ２ａＲ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＯＸ４０抗体、４－１ＢＢ抗体およびＧＩＴＲ抗体からなる群から選択された１種以上であってよい。例えば、前記免疫チェックポイント抑制剤は、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、トリパリマブ（ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ）のようなＰＤ－１抗体；アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）、デュルバルマブ（ｄｕｒａｌｕｍａｂ）のようなＰＤ－Ｌ１抗体；イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）のようなＣＴＬＡ－４抗体であるか、これらのすべてであってよい。
【0053】
一実施態様において、免疫抗がん剤は細胞治療剤であってよく、チサゲンレクロイセル（ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｅｕｃｅｌ）、アキシカブタゲンシロルユーセル（ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ）のようなＣＡＲ－Ｔ治療剤またはＣＡＲ－ＮＫ治療剤であってよいが、これに制限されるものではない。
【0054】
本発明において、代謝抗がん剤は、がん細胞に栄養を供給するなど、がん細胞の成長および生存に関与するか、必須な様々な代謝作用に関与してがん細胞を死滅させる薬物を言う。前記代謝抗がん剤は、例えば、ＩＭ－１５６、３－ブロモピルビン酸（３ＢＰ）、ＮＹＨ８１７１００、ＷＺＢ１１７、ＧＮＥ－１４０、ＡＺ９３、ＡＺＤ３９６５、ＣＰＩ－６１３、ＭＫＴ－０７７、ＣＢ－８３９、ＣＢ－１１５８、ＣＰＩ－４４４、ＴＶＢ－２６４０、ＮＤＩ－０１０９７６、ＴＣＤ－７１７、ＡＤＩ－ＰＥＧ２０、エパカドスタット（Ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ）、インドキシモド（Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ）、ＰＸ４７８、ＣＰＩ－０６１０、ＲＴＡ４０２、ＡＰＯ８６６、ＧＭＸ１７７８、ＡＧ－２２１またはＡＧ－１２０などであってよいが、これに制限されるものではない。
【0055】
本発明のＡＤＰ－リボースは、第２抗がん剤と独立して存在する形態で併用投与されることができるだけでなく、目的によって、公知の任意の方法で第２抗がん剤と物理／化学的な結合を形成した状態で投与されることができる。例えば、ＡＤＰ－リボースは、第２抗がん剤と直接結合された状態で使用されるか、または公知のリンカーを通じて第２抗がん剤と連結された状態で使用されることができ、本発明のＡＤＰ－リボースが第２抗がん剤とともに作用して相乗した抗がん効果を示す限り、その適用方法に特に制限されない。
【0056】
抗がん剤と併用されたＡＤＰ－リボースの相乗的抗がん効果
本発明に係るＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、化学療法と併用される場合、相乗的抗がん効果を示すため、化学療法に対する抗がん補助剤または抗がん療法敏感化剤として有用に活用されることができる。前記抗がん補助剤または化学療法敏感化剤で、がんは、上述した固形がんであってよい。前記固形がんは、放射線療法に対して耐性を示す固形がんであってよい。
本発明に係るＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、化学療法と併用される場合、相乗的抗がん効果を示すため、化学療法に対する抗がん補助剤または抗がん療法敏感化剤として有用に活用されることができる。前記抗がん補助剤または化学療法敏感化剤で、がんは、上述した固形がんであってよい。前記固形がんは、放射線療法に対して耐性を示す固形がんであってよい。
【0057】
既存の抗がん剤によるがん細胞生存の減少などで代表される抗がん効果は、ＡＤＰ－リボースのシグナルによって誘導されることができ、既存の抗がん剤による死滅過程でＡＤＰ－リボースを積極的に活用することができるように誘導すると、既存の抗がん剤を必要濃度以下で処理しても、相乗した抗がん効果を期待することができる。具体的に、本発明者らは、ＡＤＰ－リボースと第２活性剤の併用投与時に各種固形がん（脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん）に対して相乗的抗がん効果を示すことを確認した（実施例５；図１５、実施例６；図１６）。
【0058】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる細胞毒性抗がん剤は、抗代謝剤抗がん剤であってよく、具体的に、ピリミジン誘導体であってよく、より具体的に、ゲムシタビンまたは５－フルオロウラシルであってよい。この場合、前記併用療法によって治療され得るがんは固形がんであり、具体的に膵臓がんまたは大腸がんである。本発明者らは、ＡＤＰ－リボースとゲムシタビンの併用投与による相乗的抗がん効果を膵臓がんで確認し（実施例５－３；図１５Ｃ；実施例６－３；図１６Ｃ）、ＡＤＰ－リボースと５－フルオロウラシルの併用投与による相乗的抗がん効果を大腸がんで確認した（実施例５－６；図１５Ｆ）。
【0059】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる標的抗がん剤は、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ抑制剤であってよく、具体的に抗－ＶＥＧＦ単クローン抗体であってよい。この場合、治療可能ながんは、固形がん、具体的に脳がんまたは肝がんであってよい。本発明者らは、ＡＤＰ－リボースと抗－ＶＥＧＦ単クローン抗体であるベバシズマブの併用投与による相乗的抗がん効果を脳がんで確認し（実施例５－１；図１５Ａ、実施例６－１；図１６Ａ）、ＡＤＰ－リボースとソラフェニブの併用投与による相乗的抗がん効果を肝がんで確認した（実施例５－４；図１５Ｄ、実施例６－４; 図１６Ｄ）。
【0060】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる標的抗がん剤は、ＥＧＦＲ抑制剤であってよく、具体的に、低分子ＥＧＦＲ抑制剤であってよい。この場合、治療可能ながんは、固形がん、具体的に、肺がんであってよい。本発明者らは、ＡＤＰ－リボースとＥＧＦＲ抑制剤であるオシメルチニブの併用投与による相乗的抗がん効果を肺がんで確認した（実施例５－２；図１５Ｂ、実施例６－２；図１６Ｂ）。
【0061】
一実施態様において、ＡＤＰ－リボースと併用投与されることができる標的抗がん剤は、ＨＥＲ２抑制剤であってよく、具体的に抗－ＨＥＲ２単クローン抗体であってよい。この場合、治療可能ながんは、固形がん、具体的に、乳房がんであってよい。本発明者らは、ＡＤＰ－リボースと抗－ＨＥＲ２単クローン抗体であるトラスツズマブの併用投与による相乗的抗がん効果を乳房がんで確認した（実施例５－５；図１５Ｅ）。
【0062】
投与経路、用法および用量
本発明の抗がん組成物または組み合わせ物において、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩と第２抗がん剤は、同時または異時に投与されてよい。例えば、前記組成物または組み合わせ物は、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩が第２抗がん剤の抗がん療法前または後に投与されることができる。それぞれの療法は、投与サイクルを１回または数回繰り返すものであってよいが、これに制限されない。
本発明の抗がん組成物または組み合わせ物において、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩と第２抗がん剤は、同時または異時に投与されてよい。例えば、前記組成物または組み合わせ物は、ＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩が第２抗がん剤の抗がん療法前または後に投与されることができる。それぞれの療法は、投与サイクルを１回または数回繰り返すものであってよいが、これに制限されない。
【0063】
一実施態様において、腫瘍マウスモデルを対象に相乗的抗がん効果を確認した第２抗がん剤とＡＤＰ－リボースの投与スケジュール（図１６）は、以下の表１のとおりであり、本発明の抗がん組成物と第２抗がん剤の好ましい患者投与用量は、本発明で具体的に確認された最適のマウス投与用量とマウス－ヒトとの間の用量－反応関係（ｄｏｓｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ）およびＮＯＡＥＬ（Ｎｏ－ｏｂｓｅｒｖｅｄ－ａｄｖｅｒｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｌｅｖｅｌ）などを考慮して換算されることができる。
本発明に係るＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩と第２抗がん剤は、医学的治療または予防に適用可能な合理的な受益／危険割合で疾患を治療または予防するに十分な量でそれぞれ投与されることができる。それぞれの有効用量水準は、疾患の重症度、薬物の活性、患者の年齢、体重、健康、性別、患者の薬物に対する敏感度、使用された本発明組成物の投与時間、投与経路および排出割合、治療期間、使用された本発明の組成物と配合または同時に使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野によく知られている要素によって決定されることができる。
【表1】
本発明に係るＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩と第２抗がん剤は、医学的治療または予防に適用可能な合理的な受益／危険割合で疾患を治療または予防するに十分な量でそれぞれ投与されることができる。それぞれの有効用量水準は、疾患の重症度、薬物の活性、患者の年齢、体重、健康、性別、患者の薬物に対する敏感度、使用された本発明組成物の投与時間、投与経路および排出割合、治療期間、使用された本発明の組成物と配合または同時に使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野によく知られている要素によって決定されることができる。
【0064】
４．抗がん治療のためのＡＤＰ－リボース製剤
上述した抗がん組成物に含まれるＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容される塩の重量％は、特にこれに制限されないが、最終組成物の総重量を基準に０．０００１～９０重量％、具体的に０．００１～５０重量％、より具体的に０．０１～２０重量％の含量で含まれ得。
また、前記抗がん組成物は、薬学組成物または食品組成物の形態で製造されることができる。
上述した抗がん組成物に含まれるＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容される塩の重量％は、特にこれに制限されないが、最終組成物の総重量を基準に０．０００１～９０重量％、具体的に０．００１～５０重量％、より具体的に０．０１～２０重量％の含量で含まれ得。
また、前記抗がん組成物は、薬学組成物または食品組成物の形態で製造されることができる。
【0065】
本発明の抗がん組成物が薬学組成物の形態で製造される場合、前記薬学組成物は、薬剤の製造に通常的に使用される適切な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含んで製造されることができる。
【0066】
具体的に、本発明の薬学組成物は、それぞれ通常の方法によって多様な投与経路の製剤で製造されることができる。
【0067】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、経口投与用製剤で製造されることができる。具体的に、前記組成物は、錠剤（例えば、口腔崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤（例えば、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤）、顆粒剤（例えば、徐放性顆粒剤、腸溶性顆粒剤、発泡顆粒剤）、散剤、経口用液剤（例えば、エリクサー剤、懸濁液剤、乳剤、レモネード剤、芳香水剤、煎剤および浸剤、酒精剤、チンキ剤）、シロップ剤、経口用ゼリー剤、茶剤、エキス剤（例えば、軟稠エキス剤、乾燥エキス剤）、流動エキス剤、丸剤で製造されることができる。
【0068】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、口腔投与用製剤で製造されることができる。具体的に、前記組成物は、口腔用錠剤（例えば、トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用液剤（例えば、ガーグル剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤（例えば、口腔用クリーム剤、口腔用ゲル剤、口腔用軟膏剤）、口腔溶解フィルムで製造されることができる。
【0069】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、注射剤で製造されることができる。この場合、注射剤は、アンプル、バイアル、プレフィルドシリンジ、カートリッジ形態などで製造されることができ、より具体的に、輸液剤、凍結乾燥注射剤、粉末注射剤、移植剤、持続性注射剤、透析および貫流用製剤で製造されることができる。
【0070】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、投石および貫流用製剤で製造されることができる。具体的に、前記組成物は、透析剤（例えば、腹膜透析剤、血液透析剤）、貫流剤で製造されることができる。
【0071】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、気管支、肺投与用製剤で製造されることができる。具体的に、前記組成物は、吸入剤（例えば、吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアロゾル剤）で製造されることができる。
