特表 2024-533245 ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-12

(54)【発明の名称】ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20240905BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240905BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20240905BHJP

   C07K 14/71 20060101ALN20240905BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17

A61K47/12

A61K47/20

A61K47/22

A61K9/08

A61K47/18

A61K47/26

A61P27/02

A61P35/00

C07K19/00 ZNA

C07K14/71

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024514527

(86)(22)【出願日】2022-09-06

(85)【翻訳文提出日】2024-05-02

(86)【国際出願番号】 EP2022074711

(87)【国際公開番号】W WO2023031478

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】21195093.6

(32)【優先日】2021-09-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】504359293

【氏名又は名称】レツク・フアーマシユーテイカルズ・デー・デー

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ズーラ，アレス

(72)【発明者】

【氏名】ジダル，ミチャ

(72)【発明者】

【氏名】ベルコ－パルケル，カーヤ

(72)【発明者】

【氏名】シンク，ロマン

(72)【発明者】

【氏名】レバー，ブラジュ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076BB11

4C076CC10

4C076CC27

4C076DD09E

4C076DD43Z

4C076DD51

4C076DD55Z

4C076DD60Z

4C076EE41

4C076FF15

4C076FF36

4C076FF61

4C076FF63

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA41

4C084DB57

4C084MA17

4C084MA66

4C084NA03

4C084ZA33

4C084ZB26

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA75

4H045EA20

(57)【要約】

本発明は、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む液体製剤に関し、製剤は、ｉ）緩衝剤を含まない、ｉｉ）クエン酸緩衝液を含む、又はｉｉｉ）好ましくはスクロースを含まず好ましくはメチオニンを含むヒスチジン緩衝液を含む。さらに、本発明は、そのような液体製剤を含む容器を含む製造品、並びに治療方法のための液体製剤の使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも１００ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む液体医薬製剤であって、前記製剤が、
ｉ）緩衝剤を含まない、
ｉｉ）クエン酸緩衝液を含む、又は
ｉｉｉ）メチオニンを含むヒスチジン緩衝液を含む、
液体製剤。

【請求項2】

前記製剤が、緩衝剤を含まない、請求項１に記載の液体製剤。

【請求項3】

前記製剤が、緩衝剤を含まないか、又はクエン酸緩衝液を含み、さらに、前記製剤が、ヒスチジンを含まない、請求項１に記載の液体製剤。

【請求項4】

前記製剤が、１つ以上の遊離アミノ酸を含む、請求項１～３のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項5】

前記ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、アフリベルセプトである、請求項１～請求項４のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項6】

前記ＶＥＧＦ受容体タンパク質の濃度が、約１１５ｍｇ／ｍｌである、請求項１～４のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項7】

前記アフリベルセプトの濃度が、約１１５ｍｇ／ｍｌである、請求項５に記載の液体製剤。

【請求項8】

前記アフリベルセプトの濃度が、１１４～１１５ｍｇ／ｍｌである、請求項５に記載の液体製剤。

【請求項9】

前記アフリベルセプトの濃度が、１１４．３ｍｇ／ｍｌである、請求項５に記載の液体製剤。

【請求項10】

前記製剤が、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアミン及びトリプトファンからなる群より選択され、好ましくは、プロリン及びメチオニンからなる群より選択される、１つ以上のアミノ酸を含む、請求項１～９のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項11】

前記製剤が、メチオニンを含み、特に、前記製剤が、ヒスチジン緩衝液及びメチオニン又はクエン酸緩衝液並びにメチオニンを含む、請求項１～１０のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項12】

前記製剤が、スクロースを含まず、特に、前記製剤が、緩衝剤もスクロースも含まない、請求項１～１１のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項13】

前記製剤が、プロリンを含み、特に、前記製剤がプロリンを含むがスクロースを含まず、特に、前記製剤が、プロリンを含み、糖及び糖アルコールからなる群から選択される安定剤を含まない、請求項１～１２のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項14】

前記製剤が、リジン及びアルギニンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸、好ましくはアルギニンを含む、請求項１～１３のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項15】

前記製剤が、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０などの界面活性剤を含む、請求項１～１４のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項16】

