特表 2024-533306 認知および気分症状の処置のためのイミダゾベンゾジアゼピン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-12

(54)【発明の名称】認知および気分症状の処置のためのイミダゾベンゾジアゼピン

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20240905BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 31/551 20060101ALI20240905BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 154

C07D487/04 CSP

A61P25/28

A61K31/551

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024515060

(86)(22)【出願日】2022-09-08

(85)【翻訳文提出日】2024-04-15

(86)【国際出願番号】 US2022042832

(87)【国際公開番号】W WO2023039018

(87)【国際公開日】2023-03-16

(31)【優先権主張番号】63/241,877

(32)【優先日】2021-09-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/334,978

(32)【優先日】2022-04-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515076769

【氏名又は名称】ユーダブリューエム・リサーチ・ファウンデーション，インコーポレーテッド

(71)【出願人】

【識別番号】518332310

【氏名又は名称】センター フォー アディクション アンド メンタル ヘルス

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100141195

【弁理士】

【氏名又は名称】西澤 恵美子

(72)【発明者】

【氏名】プレヴォ，トーマス，ダミアン

(72)【発明者】

【氏名】マーコット，マイケル，ジェフリー

(72)【発明者】

【氏名】シビル，エティエンヌ，ローレン

(72)【発明者】

【氏名】クック，ジェームス，エム．

(72)【発明者】

【氏名】リ，グァンガン

(72)【発明者】

【氏名】モンダル，プリス

(72)【発明者】

【氏名】ミアン，エムディ，イェヌス

(72)【発明者】

【氏名】ラシッド，ファルジャナ

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB12

4C086GA16

4C086MA02

4C086MA05

4C086NA14

4C086ZA15

(57)【要約】

アミドまたはオキサジアゾールで３位に置換されている４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン、およびそれらの医薬組成物は、認知を増強する効力を呈し、神経変性および精神神経障害などの認知欠損症の処置において有用性を有し得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

【化1】

からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

化合物が、

【化2】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

化合物が、

【化3】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

化合物が、

【化4】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

化合物が、

【化5】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

化合物が、

【化6】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

化合物が、

【化7】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

化合物が、

【化8】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

化合物が、

【化9】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

化合物が、

【化10】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

化合物が、

【化11】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

化合物が、

【化12】

である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

化合物が実質的にエナンチオマー的に純粋である、請求項１から８または１０から１２のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項14】

請求項１から１３のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【請求項15】

治療有効量の請求項１から１３のいずれかに記載の化合物、あるいは請求項１４に記載の医薬組成物、あるいは

【化13】

からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、認知を増強する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
この出願は、２０２１年９月８日に出願された米国仮出願第６３／２４１，８７７号、および２０２２年４月２６日に出願された米国仮出願第６３／３３４，９７８号の利益を主張し、これらの全内容は、本明細書に参照により組み込まれる。

【0002】

連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
この発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって授与された認可番号ＤＡ０４３２０４下の政府支援で行われた。政府は、本発明におけるある特定の権利を有する。

【0003】

技術分野
イミダゾベンゾジアゼピンアミドおよびオキサジアゾールならびにそれらの医薬組成物は、神経変性および精神神経障害における認知欠損症の処置に関して認知を増強するのに有用である。

【背景技術】

【0004】

世界保健機関によると、大うつ病性障害（ＭＤＤ）は、能力障害の主要な原因であり、世界中で３億５千万の人々に影響している。それは、低感情（law affect）、快感消失、不安、反芻思考、食欲変化、睡眠障害、および認知機能障害（impairment）を含む症状を有する複合障害である。それの早期発症および慢性的性質は、教育の喪失および失業に関して深刻な結果を有する。それは、高い再発率、女性におけるより高い有病率、および３７％の遺伝率とともに、それぞれ５．３％および１３．２％の年間および生涯の推定有病率を有する。ＭＤＤは、開発途上国および先進国の両方において、ならびに女性および男性の両方において、能力障害によって失われた年数の主要な原因である。うつ病の負担は増加している。疾病の重症および慢性形態である処置抵抗性うつ病は、常時集団の１～３％の推定有病率を有し、統合失調症および双極性障害の症例を合わせたものよりも大きい割合である。罹患者、彼らの家族および社会に対する許容できない負荷にもかかわらず、製薬会社は、大部分が、新たな抗うつ薬を開発することから撤退してきた。

【0005】

認知機能障害は、不安、快感消失、睡眠障害および他の欠損と並行して発症する共存症状の一部である。認知機能不全は、注意、視覚および聴覚処理、短期および作業記憶、運動機能、学習および記憶プロセスにおける欠損を指す。うつ病における認知機能障害の重要性に対する圧倒的なコンセンサスにもかかわらず、うつ病における認知機能障害の完全なプロファイルに関する結論がない。認知機能障害は、ＭＤＤにおける主要な機能不全であり得、いくつかの他の中核症状は、認知機能不全のメディエーターとして作用し得る。現在の抗うつ薬物療法は、全て、５０年以上前に偶然に発見された手法および作用モードから誘導されている。これらの薬物は、主として、モノアミン（セロトニンおよびノルエピネフリン）系上で作用する。それらは、しばしば、治療効果を達成するのに数週かかり、対象は、不十分な応答、低い寛解率（約５０％）およびかなりの副作用を経験する。さらに、利用可能な抗うつ薬は、認知機能障害を処置するために設計されておらず、一部の場合（一部のベンゾジアゼピンのように）、疾病の一部の側面（不安、快感消失）に対するそれらのプラス効果は、認知に影響する負の副作用によって相殺される。さらに、臨床研究は、認知欠損が、気分症状からの寛解期間においてさえ、まだ検出されることを実証した。それゆえに、認知機能不全、ならびに情動的および動機的症状を潜在的に救済することができる抗うつ薬を開発することは、ＭＤＤの将来の処置にとって重要であると思われる。

【0006】

新たな抗うつ薬開発に対する障壁は、疾患機序に対する知識の、および疾病の主要な病理によって情報を与えられる標的の不足から始まり、複数ある。したがって、合理的な薬物設計に向けた努力、または個人化された処置のための生物学的な診断的および治療的マーカーを開発するための努力は現在ほとんどない。

【発明の概要】

【0007】

一態様において、本発明は、

【0008】

【化1】

からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0009】

本発明の別の態様は、

【0010】

【化2】

からなる群から選択される化合物、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0011】

別の態様において、本発明は、認知を増強する方法における使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、ここで、化合物は、

【0012】

【化3】

からなる群から選択される。

【0013】

別の態様において、本発明は、認知を増強するための医薬の製造における化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供し、ここで、化合物は、

【0014】

【化4】

からなる群から選択される。

【0015】

本開示の他の態様は、詳細な記載および添付の図面を考慮することによって明らかになる。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率（alternation rate）の有意な低減を誘発することを示す図である（ｐ＜０．００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＧＬ－ＩＩＩ－６８、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＧＬ－ＩＩＩ－６８の認知促進（pro-cognitive）効果を示唆している。

【図2】図２Ａは、群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１２）＝７．３、ｐ＜０．０１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．０１）。この効果は、試験の３０分前の、ＭＹＭ－ＩＩＩ－２９、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（ｐ＜０．０５）。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＭＹＭ－ＩＩＩ－２９の認知促進効果を示唆している。図２Ｂは、ＣＲＳおよび３ｍｇ／ｋｇのＭＹＭ－ＩＩＩ－２９での急性処置後、Ｙ迷路において試験されたマウスの結果を示す図である。結果は、群間に有意な差異がないことを示す（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１１）＝２．７、ｐ＝０．１）。

【図3】オープンアームにおける移動距離を増加させる、高架式十字迷路における１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）ＭＹＭ－ＩＩＩ－２９の有意な効果を示す図である（ｔ試験：ｐ＜０．０５）。この結果は、ＭＹＭ－ＩＩＩ－２９の潜在的な抗不安効果を示唆している。

【図4】慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す図である（ｐ＜０．０００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＦＲ－ＩＩＩ－１７、０．３ｍｇ／ｋｇ（＄＄ｐ＜０．０１）、１ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）または３ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＦＲ－ＩＩＩ－１７の認知促進効果を示唆している。

【図5】図５Ａは、群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１１）＝２．９、ｐ＜０．０５）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．０５）。この効果は、試験の３０分前の、ＰＭ－ＩＩ－２６、３０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（傾向：ｐ＝０．１）。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＰＭ－ＩＩ－２６の認知促進効果を示唆している。図５Ｂは、群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，７）＝１９．６、ｐ＜０．００１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＰＭ－ＩＩ－２６、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（ｐ＜０．００１）。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＰＭ－ＩＩ－２６の認知促進効果を示唆している。

【図6】慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す図である（ｐ＜０．０００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＭＹＭ－ＩＩＩ－４１、５ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）および１０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０５）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＭＹＭ－ＩＩＩ－４１の認知促進効果を示唆している。

【図7】群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（３，１４）＝９．７、ｐ＜０．００１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．０１）。この効果は、試験の３０分前の、ＧＬ－ＩＶ－０３、３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＧＬ－ＩＶ－０３の認知促進効果を示唆している。

【図8】群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，２８）＝５．３、ｐ＜０．０５）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．０１）。この効果は、試験の３０分前の、ＧＬ－Ｉ－６５、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（ｐ＜０．０５）。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＧＬ－Ｉ－６５の認知促進効果を示唆している。

【図9】試験の３０分前の、ＧＬ－Ｉ－６５、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与を受ける老齢マウスにおける交替率の有意な改善を示す図である（ｔ試験：ビヒクルを受ける老齢マウスと比較して、ｐ＜０．０５）。

【図10】慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す図である（ｐ＜０．００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＧＬ－ＩＩＩ－６０、１０ｍｇ／ｋｇ（＄＄ｐ＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＧＬ－ＩＩＩ－６０の認知促進効果を示唆している。

【図11】群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１１）＝４．４、ｐ＜０．０５）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．０５）。この効果は、試験の３０分前の、ＧＬ－ＩＩ－３３、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（傾向ｐ＝０．０６）。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＧＬ－ＩＩ－３３の認知促進効果を示唆している。

【図12】慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す図である（ｐ＜０．００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＭＹＭ－ＩＩＩ－４３、３ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）、１０ｍｇ／ｋｇ（＄＄ｐ＜０．０１）、および３０ｍｇ／ｋｇ（＄＄ｐ＜０．０１）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＭＹＭ－ＩＩＩ－４３の認知促進効果を示唆している。

【図13】群間の有意な差異を示す図である（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１１）＝１０、ｐ＜０．０１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す（ｐ＜０．０５）。この効果は、試験の３０分前の、ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅ、３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０５）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＰＭ－ＩＩ－８４Ｅの認知促進効果を示唆している。

【図14】慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発することを示す図である（ｐ＜０．００１）。この効果は、試験の３０分前の、ＭＹＭ－ＩＶ－４７、１０ｍｇ／ｋｇ（＄＄＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）の急性投与によって逆転される。この結果は、作業記憶欠損を逆転させるＭＹＭ－ＩＶ－４７の認知促進効果を示唆している。

【図15】オープンアームにおいて費やされる時間を増加させる、高架式十字迷路における１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅの有意な効果を示す図である（ｔ試験：ｐ＜０．０１）。この結果は、ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅの潜在的な抗不安効果を示唆している。

【図16】作業記憶に関するＹ迷路空間交替タスクにおける１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）のＭＹＭ－Ｖ－２８が、対照（ＣＲＳビヒクル）との比較において、交替率を有意に改善した（＄ｐ＜０．０５）ことを示す図である。

【図17】作業記憶に関するＹ迷路空間交替タスクにおける１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）のＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｒが、対照（ＣＲＳビヒクル）との比較において、交替率を有意に改善した（＄＄ｐ＜０．０１）ことを示す図である。

【図18】作業記憶に関するＹ迷路空間交替タスクにおける１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）のＦＲ－ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｓが、対照（ＣＲＳビヒクル）との比較において、交替率を有意に改善した（＄ｐ＜０．０５）ことを示す図である。

【図19】１０ｍｇ／ｋｇでのＭＹＭ－ＩＶ－４６が、対照（ＣＲＳビヒクル）との比較において、作業記憶に関するＹ迷路交替タスクにおいて交替率を改善した（＄＄＜０．０１）ことを示す図である。

【図20】ＦＲ－ＩＩＩ－１７（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、試験の３０分前）およびビヒクル対照を不安様行動に関して高架式十字迷路において試験したことを示す図である。ｔ試験は、ＦＲ－ＩＩＩ－１７が、オープンアームにおいて％時間、％移動距離および％進入を有意に増加させる（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝１群当たり６）ことを見出し、抗不安特性を示唆した。

【図21】ヒトα１β２γ３、α２β２γ３、α３β２γ３、α４β２γ３、またはα５β２γ３ＧＡＢＡ_Ａ受容体でトランスフェクトされた細胞におけるＧＬ－ＩＩＩ－６８の電気生理学的解析を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0017】

詳細な説明
本開示の任意の実施形態が詳細に説明される前に、本開示は、それの適用において、以下の記載において説明されているまたは以下の図面に例示されている構成の詳細および構成成分の配置に限定されないと理解されるべきである。本開示は、他の実施形態が可能であり、様々なやり方で実践または実施されることが可能である。

【0018】

医学的介入および生存条件における改善は、平均ヒト寿命を劇的に増加させてきた。結果として、増加する数の人々が、認知症を含めて、神経変性疾患を患っている。２０１５年には世界的に４，６８０万の人々が認知症を有して生活しており、この数は、２０年ごとに２倍になり、２０３０年には７，４７０万人、および２０５０年には１億３１５０万人に達すると予想される。認知症を有する人々の大多数は、アルツハイマー病（ＡＤ）を患っている。ＡＤは、人生の認知的、情動的および行動学的側面に影響する致死的疾患である。認知症状は、決定をする、単純タスクを行う、または会話についていくという人間の能力に対する負の効果を含む。抗コリン薬は、ＡＤにおける認知欠損のために使用されるが、成功は非常に限定される。ＡＤにおける気分症状としては、感情鈍麻、興味の喪失、低感情、不安および離脱が挙げられる。ＡＤは、ＡＤの個人的、社会的および経済的な負担を増大させており、即ち、２０１３年には６０４０億ドルであり、２０５０年には２兆ドルを超えると予測されており、前駆（軽度認知機能障害）および高いリスク因子（老化およびうつ病）状態の負担を考慮していない。この負担は、ＡＤの古典的な神経病理（即ち、アミロイドプラークおよび濃縮体）に狙いを定めた臨床試験の近年の失敗によって悪化されている。

【0019】

脳障害の生物学的基礎を明らかにすることにおける近年の進歩は、疾患の古典的なカテゴリー診断を超えて細胞および分子病理の重大な共有および連続を実証する。したがって、この文献に記載されているとともにアルファ５含有ＧＡＢＡ－_Ａ受容体でアゴニストまたはポジティブアロステリック活性を有する化合物によって標的化されるＧＡＢＡ関連病理は、精神神経性障害（例えば、うつ病、統合失調症）から神経変性障害（例えばＡＤ）までの脳障害にわたって報告されている。それゆえに、新規な治療的戦略は、精神神経性障害（例えば、うつ病、統合失調症）から神経変性障害（例えば、ＡＤ）までの障害にわたる特定の障害ならびに症状の側面（例えば、認知、気分）を対象とすることができる。

