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特表2024-533361自己免疫疾患を治療または予防するための組成物及び方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-12

(54)【発明の名称】自己免疫疾患を治療または予防するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

A61K 35/28 20150101AFI20240905BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20240905BHJP

C12N 5/0789 20100101ALI20240905BHJP

C12N 15/86 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/11 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/13 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/12 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/62 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/85 20060101ALI20240905BHJP

C12N 7/01 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/867 20060101ALI20240905BHJP

A61P 37/02 20060101ALI20240905BHJP

A61K 35/545 20150101ALI20240905BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20240905BHJP

A61P 17/14 20060101ALI20240905BHJP

A61P 19/08 20060101ALI20240905BHJP

A61P 7/06 20060101ALI20240905BHJP

A61P 1/16 20060101ALI20240905BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 17/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 25/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20240905BHJP

A61P 7/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 21/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 5/16 20060101ALI20240905BHJP

A61P 5/14 20060101ALI20240905BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20240905BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20240905BHJP

A61P 27/16 20060101ALI20240905BHJP

A61P 21/04 20060101ALI20240905BHJP

A61P 27/02 20060101ALI20240905BHJP

A61P 17/06 20060101ALI20240905BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP

A61P 5/44 20060101ALI20240905BHJP

A61K 48/00 20060101ALI20240905BHJP

C12N 15/09 20060101ALN20240905BHJP

【ＦＩ】

A61K35/28

C12N5/10 ZNA

C12N5/0789

C12N15/86 Z

C12N15/11 Z

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/62 Z

C12N15/85 Z

C12N7/01

C12N15/867 Z

A61P37/02

A61K35/545

A61P3/10

A61P17/14

A61P19/08

A61P7/06

A61P1/16

A61P9/00

A61P17/00

A61P25/00

A61P1/04

A61P7/00

A61P21/00

A61P5/16

A61P5/14

A61P43/00 105

A61P13/12

A61P19/02

A61P27/16

A61P21/04

A61P27/02

A61P17/06

A61P35/00

A61P5/44

A61K48/00

C12N15/09 110

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024515336

(86)(22)【出願日】2022-09-08

(85)【翻訳文提出日】2024-05-07

(86)【国際出願番号】 US2022076137

(87)【国際公開番号】W WO2023039489

(87)【国際公開日】2023-03-16

(31)【優先権主張番号】63/241,836

(32)【優先日】2021-09-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521529868

【氏名又は名称】オーチャードセラピューティクス（ヨーロッパ）リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ウォルフェ，ジア，エル．

(72)【発明者】

【氏名】マークス－ブルース，ジョナサン，シメオン

(72)【発明者】

【氏名】ガスパー，ボビー

(72)【発明者】

【氏名】サグー，パーヴィンダー

(72)【発明者】

【氏名】レッキ，キアラ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA92X

4B065AA92Y

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AA97X

4B065AB01

4B065AC12

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA13

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA01

4C084ZA02

4C084ZA33

4C084ZA34

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4C084ZA55

4C084ZA68

4C084ZA75

4C084ZA81

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4C084ZA94

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4C084ZB26

4C084ZC06

4C084ZC08

4C084ZC35

4C087AA01

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4C087BB44

4C087BB65

4C087CA12

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZA01

4C087ZA02

4C087ZA33

4C087ZA34

4C087ZA36

4C087ZA51

4C087ZA55

4C087ZA68

4C087ZA75

4C087ZA81

4C087ZA89

4C087ZA92

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4C087ZB07

4C087ZB15

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZC06

4C087ZC08

4C087ZC35

(57)【要約】

自己免疫疾患を有するか、またはそれを発症するリスクのある対象を治療するための組成物及び方法が本明細書に記載される。本開示の組成物及び方法を使用して、患者は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞（例えば、Ｆｏｘｐ３プロモーター）において活性である系統特異的転写調節エレメントの制御下で、自己抗原結合部分（例えば、キメラ抗原受容体）を発現するように遺伝子修飾される多能性造血細胞を提供され得る。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

自己免疫疾患の治療または予防を必要とする患者においてそれを行う方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与することを含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【請求項2】

自己免疫疾患を有すると診断された患者において自己反応性エフェクター免疫細胞の集団の活性及び／または増殖を抑制する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与することを含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【請求項3】

自己免疫疾患を有すると診断された患者において自己反応性エフェクター免疫細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与することを含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【請求項4】

自己免疫疾患を有すると診断された患者において自己免疫応答から内因性組織を保護する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与することを含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【請求項5】

自己免疫疾患を有すると診断された患者において炎症を低減させる方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与することを含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【請求項6】

前記多能性造血細胞が、造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血前駆細胞（ＨＰＣ）である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記多能性造血細胞が、胚幹細胞である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記多能性造血細胞が、人工多能性幹細胞である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記多能性造血細胞が、リンパ系前駆細胞である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記多能性造血細胞が、ＣＤ３４＋細胞である、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記多能性造血細胞の集団が、前記患者に全身投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記多能性造血細胞の集団が、前記患者に静脈内注射によって投与される、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記多能性造血細胞が、前記患者に対して自己由来である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記多能性造血細胞が、前記患者に対して同種異系である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記多能性造血細胞は、前記患者とＨＬＡが一致している、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むウイルスベクターを用いてエクスビボで形質導入される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むポリヌクレオチドを用いてエクスビボでトランスフェクトされる、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記多能性造血細胞が、前記細胞のゲノム内の標的位置で一本鎖切断または二本鎖切断を触媒するヌクレアーゼを前記細胞に送達することによって得られる、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記ヌクレアーゼが、前記細胞のゲノム内の前記標的位置にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と組み合わせて前記細胞に送達される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記ヌクレアーゼが、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造の反復（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質である、請求項１８または１９に記載の方法。

【請求項21】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）またはＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記細胞が前記ヌクレアーゼと接触している間に、前記細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含む鋳型ポリヌクレオチドと更に接触する、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記鋳型ポリヌクレオチドが、相同組換えを促進するために、前記標的位置に対して５’に位置する核酸配列及び前記標的位置に対して３’に位置する核酸配列に十分に類似する核酸配列をそれぞれ有する５’相同性アーム及び３’相同性アームを含む、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドが、前記細胞を、前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターと接触させることによって、前記細胞に送達される、請求項２２または２３に記載の方法。

【請求項25】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、もしくは配列番号４の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、請求項２５または２６に記載の方法。

【請求項28】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ１エンハンサーを含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５、配列番号６、配列番号７、もしくは配列番号８の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記ＣＮＳ１エンハンサーが、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、請求項２８または２９に記載の方法。

【請求項31】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ２エンハンサーを含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、もしくは配列番号１２の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ＣＮＳ２エンハンサーが、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、請求項３１または３２に記載の方法。

【請求項34】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ３エンハンサーを含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、もしくは配列番号１６の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記ＣＮＳ３エンハンサーが、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、請求項３４または３５に記載の方法。

【請求項37】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ０エンハンサーを含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、もしくは配列番号２０の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記ＣＮＳ０エンハンサーが、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する、請求項３７または３８に記載の方法。

【請求項40】

前記自己抗原結合タンパク質が、一本鎖ポリペプチドである、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記自己抗原結合タンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記自己抗原結合タンパク質が、多鎖タンパク質である、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記自己抗原結合タンパク質が、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記自己免疫疾患が、Ｉ型糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、またはウェゲナー肉芽腫症である、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクアポリン４、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記自己免疫疾患が、多発性硬化症であり、前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質である、請求項４４に記載の方法。

【請求項47】

前記自己免疫疾患が、Ｉ型糖尿病であり、前記自己抗原が、インスリン、ＧＡＤ－６５、ＩＡ－２、またはＺｎＴ８である、請求項４４に記載の方法。

【請求項48】

前記自己免疫疾患が、関節リウマチであり、前記自己抗原が、コラーゲンＩＩ、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、またはＨＳＰ６５である、請求項４４に記載の方法。

【請求項49】

前記自己免疫疾患が、重症筋無力症であり、前記自己抗原が、ＡＣｈＲ、ＭｕＳＫ、またはＬＲＰ４である、請求項４４に記載の方法。

【請求項50】

前記自己免疫疾患が、狼瘡であり、前記自己抗原が、ヒストンＩＩＡである、請求項４４に記載の方法。

【請求項51】

前記自己免疫疾患が、甲状腺機能低下症であり、前記自己抗原が、甲状腺で発現されるタンパク質である、請求項４４に記載の方法。

【請求項52】

前記自己免疫疾患が、グレーブス病であり、前記自己抗原が、前記チロトロピン受容体である、請求項４４に記載の方法。

【請求項53】

前記自己免疫疾患が、尋常性天疱瘡であり、前記自己抗原が、二本鎖ＤＮＡである、請求項４４に記載の方法。

【請求項54】

前記自己免疫疾患が、乾癬であり、前記自己抗原が、二本鎖ＤＮＡである、請求項４４に記載の方法。

【請求項55】

前記自己免疫疾患が、視神経脊髄炎であり、前記自己抗原が、アクアポリン４である、請求項４４に記載の方法。

【請求項56】

前記多能性造血細胞の集団を前記患者に投与すると、前記投与された細胞またはその子孫が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞に分化する、請求項１～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記患者が、哺乳動物であり、前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記哺乳動物が、ヒトであり、前記細胞が、ヒト細胞である、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

医薬組成物であって、（ｉ）自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団であって、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記多能性造血細胞の集団、及び（ｉｉ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含む、前記医薬組成物。

【請求項60】

前記多能性造血細胞が、ＨＳＣまたはＨＰＣである、請求項５９に記載の医薬組成物。

【請求項61】

前記多能性造血細胞が、胚幹細胞である、請求項５９に記載の医薬組成物。

【請求項62】

前記多能性造血細胞が、人工多能性幹細胞である、請求項５９に記載の医薬組成物。

【請求項63】

前記多能性造血細胞が、リンパ系前駆細胞である、請求項５９に記載の医薬組成物。

【請求項64】

前記多能性造血細胞が、ＣＤ３４＋細胞である、請求項５９～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項65】

前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むウイルスベクターを用いてエクスビボで形質導入される、請求項５９～６４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項66】

前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むポリヌクレオチドを用いてエクスビボでトランスフェクトされる、請求項５９～６４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項67】

前記多能性造血細胞が、前記細胞のゲノム内の標的位置で一本鎖切断または二本鎖切断を触媒するヌクレアーゼを前記細胞に送達することによって得られる、請求項５９～６４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項68】

前記ヌクレアーゼが、前記細胞のゲノム内の前記標的位置にハイブリダイズするｇＲＮＡと組み合わせて前記細胞に送達される、請求項６７に記載の医薬組成物。

【請求項69】

前記ヌクレアーゼが、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質である、請求項６７または６８に記載の医薬組成物。

【請求項70】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９またはＣａｓ１２ａである、請求項６９に記載の医薬組成物。

【請求項71】

前記細胞が前記ヌクレアーゼと接触している間に、前記細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含む鋳型ポリヌクレオチドと更に接触する、請求項６７～７０のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項72】

前記鋳型ポリヌクレオチドが、相同組換えを促進するために、前記標的位置に対して５’に位置する核酸配列及び前記標的位置に対して３’に位置する核酸配列に十分に類似する核酸配列をそれぞれ有する５’相同性アーム及び３’相同性アームを含む、請求項７１に記載の医薬組成物。

【請求項73】

前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドが、前記細胞を、前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターと接触させることによって、前記細胞に送達される、請求項７１または７２に記載の医薬組成物。

【請求項74】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む、請求項５９～７３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項75】

前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、もしくは配列番号４の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項７４に記載の医薬組成物。

【請求項76】

前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、請求項７４または７５に記載の医薬組成物。

【請求項77】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ１エンハンサーを含む、請求項５９～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項78】

前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５、配列番号６、配列番号７、もしくは配列番号８の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項７７に記載の医薬組成物。

【請求項79】

前記ＣＮＳ１エンハンサーが、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、請求項７７または７８に記載の医薬組成物。

【請求項80】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ２エンハンサーを含む、請求項５９～７９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項81】

前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、もしくは配列番号１２の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項８０に記載の医薬組成物。

【請求項82】

前記ＣＮＳ２エンハンサーが、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、請求項８０または８１に記載の医薬組成物。

【請求項83】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ３エンハンサーを含む、請求項５９～８２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項84】

前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、もしくは配列番号１６の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項８３に記載の医薬組成物。

【請求項85】

前記ＣＮＳ３エンハンサーが、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、請求項８３または８４に記載の医薬組成物。

【請求項86】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ０エンハンサーを含む、請求項５９～８５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項87】

前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、もしくは配列番号２０の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項８６に記載の医薬組成物。

【請求項88】

前記ＣＮＳ０エンハンサーが、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する、請求項８６または８７に記載の医薬組成物。

【請求項89】

前記自己抗原結合タンパク質が、一本鎖ポリペプチドである、請求項５９～８８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項90】

前記自己抗原結合タンパク質が、ＣＡＲである、請求項５９～８９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項91】

前記自己抗原結合タンパク質が、多鎖タンパク質である、請求項５９～８８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項92】

前記自己抗原結合タンパク質が、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である、請求項９１に記載の医薬組成物。

【請求項93】

前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である、請求項５９～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項94】

請求項５９～９３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含むキットであって、前記キットが、前記キットの使用者に、自己免疫疾患を有するヒト患者に前記医薬組成物を投与するように指示する添付文書を更に含む、前記キット。

【請求項95】

前記添付文書が、前記キットの使用者に、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法を実施するように指示する、請求項９４に記載のキット。

【請求項96】

自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットであって、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記核酸カセット。

【請求項97】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む、請求項９６に記載の核酸カセット。

【請求項98】

前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、もしくは配列番号４の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項９７に記載の核酸カセット。

【請求項99】

前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、請求項９７または９８に記載の核酸カセット。

【請求項100】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ１エンハンサーを含む、請求項９６～９９のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項101】

前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５、配列番号６、配列番号７、もしくは配列番号８の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１００に記載の核酸カセット。

【請求項102】

前記ＣＮＳ１エンハンサーが、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、請求項１００または１０１に記載の核酸カセット。

【請求項103】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ２エンハンサーを含む、請求項９６～１０２のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項104】

前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、もしくは配列番号１２の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１０３に記載の核酸カセット。

【請求項105】

前記ＣＮＳ２エンハンサーが、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、請求項１０３または１０４に記載の核酸カセット。

【請求項106】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ３エンハンサーを含む、請求項９６～１０５のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項107】

前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、もしくは配列番号１６の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１０６に記載の核酸カセット。

【請求項108】

前記ＣＮＳ３エンハンサーが、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、請求項１０６または１０７に記載の核酸カセット。

【請求項109】

前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ０エンハンサーを含む、請求項９６～１０８のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項110】

前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、もしくは配列番号２０の核酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１０９に記載の核酸カセット。

【請求項111】

前記ＣＮＳ０エンハンサーが、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する、請求項１０９または１１０に記載の核酸カセット。

【請求項112】

前記自己抗原結合タンパク質が、一本鎖ポリペプチドである、請求項９６～１１１のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項113】

前記自己抗原結合タンパク質が、ＣＡＲである、請求項９６～１１２のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項114】

前記自己抗原結合タンパク質が、多鎖タンパク質である、請求項９６～１１１のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項115】

前記自己抗原結合タンパク質が、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である、請求項１１４に記載の核酸カセット。

【請求項116】

前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である、請求項９６～１１５のいずれか１項に記載の核酸カセット。

【請求項117】

請求項９６～１１６のいずれか１項に記載の核酸カセットを含む、ウイルスベクター。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出されている配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。当該ＸＭＬコピーは、２０２２年８月２４日に作成され、５１１３９－０３２ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿８＿２４＿２２という名称であり、２５，５６７バイトのサイズである。

【0002】

本開示は、遺伝子修飾された多能性造血細胞に由来する調節Ｔ細胞による自己免疫疾患を治療するための方法、及びかかる方法で使用され得る組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、免疫応答を抑制する上で重要な役割を果たし、それによって恒常性及び自己寛容を維持するＴ細胞のサブセットである。Ｔｒｅｇ欠損症または機能不全は、いくつかの自己免疫疾患の病理に関与しており、Ｔｒｅｇ細胞療法は、これらの疾患のための潜在的な治療パラダイムとして調査されている。Ｔｒｅｇ細胞療法の開発は、Ｔｒｅｇ細胞の耐久性、安定性、実行可能性、製造、及び投薬量に関連する困難によって妨げられている。自己免疫疾患の治療のための改善されたＴｒｅｇ細胞療法の必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【0004】

本開示は、自己免疫疾患の治療のための組成物及び方法に関する。第１の態様では、本開示は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞の集団を患者に投与することによって、自己免疫疾患の治療または予防を必要とする患者（例えば、ヒト患者などの哺乳動物患者）においてそれを行う方法を提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞において活性である（すなわち、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）と比較して、Ｔｒｅｇ系統の細胞において優先的に活性である）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。

【0005】

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患を有すると診断された患者（例えば、ヒト患者などの哺乳動物患者）において自己反応性エフェクター免疫細胞の集団の活性及び／または増殖を抑制する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞の集団を患者に投与する工程を含む、方法を提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。

【0006】

別の態様では、本開示は、自己免疫疾患を有すると診断された患者（例えば、ヒト患者などの哺乳動物患者）において自己反応性エフェクター免疫細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞の集団を患者に投与する工程を含む、方法を提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。

【0007】

別の態様では、本開示は、自己免疫疾患を有すると診断された患者（例えば、ヒト患者などの哺乳動物患者）において自己免疫応答から内因性組織を保護する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞の集団を患者に投与する工程を含む、方法を提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。

【0008】

別の態様では、本開示は、自己免疫疾患を有すると診断された患者（例えば、ヒト患者などの哺乳動物患者）において炎症を低減させる方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞の集団を患者に投与する工程を含む、方法を提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。

【0009】

上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、多能性細胞は、多能性造血細胞（例えば、造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血前駆細胞（ＨＰＣ））である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、胚幹細胞である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、人工多能性幹細胞である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、リンパ系前駆細胞である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、ＣＤ３４＋細胞（例えば、ＨＳＣ）である。

【0010】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞の集団は、患者に全身投与される。例えば、多能性造血細胞の集団は、患者に静脈内注射によって投与され得る。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞の集団は、患者に局所投与される。

【0011】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、患者に対して自己由来である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、患者に対して同種異系である（例えば、ＨＬＡが一致した同種異系細胞）。

【0012】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ、ＨＰＣ、胚幹細胞、人工多能性幹細胞、リンパ系前駆細胞、及び／またはＣＤ３４＋細胞）は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含むウイルスベクターを用いてエクスビボで形質導入される。

【0013】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、レトロウイルス科ファミリーウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、及びポックスウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターで形質導入される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターは、アルファレトロウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである。

【0014】

いくつかの実施形態では、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターは、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び、３’－自己不活性化ＬＴＲを含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、偽型ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、偽型ウイルスベクターは、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ファミリーウイルスからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、偽型ウイルスベクターは、偽型レンチウイルスベクターである。

【0016】

いくつかの実施形態では、偽型ウイルスベクターは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ＲＤ１１４ウイルス、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、ヒトフォーミーウイルス（ＨＦＶ）、ウォールアイ皮膚肉腫ウイルス（ＷＤＳＶ）、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）、狂犬病ウイルス、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、シンノンブルウイルス（ＳＮＶ）、チェリーねじれリーフウイルス（ＣｈＴＬＶ）、サルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ）、マソン・ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）、リスサルレトロウイルス（ＳＭＲＶ）、ラウス関連ウイルス（ＲＡＶ）、藤浪肉腫ウイルス（ＦｕＳＶ）、トリ癌腫ウイルス（ＭＨ２）、トリ脳脊髄炎ウイルス（ＡＥＶ）、アルファモザイクウイルス（ＡＭＶ）、トリ肉腫ウイルスＣＴ１０、及びウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）から選択されるウイルス由来のエンベロープタンパク質を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、偽型ウイルスベクターは、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ、ＨＰＣ、胚幹細胞、人工多能性幹細胞、リンパ系前駆細胞、及び／またはＣＤ３４＋細胞）は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含むポリヌクレオチドを用いてエクスビボでトランスフェクトされる。

【0019】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチルデキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び／または磁気ビーズを使用してトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、エレクトロポレーション、ヌクレオフェクション、スクイーズポレーション（ｓｑｕｅｅｚｅ－ｐｏｒａｔｉｏｎ）、ソノポーレーション、オプティカルトランスフェクション（ｏｐｔｉｃａｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）、磁気フェクション、及び／またはインペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）によってトランスフェクトされる。

【0020】

いくつかの実施形態では、核酸カセットは、転移性エレメントの一部である。いくつかの実施形態では、核酸カセットは、多能性造血細胞のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子への組み込みのためのトランスポザーゼ認識及び切断エレメントを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、核ＤＮＡ分子またはミトコンドリアＤＮＡ分子であり、トランスポザーゼ認識及び切断エレメントは、核ＤＮＡ分子またはミトコンドリアＤＮＡ分子への組み込みを促進する。

【0021】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、細胞のゲノム内の標的位置で一本鎖切断または二本鎖切断を触媒するヌクレアーゼを細胞に送達することによって得られる。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、細胞のゲノム内の標的位置にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と組み合わせて細胞に送達される。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造の反復（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質である。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）またはＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）である。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである。

【0022】

いくつかの実施形態では、細胞がヌクレアーゼと接触している間に、細胞は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む鋳型ポリヌクレオチドと更に接触する。いくつかの実施形態では、鋳型ポリヌクレオチドは、相同組換えを促進するために、標的位置に対して５’に位置する核酸配列及び標的位置に対して３’に位置する核酸配列に十分に類似する核酸配列をそれぞれ有する５’相同性アーム及び３’相同性アームを含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドは、細胞を、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターと接触させることによって、細胞に送達される。

【0024】

いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターは、ＡＡＶ、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、またはレトロウイルス科ファミリーウイルスである。

【0025】

いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターは、レトロウイルス科ファミリーウイルスである。いくつかの実施形態では、レトロウイルス科ファミリーウイルスは、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドをコードするレトロウイルス科ファミリーウイルスは、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む。

【0026】

いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターは、組み込み欠損性のレンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ、ｇＲＮＡ、及び／または鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４からなる群から選択されるＡＡＶである。

【0027】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む。

【0028】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号１の核酸配列を有する。

【0029】

配列番号１
ＴＴＣＣＣＡＴＣＣＡＣＡＣＡＴＡＧＡＧＣＴＴＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＣＴＣＡＣＴＣＡＣＡＧＡＡＴＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＧＧＧＴＴＧＧＣＣＣＴＧＴＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＴＣＴＴＴＴＣＣＣＴＴＧＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡＣＴＣＴＡＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＡＣＴＧＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＣＣＴＡＴＴＡＴＣＴＣＡＴＴＧＡＴＡＣＣＴＣＴＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＡＴＴＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＣＣＧＴＴＴＡＡＧＴＣＴＣＡＴＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＴＧＡＧＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＴＧＡＴＴＡＴＣＡＧＣＧＣＡＣＡＣＡＣＴＣＡＴＣＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＴＧＧＡＴＴＡＴＴＡＧＡＡＧＡＧＡＧＡＧＧＴＣＴＧＣＧＧＣＴＴＣＣＡＣＡＣＣＧＴＡＣＡＧＣＧＴＧＧＴＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＧＧＴＡＴＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＴＴＧＴＴＴＴＴＧＡＴＡＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＧＧＣＴＧＡＴＣＣＴＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＴＣＣＡＣＴＴＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＡＧＴＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＴＣＣＣＣＴＡＣＣＡＧＡＴＧＴＧＧＧＣＣＣＣＡＴＴＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＣＡＧＧＧＡＧＧＴＡＧＧＣＡＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＧＣＣＣＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＴＧＧＧＡＴＧＴＡＣＣＣＡＧＣＴＡＣＣＧＴＧＡＴＴＣＣＡＧＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＴＣＴ

【0030】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号２の核酸配列を有する。

【0031】

配列番号２
ＧＣＴＴＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＣＴＣＡＣＴＣＡＣＡＧＡＡＴＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＧＧＧＴＴＧＧＣＣＣＴＧＴＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＴＣＴＴＴＴＣＣＣＴＴＧＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡＣＴＣＴＡＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＡＣＴＧＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＣＣＴＡＴＴＡＴＣＴＣＡＴＴＧＡＴＡＣＣＴＣＴＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＡＴＴＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＣＣＧＴＴＴＡＡＧＴＣＴＣＡＴＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＴＧＡＧＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＴＧＡＴＴＡＴＣＡＧＣＧＣＡＣＡＣＡＣＴＣＡＴＣＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＴＧＧＡＴＴＡＴＴＡＧＡＡＧＡＧＡＧＡＧＧＴＣＴＧＣＧＧＣＴＴＣＣＡＣＡＣＣＧＴＡＣＡＧＣＧＴＧＧＴＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＧＧＴＡＴＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＴＴＧＴＴＴＴＴＧＡＴＡＣＧＴＧＡＣ

【0032】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号３の核酸配列を有する。

【0033】

配列番号３
ＧＣＴＴＣＡＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＴＣＴＧＴＴＣＡＡＣＣＣＡＧＣＧＡＴＣＣＴＣＣＡＡＣＧＴＣＴＣＡＣＡＡＡＣＡＣＡＡＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＧＧＡＴＧＣＣＴＴＴＧＴＧＡＴＴＴＧＡＣＴＴＡＴＴＴＴＣＣＣＴＣＡＧＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＡＣＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＴＴＴＧＴＴＴＡＡＧＡＡＡＴＴＧＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＣＣＴＧＴＴＡＴＣＴＣＡＴＴＧＡＴＡＣＣＴＴＴＴＡＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＡＴＴＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＣＣＧＴＴＴＡＡＧＴＣＴＣＡＴＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴＡＡＡＣＡＡＡＧＴＡＡＧＡＧＡＧＣＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＡＡＴＴＡＴＣＡＧＣＡＣＡＣＡＣＡＣＴＣＡＴＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＧＡＴＴＡＴＴＡＧＡＡＧＡＧＣＧＡＧＧＴＣＴＧＣＧＧＣＴＴＣＣＡＣ

【0034】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、配列番号４の核酸配列を有する。

【0035】

配列番号４
ＧＣＴＴＣＡＧＡＴＴＣＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＣＴＣＡＣＴＣＡＣＡＧＡＡＴＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＧＧＧＴＴＧＧＣＣＣＴＧＴＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＧＴＴＣＴＴＴＴＣＣＣＴＴＧＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡＣＴＣＴＡＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＡＣＴＧＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＣＣＴＡＴＴＡＴＣＴＣＡＴＴＧＡＴＡＣＣＴＣＴＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＡＴＴＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＣＣＧＴＴＴＡＡＧＴＣＴＣＡＴＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＴＧＡＧＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＴＧＡＴＴＡＴＣＡＧＣＧＣＡＣＡＣＡＣＴＣＡＴＣＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＴＧＧＡＴＴＡＴＴＡＧＡＡＧＡＧＡＧＡＧＧＴＣＴＧＣＧＧＣＴＴＣＣＡＣ

【0036】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する。

【0037】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ１エンハンサーを含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号５の核酸配列を有する。

【0039】

配列番号５
ＴＴＴＡＡＧＴＣＴＴＴＴＧＣＡＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＧＡＴＡＡＣＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＴＧＴＴＧＧＣＴＴＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＡＧＧＴＣＡＡＡＡＧＴＧＴＧＧＧＴＡＴＧＧＧＡＧＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＣＴＡＧＣＣＴＣＡＡＣＴＣＡＡ

【0040】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号６の核酸配列を有する。

【0041】

配列番号６
ＡＡＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＧＡＴＡＡＡＴＧＴＴＣＡＣＣＴＡＴＧＴＴＧＧＣＴＴＣＴＡＧＴＣＴＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＣＴＡＴＡＧＡＧＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＧＧＧＴＡＣＴＧＧＡＧＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＡＡＣＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＣＣＡＡ

【0042】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号７の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号７の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号７の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号７の核酸配列を有する。

【0043】

配列番号７
ＴＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＴＴＣＴＧＴＧＴＡＴＧＧＴＴＴＴＧＴＧＴＴＴＴＡＡＧＴＣＴＴＴＴＧＣＡＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＧＡＴＡＡＣＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＴＧＴＴＧＧＣＴＴＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＡＧＧＴＣＡＡＡＡＧＴＧＴＧＧＧＴＡＴＧＧＧＡＧＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＣＴＡＧＣＣＴＣＡＡＣＴＣＡＡＧＴＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＴＴＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＣＴＴＡＡＣＣＴＣＴＣＴＧＴＡＣＣＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＣＧＴＡＴＧＴＡＣＴＧＴＧＡＴＧＡＴＴＡＴＡＡＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＣＴＣＡＧＡＧＧＡＴＣＴＴＴＣＴＧＡＧＧＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＡＴＧＧＴＡＧＧＴＧＣＴＣＡＧＣＡＣＡＡＧＧＣＣ

【0044】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、配列番号８の核酸配列を有する。

【0045】

配列番号８
ＴＡＧＧＴＴＡＧＴＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＴＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴＡＧＡＡＡＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＧＡＴＡＡＡＴＧＴＴＣＡＣＣＴＡＴＧＴＴＧＧＣＴＴＣＴＡＧＴＣＴＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＣＴＡＴＡＧＡＧＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＧＧＧＴＡＣＴＧＧＡＧＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＡＡＣＣＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣＴＡＴＧＴＧＴＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＣＡＧＧＣＡＣＴＴＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＴＡＣＣＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＡＴＧＴＡＣＴＧＣＡＡＴＧＧＴＴＡＴＡＡＴＡＧＴＡＣＣＴＴＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＴＴＴＧＴＴＴＡＧＡＴＴＡＡＡＡＴＴＴＴＴＡＡＣＣＡＣＡＧＴＡＡＡＴＡＣＴＴＡＧＣＡＣＡＡＧＧＣＣ

【0046】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する。

【0047】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ２エンハンサーを含む。

【0048】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号９の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号９の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号９の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号９の核酸配列を有する。

【0049】

配列番号９
ＣＡＧＡＴＧＧＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＣＣＡＣＡＴＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＣＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＣＴＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＧＧＡＴＡＧＡＣＴＡＧＣＣＡＣＴＴＣＴＣＧＧＡＡＣＧＡＡＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＴＡＧＡＴＴＡＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＴＧＣＣＧＡＴＧＡＡＧＣＣＣＡＡＴＧＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＧＴＧＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＡＧＡＣＣＣＣＧＡＴＡＧＧＡＡＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＴＧＴＣＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＣＣＴＣＣＡＴＡＣＡＧＣＴＴＣＴＡＡＧＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＣＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＧＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＣＣＣＴＡＧＴＡＣＣＡＣＴＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＴＡＴＣＣＡＡＴＴＣＡＧＧＴＣＣＴＣＴＴＴＣＴＧＡＧＡ

【0050】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１０の核酸配列を有する。

【0051】

配列番号１０
ＣＡＧＡＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＡＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＴＴＣＴＣＧＧＡＡＣＧＡＡＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＡＴＣＴＧＣＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＣＧＡＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＴＧＴＧＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＡＴＡＴＧＡＡＡＡＣＡＴＡＡＴＣＴＧＴＧＴＣＣＣＡＧＡＡＡＣＡＴＣＣＣＣＣＡＴＴＣＡＧＣＴＴＣＴＧＡＧＡＡＡＣＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＧＴＣＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＡＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＣＴＣＴＡＧＧＴＣＣＴＣＴＡＣＣＣＣＣＡＧＡＣＡＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡ

【0052】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１１の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１１の核酸配列を有する。

【0053】

配列番号１１
ＴＧＧＧＴＴＴＴＧＣＡＴＧＧＴＡＧＣＣＡＧＡＴＧＧＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＣＣＡＣＡＴＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＣＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＡＣＣＴＧＧＧＣＣＴＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＧＧＡＴＡＧＡＣＴＡＧＣＣＡＣＴＴＣＴＣＧＧＡＡＣＧＡＡＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＴＡＧＡＴＴＡＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＴＧＣＣＧＡＴＧＡＡＧＣＣＣＡＡＴＧＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＧＴＧＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＡＧＡＣＣＣＣＧＡＴＡＧＧＡＡＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＴＧＴＣＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＣＣＴＣＣＡＴＡＣＡＧＣＴＴＣＴＡＡＧＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＣＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＧＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＣＣＣＴＡＧＴＡＣＣＡＣＴＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＴＡＴＣＣＡＡＴＴＣＡＧＧＴＣＣＴＣＴＴＴＣＴＧＡＧＡＡＴＧＴＡ

【0054】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、配列番号１２の核酸配列を有する。

【0055】

配列番号１２
ＧＧＧＣＴＴＧＴＣＡＴＡＧＴＧＧＣＣＡＧＡＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＡＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＴＴＣＴＣＧＧＡＡＣＧＡＡＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＡＴＣＴＧＣＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＣＧＡＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＴＧＴＧＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＡＴＡＴＧＡＡＡＡＣＡＴＡＡＴＣＴＧＴＧＴＣＣＣＡＧＡＡＡＣＡＴＣＣＣＣＣＡＴＴＣＡＧＣＴＴＣＴＧＡＧＡＡＡＣＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＧＴＣＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＡＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＣＴＣＴＡＧＧＴＣＣＴＣＴＡＣＣＣＣＣＡＧＡＣＡＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＡＧＡＡＴＧＴＡ

【0056】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ２エンハンサーは、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する。

【0057】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ３エンハンサーを含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１３の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１３の核酸配列を有する。

【0059】

配列番号１３
ＣＣＣＧＧＧＧＣＣＣＡＧＡＡＴＧＧＧＧＴＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＧＧＴＡＣＴＴＧＧＧＣＣＴＡＴＡＧＧＴＧＴＣＧＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＴＧＴＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＴＡＴＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＣＴＧＡＣＴＴＡＴＧＣＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＴＣＡＧＡＧＡＴＴＣＡＡＧＧＣＴＴＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣ

【0060】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１４の核酸配列を有する。

【0061】

配列番号１４
ＣＣＣＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＴＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＧＧＧＴＧＧＧＧＴＡＣＣＴＧＧＡＣＣＴＡＣＡＧＧＴＧＣＣＧＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＣＧＧＧＡＧＧＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＡＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＣＴＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＣＣ

【0062】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１５の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１５の核酸配列を有する。

【0063】

配列番号１５
ＧＴＧＡＧＧＣＣＣＧＧＧＧＣＣＣＡＧＡＡＴＧＧＧＧＴＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＧＧＴＡＣＴＴＧＧＧＣＣＴＡＴＡＧＧＴＧＴＣＧＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＴＧＴＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＴＡＴＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＣＴＧＡＣＴＴＡＴＧＣＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＴＣＡＧＡＧＡＴＴＣＡＡＧＧＣＴＴＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＣＡＡＴＣＣＴＣＡＴＣＣＣＧＡＴＡＧ

【0064】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、配列番号１６の核酸配列を有する。

【0065】

配列番号１６
ＧＴＧＡＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＴＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＧＧＧＴＧＧＧＧＴＡＣＣＴＧＧＡＣＣＴＡＣＡＧＧＴＧＣＣＧＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＣＧＧＧＡＧＧＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＡＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＣＴＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＣＣＡＡＴＣＣ

【0066】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する。

【0067】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ０エンハンサーを含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１７の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１７の核酸配列を有する。

【0069】

配列番号１７
ＴＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＡＣＧＧＧＧＧＧＴＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＣＡＧＧＣＣＴＴＡＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＡＧＴＴＧＡＡＡＴＧＴＡＴＴＴＧＣＴＡＧＧＡＡＡＧＴＣＡＣＣＧＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＣＴＴＡＴＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＧＣＡＧＣＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＣＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＣＴＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＡＡＧＣＴＡＴＣＡＡＡＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＴＣＡＣＧＴＴＧＧＧＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＡＡＡＣＡＡＴＴＧＴＣＴＡＡＡＴＧＡＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＡＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＡＣＧＧＣＡＡＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＧＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＴＣＣＴＴＴＣＡＣＡＴＴＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＡＡＣＴＴ

【0070】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１８の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１８の核酸配列を有する。

【0071】

配列番号１８
ＡＧＴＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＴＡＡＡＧＡＧＴＧＴＧＡＡＡＧＧＣＡＧＡＧＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＧＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＡＡＣＡＴＡＣＡＴＧＧＧＣＧＧＴＴＴＴＡＡＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＡＧＡＣＡＡＴＴＧＴＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＴＣＴＧＴＧＧＴＴＣＣＴＡＡＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＧＡＴＡＴＴＡＴＴＴＴＡＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＴＧＧＣＴＴＴＴＴＧＡＴＡＧＣＴＴＣＴＴＴＡＴＣＴＴＴＣＧＡＴＣＴＣＡＧＣＴＣＴＴＧＣＡＡＡＧＧＧＧＡＧＧＴＴＧＧＴＧＣＴＣＡＴＴＧＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＡＡＧＧＧＴＴＴＣＴＴＴＧＴＡＧＧＴＣＧＧＴＧＧＣＴＴＴＣＴＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＡＴＴＴＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＴＧＴＴＴＴＡＧＡＡＣＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＴＴＧＣＡＧＣＡＣＴＧＴＴＧＡＡＧＡＣＴＡＧＣＣＡＣＣＣＴＴＴＧＴＧＡＣＣＴＡＧＣＣＣＴＣＴＴＧＧＧＡＡＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＧ

【0072】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１９の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号１９の核酸配列を有する。

【0073】

配列番号１９
ＣＡＧＴＧＧＧＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＡＣＧＡＴＴＣＴＧＡＡＧＣＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＣＴＣＣＣＡＣＡＧＡＴＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＡＴＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＡＣＧＧＧＧＧＧＴＡＧＣＴＡＴＴＣＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＴＴＣＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＣＡＧＧＣＣＴＴＡＡＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＡＧＴＴＧＡＡＡＴＧＴＡＴＴＴＧＣＴＡＧＧＡＡＡＧＴＣＡＣＣＧＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＣＴＴＡＴＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＧＣＡＧＣＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＣＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＣＴＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＡＡＧＣＴＡＴＣＡＡＡＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＴＣＡＣＧＴＴＧＧＧＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＡＡＡＣＡＡＴＴＧＴＣＴＡＡＡＴＧＡＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＡＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＡＣＧＧＣＡＡＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＧＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＴＣＣＴＴＴＣＡＣＡＴＴＣＴＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＡＡＣＴＴＣＡＧＴＡＣＴＣＡＡＣＴＧＴＣＴＴＡＴＣＴＴＣＣＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＣＡＣＡＡＣＴＧＣＣＧＡＴＧＧＡＡＴＡＡＧＡＡＧＴＧＡＴＴＧＡＡＡＴＧＣＡＧＧＣＧＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＣ

【0074】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号２０の核酸配列と少なくとも８５％同一（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一）である核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、配列番号２０の核酸配列を有する。

【0075】

配列番号２０
ＣＧＧＣＴＧＴＣＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＡＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡＧＴＴＴＧＧＧＴＡＡＡＧＧＡＧＴＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＴＡＡＡＧＡＧＴＧＴＧＡＡＡＧＧＣＡＧＡＧＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＧＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＡＡＣＡＴＡＣＡＴＧＧＧＣＧＧＴＴＴＴＡＡＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＡＧＡＣＡＡＴＴＧＴＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＴＣＴＧＴＧＧＴＴＣＣＴＡＡＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＧＡＴＡＴＴＡＴＴＴＴＡＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＴＧＧＣＴＴＴＴＴＧＡＴＡＧＣＴＴＣＴＴＴＡＴＣＴＴＴＣＧＡＴＣＴＣＡＧＣＴＣＴＴＧＣＡＡＡＧＧＧＧＡＧＧＴＴＧＧＴＧＣＴＣＡＴＴＧＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＡＡＧＧＧＴＴＴＣＴＴＴＧＴＡＧＧＴＣＧＧＴＧＧＣＴＴＴＣＴＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＡＴＴＴＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＴＧＴＴＴＴＡＧＡＡＣＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＴＴＧＣＡＧＣＡＣＴＧＴＴＧＡＡＧＡＣＴＡＧＣＣＡＣＣＣＴＴＴＧＴＧＡＣＣＴＡＧＣＣＣＴＣＴＴＧＧＧＡＡＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＧＴＡＴＡＴＣＣＣＴＴＡＣＣＴＧＴＧＧＧＡＧＣＣＣＴＡＴＣＡＧＡＧＧＧＣＴＴＣ

【0076】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する。

【0077】

いくつかの実施形態では、核酸カセットは、リボスイッチに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、リボスイッチへのリガンドの結合は、核酸カセットの発現を誘導する。いくつかの実施形態では、リボスイッチへのリガンドの結合は、核酸カセットの発現を抑制する。

【0078】

いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、一本鎖ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。

【0079】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意に１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0081】

いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、一本鎖抗体断片（例えば、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ））である。

【0082】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＣＤ４、ＣＤ７、またはＩｇＤヒンジドメインである。

【0083】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメインである。

【0084】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８、ＦｃＲＩγ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＯＸ４０、またはＭＨＣ（Ｈ２－Ｋｂ）膜貫通ドメインを含む。

【0085】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。

【0086】

いくつかの実施形態では、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。

【0087】

いくつかの実施形態では、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインである。

【0088】

いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。

【0089】

いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つは、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインである。

【0090】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｎ末端リーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、Ｎ末端リーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインのＮ末端リーダー配列は、キメラ抗原受容体の細胞処理及び細胞膜への局在化中に、抗原認識ドメインから切断される。

【0091】

いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、多鎖タンパク質である。いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である。

【0092】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、Ｉ型糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、またはウェゲナー肉芽腫症である。

【0093】

いくつかの実施形態では、自己抗原は、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクアポリン４、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である。

【0094】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症であり、自己抗原は、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質である。

【0095】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、Ｉ型糖尿病であり、自己抗原は、インスリン、ＧＡＤ－６５、ＩＡ－２、またはＺｎＴ８である。

【0096】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチであり、自己抗原は、コラーゲンＩＩ、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、またはＨＳＰ６５である。

【0097】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、重症筋無力症であり、自己抗原は、ＡＣｈＲ、ＭｕＳＫ、またはＬＲＰ４である。

【0098】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡であり、自己抗原は、ヒストンＩＩＡである。

【0099】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、甲状腺機能低下症であり、自己抗原は、甲状腺で発現されるタンパク質である。

【0100】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、グレーブス病であり、自己抗原は、チロトロピン受容体である。

【0101】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、尋常性天疱瘡であり、自己抗原は、二本鎖ＤＮＡである。

【0102】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、乾癬であり、自己抗原は、二本鎖ＤＮＡである。

【0103】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、視神経脊髄炎であり、自己抗原は、アクアポリン４である。

【0104】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞の集団を患者に投与する前に、先駆細胞の集団を患者またはドナーから単離し、先駆細胞を拡大し、エクスビボで遺伝子修飾して、患者に投与される細胞の集団を得る。いくつかの実施形態では、先駆細胞は、ＣＤ３４＋ＨＳＣであり、先駆細胞は、ＨＳＣ機能的可能性の実質的な損失なしに拡大される。いくつかの実施形態では、患者またはドナーから先駆細胞を単離する前に、患者またはドナーに、１つ以上の多能性造血細胞動員剤を投与する。

【0105】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞の集団を患者に投与する前に、内因性多能性造血細胞の集団は、１つ以上のコンディショニング剤を患者に投与することによって、患者において切除される。

【0106】

いくつかの実施形態では、本方法は、多能性造血細胞の集団を患者に投与する前に、１つ以上のコンディショニング剤を患者に投与することによって、患者における内因性多能性造血細胞の集団を切除することを含む。

【0107】

いくつかの実施形態では、１つ以上のコンディショニング剤は、非骨髄破壊性コンディショニング剤である。いくつかの実施形態では、１つ以上のコンディショニング剤は、患者におけるＣＤ３４＋細胞の集団を枯渇させる。いくつかの実施形態では、枯渇したＣＤ３４＋細胞は、リンパ系前駆細胞である。いくつかの実施形態では、１つ以上のコンディショニング剤は、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ１１７、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３４、ＣＤ９０、ＣＤ４５、またはＣＤ１３３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ１１７に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞毒素にコンジュゲートされている。

【0108】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞の集団を患者に投与すると、投与された細胞またはその子孫は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞に分化する。

【0109】

いくつかの実施形態では、患者は、哺乳動物であり、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトであり、細胞は、ヒト細胞である。

【0110】

別の態様では、本開示は、（ｉ）自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞（例えば、多能性造血細胞）の集団を含む医薬組成物を提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメント、及び（ｉｉ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤に作動可能に連結していてよい。

【0111】

上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、多能性細胞は、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣまたはＨＰＣ）である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、胚幹細胞である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、人工多能性幹細胞である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、リンパ系前駆細胞である。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、ＣＤ３４＋細胞（例えば、ＨＳＣ）である。

【0112】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含むウイルスベクターを用いてエクスビボで形質導入される。

【0113】

いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス科ファミリーウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、及びポックスウイルスからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターは、アルファレトロウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである。

【0114】

【0115】

【0116】

【0117】

いくつかの実施形態では、偽型ウイルスベクターは、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含むポリヌクレオチドを用いてエクスビボでトランスフェクトされる。

【0119】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチルデキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び／または磁気ビーズを使用してトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、エレクトロポレーション、ヌクレオフェクション、スクイーズポレーション、ソノポーレーション、オプティカルトランスフェクション、磁気フェクション、及び／またはインペールフェクションによってトランスフェクトされる。

【0120】

【0121】

いくつかの実施形態では、多能性造血細胞は、細胞のゲノム内の標的位置で一本鎖切断または二本鎖切断を触媒するヌクレアーゼを細胞に送達することによって得られる。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、細胞のゲノム内の標的位置にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と組み合わせて細胞に送達される。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造の反復（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）またはＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）である。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである。

