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特表2024-533523β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼを標的とするベクター
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-12
(54)【発明の名称】β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼを標的とするベクター
(51)【国際特許分類】
C07K 5/10 20060101AFI20240905BHJP
A61K 47/62 20170101ALI20240905BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240905BHJP
C07K 14/76 20060101ALI20240905BHJP
【ＦＩ】
C07K5/10
A61K47/62
A61P35/00
A61P43/00 123
C07K14/76
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024516583
(86)(22)【出願日】2022-09-13
(85)【翻訳文提出日】2024-04-23
(86)【国際出願番号】 EP2022075426
(87)【国際公開番号】W WO2023041531
(87)【国際公開日】2023-03-23
(31)【優先権主張番号】2109610
(32)【優先日】2021-09-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】504007888
【氏名又は名称】センター ナショナル デ ラ レシェルシェ サイエンティフィーク
(71)【出願人】
【識別番号】510256920
【氏名又は名称】ユニヴェルシテ ドゥ ポワティエ
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＤＥ ＰＯＩＴＩＥＲＳ
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】パポー，セバスチャン
(72)【発明者】
【氏名】ルヌー，ブリジット
(72)【発明者】
【氏名】シャトレ，レミ
【テーマコード（参考）】
4C076
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF68
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA13
4H045CA40
4H045DA70
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA10
4H045FA71
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
Ａは、抗癌剤であり、
Ｙは、電子求引基又は電子供与基であり、
Ｌは、リンカー－Ａ１－Ａ２－Ａ３－Ａ４－Ａ５－Ａ６－を表し、
Ａ１、Ａ３、及びＡ５は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基を表し、
Ａ２は、クリックケミストリーによって得られる基を表し、
Ａ４は、少なくとも１個の酸素原子によって中断された（Ｃ１～Ｃ３２）アルキレン基であり、
Ａ６は、－ＮＲｃ－、－Ｏ－、及び－Ｓ－からなる群から選択される基であり、Ｒｃは、Ｈ又は（Ｃ１～Ｃ１２）アルキル基を表し、
Ｌ’は、アミノ、ヒドロキシ、又はチオール官能基と反応することができる基である、化合物に関する。
式中、
Ａは、抗癌剤であり、
Ｙは、電子求引基又は電子供与基であり、
Ｌは、リンカー－Ａ１－Ａ２－Ａ３－Ａ４－Ａ５－Ａ６－を表し、
Ａ１、Ａ３、及びＡ５は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基を表し、
Ａ２は、クリックケミストリーによって得られる基を表し、
Ａ４は、少なくとも１個の酸素原子によって中断された（Ｃ１～Ｃ３２）アルキレン基であり、
Ａ６は、－ＮＲｃ－、－Ｏ－、及び－Ｓ－からなる群から選択される基であり、Ｒｃは、Ｈ又は（Ｃ１～Ｃ１２）アルキル基を表し、
Ｌ’は、アミノ、ヒドロキシ、又はチオール官能基と反応することができる基である、化合物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式（Ｉ）の化合物であって、【化1】
式中、
Ａは、抗癌剤であり、
Ｙは、電子求引基又は電子供与基であり、
Ｌは、以下の式（ＩＩ）に対応するリンカーを表し、
－Ａ１－Ａ２－Ａ３－Ａ４－Ａ５－Ａ６－ （ＩＩ）
式中、
Ａ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基を表し、
Ａ２は、クリックケミストリーによって得られる基を表し、
Ａ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基を表し、
Ａ４は、少なくとも１個の酸素原子によって中断された（Ｃ１～Ｃ３２）アルキレン基を表し、好ましくはポリオキシアルキレン基であり、
Ａ５は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基を表し、
Ａ６は、－ＮＲｃ－、－Ｏ－、及び－Ｓ－からなる群から選択される基であり、Ｒｃは、Ｈ又は（Ｃ１～Ｃ１２）アルキル基を表し、
Ｌ’は、アミノ官能基、ヒドロキシ官能基、又はチオール官能基、好ましくはチオール官能基と反応することができる基を表す、化合物、
及びその薬学的に許容される塩、又はそのラセミジアステレオマー若しくはエナンチオマー混合物。
【請求項2】
Ａ２は、トリアゾール基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
以下の式（ＩＩＩ）を有する、【化2】
式中、Ａ、Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、及びＬ’は請求項１で定義した通りである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項4】
Ａ４は、式－（ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２）ｎ－の基であり、ｎは、１～１２からなる整数である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
以下の式（ＩＶ）に一致する、【化3】
式中、ｉは、１～６の整数であり、
ｊは、１～６の整数であり、
ｎは、１～１２の整数であり、
Ａ及びＬ’は、請求項１で定義した通りである、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項6】
Ｌ’は、マレイミドカプロイル基である、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項7】
Ａは、モノメチルアウリスタチンＥ、ドキソルビシン、又はその誘導体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
以下の式に一致する、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。【化4】
【請求項9】
アルブミン分子又はその断片若しくは誘導体に共有結合によって結合した、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物を含むプロドラッグ。
【請求項10】
医薬品として使用するための、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又は請求項９に記載のプロドラッグ。
【請求項11】
請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物若しくは請求項９に記載のプロドラッグ、又は薬学的に許容される塩、並びに少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項12】
癌の治療及び／又は予防に使用するための、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又は請求項９に記載のプロドラッグ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼを標的とする新規ベクター、及び対応するプロドラッグに関する。本発明はまた、癌の治療に使用するための当該ベクター及びプロドラッグに関する。
【背景技術】
【0002】
癌及び炎症性疾患は、現時点で最も一般的な病理学的状態の１つである。様々な可能な治療様式の中で、化学療法は、リンパ腫及び白血病などの循環腫瘍、並びに転移に対してのみ使用可能である。化学療法において想定することができる活性成分の中には、特定の天然ペプチド化合物、例えば、特に、４つのアミノ酸からなり、そのうちの３つが特異的である、海洋界に由来する直鎖状天然化合物であるドラスタチン１０がある。ドラスタチン１０の合成誘導体も現在入手可能であり、好ましい。それらは、より具体的には、アウリスタチンＰＥ、アウリスタチンＥ、及びモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含む。ドラスタチン、アウリスタチンＥ、及びそれらの誘導体は、チューブリンの重合を阻害し、したがって細胞分裂を防止する（抗有糸分裂）特性を有する。しかしながら、ドラスタチンファミリーのこれらの活性成分は、残念ながら、臨床的に使用される他の抗癌活性薬剤が行うように、腫瘍細胞に関して満足な選択性を欠いている。実際、それらは健康な組織も標的とする。この非選択的破壊は、重篤な副作用を引き起こし、ほとんどの場合、治療の早期停止につながる。したがって、健康な器官に影響を及ぼすことなく腫瘍を選択的に破壊することができる新規な抗癌剤の開発は、癌に対抗することにおいて大きな関心が寄せられている。