【0020】

脳障害の分子および細胞病理は、ヒト死後脳における不偏ゲノムアプローチ（unbiased genomic approaches）を使用して調査されており；遺伝子および環境マウスモデルは、ヒト脳において同定された病理とげっ歯類における気分および認知調節機序との間の因果関係を調査するために使用されており；標的は、それらの原因病理学モジュール内で同定されており、これらの標的の価値を新規な治療的戦略として支持するための予備的前臨床研究を行ってきた。これは、認知改善抗うつ／抗不安処置のための新規な標的として、ＧＡＢＡ系におよびアルファ５サブユニット含有ＧＡＢＡ_Ａ受容体に至る。

【0021】

より具体的には、収束する証拠は、うつ病における阻害性ＧＡＢＡ系のための役割を長いこと示唆してきた。近年の証拠は、それらの変化についての特定の細胞起源を示唆している（Guilloux et al, Molecular Psychiatry, 2012, 17, 1130-1142; Tripp et al, Am J Psychiatry, 2012, 169, 1194-1202）。これらの所見は、ＧＡＢＡ関連の生化学、細胞および脳領域の所見をうつ病における心理学的概念および症状の側面と結びつけるモデルに統合されてきた（Northoff & Sibille, Molecular Psychiatry, 2014, 19, 966-977）。このモデルにおいて、錐体細胞の樹状突起への興奮性入力を調節するソマトスタチン陽性（ＳＳＴ＋）ＧＡＢＡニューロンの欠損は、局所細胞回路によって、変更された情報処理に変わり、鍵となる脳領域（前頭および帯状皮質）および神経ネットワーク（デフォルトモードおよび実行ネットワーク）の変更された活性をもたらす。順じて、これらの統合された生物学的欠損は、うつ病の２つの中心的特色である快感消失（喜びを経験することの欠如）および負の自己焦点化（self-focus）の増加（反芻思考、自殺傾向）として表面化する。

【0022】

ＳＳＴ＋ＧＡＢＡと錐体ニューロンとの間の細胞特異的結合の分子構成成分の検査に基づき、ＧＡＢＡ_Ａ受容体のアルファ５サブユニットは、うつ病の分子の病理を改善するための、および認知促進および抗うつ様活性を潜在的に発揮するための論理的標的であることが提案される。ＧＡＢＡ_Ａ受容体の異なるアルファサブユニットは、細胞区画にわたるこれらの受容体の局在化を決定する。アルファ５含有ＧＡＢＡ_Ａ受容体は、ＳＳＴ＋ＧＡＢＡニューロン末端の反対側の錐体細胞の樹状突起に位置し；それゆえに、それらは、ＳＳＴ＋ＧＡＢＡニューロンの機能を媒介する。ＧＡＢＡ_Ａ受容体アルファサブユニットは、ベンゾジアゼピン様化合物の主標的である。これらの化合物は、鎮静、抗不安および抗けいれん効果を有する。この広範な活性は、いくつかのアルファサブユニットのそれらの非特異的標的化による。この全アルファサブユニット活性は、鎮静、耐性および認知の副作用により、それらの治療的可能性をかなり制限している。様々なＧＡＢＡ_ＡＲアルファサブユニットの近年の解剖学的、遺伝子的および機能的特徴付けは、特定のサブユニットの選択的標的化が、精神神経障害のための新規な治療機会を明らかにするという希望を高めている。

【0023】

ここで、うつ病の主要な分子病理によって情報を与えられる、新規な認知促進および抗うつモダリティが提案される。主要な標的は、阻害性ＧＡＢＡ_Ａ受容体アルファ５サブユニットであり、薬理効果は、ポジティブアロステリックモジュレーション（アルファ５－ＰＡＭ）であり、治療効能は、気分および認知欠損を共有するうつ病および他の障害に対してであり、認知および反芻思考中核症状に潜在的に焦点を合わせる。この標的を選ぶことの理論的根拠は、（１）うつ病におけるＧＡＢＡ_Ａ－アルファ５含有シナプスでの機能の低減を示唆するヒト死後脳試料を使用した所見、（２）うつ病におけるＧＡＢＡ機能の変更を示唆する大規模な研究調査、ならびに（３）アルファ５－ＰＡＭの抗うつ効果（Piantodosi et al, Frontiers in Pharmacology, 2016, 7, 446）および認知促進効果を示す前臨床げっ歯類研究に基づく。近年の所見は、アルファ５含有ＧＡＢＡ－_Ａ受容体の機能を低減することが抗うつ活性を発揮し得ることも示唆する（Fischell et al, Neuropsychopharmacology, 2015, 40, 2499-2509）ことに留意されたい。これは、アルファ５－ＧＡＢＡ－_Ａ受容体機能のための推定逆Ｕ字形効果（putative inverted U-shape effect）を示唆し、ここで、高機能および低機能の両方が治療的可能性を有し得る。しかしながら、アルファ５含有ＧＡＢＡ－_Ａ受容体の機能を低減することは、脳障害において観察される主要な病理（即ち、ＳＳＴ細胞機能の低減）を悪化させると特に予測され、それゆえに、それは、長期有害効果についてのより高いリスクと潜在的に関連する。

【0024】

ＡＤ、統合失調症、双極性うつ病、および大うつ病を含めた神経学的障害におけるソマトスタチン（ＳＳＴ）陽性阻害性ＧＡＢＡニューロンの発現および機能の低減の強い証拠がある（Lin and Sibille, Frontiers Pharmacology, 2013, 4, 110）。ＳＳＴ陽性ＧＡＢＡニューロンは、脳における主な興奮性細胞であるグルタミン酸作動性錐体ニューロンの樹状区画を阻害することによって特徴付けられる阻害性ニューロンのサブタイプである。ＳＳＴニューロンを介するシグナル伝達は、情報および神経プロセスを調節し、認知および気分を調節することに特異的に関わっている。ＳＳＴ陽性ニューロンの主な機能は、神経伝達物質ＧＡＢＡによって、およびアルファ５サブユニットを含有するＧＡＢＡ_Ａ受容体の特定のサブタイプによって媒介される。アルファ５含有ＧＡＢＡ_Ａ受容体は、錐体細胞の樹状突起上に局在化され、該細胞区画は、ＳＳＴ陽性ニューロンによって標的化される。それゆえに、神経学的障害にわたって観察されるＳＳＴ陽性細胞における欠損は、アルファ５含有ＧＡＢＡ_Ａ受容体を介するシグナル伝達の低減をもたらすと仮定される。増加するアルファ５含有ＧＡＢＡ_Ａ受容体シグナル伝達は、そのため、脳障害にわたる、ならびに具体的にはＡＤおよびＭＤＤにおける認知および気分症状にとって、治療的価値を有し得る。

【0025】

定義
特定の官能基および化学用語の定義は、下記でより詳細に記載されている。この開示の目的のため、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ、ＣＡＳ版、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５編集、内側カバーに従って同定され、特定の官能基は、一般に、そこに記載されている通りに定義される。追加として、有機化学の一般原則、ならびに特定の官能部分および反応性は、Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999；Smith and March March's Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001；Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989；Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987に記載されており；これらの各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0026】

当技術分野において使用される慣習に従って、基：

【0027】

【化5】

は、コアまたは骨格構造への部分または置換基の付着点である結合を図示するために、本明細書における構造式において使用される。

【0028】

障害を処置する文脈において、「有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、対象への単一または複数用量の投与で、対象における障害の細胞を処置すること、または対象における障害の症状を治癒、軽減、緩和もしくは改善することに有効である化合物または化合物を含む組成物の量を指す。化合物または組成物の有効量は、用途に従って変動することができる。障害を処置する文脈において、有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す化合物の能力などの因子に依存し得る。例において、化合物の有効量は、対照と比較した場合の所与のパラメータにおける、例えば、化合物で処置されていない細胞（例えば、細胞の培養）または対象における統計的に有意な変化を生成する量である。

【0029】

「対象」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト、ネコ、イヌ、ウマ、ウシなどの哺乳動物を指す

【0030】

本明細書において列挙されている任意の数値（例えば、範囲）は、低い方の値から高い方の値までの全ての値を含むと具体的に理解され、即ち、列挙されている最低値と最高値との間の数値の全ての可能な組合せは、この出願において明確に明記されていると考えられるべきである。例えば、濃度範囲が１％から５０％と明記されているならば、２％から４０％、１０％から３０％、または１％から３％などの値は、この明細書において明確に列挙されていると意図される。これらは、具体的に意図されるものの例にすぎない。

【0031】

化合物
本発明において有用な化合物は、以下の番号付け実施形態において説明されている。第１の実施形態はＥ１と示され、別の実施形態はＥ２などと示される。
Ｅ１．

【0032】

【化6】

からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ１．１．

【0033】

【化7】

からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ２．

【0034】

【化8】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ３．

【0035】

【化9】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ４．

【0036】

【化10】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ５．

【0037】

【化11】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ６．

【0038】

【化12】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ７．

【0039】

【化13】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ８．

【0040】

【化14】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ９．

【0041】

【化15】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ１０．

【0042】

【化16】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ１１．

【0043】

【化17】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ１２．

【0044】

【化18】

である、Ｅ１の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ１３．化合物が実質的にエナンチオマー的に純粋である、Ｅ１～Ｅ８もしくはＥ１０～Ｅ１２のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ１４．Ｅ１～Ｅ１３のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
Ｅ１５．Ｅ１～Ｅ１３のいずれかの化合物、あるいはＥ１４の医薬組成物、あるいは

【0045】

【化19】

からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、認知を増強する方法。

【0046】

本発明の化合物において、任意の「水素」または「Ｈ」は、構造において明確に列挙されていてもまたは暗黙的であっても、水素同位体^１Ｈ（プロチウム）および^２Ｈ（重水素）を包含する。

【0047】

化合物は、塩の形態、例えば、薬学的に許容される塩であってよい。「薬学的に許容される塩」という用語は、化合物上に見出される特別な置換基に依存して、相対的に非毒性の酸または塩基で調製される活性化合物の塩を含む。この開示の化合物の適当な薬学的に許容される塩としては、例えば、本開示による化合物の溶液を、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することによって形成することができる酸付加塩が挙げられる。さらに、本開示の化合物が酸性部分を保有する場合、その適当な薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩；および適当な有機リガンドで形成される塩、例えば第４級アンモニウム塩を挙げることができる。

【0048】

化合物の中性形態は、従来の方式で、塩を塩基または酸と接触させることおよび親化合物を単離することによって再生することができる。化合物の親形態は、極性溶媒における可溶性など、ある特定の物理的特性において様々な塩形態と異なるが、そうでなければ塩は、この開示の目的のための化合物の親形態と同等である。

【0049】

塩形態に加えて、本開示は、プロドラッグ形態である化合物を提供することもできる。化合物のプロドラッグは、化合物を提供するための生理学的条件下で化学変化を容易に受けるような化合物である。プロドラッグは、エクスビボ環境において化学的または生化学的方法によって本開示の化合物に変換され得る。例えば、プロドラッグは、適当な酵素または化学的試薬を有する経皮パッチリザーバーに入れられた場合、本開示の化合物にゆっくり変換され得る。

【0050】

化合物は、本明細書に記載されている立体異性体のエナンチオマー的に富化された異性体であってよい。エナンチオマーは、本明細書で使用される場合、分子構造が互いに鏡像関係を有する１対の化学化合物のいずれかを指す。例えば、化合物は、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のエナンチオマー過剰率を有することができる。

【0051】

化合物の調製物は、選択された立体中心に対応する選択された立体化学、例えば、ＲまたはＳを有する化合物の異性体について富化されていてよい。例えば、化合物は、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の、選択された立体中心の選択された立体化学を有する化合物に対応する純度を有することができる。化合物は、例えば、選択された立体中心において選択された立体化学、例えば、ＲまたはＳを有する構造（単数または複数）について富化されている、本明細書において開示されている化合物の調製物を含むことができる。「実質的にエナンチオマー的に純粋」は、示されているエナンチオマーにおける９５％以上の富化を指す。

【0052】

化合物の調製物は、化合物のジアステレオマーである異性体（対象異性体）について富化されていてよい。ジアステレオマーは、本明細書で使用される場合、同じ化合物の別の立体異性体の鏡像ではない、２つ以上のキラル中心を有する化合物の立体異性体を指す。例えば、化合物は、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の、選択されたジアステレオマーを有する化合物に対応する純度を有することができる。

【0053】

化合物の所与の立体中心における立体配置について特定の指示がなされていない場合、立体配置のいずれか１つまたは立体配置の混合物が意図される。

【0054】

化合物は、立体特異的合成または分割のいずれかによって、ラセミ体形態でまたは個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして調製することができる。化合物は、例えば、光学活性塩基との塩形成による立体異性体対の形成、続いて、遊離酸の分別晶出および再生などの標準的技術によって、それらの構成成分エナンチオマーまたはジアステレオマーに分割することができる。化合物は、立体異性体エステルまたはアミドの形成、続いて、クロマトグラフィー分離およびキラル補助剤の除去によって分割することもできる。代替として、化合物は、キラルＨＰＬＣカラムを使用して分割することができる。エナンチオマーも、リパーゼ酵素を使用する、対応するエステルのラセミ体の速度論的分割から得ることができる。

【0055】

化合物の合成
化合物は、市販で利用可能な出発材料から合成することができる。例証的な合成は、実施例において下記に例示されている。

【0056】

本明細書における式の化合物を合成する他の方法は、当業者に明らかである。化合物を合成することにおいて有用な合成化学転換および保護基方法論（保護および脱保護）は、当技術分野において知られており、例えば、R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989)；T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991)；L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)；およびL. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)、ならびにその後続版に記載されているようなものが挙げられる。

【0057】

化合物の評価
化合物は、エクスビボおよびインビボの方法を含めて、多数の方法を使用して分析することができる。

【0058】

例えば、化合物のＧＡＢＡ_Ａサブユニット選択性は、競合的結合アッセイを使用して評価することができる。こうしたアッセイは、以前に記載された（Choudhary et al. Mol Pharmacol. 1992, 42, 627-33；Savic et al. Progress in Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry, 2010, 34, 376-386）。該アッセイは、［^３Ｈ］フルニトラゼパムなど、ＧＡＢＡ_Ａ受容体に結合することが知られている放射標識化化合物の使用を伴う。膜タンパク質は、収穫し、放射標識化化合物でインキュベートすることができ、非特異的結合は、放射標識化化合物の結合を別の非標識化化合物（例えば、ジアゼパム）と比較することによって評価することができる。結合放射能は、液体シンチレーション計数によって定量化することができる。膜タンパク質濃度は、市販で利用可能なアッセイキット（例えば、Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡから）を使用して決定することができる。

