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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-12
(54)【発明の名称】抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体及びその組成物並びに用途
(51)【国際特許分類】
A61K 47/68 20170101AFI20240905BHJP
A61K 31/357 20060101ALI20240905BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240905BHJP
C07D 493/22 20060101ALI20240905BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20240905BHJP
【ＦＩ】
A61K47/68
A61K31/357
A61K39/395 L
C07D493/22
A61P35/00
C07K16/28 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024515317
(86)(22)【出願日】2022-09-16
(85)【翻訳文提出日】2024-03-08
(86)【国際出願番号】 CN2022119214
(87)【国際公開番号】W WO2023041006
(87)【国際公開日】2023-03-23
(31)【優先権主張番号】202111085308.7
(32)【優先日】2021-09-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516089784
【氏名又は名称】チア タイ ティエンチン ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｃｈｉａ Ｔａｉ Ｔｉａｎｑｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．３６９ Ｙｕｚｈｏｕ Ｓｏｕｔｈ Ｒｄ．，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２２０６２ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100115794
【弁理士】
【氏名又は名称】今下 勝博
(74)【代理人】
【識別番号】100119677
【弁理士】
【氏名又は名称】岡田 賢治
(74)【代理人】
【識別番号】100160495
【弁理士】
【氏名又は名称】畑 雅明
(74)【代理人】
【識別番号】100173716
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 真理
(72)【発明者】
【氏名】チェン、ティアンシ
(72)【発明者】
【氏名】シュ、トンジェ
(72)【発明者】
【氏名】タン、シャオチー
(72)【発明者】
【氏名】フェン、ウェイウェイ
(72)【発明者】
【氏名】ヂャン、ゼンピン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076EE59
4C085AA26
4C085BB11
4C085CC23
4C085DD52
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BA16
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZB26
4H045AA11
4H045BA51
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA50
(57)【要約】
連結された抗体部分と、中間リンカー部分と細胞傷害性薬物部分とを含む抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体を提供する。提供される抗体薬物複合体には、優れた抗腫瘍活性又は／及び良い安全性が実現されている。提供される抗体薬物複合体は、がんの治療に用いることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する（式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる）抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物であって、前記抗体薬物複合体は、次の式ＩＩａで示される構造を含むことを特徴とする、抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【化1】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。）
【請求項2】
前記抗体薬物複合体は次の式ＩＩＩａで示される構造を含む、請求項１に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。【化2】
【請求項3】
前記抗体薬物複合体は次の式ＩＶで示される構造である、請求項１又は２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。【化3】
Ａｂは抗体部分を表し、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。）
【請求項4】
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から選ばれる、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項5】
前記抗体薬物複合体は次の式ＩＩＩａ－１で示される構造を含む、請求項１又は２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。【化4】
【請求項6】
前記抗体薬物複合体は次の式ＩＶ－１で示される構造である、請求項３に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。【化5】
【請求項7】
前記ｎは、２～４．８、２．６～４．８、３．５～４．８、４～４．８、２～４．５、２．６～４．５、３．５～４．５、４～４．５、３．５～４．２、３．５～４、４～４．２、７～８、７～７．９、７～７．６、７～７．５、７．１～８、７．１～７．９、７．１～７．６、７．５～８、７．６～８、又は７．６～７．９である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項8】
前記ｎは、約２．６、約４、約４．２、約４．８、約７、約７．１、約７．５、約７．６、約７．９又は約８である、請求項７に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項9】
前記Ａｂは抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項10】
前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１を含み、配列番号２で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２を含み、配列番号３で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、配列番号４で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１を含み、配列番号５で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２を含み、そして配列番号６で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含む、請求項９に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項11】
前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は前記重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項12】
前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０又は１１に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項13】
前記抗ＨＥＲ３抗体はパトリツマブである、請求項９に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項14】
前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、下記の特性、即ち、（ａ）ＨＥＲ３と結合する特性
（ｂ）ＨＥＲ３とリガンドとの結合を遮断する特性
（ｃ）ＨＥＲ３を発現する細胞でエンドサイトーシスを示す特性
（ｄ）ＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞に対して殺傷活性がある特性
（ｅ）バイスタンダー効果がある特性
の１つ又は複数の組み合わせを示す、請求項９～１３のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を含み、任意に、薬学的に許容される担体をさらに含む、医薬組成物。
【請求項16】
がんを治療するための薬物の製造における請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物又は請求項１５に記載の医薬組成物の用途であって、好ましくは、前記がんはＨＥＲ３陽性がんであり、好ましくは、前記がんは胆道がん、がん肉腫、食道がん、食道胃接合部がん、乳がん、胃がん、膵臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、腎がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮がん、黒色腫、咽頭がん、口腔がん、皮膚がん、肺がん、多形膠芽腫、膠芽腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、扁平上皮がん、腹膜がん、肝がん、唾液腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、肛門がん又は陰茎がんである、用途。
【請求項17】
必要とする患者に治療有効量の、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物又は請求項１５に記載の医薬組成物を投与することを含むがんの治療方法であって、好ましくは、前記がんはＨＥＲ３陽性がんであり、好ましくは、前記がんは胆道がん、がん肉腫、食道がん、食道胃接合部がん、乳がん、胃がん、膵臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、腎がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮がん、黒色腫、咽頭がん、口腔がん、皮膚がん、肺がん、多形膠芽腫、膠芽腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、扁平上皮がん、腹膜がん、肝がん、唾液腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、肛門がん又は陰茎がんである、方法。
【請求項18】
腫瘍細胞を前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物、又は前記医薬組成物と接触させることにより、腫瘍細胞を殺傷し又は腫瘍細胞の成長を抑制することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
式ＩＩＩで示される構造を有するリンカー－薬物中間体化合物である。【化6】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。）
【請求項20】
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から選ばれることを特徴とする請求項１９に記載のリンカー－薬物中間体化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、連結された抗体部分と、中間リンカー部分と細胞傷害性薬物部分とを含む抗体薬物複合体に関する。本発明は、また、がんを治療するための薬物の製造における前記抗体薬物複合体の用途に関する。
【背景技術】
【0002】
ＨＥＲ３（ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３、ヒト上皮成長因子受容体３）は、ＥｒｂＢ－３（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｅｒｂＢ－３、受容体型チロシンタンパク質キナーゼｅｒｂＢ－３）とも呼ばれ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＨＥＲ２／ｃ－ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ－３）及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ－４）を含むヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ／ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ）ファミリーのメンバーである。ＨＥＲ３は、細胞外リガンド結合ドメイン（ＥＣＤ）、ＥＣＤ内の二量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、タンパク質チロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）及びＣ末端リン酸化ドメインを有するが、細胞内チロシンキナーゼ活性を欠いている。
【0003】
ＨＥＲ３のリガンドであるニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ、ＮＲＧ、別称ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ、ヘレグリン、ＨＲＧ）は、ＨＥＲ３の細胞外ドメインと結合し、他のＨＥＲファミリーメンバーとの二量体化、及びその細胞内ドメインのリン酸転移作用を促進することにより、受容体によって媒介されるシグナル伝達経路を活性化する。ＨＥＲ３と他のＨＥＲファミリーメンバーの二量体形成はＨＥＲ３のシグナル伝達能力を拡張し、シグナルを多様化させる手段としてだけでなく、シグナルを増幅させる手段としても用いられる。例えば、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３ヘテロ二量体は、ＨＥＲファミリーメンバーの中で最も重要な有系分裂促進シグナルの１つを誘導する。ＨＥＲ３は、乳がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、肺がん、皮膚がん、膵臓がんを含む様々ながんで一般的に発現される。
【0004】
抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）は、治療用抗体の高い特異性と細胞傷害性薬物の高い殺傷活性を併せ持つ薬物であり、そのうち、治療用抗体部分と細胞傷害性薬物部分は中間のリンカー部分によって連結される。現在、世界で少なくとも１０種のＡＤＣ薬が販売されており、そのうち、ブレンツキシマブ ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ポラツズマブ ベドチン（ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）及びエンホルツマブ ベドチン（ｅｎｆｏｒｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）の抗体部分は、それぞれ、ＣＤ３０、ＣＤ７９ｂ及びネクチン－４（Ｎｅｃｔｉｎ－４）を標的とし、トラスツズマブ エムタンシン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）及びトラスツズマブ デルクステカン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ）の抗体部分は、ＨＥＲ２を標的とし、ゲムツズマブ オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）及びイノツズマブ オゾガマイシン（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）の抗体部分は、それぞれ、ＣＤ３３、ＣＤ２２を標的とし、サシツズマブ ゴビテカン（ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）の抗体部分は、ＴＲＯＰ２を標的とし、新たに承認されたベランタマブ マホドチン（ｂｅｌａｎｔａｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）及びロンカスツキシマブ テシリン（ｌｏｎｃａｓｔｕｘｉｍａｂ ｔｅｓｉｒｉｎｅ）は、それぞれ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９を標的とする。細胞傷害性薬物部分であるブレンツキシマブ ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ポラツズマブ ベドチン（ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、エンホルツマブ ベドチン（ｅｎｆｏｒｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）及びベランタマブ マホドチン（ｂｅｌａｎｔａｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）にはいずれも微小管に作用するアウリスタチン類（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）が用いられ、トラスツズマブ エムタンシン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）には微小管に作用するメイタンシノイド類（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）毒素分子が用いられ、ゲムツズマブ オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）及びイノツズマブ オゾガマイシン（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）にはＤＮＡに作用するカリケアミシン類（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎｓ）毒素分子が用いられ、トラスツズマブ デルクステカン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ）及びサシツズマブ ゴビテカン（ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）にはいずれもカンプトテシン類毒素分子が用いられ、ロンカスツキシマブ テシリン（ｌｏｎｃａｓｔｕｘｉｍａｂ ｔｅｓｉｒｉｎｅ）の方にはＤＮＡに作用するＰＢＤ二量体が用いられる。中間リンカー部分であるトラスツズマブ エムタンシン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ベランタマブ マホドチン（ｂｅｌａｎｔａｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）には非切断可能なリンカーが用いられ、他の８つの分子にはいずれも切断可能なリンカーが用いられる。
【0005】
エリブリン（Ｅｒｉｂｕｌｉｎ、次の式Ｉ）は、海洋天然物ハリコンドリンＢ（ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉｎ Ｂ）の合成類似体であり、微小管の成長期を抑制することができ、チューブリンに基づく抗有糸分裂メカニズムによって機能し、Ｇ２／Ｍ細胞周期の停止、有糸分裂で紡錘体の破壊を起こし、最終的に長期の有糸分裂の停止後にアポトーシスが起こる。現在、エリブリンは、転移性乳がん及び軟部組織肉腫の治療に承認されている。
【化1】
【0006】
ＡＤＣ薬は細胞傷害性低分子の高い効果及び特定の腫瘍細胞に対する抗体の高い選択性の２つの利点を組み合わせている。現在、より多くの適応症に対する効果的で低毒性のＡＤＣ薬を開発することがなおも必要である。
【発明の概要】
【0007】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）：
本発明は、抗体薬物複合体を提供し、ただし、抗体又はその抗原結合断片は細胞傷害性薬物エリブリン又はその誘導体と複合され、好ましくは、前記抗体又はその抗原結合断片はＨＥＲ３と特異的に結合する。
本発明は、抗体薬物複合体を提供し、ただし、抗体又はその抗原結合断片は細胞傷害性薬物エリブリン又はその誘導体と複合され、好ましくは、前記抗体又はその抗原結合断片はＨＥＲ３と特異的に結合する。
【0008】
本発明の一態様では、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。いくつかの実施形態では、抗体部分Ａｂとリンカー部分は特定の官能基によって連結され、当該抗体部分は抗原と特異的に結合できる。
【0009】
本発明の一態様では、一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ただし、細胞傷害性薬物部分Ｕと抗体部分Ａｂはリンカー部分Ｌによって複合される。いくつかの具体的な実施形態では、本発明によって提供される抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物において、各細胞傷害性薬物部分Ｕと抗体部分Ａｂは１つのリンカー部分Ｌによって複合される。本発明のリンカー部分Ｌは当分野で知られているいずれかの方法により抗体部分と連結されてもよく、好ましくは、リンカー部分と抗体部分はメルカプト基及び／又はアミノ基によって連結される。いくつかのより好ましい実施形態では、本発明のリンカー部分はメルカプト基によって抗体部分と連結される。
【0010】
本発明の一態様では、一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ただし、細胞傷害性薬物部分Ｕと抗体部分Ａｂはリンカー部分Ｌによって複合され、前記リンカー部分は切断可能なリンカー又は非切断可能なリンカーであってもよい。いくつかの実施形態では、本発明のリンカー部分は切断可能なリンカーであり、例えば、低ｐＨ分解型（ヒドラゾン結合、カーボネート結合などを含む）、プロテアーゼ分解型（ペプチド結合を含む）又は高グルタチオン濃度分解型（ジスルフィド結合を含む）などであってもよい。切断可能なリンカーは標的細胞内で切断することができ、これによって細胞傷害性薬物が放出される。また、いくつかの実施形態では、本発明のリンカー部分は非切断可能なリンカーであり、例えば、マレイミドカプロイル基などであってもよい。
【0011】
本発明の一態様では、一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ただし、抗体部分Ａｂは１つ又は複数の細胞傷害性薬物部分Ｕと複合され、細胞傷害性薬物は、例えば、アルカロイド類、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、アルキル化剤類、白金類などから選ばれてもよく、細胞傷害性薬物として好ましいのは微小管阻害剤類細胞傷害性薬物（メイタンシノイド類、アウリスタチン類、エリブリン類などを含む）又はＤＮＡに作用する細胞傷害性薬物（カリケアミシン類、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）類、ＰＢＤ（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ、ピロロベンゾジアゼピン）類、トポイソメラーゼＩ阻害剤類などを含む）である。
【0012】
いくつかの具体的な実施形態では、本発明によって提供される一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の細胞傷害性薬物部分Ｕは微小管阻害剤である。
【0013】
いくつかの具体的な実施形態では、本発明によって提供される一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の細胞傷害性薬物部分Ｕはエリブリン又はその誘導体である。
【0014】
いくつかの実施形態では、前記細胞傷害性薬物部分とリンカー部分は官能基によって連結され、腫瘍細胞内では、細胞傷害性薬物分子が遊離して、抗腫瘍効果を発揮する。
【0015】
本発明の一態様では、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ただし、前記抗体薬物複合体は、次の式ＩＩａで示される構造を含む。
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。
【化2】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。
【0016】
いくつかの実施形態では、前記抗体薬物複合体は、次の式ＩＩａ－１に記載の構造を含む。
【化3】
【0017】
本発明のいくつかの実施形態では、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ただし、前記－Ｕは式ＩＩａで示される構造であり、
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。いくつかの実施形態では、前記－Ｕは式ＩＩａ－１で示される構造である。
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。いくつかの実施形態では、前記－Ｕは式ＩＩａ－１で示される構造である。
【0018】
いくつかの実施形態では、本発明によって提供される一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、次の式ＩＩＩａで示される構造を含む。
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。
【化4】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。
【0019】
いくつかの実施形態では、前記抗体薬物複合体は、次の式ＩＩＩａ－１に記載の構造を含む。
【化5】
【0020】
いくつかの実施形態では、本発明によって提供される一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、次の式ＩＶで示される構造であり、
式中、
Ａｂは抗体部分を表し、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子又はＣ１～５アルキル基から独立的に選ばれる（好ましくは、Ｃ１～４アルキル基であり、例えば、Ｃ１～３アルキル基である）。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。一実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。
【化6】
Ａｂは抗体部分を表し、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子又はＣ１～５アルキル基から独立的に選ばれる（好ましくは、Ｃ１～４アルキル基であり、例えば、Ｃ１～３アルキル基である）。いくつかの実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。一実施形態では、前記Ｒａ及びＲｂは水素原子である。
【0021】
本発明の具体的な一実施形態では、次の式ＩＶ－１で示される抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、
式中、
Ａｂは抗体部分であり、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。
【化7】
Ａｂは抗体部分であり、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。
【0022】
いくつかの実施形態では、上記の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物において、前記ｎは、２～４．８、２．６～４．８、３．５～４．８、４～４．８、２～４．５、２．６～４．５、３．５～４．５、４～４．５、３．５～４．２、３．５～４、４～４．２、７～８、７～７．９、７～７．６、７～７．５、７．１～８、７．１～７．９、７．１～７．６、７．５～８、７．６～８、又は７．６～７．９である。いくつかの実施形態では、前記ｎは、約２．６、約４、約４．２、約４．８、約７、約７．１、約７．５、約７．６、約７．９又は約８である。
【0023】
本発明の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）で抗体部分と複合される細胞傷害性薬物の数は変わってもよく、これにより、本発明によって提供される抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物が不均一なものであってもよく、即ち、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、異なる数の細胞傷害性薬物が複合された抗体又はその抗原結合断片を含み、例えば、１分子の抗体又はその抗原結合断片に０分子（即ち、細胞傷害性薬物を含まない）、１分子、２分子、３分子、４分子、５分子、６分子、７分子、８分子又はより多い分子の細胞傷害性薬物が複合されている。
【0024】
上記の異なる数の細胞傷害性薬物が複合された抗体又はその抗原結合断片の比率を制御することにより、異なる薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を得ることができる。本明細書では、「ＤＡＲ」と「ｎ」は入れ替えて使用されてもよい。なお、前記ＤＡＲ又はｎは、ＡＤＣにおける細胞傷害性薬物と抗体又はその抗原結合断片の平均モル比であり、即ち、抗体又はその抗原結合断片の１分子あたりに複合されている細胞傷害性薬物の数である。例えば、「ＤＡＲは約４である」又は「ｎは約４である」とは、１分子あたりに異なる数の細胞傷害性薬物が複合されている抗体又はその抗原結合断片を含む（例えば、各抗体又はその抗原結合断片に０、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ又は８つの細胞傷害性薬物が複合されている）不均一な混合物であって、ただし細胞傷害性薬物と抗体又はその抗原結合断片の平均モル比は約４である抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を指す。同様に、「ＤＡＲは約８である」又は「ｎは約８である」とは、当該ＡＤＣで細胞傷害性薬物と抗体又はその抗原結合断片の平均モル比は約８であることを指す。
【0025】
一態様では、本発明によって提供される一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物において、Ａｂ（抗体部分）は腫瘍抗原と特異的に結合することができ、前記腫瘍抗原は、当分野で知られているいかなる腫瘍治療標的から選ばれてもよく、前記標的の非限定的な例は、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７９ｂ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＭＥＴ、ＲＥＴ、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１を含む。本発明のいくつかの実施形態では、式ＩＶ－１で示される抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、Ａｂ（抗体部分）は腫瘍抗原と特異的に結合することができ、前記腫瘍抗原は、当分野で知られているいかなる腫瘍治療標的から選ばれてもよく、前記標的の非限定的な例は、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７９ｂ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＭＥＴ、ＲＥＴ、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１を含む。
【0026】
いくつかの実施形態では、前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物において、Ａｂは抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片である。
【0027】
いくつかの実施形態では、前記Ａｂは抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片であり、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１で示されるアミノ酸配列の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１を含み、配列番号２で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２を含み、配列番号３で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、配列番号４で示されるアミノ酸配列の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１を含み、配列番号５で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２を含み、そして配列番号６で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含む。
【0028】
前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲのアミノ酸配列は、次の表Ｓ１で提供される。
【0029】
