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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-12
(54)【発明の名称】チオストレプトン組成物及びその調製
(51)【国際特許分類】
A61K 38/12 20060101AFI20240905BHJP
A61K 38/05 20060101ALI20240905BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20240905BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240905BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240905BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20240905BHJP
C07K 1/30 20060101ALI20240905BHJP
C07K 7/50 20060101ALI20240905BHJP
【ＦＩ】
A61K38/12
A61K38/05
A61K38/07
A61P35/00
A61K9/08
A61K47/22
A61K47/20
C07K1/30
C07K7/50
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024517123
(86)(22)【出願日】2022-09-16
(85)【翻訳文提出日】2024-04-10
(86)【国際出願番号】 US2022043772
(87)【国際公開番号】W WO2023043982
(87)【国際公開日】2023-03-23
(31)【優先権主張番号】21382839.5
(32)【優先日】2021-09-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521292870
【氏名又は名称】アールエス・オンコロジー，エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ダンカン，ジャレット・ビー
(72)【発明者】
【氏名】ナウモフ，ジョージ・エヌ
(72)【発明者】
【氏名】トンプソン，ロドニー・イー
(72)【発明者】
【氏名】トルレス，アドリア・エスピナス
(72)【発明者】
【氏名】オレ，シャビエ・プホル
(72)【発明者】
【氏名】ソローリャ，リュイス・サストレ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076BB11
4C076BB21
4C076CC27
4C076DD22
4C076DD50
4C076DD55
4C076DD59
4C076EE23
4C076FF67
4C084AA02
4C084BA01
4C084BA14
4C084BA16
4C084BA25
4C084BA27
4C084BA28
4C084BA32
4C084CA59
4C084MA05
4C084MA17
4C084MA56
4C084MA66
4C084NA06
4C084ZB261
4C084ZB262
4H045AA10
4H045AA20
4H045BA13
4H045CA11
4H045EA20
4H045GA05
(57)【要約】
チオストレプトンの超高純度調製物、そのような調製物を含む医薬組成物、及びそのような調製物を調製する方法が開示される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
少なくとも約９８％（ｗ／ｗ）の純度を有するチオストレプトンの超高純度調製物であって；ここで、前記調製物は、以下の量以下を含む：ａ．３０００ｐｐｍのメタノール、好ましくは３００ｐｐｍの以下のメタノール；
ｂ．６００ｐｐｍのジクロロメタン、好ましくは６０ｐｐｍの以下のジクロロメタン；
ｃ．６０ｐｐｍのクロロホルム；及び
ｄ．４１０ｐｐｍのアセトニトリル、好ましくは２００ｐｐｍの以下のアセトニトリル。
【請求項2】
前記チオストレプトンの純度が少なくとも約９９％（ｗ／ｗ）である、請求項１に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【請求項3】
チオストレプトンを精製する方法であって、以下のステップ：（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して、第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）前記第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を前記第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それにより第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それによって第２のチオストレプトン固体を生成するステップと；
（５）前記第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；を含み、
それにより、チオストレプトンの超高純度調製物を生成する、前記方法。
【請求項4】
前記第１の溶媒がクロロホルム、及び任意選択で０．５～１．０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
請求項３または４のいずれか１項に記載の方法であって、ここで： －ステップ（１）は、前記第１のチオストレプトン溶液を１５～３０℃の温度に冷却することをさらに含み、及び／または
－ステップ（２）は、前記第２のチオストレプトン溶液の容積を前記第１のチオストレプトン溶液の容積よりも少なくとも５０％減少させ、任意選択で前記第２のチオストレプトン溶液を１５℃～２５℃の温度に冷却することを含み；及び／または
－ステップ（３）における前記第２の溶媒は、好ましくは前記第２のチオストレプトン溶液の容積と等しい容積のアセトニトリルを含み、ステップ（３）は、任意選択で、前記第１のチオストレプトン固体を前記第３の溶液から分離することと、前記第１のチオストレプトン固体を乾燥することをさらに含み；及び／または
－ステップ（４）の前記第３の溶媒は、水を含むか、または水とアセトニトリルの混合物、好ましくは水とアセトニトリルの４：１（ｖ／ｖ）混合物であり、前記第１のチオストレプトン固体をステップ（４）の第３の溶媒で洗浄することは任意選択で、前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒に浸漬することを含む、前記方法。
【請求項6】
前記第１の固体を第３の溶媒で洗浄して前記第２の固体を生成するステップに続いて、前記第２のチオストレプトン固体を前記第３の溶媒の少なくとも一部のさらなる部分で洗浄する追加のステップを含む、請求項３～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
請求項３～６のいずれか１項に記載の方法であって、前記方法は、前記第１のチオストレプトンを第３溶媒で洗浄して、前記第２のチオストレプトン固体を生成するステップに続いて、前記第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒で洗浄するステップ、好ましくは前記第２のチオストレプトン固体を前記第４の溶媒で浸漬する追加のステップを含み、ここで、前記第４の溶媒は任意選択で水を含む、前記方法。
【請求項8】
請求項３から７のいずれか１項に記載の方法であって、前記第２のチオストレプトン固体のメタノール、アセトニトリル、ジクロロメタン及び／またはクロロホルム含有量が分析され、前記第２のチオストレプトン固体が３０００ｐｐｍを超えるメタノール、６００ｐｐｍのジクロロメタン、６０ｐｐｍのクロロホルム、及び／または４１０ｐｐｍのアセトニトリルを含む場合、前記第２のチオストレプトン固体がステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルに供される、前記方法。
【請求項9】
ステップ（ａ）が、１００ミリグラム～１００キログラム、好ましくは１．０グラム～１０キログラムのチオストレプトンスケールで行われる、請求項３～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
請求項３～９のいずれか１項に記載の方法に従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物。
【請求項11】
請求項１、２または１０のいずれか１項に記載のチオストレプトンの超高純度調製物化合物と；１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項12】
前記医薬組成物が水性組成物であり、好ましくは水１ｍＬ当たり１～５ｍｇの超高純度チオストレプトンを含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
ビタミンＥ－ＴＰＧＳを、好ましくは水１ｍＬ当たりビタミンＥ－ＴＰＧＳ０．０５～０．１ｇの量でさらに含む、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、好ましくは水１ｍＬ当たり０．０１～０．０３ｇの量でさらに含む、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項15】
がんの治療に使用するための、請求項１１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月１７日出願の欧州特許出願第２１３８２８３９．５号に対する恩典を主張するものであり、この出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年９月１７日出願の欧州特許出願第２１３８２８３９．５号に対する恩典を主張するものであり、この出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