【0059】

化合物は、アフリカツメガエル卵母細胞におけるまたはトランスフェクト細胞株における電気生理学的アッセイにおいて評価することもできる。化合物は、ＧＡＢＡの添加前に予備適用することができ、次いで、ピーク応答が観察されるまで化合物と同時適用することができる。適用間に、卵母細胞またはトランスフェクト細胞株は、脱感作からの完全な回復を確実にするために洗浄することができる。ＧＡＢＡ応答規模の電流測定（Fisher et al. Mol Pharmacol,1997, 52, 714-724）のため、卵母細胞またはトランスフェクト細胞に微小電極を刺入し、電圧クランプを使用して記録を行うことができる。

【0060】

本明細書に記載されている化合物は、ＧＡＢＡ_Ａ／α５および／またはＧＡＢＡ_Ａ／α２、ＧＡＢＡ_Ａ／α３またはＧＡＢＡ_Ａ／α_２／３受容体でのアゴニスト効力の増加により抗うつ、抗不安または認知促進活性を呈するＧＡＢＡ_Ａ受容体リガンドであってよい。化合物は、ＧＡＢＡ_Ａ／α１受容体に相対して、ＧＡＢＡ_Ａ／α５受容体に対して少なくとも２倍、適当には少なくとも５倍、有利には少なくとも１０倍の選択的効力を有することができる。しかしながら、ＧＡＢＡ_Ａ／α５受容体に対するそれらのアゴニスト効力の点から選択的でない化合物も本開示の範疇内に包含される。こうした化合物は、望ましくは、ＧＡＢＡ_Ａ／α１受容体での効力の減少による鎮静催眠／筋弛緩／失調活性の減少とともに、認知促進および／または抗うつ活性を実証することによって機能的選択性を呈する。

【0061】

アゴニストもしくは部分アゴニストまたはポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）として作用するＧＡＢＡＡ受容体のリガンドであるＧＡＢＡ作動性受容体サブタイプ選択性化合物は、後文で、「ＧＡＢＡ_Ａ受容体アゴニスト」もしくは「ＧＡＢＡ_Ａ受容体部分アゴニスト」または「アゴニスト」もしくは「部分アゴニスト」または「ＰＡＭ」と称される。特に、これらは、ＧＡＢＡ_Ａ受容体のベンゾジアゼピン（ＢＺ）結合部位のリガンドであり、それゆえに、ＢＺ部位アゴニスト、部分アゴニストまたはＰＡＭとして作用する化合物である。こうしたリガンドとしては、その上、ＧＡＢＡ部位でまたはＧＡＢＡ_Ａ受容体のベンゾジアゼピン部位以外のモジュレート部位（modulatory sites）で作用する化合物が挙げられる。

【0062】

ＧＡＢＡ作動性の受容体サブタイプ選択性化合物は、ＧＡＢＡ_Ａ／α_１受容体と比較した場合に、ＧＡＢＡ_Ａ／α５受容体を選択的または優先的に活性化することによってアゴニスト、部分アゴニストまたはＰＡＭとして作用する。選択的または優先的治療剤は、ＧＡＢＡ_Ａ／α_５、ＧＡＢＡ_Ａ／α_２またはＧＡＢＡ_Ａ／α_３受容体と比較して、ＧＡＢＡ_Ａ／α_１受容体に対して、より小さい結合親和性または効力を有する。代替として、該薬剤は、ＧＡＢＡ_Ａ／α_５、ＧＡＢＡ_Ａ／α_１、ＧＡＢＡ_Ａ／α_２、およびＧＡＢＡ_Ａ／α_３受容体に、匹敵する親和性で結合するが、ＧＡＢＡ_Ａ／α_１受容体と比較して、ＧＡＢＡ_Ａ／α_５受容体活性化の優先的な効力を発揮する。代替として、選択的薬剤は、ＧＡＢＡ_Ａ／α_５に相対して、ＧＡＢＡ_Ａ／α_２およびＧＡＢＡ_Ａ／α_３受容体へのより大きいまたはより小さい結合親和性を有することもできる。Ｂｚ／ＧＡＢＡアゴニストは、それぞれのＧＡＢＡ_Ａ受容体のベンゾジアゼピン部位で作用するが、それの受容体相互作用においてこの薬物結合性ドメインに制限されない。

【0063】

ＧＡＢＡ受容体サブタイプ特異的化合物の薬物動態学的特性は、腹腔内、食道によるおよび静脈内投与に続いて、血漿および脳における化合物含有量を測定して（Piantadosi et al. Front Pharmacol, 2016, 7, 446）判定される。マウスおよびラットは、異なる化合物を異なる用量で受ける。連続の脳および血漿濃度は、異なる時間に得られ、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳは、各試料における各化合物の濃度を測定するために使用される。このアッセイを使用して、Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、ＡＵＣ_０－１２、ＡＵＣ_０－∞、Ｔ_１／２およびβが、各組織における各化合物、両方の種のための各投与経路について測定される。潜在的な治療的介入のために、最適な薬物動態学的特性を有する化合物が考えられる。

【0064】

ＧＡＢＡ受容体サブタイプ特異的化合物の代謝利用可能性は、ヒトおよびマウス肝臓ミクロソームアッセイを使用して化合物の分解速度を測定することによって判定される。肝臓ミクロソームは、各化合物でインキュベートされ、半減期、固有クリアランスおよび代謝速度が測定される。潜在的な治療的介入のために、最適な代謝パラメータを有する化合物が考えられる。

【0065】

細胞毒性および生存能は、インビトロ条件において評価することができる。ヒト細胞（それぞれ肝臓および腎臓からのＨＥＰＧ２および／またはＨＥＫ２９３細胞株）は、化合物でインキュベートされ、細胞生存能アッセイが、化合物の毒性を決定するために行われる。１００μＭよりも優れたＬＤ_５０を有する化合物は、細胞生存能に対して毒性効果を有さないと考えられる。

【0066】

化合物を評価するための他の方法は、当業者に知られている。認知機能を改善する潜在性を評価するため、以下に限定されないが、注意、視覚および聴覚処理、運動機能、短期および作業記憶、複数の認知側面（cognitive dimensions）についての学習および記憶処理（手続、陳述、空間／参照記憶など）についての試験を含めて、多数の行動試験が、げっ歯類および他の哺乳動物において存在する。

【0067】

陳述および手続認知機能は、モリス水迷路、放射状迷路、Ｂａｒｎｅｓホールボードなどを含めて、様々な迷路を使用して、評価することができる（Gallagher et al, Behav Neurosci, 1993, 107,618-626；Vorhees and Williams, ILAR J, 2014, 55,310-332；Schwabe et al. Neurosci & Biobehavioral review, 2010, 34, 584-591）。これらのパラダイムは、学習および記憶能力を試験し、それらの環境を参照することで課題を解決するための動物の学習および記憶能力を改善することにおける化合物の効力を同定するために使用される。動物は、検索／探査試験中にタスクを学習するとともに情報を想起するように訓練される。化合物の潜在的な認知促進特性を試験するための分野における方法は、試験の学習および／または想起段階中の化合物の投与を含む。成功までの潜時ならびに／または学習および／もしくは想起段階中のタスクにおけるエラーの数を低減する化合物は、潜在的な認知促進作用を有すると考えられる。

【0068】

認知機能を測定する他の試験は、熟知した物体／対象と新規な物体／対象との間の判別タスクを含む。これらの試験は、以下に限定されないが、新規物体認識試験、場所認識試験、社会的新規性判別、３チャンバー試験などの変形を含む（Morici et al, Behav Brain Research, 2015, 292, 241-251；Millan and Bales, Neurosci & Biobehavioral Reviews, 2013, 37, 2166-2180）。これらの試験の概念は、それの環境において熟知した要素と新規な要素との間を判別する動物の能力を判定することである。新規な要素と相互作用する時間を増加させる化合物は、認知促進特性を有すると考えられる。

【0069】

短期および作業記憶機能は、その上、モリス水迷路、Ｙ迷路またはＴ迷路器具または変形を用いた異なるタスクを使用して判定することができる（Lalonde, Neurosci & Biobehavioral Reviews, 2002, 26, 91-104）。簡潔には、これらの試験は、獲得後すぐに情報を想起するために、短時間の間情報を保持するための動物の能力に基づく。作業記憶の効率的な処理は、新たな関連情報の獲得を可能にするために、無関係な情報が「消去」されることを必要とする。例えば、短期作業記憶は、新たな環境を探索するという動物の先天的傾向を利用することによって判定することができ、器具の２つの異なるアームを訪れる選択が反復して与えられた場合に自発的に交替するというそれらの性向に依拠し得る。複数の試行に続き、エラーの数は、干渉の負荷により増加することがある。干渉の負荷は、試行間の遅延の変動によってモジュレートすることができ、長い試行間の間隔は、エラーの数における増加として指標化される干渉の負荷を増加させる。ストレスパラダイム、正常な加齢または精神神経性もしくは神経変性障害の他のモデルは、これらの試験において認知能力を低減するために使用することができる。これは、エラーの数における増加によって特徴付けられる（即ち、水迷路タスクにおけるエラーの増加、または交替タスクにおける５０％のチャンスレベル辺りの性能）。これらの欠損を逆転させる化合物は、認知促進作用を有すると考えられる。

【0070】

化合物の抗うつ潜在性を評価するため、以下に限定されないが、不安様、行動絶望様、無力様または快感消失様行動応答のための試験を含めて、情動性を判定するための多数の試験が、げっ歯類および他の哺乳動物において存在する。

【0071】

該分野における標準的方法で、強制水泳試験および尾懸垂試験（Castagne et al. Curr Protoc Neurosci ,2011, Chapter 8）は、主として、げっ歯類における抗うつ作用をスクリーニングするために使用されるが、その上、ストレスへの応答における絶望の行動尺度として用いられる。簡潔には、げっ歯類は、潜在的な抗うつ化合物を試験するために急性的にまたは亜慢性的に注射される。げっ歯類は、不可避な状況に入れられ（水のタンクの中、または尾で吊るされている）、不動時間の計数は、絶望の状態への諦めの指標として測定される。これらの試験において不動を低減した化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。

【0072】

抗うつ作用を評価する他の方法は、学習性無力感試験または恐怖条件付けなどの嫌悪的刺激に対する行動反応性を含む（Cryan and Mombereau, Molecular Psychiatry, 2004, 9, 326；Phillips and LeDoux, Behavioral Neuroscience, 1992, 106, 274-285）。両方の試験は、悪条件付けおよび非条件付け刺激に対処するための動物の能力に依拠する。フットショックが動物に適用され、生成された行動応答は、化合物の潜在的な抗うつ特性のための指標として使用される。学習性無力感試験におけるフットショックを避けるための数および／または潜時、ならびに恐怖条件付けパラダイムにおけるすくみに費やされる時間を減少させる化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。

【0073】

化合物の潜在的な抗うつ活性は、変更された情動性を呈する動物モデルにおいて観察された快感消失様行動を逆転させるそれらの特性について評価することもできる。例えば、新規性誘発性食欲不振（novelty induced hypophagia）、スクロース嗜好性もしくは摂取、またはクッキー試験は、げっ歯類における快感消失を判定するために用いることができる。快感消失は、以下に限定されないが、美味な溶液または食物を含めて、心地よい経験の探索における減少によって特徴付けられる（Willner, Neuropsychobiology, 2005, 52, 90-110；Nollet et al. Curr Protoc Neurosci ,2013, Chapter 5）。快感経験の探索を増加させる化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。

【0074】

化合物を評価するための他の方法は、当業者に知られている。不安症状は、しばしば併存症的であり、うつ病またはＡＤにおいて観察される気分スペクトルから分離することが難しい。例えば、化合物の抗不安効果の判定は、Fischer et al. Neuropharmacology 59 (2010) 612-618に記載されている通り、オペラントベースの対立手順（operant-based conflict procedures）で客観的におよび定量的に達成することができる。簡潔には、正に強化される行動は、軽度の電気ショックなどの有害な刺激の応答付随的投与によって、これらの手順において抑制することができる。化合物が抗不安効果を有するならば、それは、ショックの応答付随的送達によって正常に抑制される応答速度を増加させる。対立手順の強みは、ヒトにおける予想治療効果に関するそれらの予測的妥当性である。

【0075】

潜在的な抗不安活性および自発運動活性は、ホームケージ様器具において評価することができる。高レベルの不安を有する動物は、より多くの時間をそれらのシェルターに隠れて費やす性向を有し、それらの探索行動を制限する。同じ設定が、光チャレンジ（light challenge）の適用で使用され得る。不安な動物は、光課題の最後でさえ照明ゾーン（lit zone）を回避し続ける（Pham et al. J Neurosci Methods, 2009, 178, 323-326）。探索を増加させるとともにこれらの型の試験におけるこの回避行動を制限する化合物は、潜在的な抗うつ／抗不安作用を有すると考えられる。

【0076】

抗不安活性は、Ｃｒａｗｌｅｙ（Neurosci Biobehav Rev 1985, 9, 37-44）によって開発された方法によって、明／暗ボックス試験において評価することもできる。明／暗ボックスは、抗不安活性についての単純な非侵襲的試験である。暗ボックスに進入する潜時を増加させ、および／または照明ボックスにおいて費やされる時間を増加させる化合物は、抗不安作用を有すると考えられる。

【0077】

潜在的な抗不安活性は、高架式十字迷路およびオープンフィールド試験において測定することができる（Bailey and Crawley, Methods of Behavior Analysis in Neuroscience, 2009, 2^nd Edition）。両方の試験において、探索するという動物の自然な傾向と、曝露された環境における捕食動物の脅威のそれの先天的恐怖との間に、対立が生じられる。げっ歯類は、明るい光条件下にて迷路／フィールドの中心に入れられる。進入の数ならびに曝露領域（オープンアーム／活動領域の中心）において費やされた時間が記録される。探索行動を減少させることなくこれらのパラメータを増加させる化合物は、抗不安作用を有すると考えられる。

【0078】

化合物の抗不安特性を判定するための他の方法は、食物または加糖溶液に対する動因と新規な環境に入れられるという恐怖との間の対立に依拠する試験を用い得る。これらの試験において、新規に抑制された摂食またはクッキー試験においてアプローチするとともに摂食するための潜時、ならびに新規性誘発性食欲不振においてコンデンスミルクを飲むための潜時は、結果尺度である（Nollet et al. Curr Protoc Neurosci ,2013, Chapter 5）。これらのパラメータを減少させる化合物は、潜在的な抗不安特性を有すると考えられる。

【0079】

ガラス玉覆い隠しアッセイ（Deacon, Nat Protocols, 2006, 1, 122；Kinsey et al., Pharmacol Biochem Behav 2011, 98, 21）は、別の抗不安試験である。マウスまたはラットは、ガラス玉を覆い隠すために掘ることができる寝床材料の上部にガラス玉を有するケージに入れられる。げっ歯類は次いで時間を測定され、覆い隠されたガラス玉の数が数えられる。対照と比較したガラス玉覆い隠しの低減は、抗不安効果と考えられる。