【0122】

【0123】

【0124】

【0125】

【0126】

【0127】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む。

【0128】

【0129】

【0130】

【0131】

【0132】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する。

【0133】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ１エンハンサーを含む。

【0134】

【0135】

【0136】

【0137】

【0138】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する。

【0139】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ２エンハンサーを含む。

【0140】

【0141】

【0142】

【0143】

【0144】

【0145】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ３エンハンサーを含む。

【0146】

【0147】

【0148】

【0149】

【0150】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する。

【0151】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ０エンハンサーを含む。

【0152】

【0153】

【0154】

【0155】

【0156】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する。

【0157】

いくつかの実施形態では、核酸カセットは、リボスイッチに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、リボスイッチへのリガンドの結合は、核酸カセットの発現を誘導する。

【0158】

いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、一本鎖ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、キメラ抗原受容体である。

【0159】

【0160】

【0161】

いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、一本鎖抗体断片（例えば、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ））である。

【0162】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＣＤ４、ＣＤ７、またはＩｇＤヒンジドメインである。

【0163】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメインである。

【0164】

【0165】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。

【0166】

【0167】

【0168】

【0169】

【0170】

【0171】

いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、多鎖タンパク質である。いくつかの実施形態では、自己抗原結合タンパク質は、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である。

【0172】

【0173】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物を含むキットを提供する。キットは、キットの使用者に、自己免疫疾患を有するヒト患者に医薬組成物を投与するように指示する添付文書を更に含み得る。添付文書は、キットの使用者に本明細書に記載の方法を実施するように指示し得る。

【0174】

別の態様では、本開示は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを提供する。核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。

【0175】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む。

【0176】

【0177】

【0178】

【0179】

【0180】

いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３プロモーターは、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する。

【0181】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ１エンハンサーを含む。

【0182】

【0183】

【0184】

【0185】

【0186】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ１エンハンサーは、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する。

【0187】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ２エンハンサーを含む。

【0188】

【0189】

【0190】

【0191】

【0192】

【0193】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ３エンハンサーを含む。

【0194】

【0195】

【0196】

【0197】

【0198】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ３エンハンサーは、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する。

【0199】

いくつかの実施形態では、１つ以上の系統特異的転写調節エレメントは、ＣＮＳ０エンハンサーを含む。

【0200】

【0201】

【0202】

【0203】

【0204】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ０エンハンサーは、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する。

【0205】

【0206】

【0207】

【0208】

【0209】

いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、一本鎖抗体断片（例えば、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ））である。

【0210】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＣＤ４、ＣＤ７、またはＩｇＤヒンジドメインである。

【0211】

いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメインである。

【0212】

【0213】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。

【0214】

【0215】

【0216】

【0217】

【0218】

【0219】

【0220】

【0221】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸カセットを含むウイルスベクターを提供する。

【0222】

【0223】

【0224】

【0225】

【0226】

いくつかの実施形態では、偽型ウイルスベクターは、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を含む。

【図面の簡単な説明】

【0227】

【図1A】Ａ及びＢは、ＰｏＣ研究のために、構成的プロモーターの制御下でキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にするように設計されたレンチウイルスベクター構築物の概略図である。Ａは、レンチウイルス構築物設計の基本構成成分を示す概略図である。既知の抗原特異性を有する抗体からの重鎖及び軽鎖配列を連結することによって、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を作製した。ＣＡＲの検出を容易にするために、Ｈｉｓタグを導入した。第２世代ＣＡＲシグナル伝達ドメインを、調節Ｔ細胞機能との適合性のために選択した。ＰｏＣ研究のために、インビトロアッセイの最適化を可能にし、インビボでＣＡＲ生物学の安全性及び機能を試験するために、無関係な抗原（Ａｇ）に対する特異性を有するｓｃＦｖ（Ｂ）を選択した。ＲＲＥ（Ｒｅｖ応答エレメント）、ｃＰＰＴ（中央ポリプリン帯）、ＥＦＳ（伸長因子１ａショート結合配列）、ＶＬ（可変軽鎖）、ＶＨ（可変重鎖）、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）。

【図1B】図１Ａの続き。

【図2A】ヒトＴ細胞株における抗原特異的ＣＡＲの発現を示す一連のグラフである。ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、レンチウイルスベクター（ＭＯＩ５）で形質導入して、抗原特異的ＣＡＲ（ａＡｇ－ＣＡＲ）を発現させた。ストレプトアビジン－ＰＥコンジュゲートで染色する前に、５０，０００ｐｇ／ｍｌのビオチン化ＣＡＲリガンド（全タンパク質）とともに細胞をインキュベートすることによってフローサイトメトリー（ＦＣ）によって評価される、７２時間後のＣＡＲ発現を示す一連のグラフである。ＦＣプロットは、生ＪｕｒｋａｔＴ細胞に対してゲーティングされており、非形質導入細胞（陰性対照）及び形質導入細胞を示している。ＣＡＲリガンドの滴定を使用して、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として定量化された受容体発現を評価した。

【図2B】ヒトＴ細胞株における抗原特異的ＣＡＲの発現を示す一連のグラフである。ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、レンチウイルスベクター（ＭＯＩ５）で形質導入して、抗原特異的ＣＡＲ（ａＡｇ－ＣＡＲ）を発現させた。異なるレベルのＡｇ特異的ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔＴ細胞のライブラリを生成するために使用されるＭＯＩ滴定を示す一連のグラフである。導入遺伝子ベクターコピー数（ＶＣＮ）（左のグラフ）をｄｄＰＣＲによって測定し、一方で、ＣＡＲ^＋細胞％を（ａ）に概説したように定量化した。

【図2C】ヒトＴ細胞株における抗原特異的ＣＡＲの発現を示す一連のグラフである。ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、レンチウイルスベクター（ＭＯＩ５）で形質導入して、抗原特異的ＣＡＲ（ａＡｇ－ＣＡＲ）を発現させた。使用されるＭＯＩの尺度としてＭＦＩとして定量化された、ＦＣによるＣＡＲ発現を評価することによってＶＣＮの増加に伴うＣＡＲ発現の増加が確認されたことを示すグラフである。

【図3A】ヒトＴ細胞株におけるインビトロでの抗原特異的ＣＡＲ機能の確認を示すグラフである。異なるレベルのａＡｇ－ＣＡＲを発現する形質導入されたＪｕｒｋａｔＴ細胞（図２Ａ～２Ｃに示す形質導入効率）を、インビトロで２４時間、増加量のＣＡＲリガンドで処理した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）として定量化された、発現Ｔ細胞活性化マーカー、ＣＤ６９（左のグラフ）及びＣＤ２５（右のグラフ）のＦＣ分析によって評価されるＣＡＲ機能を示す一連のグラフである。

【図3B】ヒトＴ細胞株におけるインビトロでの抗原特異的ＣＡＲ機能の確認を示すグラフである。異なるレベルのａＡｇ－ＣＡＲを発現する形質導入されたＪｕｒｋａｔＴ細胞（図２Ａ～２Ｃに示す形質導入効率）を、インビトロで２４時間、増加量のＣＡＲリガンドで処理した。培養されたＪｕｒｋａｔＴ細胞からの上清を収集し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってＩＬ－２産生について評価した実験の結果を示すグラフである。データポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表す（ｎ＝３）。

【図4A】形質導入された一次マウスＴ細胞が機能的な抗原特異的ＣＡＲを発現することを示すグラフである。精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^－ナイーブ脾臓Ｔ細胞を、ａＡｇ－ＣＡＲの発現のためのレンチウイルスベクター（ＭＯＩ１０）を添加する前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。７２時間後に、ａＡｇ－ＣＡＲの発現がＦＣ分析によって確認されたことを示す一連のグラフである。プロットは、生ＣＤ４^＋Ｔ細胞に対してゲーティングされている。非形質導入細胞は、陰性対照として使用した。。

【図4B】形質導入された一次マウスＴ細胞が機能的な抗原特異的ＣＡＲを発現することを示すグラフである。精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^－ナイーブ脾臓Ｔ細胞を、ａＡｇ－ＣＡＲの発現のためのレンチウイルスベクター（ＭＯＩ１０）を添加する前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。生ＣＤ４^＋Ｔ細胞の％として定量化された形質導入細胞の％を示す（ｎ＝４）。

【図4C】形質導入された一次マウスＴ細胞が機能的な抗原特異的ＣＡＲを発現することを示すグラフである。精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^－ナイーブ脾臓Ｔ細胞を、ａＡｇ－ＣＡＲの発現のためのレンチウイルスベクター（ＭＯＩ１０）を添加する前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。Ｃ及びＤは、形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^－Ｔ細胞を、インビトロで４８時間、増加濃度のＣＡＲリガンドで処理した実験の結果を示す。Ｔ細胞活性化は、ＭＦＩとして定量化されたＦＣによるＣＤ６９（右のグラフ）及びＣＤ２５（左のグラフ）発現を測定することによって評価した（Ｃ）。培養された細胞からの上清は、ＩＬ－２分泌について並行して評価した。データポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表す（ｎ＝４）（Ｄ）。

【図4D】形質導入された一次マウスＴ細胞が機能的な抗原特異的ＣＡＲを発現することを示すグラフである。精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^－ナイーブ脾臓Ｔ細胞を、ａＡｇ－ＣＡＲの発現のためのレンチウイルスベクター（ＭＯＩ１０）を添加する前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。Ｃ及びＤは、形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^－Ｔ細胞を、インビトロで４８時間、増加濃度のＣＡＲリガンドで処理した実験の結果を示す。Ｔ細胞活性化は、ＭＦＩとして定量化されたＦＣによるＣＤ６９（右のグラフ）及びＣＤ２５（左のグラフ）発現を測定することによって評価した（Ｃ）。培養された細胞からの上清は、ＩＬ－２分泌について並行して評価した。データポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表す（ｎ＝４）（Ｄ）。

【図5】Ａ及びＢは、インビトロでのＣＡＲの活性化後に、形質導入された一次マウス調節Ｔ細胞が免疫抑制性サイトカイン、ＩＬ－１０を分泌することを示すグラフである。精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇを、発現ａＡｇ－ＣＡＲのためのレンチウイルス形質導入（ＭＯＩ１０）の前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。Ａは、７２時間後に、ａＡｇ－ＣＡＲの発現がＦＣ分析によって確認されたことを示すグラフである。プロットは、生ＣＤ４^＋Ｔ細胞に対してゲーティングした。Ｂは、形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇを、培地単独または１０μｇのＣＡＲリガンドにおいて４８時間培養した実験の結果を示すグラフである。上清を収集し、ＩＬ－１０分泌を定量化した。バーは、示される個別のデータポイントを有する平均＋／－ＳＥＭを表す（ｎ＝４）。対応のないＴ検定によって評価される統計的有意性：＊＊ｐ＝０．００１９

【図6A】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、再構築された免疫区画内で優先的なＦｏｘＰ３プロモーター指向性導入遺伝子発現を有する調節Ｔ細胞の生成をもたらすことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するように設計されたレンチウイルス構築物で形質導入した。移植の１０週間後、ＧＦＰの発現を再構築された免疫区画内で評価した。Ｔｒｅｇプロモーター設計を示す概略図である。構築物内の保存された非コード配列（ＣＮＳ）ドメイン１、２、及び３、Ｆｏｘｐ３プロモーター、ならびに３’ＵＴＲ配列エレメントは、Ｔｒｅｇ区画内の導入遺伝子発現を向上させ、一方で、他の免疫サブセット内の導入遺伝子発現を制限するように設計される。プロモーター活性は、ＧＦＰの発現によって評価した。

【図6B】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、再構築された免疫区画内で優先的なＦｏｘＰ３プロモーター指向性導入遺伝子発現を有する調節Ｔ細胞の生成をもたらすことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するように設計されたレンチウイルス構築物で形質導入した。移植の１０週間後、ＧＦＰの発現を再構築された免疫区画内で評価した。移植動物の脾臓に由来するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞におけるＧＦＰ発現プロファイルを示す代表的なＦＣプロットである。

【図6C】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、再構築された免疫区画内で優先的なＦｏｘＰ３プロモーター指向性導入遺伝子発現を有する調節Ｔ細胞の生成をもたらすことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するように設計されたレンチウイルス構築物で形質導入した。移植の１０週間後、ＧＦＰの発現を再構築された免疫区画内で評価した。ＦＣによって示される免疫細胞で評価されるＦｏｘｐ３プロモーターの活性を示す。ＧＦＰ発現は、ＭＦＩとして定量化した。個別のデータポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表すバーでの生物学的複製を表す（ｎ＝４）。ＢＭ（骨髄）、ＤＰ（二重陽性）、ＳＰ（単一陽性）、ＭＬＮ（腸間膜リンパ節）、ｐＬＮ（末梢リンパ節）。

【図7A】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、インビボでＣＡＲ発現調節Ｔ細胞の生成をもたらすことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、ＣＡＲ発現を免疫区画全体で評価した。骨髄キメラマウスにおけるＴｒｅｇ発達及び機能の変化を、エクスビボで測定した。Ｔｒｅｇプロモーター設計の構成成分を示す概略図である。プロモーター活性は、抗原特異的ＣＡＲの発現によって評価した。

【図7B】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、インビボでＣＡＲ発現調節Ｔ細胞の生成をもたらすことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、ＣＡＲ発現を免疫区画全体で評価した。骨髄キメラマウスにおけるＴｒｅｇ発達及び機能の変化を、エクスビボで測定した。移植動物の脾臓に由来するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現プロファイルを示す代表的なＦＣプロットである。

【図7C】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、インビボでＣＡＲ発現調節Ｔ細胞の生成をもたらすことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、ＣＡＲ発現を免疫区画全体で評価した。骨髄キメラマウスにおけるＴｒｅｇ発達及び機能の変化を、エクスビボで測定した。エクスビボでのＦＣ分析によって評価された、ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現する脾臓調節Ｔ細胞の同等の数及び表現型が検出されることを示す一連のグラフである。脾臓当たりの調節細胞の総数を定量化した（左のグラフ）。転写因子Ｆｏｘｐ３及び表面マーカーＣＤ２５を含む主要な調節Ｔ細胞遺伝子の発現レベルを、それぞれＭＦＩ（中央及び右のグラフ）として定量化した。個別のデータポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表すバーでの生物学的複製を表す（ＣＡＲ－ｎ＝４、ＣＡＲ＋ｎ＝６）。統計的差異は、対応のないＴ細胞検定によって評価したが、有意差は検出されなかった。

【図8A】ＣＡＲを発現する形質転換されたマウス骨髄ＨＳＣ由来Ｔｒｅｇが、無関係な導入遺伝子を発現するＴｒｅｇと同等の免疫抑制性活性を有することを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、インビトロで免疫機能の変化について評価した。ＣＡＲ発現Ｔｒｅｇを、細胞トレーサーバイオレットで標識されたエフェクターＴ細胞を用いてＴｒｅｇを培養することによって、免疫抑制性能力について評価した実験の結果を示す。エフェクターＴ細胞を、対照ＣＡＲ－またはＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇの存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズで９６時間刺激した。代表的なヒストグラムは、示される実験条件のための細胞トレーサー色素プロファイルを示す。

【図8B】ＣＡＲを発現する形質転換されたマウス骨髄ＨＳＣ由来Ｔｒｅｇが、無関係な導入遺伝子を発現するＴｒｅｇと同等の免疫抑制性活性を有することを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、インビトロで免疫機能の変化について評価した。細胞トレーサー色素の希釈によって増殖性応答を定量化した実験の結果を示す。データは、分裂を受けている、細胞トレーサーで標識された細胞のパーセンテージ、すなわち「増殖％」として表される。個別のデータポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表すバーでの生物学的複製を表す（ＣＡＲ－ｎ＝４、ＣＡＲ＋ｎ＝６）。統計的有意性は、細胞の各々の同等の比について対応のあるＴ検定によって評価したが、有意差は検出されなかった。

【図9A】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣ由来Ｔｒｅｇが、抗原特異的ＣＡＲ刺激によって活性化され得、向上した免疫抑制可能性を示すことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ特異的（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（対照ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、ＣＡＲリガンドを用いてインビトロで４８時間培養して、活性化を評価した。１０μｇのＣＡＲリガンドによる刺激後のＣＤ２５発現レベルの変化を示す代表的なヒストグラムを示す。

【図9B】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣ由来Ｔｒｅｇが、抗原特異的ＣＡＲ刺激によって活性化され得、向上した免疫抑制可能性を示すことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ特異的（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（対照ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、ＣＡＲリガンドを用いてインビトロで４８時間培養して、活性化を評価した。ＣＤ２５レベルは、ＭＦＩとして対照ＣＡＲ－及びＣＡＲ＋発現調節Ｔ細胞において定量化される。

【図9C】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣ由来Ｔｒｅｇが、抗原特異的ＣＡＲ刺激によって活性化され得、向上した免疫抑制可能性を示すことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ特異的（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（対照ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、ＣＡＲリガンドを用いてインビトロで４８時間培養して、活性化を評価した。Ｃ及びＤは、対照（黒い円）及びＣＡＲ発現Ｔｒｅｇ（白い正方形）を、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズの不在下（Ｃ）または存在下（Ｄ）で１０μｇのＣＡＲリガンドに４８時間曝露した実験の結果を示す。上清を収集し、ＩＬ１０分泌をＥＬＩＳＡによって決定した。統計的有意性は、対応のあるＴ検定によって評価し、ｐ値が示されている。

【図9D】形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣ由来Ｔｒｅｇが、抗原特異的ＣＡＲ刺激によって活性化され得、向上した免疫抑制可能性を示すことを示す。系統－ＢＭ細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ特異的（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（対照ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、ＣＡＲリガンドを用いてインビトロで４８時間培養して、活性化を評価した。Ｃ及びＤは、対照（黒い円）及びＣＡＲ発現Ｔｒｅｇ（白い正方形）を、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズの不在下（Ｃ）または存在下（Ｄ）で１０μｇのＣＡＲリガンドに４８時間曝露した実験の結果を示す。上清を収集し、ＩＬ１０分泌をＥＬＩＳＡによって決定した。統計的有意性は、対応のあるＴ検定によって評価し、ｐ値が示されている。

【0228】

定義
本明細書で使用する場合、用語「多能性細胞」とは、２つ以上の分化細胞型に発達する能力を保有する細胞を意味する。例えば、多能性細胞は、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）などの、造血系統の２つ以上の分化細胞型に発達する能力を保有する多能性造血細胞であり得る。多能性造血細胞の例は、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、リンパ系前駆細胞、及びＣＤ３４＋細胞である。

【0229】

本明細書で使用する場合、用語「幹細胞」及び「未分化細胞」とは、複数の細胞型に分化する発達能力を有する、未分化の、または部分的に分化した状態にある細胞を意味する。幹細胞は、その機能的可能性を維持しながら、増殖し、かかる幹細胞をより多く生じさせることが可能である。幹細胞は、非対称的に分裂することができ、これは、不可避的非対称性分化として既知であり、ある娘細胞が、親幹細胞の機能的可能性を保持しながら、他の娘細胞が、親細胞とは異なる、いくつかの他の特定の機能、表現型、及び／または発達可能性を発現する。娘細胞自体は、増殖し、その後、１つ以上の成熟細胞型に分化する子孫を産生するように誘導されることができ、一方で、親の発達可能性を有する１つ以上の細胞も保持することができる。分化細胞は、多能性細胞に由来してもよく、多能性細胞自体が多能性細胞などから由来する。代替的に、集団内の幹細胞のいくつかは、２つの幹細胞に対称的に分裂することができる。したがって、用語「幹細胞」とは、特定の状況下にて、より特殊化または分化した表現型に分化する発達可能性を有し、ある特定の状況下にて、実質的に分化されることなく増殖する能力を保持する細胞の任意のサブセットを意味する。いくつかの実施形態では、幹細胞という用語は一般に、子孫（ｄｅｓｃｅｎｄａｎｔ）（子孫（ｐｒｏｇｅｎｙ）細胞）が、分化により、例えば、胚細胞及び組織の進行性多様化において生じる、完全に個別の特徴を獲得することにより、多くの場合に異なる方向に特殊化する、自然に存在する親細胞を意味する。いくつかの分化細胞はまた、より大きな発達可能性の細胞を生じさせる能力を有する。かかる能力は、天然であってよく、または様々な因子で処理した際に、人工的に誘導されてよい。幹細胞として始まる細胞は、分化した表現型に進行し得るが、次いで、「反転」し、幹細胞の表現型を再発現するように誘導され得る。この用語は多くの場合、当業者により、「脱分化」、または「リプログラミング」、または「レトロ分化」と呼ばれる。

【0230】

本明細書で使用する場合、用語「造血幹細胞」及び「ＨＳＣ」とは、自己複製して、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むが、これらに限定されない、多様な系統の成熟血液細胞に分化する能力を有する、未成熟血液細胞を意味する。かかる細胞は、ＣＤ３４＋細胞を含み得るか、または含み得ないことが当該技術分野において既知である。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未成熟細胞である。ヒトにおいて、ＣＤ３４＋細胞は、上で定義される幹細胞の性質を有する細胞のサブ集団を含むと考えられるのに対し、マウスにおいて、ＨＳＣは、ＣＤ３４－である。加えて、ＨＳＣはまた、長期再増殖ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）及び短期再増殖ＨＳＣ（ＳＴ－ＨＳＣ）を意味する。ＬＴ－ＨＳＣ及びＳＴ－ＨＳＣは、機能的可能性、及び細胞表面マーカー発現に基づき分化される。例えば、ヒトＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ９０＋、ＣＤ４９Ｆ＋、及びｌｉｎ－（ＣＯ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ２３５Ａを含む成熟系統マーカーに陰性である）であり得る。マウスにおいて、骨髄ＬＴ－ＨＳＣは、ＣＤ３４－、ＳＣＡ－１＋、Ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５－、Ｓｌａｍｆ１／ＣＤ１５０＋、ＣＤ４８－、及びｌｉｎ－（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ－７ｒａを含む成熟系統マーカーに陰性である）であり得るのに対し、ＳＴ－ＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＳＣＡ－１＋、Ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５－、Ｓｌａｍｆ１／ＣＤ１５０＋、及びｌｉｎ－（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ－７ｒａを含む成熟系統マーカーに陰性である）であり得る。加えて、ＳＴ－ＨＳＣは、恒常性条件下にて、ＬＴ－ＨＳＣよりも休止しておらず（すなわち、より活性であり）、より増殖性である。しかしながら、ＬＴ－ＨＳＣは、より大きな自己複製可能性を有する（すなわち、それらは成人期を通して生残し、連続したレシピエントを通して連続的に移植することができる）のに対し、ＳＴ－ＨＳＣは、限定的な自己複製を有する（すなわち、それらは限定的な期間のみ生残し、連続的な移植可能性を保有しない）。これらのＨＳＣのいずれかを、本明細書に記載の方法のいずれかで使用することができる。任意に、ＳＴ－ＨＳＣは、非常に増殖性であり、したがって、分化した子孫をより素早く生じさせることができるため、有用である。

【0231】

本明細書で使用する場合、用語「造血前駆細胞」及び「ＨＰＣ」とは、自己複製して、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むが、これらに限定されない、多様な系統の成熟血液細胞に分化する能力を有する、未成熟血液細胞を意味する。造血前駆細胞の例としては、リンパ系前駆細胞及び骨髄系前駆細胞が挙げられる。

【0232】

本明細書で使用する場合、用語「胚幹細胞」及び「ＥＳ細胞」とは、好適な条件下でインビトロ培養液中で維持可能な、胚盤胞の内部細胞塊に由来する、胚由来の全能性または多分化能幹細胞を意味する。ＥＳ細胞は、例えば、内胚葉、外胚葉、または中胚葉の、３つの脊椎動物の胚芽層のいずれかの細胞内に分化することが可能である。ＥＳ細胞は、好適なインビトロ培養条件下にて、無期限に増殖する能力もまた特徴とする。ＥＳ細胞は、例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２８２：１１４５（１９９８）に記載されており、その開示は、胚幹細胞の構造及び機能性に関するため、参照により本明細書に組み込まれている。

【0233】

本明細書で使用する場合、用語「人工多能性幹細胞」、「ｉＰＳ細胞」、及び「ｉＰＳＣ」とは、分化した体細胞から直接誘導可能な多分化能幹細胞を意味する。ヒトｉＰＳ細胞は、リプログラミング因子の特定のセットを、例えば、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘファミリー転写因子（例えば、Ｓｏｘ１、Ｓｏｘ２、Ｓｏｘ３、Ｓｏｘｌ５）、Ｍｙｃファミリー転写因子（例えば、ｃ－Ｍｙｃ、１－Ｍｙｃ、ｎ－Ｍｙｃ）、Ｋｒｕｐｐｅｌ－様ファミリー（ＫＬＦ）転写因子（例えば、ＫＬＦ１、ＫＬＦ２、ＫＬＦ４、ＫＬＦ５）、及び／またはＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、及び／またはＧｌｉｓ１などの関連転写因子を含み得る、非多能性細胞に導入することによって生成され得る。ヒトｉＰＳ細胞はまた、例えば、ｍｉＲＮＡ、転写因子の作用を模倣する低分子、または系統特定因子の使用によって生成され得る。ヒトｉＰＳ細胞は、３つの脊椎動物の胚芽層、例えば、内胚葉、外胚葉、または中胚葉のいずれかの細胞に分化する能力を特徴とする。ヒトｉＰＳ細胞は、好適なインビトロ培養条件下にて、無期限に増殖する能力もまた特徴とする。ヒトｉＰＳ細胞は、例えば、ＴａｋａｈａｓｈｉａｎｄＹａｍａｎａｋａ，Ｃｅｌｌ１２６：６６３（２００６）に記載されており、その開示は、ｉＰＳ細胞の構造及び機能性に関するため、参照により本明細書に組み込まれている。

【0234】

本明細書で使用する場合、用語「自己由来」とは、個体自身の細胞、組織、核酸分子などから得られるかまたはこれらに由来する、細胞、組織、核酸分子、もしくは他の物質を意味する。例えば、本明細書に記載の１つ以上のタンパク質を発現する細胞の集団（例えば、多能性細胞の集団）の文脈において、自己由来細胞は、療法を受けている患者から得られ、次いで、１つ以上の目的のタンパク質の発現を指令するベクターで形質導入またはトランスフェクトされる細胞を含む。

【0235】

本明細書で使用する場合、用語「同種異系」とは、同一種の異なる対象から得られるかもしくはそれに由来する細胞、組織、核酸分子、または他の物質を意味する。例えば、本明細書に記載の１つ以上のタンパク質を発現する細胞の集団（例えば、多能性細胞の集団）の文脈において、同種異系細胞は、（ｉ）療法を受けていない対象から得られ、次いで、（ｉｉ）１つ以上の所望のタンパク質の発現を指令するベクターで形質導入またはトランスフェクトされる細胞を含む。語句「発現を指令する」とは、発現する１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含めることを意味する。ポリヌクレオチドは、目的のタンパク質の発現を向上させる、追加の配列モチーフを含有し得る。

【0236】

本明細書で使用する場合、用語「ＨＬＡが一致した」とは、多能性造血幹細胞移植療法を必要とするレシピエントに造血幹細胞移植片を提供するドナーなどの、ドナーとレシピエントとの間で、ＨＬＡ抗原のいずれもがミスマッチしていない、ドナーとレシピエントのペアを意味する。内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、入ってくる移植片を異物として認識する可能性が低く、したがって、移植組織に対して免疫応答をマウントする可能性が低いため、ＨＬＡが一致した（すなわち、６つの対立遺伝子の全てが一致する）ドナーとレシピエントのペアは、移植片拒絶のリスクが低下する。

【0237】

本明細書で使用する場合、用語「ＨＬＡがミスマッチした」とは、多能性造血幹細胞移植療法を必要とするレシピエントに造血幹細胞移植片を提供するドナーなどの、とりわけ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、及びＨＬＡ－ＤＲに対して、少なくとも１つのＨＬＡ抗原が、ドナーとレシピエントとの間でミスマッチした、ドナーとレシピエントのペアを意味する。いくつかの実施形態では、あるハプロタイプは一致しており、他のものはミスマッチしている。内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、ＨＬＡがミスマッチしたドナーとレシピエントのペアの場合、入ってくる移植片を異物として認識する可能性が高く、かかるＴ細胞及びＮＫ細胞は、したがって、移植組織に対して免疫応答をマウントする可能性が高いため、ＨＬＡがミスマッチしたドナーとレシピエントのペアは、ＨＬＡが一致したドナーとレシピエントのペアと比較して、移植片拒絶のリスクが増加する可能性がある。

【0238】

本明細書で使用する場合、用語「機能的可能性」とは、造血幹細胞などの多能性細胞に関する場合、以下を含む幹細胞の機能的性質を意味する：１）多能性（これは、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むが、これらに限定されない、複数の異なる血液系統に分化する能力を意味する）、２）自己複製（これは、幹細胞が、母細胞と同等の可能性を有し、更に、個体の寿命を通して、疲弊を伴わずに繰り返し生じることができる能力を有する、娘細胞を生じさせる能力を意味する）、ならびに３）幹細胞またはその子孫が幹細胞ニッシェにホーミングし、生産的かつ持続的な細胞成長及び分化を再確立する際に、移植レシピエントに再導入される能力。

【0239】

本明細書で使用する場合、用語「切除する」、「切除すること」、「切除」、「調節する」、「コンディショニング」とは、インビボまたはエクスビボでの細胞の集団における１つ以上の細胞の枯渇を意味する。本開示のいくつかの実施形態では、治療用の細胞の集団などの治療用組成物を対象に投与する前に、患者（例えば、本明細書に記載の疾患のための治療を受ける患者）内で、内因性細胞を切除するのが望ましい場合がある。これは、例えば、新しく投与される細胞に、細胞が生着し得る環境を提供するために、有益であり得る。内因性細胞の集団の切除は、例えば、標的細胞で発現される抗原に結合する抗体または抗体－薬物コンジュゲートを使用し、その後、標的細胞の殺傷を行って、特定の細胞型を選択的に標的にする方法で実施され得る。更に、または代替的に、切除は、特定の細胞型に局在化せず、代替的に、様々な異なる細胞で細胞毒性効果を発揮することが可能な細胞毒素を使用する、非特異的な方法で実施され得る。切除の例としては、インビボまたはインビトロでの細胞の集団における細胞の少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれ以上）の枯渇が挙げられる。細胞のサンプル内で細胞計数を定量化することは、例えば、計数チャンバ、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター、フローサイトメトリー、または当該技術分野において既知の他の細胞計数方法の使用による、様々な細胞計数技術を使用して実施され得る。

【0240】

本開示の組成物及び方法に従って、患者における細胞の集団を「除去」するために（すなわち、治療のために患者を「調節する」ために）使用され得る例示的な薬剤としては、アルキル化剤、例えば、窒素マスタード（例えば、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、またはメルファラン）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、またはストレプトゾシン）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン）、トリアジン（例えば、ダカルバジンまたはテモゾロミド）、またはエチレンイミン（例えば、アルトレタミンまたはチオテパ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、１つ以上のコンディショニング剤は、内因性ＣＤ３４＋ＨＳＣまたはＨＰＣの集団などの、特定の内因性多能性細胞の集団を選択的に標的にして切除する、非骨髄破壊性コンディショニング剤である。例えば、１つ以上のコンディショニング剤としては、シタラビン、抗胸腺細胞グロブリン、フルダラビン、またはイダルビシンを挙げることができる。

【0241】

本明細書で使用する場合、用語「調節する」及び「コンディショニング」とは、対象が、細胞の集団（例えば、ＣＤ３４＋細胞などの多能性細胞の集団）を含有する移植組織を受けるために準備されるプロセスを意味する。かかる操作は、例えば、内因性細胞（例えば、とりわけ内因性ＣＤ３４＋細胞）を選択的に枯渇させることによって、細胞移植組織の生着を促進し、それによって、外因性細胞移植組織によって埋められる空孔を作り出す。本明細書に記載の方法によれば、対象は、内因性細胞（例えば、とりわけＣＤ３４＋細胞）を切除することが可能な１つ以上の薬剤、放射線療法、またはこれらの組み合わせを対象に投与することによって、細胞移植組織操作のためにコンディショニングされ得る。本開示の組成物及び方法と組み合わせるのに有用なコンディショニングレジメンは、骨髄破壊性であっても、非骨髄破壊性であってもよい。当該技術分野において周知の他の細胞切除の薬剤及び方法（例えば、抗体及び抗体－薬物コンジュゲート）も使用され得る。

【0242】

本明細書で使用する場合、用語「骨髄破壊性」または「骨髄破壊」とは、典型的には、細胞毒性剤または放射線への曝露により、造血系を実質的に不全にする、または破壊する、コンディショニング編成を意味する。骨髄破壊は、造血系を破壊する、高用量の細胞毒性剤または全身放射線によりもたらされる、完全な骨髄破壊を包含する。

【0243】

本明細書で使用する場合、用語「非骨髄破壊性」または「骨髄抑制性」とは、宿主由来の、実質的に全ての造血細胞を除去しない、コンディショニング編成を意味する。

【0244】

造血幹及び／または前駆細胞の文脈において本明細書で使用する場合、用語「動員」とは、細胞が典型的に存在する幹細胞ニッシェ（例えば骨髄）から末梢循環に、かかる細胞を放出することを意味する。「動員剤」とは、幹細胞ニッシェから末梢循環への、造血幹及び／または前駆細胞の放出を誘導することが可能である薬剤である。

【0245】

本明細書で使用する場合、用語「膨張剤」とは、所与の細胞型の、エクスビボでの増殖を促進可能な物質を意味する。したがって、「造血幹細胞膨張剤」または「ＨＳＣ膨張剤」とは、エクスビボで造血幹細胞の集団の増殖を促進することが可能な物質を意味する。造血幹細胞膨張剤としては、細胞が造血幹細胞の機能的可能性を保持するように、造血幹細胞の集団の増殖を引き起こすものが挙げられる。本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る例示的な造血幹細胞膨張剤としては、限定されないが、米国特許第８，９２７，２８１号及び同第９，５８０，４２６号に記載されるものなどのアリール炭化水素受容体アンタゴニスト、及び特に、化合物ＳＲ１が挙げられ、これらの各々の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る追加の造血幹細胞膨張剤としては、化合物ＵＭ－１７１及び米国特許第９，４０９，９０６号に記載される他の化合物が挙げられ、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。造血幹細胞膨張剤としては、ＵＳ２０１７／００３７０４７に記載される化合物などの化合物ＵＭ－１７１の構造及び／または立体異性体バリアントを更に含み、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。本開示における使用に好適な追加の造血幹細胞膨張剤としては、とりわけ、例えば、ＷＯ２０００／０２３５６７に記載されるヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えば、トリコスタチンＡ、トラポキシン、トラポキシンＡ、クラミドシン、酪酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、スベラニロヒドロキサム酸、ｍ－カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキサミド、ＨＣ－トキシン、Ｃｙｌ－２、ＷＦ－３１６１、デプデシン、及びラジシコールが挙げられ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0246】

本明細書で使用する場合、用語「Ｔ細胞」とは、細胞媒介性免疫において中心的な役割を果たすリンパ球のタイプを意味する。Ｔ細胞は、細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在によって、Ｂ細胞及びＮＫ細胞などの他のリンパ球と区別され得る。Ｔ細胞受容体は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によってコードされる自己分子に関連する抗原を認識することによって、Ｔ細胞に抗原特異性を付与する。抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、ウイルス感染細胞などの表面上でＭＨＣ分子とともに表示され得る。Ｔ細胞のいくつかのサブセットがあり、各々が異なる機能（例えば、エフェクターＴ細胞、調節Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞毒性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ）、及びガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞））を有する。

【0247】

本明細書で使用する場合、用語「調節Ｔ細胞」または「Ｔｒｅｇ細胞」とは、免疫系を調節し、自己抗原に対する耐性を維持し、自己免疫疾患を予防する免疫抑制性Ｔ細胞のサブ集団を意味する。例えば、Ｔｒｅｇ細胞は、他のＴ細胞集団の増殖及び／またはエフェクター機能を抑制する能力を有する。Ｔｒｅｇ細胞は、その独自の表面タンパク質提示に基づいて区別され得る。例えば、Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＦＯＸＰ３、及び／またはＣＤ１７バイオマーカーを発現するＴ細胞であり得る。Ｔｒｅｇ細胞は、例えば、ＩＬ－２／ＩＬ－２受容体依存性メカニズムを介して、及び阻害性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、及びＴＧＦ－β）の産生によって、その免疫抑制性効果を実行する。

【0248】

本明細書で使用する場合、用語「自己反応性エフェクター細胞」または「自己反応性エフェクター免疫細胞」とは、免疫エフェクター応答の促進（例えば、標的に対する免疫応答の促進）に関与し、自己抗原を認識する細胞を意味する。自己反応性エフェクター免疫細胞の例としては、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。

【0249】

本明細書中で使用する場合、用語「細胞型」とは、遺伝子発現データに基づいて統計的に分離可能な表現型を共有する細胞群を指す。例えば、一般的な細胞型の細胞は、同様の構造及び／または機能的特徴、例えば、同様の遺伝子活性化パターン及び抗原提示プロファイルを共有している場合がある。一般的な細胞型の細胞としては、生体内の一般的な組織（例えば、上皮組織、神経組織、結合組織、もしくは筋肉組織）から分離される細胞、及び／または一般的な臓器、組織系、血管、もしくは他の構造及び／または領域から分離される細胞を挙げることができる。

【0250】

本明細書で使用する場合、用語「自己抗原結合タンパク質」とは、対象（例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象）において内因性に発現される抗原に特異的に結合するタンパク質（例えば、一本鎖タンパク質または複数のポリペプチドサブユニットからなるタンパク質）を意味する。自己抗原結合性タンパク質の例は、自己免疫疾患を有する対象において内因性に発現される抗原に特異的に結合する、キメラ抗原受容体及び一本鎖抗体断片などの一本鎖タンパク質である。自己抗原結合性タンパク質の追加の例は、自己免疫疾患を有する対象において内因性に発現される抗原に特異的に結合する、Ｔ細胞受容体及び全長抗体などの多鎖タンパク質である。

【0251】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」（Ａｂ）とは、特定の抗原に特異的に結合するか、またはそれと免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を意味し、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重、三重、及び四重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ）、ならびに例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒｌｇＧ、及びｓｃＦｖ断片を含む抗体の抗原結合断片を含むが、これらに限定されない、抗体のポリクローナル形態、モノクローナル形態、遺伝子操作された形態、及び他の方法で修飾された形態を含む。更に、別段の指示がない限り、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）とは、標的タンパク質に特異的に結合することが可能であるインタクトな分子及び抗体断片（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片など）の両方を含むことを意味する。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片は、インタクトな抗体のＦｃ断片を欠き、動物の循環からより迅速に消失し、インタクトな抗体よりも少ない非特異的な組織結合を有し得る（参照により本明細書に組み込まれているＷａｈｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６（１９８３）を参照されたい）。

【0252】

用語「抗原結合断片」とは、本明細書で使用する場合、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を意味する。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって果たされ得る。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であり得る。抗体の「抗原結合断片」という用語に包含される結合断片の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。（ｉ）Ｆａｂ断片、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを含むｄＡｂ、（ｖｉ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４－５４６，１９８９）、（ｖｉｉ）Ｖ_ＨまたはＶ_ＬドメインからなるｄＡｂ、（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｘ）任意に合成リンカーによって結合され得る２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせ。更に、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈが別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、Ｖ_Ｌ領域及びＶ_Ｈ領域がペアになって一価分子を形成する単一タンパク質鎖として作製されることを可能にするリンカーによって結合され得る（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として既知であり、例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６（１９８８）、及びＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３（１９８８）を参照されたい）。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を使用して得ることができ、断片は、インタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断、またはいくつかの実施形態では、当該技術分野において既知の化学的ペプチド合成操作によって産生することができる。

【0253】

本明細書で使用する場合、用語「ＶＨ」とは、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはＦａｂの重鎖を含む抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を意味する。「ＶＬ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、またはＦａｂの軽鎖を含む免疫グロブリン軽鎖の可変領域を意味する。抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造特徴を有する糖タンパク質である。抗体は、特定の標的に対する結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、抗体及び標的特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。天然抗体及び免疫グロブリンは、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成される。天然抗体の各重鎖は、アミノ末端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いて多数の定常ドメインを有する。天然抗体の各軽鎖は、アミノ末端（ＶＬ）に可変ドメインを有し、カルボキシ末端に定常ドメインを有する。

【0254】

本明細書で使用する場合、用語「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とは、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方において見出される超可変領域を意味する。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。当該技術分野において理解されるように、抗体の超可変領域を表すアミノ酸位置は、当該技術分野において既知の文脈及び様々な定義に応じて変化し得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置が、ある基準のセットの下では超可変領域内とみなされ得る一方で、異なる基準のセットの下では超可変領域外とみなされ得るという点で、ハイブリッド超可変位置とみなすことができる。これらの位置のうちの１つ以上はまた、伸長超可変領域において見出され得る。本明細書に記載の抗体は、これらのハイブリッド超可変位置における修飾を含み得る。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのフレームワーク領域を含み、これらは主にβシート構成を採用し、３つのＣＤＲによって接続され、ＣＤＲは、βシート構造に連結するループを形成し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖内のＣＤＲは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順序でＦＲ領域によって密接に近接して一緒に保持され、他の抗体鎖由来のＣＤＲとともに、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（参照により本明細書に組み込まれているＫａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．１９８７）を参照されたい）。本明細書で使用する場合、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、別段の指示がない限り、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．の免疫グロブリンアミノ酸残基番号付けシステムに従って行われる。

【0255】

本明細書で使用する場合、用語「可変領域ＣＤＲ」とは、配列または構造ベースの方法を使用して同定されるＣＤＲまたは相補性決定領域内のアミノ酸を含む。本明細書で使用する場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」とは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非隣接抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６，１９７７、及びＫａｂａｔ，ｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１－３２４２，１９９１、Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７）、ならびにＭａｃＣａｌｌｕｍｅｔａｌ．，（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５，１９９６）によって記載されており、定義は、互いに比較した場合、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。用語「ＣＤＲ」とは、例えば、配列比較に基づいてＫａｂａｔによって定義されるＣＤＲであり得る。

【0256】

本明細書で使用する場合、用語「フレームワーク領域」または「ＦＷ領域」とは、ＣＤＲに隣接するアミノ酸残基を含む。ＦＷ領域残基は、とりわけ、例えば、ヒト抗体、げっ歯類由来抗体（例えば、マウス抗体）、ヒト化抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）、一本鎖抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ断片）、抗体ドメイン、及び二重特異性抗体に存在し得る。

【0257】

本明細書で使用する場合、用語「ヒンジ領域」とは、抗体またはその抗原結合断片の文脈において、抗体またはその抗原結合断片のＦａｂ領域などの抗体またはその抗原結合断片の抗原結合部分（複数可）と、抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域などの抗体またはその抗原結合断片のアイソタイプを指示する抗体またはその抗原結合断片の一部分との間に位置する、抗体またはその抗原結合断片（例えば、ＩｇＧ２抗体またはその抗原結合断片）のドメインを意味する。例えば、モノクローナル抗体の文脈において、ヒンジ領域は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２及びＣＨ３ドメインに接続する、各重鎖のほぼ中心に位置するポリペプチドである。抗体またはその抗原結合断片のヒンジ領域は、抗体またはその抗原結合断片の鎖間に化学的連結を提供し得る。例えば、モノクローナル抗体では、ヒンジ領域内のシステイン残基は、鎖間ジスルフィド結合を形成し、それによって重鎖間に明示的な共有結合を提供する。本明細書で使用する場合、抗体ヒンジ領域は、Ｋａｂａｔｅｔａｌ，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．１９８７）の番号付けシステムに従って番号付けされ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0258】

本明細書で使用する場合、用語「二重特異性抗体」とは、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有する抗体（例えば、モノクローナル抗体、多くの場合、ヒト化抗体またはヒト化抗体）を意味する。例えば、結合特異性のうちの１つは、自己抗原（例えば、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）に対して指向され得、他のものは、任意の他の抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来タンパク質、ウイルスコードされたエンベロープタンパク質、細菌由来タンパク質、または細菌表面タンパク質などに指向され得る。

【0259】

本明細書で使用する場合、用語「キメラ」抗体とは、ラットまたはマウスなどの１つの供給源生体の免疫グロブリンに由来する可変ドメイン配列（例えば、ＣＤＲ配列）、及び異なる生物（例えば、とりわけ、ヒト、別の霊長類、ブタ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、ネコ、イヌ、モルモット、ウシ科ファミリーのメンバー（とりわけ、ウシ、バイソン、バッファロー、エルク、及びヤクなど）、雌ウシ、ヒツジ、ウマ、またはバイソン）の免疫グロブリンに由来する定常領域を有する抗体を意味する。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれているＭｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２２９（４７１９）：１２０２－７（１９８５）、Ｏｉｅｔａｌ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．４：２１４－２２１（１９８６）、Ｇｉｌｌｉｅｓｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２５：１９１－２０２（１９８５）、米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、及び同第４，８１６，３９７号を参照されたい。

【0260】

本明細書で使用する場合、用語「ダイアボディ」とは、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体を意味し、各ポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインの分子内会合を可能にするには短すぎるリンカー（例えば、５つのアミノ酸で構成されるリンカー）によって結合されたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを含む。この構成は、ホモ二量体構造を形成するように、各ドメインを別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインとペアになるように強制する。したがって、用語「トリアボディ」とは、３つのペプチド鎖を含む三価抗体を意味し、それらの各々は、同じペプチド鎖内のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインの分子内会合を可能にするために、非常に短いリンカー（例えば、１～２つのアミノ酸で構成されるリンカー）によって結合された１つのＶ_Ｈドメイン及び１つのＶ_Ｌドメインを含有する。その天然構造に折り畳むために、このように構成されたペプチドは、典型的には、適切な折り畳みを可能にするために、隣接するペプチド鎖のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを空間的に互いに近接して配置するように三量体化する（参照により本明細書に組み込まれているＨｏｌｌｉｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－４８，１９９３を参照されたい）。

【0261】

本明細書で使用する場合、「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（「ＤＶＤ－Ｉｇ」）とは、リンカーを介して２つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインを組み合わせて、四価の二重標的化単剤を作製する抗体を意味する。（参照により本明細書に組み込まれているＧｕｅｔａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，５０２：２５－４１，２０１２）。本明細書に記載のＤＶＤの軽鎖において使用するための好適なリンカーとしては、Ｇｕｅｔａｌの３０ページの表２．１に同定されているものが挙げられる。

【0262】

本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」とは、タンパク質の実質的に全ての部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、Ｃ_Ｌ、Ｃ_Ｈドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）、ヒンジ、（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ））が、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、わずかな配列の変化または変異のみを有する抗体を意味する。ヒト抗体は、ヒト細胞内で（例えば、組換え発現によって）、または機能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／または軽鎖）遺伝子を発現することが可能である非ヒト動物または原核もしくは真核細胞によって産生され得る。更に、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは天然のヒト抗体において見出されないリンカーペプチドを含み得る。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域及び軽鎖の可変領域を接続する、２～約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含み得る。かかるリンカーペプチドは、ヒト起源のものとみなされる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージディスプレイ方法を含む、当該技術分野において既知の様々な方法によって作製され得る。参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第４，４４４，８８７号及び同第４，７１６，１１１号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ１９９８／４６６４５、ＷＯ１９９８／５０４３３、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９８／１６６５４、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、及びＷＯ１９９１／１０７４１を参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現することが不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生され得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８８５，７９３号、同第５，９１６，７７１号、及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。