【0072】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、眼球投与用製剤で製造されることができる。具体的に、前記組成物は、点眼剤、眼軟膏剤で製造されることができる。
【0073】
一実施態様において、本発明の薬学組成物は、鼻に投与する製剤（例えば、点鼻粉末剤、点鼻液剤）で製造されるか、浣腸剤、直腸投与製剤（例えば、坐剤、直腸用半固形剤、浣腸剤）で製造されるか、膣に適用される製剤（例えば、膣錠、膣用坐剤）、皮膚適用製剤（例えば、外用固形剤、外用液剤、エアロゾル剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、経皮吸収剤、カタプラズマ剤、貼付剤、ペースト剤）で製造されることができる。
【0074】
前記薬学組成物が経口投与用として使用される場合、適切なカプセル化（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）、腸溶コーティング（ｅｎｔｅｒｉｃ ｃｏａｔｉｎｇ）、ポリマーの配合などを通じて、徐放性製剤で製造されることができる。
【0075】
一実施様態において、前記徐放性製剤は、長時間作用性（ｌｏｎｇ ａｃｔｉｎｇ）製剤で製造されることができる。
【0076】
一実施態様において、長時間作用性製剤には、ポリマーと脂質が適切な割合で混合されることができる。
【0077】
本発明の抗がん組成物が食品組成物の形態で製造される場合、前記食品組成物は、食品に通常使用されて、匂い、味、視覚などを向上させることができる追加成分を含むことができる。例えば、食品添加物（ｆｏｏｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）を添加することができる。前記添加物は、食品の種類によって選別され、適切な量で使用される。
【0078】
前記食品組成物は、健康機能性食品で製造されることができ、ここで、健康機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄ）とは、特定保健用食品（ｆｏｏｄ ｆｏｒ ｓｐｅｃｉａｌ ｈｅａｌｔｈ ｕｓｅ、ＦｏＳＨＵ）と同一の用語であって、栄養供給の外にも、生体調節機能が効率的に示されるように加工された医学、医療効果が高い食品を意味する。前記健康機能性食品は、がんの改善に有用な効果を得るために、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、液状、丸などの多様な形態で製造されることができる。
【発明の効果】
【0079】
本発明に係るＡＤＰ－リボースまたはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、単独または放射線療法および／または化学療法と併用されて効果的な抗がん治療効果を示すだけでなく、正常細胞に対する毒性を現わさないため、抗がん療法に有用に活用されることができる。
【図面の簡単な説明】
【0080】
【図1】各種固形がん（Ａ：Ｕ－８７ＭＧ、Ｂ：Ｈ１９７５、Ｃ：ＡｓＰＣ－１、Ｄ：Ｈｅｐ Ｇ２、Ｅ：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｆ：ＨＣＴ１１６、Ｇ：Ｃａｋｉ－１細胞株）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、細胞内ＡＤＰ－リボースが蓄積されたことを確認した結果を示すグラフである。
【図2】脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図3】肺がん（Ｈ１９７５）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図4】膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図5】肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図6】乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図7】大腸がん（ＨＣＴ１１６）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図8】腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞成長抑制および死滅効果を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図9】胃がん（ＳＮＵ－１）または卵巣がん（ＯＶＣＡＲ－３）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞死滅効果を確認したグラフである。
【図10】膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞の浸透および転移能力の減少を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図11】乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞にＡＤＰ－リボース処理後、がん細胞の浸透および転移能力の減少を確認した顕微鏡写真（Ａ）およびグラフ（Ｂ）である。
【図12】膵臓がん細胞株に誘発された異種移植動物モデルにＡＤＰ－リボース皮下注射（Ｓ．Ｃ）後、腫瘍体積の減少効果を示したグラフ（Ａ）および顕微鏡写真（Ｂ）である。
【図13】腎臓がん細胞株に誘発された異種移植動物モデルにＡＤＰ－リボース静脈注射（Ｉ．Ｖ）後、腫瘍体積の減少効果を示したグラフ（Ａ）および顕微鏡写真（Ｂ）である。
【図14】膵臓がん細胞株に誘発された異種移植動物モデルにＡＤＰ－リボース経口投与（Ｐ．Ｏ）後、腫瘍体積の減少効果を示したグラフ（Ａ）および顕微鏡写真（Ｂ）である。
【図15】各種固形がん（Ａ：Ｕ－８７ＭＧ、Ｂ：Ｈ１９７５、Ｃ：ＡｓＰＣ－１、Ｄ：Ｈｅｐ Ｇ２、Ｅ：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｆ：ＨＣＴ１１６）細胞に低用量の抗がん剤（Ａ：ベバシズマブ、Ｂ：オシメルチニブ、Ｃ：ゲムシタビン、Ｄ：ソラフェニブ、Ｅ：ハーセプチン、Ｆ：５－フルオロウラシル）とＡＤＰ－リボースを併用処理したとき、相乗的細胞死滅効果を示したグラフである。
【図16】腫瘍誘発動物に低用量の抗がん剤（Ａ：ベバシズマブ、Ｂ：オシメルチニブ、Ｃ：ゲムシタビン、Ｄ：ソラフェニブ）とＡＤＰ－リボースを併用投与したとき、相乗的腫瘍体積減少効果を示したグラフである。
【図17】固形がん（Ａ：Ｕ－８７ＭＧ、Ｂ：Ｃａｋｉ－１、Ｃ：ＡｓＰＣ－１、Ｄ：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞に放射線を照射したときとＡＤＰ－リボースを処理したとき、細胞内ＡＤＰ－リボース蓄積量を比較した結果を示すグラフである。
【図18】固形がん（Ａ：Ｕ－８７ＭＧ、Ｂ：Ｈ１９７５、Ｃ：ＡｓＰＣ－１、Ｄ：Ｈｅｐ Ｇ２、Ｅ：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｆ：ＨＣＴ１１６、Ｇ：Ｃａｋｉ－１）細胞に放射線照射耐性を示す線量とＡＤＰ－リボースを併用処理したとき、相乗的細胞死滅効果を確認したグラフである。
【図19】腫瘍誘発動物に低線量の放射線照射とＡＤＰ－リボースを併用投与したとき、相乗的腫瘍体積減少効果を示すグラフである。
【図20】正常細胞（Ａ、Ｂ：Ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、Ｃ、Ｄ：Ｈｕｍａｎ ｈａｉｒ ｄｅｒｍａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｃｅｌｌ）にＡＤＰ－リボースを投与した後、細胞毒性が現れるか否かを確認した写真およびグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0081】
以下、本発明を実施例を通じてより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
【0082】
材料および方法
１．ＡＤＰ－リボースおよび抗がん剤準備
ＡＤＰ－リボースおよびベバシズマブ、オシメルチニブ、ゲムシタビン、ソラフェニブ、ハーセプチン、５－フルオロウラシル抗がん剤は、すべてＳｉｇｍａ社から注文した（Ｓｔ Ｌｕｏｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）。ＡＤＰ－リボースとすべての抗がん剤は、活用する前まで―２０℃冷凍保管した。
１．ＡＤＰ－リボースおよび抗がん剤準備
ＡＤＰ－リボースおよびベバシズマブ、オシメルチニブ、ゲムシタビン、ソラフェニブ、ハーセプチン、５－フルオロウラシル抗がん剤は、すべてＳｉｇｍａ社から注文した（Ｓｔ Ｌｕｏｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）。ＡＤＰ－リボースとすべての抗がん剤は、活用する前まで―２０℃冷凍保管した。
【0083】
２．細胞株の準備
脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）、胃がん（ＳＮＵ－１）、卵巣がん（ＯＶＣＡＲ－３）細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）社から注文して、研究に活用する前まで液体窒素に保管した。
脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）、胃がん（ＳＮＵ－１）、卵巣がん（ＯＶＣＡＲ－３）細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）社から注文して、研究に活用する前まで液体窒素に保管した。
【0084】
３．ＡＤＰ－リボース定量分析
５×１０５個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞をそれぞれの適正培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で何も処理しないグループ、ＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養後に培地を除去して、リン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄した後、ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒを入れて２０分間氷上に放置した。細胞を掻き寄せた後、遠心分離機チューブに入れて、１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間遠心分離した。上層液を獲得して、１％のＳＤＳを添加した後、１００℃で５分間沸かして、氷に冷やした。上層液を１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間再遠心分離して最終上層液を獲得し、ＥＬＩＳＡ分析キット（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を活用して、ＡＤＰ－リボースを定量分析して比較した。
５×１０５個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞をそれぞれの適正培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で何も処理しないグループ、ＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養後に培地を除去して、リン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄した後、ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒを入れて２０分間氷上に放置した。細胞を掻き寄せた後、遠心分離機チューブに入れて、１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間遠心分離した。上層液を獲得して、１％のＳＤＳを添加した後、１００℃で５分間沸かして、氷に冷やした。上層液を１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間再遠心分離して最終上層液を獲得し、ＥＬＩＳＡ分析キット（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を活用して、ＡＤＰ－リボースを定量分析して比較した。
【0085】
４．がん細胞死滅検証
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）、胃がん（ＳＮＵ－１）、卵巣がん（ＯＶＣＡＲ－３）細胞をそれぞれ３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、各濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれのがん細胞に処理した。３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して、処理しない細胞対比半数致死率および最大致死率の濃度を求めた。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）、胃がん（ＳＮＵ－１）、卵巣がん（ＯＶＣＡＲ－３）細胞をそれぞれ３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、各濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれのがん細胞に処理した。３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して、処理しない細胞対比半数致死率および最大致死率の濃度を求めた。
【0086】
５．がん細胞転移および浸透能抑制検証
