特表 2024-533998 癌の治療のための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-18

(54)【発明の名称】癌の治療のための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240910BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 38/28 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 38/43 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240910BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 31/5375 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 31/357 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 31/164 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20240910BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 25/06 20060101ALI20240910BHJP

   C07K 16/40 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240910BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20240910BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20240910BHJP

   G01N 33/573 20060101ALI20240910BHJP

   G01N 33/531 20060101ALI20240910BHJP

   G01N 33/92 20060101ALI20240910BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61K39/395 D ZNA

A61P43/00 111

A61K45/00

A61K38/28

A61K38/43

A61K47/68

A61K9/127

A61K38/16

A61K39/39

A61K31/5375

A61K31/357

A61K31/164

A61K9/48

A61K47/14

A61P37/04

A61K39/00 H

A61P1/00

A61P35/00

A61K31/7088

A61K48/00

A61P3/10

A61P9/10

A61P3/04

A61P37/02

A61P27/02

A61P25/28

A61P25/06

A61K39/395 E

A61K39/395 T

C07K16/40

C12N15/63 Z

C12N15/13

C07K14/00

G01N33/574 A

G01N33/573 A

G01N33/531 A

G01N33/92 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024508333

(86)(22)【出願日】2022-08-10

(85)【翻訳文提出日】2024-04-08

(86)【国際出願番号】 US2022074785

(87)【国際公開番号】W WO2023019186

(87)【国際公開日】2023-02-16

(31)【優先権主張番号】63/231,694

(32)【優先日】2021-08-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518056003

【氏名又は名称】ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】100189131

【弁理士】

【氏名又は名称】佐伯 拓郎

(74)【代理人】

【識別番号】100182486

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 正展

(74)【代理人】

【識別番号】100147289

【弁理士】

【氏名又は名称】佐伯 裕子

(72)【発明者】

【氏名】チャタジー， スブロト

【テーマコード（参考）】

2G045

4C076

4C084

4C085

4C086

4C206

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA26

2G045DA20

2G045DA60

2G045FB03

2G045FB06

4C076AA19

4C076AA53

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB25

4C076CC01

4C076CC06

4C076CC07

4C076CC10

4C076CC11

4C076CC27

4C076CC41

4C076DD47H

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA13

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA18

4C084BA23

4C084DB34

4C084DC01

4C084MA37

4C084NA05

4C084ZA08

4C084ZA16

4C084ZA33

4C084ZA36

4C084ZA66

4C084ZA70

4C084ZB07

4C084ZB09

4C084ZB26

4C084ZC20

4C084ZC35

4C084ZC41

4C084ZC75

4C085AA03

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA21

4C085AA38

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085EE06

4C085FF24

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA15

4C086BC73

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA37

4C086NA05

4C086ZA08

4C086ZA16

4C086ZA33

4C086ZA36

4C086ZA66

4C086ZA70

4C086ZB07

4C086ZB09

4C086ZB26

4C086ZC20

4C086ZC35

4C086ZC41

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206GA03

4C206GA25

4C206MA03

4C206MA05

4C206MA57

4C206NA05

4C206ZA08

4C206ZA16

4C206ZA33

4C206ZA36

4C206ZA66

4C206ZA70

4C206ZB07

4C206ZB09

4C206ZB26

4C206ZC20

4C206ZC35

4C206ZC41

4C206ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA17

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA10

4H045FA74

(57)【要約】

結腸直腸癌又は異常レベルのβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に関連する疾患等の癌の予防及び治療における組成物は、少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を含む。
【選択図】図１－１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

治療有効量の抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、前記抗体が、
ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は
ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む、医薬組成物。

【請求項2】

治療有効量の抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、前記抗体が、
ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は
ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む、医薬組成物。

【請求項3】

治療有効量の抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、前記抗体が、
ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は
ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む、医薬組成物。

【請求項4】

前記抗体が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記抗体が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

１つ以上の二次治療剤を更に含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記１つ以上の二次治療剤が、化学療法剤、抗炎症剤、コレステロール低下剤、インスリン、抗体、ペプチド、酵素、アジュバント又はそれらの組合せを含む、請求項５に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記抗体を、検出可能な薬剤、放射線治療剤、毒素、放射性薬剤、色素、ペプチド、ポリヌクレオチド又はナノリポソームにコンジュゲートさせることを更に含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記医薬組成物が、１つ以上の治療剤を含むナノリポソームを含む、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項10】

ＩＧＡＱＶＹＥＱＶＬＲＳＡＹＡＫＲＮＳＳＶＮＤ（配列番号５）と少なくとも８０％の配列同一性を有するペプチドを更に含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

ＩＧＡＱＶＹＥＱＶＬＲＳＡＹＡＫＲＮＳＳＶＮＤ（配列番号５）と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを更に含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記抗体がヒト化されている、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項13】

β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合することができる、ヒト化抗体が提供される。

【請求項14】

請求項１３に記載のヒト化抗体を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

発現ベクターであって、ｇａａｇｔｔｃａｇｃｔｇｇａｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔａｇａｃｃｔｇｇｇｇｃｔｔｃａｇｔｇａａｇｔｔｇｔｃｃｔｇｔａｇｇａｃｔｔｃｔｇｇｃｔａｃａｃｃｔｔｔａｃａａａｃｔａｃｔｇｇａｔｇｃａｇｔｇｇａｔｔａａａｃａｇａｇｇｃｃｔｇｇａｃａｇｇｇｔｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｔｇｇｇｇｃｔａｔｇｃａｔｃｃｔｇｇａｃｇｔｇｃｇｔａｔａｔｔａｇｇｔａｃａａｃｃａｇａａｇｔｔｃｃａｇｇｇｃａａｇｇｃｃａｃａｔｔｇａｃｔｇｃａｇａｔａａａｔｃｃｔｃｃａｇｃａｃａｇｃｔｔａｃａｔｇｃａａｃｔｃａａｃａｇｃｔｔｇｇｃａｔｃｔｇａｇｇａｃｔｃｔｇｃｇｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃａａｇａｔｇｇａｇｔｇａｃｔａｃｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｃａａｇｇｃａｃｃａｃｔｃｔｃａｃａｇｔｃｔｃｃｔｃａ（配列番号１）と少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列を含む、発現ベクター。

【請求項16】

発現ベクターであって、ｇａａｇｔｔｃａｇｃｔｇｇａｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔａｇａｃｃｔｇｇｇｇｃｔｔｃａｇｔｇａａｇｔｔｇｔｃｃｔｇｔａｇｇａｃｔｔｃｔｇｇｃｔａｃａｃｃｔｔｔａｃａａａｃｔａｃｔｇｇａｔｇｃａｇｔｇｇａｔｔａａａｃａｇａｇｇｃｃｔｇｇａｃａｇｇｇｔｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｔｇｇｇｇｃｔａｔｇｃａｔｃｃｔｇｇａｃｇｔｇｃｇｔａｔａｔｔａｇｇｔａｃａａｃｃａｇａａｇｔｔｃｃａｇｇｇｃａａｇｇｃｃａｃａｔｔｇａｃｔｇｃａｇａｔａａａｔｃｃｔｃｃａｇｃａｃａｇｃｔｔａｃａｔｇｃａａｃｔｃａａｃａｇｃｔｔｇｇｃａｔｃｔｇａｇｇａｃｔｃｔｇｃｇｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃａａｇａｔｇｇａｇｔｇａｃｔａｃｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｃａａｇｇｃａｃｃａｃｔｃｔｃａｃａｇｔｃｔｃｃｔｃａ（配列番号１）と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列を含む、発現ベクター。

【請求項17】

前記ベクターが、配列番号１に示される核酸配列を含む、請求項１５又は１６に記載の発現ベクター。

【請求項18】

発現ベクターであって、ｇａｔｇｔｔｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇａｃｔｃｃａｃｔｃａｃｔｔｔｇｔｃｇｇｔｔａｃｃａｔｔｇｇａｃａａｃｃａｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｔｇｃａａｇｔｃａａｇｔｃａｇａｇｃｃｔｃｔｔａｇａｔａｇｔｇａｔｇｇａａａｇａｃａｔａｔｔｔｇａａｔｔｇｇｔｔｇｔｔａｃａｇａｇｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｔｃｃａａａｇｃｇｃｃｔａａｔｃｔａｔｃｔｇｇｔｇｔｃｔａａａｃｔｇｇｇｃｔｃｔｇｇａｇｔｃｃｃｔｇａｃａｇｇｔｔｃａｃｔｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃａｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃａｃｔｇａａａａｔｃａｇｃａｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇａｔｔｔｇｇｇａｇｔｔｔａｔｔａｔｔｇｃｔｇｇｃａａｇｇｔａｃａｃａｔｔｔｔｃｃｔｃｇｇａｃｇｔｔｃｇｇｔｇｇａｇｇｃａｃｃａａｇｃｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇｇ（配列番号２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む、発現ベクター。

【請求項19】

発現ベクターであって、ｇａｔｇｔｔｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇａｃｔｃｃａｃｔｃａｃｔｔｔｇｔｃｇｇｔｔａｃｃａｔｔｇｇａｃａａｃｃａｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｔｇｃａａｇｔｃａａｇｔｃａｇａｇｃｃｔｃｔｔａｇａｔａｇｔｇａｔｇｇａａａｇａｃａｔａｔｔｔｇａａｔｔｇｇｔｔｇｔｔａｃａｇａｇｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｔｃｃａａａｇｃｇｃｃｔａａｔｃｔａｔｃｔｇｇｔｇｔｃｔａａａｃｔｇｇｇｃｔｃｔｇｇａｇｔｃｃｃｔｇａｃａｇｇｔｔｃａｃｔｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃａｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃａｃｔｇａａａａｔｃａｇｃａｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇａｔｔｔｇｇｇａｇｔｔｔａｔｔａｔｔｇｃｔｇｇｃａａｇｇｔａｃａｃａｔｔｔｔｃｃｔｃｇｇａｃｇｔｔｃｇｇｔｇｇａｇｇｃａｃｃａａｇｃｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇｇ（配列番号２）と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む、発現ベクター。

【請求項20】

前記ベクターが、配列番号２に示される核酸配列を含む、請求項１９に記載の発現ベクター。

【請求項21】

発現ベクターであって、（ｉ）配列番号３と少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列と、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列とを含む、発現ベクター。

【請求項22】

発現ベクターであって、（ｉ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列と、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列とを含む、発現ベクター。

【請求項23】

発現ベクターであって、（ｉ）配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列と、（ｉｉ）配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列とを含む、発現ベクター。

【請求項24】

（ｉ）配列番号３を含む重鎖可変領域配列核酸配列と、（ｉｉ）配列番号２を含む軽鎖可変領域配列核酸配列とを含む、請求項２３に記載の発現ベクター。

【請求項25】

合成ペプチドであって、配列番号５と少なくとも８０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む、合成ペプチド。

【請求項26】

合成ペプチドであって、配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む、合成ペプチド。

【請求項27】

前記ペプチドが、配列番号５を含む、請求項２６に記載の合成ペプチド。

【請求項28】

医薬組成物であって、配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む治療有効量の合成ペプチドと、少なくとも１つのアジュバントとを含む、医薬組成物。

【請求項29】

前記合成ペプチドが、配列番号５を含む、請求項２８に記載の医薬組成物。

【請求項30】

医薬組成物であって、治療有効量の
（ｉ）（ａ）配列番号３と少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体、
（ｉｉ）配列番号５と少なくとも８０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチド、
（ｉｉｉ）アジュバント又は薬学的に許容され得る担体、
を含む、医薬組成物。

【請求項31】

医薬組成物であって、治療有効量の
（ｉ）（ａ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体、
（ｉｉ）配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチド、
（ｉｉｉ）アジュバント又は薬学的に許容され得る担体、
を含む、医薬組成物。

【請求項32】

前記抗体が、（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域核酸配列、及び（ｂ）配列番号２を含む軽鎖可変領域核酸配列と、配列番号５を含む合成ペプチドアミノ酸配列とを含む、請求項３１に記載の医薬組成物。

【請求項33】

医薬組成物であって、治療有効量の
（ａ）抗体であって、前記抗体が、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、前記抗体が、
（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は
（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列と、
（ｂ）治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤と
を含む、医薬組成物。

【請求項34】

医薬組成物であって、治療有効量の
（ａ）抗体であって、前記抗体が、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、前記抗体が、
（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は
（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列と、
（ｂ）治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤と
を含む、医薬組成物。

【請求項35】

前記抗体が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む、請求項３３又は３４に記載の医薬組成物。

【請求項36】

前記抗体が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項37】

フィンゴ糖脂質合成の前記少なくとも１つの阻害剤が、生分解性ポリマーによってカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項38】

前記スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤が、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）である、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項39】

前記生分解性ポリマーが、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる、請求項３７又は３８に記載の医薬組成物。

【請求項40】

β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において生じさせる方法であって、治療有効量の、配列番号５と少なくとも８０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列と、アジュバントと、を含む、方法。

【請求項41】

β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において生じさせる方法であって、配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有する治療有効量のアミノ酸配列と、アジュバントと、を含む、方法。

【請求項42】

結腸直腸癌を治療する方法であって、結腸直腸癌に罹患しているか、又は結腸直腸癌に罹患しやすい対象に、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合する抗体を投与することを含む、結腸直腸癌を治療する方法。

【請求項43】

結腸直腸癌を治療する方法であって、結腸直腸癌に罹患しているか、又は結腸直腸癌に罹患しやすい対象に、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合するヒト化抗体を投与することを含む、結腸直腸癌を治療する方法。

【請求項44】

結腸直腸癌を治療する方法であって、結腸直腸癌に罹患しているか、又は結腸直腸癌を罹患しやすい対象に、請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター又はペプチドを投与することを含む、結腸直腸癌を治療する方法。

【請求項45】

結腸直腸癌を治療する方法であって、（ａ）配列番号３と少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、結腸直腸癌を治療する方法。

【請求項46】

結腸直腸癌を治療する方法であって、（ａ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、結腸直腸癌を治療する方法。

【請求項47】

前記対象が結腸直腸癌に罹患していると同定され、前記同定された対象に前記医薬組成物、発現ベクター又はペプチドが投与される、請求項４１～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記抗体が、（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２を含む軽鎖可変領域核酸配列を含む、請求項４１～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

配列番号５と少なくとも８０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む治療有効量の合成ペプチドと、少なくとも１つのアジュバントを投与することを更に含む、請求項４１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む治療有効量の合成ペプチドと、少なくとも１つのアジュバントを投与することを更に含む、請求項４１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記合成ペプチドが、配列番号５を含む、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

化学療法剤、放射線療法、毒素又はそれらの組合せを投与することを更に含む、請求項４１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

生分解性ポリマーによってカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を投与することを更に含む、請求項４１～５２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）であるスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤が投与される、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記生分解性ポリマーが、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる、請求項５３又は５４に記載の方法。

【請求項56】

糖尿病、アテローム性動脈硬化症、肥満、自己免疫疾患、又は異常なレベルのβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に関連する疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを投与することを含む、方法。

【請求項57】

結腸直腸癌を診断及び治療する方法であって、
対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することであって、健常対象と比較した場合に、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルの増加が上昇しており、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルの上昇が結腸直腸癌の診断である、対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することと、
結腸直腸癌と診断された前記対象に、請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを投与することと、それにより、結腸直腸癌を治療することと、
を含む、結腸直腸癌を診断及び治療する方法。

【請求項58】

β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルと組み合わせて結腸直腸癌腫瘍マーカーのレベルを測定することを更に含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

結腸直腸癌腫瘍マーカーが、ＮＭＴ－１、ＡＰＣ、ｐ５３及びそれらの組合せを含む、請求項５７記載の方法。

【請求項60】

対象における結腸直腸癌の進行及び治療を監視する方法であって、
結腸直腸癌と診断された前記対象に、請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを投与することと、
対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することであって、ベースラインと比較した場合のβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルの低下が、結腸直腸癌細胞の減少及び結腸直腸癌の治療を示す、対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することと、
それにより、結腸直腸癌の進行及び治療を監視することと、
を含む、対象における結腸直腸癌の進行及び治療を監視する方法。

【請求項61】

前記対象に投与される前記組成物の前記用量が、前記結腸直腸癌の進行に基づいて調節される、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

黄斑変性症に罹患しているか、又は黄斑変性症に罹患しやすい対象を治療する方法であって、有効量の請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを前記対象に投与することを含む、黄斑変性症に罹患しているか、又は黄斑変性症に罹患しやすい対象を治療する方法。

【請求項63】

前記対象が黄斑変性に罹患していると同定され、前記医薬組成物、ペプチド若しくは発現ベクター又はそれらの組合せが前記同定された対象に投与される、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

アルツハイマー病に罹患しているか、又はアルツハイマー病に罹患しやすい対象を治療する方法であって、有効量の請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを前記対象に投与することを含む、アルツハイマー病に罹患しているか、又はアルツハイマー病に罹患しやすい対象を治療する方法。

【請求項65】

前記対象がアルツハイマー病に罹患していると同定され、前記医薬組成物、ペプチド若しくは発現ベクター又はそれらの組合せが前記同定された対象に投与される、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

片頭痛若しくは片頭痛の疼痛に罹患しているか、又は片頭痛若しくは片頭痛の疼痛に罹患しやすい対象を治療する方法であって、有効量の請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを前記対象に投与することを含む、片頭痛若しくは片頭痛の疼痛に罹患しているか、又は片頭痛若しくは片頭痛の疼痛に罹患しやすい対象を治療する方法。

【請求項67】

前記対象が片頭痛又は片頭痛の疼痛に罹患していると同定され、前記医薬組成物、ペプチド若しくは発現ベクター又はそれらの組合せが前記同定された対象に投与される、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

メタボリックシンドロームに罹患しているか、又はメタボリックシンドロームに罹患しやすい対象を治療する方法であって、有効量の請求項１～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物、抗体、発現ベクター若しくはペプチド、又はそれらの組合せを前記対象に投与することを含む、メタボリックシンドロームに罹患しているか、又はメタボリックシンドロームに罹患しやすい対象を治療する方法。

【請求項69】

前記対象がメタボリックシンドロームに罹患していると同定され、前記医薬組成物、ペプチド若しくは発現ベクター又はそれらの組合せが前記同定された対象に投与される、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記対象がヒトである、請求項４０～６９のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年８月１０日に出願された米国仮出願第６３／２３１，６９４号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

実施形態は、スフィンゴ糖脂質合成を阻害する組成物、及び結腸直腸癌等の癌の治療におけるそれらの使用に関する。

【0003】

連邦政府による資金提供を受けた研究に関する記載
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金番号ＨＬ１０７１５３の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

【背景技術】

【0004】

結腸直腸癌（ＣＲＣ）は、１４０万人を超えて罹患し、世界中で６９万人を超える死亡を引き起こし（Ｐ．Ｆａｖｏｒｉｔｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｒｅｖｉｅｗ，Ｕｐｄａｔｅｓ Ｓｕｒｇ．６８（１）（２０１６）７－１１．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ１３３０４－０１６－０３５９－ｙ．Ｈ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ，Ｌａｎｃｅｔ．３８３（９９２７）（２０１４）１４９０－１５０２．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（１３）６１６４９－９．Ｆｅｒｌａｙ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ：ｓｏｕｒｃｅｓ，ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｍａｊｏｒ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ ＧＬＯＢＯＣＡＮ ２０１２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１３６（５）（２０１５）Ｅ３５９－Ｅ３８６．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｉｊｃ．２９２１０．Ｍ．Ａｒｎｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｏｂａｌ ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｎｄ ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，Ｇｕｔ．６６（４）（２０１７）６８３－６９１．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１３６／ｇｕｔｊｎｌ－２０１５－３１０９１２）、全癌型の有病率で３番目である（Ｈ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｃ．Ｓｔｏｃｋ，Ｍ．Ｈｏｆｆｍｅｉｓｔｅｒ，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ：ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｔｏ ａｃｔ ｉｓ ｎｏｗ，ＢＭＣ Ｍｅｄ．１３（２０１５）２６２．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１２９１６－０１５－０４９８－ｘ）。現在のＣＲＣ早期検出方法は、利用可能性が限られていること、患者のコンプライアンスが低いこと、及び検査特異度が低いこと（Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１１（９）（２０１０）３２０９－３２２５．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３９０／ｉｊｍｓ１１０９３２０９．Ｓ．Ｈｕｎｄｔ，Ｕ．Ｈａｕｇ，Ｈ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｂｌｏｏｄ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ，Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ Ｐｒｅｖ．１６（１０）（２００７）１９３５－１９５３．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０５５－９９６５．ＥＰＩ－０６－０９９４．Ｋ．Ｓｉｍｏｎ，Ｖ．Ｂａｌｃｈｅｎ，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｔｅｒｖ．Ａｇｉｎｇ．１１（２０１６）９６７－９７６．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．２１４７／ＣＩＡ．Ｓ１０９２８５．Ｔ．Ｆ．Ｉｍｐｅｒｉａｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔ ｓｔｏｏｌ ＤＮＡ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ－ｃａｎｃｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７０（２０１４）１２８７－１２９７．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１３１１１９４）によって課題がある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｐ．Ｆａｖｏｒｉｔｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｒｅｖｉｅｗ，Ｕｐｄａｔｅｓ Ｓｕｒｇ．６８（１）（２０１６）７－１１．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ１３３０４－０１６－０３５９－ｙ．

【非特許文献2】Ｈ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ，Ｌａｎｃｅｔ．３８３（９９２７）（２０１４）１４９０－１５０２．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（１３）６１６４９－９．

【非特許文献3】Ｆｅｒｌａｙ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ：ｓｏｕｒｃｅｓ，ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｍａｊｏｒ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ ＧＬＯＢＯＣＡＮ ２０１２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１３６（５）（２０１５）Ｅ３５９－Ｅ３８６．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｉｊｃ．２９２１０．

【非特許文献4】Ｍ．Ａｒｎｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｏｂａｌ ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｎｄ ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，Ｇｕｔ．６６（４）（２０１７）６８３－６９１．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１３６／ｇｕｔｊｎｌ－２０１５－３１０９１２

【非特許文献5】Ｈ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｃ．Ｓｔｏｃｋ，Ｍ．Ｈｏｆｆｍｅｉｓｔｅｒ，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ：ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｔｏ ａｃｔ ｉｓ ｎｏｗ，ＢＭＣ Ｍｅｄ．１３（２０１５）２６２．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１２９１６－０１５－０４９８－ｘ

【非特許文献6】Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１１（９）（２０１０）３２０９－３２２５．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３９０／ｉｊｍｓ１１０９３２０９．

【非特許文献7】Ｓ．Ｈｕｎｄｔ，Ｕ．Ｈａｕｇ，Ｈ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｂｌｏｏｄ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ，Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ Ｐｒｅｖ．１６（１０）（２００７）１９３５－１９５３．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０５５－９９６５．ＥＰＩ－０６－０９９４．

【非特許文献8】Ｋ．Ｓｉｍｏｎ，Ｖ．Ｂａｌｃｈｅｎ，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｔｅｒｖ．Ａｇｉｎｇ．１１（２０１６）９６７－９７６．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．２１４７／ＣＩＡ．Ｓ１０９２８５．

【非特許文献9】Ｔ．Ｆ．Ｉｍｐｅｒｉａｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔ ｓｔｏｏｌ ＤＮＡ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ－ｃａｎｃｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７０（２０１４）１２８７－１２９７．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１３１１１９４

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明の実施形態は、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を含む組成物及び使用方法に関する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

第１の態様において、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合することができるヒト化抗体が提供される。

【0008】

本発明のヒト化抗体は、癌、特にＧａｌＴ－Ｖを過剰発現する癌、例えば結腸直腸癌、腎癌及び神経芽細胞腫に対する治療に特に有用である。

【0009】

第２の態様において、癌を治療する方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の抗体を含む組成物を投与することを含み、抗体は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は、（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む。好ましくは、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤も対象に投与される。