【0263】

本明細書で使用する場合、用語「ヒト化」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、または抗体の他の標的結合サブドメインなど）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を意味する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応する。ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものであってもよい。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の少なくとも一部分を含み得る。抗体ヒト化の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－７，１９８８、Ｑｕｅｅｎｅｔａｌの米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、及び同第６，１８０，３７０号、ＥＰ２３９４００、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７、米国特許第５，２２５，５３９、ＥＰ５９２１０６、及びＥＰ５１９５９６を参照されたい。

【0264】

本明細書で使用する場合、用語「霊長類化抗体」とは、霊長類由来抗体からのフレームワーク領域、ならびに非霊長類源の抗体からの他の領域、例えば、ＣＤＲ及び／または定常領域を含む抗体を意味する。霊長類化抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，６５８，５７０号、同第５，６８１，７２２号、及び同第５，６９３，７８０号を参照されたい。例えば、本明細書に記載の霊長類化抗体またはその抗原結合断片は、非霊長類抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲを、霊長類の１つ以上のフレームワーク領域を含有する抗体またはその抗原結合断片に挿入することによって産生され得る。

【0265】

本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核、原核、またはファージクローンを含む、単一のクローンに由来する抗体を意味し、それが産生される方法によらない。

【0266】

本明細書で使用する場合、用語「ｓｃＦｖ」とは、抗体からの重鎖及び軽鎖の可変ドメインが結合されて１つの鎖を形成している一本鎖Ｆｖ抗体を意味する。ｓｃＦｖ断片は、リンカーによって分離された抗体軽鎖（ＶＬ）の可変領域（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び／またはＣＤＲ－Ｌ３）及び抗体重鎖（ＶＨ）の可変領域（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及び／またはＣＤＲ－Ｈ３）を含む単一のポリペプチド鎖を含有する。ｓｃＦｖ断片のＶＬ及びＶＨ領域を結合するリンカーは、タンパク質生成アミノ酸で構成されるペプチドリンカーであり得る。ｓｃＦｖ断片のタンパク質分解に対する耐性を増加させるように（例えば、Ｄ－アミノ酸を含有するリンカー）、ｓｃＦｖ断片の溶解度を向上させるために（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカーもしくは反復グリシン及びセリン残基を含有するポリペプチドなどの親水性リンカー）、分子の生物物理的安定性を改善するために（例えば、分子内もしくは分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー）、またはｓｃＦｖ断片の免疫原性を減弱させるために（例えば、グリコシル化部位を含有するリンカー）、代替的なリンカーが使用され得る。ｓｃＦｖ分子は、当該技術分野において既知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号、Ｆｌｏｅｔａｌ．、（Ｇｅｎｅ７７：５１、１９８９）、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．、（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３、１９８８）、Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏｅｔａｌ．、（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３０：１０１１７、１９９１）、Ｍｉｌｅｎｉｃｅｔａｌ．、（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５１：６３６３、１９９１）、及びＴａｋｋｉｎｅｎｅｔａｌ．、（ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ４：８３７、１９９１）に記載されている。ｓｃＦｖ分子のＶＬ及びＶＨドメインは、１つ以上の抗体分子に由来し得る。また、当業者は、本明細書に記載のｓｃＦｖ分子の可変領域が、それらが由来する抗体分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも理解するであろう。例えば、一実施形態では、アミノ酸残基で保存的置換または変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸置換が作製され得る（例えば、ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基において）。代替的にまたは加えて、変異がＣＤＲアミノ酸残基に作製され、当該技術分野で認識される技術を使用して抗原結合を最適化する。ｓｃＦｖ断片は、例えば、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２０１１／０８４７１４に記載されている。

【0267】

本明細書で使用する場合、用語「キメラ抗原受容体」（「ＣＡＲ」）とは、所与の抗原（例えば、自己抗原）を認識し、それに特異的に結合する１つ以上の抗原認識領域（例えば、１つ以上のＣＤＲ）を含有する組換えポリペプチドを意味する。本明細書に記載のＣＡＲは、一般に、少なくとも細胞外抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び本明細書に定義される刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含有する。刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖であってよい。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、以下に記載されるように、少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含有する。共刺激分子は、例えば、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／またはＣＤ２８を含有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメインを有するキメラ融合タンパク質を含有する。ＣＡＲは、例えば、細胞外抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメインを有するキメラ融合タンパク質を含有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに１つ以上の共刺激分子（複数可）に由来する２つの機能的シグナル伝達ドメイン、及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有するキメラ融合タンパク質を含有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに１つ以上の共刺激分子（複数可）に由来する少なくとも２つの機能的シグナル伝達ドメイン、及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有するキメラ融合タンパク質を含有する。ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端にリーダー配列を含有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含有し、これは、ＣＡＲの細胞処理及び細胞膜への局在化中に、抗原認識ドメイン、例えば、（ｓｃＦｖ）から切断され得る。誤解を避けるために、本明細書で使用する場合、用語「細胞内ドメイン」及び「細胞質ドメイン」とは、同じ意味で用いられる。

【0268】

用語「シグナル伝達ドメイン」とは、セカンドメッセンジャーを生成することにより、またはかかるメッセンジャーに応答することによってエフェクターとして機能することにより、定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を制御するために、細胞内で情報を伝達することによって作用するタンパク質の機能的部分を意味する。本明細書に記載のＣＡＲは、様々な形態で存在し得る抗体またはその抗体断片を含有し得る。例えば、抗原認識ドメインは、例えば、単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、及びヒト化抗体を含む隣接ポリペプチド鎖の一部として発現され得る（Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．，１９９９，Ｉｎ：ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＮＹ、Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｈｏｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６）。

【0269】

本明細書で使用する場合、用語「ヒンジドメイン」とは、ＣＡＲの文脈において、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、及び活性化を可能にするために、抗原認識ドメインをＴ細胞表面から離れるように位置させる役割を果たすＣＡＲの細胞外部分を意味する。ＣＡＲは、一般に、抗原認識ドメインと膜貫通ドメインとの間に１つ以上のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインの例としては、ＣＤ２８、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４（ヒンジ－Ｆｃ部分）、ＣＤ４、ＣＤ７、及びＩｇＤに由来するものが挙げられる。

【0270】

本明細書で使用する場合、用語「膜貫通ドメイン」とは、細胞外抗原認識ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを融合させ、ＣＡＲをＴ細胞の形質膜にアンカーするＣＡＲの一部分を意味する。膜貫通ドメインの例としては、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、ＦｃＲＩγ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＯＸ４０、及びＭＨＣ（Ｈ２－Ｋｂ）に由来するものが挙げられる。

【0271】

本明細書で使用する用語としての「刺激分子」とは、Ｔ細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様について刺激的な方法でＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する一次細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供するＴ細胞によって発現される分子を意味する。一態様では、一次シグナルは、例えば、ペプチドが負荷されたＭＨＣ分子とのＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって開始され、これは、増殖、活性化、分化などを含むが、これらに限定されない、Ｔ細胞応答の媒介をもたらす。刺激的な方法で作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても既知である）、及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の例示的なＣＡＲ分子において、本開示の任意の１つ以上のＣＡＲ分子における細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えば、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列を含む。本開示の特定のＣＡＲにおいて、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列は、ヒト配列、または非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの同等の残基である。

【0272】

本明細書で使用する用語としての「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、分子の細胞内部分を意味する。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えば、ＣＡＲＴｒｅｇ細胞の免疫抑制機能を促進するシグナルを生成し得る。例えば、Ｔｒｅｇ細胞における免疫抑制機能の例としては、自己反応性エフェクター免疫細胞の活性及び／または増殖の抑制が挙げられる。

【0273】

いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインとしては、一次刺激または抗原依存性シミュレーションに関与する分子に由来するものが挙げられる。実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナルまたは抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、ＣＡＲＴｒｅｇの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体または共刺激分子からの細胞質配列を含み得る。

【0274】

一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0275】

本明細書で使用する場合、「ゼータ」、または代替的に「ゼータ鎖」、「ＣＤ３ゼータ」もしくは「ＴＣＲゼータ」は、ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃ．Ｎｏ．ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、または非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの同等の残基として定義され、「ゼータ刺激ドメイン」、または代替的に「ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン」もしくは「ＴＣＲゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分であるゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。一態様では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃ．Ｎｏ．ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４、またはその機能的オルソログである非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの同等の残基を含む。

【0276】

「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、Ｔ細胞による共刺激応答、例えば、限定されないが、増殖を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを意味する。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要とされる抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0277】

共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分に由来し得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーにおいて表すことができる：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び活性化ＮＫ細胞受容体。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、もしくは天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその機能的断片を含み得る。

【0278】

本明細書で使用する場合、用語「自己免疫疾患」とは、自らの免疫系が自らの組織を誤って攻撃することに起因する疾患の群を意味する。自己免疫障害の非限定的な例としては、Ｉ型糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。

【0279】

本明細書で使用する場合、用語「炎症」とは、感染性因子（例えば、病原体）、毒素、腫瘍細胞、刺激物、及びストレスによる細胞傷害に対するシグナル媒介性応答を意味する。急性炎症は、有害な刺激（例えば、病原体、損傷した細胞、がん／腫瘍細胞、ストレス、または刺激物）から身体を防御及び保護するために重要であるが、慢性及び不適切に高い炎症は、組織破壊（例えば、自己免疫、炎症性疾患、神経変性疾患、または心血管疾患において）を引き起こす可能性がある。炎症は、流体の蓄積（浮腫）及び白血球の動員を伴う毛細血管拡張の結果を表す。本明細書で使用する目的のために、炎症の増加または低下は、白血球の動員の増加もしくは低下、及び／または免疫細胞活性の増加もしくは低下（例えば、Ｔ細胞極性化、Ｔ細胞活性化、樹状細胞活性化、好中球活性化、好酸球活性化、好塩基球活性化、Ｔ細胞増殖、Ｂ細胞増殖、単球増殖、マクロファージ増殖、樹状細胞増殖、ＮＫ細胞増殖、ＩＬＣ増殖、肥満細胞増殖、好中球増殖、好酸球増殖、好塩基球増殖、細胞傷害性Ｔ細胞活性化、単球の循環、末梢血造血幹細胞、マクロファージ極性化、マクロファージ食作用、マクロファージＡＤＣＰ、好中球食作用、単球食作用、肥満細胞食作用、Ｂ細胞食作用、好酸球食作用、樹状細胞食作用、マクロファージ活性化、抗原提示（例えば、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞の抗原提示）、抗原提示細胞の遊走（例えば、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞の遊走）、リンパ節免疫細胞ホーミング及び細胞移出（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、もしくはマクロファージのリンパ節ホーミング及び移出）、ＮＫ細胞活性化、ＮＫ細胞ＡＤＣＣ、肥満細胞脱顆粒化、ＮＫ細胞脱顆粒化、ＩＬＣ活性化、ＩＬＣＡＤＣＣ、ＩＬＣ脱顆粒化、細胞傷害性Ｔ細胞脱顆粒化、好中球脱顆粒化、好酸球脱顆粒化、好塩基球脱顆粒化、好中球動員、好酸球動員、ＮＫＴ細胞活性化、Ｂ細胞活性化、調節Ｔ細胞分化、樹状細胞成熟、ＨＥＶの発生、または異所性もしくは三次リンパ器官（ＴＬＯ）の発生のうちの１つ以上）によって評価される。本開示の組成物及び方法は、自己免疫疾患を有すると診断された対象または自己免疫疾患に罹患していない対象における炎症を低減させるために投与され得る。

【0280】

本明細書で使用する場合、用語「白血球動員」とは、循環系から、組織損傷、感染、傷害、またはストレスの部位への白血球の移動または遊走を意味する。組織内の血流から炎症性病巣への白血球動員は、炎症性応答の成功をマウントするために基本的であり、好中球輸送が損なわれる状態のクラスである白血球接着欠損症に罹患している患者の再発感染及び乏しい生存率によって証明されるように、自然免疫応答の不可欠な部分を形成する。単球はまた、それらのマクロファージへの発達中に、感染または組織損傷の不在下においてこのプロセスを使用する。白血球動員は、主に、白血球輸送を制御する分子が優先的に発現される後毛細血管細静脈で行われる。白血球動員のプロセス中、白血球は血管内皮に接着し、その後、化学遊走物質（例えば、ケモカイン）によって駆動される経内皮遊走によって循環を離れる。これは、血管外遊出として既知のプロセスである。

【0281】

本明細書で使用する場合、用語「発現する」とは、以下の事象のうちの１つ以上を意味する：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）、（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳、ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。タンパク質産物をコードする遺伝子の文脈において、用語「遺伝子発現」などは、用語「タンパク質発現」などと同じ意味で用いられる。対象における目的の遺伝子またはタンパク質の発現は、例えば、対象から得られるサンプルにおける、対応するタンパク質をコードするｍＲＮＡの量もしくは濃度の増加（例えば、本明細書に記載の、もしくは当該技術分野において既知のＲＮＡ検出操作、例えば、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）及びＲＮＡｓｅｑ技術を使用して評価されるような）、対応するタンパク質の量もしくは濃度の増加（例えば、本明細書に記載の、もしくは当該技術分野において既知のタンパク質検出方法、例えば、とりわけ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価されるような）、及び／または対応するタンパク質の活性の増加（例えば、酵素の場合、本明細書に記載の、もしくは当該技術分野において既知の酵素活性アッセイを使用して評価されるような）を検出することによって明らかにすることができる。本明細書で使用する場合、上記の事象のうちの１つ以上、または全てが、細胞内または細胞が存在する培地中で検出され得る場合、細胞は、目的の遺伝子またはタンパク質を「発現する」とみなされる。例えば、目的の遺伝子またはタンパク質は、（ｉ）細胞もしくは細胞の集団による、ｍＲＮＡ鋳型などの対応するＲＮＡ転写産物の産生（例えば、本明細書に記載のＲＮＡ検出操作を使用する）、（ｉｉ）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシング、例えば、本明細書に記載のＲＮＡ検出操作を使用する）、（ｉｉｉ）ＲＮＡ鋳型のタンパク質産物への翻訳（例えば、本明細書に記載のタンパク質検出操作を使用する）、及び／または（ｉｖ）タンパク質産物の翻訳後修飾（例えば、本明細書に記載のタンパク質検出操作を使用する）を検出することができる場合、細胞または細胞の集団によって「発現される」とみなされる。

【0282】

本明細書で使用する場合、用語「核酸カセット」とは、遺伝子産物（例えば、本明細書に記載の遺伝子産物）をコードする組換え核酸（例えば、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ）を意味する。遺伝子産物は、ＲＮＡ、ペプチド、またはタンパク質であり得る。遺伝子産物についてのコード領域に加えて、核酸カセットは、プロモーター、エンハンサー（複数可）、脱安定化ドメイン（複数可）、応答エレメント（複数可）、レポーターエレメント（複数可）、インスレーターエレメント（複数可）、ポリアデニル化シグナル（複数可）、及び／または他の機能的エレメントなどの、発現を促進または向上するための１つ以上のエレメントを含み得るか、またはそれらに作動可能に連結していてよい。本開示の実施形態は、任意の既知の好適なプロモーター、エンハンサー（複数可）、脱安定化ドメイン（複数可）、応答エレメント（複数可）、レポーターエレメント（複数可）、インスレーターエレメント（複数可）、ポリアデニル化シグナル（複数可）、及び／または他の機能的エレメントを利用することができる。

【0283】

本明細書で使用する場合、用語「作動可能に連結される」とは、第２の分子に結合される第１の分子を意味し、分子は、第１の分子が第２の分子の機能に影響を及ぼすように配置される。２つの分子は、単一の切れ目のない分子の一部であってもよく、そうでなくてもよく、隣接していてもよく、隣接していなくてもよい。例えば、プロモーターが細胞内の目的の転写可能なポリヌクレオチド分子の転写を調節する場合、プロモーターは、転写可能なポリヌクレオチド分子に作動可能に連結している。更に、転写調節エレメントの２つの部分は、一方の部分の転写活性化機能が他方の部分の存在により悪影響を受けないようにそれらが結合している場合、互いに作動可能に連結している。２つの転写調節エレメントは、リンカー核酸（例えば、介在非コード核酸）によって互いに作動可能に連結していてよく、または介在ヌクレオチドが存在せずに互いに作動可能に連結していてよい。

【0284】

本明細書中で使用する場合、用語「転写調節エレメント」とは、目的の遺伝子の転写を少なくとも部分的に制御する核酸を指す。転写調節エレメントは、遺伝子転写を制御するか、または制御するのを支援するプロモーター、エンハンサー、及び他の核酸（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含み得る。転写調節エレメントの例は、例えば、Ｍａｎｔｅｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（６）：３５９３－６０２（２００６）、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）、Ｚｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）、Ｔｏｎｅｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（２）：１９４－２０２（２００８）、Ｄｉｋｉｙｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９３１－９４６（２０２１）、Ｋａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）、及びＧｏｅｄｄｅｌ，ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８５（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０）に記載されており、これらの開示は、それらの全体が参照により組み込まれている。

【0285】

本明細書で使用する場合、用語「系統特異的」とは、別の細胞型よりも特定の細胞型に対して選択的であることを意味する。例えば、用語「系統特異的転写調節エレメント」とは、特定の細胞型において見出される遺伝子の転写を少なくとも部分的に制御する核酸を意味する。系統特異的転写調節エレメントの例としては、Ｔｒｅｇ細胞の明確な特徴であるＦｏｘｐ３遺伝子の転写を制御するＦｏｘｐ３プロモーター、ＣＮＳ１エンハンサー、ＣＮＳ２エンハンサー、ＣＮＳ３エンハンサー、及びＣＮＳ０エンハンサーが挙げられる。

【0286】

本明細書で使用されるとき、用語「プロモーター」とは、ＲＮＡポリメラーゼが結合するＤＮＡ上の認識部位を指す。ポリメラーゼは、核酸カセットの転写を駆動する。本明細書に記載の組成物及び方法とともに使用するのに好適な例示的なプロモーターは、例えば、Ｍａｎｔｅｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（６）：３５９３－６０２（２００６）、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）、及びＺｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されている。更に、用語「プロモーター」とは、生物学的な系において自然に存在しない調節ＤＮＡ配列である合成プロモーターを意味し得る。合成プロモーターは、自然に存在しないポリヌクレオチド配列と組み合わせた、自然に存在するプロモーターの一部を含有し、様々な核酸カセット、ベクター、及び標的細胞型を使用して組換えＤＮＡを発現するように最適化され得る。

【0287】

本明細書で使用する場合、用語「エンハンサー」とは、転写開始部位に対するエンハンサーの距離または配向に関係なく、転写の効率を高めることができる調節エレメントのタイプを意味する。したがって、エンハンサーは、転写開始部位の上流もしくは下流に、またはプロモーターからかなりの距離に位置され得る。エンハンサーはまた、物理的及び機能的にプロモーターと重複し得る。プロモーター配列（例えば、Ｆｏｘｐ３プロモーター配列）を含む多数のポリヌクレオチドはまた、エンハンサー配列（例えば、ＣＮＳ１エンハンサー配列）を含有する。

【0288】

本明細書で使用する場合、用語「Ｆｏｘｐ３プロモーター」とは、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦｏｘｐ３遺伝子の転写をオンにするプロモーターを意味する。例示的なヒトＦｏｘｐ３プロモーターとしては、例えば、配列番号１に記載される核酸が挙げられ、これはＭａｎｔｅｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（６）：３５９３－６０２（２００６）に記載されている。ヒトＦｏｘｐ３プロモーターの別の例としては、配列番号２に記載される核酸が挙げられ、これはＫｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されている。例示的なマウスＦｏｘｐ３プロモーターとしては、例えば、配列番号３に記載される核酸が挙げられ、これはＺｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されている。配列番号３のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＦｏｘｐ３プロモーターの更なる例としては、配列番号４に記載される核酸が挙げられる。Ｆｏｘｐ３プロモーター核酸の追加の例としては、上記核酸配列に関して少なくとも７０％の同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸が挙げられる。

【0289】

本明細書で使用する場合、用語「ＣＮＳ０エンハンサー」とは、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦｏｘｐ３遺伝子の転写効率を増加させるエンハンサーを意味する。例えば、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るＣＮＳ０エンハンサーとしては、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５を動員するものが挙げられる。例示的なマウスＣＮＳ０エンハンサーとしては、例えば、配列番号１７に記載される核酸が挙げられ、これはＫａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されている。配列番号１７のヒトゲノムへのアラインメントとして、例示的なヒトＣＮＳ０エンハンサーには、例えば、配列番号１８に記載される核酸が含まれる。マウスＣＮＳ０エンハンサーの別の例としては、配列番号１９に記載される核酸が挙げられ、これはＤｉｋｉｙｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９３１－９４６（２０２１）に記載されている。配列番号１９のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ０エンハンサーの更なる例としては、配列番号２０に記載される核酸が挙げられる。ＣＮＳ０エンハンサー核酸の追加の例としては、上記核酸配列に関して少なくとも７０％の同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸が挙げられる。

【0290】

本明細書で使用する場合、用語「ＣＮＳ１エンハンサー」とは、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦｏｘｐ３遺伝子の転写効率を増加させるエンハンサーを意味する。例えば、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るＣＮＳ１エンハンサーとしては、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏ（例えば、Ｆｏｘｏ１及びＦｏｘｏ３）を動員するものが挙げられる。ＣＮＳ１エンハンサーは、Ｔｒｅｇ細胞の末梢誘導及び粘膜免疫寛容に寄与すると考えられている。例示的なヒトＣＮＳ１エンハンサーは、例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸－５００～＋１００を含有する。例示的なマウスＣＮＳ１エンハンサーとしては、例えば、配列番号５に記載される核酸が挙げられ、これはＴｏｎｅｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（２）：１９４－２０２（２００８）に記載されている。配列番号５のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ１エンハンサーの追加の例としては、配列番号６に記載される核酸が挙げられる。マウスＣＮＳ１エンハンサーの別の例としては、配列番号７に記載される核酸が挙げられ、これはＺｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されている。配列番号７のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ１エンハンサーの更なる例としては、配列番号８に記載される核酸が挙げられる。ＣＮＳ１エンハンサー核酸の追加の例としては、上記核酸配列に関して少なくとも７０％の同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸が挙げられる。

【0291】

本明細書で使用する場合、用語「ＣＮＳ２エンハンサー」とは、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦｏｘｐ３遺伝子の転写効率を増加させるエンハンサーを意味する。例えば、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るＣＮＳ２エンハンサーとしては、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌを動員するものが挙げられる。ＣＮＳ２エンハンサーは、機能的Ｔｒｅｇ細胞において高度に脱メチル化されており、Ｔ細胞受容体刺激に応答して、及びＴｒｅｇ細胞増殖中に、Ｆｏｘｐ３発現の安定性に関与すると考えられている。例示的なヒトＣＮＳ２エンハンサーは、例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸＋２，０２２～＋２，７２１を含有する。例示的なマウスＣＮＳ２エンハンサーとしては、例えば、配列番号９に記載される核酸が挙げられ、これはＫａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されている。配列番号９のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ２エンハンサーの追加の例としては、配列番号１０に記載される核酸が挙げられる。マウスＣＮＳ２エンハンサーの別の例としては、配列番号１１に記載される核酸が挙げられ、これはＺｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されている。配列番号１１のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ２エンハンサーの更なる例としては、配列番号１２に記載される核酸が挙げられる。ＣＮＳ２エンハンサー核酸の追加の例としては、上記核酸配列に関して少なくとも７０％の同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸が挙げられる。

【0292】

本明細書で使用する場合、用語「ＣＮＳ３エンハンサー」とは、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦｏｘｐ３遺伝子の転写効率を増加させるエンハンサーを意味する。例えば、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るＣＮＳ３エンハンサーとしては、転写因子Ｆｏｘｏ（例えば、Ｆｏｘｏ１及びＦｏｘｏ３）及び／またはｃ－Ｒｅｌを動員するものが挙げられる。ＣＮＳ３エンハンサーは、Ｆｏｘｐ３発現に必要とされるＴＣＲ刺激を閾値化する役割を果たし、末梢及び胸腺Ｔｒｅｇ細胞の生成に重要であると考えられている。例示的なヒトＣＮＳ３エンハンサーは、例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸＋４，３０１～＋４，５００を含有する。例示的なマウスＣＮＳ３エンハンサーとしては、例えば、配列番号１３に記載される核酸が挙げられ、これはＫａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されている。配列番号１３のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ３エンハンサーの追加の例としては、配列番号１４に記載される核酸が挙げられる。マウスＣＮＳ３エンハンサーの別の例としては、配列番号１５に記載される核酸が挙げられ、これはＺｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されている。配列番号１５のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ３エンハンサーの更なる例としては、配列番号１６に記載される核酸が挙げられる。ＣＮＳ３エンハンサー核酸の追加の例としては、上記核酸配列に関して少なくとも７０％の同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸が挙げられる。

【0293】

本明細書で使用する場合、用語「調節配列」とは、遺伝子（複数可）の転写または翻訳を制御する、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。かかる調節配列は、例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Ｐｅｒｄｅｗｅｔａｌ．，ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ，（２０１４））に記載されている。

【0294】

参照ポリヌクレオチド配列または参照ポリペプチド配列に対する「配列同一性割合（％）」とは、必要であれば、配列をアラインメントし、ギャップを導入して、最大の配列同一性の割合を達成した後、参照ポリヌクレオチド配列または参照ポリペプチド配列内の核酸またはアミノ酸と同一である候補配列内の核酸またはアミノ酸の割合と定義される。核酸またはアミノ酸配列同一性割合を決定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの、一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の能力の範囲内の様々な方法で達成することができる。当業者は、比較されている配列の全長にわたる最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするのに適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性割合の値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用して生成されてよい。一例として、所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ａの配列同一性割合（これは代替的に、所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれ対するある特定の配列同一性割合を有する所与の核酸配列またはアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下のように計算される：
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
式中、Ｘは、Ａ及びＢのプログラムのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）によって同一の一致としてスコアリングされたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂにおける核酸の総数である。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性割合は、Ａに対するＢの配列同一性割合と等しくないと理解される。

【0295】

本明細書で使用する場合、用語「阻害剤」とは、標的分子に結合する、及び／または、別の場合においては、標的分子の活性を抑制する剤（例えば、低分子、ペプチド断片、タンパク質、抗体、またはその抗原結合断片）を意味する。

【0296】

本明細書で使用する場合、用語「内因性」とは、特定の生体（例えば、ヒト）または生体内の特定の位置（例えば、器官、組織、または細胞、例えば、ヒト細胞）に自然に見出される分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を表す。

【0297】

本明細書で使用する場合、用語「外因性」とは、特定の生体（例えば、ヒト）または生体内の特定の位置（例えば、器官、組織、または細胞、例えば、ヒト細胞）に自然に見出されない分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を表す。外因性物質としては、生体またはそこから抽出された培養物質に対して外部源から提供されるものが挙げられる。

【0298】

本明細書で使用する場合、用語「形質導入」及び「形質導入する」とは、細胞内にウイルスベクター構築物またはその一部を導入し、それに続いて細胞においてベクター構築物またはその一部によってコードされる核酸カセットを発現させる方法を意味する。

【0299】

本明細書で使用する場合、用語「ポロキサマー」とは、ポリオキシエチレンの２つの親水性鎖が隣接する、ポリオキシプロピレンの中心の疎水性鎖で構成される、非イオン性の三元ブロックコポリマーを意味する。ポロキサマーは、「プルロニクス」または「シンペロにクス」（ＢＡＳＦ）の商品名でもまた既知である。ブロックコポリマーは、以下の式によって表すことができる：ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ。ポリマーブロックの長さは、カスタマイズすることができる。結果的に、多くの異なるポロキサマーが存在する。本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用するのに好適なポロキサマーとしては、少なくとも約１０，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１１，４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１２，６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１３，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１４，６００ｇ／ｍｏｌ、または少なくとも約１５，０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有するものが挙げられる。ブロックコポリマーの合成は、あるバッチから別のバッチへの、自然な変動度に関連しているため、上で引用した数値（及び、所与のポロキサマーを特徴付けるために本明細書で使用するもの）は、合成の際に正確に到達可能でなくてもよく、平均値は一定の程度で異なる。したがって、本明細書で使用する場合、用語「ポロキサマー」は、別段に明示されていないのであれば、用語「ポロキサマー」（ポロキサマーの混合物としても呼ばれる、いくつかのポロキサマーの実体を表す）と同じ意味で用いることができる。本明細書で使用する場合、ポロキサマー（複数可）のモノマー単位または分子量の数と関係する用語「平均」とは、全てが同一の組成物、及びしたがって同一の分子量を有するポロキサマーを、技術的に産生することができない結果である。最先端の方法に従って産生されたポロキサマーは、ポロキサマーの混合物として存在し、各々は、それらの分子量に関して変動性を示すが、混合物は全体として本明細書で明記される分子量を平均している。ＢＡＳＦ及びＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈは、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用するためのポロキサマーの好適な供給元である。

【0300】

本明細書で使用する場合、例えば、スタウロスポリンなどのタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤の文脈において、用語「バリアント」とは、参照薬剤と比較して１つ以上の修飾を含む薬剤を意味し、（ｉ）参照薬剤の機能的性質（例えば、ＰＫＣ活性を阻害する能力）を保持し、及び／または（ｉｉ）細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞などの本明細書に記載の型の細胞）内で参照薬剤に変換される。スタウロスポリンなどの低分子ＰＫＣ阻害剤の文脈において、参照化合物の構造バリアントとしては、１つ以上の置換基の包含及び／または位置により、参照化合物とは異なるバリアント、ならびに構造異性体（例えば、位置異性体）または立体異性体（例えば、エナンチオマーまたはジアステレオマー）などの参照化合物の異性体であるバリアント、ならびに参照化合物のプロドラッグが挙げられる。干渉ＲＮＡ分子の文脈において、バリアントは、親干渉ＲＮＡ分子と比較して、１つ以上の核酸置換を含有し得る。

【0301】

本明細書で使用する場合、ヒストンの脱アセチル化を阻害する薬剤とは、直接の相互作用、または細胞内で産生されたヒストン脱アセチル化酵素の量の低減を引き起こすこと、もしくはヒストン脱アセチル化酵素とアセチル化ヒストン基質との間の相互作用を阻害することなどによる間接的手段のいずれかにより、ヒストン脱アセチル化酵素の活性、より具体的には、その酵素活性を減衰または防止することが可能な物質または組成物（例えば、低分子、タンパク質、干渉ＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、または他の自然もしくは合成化合物、またはウイルス、もしくは複数の物質で構成される他の材料などの組成物）を意味する。ヒストン脱アセチル化酵素の酵素活性を阻害することは、ヒストン脱アセチル化酵素がヒストン残基（例えば、ヒストンタンパク質内のモノ、ジ、もしくはトリメチル化リジン残基、モノメチル化アルギニン残基、または対称／非対称ジメチル化アルギニン残基）からのアセチル基の除去を触媒する能力を低減させることを意味する。好ましくは、ヒストン脱アセチル化を阻害する薬剤が、別の関連しない生物学的効果を産生するために必要とされる阻害剤の濃度よりも低い濃度で、ヒストン脱アセチル化酵素がヒストン残基からアセチル基を除去する能力を低減させるように、かかる阻害は特異的である。

【0302】

本明細書で使用する場合、用語「ヒストン脱アセチル化酵素」及び「ＨＤＡＣ」とは、ヒストンのＮ末端において、リジン残基のε－アミノ基からの、アセチル基の除去を触媒する酵素のファミリーのいずれか１つを意味する。文脈によって別段の指示がない限り、用語「ヒストン」とは、任意の種由来のＨＩ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、及びＨ５を含む任意のヒストンタンパク質を意味することを意味する。ヒトＨＤＡＣタンパク質または遺伝子産物としては、ＨＤＡＣ－１、ＨＤＡＣ－２、ＨＤＡＣ－３、ＨＤＡＣ－４、ＨＤＡＣ－５、ＨＤＡＣ－６、ＨＤＡＣ－７、ＨＤＡＣ－８、ＨＤＡＣ－９、ＨＤＡＣ－１０、及びＨＤＡＣ－１１が挙げられるが、これらに限定されない。

【0303】

本明細書で使用する場合、「プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達を活性化する」化合物などは、明記した化合物と接触していないプロスタグランジンＥ受容体発現細胞における、プロスタグランジンＥ受容体シグナル形質導入活性と比較して、明記した化合物と接触したプロスタグランジンＥ受容体発現細胞において、プロスタグランジンＥ受容体のシグナル形質導入活性を増加させる能力を有する化合物を意味する。プロスタグランジンＥ受容体シグナル形質導入を測定するために使用され得るアッセイは、例えば、ＷＯ２０１０／１０８０２８に記載されており、その開示がプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の評価方法に関するため、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0304】

本明細書で使用する場合、用語「トランスフェクション」とは、外因性ＤＮＡを原核または真核宿主細胞に導入するために一般に使用される多種多様な技術のいずれか、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクション、ヌクレオフェクション、スクイーズポレーション、ソノポーレーション、オプティカルトランスフェクション、磁気フェクション、インペールフェクションなどを意味する。

【0305】

本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、核酸ベクター（例えば、プラスミドなどのＤＮＡベクター）、ＲＮＡベクター、ウイルス、または、他の好適なレプリコン（例えば、ウイルスベクター）を含む。外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを原核細胞または真核細胞に送達するために、様々なベクターが開発されている。かかる発現ベクターの例は、例えば、ＷＯ１９９４／０１１０２６に記載されており、その開示は、目的の遺伝子の発現に好適なベクターに関するため、参照により本明細書に組み込まれている。本明細書に記載の組成物及び方法とともに使用するのに好適な発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、ならびに例えば、タンパク質の発現及び／または哺乳動物細胞のゲノムへのこれらのポリヌクレオチド配列の組み込みに使用する追加の配列エレメントを含有する。本明細書に記載のタンパク質（複数可）の発現のために使用され得るベクターとしては、遺伝子転写を指令する、プロモーター及びエンハンサー領域などの制御配列を含有するプラスミドが挙げられる。加えて、本明細書に記載のタンパク質（複数可）の発現に有用なベクターは、対応する遺伝子（複数可）の翻訳速度を向上させるか、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外搬出を改善する、ポリヌクレオチド配列を含有し得る。かかる配列エレメントの例は、５’及び３’非翻訳領域、ＩＲＥＳ、ならびに発現ベクターで担持される遺伝子または遺伝子の効率的な転写を指令するためのポリアデニル化シグナル部位である。本明細書に記載の組成物及び方法とともに使用するのに好適な発現ベクターは、かかるベクターを含有する細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドもまた、含有することができる。好適なマーカーの例は、とりわけ、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ノーセオスリシン、またはゼオシンなどの抗生物質に耐性をコードする遺伝子である。

【0306】

本明細書で使用する場合、用語「プラスミド」とは、その中に追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る、染色体外環状二本鎖ＤＮＡ分子を意味する。プラスミドは、ベクターのタイプであり、連結している別の核酸を輸送することが可能な核酸分子である。ある特定のプラスミドは、それらが導入される宿主細胞において自己複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌プラスミド及びエピソーム性哺乳動物プラスミド）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。ある特定のプラスミドは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指令することが可能である。

【0307】

本明細書で使用する場合、用語「対象」及び「患者」とは、同じ意味で用いられ、本明細書に記載の自己免疫疾患などの疾患を発症するリスクのある、もしくは有すると診断されている、及び／または治療を受けている生体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）を意味する。

【0308】

本明細書で使用する場合、用語「投与すること」、「投与」などは、任意の効果的な経路により、患者に、治療剤（例えば、多能性細胞（例えば、胚幹細胞、人工多能性幹細胞、またはＣＤ３４＋細胞）の集団といった、細胞の集団）を直接与えることを意味する。例示的な投与経路は、本明細書に記載されており、とりわけ、静脈内注射などの全身投与経路が挙げられる。

【0309】

本明細書で使用する場合、「治療」及び「治療すること」とは、有益な、または所望の結果、例えば臨床的結果を得るためのアプローチを意味する。有益な、または所望の結果としては、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、１つ以上の兆候または症状の軽減または寛解；疾患または症状の程度の減少；疾患、障害、または症状の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）；疾患または症状の拡大の予防；疾患または症状の進行の遅延または減速；疾患または症状の寛解または緩和；及び（部分的または完全）緩解を挙げることができるが、これらに限定されない。疾患または症状を「寛解すること」または「緩和すること」とは、治療の不在下における程度または時間経過と比較して、疾患、障害、または症状の程度及び／または望ましくない臨床兆候が減少させられ、及び／または進行の時間経過が減速または延長させられることを意味する。「治療」はまた、治療を受けていない場合の予測される生存と比較して、生存を延長することも意味し得る。治療を必要とする者としては、症状または障害を既に有する者、及び症状または障害を発症する傾向にあるか、または発症するリスクのある者、ならびに症状または障害を予防する必要がある者が挙げられる。

【0310】

本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」とは、本明細書に記載の自己免疫疾患などの、哺乳動物に影響を与える特定の疾患または症状を予防、治療、または制御するために、哺乳動物、例えば、ヒトなどの対象に投与され得る治療剤（例えば、多能性造血細胞（例えば、胚幹細胞、人工多能性幹細胞、リンパ系前駆細胞、またはＣＤ３４＋細胞）の集団などの細胞の集団）を含有する組成物を意味する。

【0311】

本明細書中で使用する場合、用語「薬学的に許容される」とは、過度の毒性、刺激、アレルギー反応及び他の問題となる障害がなく、妥当なベネフィット／リスク比を有し、哺乳動物（例えば、ヒト）などの対象の組織との接触に好適な化合物、物質、組成物、及び／または剤形を指す。

【0312】

本明細書で使用する場合、用語「サンプル」とは、対象から単離された試験体（例えば、血液、血液構成成分（例えば、血清または血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤または真皮）、膵液、絨毛膜サンプル、及び細胞）を意味する。サンプルという用語はまた、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ含有サンプルなどの調製または処理されたサンプルに関連し得る。

【0313】

本明細書で使用する場合、用語「約」とは、参照量に対して３０％ほど（例えば、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％）まで変化する量を意味する。

【0314】

本発明で使用する場合、用語「アルキル」とは、１～６個、またはそれ以上の炭素原子を有するものなどの、一価の、任意に分岐したアルキル基を意味する。この用語は、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ヘキシルなどの基により例示される。

【0315】

本明細書で使用する場合、用語「低級アルキル」とは、１～６個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。

【0316】

本明細書で使用する場合、用語「アリール」とは、１つの環（例えばフェニル）、または複数の縮合環（例えばナフチル）を有する、６～１４個の炭素原子の、不飽和芳香族炭素環基を意味する。好ましいアリールとしては、フェニル、ナフチル、フェナントレニルなどが挙げられる。

【0317】

本明細書で使用する場合、用語「アラルキル」及び「アリールアルキル」は同じ意味で用いられ、アリール部分を含有するアルキル基を意味する。同様に、用語「アリール低級アルキル」などは、アリール部分を含有する低級アルキル基を意味する。

【0318】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルアリール」とは、ベンジル、フェネチルなどを含むアリール置換基を有するアルキル基を意味する。

【0319】

本明細書で使用する場合、用語「ヘテロアリール」とは、単環式の複素環式芳香族、または、二環式もしくは三環式の縮合環複素環式芳香族基を意味する。複素環式芳香族基の具体例としては、任意に置換されたピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１，２，３－トリアゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，２，５－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、１，３，４－トリアジニル、１，２，３－トリアジニル、ベンゾフリル、２，３－ジヒドロジベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ－インドリル、ベンズイミダゾリル、イミダゾ［１，２－ａ」ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、ピリド［３，４－ｂ］ピリジル、ピリド［３，２－ｂ］ピリジル、ピリド［４，３－ｂ］ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、５，６，７，８－テトラヒドロキノリル、５，６，７，８－テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、ベンゾキノリルなどが挙げられる。

【0320】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルヘテロアリール」とは、２－フリルメチル、２－チエニルメチル、２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチルなどを含む、ヘテロアリール置換基を有するアルキル基を意味する。

【0321】

本明細書で使用する場合、用語「低級アルケニル」とは、好ましくは２～６個の炭素原子を有し、少なくとも１または２個の、アルケニル不飽和部位を有するアルケニル基を意味する。例示的なアルケニル基は、エテニル（－ＣＨ＝ＣＨ_２）、ｎ－２－プロペニル（アリル、－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）などである。

【0322】

本明細書で使用する場合、用語「アルケニルアリール」とは、２－フェニルビニルなどを含む、アリール置換基を有するアルケニル基を意味する。

【0323】

本明細書で使用する場合、用語「アルケニルヘテロアリール」とは、２－（３－ピリジニル）ビニルなどを含む、ヘテロアリール置換基を有するアルケニル基を意味する。

【0324】

本明細書で使用する場合、用語「低級アルキニル」とは、好ましくは２～６個の炭素原子を有し、少なくとも１～２個の、アルキニル不飽和部位を有するアルキニル基を意味し、好ましいアルキニル基としては、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（－ＣＨ_２Ｃ≡ＣＨ）などが挙げられる。

【0325】

本明細書で使用する場合、用語「アルキニルアリール」とは、フェニルエチニルなどを含む、アリール置換基を有するアルキニル基を意味する。

【0326】

本明細書で使用する場合、用語「アルキニルヘテロアリール」とは、２－チエニルエチニルなどを含む、ヘテロアリール置換基を有するアルキニル基を意味する。

【0327】

本明細書で使用する場合、用語「シクロアルキル」とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチル、シクロオクチルなどといった、３～８個の炭素原子を有する単環式シクロアルキル基を意味する。

【0328】

本明細書で使用する場合、用語「低級シクロアルキル」とは、単環（例えば、シクロヘキシル）、または複数の縮合環（例えば、ノルボルニル）を有する、３～８個の炭素原子の飽和炭素環式基を意味する。好ましいシクロアルキルとしては、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボニルなどが挙げられる。

【0329】

本明細書で使用する場合、用語「ヘテロシクロアルキル」とは、１つ以上の環炭素原子が、例えば、窒素原子、酸素原子、硫黄原子などのヘテロ原子で置き換えられているシクロアルキル基を意味する。例示的なヘテロシクロアルキル基は、ピロリジニル、ピペリジニル、オキソピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、オキソピペラジニル、チオモルホリニル、アゼパニル、ジアゼパニル、オキサゼパニル、チアゼパニル、ジオキソチアゼピニル、アゾカニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニルなどである。

【0330】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルシクロアルキル」とは、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルプロピルなどを含む、シクロアルキル置換基を有するアルキル基を意味する。

【0331】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルヘテロシクロアルキル」とは、２－（１－ピロリジニル）エチル、４－モルホリニルメチル、（１－メチル－４－ピペリジニル）メチルなどを含む、ヘテロシクロアルキル置換基を有するＣ_１－Ｃ_６アルキル基を意味する。

【0332】

本明細書で使用する場合、用語「カルボキシ」とは、基－Ｃ（Ｏ）ＯＨを意味する。

【0333】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルカルボキシ」とは、２－カルボキシエチルなどを含む、カルボキシ置換基を有するＣ_１－Ｃ_５アルキル基を意味する。

【0334】

本明細書で使用する場合、用語「アシル」とは、基－Ｃ（Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは例えば、他の置換基の中でも、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールであってよい。］を意味する。

【0335】

本明細書で使用する場合、用語「アシルオキシ」とは、基－ＯＣ（Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは例えば、他の置換基の中でも、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールであってよい。］を意味する。

【0336】

本明細書で使用する場合、用語「アルコキシ」とは、基－Ｏ－Ｒ［式中、Ｒは例えば、他の置換基の中でも、任意に置換されたＣ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールなどの、任意に置換されたアルキル基である。］を意味する。例示的なアルコキシ基としては、例えば、メトキシ、エトキシ、フェノキシなどが挙げられる。

【0337】

本明細書で使用する場合、用語「アルコキシカルボニル」とは、基－Ｃ（Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒは例えば、他の可能な置換基の中でも、水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールである。］を意味する。

【0338】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルアルコキシカルボニル」とは、２－（ベンジルオキシカルボニル）エチルなどを含む、アルコキシカルボニル置換基を有するアルキル基を意味する。

【0339】

本明細書で使用する場合、用語「アミノカルボニル」とは、基－Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’［式中、Ｒ及びＲ’の各々は独立して、例えば、他の置換基の中でも、水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールであってよい。］を意味する。

【0340】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルアミノカルボニル」とは、２－（ジメチルアミノカルボニル）エチルなどを含む、アミノカルボニル置換基を有するアルキル基を意味する。

【0341】

本明細書で使用する場合、用語「アシルアミノ」とは、基－ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ’［式中、Ｒ及びＲ’の各々は独立して、例えば、他の置換基の中でも、水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールであってよい。］を意味する。

【0342】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルアシルアミノ」とは、２－（プロピオニルアミノ）エチルなどを含む、アシルアミノ置換基を有するアルキル基を意味する。

【0343】

本明細書で使用する場合、用語「ウレイド」とは、基－ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”［式中、Ｒ、Ｒ’、及びＲ”の各々は独立して、例えば、他の置換基の中でも、水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルであってよい。］を意味する。例示的なウレイド基としては、Ｒ’及びＲ”が、それらが結合する窒素原子とともに、３～８員のヘテロシクロアルキル環を形成する部分が更に挙げられる。

【0344】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルウレイド」とは、２－（Ｎ’－メチルウレイド）エチルなどを含む、ウレイド置換基を有するアルキル基を意味する。

【0345】

本明細書で使用する場合、用語「アミノ」とは、基－ＮＲＲ’［式中、Ｒ及びＲ’の各々は独立して、例えば、他の置換基の中でも、水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルであってよい。］を意味する。例示的なアミノ基としては、Ｒ及びＲ’が、それらが結合する窒素原子とともに、３～８員のヘテロシクロアルキル環を形成し得る部分が更に挙げられる。

【0346】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルアミノ」とは、２－（１－ピロリジニル）エチルなどを含む、アミノ置換基を有するアルキル基を意味する。

【0347】

本明細書で使用する場合、用語「アンモニウム」とは、正に荷電した基－Ｎ^＋ＲＲ’Ｒ”［式中、Ｒ、Ｒ’、及びＲ”の各々は独立して、例えば、他の置換基の中でも、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルであってよい。］を意味する。例示的なアンモニウム基としては、Ｒ及びＲ’が、それらが結合する窒素原子とともに、３～８員のヘテロシクロアルキル環を形成する部分が更に挙げられる。