いくつかの実施形態では、本発明によって提供される一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎである抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の抗体部分は、次の表Ｓ１で示される配列を有するパトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）である。
【表1】
【0030】
いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７で示され、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８で示される。
【0031】
いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、免疫グロブリンの定常領域、又は前記定常領域の断片、類似体、バリアント若しくは誘導体をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、前記定常領域は、ヒト免疫グロブリン重鎖、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４又は他のクラスの免疫グロブリンの重鎖、好ましくは、ＩｇＧ１の重鎖に由来する。いくつかの実施形態では、前記定常領域は、本明細書に記載のいずれかの修飾、例えば、アミノ酸の挿入、欠失、置換又は化学修飾を含んでもよい。いくつかの実施形態では、前記定常領域は、エフェクター機能を変更する変異を含む。いくつかの実施形態では、前記定常領域のいずれかのアミノ酸残基がいずれかのアロタイプ（ａｌｌｏｔｙｐｅ）のアミノ酸残基によって置換されてもよい。
【0032】
いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号９で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片の重鎖のアミノ酸配列は配列番号９で示され、軽鎖のアミノ酸配列は配列番号１０で示される。
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＥＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＫＷＴＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）
ＤＩＥＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＶＬＹＳＳＳＮＲＮＹＬＡＷＹＱＱＮＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＥＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＫＷＴＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）
ＤＩＥＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＶＬＹＳＳＳＮＲＮＹＬＡＷＹＱＱＮＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）
【0033】
いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体は、次の抗体、即ち、パトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、セリバンツマブ（Ｓｅｒｉｂａｎｔｕｍａｂ）、エルゲムツマブ（Ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、デュリゴツズマブ（Ｄｕｌｉｇｏｔｕｚｕｍａｂ）、ＣＤＸ－３３７９、ルムレツズマブ（Ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）又はＧＳＫ２８４９３３０からなる群から選ばれる。いくつかの具体的な実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体はパトリツマブである。
【0034】
いくつかの実施形態では、前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、単離されたＣＤＲ領域、ｓｃＦｖ、ナノボディ又は融合タンパク質から選ばれる。
【0035】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、一般式がＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎであり、式中、Ａｂは修飾されてもよく、例えば、１つ又は複数のアミノ酸配列の変更、添加又は削除を含む。本明細書では、修飾後のＡｂにはその対応する抗原と特異的に結合する活性が保たれている。
【0036】
いくつかの実施形態では、本発明によって提供される抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、次に示す構造である。
いくつかのこのような実施形態では、前記ｎは、２～４．８、２．６～４．８、３．５～４．８、４～４．８、２～４．５、２．６～４．５、３．５～４．５、４～４．５、３．５～４．２、３．５～４、４～４．２、７～８、７～７．９、７～７．６、７～７．５、７．１～８、７．１～７．９、７．１～７．６、７．５～８、７．６～８、又は７．６～７．９である。いくつかの具体的な実施形態では、前記ｎは、約２．６、約４、約４．２、約４．８、約７、約７．１、約７．５、約７．６、約７．９又は約８である。
【化8】
【0037】
一態様では、本発明によって提供される一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、下記の特性、即ち、
（ａ）ＨＥＲ３と結合すること
（ｂ）ＨＥＲ３とリガンドとの結合を遮断すること
（ｃ）ＨＥＲ３を発現する細胞でエンドサイトーシスを示すこと
（ｄ）ＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞に殺傷活性があること
（ｅ）バイスタンダー効果があること
の１つ又は複数の組み合わせを示す。
（ａ）ＨＥＲ３と結合すること
（ｂ）ＨＥＲ３とリガンドとの結合を遮断すること
（ｃ）ＨＥＲ３を発現する細胞でエンドサイトーシスを示すこと
（ｄ）ＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞に殺傷活性があること
（ｅ）バイスタンダー効果があること
の１つ又は複数の組み合わせを示す。
【0038】
いくつかの実施形態では、前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物はヒトＨＥＲ３と結合する。
【0039】
いくつかの実施形態では、本発明によって提供される抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、異なるＨＥＲ３発現量の細胞で強いエンドサイトーシスを示しており、エンドサイトーシスの時間の増加につれてエンドサイトーシスされたＡＤＣの量を継続的に蓄積することができる。
【0040】
医薬組成物：
本発明の一態様では、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を含む医薬組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態では、本発明による抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。薬学的に許容される担体は、例えば、賦形剤、希釈剤、カプセル化材料、充填剤、緩衝剤又は他の試薬を含む。
本発明の一態様では、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を含む医薬組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態では、本発明による抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。薬学的に許容される担体は、例えば、賦形剤、希釈剤、カプセル化材料、充填剤、緩衝剤又は他の試薬を含む。
【0041】
用途：
本発明の一態様では、がんを治療するための薬物の製造における本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の用途を提供する。本発明の一態様では、がんを治療するための薬物の製造における本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物の用途を提供する。本発明の一態様では、がんを治療するための薬物の製造における本発明の医薬組成物の用途を提供する。
本発明の一態様では、がんを治療するための薬物の製造における本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の用途を提供する。本発明の一態様では、がんを治療するための薬物の製造における本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物の用途を提供する。本発明の一態様では、がんを治療するための薬物の製造における本発明の医薬組成物の用途を提供する。
【0042】
本発明の一態様では、がんを治療するための抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物、又は上記の医薬組成物を提供する。
【0043】
本発明の一態様では、がんの治療方法を提供し、当該方法は、必要とする患者に治療有効量の、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物又は本発明の抗体薬物複合体若しくは薬学的に許容されるその塩若しくは溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を投与することを含む。本発明の一態様では、がんの治療方法を提供し、当該方法は、必要とする患者に治療有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、腫瘍細胞を前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物、又は前記医薬組成物と接触させることにより、腫瘍細胞を殺傷し又は腫瘍細胞の成長を抑制することを含む。
【0044】
いくつかの実施形態では、患者に治療有効量の本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物、又は本発明の医薬組成物を投与することで、腫瘍細胞を殺傷し又は腫瘍細胞の成長を抑制することができる。
【0045】
本発明の一態様では、本願の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物のがんを治療する用途を提供する。本発明の一態様では、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む本願の医薬組成物のがんを治療する用途を提供する。本発明の一態様では、また、本発明の医薬組成物のがんを治療する用途を提供する。
【0046】
いくつかの実施形態では、上記の方法又は用途において、前記患者は、ＨＥＲ２を標的とする薬物での治療に適さない。いくつかの実施形態では、上記の方法又は用途において、前記患者はＨＥＲ２を標的とする薬物に耐性である。
【0047】
いくつかの実施形態では、上記の方法又は用途において、前記がんはＨＥＲ３陽性がんである。いくつかの実施形態では、本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、ＨＥＲ３タンパク質を発現するがんの治療に用いることができる。いくつかの実施形態では、患者に治療有効量の本発明の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物、又は本発明の医薬組成物を投与することで、ＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞を殺傷し又はＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞の成長を抑制することができる。がんの例は、胆道がん、がん肉腫、食道がん、食道胃接合部がん、乳がん、胃がん、膵臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、腎がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮がん、黒色腫、咽頭がん、口腔がん、皮膚がん、肺がん、多形膠芽腫、膠芽腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、扁平上皮がん、腹膜がん、肝がん、唾液腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、肛門がん又は陰茎がんを含み、ただしそれらに限定されない。
【0048】
リンカー－薬物中間体化合物：
本発明のいくつかの態様では、次の式ＩＩＩで示される構造のリンカー－薬物中間体化合物を提供する。
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。
本発明のいくつかの態様では、次の式ＩＩＩで示される構造のリンカー－薬物中間体化合物を提供する。
【化9】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する。
【0049】
いくつかの実施形態では、前記式ＩＩＩで示される構造のリンカー－薬物中間体化合物において、式中、Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる。
【0050】
本発明の具体的な一実施形態では、次の式ＩＩＩ－１で示される構造のリンカー－薬物中間体化合物を提供する。
【化10】
【発明の効果】
【0051】
本発明で用いるリンカー構造は、抗腫瘍化合物エリブリン又はその誘導体と抗体又はその抗原結合断片を連結させ、提供される抗体薬物複合体には優れた抗腫瘍効果及び／又は安全性が実現されている。いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体の抗腫瘍効果及び／又は安全性はエリブリンより優れている。いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体の抗腫瘍効果及び／又は安全性は第一三共株式会社の抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体Ｕ３－１４０２（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ、パトリツマブ デルクステカン）より優れている。いくつかの実施形態では、提供される抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体は腫瘍細胞に対する良好な殺傷活性を示しており、様々な腫瘍細胞及び／又は異なるＨＥＲ３発現レベル（高及び／又は中等度及び／又は低）の細胞に良好な殺傷活性を示している。いくつかの実施形態では、提供される抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体はトラスツズマブ耐性腫瘍細胞に良好な殺傷活性を示している。いくつかの実施形態では、提供される抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体は優れた安全性を有する。いくつかの実施形態では、提供される抗体薬物複合体、例えば、抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体は凝集しにくい。いくつかの試験では、本発明のリンカー構造を用いて抗腫瘍化合物エリブリン又はその誘導体と抗体又はその抗原結合断片を連結させるのは抗体薬物複合体の抗凝集特性を向上できるということが判明した。
【図面の簡単な説明】
【0052】
【図4】図４は、ＪＩＭＴ－１ヒト乳がん細胞のヌードマウス皮下移植腫瘍モデルでマウスの腫瘍体積の変化に対する異なるＤＡＲ値のパトリツマブ－エリブリン複合体、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８及び溶媒対照の影響である。
【0053】
説明と定義：
特に説明がない限り、本願で使用する下記の用語は次の意味を有する。特定の用語は、特に定義されない場合に、確定しないもの又は不明瞭なものとしてではなく、本分野の通常の意味で理解する。本明細書で商品名が記載される場合は、対応する商品又はその有効成分を指す。
特に説明がない限り、本願で使用する下記の用語は次の意味を有する。特定の用語は、特に定義されない場合に、確定しないもの又は不明瞭なものとしてではなく、本分野の通常の意味で理解する。本明細書で商品名が記載される場合は、対応する商品又はその有効成分を指す。
【0054】
用語「置換された」とは、特定の原子の原子価が正常であり、且つ置換後の化合物が安定的なものでさえあれば、当該原子上のいずれか１個又は複数の水素原子が置換基によって置換されることを指す。置換基が酸素置換（＝Ｏ）である場合は、２個の水素原子が置換されることになる。酸素置換はアリール基に起こらない。