前記製剤が、ポリソルベート８０を含む、請求項１～１５のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項17】

前記製剤が、ポリソルベート２０を含む、請求項１～１５のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項18】

前記製剤が、２５℃で８週間貯蔵した後、凝集体の１．３０％未満の増加を示す、請求項１～１７のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項19】

前記製剤のｐＨが、５．８である、請求項１～１８のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項20】

前記ヒスチジン緩衝液又はクエン酸緩衝液が、５～２０ｍＭの濃度を有し、特に、前記緩衝液が、２０ｍＭの濃度を有するヒスチジン緩衝液であるか、又は１０ｍＭの濃度を有するクエン酸緩衝液である、請求項１～１９のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項21】

前記製剤が、アフリベルセプト、クエン酸緩衝液、ｐＨ５．８、スクロース又はトレハロース、ポリソルベート２０、アルギニンを含み、ヒスチジンを含まない、請求項１～１５のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項22】

前記製剤が、アフリベルセプト、緩衝剤なし、ｐＨ５．８、プロリン、アルギニン及びポリソルベート２０を含む、請求項１～１５のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項23】

前記製剤が、アフリベルセプト、緩衝剤なし、ｐＨ５．８、プロリン、メチオニン及びポリソルベート２０を含む、請求項１～１５のいずれかに記載の液体製剤。

【請求項24】

請求項１～２３のいずれか一項に記載の液体医薬製剤を含む容器と、その使用説明書とを含む製品。

【請求項25】

前記物品が、プレフィルドシリンジ又はガラスバイアルである、請求項２４に記載の物品。

【請求項26】

前記ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、ヒト又は動物の身体の疾患を治療する方法に使用するためのものである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の液体医薬製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む液体製剤に関し、製剤は、ｉ）緩衝剤を含まない、ｉｉ）クエン酸緩衝液を含む、又はｉｉｉ）好ましくはスクロースを含まず好ましくはメチオニンを含むヒスチジン緩衝液を含む。さらに、本発明は、そのような液体製剤を含む容器を含む製造品、及び治療方法のための液体製剤の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｆｃベースの融合タンパク質、すなわち、別のペプチドに連結された免疫グロブリンＦｃドメインから構成される融合タンパク質は、最も関連するタンパク質治療薬の１つである。融合したパートナーは有意な治療可能性を有し、それらはＦｃドメインに結合して、ハイブリッドにいくつかの追加の有益な生物学的及び薬理学的特性を与える。おそらく最も重要なことに、Ｆｃドメインの存在は、それらの血漿半減期を著しく増加させる。さらに、生物物理学的観点から、Ｆｃドメインは独立して折り畳まれ、融合パートナーの溶解性及び安定性を改善することができる。Ｆｃベースの融合タンパク質の例は、アフリベルセプトのような血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体Ｆｃ融合タンパク質である。

【0003】

バイオテクノロジーの進歩により、医薬品用途のための様々なタンパク質を製造することが可能になった。しかしながら、タンパク質は大きく複雑であるため（すなわち、複雑な三次元構造に加えて複数の官能基を有する）、そのようなタンパク質の製剤化には特別な問題がある。望ましくない翻訳後修飾をもたらす非天然の不可逆的凝集及び他の経路などの分解経路は、精製、凍結、輸送及び長期貯蔵を含むこれらの生物治療薬の製造における複数の工程に影響を及ぼす。分解されたタンパク質分子はしばしば生物学的活性を実行することができないだけでなく、特にタンパク質凝集体は、医薬品の免疫原性を増強し、したがってその安全性及び有効性を低下させることによって深刻な有害作用を引き起こす可能性がある。これは、特に高濃度製剤に当てはまる。高濃度製剤（すなわち≧１００ｍｇ／ｍｌ）は、より少ない注入量の生物治療用タンパク質を可能にするが、タンパク質凝集及び粘度が増加する傾向を示すことが多く、その結果、全体的なタンパク質効力が低下し、製造及び貯蔵安定性が低下する。

【0004】

当業者に知られているＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質のためのいくつかの製剤が存在するが、特に高濃度のＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質を有する製剤のための新たな製剤を開発する緊急の必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