【0080】

障害と関連する認知、うつ病、不安および他の行動的側面は、正常のベースライン条件下にて、または該状態もしくは症状のげっ歯類モデルを使用して評価することができる。こうしたモデルの例は、予測不可能な慢性の軽度ストレス、慢性拘束ストレスおよび社会的敗北パラダイムを含む。例えば、「損なわれた認知」および「うつ病様」の状態は、数週にわたって予測不可能な軽度のストレッサーの延長プロトコールを使用して、げっ歯類において誘発することができる。軽度のストレッサーは、予測不可能な環境を提供するため、ランダム方式で、典型的であるが排他的でなく適用される。軽度のストレッサーとしては、以下に限定されないが、光サイクルにおける変化、ケージ寝床における変化、ケージの変更、捕食動物臭気への、雑音または明るい光への曝露、社会的ストレッサー、攻撃的なマウスへの曝露を挙げることができる。これらのパラダイムに曝露されるげっ歯類は、典型的に、認知機能の変更ならびにうつ病および不安関連行動の増加を呈し、以下に限定されないが、本明細書に記載されているものを含めて、様々な行動試験によって判定することができる。これらの試験において欠損を逆転させる化合物は、治療効能が考えられ得る。

【0081】

これらの障害と関連する認知、うつ病、不安、および他の行動的側面は、該障害と関連する行動的または生理的変化を引き起こす細胞または分子病理を誘発するために遺伝子工学が使用されてきたげっ歯類モデルにおいて評価することができる。例えば、化学遺伝学的な手法を使用するＳＳＴ ＧＡＢＡニューロンの急性阻害は、行動的情動性（behavioral emotionality）の上昇を誘発し（Soumier and Sibille, Neuropsychopharmacology, 2014, 39:9, 2252-62）、さらに、情動性を低減する化合物は、治療効能が考えられ得る。

【0082】

神経変性障害と関連する認知機能における欠損は、その上、増加されたベータ－アミロイドプラークおよび／または神経原線維濃縮体など、ヒト脳において観察される病理を誘発するために遺伝子操作を使用して開発された複数のげっ歯類モデルにおいて評価することができる。例えば、ＡＤのＴｇＣＲＮＤ８マウスモデルは、ＴｇＣＲＮＤ８マウスにおいて、突然変異体ヒトｂＡＰＰ導入遺伝子を発現し、脳におけるアミロイドベータプラークおよび神経原線維濃縮体のレベルを両方増加させることを伴う３カ月齢で空間学習欠損を呈する（Janus et al, Nature, 2000, 408:979-982）。データは、これらのモデルにおいて認知症状を逆転または改善する化合物が、正常または疾患関連の、認知の喪失または病理的状態において有効であることを示唆する。

【0083】

統合失調症を処置する潜在性の評価のため、化合物は、Gill et al. Neuropsychopharmacology 2011, 36: 1903-1911に記載されている通り、マウスモデルを使用して試験することができる。統合失調症のこのマウスモデルは、妊娠１７日目に妊娠中の雌親へのＤＮＡメチル化剤、酢酸メチルアゾキシメタノール（ＭＡＭ）の投与によって誘発される発達障害（development disturbance）から生じる。ＭＡＭで処置された子孫は、統合失調症を有するヒト患者において観察されたものと一致する構造および行動異常を呈する。α５ＧＡＢＡ_Ａ受容体（α５ＧＡＢＡ_ＡＲ）の拮抗作用または遺伝子欠失は、驚きに対するプレパルス阻害および損なわれた潜在阻害を含めて、統合失調症において見られる行動異常の一部に似ている行動に至る。ＭＡＭモデルは、ＧＡＢＡ_ＡＲのα５サブユニットに選択的なベンゾジアゼピン－ポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）化合物の有効性を示すために使用することができる。Ｇｉｌｌらにおいて、脳における持続性ドーパミン伝達（tonic dopamine transmission）の病的増加は逆転され、ＭＡＭラットにおいて観察された覚醒剤に対する行動感受性は低減された。データは、こうした化合物が、ドーパミン媒介精神病を軽減することに有効であると示唆する。

【0084】

世界的な自発運動の尺度も、試験化合物の潜在的な鎮静効果を判定するために使用することができる。マウスは、ホームケージ様活動領域に入れられ、移動距離を３０～６０分間モニタリングされる（Tang et al. Behavioral Brain Research, 2002, 136, 555-569）。移動距離における劇的な低減を誘発する化合物は、鎮静または望ましくない副作用を有すると考えられる。

【0085】

空間および運動協調性の尺度も、化合物の鎮静催眠／筋弛緩／失調活性を判定するために判定することができる。感覚運動ロータロッド試験は、典型的に、これらの判定のために使用される（Voss et al. European Journal of Pharmacology, 2003, 482, 215-222）。この試験は、試験化合物の注射の１０分後、３０分後および６０分後に実施される。マウスまたはラットは、回転するロッド（ロータロッド）上にて１５ｒｐｍで最大３分間試験され、落下の時間が記録される。試験期間３分前の落下は、化合物によって誘発される任意の自発運動協調機能障害を示す。

【0086】

こうした化合物は、望ましくは、ＧＡＢＡ_Ａ／α１受容体での効力の減少による鎮静催眠／筋弛緩／失調活性の減少で、認知促進および／または抗うつ活性を実証することによって機能的選択性を呈する。

【0087】

ＧＡＢＡ－Ａ受容体を活性化する化合物ならびにＧＡＢＡ_Ａ受容体サブユニットに選択的な化合物は、神経活性のそれらの一般的抑制により、抗てんかん活性をしばしば呈する。したがって、化合物の抗てんかん特性は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０２６１７１１号明細書に記載されている通り、てんかんのいくつかの標準的ラットおよびマウスモデルの発作を抑制する能力について試験することができる。化合物の抗けいれん活性は、ジアゼパムと比較することができる。抗けいれんスクリーニングに組み込まれる標準的モデルは、最大電気ショック試験（ＭＥＳ）、皮下メトラゾール試験（ｓｃＭｅｔ）、および毒性の評価（ＴＯＸ）を含む。各状態のためのデータは、所与の時間ポイントおよび用量で試験された動物の数に対する保護されたまたは毒性（自発運動活性の喪失）の動物の数のいずれかの比として表すことができる。

【0088】

ＭＥＳは、全身性強直間代発作のためのモデルであり、脳における全てのニューロン回路が最大活性である場合に発作伝播を防止する化合物の能力の指標を提供する。これらの発作は、高く再現可能であり、ヒト発作と電気生理学的に一致する。ＭＥＳけいれんに基づく全ての試験のため、６０Ｈｚの交流電流（マウスで５０ｍＡ、ラットで１５０）が、麻酔剤（０．５％テトラカインＨＣＬ）を含有する電解質溶液で満たされた角膜電極によって送達される。試験１のため、マウスは、０．０１ｍＬ／ｇの体積のｉｐ注射によって与えられる試験化合物３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ／ｋｇの用量に続いて、様々な間隔で試験される。試験２では、ラットは、０．０４ｍＬ／ｇの体積における３０ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ）の用量の後に試験される。試験３は、再び０．０４ｍｌ／ｇの体積におけるｉ．ｐ．注射を介して投与される変動する用量を使用する。動物は、発作の後肢強直性伸筋成分（hindlimb tonic extensor component）の消滅でＭＥＳ誘発発作から「保護された」と考えられる（Swinyard, E. A., et al. in Antiepileptic Drugs, Levy, R. H. M., et al., Eds；Raven Press: New York, 1989; pp 85-102; White, H. S., et al., Ital J Neurol Sci. 1995a, 16, 73-7；White, H. S., et al., in Antiepileptic Drugs, Levy, R. H. M., Meldrum, B. S., Eds.；Raven Press: New York, pp 99-110, 1995b）。

【0089】

けいれん薬メトラゾールの皮下注射は、実験室動物において間代性発作を生じさせる。ｓｃＭｅｔ試験は、動物の発作閾値を上昇させ、したがって、間代性発作を呈することからそれを保護するという試験化合物の能力を検出する。動物は、様々な用量の試験化合物で（５０ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ）の用量が試験２ ｓｃＭｅｔについて標準であるが、ＭＥＳ試験と同様の方式で）前処理することができる。試験化合物の予め決定されたＴＰＥで、動物の９７％においてけいれんを誘発するメトラゾールの用量（ＣＤ．ｓｕｂ．９７：８５ｍｇ／ｋｇマウス）が、頸部の正中線における皮膚の緩いひだに注射される。動物は、ストレスを最小化するために単離ケージに入れられ（Swinyard et al. J. Physiol. 1961, 132, 97-0.102）、発作の存在または非存在について次の３０分間観察することができる。前肢および／もしくは後肢、顎、または感覚毛の間代性痙攣のエピソード、およそ３～５秒が、終点と見なされる。この判断基準に合わない動物は、保護されたと考えられる。

【0090】

化合物の抗けいれん活性をさらに特徴付けるため、海馬キンドリングスクリーンが行われ得る。このスクリーンは、複雑部分発作を処置するための物質潜在的有用性（substance potential utility）の同定についての伝統的なＭＥＳおよびｓｃＭｅｔ試験に対する有用な補助物である。

【0091】

ベンゾジアゼピンは、ある特定の処置パラダイムにおける高度に有効な薬物であり得る。それらは、てんかん重積状態および他の急性状態などの緊急事態のために日常的に用いられる。しかし、慢性けいれん疾患におけるそれらの使用は、鎮静ならびに高用量での呼吸抑制、低血圧および他の効果などの副作用により制限されている。さらに、このクラスの薬物の慢性投与は、抗けいれん効果に対する耐性に至り得ることが長く主張されてきた。これは、慢性の抗けいれん状態のための第一選択処置としてのそれらの有用性を制限してきた。減少された副作用プロファイルおよび長期の処置期間にわたる効力を有する強力なＢＤＺの発見が非常に望ましい。

【0092】

組成物および投与経路
別の態様において、本開示は、薬学的に許容される担体とともにこの開示の１種または複数の化合物を含む医薬組成物を提供する。こうした組成物は、経口、非経口、鼻腔内、舌下もしくは直腸投与のための、または吸入もしくは吹送法による投与ための；錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、無菌非経口液剤または懸濁剤、定量エアゾールまたは液スプレー剤、点滴剤、アンプル剤、自動インジェクター装置または坐剤などの単位剤形であってよい。その上、化合物は、連続様式において薬物の適切な量を送達するように設計された経皮パッチに組み込むことができると想定される。錠剤などの固体組成物を調製するため、主要活性成分は、薬学的担体、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウムまたはガムなどの従来の錠剤化成分、および他の医薬希釈剤、例えば水と混合されることで、本開示の化合物、またはその薬学的に許容される塩のための均質の混合物を含有する固体予備製剤組成物を形成する。これらの予備製剤組成物を均質と称する場合、活性成分が組成物の全体にわたって均等に分散されることで、組成物は、錠剤、丸剤およびカプセル剤など同等に有効な単位剤形に簡便に細分化することができることが意味される。この固体予備製剤組成物は、次いで、本開示の活性成分０．１ｍｇから約５００ｍｇを含有する、上に記載されている型の単位剤形に細分化される。典型的な単位剤形は、１ｍｇから１００ｍｇ、例えば、１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇまたは１００ｍｇの活性成分を含有する。新規な組成物の錠剤または丸剤は、延長作用の利点を与える剤形を提供するためにコーティングまたはそうでなければ配合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部投与量および外部投与量構成成分を含むことができ、後者は、前者上の外被の形態である。２種の構成成分は、胃における崩壊に抵抗する働きをするとともに内部構成成分が十二指腸へ無傷で通過するのをまたは放出において遅延されるのを可能にする腸溶性層によって分離することができる。様々な材料が、こうした腸溶性層またはコーティングのために使用することができ、こうした材料としては、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料との混合物が挙げられる。

【0093】

本開示の組成物が経口的にまたは注射による投与のために組み込まれ得る液状形態としては、水溶液、適当には、香味付けシロップ、水性または油性懸濁液、および綿実油、ゴマ油、ヤシ油または落花生油などの食用油での香味付けエマルジョン、ならびにエリキシルおよび同様の医薬ビヒクルが挙げられる。水性懸濁液のための適当な分散剤または懸濁化剤としては、合成および天然ガム、例えば、トラガカント、アカシア、アルギネート、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンが挙げられる。

【0094】

適当な投与量レベルは、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから２５０ｍｇ／ｋｇ、１日当たり約０．０５ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、または１日当たり約０．０５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇである。化合物は、１日当たり１回から４回のレジメンで、または例えば、経皮パッチの使用を介する連続ベースで投与することができる。

【0095】

経腸投与、例えば、経鼻、頬側、直腸、または殊に経口投与のための、および非経口投与、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、硬膜外、硬膜外またはくも膜下腔内投与のための医薬組成物が適当である。医薬組成物は、およそ１％からおよそ９５％の活性成分、またはおよそ２０％からおよそ９０％の活性成分を含む。

【0096】

冠内、脳血管内または末梢血管注射／注入を含めた非経口投与のため、サブユニット選択的ＧＡＢＡ_Ａ受容体アゴニストの溶液、およびその上懸濁液または分散体、殊に、例えば使用の直前に作製することができる等張水溶液、分散体または懸濁液の使用が優先される。医薬組成物は、滅菌することができる、ならびに／あるいは賦形剤、例えば、保存料、安定剤、湿潤剤および／もしくは乳化剤、可溶化剤、粘増剤、浸透圧を調節するための塩、および／または緩衝液を含むことができ、それ自体知られている方式にて、例えば、従来の溶解および凍結乾燥プロセスの手段によって調製される。

【0097】

経口医薬品調製のため、適当な担体は、殊に、糖、例えばラクトース、ショ糖、マンニトールもしくはソルビトール、セルロース調製物および／またはリン酸カルシウムなどの充填剤、ならびにその上、デンプン、セルロース誘導体および／またはポリビニルピロリドンなどのバインダー、ならびに／あるいは、所望であれば、崩壊薬、流動調整剤および滑沢剤、例えば、ステアリン酸もしくはその塩および／またはポリエチレングリコールである。錠剤コアは、適当な、任意選択により腸溶性のコーティングを提供され得る。染料または顔料は、例えば、同定の目的のために、または活性成分の異なる用量を示すために、錠剤または錠剤コーティングに添加することができる。経口投与のための医薬組成物は、その上、ゼラチンからなる硬カプセル剤、ならびにその上、ゼラチンおよび可塑剤、例えば、グリセロールまたはソルビトールからなる軟密封カプセル剤を含む。カプセル剤は、活性成分を、顆粒の形態で、または油などの適当な液体賦形剤中に溶解もしくは懸濁させて、含有することができる。

【0098】

例えば、長時間期間、例えば１日から２０日にわたる投与を可能にする経皮パッチを使用する経皮適用も考えられる。

【0099】

処置の方法
本明細書においてさらに提供されるのは、本明細書において開示されている化合物を用いて障害または状態を処置する方法である。さらに提供されるのは、神経学的障害における認知および気分改善の方法である。

【0100】

障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）、認知症、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脳血管性疾患、麻酔、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、うつ病、例えば、大うつ病および持続性うつ病性障害および双極性うつ病、統合失調症、アルコール依存症、中毒、不安障害、てんかん、神経障害性疼痛、自閉症スペクトラム障害、またはその組合せから選択することができる。