【0010】

第３の態様において、癌を治療する方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の抗体を含む組成物を投与することを含み、抗体は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８３、８４、８５、８６、又は８７％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は、（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８３、８４、８５、８６、又は８７％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む。好ましくは、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤も対象に投与される。

【0011】

第４の態様において、癌を治療する方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の（ａ）抗体であって、該抗体は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、該抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％若しくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％若しくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む。好ましくは、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤も対象に投与される。

【0012】

特定の実施形態において、抗体は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、１つ以上の二次治療剤を更に含む。特定の実施形態において、１つ以上の二次治療剤は、化学療法剤、抗炎症剤、コレステロール低下剤、インスリン、抗体、ペプチド、酵素、アジュバント又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、抗体を、検出可能な薬剤、放射線治療剤、毒素、放射性薬剤、色素、ペプチド、ポリヌクレオチド又はナノリポソームにコンジュゲートさせることを更に含む。特定の実施形態において、ナノリポソームは、治療剤（複数可）を含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、ＩＧＡＱＶＹＥＱＶＬＲＳＡＹＡＫＲＮＳＳＶＮＤ（配列番号５）と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを更に含む。

【0013】

第５の態様において、医薬組成物は、治療有効量の：（ｉ）（ａ）配列番号３と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び（ｂ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体、及び／又は（ｉｉ）配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチドを含む。特定の実施形態において、医薬組成物はまた、１つ以上のアジュバント及び／又は１つ以上の薬学的に許容され得る担体を含んでもよい。特定の実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２を含む軽鎖可変領域核酸配列、及び／又は配列番号５を含む合成ペプチドアミノ酸配列を含む。

【0014】

第６の態様において、医薬組成物は、治療有効量の（ａ）抗体であって、該抗体は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、該抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む。特定の好ましい態様において、医薬組成物はまた、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を含み得る。特定の実施形態において、抗体は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態において、少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤は、生分解性ポリマーによってカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤は、生分解性ポリマー（ＢＰＤ）にカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）である。特定の実施形態において、生分解性ポリマーは、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる。特定の実施形態において、本明細書に開示される抗体、Ｄ－ＰＤＭＰペプチドにカップリングされたポリ（アミドアミン）デンドリマーベースのナノプラットフォームは、癌検出並びに標的療法において有用である。

【0015】

第７の態様において、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合する抗体は、ヒト化される。特定の実施形態において、抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む。

【0016】

第８の態様において、医薬組成物は、治療有効量の、配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチド、好ましくは少なくとも１つのアジュバント、又は少なくとも１つの他の薬学的に許容され得る担体を含む。特定の実施形態において、合成ペプチドは、配列番号５を含む。

【0017】

第９の態様において、発現ベクターは、ｇａａｇｔｔｃａｇｃｔｇｇａｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔａｇａｃｃｔｇｇｇｇｃｔｔｃａｇｔｇａａｇｔｔｇｔｃｃｔｇｔａｇｇａｃｔｔｃｔｇｇｃｔａｃａｃｃｔｔｔａｃａａａｃｔａｃｔｇｇａｔｇｃａｇｔｇｇａｔｔａａａｃａｇａｇｇｃｃｔｇｇａｃａｇｇｇｔｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｔｇｇｇｇｃｔａｔｇｃａｔｃｃｔｇｇａｃｇｔｇｃｇｔａｔａｔｔａｇｇｔａｃａａｃｃａｇａａｇｔｔｃｃａｇｇｇｃａａｇｇｃｃａｃａｔｔｇａｃｔｇｃａｇａｔａａａｔｃｃｔｃｃａｇｃａｃａｇｃｔｔａｃａｔｇｃａａｃｔｃａａｃａｇｃｔｔｇｇｃａｔｃｔｇａｇｇａｃｔｃｔｇｃｇｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃａａｇａｔｇｇａｇｔｇａｃｔａｃｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｃａａｇｇｃａｃｃａｃｔｃｔｃａｃａｇｔｃｔｃｃｔｃａ（配列番号１）と少なくとも８０％、８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列を含む。特定の実施形態において、ベクターは、配列番号１に示される核酸配列を含む。

【0018】

第１０の態様において、発現ベクターは、ｇａｔｇｔｔｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇａｃｔｃｃａｃｔｃａｃｔｔｔｇｔｃｇｇｔｔａｃｃａｔｔｇｇａｃａａｃｃａｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｔｇｃａａｇｔｃａａｇｔｃａｇａｇｃｃｔｃｔｔａｇａｔａｇｔｇａｔｇｇａａａｇａｃａｔａｔｔｔｇａａｔｔｇｇｔｔｇｔｔａｃａｇａｇｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｔｃｃａａａｇｃｇｃｃｔａａｔｃｔａｔｃｔｇｇｔｇｔｃｔａａａｃｔｇｇｇｃｔｃｔｇｇａｇｔｃｃｃｔｇａｃａｇｇｔｔｃａｃｔｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃａｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃａｃｔｇａａａａｔｃａｇｃａｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇａｔｔｔｇｇｇａｇｔｔｔａｔｔａｔｔｇｃｔｇｇｃａａｇｇｔａｃａｃａｔｔｔｔｃｃｔｃｇｇａｃｇｔｔｃｇｇｔｇｇａｇｇｃａｃｃａａｇｃｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇｇ（配列番号２）と少なくとも８０％、８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む。特定の実施形態において、ベクターは、配列番号２に示される核酸配列を含む。

【0019】

第１１の態様において、発現ベクターは、（ｉ）配列番号３と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び／又は（ｉｉ）配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む。

【0020】

第１２の態様において、発現ベクターは、（ｉ）配列番号３を含む重鎖可変領域配列核酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２を含む軽鎖可変領域配列核酸配列を含む。

【0021】

第１３の態様において、合成ペプチドは、配列番号５に対する少なくとも８０％、８５％、９０％又は９５％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、合成ペプチドは、配列番号５を含む。

【0022】

第１４の態様において、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において生じさせる方法は、治療有効量の、配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％又は９５％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチドと、好ましくはアジュバント又は薬学的に許容され得る担体とを投与することを含む。

【0023】

第１５の態様において、結腸直腸癌を治療する方法は、（ａ）配列番号３と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び／又は（ｂ）配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％若しくは９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域核酸配列、及び（ｂ）配列番号２を含む軽鎖可変領域核酸配列を含む。特定の実施形態において、方法は、治療有効量の、配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％又は９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチドと、好ましくは少なくとも１つのアジュバント又は薬学的に許容され得る担体とを投与することを更に含む。特定の実施形態において、合成ペプチドは、配列番号５を含む。特定の実施形態において、方法は、化学療法剤、放射線療法、毒素又はそれらの組合せ等の抗癌剤を投与することを更に含む。特定の実施形態において、抗癌剤は、化学療法剤又は成長阻害剤、標的化治療剤、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合断片、抗体－薬物コンジュゲート、血管新生阻害剤、抗新生物剤、癌ワクチン、アジュバント、及びそれらの組合せである。特定の実施形態において、抗癌剤は、化学療法剤又は成長阻害剤である。例えば、化学療法剤又は増殖阻害剤には、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、Ｌｙｎキナーゼ阻害剤、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ－Ｒ１ Ｒ２阻害剤、ＥＧＦ－Ｒ阻害剤、ＧＳＫ－アルファキナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒性剤又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及びそれらの組合せが含まれ得る。

【0024】

特定の実施形態において、抗癌剤は、アジュバントである。癌関連抗原に対する等の抗癌免疫応答を増強するか、又は免疫系の成分への癌抗原の提示を助ける任意の物質を、本開示の抗癌アジュバントと見なし得る。特定の実施形態において、方法は、生分解性ポリマーによってカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を投与することを更に含む。特定の実施形態において、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤は、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）（例えば、生分解性ポリマーと混合され得る、例えば、生分解性ポリマー（ＢＰＤ）にカプセル化されていないか、又はカプセル化されているＤ－ＰＤＭＰを含む）である。特定の実施形態において、生分解性ポリマーは、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる。

【0025】

第１６の態様において、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、肥満、自己免疫疾患、又は異常なレベルのβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に関連する疾患、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎癌、肺癌、黒色腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、肺、癌、肝臓癌を治療する方法は、それを必要とする対象に、本明細書で具体化される医薬組成物；本明細書で具体化される発現ベクター；本明細書で具体化される合成ペプチド；又はそれらの組合せを投与することを含む。

【0026】

第１７の態様において、結腸直腸癌を診断及び治療する方法は、対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することであって、健常対象と比較した場合に、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルの増加が上昇しており、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルの上昇が結腸直腸癌の診断である、対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することと、結腸直腸癌と診断された前記対象に、本明細書で具体化される医薬組成物；本明細書で具体化される発現ベクター；本明細書で具体化される合成ペプチド；又はそれらの組合せを投与することを含む。特定の実施形態において、方法は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベルと組み合わせて結腸直腸癌腫瘍マーカーのレベルを測定することを更に含む。特定の実施形態において、結腸直腸癌腫瘍マーカーは、ＮＭＴ－１、ＡＰＣ、ｐ５３、ＮＯＴＣＨ－１、Ｂ－ＣＡＴＥＮＩＮ及びそれらの組合せを含む。

【0027】

第１８の態様において、蛍光タグ付きＧａｌＴ－Ｖ抗体又は放射性同位体（例えば、［１２５Ｉ］、［８９］Ｚｒ、及び他のガンマ放出同位体を含むタグ付きＧａｌＴ－Ｖ抗体、又はＣＦ－７５０タグ付きＧＡＴＴ－Ｖ抗体を使用して、腫瘍進行（直腸又は結腸直腸の腫瘍又は癌を含む）を監視する方法。

【0028】

対象における結腸直腸癌の治療において、治療は、結腸直腸癌と診断された対象に、本明細書に開示される医薬組成物；本明細書で具体化される発現ベクター；本明細書で具体化される合成ペプチドを投与することと、対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することであって、ベースラインと比較した場合のβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及び／又はＧＳＬレベル（例えば、蛍光タグ付きスフィンゴ糖脂質抗体を使用する）の低下が、結腸直腸癌細胞の減少及び結腸直腸癌の治療を示す、対象の生物学的試料中のβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）及び／又はスフィンゴ糖脂質のレベルを測定することとを含み得る。特定の実施形態において、対象に投与される組成物の用量は、結腸直腸癌の進行に基づいて調節される。

【0029】

特定の実施形態において、治療又は監視されている癌は、デュークスＢ（ステージＩＩ）又はデュークスＣ（ステージＩＩＩ）の結腸直腸癌である。

【0030】

なお更なる態様において、黄斑変性症に罹患している又は黄斑変性症に罹患しやすい患者を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクター（それらの組合せを含む）を対象に投与することを含む方法が提供される。特定の態様において、対象は黄斑変性を罹患していると同定され得、本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクターは、同定された対象に投与される。特定の好ましい実施形態において、対象はヒトである。

【0031】

追加の態様において、アルツハイマー病に罹患している又はアルツハイマー病に罹患しやすい患者を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクター（それらの組合せを含む）を対象に投与することを含む方法が提供される。特定の態様において、対象はアルツハイマー病に罹患していると同定され得、本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド又は発現ベクターは、同定された対象に投与される。特定の好ましい実施形態において、対象はヒトである。

【0032】

更なる態様において、片頭痛若しくは片頭痛の疼痛に罹患している又は片頭痛若しくは片頭痛の疼痛に罹患しやすい患者を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクター（それらの組合せを含む）を対象に投与することを含む方法が提供される。特定の態様において、対象は片頭痛又は片頭痛の疼痛を罹患していると同定され得、本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクターは、同定された対象に投与される。特定の好ましい実施形態において、対象はヒトである。

【0033】

更に追加の態様において、メタボリックシンドロームに罹患している又はメタボリックシンドロームに罹患しやすい患者を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクター（それらの組合せを含む）を対象に投与することを含む方法が提供される。特定の態様において、対象はメタボリックシンドロームを罹患していると同定され得、本明細書に開示される１つ以上の医薬組成物、ペプチド及び／又は発現ベクターは、同定された対象に投与される。特定の好ましい実施形態において、対象はヒトである。

【0034】

他の態様については、以下に記載する。

【0035】

定義
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、本発明を限定することを意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数形も含むことが意図される。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」という用語、又はそれらの変形が詳細な説明及び／又は特許請求の範囲のいずれかで使用される限り、そのような用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様に包括的であることを意図している。

【0036】

「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味し、これは値がどのように測定又は決定されるか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野の慣例に従って、１標準偏差以内又は１標準偏差を超えることを意味することができる。あるいは、「約」は、所与の値又は範囲の最大２０％、最大１０％、最大５％、又は最大１％の範囲を意味することができる。あるいは、特に生物学的システム又はプロセスに関して、この用語は、ある値の５倍以内、更には２倍以内の１桁以内を意味し得る。特定の値が本出願及び特許請求の範囲に記載されている場合、特に明記しない限り、「約」という用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味すると仮定されるべきである。

【0037】

「アジュバント」という用語は、ワクチン技術の分野におけるその通常の意味、すなわち、１）それ自体ではワクチンの免疫原に対する特異的免疫応答を開始することができないが、２）それにもかかわらず免疫原に対する免疫応答を増強することができる物質又は組成物を有する。又は、言い換えれば、アジュバント単独でのワクチン接種は免疫原に対する免疫応答をもたらさず、免疫原によるワクチン接種は免疫原に対する免疫応答を生じさせても生じなくてもよいが、免疫原とアジュバントとの併用ワクチン接種は、免疫原単独によって誘導されるものよりも強い免疫原に対する免疫応答を誘導する。

【0038】

本明細書で使用される場合、「投与する」という用語は、治療剤をそのような薬剤による治療を必要とする対象に移す、送達する、導入する、又は輸送する任意の様式を指す。そのような様式には、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、鼻腔内及び皮下の投与が含まれるが、これらに限定されない。

【0039】

本明細書で使用される場合、「薬剤」という用語は、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）の発現又は活性を調節することができる任意の分子、化学的実体、組成物、薬物、治療剤、化学療法剤、又は生物学的薬剤を包含することを意味する。この用語は、小分子化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ試薬、抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、一本鎖抗体、抗体模倣物（例えば、ＤＡＲＰｉｎｓ、アフィボディ分子、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、フィノマー、クニッツドメインペプチド及びモノボディ）、ペプトイド、アプタマー等のエピトープ認識部位を有する抗体断片；酵素、ペプチド有機分子又はペプチド無機分子、天然又は合成の化合物等含む。薬剤を、臨床試験中、治験前試験中、又はＦＤＡ承認後の任意の段階で本発明の方法に従ってアッセイすることができる。

【0040】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ヒト及びヒト化抗体を含む全ての種を含み、抗原性標的は任意の種に由来し得る。したがって、例えば抗原「Ｘ」に結合する抗体は、マウス抗ヒトＸ、ヒト抗ヒトＸ；ヒト化抗ヒトＸ、ヤギ抗ヒトＸ；ヤギ抗マウスＸ；ラット抗ヒトＸ；マウス抗ラットＸ等であり得る。別の種からの抗原標的、例えば「Ｘ」に対する特定の種、又は場合によっては同じ種（例えば、自己免疫応答又は炎症応答において）に対して生成される抗体の組合せは限定されず、全ての種が本発明で具体化される。抗体という用語は最も広い意味で使用され、完全に組み立てられた抗体、モノクローナル抗体（ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の生物学的活性を示す限り、前述の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗原に結合することができる抗体断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）_２、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ）を含む。二重特異性抗体の例としては、ＧａｌＴ－Ｖ抗体と別の抗体、例えばラクトスルセラミド、Ｌｙｎキナーゼ、Ｓｒｃキナーゼ、ＶＥＧＦ－Ｒ１、Ｒ２、ＥＧＦ－Ｒ ＧＳＫ－アルファキナーゼとの組合せが挙げられる。

【0041】

「アンチセンスオリゴヌクレオチド」又は「アンチセンス化合物」とは、別のＲＮＡ又はＤＮＡ（標的ＲＮＡ、ＤＮＡ）に結合するＲＮＡ又はＤＮＡ分子を意味する。例えば、それがＲＮＡオリゴヌクレオチドである場合、ＲＮＡ－ＲＮＡ相互作用によって別のＲＮＡ標的に結合し、標的ＲＮＡの活性を変化させる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、特定のポリヌクレオチドの発現及び／又は機能を上方制御又は下方制御することができる。定義は、治療、診断、又は他の観点から有用な任意の外来ＲＮＡ又はＤＮＡ分子を含むことを意味する。そのような分子には、例えば、アンチセンスＲＮＡ分子又はアンチセンスＤＮＡ分子、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、マイクロＲＮＡ、デコイＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、酵素ＲＮＡ、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、治療用編集ＲＮＡ並びにアゴニスト及びアンタゴニストＲＮＡ、アンチセンスオリゴマー化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド、交互スプライサー、プライマー、プローブ、並びに標的核酸の少なくとも一部にハイブリダイズする他のオリゴマー化合物が含まれる。したがって、これらの化合物は、一本鎖、二本鎖、部分的に一本鎖、又は環状オリゴマー化合物の形態で導入され得る。

【0042】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、「又は」という用語は、一般に、その内容が明らかにそうでないことを指示しない限り、「及び／又は」を含む意味で使用される。

【0043】

本明細書で使用される場合、当技術分野でのその使用と一致する「化学療法剤」という用語は、癌を治療することが知られているか、又は癌の治療に寄与することが知られているか、又は知られている特徴を有する１つ以上の薬剤を指す。特に、化学療法剤には、アポトーシス促進剤、細胞増殖抑制剤及び／又は細胞傷害剤が含まれる。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤（例えば、以下の微小管標的化部分、例えばタキサン、メイタンシン及びその類縁体）、エポチロン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤ＨＤＡＣ）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、トポイソメラーゼＩ及び／又はトポイソメラーゼＩＩの阻害剤）、キナーゼ阻害剤、ヌクレオチド類縁体又はヌクレオチド前駆体類縁体、ペプチド抗生物質、白金系薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、及び／又は関連する抗増殖活性を共有する類縁体であり得るか、又はそれらを含み得る。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、アクチノマイシン、オールトランスレチノイン酸、アウイリスタチン、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、クルクミン、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、イリノテカン、メイタンシン及び／又はその類縁体（例えば、ＤＭ１）、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、メイタンシノイド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、又はそれらの組合せであり得るか、又はそれらを含み得る。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、抗体－薬物コンジュゲートの状況で利用することができる。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、ｈＬＬ１－ドキソルビシン、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８、ｈＭＮ－１４－ＳＮ－３８、ｈＬＬ２－ＳＮ－３８、ｈＡ２０－ＳＮ－３８、ｈＰＡＭ４－ＳＮ－３８、ｈＬＬ１－ＳＮ－３８、ｈＲＳ７－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＭＮ－１４－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＬＬ２－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＡ２０－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＰＡＭ４－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＬＬ１－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、Ｐ４／Ｄ１０－ドキソルビシン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、グレムバツムマブベドチン、ＳＡＲ３４１９、ＳＡＲ５６６６５８、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ０６２、ＳＧＮ－７５、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＡＭＧ－１７２、ＡＭＧ－５９５、ＢＡＹ－９４－９３４３、ＡＳＧ－ＳＭＥ、ＡＳＧ－２２ＭＥ、ＡＳＧ－１６Ｍ８Ｆ、ＭＤＸ－１２０３、ＭＬＮ－０２６４、ａｎｔｉ－ＰＳＭＡ ＡＤＣ、ＲＧ－７４５０、ＲＧ－７４５８、ＲＧ－７５９３、ＲＧ－７５９６、ＲＧ－７５９８、ＲＧ－７５９９、ＲＧ－７６００、ＲＧ－７６３６、ＡＢＴ－４１４、ＩＭＧＮ－８５３、ＩＭＧＮ－５２９，ボルセツズマブマホドチン、及びロルボツズマブメルタンシンからなる群から選択される抗体－薬物コンジュゲート中に見出される。

【0044】

本明細書で使用される場合、本明細書で使用される「併用療法」という用語は、対象が両方の薬剤に同時に曝露されるように、２つ以上の異なる医薬品が重複レジメンで投与される状況を指す。併用療法で使用される場合、２つ以上の異なる薬剤が同時に又は別々に投与され得る。この組合せでの投与は、同じ剤形での２つ以上の薬剤の同時投与、別々の剤形での同時投与、及び別々の投与を含み得る。すなわち、２つ以上の薬剤を同じ剤形で一緒に製剤化し、同時に投与することができる。あるいは、２つ以上の薬剤を同時に投与することができ、薬剤は別々の製剤中に存在する。別の実施形態において、第１の薬剤を投与した後、１つ以上の追加の薬剤を投与することができる。別個の投与プロトコルでは、２つ以上の薬剤は、数分間隔で、又は数時間間隔で、又は数日間隔で投与され得る。

【0045】

本明細書で使用される場合、「含む（こと）（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」又は「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」という用語及びその変形は、項目、組成物、装置、方法、プロセス、システム等の定義された又は記載された要素に関して、包括的又はオープンエンドであることを意味し、追加の要素を可能にし、それによって定義された又は記載された項目、組成物、装置、方法、プロセス、システム等がそれらの指定された要素、又は必要に応じてそれらの均等物を含むこと、及び他の要素が含まれてもよく、定義された項目、組成物、装置、方法、プロセス、システム等の範囲／定義内に入ることを示す。

【0046】

本明細書で使用される場合、「診断」という用語は、対象が疾患、障害、症状、又は状態を有するか、若しくは発症するであろうかどうかを判断すること、及び／又は定量的確率の定性的な判断を指す。例えば、癌の診断において、診断は、癌のリスク、タイプ、病期、悪性度、又は他の分類に関する判定を含むことができる。場合によっては、例えば本明細書に記載されるように、診断は、予後及び／又は１つ以上の一般的若しくは特定の治療剤若しくはレジメンに対する可能性のある応答に関する決定であり得るか、又はそれを含み得る。

【0047】

「疾患」は、動物が恒常性を維持することができず、疾患が改善されない場合、動物の健康が悪化し続ける動物の健康状態である。対照的に、動物における「障害」は、動物が恒常性を維持することができる健康状態であるが、動物の健康状態は、障害がない場合よりも好ましくない。未治療のままでは、障害は必ずしも動物の健康状態の更なる低下を引き起こさない。疾患又は障害は、疾患又は障害の症候の重症度、そのような症候が患者によって経験される頻度、又はその両方が低下する場合に「緩和される」。

【0048】

「投薬レジメン」（又は「治療レジメン」）は、その用語が本明細書で使用される場合、典型的には期間で区切られて対象に個別に投与される単位用量（典型的には２つ以上）のセットである。いくつかの実施形態において、所与の治療剤は、１つ以上の用量を含み得る推奨される投薬レジメンを有する。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、それぞれが同じ長さの期間だけ互いに隔てられている複数の用量を含み、いくつかの態様において、投薬レジメンは、複数の用量と、個々の用量を分離する少なくとも２つの異なる期間とを含む。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、患者の集団にわたって投与された場合、所望の治療成績であるか、又はそれと相関していた。本明細書で使用される場合、「制御放出投与製剤」は、特定の制御可能な速度で長期放出を提供する薬物の製剤を指す。

【0049】

「有効量」とは、未治療の患者と比較して疾患の症候を改善するのに必要な量を意味する。疾患の治療的処置のために本発明を実施するために使用される活性化合物（複数可）の有効量は、投与様式、対象の年齢、体重及び全般的な健康状態に応じて変化する。最終的には、主治医又は獣医が適切な量及び投与レジメンを決定する。このような量を「有効」量と呼ぶ。治療有効量、並びに剤形、投与経路、及び投与頻度を含む本発明の化合物の本発明の対象への有効投与に関連する他の要因の決定は、治療又は対処されている対象及び症状、特定の対象における症状の重症度、使用されている特定の化合物、使用されている特定の投与経路、投与頻度、及び使用されている特定の製剤を含む、遭遇する症状の詳細に依存し得る。本発明の対象に対する治療上有効な治療レジメンの決定は、医学分野又は獣医学分野の当業者のレベルの範囲内である。臨床使用において、有効量は、米国食品医薬品局又は同等の外国機関によって推奨される量であり得る。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される対象及び特定の投与様式に応じて変化する。