【0003】
アルブミンにインビボで結合することができるグルクロン酸化ベクターでβ－グルクロニダーゼを標的化することは、多種多様な悪性病変を治療するための非常に有効な戦略である。腫瘍微小環境におけるその発現は、この酵素を種々の活性成分の選択的放出のための選択の標的にする。一方、ベクター化されたポリ化学療法を開発する目的で、固形腫瘍の細胞外マトリックス中に高濃度で存在する他の酵素の発見は非常に興味深い。β－グルクロニダーゼの活性は、それが作用するのに最適ではないｐＨ（６～６．５）のために、腫瘍微小環境において実際に低下する。したがって、悪性組織への大量のベクターの流入によって引き起こされるこの酵素の飽和は、この標的化戦略の限界を構成し得る。これに関連して、β－グルクロニダーゼ以外の酵素を標的とする新しいグリコシル化トリガーの開発は、この問題を克服するための興味深い代替法である。実際、異なる酵素の基質ベクターのカクテルの使用は、単一の酵素の活性の飽和を制限することを可能にし、したがって、より高濃度の抗癌剤の腫瘍への選択的放出をもたらすはずである。更に、このアプローチは、ベクター化されたポリ化学療法の間に、その放出が特異的グリコシダーゼによって制御される異なる活性分子を標的化するために適切であり得、この戦略は、現在までまだ使用されていない。
【0004】
β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼは、大多数の細胞に存在するリソソームグリコシダーゼである。それは、糖タンパク質上に存在するＮ－アセチルグルコサミン残基の選択的加水分解活性を有し、その特性の活性化又は不活性化に寄与する。この設計の存在は、Ｎ－アセチルグルコサミン残基を固定するＤ－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの活性とβ－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの活性との間の平衡に由来する。この平衡から、細胞増殖にとって重要である多数のシグナル伝達プロセスが生じる。この恒常性の不均衡は、癌の特定の症例において観察され、タンパク質における発癌特性の出現をもたらした（Ａ．Ｐｅｉｘｏｔｏ，Ｍ．Ｒｅｌｖａｓ－Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａｚｅｖｅｄｏ，Ｌ．Ｌ．Ｓａｎｔｏｓ，Ｊ．Ａ．Ｆｅｒｒｅｉｒａ，Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．，２０１９，９，３８０；Ｈ．Ｎｉｅ，Ｈ．Ｊｕ，Ｊ．Ｆａｎ，Ｘ．Ｓｈｉ，Ｙ．Ｃｈｅｎｇ，Ｘ．Ｃａｎｇ，Ｚ．Ｚｈｅｎｇ，Ｘ．Ｄｕａｎ，Ｗ．Ｙｉ，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０２０，１１，３６Ｒ．Ｍｕｎｉｚ ｄｅ Ｑｕｅｉｒｏｚ，Ｒ．Ｍａｄａｎ，Ｊ．Ｃｈｉｅｎ，Ｗ．Ｂ．Ｄｉａｓ，Ｃ．Ｓｌａｗｓｏｎ，ＪＢＣ，２０１６，２９１，１８８９７－１８９１４；Ｚ．Ｍａ，Ｋ．Ｖｏｓｓｅｌｌｅｒ，ＪＢＣ，２０１４，２８９，３４４５７－３４４６５ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｈａｎｏｖｅｒ，Ｗ．Ｃｈｅｎ，Ｍ．Ｒ．Ｂｏｎｄ，Ｊ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇ．Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．，２０１８，５０，１５５－１７３）。
【0005】
β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの濃度を高めることは、活性成分の選択的放出のための興味深い特徴であるが、この酵素の基質化合物は治療目的のためにほとんど開発されていない。
【発明の概要】
【0006】
したがって、本発明の目的は、酵素β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの新規ベクターを提供することである。
【0007】
したがって、本発明は、以下の式（Ｉ）の化合物であって、
【0008】
【化1】
式中、
Ａは、抗癌剤であり、
Ｙは、電子求引基又は電子供与基であり、
Ｌは、以下の式（ＩＩ）に対応するリンカーを表し、
－Ａ１－Ａ２－Ａ３－Ａ４－Ａ５－Ａ６－ （ＩＩ）
式中、
Ａ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基、特に－ＣＨ２－を表し、
Ａ２は、クリックケミストリーによって得られる基、特にトリアゾールを表し、
Ａ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基、特に－ＣＨ２－を表し、
Ａ４は、少なくとも１個の酸素原子によって中断された（Ｃ１～Ｃ３２）アルキレン基を表し、好ましくはポリオキシアルキレン基であり、特に
－（ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２）１０－、
Ａ５は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基、特に－ＣＨ２－を表し、
Ａ６は、－ＮＲｃ－、－Ｏ－及び－Ｓ－からなる群から選択される基であり、Ｒｃは、Ｈ又は（Ｃ１～Ｃ１２）アルキル基、特に－ＮＨ－を表し、
Ｌ’は、アミノ、ヒドロキシ又はチオール官能基、好ましくはチオール官能基と反応することができる基を表す、化合物、
及びその薬学的に許容される塩、又はそのラセミジアステレオマー若しくはエナンチオ
マー混合物に関する。
【0009】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、抗癌剤Ａ及びβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの基質のベクターである。
【0010】
式（Ｉ）の化合物は、不斉中心を有することができる。非対称に置換された原子を含む本発明の化合物は、光学活性形態又はラセミ形態で単離することができる。ラセミ形態の分割又は光学活性出発物質からの合成などによって、光学活性形態を調製する方法は、本発明の分野において周知である。立体化学又は異性体形態が具体的に示されない限り、化合物の全てのキラル、ジアステレオ異性体、ラセミ形態、及び全ての幾何異性体形態が対象とされる。
【0011】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的に又は他の点で望ましくないものではない塩を指す。多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基及び／若しくはカルボキシル基又はこれらに類似の基の存在によって、酸塩及び／又は塩基塩を形成することができる。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸及び有機酸から調製することができ、薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基から調製することができる。薬学的に許容される塩の概説については、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｄ，ｖｏｌ．６６，１）を参照されたい。「薬学的に許容される塩」という表現は、非毒性の薬学的に許容される無機酸若しくは有機酸又は無機塩基若しくは有機塩基を用いて形成される非毒性の塩を指す。例えば、塩は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸及び類似の酸から誘導される塩、並びに有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、フマル酸、メタンスルホン酸、及びトルエンスルホン酸及び類似の酸から調製される塩を含む。
【0012】
上述したように、Ａは抗癌剤である。
【0013】
一実施形態によれば、抗癌剤は、細胞増殖抑制剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡインターカレーター、トポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害剤、チューブリン阻害剤、アルキル化剤、ネオカルチノスタチン、カリチアマイシン、ダイネマイシン又はスピラマイシンＡ、リボソーム阻害剤、チロシンホスホキナーゼ阻害剤、分化誘導化合物、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、低分子量免疫調節剤、又は癌性幹細胞を標的とする低分子量から選択される。
【0014】
更により具体的には、本発明による抗癌剤は、細胞増殖抑制剤及び代謝拮抗剤、例えば、５－フルオロウラシル、５－フルオロシチジン、５－フルオロウリジン、シトシンアラビノシド、若しくはメトトレキサートから、ＤＮＡインターカレーター、例えば、ドキソルビシン、ダウノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、若しくはミトキサントロンから、トポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害剤、例えば、カンプトテシン、エトポシド、又はｍ－ＡＭＳＡから、チューブリン阻害剤、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、タキソール、ノコダゾール、若しくはコルチシンから、アルキル化剤、例えば、シクロホスファミド、ミトマイシンＣ、アクルマイシン、シスプラチン、マスタードガスホスホアミド、メルファラン、ブレオマイシン、Ｎ－ビス（２－クロロエチル）－４－ヒドロキシアニリン、ネオカルチノスタチン、カリケアマイシン、ダイネマイシン、若しくはスピラマイシンＡから、又はリボソーム阻害剤、例えば、ベルカリンＡから、チロシンホスホキナーゼ阻害剤、例えば、ケルセチン、ゲニスタイン、エルブスタチン、チルホスチン、若しくはチロホスチン及びそれらの誘導体から、分化を誘導する化合物、例えば、レチノイン酸、酪酸、ホルボールエステル、若しくはアクラシノマイシンから、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、例えば、ＣＩ－９９４又はＭＳ２７５から、免疫調節剤、例えば、イミキモドから、並びに癌性幹細胞を標的とする小分子、例えば、ヘッジホッグ阻害剤様シクロパミン誘導体からのものである。