【0101】

不安障害は、全般性不安障害、恐怖症性障害、およびパニック障害に分けられ；各々は、それ自体の特徴および症状を有し、それらは、異なる処置を必要とする。不安障害の特別な例としては、全般性不安障害、パニック障害、恐怖症、例えば、広場恐怖症、社交不安障害、強迫性障害、外傷後ストレス障害、分離不安障害および小児期不安障害が挙げられる。

【0102】

多くの異なるてんかん症候群があり、各々が、発作型、発症の典型的な年齢、ＥＥＧ所見、処置、および予後のそれ自体独特の組合せを呈する。例証的なてんかん症候群としては、例えば、小児期の良性中心側頭葉てんかん、小児期の良性後頭部てんかん（ＢＯＥＣ）、常染色体優性夜間前頭葉てんかん（ＡＤＮＦＬＥ）、原発性読書てんかん、小児欠神てんかん（ＣＥＡ）、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、症候性局在関連性てんかん、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）、前頭葉てんかん、ラスムッセン脳炎、ウエスト症候群、ドラベ症候群、進行性ミオクローヌスてんかん、およびレノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）が挙げられる。遺伝的、先天的および発達的状態は、しばしば、より若い患者の間のてんかんと関連する。腫瘍は、４０の年齢を超える患者の原因となり得る。頭部外傷および中枢神経系感染は、いかなる年齢でもてんかんを引き起こすことがある。

【0103】

統合失調症は、思考プロセスの崩壊によっておよび不十分な情動応答性によって特徴付けられる精神障害である。統合失調症の特別な型としては、妄想型、解体型、緊張型、未分化型、残遺型、統合失調症後うつ病および単純型統合失調症が挙げられる。

【0104】

自閉症スペクトラム障害は、様々な文脈にわたる社会的コミュニケーションおよび相互作用における持続的欠損によって特徴付けられる、神経発生中に発現される表現型の範囲を包含する。

【0105】

処置は、下部にある脳病理の側面的視点（dimensional perspective）と一致する、精神神経性（例えば、うつ病、統合失調症）から神経変性（例えば、ＡＤ）の障害までの障害にわたる症状の側面（例えば、認知、気分）を対象とすることもできる。

【0106】

方法は、本明細書に記載されている通りの化合物または組成物を、それを必要とする対象に投与することを含むことができる。

【0107】

以下の非限定的な実施例は、純粋に、一部の態様および実施形態の例示であると意図され、開示に従って実施された特定の実験を示す。

【実施例】

【0108】

スキーム１．置換３－メチル－５－フェニル－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン－２－オンの一般的合成

【0109】

【化20】

スキーム２．置換エチル４－メチル－６－フェニル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレートの一般的合成

【0110】

【化21】

【0111】

スキーム１および２において、Ｒ^１は、フェニル、クロロ、ブロモ、エチニル、またはシクロプロピルであってよく、Ｘは、Ｎ、Ｃ－Ｃｌ、またはＣ－Ｆであってよい。スキーム２におけるエチルエステルは、塩基性条件下にて加水分解などの周知の方法を使用して、対応するカルボン酸に変換することができる。

【0112】

他のアミドのための一般的手順
カルボン酸（１当量）、塩化チオニル（１０当量）および乾燥ジクロロメタンの混合物を、オーブン乾燥させた丸底フラスコにアルゴン下で入れる。この懸濁液を６０℃で２時間の間アルゴン下で還流させておく。有機溶媒および過剰の塩化チオニルを減圧下で蒸発させ、これを乾燥ジクロロメタンで５回反復する。得られた生成物を乾燥ジクロロメタン中に溶解させ、０℃に１０分間アルゴン下で冷却する。次いで、適切なアミン（２当量）、続いてＥｔ_３Ｎ（１当量）を反応混合物に０℃で添加し、混合物を次いで室温に加温させ、およそ７時間の間撹拌する。反応の完了後、溶媒を減圧下で除去する。生成物を氷水で処理し、ジクロロメタンで抽出する。合わせた有機層をブラインで洗浄する。溶媒を減圧下で除去し、生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製することで、対応する純粋なアミドが得られる。

【0113】

（Ｓ）－８－エチニル－Ｎ，４－ジメチル－６－（ピリジン－２－イル）－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキサミド（ＭＹＭ－ＩＩＩ－２９）

【0114】

【化22】

出発エステル、エチル（Ｓ）－８－エチニル－４－メチル－６－（ピリジン－２－イル）－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）を、セプタムが装着された密閉容器に－３０℃で投入し、次いで、メチルアミン（２０ｍＬ、ＥｔＯＨ中３３％ｗｔ溶液）を添加した。容器をスクリューキャップで密閉し、６０℃で１２時間の間撹拌した。溶液を次いで室温に冷却し、メチルアミンおよびエタノールを減圧下で除去した。結果として得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）によって精製することで、純粋な標題化合物がオフホワイトの粉末として得られた（０．６３ｇ、６５％）：¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.56 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.82 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 6.7, 5.5 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.90 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.15 (s, 1H), 2.97 (s, 3H), 1.28 (d, J = 7.2 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 164.69 (s), 163.40 (s), 157.72 (s), 148.38 (s), 138.74 (s), 136.83 (s), 136.08 (s), 135.95 (s), 134.84 (s), 133.63 (s), 131.57 (s), 128.01 (s), 124.45 (s), 124.07 (s), 122.25 (s), 120.70 (s), 81.84 (s), 79.18 (s), 49.63 (s), 25.57 (s), 14.74 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M+H] + C₂₁ H₁₇N₅Oの計算値356.1506; 実測値356.1474. % EE = >99% (HPLC) . %純度 = >99% (HPLC).

【0115】

（Ｒ）－６－（２－フルオロフェニル）－Ｎ，Ｎ，４－トリメチル－８－フェニル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキサミド（ＭＹＭ－ＩＩＩ－４１）

【0116】

【化23】

（Ｒ）－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－８－フェニル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボン酸（ＭＹＭ－ＩＩＩ－３７）（３５０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（０．６ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）、触媒量の無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．０７ｍＬ、．０８５ｍｍｏｌ）および乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）の混合物を、オーブン乾燥させた丸底フラスコにアルゴン下で投入した。形成したこの懸濁液を５０℃で１時間の間アルゴン下で還流させておいた。有機溶媒および過剰の塩化チオニルをロータリーエバポレーター上にて減圧下で除去し、それを無水ジクロロメタン（５×１０ｍＬ）で５回反復した。無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の、結果として得られた黄色の残渣を０℃に１０分間アルゴン下で冷却し、続いて、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミン溶液（４．２５ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を次いで室温に加温させ、１時間の間撹拌した。反応の完了後、混合物を氷冷水（１５ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃおよび１％トリメチルアミン）で精製することで、ＭＹＭ－ＩＩＩ－４１の淡黄色の固体が得られた（０．２９ｇ、８０％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.98 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.67 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.52 - 7.47 (m, J = 7.2 Hz, 3H), 7.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 7.25 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.40 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 3.14 (s,3H), 3.03 (s, 3H), 1.96 (d, J = 6.6 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 166.36 (s), 163.43 (s), 160.29 (d, J = 251.4 Hz), 140.38 (s), 138.95 (s), 134.84 (s), 133.83 (s), 132.43 (s), 131.92 (d, J = 7.9 Hz), 131.38 (s), 131.36 (s), 130.67 (s), 130.32 (s), 129.51 (s), 129.03 (s), 128.61 (s), 128.20 (s), 128.03 (d, J = 12.4 Hz), 127.13 (s), 124.47 (d, J = 2.5 Hz), 123.06 (s), 116.14 (d, J = 21.4 Hz), 52.26 (s), 39.16 (s), 35.06 (s), 18.55 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M+H] + C₂₇H₂₃FN₄Oの計算値439.1929; 実測値439.1908. % EE = >99% (HPLC). %純度 = >99% (HPLC).

【0117】

（Ｒ）－８－シクロプロピル－Ｎ－エチル－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキサミド（ＧＬ－ＩＩＩ－６８）

【0118】

【化24】

トルエン（５０ｍＬ）および水（１．４６ｍＬ）中の（Ｒ）－８－ブロモ－Ｎ－エチル－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキサミド（３．０ｇ、６．８ｍｍｏｌ）の溶液に、シクロプロピルボロン酸（３ｇ、３４．０ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（６．３ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジアセテート（１．５２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。還流凝縮器を取り付け、混合物を真空下にてアルゴンで脱ガスした。このプロセスを４回反復した。混合物を撹拌し、１００℃に加熱した。１２時間後に、反応をＴＬＣ（シリカゲル）による分析で完了し、それを次いで室温に冷却した。水（２０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出し、この後、濾液をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮した。結果として生じた黒色の残渣を洗浄カラム（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン４：１）によって精製することで、標題化合物が白色の固体として得られた（２．３ｇ、８５％）：ｍｐ１８９～１９０℃；¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.79 (s, 1H), 7.61 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 10.0 Hz, 2H), 7.31 - 7.14 (m, 3H), 7.09 - 6.91 (m, 2H), 6.86 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.62 - 3.24 (m, 2H), 1.94 - 1.71 (m, 1H), 1.22 (dd, J = 15.1, 7.6 Hz, 6H), 0.98 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 0.70 - 0.46 (m, 2H); ¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ 163.84 (s), 162.71 (s), 160.15 (d, J = 249.0 Hz), 143.60 (s), 138.69 (s), 133.31 (s), 132.27 (s), 131.57 (s), 131.40 (s), 129.35 (s), 129.29 (s), 128.49 (s), 128.29 (s), 127.85 (s), 124.28 (s), 121.79 (s), 115.89 (d, J = 21.8 Hz), 49.82 (s), 33.65 (s), 15.03 (s), 14.82 (s), 9.82 (s); HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M + H] C₂₄H₂₄FN₄Oの計算値403.1929; 実測値403.1927.

【0119】

（Ｒ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－Ｎ，Ｎ，４－トリメチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキサミド（ＰＭ－ＩＩ－２６）

【0120】

【化25】

（Ｒ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－カルボン酸（２ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタンのフラスコ中に添加し、懸濁液をもたらした。塩化チオニル（７当量）を添加し、溶液を還流で２時間の間撹拌した。水素発生が終わったので、反応は２時間後に完了した。結果として得られた酸塩化物を減圧下で乾燥させることで、過剰の塩化チオニルを除去した。酸塩化物を次いで乾燥ジクロロメタン中に溶解させ、ジメチルアミン（６当量）を空のフラスコ中に添加し、温度を氷で０℃に低減した。次いで、酸塩化物をアミンに１時間かけて滴下により添加し、３時間の間室温で撹拌した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル、１％メタノール）によって精製することで、純粋なＰＭ－ＩＩ－２６が得られた（１．５ｇ、７１％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.91 (s, 1H), 7.71 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 6.3, 3.1 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 4.37 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.15 (s, 1H), 3.13 (s, 2H), 2.98 (s, 2H), 1.92 (d, J = 6.4 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 165.31 (s), 138.69 (s), 135.39 (s), 135.20 (s), 134.42 (s), 133.89 (s), 133.49 (s), 132.67 (s), 132.46 (s), 130.82 (s), 130.67 (s), 130.07 (s), 129.01 (s), 127.19 (s), 122.66 (s), 121.49 (s), 81.56 (s), 79.55 (s), 52.10 (s), 39.03 (s), 34.99 (s), 18.38 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M + H] + C23H19ClN4Oの計算値403.132; 実測値403.133.

【0121】

（Ｓ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－Ｎ，４－ジメチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキサミド（ＦＲ－ＩＩＩ－１７）

【0122】

【化26】

出発エステル、エチル（Ｓ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を、セプタムが装着された密閉容器に－３０℃で投入し、次いで、メチルアミン（１５ｍＬ、ＥｔＯＨ中３３％ｗｔ溶液）を添加した。容器をスクリューキャップで密閉し、６０℃で１２時間の間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル、１％メタノール）によって精製することで、純粋なＦＲ－ＩＩＩ－１７が得られた（６９０ｍｇ、６９％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.81 (s, 1H), 7.66 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.41 - 7.37 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.89 (q, 1H), 3.14 (s, 1H), 2.98 (s, 3H), 1.36 (d, J = 4.3 Hz, 3H).

【0123】

オキサジアゾールのための一般的手順
スキーム３

【0124】

【化27】

エチルエステル（０．５２ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中に室温でアルゴン下にて溶解させる。３Åモレキュラーシーブを含有した別のフラスコ中で、対応するアミドオキシムＲ^３Ｃ（＝ＮＯＨ）ＮＨ_２（２．０８ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中にアルゴン下で溶解させ、水素化ナトリウム（鉱物油中６０％分散、０．５７ｍｍｏｌ）で処理した。結果として得られた混合物を１５分間撹拌し、この時点で、エチルエステルを含有する溶液を添加する。結果として得られた反応混合物を、ＴＬＣ（シリカゲル）による分析で示された通りに出発材料が消費されるまで室温で２時間の間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５０ｍＬ）でクエンチする。水（５０ｍＬ）を次いで添加し、生成物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させる（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を減圧下で除去する。結果として得られた固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）によって精製することで、オキサジアゾールが得られる。

【0125】

スキーム３において、Ｒ^１は、フェニル、クロロ、ブロモ、エチニル、またはシクロプロピルであってよく；Ｘは、Ｎ、Ｃ－Ｃｌ、またはＣ－Ｆであってよく；Ｒ^３は、アルキル基またはシクロアルキル基であってよい。

【0126】

５－（８－シクロプロピル－６－（２－フルオロフェニル）－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－エチル－１，２，４－オキサジアゾール（ＭＹＭ－ＩＩＩ－４３）

【0127】

【化28】

Ｎ’－ヒドロキシプロピオンイミドアミド（０．９ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中にアルゴン下で溶解させ、水素化ナトリウム（鉱物油中６０％分散、０．０６８ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）で１時間の間モレキュラーシーブ３Åにて丸底フラスコ中で処理した。エチル８－シクロプロピル－６－（２－フルオロフェニル）－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中に別のフラスコ中にて室温でアルゴン下にて溶解させ、次いで、Ｎ’－ヒドロキシプロピオンイミドアミドを含有するフラスコに添加した。結果として生じた反応混合物を、ＴＬＣ（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：へクス＝５０：５０）による分析で示された通りに出発材料が消費されるまで室温で２時間の間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３水溶液（２０ｍＬ）でクエンチした。水（５０ｍＬ）を次いで添加し、生成物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬで抽出した）。有機層を合わせ、洗浄し（１０％ＮａＣｌ水溶液、２×３０ｍＬ）、乾燥させた（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を減圧下で除去した。結果として生じた固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：へクス＝５０：５０）によって精製することで、純粋なオキサジアゾール、ＭＹＭ－ＩＩＩ－４３が得られた（白色の粉末、８５０ｍｇ、８０％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 7.64 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.03 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 2.84 (qd, J = 7.6, 1.1 Hz, 2H), 1.95 - 1.88 (m, 1H), 1.40 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 0.67 (s, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 171.85 (s), 170.94 (s), 166.63 (s), 160.26 (d, ¹J _C-F = 251.6 Hz), 144.35 (s), 136.22 (s), 135.60 (s), 132.10 (d, ²J _C-F = 8.4 Hz), 131.64 (s), 131.31 (d, ⁴J _C-F = 2.3 Hz), 129.04 (s), 128.78 (s), 128.15 (s), 128.06 (s), 128.02 (s), 124.47 (s), 124.36 (d, ³J _C-F= 3.5 Hz), 122.32 (s), 116.10 (d, ²J _C-F = 21.6 Hz), 44.82 (s), 19.77 (s), 15.13 (s), 11.57 (s), 9.91 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M+H] + C₂₄ H₂₀ N₅O Fの計算値414.1725; 実測値414.1691.