【0055】
用語「任意の」又は「任意に」とは、続いて記述される事項又は状況は生じてもよいし又は生じなくてもよいことを指し、当該記述には前記事項又は状況が生じる場合及び前記事項又は状況が生じない場合が含まれる。用語「任意に置換された」は、置換された又は置換されていないことを表し、例えば、エチル基が「任意に」ハロゲンによって置換されるとは、エチル基は置換されなくてもよいし（ＣＨ２ＣＨ３）、単置換されてもよいし（例えば、ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）、多置換されてもよいし（例えば、ＣＨＦＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＣＨＦ２など）又は完全に置換されてもよい（例えば、ＣＦ２ＣＦ３）。当業者が理解できることだろうが、１つ又は複数の置換基を含む基には、空間的に存在し得ない且つ／又は合成できない置換又は置換形態が認められない。
【0056】
本明細書でＣｍ～ｎとは、当該部分が所定の範囲のうちの整数又は小数の炭素原子を有することを指す。例えば、「Ｃ１～６」とは、対象基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子又は６個の炭素原子を有してもよいことを指す。
【0057】
化合物の組成又は構造で特定の変数（例えば、Ｒ）が１回以上出現した場合は、出現するたびに独立的に定義される。したがって、例えば、対象基が２つのＲによって置換される場合に、各Ｒは独立的に選択される。
【0058】
特定の接続基の数が０であり、例えば、－（ＣＨ２）０－である場合は、当該接続基が共有結合であることを表す。
【0059】
変数が共有結合から選ばれる場合は、それによって接続された２つの基が直接に接続されることを表す。例えば、Ａ－Ｌ－ＺでＬが共有結合を表す場合に、当該構造は実際にＡ－Ｚであることを表す。
【0060】
用語「ハロ」又は「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
【0061】
用語「ヒドロキシ基」とは、－ＯＨ基を指す。
【0062】
用語「シアノ基」とは、－ＣＮ基を指す。
【0063】
用語「メルカプト基」とは、－ＳＨを指す。
【0064】
用語「アミノ基」とは、－ＮＨ２基を指す。
【0065】
用語「ニトロ基」とは、－ＮＯ２基を指す。
【0066】
用語「アルキル基」とは、一般式がＣｎＨ２ｎ＋１である炭化水素基を指す。当該アルキル基は、直鎖でもよいし分岐鎖でもよい。例えば、用語「Ｃ１～６アルキル基」とは、１～６個の炭素原子を含むアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、ネオペンチル基、ヘキシル基、２－メチルペンチル基など）を指す。同様に、アルコキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルスルホニル基及びアルキルチオ基のアルキル基部分（即ちアルキル基）には上記と同じ定義が適用される。
【0067】
用語「アルコキシ基」とは、－Ｏ－アルキル基を指す。
【0068】
用語「アルキルアミノ基」とは、－ＮＨ－アルキル基を指す。
【0069】
用語「ジアルキルアミノ基」とは、－Ｎ（アルキル）２基を指す。
【0070】
用語「アルキルスルホニル基」とは、－ＳＯ２－アルキル基を指す。
【0071】
用語「アルキルチオ基」とは、－Ｓ－アルキル基を指す。
【0072】
用語「アルケニル基」とは、炭素原子及び水素原子からなる直鎖又は分岐鎖で少なくとも１つの二重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基を指す。アルケニル基の非限定的な例は、エテニル基、１－プロペニル基、２－プロペニル基、１－ブテニル基、イソブテニル基、１，３－ブタジエニル基を含み、ただしそれらに限定されない。
【0073】
用語「アルキニル基」とは、炭素原子及び水素原子からなる直鎖又は分岐鎖で少なくとも１つの三重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基を指す。アルキニル基の非限定的な例は、エチニル基（－Ｃ≡ＣＨ）、１－プロピニル基（－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ３）、２－プロピニル基（－ＣＨ２－Ｃ≡ＣＨ）、１，３－ジアセチレニル基（－Ｃ≡Ｃ－Ｃ≡ＣＨ）などを含み、ただしそれらに限定されない。
【0074】
用語「シクロアルキル基」とは、完全飽和で単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る炭素環を指す。特に指定がない限り、当該炭素環は一般的に３～１０員環である。シクロアルキル基の非限定的な例は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、ノルボルニル基（ビシクロ［２．２．１］ヘプチル基）、ビシクロ［２．２．２］オクチル基、アダマンタニル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
【0075】
用語「シクロアルケニル基」とは、非完全飽和で単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る非芳香族炭素環を指す。特に指定がない限り、当該炭素環は一般的に５～８員環である。シクロアルケニル基の非限定的な例は、シクロペンテニル基、シクロペンタジエニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘキサジエニル基、シクロヘプテニル基、シクロヘプタジエニル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
【0076】
用語「ヘテロシクリル基」とは、完全飽和又は一部不飽和であり（ただし完全不飽和のヘテロアリール基ではない）且つ単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る非芳香族環を指す。特に指定がない限り、当該複素環は一般的に硫黄、酸素及び／又は窒素から独立的に選ばれる１～３個（好ましくは１個又は２個）のヘテロ原子を含む３～７員環である。ヘテロシクリル基の非限定的な例は、オキシラニル基、テトラヒドロフリル基、ジヒドロフリル基、ピロリジニル基、Ｎ－メチルピロリジニル基、ジヒドロピロリル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ピラゾリジニル基、４Ｈ－ピラニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、テトラヒドロチエニル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
【0077】
用語「ヘテロシクロアルキル基」とは、完全飽和で且つ単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る環状基を指す。特に指定がない限り、当該ヘテロシクロアルキル基は一般的に、硫黄、酸素及び／又は窒素から独立的に選ばれる１～３個（好ましくは１個又は２個）のヘテロ原子を含む３～７員環である。３員ヘテロシクロアルキル基の例は、オキシラニル基、チイラニル基、アジリジニル基を含み、ただしそれらに限定されず、４員ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例は、アゼチジニル基、オキセタニル基、チエタニル基を含み、ただしそれらに限定されず、５員ヘテロシクロアルキル基の例は、テトラヒドロフリル基、テトラヒドロチエニル基、ピロリジニル基、イソオキサゾリジニル基、オキサゾリジニル基、イソチアゾリジニル基、チアゾリジニル基、イミダゾリジニル基、テトラヒドロピラゾリル基を含み、ただしそれらに限定されず、６員ヘテロシクロアルキル基の例は、ピペリジニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、モルホリニル基、ピペラジニル基、１，４－チオキサニル基、１，４－ジオキサニル基、チオモルホリニル基、１，３－ジチアニル基、１，４－ジチアニル基を含み、ただしそれらに限定されず、７員ヘテロシクロアルキル基の例は、アゼパニル基、オキセパニル基、チエパニル基を含み、ただしそれらに限定されない。好ましくは、５個又は６個の環原子を有する単環式ヘテロシクロアルキル基である。
【0078】
用語「アリール基」とは、共役のπ電子系を有する全炭素単環又は縮合多環の芳香族環状基を指す。例えば、アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１４個の炭素原子又は６～１２個の炭素原子を有してもよい。アリール基の非限定的な例は、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレンなどを含み、ただしそれらに限定されない。
【0079】
用語「ヘテロアリール基」とは、Ｎ、Ｏ又はＳから選ばれる少なくとも１個の環原子を含み、残りの環原子はＣであり、且つ少なくとも１つの芳香環を有する単環式又は縮合多環式の環系を指す。好ましくは、ヘテロアリール基は４～８員環、特に５～８員環を１つ、又は６～１４個、特に６～１０個の環原子を含む複数の縮合環を有する。ヘテロアリール基の非限定的な例は、ピロリル基、フリル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、ピリジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、テトラゾリル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、ベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、イソインドリル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
【0080】
「誘導体」とは、母体化合物分子の原子又は原子団が他の原子又は原子団によって置換されて形成される化合物であり、母体化合物の誘導体と呼ばれる。
【0081】
本願の化合物及び中間体は、異なる互変異性体の形態で存在してもよく、そのような形態の全てが本願の範囲に含まれる。用語「互変異性体」又は「互変異性体形態」とは、低エネルギー障壁によって相互に変換できる、異なるエネルギーを持つ構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体とも呼ばれる）は、プロトン転移による相互変換、例えば、ケトン－エノール異性化、イミン－エナミン異性化を含む。プロトン互変異性体の具体例は、プロトンが２つの環上窒素原子の間で転移できるイミダゾール部分である。原子価互変異性体は、いくつかの結合電子の組み替えによる相互変換を含む。
【0082】
本願の化合物は、例えば、１つ又は複数の立体異性体を有するなど、非対称のものであってもよい。特に説明がない限り、エナンチオマー、ジアステレオマーなど全ての立体異性体が含まれる。本願の非対称炭素原子を含む化合物は、光学的に純粋な形態又はラセミ体の形態として単離させることができる。光学的に純粋な形態は、ラセミ混合物から分割してもよいし、又は不斉原料若しくは不斉試薬を使用して合成してもよい。
【0083】
本発明で標識して合成される化合物のいずれかの原子は特に指定がない限り、当該原子のいずれかの安定的な同位体を表すことができる。特段の説明がない限り、構造のある位置がＨ、即ち水素（Ｈ－１）と定義される場合に、当該位置は天然に存在する同位体だけを含む。同様に、特段の説明がない限り、構造のある位置がＤ、即ち重水素（Ｈ－２）と定義される場合に、当該位置の同位体量は少なくとも天然に存在する同位体量（０．０１５％）より３３４０倍多く（即ち、少なくとも５０．１％の重水素同位体を含む）、標識して合成される化合物の構造で、ある１つ又は複数の位置がＤ、即ち重水素（Ｈ－２）と定義される場合に、当該構造で示される化合物の含有量は少なくとも５２．５％、少なくとも６０％、少なくとも６７．５％、少なくとも７５％、少なくとも８２．５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％であってもよい。本発明で標識して合成される化合物の重水素化率とは、標識して合成されるものの同位体含有量と天然に存在する同位体量の比を指す。本発明で標識して合成される化合物の各対象重水素原子の重水素化率は少なくとも３５００倍（５２．５％）、少なくとも４０００倍（６０％）、少なくとも４５００倍（６７．５％）、少なくとも５０００倍（７５％）、少なくとも５５００倍（８２．５％）、少なくとも６０００倍（９０％）、少なくとも６３３３．３倍（９５％）、少なくとも６４６６．７倍（９７％）、少なくとも６５６６．７倍（９８．５％）、少なくとも６６００倍（９９％）、少なくとも６６３３．３倍（９９．５％）であってもよい。本発明では、同位体種（ｉｓｏｔｏｐｏｌｏｇｕｅｓ）とは、化学構造的に同位体構成だけが異なる化合物を指す。本発明で標識して合成される化合物は同じ化学構造を有し、その分子の原子の同位体構成だけが異なる。したがって、本発明で標識して合成される特定の位置で重水素を含む化合物は、当該位置における水素同位体種をもわずかに含み、本発明で標識して合成される化合物のある位置における水素同位体種の量は、重水素化試薬（Ｄ２Ｏ、Ｄ２、ＮａＢＤ４、ＬｉＡｌＤ４など）の重水素同位体の純度、重水素同位体導入の合成方法の有効性など多くの要因から決定される。しかし、そのようなある位置における水素同位体種の総量は４９．９％より少ない。本発明で標識して合成される化合物のある位置における水素同位体種の総量は、４７．５％、４０％、３２．５％、２５％、１７．５％、１０％、５％、３％、１％又は０．５％より少ない。
【0084】
本発明では、重水素と指定されない各原子はその天然同位体の存在度で存在する。
【0085】
用語「バイスタンダー効果」（Ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｅｆｆｅｃｔ）は、本明細書で使用される場合に、切断可能な又は非切断可能なリンカーによって抗体又はその抗原結合断片に複合されている細胞傷害性薬物は、抗体又はその抗原結合断片から放出されると拡散して細胞膜を超えて、隣接する細胞に対する殺傷が起こるという能力を持つという効果を指す。拡散して細胞膜を超える能力は細胞傷害性薬物又は細胞傷害性薬物とリンカーの組み合わせの疎水性に関係している。このような細胞傷害性薬物は、例えば、エリブリン又はＭＭＡＥである。特に、標的発現が不均一な腫瘍及び抗体の通過が制限される固形腫瘍には、バイスタンダー効果が望ましい。
【0086】
用語「治療」とは、疾患又は前記疾患に関連する１つ又は複数の症状を予防、改善又は解消するために、本願に記載の化合物又は医薬組成物を投与することを意味し、且つ、以下の事項を含み、ただしそれらに限定されない。
（ｉ）哺乳動物における疾患又は疾患の状態の出現を予防することであって、特に当該疾患の状態になりやすい哺乳動物が、当該疾患の状態であると診断されていない時の予防
（ｉｉ）疾患又は疾患の状態を抑制し、即ちその進行を抑制すること
（ｉｉｉ）疾患又は疾患の状態を緩和し、即ち当該疾患又は疾患の状態を解消させること
（ｉｖ）疾患又は疾患の状態のいずれかの直接の又は間接的な病理学的影響を低下させること。
（ｉ）哺乳動物における疾患又は疾患の状態の出現を予防することであって、特に当該疾患の状態になりやすい哺乳動物が、当該疾患の状態であると診断されていない時の予防
（ｉｉ）疾患又は疾患の状態を抑制し、即ちその進行を抑制すること
（ｉｉｉ）疾患又は疾患の状態を緩和し、即ち当該疾患又は疾患の状態を解消させること
（ｉｖ）疾患又は疾患の状態のいずれかの直接の又は間接的な病理学的影響を低下させること。
【0087】
用語「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、病状若しくは障害を治療又は予防すること、（ｉｉ）特定の疾患、病状又は障害の１種若しくは複数種の症状を軽減、改善若しくは解消すること、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、病状若しくは障害の１種若しくは複数種の症状の発生を予防若しくは遅延させる、本願の化合物の用量を指す。本願の化合物又は医薬組成物に係る「治療有効量」は、例えば、当該化合物又は医薬組成物、及びその個体に所望の応答を引き起こす能力、疾患の状態及びその重症度、投与方式及び被治療哺乳動物の年齢、性別、体重であるいくつかの要因によって変わる。有効量は、一般的に、当業者によってその知識又は本開示の内容に基づいて決定されてもよい。
【0088】
用語「薬学的に許容される」とは、ヒト及び動物の組織に接触して使用するのに適し、毒性又は刺激性はなく、アレルギー反応、その他の問題や合併症を引き起こさないと医学的に判断され、利益対リスクが合理的である化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対して使用される。
【0089】
薬学的に許容される塩としては、例えば、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基と形成した塩、無機酸と形成した塩、有機酸と形成した塩、塩基性又は酸性のアミノ酸と形成した塩などが挙げられる。
【0090】
用語「溶媒和物」とは、化合物が溶媒分子と会合して形成される物質を指す。
【0091】
