特表 2024-533558 抗体－薬物コンジュゲートの使用、並びに併用薬物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-12

(54)【発明の名称】抗体－薬物コンジュゲートの使用、並びに併用薬物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/68 20170101AFI20240905BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 38/07 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP

【ＦＩ】

A61K47/68

C07K16/28 ZNA

A61K38/07

A61K39/395 N

A61P35/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024516794

(86)(22)【出願日】2022-09-15

(85)【翻訳文提出日】2024-05-14

(86)【国際出願番号】 CN2022118964

(87)【国際公開番号】W WO2023040941

(87)【国際公開日】2023-03-23

(31)【優先権主張番号】202111088584.9

(32)【優先日】2021-09-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519058745

【氏名又は名称】シャンハイ ミラコーケン インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100203828

【弁理士】

【氏名又は名称】喜多村 久美

(72)【発明者】

【氏名】リー フー

(72)【発明者】

【氏名】フー チャオホン

(72)【発明者】

【氏名】リウ ウェンチャオ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076EE59

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA10

4C084BA14

4C084BA23

4C084BA42

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C085AA14

4C085AA26

4C085BB11

4C085DD52

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本出願は、抗体－薬物コンジュゲートの使用、並びに併用薬物及びその使用に関する。具体的には、抗体－薬物コンジュゲートの使用、併用薬物、及びその使用が提供される。前記抗体－薬物コンジュゲートは、ＥＧＦＲ変異発現を伴うさまざまなＮＳＣＬＣ細胞株、及びＥＧＦＲ変異発現を伴うＡＺＤ９２９１薬剤耐性のさまざまなヒトＮＳＣＬＣ ＰＤＸ腫瘍モデルにおいて、腫瘍細胞の増殖を阻害する顕著な薬動力学的効果を示す。さらに、抗体－薬物コンジュゲートと抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用投与は、ＥＧＦＲ変異発現を有する、ＡＺＤ９２９１薬剤耐性のヒトＮＳＣＬＣ ＰＤＸ腫瘍モデルにおいて、腫瘍細胞増殖を阻害する顕著な相乗的な薬動力学的効果を示す。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

１）非小細胞肺癌阻害剤の調製における使用、及び
２）非小細胞肺癌を治療及び／又は予防するための医薬の調製における使用、
からなる群から選択される１つ又はそれ以上である、抗体－薬物コンジュゲート、前記抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物の使用であって、
ここで、前記非小細胞肺癌は、
１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び
２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群
から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的に前記ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有し、
ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは式Ｉ：
Ａｂ－（ＬＤ）_ｐ
式Ｉ
［式中、
Ａｂは抗ＥＧＦＲ抗体を表し、ここで前記抗ＥＧＦＲ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５～７に示される配列又はそれらの変異体を含み、並びに軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２～１４に示される配列又はそれらの変異体を含み；
Ｌはリンカーを表し；
好ましくは、前記リンカーは、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）吉草酸塩（ＳＰＰ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－ホルミル（ＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、及び６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）からなる群から選択され；
より好ましくは、前記リンカーは６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）から選択され；
Ｄは細胞傷害性薬剤を表し；
好ましくは、前記細胞傷害性薬剤は、毒素、例えばＳＮ－３８、ゲムシタビン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシノイド（例えば、メイタンシンＤＭ１及びメイタンシンＤＭ４）、カリケアマイシン、ＭＧＢＡ（例えば、デュオカルマイシン）、ドキソルビシン、リシン及びジフテリア毒素、Ｉ１３１、インターロイキン類、腫瘍壊死因子、ケモカイン類、及びナノ粒子からなる群から選択され；
より好ましくは、前記細胞傷害性薬剤はＭＭＡＥであり；
ｐは、１～９、好ましくは２～６、より好ましくは３～５を表す］
の構造を有する、使用。

【請求項2】

前記抗ＥＧＦＲ抗体が以下の特徴：
１）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ、配列番号８～１１に示される配列又はそれらの変異体を含む；
２）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ、配列番号１５～１８に示される配列又はそれらの変異体を含む；
３）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ定常領域又はそれらの変異体から選択される；
好ましくは、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される；並びに
４）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域は、ヒトのラムダ定常領域及びカッパ定常領域又はそれらの変異体から選択される、
の１つ又はそれ以上を有する、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記抗ＥＧＦＲ抗体が以下の特徴：
１）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は、配列番号１に示される配列、あるいは配列番号１に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は配列番号１に示される；
２）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は、配列番号２示される配列、あるいは配列番号２に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは、前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は配列番号２に示される；
３）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は、配列番号３示される配列、あるいは配列番号３に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは、前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は配列番号３に示される；並びに
４）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は、配列番号４示される配列、あるいは配列番号４に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは、前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は配列番号４に示される、
の１つ又はそれ以上を有する、請求項１～２のいずれか１項に記載の使用。

【請求項4】

前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌が、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有し；
好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異であり；
より好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
さらに好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
最も好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異である、
請求項１～３のいずれか１項に記載の使用。

【請求項5】

請求項１～４のいずれか１項に記載の使用であって、ここで、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩが、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり；
好ましくは、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩがオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）であり；
又は、前記非小細胞肺癌が、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群より選択される、使用。

【請求項6】

抗体－薬物コンジュゲート、前記抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、あるいは前記塩の溶媒和物である第１の薬物と、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である第２の薬物とを含む併用薬物であって、
ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは、請求項１～３のいずれか１項に記載のように定義され、
好ましくは、第１の薬物と第２の薬物は互いに分離されている、併用薬物。

【請求項7】

前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項６に記載の併用薬物であって、
好ましくは、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＫ１０３、トリパリマブ（ＪＳ－００１）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、カムレリズマブ、ティスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、オプジーボ又はニボルマブ、キイトルーダ又はペンブロリズマブ、ＣＳ１００３、セルプルリマブ（ＨＬＸ１０）、ＡＫ１０４、ゲプタノリマブ（ＧＢ２２６）、リズマブ（例えば、ＬＺＭ００９）、ＢＡＴ－１３０６、ＳＣＴ－Ｉ１０Ａ、Ｆ５２０、ＳＧ００１、ＧＬＳ－０１０、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、及びＳＴＩ－Ａ１１１０からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり；
より好ましくは、前記抗ＰＤ－１抗体はＡＫ１０３であり；
好ましくは、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はそれらの組み合わせである、併用薬物。

【請求項8】

前記第１の薬物と前記第２の薬物との重量比は１５：１～１：１５であり、好ましくは、第１の薬物と第２の薬物の重量比は１：１～１：１０である、請求項６～７のいずれか１項に記載の併用薬物。

【請求項9】

１）非小細胞肺癌阻害剤の調製における使用、及び
２）非小細胞肺癌を治療及び／又は予防するための医薬の調製における使用、からなる群から選択される１つ以上である、請求項６～８のいずれか１項に記載の併用薬物の使用であって、
ここで、前記非小細胞肺癌は、
１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び
２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的に、前記ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有する、使用。

【請求項10】

前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌が、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有する、請求項９に記載の使用であって、
好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異であり；
より好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
さらに好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
最も好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異であり；
又は、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩは、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり；
好ましくは、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩはオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）であり、
又は、前記非小細胞肺癌は、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群から選択される、使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、生物医学の分野、特に抗体－薬物コンジュゲートの使用、併用薬物、及びそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、ＥＧＦ受容体ファミリーの膜貫通型受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）であり、４つの密接に関連したＲＴＫ（ＥｒｂＢ１／ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３、及びＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４）から構成される。ＥＧＦＲは、結腸直腸癌、頭頸部癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、卵巣癌、脳癌、膀胱癌を含むさまざまなヒトの腫瘍で過剰発現される。これらの腫瘍では、ＥＧＦＲは、癌細胞の増殖、シグナル伝達、分化、接着、遊走、及び生存を調節するシグナル伝達カスケードに関与している。

【0003】

ＥＧＦＲは癌における多次元的な役割により、魅力的な治療標的となっている。ＥＧＦＲを標的とする多くの小分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ、例えばゲフィチニブ、エルロチニブ、及びオシメルチニブ）及びモノクローナル抗体（例えばセツキシマブ及びパニツムマブ）が、単独療法又は化学療法との併用薬として承認されている。これらの既存の標的療法は成功しているにもかかわらず、患者は、ＥＧＦＲキナーゼドメイン内の変異により、小分子ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性を発症することがよくある。さらに、これまでのところ、セツキシマブなどの市販のモノクローナル抗体は、ＫＲＡＳ野生型転移性結腸直腸癌（ＲＡＳ ｗｔ ｍＣＲＣ）及び／又は頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）の治療薬としてのみ承認されており、パニツムマブは転移性結腸癌の治療に承認されている。

【0004】

ヒトＥＧＦＲ遺伝子は染色体７ｐ１２－１４に位置し、２４個のエクソンから構成される。エクソン１８～２４はＴＫ機能領域をコードし、ここで、エクソン１８～２０はＮローブをコードし、エクソン２１～２４はＣローブをコードする。ＴＫＩ薬剤感受性に関連する変異は、エクソン１８～２１に集中している。変異の約４９％は、エクソン１９のコドン７４６～７５２の領域の欠失変異（例えば、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０）であり、その８０％超はロイシン（Ｌ）－アルギニン（Ｒ）－グルタミン酸（Ｅ）－アラニン（Ａ）モチーフがない。変異の約４５％はエクソン２１の点突然変異Ｌ８５８Ｒ（８５８位のロイシンからアルギニンへの変異）であり、その他の頻度の低い変異には、エクソン１８のＧ７１９Ｓ及びエクソン２１のＬ８６１Ｑが含まれる。