したがって、本発明によって解決される課題は、特に低い凝集レベルに関して満足のいく安定性を有する、アフリベルセプトのようなＶＥＧＦ受容体融合タンパク質のための高濃度製剤を提供することであった。

【課題を解決するための手段】

【0006】

この問題は、以下及び添付の特許請求の範囲に記載の主題によって解決される。

【0007】

第１の態様では、本発明は、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む液体医薬製剤に関し、製剤は、ｉ）緩衝剤を含まない、ｉｉ）クエン酸緩衝液を含む、又はｉｉｉ）好ましくはスクロースを含まず好ましくはメチオニンを含むヒスチジン緩衝液を含む。

【0008】

本発明の製剤は、好ましくは、貯蔵時に好ましくは低い凝集傾向を有する安定な製剤である。本発明による「安定な」製剤は、ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質が貯蔵時にその物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物学的活性を保持する製剤である。好ましくは、ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質は、貯蔵時にその物理的及び化学的安定性並びにその生物学的活性を本質的に保持する。貯蔵期間は、一般に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。

【0009】

タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で利用可能である。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって及び／又は目視検査によって）、陽イオン交換クロマトグラフィー、イメージキャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）又はキャピラリーゾーン電気泳動を使用して電荷不均一性を評価することによって、アミノ末端又はカルボキシ末端配列分析、質量分析、還元されたＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質とインタクトなＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質とを比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析、ペプチドマップ（例えば、トリプシン又はＬＹＳ－Ｃ）分析、ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質の生物学的活性又は抗原結合機能の評価などを含む、様々な異なる方法で定性的及び／又は定量的に評価することができる。不安定性は、凝集、脱アミド化（例えばＡｓｎ脱アミド）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化の違いなどのいずれか１つ以上を含み得る。本発明によれば、安定な製剤は、特に、２５℃で８週間貯蔵した後、２５℃で８週間貯蔵する前と比較して、１．３０％未満、好ましくは１．２０％未満、最も好ましくは１．１０％未満の凝集体増加を示す製剤である。

【0010】

本発明の製剤に含まれるＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質は、目的の任意のＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質であり得る。例えば、ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質は、以下であり得る。

【0011】

・配列番号１の核酸配列又は配列番号１のヌクレオチド７９～１３７４若しくは７９～１３７１によってコードされる、
・配列番号２のアミノ酸又は配列番号２のアミノ酸２７～４５７若しくは２７～４５８を含む、
・（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦＲ１成分、
（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦＲ２成分、
（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７又は４５８を含む多量体化成分（「ＦｃΔＣ１（ａ）」（配列番号２のＣ末端アミノ酸、すなわちＫ４５８は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質に含まれていても含まれていなくてもよい）
を含み、なお、配列番号２のアミノ酸１～２６はシグナル配列である、
・第１のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１）の免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン２及び第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン３を含み、任意選択的に、第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン４及び多量体化成分（例えば、ＩｇＧのＦｃドメイン）をさらに含む、
・コンベルセプトである、又は
・アフリベルセプトである。

【0012】

本発明の好ましい実施形態では、ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質は、アフリベルセプト及びコンベルセプトから選択される。アフリベルセプトは、ヒトＶＥＧＦＲ－１の第２の細胞外ドメイン及びヒトＶＥＧＦＲ－２の第３の細胞外ドメインをヒト免疫グロブリンＩｇＧ１のＦｃ部分と融合する、１１５ｋＤａの組換えタンパク質である。コンベルセプトは、チャイニーズハムスター卵巣細胞において完全なヒトｃＤＮＡ配列から操作された１４３ｋＤａの組換え抗ＶＥＧＦ融合タンパク質である。コンベルセプトのＦａｂは、ＶＥＧＦＲ－１の第２の細胞外ドメイン並びにＶＥＧＦＲ－２の第３及び第４の細胞外ドメインを含み、これらはその後、ヒトＩｇＧ１のＦｃに融合する。最も好ましくは、本発明の製剤中のＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質は、アフリベルセプトである。