８．０μｍ気孔サイズポリカーボネート膜フィルターを有するトランスウェルを使用して、がん細胞の転移および浸透能を分析した。トランスウェルを２４－ウェルプレートに入れ、各ウェルに膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）および乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞を各ウェル当たり３．５×１０５細胞の密度で挿入物の上面に撒き、何も処理しないグループとＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。培養後、トランスウェルを滅菌水で控え目に洗浄した後、１００％メタノールに入れ、付いている細胞を固定させた。固定後、細胞を観察するために、ヘマトキシリンおよびエオシン試薬で染色し、何も処理しないグループ対比挿入物の上面を透過して、下面に転移および浸透した細胞の割合を求めた。
８．０μｍ気孔サイズポリカーボネート膜フィルターを有するトランスウェルを使用して、がん細胞の転移および浸透能を分析した。トランスウェルを２４－ウェルプレートに入れ、各ウェルに膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）および乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞を各ウェル当たり３．５×１０５細胞の密度で挿入物の上面に撒き、何も処理しないグループとＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。培養後、トランスウェルを滅菌水で控え目に洗浄した後、１００％メタノールに入れ、付いている細胞を固定させた。固定後、細胞を観察するために、ヘマトキシリンおよびエオシン試薬で染色し、何も処理しないグループ対比挿入物の上面を透過して、下面に転移および浸透した細胞の割合を求めた。
【0087】
６．動物の準備
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から注文した。飼育施設は、特定病巣がない環境で温度は２２～２５℃、昼夜サイクルは１２時間周期（午前８時点灯）で維持し、飼料と飲水は自律配食した。すべての動物研究は、動物研究倫理委員会の規定によって遂行した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から注文した。飼育施設は、特定病巣がない環境で温度は２２～２５℃、昼夜サイクルは１２時間周期（午前８時点灯）で維持し、飼料と飲水は自律配食した。すべての動物研究は、動物研究倫理委員会の規定によって遂行した。
【0088】
７．異種移植モデルからＡＤＰ－リボースの投薬経路および濃度による抗がん効能検証
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）または腎臓がん（ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７個）をマウスの脇腹後ろに接種し、腫瘍体積の約１５０ｍｍ３まで成長させた。そして、３種の濃度のＡＤＰ－リボースを週３回皮下注射、静脈注射、口腔投与した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを６日間隔で測定して、腫瘍体積の変化結果を各群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）または腎臓がん（ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７個）をマウスの脇腹後ろに接種し、腫瘍体積の約１５０ｍｍ３まで成長させた。そして、３種の濃度のＡＤＰ－リボースを週３回皮下注射、静脈注射、口腔投与した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを６日間隔で測定して、腫瘍体積の変化結果を各群別に比較した。
【0089】
８．がん細胞で抗がん剤併用による死滅検証
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）細胞をそれぞれ３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）を対象に１５ｍＭのベバシズマブ、肺がん（Ｈ１９７５）を対象に１ｎＭのオシメルチニブ、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）を対象に１μＭのゲムシタビン、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）を対象に１μＭのソラフェニブ、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）を対象に２．５μＭのハーセプチン、そして、大腸がん（ＨＣＴ１１６）を対象に１０μＭの５－フルオロウラシルを単独またはＡＤＰ－リボースと併用処理した。処理後、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の死滅程度を比較した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）細胞をそれぞれ３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）を対象に１５ｍＭのベバシズマブ、肺がん（Ｈ１９７５）を対象に１ｎＭのオシメルチニブ、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）を対象に１μＭのゲムシタビン、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）を対象に１μＭのソラフェニブ、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）を対象に２．５μＭのハーセプチン、そして、大腸がん（ＨＣＴ１１６）を対象に１０μＭの５－フルオロウラシルを単独またはＡＤＰ－リボースと併用処理した。処理後、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の死滅程度を比較した。
【0090】
９．異種移植モデルから抗がん剤併用による抗がん効能検証
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）、または肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞（１×１０７個）をそれぞれマウスの脇腹後ろに接種し、腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３に成長する時点で対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、抗がん剤単独処理群、併用処理群に分類した。脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）研究のために、２５ｍｇ／ｋｇ低用量のベバシズマブを週２回腹腔に、肺がん（Ｈ１９７５）研究のために、１ｍｇ／ｋｇ低用量のオシメルチニブを週２回口腔に、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）研究のために、５０ｍｇ／ｋｇ低用量のゲムシタビンを週２回腹腔に、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）研究のために、１０ｍｇ／ｋｇ低用量のソラフェニブを週５回口腔に単独または既述されたそれぞれの抗がん剤と１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボース（皮下投与、週３回）を併用投与した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを６日間隔で測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）、または肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞（１×１０７個）をそれぞれマウスの脇腹後ろに接種し、腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３に成長する時点で対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、抗がん剤単独処理群、併用処理群に分類した。脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）研究のために、２５ｍｇ／ｋｇ低用量のベバシズマブを週２回腹腔に、肺がん（Ｈ１９７５）研究のために、１ｍｇ／ｋｇ低用量のオシメルチニブを週２回口腔に、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）研究のために、５０ｍｇ／ｋｇ低用量のゲムシタビンを週２回腹腔に、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）研究のために、１０ｍｇ／ｋｇ低用量のソラフェニブを週５回口腔に単独または既述されたそれぞれの抗がん剤と１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボース（皮下投与、週３回）を併用投与した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを６日間隔で測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0091】
１０．がん細胞で放射線併用によるＡＤＰ－リボース定量分析
６－ウェルプレートに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）、または乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞をそれぞれ培養して、何も処理しないグループ、放射線を処理したグループ、ＡＤＰ－リボースを処理したグループに分類した。放射線照射は、Ｘ－Ｒａｄ ３２０照射器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ－ｒａｙ、Ｎｏｒｔｈ Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ、ＵＳＡ）を活用して遂行し、１２．５ｍＡおよび２．０ｍｍ Ａｌで構成されたＸ線ビームフィルターを使用して、３００ｋＶｐ、１５０ｃＧｙ／ｍｉｎの線量率で計１、２、５Ｇｙをそれぞれがん細胞に処理した。処理前および処理後、４、８、１６、２４時間に培地を除去し、リン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄した後、ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒを入れて２０分間氷上に放置した。細胞を掻き寄せた後、遠心分離機チューブに入れて、１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間遠心分離した。上層液を獲得して、１％のＳＤＳを添加した後、１００℃で５分間沸かして、氷に冷やした。上層液を１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間再遠心分離して最終上層液を獲得し、ＥＬＩＳＡ分析キット（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を活用して、ＡＤＰ－リボースを定量分析した。
６－ウェルプレートに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）、または乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞をそれぞれ培養して、何も処理しないグループ、放射線を処理したグループ、ＡＤＰ－リボースを処理したグループに分類した。放射線照射は、Ｘ－Ｒａｄ ３２０照射器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ－ｒａｙ、Ｎｏｒｔｈ Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ、ＵＳＡ）を活用して遂行し、１２．５ｍＡおよび２．０ｍｍ Ａｌで構成されたＸ線ビームフィルターを使用して、３００ｋＶｐ、１５０ｃＧｙ／ｍｉｎの線量率で計１、２、５Ｇｙをそれぞれがん細胞に処理した。処理前および処理後、４、８、１６、２４時間に培地を除去し、リン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄した後、ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒを入れて２０分間氷上に放置した。細胞を掻き寄せた後、遠心分離機チューブに入れて、１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間遠心分離した。上層液を獲得して、１％のＳＤＳを添加した後、１００℃で５分間沸かして、氷に冷やした。上層液を１０，０００ｇ、４℃条件で１０分間再遠心分離して最終上層液を獲得し、ＥＬＩＳＡ分析キット（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を活用して、ＡＤＰ－リボースを定量分析した。
【0092】
１１．がん細胞で放射線照射併用による死滅検証
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、ＡＤＰ－リボースや２、５Ｇｙ線量の放射線を単独またはＡＤＰ－リボースと２Ｇｙ線量の放射線を併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の死滅程度を比較した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、肺がん（Ｈ１９７５）、膵臓がん（Ａｓｐｃ－１）、肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、大腸がん（ＨＣＴ１１６）、腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、ＡＤＰ－リボースや２、５Ｇｙ線量の放射線を単独またはＡＤＰ－リボースと２Ｇｙ線量の放射線を併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の死滅程度を比較した。
【0093】
１２．異種移植モデルから放射線照射併用による抗がん効能検証