用語「抗体」は、所望の生物学的活性を備えさえすれば、完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２種の完全な抗体によって形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、多機能抗体、抗体断片を含むと、最も広い意味で使用される。
【0092】
用語「ヒト化抗体」とは、非ヒト抗体に由来するＣＤＲ領域を含む抗体であって、当該抗体分子の他の部分が１種又は複数種のヒト抗体に由来する抗体を指す。
【0093】
用語「変異体」とは、オリジナルのペプチドと異なるアミノ酸で１個又は２個又はそれ以上のアミノ酸を置き換え、１個又は２個又はそれ以上の野生型アミノ酸を欠失させ、野生型には存在しない１個又は２個又はそれ以上のアミノ酸を挿入し、且つ／又は野生型には存在しないアミノ酸を野生型のアミノ末端（Ｎ末端）及び／又はカルボキシ末端（Ｃ末端）に添加する（まとめて「変異」という）ように、ペプチドのアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列を含むペプチドを指す。本発明では、「挿入」は「添加」にも含まれている。
【0094】
用語「ＣＤＲ（相補性決定領域）」は、「超可変領域」とも呼ばれ、配列が高度に可変であり且つ／又は構造が限定されているループを形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。天然のテトラボディは一般的に、３つが重鎖可変領域にあり、３つが軽鎖可変領域にある６つのＣＤＲを含む。
【0095】
用語「可変領域」とは抗体の軽鎖又は重鎖のＮ末端ドメインで限定される、約１００～１１０個又はより多いアミノ酸からなる主に抗原認識を担うドメインを指す。用語「軽鎖可変領域（ＶＬ）」「重鎖可変領域（ＶＨ）」は、それぞれ、これらの軽鎖及び重鎖のドメインを指す。
【0096】
用語「Ｆａｂ」とは、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）と、それぞれ軽鎖、重鎖にある可変ドメインＶＬ（軽鎖可変領域）及びＶＨ（重鎖可変領域）を含むものを指す。可変ドメインは、抗原結合に関与する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0097】
用語「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、それらのドメインが１つのポリペプチド鎖に存在する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはＶＨとＶＬドメインの間にあるポリペプチドリンカーをさらに含み、これによってｓｃＦｖは抗原結合に必要な構造を形成できる。
【0098】
用語「抗体部分」とは、抗体薬物複合体の抗体の部分を指す。いくつかの特定の実施形態では、それと中間リンカー部分は特定の官能基によって連結され、当該抗体部分は抗原と特異的に結合できる。
【0099】
用語「リンカー部分」とは、抗体薬物複合体における抗体部分と細胞傷害性薬物部分を連結させる部分を指し、切断可能なものであってもよいし又は非切断可能なものであってもよく、切断可能なリンカーは標的細胞内で切断することができ、これによって細胞傷害性薬物が放出される。
【0100】
用語「細胞傷害性薬物部分」とは、抗体薬物複合体における細胞傷害性薬物の部分を指す。いくつかの特定の実施形態では、それと中間リンカー部分は官能基によって連結され、腫瘍細胞内では、細胞傷害性薬物分子が遊離して、抗腫瘍効果を発揮する。
【0101】
用語「トラスツズマブ」（一般名Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）は、ヒト上皮成長因子受容体－２（ＨＥＲ２）のＥＣＤ４に選択的に作用する組換えヒト化モノクローナル抗体であり、ＨＥＲ２陽性がんの治療に用いることができる。その一例は、商品名ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）で販売される治療用モノクローナル抗体製品である。
【0102】
用語「Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ」又は「パトリツマブ」は、ＨＥＲ３タンパク質を発現するがんの治療に用いることができる完全ヒト抗ＨＥＲ３モノクローナル抗体である。
【0103】
用語「ＨＥＲ２」とは、ＥＧＦＲファミリーの２番目のメンバーであり、チロシンキナーゼ活性を有し、ただしＨＥＲ２の発現レベルは免疫組織化学法で検出することができ、ＨＥＲ２陽性とは、ＩＨＣ３＋を指し、ＨＥＲ２陰性とは、ＩＨＣ１＋／０を指し、ＩＨＣ２＋の場合はさらにＩＳＨ検出を行って判明する必要がある。
【0104】
用語「ＨＥＲ３」（ヒト上皮成長因子受容体３、別称ＥｒｂＢ３）は、他にＨＥＲ１（ＥＧＦＲとも呼ばれる）、ＨＥＲ２及びＨＥＲ４を含む受容体タンパク質チロシンキナーゼの上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）サブファミリーに属する受容体タンパク質チロシンキナーゼである。ＨＥＲ３は、細胞外リガンド結合ドメイン（ＥＣＤ）、ＥＣＤ内の二量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内タンパク質チロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）及びＣ末端リン酸化ドメインによって構成される膜貫通受容体である。ＨＥＲ３はいくつかのタイプのがん（例えば、乳がん、胃腸がん、膵臓がん）で過剰発現されることが判明した。ＨＥＲ２／ＨＥＲ３の発現と、非侵襲性から侵襲性の段階への進行との間に関係性が示されている。
【0105】
用語「トリプルネガティブ乳がん」とは、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体及びヒト上皮成長因子受容体２がいずれも発現陰性である乳がんを指す。
【0106】
用語「ＥＣ５０」とは、抗原結合構築物の最大応答の５０％を引き起こす有効濃度を指す。ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳ解析又は本分野で知られるいずれの他の方法で測定することができる。
【0107】
用語「同一性」は、一致性とも呼ばれる。アミノ酸配列の「同一性パーセント（％）」とは、被比較配列と本明細書で示される具体的なアミノ酸配列を比較し、且つ必要ならば、最大の配列同一性パーセントに達するためにギャップを導入した後、しかもいかなる保存的置換をも配列同一性の一部として考えない場合に、被比較配列における本明細書で示される具体的なアミノ酸配列のアミノ酸残基と同じアミノ酸残基のパーセントを指す。同一性のアミノ酸配列の比較では当分野の範囲内で様々な方式、例えば、ソフトウェアのＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）を用いて行ってもよい。当業者は、比較配列の全長において最大の比較範囲を得るためのいずれのアルゴリズムを含む配列比較のための適切なパラメータを決定することができる。
【0108】
本明細書では、用語「被験者」「患者」又は「主体」は入れ替えて使用されてもよい。いくつかの実施形態では、用語「被験者」「患者」又は「主体」は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、前記被験者、患者又は主体はマウスである。いくつかの実施形態では、前記被験者、患者又は主体はヒトである。
【0109】
本明細書で使用される場合に、「約」は、特定の値に対し、当業者が判定した誤差を含む許容可能範囲であり、部分的には当該値の測定方法、即ち測定システムの限界によって決定される。例えば、本分野の常識によれば、「約」は１倍の又は１倍を超える標準偏差以内を表す。又は、「約」は最大±５％の範囲を表し、例えば、示される数値範囲±２％の範囲以内、±１％の範囲以内又は±０．５％の範囲以内で変動する。本明細書又は特許請求の範囲で特定の値が示される場合に、特に説明がない限り、「約」の意味は当該特定の値に許容される誤差範囲以内にあると理解される。本明細書では、特に説明がない限り、ステップのパラメータ又は条件で示される値は「約」によって修飾されると見なされる。
【発明を実施するための形態】
【0110】
本発明は、また、次のいくつかの具体的な実施形態を提供し、ただし本発明の保護範囲はそれらに限定されない。
（実施形態１）一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物であって、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ただし、前記抗体薬物複合体は、次の式ＩＩａで示される構造を含み、
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する、抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
（実施形態１）一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物であって、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ただし、前記抗体薬物複合体は、次の式ＩＩａで示される構造を含み、
【化11】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、
ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する、抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0111】
（実施形態２）前記抗体薬物複合体は次の式ＩＩＩａで示される構造を含む、実施形態１に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【化12】
【0112】
（実施形態３）前記抗体薬物複合体は次の式ＩＶで示される構造であり、
式中、
Ａｂは抗体部分を表し、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる、実施形態１又は２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【化13】
Ａｂは抗体部分を表し、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる、実施形態１又は２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0113】
（実施形態４）Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる、実施形態１～３のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0114】
（実施形態５）前記抗体薬物複合体は次の式ＩＩＩａ－１で示される構造を含む、実施形態１又は２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【化14】
【0115】
（実施形態６）前記抗体薬物複合体は次の式ＩＶ－１で示される構造である、実施形態３に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【化15】
【0116】
（実施形態７）前記ｎは、２～４．８、２．６～４．８、３．５～４．８、４～４．８、２～４．５、２．６～４．５、３．５～４．５、４～４．５、３．５～４．２、３．５～４、４～４．２、７～８、７～７．９、７～７．６、７～７．５、７．１～８、７．１～７．９、７．１～７．６、７．５～８、７．６～８、又は７．６～７．９である、実施形態１～６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0117】
（実施形態８）前記ｎは、約２．６、約４、約４．２、約４．８、約７、約７．１、約７．５、約７．６、約７．９又は約８である、実施形態７に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0118】
（実施形態９）前記Ａｂは抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片である、実施形態１～８のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0119】
（実施形態１０）前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１を含み、配列番号２で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２を含み、配列番号３で示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、配列番号４で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１を含み、配列番号５で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２を含み、そして配列番号６で示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含む、実施形態９に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0120】
（実施形態１１）前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は前記重鎖可変領域は配列番号７で示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む、実施形態１０に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0121】
（実施形態１２）前記抗ＨＥＲ３抗体又はその抗原結合断片は重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０又は１１に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0122】
（実施形態１３）前記抗ＨＥＲ３抗体はパトリツマブである、実施形態９に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0123】
（実施形態１４）前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、下記の特性、即ち、
（ａ）ＨＥＲ３と結合すること
（ｂ）ＨＥＲ３とリガンドとの結合を遮断すること
（ｃ）ＨＥＲ３を発現する細胞でエンドサイトーシスを示すこと
（ｄ）ＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞に殺傷活性があること
（ｅ）バイスタンダー効果があること
の１つ又は複数の組み合わせを示す、実施形態９～１３のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
（ａ）ＨＥＲ３と結合すること
（ｂ）ＨＥＲ３とリガンドとの結合を遮断すること
（ｃ）ＨＥＲ３を発現する細胞でエンドサイトーシスを示すこと
（ｄ）ＨＥＲ３を発現する腫瘍細胞に殺傷活性があること
（ｅ）バイスタンダー効果があること
の１つ又は複数の組み合わせを示す、実施形態９～１３のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
【0124】
（実施形態１５）実施形態１～１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を含み、任意に、薬学的に許容される担体をさらに含む、医薬組成物。
【0125】
（実施形態１６）がんを治療するための薬物の製造における実施形態１～１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物又は実施形態１５に記載の医薬組成物の用途であって、好ましくは、前記がんはＨＥＲ３陽性がんであり、好ましくは、前記がんは胆道がん、がん肉腫、食道がん、食道胃接合部がん、乳がん、胃がん、膵臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、腎がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮がん、黒色腫、咽頭がん、口腔がん、皮膚がん、肺がん、多形膠芽腫、膠芽腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、扁平上皮がん、腹膜がん、肝がん、唾液腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、肛門がん又は陰茎がんである、用途。
【0126】
（実施形態１７）必要とする患者に治療有効量の、実施形態１～１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物又は実施形態１５に記載の医薬組成物を投与することを含むがんの治療方法であって、好ましくは、前記がんはＨＥＲ３陽性がんである、方法。
【0127】
（実施形態１８）腫瘍細胞を前記抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物、又は前記医薬組成物と接触させることにより、腫瘍細胞を殺傷し又は腫瘍細胞の成長を抑制することを含む、実施形態１７に記載の方法。