【0050】

抗体に対する「高親和性」とは、標的抗原に対するＫ_Ｄが１×１０^－７Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－８Ｍ以下、更に好ましくは１×１０^－８Ｍ以下、更により好ましくは５×１０^－９Ｍ以下、更に好ましくは１×１０^－９Ｍ以下の抗体をいう。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプについて異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高親和性」結合は、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、又は１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄを有する抗体を指す。

【0051】

「増強（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」、「増強する（ｅｎｈａｎｃｅ）」、「増強する（ｅｎｈａｎｃｅｓ）」又は「増強する（こと）（ｅｎｈａｎｃｉｎｇ）」という用語は、特定のパラメータの増加（例えば、少なくとも約１．１倍、１．２５倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、８倍、１０倍、１２倍、又は更には１５倍以上の増加）及び／又は少なくとも約５％、１０％、２５％、３５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％の特定の活性の増加を指す。

【0052】

本明細書で使用される場合、対象への治療の投与の状況における「組み合わせて」という用語は、治療上の利益のための２つ以上の治療の使用を指す。投与の状況における「組み合わせて」という用語はまた、少なくとも１つの追加の治療と共に使用される場合の対象への治療の予防的使用を指すことができる。「組み合わせて」という用語の使用は、治療（例えば、第１及び第２の治療）が対象に投与される順序を制限しない。治療は、癌を有していた、有している、又は癌にかかりやすい対象への第２の治療の投与の前に（例えば、１分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）、それと同時に、又はそれに続いて（例えば、１分後、５分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、８週間後、又は１２週間後）投与することができる。治療は、治療法が一緒に作用することができるように、一連の時間間隔内で対象に投与される。特定の実施形態において、治療は、他の方法で投与された場合よりも高い利益を提供するように、一連の時間間隔内で対象に投与される。任意の追加の治療は、他の更なる治療と任意の順序で投与することができる。

【0053】

本明細書で使用される場合、スフィンゴ糖脂質合成又はグルコシルセラミド合成の「阻害剤」は、合成のサイクルで関連するものを含むこれらの分子の合成を阻害する。これらの分子の合成の阻害は、任意の標準的なアッセイによって測定することができる。例えば、以下の実施例の項の方法を参照されたい。

【0054】

本明細書で使用される場合、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶの「阻害」又は「減少」は、細胞内のβ１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶの量を約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％超減少させる。β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶの量は、限定するものではないが、デンシトメーター、蛍光光度計、ラジオグラフィ、ルミノメーター、抗体ベースの方法及び活性測定を含む周知の方法によって決定することができる。

【0055】

「阻害する」、「減弱させる」、「減少させる」又は「抑制する」という用語は、特定のパラメータの減少（例えば、少なくとも約１．１倍、１．２５倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、８倍、１０倍、１２倍、又は更には１５倍以上の増加）及び／又は特定の活性の少なくとも約５％、１０％、２５％、３５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％の減少又は減少を指す。これらの用語は、参照又は対照に対するものであることを意図している。

【0056】

本明細書で使用される場合、「Ｋ_{ａｓｓｏｃ}」又は「Ｋ_ａ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことを意図しており、一方、本明細書で使用される場合、「Ｋ_ｄｉｓ」又は「Ｋ_ｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことを意図している。本明細書で使用される場合、「Ｋ_Ｄ」という用語は、Ｋ_ｄ対Ｋ_ａ（すなわち、Ｋ_ｄ／Ｋ_ａ）の比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことを意図している。抗体のＫ_Ｄ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫ_Ｄを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム等のバイオセンサシステムを使用することによるものである。

【0057】

本明細書で使用される場合、「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」、「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅｓ）」又は「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」は、特定の活性又はレベル（例えば、ｍＲＮＡの量、タンパク質の量、マーカーの発現、ＧＳＬの量等）の増強（例えば、増加）又は阻害（例えば、減弱、減少又は抑制される）を指す。対照レベルと比較して、決定されるレベルは増加したレベルであり得る。本明細書で使用される場合、レベル（例えば、タンパク質又はｍＲＮＡレベル）に関して「増加した」という用語は、対照レベルを超える任意の％増加を指す。様々な実施形態において、増加したレベルは、対照レベルと比較して、少なくとも又は約５％の増加、少なくとも又は約１０％の増加、少なくとも又は約１５％の増加、少なくとも又は約２０％の増加、少なくとも又は約２５％の増加、少なくとも又は約３０％の増加、少なくとも又は約３５％の増加、少なくとも又は約４０％の増加、少なくとも又は約４５％の増加、少なくとも又は約５０％の増加、少なくとも又は約５５％の増加、少なくとも又は約６０％の増加、少なくとも又は約６５％の増加、少なくとも又は約７０％の増加、少なくとも又は約７５％の増加、少なくとも又は約８０％の増加、少なくとも又は約８５％の増加、少なくとも又は約９０％の増加、少なくとも又は約９５％の増加であり得る。対照レベルと比較して、決定されるレベルは低下したレベルであり得る。本明細書で使用される場合、レベル（例えば、タンパク質又はｍＲＮＡレベル）に関して「減少した」という用語は、対照レベルを下回る任意の％減少を指す。様々な実施形態において、減少したレベルは、対照レベルと比較して、少なくとも又は約５％の減少、少なくとも又は約１０％の減少、少なくとも又は約１５％の減少、少なくとも又は約２０％の減少、少なくとも又は約２５％の減少、少なくとも又は約３０％の減少、少なくとも又は約３５％の減少、少なくとも又は約４０％の減少、少なくとも又は約４５％の減少、少なくとも又は約５０％の減少、少なくとも又は約５５％の減少、少なくとも又は約６０％の減少、少なくとも又は約６５％の減少、少なくとも又は約７０％の減少、少なくとも又は約７５％の減少、少なくとも又は約８０％の減少、少なくとも又は約８５％の減少、少なくとも又は約９０％の減少、少なくとも又は約９５％の減少であり得る。

【0058】

疾患、障害又は症状の発生に関連して本明細書で使用される場合、「予防する」及び「予防」という用語は、疾患、障害若しくは症状を発症するリスクを低下させること；疾患、障害若しくは症状の発病を遅延させること；疾患、障害、若しくは状態の１以上の特徴若しくは症候の発病を遅延させること；並びに／又は疾患、障害、若しくは症候の１つ以上の特徴若しくは症状の頻度及び／若しくは重症度を低下させることを指す。予防は、特定の対象における予防又は対象の集団に対する統計的影響を指すことができる。疾患、障害、又は症状の発病が所定の期間遅延した場合、予防は完全であると考えることができる。

【0059】

本明細書で使用される場合、「予後」という用語は、少なくとも１つの可能性のある将来の転帰又は事象の定量的確率の定性的な決定を指す。本明細書で使用される場合、予後は、対象における癌等の疾患、障害、又は症状の可能性のある経過の決定、対象の平均余命に関する決定、又は治療、例えば特定の治療に対する応答に関する決定であり得る。

【0060】

本明細書で使用される場合、「予後情報」という用語は、予後を提供するのに有用な情報を指す。予後情報は、バイオマーカーの状態情報を含み得るが、これに限定されない。

【0061】

本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの評価を目的として得られた生物学的試料を指す。実施形態において、試料は体液を含み得る。いくつかの実施形態において、体液には、対象から得られた全血、血漿、血清、リンパ液、母乳、唾液、粘液、精液、細胞抽出物、炎症液、脳脊髄液、硝子体液、涙液、硝子体液、房水、又は尿が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、試料は２つ以上の体液の複合パネルである。例示的な態様において、試料は血液又はその画分（例えば、血漿、血清、又は白血球除去療法によって得られた画分）を含む。

【0062】

本明細書で使用される場合、対象への治療の投与の状況における「予防する」、「予防する（こと）」及び「予防」という用語は、治療（例えば、予防剤）又は治療の組合せ（例えば、予防剤の組合せ）の投与に起因する対象における疾患若しくは障害又はその症候の再発、発病及び／又は発症の予防又は阻害を指す。

【0063】

「減少する」とは、参照と比較して少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、又は１００％の負の変化を意味する。

【0064】

「参照」とは、標準又は対照条件を意味する。

【0065】

本明細書で使用される場合、ポリペプチド又はエピトープに「特異的に結合する」抗体は、１×１０^－７Ｍ以下、又は５×１０^－８Ｍ以下、又は３×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは１×１０^－８Ｍ以下、又は５×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄでポリペプチド又はエピトープに結合する抗体を指すことを意図している。したがって、「特異的結合」又は「特異的に結合する」という用語は、タンパク質と抗体又は代替タンパク質骨格又はペプトイド又はアプタマーとの相互作用に関して使用される場合、相互作用がタンパク質上の特定の構造（すなわち、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味し、換言すれば、抗体は、一般にタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合している。したがって、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープに「特異的に結合する」又は「特異的である」抗体は、任意の他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープに結合する抗体である。

【0066】

本明細書で使用される場合、「持続放出投与製剤」は、最小の副作用で特定の期間一定の薬物濃度を維持するために、薬物を所定の速度で放出するように設計された薬物の製剤である。任意に、期間は、３０分若しくはそれ以上、例えば２～４時間若しくはそれ以上、例えば３～８時間若しくはそれ以上、例えば４～２４時間であり、又は例えば、１～３日若しくはそれ以上、例えば、２～７日若しくはそれ以上、例えば、４～１４日若しくはそれ以上、例えば、７日若しくはそれ以上、例えば、１４日間～１ヶ月若しくはそれ以上である。

【0067】

本明細書で使用される場合、症状、疾患若しくは障害、又は症状、疾患若しくは障害に関連する症候を「治療すること」又はその「治療」は、臨床結果を含む有益な又は所望の結果を得るためのアプローチを指す。有益な又は所望の臨床結果としては、限定されないが、部分的であるか全体的であるかを問わない、１つ以上の症候又は症状の緩和又は改善、症状、障害又は疾患の程度の減弱、症状、障害又は疾患の状態の安定化、症状、障害又は疾患の発症の予防、症状、障害又は疾患の進展の予防、症状、障害又は疾患の進行の遅延又は減速、症状、障害又は疾患の発病の遅延又は減速、症状、障害又は疾患の状態の改善又は緩和、及び寛解が挙げられ得る。「治療すること」はまた、症状、障害又は疾患の進行を阻害すること、症状、障害又は疾患の進行を一時的に減速させることを意味し得るが、場合によっては、症状、障害又は疾患の進行を永続的に停止させることを含む。

【0068】

本明細書で提供される範囲は、その範囲内の全ての値の省略表現であると理解される。例えば、１～５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０、並びに例えば１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、又は１．９等の前述の整数間の全ての介在する十進数値を含むと理解される。部分範囲に関して、範囲のいずれかの終点から延びる「入れ子状部分範囲（ｎｅｓｔｅｄ ｓｕｂ－ｒａｎｇｅ）」が特に企図される。例えば、１～５０の例示的な範囲の入れ子状部分範囲は、一方向に１～１０、１～２０、１～３０、及び１～４０、又は他の方向に５０～４０、５０～３０、５０～２０、及び５０～１０を含み得る。

【0069】

本明細書で提供される任意の組成物又は方法は、本明細書で提供される他の組成物及び方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる。

【0070】

特許又は出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を伴うこの特許又は特許出願公開の写しは、請求及び必要な料金の支払いに応じて特許庁によって提供される。

【図面の簡単な説明】

【0071】

【図1】図１Ａ～図１Ｉは、ＣＲＣ組織が抗β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ抗体に強く免疫反応し、ＬＣＳ活性及びＢ４ＧＡＬＴ５発現の増加を示すことを実証する一連の免疫染色及びグラフである。（図１Ａ）正常結腸スコア２（倍率２０倍）。（図１Ｂ）内皮の細胞質染色（２０倍）。（図１Ｃ）結腸癌症例スコア１（２０倍）。（図１Ｄ）結腸癌症例スコア２（２０倍）。（図１Ｅ）結腸癌症例スコア３（２０倍）。（図１Ｆ）ＣＲＣ組織は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖを過剰発現する。視覚的に正常なＣＲＣ組織（それぞれ５０ｍｇ）をＲＩＰＡ緩衝液中でホモジナイズし、１０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を使用して、ＥＬＩＳＡによってβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ質量を測定した。次いで、このアッセイを、正常及び腫瘍試料の両方について、Ｎ＝１０で三連で行った。平均値±ＳＥｍ値を示す（＊Ｐ＝０．０３４０）。対応のないｔ検定を使用して、統計学的有意性を決定した。（図１Ｇ）結腸直腸腫瘍におけるＬＣＳ活性の増加。平均±ＳＥｍ、＊＊Ｐ＝０．００５２。（図１Ｈ）ＡＰＣ、ＮＭＴ１及びＴＰ５３遺伝子は、正常試料の発現と比較して、腫瘍における発現の増加を示した。（図１Ｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ５は特異的に発現増加を示したが、Ｂ４ＧＡＬＴ６及びＵＧＣＧは比較的発現が増加しなかった。平均±ＳＥＭ、患者の正常試料と腫瘍試料の両方についてＮ≧４。通常の一元配置ＡＮＯＶＡを統計分析に利用した。

【0072】

【図2】図２Ａ～図２Ｇは、ＬａｃＣｅｒ質量がＣＲＣ組織において増加していることを実証する一連のグラフである。視覚的に正常なＣＲＣ組織（それぞれ５０ｍｇ）を、内部スフィンゴ脂質標準の存在下でクロロホルム－メタノール（２：１）中でホモジナイズした。次いで、脂質抽出物をＬＣ－ＭＳに供して、（図２Ａ）Ｃｅｒ、（図２Ｂ）ＤＨＣｅｒ、（図２Ｃ）ＧａｌＣｅｒ及びＧｌｃＣｅｒ、（図２Ｄ）ジヒドロＧａｌＣｅｒ／ジヒドロＧｌｃＣｅｒ、（図２Ｅ）ＬａｃＣｅｒ及び（図２Ｆ）ＤＨＬａｃＣｅｒを用いて、ＣＲＣ又は正常組織におけるスフィンゴ脂質種のレベルの変化を調べた。調査したＧＳＬの中で、ＬａｃＣｅｒレベルのみ（図２Ｅ）が結腸直腸腫瘍で統計的かつ有意に増加した（＊Ｐ＝０．０１１２）。Ｃｅｒ及びジヒドロＧａｌＣｅｒ／ジヒドロＧｌｃＣｅｒの場合、Ｎ＝１０（正常）及びＮ＝９（腫瘍）；ＤＨＣｅｒの場合、Ｎ＝９（正常）及びＮ＝１０（腫瘍）；並びにＧａｌＣｅｒとＧｌｃＣｅｒ、ＬａｃＣｅｒ、及びＤＨＬａｃＣｅｒの場合、Ｎ＝１０（正常及び腫瘍の両方）。（図２Ｇ）正常組織及び腫瘍組織を、ＬＣ－ＭＳによってスフィンゴミエリン及びＤＨＳＭレベルについて評価した。正常対腫瘍のスフィンゴミエリン値に静的に有意な差は見られなかった。対照的に、腫瘍試料は、正常と比較して有意に上昇したＤＨＳＭ値を示した（＊＊Ｐ＝０．００５９）。スフィンゴミエリンの場合、Ｎ＝１０（正常）及びＮ＝６（腫瘍）、並びにＤＨＳＭの場合、Ｎ＝１０（正常と腫瘍の両方）。平均±ＳＥｍ値及び対応のないｔ検定を使用して、統計学的有意性を決定した。

【0073】

【図3】図３Ａ～図３Ｈは、ＧＳＬ合成の薬理学的阻害が増殖を用量依存的に減少させ、ＨＣＴ－１１６におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖタンパク質発現を減少させることを実証する一連のグラフ及び蛍光染色である。Ｄ－ＰＤＭＰは、対照と比較して、ＨＣＴ－１１６細胞増殖において（図３Ａ）２４時間及び（図３Ｂ）９６時間で用量及び時間依存的減少を示し、最大有効用量は２０μＭであった。＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１。２４時間での（図３Ｃ）対照のＵＧＣＧ免疫蛍光と比較して、（図３Ｄ）Ｄ－ＰＤＭＰ処置細胞のＵＧＣＧ免疫蛍光に差は見られなかった。しかし、（図３Ｆ）２４時間及び（図３Ｈ）９６時間でのＤ－ＰＤＭＰ処置は、未処置対照のものと比較してＧａｌＴ－Ｖ蛍光を減少させた（それぞれＥ及びＧ）。

【0074】

【図4】図４Ａ～図４Ｈは、Ｄ－ＰＤＭＰ処置がＨＣＴ－１１６中のいくつかのスフィンゴ脂質のレベルを低下させることを実証する一連のグラフである。ＨＣＴ－１１６細胞（１０^５）を、１０ｍＬの培地中の滅菌（１００ｍｍ^２）プラスチックペトリ皿上に２４時間播種した。次いで、培地を、Ｄ－ＰＤＭＰ（１０μＭ）を含む又は含まない２％血清含有培地に交換した。２４時間後、培地を除去し、スフィンゴ脂質内部標準の存在下でヘキサン－イソプロパノール（体積で３：２）を用いて総脂質を抽出し、ＭＳに供した。Ｄ－ＰＤＭＰ処置（ｘ軸でＤ１０と示す）は、対照値（ｘ軸でＣと示す）と比較して、１０μＭで（図４Ａ）Ｃｅｒ、（図４Ｂ）ＤＨＣｅｒ、（図４Ｃ）モノヘキソシルセラミド、（図４Ｄ）ジヒドロＧｌｃ／ガルセラミド（ｇａｌｃｅｒａｍｉｄｅ）、（図４Ｅ）ジヘキソシルセラミド、（図４Ｆ）ＤＨＬａｃＣｅｒのレベルを低下させたが、（図４Ｇ）スフィンゴミエリンのレベルも（図４Ｈ）ＤＨＳＭのレベルも低下させなかった。データは平均±ＳＥｍを表し、対照及び（図４Ａ～図４Ｈ）の１０μＭ Ｄ－ＰＤＭＰについてＮ＝３生物学的反復を表し、対応のないｔ検定を統計分析に使用した。＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１］＼

【0075】

【図5】図５Ａ～図５Ｄは、ＣＲＣ組織が抗β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ抗体に強く免疫反応することを実証する一連の免疫染色である。

【0076】

【図6】図６は、結腸癌切片のＧａｌＴ－Ｖ抗体による免疫染色を示す。

【0077】

【図7】図７は、スフィンゴ脂質合成経路を示す模式図である。

【0078】

【図8】図８は、ＧａｌＴ－Ｖに対するＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置が増殖イオンＨＣＴ－１１６細胞を用量依存的に減少させることを実証するグラフである。ＨＣＴ－１１６細胞を９６ウェルトレイに播種し（１×１０^４細胞／ウェル）、１０％ウシ胎児血清を補充した培地で成長させた。２４時間後、^３Ｈ－チミジン（５μＣｉ／ｍｌ）及び様々な希釈のＧａｌＴ－Ｖモノクローナル抗体を含有する新鮮な培地を添加した。Ｄ－ＰＤＭＰ（５μＭ）による処置を陽性対照とした。２４時間のインキュベーション後、放射能のＤＮＡへの取り込みをシンチレーション分光法によって測定した。ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、ＨＣＴ－１１６細胞増殖を用量依存的に減少させた（Ｐ＊＊≦０．０１、Ｐ＊＊＊≦０．００１及びＰ＊＊＊＊≦０．０００１（Ｎ＝５））。

【0079】

【図9】図９は、ＧａｌＴ－Ｖに対するＧａｌＴ－Ｖ抗体での処置がマウス結腸直腸癌細胞における増殖を用量依存的に減少させることを実証するグラフである。マウス結腸直腸癌細胞を９６ウェルトレイに播種し（１×１０^４細胞／ウェル）、１０％ウシ胎児血清を補充した最少必須培地中で成長させ、上記の図８に記載されるように処理した。ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、ＭＣ－３８細胞増殖を用量依存的に減少させたことに留意されたい（Ｎ＝５）。

【0080】

【図10】図１０Ａ～図１０Ｉは、ＶＥＧＦ誘導管形成がβ－ＧａｌＴ－Ｖに対する抗体及びラクトシルセラミド抗体によって軽減されたことを実証する一連の写真及びグラフである。ヒト臍帯静脈内皮細胞を様々な希釈のβ－ＧａｌＴ－Ｖ抗体又はＬａｃＣｅｒ抗体と１時間インキュベートし、続いてＶＥＧＦで６時間処置した。次いで、管形成アッセイを行った。グラフの処置軸上の文字（図１０Ｉ）は、図１０Ａ～図１０Ｈに示す処置を表す。

【0081】

【図11】図１１Ａ～図１１Ｄは、β－１，４ＧａｌＴ－Ｖ抗体又はバイオポリマーカプセル化Ｄ－ＰＤＭＰによる処置が、正常な雌マウスにおいて腫瘍成長を妨げたことを実証する一連の写真である。３２週齢の正常雌マウス（Ｃ５７ＢＬ６）を剃毛した。背側領域をアルコール消毒綿で洗浄し、１００μＬの結腸直腸癌細胞ＨＣＴ－１１６（４×１０^６）懸濁液を注入した。１週間後、１００μＬのＢ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖに対するモノクローナル抗体（図１１Ａ、図１１Ｂ）又はβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ阻害剤（５ｍｐｋのバイオポリマー－カプセル化Ｄ－ＰＤＭＰ（図１１Ｃ、図１１Ｄ）を腫瘍細胞注射部位に３週間注入した。背部に毛が伸びた場合には背部領域を再度Ｎａｉｒで剃毛し、マウスを撮影した。処置マウスでは腫瘍成長は観察されなかったことに留意されたい（図１１Ａ～図１１Ｄ）。

【0082】

【図12】図１２は、β－ガラクトシルトランスフェラーゼ（β－ＧａｌＴ－Ｖ）が結腸直腸癌にどのように寄与し得るか、及びそれを予防するための本明細書の新規アプローチに関する反応の概要を示す概略図である。

【0083】

【図13】図１３は、実施例４のＧａｌＴ－Ｖ抗体処置モデルの模式図である。

【0084】

【図14】図１４は、ＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置がＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおいて体重を変化させなかったことを示す結果を示す。

【0085】

【図15】図１５（図１５Ａ～図１５Ｂを含む）は、ＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置を示し、これはＨＣＴ－１１６細胞を接種したＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおいて用量依存的に腫瘍体積を減少した。

【0086】

【図16】図１６（図１６Ａ～図１６Ｃを含む）は、ＨＣＴ－１１６直腸同所性腫瘍を担持するマウスの光学イメージングを示す。

【0087】

【図17】図１７は、ＣＲＣマウスにおけるＢ４ＧＡＬＴ－Ｖ、ＣＥＡ及びＮＭＴ－１の遺伝子発現のｑ－ＲＴ－ＰＣＲ分析を示す。

【0088】

【図18】図１８（図１８Ａ～図１８Ｂを含む）は、ＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置が血漿中のＧａｌＴ－Ｖの質量を減少させたことを実証する図１８ＡのＥＬＩＳＡアッセイ、及びＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置がプラセボと比較して腫瘍組織中のＬａｃＣｅｒの質量を減少させたことを実証する図１８ＢのＨＰＴＬＣ及びデンシトメトリー分析を示す。

【0089】

【図19】図１９は、共焦点顕微鏡法（実施例５）によって決定されたＧａｌＴ－Ｖ抗体の細胞表面局在を示す。

【0090】

【図20】図２０は、共焦点顕微鏡法によって決定されるような内在化されたＧａｌＴ－Ｖ抗体（３７℃）を示す。

【0091】

【図21】図２１は、ヒト冠動脈内皮細胞（ＨＣＡＥＣ）及びヒト結腸直腸癌細胞における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体結合を示す。