【0005】

研究では、後天性ＴＫＩ耐性ＮＳＣＬＣ患者の約５０～６０％はＴ７９０Ｍ変異を有し、ゲフィチニブやエルロチニブに応答しないことが示されている。Ｔ７９０Ｍ変異を特異的に標的とする第３世代ＴＫＩであるオシメルチニブで治療した場合でも、ＮＳＣＬＣ患者は約１０か月の治療後に依然として疾患の進行を経験する。

【0006】

非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の場合、ＴＫＩの発明は治療状況を大きく変え、これらの患者に利益をもたらしたが、ＥＧＦＲキナーゼドメインで突然変異が起きる速度は、これらの突然変異によって引き起こされる耐性を克服するための新しいＴＫＩの開発をはるかに上回っている。ＥＧＦＲ変異によって引き起こされる薬剤耐性は、現在のＥＧＦＲを標的とするＴＫＩの主な課題の１つである。従って、現在利用可能なＥＧＦＲ標的治療は患者のニーズを完全に満たすことができず、新しいメカニズムによる治療に対する明らかに満たされていない医療ニーズが存在する。

【0007】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を標的とする免疫チェックポイント阻害剤は、ＮＳＣＬＣを含むいくつかの癌の患者において顕著かつ持続的な臨床応答を示している。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイントの遮断は劇的な応答をもたらす可能性があるが、この治療法は一部の患者にしか効果がなく、多くの患者は治療に対して部分的にしか応答しない。臨床試験では、扁平上皮ＮＳＣＬＣ患者における抗ＰＤ－１抗体に対する客観的応答率は約３３％で、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ患者における抗ＰＤ－１抗体に対する客観的応答率は１２％であることが示されている。さらに、ＥＧＦＲ活性化変異を有するＮＳＣＬＣにおけるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の適用は、現時点ではまだ不明である。ＥＧＦＲ変異ＮＳＣＬＣがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤から恩恵を受けられるかどうかは不明である。

【0008】

既存の標的化ＥＧＦＲ－ＴＫＩ薬に存在する上記薬剤耐性の問題とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイント遮断療法の限界を考慮すると、有効性がより高く、毒性や副作用及び薬剤耐性がより少ない治療法の提供が依然として急務となっている。

【発明の概要】

【0009】

発明の概要
本発明の抗体－薬物コンジュゲート（ＭＹＫ－３など）は、ＥＧＦＲ変異を発現する様々なＮＳＣＬＣ細胞株、及びＥＧＦＲ変異を発現する様々なＡＺＤ９２９１（オシメルチニブ）耐性ヒトＮＳＣＬＣ ＰＤＸ腫瘍モデルにおける腫瘍細胞の増殖の阻害において、顕著な薬動力学的効果を示すことが分かっている。

【0010】

さらに、本発明の抗体－薬物コンジュゲート（ＭＹＫ－３など）と抗ＰＤ－１抗体（ＡＫ１０３など）を併用すると、ＥＧＦＲ変異を発現するＡＺＤ９２９１（オシメルチニブ）耐性ヒトＮＳＣＬ ＣＰＤＸ腫瘍モデルにおける腫瘍細胞の増殖阻害において顕著な相乗的な薬動力学的効果を示すこともわかっている。

【0011】

これを考慮して、本発明の第１の態様において、抗体－薬物コンジュゲート、前記抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物の使用が提供され、この使用は、

【0012】

１）非小細胞肺癌阻害剤の調製における使用；及び

【0013】

２）非小細胞肺癌を治療及び／又は予防するための医薬の調製における使用、からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、

【0014】

ここで、前記非小細胞肺癌は、

【0015】

１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び

【0016】

２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的にＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有し、

【0017】

ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは式Ｉ：
Ａｂ－（ＬＤ）_ｐ
式Ｉ
の構造を有し、

【0018】

式中、

【0019】

Ａｂは抗ＥＧＦＲ抗体を表し、ここで抗ＥＧＦＲ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５～７に示される配列又はそれらの変異体を含み、並びに軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２～１４に示される配列又はそれらの変異体を含み、

【0020】

Ｌはリンカーを表し、

【0021】

Ｄは細胞傷害性薬剤を表し、

【0022】

ｐは、１～９（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９、又は例えば１～７）、例えば２～６、３～５、具体的には、例えば３．９、４．０、又は４．１を表す。

【0023】

本発明の第２の態様において、以下の１つ又はそれ以上に使用するための、抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物が提供される：

【0024】

１）非小細胞肺癌腫瘍の増殖の阻害、及び

【0025】

２）非小細胞肺癌の治療及び／又は予防、

【0026】

ここで、非小細胞肺癌は、

【0027】

１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び

【0028】

２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、及び任意選択的にＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有し、

【0029】

ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは式Ｉ：
Ａｂ－（ＬＤ）_ｐ
式Ｉ
の構造を有し、

【0030】

式中、

【0031】

Ａｂは抗ＥＧＦＲ抗体を表し、ここで抗ＥＧＦＲ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５～７に示される配列又はそれらの変異体を含み、並びに軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２～１４に示される配列又はそれらの変異体を含み、

【0032】

Ｌはリンカーを表し、

【0033】

Ｄは細胞傷害性薬剤を表し、

【0034】

ｐは、１～９（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９、又は例えば１～７）、例えば、２～６、３～５、具体的には、例えば３．９、４．０、又は４．１を表す。

【0035】

本発明の第３の態様において、非小細胞肺癌腫瘍の増殖を阻害する方法、及び／又は非小細胞肺癌を治療及び／又は予防する方法が提供され、この方法は、それを必要とする対象に、有効量の抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物を投与する工程を含み、

【0036】

ここで、非小細胞肺癌は、

【0037】

１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び

【0038】

２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的にＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌は、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有し、

【0039】

ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは式Ｉ：
Ａｂ－（ＬＤ）_ｐ
式Ｉ
の構造を有し、

【0040】

式中、

【0041】

Ａｂは抗ＥＧＦＲ抗体を表し、ここで抗ＥＧＦＲ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５～７に示される配列又はそれらの変異体を含み、並びに軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２～１４に示される配列又はそれらの変異体を含み、

【0042】

Ｌはリンカーを表し、

【0043】

Ｄは細胞傷害性薬剤を表し、

【0044】

ｐは、１～９（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９、又は例えば１～７）、例えば、２～６、３～５、具体的には、例えば３．９、４．０、又は４．１を表す。

【0045】

いくつかの実施態様において、抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物の用量は、０．１～１０．０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２．６ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、２．８ｍｇ／ｋｇ、２．９ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．４ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．８ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．４ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６．２ｍｇ／ｋｇ、６．４ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、又は１０．０ｍｇ／ｋｇ、又は０．１～０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．７～０．９ｍｇ／ｋｇ、０．９～１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０～１．３ｍｇ／ｋｇ、１．３～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５～１．７ｍｇ／ｋｇ、１．７～１．９ｍｇ／ｋｇ、１．９～２．０ｍｇ／ｋｇ、２．０～２．３ｍｇ／ｋｇ、２．３～２．５ｍｇ／ｋｇ、２．５～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．７～２．９ｍｇ／ｋｇ、２．９～３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０～３．３ｍｇ／ｋｇ、３．３～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．５～３．７ｍｇ／ｋｇ、３．７～３．９ｍｇ／ｋｇ、３．９～４．０ｍｇ／ｋｇ、４．０～４．３ｍｇ／ｋｇ、４．３～４．５ｍｇ／ｋｇ、４．５～４．７ｍｇ／ｋｇ、４．７～４．９ｍｇ／ｋｇ、又は４．９～５．０ｍｇ／ｋｇ）である。

【0046】

いくつかの実施態様において、抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物の用量は、０．５～２．５ｍｇ／ｋｇである。

【0047】

いくつかの実施態様において、抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物の用量は、２．０～２．５ｍｇ／ｋｇである。

【0048】

さらに、上記の「抗体－薬物コンジュゲート」とは、同じか又は異なるＤＡＲを有するＡＤＣ分子を含む組成物を指すことに注意されたい。

【0049】

具体的には、本発明は、複数の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ分子を含む組成物を提供する。場合によっては、本明細書に記載の組成物中の各ＡＤＣは、同数の１つ又はそれ以上の細胞傷害性薬剤を含む。他の場合には、本明細書に記載の組成物中の各ＡＤＣは、異なる数の１つ又はそれ以上の細胞傷害性薬剤を含む。

【0050】

本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートにおいて、各抗ＥＧＦＲ抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上の細胞傷害性薬剤とコンジュゲートすることができる。

【0051】

上記の薬物対抗体比（ＤＡＲ）は、抗ＥＧＦＲ抗体にコンジュゲートした細胞傷害性薬剤の分子数を指す。本明細書に記載のＡＤＣに含まれる細胞傷害性薬剤の分子数は一般的に整数であるが、本明細書に記載のＡＤＣに含まれる細胞傷害性薬剤の数（例えば、式Ｉのｐ）が分数である場合、その分数は、複数のＡＤＣ分子を含む組成物中の各抗ＥＧＦＲ抗体にコンジュゲートした細胞傷害性薬剤の平均の数を指す。

【0052】

いくつかの実施態様において、リンカーは、６－マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）吉草酸塩（ＳＰＰ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－ホルミル（ＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、及び６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）からなる群から選択される。

【0053】

いくつかの実施態様において、リンカーは６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）である。

【0054】

いくつかの実施態様において、細胞傷害性薬剤は、毒素、例えばＳＮ－３８、ゲムシタビン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシノイド（例えば、メイタンシンＤＭ１及びメイタンシンＤＭ４）、カリケアマイシン、ＭＧＢＡ（例えば、デュオカルマイシン）、ドキソルビシン、リシン及びジフテリア毒素、Ｉ１３１、インターロイキン類、腫瘍壊死因子、ケモカイン類、及びナノ粒子からなる群から選択される。

【0055】

いくつかの実施態様において、細胞傷害性薬剤はモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。

【0056】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ、配列番号８～１１に示される配列又はそれらの変異体を含む。