【0015】
一実施形態によれば、本発明による抗癌剤は、コンポスタチンＡに類似した血管形成阻害剤、シクロパミンなどのヘッジホッグ経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、又は免疫賦活剤から選択される。
【0016】
ドラスタチンのファミリーは、少なくとも４種のアミノ酸の構造を有する化合物のクラスを表し、その少なくとも３種は特異的であり、すなわち、天然に最も一般的に見出される２０種のアミノ酸とは異なる。
【0017】
特に、本発明に適したものによる化合物を記載している文献の国際公開第２００４／０１０９５７号が参照され得る。
【0018】
本発明の特に好ましい実施形態では、Ａは、ドラスタチン１０、アウリスタチンＰＥ、アウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＥ、及びそれらの誘導体に由来する基、好ましくはモノメチルアウリスタチンＥ又はその誘導体に由来する基を表す。
【0019】
ドラスタチン１０とアウリスタチンサブファミリーの合成化合物との間の構造的な差異は、特に、アウリスタチンＰＥ、アウリスタチンＥ、又はモノメチルアウリスタチンの場合、ノルエフェドリン単位による、ドラスタチン１０のＣ末端位置におけるアミノチアゾールフェネチル基の置換にある。
【0020】
本発明の文脈において、特に好ましい一実施形態では、ドラスタチンファミリーの基は、有利にはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）及びその誘導体から選択される。
【0021】
本発明の目的のために、ドラスタチン１０、アウリスタチンＰＥ、アウリスタチンＥ、又はモノメチルアウリスタチンＥの誘導体は、その活性薬剤の少なくとも１つに非常に関連した化学構造を有し、ドラスタチンファミリーの化合物に起因する抗有糸分裂特性を有する。
【0022】
その構造的差異は、特に、例えば、それを構成する４種のアミノ酸のうちの少なくとも１つの少なくとも１つの側鎖上の置換であり得る。この置換は、直鎖、環状、及び／又は分岐アルキル基、アリール基、複素環、又は炭素環を含む、又は表すように行われ得る。
【0023】
この構造的差異はまた、この機能を考慮中のリンカーアームとの共有結合の確立と適合させるように、例えば、Ｎ末端位置におけるその第三級アミンのレベルでの、ドロスタチン１０（ｄｏｌｏｓｔａｔｉｎｅ １０）、アウリスタチンＰＥ、又はアウリスタチンＥ分子の改変からなり得る。
【0024】
これらの目的に最も適した改変を選択することは、当業者の一般知識の一部である。
【0025】
好ましい実施形態によれば、Ａは、モノメチルアウリスタチンＥ、ドキソルビシン、又はその誘導体である。
【0026】
好ましくは、Ａは、以下の式（Ａ－１）で表される。
【0027】
【化2】
【0028】
本発明の文脈において、「電子求引基」は、電子を引き付ける原子又は原子群の特性を指す。
【0029】
例えば、基ＮＯ２、エステル、ＣＮ基、ハロゲン原子、及びアルコキシ基からなる群から選択される基を挙げることができる。好ましくは、当該基は、ＮＯ２基、ＣＯ２Ｍｅ基、ＣＮ基、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子、塩素原子、及びメトキシ基からなる群から選択される。
【0030】
本発明の文脈において、「電子供与基」は、電子を供与する原子又は原子群の特性を指す。
【0031】
電子供与性基は、フェニル基、ヒドロキシ基（ＯＨ）、Ｃ１～Ｃ１０、好ましくはＣ１～Ｃ６の直鎖又は分岐アルキル、ハロゲン原子、水素原子、及びアルコキシ基からなる群から選択される基を指す。
【0032】
好ましくは、Ｙは、電子求引基であり、特にハロゲン原子、ＮＯ２原子、及びＣＦ３原子からなる群から選択される。好ましくは、Ｙは、ＮＯ２である。
【0033】
本発明による式（Ｉ）の化合物において、上で示したように、リンカーＬは、基Ａ６が基Ｌ’に結合し、基Ａ１が基－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ａ及び上記フェニルを有する炭素原子に結合するようなものである。
【0034】
本出願によれば、「アルキル」という用語は、特に明記しない限り、鎖中に１～１２個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖であり得る飽和又は不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキル基は、鎖中に１～６個の炭素原子を有する。「分岐」は、メチル、エチル、又はプロピルなどの１つ以上の低級アルキル基が直鎖アルキル鎖に結合されていることを意味する。「低級アルキル」は、直鎖又は分岐であり得る鎖中の約１～約４個の炭素原子を意味する。
【0035】
本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、別段の記載がない限り、１～６個の炭素原子を含む二価基を指す。アルキレン基は、水素原子が１個少ないアルキル基に相当する。当該基は、それが直鎖状である場合、特に、式（ＣＨ２）ｎで表すことができ、式中、ｎは１～６の整数である。
【0036】
好ましくは、式（Ｉ）において、Ａ１は、－ＣＨ２－基を表す。
【0037】
本発明によれば、式（Ｉ）において、Ａ２は、クリックケミストリーによって得られる
基である。したがって、この基は、クリックケミストリー反応によって得られる。
基である。したがって、この基は、クリックケミストリー反応によって得られる。
【0038】
これらのクリックケミストリー反応としては、特に、不飽和化合物の付加環化が挙げられ、中でも、ジエノフィルとジエンとの間のディールス－アルダー反応、特にアジド－アルキン１，３－双極性付加環化、好ましくは銅触媒アジド－アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）が挙げられる。
【0039】
他のクリックケミストリー反応は、アルケン及び混合ジスルフィドからのチオエーテルの形成などのチオール官能基を伴う反応、並びに非アルドール型の求電子性カルボニル基を伴う反応、例えば、オキシアミンからのオキシムエーテルの形成、ヒドラジンからのヒドラゾンの形成、又はチオセミカルバジドからのチオセミカルバゾンの形成を含む。
【0040】
クリックケミストリー反応として、チオエステル及びアミドの形成をもたらすチオカルボン酸又はチオエステルが関与する反応、並びにアジドとホスフィンとの間の反応（シュタウディンガーライゲーションなど）も挙げることができる。
【0041】
好ましくは、基Ａ２は、２つの反応性官能基間の反応によって得られ、当該反応は、
アジドとアルキンとの反応、
アルデヒド又はケトンとヒドラジドとの反応、
アルデヒド又はケトンとオキシアミンとの反応、
アジドとホスフィンとの反応、
アルケンとテトラジンとの反応、
イソニトリルとテトラジンとの反応、及び
チオールとアルケンとの反応（チオール－エン反応）からなる群から選択される。
アジドとアルキンとの反応、
アルデヒド又はケトンとヒドラジドとの反応、
アルデヒド又はケトンとオキシアミンとの反応、
アジドとホスフィンとの反応、
アルケンとテトラジンとの反応、
イソニトリルとテトラジンとの反応、及び
チオールとアルケンとの反応（チオール－エン反応）からなる群から選択される。
【0042】
好ましい一実施形態によれば、Ａ２は、トリアゾール基である。
【0043】
好ましくは、Ａ２はトリアゾール基、好ましくは以下の式（ＩＩ－１）に対応する基である。
【0044】
【化3】
【0045】
一実施形態によれば、前述の式（ＩＩ）において、Ａ３は、－ＣＨ２－基を表す。
【0046】
一実施形態によれば、前述の式（ＩＩ）において、Ａ４は、ポリオキシアルキレン基を表す。
【0047】
好ましくは、Ａ４は、式－（ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２）ｎ－の基であり、ｎは、１～１２の整数である。特に、Ａ４は、－（ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２）１０－基である。
【0048】
一実施形態によれば、前述の式（ＩＩ）において、Ａ５は、－ＣＨ２－基を表す。
【0049】
一実施形態によれば、前述の式（ＩＩ）において、Ａ６は、－ＮＨ－基である。
【0050】
式（Ｉ）において、上記のように、Ｌ’は、アミノ官能基、ヒドロキシル官能基、又はチオール官能基と反応することができる基である。
【0051】
本発明の文脈において、「アミノ官能基、ヒドロキシル官能基、又はチオール官能基と反応することができる基」は、第二級アミノ官能基、ヒドロキシル官能基、又はチオール官能基と相互作用することができ、したがって、共役分子と、この共有結合官能基の生成に適合するこの官能基を有する別個の化学物質との間に共有結合を確立することができる官能基又は化学単位を有する基、一般に炭化水素基を示す。本発明の文脈において、この別個の化学物質は、より具体的には、生体に天然に存在する高分子であり、有利には、ヒト血清アルブミンなどの内因性アルブミンの分子である。
【0052】
一実施形態によれば、Ｌ’は、マレイミド基を含む。
【0053】
一実施形態によれば、Ｌ’は、以下の式に一致する。
【0054】
【化4】
式中、Ｌ’’は、電子求引基、特にＣＦ３などのハロ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基によって任意に置換された（Ｃ１～Ｃ１２）アルキレン基、又は電子求引基、特にハロゲンによって任意に置換されたフェニレン基を表す。