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）または腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７個）をそれぞれマウスの脇腹後ろに接種し、腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３に成長する時点で対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボース（皮下投与、週３回）を併用投与する３種群に分類した。マウスに放射線照射は、Ｘ－Ｒａｄ ３２０照射器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ－ｒａｙ、Ｎｏｒｔｈ Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ、ＵＳＡ）を通じて遂行され、定められた放射線量を照射するために、放射線源から適正距離を維持してマウスを配置した。マウスの発がん部位の以外に他の身体部位や臓器を放射線の被爆から保護するために、鉛遮蔽物が使用された。１２．５ｍＡおよび２．０ｍｍＡｌで構成されたＸ線ビームフィルターを使用して、３００ｋＶｐ、１５０ｃＧｙ／ｍｉｎの線量率で計２Ｇｙの放射線を１Ｇｙ ２回分画して（２日間）照射した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを６日間隔で測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）、膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）、乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）または腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７個）をそれぞれマウスの脇腹後ろに接種し、腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３に成長する時点で対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボース（皮下投与、週３回）を併用投与する３種群に分類した。マウスに放射線照射は、Ｘ－Ｒａｄ ３２０照射器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ－ｒａｙ、Ｎｏｒｔｈ Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ、ＵＳＡ）を通じて遂行され、定められた放射線量を照射するために、放射線源から適正距離を維持してマウスを配置した。マウスの発がん部位の以外に他の身体部位や臓器を放射線の被爆から保護するために、鉛遮蔽物が使用された。１２．５ｍＡおよび２．０ｍｍＡｌで構成されたＸ線ビームフィルターを使用して、３００ｋＶｐ、１５０ｃＧｙ／ｍｉｎの線量率で計２Ｇｙの放射線を１Ｇｙ ２回分画して（２日間）照射した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを６日間隔で測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0094】
１３．統計的有意性の分析
すべてのグラフは、平均±標準偏差で求められた値で表示された。統計的有意性は、データが正規化されたか否かによって、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ分析を使用して分析された。Ｐ＜０．０５以上の差を統計的に有意なものと見なし、統計的有意性の分析のために、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ社のプログラムを活用した（Ｓｉｇｍａｓｔａｔ ｖｅｒ．３．５、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、ＵＳＡ）。
すべてのグラフは、平均±標準偏差で求められた値で表示された。統計的有意性は、データが正規化されたか否かによって、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ分析を使用して分析された。Ｐ＜０．０５以上の差を統計的に有意なものと見なし、統計的有意性の分析のために、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ社のプログラムを活用した（Ｓｉｇｍａｓｔａｔ ｖｅｒ．３．５、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、ＵＳＡ）。
【0095】
実施例１：がん細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
実施例１－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＵ－８７ＭＧ細胞を、Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
実施例１－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＵ－８７ＭＧ細胞を、Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0096】
その結果、脳がん細胞（Ｕ－８７ＭＧ）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＡ）。
【0097】
実施例１－２：Ｈ１９７５細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＨ１９７５細胞をＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、４μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
５×１０５個のＨ１９７５細胞をＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、４μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0098】
その結果、肺がん細胞（Ｈ１９７５）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＢ）。
【0099】
実施例１－３：ＡｓＰＣ－１細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＡｓＰＣ－１細胞をＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
５×１０５個のＡｓＰＣ－１細胞をＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0100】
その結果、膵臓がん細胞（ＡｓＰＣ－１）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＣ）。
【0101】
実施例１－４：Ｈｅｐ Ｇ２細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＨｅｐ Ｇ２細胞をＥａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
５×１０５個のＨｅｐ Ｇ２細胞をＥａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0102】
その結果、肝がん細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＤ）。
【0103】
実施例１－５：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞をＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、１６μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
５×１０５個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞をＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、１６μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0104】
その結果、乳房がん細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＥ）。
【0105】
実施例１－６：ＨＣＴ１１６細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＨＣＴ１１６細胞をＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
５×１０５個のＨＣＴ１１６細胞をＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、８μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0106】
その結果、大腸がん細胞（ＨＣＴ１１６）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＦ）。
【0107】
実施例１－７：Ｃａｋｉ－１細胞内ＡＤＰ－リボース水準の変化
５×１０５個のＣａｋｉ－１細胞をＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、１６μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
５×１０５個のＣａｋｉ－１細胞をＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地に１０％ウシ胎児血清＋１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン＋１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを混ぜて、３７℃、５％ＣＯ２条件で、処理しないグループ、１６μＭのＡＤＰ－リボースを処理したグループに分けて、２４時間培養した。培養された細胞の培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、準備された上層液をＥＬＩＳＡ分析に活用して、ＡＤＰ－リボースを検出分析した。
【0108】
その結果、腎臓がん細胞（Ｃａｋｉ－１）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）ＡＤＰ－リボースの量が顕著に増加したことを確認した（図１のＧ）。
【0109】
以上を整理すれば、実施例１を通じて各種固形がん（脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん）細胞で外部ＡＤＰ－リボース処理によって細胞内ＡＤＰ－リボース濃度を顕著に増加させることができることを確認した（図１）。
【0110】
実施例２：ＡＤＰ－リボース濃度によるがん細胞生存率の変化
実施例２－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＵ－８７ＭＧ細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、最終０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
実施例２－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＵ－８７ＭＧ細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、最終０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0111】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、脳がん細胞（Ｕ－８７ＭＧ）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、脳がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図２のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、８μＭの濃度で脳がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭでは、ほぼすべての細胞が死滅されることを確認した（図２のＢ）。
【0112】
実施例２－２：Ｈ１９７５細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨ１９７５細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨ１９７５細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0113】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、肺がん細胞（Ｈ１９７５）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、肺がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図３のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、２μＭの濃度で肺がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭでは、ほぼすべての細胞が死滅されることを確認した（図３のＢ）。
【0114】
