特表 2024-534012 １９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質に結合する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を用いた非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）の治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-18

(54)【発明の名称】１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質に結合する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を用いた非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）の治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/68 20170101AFI20240910BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20240910BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240910BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240910BHJP

【ＦＩ】

A61K47/68 ZNA

A61K9/08

A61P35/00

A61P13/10

C07K16/18

C12P21/08

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024508641

(86)(22)【出願日】2022-08-12

(85)【翻訳文提出日】2024-03-22

(86)【国際出願番号】 US2022074897

(87)【国際公開番号】W WO2023019236

(87)【国際公開日】2023-02-16

(31)【優先権主張番号】63/233,048

(32)【優先日】2021-08-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/242,380

(32)【優先日】2021-09-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/328,441

(32)【優先日】2022-04-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524054439

【氏名又は名称】アジェンシス，インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】507154181

【氏名又は名称】シージェン インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】カロジーノ クリストファー

(72)【発明者】

【氏名】ナラヤナン スジャータ

(72)【発明者】

【氏名】ガーグ アミット

【テーマコード（参考）】

4B064

4C076

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4C076AA12

4C076AA95

4C076BB21

4C076CC27

4C076DD09F

4C076DD60Z

4C076DD67Q

4C076EE23F

4C076EE59

4C076FF16

4C076FF36

4C076FF43

4C076FF61

4C076FF63

4C076FF68

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA10

4H045FA74

(57)【要約】

１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質（ネクチン－４）に結合する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を用いた膀胱癌の膀胱内治療方法及び非筋肉浸潤性膀胱癌の治療方法が、本明細書において提供される。
【選択図】図３Ｄ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト対象における膀胱癌を治療する方法であって、前記対象に有効量の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を膀胱内投与することを含み、前記ＡＤＣが、
モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）の１単位以上にコンジュゲートした、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含む、前記方法。

【請求項2】

前記膀胱癌が非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＮＭＩＢＣが組織学的に確認されており、上皮内癌（ＣＩＳ）である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記対象が乳頭状疾患を有する、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記対象が乳頭状疾患を有さない、請求項３に記載の方法。

【請求項6】

前記ＮＭＩＢＣが組織学的に確認されており、主な組織学的成分（＞５０％）が尿路上皮（移行上皮）癌である、請求項２～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記対象が、高リスクのカルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）非応答性疾患を有する、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記対象が、根治的膀胱全摘除術に不適格であるか、または受けることを拒否している、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記対象の、目に見える全ての乳頭状Ｔａ／Ｔ１腫瘍が、前記治療前６０日以内に完全に切除されている、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記対象が、残留する純粋なＣＩＳを有する、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記対象が、残留する純粋なＣＩＳを有さない、請求項９に記載の方法。

【請求項12】

前記対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが０である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが１である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが２である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記対象の糸球体濾過率（ＧＦＲ）が５０ｍＬ／分以上であり、前記対象がニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩの心不全を有さない、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記対象は、
ａ． 好中球絶対数（ＡＮＣ）が１５００／μＬ以上、
ｂ． ヘモグロビン（Ｈｇｂ）が１０ｇ／ｄＬ以上、
ｃ． 血小板数が１００，０００／μＬ以上、
ｄ． 血清ビリルビンが１．５×正常上限値（ＵＬＮ）以下、またはジルベール病を有する患者の場合は３×ＵＬＮ以下、
ｅ． クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）の計算値が３０ｍＬ／分以上（クレアチニンまたはＣｒＣｌの代わりにＧＦＲも使用できる）、ＣｒＣｌは、コッククラフト・ゴールト（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ）法または腎疾患における食生活改善（ＭＤＲＤ）式を用いて算出されるべきであり、ＥＣＯＧ活動状態が２である対象は、ＧＦＲ５０ｍＬ／分以上を有さなければならない、
ｆ． アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が３×ＵＬＮ以下、または
ｇ． ＰＴまたはａＰＴＴが抗凝固薬の使用目的の治療範囲内である限りにおいて、対象が抗凝固薬治療を受けている場合を除き、国際標準化比（ＩＮＲ）、またはプロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）もしくは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が１．５ＵＬＮ以下
からなる群から選択される状態の１つ以上を有する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記対象が、請求項１６記載の状態（ａ）～（ｇ）の全てを有する、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記対象の推定平均余命が２年を超える、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２２に記載の重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域と、配列番号２３に記載の軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、あるいは、
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、
請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含むか、あるいは、
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含む、
請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記抗体が、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記抗原結合断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖである、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記抗体が完全ヒト抗体である、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記抗体がＩｇＧ１であり、軽鎖がカッパ軽鎖である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体またはその抗原結合断片が、組換え的に産生される、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記抗体または抗原結合断片が、リンカーを介してＭＭＡＥの各単位にコンジュゲートされる、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記リンカーは、酵素切断性リンカーであり、かつ抗体またはその抗原結合断片の硫黄原子と結合を形成する、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記リンカーが、－Ａａ－Ｗｗ－Ｙｙ－の式を有し、式中、－Ａ－は伸長単位であり、ａは０または１であり、－Ｗ－はアミノ酸単位であり、ｗは０～１２の範囲の整数であり、－Ｙ－はスペーサー単位であり、ｙは０、１または２である、請求項２８または２９に記載の方法。

【請求項31】

前記伸長単位が、下記式（１）の構造を有し、前記アミノ酸単位が、バリン－シトルリンであり、前記スペーサー単位が、下記式（２）の構造を含むＰＡＢ基である、請求項３０に記載の方法：

。

【請求項32】

前記伸長単位が、抗体またはその抗原結合断片の硫黄原子と結合を形成し、前記スペーサー単位が、カルバメート基を介してＭＭＡＥに連結される、請求項３０または３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり１～２０単位のＭＭＡＥを含む、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり１～１０単位のＭＭＡＥを含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり２～８単位のＭＭＡＥを含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり３～５単位のＭＭＡＥを含む、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは１～１０である、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

ｐが２～８である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

ｐが３～５である、請求項３７または３８に記載の方法。

【請求項40】

ｐが３～４である、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

ｐが約４である、請求項３７～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記抗体薬物複合体の有効量の平均ｐ値が約３．８である、請求項３７～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記ＡＤＣが、Ｌ－ヒスチジン、ポリソルベート－２０（ＴＷＥＥＮ－２０）、及びトレハロース無水物を含む医薬組成物中に配合される、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記ＡＤＣが、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物、及び塩酸塩を含む医薬組成物中に配合され、前記医薬組成物のｐＨが２５℃で約６．０である、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記ＡＤＣが、約９ｍＭのヒスチジン、約１１ｍＭのヒスチジン塩酸塩一水和物、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、及び約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物を含む医薬組成物中に配合され、前記医薬組成物のｐＨが２５℃で約６．０である、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記ＡＤＣの有効量が、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの点滴注入量で、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約９５０ｍｇ、約１２５ｍｇ～約９００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約８５０ｍｇ、約１２５ｍｇ～約８００ｍｇ、または約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である、請求項１～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である、請求項１～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約１２５ｍｇの用量である、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約２５０ｍｇの用量である、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約５００ｍｇの用量である、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約７５０ｍｇの用量である、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

各膀胱内投与の最大滞留時間が約９０分間である、請求項１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

各膀胱内投与の最大滞留時間が約１２０分間である、請求項１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

各膀胱内投与の滞留時間が、約３０分間、４０分間、５０分間、６０分間、７０分間、８０分間、９０分間、または１２０分間である、請求項１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項55】

前記ＡＤＣが、誘導段階及び維持段階という２つの段階中に膀胱内投与される、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記維持段階が、前記誘導段階の６～１０週間後、６～９週間後、または６～８週間後に開始する、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記ＡＤＣが、前記誘導段階中の６週間にわたって、週に１回膀胱内投与される、請求項５５または５６に記載の方法。

【請求項58】

前記ＡＤＣが、前記維持段階中の９ヵ月間にわたって、月に１回膀胱内投与される、請求項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約１２５ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約２５０ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約５００ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約７５０ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月１３日に出願された米国出願第６３／２３３，０４８号、２０２１年９月９日に出願された米国出願第６３／２４２，３８０号、及び２０２２年４月７日に出願された米国出願第６３／３２８，４４１号の利益を主張し、それぞれの開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子的に提出された配列一覧への参照
本出願は、本出願とともにＸＭＬファイル形式で提出されたコンピュータ可読の配列一覧を含み、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。本出願とともに提出された配列一覧ＸＭＬファイルは「１４３６９－２８１－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｘｍｌ」を題とし、２０２２年８月２日に作成され、サイズが３４，７４３バイトである。

【0003】

１．分野
１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質（ネクチン－４）に結合する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を用いた非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）の治療方法が、本明細書で提供される。

【背景技術】

【0004】

２．背景
尿路上皮癌（ＵＣ）の最も一般的な形態であり、米国（Ｕ．Ｓ．）で６番目に多いがんである膀胱癌は、ヨーロッパで６５，０００人を超え、米国で１８，０００人近くを含め、世界全体で年間約２０万人の患者が死亡すると推定される（Ｂｒａｙ ２０１８；Ｆｅｒｌａｙ ２０１８；Ｓｉｅｇｅｌ ２０１９）。膀胱癌の新しい症例の年間診断数は、２０１８年には全世界で５４９，０００人超と推定される。２０２０年には、米国における膀胱癌の新しい症例が８１，４００を超えると推定され、この推定値は２０２１年には８３，０００例超に増加した（アメリカ癌協会（ＡＣＳ）２０２１年、全米癌研究所（ＮＣＩ）２０２１年）。膀胱癌の発生率及び死亡率は、年齢とともに強く増加し、高齢者人口が増加するにつれてますます問題となる。

【0005】

膀胱癌診断の約７０％～８０％は非筋肉浸潤性疾患である（Ｃｈａｎｇ ２０１６；Ｗｏｌｄｕ ２０１７；Ｋａｔｅｓ ２０２０；Ｌｉ ２０２０）。非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）は、本質的に乳頭状で粘膜に限定したもの（Ｔａ）、高悪性度及び平坦で上皮に限定したもの（Ｔｉｓまたは上皮内癌［ＣＩＳ］）、及び粘膜下層または固有層に浸潤したもの（Ｔ１）を含むがんの異種群を表す（Ｐａｓｉｎ ２００８）。ＮＭＩＢＣ患者のうち、乳頭状疾患が最も多く、患者の約７０％が罹患し、Ｔ１疾患及びＣＩＳは、それぞれ患者の約２０％及び約１０％が罹患する（Ｋｉｒｋａｌｉ ２００５；Ａｎａｓｔａｓｉａｄｉｓ ２０１２）。

【0006】

ＮＭＩＢＣを治療する標準的な手段は、経尿道的膀胱腫瘍切除術（ＴＵＲＢＴ）による膀胱腫瘍の外科的切除と、さらなる抗腫瘍活性のための治療薬の膀胱内投与を含む（Ｋａｗａｉ ２０１３；Ｃｈａｎｇ ２０１６；Ｗｏｌｄｕ ２０１７；Ｊａｍｉｌ ２０１９；Ｋａｔｅｓ ２０２０）。膀胱内カルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）は、ＮＭＩＢＣ患者、特に高リスク疾患の特徴を有する患者に対して、抗腫瘍活性との相関性を表す局所免疫応答を誘発する、選択すべき治療薬と考えられる（Ｋａｓｓｏｕｆ ２０１５；Ｃｈａｎｇ ２０１６）。

【0007】

ＢＣＧ非応答性疾患は、ＢＣＧによる適切な治療に応答せず、引き続き疾患再発及びＵＣの後続の段階への進行のリスクが高いＮＭＩＢＣ患者のサブグループを示す。このような患者に対して、ＢＣＧによる追加治療は選択肢ではなく、根治的膀胱全摘除術が依然として最善の選択肢である。ゲムシタビン、マイトマイシン、バルビシンなどの膀胱内化学療法剤は一定の効果を示すが、現在のガイドラインでは、根治的膀胱全摘除術以外の治療がＢＣＧ非応答性疾患の治療に劣ると記載される（Ｎａｖａｉ ２０１６；Ｔａｙｌｏｒ ２０２０）（ＥＡＵ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｎｏｎ－ｍｕｓｃｌｅｉｎｖａｓｉｖｅ Ｂｌａｄｄｅｒ Ｃａｎｃｅｒ．２０２０．ｈｔｔｐｓ：／／ｕｒｏｗｅｂ．ｏｒｇ／ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ／ｎｏｎ－ｍｕｓｃｌｅ－ｉｎｖａｓｉｖｅ－ｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒ／Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｆｅｂ １６，２０２１．）。最近、ペムブロリズマブの全身投与がＢＣＧ非応答性上皮内癌（ＣＩＳ）患者の治療として承認されたが、ペムブロリズマブで治療された患者の半数以上は治療に対して完全奏効を示さないため、この患者集団における安全で効果的な膀胱内治療は依然として必要とされる。

【0008】

１９１Ｐ４Ｄ１２（ネクチン－４としても公知である）は、接着分子のネクチンファミリーに属する、６６ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。１９１Ｐ４Ｄ１２は、３つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様サブドメインを含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、膜貫通ヘリックス、及び細胞内領域から構成される（Ｔａｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ（２００８）；２４：３０９－４２）。ネクチンは、カドヘリンを動員し、細胞骨格再編成を調節することができる接着結合部での同種親和性及び異種親和性トランス相互作用の両方によってＣａ^２＋非依存性細胞間接着を媒介すると考えられている（Ｒｉｋｉｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ（２００８）；６５（２）：２５３－６３．）。他のネクチンファミリーメンバーに対するネクチン－４の配列同一性は低く、ＥＣＤにおいて２５％～３０％の範囲である（Ｒｅｙｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２００１）；２７６（４６）：４３２０５－１５）。

【0009】

ネクチン－４は複数のがん、特に尿路上皮癌、乳癌、肺癌、膵臓癌、及び卵巣癌で発現が確認されている。発現レベルが高いほど、疾患進行及び／または予後不良と関連する（Ｆａｂｒｅ－Ｌａｆａｙ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ（２００７）；７：７３）。

【0010】

根治的膀胱全摘除術が不適応または不適格であるＢＣＧ非応答性ＮＭＩＢＣ患者、あるいは十分な情報に基づき根治的膀胱全摘除術を受けないという決断をした患者にとって、安全かつ有効な膀胱内治療のニーズは未だ満たされていない。

【発明の概要】

【0011】

３．概要
１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の膀胱内投与を用いてヒト対象における膀胱癌を治療する方法が、本明細書において提供される。

【0012】

実施形態１．ヒト対象における膀胱癌を治療する方法であって、前記対象に有効量の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を膀胱内投与することを含み、前記ＡＤＣが、
モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）の１単位以上にコンジュゲートした、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含む、前記方法。

【0013】

実施形態２．前記膀胱癌が非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）である、実施形態１に記載の方法。

【0014】

実施形態３．前記ＮＭＩＢＣが組織学的に確認されており、上皮内癌（ＣＩＳ）である、実施形態２に記載の方法。

【0015】

実施形態４．前記対象が乳頭状疾患を有する、実施形態３に記載の方法。

【0016】

実施形態５．前記対象が乳頭状疾患を有さない、実施形態３に記載の方法。

【0017】

実施形態６．前記ＮＭＩＢＣが組織学的に確認されており、主な組織学的成分（＞５０％）が尿路上皮（移行上皮）癌である、実施形態２～５のいずれかに記載の方法。

【0018】

実施形態７．前記対象が、高リスクのカルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）非応答性疾患を有する、実施形態１～６のいずれか１つに記載の方法。

【0019】

実施形態８．前記対象が、根治的膀胱全摘除術に不適格であるか、または受けることを拒否している、実施形態１～７のいずれか１つに記載の方法。

【0020】

実施形態９．前記対象の、目に見える全ての乳頭状Ｔａ／Ｔ１腫瘍が、前記治療前６０日以内に完全に切除されている、実施形態１～８のいずれか１つに記載の方法。

【0021】

実施形態１０．前記対象が、残留する純粋なＣＩＳを有する、実施形態９に記載の方法。

【0022】

実施形態１１．前記対象が、残留する純粋なＣＩＳを有さない、実施形態９に記載の方法。

【0023】

実施形態１２．前記対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが０である、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0024】

実施形態１３．前記対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが１である、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0025】

実施形態１４．前記対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが２である、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0026】

実施形態１５．前記対象の糸球体濾過率（ＧＦＲ）が５０ｍＬ／分以上であり、前記対象がニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩの心不全を有さない、実施形態１４に記載の方法。

【0027】

実施形態１６．前記対象は、
ａ．好中球絶対数（ＡＮＣ）が１５００／μＬ以上、
ｂ．ヘモグロビン（Ｈｇｂ）が１０ｇ／ｄＬ以上、
ｃ．血小板数が１００，０００／μＬ以上、
ｄ．血清ビリルビンが１．５×正常上限値（ＵＬＮ）以下、またはジルベール病を有する患者の場合は３×ＵＬＮ以下、
ｅ．クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）の計算値が３０ｍＬ／分以上（クレアチニンまたはＣｒＣｌの代わりにＧＦＲも使用できる）、ＣｒＣｌは、コッククラフト・ゴールト（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ）法または腎疾患における食生活改善（ＭＤＲＤ）式を用いて算出されるべきであり、ＥＣＯＧ活動状態が２である対象は、ＧＦＲ５０ｍＬ／分以上を有さなければならない、
ｆ．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が３×ＵＬＮ以下、または
ｇ．ＰＴまたはａＰＴＴが抗凝固薬の使用目的の治療範囲内である限りにおいて、対象が抗凝固薬治療を受けている場合を除き、国際標準化比（ＩＮＲ）、またはプロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）もしくは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が１．５ＵＬＮ以下
からなる群から選択される状態の１つ以上を有する、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0028】

実施形態１７．前記対象が、実施形態１６の状態（ａ）～（ｇ）の全てを有する、実施形態１６に記載の方法。

【0029】

実施形態１８．前記対象の推定平均余命が２年を超える、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の方法。

【0030】

実施形態１９．前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２２に記載の重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域と、配列番号２３に記載の軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の方法。

【0031】

実施形態２０．
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、あるいは、
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、
実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。

【0032】

実施形態２１．
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。

【0033】

実施形態２２．前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の方法。

【0034】

実施形態２３．前記抗体が、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の方法。

【0035】

実施形態２４．前記抗原結合断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖである、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の方法。

【0036】

実施形態２５．前記抗体が完全ヒト抗体である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の方法。

【0037】

実施形態２６．前記抗体がＩｇＧ１であり、軽鎖がカッパ軽鎖である、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の方法。

【0038】

実施形態２７．前記抗体またはその抗原結合断片が、組換え的に産生される、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の方法。

【0039】

実施形態２８．前記抗体または抗原結合断片が、リンカーを介してＭＭＡＥの各単位にコンジュゲートされる、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の方法。

【0040】

実施形態２９．前記リンカーは、酵素切断性リンカーであり、かつ抗体またはその抗原結合断片の硫黄原子と結合を形成する、実施形態２８に記載の方法。

【0041】

実施形態３０．前記リンカーが、－Ａａ－Ｗｗ－Ｙｙ－の式を有し、式中、－Ａ－は伸長単位であり、ａは０または１であり、－Ｗ－はアミノ酸単位であり、ｗは０～１２の範囲の整数であり、－Ｙ－はスペーサー単位であり、ｙは０、１または２である、実施形態２８または２９に記載の方法。

【0042】

実施形態３１．前記伸長単位が、下記式（１）の構造を有し、前記アミノ酸単位が、バリン－シトルリンであり、前記スペーサー単位が、下記式（２）の構造を含むＰＡＢ基である、実施形態３０に記載の方法：

。

【0043】

実施形態３２．前記伸長単位が、抗体またはその抗原結合断片の硫黄原子と結合を形成し、前記スペーサー単位が、カルバメート基を介してＭＭＡＥに連結される、実施形態３０または３１に記載の方法。

【0044】

実施形態３３．前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり１～２０単位のＭＭＡＥを含む、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の方法。

【0045】

実施形態３４．前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり１～１０単位のＭＭＡＥを含む、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の方法。

【0046】

実施形態３５．前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり２～８単位のＭＭＡＥを含む、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の方法。

【0047】

実施形態３６．前記ＡＤＣが、抗体またはその抗原結合断片あたり３～５単位のＭＭＡＥを含む、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の方法。

【0048】

実施形態３７．前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは１～１０である、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の方法。

【0049】

実施形態３８．ｐが２～８である、実施形態３７に記載の方法。

【0050】

実施形態３９．ｐが３～５である、実施形態３７または３８に記載の方法。

【0051】

実施形態４０．ｐが３～４である、実施形態３７～３９のいずれか１つに記載の方法。

【0052】

実施形態４１．ｐが約４である、実施形態３７～４０のいずれか１つに記載の方法。

【0053】

実施形態４２．前記抗体薬物複合体の有効量の平均ｐ値が約３．８である、実施形態３７～４０のいずれか１つに記載の方法。

【0054】

実施形態４３．前記ＡＤＣが、Ｌ－ヒスチジン、ポリソルベート－２０（ＴＷＥＥＮ－２０）、及びトレハロース無水物を含む医薬組成物中に配合される、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。

【0055】

実施形態４４．前記ＡＤＣが、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物、及び塩酸塩を含む医薬組成物中に配合され、前記医薬組成物のｐＨが２５℃で約６．０である、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の方法。

【0056】

実施形態４５．前記ＡＤＣが、約９ｍＭのヒスチジン、約１１ｍＭのヒスチジン塩酸塩一水和物、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、及び約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物を含む医薬組成物中に配合され、前記医薬組成物のｐＨが２５℃で約６．０である、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の方法。

【0057】

実施形態４６．前記ＡＤＣの有効量が、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの点滴注入量で、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約９５０ｍｇ、約１２５ｍｇ～約９００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約８５０ｍｇ、約１２５ｍｇ～約８００ｍｇ、または約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。

【0058】

実施形態４７．前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の方法。

【0059】

実施形態４８．前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約１２５ｍｇの用量である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の方法。

【0060】

実施形態４９．前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約２５０ｍｇの用量である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の方法。

【0061】

実施形態５０．前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約５００ｍｇの用量である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の方法。

【0062】

実施形態５１．前記ＡＤＣの有効量が、約２５ｍＬの点滴注入量で約７５０ｍｇの用量である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の方法。

【0063】

実施形態５２．各膀胱内投与の最大滞留時間が約９０分間である、実施形態１～５１のいずれか１つに記載の方法。

【0064】

実施形態５３．各膀胱内投与の最大滞留時間が約１２０分間である、実施形態１～５１のいずれか１つに記載の方法。

【0065】

実施形態５４．各膀胱内投与の滞留時間が、約３０分間、４０分間、５０分間、６０分間、７０分間、８０分間、９０分間、または１２０分間である、実施形態１～５１のいずれか１つに記載の方法。

【0066】

実施形態５５．前記ＡＤＣが、誘導段階及び維持段階という２つの段階中に膀胱内投与される、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の方法。

【0067】

実施形態５６．前記維持段階が、前記誘導段階の６～１０週間後、６～９週間後、または６～８週間後に開始する、実施形態５５に記載の方法。

【0068】

実施形態５７．前記ＡＤＣが、前記誘導段階中の６週間にわたって、週に１回膀胱内投与される、実施形態５５または５６に記載の方法。

【0069】

実施形態５８．前記ＡＤＣが、前記維持段階中の９ヵ月間にわたって、月に１回膀胱内投与される、実施形態５５～５７のいずれか１つに記載の方法。

【0070】

実施形態５９．前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約１２５ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の方法。

【0071】

実施形態６０．前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約２５０ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の方法。

【0072】

実施形態６１．前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約５００ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の方法。

【0073】

実施形態６２．前記ＡＤＣが以下の構造：

を有し、式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、前記抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、前記ＡＤＣは、約７５０ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、前記用量は、前記誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および前記維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、前記維持段階は、前記誘導段階の６～１０週間後に開始する、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0074】

４．図面の簡単な説明

【図1A-1】ネクチン－４タンパク質のヌクレオチド及びアミノ酸配列を示す。

【図1A-2】図１Ａ－１の説明を参照のこと。

【図1B】Ｈａ２２－２（２．４）６．１の重鎖のヌクレオチド及びアミノ酸配列を示す。

【図1C】Ｈａ２２－２（２．４）６．１の軽鎖のヌクレオチド及びアミノ酸配列を示す。

【図1D】Ｈａ２２－２（２．４）６．１の重鎖のアミノ酸配列を示す。

【図1E】Ｈａ２２－２（２．４）６．１の軽鎖のアミノ酸配列を示す。

【図2】膀胱内投与を模倣する条件を用いて、ネクチン－４を過剰発現する膀胱癌細胞（すなわち、ＵＭ－ＵＣ－３－ｈネクチン－４^＋）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでのエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の細胞毒性活性を示す。

【図3A】ネクチン－４^＋膀胱同所異種移植マウスモデルにおけるエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の膀胱内投与の有効性を示す。ＵＭ－ＵＣ－３－ｈネクチン４^＋－Ｌｕｃ^＋細胞による化学的擦過後に同所的に移植されたＳＣＩＤマウスの生成と、膀胱内ＥＶをマウスに投与し、膀胱組織の組織学的分析を行うための投与スケジュールを示す。

【図3B-1】ネクチン－４^＋膀胱同所異種移植マウスモデルにおけるエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の膀胱内投与の有効性を示す。腫瘍生着とＥＶ活性を確認する生物発光イメージング結果を示す。ＳＷＦＩ、注射用無菌水。

【図3B-2】図３Ｂ－１の説明を参照のこと。

【図3C】ネクチン－４^＋膀胱同所異種移植マウスモデルにおけるエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の膀胱内投与の有効性を示す。ＥＶ活性を確認する抗ネクチン－４免疫組織化学結果を示す。図３Ｃの右の５つのパネルの膀胱組織は、それぞれ、図３ＢのＥＶの膀胱内投与で治療した５匹のマウス由来であった。

【図3D】ネクチン－４^＋膀胱同所異種移植マウスモデルにおけるエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の膀胱内投与の有効性を示す。図３Ｂの生物発光イメージング結果の定量分析を示す。

【図3E】ネクチン－４^＋膀胱同所異種移植マウスモデルにおけるエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の膀胱内投与の有効性を示す。膀胱腫瘍組織におけるネクチン－４とＭＭＡＥの免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示し、ネクチン－４とＭＭＡＥの共局在を示す。

【図4】図Ａ～Ｂは、さまざまな濃度及び投与量で、単回の膀胱内投与のＥＶで処置されたＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの膀胱組織における遊離ＭＭＡＥを示す。

【図5】膀胱内ＥＶ全身曝露を示す。

【図6】滞留時間の異なる長さのＥＶの単回の膀胱内投与で処置されたＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの膀胱組織における遊離ＭＭＡＥを示す。

【図7】ＮＭＩＢＣを有する成人における膀胱内エンホルツマブベドチンの安全性、忍容性、ＰＫ及び抗腫瘍活性を評価するために設計された、第１相、非盲検、多施設、用量漸増及び用量拡大試験である第６．１節に記載された臨床試験のスキーマを示す。（ＢＣＧ＝カルメット・ゲラン菌；ＣＩＳ＝非浸潤癌；ＥＶ＝エンホルツマブベドチン；ｍＴＰＩ＝修正毒性確率区間；ｑ３＝３ごと；ｑ６＝６ごと；ＴＵＲＢＴ＝膀胱腫瘍の経尿道切除；ｗｋｌｙ＝週１回。所与用量での安全性、または計画された用量レベルより低いか、またはその中間的な用量レベルの調査が企図される。）

【発明を実施するための形態】

【0075】

５．詳細な説明
本開示をさらに説明する前に、本開示が本明細書に記載される特定の実施形態に限定されず、本明細書で使用される用語が特定の実施形態を記載するためのものに過ぎず、限定することを意図するものではないことは、理解されたい。

【0076】

膀胱内治療の効率的な使用において、少なくとも、注入量、滞留時間、用量濃度、総用量、注入液のｐＨ、尿のｐＨ、治療前及び治療中の尿量の減少などを含むさまざまな要因を考慮する必要があり、それにより、有効性と安全性との間の適切なバランスが達成される。本開示は、驚くべきことに、用量濃度及び総用量が、本明細書に開示されるＭＭＡＥ ＡＤＣなどのＡＤＣの効率的かつ安全な送達に対する最も重要な要因であることを決定した。本開示は、この知識を用いて、膀胱癌（例えば、非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ））を治療するためにＡＤＣの膀胱内投与を用いる様々な方法の開発に役立てた。

【0077】

５．１ 定義
本明細書に記載または参照される技術及び手順には、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｄ ｅｄ．２００１）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ ｅｄ．２００９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ ｅｄ．２０１０）；及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌｓ １ ａｎｄ ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）に記載されている広く利用されている方法などの、当業者によって従来の方法論を使用して一般によく理解されている及び／または一般に採用されているものが含まれる。

【0078】

本明細書で特に定義されない限り、本説明で使用される技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書を解釈する目的で、以下の用語の説明が適用され、必要に応じて、単数形で使用される用語は複数形も含み、その逆も同様である。記載される用語の説明が参照により本明細書に組み入れられる文書と矛盾する場合、以下に記載される用語の説明が優先されるものとする。

【0079】

「抗体」、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、以下に記載されるように、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、完全長または無傷のモノクローナル抗体を含む）、ポリエピトープ特異性またはモノエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナル抗体または一価抗体、多価抗体、少なくとも２つの無傷の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り、二重特異性抗体）、一本鎖抗体、及びそれらの断片を包含する。抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ及び／または親和性成熟抗体、ならびに他の種、例えば、マウス及びウサギ由来の抗体などであり得る。「抗体」という用語は、特定の分子抗原に結合することができ、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対が１本の重鎖（約５０～７０ｋＤａ）と１本の軽鎖（約２５ｋＤａ）とを有し、各鎖の各アミノ末端部分が約１００個～約１３０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分が定常領域を含む、免疫グロブリンクラスのポリペプチド内のＢ細胞のポリペプチド産物を含むことが意図されている。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９９５）；及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ ｅｄ．１９９７）を参照。具体的な実施形態では、特定の分子抗原は、ポリペプチドまたはエピトープを含む、本明細書で提供される抗体によって結合され得る。抗体には、合成抗体、組換え産生抗体、ラクダ化抗体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び上記のいずれかの機能的断片（例えば、抗原結合断片）も含まれるが、これらに限定されず、機能的断片とは、断片が由来する抗体の結合活性の一部または全部を保持する抗体の重鎖または軽鎖ポリペプチドの一部を指す。機能的断片（例えば、抗原結合断片）の非限定的な例としては、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）_２断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原結合ドメインまたは抗原に結合する抗原結合部位を含む分子（例えば、抗体の１つまたは複数のＣＤＲ）を含む。そのような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）；Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓ ｅｄ．，１９９５）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ２２：１８９－２２４；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７－５１５；及びＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２ｄ ｅｄ．１９９０）に見出すことができる。本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のものであり得る。抗体は、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体であってよい。

【0080】

「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る天然に存在する可能性のある変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に向けられる。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むことができるポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に向けられる。

【0081】

「抗原」は、抗体が選択的に結合することができる構造体である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、または他の天然または合成化合物の場合がある。いくつかの実施形態では、標的抗原はポリペプチドである。特定の実施形態では、抗原は、細胞と会合し、例えば細胞上または細胞内、例えばがん細胞上またはがん細胞内に存在する。

【0082】

「無傷の」抗体は、抗原結合部位ならびにＣＬならびに少なくとも重鎖定常領域、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常領域は、ヒト定常領域またはそのアミノ酸配列変異体を含む場合がある。特定の実施形態では、無傷の抗体は１つまたは複数のエフェクタ機能を有する。

【0083】

「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」という用語及び同様の用語は、抗原と相互作用し、抗原に対する特異性及び親和性を結合物質に付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分（例えば、ＣＤＲ）を指す。本明細書で使用される「抗原結合断片」には、無傷の抗体の一部、例えば、無傷の抗体の抗原結合領域または可変領域を含む「抗体断片」が含まれる。抗体断片の例としては、限定されることなく、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片；ダイアボディ及びジ－ダイアボディ（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：６４４４－４８；Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：１９６６５－７２；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－３４；国際公開公報第９３／１１１６１号；及び米国特許第５，８３７，２４２号及び同第６，４９２，１２３号を参照）；一本鎖抗体分子（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号；同第５，２６０，２０３号；同第５，４８２，８５８号；及び同第５，４７６，７８６号を参照）；二重可変ドメイン抗体（例えば、米国特許第７，６１２，１８１号を参照）；単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（例えば、Ｗｏｏｌｖｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５０：９８－１０１；及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１０１：１２４４４－４９を参照）；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。

【0084】

「結合する」または「結合すること」という用語は、例えば複合体を形成することを含む、分子間の相互作用を指す。相互作用は、例えば、水素結合相互作用、イオン結合相互作用、疎水性相互作用、及び／またはファンデルワールス相互作用を含む非共有結合相互作用であり得る。複合体はまた、共有結合もしくは非共有結合、相互作用、または力によって一緒に保持された２つまたはそれ以上の分子の結合を含み得る。抗体上の単一の抗原結合部位と抗原などの標的分子の単一のエピトープとの間の全非共有結合相互作用の強度が、そのエピトープに対する抗体または機能的断片の親和性である。一価抗原に対する結合分子（例えば、抗体）の解離速度（ｋ_ｏｆｆ）と会合速度（ｋ_ｏｎ）の比（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）が解離定数Ｋ_Ｄであり、これは親和性に反比例する。Ｋ_Ｄ値が低いほど、抗体の親和性が高い。Ｋ_Ｄの値は、抗体と抗原の異なる複合体で異なり、ｋ_ｏｎとｋ_ｏｆｆの両方に依存する。本明細書で提供される抗体の解離定数Ｋ_Ｄは、本明細書で提供される任意の方法または当業者に周知の任意の他の方法を使用して決定することができる。１つの結合部位における親和性は、必ずしも抗体と抗原との間の相互作用の真の強度を反映するとは限らない。多価抗原などの複数の反復抗原決定基を含む複合抗原が、複数の結合部位を含む抗体と接触する場合、１つの部位での抗体と抗原との相互作用は、第２の部位での反応の確率を高める。多価抗体と抗原との間のそのような複数の相互作用の強度は、アビディティと呼ばれる。

【0085】

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片に関連して、「に結合する」、「に特異的に結合する」などの用語及び類似の用語もまた、本明細書では互換的に使用され、ポリペプチドなどの抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインの結合分子を指す。抗原に結合するまたは抗原に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、関連する抗原と交差反応性である場合がある。特定の実施形態では、抗原に結合するまたは抗原に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、他の抗原と交差反応しない。抗原に結合するまたは抗原に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、または当業者に公知の他の技術によって同定することができる。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を使用して決定される任意の交差反応性抗原よりも高い親和性で抗原に結合する場合、抗原に結合するまたは抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的または選択的な反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を上回る場合もある。結合特異性に関する考察については、例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３２－３６（Ｐａｕｌ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９８９）を参照。特定の実施形態では、「非標的」タンパク質への抗体または抗原結合断片の結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析またはＲＩＡによって決定される場合、その特定の標的抗原への結合分子または抗原結合ドメインの結合の約１０％未満である。「特異的結合」、「に特異的に結合する」、または「に特異的である」などの用語は、非特異的相互作用と測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有さない類似の構造の分子である対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子、例えば過剰の非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、プローブへの標識標的の結合が過剰の非標識標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。抗原に結合する抗体または抗原結合断片は、結合分子が、例えば抗原を標的とする際の診断薬として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合することができるものを含む。特定の実施形態では、抗原に結合する抗体または抗原結合断片は、１０００ｎＭ未満、８００ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、２５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、もしくは０．１ｎＭ未満、または１０００ｎＭ、８００ｎＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、もしくは０．１ｎＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、異なる種由来の抗原間で（例えば、ヒト種とカニクイザル種との間で）保存されている抗原のエピトープに結合する。

【0086】

「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体などの結合タンパク質）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。特段の指示がない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間での１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合分子Ｘのその結合パートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野において既知の一般的な方法によって測定され得る。低親和性抗体は、一般に抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があるのに対し、高親和性抗体は、一般に抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で公知であり、そのいずれもが本開示の目的のために使用できる。具体的な例示的実施形態は、以下を含む。一実施形態では、「Ｋ_Ｄ」または「Ｋ_Ｄ値」は、当技術分野で公知のアッセイ、例えば結合アッセイによって測定され得る。Ｋ_Ｄは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われるＲＩＡで測定される場合がある（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３：８６５－８１）。Ｋ_ＤまたはＫ_Ｄ値はまた、例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ３８４システムを使用するＯｃｔｅｔ（登録商標）による、または例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００もしくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００を使用するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）による、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）または表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用することによって測定される場合がある。「オンレート」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」もまた、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ３８４、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００システムを使用して、上述したのと同じバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）または表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を用いて決定される場合がある。

【0087】

特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（１本または複数）の残りが、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である「キメラ」配列、ならびに、所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体の断片を含むことができる（米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－５５を参照）。

【0088】

特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、天然ＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性及び能力を含む、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長動物などの非ヒト種の対応するＣＤＲ（例えば、ドナー抗体）からの残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）を含むキメラ抗体である非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態の部分を含むことができる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つまたは複数のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。ヒト化抗体の重鎖または軽鎖は、少なくとも１つまたは複数の可変領域の実質的に全てを含むことができ、ＣＤＲの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２９；Ｐｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－９６；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９；米国特許第６，８００，７３８号；同第６，７１９，９７１号；同第６，６３９，０５５号；同第６，４０７，２１３号；及び同第６，０５４，２９７号を参照。

【0089】

特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、「完全ヒト抗体」または「ヒト抗体」の一部を含むことができ、これらの用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒト可変領域及び、例えばヒト定常領域を含む抗体を指す。具体的な実施形態では、これらの用語は、ヒト起源の可変領域及び定常領域を含む抗体を指す。「完全ヒト」抗体は、特定の実施形態では、ポリペプチドに結合し、ヒト生殖系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞変異体である核酸配列によってコードされる抗体も包含し得る。「完全ヒト抗体」という用語は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）によって記載されているヒト生殖系列免疫グロブリン配列に対応する可変領域及び定常領域を含む抗体を含む。「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／またはヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１）及び酵母ディスプレイライブラリ（Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：７５５－６８）を含む、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５；及びｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４に記載されている方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えばマウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１－６６；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５－５８；及びＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照）。また、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関するＬｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：３５５７－６２も参照のこと。

【0090】

特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、「組換えヒト抗体」の一部を含むことができ、この語句は、組換え手段によって調製、発現、作製または単離されるヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現される抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニック及び／またはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウスもしくはウシ）から単離される抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７－６２９５を参照）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製もしくは単離される抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有することができる（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物を使用する場合、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）に供され、したがって、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、それらに関連するが、ｉｎ ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリ内に天然には存在しない可能性のある配列である。

【0091】

特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、「モノクローナル抗体」の一部を含むことができ、本明細書で使用されるこの用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量存在する場合がある天然に存在する可能性のある変異を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は、典型的には抗原上の単一のエピトープを認識する。具体的な実施形態では、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマまたは他の細胞によって産生される抗体である。「モノクローナル」という用語は、抗体を作製するための特定の方法に限定されない。例えば、本開示において有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって調製されてよいか、または細菌もしくは真核動物もしくは植物細胞において組換えＤＮＡ法を使用して作製されてよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７に記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離されてよい。クローン細胞株及びそれによって発現されるモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００２）を参照。

【0092】

典型的な４鎖抗体単位は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖と２本の同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般に約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結され、２本のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つまたは複数のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ鎖及びＬ鎖はまた、規則的な間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いてα鎖及びγ鎖のそれぞれについて３つの定常ドメイン（ＣＨ）、μアイソタイプ及びεアイソタイプについて４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いて他方の末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬはＶＨと整列し、ＣＬは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列する。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの接触面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬとの対形成は、単一の抗原結合部位を形成する。様々なクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７１（Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，８ｔｈ ｅｄ．１９９４）；及びＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５^ｔｈ ｅｄ．２００１）を参照。

【0093】

「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」という用語は、抗原に結合する抗体領域を指す。従来のＩｇＧは、通常、それぞれがＹ字型ＩｇＧ構造の２つのアームの一方に存在する、２つのＦａｂ領域を含む。各Ｆａｂ領域は、典型的には、重鎖及び軽鎖のそれぞれの１つの可変領域と１つの定常領域で構成される。より具体的には、Ｆａｂ領域における重鎖の可変領域及び定常領域はＶＨ及びＣＨ１領域であり、Ｆａｂ領域における軽鎖の可変領域及び定常領域はＶＬ及びＣＬ領域である。Ｆａｂ領域内のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬは、本開示による抗原結合能力を付与するために様々な方法で配置することができる。例えば、従来のＩｇＧのＦａｂ領域と同様に、ＶＨ及びＣＨ１領域は１つのポリペプチド上にあり得、ＶＬ及びＣＬ領域は別個のポリペプチド上にあり得る。あるいは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ及びＣＬ領域は全て同じポリペプチド上にあり得、以下の節でより詳細に説明するように異なる順序で配向され得る。