【0128】

（Ｒ）－５－（８－クロロ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－イソプロピル－１，２，４－オキサジアゾール（ＭＹＭ－ＩＶ－４６）

【0129】

【化29】

エチルエステル、エチル（Ｒ）－８－クロロ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中にアルゴン下で溶解させ、別のフラスコの中で、Ｎ’－ヒドロキシイソブチルイミドアミド（１．０５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（鉱物油中６０％分散、０．０６５ｇ、２．８０ｍｍｏｌ）で１時間の間モレキュラーシーブ３Åで処理した。その時点で、エチルエステル溶液を他のフラスコに滴下により添加し、結果として生じた反応混合物を、出発材料が消費されるまで（ＴＬＣ、シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：へクス＝５０：５０）、室温で２時間の間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（１０％ＮａＣｌ水溶液、２×３０ｍＬ）、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、溶媒を減圧下で除去した。固体残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：へクス＝５０：５０）によって精製することで、純粋な白色のオキサジアゾール、ＭＹＭ－ＩＶ－４６が得られた（９４０ｍｇ、８６％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.46 (dd, J = 12.5, 6.5 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 17.0, 7.4 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.73 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.18 (dt, J = 13.4, 6.6 Hz, 1H), 1.40 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.36 (d, J = 7.2 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 175.34 (s), 170.65 (s), 162.02 (d, ¹J _C-F = 235.7 Hz), 139.10 (s), 136.19 (s), 135.51 (s), 133.50 (s), 132.95 (s), 132.21 (d, ⁴J _C-F = 8.1 Hz), 132.08 (s), 131.35 (s), 131.12 (s), 130.90 (s), 130.33 (s), 129.80 (s), 128.38 (d, ³J _C-F = 11.9 Hz), 125.14 (s), 124.62 (s), 124.29 (s), 123.44 (s), 116.29 (d, ²J _C-F = 21.4 Hz), 50.33 (s), 26.76 (s), 20.62 (s), 20.56 (s), 14.99 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M+H] + C₂₃H₁₉N₅OFClの計算値436.13349; 実測値436.13746. % EE = >98% (HPLC) . %純度 = >99% (HPLC).

【0130】

（Ｒ）－５－（８－クロロ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－シクロプロピル－１，２，４－オキサジアゾール（ＭＹＭ－ＩＶ－４７）

【0131】

【化30】

Ｎ’－ヒドロキシシクロプロパンカルボキシイミドアミド（１．０７ｇ、１０ｍｍｏｌ）を水素化ナトリウム（鉱物油中６０％分散、０．０６６ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）で１時間の間モレキュラーシーブ３Åでアルゴン雰囲気下にて処理し、次いで、エチル（Ｒ）－８－クロロ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．５ｍｍｏｌ、２０ｍＬ ＴＨＦ）の溶液を反応混合物に滴下により添加し、出発材料の消費まで２時間の間撹拌された。混合物を次いでクエンチし（２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液）、希釈し（水、５０ｍＬ）、抽出した（ＥｔＯＡｃ、３×１００ｍＬ）。合わせた有機層を洗浄し（１０％ＮａＣｌ水溶液２×５０ｍＬ）、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：へクス＝５０：５０）によって精製することで、純粋なＭＹＭ－ＩＶ－４７が得られた（白色の粉末、０．９９ｇ、９１％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 7.65 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.46 (td, J = 7.4, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 14.1, 6.4 Hz, 2H), 7.05 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 6.66 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 2.20 - 2.11 (m, 2H), 1.33 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.19 - 1.10 (m, 2H), 1.06 (dd, J = 8.3, 2.2 Hz, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 172.64 (s), 170.48 (s), 162.94 (s), 160.07 (d, ¹J _C-F = 249.6 Hz), 139.11 (s), 136.16 (s), 135.48 (s), 133.51 (s), 132.92 (s), 132.55 (d, ³J _C-F= 8.0 Hz), 132.20 (d, ⁴J _C-F = 7.6 Hz), 132.05 (s), 131.10 (s), 130.88 (s), 130.32 (s), 129.80 (s), 128.36 (d, ²J _C-F= 12.0 Hz), 125.01 (s), 124.61 (s), 124.28 (s), 123.41 (s), 116.28 (d, ²J _C-F = 21.4 Hz), 50.29 (s), 14.98 (s), 7.76 (s), 6.90 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M+H] + C₂₃ H₁₇ N₅OF Clの計算値434.11784; 実測値434.12100. % EE = >98% (HPLC). %純度 = >99% (HPLC).

【0132】

（Ｒ）－５－（８－シクロプロピル－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－エチル－１，２，４－オキサジアゾール（ＧＬ－ＩＶ－０３）

【0133】

【化31】

トルエン（３０ｍＬ）および水（０．６５ｍＬ）中の（Ｒ）－５－（８－ブロモ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－エチル－１，２，４－オキサジアゾール（１．１ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）、トリ（Ｏ－トリル）ホスフィン（８５．５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、シクロプロピルボロン酸（０．７２４ｇ、８．４３ｍｍｏｌ）およびリン酸カリウム（２．５６ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（３１．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をＡｒ下にて室温で添加することで、オレンジ色の濁った溶液が形成された。還流凝縮器を取り付けた。混合物を、溶液の色が黄色になるまで室温で５分間撹拌させておき、Ｐｄ複合体の形成の表示がその場で生じた。混合物を次いで、予備加熱された油浴に１００℃で入れた。２時間後に、反応進行はＴＬＣ（シリカゲル）による分析で完了し、それを次いで室温に冷却した。次いで、水（２０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出し、この後、濾液をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮した。結果として生じた黒色の残渣を洗浄カラム（シリカゲル、ジクロロメタンおよび５％ＭｅＯＨ）によって精製することで、標題化合物が白色の固体として得られた（８１５．５ｍｇ、８１．６％）：¹H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.98 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.38 - 7.25 (m, 1H), 7.13 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.93 (t, J = 9.1 Hz, 2H), 6.63 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 2.73 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.84 - 1.65 (m, 1H), 1.27 (dd, J = 14.1, 6.6 Hz, 6H), 0.90 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 0.54 (dd, J = 10.1, 4.8 Hz, 2H); ¹³C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 171.70 (s), 170.95 (s), 164.32 (s), 160.06 (d, J = 250.5 Hz), 144.12 (s), 139.17 (s), 136.28 (s), 131.72 (s), 131.62 (s), 131.17 (s), 129.05 (t, J = 6.2 Hz), 128.61 (s), 127.96 (s), 127.20 (s), 124.36 (d, J = 8.0 Hz), 122.68 (s), 121.94 (s), 115.94 (d, J = 21.6 Hz), 50.13 (s), 19.69 (s), 15.02 (s), 14.68 (s), 11.49 (s), 9.89 (s); HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M + H] C₂₅H₂₃FN₅Oの計算値428.1881, 実測値428.1889.

【0134】

（Ｒ）－５－（８－ブロモ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－メチル－１，２，４－オキサジアゾール（ＧＬ－ＩＩＩ－６０）

【0135】

【化32】

Ｎ’－ヒドロキシアセトイミドアミド（３ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（鉱物油中６０％分散、０．８ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を用いるオキサジアゾールのための一般的手順に従って、エチル（Ｒ）－８－ブロモ－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（６ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）から標題化合物を調製した。粗残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：２）によって精製することで、標題化合物が白色の粉末として得られた（５．６ｇ、９１．８％）：¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.08 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.52 - 7.42 (m, 2H), 7.26 (td, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.11 - 6.99 (m, 1H), 6.74 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 1.35 (d, J = 7.3 Hz, 3H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ 170.69 (s), 167.46 (s), 161.09 (s), 161.06 (d, J = 495.1 Hz), 139.12 (s), 136.31 (s), 135.16 (s), 133.37 (s), 133.25 (s), 132.36 (d, J = 7.7 Hz), 131.26 (s), 131.02 (s), 128.15 (d, J = 11.0 Hz), 124.87 (s), 124.61 (d, J = 3.3 Hz), 123.71 (s), 121.26 (s), 116.29 (d, J = 21.4 Hz), 50.15 (s), 14.98 (s), 11.69 (s); HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M + H] C₂₁H₁₆BrFN₅Oの計算値452.0517, 実測値452.0542.

【0136】

（Ｒ）－５－（６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－エチル－１，２，４－オキサジアゾール（ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅ）

【0137】

【化33】

（Ｒ）－エチル６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレートから、標題化合物を調製した。Ｎ’－ヒドロキシプロピオンイミドアミド（０．５８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をＮａＨ（０．０４３ｇ、１．７０ｍｍｏｌ）で１時間の間室温でＴＨＦ中にて処理した。次いで、ＴＨＦ中に溶解させたエチルエステル（０．６５８ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を滴下により３０分間添加した。４時間後に、反応が完了した。粗残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン３：２）によって精製することで、純粋な標題化合物が白色の粉末として得られた（０．５８ｇ、８３％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.06 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 16.6, 8.1 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 1H), 7.40 (dd, J = 5.6, 3.5 Hz, 3H), 7.29 (s, 1H), 6.71 (Q, J = 12.5, 7.1 Hz, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.83 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.40 (d, J = 3.4 Hz, 3H), 1.38 (t, J = 5.9 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 171.90 (s), 139.51 (s), 139.18 (s), 136.18 (s), 135.32 (s), 134.73 (s), 133.91 (s), 132.38 (s), 130.81 (s), 130.67 (s), 130.16 (s), 129.47 (s), 129.20 (s), 128.34 (s), 127.14 (s), 125.15 (s), 122.02 (s), 121.86 (s), 81.37 (s), 79.90 (s), 50.28 (s), 19.76 (s), 15.11 (s), 11.53 (s). %). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M + H] ⁺ C₂₄H₁₈ClN₅Oの計算値428.127; 実測値428.129.

【0138】

（Ｒ）－３－シクロプロピル－５－（８－エチニル－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－１，２，４－オキサジアゾール（ＭＹＭ－Ｖ－２８）

【0139】

【化34】

１時間水素化ナトリウム（鉱物油中６０％分散、０．０６８ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）で処理した後、Ｎ’－ヒドロキシシクロプロパンカルボキシイミドアミド（１．０３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のエチル（Ｒ）－８－エチニル－６－（２－フルオロフェニル）－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）の溶液の撹拌溶液に添加した。混合物を次いで、出発材料の消費まで２時間の間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（１０％ＮａＣｌ水溶液２×５０ｍＬ）、乾燥させた（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、純粋なＭＹＭ－Ｖ－２８が白色の粉末として得られた（８９６ｍｇ、８２％）。ＭＹＭ－Ｖ－２８についてはＲ_ｆ＝０．６、およびＳＨ－２’Ｆ－Ｒ－ＣＨ_３についてはＲ_ｆ＝０．４（シリカゲル、７０％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン）。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.07 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 7.51 - 7.40 (m, 2H), 7.26 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 6.68 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.18 (s, 1H), 2.16 (ddd, J = 16.5, 8.2, 3.9 Hz, 1H), 1.34 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 1.16 (dd, J = 11.9, 9.7 Hz, 2H), 1.07 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ 172.67 (s), 170.43 (s), 163.76 (s), 160.10 (d, J = 250.9 Hz), 139.08 (s), 136.24 (s), 135.52 (s), 134.24 (s), 133.70 (d, J = 20.2 Hz), 132.30 (d, J = 8.7 Hz), 131.19 (s), 129.38 (d, J = 2.6 Hz), 128.24 (d, J = 5.1 Hz), 125.05 (s), 124.58 (d, J = 3.3 Hz), 123.01 (s), 122.24 (s), 121.95 (s), 116.29 (d, J = 21.4 Hz), 81.29 (s), 79.97 (s), 50.15 (s), 15.02 (s), 7.76 (s), 6.90 (s). HRMS (ESI/IT-TOF) m/z: [M+H] + C₂₅H₁₈N₅OFの計算値424.15681.

【0140】

（Ｒ）－５－（６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－メチル－１，２，４－オキサジアゾール（ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｒ）

【0141】

【化35】

エチル（Ｒ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）中に室温で溶解させた。別のフラスコの中で、Ｎ’－ヒドロキシメチルカルボキシイミドアミド（９．６ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（鉱物油中６０％分散、２．６ｍｍｏｌ）を室温でＴＨＦ（２０ｍＬ）中にて混合し、１時間の間撹拌した。エチル（Ｒ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレートの溶液を次いで、Ｎ’－ヒドロキシメチルカルボキシイミドアミドおよびＮａＨの懸濁液に滴下により室温で添加し、４時間の間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニタリングした。反応物をクエンチするため、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２５ｍＬ）を添加し、続いて、水（１２ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（１０％ＮａＣｌ水溶液３×５０ｍＬ）、乾燥させた（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、純粋なＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｒが白色の粉末として得られた（８５０ｍｇ、８３％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.06 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 1H), 7.40 (dd, J = 5.8, 3.4 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 37.0 Hz, 2H), 6.73 (q, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.47 (s, 3H), 1.39 (d, J = 6.6 Hz, 3H). ¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ 170.74 (s), 167.42 (s), 165.82 (s), 139.43 (s), 139.21 (s), 136.23 (s), 135.32 (s), 134.66 (s), 133.84 (s), 132.36 (s), 130.80 (s), 130.70 (s), 130.12 (s), 129.46 (s), 129.12 (s), 127.11 (s), 122.05 (s), 121.90 (s), 81.35 (s), 79.95 (s), 50.21 (s), 15.10 (s), 11.66 (s).