【0348】

本明細書で使用する場合、用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素原子を意味する。

【0349】

本明細書で使用する場合、用語「スルホニルオキシ」とは、基－ＯＳＯ_２－Ｒ［式中、Ｒは水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、ハロゲンで置換されたＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、－ＯＳＯ_２－ＣＦ_３基）、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、及びＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールである。］を意味する。

【0350】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルスルホニルオキシ」とは、２－（メチルスルホニル）エチルなどを含む、スルホニルオキシ置換基を有するアルキル基を意味する。

【0351】

本明細書で使用する場合、用語「スルホニル」とは、基「－ＳＯ_２－Ｒ」［式中、Ｒは水素、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、ハロゲンで置換されたＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、－ＳＯ_２－ＣＦ_３基）、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールである。］を意味する。

【0352】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルスルホニル」とは、２－（メチルスルホニル）エチルなどを含む、スルホニル置換基を有するアルキル基を意味する。

【0353】

本明細書で使用する場合、用語「スルフィニル」とは、基「－Ｓ（Ｏ）－Ｒ」［式中、Ｒは水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、ハロゲンで置換されたＣ_１－Ｃ_６アルキル（例えば、－ＳＯ－ＣＦ_３基）、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールである。］を意味する。

【0354】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルスルフィニル」とは、２－（メチルスルフィニル）エチルなどを含む、スルフィニル置換基を有するＣ_１－Ｃ_５アルキル基を意味する。

【0355】

本明細書で使用する場合、用語「スルファニル」とは、基－Ｓ－Ｒ［式中、Ｒは例えば、他の置換基の中でも、アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールである。］を意味する。例示的なスルファニル基は、メチルスルファニル、エチルスルファニルなどである。

【0356】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルスルファニル」とは、２－（メチルスルファニル）エチルなどを含む、スルファニル置換基を有するアルキル基を意味する。

【0357】

本明細書で使用する場合、用語「スルホニルアミノ」とは、基－ＮＲＳＯ_２－Ｒ’［式中、Ｒ及びＲ’の各々は独立して、他の置換基の中でも、水素、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリールであってよい。］を意味する。

【0358】

本明細書で使用する場合、用語「アルキルスルホニルアミノ」とは、２－（エチルスルホニルアミノ）エチルなどを含む、スルホニルアミノ置換基を有するアルキル基を意味する。

【0359】

個別の置換基の定義による別段の制約がない限り、「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、及び「ヘテロアリール」などの基のような上で説明した基は、任意に、例えば、価数が可能とするのであれば、アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、アルケニル（例えば、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル）、アルキニル（例えば、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル）、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール）、アルキルヘテロアリール（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリール）、アルキルシクロアルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルシクロアルキル）、アルキルヘテロシクロアルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロシクロアルキル）、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロなどから選択される置換基などの、１つ以上の置換基で置換され得る。いくつかの実施形態では、置換は、ビシナルな官能性置換基が関与し、したがって、例えば、とりわけラクタム、ラクトン、環式無水物、アセタール、チオアセタール、及びアミナールを形成する状況などの、隣接する置換基が閉環を受ける置換である。

【0360】

本明細書で使用する場合、用語「任意に縮合した」とは、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールなどの、環系で縮合可能な環式の化学基を意味する。任意に縮合した化学基に縮合可能な例示的な環系としては、例えば、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾイソチアゾリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、フタラジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、インドリジニル、ナフチリジニル、プテリジニル、インダニル、ナフチル、１，２，３，４－テトラヒドロナフチル、インドリニル、イソインドリニル、２，３，４，５－テトラヒドロベンゾ［ｂ］オキセピニル、６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾシクロヘプテニル、クロマニルなどが挙げられる。

【0361】

本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される塩」とは、塩が形成される非イオン化親化合物の所望の生物学的活性を保持する、本明細書に記載の化合物の塩などの塩を意味する。かかる塩の例としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）により形成される酸付加塩、ならびに、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、及びポリガラクツロン酸などの、有機酸により形成される塩が挙げられるが、これらに限定されない。化合物はまた、式－ＮＲ、Ｒ’、Ｒ”^＋Ｚ^－［式中、Ｒ、Ｒ’、及びＲ”の各々は独立して、例えば、水素、アルキル、ベンジル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルなどであってよく、Ｚは、例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、－Ｏ－アルキル、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、カルボキシレート（例えば、ベンゾエート、サクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タータラート、アスコルベート、シンナモエート、マンデロエート、及びジフェニルアセテート）などの対イオンである。］の四級アンモニウム塩などの、薬学的に許容される四級塩として投与され得る。

【0362】

本明細書に記載の構造組成物としては、互変異性体、幾何異性体（例えば、Ｅ／Ｚ異性体及びｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性体）、エナンチオマー、ジアステレオマー、ならびにラセミ体、加えて、薬学的に許容されるそれらの塩もまた挙げられる。かかる塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩または重硫酸塩、リン酸塩またはリン酸水素塩、酢酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、及びパラトルエンスルホン酸塩などの薬学的に許容される酸により形成される酸付加塩が挙げられる。

【0363】

本明細書で使用する場合、１つ以上の立体中心を有する化合物の、立体化学構成を示さない化学構造式は、示した化合物の立体異性体のいずれか１つ、または、１つ以上のかかる立体異性体の混合物（例えば、示した化合物のエナンチオマーもしくはジアステレオマーのいずれか１つ、または、エナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ混合物）もしくはジアステレオマーの混合物）を包含するものとして解釈される。本明細書で使用する場合、１つ以上の立体中心を有する化合物の立体化学構成を具体的に示さない化学構造式は、示した特定の立体異性体の、実質的に純粋な形態を参照するものとして解釈される。「実質的に純粋な」形態とは、例えば、当該技術分野において既知のクロマトグラフィー及び核磁気共鳴技術を使用して評価すると、８５％を超える純度、例えば、８５％～９９％、８５％～９９．９％、８５％～９９．９９％、または８５％～１００％の純度、例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、または１００％の純度を有する化合物を意味する。

【発明を実施するための形態】

【0364】

本開示は、とりわけ、Ｉ型糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症などの自己免疫疾患を治療するための組成物及び方法を提供する。本開示の組成物及び方法に従って、患者（例えば、ヒト患者）は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性細胞（例えば、多能性造血細胞）の集団を投与され得る。核酸カセットは、前述の症状のうちの１つ以上などの自己免疫疾患を治療または予防するように、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結していてよい。治療的治療の文脈において、多能性造血細胞は、疾患のうちの１つ以上の兆候を軽減するために、及び／または疾患に関連する根底にある分子病理を治療するために、例えば、自己反応性エフェクター免疫細胞の集団の活性及び／または増殖を抑制するか、自己反応性エフェクター免疫細胞のアポトーシスを誘導するか、内因性組織を自己免疫応答から保護するか、または炎症を低減させるために、患者に投与され得る。

【0365】

本開示の組成物及び方法は、Ｔｒｅｇ細胞療法を使用して自己免疫疾患を治療する現在の方法と比較して、顕著な利点を提供する。今日まで、ヒトポリクローナルＴｒｅｇ細胞は、自己免疫疾患を治療するための臨床試験において使用されている。しかしながら、ポリクローナルＴｒｅｇ細胞療法は、Ｔｒｅｇ細胞のインビボでの拡大及び持続性の欠如、ならびにＴｒｅｇ細胞の標的組織に対する特異性の欠如のために、無効であることが証明されている。ポリクローナルＴｒｅｇ細胞の特異性の欠如を克服するために、Ｔｒｅｇ細胞は、特定の抗原を認識することができるキメラ抗原受容体または抗原特異的Ｔ細胞受容体を含む受容体を発現するように遺伝子操作されている。これらの進歩にもかかわらず、自己免疫疾患を治療するための現在のＴｒｅｇ細胞療法の使用に関連している障害のうちの１つは、患者に直接投与されるＴｒｅｇ細胞の耐久性である。現在の研究は、細胞がインビボでわずか３～５年しか持続しない可能性があることを示唆しており、これは慢性自己免疫疾患の観点から特に懸念されるものである。本開示の組成物及び方法は、Ｔｒｅｇ細胞の特異的抑制可能性と造血幹細胞遺伝子療法の証明された耐久性とを組み合わせることによって、自己免疫疾患を治療するために、遺伝子操作された抗原特異的Ｔｒｅｇ細胞を使用するための既存のパラダイムを改善する。特に、本開示の組成物及び方法は、インビボでの造血細胞の分化の際に、Ｔｒｅｇ細胞において優先的に発現される抗原結合タンパク質を含むように遺伝子操作されている多能性造血細胞を提供する。多能性造血細胞は、多様な系統の成熟血液細胞に分化することができる一方で、抗原結合タンパク質は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔｒｅｇ細胞において優先的に活性である系統特異的転写調節エレメント（例えば、Ｆｏｘｐ３プロモーター）の発現に起因して、Ｔｒｅｇ細胞において特異的に発現される。

【0366】

本開示の組成物及び方法はまた、自己抗原結合タンパク質発現の組織特異的調節を提供することによって、Ｔｒｅｇ細胞に改善された安定性を付与し得る。したがって、自己抗原結合タンパク質の発現は、Ｔｒｅｇ細胞表現型に応答性である。対照的に、患者に直接投与される抗原特異的Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔｒｅｇ細胞において活性であり、エフェクターＴ細胞になる系統特異的転写調節エレメントを失い得る。したがって、自己免疫疾患に罹患している患者へのＴｒｅｇ細胞の直接投与は、免疫応答を抑制するよりもむしろ免疫応答を更に活性化するリスクと関連付けられる。

【0367】

本開示の組成物及び方法はまた、製造及び実行可能性に関して利点を提供し得る。直接Ｔｒｅｇ細胞療法は、Ｔｒｅｇ細胞の単一のマーカーが現在存在しないため、多量の細胞に対してマルチパラメータ細胞選別を必要とし、重大な製造上の課題をもたらしている。更に、自己免疫疾患を有する患者は、Ｔｒｅｇ細胞が少なく、機能が乏しいため、自己由来Ｔｒｅｇ細胞療法のための重大な製造上の課題をもたらしている。本開示の組成物及び方法によって提供されるように、造血幹細胞は、明確な製造手順及び適正製造基準を有する。

【0368】

更に、造血幹細胞の投薬量が十分に確立されている一方で、効果的なＴｒｅｇ細胞の投薬量は、不明なままであり、各疾患に対して異なる可能性が高い。患者に直接投与されるＴｒｅｇ細胞の長期有効性はまた、複数回用量、及び結果として複数のコンディショニングレジメンを必要とし得る。

【0369】

自己免疫疾患を治療する方法
自己免疫疾患は、自らの組織に対する自らの免疫系の不適切な攻撃の結果である。これらの疾患は、自己抗原に対する反応性を誤って示すＴリンパ球及びＢリンパ球によって媒介される。調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、「自己」主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質及び他の良性抗原と交差反応性である免疫細胞の活性を阻害するために進化しており、それによって免疫系を調節し、自己抗原に対する寛容を維持し、自己免疫疾患を予防する。Ｔｒｅｇ細胞は、その独自の表面タンパク質の提示に基づいて区別され得るＴ細胞の不均一なクラスを表す。Ｔｒｅｇ細胞の最もよく理解された集団としては、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞、及びＣＤ１７＋Ｔｒｅｇ細胞が挙げられる。Ｔｒｅｇ細胞が自己反応性エフェクター免疫細胞（例えば、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞）の抑制を媒介する正確なメカニズムは、進行中の調査の対象であるが、Ｔｒｅｇ抑制機能は、接触依存性の細胞間クロストークメカニズムを介して、ならびにＩＬ－１０、ＩＬ－３５、及びＴＧＦ－βなどの阻害性サイトカインの分泌を介して生じると考えられている。ある特定のクラスのＴｒｅｇ細胞が、標的Ｔ細胞における増殖誘導性サイトカインＩＬ－２の産生を阻害し、更に、ＩＬ－２に対するＣＤ２５（ＩＬ－２受容体のサブドメイン）の親和性により、自己反応性細胞からＩＬ－２を隔離し得ることも示されている。更に、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞も、Ｂ細胞が豊富な領域に存在し、Ｔ_Ｈ２細胞活性を減弱させるその能力とは無関係に、免疫グロブリン産生を直接抑制することが可能であることが示されている。

【0370】

Ｔｒｅｇ細胞療法は、自己免疫疾患のための潜在的な治療パラダイムとして調査されているが、Ｔｒｅｇ細胞療法による１つの問題は、Ｔｒｅｇ細胞がその表現型（例えば、ＣＤ２５＋表現型）を失う傾向があることである。したがって、Ｔｒｅｇ細胞は、その抑制機能を失い、自己反応性エフェクター免疫細胞（例えば、エフェクターＴ細胞）に変換し、免疫応答の活性化及び自己免疫疾患の悪化をもたらす可能性がある。

【0371】

本開示の組成物及び方法は、自己免疫疾患の治療のために造血系統の多様な細胞に分化することができる多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ）などの多能性細胞を提供することによって、この問題に対する解決策を提供する。例えば、多能性造血細胞は、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）に分化し得る。本明細書に記載の多能性造血細胞は、標的組織への局在化を提供する自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む。多能性造血細胞は、造血系統の複数の細胞型に分化することができるが、自己抗原結合タンパク質の発現は、Ｔｒｅｇ細胞に分化する細胞に制限される。自己抗原結合タンパク質のＴｒｅｇ特異的発現は、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において優先的に活性である転写調節エレメントの制御下に置くことによって達成される。自己抗原結合タンパク質は、Ｔｒｅｇ細胞を自己免疫の部位に存在する自己抗原に指向することができ、それによって、自己免疫疾患を治療するためにこれらの部位にＴｒｅｇサプレッサー機能を集中させる。

【0372】

分化したＴｒｅｇ細胞の上流にある多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ）を患者（例えば、自己免疫疾患に罹患しているヒト患者）に送達する利点は、自己抗原結合タンパク質の発現を制御するＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ特異的転写調節エレメントに起因して、Ｔｒｅｇ細胞が自己反応性エフェクター免疫細胞（例えば、エフェクターＴ細胞）に変換される場合に、ＨＳＣ由来のＴｒｅｇ細胞が自己抗原結合タンパク質の発現を停止することである。対照的に、自己抗原結合タンパク質を発現し、患者（例えば、自己免疫疾患に罹患しているヒト患者）に直接送達されるＴｒｅｇ細胞は、その表現型を失い、自己抗原結合タンパク質を発現し続ける自己反応性エフェクター免疫細胞に変換する可能性がある。自己抗原結合タンパク質を発現する自己反応性エフェクター免疫細胞（例えば、エフェクターＴ細胞）は、自己免疫の部位に指向され、免疫応答の活性化及び自己免疫疾患の悪化をもたらす。したがって、本開示の組成物及び方法は、自己免疫疾患の治療に顕著な利点を提供する。

【0373】

本開示の組成物及び方法を使用して治療され得る例示的な自己免疫疾患としては、とりわけ、Ｉ型糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。

【0374】

多発性硬化症を治療する方法
多発性硬化症（ＭＳ）は、脳及び脊髄における神経細胞の絶縁被覆が損傷している自己免疫脱髄疾患である。この損傷は、神経系の一部の伝達能力を破壊し、持続的な神経学的損傷をもたらす。ＭＳを有する患者は、例えば、しびれまたは刺痛、脱力感、めまい、ふるえ、協調性の欠如、不安定な歩行、視力の問題、痛み、及び倦怠を含む幅広い兆候を示し得る。

【0375】

本開示の組成物及び方法を使用して、患者、例えば、ＭＳに罹患しているヒト患者は、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ）などの多能性細胞の集団を投与され得、多能性細胞の集団は、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質に結合するタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体）をコードする核酸カセットを含み、核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している。多能性造血細胞は、疾患の１つ以上の兆候を寛解させ、疾患の進行を減速もしくは停止させ、及び／または疾患の１つ以上の根底にある生理学的原因を治療し得る。

【0376】

Ｉ型糖尿病を治療する方法
糖尿病は、血糖値の正常な調節を妨げるインスリン欠損症を特徴とする重度の自己免疫疾患である。インスリンは、膵臓のランゲルハンス島（β－島細胞）内のβ細胞によって産生されるペプチドホルモンである。インスリンは、グルコース利用、タンパク質合成、中性脂質の形成及び貯蔵を促進し、脳及び筋肉組織のエネルギーの主な供給源である。Ｉ型糖尿病は、インスリン産生を排除または低減させ、最終的に高血糖症及びケトアシドーシスをもたらす、膵臓のβ－島細胞の破壊をもたらす自己免疫反応によって引き起こされる。Ｉ型糖尿病の兆候の例としては、口渇の増加、頻繁な排尿、極度の空腹、体重減少、倦怠、及び視朦が挙げられる。Ｉ型糖尿病の慢性高血糖症は、眼、腎臓、神経、及び血管における顕著な、かつ多くの場合、荒廃的な長期合併症にも関連している。

【0377】

本開示の組成物及び方法を使用して、患者、例えば、Ｉ型糖尿病に罹患しているヒト患者は、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ）などの多能性細胞の集団を投与され得、多能性細胞の集団は、インスリン、ＧＡＤ－６５、ＩＡ－２、またはＺｎＴ８に結合するタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体）をコードする核酸カセットを含み、核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している。多能性造血細胞は、疾患の１つ以上の兆候を寛解させ、疾患の進行を減速もしくは停止させ、及び／または疾患の１つ以上の根底にある生理学的原因を治療し得る。

【0378】

関節リウマチを治療する方法
関節リウマチは、関節の内側を覆っている滑膜が炎症性になる自己免疫疾患である。経時的に、炎症は関節組織を破壊し、障害をもたらす可能性がある。関節リウマチの兆候の例としては、炎症、倦怠、脱力感、ならびに関節の痛み、腫れ、及び／または圧痛が挙げられる。

【0379】

本開示の組成物及び方法を使用して、患者、例えば、関節リウマチに罹患しているヒト患者は、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ）などの多能性細胞の集団を投与され得、多能性細胞の集団は、コラーゲンＩＩ、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、またはＨＳＰ６５に結合するタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体）をコードする核酸カセットを含み、核酸カセットは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している。多能性造血細胞は、疾患の１つ以上の兆候を寛解させ、疾患の進行を減速もしくは停止させ、及び／または疾患の１つ以上の根底にある生理学的原因を治療し得る。

【0380】

自己抗原結合タンパク質の系統特異的発現のための細胞
本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞としては、更なる分化を受けることが可能な細胞が挙げられる。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞の１つの型は、２つ以上の分化細胞型に発達する能力を保有する多能性細胞である。多能性細胞の例としては、造血系統の２つ以上の分化細胞型に発達する能力を有する多能性造血細胞が挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る多能性造血細胞としては、例えば、ＨＳＣ、ＨＰＣ、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、リンパ系前駆細胞、及びＣＤ３４＋細胞が挙げられる。ＨＳＣは、自己複製して、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むが、これらに限定されない、多様な系統を含む成熟血液細胞に分化する能力を有する、未成熟血液細胞である。

【0381】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ）を使用する１つの利点は、これらの細胞がＴｒｅｇ細胞に分化する能力を有することである。多能性造血細胞はまた、Ｔｒｅｇ細胞とは異なる系統の血液細胞に分化することができる一方で、本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、自己抗原結合タンパク質は、Ｔｒｅｇ細胞に分化する細胞において優先的に発現され得る。本開示の組成物及び方法は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において優先的に活性である系統特異的調節エレメントを有する自己抗原結合タンパク質の発現を制御することによって、Ｔｒｅｇ細胞における自己抗原結合タンパク質の優れた特異性を達成し得る。

【0382】

系統特異的転写調節エレメント
Ｆｏｘｐ３転写因子の発現は、Ｔｒｅｇ細胞の特有の特徴であり、これらの細胞によって表示される免疫抑制表現型の多くに関与する。転写調節エレメント（例えば、Ｆｏｘｐ３プロモーター、ＣＮＳ１エンハンサー、ＣＮＳ２エンハンサー、ＣＮＳ３エンハンサー、及び／またはＣＮＳ０エンハンサー）によるＦｏｘｐ３発現の調節は、Ｔｒｅｇ細胞媒介性免疫応答の恒常性を維持するために重要である。本開示の組成物及び方法は、Ｆｏｘｐ３転写調節エレメントなどのＴｒｅｇ特異的転写調節エレメントを利用して、本明細書に記載されるように、特にＴｒｅｇ細胞において、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットの発現を駆動する。

【0383】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る転写調節エレメントは、互いに作動可能に連結した様々な部分を含有し得る。例えば、本明細書に記載の転写調節エレメントは、Ｆｏｘｐ３プロモーター、またはその機能的部分を含有し得る。Ｆｏｘｐ３プロモーターは、Ｔｒｅｇ細胞におけるＦｏｘｐ３遺伝子の転写をオンにする。転写因子は、本明細書に記載されるように、Ｆｏｘｐ３プロモーター領域に結合し、Ｆｏｘｐ３遺伝子をトランス活性化し得る。Ｆｏｘｐ３プロモーター領域に結合する転写因子の例としては、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）に記載されているように、Ｆｏｘｏ転写因子ファミリーメンバー（例えば、Ｆｏｘｏ１及びＦｏｘｏ３）、及びＮｒ４ａ核受容体ファミリーメンバー（例えば、Ｎｒ４ａ１（Ｎｕｒ７７）、Ｎｒ４ａ２、及びＮｒ４ａ３）が挙げられる。ヒトＦｏｘｐ３プロモーター領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、配列番号１に記載され、Ｍａｎｔｅｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（６）：３５９３－６０２（２００６）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸－５１１～＋１７６を含有する。ヒトＦｏｘｐ３プロモーター領域を含有する調節エレメントの別の例は、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、配列番号２に記載されている。マウスＦｏｘｐ３プロモーター領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｚｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されているように、配列番号３に記載されている。配列番号３のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＦｏｘｐ３プロモーター領域を含有する調節エレメントの更なる例が、配列番号４に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせるのに有用な追加の核酸調節エレメントとしては、上記の核酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸分子が挙げられる。

【0384】

Ｆｏｘｐ３のＴｒｅｇ特異的発現の根底にあるメカニズムは、保存された非コード配列（ＣＮＳ）などの他のシス調節エレメントを伴い得る。

【0385】

更に、または代替的に、本明細書に記載の転写調節エレメントは、ＣＮＳ１エンハンサー、またはその機能的部分を含有し得る。ＣＮＳ１は、Ｔｒｅｇ細胞の末梢誘導及び粘膜免疫寛容に寄与する、形質転換成長因子－β（ＴＧＦ－β）応答エレメントを含有する。ＣＮＳ１の欠失は、腸関連リンパ組織におけるＴｒｅｇ細胞集団を著しく低減させることが示されている。転写因子は、本明細書に記載されるように、ＣＮＳ１エンハンサー領域に結合し、Ｆｏｘｐ３遺伝子をトランス活性化し得る。ＣＮＳ１エンハンサー領域に結合する転写因子の例としては、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）に記載されているように、ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及びＦｏｘｏ（例えば、Ｆｏｘｏ１及びＦｏｘｏ３）転写因子が挙げられる。ヒトＣＮＳ１エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸－５００～＋１００を含有する。マウスＣＮＳ１エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｔｏｎｅｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（２）：１９４－２０２（２００８）に記載されているように、配列番号５に記載されている。配列番号５のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ１エンハンサー領域を含有する調節エレメントの追加の例が、配列番号６に記載されている。マウスＣＮＳ１エンハンサー領域を含有する調節エレメントの別の例は、Ｚｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されているように、配列番号７に記載されている。配列番号７のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ１エンハンサー領域を含有する調節エレメントの更なる例が、配列番号８に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせるのに有用な追加の核酸調節エレメントとしては、上記の核酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸分子が挙げられる。

【0386】

更に、または代替的に、本明細書に記載の転写調節エレメントは、ＣＮＳ２エンハンサー、またはその機能的部分を含有し得る。ＣＮＳ２は、機能的Ｔｒｅｇ細胞においてのみ高度に脱メチル化されるＣｐＧ島を含有する。ＣＮＳ２の脱メチル化は、Ｔｒｅｇ細胞系統へのコミットメントの最も決定的なマーカーであるとみなされている。ＣＮＳ２は、Ｔ細胞受容体刺激に応答して、及びＴｒｅｇ細胞増殖中に、Ｆｏｘｐ３発現の安定性に関与する。転写因子は、本明細書に記載されるように、ＣＮＳ２エンハンサー領域に結合し、Ｆｏｘｐ３遺伝子をトランス活性化し得る。ＣＮＳ２エンハンサー領域に結合する転写因子の例としては、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）に記載されているように、Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及びｃ－Ｒｅｌが挙げられる。ヒトＣＮＳ２エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸＋２，０２２～＋２，７２１を含有する。マウスＣＮＳ２エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｋａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されているように、配列番号９に記載されている。配列番号９のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ２エンハンサー領域を含有する調節エレメントの追加の例が、配列番号１０に記載されている。マウスＣＮＳ２エンハンサー領域を含有する調節エレメントの別の例は、Ｚｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されているように、配列番号１１に記載されている。配列番号１１のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ２エンハンサー領域を含有する調節エレメントの更なる例が、配列番号１２に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせるのに有用な追加の核酸調節エレメントとしては、上記の核酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸分子が挙げられる。

【0387】

更に、または代替的に、本明細書に記載の転写調節エレメントは、ＣＮＳ３エンハンサー領域、またはその機能的部分を含有し得る。ＣＮＳ３は、Ｆｏｘｐ３発現に必要とされるＴＣＲ刺激を閾値化する役割を果たし、末梢及び胸腺Ｔｒｅｇ細胞の生成に重要である。転写因子は、本明細書に記載されるように、ＣＮＳ３エンハンサー領域に結合し、Ｆｏｘｐ３遺伝子をトランス活性化し得る。ＣＮＳ３エンハンサー領域に結合する転写因子の例としては、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）に記載されているように、Ｆｏｘｏ（例えば、Ｆｏｘｏ１及びＦｏｘｏ３）及びｃ－Ｒｅｌが挙げられる。ヒトＣＮＳ３エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）に記載されているように、ヒトＦｏｘｐ３遺伝子座のＦｏｘｐ３転写開始部位に関して、核酸＋４，３０１～＋４，５００を含有する。マウスＣＮＳ３エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｋａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されているように、配列番号１３に記載されている。配列番号１３のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ３エンハンサー領域を含有する調節エレメントの追加の例が、配列番号１４に記載されている。マウスＣＮＳ３エンハンサー領域を含有する調節エレメントの別の例は、Ｚｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）に記載されているように、配列番号１５に記載されている。配列番号１５のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ３エンハンサー領域を含有する調節エレメントの更なる例が、配列番号１６に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせるのに有用な追加の核酸調節エレメントとしては、上記の核酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸分子が挙げられる。

【0388】

更に、または代替的に、本明細書に記載の転写調節エレメントは、ＣＮＳ０エンハンサー、またはその機能的部分を含有し得る。ＣＮＳ０は、Ｔｒｅｇ細胞特異的エンハンサーである。転写因子は、ＣＮＳ０エンハンサー領域に結合し、Ｆｏｘｐ３遺伝子をトランス活性化し得る。ＣＮＳ０エンハンサー領域に結合する転写因子の例としては、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）及びＫａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されているように、Ｓａｔｂ１及びＳｔａｔ５が挙げられる。クロマチンオーガナイザーであるＳａｔｂ１は、ＣＮＳ０に結合し、胸腺Ｔｒｅｇ細胞分化の早期段階でＦｏｘｐ３遺伝子ならびにＣｔｌａ４及びＩｌ２ｒａなどの他のＴｒｅｇ細胞関連遺伝子のＴｒｅｇ細胞特異的エンハンサーを活性化するための先駆因子として機能することが見出された。Ｓａｔｂ１は、閉じたクロマチンに結合し、Ｆｏｘｐ３遺伝子座の後成的な状態を平衡を保った状態に改変することによって、他の転写因子が調節エレメントに結合することを可能にする。マウスＣＮＳ０エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントは、例えば、Ｋａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）に記載されているように、配列番号１７に記載されている。配列番号１７のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ０エンハンサー領域を含有する例示的な調節エレメントが、配列番号１８に記載されている。マウスＣＮＳ０エンハンサー領域を含有する調節エレメントの別の例は、Ｄｉｋｉｙｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９３１－９４６（２０２１）に記載されているように、配列番号１９に記載されている。配列番号１９のヒトゲノムへのアラインメントとして、ヒトＣＮＳ０エンハンサー領域を含有する調節エレメントの更なる例が、配列番号２０に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせるのに有用な追加の核酸調節エレメントとしては、上記の核酸配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸分子が挙げられる。

【0389】

転写調節の追加の方法
追加の転写調節エレメントは、本明細書に記載されるように、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットの発現を調節するために、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る。例えば、核酸カセットの発現は、低分子活性化因子または薬物誘導剤の存在下において、ＤＮＡ結合ドメイン及び薬物結合ドメインを含有するキメラ転写因子の結合時に核酸カセットの発現を促進または防止する、ＤＮＡ結合ドメインなどの作動可能に連結された調節配列エレメントによって、転写レベルで制御され得る。薬物誘導性系の例は、参照により本明細書に組み込まれているＴｒｉｓｔａｎ－Ｍａｎｚａｎｏｅｔａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：２０４４（２０２０）に記載されている。

【0390】

操作されたリボスイッチもまた、本明細書に記載の核酸カセットの転写を制御するために、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る。これらの調節エレメントは、代謝産物または金属イオンをリガンドとして結合し、リガンド結合に応答して代替的な構造を形成することによってｍＲＮＡ発現を制御することができる。本開示の組成物及び方法を使用して、リガンドなどの外因性薬剤は、リボスイッチに作動可能に連結している核酸カセットの転写を誘導し得る。例示的なリボスイッチは、参照により本明細書に組み込まれているＳｔｒｏｂｅｌｅｔａｌ．ＡＣＳＳｙｎｔｈ．Ｂｉｏｌ．９（６）：１２９２－１３０５（２０２０）に記載されている。誘導因子リガンドの例としては、テトラサイクリン、テトラサイクリン誘導体、ラパマイシン、テオフィリン、及びグアニンが挙げられる。誘導因子リガンドの追加の例は、参照により本明細書に組み込まれているＴｉｃｋｎｅｒｅｔａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．１４（６）：５５４（２０２１）に記載されている。

【0391】

自殺遺伝子安全性スイッチは、本明細書に記載の核酸カセットを含む多能性造血細胞などの遺伝子修飾された細胞の持続性及び生存を制御するために、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る。例えば、核酸カセットは、形質導入された遺伝子修飾された細胞（例えば、核酸カセットを含むレンチウイルスベクターで形質導入された多能性造血細胞）の選択的クリアランスのために、誘導性カスパーゼ９系（ｉＣａｓｐ９）または単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）などの自殺遺伝子安全性スイッチに作動可能に連結していてよい。ｉＣａｓｐ９の誘導は、二量体薬物ＡＰ１９０３などの低分子の投与に依存する。二量体化は、形質導入細胞におけるアポトーシスの急速な誘導をもたらし、アポトーシス経路の構成成分とフレーム内で連結した薬物結合ドメインで構成されるキメラタンパク質は、非治療用低分子二量体の投与後、形質導入細胞の条件付きの二量体化及びアポトーシスを可能にすることができる。ＨＳＶ－ＴＫと組み合わせたガンシクロビルなどのヌクレオシドアナログも、アポトーシスを誘導するために使用することができる。例示的な自殺遺伝子安全性スイッチは、Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：２５４（２０１４）に記載されており、その開示は、参照により組み込まれている。

【0392】

更に、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）配列は、Ｔｒｅｇ細胞における核酸カセットの転写を制御するために、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る。例えば、ＲＮＡｉは、マイクロＲＮＡ－１７（ｍｉＲ－１７）などのマイクロＲＮＡを標的にするために使用され得る。ｍｉＲ－１７は、参照により本明細書に組み込まれているＹａｎｇｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．４５（１）：８３－９３．（２０１６）に記載されているように、ＥｏｓなどのＦｏｘｐ３共調節因子を標的にすることによってＴｒｅｇ細胞抑制活性を減少させることが示されている。ｍｉＲ－１７を標的にすることは、遺伝子修飾されたＴｒｅｇ細胞の抑制機能を最適化し、潜在的な炎症促進性または病原性細胞活性を制限する。

【0393】

自己抗原結合タンパク質
多能性細胞（例えば、多能性造血細胞）に由来するＴｒｅｇ細胞は、本明細書に記載されるように、細胞が組織特異的自己抗原に結合し、自己免疫の部位に輸送されることを可能にし、特にＴｒｅｇサプレッサー機能を疾患部位に集中させる自己抗原結合タンパク質を発現し得る。本開示の組成物及び方法と組み合わせるのに有用な自己抗原結合タンパク質の例としては、対象において内因性に発現される抗原に特異的に結合する一本鎖タンパク質（例えば、キメラ抗原受容体及び一本鎖抗体断片）及び多鎖タンパク質（例えば、Ｔ細胞受容体、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、及びＦ（ａｂ’）_２分子）が挙げられる。

【0394】

自己抗原結合タンパク質は、本明細書に記載されるように、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクアポリン４、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、及び甲状腺で発現されるタンパク質などの自己抗原に結合され得る。自己抗原の追加の例は、Ｑｕｉｎｔａｎａｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１７（３）：１９１－７（２００１）及びＲｉｅｄｈａｍｍｅｒｅｔａｌ．，ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．６：３２２（２０１５）に記載されており、これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0395】

抗体
本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る抗体としては、対象（例えば、ヒト対象）において内因性に発現される抗原に特異的に結合することが可能である、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、またはその任意の部分などであるが、これらに限定されない、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子が挙げられる。例えば、免疫グロブリン分子のうちの２つ以上の部分は、例えば、アミド結合、チオエーテル結合、炭素－炭素結合、ジスルフィド架橋を介して、またはリンカー、例えば、本明細書に記載の、もしくは当該技術分野において既知のリンカーによって、互いに共有結合し得る。

【0396】

本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る例示的な抗体としては、ポリクローナル形態、モノクローナル形態、遺伝子操作された形態、及び他の方法で修飾された形態の抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重、三重、及び四重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ）、ならびに抗体の抗原結合断片が挙げられる。

【0397】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るキメラ抗体は、ラットまたはマウスなどの１つの供給源生体の免疫グロブリンに由来する可変ドメイン配列（例えば、ＣＤＲ配列）、及び異なる生物（例えば、とりわけ、ヒト、別の霊長類、ブタ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、ネコ、イヌ、モルモット、ウシ科ファミリーのメンバー（とりわけ、ウシ、バイソン、バッファロー、エルク、及びヤクなど）、雌ウシ、ヒツジ、ウマ、またはバイソン）の免疫グロブリンに由来する定常領域を有し得る。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２２９（４７１９）：１２０２－７（１９８５）、Ｏｉｅｔａｌ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．４：２１４－２２１（１９８６）、Ｇｉｌｌｉｅｓｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２５：１９１－２０２（１９８５）、米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、及び同第４，８１６，３９７号を参照されたい。

【0398】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るヒト抗体としては、タンパク質（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、Ｃ_Ｌ、Ｃ_Ｈドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）、ヒンジ、（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ））の実質的に全ての部分が、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、わずかな配列変化または変異を有するのみである抗体が挙げられる。ヒト抗体は、ヒト細胞内で（例えば、組換え発現によって）、または機能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／または軽鎖）遺伝子を発現することが可能である非ヒト動物または原核もしくは真核細胞によって産生され得る。更に、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは天然のヒト抗体において見出されないリンカーペプチドを含み得る。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域及び軽鎖の可変領域を接続する、２～約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含み得る。かかるリンカーペプチドは、ヒト起源のものとみなされる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージディスプレイ方法を含む、当該技術分野において既知の様々な方法によって作製され得る。米国特許第４，４４４，８８７号及び同第４，７１６，１１１号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ１９９８／４６６４５、ＷＯ１９９８／５０４３３、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９８／１６６５４、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、及びＷＯ１９９１／１０７４１を参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現することが不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８８５，７９３号、同第５，９１６，７７１号、及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。

【0399】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るヒト化抗体としては、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、または抗体の他の標的結合サブドメインなど）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態が挙げられる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応する。ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものであってもよい。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の少なくとも一部分を含み得る。抗体ヒト化の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－７，１９８８、Ｑｕｅｅｎｅｔａｌの米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、及び同第６，１８０，３７０号、ＥＰ２３９４００、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７、米国特許第５，２２５，５３９、ＥＰ５９２１０６、及びＥＰ５１９５９６を参照されたい。

【0400】

本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る抗体の例示的な抗原結合断片としては、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒｌｇＧ、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を使用して得ることができ、断片は、インタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断、またはいくつかの実施形態では、当該技術分野において既知の化学的ペプチド合成操作によって産生することができる。

【0401】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子としては、抗体からの重鎖及び軽鎖の可変ドメインが結合されて１つの鎖を形成している抗体が挙げられる。ｓｃＦｖ断片は、リンカーによって分離された抗体軽鎖（ＶＬ）の可変領域（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び／またはＣＤＲ－Ｌ３）及び抗体重鎖（ＶＨ）の可変領域（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及び／またはＣＤＲ－Ｈ３）を含む単一のポリペプチド鎖を含有する。ｓｃＦｖ断片のＶＬ及びＶＨ領域を結合するリンカーは、タンパク質生成アミノ酸で構成されるペプチドリンカーであり得る。ｓｃＦｖ断片のタンパク質分解に対する耐性を増加させるように（例えば、Ｄ－アミノ酸を含有するリンカー）、ｓｃＦｖ断片の溶解度を向上させるために（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカーもしくは反復グリシン及びセリン残基を含有するポリペプチドなどの親水性リンカー）、分子の生物物理的安定性を改善するために（例えば、分子内もしくは分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー）、またはｓｃＦｖ断片の免疫原性を減弱させるために（例えば、グリコシル化部位を含有するリンカー）、代替的なリンカーが使用され得る。ｓｃＦｖ分子は、当該技術分野において既知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号、Ｆｌｏｅｔａｌ．、（Ｇｅｎｅ７７：５１、１９８９）、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．、（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３、１９８８）、Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏｅｔａｌ．、（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３０：１０１１７、１９９１）、Ｍｉｌｅｎｉｃｅｔａｌ．、（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５１：６３６３、１９９１）、及びＴａｋｋｉｎｅｎｅｔａｌ．、（ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ４：８３７、１９９１）に記載されている。ｓｃＦｖ分子のＶＬ及びＶＨドメインは、１つ以上の抗体分子に由来し得る。また、当業者は、本明細書に記載のｓｃＦｖ分子の可変領域が、それらが由来する抗体分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも理解するであろう。例えば、一実施形態では、アミノ酸残基で保存的置換または変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸置換が作製され得る（例えば、ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基において）。代替的にまたは加えて、変異がＣＤＲアミノ酸残基に作製され、当該技術分野で認識される技術を使用して抗原結合を最適化する。ｓｃＦｖ断片は、例えば、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２０１１／０８４７１４に記載されている。

【0402】

抗体ＣＤＲに対して構造及び溶媒接触性が類似するＢＣ、ＤＥ、及びＦＧ構造ループを含有する、第１０のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（^１０Ｆｎ３）などの抗体様タンパク質足場もまた、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る。

【0403】

キメラ抗原受容体
ＣＡＲＴｒｅｇ細胞は、多能性細胞（例えば、多能性造血細胞）などの先駆細胞を操作することによって産生され得る。操作された多能性造血細胞は、本明細書に記載されるように、分化細胞がＴｒｅｇ細胞である場合、自己抗原などの標的抗原に特異的であるＣＡＲを発現する細胞に分化することができる。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞（例えば、Ｆｏｘｐ３プロモーター）において活性である系統特異的転写調節エレメントによるＣＡＲ発現の制御は、ＣＡＲのＴｒｅｇ特異的発現を可能にする。

【0404】

構造的に、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含有し得る。抗原認識ドメインは、所与の抗原（例えば、自己抗原）を認識し、それに特異的に結合することによって、標的細胞に対する特異性を付与する抗体またはその抗体断片を含有し得る。本明細書に記載の方法と組み合わせて使用され得る抗原認識ドメインの例としては、単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、及びヒト化抗体が挙げられる。ヒンジドメインは、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、及び活性化を可能にするために、抗原認識ドメインをＴ細胞表面から離れるように位置させる。本明細書に記載の方法と組み合わせて使用するための例示的なヒンジドメインとしては、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、ＣＤ２８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４（ヒンジ－Ｆｃ部分）、ＣＤ４、ＣＤ７、及びＩｇＤに由来するものが挙げられる。膜貫通ドメインは、細胞外抗原認識ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを融合させ、ＣＡＲをＴ細胞の形質膜にアンカーする。本明細書に記載の方法と組み合わせて使用するための例示的な膜貫通ドメインとしては、ＣＤ３アルファ、ＣＤ３ベータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＰＤ－１、ＣＤ４、ＦｃＲＩγ、ＣＤ７、ＯＸ４０、及びＭＨＣ（Ｈ２－Ｋｂ）に由来するものが挙げられる。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有Ｔｒｅｇ細胞の免疫抑制機能を促進するシグナルを生成し、一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び任意に１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含有し得る。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインとしては、一次刺激または抗原依存性シミュレーションに関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来し得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナルまたは抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、またはＴｏｌｌリガンド受容体に由来し得る。

【0405】

多能性造血細胞は、本明細書に記載の、または当該技術分野において既知の様々なゲノム編集技術のいずれかによって、特定の自己抗原に特異的に結合する抗原受容体をＴｒｅｇ細胞上に発現するように遺伝子修飾され得る。キメラ抗原受容体をコードする遺伝子を組み込むように多能性造血細胞ゲノムを修飾するための例示的な技術としては、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、及びＡＲＣＵＳ（商標）プラットフォームが挙げられる。

【0406】

ウイルス形質導入の方法
ポロキサマーを使用する形質導入
ポロキサマーは、形質導入効率を向上させるために、本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る。使用され得るポロキサマーとしては、２，０５０ｇ／ｍｏｌ超のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量（例えば、約２，０５５ｇ／ｍｏｌ、２，０６０ｇ／ｍｏｌ、２，０７５ｇ／ｍｏｌ、２，０８０ｇ／ｍｏｌ、２，０８５ｇ／ｍｏｌ、２，０９０ｇ／ｍｏｌ、２，０９５ｇ／ｍｏｌ、２，１００ｇ／ｍｏｌ、２，２００ｇ／ｍｏｌ、２，３００ｇ／ｍｏｌ、２，４００ｇ／ｍｏｌ、２，５００ｇ／ｍｏｌ、２，６００ｇ／ｍｏｌ、２，７００ｇ／ｍｏｌ、２，８００ｇ／ｍｏｌ、２，９００ｇ／ｍｏｌ、３，０００ｇ／ｍｏｌ、３，１００ｇ／ｍｏｌ、３，２００ｇ／ｍｏｌ、３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、４，０００ｇ／ｍｏｌ、４，１００ｇ／ｍｏｌ、４，２００ｇ／ｍｏｌ、４，３００ｇ／ｍｏｌ、４，４００ｇ／ｍｏｌ、４，５００ｇ／ｍｏｌ、４，６００ｇ／ｍｏｌ、４，７００ｇ／ｍｏｌ、４，８００ｇ／ｍｏｌ、４，９００ｇ／ｍｏｌ、または５，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量）を有するものが挙げられる。

【0407】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、２，２５０ｇ／ｍｏｌ超のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量（例えば、約２，３００ｇ／ｍｏｌ、２，４００ｇ／ｍｏｌ、２，５００ｇ／ｍｏｌ、２，６００ｇ／ｍｏｌ、２，７００ｇ／ｍｏｌ、２，８００ｇ／ｍｏｌ、２，９００ｇ／ｍｏｌ、３，０００ｇ／ｍｏｌ、３，１００ｇ／ｍｏｌ、３，２００ｇ／ｍｏｌ、３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、４，０００ｇ／ｍｏｌ、４，１００ｇ／ｍｏｌ、４，２００ｇ／ｍｏｌ、４，３００ｇ／ｍｏｌ、４，４００ｇ／ｍｏｌ、４，５００ｇ／ｍｏｌ、４，６００ｇ／ｍｏｌ、４，７００ｇ／ｍｏｌ、４，８００ｇ／ｍｏｌ、４，９００ｇ／ｍｏｌ、または５，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量）を有する。

【0408】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、２，７５０ｇ／ｍｏｌ超の、ポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量（例えば、約２，８００ｇ／ｍｏｌ、２，９００ｇ／ｍｏｌ、３，０００ｇ／ｍｏｌ、３，１００ｇ／ｍｏｌ、３，２００ｇ／ｍｏｌ、３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、４，０００ｇ／ｍｏｌ、４，１００ｇ／ｍｏｌ、４，２００ｇ／ｍｏｌ、４，３００ｇ／ｍｏｌ、４，４００ｇ／ｍｏｌ、４，５００ｇ／ｍｏｌ、４，６００ｇ／ｍｏｌ、４，７００ｇ／ｍｏｌ、４，８００ｇ／ｍｏｌ、４，９００ｇ／ｍｏｌ、または５，０００ｇ／ｍｏｌの、ポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量）を有する。

【0409】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、３，２５０ｇ／ｍｏｌ超のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量（例えば、約３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、４，０００ｇ／ｍｏｌ、４，１００ｇ／ｍｏｌ、４，２００ｇ／ｍｏｌ、４，３００ｇ／ｍｏｌ、４，４００ｇ／ｍｏｌ、４，５００ｇ／ｍｏｌ、４，６００ｇ／ｍｏｌ、４，７００ｇ／ｍｏｌ、４，８００ｇ／ｍｏｌ、４，９００ｇ／ｍｏｌ、または５，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量）を有する。

【0410】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、３，６２５ｇ／ｍｏｌ超のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量（例えば、約３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、４，０００ｇ／ｍｏｌ、４，１００ｇ／ｍｏｌ、４，２００ｇ／ｍｏｌ、４，３００ｇ／ｍｏｌ、４，４００ｇ／ｍｏｌ、４，５００ｇ／ｍｏｌ、４，６００ｇ／ｍｏｌ、４，７００ｇ／ｍｏｌ、４，８００ｇ／ｍｏｌ、４，９００ｇ／ｍｏｌ、または５，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量）を有する。