【0013】

ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質、特にアフリベルセプトは、本発明の製剤中に少なくとも１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する（高濃度製剤）。ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質、特にアフリベルセプトは、少なくとも約１０５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍｌ、又は少なくとも約３００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質、特にアフリベルセプトは、例えば、約１００ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１２０ｍｇ／ｍｌ、又は約１１０ｍｇ／ｍｌ～約１２０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲内で存在し得る。最も好ましくは、特にＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質がアフリベルセプトである場合、融合タンパク質は約１１５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。融合タンパク質は、特にアフリベルセプトの場合、例えば１１４～１１６ｍｇ／ｍｌ、特に１１４～１１５ｍｇ／ｍｌの濃度を有し得る。融合タンパク質がアフリベルセプトであるいくつかの実施形態では、その濃度は約１１４．３ｍｇ／ｍｌであり得る。

【0014】

本発明の製剤は、ｉ）緩衝剤を含まない、ｉｉ）クエン酸緩衝液を含む、又はｉｉｉ）任意選択的にメチオニンを含み好ましくはスクロースを含まないヒスチジン緩衝液を含む。製剤が緩衝剤を含まない実施形態では、実質的に全ての緩衝能がＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質自体によって提供され、ヒスチジン、酢酸、クエン酸、ＴＲＩＳ若しくはリン酸緩衝液などの他の典型的な緩衝液は存在しないか、又は製剤を十分に緩衝するのに十分ではない濃度で少なくとも予め設定されているだけである。さらなる緩衝剤を含まないこのような製剤は、典型的には、当技術分野では「自己緩衝」製剤と呼ばれる（Ｇｏｋａｒｎ，Ｙａｔｉｎ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．“Ｓｅｌｆ－ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ ９７．８（２００８）：３０５１－３０６６）。本発明者らは、そのような自己緩衝製剤が、凝集形成に関してＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質の良好な貯蔵安定性を提供することを実証した。好ましくは、そのような自己緩衝製剤は、約ｐＨ５．０～６．５、約ｐＨ５．５～６．２又は約ｐＨ５．８のｐＨを有する。又は、本発明の製剤は、クエン酸緩衝液を含んでもよく、これも低凝集を提供する。「クエン酸緩衝液」は、クエン酸イオンを含む緩衝液である。クエン酸緩衝液の例としては、クエン酸ナトリウム、クエン酸アンモニウム、クエン酸カルシウム、クエン酸マグネシウム及びクエン酸カリウム溶液が挙げられる。クエン酸緩衝液は、好ましくは、約ｐＨ５．０～６．５、約ｐＨ５．５～６．２又は約ｐＨ５．８のｐＨを有する。好ましくは、クエン酸緩衝液の濃度は、約５～約２０ｍＭ、より好ましくは約１０～約２０ｍＭの範囲内である。最後に、製剤は、第３の選択肢においてヒスチジン緩衝液を含み得るが、特にこの場合、好ましくはスクロースを含まない。「ヒスチジン緩衝液」は、ヒスチジンイオンを含む緩衝液である。ヒスチジン緩衝液の例としては、塩化ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン及び硫酸ヒスチジン溶液が挙げられ、塩化ヒスチジン（Ｈｉｓ／ＨＣｌ）が特に好ましい。ヒスチジン緩衝液又はヒスチジンＨＣｌ緩衝液は、好ましくは、約ｐＨ５．０～６．５、約ｐＨ５．５～６．２又は約ｐＨ５．８のｐＨを有する。好ましくは、ヒスチジン緩衝液の濃度は、約５～約２０ｍＭの範囲内、より好ましくは約１０～約２０ｍＭの範囲内である。本発明の文脈において、緩衝剤を含まない製剤は、特に、緩衝剤としてヒスチジン、酢酸、クエン酸、ＴＲＩＳ及び／又はリン酸を含まない製剤であり、特に、緩衝剤としてクエン酸及びヒスチジンを含まないか、又は製剤の緩衝能に有意に寄与する濃度のこれらの緩衝剤のいずれも含まないことが理解される。