【0055】
好ましい実施形態によれば、Ｌ’は、マレイミドカプロイル基である。
【0056】
一実施形態によれば、本発明の化合物は、以下の式（ＩＩＩ）に一致し、
【0057】
【化5】
式中、Ａ、Ａ１、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、及びＬ’は上で定義した通りである。
【0058】
好ましい一実施形態によれば、本発明の化合物は、以下の式（ＩＶ）に一致し、
【0059】
【化6】
式中、ｉは、１～６の整数であり、
ｊは、１～６の整数であり、
ｎは、１～１２の整数であり、
Ａ及びＬ’は、上で定義した通りである。
【0060】
本発明による好ましい化合物は、以下の式に一致する。
【0061】
【化7】
【0062】
本発明はまた、アルブミン分子、又はその断片若しくは誘導体に共有結合によって連結された、上で定義したような式（Ｉ）の化合物を含むプロドラッグに関する。
【0063】
本発明の意味の範囲内で、「プロドラッグ」という用語は、生物内で抗癌剤、特にドラスタチンファミリーの化合物を不活性化形態で運搬することができ、かつβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの作用下でその化合物を特異的に標的化された器官、組織又は細胞内に放出することができる分子を指す。
【0064】
このようなプロドラッグは、特に、以下の式（Ｖ）に一致し、
【0065】
【化8】
式中、Ａ、Ｌ、及びＹは、式（Ｉ）において上で定義した通りである。
【0066】
単位Ｌ’１は、一方では、遊離アミノ官能基、ヒドロキシル官能基、又はチオール官能基、特に高分子、有利にはアルブミン分子、更により有利には血清アルブミンが有する遊離チオール官能基と反応することができる単位を含む基Ｌ’の間の反応から誘導される。
【0067】
本出願において、プロドラッグは、高分子、好ましくはアルブミン分子を用いてインビボ又はインビトロで形成され得る。
【0068】
したがって、内因性又は外因性アルブミン、特にヒト血清アルブミン、組換えアルブミン又はアルブミン断片が想定され得る。
【0069】
一実施形態によれば、本発明によって記載されるコンジュゲートの分子と、内因性アルブミンの分子、特にヒト血清アルブミン分子又はその誘導体との間の共有結合は、インビボで実行される。
【0070】
一実施形態では、本発明によるプロドラッグは、内因性アルブミンの分子のシステイン－３４位の硫黄チオエーテル結合によって連結された式（Ｉ）を有する本発明による少なくとも１つのコンジュゲート分子を含む。
【0071】
実際に、共有結合が、例えば、一方では、チオール官能基と反応することができる基を有する化合物と、ヒトアルブミンのシステイン－３４位のチオール官能基との間でインビボで自発的に確立されることが示されている（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．２００２，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）。
【0072】
本発明はまた、基－Ｌ’１－アルブミンが以下の式（ＶＩ）に相当する、前述の式（Ｖ）のプロドラッグに関する。
【0073】
【化9】
式中、Ｌ’は上記で定義した通りであり、ｐは１～６の整数であり、好ましくは５である。
【0074】
別の特定の実施形態によれば、本発明によるプロドラッグは、アルブミン分子、組換えアルブミン分子、又はアルブミン分子の断片若しくはその誘導体に共有結合によって連結されたコンジュゲートの少なくとも１つの分子によってインビトロで形成され得る。
【0075】
本発明の意味の範囲内で、「アルブミン分子の断片」は、このようにして生成されたプロドラッグの満足のいく生物学的利用能、腫瘍組織への透過性、及び健常組織の内皮バリアへの不透過性を保証するのに十分なサイズを有するアルブミン分子の断片を指すことが重要である。
【0076】
この特定の実施形態では、その基Ｌ’による一般式（Ｉ）のコンジュゲートとアルブミン分子、組換えアルブミン分子又はアルブミン分子の断片との間のインビトロ結合は、アルブミン分子、組換えアルブミン分子又はアルブミン分子の断片に存在する遊離及び相補的反応性官能基を用いて生成することができる。
【0077】
特定の実施形態では、アルブミン分子の断片は、内因性アルブミン配列のシステイン－３４位に対応するシステインを含み得る。
【0078】
いずれの予想にも反して、一般式（Ｉ）のコンジュゲートとアルブミン分子との結合は、そのように形成されたプロドラッグの以下の能力に全く影響を及ぼさない。
－処置される組織の微小環境において運搬され、特異的に標的化される、
－β－グルクロニダーゼによって処置される組織の微小環境と切断される、
－基Ｎ－アセチルグルコサミニルの切断後に、ドラスタチンファミリーの化合物を表すラジカルを放出するようにリンカーアームの再配列を受ける。
－処置される組織の微小環境において運搬され、特異的に標的化される、
－β－グルクロニダーゼによって処置される組織の微小環境と切断される、
－基Ｎ－アセチルグルコサミニルの切断後に、ドラスタチンファミリーの化合物を表すラジカルを放出するようにリンカーアームの再配列を受ける。
【0079】
更に、基Ｌ’による一般式（Ｉ）のコンジュゲートと、アルブミン分子、特に内因性アルブミン分子のアミノ官能基、ヒドロキシ官能基、又はチオール官能基との間の結合は、こうして放出されたドラスタチン系化合物がその生物学的活性、すなわちその抗有糸分裂活性を発揮する能力に全く影響を及ぼさない。
【0080】
最後に、基Ｌ’による一般式（Ｉ）のコンジュゲートと、アルブミン分子、特に内因性アルブミン分子のアミノ官能基、ヒドロキシ官能基、又はチオール官能基との間の結合は、腎臓によるプロドラッグの除去を制限する。したがって、本発明によるプロドラッグの血中半減期は、Ｎ－アセチルグルコサミニルラジカルによって官能化されたドラスタチンファミリー化合物によって表されるプロドラッグの血中半減期と比較して増加している。
【0081】
本発明の別の実施形態では、プロドラッグのアルブミン分子又はアルブミン断片は、特にグリコシル化又はＰＥＧ化によって改変され得る。
【0082】
本発明はまた、医薬品として使用するための、式（Ｉ）を有する上で定義したような化合物若しくはコンジュゲート、又は上で定義したようなプロドラッグに関する。
【0083】
本発明はまた、特に、上で定義したような化合物又は上で定義したようなプロドラッグ又は薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【0084】
式（Ｉ）の本発明の化合物を単独で投与することは可能であるが、それらを医薬組成物の形態で提供することが好ましい。本発明に従って有用な、獣医学的使用及びヒト使用の両方のための医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤又は担体及び任意で他の治療成分とともに、上で定義したような式（Ｉ）に一致する少なくとも１つの化合物を含む。
【0085】
いくつかの好ましい実施形態では、併用療法に必要な活性成分は、同時投与のために単一の医薬組成物中で組み合わせることができる。
【0086】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語及びその文法上の変形は、組成物、支持体、希釈剤、及び試薬に言及する場合、互換可能に使用され、そしてこの物質が、望ましくない生理学的効果、例えば、悪心、眩暈、胃障害などを生じることなく、哺乳動物に投与され得ることを意味する。
【0087】
その中に溶解又は分散された活性成分を含有する医薬組成物の調製は、当技術分野においてよく理解されており、配合物に基づいて限定される必要はない。典型的には、これらの組成物は、液体溶液又は懸濁液のいずれかの形態の注射可能な製品の形態で調製される。しかしながら、使用前の液体中の溶液又は懸濁液に適した固体形態も調製することができる。調製物は乳化することもできる。特に、医薬組成物は、固体剤形、例えば、ゲルカプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、錠剤、又は顆粒剤に製剤化することができる。
【0088】
ビヒクルの選択及びビヒクル中の活性物質の含有量は、一般に、活性化合物の溶解度及び化学特性、特定の投与様式、並びに製薬実務において観察される規定に応じて決定される。例えば、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、並びにデンプン、アルギン酸、及びステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びタルクなどの滑沢剤と結合した特定の複合ケイ酸塩などの崩壊剤を、錠剤の調製に使用することができる。カプセルを調製するために、ラクトース及び高分子量ポリエチレングリコールを使用することが有利である。水性懸濁液が使用される場合、それらは、乳化剤又は懸濁を容易にする薬剤を含有し得る。スクロース、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、及びクロロホルム又はそれらの混合物などの希釈剤も使用することができる。
【0089】
本発明による式（Ｉ）の化合物若しくはコンジュゲート、プロドラッグ又は医薬組成物は、経口、非経口（皮下、静脈内又は筋肉内）又は皮膚及び粘膜への局所適用によって局所的に投与することができる。
【0090】
本発明によるコンジュゲート、プロドラッグ、又は医薬組成物は、特に、単独で、又は化学療法若しくは放射線療法と組み合わせて、又は例えば他の治療剤、特に抗癌剤及び抗有糸分裂剤と組み合わせて、また抗炎症剤と組み合わせて投与することができる。
【0091】
本発明に適した投与量は、本発明の分野で通常使用される日常的なアプローチに従って決定することができる。当該投与量の調整は、明らかに当業者の一般的能力の一部である。
【0092】