【0094】

「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」または「Ｖドメイン」という用語は、一般に軽鎖または重鎖のアミノ末端に位置し、重鎖では約１２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、軽鎖では約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸の長さを有し、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性に使用される、抗体の軽鎖または重鎖の一部を指す。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と称される場合がある。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と称される場合がある。「可変」という用語は、可変領域の特定のセグメントが抗体間で配列が大きく異なるという事実を指す。Ｖ領域は、抗原結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を規定する。しかしながら、可変性は、可変領域の１１０アミノ酸スパンにわたって均一に分布していない。代わりに、Ｖ領域は、それぞれが約９～１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれるより大きな可変性（例えば、極端な可変性）のより短い領域によって分離された、約１５アミノ酸～約３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより可変性の低い（例えば、比較的不変の）ストレッチからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、βシート構造を接続し、場合によってはβシート構造の一部を形成するループを形成する３つの超可変領域によって接続された、主にβシート形状を採用する４つのＦＲを含む。各鎖の超可変領域は、ＦＲによって近接して一緒に保持され、他方の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ ｅｄ．１９９１）を参照）。定常領域は、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与などの様々なエフェクタ機能を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列が大きく異なる。具体的な実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。

【0095】

「Ｋａｂａｔによる可変領域残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにおけるようなアミノ酸位置ナンバリング」という用語、及びその変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．前出における抗体の編集物の重鎖可変領域または軽鎖可変領域に使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＣＤＲの短縮またはＦＲもしくはＣＤＲへの挿入に対応するより少ないまたは追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び残基８２の後に３つの挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含む場合がある。残基のＫａｂａｔナンバリングは、抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同性領域でのアラインメントによって、所与の抗体について決定され得る。Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、一般に、可変ドメイン中の残基（およそ軽鎖の残基１～１０７及び重鎖の残基１～１１３）を指す場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．前出）。「ＥＵナンバリングシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基を指す場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．前出に報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。他のナンバリングシステムは、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎによって記載されている。

【0096】

「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、アミノ末端部分は約１２０～１３０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と称される５つの異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）のうちの１つであり得る。異なる重鎖はサイズが異なり、α、δ及びγは約４５０個のアミノ酸を含み、μ及びεは約５５０個のアミノ酸を含む。軽鎖と組み合わせると、これらの異なるタイプの重鎖は、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む、それぞれ５つの周知のクラス（例えば、アイソタイプ）の抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを生じる。

【0097】

「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、アミノ末端部分は約１００個～約１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。軽鎖のおおよその長さは、２１１アミノ酸～２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）またはラムダ（λ）と称される２つの異なるタイプがある。

【0098】

本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、「相補性決定領域」、及び「ＣＤＲ」という用語は互換的に使用される。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２もしくはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）のうちの１つを指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。

【0099】

ＣＤＲ領域は当業者に周知であり、周知のナンバリングシステムによって定義されている。例えば、Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．前出を参照）。代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７を参照）。Ｋａｂａｔのナンバリング規則を使用して番号付けした場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協点を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）を参照）。「接触」超可変領域は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている。開発され、広く採用されている別のユニバーサルナンバリングシステムは、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７）である。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。本明細書では、ＣＤＲは、アミノ酸配列及び軽鎖または重鎖内の位置の両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存され、ループと呼ばれる構造内に存在するので、構造的特徴に従って可変ドメイン配列を整列させるナンバリングシステムを使用することによって、ＣＤＲ及びフレームワーク残基が容易に同定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプタフレームワークに移植及び置換する際に使用することができる。さらなるナンバリングシステム（ＡＨｏｎ）が、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－７０によって開発されている。例えば、Ｋａｂａｔナンバリング及びＩＭＧＴ固有のナンバリングシステムを含むナンバリングシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ前出；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，前出；Ｍａｒｔｉｎ，前出；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．前出を参照）。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれからの残基を、以下の表１に示す。

【0100】

（表１）

【0101】

所与のＣＤＲの境界は、同定のために使用されるスキームによって異なる場合がある。したがって、特に指定されない限り、所与の抗体またはその領域、例えば可変領域の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語、ならびに抗体またはその領域の個々のＣＤＲ（例えば、「ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２）は、本明細書中上記に記載される公知のスキームのいずれかによって定義される相補性決定領域を包含すると理解されるべきである。場合によっては、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＣｏｎｔａｃｔ法によって定義されるＣＤＲなどの、特定の１つまたは複数のＣＤＲを同定するためのスキームが指定される。他の場合には、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が与えられる。

【0102】

超可変領域は、以下のような「拡張超可変領域」を含む場合がある：ＶＬにおける２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおける２６～３５または２６～３５Ａ（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、または９５～１０２（Ｈ３）。

【0103】

「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクタ機能を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含む免疫グロブリンの他の部分、可変領域と比較してより保存されたアミノ酸配列を含む免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域ならびに軽鎖のＣＬ領域を含む場合がある。

【0104】

「フレームワーク」または「ＦＲ」という用語は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基を指す。ＦＲ残基は、例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、ドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基またはＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0105】

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組換えＦｃ領域、及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、多くの場合、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端までに及ぶと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去し得る。したがって、無傷の抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体の混合物を含む抗体集団を含む場合がある。「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクタ機能」を有する。例示的な「エフェクタ機能」には、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御などが含まれる。そのようなエフェクタ機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合領域または結合ドメイン（例えば、抗体可変領域または抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、当業者に公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、置換、付加、または欠失）によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１個～約１０個のアミノ酸置換、または約１個～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、またはそれらと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それらと少なくとも約９５％の相同性を有し得る。

【0106】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」は当技術分野の用語であり、結合分子（例えば、抗体）が特異的に結合することができる抗原の局所領域を指す。エピトープは、線状エピトープ、立体配座エピトープ、非線状エピトープ、または不連続エピトープであり得る。ポリペプチド抗原の場合、例えば、エピトープは、ポリペプチドの連続するアミノ酸であり得るか（「線状」エピトープ）、またはエピトープは、ポリペプチドの２つまたはそれ以上の不連続な領域由来のアミノ酸を含み得る（「立体配座」、「非線状」または「不連続」エピトープ）。一般に、線状エピトープは、二次、三次、または四次構造に依存しても依存しなくてもよいことが当業者には理解されるであろう。例えば、いくつかの実施形態では、結合分子は、天然の三次元タンパク質構造に折り畳まれているかどうかにかかわらず、アミノ酸の群に結合する。他の実施形態では、結合分子は、エピトープを認識して結合するために、特定の立体配座（例えば、屈曲、ねじれ、回転、または折り畳み）を示すようにエピトープを構成するアミノ酸残基を必要とする。

【0107】

「ポリペプチド」及び「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖または分岐鎖であってよく、修飾アミノ酸を含んでよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。この用語はまた、天然にまたは介入によって、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾によって修飾されたアミノ酸ポリマーを包含する。非天然アミノ酸を含むがこれらに限定されるわけではないアミノ酸の１つまたは複数の類似体、ならびに当技術分野で公知の他の修飾を含むポリペプチドも定義に含まれる。本開示のポリペプチドは、抗体または免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーに基づいてよいため、特定の実施形態では、「ポリペプチド」は、一本鎖として、または２つもしくはそれ以上の関連鎖として存在することができることが理解される。

【0108】

本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、連邦もしくは州政府の規制機関によって承認されていること、または動物、より具体的にはヒトでの使用について米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般に認められている薬局方に記載されていることを意味する。

【0109】

「賦形剤」は、液体または固体の充填剤、希釈剤、溶媒、または封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。賦形剤には、例えば、吸収促進剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香味剤、保湿剤、潤滑剤、香料、防腐剤、噴射剤、放出剤、滅菌剤、甘味料、可溶化剤、湿潤剤及びそれらの混合物などの封入材料または添加剤が含まれる。「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全もしくは不完全）またはビヒクルを指すこともできる。

【0110】

一実施形態では、各成分は、薬学的製剤の他の成分と適合性であり、合理的な利益／リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症なしにヒト及び動物の組織または器官と接触して使用するのに適しているという意味で「薬学的に許容される」。例えば、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ ｅｄ．；Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ ｅｄ．；Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．；Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００９を参照。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、使用される投与量及び濃度で、それに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、ｐＨ緩衝水溶液である。

【0111】

「ＭＭＡＥ」という略語は、モノメチルアウリスタチンＥを指す。

【0112】

文脈上特に指示されない限り、ハイフン（－）はペンダント分子への結合点を指定する。

【0113】

「化学療法剤」という用語は、腫瘍増殖を阻害するのに有効な全ての化学化合物を指す。化学療法剤の非限定的な例としては、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン化合物及びアルキルスルホネート；代謝拮抗剤、例えば、葉酸、プリンまたはピリミジンアンタゴニスト；有糸分裂阻害剤、例えば、ビンカアルカロイド、アウリスタチン及びポドフィロトキシンの誘導体などの抗チューブリン剤；細胞傷害性抗生物質；ＤＮＡの発現または複製を損傷または妨害する化合物、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤；ならびに成長因子受容体アンタゴニストが挙げられる。さらに、化学療法剤には、細胞傷害剤（本明細書で定義されるような）、抗体、生物学的分子及び小分子が含まれる。

【0114】

本明細書で使用される場合、「保存的置換」という用語は、当業者に公知であり、一般に、得られる分子の生物学的活性を変化させることなく行われる可能性があるアミノ酸の置換を指す。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換が生物学的活性を実質的に変化させないことを認識する（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ ＯＦ ＴＨＥ ＧＥＮＥ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ １９８７）を参照）。そのような例示的な置換は、好ましくは、表２及び表３に示される置換に従って行われる。例えば、そのような変化には、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）及びロイシン（Ｌ）のいずれかをこれらの疎水性アミノ酸のいずれか他のもので置換すること；グルタミン酸（Ｅ）をアスパラギン酸（Ｄ）で置換すること及びその逆；アスパラギン（Ｎ）をグルタミン（Ｑ）で置換すること及びその逆；ならびにスレオニン（Ｔ）をセリン（Ｓ）で置換すること及びその逆が含まれる。他の置換もまた、特定のアミノ酸の環境及びタンパク質の三次元構造におけるその役割に応じて、保存的であると考えることができる。例えば、アラニン（Ａ）及びバリン（Ｖ）と同様に、グリシン（Ｇ）及びアラニン（Ａ）はしばしば交換可能であり得る。比較的疎水性であるメチオニン（Ｍ）は、ロイシン及びイソロイシンとしばしば交換され得、時にバリンとも交換され得る。リジン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）は、アミノ酸残基の重要な特徴がその電荷であり、これらの２つのアミノ酸残基の異なるｐＫが重要ではない位置においてしばしば交換可能である。さらに他の変化は、特定の環境では「保存的」と考えることができる（例えば、本明細書の表３；ｐａｇｅｓ １３－１５’’Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ’’２ｎｄ ＥＤ．Ｌｕｂｅｒｔ Ｓｔｒｙｅｒ ｅｄ（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １９９２ Ｖｏｌ ８９ １０９１５－１０９１９；Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９５ Ｍａｙ １９；２７０（２０）：１１８８２－１１８８６を参照）。他の置換も許容され、経験的にまたは公知の保存的置換に従って決定されてよい。

【0115】

（表２）アミノ酸の略語

【0116】

（表３）アミノ酸置換または類似性マトリックス
ＧＣＧソフトウェア９．０ ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリックス（ブロック置換マトリックス）から適合。値が高いほど、関連する天然タンパク質において置換が見出される可能性が高い。

【0117】

「相同性」または「相同な」という用語は、２つのポリヌクレオチド間または２つのポリペプチド間の配列類似性を意味することを意図している。類似性は、比較の目的で整列させることができる、各配列における位置を比較することによって決定することができる。２つのポリペプチド配列の所与の位置が同一でない場合、その位置の類似性または保存性は、例えば表３に従ってその位置のアミノ酸の類似性を評価することによって決定することができる。配列間の類似性の程度は、配列によって共有される一致する位置または相同な位置の数の関数である。配列類似性パーセントを決定するための２つの配列のアラインメントは、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ（１９９９）に記載されているものなどの、当技術分野で公知のソフトウェアプログラムを使用して行うことができる。好ましくは、アライメントにはデフォルトパラメータが使用され、その例を以下に示す。使用できる当技術分野で周知の１つのアライメントプログラムは、デフォルトパラメータに設定したＢＬＡＳＴである。特に、プログラムは、以下のデフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰである：遺伝暗号＝標準；フィルタ＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；説明＝５０配列；ソート順＝ハイスコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ翻訳＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎで見ることができる。

【0118】

所与のアミノ酸配列または核酸配列の「ホモログ」という用語は、所与のアミノ酸配列または核酸配列に対して実質的な同一性または相同性を有する「ホモログ」の対応する配列を示すことを意図している。

【0119】

２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３ ５８７７におけるように修正された、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４ ２２６８のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本明細書に記載の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、例えば、スコア＝１００、ワード長＝１２に設定したＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータを用いて実施することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に記載のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア５０、ワード長＝３に設定したＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータを用いて実施することができる。比較のためにギャップのあるアラインメントを得るには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９ ３４０２に記載されているようにＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。あるいは、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の遠隔関係を検出する反復検索を実施することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワールドワイドウェブ、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照）。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１ １７のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用することができる。

【0120】

２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容してまたは許容せずに、上記と同様の技術を用いて決定することができる。同一性パーセントの計算では、典型的には、正確な一致のみがカウントされる。

【0121】

「細胞傷害剤」という用語は、細胞の発現活性、細胞の機能を阻害もしくは防止し、及び／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位体、化学療法剤、ならびに断片及び／またはバリアントを含む、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素などの毒素を含むことを意図している。細胞傷害剤の例としては、アウリスタチン（例えば、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦ、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）、オーレオマイシン、メイタンシノイド、リシン、リシンＡ鎖、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキソール、シスプラチン、ｃｃ１０６５、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、キュリシン、クロチン、カリケアマイシン、サボンソウ（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、及びグルココルチコイドならびに他の化学療法剤、ならびにＡｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２またはＢｉ^２１３、Ｐ^３２などの放射性同位体、及びＬｕ^１７７を含むＬｕの放射性同位元素が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。抗体はまた、プロドラッグをその活性形態に変換することができる抗がんプロドラッグ活性化酵素に複合化されてよい。

【0122】

本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」という用語は、所望の結果をもたらすのに十分な、本明細書で提供される結合分子（例えば、抗体）または薬学的組成物の量を指す。

【0123】

「対象」及び「患者」という用語は、同義に使用されてよい。本明細書で使用される場合、特定の実施形態では、対象は、非霊長動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長動物（例えば、サル及びヒト）などの哺乳動物である。特定の実施形態では、対象はヒトである。一実施形態では、対象は、状態または障害と診断された哺乳動物、例えばヒトである。別の実施形態では、対象は、状態または障害を発症するリスクがある哺乳動物、例えばヒトである。

【0124】

「投与する」または「投与」は、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内送達、及び／または本明細書に記載されているもしくは当技術分野で公知の任意の他の物理的送達方法などによって、体外に存在する物質を患者に注射または他の方法で物理的に送達する行為を指す。

【0125】

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、１つまたは複数の治療法の投与に起因する疾患または状態の進行、重症度、及び／または持続期間の減少または改善を指す。治療は、患者が依然として基礎疾患に罹患している可能性があるにもかかわらず、患者に関して改善が観察されるように、基礎疾患に関連する１つまたは複数の症状の減少、緩和及び／または軽減があったかどうかを評価することによって決定される場合がある。「治療すること」という用語は、疾患の管理と改善の両方を含む。「管理する」、「管理すること」、及び「管理」という用語は、対象が必ずしも疾患の治癒をもたらさない治療法から得る有益な効果を指す。

【0126】

「予防する」、「予防すること」、及び「予防」という用語は、疾患、障害、状態、または関連する１つもしくは複数の症状（例えば、がん）の発症（または再発）の可能性を低減することを指す。

【0127】

「がん」または「がん細胞」という用語は、本明細書では、正常な組織または組織細胞からそれを区別する特性を有する、新生物に見られる組織または細胞を示すために使用される。そのような特性には、退形成の程度、形状の不規則性、細胞輪郭の不明瞭さ、核の大きさ、核または細胞質の構造の変化、他の表現型の変化、がんまたは前がん状態を示す細胞タンパク質の存在、有糸分裂の数の増加、及び転移する能力が含まれるが、これらに限定されるわけではない。「がん」に関連する単語には、癌腫、肉腫、腫瘍、上皮腫、白血病、リンパ腫、ポリープ、及び硬性がん、形質転換、新生物などが含まれる。

【0128】

本明細書で使用される場合、「局所進行性」がんとは、出現した場所から近くの組織またはリンパ節へと広がったがんを指す。

【0129】

本明細書で使用される場合、「転移性」がんとは、それが出現した場所から身体の別の場所へと広がったがんを指す。

【0130】

「膀胱内投与」という用語は、尿道カテーテルの挿入を介して治療薬を直接膀胱内に注入することを指す。

【0131】

「滞留時間」という用語は、治療物質が治療された対象の特定の部分または器官（例えば、膀胱）に保持される時間の長さを指す。

【0132】

「約」及び「およそ」という用語は、所与の値または範囲の２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、またはそれ未満を意味する。

【0133】

本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別段の指示がない限り、複数形を含む。

【0134】

実施形態が「含む」という用語を用いて本明細書で説明される場合は常に、「からなる」及び／または「から本質的になる」に関して説明される他の類似の実施形態も提供されることが理解される。また、実施形態が「から本質的になる」という語句を用いて本明細書で説明される場合は常に、「からなる」に関して説明される他の類似の実施形態も提供されることが理解される。

【0135】

本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、ＡとＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことが意図されている。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図されている。

【0136】

「バリアント」という用語は、具体的に記載されたタンパク質（例えば、図１Ａに示す１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質）の対応する位置（複数可）に１つまたは複数の異なるアミノ酸残基を有するタンパク質などの、記載されたタイプまたは基準からの変異を示す分子を指す。類似体はバリアントタンパク質の一例である。スプライスアイソフォーム及び一塩基多型（ＳＮＰ）は、バリアントのさらなる例である。

【0137】

本開示の「１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質」及び／または「１９１Ｐ４Ｄ１２関連タンパク質」には、本明細書で具体的に特定されるもの（図１Ａを参照）、ならびに本明細書に概説される方法または当技術分野で容易に利用可能な方法に従って過度の実験をすることなく単離／生成及び特性評価することができる対立遺伝子バリアント、保存的置換バリアント、類似体及びホモログが含まれる。異なる１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質の一部またはその断片を組み合わせる融合タンパク質、及び１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質と異種ポリペプチドとの融合タンパク質も含まれる。そのような１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質は、集合的に１９１Ｐ４Ｄ１２関連タンパク質、本開示のタンパク質、または１９１Ｐ４Ｄ１２と呼ばれる。「１９１Ｐ４Ｄ１２関連タンパク質」という用語は、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、もしくは２５を超えるアミノ酸、または少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１０５、少なくとも１１０、少なくとも１１５、少なくとも１２０、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、少なくとも１４５、少なくとも１５０、少なくとも１５５、少なくとも１６０、少なくとも１６５、少なくとも１７０、少なくとも１７５、少なくとも１８０、少なくとも１８５、少なくとも１９０、少なくとも１９５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３３０、少なくとも３３５、少なくとも３３９もしくはそれ以上のアミノ酸のポリペプチド断片または１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質配列を指す。「１９１Ｐ４Ｄ１２」という用語は、ネクチン－４と交換可能に使用される。

【0138】

５．２ 選択された患者に対する非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）の治療方法
１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の膀胱内投与を介してヒト対象における膀胱癌を治療するための方法が、本明細書において提供される。

【0139】

一態様では、ヒト対象における膀胱癌を治療する方法であって、本明細書で提供されるのは、該対象に有効量の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を膀胱内投与することを含み、該ＡＤＣが、
モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）の１単位以上にコンジュゲートした、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含む、方法を提供する。

【0140】

いくつかの実施形態では、該膀胱癌が非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）である。いくつかの実施形態では、ＮＭＩＢＣが組織学的に確認されている。いくつかの実施形態では、ＮＭＩＢＣが上皮内癌（ＣＩＳ）ある。いくつかの実施形態では、ＮＭＩＢＣが組織学的に上皮内癌（ＣＩＳ）として確認されている。特定の実施形態では、該対象が乳頭状疾患を有する。特定の実施形態では、該対象が乳頭状疾患を有さない。特定の実施形態では、該ＮＭＩＢＣが組織学的に確認されており、主な組織学的成分（＞５０％）が尿路上皮（移行上皮）癌である。

【0141】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、高リスクのカルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）非応答性疾患を有する。特定の実施形態では、高リスクＢＣＧ非応答性疾患は、適切なＢＣＧ療法終了後１２ヵ月以内のＣＩＳ単独または再発Ｔａ／Ｔ１（非浸潤性乳頭状疾患／腫瘍が上皮下結合組織に浸潤）疾患の持続または再発と定義される。特定の実施形態では、適切なＢＣＧ療法とは、初回誘導コース６回のうち５回投与＋維持療法３回のうち少なくとも２回投与として定義される。特定の実施形態では、適切なＢＣＧ療法とは、初回誘導コース６回のうち５回投与＋２回目誘導コース６回のうち少なくとも２回投与として定義される。

【0142】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、根治的膀胱全摘除術に不適格である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、根治的膀胱全摘除術を受けることを拒否している。

【0143】

いくつかの実施形態では、該対象の、目に見える全ての乳頭状Ｔａ／Ｔ１腫瘍が、前記治療前６０日以内に完全に切除されている。いくつかの実施形態では、該対象が、残留する純粋なＣＩＳを有する。いくつかの実施形態では、該対象は、残留する純粋なＣＩＳを有さない。

【0144】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、満足な膀胱機能と、前投薬があっても、本明細書に提供されるＡＤＣの点滴注入を少なくとも１時間保持する能力とを有する。いくつかの実施形態では、ヒト対象が少なくとも１８歳である。いくつかの実施形態では、ヒト対象の推定平均余命が２年を超える。

【0145】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが０である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが１である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが２である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態スコアが２であり、対象の糸球体濾過率（ＧＦＲ）が５０ｍＬ／分以上であり、対象は、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩの心不全を有さない。

【0146】

前段落の方法を含む、本明細書に提供される方法のさらなる実施形態において、本明細書に提供される方法を使用できるヒト対象は、種々の他の状態を有するヒト対象である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、１５００／μＬ以上の絶対好中球数（ＡＮＣ）の状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、１０ｇ／ｄＬ以上のヘモグロビン（Ｈｇｂ）の状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、１００，０００／μＬ以上の血小板数の状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、１．５×ＵＬＮ以下の正常（ＵＬＮ）、またはジルベール病を有する対象の場合に３×ＵＬＮ以下の血清ビリルビンの状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、３０ｍＬ／分以上のクレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）の計算値の状態を有する。いくつかの実施形態では、ＣｒＣｌは、Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ法または腎疾患における食生活改善（ＭＤＲＤ）式を用いて計算される。いくつかの態様では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、３０ｍＬ／分以上のＧＦＲの状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＥＣＯＧ活動状態が２であり、ＧＦＲが５０ｍＬ／分以上である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の状態が３×ＵＬＮ以下である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＰＴまたはａＰＴＴが抗凝固薬の使用目的の治療範囲内である限りにおいて、ヒト対象が抗凝固薬治療を受けている場合を除き、国際標準化比（ＩＮＲ）、またはプロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）もしくは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が１．５ＵＬＮ以下である状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、本段落に記載される複数の状態を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、本段落に記載される全ての状態を有する。

【0147】

前段落の方法を含む、本明細書に提供される方法のさらなる実施形態では、本明細書に提供される方法を使用できるヒト対象は、特定の状態を有さないヒト対象である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、筋肉浸潤性尿路上皮癌（すなわち、Ｔ２、Ｔ３、またはＴ４疾患）または転移性疾患の現在または以前の病歴を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＡＤＣによる治療前３ヵ月以内に行われるコンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）に示されるような結節または転移性疾患を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＡＤＣによる治療前３ヵ月以内に実施された腹部／骨盤の造形を伴うＣＴまたはＭＲＩ尿路造影図に示された、随伴する上路尿路上皮癌を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＡＤＣによる治療前６ヵ月以内に、前立腺尿道の尿路上皮癌の既往または随伴がない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＡＤＣの投与前に腫瘍関連水腎症を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、本明細書に提供される方法による治療の最初の投与から４週間以内に全身性抗癌療法（例えば、化学療法、生物学的療法、免疫療法、標的療法、内分泌療法、治験薬）を受けておらず、または本明細書に提供される方法による治療の開始前６週間以内にＮＭＩＢＣの治療のための任意の膀胱内療法を受けない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、本明細書に提供される方法による治療開始前の１４～６０日間に、ＴＵＲＢＴ手順の直後に細胞傷害性剤（例えば、マイトマイシンＣ、ドキソルビシン、及びゲムシタビン）の単回点滴を受ける。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＮＭＩＢＣのための先行治療に関連する有害事象（ＡＥ）に続発する症状（グレード２以上）を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、尿路上皮癌の治療のために膀胱への放射線を事前に受けない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、活性感染を有さず、対象は、ＡＤＣによる治療開始前１４日以内に全身性（例えば、経口または静脈内）抗生物質で治療される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、膀胱内投与または膀胱内外科的操作に耐性がある。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、本明細書に提供される方法による治療前の３年以内に悪性腫瘍の病歴、または以前に診断された悪性腫瘍からの残存病変の任意の証拠を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、適切に治療された子宮頸部のＣＩＳ、非黒色腫皮膚癌、乳房の管ＣＩＳ、またはステージＩ子宮癌など、転移または死亡のリスクが無視できるほど小さい（例えば、５年全生存率［ＯＳ］≧９０％）。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、本明細書に提供される方法による治療の少なくとも１年前に、確定的意図で（外科的にまたは放射線療法で）治療された前立腺癌（Ｔ２Ｎ０Ｍ０以下、グリソンスコア≦７）の病歴を有し、その前提として、該対象が前立腺癌でないと考えられ、（１）根治的前立腺切除術を受けた対象は、ＡＤＣの投与前の１年超にわたり、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が検出されず、かつ、（２）放射線照射を受けた対象は、ＰＳＡ倍加時間が１年超（１ヵ月超の間隔をおいて測定された少なくとも３つの値に基づく）であり、かつ全ＰＳＡ値が生化学的再発のＰｈｏｅｎｉｘ基準を満たさない（すなわち、最下点より＜２．０ ｎｇ／ｍＬ）、という基準が満たされる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ネクチン－４標的療法またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）含有剤に曝露されたことがない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、自己免疫性または炎症性皮膚障害を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、乾癬またはアトピー性皮膚炎を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、進行中の感覚神経障害または運動神経障害グレード２以上を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、陽性Ｂ型肝炎表面抗原及び／または抗Ｂ型肝炎コア抗体を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、Ｂ型肝炎のネガティブポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイを有し、適切な抗ウイルス予防を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、活動性のＣ型肝炎感染または公知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、活動性結核を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、制御されない糖尿病を有さない。いくつかの実施形態では、無制御の糖尿病は、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）≧８％、またはＨｂＡ１ｃが７％～８％未満であり、関連する糖尿病症状（多尿症または多飲症）を伴う対象として定義される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、ＡＤＣの初回投与前６ヵ月以内に、脳血管事象（例えば、脳卒中または一過性虚血発作）、不安定狭心症、心筋梗塞、またはＮＹＨＡクラスＩＩＩ－ＩＶと一致する心臓症状を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、エンホルツマブベドチン、またはエンホルツマブベドチンの薬物製剤中に含有される任意の賦形剤（例えば、ヒスチジン、トレハロース二水和物、及び／またはポリソルベート２０）に対して重篤な（≧グレード３）過敏症を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、活動性の角膜炎または角膜潰瘍を有さない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で治療されるヒト対象は、点状表層角膜炎を有する。

【0148】

特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、１９１Ｐ４Ｄ１２ ＲＮＡを発現する、１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質を発現する、または１９１Ｐ４Ｄ１２ ＲＮＡ及び１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質の両方を発現する、非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）を有する対象を治療するために使用される。

【0149】

いくつかの実施形態では、がんにおける１９１Ｐ４Ｄ１２ ＲＮＡ発現は、ポリヌクレオチドハイブリダイゼーション、配列決定（配列の相対的存在量を評価する）、及び／またはＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲを含む）によって決定される。いくつかの実施形態では、がんにおける１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質の発現は、ＩＨＣ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）における分析、及び／またはウェスタンブロット法によって決定される。いくつかの実施形態では、がんにおける１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質の発現は、２つ以上の方法によって決定される。いくつかの実施形態では、がんにおける１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質の発現は、ＩＨＣの２つの方法によって決定される。

【0150】

いくつかの実施形態では、非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）は、組織学的、細胞学的、または組織学的及び細胞学的の両方で確認される。

【0151】

別の態様では、本明細書において提供されるのは、ヒト対象におけるＮＭＩＢＣを治療する方法であり、有効量の抗体薬物複合体を対象に投与するステップを含み、抗体薬物複合体が、
１単位以上のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）にコンジュゲートした、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含み、抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２２に示す重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域と、配列番号２３に示す軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含み、ここで、対象が、第６節で提供される任意の適切な特性を有する。

【0152】

別の態様では、本明細書において提供されるのは、ヒト対象におけるがんを予防または治療する方法であり、有効量の抗体薬物複合体を対象に投与するステップを含み、抗体薬物複合体が、
１単位以上のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）にコンジュゲートした、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含み、抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２２に示す重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域と、配列番号２３に示す軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含み、ここで、がんは、第６節で提供される任意の適切なマーカー及び／または特性を有する。

【0153】

さらに別の態様では、本明細書において提供されるのは、ヒト対象におけるがんを予防または治療する方法であり、有効量の抗体薬物複合体を対象に投与するステップを含み、抗体薬物複合体が、
１単位以上のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）にコンジュゲートした、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含み、ここで、対象が、第６節で提供される任意の適切な特性を有する。さらなる態様では、本明細書において提供されるのは、ヒト対象におけるがんを予防または治療する方法であり、有効量の抗体薬物複合体を対象に投与するステップを含み、抗体薬物複合体が、
１単位以上のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に結合した、１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片
を含み、ここで、がんは、第６節で提供される任意の適切なマーカー及び／または特性を有する。

【0154】

本明細書に提供される全ての方法、特に前段落で記載される方法において、使用され得るＡＤＣは、第３、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６及び６節で記載され、治療のための患者の選択は、本明細書で記載され、本節（第５．２節）及び第３と６節で例示され、治療薬を投与するための投薬レジメン及び医薬組成物は、以下第５．４、５．６、６節に記載され、治療薬の同定、患者の選択、これらの方法の結果の決定、及び／またはこれらの方法の基準として機能するために使用できるバイオマーカーは、本明細書に記載され、本節及び第６節に例示され、バイオマーカーは、第５．７節または当技術分野で知られるように決定され、本明細書で提供される方法の治療成績は、本節（第５．２節）及び第３と６節に記載され、本明細書で提供される方法の追加の治療成績は、本明細書に記載されるバイオマーカーの改善であり得、例えば、本節（第５．２節）及び第３と６節に記載され例示されるものであり、ＡＤＣと他の治療薬を含む併用療法は、本節と第５．５節に記載される。従って、当業者であれば、本明細書に提供される方法が、上述及び後述する患者、治療薬、投薬レジメン、バイオマーカー、及び治療成績の全ての順列と組み合わせを含むことを理解するであろう。

【0155】

５．３ 本方法のための抗体薬物複合体
第５．２節で提供される方法を含む、本明細書で提供される方法の様々な実施形態では、本方法で使用されるＡＤＣは、本明細書及び／または米国特許第８，６３７，６４２号（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載される抗１９１Ｐ４Ｄ１２ ＡＤＣを含むか、またはそれである。いくつかの実施形態では、本明細書の方法のために提供される抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体薬物複合体は、第３及び６節ならびに第５．３．２及び５．３．４節におけるさらなる開示を含む本節（第５．３節）のものを含む、本明細書で提供されるような細胞傷害剤の１つ以上の単位（薬物単位、またはＤ）に複合化された、第３、５．３．１、及び６節のものを含む、本明細書で提供されるような１９１Ｐ４Ｄ１２に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、細胞傷害剤（薬物単位、またはＤ）は、本明細書で提供されるように直接またはリンカー単位（ＬＵ）を介して共有結合され得、第３及び６節ならびに第５．３．３節におけるさらなる開示を含む本節（５．３節）のものを含む。

【0156】

いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体化合物は、以下の式：
Ｌ－（ＬＵ－Ｄ）_ｐ（Ｉ）
を有するか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であり、式中、
Ｌは抗体単位、例えば、第３、５．３．１、及び６節で提供されるような、例えば、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片であり、
（ＬＵ－Ｄ）は、リンカー単位－薬物単位部分であり、式中、
ＬＵ－は、例えば、第３節及び６ならびに第５．３．３節におけるさらなる開示を含む本節（第５．３節）で提供されるようなリンカー単位であり、
Ｄは、例えば、第３及び６節ならびに第５．３．２及び５．３．４節におけるさらなる開示を含む本節（第５．３節）で提供されるような、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物単位であり、
ｐは、第３及び６節ならびに本節（第５．３節）で提供されるさらなる例を含む、１～２０の整数である。

【0157】

いくつかの実施形態では、ｐは、１～２０、１～１９、１～１８、１～１７、１～１６、１～１５、１～１４、１～１３、１～１２、１～１１、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、または３～４の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは約１である。いくつかの実施形態では、ｐは約２である。いくつかの実施形態では、ｐは約３である。いくつかの実施形態では、ｐは約４である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．８である。いくつかの実施形態では、ｐは約５である。いくつかの実施形態では、ｐは約６である。いくつかの実施形態では、ｐは約７である。いくつかの実施形態では、ｐは約８である。いくつかの実施形態では、ｐは約９である。いくつかの実施形態では、ｐは約１０である。いくつかの実施形態では、ｐは約１１である。いくつかの実施形態では、ｐは約１２である。いくつかの実施形態では、ｐは約１３である。いくつかの実施形態では、ｐは約１４である。いくつかの実施形態では、ｐは約１５である。いくつかの実施形態では、ｐは約１６である。いくつかの実施形態では、ｐは約１７である。いくつかの実施形態では、ｐは約１８である。いくつかの実施形態では、ｐは約１９である。いくつかの実施形態では、ｐは約２０である。

【0158】

いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体化合物は、以下の式：
Ｌ－（Ａ_ａ－Ｗ_ｗ－Ｙ_ｙ－Ｄ）_ｐ（ＩＩ）
を有するか、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であり、式中、
Ｌは抗体単位、例えば、第３、５．３．１、及び６節で提供されるような、例えば、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片であり、
－Ａ_ａ－Ｗ_ｗ－Ｙ_ｙ－は、リンカー単位（ＬＵ）であり、式中、
－Ａ－は、伸長単位であり、
ａは、０または１であり、
各－Ｗ－は独立してアミノ酸単位であり、
ｗは０～１２の範囲の整数であり、
－Ｙ－は、自己犠牲スペーサー単位であり、
ｙは０、１または２であり、
各々が、例えば、第３及び６節ならびに第５．３．３節におけるさらなる開示を含む本節（第５．３節）で提供されるようなものであり、
Ｄは、例えば、第３及び６節ならびに第５．３．２及び５．３．４節におけるさらなる開示を含む本節（第５．３節）で提供されるような、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物単位であり、
ｐは、第３及び６節ならびに本節（第５．３節）で提供されるさらなる例を含む、１～２０の整数である。

【0159】

いくつかの実施形態では、ａは０または１であり、ｗは０または１であり、ｙは０、１、または２である。いくつかの実施形態では、ａは０または１であり、ｗは０または１であり、ｙは０または１である。いくつかの実施形態では、ｐは、１～２０、１～１９、１～１８、１～１７、１～１６、１～１５、１～１４、１～１３、１～１２、１～１１、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、または３～４の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは約１である。いくつかの実施形態では、ｐは約２である。いくつかの実施形態では、ｐは約３である。いくつかの実施形態では、ｐは約４である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．８である。いくつかの実施形態では、ｐは約５である。いくつかの実施形態では、ｐは約６である。いくつかの実施形態では、ｐは約７である。いくつかの実施形態では、ｐは約８である。いくつかの実施形態では、ｐは約９である。いくつかの実施形態では、ｐは約１０である。いくつかの実施形態では、ｐは約１１である。いくつかの実施形態では、ｐは約１２である。いくつかの実施形態では、ｐは約１３である。いくつかの実施形態では、ｐは約１４である。いくつかの実施形態では、ｐは約１５である。いくつかの実施形態では、ｐは約１６である。いくつかの実施形態では、ｐは約１７である。いくつかの実施形態では、ｐは約１８である。いくつかの実施形態では、ｐは約１９である。いくつかの実施形態では、ｐは約２０である。いくつかの実施形態では、ｗが０でない場合、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ｗが１～１２である場合、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ｗは２～１２であり、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｗ及びｙは０である。

【0160】

第５．２節で提供される方法を含む、本明細書で提供される方法のいくつかの具体的な実施形態では、本方法のために本明細書で提供されるＡＤＣいずれかの一部としての細胞傷害剤は、ＭＭＡＥを含むか、ＭＭＡＥからなるか、またはＭＭＡＥである。

【0161】

複数の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物の場合、薬物負荷は、抗体単位あたりの薬物分子の平均数であるｐによって表される。薬物負荷は、抗体あたり薬物（Ｄ）１～２０の範囲であり得る。複合化反応の調製において抗体あたりの薬物の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特性決定され得る。ｐに関する抗体薬物複合体の定量的分布を特定することもできる。場合によっては、他の薬物負荷を有する抗体薬物複合体からの、ｐが一定値である均一な抗体薬物複合体の分離、精製、及び特性決定を、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって行うことができる。特定の例示的な実施形態では、ｐは２～８である。

【0162】

本明細書で提供される方法のためのＡＤＣの追加実施形態は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）に記載されていて、その両方ともそれら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0163】

第３、５．２、及び６節ならびに本節（第５．３節）を含む、本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンである。第３、５．２、及び６節ならびに本節（第５．３節）を含む、本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、ＡＤＣは、エンホルツマブベドチンのバイオシミラーである。

【0164】

５．３．１ 抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体または抗原結合断片
一実施形態では、ネクチン－４関連タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含むネクチン－４タンパク質に特異的に結合する抗体または抗原結合断片である（図１Ａを参照）。１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質をコードする対応するｃＤＮＡは、配列番号１の配列を有する（図１Ａを参照）。

【0165】

配列番号２のアミノ酸配列を含むネクチン－４タンパク質に特異的に結合する抗体には、他のネクチン－４関連タンパク質に結合することができる抗体が含まれる。例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むネクチン－４タンパク質に結合する抗体は、ネクチン－４変異体及びそのホモログまたは類似体などのネクチン－４関連タンパク質に結合することができる。

【0166】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体はモノクローナル抗体である。

【0167】

いくつかの実施形態では、抗体は、図１Ｂ及び１Ｃに示すように、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖（配列番号３のｃＤＮＡ配列）、及び／または配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖（配列番号５のｃＤＮＡ配列）を含む。

【0168】

いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（これは、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から１３６番目のアミノ酸（セリン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号２３（これは、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から１３０番目のアミノ酸（アルギニン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。特定の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（これは、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から１３６番目のアミノ酸（セリン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される重鎖可変領域配列中の対応する相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、配列番号２３（これは、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から１３０番目のアミノ酸（アルギニン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される軽鎖可変領域配列中の対応するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（これは、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から１３６番目のアミノ酸（セリン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号２３（これは、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から１３０番目のアミノ酸（アルギニン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。特定の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（これは、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から１３６番目のアミノ酸（セリン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される重鎖可変領域配列中の対応するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列からなる相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、配列番号２３（これは、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から１３０番目のアミノ酸（アルギニン）までの範囲のアミノ酸配列である）に示される軽鎖可変領域配列中の対応するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含む。配列番号２２、配列番号２３、配列番号７及び配列番号８は、図１Ｄ及び図１Ｅに示され、以下に列挙される通りである。
配列番号２２
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＳＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

配列番号２３
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＧＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＦＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ

配列番号７
ＭＥＬＧＬＣＷＶＦＬＶＡＩＬＥＧＶＱＣＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＳＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号８
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＧＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＦＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0169】

ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。上記のように、ＣＤＲ領域は当業者に周知であり、周知のナンバリングシステムによって定義されている。例えば、Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．前出を参照）。代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７を参照）。Ｋａｂａｔのナンバリング規則を使用して番号付けした場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協点を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）を参照）。「接触」超可変領域は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている。開発され、広く採用されている別のユニバーサルナンバリングシステムは、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７）である。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。本明細書では、ＣＤＲは、アミノ酸配列及び軽鎖または重鎖内の位置の両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存され、ループと呼ばれる構造内に存在するので、構造的特徴に従って可変ドメイン配列を整列させるナンバリングシステムを使用することによって、ＣＤＲ及びフレームワーク残基が容易に同定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプタフレームワークに移植及び置換する際に使用することができる。さらなるナンバリングシステム（ＡＨｏｎ）が、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－７０によって開発されている。例えば、Ｋａｂａｔナンバリング及びＩＭＧＴ固有のナンバリングシステムを含むナンバリングシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ前出；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，前出；Ｍａｒｔｉｎ，前出；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．前出を参照）。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれからの残基は、上記の表１に示されている。

【0170】

いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ ナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、Ｋａｂａｔナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0171】

いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、ＡｂＭナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、ＡｂＭナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0172】

他の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0173】

他の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0174】

さらに他の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、ＩＭＧＴナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、ＩＭＧＴナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0175】

いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、Ｋａｂａｔナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、ＡｂＭナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、ＡｂＭナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0177】

他の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0178】

他の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0179】

さらに他の実施形態では、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、ＩＭＧＴナンバリングによる配列番号２２に示される重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む重鎖可変領域と、ＩＭＧＴナンバリングによる配列番号２３に示される軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。