【0057】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ配列番号１５～１８に示される配列又はそれらの変異体を含む。

【0058】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ定常領域又はそれらの変異体から選択される。

【0059】

いくつかの実施態様において、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。

【0060】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域は、ヒトのラムダ定常領域及びカッパ定常領域又はそれらの変異体から選択される。

【0061】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は、配列番号１に示される配列、あるいは配列番号１に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0062】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は、配列番号１に示される。

【0063】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は、配列番号２に示される配列、あるいは配列番号２に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0064】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は、配列番号２に示される。

【0065】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は、配列番号３に示される配列、あるいは配列番号３に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0066】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は配列番号３に示される。

【0067】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は、配列番号４に示される配列、あるいは配列番号４に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0068】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は配列番号４に示される。

【0069】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌は、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有する。

【0070】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異である。

【0071】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0072】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、及びＣ７９７Ｓからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0073】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0074】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異である。

【0075】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異である。

【0076】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩは、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上である。

【0077】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩはオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）である。

【0078】

いくつかの実施態様において、非小細胞肺癌は、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群から選択される。

【0079】

本発明の第４の態様において、

【0080】

抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物である第１の薬物、及び

【0081】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である第２の薬物を含む併用薬物が提供され、

【0082】

ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは式Ｉ：
Ａｂ－（ＬＤ）_ｐ
式Ｉ
の構造を有し、

【0083】

式中、

【0084】

Ａｂは抗ＥＧＦＲ抗体を表し、ここで抗ＥＧＦＲ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５～７に示される配列又はそれらの変異体を含み、並びに軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２～１４に示される配列又はそれらの変異体を含み、

【0085】

Ｌはリンカーを表し、

【0086】

Ｄは細胞傷害性薬剤を表し、

【0087】

ｐは、１～９（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９、又は例えば１～７）、例えば、２～６、３～５、具体的には、例えば３．９、４．０、又は４．１を表す。

【0088】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物は互いに分離されている。互いに分離されているとは、第１の薬物と第２の薬物は混合して使用されるのではなく、分離した状態で使用されることを意味する。例えば、第１の薬物と第２の薬物は、併用投与（同時投与、逐次投与、又は交差投与など）に使用される。

【0089】

いくつかの実施態様において、リンカーは、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）吉草酸塩（ＳＰＰ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－ホルミル（ＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、及び６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）からなる群から選択される。

【0090】

いくつかの実施態様において、リンカーは６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）である。

【0091】

いくつかの実施態様において、細胞傷害性薬剤は、毒素、例えばＳＮ－３８、ゲムシタビン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシノイド（例えば、メイタンシンＤＭ１及びメイタンシンＤＭ４）、カリケアマイシン、ＭＧＢＡ（例えば、デュオカルマイシン）、ドキソルビシン、リシン及びジフテリア毒素、Ｉ１３１、インターロイキン類、腫瘍壊死因子、ケモカイン類、及びナノ粒子からなる群から選択される。

【0092】

いくつかの実施態様において、細胞傷害性薬剤はモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。

【0093】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ、配列番号８～１１に示される配列又はそれらの変異体を含む。

【0094】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ配列番号１５～１８に示される配列又はそれらの変異体を含む。

【0095】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ定常領域又はそれらの変異体から選択される。

【0096】

いくつかの実施態様において、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。

【0097】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域は、ヒトのラムダ定常領域及びカッパ定常領域又はそれらの変異体から選択される。

【0098】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は、配列番号１に示される配列、あるいは配列番号１に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0099】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は、配列番号１に示される。

【0100】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は、配列番号２に示される配列、あるいは配列番号２に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0101】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は、配列番号２に示される。

【0102】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は、配列番号３に示される配列、あるいは配列番号３に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0103】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は配列番号３に示される。

【0104】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は、配列番号４に示される配列、あるいは配列番号４に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む。

【0105】

いくつかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は配列番号４に示される。

【0106】

いくつかの実施態様において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は抗ＰＤ－１抗体である。

【0107】

いくつかの実施態様において、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＫ１０３（ＨＸ００８）、トリパリマブ（ＪＳ－００１）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、カムレリズマブ、ティスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、オプジーボ又はニボルマブ、キイトルーダ又はペンブロリズマブ、ＣＳ１００３、セルプルリマブ（ＨＬＸ１０）、ＡＫ１０４、ゲプタノリマブ（ＧＢ２２６）、リズマブ（例えば、ＬＺＭ００９）、ＢＡＴ－１３０６、ＳＣＴ－Ｉ１０Ａ、Ｆ５２０、ＳＧ００１、ＧＬＳ－０１０、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、及びＳＴＩ－Ａ１１１０からなる群から選択される１つ又はそれ以上である。

【0108】

いくつかの実施態様において、抗ＰＤ－１抗体はＡＫ１０３（ＨＸ００８）である。

【0109】

いくつかの実施態様において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0110】

いくつかの実施態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はそれらの組み合わせである。

【0111】

いくつかの実施態様において、第１の薬物対第２の薬物の重量比は、１５：１～１：１５（例えば、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、又は１：１５、又は１５：１～１４：１、１４：１～１２：１、１２：１～１０：１、１０：１～８：１、８：１～６：１、６：１～４：１、４：１～２：１、２：１～１：２、１：２～１：４、１：４～１：６、１：６～１：８、１：８～１：１０、１：１０～１：１２、１：１２～１：１４、又は１：１４～１：１５）である。

【0112】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の重量比は１：１～１：１０である。

【0113】

いくつかの実施態様において、第１の薬物対第２の薬物の重量比は、１：１～１：９、１：２～１：８、１：３～１：７、又は１：４～１：６である。

【0114】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の重量比は１：５である。

【0115】

本発明の第５の態様において、

【0116】

１）非小細胞肺癌阻害剤の調製における使用；及び

【0117】

２）非小細胞肺癌を治療及び／又は予防するための医薬の調製における使用、からなる群から選択される１つ又はそれ以上である上記併用薬物の使用が提供され；

【0118】

ここで、前記非小細胞肺癌は、

【0119】

１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び

【0120】

２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的に、ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有する。

【0121】

本発明の第６の態様において、

【0122】

１）非小細胞肺癌腫瘍の増殖の阻害、及び

【0123】

２）非小細胞肺癌の治療及び／又は予防、の１つ又はそれ以上で使用するための上記の併用薬物が提供され；

【0124】

ここで、非小細胞肺癌は、

【0125】

１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び

【0126】

２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的に、ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌は、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有する。

【0127】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌は、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有する。

【0128】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異である。

【0129】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0130】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0131】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異である。

【0132】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩは、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上である。

【0133】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩはオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）である。

【0134】

いくつかの実施態様において、非小細胞肺癌は、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群から選択される。

【0135】

本発明の第７の態様において、非小細胞肺癌腫瘍の増殖を阻害する方法、及び／又は非小細胞肺癌を治療及び／又は予防する方法が提供され、この方法は、それを必要とする対象に、有効量の第１の薬物及び有効量の第２の薬物を投与する工程を含み、ここで第１の薬物は上記の抗体－薬物コンジュゲート、又は抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物であり、ここで、第２の薬物はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤であり；

【0136】

ここで、非小細胞肺癌は、

【0137】

１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び

【0138】

２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的にＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌は、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有する。

【0139】

いくつかの実施態様において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は抗ＰＤ－１抗体である。

【0140】

いくつかの実施態様において、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＫ１０３（ＨＸ００８）、トリパリマブ（ＪＳ－００１）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、カムレリズマブ、ティスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、オプジーボ又はニボルマブ、キイトルーダ又はペンブロリズマブ、ＣＳ１００３、セルプルリマブ（ＨＬＸ１０）、ＡＫ１０４、ゲプタノリマブ（ＧＢ２２６）、リズマブ（例えば、ＬＺＭ００９）、ＢＡＴ－１３０６、ＳＣＴ－Ｉ１０Ａ、Ｆ５２０、ＳＧ００１、ＧＬＳ－０１０、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、及びＳＴＩ－Ａ１１１０からなる群から選択される１つ又はそれ以上である。

【0141】

いくつかの実施態様において、抗ＰＤ－１抗体はＡＫ１０３（ＨＸ００８）である。

【0142】

いくつかの実施態様において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0143】

いくつかの実施態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はそれらの組み合わせである。

【0144】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の用量比は、１５：１～１：１５（例えば、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、又は１：１５、又は１５：１～１４：１、１４：１～１２：１、１２：１～１０：１、１０：１～８：１、８：１～６：１、６：１～４：１、４：１～２：１、２：１～１：２、１：２～１：４、１：４～１：６、１：６～１：８、１：８～１：１０、１：１０～１：１２、１：１２～１：１４、又は１：１４～１：１５）である。

【0145】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の用量比は１：１～１：１０である。

【0146】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の用量比は、１：１～１：９、１：２～１：８、１：３～１：７、又は１：４～１：６である。

【0147】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の用量比は１：５である。

【0148】

当業者であれば、第１の薬物と第２の薬物の用量が、疾患を予防及び治療するための総用量であることを理解できることに注意されたい。総用量が変わらない場合、異なる投与方法が可能であり、例えば、Ｘ日に１回投与及びＹ回投与などである。

【0149】

いくつかの実施態様において、第１の薬物の用量は１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施態様において、第２の薬物の用量は５ｍｇ／ｋｇである。

【0150】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物は交差投与される。

【0151】

いくつかの実施態様において、第１の薬物の投与様式は、０日目から４日ごとに１回、合計３回である。

【0152】

いくつかの実施態様において、第２の薬物の投与様式は、０日目から３日に１回、合計１０回である。

【0153】

いくつかの実施態様において、第１の薬物と第２の薬物の投与経路は静脈内注射である。

【0154】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌は、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有する。