チオストレプトンは、ブリアマイシン、チアクチン、アラニンアミド、ＨＲ４Ｓ２０３Ｙ１８などの別名でも公知である環状オリゴペプチド抗生物質である。最近の研究では、チオストレプトンにも有望な抗がん活性があることが示されている。しかし、チオストレプトンを製造及び精製する現在の方法では、不純物及び過剰な残留溶媒が存在するせいで、ヒトへの使用には望ましくない物質がもたらされる。したがって、ヒト対象への投与に好ましいチオストレプトンの高純度調製物の必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【0003】
特定の実施形態では、本発明は、少なくとも約９８％（ｗ／ｗ）の純度を有するチオストレプトンの超高純度調製物を提供し、この調製物は以下の量以下を含む：
ａ．３０００ｐｐｍのメタノール；
ｂ．６００ｐｐｍのジクロロメタン；
ｃ．６０ｐｐｍのクロロホルム；及び
ｄ．４１０ｐｐｍのアセトニトリル。
ａ．３０００ｐｐｍのメタノール；
ｂ．６００ｐｐｍのジクロロメタン；
ｃ．６０ｐｐｍのクロロホルム；及び
ｄ．４１０ｐｐｍのアセトニトリル。
【0004】
特定の実施形態では、本発明はまた、本明細書に開示されるチオストレプトンの超高純度調製物を１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。
【0005】
また、本明細書に記載されている医薬組成物をその必要な対象に投与することを含む、がんを治療する方法も、本明細書では提供されている。
【0006】
特定の実施形態では、本発明はまた、以下のステップを含むチオストレプトンを精製する方法も提供する：
（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それにより第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それにより第２のチオストレプトン固体を生成するステップと；及び
（５）第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；
これにより、チオストレプトンの超高純度調製物を生成するステップと。
（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それにより第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それにより第２のチオストレプトン固体を生成するステップと；及び
（５）第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；
これにより、チオストレプトンの超高純度調製物を生成するステップと。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【図1-1】適正製造基準（ＧＭＰ）結晶化プロセスの概略図が含まれている。
【図1-2】適正製造基準（ＧＭＰ）結晶化プロセスの概略図が含まれている。
【図2】ＧＭＰ残留溶媒置換プロセスの概略図を含む。
【図3】２つの溶媒置換プロセスの概略図を含む。
【図4】示された濃度の化合物で４８時間処理したＳＫＯＶ３細胞の市販ＴＳ（非ＧＭＰ）及び超高純度ＴＳ（ＧＭＰ）に対する応答を示すチャートである。Ｎ＝４複製。
【図5】ＳＫＯＶ３細胞の市販ＴＳ（非ＧＭＰ）及び超高純度ＴＳ（ＧＭＰ）のＥＣ５０値を示すチャートである。Ｎ＝４複製、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、対応のないｔ検定。
【発明を実施するための形態】
【0008】
特定の態様では、本開示はチオストレプトンの調製物を提供する。特定の態様では、調製物はチオストレプトンの超高純度調製物である。チオストレプトンは、多くの異なる方法で製剤化できる原薬または医薬品有効成分であり、いくつかの例示的な医薬製剤を以下に記載する。
【0009】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、約９８％を超える純度；約９９％を超える純度；約９９．５％を超える純度；または約９９．９％を超える純度を有する。
【0010】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、３０００ｐｐｍ未満のメタノール；約１０００ｐｐｍ未満のメタノール；約５００ｐｐｍ未満のメタノール；約３００ｐｐｍ未満のメタノール；約１００ｐｐｍ未満のメタノール；または約５０ｐｐｍ未満のメタノールを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、少なくともメタノールの検出下限である濃度のメタノールを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、約１ｐｐｍ～約３０００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１０００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５０ｐｐｍのメタノールを含む。
【0011】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、６００ｐｐｍ未満のジクロロメタン；約１００ｐｐｍ未満のジクロロメタン；約６０ｐｐｍ未満のジクロロメタン；約２０ｐｐｍ未満のジクロロメタン；または約１０ｐｐｍ未満のジクロロメタンを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、少なくともジクロロメタンの検出下限である濃度のジクロロメタンを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、約１ｐｐｍ～６００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約６０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約２０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１０ｐｐｍのジクロロメタンを含む。
【0012】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、６０ｐｐｍ未満のクロロホルム；約３０ｐｐｍ未満のクロロホルム；約１０ｐｐｍ未満のクロロホルム；または約５ｐｐｍ未満のクロロホルムを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、少なくともクロロホルムの検出下限である濃度のクロロホルムを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、約１ｐｐｍ～約６０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約３０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５ｐｐｍのクロロホルムを含む。
【0013】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、４１０ｐｐｍ未満のアセトニトリル；約２００ｐｐｍ未満のアセトニトリル；約１５０ｐｐｍ未満のアセトニトリル；約１００ｐｐｍ未満のアセトニトリル；または約５０ｐｐｍ未満のアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、少なくともアセトニトリルの検出下限である濃度のアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、約１ｐｐｍ～４１０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約２００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１５０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５０ｐｐｍのアセトニトリルを含む。
【0014】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は９８％を超える純度を有し、３０００ｐｐｍ未満のメタノール；６００ｐｐｍの未満のジクロロメタン；６０ｐｐｍの未満のクロロホルム；及び４１０ｐｐｍの未満のアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は９９％を超える純度を有し、約３００ｐｐｍ未満のメタノール；約６０ｐｐｍの未満のジクロロメタン；約６０ｐｐｍの未満のクロロホルム；及び約２００ｐｐｍのアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は約９９％を超える純度を有し、約１００ｐｐｍ未満のメタノール；約２０ｐｐｍの未満のジクロロメタン；約６０ｐｐｍの未満のクロロホルム；及び約１５０ｐｐｍの未満のアセトニトリルを含む。
【0015】
特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載のチオストレプトンの超高純度調製物のいずれかと、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、組成物は水性組成物である。
【0016】
特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．１～約１０ｍｇの超高純度チオストレプトンを含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約１～約５ｍｇの超高純度チオストレプトンを含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約３ｍｇの超高純度チオストレプトンを含む。
【0017】
特定の実施形態では、組成物はビタミンＥ－ＴＰＧＳをさらに含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．０１～約０．５ｇのビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．０５～約０．１ｇのビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．０７ｇのビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む。
【0018】