【0180】

上記のように、異なるナンバリングシステムによるＣＤＲ配列は、例えば抗原受容体ナンバリング及び受容体分類（Ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ａｎｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔＩｏｎ）（ＡＮＡＲＣＩ）によって提供されるものなどのオンラインツールを使用して容易に決定することができる。例えば、ＡＮＡＲＣＩによって決定されたＫａｂａｔナンバリングによる配列番号２２内の重鎖ＣＤＲ配列、及び配列番号２３内の軽鎖ＣＤＲ配列を以下の表４に列挙する。

【0181】

（表４）

【0182】

別の例として、ＡＮＡＲＣＩによって決定されたＩＭＧＴナンバリングによる配列番号２２内の重鎖ＣＤＲ配列、及び配列番号２３内の軽鎖ＣＤＲ配列を以下の表５に列挙する。

【0183】

（表５）

【0184】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0185】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0186】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0187】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0189】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域とを含む。

【0190】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0191】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲のアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。

【0192】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。例えば、特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクタ機能、グリコシル化、免疫原性の低下、または溶解度を含むがこれらに限定されるわけではない、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を最適化することが望ましい場合がある。したがって、本明細書に記載の抗体に加えて、抗体変異体が調製され得ることが企図される。例えば、抗体変異体は、適切なヌクレオチド変化をコードＤＮＡに導入することによって、及び／または所望の抗体もしくはポリペプチドの合成によって調製することができる。アミノ酸変化が抗体の翻訳後プロセスを変化させ得ること、例えばグリコシル化部位の数もしくは位置を変化させ得ること、または膜固定特性を変化させ得ることを当業者は認識している。

【0193】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、例えば、抗体への任意の種類の分子の共有結合によって化学的に修飾される。抗体派生物には、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合などによって化学修飾された抗体が含まれ得る。多くの化学修飾のいずれもが、特異的な化学的切断、アセチル化、製剤化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むがこれらに限定されるわけではない公知の技術によって実施され得る。さらに、抗体は、１つまたは複数の非古典的アミノ酸を含み得る。

【0194】

変異は、元の抗体またはポリペプチドと比較してアミノ酸配列の変化をもたらす、単一ドメイン抗体またはポリペプチドをコードする１つまたは複数のコドンの置換、欠失または挿入であり得る。アミノ酸置換は、ロイシンのセリンによる置換などの、１つのアミノ酸を類似の構造的及び／または化学的特性を含む別のアミノ酸で置換した結果、例えば保存的アミノ酸置換であり得る。当業者に公知の標準的な技術を使用して、例えば、アミノ酸置換をもたらす部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介突然変異誘発を含む、本明細書で提供される分子をコードするヌクレオチド配列に突然変異を導入することができる。挿入または欠失は、約１～５アミノ酸の範囲であってもよい。特定の実施形態では、置換、欠失、または挿入は、元の分子と比較して、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、または２未満のアミノ酸置換を含む。具体的な実施形態では、置換は、１つまたは複数の予測される非必須アミノ酸残基で行われる保存的アミノ酸置換である。許容される変異は、配列中のアミノ酸の挿入、欠失または置換を体系的に行い、得られた変異体を親抗体によって示される活性について試験することによって決定され得る。

【0195】

アミノ酸配列挿入には、１つの残基から複数の残基を含むポリペプチドまでの長さに及ぶアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。

【0196】

保存的アミノ酸置換によって生成された抗体は、本開示に含まれる。保存的アミノ酸置換では、アミノ酸残基は、同様の電荷を有する側鎖を含むアミノ酸残基で置換される。上記のように、類似の電荷を有する側鎖を含むアミノ酸残基のファミリーが当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。あるいは、飽和突然変異誘発などによって、突然変異をコード配列の全部または一部に沿ってランダムに導入することができ、得られた突然変異体を生物学的活性についてスクリーニングして、活性を保持する突然変異体を同定することができる。突然変異誘発後、コードされたタンパク質を発現させることができ、タンパク質の活性を決定することができ、特性を維持するかまたは有意に変化させないように保存的（例えば、類似の特性及び／または側鎖を有するアミノ酸のグループ内での）置換を行い得る。

【0197】

アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従ってグループ化し得る（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７３－７５（２ｄ ｅｄ．１９７５）を参照）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。あるいは、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいてグループに分けられ得る：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0198】

例えば、抗体の適切な立体配座の維持に関与しない任意のシステイン残基を、例えば、アラニンまたはセリンなどの別のアミノ酸で置換して、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止することもできる。

【0199】

変形は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）突然変異誘発、アラニンスキャニング及びＰＣＲ突然変異誘発などの当技術分野で公知の方法を使用して行うことができる。部位特異的突然変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２３７：１－７；及びＺｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７－５００を参照）、カセット突然変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ ３４：３１５－２３を参照）、または他の公知の技術をクローン化ＤＮＡに対して実施して、抗抗ＭＳＬＮ抗体変異体ＤＮＡを産生することができる。

【0200】

抗体の共有結合修飾は、本開示の範囲内に含まれる。共有結合修飾には、抗体の標的アミノ酸残基を、抗体の選択された側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることが含まれる。他の修飾には、グルタミニル残基及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル残基及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル残基またはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ７９－８６（１９８３）を参照）、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。

【0201】

本開示の範囲内に含まれる抗体の他の種類の共有結合修飾には、抗体またはポリペプチドの天然のグリコシル化パターンを変化させること（例えば、Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：４８２－５０１；及びＷａｌｓｈ，２０１０，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １５：７７３－８０を参照）、及び抗体を様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンの１つに、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号；または同第４，１７９，３３７号に記載されている方法で連結することが含まれる。

【0202】

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と特定の相同性または同一性を有する重鎖と、配列番号８に示される軽鎖と特定の相同性または同一性を有する軽鎖とを含む。そのような相同性または同一性を有する重鎖／軽鎖の実施形態は、さらに以下に示される通りである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と７０％を超える相同性または同一性を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と７５％を超える相同性または同一性を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と８０％を超える相同性または同一性を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と８５％を超える相同性または同一性を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と９０％を超える相同性または同一性を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖と９５％を超える相同性または同一性を有する重鎖を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号７に示される重鎖に対して、いずれかの示された相同性または同一性を有する重鎖を含み、そのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）は、配列番号７に示される重鎖中のＣＤＲと同一である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖と７０％を超える相同性または同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖と７５％を超える相同性または同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖と８０％を超える相同性または同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖と８５％を超える相同性または同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖と９０％を超える相同性または同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖と９５％を超える相同性または同一性を有する軽鎖を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号８に示される軽鎖に対して、いずれかの示された相同性または同一性を有する軽鎖を含み、そのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）は、配列番号８に示される軽鎖中のＣＤＲと同一である。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、本段落で提供される任意の相同軽鎖及び任意の相同重鎖を組合せまたは順列を問わずに含む。

【0203】

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と特定の相同性または同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と特定の相同性または同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。そのような相同性または同一性を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の実施形態は、さらに以下に示される通りである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と７０％を超える相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と７５％を超える相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と８０％を超える相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と８５％を超える相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と９０％を超える相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域と９５％を超える相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２２に示される重鎖可変領域に対して、いずれかの示された相同性または同一性を有する重鎖可変領域を含み、そのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）は、配列番号２２に示される重鎖可変領域中のＣＤＲと同一である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と７０％を超える相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と７５％を超える相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と８０％を超える相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と８５％を超える相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と９０％を超える相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域と９５％を超える相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域に対して、いずれかの示された相同性または同一性を有する軽鎖可変領域を含み、そのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）は、配列番号２３に示される軽鎖可変領域中のＣＤＲと同一である。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、本段落で提供される任意の相同軽鎖可変領域及び任意の相同重鎖可変領域を組合せまたは順列を問わずに含む。

【0204】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域、またはＨａ２２－２（２，４）６．１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域を含み、当該抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗ネクチン－４抗体の望ましい機能的特性を保持する。

【0205】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）、またはＨａ２２－２（２，４）６．１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列からなる重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域を含み、当該抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗ネクチン－４抗体の望ましい機能的特性を保持する。

【0206】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化重鎖可変領域及びヒト化軽鎖可変領域を含み、その場合に、
（ａ）重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体に示される重鎖可変領域ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）を含み；
（ｂ）軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体に示される軽鎖可変領域ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0207】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化重鎖可変領域及びヒト化軽鎖可変領域を含み、その場合に、
（ａ）重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体に示される重鎖可変領域ＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）を含み；
（ｂ）軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体に示される軽鎖可変領域ＣＤＲのアミノ酸配列からなるＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0208】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域、またはＨａ２２－２（２，４）６．１の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含み、当該抗体は、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体の望ましい機能的特性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域、またはＨａ２２－２（２，４）６．１の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列からなる重鎖及び軽鎖可変領域を含み、当該抗体は、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体の望ましい機能的特性を保持する。本開示の抗体の定常領域として、任意のサブクラスの定常領域を選択することができる。一実施形態では、重鎖定常領域としてヒトＩｇＧ１定常領域を、軽鎖定常領域としてヒトＩｇカッパ定常領域を使用することができる。

【0209】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖、またはＨａ２２－２（２，４）６．１の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含み、当該抗体は、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体の望ましい機能的特性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生されるＨａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖、またはＨａ２２－２（２，４）６．１の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列からなる重鎖及び軽鎖可変領域を含み、当該抗体は、本明細書で提供される抗ネクチン－４抗体の望ましい機能的特性を保持する。

【0210】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その場合に、
（ａ）重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも８０％相同または同一であるアミノ酸配列を含み；及び
（ｂ）軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも８０％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。

【0211】

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列と一定の相同性または同一性を有する重鎖可変領域と、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と一定の相同性または同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。そのような相同性または同一性を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の実施形態は、さらに以下に示される通りである。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、重鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同または同一であり得る。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、軽鎖可変領域は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同または同一であり得る。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、本段落で提供される任意の相同軽鎖可変領域及び任意の相同重鎖可変領域を組合せまたは順列を問わずに含む。

【0212】

他の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含み、その場合に、
（ａ）重鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖アミノ酸配列と少なくとも８０％相同または同一であるアミノ酸配列を含み；及び
（ｂ）軽鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも８０％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。

【0213】

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖アミノ酸配列と一定の相同性または同一性を有する重鎖と、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖アミノ酸配列と一定の相同性または同一性を有する軽鎖とを含む。そのような相同性または同一性を有する重鎖及び軽鎖の実施形態は、さらに以下に示される通りである。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖アミノ酸配列と少なくとも８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、重鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、重鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、重鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖アミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同または同一であり得る。いくつかの実施形態では、軽鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも８５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、軽鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、軽鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９５％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、軽鎖は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７の下に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の軽鎖アミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同または同一であり得る。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、本段落で提供される任意の相同軽鎖及び任意の相同重鎖を組合せまたは順列を問わずに含む。

【0214】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の特異的エピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２のＶＣ１ドメインに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２のＶＣ１ドメインには結合するが、Ｃ１Ｃ２ドメインには結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１番目から１４７番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１番目から１４７番目のアミノ酸残基に位置するエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１番目から１０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１１番目から２０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の２１番目から３０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の３１番目から４０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の４１番目から５０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の５１番目から６０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の６１番目から７０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の７１番目から８０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の８１番目から９０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の９１番目から１００番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１０１番目から１１０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１１１番目から１２０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１２１番目から１３０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１３１番目から１４０番目のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２の１４１番目から１４７番目のアミノ酸残基に結合する。本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片の特定の実施形態の結合エピトープは、その全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２０１２／０４７７２４において決定され、記載されている。

【0215】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒトで観察される１９１Ｐ４Ｄ１２変異体間で共通する１９１Ｐ４Ｄ１２のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒトで観察される１９１Ｐ４Ｄ１２多型間で共通する１９１Ｐ４Ｄ１２のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒトがんで観察される１９１Ｐ４Ｄ１２多型間で共通する１９１Ｐ４Ｄ１２のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２または１９１Ｐ４Ｄ１２変異体の生物学的機能を結合、内在化、破壊、または調節するであろう１９１Ｐ４Ｄ１２のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、１９１Ｐ４Ｄ１２とリガンド、基質、及び結合パートナーとの間の相互作用を破壊するであろう１９１Ｐ４Ｄ１２のエピトープに結合する。

【0216】

本明細書で提供される操作された抗体には、ＶＨ及び／またはＶＬ内のフレームワーク残基に修飾が行われたものが含まれる（例えば、抗体の特性を改善するために）。典型的には、そのようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、１つのアプローチは、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に「復帰突然変異」させることである。より具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含み得る。そのような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖系列配列と比較することによって同定することができる。フレームワーク領域配列をそれらの生殖系列配置に戻すために、体細胞突然変異を、例えば部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発によって生殖系列配列に「復帰突然変異」させることができる（例えば、ロイシンからメチオニンに「復帰突然変異」させる）。そのような「復帰突然変異」された抗体も本開示に包含されることが意図されている。

【0217】

別の種類のフレームワーク修飾は、Ｔ細胞エピトープを除去し、それによって抗体の潜在的な免疫原性を低下させるために、フレームワーク領域内、またはさらには１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つまたは複数の残基を変異させる工程を含む。このアプローチは、「脱免疫化」とも称され、Ｃａｒｒ ｅｔ ａｌ．による米国特許出願公開第２００３／０１５３０４３号にさらに詳細に記載されている。

【0218】

フレームワーク領域またはＣＤＲ領域内で行われる修飾に加えて、またはその代わりに、本開示の抗体は、典型的には血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／または抗原依存性細胞傷害などの抗体の１つまたは複数の機能的特性を改変するために、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作され得る。さらに、本明細書で提供される抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体は、やはり抗体の１つまたは複数の機能的特性を改変するために、化学的に修飾され得る（例えば、１つもしくは複数の化学部分を抗体に結合させることができる）か、またはそのグリコシル化を改変するように修飾され得る。これらの実施形態のそれぞれを以下でさらに詳細に説明する。

【0219】

一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変化する、例えば増加または減少するように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖の組み立てを容易にするために、または抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体の安定性を増加もしくは減少させるために変更される。

【0220】

別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体の生物学的半減期を減少させるように変異される。より具体的には、抗体が天然のＦｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較して低下したブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ）プロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に１つまたは複数のアミノ酸変異が導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．による米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載されている。

【0221】

別の実施形態では、抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾される。様々なアプローチが可能である。例えば、Ｗａｒｄの米国特許第６，２７７，３７５号に記載されているように変異を導入することができる。あるいは、生物学的半減期を増加させるために、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，８６９，０４６号及び同第６，１２１，０２２号に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから得られるサルベージ受容体結合エピトープを含むように、抗体をＣＨ１またはＣＬ領域内で変化させることができる。

【0222】

さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクタ機能（複数可）を改変するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによって改変される。例えば、アミノ酸特異的残基から選択される１つまたは複数のアミノ酸を、抗体がエフェクタリガンドに対して変化した親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。親和性が変化するエフェクタリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、どちらもＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，６２４，８２１号及び同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。

【0223】

抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体と１９１Ｐ４Ｄ１２関連タンパク質との反応性は、必要に応じて１９１Ｐ４Ｄ１２関連タンパク質、１９１Ｐ４Ｄ１２発現細胞またはその抽出物を使用して、ウェスタンブロット、免疫沈降、ＥＬＩＳＡ、及びＦＡＣＳ分析を含む多くの周知の手段によって確立することができる。１９１Ｐ４Ｄ１２抗体またはその断片は、検出可能なマーカーで標識され得るか、または第２の分子に複合化され得る。適切な検出可能なマーカーには、放射性同位体、蛍光化合物、生物発光化合物、化学発光化合物、金属キレート剤または酵素が含まれるが、これらに限定されるわけではない。さらに、２つまたはそれ以上の１９１Ｐ４Ｄ１２エピトープに特異的な二重特異性抗体は、当技術分野で一般的に公知の方法を使用して生成される。ホモ二量体抗体はまた、当技術分野で公知の架橋技術によって生成することができる（例えば、Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２５６０－２５６５）。

【0224】

さらに別の具体的な実施形態では、本明細書で提供される抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体は、Ｈａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体の重鎖及び軽鎖を含む抗体である。Ｈａ２２－２（２，４）６．１の重鎖は、配列番号７の２０番目のＥ残基から４６６番目のＫ残基までの範囲のアミノ酸配列からなり、Ｈａ２２－２（２，４）６．１の軽鎖は、配列番号８の配列の２３番目のＤ残基から２３６番目のＣ残基までの範囲のアミノ酸配列からなる。

【0225】

Ｈａ２２－２（２，４）６．１と称される抗体を産生するハイブリドーマは、２０１０年８月１８日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １５４９，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１０８に（Ｆｅｄｅｒａｌ Ｅｘｐｒｅｓｓを介して）送付され、アクセッション番号ＰＴＡ－１１２６７が割り当てられた。

【0226】

抗ネクチン－４抗体の追加の実施形態は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）に記載されていて、その両方ともそれら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0227】

５．３．２ 細胞傷害性剤（薬物単位）
本明細書で提供される方法に使用されるＡＤＣが、細胞傷害剤に複合化された抗体またはその抗原結合断片を含む場合、本開示は、方法に使用するためのＡＤＣの一部として細胞傷害剤の種々の実施形態をさらに提供する。第５．２節で提供される方法を含む、本明細書で提供される方法の種々の実施形態では、本方法のために本明細書で提供されるＡＤＣのいずれかの一部としての細胞傷害剤は、チューブリン破壊剤を含むか、チューブリン破壊剤からなるか、またはチューブリン破壊剤である。一実施形態では、細胞傷害剤はチューブリン破壊剤である。いくつかの実施形態では、チューブリン破壊剤は、ドラスタチン、アウリスタチン、ヘミアスタリン、ビンカアルカロイド、マイタンシノイド、エリブリン、コルヒチン、プロカブリン、フォモプシン、エポチロン、クリプトフィシン、及びタキサンからなる群より選択される。具体的な一実施形態では、チューブリン破壊剤はアウリスタチンである。さらなる具体的な実施形態では、アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ＡＦＰ、またはアウリスタチンＴである。さらに別の具体的な実施形態では、アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。

【0228】

第５．２節で提供される方法を含む、本明細書で提供される方法の種々の実施形態では、本方法のために本明細書で提供されるＡＤＣいずれかの一部としての細胞傷害剤は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）（その両方ともそれら全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載される細胞傷害剤から選択される任意の剤を含むか、それからなるか、またはそれである。

【0229】

いくつかの実施形態では、アウリスタチンはＭＭＡＥである（式中、波線は、抗体薬物複合体のリンカーとの共有結合を示す）。

【0230】

いくつかの実施形態では、ＭＭＡＥ及びリンカー成分（本明細書でさらに記載）を含む例示的な実施形態は、以下の構造を有する（式中、Ｌは抗体（例えば、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片）を表し、ｐは１～１２の範囲である）。

【0231】

前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは、１～２０、１～１９、１～１８、１～１７、１～１６、１～１５、１～１４、１～１３、１～１２、１～１１、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３の範囲である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、または３～４の範囲である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約２である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約３である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約４である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約３．８である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約５である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約６である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約７である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約８である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約９である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１０である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１１である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１２である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１３である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１４である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１５である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１６である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１７である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１８である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約１９である。前段落に記載された式のいくつかの実施形態では、ｐは約２０である。

【0232】

典型的には、ペプチドベースの薬物単位は、２つまたはそれ以上のアミノ酸及び／またはペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。そのようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野で周知の液相合成法（Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌｕｂｋｅ，“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ ７６－１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照）に従って調製することができる。アウリスタチン／ドラスタチン薬物単位は、ＵＳ ５６３５４８３；ＵＳ ５７８０５８８；Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３－５４６５；Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉ－Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １３：２４３－２７７；Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９－７２５；Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１ ５：８５９－８６３；及びＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２１（７）：７７８－７８４の方法に従って調製することができる。

【0233】

細胞傷害剤の追加の実施形態は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）に記載されていて、その両方ともそれら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0234】

５．３．３ リンカー
典型的には、抗体薬物複合体は、薬物単位（例えば、ＭＭＡＥ）と抗体単位（例えば、抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体またはその抗原結合断片）との間にリンカー単位を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカーの切断が細胞内環境で抗体から薬物単位を放出するように、細胞内条件下で切断可能である。さらに他の実施形態では、リンカー単位は切断可能ではなく、薬物は、例えば抗体分解によって放出される。いくつかの実施形態では、リンカーは、細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ内）に存在する切断剤によって切断可能である。リンカーは、例えば、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含むがこれらに限定されるわけではない細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長または少なくとも３アミノ酸長である。他の実施形態では、切断可能なリンカーはｐＨ感受性であり、すなわち、特定のｐＨ値で加水分解に感受性である。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソーム中で加水分解可能な酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シスアコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を使用することができる。さらに他の実施形態では、リンカーは還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）ブチレート）及びＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジル－オキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジル－ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢ及びＳＭＰＴを使用して形成することができるものを含む、様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で公知である。

【0235】

「リンカー単位」（ＬＵ）は、薬物単位と抗体単位とを連結して抗体薬物複合体を形成するために使用することができる二官能性化合物である。いくつかの実施形態では、リンカー単位は、式：
－Ａ_ａ－Ｗ_ｗ－Ｙ_ｙ－
を有し、
式中、－Ａ－は伸長単位であり、
ａは０または１であり、
各－Ｗ－は独立してアミノ酸単位であり、
ｗは０～１２の範囲の整数であり、
－Ｙ－は自己犠牲スペーサー単位であり、
ｙは０、１または２である。

【0236】

いくつかの実施形態では、ａは０または１であり、ｗは０または１であり、ｙは０、１または２である。いくつかの実施形態では、ａは０または１であり、ｗは０または１であり、ｙは０または１である。いくつかの実施形態では、ｗが１～１２である場合、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ｗは２～１２であり、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｗ及びｙは０である。リンカーならびに伸長単位、アミノ酸単位、及びスペーサー単位の各々は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）に記載されていて、その両方ともそれら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0237】

抗体－薬物複合体の実施形態は、以下を含み得る：

（式中、ｗ及びｙはそれぞれ０、１または２である）、

（式中、ｗ及びｙはそれぞれ０である）、

。

【0238】

５．３．４ 薬物負荷
薬物負荷はｐによって表され、分子中の抗体あたりの薬物単位の平均数である。薬物負荷は、抗体あたり１～２０薬物単位（Ｄ）の範囲であり得る。本明細書で提供されるＡＤＣは、例えば１～２０の範囲の薬物単位と複合化した抗体または抗原結合断片の集合を含む。複合化反応からのＡＤＣの調製物中の抗体あたりの薬物単位の平均数は、質量分析及びＥＬＩＳＡアッセイなどの従来の手段によって特徴付けることができる。ｐに関するＡＤＣの定量的分布も決定し得る。場合によっては、他の薬物負荷を有するＡＤＣからの、ｐが特定の値である均一なＡＤＣの分離、精製及び特徴付けは、電気泳動などの手段によって達成し得る。

【0239】

特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～２０の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～１８の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～１５の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～１２の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～１０の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～９の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～８の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～７の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～６の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～５の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～４の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～３の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～１２の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～１０の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～９の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～８の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～７の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～６の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～５の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～４の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～１２の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～１０の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～９の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～８の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～７の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～６の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～５の範囲である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～４の範囲である。

【0240】

特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、１～約８、約２～約６、約３～約５、約３～約４、約３．１～約３．９、約３．２～約３．８、約３．２～約３．７、約３．２～約３．６、約３．３～約３．８、または約３．３～約３．７の範囲である。

【0241】

特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、またはそれ以上である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、または約３．９である。

【0242】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、または２～１３の範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、または３～１３の範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約２である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約３である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約４である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約３．８である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約５である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約６である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約７である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約８である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約９である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１０である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１１である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１２である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１３である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１４である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１５である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１６である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１７である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１８である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約１９である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣの薬物負荷は、約２０である。

【0243】

特定の実施形態では、複合化反応中に、理論上の最大値よりも少ない薬物単位が抗体に複合化される。抗体は、例えば、薬物－リンカー中間体ともリンカー試薬とも反応しないリジン残基を含み得る。一般に、抗体は、薬物単位に連結され得る多くの遊離及び反応性システインチオール基を含まない；実際に、抗体中のほとんどのシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在する。特定の実施形態では、抗体は、部分的または完全な還元条件下で、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で還元されて、反応性システインチオール基を生成し得る。特定の実施形態では、抗体を変性条件に供して、リジンまたはシステインなどの反応性求核基を露出させる。いくつかの実施形態では、リンカー単位または薬物単位は、抗体単位上のリジン残基を介して複合化される。いくつかの実施形態では、リンカー単位または薬物単位は、抗体単位上のシステイン残基を介して複合化される。

【0244】

いくつかの実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片の重鎖にある。いくつかの実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖にある。いくつかの実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片のヒンジ領域にある。いくつかの実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域にある。他の実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片の定常領域（例えば、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２もしくはＣＨ３、または軽鎖のＣＨ１）にある。さらに他の実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片のＶＨフレームワーク領域にある。さらに他の実施形態では、リンカー単位または薬物単位に結合するアミノ酸は、抗体またはその抗原結合断片のＶＬフレームワーク領域にある。

【0245】

ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、様々な方法で、例えば、（ｉ）抗体に対する薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬のモル過剰を制限すること、（ｉｉ）複合化の反応時間または温度を制限すること、（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的または制限的な還元条件、（ｉｖ）システイン残基の数及び位置がリンカー－薬物結合の数及び／または位置の制御のために改変されるように、抗体のアミノ酸配列を組換え技術によって操作すること（本明細書及び国際公開公報第２００６／０３４４８８号（その全体が参照により本明細書に組み入れられる）に開示されるように調製されたチオＭａｂまたはチオＦａｂなど）によって、制御され得る。

【0246】

複数の求核基が薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬と反応し、続いて薬物単位試薬と反応する場合、得られる生成物は、抗体単位に結合した１つまたは複数の薬物単位が分布しているＡＤＣ化合物の混合物であることが理解されるべきである。抗体あたりの薬物の平均数は、抗体に特異的でかつ薬物に特異的な二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算され得る。個々のＡＤＣ分子は、質量分析によって混合物中で同定され、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィによって分離され得る（例えば、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．”Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．”Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４）。特定の実施形態では、単一の負荷値を有する均一なＡＤＣは、電気泳動またはクロマトグラフィによって複合混合物から単離され得る。

【0247】

抗体薬物複合体を調製、スクリーニング及び特徴付けるための方法は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる米国特許第８，６３７，６４２号に記載されているように、当業者に公知である。

【0248】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法のための抗体薬物複合体は、米国特許第８，６３７，６４２号に記載される方法に従って調製され、以下の式を有するＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅである：

式中、ＬはＨａ２２－２（２，４）６．１であり、ｐは１～２０である。

【0249】

いくつかの実施形態では、ｐは、１～２０、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３の範囲である。他の実施形態では、ｐは約１である。他の実施形態では、ｐは約２である。他の実施形態では、ｐは約３である。他の実施形態では、ｐは約４である。他の実施形態では、ｐは約５である。他の実施形態では、ｐは約６である。他の実施形態では、ｐは約７である。他の実施形態では、ｐは約８である。他の実施形態では、ｐは約９である。他の実施形態では、ｐは約１０である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．１である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．２である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．３である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．４である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．５である。他の実施形態では、ｐは約３．６である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．７である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．８である。いくつかの実施形態では、ｐは約３．９である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．０である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．１である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．２である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．３である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．４である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．５である。他の実施形態では、ｐは約４．６である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．７である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．８である。いくつかの実施形態では、ｐは約４．９である。いくつかの実施形態では、ｐは約５．０である。

【0250】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法において使用されるＡＤＣは、エンホルツマブベドチンである。エンホルツマブベドチンは、プロテアーゼ切断可能リンカーを介して微小管破壊剤（ＭＭＡＥ）に複合化された完全ヒト免疫グロブリンＧ１カッパ（ＩｇＧ１_Κ）抗体から構成されるＡＤＣである（Ｃｈａｌｌｉｔａ－Ｅｉｄ ＰＭ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６；７６（１０）：３００３－１３）。エンホルツマブベドチンは、細胞表面の１９１Ｐ４Ｄ１２タンパク質に結合してＡＤＣ－１９１Ｐ４Ｄ１２複合体の内在化をもたらし、次いで、これがリソソーム区画に輸送され、そこでリンカーのタンパク質分解切断を介してＭＭＡＥが放出されることによって、抗腫瘍活性を誘導する。ＭＭＡＥの細胞内放出は、その後、チューブリン重合を破壊し、Ｇ２／Ｍ期細胞周期停止及びアポトーシス細胞死をもたらす（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ＪＡ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．２００３ Ａｕｇ １５；１０２（４）：１４５８－６５）。

【0251】

上記及び米国特許第８，６３７，６４２号に記載されているように、ＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅは、マウスハイブリドーマ細胞株に由来するＡＤＣである。エンホルツマブベドチンは、ＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅ ＡＤＣのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株由来等価物であり、ヒト治療のために使用される例示的な生成物である。エンホルツマブベドチンは、ＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅと同じアミノ酸配列、リンカー及び細胞傷害性薬物を有する。エンホルツマブベドチンとＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅとの間の同等性は、１９１Ｐ４Ｄ１２に対する結合親和性、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性、及びｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性などの広範な分析的及び生物学的特性評価試験を通して確認された。

【0252】

一実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、ＥＶ、ＰＡＤＣＥＶ、ＡＧＳ－２２Ｍ６Ｅ、ＡＧＳ－２２Ｃ３Ｅ、ＡＧＳ－２２Ｃ３Ｅとしても公知であるエンホルツマブベドチンである。エンホルツマブベドチンは抗１９１Ｐ４Ｄ１２抗体を含み、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸残基２０からアミノ酸残基４６６までを含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸残基２３からアミノ酸残基２３６までを含む軽鎖とを含む。

【0253】

エンホルツマブベドチンは、プロテアーゼ切断可能なマレイミドカプロイルバリン－シトルリン（ｖｃ）リンカー（ＳＧＤ－１００６）を介して小分子微小管破壊剤であるモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に複合化された完全ヒト抗ネクチン－４ ＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体（ＡＧＳ－２２Ｃ３）で構成された、ネクチン－４に対する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。抗体の鎖間ジスルフィド結合を構成するシステイン残基で複合化が行われ、薬物対抗体比がおよそ３．８：１の生成物が生成される。分子量は、およそ１５２ｋＤａである。

【0254】

エンホルツマブベドチンは以下の構造式を有する。

【0255】

各抗体分子におよそ４分子のＭＭＡＥが結合している。エンホルツマブベドチンは、抗体と小分子成分との化学的複合化によって生成される。抗体は哺乳動物（チャイニーズハムスター卵巣）細胞によって生成され、小分子成分は化学合成によって生成される。

【0256】

エンホルツマブベドチン注射剤は、防腐剤非含有の白色からオフホワイト色の滅菌凍結乾燥粉末として、静脈注射用の単回投与バイアルで提供される。エンホルツマブベドチンの含量はバイアルあたり２０ｍｇ及びバイアルあたり３０ｍｇであり、ＵＳＰの注射用滅菌水（それぞれ２．３ｍＬ及び３．３ｍＬ）で再構成する必要があり、最終濃度１０ｍｇ／ｍＬの透明からわずかに白濁、無色から淡黄色の溶液が得られる。再構成後、各バイアルから２ｍＬ（２０ｍｇ）及び３ｍＬ（３０ｍｇ）を回収できる。再構成後の溶液は、１ｍＬごとにエンホルツマブベドチン１０ｍｇ、ヒスチジン（１．４ｍｇ）、ヒスチジン塩酸塩一水和物（２．３１ｍｇ）、ポリソルベート２０（０．２ｍｇ）、及びトレハロース二水和物（５５ｍｇ）を含有し、ｐＨは６．０である。

【0257】

５．４ 医薬組成物
本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、本方法で使用されるＡＤＣは、「医薬組成物」として提供される。そのような医薬組成物は、本明細書で提供される抗体薬物複合体、及び１つまたは複数の薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される賦形剤を含む。特定の実施形態では、抗体薬物複合体は、１つもしくは複数のさらなる剤と組み合わせて、またはそれとは別個に提供される。そのような１つまたは複数のさらなる剤、及び１つまたは複数の薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される賦形剤を含む組成物も提供される。特定の実施形態では、抗体薬物複合体及びさらなる剤（複数可）は、治療上許容される量で存在する。医薬組成物は、本明細書で提供される方法及び使用に従って使用され得る。したがって、例えば、医薬組成物は、本明細書で提供される治療方法及び使用を実施するために、対象にｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで投与することができる。本明細書で提供される医薬組成物は、意図される方法または投与経路と適合するように製剤化することができ、例示的な投与経路は本明細書に記載されている。

【0258】

いくつかの実施形態では、がんまたは腫瘍を調節する抗体薬物複合体の医薬組成物が提供される。

【0259】

本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、ＡＤＣを含む医薬組成物は、本明細書に記載の様々な疾患及び障害（例えば、がん）の治療または予防に使用することができる、本明細書に開示されるまたは当業者に公知の他の治療活性作用物質または化合物をさらに含み得る。上記のように、さらなる治療活性物質または化合物は、別個の医薬組成物（複数可）中に存在してもよい。

【0260】

医薬組成物は、典型的には、治療有効量の本明細書で提供される抗体薬物複合体の少なくとも１つ、及び１つまたは複数の薬学的に許容される製剤化剤を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の１つまたは複数のさらなる剤をさらに含む。

【0261】

一実施形態では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の本明細書で提供される抗体薬物複合体を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤を含む。

【0262】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中の抗体薬物複合体は、上記の第５．３節に記載される抗体薬物複合体から選択される。

【0263】

特定の実施形態では、医薬組成物は、０．１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。他の実施形態では、医薬組成物は、５ｍｇ／ｍＬ～１５ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。他の実施形態では、医薬組成物は、８ｍｇ／ｍＬ～１２ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。他の実施形態では、医薬組成物は、９ｍｇ／ｍＬ～１１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約９．５ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約９．６ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約９．７ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約９．８ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約９．９ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、約１０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０．２ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０．３ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０．３ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０．４ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０．５ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体薬物複合体を含む。

【0264】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、

【0265】

Ｌ－ヒスチジン、ＴＷＥＥＮ－２０、及びトレハロース二水和物またはスクロースの少なくとも一方を含む。いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、塩酸（ＨＣｌ）またはコハク酸をさらに含む。

【0266】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物において有用なＬ－ヒスチジンの濃度は、５ｍＭ～５０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、１５ｍＭ～３５ｍＭの範囲である。

【0267】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、１５ｍＭ～３０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、１５ｍＭ～２５ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、１５ｍＭ～３５ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約１６ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約１７ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約１８ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約１９ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約２０ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約２１ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約２２ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約２３ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約２４ｍＭである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物中のＬ－ヒスチジンの濃度は、約２５ｍＭである。

【0268】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物に有用なＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、０．００１％～０．１％（ｖ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、０．００２５％～０．０７５％（ｖ／ｖ）の範囲である。一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、０．００５％～０．０５％（ｖ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、０．００７５％～０．０２５％（ｖ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、０．００７５％～０．０５％（ｖ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、０．０１％～０．０３％（ｖ／ｖ）の範囲である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０１％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０１５％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０１６％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０１７％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０１８％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０１９％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０２％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０２１％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０２２％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０２３％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０２４％（ｖ／ｖ）である。特定の一実施形態では、ＴＷＥＥＮ－２０の濃度は、約０．０２５％（ｖ／ｖ）である。

【0269】

一実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物に有用なトレハロース二水和物の濃度は、１％～２０％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、２％～１５％（ｗ／ｖ）の範囲である。一実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、３％～１０％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、４％～９％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、４％～８％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、４％～７％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、４％～６％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、４．５％～６％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約４．６％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約４．７％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約４．８％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約４．９％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．０％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．１％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．２％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．３％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．４％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．５％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．６％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．７％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．８％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約５．９％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約６．０％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約６．１％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約６．２％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約６．３％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約６．４％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約６．５％（ｗ／ｖ）である。

【0270】

特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、５０ｍＭ～３００ｍＭである。他の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、７５ｍＭ～２５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、１００ｍＭ～２００ｍＭである。他の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、１３０ｍＭ～１５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、１３５ｍＭ～１５０ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１３５ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１３６ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１３７ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１３８ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１３９ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４０ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４１ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４２ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４３ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４４ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４５ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１４６ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５０ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５１ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５１ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５２ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５３ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５４ｍＭである。特定の実施形態では、トレハロース二水和物のモル濃度は、約１５５ｍＭである。

【0271】

一実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物に有用なスクロースの濃度は、１％～２０％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、２％～１５％（ｗ／ｖ）の範囲である。一実施形態では、スクロースの濃度は、３％～１０％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、４％～９％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、４％～８％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、４％～７％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、４％～６％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、４．５％～６％（ｗ／ｖ）の範囲である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約４．６％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約４．７％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約４．８％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約４．９％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．０％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．１％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．２％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．３％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．４％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．５％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．６％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．７％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．８％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約５．９％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６．０％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６．１％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６．２％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６．３％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６．４％（ｗ／ｖ）である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約６．５％（ｗ／ｖ）である。

【0272】

特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、５０ｍＭ～３００ｍＭである。他の実施形態では、スクロースのモル濃度は、７５ｍＭ～２５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、スクロースのモル濃度は、１００ｍＭ～２００ｍＭである。他の実施形態では、スクロースのモル濃度は、１３０ｍＭ～１５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、スクロースのモル濃度は、１３５ｍＭ～１５０ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１３５ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１３６ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１３７ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１３８ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１３９ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４０ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４１ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４２ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４３ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４４ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４５ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１４６ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５０ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５１ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５１ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５２ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５３ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５４ｍＭである。特定の実施形態では、スクロースのモル濃度は、約１５５ｍＭである。

【0273】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、ＨＣｌを含む。他の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、コハク酸を含む。

【0274】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、５．５～６．５の範囲のｐＨを有する。他の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、５．７～６．３の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約５．７のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約５．８のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約５．９のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約６．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約６．１のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約６．２のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約６．３のｐＨを有する。

【0275】

いくつかの実施形態では、ｐＨは室温で測定される。他の実施形態では、ｐＨは１５℃～２７℃で測定される。さらに他の実施形態では、ｐＨは４℃で測定される。さらに他の実施形態では、ｐＨは２５℃で測定される。

【0276】

いくつかの実施形態では、ｐＨはＨＣｌによって調整される。いくつかの実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で５．５～６．５の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で５．７～６．３の範囲のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約５．７のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約５．８のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約５．９のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約６．０のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約６．１のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約６．２のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は室温で約６．３のｐＨを有する。

【0277】

いくつかの実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で５．５～６．５の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で５．７～６．３の範囲のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約５．７のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約５．８のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約５．９のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．０のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．１のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．２のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はＨＣｌを含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．３のｐＨを有する。

【0278】

いくつかの実施形態では、ｐＨはコハク酸によって調整される。いくつかの実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で５．５～６．５の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で５．７～６．３の範囲のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約５．７のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約５．８のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約５．９のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約６．０のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約６．１のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約６．２のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は室温で約６．３のｐＨを有する。

【0279】

いくつかの実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で５．５～６．５の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で５．７～６．３の範囲のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約５．７のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約５．８のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約５．９のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．０のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．１のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．２のｐＨを有する。いくつかのより具体的な実施形態では、医薬組成物はコハク酸を含み、医薬組成物は１５℃～２７℃で約６．３のｐＨを有する。

【0280】

いくつかの具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、及び約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物または約５％（ｗ／ｖ）のスクロースの少なくとも一方を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、ＨＣｌまたはコハク酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ｐＨは室温で約６．０である。いくつかの実施形態では、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0281】

いくつかの具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物及びＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、ｐＨは室温で約６．０である。いくつかの実施形態では、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0282】

いくつかの具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５％（ｗ／ｖ）のスクロース及びＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、ｐＨは室温で約６．０である。いくつかの実施形態では、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0283】

他の具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物及びコハク酸を含む。いくつかの実施形態では、ｐＨは室温で約６．０である。いくつかの実施形態では、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0284】

いくつかの具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５％（ｗ／ｖ）のスクロース及びコハク酸を含む。いくつかの実施形態では、ｐＨは室温で約６．０である。いくつかの実施形態では、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0285】

具体的な実施形態では、本明細書で提供されるものは、
（ａ）以下の構造：

を含み、式中、Ｌ－は、抗体またはその抗原結合断片（例えば、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片）を表し、ｐは１～１０である抗体薬物複合体；ならびに
（ｂ）約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物、及びＨＣｌを含む、薬学的に許容される賦形剤を含み、抗体薬物複合体は約１０ｍｇ／ｍＬの濃度であり、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0286】

別の具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、
（ａ）以下の構造：

を含み、式中、Ｌ－は、抗体またはその抗原結合断片（例えば、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片）を表し、ｐは１～１０である抗体薬物複合体；ならびに
（ｂ）約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．５％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物、及びコハク酸を含む、薬学的に許容される賦形剤を含み、
抗体薬物複合体は約１０ｍｇ／ｍＬの濃度であり、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0287】

さらに別の具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、
（ａ）以下の構造：

を含み、式中、Ｌ－は、抗体またはその抗原結合断片（例えば、抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片）を表し、ｐは１～１０である抗体薬物複合体；ならびに
（ｂ）約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴＷＥＥＮ－２０、約５．０％（ｗ／ｖ）のスクロース、及びＨＣｌを含む、薬学的に許容される賦形剤を含み、
抗体薬物複合体は約１０ｍｇ／ｍＬの濃度であり、ｐＨは２５℃で約６．０である。

【0288】

特定の数（及びその数値範囲）が提供されているが、特定の実施形態では、上記数（または数値範囲）の例えば２％、５％、１０％、１５％または２０％以内の数値も企図されることが理解される。

【0289】

ビヒクル中の一次溶媒は、本質的に水性または非水性のいずれかであり得る。さらに、ビヒクルは、医薬組成物のｐＨ、オスモル濃度、粘度、無菌性または安定性を改変または維持するための他の薬学的に許容される賦形剤を含み得る。特定の実施形態では、薬学的に許容されるビヒクルは水性緩衝液である。他の実施形態では、ビヒクルは、例えば、塩化ナトリウム及び／またはクエン酸ナトリウムを含む。