実際、投与量は、特に、治療される個体の体重、年齢及び性別、並びに治療される疾患の進行に依存する。
【0093】
本発明はまた、癌の治療及び／又は予防のために使用するための、本発明による式（Ｉ）の化合物、又は上で定義したようなプロドラッグに関する。
【0094】
本発明はまた、本発明による、一般式（Ｉ）のコンジュゲート、上で定義したようなプロドラッグ、特に一般式（Ｖ）のプロドラッグ、又は医薬組成物の投与を含む、癌を治療するための方法に関する。
【0095】
本発明はまた、式（Ｉ）のコンジュゲート、上で定義したようなプロドラッグ、特に一般式（Ｖ）のプロドラッグ、又は本発明による医薬組成物を、化学療法、放射線療法、少なくとも１種の抗炎症剤による治療、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される別の治療と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法に関する。
【0096】
一般式（Ｉ）のコンジュゲート若しくは化合物、本発明によるプロドラッグ、特に一般式（Ｖ）のプロドラッグ、又は本発明による医薬組成物は、優先的には神経芽細胞種、膠芽腫、骨肉種、網膜芽腫、軟部組織肉腫、中枢神経系癌、腎芽細胞腫、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、腎臓癌、肝臓癌、脳癌、精巣癌、膵臓癌、骨癌、皮膚癌、小腸癌、胃癌、胸膜癌、食道癌、喉頭癌を含む群から選
択される固形癌の予防及び／又は治療における使用のために使用され得る。
択される固形癌の予防及び／又は治療における使用のために使用され得る。
【0097】
特定の実施形態では、固形癌は、膵臓癌、肺癌、及び乳癌からなる群から選択される。
【0098】
特定の実施形態では、一般式（Ｉ）のコンジュゲート、本発明によるプロドラッグ、特に一般式（Ｖ）のプロドラッグ、又は本発明による医薬組成物は、転移の予防及び／又は治療における使用のために使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【0099】
【図1】７２時間のインキュベーション後に測定された、細胞株ＫＢ及びＭＢＡ－ＭＢ－２３１に対するβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ＧｌｃＮａｓｅ）の存在又は非存在下でのＭＭＡＥ及びベクター８０（本発明による化合物）の抗増殖活性を示す。丸印付きの曲線はＭＭＡＥに対応し、四角印付きの曲線はベクター８０に対応し、三角印付きの曲線はＧｌｃＮａｓｅが存在する場合のベクター８０に対応する。
【図2】マウスにおけるＭＤＡ－ＭＢ－２３１同所性腫瘍の処置のためのベクター８０の治療有効性を示す（初期体積５８ｍｍ３）。ベクターを２１、３５、及び４９日目に投与した。各点は、腫瘍体積の平均±ＳＥＭに対応する。三角形の曲線はビヒクルに対応し、四角形の曲線はベクトル８０に対応する。
【実施例】
【0100】
試薬及び溶媒
全ての反応はアルゴン雰囲気下で行った。別段の指示がない限り、使用した溶媒はＨＰＬＣグレードであった。化学製品は商業的供給源からの分析品質のものであり、更に精製することなく使用した。
全ての反応はアルゴン雰囲気下で行った。別段の指示がない限り、使用した溶媒はＨＰＬＣグレードであった。化学製品は商業的供給源からの分析品質のものであり、更に精製することなく使用した。
【0101】
反応モニタリング、精製、及び分析
反応の進行は、液体クロマトグラフィー、質量分析と組み合わせた液体クロマトグラフィー、又は予めコーティングされたＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ ＡＬＵＧＲＡＭ（登録商標）ＳＩＬ Ｇ／ＵＶ２５４シリカゲルＴＬＣシート（０．２ｍｍのシリカゲル６０）のいずれかによってモニターした。スポットを、２５４ｎｍのＵＶ光下で、及び／又はＴＬＣシートをエタノール（１００ｍＬ）中のリンモリブデン酸（３ｇ）の溶液に浸漬し、続いてサーマルガンで加熱することによって可視化した。
反応の進行は、液体クロマトグラフィー、質量分析と組み合わせた液体クロマトグラフィー、又は予めコーティングされたＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ ＡＬＵＧＲＡＭ（登録商標）ＳＩＬ Ｇ／ＵＶ２５４シリカゲルＴＬＣシート（０．２ｍｍのシリカゲル６０）のいずれかによってモニターした。スポットを、２５４ｎｍのＵＶ光下で、及び／又はＴＬＣシートをエタノール（１００ｍＬ）中のリンモリブデン酸（３ｇ）の溶液に浸漬し、続いてサーマルガンで加熱することによって可視化した。
【0102】
自動クロマトグラフィーは、ＵＶ検出器及びＥＬＳＤを備えたＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）ＲＦ ２００Ｉ ＴＥＬＥＤＹＮＥ ＩＳＣＯ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを用いて、及び順相クロマトグラフィー用のＩｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）１５又は５０μｍシリカフラッシュカートリッジと逆相クロマトグラフィー用のＨＰ Ｃ１８ ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）ＧＯＬＤ ４ｇ又は１５．５ｇを使用して行った。
【0103】
ＮＭＲ１Ｈ及び１３Ｃスペクトルは、ウルトラシールド磁石及びＢＢＦＯ ５ｍｍ広帯域プローブを備えたＢｒｕｋｅｒ ４００ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ機器で、それぞれ４００ＭＨｚ及び１００ＭＨｚで記録した。選択された化合物について、ＮＭＲ１Ｈ及び１３Ｃを、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＲｅｎｎｅｓからのＰｒｉｓｍプラットフォームにおいてＴＸＩ１Ｈ－１３Ｃ－１５Ｎクライオプローブ（５ｍｍ）を備えたＢｒｕｋｅｒ分光計で、それぞれ５００ＭＨｚ及び１２６ＭＨｚで記録した。化学シフト（δ）は、低磁場から高磁場への百万分率（ｐｐｍ）で報告され、残留溶媒を基準とする。結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表される。
【0104】
全ての誘導体について、オルレアン大学のＣＢＭ／ＩＣＡ ＦＲ２７０８及びポアティエ大学のＩＣ２ＭＰのＯｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｃｅｎｔｅｒにおいて高分解
能ＥＳＩ質量分析計への注入によって正確な質量を決定した。
能ＥＳＩ質量分析計への注入によって正確な質量を決定した。
【0105】
分析用ＲＰ－ＨＰＬＣは、ＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ ＮＵＣＬＥＯＳＨＥＬＬ（登録商標）逆相クロマトグラフィーカラム（１５０／４．６、ＲＰ１８、５μｍ）を有する可変波長ＵＶ／可視検出器を備えたＤｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００システム上で、３０℃及び１ｍＬ．ｍｉｎ－１で行った。方法１は、２０％Ｂで開始し、３０分で１００％Ｂに達する、Ａ（水中０．２％ＴＦＡ）及びＢ（ＣＨ３ＣＮ）から構成される線形勾配を使用した。全てのクロマトグラムを２５４ｎｍで記録した。
【0106】
分析用ＬＣ－ＭＳは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣＭＳ－２０２０装置で行った。４０℃のＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ ＮＵＣＬＥＯＳＨＥＬＬ（登録商標）逆相クロマトグラフィーカラム（１５０／４．６、ＲＰ１８、５μｍ）を、１ｍＬ．ｍｉｎ－１の流速でクロマトグラフィー分離に使用した。カラムからの溶出液を質量分析計のエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源に導入した。分析は、陽イオンモード及び陰イオンモードで行った。エレクトロスプレー電圧を４．５ｋＶに設定した。キャピラリー及びヒーター温度は、それぞれ２５０℃及び４００℃であった。乾燥ガス（窒素）及び噴霧ガス（窒素）の流量をそれぞれ１５Ｌ．ｍｉｎ－１及び１．５Ｌ．ｍｉｎ－１に設定した。ソフトウェアＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓを用いてデータ分析を行った。ＬＣ／ＭＳ実験は、Ａ（水中０．１％ギ酸）及びＢ（ＣＨ３ＣＮ中０．１％ギ酸）からなる直線勾配を使用して、２０％Ｂで開始し、１５分で１００％Ｂに到達させて実施した（方法２）。
【0107】
手順：
化合物８３の合成
化合物８３の合成
【0108】
【化10】
【0109】
Ｎ－アセチルグルコサミン（３．０ｇ、１３．５ｍｍｏｌ、１当量）を塩化アセチル（１３．５ｍＬ、１９０ｍｍｏｌ、１４当量）に溶解し、溶液を室温で７２時間撹拌した。完了後、氷水（１５０ｍＬ）を添加することによって溶液を加水分解し、５分間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）を添加した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（２×６０ｍＬ）及びブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗残留物をシリカゲルカラム上でのクロマトグラフィー（２０分間でＥＰ／ＥｔＯＡｃ ５０／５０～０／１００）によって精製して、化合物８３（３．０ｇ、６１％）を白色固体の形態で得た。
【0110】
Ｒｆ：０．３７（ＥＰ／ＥｔＯＡｃ４０／６０）