【0411】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約２，０５０ｇ／ｍｏｌ～約４，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約２，０５０ｇ／ｍｏｌ、２，０５５ｇ／ｍｏｌ、２，０６０ｇ／ｍｏｌ、２，０６５ｇ／ｍｏｌ、２，０７０ｇ／ｍｏｌ、２，０７５ｇ／ｍｏｌ、２，０８０ｇ／ｍｏｌ、２，０８５ｇ／ｍｏｌ、２，０９０ｇ／ｍｏｌ、２，０９５ｇ／ｍｏｌ、２，１００ｇ／ｍｏｌ、２，１０５ｇ／ｍｏｌ、２，１１０ｇ／ｍｏｌ、２，１１５ｇ／ｍｏｌ、２，１２０ｇ／ｍｏｌ、２，１２５ｇ／ｍｏｌ、２，１３０ｇ／ｍｏｌ、２，１３５ｇ／ｍｏｌ、２，１４０ｇ／ｍｏｌ、２，１４５ｇ／ｍｏｌ、２，１５０ｇ／ｍｏｌ、２，１５５ｇ／ｍｏｌ、２，１６０ｇ／ｍｏｌ、２，１６５ｇ／ｍｏｌ、２，１７０ｇ／ｍｏｌ、２，１７５ｇ／ｍｏｌ、２，１８０ｇ／ｍｏｌ、２，１８５ｇ／ｍｏｌ、２，１９０ｇ／ｍｏｌ、２，１９５ｇ／ｍｏｌ、２，２００ｇ／ｍｏｌ、２，２０５ｇ／ｍｏｌ、２，２１０ｇ／ｍｏｌ、２，２１５ｇ／ｍｏｌ、２，２２０ｇ／ｍｏｌ、２，２２５ｇ／ｍｏｌ、２，２３０ｇ／ｍｏｌ、２，２３５ｇ／ｍｏｌ、２，２４０ｇ／ｍｏｌ、２，２４５ｇ／ｍｏｌ、２，２５０ｇ／ｍｏｌ、２，２５５ｇ／ｍｏｌ、２，２６０ｇ／ｍｏｌ、２，２６５ｇ／ｍｏｌ、２，２７０ｇ／ｍｏｌ、２，２７５ｇ／ｍｏｌ、２，２８０ｇ／ｍｏｌ、２，２８５ｇ／ｍｏｌ、２，２９０ｇ／ｍｏｌ、２，２９５ｇ／ｍｏｌ、２，３００ｇ／ｍｏｌ、２，３０５ｇ／ｍｏｌ、２，３１０ｇ／ｍｏｌ、２，３１５ｇ／ｍｏｌ、２，３２０ｇ／ｍｏｌ、２，３２５ｇ／ｍｏｌ、２，３３０ｇ／ｍｏｌ、２，３３５ｇ／ｍｏｌ、２，３４０ｇ／ｍｏｌ、２，３４５ｇ／ｍｏｌ、２，３５０ｇ／ｍｏｌ、２，３５５ｇ／ｍｏｌ、２，３６０ｇ／ｍｏｌ、２，３６５ｇ／ｍｏｌ、２，３７０ｇ／ｍｏｌ、２，３７５ｇ／ｍｏｌ、２，３８０ｇ／ｍｏｌ、２，３８５ｇ／ｍｏｌ、２，３９０ｇ／ｍｏｌ、２，３９５ｇ／ｍｏｌ、２，４００ｇ／ｍｏｌ、２，４０５ｇ／ｍｏｌ、２，４１０ｇ／ｍｏｌ、２，４１５ｇ／ｍｏｌ、２，４２０ｇ／ｍｏｌ、２，４２５ｇ／ｍｏｌ、２，４３０ｇ／ｍｏｌ、２，４３５ｇ／ｍｏｌ、２，４４０ｇ／ｍｏｌ、２，４４５ｇ／ｍｏｌ、２，４５０ｇ／ｍｏｌ、２，４５５ｇ／ｍｏｌ、２，４６０ｇ／ｍｏｌ、２，４６５ｇ／ｍｏｌ、２，４７０ｇ／ｍｏｌ、２，４７５ｇ／ｍｏｌ、２，４８０ｇ／ｍｏｌ、２，４８５ｇ／ｍｏｌ、２，４９０ｇ／ｍｏｌ、２，４９５ｇ／ｍｏｌ、２，５００ｇ／ｍｏｌ、２，５０５ｇ／ｍｏｌ、２，５１０ｇ／ｍｏｌ、２，５１５ｇ／ｍｏｌ、２，５２０ｇ／ｍｏｌ、２，５２５ｇ／ｍｏｌ、２，５３０ｇ／ｍｏｌ、２，５３５ｇ／ｍｏｌ、２，５４０ｇ／ｍｏｌ、２，５４５ｇ／ｍｏｌ、２，５５０ｇ／ｍｏｌ、２，５５５ｇ／ｍｏｌ、２，５６０ｇ／ｍｏｌ、２，５６５ｇ／ｍｏｌ、２，５７０ｇ／ｍｏｌ、２，５７５ｇ／ｍｏｌ、２，５８０ｇ／ｍｏｌ、２，５８５ｇ／ｍｏｌ、２，５９０ｇ／ｍｏｌ、２，５９５ｇ／ｍｏｌ、２，６００ｇ／ｍｏｌ、２，６０５ｇ／ｍｏｌ、２，６１０ｇ／ｍｏｌ、２，６１５ｇ／ｍｏｌ、２，６２０ｇ／ｍｏｌ、２，６２５ｇ／ｍｏｌ、２，６３０ｇ／ｍｏｌ、２，６３５ｇ／ｍｏｌ、２，６４０ｇ／ｍｏｌ、２，６４５ｇ／ｍｏｌ、２，６５０ｇ／ｍｏｌ、２，６５５ｇ／ｍｏｌ、２，６６０ｇ／ｍｏｌ、２，６６５ｇ／ｍｏｌ、２，６７０ｇ／ｍｏｌ、２，６７５ｇ／ｍｏｌ、２，６８０ｇ／ｍｏｌ、２，６８５ｇ／ｍｏｌ、２，６９０ｇ／ｍｏｌ、２，６９５ｇ／ｍｏｌ、２，７００ｇ／ｍｏｌ、２，７０５ｇ／ｍｏｌ、２，７１０ｇ／ｍｏｌ、２，７１５ｇ／ｍｏｌ、２，７２０ｇ／ｍｏｌ、２，７２５ｇ／ｍｏｌ、２，７３０ｇ／ｍｏｌ、２，７３５ｇ／ｍｏｌ、２，７４０ｇ／ｍｏｌ、２，７４５ｇ／ｍｏｌ、２，７５０ｇ／ｍｏｌ、２，７５５ｇ／ｍｏｌ、２，７６０ｇ／ｍｏｌ、２，７６５ｇ／ｍｏｌ、２，７７０ｇ／ｍｏｌ、２，７７５ｇ／ｍｏｌ、２，７８０ｇ／ｍｏｌ、２，７８５ｇ／ｍｏｌ、２，７９０ｇ／ｍｏｌ、２，７９５ｇ／ｍｏｌ、２，８００ｇ／ｍｏｌ、２，８０５ｇ／ｍｏｌ、２，８１０ｇ／ｍｏｌ、２，８１５ｇ／ｍｏｌ、２，８２０ｇ／ｍｏｌ、２，８２５ｇ／ｍｏｌ、２，８３０ｇ／ｍｏｌ、２，８３５ｇ／ｍｏｌ、２，８４０ｇ／ｍｏｌ、２，８４５ｇ／ｍｏｌ、２，８５０ｇ／ｍｏｌ、２，８５５ｇ／ｍｏｌ、２，８６０ｇ／ｍｏｌ、２，８６５ｇ／ｍｏｌ、２，８７０ｇ／ｍｏｌ、２，８７５ｇ／ｍｏｌ、２，８８０ｇ／ｍｏｌ、２，８８５ｇ／ｍｏｌ、２，８９０ｇ／ｍｏｌ、２，８９５ｇ／ｍｏｌ、２，９００ｇ／ｍｏｌ、２，９０５ｇ／ｍｏｌ、２，９１０ｇ／ｍｏｌ、２，９１５ｇ／ｍｏｌ、２，９２０ｇ／ｍｏｌ、２，９２５ｇ／ｍｏｌ、２，９３０ｇ／ｍｏｌ、２，９３５ｇ／ｍｏｌ、２，９４０ｇ／ｍｏｌ、２，９４５ｇ／ｍｏｌ、２，９５０ｇ／ｍｏｌ、２，９５５ｇ／ｍｏｌ、２，９６０ｇ／ｍｏｌ、２，９６５ｇ／ｍｏｌ、２，９７０ｇ／ｍｏｌ、２，９７５ｇ／ｍｏｌ、２，９８０ｇ／ｍｏｌ、２，９８５ｇ／ｍｏｌ、２，９９０ｇ／ｍｏｌ、２，９９５ｇ／ｍｏｌ、３，０００ｇ／ｍｏｌ、３，００５ｇ／ｍｏｌ、３，０１０ｇ／ｍｏｌ、３，０１５ｇ／ｍｏｌ、３，０２０ｇ／ｍｏｌ、３，０２５ｇ／ｍｏｌ、３，０３０ｇ／ｍｏｌ、３，０３５ｇ／ｍｏｌ、３，０４０ｇ／ｍｏｌ、３，０４５ｇ／ｍｏｌ、３，０５０ｇ／ｍｏｌ、３，０５５ｇ／ｍｏｌ、３，０６０ｇ／ｍｏｌ、３，０６５ｇ／ｍｏｌ、３，０７０ｇ／ｍｏｌ、３，０７５ｇ／ｍｏｌ、３，０８０ｇ／ｍｏｌ、３，０８５ｇ／ｍｏｌ、３，０９０ｇ／ｍｏｌ、３，０９５ｇ／ｍｏｌ、３，１００ｇ／ｍｏｌ、３，１０５ｇ／ｍｏｌ、３，１１０ｇ／ｍｏｌ、３，１１５ｇ／ｍｏｌ、３，１２０ｇ／ｍｏｌ、３，１２５ｇ／ｍｏｌ、３，１３０ｇ／ｍｏｌ、３，１３５ｇ／ｍｏｌ、３，１４０ｇ／ｍｏｌ、３，１４５ｇ／ｍｏｌ、３，１５０ｇ／ｍｏｌ、３，１５５ｇ／ｍｏｌ、３，１６０ｇ／ｍｏｌ、３，１６５ｇ／ｍｏｌ、３，１７０ｇ／ｍｏｌ、３，１７５ｇ／ｍｏｌ、３，１８０ｇ／ｍｏｌ、３，１８５ｇ／ｍｏｌ、３，１９０ｇ／ｍｏｌ、３，１９５ｇ／ｍｏｌ、３，２００ｇ／ｍｏｌ、３，２０５ｇ／ｍｏｌ、３，２１０ｇ／ｍｏｌ、３，２１５ｇ／ｍｏｌ、３，２２０ｇ／ｍｏｌ、３，２２５ｇ／ｍｏｌ、３，２３０ｇ／ｍｏｌ、３，２３５ｇ／ｍｏｌ、３，２４０ｇ／ｍｏｌ、３，２４５ｇ／ｍｏｌ、３，２５０ｇ／ｍｏｌ、３，２５５ｇ／ｍｏｌ、３，２６０ｇ／ｍｏｌ、３，２６５ｇ／ｍｏｌ、３，２７０ｇ／ｍｏｌ、３，２７５ｇ／ｍｏｌ、３，２８０ｇ／ｍｏｌ、３，２８５ｇ／ｍｏｌ、３，２９０ｇ／ｍｏｌ、３，２９５ｇ／ｍｏｌ、３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，３０５ｇ／ｍｏｌ、３，３１０ｇ／ｍｏｌ、３，３１５ｇ／ｍｏｌ、３，３２０ｇ／ｍｏｌ、３，３２５ｇ／ｍｏｌ、３，３３０ｇ／ｍｏｌ、３，３３５ｇ／ｍｏｌ、３，３４０ｇ／ｍｏｌ、３，３４５ｇ／ｍｏｌ、３，３５０ｇ／ｍｏｌ、３，３５５ｇ／ｍｏｌ、３，３６０ｇ／ｍｏｌ、３，３６５ｇ／ｍｏｌ、３，３７０ｇ／ｍｏｌ、３，３７５ｇ／ｍｏｌ、３，３８０ｇ／ｍｏｌ、３，３８５ｇ／ｍｏｌ、３，３９０ｇ／ｍｏｌ、３，３９５ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，４０５ｇ／ｍｏｌ、３，４１０ｇ／ｍｏｌ、３，４１５ｇ／ｍｏｌ、３，４２０ｇ／ｍｏｌ、３，４２５ｇ／ｍｏｌ、３，４３０ｇ／ｍｏｌ、３，４３５ｇ／ｍｏｌ、３，４４０ｇ／ｍｏｌ、３，４４５ｇ／ｍｏｌ、３，４５０ｇ／ｍｏｌ、３，４５５ｇ／ｍｏｌ、３，４６０ｇ／ｍｏｌ、３，４６５ｇ／ｍｏｌ、３，４７０ｇ／ｍｏｌ、３，４７５ｇ／ｍｏｌ、３，４８０ｇ／ｍｏｌ、３，４８５ｇ／ｍｏｌ、３，４９０ｇ／ｍｏｌ、３，４９５ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，５０５ｇ／ｍｏｌ、３，５１０ｇ／ｍｏｌ、３，５１５ｇ／ｍｏｌ、３，５２０ｇ／ｍｏｌ、３，５２５ｇ／ｍｏｌ、３，５３０ｇ／ｍｏｌ、３，５３５ｇ／ｍｏｌ、３，５４０ｇ／ｍｏｌ、３，５４５ｇ／ｍｏｌ、３，５５０ｇ／ｍｏｌ、３，５５５ｇ／ｍｏｌ、３，５６０ｇ／ｍｏｌ、３，５６５ｇ／ｍｏｌ、３，５７０ｇ／ｍｏｌ、３，５７５ｇ／ｍｏｌ、３，５８０ｇ／ｍｏｌ、３，５８５ｇ／ｍｏｌ、３，５９０ｇ／ｍｏｌ、３，５９５ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，６０５ｇ／ｍｏｌ、３，６１０ｇ／ｍｏｌ、３，６１５ｇ／ｍｏｌ、３，６２０ｇ／ｍｏｌ、３，６２５ｇ／ｍｏｌ、３，６３０ｇ／ｍｏｌ、３，６３５ｇ／ｍｏｌ、３，６４０ｇ／ｍｏｌ、３，６４５ｇ／ｍｏｌ、３，６５０ｇ／ｍｏｌ、３，６５５ｇ／ｍｏｌ、３，６６０ｇ／ｍｏｌ、３，６６５ｇ／ｍｏｌ、３，６７０ｇ／ｍｏｌ、３，６７５ｇ／ｍｏｌ、３，６８０ｇ／ｍｏｌ、３，６８５ｇ／ｍｏｌ、３，６９０ｇ／ｍｏｌ、３，６９５ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，７０５ｇ／ｍｏｌ、３，７１０ｇ／ｍｏｌ、３，７１５ｇ／ｍｏｌ、３，７２０ｇ／ｍｏｌ、３，７２５ｇ／ｍｏｌ、３，７３０ｇ／ｍｏｌ、３，７３５ｇ／ｍｏｌ、３，７４０ｇ／ｍｏｌ、３，７４５ｇ／ｍｏｌ、３，７５０ｇ／ｍｏｌ、３，７５５ｇ／ｍｏｌ、３，７６０ｇ／ｍｏｌ、３，７６５ｇ／ｍｏｌ、３，７７０ｇ／ｍｏｌ、３，７７５ｇ／ｍｏｌ、３，７８０ｇ／ｍｏｌ、３，７８５ｇ／ｍｏｌ、３，７９０ｇ／ｍｏｌ、３，７９５ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，８０５ｇ／ｍｏｌ、３，８１０ｇ／ｍｏｌ、３，８１５ｇ／ｍｏｌ、３，８２０ｇ／ｍｏｌ、３，８２５ｇ／ｍｏｌ、３，８３０ｇ／ｍｏｌ、３，８３５ｇ／ｍｏｌ、３，８４０ｇ／ｍｏｌ、３，８４５ｇ／ｍｏｌ、３，８５０ｇ／ｍｏｌ、３，８５５ｇ／ｍｏｌ、３，８６０ｇ／ｍｏｌ、３，８６５ｇ／ｍｏｌ、３，８７０ｇ／ｍｏｌ、３，８７５ｇ／ｍｏｌ、３，８８０ｇ／ｍｏｌ、３，８８５ｇ／ｍｏｌ、３，８９０ｇ／ｍｏｌ、３，８９５ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、３，９０５ｇ／ｍｏｌ、３，９１０ｇ／ｍｏｌ、３，９１５ｇ／ｍｏｌ、３，９２０ｇ／ｍｏｌ、３，９２５ｇ／ｍｏｌ、３，９３０ｇ／ｍｏｌ、３，９３５ｇ／ｍｏｌ、３，９４０ｇ／ｍｏｌ、３，９４５ｇ／ｍｏｌ、３，９５０ｇ／ｍｏｌ、３，９５５ｇ／ｍｏｌ、３，９６０ｇ／ｍｏｌ、３，９６５ｇ／ｍｏｌ、３，９７０ｇ／ｍｏｌ、３，９７５ｇ／ｍｏｌ、３，９８０ｇ／ｍｏｌ、３，９８５ｇ／ｍｏｌ、３，９９０ｇ／ｍｏｌ、３，９９５ｇ／ｍｏｌ、または４，０００ｇ／ｍｏｌ）の、ポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量を有する。

【0412】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約２，７５０ｇ／ｍｏｌ～約４，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約２，７５０ｇ／ｍｏｌ、２，７５５ｇ／ｍｏｌ、２，７６０ｇ／ｍｏｌ、２，７６５ｇ／ｍｏｌ、２，７７０ｇ／ｍｏｌ、２，７７５ｇ／ｍｏｌ、２，７８０ｇ／ｍｏｌ、２，７８５ｇ／ｍｏｌ、２，７９０ｇ／ｍｏｌ、２，７９５ｇ／ｍｏｌ、２，８００ｇ／ｍｏｌ、２，８０５ｇ／ｍｏｌ、２，８１０ｇ／ｍｏｌ、２，８１５ｇ／ｍｏｌ、２，８２０ｇ／ｍｏｌ、２，８２５ｇ／ｍｏｌ、２，８３０ｇ／ｍｏｌ、２，８３５ｇ／ｍｏｌ、２，８４０ｇ／ｍｏｌ、２，８４５ｇ／ｍｏｌ、２，８５０ｇ／ｍｏｌ、２，８５５ｇ／ｍｏｌ、２，８６０ｇ／ｍｏｌ、２，８６５ｇ／ｍｏｌ、２，８７０ｇ／ｍｏｌ、２，８７５ｇ／ｍｏｌ、２，８８０ｇ／ｍｏｌ、２，８８５ｇ／ｍｏｌ、２，８９０ｇ／ｍｏｌ、２，８９５ｇ／ｍｏｌ、２，９００ｇ／ｍｏｌ、２，９０５ｇ／ｍｏｌ、２，９１０ｇ／ｍｏｌ、２，９１５ｇ／ｍｏｌ、２，９２０ｇ／ｍｏｌ、２，９２５ｇ／ｍｏｌ、２，９３０ｇ／ｍｏｌ、２，９３５ｇ／ｍｏｌ、２，９４０ｇ／ｍｏｌ、２，９４５ｇ／ｍｏｌ、２，９５０ｇ／ｍｏｌ、２，９５５ｇ／ｍｏｌ、２，９６０ｇ／ｍｏｌ、２，９６５ｇ／ｍｏｌ、２，９７０ｇ／ｍｏｌ、２，９７５ｇ／ｍｏｌ、２，９８０ｇ／ｍｏｌ、２，９８５ｇ／ｍｏｌ、２，９９０ｇ／ｍｏｌ、２，９９５ｇ／ｍｏｌ、３，０００ｇ／ｍｏｌ、３，００５ｇ／ｍｏｌ、３，０１０ｇ／ｍｏｌ、３，０１５ｇ／ｍｏｌ、３，０２０ｇ／ｍｏｌ、３，０２５ｇ／ｍｏｌ、３，０３０ｇ／ｍｏｌ、３，０３５ｇ／ｍｏｌ、３，０４０ｇ／ｍｏｌ、３，０４５ｇ／ｍｏｌ、３，０５０ｇ／ｍｏｌ、３，０５５ｇ／ｍｏｌ、３，０６０ｇ／ｍｏｌ、３，０６５ｇ／ｍｏｌ、３，０７０ｇ／ｍｏｌ、３，０７５ｇ／ｍｏｌ、３，０８０ｇ／ｍｏｌ、３，０８５ｇ／ｍｏｌ、３，０９０ｇ／ｍｏｌ、３，０９５ｇ／ｍｏｌ、３，１００ｇ／ｍｏｌ、３，１０５ｇ／ｍｏｌ、３，１１０ｇ／ｍｏｌ、３，１１５ｇ／ｍｏｌ、３，１２０ｇ／ｍｏｌ、３，１２５ｇ／ｍｏｌ、３，１３０ｇ／ｍｏｌ、３，１３５ｇ／ｍｏｌ、３，１４０ｇ／ｍｏｌ、３，１４５ｇ／ｍｏｌ、３，１５０ｇ／ｍｏｌ、３，１５５ｇ／ｍｏｌ、３，１６０ｇ／ｍｏｌ、３，１６５ｇ／ｍｏｌ、３，１７０ｇ／ｍｏｌ、３，１７５ｇ／ｍｏｌ、３，１８０ｇ／ｍｏｌ、３，１８５ｇ／ｍｏｌ、３，１９０ｇ／ｍｏｌ、３，１９５ｇ／ｍｏｌ、３，２００ｇ／ｍｏｌ、３，２０５ｇ／ｍｏｌ、３，２１０ｇ／ｍｏｌ、３，２１５ｇ／ｍｏｌ、３，２２０ｇ／ｍｏｌ、３，２２５ｇ／ｍｏｌ、３，２３０ｇ／ｍｏｌ、３，２３５ｇ／ｍｏｌ、３，２４０ｇ／ｍｏｌ、３，２４５ｇ／ｍｏｌ、３，２５０ｇ／ｍｏｌ、３，２５５ｇ／ｍｏｌ、３，２６０ｇ／ｍｏｌ、３，２６５ｇ／ｍｏｌ、３，２７０ｇ／ｍｏｌ、３，２７５ｇ／ｍｏｌ、３，２８０ｇ／ｍｏｌ、３，２８５ｇ／ｍｏｌ、３，２９０ｇ／ｍｏｌ、３，２９５ｇ／ｍｏｌ、３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，３０５ｇ／ｍｏｌ、３，３１０ｇ／ｍｏｌ、３，３１５ｇ／ｍｏｌ、３，３２０ｇ／ｍｏｌ、３，３２５ｇ／ｍｏｌ、３，３３０ｇ／ｍｏｌ、３，３３５ｇ／ｍｏｌ、３，３４０ｇ／ｍｏｌ、３，３４５ｇ／ｍｏｌ、３，３５０ｇ／ｍｏｌ、３，３５５ｇ／ｍｏｌ、３，３６０ｇ／ｍｏｌ、３，３６５ｇ／ｍｏｌ、３，３７０ｇ／ｍｏｌ、３，３７５ｇ／ｍｏｌ、３，３８０ｇ／ｍｏｌ、３，３８５ｇ／ｍｏｌ、３，３９０ｇ／ｍｏｌ、３，３９５ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，４０５ｇ／ｍｏｌ、３，４１０ｇ／ｍｏｌ、３，４１５ｇ／ｍｏｌ、３，４２０ｇ／ｍｏｌ、３，４２５ｇ／ｍｏｌ、３，４３０ｇ／ｍｏｌ、３，４３５ｇ／ｍｏｌ、３，４４０ｇ／ｍｏｌ、３，４４５ｇ／ｍｏｌ、３，４５０ｇ／ｍｏｌ、３，４５５ｇ／ｍｏｌ、３，４６０ｇ／ｍｏｌ、３，４６５ｇ／ｍｏｌ、３，４７０ｇ／ｍｏｌ、３，４７５ｇ／ｍｏｌ、３，４８０ｇ／ｍｏｌ、３，４８５ｇ／ｍｏｌ、３，４９０ｇ／ｍｏｌ、３，４９５ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，５０５ｇ／ｍｏｌ、３，５１０ｇ／ｍｏｌ、３，５１５ｇ／ｍｏｌ、３，５２０ｇ／ｍｏｌ、３，５２５ｇ／ｍｏｌ、３，５３０ｇ／ｍｏｌ、３，５３５ｇ／ｍｏｌ、３，５４０ｇ／ｍｏｌ、３，５４５ｇ／ｍｏｌ、３，５５０ｇ／ｍｏｌ、３，５５５ｇ／ｍｏｌ、３，５６０ｇ／ｍｏｌ、３，５６５ｇ／ｍｏｌ、３，５７０ｇ／ｍｏｌ、３，５７５ｇ／ｍｏｌ、３，５８０ｇ／ｍｏｌ、３，５８５ｇ／ｍｏｌ、３，５９０ｇ／ｍｏｌ、３，５９５ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，６０５ｇ／ｍｏｌ、３，６１０ｇ／ｍｏｌ、３，６１５ｇ／ｍｏｌ、３，６２０ｇ／ｍｏｌ、３，６２５ｇ／ｍｏｌ、３，６３０ｇ／ｍｏｌ、３，６３５ｇ／ｍｏｌ、３，６４０ｇ／ｍｏｌ、３，６４５ｇ／ｍｏｌ、３，６５０ｇ／ｍｏｌ、３，６５５ｇ／ｍｏｌ、３，６６０ｇ／ｍｏｌ、３，６６５ｇ／ｍｏｌ、３，６７０ｇ／ｍｏｌ、３，６７５ｇ／ｍｏｌ、３，６８０ｇ／ｍｏｌ、３，６８５ｇ／ｍｏｌ、３，６９０ｇ／ｍｏｌ、３，６９５ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，７０５ｇ／ｍｏｌ、３，７１０ｇ／ｍｏｌ、３，７１５ｇ／ｍｏｌ、３，７２０ｇ／ｍｏｌ、３，７２５ｇ／ｍｏｌ、３，７３０ｇ／ｍｏｌ、３，７３５ｇ／ｍｏｌ、３，７４０ｇ／ｍｏｌ、３，７４５ｇ／ｍｏｌ、３，７５０ｇ／ｍｏｌ、３，７５５ｇ／ｍｏｌ、３，７６０ｇ／ｍｏｌ、３，７６５ｇ／ｍｏｌ、３，７７０ｇ／ｍｏｌ、３，７７５ｇ／ｍｏｌ、３，７８０ｇ／ｍｏｌ、３，７８５ｇ／ｍｏｌ、３，７９０ｇ／ｍｏｌ、３，７９５ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，８０５ｇ／ｍｏｌ、３，８１０ｇ／ｍｏｌ、３，８１５ｇ／ｍｏｌ、３，８２０ｇ／ｍｏｌ、３，８２５ｇ／ｍｏｌ、３，８３０ｇ／ｍｏｌ、３，８３５ｇ／ｍｏｌ、３，８４０ｇ／ｍｏｌ、３，８４５ｇ／ｍｏｌ、３，８５０ｇ／ｍｏｌ、３，８５５ｇ／ｍｏｌ、３，８６０ｇ／ｍｏｌ、３，８６５ｇ／ｍｏｌ、３，８７０ｇ／ｍｏｌ、３，８７５ｇ／ｍｏｌ、３，８８０ｇ／ｍｏｌ、３，８８５ｇ／ｍｏｌ、３，８９０ｇ／ｍｏｌ、３，８９５ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、３，９０５ｇ／ｍｏｌ、３，９１０ｇ／ｍｏｌ、３，９１５ｇ／ｍｏｌ、３，９２０ｇ／ｍｏｌ、３，９２５ｇ／ｍｏｌ、３，９３０ｇ／ｍｏｌ、３，９３５ｇ／ｍｏｌ、３，９４０ｇ／ｍｏｌ、３，９４５ｇ／ｍｏｌ、３，９５０ｇ／ｍｏｌ、３，９５５ｇ／ｍｏｌ、３，９６０ｇ／ｍｏｌ、３，９６５ｇ／ｍｏｌ、３，９７０ｇ／ｍｏｌ、３，９７５ｇ／ｍｏｌ、３，９８０ｇ／ｍｏｌ、３，９８５ｇ／ｍｏｌ、３，９９０ｇ／ｍｏｌ、３，９９５ｇ／ｍｏｌ、または４，０００ｇ／ｍｏｌ）のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量を有する。

【0413】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約３，２５０ｇ／ｍｏｌ～約４，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約３，２５０ｇ／ｍｏｌ、３，２５５ｇ／ｍｏｌ、３，２６０ｇ／ｍｏｌ、３，２６５ｇ／ｍｏｌ、３，２７０ｇ／ｍｏｌ、３，２７５ｇ／ｍｏｌ、３，２８０ｇ／ｍｏｌ、３，２８５ｇ／ｍｏｌ、３，２９０ｇ／ｍｏｌ、３，２９５ｇ／ｍｏｌ、３，３００ｇ／ｍｏｌ、３，３０５ｇ／ｍｏｌ、３，３１０ｇ／ｍｏｌ、３，３１５ｇ／ｍｏｌ、３，３２０ｇ／ｍｏｌ、３，３２５ｇ／ｍｏｌ、３，３３０ｇ／ｍｏｌ、３，３３５ｇ／ｍｏｌ、３，３４０ｇ／ｍｏｌ、３，３４５ｇ／ｍｏｌ、３，３５０ｇ／ｍｏｌ、３，３５５ｇ／ｍｏｌ、３，３６０ｇ／ｍｏｌ、３，３６５ｇ／ｍｏｌ、３，３７０ｇ／ｍｏｌ、３，３７５ｇ／ｍｏｌ、３，３８０ｇ／ｍｏｌ、３，３８５ｇ／ｍｏｌ、３，３９０ｇ／ｍｏｌ、３，３９５ｇ／ｍｏｌ、３，４００ｇ／ｍｏｌ、３，４０５ｇ／ｍｏｌ、３，４１０ｇ／ｍｏｌ、３，４１５ｇ／ｍｏｌ、３，４２０ｇ／ｍｏｌ、３，４２５ｇ／ｍｏｌ、３，４３０ｇ／ｍｏｌ、３，４３５ｇ／ｍｏｌ、３，４４０ｇ／ｍｏｌ、３，４４５ｇ／ｍｏｌ、３，４５０ｇ／ｍｏｌ、３，４５５ｇ／ｍｏｌ、３，４６０ｇ／ｍｏｌ、３，４６５ｇ／ｍｏｌ、３，４７０ｇ／ｍｏｌ、３，４７５ｇ／ｍｏｌ、３，４８０ｇ／ｍｏｌ、３，４８５ｇ／ｍｏｌ、３，４９０ｇ／ｍｏｌ、３，４９５ｇ／ｍｏｌ、３，５００ｇ／ｍｏｌ、３，５０５ｇ／ｍｏｌ、３，５１０ｇ／ｍｏｌ、３，５１５ｇ／ｍｏｌ、３，５２０ｇ／ｍｏｌ、３，５２５ｇ／ｍｏｌ、３，５３０ｇ／ｍｏｌ、３，５３５ｇ／ｍｏｌ、３，５４０ｇ／ｍｏｌ、３，５４５ｇ／ｍｏｌ、３，５５０ｇ／ｍｏｌ、３，５５５ｇ／ｍｏｌ、３，５６０ｇ／ｍｏｌ、３，５６５ｇ／ｍｏｌ、３，５７０ｇ／ｍｏｌ、３，５７５ｇ／ｍｏｌ、３，５８０ｇ／ｍｏｌ、３，５８５ｇ／ｍｏｌ、３，５９０ｇ／ｍｏｌ、３，５９５ｇ／ｍｏｌ、３，６００ｇ／ｍｏｌ、３，６０５ｇ／ｍｏｌ、３，６１０ｇ／ｍｏｌ、３，６１５ｇ／ｍｏｌ、３，６２０ｇ／ｍｏｌ、３，６２５ｇ／ｍｏｌ、３，６３０ｇ／ｍｏｌ、３，６３５ｇ／ｍｏｌ、３，６４０ｇ／ｍｏｌ、３，６４５ｇ／ｍｏｌ、３，６５０ｇ／ｍｏｌ、３，６５５ｇ／ｍｏｌ、３，６６０ｇ／ｍｏｌ、３，６６５ｇ／ｍｏｌ、３，６７０ｇ／ｍｏｌ、３，６７５ｇ／ｍｏｌ、３，６８０ｇ／ｍｏｌ、３，６８５ｇ／ｍｏｌ、３，６９０ｇ／ｍｏｌ、３，６９５ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，７０５ｇ／ｍｏｌ、３，７１０ｇ／ｍｏｌ、３，７１５ｇ／ｍｏｌ、３，７２０ｇ／ｍｏｌ、３，７２５ｇ／ｍｏｌ、３，７３０ｇ／ｍｏｌ、３，７３５ｇ／ｍｏｌ、３，７４０ｇ／ｍｏｌ、３，７４５ｇ／ｍｏｌ、３，７５０ｇ／ｍｏｌ、３，７５５ｇ／ｍｏｌ、３，７６０ｇ／ｍｏｌ、３，７６５ｇ／ｍｏｌ、３，７７０ｇ／ｍｏｌ、３，７７５ｇ／ｍｏｌ、３，７８０ｇ／ｍｏｌ、３，７８５ｇ／ｍｏｌ、３，７９０ｇ／ｍｏｌ、３，７９５ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，８０５ｇ／ｍｏｌ、３，８１０ｇ／ｍｏｌ、３，８１５ｇ／ｍｏｌ、３，８２０ｇ／ｍｏｌ、３，８２５ｇ／ｍｏｌ、３，８３０ｇ／ｍｏｌ、３，８３５ｇ／ｍｏｌ、３，８４０ｇ／ｍｏｌ、３，８４５ｇ／ｍｏｌ、３，８５０ｇ／ｍｏｌ、３，８５５ｇ／ｍｏｌ、３，８６０ｇ／ｍｏｌ、３，８６５ｇ／ｍｏｌ、３，８７０ｇ／ｍｏｌ、３，８７５ｇ／ｍｏｌ、３，８８０ｇ／ｍｏｌ、３，８８５ｇ／ｍｏｌ、３，８９０ｇ／ｍｏｌ、３，８９５ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、３，９０５ｇ／ｍｏｌ、３，９１０ｇ／ｍｏｌ、３，９１５ｇ／ｍｏｌ、３，９２０ｇ／ｍｏｌ、３，９２５ｇ／ｍｏｌ、３，９３０ｇ／ｍｏｌ、３，９３５ｇ／ｍｏｌ、３，９４０ｇ／ｍｏｌ、３，９４５ｇ／ｍｏｌ、３，９５０ｇ／ｍｏｌ、３，９５５ｇ／ｍｏｌ、３，９６０ｇ／ｍｏｌ、３，９６５ｇ／ｍｏｌ、３，９７０ｇ／ｍｏｌ、３，９７５ｇ／ｍｏｌ、３，９８０ｇ／ｍｏｌ、３，９８５ｇ／ｍｏｌ、３，９９０ｇ／ｍｏｌ、３，９９５ｇ／ｍｏｌ、または４，０００ｇ／ｍｏｌ）のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量を有する。

【0414】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約３，６２５ｇ／ｍｏｌ～約４，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約３，６２５ｇ／ｍｏｌ、３，６３０ｇ／ｍｏｌ、３，６３５ｇ／ｍｏｌ、３，６４０ｇ／ｍｏｌ、３，６４５ｇ／ｍｏｌ、３，６５０ｇ／ｍｏｌ、３，６５５ｇ／ｍｏｌ、３，６６０ｇ／ｍｏｌ、３，６６５ｇ／ｍｏｌ、３，６７０ｇ／ｍｏｌ、３，６７５ｇ／ｍｏｌ、３，６８０ｇ／ｍｏｌ、３，６８５ｇ／ｍｏｌ、３，６９０ｇ／ｍｏｌ、３，６９５ｇ／ｍｏｌ、３，７００ｇ／ｍｏｌ、３，７０５ｇ／ｍｏｌ、３，７１０ｇ／ｍｏｌ、３，７１５ｇ／ｍｏｌ、３，７２０ｇ／ｍｏｌ、３，７２５ｇ／ｍｏｌ、３，７３０ｇ／ｍｏｌ、３，７３５ｇ／ｍｏｌ、３，７４０ｇ／ｍｏｌ、３，７４５ｇ／ｍｏｌ、３，７５０ｇ／ｍｏｌ、３，７５５ｇ／ｍｏｌ、３，７６０ｇ／ｍｏｌ、３，７６５ｇ／ｍｏｌ、３，７７０ｇ／ｍｏｌ、３，７７５ｇ／ｍｏｌ、３，７８０ｇ／ｍｏｌ、３，７８５ｇ／ｍｏｌ、３，７９０ｇ／ｍｏｌ、３，７９５ｇ／ｍｏｌ、３，８００ｇ／ｍｏｌ、３，８０５ｇ／ｍｏｌ、３，８１０ｇ／ｍｏｌ、３，８１５ｇ／ｍｏｌ、３，８２０ｇ／ｍｏｌ、３，８２５ｇ／ｍｏｌ、３，８３０ｇ／ｍｏｌ、３，８３５ｇ／ｍｏｌ、３，８４０ｇ／ｍｏｌ、３，８４５ｇ／ｍｏｌ、３，８５０ｇ／ｍｏｌ、３，８５５ｇ／ｍｏｌ、３，８６０ｇ／ｍｏｌ、３，８６５ｇ／ｍｏｌ、３，８７０ｇ／ｍｏｌ、３，８７５ｇ／ｍｏｌ、３，８８０ｇ／ｍｏｌ、３，８８５ｇ／ｍｏｌ、３，８９０ｇ／ｍｏｌ、３，８９５ｇ／ｍｏｌ、３，９００ｇ／ｍｏｌ、３，９０５ｇ／ｍｏｌ、３，９１０ｇ／ｍｏｌ、３，９１５ｇ／ｍｏｌ、３，９２０ｇ／ｍｏｌ、３，９２５ｇ／ｍｏｌ、３，９３０ｇ／ｍｏｌ、３，９３５ｇ／ｍｏｌ、３，９４０ｇ／ｍｏｌ、３，９４５ｇ／ｍｏｌ、３，９５０ｇ／ｍｏｌ、３，９５５ｇ／ｍｏｌ、３，９６０ｇ／ｍｏｌ、３，９６５ｇ／ｍｏｌ、３，９７０ｇ／ｍｏｌ、３，９７５ｇ／ｍｏｌ、３，９８０ｇ／ｍｏｌ、３，９８５ｇ／ｍｏｌ、３，９９０ｇ／ｍｏｌ、３，９９５ｇ／ｍｏｌ、または４，０００ｇ／ｍｏｌ）のポリオキシプロピレンサブユニットの平均モル質量を有する。

【0415】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、４０質量％超（例えば、約４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、またはそれ以上）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0416】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、５０質量％超（例えば、約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、またはそれ以上）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0417】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、６０質量％超（例えば、約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、またはそれ以上）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0418】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、７０質量％超（例えば、約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、またはそれ以上）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0419】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約４０％～約９０％（例えば、約４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、または９０％）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0420】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約５０％～約８５％（例えば、約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、または８５％）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0421】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約６０％～約８０％（例えば、約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％）の平均エチレンオキシド含有量を有する。

【0422】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、１０，０００ｇ／ｍｏｌ超（例えば、約１０，１００ｇ／ｍｏｌ、１０，２００ｇ／ｍｏｌ、１０，３００ｇ／ｍｏｌ、１０，４００ｇ／ｍｏｌ、１０，５００ｇ／ｍｏｌ、１０，６００ｇ／ｍｏｌ、１０，７００ｇ／ｍｏｌ、１０，８００ｇ／ｍｏｌ、１０，９００ｇ／ｍｏｌ、１１，０００ｇ／ｍｏｌ、１１，１００ｇ／ｍｏｌ、１１，２００ｇ／ｍｏｌ、１１，３００ｇ／ｍｏｌ、１１，４００ｇ／ｍｏｌ、１１，５００ｇ／ｍｏｌ、１１，６００ｇ／ｍｏｌ、１１，７００ｇ／ｍｏｌ、１１，８００ｇ／ｍｏｌ、１１，９００ｇ／ｍｏｌ、１２，０００ｇ／ｍｏｌ、１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0423】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、１１，０００ｇ／ｍｏｌ超（例えば、約１１，１００ｇ／ｍｏｌ、１１，２００ｇ／ｍｏｌ、１１，３００ｇ／ｍｏｌ、１１，４００ｇ／ｍｏｌ、１１，５００ｇ／ｍｏｌ、１１，６００ｇ／ｍｏｌ、１１，７００ｇ／ｍｏｌ、１１，８００ｇ／ｍｏｌ、１１，９００ｇ／ｍｏｌ、１２，０００ｇ／ｍｏｌ、１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0424】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、１２，０００ｇ／ｍｏｌ超（例えば、約１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0425】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、１２，５００ｇ／ｍｏｌ超（例えば、約１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0426】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約１０，０００ｇ／ｍｏｌ～約１５，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約１０，０００ｇ／ｍｏｌ、１０，１００ｇ／ｍｏｌ、１０，２００ｇ／ｍｏｌ、１０，３００ｇ／ｍｏｌ、１０，４００ｇ／ｍｏｌ、１０，５００ｇ／ｍｏｌ、１０，６００ｇ／ｍｏｌ、１０，７００ｇ／ｍｏｌ、１０，８００ｇ／ｍｏｌ、１０，９００ｇ／ｍｏｌ、１１，０００ｇ／ｍｏｌ、１１，１００ｇ／ｍｏｌ、１１，２００ｇ／ｍｏｌ、１１，３００ｇ／ｍｏｌ、１１，４００ｇ／ｍｏｌ、１１，５００ｇ／ｍｏｌ、１１，６００ｇ／ｍｏｌ、１１，７００ｇ／ｍｏｌ、１１，８００ｇ／ｍｏｌ、１１，９００ｇ／ｍｏｌ、１２，０００ｇ／ｍｏｌ、１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0427】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約１１，０００ｇ／ｍｏｌ～約１５，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約１１，０００ｇ／ｍｏｌ、１１，１００ｇ／ｍｏｌ、１１，２００ｇ／ｍｏｌ、１１，３００ｇ／ｍｏｌ、１１，４００ｇ／ｍｏｌ、１１，５００ｇ／ｍｏｌ、１１，６００ｇ／ｍｏｌ、１１，７００ｇ／ｍｏｌ、１１，８００ｇ／ｍｏｌ、１１，９００ｇ／ｍｏｌ、１２，０００ｇ／ｍｏｌ、１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0428】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約１１，５００ｇ／ｍｏｌ～約１５，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約１１，５００ｇ／ｍｏｌ、１１，６００ｇ／ｍｏｌ、１１，７００ｇ／ｍｏｌ、１１，８００ｇ／ｍｏｌ、１１，９００ｇ／ｍｏｌ、１２，０００ｇ／ｍｏｌ、１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0429】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約１２，０００ｇ／ｍｏｌ～約１５，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約１２，０００ｇ／ｍｏｌ、１２，１００ｇ／ｍｏｌ、１２，２００ｇ／ｍｏｌ、１２，３００ｇ／ｍｏｌ、１２，４００ｇ／ｍｏｌ、１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の平均モル質量を有する。

【0430】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、約１２，５００ｇ／ｍｏｌ～約１５，０００ｇ／ｍｏｌ（例えば、約１２，５００ｇ／ｍｏｌ、１２，６００ｇ／ｍｏｌ、１２，７００ｇ／ｍｏｌ、１２，８００ｇ／ｍｏｌ、１２，９００ｇ／ｍｏｌ、１３，０００ｇ／ｍｏｌ、１３，１００ｇ／ｍｏｌ、１３，２００ｇ／ｍｏｌ、１３，３００ｇ／ｍｏｌ、１３，４００ｇ／ｍｏｌ、１３，５００ｇ／ｍｏｌ、１３，６００ｇ／ｍｏｌ、１３，７００ｇ／ｍｏｌ、１３，８００ｇ／ｍｏｌ、１３，９００ｇ／ｍｏｌ、１４，０００ｇ／ｍｏｌ、１４，１００ｇ／ｍｏｌ、１４，２００ｇ／ｍｏｌ、１４，３００ｇ／ｍｏｌ、１４，４００ｇ／ｍｏｌ、１４，５００ｇ／ｍｏｌ、１４，６００ｇ／ｍｏｌ、１４，７００ｇ／ｍｏｌ、１４，８００ｇ／ｍｏｌ、１４，９００ｇ／ｍｏｌ、または１５，０００ｇ／ｍｏｌ）の、平均モル質量を有する。

【0431】

ポロキサマーＰ２８８、Ｐ３３５、Ｐ３３８、及びＰ４０７
本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るポロキサマーとしては、適切な化学式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約２３６．３６であり、ｚは約４４．８３である。］を有する、「ポロキサマー２８８」（当該技術分野においては、「Ｐ２８８」及びポロキサマー「Ｆ９８」とも呼ばれる）が挙げられる。Ｐ２８８の平均分子量は、約１３，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0432】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約２２０～約２５０であり、ｚは約４０～約５０である。］のバリアントなどの、Ｐ２８８のバリアントである。いくつかの実施形態では、ポロキサマーの平均分子量は、約１２，０００ｇ／ｍｏｌ～約１４，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0433】

本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るポロキサマーとしては、適切な化学式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約７３．８６であり、ｚは約５６．０３である。］を有する、「ポロキサマー３３５」（当該技術分野においては、「Ｐ３３５」及びポロキサマー「Ｐ１０５」とも呼ばれる）が更に挙げられる。Ｐ３３５の平均分子量は、約６，５００ｇ／ｍｏｌである。

【0434】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約６０～約８０であり、ｚは約５０～約６０である。］のバリアントなどの、Ｐ３３５のバリアントである。いくつかの実施形態では、ポロキサマーの平均分子量は、約６，０００ｇ／ｍｏｌ～約７，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0435】

本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るポロキサマーとしては、適切な化学式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約２６５．４５であり、ｚは約５０．３４である。］を有する、「ポロキサマー３３８」（当該技術分野においては、「Ｐ３３８」及びポロキサマー「Ｆ１０８」とも呼ばれる）が更に挙げられる。Ｐ３３５の平均分子量は、約１４，６００ｇ／ｍｏｌである。

【0436】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約２６０～約２７０であり、ｚは約４５～約５５である。］のバリアントなどの、Ｐ３３８のバリアントである。いくつかの実施形態では、ポロキサマーの平均分子量は、約１４，０００ｇ／ｍｏｌ～約１５，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0437】

本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得るポロキサマーとしては、適切な化学式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約２００．４５であり、ｚは約６５．１７である。］を有する、「ポロキサマー４０７」（当該技術分野においては、「Ｐ４０７」及びポロキサマー「Ｆ１２７」とも呼ばれる）が更に挙げられる。Ｐ３３５の平均分子量は、約１２，６００ｇ／ｍｏｌである。

【0438】

いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、式ＨＯ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｘ（Ｃ_３Ｈ_６Ｏ）_ｙ（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｚＨ［式中、ｘ及びｙの合計は約１９０～約２１０であり、ｚは約６０～約７０である。］のバリアントなどの、Ｐ４０７のバリアントである。いくつかの実施形態では、ポロキサマーの平均分子量は、約１２，０００ｇ／ｍｏｌ～約１３，０００ｇ／ｍｏｌである。