【0290】

本明細書で提供される医薬組成物は、本明細書に記載されるように、抗体薬物複合体及び／またはさらなる剤の放出速度を改変または維持するためのさらに他の薬学的に許容される製剤化剤を含み得る。そのような製剤化剤には、徐放性製剤の調製において当業者に公知の物質が含まれる。薬学的及び生理学的に許容される製剤化剤に関するさらなる参考文献については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２）ページ１４３５－１７１２、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，１２ｔｈ Ｅｄ．（１９９６，Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，ＮＪ）；及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｓｏｌｉｄ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（１９９３，Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，Ｐａ．）を参照。投与に適したさらなる医薬組成物は当技術分野で公知であり、本明細書で提供される方法及び組成物に適用可能である。

【0291】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は液体形態である。他の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は凍結乾燥されている。

【0292】

医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化することができる。したがって、医薬組成物は、非経口（例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内、筋肉内、または腹腔内）、皮内、経口（例えば、摂取）、吸入、腔内、頭蓋内、及び経皮（局所）を含む経路による投与に適した賦形剤を含む。他の例示的な投与経路は本明細書に記載されている。

【0293】

医薬組成物は、滅菌注射用の水性または油性の懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、本明細書に開示されているかまたは当業者に公知の適切な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して製剤化され得る。滅菌注射用調製物はまた、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液のような、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であり得る。使用され得る許容される希釈剤、溶媒及び分散媒には、水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム溶液、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、ならびにそれらの適切な混合物が含まれる。さらに、滅菌固定油は、溶媒または懸濁媒として慣例的に使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を使用し得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製に使用される。特定の注射用製剤の長期吸収は、吸収を遅延させる剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチン）を含めることによって達成することができる。

【0294】

一実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、局所または全身投与のために、注射、注入、または埋込みによって非経口投与され得る。本明細書で使用される非経口投与には、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、滑液包内、及び皮下投与が含まれる。

【0295】

一実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、注射前の液体中の溶液または懸濁液に適した溶液、懸濁液、エマルジョン、ミセル、リポソーム、ミクロスフェア、ナノシステム、及び固体形態を含む、非経口投与に適した任意の剤形で製剤化され得る。そのような剤形は、薬学の当業者に公知の従来の方法に従って調製することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、前出を参照）。

【0296】

一実施形態では、非経口投与を意図した医薬組成物は、水性ビヒクル、水混和性ビヒクル、非水性ビヒクル、微生物の増殖に対する抗菌剤または防腐剤、安定剤、溶解促進剤、等張剤、緩衝剤、酸化防止剤、局所麻酔剤、懸濁化剤及び分散剤、湿潤剤または乳化剤、錯化剤、金属イオン封鎖剤またはキレート剤、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、及び不活性ガスを含むが、これらに限定されるわけではない１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含み得る。

【0297】

一実施形態では、適切な水性ビヒクルには、水、生理食塩水、食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース及び乳酸加リンゲル注射液が含まれるが、これらに限定されるわけではない。非水性ビヒクルには、植物起源の固定油、ヒマシ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、落花生油、ペパーミント油、ベニバナ油、ゴマ油、大豆油、硬化植物油、硬化大豆油、及びココナッツ油の中鎖トリグリセリド、及びパーム種子油が含まれるが、これらに限定されるわけではない。水混和性ビヒクルには、エタノール、１，３－ブタンジオール、液体ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール３００及びポリエチレングリコール４００）、プロピレングリコール、グリセリン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、及びジメチルスルホキシドが含まれるが、これらに限定されるわけではない。

【0298】

一実施形態では、適切な抗菌剤または防腐剤には、フェノール、クレゾール、水銀、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル及びプロピル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム（例えば、塩化ベンゼトニウム）、メチル－及びプロピル－パラベン、ならびにソルビン酸が含まれるが、これらに限定されるわけではない。適切な等張剤には、塩化ナトリウム、グリセリン及びデキストロースが含まれるが、これらに限定されるわけではない。適切な緩衝剤には、リン酸塩及びクエン酸塩が含まれるが、これらに限定されるわけではない。適切な酸化防止剤は、重亜硫酸塩及びメタ重亜硫酸ナトリウムを含む、本明細書に記載されるものである。適切な局所麻酔剤にはプロカイン塩酸塩が含まれるが、これに限定されるわけではない。適切な懸濁化剤及び分散剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンを含む、本明細書に記載されるものである。適切な乳化剤には、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート８０、及びトリエタノールアミンオレエートを含む、本明細書に記載されるものが含まれる。適切な金属イオン封鎖剤またはキレート剤には、ＥＤＴＡが含まれるが、これに限定されるわけではない。適切なｐＨ調整剤には、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、及び乳酸が含まれるが、これらに限定されるわけではない。適切な錯化剤には、シクロデキストリン、例えばα－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン、及びスルホブチルエーテル７－β－シクロデキストリン（ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）、ＣｙＤｅｘ、Ｌｅｎｅｘａ、ＫＳ）が含まれるが、これらに限定されるわけではない。

【0299】

一実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、単回投与または複数回投与用に製剤化され得る。単回投与製剤は、アンプル、バイアル、またはシリンジに包装される。複数回投与非経口製剤は、静菌濃度または静真菌濃度の抗菌剤を含み得る。全ての非経口製剤は、当技術分野で公知でありかつ実施されているように、無菌でなければならない。

【0300】

一実施形態では、医薬組成物は、すぐに使用できる滅菌溶液として提供される。別の実施形態では、医薬組成物は、使用前にビヒクルで再構成される、凍結乾燥粉末及び皮下注射用錠剤を含む滅菌乾燥可溶性製品として提供される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、すぐに使用できる滅菌懸濁液として提供される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、使用前にビヒクルで再構成される滅菌乾燥不溶性製品として提供される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、すぐに使用できる滅菌エマルジョンとして提供される。

【0301】

一実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的放出、及びプログラム放出形態を含む、即時放出または改変放出剤形として製剤化され得る。

【0302】

水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性粉末及び顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤及び１つもしくは複数の防腐剤と混合された活性成分を提供する。適切な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤が本明細書に例示される。

【0303】

医薬組成物はまた、インプラント、リポソーム、ヒドロゲル、プロドラッグ及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、急速な分解または身体からの排出から組成物を保護するための賦形剤を含むことができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を単独で、またはワックスと組み合わせて使用し得る。注射用医薬組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含めることによって達成することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。

【0304】

本明細書で提供される医薬組成物は、－８０℃、４℃、２５℃または３７℃で保存し得る。

【0305】

凍結乾燥組成物は、本明細書で提供される液体医薬組成物を凍結乾燥することによって作製することができる。具体的な実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、凍結乾燥医薬組成物である。いくつかの実施形態では、医薬製剤は凍結乾燥粉末であり、溶液、エマルジョン及び他の混合物として投与するために再構成することができる。それらはまた、固体またはゲルとして再構成及び製剤化され得る。

【0306】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される凍結乾燥製剤の調製は、凍結乾燥、無菌濾過、バイアルへの充填、凍結乾燥チャンバ内でのバイアルの凍結のための製剤化されたバルク溶液のバッチ処理、その後の凍結乾燥、栓締め及びキャッピングを含む。

【0307】

凍結乾燥製剤の調製には、凍結乾燥機を使用することができる。例えば、ＶｉｒＴｉｓ Ｇｅｎｅｓｉｓ Ｍｏｄｅｌ ＥＬパイロットユニットを使用することができる。ユニットは、３つの作業棚（使用可能な全棚面積は約０．４平方メートル）を有するチャンバ、外部コンデンサ、及び機械式真空ポンプシステムを組み込んでいる。カスケード式の機械的冷凍により、棚を－７０℃またはそれ以下に、外部コンデンサを－９０℃またはそれ以下に冷却することができる。棚温度及びチャンバ圧力は、それぞれ＋／－０．５℃及び＋／－２ミクロン（ｍｉｌｌｉＴｏｒｒ）に自動的に制御された。ユニットは、キャパシタンスマノメータ真空計、ピラニ真空計、圧力変換器（０～１気圧を測定するため）、及び相対湿度センサを備えていた。

【0308】

凍結乾燥粉末は、本明細書で提供される抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される派生物を適切な溶媒に溶解することによって調製することができる。いくつかの実施形態では、凍結乾燥粉末は滅菌されている。溶液のその後の滅菌濾過、続いて当業者に公知の標準条件下での凍結乾燥により、所望の製剤が提供される。一実施形態では、得られた溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配される。各バイアルは、単回投与量または複数回投与量の抗体薬物複合体を含む。凍結乾燥粉末は、適切な条件下、例えば約４℃から室温で保存することができる。

【0309】

この凍結乾燥粉末を注射用水で再構成することにより、非経口投与に使用するための製剤が提供される。再構成のために、凍結乾燥粉末を滅菌水または他の適切な賦形剤に添加する。そのような量は、経験的に決定し、特定のニーズに応じて調整することができる。

【0310】

例示的な再構成手順を以下に示す：（１）５ｍＬまたは３ｍＬのシリンジに１８または２０ゲージの針を取り付け、注射用水（ＷＦＩ）グレードの水をシリンジに充填する；（２）シリンジに気泡がないことを確保しながら、シリンジの目盛を使用して適切な量のＷＦＩを測定する；（３）ゴム栓に針を挿入する；（４）シリンジの内容物全体をバイアル壁から容器に分注し、シリンジ及び針を取り外し、シャープコンテナに入れる；（４）バイアルを連続的に旋回させて、バイアルの内容物全体を完全に再構成されるまで慎重に可溶化し（例えば、約２０秒～約４０秒）、発泡をもたらし得るタンパク質溶液の過度の撹拌を最小限に抑える。

【0311】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、密閉容器中の乾燥滅菌凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給され、例えば、水または生理食塩水を用いて対象への投与のために適切な濃度に再構成することができる。特定の実施形態では、抗体薬物複合体は、少なくとも０．１ｍｇ、少なくとも０．５ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも２ｍｇ、少なくとも３ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも８０ｍｇ、少なくとも８５ｍｇ、少なくとも９０ｍｇ、少なくとも９５ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇの単位投与量で、密閉容器中の乾燥滅菌凍結乾燥粉末として供給される。凍結乾燥抗体薬物複合体は、その元の容器中で２～８℃で保存することができ、抗体薬物複合体は、再構成後１２時間以内、例えば６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与することができる。代替的な実施形態では、本明細書で提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、抗抗体薬物複合体の量及び濃度を示す密閉容器中の液体形態で供給される。特定の実施形態では、抗体薬物複合体の液体形態は、密封容器中で、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも９０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで供給される。

【0312】

医薬組成物の追加の実施形態は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）に記載されていて、その両方ともそれら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0313】

５．５ 併用療法の方法
本明細書に提供される医薬組成物を使用して腫瘍細胞の増殖を阻害する方法は、化学療法もしくは放射線療法、またはその両方と組み合わせて使用することができ、化学療法もしくは放射線療法を開始する前、開始中、または開始後、ならびにそれらの任意の組み合わせ（すなわち、化学療法及び／または放射線療法を開始する前及び開始中、開始前及び開始後、開始中及び開始後、または開始前、開始中、開始後）に、本発明の医薬組成物を投与することを含む。治療プロトコル及び特定の患者のニーズに応じて、本方法は、最も有効な治療を提供し、最終的に患者の寿命を延長する方法で実施される。このような併用療法に関する追加的な実施形態は、米国特許第８，６３７，６４２号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０５６２１４号（公開番号ＷＯ２０２０／１１７３７３）に記載され、これらの両方は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0314】

５．６ 各方法におけるＡＤＣの投与量
いくつかの実施形態では、がんの予防及び／または治療に有効な予防薬もしくは治療薬（例えば、本明細書に提供される抗体薬物複合体）、または本明細書に提供される医薬組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。いくつかの実施形態では、有効量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から誘導された用量反応曲線から外挿することができる。製剤に採用される正確な用量は、投与経路や対象のがんの重症度によっても異なり、医師の判断と各患者の状況に応じて決定されるべきものであることを理解される。

【0315】

いくつかの実施形態では、本節（第５．６節）において様々な投与量が記載される方法のＡＤＣは、エンホルツマブベドチン（ＥＶ）である。

【0316】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物に製剤化された抗体薬物複合体の患者への投与経路は、経鼻、筋肉内、静脈内、またはそれらの組み合わせであるが、本明細書に記載される他の経路も許容される。各用量は、同一の投与経路によって投与されてもされなくてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物中に配合される抗体薬物複合体は、１つ以上の追加の治療薬の他の用量と同時に、または後に、複数の投与経路を介して投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、膀胱内に投与される。

【0317】

本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物に関して、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で、約１０ｍｇ～約１０００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇ～約９５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇ～約９００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇ～約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇ～約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である。

【0318】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍｇ～約１０００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍｇ～約１０００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１００ｍｇ～約９００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１２５ｍｇ～約９００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１２５ｍｇ～約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１２５ｍｇ～約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１２５ｍｇ～約７５０ｍｇの用量である。

【0319】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約９００ｍｇの用量である。

【0320】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、９００ｍｇの用量である。

【0321】

いくつかの実施形態では、注入容量は約１０ｍＬ～約１００ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約１０ｍＬ～約５０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約１５ｍＬ～約３０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約１０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約１５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約２０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約２５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約３０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約３５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約４０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約４５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約５０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約５５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約６０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約６５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約７０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約７５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約８０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約８５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約９０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約９５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は約１００ｍＬである。

【0322】

いくつかの実施形態では、注入容量は１０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は１５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は２０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は２５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は３０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は３５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は４０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は４５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は５０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は５５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は６０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は６５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は７０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は７５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は８０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は８５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は９０ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は９５ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入容量は１００ｍＬである。

【0323】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１０ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0324】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１０ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0325】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約１５ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0326】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、１５ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0327】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２０ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0328】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２０ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0329】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約２５ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0330】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、２５ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0331】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３０ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0332】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３０ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0333】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約３５ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0334】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、３５ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0335】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４０ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0336】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４０ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0337】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約４５ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0338】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、４５ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0339】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、約５０ｍＬの注入容量で、約９００ｍｇの用量である。

【0340】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、１００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、１２５ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、１５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、２００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、２５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、３００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、３５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、４００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、４５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、５００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、５５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、６００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、６５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、７００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、７５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、８００ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、８５０ｍｇの用量である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの有効量は、５０ｍＬの注入容量で、９００ｍｇの用量である。

【0341】

いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の最大滞留時間は約１２０分である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の最大滞留時間は約９０分である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の最大滞留時間は、対象の許容滞留時間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の最大滞留時間は、約３０分間～約１２０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の最大滞留時間は、約３０分間～約９０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約３０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約４０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約５０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約６０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約７０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約８０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約９０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約１００分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約１１０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は約１２０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は３０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は４０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は５０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は６０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は７０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は８０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は９０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は１００分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は１１０分間である。いくつかの実施形態では、各膀胱内投与の滞留時間は１２０分間である。

【0342】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、２つの段階中に膀胱内に投与され、ここで、２つの段階は誘導段階及び維持段階である。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の後に開始する。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の６～１０週間後、６～９週間後、または６～８週間後に開始する。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の１０週間後に開始する。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の９週間後に開始する。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の８週間後に開始する。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の７週間後に開始する。いくつかの実施形態では、維持段階は、誘導段階の６週間後に開始する。

【0343】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、約１～約２５回投与され、用量は、必要に応じて、例えば、毎週、隔週、毎月、隔月、３ヵ月毎など、医師によって決定されるように投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、毎週投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、隔週投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、毎月投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、隔月投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、３ヵ月毎に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、ＮＭＩＢＣを治療するために２５回、２４回、２３回、２２回、２１回、２０回、１９回、１８回、１７回、１６回、１５回、１４回、１３回、１２回、１１回、１０回、９回、８回、７回、６回、５回、４回、３回、２回または１回投与され、用量は、約１０ｍＬ～約１００ｍＬの注入容量で約１０ｍｇ～約１０００ｍｇである。

【0344】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に、週に１回、４週間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に、週に１回、５週間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に、週に１回、６週間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に、週に１回、７週間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に、週に１回、８週間にわたり膀胱内に投与される。

【0345】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に、月に１回、６ヵ月間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に、月に１回、７ヵ月間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に、月に１回、８ヵ月間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に、月に１回、９ヵ月間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に、月に１回、１０ヵ月間にわたり膀胱内に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、維持段階中に、月に１回、１１ヵ月間にわたり膀胱内に投与される。

【0346】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体薬物複合体を含む医薬組成物は、誘導段階中に、週に１回６週間にわたり、維持段階中で月に１回９ヵ月間にわたり、膀胱内に投与され、維持段階は、誘導段階の６～１０週間後、６～９週間後、または６～８週間後に開始する。

【0347】

本明細書に提供される方法のより具体的な実施形態では、ＡＤＣは以下の構造を有する：

式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、該抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、該ＡＤＣは、約１２５ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、該用量は、誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、維持段階は、誘導段階の６～１０週間後に開始する。

【0348】

本明細書に提供される方法のより具体的な実施形態では、ＡＤＣは以下の構造を有する：

式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、該抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、該ＡＤＣは、約２５０ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、該用量は、誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、維持段階は、誘導段階の６～１０週間後に開始する。

【0349】

本明細書に提供される方法のより具体的な実施形態では、ＡＤＣは以下の構造を有する：

式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、該抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、該ＡＤＣは、約５００ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、該用量は、誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、維持段階は、誘導段階の６～１０週間後に開始する。

【0350】

本明細書に提供される方法のより具体的な実施形態では、ＡＤＣは以下の構造を有する：

式中、Ｌ－は抗体またはその抗原結合断片を表し、ｐは約３～約４であり、該抗体は、配列番号７の２０番目のアミノ酸（グルタミン酸）から４６６番目のアミノ酸（リジン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８の２３番目のアミノ酸（アスパラギン酸）から２３６番目のアミノ酸（システイン）までの範囲にわたるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、ここで、該ＡＤＣは、約７５０ｍｇの用量で、約２５ｍＬの点滴注入量及び最大９０分間の滞留時間で膀胱内投与され、該用量は、誘導段階中の６週間にわたって週に１回、および維持段階中の９ヵ月間にわたって月に１回膀胱内投与され、維持段階は、誘導段階の６～１０週間後に開始する。

【0351】

５．７ バイオマーカーを決定する方法
本開示では、本明細書で提供されるマーカーのいずれの発現も、当技術分野において公知である種々の方法によって決定できることを規定する。いくつかの実施形態では、マーカーの発現は、マーカー遺伝子から転写されたｍＲＮＡの量または相対量によって決定することができる。一実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物の量または相対量によって決定することができる。別の実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物によって誘発される生物学的または化学的な応答のレベルによって決定することができる。加えて、特定の実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、マーカー遺伝子の発現と相関する１つまたは複数の遺伝子の発現によって決定することができる。

【0352】

上記のように、マーカー遺伝子の遺伝子転写物（例えば、ｍＲＮＡ）のレベルまたは量をマーカー遺伝子の発現レベルの代用として使用することができる。本明細書に例示されるものを含め、多数の異なるＰＣＲまたはｑＰＣＲプロトコルが当技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、種々のマーカー遺伝子のｍＲＮＡレベルを決定するために、種々のＰＣＲ法またはｑＰＣＲ法が適用または適合される。定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）（リアルタイムＰＣＲとも称される）は、定量的測定のみならず、時間及び汚染の低減も提供するため、いくつかの実施形態に適用及び適合される。本明細書で使用される場合、「定量的ＰＣＲ（または「ｑＰＣＲ」）」は、反応生成物のサンプリングの反復を必要とせずに、ＰＣＲ増幅の進行が発生している時に直接モニタリングすることを指す。定量的ＰＣＲでは、シグナルがバックグラウンドレベルを超え、反応がプラトーに達する前に、生成され、追跡された反応生成物をシグナル伝達機構（例えば、蛍光）を介してモニタリングすることができる。検出可能なレベルまたは「閾値」レベルの蛍光を達成するのに必要なサイクル数は、ＰＣＲプロセス開始時の増幅可能な標的の濃度と正比例しており、試料中の標的核酸量のリアルタイムな測定値を示すシグナル強度の測定が可能である。ｍＲＮＡの発現レベルの決定にｑＰＣＲを適用する場合、ｍＲＮＡからＤＮＡへの逆転写という追加工程をｑＰＣＲ分析の前に実施する。ＰＣＲ法の例は、文献（Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ３９：７５－８５（２００５）；Ｄ’ｈａｅｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ５０：２６２－２７０（２０１０））で参照することができ、これらは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。ＰＣＲアッセイの例も、米国特許第６，９２７，０２４号で参照でき、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。ＲＴ－ＰＣＲ法の例は、米国特許第７，１２２，７９９号で参照でき、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。蛍光ｉｎ ｓｉｔｕ ＰＣＲの方法は、米国特許第７，１８６，５０７号に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

【0353】

具体的な一実施形態では、ｑＰＣＲを実施して、マーカー遺伝子のｍＲＮＡレベルを以下のように決定または測定することができる。簡潔には、マーカー遺伝子及び１つまたは複数のハウスキーピング遺伝子についての複製ｑＰＣＲ反応の平均Ｃｔ（サイクル閾値）値（または本明細書で同義にＣｑ（定量サイクル）と称する）を決定する。次に、以下の例示的な式：マーカー遺伝子ΔＣｔ＝（マーカー遺伝子の平均Ｃｔ－ハウスキーピング遺伝子Ａの平均Ｃｔ）を使用して、ハウスキーピング遺伝子のＣｔ値に対してマーカー遺伝子の平均Ｃｔ値を正規化することができる。次に、相対マーカー遺伝子ΔＣｔを用いて、例えば、ｍＲＮＡ発現＝２^－△Ｃｔの式を使用することによりマーカー遺伝子ｍＲＮＡの相対レベルを決定することができる。Ｃｔ値及びＣｑ値の概要については、ＭＩＱＥガイドライン（Ｂｕｓｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＭＩＱＥ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５５：４（２００９））を参照のこと。

【0354】

当技術分野において公知である他の一般的な使用方法を、マーカー遺伝子の発現の代用として試料中のマーカー遺伝子のＲＮＡ転写物の定量化に使用することができ、これには、ノーザンブロッティング及びｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（Ｐａｒｋｅｒ ＆ Ｂａｒｎｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １０６：２４７－２８３（１９９９））；ＲＮＡｓｅ保護アッセイ（Ｈｏｄ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：８５２－ ８５４（１９９２））；マイクロアレイ（Ｈｏｈｅｉｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：２００－２１０（２００６）；Ｊａｌｕｒｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ ６：４（２００７））；及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（Ｗｅｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８：２６３－２６４（１９９２））が含まれる。ＲＮＡ ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）とは、細胞及び組織の状況を維持しながら、血中循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）または組織切片などの細胞内の特定のＲＮＡ配列、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ロングノンコーディングＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を測定及び局在検出するために広範に使用されている分子生物学手法である。ＩＳＨは、プローブなどの直接的または間接的に標識された相補的ＤＮＡまたはＲＮＡ鎖を使用して、試料中、特に組織または細胞の部分または切片中（ｉｎ ｓｉｔｕ）のＤＮＡまたはＲＮＡなどの特定の核酸に結合させ、局在化させるハイブリダイゼーションの一種である。プローブの種類は、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、一本鎖相補的ＲＮＡ（ｓｓｃＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ、ミトコンドリアＲＮＡ、及び／または合成オリゴヌクレオチドであり得る。「蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション」または「ＦＩＳＨ」という用語は、蛍光標識を利用するＩＳＨの一種を指す。「発色ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション」または「ＣＩＳＨ」という用語は、発色標識を用いたＩＳＨの一種を指す。ＩＳＨ法、ＦＩＳＨ法、及びＣＩＳＨ法は、当業者に周知されている（例えば、Ｓｔｏｌｅｒ，Ｃｌｉｎｉｃｓ ｉｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １０（１）：２１５－２３６（１９９０）；Ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９２）；Ｓｃｈｗａｒｚａｃｈｅｒ ａｎｄ Ｈｅｓｌｏｐ－Ｈａｒｒｉｓｏｎ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＢＩＯＳ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄ（２０００）を参照）。したがって、ＲＮＡ ＩＳＨは、細胞及び組織内の遺伝子発現の時空間的可視化ならびに定量化を可能にする。これは、研究及び診断において広範に応用されている（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｒｋ．Ｒｅｓ．２（１）：１－１３，ｄｏｉ：１０．１１８６／２０５０－７７７１－２－３（２０１４）；Ｒａｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｅｕｓ ９（６）：ｅ１３２５．ｄｏｉ：１０．７７５９／ｃｕｒｅｕｓ．１３２５（２０１７）；Ｗｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｄｉａｇｎ．２（２）：１０９－１１９（２００２））。蛍光ＲＮＡ ＩＳＨは、ＲＮＡの標識及び検出にそれぞれ蛍光色素及び蛍光顕微鏡を利用する。蛍光ＲＮＡ ＩＳＨは、４～５個の標的配列の多重化を可能にすることができる。

【0355】

あるいは、マーカー遺伝子の発現の代用として試料中のマーカー遺伝子のＲＮＡ転写物を配列決定技術によって決定することができる。配列決定に基づく遺伝子発現解析の代表的な方法として、Ｓｅｒｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＳＡＧＥ）、及びｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（ＭＰＳＳ）による遺伝子発現解析が挙げられる。

【0356】

いくつかの実施形態では、転写された全ＲＮＡのプール中でのマーカー遺伝子のＲＮＡ転写物（例えば、ｍＲＮＡを含む）の相対的存在量によってマーカー遺伝子の発現を決定することができる。マーカー遺伝子のＲＮＡ転写物のそのような相対的存在量は、ＲＮＡ－ｓｅｑとして公知である次世代シーケンシングによって決定することができる。ＲＮＡ－ｓｅｑ手順の一例では、異なる供給源（血液、組織、細胞）からのＲＮＡを精製し、場合により濃縮し（例えば、オリゴ（ｄＴ）プライマーを用いる）、ｃＤＮＡに変換し、断片化する。ランダムに断片化されたｃＤＮＡライブラリから、数百万または数十億もの短い配列リードが生成される。Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ ｇｅｎｏｍｉｃｓ １６：９７（２０１５）；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８：４７８１（２０１８）；Ｓｈａｎｒｏｎｇ Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ，２０２０年４月１３日事前公開，ｄｏｉ：１０．１２６１／ｒｎａ．０７４９２２．１２０（これらは全て、その全体が参照により本明細書に組み入れられる）を参照のこと。マーカー遺伝子の各ｍＲＮＡ転写物の発現レベルは、正規化時にマッピングされた断片の総数によって決定され、これはその存在量レベルと正比例する。いくつかの正規化法が公知であり、これを使用すると、遺伝子発現を決定するパラメータとしてＲＮＡ転写物の存在量を使用しやすくなる。正規化法には、ＲＰＫＭ（Ｒｅａｄｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ Ｍｉｌｌｉｏｎ）、ＦＰＫＭ（Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ Ｍｉｌｌｉｏｎ）、及び／またはＴＰＭ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ Ｍｉｌｌｉｏｎ）がある。簡潔には、ＲＰＫＭは次のように計算することができる。試料の総リード数を計数し、その数を１，０００，０００で割る。これは「１００万あたりの」換算係数である。リード数を「１００万あたりの」換算係数で割る。これをシーケンス深度に対して正規化し、１００万あたりのリード数（ＲＰＭ）を得て、ＲＰＭ値を遺伝子深度（キロベース単位）で割ると、ＲＰＫＭが得られる。ＦＰＫＭは、リードが断片に置き換わる以外、ＲＰＫＭと密に関連する。ＲＰＫＭはシングルエンドＲＮＡ－ｓｅｑ用に作成されたものであり、リードはどれもシーケンスされた１つの断片に対応する。ＦＰＫＭはペアエンドＲＮＡ－ｓｅｑ用に作成されたものであり、１つの断片に２つのリードが対応するか、あるいはペアのうち片方のリードがマッピングされなかった場合、１つの断片に１つのリードが対応する。ＴＰＭは、ＲＰＫＭ及びＦＰＫＭと酷似しており、次のように計算される。リード数を各遺伝子長（キロベース単位）で割り、キロベースあたりのリード（ＲＰＫ）を得る。試料のＲＰＫ値を据えて計数し、その数を１，０００，０００で割り、「１００万あたりの」換算係数を得る。ＲＰＫ値を「１００万あたりの」換算係数で割ると、ＴＰＭが得られる。Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ ｇｅｎｏｍｉｃｓ １６：９７（２０１５）；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８：４７８１（２０１８）；Ｓｈａｎｒｏｎｇ Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ，２０２０年４月１３日事前公開，ｄｏｉ：１０．１２６１／ｒｎａ．０７４９２２．１２０（これらは全て、その全体が参照により本明細書に組み入れられる）を参照のこと。

【0357】

一実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば、ＴＰＭ、ＲＰＫＭ、及び／またはＦＰＫＭによって決定される。いくつかの実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、ＴＰＭによって決定される。いくつかの実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、ＲＰＫＭによって決定される。いくつかの実施形態では、マーカー遺伝子の発現は、ＦＰＫＭによって決定される。

【0358】

先述のように、マーカー遺伝子の発現は、対象からの試料において決定することができる。いくつかの実施形態では、試料は、血液試料、血清試料、血漿試料、体液（例えば、がんの組織液を含む組織液）、または組織（例えば、がん組織またはがん周辺組織）である。いくつかの実施形態では、試料は組織試料である。いくつかの実施形態では、組織試料は、哺乳動物、特にヒトから単離または抽出された組織画分である。いくつかの実施形態では、組織試料は、哺乳動物、特にヒトから単離または抽出された細胞の集団である。いくつかの実施形態では、組織試料は、生検から得た試料である。特定の実施形態では、ヒト対象を含む対象の様々な臓器から試料を得ることができる。いくつかの実施形態では、試料は、がんを有する対象の臓器から得られる。いくつかの実施形態では、試料は、がんを有する対象の、がんを有する臓器から得られる。他の実施形態では、試料、例えば参照試料は、患者または第２のヒト対象の正常な臓器から得られる。

【0359】

本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、組織として、膀胱、尿管、乳房、肺、結腸、直腸、卵巣、卵管、食道、子宮頸部、子宮内膜、皮膚、喉頭、骨髄、唾液腺、腎臓、前立腺、脳、脊髄、胎盤、副腎、膵臓、副甲状腺、下垂体、精巣、甲状腺、脾臓、扁桃腺、胸腺、心臓、胃、小腸、肝臓、骨格筋、末梢神経、中皮、または眼からの組織が挙げられる。

【0360】

本明細書で提供される方法のさらなる実施形態では、種々のマーカー遺伝子の発現を、当技術分野において公知である様々なイムノアッセイによって検出することができ、これには、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイ、イムノブロッティングアッセイ、ＦＡＣＳアッセイ、及びＥＬＩＳＡが含まれる。

【0361】

様々なＩＨＣアッセイにおいて、種々のマーカー遺伝子の発現を、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物に対する抗体によって検出することができる。組織切片のＩＨＣ染色は、試料中のタンパク質の存在を評価または検出する信頼性の高い方法であることが示されている。ＩＨＣ技術は抗体を利用して、一般には発色法または蛍光法により、ｉｎ ｓｉｔｕで細胞抗原をプローブ及び可視化する。マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物を特異的に標的とするポリクローナル抗血清及びモノクローナル抗体などの一次抗体または抗血清を使用して、ＩＨＣアッセイでマーカー遺伝子の発現を検出することができる。いくつかの実施形態では、抗体と標的との結合が生じるのに十分な時間、特異的標的に対する一次抗体と組織試料を接触させる。詳細に先述したように、抗体は、例えば、放射性標識、蛍光標識、ビオチンなどのハプテン標識、または西洋ワサビペルオキシダーゼもしくはアルカリホスファターゼなどの酵素といった、抗体自体での直接標識によって検出することができる。あるいは、一次抗体に対して特異的な抗血清、ポリクローナル抗血清、またはモノクローナル抗体を含む標識二次抗体と組み合わせて、非標識一次抗体を使用する。ＩＨＣのプロトコル及びキットは当技術分野において周知されており、市販されている。スライド作製及びＩＨＣ処理の自動化システムが市販されている。Ｌｅｉｃａ ＢＯＮＤ Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ及びＬｅｉｃａ Ｂｏｎｄ Ｒｅｆｉｎｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎシステムは、このような自動化システムの一例である。

【0362】

いくつかの実施形態では、ＩＨＣアッセイは、非標識一次抗体を標識二次抗体と組み合わせた間接アッセイで行われる。間接アッセイは、組織試料中の、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物の検出に２つの抗体を利用する。最初に、非結合一次抗体を組織に塗布し（第１層）、組織試料中の標的抗原と反応させる。次に、一次抗体の抗体アイソタイプを特異的に認識する酵素標識二次抗体を塗布する（第２層）。二次抗体が一次抗体と反応した後、基質－色原体を塗布する。第２層の抗体は、ペルオキシダーゼなどの酵素で標識することができる。この酵素は、色原体３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）と反応して、反応部位に茶褐色の沈着物を生成する。この方法は、シグナル増幅システムを用いたシグナル増幅が見込まれるため、高感度かつ多用途である。

【0363】

特定の実施形態では、検出の感度を高めるために、シグナル増幅システムを使用することができる。本明細書で使用される「シグナル増幅システム」とは、結合した一次抗体または二次抗体を検出することで得られるシグナルを増加させるために使用できる試薬及び方法のシステムを意味する。シグナル増幅システムは、標的タンパク質検出の感度を高め、検出シグナルを増加させ、検出限界の下限を低下させる。シグナル増幅システムには、酵素標識システム及びマクロ標識システムを含む、数種のシグナル増幅システムがある。これらのシステム／手法は相互に排他的ではなく、組み合わせて使用すると相加効果が得られる。

【0364】

マクロ標識またはマクロ標識システムとは、共通の足場に付着または組み込まれる数十（例えば、フィコビリタンパク質）から数百万（例えば、蛍光マイクロスフィア）のナンバリングした標識の集合である。抗体などの標的特異的親和性試薬に足場を結合することができ、それにより、組み込まれた標識が結合時に標的と集合的に会合する。マクロ標識中の標識は、フルオロフォア、ハプテン、酵素、及び／または放射性同位体など、本明細書に記載の標識のいずれかであり得る。シグナル増幅システムの一実施形態では、標識鎖ポリマーを複合化した二次抗体を使用した。ポリマー技術は、デキストランのＨＲＰ酵素標識不活性「棘状」分子を利用したものであり、これには、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、５０、またはそれ以上の二次抗体分子を付着させることができるため、システムがさらに高感度になる。

【0365】

酵素標識システムに基づくシグナル増幅システムは、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼなどの酵素の触媒活性を利用して、ｉｎ ｓｉｔｕで標的タンパク質または核酸配列の高密度標識を生成する。一実施形態では、チラミドを使用してＨＲＰのシグナルを増加させることができる。そのようなシステムでは、ＨＲＰにより、標識チラミド誘導体が反応性の高い、短寿命のチラミドラジカルに酵素的に変換される。次に、標識活性チラミドラジカルが、ＨＲＰ－抗体－標的相互作用部位付近の残基（主にタンパク質チロシン残基のフェノール部分）に共有結合する。その結果、その部位での標識数が増幅され、シグナル局在の拡散関連損失が最小限に抑えられる。結果として、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、５０倍、７５倍、または１００倍にシグナルを増幅することができる。当業者には公知であるように、チラミドの標識は、フルオロフォア、酵素、ハプテン、放射性同位体、及び／またはフォトフォアを含む、本明細書に記載の標識のいずれであってもよい。他の酵素に基づく反応を利用して、シグナル増幅を創出することもできる。例えば、アルカリホスファターゼには酵素標識蛍光（ＥＬＦ）シグナル増幅を利用でき、その場合、アルカリホスファターゼは弱青色蛍光基質（ＥＬＦ９７ホスフェート）を酵素的に切断し、並外れて大きなストークスシフトと優れた光安定性を示す明黄緑色蛍光沈着物に変換する。チラミドに基づくシグナル増幅システムとＥＬＦシグナル増幅のいずれもが市販されており、例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ ＵＳＡ ０２４５１）製のものがある。

【0366】

したがって、本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、マーカー遺伝子の発現レベルは、シグナル増幅システムを使用するＩＨＣを用いて検出される。いくつかの実施形態では、さらに標本を対比染色して、細胞要素及び細胞内要素を識別する。

【0367】

いくつかの実施形態では、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物の発現レベルを、イムノブロッティングアッセイを使用して、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物に対する抗体を用いて検出することもできる。イムノブロッティングアッセイのいくつかの実施形態では、タンパク質を電気泳動によって分離し、膜（通常はニトロセルロース膜またはＰＶＤＦ膜）に転写する場合が多い（ただし、必ずしもそうである必要はない）。ＩＨＣアッセイと同様に、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物を特異的に標的とするポリクローナル抗血清及びモノクローナル抗体などの一次抗体または抗血清を使用して、マーカー遺伝子の発現を検出することができる。いくつかの実施形態では、抗体と抗原との結合が生じるのに十分な時間、特異的標的に対する一次抗体と膜を接触させ、結合抗体を、例えば、放射性標識、蛍光標識、ビオチンなどのハプテン標識、または西洋ワサビペルオキシダーゼもしくはアルカリホスファターゼなどの酵素といった、一次抗体自体での直接標識によって検出することができる。他の実施形態では、上記のような間接アッセイにおいて、一次抗体に対して特異的な標識二次抗体と組み合わせて非標識一次抗体を使用する。本明細書に記載されるように、二次抗体は、例えば、酵素、または蛍光標識、発光標識、比色標識、または放射性同位体などの他の検出可能な標識で標識することができる。イムノブロッティングのプロトコル及びキットは当技術分野において周知されており、市販されている。イムノブロッティング用の自動化システム、例えば、ｉＢｉｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ ＵＳＡ ０２４５１）が市販されている。イムノブロッティングとしては、ウェスタンブロット、ｉｎ－ｃｅｌｌウェスタンブロット、及びドットブロットが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ドットブロットは、タンパク質試料を電気泳動によって分離せず、膜に直接スポットする簡素化された手順である。ｉｎ ｃｅｌｌウェスタンブロットは、マイクロタイタープレートに細胞を播種し、細胞を固定／透過処理し、その後、一次標識一次抗体または非標識一次抗体、続いて本明細書に記載の標識二次抗体により検出することを伴う。

【0368】

他の実施形態では、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物の発現レベルは、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）アッセイを含むフローサイトメトリーアッセイにおいて、本明細書に記載の抗体を用いて検出することもできる。ＩＨＣアッセイまたはイムノブロッティングアッセイと同様に、ＦＡＣＳアッセイにおいて、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物を特異的に標的とするポリクローナル抗血清及びモノクローナル抗体などの一次抗体または抗血清を使用して、タンパク質の発現を検出することができる。いくつかの実施形態では、抗体と抗原との結合が生じるのに十分な時間、特異的標的タンパク質に対する一次抗体と共に細胞を染色し、結合抗体を、例えば、一次抗体上の蛍光標識またはビオチンなどのハプテン標識といった、一次抗体での直接標識によって検出することができる。他の実施形態では、上記のような間接アッセイにおいて、一次抗体に対して特異的な蛍光標識二次抗体と組み合わせて非標識一次抗体を使用する。ＦＡＣＳは、各細胞の特定の光散乱及び蛍光特性に基づいて、一度に１細胞ずつ、蛍光標識生体細胞の混合物を選別または分析する方法を提供する。例えば、フローサイトメーターは、標的タンパク質の発現レベルを示す蛍光色素タグ付き抗体の強度を検出して報告する。その結果、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物の発現レベルを、そのようなタンパク質産物に対する抗体を使用して検出することができる。非蛍光細胞質タンパク質もまた、透過処理された細胞を染色することによって観察することができる。ＦＡＣＳ染色及び分析を実施するための方法は、当業者に周知されており、Ｔｅｒｅｓａ Ｓ．Ｈａｗｌｅｙ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔ Ｇ．Ｈａｗｌｅｙ ｉｎ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２０１１（ＩＳＢＮ １６１７３７９５０６，９７８１６１７３７９５０５）に記載されている。

【0369】

他の実施形態では、マーカー遺伝子がコードするタンパク質産物の発現レベルは、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）またはＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを使用して検出することもできる。ＥＩＡアッセイ及びＥＬＩＳＡアッセイのいずれも、例えば、血液、血漿、血清、または骨髄を含む多種多様な組織及び試料の分析用として、当技術分野において公知である。広範なＥＬＩＳＡアッセイ形式が利用可能であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，０１６，０４３号、同第４，４２４，２７９号、及び同第４，０１８，６５３号を参照のこと。これには、従来の競合結合アッセイに加え、非競合型のシングルサイトアッセイとツーサイトアッセイ（すなわち「サンドイッチ」アッセイ）の両方が含まれる。これらのアッセイにはまた、標的タンパク質への標識抗体の直接結合も含まれる。サンドイッチアッセイが一般的に使用されるアッセイ形式である。サンドイッチアッセイ技術の変形例は多数存在する。例えば、典型のフォワードアッセイでは、非標識抗体を固体基板上に固定し、試験しようとする試料を結合分子と接触させる。適切な期間、すなわち抗体－抗原複合体の形成を可能にするのに十分な期間、インキュベーションした後、検出可能なシグナルを生成できるレポーター分子で標識された、抗原特異的二次抗体を添加してさらにインキュベートし、抗体－抗原－標識抗体の別の複合体を形成するのに十分な時間をかける。未反応の物質を洗い流し、レポーター分子によって生成されたシグナルの観察によって抗原の存在を決定する。結果は、可視シグナルの単純な観察による定性的なもの、または既知量の標的タンパク質を含有する対照試料と比較することによる定量的なもののいずれかでもあり得る。