【0015】

ｐＨは、標準ガラス球ｐＨ計を使用して測定される。別段示されない限り、本発明の製剤について本明細書で定義されるｐＨ値及び範囲は、２５℃でのｐＨを反映する。特にＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質がアフリベルセプトである場合、製剤のｐＨは好ましくはｐＨ５．８である。

【0016】

緩衝剤（又は自己緩衝製剤中のその非存在）の他に、本発明の製剤はさらなる成分を含み得る。例えば、製剤は、１つ以上の遊離アミノ酸（すなわち、ペプチド又はタンパク質の成分としてではなく、個々の化合物として）を含み得る。ただし、ヒスチジンは、ヒスチジン緩衝液を使用しない限り、好ましくはこれらのアミノ酸の中の１つではない。製剤は、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン及びトリプトファンからなるアミノ酸の第１の群から選択される１つ以上のアミノ酸を含み得る。好ましくは、１つ以上のアミノ酸はプロリン及びメチオニンから選択される。１つ以上のアミノ酸の濃度は、互いに独立して、約５～約４５０ｍＭの範囲内であり得る。例えば、１つ以上のアミノ酸の濃度は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ又は約４５０ｍＭであり得る。メチオニンは、酸化防止剤として特に有用である。メチオニンの好ましい濃度は５～２５ｍＭの範囲内である。最も好ましくは、メチオニンは１０ｍＭの濃度で使用される。プロリンが使用され、糖（又は糖アルコール）が使用されない場合、プロリンの濃度は、１００～４５０ｍＭの範囲内、特に２５０～３００ｍＭの範囲内であり得る。代替において、又はアミノ酸の第１の群から選択される１つ以上のアミノ酸に加えて、本発明の製剤は、アルギニン及びリジンからなるアミノ酸の第２の群から選択される１つ以上のアミノ酸を含み得る。好ましくは、第２の群のアミノ酸はアルギニンである。アルギニンは、粘度低下剤として特に有用である。アルギニンの好ましい濃度は、２５～７５ｍＭの範囲内である。最も好ましくは、アルギニンは約５０ｍＭの濃度で使用される。リジンも粘度低下剤として適しており、好ましい濃度は約５０～約１５０ｍＭであり、１００ｍＭが最も好ましい。遊離アミノ酸の好ましい組み合わせは、ｉ）メチオニン＋アルギニン、ｉｉ）プロリン＋メチオニン、ｉｉｉ）プロリン＋アルギニン、ｉｖ）メチオニン＋アルギニン＋プロリン、ｖ）メチオニン＋リジン及びｖｉ）メチオニン＋リジン＋プロリンである。

【0017】

緩衝液とアミノ酸の好ましい組み合わせは、ヒスチジン緩衝液とメチオニン又はクエン酸緩衝液とメチオニンである。

【0018】

可能であるが任意選択のさらなる成分として、製剤は界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、原則として、タンパク質製剤に適した任意の（非イオン性）界面活性剤であり得るが、好ましくは、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー（ポロキサマー１８８など）及びそれらの組み合わせの群から選択される。最も好ましくは、界面活性剤はポリソルベート２０又はポリソルベート８０である。典型的には、必ずしもそうとは限らないが、界面活性剤、特にポリソルベート２０又はポリソルベート８０は、約０．０１％～約０．１％ ｗ／ｖの濃度で存在する。本発明の製剤は、例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌ又は約１ｍｇ／ｍｌを含み得る。本発明の好ましい実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約０．３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。より好ましくは、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０の濃度は約０．２ｍｇ／ｍｌである。

【0019】

本発明の製剤のさらなる、ただし任意の成分は、糖及び糖アルコールの群から選択される安定剤である。糖の例は、ラクトース、フルクトース、マルトース、トレハロース及びスクロースである。糖はスクロースであってもよい（ただし製剤がヒスチジン緩衝液である場合を除く。その場合安定剤はスクロースではないことが好ましい）。糖アルコールの好ましい例は、アラビトール、マンニトール及びソルビトールである。ソルビトールは凝集を抑制するのに役立ち得る。いくつかの実施形態において、ソルビトールは、約３００ｍＭ以下の濃度で存在する。ソルビトールの濃度は、例えば、１００～３５０ｍＭの範囲内、より好ましくは１００～３００ｍＭの範囲内であり得る。本発明の製剤がスクロースを含有する場合、それは好ましくは１００～３００ｍＭのスクロースの範囲、好ましくは１４０～２１０ｍＭのスクロースの範囲、好ましくは１４６ｍＭのスクロースで使用される。しかしながら、本発明はまた、スクロースを含まない本発明による製剤を使用することも特に意図する。そのようなシナリオの典型的な実施形態は、緩衝剤もスクロースも含まない製剤である。