【0155】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異である。

【0156】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0157】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異である。

【0158】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異である。

【0159】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩは、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上である。

【0160】

いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲ－ＴＫＩはオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）である。

【0161】

いくつかの実施態様において、非小細胞肺癌は、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群から選択される。

【0162】

有益な効果：

【0163】

１．本発明の抗体－薬物コンジュゲート（例えば、ＭＹＫ－３）は、ＥＧＦＲ変異を発現する様々なＮＳＣＬＣ細胞株、並びにＥＧＦＲ変異を発現する様々なＡＺＤ９２９１耐性ヒトＮＳＣＬＣ ＰＤＸ腫瘍モデルの増殖の阻害において、顕著な薬動力学的効果を示した。

【0164】

２．本発明の抗体－薬物コンジュゲート（例えば、ＭＹＫ－３）と抗ＰＤ－１抗体（例えば、ＡＫ１０３）又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用は、ＥＧＦＲ変異を発現するＡＺＤ９２９１耐性ヒトＮＳＣＬＣ ＤＸ腫瘍モデルにおける腫瘍細胞の増殖の阻害において顕著な相乗的な薬動力学的効果を示した。

【図面の簡単な説明】

【0165】

【図1】図１は、抗体－薬物コンジュゲートの薬物／抗体比を決定するためのＨＩＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムである。

【0166】

【図2】図２は、ヒト肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５におけるＭＹＫ－３及びＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）の代表的な細胞死滅曲線を示す。

【0167】

【図3】図３は、ヒト肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ１６５０におけるＭＹＫ－３及びＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）の代表的な細胞死滅曲線を示す。

【0168】

【図4】図４は、ヌードマウスにおけるヒト肺癌ＮＣＩ－Ｈ１９７５皮下異種移植腫瘍に対するＡＤＣ－３及びＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）の有効性を示す。

【0169】

【図5】図５は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２００５－１４３における腫瘍体積に対する様々な試験薬物の効果を示す。

【0170】

【図6】図６は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２２１０－４ａにおける腫瘍体積に対する様々な種試験薬物の効果を示す。

【0171】

【図7】図７は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２２１０－１０６における腫瘍体積に対する様々な試験薬物の効果を示す。

【0172】

【図8】図８は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２３５５－１２８における腫瘍体積に対する様々な試験薬物の効果を示す。

【0173】

【図9】図９は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２４４１－１１８における腫瘍体積に対する様々な試験薬物の効果を示す。

【0174】

【図10】図１０は、ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２２１０－１０６における腫瘍体積に対する様々な試験薬物の効果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0175】

実施態様の詳細な説明
以下、実施例を挙げて本発明の実施態様を詳細に説明する。しかしながら、当業者であれば、以下の実施例は本発明を説明するためにのみ使用されるものであり、本発明の範囲を限定するものではないことを理解するであろう。実施例中に特別な条件を記載していないものは、通常、従来の条件又は製造業者が推奨する条件で実施される。製造業者を特定せずに使用した試薬や器具は、いずれも市販されている従来品である。

【0176】

本発明において、本明細書で使用されるすべての科学技術用語は、特に明記しない限り、当業者に一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用されるタンパク質化学及び核酸化学、分子生物学、細胞培養及び組織培養、微生物学、免疫学、及び実験室手順の関連用語はすべて、対応する技術分野で広く使用されている用語及び日常的な手順である。さらに、本発明をよりよく理解するために、関連する用語の定義及び説明を以下に提供する。

【0177】

特に明記しない限り、本発明においては、濃度範囲、パーセント範囲、比率範囲、又は数値範囲は、記載された範囲内の任意の整数値、及び必要に応じて、記載された範囲内の分数値を含むものと理解されるべきである。

【0178】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子を指し、これは、通常２対の同一のポリペプチド鎖から構成され、各対が「軽」（Ｌ）鎖と「重」（Ｈ）鎖を有する。抗体の軽鎖は、κとλの２つのカテゴリーに分類できる。重鎖は、μ、δ、γ、α、εの５つのカテゴリーに分類できる。重鎖の違いにより、抗体はＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥの５つのカテゴリーに分類できる。軽鎖と重鎖内では、可変領域と定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接続されており、重鎖はまた約３個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。重鎖定常領域は３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び補体系の成分Ｃ１ｑを含む宿主組織又は因子への、免疫グロブリンの結合を媒介することができる。ＶＨ及びＶＬはまた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる可変性の高い領域に細分することもでき、ここには、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域が点在する。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、３つのＣＤＲと４つのＦＲが以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。各重鎖／軽鎖対の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）は、それぞれ抗体結合部位を形成する。各領域又は構造ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． （１９８７ ａｎｄ １９９１））， 又は Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ （１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７； Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３ の定義に従う。

【0179】

本明細書に記載のモノクローナル抗体変種は、伝統的な遺伝子工学的方法を通じて得ることができる。当業者は、核酸変異を使用してＤＮＡ分子を修飾する方法を十分に知っている。さらに、重鎖及び軽鎖の変種をコードする核酸分子は、化学合成によっても入手することができる。

【0180】

本発明において、配列同一性（相同性）及び配列類似性パーセントを決定するために使用されるアルゴリズムは、例えば、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０であり、それぞれ Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， （１９７７） Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ． Ｒｅｓ． ２５： ３３８９－３４０２ 及び Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， （１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５： ４０３－４１０ に記載されている。ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０を使用して、例えば参考文献に記載されているパラメータ又はデフォルトパラメータを使用して、本発明のアミノ酸配列同一性のパーセントを決定することができる。ＢＬＡＳＴ分析を実行するために使用されるソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ を通じて公的に入手可能である。

【0181】

本明細書に記載されるように、あるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する前記アミノ酸配列には、前記アミノ酸配列と実質的に同一であるポリペプチド配列、例えば、本明細書に記載の方法（標準パラメータを使用するＢＬＡＳＴ分析など）を使用する場合、本発明のポリペプチド配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を有する配列が含まれる。

【0182】

本明細書で使用される前記アミノ酸配列の変異体は、前記アミノ酸配列に対して７０％を超える同一性、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える同一性を有する配列、例えば、アミノ酸の３、２、又は１個の置換、欠失、又は付加を有する配列を指す。好ましくは、３つ以下のアミノ酸が置換、付加、又は欠失される。より好ましくは、２つ以下のアミノ酸が置換、付加、又は欠失される。最も好ましくは、１つ以下のアミノ酸が置換、付加、又は欠失される。

【0183】

「置換」変種は、天然配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、異なるアミノ酸がその同じ位置に挿入されたものである。置換は、分子内で１つのアミノ酸のみが置換される単一の置換、又は同じ分子内で２つ又はそれ以上のアミノ酸が置換される複数の置換であってもよい。連続した部位で複数の置換を行うことができる。同様に、１つのアミノ酸が複数の残基で置換されていてもよく、そのような変種には置換と挿入の両方が含まれる。「挿入」（又は「付加的」）変種は、１つ又はそれ以上のアミノ酸が天然配列にすぐ隣接する特定の位置に挿入されるものである。アミノ酸のすぐ隣とは、アミノ酸のα－カルボキシル又はα－アミノ官能基への結合を意味する。「欠失」変種は、天然アミノ酸配列中の１つ又はそれ以上のアミノ酸が除去されているものである。通常、欠失変種では、分子の特定の領域で１つ又は２つのアミノ酸が欠失している。

【0184】

本発明において、ＭＭＡＥの構造は、以下の通りである：

【0185】

【化1】

【0186】

本発明において、式ＩのＬ－ＤはＭＭＡＥであり、すなわち、Ｌ－ＤがＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥである場合、その構造は以下で表される：

【0187】

【化2】

【0188】

本発明において、抗ＥＧＦＲ抗体Ａｂは、自身のジスルフィド結合が還元された後に生成されるチオールを介してＬ－Ｄに結合される。例えば、Ｌ－ＤがＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥである場合、ＡｂがＬ－Ｄに結合した後の構造は以下で表される：

【0189】

【化3】

【0190】

本発明において、薬物抗体比（ＤＡＲ）又は薬物負荷は、ｐ、すなわち、式Ｉ：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ の分子中の抗体当たりの薬物モジュール（すなわち、細胞傷害性薬剤）の平均数で表され、これは整数でも分数でもよい。一般式ＩのＡＤＣには、一連の薬物モジュールとコンジュゲートした抗体の集合が含まれる。コンジュゲーション反応によるＡＤＣ配合物中の抗体当たりの薬物モジュールの平均数は、従来の手段、例えば質量分析法、ＥＬＩＳＡ、ＨＩＣ、ＨＰＬＣなどで証明することができる。ｐ内のＡＤＣの定量的分布も決定することができる。場合によっては、他のＤＡＲを予測ＡＤＣから特定のｐ値を有する均質なＡＤＣの分離、精製、検証は、逆相ＨＰＬＣや電気泳動などの手段によって行うことができる。

【0191】

特定の実施態様において、コンジュゲーション反応で、理論上の最大値未満の薬物部分が抗体にコンジュゲートされる。一般的に、抗体は、薬物部分を連結できる多くの遊離の反応性システインチオール基を含んでいない。実際、抗体内のほとんどのシステインチオール基はジスルフィド架橋として存在する。特定の実施態様において、抗体は、部分的又は完全な還元条件下で、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤を用いて還元されて、反応性システインチオール基を生成することができる。

【0192】

本発明において、「治療」とは、予防のため又は臨床病理の過程において、治療される個体又は細胞の自然な経過を変更しようとする臨床的介入を指す。治療の所望の効果には、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的影響の軽減、転移の予防、疾患の進行の遅延、疾患状態の改善又は緩和、及び予後の解消又は改善が含まれる。いくつかの実施態様において、本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、疾患又は障害の発症を遅らせるため、又は疾患又は障害の進行を遅らせるために使用される。治療の成功及び疾患の改善を評価するための上述のパラメータは、医師が熟知してしている日常的な手順によって容易に測定することができる。癌治療の場合、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）を評価すること、及び／又は奏効率（ＲＲ）を決定することによって測定することができる。