【0128】
（実施形態１９）前記がんは、胆道がん、がん肉腫、食道がん、食道胃接合部がん、乳がん、胃がん、膵臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、腎がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮がん、黒色腫、咽頭がん、口腔がん、皮膚がん、肺がん、多形膠芽腫、膠芽腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、扁平上皮がん、腹膜がん、肝がん、唾液腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、肛門がん又は陰茎がんである、実施形態１７又は１８に記載の方法。
【0129】
（実施形態２０）式ＩＩＩで示される構造を有するリンカー－薬物中間体化合物であって、
式中、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する、リンカー－薬物中間体化合物。
【化16】
Ｒａは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、任意に置換されたＣ１～６アルキル基、任意に置換されたＣ３～７シクロアルキル基、任意に置換されたＣ３～７ヘテロシクリル基、任意に置換されたＣ６～１０アリール基、任意に置換されたＣ５～１２ヘテロアリール基から選ばれ、
又は、ＲａとＲｂとそれらに連結された原子が、任意に置換された５～８員のヘテロシクリル基を形成する、リンカー－薬物中間体化合物。
【0130】
（実施形態２１）Ｒａ及びＲｂは、それぞれ、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基から独立的に選ばれる、実施形態２０に記載のリンカー－薬物中間体化合物。
【0131】
以下、本発明が一層明瞭になるよう、実施例を用いて更なる説明を行い、ただし本願の範囲は実施例に限定されない。本願で使用される試薬は一般的に市販品であり、精製しなくても使用できる。
【0132】
本願の実施例で用いるパトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）は、通常の方法で製造される抗体であり、最初に発現ベクター（例えば、ＣＮ１０７００１４６３Ａに開示されているｐｃＤＮＡ３．１ベクター、ＣＮ１０９４２２８１１Ａに開示されているｐＣＨＯ１．０ベクターなどを含む）を構築し、Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ宿主細胞をトランスフェクションした後に発現し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して精製する。パトリツマブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９、１０に示すとおりである。重水素化ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸｄ（ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＤＤＸｄ）の合成は、特許開示ＷＯ２０２２０３３５７８Ａ１の実施例１４の方法を参照する。
【0133】
本願の実施例に関わる細胞及びその提供は、次の表に示すとおりである。
【表2】
【0134】
実施例１：化合物ＩＩＩ－１の製造
１００ｍｇの化合物Ａ（０．１２ｍｍｏｌ）及び７５ｍｇの化合物Ｂ（０．１４５ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍＬの反応管に加え（化合物ＡのＣＡＳ番号は２４１３４２８－３６－９、化合物ＢのＣＡＳ番号は４４１０４５－１７－６）、２ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを加え、０℃に下げて、７０ｍｇの２－（７－アザベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．１８ｍｍｏｌ）及び４９ｍｇのＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．３６ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間反応させ、分取液体クロマトグラフィーで精製して約７０ｍｇの化合物ＩＩＩ－１（ＭＣ－ＧＧＦＧ－Ｅｒｉｂｕｌｉｎ、ＭＣ－ＧＧＦＧ－エリブリン）を得た。ＥＳＩ－ＭＳで分析したところ、化合物ＩＩＩ－１のｍ／ｚ＝１２４１．７２［Ｍ＋Ｈ］＋であった。化合物ＩＩＩ－１の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは次のとおりであった。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ８．２２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０－７．２１（ｍ，４Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｓ，２Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝２６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝３８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６５－４．６０（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５０－４．４２（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－４．１４（ｍ，１Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），４．０５－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８６－３．６４（ｍ，８Ｈ），３．６０－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．３７－３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，４Ｈ），３．１７－３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０８－２．９９（ｍ，２Ｈ），２．８４（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８６－２．６６（ｍ，３Ｈ），２．５６－２．５０ｍ，１Ｈ），２．３７－２．１８（ｍ，５Ｈ），２．１５－２．０５（ｍ，３Ｈ），２．０５－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９５－１．８４（ｍ，４Ｈ），１．７５－１．５７（ｍ，６Ｈ），１．５５－１．３８（ｍ，６Ｈ），１．３５－１．２５（ｍ，３Ｈ），１．２３－１．１２（ｍ，３Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．００－０．９２（ｍ，１Ｈ）．
【化17】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ８．２２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０－７．２１（ｍ，４Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｓ，２Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝２６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝３８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６５－４．６０（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５０－４．４２（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－４．１４（ｍ，１Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），４．０５－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８６－３．６４（ｍ，８Ｈ），３．６０－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．３７－３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，４Ｈ），３．１７－３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０８－２．９９（ｍ，２Ｈ），２．８４（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８６－２．６６（ｍ，３Ｈ），２．５６－２．５０ｍ，１Ｈ），２．３７－２．１８（ｍ，５Ｈ），２．１５－２．０５（ｍ，３Ｈ），２．０５－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９５－１．８４（ｍ，４Ｈ），１．７５－１．５７（ｍ，６Ｈ），１．５５－１．３８（ｍ，６Ｈ），１．３５－１．２５（ｍ，３Ｈ），１．２３－１．１２（ｍ，３Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．００－０．９２（ｍ，１Ｈ）．
【0135】
実施例２：抗体薬物複合体の製造
試薬：
溶液Ａ：ｐＨが７．４のＰＢＳ緩衝液
溶液Ｂ：１０ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）水溶液
溶液Ｃ：ＤＭＳＯ
溶液Ｄ：ヒスチジン緩衝液（０．８９ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン及び４．０４ｍｇ／ｍＬの塩酸Ｌ－ヒスチジン一水和物を含む）
溶液Ｅ：７００ｍｇ／ｍＬのスクロース溶液（溶液Ｄで調製）
溶液Ｆ：２０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０（溶液Ｄで調製）
試験手順：
１．抗体の置換
ａ．３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ａで十分に湿潤させた。
ｂ．抗体を溶液Ａに置換させた。
ｃ．適量の溶液Ａを加えて抗体濃度を調整した。
２．抗体の還元
ａ．抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。
ｂ．抗体溶液に適量の溶液Ｂを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２にした。
ｃ．アルミ箔で包み、ロータリーインキュベーターに置いて低速（２０ｒｐｍ）で振盪し、３７℃で暗所１時間反応させた。
３．複合
ａ．適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）をＤＭＳＯで溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。
ｂ．抗体溶液にＤＭＳＯを加えて、濃度を５％とし、さらに適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）溶液を加えて、モル量をＮ３とした。
ｃ．アルミ箔で包み、ロータリーインキュベーターに置いて低速（２０ｒｐｍ）で振盪し、２２℃で暗所１．５時間反応させた。
４．複合の停止
ａ．溶液Ｄで限外濾過遠心管を湿潤させた。
ｂ．抗体を溶液Ｄに置換させて、適量の溶液Ｅ、Ｆを加え、－８０℃で冷凍保存した。
抗体薬物複合体のＤＡＲ値（１抗体分子あたりの平均薬物連結数）の測定：
ＬＣ－ＭＳ法を用いてＤＡＲ値を測定した。５０μｇのＡＤＣサンプルに、１μＬのグリコシダーゼＰＮＧａｓｅ Ｆ（中国瑞安生物）を加え、３７℃で２０時間インキュベートした。試験で質量分析計は高解像度Ｘｅｖｏ Ｇ２－ＸＳ（米国Ｗａｔｅｒｓ）であった。サンプルの濃度を５μＭに調整し、直接注入法を用いて、正イオンモードにおける質量分析データを収集した。収集した非変性質量分析データはソフトウェアＵＮＩＦＩ １．８．２．１６９（米国Ｗａｔｅｒｓ）を用いて分析処理を行った。
試薬：
溶液Ａ：ｐＨが７．４のＰＢＳ緩衝液
溶液Ｂ：１０ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）水溶液
溶液Ｃ：ＤＭＳＯ
溶液Ｄ：ヒスチジン緩衝液（０．８９ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン及び４．０４ｍｇ／ｍＬの塩酸Ｌ－ヒスチジン一水和物を含む）
溶液Ｅ：７００ｍｇ／ｍＬのスクロース溶液（溶液Ｄで調製）
溶液Ｆ：２０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０（溶液Ｄで調製）
試験手順：
１．抗体の置換
ａ．３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ａで十分に湿潤させた。
ｂ．抗体を溶液Ａに置換させた。
ｃ．適量の溶液Ａを加えて抗体濃度を調整した。
２．抗体の還元
ａ．抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。
ｂ．抗体溶液に適量の溶液Ｂを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２にした。
ｃ．アルミ箔で包み、ロータリーインキュベーターに置いて低速（２０ｒｐｍ）で振盪し、３７℃で暗所１時間反応させた。
３．複合
ａ．適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）をＤＭＳＯで溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。
ｂ．抗体溶液にＤＭＳＯを加えて、濃度を５％とし、さらに適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）溶液を加えて、モル量をＮ３とした。
ｃ．アルミ箔で包み、ロータリーインキュベーターに置いて低速（２０ｒｐｍ）で振盪し、２２℃で暗所１．５時間反応させた。
４．複合の停止
ａ．溶液Ｄで限外濾過遠心管を湿潤させた。
ｂ．抗体を溶液Ｄに置換させて、適量の溶液Ｅ、Ｆを加え、－８０℃で冷凍保存した。
抗体薬物複合体のＤＡＲ値（１抗体分子あたりの平均薬物連結数）の測定：
ＬＣ－ＭＳ法を用いてＤＡＲ値を測定した。５０μｇのＡＤＣサンプルに、１μＬのグリコシダーゼＰＮＧａｓｅ Ｆ（中国瑞安生物）を加え、３７℃で２０時間インキュベートした。試験で質量分析計は高解像度Ｘｅｖｏ Ｇ２－ＸＳ（米国Ｗａｔｅｒｓ）であった。サンプルの濃度を５μＭに調整し、直接注入法を用いて、正イオンモードにおける質量分析データを収集した。収集した非変性質量分析データはソフトウェアＵＮＩＦＩ １．８．２．１６９（米国Ｗａｔｅｒｓ）を用いて分析処理を行った。
【0136】
抗体薬物複合体のタンパク質濃度の測定：
ローリー（ｌｏｗｒｙ）法を用いてタンパク質濃度を検出した。マイクロプレートリーダーで波長６５０におけるサンプルの吸光度値ＯＤを測定し、標準曲線を当てはめし、サンプルの吸光度値を標準曲線に代入して、タンパク質濃度を計算した。
ローリー（ｌｏｗｒｙ）法を用いてタンパク質濃度を検出した。マイクロプレートリーダーで波長６５０におけるサンプルの吸光度値ＯＤを測定し、標準曲線を当てはめし、サンプルの吸光度値を標準曲線に代入して、タンパク質濃度を計算した。
【0137】
上記の方法で式ＩＶ－１の抗体薬物複合体（ＩＶ－１（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ、パトリツマブ）を含む）及び式ＩＶシリーズの他の抗体薬物複合体を製造した。
【化18】
【化19】
【0138】
それぞれ、サンプル１及びサンプル２を製造した。サンプル１：ＤＡＲ＝４．８、タンパク質濃度＝１．７１ｍｇ／ｍＬ、サンプル２：ＤＡＲ＝７．１、タンパク質濃度＝１．６５ｍｇ／ｍＬ。
【0139】
実施例３：小分子細胞傷害性化合物及び抗体薬物複合体の細胞活性
小分子細胞傷害性化合物に対して、培地を使用して３５０００ｎｇ／ｍＬ～０．０８９６ｎｇ／ｍＬに希釈し、合計で９つの濃度であった。対数増殖期の腫瘍細胞を使用して、密度を１×１０５細胞／ｍＬに調整してプレーティングし、各ウェルに１００μＬを加え、対照として無細胞ブランクウェルを設置した。上記の勾配希釈したサンプルを加え、各ウェルは５０μＬであった。３７℃で５％のＣＯ２インキュベータにおいて５日培養した。培養液を捨て、ＣＣＫ－８（同仁化学、製品番号ＣＫ０４）作業溶液を加え、各ウェルは１００μＬであり、インキュベートして４～５時間発色させてからマイクロプレートリーダー（メーカーＴｈｅｒｍｏ、型番ＶａｒｉｏｓｋａｎＦｌａｓｈ）に置いて、参照波長６３０ｎｍで、波長４５０ｎｍでのウェルプレートの吸光度値を読み取り、記録した。腫瘍細胞の増殖抑制率を計算した。