特定の実施形態では、組成物はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．００５～約０．０５ｇのＤＭＳＯを含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．０１～約０．０３ｇのＤＭＳＯを含む。特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約０．０１７ｇのＤＭＳＯを含む。
【0019】
特定の実施形態では、組成物は、水１ｍＬ当たり約３ｍｇの超高純度チオストレプトン、水１ｍＬ当たり約０．０７ｇのビタミンＥ－ＴＰＧＳ、及び水１ｍＬ当たり約０．０１７ｇのＤＭＳＯを含む。
【0020】
特定の実施形態では、組成物はまた、１つ以上の薬学的に許容される担体及び賦形剤を含む。チオストレプトンの製剤は、国際公開第２０２０／１４２７８２号に開示されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【0021】
一態様では、以下のステップを含むチオストレプトンを精製する方法が提供される：
（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それによって第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それによって第２のチオストレプトン固体及び第４の溶液を生成するステップと；
（５）第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；
それにより、チオストレプトンの超高純度調製物を製造するステップ。
（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それによって第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それによって第２のチオストレプトン固体及び第４の溶液を生成するステップと；
（５）第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；
それにより、チオストレプトンの超高純度調製物を製造するステップ。
【0022】
特定の実施形態では、この方法は、チオストレプトンと第１の溶媒とを混合して第１のチオストレプトン溶液を生成するステップ（１）を含む。特定の実施形態では、この第１の溶媒は、チオストレプトンの可溶性が高い（すなわち、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する）溶媒である。特定の実施形態では、この第１の溶媒は塩素系溶剤を含む。特定の実施形態では、塩素系溶剤はクロロホルムを含む。特定の実施形態では、この第１の溶媒はクロロホルム及びアルコールを含む。特定の実施形態では、この第１の溶媒は約０．５～約１０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む。特定の実施形態では、塩素系溶剤は約０．５～約５．０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む。特定の実施形態では、クロロホルムは、約０．５～約１．０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む。特定の実施形態では、アルコールは、エタノールである。特定の実施形態では、この第１の溶媒は、約４．０～約７．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、この第１の溶媒は、約５．０～約６．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、この第１の溶媒の温度は、約３０℃～約６０℃である。特定の実施形態では、この第１の溶媒の温度は、約４０℃～約５０℃である。
【0023】
特定の実施形態では、この方法は、第１のチオストレプトン溶液を約１０℃～約３５℃の温度に冷却するステップをさらに含む。特定の実施形態では、チオストレプトン溶液は約１５℃～約３０℃の温度に冷却される。
【0024】
特定の実施形態では、この方法は、第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップ（２）をさらに含む。特定の実施形態では、この第１のチオストレプトン溶液の蒸留は減圧下で行う。特定の実施形態では、この第１のチオストレプトン溶液の減圧蒸留は、約３５℃～約７０℃の温度で行う。特定の実施形態では、この第１のチオストレプトン溶液の減圧蒸留は、約４０℃～約５０℃の温度で行う。特定の実施形態では、第２のチオストレプトン溶液の容積は、第１のチオストレプトン溶液の容積より少なくとも約３０％少ない。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン溶液の容積は、第１のチオストレプトン溶液の容積より少なくとも約５０％少ない。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン溶液の容積は、第１のチオストレプトン溶液の容積より少なくとも約７０％少ない。
【0025】
特定の実施形態では、この方法は、第２のチオストレプトン溶液を約１０℃～約３０℃の温度に冷却するステップをさらに含む。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン溶液は約１５℃～約２５℃の温度に冷却される。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン溶液は高くても約２５℃の温度に冷却される。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン溶液は高くても約２０℃の温度に冷却される。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン溶液は高くても約１５℃の温度に冷却される。
【0026】
特定の実施形態では、この方法は、第２の溶媒を第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それにより第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液（すなわち、母液）を生成するステップ（３）をさらに含む。特定の実施形態では、この第２の溶媒は有機溶媒である。特定の実施形態では、有機溶媒は、チオストレプトンに対する貧溶媒（すなわち貧溶媒）である。特定の実施形態では、この第２の溶媒はアセトニトリルである。特定の実施形態では、この第２の溶媒の容積は、第２のチオストレプトン溶液の容積とほぼ等しい。特定の実施形態では、この第２の溶媒は、撹拌しながら第２のチオストレプトン溶液に添加される。
【0027】
チオストレプトンの貧溶媒とは、チオストレプトンの溶解度が１ｇ／１００ｍＬ、０．５ｇ／１００ｍＬ、または０．１ｇ／１００ｍＬ未満である溶媒である。
【0028】
特定の実施形態では、この方法は、チオストレプトンの貧溶媒を含む洗浄溶媒の１つ以上の部分で第１のチオストレプトン固体を洗浄することを含む。特定の実施形態では、洗浄溶媒はアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、洗浄溶媒はアセトニトリルとクロロホルムとの混合物を含む。特定の実施形態では、洗浄溶媒はアセトニトリル及びクロロホルムの１：１混合物である。
【0029】
特定の実施形態では、この方法は、第１のチオストレプトン固体を第３の溶液から分離することと、第１の固体を乾燥することをさらに含む。
【0030】
特定の実施形態では、この方法は、第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して第２のチオストレプトン固体を生成するステップ（４）を含む。特定の実施形態では、この第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄することは、第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒に浸漬することを含む。いくつかの実施形態では、この第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒に浸漬することは、撹拌しながら行われる。いくつかの実施形態では、この第３の溶媒は、水を含む。いくつかの実施形態では、この第３の溶媒は、水及びアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、水とアセトニトリルとは、約２０：１～約１：１の容積対容積比を有する。特定の実施形態では、水とアセトニトリルとの容積対容積比は約１０：１～約１：１である。特定の実施形態では、水とアセトニトリルとの容積対容積比は約５：１～約１：１である。特定の実施形態では、水とアセトニトリルとの容積対容積比は約１０：１である。特定の実施形態では、水とアセトニトリルとの容積対容積比は約８：１である。特定の実施形態では、水とアセトニトリルとの容積対容積比は約４：１である。
【0031】
特定の実施形態では、第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄することは、少なくとも約３０分間行われる。特定の実施形態では、この第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄することは、少なくとも約６０分間行われる。特定の実施形態では、この第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄することは、少なくとも約９０分間行われる。
【0032】
特定の実施形態では、第２のチオストレプトン固体は、第１のチオストレプトン固体よりも少ない残留溶媒、例えばメタノール、ジクロロメタン、クロロホルム及び／またはアセトニトリルを含む。理論に束縛されるものではないが、ステップ（４）の洗浄により、第３の溶液から分離された後、第１のチオステプトン固体のケーキに捕捉された溶媒分子が除去及び／または交換されると考えられる。
【0033】
特定の実施形態では、この方法は、第１の固体を第３の溶媒で洗浄して第２の固体を生成するステップに続いて、第２のチオストレプトン固体を第３の溶媒の少なくとも一部のさらなる部分で洗浄する追加のステップを含む。
【0034】