【0193】

本発明において、「対象」という用語は脊椎動物を指す。いくつかの実施態様において、脊椎動物は哺乳動物である。哺乳動物には、限定されるものではないが、家畜（例えば、牛）、ペット（例えば、猫、犬、馬）、霊長類、マウス、ラットが含まれる。いくつかの実施態様において、哺乳動物はヒトを指す。

【0194】

本発明において、「有効量」とは、必要な用量及び時間で所望の治療効果又は予防効果を達成するのに有効な量を指す。本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の音を誘発する物質／分子の能力などの要因に応じて変化し得る。治療有効量はまた、物質／分子の毒性又は有害な結果を治療上有益な効果が凌駕している量も包含する。「予防有効量」とは、所望の予防効果を達成するために必要な用量及び時間で有効な量を指す。必ずしもではないが、通常、予防有効用量は、疾患の発症前又は疾患の初期段階で対象に投与されるため、治療有効量よりも少ないであろう。癌の場合、治療有効量の薬物は、癌細胞の数が減少させ、腫瘍サイズを縮小し、周囲の臓器への癌細胞の浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅くし、好ましくは停止させる）、腫瘍の転移を阻害し（すなわち、ある程度遅くし、好ましくは停止させる）、腫瘍の増殖をある程度阻害し、及び／又は癌に関連する１つ又はそれ以上の症状をある程度軽減する。

【0195】

疾患の予防又は治療について、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの適切な用量（単独で使用する場合、又は化学療法剤などの１つ又はそれ以上の他の治療薬と併用する場合）は、治療する疾患の種類、抗体－薬物コンジュゲートの種類、疾患の重症度及び進行度、抗体－薬物コンジュゲートが予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の病歴、及び抗体－薬物コンジュゲートに対する反応性、及び主治医医師の判断に依存するであろう。適切には、抗体－薬物コンジュゲートは、１回又は一連の治療にわたって患者に投与される。

【0196】

本発明において、「相乗的」という用語は、成分又は薬剤の併用投与（例えば、ＭＹＫ－３などの抗体－薬物コンジュゲートとＡＫ１０３などの抗ＰＤ－１抗体、又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用投与）において、個々の成分の相加的な特性又は効果に基づいて期待される効果よりも大きいそのような効果（例えば、腫瘍増殖の阻害、生存時間の延長など）を生み出す観察された結果を指す。いくつかの実施態様において、相乗効果は、Ｂｌｉｓｓ分析を行うことによって決定される（例えば、Ｆｏｕｃｑｕｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｒｅｓ． Ｐｅｒｓｐｅｃｔ． （２０１５）３（３）： ｅ００１４９ を参照、この内容は、すべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。Ｂｌｉｓｓ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔモデルでは、薬物の効果は確率的プロセスの結果であり、薬物は完全に独立して作用する（つまり、薬物は互いに干渉しない（たとえば、薬物の作用部位が異なる）が、それぞれが共通の結果に寄与する）と仮定する。Ｂｌｉｓｓ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔモデルによると、２つの薬物の併用で期待される効果は次の式を使用して計算される：

【0197】

Ｅ_ＡＢ＝Ｅ_Ａ＋Ｅ_Ｂ－Ｅ_Ａ×Ｅ_Ｂ、

【0198】

ここで、Ｅ_ＡとＥ_Ｂはそれぞれ薬物ＡとＢの効果を表し、Ｅ_ＡＢは薬物ＡとＢの併用の効果を表す。観察された併用の効果が期待される効果Ｅ_ＡＢよりも高い場合、２つの薬物は相乗効果があると考えられる。観察された併用の効果がＥ_ＡＢに等しい場合、２つの薬物の併用は相加的であるとみなされる。あるいは、観察された併用の効果がＥ_ＡＢの効果よりも低い場合、２つの薬物の併用は拮抗的であると考えられる。

【0199】

薬物併用の観察された効果は、例えば、対象又は対象集団のＴＧＩ指数、腫瘍サイズ（例えば、体積、質量）、２つ又はそれ以上の時点間（例えば、治療の投与初日と治療の最初の投与後の特定の日数との間）の腫瘍サイズ（例えば、体積、質量）の絶対的変化、２つ又はそれ以上の時点間（例えば、治療の投与初日と治療の最初の投与後の特定の日数との間）の腫瘍サイズ（例えば、体積、質量）の変化率、又は生存時間に基づくことができる。ＴＧＩ指数が薬物併用の観察された効果の尺度として使用される場合、ＴＧＩ指数は１つ又はそれ以上の時点で決定され得る。ＴＧＩ指数が２つ又はそれ以上の時点で決定される場合、場合によっては、複数のＴＧＩ指数の平均又は中央値が、観察された効果の尺度として使用される場合がある。さらに、ＴＧＩ指数は、被験者又は被験者集団において決定され得る。集団においてＴＧＩ指数が決定される場合、集団における（例えば、１つ又はそれ以上の時点における）ＴＧＩ指数の平均又は中央値が、観察された効果の尺度として使用され得る。観察された効果の尺度として腫瘍サイズ又は腫瘍増殖率が使用される場合、腫瘍サイズ又は腫瘍増殖率は、対象又は対象集団において測定され得る。場合によっては、平均又は中央値の腫瘍サイズ又は腫瘍増殖率は、対象について２つ又はそれ以上の時点で、又は対象集団について１つ又はそれ以上の時点で決定される。集団内の生存時間が決定される場合、観察された効果の尺度として平均又は中央値生存時間が使用される場合がある。

【0200】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」には一般的に、使用される用量及び濃度で曝露される細胞又は哺乳動物に対して、非毒性である薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤が含まれる。典型的には、生理学的に許容される担体とは、ｐＨ緩衝水溶液を指す。生理学的に許容される担体の例には、緩衝液、例えばリン酸塩、クエン酸塩、その他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化物質；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジン；単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、例えばグルコース、マンノース、スクロース、トレハロース、又はデキストリン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトール又はソルビトール；塩を形成する対イオン、例えば、ナトリウム；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）が含まれる。

【0201】

いくつかの実施態様において、薬学的に許容される塩は無機酸塩又は有機酸塩であり、ここで、無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、重炭酸塩、炭酸塩、硫酸塩、又はリン酸塩であり、有機酸塩は、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、α－ケトグルタル酸塩、α－グリセロリン酸塩、アルキルスルホン酸塩、又はアリールスルホン酸塩であり；好ましくは、アルキルスルホン酸塩はメタンスルホン酸塩又はエタンスルホン酸塩である；アリールスルホン酸塩は、ベンゼンスルホン酸塩又はｐ－トルエンスルホン酸塩である。

【0202】

薬学的に許容される塩は、当分野で周知の標準手順を使用して、例えば十分な量の塩基性化合物を、薬学的に許容されるアニオンを提供する適切な酸と反応させることによって得ることができる。

【0203】

本発明において、溶媒和物とは、本発明の抗体－薬物コンジュゲートのこれらの形態、すなわち、抗体－薬物コンジュゲートと溶媒分子との配位によって形成される固体又は液体形態のコンジュゲートを指す。水和物は、水分子が配位した溶媒和物の特定の形態である。本発明においては、水和物が好ましい溶媒和物である。

【0204】

本発明において、ＥＧＦＲの過剰発現とは、正常上皮細胞の表面におけるＥＧＦＲの発現レベルと比較して、ＥＧＦＲの発現レベルが増加することをいう。これは、高発現、中程度の発現、及び低発現に分類することができる（Ｗｉｌｄ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｈｅｒ ２００６：５（１）， ｐ１０４－１１３， Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ （ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ） ｉｓ ｎｏｔ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｂｙ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏｔａｌ ｏｒ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｕｍｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ）。

【0205】

本発明において、２０種類の従来のアミノ酸及びその略語は従来の用法に従う。参照により本明細書に組み込まれる、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （第２版， Ｅ．Ｓ． Ｇｏｌｕｂ ａｎｄ Ｄ．Ｒ． Ｇｒｅｎ， Ｅｄｓ．， Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ， Ｍａｓｓ． （１９９１））を参照されたい。

【0206】

ＭＹＫ－３は、ｖｃ（すなわち、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル、ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢとしても知られている）リンカーを介して、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ＢＡ０３）と強力な細胞傷害性小分子薬物ＭＭＡＥ（メチルオーリスタチンＥ）の結合によって形成される。ＭＹＫ－３は、腫瘍細胞の表面にあるＥＧＦＲ受容体に結合することにより、エンドサイトーシスを受けてＭＭＡＥを放出し、それによって、チューブリンが関与するさまざまな細胞生理学的機能（有糸分裂を含む）をブロックし、さらに腫瘍細胞の増殖を阻害して腫瘍細胞の死をもたらす。

【0207】

ＡＫ１０３は、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体薬物であり、免疫チェックポイント阻害剤である。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路をブロックすることにより、Ｔ細胞の活性化がアップレギュレートされ、内因性の抗腫瘍免疫応答が活性化され、それによって腫瘍に対する治療効果を発揮する。

【0208】

本発明における抗体ＢＡ０３は、中国発明特許出願ＣＮ１０３７７２５０４ＡにおけるＢＡ０３である。その調製方法については、特許出願の実施例３を参照されたい。抗体の各部分の配列は次のとおりである：

【0209】

重鎖可変領域の配列は以下のとおりである：

【0210】

ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＮＹＤＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＮＴＤＹＮＴＰＦＴＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＬＤＹＹＤＹＥＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号１）。