小分子細胞傷害性化合物に対して、培地を使用して３５０００ｎｇ／ｍＬ～０．０８９６ｎｇ／ｍＬに希釈し、合計で９つの濃度であった。対数増殖期の腫瘍細胞を使用して、密度を１×１０５細胞／ｍＬに調整してプレーティングし、各ウェルに１００μＬを加え、対照として無細胞ブランクウェルを設置した。上記の勾配希釈したサンプルを加え、各ウェルは５０μＬであった。３７℃で５％のＣＯ２インキュベータにおいて５日培養した。培養液を捨て、ＣＣＫ－８（同仁化学、製品番号ＣＫ０４）作業溶液を加え、各ウェルは１００μＬであり、インキュベートして４～５時間発色させてからマイクロプレートリーダー（メーカーＴｈｅｒｍｏ、型番ＶａｒｉｏｓｋａｎＦｌａｓｈ）に置いて、参照波長６３０ｎｍで、波長４５０ｎｍでのウェルプレートの吸光度値を読み取り、記録した。腫瘍細胞の増殖抑制率を計算した。
【0140】
抗体薬物複合体に対して、培地を使用して５０００ｎｇ／ｍＬ～０．０１２８ｎｇ／ｍＬに希釈し、合計で９つの濃度であった。対数増殖期の腫瘍細胞を使用して、密度を２×１０４細胞／ｍＬに調整してプレーティングし、各ウェルに１００μＬを加え、対照として無細胞ブランクウェルを設置した。上記の勾配希釈したサンプルを加え、各ウェルは５０μＬであった。３７℃で５％のＣＯ２インキュベータにおいて培養した。培養液を捨て、ＣＴＧ検出液（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号Ｇ７５７２）を加え、各ウェルは１００μＬであり、インキュベートして１０分間発色させてから多機能プレートリーダー（メーカーＴｈｅｒｍｏ、型番ＶａｒｉｏｓｋａｎＦｌａｓｈ）に置いて、化学発光値を読み取った。腫瘍細胞の増殖抑制率を計算した。
【表3】
【0141】
実施例４：抗体薬物複合体の製造
試薬：
溶液Ｇ：ヒスチジン／塩酸ヒスチジン緩衝液（１．４３ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、２．２７ｍｇ／ｍＬの塩酸Ｌ－ヒスチジン一水和物）
溶液Ｈ：１０ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）水溶液
溶液Ｉ：ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
溶液Ｊ：５００ｍｇ／ｍＬのスクロース溶液（溶液Ｇで調製）
溶液Ｋ：３０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０（溶液Ｇで調製）
溶液Ｌ：１０％のＤＭＳＯの溶液Ｇ
溶液Ｍ：０．３ＭのＮａ２ＨＰＯ４
抗体：パトリツマブ
リンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）（リンカー－薬物中間体化合物）：実施例１の式ＩＩＩ－１で示される構造の化合物ＭＣ－ＧＧＦＧ－エリブリン（パトリツマブ－エリブリン複合体の製造に使用）、ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＤＤＸｄ（パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ複合体の製造に使用）。
試薬：
溶液Ｇ：ヒスチジン／塩酸ヒスチジン緩衝液（１．４３ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、２．２７ｍｇ／ｍＬの塩酸Ｌ－ヒスチジン一水和物）
溶液Ｈ：１０ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）水溶液
溶液Ｉ：ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
溶液Ｊ：５００ｍｇ／ｍＬのスクロース溶液（溶液Ｇで調製）
溶液Ｋ：３０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０（溶液Ｇで調製）
溶液Ｌ：１０％のＤＭＳＯの溶液Ｇ
溶液Ｍ：０．３ＭのＮａ２ＨＰＯ４
抗体：パトリツマブ
リンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）（リンカー－薬物中間体化合物）：実施例１の式ＩＩＩ－１で示される構造の化合物ＭＣ－ＧＧＦＧ－エリブリン（パトリツマブ－エリブリン複合体の製造に使用）、ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＤＤＸｄ（パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ複合体の製造に使用）。
【0142】
（１）次の試験手順に従って、ＤＡＲが２．６又は７．６であるパトリツマブ－エリブリン複合体を製造し、それぞれ、パトリツマブ－エリブリン－Ｄ２、パトリツマブ－エリブリン－Ｄ８と命名した。次の試験手順に従って、ＤＡＲが７．９であるパトリツマブ－ＤＤＤＸｄ複合体を製造し、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８と命名した。
試験手順：
１．抗体の置換：
３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ｇで十分に湿潤させ、抗体を溶液Ｇに置換させ、適量の溶液Ｇを加えて抗体濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。次に適量の溶液Ｍを加えて抗体溶液のｐＨを約７．０に調整した。
試験手順：
１．抗体の置換：
３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ｇで十分に湿潤させ、抗体を溶液Ｇに置換させ、適量の溶液Ｇを加えて抗体濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。次に適量の溶液Ｍを加えて抗体溶液のｐＨを約７．０に調整した。
【0143】
２．抗体の還元：
抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。抗体溶液に適量の溶液Ｈを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２にした。得られた混合物を３７℃で暗所１時間振盪し、これによって抗体のジスルフィド結合が還元されて、反応溶液１を得た。
抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。抗体溶液に適量の溶液Ｈを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２にした。得られた混合物を３７℃で暗所１時間振盪し、これによって抗体のジスルフィド結合が還元されて、反応溶液１を得た。
【0144】
３．抗体とリンカー－薬物中間体化合物の複合：
適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）を５０％のアセトン水溶液で溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。反応溶液１に溶液Ｉ（溶液Ｉ：反応溶液１（ｖ／ｖ）＝１：１０）を加え、均一に混合し、さらに適量の上記でアセトン水溶液を用いて溶解したリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）溶液を加えて、リンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）のモル量をＮ３とした。反応混合物を２２℃で暗所１時間振盪して、反応溶液２を得た。
適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）を５０％のアセトン水溶液で溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。反応溶液１に溶液Ｉ（溶液Ｉ：反応溶液１（ｖ／ｖ）＝１：１０）を加え、均一に混合し、さらに適量の上記でアセトン水溶液を用いて溶解したリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）溶液を加えて、リンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）のモル量をＮ３とした。反応混合物を２２℃で暗所１時間振盪して、反応溶液２を得た。
【0145】
４．複合反応の停止：
溶液Ｌで限外濾過遠心管を湿潤させた。２０倍量の溶液Ｌ、次に２０倍量の溶液Ｇで反応溶液２を限外濾過して、適量の溶液Ｊ、Ｋを加え、－８０℃で冷凍保存した。
溶液Ｌで限外濾過遠心管を湿潤させた。２０倍量の溶液Ｌ、次に２０倍量の溶液Ｇで反応溶液２を限外濾過して、適量の溶液Ｊ、Ｋを加え、－８０℃で冷凍保存した。
【0146】
ただし、試験条件及び群の設定は、次の表１－１に示すとおりであった。
【表4】
【0147】
（２）次の試験手順に従って、ＤＡＲが４．０～４．２であるパトリツマブ－エリブリン複合体を製造し、パトリツマブ－エリブリン－Ｄ４と命名した。
試験手順：
１．抗体の置換：
３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ｇで十分に湿潤させ、抗体を溶液Ｇに置換させ、適量の溶液Ｇを加えて抗体濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。次に適量の溶液Ｍを加えて抗体溶液のｐＨを約７．０に調整した。
試験手順：
１．抗体の置換：
３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ｇで十分に湿潤させ、抗体を溶液Ｇに置換させ、適量の溶液Ｇを加えて抗体濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。次に適量の溶液Ｍを加えて抗体溶液のｐＨを約７．０に調整した。
【0148】
２．抗体の還元：
抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。抗体溶液に適量の溶液Ｈを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２にした。得られた混合物を５～１０℃で暗所６時間反応させ、これによって抗体のジスルフィド結合が還元されて、反応溶液３を得た。
抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。抗体溶液に適量の溶液Ｈを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２にした。得られた混合物を５～１０℃で暗所６時間反応させ、これによって抗体のジスルフィド結合が還元されて、反応溶液３を得た。
【0149】
３．抗体とリンカー－薬物中間体化合物の複合：
適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）を５０％のアセトン水溶液で溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。反応溶液３に適量の上記でアセトン水溶液を用いて溶解したリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）溶液を加えて、リンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）のモル量をＮ３とした。反応混合物を５～１０℃で暗所４０分間反応させて、反応溶液４を得た。
適量のリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）を５０％のアセトン水溶液で溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。反応溶液３に適量の上記でアセトン水溶液を用いて溶解したリンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）溶液を加えて、リンカー－ペイロード（ｌｉｎｋｅｒ－ｐａｙｌｏａｄ）のモル量をＮ３とした。反応混合物を５～１０℃で暗所４０分間反応させて、反応溶液４を得た。
【0150】
４．複合反応の停止：
溶液Ｌで限外濾過遠心管を湿潤させた。次に２０倍量の溶液Ｌ、次に２０倍量の溶液Ｇで反応溶液４を限外濾過して、適量の溶液Ｊ、Ｋを加え、－８０℃冷凍保存した。
溶液Ｌで限外濾過遠心管を湿潤させた。次に２０倍量の溶液Ｌ、次に２０倍量の溶液Ｇで反応溶液４を限外濾過して、適量の溶液Ｊ、Ｋを加え、－８０℃冷凍保存した。
【0151】
ただし、試験条件及び群の設定は、次の表１－２に示すとおりであった。
【表5】
【0152】
実施例５：抗体薬物複合体のＤＡＲ値の測定
ブチル基が結合された非多孔質ポリスチレン／ジビニルベンゼン（ＰＳ／ＤＶＢ）フィラーを用いて、上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体の各成分を単離させ、中性の高塩分移動相を利用してタンパク質分子の疎水特性を向上させ、これによりカラムの疎水性結合と結合させ、次に塩濃度を徐々に低下させながら、イソプロピルアルコールの比率を徐々に増加させることにより物質を溶出し、疎水性の低い成分は先に溶出し、疎水性の高い成分は後から溶出する。
ブチル基が結合された非多孔質ポリスチレン／ジビニルベンゼン（ＰＳ／ＤＶＢ）フィラーを用いて、上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体の各成分を単離させ、中性の高塩分移動相を利用してタンパク質分子の疎水特性を向上させ、これによりカラムの疎水性結合と結合させ、次に塩濃度を徐々に低下させながら、イソプロピルアルコールの比率を徐々に増加させることにより物質を溶出し、疎水性の低い成分は先に溶出し、疎水性の高い成分は後から溶出する。
【0153】
カラムの仕様は、Ｓｅｐａｘ ＨＩＣ－Ｂｕｔｙｌ、４．６×１００ｍｍ、５μｍであり、カラム温度は２５℃であった。移動相Ａは、１０ｍＭのリン酸塩緩衝液－１．５Ｍの硫酸アンモニウムであり、ｐＨは７．０であった（１．４２ｇの無水リン酸水素二ナトリウム、１９８．２１ｇの硫酸アンモニウムを秤量して、約８００ｍＬの超純水を加え、充分に溶解するまで撹拌した後、リン酸でｐＨを７．０±０．１に調整して、１Ｌに定容し、均一に混合してから０．２２μｍ濾過膜で濾過した）。移動相Ｂは１０ｍＭのリン酸塩緩衝液であり、ｐＨは７．０であった（１．４２ｇの無水リン酸水素二ナトリウムを秤量して、約８００ｍＬの超純水を加え、充分に溶解するまで撹拌した後、リン酸でｐＨを７．０±０．１に調整して、１Ｌに定容し、均一に混合してから０．２２μｍ濾過膜で濾過した）。移動相Ｃは１００％のイソプロピルアルコールであった。流量は０．５ｍＬ／分であり、３０分間勾配溶出し、移動相のパラメータは、０～１５分には７５％の移動相Ａ及び２５％の移動相Ｂから７５％の移動相Ｂ及び２５％の移動相Ｃに上昇し、１５～２０分には７５％の移動相Ｂ及び２５％の移動相Ｃであり、２０～３０分には７５％の移動相Ａ及び２５％の移動相Ｂであった）。０分の初期移動相でパトリツマブ－エリブリン複合体を１倍希釈して供試品溶液とし、パトリツマブ－エリブリン複合体の濃度に基づいて注入量を調整して５０μｇのタンパク質を注入し、波長２８０ｎｍで吸光度値を検出した。
【0154】
データの処理では、面積百分率法を用いて結果を定量的に分析した。それぞれ、０、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ及び８つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージを計算し、ＤＡＲ値を計算して結果を得た。計算式は、ＤＡＲ値＝（細胞傷害性薬物のないＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×０＋１つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×１＋２つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×２＋３つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×３＋４つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×４＋５つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×５＋６つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×６＋７つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×７＋８つの細胞傷害性薬物を含有するＡＤＣのピーク面積のパーセンテージ×８）／１００％であった。
【0155】
実施例４及び実施例５の方法で、次の構造を有するパトリツマブ－エリブリン複合体を製造し、測定した。
ただし、パトリツマブ－エリブリン－Ｄ２に対して測定したＤＡＲ値は２．６であり、パトリツマブ－エリブリン－Ｄ４に対して測定したＤＡＲ値は４～４．２であり、パトリツマブ－エリブリン－Ｄ８に対して測定したＤＡＲ値は７．６であった。
【化20】
【0156】
実施例４及び実施例５の方法で、次の構造を有するパトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８を製造し、測定した。
測定したＤＡＲ値は７．９であった。
【化21】
【0157】
実施例６：抗体薬物複合体の凝集体の検証