【0092】

【図22】図２２は、ヒト冠動脈内皮細胞（ＨＣＡＥＣ）及びヒト結腸直腸癌細胞における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体結合を示す。

【0093】

【図23】図２３は、Ｄ－ＰＤＭＰが、ヒト結腸直腸癌細胞におけるジルコニウムタグ付きＧａｌＴ－Ｖ抗体結合を阻害することを示す。

【0094】

【図24】図２４は、ヒト結腸直腸癌細胞における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及び内在化の特異性を示す図である。

【0095】

【図25】図２５は、ヒト結腸直腸癌細胞における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の時間依存的結合及び内在化を示す。

【0096】

【図26-27】図２６及び図２７は、特定の期間におけるヒトＣＲＣ腫瘍担持マウスのｉｎ ｖｉｖｏ異種蛍光画像を示す。

【0097】

【図28】図２８（図２８Ａ～図２８Ｃを含む）は、皮下／異種移植腫瘍担持マウス由来の個々の組織におけるＣＦ－７５０ ＧａｌＴ－Ｖ抗体蛍光の分布を示す。

【発明を実施するための形態】

【0098】

本発明は、β－ガラクトシルトランスフェラーゼ（β－ＧａｌＴ－Ｖ）がヒトＣＲＣにおいて役割を果たし、その阻害が腫瘍細胞増殖も軽減するという発見に部分的に基づく。結腸直腸癌対象からの試料は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ抗体に対して免疫反応性であることが分かった。さらに、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ質量、ｍＲＮＡ発現、酵素活性、及びＧＳＬ最終生成物レベルを評価した。ヒトＣＲＣ細胞株におけるＧＳＬグリコシルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を調べた。実施例のセクションで詳細に記載されるこれらの結果は、ＣＲＣの病理発生に対する新たな洞察を提供し、ＣＲＣの有望な検出／予後バイオマーカーを明らかにする。用途には、癌、特に結腸直腸癌及び結腸直腸癌の前駆腫瘍（例えば、進行した腺腫）のスクリーニングに有用なバイオマーカーが含まれる。結腸直腸癌等の癌の治療に使用するための組成物も記載される。

【0099】

結腸直腸癌には、結腸癌、直腸癌、及びそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。結腸直腸癌には、転移性結腸直腸癌及び非転移性結腸直腸癌が含まれる。結腸直腸癌には、結腸癌の近位部分に位置する癌及び結腸の遠位部分に位置する癌が含まれる。結腸直腸癌には、例えば、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ及びステージＩＶ結腸直腸癌（例えば、ステージ０、Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＣ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、ＩＶＡ、ＩＶＢ及びＩＶＣ）を含む、当技術分野で公知の様々な可能性のあるステージのいずれかの結腸直腸癌が含まれる。結腸直腸癌には、腫瘍／結節／転移（ＴＮＭ）の病期分類システムの全ての病期が含まれる。結腸直腸癌に関して、Ｔは、腫瘍が結腸又は直腸の壁内に成長したかどうか、及びその場合は何層まで成長したかを指すことができ、Ｎは、腫瘍がリンパ節に進展しているかどうか、及び進展している場合、リンパ節の数及びそれらが位置する場所を指すことができ、Ｍは、癌が身体の他の部分に進展しているかどうか、及び進展している場合はどの部分にどの程度まで進展しているかを指すことができる。Ｔ、Ｎ、及びＭの特定の病期は、当技術分野で公知である。Ｔ病期は、ＴＸ、Ｔ０、Ｔｉｓ、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４ａ、及びＴ４ｂを含むことができ、Ｎ病期は、ＮＸ、Ｎ０、Ｎ１ａ、Ｎ１ｂ、Ｎ１ｃ、Ｎ２ａ、及びＮ２ｂを含むことができ、Ｍ病期は、Ｍ０、Ｍ１ａ、及びＭ１ｂを含むことができる。さらに、結腸直腸癌のグレードには、ＧＸ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３及びＧ４が含まれ得る。癌、特に結腸直腸癌を病期分類する様々な手段は当技術分野で周知であり、例えば、ｃａｎｃｅｒ．ｎｅｔ／ｃａｎｃｅｒ－ｔｙｐｅｓ／ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ－ｃａｎｃｅｒ／ｓｔａｇｅｓに要約される。

【0100】

特定の実施形態において、本開示は、初期結腸直腸癌のスクリーニングを含む。初期段階の結腸直腸癌は、例えば、それらがまだ対象のリンパ節、例えば癌に近いリンパ節に進展しておらず（ステージＮＯ）、遠隔部位に進展していない（ステージＭ０）という点で、例えば対象内に局在する結腸直腸癌を含み得る。初期癌には、例えばステージ０～ＩＩＣに対応する結腸直腸癌が含まれる。

【0101】

したがって、結腸直腸癌には、とりわけ、前悪性結腸直腸癌（例えば、進行した腺腫）及び悪性結腸直腸癌が含まれる。本開示の方法及び組成物は、本明細書に命名されたもの又は当技術分野で他の方法で公知のもの、並びにそれらの全てのサブセットを含むがこれらに限定されない、その形態及び病期の全てにおいて結腸直腸癌のスクリーニングに有用である。したがって、当業者は、本明細書で提供される結腸直腸癌への全ての言及が、本明細書に命名されたもの又は他の様態で当技術分野で公知のものを含むがこれらに限定されない、その全ての形態及び病期の結腸直腸癌、並びにその全てのサブセットを含むがこれらに限定されないことを理解するであろう。

【0102】

したがって、特定の実施形態において、癌、例えば結腸直腸癌の予防及び治療における医薬組成物は、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤の、それを必要とする対象への投与を含む。

【0103】

特定の実施形態において、癌を治療する方法は、治療有効量の（ａ）抗体であって、該抗体は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、該抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む抗体と、（ｂ）治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤と、を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。

【0104】

特定の実施形態において、医薬組成物は、治療有効量の（ｉ）（ａ）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列核酸配列、及び（ｂ）配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列核酸配列を含む抗体と、（ｉｉ）配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む合成ペプチドと、（ｉｉｉ）アジュバントとを含む。特定の実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号３を含む重鎖可変領域核酸配列、及び（ｂ）配列番号２を含む軽鎖可変領域核酸配列と、配列番号５を含む合成ペプチドアミノ酸配列とを含む。

【0105】

特定の実施形態において、医薬組成物は、治療有効量の（ａ）抗体であって、該抗体はβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、該抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む抗体と、（ｂ）治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤と、を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。

【0106】

特定の実施形態において、医薬組成物は、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を更に含み、生分解性ポリマーによってカプセル化されていないか、又はカプセル化されている。特定の実施形態において、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤は、生分解性ポリマー（ＢＰＤ）にカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）である。特定の実施形態において、生分解性ポリマーは、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる。

【0107】

特定の実施形態において、医薬組成物は、１つ以上の二次治療剤を更に含む。特定の実施形態において、１つ以上の二次治療剤は、化学療法剤、抗炎症剤、コレステロール低下剤、インスリン、抗体、ペプチド、酵素、アジュバント又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、抗体を、検出可能な薬剤、放射線治療剤、毒素、放射性薬剤、色素、ペプチド、ポリヌクレオチド又はナノリポソームにコンジュゲートさせることを更に含む。特定の実施形態において、ナノリポソームは、治療剤（複数可）を含む。

【0108】

特定の実施形態において、医薬組成物は、ＩＧＡＱＶＹＥＱＶＬＲＳＡＹＡＫＲＮＳＳＶＮＤ（配列番号５）と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを更に含む。

【0109】

特定の実施形態において、組成物が、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤及び／又は治療有効量の、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）、そのアイソフォーム若しくはペプチドに特異的に結合する抗体を含む。

【0110】

特定の実施形態において、組成物が、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤及び／又は治療有効量のβ１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）、そのアイソフォーム若しくはペプチドの発現又は活性を調節する薬剤を含む。特定の実施形態において、薬剤は、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）、そのアイソフォーム又はペプチドの発現又は活性を阻害する。

【0111】

脂質の例としては、限定されないが、脂肪酸、遊離脂肪酸、コレステロール、ステロールエステル、トリグリセリド、ジグリセリド、グリセリド、ワックスエステル、スクアレン、セラミド、脂質、リン脂質、糖脂質、リノール酸又はそれらの組合せが挙げられる。

【0112】

他の実施形態において、癌を治療する方法は、それを必要とする対象に、治療有効量のスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤、脂質又はそれらの組合せを投与することを含む。特定の実施形態において、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤は、生分解性ポリマー（ＢＰＤ）にカプセル化されていないか、結合されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）である。特定の実施形態において、生分解性ポリマーは、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる。

【0113】

併用療法
特定の実施形態において、医薬組成物は、化学療法剤、放射線療法、毒素又はそれらの組合せ等の抗癌剤を含む。

【0114】

特定の実施形態において、特定の実施形態において、抗癌剤は、化学療法剤又は成長阻害剤、標的化治療剤、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合断片、抗体－薬物コンジュゲート、血管新生阻害剤、抗新生物剤、癌ワクチン、アジュバント、及びそれらの組合せである。特定の実施形態において、抗癌剤は、化学療法剤又は成長阻害剤である。例えば、化学療法剤又は増殖阻害剤には、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒性剤又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及びそれらの組合せが含まれ得る。特定の実施形態において、抗癌剤は、アジュバントである。癌関連抗原に対する等の抗癌免疫応答を増強するか、又は免疫系の成分への癌抗原の提示を助ける任意の物質を、本開示の抗癌アジュバントと見なし得る。

【0115】

化学療法：一般に、癌治療には、化学療法及び放射線療法の両方に基づく治療を伴う様々な併用療法も含まれる。併用化学療法としては、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソ尿素、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファメシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、５－フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン及びメトトレキサート、テマゾロミド（ＤＴＩＣの水性形態）、又は前述の任意の類縁体若しくは誘導体変異体が挙げられる。化学療法と生物学的療法との組合せは、生物化学療法として知られている。化学療法はまた、メトロノミック化学療法として知られている低用量の連続投与で投与され得る。

【0116】

なお更なる併用化学療法には、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパ、ウレドパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、トリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類縁体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類縁体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類縁体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロフォスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガムオール及びカリケアマイシンオメガオール）等の抗生物質；ダイネマイシン（ダイネマイシンＡを含む）；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；同様にまた、ネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラルマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリジン－ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラルマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ドキソルビシン；メトトレキサート、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）等の代謝拮抗剤；デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類縁体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類縁体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフル、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類縁体；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナリン、例えば、ミトタン、トリロスタン；フロリン酸等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；トグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサミトシン等のメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトレリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えばパクリタキセル及びドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチン等の白金配位錯体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルクロルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸等のレチノイド；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金；並びに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸又は誘導体が含まれる。特定の実施形態において、１つ以上化学療法剤が、本明細書に提供される組成物と組み合わせて使用される場合がある。

【0117】

放射線療法：ＤＮＡ損傷を引き起こし、癌治療において広く使用されている他の因子には、ガンマ線、Ｘ線、及び／又は腫瘍細胞への放射性同位元素の指向性送達として一般に知られているものが含まれる。マイクロ波及びＵＶ照射等の他の形態のＤＮＡ損傷因子も知られている。これらの因子の全てが、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製及び修復、並びに染色体の構築及び維持に広範囲の損傷をもたらす可能性が最も高い。Ｘ線の線量範囲は、長期間（３～４週間）にわたる５０～２００レントゲンの１日線量から２０００～６０００レントゲンの単回線量までの範囲である。放射性同位元素の線量範囲は広く異なり、同位体の半減期、放出される放射線の強度及び種類、並びに新生物細胞による取り込みに依存する。

【0118】

免疫療法：免疫療法は、一般に、癌細胞を標的化して破壊するための免疫エフェクター細胞及び分子の使用に依存する。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上のいくつかのマーカーに特異的な抗体であり得る。抗体は単独で治療のエフェクターとして機能し得るか、又は他の細胞を動員して実際に細胞死滅をもたらし得る。抗体はまた、薬物又は毒素（化学療法薬、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素等）に結合体化され得、単に標的化剤として機能し得る。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的又は間接的に相互作用する表面分子を担持するリンパ球であり得る。様々なエフェクター細胞には、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞、並びにキメラ抗原受容体を発現するように改変されたこれらの細胞型の遺伝子操作された変異体が含まれる。

【0119】

免疫療法は、１つ以上の癌抗原、特にタンパク質若しくはその免疫原性断片、前記癌抗原をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡ、特にタンパク質若しくはその免疫原性断片、癌細胞溶解物、及び／又は腫瘍細胞からのタンパク質調製物を含む癌ワクチンであり得る。本明細書で使用される場合、癌抗原は、癌細胞に存在する抗原性物質である。原則として、変異に起因する異常な構造を有する癌細胞において産生されるタンパク質はいずれも、癌抗原として作用し得る。原則として、癌抗原は、変異癌遺伝子及び腫瘍抑制遺伝子の産物、他の変異遺伝子の産物、過剰発現又は異常発現細胞タンパク質、発癌性ウイルスによって産生される癌抗原、癌胎児抗原、変化した細胞表面糖脂質及び糖タンパク質、又は細胞型特異的分化抗原であり得る。癌抗原の例としては、ｒａｓ及びｐ５３遺伝子の異常産物が挙げられる。他の例としては、組織分化抗原、変異タンパク質抗原、発癌性ウイルス抗原、癌精巣抗原及び血管又は間質特異的抗原が挙げられる。組織分化抗原は、特定のタイプの組織に特異的な抗原である。正常細胞はこれらのタンパク質を含有すべきではないので、変異タンパク質抗原は癌細胞にはるかに特異的である可能性が高い。正常細胞はそのＭＨＣ分子上に正常タンパク質抗原を提示するが、癌細胞は変異型を提示する。いくつかのウイルスタンパク質は癌の形成に関与しており、いくつかのウイルス抗原も癌抗原である。

【0120】

特定の実施形態において、癌を治療する方法は、配列番号５と少なくとも９０％のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含む治療有効量の合成ペプチドと、少なくとも１つのアジュバントを投与することを含む。特定の実施形態において、合成ペプチドは、配列番号５を含む。治療有効量の配列番号５の投与は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）に対する免疫応答を生成する。特定の実施形態において、アジュバントも対象に投与される。

【0121】

特定の実施形態において、免疫療法は、ポリクローナル抗体調製物の一部等の抗体であり得るか、又はモノクローナル抗体であり得る。抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体断片、二重特異性抗体又は一本鎖抗体であり得る。本明細書に開示される抗体は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄｆｖ）及びＶＬドメイン又はＶＨドメインのいずれかを含む断片等の抗体断片を含む。

【0122】

特定の実施形態において、抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む。

【0123】

特定の実施形態において、１つ以上の抗体は、併用療法として、それを必要とする対象に投与される。本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用され得るモノクローナル抗体の例には、限定されないが、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）；ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ）；セツキシマブ（上皮増殖因子受容体ＥＧＦＲに対するキメラモノクローナル抗体）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ザルツムマブ（抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）；ネシツムマブ（抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）；ＭＤＸ－２１０（ヒト化抗ＨＥＲ－２二重特異性抗体）；ＭＤＸ－２１０（ヒト化抗ＨＥＲ－２二重特異性抗体）；ＭＤＸ－４４７（ヒト化抗ＥＧＦ受容体二重特異性抗体）；リツキシマブ（キメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；トシツムマブ－Ｉ１３１（抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ ｍＡｂ）；ラムシルマブ（抗ＶＥＧＦＲ２ ｍＡｂ）；ラニビズマブ（抗ＶＥＧＦ ｍＡｂ）；アフリベルセプト（ＩｇＧ１Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１及びＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメイン）；ＡＭＧ３８６（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したアンジオポエチン－１及び－２結合ペプチド）；ダロツズマブ（抗ＩＧＦ－１Ｒ ｍＡｂ）；ゲムツズマブオゾガマイシン（抗ＣＤ３３ ｍＡｂ）；アレムツズマブ（抗Ｃａｍｐａｔｈ－１／ＣＤ５２ ｍＡｂ）；ブレンツキシマブベドチン（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）；カツマキソマブ（上皮細胞接着分子及びＣＤ３を標的とする二重特異性 ｍＡｂ）；ナプトモマブ（抗５Ｔ４ ｍＡｂ）；ジレンツキシマブ（抗炭酸脱水酵素ｉｘ）；又はファルレツズマブ（抗葉酸受容体）が含まれる。他の例には、抗体、例えば、Ｐａｎｏｒｅｘ（商標）（１７－１Ａ）（マウスモノクローナル抗体）；Ｐａｎｏｒｅｘ（１７－１Ａ）（キメラマウスモノクローナル抗体）；ＢＥＣ２（アミイディオタイプｍＡｂはＧＤエピトープを模倣する）（ＢＣＧ使用）；腫瘍（Ｌｙｍ－１モノクローナル抗体）；ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５ Ａｂ、ヒト化１３’ １ ＬＹＭ－１（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、Ｏｖａｒｅｘ（Ｂ４３．１３、抗イディオタイプマウスｍＡｂ）；腺癌上のＥＧＰ４０（１７－１Ａ）汎癌抗原に結合する３６２２Ｗ９４ ｍＡｂ；Ｚｅｎａｐａｘ（ＳＭＡＲＴ抗Ｔａｃ（ＩＬ－２受容体）；ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５ Ａｂ、ヒト化Ａｂ、ヒト化）；ＮｏｖｏＭＡｂ－Ｇ２（汎癌特異的Ａｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；グリオーマブ－Ｈ（モノクローナル抗体－ヒト化Ａｂ）；ＧＮＩ－２５０ Ｍａｂ；ＥＭＤ－７２０００（キメラＥＧＦアンタゴニスト）；リンホシド（ヒト化ＩＬ．Ｌ．２抗体）；及びＭＤＸ－２６０二重特異性、標的であるＧＤ－２、ＡＮＡ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＩＤＩＯ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ ３６４ Ａｂ又はＩｍｍｕＲＡＩＴ－ＣＥＡが含まれる。抗体の例としては、米国特許第５，７３６，１６７号、米国特許第７，０６０，８０８号及び米国特許第第５，８２１，３３７号に開示されているものが挙げられる。

【0124】

受動免疫療法：癌の受動免疫療法のためのいくつかの異なるアプローチが存在する。それらは、以下に広く分類され得る：抗体単独の注射；毒素又は化学療法剤に結合した抗体の注射；放射性同位体に結合した抗体の注入；抗イディオタイプ抗体の注射；最後に、骨髄中の腫瘍細胞のパージを行う。

【0125】

したがって、特定の実施形態において、癌を治療する方法は、治療有効量の（ａ）抗体であって、該抗体は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、該抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む抗体と、１つ以上の二次治療剤と、を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。特定の実施形態において、１つ以上の二次治療剤は、化学療法剤、抗炎症剤、コレステロール低下剤、インスリン、抗体、ペプチド、酵素、アジュバント又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、抗体を、検出可能な薬剤、放射線治療剤、毒素、放射性薬剤、色素、ペプチド、ポリヌクレオチド又はナノリポソームにコンジュゲートさせることを更に含む。特定の実施形態において、ナノリポソームは、治療剤（複数可）を含む。

【0126】

他の薬剤：治療の治療有効性を改善するために、他の薬剤を本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用され得ると考えられる。これらの追加の薬剤には、免疫調節剤、細胞表面受容体及びＧＡＰ接合部の上方制御に影響を及ぼす薬剤、細胞増殖抑制剤及び分化剤、細胞接着の阻害剤、又はアポトーシス誘導因子に対する過剰増殖性細胞の感受性を増加させる薬剤を含む。免疫調節剤には、腫瘍壊死因子；インターフェロンアルファ、ベータ及びガンマ；ＩＬ－２及び他のサイトカイン；Ｆ４２Ｋ及び他のサイトカイン類縁体；又はＭＩＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＭＣＰ－１、ＲＡＮＴＥＳ及び他のケモカインが含まれる。細胞表面受容体又はそれらのリガンド（例えば、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド、ＤＲ４又はＤＲ５／ＴＲＡＩＬ等）のアップレギュレーションは、過剰増殖性細胞に対するオートクリン又はパラクリン効果の確立によって、本明細書中に提供される組成物のアポトーシス誘導能を増強するであろうことが更に想定される。ＧＡＰ接合部の数を増加させることによる細胞間シグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖性細胞集団に対する抗過剰増殖効果を増加させるであろう。他の実施形態において、細胞増殖抑制剤又は分化剤を本明細書で提供される組成物と組み合わせて使用して、治療の抗増殖効力を改善することができる。細胞接着の阻害剤は、本発明の有効性を改善するために企図される。細胞接着阻害剤の例は、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤及びロバスタチンである。アポトーシスに対する過剰増殖性細胞の感受性を増加させる他の薬剤、例えば抗体ｃ２２５を、本明細書に提供される組成物と組み合わせて使用して、治療効力を改善することができることが更に企図される。

【0127】

更なる実施形態において、他の薬剤は、１つ以上の腫瘍溶解性ウイルス、例えばｐ５３及び／又はＩＬ２４以外の遺伝子、例えばサイトカインを発現するように操作された腫瘍溶解性ウイルスであり得る。腫瘍溶解性ウイルスの例としては、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザウイルス及びレオウイルスが挙げられる。

【0128】

特定の実施形態において、ホルモン療法はまた、本実施形態と組み合わせて、又は前述の任意の他の癌治療と組み合わせて使用されてもよい。ホルモンの使用は、特定のホルモンのレベルを低下させるか又はその効果を遮断するために使用され得る。この治療は、治療選択肢として、又は転移のリスクを低減するために、少なくとも１つの他の癌治療と組み合わせて使用されることが多い。

【0129】

いくつかの態様において、追加の抗癌剤は、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ－３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ－Ｋｉｔ、ｅｐｈ受容体又はＢＲＡＦ阻害剤等のプロテインキナーゼ又は成長因子シグナル伝達経路に関与する受容体を阻害するプロテインキナーゼ阻害剤又はモノクローナル抗体である。プロテインキナーゼ又は成長因子シグナル伝達経路阻害剤の非限定的な例には、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＭＫ－２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ－４４３６５４、ＶＱＤ－００２、ミルテホシン、ペリホシン、ＣＡＬ１０１、ＰＸ－８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ－６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ－０５、ＡＧ－０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６－００、ＧＷ５７２０１６又はそれらの混合物が含まれる。