実施例２－３：ＡｓＰＣ－１細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＡｓＰＣ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＡｓＰＣ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0115】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、膵臓がん細胞（ＡｓＰＣ－１）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、膵臓がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図４のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、２μＭの濃度で膵臓がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭでは、ほぼすべての細胞が死滅されることを確認した（図４のＢ）。
【0116】
実施例２－４：Ｈｅｐ Ｇ２細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨｅｐ Ｇ２細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨｅｐ Ｇ２細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0117】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、肝がん細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、肝がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図５のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、４μＭの濃度で肝がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭではすべての細胞が死滅されることを確認した（図５のＢ）。
【0118】
実施例２－５：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0119】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、乳房がん細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、乳房がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図６のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、１６μＭの濃度で乳房がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭでは、ほぼすべての細胞が死滅されることを確認した（図６のＢ）。
【0120】
実施例２－６：ＨＣＴ１１６細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨＣＴ１１６細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨＣＴ１１６細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0121】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、大腸がん細胞（ＨＣＴ１１６）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、大腸がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図７のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、８μＭの濃度で大腸がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭでは、ほぼすべての細胞が死滅されることを確認した（図７のＢ）。
【0122】
実施例２－７：Ｃａｋｉ－１細胞でＡＤＰ－リボース濃度増加による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＣａｋｉ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＣａｋｉ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、０．１２５、０．２５、０．５、１、２、４、８、１６、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0123】
その結果、ＡＤＰ－リボースを処理しない対照群では、腎臓がん細胞（Ｃａｋｉ－１）が急激に成長している形態を顕微鏡で観察した一方、ＡＤＰ－リボースを処理した実験群では、腎臓がん細胞の成長が抑制されて死滅することを確認した（図８のＡ）。ＡＤＰ－リボース処理濃度による半数致死量および最大致死量を定量的に測定した結果、１６μＭの濃度で腎臓がん細胞の半分程度が死滅され、３２μＭでは、ほぼすべての細胞が死滅されることを確認した（図８のＢ）。
【0124】
実施例２－８：ＳＮＵ－１またはＯＶＣＡＲ－３細胞でＡＤＰ－リボース処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＳＮＵ－１またはＯＶＣＡＲ－３細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＳＮＵ－１またはＯＶＣＡＲ－３細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、３２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースをそれぞれ処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0125】
その結果、胃がん細胞（ＳＮＵ－１）または卵巣がん細胞（ＯＶＣＡＲ－３）にＡＤＰ－リボース処理時に対照群グループと対比して有意に細胞が死滅されることを確認した（図９）。
【0126】
以上を整理すれば、実施例２の細胞実験を通じてＡＤＰ－リボースが各種固形がん（脳がん、肺がん、膵臓がん、肝がん、乳房がん、大腸がん、腎臓がん、胃がん、卵巣がん）細胞に対する抗がん効果があることを確認した（図２～９）。
【0127】
実施例３：ＡＤＰ－リボースによる前ががん細胞転移および浸透能力の変化
がん細胞の成長が抑制されて死滅が誘導されれば、がん細胞の転移能力や浸透能力にも影響を受けることができる。前記実施例２のように、ＡＤＰ－リボースの処理によってがん細胞の成長抑制および死滅誘導の効果を明確に観察したので、ＡＤＰ－リボースの処理ががん細胞の転移および浸透能力の減少を誘導すると期待することができる。
がん細胞の成長が抑制されて死滅が誘導されれば、がん細胞の転移能力や浸透能力にも影響を受けることができる。前記実施例２のように、ＡＤＰ－リボースの処理によってがん細胞の成長抑制および死滅誘導の効果を明確に観察したので、ＡＤＰ－リボースの処理ががん細胞の転移および浸透能力の減少を誘導すると期待することができる。
【0128】
実施例３－１：ＡｓＰＣ－１細胞でＡＤＰ－リボースによる転移および浸透能力の変化
８．０μｍ気孔サイズポリカーボネート膜フィルターを有するトランスウェルを使用して分析が遂行された。トランスウェルを２４－ウェルプレートに入れ、各ウェルにＡｓＰＣ－１細胞を各ウェル当たり３．５×１０５細胞の密度で挿入物の上面に撒き、３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。培養後、トランスウェルを滅菌水で控え目に洗浄した後、１００％メタノールに入れ、付いている細胞を固定させた。固定後、細胞を観察するために、ヘマトキシリンおよびエオシン試薬で染色した。
８．０μｍ気孔サイズポリカーボネート膜フィルターを有するトランスウェルを使用して分析が遂行された。トランスウェルを２４－ウェルプレートに入れ、各ウェルにＡｓＰＣ－１細胞を各ウェル当たり３．５×１０５細胞の密度で挿入物の上面に撒き、３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。培養後、トランスウェルを滅菌水で控え目に洗浄した後、１００％メタノールに入れ、付いている細胞を固定させた。固定後、細胞を観察するために、ヘマトキシリンおよびエオシン試薬で染色した。
【0129】
その結果、対照群ではトランスウェル上部から下部への膵臓がん細胞（ＡｓＰＣ－１）浸透および転移が容易に観察される一方、１６μＭのＡＤＰ－リボースを処理した実験群では膵臓がん細胞の浸透および転移が顕著に抑制されたことを確認した（図１０のＡ）。ＡＤＰ－リボースの膵臓がん細胞に対する転移および浸透抑制効果を定量的に測定した結果、対照群に対比して有意に（Ｐ＜０．００１）転移および浸透能力が顕著に減少したことを確認した（図１０のＢ）。
【0130】
実施例３－２：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞でＡＤＰ－リボースによる転移および浸透能力の変化
８．０μｍ気孔サイズポリカーボネート膜フィルターを有するトランスウェルを使用して分析が遂行された。トランスウェルを２４－ウェルプレートに入れ、各ウェルにＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を各ウェル当たり３．５×１０５細胞の密度で挿入物の上面に撒き、３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。培養後、トランスウェルを滅菌水で控え目に洗浄した後、１００％メタノールに入れ、付いている細胞を固定させた。固定後、細胞を観察するために、ヘマトキシリンおよびエオシン試薬で染色した。
８．０μｍ気孔サイズポリカーボネート膜フィルターを有するトランスウェルを使用して分析が遂行された。トランスウェルを２４－ウェルプレートに入れ、各ウェルにＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を各ウェル当たり３．５×１０５細胞の密度で挿入物の上面に撒き、３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。培養後、トランスウェルを滅菌水で控え目に洗浄した後、１００％メタノールに入れ、付いている細胞を固定させた。固定後、細胞を観察するために、ヘマトキシリンおよびエオシン試薬で染色した。
【0131】
その結果、対照群ではトランスウェル上部から下部への乳房がん細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）浸透および転移が容易に観察される一方、３２μＭのＡＤＰ－リボースを処理した実験群では乳房がん細胞の浸透および転移が顕著に抑制されたことを確認した（図１１のＡ）。ＡＤＰ－リボースの乳房がん細胞に対する転移および浸透抑制効果を定量的に測定した結果、対照群に対比して有意に（Ｐ＜０．００１）転移および浸透能力が顕著に減少したことを確認した（図１１のＢ）。
【0132】
以上を整理すれば、実施例３を通じてＡＤＰ－リボースが固形がん（膵臓がん、乳房がん）細胞の転移および浸透能力を抑制することで、転移性がんに対する治療効果に優れる点を確認した（図１０および１１）。
【0133】
実施例４：動物モデルを利用したＡＤＰ－リボースの濃度および投与経路による抗がん効能効果比較および検証
実施例４－１：多様な濃度のＡＤＰ－リボースを皮下経路に注射した動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２、２０、および４０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを皮下経路に注射する４種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、各濃度のＡＤＰ－リボースを週３回皮下注射した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
実施例４－１：多様な濃度のＡＤＰ－リボースを皮下経路に注射した動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２、２０、および４０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを皮下経路に注射する４種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、各濃度のＡＤＰ－リボースを週３回皮下注射した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0134】
経時によって注射された膵臓がんの体積を測定した結果、最終投薬後の対照群腫瘍の最終体積は約２１５５．８ｍｍ３であり、２、２０、および４０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを皮下経路に注射した群の最終腫瘍体積は、それぞれ１０１５．８ｍｍ３、４９６．６ｍｍ３、３３６．２ｍｍ３であって、すべての投薬グループで対照群に対比して統計的に有意に（Ｐ＜０．００１）腫瘍の体積が減少した。具体的に、２ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを皮下注射した群と対比して、２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを皮下注射した群の腫瘍の体積が有意に（Ｐ＜０．００１）減少しており、４０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを皮下注射した群の腫瘍の体積が最も小さく、２ｍｇ／ｋｇ ＡＤＰ－リボースを皮下注射した群と対比して、統計的に有意な（Ｐ＜０．００１）減少を示した（図１２のＡ、Ｂ）。
【0135】