【0211】

配列中、下線部はそれぞれＣＤＲ１（配列番号５）、ＣＤＲ２（配列番号６）、及びＣＤＲ３（配列番号７）である。

【0212】

下線のない部分はそれぞれＦＲ１（配列番号８）、ＦＲ２（配列番号９）、ＦＲ３（配列番号１０）、及びＦＲ４（配列番号１１）である。

【0213】

軽鎖可変領域の配列は次のとおりである：

【0214】

ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＧＴＮＩＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＮＮＥＷＰＴＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ （配列番号２）。

【0215】

配列中、下線部はそれぞれＣＤＲ１（配列番号１２）、ＣＤＲ２（配列番号１３）、及びＣＤＲ３（配列番号１４）である。

【0216】

下線のない部分はそれぞれＦＲ１（配列番号１５）、ＦＲ２（配列番号１６）、ＦＲ３（配列番号１７）、及びＦＲ４（配列番号１８）である。

【0217】

重鎖定常領域の配列は次のとおりである：

【0218】

ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３）。

【0219】

軽鎖定常領域の配列は次のとおりである：

【0220】

ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４）。

【0221】

以下、具体的な実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。

【0222】

本発明及び以下の実施例において、ＡＤＣ－３又はＭＲＧ００３はＭＹＫ－３を指すことに注意されたい。

【0223】

実施例１：抗体－薬物コンジュゲートの調製方法
１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を使用して、１０ｍｇの抗体ＢＡ０３を還元緩衝液（２５ｍＭホウ酸ナトリウム、ｐＨ８．０、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に、合計３回緩衝液交換し（最終容量は約１ｍＬであった）、新しいエッペンドルフ遠心管（秤量済み）に移し、秤量した。タンパク質の濃度を検出し、タンパク質の総量を算出した。２．５倍モル量のＤＴＴを抗体に加え、混合物を室温で２時間インキュベートし、混合を続けた。混合物を、１５ｍｌの３０ＫＤ限外濾過装置を使用して、結合緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に、合計３回緩衝液交換した。濃縮液を採取し、Ａ２８０によりタンパク質濃度を測定し、秤量して総タンパク質量を算出した。１０μｌの試料を採取し、エルマン試験により遊離チオール基の数を測定し；
そしてその遊離チオール基のモル濃度を以下の式に従って算出した：

【化4】

ｂ：キュベットの光路長（通常１ｃｍ）。

【0224】

遊離チオール基のモル数は、遊離チオール基のモル濃度と総タンパク質溶液の体積から算出した。

【0225】

遊離チオール基のモル数の１．１倍のｖｃ－ＭＭＡＥ（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｈａｏｙｕａｎ Ｃｈｅｍｅｘｐｒｅｓｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．から購入 、カタログ番号ＨＹ－１５５７５）（ＤＭＳＯに溶解されている）を還元抗体に加え、混合物をよく混合して、断続的に混合しながら室温で２時間反応させた。ｖｃ－ＭＭＡＥのモル数の２０倍のＮ－アセチルシステインを反応系に加えた。反応混合物をよく混合し、５分間放置した。１５ｍｌの３０ＫＤ限外濾過装置を使用して、混合物を結合原液（２０ｍＭクエン酸Ｎａ、０．３％ＮａＣｌ、５％トレハロース、０．０５％ツイーン－８０、ｐＨ６．０）に合計３回緩衝液交換して、抗体－薬物コンジュゲートＭＹＫ－３を得た。試料は４℃で保存した。

【0226】

薬物対抗体比の決定：
調製した抗体－薬物コンジュゲートをＨＩＣ－ＨＰＬＣで分析（Ｊｕｎ Ｏｕｙａｎｇ， Ｄｒｕｇ－Ｔｏ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＤＡＲ） Ｒａｔｉｏ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｂｙ Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐｈａｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， Ｌａｕｒｅｎｔ Ｄｕｃｒｙ （ｅｄ．）， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ， Ｃｈａｐｔｅｒ １７， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ １０４５， ｐ２７５－２８３）して、薬物対抗体比（ＤＡＲ）を決定した。図１に示すように、スペクトルのピーク面積に基づいて算出された平均ＤＡＲは４．１であった。

【0227】

実施例２．ＥＧＦＲ変異を有する細胞株に対するＭＹＫ－３のインビトロ死滅活性
ＥＧＦＲ変異を有する細胞株に対するＭＹＫ－３の殺傷効果を研究するために、異なるＥＧＦＲ変異を有する２つのヒト肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５及びＮＣＩ－Ｈ１６５０を選択し、ＭＹＫ－３と市販の参照薬 Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）の殺傷効果を、ＣＣＫ－８検査試薬を用いる細胞増殖阻害法により測定した。研究結果を表１及び図２～３に示す。

【0228】

【表1】

注：ＥＧＦＲの発現レベルと変異部位については参考文献を参照されたい。ＩＣ_５０の値は、２つの９６ウェルプレートで計算されたＩＣ_５０の平均である。ＮＤは、最も高い増殖阻害％が５０％未満であり、従ってＩＣ_５０値は計算できないことを示す。

【0229】

実験結果は、ＭＹＫ－３が、異なるＥＧＦＲ変異を有する２つのヒト肺癌細胞株に対して顕著な細胞死滅効果を示し、その効果は市販の参照薬Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）よりも大幅に優れていることを示す。

【0230】

実施例３．ＣＤＸモデルにおけるＭＹＫ－３の腫瘍阻害効果
ヒト由来腫瘍細胞異種移植モデル（ＣＤＸモデル）は、免疫不全マウスのヒト腫瘍細胞を用いて確立された腫瘍モデルである。将来の臨床適応症におけるＭＹＫ－３の有効性を効果的に評価するために、ＥＧＦＲ変異ヒトＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルで実験を行った。すべての実験において、市販のＥＧＦＲ標的モノクローナル抗体薬（登録商標）を参照薬物として使用し、腫瘍阻害活性を比較した。

【0231】

【表2】

【0232】

ヌードマウスにヒト肺癌細胞Ｈ１９７５を皮下接種した。腫瘍が１００～２００ｍｍ^３に成長した後、動物をランダムに群別した（Ｄ０）。ＭＹＫ－３は０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、１４日目（Ｄ１４）の腫瘍阻害率はそれぞれ３４％、１２８％、１４１％であった。１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ用量群では、８匹中７匹のマウスが部分的な腫瘍退縮を示した。２６日目（Ｄ２５）までに、１ｍｇ／ｋｇ群では８匹中５匹のマウスが部分的に腫瘍退縮を示したが、３ｍｇ／ｋｇ群では８匹中５匹のマウスが部分的に腫瘍退縮を示し、８匹中２匹のマウスが完全な腫瘍退縮を示した。Ｈ１９７５に対する参照薬Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）の腫瘍阻害率は８２％（Ｄ１４）であった。上記の薬物に対して腫瘍担持マウスは良好な耐容性を示した。Ｈ１９７５に対する１ｍｇ／ｋｇの用量で投与されたＡＤＣ－３の有効性は、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与されたＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）の有効性よりも有意に優れていた。実験結果を図４に示す。

【0233】

実施例４．ＰＤＸモデルにおけるＭＹＫ－３の腫瘍抑制効果
ヒト由来腫瘍組織異種移植モデル（ＰＤＸモデル）は、ヒト腫瘍組織を用いて免疫不全マウスで樹立された腫瘍モデルであり、原発腫瘍の不均一性、分子多様性、組織学的特徴が最大限に保持されている。これは、薬物の臨床治療効果の予測値が高く、近年癌研究での使用が増えている（Ｈｉｄａｌｇｏ－２０１４）。将来の臨床適応症におけるＭＹＫ－３の有効性を効果的に評価するために、５つのＡＺＤ９２９１耐性ヒトＮＳＣＬＣ ＰＤＸモデルで実験が行われた。すべての実験において、市販の第３世代ＥＧＦＲ阻害剤ＡＺＤ９２９１を参照薬物として使用し、腫瘍阻害活性を比較した。この研究で使用された５つのＰＤＸモデルの情報を表３に示す。

【0234】

【表3】

【0235】

１）ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２００５－１４３におけるＭＹＫ－３の有効性に関する試験
ＬＵＮ＃２００５－１４３は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺腺癌（ＮＳＣＬＣの一種）ＰＤＸモデルである。この実験は、ビヒクル群（ＡＤＣ－３ビヒクル）、ＡＺＤ９２９１投与群（５ｍｇ／ｋｇ）、及びＡＤＣ－３投与群（１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ）の合計４群で実施した。実験全体を通じて、ＡＤＣ－３は０日目、４日目、８日目、及び１２日目に合計４回、尾静脈注射により投与され、そしてＡＺＤ９２９１は１日１回胃内投与により合計２９回投与された。実験結果を図５に示す。２９日目におけるＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）投与群の相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）は３６．９０％（Ｐ＜０．０００１）で、腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ％は６３．１０％であり；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は６９．８６％（Ｐ＜０．００１）で、ＴＧＩ％は３０．１４％であり；ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は２５．２７％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は７４．７３％であった。２９日目に、ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）群では、８匹中１匹で完全な腫瘍退縮が観察された。体重に関しては、試験した薬物群のすべての動物が良好な耐容性を示した。実験結果は、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）とＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）の両方が腫瘍増殖を有意に阻害する可能性があり、ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）はＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）よりも腫瘍に対して優れた阻害効果を有し；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）は一定の抗腫瘍活性を示すが、腫瘍に対して有意な阻害効果はない［Ｔ／Ｃ（％）＞４０％］ことを示した。この実験では、腫瘍担持マウスは試験した薬物に対して良好な耐容性を示した。