【0130】

追加の癌治療は、例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ－１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ－２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ－３／ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ－４／ＨＥＲ４、ＥＧＦＲリガンドファミリー；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）ファミリー、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ＩＧＦＲリガンドファミリー（ＩＧＦ－１Ｒ）；血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）ファミリー、ＰＤＧＦＲリガンドファミリー；線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリー、ＦＧＦＲリガンドファミリー、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリー、ＶＥＧＦファミリー；ＨＧＦ受容体ファミリー：ＴＲＫ受容体ファミリー；エフリン（ＥＰＨ）受容体ファミリー；ＡＸＬ受容体ファミリー；白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）受容体ファミリー；ＴＩＥ受容体ファミリー、アンジオポエチン１、２；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体（ＲＯＲ）受容体ファミリー；ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）ファミリー；ＲＥＴ受容体ファミリー；ＫＬＧ受容体ファミリー；ＲＹＫレセプターファミリー；ＭｕＳＫ受容体ファミリー；トランスフォーミング成長因子アルファ（ＴＧＦ－α）、ＴＧＦ－α受容体；形質転換成長因子β（ＴＧＦ－β）、ＴＧＦ－β受容体；インターロイキン１３受容体アルファ２鎖（１Ｌ１３Ｒアルファ２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、１Ｌ－６受容体、インターロイキン－４、ＩＬ－４受容体、サイトカイン受容体、クラスＩ（ヘマトポエチンファミリー）及びクラスＩＩ（インターフェロン／１Ｌ－１０ファミリー）受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリー、ＴＮＦ－α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＴＲＳＦ）、細胞死受容体ファミリー、ＴＲＡＩＬ受容体；癌精巣（ＣＴ）抗原、系統特異的抗原、分化抗原、アルファ－アクチニン－４、ＡＲＴＣ１、切断点クラスター領域－アベルソン（Ｂｃｒ－ａｂｌ）融合産物、Ｂ－ＲＡＦ、カスパーゼ－５（ＣＡＳＰ－５）、カスパーゼ－８（ＣＡＳＰ－８）、ベータ－カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、細胞分裂周期２７（ＣＤＣ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯＡ－１、ｄｅｋ－ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦＴＵＤ－２、伸長因子２（ＥＬＦ２）、Ｅｔｓ変異体遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ（ＥＴＣ６－ＡＭＬ１）融合タンパク質、フィブロネクチン（ＦＮ）、ＧＰＮＭＢ、低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌフコース：β－ガラクトース２－アルファ－Ｌフコシルトランフエェラーゼ；（ＬＤＬＲ／ＦＵＴ）融合タンパク質、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ａ２遺伝子のアルファ２ドメインのアルファヘリックスの残基１７０におけるアルギニンからイソロイシンへの交換（ＨＬＡ－Ａ＊２０１－Ｒ１７０Ｉ）、ＭＬＡ－Ａ１１、熱ショックタンパク質７０－２変異（ＨＳＰ７０－２Ｍ）、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＡＲＴ２、偏在性黒色腫変異１、２、３（ＭＵＭ－１、２、３）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ｎｅｏ－ＰＡＰ、ミオシンクラス１、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ－９、ｐｍｌ－ＲＡＲアルファ融合タンパク質、ＰＲＤＸＳ、ＰＴＰＲＫ、Ｋ－ｒａｓ（ＫＲＡＳ２）、Ｎ－ｒａｓ（ＮＲＡＳ）、ＨＲＡＳ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ－ＳＳＸ１又は－ＳＳＸ２融合タンパク質、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ－１、ＢＡＧＥ－２、３、４、５、ＧＡＧＥ－１、２、３、４、５、６、７、８、ＧｎＴ－Ｖ（異常なＮ－アセチルジウコサミニルトランスフェラーゼＶ、ＭＧＡＴＳ）、ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ、ＫＫ－ＬＣ、ＫＭ－ＨＮ－１、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、黒色腫上のＣＴＬ認識抗原（ＣＡＭＥＬ）、ＭＡＧＥ－Ａ１（ＭＡＧＥ－１）、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－ＡＳ、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－Ｂ１、ＭＡＧＥ－Ｂ２、ＭＡＧＥ－Ｂ５、ＭＡＧＥ－Ｂ６、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（ＭＬＡＮＡ）、ｇｐ１００、ｇｐ１００／Ｐｍｅ１１７（Ｓ１ＬＶ）、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、ＴＲＰ－１、ＨＡＧＥ、ＮＡ－８８、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ－１、２、３、４、ＴＲＰ２－１ＮＴ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、カリクレフィン４（Ｋａｌｌｉｋｆｅｉｎ４）、ｍａｍｍａｇｌｏｂｍ－Ａ、ＯＡ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原、ＴＲＰ－１／ｇｐ７５、ＴＲＰ－２、アディポフィリン、ニエラノルナ２に存在しないインターフェロン誘導性タンパク質（ＡＩＭ－２）、ＢＩＮＧ－４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、上皮細胞接着分子（Ｅｐ－ＣＡＭ）、ＥｐｂＡ３、線維芽細胞増殖因子－５（ＦＧＦ－５）、糖タンパク質２５０（ｇｐ２５０腸管カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、アルファ－フェトタンパク質（ＡＦＰ）、Ｍ－ＣＳＦ、ｍｄｍ－２、ＭＵＣＩ、ｐ５３（ＴＰ５３）、ＰＢＦ、ＦＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ－１、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１１、サバイビン（ＢＩＲＣＳ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、テロメラーゼ、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＳＹＣＰ１、ＢＲＤＴ、ＳＰＡＮＸ、ＸＡＧＥ、ＡＤＡＭ２、ＰＡＧＥ－５、ＬＩＰ１、ＣＴＡＧＥ－１、ＣＳＡＧＥ、ＭＭＡ１、ＣＡＧＥ、ＢＯＲＩＳ、ＨＯＭ－ＴＥＳ－８５、ＡＦ１５ｑ１４、ＨＣＡ６６Ｉ、ＬＤＨＣ、ＭＯＲＣ、ＳＧＹ－１、ＳＰＯ１１、ＴＰＸ１、ＮＹ－ＳＡＲ－３５、ＦＴＨＬＩ７、ＮＸＦ２ ＴＤＲＤ１、ＴＥＸ１５、ＦＡＴＥ、ＴＰＴＥ、免疫グロブリンイディオタイプ、ベンス・ジョーンズタンパク質、エストロゲン受容体（ＥＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ３、癌抗原７２－４（ＣＡ ７２－４）、癌抗原１５－３（ＣＡ １５－３）、癌抗原２７－２９（ＣＡ ２７－２９）、癌抗原１２５（ＣＡ １２５）、癌抗原１９－９（ＣＡ １９－９）、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、１－２ミクログロブリン、扁平上皮癌抗原、ニューロン特異的ｅｎｏＪａｓｅ、熱ショックタンパク質ｇｐ９６、ＧＭ２、サルグラモスチム、ＣＴＬＡ－４、７０７アラニンプロリン（７０７－ＡＰ）、Ｔ細胞によって認識される腺癌抗原４（ＡＲＴ－４）、癌発生抗原ペプチド－１（ＣＡＰ－１）、カルシウム活性化クロライドチャネル－２（ＣＬＣＡ２）、シクロフィリンＢ（Ｃｙｐ－Ｂ）、ヒトシネ環腫瘍－２（ＨＳＴ－２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質（ＨＰＶ－Ｅ６、ＨＰＶ－Ｅ７、主要カプシド抗原又は微量カプシド抗原、その他）、エプスタイン・バー・ビム（ＥＢＶ）タンパク質（ＥＢＶ潜在膜タンパク質－ＬＭＰ１、ＬＭＰ２；その他）、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルスタンパク質、及びＨＩＶタンパク質を標的とする抗体、ペプチド、ポリペプチド、小分子阻害剤、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、又は遺伝子治療を含み得る。

【0131】

スフィンゴ糖脂質合成阻害剤：特定の実施形態において、方法は、生分解性ポリマーによってカプセル化されていないか、又はカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤を投与することを更に含む。特定の実施形態において、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤は、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）（例えば、生分解性ポリマーと混合され得る、例えば、生分解性ポリマー（ＢＰＤ）にカプセル化されていないか、又はカプセル化されているＤ－ＰＤＭＰを含む）である。特定の実施形態において、生分解性ポリマーは、ポリエチレングリコール及びセバシン酸からなる。

【0132】

ある特定の実施形態において、組成物は、スフィンゴ糖脂質合成の阻害剤、グルコシルセラミドシンターゼの阻害剤又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、グルコシルセラミド合成を阻害する化合物は、イミノ糖である。別の実施形態において、イミド糖は、Ｎ－ブチルデオキシノジリマイシン、Ｎ－ブチルデオキシガラクトノジリマイシン（ＮＢ－ＤＧＪ）又はＮ－ノニルデオキシノジリマイシンである。別の実施形態において、グルコシルセラミド合成の阻害剤は、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール及びその構造的に関連する類縁体である。別の実施形態において、グルコシルセラミド合成の阻害剤は、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）及びその構造的に関連する類縁体である。特定の実施形態において、組成物は、生分解性ポリマーによってカプセル化されている、Ｄ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、（１Ｒ，２Ｒ）－ノナン酸（２－（２’，３－ジヒドロ－ベンゾ（１，４）ジオキシン－６’－イル）－２－ヒドロキシ－１－ピロリジン－１－イルメチル－エチル）－アミド－Ｌ－酒石酸塩（Ｇｅｎｚ－１２３３４６）、イミド糖、１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＤＭＰ）、１－フェニル－２－パルミトイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（ＰＰＭＰ）、脂質、セラミド、又はそれらの組合せを含む。

【0133】

医薬製剤
特定の実施形態において、本明細書で具体化される医薬組成物は、全身投与、例えば経口、ｉ．ｖ．、ｉ．ｍ．等のために製剤化され、治療有効量のスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤、例えば、治療有効量の（ａ）抗体であって、該抗体はβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）エピトープに特異的に結合し、該抗体は、（ｉ）ＥＶＱＬＥＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＴＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＭＨＰＧＲＡＹＩＲＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＳＤＹＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び（ｉｉ）ＤＶＶＭＴＱＴＰＰＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＧＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変配列を含む抗体、及び／又は配列番号５を含むペプチド、及び／又は例えば、生分解性ポリマーと混合され得る、例えば、生分解性ポリマー（ＢＰＤ）にカプセル化されていない若しくはカプセル化されたＤ－ＰＤＭＰを含むＤ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ）、又はそれらの組合せを含む。

【0134】

医薬組成物は、薬学的に許容され得る担体を含み得る。「薬学的に許容され得る」という用語は、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されていること、又は動物、より具体的にはヒトでの使用について、米国薬局方若しくは他の一般に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。「担体」という用語は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのような医薬担体は、滅菌液体、例えば水及び油、例えば石油、動物、植物又は合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油、オリーブ油、ゲル（例えば、ヒドロゲル）等であり得る。医薬組成物を静脈内投与する場合、生理食塩水が好ましい担体である。生理食塩水並びにデキストロース及びグリセロール水溶液も、特に注射液用の液体担体として使用することができる。

【0135】

適切な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が含まれる。組成物は、所望であれば、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤も含有することができる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、持続放出製剤等の形態をとることができる。経口製剤は、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体を含むことができる。適切な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”に記載されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。そのような組成物は、一般に、患者への適切な投与のための形態を提供するように、適切な量の担体と共に、精製形態の治療有効量の医薬品及び／又は治療化合物（例えば、バイオポリマーカプセル化Ｄ－ＰＤＭＰ）を含有する。製剤は投与様式に適するべきである。

【0136】

実施形態において、医薬品及び／又は治療化合物は、例えば活性物質の制御された溶解及び／又は拡散によって、即時放出又は制御放出組成物として局所投与される。溶解又は拡散制御放出は、活性物質を適切なマトリックスに組み込むことによって達成することができる。制御放出マトリックスは、バイオポリマー、シェラック、ミツロウ、グリコワックス（ｇｌｙｃｏｗａｘ）、キャスターワックス、カルナバロウ、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセロールエステル、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ－ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、２－ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートヒドロゲル、１，３ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、及び／又はポリエチレングリコール及び／又はセバシン酸のうちの１つ以上を含み得る。制御放出マトリックス配合物では、マトリックス材料はまた、例えば、水和メチルセルロース、カルナバワックス及びステアリルアルコール、カルボポール９３４、シリコーン、グリセリルトリステアレート、メチルアクリレート－メチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、及び／又はハロゲン化フルオロカーボンを含み得る。特定の実施形態において、制御放出組成物は、経皮パッチを介して達成される。

【0137】

制御放出マトリックスはまた、ヒドロゲル：大量の水を取り込むことができる三次元、親水性又は両親媒性ポリマーネットワークであってもよい。ネットワークは、共有結合性の化学的又は物理的（例えば、イオン性、疎水性相互作用、絡み合い）架橋の存在に起因して不溶性であるホモポリマー又はコポリマーから構成され得る。架橋は、ネットワーク構造及び物理的完全性を提供する。ヒドロゲルは、水性媒体中で膨潤することを可能にする水との熱力学的適合性を示す。ネットワークの鎖は、細孔が存在し、これらの細孔のかなりの部分が１ｎｍ～１０００ｎｍの寸法であるように接続されている。

【0138】

ヒドロゲルは、親水性バイオポリマー又は合成ポリマーを架橋することによって調製することができる。親水性バイオポリマーの物理的又は化学的架橋から形成されるヒドロゲルの例には、ヒアルロナン、キトサン、アルギネート、コラーゲン、デキストラン、ペクチン、カラギーナン、ポリリジン、ゼラチン、アガロース、（メタ）アクリレート－オリゴラクチド－ＰＥＯ－オリゴラクチド－（メタ）アクリレート、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＯ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＯ）、ＰＥＯ－ＰＰＯ－ＰＥＯコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（メタクリレート）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ＰＬ（Ｇ）Ａ－ＰＥＯ－ＰＬ（Ｇ）Ａコポリマー、ポリ（エチレンイミン）等が含まれるが、これらに限定されない。Ｈｅｎｎｉｎｋ ａｎｄ ｖａｎ Ｎｏｓｔｒｕｍ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．５４：１３－３６（２００２）；Ｈｏｆｆｍａｎ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．４３：３－１２（２００２）；Ｃａｄｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ ７８：１－１３（２００２）；Ｓｕｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ ９０：２９１－３０１（２００３）；及び米国特許第７，９６８，０８５号（これらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。これらの材料は、直鎖又は分枝鎖の多糖又はポリペプチドからなる高分子量骨格鎖からなる。

【0139】

アテローム性心疾患の治療又は予防に有効となる本発明の医薬組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、任意に、最適な投与量範囲を特定するのを助けるために使用され得る。製剤に使用される正確な用量はまた、投与経路及び疾患の重篤度に依存し得、施術者の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、本明細書に記載されるか又は当業者に公知のｉｎ ｖｉｔｒｏ又は動物モデル試験系から誘導される用量応答曲線から外挿され得る。

【0140】

投与及び投与レジメン
医薬品及び／又は治療用化合物又はこれらの剤／化合物を含有する組成物は、投与製剤と適合する様式で、治療的に効果的、保護的及び免疫原性であり得る量で投与され得る。

【0141】

薬剤及び／又は組成物は、経口、経口胃管栄養、非経口、頬側及び舌下、直腸、エアロゾル、鼻、筋肉内、皮下、皮内、骨内、皮膚、及び局所を含むがこれらに限定されない異なる経路を介して投与され得る。本明細書で使用される場合、非経口という用語は、例えば、眼内、皮下、腹腔内、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、及び頭蓋内注射、又は他の注入技術を含む。

【0142】

実施形態において、本発明に従って製剤化された医薬品及び／又は治療化合物は、全身応答を誘発するように製剤化され送達される。したがって、実施形態において、製剤は、有効成分を液体担体と均一かつ密接に会合させることによって調製される。投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び製剤を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性滅菌溶液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。製剤は、単位用量又は複数用量容器、例えば密封されたアンプル及びバイアルで提供されてもよく、使用直前に滅菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とする凍結乾燥（凍結乾燥）条件で保存されてもよい。即時の溶液及び懸濁液は、当業者によって一般的に使用される滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製され得る。

【0143】

薬剤及び／又は組成物は、限定されないが、溶液、エマルジョン及び懸濁液、ミクロスフェア、粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子、リポソーム等を含む異なる形態で投与され得る。

【0144】

医薬品及び／又は治療化合物は、投与製剤と適合する様式で、治療的に有効、免疫原性及び保護的であり得る量で投与され得る。投与される量は、例えば、疾患の病期を含む、治療される対象に依存する。投与する必要がある有効成分の正確な量は、施術者の判断に依存する。しかしながら、適切な投与量範囲は、当業者によって容易に決定可能であり、１用量当たり１マイクログラム～１ミリグラム程度の有効成分（複数可）であり得る。投与量はまた、投与経路に依存し得、宿主のサイズに応じて変動し得る。

【0145】

医薬品及び／又は治療化合物は、疾患を改善、治療及び／又は予防するのに有効な量で対象に投与されるべきである。任意の特定の対象に対する具体的な投与量及び治療レジメンは、使用される具体的な化合物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組合せ、疾患の重症度及び経過（腫瘍サイズを含む）、症状又は症候、疾患に対する対象の性質、症状又は症候、投与方法、及び治療する医師の判断を含む様々な因子に依存し得る。実際の投与量は、当業者によって容易に決定され得る。

【0146】

例示的な単位投与製剤は、投与される成分の用量若しくは単位又はその適切な画分を含有するものである。本明細書で言及される成分に加えて、本発明の製剤は、当業者によって一般的に使用される他の薬剤を含み得ることを理解されたい。

【0147】

特定の実施形態において、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）に特異的に結合する抗体、そのアイソフォーム又はペプチドは、全身投与されるか、内視鏡検査を介して投与されるか、又は肛門内投与される。

【0148】

特定の実施形態において、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤及び／又はβ１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）、そのアイソフォーム若しくはペプチドの発現又は活性を調節する治療有効量の薬剤を含む組成物を、全身又は局所に投与する。

【0149】

特定の実施形態において、治療有効量の少なくとも１つのスフィンゴ糖脂質合成の阻害剤及び／又はβ１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＶ（ＢＧＡ）、そのアイソフォーム若しくはペプチドの発現又は活性を調節する治療有効量の薬剤を含む組成物を、対象に同時投与する。「同時投与」という用語は、個体の血液中の２つの活性剤の同時存在を指す。同時投与される活性剤は、同時に又は順次送達され得る。

【0150】

典型的には、従来の全身投与治療では、治療有効投与量は、約０．１ｎｇ／ｍｌ～約５０～１００μｇ／ｍｌの化合物の血清濃度をもたらすはずである。医薬組成物は、典型的には、１日当たり体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ～約２０００ｍｇの投与量の化合物を提供する。例えば、ヒト患者への全身投与のための投与量は、１～１０μｇ／ｋｇ、２０～８０μｇ／ｋｇ、５～５０μｇ／ｋｇ、７５～１５０μｇ／ｋｇ、１００～５００μｇ／ｋｇ、２５０～７５０μｇ／ｋｇ、５００～１０００μｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、５～５０ｍｇ／ｋｇ、２５～７５ｍｇ／ｋｇ、５０～１００ｍｇ／ｋｇ、１００～２５０ｍｇ／ｋｇ、５０～１００ｍｇ／ｋｇ、２５０～５００ｍｇ／ｋｇ、５００～７５０ｍｇ／ｋｇ、７５０～１０００ｍｇ／ｋｇ、１０００～１５００ｍｇ／ｋｇ、１５００～２０００ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ又は２０００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。例示的な実施形態において、体重２００ｋｇのヒトに対する経口投与量は、約２００ｍｇ／日である。医薬投薬単位形態は、投薬単位形態あたり約１ｍｇ～約５０００ｍｇ、例えば約１００～約２５００ｍｇの化合物又は必須成分の組合せを提供するように調製される。

【0151】

一般に、剤形中の本化合物の治療有効量は、通常、使用される化合物、治療される症状又は感染症及び投与経路に応じて、患者の約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／日よりわずかに少ない～約２．５ｇ／ｋｇ／日、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日又はかなり多い範囲であるが、この投与量範囲に対する例外が本発明によって企図され得る。本発明は、ヒト及び獣医学の両方の用途を有することを理解されたい。

【0152】

薬剤及び／又は組成物は、所望の効果を達成するために必要に応じて１つ以上の用量で投与される。したがって、薬剤及び／又は組成物は、１、２、３、４、５、又はそれ以上の用量で投与され得る。さらに、用量は、任意の期間、例えば、数時間、数日、数週間、数ヶ月、及び数年を空けてもよい。

【0153】

薬剤及び／又は組成物は、液体若しくは乾燥粉末として、又はミクロスフェアの形態で製剤化することができる。

【0154】

薬剤及び／又は組成物は、貯蔵期間に応じて、約－１００℃～約２５℃の温度で貯蔵されてもよい。薬剤及び／又は組成物はまた、室温を含む異なる温度で凍結乾燥状態で保存されてもよい。薬剤及び／又は組成物は、当業者に公知の従来の手段によって滅菌され得る。そのような手段には、濾過が含まれるが、これに限定されない。組成物はまた、他の抗アテローム硬化性治療剤と組み合わせてもよい。

【0155】

単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせられ得る有効成分の量は、治療される宿主及び特定の投与様式に応じて変化し得る。実施形態において、調製物は、約０．１％～約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）、約２０％～約８０％の活性化合物、又はそれらの間の任意の割合の活性化合物を含有し得る。

【0156】

実施形態において、製剤のｐＨは、製剤化された化合物又はその送達形態の安定性を高めるために、薬学的に許容され得る酸、塩基又は緩衝剤で調整され得る。

【0157】

実施形態において、薬学的担体は、例えば滅菌水性又は油性懸濁液としての滅菌液体製剤の形態であり得る。使用され得る許容され得るビヒクル及び溶媒の中には、マンニトール、水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。

【0158】

さらに、滅菌固定油は、溶媒又は懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を使用してもよい。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体等の脂肪酸は、オリーブ油又はヒマシ油等の天然の薬学的に許容され得る油、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンと同様に、注射剤の調製に有用である。これらの油溶液又は懸濁液はまた、エマルジョン及び／又は懸濁液等の薬学的に許容され得る剤形の製剤に一般的に使用される長鎖アルコール希釈剤若しくは分散剤、又はカルボキシメチルセルロース若しくは同様の分散剤を含有し得る。

【0159】

ＴＷＥＥＮ（商標）又はＳＰＡＮ（商標）等の他の一般的に使用される界面活性剤及び／又は薬学的に許容され得る固体、液体、若しくは他の剤形の製造に一般的に使用される他の同様の乳化剤又はバイオアベイラビリティ増強剤もまた、製剤化の目的のために使用され得る。

【0160】

実施形態において、薬剤及び／又は組成物は、エキソソーム送達系で送達することができる。エキソソームは、多小胞体と原形質膜との融合中に細胞外環境に放出される小さな膜小胞である。エキソソームは、造血細胞、正常な上皮細胞、更にはいくつかの腫瘍細胞を含む様々な細胞型によって分泌される。

【0161】

特定の実施形態において、Ｄ－ＰＤＭＰをカプセル化するバイオポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びセバシン酸（ＳＡ）を含む。ＰＥＧ及びＳＡの両方がＦＤＡに承認されている。ポリエチレングリコール－セバシン酸（ＰＥＧ－ＳＡ）コポリマーは、以前に記載（Ｆｕ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２００２；２３：４４２５－４４３３）されるように調製することができ、ＰＥＧ－ＳＡコポリマーによってカプセル化されたＤ－ＰＤＭＰの微粒子は、単一エマルジョン溶媒蒸発法を変更することによって調製される。バイオポリマーのシンチグラフィー追跡のために、ＰＥＧポリマーを４５ｍＣｉ（８１０ｋＢｑ）の（^１２５Ｉ）ＮａＩで放射性ヨウ素化する。次いで、放射性標識ＰＥＧをＰＥＧ－ＳＡバイオポリマーに組み込んだ。ＰＥＧ－ＳＡコポリマーは、Ｆｕ及び共同研究者（Ｉｄ．）によって公開された文献手順に従って調製することができる。簡潔には、セバシン酸プレポリマーは、無水酢酸中でセバシン酸（ＳＡ）を還流し、続いて高真空下で乾燥させ（蒸発）、乾燥トルエンから結晶化させ、１：１無水エチルエーテル－石油エーテルで洗浄し、最後に風乾させることによって作製される。ＰＥＧプレポリマーは、無水酢酸中でポリオキシエチレンジカルボン酸を還流することによって作製され、揮発性溶媒は真空下で除去される。固体塊を無水エーテルで抽出し、風乾させる。次いで、ポリ（ＰＥＧ－ＳＡ）コブロックポリマーを溶融重縮合法によって合成し、プロトンＮＭＲによって特性評価する。このコポリマーは、組成及び構造的同一性について広く特徴付けられていることに留意されたい（Ａｉｃｈ Ｕ，ｅｔ ａｌ．Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｊｏｕｒｎａｌ．２０１０；２７：４４５－４５９）。