【0142】

（Ｓ）－５－（６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－イル）－３－メチル－１，２，４－オキサジアゾール

【0143】

【化36】

エチル（Ｓ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレート（１ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）中に室温で溶解させた。別のフラスコの中で、Ｎ’－ヒドロキシメチルカルボキシイミドアミド（９．６ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（鉱物油中６０％分散、２．６ｍｍｏｌ）を室温でＴＨＦ（２０ｍＬ）中にて混合し、１時間の間撹拌した。エチル（Ｓ）－６－（２－クロロフェニル）－８－エチニル－４－メチル－４Ｈ－ベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，５－ａ］［１，４］ジアゼピン－３－カルボキシレートの溶液を次いで、Ｎ’－ヒドロキシメチルカルボキシイミドアミドおよびＮａＨの懸濁液に滴下により室温で添加し、４時間の間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニタリングした。反応物をクエンチするため、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２５ｍＬ）を添加し、続いて、水（１２ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（１０％ＮａＣｌ水溶液３×５０ｍＬ）、乾燥させた（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、純粋なＰＭ－ＦＲ－ＩＩＩ－５７Ｓが白色の粉末として得られた（８９０ｍｇ、８７％）。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.06 (s, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 1H), 7.39 (dd, J = 8.3, 4.5 Hz, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 6.72 (q, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.39 (d, J = 6.9 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ 170.74 (s), 167.44 (s), 165.84 (s), 139.46 (s), 139.22 (s), 136.23 (s), 135.31 (s), 134.70 (s), 133.87 (s), 132.39 (s), 130.80 (s), 130.70 (s), 130.14 (s), 129.50 (s), 127.12 (s), 124.98 (s), 122.02 (s), 121.88 (s), 81.37 (s), 79.92 (s), 50.22 (s), 15.08 (s), 11.66 (s).

【0144】

Ｙ迷路交替タスク
若齢動物および慢性ストレス手順：８週齢のＣ５７／Ｂｌ６マウス、雄性および雌性を正常の収容条件（午前７時に開始する１２時間点灯サイクル／水および食物は無制限）に１週間保つ。この週の間、動物を単一収容し、実験者への不安様応答を低減するように取り扱う。作業記憶欠損を誘発するため、マウスを慢性拘束ストレスプロトコール（ＣＲＳ）にかける。それらを、５０ｍＬのＦａｌｃｏｎ（登録商標）チューブの中に、１日２回、１時間の間、それらの概日周期サイクルの間入れた。ストレスの出現の時間は、予測性を回避するため、毎日無作為化する。ＣＲＳは、試験日には適用しない。Ｙ迷路試験は、最後のストレッサーの後、最低１５時間で起こる。

【0145】

若齢対老齢動物試験：１０カ月齢のＣ５７／Ｂｌ６雄性マウスを、それらが２２カ月齢に達するまで、正常の収容条件（午前７時に開始する１２時間点灯サイクル／水および食物は無制限）に保つ。８週齢動物の若い方のコホートを実験のための対照として使用する。試験する前、実験者に対する不安様応答を低減するように動物を取り扱う。下に記載されている通りのＹ迷路試験を使用して、正常な加齢誘発作業記憶欠損を判定する。

【0146】

プロトコール：マウスを最初に、連続した２日の間、１０分の自由探索セッション（１日当たり１つのセッション）にわたって、Ｙ迷路器具および遠位合図（distal cues）に馴化させる。翌日、動物は、３０秒の試行間の間隔（ＩＴＩ）によって分けられる７つの連続的試行からなる訓練セッションを行い；この訓練セッション中、マウスを実験手順（ドアの開閉およびゴールアームへの拘束）に慣れさせる。各試行のため、マウスは、３０秒のＩＴＩの間スタートボックスにとどまる。次いで、ドアを開け、マウスを２つのゴールアームの１つに自由に進入させ；選択アームを閉じ、該選択を記録する。選択アームへの３０秒の拘束期間後、マウスを取り出し、第１の試行と同一の第２の試行のためにスタートボックスに戻し、この手順を試行シリーズにわたって反復する。

【0147】

ＩＴＩを９０秒に延長したことを除いて、訓練セッションにおいて使用された同じ一般的手順を２４時間後に実践する。この実験のため、試験の開始３０分前に、動物にビヒクルまたは薬物をｉ．ｐ．で急性的に注射する。該シリーズにわたって交替への意欲の最終的進行性喪失と記憶欠損を分離して考えるため、より短いＩＴＩ（５秒）によって７回目の試行と分けられる８回目の試行を該シリーズに加える。８回目の試行で交替し損なった全ての動物を除外する。平均交替率を算出し、百分率（動物によって行われた交替の数／可能な交替の合計数×１００）±ＳＥＭで表す。タスク全体の間の交替の百分率は、作業記憶能力の指標として考えられる（５０％のランダム交替率（50% of being a random alternation rate））。階乗（Factorial）ＡＮＯＶＡをデータに適用することで、群間の差異を明らかにする。ＡＮＯＶＡが群効果に有意であるならば（ｐ＜０．０５）、シェッフェ事後分析を行うことで、どの群が互いに異なるかを同定する。

【0148】

薬物調製および投与：全ての薬物を、８５％ Ｈ_２Ｏ、１４％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％ツイーン８０（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有するビヒクル溶液中に希釈する。作業溶液を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、各動物の体重に調整してｉ．ｐ．で投与する。使用される用量は、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇのいずれかである。全てのＹ迷路実験のため、試験の開始３０分前に、動物にビヒクルまたは薬物をｉ．ｐ．で急性的に注射する。

【0149】

ＧＬ－ＩＩＩ－６８を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＧＬ－ＩＩＩ－６８を注射し（３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．、試験３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、処置介入（intervention）の全体的な効果を見出した（ｐ＜０．００１）。ストレスは交替率を有意に低減し（ｐ＜０．００１）、この機能障害は、１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ－ＩＩＩ－６０での処置によって逆転された（＄ｐ＜０．０５）（図１）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0150】

ＭＹＭ－ＩＩＩ－２９を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図２Ａおよび２Ｂ）は、群間の有意な差異を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１２）＝７．３、ｐ＜０．０１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して、交替率の有意な低減を誘発する（ｐ＜０．０１）ことを示す。この効果は、試験の３０分前のＭＹＭ－ＩＩＩ－２９、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（ｐ＜０．０５）。ＭＹＭ－ＩＩＩ－２９は、１０ｍｇ／ｋｇで有意な認知促進効果を有する（ｐ＜０．０５、対照－ビヒクル群と比較して）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0151】

ＦＲ－ＩＩＩ－１７を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：慢性拘束ストレスにかけられたマウスにＦＲ－ＩＩＩ－１７を注射し（０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。変動の分析は、全体的な効果を見出し（ｐ＜０．００１）、事後分析は、ストレスは交替率を有意に低減したこと（^＊＊＊ｐ＜０．０００１）を明らかにし、この欠損は、０．３ｍｇ／ｋｇ（＄＄ｐ＜０．０１）、１ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）または３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０５）のＦＲ－ＩＩＩ－１７によって有意に逆転された（図４）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0152】

ＰＭ－ＩＩ－２６を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図５Ａおよび５Ｂ）は、ＣＲＳによる損なわれた交替を示し、これは、１０ｍｇ／ｋｇでのＰＭ－ＩＩ－２６処置によって逆転され（ｐ＜０．００１）、傾向は３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．１）で観察された。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0153】

ＭＹＭ－ＩＩＩ－４１を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＭＹＭ－ＩＩＩ－４１を注射し（１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、処置介入の全体的な効果を見出した（ｐ＜０．０００１）。ストレスは、交替率を有意に低減し（ｐ＜０．００１）、この機能障害は、５ｍｇ／ｋｇのＭＹＭ－ＩＩＩ－４１（ｐ＜０．０１）および１０ｍｇ／ｋｇのＭＹＭ－ＩＩＩ－４１を用いる処置によって逆転された（ｐ＜０．０５）（図６）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0154】

ＧＬ－ＩＶ－０３を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図７）は、群間の有意な差異を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（３，１４）＝９．７、ｐ＜０．００１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して交替率の有意な低減を誘発する（ｐ＜０．０１）ことを示す。この効果は、試験の３０分前のＧＬ－ＩＶ－０３、３ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０１）の急性投与によって逆転される。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0155】

ＧＬ－Ｉ－６５を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図８および９）は、群間の有意な差異を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，２８）＝５．３、ｐ＜０．０５）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して交替率の有意な低減を誘発する（ｐ＜０．０１）ことを示す。この効果は、試験の３０分前のＧＬ－Ｉ－６５、１０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（ｐ＜０．０５）（図８）。同様の改善が老齢マウスにおいて観察され、ここで、試験の３０分前のＧＬ－Ｉ－６５（１０ｍｇ／ｋｇ）の急性投与は、老齢マウスにおける交替率を改善した（ｐ＜０．０５）（図９）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0156】

ＧＬ－ＩＩＩ－６０を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスに、ＧＬ－ＩＩＩ－６０を注射し（３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、処置介入の全体的な効果を見出した（ｐ＜０．００１）。ストレスは、交替率を有意に低減し（ｐ＜０．００１）、この機能障害は、１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ－ＩＩＩ－６０（＄＄ｐ＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇを用いる処置によって逆転された（＄ｐ＜０．０５）（図１０）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0157】

ＧＬ－ＩＩ－３３を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＧＬ－ＩＩ－３３を注射し（３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、処置介入の全体的な効果を見出した（ｐ＜０．００１）。ストレスは、交替率を有意に低減し（ｐ＜０．００１）、この機能障害は、１０ｍｇ／ｋｇのＧＬ－ＩＩ－３３（＄ｐ＜０．０５）を用いる処置によって逆転されたが、３ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇでは逆転されなかった（図１１）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0158】

ＭＹＭ－ＩＩＩ－４３を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＭＹＭ－ＩＩＩ－４３を注射し（ｉ．ｐ．注射による３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、操作の有意な全体的な効果を見出し（ｐ＜０．００１）、事後検定は、対照と比較してストレスの有意な効果を明らかにし（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、これは、３ｍｇ／ｋｇ（＄＜０．０５）、１０ｍｇ／ｋｇ＄＄（＄＄ｐ＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇ（＄＄ｐ＜０．０１）でのＭＹＭ－ＩＩＩ－４３の投与によって逆転された（図１２）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0159】

ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅを用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：データ分析（図１３）は、群間の有意な差異を示した（ＡＮＯＶＡ：Ｆ（２，１１）＝１０、ｐ＜０．０１）。フィッシャーＰＬＳＤ事後分析は、慢性拘束ストレス（ＣＲＳ）が、対照ビヒクルマウスと比較して交替率の有意な低減を誘発する（ｐ＜０．０５）ことを示す。この効果は、試験の３０分前のＰＭ－ＩＩ－８４Ｅ、３０ｍｇ／ｋｇの急性投与によって逆転される（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0160】

ＭＹＭ－ＩＶ－４７を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＭＹＭ－ＩＶ－４７を注射し（ｉ．ｐ．注射による３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、操作の有意な全体的な効果を見出し（ｐ＜０．００１）、事後検定は、対照と比較してストレスの有意な効果を明らかにし（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、これは、１０ｍｇ／ｋｇでのＭＹＭ－ＩＶ－４７（＄＄＜０．０１）および３０ｍｇ／ｋｇのＭＹＭ－ＩＶ－４７ rate（＄ｐ＜０．０５）の投与によって有意に逆転され、３ｍｇ／ｋｇで有意な効果はなかった（図１４）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0161】

ＭＹＭ－Ｖ－２８を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＭＹＭ－Ｖ－２８を注射し（ｉ．ｐ．注射による３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、操作の有意な全体的な効果を見出し（ｐ＜０．０５）、事後検定は、対照と比較してストレスの有意な効果を明らかにし（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、これは、１０ｍｇ／ｋｇ（＄＜０．０５）および３０ｍｇ／ｋｇ（＄ｐ＜０．０５）でのＭＹＭ－Ｖ－２８の投与によって有意に逆転されたが、３ｍｇ／ｋｇでは逆転されなかった（図１６）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0162】

ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｒを用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｒを注射し（ｉ．ｐ．注射による３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、操作の有意な全体的な効果を見出し（ｐ＜０．０１）、事後検定は、対照と比較してストレスの有意な効果を明らかにし（^＊＊ｐ＜０．０１）、これは、１０ｍｇ／ｋｇでのＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｒの投与によって有意に逆転された（＄＄＜０．０１）が、３ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇでは逆転されなかった（図１７）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0163】

ＦＲ－ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｓを用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＦＲ－ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｓを注射し（ｉ．ｐ．注射による３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、操作の有意な効果を見出し（ｐ＜０．０１）、事後検定は、対照と比較してストレスの有意な効果を明らかにした（^＊＊＊ｐ＜０．００１）。これは、１０ｍｇ／ｋｇでのＦＲ－ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｓの投与によって有意に逆転され（＄＜０．０５）、３０ｍｇ／ｋｇでのＦＲ－ＰＭ－ＩＩＩ－５７Ｓの傾向レベル効果もあった（†＜０．１０）（図１８）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0164】

ＭＹＭ－ＩＶ－４６を用いる処置後のＹ迷路交替タスクの結果：ＣＲＳにかけられたマウスにＭＹＭ－ＩＶ－４６を注射し（ｉ．ｐ．注射による３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ、試験の３０分前）、Ｙ迷路における空間作業記憶について試験した。ＡＮＯＶＡは、操作の有意な全体的な効果を見出し（ｐ＜０．００１）、事後検定は、対照と比較してストレスの有意な効果を明らかにし（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、これは、１０ｍｇ／ｋｇでのＭＹＭ－ＩＶ－４６の投与によって有意に逆転された（＄＄＜０．０１）。３０ｍｇ／ｋｇのＭＹＭ－ＩＶ－４６で、交替率に対する傾向レベル効果があり（†ｐ＜０．１）、３ｍｇ／ｋｇで有意な効果はなかった（図１９）。これらの結果は、認知欠損を逆転させるというこの化合物の潜在的な効能を示唆する。

【0165】

他の認知試験におけるアルファＰＡＭの効果
モリス水迷路アッセイのための手順：ラットの認知能力に影響する化合物の潜在性は、２つの良く検証された挙動モデルにおいて判定することができる。最初に、モリス水迷路実験を、２２±１℃の水で３０ｃｍの高さに充填された２ｍ径の円形プールにおいて行う。避難プラットフォーム（１５ｃｍ×１０ｃｍ）を水面２ｃｍ下に沈める。全ての実験詳細は、Ｓａｖｉｃら（Int. J. Neuropsychopharmacol. 2009, 12, 1179-1193）に記載されている通りである。連続した５日の各々で、４つの試行からなる１つの水泳ブロックをラットに与える。各試行のため、ラットを４つの疑似無作為に決定された開始位置の１つで水の中に入れる。一旦ラットが避難プラットフォームを発見して乗ると、プラットフォーム上に１５秒間とどまることを許す。ラットが１２０秒内にプラットフォームを見つけ損なったならば、ラットを実験者によってプラットフォームに導く。習得段階中、処置を水泳ブロックの前に１日１回適用する。第６日目に、ラットにプラットフォームのない無処置プローブ試験（６０秒）を与える。プローブ試験を新規な最も遠位の位置から開始する。習得試行中に追跡するために選択される従属変数は、避難潜時（秒）、移動合計距離（ｍ）、路効率（最も短い可能な路長対実際の路長の比）、周辺輪における水泳距離の％および平均速度（ｍ／ｓ）である。プローブ試験における選択パラメータは、標的ゾーンにおける水泳距離（秒）および周辺輪における水泳距離の％である。２ｍｇ／ｋｇのジアゼパムは対照薬物である。化合物の用量は、それらが、Ｓｔａｍｅｎｉｃら（Eur. J. Pharmacol. 2016, 791, 433-443）に表されている徹底的な薬物動態学的および電気生理学的データの分析に従って、それぞれα５ＧＡＢＡＡＲの軽度、中程度および強度のポジティブモジュレーションを引き出すように選択される。モリス水迷路における習得日からのデータを、各ラットについて平均化し（合計データ／１日当たりの試行の合計数）、反復測定として日数を用いる反復測定（因子：処置および日数）を用いる二元配置ＡＮＯＶＡを使用して分析する。有意な相互作用の場合において、別々の一元配置ＡＮＯＶＡを行うことで、因子日数の個々のレベル内での処置の影響を判定する。一元配置ＡＮＯＶＡを使用して、プローブ試験からのデータを判定する。