特定の実施形態では、この方法は、第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して第２のチオストレプトン固体を生成するステップに続いて、第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒で洗浄する追加のステップを含む。特定の実施形態では、第２の固体を第４の溶媒で洗浄することは、第２の固体を第４の溶媒に浸漬することを含む。特定の実施形態では、第４の溶媒は、水を含む。特定の実施形態では、この第４の溶媒は、水である。
【0035】
特定の実施形態では、第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒で洗浄することは、少なくとも約３０分間行われる。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒で洗浄することは、少なくとも約６０分間行われる。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒で洗浄することは、少なくとも約９０分間行われる。
【0036】
特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒に浸漬することは、高温及び減圧下で行われる。特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒に浸漬することは、高温及び減圧下で、少なくとも３時間、６時間または１０時間行われる。特定の実施形態では、高温度とは約５０℃～約６０℃である。特定の実施形態では、高温度とは約６０℃～約７０℃である。特定の実施形態では、高温度とは約７０℃～約８０℃である。特定の実施形態では、高温度とは少なくとも約５０℃である。特定の実施形態では、高温度とは少なくとも約６０℃である。特定の実施形態では、減圧とは真空である。
【0037】
特定の実施形態では、この方法は、第４の溶液から第２のチオストレプトン固体を分離することと、ステップ（５）第２のチオストレプトン固体を乾燥して残留溶媒を除去することとをさらに含む。特定の実施形態では、第２のチオストレプトン固体の乾燥は、減圧下で行われる。
【0038】
特定の実施形態では、この第２のチオストレプトン固体は、メタノール、アセトニトリル、ジクロロメタン及びクロロホルム含有量について分析される。特定の実施形態では、沈殿物が３０００ｐｐｍを超えるメタノール、６００ｐｐｍのジクロロメタン、６０ｐｐｍのクロロホルム、及び／または４１０ｐｐｍのアセトニトリルを含む場合、第２の固体を、ステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルに供する。特定の実施形態では、ステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルの数は１である。特定の実施形態では、ステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルの数は２である。特定の実施形態では、ステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルの数は３である。特定の実施形態では、ステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルの数は４である。
【0039】
特定の実施形態では、この方法は以下のステップ：ａ．粗チオストレプトンを、０．５～１．０％（ｖ／ｖ）エタノールを含有するクロロホルムに、ｐＨ約５．０～６．０、温度４０～５０℃で溶解するステップと；ｂ．ステップａの溶液を１５～３０℃の温度に冷却するステップと；ｃ．冷却した溶液を４０℃～５０℃の温度に加熱し、真空下で蒸留して容積を少なくとも５０％減少させるステップと；ｄ．蒸留溶液を１５～２５℃の温度に冷却するステップと；ｅ．等量のアセトニトリルを、沈殿が形成されるまで撹拌しながら冷却溶液に添加するステップと；ｆ．沈殿物を集めて乾燥させるステップと；ｇ．乾燥した沈殿物をＨ２Ｏ：アセトニトリルの４：１混合物に浸漬するステップと；ｈ．この沈殿物から残留液体を排出するステップと；ｉ．この沈殿物をＨ２Ｏに浸漬するステップと；ｊ．この沈殿物から残留液体を排出するステップと；Ｋ．この沈殿物を乾燥させるステップと、を含み、チオストレプトンの超高純度調製物を生成する。
【0040】
特定の実施形態では、ステップ（１）は、１０グラムを超えるチオストレプトンスケールで実行される。特定の実施形態では、ステップ（１）は、１キログラムを超えるチオストレプトンスケールで実行される。特定の実施形態では、ステップ（１）は、１０グラムを超えるチオストレプトンスケールで実行される。特定の実施形態では、ステップ（１）は、約１００ミリグラム～約１００キログラム、約１００ミリグラム～約１０キログラム、約１．０グラム～約１０キログラム、約１．０グラム～約１０キログラム、約１．０グラム～約１．０キログラム、または約２０．０グラム～約１００グラムというチオストレプトンスケールで行われる。特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物を提供する。
【0041】
特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される医薬組成物のいずれか１つをその必要な対象に投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。
【0042】
特定の実施形態では、本発明のチオストレプトンの超高純度調製物中に存在する残留溶媒は、ＵＳＰ＜４６７＞に概説されている手順に従って決定され得る。ＵＳＰ＜４６７＞は、とりわけ、医薬品中の残留溶媒の暴露限界を確立するための手順を確立している。
【0043】
医薬組成物
特定の実施形態では、本発明のチオストレプトンの超高純度調製物、または本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物は、医薬組成物中に製剤化される。例えば、この医薬組成物は、チオストレプトンの超高純度調製物及び薬学的に許容される担体を含んでもよい。さらなる例として、この医薬組成物は、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物及び薬学的に許容される担体を含んでもよい。
特定の実施形態では、本発明のチオストレプトンの超高純度調製物、または本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物は、医薬組成物中に製剤化される。例えば、この医薬組成物は、チオストレプトンの超高純度調製物及び薬学的に許容される担体を含んでもよい。さらなる例として、この医薬組成物は、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物及び薬学的に許容される担体を含んでもよい。
【0044】
特定の実施形態では、この医薬組成物は、３０００ｐｐｍ未満のメタノール；約１０００ｐｐｍ未満のメタノール；約５００ｐｐｍ未満のメタノール；約３００ｐｐｍ未満のメタノール；約１００ｐｐｍ未満のメタノール；または約５０ｐｐｍ未満のメタノールを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、少なくともメタノールの検出下限である濃度のメタノールを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、約１ｐｐｍ～約３０００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１０００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５０ｐｐｍのメタノールを含む。
【0045】
特定の実施形態では、この医薬組成物は、６００ｐｐｍ未満のジクロロメタン；約１００ｐｐｍ未満のジクロロメタン；約６０ｐｐｍ未満のジクロロメタン；約２０ｐｐｍ未満のジクロロメタン；または約１０ｐｐｍ未満のジクロロメタンを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、少なくともジクロロメタンの検出下限である濃度のジクロロメタンを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、約１ｐｐｍ～６００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約６０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約２０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１０ｐｐｍのジクロロメタンを含む。
【0046】
特定の実施形態では、この医薬組成物は、６０ｐｐｍ未満のクロロホルム；約３０ｐｐｍ未満のクロロホルム；約１０ｐｐｍ未満のクロロホルム；または約５ｐｐｍ未満のクロロホルムを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、少なくともクロロホルムの検出下限である濃度のクロロホルムを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、約１ｐｐｍ～約６０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約３０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５ｐｐｍのクロロホルムを含む。
【0047】
特定の実施形態では、この医薬組成物は、４１０ｐｐｍ未満のアセトニトリル；約２００ｐｐｍ未満のアセトニトリル；約１５０ｐｐｍ未満のアセトニトリル；約１００ｐｐｍ未満のアセトニトリル；または約５０ｐｐｍ未満のアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、少なくともアセトニトリルの検出下限である濃度のアセトニトリルを含む。特定の実施形態では、この医薬組成物は、約１ｐｐｍ～４１０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約２００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１５０ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約１００ｐｐｍ、または約１ｐｐｍ～約５０ｐｐｍのアセトニトリルを含む。