【0162】

ポリ（ＰＥＧ－ＳＡ）へのＤ－ＰＤＭＰのカプセル化（後にＢＰＤと呼ばれるポリマーカプセル化薬物を調製するため）と、それに続くＳＡ及びＰＥＧプレポリマーについて上述した溶融重縮合法であるが、ポリ（ＰＥＧ－ＳＡ）対Ｄ－ＰＤＭＰの出発比が７０：３０のＤ－ＰＤＭＰを含む方法。続いて、単一エマルジョン溶媒蒸発法を用いて微粒子を調製する。簡潔には、Ｄ－ＰＤＭＰ及びＰＥＧ－ＳＡをクロロホルム（５０ｍｇ／ｍＬ）に溶解し、温度を２５℃未満に保つ超音波処理条件下で１．０％ｗ／ｗのポリ（ビニルアルコール）水溶液に乳化する。粒子を、１２時間撹拌しながらクロロホルムを室温で蒸発させることによって硬化させる。粒子を収集し、２，６００×ｇ（３０分）での遠心分離を介して再蒸留水で３回洗浄し、使用準備が整うまで４８時間凍結乾燥する。

【0163】

特定の実施形態において、Ｄ－ＰＤＭＰは、脂質二重層間の共有結合架橋を含む多層脂質ベシクルにカプセル化され、多層脂質ベシクル中の少なくとも２つの脂質二重層は、チオール化バイオポリマーによって互いに共有結合的に架橋されている。特定の実施形態において、脂質二重層は、官能化脂質を介して架橋されている。特定の実施形態において、１つ以上の脂質は、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＥ、ＤＯＢＡＱ、ＤＯＰＣ又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、脂質は、マレイミド官能化されているか、又はジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）で修飾されている。特定の実施形態において、チオール化バイオポリマーは、キトサン、ポリグルタミン酸、ポリホスファゼン、ポリエチレンイミン、ポリアルキルアクリル酸（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリ（エチルアクリル酸）、ポリ（プロピルアクリル酸）、又はポリ（ブチルアクリル酸）、ＨＡ、ペグ化アジド修飾ポリエチレンイミン、分岐ポリエチレンイミン、及びジアジドからなる群から選択される。特定の実施形態において、チオール化バイオポリマーは、複数のスルフヒドリル部分を含む。

【0164】

ナノ粒子を使用した医薬品及び／又は治療化合物の送達も本発明によって企図される。例えば、本明細書で提供される薬剤及び／又は組成物は、それに連結された、例えばナノ粒子の表面に連結された少なくとも１つ以上の薬剤を有するナノ粒子を含有することができる。組成物は、典型的には、各ナノ粒子が少なくとも１つ以上の薬剤が連結された多くのナノ粒子を含む。ナノ粒子はコロイド金属であり得る。コロイド状金属は、液体水中に分散された任意の水不溶性金属粒子又は金属化合物を含む。典型的には、コロイド金属は、水溶液中の金属粒子の懸濁液である。金、銀、銅、ニッケル、アルミニウム、亜鉛、カルシウム、白金、パラジウム、及び鉄を含む、コロイド形態で作製することができる任意の金属を使用することができる。場合によっては、金ナノ粒子が使用され、例えばＨＡｕＣｌ_４から調製される。ナノ粒子は、任意の形状であり得、サイズが約１ｎｍ～約１０ｎｍ、例えば、サイズが約２ｎｍ～約８ｎｍ、約４～約６ｎｍ、又は約５ｎｍの範囲であり得る。ＨＡｕＣｌ_４からの金コロイドナノ粒子を含むコロイド金属ナノ粒子を製造する方法は、当業者に公知である。例えば、本明細書中に記載される方法並びに他の箇所に記載される方法（例えば、米国特許出願公開第２００１／００５５８１号；同第２００３／０１１８６５７号；及び同第２００３／００５３９８３号（これらは参照により本明細書に組み込まれる））は、ナノ粒子を作製するための有用な指針である。

【0165】

特定の場合には、ナノ粒子は、その表面に連結された２、３、４、５、６又はそれ以上の活性剤を有することができる。典型的には、活性剤の多くの分子が、多くの位置でナノ粒子の表面に結合している。したがって、ナノ粒子が、例えば、それに連結された２つの活性剤を有すると記載される場合、ナノ粒子は、その表面に連結された、それぞれが独自の分子構造を有する２つの活性剤を有する。場合によっては、活性剤の１分子を、単一の結合部位を介して、又は複数の結合部位を介してナノ粒子に連結することができる。

【0166】

活性剤は、ナノ粒子表面に直接又は間接的に連結することができる。例えば、活性剤は、ナノ粒子の表面に直接的に、又は介在リンカーを介して間接的に連結することができる。

【0167】

任意の種類の分子をリンカーとして使用することができる。例えば、リンカーは、少なくとも２個の炭素原子（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の炭素原子）を含む脂肪族鎖であり得、ケトン、エーテル、エステル、アミド、アルコール、アミン、尿素、チオ尿素、スルホキシド、スルホン、スルホンアミド及びジスルフィドを含む１つ以上の官能基で官能基に置換され得る。ナノ粒子が金を含む場合、リンカーは任意のチオール含有分子であり得る。チオール基と金との反応は、共有結合スルフィド（－Ｓ－－）結合をもたらす。リンカーの設計及び合成は、当技術分野で周知である。

【0168】

実施形態において、ナノ粒子は、標的化剤／部分に連結されている。標的化機能により、ナノ粒子は、他の組織よりも高い濃度で標的に蓄積することができる。一般に、標的化分子は、結合対の第２のメンバーに対して親和性及び特異性を示す結合対の１つのメンバーであり得る。例えば、抗体又は抗体断片治療剤は、治療機能も果たしながら、ナノ粒子を身体の特定の領域又は分子（例えば、抗体が特異的である領域又は分子）に標的化することができる。いくつかの場合、受容体又は受容体断片は、ナノ粒子を身体の特定の領域、例えばその結合対メンバーの位置に標的化することができる。小分子等の他の治療剤も同様に、ナノ粒子を受容体、タンパク質、又は治療剤に対する親和性を有する他の結合部位に標的化することができる。

【0169】

本発明の組成物が１つ以上の追加の治療剤又は予防薬を含む場合、治療剤及び追加の薬剤は、単剤療法レジメンで通常投与される投与量の約０．１～１００％又は約５～９５％の投与量レベルで存在すべきである。追加の薬剤は、複数回用量計画の一部として、本発明の薬剤とは別個に投与され得る。あるいは、これらの追加の薬剤は、単一組成物中で本発明の薬剤と一緒に混合された単一剤形の一部であり得る。

【0170】

本発明の医薬品及び／又は治療化合物の投与は、例えば、抗癌応答を誘発する。典型的には、用量は、例えば、対象の年齢、対象の健康及び身体状態、対象の免疫系が免疫応答をもたらす能力、対象の体重、対象の性別、食事、投与時間、所望の保護の程度、及び他の臨床的因子に基づいてこの範囲内で調整することができる。当業者はまた、本発明の薬剤及び／又は組成物を製剤化する場合、生物学的半減期、バイオアベイラビリティ、投与経路及び毒性等のパラメータに容易に対処することができる。

【実施例】

【0171】

実施例１：ラクトシルセラミドシンターゼβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ：ヒト結腸直腸癌の診断及び治療法のための新規標的
β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ－Ｖ（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ）がヒトＣＲＣにおいて十分に役割を果たし得ること、及びその阻害が腫瘍細胞増殖も軽減し得ることが仮定された。この仮説を試験するために、本発明者らは、非同定癌患者から結腸直腸組織試料を取得し、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ抗体に対する免疫反応性を評価した。さらに、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ質量、ｍＲＮＡ発現、酵素活性、及びＧＳＬ最終生成物レベルを評価した。最後に、ヒトＣＲＣ細胞株におけるＧＳＬグリコシルトランスフェラーゼ阻害剤の効果も調べた。これらの結果は、ＣＲＣの病理発生に対する新しい洞察を提供し、ＣＲＣの有望な検出／予後バイオマーカーを明らかにする。さらに、これらの所見は、将来のＣＲＣ治療のための実行可能な標的を実証する。

【0172】

材料及び方法
ヒトＣＲＣ組織におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの免疫組織化学的（ＩＨＣ）局在化。
ＩＨＣを、ヒト対象の研究に関する施設内審査委員会からの承認後に、ジョンズ・ホップキンズ病理学部門からの保管組織に対して行った。２～３歳の材料から選択された結腸癌症例のホルマリン固定パラフィン包埋ブロックから回収組織を切片化した。厚さ４ミクロンの切片を切断し、ＩＨＣ分析のために染色した。β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ染色を、標準的なＩＨＣ法を使用して自動化された装置で行った。簡潔には、切片を脱パラフィンし、水和し、染色のために調製した。

【0173】

切片を、ＧａｌＴ－Ｖ合成ペプチド、ＩＧＡＱＶＹＥＱＶＬＲＳＡＹＡＫＲＮＳＳＶＮＤ、配列番号５（１：６００希釈）に対して産生されたβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖマウスモノクローナル抗体と共に３０分間インキュベートした。二次抗体抗ウサギＨＲＰを適用し、ＤＡＢ色素原検出（カタログ番号ＤＳ ９８００、Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して褐色のシグナルを発色させた。次いで、スライドをヘマトキシリンで対比染色し、洗浄し、脱水し、カバーガラスで覆った。ＩＨＣ染色の評価を盲検病理学者が行った。染色の強度及び染色された腫瘍の面積に基づいて、染色をスコア化した。

【0174】

ヒトＣＲＣ組織のＨスコア決定。
腫瘍組織は、チームの２人の病理学者（ＲＭ及びＭＡ）によって独立して検査された。結腸腺癌の２１例をジョンズ・ホップキンズ病院の保管データから選択した。原発性の結腸癌症例のみをこの試験に含めた。症例選択のために、保管症例を解剖病理学者からの報告に基づいて再検討し、選択した。非染色切片をパラフィンブロックから得て、ＧａｌＴ－Ｖ抗体を用いたＩＨＣを方法のセクションに記載されるように行った。０～３のスコアリングシステムを作成した後、結果を評価した（０＝染色なし、１＝非常に弱い染色、２＝中程度の染色、及び３＝強い染色）。腫瘍上の陽性染色面積も評価し、これをＨスコアの計算に使用した。

【0175】

遺伝子発現分析。
患者の正常組織及びＣＲＣ組織は、Ｂｅｒｔ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ博士（ＪＨＵ）との協力によって提供された。全ＲＮＡを、ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ－４ＰＣＲキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者の説明書に従って使用して組織試料から単離した。ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、大腸腺腫様ポリポーシス（ＡＰＣ、Ｈｓ０１５６８２６９）、Ｎ－ミリストイルトランスフェラーゼ－１（ＮＭＴ１、Ｈｓ００２２１５０６）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ＴＰ５３、Ｈｓ０１０３４２４９）、ＵＤＰ－Ｇａｌ：βＧｌｃＮＡｃ β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ、ポリペプチド５（β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ、Ｈｓ００１９１１４２）、ＵＤＰ－Ｇａｌ：βＧｌｃＮＡｃ、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ、ポリペプチド６（β－１，４ＧａｌＴ－ＶＩ、Ｈｓ００１９１１３５）及びＵＤＰ－グルコースセラミドグルコシルトランスフェラーゼ（ＵＧＣＧ、Ｈｓ００２３４２９３）の発現レベルを決定した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ逆転写キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ４３７４９６６）を製造業者のプロトコルに従って使用して、単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイを、Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）において７９００ＨＴ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲによって行った。

【0176】

ラクトシルセラミドシンターゼ（ＬＣＳ）活性の測定。
目に見える正常組織及び癌組織におけるＬＣＳ活性を、本発明者の以前に公開された方法（２０、２１）に従って測定した。１０個の正常腫瘍試料及び１０個の腫瘍試料の両方について、全てのアッセイを三連で実行し、平均値±測定値の標準誤差（ＳＥｍ）を示し、対応のないｔ検定を行って統計学的有意性を決定した。

【0177】

ＣＲＣ組織におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ質量の測定。
約１０ｍｇの組織を放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中でホモジナイズし、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。以前に公開されたように（２２）、ＥＬＩＳＡを使用して上清中のＧａｌＴ－Ｖ質量を測定した。

【0178】

液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）。
ヒトＣＲＣ組織及びヒト培養ＣＲＣ細胞（ＨＣＴ－１１６）におけるスフィンゴ脂質レベルを、以前に記載されたように（２３）、ＬＣ－ＭＳによって測定した。視覚的に正常なＣＲＣ組織（５０ｍｇ）を、スフィンゴ脂質内部標準の存在下、クロロホルム－メタノール（２：１）中でホモジナイズした。１０^５個のＨＣＴ－１１６細胞を１００ｍｍ^２の滅菌プラスチックペトリ皿で成長させた。脂質抽出物を、記載されるように（２４、２５）ＬＣ－ＭＳに供した。

【0179】

ヒトＣＲＣ細胞におけるグリコシルトランスフェラーゼのＩＨＣ局在化に対するＤ－ＰＤＭＰの効果の決定。
ＨＣＴ－１１６細胞を滅菌ガラスカバーガラス上に播種し（１０^４）、次いで、これを６ウェル滅菌プラスチックトレイに入れ、完全培地中で２４時間成長させた。次に、培地を２ｍＬの２％血清含有培地＋１０μＭ Ｄ－ＰＤＭＰと交換した。２４時間及び９６時間インキュベートした後、培地を除去し、細胞をエタノールで固定し、洗浄し、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ又はＵＧＣＧに対する抗体とインキュベートし、写真撮影した。

【0180】

細胞増殖に対するＤ－ＰＤＭＰの効果の決定。
ＨＣＴ－１１６細胞を９６ウェル滅菌プラスチックプレートに播種し（１０^４／ウェル）、１０％ウシ胎児血清を含む完全培地で２４時間成長させた。次いで、培地を、Ｄ－ＰＤＭＰあり及びなしで、２％血清含有培地（１００μＬ）＋^３Ｈ－チミジン（５μＣｉ／ｍＬ）と交換した。更に２４時間インキュベートした後、^３Ｈ－チミジンのＤＮＡへの取り込みをシンチレーション分光法によって測定した。

【0181】

結果
ヒトＣＲＣ組織は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ抗体に対して強い陽性免疫反応性を示す。
まず、モノクローナル抗体を用いて、２４例のヒトＣＲＣ検体におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫反応性を調べた。正常な結腸組織は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの細胞質局在を示し、大血管及び小血管において強く陽性の免疫染色された内皮細胞を示した（図１Ｂ）。結腸腺癌（図１Ｃ）では、病変細胞の約５０％が軽度の細胞質β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫反応性を発現することが分かった。Ｈスコア分析は、場合によっては１００の合計スコアをもたらしたが、場合によっては２００の合計スコア（図１Ｄ）に達し、他の場合では３００の合計スコア（図１Ｅ）に達した（表１）。追加の研究は、ゴルジ体、細胞質、及び程度は低いが細胞表面の内面への抗原局在化に関連して、核周囲領域において強い免疫反応性を示した。

【0182】

表１：腫瘍組織のβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫組織化学染色。

【表1】

【0183】

表１は、正常及びＣＲＣ組織切片のβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫組織化学染色の評価を示す。ＧａｌＴ－Ｖに対する免疫染色の検討により、腫瘍細胞における様々な程度の陽性が明らかになった：１＋（１５％；３／２０）、２＋（６５％；１３／２０）及び３＋（２０％；４／２０）。染色は、ほとんどが腫瘍の細胞質で観察され、ごく稀に腫瘍細胞の核で観察された。入手可能な場合、弱い（１＋）から中程度の（２＋）細胞質染色もまた、隣接する正常結腸粘膜において７９％の症例（１５／１９）で観察された。ほとんどの場合、正常な結腸粘膜も軽度から中程度のレベルで染色された。Ｈスコアは、腫瘍強度スコア％×腫瘍の総面積として決定した。

【0184】

ＣＲＣ組織は、タンパク質質量、活性（ラクトシルセラミドの合成）、及びβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの遺伝子発現が増加している。
ＥＬＩＳＡは、同じ組織標本からの視覚的に正常な領域（すなわち、「隣接正常」）と比較して、ＣＲＣ組織におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの顕著な増加（およそ６．５倍）を明らかにした（図１Ｆ）。ＣＲＣ試料では、正常な結腸上皮のものと比較して、ラクトシルセラミドシンターゼ活性において２．２５倍の増加が観察された（＊＊Ｐ＝０．００５２、図１Ｇ）。定量的ＲＴ－ＰＣＲにより、正常試料と比較して、ＣＲＣに以前に関連していたいくつかの遺伝子、例えば、大腸腺腫症（ＡＰＣ）（２６）、Ｎ－ミリストイルトランスフェラーゼ１（ＮＭＴ１）及び腫瘍タンパク質ｐ５３（ＴＰ５３）の発現上昇が更に明らかにされた（図１Ｈ）。さらに、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ（Ｂ４ＧＡＬＴ５）は特異的に発現増加を示したが、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ、ポリペプチド６（Ｂ４ＧＡＬＴ６）及びＵＤＰ－グルコース－セラミドβ－１，４－グルコシルトランスフェラーゼ（ＵＧＣＧ）は発現増加を示さなかった（図１Ｉ）。ＬＣ－ＭＳは、正常な結腸標本と比較して、腫瘍中のセラミド（Ｃｅｒ）（図２Ａ）、ジヒドロセラミド（ＤＨＣｅｒ）（図２Ｂ）、モノグリコシルセラミド（すなわち、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ））及びグルコシルセラミド（ＧｌｃＣｅｒ）、図２Ｃ）、ジヒドロＧａｌＣｅｒ／ジヒドロＧｌｃＣｅｒ（図２Ｄ）、並びにジヒドロラクトシルセラミド（ＤＨＬａｃＣｅｒ）（図２Ｆ）のレベルがわずかであるが中程度に上昇していることを明らかにした。しかしながら、調査したＧＳＬのうち、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）レベルのみがＣＲＣ組織において統計的及び有意に増加した（図２Ｅ、＊Ｐ＝０．０１１２）。ＣＲＣ試料はまた、正常組織と比較して高いジヒドロスフィンゴミエリン（ＤＨＳＭ）（図２Ｇ、＊＊Ｐ＝０．００５９）及び同様のレベルのスフィンゴミエリン（図２Ｇ）を示した。

【0185】

ＧＳＬ合成の阻害は、ヒトＣＲＣ細胞の増殖を用量依存的に減少させる。
ＨＣＴ－１１６細胞を、ＵＤＰ－グルコース－ｃｅｒ：グルコシルトランスフェラーゼ及びＬＣＳ／３－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＧａｌＴ－Ｖ）活性（２７、２８、２９）の強力な阻害剤であるＤ－トレオ－１－フェニル－２－デカノイルアミノ－３－モルホリノ－１－プロパノール（Ｄ－ＰＤＭＰ、図３Ａ）で処置した。ＣＲＣ細胞では、Ｄ－ＰＤＭＰは、対照細胞と比較して、用量及び時間依存的（図３Ａ、図３Ｂ）増殖の減少を示し、最大有効用量は２０μＭであることが見出された。

【0186】

Ｄ－ＰＤＭＰ処置は、ヒトＣＲＣ細胞におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖタンパク質の発現及び活性（すなわち、スフィンゴ脂質合成）を低下させる。
２４時間で対照（図３Ｃ）と比較して、Ｄ－ＰＤＭＰ処置細胞（図３Ｄ）のＵＧＣＧ免疫蛍光に差は見られなかった。しかし、２４時間（図３Ｆ）及び９６時間（図３Ｈ）のＤ－ＰＤＭＰ処置は、対照と比較してＧａｌＴ－Ｖ蛍光を減少させた（図３Ｅ及び図３Ｇ）。Ｄ－ＰＤＭＰ（１０μＭ）あり又はなしで処置したＨＣＴ－１１６細胞に由来するＧＳＬのＬＣ－ＭＳ分析により、対照値と比較して、Ｃｅｒ（図４Ａ）、ＤＨＣｅｒ（図４Ｂ）、モノヘキソシルセラミド（図４Ｃ）、ジヒドロＧａｌＣｅｒ／ジヒドロＧｌｃＣｅｒ（図４Ｄ）、ジヘキソシルセラミド（図４Ｅ）、ＤＨＬａｃＣｅｒ（図４Ｆ）のレベルが低下したが、スフィンゴミエリン（図４Ｇ）及びＤＨＳＭ（図４Ｈ）のレベルは低下しなかったことが明らかになった。

【0187】

考察
この研究からいくつかの主要な知見が明らかになる。第１に、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ発現、タンパク質量、及びＩＨＣ染色は全て、視覚的に正常な組織と比較して、ヒトＣＲＣ組織において著しく増加したことが観察された。第２に、ヒトＣＲＣ腫瘍におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ（すなわち、ラクトシルセラミドの合成）の活性は、対照組織と比較して統計的に有意に高かった。第３に、スフィンゴ糖脂質合成の阻害は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの免疫染色を減少させ、その結果、培養されたヒトＣＲＣ（ＨＣＴ－１１６）細胞における細胞増殖を減少させた。第４に、ジヒドロスフィンゴ脂質代謝（図２Ｇ）の増強が腫瘍組織で認められ、明らかに正常な組織と比較して、ジヒドロスフィンゴミエリンのレベルが有意に増加した。

【0188】

また、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ抗体を用いた免疫染色により、病理医は、正常な上皮細胞（図１Ａ）と癌性上皮細胞（図１Ｃ～図１Ｅ）とを明確に区別することができた。染色後、組織を腫瘍の適切さについて評価し、適切な腫瘍組織が評価に利用可能であった２０例を選択した。ＧａｌＴ－Ｖに対する免疫染色の検討により、腫瘍細胞における様々な程度の陽性が明らかになった（表１）：１＋（１５％；３／２０）、２＋（６５％；１３／２０）及び３＋（２０％；４／２０）。染色は、ほとんどが腫瘍の細胞質で観察され、ごく稀に腫瘍細胞の核で観察された。入手可能な場合、弱い（１＋）から中程度の（２＋）細胞質染色もまた、隣接する正常結腸粘膜において７９％の症例（１５／１９）で観察された。さらに、２０例そのような組織のコンピュータによる（Ａｓｐｅｒｉｏｎプログラム）分析は、免疫染色指数の定量的推定値を提供し、１００～３００（０～３００のスケール）の実質的なＨスコアをもたらした（２１）。これらの所見は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫染色が実際にＣＲＣ進行の新規バイオマーカーとして役立ち得るという証拠を提供する。毛細血管内皮細胞の強いβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫染色も、本発明者の以前の研究と一致して観察された（３０、３１）。扁平上皮細胞内では、核周囲領域に強い免疫染色が観察され、抗原がゴルジ体内で濃縮されることが示唆された（データは示さず）。

【0189】

対照及びＣＲＣ腫瘍組織の両方における細胞質のβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫染色は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖが膜結合型並びに可溶性形態で存在しなければならないという証拠を提供する。溶解度は、非侵襲性又は低侵襲性の手順を介して、様々な体液中のこの抗原の測定を可能にする。結腸上皮細胞の刷子縁膜も抗体に陽性に反応したことから、これは、結腸直腸組織では、ＧａｌＴ－Ｖがエキソソーム中に放出され得るという証拠を提供する。

【0190】

以前の研究は、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼが共通のステム領域を共有することを示している。β－１，４－ＧａｌＴ－１（ラクトサミンシンターゼ）ではステム領域が短いため、酵素の大部分はゴルジの細胞質に局在し、原形質膜では比較的少ない（３２）。さらに、ステム領域を構成するヒドロキシル化アミノ酸の数がβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼの局在化を決定することが提案されているが、他の因子がこのタンパク質の局在化を決定する可能性がある。ステム領域の変化がβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの原形質膜局在化を可能にするかどうかを調べるために、更なる研究が必要である。

【0191】

さらに、ＩＨＣによって観察されたβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの濃縮は、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖタンパク質質量の定量的測定によって更に実証された。ＣＲＣ組織では、対照組織と比較して、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ質量が統計的に有意に増加した（図１Ｆ）。ラクトシルセラミドシンターゼの活性（したがって、ラクトシルセラミド質量）も、対照と比較してＣＲＣ組織で有意に高かった（図１Ｇ）。対照的に、腫瘍組織対対照組織における他のスフィンゴ脂質のレベルの差は統計学的に有意ではなかった（図２Ａ～図２Ｇ）。