【0439】

明確にするために、用語「平均モル質量」及び「平均分子量」は、本明細書では同じ意味で用いられ、同じ量を指す。本明細書に記載のポロキサマーの平均モル質量、エチレンオキシド含有量、及びプロピレンオキシド含有量は、ＡｌｅｘａｎｄｒｉｄｉｓａｎｄＨａｔｔｏｎ，ＣｏｌｌｏｉｄｓａｎｄＳｕｒｆａｃｅｓＡ：ＰｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＡｓｐｅｃｔｓ９６：１－４６（１９９５）に開示されている方法を使用して決定することができ、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0440】

タンパク質キナーゼＣモジュレーターを使用する形質導入
様々な薬剤を使用して、ＰＫＣ活性及び／または発現を低減させることができる。メカニズムによって制限されることなく、かかる薬剤は、Ａｋｔシグナル伝達を刺激すること、及び／またはコフィリンを脱リン酸化状態に維持することによってウイルス形質導入を増強することができ、それによってアクチン解重合を促進する。このアクチン解重合事象は、ウイルスベクターの、標的細胞の核内への侵入を阻害する物理的障壁を取り除く役割を果たし得る。

【0441】

スタウロスポリン及びそのバリアント
いくつかの実施形態では、ＰＫＣの活性及び／または発現を低減させる物質は、ＰＫＣ阻害剤である。ＰＫＣ阻害剤は、スタウロスポリン、またはそのバリアントであってよい。例えば、ＰＫＣ阻害剤は、式（Ｉ）で表される化合物

【化1】

［式中、Ｒ_１は、Ｈ、ＯＨ、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアシルオキシ、任意に置換されたアミノ、任意に置換されたアルキルアミノ、任意に置換されたアミド、ハロゲン、任意に置換されたＣ_１－６アルキル、任意に置換されたＣ_２－６アルケニル、任意に置換されたＣ_２－６アルキニル、任意に置換されたアシル、任意に置換されたアルコキシカルボニル、オキソ、チオカルボニル、任意に置換されたカルボキシ、またはウレイドであり、
Ｒ_２は、Ｈ、任意に置換されたＣ_１－６アルキル、任意に置換されたＣ_２－６アルケニル、任意に置換されたＣ_２－６アルキニル、または任意に置換されたアシルであり、
Ｒ_ａ及びＲ_ｂは各々独立して、Ｈ、任意に置換されたＣ_１－６アルキル、任意に置換されたＣ_２－６アルケニル、もしくは任意に置換されたＣ_２－６アルキニル、任意に置換され任意に縮合したアリール、任意に置換され任意に縮合したヘテロアリール、任意に置換され任意に縮合したシクロアルキル、もしくは任意に置換され任意に縮合したヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ_ａ及びＲ_ｂは、それらに結合する原子とともに結合し、任意に置換され任意に縮合したヘテロシクロアルキル環を形成し、
Ｒ_ｃは、Ｏ、ＮＲ_ｄ、またはＳであり、
Ｒ_ｄは、Ｈ、任意に置換されたＣ_１－６アルキル、任意に置換されたＣ_２－６アルケニル、または任意に置換されたＣ_２－６アルキニルであり、
各Ｘは独立して、ハロゲン、任意に置換されたハロアルキル、シアノ、任意に置換されたアミノ、ヒドロキシル、チオール、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアシルオキシ、任意に置換されたアルコキシカルボニル、任意に置換されたカルボキシ、ウレイド、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたヘテロアリールスルホニル、任意に置換されたシクロアルキルスルホニル、任意に置換されたヘテロシクロアルキルスルホニル、任意に置換されたアルキルスルファニル、任意に置換されたアリールスルファニル、任意に置換されたヘテロアリールスルファニル、任意に置換されたシクロアルキルスルファニル、任意に置換されたヘテロシクロアルキルスルファニル、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアリールスルフィニル、任意に置換されたヘテロアリールスルフィニル、任意に置換されたシクロアルキルスルフィニル、任意に置換されたヘテロシクロアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換され任意に縮合したアリール、任意に置換され任意に縮合したヘテロアリール、任意に置換され任意に縮合したシクロアルキル、または、任意に置換され任意に縮合したヘテロシクロアルキルであり、
各Ｙは独立して、ハロゲン、任意に置換されたハロアルキル、シアノ、任意に置換されたアミノ、ヒドロキシル、チオール、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアシルオキシ、任意に置換されたアルコキシカルボニル、任意に置換されたカルボキシ、ウレイド、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたヘテロアリールスルホニル、任意に置換されたシクロアルキルスルホニル、任意に置換されたヘテロシクロアルキルスルホニル、任意に置換されたアルキルスルファニル、任意に置換されたアリールスルファニル、任意に置換されたヘテロアリールスルファニル、任意に置換されたシクロアルキルスルファニル、任意に置換されたヘテロシクロアルキルスルファニル、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアリールスルフィニル、任意に置換されたヘテロアリールスルフィニル、任意に置換されたシクロアルキルスルフィニル、任意に置換されたヘテロシクロアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換され任意に縮合したアリール、任意に置換され任意に縮合したヘテロアリール、任意に置換され任意に縮合したシクロアルキル、または、任意に置換され任意に縮合したヘテロシクロアルキルであり、

【化2】

は、任意に存在する結合を表し、
ｎは、０～４の整数であり、
ｍは、０～４の整数である。］、
またはその塩である。

【0442】

干渉ＲＮＡ
本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る例示的なＰＫＣ調節剤としては、ＰＫＣ遺伝子発現を減少させる、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及び／またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）などの干渉ＲＮＡ分子が挙げられる。干渉ＲＮＡ分子を産生するための方法は当技術分野において既知であり、例えば、ＷＯ２００４／０４４１３６及び米国特許第９，１５０，６０５号に詳細に記載されており、これらの各々の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0443】

ＨＤＡＣ阻害剤を使用する形質導入
様々な薬剤を使用して、ウイルス形質導入中に核酸カセットの発現を増加させるために、ヒストン脱アセチル化酵素を阻害することができる。理論に拘束されることを望まないが、ウイルスベクターからの核酸カセット発現の低減は、ヒストン脱アセチル化によって行われるベクターゲノムの後成的なサイレンシングによって引き起こされ得る。ヒドロキサム酸は、これらの酵素の活性部位内でカチオン性亜鉛に結合する、ヒドロキサメートの官能性により、これらの酵素を阻害する、特にロバストなクラスのＨＤＡＣ阻害剤を表す。例示的な阻害剤としては、トリコスタチンＡ、及びボリノスタット（Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５，８４ｔｏ９０（２００７）、Ｓｔｅｎｇｅｒ，ＣｏｍｍｕｎｉｔｙＯｎｃｏｌｏｇｙ４，３８４－３８６（２００７）に記載されているＮ－ヒドロキシ－Ｎ’－フェニル－オクタンジアミド、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている）が挙げられる。他のＨＤＡＣ阻害剤としては、ＤｒｕｇｓｏｆｔｈｅＦｕｔｕｒｅ３２（４）：３１５－３２２（２００７）に記載されているパノビノスタットが挙げられ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0444】

ヒストン脱アセチル化酵素のヒドロキサム酸阻害剤の追加の例としては、Ｂｅｒｔｒａｎｄ，ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ４５：２０９５－２１１６（２０１０）に記載されている、以下に示される化合物が挙げられ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0445】

ヒドロキサメート置換基を含有しない他のＨＤＡＣ阻害剤も開発されており、バルプロ酸（Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ，ｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．２０（２４）：６９６９－６９７８（２００１）及びＢａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓ２８０：２１１－２２１（２００９）に記載されているモセチノスタット（Ｎ－（２－アミノフェニル）－４－［［（４－ピリジン－３－イルピリミジン－２－イル）アミノ］メチル］ベンズアミド）が含まれ、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。ヒドロキサメートとは異なる化学官能性を利用する他の低分子阻害剤としては、Ｂｅｒｔｒａｎｄ，ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ４５：２０９５－２１１６（２０１０）に記載されているものが挙げられ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0446】

本発明の組成物及び方法とともに有用な、ヒストンアセチル化の化学的モジュレーターの追加の例としては、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９、ＨＤＡＣ１０、Ｓｉｒｔ１、Ｓｉｒｔ２、及び／またはＨＡＴのモジュレーター、例えば、ブチリルヒドロキサム酸、Ｍ３４４、ＬＡＱ８２４（ダシノスタット）、ＡＲ－４２、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＣＵＤＣ－１０１、スクリプタイド、フェニルブチル酸ナトリウム、タスキニモド、キシノスタット（ＪＮＪ－２６４８１５８５）、プラシノスタット（ＳＢ９３９）、ＣＵＤＣ－９０７、エンチノスタット（ＭＳ－２７５）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ツバスタチンＡＨＣｌ、ＰＣＩ－３４０５１、ドロキシノスタット、ＰＣＩ－２４７８１（アベキシノスタット）、ＲＧＦＰ９６６、ロシリノスタット（ＡＣＹ－１２１５）、ＣＩ９９４（タセジナリン）、ツバシン、ＲＧ２８３３（ＲＧＦＰ１０９）、レスミノスタット、ツバスタチンＡ、ＢＲＤ７３９５４、ＢＧ４５、４ＳＣ－２０２、ＣＡＹ１０６０３、ＬＭＫ－２３５、ネクスツラスタットＡ、ＴＭＰ２６９、ＨＰＯＢ、カンビノール、及びアナカルド酸が挙げられる。

【0447】

いくつかの特定の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は、スクリプタイドである。

【0448】

シクロスポリンを使用する形質導入
いくつかの実施形態では、本開示の治療用細胞は、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）またはシクロスポリンＨ（ＣｓＨ）などのシクロスポリンの存在下で細胞を形質導入することによって産生される。

【0449】

いくつかの実施形態では、シクロスポリンの濃度は、細胞と接触した場合、約１μＭ～約１０μＭ（例えば、約１μＭ、１．１μＭ、１．２μＭ、１．３μＭ、１．４μＭ、１．５μＭ、１．６μＭ、１．７μＭ、１．８μＭ、１．９μＭ、２μＭ、２．１μＭ、２．２μＭ、２．３μＭ、２．４μＭ、２．５μＭ、２．６μＭ、２．７μＭ、２．８μＭ、２．９μＭ、３μＭ、３．１μＭ、３．２μＭ、３．３μＭ、３．４μＭ、３．５μＭ、３．６μＭ、３．７μＭ、３．８μＭ、３．９μＭ、４μＭ、４．１μＭ、４．２μＭ、４．３μＭ、４．４μＭ、４．５μＭ、４．６μＭ、４．７μＭ、４．８μＭ、４．９μＭ、５μＭ、５．１μＭ、５．２μＭ、５．３μＭ、５．４μＭ、５．５μＭ、５．６μＭ、５．７μＭ、５．８μＭ、５．９μＭ、６μＭ、６．１μＭ、６．２μＭ、６．３μＭ、６．４μＭ、６．５μＭ、６．６μＭ、６．７μＭ、６．８μＭ、６．９μＭ、７μＭ、７．１μＭ、７．２μＭ、７．３μＭ、７．４μＭ、７．５μＭ、７．６μＭ、７．７μＭ、７．８μＭ、７．９μＭ、８μＭ、８．１μＭ、８．２μＭ、８．３μＭ、８．４μＭ、８．５μＭ、８．６μＭ、８．７μＭ、８．８μＭ、８．９μＭ、９μＭ、９．１μＭ、９．２μＭ、９．３μＭ、９．４μＭ、９．５μＭ、９．６μＭ、９．７μＭ、９．８μＭ、９．９μＭ、または１０μＭ）である。

【0450】

プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子を使用する形質導入
いくつかの実施形態では、本開示の治療用細胞は、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子の存在下で細胞を形質導入することによって産生される。

【0451】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ＷＯ２００７／１１２０８４またはＷＯ２０１０／１０８０２８に記載されている化合物などの低分子であり、これらの各々の開示は、それらがプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達活性化因子に関係するため、参照により本明細書に組み込まれている。

【0452】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、有機低分子、プロスタグランジン、Ｗｎｔ経路アゴニスト、ｃＡＭＰ／ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路アゴニスト、Ｃａ^２＋セカンドメッセンジャー経路アゴニスト、一酸化窒素（ＮＯ）／アンギオテンシンシグナル伝達アゴニストなどの低分子、またはメベベリン、フルランドレノリド、アテノロール、ピンドロール、ガボキサドール、キヌレン酸、ヒドララジン、チアベンダゾール、ビククリン、ベサミコール、ペルボシド、イミプラミン、クロルプロパミド、１，５－ペンタメチレンテトラゾール、４－アミノピリジン、ジアゾキシド、ベンフォチアミン、１２－メトキシドデセン酸、Ｎ－ホルミル－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ、ガラミン、ＩＡＡ９４、クロロトリアニセン、及び／またはこれらの化合物のいずれかの誘導体から選択される化合物などのプロスタグランジンシグナル伝達経路を刺激することが既知の別の化合物である。

【0453】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、プロスタグランジンＥ受容体に結合し、及び／またはこれと相互作用し、典型的には、プロスタグランジンＥ受容体と関連する下流シグナル伝達経路のうちの１つ以上を活性化もしくは増加させる、自然に存在するもしくは合成化学分子またはポリペプチドである。

【0454】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、プロスタグランジン（ＰＧ）Ａ２（ＰＧＡ２）、ＰＧＢ２、ＰＧＤ２、ＰＧＥ１（アルプロスタジル）、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２、ＰＧＩ２（エポプロステノール）、ＰＧＨ２、ＰＧＪ２、ならびにそれらの誘導体及び類似体からなる群から選択される。

【0455】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧＥ２である。

【0456】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、１５ｄ－ＰＧＪ２、デルタｌ２－ＰＧＪ２、２－ヒドロキシヘプタデカトリエン酸（ＨＨＴ）、トロンボキサン（ＴＸＡ２及びＴＸＢ２）、ＰＧＩ２類似体、例えば、イロプロスト及びトレプロスチニル、ＰＧＦ２類似体、例えば、トラボプロスト、カルボプロストトロメタミン、タフルプロスト、ラタノプロスト、ビマトプロスト、ウノプロストンイソプロピル、クロプロステノール、オエストロファン、及びスーパーファン、ＰＧＥ１類似体、例えば、１１－デオキシＰＧＥ１、ミソプロストール、及びブタプロスト、ならびにＣｏｒｅｙアルコール－Ａ（［３ａａ，４ａ，５，６ａａ］－（－）－［ヘキサヒドロ－４－（ヒドロキシメチル）－２－オキソ－２Ｈ－シクロペンタ／ｂ／フラン－５－イル］［１，１’－ビフェニル］－４－カルボキシレート）、Ｃｏｒｅｙアルコール－Ｂ（２Ｈ－シクロペンタ［ｂ］フラン－２－オン，５－（ベンゾイルオキシ）ヘキサヒドロ－４－（ヒドロキシメチル）［３ａＲ－（３ａａ，４ａ，５，６ａａ）］）、及びＣｏｒｅｙジオール（（３ａＲ，４Ｓ，５Ｒ，６ａＳ）－ヘキサヒドロ－５－ヒドロキシ－４－（ヒドロキシメチル）－２Ｈ－シクロペンタ［ｂ］フラン－２－オン）である。

【0457】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）などのプロスタグランジンＥ受容体リガンド、または、その類似体もしくは誘導体である。プロスタグランジンとは、一般に、本明細書に記載の、及び当該技術分野において既知の５炭素環を含む、２０個の炭素原子を含有する脂肪酸に由来するホルモン様分子を意味する。ＰＧＥ２「類似体」または「誘導体」の実例としては、１６，１６－ジメチルＰＧＥ２、１６－１６ジメチルＰＧＥ２ｐ－（ｐ－アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル、１１－デオキシ－１６，１６－ジメチルＰＧＥ２、９－デオキシ－９－メチレン－１６，１６－ジメチルＰＧＥ２、９－デオキシ－９－メチレンＰＧＥ２、９－ケトフルプロステノール、５－トランスＰＧＥ２、１７－フェニル－オメガ－トリノールＰＧＥ２、ＰＧＥ２セリノールアミド、ＰＧＥ２メチルエステル、１６－フェニルテトラノールＰＧＥ２、１５（Ｓ）－１５－メチルＰＧＥ２、１５（Ｒ）－１５－メチルＰＧＥ２、８－イソ－１５－ケトＰＧＥ２、８－イソＰＧＥ２イソプロピルエステル、２０－ヒドロキシＰＧＥ２、ノクロプロスト、スルプロストン、ブタプロスト、１５－ケトＰＧＥ２、及び１９（Ｒ）ヒドロキシＰＧＥ２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0458】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、９位がハロゲンで置換されたＰＧＥ２に類似の構造を有するプロスタグランジン類似体または誘導体（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００１／１２５９６を参照されたい）、ならびに、その全体が参照により本明細書に組み込まれているＵＳ２００６／０２４７２１４に記載されているものなどの、２－デカルボキシ－２－ホスフィニコプロスタグランジン誘導体である。

【0459】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、非ＰＧＥ２ベースのリガンドである。いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ＣＡＹ１０３９９、ＯＮＯ＿８８１５Ｌｙ、ＯＮＯ－ＡＥ１－２５９、またはＣＰ－５３３，５３６である。非ＰＧＥ２ベースのＥＰ２アゴニストの追加の例としては、かかる剤のその開示に関して参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００７／０７１４５６に開示されている、カルバゾール及びフルオレンが挙げられる。非ＰＧＥ２ベースのＥＰ_３アゴニストの実例としては、ＡＥ５－５９９、ＭＢ２８７６７、ＧＲ６３７９９Ｘ、ＯＮＯ－ＮＴ０１２、及びＯＮＯ－ＡＥ－２４８が挙げられるが、これらに限定されない。非ＰＧＥ_２ベースのＥＰ_４アゴニストの実例としては、ＯＮＯ－４８１９、ＡＰＳ－９９９Ｎａ、ＡＨ２３８４８、及びＯＮＯ－ＡＥ１－３２９が挙げられるが、これらに限定されない。非ＰＧＥ２ベースのＥＰ４アゴニストの追加の例は、ＷＯ２０００／０３８６６３、米国特許第６，７４７，０３７号、及び同第６，６１０，７１９号に見出すことができ、これらの各々は、かかるアゴニストのそれらの開示について参照により組み込まれている。

【0460】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、Ｗｎｔアゴニストである。Ｗｎｔアゴニストの実例としては、Ｗｎｔポリペプチド、及びグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達経路を刺激する化合物としての使用に好適なＷｎｔポリペプチドの実例としては、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２ｂ／１３、Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ３ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ５ｂ、Ｗｎｔ６、Ｗｎｔ７ａ、Ｗｎｔ７ｂ、Ｗｎｔ７ｃ、Ｗｎｔ８、Ｗｎｔ８ａ、Ｗｎｔ８ｂ、Ｗｎｔ８ｃ、Ｗｎｔ１Ｏａ、Ｗｎｔ１Ｏｂ、Ｗｎｔ１１、Ｗｎｔ１４、Ｗｎｔ１５、またはこれらの生物学的に活性な断片が挙げられるが、これらに限定されない。プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達経路を刺激する薬剤としての使用に好適なＧＳＫ３阻害剤は、ＧＳＫ３ａまたはＧＳＫ３に結合し、ＧＳＫ３ａまたはＧＳＫ３の活性を低下させる。ＧＳＫ３阻害剤の実例としては、米国特許第６，０５７，１１７号及び同第６，６０８，０６３号、ならびにＵＳ２００４／００９２５３５及びＵＳ２００４／０２０９８７８に例示されているような、ＢＩＯ（６－ブロモインジルビン－３^’－オキシム）、ＬｉＣｌ、Ｌｉ_２ＣＯ_３、または他のＧＳＫ－３阻害剤、ならびにＡＴＰ競合、選択性のＧＳＫ－３阻害剤であるＣＨＩＲ－９１１及びＣＨＩＲ－８３７（それぞれ、ＣＴ－９９０２１／ＣＨＩＲ－９９０２１及びＣＴ－９８０２３／ＣＨＩＲ－９８０２３とも呼ばれる）（ＣｈｉｒｏｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0461】

ＣＨＩＲ－９９０２１の構造は、

【化3】

またはその塩である。

【0462】

ＣＨＩＲ－９８０２３の構造は、

【化4】

またはその塩である。

【0463】

いくつかの実施形態では、方法は、細胞をＧＳＫ３阻害剤と接触させることを更に含む。

【0464】

いくつかの実施形態では、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ－９９０２１またはＣＨＩＲ－９８０２３である。

【0465】

いくつかの実施形態では、ＧＳＫ３阻害剤は、Ｌｉ_２ＣＯ_３である。

【0466】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ジブチリルｃＡＭＰ（ＤＢｃＡＭＰ）、ホルボールエステル、フォルスコリン、スクラレリン、８－ブロモ－ｃＡＭＰ、コレラ毒素（ＣＴｘ）、アミノフィリン、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、ノルエピネフィリン、エピネフィリン、イソプロテレノール、イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、カフェイン、テオフィリン（ジメチルキサンチン）、ドーパミン、ロリプラム、イロプロスト、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）、及び血管作動性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）、ならびにこれらの薬剤の誘導体からなる群から選択される薬剤などの、ｃＡＭＰ／Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴセカンドメッセンジャー経路を通してシグナル伝達を増加させる薬剤である。

【0467】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、Ｂａｐｔａ－ＡＭ、フェンジリン、ニカルジピン、及びこれらの薬剤の誘導体からなる群から選択される薬剤などの、Ｃａ^２＋セカンドメッセンジャー経路を通してシグナル伝達を増加させる薬剤である。

【0468】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、Ｌ－Ａｒｇ、ニトロプルシドナトリウム、バナジン酸ナトリウム、ブラジキニン、及びこれらの誘導体からなる群から選択される薬剤などの、ＮＯ／アンギオテンシンシグナル伝達を通してシグナル伝達を増加させる薬剤である。

【0469】

ポリカチオン性ポリマーを使用する形質導入
いくつかの実施形態では、本開示の治療用細胞は、ポリカチオン性ポリマーの存在下で細胞を形質導入することによって産生される。いくつかの実施形態では、ポリカチオン性ポリマーは、ポリブレン、硫酸プロタミン、ポリエチレンイミン、またはポリエチレングリコール／ポリ－Ｌ－リジンブロックコポリマーである。

【0470】

いくつかの実施形態では、ポリカチオン性ポリマーは硫酸プロタミンである。

【0471】

いくつかの実施形態では、細胞は、形質導入操作の間に、膨張剤と更に接触する。細胞は例えば、多能性造血幹細胞であってよく、膨張剤は、当該技術分野において既知の、または本明細書に記載の多能性造血幹細胞膨張剤などの、多能性造血幹細胞膨張剤であってよい。

【0472】

追加の形質導入エンハンサー
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、形質導入操作の間に、細胞を、ｍＴＯＲシグナル伝達を阻害する薬剤と更に接触させる。ｍＴＯＲシグナル伝達を阻害する薬剤は、ｍＴＯＲシグナル伝達の他のサプレッサーの中でも、例えば、ラパマイシンであり得る。

【0473】

本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る追加の形質導入エンハンサーとしては、例えば、タクロリムス及びベクトフシンが挙げられる。

【0474】

スピノキュレーション
本開示のいくつかの実施形態では、形質導入に対して標的化された細胞は、（例えば、本明細書に記載の１つ以上の追加の薬剤と組み合わせて）ウイルスベクターにより培養しながら、例えば遠心分離によりスピンすることができる。「スピノキュレーション」プロセスは、例えば、約２００ｘｇ～約２，０００ｘｇの求心力とともに生じ得る。求心力は、例えば、約３００ｘｇ～約１，２００ｘｇ（例えば、約３００ｘｇ、４００ｘｇ、５００ｘｇ、６００ｘｇ、７００ｘｇ、８００ｘｇ、９００ｘｇ、１，０００ｘｇ、１，１００ｘｇ、もしくは１，２００ｘｇ、またはそれ以上）であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、約１０分～約３時間（例えば、約１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、６０分、６５分、７０分、７５分、８０分、８５分、９０分、９５分、１００分、１０５分、１１０分、１１５分、１２０分、１２５分、１３０分、１３５分、１４０分、１４５分、１５０分、１５５分、１６０分、１６５分、１７０分、１７５分、１８０分、またはそれ以上）スピンされる。いくつかの実施形態では、細胞は、室温で、例えば、約２５℃の温度でスピンされる。

【0475】

スピノキュレーション工程を伴う例示的な形質導入手順は、例えば、Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ４：ｅ６４６１（２００９）、Ｇｕｏｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ８５：９８２４－９８３３（２０１１）、Ｏ’Ｄｏｈｅｒｔｙｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ７４：１００７４－１００８０（２０００）、及びＦｅｄｅｒｉｃｏｅｔａｌ．，ＬｅｎｔｉｖｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓａｎｄＥｘｏｓｏｍｅｓａｓＧｅｎｅａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＤｅｌｉｖｅｒｙＴｏｏｌｓ，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ１４４８，Ｃｈａｐｔｅｒ４（２０１６）に記載されており、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0476】

発現のためのウイルスベクター
ウイルスゲノムは、哺乳動物細胞への外来性遺伝子の効率的な送達に使用され得るベクターの豊富な源を提供する。ウイルスゲノムは、かかるゲノム内に含有されるポリヌクレオチドが、通常、普遍形質導入または特殊形質導入によって哺乳動物細胞の核ゲノムに組み込まれるため、遺伝子送達のための特に有用なベクターである。これらのプロセスは、天然のウイルス複製サイクルの一部として生じ、遺伝子の組み込みを誘導するためにタンパク質または試薬を追加する必要がない。ウイルスベクターの例は、レトロウイルス（例えば、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクター）、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、パルボウイルス、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、プラス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ピコルナウイルス及びアルファウイルス、ならびにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（例えば、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘及びカナリアポックス）を含む二本鎖ＤＮＡウイルスである。他のウイルスとしては、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトフォーミーウイルス、及び肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例は、トリ白血病肉腫、トリＣ型ウイルス、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、オンコレトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、アルファレトロウイルス、ガンマレトロウイルス、スプーマウイルスである（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅｖｉｒｕｓｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，ＴｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９６）））。他の例は、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳腺腫瘍ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内在性ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、マソン－ファイザーサルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、及びレンチウイルスである。ベクターの他の例は、例えば、ＭｃＶｅｙｅｔａｌ．，（ＵＳ５，８０１，０３０）に記載されており、その教示が参照により本明細書に組み込まれている。

【0477】

レトロウイルスベクター
本明細書に記載の方法及び組成物に使用される送達ベクターは、レトロウイルスベクターであり得る。本明細書に記載の方法及び組成物に使用され得るレトロウイルスベクターの一種は、レンチウイルスベクターである。レンチウイルスベクター（ＬＶ）は、レトロウイルスのサブセットであり、広範囲の分裂及び非分裂細胞型を高い効率で形質導入し、核酸カセットの安定な長期間の発現を与える。ＬＶをパッケージングし、形質導入するための最適化戦略の概要は、Ｄｅｌｅｎｄａ，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅ６：Ｓ１２５（２００４）に提供されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0478】

レンチウイルスベースの遺伝子移入技術の使用は、目的の核酸カセットが収容される高度に欠失したウイルスゲノムを保有する組換えレンチウイルス粒子のインビトロでの産生に依存する。特に、許容細胞株における、（１）パッケージング構築物、すなわち、ＲｅｖとともにＧａｇ－Ｐｏｌ前駆体を発現するベクター（トランスで代替的に発現される）、（２）一般に、異種性の性質のエンベロープ受容体を発現するベクター、ならびに（３）全てのオープンリーディングフレームが欠けているウイルスｃＤＮＡで構成されるが、発現される配列が挿入される、複製、キャプシド化及び発現のために必要とされる配列を維持する移入ベクターのトランスでの共発現を介して、組換えレンチウイルスは回収される。

【0479】

本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるＬＶとしては、５’－長末端反復（ＬＴＲ）、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位（ＳＤ）、デルタ－ＧＡＧエレメント、Ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）、３’－スプライス部位（ＳＡ）、伸長因子（ＥＦ）１－アルファプロモーター、及び、３’－自己不活性化ＬＴＲ（ＳＩＮ－ＬＴＲ）のうちの１つ以上を挙げることができる。レンチウイルスベクターは、任意に、その開示が、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）に関するために、参照により本明細書に組み込まれている、ＵＳ６，１３６，５９７に記載されているような、中央ポリプリン帯（ｃＰＰＴ）及びＷＰＲＥを含む。レンチウイルスベクターは、例えば、以下に提供されるようなものを含み得る、ｐＨＲ’骨格を更に含み得る。

【0480】

ＤＮＡ分子及び／または形質導入細胞を発現するために、Ｌｕｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅ６：９６３（２００４）に記載されているＬｅｎｔｉｇｅｎＬＶが使用され得る。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるＬＶとしては、５’－長末端反復（ＬＴＲ）、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位（ＳＤ）、デルタ－ＧＡＧエレメント、Ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）、３’－スプライス部位（ＳＡ）、伸長因子（ＥＦ）１－アルファプロモーター、及び、３’－自己不活性化ＬＴＲ（ＳＩＮ－ＬＴＲ）を挙げることができる。任意に、これらの領域のうちの１つ以上が、同様の機能を発揮する別の領域で置換されることが、当業者には速やかに明らかとなるであろう。

【0481】

エンハンサーエレメントを使用して、修飾ＤＮＡ分子の発現を増加させるか、または、レンチウイルス組み込みの効率を増加させることができる。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるＬＶとしては、ｎｅｆ配列を挙げることができる。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるＬＶとしては、ベクター組み込みを向上させる、ｃＰＰＴ配列を挙げることができる。ｃＰＰＴは、（＋）－鎖ＤＮＡ合成の第２の起点として作用し、その天然ＨＩＶゲノムの中心にて、部分的な鎖の重なり合いを導入する。移入ベクター骨格におけるｃＰＰＴ配列の導入により、核輸送、及び標的細胞のＤＮＡに組み込まれるゲノムの総量が著しく増加した。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるＬＶとしては、ウッドチャック転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を挙げることができる。ＷＰＲＥは、転写レベルで作用し、転写産物の核外搬出を促進することによって、及び／または新生の転写産物のポリアデニル化の効率を高めることによって、細胞内のｍＲＮＡの総量を増加させる。ＬＶにＷＰＲＥを付加することで、インビトロ及びインビボの両方で、いくつかの異なるプロモーターからの核酸カセット発現のレベルを実質的に改善する。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるＬＶとしては、ｃＰＰＴ配列及びＷＰＲＥ配列の両方を挙げることができる。ベクターとしては、単一のプロモーターから複数のポリペプチドの発現を可能にする、ＩＲＥＳ配列もまた挙げることができる。

【0482】

ＩＲＥＳ配列に加えて、複数のポリペプチドの発現を可能にする他のエレメントが有用である。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるベクターとしては、２つ以上のポリペプチドの発現を可能にする複数のプロモーターを挙げることができる。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるベクターとしては、２つ以上のポリペプチドの発現を可能にするタンパク質切断部位を挙げることができる。２つ以上のポリペプチドの発現を可能にするタンパク質切断部位の例は、Ｋｌｕｍｐｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｒ．；８：８１１（２００１），Ｏｓｂｏｒｎｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ１２：５６９（２００５），ＳｚｙｍｃｚａｋａｎｄＶｉｇｎａｌｉ，ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＢｉｏｌＴｈｅｒ．５：６２７（２００５）、及びＳｚｙｍｃｚａｋｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５８９（２００４）に記載されており、これらの開示が、２つ以上のポリペプチドの発現を可能にするタンパク質切断部位に関するため、参照により本明細書に組み込まれている。将来的に同定される複数のポリペプチドの発現を可能にする他のエレメントが有用であり、本明細書に記載の組成物及び方法とともに使用するのに好適なベクター内で利用され得ることが、当業者には速やかに明らかとなるであろう。

【0483】

本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるベクターは、臨床グレードのベクターであり得る。

【0484】

エクスビボでのトランスフェクションの方法
本明細書に記載の１つ以上のタンパク質の治療有効細胞内濃度を哺乳動物細胞において達成するために使用され得る１つのプラットフォームは、これらの薬剤をコードする遺伝子の安定な発現を介するものである（例えば、哺乳動物細胞の核またはミトコンドリアゲノムへの組み込みによる）。これらの遺伝子は、対応するタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。かかる外来性遺伝子を哺乳動物細胞に導入するために、これらの遺伝子は、ベクターに組み込まれ得る。ベクターは、転換、トランスフェクション、直接的な取り込み、プロジェクタイルボンバードメント（ｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）、及びリポソーム中のベクターの封入を含む様々な方法によって、細胞へと導入され得る。細胞をトランスフェクトまたは形質転換する好適な方法の例は、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、感染、リポフェクション、及び直接的な取り込みである。かかる方法は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＦｏｕｒｔｈＥｄｉｔｉｏｎ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（２０１４））、及びＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（２０１５））により詳細に記載されており、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0485】

本開示の治療用タンパク質をコードする遺伝子はまた、かかる薬剤をコードする遺伝子を含有するベクターを、細胞膜リン脂質に対して標的にすることによって、哺乳動物細胞に導入され得る。例えば、全ての細胞膜リン脂質に親和性を持つウイルスタンパク質であるＶＳＶ－Ｇタンパク質にベクター分子を連結させることによって、ベクターを細胞膜の細胞外表面上のリン脂質に対して標的にすることができる。このように、構築物は、当業者に周知の方法を使用して産生され得る。

【0486】

哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼによる、本開示の１つ以上の治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドの認識及び結合は、遺伝子発現にとって重要である。したがって、ＲＮＡポリメラーゼを動員し、転写開始部位での転写複合体の集合を促進する転写因子に対して高い親和性を示す配列エレメントをポリヌクレオチド内に含めてよい。かかる配列エレメントとしては、例えば、哺乳動物プロモーターが挙げられ、その配列は、特定の転写開始因子、及び最終的にはＲＮＡポリメラーゼによって認識され、結合され得る。哺乳動物プロモーターの例は、Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｓｙｓ．Ｂｉｏｌ．，３：７３、オンライン出版に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0487】

１つ以上の治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、哺乳動物細胞の核ＤＮＡに組み込まれると、このポリヌクレオチドの転写は、当該技術分野において既知の方法によって誘導され得る。例えば、発現は、外部の化学試薬、例えば、哺乳動物プロモーターへの転写因子及び／またはＲＮＡポリメラーゼの結合を調節し、したがって遺伝子発現を制御する薬剤に哺乳動物細胞を曝露することによって誘導され得る。化学試薬は、例えば、プロモーターに結合しているリプレッサータンパク質を除去することによって、哺乳動物プロモーターへのＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子の結合を促進するように機能し得る。代替的に、化学試薬は、化学試薬の存在下でプロモーターの下流に位置する遺伝子の転写速度を高めるように、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子に対する哺乳動物プロモーターの親和性を向上させるように機能し得る。上記のメカニズムによるポリヌクレオチド転写を強化する化学試薬の例は、テトラサイクリン及びドキシサイクリンである。これらの試薬は市販されており（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、確立された手順に従って遺伝子発現を促進するために哺乳動物細胞に投与され得る。

【0488】

本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのポリヌクレオチドに含まれ得る他のＤＮＡ配列エレメントは、エンハンサー配列である。エンハンサーは、ＤＮＡが転写開始部位での転写因子及びＲＮＡポリメラーゼの結合に好ましい三次元配向をとるように、目的の遺伝子を含有するポリヌクレオチドの立体構造変化を誘導する別のクラスの調節エレメントを表す。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのポリヌクレオチドは、１つ以上の治療用タンパク質をコードするものを含み、更に、哺乳動物エンハンサー配列を含む。現在、多くのエンハンサー配列が、哺乳動物遺伝子から既知であり、例は、哺乳動物グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリンをコードする遺伝子からのエンハンサーである。本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのエンハンサーとしては、真核細胞に感染することが可能なウイルスの遺伝物質に由来するエンハンサーも挙げられる。例は、複製起点の後期側にあるＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーである。真核生物遺伝子転写の活性化を誘導する追加のエンハンサー配列は、Ｙａｎｉｖｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ２９７：１７（１９８２）に開示されている。本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのエンハンサーの更なる例としては、Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５０（３）：ｅ４５６（２０１８）、Ｋａｗａｋａｍｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９４７－９６１（２０２１）、Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０４（７）：１５４３－５１（２００７）、Ｚｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４６３（７２８２）：８０８－１２（２０１０）、Ｔｏｎｅｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（２）：１９４－２０２（２００８）、及びＤｉｋｉｙｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．５４（５）：９３１－９４６（２０２１）に記載されているように、ＣＮＳ１、ＣＮＳ２、ＣＮＳ３、及びＣＮＳ０エンハンサーが挙げられる。

【0489】

発現及び送達のための細胞
本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞としては、更なる分化を受けることが可能な細胞が挙げられる。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞の１つの型は、２つ以上の分化細胞型に発達する能力を保有する多能性細胞である。多能性細胞の例としては、造血系統の２つ以上の分化細胞型に発達する能力を有する多能性造血細胞が挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る多能性造血細胞の例としては、ＨＳＣ、ＨＰＣ、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、リンパ系前駆細胞、及びＣＤ３４＋細胞が挙げられる。

【0490】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞としては、造血幹細胞及び造血前駆細胞が挙げられる。造血幹細胞（ＨＳＣ）は、自己複製して、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、及びＴ細胞）を含むが、これらに限定されない、多様な系統を含む成熟血液細胞に分化する能力を有する、未成熟血液細胞である。ヒトＨＳＣは、ＣＤ３４＋である。加えて、ＨＳＣはまた、長期再増殖ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）及び短期再増殖ＨＳＣ（ＳＴ－ＨＳＣ）を意味する。これらのＨＳＣのうちのいずれかを、本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用することができる。

【0491】

ＨＳＣ及び他の多能性前駆細胞は、血液製剤から得ることができる。血液製剤は、身体、または造血起源の細胞を含有する身体の器官から得られる産物である。かかる源としては、非分画性の骨髄、臍帯、胎盤、末梢血、または動員末梢血が挙げられる。前述の粗または非分画性血液産物の全ては、いくつかの方法で、ＨＳＣまたはリンパ系前駆細胞の特徴を有する細胞について濃縮することができる。例えば、成熟すればするほど、分化細胞は、それらが発現する細胞表面の分子に基づいて、選択されることができる。血液製剤は、ＣＤ３４＋細胞を正に選択することによって分画され得、ＣＤ３４＋細胞は、自己複製、多能性が可能であり、移植レシピエントに再導入されると、造血幹細胞ニッシェにホーミングし、生産的かつ持続的な造血を再度確立することができる造血幹細胞のサブ集団を含む。かかる選択は、例えば、市販されている磁気性の抗ＣＤ３４ビーズ（Ｄｙｎａｌ，ＬａｋｅＳｕｃｃｅｓｓ，ＮＹ）を使用して達成される。リンパ系前駆細胞も、それらが発現するマーカーに基づいて単離することができる。非分画性の血液製剤は、ドナーから直接得ることができるか、または冷凍保存庫から回収することができる。ＨＳＣ及びリンパ系前駆細胞はまた、ＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞、または他のリプログラミングされた成熟細胞型の分化によって得ることができる。

【0492】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞としては、同種異系細胞及び自己由来細胞が挙げられる。同種異系細胞を使用する場合、細胞は、任意に、細胞処理を受ける対象とＨＬＡが一致していてもよい。

【0493】

本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る細胞としては、ＣＤ３４＋／ＣＤ９０＋細胞、及び、ＣＤ３４＋／ＣＤ１６４＋細胞が挙げられる。これらの細胞は、より高いパーセンテージのＨＳＣを含有する場合がある。これらの細胞は、Ｒａｄｔｋｅｅｔａｌ．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．９：１－１０，２０１７、及びＰｅｌｌｉｎｅｔａｌ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．１－：２３９５，２０１９に記載されており、これらの各々の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0494】

本明細書及び上記に記載の細胞は、例えば、本明細書に記載の様々な方法論を使用して、本明細書に記載の自己抗原結合タンパク質（例えば、一本鎖タンパク質（例えば、キメラ抗原受容体もしくは一本鎖抗体断片）または多鎖タンパク質（例えば、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、もしくはＦ（ａｂ’）_２分子））を発現するように遺伝子修飾されてよい。細胞が生理学的または好適なレベルの自己抗原結合タンパク質を発現するように適合されると、これらの細胞は治療的有用性を有し、本明細書で「本開示の治療用細胞」と呼ばれる。

【0495】

遺伝子編集技術
上記に加えて、多能性細胞（例えば、多能性造血細胞）などの細胞への目的の遺伝子の組み込みに使用され得る様々なツールが開発されている。標的遺伝子をコードするポリヌクレオチドを標的細胞に組み込むために使用され得るかかる方法の１つは、トランスポゾンの使用を伴う。トランスポゾンは、トランスポザーゼ酵素をコードし、５’及び３’切除部位に隣接する目的のポリヌクレオチド配列または遺伝子を含有するポリヌクレオチドである。トランスポゾンが細胞に送達されると、トランスポザーゼ遺伝子の発現が開始し、トランスポゾンから目的の遺伝子を切断する活性酵素がもたらされる。この活性は、トランスポザーゼによるトランスポゾン切除部位の部位特異的認識によって媒介される。いくつかの例では、これらの切除部位は、末端反復または逆位末端配列であり得る。目的の遺伝子はトランスポゾンから切除されると、細胞の核ゲノム内に存在する同様の切除部位の、トランスポザーゼによって触媒される切断によって哺乳動物細胞のゲノムに組み込むことができる。これにより、相補的な切除部位で切断された核ＤＮＡに目的の遺伝子が挿入され、その後、目的の遺伝子を哺乳動物細胞ゲノムのＤＮＡに結合するホスホジエステル結合の共有結合ライゲーションによって組み込みプロセスが完了する。ある特定の場合では、トランスポゾンは、標的遺伝子をコードする遺伝子が最初にＲＮＡ産物に転写され、次いで、ＤＮＡに逆転写された後に、哺乳動物細胞ゲノムに組み込まれるようなレトロトランスポゾンであり得る。例示的なトランスポゾン系は、ピギーバックトランスポゾン（例えば、ＷＯ２０１０／０８５６９９に詳細に記載されている）及びスリーピングビューティートランスポゾン（例えば、ＵＳ２００５／０１１２７６４に詳細に記載されている）であり、これらの各々の開示は、それらが目的の細胞への遺伝子送達に使用するためのトランスポゾンに関係するため、参照により本明細書に組み込まれている。

【0496】

細胞（例えば、多能性造血細胞）のゲノムへの標的遺伝子の組み込みのための別の有用なツールは、元々、ウイルス感染に対する細菌及び古細菌の適応防御メカニズムとして進化した系である、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造の反復（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ系である。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、プラスミドＤＮＡ内の回文構造反復配列及びＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質（Ｃａｓ；例えば、Ｃａｓ９またはＣａｓ１２ａ）を含む。ＤＮＡ及びタンパク質のこのアンサンブルは、最初に、外来ＤＮＡをＣＲＩＳＰＲ遺伝子座に組み込むことによって、標的配列の部位特異的ＤＮＡ切断を指向する。次に、これらの外来配列を含有するポリヌクレオチド、及びＣＲＩＳＰＲ遺伝子座の反復スペーサーエレメントは、ガイドＲＮＡを作製するために宿主細胞内で転写され、その後、ガイドＲＮＡは標的配列にアニールして、この部位にＣａｓヌクレアーゼを局在化することができる。このように、高度に部位特異的なＣａｓ媒介性ＤＮＡ切断は、外来ポリヌクレオチドにおいて起こすことができる。なぜなら、Ｃａｓを標的ＤＮＡ分子に密接に近接させる相互作用は、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションによって支配されるからである。結果として、目的の任意の標的ＤＮＡ分子を切断するようにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を設計することができる。この技術は、真核生物ゲノムを編集するために利用されており（Ｈｗａｎｇｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３１：２２７（２０１３）、その開示は参照により本明細書に組み込まれている）、ＤＮＡを切断した後に、標的遺伝子をコードする遺伝子を組み込むために造血幹細胞ゲノムを部位特異的に編集する効率的な手段として使用することができる。遺伝子発現を調節するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓの使用は、例えば、ＷＯ２０１７／１８２８８１及びＵＳ８，６９７，３５９に記載されており、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0497】

多能性造血細胞においてゲノムＤＮＡを部位特異的に切断した後に目的の遺伝子を組み込むための代替的な方法としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）及び転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）の使用が挙げられる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系とは異なり、これらの酵素は、特定の標的配列に局在させるためにガイドポリヌクレオチドを含有しない。代わりに、標的特異性は、これらの酵素内のＤＮＡ結合ドメインによって制御される。ゲノム編集用途におけるＺＦＮ及びＴＡＬＥＮの使用は、例えば、Ｕｒｎｏｖｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＧｅｎｅｔｉｃｓ１１：６３６（２０１０）、及びＪｏｕｎｇｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ１４：４９（２０１３））に記載されており、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。

【0498】

標的遺伝子をコードするポリヌクレオチドを標的細胞のゲノムに組み込むために使用され得る追加のゲノム編集技術としては、ゲノムＤＮＡを部位特異的に切断するように合理的に設計され得るＡＲＣＵＳ（商標）メガヌクレアーゼの使用が挙げられる。かかる酵素について確立されている、規定された構造活性相関を考慮すると、標的遺伝子をコードする遺伝子を哺乳動物細胞のゲノムに組み込むために、これらの酵素を使用することは有利である。所望の位置でＤＮＡを選択的に切断して、標的遺伝子を標的細胞の核ＤＮＡに部位特異的に組み込むことを可能にするヌクレアーゼを作製するために、一本鎖メガヌクレアーゼを、ある特定のアミノ酸位置において修飾することができる。これらの一本鎖ヌクレアーゼは、例えば、米国特許第８，０２１，８６７号及び同第８，４４５，２５１号に広く記載されており、これらの各々の開示は、ゲノム編集のための組成物及び方法に関するものとして、参照により本明細書に組み込まれている。

【0499】

多能性細胞動員を促進する薬剤
本開示のいくつかの実施形態では、自己免疫疾患のために治療されている対象（例えば、自己由来細胞集団の場合）から、またはドナー（例えば、同種異系細胞集団の場合）から、多能性細胞（例えば、多能性造血細胞）を単離する前に、対象またはドナーに、骨髄などの幹細胞ニッシェから末梢循環への多能性造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋ＨＳＣ及びＨＰＣ）の遊走を刺激する１つ以上の動員剤を投与する。本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る例示的な細胞動員剤は、本明細書に記載され、当該技術分野において既知である。例えば、動員剤は、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体（ＣＸＣＲ）２（ＣＸＣＲ２）アゴニストであってよい。ＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ－ベータ、またはその切頭バリアントであってよい。Ｇｒｏ－ベータ及びそのバリアントは、例えば、米国特許第６，０８０，３９８号、同第６，４４７，７６６号、及び同第６，３９９，０５３号に記載されており、これらの各々の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。更に、または代替的に、動員剤は、プレリキサホルまたはそのバリアントなどのＣＸＣＲ４アンタゴニストを含み得る。プレリキサホル及び構造的に類似の化合物は、例えば、米国特許第６，９８７，１０２号、同第７，９３５，６９２号、及び同第７，８９７，５９０号に記載されており、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。更に、または代替的に、動員剤は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）を含み得る。幹細胞ニッシェから末梢循環への多能性造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋ＨＳＣ及び／またはＨＰＣ）の動員を誘導する薬剤としてのＧ－ＣＳＦの使用は、例えば、ＵＳ２０１０／０１７８２７１に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0500】