実施例４－２：多様な濃度のＡＤＰ－リボースを静脈注射した動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに腎臓がん（ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２、１０、および２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射する４種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、各濃度のＡＤＰ－リボースを週３回静脈注射した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに腎臓がん（ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２、１０、および２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射する４種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、各濃度のＡＤＰ－リボースを週３回静脈注射した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0136】
経時によって注射された腎臓がんの体積を測定した結果、最終投薬後の対照群腫瘍の最終体積は約２０７４．９ｍｍ３であり、２、１０、および２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射した群の最終腫瘍体積は７０６．７ｍｍ３、３３１．７ｍｍ３、２２７．２ｍｍ３であって、すべての注射グループで対照群に対比して統計的に有意に（Ｐ＜０．００１）腫瘍の体積が減少した。具体的に、２ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射した群と対比して、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射した群の腫瘍の体積が有意に（Ｐ＜０．００１）減少しており、２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射した群の腫瘍の体積が最も小さく、２ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを静脈注射した群と対比して、統計的に有意な（Ｐ＜０．００１）減少を示した（図１３のＡ、Ｂ）。
【0137】
実施例４－３：多様な濃度のＡＤＰ－リボースを口腔投与した動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを口腔投与する４種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、各濃度のＡＤＰ－リボースを週５回口腔投与した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを口腔投与する４種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、各濃度のＡＤＰ－リボースを週５回口腔投与した。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0138】
経時によって注射された膵臓がんの体積を測定した結果、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約３１９４．３ｍｍ３であり、１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを口腔投与した群の最終腫瘍体積は１７９８．６ｍｍ３、１１７５．９ｍｍ３、１０５６．９ｍｍ３であって、すべての口腔投与グループで対照群に対比して統計的に有意に（Ｐ＜０．００１）腫瘍の体積が減少した。１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを口腔投与した群と対比して、４０および８０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを口腔注射した群の腫瘍の体積が有意に（Ｐ＜０．００１）減少していた（図１４のＡ、Ｂ）。
【0139】
以上を整理すれば、細胞実験結果である実施例２、３に引き続き、実施例４の動物実験を通じてＡＤＰ－リボースが各種固形がんに対する抗がん効果があることを再確認した（図１２～１４）。
【0140】
実施例５：ＡＤＰ－リボースと抗がん剤低濃度併用処理によるがん細胞生存率の変化
実施例５－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度ベバシズマブの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１５ｍＭのベバシズマブをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
実施例５－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度ベバシズマブの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１５ｍＭのベバシズマブをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0141】
その結果、脳がん細胞にベバシズマブを単独で処理したときは、全がん細胞の約６８％が生存したが、ＡＤＰ－リボースと併用処理する場合、がん細胞の生存率が約１８％で（Ｐ＜０．００１）顕著に減少することを確認した（図１５のＡ）。
【0142】
実施例５－２：Ｈ１９７５細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度オシメルチニブの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の肺がん（Ｈ１９７５）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１ｎＭのオシメルチニブをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の肺がん（Ｈ１９７５）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１ｎＭのオシメルチニブをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0143】
その結果、肺がん細胞にオシメルチニブを単独で処理したときは、全がん細胞の約５０％が生存したが、ＡＤＰ－リボースと併用処理する場合、がん細胞の生存率が約０．９％で（Ｐ＜０．００１）顕著に減少することを確認した（図１５のＢ）。
【0144】
実施例５－３：ＡｓＰＣ－１細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度ゲムシタビンの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１μＭのゲムシタビンをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１μＭのゲムシタビンをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0145】
その結果、膵臓がん細胞にゲムシタビンを単独で処理したときは、全がん細胞の約５４％が生存したが、ＡＤＰ－リボースと併用処理する場合、がん細胞の生存率が約１％で（Ｐ＜０．００１）顕著に減少することを確認した（図１５のＣ）。
【0146】
実施例５－４：Ｈｅｐ Ｇ２細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度ソラフェニブの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１μＭのソラフェニブをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと１μＭのソラフェニブをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0147】
その結果、肝がん細胞に１μＭのソラフェニブを単独で処理したときは、全がん細胞の約４９％が生存したが、ＡＤＰ－リボースと併用処理する場合、がん細胞の生存率が約０．９％で（Ｐ＜０．００１）顕著に減少することを確認した（図１５のＤ）。
【0148】
実施例５－５：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度ハーセプチンの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、３．２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと２．５μＭのハーセプチンをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、３．２μＭ濃度のＡＤＰ－リボースと２．５μＭのハーセプチンをそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0149】
その結果、乳房がん細胞に２．５μＭのハーセプチンを単独で処理したときは、ハーセプチン耐性によって全がん細胞のなんと８１％が生存したが、ＡＤＰ－リボースと併用処理する場合、がん細胞の生存率が約２０％で（Ｐ＜０．００１）顕著に減少することを確認した（図１５のＥ）。
【0150】
実施例５－６：ＨＣＴ１１６細胞でＡＤＰ－リボースと低濃度５－フルオロウラシルの併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個の大腸がん（ＨＣＴ１１６）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ／１００μｌ濃度のＡＤＰ－リボースと１０μＭの５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個の大腸がん（ＨＣＴ１１６）細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１．６μＭ／１００μｌ濃度のＡＤＰ－リボースと１０μＭの５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、２００μｌのジメチルスルホキシドを各ウェルに入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0151】
その結果、大腸がん細胞に１０μＭの５－フルオロウラシルを単独で処理したときは、全がん細胞の約５１％が生存したが、ＡＤＰ－リボースと併用処理する場合、がん細胞の生存率が約１２％で（Ｐ＜０．００１）顕著に減少することを確認した（図１５のＦ）。
【0152】
以上を整理すれば、実施例５を通じてＡＤＰ－リボースと既存の抗がん剤の併用投与時に固形がんに対する相乗的抗がん効果を示し、ＡＤＰ－リボースが固形がんに対する抗がん剤として活用されることができるだけでなく、既存の抗がん剤の抗がん補助剤として有用に活用され得ることが分かる（図１５）。
【0153】
実施例６：ＡＤＰ－リボースと低濃度抗がん剤を併用投与した動物モデルから腫瘍体積の変化
実施例６－１：ＡＤＰ－リボースと低濃度ベバシズマブを併用投与した脳がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とアバスチン（成分名ベバシズマブ）２５ｍｇ／ｋｇの単独腹腔投与、アバスチン＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、アバスチンは週２回腹腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは、皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
実施例６－１：ＡＤＰ－リボースと低濃度ベバシズマブを併用投与した脳がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とアバスチン（成分名ベバシズマブ）２５ｍｇ／ｋｇの単独腹腔投与、アバスチン＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、アバスチンは週２回腹腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは、皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0154】
経時によって脳がんの体積を測定してこれを比較した結果、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２５２７．１ｍｍ３であり、アバスチンを投与した群の最終腫瘍体積は約１５９８．９ｍｍ３で対照群に対比して約３７％減少にとどまった一方、アバスチンとＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約３３４．５ｍｍ３で対照群に対比して約８７％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、アバスチンを単独処理した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約７９％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１６のＡ）。
【0155】
実施例６－２：ＡＤＰ－リボースと低濃度オシメルチニブを併用投与した肺がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに肺がん（Ｈ１９７５）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とオシメルチニブ１ｍｇ／ｋｇの単独口腔投与、オシメルチニブ＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、オシメルチニブは週２回口腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに肺がん（Ｈ１９７５）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とオシメルチニブ１ｍｇ／ｋｇの単独口腔投与、オシメルチニブ＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、オシメルチニブは週２回口腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0156】