ＮＭＲ１Ｈ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝６．１９（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ１ａ），５．７７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，ＨＮＨ），５．
３２（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．６，８．８，３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ２ａ），４．３７－４．２３（ｍ，２Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ）。
ＮＭＲ１Ｈ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝６．１９（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ１ａ），５．７７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，ＨＮＨ），５．
３２（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．６，８．８，３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ２ａ），４．３７－４．２３（ｍ，２Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ）。
【0111】
化合物８４の合成
【0112】
【化11】
【0113】
ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｍ、１．４ｍＬ）の混合物中に可溶化されたフェノール５５（国際公開第２０１１／１４５０６８号を参照）（１６９ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（１７６ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物を室温で１５日分間撹拌した。次に、化合物８３（２００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１当量）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）溶液を添加し、塩素化化合物８３が完全に消費されるまで混合物を撹拌した。５時間３０分後、有機相を分離し、水（５ｍＬ）、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗残渣をシリカゲルカラム上でのクロマトグラフィー（２０分間でＥＰ／ＥｔＯＡｃ １００／０～０／１００）により精製して、化合物８４を２つのジアステレオ異性体の混合物の形態で得た（２００ｍｇ、白色固体、６８％）。
【0114】
Ｒｆ：０．３１（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９５／５）
ＮＭＲ１Ｈ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝７．８５（２ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ３ｂ）、７．６２－７．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５ｂ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６ｂ）、５．７７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，ＨＮＨ）、５．５９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４、９．１Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ３ａ）、５．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．２、１．１Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ１ａ）、５．１３（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４ａ），４．９７－４．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈｂ）、４．３４－４．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ６ａ），３．９７－３．８１（ｍ，２Ｈ，Ｈ２ａ及びＨ５ａ），２．７３－２．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈｃ），２．１１（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈｄ）２．０９（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），２．０６（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），２．０５（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），１．９９（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｍｉｄｅ）。
ＮＭＲ１Ｈ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝７．８５（２ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ３ｂ）、７．６２－７．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５ｂ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６ｂ）、５．７７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，ＨＮＨ）、５．５９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４、９．１Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ３ａ）、５．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．２、１．１Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ１ａ）、５．１３（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４ａ），４．９７－４．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈｂ）、４．３４－４．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ６ａ），３．９７－３．８１（ｍ，２Ｈ，Ｈ２ａ及びＨ５ａ），２．７３－２．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈｃ），２．１１（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈｄ）２．０９（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），２．０６（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），２．０５（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），１．９９（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｍｉｄｅ）。
【0115】
ＮＭＲ１３Ｃ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝１７１．２８，１７０．７１，１７０．６１，１６９．６３，１４８．８６，１３８．９１，１３１．２９，１２２．６５，１２１．２０，１２１．１４，９９．７１，７９．５３，７７．４１，７７．１６，７６．９１，７２．３７，７２．２０，７１．２８，７０．８３，６８．５９，６２．０４，５５．４８，２９．６２，２３．５０，２０．９１，２０．８５，２
０．８１。
０．８１。
【0116】
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｎａ］＋のＣ２４Ｈ２８Ｎ２ＮａＯ１２に対する計算値：５５９．１５３４；実測値５５９．１５２１。
【0117】
化合物８５の合成
【0118】
【化12】
【0119】
ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中に可溶化されたフェノール溶液８４（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１当量）に、クロロギ酸ニトロフェニル（１５０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、２当量）を室温で添加した。混合物を０℃に冷却し、ピリジン（７５．２μｌ、０．９３ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を０℃で２０分間撹拌し、３時間かけて室温に加温した。完了後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（４ｍＬ）で加水分解し、５分間撹拌した。次いで、有機相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗残渣をシリカゲルカラム上でのクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ １００／０～９５／５、３０分）により精製して、化合物８５を２つのジアステレオ異性体の混合物の形態で得た（１８８ｍｇ、白色固体、７２％）。