【0192】

この研究の別の興味深い知見は、ジヒドロスフィンゴ脂質経路（図７）が腫瘍組織において有意に活性であったことであった（図２Ｇ）。例えば、腫瘍組織では、ジヒドロセラミド、ジヒドロＧｌｃＣｅｒ／ジヒドロＧａｌＣｅｒ、及びジヒドロＬａｃＣｅｒの質量がいずれもやや上昇している（但し、有意ではない）ことが観察された。しかしながら、腫瘍組織と目に見える正常組織との間の最も有意な差は、ジヒドロスフィンゴミエリンのレベルが腫瘍組織において著しく増加したことであった（図２Ｇ）。最近の研究は、ジヒドロスフィンゴ脂質、例えばジヒドロセラミドがオートファジーにおいて重要な役割を果たすことを示唆している（３３、３４）。しかしながら、ヒトＣＲＣにおけるジヒドロスフィンゴミエリンの役割を調べる必要がある。

【0193】

本明細書における定量的ＲＴ－ＰＣＲ研究は、腫瘍組織におけるＢ４ＧＡＬＴ５遺伝子発現の増加を明らかにしたが、そのアイソフォームＢ４ＧＡＬＴ６又はホモログＵＧＣＧの発現については、相対的には、明らかにしなかった（図１Ｉ）。これらの観察結果は、遺伝子発現技術の連続分析を使用して、ＣＲＣ腫瘍におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの特異的増加を確認したが、β－１，４－ＧａｌＴ－ＶＩの特異的増加は確認されなかった（３０）。したがって、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ遺伝子及びタンパク質発現の増加はＣＲＣ組織に特異的であり、この疾患を診断し、薬物応答を測定するためのバイオマーカーとして十分に役立ち得る。以前に、ＮＭＴ１、ＡＰＣ及びＴＰ５３を含むいくつかの他の遺伝子がＣＲＣバイオマーカーとして役立つことが示唆されている（３５、３６、３７）。したがって、これらの遺伝子の発現を分析し、ＣＲＣ腫瘍対正常組織において、３つ全てにおいて上方制御が観察された（図１Ｈ）。したがって、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの上方制御を３バイオマーカーパネルに実行可能に加えることができ、したがってＣＲＣ診断の予測値を高めることができた。

【0194】

ＨＣＴ－１１６細胞では、原形質膜及びサイトゾルの内層内にもβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ免疫染色が観察された。さらに、免疫反応性は、細胞が２４時間から９６時間まで成長するにつれて増加し（図３Ａ～図３Ｈ）、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの発現増加と相関した。対照的に、Ｄ－ＰＤＭＰによるスフィンゴ糖脂質合成の阻害は、ＨＣＴ－１１６細胞におけるＧａｌＴ－Ｖ免疫反応性を有意に減弱させ（図３Ａ～図３Ｈ）、したがって、処置がこれらの細胞におけるβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖタンパク質質量及びジヒドログリコシルセラミド／ＬａｃＣｅｒレベルを減少させ得、その結果、細胞増殖を減少させ得るという証拠を提供する（図３Ａ～図３Ｈ）。

【0195】

ＨＣＴ－１１６細胞におけるＵＧＣＧの免疫染色を行った。同様に、この抗原／酵素は核周囲領域及び細胞質に局在することが見出された。しかしながら、Ｄ－ＰＤＭＰによる処置は、抗ＵＧＣＧ抗体に対する免疫反応性を低下させなかった。したがって、処置は、酵素活性を阻害することによってＨＣＴ－１１６細胞中のグルコシルセラミドレベルを低下させる可能性がある。

【0196】

ヒトＣＲＣ腫瘍に加えて、ＨＣＴ－１１６細胞もまた、活性なジヒドロスフィンゴ脂質経路を有することが見出された。Ｄ－ＰＤＭＰによる処置は、ジヒドロスフィンゴミエリンのレベルを除いて、本発明者らの研究における全てのジヒドロスフィンゴ脂質種のレベルを低下させた。この観察に更に対処するために、更なる機構的研究が必要である。Ｄ－ＰＤＭＰ処置の正味の結果は、ＨＣＴ－１１６細胞増殖の用量依存的減少であることも見出された。

【0197】

要約すると、この研究は、ヒトＣＲＣにおいて、ラクトシルセラミド量の増加と同時に、β－１，４－ＧａｌＴ－Ｖの遺伝子発現、タンパク質レベル、及び酵素活性の特異的増加を示した。これらの分子及び生化学データは、ＩＨＣ及び病理研究によって更に実証された。これらの所見は、ヒト液体生検標本中のβ－１，４－ＧａｌＴ－Ｖ及びラクトシルセラミドのレベルが他の現在使用されているバイオマーカー（例えば、ＮＭＴ１、ＡＰＣ及びＴＰ５３）を補完し、したがってＣＲＣの陽性予測値を増加させ得ることを実証している。最後に、スフィンゴ糖脂質合成の阻害は、ヒト結腸直腸癌、及びおそらくは他のタイプの癌を治療するための新規アプローチであり得る。

【0198】

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【0199】

実施例２：ｉｎ ｖｉｖｏで結腸直腸癌（ＣＲＣ）を予防するためのラクトシルセラミドシンターゼ（β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ）抗体を使用する免疫療法。
β－１，４ ＧａｌＴ－ＶがヒトＣＲＣにおいて重要な役割を果たすと仮定され、この酵素を操作することは、血管新生を阻害することによって腫瘍細胞増殖及び転移を十分に軽減し得る。この仮説を試験するために、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖに対するマウスモノクローナル抗体を調製し、ヒト及びマウスＣＲＣ細胞、ヒト臍帯静脈内皮細胞並びにヒトＣＲＣのマウス異種移植モデルにおける増殖及び血管新生に対するその効果を判断した。

【0200】

材料及び方法
アミノ酸配列（ＩＧＡＱＶＹＥＱＶＬＲＳＡＹＡＫＲＮＳＳＶＮＤ、配列番号５）を有するβ－１，４ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＧａｌＴ－Ｖ）ペプチドに対するモノクローナル抗体を調製し、その力価に関して特性評価し、ＥＬＩＳＡ、ウエスタン免疫ブロット法アッセイ並びにマウス及びヒト組織の免疫捕捉における使用を行った。ヒト結腸直腸癌細胞株（ＨＣＴ－１１６）は、この施設から遅れてＤａｖｉｄ Ｈｕｓｏ博士（比較医学部門）からの贈り物であった。マウス結腸直腸癌株ＭＣ－３８及びマウス結腸直腸癌由来の薄い組織切片は、施設の腫瘍学部門のＣｉｎｄｙ Ｓｅａｒｓ博士からの贈り物であった。ヒト臍静脈内皮細胞をＣｌｏｎｅｔｉｃｓから購入し、適切な成長培地で培養した。ヒト微小血管内皮細胞は、同部門のＳｔｅｐｈａｎｉｅ Ｂｒｉｎｄａｌ氏からの贈り物であった。血管内皮増殖因子は、Ｒ ａｎｄ Ｄ Ｉｎｃ．Ｍａｔｒｉｇｅｌから購入し、他の全ての試薬はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。バイオポリマーカプセル化－ＰＤＭＰを記載のように調製した（６）。

【0201】

細胞増殖アッセイ
１×１０^４個のＨＣＴ－１１６細胞及びＭＣ－３８細胞を９６ウェル滅菌プラスチックトレイに播種し、１０％ウシ胎児血清を含有する１００μＬのダルベッコの最小必須培地中、５％ＣＯ_２空気加湿インキュベーター内で３７にて２４時間成長させた。培地を、２％血清及び５μＣｉ／ｍＬの（^３Ｈ）チミジンを補充した新鮮な培地と交換した。β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体の漸増希釈液をウェルに添加した。これらの実験では、ヒトＩｇＧ又はマウスＩｇＧを陰性対照として用い、Ｄ－ＰＤＭＰ（１０μＭ）又は１ｕＭ ＢＰＤを陽性対照として用いた。２４時間のインキュベーション後、実験を終了し、（^３Ｈ）チミジンのＤＮＡへの取り込みをシンチレーション分光法によって測定した。

【0202】

血管新生アッセイ
血管新生アッセイを、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｃ．から市販されているキットを使用して行った（７）。

【0203】

β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ活性の測定
β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖの活性を、先に記載されたように（１４）、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体で処置した細胞及び処理しなかった細胞において測定した。

【0204】

スフィンゴ糖脂質の測定
ＧＳＬの質量は、記載のように定量的ＨＰＴＬＣによって測定した（９）。

【0205】

腫瘍細胞成長の阻止
正常な雄及び雌のマウス（Ｃ５７ ＢＬ－６）をＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、通常のマウス飼料を与えた。ＨＣＴ－１１６細胞の半コンフルエント培養物を回収し、細胞ペレットを７０：３０（体積基準）の比でマトリゲルを補充した培地に再懸濁した。除毛剤であるＮａｉｒ（Ｃｈｕｒｃｈ及びＤｗｉｇｈｔ Ｃｏ．）を用いてマウスの背部毛を除毛し、アルコール消毒綿で毛のない皮膚領域を清潔にした。次に、４×１０^６個のＨＣＴ細胞懸濁液を皮下注射した。１週間後、１００μｌのＧａｌＴ－Ｖ抗体又は１００μＬのＢＰＤ（１ｍｇ／ｋｇ体重）体重）を腫瘍細胞の注射部位で３週間毎日皮下注射した。剃毛した領域に毛が伸びたため、Ｎａｉｒを使用して毛を除去して皮膚領域を露出させ、マウスを写真撮影して記録した。

【0206】

免疫組織化学
マウス結腸直腸癌腫瘍組織から薄い組織切片を切り出し、先に記載されたように（８）、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体による免疫組織化学染色に供した。簡潔には、切片を脱パラフィン化し、水和させ、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体（１：６００希釈）と３０分間インキュベートした。第２の抗体である抗ウサギＨＲＰを適用し、ＤＡＢ色素原検出（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて褐色シグナルを発色させた。次に、スライドをヘマトキシリンで対比染色し、洗浄し、脱水し、カバースリップし、写真撮影した（８）。

【0207】

結果
ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、時間依存的に内皮細胞及びＨＣＴ－１１６細胞に取り込まれる。
ヒト微小血管内皮細胞では、蛍光タグ付きＧａｌＴ－Ｖを４℃で取り込んだ。温度を３７℃にシフトさせると、細胞質へのＧａｌＴ－Ｖ抗体の取り込み及びゴルジ装置を表す核周囲領域において時間依存的増加が観察された。過剰量のＧａｌＴ－Ｖペプチドとの細胞のプレインキュベーション。同様に、ＨＣＴ－１１６細胞も、同様の温度及び時間依存的様式で蛍光タグ付きβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体を取り込んだ。これらの研究は、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体がヒト内皮細胞及びＨＣＴ－１１６細胞によって時間及び温度依存的に取り込まれ、内在化されることを示した。

【0208】

ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、ヒト及びマウスの結腸直腸癌細胞における増殖を阻害する。
^３Ｈチミジン取り込み研究により、ヒト結腸直腸癌細胞において、ＧａｌＴ－Ｖ抗体は細胞増殖を用量依存的に減少させ、この阻害はβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖの薬理学的阻害剤であるＤ－ＰＤＭＰを使用して観察された阻害の範囲内であることが明らかになった。

【0209】

同様に、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体もマウス結腸直腸細胞の増殖を用量依存的に阻害した（図８）；ＭＣ－３８（図９）。細胞をマウスＩｇＧとインキュベートした場合、細胞増殖の阻害は観察されなかった。

【0210】

ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、ヒト臍帯静脈内皮細胞におけるＶＥＧＦ誘導血管新生を阻害する。
図１０Ａ～図１０Ｈは、ＨＵＶＥＣにおける管形成／血管新生の写真を示す。図１０Ｉは、血管新生の対応する定量化を示す。ＨＵＶＥＣとＶＥＧＦ／ＦＧＦとのインキュベーションは、対照（図１０Ａ）と比較してチューブ形成／血管新生を著しく増加させた（図１０Ｂ）。β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体での処置は、ＨＵＶＥＣにおけるＶＥＧＦ誘導血管新生において用量依存的減少を示した（図１０Ｃ～１０Ｆ）が、ウサギＩｇＧでは示さなかった（図１０Ｇ）。

【0211】

ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、マウスにおける腫瘍成長を防止する。
マウスにＨＣＴ－１６細胞を注射した７日後、マウスを３週間にわたって毎日、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体で、及びβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体なしで処置した。並行して、別の群のマウスを腫瘍細胞注射部位で３週間毎日ＢＰＤ（５ｍｐｋ）で処置した。β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体（図１１Ａ、図１１Ｂ）又はＢＰＤ（図１１Ｃ、図１１Ｄ）による処置は、腫瘍の成長及び進行を完全に防止することが観察された。

【0212】

考察
この研究は、以下の結論を導く。（ｉ）β－１，４ Ｇａｌ Ｔ－Ｖ抗体によるその処置は、培養されたヒト結腸直腸癌細胞及びマウス結腸直腸癌細胞における増殖を用量依存的に減少させた。（ｉｉ）β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体によるヒト臍静脈内皮細胞処置は、ＶＥＧＦ誘導血管新生を用量依存的に減少させた。（ｉｉｉ）結腸直腸癌のマウス異種移植モデルにおいて、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体及びＢＰＤによる処置は腫瘍成長を妨げた。

【0213】

β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖは、ガラクトシルトランスフェラーゼの大きなファミリーのメンバーであり、その機能は、ガラクトースをＵＤＰ－ガラクトースからグルコシルセラミドに転移させてラクトシルセラミド（１）を形成することである。また、ガラクトースを、腫瘍細胞に特徴的な高度に分岐したＮグリカンのＧｌｃＮＡｃ β－１，６マンノース基に転移する（２、３）。これらの産物のうち、ＬＣは、独立した分裂促進剤、血管新生剤として役立つことが示されており、同様に細胞遊走、アポトーシス及び細胞接着に関与する（４）。最も重要なことには、ＬＣは、増殖因子、例えばＶＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ及び炎症促進性サイトカインＴＮＦの作用を媒介する代理物として働き、細胞型に応じて上記の表現型をもたらす（４）。重要なことに、これらの成長因子及びＴＮＦα誘導性表現型は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（７）及びｉｎ ｖｉｖｏ（１５）での薬理学的薬剤ＢＰＤ及びＤ－ＰＤＭＰ（６、９）並びにＧａｌＴ－Ｖ遺伝子操作の使用によって軽減することができる（図１２）。これは、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ免疫療法が結腸直腸癌の成長及び増殖を減少させるのに有効であることが示された最初の報告である。本明細書の研究は、ヒト結腸直腸癌組織内皮において、細胞のβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ ｍＲＮＡレベルが特異的に増加し、その結果、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖタンパク質の質量も癌病期依存的に増加することを示す。正常結腸細胞ではβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖは大部分が細胞質／ゴルジに見られるが、結腸直腸癌では、上皮細胞の刷子縁膜に加えて、ヒト結腸直腸癌細胞の細胞膜にある程度存在する（８）。これにより、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体がＧａｌＴ－Ｖタンパク質に結合する。３７℃で、蛍光タグ付きβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、正常ヒト内皮細胞及びＨＣＴ－１１６細胞の細胞質の大部分で抗原に結合することが観察された（８）。大量の非標識抗体は、タグ付き抗体の取り込みを競合的に阻害したことから、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及び取り込みが培養された結腸直腸細胞において特異的であることを示唆する（データは示さず）。

【0214】

本発明者の以前の研究は、活性化ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼであるβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖの増殖因子誘導性活性化に起因してＬＣが生成し、細胞増殖をもたらすマイトジェン活性化プロテインキナーゼ／ｃ－ｆｏｓ経路におけるシグナル伝達中間体として働く活性酸素種を生成することを示した（４）。この研究では、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置が、β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖ酵素活性及びＬＣ質量を低下させ、したがってＨＣＴ－１１６細胞における細胞増殖を軽減することが観察された。

【0215】

モノクローナル抗体は、治療的使用のために作製された特定の種類の抗体／タンパク質である。そのような抗体は、癌細胞中の異常タンパク質を遮断するための標的療法に使用することができる。モノクローナル抗体の一部は、そのタンパク質を発現する癌細胞に特異的に結合するので、モノクローナル抗体を免疫療法に使用することができる。したがって、癌細胞を同定することにより、免疫系が癌細胞を攻撃及び破壊することが可能になる。別の種類の抗体は、免疫系のブレーキを解除することによって癌の成長に影響を及ぼし、癌細胞を破壊することができる。研究は、プログラム細胞死（ＰＤ１）／プログラム細胞死リガンド（ＰＤＬ－１）、ＣＴＬＡ－４経路が、癌成長を制御する免疫系の能力にとって重要であることを示している。そのような経路は「免疫チェックポイント」と呼ばれる。いくつかのタイプの癌は、免疫系から逃れるためにこれらの経路を公正に使用する。対照的に、免疫チェックポイント阻害剤、例えばペンブロリズマブ（キイトルーダ）等は、癌細胞において保護シールドのように作用するＰＤ－Ｌ１タンパク質による遮断を同定するのに有用である。最近、ペンブロリズマブは、化学療法によって治療することができない腫瘍－転移性癌並びにメルケルポリオーマウイルス感染によるメルケル皮膚癌を治療するためにＦＤＡによって承認された。したがって、このチェックポイント阻害剤は体内の任意の腫瘍を標的とすることができ、したがって腫瘍非依存性治療と呼ばれる。ニボルマブは、化学療法が失敗した後の患者においてＭ９１－Ｈ又はｄＭＭＲを伴うＣＲＣを治療するために承認された薬物である。インターフェロン及びインターロイキンもまた、癌と戦うために、及び癌を破壊する細胞を生成するための免疫系を発達させるために使用されている。免疫療法の２年成功率は、ステージＩＶリンパ腫で最も高く（８２％）、ステージＩＶ ＣＲＣの患者ではわずか３８％であった。β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖモノクローナル抗体はＩｇＧ型であり、ヒトＣＲＣ組織に見られる過剰量のβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖタンパク質を遮断し、培養されたヒトＣＲＣ細胞の内皮細胞及び細胞質の細胞膜の内面を装飾する標的療法によく役立つ可能性がある（８）。ヒト化β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖモノクローナル抗体を単独で、又はＢＰＤ及び／又は他のＣＲＣ薬物、例えばニボルマブと組み合わせて使用することは、ＣＲＣを軽減するための本発明者らの治療努力を加速するための研究の将来の方向となり得る。β－１，４ ＧａｌＴ－Ｖタンパク質も腎癌において過剰発現されるため（９）、この免疫療法アプローチの複数の用途が見出され得る。

【0216】

参考文献
1. Kolmakova A, Chatterjee S. Platelet derived growth factor recruits lactosylceramide to induce cell proliferation in UDPGal:GlcCer:β1 4Galactosyltransferase (GalT-V) mutant Chinese hamster ovary cells. Glycoconj J 2005; 22: 401-7.
2. J. Arango, M. Pierce, Comparison of N-acetylglucosaminyltransferase V activities in Rous sarcoma-transformed baby hamster kidney (RS-BHK) and BHK cells, J. Cell. Biochem., 37 (2) (1988), pp. 225-231.
3. K. Shirane, T. Sato, K. Segawa, et a!. Involvement of beta-1,4-galactoslytransferase V in malignant transformation-associated changes in glycosylation, Biochem. Biophys. Res. Commun., 265 (2) (1999), pp. 434-438.
4. Chatterjee, S. and Pandey, A. The Yin and Yang of lactosylceramide metabolism: implications in cell function. Biochem.Biophys Acta. 1780:370-382, 2007.
5. Chatterjee, S. Kolmakova, A and Mohanraj,R. Regulation of lactosylceramide synthase; implications as a drug target. Curr. Drug Targets 9: 272-281, 2008.
6. D. Bedja, W. Yan, V. Lad, et al. Inhibition of glycosphingolipid synthesis reverses skin inflammation and hair loss in ApoE -/- mice fed western diet, Sci. Rep., 8 (2018), p. 11463.
7. M. Rajesh, A. Kolmakova, S. Chatterjee. Novel role of lactosylceramide in vascular endothelial growth factor-mediated angiogenesis in human endothelial cells, Circ. Res., 97 (8) (2005), pp. 796804.
8. S. Chatterjee, et al. Lactosylceramide synthase B-1,4GalT-V : A novel target for the diagnosis and therapy of human colorectal cancer. Bio Chem. Biophys. Res. Comm. 2019; 508, 380-400.
9. S. Chatterjee, N. Alsaeedi, J. Hou, et al., Use of a glycolipid inhibitor to ameliorate renal cancer in a mouse model, PloS One, 8 (5) (2013), Article e63726.
10. P. Favoriti, G. Carbone, M. Grego, et al. Worldwide burden of colorectal cancer: a review, Updates Surg, 68 (1) (2016), pp. 7-11. 11. S.I. Hakomori, W.T. Murakami, Glycolipids of hamster fibroblasts and derived malignant-transformed cell lines, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 59 (1) (1968), pp. 254-261.
12. J.W. Dennis, S. Laferte, Oncodevelopmental expression of -GlcNAc beta 1-6Man alpha 1-6Man beta 1-branched asparagine-linked oligosaccharides in murine tissues and human breast carcinomas, Cancer Res., 49 (4) (1989), pp. 945-950.
13. S. Hakomori, Tumor malignancy defined by aberrant glycosylation and sphingo(glycol)lipid metabolism, Cancer Res., 56 (23) (1996), pp. 5309-5318.
14. Y.Y. Liu, R.A. Hill, Y.T. Li, Ceramide glycosylation catalyzed by glucosylceramide synthase and cancer drug resistance, Adv. Cancer Res., 117 (2013), pp. 59-89.
15. Y. Wei, F. Zhou, Y. Ge, et al., β1,4-Galactosyltransferase V regulates self-renewal of glioma-initiating cell, Biochem. Biophys. Res. Commun., 396 (3) (2010), pp. 602-607.