【0048】
特定の実施形態では、本発明の組成物及び方法は、それを必要とする個体を治療するために利用され得る。特定の実施形態では、この個体は、ヒトなどの哺乳動物、または非ヒト哺乳動物である。ヒトなどの動物に投与される場合、この組成物または化合物は、好ましくは、例えば、チオストレプトンの超高純度調製物、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与される。薬学的に許容される担体は、当技術分野において周知であり、例えば、水もしくは生理学的緩衝食塩水などの水溶液、またはグリコール、グリセロール、オリーブ油などの油、もしくは有機エステルなどの、他の溶媒もしくはビヒクルを含む。
【0049】
薬学的に許容される担体は、例えば、チオストレプトンなどの化合物の安定化、溶解度の増加、または吸収の増加に作用する生理学的に許容される薬剤を含んでもよい。そのような生理学的に許容される薬剤としては、例えば、グルコース、スクロースまたはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質または他の安定剤もしくは賦形剤が挙げられる。
【0050】
医薬的に許容可能な抗酸化剤のさらなる例としては、以下：（１）水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロシキトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなど；及び（３）金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
【0051】
「薬学的に許容される」という語句は、本明細書において用いる場合、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症がなく、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適した、それらの化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指して用いられる。
【0052】
語句「薬学的に許容可能な担体」とは、本明細書で使用される場合、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化物質などの薬学的に許容可能な物質、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、かつ対象に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。医薬的に許容可能な担体として機能し得る材料のいくつかの例としては、以下：（１）糖、例えばラクトース、グルコース、及びスクロース；（２）デンプン、例えばコーンスターチ及びジャガイモデンプン；（３）セルロース、及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばココアバター及び坐剤ワックス；（９）油、例えばピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝剤；ならびに（２１）医薬製剤に採用される他の非毒性適合性物質が挙げられる。
【0053】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、活性化合物、例えば、チオストレプトンを、担体及び任意選択で、１つ以上の副成分と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、活性物質を１つ以上の液体担体と均一かつ緊密に会合させることによって調製される。
【0054】
懸濁液は、活性化合物（複数可）に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微晶質セルロース、メタ水酸化アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ ｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、ベントナイト、寒天、及びトラガカント、ならびにそれらの混合物を含んでもよい。
【0055】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントも含んでもよい。微生物の活動の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含によって確実となり得る。糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることも望ましい場合がある。
【0056】
医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に対し毒性を有さずに、特定の患者、組成物、及び投与様式に対する所望の治療応答を達成するのに有効である、有効成分の量を得るように変化されてもよい。
【0057】
選択された投薬レベルは、用いられる特定化合物もしくは化合物の組み合わせの活性、投与経路、投与時間、用いられる特定化合物（複数可）のクリアランスもしくは分泌の速度、治療期間、用いられる特定化合物（複数可）と併用される他の薬物、化合物、及び／もしくは材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康、及び以前の病歴、ならびに医学分野において周知の同様の因子を含む多様な因子に依存する。
【0058】
当技術分野の通常の技能を有する医師または獣医は、必要な医薬組成物の治療有効量を容易に決定及び処方し得る。例えば、医師または獣医は、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで医薬組成物または化合物の投与を開始し、そして所望の効果が達成されるまで用量を漸増させることが可能である。「治療上有効な量」とは、所望の治療効果を引き出すのに十分な化合物の濃度を意味する。概して、化合物の有効量は、対象の体重、性別、年齢及び病歴によって異なることは理解される。有効量に影響する他の因子としては、限定するものではないが、患者の状態の重症度、治療される障害、化合物の安定性、及び所望される場合は、チオストレプトンとともに投与される別の種類の活性剤が挙げられる。薬剤の複数回投与により、より大きな総用量を送達し得る。有効性及び投与量を決定する方法は、当業者に公知である（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３ ｅｄ．，１８１４－１８８２、参照により本明細書に組み込まれる）。
【0059】
一般に、本明細書に記載の組成物及び方法で使用される活性化合物の適切な１日用量とは、治療効果を生じるために有効な最低用量である化合物の量である。そのような有効用量は、一般的に上述の因子に依存する。
【0060】
所望される場合、有効な１日用量の活性化合物は、別個に投与される１回、２回、３回、４回、５回、６回、またはそれ以上の副用量として、１日にわたって適切な間隔で別々に、任意選択で、単位剤形で投与され得る。特定の実施形態では、活性化合物は、１日２回または３回投与され得る。特定の実施形態では、活性化合物は、１日１回投与される。
【0061】
この治療を受ける患者は、それを必要とする任意の動物であり、霊長類、特にヒト、及びウマ、ウシ、ブタ、及びヒツジなどの他の哺乳動物、ならびに家禽及びペットを一般に含む。
【0062】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物は、単独で投与されてもよいし、または別の種類の治療剤と併用して投与されてもよい。本明細書において用いる場合、「併用投与」という語句は、先に投与された活性化合物が体内で依然有効である間に第２の化合物が投与されるような、２つ以上の異なる治療化合物の任意の投与形態を指す（例えば、２つの化合物は患者内で同時に有効であり、これは２つの化合物の相乗効果を含み得る）。例えば、異なる活性化合物は、同じ製剤で投与されてもよいし、別々の製剤で投与されてもよく、同時に投与されても連続して投与されてもよい。特定の実施形態では、異なる活性化合物を、互いの１時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、または１週間以内に投与してもよい。ゆえに、かかる処置を受ける個体は、異なる活性化合物の組み合わせ効果から利益を得る場合がある。
【0063】
特定の実施形態では、チオストレプトンの超高純度調製物と１つ以上の追加の活性薬剤（例えば、１つ以上の追加の化学療法剤（複数可））との併用投与は、チオストレプトンの超高純度調製物または１つ以上の追加の活性剤（複数可）の各々の個々の投与よりも有効性が改善されている。このような特定の実施形態では、併用投与は相加効果を提供し、ここで相加効果とは、チオストレプトンの超高純度調製物及び１つ以上の追加の活性薬剤（複数可）の個別投与の効果のそれぞれの合計を指す。
【0064】
「治療する」という用語は、予防的及び／または治療的処置を含む。「予防的または治療的処置」という用語は当該技術分野では認識されているものであり、主題組成物の１つ以上をホストに投与することを含む。望ましくない状態（例えば、宿主動物の疾患または他の望ましくない状態）の臨床兆候前に投与される場合、その処置は予防的であるが（すなわち、望ましくない状態を発症することから宿主を保護する）、一方で、望ましくない状態の兆候後に施される場合、その処置は治療的である（すなわち、既存の望ましくない状態またはその副作用を軽減する、改善する、または安定させることを意図する）。治療にはまた、望ましくない症状または副作用を取り除くことも含んでもよい。本明細書で使用される場合、疾患、障害、または状態の治療には、疾患、障害、または状態の合併症（複数可）に特有の根底にある病態生理学を治療することなどにより、その疾患、障害、または状態の合併症（複数可）を治療することが含まれる。活性薬剤が投与される対象は、無症候性であっても症候性であってもよい。
【0065】