経時によって肺がんの体積を測定してこれを比較した結果、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２２６５．５ｍｍ３であり、オシメルチニブを投与した群の最終腫瘍体積は約１８８１．９ｍｍ３で対照群に対比して約１７％減少にとどまった一方、オシメルチニブとＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約４２４．７ｍｍ３で対照群に対比して約８１％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、オシメルチニブを単独処理した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約７７％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１６のＢ）。
【0157】
実施例６－３：ＡＤＰ－リボースと低濃度ゲムシタビンを併用投与した膵臓がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇの単独腹腔投与、ゲムシタビン＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、ゲムシタビンは週２回腹腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇの単独腹腔投与、ゲムシタビン＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、ゲムシタビンは週２回腹腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0158】
経時によって膵臓がんの体積を測定してこれを比較した結果、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２１７４．３ｍｍ３であり、ゲムシタビンを投与した群の最終腫瘍体積は約１８１５．３ｍｍ３で対照群に対比して約１７％減少にとどまった一方、ゲムシタビンとＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約４４４．３ｍｍ３で対照群に対比して約８０％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、ゲムシタビンを単独処理した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約７６％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１６のＣ）。
【0159】
実施例６－４：ＡＤＰ－リボースと低濃度ソラフェニブを併用投与した肝がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とソラフェニブ１０ｍｇ／ｋｇの単独口腔投与、ソラフェニブ＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、ソラフェニブは週５回口腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに肝がん（Ｈｅｐ Ｇ２）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とソラフェニブ１０ｍｇ／ｋｇの単独口腔投与、ソラフェニブ＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、ソラフェニブは週５回口腔に投与され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0160】
経時によって肝がんの体積を測定してこれを比較した結果であって、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２３２２．４ｍｍ３であり、ソラフェニブを投与した群の最終腫瘍体積は約１８４９．８ｍｍ３で対照群に対比して約２０％減少にとどまった一方、ソラフェニブとＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約５４６ｍｍ３で対照群に対比して約７６％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、ソラフェニブを単独処理した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約７０％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１６のＤ）。
【0161】
以上を整理すれば、実施例５の細胞実験に引き続き、実施例６の動物実験を通じてＡＤＰ－リボースと既存の抗がん剤の併用投与時低い濃度で投与しても固形がんに対する相乗的抗がん効果を示し、ＡＤＰ－リボースが固形がんに抗がん剤として活用されることができるだけでなく、既存の抗がん剤の抗がん補助剤としても有用に活用され得ることが分かる（図１６）。
【0162】
実施例７：放射線およびＡＤＰ－リボース処理によるＡＤＰ－リボースのがん細胞内変化
実施例７－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞内の多様な線量の放射線およびＡＤＰ－リボースの処理によるＡＤＰ－リボースの時間による変化
Ｕ－８７ＭＧ細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
実施例７－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞内の多様な線量の放射線およびＡＤＰ－リボースの処理によるＡＤＰ－リボースの時間による変化
Ｕ－８７ＭＧ細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
【0163】
図１７のＡは、Ｕ－８７ＭＧ細胞で１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量および８μＭのＡＤＰ－リボース処理によって対照群グループと対比してＡＤＰ－リボースの細胞内の増加量を％で示したグラフで、１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量を活用したグループは、ＡＤＰ－リボースの量が４時間に最高に増加してから８時間から減少し始めて、２４時間に処理しないグループとほぼ同じ量に修復されているが、ＡＤＰ－リボースを処理したグループは、２４時間が過ぎても対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）細胞内ＡＤＰ－リボースの量が増加して維持されていることを確認した（図１７のＡ）。
【0164】
実施例７－２：Ｃａｋｉ－１細胞内の多様な線量の放射線およびＡＤＰ－リボースの処理によるＡＤＰ－リボースの時間による変化
Ｃａｋｉ－１細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
Ｃａｋｉ－１細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
【0165】
図１７のＢは、Ｃａｋｉ－１細胞で１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量および１６μＭのＡＤＰ－リボース処理によって対照群グループと対比してＡＤＰ－リボースの細胞内の増加量を％で示したグラフで、１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量を活用したグループは、ＡＤＰ－リボースの量が４時間に最高に増加してから８時間から処理しないグループとほぼ同じ量に修復されているが、ＡＤＰ－リボースを処理したグループは、２４時間が過ぎても対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）細胞内ＡＤＰ－リボースの量が増加して維持されていることを確認した（図１７のＢ）。
【0166】
実施例７－３：ＡｓＰＣ－１細胞内の多様な線量の放射線およびＡＤＰ－リボースの処理によるＡＤＰ－リボースの時間による変化
ＡｓＰＣ－１細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
ＡｓＰＣ－１細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
【0167】
図１７のＣは、ＡｓＰＣ－１細胞で１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量および２μＭのＡＤＰ－リボース処理によって対照群グループと対比してＡＤＰ－リボースの細胞内の増加量を％で示したグラフで、１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量を活用したグループは、ＡＤＰ－リボースの量が４時間に最高に増加してから１６時間から処理しないグループとほぼ同じ量に修復されているが、ＡＤＰ－リボースを処理したグループは、２４時間が過ぎても対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）細胞内ＡＤＰ－リボースの量が増加して維持されていることを確認した（図１７のＣ）。
【0168】
実施例７－４：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞内の多様な線量の放射線およびＡＤＰ－リボースの処理によるＡＤＰ－リボースの時間による変化
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を何も処理しないか（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、１、２、５Ｇｙの放射線を処理するか、ＡＤＰ－リボースを処理した５個のグループに分けて、０、４、８、１６、２４時間の間それぞれ６－ウェルプレートに培養した後、培地を除去し、ＲＩＰＡバッファーおよび１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を処理して、上層液を準備した。準備された上層液は、ＡＤＰ－リボースの検出のためのＥＬＩＳＡ分析に活用した。
【0169】
図１７のＤは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞で１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量および１６μＭのＡＤＰ－リボース処理によって対照群グループと対比してＡＤＰ－リボースの細胞内の増加量を％で示したグラフで、１、２、５Ｇｙの増加する放射線線量を活用したグループは、ＡＤＰ－リボースの量が４時間に最高に増加してから１６時間から処理しないグループとほぼ同じ量に修復されているが、ＡＤＰ－リボースを処理したグループは、２４時間が過ぎても対照群グループと対比して有意に（Ｐ＜０．００１）細胞内ＡＤＰ－リボースの量が増加して維持されていることを確認した（図１７のＤ）。
【0170】
以上を整理すれば、実施例７を通じて、各種固形がん細胞で外部ＡＤＰ－リボース処理によって放射線照射時に上昇するがん細胞内ＡＤＰ－リボース濃度以上に細胞内ＡＤＰ－リボース濃度上昇を維持させることができることを確認した（図１７）。放射線照射による抗がん効果は、遺伝物質の損傷による死滅作用を通じて期待することができるが、がん細胞は、これを克服するために、アデノシン二リン酸リボシル化と知られている工程を通じてＤＮＡの鎖を持続的に修復する。しかし、図１７から見られるように、放射線照射による修復作用で一時的にのみ増加するＡＤＰ－リボースを持続的に蓄積されるように補助すると、生化学作用の撹乱によって放射線治療の相乗した抗がん効果を期待することができ、ＡＤＰ－リボースを併用することで、放射線治療の耐性克服および副作用減少のための減少した線量への抗がん放射線活用可能性を期待することができる。
【0171】
実施例８：ＡＤＰ－リボースと放射線併用処理によるがん細胞生存率の変化
実施例８－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＵ－８７ＭＧ細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、８μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
実施例８－１：Ｕ－８７ＭＧ細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＵ－８７ＭＧ細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、８μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0172】
その結果、Ｕ－８７ＭＧ細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約８８％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約１２．３％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＡ）。
【0173】
実施例８－２：Ｈ１９７５細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨ１９７５細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、２μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨ１９７５細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、２μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0174】
その結果、Ｈ１９７５細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約７５％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約８％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＢ）。
【0175】
実施例８－３：ＡｓＰＣ－１細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＡｓＰＣ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、２μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＡｓＰＣ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、２μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0176】