【0370】

ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡアッセイのいくつかの実施形態では、酵素が二次抗体に複合化されている。他の実施形態では、蛍光標識二次抗体を酵素標識二次抗体の代わりに使用して、ＥＬＩＳＡアッセイ形式で検出可能なシグナルを生成することができる。特定の波長の光を照射することによって活性化されると、蛍光色素標識抗体は光エネルギーを吸収し、分子内に励起状態が誘発され、続いて光学顕微鏡で視覚的に検出可能である特徴的な色の光を放射する。ＥＩＡ及びＥＬＩＳＡと同様に、蛍光標識抗体を最初の抗体－標的タンパク質複合体に結合させる。非結合試薬を洗い流した後、残りの三次複合体を適切な波長の光にさらに露出する。観測された蛍光は、対象となる標的タンパク質の存在を示す。免疫蛍光技術及びＥＩＡ技術はいずれも当技術分野において極めて十分に確立されたものであり、本明細書で開示されている。

【0371】

本明細書に記載のイムノアッセイでは、それぞれ酵素活性標識または非酵素標識を検出できる限り、多数の酵素標識または非酵素標識のいずれをも利用することができる。したがって、酵素は標的タンパク質の検出に利用することができる検出可能なシグナルを生成するものである。特に有用な検出可能なシグナルは発色シグナルまたは蛍光シグナルである。したがって、標識として使用するのに特に有用な酵素としては、発色基質または蛍光基質を利用可能である酵素が挙げられる。そのような発色基質または蛍光基質は酵素反応によって、顕微鏡または分光法を使用して容易に検出及び／または定量化できる容易に検出可能な発色生成物または蛍光生成物に変換することができる。そのような酵素は当業者に周知されており、これには、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどを含むがこれらに限定されるわけではない（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（１９９６）を参照）。周知の発色基質または蛍光基質を有する他の酵素には、発色性または蛍光性のペプチド基質を利用してタンパク質分解切断反応を検出できる種々のペプチダーゼが含まれる。発色基質及び蛍光基質の使用は、細菌診断においても周知されており、これには、限定されるわけではないが、α－及びβ－ガラクトシダーゼ、β－グルクロニダーゼ、６－ホスホ－β－Ｄ－ガラクトシド、６－ホスホガラクトヒドロラーゼ、α－グルオシダーゼ、α－グルコシダーゼ、アミラーゼ、ノイラミニダーゼ、エステラーゼ、リパーゼなどの使用が含まれ（Ｍａｎａｆｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５５：３３５－３４８（１９９１））、公知の発色基質または蛍光基質を有するそのような酵素は、本開示の方法での使用に容易に適合させることができる。

【0372】

検出可能なシグナルを生成するための種々の発色基質または蛍光基質は、当業者に周知されており、市販されている。検出可能なシグナルを生成するために利用できる例示的な基質としては、西洋ワサビペルオキシダーゼでは、３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、クロロナフトール（４－ＣＮ）（４－クロロ－１－ナフトール）、２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、ｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）、及び３－アミノ－９－エチルカルバゾール（ＡＥＣ））；アルカリホスファターゼでは、５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリル－１－リン酸（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、Ｆａｓｔ Ｒｅｄ（Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＴＲ／ＡＳ－ＭＸ）、及びｐ－ニトロフェニルリン酸（ＰＮＰＰ）；β－ガラクトシダーゼでは、１－メチル－３－インドリル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド及び２－メトキシ－４－（２－ニトロビニル）フェニルβ－Ｄ－ガラクトピラノシド；α－グルコシダーゼでは、２－メトキシ－４－（２－ニトロビニル）フェニルβ－Ｄ－グルコピラノシドなどが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。例示的な蛍光基質としては、アルカリホスファターゼでは、４－（トリフルオロメチル）ウンベリフェリルリン酸；ホスファターゼでは、４－メチルウンベリフェリルリン酸ビス（２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール）、４－メチルウンベリフェリルリン酸ビス（シクロヘキシルアンモニウム）、及び４－メチルウンベリフェリルリン酸；西洋ワサビペルオキシダーゼでは、ＱｕａｎｔａＢｌｕ（商標）及びＱｕａｎｔａＲｅｄ（商標）；β－ガラクトシダーゼでは、４－メチルウンベリフェリルβ－Ｄ－ガラクトピラノシド、フルオレセイン ジ（β－Ｄ－ガラクトピラノシド）、及びナフトフルオレセイン ジ－（β－Ｄ－ガラクトピラノシド）；β－グルコシダーゼでは、３－アセチルウンベリフェリルβ－Ｄ－グルコピラノシド、及び４－メチルウンベリフェリル－β－Ｄ－グルコピラノシド；ならびにα－ガラクトシダーゼでは、４－メチルウンベリフェリル－α－Ｄ－ガラクトピラノシドが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。検出可能なシグナルを生成するための例示的な酵素及び基質はまた、例えば、米国公開第２０１２／０１００５４０号にも記載されている。発色基質または蛍光基質を含む、種々の検出可能な酵素基質は周知されており、市販されている（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬ；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｌｌａｓ ＴＸ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ；４２ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｂｉｏｃａｒｅ）。概して、基質は、標的核酸の部位に付着する沈着物を形成する生成物に変換される。他の例示的な基質としては、ＨＲＰ－Ｇｒｅｅｎ（４２ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｂｉｏｃａｒｅ（Ｃｏｎｃｏｒｄ ＣＡ；ｂｉｏｃａｒｅ．ｎｅｔ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ／ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｓ）製のＢｅｔａｚｏｉｄ ＤＡＢ、Ｃａｒｄａｓｓｉａｎ ＤＡＢ、Ｒｏｍｕｌｉｎ ＡＥＣ、Ｂａｊｏｒａｎ Ｐｕｒｐｌｅ、Ｖｉｎａ Ｇｒｅｅｎ、Ｄｅｅｐ Ｓｐａｃｅ Ｂｌａｃｋ（商標）、Ｗａｒｐ Ｒｅｄ（商標）、Ｖｕｌｃａｎ Ｆａｓｔ Ｒｅｄ、及びＦｅｒａｎｇｉ Ｂｌｕｅが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

【0373】

イムノアッセイのいくつかの実施形態では、検出可能な標識は、一次抗体、または有する可能性のある非標識一次抗体を検出する二次抗体のいずれかに直接結合することができる。例示的な検出可能な標識は当業者に周知されており、これには、発色標識または蛍光標識を含むがこれらに限定されるわけではない（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（１９９６）を参照）。標識として有用である例示的なフルオロフォアとしては、ローダミン誘導体、例えば、テトラメチルローダミン、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、スルホローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（スルホローダミン１０１）、ローダミン１１０、及びそれらの誘導体、例えば、テトラメチルローダミン－５－（または６）、リサミンローダミンＢなど；７－ニトロベンゾ－２－オキサ－１，３－ジアゾール（ＮＢＤ）；フルオレセイン及びその誘導体；ダンシル（５－ジメチルアミノナフタレン－１－スルホニル）などのナフタレン；クマリン誘導体、例えば、７－アミノ－４－メチルクマリン－３－酢酸（ＡＭＣＡ）、７－ジエチルアミノ－３－［（４’－（ヨードアセチル）アミノ）フェニル］－４－メチルクマリン（ＤＣＩＡ）、Ａｌｅｘａ蛍光色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）など；４，４－ジフルオロ－４－ボラ－３ａ，４ａ－ジアザ－ｓ－インダセン（ＢＯＤＩＰＹ（商標））及びその誘導体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ；Ｅｕｇｅｎｅ Ｏｒｅｇ．）；ピレン及びスルホン化ピレン、例えば、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ（商標）、及び８－メトキシピレン－１，３，６－トリスルホン酸などを含むその誘導体；ピリジルオキサゾール誘導体及びダポキシル誘導体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）；Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ（３，６－ジスルホネート－４－アミノ－ナフタルイミド）及びその誘導体；ＣｙＤｙｅ（商標）蛍光色素（Ａｍｅｒｓｈａｍ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）などが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。例示的な発色団としては、フェノールフタレイン、マラカイトグリーン、ニトロフェニルなどのニトロ芳香族、ジアゾ色素、ダブシル（４－ジメチルアミノアゾベンゼン－４’－スルホニル）などが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

【0374】

顕微鏡法または分光法などの当業者に周知の方法を利用して、結合した一次抗体または二次抗体に関連する発色性または蛍光性の検出可能シグナルを可視化することができる。

【0375】

本節（第５．７節）で提供される方法、当技術分野において公知である種々のがんモデルで使用することができる。一実施形態では、マウス異種移植がんモデルが使用される。簡潔には、Ｔ－２４細胞及びＵＭ－ＵＣ－３細胞をＡＴＣＣから購入し、推奨培地条件を使用して培養する。Ｔ－２４ ｈＮｅｃｔｉｎ－４（ヒトネクチン－４）細胞及びＵＭ－ＵＣ－３ネクチン－４細胞は、ｐＲＣＤＣＭＥＰ－ＣＭＶ－ｈＮｅｃｔｉｎ－４ ＥＦ１－Ｐｕｒｏ構築物を使用して、ヒトネクチン－４含有レンチウイルスを親細胞に形質導入することにより生成し、ピューロマイシンを使用して選択する。Ｔ－２４ネクチン－４（クローン１Ａ９）細胞をヌードマウスに移植し、トロカールを用いて継代し、腫瘍体積が約２００ｍｍ^３に達した後、治療群あたり７匹の動物へのエンホルツマブベドチン（３ｍｇ／ｋｇ）または非結合ＡＤＣ（３ｍｇ／ｋｇ）の単回腹腔内（ＩＰ）投与により処置した。このモデルを用いたフォローアップＩＣＤ試験は、ＲＮＡ－ｓｅｑ、フロー、免疫組織化学（ＩＨＣ）、及びＬｕｍｉｎｅｘによる下流分析のために、処置後５日での腫瘍採取を要する。腫瘍をホルマリンで固定し、ＦＦＰＥ組織ブロックとして調製する。ブロックを４μｍに切断し、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｃを使用して免疫組織化学を実施する。免疫組織化学染色したスライド切片をＬｅｉｃａ ＡＴ２デジタル全スライドスキャナーでスキャンし、ネクチン４、ＣＤ１１ｃ、及びＦ４／８０染色に合わせたカスタムメイドのアルゴリズムを使用したＶｉｓｉｏｐｈａｒｍソフトウェアで画像を解析する。アルゴリズムは、染色強度及びバックグラウンド染色に基づいて最適化されている。ネクチン４についての陽性染色率を算出し、Ｆ４８０及びＣＤ１１ｃについて１ｍｍ^２あたりの陽性細胞を算出する。

【0376】

腫瘍の切片をＣｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）、カタログ番号８９５３４７）に溶解する。腫瘍試料からのサイトカイン及びケモカインを、ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ ＭＡＰマウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネル（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して測定し、ＬＵＭＩＮＥＸ ＭＡＧＰＩＸシステムで読み取る。

【0377】

ＲＮＡ－ｓｅｑ分析の場合、ＴＲＩＺＯＬ Ｐｌｕｓ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者のプロトコルに従って使用して急速凍結腫瘍からＲＮＡを単離し、高品質のＲＮＡ（ＲＮＡ完全性の平均数＞８）を得る。ＲＮＡ選択法には、Ｐｏｌｙ（Ａ）選択及びＩｌｌｕｍｉｎａ製ｍＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔを使用し、Ｈｉ－Ｓｅｑ ２×１５０ｂｐ、シングルインデックス（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）で読み取る。配列リードをヒト及びマウスのトランスクリプトームにマッピングし、１００万あたりの総リードを決定した。

【0378】

本開示は一般に、多数の実施形態を説明するために断定的な文言を使用して提供される。本開示はまた、具体的には、物質または材料、方法のステップ及び条件、プロトコル、手順、アッセイまたは分析などの特定の主題が完全にまたは部分的に除外される実施形態を含む。したがって、本開示は一般に、本開示が含まないものに関して本明細書では表現されていないが、それにもかかわらず、本開示に明示的に含まれない態様が本明細書に開示される。

【0379】

本開示を実施するために発明者が知る最良の形態を含む、本開示の特定の実施形態が、本明細書に記載される。前述の説明を読むと、開示された実施形態の変形が当業者に明らかになる可能性があり、当業者はそのような変形を適切に使用し得ると予想される。したがって、本開示が、本明細書に具体的に記載されたものとは別の方法で実施され、本開示が、適用法令に認められる、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙された主題の全ての修正及び等価物を含むことを目的とする。さらに、本明細書で特に指示されない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、その全ての可能な変形における上述の要素の任意の組み合わせが本開示に包含される。

【0380】

本明細書で引用される全ての刊行物、特許出願、アクセッション番号、及び他の参考文献は、あたかも各個々の刊行物または特許出願が参照により組み入れられることが具体的かつ個別に示されているかのごとくに、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

【0381】

本開示のいくつかの実施形態を説明してきた。それにもかかわらず、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正を行い得ることが理解されるであろう。

【実施例】

【0382】

６． 実施例
６．１ 実施例１－動物モデルにおけるエンホルツマブベドチンの膀胱内投与の有効性及び安全性試験
６．１．１ ネクチン－４^＋膀胱同所性異種移植マウスモデルにおける有効性試験
この試験は、ネクチン－４^＋膀胱同所性異種移植マウスモデルにおけるエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の膀胱内投与の有効性を測定することを目的とする。具体的には、任意の特定の作用機序に限定されるものではないが、膀胱内投与によるＥＶの局所投与は、ＥＶの全身投与と比較して全身への曝露を低減し、安全性プロファイルを改善しながら、ＮＭＩＢＣ細胞へのＥＶの直接曝露を可能にし得る。

【0383】

表６は、マウス及びラットにおける前臨床実験の用量選択を示す。ヒトネクチン－４とルシフェラーゼを発現するように操作したヒト尿路上皮膀胱癌細胞株ＵＭ－ＵＣ－３（すなわち、ＵＭ－ＵＣ－３－ｈＮｅｃｔｉｎ４＋－Ｌｕｃ＋）を用い、マウス同所性モデルをＳＣＩＤマウスで開発した。ＥＶはラット及びヒトのネクチン－４オルソログに同程度の親和性で結合するため、安全性評価をラットで行った。

【0384】

（表６）用量の選択

^ａ体重７８ｋｇの患者（薬物動態ＥＶモデル集団の平均体重）、２００ｇのラット、２５ｇのマウスを想定する。
^ｂ膀胱の容積から求めた膀胱表面積で、Ｖ＝（４／３）πｒ^３、ＳＡ＝４πｒ^２（Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ ＫＥ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ．２００４；８４：９３５－９８６）。注：全身への曝露が限定的であり、投薬経路が局所的であるため、体表面積による用量スケーリングは適切ではない。代わりに、適切な前臨床用量を確保するため、総用量を膀胱組織表面積に対して正規化した（Ｕ．Ｓ． Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ． Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓａｆｅ Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｄｏｓｅ ｉｎ Ｉｎｉｔｉａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ａｄｕｌｔ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ ２００５． ｗｗｗ． ｆｄａ． ｇｏｖ／ｍｅｄｉａ／７２３０９／ ｄｏｗｎｌｏａｄ． ２０２２年３月１日にアクセス）。

【0385】

ネクチン－４は、非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）及び筋肉浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）を含む、膀胱癌の全ての段階にわたって高度に発現される（データは示されない）。膀胱内投与を模倣した条件下でｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＥＶの細胞傷害活性を評価するために、ネクチン－４過剰発現膀胱癌細胞（ＵＭ－ＵＣ－３－ｈＮｅｃｔｉｎ－４^＋）を、ＥＶ、非結合抗ネクチン－４抗体、非結合ＭＭＡＥ、または対照ＡＤＣのいずれかに曝露した（図２）。ＩＶ投与は、細胞を９６時間曝露することによってモデル化された。膀胱内投与は、２時間及び２４時間の曝露後、試験物を洗浄することでモデル化された。細胞死を、Ｃｅｌｌ ＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）を用いて測定した。曝露を９６時間から２時間に減少すると、非結合ＭＭＡＥでは効力（ＥＣ_９０）が４４倍減少したが、ＥＶではほとんど変化しなかった（２倍）。対照ＡＤＣ及び非結合抗ネクチン－４は、ＥＣ_９０を決定するのに十分な活性を示さなかった（データは示されない）。従って、ＥＶは、膀胱内投与を模倣した条件を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞障害活性を維持する（図２）。

【0386】

ネクチン－４^＋膀胱同所性異種移植マウスモデルを構築するために、ルシフェラーゼ形質導入ＵＭ－ＵＣ－３－ｈネクチン４＋－Ｌｕｃ＋、膀胱癌細胞をＳＣＩＤ－ベージュ系マウスにカテーテルを介して経尿道的に注入した（図３Ａ）。この試験では合計１８匹のマウスを使用した：３匹のマウスを未治療とした（図３Ｂ、左端のパネル「未治療」）；５匹のマウスを週１回、２週間、滅菌水の２時間膀胱内投与で治療した（図３Ｂ、左から２番目のパネル「ビヒクル（ＳＷＦＩ）２時間膀胱内投与」）；５匹のマウスを週１回、２週間、０．７５ｍｇ ＥＶの２時間膀胱内投与で治療した（０．０５ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬのＥＶ（注：マウスにおける１５ｍｇ／ｍｌの用量濃度は、マウスにおける０．５ｍｇ／ｃｍ^２の用量／膀胱表面積に相当する）（図３Ｂ、「ＥＶ ２時間膀胱内投与」と題された左から３番目のパネル）；５匹のマウスを、０．７５ｍｇのＥＶ（３ｍｇ／ｍＬの０．２５ｍＬのＥＶ）の静脈内投与で２週間、週１回治療した（図３Ｂ、「ＥＶ ＩＶ投与」と題された右端のパネル）。マウスを画像化して、ＥＶの有効性を測定した。さらに、ＥＶ投与２４時間後に各マウスから血液を採取し、薬物動態解析を行った。本明細書に関わる方法は、当業者に周知である。

【0387】

図３Ｂの生物発光イメージング結果に示すように、膀胱腫瘍は、未治療マウス及び滅菌水の２時間膀胱内投与で治療したマウスにおいて大きく増殖した（図３Ｂ、「未治療」と題する左端のパネル及び「ビヒクル（ＳＷＦＩ）２時間膀胱内投与」と題する左から２番目のパネル）。対照的に、ＥＶを２時間膀胱内投与したマウス、及びＥＶを静脈内投与したマウスでは、膀胱腫瘍が実質的に退縮した（図３Ｂ、「ＥＶ ２時間膀胱内投与」と題する左から３番目のパネル及び「ＥＶ ＩＶ投与」と題する右端のパネル）。図３Ｃに示す抗ネクチン－４免疫組織化学の結果からも、ＥＶを２時間膀胱内投与したマウスでは膀胱腫瘍が退縮したことがわかる。図３Ｃの右の５つのパネルの膀胱組織は、それぞれ、図３ＢのＥＶの膀胱内投与で治療した５匹のマウス由来であった。さらに、図３Ｂの生物発光イメージング結果を定量化し、図３Ｄ及び表７にまとめた。ＥＶの２時間滞留時間膀胱内投与で治療したマウスでは、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、１７日目に９７．１％であった（対照と比較して総流束単位（光子／秒）の分析により測定）（図３Ｂ、「ＥＶ ２時間膀胱内」と題する左から３番目のパネル、図３Ｄ、及び表７）。

【0388】

（表７）ＮＭＩＢＣ同所性モデルにおけるＥＶの腫瘍増殖阻害

腫瘍増殖阻害を、試験終了時（開始１６日後）の未治療対照群と比較した腫瘍生物発光シグナルの平均値から計算した。膀胱内用量１５ｍｇ／ｍＬは、全用量７５０μｇであり、膀胱表面積の０．５ｍｇ／ｃｍ^２の用量に相当する。静脈内投与されたＥＶの総量は約１／１０であり、２５グラムのマウスあたり７５μｇであった。

【0389】

さらに、免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を行い、膀胱腫瘍組織におけるネクチン－４及びＭＭＡＥの局在を評価した（図３Ｅ）。特に、最初のＥＶ投与から６時間後に腫瘍を採取し、図３Ｅに示すように、ネクチン－４と抗ＭＭＡＥについて染色した。ＩＨＣ分析は、ビオチン結合抗ＭＭＡＥ一次抗体によって検出されるように、薬物の共局在を伴う膀胱腫瘍組織におけるネクチン－４の存在を示した。

【0390】

上記の結果から、本明細書で使用されるネクチン－４^＋膀胱同所性異種移植マウスモデルにおける腫瘍（ＮＭＩＢＣ）の生着及び膀胱内ＥＶ活性が確認された。

【0391】

６．１．２ Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを用いた安全性試験
この試験は、再構成されたＥＶに対して最大で実現可能な種々の濃度及び投与量のエンホルツマブベドチン（ＥＶ）の単回膀胱内投与後のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける局所組織、血漿曝露、及び組織薬物レベルに対する効果を特徴付けることを目的とする。

【0392】

表８に示す試験デザインに従って、１５、３０、または５０ｍｇ／ｍＬのＥＶを０．１、０．２、０．４ｍＬずつ、雌性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットに２時間単回膀胱内投与した。

【0393】

（表８）試験デザイン

【0394】

局所組織（腎臓、膀胱、尿管、及び尿道）におけるＡＤＣとＭＭＡＥの濃度を決定するために、これらの組織を、ＥＶ投与の２４時間後に各ラットから採取して、生体分析及び抗ＭＭＡＥ免疫組織化学（ＩＨＣ）分析を行った。ＡＤＣとＭＭＡＥの血清濃度を決定するために、３００μＬの血液を、異なる時点（ＥＶ投与の１時間後、６時間後、２４時間後、７２時間後、及び１６８時間後）で各ラットから採取し、生体分析した。本明細書に関わる方法は、当業者に周知である。

【0395】

図４Ａ及び図４Ｂの生物分析結果、ならびに表９の抗ＭＭＡＥ ＩＨＣ結果に示されるように、大きな注入容量よりも、用量濃度及び総用量は高いほど、膀胱組織中のＭＭＡＥレベルをさらに向上させた。具体的には、図４Ａは、雌性ラットに０．３～４．１ｍｇ／ｃｍ^２の用量で１５～５０ｍｇ／ｍＬを２時間の滞留時間で投与したＥＶの単回膀胱内投与を示し、質量ベースで最大１００ｍｇ／ｋｇの用量を表す。２４時間後の総ＭＭＡＥの膀胱レベルを、膀胱組織重量に対して正規化した。ＭＭＡＥは、膀胱組織において最大７日間検出され、ピーク濃度は、投与後２４時間以内であった。加えて、ＭＭＡＥは一般に検出されず、血清中で検出されたＡＤＣはごくわずかであった（＜１ｎｇ／ｍＬ）。濃度を一定に保ち、滞留時間を３０～１２０分で変化させた場合、全ＭＭＡＥレベルに有意差はなかった（データ示されない）。したがって、ＥＶの総用量と濃度を高くすることは、注入量や滞留時間の変更よりも活性を高め、組織内薬物濃度を増加させることになる。上記の結果から、雌性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットに対して１５、３０、または５０ｍｇ／ｍＬのエンホルツマブベドチンを０．１、０．２、または０．４ｍＬの単回の膀胱内投与した場合の認容性は良好であることが示された。従って、ＥＶの膀胱内投与は、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおいて限定された全身曝露を伴うＥＶの効果的な局所投与を提供した。

【0396】

（表９）局所組織における抗ＭＭＡＥ ＩＨＣ

ＩＨＣスコア：
－＝＜１％の移行細胞染色陽性
１＝１～２５％陽性
２＝２６～５０％陽性
３＝５０～７５％陽性
４＝＞７５％陽性

【0397】

毒性の可能性を評価し、膀胱内ＥＶの薬物動態を特徴付けるために、雌性ラットにＥＶまたは対照を６回毎週膀胱内投与した。表１０に示すように、皮膚及び骨髄を含む以前に同定された標的組織において、顕微鏡的所見は存在しなかった。ＥＶの無影響量に対応する用量は、承認されたヒトＩＶ用量の＞２０倍に相当する。

【0398】

（表１０）用量毒性試験

【0399】

膀胱内投与されたＥＶの血清濃度は、有効なＥＬＩＳＡベースのアッセイを用いて、ＥＶの最初の投与後に決定された（平均±ＳＥＭ）（図５）。ＥＶの平均Ｃ_ｍａｘは７５０ｎｇ／ｍＬ以下（すなわち、臨床的に承認された用量のＩＶ Ｃ_ｍａｘの１／３５より小さい）であり、有効な質量分析アッセイでは検出可能な血清ＭＭＡＥはなかった。時間濃度曲線下の血清面積の推定は、最高ＥＶ用量（３０ｍｇ／ｋｇ）のみに限定され、注入後２４時間までしか検出できなかった。非結合ＭＭＡＥの血清濃度は、定量の下限未満（＜１０ ｐｇ／ｍＬ）であった。したがって、ＥＶの膀胱内投与は、全身への曝露を制限し、全身吸収は低く一過性である。

【0400】

したがって、表９と図５から、ＥＶの膀胱内投与は、検出可能な局所毒性も全身毒性もなく、一過性の全身吸収も低く、忍容性が高いことが示された。任意の特定の作用機構によって制限されることなく、これらのデータはまた、膀胱内ＥＶの低い全身吸収が、全身投与されたＥＶで観察される最も一般的な有害事象の発生率を低下させ得ることを示す。

【0401】

６．１．３ Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける滞留時間の長さの影響
本試験は、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにエンホルツマブベドチン（ＥＶ）を異なる滞留時間の長さで膀胱内投与し、膀胱組織中のＭＭＡＥ濃度を測定することを目的とする。

【0402】

具体的には、２４匹の雌性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを無作為に４群（１群あたり６匹のラット）に分類した。３０ｍｇ／ｍＬのＥＶを各ラットに単回用量０．４ｍＬずつ、３０分、６０分、９０分、１２０分かけて膀胱内投与した。ＥＶ投与２４時間後に各ラットから膀胱組織を採取し、生物分析を行い、膀胱組織中のＭＭＡＥレベルを測定した。本明細書に関わる方法は、当業者に周知である。

【0403】

図６に示すように、３０分から１２０分までの異なる滞留時間のＥＶを膀胱内投与したラットでは、膀胱組織のＭＭＡＥレベルに実質的な差は見られなかった。ＡＤＣが標的細胞に到達するのを阻害し、従来の小分子よりも拡散を制御する可能性のある粘液層などの因子が存在する場合、このようなｉｎ ｖｉｖｏの結果はやや意外である。理論に束縛されることなく、ラットにおいて膀胱組織のＭＭＡＥが飽和に達するには、比較的短い滞留時間で十分であると思われる。

【0404】

６．２ 仮説例２－非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）成人患者を対象としたエンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ及び抗腫瘍活性を評価するために設計された、第１相、非盲検、多施設、用量漸増及び用量拡大試験
６．２．１ 臨床試験で使用する薬物
エンホルツマブベドチンは、微小管破壊剤モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に共有結合したネクチン－４標的モノクローナル抗体（ＡＧＳ－２２Ｃ３）である。エンホルツマブベドチンは、
● 完全ヒトＩｇＧ１Κ抗体（ＡＧＳ－２２Ｃ３）と、
● 微小管破壊剤ＭＭＡＥと、
● ＭＭＡＥをＡＧＳ－２２Ｃ３に共有結合させる、プロテアーゼ切断可能なマレイミドカプロイル－バリン－シトルリン（ｖｃ）リンカーと、という３つの機能的サブユニットを有する。

【0405】

エンホルツマブベドプチンは、ネクチン－４のＶドメインに結合する（Ｃｈａｌｌｉｔａ－Ｅｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２０１６）；７６（１０）：３００３－１３．）。推定される作用機構において、薬物は、細胞表面上のネクチン－４タンパク質に結合し、内在化され、ｖｃリンカーのタンパク質分解切断及びＭＭＡＥの細胞内放出を引き起こす。遊離ＭＭＡＥは、その後、チューブリン重合を阻害し、有糸分裂の停止を引き起こす。

【0406】

６．２．２ 試験概要
６．２．２．１ プロトコル名
非筋肉浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）患者に対するエンホルツマブベドチンの膀胱内投与試験

【0407】

６．２．２．２ 試験目的
主要項目
● ＮＭＩＢＣを有する対象におけるエンホルツマブベドチンの膀胱内投与の安全性及び忍容性を評価すること
● ＮＭＩＢＣを有する対象におけるエンホルツマブベドチンの膀胱内投与の最大耐容量（ＭＴＤ）または推奨用量を同定すること

【0408】

副次項目
● エンホルツマブベドチン膀胱内投与の薬物動態（ＰＫ）を評価すること
● エンホルツマブベドチン膀胱内投与の免疫原性を評価すること
● エンホルツマブベドチン膀胱内投与の抗腫瘍活性を完全奏効率（ＣＲ）で評価すること
● ＣＲの持続時間を評価すること
● 膀胱摘出率を評価すること
● 無増悪生存（ＰＦＳ）を評価すること
● 無嚢胞生存率（ＣＦＳ）を評価すること

【0409】

探索
●エンホルツマブベドチンに対する応答性、毒性、薬力学、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）関係、または耐性に関連するバイオマーカーを評価すること
●対象が報告した治療経験及び対象が報告した治療忍容性を評価すること

【0410】

６．２．２．３ 試験対象集団
選択基準
１． 対象は、組織学的に確認された、ｉｎ ｓｉｔｕ癌腫（ＣＩＳ）（乳頭状疾患の有無は問わない）を伴う非筋肉浸潤性尿路上皮（移行細胞）癌を有さなければならない。組織学的確認は、試験治療の初回投与前の６０日以内に行うべきである。
２． 主な組織学的成分（＞５０％）は、尿路上皮（移行細胞）癌でなければならない。純粋な変異組織は除外される。
３． 対象は、以下のように定義される高リスクのカルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）非応答性疾患を有さなければならない。
● 適切なＢＣＧ療法終了後１２ヵ月以内に、ＣＩＳ単独、または再発したＴａ／Ｔ１（非浸潤性乳頭状疾患／腫瘍が上皮下結合組織に浸潤する）病変が持続または再発した場合。
適切なＢＣＧ療法は、以下の１つとして定義される：
● 初期誘導コースにおける６回投与中の５回投与＋維持療法における３回投与中の少なくとも２回投与
● 初期誘導コースにおける６回投与中の５回投与＋２回目誘導コースにおける６回投与中の少なくとも２回投与
注：世界中のＢＣＧ不足に起因して、十分なＢＣＧコースを完了できない、またはＢＣＧ療法の低減された用量を受けた対象は、医療モニタと相談の上、登録することができる。
４． 治験責任医師の見解では、対象者は根治的膀胱全摘除術不適格であるか、または拒否していなければならない。
５． 目に見える全ての乳頭状Ｔａ／Ｔ１腫瘍は、登録前６０日以内に完全に切除されていなければならない。純粋なＣＩＳの残留は許される。
● Ｔ１腫瘍を有することが認められた全ての対象は、試験治療を開始する前に、追加の再ＴＵＲＢＴ（経尿道的膀胱腫瘍切除術）を受けるべきである。再病期分類ＴＵＲＢＴは、浸潤のない（腫瘍が存在しない）固有筋層を示さなければならない。
６． 対象は、十分な膀胱機能と、前投薬があっても試験薬の点滴を最低１時間保持できる能力とを有さなければならない。
７． １８歳以上。
８． 米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態のスコアは、該当する場合、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙスケールを用いた活動状態の変換に関して０、１、または２である。
ＥＣＯＧ活動状態が２の対象は、さらに以下の基準を満たさなければならない。
● 糸球体濾過率（ＧＦＲ）≧５０ｍＬ／分
● ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩの心不全を有してはならない
９． 以下のベースライン臨床検査データ：
● 好中球絶対数（ＡＮＣ）が１５００／μＬ以上であること
● ヘモグロビン（Ｈｇｂ）が１０ｇ／ｄＬ以上であること
● 血小板数が１００，０００／μＬ以上であること
● 血清ビリルビン≦１．５×正常上限値（ＵＬＮ）、または≦ジルベール病を有する患者の場合は３×ＵＬＮ
● クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）の計算値が３０ｍＬ／分以上（クレアチニンまたはＣｒＣｌの代わりにＧＦＲも使用できる）。ＣｒＣｌは、Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ法または腎疾患における食生活改善（ＭＤＲＤ）式を用いて算出される。ＥＣＯＧ活動状態が２の対象は、ＧＦＲが５０ｍＬ／分以上でなければならない。
● アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が３×ＵＬＮ以下であること
● ＰＴまたはａＰＴＴが抗凝固薬の使用目的の治療範囲内である限りにおいて、対象が抗凝固薬治療を受けている場合を除き、国際標準化比（ＩＮＲ）、またはプロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）もしくは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が１．５ＵＬＮ以下であること。
１０． 推定平均余命＞２年間。
１１． 妊娠可能な女性とは、女性として生まれ、初潮を経験し、外科的不妊手術（子宮摘出、両側卵管切除、両側卵巣摘出など）を受けないか、閉経していない人をいう。閉経期とは、臨床的には、４５歳超の人で、他の生物学的、生理学的、薬理学的原因がない場合に、１２ヵ月間無月経が続くことと定義される。妊娠の可能性のある女性対象は、以下の条件を満たさなければならない：
● 試験期間中及び試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月間は妊娠を希望しないことに同意すること。
● １日目前３日以内に、血清または尿による妊娠検査（最低感度２５ｍＩＵ／ｍＬまたはβヒト絨毛性ゴナドトロピン［β－ｈＣＧ］相当単位）の結果が陰性であること。偽陽性の結果が出た女性対象で、妊娠が陰性であることを証明する文書がある場合は、参加資格がある。
● 異性との性交渉がある場合は、スクリーニング時から試験期間中、及び試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月間は、失敗率が１％未満の有効性の高い避妊法を一貫して使用しなければならない。
● 女性対象は、スクリーニング時から試験期間中、及び試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月間は、授乳または卵子提供を行わないことに同意しなければならない。
１２． 父親となりうる男性対象とは、精巣があり、外科的不妊手術（例えば、精管切除術の後、その手術が有効であったことを証明する臨床試験）を受けない、男性として生まれた人である。父親となりうる男性対象は、以下の条件を満たさなければならない。
● スクリーニング時から試験期間中、及び試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月間は精子提供を行わないこと。男性対象には、本試験の治療による生殖機能及び生殖能力への負のリスクについて説明する。治療に先立ち、男性対象には妊孕性温存と精子凍結保存に関する情報を求めるよう助言すべきである。
● スクリーニング時から試験期間中、及び試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月間は、失敗率が１％未満の有効性の高い避妊法を一貫して使用すること。
● 妊娠中または授乳中のパートナー（複数可）がいる男性対象は、試験期間中及び試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月間は、妊娠期間中またはパートナーが授乳中の間精液への二次曝露を防止するための２つの避妊法のうち１つを一貫して使用しなければならない。
１３． 対象は書面によるインフォームドコンセントを提供しなければならない。

【0411】

除外基準
１． 筋肉浸潤性尿路上皮癌（すなわち、Ｔ２、Ｔ３、またはＴ４疾患）または転移性疾患に現在罹っているまたはその既往歴がある。
２． 試験治療開始前３ヵ月以内にコンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で認められた結節性または転移性疾患。
３． 試験治療開始前３ヵ月以内に実施された腹部／骨盤の造影付きＣＴまたはＭＲＩ尿路造影で認められた上部尿路上皮癌の併発。
４． 試験開始前６ヵ月以内に、治験責任医師の評価により、前立腺尿道の尿路上皮癌の既往または併発が判明する対象。
５． スクリーニング時に腫瘍に関連した水腎症を有する対象（治験責任医師が確認した場合、腫瘍以外の原因による水腎症を有する対象も可）。
６． 対象は、試験治療の最初の投与から４週間以内に他のいずれかの全身性抗癌療法（例えば、化学療法、生物学的療法、免疫療法、標的療法、内分泌療法、治験薬）を受けたことがあるか、または試験治療の開始前６週間以内にＮＭＩＢＣの治療のための任意の膀胱内療法を受けたことがあるが、以下を除く：
● 細胞傷害性剤（例えば、マイトマイシンＣ、ドキソルビシン、及びゲムシタビン）は、ＴＵＲＢＴ治療の直後に単一の点滴注入として投与される場合、試験治療開始の１４～６０日前に許容されること
７． 対象は、ＮＭＩＢＣに対する以前の治療に関連した有害事象（ＡＥ）に続発する症状（グレード２以上）を有する。
８． 対象は、尿路上皮癌のために膀胱への放射線照射を受けたことがある。
９． 試験治療開始前１４日以内に全身性（経口または静脈内など）抗生物質を必要とする活動性感染症。予防用抗生物質（例えば、尿路感染症［ＵＴＩ］または慢性閉塞性肺疾患の予防のため）を受ける対象は適格である。
１０． 膀胱内投与または膀胱内外科的操作に耐えられない対象。
１１． 試験薬の初回投与前３年以内に他の悪性腫瘍の既往歴がある、または以前に診断された悪性腫瘍の残存病変が認められる。適切に治療された子宮頸部のＣＩＳ、非黒色腫皮膚癌、乳房の管ＣＩＳ、またはステージＩ子宮癌など、転移または死亡のリスクが無視できるほど小さい可能性の悪性腫瘍（例えば、５年全生存率［ＯＳ］≧９０％）は除外される。
● 試験開始の少なくとも１年前に確定的治療（外科的治療または放射線療法）を受けた前立腺癌（Ｔ２Ｎ０Ｍ０以下、グリソンスコアが７以下）の既往歴があった対象は、前立腺癌を有さないとみなされ、以下の基準を満たすことを条件に適格とする：
（ｉ）． 根治的前立腺摘除術を受けた対象は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）が１年超検出されず、スクリーニング時にも検出されないこと。
（ｉｉ）． 放射線照射を受けた対象は、ＰＳＡ倍加時間が１年を超え（１ヵ月超の間隔をおいて測定された少なくとも３つの値に基づく）、かつ総ＰＳＡ値がＰｈｏｅｎｉｘの生化学的再発の基準を満たさないこと（すなわち、最下点より＜２．０ｎｇ／ｍＬ）。
１２． ネクチン－４標的療法またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）含有剤への前曝露。
１３． 乾癬やアトピー性皮膚炎などの自己免疫疾患または炎症性皮膚疾患で、何らかの治療を必要とする活動性の疾患がある対象。
１４． グレード２以上の感覚神経障害または運動神経障害が継続する対象。
１５． Ｂ型肝炎表面抗原及び／または抗Ｂ型肝炎コア抗体が陽性の対象。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイが陰性である対象は、適切な抗ウイルス予防を許容される。
１６． 活動性のＣ型肝炎感染または既知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染。Ｃ型肝炎治療歴のある対象は、１２週間以上のウイルス学的反応の持続が証明される場合に許容される。地元の保健当局が義務付けない限り、ＨＩＶ検査の必要はない。
１７． 活動性結核の既往がある。
１８． 糖尿病が制御されない対象。制御ない糖尿病とは、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）が８％以上、またはＨｂＡ１ｃが７％～８％未満で、他に説明されない糖尿病症状（多尿症または多飲症）を伴うものと定義される。
１９． エンホルツマブベドチンの初回投与前６ヵ月以内に、脳血管事象（脳卒中または一過性虚血発作）、不安定狭心症、心筋梗塞、またはＮＹＨＡクラス ＩＩＩ～ＩＶに一致する心臓症状の既往歴が証明される。
２０． インフォームドコンセント時から試験薬最終投与後少なくとも６ヵ月までの間に授乳中、妊娠中、または妊娠を計画する対象。
２１． エンホルツマブベドチン、またはエンホルツマブベドチンの薬物製剤中に含有される任意の賦形剤（ヒスチジン、トレハロース二水和物、及びポリソルベート２０を含む）に対して重篤な（≧グレード３）過敏症が知られる。
２２． 活動性角膜炎または角膜潰瘍を有する対象。点状表層角膜炎を有する対象は、治験責任医師の意見においてその疾患が適切に治療される場合に許容される。
２３． 治験責任医師の見解により、対象が計画された治療及び追跡調査を受ける、または耐える能力を損なうと思われるその他の重篤な基礎疾患。

【0412】

６．２．２．４ 予定対象数
この試験には約５８名の対象が登録される。これには、用量漸増において評価される最大約１８人の対象と、用量拡大において評価される最大約４０人の対象が含まれる（それぞれ約２０人の対象の最大２コホート）。

【0413】

６．２．２．５ 試験デザイン
本試験は、ＮＭＩＢＣの成人患者を対象としたエンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ及び抗腫瘍活性を評価するために設計された、第１相、非盲検、多施設、用量漸増及び用量拡大試験である。

【0414】

この試験は、以下の２部で実施する：

【0415】

用量漸増：約１８人の対象を治療して、エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、及び全身曝露を評価して、ＭＴＤ及び／または推奨用量を同定する。

【0416】

用量拡大：エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、ＰＫ、及び抗腫瘍活性をさらに評価するため、約４０人の対象（約２０名ずつの２コホートまで）をＭＴＤまたは推奨用量で治療する。

【0417】

用量漸増及び用量拡大では、ＣＩＳ（乳頭状疾患の有無にかかわらず）を有するＢＣＧ非応答性ＮＭＩＢＣの成人対象を登録する。全ての対象は、膀胱内投与を介して、治験中の治験薬であるエンホルツマブベドチンを受ける。本試験での治療は誘導段階と維持段階に行われ、対象は維持段階終了後に追跡調査期間に入る。