特定の実施形態では、チオストレプトン及びビタミンＥ－ＴＰＧＳの超高純度調製物を含む組成物は、カテーテルを使用して細胞及び／または対象に投与され、組成物を対象の体腔に注入し、及び／または対象の体腔をその組成物で洗浄する。本発明の特定の実施形態で使用され得るカテーテルの例としては、限定するものではないが、胸腔内カテーテル及び腹腔内カテーテルが挙げられる。非限定的な例では、胸膜内カテーテルを使用して、チオストレプトン及びビタミンＥ－ＴＰＧＳの超高純度調製物を含む本発明の組成物の１回以上の用量を、複数の滲出液を有する対象の複数の腔に投与する。別の非限定的な例では、腹腔内カテーテルを使用して、卵巣癌を患う対象に、チオストレプトンとビタミンＥ－ＴＰＧＳの超高純度調製物を含む本発明の組成物を腹腔に投与することができる。
【0066】
定義
「ＮＬＴ」とは、「Ｎｏｔ Ｌｅｓｓ Ｔｈａｎ（以下）」を意味する、業界で認知された用語である。
「ＮＬＴ」とは、「Ｎｏｔ Ｌｅｓｓ Ｔｈａｎ（以下）」を意味する、業界で認知された用語である。
【0067】
本明細書で使用される「浸漬」とは、固体材料を液体に浸漬することを指す。
【0068】
本明細書で使用される「ＴＳ」とは、チオストレプトンを指す。
【0069】
本明細書で使用される「超高純度」とは、少なくとも約９８％（ｗ／ｗ）の純度、ならびに以下：３０００ｐｐｍのメタノール、６００ｐｐｍのジクロロメタン、６０ｐｐｍのクロロホルム及び／または４１０ｐｐｍのアセトニトリルの量以下を、すなわち、ＩＣＨ（人間用医薬品登録のための技術的要件調和に関する国際会議）のクラス２溶媒の要件に準拠して、有する物質を指す。
【0070】
「ビタミンＥ－ＴＰＧＳ」とは当該技術分野で認知された用語であり、Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールコハク酸塩を指す。ビタミンＥ－ＴＰＧＳとはまた、Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール１０００コハク酸塩としても公知である。「ビタミンＥ－ＴＰＧＳ」、「ＶｉｔＥ」、及び「ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【0071】
「ｖ／ｖ」とは、当該技術分野で認識されている用語であり、容積で測定した、混合物内の特定の物質の割合を指す。
【0072】
「ｗ／ｗ」とは当該技術分野で認識されている用語であり、容積で測定した、混合物内の特定の物質の割合を指す。
【0073】
好ましい実施形態
１．少なくとも約９８％（ｗ／ｗ）の純度を有するチオストレプトンの超高純度調製物であって；ここで、この調製物は、以下の量以下を含む：
ａ．３０００ｐｐｍのメタノール；
ｂ．６００ｐｐｍのジクロロメタン；
ｃ．６０ｐｐｍのクロロホルム；及び
ｄ．４１０ｐｐｍのアセトニトリル。
１．少なくとも約９８％（ｗ／ｗ）の純度を有するチオストレプトンの超高純度調製物であって；ここで、この調製物は、以下の量以下を含む：
ａ．３０００ｐｐｍのメタノール；
ｂ．６００ｐｐｍのジクロロメタン；
ｃ．６０ｐｐｍのクロロホルム；及び
ｄ．４１０ｐｐｍのアセトニトリル。
【0074】
２．チオストレプトンの純度が少なくとも約９９％（ｗ／ｗ）である、実施形態１に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0075】
３．３００ｐｐｍ以下のメタノールを含む、実施形態１または２に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0076】
４．１００ｐｐｍ以下のメタノールを含む、実施形態３に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0077】
５．前記調製物が６０ｐｐｍ以下のジクロロメタンを含む、実施形態１～４のいずれか１項に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0078】
６．前記調製物が２０ｐｐｍ以下のジクロロメタンを含む、実施形態５に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0079】
７．前記調製物が２００ｐｐｍ以下のアセトニトリルを含む、実施形態１～６のいずれか１項に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0080】
８．前記調製物が１５０ｐｐｍ以下のアセトニトリルを含む、実施形態７のいずれか１項に記載のチオストレプトンの超高純度調製物。
【0081】
９．実施形態１～８のいずれか１項に記載のチオストレプトンの超高純度調製物；及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体、を含む医薬組成物。
【0082】
１０．前記医薬組成物が水性組成物である、実施形態９に記載の医薬組成物。
【0083】
１１．水１ｍＬ当たり約１～約５ｍｇの超高純度チオストレプトンを含む、実施形態１０に記載の医薬組成物。
【0084】
１２．水１ｍＬ当たり約３ｍｇの超高純度チオストレプトンを含む、実施形態１１に記載の医薬組成物。
【0085】
１３．ビタミンＥ－ＴＰＧＳをさらに含む、実施形態１０～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0086】
１４．水１ｍＬ当たり約０．０５～約０．１ｇのビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【0087】
１５．ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む、実施形態１０～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0088】
１６．水１ｍＬ当たり約０．０１～約０．０３ｇのＤＭＳＯを含む、実施形態１５に記載の医薬組成物。
【0089】
１７．チオストレプトンを精製する方法であって、以下のステップ：
（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して、第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）前記第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を前記第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それにより第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それによって第２のチオストレプトン固体を生成するステップと；
（５）前記第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；を含み、
それにより、チオストレプトンの超高純度調製物を生成する、前記方法。
（１）チオストレプトンを第１の溶媒に溶解して、第１のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（２）前記第１のチオストレプトン溶液から溶媒不純物を蒸留して第２のチオストレプトン溶液を生成するステップと；
（３）第２の溶媒を前記第２のチオストレプトン溶液と混合してチオストレプトンを沈殿させ、それにより第１のチオストレプトン固体及び第３の溶液を生成するステップと；
（４）前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して不純物を除去し、それによって第２のチオストレプトン固体を生成するステップと；
（５）前記第２のチオストレプトン固体を乾燥させて残留溶媒を除去するステップと；を含み、
それにより、チオストレプトンの超高純度調製物を生成する、前記方法。
【0090】
１８．前記第１の溶媒がクロロホルムを含む、実施形態１６または１７に記載の方法。
【0091】
１９．前記第１の溶媒が約０．５～約１．０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む、実施形態１８に記載の方法。
【0092】
２０．前記第１の溶媒のｐＨが約５～約６である、実施形態１６～１９のいずれか１項に記載の方法。
【0093】
２１．前記第１の溶媒の温度が約４０℃～約５０℃である、実施形態１６～２０のいずれか１項に記載の方法。
【0094】
２２．ステップ（１）が、第１のチオストレプトン溶液を約１５～約３０℃の温度に冷却することをさらに含む、実施形態１６～２１のいずれか１項に記載の方法。
【0095】
２３．ステップ（２）が、第１のチオストレプトン溶液を減圧で蒸留することを含む、実施形態１６～２２のいずれか１項に記載の方法。
【0096】
２４．前記第１のチオストレプトン溶液の蒸留が約４０℃～約５０℃の温度で行われる、実施形態１６～２３のいずれか１項に記載の方法。
【0097】
２５．前記第２のチオストレプトン溶液の容積が、前記第１のチオストレプトン溶液の容積より少なくとも約５０％少ない、実施形態１６～２４のいずれか１項に記載の方法。
【0098】
２６．ステップ（２）が、第２のチオストレプトン溶液を約１５～約２５℃の温度に冷却することをさらに含む、実施形態１６～２５のいずれか１項に記載の方法。
【0099】
２７．前記第２の溶媒がアセトニトリルを含む、実施形態１６～２６のいずれか１項に記載の方法。
【0100】
２８．第２の溶媒の容積が第２のチオストレプトン溶液の容積とほぼ等しい、実施形態１６～２７のいずれか１項に記載の方法。
【0101】
２９．前記第２の溶媒が、撹拌しながら前記第２の溶液に添加される、実施形態１６～２８のいずれか１項に記載の方法。
【0102】
３０．ステップ（３）が、前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶液から分離することと、前記第１のチオストレプトン固体を乾燥することをさらに含む、実施形態１６～２９のいずれか１項に記載の方法。
【0103】
３１．前記第３の溶媒が水を含む、実施形態１６～３０のいずれか１項に記載の方法。
【0104】
３２．前記第３の溶媒が水とアセトニトリルの混合物である、実施形態１６～３１のいずれか１項に記載の方法。
【0105】
３３．前記第３の溶媒が水とアセトニトリルの約４：１（ｖ／ｖ）混合物である、実施形態１６～３２のいずれか１項に記載の方法。
【0106】
３４．前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄することが、前記第１のチオストレプトン固体を前記第３の溶媒に浸漬することを含む、実施形態１６～３３のいずれか１項に記載の方法。
【0107】
３５．前記浸漬が少なくとも約３０分間実施される、実施形態３４に記載の方法。
【0108】