【0020】

本発明の製剤のさらなる任意の成分は、キレート剤及び／又は酸素捕捉剤又は両方の組み合わせである。典型的なキレート剤は、クエン酸、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である。酸素捕捉剤の例は、メチオニン、チオ硫酸ナトリウム、カタラーゼ又は白金であり、メチオニンが本発明の好ましい酸素捕捉剤である。本発明の製剤がＤＴＰＡ又はＥＤＴＡなどのキレート剤を含む場合、そのようなキレート剤は、５～１５０μＭの範囲内、好ましくは２０～１００μＭの範囲内の濃度で存在し得る。特に好ましい濃度は、２０μＭ、５０μＭ及び１００μＭである。２０μＭのキレート剤濃度が最も好ましい。本発明の製剤がメチオニンなどの酸素捕捉剤を含む場合、そのような捕捉剤は、好ましくは約１００μＭ～１５ｍＭの濃度で存在する。メチオニンの特に好ましい濃度は１０ｍＭである。キレート剤及び／又は酸素捕捉剤を使用する代わりに、酸素を置換し、酸化を最小限に抑えるために、本発明の製剤を含む容器のヘッドスペースを不活性ガス、例えば窒素でフラッシュすることも考えられ得る。

【0021】

最後に、本発明の製剤は、任意選択的に、硫酸ナトリウム若しくは塩化ナトリウム又はそれらの組み合わせなどの無機塩も含み得る。塩化ナトリウムは、製剤の粘度を低下させることができる。本発明の製剤は、それに限定されないが、１０～１００ｍＭの塩、例えば１０～２０ｍＭの硫酸ナトリウム、特に１６ｍＭの硫酸ナトリウムを含み得るか、又は２５～７５ｍＭの塩化ナトリウム、特に４０～６０ｍＭの塩化ナトリウム、特に５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み得る。しかしながら、塩の使用は任意であり、本発明は塩を含まない、例えば塩化ナトリウムを含まない製剤を意図する。

【0022】

本発明の製剤は、例えば、以下を含む製剤から選択され得る。

【0023】

ｉ）１００～１２０ｍｇのアフリベルセプト、特に１１４～１１５ｍｇのアフリベルセプト、緩衝剤なし、ｐＨ５．８、プロリン、並びに任意選択的にメチオニン及び／若しくは界面活性剤、又は
ｉｉ）１００～１２０ｍｇのアフリベルセプト、特に１１４～１１５ｍｇのアフリベルセプト、クエン酸緩衝液、ｐＨ５．８、スクロース、アルギニン、並びに任意選択的にメチオニン及び／若しくは界面活性剤。

【0024】

本発明の製剤のさらなる具体例は、例えば、以下の群から選択され得る。

【0025】

ｉ）１００～１２０ｍｇのアフリベルセプト、好ましくは１１４ｍｇのアフリベルセプト、クエン酸緩衝液、ｐＨ５．８、スクロース又はトレハロース、ポリソルベート２０（例えば０．３ｍｇ／ｍｌ）及びアルギニン、好ましくはヒスチジンを含まない、
ｉｉ）１００～１２０ｍｇのアフリベルセプト、好ましくは１１４ｍｇのアフリベルセプト、緩衝剤なし、ｐＨ５．８、プロリン、アルギニン、ポリソルベート２０（例えば０．３ｍｇ／ｍｌ）、この製剤は好ましくは糖又は糖アルコールを含まない、及び
ｉｉｉ）１００～１２０ｍｇのアフリベルセプト、好ましくは１１４ｍｇのアフリベルセプト、緩衝剤なし、ｐＨ５．８、プロリン、メチオニン、ポリソルベート２０（例えば０．３ｍｇ／ｍｌ）、この製剤は好ましくは糖又は糖アルコールを含まない。