【0418】

誘導段階中に、対象は、エンホルツマブベドチンの膀胱内注入を週に１回（ｑ１ｗｋ）、６週間にわたって受ける。誘導段階の完了から６～８週間後、対象は、最初の試験中応答評価を受け、その後、維持段階に入る。維持段階中に、対象は、月に１回、合計９回投与で膀胱内エンホルツマブベドチンを受ける。

【0419】

維持段階の完了後、対象は試験の追跡調査段階に入る。標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診による腫瘍応答評価は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗癌療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。疾患持続、再発、進行、または後続の抗癌療法の開始に起因する研究治療の中断後、対象は生存追跡調査に入り、追跡調査不能、同意の撤回、死亡、または治験依頼者による試験中止のいずれかが最初に起こるまで、生存及び後続の抗癌療法データは６ヵ月（±２週間）ごとに収集され、登録後最長５年間続く。

【0420】

膀胱鏡検査法及び尿細胞診による応答評価は、次回の試験薬投与前１４日以内に完了しなければならない。膀胱鏡検査異常、陽性、または尿細胞診異常のある対象は、治験責任医師の臨床的判断により、追加の評価（例えば、画像診断、生検、麻酔下での検査）を受ける必要がある。

【0421】

本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最低４回の生検が必要）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。

【0422】

最初の試験実施３ヵ月後の評価を含む試験実施中の評価において、ＣＩＳの有無にかかわらず高悪性度Ｔ１疾患または病期進行が認められた対象は、試験治療を中止する。試験開始３ヵ月後の最初の評価でＣＩＳが持続または高悪性度Ｔａ疾患が再発した対象は、試験治療の継続に再同意した後に治療を継続し、６ヵ月後に再度評価され得る。６ヵ月後の評価から、高リスクＮＭＩＢＣが持続または再発した対象、または病勢進行した対象は、試験治療を中止する。低悪性度腫瘍の出現、存在、残存は再発とはみなされない。低悪性度腫瘍のみを有する対象は、切除及び組織学的確認後に治療を続けるべきである。

【0423】

疾患の持続、再発、進行以外の理由で試験治療を中止した対象は、本試験の追跡調査段階に留まる。

【0424】

用量漸増
エンホルツマブベドチンの全身投与は、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤とプラチナ製剤を含む化学療法を受けたことのある局所進行性または転移性尿路上皮癌患者を対象に、１．２５ｍｇ／ｋｇ（最大投与量１２５ｍｇ）の用量で現在米国で承認されている。エンホルツマブベドチンの全身投与の安全性プロファイルは十分に確立されており、複数の臨床試験においてこの用量レベルで評価される。この確立された全身投与量とその安全性プロファイルを考慮し、本試験ではエンホルツマブベドチンを１２５ｍｇから膀胱内投与で評価する。

【0425】

本試験の用量漸増部分では、４つの計画用量レベル（１２５、２５０、５００、及び７５０ｍｇ）でエンホルツマブベドチンの濃度を漸増させ、２５ｍＬの注入量と最大９０分間の滞留時間（または対象の許容滞留時間；実際の滞留時間は適切な電子症例報告書に記録される）で評価する。最大約１８人の対象を登録して、安全性、忍容性、全身性バイオアベイラビリティを評価し、ＭＴＤ及び／または推奨される用量の膀胱内エンホルツマブベドチンを同定する。

【0426】

用量漸増は修正毒性確率区間（ｍＴＰＩ）法を用いて行われる。登録は、コホート単位で行われる。

【0427】

エンホルツマブベドチンは、誘導段階には６週間、週に１回、膀胱内に投与され、維持段階には１ヵ月に１回、９回投与、上表の計画用量で投与される。また、治験依頼者及び／または安全性監視委員会（ＳＭＣ）は、低用量及び／または中間用量レベルの調査を推奨することができる。ＭＴＤに達しない場合、７５０ｍｇより高い用量レベルを検討することができる。

【0428】

用量制限毒性
用量制限毒性（ＤＬＴ）は、試験の用量漸増部分で評価される。ＤＬＴ評価期間は、誘導開始から誘導投与全６回終了までの期間に１週間を加えた期間である。対象は、ＤＬＴを経験したか、またはエンホルツマブベドチンの誘導用量を最低５回受けた場合、ＤＬＴ評価可能（ＤＥ）対象と考えられる。

【0429】

ＤＬＴは、エンホルツマブベドチン膀胱内投与に関連すると治験責任医師が評価した場合、以下のいずれかとして定義される。グレード付けは、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ第５．０版に従って行われる：
● 血尿、排尿困難、尿閉、頻尿・尿意切迫、膀胱けいれんなどのグレード３以上の尿路系の治療出現ＡＥの発生
● 鼠径部または会陰部におけるグレード３以上の局所皮膚反応または粘膜反応
● 治験責任医師による評価で、血栓閉塞につながる著明な血尿が治験薬に関連する
● グレード３以上の血液学的毒性（ベースラインから２グレード以上増加した場合）は、以下を含む。
○ 好中球減少熱
－ グレード３の発熱性好中球減少症とは、ＡＮＣが１０００／ｍｍ^３未満で、
かつ３８．３℃（１０１°Ｆ）超の体温が１回のみ、または３８℃（１００．４°Ｆ）以上の体温が１時間超持続する場合と定義される
－ グレード４の発熱性好中球減少症とは、ＡＮＣが１０００／ｍｍ^３未満で、
かつ３８．３℃（１０１°Ｆ）超の体温が１回のみ、または３８℃（１００．４°Ｆ）以上の体温が１時間超持続し、生命を脅かす可能性があり、緊急介入を要するものと定義される
○ グレード４の好中球減少症または血小板減少症が７日超続く
○ 出血を伴うグレード３の血小板減少症
● その他のグレード３以上の非血液学的ＡＥ（基礎疾患、併発疾患、悪性腫瘍による説明を除く）
● 未解決の治療関連グレード２ＡＥが１４日超続く
● 基礎疾患や外因によるものでないことが明らかな死亡
● Ｈｙ’ｓ ｌａｗの症例

【0430】

以下の非血液学的毒性は、ＤＬＴと見なされない：
● グレード３の悪心／嘔吐または下痢が７２時間未満で、制吐剤及びその他の支持療法が十分である
● グレード３の疲労＜１週間
● ≧グレード３の電解質異常またはその他の非血液学的臨床検査異常で、７２時間未満持続し、臨床的に合併症がなく、自然に治癒するか、従来の内科的介入に応答する
● ≧グレード３のアミラーゼまたはリパーゼで、膵炎の症状や臨床症状を伴わない

【0431】

用量拡大
エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ、及び抗腫瘍活性をさらに特徴付けるために、最大２つの用量拡大コホート（コホートあたり約２０人の対象）に約４０人の対象を追加登録する。試験の用量漸増部分でＭＴＤが同定された場合、対応する用量レベルが用量拡大で評価される。治験依頼者は、ＭＴＤに達しない場合、または異なる用量レベルがさらなる評価を必要とする場合、ＳＭＣと相談して、用量拡大において２つ以上の用量レベルを評価することもできる。これらの用量拡大コホートの開始は、用量漸増中に示された安全性と活性の累積に基づいて、ＳＭＣと相談して治験依頼者によって決定される。

【0432】

安全監視委員会
治験責任医師（複数可）と治験依頼者の代表者（研究医療モニタ、薬物安全性代表者、臨床科学者、及び生物統計学者を含む）で構成されるＳＭＣは、対象の安全性を監視し、用量漸増及び用量拡大を通して用量推奨を行う。ＳＭＣは、所与の用量での安全性をさらに評価すること（すなわち、所与の用量で対象を追加登録すること）、または計画された用量レベルより低い、もしくは中間的な用量レベルの調査を推奨してもよい。ＳＭＣはまた、ＤＬＴウィンドウを超える累積的曝露に起因して出現し得る安全性の問題を識別するために、累積的安全性データを検討する。ＳＭＣはまた、抗腫瘍活性データを検討して、ベネフィット－リスク特性が用量またはコホートについて、試験の継続または中止を支持するかどうかを決定することができる。ＳＭＣは推奨を行い、最終決定は治験依頼者が行う。さらなる詳細は、ＳＭＣ宣言に文書化される。

【0433】

６．２．２．６ 治験薬、用量及び投与方法
エンホルツマブベドチンは、誘導段階には６週間、週に１回、膀胱内に投与され、維持段階には１ヵ月に１回、９回投与される。

【0434】

６．２．２．７ 治療の持続時間
誘導段階中に、対象は、６週間にわたって、週に１回、エンホルツマブベドチンの膀胱内注入を受ける。誘導段階の完了から６～８週間後、対象は、最初の試験中応答評価を有し、その後、維持段階に入る。維持段階中に、対象は、月に１回、合計９回投与で膀胱内エンホルツマブベドチンを受ける。

【0435】

６．２．２．８ １１２Ｂ応答／有効性評価
本試験における腫瘍反応性の評価は、スクリーニング時に標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診を行い、その後、登録後最初の２年間は最初の誘導投与から３ヵ月ごとに評価し、その後登録後５年間は６ヵ月ごとに評価する。

【0436】

膀胱鏡検査法及び尿細胞診による応答評価は、次回の試験薬投与前ｄ１４日以内に完了しなければならない。膀胱鏡検査異常、陽性、または尿細胞診異常のある対象は、治験責任医師の臨床的判断により、追加の評価（例えば、画像診断、生検、麻酔下での検査）を受ける必要がある。

【0437】

年１回の上部管画像診断は、対象が試験を受ける間、臨床的に指示された場合に行われる。

【0438】

本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最低４回の生検が必要）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。

【0439】

対象は、以下の所見の全てを有する場合にＣＲを有すると考えられる。
１． 膀胱鏡検査：膀胱の外観は正常。膀胱鏡検査で膀胱の外観に異常がある場合、生検は陰性か、悪性度の低いＴａ、悪性度の低い尿路上皮乳頭状新生物、または悪性度の低い乳頭腫でなければならない。ランダムに膀胱生検を実施する場合、これらの生検は陰性であるか、低悪性度の疾患を示すべきである。
２． 尿細胞診：陰性。
ａ． 決定的でない尿細胞診は、プロトコルに従って評価されるべきである。
ｂ． 尿細胞診が陽性であった場合は、膀胱鏡検査±生検、画像診断により臨床的評価を行う必要がある
３． 画像診断（実施された場合）：正常、または異常が見つかった場合は、所見が膀胱内のＣＲを支持するものでなければならない。

【0440】

試験治療薬の膀胱内投与のため、対象は、上部管または前立腺尿道にがんが見つかり、ランダム膀胱生検が陰性の場合、悪性尿細胞診を伴う膀胱鏡検査が陰性であればＣＲとみなされる。

【0441】

持続性疾患は、乳頭状疾患を伴うまたは伴わないＣＩＳ疾患の存在として定義される（高悪性度Ｔａ／Ｔ１）。

【0442】

再発は、治療開始後の高悪性度疾患（高悪性度Ｔａ、Ｔ１、またはＣＩＳ）の再出現として定義される。再発は、生検によって確認されなければならない。

【0443】

進行とは、以下のいずれかの発症と定義される：Ｔ１疾患（固有層浸潤）、≧Ｔ２疾患（筋浸潤）、リンパ節転移（Ｎ１＋）、遠隔転移（Ｍ１）、または悪性度が低悪性度から高悪性度に上昇すること。

【0444】

低悪性度の疾患の持続、出現、存在は再発とはみなされない。低悪性度乳頭状疾患が再発した対象は、切除術を受けて試験を継続することができる。

【0445】

６．２．２．９ 薬動力学的及び免疫原性評価
ＰＫ及び抗治療抗体（ＡＴＡ）分析用の血液サンプルとＰＫ分析用の尿サンプルは、プロトコルで規定された時点で採取される。推定されるエンホルツマブベドチンの用量関連血中ＰＫパラメータは、濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最大濃度（Ｃｍａｘ）、最大濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、見かけの終末半減期（ｔ１／２）、及びトラフ濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）を含み得るが、これらに限定されない。必要に応じて、追加の分析項目も評価される。

【0446】

６．２．２．１０ 薬動力学的及びバイオマーカー評価
腫瘍組織におけるバイオマーカー
登録後１２ヵ月以内に採取された保存腫瘍組織は、入手可能な場合（最も最近に利用可能な組織を使用すべきである）、全ての対象に必要である。新たにカットしたスライドのみを提供できる場合は、最低１０～１５切片が必要（１０切片未満の場合は治験依頼者に問い合わせること）。生検は１２ヵ月目の評価時に必要であり、他の全ての評価時には臨床的適応に応じて実施すべきである。治療中に採取した生検由来の組織をバイオマーカー評価に使用する。

【0447】

治療前の腫瘍の生物学的特性と対象の転帰との関係を理解するために、ＴＵＲＢＴ（腫瘍生検）由来の組織を検査する。生検は、腫瘍内の特定の薬力学的、予測的、予後的バイオマーカーについて評価される。組織が、登録後に採取された標準的な生検から入手可能である場合、治療に対する耐性や作用機序、応答性のバイオマーカーをさらに同定するために検査される。

【0448】

腫瘍組織におけるバイオマーカー評価は、免疫組織化学及び次世代シークエンシングによるネクチン－４及びＰＤ－Ｌ１発現の中心的評価、腫瘍のサブタイプ分類、腫瘍微小環境分析、ならびにがんで一般的に変化する遺伝子またはＲＮＡの体細胞変異もしくは変化のプロファイリングを含み得るが、これらに限定されない。

【0449】

血液及び／または尿中のバイオマーカー
腫瘍細胞に対するエンホルツマブベドチンの主な効果は、局所、腫瘍関連、及び末梢免疫細胞の活性化状態の変化をもたらし得る。血液及び尿サンプルにおけるバイオマーカー評価は、循環／無細胞腫瘍ＤＮＡ、可溶性ネクチン－４の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）評価、尿中バイオマーカーの免疫アッセイ、ならびに免疫細胞サブセット及びサイトカインの存在量を含む免疫機能のマーカーを含み得るが、これらに限定されない。

【0450】

６．２．２．１１ 安全性評価
安全性評価は、重篤な有害事象（ＳＡＥ）を含むＡＥの監視及び記録、併用薬の記録、ならびにプロトコルで指定された身体診察所見と臨床検査の測定を含む。

【0451】

６．２．２．１２ 他の評価
対象視点は、治療経験及び忍容性について４５～６０分間の電話インタビューを通して定性的に評価される。これらのインタビュー中に調査されるトピック及び質問に関する追加の詳細は、Ｓｕｂｊｅｃｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｇｕｉｄｅ文書に記載される。用量漸増中及び用量拡大中のインタビューは、以下の時点：誘導段階の終了時、維持段階の５回投与終了時、及び維持段階の終了時に行われる。

【0452】

６．２．２．１３ 統計的方法
用量漸増とＭＴＤの同定はｍＴＰＩ法を用いて行う。用量漸増が終了した時点で、モデルによるＤＬＴ確率の推定値が９５％信頼区間とともに示される。ＤＥ分析セットは、ＤＬＴを経験したか、または少なくとも５回のエンホルツマブベドチンの誘導用量を受けた、用量漸増における全ての治療対象を含む。ＤＥ分析セットは、ＭＴＤの決定するための主要母集団である。

【0453】

安全性及び抗腫瘍活性の評価項目は、試験薬の投与量を問わず治療を受けた対象全員を含む、全治療対象分析セットに基づく記述統計を用いて要約される。試験の任意時点でのＣＲ率、３、６、１２、１８、及び２４ヵ月でのＣＲ率、ならびに膀胱摘出率を、９５％両側正確信頼区間（ＣＩ）とともにまとめた。ＣＲ期間、ＰＦＳ、無嚢胞生存期間はＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を用いて推定した。

【0454】

拡大コホートでは、正式な仮説検証は予定されない。観察されたＣＲ率が３０％～５０％の範囲にあると仮定すると、コホートあたり２０人の対象を用いた９５％及び８０％の正確ＣＩを以下の表１１にまとめる。

【0455】

（表１１）

ＣＩ＝信頼区間、ＣＲ＝完全応答

【0456】

６．２．３ 目的
本試験は、ＮＭＩＢＣ患者を対象にエンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ、及び抗腫瘍活性を評価する。本試験の具体的な目的と対応するエンドポイントを以下の表１２に要約する。

【0457】

（表１２）

ＡＥ＝有害事象、ＡＴＡ＝抗治療抗体、ＡＵＣ＝濃度－時間曲線下面積、Ｃｍａｘ＝最大濃度、ＣＲ＝完全奏効、Ｃｔｒｏｕｇｈ＝トラフ濃度、ＤＬＴ＝用量制限毒性、ＭＴＤ＝最大耐量、ＮＭＩＢＣ＝非筋肉浸潤性膀胱癌、ＰＤ－Ｌｌ＝プログラムされた死－リガンド１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）、ＰＫ＝薬物動態、ＰＫ／ＰＤ＝薬物動態／薬力学、Ｔｍａｘ＝最大濃度発現時間、ｔ１／２＝半減期

【0458】

６．２．４ 治験計画書
６．２．４．１ 試験デザインの概要
本試験は、ＮＭＩＢＣの成人患者を対象としたエンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ及び抗腫瘍活性を評価するために設計された、第１相、非盲検、多施設、用量漸増及び用量拡大試験である。

【0459】

この試験は、以下の２部で実施した：
● 用量漸増：約１８人の対象を治療して、エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、及び全身曝露を評価して、最大耐量（ＭＴＤ）及び／または推奨用量を同定する。
● 用量拡大：エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、ＰＫ、及び抗腫瘍活性をさらに評価するため、約４０人の対象（約２０名ずつの２コホートまで）をＭＴＤまたは推奨用量で治療する。

【0460】

用量漸増及び用量拡大では、ＣＩＳ（乳頭状疾患の有無にかかわらず）を有するＢＣＧ非応答性ＮＭＩＢＣの成人対象を登録する。全ての対象は、膀胱内投与を介して、治験中の治験薬であるエンホルツマブベドチンを受ける。本試験での治療は誘導段階と維持段階に行われ、対象は維持段階終了後に追跡調査期間に入る。

【0461】

誘導段階中に、対象は、エンホルツマブベドチンの膀胱内注入を週に１回（ｑ１ｗｋ）、６週間にわたって受ける。誘導段階の完了から６～８週間後、対象は、最初の試験中応答評価を有し、その後、維持段階に入る。維持段階中に、対象は、月に１回、合計９回投与で膀胱内エンホルツマブベドチンを受ける。

【0462】

維持段階の完了後、対象は試験の追跡調査段階に入る。標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診による腫瘍応答評価は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗がん療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。疾患持続、再発、進行、または後続の抗がん療法の開始に起因する研究治療の中断後、対象は生存追跡調査に入り、追跡調査不能、同意の撤回、死亡、または治験依頼者による試験中止のいずれかが最初に起こるまで、生存及び後続の抗がん療法データは６ヵ月（±２週間）ごとに収集され、登録後最長５年間続く。

【0463】

膀胱鏡検査法及び尿細胞診による応答評価は、次回の試験薬投与前１４日以内に完了しなければならない。膀胱鏡検査異常、陽性、または尿細胞診異常のある対象は、治験責任医師の臨床的判断により、追加の評価（例えば、画像診断、生検、麻酔下での検査）を受ける必要がある。

【0464】

本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最小限の生検）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。

【0465】

最初の試験実施３ヵ月後の評価を含む試験実施中の評価において、ＣＩＳの有無にかかわらず高悪性度Ｔ１疾患または病期進行が認められた対象は、試験治療を中止する。試験開始３ヵ月後の最初の評価でＣＩＳが持続または高悪性度Ｔａ疾患が再発した対象は、試験治療の継続に再同意した後に治療を継続し、６ヵ月後に再度評価され得る。６ヵ月後の評価から、高リスクＮＭＩＢＣが持続または再発した対象、または病勢進行した対象は、試験治療を中止する。低悪性度腫瘍の出現、存在、残存は再発とはみなされない。低悪性度腫瘍のみを有する対象は、切除及び組織学的確認後に治療を続けるべきである。

【0466】

疾患の持続、再発、進行以外の理由で試験治療を中止した対象は、本試験の追跡調査段階に留まる。図７は、全体的な試験デザインを示す。

【0467】

治験責任医師（複数可）と治験依頼者の代表者（研究医療モニタ、薬物安全性代表者、臨床科学者、及び生物統計学者を含む）で構成される安全監視委員会（ＳＭＣ）は、対象の安全性を監視し、用量漸増及び用量拡大を通して用量推奨を行う。ＳＭＣは、所与の用量での安全性をさらに評価すること（すなわち、所与の用量で対象を追加登録すること）、または計画された用量レベルより低い、もしくは中間的な用量レベルの調査を推奨してもよい。ＳＭＣはまた、用量制限毒性（ＤＬＴ）ウィンドウを超える累積的曝露に起因して出現し得る安全性の問題を識別するために、累積的安全性データを検討する。ＳＭＣはまた、抗腫瘍活性データを検討して、ベネフィットとリスク特性が用量またはコホートについて、試験の継続または中止を支持するかどうかを決定することができる。ＳＭＣは推奨を行い、最終決定は治験依頼者が行う。さらなる詳細は、ＳＭＣ宣言に文書化される。

【0468】

（ｉ） 用量漸増コホート
約１８人の対象を用量漸増に登録する。

【0469】

用量漸増は、安全性及び忍容性を評価し、エンホルツマブベドチン膀胱内投与のＭＴＤ及び／または推奨される用量を同定するために、修正毒性確率区間（ｍＴＰＩ）法（Ｊｉ ２０１０）を用いて行われる。安全性、ＰＫ、薬力学、バイオマーカー分析、及び予備的な抗腫瘍活性を使用して、推奨される用量とスケジュールを決定する。

【0470】

ｍＴＰＩ法は、ベイズモデルを使用して、各用量レベルの毒性率と目標ＤＬＴ率との間の相対距離を反映する３つの間隔の事後確率を計算する。投与決定規則は、目標ＤＬＴ率２５％、マージン５％で決定される。３つの間隔は、（０％、２０％）、（２０％、３０％）、及び（３０％、１００％）であり、対応する投与決定規則は以下の通りである：
１． 現在の用量ＤＬＴ率が２０％未満の可能性が高い場合、漸増し、
２． 現在の用量ＤＬＴ率が２０％～３０％の間である可能性が高い場合、そのまま維持し、
３． 現在の用量ＤＬＴ率が３０％を超える可能性が高い場合、漸減する。

【0471】

用量設定の決定を表１３に示す。「Ｅ」は用量の漸増、「Ｓ」は用量の維持、「Ｄ」は用量の漸減を表す。決定「ＤＵ」は、現在の用量レベルが高い毒性のために許容できないことを意味する。ＤＬＴ率が２５％を超える事後確率が９５％を超える場合、その用量は許容できない毒性を有すると定義される。

【0472】

（表１３）ｍＴＰＩ設計のための用量決定スプレッドシート

Ｄ＝次の低用量に漸減、ＤＬＴ＝用量制限毒性、ＤＵ＝現在の用量が、許容できないほど毒性である、Ｅ＝次の高用量に漸増、ｍＴＰＩ＝修正毒性確率区間、Ｓ＝現在の用量で維持。

【0473】

登録は、コホート単位で行われる。用量漸増及びその後のコホート規模（最低２人の対象）の決定は、各コホート終了後にＳＭＣと相談して治験依頼者によって行われる。現在のコホートの対象は、次のコホートが登録される前に、ＤＬＴ期間の全期間観察されなければならない。予防措置として、本試験における最初の２人の対象には、各対象が試験薬の初回投与を受けた後、次の対象に投与するまでに７２時間の観察期間が設けられる。用量レベル１以上では、最初の対象がエンホルツマブベドチンの膀胱内投与を受けた後、その用量レベルで後続の対象に投与する前に、７２時間の観察期間が必要である。ＤＬＴの評価不能と判断された対象は交代する。用量漸増を中止する前に、推定ＭＴＤで最低６例のＤＬＴ評価可能症例（ＤＥ）が観察される。ＭＴＤは、評価された全用量にわたる全ての対象のデータに基づいて推定される。ＭＴＤに達しない場合は、安全性、ＰＫ、薬力学、バイオマーカーのデータ、及び予備的な抗腫瘍活性を使用して、推奨される用量を決定する。

【0474】

低用量または中間用量レベルへの漸減は、ＳＭＣと相談して治験依頼者によって任意の時点で行われる。

【0475】

本試験の用量漸増部分では、４つの計画用量レベル（１２５、２５０、５００、及び７５０ｍｇ、表３を参照）でエンホルツマブベドチンの濃度を漸増させ、２５ｍＬの注入量と最大９０分間の滞留時間（または対象の許容滞留時間；実際の滞留時間は適切な電子症例報告書［ｅＣＲＦ］に記録される）で評価する。本試験の用量漸増部分には最大約１８人の対象が登録される。エンホルツマブベドチンは、誘導段階には６週間、週に１回、膀胱内に投与され、維持段階には１ヵ月に１回、９回投与、表１４に示す計画用量で投与される。また、治験依頼者及び／またはＳＭＣは、低用量及び／または中間用量レベルの調査を推奨することができる。ＭＴＤに達しない場合、７５０ｍｇより高い用量レベルを検討することができる。

【0476】

（表１４）用量漸増スキーマ

ｑ１ｗｋ＝週１回、ＳＭＣ＝安全監視委員会、投与頻度：誘導 週１回×６週間、維持：月１回×９回投与、注入容量２５ｍＬ。
ａ 新たな臨床データに基づいて、ＳＭＣはより低用量または中間用量レベルの検討を推奨することがある。

【0477】

（ｉｉ） 用量拡大コホート
エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ、及び抗腫瘍活性をさらに特徴付けるために、最大２つの用量拡大コホート（コホートあたり約２０人の対象）に約４０人の対象を追加登録する。試験の用量漸増部分でＭＴＤが同定された場合、対応する用量レベルが用量拡大で評価される。治験依頼者は、ＭＴＤに達しない場合、または異なる用量レベルがさらなる評価を必要とする場合、ＳＭＣと相談して、用量拡大において２つ以上の用量レベルを評価することもできる。これらの用量拡大コホートの開始は、用量漸増中に示された安全性と活性の累積に基づいて、ＳＭＣと相談して治験依頼者によって決定される。

【0478】

（ｉｉｉ） 治療の持続時間
誘導段階中に、対象は、６週間にわたって、週に１回、エンホルツマブベドチンの膀胱内注入を受ける。誘導段階の完了から６～８週間後、対象は、最初の試験中応答評価を有し、その後、維持段階に入る。維持段階中に、対象は、月に１回、合計９回投与で膀胱内エンホルツマブベドチンを受ける。

【0479】

（ｉｖ） 用量制限毒性
ＤＬＴは、本試験の用量漸増部分で評価される。ＤＬＴ評価期間は、誘導開始から誘導投与全６回終了までの期間に１週間を加えた期間である。対象は、ＤＬＴを経験したか、またはエンホルツマブベドチンの誘導用量を最低５回受けた場合、ＤＬＴ評価可能（ＤＥ）対象と考えられる。

【0480】

ＤＬＴは、エンホルツマブベドチン膀胱内投与に関連すると治験責任医師が評価した場合、以下のいずれかとして定義される。グレード付けは、米国国立癌研究所の有害事象共通用語基準（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ）第５．０版に従って行われる：
● 血尿、排尿困難、尿閉、頻尿・尿意切迫、膀胱けいれんなどのグレード３以上の尿路系の治療出現ＡＥの発生
● 鼠径部または会陰部におけるグレード３以上の局所皮膚反応または粘膜反応
● 治験責任医師による評価で、血栓閉塞につながる著明な血尿が試験薬に関連する
● グレード３以上の血液学的毒性（ベースラインから２グレード以上増加した場合）は、以下を含む。
○ 好中球減少熱
● グレード３の発熱性好中球減少症は、絶対好中球数（ＡＮＣ）と定義される。
● ＜１，０００／ｍｍ^３未満で、３８．３℃（１０１°Ｆ）を超える体温、または３８℃（１００．４°Ｆ）以上の体温が１時間超持続する
● グレード４の発熱性好中球減少症とは、ＡＮＣが１０００／ｍｍ^３未満で、かつ３８．３℃（１０１°Ｆ）超の体温が１回のみ、または３８℃（１００．４°Ｆ）以上の体温が１時間超持続し、生命を脅かす可能性があり、緊急介入を要するものと定義される
○ グレード４の好中球減少症または血小板減少症が７日超続く
○ 出血を伴うグレード３の血小板減少症
● その他のグレード３以上の非血液学的ＡＥ（基礎疾患、併発疾患、悪性腫瘍による説明を除く）
● 未解決の治療関連グレード２ＡＥが１４日超続く
● 基礎疾患や外因によるものでないことが明らかな死亡
● Ｈｙ’ｓ ｌａｗの症例

【0481】

以下の非血液学的毒性は、ＤＬＴと見なされない：
● グレード３の悪心／嘔吐または下痢が７２時間未満で、制吐剤及びその他の支持療法が十分である
● グレード３の疲労＜１週間
● ≧グレード３の電解質異常またはその他の非血液学的臨床検査異常が持続する
● ７２時間未満持続し、臨床的に合併症がなく、自然に治癒するか、従来の内科的介入に応答する
● ≧グレード３のアミラーゼまたはリパーゼで、膵炎の症状や臨床症状を伴わない

【0482】

（ｖ） 停止基準
（ａ） コホートレベルでの登録停止
死亡がエンホルツマブベドチンに関連すると治験依頼者が判断した場合、以下の通りまで、その用量及びそれ以上の用量で登録が停止される：
１． 治験責任医師、治験依頼者及びＳＭＣがこの症例を検討し、
２． 治験依頼者は、該当する規制当局に対し、安全性評価の結果及び該当するコホートにおける登録再開の正当性を通知し、現地規制により必要とされる場合には、再開の承認を得る。

【0483】

（ｂ） 全試験の登録中止
試験全体のベネフィットとリスクのバランスがマイナスと見なされた場合、治験依頼者によって全試験への登録が中止される。

【0484】

安全性は、治験依頼者とＳＭＣによって試験期間中継続的に監視され、毒性の発現率及び／または重症度が試験集団に容認できないリスク・ベネフィット評価につながる場合には、登録中止が検討される。治験依頼者はＳＭＣと相談して、既に治療を受ける対象に治療を継続させるか、登録継続のためのプロトコルの修正を検討するか、あるいは試験を中止するかを検討する。

【0485】

安全性の懸念のために登録が中止された場合、登録の再開は、適切な修正と規制当局への通知を行った後でなければならず、現地の規制により再開が必要とされる場合には、その承認が必要となる。

【0486】

（ｖｉ） 研究の終了
本試験は、最後の対象が登録されてから約５年後、または追跡調査中の対象がいなくなった時点のいずれか早い時点で終了する。さらに、治験依頼者は任意の時点で試験を終了することができる。

【0487】

（ｖｉｉ） 安全監視委員会
ＳＭＣは、用量漸増及び用量拡大を通して、エンホルツマブベドチンの安全性を監視する。ＳＭＣは、治験責任医師（複数可）と治験依頼者の代表者（研究医療モニタ、薬物安全性代表者、臨床科学者、及び生物統計学者を含む）で構成される。委員会は、用量漸増の決定や治療出現（ＴＥ）毒性に関連するデータのレビューを含む定期的及び／または臨時の会議を通じて、本試験参加者の安全性を監視する。少なくとも、コホート中の全ての対象がＤＬＴ評価期間を完了した後、ＳＭＣ会議が試験の用量漸増期間中に開催される。ＳＭＣは、安全性評価及びＤＬＴ決定のために、登録された対象の臨床データをレビューする。ＳＭＣは、ｍＴＰＩ決定規則表と併せて、用量レベル及びコホートサイズに関する推奨を行う。ｍＴＰＩモデルに従った用量レベルで複数のコホートが登録される。ＳＭＣはまた、累積対象データの再検討に関して、用量拡大期間中、四半期に１回程度会議を開く。

【0488】

ＤＬＴの決定及び用量漸増の推奨に加え、ＳＭＣは、該当する場合、試験中に以下の推奨の１つ以上を行うことができる：
● 所与の用量における安全性のさらなる評価
● 試験薬投与の代替アプローチの評価（投与時間の延長、投与前の前投薬の必要性など）
● 用量漸増中の低用量または中間用量の評価
● 漸増中の用量レベルの活性及び忍容性に基づき、拡張コホートで評価される用量（複数可）を推奨する
● 安全性と活性のデータに基づくエンホルツマブベドチン膀胱内投与の単剤投与量とスケジュールの推奨
● ＭＴＤに達しない場合は、用量漸増中により高い用量レベルを評価する

【0489】

さらなる詳細は、ＳＭＣ宣言に文書化される。

【0490】

６．２．４．２ 考察と試験デザインの根拠
このファースト・イン・ヒューマン（ＦＩＨ）試験は、エンホルツマブベドチンを誘導段階には週１回、６週間、維持期には月１回、計９回膀胱内に投与し、その安全性と忍容性を評価する第１相、用量漸増及び用量拡大試験であり、ＮＭＩＢＣ患者を対象にＭＴＤを推定し、及び／または推奨用量及びスケジュールを決定する。エンホルツマブベドチン膀胱内投与の初期臨床開発では、ＢＣＧ非応答性で、標準的な治療法の選択肢がなく（例えば、根治的膀胱全摘除術に不適格、あるいは拒否している）、治療医師の意見でエンホルツマブベドチン膀胱内投与の候補とされる対象に、その評価が行われる。

【0491】

用量漸増は、エンホルツマブベドチンの膀胱内投与におけるＭＴＤの推定及び／または推奨用量の決定に用いられる。用量漸増が完了し、薬剤の初期安全性が実証された後、エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性と抗腫瘍活性をさらに評価するため、それぞれ約２０人の対象からなる最大２つの拡大コホートが登録される。拡大コホートにより、エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性、忍容性、ＰＫ、抗腫瘍活性に関する追加情報を収集することができる。この情報は、エンホルツマブベドチン膀胱内投与のさらなる開発の基礎となる。

【0492】

（ｉ） 用量漸増中にｍＴＰＩを使用するための根拠
ｍＴＰＩ用量漸増法は、従来の「３＋３」用量決定法よりも優れる可能性があるため、この試験に選ばれた。これらの利点には、事前に規定したあらゆるＤＬＴ率を目標とすることができること、ＭＴＤを超える対象の治療数を少なくして安全性を向上させること、柔軟なコホートサイズを可能にすることなどがある（Ｊｉ ２０１０）。ｍＴＰＩ法はまた、全ての用量レベルで治療を受けた全ての対象の情報をＭＴＤの推定に使用して、ＭＴＤの推定精度を向上させる。

【0493】

（ｉｉ） 対象を治療群に割り当てる方法
用量漸増中、対象の用量レベルへの割り当ては、表１３に示すｍＴＰＩ決定規則により決定され、治験依頼者による対象登録の承認時に行われる。

【0494】

用量拡大中、対象は約２０人ずつ最大２つのコホートに登録される。試験の用量漸増部分でＭＴＤが同定された場合、対応する用量レベルが用量拡大で評価される。治験依頼者は、ＭＴＤに達しない場合、または異なる用量レベルがさらなる評価を必要とする場合、ＳＭＣと相談して、用量拡大において２つ以上の用量レベルを評価することもできる。これらの用量拡大コホートの開始は、用量漸増中に示された安全性と活性の累積に基づいて、ＳＭＣと相談して治験依頼者によって決定される。

【0495】

医療モニタは試験期間中、エンホルツマブベドチン膀胱内投与の安全性を評価し、安全性の理由から、特定の用量レベルに対する対象のモデルの割り当てを無効にすることができる。

【0496】

（ｉｉｉ） 用量選択の根拠
現在米国では、ネオアジュバント／アジュバント、局所進行性、転移性においてＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤とプラチナ製剤を含む化学療法を受けたことのある局所進行性または転移性ＵＣ患者の治療薬として、エンホルツマブベドチンの全身投与が１．２５ｍｇ／ｋｇ（最大用量１２５ｍｇまで）で承認されており、臨床試験においてもこの用量で評価される。この用量レベルでのエンホルツマブベドチンの安全性プロファイルは、全身性固形腫瘍治験において、特に膀胱癌において十分に確立される（ＥＶ－１０１、ＥＶ－２０１、ＥＶ－３０１；更なる詳細は治験責任医師用パンフレットを参照）。前臨床試験での忍容性、全身吸収の低さ、及び１２５ｍｇのエンホルツマブベドチン全身投与の既知の安全性プロファイルを考慮し、本試験ではエンホルツマブベドチンを１２５ｍｇから膀胱内投与で評価する。

【0497】

（ｉｖ） 盲検及び非盲検
これは非盲検試験である。

【0498】

６．２．５ 試験対象集団
対象は、試験に適格であるためには、登録基準を全て満たす必要がある。適格性基準は、治験責任医師によって免除されることはなく、適正臨床診察監査及び／または健康規制当局の検査の場合にレビューを受ける。

【0499】

６．２．５．１ 選択基準と除外基準
第６．２．２節を参照する。

【0500】

６．２．５．２ 妊娠の可能性
妊娠可能な人とは、女性として生まれ、初潮を経験し、外科的不妊手術（子宮摘出、両側卵管切除、両側卵巣摘出など）を受けないか、閉経していない人をいう。閉経期とは、臨床的には、４５歳超の人で、他の生物学的、生理学的、薬理学的原因がない場合に、１２ヵ月間無月経が続くことと定義される。

【0501】

父親となりうる人とは、精巣があり、外科的不妊手術（例えば、精管切除術の後、その手術が有効であったことを証明する臨床試験）を受けない、男性として生まれた人である。

【0502】

６．２．５．３ 対象の試験治療または評価からの除外
対象が試験治療からまたは試験から除外される場合、本試験の治験依頼者に通知しなければならない。対象の試験中止の理由（複数可）は、対象の医療記録及び症例報告書（ＣＲＦ）に記載されなければならない。

【0503】

（ｉ） 試験治療の中止
対象の試験治療は、以下のいずれかの理由で中止される：
● プロトコルによる治療完了
● 持続性、再発性、または進行性の疾患
○ 最初の試験実施３ヵ月後の評価を含む試験実施中の評価において、ＣＩＳの有無にかかわらず高悪性度Ｔ１疾患が認められた対象は、試験治療を中止する
○ 試験開始３ヵ月後の最初の評価でＣＩＳが持続または高悪性度Ｔａ疾患が再発した対象は、試験治療の継続に再同意した後に治療を継続し、６ヵ月後に再度評価され得る
○ ６ヵ月後の評価から、高リスクＮＭＩＢＣが持続または再発した対象、または病勢進行した対象は、試験治療を中止する。
● 低悪性度腫瘍の出現、存在、残存は再発とはみなされない。低悪性度腫瘍のみを有する対象は、切除及び組織学的確認後に治療を続けるべきである
● 有害事象（ＡＥ）
● 妊娠
● 治験責任医師の決定
● 対象決定、非ＡＥ
● 治験依頼者による試験終了
● その他、非ＡＥ

【0504】

試験治療を中止する対象は、同意が撤回されない限り、追跡調査の研究に引き続き参加する。

【0505】

（ｉｉ） 肝安全性に関連する治療中止推奨
ウイルス性肝炎、既往または急性の肝疾患、肝障害に関連する他の薬剤への曝露など、肝機能検査値の上昇について説明がない場合は、対象の試験治療を中止する。治験責任医師は、治験治療を継続することが対象の最善の利益にならないと判断することができる。次のような場合は、治療の中止を考慮すべきである：
● ＡＬＴまたはＡＳＴ ＞８ × ＵＬＮ
● ＡＬＴまたはＡＳＴ＞５×ＵＬＮが２週間超続く
● ＡＬＴもしくはＡＳＴ＞３×ＵＬＮ、総ビリルビン＞２×ＵＬＮ、またはＩＮＲ＞ １．５（ＩＮＲ検査が適用／評価される場合）
● ＡＬＴまたはＡＳＴが３×ＵＬＮを超え、肝障害を示唆する症状（例えば、右上腹部の痛みや圧痛）及び／または好酸球増加症（５％超）が認められる

【0506】

これらの治療中止推奨は、ＦＤＡの業界向けガイダンス（Ｄｒｕｇ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｊｕｒｙ：Ｐｒｅｍａｒｋｅｔｉｎｇ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，Ｊｕｌｙ ２００９）に基づく。本推奨は、開発中の薬剤に関する臨床経験の蓄積に基づく治験責任医師への基本的な指針であり、エンホルツマブベドチンの臨床経験に特化したものではない。

【0507】

（ｉｉｉ） 対象の試験からの離脱
対象の試験は、以下のいずれかの理由で中止される：
● プロトコルによる試験完了
● 対象の同意撤回
● 治験依頼者による試験終了
● 追跡調査の喪失
● 死亡
● その他

【0508】

６．２．６ 治療
６．２．６．１ 実施した治療
全ての対象は、膀胱内投与を介して、本プロトコルの治験薬であるエンホルツマブベドチンを受ける。

【0509】

６．２．６．２ 治験薬
エンホルツマブベドチンの調製、投与、保存に関する詳細な情報は、「Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ」に記載される。

【0510】

（ｉ） 説明
エンホルツマブベドチンは、ＭＭＡＥ及びリンカーサブユニットの両方を含む化学中間体を、抗体のシステイン残基に結合させることによって生成される。得られたＡＤＣは、抗体１個あたり平均３．８個の薬物分子を含む。エンホルツマブベドチン製剤は、無菌で、保存剤を含まなく、白色からオフホワイトの凍結乾燥粉末であり、膀胱内投与のために再構成される。エンホルツマブベドチンを３０ｍｇ単回用量バイアルで供給する。