細胞生着を向上させる薬剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞の集団（例えば、ＣＤ３４＋細胞）を患者に投与する前に、患者にＣＤ３４＋細胞の内因性集団を切除する薬剤を投与して、投与されたＣＤ３４＋細胞が患者に生着することを可能にすることができる。コンディショニング剤の例としては、患者における多種多様な造血細胞を枯渇させる骨髄破壊性コンディショニング剤が挙げられる。例えば、その患者は、アルキル化剤、例えば、窒素マスタード（例えば、ベンダムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、またはメルファラン）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、またはストレプトゾシン）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン）、トリアジン（例えば、ダカルバジンまたはテモゾロミド）、またはエチレンイミン（例えば、アルトレタミンまたはチオテパ）で前処置され得る。いくつかの実施形態では、患者は、内因性ＣＤ３４＋ＨＳＣまたはＨＰＣの集団などの、特定の内因性細胞の集団を選択的に切除するコンディショニング剤を投与される。

【0501】

いくつかの実施形態では、コンディショニング剤は、抗体またはその抗原結合断片を含む。抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ１１７、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３４、ＣＤ９０、ＣＤ４５、またはＣＤ１３３（例えば、ＣＤ１１７）に結合し得る。抗体またはその抗原結合断片は、細胞毒素にコンジュゲートされ得る。

【0502】

いくつかの実施形態では、患者は、投与された細胞の生着を容易にするのを助けるために、プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子で前処置される。プロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達活性化因子は、例えば、プロスタグランジン（ＰＧ）Ａ２（ＰＧＡ２）、ＰＧＢ２、ＰＧＤ２、ＰＧＥ１（アルプロスタジル）、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２、ＰＧＩ２（エポプロステノール）、ＰＧＨ２、ＰＧＪ２、ならびにそれらの誘導体及び類似体からなる群から選択され得る。

【0503】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ＰＧＥ２またはｄｍＰＧ２である。

【0504】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、１５ｄ－ＰＧＪ２、デルタｌ２－ＰＧＪ２、２－ヒドロキシヘプタデカトリエン酸（ＨＨＴ）、トロンボキサン（ＴＸＡ２及びＴＸＢ２）、ＰＧＩ２類似体、例えば、イロプロスト及びトレプロスチニル、ＰＧＦ２類似体、例えば、トラボプロスト、カルボプロストトロメタミン、タフルプロスト、ラタノプロスト、ビマトプロスト、ウノプロストンイソプロピル、クロプロステノール、オエストロファン、及びスーパーファン、ＰＧＥ１類似体、例えば、１１－デオキシＰＧＥ１、ミソプロストール、及びブタプロスト、ならびにＣｏｒｅｙアルコール－Ａ（［３ａａ，４ａ，５，６ａａ］－（－）－［ヘキサヒドロ－４－（ヒドロキシメチル）－２－オキソ－２Ｈ－シクロペンタ／ｂ／フラン－５－イル］［１，１’－ビフェニル］－４－カルボキシレート）、Ｃｏｒｅｙアルコール－Ｂ（２Ｈ－シクロペンタ［ｂ］フラン－２－オン，５－（ベンゾイルオキシ）ヘキサヒドロ－４－（ヒドロキシメチル）［３ａＲ－（３ａａ，４ａ，５，６ａａ）］）、及びＣｏｒｅｙジオール（（３ａＲ，４Ｓ，５Ｒ，６ａＳ）－ヘキサヒドロ－５－ヒドロキシ－４－（ヒドロキシメチル）－２Ｈ－シクロペンタ［ｂ］フラン－２－オン）である。

【0505】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）などのプロスタグランジンＥ受容体リガンド、またはその類似体もしくは誘導体である。プロスタグランジンとは、一般に、本明細書に記載の、及び当該技術分野において既知の５炭素環を含む、２０個の炭素原子を含有する脂肪酸に由来するホルモン様分子を意味する。ＰＧＥ２「類似体」または「誘導体」の実例としては、１６，１６－ジメチルＰＧＥ２、１６－１６ジメチルＰＧＥ２ｐ－（ｐ－アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル、１１－デオキシ－１６，１６－ジメチルＰＧＥ２、９－デオキシ－９－メチレン－１６，１６－ジメチルＰＧＥ２、９－デオキシ－９－メチレンＰＧＥ２、９－ケトフルプロステノール、５－トランスＰＧＥ２、１７－フェニル－オメガ－トリノールＰＧＥ２、ＰＧＥ２セリノールアミド、ＰＧＥ２メチルエステル、１６－フェニルテトラノールＰＧＥ２、１５（Ｓ）－１５－メチルＰＧＥ２、１５（Ｒ）－１５－メチルＰＧＥ２、８－イソ－１５－ケトＰＧＥ２、８－イソＰＧＥ２イソプロピルエステル、２０－ヒドロキシＰＧＥ２、ノクロプロスト、スルプロストン、ブタプロスト、１５－ケトＰＧＥ２、及び１９（Ｒ）ヒドロキシＰＧＥ２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0506】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、９位がハロゲンで置換されたＰＧＥ２に類似の構造を有するプロスタグランジン類似体または誘導体（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００１／１２５９６を参照されたい）、ならびに、その全体が参照により本明細書に組み込まれているＵＳ２００６／０２４７２１４に記載されているものなどの、２－デカルボキシ－２－ホスフィニコプロスタグランジン誘導体である。

【0507】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、非ＰＧＥ２ベースのリガンドである。いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ＣＡＹ１０３９９、ＯＮＯ＿８８１５Ｌｙ、ＯＮＯ－ＡＥ１－２５９、またはＣＰ－５３３，５３６である。非ＰＧＥ２ベースのＥＰ２アゴニストの追加の例としては、かかる剤のその開示に関して参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００７／０７１４５６に開示されている、カルバゾール及びフルオレンが挙げられる。非ＰＧＥ２ベースのＥＰ_３アゴニストの実例としては、ＡＥ５－５９９、ＭＢ２８７６７、ＧＲ６３７９９Ｘ、ＯＮＯ－ＮＴ０１２、及びＯＮＯ－ＡＥ－２４８が挙げられるが、これらに限定されない。非ＰＧＥ_２ベースのＥＰ_４アゴニストの実例としては、ＯＮＯ－４８１９、ＡＰＳ－９９９Ｎａ、ＡＨ２３８４８、及びＯＮＯ－ＡＥ１－３２９が挙げられるが、これらに限定されない。非ＰＧＥ２ベースのＥＰ４アゴニストの追加の例は、ＷＯ２０００／０３８６６３、米国特許第６，７４７，０３７号、及び同第６，６１０，７１９号に見出すことができ、これらの各々は、かかるアゴニストのそれらの開示について参照により組み込まれている。

【0508】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、Ｗｎｔアゴニストである。Ｗｎｔアゴニストの実例としては、Ｗｎｔポリペプチド、及びグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達経路を刺激する化合物としての使用に好適なＷｎｔポリペプチドの実例としては、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２ｂ／１３、Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ３ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ５ｂ、Ｗｎｔ６、Ｗｎｔ７ａ、Ｗｎｔ７ｂ、Ｗｎｔ７ｃ、Ｗｎｔ８、Ｗｎｔ８ａ、Ｗｎｔ８ｂ、Ｗｎｔ８ｃ、Ｗｎｔ１Ｏａ、Ｗｎｔ１Ｏｂ、Ｗｎｔ１１、Ｗｎｔ１４、Ｗｎｔ１５、またはこれらの生物学的に活性な断片が挙げられるが、これらに限定されない。プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達経路を刺激する薬剤としての使用に好適なＧＳＫ３阻害剤は、ＧＳＫ３ａまたはＧＳＫ３に結合し、ＧＳＫ３ａまたはＧＳＫ３の活性を低下させる。ＧＳＫ３阻害剤の実例としては、米国特許第６，０５７，１１７号及び同第６，６０８，０６３号、ならびにＵＳ２００４／００９２５３５及びＵＳ２００４／０２０９８７８に例示されているような、ＢＩＯ（６－ブロモインジルビン－３^’－オキシム）、ＬｉＣｌ、Ｌｉ_２ＣＯ_３、または他のＧＳＫ－３阻害剤、ならびにＡＴＰ競合、選択性のＧＳＫ－３阻害剤であるＣＨＩＲ－９１１及びＣＨＩＲ－８３７（それぞれ、ＣＴ－９９０２１／ＣＨＩＲ－９９０２１及びＣＴ－９８０２３／ＣＨＩＲ－９８０２３とも呼ばれる）（ＣｈｉｒｏｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0509】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、ジブチリルｃＡＭＰ（ＤＢｃＡＭＰ）、ホルボールエステル、フォルスコリン、スクラレリン、８－ブロモ－ｃＡＭＰ、コレラ毒素（ＣＴｘ）、アミノフィリン、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、ノルエピネフィリン、エピネフィリン、イソプロテレノール、イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、カフェイン、テオフィリン（ジメチルキサンチン）、ドーパミン、ロリプラム、イロプロスト、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）、及び血管作動性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）、ならびにこれらの薬剤の誘導体からなる群から選択される薬剤などの、ｃＡＭＰ／Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴセカンドメッセンジャー経路を通してシグナル伝達を増加させる薬剤である。

【0510】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、Ｂａｐｔａ－ＡＭ、フェンジリン、ニカルジピンからなる群から選択される薬剤、及びこれらの薬剤の誘導体などの、Ｃａ^２＋セカンドメッセンジャー経路を通してシグナル伝達を増加させる薬剤である。

【0511】

いくつかの実施形態では、細胞の生着を容易にするのを助けるために使用されるプロスタグランジンＥ受容体シグナル伝達の活性化因子は、Ｌ－Ａｒｇ、ニトロプルシドナトリウム、バナジン酸ナトリウム、ブラジキニン、及びこれらの誘導体からなる群から選択される薬剤などの、ＮＯ／アンギオテンシンシグナル伝達を通してシグナル伝達を増加させる薬剤である。

【0512】

投与経路
本明細書に記載の組成物は、静脈内などの様々な経路のうちの１つ以上によって、または骨髄移植の手段によって、患者（例えば、自己免疫疾患に罹患しているヒト患者）に投与され得る。任意の所与の場合における投与に最も好適な経路は、投与される特定の組成物、患者、薬学的製剤化方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄速度に依存し得る。複数の投与経路を使用して、一度に単一の患者を治療することができ、または患者は、最初に１つの投与経路を介して治療を受け、第２の診察中に、例えば、１週間後、２週間後、１ヶ月後、６ヶ月後、もしくは１年後に別の投与経路を介して治療を受けることができる。組成物は、対象に１回投与され得るか、または細胞は、週、月、もしくは年当たりに１回以上（例えば、２～１０回）投与され得る。

【0513】

ドナー細胞の選択
いくつかの実施形態では、治療を受けている患者は、患者に再投与される前に、本開示の１つ以上の治療用タンパク質を発現するようにその後に修飾される細胞（例えば、多能性造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞または前駆細胞）などの多能性細胞）を提供するドナーである。かかる場合、取り出した細胞（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）は、例えば、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットの組み込みに続いて、対象に再注入されてよく、その結果、細胞は、その後、造血組織にホーミングし、生産的造血を確立してよく、それによって、患者において欠陥または欠損している細胞株を増殖または再増殖してよい。治療を受けている患者が細胞ドナーとしても機能する場合、移植された細胞（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）は、移植片拒絶を受ける可能性が低い。このことは、注入した細胞が患者に由来し、患者により発現されるのと同じＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ抗原を発現するという事実に由来する。代替的に、患者及びドナーは、別個であってよい。いくつかの実施形態では、患者及びドナーは関連しており、例えば、ＨＬＡが一致していてもよい。本明細書に記載されるように、移植レシピエント内の内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が、入ってくる造血幹細胞または前駆細胞移植片を異物として認識する可能性が低く、したがって、移植組織に対して免疫応答をマウントする可能性が低いため、ＨＬＡが一致したドナーとレシピエントのペアは、移植片拒絶のリスクが低下する。例示的なＨＬＡが一致したドナーとレシピエントのペアは、家族でのドナーとレシピエントのペア（例えば、兄弟のドナーとレシピエントのペア）などの、遺伝上関連のあるドナー及びレシピエントである。いくつかの実施形態では、患者及びドナーは、ＨＬＡがミスマッチしており、これは、少なくとも１つのＨＬＡ抗原、特にＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－ＤＲに関して、ドナーとレシピエントとの間でミスマッチであるときに生じる。移植片拒絶の可能性を低減させるために、例えば、あるハプロタイプはドナーとレシピエントとの間で一致していてもよく、他はミスマッチしていてもよい。

【0514】

医薬組成物及び投薬
患者に、本開示の１つ以上の治療用タンパク質を一緒に発現する細胞の集団を投与する場合、投与される細胞の数は、例えば、所望のタンパク質（複数可）の発現レベル、患者、薬学的製剤化方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、及び患者が内因性多能性細胞（例えば、とりわけ、内因性ＣＤ３４＋細胞、造血幹細胞または前駆細胞などの多能性造血細胞）を切除するための薬剤で治療されているかどうかに依存し得る。投与される細胞の数は、例えば、１×１０^６細胞／ｋｇ～１×１０^１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上（例えば、１×１０^７細胞／ｋｇ、１×１０^８細胞／ｋｇ、１×１０^９細胞／ｋｇ、１×１０^１０細胞／ｋｇ、１×１０^１１細胞／ｋｇ、１×１０^１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上）であり得る。細胞は、未分化状態で、またはミクログリアへの部分的もしくは完全な分化後に投与され得る。多能性細胞の数は、任意の好適な剤形で投与され得る。

【0515】

細胞は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／または賦形剤と混合され得る。本開示の組成物及び方法と組み合わせて使用され得る例示的な担体、希釈剤、及び賦形剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（２０１２，２２ｎｄｅｄ．）及びＴｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：ＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＦｏｒｍｕｌａｒｙ（２０１５，ＵＳＰ３８ＮＦ３３）に記載されている。

【実施例】

【0516】

以下の実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法をどのように使用、製造、及び評価し得るかについての説明を当業者に提供するために提示し、純粋に本開示を例示することを意図するものであり、本発明者らが自身の開示とみなすものの範囲を限定することを意図しない。

【0517】

［実施例１．概念実証（ＰｏＣ）研究のための、構成的プロモーターの制御下でキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にするためのレンチウイルスベクター構築物の設計。］
目的
この研究の目的は、ＰｏＣ研究のために、構成的プロモーターの制御下でキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にするためのレンチウイルスベクター構築物を設計することであった。レンチウイルスベクター構築物は、それが細胞（例えば、本明細書に記載の造血幹細胞由来の調節Ｔ細胞）に抗原結合能力を付与するために使用され得るように、所望の抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するように設計された。

【0518】

材料及び方法
レンチウイルスベクター構築物は、以下のエレメント：Ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）、中央ポリプリン帯（ｃＰＰＴ）、伸長因子１ａショート結合配列（ＥＦＳ）プロモーター、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列、一本鎖可変断片（可変軽鎖（ＶＬ）、リンカー、可変重鎖（ＶＨ）、及び第２世代ＣＡＲシグナル伝達ドメイン（ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）及びシグナルドメイン、ならびにＣＤ３ζシグナルドメイン）を含む）をコードするコード領域、ならびにウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を組み込むことによって設計された。既知の抗原特異性を有する抗体からの重鎖及び軽鎖配列を連結することによって、一本鎖可変断片を作製した。ＣＡＲの検出を容易にするために、Ｈｉｓタグを導入した。第２世代ＣＡＲシグナル伝達ドメインを、調節Ｔ細胞機能との適合性のために選択した。

【0519】

結果
上記のエレメントは、本開示のレンチウイルスベクター構築物に組み込まれ得る例示的な構成成分の例示を提供する、図１Ａに示される。図１Ｂには、上に論じられるエレメントを使用して産生された例示的なレンチウイルスベクター構築物が示されている。図１Ｂが示すように、産生されたレンチウイルスベクター構築物は、ＲＲＥ、ｃＰＰＴ、ＥＦＳプロモーター、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列、抗原特異性及び第２世代ＣＡＲシグナル伝達ドメインを有するｓｃＦｖをコードするコード配列、ならびにＷＰＲＥを含んでいた。図１Ｂにおいて産生される構築物を、その後、以下の実施例２～９に記載されるＰｏＣ研究で使用した。これらの実施例の目的のために、インビトロアッセイの最適化を可能にし、インビボでＣＡＲ生物学の安全性及び機能を試験するために、無関係な抗原（Ａｇ）に対する特異性を有するｓｃＦｖを選択した。

【0520】

［実施例２．ヒトＴ細胞株における抗原特異的ＣＡＲの発現、続くフローサイトメトリーを使用する発現レベルの評価。］
目的
この研究の目的は、ヒトＴ細胞株において抗原特異的ＣＡＲを発現させ、次いで、フローサイトメトリーを使用して発現レベルを評価することであった。

【0521】

材料及び方法
ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、非形質導入またはレンチウイルスベクター（感染多重度、ＭＯＩ５）で形質導入して、抗原特異的ＣＡＲ（αＡｇ－ＣＡＲ）を発現させた。７２時間後、ＣＡＲ発現を、ストレプトアビジン－ＰＥコンジュゲートで染色する前に、５０，０００ｐｇ／ｍｌのビオチン化ＣＡＲリガンド（全タンパク質）とともに細胞をインキュベートすることによって、フローサイトメトリー（ＦＣ）によって評価した。次いで、ＣＡＲリガンドの滴定を実施して、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として定量化された受容体発現を評価した。

【0522】

０～５の範囲のＭＯＩ滴定を使用して、異なるレベルのＡｇ特異的ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔＴ細胞のライブラリを生成した。ベクターコピー数（ＶＣＮ）を液滴デジタルＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）によって測定し、使用されるＭＯＩの尺度としてのＣＡＲ^＋細胞％をＦＣを使用して定量化した。

【0523】

ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、０～５の範囲の異なるＭＯＩを有するレンチウイルスベクターで形質導入して、抗原特異的ＣＡＲ（αＡｇ－ＣＡＲ）を発現させた。７２時間後、使用されるＭＯＩの尺度としてのＣＡＲ発現を、ストレプトアビジン－ＰＥコンジュゲートで染色する前に、０ｐｇ／ｍｌまたは５０，０００ｐｇ／ｍｌのいずれかのビオチン化ＣＡＲリガンド（全タンパク質）とともに細胞をインキュベートすることによって、ＦＣによって評価した。

【0524】

結果
結果として、本発明者らは、レンチウイルスベクター（ＭＯＩ５）で形質導入されたＪｕｒｋａｔＴ細胞が、抗原特異的ＣＡＲ（αＡｇ－ＣＡＲ）を発現したことを観察した（図２Ａ）。ＦＣプロットは、生ＪｕｒｋａｔＴ細胞に対してゲーティングされており、非形質導入細胞（陰性対照）及び形質導入細胞を示し、ＣＡＲ発現細胞の割合は、表面結合ＣＡＲリガンド（ＣＡＲ－Ｒ－ＰＥ－Ａ）を有する細胞に対してゲーティングすることによって決定した。図２Ａはまた、ｐｇにおけるＣＡＲリガンドの滴定を使用して、平均蛍光強度（ＰＥＭＦＩ）によって定量化された受容体発現を評価したことを示す。形質導入細胞は、ほとんどのリガンド濃度（わずかに１０^２未満～１０^６の範囲）にわたって非形質導入細胞と比較してより高いＰＥＭＦＩを有することが観察された。また、形質導入細胞についてのＰＥＭＦＩは、リガンド濃度の増加に伴って増加した。

【0525】

本発明者らはまた、ｄｄＰＣＲ（図２Ｂ）によって測定したＪｕｒｋａｔＴ細胞における導入遺伝子ベクターコピー数（ＶＣＮ）が、０～５の範囲のＭＯＩ滴定の増加に伴って増加することを観察した。ＭＯＩ滴定の尺度としてのＣＡＲ^＋細胞％を、ＭＯＩ滴定を使用して生成されたＪｕｒｋａｔＴ細胞のライブラリにおいて定量化し、生αＡｇ－ＣＡＲ＋細胞の％がＭＯＩ滴定の増加に伴って増加することが観察された。更に、本発明者らは、ＦＣ（図２Ｃ）を介して、ＣＡＲ発現の尺度であるＰＥＭＦＩが、１～５の範囲の全てのＭＯＩ値において、リガンドの０ｐｇ／ｍｌと比較してリガンドの５０，０００ｐｇ／ｍｌ濃度でより高いことを観察した。

【0526】

［実施例３．ヒトＴ細胞株における抗原特異的ＣＡＲ機能のインビトロでの機能の確認］
目的
この研究の目的は、ヒトＴ細胞株における抗原特異的ＣＡＲ機能の発現後の機能をインビトロで確認することであった。

【0527】

材料及び方法
ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、異なるレベルのαＡｇ－ＣＡＲを発現させるためにレンチウイルスベクターで形質導入し（形質導入効率を図２に示す）、インビトロで２４時間、増加量のＣＡＲリガンドで処理した。その後、ＣＡＲ機能を評価するためにＦＣを実施した。ＣＡＲ機能は、０～５の範囲の異なるＭＯＩ滴定における発現Ｔ細胞活性化マーカー、ＣＤ６９及びＣＤ２５のレベルとして測定した。加えて、培養されたＪｕｒｋａｔＴ細胞からの上清を収集し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってＩＬ－２産生について評価した。

【0528】

結果
結果として、本発明者らは、ここでＦＣを介して平均ＭＦＩとして測定したＣＤ６９発現（図３Ａ、左のグラフ）が、ＭＯＩ値（１～５の範囲）の増加に伴って、及びリガンド濃度（０．０１μｇ～１０μｇ）の増加に伴って増加することを観察した。また、本発明者らは、ＣＤ２５発現が、ＭＯＩ値（１～５の範囲）の増加に伴って、及びリガンド濃度（０．０１μｇ～１０μｇ）の増加に伴って増加することを観察した。更に、図３Ｂに示されるように、ＥＬＩＳＡを介して測定された、培養されたＪｕｒｋａｔ細胞によって産生されるＩＬ－２のレベルは、ＭＯＩ値（１，３，５）の増加に伴って、及びリガンド濃度（０μｇ～１０μｇ）の増加に伴って増加していた。まとめると、これらのデータは、ヒトＴ細胞における形質導入後の抗原特異的ＣＡＲ機能を確認している。

【0529】

［実施例４．一次マウスＴ細胞における抗原特異的ＣＡＲの発現、続くフローサイトメトリーを使用する発現レベルの評価、ならびにフローサイトメトリー及び酵素結合免疫吸着アッセイを使用する機能レベルの評価］
目的
この研究の目的は、一次マウスＴ細胞において抗原特異的ＣＡＲを発現させ、続いて、フローサイトメトリーを使用して発現レベルを評価し、フローサイトメトリー及び酵素結合免疫吸着アッセイを使用して機能レベルを評価することであった。

【0530】

材料及び方法
精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^－ナイーブ脾臓Ｔ細胞を、αＡｇ－ＣＡＲの発現のためのレンチウイルスベクター（ＭＯＩ１０）を添加する前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。７２時間後、αＡｇ－ＣＡＲの発現をＦＣ分析によって確認した。いくつかの細胞は、陰性対照として機能するように形質導入されなかった。

【0531】

形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^－Ｔ細胞を、インビトロで４８時間、増加濃度のＣＡＲリガンドで処理した。ＭＦＩとして定量化された、ＦＣによるＣＤ６９及びＣＤ２５発現を測定することによって、Ｔ細胞活性化を評価した。培養された細胞からの上清は、ＩＬ－２分泌についてＥＬＩＳＡを介して並行して評価した。

【0532】

結果
結果として、本発明者らは、形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^－ナイーブ脾臓Ｔ細胞が、形質導入細胞の右上象限におけるＦＣ輪郭（２８．７７％）の存在から明らかなように、非形質導入細胞と比較してより高いリガンド結合を示したことを観察した（図４Ａ）。ここで、ＴＣＲｂＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ７８濃度は、Ｔ細胞を同定するために使用され、ＣＡＲ発現細胞の割合は、表面結合ＣＡＲリガンド（ＣＡＲ－Ｒ－ＰＥ－Ａ）を有する細胞に対してゲーティングすることによって決定した。プロットは、生ＣＤ４^＋Ｔ細胞に対してゲーティングされている。非形質導入細胞は、陰性対照として使用した。αＡｇ－ＣＡＲ^＋形質導入細胞の％を、生ＣＤ４^＋Ｔ細胞（ｎ＝４）の％として定量化した（図４Ｂ）。生αＡｇ－ＣＡＲ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の％は、形質導入ＭＯＩ１０においてより高く、形質導入ＭＯＩ０（非形質導入細胞）においてほとんど無視できることが観察され、生αＡｇ－ＣＡＲ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の％の増加が、αＡｇ－ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターでの形質導入の直接的な結果であることが示唆された。

【0533】

本発明者らは、ここでＦＣを介して平均ＭＦＩとして測定したＣＤ２５発現（図４Ｃ、左のグラフ）が、非形質導入細胞（円）よりも形質導入細胞（正方形）においてより高く、リガンド濃度（０．０１μｇ～１０μｇ）の増加に伴って増加することを更に観察した。また、本発明者らは、ここでＦＣを介して平均ＭＦＩとして測定したＣＤ６９発現（図４Ｃ、右のグラフ）が、非形質導入細胞（円）よりも形質導入細胞（正方形）においてより高く、リガンド濃度（０．１μｇ～１０μｇ）の増加に伴って増加することを観察した。更に、ＥＬＩＳＡを介して測定した培養された細胞によって産生されたＩＬ－２のレベル（図４Ｄ）は、形質導入、及びリガンド濃度（０μｇ～１００μｇ）の増加に伴って増加した。まとめると、これらのデータは、一次マウスＴ細胞の形質導入が、機能的な抗原特異的ＣＡＲの発現をもたらすことを実証している。

【0534】

［実施例５．一次マウス調節Ｔ細胞における抗原特異的ＣＡＲの発現、続くフローサイトメトリーを使用する発現レベルの評価、及び酵素結合免疫吸着アッセイを使用する機能レベルの評価］
目的
この研究の目的は、一次マウス調節Ｔ細胞において抗原特異的ＣＡＲを発現させ、続いて、フローサイトメトリーを使用して発現レベルを評価し、酵素結合免疫吸着アッセイを使用して機能レベルを評価することであった。

【0535】

材料及び方法
精製したＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を、αＡｇ－ＣＡＲを発現するためのレンチウイルス形質導入（ＭＯＩ１０）の前に、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用してインビトロで活性化した。７２時間後、ＦＣを実施して、αＡｇ－ＣＡＲの発現を確認した。

【0536】

形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇを、培地単独または１０μｇのＣＡＲリガンドにおいて４８時間培養した。上清を収集し、ＩＬ－１０分泌をＥＬＩＳＡで定量化した。

【0537】

結果
結果として、本発明者らは、図５Ａの右上象限におけるＦＣ輪郭（３２．４３％）の存在から明らかであるように、レンチウイルス形質導入後にＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＴｒｅｇがαＡｇ－ＣＡＲを発現したことを観察した。ここで、ＴＣＲｂＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ７８濃度は、Ｔ細胞を同定するために使用され、ＣＡＲ発現細胞の割合は、表面結合ＣＡＲリガンド（ＣＡＲ－Ｒ－ＰＥ－Ａ）を有する細胞に対してゲーティングすることによって決定した。プロットは、生ＣＤ４^＋Ｔ細胞に対してゲーティングされている。

【0538】

また、本発明者らは、ＥＬＩＳＡを介して測定した形質導入されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇによって産生されるＩＬ－１０のレベル（図５Ｂ）が、より高いリガンド濃度（０μｇ対１０μｇ）で増加することを観察し、ＩＬ－１０分泌のレベルがＣＡＲ機能の結果であることを示唆していた。ＣＡＲ発現は、リガンド結合をもたらし、より多くのＩＬ－１０を産生する。ここで、ＩＬ－１０（ｐｇ／ｍｌ）濃度は、リガンドの量（μｇ）に対してプロットされている。バーは、示される個別のデータポイントを有する平均＋／－ＳＥＭを表す（ｎ＝４）。対応のないＴ検定によって評価される統計的有意性：＊＊ｐ＝０．００１９。

【0539】

まとめると、これらのデータは、抗原特異的ＣＡＲを発現するための一次マウスＴｒｅｇ細胞の形質導入が、機能的なＣＡＲ構築物を発現する形質導入Ｔｒｅｇ細胞をもたらすことを実証している。

【0540】

［実施例６．形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植を介する、再構築された免疫区画内で優先的なＦｏｘＰ３プロモーター指向性導入遺伝子発現を有する調節Ｔ細胞の生成］
目的
この研究の目的は、形質導入されたマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を介して、再構築された免疫区画内で優先的なＦｏｘＰ３プロモーター指向性導入遺伝子発現を有する調節Ｔ細胞を生成することであった。

【0541】

材料及び方法
系統－骨髄（系統－ＢＭ）細胞を単離し、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するように設計されたレンチウイルス構築物で形質導入した。移植の１０週間後、ＧＦＰの発現を再構築された免疫区画内で評価した。レンチウイルス構築物を、保存された非コード配列（ＣＮＳ）ドメイン１、２、及び３（ＣＮＳ１、ＣＮＳ２、及びＣＮＳ３）、Ｆｏｘｐ３プロモーター、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）のためのコード配列、ならびに３’ＵＴＲ配列エレメントを含有するように設計した。Ｔｒｅｇ区画内の導入遺伝子発現を向上させ、一方で、他の免疫サブセット内の導入遺伝子発現を制限するように、この構築物を設計した。その後、移植動物の脾臓に由来するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞においてＦＣを実施し、ＧＦＰ発現を測定した。ＦＣを再び実施し、免疫細胞におけるＦｏｘｐ３プロモーターの活性を測定した。

【0542】

結果
結果として、本発明者らは、保存された非コード配列（ＣＮＳ）ドメイン１、２、及び３（ＣＮＳ１、ＣＮＳ２、及びＣＮＳ３）、Ｆｏｘｐ３プロモーター、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）のためのコード配列、ならびに３’ＵＴＲ配列エレメントを含有するレンチウイルス構築物（図６Ａ）を得、その結果、レンチウイルス構築物は、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現することができた。

【0543】

本発明者らは、図６Ｂの右上領域におけるＦＣ輪郭（７５．０８％）の存在から明らかなように、移植動物の脾臓に由来するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞におけるＧＦＰ発現を観察した。ここで、ＣＤ４－ＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ６０マーカーの検出は、Ｔ細胞を同定するために使用され、ＧＦＰ発現細胞の割合は、ＧＦＰ（ＧＦＰ－ＦＩＴＣ－Ａ）に対してゲーティングすることによって決定する。

【0544】

本発明者らはまた、ＧＦＰレベル（ＭＦＩ）として測定したＦｏｘｐ３プロモーター活性が、免疫細胞の型及び組織タイプ（胸腺、脾臓、ＭＬＮ（腸間膜リンパ節）、及びｐＬＮ（末梢リンパ節）におけるＢ細胞、Ｔ細胞、単球、及び好中球）に基づいて変化することを観察した（図６Ｃ）。最高のＧＦＰレベルは、胸腺、脾臓、ＭＬＮ、及びＰＬＮにおけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞で観察される。ここで、ＧＦＰレベル（ＭＦＩ）は、特定の組織／細胞型における免疫細胞の各タイプに対してプロットされている。個別のデータポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表すバーでの生物学的複製を表す（ｎ＝４）。図の略語：ＢＭ（骨髄）、ＤＰ（二重陽性）、ＳＰ（単一陽性）。

【0545】

まとめると、これらのデータは、発現がＦｏｘＰ３プロモーターによって駆動されるとき、形質導入されたマウス骨髄ＨＳＣの移植が、Ｔｒｅｇ細胞におけるＧＦＰの優先的な発現をもたらすことを実証している。

【0546】

［実施例７．形質導入されたマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植後の、インビボでのＣＡＲ発現調節Ｔ細胞の生成］
目的
この研究の目的は、形質導入されたマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植後にインビボでＣＡＲ発現調節Ｔ細胞を生成することであった。

【0547】

材料及び方法
系統－骨髄（系統－ＢＭ）細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、ＣＡＲ発現を免疫区画全体で評価した。

【0548】

レンチウイルス構築物を、保存された非コード配列（ＣＮＳ）ドメイン１、２、及び３（ＣＮＳ１、ＣＮＳ２、及びＣＮＳ３）、Ｆｏｘｐ３プロモーター、抗原特異的ＣＡＲ（αＡｇ－ＣＡＲ）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）のためのコード配列、ならびに３’ＵＴＲ配列エレメントを含有するように設計した。その後、移植動物の脾臓に由来するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞においてＦＣを実施し、ＣＡＲ発現を測定した。

【0549】

ＦＣをエクスビボで実施して、骨髄キメラマウスにおけるＴｒｅｇ発達及び機能の変化を測定した。脾臓当たりの調節細胞の総数、転写因子、Ｆｏｘｐ３、及び表面マーカーＣＤ２５を含む主要な調節Ｔ細胞遺伝子の発現レベルを測定した。

【0550】

結果
結果として、本発明者らは、保存された非コード配列（ＣＮＳ）ドメイン１、２、及び３（ＣＮＳ１、ＣＮＳ２、及びＣＮＳ３）、Ｆｏｘｐ３プロモーター、抗原特異的ＣＡＲ（αＡｇ－ＣＡＲ）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）のためのコード領域、ならびに３’ＵＴＲ配列エレメントを含有するレンチウイルス構築物（図７Ａ）を得、その結果、レンチウイルス構築物は、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現することができた。

【0551】

本発明者らは、結合したＣＡＲリガンド濃度が高い右上象限におけるＦＣ輪郭（７５．６９％）の存在から明らかなように、移植動物の脾臓に由来するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋調節Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現を観察した（図７Ｂ）。ここで、ＣＤ４－ＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ６０マーカーの検出は、Ｔ細胞を同定するために使用され、ＣＡＲ発現細胞の割合は、表面結合ＣＡＲリガンド（ＣＡＲ－Ｒ－ＰＥ－Ａ）を有する細胞に対してゲーティングすることによって決定した。

【0552】

更に、本発明者らは、エクスビボでのＦＣ分析によって評価される、ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現する脾臓調節Ｔ細胞の数及び表現型を比較した（図７Ｃ）。ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現する脾臓調節Ｔ細胞の同等の数及び表現型を検出した。脾臓当たりの調節細胞の総数を定量化し、ＣＡＲ＋群とＣＡＲ－群との間に有意差は観察されなかった（左のグラフ）。ここで、細胞計数は、ＣＡＲ導入遺伝子発現に従ってプロットされている。転写因子Ｆｏｘｐ３及び表面マーカーＣＤ２５を含む主要な調節Ｔ細胞遺伝子の発現レベルを、それぞれＭＦＩ（中央及び右のグラフ）として定量化しているが、両方の場合においてＣＡＲ＋群とＣＡＲ－群との間に有意差は見出されなかった。ここで、Ｆｏｘｐ３レベル（ＭＦＩ）及びＣＤ２５レベル（ＭＦＩ）は、ＣＡＲ導入遺伝子発現に従ってプロットされている。

【0553】

個別のデータポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表すバーでの生物学的複製を表す（ＣＡＲ－ｎ＝４、ＣＡＲ＋ｎ＝６）。統計的差異は、対応のないＴ細胞検定によって評価したが、有意差は検出されなかった。

【0554】

［実施例８．Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現するレンチウイルス構築物を用いるマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の形質導入後の、ＣＡＲ発現調節Ｔ細胞の生成、続くそれらの免疫抑制可能性の評価］
目的
この研究の目的は、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現するレンチウイルス構築物を用いるマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の形質導入後に、ＣＡＲ発現調節Ｔ細胞を生成し、続いて、細胞トレーサーバイオレット増殖アッセイを使用してそれらの免疫抑制可能性を評価することであった。

【0555】

材料及び方法
系統－骨髄（系統－ＢＭ）細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、インビトロで免疫機能の変化について評価した。ＣＡＲ発現Ｔｒｅｇを、細胞トレーサーバイオレットで標識されたエフェクターＴ細胞を用いてＴｒｅｇを培養することによって、免疫抑制性能力について評価した。エフェクターＴ細胞を、対照ＣＡＲ－またはＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇの存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズで９６時間刺激した。増殖性応答は、細胞トレーサー色素の希釈によって測定した。

【0556】

結果
結果として、本発明者らは、ＣＡＲ－（図８Ａ、右上）及びＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇ（図８Ａ、右下）の両方が免疫抑制性能力を有し、各ピークが細胞分裂を表すヒストグラムプロファイル内のピークの数によって示される、細胞トレーサーバイオレットで標識されたエフェクターＴ細胞の増殖を低減させることができたことを観察した。代表的なヒストグラムは、示される実験条件のための細胞トレーサー色素プロファイルを示す。

【0557】

また、本発明者らは、エフェクターＴ細胞に対するＴｒｅｇの濃度が増加するにつれて、エフェクターＴ細胞の増殖性能力％が低下することを観察した（図８Ｂ）。増殖性応答は、細胞トレーサー染料の希釈によって定量化した。データは、分裂を受けている、細胞トレーサーで標識された細胞のパーセンテージ、すなわち「増殖％」として表される。個別のデータポイントは、平均＋／－ＳＥＭを表すバーでの生物学的複製を表す（ＣＡＲ－ｎ＝４、ＣＡＲ＋ｎ＝６）。統計的有意性は、細胞の各々の同等の比について対応のあるＴ検定によって評価したが、有意差は検出されなかった。

【0558】

［実施例９．Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現するレンチウイルス構築物を用いるマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の形質導入後の、ＣＡＲ発現調節Ｔ細胞の生成、続くそれらの抗原特異的免疫抑制可能性の評価］
目的
この研究の目的は、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（ＣＡＲ－）を発現するレンチウイルス構築物を用いるマウス骨髄造血幹細胞（ＨＳＣ）の形質導入後に、ＣＡＲ発現調節Ｔ細胞を生成し、続いて、ＣＡＲによって付与される抗原特異的免疫抑制性機能を評価することであった。

【0559】

材料及び方法
系統－骨髄（系統－ＢＭ）細胞を単離し、レンチウイルス構築物で形質導入して、Ｔｒｅｇ特異的（Ｆｏｘｐ３）プロモーターの制御下で抗原特異的ＣＡＲ（ＣＡＲ＋）または無関係な導入遺伝子（対照ＣＡＲ－）を発現させた。移植の１０週間後、調節Ｔ細胞を末梢免疫器官から単離し、ＣＡＲリガンドを用いてインビトロで４８時間培養して、活性化を評価した。ＣＤ２５発現レベルを、ＣＤ２５－ＰＥ－Ｃｙ７－Ａリガンドを使用して、対照ＣＡＲ－Ｔｒｅｇ及びαＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇの両方において１０μｇのＣＡＲリガンドを用いて刺激した後、ＦＣを介して測定した。その後、対照ＣＡＲ－Ｔｒｅｇ及びαＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇの両方を、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズの不在下または存在下で１０μｇのＣＡＲリガンドに４８時間曝露した。上清を収集し、ＩＬ－１０分泌をＥＬＩＳＡによって決定した。

【0560】

結果
結果として、本発明者らは、対応するリガンドで刺激すると、αＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇ（右）が、対照ＣＡＲ－Ｔｒｅｇと比較してＣＤ２５のはるかに高い発現を有することを観察した（図９Ａ）。ここで、表面結合ＣＤ２５－ＰＥ－Ｃｙ７－Ａによって決定される、異なるレベルのＣＤ２５を発現する細胞の数（計数）を示す。ＣＤ２５レベルは、平均ＭＦＩとして、対照ＣＡＲ－及びＣＡＲ＋発現調節Ｔ細胞において定量化される（図９Ｂ）。

【0561】

また、本発明者らは、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズの不在下（図９Ｃ）または存在下（図９Ｄ）で１０μｇのＣＡＲリガンドに４８時間曝露した後、αＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇ（正方形）が、対照ＣＡＲ－Ｔｒｅｇ（円）と比較してより多くのＩＬ－１０（ｐｇ／ｍｌ）を分泌することを観察した。αＡｇ－ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇ（正方形）は、１０μｇのＣＡＲリガンドに曝露した後により多くのＩＬ－１０（ｐｇ／ｍｌ）を分泌したが、リガンドへの曝露の前後に、対照ＣＡＲ＋Ｔｒｅｇによって分泌されるＩＬ－１０の量に有意差はなかった。統計的有意性は、対応のあるＴ検定によって評価し、ｐ値が示されている。

【0562】

［実施例１０．自己免疫疾患の治療のための自己抗原結合タンパク質を発現する多能性細胞の生成］
自己抗原結合タンパク質を発現する多能性造血細胞（例えば、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）、胚幹細胞（ＥＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、リンパ系前駆細胞、またはＣＤ３４＋細胞）などの多能性細胞を作製するための例示的な方法は、形質導入によるものである。例えば、本明細書に記載のＦｏｘｐ３プロモーターなどの好適なプロモーター、本明細書に記載のＣＮＳ１、ＣＮＳ２、ＣＮＳ３、及び／またはＣＮＳ０エンハンサーなどの好適なエンハンサー、ならびに自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含有するレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクター）は、本明細書に記載の、または当該技術分野において既知のベクター産生技術を使用して操作することができる。レトロウイルスベクターが操作された後、レトロウイルスを使用して、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ、ＨＰＣ、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、リンパ系前駆細胞、またはＣＤ３４＋細胞）を形質導入して、自己抗原結合タンパク質を発現する多能性造血細胞の集団を生成することができる。

【0563】

自己抗原結合タンパク質を発現する多能性造血細胞を作製するための追加の例示的な方法は、トランスフェクション技術である。本明細書に記載の、及び当該技術分野において既知の分子生物学操作を使用して、例えば、プロモーター、１つ以上のエンハンサー、及び自己抗原結合タンパク質を含有するプラスミドＤＮＡを産生することができる。例えば、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸は、当該技術分野において既知のＰＣＲベースの技術を使用してヒト細胞株から増幅され得るか、または自己抗原結合タンパク質をコードする核酸は、例えば、固相ポリヌクレオチド合成操作を使用して合成され得る。次いで、核酸、プロモーター、及びエンハンサー（複数可）は、例えば、好適な制限エンドヌクレアーゼ媒介性切断及びライゲーション手順を使用して、目的のプラスミドにライゲーションすることができる。プラスミドＤＮＡが操作された後、プラスミドを使用して、例えば、エレクトロポレーションまたは本明細書に記載の別のトランスフェクション技術を使用して、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ、ＨＰＣ、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、リンパ系前駆細胞、またはＣＤ３４＋細胞）をトランスフェクトして、コードされたタンパク質（複数可）を発現する多能性造血細胞の集団を生成することができる。

【0564】

［実施例１１．自己免疫疾患に罹患している患者への治療用組成物の投与］
本明細書に開示される方法によれば、患者、例えば、ヒト患者は、自己免疫疾患の兆候を低減もしくは軽減させるように、及び／または疾患の根底にある生化学的病因を標的にするように、治療され得る。このために、患者は、例えば、多能性造血細胞（例えば、ＨＳＣ、ＨＰＣ、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、リンパ系前駆細胞、またはＣＤ３４＋細胞）などの、例えば、多能性細胞の集団を投与され得、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞において活性である系統特異的転写調節エレメントの制御下で自己抗原結合タンパク質を発現する。多能性造血細胞の集団は、患者に、例えば、全身的に（例えば、静脈内に）投与され得る。細胞は、治療有効量、例えば、１×１０^６細胞／ｋｇ～１×１０^１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上（例えば、１×１０^７細胞／ｋｇ、１×１０^８細胞／ｋｇ、１×１０^９細胞／ｋｇ、１×１０^１０細胞／ｋｇ、１×１０^１１細胞／ｋｇ、１×１０^１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上）で投与され得る。

【0565】

細胞の集団が患者に投与される前に、１つ以上の薬剤が、例えば、本明細書に記載のコンディショニング剤の投与によって、患者の内因性造血細胞集団を切除するために患者に投与され得る。

【0566】

治療の成功は、様々な臨床的指標によってモニターされ得る。本開示の組成物を使用する自己免疫疾患の効果的な治療は、例えば、（ｉ）少なくとも１年間の持続的な疾患緩解などの持続的な疾患緩解、（ｉｉ）患者における炎症の低減もしくは痛みの軽減の観察、及び／または（ｉｉｉ）患者における組織損傷の低減の観察として明らかになり得る。

【0567】

本発明の例示的な実施形態
本発明の例示的な実施形態を、以下に列挙される段落に記載する。
１．自己免疫疾患の治療または予防を必要とする患者においてそれを行う方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する工程を含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【0568】

２．自己免疫疾患を有すると診断された患者において自己反応性エフェクター免疫細胞の集団の活性及び／または増殖を抑制する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する工程を含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【0569】

３．自己免疫疾患を有すると診断された患者において自己反応性エフェクター免疫細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する工程を含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【0570】

４．自己免疫疾患を有すると診断された患者において自己免疫応答から内因性組織を保護する方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する工程を含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【0571】

５．自己免疫疾患を有すると診断された患者において炎症を低減させる方法であって、自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する工程を含み、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記方法。

【0572】

６．前記多能性造血細胞が、造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血前駆細胞（ＨＰＣ）である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。

【0573】

７．前記多能性造血細胞が、胚幹細胞である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。

【0574】

８．前記多能性造血細胞が、人工多能性幹細胞である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。

【0575】

９．前記多能性造血細胞が、リンパ系前駆細胞である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。

【0576】

１０．前記多能性造血細胞が、ＣＤ３４＋細胞である、実施形態１～９のいずれか１つに記載の方法。

【0577】

１１．前記多能性造血細胞の集団が、前記患者に全身投与される、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法。

【0578】

１２．前記多能性造血細胞の集団が、前記患者に静脈内注射によって投与される、実施形態１１に記載の方法。

【0579】

１３．前記多能性造血細胞が、前記患者に対して自己由来である、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の方法。

【0580】

１４．前記多能性造血細胞が、前記患者に対して同種異系である、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の方法。

【0581】

１５．前記多能性造血細胞は、前記患者とＨＬＡが一致している、実施形態１４に記載の方法。

【0582】

１６．前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むウイルスベクターを用いてエクスビボで形質導入される、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0583】