【0120】
Ｒｆ：０．１７（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ９８／２）
ＮＭＲ１Ｈ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝８．２８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ３ｃ），７．９１（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ３ｂ），７．６２（ｄｔ，Ｊ＝８．６、２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ５ｂ）７．４３－７．３０（ｍ，３Ｈ，Ｈ６ｂ及びＨ２ｃ），５．９１－５．７２（ｍ，２Ｈ，Ｈｂ及びＨＮＨ），５．７２－５．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ３ａ及びＨ１ａ），５．１３（ｔＪ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４ａ），４．３５－４．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ６ａ），３．９９－３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ５ａ），３．８８－３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ２ａ），３．０１－２．７８（ｍ，２Ｈ，Ｈｃ），２．１２－２．０８（ｍ，４Ｈ，Ｈｄ及びＨａｃｅｔａｔｅ），２．０７（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），２．０５（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），１．９８（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｍｉｄｅ）。
ＮＭＲ１Ｈ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝８．２８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ３ｃ），７．９１（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ３ｂ），７．６２（ｄｔ，Ｊ＝８．６、２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ５ｂ）７．４３－７．３０（ｍ，３Ｈ，Ｈ６ｂ及びＨ２ｃ），５．９１－５．７２（ｍ，２Ｈ，Ｈｂ及びＨＮＨ），５．７２－５．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ３ａ及びＨ１ａ），５．１３（ｔＪ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４ａ），４．３５－４．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ６ａ），３．９９－３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ５ａ），３．８８－３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ２ａ），３．０１－２．７８（ｍ，２Ｈ，Ｈｃ），２．１２－２．０８（ｍ，４Ｈ，Ｈｄ及びＨａｃｅｔａｔｅ），２．０７（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），２．０５（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｔｅ），１．９８（ｓ，３Ｈ，Ｈａｃｅｔａｍｉｄｅ）。
【0121】
ＮＭＲ１３Ｃ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２９８Ｋ）：δ ｐｐｍ＝１７１．３５，１７１．３１，１７０．６６，１７０．５２，１６９．６１，１５５．２７，１５１．６
２，１４９．９２，１４５．７０，１４１．４４，１４１．３０，１３３．４６，１３３．４１，１３２．４６，１３２．２６，１２５．５２，１２３．７６，１２３．５７，１２１．８５，１２１．８３，１２０．７９，１２０．６５，９９．３１，９９．１８，７２．６１，７２．４１，７１．０２，７０．９８，６８．５４，６１．９９，６０．５６，５５．６９，５５．６２，２６．３７，２３．５０，２１．２２，２０．８９，２０．８３，２０．８０，１４．３３。
２，１４９．９２，１４５．７０，１４１．４４，１４１．３０，１３３．４６，１３３．４１，１３２．４６，１３２．２６，１２５．５２，１２３．７６，１２３．５７，１２１．８５，１２１．８３，１２０．７９，１２０．６５，９９．３１，９９．１８，７２．６１，７２．４１，７１．０２，７０．９８，６８．５４，６１．９９，６０．５６，５５．６９，５５．６２，２６．３７，２３．５０，２１．２２，２０．８９，２０．８３，２０．８０，１４．３３。
【0122】
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｎａ］＋のＣ３１Ｈ３１Ｎ３Ｏ１６＋に対する計算値７２４．１５９７；実測値７２４．１６０４。
【0123】
化合物８６の合成
【0124】
【化13】
【0125】
無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に可溶化された炭酸塩溶液８５（９８ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、１当量）に、ＭＭＡＥ（１００ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、１当量）及びＨＯＢｔ（１９ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物を室温で撹拌し、ピリジン（０．７ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。完了後、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗残渣をシリカゲルカラム上でのクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ １００／０～９０／１０、３０分間）により精製して、化合物８６を２つのジアステレオ異性体の混合物の形態で得た（１６６ｍｇ、白色固体、９３％）。
【0126】
Ｒｔ＝１０．２０分（方法２）
ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋のＣ６４Ｈ９４Ｎ７Ｏ２０に対する計算値１２８０．６；実測値１２８０．９。［Ｍ＋２Ｈ］２＋のＣ６４Ｈ９５Ｎ７Ｏ２０に対する計算値：６４０．８；実測値６４１．３。
ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋のＣ６４Ｈ９４Ｎ７Ｏ２０に対する計算値１２８０．６；実測値１２８０．９。［Ｍ＋２Ｈ］２＋のＣ６４Ｈ９５Ｎ７Ｏ２０に対する計算値：６４０．８；実測値６４１．３。
【0127】
化合物６３の合成
【0128】
【化14】
【0129】
無水マレイン酸（８００ｍｇ、８．１６ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の６－アミノヘキサン酸（１．０７ｇ、８．１６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に添加し、室温で撹拌した。２時間後、混合物を０℃に冷却し、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（１．１３ｇ、９．７９ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＥＤＣ．ＨＣｌ（３．９１ｇ、２０．４ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加し、次いで３５℃に１２時間加熱した。室温に冷却した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム上でのクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥＰ ６０／４０）により精製して、化合物６３（１．５３ｍｇ、６３％）を白色固体の形態で得た。
【0130】
Ｒｆ：０．４１（ＥｔＯＡｃ／ＥＰ ６０／４０）
ＮＭＲ１Ｈ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ ｐｐｍ）：６．６７（ｓ，２Ｈ，Ｈ１０），３．５０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，Ｈ８），２．８１（ｓｌ，４Ｈ，Ｈ１），２．５８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，Ｈ４），１．７５（ｍ，２Ｈ，Ｈ７），１．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ５），１．３９（ｍ，２Ｈ，Ｈ６）。
ＮＭＲ１Ｈ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ ｐｐｍ）：６．６７（ｓ，２Ｈ，Ｈ１０），３．５０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，Ｈ８），２．８１（ｓｌ，４Ｈ，Ｈ１），２．５８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，Ｈ４），１．７５（ｍ，２Ｈ，Ｈ７），１．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ５），１．３９（ｍ，２Ｈ，Ｈ６）。