３６．前記第１の固体を第３の溶媒で洗浄して第２の固体を生成するステップに続いて、前記第２のチオストレプトン固体を前記第３の溶媒の少なくとも一部のさらなる部分で洗浄する追加のステップを含む、実施形態１６～３５のいずれか１項に記載の方法。
【0109】
３７．前記第１のチオストレプトン固体を第３の溶媒で洗浄して前記第２のチオストレプトン固体を生成するステップに続いて、前記第２のチオストレプトン固体を第４の溶媒で洗浄する追加のステップを含む、実施形態１６～３６のいずれか１項に記載の方法。
【0110】
３８．前記第４の溶媒が水を含む、実施形態１６～３７のいずれか１項に記載の方法。
【0111】
３９．前記洗浄が前記第２のチオストレプトン固体を前記第４の溶媒に浸漬することを含む、実施形態１６～３８のいずれか１項に記載の方法。
【0112】
４０．前記浸漬が少なくとも約３０分間実施される、実施形態３９に記載の方法。
【0113】
４１．前記浸漬が、真空下、約５０～約６０℃の温度で少なくとも１０時間実施される、実施形態３９または４０に記載の方法。
【0114】
４２．前記第２のチオストレプトン固体を、メタノール、アセトニトリル、ジクロロメタン及び／またはクロロホルム含有量について分析する、実施形態１６～４１のいずれか１項に記載の方法。
【0115】
４３．前記第２のチオストレプトン固体が３０００ｐｐｍを超えるメタノール、６００ｐｐｍのジクロロメタン、６０ｐｐｍのクロロホルム、及び／または４１０ｐｐｍのアセトニトリルを含む場合、前記第２のチオストレプトン固体がステップ（４）及び（５）のさらなるサイクルに供される、実施形態４２に記載の方法。
【0116】
４４．前記ステップ（ａ）が、約１００ミリグラム～約１００キログラムのチオストレプトンスケールで行われる、実施形態１６～４３のいずれか１項に記載の方法。
【0117】
４５．前記ステップ（ａ）が、約１．０グラム～約１０キログラムのチオストレプトンスケールで行われる、実施形態４４に記載の方法。
【0118】
４６．前記ステップ（ａ）が、約２０．０グラム～約１．０キログラムのチオストレプトンスケールで行われる、実施形態４５に記載の方法。
【0119】
４７．実施形態１７～４６のいずれか１項に記載の方法に従って調製されたチオストレプトンの超高純度調製物。
【0120】
４８．実施形態９～１６に記載の医薬組成物を、その必要な対象に投与することを含む、がんを治療する方法。
【実施例】
【0121】
本明細書に記載の本発明をより完全に理解し得るように、以下の実施例を示す。本出願に記載の例は、本明細書に提供される化合物、組成物、材料、デバイス、及び方法を例示するために提供され、それらの範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。
実施例１：チオストレプトンの超高純度調製物の製造
材料及び方法。同一性及び効力を実証するために、米国薬局方のＡＰＩチオストレプトン及び精製チオストレプトン原薬（ＤＳ）の両方を、チオストレプトンのＵＳＰモノグラフに指定されているアッセイを使用して既知のＵＳＰ標準と比較した。
１．ＩＲスペクトルによる識別、ＵＳＰ＜１９７Ｋ＞
２．抗生物質－微生物アッセイ、ＵＳＰ＜８１＞
実施例１：チオストレプトンの超高純度調製物の製造
材料及び方法。同一性及び効力を実証するために、米国薬局方のＡＰＩチオストレプトン及び精製チオストレプトン原薬（ＤＳ）の両方を、チオストレプトンのＵＳＰモノグラフに指定されているアッセイを使用して既知のＵＳＰ標準と比較した。
１．ＩＲスペクトルによる識別、ＵＳＰ＜１９７Ｋ＞
２．抗生物質－微生物アッセイ、ＵＳＰ＜８１＞
【0122】
さらに、ＵＳＰ＜４６７＞に記載されているヘッドスペースガスクロマトグラフィーアッセイを利用して、有機不純物、無機不純物、及び残留溶媒を測定し、ＤＳ製造プロセスによる４つのクラス２溶剤について、残留溶媒をＩＣＨ推奨限度値まで低減した後、精製チオストレプトンＤＳの純度を確認した。ＵＳＰ＜４６７＞に概説されているように、ガスクロマトグラフには、炎イオン化検出器が装備されていた。ＤＳ製造プロセスの２番目の部分には、クラス２の溶媒制限が確実に満たされるようにするための工程内管理が含まれている。したがって、ＤＳの再処理は許可されない。
【0123】
ｃＧＭＰグレードのチオストレプトン原薬（ＧＭＰ ＴＳ ＤＳ）の製造プロセスには、結晶化プロセス（ＣＰ）（以下「Ａ」）に続いて残留溶媒置換プロセス（ＲＳＤＰ）（以下「Ｂ」）が含まれた。２ｋｇスケールのｃＧＭＰ製造プロセス（ＧＭＰ ＤＳロット１）の各部分のプロセスフロー図を、図１及び図２に示す；１４０ｇスケールの非ＧＭＰとの比較。
Ａ．結晶化プロセス（ＣＰ）（図１）
Ａ．結晶化プロセス（ＣＰ）（図１）
【0124】
ＧＭＰ ＣＰを図１に示す。プロセスの説明は次のとおりである。
使用したクロロホルムはｐＨ５～６であり、安定剤として０．５～１．０％のエタノールを含んでいた。
２ｋｇのチオストレプトン粗ＡＰＩを、２つの１ｋｇ部分に分割した。各部分について：
１．２４Ｌのクロロホルムを、３μｍカートリッジフィルターを通して室温で３０－Ｌ ハステロイＣ－２２反応器に充填した。
２．１ｋｇのチオストレプトンＡＰＩを追加した。
３．反応器を撹拌しながら４５℃（４０～５０℃）に加熱し、チオストレプトンが完全に溶解して透明な溶液が得られるまで保持した。
４．容器を撹拌しながら２５℃（２０～３０℃）に冷却した。
５．溶解液を６０－Ｌ ハステロイ Ｃ－２２反応器に移し、３μｍカートリッジ研磨フィルターで濾過した。
６．３０Ｌ反応器、移送ライン及びフィルターを４Ｌのクロロホルムですすぎ、これら４Ｌを６０Ｌの反応器に集めた。
使用したクロロホルムはｐＨ５～６であり、安定剤として０．５～１．０％のエタノールを含んでいた。
２ｋｇのチオストレプトン粗ＡＰＩを、２つの１ｋｇ部分に分割した。各部分について：
１．２４Ｌのクロロホルムを、３μｍカートリッジフィルターを通して室温で３０－Ｌ ハステロイＣ－２２反応器に充填した。
２．１ｋｇのチオストレプトンＡＰＩを追加した。
３．反応器を撹拌しながら４５℃（４０～５０℃）に加熱し、チオストレプトンが完全に溶解して透明な溶液が得られるまで保持した。
４．容器を撹拌しながら２５℃（２０～３０℃）に冷却した。
５．溶解液を６０－Ｌ ハステロイ Ｃ－２２反応器に移し、３μｍカートリッジ研磨フィルターで濾過した。
６．３０Ｌ反応器、移送ライン及びフィルターを４Ｌのクロロホルムですすぎ、これら４Ｌを６０Ｌの反応器に集めた。
【0125】
最初の部分からの２８Ｌを２５℃（２０～３０℃）に保持し、２番目の部分からの２８Ｌを６０Ｌの反応器に加え、最初の部分と混合した。プロセスは次のように続いた。
１．反応器を４５℃（４０～５０℃）に加熱し、溶媒を真空下で撹拌しながら蒸留した。
２．容積が約２２Ｌに減少したら、反応器を、撹拌しながら約３０分、２０℃（１５～２５℃）まで冷却した。
３．温度を２０℃（１５～２５℃）に維持したまま、撹拌しながら２２Ｌのアセトニトリルを１時間かけて加えた。
４．懸濁液を２０℃（１８～２２℃）で最長１時間撹拌した。
５．懸濁液を２０℃（１８～２２℃）でハステロイ Ｃ－２２フィルタードライヤーに充填した。
６．母液をフィルタードライヤーから除去した。
７．ケーキをクロロホルム２Ｌとアセトニトリル２Ｌの混合物（２０℃）で洗浄し、ケーキをスコップで取り出し、水を切った。
８．ケーキを４Ｌのアセトニトリル（２０℃）で洗浄し、そのケーキをスコップで取り出し、３０分間浸漬し、水を切った。このプロセスステップは２回行った。
９．固体を真空下、ジャケット温度５５℃で最長９時間乾燥させた。
１０．フィルタードライヤーを冷却した。
１１． 工程内管理実施（ヘッドスペースガスクロマトグラフィー・炎イオン化検出器（ＨＳＧＣ－ＦＩＤ）により残留溶媒を確認）。
１．反応器を４５℃（４０～５０℃）に加熱し、溶媒を真空下で撹拌しながら蒸留した。
２．容積が約２２Ｌに減少したら、反応器を、撹拌しながら約３０分、２０℃（１５～２５℃）まで冷却した。
３．温度を２０℃（１５～２５℃）に維持したまま、撹拌しながら２２Ｌのアセトニトリルを１時間かけて加えた。
４．懸濁液を２０℃（１８～２２℃）で最長１時間撹拌した。
５．懸濁液を２０℃（１８～２２℃）でハステロイ Ｃ－２２フィルタードライヤーに充填した。
６．母液をフィルタードライヤーから除去した。
７．ケーキをクロロホルム２Ｌとアセトニトリル２Ｌの混合物（２０℃）で洗浄し、ケーキをスコップで取り出し、水を切った。
８．ケーキを４Ｌのアセトニトリル（２０℃）で洗浄し、そのケーキをスコップで取り出し、３０分間浸漬し、水を切った。このプロセスステップは２回行った。
９．固体を真空下、ジャケット温度５５℃で最長９時間乾燥させた。
１０．フィルタードライヤーを冷却した。
１１． 工程内管理実施（ヘッドスペースガスクロマトグラフィー・炎イオン化検出器（ＨＳＧＣ－ＦＩＤ）により残留溶媒を確認）。
【0126】
Ｂ．残留溶媒置換プロセス（ＲＳＤＰ）（図２）
ＧＭＰ ＲＳＤＰを図２に示す。このセクションではプロセスについて説明する。結晶化プロセスの最終生成物は、フィルター面積０．１平方メートルのフィルタードライヤー内に残った。処理を続行した：
１．６．４Ｌのプロセス水と１．６Ｌのアセトニトリル（２５℃）の混合物を投入し、ケーキをスコップで除去し、３０分間浸漬して排水する。このプロセスステップは４回行った。
２．８Ｌのプロセス水（２５℃）を投入し、ケーキをスコップで取り除き、３０分間浸漬して排水する。このプロセスステップは２回行った。
３．ケーキを少なくとも２時間水切りし、その固体を真空下、ジャケット温度６０℃で最長２４時間乾燥させた。
４．工程内管理実施（ヘッドスペースガスクロマトグラフィー・炎イオン化検出器（ＨＳＧＣ－ＦＩＤ）により残留溶媒を確認）。
ａ．メタノール≦３０００ｐｐｍ
ｂ．アセトニトリル≦４１０ｐｐｍ
ｃ．ジクロロメタン≦６００ｐｐｍ
ｄ．クロロホルム≦６０ｐｐｍ
ｅ．ＩＰＣ管理が満たされない場合は、乾燥時間をさらに２０時間延長して、ＩＰＣが達成できるか否かを判断した。乾燥時間を延長しても不十分な場合は、ＲＳＤＰを繰り返した。
５．工程内管理－乾燥減量を確認した。ＩＰＣが５．０％以下の制限を満たしていない場合は、乾燥時間を延長し、合格するまでＩＰＣを繰り返した。
６．チオストレプトンの単離：固体チオストレプトン（二重のＰＥ袋に入っており、内側の第２のＰＥ袋は、熱シールされたアルミニウム袋の内側かつアルミニウムドラムの内側というシリカの袋を備えている）を出す。－２０℃でかつ湿度管理下で冷凍保存。