【0217】

実施例３：ＩＩ型糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ）におけるアテローム性動脈硬化症及び体重減少を軽減するためのβ－１，４ ＧａｌＴ－Ｖモノクローナル抗体。
１１週齢の雄のＩＩ型糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ）をＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。本発明者らは、マウスを、正常マウス飼料及び水で飼育した。３０週齢で、マウスを２つの群に分けた。第１群のマウス（プラセボ）には、６週間にわたって腹腔内注射によって毎日生理食塩水（１００μＬ）を与えた。第２の群のマウスを、ＧａｌＴ－Ｖ抗体（１ｍｇ／ｋｇ体重）で同じ期間処置した。３６週齢の最後に、マウスの体重を測定し、様々な組織を収集し、更なる分析まで凍結した。次に、総脂質を抽出するために、約１０ｍｇの肝臓組織を切除し（回収を確認するためにＣ１２セラミド及びＣ１２スフィンゴミレインの内部標準を添加した）、アセトニトリル中でホモジナイズし、１０００ｒｐｍで数分間遠心分離した。透明な上清を保存し、ペレットを繰り返し抽出した。プールした上清をＮ２中で乾燥させ、クロロホルム－メタノール（２：１ ｖ／ｖ）中で再構成した。脂質抽出物の適切なアリコートを高速薄層クロマトグラフィープレートにロードした。また、コレステロールエステル、トリグリセリド及びコレステロールからなる標準的な中性脂質の誤った解釈も、プレートを較正するために負荷した。ヘプタン：エチルエーテル及び酢酸（６５：１６：１ ｖ／ｖ）を溶媒として使用してプレートを現像した。ヨウ素蒸気でプレートを曝露することによって脂質を同定し、写真撮影した。脂質の質量の定量は、個々の脂質の標準曲線を使用し、両側パラメトリックｔ検定を使用して、濃度測定分析によって行った。

【0218】

結果は、ＧａｌＴ－ＶモノクローナルＡＢで処置した糖尿病マウスが、プラセボ群のマウスと比較して有意に低下したコレステロールレベルを有することを実証した。処置はまた、マウスのプラセボ群と比較してトリグリセリド（中性脂肪）のレベルを著しく低下させた。加えて、処置はマウスの体重を約２０％減少させた。

【0219】

実施例４：本発明者らは、培養ヒトＣＲＣ細胞（ＨＣＴ－１１６）において、ＧａｌＴ－Ｖ ＡＢによる処置が細胞増殖及び血管新生を用量依存的に軽減することを示した［１］。さらに、本発明者らは、ＣＲＣのＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスモデルにおける異種移植腫瘍におけるＣＦ－７５０タグ付きＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂの濃縮を示した。

【0220】

本発明者らは更に、ＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置がマウス直腸のマウス同所性腫瘍における腫瘍成長及び転移に影響を及ぼすかどうかを決定することを望む。

【0221】

方法：
直腸癌を、生きたヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）（ＭｃＣｏｙ培地中５０ｕＬ中の１×１０^６細胞）を注射することによってＮＯＤ－ＳＣＩＤ／免疫無防備状態のマウスにおいて誘導した。マウスの処置群は、尾静脈へのＩＶ注射によって５０ｕＬのＰＢＳ（プラセボ）、２０ｕｇ／ｋｇのＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂ及び２００ｕｇ／ｋｇのＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂを受けた。

【0222】

図１３は、直腸癌のマウスモデルにおけるＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置の効果を研究するために従ったスキームを要約する。簡潔には、ＨＣＴ－１１６細胞を組織培養において約７５％コンフルエンスまで成長させた。トリプシンを用いて細胞を回収し、遠心分離し、細胞数を計測した。血清非含有ＭｃＣｏｙ培地に懸濁した１×１０^６個の細胞を、雄ＮＯＤ ＳＣＩＤマウス（約１０週齢）の直腸に注射した。２週間後、直腸腫瘍が見え、定量化されたとき、処置を開始した。マウスを３つの群：Ａ．プラセボ、Ｂ．２０ｕｇのＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂ／ｋｇ体重、及びＣ．２００ｕｇのＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂ／ｋｇ体重に分けた。１日おきに尾静脈にＩＶによって処置を行い、体重及び腫瘍サイズを記録した。処置の４週間後、マウスを２つの群：１．数匹のマウスを腫瘍の撮像に使用した、及び２．残りのマウスを安楽死させ、血液を採取して血漿及び様々な組織を採取した。腫瘍組織の半分をホルマリン溶液に保存し、脂質分析並びに免疫組織化学研究に使用した。腫瘍組織の残りの半分を急速凍結し、分子研究に使用した。

【0223】

結果：
ＧａｌＴ－ＡＢ抗体による処置は、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおけるＣＲＣの同所性モデルにおいて直腸腫瘍体積を用量依存的に減少させる。

【0224】

マウスの体重は、４週間にわたる処置に関係なく変化しなかった（図１４）。ＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置は、腫瘍体積の用量及び時間依存性減少を有した。例えば、処置の２週間後、本発明者らは、２０ｕｇ／ｋｇ及び２００ｕｇ／ｋｇの抗体を受けたマウスにおいて腫瘍体積が約３８～４１％減少したことに注目した（図１５Ａ）。４週間の処置後、２０及び２００ｕｇ／ｋｇの抗体で処置したマウスにおける腫瘍体積は、直腸腫瘍を担持するプラセボマウスと比較して、それぞれ３２％及び４１％低かった（図１５Ｂ）。

【0225】

腫瘍体積の減少の分子イメージング：
処置の４週間後、マウスに、確立された腫瘍バイオマーカーである５０ｕＬのＣＦ－７５０タグ付き癌胎児性抗原（ＣＥＡ）を注射した。２時間後、図１６Ａに示すように、マウス全体を撮像した。

【0226】

図１６では、ＨＣＴ－１１６直腸同所性腫瘍を担持するマウスの光学画像が示される：肝臓（１）、大腸（２）、血液（３）、脳（４）、黒矢印で示されている腫瘍（５）、小腸（６）、脾臓（７）、心臓（８）、肺（９）、盲腸（１０）、胃（１１）、腎臓（１２）が時計回りの順序で示されている。

【0227】

ＨＣＴ－１１６ヒトＣＲＣ腫瘍細胞（１×１０^６個）をＮＯＤ－ＳＣＩＤ雄マウス（１０週齢）の直腸に移植した。２週間後、４週間にわたる１日おきのＩＶ注射によって処置を開始した。癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するＣＦ－７５０抗体の送達の２時間後に、Ｆｏｒａｇｅｒイメージングマシンを用いてマウスを撮像した（図１６Ａ）：対照、ＣＥＡ－Ａｂなしのマウス、Ｍ１．２００ｕｇのＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ／Ｋｇ体重で処置したマウス、Ｍ２、プラセボを与えたマウス及びＭ３、２０ｕｇのＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ／Ｋｇ体重で処置したマウス。２４時間後、マウス組織を採取し、ペトリ皿に置き、写真撮影し（図１６Ｂ）、最後に画像化した（図１６Ｃ）。

【0228】

イメージング研究は、ヒトＣＥＡに対するＣＦ－７５０タグ付き抗体を調製すること、及び尾静脈へのＩＶ注射によってそれを送達することを含んだ。図１６Ａに示すように、プラセボ（図１６ＡのＭ２）を投与したマウス全身撮像では、直腸（緑色）、肝臓（青色）及び頭部（青色）へのタグの広範な局在化／濃度が明らかになった。２０ｕｇのＧａｌＴ－Ｖ Ａｂを投与したマウスでは、これらの組織に関連するタグは比較的少なかった（図１６ＡのＭ３）。しかしながら、２００ｕｇのＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂで処置すると、タグのほとんどが直腸腫瘍に濃縮された（青色）（図１６ＡのＭ１）。

【0229】

図１６Ｂは、ＣＦ－７５０－ＣＥＡ－Ａｂ（図１６Ｃ）の注射の２４時間後のイメージング前及び撮像後の個々のマウス組織の写真を示す。プラセボ腫瘍（図１６Ｃ、Ｍ２）は、タグの最高レベルを占めた（赤色）。染色強度は、ＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂ処置群と比較してプラセボ肝臓（図１６ＣのＭ２）で最も高かった。肺、腎臓及び血液にいくつかのタグが見られた（赤色）。本発明者らはまた、染色の強度が、２０μｇ（図４ＣのＭ３）及び２００μｇのＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂ／ｋｇ（図１６ＣのＭ１）での処置時に腫瘍組織（赤色）中で用量依存的に減少したことに注目する。本発明者らはインタクトＣＥＡ－Ａｂ（ＩｇＧ１）を使用したため、それは門脈循環並びに腎臓及び肺を介して肝臓に入った。この観察結果は、以前の報告と一致する。将来、本発明者らは、ＣＥＡ－ＡｂのＣＦ－７５０－Ｆａｂ断片のみを使用することを計画しており、これはＣＥＡ－Ａｂが＞１０：１の比で腫瘍組織対肝臓に取り込まれるためである。

【0230】

ＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置及び腫瘍マーカー遺伝子の発現：
逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）による遺伝子発現の定量分析は、ＣＥＡ及びＮＭＴ－１のｍＲＮＡレベルがプラセボ群及び処置群（ｎｓ）で類似していることを示す。しかしながら、Ｂ４ ＧＡＬＴ－Ｖの発現は、対照と比較して２０Ｕ／ｋｇ群で減少し、２００Ｕ／ｋｇ群では有意ではなかった。図１７を参照されたい。

【0231】

ＧａｌＴ－Ｖ抗体による処置は、ＧａｌＴ－Ｖの血中レベル及びラクトシルセラミドの腫瘍レベルを低下させた。
ヒトＣＲＣ組織における本発明者らの以前の研究は、ＧａｌＴ－Ｖの質量及びＬａｃＣｅｒのレベルの両方が、同じＣＲＣ患者由来の目に見える正常組織と比較して増加したことを明らかにした。本発明者らはまた、ＧａｌＴ－Ｖの阻害剤であるＤ－ＰＤＭＰによる処置が、ＨＣＴ－１１６細胞におけるＧａｌＴ－Ｖのレベル及びＬａｃＣｅｒの質量を減少させ、細胞増殖を減少させたことを示した。また、ヒト内皮細胞において、Ｄ－ＰＤＭＰ及びＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置は血管新生を減少させた。最後に、Ｄ－ＰＤＭＰによる腎癌処置のマウスモデルでは、腫瘍体積及びＧａｌＴ－Ｖ質量が著しく減少した［２］。したがって、本発明者らは、血漿中のＧａｌＴ－Ｖの質量及び腫瘍組織中のＬａｃＣｅｒのレベルを測定した。図１８Ａに示すように、ＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置は、血漿中のＧａｌＴ－Ｖのレベルを有意に低下させた。また、ＧａｌＴ－Ｖ処置マウス群では、腫瘍組織中のＬａｃＣｅｒレベルが低下する傾向があった（図１８Ｂ）。

【0232】

概要：
１．生きたＨＣＴ－１１６細胞を接種した直腸癌の同所性マウスモデルでは、６週間の期間にわたって腫瘍体積の著しい増加があった。
２．２０ｕｇ／ｋｇのＧａｌＴ－Ｖ Ａｂを与えたマウスにおいて、ＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂ用量での処置及び時間依存的に減少した腫瘍体積は、２週間～４週間で３２％～３８％程度であった。
３．より高用量のＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂによる処置は、プラセボ腫瘍体積と比較して腫瘍体積を４１％減少させた。
４．この観察の生化学的及び分子的基礎は、処置が、少なくともマウスが２０ｕｇＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ／ｋｇで処置された場合に、血液中のその質量を減少させることによって抗原ＧａｌＴ－Ｖを標的化し、同様に腫瘍組織中のその産物ＬａｃＣｅｒを、ＧａｌＴ－Ｖ遺伝子発現を減少させることによって標的化したことを本発明者らが観察したことから説明された。
５．イメージング研究は、上記の観察を再現した。さらに、イメージング研究は、プラセボマウスにおいて、接種の６週間後に、腫瘍転移が、血液循環における主要な組織である他の組織、例えば肝臓、腎臓及び肺に起こったことを明らかにした。これは、マウスを低用量又は高用量のＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂで処置した場合に有意に軽減され、高用量のＧａｌＴ－Ｖ－Ａｂで処置したマウスでは著しく減弱された。

【0233】

ＧａｌＴ－Ｖ抗体を用いた免疫療法は、直腸腫瘍の成長及び転移を予防又は阻害するための有効な治療法である。

【0234】

実施例５：ヒト結腸直腸癌細胞におけるＧａｌＴ－Ｖの局在化並びに細胞表面タンパク質及びゴルジ装置の細胞オルガネラ特異的バイオマーカーとの共局在化を判定した。

【0235】

ＨＣＴ－１１６細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ共焦点蛍光画像を撮影した（図１９参照）。ヒトＧａｌＴ－Ｖ（赤色、ローダミン、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）に対して産生された標識マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）及びマウスで産生されたモノクローナル抗カベオリン－１抗体（緑色、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ＮＨＳエステル、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の、１時間のインキュベーション後の４℃における細胞表面局在を観察した。画像をマージした場合のＧａｌＴ－Ｖ及びカベオリンの共局在化（黄色、注意白矢印）も同様に観察した。対応する画像をマージした場合、４℃でのモノクローナル抗ゴルジ５８ｋタンパク質（緑色、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ＮＨＳエステル、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）との共局在は観察されなかった。

【0236】

ヒトＧａｌＴ－Ｖに対するマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をローダミンでタグ付けした。カベオリン－１Ａｂ及びゴルジＡｂもインドシアニングリーンでタグ付けした。次いで、これらの抗体を使用して、共焦点顕微鏡法（ＤＯＩからのプロトコル：１０．１０２１／ａｃｓ．ｍｏｌｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．０ｃ００４５７に従う）を使用してＧａｌＴ－Ｖの局在を決定した。ＤＮＡに結合するＤＡＰＩ染色（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で核を染色した（青色）。図１９（上のパネル）に示すように、４℃のＧａｌＴ－Ｖ（赤色染色）及びカベオリン（緑色染色）抗体は、ヒト結腸直腸癌細胞株ＨＣＴ－１１６の細胞表面に強く結合した。これらの図を合成すると（上のパネルを右端に）、ＧａｌＴ－Ｖとカベオリンの免疫染色が重なり合い、色が黄色に変化することが観察された（白い矢印で示す）。細胞を内部移行の遮断薬であるメチル－シクロデキストリンとインキュベートした場合、ＧａｌＴ－Ｖ免疫染色の大部分は細胞表面に関連していた。対照的に、細胞をゴルジ装置に対する抗体（図１９下パネル）で処置した場合、免疫染色は全く観察されなかった。共焦点顕微鏡画像を、２０倍の倍率を用いてＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ７００で撮影し、Ｉｍａｇｅ－Ｊで処理した。

【0237】

実施例６：ＧａｌＴ－Ｖ（赤色）、カベオリン（緑色）及びゴルジ（緑色）に対する蛍光タグ付き抗体によるＨＣＴ－１１６細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ共焦点蛍光画像。図２０を参照されたい。３７℃で２時間インキュベートした後のＧａｌＴ－Ｖ抗体（赤色）及びカベオリン（緑色）抗体の細胞内移行が観察された。画像をマージした場合、ＧａｌＴ－Ｖとカベオリン抗体の限定的な共局在が観察された（黄色、白矢印を参照）。

【0238】

次に、細胞を３７℃に２時間加温した後、共焦点顕微鏡を行った。図２０の上部パネルに示されるように、ＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ（赤色染色）は細胞を内在化し、細胞質と会合していた。被覆ピット内に含まれるカベオリンは内在化されて細胞表面に戻ることが知られていることから、本発明者らは細胞質及び細胞表面免疫染色（緑色染色）を観察した。ゴルジ抗体によるかすかな免疫染色（緑色染色）が下のパネルで観察された。

【0239】

実施例７：ヒト冠動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）及びヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及び内在化
細胞培養物を漸増濃度の［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体と共にインキュベートし、洗浄し、自動ガンマカウンター（１２８２ Ｃｏｍｐｕ－ｇａｍｍａ ＣＳ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ／ＬＫＢ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｉｎｃ．）で放射能を測定した。ＨＣＴ－１１６細胞は、ＨＣＡＥＣ細胞と比較して有意により多くの量のＧａｌＴ－Ｖ抗体に結合することに留意されたい（ｎ＝３、ｐ＊＊＊＊（５ｕｇ／ｍＬ）＝０．００００５３、ｐ＊＊＊（１０ｕｇ／ｍＬ）＝０．０００８０５）。

【0240】

図２１は、４℃で１時間インキュベートした後のヒト冠動脈内皮細胞（ＨＣＡＥＣ）及びヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体結合を示す。

【0241】

実施例８：ヒト冠動脈内皮細胞（ＨＣＡＥＣ）及びヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体結合
細胞培養物を漸増濃度の［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体と共にインキュベートし、洗浄し、放射能をガンマカウンターで測定した。ＨＣＴ－１１６細胞は、ＨＣＡＥＣ細胞と比較して有意により多くの量のＧａｌＴ－Ｖ抗体に結合して内在化することに留意されたい（ｎ＝３、ｐ＊＊＊（１０ｕｇ／ｍＬ）＝０．０００１２４）。結果を図２２に示し、これは、３７℃で２時間のインキュベーション後のヒト冠動脈内皮細胞（ＨＣＡＥＣ）及びヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体結合を示す。

【0242】

実施例９：細胞をＧａｌＴ－Ｖ、Ｄ－ＰＤＭＰ（２０ｕＭ）の阻害剤あり又はなしでプレインキュベートした後、［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及び内在化の測定を行った。Ｄ－ＰＤＭＰはＧａｌＴ－Ｖの質量を減少させることから、［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及び内在化も減少させた（ｎ＝３、ｐ＊＊＝０．００７９）。結果を図２３に示し、これは、Ｄ－ＰＤＭＰがヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）においてジルコニウムタグ付きＧａｌＴ－Ｖ抗体結合を阻害することを示す。

【0243】

実施例１０：細胞を、過剰の非標識（コールド、５０ｕｇ／ｍＬ）ＧａｌＴ－Ｖ抗体並びに［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ Ａｂの存在下でインキュベートした。非標識抗体の存在は、処置されたＨＣＴ－１１６細胞における［^８９Ｚｒ］の結合及び内在化を著しく減弱させたことに留意されたい（ｎ＝３、ｐ＊＊＊＊≦０．０００１）。結果を、ヒト結腸直腸癌細胞（ＨＣＴ－１１６）における［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及び内在化の特異性を示す図２４に示す。

【0244】

実施例１１：ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、強力なガンマ放出体であるため［^８９Ｚｒ］で放射性標識され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究並びにマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ研究に有用である。図２１に示すように、４℃で測定したＨＣＡＥＣ細胞（青色）及びＨＣＴ－１１６細胞（赤色）への［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ結合は濃度依存的であった。さらに、ＨＣＴ－１１６細胞へのＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ結合は、４℃（図２１）及び３７℃（図２２）の両方でＨＣＡＥＣ細胞と比較して統計的に有意に高かった。ＨＣＴ－１１６細胞のＧａｌＴ－Ｖ活性及び質量を阻害することが知られているＤ－ＰＤＭＰも、未処置細胞と比較して、結合したＧａｌＴ－Ｖ Ａｂが少なかった（図２３）。［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ結合の特異性を、ＨＣＴ細胞を、放射性標識されたＡｂと競合し得る過剰なＧａｌＴ－Ｖ抗体とインキュベートすることによって評価した。図２４に示すように、５０ｕｇ／ｍＬのコールド非標識ＧａｌＴ－Ｖと共にインキュベートしたＨＣＴ－１１６細胞は、熱放射性ＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ（赤色バー）と共にインキュベートした細胞と比較して、結合が著しく減弱した（青色バー）。ＨＣＴ－１１６細胞（図２５）への［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ Ａｂ結合の時間経過の研究は、ＨＣＴ－１１６細胞において３０分から２時間までほぼ線形の結合を示した。

【0245】

実施例１２：ヒトＣＲＣ腫瘍担持マウスのｉｎ ｖｉｖｏ異種蛍光画像
ヒトＣＲＣ腫瘍担持マウスのｉｎ ｖｉｖｏ異種蛍光画像を撮影した。ＣＦ－７５０－ＧａｌＴ－Ｖ抗体の注射の５時間後、図２６に示されている黒矢印で示されている皮下／異種指向性ＣＲＣ腫瘍を示す。

【0246】

蛍光タグ付きＧａｌＴ－Ｖ抗体の注射の４８時間後、図２７に黒い矢印で示されている異種指向性ＣＲＣ腫瘍を示す。ＣＦ－７５０－ＧａｌＴ－Ｖ抗体の強度は、異種指向性ＣＲＣ腫瘍を担持するマウスにおいて注射５時間後から注射４８時間後に著しく増加した（青色スポット）ことに留意されたい。

【0247】

図２６に示すように、本発明者らは、ＣＦ－７５０－ＧａｌＴ－Ｖ抗体（黒矢印で示す）の注射後５時間以内にマウスの異種指向性ＣＲＣ腫瘍を撮像することができた。右側のバーは、蛍光の強度を示す。深い青色及び赤色は、それぞれ非常に高い及び非常に低いＧａｌＴ－Ｖ抗体蛍光強度を表す。これらのマウスの毛は自家蛍光であったため、インタクト動物では麻酔後に非侵襲的に他の内臓、例えば肝臓、脾臓等を撮像することができなかった。本発明者らは、緑色から青色への色の変化によって示されるように、異種指向性腫瘍における蛍光の時間依存性濃縮を観察した（蛍光タグ付きＧａｌＴ－Ｖ抗体による注射の５時間後の図２６及び４８時間後の図２７を比較する）。

【0248】

実施例１３：異種指向性腫瘍を担持するマウスにおけるＣＦ－７５０蛍光ＧａｌＴ－Ｖ抗体の組織分布
図２８Ａ、Ｂ及びＣは、皮下／異種移植腫瘍担持マウス由来の個々の組織におけるＣＦ－７５０ ＧａｌＴ－Ｖ抗体蛍光の分布を示す。肝臓（１）、結腸（２）、脳（３）、腫瘍（４）、Ｓ状結腸（５）、大腸（６）、脾臓（７）、心臓（８）、肺（９）、小腸（１０）、盲腸（１１）、胃（１２）、腎臓（１３）、筋肉（１４）、及び血液（１５）。

【0249】

ＣＦ－７５０－ＧａｌＴ－Ｖ抗体の注射後７２時間で、３匹の異種指向性腫瘍担持マウス（Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３）を安楽死させ、個々の臓器を切除し、写真撮影した（図２８Ａ、Ｂ、Ｃ）。まず、各臓器を撮影（左パネル図２８Ａ、Ｂ、Ｃ）した後、異種指向性移植画像を撮影した。肝臓、脾臓、及び腎臓が有意な蛍光を吸収したことに留意されたい。しかし、腫瘍組織（白色矢印で示す）は最大量の蛍光を蓄積した。

【0250】

要するに、本発明者らのｉｎ ｖｉｖｏ研究は、ＧａｌＴ－Ｖ抗体の蛍光タグ付けがマウスのＣＲＣ腫瘍を非侵襲的に画像化するための貴重な試薬であることを明らかにする。経時的に、ＣＦ－７５０－ＧａｌＴ－Ｖ抗体は主に腫瘍組織に濃縮される。肝臓、腎臓及び肺は抗体の代謝及びその後の排出に関与しているため、これらの組織でも有意な蛍光が観察された。この追加の情報は、ＣＲＣに加えて、腎臓癌及び肝臓癌の緩和におけるＧａｌＴ－Ｖ抗体の治療有効性を決定するのに有用であり得る。また、ＣＦ－７５０－ＧａｌＴ－Ｖ抗体は、ＧａｌＴ－Ｖ濃縮が起こり得るヒトＣＲＣ及び他の癌組織における診断ツールとして使用することができる。

【0251】

統計分析：ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアを用いた単数／複数の対応のないｔ検定を用いて、データの統計分析を行った。

【0252】

結論：
１．免疫組織化学的研究は、ヒトＨＣＴ－１１６細胞では、ＧａｌＴ－Ｖがカベオリンと細胞表面に共局在していることを示す。
２．インキュベーション温度を４℃から３７℃にシフトさせると、細胞表面に結合したＧａｌＴ－Ｖは内部移行し、細胞質に存在する。弱い免疫染色は、存在量が低いためにゴルジ装置に関連する。
３．［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体を使用した結合及び内在化試験は、ＨＣＴ－１１６細胞及びＨＣＡＥＣ細胞への濃度依存性及び時間依存性結合を示した。
４．結合はＧａｌＴ－Ｖ抗原に特異的であった。
５．結合は、以下のようにＧａｌＴ－Ｖの細胞レベルに依存した：ａ．ＨＣＴ－１１６細胞は、ＨＣＡＥＣと比較して、より多くのＧａｌＴ－Ｖ抗体に有意に結合した。ｂ．Ｄ－ＰＤＭＰ処置ＨＣＴ－１１６細胞は、未処置細胞よりも結合が少なかった。本発明者らの以前の研究は、Ｄ－ＰＤＭＰがＧａｌＴ－Ｖ質量を減少させることを示している。

【0253】

ヒト結腸直腸細胞では、ＧａｌＴ－Ｖは細胞表面に局在し、対応する［^８９Ｚｒ］ＧａｌＴ－Ｖ抗体の結合及びその後の内在化を可能にする。

【0254】

他の実施形態
上記の説明から、本明細書に記載の発明を様々な用途及び条件に採用するために変形及び修正が行われ得ることは明らかであろう。そのような実施形態も、以下の特許請求の範囲に含まれる。

【0255】

本明細書における配列、特許及び刊行物に対する全ての引用は、あたかも各独立した特許及び刊行物が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4-1】

【図4-2】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16-1】

【図16-2】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28A】

【図28B】

【図28C】

【国際調査報告】