【0236】

２）ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２２１０－４ａにおけるＭＹＫ－３の有効性に関する試験
ＬＵＮ＃２２１０－４ａは肺ＰＤＸモデルのＡＺＤ９２９１耐性ヒト腺扁平上皮癌である。この実験は、ビヒクル群（ＡＤＣ－３ビヒクル）、ＡＺＤ９２９１投与群（５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＣ－３投与群（１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ）の合計４群で実施した。実験全体を通じて、ＡＤＣ－３は０日目、４日目、８日目、１２日目の合計４回、尾静脈注射により投与され、ＡＺＤ９２９１は１日１回胃内投与により合計２８回投与された。実験結果を図６に示す。２８日目に、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は６８．９９％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は３１．０１％であり；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は１３．１０％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は８６．９０％であり；ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は０．３１％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は９９．６９％であった。２８日目には、ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群とＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群では、それぞれ８匹中１匹及び８匹中７匹で完全な腫瘍退縮が観察された。腫瘍担持マウスは、試験した薬物に対して良好な耐容性を示した。

【0237】

３）ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２２１０－１０６におけるＭＹＫ－３の有効性に関する試験
ＬＵＮ＃２２１０－１０６は、肺ＰＤＸモデルのＡＺＤ９２９１耐性ヒト腺扁平上皮癌である。この実験は、ビヒクル群（ＡＤＣ－３ビヒクル）、ＡＺＤ９２９１投与群（５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＣ－３投与群（１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ）の合計４群で実施した。実験全体を通じて、ＡＤＣ－３は０日目、４日目、８日目、１２日目の合計４回、尾静脈注射により投与され、ＡＺＤ９２９１は１日１回胃内投与により合計３０回投与された。実験結果を図７に示す。３０日目に、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は６５．３１％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は３４．６９％であり；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は５５．４９％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は４４．５１％であり；ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は０．０％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は１００．００％であった。３０日目に、ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群では、８匹中１匹で完全な腫瘍退縮が観察された。実験結果からわかるように、ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）は実験期間全体を通じて腫瘍の増殖を有意に阻害できた。ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）は、投与期間中の腫瘍増殖を有意に阻害する可能性がある；４回の投与後（１２日目）に投与を中止してから実験終了（３０日目）まで、ある程度の抗腫瘍活性はあったものの、腫瘍に対する有意な阻害効果は見られなかった［Ｔ／Ｃ（％）＞４０％］。ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）は、実験期間全体を通じて一定の抗腫瘍活性を示したが、腫瘍に対して有意な阻害効果はなかった［Ｔ／Ｃ（％）＞４０％］。腫瘍担持マウスは、試験した薬物に対して良好な耐容性を示した。

【0238】

４）ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２３５５－１２８におけるＭＹＫ－３の有効性に関する試験
ＬＵＮ＃２３５５－１２８は、ＡＺＤ９２９１耐性ヒト大細胞肺癌ＰＤＸモデルである。この実験は、ビヒクル群（ＡＤＣ－３ビヒクル）、ＡＺＤ９２９１投与群（５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＣ－３投与群（１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ）の合計４群で実施した。実験全体を通じて、ＡＤＣ－３は０日目、４日目、８日目、１２日目の合計４回、尾静脈注射により投与され、ＡＺＤ９２９１は１日１回胃内投与により合計２７回投与された。実験期間は２７日間であった。実験結果を図８に示す。１６日目に、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は３３．６１％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は６６．３９％であり；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は４５．３２％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は５４．６８％であり；ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は３．６０％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は９６．４０％であり、８匹中１匹で完全な腫瘍退縮が観察された。２７日目に、ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の８匹中１匹で完全な腫瘍退縮が観察された。実験結果は、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）とＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）の両方が腫瘍増殖を有意に阻害する可能性があり、ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）はＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）よりも腫瘍に対して優れた阻害効果を有し；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）は一定の抗腫瘍活性を示したが、腫瘍に対して有意な阻害効果はない［Ｔ／Ｃ（％）＞４０％］ことを示した。腫瘍担持マウスは、試験した薬物に対して良好な耐容性を示した。

【0239】

５）ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２４４１－１１８におけるＭＹＫ－３の有効性に関する試験
ＬＵＮ＃２４４１－１１８は、肺ＰＤＸモデルのＡＺＤ９２９１耐性ヒト腺扁平上皮癌である。この実験は、ビヒクル群（ＡＤＣ－３ビヒクル）、ＡＺＤ９２９１投与群（５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＣ－３投与群（１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ）の合計４群で実施した。実験全体を通じて、ＡＤＣ－３は０日目、４日目、８日目、１２日目に尾静脈注射により合計４回投与され、ＡＺＤ９２９１は１日１回胃内投与により合計２８回投与された。実験期間は２８日間であった。実験結果を図９に示す。２５日目に、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は２９．３５％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は７０．６５％であり；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は５．６８％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は９４．３２％であり；ＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は３．４４％（Ｐ＜０．０００１）で、ＴＧＩ％は９６．５６％であった。実験結果は、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）、及びＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）のすべてが腫瘍の増殖を有意に阻害することができ、ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）とＡＤＣ－３（３ｍｇ／ｋｇ）は、ＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に優れた抗腫瘍活性（Ｐ＜０．０５）を有することを示した。腫瘍担持マウスは、試験した薬物に対して良好な耐容性を示した。

【0240】

６）Ｈｕ－ＨＳＣ－ＮＰＧマウス中のヒト肺癌ＰＤＸモデルＬＵＮ＃２２１０－１０６におけるＭＹＫ－３とＡＫ１０３並びにＭＹＫ－３とＡＫ１０３の併用の有効性に関する試験
ＬＵＮ＃２２１０－１０６は、肺ＰＤＸモデルのＡＺＤ９２９１耐性ヒト腺扁平上皮癌である。この実験は、ビヒクル群（ＡＤＣ－３ビヒクル）、ＡＤＣ－３投与群（１ｍｇ／ｋｇ）、ＡＫ１０３投与群（５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）＋ＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）投与群の合計４群で実施した。実験全体を通じて、ＡＤＣ－３単剤投与群には０日目、４日目、８日目に合計３回、尾静脈注射によりＡＤＣ－３を投与した。そしてＡＫ１０３単剤投与群にはＡＫ１０３を尾静脈注射により３日おきに合計８回投与した。ＡＤＣ－３＋ＡＫ１０３投与群は、ＡＤＣ－３を３回、ＡＫ１０３を合計１０回投与し、投与形態は単剤投与群と同様であった。実験期間は３４日間であった。実験結果を図１０に示す。２０日目にＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は１３．３１％（Ｐ＜０．０５）で、ＴＧＩ％は８６．６９％であり；ＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は９３．６１％（Ｐ＞０．０５）で、ＴＧＩ％は６．３９％であり；ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）＋ＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）投与群のＴ／Ｃ（％）は２．７７％（Ｐ＜０．００５）で、ＴＧＩ％は９７．２３％であり、６匹中３匹で腫瘍の完全な退縮が観察された。２０日目から３４日目までの期間中、ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）投与群の動物の平均腫瘍体積は徐々に増加を再開した（１８４ｍｍ^３から８９３ｍｍ^３まで）。ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）＋ＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）投与群の動物の平均腫瘍体積はゆっくり増加し（３８ｍｍ^３から１２６ｍｍ^３まで）、３４日目でも６匹の動物中１匹で完全な腫瘍退縮が観察された。

【0241】

ＡＤＣ－３とＡＫ１０３の併用による相乗効果の有無は、式Ｅ_ＡＢ＝Ｅ_Ａ＋Ｅ_Ｂ－Ｅ_Ａ×Ｅ_Ｂにより計算し、計算対象はＴＧＩ％とした。予測ＴＧＩ％＝０．８６６９＋０．０６３９－０．８６６９×０．０６３９＝８７．５４％。明らかに、予測されるＴＧＩ％（８７．５４％）は観察されたＴＧＩ％（９７．２３％）よりも小さかった。従って、ＡＤＣ－３とＡＫ１０３の併用には相乗効果があると判断できる。

【0242】

上記結果は、ビヒクル対照群と比較して、ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）とＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）及びＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）の併用との両方が腫瘍増殖を有意に阻害できることを示したが、ＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）には腫瘍増殖に対する明らかな阻害効果はなかった。ＡＤＣ－３（１ｍｇ／ｋｇ）単独の投与と比較して、同用量のＡＤＣ－３とＡＫ１０３（５ｍｇ／ｋｇ）の併用は、より顕著な抗腫瘍効果を示した（２０日目、Ｐ＜０．０５）を有し、相乗効果を発揮した。腫瘍担持マウスは、試験した薬物に対して良好な耐容性を示した。

【0243】

５つのＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルにおけるＭＹＫ－３のインビボ有効性試験の結果が表４に要約される。

【0244】

【表4】

【0245】

注：「／」は適用されないことを意味する。腫瘍体積（ＴＶ）を計算する式は次のとおりである：ＴＶ＝ｌ×ｗ^２／２、式中、ｌとｗはそれぞれ腫瘍の測定された長さと幅を表す。測定結果に基づいて、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は、ＲＴＶ＝Ｖ_ｆ／Ｖ０で計算され、式中、Ｖ０は群投与時（すなわち、０日目）に測定された腫瘍体積であり、Ｖ_ｆは最終日に測定された腫瘍体積である。Ｔ／Ｃ（％）＝（投与群のＲＴＶ／ビヒクル群のＲＴＶ）×１００％。ＴＧＩ％＝（ビヒクル群の平均腫瘍体積－投与群の平均腫瘍体積）／ビヒクル群の平均腫瘍体積×１００％。「＋＋＋＋」はＴ／Ｃ（％）≧０かつ≦１０％を示す。「＋＋＋」は、Ｔ／Ｃ（％）＞１０％かつ≦２０％を示す。「＋＋」は、Ｔ／Ｃ（％）＞２０％かつ≦４０％を示す。「＋」はＴ／Ｃ（％）＞４０％を示す。試験薬物の腫瘍阻害活性は、モデルの最高用量でのＴ／Ｃ（％）に基づいて分類される。