【0166】

社会的新規性判別（ＳＮＤ）アッセイのための手順：ＳＮＤ試験は、成体ラットの社会調査時間を、熟知したおよび新規の若年ラットで比較する。試験は、成体対象に対する２つの連続した若年提示期間：期間１（Ｐ１）および期間２（Ｐ２）からなる。Ｐ１の始めに、１匹の若年を成体用ホームケージに入れ、若年を調査する成体によって費やされた時間（肛門生殖器を嗅ぐこと、舐めること、近くで追いかけること、および触ること（pawing））を手動で５分間記録する。Ｐ２中、同じ若年および第２の新規な若年を成体と一緒にケージに入れ、各若年を調査する成体によって費やされた時間を独立して３分間測定する。若年ラットの異なる対を、試験される各成体に示す。手動のスコア化を盲検方式で行う。Ｐ１とＰ２との間に３０分の遅延があり、それらのＳＮＤは低いと予想されたので、ＳＮＤは、対照ラットにおいて、適用されたパラメータ操作によって計画的に損なわれた。ＳＮＤにおけるこのように誘発された機能障害に対する化合物の影響を検査する。Ｐ１の２０分前に以下の処置の１つを受けるラットの５つの群がある：溶媒、１．５ｍｇ／ｋｇのジアゼパム、または１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物。Ｐ２中に、熟知した（Ｔｆ）および新規な（Ｔｎ）若年を調査する時間の量を手動でスコア化し、判別指標（Ｔｎ－Ｔｆ／Ｔｎ＋Ｔｆ）を算出する。Ｐ１およびＰ２中の合計探索時間も手動で記録する。

【0167】

強制水泳試験
強制水泳試験アッセイ（ＦＳＴ）のための手順
動物：８週齢のＣ５７Ｂｌ／６雄性マウスを、正常の収容条件下で（午前７時に開始する１２時間点灯サイクル／水および食物は無制限）１週間群収容する（４～５匹のマウス／ケージ）。この週の間、実験者に動物を馴化させるとともに行動試験中の動物の不安様応答を低減するように動物を取り扱う。

【0168】

薬物調製および投与：全ての薬物を、８５％ Ｈ_２Ｏ、１４％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％ツイーン８０（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有するビヒクル溶液中に希釈する。作業溶液を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、各動物の体重に調整してｉ．ｐ．で投与する。使用される用量は、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのいずれかである。全てのＦＳＴ実験のため、動物にビヒクルまたは試験化合物をｉ．ｐ．で注射する。

【0169】

プロトコール：マウスを強制水泳試験（ＦＳＴ）において試験した（抗うつ効力の判定のために使用される絶望様行動の尺度）。潜在的な抗うつ化合物を試験するための分野における標準的方法の通りに、動物に３回（試験の２４時間前、２０時間前および１時間前）亜慢性的に注射する。

【0170】

最後の注射の１時間後、マウスを水（２５ｃｍ、２５～２６℃）で充填された不可避な透明タンクに入れ、ここで、それらは底に触れず、タンクから飛び出せない。動物を６分の期間の間記録し、タンクにおける不動時間の手動計数を、マウス処置履歴が分からない実験者によって２～６分の期間の間測定する。不動は、浮いたままでいるための最小量の動きとして定義される。ＦＳＴにおける不動を低減した化合物は、潜在的な抗うつ作用を有すると考えられる。

【0171】

高架式十字迷路（ＥＰＭ）
ＥＰＭは、不安様行動を判定するために前臨床げっ歯類モデルにおいて共通して使用される。簡潔には、マウスを、床から５５ｃｍに上げられた十字形状迷路に入れ、２つのオープンアームは向き合っており、２つのクローズドアームは向かい合っている。試験中、マウスを個々に、オープンアームに向いている迷路の中心に入れ、１０分間探索させておく。試験の全体にわたって、天井に取り付けられたデジタルカメラを使用して、各マウスの探索を記録する。探索の１０分後、カメラを止め、マウスを迷路から取り出し、それのホームケージに戻す。Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎ ＸＴ１４ソフトウェアを使用して、ビデオを分析する。考えられる特定のパラメータは、（［（オープンアームにおいて費やされた合計時間）／（オープンアームにおいて費やされた合計時間＋クローズドアームにおいて費やされた合計時間）］^＊１００）を使用して算出されるオープンアームにおいて費やされた％時間、およびオープンアーム進入の数である。

【0172】

ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅを用いるＥＰＭにおける結果。ＰＭ－ＩＩ－８４Ｅ（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、試験の３０分前）およびビヒクル対照で処置されたマウスを高架式十字迷路において不安様行動について試験した。ｔ試験は、オープンアームへの進入のパーセント（^＊ｐ＜０．０５）およびオープンアームにおいて費やされた時間のパーセント（^＊＊ｐ＜０．０１）に対するＰＭ－ＩＩ－８４Ｅの有意な効果、ならびにオープンアームにおける移動距離のパーセントに対する傾向レベル効果（†ｐ＜０．１０）（ｎ＝１群当たり６）を見出し、抗不安特性を示唆した（図１５）。

【0173】

ＦＲ－ＩＩＩ－１７を用いるＥＰＭにおける結果。ＦＲ－ＩＩＩ－１７（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、試験の３０分前）およびビヒクル対照で処置されたマウスを高架式十字迷路において不安様行動について試験した。ｔ試験は、ＦＲ－ＩＩＩ－１７がオープンアームにおける％時間、％移動距離および％進入を有意に増加させることを見出し（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１）（ｎ＝１群当たり６）、抗不安特性を示唆した（図２０）。

【0174】

自発運動活性
試験化合物に関するホームケージ自発運動活性変化は、薄明かり状態における動物の動きを判定するとともに異なる化合物の潜在的な鎮静効果を検出するために定量化することができる。上からのビデオ記録を可能にするために寝床および蓋を用いずに、マウスをそれらのホームケージ（２８．２×１７．１ｃｍ）と同様の清潔なケージに入れる。ＡＮＹ－Ｍａｚｅ（商標）追跡ソフトウェア（バージョン４９９ｚ）を使用して、追跡を行うとともに移動距離（３０分のセッション）を分析することで、ホームケージ環境における自発運動活性を判定する。動物は、試験の１時間前に単回用量の化合物またはビヒクル溶液を受ける。

【0175】

薬物調製および投与：全ての薬物を、８５％ Ｈ２Ｏ、１４％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％ツイーン８０（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有するビヒクル溶液中に希釈する。作業溶液を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製し、各動物の体重に調整してｉ．ｐ．で投与する。使用される用量は、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのいずれかである。全ての自発運動活性実験のため、動物に試験の始まる１時間前にビヒクルまたは試験化合物をｉ．ｐ．で急性的に注射する。

【0176】

運動協調性
ロータロッド試験をマウスロータロッド（Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ、Ｃｏｍｅｒｉｏ、Ｉｔａｌｙ）上で行うことで、１５ｒｐｍで回転するロッド上に自身を維持するという動物の能力を観察する。試験の前日、マウスを３つのセッションにおいて続けて訓練し、各セッションは１８０秒続き、間に少なくとも３０分の休止がある。翌日、選択がなされ、落下することなくロッド上に自身を１８０秒間維持するという基準を満たすマウスを、２時間後に開始する試験に含む。雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、溶媒（ＳＯＬ）または化合物の経口適用の２０分後、１時間後および３時間後に試験する。ロータロッドから落ちるまでの潜時を実験者によって手動で記録する。化合物の剤形を、超音波処理の助けにより、ＳＯＬ（８５％蒸留水、１４％プロピレングリコールおよび１％ツイーン８０）中にそれらを希釈／懸濁させることによって調製する。適切な体積の処置物を胃内プローブによって適用する。実験のグラフィック解釈をＳｉｇｍａプロット１２（Ｓｙｓｔａｔ、ＵＳＡ）において行う。

【0177】

電気生理
手順Ａ：哺乳動物細胞のトランスフェクションおよび電気生理学的記録。哺乳動物発現ベクターにおけるＧＡＢＡ_Ａ受容体サブタイプのための全長ｃＤＮＡ（寛大にも、Ｄｒ．Ｒｏｂｅｒｔ Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＤｒ．Ｄａｖｉｄ Ｗｅｉｓｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ａｎｔｏｎｉｏ、ＴＸによって提供された）を、ヒト胎児由来腎臓細胞株ＨＥＫ－２９３Ｔ（ＧｅｎＨｕｎｔｅｒ、Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ、ＴＮ）にトランスフェクトした（Chestnut et al, 1996, J. Immunol. Methods 193, 17-27）。全てのサブタイプは、ヒトクローンであったα２を除いてラットクローンであった。細胞をダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）プラス１０％ウシ胎児血清、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン中で維持した。

【0178】

リン酸カルシウム沈殿を使用して、ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を一過性にトランスフェクトした。ＧＡＢＡ_Ａ受容体サブタイプｃＤＮＡをコード化するプラスミドを、各々２μｇの１：１：１比（α：β：γ）で細胞に添加した。３１。ポジティブにトランスフェクトされた細胞の同定のため、表面抗体ｓＦｖをコード化するｃＤＮＡを含有するプラスミドｐＨｏｏｋ－１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ ＮＹ）１μｇも、細胞にトランスフェクトした。１１。３％ ＣＯ２での４～６時間のインキュベーションに続き、細胞をＢＢＳ緩衝液（５０ｍＭ ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ－ビス［２－ヒドロキシエチル］－２－アミノエタンスルホン酸）、２８０ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４）中の１５％グリセロール溶液で３０秒間処置した。ｐＨｏｏｋ発現のための選択手順を１８～５２時間後に行った。細胞を継代し、ｐＨｏｏｋ抗体に対する抗原でコーティングされた磁気ビーズ３～５μＬ（およそ６×１０５個のビーズ）と３０～６０分間混合した。１１。磁気スタンドを使用して、ビーズでコーティングされた細胞を単離した。選択された細胞を、補充されたＤＭＥＭ中に再懸濁し、ポリＬ－リジンおよびコラーゲンで処理されたガラスカバースリップ上に平板培養し、翌日に記録のために使用した。

【0179】

細胞を全細胞記録構成において－５０ｍＶでパッチクランプした。浴溶液は、ｐＨ＝７．４および２９５～３０５ｍＯｓｍに調整された容積モル浸透圧濃度で、（ｍＭで）１４２ ＮａＣｌ、８．１ ＫＣｌ、６ ＭｇＣｌ２、１ ＣａＣｌ２、および１０ ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）からなる。記録電極に、ｐＨ＝７．４および２９５～３０５ｍＯｓｍに調整された容積モル浸透圧濃度で、（ｍＭで）１５３ ＫＣｌ、１ ＭｇＣｌ２、５ Ｋ－ＥＧＴＡ（エチレングリコール－ビス（β－アミノエチルエーテルＮ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’－テトラアセテート）、および１０ ＨＥＰＥＳの溶液を充填する。ＧＡＢＡを、水において新鮮に作製または凍結されたストックからの浴溶液中に希釈する。化合物をＤＭＳＯ中に溶解させ、０．０１％の、細胞に適用された最も高いＤＭＳＯレベルで浴溶液中に希釈する。パッチピペットを５～１０ＭΩの抵抗まで２段階プラー（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ、日本）上のホウケイ酸ガラス（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｓａｒａｓｏｔａ、ＦＬ）から引く。ＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ＋化合物を含有する溶液を、コンピューター駆動のステッパモーター（ＳＦ－７７Ｂ、Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ、＜５０ｍｓのオープン先端交換時間）によって制御される３連式（3-barrelled）溶液送達装置を使用して、細胞に５秒間適用する。チャンバーを介する外液の連続的流れがある。電流をＡｘｏｎ ２００Ｂ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）パッチクランプ増幅器で記録する。

【0180】

プログラムＣｌａｍｐｆｉｔ（ｐＣｌａｍｐ９ ｓｕｉｔｅ、Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）およびＰｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して、全細胞電流を分析する。濃度反応データを４パラメータロジスティック式（電流＝［最小電流＋（最大電流－最小電流）］／１＋（１０（ｌｏｇＥＣ５０－ｌｏｇ［モジュレーター］）ｎ）でフィットし、ここで、ｎはＨｉｌｌ数を表す。各細胞についてのＧＡＢＡ単独に対する応答の百分率として表される電流を用いる正規化データに対して、全てのフィットを行う。

【0181】

手順Ｂ：ＧＡＢＡ_Ａ受容体サブタイプについての全長ｃＤＮＡをヒト胎児由来腎臓細胞株ＨＥＫ－２９３Ｔ中にトランスフェクトする。全てのサブタイプは、ヒトクローンであるα２を除いて、ラットクローンである。細胞を全細胞記録構成において－５０ｍＶでパッチクランプする。ＧＡＢＡを浴中に希釈し、化合物をＤＭＳＯ中に溶解させ、浴溶液中に希釈する。ＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ＋化合物を含有する溶液を細胞に５秒間適用する。Ａｘｏｎ ２００Ｂパッチクランプ増幅器を用いて、電流を記録する。各細胞についてのＧＡＢＡ単独に対する応答の百分率として表されるデータ電流に、データを正規化する。

【0182】

手順ＢによるＧＬ－ＩＩＩ－６８の電気生理学的解析：ヒト哺乳動物細胞をヒトα１β２γ３、α２β２γ３、α３β２γ３、α４β２γ３、またはα５β２γ３ＧＡＢＡ_Ａ受容体でトランスフェクトする。細胞を０．０３μＭから１００μＭの濃度の範囲にてＧＬ－ＩＩＩ－６８でインキュベートする。電流を５μＭのＧＡＢＡでの刺激によって誘発し、ＩｏｎＷｏｒｋｓ Ｂａｒｒａｃｕｄａ（登録商標）試験プラットフォームを使用して記録する。電流を、任意のアロステリックモジュレーターの非存在下で５μＭのＧＡＢＡによって誘発される電流に正規化する。ＧＡＢＡ^Ａ受容体の異なるサブタイプのＰＡＭ効果。５μＭのＧＡＢＡ単独によって生成される電流（１００％に設定）に相対して、電流の％を算出した（図２１）。ＥＣ_５０結果は下記に示されている。

【0183】

α１、α２、α３、α４α５、または受容体でトランスフェクトされた哺乳動物細胞におけるα１、α２、α３、α４またはα５でのＧＬ－ＩＩＩ－６８のＥＣ_５０

【0184】

【表1】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【国際調査報告】