【0511】

（ｉｉ） 用量及び投与
エンホルツマブベドチンは、誘導段階には６週間、週に１回、膀胱内に投与され、維持段階には１ヵ月に１回、９回投与される。

【0512】

本試験の用量漸増部分では、４つの計画用量レベル（１２５、２５０、５００、及び７５０ｍｇ）でエンホルツマブベドチンの濃度を漸増させ、２５ｍＬの注入量と最大９０分間の滞留時間（または対象の許容滞留時間；実際の滞留時間は適切なｅＣＲＦに記録される）で評価する。

【0513】

（ｉｉｉ） 用量の変更
毒性に対する投与延期または投与量の変更は、治験責任医師が対象ごとに医療モニタと相談しながら行う。本試験の用量漸増期間中、ＤＬＴ評価期間中にＤＬＴ基準を満たす毒性が発現した場合、毒性が適切に管理され、治験責任医師が試験治療の再開が適切と判断し、医療モニタから承認が得られない限り、対象は試験治療を中止される。観察されたＡＥのタイプ及び重症度は、決定を下ろすために考慮される。

【0514】

投与が延期された場合、対象は標準治療と治験日程に従って、３ヵ月ごとに反応評価を受け続けなければならない。

【0515】

（ａ） 誘導段階
誘導段階の投与遅延は、医療モニタの承認があれば１４日間まで認められる。誘導段階の間、治験責任医師は、未解決の毒性により予定された誘導治療を１回のみスキップすることができる。予定された誘導治療を１回よりも多くスキップする必要がある対象は、試験治療を中止する。

【0516】

誘導段階の間にＤＬＴ基準を満たす有害事象が発生した対象は、毒性が適切に管理され、治験責任医師がエンホルツマブベドチンの膀胱内投与の再開が適切と判断し、医療モニタから再開の承認が得られない限り、エンホルツマブベドチン膀胱内投与による治療を受けるべきでない。観察されたＡＥのタイプ及び重症度は、決定を下ろすために考慮される。

【0517】

対象は、医療モニタと相談した後、同じ用量レベルまたは減少した用量レベルで治療を再開し得る。ＤＬＴ に該当するＡＥが発生した後に対象が治療を継続し、同じＡＥが再発した場合、治療は永久に中止されなければならない。エンホルツマブベドチン膀胱内投与の永久中止の基準を満たすＡＥが発生した対象は、用量の減量または変更を含め、試験治療を再開することはできない。

【0518】

同じグレード３のＡＥが２回発生した場合、エンホルツマブベドチンの膀胱内投与は永久に中止すべきである。

【0519】

用量遅延≧１４日を必要とする、治療に関連しないその他のＡＥが発生した場合は、医療モニタに連絡する。

【0520】

（ｂ） 維持段階
維持段階の間、用量遅延を必要とする未解決の治療関連グレード２以上のＡＥを有する対象は、ＡＥがグレード１またはベースライン重症度に戻るまで、予定された維持用量を保持し得る。任意の未解決ＡＥに対する治療遅延が２８日を超える場合、対象が治験を継続する進行中の臨床的利益があるかどうかを決定するために、医療モニタと相談すべきである。維持用量は、スキップされるのではなく、遅延されるべきである。治療に関連した毒性が未解決のため、連続２回の維持投与を遅らせることは許されず、治療を永久に中止しなければならない。

【0521】

対象は、医療モニタと相談した後、同じ用量レベルまたは減少した用量レベルで治療を再開し得る。ＤＬＴ に該当するＡＥが発生した後に対象が治療を継続し、同じＡＥが再発した場合、治療は永久に中止されなければならない。エンホルツマブベドチン膀胱内投与の永久中止の基準を満たすＡＥが発生した対象は、用量の減量または変更を含め、試験治療を再開することはできない。

【0522】

同じグレード３のＡＥが２回発生した場合、エンホルツマブベドチンの膀胱内投与は永久に中止することとなる。

【0523】

（ｃ） 治療関連毒性に対する用量変更
エンホルツマブベドチン関連血液毒性及び非血液毒性の用量変更推奨を、それぞれ表１５及び表１６に示す。

【0524】

（表１５）エンホルツマブベドチンに関連した血液毒性に対する推奨用量変更

【0525】

（表１６）エンホルツマブベドチンに関連した非血液毒性に対する推奨用量変更

試験治療を通じて、高血糖を除くグレード３／４の電解質平衡異常／臨床検査異常で、臨床的後遺症を伴わず、発症から７２時間以内に補充／適切な管理により改善される場合は、中止の必要はない（例えば、グレード４の低ナトリウム血症）。

【0526】

（ｉｖ） 保管及び取り扱い
エンホルツマブベドチンを含むバイアル及び溶液の保管のために、冷蔵は２～８℃に設定されるべきである。制御された位置は、薬剤師、治験責任医師、または正式に指定された人にのみアクセス可能でなければならない。試験薬は、投与前に再構成されなければならない。

【0527】

試験薬に対する光の影響は評価されない。したがって、エンホルツマブベドチンの凍結乾燥粉末、再構成薬物生成物及び／または投与溶液のバイアルは、使用時間まで光から保護されることが推奨される。

【0528】

試験薬の再構成されたバイアルを振盪しない。

【0529】

任意の部分的に使用されたバイアルまたは調製された投与溶液は、施設内薬物廃棄手順に従って現場で廃棄されるべきである。未使用のバイアルは、施設によって廃棄されるか、または治験依頼者の承認後に治験依頼者に返却する。

【0530】

６．２．６．３ 必要とされる前投薬と後投薬
エンホルツマブベドチンの膀胱内投与に必要な前投薬や後投薬はない。

【0531】

皮膚との接触または刺激を防止するために、外性器官周囲への点滴注入前に局所皮膚バリア軟膏の使用が考慮される。

【0532】

対象、特に女性には、投与当日の排尿後に性器を洗浄し、必要に応じてバリア軟膏を使用するように指導する。

【0533】

６．２．６．４ 併用療法
対象の福祉に必要であると治験責任医師が判断した全ての治療は、禁止薬として指定されたものを除き、地域社会の医療水準に従って、治験責任医師の裁量で実施される。

【0534】

投与された全ての併用薬及び血液製剤は、初日（投与前）から安全報告期間まで記録される。試験プロトコルに関連するＡＥに対して投与された併用薬は、インフォームドコンセントの時点から記録されるべきである。

【0535】

（ｉ） 必要とされる併用療法
必要とされる併用療法はない。

【0536】

（ｉｉ） 許可される併用療法
慢性プレドニゾン（またはそれに相当するもの）を≦２０ｍｇ／日の用量で併用する。医学的適応がある場合、試験中に発生した急性の症状を治療するために、プレドニゾン（またはそれに相当するもの）の高用量投与が期間限定で許可される。制吐薬の使用が許容される。

【0537】

強力なチトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）３Ａ４阻害剤またはＰ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）阻害剤をエンホルツマブベドチンと併用投与する対象は、有害反応について注意深く監視する必要がある。

【0538】

ワクチンによる日常的な予防は認められるが、使用されるワクチンは生きた微生物を含まないことが推奨される。

【0539】

ベースライン時にＢ型肝炎表面抗原及び／または抗Ｂ型肝炎コア抗体が陽性で、ＰＣＲアッセイが陰性の対象は、地域または施設のガイドラインに従って、適切な抗ウイルス予防または定期的な監視モニタリングを受けるべきである。

【0540】

尿路感染症のリスクを最小限にするため、臨床的適応があれば予防的抗生物質の投与は許可される。対象が症候性ＵＴＩを有する場合、抗生物質のフルコースで治療し、治癒するまで試験薬は中止される。

【0541】

抗コリン薬は、頻尿、切迫感、失禁の症状がある対象に処方される。

【0542】

対象の福祉に必要であると治験責任医師が判断した全ての治療は、地域社会の医療水準に従って、治験責任医師の裁量で実施される。

【0543】

（ｉｉｉ） 禁止される併用療法
利尿剤は投与日の前夜、または試験薬投与前の投与日には服用しないこと。

【0544】

可能な限り、エンホルツマブベドチン膀胱内投与４～６時間前の水分摂取は避けるべきである。

【0545】

対象は試験期間中、他の治験薬、放射線治療、膀胱内治療、または全身抗悪性腫瘍治療を受けることはできない。

【0546】

６．２．６．５ 治療出現する有害事象の管理
（ｉ） 高血糖の管理
治験責任医師は血糖値をモニタし、高血糖の症状が認められた場合には、感染症の徹底的な評価も含め、追加的な評価を行うことが推奨される。加えて、ステロイドが他の疾患の治療に使用される場合、血糖値のモニタリングが必要になることがある。血糖値の上昇が観察された場合、対象は地域の標準治療に従って治療を行い、内分泌内科への紹介が考慮される。

【0547】

対象、特に糖尿病または高血糖の既往歴のある対象、または継続中の対象は、血糖値の制御が困難になった場合、または頻尿、喉の渇きの増加、目のかすみ、疲労感、頭痛などの高血糖を示唆する症状が現れた場合、直ちに医師に連絡するよう助言されるべきである。

【0548】

ベースライン時にＨｂＡ１ｃが高値（≧６．５％）で試験に参加した対象は、誘導段階に適切な医療機関に紹介され、グルコース管理を受けるべきである。毎回の投与前に血糖値をチェックし、血糖値が２５０ｍｇ／ｄＬを超える場合は投与を中止する。対象の血糖が２５０ｍｇ／ｄＬ以下に改善され、臨床的及び代謝的に安定すると、投与を継続することができる。インスリンの使用は、標準的なケアの一部として許容される。エンホルツマブベドチンに関連すると考えられる血糖値＞５００ｍｇ／ｄＬに関して、薬物の中断と基礎診断を決定するための高血糖の完全な評価を必要とする。高血糖／高血糖が２５０ｍｇ／ｄＬ以下に改善されると、医療モニタと相談の上、注意深く監視しながら投与を再開することができる。対象が新たに糖尿病を発症した場合は、代謝パネル、尿ケトン、ＨｂＡ１ｃ、Ｃ－ペプチドで評価することにより、以前のチェックポイント阻害剤療法の設定における１型糖尿病の新たな発症を評価する。

【0549】

（ｉｉ） エンホルツマブベドチンによる発疹の管理
エンホルツマブベドチンは、ネクチン－４指向性抗体薬物複合体である。ネクチン－４は、尿路上皮癌で高発現する細胞接着分子である。ネクチン－４は、皮膚のケラチノサイト、汗腺、毛包などの正常組織にも低レベルから中レベルで発現するため、皮膚反応は予想される事象である。したがって、皮膚反応はエンホルツマブベドチンを用いた全ての臨床試験で問題となる有害事象である。

【0550】

２０１９年１２月１８日（米国におけるエンホルツマブベドチンの承認日）から２０２０年１０月２２日までの市販後安全性データの累積的検討により、ＩＶエンホルツマブベドチンを受けた１５人の患者において重度の皮膚有害反応の報告が確認され、その中には致命的な転帰となる患者もいた。これらの反応は、主に第１の治療サイクルで発生した。これらの症例で報告されたＡＥは、Ｓｔｅｖｅｎｓ－Ｊｏｈｎｓｏｎ症候群（ＳＪＳ：５例）、水疱（３例）、水疱性皮膚炎（３例）、対称性薬物関連棘間及び撓骨性発疹（ＳＤＲＩＦＥ：２例）、ならびに剥脱性皮膚炎、剥脱性発疹、表皮壊死、口腔咽頭水疱、口内炎、中毒性表皮壊死融解症（ＴＥＮ）が各１例であった。

【0551】

尿路上皮癌のエンホルツマブベドチン単剤療法の全身投与試験において、重篤な皮膚有害事象（ＳＡＥ）が７４９例中１１例（１．５％）に報告され、その内訳は水疱性皮膚炎（０．４％）、薬疹（０．４％）、水疱（０．１％）、結膜炎（０．１％）、ＳＪＳ（０．１％）、口内炎（０．１％）、中毒性皮疹（０．１％）であった。

【0552】

また、対象に皮膚反応、口腔粘膜、粘膜炎や結膜炎を含む眼球異常の徴候や症状がある場合は、直ちに治験責任医師に連絡するよう助言する。最初のサイクルから治療期間中、対象の皮膚反応を注意深く監視する。軽度から中等度の皮膚反応に対しては、臨床的適応に応じて局所コルチコステロイドや抗ヒスタミン薬などの適切な治療を考慮する。グレード２の発疹または皮膚反応が悪化した場合は、エンホルツマブベドチンの投与を中止することを検討する。グレード３または４の発疹または皮膚反応、あるいはＳＪＳまたはＴＥＮが疑われる場合または確認された場合は、エンホルツマブベドチンを永久に中止し、専門医療機関への紹介を検討する。

【0553】

（ａ） 局所スキンケアケア
エンホルツマブベドチンが皮膚や粘膜表面から曝露された場合の安全性は、進行中の臨床試験や前臨床試験で評価されない。注入中の薬物や注入後の尿が皮膚、眼、粘膜に偶発的に曝露することはないように注意すべきである。

【0554】

注入時、滞留時、排泄時に不注意で皮膚が露出することがあるため、治験責任医師は各注入前に性器及び会陰部の皮膚刺激または皮膚破壊がないか検査する必要がある。皮膚刺激や皮膚破壊を最小限に抑えるため、局所バリア軟膏や包帯剤を塗布し、これらを行うときに皮膚が曝露しないようにする。注入前に皮膚に著しい変化または破壊が認められた場合は、医療モニタへの相談に加えて、必要な予防措置及び／または投与中止を考慮する必要がある。性器、会陰部、その他の患部の目視検査は、可能な場合、または対象が偶発的な曝露や皮膚刺激に関連する症状を報告した場合に、尿排泄後に行うべきである。

【0555】

対象は尿排泄後に手を洗うべきである。対象が偶発的に曝露した場合は、直ちに石鹸と水で患部を洗うべきである。翌日以降、患部に赤み、かゆみ、腫れなどの症状が出ないか観察すべきである。適切な治療と追跡調査のため、いかなる症状も直ちに担当治験責任医師に報告されなければならない。

【0556】

（ｉｉｉ） アレルギー性／過敏症反応
アレルギー性／過敏症反応は、アレルゲンへの曝露による局所的または全身的な有害反応を特徴とする（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ 第５．０版）。アレルギー性／過敏症反応は、かゆみ、各種発疹、蕁麻疹、吐き気、嘔吐、背部痛、腹痛などの徴候や症状の組み合わせとして現れることがある。

【0557】

許容される措置は、用量変更（表１６）と併用薬を含む。

【0558】

（ｉｖ） 過量投与の管理
エンホルツマブベドチンの＞１０％の過量投与があった場合、治験施設は過量投与に気づき次第、治験依頼者に通知しなければならない。患者は有害反応について注意深く観察されるべきである。施設内標準に従った補助治療を実施すべきである。

【0559】

６．２．６．６ 治療遵守
試験薬の投与は試験実施施設のスタッフが行い、原資料及びＣＲＦに文書化される。

【0560】

６．２．７ 試験作業
６．２．７．１ 治験日程
ＡＥ及び併用薬は、投与１日目（投与前）から安全報告期間まで記録される。試験プロトコルに関連するあらゆるＡＥ、及びＡＥの治療のために投与された併用薬は、インフォームドコンセントの時点から記録されるべきである。

【0561】

臨床検査評価（血清化学パネル、全血球数［ＣＢＣ］（鑑別［臨床的に指示された場合は手動による鑑別］）、尿検査［異常結果に対する反射顕微鏡検査］）、身体検査、体重、及びＥＣＯＧ活動状態は、誘導段階の１週目１日目の試験薬投与前３日以内に実施される。関連する全ての臨床検査評価の結果は、投与前に確認されなければならない。治験日程を表１７に示す。

【0562】

（表１７）治験日程

ＡＥ＝有害事象、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＳＴ＝アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＡＴＡ＝抗治療抗体、ＣＢＣ＝全血球数、ＣＩＳ＝上皮内癌、ＣＴ＝コンピュータ断層撮影、Ｄ／ｄ＝日、ＥＣＯＧ＝米国東海岸癌臨床試験グループ、ＥＣＧ＝心電図、ＥＯＴ＝治療終了、ＨｂＡ１ｃ＝ヘモグロビンＡ１ｃ、ＭＲＩ＝磁気共鳴画像化、ＰＫ＝薬物動態、ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ＝プロトロンビン時間／部分的トロンボプラスチン時間／国際標準化比、ｑ１ｗｋ＝週１回、ＴＵＲＢＴ＝経尿道的膀胱腫瘍切除術、Ｗｋ＝週
Ａ 処置は、誘導段階の各週の１日目と２日目に週１回実施される。
Ｂ （誘導段階終了後６～８週間後に行われる）最初の試験応答評価後、対象は維持段階に入る。処置は、維持段階中の毎月１日目と１５日目に実施される。
Ｃ ＥＯＴ評価は、非プロトコール抗癌剤治療を開始する前に行うべきである。ＥＯＴ評価が最終試験治療後３０日より前に終了した場合は、対象の最終試験治療後３０～３７日目に電話によるスクリーニングを実施し、ＡＥプロファイルに変化がないことを確認する。
Ｄ 疾患の持続、再発、進行以外の理由で試験治療を中止した対象、及び維持段階を終了した対象は、本試験の追跡調査段階に入る。追跡調査は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗癌療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。
Ｅ 誘導段階中の２日目の来院は、診療所において、またはテレヘルス／電話診察で行われる。４日目の来院は１週目、２週目、６週目のみ。２日目と４日目のＰＫサンプルは、外部のホームヘルパー業者による自宅検査で採取することも可能である。
Ｆ １５日目の来院は、最初の３回の維持用量投与中に必要であり、ＡＥ及び併用薬の評価を行うため、テレヘルス／電話で実施される。
Ｇ 初日前７日以内に実施された場合は不要。妊娠検査は、誘導段階の第１週、第３週、第６週、第９週の試験初日、及び維持段階の各月の試験初日に必要とされる。
Ｈ エンホルツマプベドチンの最終投与後６ヵ月間、毎月採取された。
Ｉ 初日前３日以内に実施された場合は不要。
Ｊ 実際に来院する場合に行われる。
Ｋ 過去１２ヵ月以内に測定された身長が使用される。
Ｌ 臨床的適応がある場合、試験中の任意の時点で実施される。
Ｍ 誘導段階の第１週、第３週、第６週のみ血清化学パネルが必要。
Ｎ 臨床的適応がある場合。
Ｏ バイタルサインを収集し、投与前と最初の排泄から２時間後にＡＥを記録する。
Ｐ 医学的に禁忌でない限り、ＩＶ造影による診断品質の胸部ＣＴが必要である。対象がＩＶ造影に耐えられない場合は、非造影胸部ＣＴが許容される。上部尿路、腹部、骨盤の画像診断には、造影剤を使用したＣＴまたはＭＲＩ尿路造影（医学的に禁忌でない限り）が許容される。試験治療開始前３ヵ月以内に同様のモダリティによる画像診断を行ったことがある場合は、その画像を使用する。
Ｑ 用量漸増中及び用量拡大中のインタビューは、以下の時点（＋７日間のウィンドウ）：誘導段階の終了時、維持段階の５回投与終了時、及び維持段階の終了時に行われる。誘導段階の６週目より前に中止した対象は、最終来院時に終了時インタビューを受ける。
Ｒ インフォームドコンセント時から。
Ｓ 維持段階中に、エンホルツマブベドチンを月１回、計９回膀胱内投与する。
Ｔ 登録から１２ヵ月以内に採取された直近のＴＵＲＢＴから採取された保存腫瘍標本または組織が、入手可能な場合には必要とされる。入手可能な最新の組織を使用すべきである。新たにカットしたスライドのみを提供できる場合は、最低１０～１５切片が必要（１０切片未満の場合は治験依頼者に問い合わせること）。
Ｕ 膀胱鏡検査法及び尿細胞診による応答評価は、次回の試験薬投与前１４日以内に完了しなければならない。膀胱鏡検査異常、陽性、または尿細胞診異常のある対象は、治験責任医師の臨床的判断により、追加の評価（例えば、画像診断、生検、麻酔下での検査）を受ける必要がある。
Ｖ 対象は維持段階に入る前に膀胱鏡検査を受けなければならない。
Ｗ 目に見える全ての乳頭状Ｔａ／Ｔ１腫瘍は、登録前６０日以内に完全に切除されていなければならない。純粋なＣＩＳの残留は許される。Ｔ１疾患を有する対象は、試験開始前に反復ＴＵＲＢＴを受けるべきである。再病期分類ＴＵＲＢＴは、浸潤のない固有筋層を示さなければならない。標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診による腫瘍応答評価は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗癌療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。全ての対象について、膀胱鏡検査異常、尿細胞診陽性、疑わしい所見または不確定な所見を有する２つ以上の連続した尿細胞診検体などの腫瘍評価中の所見に基づいて、臨床的適応があれば追加評価（画像診断、生検など）を検討すべきである。
Ｘ 本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最低４回の生検が必要）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。
Ｙ 疾患の持続、再発、進行、またはその後の抗癌剤治療の開始による試験治療の中止後、対象は生存追跡調査に入る。生存期間及びその後の抗癌剤治療に関するデータは、追跡不能、同意の撤回、死亡、または治験依頼者による試験中止のいずれかが最初に起こるまで、６ヵ月（±２週間）ごとに、登録後最長５年間収集される。
Ｚ 投与前に採血またはフィンガースティックで血糖値が２５０ｍｇ／ｄＬ未満であることを確認する。
ＡＡ 血清化学パネルとしては、アルブミン、アルカリホスファターゼ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、重炭酸塩、血液尿素窒素、カルシウム、クレアチニン、塩化物、乳酸脱水素酵素、リン、カリウム、ナトリウム、総ビリルビン、アミラーゼ、リパーゼ、グルコース、及び尿酸検査が挙げられる。
ＢＢ 視力検査、細隙灯検査、眼圧検査、及び拡張眼底検査を含むがこれらに限定されない、適格な検眼士または眼科医によって行われる眼の精密検査。その後の眼検査は、臨床的な指示に応じて実施される。ＥＯＴ細隙灯検査は、本試験中に角膜ＡＥが発生した対象に必要であり、最終投与から少なくとも４週間以内に実施されなければならない。
ＣＣ ４ヵ月目のみ。試験開始３ヵ月後の最初の評価でＣＩＳが持続または高悪性度Ｔａ疾患が再発した対象は、試験治療の継続に再同意した後に治療を継続し、６ヵ月後に再度評価され得る。
ＤＤ 疾患の全ての既知の部位は、スクリーニング時に記録され、その後の各腫瘍評価時に再評価されるべきである。

【0563】

（表１８）ＰＫ、ＡＴＡ、及びバイオマーカー採取（血液）

ＡＴＡ＝抗治療抗体；ｃｆＤＮＡ＝循環遊離ＤＮＡ；ＥＯＴ＝治療終了；Ｎ／Ａ＝該当せず；ＰＢＭＣ＝末梢血単核球；ＰＫ＝薬物動態；ＴＵＲＢＴ＝経尿道的膀胱腫瘍切除術
Ａ 試験中に標準治療の一環として腫瘍サンプルを採取する場合、可能であれば、バイオマーカー検査用にそのサンプルの一部を治験依頼者に提出すべきである。治療中に採取した生検由来の組織をバイオマーカー評価に使用する。
Ｂ ＴＵＲＢＴがスクリーニングウィンドウ内で実施される場合、スクリーニング時のバイオマーカー評価のための採取は、ＴＵＲＢＴの前またはＴＵＲＢＴ時に行うべきである。
ｃ 登録から１２ヵ月以内に採取された直近のＴＵＲＢＴから採取された保存腫瘍標本または組織が、入手可能な場合には必要とされる。入手可能な最新の組織を使用すべきである。新たにカットしたスライドのみを提供できる場合は、最低１０～１５切片が必要（１０切片未満の場合は治験依頼者に問い合わせること）。
Ｄ ２日目と４日目のＰＫサンプルは、外部のホームヘルパー業者による自宅検査で採取することも可能である。
Ｅ 本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最低４回の生検が必要）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合には考慮される。
Ｆ 追跡調査は、登録後最初の２年間は最初の誘導用品から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗癌療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。

【0564】

（表１９）ＰＫ及びバイオマーカー採取（尿）

ｃｆＤＮＡ＝循環遊離ＤＮＡ、ＥＯＴ＝治療終了、Ｎ／Ａ＝該当せず、ＰＫ＝薬物動態、ＴＵＲＢＴ＝経尿道的膀胱腫瘍切除術
Ａ ＴＵＲＢＴがスクリーニングウィンドウ内で実施される場合、スクリーニング時のバイオマーカー評価のための採取は、ＴＵＲＢＴの前またはＴＵＲＢＴ時に行うべきである。
Ｂ 滞留時間終了直後の排尿を採取するべきである。採尿は、試験薬の最大９０分間の滞留時間（または対象が許容できる滞留時間の終了）後の排尿とする。
ｃ 試験薬注入後、対象は最大９０分間の滞留時間にわたり、または対象の許容滞留時間が終了するまで試験薬を保持する。
Ｄ 最大９０分間の滞留時間排尿終了後（または対象の許容滞留時間排尿終了後）に２回目の採尿を行う。
Ｅ ２日目と４日目のＰＫサンプルは、外部のホームヘルパー業者による自宅検査で採取することも可能である。
Ｆ 追跡調査は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗癌療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。

【0565】

６．２．７．２ スクリーニング検査（およそ２８日目～１日目）
● インフォームドコンセント
● 選択／除外基準による試験の適格性
● 病歴
● 心電図（ＥＣＧ）
● 画像診断（試験治療開始前３ヵ月以内に同様のモダリティによる画像診断を行ったことがある場合は、その画像を使用する。）
○ 医学的に禁忌でない限り、ＩＶ造影による診断品質の胸部ＣＴが必要である。対象がＩＶ造影に耐えられない場合は、非造影胸部ＣＴが許容される。
○ 上部尿路、腹部、骨盤の画像診断には、造影剤を使用したＣＴまたはＭＲＩ尿路造影（医学的に禁忌でない限り）が許容される。
● 眼科精密検査
● 登録時に提出する保存腫瘍生検標本の採取を開始する
● 膀胱鏡検査及び細胞診（疾患の全ての既知の部位は、スクリーニング時に記録され、その後の各腫瘍評価時に再評価されるべきである。Ｔ１疾患を有する対象は、試験開始前に反復ＴＵＲＢＴを受けるべきである。再病期分類ＴＵＲＢＴは、浸潤のない固有筋層を示さなければならない。）
● 生検（臨床的適応がある場合）
● バイオマーカー評価のための血液及び尿サンプルの採取（可能な場合、また該当する場合は、ＴＵＲＢＴ前またはＴＵＲＢＴ時に採取する）

【0566】

６．２．７．３ ベースライン検査（およそ７日目～１日目）
● 身体診察
● 身長と体重（過去１２ヵ月以内に測定された身長が使用される）
● バイタルサイン
● ＥＣＯＧ活動状態
● 血液と尿のサンプル採取：
○ ＣＢＣ（末梢血液像）
○ 血清化学パネル（グルコースを含む）
○ ＨｂＡ１ｃ
○ 血清検査（Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎）
○ プロトロンビン時間／部分トロンボプラスチン時間／国際標準化比（ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ）
○ 尿検査（異常値には反射顕微鏡検査を実施）
○ 妊娠可能性のある対象の血清または尿に対して、β－ｈＣＧ妊娠検査を行う

【0567】

６．２．７．４ 誘導段階（１ヵ月目～３ヵ月目）
（ｉ） １週目の１日目～６週目（１週目の±１日後のみ）
● エンホルツマブベドチンの膀胱内投与前：
○ 対象／除外基準に従って対象の適格性を確認し、病歴を記録する（１週目のみ）
○ 身体検査；新しい症状や進行中の症状について検討＊
○ 体重＊
○ ＥＣＯＧ活動状態（１週目のみ）＊
○ バイタルサイン
○ ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
○ 血液及び／または尿のサンプル採取：
○ 血清化学パネル（１週目、３週目、６週目のみ）＊
○ 投与前にグルコースが２５０ｍｇ／ｄＬ未満であることを採血またはフィンガースティックで確認すること
○ ＣＢＣ（末梢血液像）＊
○ ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ（臨床的適応がある場合）
○ ＰＫ／抗治療抗体（ＡＴＡ）評価
○ バイオマーカー評価
○ 血清または尿によるβ－ｈＣＧ妊娠試験（１週目、３週目、及び６週目）（妊娠可能性のある対象のみ）（投与前７日以内に採取された場合は不要）
○ 尿検査（異常値には反射顕微鏡検査を実施）＊
● 臨床検査の結果を検討し、試験薬投与前に適格性を確認すること（１週目のみ）
● エンホルツマブベドチン膀胱内投与（週１回、６週間投与予定）
● エンホルツマブベドチンの膀胱内投与終了後：
○ バイタルサイン（最初の排泄から２時間［±１５分間］後に採取する）
○ 最初の排泄から２時間の観察
○ ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
○ ＰＫ評価のための血液及び尿サンプル
＊ １週目の１日目のみ、投与前３日以内に指示された評価を収集する。

【0568】

（ｉｉ） １週目の２日目～６週目
誘導段階中の２日目の来院は、診療所において、またはテレヘルス／電話で行われる。診療所での受診がない対象については、在宅医療提供者を通じて血液と尿サンプルを採取する。
● 健康診断（現地で実施する場合のみ）
● 対象インタビュー（＋７日間；６週目のみ；誘導段階の第６週以前に中止した対象は最終検査時に終了インタビューを受ける）
● ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
● ＰＫ評価のための血液及び尿サンプル（±４時間；１週目、２週目、６週目のみ）

【0569】

（ｉｉｉ） １週目の４日目～６週目
診療所での受診がない対象については、在宅医療提供者を通じて血液と尿サンプルを採取する。
● ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
● ＰＫ評価のための血液及び尿サンプル（±４時間；１週目、２週目、６週目のみ）

【0570】

（ｉｖ） ９週目の１日目（±３日）
血清または尿によるβ－ｈＣＧ妊娠検査（妊娠可能性のある対象のみ）

【0571】

６．２．７．５ 維持段階（４ヵ月目～１２ヵ月目）
（ｉ） １日目（±３日）
● エンホルツマブベドチンの膀胱内投与前：
○ インフォームドコンセント（４ヵ月目のみ；試験開始３ヵ月後の最初の評価でＣＩＳが持続または高悪性度Ｔａ疾患が再発した対象は、試験治療の継続に再同意した後に治療を継続し、６ヵ月後に再度評価され得る）
○ 身体検査；新しい症状や進行中の症状について検討
○ 体重
○ ＥＣＯＧ活動状態
○ バイタルサイン
○ ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
○ 血液及び／または尿のサンプル採取：
○ 血清化学パネル
○ 投与前にグルコースが２５０ｍｇ／ｄＬ未満であることを採血またはフィンガースティックで確認すること
○ ＣＢＣ（末梢血液像）
○ ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ（臨床的適応がある場合）
○ ＰＫ／ＡＴＡ評価
○ バイオマーカー評価
○ 血清または尿によるβ－ｈＣＧ妊娠試験（妊娠可能性のある対象のみ）（投与前７日以内に採取された場合は不要）
○ 尿検査（異常値には反射顕微鏡検査を実施）
○ 膀胱鏡検査及び細胞診（対象は、維持段階に入る前、及び登録後最初の２年間は最初の誘導投与から３ヵ月ごとに膀胱鏡検査を受けなければならず、また、試験薬投与前１４日以内に完了しなければならない）
○ 膀胱マッピング生検（１２ヵ月目の評価時に必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである［最低４回の生検が必要］。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。）
● エンホルツマブベドチン膀胱内投与（月に１回、合計９回投与予定）
● エンホルツマブベドチンの膀胱内投与終了後：
○ バイタルサイン（最初の排泄から２時間［±１５分間］後に採取する）
○ 最初の排泄から２時間の観察
○ ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
○ ＰＫ評価のための血液及び尿サンプル

【0572】

（ｉｉ） １５日目（±３日）
１５日目の来院は、最初の３回の維持用量投与中に必要であり、ＡＥ及び併用薬の評価を行うためにテレヘルス／電話で実施される。
● 対象インタビュー（維持段階の５回投与終了時及び維持期終了時［＋７日間］に実施予定）

【0573】

６．２．７．６ 応答評価
本試験における腫瘍反応性の評価は、スクリーニング時に標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診を行い、その後、登録後最初の２年間は最初の誘導投与から３ヵ月ごとに評価し、その後登録後５年間は６ヵ月ごとに評価する。

【0574】

膀胱鏡検査法及び尿細胞診による応答評価は、次回の試験薬投与前１４日以内に完了しなければならない。膀胱鏡検査異常、陽性、または尿細胞診異常のある対象は、治験責任医師の臨床的判断により、追加の評価（例えば、画像診断、生検、麻酔下での検査）を受ける必要がある。

【0575】

本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最低４回の生検が必要）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。

【0576】

６．２．７．７ 治療終了時検査（試験薬最終投与から３０～３７日後）
治療終了（ＥＯＴ）検査は、ＡＥによる遅延がない限り、試験薬の最終投与から３０～３７日後に行う。注：３ヵ月目の膀胱鏡検査後に治療を中止した対象のＥＯＴ検査までの期間が３７日を超えるが、ＥＯＴ評価は新たな抗がん剤治療を開始する前に行われなければならない。ＥＯＴ 評価が試験最終治療後３０日より前に終了した場合、対象に最終治療後３０～３７日目に連絡し、ＡＥを評価する。
● 身体診察
● バイタルサイン
● ＥＣＯＧ活動状態
● 該当する場合、眼科精密検査（ＥＯＴ細隙灯検査は、本試験中に角膜ＡＥが発生した対象に必要であり、最終投与から少なくとも４週間で実施されなければならない）
● ＡＥ及び併用薬の収集（該当する場合）
● 血液及び／または尿のサンプル採取：
○ 血清化学パネル（グルコースを含む）
○ ＣＢＣ（末梢血液像）
○ ＰＫ／ＡＴＡ評価
○ バイオマーカー評価
○ 血清または尿によるβ－ｈＣＧ妊娠検査（妊娠可能性のある対象のみ）
○ 尿検査（異常値には反射顕微鏡検査を実施）
● 疾患の状態、生存状態、初回以降の治療の収集（該当する場合）

【0577】

６．２．７．８ 追跡調査（±１週間）
疾患の持続、再発、進行以外の理由で試験治療を中止した対象、及び維持段階を終了した対象は、本試験の追跡調査段階に入る。追跡調査段階において、標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診による腫瘍応答評価は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗がん療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。

【0578】

以下の評価は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗がん療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。
● 身体診察
● 血清または尿によるβ－ｈＣＧ妊娠検査（妊娠可能性のある対象のみ）（エンホルツマブベドチンの最終投与後６ヵ月間、毎月採取すること）
● 尿検査（異常値には反射顕微鏡検査を実施）
● 画像診断（臨床的適応がある場合）
● バイオマーカー評価のための血液及び尿サンプル
● 膀胱鏡検査及び細胞診
● 生検（臨床的適応がある場合）
● 重症で試験治療に関連すると考えられる場合、ＡＥを収集する

【0579】

６．２．７．９ 生存追跡調査（±２週間）
疾患の持続、再発、進行、またはその後の抗がん剤治療の開始による試験治療の中止後、対象は生存追跡調査に入る。病状、生存期間及びその後の抗がん剤治療に関するデータは、追跡不能、同意の撤回、死亡、または治験依頼者による試験中止のいずれかが最初に起こるまで、６ヵ月（±２週間）ごとに、登録後最長５年間収集される。

【0580】

６．２．７．１０ 試験終了／追跡調査終了
対象が試験中止の基準を満たした日付と試験中止の理由が記録される。

【0581】

６．２．８ 試験評価
６．２．８．１ スクリーニング／ベースライン評価
適格性基準を満たす対象のみが、この試験に登録される。

【0582】

対象の病歴には、過去の重要な病歴、現在の状態、過去の悪性腫瘍の治療歴及び治療に対する応答、ならびに任意の併用薬に関する詳細なレビューが含まれる。

【0583】

身体検査には、以下の身体部分／システム、すなわち、腹部、四肢、頭部、心臓、肺、頸部、及び神経学的検査が含まれる。体重及び身長も測定し、身長は過去１２ヵ月以内に測定したものを使用する。

【0584】

スクリーニング検査では、眼の精密検査が行われる。

【0585】

血液検査及び尿検査には、ＣＢＣ（末梢血液像）、血清化学パネル、ＨｂＡ１ｃ、グルコース、血清検査（Ｂ及びＣ型肝炎）、ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ、ならびに尿検査（異常な結果に対する反射顕微鏡検査を行う）が含まれる。妊娠可能性のある対象に対して、血清または尿による妊娠検査を行う。

【0586】

バイオマーカー評価のための血液及び尿サンプルを採取する。登録から１２ヵ月以内に採取された直近のＴＵＲＢＴから採取された保存腫瘍標本または組織は、入手可能な場合には必要とされる。さらなる詳細については、表１８及び表１９を参照する。

【0587】

心電図はすべての対象に対してスクリーニング時に実施される。

【0588】

試験治療開始前３ヵ月以内に、胸部ＣＴ、上部消化管、腹部、骨盤の画像診断とＣＴまたはＭＲＩによる尿路造影が必要とされる。胸部ＣＴの場合、造影剤を用いた画像診断が望ましい。対象がＩＶ造影に耐えられない場合は、非造影ＣＴが許容される。上部尿路、腹部、骨盤の画像診断には、造影剤を使用したＣＴまたはＭＲＩ尿路造影（医学的に禁忌でない限り）が許容される。

【0589】

６．２．８．２ 応答／抗腫瘍活性評価
本試験における腫瘍反応性の評価は、スクリーニング時に標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診を行い、その後、登録後最初の２年間は最初の誘導投与から３ヵ月ごとに評価し、その後登録後５年間は６ヵ月ごとに評価する。

【0590】

膀胱鏡検査法及び尿細胞診による応答評価は、次回の試験薬投与前１４日以内に完了しなければならない。膀胱鏡検査異常、陽性、または尿細胞診異常のある対象は、治験責任医師の臨床的判断により、追加の評価（例えば、画像診断、生検、麻酔下での検査）を受ける必要がある。

【0591】

年１回の上部管画像診断は、対象が試験を受ける間、臨床的に指示された場合に行われる。

【0592】

白色光膀胱鏡検査、狭帯域画像化膀胱鏡検査、または蛍光（青色光）膀胱鏡検査は、試験中の評価に許容される。試験治療開始後、各対象は試験期間中可能な限り同じ膀胱鏡検査法を用いて疾患のモニタリングを受け、試験ＣＲＦに記録されるべきである。

【0593】

本試験では、１２ヵ月目の評価時に膀胱マッピング生検が必要となる。目に見える腫瘍がない場合は、膀胱の全ての象限から生検を行うべきである（最低４回の生検が必要）。生検は他の全ての来院時には必要とされないが、有効性を考慮するために臨床的に示される場合に考慮される。

【0594】

対象は、以下の所見の全てを有する場合にＣＲを有すると考えられる。
１． 膀胱鏡検査：膀胱の外観は正常。膀胱鏡検査で膀胱の外観に異常がある場合、生検は陰性か、悪性度の低いＴａ、悪性度の低い尿路上皮乳頭状新生物、または悪性度の低い乳頭腫でなければならない。ランダムに膀胱生検を実施する場合、これらの生検は陰性であるか、低悪性度の疾患を示すべきである。
２． 尿細胞診：陰性。
ａ． 決定的でない尿細胞診は、評価されるべきである。
ｂ． 尿細胞診が陽性であった場合は、膀胱鏡検査±生検、画像診断により臨床的評価を行う必要がある
３． 画像診断（実施された場合）：正常、または異常が見つかった場合は、所見が膀胱内のＣＲを支持するものでなければならない。

【0595】

試験治療薬の膀胱内投与のため、対象は、上部管または前立腺尿道にがんが見つかり、ランダム膀胱生検が陰性の場合、悪性尿細胞診を伴う膀胱鏡検査が陰性であればＣＲとみなされる。

【0596】

（ｉ） 尿細胞学の解釈
● 対象が試験中に尿細胞診で陽性を示した場合、治験責任医師は臨床的な指示に従い、膀胱鏡検査及び／または上腸管画像診断を行い、さらなる評価を行わなければならない。
● 尿細胞診が陽性であっても、疾患進行の指標として単独で用いることはできず、補助的臨床試験は、実施されなければならない。
● 尿細胞診の結果が「不満足」、「非定型細胞」、「疑わしい」、「不確定」の場合は、次の２１日以内に再度細胞診を行わなければならない。サンプル間の時間は最低でも２４時間を超える必要がある。
● 連続２回の尿細胞診の結果が「疑わしい」、「不確定」の場合、担当治験責任医師の判断により、膀胱鏡検査及び／または上部管画像診断によるさらなる臨床評価が必要となる。
● 尿細胞診が「疑わしい」、「不確定」で、かつ生検が陰性の場合、結果は陰性と解釈される。
● 連続２回の結果が「不満足」、「非定型細胞」の場合、全体の結果は陰性とみなされる。

【0597】

持続性疾患は、乳頭状疾患を伴うまたは伴わないＣＩＳ疾患の存在として定義される（高悪性度Ｔａ／Ｔ１）。

【0598】

再発は、治療開始後の高悪性度疾患（高悪性度Ｔａ、Ｔ１、またはＣＩＳ）の再出現として定義される。再発は、生検によって確認されなければならない。

【0599】

進行とは、以下のいずれかの発症と定義される：Ｔ１疾患（固有層浸潤）、≧Ｔ２疾患（筋浸潤）、リンパ節転移（Ｎ１＋）、遠隔転移（Ｍ１）、または悪性度が低悪性度から高悪性度に上昇すること。