１７．前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、及びポックスウイルスからなる群から選択される、実施形態１６に記載の方法。

【0584】

１８．前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターである、実施形態１７に記載の方法。

【0585】

１９．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１８に記載の方法。

【0586】

２０．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、アルファレトロウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態１８に記載の方法。

【0587】

２１．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、実施形態１７～２０のいずれか１つに記載の方法。

【0588】

２２．前記ウイルスベクターが、偽型ウイルスベクターである、実施形態１７～２１のいずれか１つに記載の方法。

【0589】

２３．前記偽型ウイルスベクターが、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ファミリーウイルスからなる群から選択される、実施形態２２に記載の方法。

【0590】

２４．前記偽型ウイルスベクターが、偽型レンチウイルスベクターである、実施形態２３に記載の方法。

【0591】

２５．前記偽型ウイルスベクターが、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ＲＤ１１４ウイルス、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、ヒトフォーミーウイルス（ＨＦＶ）、ウォールアイ皮膚肉腫ウイルス（ＷＤＳＶ）、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）、狂犬病ウイルス、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、シンノンブルウイルス（ＳＮＶ）、チェリーねじれリーフウイルス（ＣｈＴＬＶ）、サルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ）、マソン・ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）、リスサルレトロウイルス（ＳＭＲＶ）、ラウス関連ウイルス（ＲＡＶ）、藤浪肉腫ウイルス（ＦｕＳＶ）、トリ癌腫ウイルス（ＭＨ２）、トリ脳脊髄炎ウイルス（ＡＥＶ）、アルファモザイクウイルス（ＡＭＶ）、トリ肉腫ウイルスＣＴ１０、及びウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）から選択されるウイルス由来のエンベロープタンパク質を含む、実施形態２２～２４のいずれか１つに記載の方法。

【0592】

２６．前記偽型ウイルスベクターが、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を含む、実施形態２５に記載の方法。

【0593】

２７．前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むポリヌクレオチドを用いてエクスビボでトランスフェクトされる、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0594】

２８．前記多能性造血細胞が、カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチルデキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び／または磁気ビーズを使用してトランスフェクトされる、実施形態２７に記載の方法。

【0595】

２９．前記多能性造血細胞が、エレクトロポレーション、ヌクレオフェクション、スクイーズポレーション、ソノポーレーション、オプティカルトランスフェクション、磁気フェクション、及び／またはインペールフェクションによってトランスフェクトされる、実施形態２７または２８に記載の方法。

【0596】

３０．前記核酸カセットが、転移性エレメントの一部である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0597】

３１．前記核酸カセットが、前記多能性造血細胞のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子への組み込みのためのトランスポザーゼ認識及び切断エレメントを含む、実施形態３０に記載の方法。

【0598】

３２．前記ＤＮＡ分子が、核ＤＮＡ分子またはミトコンドリアＤＮＡ分子であり、前記トランスポザーゼ認識及び前記切断エレメントが、前記核ＤＮＡ分子または前記ミトコンドリアＤＮＡ分子への組み込みを促進する、実施形態３１に記載の方法。

【0599】

３３．前記多能性造血細胞が、前記細胞のゲノム内の標的位置で一本鎖切断または二本鎖切断を触媒するヌクレアーゼを前記細胞に送達することによって得られる、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0600】

３４．前記ヌクレアーゼが、前記細胞のゲノム内の前記標的位置にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と組み合わせて前記細胞に送達される、実施形態３３に記載の方法。

【0601】

３５．前記ヌクレアーゼが、クラスター化された規則的な間隔の短い回文構造の反復（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質である、実施形態３３または３４に記載の方法。

【0602】

３６．前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）またはＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）である、実施形態３５に記載の方法。

【0603】

３７．前記ヌクレアーゼが、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである、実施形態３３または３４に記載の方法。

【0604】

３８．前記細胞が前記ヌクレアーゼと接触している間に、前記細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含む鋳型ポリヌクレオチドと更に接触する、実施形態３３～３７のいずれか１つに記載の方法。

【0605】

３９．前記鋳型ポリヌクレオチドが、相同組換えを促進するために、前記標的位置に対して５’に位置する核酸配列及び前記標的位置に対して３’に位置する核酸配列に十分に類似する核酸配列をそれぞれ有する５’相同性アーム及び３’相同性アームを含む、実施形態３８に記載の方法。

【0606】

４０．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドが、前記細胞を、前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターと接触させることによって、前記細胞に送達される、実施形態３８または３９に記載の方法。

【0607】

４１．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、またはレトロウイルス科ファミリーウイルスである、実施形態４０に記載の方法。

【0608】

４２．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルスである、実施形態４１に記載の方法。

【0609】

４３．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスが、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態４２に記載の方法。

【0610】

４４．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記レトロウイルス科ファミリーウイルスが、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、実施形態４２または４３に記載の方法。

【0611】

４５．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、組み込み欠損性のレンチウイルスベクターである、実施形態４０に記載の方法。

【0612】

４６．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４からなる群から選択されるＡＡＶである、実施形態４０に記載の方法。

【0613】

４７．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の方法。

【0614】

４８．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４７に記載の方法。

【0615】

４９．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態４８に記載の方法。

【0616】

５０．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態４９に記載の方法。

【0617】

５１．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列を有する、実施形態５０に記載の方法。

【0618】

５２．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４７に記載の方法。

【0619】

５３．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態５２に記載の方法。

【0620】

５４．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態５３に記載の方法。

【0621】

５５．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列を有する、実施形態５４に記載の方法。

【0622】

５６．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４７に記載の方法。

【0623】

５７．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態５６に記載の方法。

【0624】

５８．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態５７に記載の方法。

【0625】

５９．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列を有する、実施形態５８に記載の方法。

【0626】

６０．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４７に記載の方法。

【0627】

６１．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態６０に記載の方法。

【0628】

６２．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態６１に記載の方法。

【0629】

６３．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列を有する、実施形態６２に記載の方法。

【0630】

６４．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、実施形態４７～６３のいずれか１つに記載の方法。

【0631】

６５．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ１エンハンサーを含む、実施形態１～６４のいずれか１つに記載の方法。

【0632】

６６．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態６５に記載の方法。

【0633】

６７．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態６６に記載の方法。

【0634】

６８．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態６７に記載の方法。

【0635】

６９．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列を有する、実施形態６８に記載の方法。

【0636】

７０．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態６５に記載の方法。

【0637】

７１．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態７０に記載の方法。

【0638】

７２．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態７１に記載の方法。

【0639】

７３．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列を有する、実施形態７２に記載の方法。

【0640】

７４．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態６５に記載の方法。

【0641】

７５．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態７４に記載の方法。

【0642】

７６．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態７５に記載の方法。

【0643】

７７．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列を有する、実施形態７６に記載の方法。

【0644】

７８．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態６５に記載の方法。

【0645】

７９．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態７８に記載の方法。

【0646】

８０．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態７９に記載の方法。

【0647】

８１．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列を有する、実施形態８０に記載の方法。

【0648】

８２．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、実施形態６５～８１のいずれか１つに記載の方法。

【0649】

８３．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ２エンハンサーを含む、実施形態１～８２のいずれか１つに記載の方法。

【0650】

８４．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態８３に記載の方法。

【0651】

８５．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態８４に記載の方法。

【0652】

８６．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態８５に記載の方法。

【0653】

８７．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列を有する、実施形態８６に記載の方法。

【0654】

８８．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態８３に記載の方法。

【0655】

８９．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態８８に記載の方法。

【0656】

９０．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態８９に記載の方法。

【0657】

９１．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列を有する、実施形態９０に記載の方法。

【0658】

９２．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態８３に記載の方法。

【0659】

９３．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態９２に記載の方法。

【0660】

９４．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態９３に記載の方法。

【0661】

９５．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列を有する、実施形態９４に記載の方法。

【0662】

９６．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態８３に記載の方法。

【0663】

９７．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態９６に記載の方法。

【0664】

９８．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態９７に記載の方法。

【0665】

９９．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列を有する、実施形態９８に記載の方法。

【0666】

１００．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、実施形態８３～９９のいずれか１つに記載の方法。

【0667】

１０１．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ３エンハンサーを含む、実施形態１～１００のいずれか１つに記載の方法。

【0668】

１０２．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１０１に記載の方法。

【0669】

１０３．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１０２に記載の方法。

【0670】

１０４．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１０３に記載の方法。

【0671】

１０５．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列を有する、実施形態１０４に記載の方法。

【0672】

１０６．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１０１に記載の方法。

【0673】

１０７．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１０６に記載の方法。

【0674】

１０８．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１０７に記載の方法。

【0675】

１０９．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列を有する、実施形態１０８に記載の方法。

【0676】

１１０．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１０１に記載の方法。

【0677】

１１１．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１１０に記載の方法。

【0678】

１１２．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１１１に記載の方法。

【0679】

１１３．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列を有する、実施形態１１２に記載の方法。

【0680】

１１４．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１０１に記載の方法。

【0681】

１１５．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１１４に記載の方法。

【0682】

１１６．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１１５に記載の方法。

【0683】

１１７．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列を有する、実施形態１１６に記載の方法。

【0684】

１１８．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、実施形態１０１～１１７のいずれか１つに記載の方法。

【0685】

１１９．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ０エンハンサーを含む、実施形態１～１１８のいずれか１つに記載の方法。

【0686】

１２０．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１１９に記載の方法。

【0687】

１２１．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１２０に記載の方法。

【0688】

１２２．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１２１に記載の方法。

【0689】

１２３．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列を有する、実施形態１２２に記載の方法。

【0690】

１２４．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１１９に記載の方法。

【0691】

１２５．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１２４に記載の方法。

【0692】

１２６．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１２５に記載の方法。

【0693】

１２７．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列を有する、実施形態１２６に記載の方法。

【0694】

１２８．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１１９に記載の方法。

【0695】

１２９．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１２８に記載の方法。

【0696】

１３０．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１２９に記載の方法。

【0697】

１３１．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列を有する、実施形態１３０に記載の方法。

【0698】

１３２．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態１１９に記載の方法。

【0699】

１３３．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態１３２に記載の方法。

【0700】

１３４．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態１３３に記載の方法。

【0701】

１３５．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列を有する、実施形態１３４に記載の方法。

【0702】

１３６．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する、実施形態１１９～１３５のいずれか１つに記載の方法。

【0703】

１３７．前記核酸カセットが、リボスイッチに作動可能に連結している、実施形態１～１３６のいずれか１つに記載の方法。

【0704】

１３８．前記リボスイッチへのリガンドの結合が、前記核酸カセットの発現を誘導する、実施形態１３７に記載の方法。

【0705】

１３９．前記自己抗原結合タンパク質が、一本鎖ポリペプチドである、実施形態１～１３８のいずれか１つに記載の方法。

【0706】

１４０．前記自己抗原結合タンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１～１３９のいずれか１つに記載の方法。

【0707】

１４１．前記キメラ抗原受容体が、抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１４０に記載の方法。

【0708】

１４２．前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意に１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１４１に記載の方法。

【0709】

１４３．前記抗原認識ドメインが、一本鎖抗体断片であり、任意に、前記一本鎖抗体断片が、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）である、実施形態１４１または１４２に記載の方法。

【0710】

１４４．前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＣＤ４、ＣＤ７、またはＩｇＤヒンジドメインである、実施形態１４１～１４３のいずれか１つに記載の方法。

【0711】

１４５．前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８ヒンジドメインである、実施形態１４４に記載の方法。

【0712】

１４６．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８、ＦｃＲＩγ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＯＸ４０、またはＭＨＣ（Ｈ２－Ｋｂ）膜貫通ドメインを含む、実施形態１４１～１４５のいずれか１つに記載の方法。

【0713】

１４７．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、実施形態１４６に記載の方法。

【0714】

１４８．前記１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、実施形態１４２～１４７のいずれか１つに記載の方法。

【0715】

１４９．前記１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインである、実施形態１４８に記載の方法。

【0716】

１５０．前記１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、実施形態１４２～１４９のいずれか１つに記載の方法。

【0717】

１５１．前記１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインである、実施形態１５０に記載の方法。

【0718】

１５２．前記キメラ抗原受容体が、Ｎ末端リーダー配列を含む、実施形態１４１～１５１のいずれか１つに記載の方法。

【0719】

１５３．前記抗原認識ドメインが、Ｎ末端リーダー配列を含む、実施形態１４１～１５２のいずれか１つに記載の方法。

【0720】

１５４．前記抗原認識ドメインの前記Ｎ末端リーダー配列が、前記キメラ抗原受容体の細胞処理及び細胞膜への局在化中に、前記抗原認識ドメインから切断される、実施形態１５３に記載の方法。

【0721】

１５５．前記自己抗原結合タンパク質が、多鎖タンパク質である、実施形態１～１３８のいずれか１つに記載の方法。

【0722】

１５６．前記自己抗原結合タンパク質が、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である、実施形態１５５に記載の方法。

【0723】

１５７．前記自己免疫疾患が、Ｉ型糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、またはウェゲナー肉芽腫症である、実施形態１～１５６のいずれか１つに記載の方法。

【0724】

１５８．前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクアポリン４、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である、実施形態１～１５７のいずれか１つに記載の方法。

【0725】

１５９．前記自己免疫疾患が、多発性硬化症であり、前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質である、実施形態１５７に記載の方法。

【0726】

１６０．前記自己免疫疾患が、Ｉ型糖尿病であり、前記自己抗原が、インスリン、ＧＡＤ－６５、ＩＡ－２、またはＺｎＴ８である、実施形態１５７に記載の方法。

【0727】

１６１．前記自己免疫疾患が、関節リウマチであり、前記自己抗原が、コラーゲンＩＩ、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、またはＨＳＰ６５である、実施形態１５７に記載の方法。

【0728】

１６２．前記自己免疫疾患が、重症筋無力症であり、前記自己抗原が、ＡＣｈＲ、ＭｕＳＫ、またはＬＲＰ４である、実施形態１５７に記載の方法。

【0729】

１６３．前記自己免疫疾患が、狼瘡であり、前記自己抗原が、ヒストンＩＩＡである、実施形態１５７に記載の方法。

【0730】

１６４．前記自己免疫疾患が、甲状腺機能低下症であり、前記自己抗原が、甲状腺で発現されるタンパク質である、実施形態１５７に記載の方法。

【0731】

１６５．前記自己免疫疾患が、グレーブス病であり、前記自己抗原が、前記チロトロピン受容体である、実施形態１５７に記載の方法。

【0732】

１６６．前記自己免疫疾患が、尋常性天疱瘡であり、前記自己抗原が、二本鎖ＤＮＡである、実施形態１５７に記載の方法。

【0733】

１６７．前記自己免疫疾患が、乾癬であり、前記自己抗原が、二本鎖ＤＮＡである、実施形態１５７に記載の方法。

【0734】

１６８．前記自己免疫疾患が、視神経脊髄炎であり、前記自己抗原が、アクアポリン４である、実施形態１５７に記載の方法。

【0735】

１６９．前記多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する前に、先駆細胞の集団が、前記患者またはドナーから単離され、前記先駆細胞が、前記患者に投与される前記細胞の集団を得るために拡大され、エクスビボで遺伝子修飾される、実施形態１～１６８のいずれか１つに記載の方法。

【0736】

１７０．前記先駆細胞が、ＣＤ３４＋ＨＳＣであり、前記先駆細胞が、ＨＳＣ機能的可能性の実質的な損失なしに拡大される、実施形態１６９に記載の方法。

【0737】

１７１．前記患者または前記ドナーからの前記先駆細胞の単離前に、前記患者または前記ドナーが、１つ以上の多能性造血細胞動員剤を投与される、実施形態１６９または１７０に記載の方法。

【0738】

１７２．前記多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する前に、内因性多能性造血細胞の集団が、１つ以上のコンディショニング剤を前記患者に投与することによって、前記患者において切除される、実施形態１～１７１のいずれか１つに記載の方法。

【0739】

１７３．前記方法が、前記多能性造血細胞の集団を前記患者に投与する前に、１つ以上のコンディショニング剤を前記患者に投与することによって、前記患者における内因性多能性造血細胞の集団を切除する工程を含む、実施形態１～１７１のいずれか１つに記載の方法。

【0740】

１７４．前記１つ以上のコンディショニング剤が、非骨髄破壊性コンディショニング剤である、実施形態１７２または１７３に記載の方法。

【0741】

１７５．前記１つ以上のコンディショニング剤が、前記患者におけるＣＤ３４＋細胞の集団を枯渇させる、実施形態１７２～１７４のいずれか１つに記載の方法。

【0742】

１７６．前記枯渇したＣＤ３４＋細胞が、リンパ系前駆細胞である、実施形態１７５に記載の方法。

【0743】

１７７．前記１つ以上のコンディショニング剤が、抗体またはその抗原結合断片を含む、実施形態１７２～１７６のいずれか１つに記載の方法。

【0744】

１７８．前記抗体または前記その抗原結合断片が、ＣＤ１１７、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３４、ＣＤ９０、ＣＤ４５、またはＣＤ１３３に結合する、実施形態１７７に記載の方法。

【0745】

１７９．前記抗体または前記その抗原結合断片が、ＣＤ１１７に結合する、実施形態１７８に記載の方法。

【0746】

１８０．前記抗体または前記その抗原結合断片が、細胞毒素にコンジュゲートされている、実施形態１７７～１７９のいずれか１つに記載の方法。

【0747】

１８１．前記多能性造血細胞の集団を前記患者に投与すると、前記投与された細胞またはその子孫が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞に分化する、実施形態１～１８０のいずれか１つに記載の方法。

【0748】

１８２．前記患者が、哺乳動物であり、前記細胞が、哺乳動物細胞である、実施形態１～１８１のいずれか１つに記載の方法。

【0749】

１８３．前記哺乳動物が、ヒトであり、前記細胞が、ヒト細胞である、実施形態１８２に記載の方法。

【0750】

１８４．医薬組成物であって、（ｉ）自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットを含む多能性造血細胞の集団であって、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記多能性造血細胞の集団、及び（ｉｉ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含む、前記医薬組成物。

【0751】

１８５．前記多能性造血細胞が、ＨＳＣまたはＨＰＣである、実施形態１８４に記載の医薬組成物。

【0752】

１８６．前記多能性造血細胞が、胚幹細胞である、実施形態１８４に記載の医薬組成物。

【0753】

１８７．前記多能性造血細胞が、人工多能性幹細胞である、実施形態１８４に記載の医薬組成物。

【0754】

１８８．前記多能性造血細胞が、リンパ系前駆細胞である、実施形態１８４に記載の医薬組成物。

【0755】

１８９．前記多能性造血細胞が、ＣＤ３４＋細胞である、実施形態１８４～１８８のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0756】

１９０．前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むウイルスベクターを用いてエクスビボで形質導入される、実施形態１８４～１８９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0757】

１９１．前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、及びポックスウイルスからなる群から選択される、実施形態１９０に記載の医薬組成物。

【0758】

１９２．前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターである、実施形態１９１に記載の医薬組成物。

【0759】

１９３．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１９２に記載の医薬組成物。

【0760】

１９４．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、アルファレトロウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態１９２に記載の医薬組成物。

【0761】

１９５．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、実施形態１９１～１９４のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0762】

１９６．前記ウイルスベクターが、偽型ウイルスベクターである、実施形態１９１～１９５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0763】

１９７．前記偽型ウイルスベクターが、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ファミリーウイルスからなる群から選択される、実施形態１９６に記載の医薬組成物。

【0764】

１９８．前記偽型ウイルスベクターが、偽型レンチウイルスベクターである、実施形態１９７に記載の医薬組成物。

【0765】

１９９．前記偽型ウイルスベクターが、ＶＳＶ、ＲＤ１１４ウイルス、ＭＬＶ、ＦｅＬＶ、ＶＥＥ、ＨＦＶ、ＷＤＳＶ、ＳＦＶ、狂犬病ウイルス、ＡＬＶ、ＢＩＶ、ＢＬＶ、ＥＢＶ、ＣＡＥＶ、ＳＮＶ、ＣｈＴＬＶ、ＳＴＬＶ、ＭＰＭＶ、ＳＭＲＶ、ＲＡＶ、ＦｕＳＶ、ＭＨ２、ＡＥＶ、ＡＭＶ、トリ肉腫ウイルスＣＴ１０、及びＥＩＡＶから選択されるウイルス由来のエンベロープタンパク質を含む、実施形態１９６～１９８のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0766】

２００．前記偽型ウイルスベクターが、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を含む、実施形態１９９に記載の医薬組成物。

【0767】

２０１．前記多能性造血細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含むポリヌクレオチドを用いてエクスビボでトランスフェクトされる、実施形態１８４～１８９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0768】

２０２．前記多能性造血細胞が、カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチルデキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び／または磁気ビーズを使用してトランスフェクトされる、実施形態２０１に記載の医薬組成物。

【0769】

２０３．前記多能性造血細胞が、エレクトロポレーション、ヌクレオフェクション、スクイーズポレーション、ソノポーレーション、オプティカルトランスフェクション、磁気フェクション、及び／またはインペールフェクションによってトランスフェクトされる、実施形態２０１または２０２に記載の医薬組成物。

【0770】

２０４．前記核酸カセットが、転移性エレメントの一部である、実施形態１８４～１８９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0771】

２０５．前記核酸カセットが、前記多能性造血細胞のＤＮＡ分子への組み込みのためのトランスポザーゼ認識及び切断エレメントを含む、実施形態２０４に記載の医薬組成物。

【0772】

２０６．前記ＤＮＡ分子が、核ＤＮＡ分子またはミトコンドリアＤＮＡ分子であり、前記トランスポザーゼ認識及び前記切断エレメントが、前記核ＤＮＡ分子または前記ミトコンドリアＤＮＡ分子への組み込みを促進する、実施形態２０５に記載の医薬組成物。

【0773】

２０７．前記多能性造血細胞が、前記細胞のゲノム内の標的位置で一本鎖切断または二本鎖切断を触媒するヌクレアーゼを前記細胞に送達することによって得られる、実施形態１８４～１８９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0774】

２０８．前記ヌクレアーゼが、前記細胞のゲノム内の前記標的位置にハイブリダイズするｇＲＮＡと組み合わせて前記細胞に送達される、実施形態２０７に記載の医薬組成物。

【0775】

２０９．前記ヌクレアーゼが、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質である、実施形態２０７または２０８に記載の医薬組成物。

【0776】

２１０．前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９またはＣａｓ１２ａである、実施形態２０９に記載の医薬組成物。

【0777】

２１１．前記ヌクレアーゼが、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである、実施形態２０７または２０８に記載の医薬組成物。

【0778】

２１２．前記細胞が前記ヌクレアーゼと接触している間に、前記細胞が、前記自己抗原結合タンパク質をコードする前記核酸カセットを含む鋳型ポリヌクレオチドと更に接触する、実施形態２０７～２１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0779】

２１３．前記鋳型ポリヌクレオチドが、相同組換えを促進するために、前記標的位置に対して５’に位置する核酸配列及び前記標的位置に対して３’に位置する核酸配列に十分に類似する核酸配列をそれぞれ有する５’相同性アーム及び３’相同性アームを含む、実施形態２１２に記載の医薬組成物。

【0780】

２１４．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドが、前記細胞を、前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターと接触させることによって、前記細胞に送達される、実施形態２１２または２１３に記載の医薬組成物。

【0781】

２１５．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、またはレトロウイルス科ファミリーウイルスである、実施形態２１４に記載の医薬組成物。

【0782】

２１６．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルスである、実施形態２１５に記載の医薬組成物。

【0783】

２１７．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスが、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態２１６に記載の医薬組成物。

【0784】

２１８．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記レトロウイルス科ファミリーウイルスが、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、実施形態２１６または２１７に記載の医薬組成物。

【0785】

２１９．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、組み込み欠損性のレンチウイルスベクターである、実施形態２１４に記載の医薬組成物。

【0786】

２２０．前記ヌクレアーゼ、前記ｇＲＮＡ、及び／または前記鋳型ポリヌクレオチドをコードする前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４からなる群から選択されるＡＡＶである、実施形態２１４に記載の医薬組成物。

【0787】

２２１．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む、実施形態１８４～２２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0788】

２２２．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２２１に記載の医薬組成物。

【0789】

２２３．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２２２に記載の医薬組成物。

【0790】

２２４．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２２３に記載の医薬組成物。

【0791】

２２５．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列を有する、実施形態２２４に記載の医薬組成物。

【0792】

２２６．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２２１に記載の医薬組成物。

【0793】

２２７．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２２６に記載の医薬組成物。

【0794】

２２８．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２２７に記載の医薬組成物。

【0795】

２２９．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列を有する、実施形態２２８に記載の医薬組成物。

【0796】

２３０．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２２１に記載の医薬組成物。

【0797】

２３１．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２３０に記載の医薬組成物。

【0798】

２３２．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２３１に記載の医薬組成物。

【0799】

２３３．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列を有する、実施形態２３２に記載の医薬組成物。

【0800】

２３４．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２２１に記載の医薬組成物。

【0801】

２３５．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２３４に記載の医薬組成物。

【0802】

２３６．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２３５に記載の医薬組成物。

【0803】

２３７．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列を有する、実施形態２３６に記載の医薬組成物。

【0804】

２３８．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、実施形態２２１～２３７のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0805】

２３９．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ１エンハンサーを含む、実施形態１８４～２３８のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0806】

２４０．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２３９に記載の医薬組成物。

【0807】

２４１．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２４０に記載の医薬組成物。

【0808】

２４２．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２４１に記載の医薬組成物。

【0809】

２４３．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列を有する、実施形態２４２に記載の医薬組成物。

【0810】

２４４．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２３９に記載の医薬組成物。

【0811】

２４５．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２４４に記載の医薬組成物。

【0812】

２４６．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２４５に記載の医薬組成物。

【0813】

２４７．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列を有する、実施形態２４６に記載の医薬組成物。

【0814】

２４８．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２３９に記載の医薬組成物。

【0815】

２４９．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２４８に記載の医薬組成物。

【0816】

２５０．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２４９に記載の医薬組成物。

【0817】

２５１．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列を有する、実施形態２５０に記載の医薬組成物。

【0818】

２５２．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２３９に記載の医薬組成物。

【0819】

２５３．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２５２に記載の医薬組成物。

【0820】

２５４．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２５３に記載の医薬組成物。

【0821】

２５５．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列を有する、実施形態２５４に記載の医薬組成物。

【0822】

２５６．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、実施形態２３９～２５５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0823】

２５７．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ２エンハンサーを含む、実施形態１８４～２５６のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0824】

２５８．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２５７に記載の医薬組成物。

【0825】

２５９．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２５８に記載の医薬組成物。

【0826】

２６０．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２５９に記載の医薬組成物。

【0827】

２６１．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列を有する、実施形態２６０に記載の医薬組成物。

【0828】

２６２．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２５７に記載の医薬組成物。

【0829】

２６３．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２６２に記載の医薬組成物。

【0830】

２６４．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２６３に記載の医薬組成物。

【0831】

２６５．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列を有する、実施形態２６４に記載の医薬組成物。

【0832】

２６６．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２５７に記載の医薬組成物。

【0833】

２６７．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２６６に記載の医薬組成物。

【0834】

２６８．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２６７に記載の医薬組成物。

【0835】

２６９．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列を有する、実施形態２６８に記載の医薬組成物。

【0836】

２７０．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２５７に記載の医薬組成物。

【0837】

２７１．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２７０に記載の医薬組成物。

【0838】

２７２．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２７１に記載の医薬組成物。

【0839】

２７３．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列を有する、実施形態２７２に記載の医薬組成物。

【0840】

２７４．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、実施形態２５７～２７３のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0841】

２７５．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ３エンハンサーを含む、実施形態１８４～２７４のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0842】

２７６．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２７５に記載の医薬組成物。

【0843】

２７７．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２７６に記載の医薬組成物。

【0844】

２７８．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２７７に記載の医薬組成物。

【0845】

２７９．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列を有する、実施形態２７８に記載の医薬組成物。

【0846】

２８０．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２７５に記載の医薬組成物。

【0847】

２８１．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２８０に記載の医薬組成物。

【0848】

２８２．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２８１に記載の医薬組成物。

【0849】

２８３．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列を有する、実施形態２８２に記載の医薬組成物。

【0850】

２８４．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２７５に記載の医薬組成物。

【0851】

２８５．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２８４に記載の医薬組成物。

【0852】

２８６．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２８５に記載の医薬組成物。

【0853】

２８７．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列を有する、実施形態２８６に記載の医薬組成物。

【0854】

２８８．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２７５に記載の医薬組成物。

【0855】

２８９．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２８８に記載の医薬組成物。

【0856】

２９０．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２８９に記載の医薬組成物。

【0857】

２９１．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列を有する、実施形態２９０に記載の医薬組成物。

【0858】

２９２．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、実施形態２７５～２９１のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0859】

２９３．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ０エンハンサーを含む、実施形態１８４～２９２のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0860】

２９４．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２９３に記載の医薬組成物。

【0861】

２９５．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２９４に記載の医薬組成物。

【0862】

２９６．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２９５に記載の医薬組成物。

【0863】

２９７．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列を有する、実施形態２９６に記載の医薬組成物。

【0864】

２９８．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２９３に記載の医薬組成物。

【0865】

２９９．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態２９８に記載の医薬組成物。

【0866】

３００．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態２９９に記載の医薬組成物。

【0867】

３０１．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列を有する、実施形態３００に記載の医薬組成物。

【0868】

３０２．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２９３に記載の医薬組成物。

【0869】

３０３．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３０２に記載の医薬組成物。

【0870】

３０４．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３０３に記載の医薬組成物。

【0871】

３０５．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列を有する、実施形態３０４に記載の医薬組成物。

【0872】

３０６．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態２９３に記載の医薬組成物。

【0873】

３０７．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３０６に記載の医薬組成物。

【0874】

３０８．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３０７に記載の医薬組成物。

【0875】

３０９．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列を有する、実施形態３０８に記載の医薬組成物。

【0876】

３１０．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する、実施形態２９３～３０９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0877】

３１１．前記核酸カセットが、リボスイッチに作動可能に連結している、実施形態１８４～３１０のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0878】

３１２．前記リボスイッチへのリガンドの結合が、前記核酸カセットの発現を誘導する、実施形態３１１に記載の医薬組成物。

【0879】

３１３．前記自己抗原結合タンパク質が、一本鎖ポリペプチドである、実施形態１８４～３１２のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0880】

３１４．前記自己抗原結合タンパク質が、ＣＡＲである、実施形態１８４～３１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0881】

３１５．前記キメラ抗原受容体が、抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態３１４に記載の医薬組成物。

【0882】

３１６．前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意に１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態３１５に記載の医薬組成物。

【0883】

３１７．前記抗原認識ドメインが、一本鎖抗体断片であり、任意に、前記一本鎖抗体断片が、ｓｃＦｖである、実施形態３１５または３１６に記載の医薬組成物。

【0884】

３１８．前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＣＤ４、ＣＤ７、またはＩｇＤヒンジドメインである、実施形態３１５～３１７のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0885】

３１９．前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８ヒンジドメインである、実施形態３１８に記載の医薬組成物。

【0886】

３２０．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８、ＦｃＲＩγ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＯＸ４０、またはＭＨＣ（Ｈ２－Ｋｂ）膜貫通ドメインを含む、実施形態３１５～３１９のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0887】

３２１．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、実施形態３２０に記載の医薬組成物。

【0888】

３２２．前記１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、実施形態３１６～３２１のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0889】

３２３．前記１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインである、実施形態３２２に記載の医薬組成物。

【0890】

３２４．前記１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、実施形態３１６～３２３のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0891】

３２５．前記１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインである、実施形態３２４に記載の医薬組成物。

【0892】

３２６．前記キメラ抗原受容体が、Ｎ末端リーダー配列を含む、実施形態３１５～３２５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0893】

３２７．前記抗原認識ドメインが、Ｎ末端リーダー配列を含む、実施形態３１５～３２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0894】

３２８．前記抗原認識ドメインの前記Ｎ末端リーダー配列が、前記キメラ抗原受容体の細胞処理及び細胞膜への局在化中に、前記抗原認識ドメインから切断される、実施形態３２７に記載の医薬組成物。

【0895】

３２９．前記自己抗原結合タンパク質が、多鎖タンパク質である、実施形態１８４～３１２のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0896】

３３０．前記自己抗原結合タンパク質が、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である、実施形態３２９に記載の医薬組成物。

【0897】

３３１．前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である、実施形態１８４～３３０のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【0898】

３３２．実施形態１８４～３３１のいずれか１つに記載の医薬組成物を含むキットであって、前記キットが、前記キットの使用者に、自己免疫疾患を有するヒト患者に前記医薬組成物を投与するように指示する添付文書を更に含む、前記キット。

【0899】

３３３．前記添付文書が、前記キットの使用者に、実施形態１～１８３のいずれか１つに記載の方法を実施するように指示する、実施形態３３２に記載のキット。

【0900】

３３４．自己抗原結合タンパク質をコードする核酸カセットであって、前記核酸カセットが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞において活性である（すなわち、Ｔｒｅｇ系統の細胞において特異的に活性であり、他の細胞型（例えば、他の造血細胞）において活性ではない）１つ以上の系統特異的転写調節エレメントに作動可能に連結している、前記核酸カセット。

【0901】

３３５．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、Ｆｏｘｐ３プロモーターを含む、実施形態３３４に記載の核酸カセット。

【0902】

３３６．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３３５に記載の核酸カセット。

【0903】

３３７．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３３６に記載の核酸カセット。

【0904】

３３８．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３３７に記載の核酸カセット。

【0905】

３３９．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号１の核酸配列を有する、実施形態３３８に記載の核酸カセット。

【0906】

３４０．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３３５に記載の核酸カセット。

【0907】

３４１．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３４０に記載の核酸カセット。

【0908】

３４２．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３４１に記載の核酸カセット。

【0909】

３４３．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号２の核酸配列を有する、実施形態３４２に記載の核酸カセット。

【0910】

３４４．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３３５に記載の核酸カセット。

【0911】

３４５．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３４４に記載の核酸カセット。

【0912】

３４６．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３４５に記載の核酸カセット。

【0913】

３４７．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号３の核酸配列を有する、実施形態３４６に記載の核酸カセット。

【0914】

３４８．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３３５に記載の核酸カセット。

【0915】

３４９．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３４８に記載の核酸カセット。

【0916】

３５０．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３４９に記載の核酸カセット。

【0917】

３５１．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、配列番号４の核酸配列を有する、実施形態３５０に記載の核酸カセット。

【0918】

３５２．前記Ｆｏｘｐ３プロモーターが、転写因子Ｎｒ４ａ及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、実施形態３３５～３５１のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0919】

３５３．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ１エンハンサーを含む、実施形態３３４～３５２のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0920】

３５４．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３５３に記載の核酸カセット。

【0921】

３５５．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３５４に記載の核酸カセット。

【0922】

３５６．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３５５に記載の核酸カセット。

【0923】

３５７．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号５の核酸配列を有する、実施形態３５６に記載の核酸カセット。

【0924】

３５８．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３５３に記載の核酸カセット。

【0925】

３５９．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３５８に記載の核酸カセット。

【0926】

３６０．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３５９に記載の核酸カセット。

【0927】

３６１．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号６の核酸配列を有する、実施形態３６０に記載の核酸カセット。

【0928】

３６２．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３５３に記載の核酸カセット。

【0929】

３６３．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３６２に記載の核酸カセット。

【0930】

３６４．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３６３に記載の核酸カセット。

【0931】

３６５．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号７の核酸配列を有する、実施形態３６４に記載の核酸カセット。

【0932】

３６６．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３５３に記載の核酸カセット。

【0933】

３６７．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３６６に記載の核酸カセット。

【0934】

３６８．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３６７に記載の核酸カセット。

【0935】

３６９．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、配列番号８の核酸配列を有する、実施形態３６８に記載の核酸カセット。

【0936】

３７０．前記ＣＮＳ１エンハンサーが、転写因子ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、Ｓｍａｄ３、及び／またはＦｏｘｏに特異的に結合する、実施形態３５３～３６９のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0937】

３７１．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ２エンハンサーを含む、実施形態３３４～３７０のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0938】

３７２．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３７１に記載の核酸カセット。

【0939】

３７３．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３７２に記載の核酸カセット。

【0940】

３７４．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３７３に記載の核酸カセット。

【0941】

３７５．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号９の核酸配列を有する、実施形態３７４に記載の核酸カセット。

【0942】

３７６．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３７１に記載の核酸カセット。

【0943】

３７７．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３７６に記載の核酸カセット。

【0944】

３７８．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３７７に記載の核酸カセット。

【0945】

３７９．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１０の核酸配列を有する、実施形態３７８に記載の核酸カセット。

【0946】

３８０．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３７１に記載の核酸カセット。

【0947】

３８１．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３８０に記載の核酸カセット。

【0948】

３８２．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３８１に記載の核酸カセット。

【0949】

３８３．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１１の核酸配列を有する、実施形態３８２に記載の核酸カセット。

【0950】

３８４．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３７１に記載の核酸カセット。

【0951】

３８５．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３８４に記載の核酸カセット。

【0952】

３８６．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３８５に記載の核酸カセット。

【0953】

３８７．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、配列番号１２の核酸配列を有する、実施形態３８６に記載の核酸カセット。

【0954】

３８８．前記ＣＮＳ２エンハンサーが、転写因子Ｒｕｎｘ、Ｆｏｘｐ３、Ｅｔｓ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｔａｔ５、ＮＦＡＴ、及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、実施形態３７１～３８７のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0955】

３８９．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ３エンハンサーを含む、実施形態３３４～３８８のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0956】

３９０．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３８９に記載の核酸カセット。

【0957】

３９１．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３９０に記載の核酸カセット。

【0958】

３９２．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３９１に記載の核酸カセット。

【0959】

３９３．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１３の核酸配列を有する、実施形態３９２に記載の核酸カセット。

【0960】

３９４．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３８９に記載の核酸カセット。

【0961】

３９５．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３９４に記載の核酸カセット。

【0962】

３９６．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３９５に記載の核酸カセット。

【0963】

３９７．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１４の核酸配列を有する、実施形態３９６に記載の核酸カセット。

【0964】

３９８．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３８９に記載の核酸カセット。

【0965】

３９９．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態３９８に記載の核酸カセット。

【0966】

４００．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態３９９に記載の核酸カセット。

【0967】

４０１．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１５の核酸配列を有する、実施形態４００に記載の核酸カセット。

【0968】

４０２．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態３８９に記載の核酸カセット。

【0969】

４０３．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態４０２に記載の核酸カセット。

【0970】

４０４．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態４０３に記載の核酸カセット。

【0971】

４０５．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、配列番号１６の核酸配列を有する、実施形態４０４に記載の核酸カセット。

【0972】

４０６．前記ＣＮＳ３エンハンサーが、転写因子Ｆｏｘｏ及び／またはｃ－Ｒｅｌに特異的に結合する、実施形態３８９～４０５のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0973】

４０７．前記１つ以上の系統特異的転写調節エレメントが、ＣＮＳ０エンハンサーを含む、実施形態３３４～４０６のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0974】

４０８．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４０７に記載の核酸カセット。

【0975】

４０９．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態４０８に記載の核酸カセット。

【0976】

４１０．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態４０９に記載の核酸カセット。

【0977】

４１１．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１７の核酸配列を有する、実施形態４１０に記載の核酸カセット。

【0978】

４１２．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４０７に記載の核酸カセット。

【0979】

４１３．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態４１２に記載の核酸カセット。

【0980】

４１４．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態４１３に記載の核酸カセット。

【0981】

４１５．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１８の核酸配列を有する、実施形態４１４に記載の核酸カセット。

【0982】

４１６．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４０７に記載の核酸カセット。

【0983】

４１７．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態４１６に記載の核酸カセット。

【0984】

４１８．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態４１７に記載の核酸カセット。

【0985】

４１９．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号１９の核酸配列を有する、実施形態４１８に記載の核酸カセット。

【0986】

４２０．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、実施形態４０７に記載の核酸カセット。

【0987】

４２１．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列を有する、実施形態４２０に記載の核酸カセット。

【0988】

４２２．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有し、任意に、前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列と少なくとも９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一、またはそれ以上である核酸配列を有する、実施形態４２１に記載の核酸カセット。

【0989】

４２３．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、配列番号２０の核酸配列を有する、実施形態４２２に記載の核酸カセット。

【0990】

４２４．前記ＣＮＳ０エンハンサーが、転写因子Ｓａｔｂ１及び／またはＳｔａｔ５に特異的に結合する、実施形態４０７～４２３のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0991】

４２５．前記核酸カセットが、リボスイッチに作動可能に連結している、実施形態３３４～４２４のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0992】

４２６．前記リボスイッチへのリガンドの結合が、前記核酸カセットの発現を誘導する、実施形態４２５に記載の核酸カセット。

【0993】

４２７．前記自己抗原結合タンパク質が、一本鎖ポリペプチドである、実施形態３３４～４２６のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0994】

４２８．前記自己抗原結合タンパク質が、ＣＡＲである、実施形態３３４～４２７のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0995】

４２９．前記キメラ抗原受容体が、抗原認識ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４２８に記載の核酸カセット。

【0996】

４３０．前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意に１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４２９に記載の核酸カセット。

【0997】

４３１．前記抗原認識ドメインが、一本鎖抗体断片であり、任意に、前記一本鎖抗体断片が、ｓｃＦｖである、実施形態４２９または４３０に記載の核酸カセット。

【0998】

４３２．前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＣＤ４、ＣＤ７、またはＩｇＤヒンジドメインである、実施形態４２９～４３１のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【0999】

４３３．前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８ヒンジドメインである、実施形態４３２に記載の核酸カセット。

【1000】

４３４．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８、ＦｃＲＩγ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＯＸ４０、またはＭＨＣ（Ｈ２－Ｋｂ）膜貫通ドメインを含む、実施形態４２９～４３３のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1001】

４３５．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、実施形態４３４に記載の核酸カセット。

【1002】

４３６．前記１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、実施形態４３０～４３５のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1003】

４３７．前記１つ以上の一次細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインである、実施形態４３６に記載の核酸カセット。

【1004】

４３８．前記１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、実施形態４３０～４３７のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1005】

４３９．前記１つ以上の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つが、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインである、実施形態４３８に記載の核酸カセット。

【1006】

４４０．前記キメラ抗原受容体が、Ｎ末端リーダー配列を含む、実施形態４２９～４３９のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1007】

４４１．前記抗原認識ドメインが、Ｎ末端リーダー配列を含む、実施形態４２９～４４０のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1008】

４４２．前記抗原認識ドメインの前記Ｎ末端リーダー配列が、前記キメラ抗原受容体の細胞処理及び細胞膜への局在化中に、前記抗原認識ドメインから切断される、実施形態４４１に記載の核酸カセット。

【1009】

４４３．前記自己抗原結合タンパク質が、多鎖タンパク質である、実施形態３３４～４２６のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1010】

４４４．前記自己抗原結合タンパク質が、全長抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆａｂ断片、またはＦ（ａｂ’）_２分子である、実施形態４４３に記載の核酸カセット。

【1011】

４４５．前記自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、アクチン、チューブリン、ミオシン、トロポミオシン、ビメンチン、フィブロネクチン、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＶ、ヘパリン、ラミニン、コラゲナーゼ、カルジオリピン、グルコセレブロシド、ホスファチジルエタノールアミン、コレステロール、エノラーゼ、アルドラーゼ、酸性ホスファターゼ、アネキシン３３ｋＤａ、アネキシン６７ｋＤａ、シトクロムＰ４５０Ｃ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、チロシナーゼ、リボヌクレアーゼ、ヒストンＩＩＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、トランスフェリン、フェツイン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、フィブリン、フィブリノーゲン、Ｃ１、Ｃ１ｑ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン４、インターフェロンγ、ＴＮＦαＲ、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＧＡＤ、インスリン、ＩＡ－２、ＺｎＴ８、ＭＢＰ、ＡｃｈＲ、ミオグロブリン、サイログロブリン、ヘモグロビンＡ、スペクトリン、ＴＢＰＰＤ、ＬＰＳ、ＭｕＳＫ、ＬＲＰ４、免疫グロビンのＦｃ部分、シトルリン化ペプチド、カルバミル化ペプチド、チロトロピン受容体、または甲状腺で発現されるタンパク質である、実施形態３３４～４４４のいずれか１つに記載の核酸カセット。

【1012】

４４６．実施形態３３４～４４５のいずれか１つに記載の核酸カセットを含む、ウイルスベクター。

【1013】

４４７．前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、及びポックスウイルスからなる群から選択される、実施形態４４６に記載のウイルスベクター。

【1014】

４４８．前記ウイルスベクターが、レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターである、実施形態４４７に記載のウイルスベクター。

【1015】

４４９．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態４４８に記載のウイルスベクター。

【1016】

４５０．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、アルファレトロウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態４４８に記載のウイルスベクター。

【1017】

４５１．前記レトロウイルス科ファミリーウイルスベクターが、中央ポリプリン帯、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶＰｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、実施形態４４７～４５０のいずれか１つに記載のウイルスベクター。

【1018】

４５２．前記ウイルスベクターが、偽型ウイルスベクターである、実施形態４４７～４５１のいずれか１つに記載のウイルスベクター。

【1019】

４５３．前記偽型ウイルスベクターが、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ファミリーウイルスからなる群から選択される、実施形態４５２に記載のウイルスベクター。

【1020】

４５４．前記偽型ウイルスベクターが、偽型レンチウイルスベクターである、実施形態４５３に記載のウイルスベクター。

【1021】

４５５．前記偽型ウイルスベクターが、ＶＳＶ、ＲＤ１１４ウイルス、ＭＬＶ、ＦｅＬＶ、ＶＥＥ、ＨＦＶ、ＷＤＳＶ、ＳＦＶ、狂犬病ウイルス、ＡＬＶ、ＢＩＶ、ＢＬＶ、ＥＢＶ、ＣＡＥＶ、ＳＮＶ、ＣｈＴＬＶ、ＳＴＬＶ、ＭＰＭＶ、ＳＭＲＶ、ＲＡＶ、ＦｕＳＶ、ＭＨ２、ＡＥＶ、ＡＭＶ、トリ肉腫ウイルスＣＴ１０、及びＥＩＡＶから選択されるウイルス由来のエンベロープタンパク質を含む、実施形態４５２～４５４のいずれか１つに記載のウイルスベクター。

【1022】

４５６．前記偽型ウイルスベクターが、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を含む、実施形態４５５に記載のウイルスベクター。

【1023】

他の実施形態
記載された開示の様々な改変及び変形は、本開示の範囲及び趣旨から逸脱することなく当業者には明らかであろう。本開示は、特定の実施形態に関連して記載されているが、特許請求される本開示はかかる特定の実施形態に必要以上に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者には明らかである、本開示を実行するための記載された様式の様々な改変は、本開示の範囲内にあることが意図される。

【1024】

他の実施形態は、特許請求の範囲内である。

【図1A】