ゲル濾過クロマトグラフィーを用いて上記の実施例４で製造したパトリツマブ－薬物複合体の各成分を単離させた。１０％のイソプロピルアルコールを添加した中性ｐＨ緩衝液を移動相として溶出し、各成分は分子量が小さくなる順にそれぞれ溶出された。カラムは、仕様がＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣ Ｃｏｌｕｍｎ ２００Å、１．７μｍ、４．６×３００ｍｍであるゲル濾過カラムであり、カラム温度は２５℃であった。移動相は、５０ｍＭのリン酸塩緩衝液－２００ｍＭの塩化ナトリウム－１０％のイソプロピルアルコールであり、ｐＨは７．０であった（１２．５３ｇのリン酸水素二ナトリウム十二水和物、２．３３ｇのリン酸二水素ナトリウム二水和物、１１．６９ｇの塩化ナトリウムを秤量して、約８００ｍＬの超純水を加え、充分に溶解するまで撹拌して、使用に備えて超純水を加えて１０００ｍＬとし、１００ｍＬのイソプロピルアルコールを上記の溶液に加えて１０００ｍＬとし、均一に混合してから０．２２μｍ濾過膜で濾過した）。２０μｇのパトリツマブ－薬物複合体を正確に計量して液体クロマトグラフに注入し、波長２８０ｎｍで検出した。流量は０．３ｍＬ／分であり、１５分間アイソクラティック溶出した。
ゲル濾過クロマトグラフィーを用いて上記の実施例４で製造したパトリツマブ－薬物複合体の各成分を単離させた。１０％のイソプロピルアルコールを添加した中性ｐＨ緩衝液を移動相として溶出し、各成分は分子量が小さくなる順にそれぞれ溶出された。カラムは、仕様がＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣ Ｃｏｌｕｍｎ ２００Å、１．７μｍ、４．６×３００ｍｍであるゲル濾過カラムであり、カラム温度は２５℃であった。移動相は、５０ｍＭのリン酸塩緩衝液－２００ｍＭの塩化ナトリウム－１０％のイソプロピルアルコールであり、ｐＨは７．０であった（１２．５３ｇのリン酸水素二ナトリウム十二水和物、２．３３ｇのリン酸二水素ナトリウム二水和物、１１．６９ｇの塩化ナトリウムを秤量して、約８００ｍＬの超純水を加え、充分に溶解するまで撹拌して、使用に備えて超純水を加えて１０００ｍＬとし、１００ｍＬのイソプロピルアルコールを上記の溶液に加えて１０００ｍＬとし、均一に混合してから０．２２μｍ濾過膜で濾過した）。２０μｇのパトリツマブ－薬物複合体を正確に計量して液体クロマトグラフに注入し、波長２８０ｎｍで検出した。流量は０．３ｍＬ／分であり、１５分間アイソクラティック溶出した。
【0158】
データの処理では、面積百分率法を用いて結果を定量的に分析した。凝集体、免疫グロブリン単量体及び低分子量不純物のピーク面積のパーセンテージをそれぞれ計算し、そのうちメインピーク前は凝集体であり、メインピークは免疫グロブリン単量体であり、メインピーク後は低分子量不純物であった。パトリツマブ－薬物複合体の単量体、凝集体及び低分子量不純物の含有量の比率は表２のとおりであった。
【表6】
【0159】
実施例７：抗体薬物複合体の細胞結合活性
ＦＡＣＳ法を利用して、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８及びパトリツマブを対照として、ＨＥＲ３高発現レベルのＭＣＦ－７、ＨＣＣ１５６９、ＢＴ４７４細胞、ＨＥＲ３中等度発現レベルのＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＪＩＭＴ－１細胞、ＨＥＲ３低発現レベルのＳＷ６２０細胞及びＨＥＲ３陰性のＡ５４９細胞を含む異なるＨＥＲ３発現レベルの細胞に対する、上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体の結合活性を分析した。
ＦＡＣＳ法を利用して、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８及びパトリツマブを対照として、ＨＥＲ３高発現レベルのＭＣＦ－７、ＨＣＣ１５６９、ＢＴ４７４細胞、ＨＥＲ３中等度発現レベルのＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＪＩＭＴ－１細胞、ＨＥＲ３低発現レベルのＳＷ６２０細胞及びＨＥＲ３陰性のＡ５４９細胞を含む異なるＨＥＲ３発現レベルの細胞に対する、上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体の結合活性を分析した。
【0160】
１×１０５個の細胞を９６ウェル細胞培養プレートの各ウェルに加え、パトリツマブ－エリブリン複合体を１３５．１４ｎＭの開始濃度から、４倍希釈で９つ濃度勾配にし、ＦＡＣＳ緩衝液（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、製品番号１３０－０９１－２２１）において希釈し、４℃で６０分間インキュベートした後、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を捨て、予冷したＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄し、１：２００（ｖ／ｖ）で希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ－ＰＥ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、製品番号１０９－１１６－１７０）を加え、１００μＬ／ウェルであり、４℃で３０分間インキュベートした。予冷したＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄し、１００μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）で再懸濁させ、次にフローサイトメーター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ｉＱＵＥ）を用いて検出蛍光信号を分析した。染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）で上記の各細胞に対するパトリツマブ－エリブリン複合体及び対照の結合活性を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５を用いてデータを分析し、結果は図１Ａ～図１Ｇに示され、計算されたＥＣ５０は次の表３に示された。結果は、ＨＥＲ３高、中等度、低発現レベルの細胞に対する各ＤＡＲ値のパトリツマブ－エリブリン複合体の結合活性はいずれもパトリツマブと同等であり、ＨＥＲ３陰性のＡ５４９細胞と結合しないということを明らかにした。
【表7】
【0161】
実施例８：抗体薬物複合体のエンドサイトーシス試験
ＦＡＣＳ法を利用して、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８及びパトリツマブを対照として、ＨＥＲ３高発現レベルのＭＣＦ－７、ＢＴ４７４細胞、ＨＥＲ３中等度発現レベルのＮＣＩ－Ｎ８７細胞及びＨＥＲ３低発現レベルのＳＷ６２０細胞を含む異なるＨＥＲ３発現レベルの細胞における上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体のエンドサイトーシスの状況を分析した。
ＦＡＣＳ法を利用して、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８及びパトリツマブを対照として、ＨＥＲ３高発現レベルのＭＣＦ－７、ＢＴ４７４細胞、ＨＥＲ３中等度発現レベルのＮＣＩ－Ｎ８７細胞及びＨＥＲ３低発現レベルのＳＷ６２０細胞を含む異なるＨＥＲ３発現レベルの細胞における上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体のエンドサイトーシスの状況を分析した。
【0162】
細胞密度を１×１０６個／ｍＬに調整し、５０μＬ／ウェルで９６ウェル細胞培養プレートに加えた。サンプルの用意として、パトリツマブ－エリブリン複合体をあらかじめ濃度２０μｇ／ｍＬに希釈して、Ｓ１とマークし、次に３倍の濃度勾配で希釈して、９つのサンプルＳ１～Ｓ９を得た。勾配希釈したサンプル溶液を細胞培養プレートに加え、各ウェルに５０μＬを加え、４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーションの終了後に９６ウェル細胞培養プレートを取り出して、４℃、４００ｇで４分間遠心分離し、上清を捨てた。１：２００（ｖ／ｖ）でｐＨｒｏｄｏ（商標） Ｇｒｅｅｎ Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（グリーンマレイミド、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、製品番号Ｐ３５３７０）で標識したＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ、Ｆｃγ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ断片特異性抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ、製品番号１０９－００５－１９０）を希釈し、各ウェルに５０μＬを加えた後に４℃でインキュベートした。３０分間後に洗浄し、各ウェルに５０μＬの細胞培地を加え、均一に混合した後に３７℃で２時間インターナリゼーションし、フローサイトメーター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ｉＱＵＥ）に置いて、ＢＬ１チャネルの蛍光値を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５を用いてデータを分析し、結果は図２Ａ～図２Ｄに示され、計算されたＥＣ５０は次の表４に示された。結果は、各ＤＡＲ値のパトリツマブ－エリブリン複合体は、ＨＥＲ３高、中等度発現レベルの細胞では明らかなエンドサイトーシスを示し、低発現レベルのＳＷ６２０細胞ではエンドサイトーシスが弱いということを明らかにした。
【表8】
【0163】
実施例９：抗体薬物複合体の細胞殺傷活性
腫瘍細胞に対する上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体の増殖抑制効果を検出するために、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８を対照として、ＨＥＲ３高発現レベルのＢＴ４７４、ＭＣＦ－７、ＨＣＣ１５６９細胞、ＨＥＲ３中等度発現レベルのＳＫＢＲ３、ＮＣＩ－Ｎ８７、ＪＩＭＴ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞、及びＨＥＲ３低発現レベルのＳＷ６２０、ＷｉＤｒ細胞を含む異なるＨＥＲ３発現レベルの細胞を用いて、それぞれ、殺傷活性を検出した。
腫瘍細胞に対する上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体の増殖抑制効果を検出するために、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８を対照として、ＨＥＲ３高発現レベルのＢＴ４７４、ＭＣＦ－７、ＨＣＣ１５６９細胞、ＨＥＲ３中等度発現レベルのＳＫＢＲ３、ＮＣＩ－Ｎ８７、ＪＩＭＴ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞、及びＨＥＲ３低発現レベルのＳＷ６２０、ＷｉＤｒ細胞を含む異なるＨＥＲ３発現レベルの細胞を用いて、それぞれ、殺傷活性を検出した。
【0164】
対数増殖期の細胞を９６ウェルプレートに加え、１００μＬ／ウェルであり、細胞密度は１×１０４個／ｍＬ又は２×１０４個／ｍＬであった。３７℃、５％のＣＯ２で壁に付着させて一晩培養した。サンプルの用意として、１０％のＦＢＳを含む基礎培地を用いてパトリツマブ－エリブリン複合体を被測定サンプルとして調製した（５μｇ／ｍＬから、５倍の勾配希釈で、９つの勾配）。壁に付着させて一晩培養した細胞を取り出して、試験群は５０μＬ／ウェルで希釈した被測定サンプルを加え、対照群は５０μＬ／ウェルで１０％のＦＢＳを含む基礎培地を加え、引き続き９６時間、１２０時間又は１４４時間培養した後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号Ｇ７５７２）を用いて検出し、９６ウェルプレートを取り出して、各ウェルに７５μＬのＣＴＧ検出液（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号Ｇ７５７２）を加え、振盪して均一に混合し、室温で暗所１０分間インキュベートした後に各ウェルから１８０μＬ吸い出して白色の不透明プレートに移し、気泡を除去して、化学発光値を読み取り、殺傷率を計算した。
殺傷率（％）＝（１－試験群の発光値／対照群の発光値）×１００％
殺傷率（％）＝（１－試験群の発光値／対照群の発光値）×１００％
【0165】
Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５を用いてデータを分析及び処理し、結果は図３Ａ～図３Ｉに示され、計算されたＥＣ５０は次の表５－１及び表５－２に示された。結果は、ＨＥＲ３高、中等度、低発現レベルの細胞に対して、ＤＡＲ値が大きいほど、パトリツマブ－エリブリン複合体の殺傷活性は強く、且つ各ＤＡＲ値のパトリツマブ－エリブリン複合体の殺傷活性はいずれもパトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８より優れているということを明らかにした。
【表9】
【表10】
【0166】
実施例１０：ＪＩＭＴ－１ヒト乳がん細胞のヌードマウス皮下移植腫瘍モデルにおける抗体薬物複合体の薬力学評価
トラスツズマブ耐性細胞株ＪＩＭＴ－１ヒト乳がん細胞のヌードマウス皮下移植腫瘍モデルにより、上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体のインビボ薬力学を評価した。
トラスツズマブ耐性細胞株ＪＩＭＴ－１ヒト乳がん細胞のヌードマウス皮下移植腫瘍モデルにより、上記の実施例４で製造されたパトリツマブ－エリブリン複合体のインビボ薬力学を評価した。
【0167】
ＳＰＦ雌ヌードマウス（提供は常州▼カ▲文斯実験動物有限公司）の右腋窩にＪＩＭＴ－１細胞を皮下接種し、２×１０６個／匹であった。平均腫瘍体積が１００～３００ｍｍ３に達している時に、動物を５群に分け、各群は６匹であり、具体的な群分け及び投与計画は表６に示された。
【表11】
【0168】
群分け当日は０日目であり、群分け後の１日目に尾静脈投与した。週に２～３回腫瘍体積を測定し、またマウスの体重を量り、データを記録した。マウスの日常的な挙動を毎日観察及び記録した。試験終了後に腫瘍を摘出して重さを量り、写真を撮った。
【0169】
検出指標は、次のものを含む。
腫瘍体積ＴＶ（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）であり、ここで、ａは長径であり、ｂは短径である。
腫瘍体積ＴＶ（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）であり、ここで、ａは長径であり、ｂは短径である。
【0170】
相対腫瘍体積ＲＴＶ＝ＴＶｔ／ＴＶ０であり、ここで、ＴＶ０は０日目の腫瘍体積であり、ＴＶｔは各回の測定時の腫瘍体積である。
【0171】
相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％であり、ここで、ＴＲＴＶは治療群のＲＴＶであり、ＣＲＴＶは対照群のＲＴＶである。
【0172】
腫瘍成長抑制率１－Ｔ／Ｃである。
【0173】
腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）＝（１－ＴＷ／ＴＷ０）×１００％であり、ここで、ＴＷは治療群の腫瘍重量であり、ＴＷ０は対照群の腫瘍重量である。
【0174】
体重変化率ＷＣＲ（％）＝（Ｗｔｔ－Ｗｔ０）／Ｗｔ０×１００％であり、ここで、Ｗｔ０は０日目の動物の体重であり、Ｗｔｔは各回の測定時の動物の体重である。
【0175】
腫瘍体積、腫瘍重量、及びマウスの体重に対する各薬物の影響は図４～図６のとおりであり、検出指標の結果は次の表７に示された。２１日目の試験終了で、死亡した動物はなく、各治療群のマウスの体重増加はモデル群と同等であり、薬物に明らかな毒性作用はなく、安全性は良い。各ＤＡＲ値のパトリツマブ－エリブリン複合体はいずれも、パトリツマブ－ＤＤＤＸｄ－Ｄ８より優れている良い体内腫瘍増殖抑制活性を示し、パトリツマブ－エリブリン複合体のＤＡＲ値が大きいほど、体内腫瘍増殖抑制活性は強い。
【表12】
【0176】
本願で開示される内容によれば、好ましい実施形態に基づいて本願の方法を説明しているものの、当業者は、本願の概念、趣旨及び範囲から逸脱することなく、ここに記載の方法及び前記方法のステップ又はステップの順番を変更することができる。
【0177】
本明細書で言及される全ての文献の開示内容を援用してここに組み込み、例示的な、手順上の及び他の詳細を提供して本明細書の記載内容を補足するように援用している。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図1E】
【図1F】
【図1G】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E】
【図3F】
【図3G】
【図3H】
【図3I】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】