【0600】

低悪性度の疾患の持続、出現、存在は再発とはみなされない。低悪性度乳頭状疾患が再発した対象は、切除術を受けて試験を継続することができる。

【0601】

対象の臨床データは、ＣＲＦ源検証に利用可能でなければならない。

【0602】

６．２．８．３ 薬動力学的及び免疫原性評価
ＰＫ及びＡＴＡ分析のための血液及び尿サンプルは、表１８及び表１９に提供されるサンプル採取スケジュールに従って、試験期間中採取される。エンホルツマブベドチン、ａｃ－ＭＭＡＥ、全抗体（ＴＡｂ）、及び非結合ＭＭＡＥ濃度は、検証されたアッセイを用いて決定される。アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）や、さらなる特徴付けが必要な場合は他のアッセイを含み得る。ＰＫサンプルは、他のエンホルツマブベドチン関連種の可能な分析のために保存される。血清中のエンホルツマブベドチンに対するＡＴＡレベルを測定するために、電気化学発光アッセイが使用される。推定されるエンホルツマブベドチンの用量関連血中ＰＫパラメータは、濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最大濃度（Ｃｍａｘ）、最大濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、見かけの終末半減期（ｔ１／２）、及びトラフ濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）を含み得るが、これらに限定されない。

【0603】

必要に応じて、追加の分析項目も評価される。

【0604】

６．２．８．４ 薬動力学的及びバイオマーカー評価
バイオマーカー評価は、尿、末梢血、腫瘍組織において、本節及びスケジュール表に概説されたとおりに実施される。バイオマーカー評価は、対象選択には使用されない。エンホルツマブベドチンの治療前及び治療中は、応答、耐性、または安全性に関連する探索的、予測的、及び予後のバイオマーカーを監視する。

【0605】

腫瘍細胞に対するエンホルツマブベドチンの主な効果は、局所、腫瘍関連、及び末梢免疫細胞の活性化状態の変化をもたらし得る。血液及び尿サンプルにおけるバイオマーカー評価は、循環／無細胞腫瘍ＤＮＡ、可溶性ネクチン－４のＥＬＩＳＡ評価、尿中バイオマーカーの免疫アッセイ、ならびに免疫細胞サブセット及びサイトカインの存在量を含む免疫機能のマーカーを含み得るが、これらに限定されない。

【0606】

登録後１２ヵ月以内に採取された保存腫瘍組織は、入手可能な場合（最も最近に入手可能な組織を使用すべきである）、全ての対象に必要である。新たにカットしたスライドのみを提供できる場合は、最低１０～１５切片が必要（１０切片未満の場合は治験依頼者に問い合わせること）。生検は１２ヵ月目の評価時に必要であり、他の全ての評価時には臨床的適応に応じて実施すべきである。試験中に標準治療の一環として腫瘍サンプルを採取する場合、そのサンプルの一部はバイオマーカー試験のために治験依頼者に提出されるべきである。

【0607】

生検は、適切な訓練を受けた臨床施設の担当者が採取すべきである。生検部位の腫瘍内容を十分に確認し、生検の採取及び処理技術が最適であることを確認するため、可能な限り病理医が生検に立ち会うことが推奨される（Ｆｅｒｒｙ－Ｇａｌｏｗ ２０１８）。

【0608】

治療前の腫瘍の生物学的特性と対象の転帰との関係を理解するために、ＴＵＲＢＴ（腫瘍生検）由来の組織を検査する。生検は、腫瘍内の特定の薬力学的、予測的、予後的バイオマーカーについて評価される。組織が、登録後に採取された標準的な生検から入手可能である場合、治療に対する耐性や作用機序、応答性のバイオマーカーをさらに同定するために検査され得る。

【0609】

腫瘍組織におけるバイオマーカー評価は、免疫組織化学及び次世代シークエンシングによるネクチン－４及びＰＤ－Ｌ１発現の中心的評価、腫瘍のサブタイプ分類、腫瘍微小環境分析、ならびにがんで一般的に変化する遺伝子またはＲＮＡの体細胞変異もしくは変化のプロファイリングを含み得るが、これらに限定されない。

【0610】

６．２．８．５ 生体試料保管施設
米国のみでは、追加の同意を提供する対象に対して、残りの未同定の血液及び／または組織は、研究治験依頼者によって保持され、新規の治療薬の標的の評価、ＡＤＣ感受性及び耐性機構の生物学、ならびにＡＤＣのバイオマーカーの同定を含むが、それらに限定されない、将来の研究に使用される。将来の研究のために提供された血液及び組織サンプルは、最大２５年間保管される。追加の同意が提供されない場合、試験が完了し、全ての適用可能な規制義務が満たされた後に、任意の残りの生物学的サンプルが破棄される。

【0611】

６．２．８．６ 対象インタビュー
対象視点は、治療経験及び忍容性について４５～６０分間の電話インタビューを通して定性的に評価される。これらのインタビュー中に調査されるトピック及び質問に関する追加の詳細は、Ｓｕｂｊｅｃｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｇｕｉｄｅに記載される。用量漸増中及び用量拡大中のインタビューは、以下の時点：誘導段階の終了時、維持段階の５回投与終了時、及び維持段階の終了時に行われる。

【0612】

６．２．８．７ 安全性評価
本試験期間中の安全性評価は、ＳＡＥを含むＡＥの監視と記録、併用薬の記録、プロトコルで指定された身体検査所見と臨床検査の測定を含む。

【0613】

（ｉ） 有害事象
（ａ） 定義
有害事象
医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）のＥ２Ａガイドライン定義、迅速報告用の標準規格及び２１ＣＦＲ ３１２．３２のＩＮＤ安全報告によれば、ＡＥとは、医薬品を投与された対象または治験対象に発生した医療上の不都合な事象であって、当該治療との因果関係が必ずしもないものをいう。

【0614】

検査結果、病状、その他の出来事を有害事象ＣＲＦに記録するか否かを決定する際には、以下の情報を考慮すべきである：
● インフォームドコンセントの時点から試験１日前まで、試験プロトコルに関連するＡＥのみが記録されるべきである。プロトコルに関連するＡＥとは、プロトコルで義務付けられた手順の結果として発生した不慮の医療事象と定義される。
● ＮＣ Ｉ ＣＴＣＡＥグレードが上昇するような、試験１日目の投与前に存在する、または進行中の全ての病状を記録するべきである。
● 試験１日目の投与前に存在した、または進行中であった病状のうち、重症度が悪化した、頻度が増加した、試験薬に関連するようになった、またはその他の方法で悪化したが、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレードの増加の閾値に達しなかったものは記録されるべきである。
● 試験初日（投与中及び投与後）から安全報告期間終了まで、全てのＡＥ（試験薬との関連は問わない）は記録されるべきである。任意の処置（例えば、生検）に関連して発生した合併症は、その処置がプロトコルで義務付けられるか否かに関わらず、ＡＥとして記録されるべきである。
● 一般的に、臨床検査値の異常は、臨床徴候や症状を伴う場合、介入を必要とする場合、ＳＡＥを生じる場合、または試験の中止や治療の中断・中止を生じる場合を除き、ＡＥとして記録されるべきでない。臨床検査異常に起因するＡＥを記録する場合、異常そのものではなく、結果として生じた病態を記録すべきである（例えば、「ヘモグロビン低下」ではなく「貧血」を記録する）。

【0615】

重篤な有害事象
ＡＥは、以下の基準のいずれかを満たす場合、ＳＡＥとして分類されるべきである：
致命的： ＡＥにより死亡
生命に関わる： ＡＥにより、対象が直ちに死亡する危険性がある。この分類は、より重篤な場合、仮に死に至る可能性のあるＡＥには適用されない。
入院： ＡＥの結果、入院を余儀なくされた、または既存の入院が延長された。
この基準では、インフォームドコンセントに署名する前に計画された選択的な医学的・外科的処置や治療のための入院、または定期検診はＳＡＥではない。緩和ケア施設またはホスピスケア施設への入院は、入院とはみなされない。基礎がんまたは試験標的疾患の計画された治療のための入院または長期入院は、ＳＡＥとして捕捉する必要はない。
生活不能／無力化： 対象が通常の生活機能を遂行する能力が持続的または著しく損なわれる、あるいは実質的に中断されるようなＡＥ。
先天性異常または出生異常： 受胎前または妊娠中に分子または試験治療レジメンに曝露された対象の子または胎児に有害な転帰が生じること。
医学的に有意： ＡＥは上記基準のいずれにも該当しないが、対象を危険にさらす可能性があり、上記に列挙した転帰のいずれかを予防するために医学的または外科的介入を必要とするか、または感染因子の医薬品を介した感染が疑われる可能性がある。潜在的なＤＩＬＩは、医学的に有意な事象とも考えられる。

【0616】

有害事象の重症度
ＡＥ重症度は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ、第５．０版を用いて分類すべきである。これらの基準は、試験マニュアルで提供される。

【0617】

ＡＥの重症度及び重篤度は独立して評価される。「重症度」は、ＡＥの強度を特徴付ける。「重篤な」は規制上の定義であり、規制当局の報告義務を定義するための治験依頼者のガイドとなる（上記のＳＡＥの定義を参照）。

【0618】

有害事象と試験治療との関係
各ＡＥとエンホルツマブベドチンとの関係は、治験責任医師が以下の基準で評価する：
関連：薬物とＡＥとの因果関係を示唆する証拠がある。例えば、
一般的でなく、薬物曝露と強く関連することが知られる事象（例えば、血管浮腫、肝障害、スティーブンス・ジョンソン症候群）が単発で発生した場合
薬物への曝露に一般的に関連しないが、薬物に曝露された集団では一般的でない事象（例えば、腱断裂）が１回以上発生した場合
非関連性：ＡＥの他の原因がより妥当である（例えば、基礎疾患によるもの、試験集団で一般的に発生するもの）、またはＡＥの発現と試験治療薬の投与との時間的順序が確立できない、または因果関係が生物学的にあり得ないと考えられる。

【0619】

（ｂ） 有害事象の誘発と記録の手順
治験責任医師及び治験担当者は、対象の質問中に誘発されたか、身体検査、臨床検査及び／またはその他の手段で発見されたかにかかわらず、全てのＡＥ及びＳＡＥを、適宜、ＣＲＦ及び／またはＳＡＥ表に記録することにより報告する。

【0620】

有害事象の誘発
各臨床試験において、ＡＥの報告を引き出すために、非制限的または非指示的な質問方法を用いるべきである。

【0621】

有害事象の記録
以下の情報は、有害事象ＣＲＦに記録されるべきである。
● 発症日及び解決日を含む説明
● ＳＡＥ基準を満たすかどうか
● 重症度
● 試験治療またはその他の因果関係
● 結果

【0622】

診断と徴候や症状との比較
一般的には、個々の症状を列挙するよりも、統一的な診断を用いる方が望ましい。症状のグループ分けは、各構成徴候及び／または症状が、標準的な医学教科書で証明されるように、診断の医学的に確認された構成要素である場合にのみ行われるべきである。徴候や症状のいずれかの側面が、診断の古典的なパターンに適合しない場合、個々の症状は別のＡＥとして報告される。

【0623】

重篤な有害事象の記録
ＳＡＥに関して、事象（複数可）はＣＲＦとＳＡＥ表の両方に記録される。ＳＡＥを記録する場合、以下を考慮すべきである：
● 死亡はある事象の結果である。死亡をもたらす事象は、ＳＡＥ表とＣＲＦの両方に記録され、報告されるべきである。
● 入院、外科的処置、診断的処置については、処置そのものではなく、外科的処置または診断的処置に至った病気をＳＡＥとして記録すべきである。その処置は、病気に対して取られた処置の一部として、説明文に記載されるべきである。

【0624】

基礎的悪性腫瘍の進行
基礎的悪性腫瘍の進行は有効性の変数として評価されるため、ＡＥまたはＳＡＥとして報告されるべきではない。「疾患の進行」、「疾患の進行」、「悪性疾患の進行」、その他類似の用語は、ＡＥまたはＳＡＥを説明するために使用されるべきではない。しかしながら、進行に伴う臨床症状が、基礎悪性腫瘍の進行のみに起因するものと判断できない場合、または試験中の疾患について予想される進行パターンに合致しない場合は、ＡＥまたはＳＡＥとして報告される。加えて、基礎悪性腫瘍の進行による合併症は、ＡＥまたはＳＡＥとして報告されるべきである。

【0625】

妊娠
薬物安全性への通知
妊娠報告表は、父親となり得る対象のパートナーに生じた妊娠を含め、試験薬（複数可）初回投与時から試験薬最終投与後６ヵ月までに生じた全ての妊娠について記入する。妊娠予定日が対象の最初の試験薬投与後である場合、対象のパートナーに発生した妊娠のみが報告される。妊娠が判明してから４８時間以内に、治験依頼者の医薬品安全性部門に電子メールまたはファックスを送信する。全ての妊娠を全期間監視し、全ての周産期及び新生児の転帰を報告すべきである。乳児は、最低８週間追跡されるべきである。

【0626】

ＣＲＦに関するデータの収集
試験薬（複数可）の最終投与から３０日以内に発生した全ての妊娠（上記のとおり）も有害事象ＣＲＦに記録される。

【0627】

妊娠中絶は、偶発的、治療的、または自発的にかかわらず、ＳＡＥとして報告されなければならない。上記の「重篤な」基準で定義される先天性異常または出生欠陥は、ＳＡＥとして報告されるべきである。

【0628】

角膜有害事象
グレード２以上の角膜潰瘍または角膜炎のＡＥは、それぞれのＮＣＩ ＣＴＣＡＥカテゴリー内で評価されるべきである。グレード１の角膜潰瘍または角膜炎のＡＥは、「眼障害－その他、具体的に」の基準に従って評価されるべきである。その他の角膜ＡＥは記録し、「眼障害－その他、具体的に」の基準に従って評価されるべきである。

【0629】

糖尿病及び高血糖
糖尿病のグレード付けは、グルコース不耐性のＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ５．０事象項に基づくべきである。高血糖のグレード付けは、高血糖のＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ５．０事象項に基づくべきである。

【0630】

潜在的な薬物性肝傷害
Ｈｙ’ｓ Ｌａｗは、試験薬が重篤な肝毒性の発生率を増加させる可能性と重症度を推定するために用いられる。

【0631】

臨床試験における肝毒性の欠如は、試験される臨床的状況における潜在的な薬物誘発性肝損傷（ＤＩＬＩ）の限られた予測値を提供する。しかしながら、臨床試験でＨｙ’ｓ Ｌａｗ症例が１例見つかると不吉であり、２例見つかると重篤なＤＩＬＩの可能性を高度に予測することになる。

【0632】

定義
簡単に説明すると、潜在的なＨｙ’ｓ Ｌａｗの事例には以下の３つの要素が含まれる：
１． アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ及び／またはＡＳＴ）の上昇＞３×ＵＬＮかつ
２． 総ビリルビン値＞２×ＵＬＮであり、胆汁うっ滞の初期所見（すなわち血清アルカリホスファターゼの上昇）がない、
かつ
３． アミノトランスフェラーゼ上昇及び高ビリルビン血症の原因として、ウイルス性肝炎、慢性または急性の既往の肝疾患、肝毒性を有することが知られる他の薬物（複数可）の投与など（ただし、これらに限定されない）、他に直ちに考えられるものはない。

【0633】

報告要件
任意の潜在的なＨｙ’ｓ Ｌａｗの事例は、ＳＡＥとして扱われ、治験依頼者に迅速に報告されるべきである。

【0634】

報告には利用可能な全ての情報を含めるべきであり、問題が完全に解決し、補足データを得るための全ての試みが完了するまで、追跡調査を注意深く開始すべきである。

【0635】

ＤＩＬＩの可能性を示唆する異常な臨床検査結果の追跡調査
一般に、血清ＡＬＴまたはＡＳＴが＞３×ＵＬＮに上昇した場合は、血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、アルカリホスファターゼ、総ビリルビンを４８～７２時間以内に再検査し、異常の確認と悪化の有無を判断する。

【0636】

肝毒性の潜在的な交絡因子や代替原因を調査するために、適切な医学的評価を開始すべきである。この調査の間、試験薬の差し控えを検討する。

【0637】

（ｃ） 有害事象及び重篤な有害事象の報告期間
全てのＡＥ及びＳＡＥの安全報告期間は、試験初日（投与前）から試験最終治療後３０日までとする。しかしながら、全ての研究プロトコル関連ＡＥは、インフォームドコンセントの時点から記録される。安全報告期間後に発生し、治験責任医師の見解において試験治療に関連すると考えられる全てのＳＡＥも、治験依頼者に報告されるべきである。

【0638】

ＳＡＥは、有意な変化がベースラインに戻るか、事象が安定化（回復／解決）するか、治験責任医師が臨床的に重要でないと判断するか、対象が死亡するか同意を撤回するまで追跡調査される。全ての非重篤なＡＥは、安全報告期間を通して追跡される。特定の非重篤なＡＥは、解決、ベースラインへの復帰、または試験終了まで追跡される。

【0639】

（ｄ） 重篤な有害事象は、即時報告を必要とする
治験責任医師は、ＳＡＥを観察または知った後２４時間以内に、その事象と治験の治療レジメンとの関係にかかわらず、その事象を治験依頼者に報告する。

【0640】

初回ＳＡＥ報告の場合、利用可能な症例の詳細はＳＡＥ表に記録される。少なくとも、以下が含まれるべきである：
● 対象番号
● 事象発生日
● 事象の説明
● 既知の場合は試験治療薬
● 治験責任医師の因果関係評価

【0641】

記入されたＳＡＥ表は、２４時間以内に治験依頼者の医薬品安全性部門に電子メールまたはファックスで送信される（ＳＡＥ報告書に指定された電子メールまたはファックス番号を参照）。

【0642】

関連する追跡情報が入手可能になり次第、治験依頼者に提出する。

【0643】

（ｅ） 規制当局への治験依頼者の安全報告
治験責任医師は、全てのＳＡＥを治験依頼者に報告することが要求される。治験依頼者は、予期せぬ重篤な副作用の疑い（ＳＵＳＡＲ）を含む全てのＳＡＥを、現地の法令または規制当局の報告要件に従って規制当局に報告する。

【0644】

（ｆ） 特に注目すべき有害事象
特定の非重篤な有害事象（ＡＥＳＩ）は、解決、ベースラインへの復帰、対象の休薬、試験終了、または事象が十分に特徴付けられる程度に慢性化するまで追跡調査する（関連する併用薬の収集を含む）。

【0645】

この目的でエンホルツマブベドチンに関連するＡＥＳＩは、以下のリストの事象を含むが、これらに限定されない：
● 皮膚反応
● 末梢神経障害
● 角膜事象
● 高血糖

【0646】

ＡＥＳＩは電子データ収集（ＥＤＣ）により速やかに報告されるべきである。重篤な基準を満たす事象が発生した場合は、２４時間以内に重篤な事象として報告されるべきである。

【0647】

（ｉｉ） バイタルサイン
バイタルサインの測定には、心拍数、収縮期及び拡張期血圧、体温が含まれる。バイタルサイン値は記録され、臨床的に有意なバイタルサイン異常と関連する診断は、ＡＥまたは既往症として記録される。

【0648】

（ｉｉｉ） 臨床検査検査
サンプルは地元のラボで採取される。現地の臨床検査試験には、安全性の評価と臨床判断のための施設内標準検査が含まれる。試験期間中、予定された時点（治験日程を参照）において、安全性を評価するため、以下の臨床検査が現地の検査機関により実施される：
● 血清化学パネルとしては、アルブミン、アルカリホスファターゼ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、重炭酸塩、血液尿素窒素、カルシウム、クレアチニン、塩化物、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、リン、カリウム、ナトリウム、総ビリルビン、アミラーゼ、リパーゼ、グルコース、及び尿酸が挙げられる。
● ＨｂＡ１ｃ
● グルコース（投与前に採血またはフィンガースティックで２５０ｍｇ／ｄＬ未満であることを確認する必要がある）。
● ＣＢＣ（末梢血液像）には以下の検査が含まれる：５分類（好中球、リンパ球、単球、好酸球、好塩基球）を有する白血球数、血小板数、Ｈｇｂ、ヘマトクリット。
● 計算されたＣｒＣｌ（クレアチニンまたはＣｒＣｌの代わりにＧＦＲを使用することも可能である）。ＣｒＣｌは、Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ法またはＭＤＲＤ式を用いて算出される。

【0649】

試験期間中、予定された時点（治験日程を参照）において、安全性を評価するため、現地の検査機関により以下の臨床評価（複数可）が実施される：
● 血清検査（Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎）
● ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ
● 尿検査
○ 標準的な尿検査（異常がある場合は反射顕微鏡検査を含む）
○ 妊娠可能性のある対象の血清または尿に対して、β－ｈＣＧ妊娠検査を行う

【0650】

（ｉｖ） 身体診察
身体検査には、以下の身体部分／システム、すなわち、腹部、四肢、頭部、心臓、肺、頸部、及び神経学的検査が含まれる。体重及び身長も測定される。過去１２ヵ月以内に測定された身長が使用される。

【0651】

エンホルツマブベドチンの膀胱内投与に先立ち、腹痛（特に下腹部、脇腹、尿道）、発熱、悪寒、閉塞を示唆する症状、皮疹、出血の徴候（極小または肉眼的血尿、血栓）の有無など、新規または継続中の症状について対象に質問することが推奨される。全体的な臨床評価でＡＥが示唆された場合、治験責任医師の判断により、症状が消失するまでさらなる治療を中止すべきである。

【0652】

（ｖ） ＥＣＯＧ活動状態
ＥＣＯＧ活動状態は、プロトコル指定の時点で評価される。

【0653】

（ｖｉ） 心電図
全ての対象は、スクリーニング時に１２誘導心電図を３回測定する。臨床的に適切であれば、追加のＥＣＧを実施すべきである。対象が仰臥位に少なくとも５分間置かれた後、ＥＣＧが行われる。ＥＣＧは可能な場合、バイオマーカーサンプルを得る前に行われるべきである。

【0654】

各ＥＣＧ間の待機期間は必要とされない。追跡の電子コピーまたは紙コピーは、中央評価の可能性があるため、治験依頼者の被指名者に提出される。

【0655】

（ｖｉｉ） 妊娠検査
妊娠の可能性がある対象には、ベースライン時、誘導段階の第１週、第３週、第６週、第９週の試験初日、維持段階の各月の試験初日、ＥＯＴ来院時、及びエンホルツマブベドチンの最終投与後６ヵ月間は毎月、少なくとも２５ｍＩＵ／ｍＬの感度を有する血清または尿のβ－ｈＣＧ妊娠検査を実施する。対象が試験薬を投与される前に、妊娠陰性の結果が必要である。妊娠検査は、施設内治験審査委員会／独立倫理委員会（ＩＲＢ／ＩＥＣ）の要請に応じて、またはローカル規制によって要求される場合には、繰り返し実施することもできる。

【0656】

（ｖｉｉｉ） 画像診断
対象はスクリーニング時に上部管、腹部、骨盤のＣＴまたはＭＲＩ尿路造影図と胸部の画像診断を受ける。対象がＩＶ造影に耐えられない場合は、非造影ＣＴでもよい。上部尿路、腹部、骨盤の画像診断には、造影剤を使用したＣＴまたはＭＲＩ尿路造影（医学的に禁忌でない限り）が認められる。試験治療開始前３ヵ月以内に同様のモダリティによる画像診断を行ったことがある場合は、その画像を使用する。

【0657】

（ｉｘ） 眼科精密検査
対象はスクリーニング時に、視力検査、細隙灯検査、眼圧検査、及び拡張眼底検査を含むがこれらに限定されない、適格な検眼士または眼科医によって行われる眼の精密検査を受ける。その後の眼検査は、臨床的な指示に応じて実施される。ＥＯＴ細隙灯検査は、本試験中に角膜ＡＥが発生した対象に必要であり、最終投与から少なくとも４週間で実施されなければならない。

【0658】

６．２．８．８ 治療後の評価
（ｉ） 追跡調査評価
疾患の持続、再発、進行以外の理由で試験治療を中止した対象、及び維持段階を終了した対象は、本試験の追跡調査段階に入る。身体診察、尿検査、妊娠検査は、治験日程に記載される通りに行われる。臨床的適応がある場合は画像診断を行う。追跡期間中、標準的な膀胱鏡検査（すなわち、膀胱鏡検査±生検）及び細胞診による腫瘍応答評価は、登録後最初の２年間は最初の誘導用量から３ヵ月ごとに、その後、登録後５年間にわたり、疾患再発、進行、その後の抗がん療法の開始、または死亡のいずれかが最初に起こるまで６ヵ月ごとに行われる。

【0659】

（ｉｉ） 全生存期間追跡評価
疾患の持続、再発、進行、またはその後の抗がん剤治療の開始による試験治療の中止後、対象は生存追跡調査に入る。生存期間及びその後の抗がん剤治療に関するデータは、追跡不能、同意の撤回、死亡、または治験依頼者による試験中止のいずれかが最初に起こるまで、６ヵ月（±２週間）ごとに、登録後最長５年間収集される。

【0660】

６．２．８．９ 測定の妥当性
この試験で使用される安全対策は、試験薬の潜在的な有害反応を評価するための標準的な手順と考えられる。

【0661】

応答は、ＮＭＩＢＣにおける応答を評価するための標準的な膀胱鏡検査±生検及び細胞診によって評価される。このプロトコルにおける評価間隔は、疾患管理に適切であると考えられる。

【0662】

免疫原性は一般に生物製剤について評価され、したがって、標準的な試験を実施して、エンホルツマブベドチンに対する特異的抗体の存在の可能性を検出する。薬物動態学的評価はまた、用量－曝露－応答関係の特徴付けを明らかにするための臨床試験において一般的である。

【0663】

６．２．９ データ分析法
６．２．９．１ サンプルサイズの決定
この試験には約５８名の対象が登録される。これには、用量漸増で評価される約１８人の対象と、最大２つの拡大コホートで評価される約４０人の対象（各コホート約２０人）が含まれる。

【0664】

用量漸増を完了するのに必要な対象の正確な数は、ＭＴＤに達すると評価された用量レベルの数及び各用量レベルで治療された対象の数に依存するため、未知である。

【0665】

拡大コホートでは、正式な仮説検証は予定されない。観察されたＣＲ率が３０％～５０％の範囲にあると仮定すると、コホートあたり２０人の対象を用いた９５％及び８０％の正確ＣＩを以上の表１１にまとめる。

【0666】

６．２．９．２ 試験エンドポイントの定義
試験エンドポイントは６．１．３目的に示される。エンドポイント定義は、この節に示される。

【0667】

（ｉ） 完全奏効率
ＣＲ率は、ＣＲを達成する対象の割合として定義される。

【0668】

対象は、以下の所見の全てを有する場合にＣＲを有すると考えられる。
１． 膀胱鏡検査：膀胱の外観は正常。膀胱鏡検査で膀胱の外観に異常がある場合、行われる生検は陰性か、悪性度の低いＴａ、悪性度の低い尿路上皮乳頭状新生物、または悪性度の低い乳頭腫でなければならない。ランダムに膀胱生検を実施する場合、これらの生検は陰性であるか、低悪性度の疾患を示すべきである。
２． 尿細胞診：陰性。
ａ． 決定的でない尿細胞診は、評価されるべきである。
ｂ． 尿細胞診が陽性であった場合は、膀胱鏡検査±生検、画像診断により臨床的評価を行う必要がある
３． 画像診断（実施された場合）：正常、または異常が見つかった場合は、所見が膀胱内のＣＲを支持するものでなければならない。

【0669】

試験治療薬の膀胱内投与のため、対象は、上部管または前立腺尿道にがんが見つかり、ランダム膀胱生検が陰性の場合、悪性尿細胞診を伴う膀胱鏡検査が陰性であればＣＲとみなされる。

【0670】

ベースライン後に応答評価を受けなかった対象は、ＣＲを達成しないと考えられる。

【0671】

（ｉｉ） 完全奏効期間
ＣＲの持続期間は、最初にＣＲが証明されてから、再発、進行、または何らかの原因による死亡のいずれかが最初に起こるまでの期間と定義される。

【0672】

ＣＲを達成し、生存しており、分析時に疾患の再発及び進行がない対象は、最後の疾患評価で削除される。詳細な削除規則は統計解析計画書（ＳＡＰ）に記載される。

【0673】

（ｉｉｉ） 膀胱摘出率
膀胱摘出率は、その後膀胱摘出を受けた対象の割合として定義される。

【0674】

（ｉｖ） 無増悪生存期間
無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、試験治療開始から最初の進行の証拠または何らかの原因による死亡のいずれかが最初に起こるまでの期間と定義される。分析時点で生存しており、進行のない対象は、最後の疾患評価で削除される。詳細な削除規則はＳＡＰに記載される。

【0675】

（ｖ） 無嚢胞生存率
無嚢胞生存期間（ＣＦＳ）は、試験治療開始から膀胱摘出術または何らかの原因による死亡のいずれかが最初に起こるまでの期間と定義される。分析時点で生存しており、膀胱摘出術を受けない対象は、生存が確認された最後の日付で削除される。詳細な削除規則はＳＡＰに記載される。

【0676】

６．２．９．３ 統計及び分析計画
高レベル統計及び分析計画を以下に要約する。より詳細で包括的な計画がＳＡＰにおいて提供される。

【0677】

（ｉ） 検討事項
本試験は第１相用量漸増試験であり、その後の拡大コホートが予定される。全ての分析は記述的である。

【0678】

連続変数の記述には記述統計量（平均値、中央値、標準偏差、最小値、最大値）を用いる。カテゴリー変数の説明には、頻度と割合を用いる。

【0679】

（ａ） 無作為化と盲検化
本試験は非盲検用量漸増・拡大試験である。無作為化は利用されず、盲検化は適用できない。

【0680】

（ｂ） 共変量の調整
共変量の調整は計画されない。

【0681】

（ｃ） ドロップアウト及び欠落データの取り扱い
特に明記しない限り、欠落データを作成する。欠落ＡＥ開始日及び停止日は、事象の持続時間及びＴＥ状態を計算する目的で与えられる。欠落データの取り扱いに関する詳細は、ＳＡＰに提供される。

【0682】

（ｄ） 多施設共同試験
本試験には複数の施設が参加するが、どの施設でも施設別の分析が必要となるほどの対象が得られるとは予想されない。

【0683】

（ｅ） 複数の比較及び多重度
この第１相試験では、多重比較は予定されておらず、アルファ調整は必要ない。

【0684】

（ｆ） データ変換及び導出
解析計画において特に指定がない限り、２日（例えば、開始日時、終了日時）に基づく時間変数は、（終了日時－開始日時＋１）（日数）として算出される。

【0685】

全ての統計分析で使用されるベースライン値は、分析計画において特に明記しない限り、試験薬初回投与前の直近の非欠損測定である。

【0686】

（ｇ） 分析セット
全対象分析セット
全治療対象（ＡＴＳ）分析セットには、任意の量のエンホルツマブベドチンの投与を受けた全ての対象が含まれる。ＡＴＳ分析セットは、安全性と有効性のエンドポイントの解析に使用される。

【0687】

ＤＬＴ評価可能分析セット
ＤＥ分析セットには、ＤＬＴを経験したか、エンホルツマブベドチンの誘導投与を少なくとも５回受けた、用量漸増中の全治療対象が含まれる。ＤＥ分析セットはＭＴＤの決定に使用される。

【0688】

（ｈ） サブグループの検査
探索的分析として、選択したエンドポイントについてサブグループ分析を行った。サブグループは、以下を含み得るが、これらに限定されない：
● 以前の治療
● 疾患サブタイプ
● ネクチン－４発現レベル

【0689】

（ｉ） 分析のタイミング
本試験の最終分析は、すべての対象が治療と追跡期間を終了した後、あるいは治験依頼者による試験終了後に行われる。

【0690】

（ｉｉ） 対象の処置
試験対象を処置によって集計し、各分析セットの対象数をまとめる。試験治療を中止した対象及び試験から離脱した対象は、中止または離脱の理由とともに要約される。

【0691】

（ｉｉｉ） 対象の特徴
人口統計とその他のベースライン特性は要約される。詳細はＳＡＰに記載される。

【0692】

（ｉｖ） 治療遵守
試験薬は、治験実施医療機関で膀胱内に投与される。治療遵守の要件は計画されない。

【0693】

（ｖ） 有効性分析
全ての有効性分析は、ＡＴＳ分析セットを用いて行われる。

【0694】

試験開始時のＣＲ率と３、６、１２、１８、及び２４ヵ月後のＣＲ率を正確な９５％ＣＩとともにまとめた。

【0695】

ＣＲの持続時間は、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を用いて推定される。ＣＲを達成する対象のみが分析に含まれる。

【0696】

Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を用いてＰＦＳ及びＣＦＳを推定する。ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロットは適切な場合に提示される。詳細な方法は、ＳＡＰにおいて提供される。

【0697】

膀胱摘出率は正確な９５％信頼区間とともに要約される。

【0698】

（ｖｉ） 薬動力学的及び免疫原性分析
血液及び尿中のエンホルツマブベドチン濃度を、各ＰＫサンプリング時点での記述統計量と共に要約する。算出される用量関連ＰＫパラメータには、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ｔ１／２及びＣｔｒｏｕｇｈを含み得るが、これらに限定されず、非コンパートメント分析によって推定され、記述統計によって要約される。必要に応じて、追加の分析項目も評価される。ＰＫと薬力学的エンドポイント、安全性、または有効性との間の関係を調べる。

【0699】

ＡＴＡの発生率は、記述統計によって要約される。

【0700】

（ｖｉｉ） バイオマーカー分析
バイオマーカーパラメータ（例えば、ベースライン値、ベースラインからの絶対的及び相対的変化）と抗腫瘍活性、安全性、ＰＫパラメータとの関係を検討する。関心があると判定された関係及び関連データを要約する。詳細は、ＳＡＰまたはバイオマーカー分析計画に別々に記載される。

【0701】

（ｖｉｉｉ） 患者報告転帰分析
患者から報告された転帰は、対象のインタビューを通じて収集される。これらのインタビューから作成されるトランスクリプトの分析は、別個の文書に記載される。

【0702】

（ｉｘ） 安全性分析
全ての安全性分析は、ＡＴＳ分析セットを用いて行われる。

【0703】

（ａ） 曝露範囲
治療の持続時間、用量の数、総用量、及び用量強度を要約する。投与遅延、スキップ、減量を含む投与量の変更についてまとめた。詳細は、ＳＡＰに提供される。

【0704】

（ｂ） 有害事象
ＡＥの概要は、全ての治療出現する有害事象（ＴＥＡＥ）、治療関連ＴＥＡＥ、グレード３以上のＴＥＡＥ、治療関連グレード３以上のＴＥＡＥ、ＴＥ ＳＡＥ、治療関連ＴＥ ＳＡＥ、死に至るＴＥＡＥ、死に至る治療関連ＴＥＡＥ、治療中止に至るＴＥＡＥ、及び治療中止に至る治療関連ＴＥＡＥの発生率の一覧を提供する。ＡＥは、試験治療の最初の投与後及び最終投与後３０日以内に新たに発生または悪化した場合に、治療が緊急に発生すると定義される。

【0705】

ＴＥＡＥは、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（ＭｅｄＤＲＡ）が推奨する用語、重症度、試験薬との関係について要約される。１人の対象に同じ優先用語で同じＡＥが複数回発生した場合、ＡＥの発生は１回と数える。投与量の変更または治療中止に至ったＴＥＡＥも同様にまとめた。

【0706】

全てのＴＥＡＥ、グレード３以上のＴＥＡＥ、及び治療中止に至ったＴＥＡＥが記載される。

【0707】

（ｃ） 用量制限毒性
ＤＬＴを経験する対象の数及び割合は、ＤＥ分析セットについて要約される。ＤＬＴ確率のモデルベース推定値は、各用量レベルについて９５％信頼区間とともに示される。

【0708】

（ｄ） 死亡と重篤な有害事象
ＳＡＥはＴＥＡＥと同様に列挙され、要約される。致命的な転帰を招いた事象は列挙される。

【0709】

（ｅ） 臨床検査結果
臨床検査値（例えば、化学、血液学、及び尿検査）を来院ごとに要約する。ベースラインから最大ベースライン後ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレードへのシフトを表に示す。

【0710】

臨床検査値は、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥによるグレードとともに記載され、正常な基準範囲外の値にはフラグが付けられる。

【0711】

（ｆ） 他の安全性分析
バイタルサイン
バイタルサインの測定値（収縮期及び拡張期血圧、心拍数、体温）が記載される。

【0712】

ＥＣＯＧ活動状態
ベースラインから最良及び最悪ベースライン後スコアへのシフトを表に示す。

【0713】

ＥＣＧ
ＥＣＧの状態（正常、臨床的に有意な異常、臨床的に有意でない異常）が記載される。

【0714】

（ｘ） 中間分析
正式な中間分析は計画されない。試験の用量漸増部分では、各コホート終了後に治験依頼者とＳＭＣがデータを評価し、ＤＬＴを判定して用量漸増の決定に役立てる。ＳＭＣは、安全性及びＤＬＴを継続的に監視する。

【0715】

ＳＭＣの決定プロセス、及びＳＭＣの役割と責任については、別文書に詳述される。

【0716】

この試験の中間データは、米国臨床腫瘍学会の年次総会などの学術会議で発表される。

【0717】

６．２．１０ 用語の略称及び定義の一覧表
ＡＤＣ 抗体薬物複合体
ＡＥ 有害事象
ＡＥＳＩ 特に注目すべき有害事象
ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＮＣ 絶対好中球数
ａＰＴＴ 部分トロンボプラスチン時間
ＡＳＴ アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＡＴＡ 抗治療抗体
ＡＴＳ 全治療対象者
ＡＵＡ 米国泌尿器科学会
ＡＵＣ 濃度時間－曲線下の面積
β－ｈＣＧ ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン
ＢＣＧ カルメット・ゲラン菌
ＢＩＣＲ 盲検独立中央審査
Ｃｍａｘ 最大濃度
ＣｒＣｌ クレアチニンクリアランス
Ｃｔｒｏｕｇｈ トラフ濃度
ＣＢＣ 全血球数
ＣＦＳ 無嚢胞生存率
ＣＩ 信頼区間
ＣＩＳ 上皮内癌
ＣＲ 完全奏効率
ＣＲＦ 症例報告書
ＣＴ コンピュータ断層撮影法
ＣＹＰ シトクロムＰ４５０
ＤＥ ＤＬＴ評価可能
ＤＩＬＩ 薬物性肝傷害
ＤＬＴ 用量制限毒性
ＤＯＲ 完全奏効期間
ＤＵ 現在の用量は許容できないほど毒性である
ＥＡＵ 欧州泌尿器科学会
ＥＣＤ 細胞外ドメイン
ＥＣＧ 心電図
ＥＣＯＧ 米国東海岸癌臨床試験グループ
ｅＣＲＦ 電子症例報告書
ＥＬＩＳＡ 酵素結合免疫吸着アッセイ
ＥＯＴ 治療終了
ＦＩＨ ファースト・イン・ヒューマン
ＧＦＲ 糸球体濾過率
ＨｂＡ１ｃ ヘモグロビンＡ１ｃ
Ｈｇｂ ヘモグロビン
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＨＲ ハザード比
ＩＣＨ 医薬品規制調和国際会議
ＩＥＣ 独立倫理委員会
Ｉｇ 免疫グロブリン
ＩＮＤ 治験薬
ＩＲＢ 施設内治験審査委員会
ＩＲＲ 注入関連の反応
ＩＶ 静脈内
ＬＤＨ 乳酸デヒドロゲナーゼ
ｍＡＢ モノクローナル抗体
ＭＤＲＤ 腎疾患における食生活改善
ＭｅｄＤＲＡ 医薬品規制用語集
ＭＭＡＥ モノメチルウリスタチンＥ
ＭＲＨＤ ヒトの最大推奨用量
ＭＲＩ 磁気共鳴画像法
ＭＴＤ 最大耐量
ｍＴＰＩ 修正毒性確率区間
ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ 米国国立癌研究所の有害事象共通用語基準
ＮＭＩＢＣ 非筋肉浸潤性膀胱癌
ＮＯＡＥＬ 無毒性量
ＮＹＨＡ ニューヨーク心臓協会
ＯＲＲ 客観的応答率
ＯＳ 全生存期間
ＰＡＣＳ 画像保存通信システム
ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応
ＰＤ－１ プログラム細胞死タンパク質１
ＰＤ－Ｌ１ プログラム死リガンド１
ＰＦＳ 無増悪生存期間
Ｐ－ｇｐ Ｐ－糖タンパク質
ＰＫ 薬物動態
ＰＫ／ＰＤ 薬物動態／薬力学
ＰＮ 末梢神経障害
ＰＳＡ 前立腺特異抗原
ＰＴ／ＰＴＴ／ＩＮＲ プロトロンビン時間／部分トロンボプラスチン時間／国際標準化比：週１回／週２回
ＳＡＥ 重篤な有害事象
ＳＡＰ 解析計画書
ＳＪＳ スティーブンス・ジョンソン症候群
ＳＭＣ 安全監視委員会
ＳＵＳＡＲ 予期せぬ重篤な副作用の疑い
ｔ１／２ 半減期
ＴＡｂ 全抗体
ＴＥ 治療出現
ＴＥＡＥ 治療出現の有害事象
ＴＥＮ 中毒性表皮壊死融解症
Ｔｍａｘ 最大濃度までの時間
ＴＵＲＢＴ 膀胱腫瘍の経尿道切除
ＵＣ 尿路上皮癌
ＵＬＮ 基準値上限
ＵＳ 米国
ＵＴＩ 尿路感染症

【図1A-1】

【図1A-2】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図2】

【図3A】

【図3B-1】

【図3B-2】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

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【国際調査報告】