【0246】

ＡＺＤ９２９１耐性ヒト肺癌ＰＤＸモデルにおける抗ＰＤ－１抗体とＭＹＫ－３の併用のインビボ有効性試験の結果を表５に要約する。

【0247】

【表5】

【0248】

注：「／」は適用されないことを意味する。腫瘍体積（ＴＶ）を計算する式は次のとおりである：ＴＶ＝ｌ×ｗ^２／２、式中、ｌとｗはそれぞれ腫瘍の測定された長さと幅を表す。測定結果に基づいて、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は、ＲＴＶ＝Ｖ_ｆ／Ｖ０で計算され、式中、Ｖ０は群投与時（すなわち、０日目）に測定された腫瘍体積であり、Ｖ_ｆは最終日に測定された腫瘍体積である。Ｔ／Ｃ（％）＝（投与群のＲＴＶ／ビヒクル群のＲＴＶ）×１００％。ＴＧＩ％＝（ビヒクル群の平均腫瘍体積－投与群の平均腫瘍体積）／ビヒクル群の平均腫瘍体積×１００％。「＋＋＋＋」はＴ／Ｃ（％）≧０かつ≦１０％を示す。「＋＋＋」は、Ｔ／Ｃ（％）＞１０％かつ≦２０％を示す。「＋＋」は、Ｔ／Ｃ（％）＞２０％かつ≦４０％を示す。「＋」はＴ／Ｃ（％）＞４０％を示す。試験薬物の腫瘍阻害活性は、モデルの最高用量でのＴ／Ｃ（％）に基づいて分類される。

【0249】

インビボ有効性試験の結果は、５つのＡＺＤ９２９１耐性ＰＤＸモデル（すべてのモデルはＮＳＣＬＣであった）において、ＭＹＫ－３は顕著な腫瘍増殖阻害効果を示し、腫瘍担持マウスはＭＹＫ－３に対して良好な耐容性を有すること示した。これら５つのＰＤＸモデルはすべて、中程度から高度のＥＧＦＲ発現を示し、ＡＺＤ９２９１に対して耐性があり、そのうちの２つはＥＧＦＲ変異に対して耐性であったことに注意されたい。

【0250】

ＥＧＦＲ変異ＡＺＤ９２９１耐性ＰＤＸモデルにおいて、ＭＹＫ－３とＡＫ１０３（抗ＰＤ－１抗体）の併用は、同用量の単剤（ＭＹＫ－３又はＰＤ－１）よりも顕著な腫瘍増殖阻害効果を示し、相乗効果を達成している。さらに、投与を中止した後に実験の終了まで、動物の平均腫瘍体積はゆっくりと成長し、完全な腫瘍退縮が６匹中１匹の動物で依然として観察された。単独療法で治療有効性を達成するのに必要な用量と比較して、併用療法ではより低用量のＭＹＫ－３又はＰＤ－１が投与された。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-07-04

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗体－薬物コンジュゲート、前記抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、又は前記塩の溶媒和物を含む組成物であって、以下：
１）非小細胞肺癌腫瘍の増殖を阻害するため、及び
２）非小細胞肺癌を治療及び／又は予防するため、
の１つ又はそれ以上のために使用される組成物であり、
ここで、前記非小細胞肺癌は、
１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び
２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群
から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的に前記ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有し、
ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは式Ｉ：
Ａｂ－（ＬＤ）_ｐ
式Ｉ
［式中、
Ａｂは抗ＥＧＦＲ抗体を表し、ここで前記抗ＥＧＦＲ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５～７に示される配列又はそれらの変異体を含み、並びに軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２～１４に示される配列又はそれらの変異体を含み；
Ｌはリンカーを表し；
好ましくは、前記リンカーは、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）吉草酸塩（ＳＰＰ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－ホルミル（ＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、及び６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）からなる群から選択され；
より好ましくは、前記リンカーは６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）から選択され；
Ｄは細胞傷害性薬剤を表し；
好ましくは、前記細胞傷害性薬剤は、毒素、例えばＳＮ－３８、ゲムシタビン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシノイド（例えば、メイタンシンＤＭ１及びメイタンシンＤＭ４）、カリケアマイシン、ＭＧＢＡ（例えば、デュオカルマイシン）、ドキソルビシン、リシン及びジフテリア毒素、Ｉ１３１、インターロイキン類、腫瘍壊死因子、ケモカイン類、及びナノ粒子からなる群から選択され；
より好ましくは、前記細胞傷害性薬剤はＭＭＡＥであり；
ｐは、１～９、好ましくは２～６、より好ましくは３～５を表す］
の構造を有する、組成物。

【請求項2】

前記抗ＥＧＦＲ抗体が以下の特徴：
１）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ、配列番号８～１１に示される配列又はそれらの変異体を含む；
２）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域は、それぞれ、配列番号１５～１８に示される配列又はそれらの変異体を含む；
３）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ定常領域又はそれらの変異体から選択される；
好ましくは、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される；並びに
４）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域は、ヒトのラムダ定常領域及びカッパ定常領域又はそれらの変異体から選択される、
の１つ又はそれ以上を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記抗ＥＧＦＲ抗体が以下の特徴：
１）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は、配列番号１に示される配列、あるいは配列番号１に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖可変領域の配列は配列番号１に示される；
２）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は、配列番号２示される配列、あるいは配列番号２に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは、前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖可変領域の配列は配列番号２に示される；
３）前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は、配列番号３示される配列、あるいは配列番号３に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは、前記抗ＥＧＦＲ抗体の重鎖定常領域の配列は配列番号３に示される；並びに
４）前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は、配列番号４示される配列、あるいは配列番号４に示される配列と、７０％を超える、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を超える同一性を有する配列を含む；
好ましくは、前記抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖定常領域の配列は配列番号４に示される、
の１つ又はそれ以上を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌が、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有し；
好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異であり；
より好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
さらに好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
最も好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異である、
請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩが、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり；
好ましくは、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩがオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）であり；
又は、前記非小細胞肺癌が、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群より選択される、組成物。

【請求項6】

抗体－薬物コンジュゲート、前記抗体－薬物コンジュゲートの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、あるいは前記塩の溶媒和物である第１の薬物と、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である第２の薬物とを含む併用薬物であって、
ここで、前記抗体－薬物コンジュゲートは、請求項１～３のいずれか１項に記載のように定義され、
好ましくは、第１の薬物と第２の薬物は互いに分離されている、併用薬物。

【請求項7】

前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項６に記載の併用薬物であって、
好ましくは、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＫ１０３、トリパリマブ（ＪＳ－００１）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、カムレリズマブ、ティスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、オプジーボ又はニボルマブ、キイトルーダ又はペンブロリズマブ、ＣＳ１００３、セルプルリマブ（ＨＬＸ１０）、ＡＫ１０４、ゲプタノリマブ（ＧＢ２２６）、リズマブ（例えば、ＬＺＭ００９）、ＢＡＴ－１３０６、ＳＣＴ－Ｉ１０Ａ、Ｆ５２０、ＳＧ００１、ＧＬＳ－０１０、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、及びＳＴＩ－Ａ１１１０からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり；
より好ましくは、前記抗ＰＤ－１抗体はＡＫ１０３であり；
好ましくは、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はそれらの組み合わせである、併用薬物。

【請求項8】

前記第１の薬物と前記第２の薬物との重量比は１５：１～１：１５であり、好ましくは、第１の薬物と第２の薬物の重量比は１：１～１：１０である、請求項６に記載の併用薬物。

【請求項9】

１）非小細胞肺癌腫瘍の増殖を阻害するため、及び
２）非小細胞肺癌を治療及び／又は予防するため、
の１つ又はそれ以上のために使用される、請求項６に記載の併用薬物であって、
ここで、前記非小細胞肺癌は、
１）ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌、及び
２）ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり、そして任意選択的に、前記ＥＧＦＲ変異非小細胞肺癌はまた、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上も有する、併用薬物。

【請求項10】

前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩ耐性の非小細胞肺癌が、ＥＧＦＲ変異、ＣＤＫＮ２Ａ／２Ｂ変異、ＳＴＫ１１変異、ｃ－Ｍｅｔ増幅、及びＨＥＲ３増幅からなる群から選択される１つ又はそれ以上を有する、請求項９に記載の併用薬物であって、
好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、エクソン１８、エクソン１９、エクソン２０、及びエクソン２１からなる群から選択される１つ又はそれ以上の部位における変異であり；
より好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、Ｃ７９７Ｓ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ａ、Ｔ８５４Ａ、及びＤ７６１Ｙからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
さらに好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、及びＴ７９０Ｍからなる群から選択される１つ又はそれ以上の変異であり；
最も好ましくは、前記ＥＧＦＲ変異は、ＤｅｌＥ７４６－Ａ７５０、Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ、又はＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重変異であり；
又は、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩは、オシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ダコチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ナザルチニブ、ロシレチニブ、ナコチニブ、バンデタニブ、ネラチニブ、ペリチニブ、カネルチニブ、ブリガチニブ、ＰＫＣ４１２、Ｇｏ６９７６、マベレルチニブ、オルムチニブ、ＷＺ４００２、ＴＡＳ２９１３、セツキシマブ、パニツムマブ、アビチニブ、ＨＳ－１０２９６、及びＴＱＢ３８０４からなる群から選択される１つ又はそれ以上であり；
好ましくは、前記ＥＧＦＲ－ＴＫＩはオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）であり、
又は、前記非小細胞肺癌は、肺腺癌（好ましくは、気管支肺胞癌）、肺扁平上皮癌、肺の腺扁平上皮癌、及び肺大細胞癌からなる群から選択される、併用薬物。

【国際調査報告】