【0026】

さらなる態様では、本発明は、本発明による液体製剤を含有する容器及び注射装置（滅菌されていてもよい）と、任意選択的にその使用説明書とを含む製造品に関する。製造品は、特に、ガラスバイアル若しくは試験管のような容器、プレフィルドシリンジ（例えば、充填ガラスシリンジ若しくは充填プラスチックシリンジ）などの注射装置、又は硝子体内インプラント、例えば再充填可能なインプラントであり得る。

【0027】

「プレフィルド」シリンジは、医師又は患者による販売又は使用の前に本発明の製剤で充填されているシリンジである。これは、１つ以上の用量線目盛りを含み得る及び／又は用量測定システムである。

【0028】

本明細書における「滅菌」は、無菌性であるか、又は実質的に全て若しくは全ての生きている微生物及びそれらの胞子を含まないことを指す。

【0029】

容器及び注射装置は、シリコーン（例えば、シリコーンオイル若しくは焼成シリコーン（例えば＜４０ｐｇ又は＜１００ｐｇ））でコーティングされてもよく、実質的に金属を含まないか、実質的にタングステンを含まないか、又は低タングステンである。

【0030】

最後に、本発明は、ヒト又は動物の身体の疾患を治療する方法において使用するための本発明による製剤に関し、特に、疾患は、血管形成性眼障害又はがんなどのＶＥＧＦ関連疾患である。

【0031】

本明細書における血管形成性眼障害は、血管の成長若しくは増殖及び／又は血管漏出によって引き起こされるか又はそれに関連する眼の任意の疾患を指す。本明細書の製剤及び方法を使用して治療可能又は予防可能な血管形成性眼障害の非限定的な例には、血管新生（滲出型）加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、虹彩血管新生、血管新生緑内障、緑内障における術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経円板血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、硝子体血管新生、血管網膜症、糖尿病性網膜症（例えば、ＤＭＥに罹患していない対象における非増殖性糖尿病性網膜症又は増殖性糖尿病性網膜症）、及び／又は糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）を有する患者の糖尿病性網膜症が含まれる。

【0032】

がんは、ＶＥＧＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質が治療上有効である任意の種類のがんであり得る。がんには、成長、増殖、生存及び／又は転移が血管形成にある程度依存するがんが含まれる。本発明の一実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、皮膚がん、乳がん、脳がん、胃がん、腎がん、前立腺がん、肝臓がん又は膵臓がんである。

【0033】

液体組成物は、経口又は非経口経路を介して投与され得る。非経口投与（例えば、注入）の場合、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、内皮投与、局所投与、鼻腔内投与、肺内投与、直腸内投与、腫瘍内投与、硝子体内投与などによって投与され得る。

【0034】

特定の実施形態では、液体組成物は、上記のＶＥＧＦアンタゴニストを含む眼科用溶液であってもよく、この場合、眼の硝子体液中に投与される非経口製剤であってもよい。

【0035】

本明細書で使用される「を含み、」という用語は、「からなり、」（すなわち、追加の他の物質の存在を除外する）という意味に限定されると解釈されるべきではない。むしろ、「を含み、」は、任意選択的に追加の物質、特徴又はステップが存在し得ることを意味する。「を含み、」という用語は、その範囲内にある特に想定される実施形態として、「からなり、」（すなわち、追加の他の物質の存在を除外する）及び「含むが、からなるものではない」（すなわち、追加の他の物質、特徴又はステップの存在を必要とする）を包含し、前者がより好ましい。

【0036】

本明細書で使用される場合、「１つ（ａ）」又は「１つ（ａｎ）」という単語の使用は、「１つ（ｏｎｅ）」を意味し得るが、「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」及び「１つ又は１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｏｎｅ）」の意味とも一致する。

【0037】

以下では、添付の図面の簡単な説明を行う。図面は、本発明をより詳細に説明するためのものである。しかしながら、本発明の範囲をこれらの具体的に例示された実施形態のみに限定することは意図されていない。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】アフリベルセプトの様々な製剤（それぞれ１１５ｍｇ／ｍｌ）及び２５℃で８週間貯蔵した後の凝集体形成に対するそれらの影響を示す表である。