【0131】
ＮＭＲ１３Ｃ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ ｐｐｍ）：１７０．８（Ｃ９），１６９．１（Ｃ２），１６８．３（Ｃ３），１３４．０（Ｃ１０），３７．４（Ｃ８），３０．８（Ｃ４），２８．０（Ｃ７），２５．８（Ｃ６），２５．６（Ｃ１），２４．１（Ｃ５）。
【0132】
化合物８０の合成
【0133】
【化15】
【0134】
ベクター８０を化合物８６から中間精製なしに３工程で調製した。
【0135】
最初に、アルゴン雰囲気中の脱気したＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中のアルキン８６（７０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、１当量）及びアジド－ＰＥＧ １０－アミン４６（３２ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ、１．１当量）溶液に、Ｃｕ（ＭｅＣＮ）４ＰＦ６（２０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物を完了するまで室温で撹拌した。３時間後、樹脂ＱｕａｄｒａＰｕｒｅ（登録商標）ＩＤＡ（３００ｍｇ）を混合物に添加して、銅を捕捉した。溶液を更に３時間撹拌し、樹脂を濾過により除去した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗製物を更に精製することなく次の工程に直ちに使用した。
【0136】
第２に、粗化合物８７をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に可溶化した。次に、ナトリウムメタノレート（０．４４ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、０．１５当量）を添加し、混合物を室温で５時間撹拌した。完了後、樹脂ＩＲ－１２０（３００ｍｇ）を、中性ｐＨに達するまで添加した。溶媒を減圧下で蒸発させた。粗製物を更に精製することなく次の工程に直ちに使用した。
【0137】
最後に、トリエチルアミン（２３μＬ、０．１６４ｍｍｏｌ、３当量）を、粗アミン８８及びエステルＮＨＳ６３（１８．５ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ、１．１当量）の無水ＤＭＳＯ（２ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。完了後、ＬＣ－ＭＳ（方法２により制御して、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗残留物をＣ１８グラフト化シリカ上での逆相クロマトグラフィーにより精製して（溶出勾配ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）２０／８０～８０／２０、３０分間）、ベクター８０を２つのジアステレオ異性体の混合物の形態で得た（２５ｍｇ、白色固体、３工程で２４％）。
【0138】
Ｒｔ＝７．３３分（方法２）
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｎａ］＋のＣ９０Ｈ１４４Ｎ１２ＮａＯ３０に対する計算
値１８９６．０００４；実測値１８９５．９９５２。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｎａ］＋のＣ９０Ｈ１４４Ｎ１２ＮａＯ３０に対する計算
値１８９６．０００４；実測値１８９５．９９５２。
【0139】
ベクター８０の生物学的評価
ベクター８０の抗増殖活性の評価
ベクター８０の抗増殖活性を、ヒトＫＢ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍株で評価し、ＭＭＡＥの抗増殖活性と比較した。これを行うために、化合物８０を、β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの非存在下又は存在下で培養培地に置き、細胞生存率をインキュベーションの７２時間後に測定した（図１）。
ベクター８０の抗増殖活性の評価
ベクター８０の抗増殖活性を、ヒトＫＢ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍株で評価し、ＭＭＡＥの抗増殖活性と比較した。これを行うために、化合物８０を、β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの非存在下又は存在下で培養培地に置き、細胞生存率をインキュベーションの７２時間後に測定した（図１）。
【0140】
ベクター８０は、ＭＭＡＥと同様の抗増殖活性を有することに留意されたい。実際に、β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの非存在下又は存在下でのインキュベーションは、両方の細胞株に対して同一の細胞毒性をもたらす。
【0141】
この驚くべき結果が示すように、ベクター８０は、そのグルクロン酸化類似体２４とは対照的に、ＭＭＡＥの毒性をマスクすることを可能にしない。この結果は、グルクロニドとイオン化可能な化学官能基を有さないＮ－アセチルグルコサミニド（カルボン酸）との間の極性の差異によって説明され得る。したがって、化合物８０は、細胞膜を受動的に透過し、次いで、リソソームβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼによって活性化されて、ＭＭＡＥの放出をもたらし得る。第２の仮説は、これらの癌細胞によるβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの放出に基づく。実際、これらの癌細胞は、培養培地中にこの酵素を分泌し得ることが実証されている。次いで、この現象は、培養培地へのβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの添加とは無関係に、ベクター８０の活性化の原因であり得る。
【0142】
インビボでのプロドラッグ８０の治療効果の評価
ベクター８０の治療有効性を、マウスにおいて、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１型のトリプルネガティブ乳房腫瘍モデルで評価した（図２）。化合物８０を４ｍｇ．ｋｇ－１の用量で尾静脈内に１４日間の期間で３回投与した。
ベクター８０の治療有効性を、マウスにおいて、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１型のトリプルネガティブ乳房腫瘍モデルで評価した（図２）。化合物８０を４ｍｇ．ｋｇ－１の用量で尾静脈内に１４日間の期間で３回投与した。
【0143】
ベクター８０は、対照群と比較して有意な治療活性を有することが分かる。実際に、最初の投与で早くも、腫瘍量の減少が得られる。更に、最初の注射の最後に、ベクター８０で処置された４／６マウスは、３５日目からもはや検出可能な腫瘍を有さなかった。
【0144】
ベクター８０はまた、プロトコルの最後（６３日目）まで死亡が観察されなかったので、動物によって十分に許容された。５６日目に、ベクター８０による処置は、対照群と比較して腫瘍増殖の強い阻害（９９％）をもたらした。実験終了時（６３日目）に、３／６匹のマウスについて、腫瘍の全体的かつ持続的な退縮が得られた。一方、腫瘍形成の再開が、３５日目にもはや検出可能な腫瘍を有さなかったマウスの１匹で観察された。
【0145】
８０での処置に対する初期応答も非常に重要であり、初期腫瘍サイズの９０％の減少をもたらす。しかしながら、プロトコルの４２日目に、腫瘍増殖の再開が観察された。また、その後の投与（４９日目）はほとんど効果がないと思われる。
【0146】
結論
目標は、腫瘍において細胞毒性剤を選択的に放出するためのβ－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの標的化を研究することであった。これに関連して、ＭＭＡＥ８０のＮ－アセチルグルコサミニル化ベクターの合成及び生物学的評価を行った。後者は、自壊性スペーサによってＭＭＡＥに連結されたＮ－アセチルグルコサミンを含む。癌組織の標的化は、マイケル付加反応によって血漿アルブミンのチオール官能基とインビボで反応することができる８０のマレイミド基の存在によって可能になる。
目標は、腫瘍において細胞毒性剤を選択的に放出するためのβ－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼの標的化を研究することであった。これに関連して、ＭＭＡＥ８０のＮ－アセチルグルコサミニル化ベクターの合成及び生物学的評価を行った。後者は、自壊性スペーサによってＭＭＡＥに連結されたＮ－アセチルグルコサミンを含む。癌組織の標的化は、マイケル付加反応によって血漿アルブミンのチオール官能基とインビボで反応することができる８０のマレイミド基の存在によって可能になる。
【0147】
【化16】
【0148】
次いで、形成された高分子ベクター８１は、悪性腫瘍におけるアルブミンの生理病理学的向性並びにＥＰＲ効果による腫瘍新生血管形成に関連する血管新生の欠損のおかげで、腫瘍上に蓄積することができる。
【0149】
この新しいベクターの治療有効性を、マウスに移植したトリプルネガティブ乳房腫瘍モデルＭＢＡ－ＭＢ－２３１で評価した。これらの試験は、ベクター８０が非常に有意な抗癌活性を有することを示した。したがって、Ｎ－アセチルグルコサミニル化ベクターの開発は、悪性病変の新規の選択的かつ有効な処置の開発のための非常に有望なアプローチである。
【図1】
【図2】
【国際調査報告】