ＧＭＰ ＲＳＤＰを図２に示す。このセクションではプロセスについて説明する。結晶化プロセスの最終生成物は、フィルター面積０．１平方メートルのフィルタードライヤー内に残った。処理を続行した：
１．６．４Ｌのプロセス水と１．６Ｌのアセトニトリル（２５℃）の混合物を投入し、ケーキをスコップで除去し、３０分間浸漬して排水する。このプロセスステップは４回行った。
２．８Ｌのプロセス水（２５℃）を投入し、ケーキをスコップで取り除き、３０分間浸漬して排水する。このプロセスステップは２回行った。
３．ケーキを少なくとも２時間水切りし、その固体を真空下、ジャケット温度６０℃で最長２４時間乾燥させた。
４．工程内管理実施（ヘッドスペースガスクロマトグラフィー・炎イオン化検出器（ＨＳＧＣ－ＦＩＤ）により残留溶媒を確認）。
ａ．メタノール≦３０００ｐｐｍ
ｂ．アセトニトリル≦４１０ｐｐｍ
ｃ．ジクロロメタン≦６００ｐｐｍ
ｄ．クロロホルム≦６０ｐｐｍ
ｅ．ＩＰＣ管理が満たされない場合は、乾燥時間をさらに２０時間延長して、ＩＰＣが達成できるか否かを判断した。乾燥時間を延長しても不十分な場合は、ＲＳＤＰを繰り返した。
５．工程内管理－乾燥減量を確認した。ＩＰＣが５．０％以下の制限を満たしていない場合は、乾燥時間を延長し、合格するまでＩＰＣを繰り返した。
６．チオストレプトンの単離：固体チオストレプトン（二重のＰＥ袋に入っており、内側の第２のＰＥ袋は、熱シールされたアルミニウム袋の内側かつアルミニウムドラムの内側というシリカの袋を備えている）を出す。－２０℃でかつ湿度管理下で冷凍保存。
【0127】
【表1】
【0128】
実施例２：残留溶媒レベルを下げるためのさらなるステップ
以下の表は、実施例１で上記で説明したプロセスの工程内の結果を示している。
溶媒置換１（残留溶媒置換プロセスの１回の反復）後、４５時間の乾燥時間を経てもクロロホルムは＜６０ｐｐｍに達しなかった。結果として、溶媒置換２（残留溶媒置換プロセスの２回目の繰り返し）を実行した。クロロホルムは＜６０ｐｐｍ未満に達したが、２４時間の乾燥時間の後、アセトニトリルは３００ｐｐｍを超えていた。３１時間の乾燥時間の後、アセトニトリルは３００ｐｐｍを下回り、プロセスは終了したと宣言される。
以下の表は、実施例１で上記で説明したプロセスの工程内の結果を示している。
溶媒置換１（残留溶媒置換プロセスの１回の反復）後、４５時間の乾燥時間を経てもクロロホルムは＜６０ｐｐｍに達しなかった。結果として、溶媒置換２（残留溶媒置換プロセスの２回目の繰り返し）を実行した。クロロホルムは＜６０ｐｐｍ未満に達したが、２４時間の乾燥時間の後、アセトニトリルは３００ｐｐｍを超えていた。３１時間の乾燥時間の後、アセトニトリルは３００ｐｐｍを下回り、プロセスは終了したと宣言される。
【0129】
工程内目標及び測定された工程内値は、最終生成物の試験結果と同一ではないことに注意のこと；例えば、アセトニトリルは、最終工程内測定では２２０ｐｐｍであったが、実施例１の最終生成物試験では１４０ｐｐｍであることが判明した。
【表2】
【0130】
実施例３：さらなる結晶化プロトコル
多くの代替結晶化プロトコルを検討したが、その多くは収率、純度、及び／または残留溶媒レベルが低いせいで満足のいくものではなかった。
多くの代替結晶化プロトコルを検討したが、その多くは収率、純度、及び／または残留溶媒レベルが低いせいで満足のいくものではなかった。
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【表3-4】
【表3-5】
【表3-6】
【0131】
０．５～１．０％ＥｔＯＨで安定化されたクロロホルムは、貧溶媒としてＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、及びアセトニトリルを使用すると高純度の結果が得られる好ましい溶媒として特定された。
【0132】
クロロホルム溶媒及び貧溶媒としてのアセトニトリル、ならびに溶媒としてのテトラヒドロフラン及び貧溶媒としての水の試験では、特に高純度の結果が得られ、ジャケット付き反応器で大規模に実行した。溶媒としてのクロロホルム及び貧溶媒としてのアセトニトリル中での再結晶化を、０．５～１％ＥｔＯＨ（ｐＨ：５）で安定化したクロロホルムを使用して１５ｇスケールで繰り返し、収率８５％及びクロマトグラフィー純度９８．４％の白色固体を得た。
【0133】
実施例４：残留溶媒の置換プロセス
最終製品の残留溶媒仕様を満たすために、チオストレプトンを硬化するために２つの溶媒置換プロセスを開発した：ホットスラリー及び浸漬、それぞれ３つの溶媒系（水のみ、アセトニトリルのみ、及び水／アセトニトリル２／８の混合物）を使用。水のみを使用する２つのシステムでは、図３に示すように、チオストレプトンの疎水性のおかげで湿潤性が低いことに起因して、残留溶媒のＩＣＨレベルを達成できず、操作性も悪かった。
最終製品の残留溶媒仕様を満たすために、チオストレプトンを硬化するために２つの溶媒置換プロセスを開発した：ホットスラリー及び浸漬、それぞれ３つの溶媒系（水のみ、アセトニトリルのみ、及び水／アセトニトリル２／８の混合物）を使用。水のみを使用する２つのシステムでは、図３に示すように、チオストレプトンの疎水性のおかげで湿潤性が低いことに起因して、残留溶媒のＩＣＨレベルを達成できず、操作性も悪かった。
【表4】
【0134】
アセトニトリルに関与するプロセスは、残留溶媒のＩＣＨレベルを達成するのに効果的であり、アセトニトリルがチオストレプトンの湿潤性を高めるおかげで、良好な操作性を示した。浸漬プロセスは、ホットスラリープロセスと比較して操作が容易で、機械的損失が最小限に抑えられた。ＡＣＮ／水浸漬では、ＡＣＮのみの浸漬よりもメタノール及びＡＣＮのレベルが低くなった。
【0135】
開発を最終化し、残留溶媒置換プロセスの戦略を定義するために、クロロホルムとアセトニトリルでのスケールアップ結晶化から得られた生成物（バッチＨ）を、３つの部分に分割し、浸漬プロセスをＡＣＮのみ、水／ＡＣＮ８／２の混合物及び水のみを使用して再現した。残留溶媒のＩＣＨレベルを達成するのに効果的な浸漬プロセスは、水／ＡＣＮ８／２（バッチＩ；以下の表を参照）であることが判明した。どの実験でも、不純物プロファイルの変化も劣化も観察されなかった。
【表5】
【0136】
実施例５：超純チオストレプトンと市販チオストレプトンの生物学的活性の比較
市販のチオストレプトン（ＴＳ）出発原料（ＴＳ Ｎｏｎ－ＧＭＰ）及び超高純度ＴＳ（ＴＳ ＧＭＰ）を滅菌ＤＭＳＯで１０ｍＭに希釈した。ＡＴＣＣから購入した卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３を使用した細胞生存率アッセイで、ＴＳのロットを評価した。技術的複製を含む２つの複製プレートをスクリーニング用にセットアップした。細胞を９６ウェルプレートに２，５００細胞／ウェルの密度で播種し、処理前に２４時間接着させた。各ＴＳ溶液の開始濃度２０μＭを、２０μＭ～２０ｎＭの濃度範囲をカバーする１：１で連続希釈した。細胞を処理して４８時間インキュベートした後、３％ホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレット細胞染色して、残っている細胞を測定した（１００％＝細胞死なし、０％＝完全な細胞死）。図４．ＥＣ５０値（５０％の細胞を死滅させるのに必要な濃度）は、可変勾配最小二乗フィット非線形回帰を使用して決定した。図５．データによって、がん細胞の細胞死％及びＥＣ５０の両方で測定した場合、超高純度ＴＳが市販のＴＳよりも優れた生物活性を示すことが示された。
市販のチオストレプトン（ＴＳ）出発原料（ＴＳ Ｎｏｎ－ＧＭＰ）及び超高純度ＴＳ（ＴＳ ＧＭＰ）を滅菌ＤＭＳＯで１０ｍＭに希釈した。ＡＴＣＣから購入した卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３を使用した細胞生存率アッセイで、ＴＳのロットを評価した。技術的複製を含む２つの複製プレートをスクリーニング用にセットアップした。細胞を９６ウェルプレートに２，５００細胞／ウェルの密度で播種し、処理前に２４時間接着させた。各ＴＳ溶液の開始濃度２０μＭを、２０μＭ～２０ｎＭの濃度範囲をカバーする１：１で連続希釈した。細胞を処理して４８時間インキュベートした後、３％ホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレット細胞染色して、残っている細胞を測定した（１００％＝細胞死なし、０％＝完全な細胞死）。図４．ＥＣ５０値（５０％の細胞を死滅させるのに必要な濃度）は、可変勾配最小二乗フィット非線形回帰を使用して決定した。図５．データによって、がん細胞の細胞死％及びＥＣ５０の両方で測定した場合、超高純度ＴＳが市販のＴＳよりも優れた生物活性を示すことが示された。
【0137】
実施例６：超高純度チオストレプトンを含む例示的な医薬組成物
【表6】
【0138】
参照による援用
本明細書で引用される米国特許、ならびに米国及びＰＣＴ公開特許出願の全ては、参照により本明細書に援用される。
本明細書で引用される米国特許、ならびに米国及びＰＣＴ公開特許出願の全ては、参照により本明細書に援用される。
【0139】
等価物
前述の文書による明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分なものであるとみなす。本発明は、提供される実施例によって範囲が限定されるものではなく、これらの実施例は、本発明の一態様の単なる例示であることが意図され、他の機能的に同等である実施形態も、本発明の範囲内に含まれる。本明細書に示され説明されるもの以外の本発明の様々な改変が上記の説明から当業者には明らかとなり、添付の「特許請求の範囲」の範囲に含まれる。本発明の利益及び目的は、本発明の各実施形態に必ずしも包含されるものではない。
前述の文書による明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分なものであるとみなす。本発明は、提供される実施例によって範囲が限定されるものではなく、これらの実施例は、本発明の一態様の単なる例示であることが意図され、他の機能的に同等である実施形態も、本発明の範囲内に含まれる。本明細書に示され説明されるもの以外の本発明の様々な改変が上記の説明から当業者には明らかとなり、添付の「特許請求の範囲」の範囲に含まれる。本発明の利益及び目的は、本発明の各実施形態に必ずしも包含されるものではない。
【図1-1】
【図1-2】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【国際調査報告】