【図2】アフリベルセプトについての異なる緩衝液／賦形剤のスコア寄与を示す図である。各緩衝液／賦形剤のスコアは、凝集の減少に対するその効果（凝集体の％）を表す。スコアの寄与が低いほど、タンパク質の安定性に対する効果が良好である。

【実施例】

【0039】

以下では、本発明の様々な実施形態及び態様を示す具体例を提示する。しかしながら、本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の様々な変更は、前述の説明、添付の図面及び以下の実施例から当業者には容易に明らかになるであろう。全てのそのような変更は、添付の特許請求の範囲内に入る。

【0040】

［実施例１］
様々なアフリベルセプト製剤における凝集体形成
この研究の目的は、アフリベルセプト安定性に対する異なる緩衝剤及び賦形剤（糖、酸化防止剤、粘度低下剤（ＶＲＡ））の効果を評価することであった。簡単に説明すると、試料の調製には、ｐＨ調整、タンパク質材料の目標濃度を超える濃縮（５０Ｋ Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心濾過チューブ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用し、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度に達するまで遠心分離する）、及び賦形剤ストックによる目標濃度（１１５ｍｇ／ｍｌ）までの希釈が含まれていた（図１参照）。さらに、試料を２５℃で８週間温度ストレス条件に曝露した。２５℃で８週間後及び前（ｔ_０）に採取した試料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析並びに凝集生成物及び分解生成物の評価に使用した。

【0041】

ＳＥＣ分析のために、ＳＥＣカラム（２００Åの孔径、１．７ｍｍのビーズ径及び４．６ｍｍ×１５０ｍｍのカラム寸法）を備えたＷａｔｅｒｓ（登録商標）ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣシステムで試料を４０℃で分析した。試料搭載は０．７５μｌであった。移動相（５０ｍＭリン酸二水素ナトリウム及び４００ｍＭ過塩素酸ナトリウム、ｐＨ６．０）の流速は０．４ｍＬ／分で、総ランタイムは５分であった。試料を１５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７で１ｍｇ／ｍｌに希釈し、注入前にオートサンプラー内で２～８℃に保持した。Ｅｍｐｏｗｅｒ ３ソフトウェアを用いてデータを分析した。記載されたカラム搭載での相対凝集体含有量測定（凝集体／モノマー）の変動は、０．１％（絶対値）であると推定された。

【0042】

結果は、ｔ_０（温度ストレス曝露前）に存在する凝集体と比較した、２５℃で８週間後（プルポイント；ＰＰ）の温度ストレス負荷された試料の凝集体生成物（％）の増加として提供され、図１の表に示す。

【0043】

さらに、凝集の減少に対する個々の製剤成分（緩衝剤／賦形剤、図１の表を参照）のスコア寄与を評価した。簡潔には、結果を線形回帰で評価し、賦形剤の寄与を解明した。この手法は、寄与が線形加法的であると仮定することに留意されたい。製剤成分を適合のための特徴として使用した（「ワンホット符号化」）。平均凝集体増加からの偏差（図１の表のＳＥＣ ＡＰ列）を、一次関数を当てはめた応答として使用した。個々の製剤成分の適合係数は、それらのスコアとして定義され、値が低いほど、賦形剤は良好である。無緩衝液製剤は、緩衝液成分を有しないものとして処理した（「０寄与」）。陽性スコアは、無緩衝液製剤と比較して凝集体形成の増加を示し、陰性スコアは、無緩衝液製剤よりも凝集体形成が少ないことを示す。

【0044】

凝集に対する様々な製剤成分の個々の寄与を図２に示す。図から分かるように、ヒスチジン緩衝液、無緩衝液、及び程度は低いがクエン酸緩衝液は、高濃度アフリベルセプト製剤のための好ましい緩衝液選択である。さらに、リジン、アルギニン、メチオニン又はプロリンなどの遊離アミノ酸の添加も一般に有利である。

【図1】

【図2】

【配列表】

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【国際調査報告】