その結果、ＡｓＰＣ－１細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約８７．３％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約８％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＣ）。
【0177】
実施例８－４：Ｈｅｐ Ｇ２細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨｅｐ Ｇ２細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、４μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨｅｐ Ｇ２細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、４μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0178】
その結果、Ｈｅｐ Ｇ２細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約８２．３％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約７．３％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＤ）。
【0179】
実施例８－５：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１６μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１６μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0180】
その結果、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約９０．６％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約１１．３％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＥ）。
【0181】
実施例８－６：ＨＣＴ１１６細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨＣＴ１１６細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１６μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＨＣＴ１１６細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１６μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させた。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0182】
その結果、ＨＣＴ１１６細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約９０．３％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約１４％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＦ）。
【0183】
実施例８－７：Ｃａｋｉ－１細胞でＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線併用処理による生存率の変化
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＣａｋｉ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１６μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
９６－ウェルプレートに３×１０３個のＣａｋｉ－１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養後、１６μＭのＡＤＰ－リボースと２、５Ｇｙ線量の放射線をそれぞれまたは併用処理し、３７℃、５％ＣＯ２条件でさらに２４時間培養した後、１０μｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロマイド試薬を各ウェルに入れて、１時間反応させる。反応を終えた試薬を除去した後、ジメチルスルホキシドを各ウェルに２００μｌずつ入れた後、吸光度を測定して細胞の生存率を確認した。
【0184】
その結果、Ｃａｋｉ－１細胞に２Ｇｙ線量の放射線を単独で処理したとき、処理しないグループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）対比、がん細胞の約９４．７％が生存する耐性を示しているが、ＡＤＰ－リボースと併用処理すると、２Ｇｙ線量の放射線を活用しても、がん細胞の生存率は約２２．７％で有意に（Ｐ＜０．００１）減少することを確認した（図１８のＧ）。
【0185】
以上を整理すれば、実施例８を通じてＡＤＰ－リボースと放射線併用投与時に固形がんに対する相乗的抗がん効果を示し、ＡＤＰ－リボースが固形がんに抗がん剤として活用されることができるだけでなく、放射線療法の抗がん補助剤としても有用に活用され得ることが分かる（図１８）。
【0186】
実施例９：ＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線を併用処理した動物モデルから腫瘍体積の変化
実施例９－１：ＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線を併用処理した脳がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
実施例９－１：ＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線を併用処理した脳がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに脳がん（Ｕ－８７ＭＧ）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0187】
図１９のＡは、経時によって脳がんの体積を測定してこれを比較した結果であって、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２５４５．２ｍｍ３であり、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群の最終腫瘍体積は約１４７２．１ｍｍ３で対照群に対比して約４２％減少した一方、２Ｇｙ線量の放射線とＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約７２５．２ｍｍ３で対照群に対比して約７１．５％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約５０．７％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１９のＡ）。
【0188】
実施例９－２：ＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線を併用処理した膵臓がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに膵臓がん（ＡｓＰＣ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0189】
図１９のＢは、経時によって膵臓がんの体積を測定してこれを比較した結果であって、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２３８４．３ｍｍ３であり、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群の最終腫瘍体積は約１７２５．５ｍｍ３で対照群に対比して約２７．６％減少した一方、２Ｇｙ線量の放射線とＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約７３６．２ｍｍ３で対照群に対比して約６９．１％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約５７．３％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１９のＢ）。
【0190】
実施例９－３：ＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線を併用処理した乳房がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに乳房がん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0191】
図１９のＣは、経時によって乳房がんの体積を測定してこれを比較した結果であって、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２３３６．１ｍｍ３であり、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群の最終腫瘍体積は約１４５９．６ｍｍ３で対照群に対比して約３７．５％減少した一方、２Ｇｙ線量の放射線とＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約６４０．４ｍｍ３で対照群に対比して約７２．６％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約５６．１％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した。
【0192】
実施例９－４：ＡＤＰ－リボースと耐性線量の放射線を併用処理した腎臓がん動物モデルから腫瘍体積の変化
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
５週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに腎臓がん（Ｃａｋｉ－１）細胞（１×１０７）をマウスの脇腹後ろに接種し、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と２Ｇｙ線量の放射線単独、２Ｇｙ線量放射線＋２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースを併用投与する３種群に分類した。腫瘍の体積が約１５０ｍｍ３まで成長したとき、２Ｇｙ線量の放射線は１Ｇｙずつ２回照射され、２０ｍｇ／ｋｇのＡＤＰ－リボースは皮下に週３回注射された。デジタルケリファーを使用して腫瘍サイズを測定して、腫瘍体積の変化結果を群別に比較した。
【0193】
図１９のＤは、経時によって腎臓がんの体積を測定してこれを比較した結果であって、最終投薬後の対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）腫瘍の最終体積は約２６２０．５ｍｍ３であり、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群の最終腫瘍体積は約２４５４．５ｍｍ３で対照群に対比して約６．３％減少にとどまった一方、２Ｇｙ線量の放射線とＡＤＰ－リボースを併用投与した群の最終腫瘍体積は約７８６．４ｍｍ３で対照群に対比して約７０％の有意な減少（Ｐ＜０．００１）結果を示し、２Ｇｙ線量の放射線を単独照射した群と対比しても、併用投与群の腫瘍体積が約６８％有意に減少（Ｐ＜０．００１）する結果を示した（図１９のＤ）。
【0194】
以上を整理すれば、実施例８の細胞実験に引き続き、実施例９の動物実験を通じてＡＤＰ－リボースと放射線併用投与時に固形がんに対する相乗的抗がん効果を示し、ＡＤＰ－リボースが固形がんに抗がん剤として活用されることができるだけでなく、放射線療法の抗がん補助剤としても有用に活用され得ることが分かる（図１９）。
【0195】
実施例１０：ＡＤＰ－リボースの正常細胞処理時の毒性有無確認
抗がん剤の場合、正常細胞に対しては毒性を現わさないとともに、がん細胞に特異的に毒性を現わすことが重要である。そのため、本発明によってＡＤＰ－リボースが正常細胞に対して毒性を現わすか否かを評価した。
抗がん剤の場合、正常細胞に対しては毒性を現わさないとともに、がん細胞に特異的に毒性を現わすことが重要である。そのため、本発明によってＡＤＰ－リボースが正常細胞に対して毒性を現わすか否かを評価した。
【0196】
正常細胞としてｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ（ＣＣＤ－１８Ｃｏ）とｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｃｅｌｌ（ＨＤＰＣ）細胞を活用した。先ず、９６－ウェルプレートに５×１０３個の各正常細胞をＤＭＥＭ培地で３７℃、５％ＣＯ２条件で２４時間培養した。次いで、ＡＤＰ－リボースを処理しないグループ（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ）および処理したグループに区分（２５、５０、１００ ｕｌ濃度別に増量処理）、計４グループに区分した。薬物処理２４、４８、７２時間後、ＭＴＴ ａｓｓａｙで細胞生存率を比較した。
【0197】
その結果、正常細胞（図２０のＡ、Ｂ：ＣＣＤ－１８Ｃｏ、図２０のＣ、Ｄ：ＨＤＰＣ）すべてにおいて、ＡＤＰ－リボース処理時に毒性が現れないことを確認した。よって、上述した実施例の実験結果とともに、本実施例は、ＡＤＰ－リボースががん細胞特異的に作用して、抗がん剤として有用に活用され得ることを示す。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【国際調査報告】